JP3432940B2 - 皮膚外用剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【産業上の利用分野】本発明は、担子菌の培養液又は菌
体の抽出液を配合した皮膚外用剤に関するものであっ
て、より詳しくは、特定の担子菌を液体培養したその培
養液又は菌体から水及び／又は有機溶媒で抽出した抽出
液のメラニン生成抑制成分の１種又は２種以上を配合す
ることによって美白効果を発揮するほか、細胞賦活効果
及び保湿効果を併せ持った老化防止に優れた皮膚外用剤
に関する。 【０００２】 【従来の技術】担子菌類（キノコ）は、従来食用または
漢方薬として利用されてきた。最近では、医薬品または
化粧品への応用もみられる。化粧品への応用例として
は、特公平４−７７７２５号公報、特公平２−４６５６
４号公報、特開昭６３−２２７５１２号公報、特開平１
−２２８４８０号公報、特開平２−４９７１０号公報及
び特開平３−９９００５号公報などがある。 【０００３】特公平４−７７７２５号公報には、シロキ
クラゲの液体培養で得られた粘性物を配合した化粧料、
特公平２−４６５６４号公報には、子実体から抽出した
紫外線吸収剤、特開昭６３−２２７５１２号公報には、
シロキクラゲ子実体からの抽出粘性体を含有する化粧
料、特開平１−２２８４８０号公報には、培養固形物か
ら抽出した抗アレルギー作用を持つ物質、特開平２−４
９７１０号公報には、キノコの子実体からの抽出物を利
用した化粧料そして特開平３−９９００５号公報には、
シロキクラゲ目またはキクラゲ目のキノコの粉砕物をス
クラブ剤として配合した化粧料が開示されている。 【０００４】他にも、従来の担子菌の利用方法として、
制癌剤、抗腫瘍性物質、免疫調節物質などの医薬品への
利用は数多くみられるが、化粧品への利用は前述の通り
粘性物質を得る物が幾つがあるにすぎず、各種有用性物
質を得るものとしては、例えば、特開平２−４９７１０
号公報があるが、現在求められている多機能の素材はな
い。また同公報には、キノコの子実体からの抽出物を利
用した化粧料が開示されているが、子実体は、その生育
に時間がかかるため安価に大量に入手しにくく、また入
手した後も、子実体の個体差による有用性の変動や抽出
率の低さのため量産化が困難であるなどの実用的な面で
の問題点が多い。 【０００５】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、皮膚
外用剤の有効成分として使用する担子菌由来の各種の成
分を培養液又は菌体中に変動無くかつ高濃度に生産させ
ることで量産化を図り、さらにはその濃度を高めること
によって老化防止用の外用剤として求められている機能
性（有効性）に幅広い適応性を持たせた安全性にすぐれ
た皮膚外用剤を提供することにある。 【０００６】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するため鋭意研究を行った結果、特定の担子菌類
を液体培養した培養液又は菌体の抽出液に美白効果があ
ることを初めて見出し、さらにこれらの培養液又は菌体
の抽出液には、細胞賦活効果及び保湿効果があるという
ことも確認し本発明を完成した。すなわち、本発明によ
れば、ヌメリツバタケ、マツオオジ、フチドリツエタ
ケ、ムラサキシメジおよびナラタケからなる群より選択
されたシメジ科の担子菌、シロナメツムタケ、チャナメ
ツムタケおよびヌメリスギタケからなる群より選択され
たモエギタケ科の担子菌、シロマイタケ、チャカイガラ
タケおよびヒトクチタケからなる群より選択されたサル
ノコシカケ科の担子菌、ならびにブナハリタケ、カバノ
アナタケ、ショウロ、ヌメリコウジタケおよびオオヒラ
タケからなる群より選択される担子菌の培養液又は菌体
の抽出液群のメラニン生成抑制成分の１種又は２種以上
を配合することを特徴とする皮膚外用剤が提供される。
これらの担子菌類の培養液又は菌体からの抽出液は、メ
ラニン生成抑制成分による美白効果をはじめとする老化
防止に著しく優れている。 【０００７】 【発明の具体的説明】本発明者は、担子菌類のうち、シ
メジ科のヌメリツバタケ及びモエギタケ科のヌメリスギ
タケを用い、培養液又は菌体抽出液にメラニン生成抑制
成分を生産すべく研究を重ねたところ、糖類を炭素源と
した通気攪拌液体培養により得られた培養液又は菌体抽
出液にマウスメラノーマＢ１６細胞のメラニン生成を強
く抑える成分があることを最初に見いだしたほか、正常
ヒト皮膚線維芽細胞の増殖及びコラーゲン産生を促す効
果、ケラチノサイトの増殖効果ならびに保湿効果がある
ことを見いだした。 【０００８】次に、担子菌類数十種類について同様な効
果を得るべく鋭意研究を行った結果、シメジ科、モエギ
タケ科、ハリタケ科、サルノコシカケ科、キコブタケ
科、シロキクラゲ科、ショウロ科、アミタケ科およびヒ
ラタケ科の特定の担子菌類の培養液、又は菌体の抽出液
のメラニン生成抑制成分による美白効果を見いだしたほ
か、それらがヒト皮膚細胞の活性化作用及び高い保湿性
も有することを確認して本発明を完成した。 【０００９】本発明の担子菌類としては、シメジ科、モ
エギタケ科、ハリタケ科、サルノコシカケ科、キコブタ
ケ科、シロキクラゲ科、ショウロ科、アミタケ科および
ヒラタケ科に属する特定の担子菌が使用可能であるが、
特にシメジ科のヌメリツバタケ、マツオオジ、シロタモ
ギタケ、フチドリツエタケ、ムラサキシメジおよびナラ
タケ、モエギタケ科のシロナメツムタケ、チャナメツム
タケおよびヌメリスギタケ、ハリタケ科のブナハリタ
ケ、サルノコシカケ科の、シロマイタケ、チャカイガラ
タケおよびヒトクチタケ、キコブタケ科のカバノアナタ
ケ、ショウロ科のショウロ、アミタケ科のヌメリコウジ
タケおよびヒラタケ科のオオヒラタケが用いられる。 【００１０】本発明における培養液としては、炭素源、
窒素源、無機塩類などを含む液体培地に担子菌の種菌を
接種し、１５ないし３５℃、好ましくは２０ないし３０
℃の温度条件で、５ないし４５日間、好ましくは１０な
いし３０日間、通気攪拌培養後、培養物から菌体を遠心
分離又はろ別などにより除去した溶液又はその溶液を減
圧濃縮機などで濃縮したものが好適なものとして開示で
きる。また、有効性、安全性をさらに高めるため、培養
液を限外ろ過または逆浸透膜処理したもの若しくは活性
炭又は各種樹脂、例えばセパビーズＳＰ−８５０（三菱
化学（株））などで処理したもの、又はそれらの濃縮物
も含まれる。 【００１１】本発明における菌体抽出液とは、上記の培
養物からろ別して得られた菌体をそのまま若しくは細断
後、水及び／又は有機溶媒にて充分抽出したもの、また
はその濃縮液が好適なものとして開示できる。有機溶媒
としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアル
コール、ブタノール、グリセリン、エチレングリコー
ル、１，３−ブチレングリコールおよびアセトンなどが
好ましく使用される。また、有効性、安全性をさらに高
めるため上記菌体抽出液又はその希釈液若しくは濃縮液
を限外ろ過又は逆浸透膜処理したもの若しくは活性炭又
は各種樹脂例えばセパビーズＳＰ−２０５（三菱化学
（株））などで処理したもの、又はそれらを希釈又は濃
縮物したものも含まれる。以上のようにして得られた本
発明による担子菌類の培養液若しくは菌体抽出液は、メ
ラニン生成抑制成分による美白効果に優れており、また
同時に、細胞賦活効果及び保湿効果も併せ持っており、
皮膚に対し何ら傷害を与えるものでなく安全性にも優れ
ている。 【００１２】保湿性に関しては、粘性物（多糖）を生産
する担子菌において特にその効果が高いことが認められ
た。粘性物を生産する担子菌としては、特にヌメリスギ
タケ、シロマイタケ、チャカイガラタケおよびヒトクチ
タケが好ましいものとして例示できる。これらの担子菌
が生産する粘性物は、菌体を除去した培養液中に認めら
れ、その粘性および皮膚に対する優れた感触（すべり
感、なじみ感など）により容易に識別し得る。また、培
養液の濃縮物又は培養菌体から粘性物を抽出液として得
る場合には、粘性物が水溶性であるという特徴から、
水、または５０％以下、好ましくは２０％以下のアルコ
ール類による抽出が望ましい。 【００１３】また、粘性物を単離する場合には、粘性物
の白い沈殿が生ずるまでアルコール類を添加し、遠心分
離又はろ別することにより得ることができる。得られた
粘性物は、医薬品、化粧料への利用ばかりではなく食品
や工業製品等への増粘剤としての利用が可能である。 【００１４】本発明の皮膚外用剤は、皮膚施用上適する
ものであれば特に制限はなく、例えばパップ剤、プラス
ター剤、ペースト剤、クリーム、軟膏、エアゾール剤、
乳剤、ローション、乳液、エッセンス、パック、ゲル
剤、パウダー、ファンデーション、サンケア、バスソル
トなどの医薬品、医薬部外品および化粧料として許容し
得る公知の形態で幅広く使用に供されるものである。こ
のように、本発明の皮膚外用剤は、前述の有効成分を含
有する溶液を皮膚施用上許容し得る公知の剤型に配合し
て製造するものであり、その配合量は培養方法、処理方
法、濃縮度合い、および配合する製剤の形態によって多
少異なるが、通常、培養液または菌体抽出液あるいはそ
れらの濃縮液を製剤中に０．０５ないし５０重量％、好
ましくは０．１ないし１０重量％程度配合するのが好ま
しい。 【００１５】本発明の皮膚外用剤を調製する場合、通常
に用いられる種々の公知の有効成分、例えば、塩化カル
プロニウム、セファランチン、ビタミンＥ、ビタミンＥ
ニコチネート、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ニコチ
ン酸ベンジル、ショウキョウチンキおよびトウガラシチ
ンキなどの末梢血管拡張剤、カンフル、メントールおよ
びハッカ油などの清涼剤、ヒノキチオール、塩化ベンザ
ルコニウムおよびウンデシレン酸などの抗菌剤、副腎皮
質ホルモン、ε−アミノカプロン酸、塩化リゾチーム、
グリチルリチンおよびアラントインなどの消炎剤、コウ
ジ酸、アスコルビン酸およびアルブチンなどの色白剤、
胎盤抽出液、肝臓抽出物、紫根エキスおよび乳酸菌培養
抽出物などの動物・植物・微生物由来の各種抽出物など
をその時々の目的に応じて適宜添加して使用することが
できる。さらに、前述の医薬品、医薬部外品、化粧料に
は、公知の有効成分に加え、油脂類などの基剤成分の
他、必要に応じて公知の紫外線吸収剤／散乱剤、保湿
剤、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香
料および着色剤など種々の添加剤を併用できる。 【００１６】 【実施例】次に、本発明の実施例並びにその効果を示す
ための試験例を挙げるが、これらは本発明を何ら限定す
るものではない。 ＜製造例１＞グルコース４５ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エ
キス３ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製水１５００ｍ
ｌに溶解後、ｐＨ５．５に調整し、１２０℃で１５分間
殺菌した。３０℃に冷却後、ヌメリスギタケの種菌をこ
れに接種し、通気攪拌培養をグルコース残量が０．３％
以下になるまで３０℃で１８日間行った。培養物を遠心
分離して菌体を除いた後、その培養液に、活性炭を０．
２％添加し攪拌後、セライト（粘土質ろ過助剤）を用い
てろ過を行った。本ろ液を０．４５μｍメンブレンろ過
し、１．４ｋｇの生成物を得た。 【００１７】＜製造例２＞製造例１の培養物から遠心分
離により集めた菌体を水洗後、ナイロンメッシュろ布に
取り水分をきり、菌体６８ｇを得た。本菌体に５０％エ
タノール４７６ｍｌを添加後、ミキサーで粉砕抽出し遠
心分離により上澄液を得た。上澄液を０．４５μｍメン
ブレンろ過し、０．４ｋｇの生成物を得た。 【００１８】＜製造例３＞グルコース４５ｇ、ペプトン
３ｇ、酵母エキス３ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製
水１５００ｍｌに溶解後、ｐＨ６．０に調整し、１２０
℃で１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、ヌメリツバタ
ケの種菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコース残
量が０．３％以下になるまで３０℃で２０日間行った。
培養物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養液に、
活性炭を０．３％添加し、セライトろ過を行った。本ろ
液を０．４５μｍメンブレンろ過し、１．４ｋｇの生成
物を得た。 【００１９】＜製造例４＞製造例３の培養物から遠心分
離により集めた菌体を水洗後、ナイロンメッシュろ布に
取り水分をきり、菌体５４ｇを得た。本菌体に１０％エ
タノール３７８ｍｌを添加後、ミキサーで粉砕抽出し遠
心分離により上澄液を得た。上澄液を０．４５μｍメン
ブレンろ過し、０．３ｋｇの生成物を得た。 【００２０】＜製造例５＞グルコース１５ｇ、ペプトン
１．５ｇを馬鈴薯抽出液（馬鈴薯２００ｇに水１５００
ｍｌを加え煮沸後、ろ布ろ過し１５００ｍｌにフィルア
ップしたもの）に溶解後、ｐＨ４．５に調整し、１２０
℃で１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、シロナメツム
タケの種菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコース
残量が０．３％以下になるまで３０℃で２２日間行っ
た。培養物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養液
にセパビーズＳＰ−２０５（三菱化学（株））を２％添
加し、ろ紙ろ過を行った。本ろ液を０．４５μｍメンブ
レンろ過し、１．４ｋｇの生成物を得た。 【００２１】＜製造例６＞グルコース４５ｇ、ペプトン
３ｇ、酵母エキス３ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製
水１５００ｍｌに溶解後、ｐＨ５．５に調整し、１２０
℃で１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、ブナハリタケ
の種菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコース残量
が０．２％以下になるまで３０℃で２２日間行った。培
養物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養液に、活
性炭を０．２％添加しセライトろ過を行った。本ろ液を
減圧濃縮機を用いて１／２量に濃縮した。本濃縮液を
０．４５μｍメンブレンろ過し、０．７ｋｇの生成物を
得た。 【００２２】＜製造例７＞グルコース４５ｇ、ペプトン
３ｇ、酵母エキス３ｇ、ＫＨ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製
水１５００ｍｌに溶解後、ｐＨ５．５に調整し、１２０
℃で１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、コフキサルノ
コシカケの種菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコ
ース残量が０．２％以下になるまで３０℃で２０日間行
った。培養物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養
液に、活性炭を０．２％添加しセライトろ過を行った。
本ろ液を０．４５μｍメンブレンろ過し、１．３ｋｇの
生成物を得た。 【００２３】 【００２４】 【００２５】 【００２６】 【００２７】 【００２８】 【００２９】＜製造例８＞ グルコース３０ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製水１５００ｍｌに溶解後、
ｐＨ６．０に調整し、１２０℃で１５分間殺菌した。３
０℃に冷却後、ショウロの種菌をこれに接種し、通気攪
拌培養をグルコース残量が０．２％以下になるまで３０
℃で２８日間行った。培養物を遠心分離して菌体を除い
た後、その培養液に、活性炭を０．２％添加しセライト
ろ過後、ＳＰ−８５０（三菱化学（株））を２％添加し
ろ紙によるろ過を行った本ろ液のＲＯ膜（分子量１００
０カット）透過液を０．４５μｍメンブレンろ過し、
１．４ｋｇの生成物を得た。 【００３０】 【００３１】 【００３２】＜製造例９＞ グルコース３０ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇを精製水１５００ｍｌに溶解後、
ｐＨ６．０に調整し、１２０℃で１５分間殺菌した。３
０℃に冷却後、ムラサキシメジの種菌をこれに接種し、
通気攪拌培養をグルコース残量が０．２％以下になるま
で３０℃で２０日間行った。培養物を遠心分離して菌体
を除いた後、その培養液に、活性炭を０．２％添加しセ
ライトろ過後、ＳＰ−２０６（三菱化学（株））を３％
添加、撹拌し、ろ過を行った。本ろ液のＲＯ膜（分子量
１０００カット）透過液を集め、本発明品１．３ｋｇを
得た。 【００３３】＜製造例１０＞ グルコース４５ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ０．５ｇを精製水１５
００ｍｌに溶解後、ｐＨ６．０に調整し、１２０℃で１
５分間殺菌した。３０℃に冷却後、ナラタケの種菌をこ
れに接種し、通気攪拌培養をグルコース残量が０．５％
以下になるまで３０℃で２２日間行った。培養物を遠心
分離して菌体を除いた後、その培養液に、活性炭を０．
２％添加しセライトろ過を行った。本ろ液を０．２２μ
ｍメンブレンろ過し、本発明品１．４ｋｇを得た。 【００３４】＜製造例１１＞ グルコース３０ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ０．５ｇを精製水１
５００ｍｌに溶解後、ｐＨ６．０に調整し、１２０℃で
１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、ヌメリコウジタケ
の種菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコース残量
が０．３％以下になるまで３０℃で１９日間行った。培
養物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養液に、活
性炭を０．５添加しセライトろ過を行った。そのろ液を
３倍濃縮し、濃縮液と等量の９９％エタノールを添加し
撹拌後、一晩静置した。本ろ液から沈殿をろ別した。本
ろ液を０．２２μｍメンブレンろ過し、本発明品０．９
ｋｇを得た。 【００３５】＜製造例１２＞ グルコース４５ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．５ｇを精製水１５００ｍｌに溶解後、ｐ
Ｈ５．５に調整し、１２０℃で１５分間殺菌した。３０
℃に冷却後、チャナメツムタケの種菌をこれに接種し、
通気攪拌培養をグルコース残量が０．３％以下になるま
で３０℃で２１日間行った。培養物を遠心分離して菌体
を除いた後、その培養液に、活性炭を０．３％添加しセ
ライトろ過を行った。本ろ液を０．２２μｍメンブレン
ろ過し、本発明品１．４ｋｇを得た。 【００３６】＜製造例１３＞ グルコース３０ｇ、ペプトン３ｇ、酵母エキス３ｇ、Ｋ
Ｈ₂ ＰＯ₄ ０．７５ｇ、ＭｇＳＯ₄ ０．５ｇを精製水１
５００ｍｌに溶解後、ｐＨ６．０に調整し、１２０℃で
１５分間殺菌した。３０℃に冷却後、オオヒラタケの種
菌をこれに接種し、通気攪拌培養をグルコース残量が
０．２％以下になるまで３０℃で１８日間行った。培養
物を遠心分離して菌体を除いた後、その培養液に、活性
炭を０．３％添加しセライトろ過を行った。ろ液のｐＨ
を７．５に調整し、アクチナーゼＥ（科研製薬（株））
を０．００３％添加し、一晩撹拌後、ろ過を行った。本
ろ液のＲＯ膜（分子量１０００カット）透過液を集め、
ｐＨを６．５に調整し、本発明品１．３ｋｇを得た。 【００３７】＜試験例１＞ マウスメラノーマＢ１６細
胞の色白化試験試験方法 試料をＭＥＭ（Eagle's Minimum Essential Medium）に
最終濃度が表１に示す濃度になるように調製、溶解し、
孔径０．４５μｍの除菌フィルターでろ過した。ＭＥＭ
に不溶性の試料は、１００μｌのエタノールに溶解後、
ＭＥＭに添加した。２枚のプラスチックシャーレ（Falc
on製、内径９ｃｍ）にそれぞれ、試料を溶解・ろ過除菌
したＭＥＭを８ｍｌ、ＦＢＳ（ウシ胎児血清）１ｍｌお
よびＭＥＭ１ｍｌに懸濁した１×１０⁵ 個／ｍｌのＢ１
６細胞を添加し、培養開始３日後に培地交換を行い、計
５日間、５％ＣＯ₂ 、９５％空気条件下、３７℃で培養
した。培養終了後、シャーレの底に増殖した細胞を集め
Phosphate buffered saline(PBS) に懸濁させ、２，０
００ｒｐｍで３分間遠心分離を行い、得られた細胞ペレ
ットの黒化度を肉眼的に評価した。また、培養終了後の
細胞数をカウントし、細胞増殖率を算出した。表１にお
いて、肉眼的色調における＋−は、下記の評価を示す。 ±：無添加区と同程度の黒化度を示す。 ＋：無添加区よりやや少ない黒化度を示す。 ＋＋：無添加区より明らかに少ない黒化度を示す。 ＋＋＋：僅かに認められる黒化度を示す。 ＋＋＋＋：白色ないし灰色で黒色と認められない。 ＋＋＋＋＋：白色。 【００３８】試験結果 表１−１ないし１−３に示すごとく、サンプル添加濃度
に依存してＢ１６細胞白色化効果が認められた。 【００３９】【００４０】【００４１】 【００４２】【００４３】 【００４４】考察 表１−１ないし１−３に示した結果は、製造例毎に有効
添加濃度が異なるため、予備試験を行い細胞数に減少が
少なくかつ有効性の高い濃度を求めた後、再試験した値
である。担子菌の培養液及び菌体抽出液には濃度依存的
にマウスメラノーマＢ１６細胞のメラニン生成抑制作用
が認められたことから皮膚の美白作用があると考えられ
る。 【００４５】＜試験例２＞ ヒト線維細胞の増殖促進お
よびコラーゲン生成亢進試験試験方法 ヒト由来正常皮膚線維芽細胞（ＣＣＤ−２７ＳＫ）を直
径３．５ｃｍのプラスチッククシャーレ（Falcon 3001
）に０．８×１０⁵ 個播種し、１０％ウシ胎児血清を
含むイーグルＭＥＭ培地で１日培養後、培地を表皮角化
細胞増殖培地（Ｋ−ＧＭ：クラボウ社）に置換すると同
時に、本発明の試料を最終濃度が表２に示す濃度になる
ように添加し、さらに３日間培養した。培養終了後、培
養液を除去し、トリプシンで細胞を剥離し、血球カウン
ターを用いて細胞数を測定し、エタノール添加のものと
比較した。また、培養上清をサンプリングし、この培養
液についてプロコラーゲン量を測定した。なお、プロコ
ラーゲンの測定には、Procollagen TypeI C-peptide
(PIP)測定キット（宝酒造株式会社製）を用い、試料無
添加区のものをコントロールとし、添加区とのコラーゲ
ン量比で表した。 【００４６】試験結果 表２−１および２−２に示すごとく、担子菌の培養液及
び菌体抽出液は、線維芽細胞の増殖を促進し、コラーゲ
ン産生量も対照より亢進した。 【００４７】 【００４８】【００４９】考察 細胞数が最初の播き数よりも減少するのは、培地交換時
に細胞数が半減するためで、試料添加後はいずれの群も
増殖している。したがって、担子菌の培養液及び菌体抽
出液には線維芽細胞の増殖能があり、また、産生コラー
ゲン量もこれらの添加により増加することから、細胞の
活性化作用があると考えられる。 【００５０】＜試験例３＞ ヒトケラチノサイトの増殖
促進試験試験方法 ヒト胸由来ケラチノサイト（クラボウ社）を直径３．５
ｃｍプラスチックシャーレ（Falcon 3001 ）に０．７×
１０⁵ 個播種し、表皮角化細胞増殖培地（Ｋ−ＧＭ：ク
ラボウ社）で１日培養後、表皮角化細胞基礎培地（Ｋ−
ＢＭ：クラボウ社）に培地置換すると同時に最終濃度が
表３に示す濃度になるように本発明の試料を添加し、さ
らに３日間培養した。培養終了後は、培養液を除去し、
トリプシンで細胞を剥離し、血球カウンターを用いて細
胞数を測定し、エタノール添加のものと比較した。 【００５１】試験結果 表３−１ないし３−３に示すごとく、担子菌の培養液又
は菌体抽出液を添加することにより細胞増殖を促進し
た。【００５２】【００５３】 【００５４】【００５５】 【００５６】考察 細胞数が最初の播き数よりも減少するのは、培地交換時
に細胞数が半減するためで、試料添加後はいずれの群も
増殖している。したがって、担子菌の培養液及び菌体抽
出液にはケラチノサイトの増殖能があると考えられる。 【００５７】＜試験例４＞ インピーダンスメーターに
よる保湿性試験 高周波インピーダンスメーター（ＩＢＳ社製：MODEL IB
-355）を用い、精製水をコントロールとして、製造例で
得られた生成物の保湿性を調べた。他の保湿剤と比較す
るために保湿性が高いヒアルロン酸ナトリウムを対照と
して同様に調べた。測定方法 ヒト前腕部内側に試料を塗布（２ｃｍ×２ｃｍ）し、３
０秒後すばやくガーゼで軽く拭き取り、１分毎に皮膚の
電導度（コンダクタンス）を経時的に５分まで測定し
た。 （測定条件：測定室内温度２０℃、湿度６０％、測定回
数ｎ＝１０） 測定結果 表４−１ないし４−３に示すごとく、担子菌培養液及び
菌体抽出液には、高い保湿性が認められた。 【００５８】 【００５９】【００６０】 【００６１】考察 表４−１ないし４−２の結果は、電導度が高いほど保湿
性が高いことを示しており、本発明の担子菌の培養液及
び菌体抽出液は、保湿性が優れているヒアルロン酸ナト
リウムと同程度の保湿性を示しており、保湿剤として優
れていることが確認された。 【００６２】 【処方例】以下に、本発明の皮膚外用剤の処方例を示
す。処方例中、適量とは、処方全体で１００重量％にな
る割合を意味する。 【００６３】 ＜処方例１＞ クリーム１ （重量％） Ａ モノステアリン酸ポリエチレングリコール（40E.0.） ２．０ 自己乳化型モノステアリン酸グリセリン ５．０ ステアリン酸 ５．０ ベヘニルアルコール １．０ 流動パラフィン １０．０ トリオクタン酸グリセリル １０．０ Ｂ グリセリン ５．０ エチルパラベン ０．１ 本発明の担子菌培養液（製造例１のもの） ３．０ 精製水 適 量 ────────────────────────────────── Ａに属する成分を加熱溶解する。別に、Ｂに属する成分
を加熱溶解する。ＡにＢを添加して攪拌、乳化後、冷却
してクリームを製造した。 【００６４】 【００６５】 【００６６】 【００６７】 ＜処方例２＞ 化粧水１ （重量％） Ａ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（60E.0.） ８．０ エタノール １５．０ 本発明の担子菌培養液（製造例８のもの） １２．０ エチルパラベン ０．１ クエン酸 ０．１ クエン酸ナトリウム ０．３ １，３−ブチレングリコール ４．０ エデト酸二ナトリウム ０．０１ 精製水 適 量 上記の各成分を混合、均一に攪拌、溶解し化粧水を製造
した。 【００６８】 ＜処方例３＞ 化粧水２ （重量％） Ａ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（60E.0.） ８．０ エタノール １５．０ 製造例９の担子菌をシロマイタケに代えたもの １２．０ エチルパラベン ０．１ クエン酸 ０．１ クエン酸ナトリウム ０．３ １，３−ブチレングリコール ４．０ エデト酸二ナトリウム ０．０１ 精製水 適 量 上記の各成分を混合、均一に攪拌、溶解し化粧水を製造
した。 【００６９】 ＜処方例４＞ クリームパック１ （重量％） Ａ ビーガム ５．０ スクワラン ２．０ プロピレングリコール ５．０ 製造例３の担子菌をマツオオジに代えたもの ０．５ ビタミンＢ₁₂ ０．０５ 精製水 適 量 Ｂ 酸化亜鉛 １０．０ Ｃ エタノール ５．０ Ａに属する成分を混合、攪拌して膨潤させ、Ｂを少しず
つ加える。これにＣを徐々に加えてペースト状になるま
で混練しクリームパックを製造した。 【００７０】 ＜処方例５＞ クリームパック２ （重量％） Ａ ビーガム ５．０ スクワラン ２．０ プロピレングリコール ５．０ 製造例１３の担子菌をチャカイガラタケに代えたもの ０．５ ビタミンＢ₁₂ ０．０５ 精製水 適 量 Ｂ 酸化亜鉛 １０．０ Ｃ エタノール ５．０ Ａに属する成分を混合、攪拌して膨潤させ、Ｂを少しず
つ加える。これにＣを徐々に加えてペースト状になるま
で混練しクリームパックを製造した。 【００７１】 【００７２】 【００７３】 ＜処方例６＞ エアゾール剤 （重量％） Ａ コウジ酸 ２．０ 製造例４の担子菌をフチドリツエタケに代えたもの ５．０ ニコチン酸ベンジル ０．０１ ビタミンＥアセテート ０．０５ セタノール １．２ プロピレングリコール ４．０ エタノール ８．０ 精製水 適 量 Ｂ ＬＰＧ ７．０ Ａに属する成分を均一に混合溶解してエアゾール容器に
入れ、常法によりＢを容器に充填してエアゾール剤を製
造した。上記の処方例１ないし６は、いずれも表１−１
ないし４−２に開示したとおりの本発明の目的を満足す
る効果を有する製剤であることが確認された。 【００７４】 【００７５】 【発明の効果】本発明によれば、シメジ科、モエギタケ
科、ハリタケ科、サルノコシカケ科、キコブタケ科、シ
ロキクラゲ科、ショウロ科、アミタケ科及びヒラタケ科
からなる群より選択される特定の担子菌の培養液又は菌
体の抽出液群のメラニン生成抑制成分の１種又は２種以
上を配合した皮膚外用剤が提供され、この皮膚外用剤は
皮膚に塗布した場合、全く副作用がなく、美白効果のほ
かに細胞賦活効果及び保湿効果等の機能を併せて発揮す
ることができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 43/00 １０１ 43/00 １０１ // Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｐ 1/02 Ａ (Ｃ１２Ｐ 1/02 Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645 (56)参考文献 特開 昭63−8336（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−90119（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−121905（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−129113（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−260006（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−258062（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−187949（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−258022（ＪＰ，Ａ) Ｃｏｌｅｔｔｏ，Ｍ．Ａ．Ｂ，Ａｎｔ ｉｂｉｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉ ｎｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ ＩＩ Ｉ．Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔ ｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｙｃｅｌｉａ ａ ｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｉｌｔｒａｒ ｅｓ，ＡＬＬＯＮＩＡ（ＴＵＲＩＮ）, 1987年，Ｖｏｌ．28，Ｎｏ．０，ｐｐ. 165−170 友田正司，生薬の生物活性多糖をめぐ って（１），現代東洋医学，1989年，Ｖ ｏｌ．10，Ｎｏ．１，ｐｐ．78−83 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 7/48 A61K 7/00 A61K 35/84 ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (1)

1. (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 ヌメリツバタケ、マツオオジ、フチドリ
   ツエタケ、ムラサキシメジおよびナラタケからなる群よ
   り選択されたシメジ科の担子菌、シロナメツムタケ、チ
   ャナメツムタケおよびヌメリスギタケからなる群より選
   択されたモエギタケ科の担子菌、シロマイタケ、チャカ
   イガラタケおよびヒトクチタケからなる群より選択され
   たサルノコシカケ科の担子菌、ならびにブナハリタケ、
   カバノアナタケ、ショウロ、ヌメリコウジタケおよびオ
   オヒラタケからなる群より選択される担子菌の培養液又
   は菌体の抽出液群のメラニン生成抑制成分の１種又は２
   種以上を配合することを特徴とする皮膚外用剤。