JP3413294B2 - ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 - Google Patents
２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌Info
- Publication number
- JP3413294B2 JP3413294B2 JP27055694A JP27055694A JP3413294B2 JP 3413294 B2 JP3413294 B2 JP 3413294B2 JP 27055694 A JP27055694 A JP 27055694A JP 27055694 A JP27055694 A JP 27055694A JP 3413294 B2 JP3413294 B2 JP 3413294B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dihydroxypyridine
- producing
- hydroxypyridine
- reaction
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、農薬などの原料として
用いられる２，５−ジヒドロキシピリジンを製造する方
法、および該２，５−ジヒドロキシピリジンを生産する
微生物に関する。
用いられる２，５−ジヒドロキシピリジンを製造する方
法、および該２，５−ジヒドロキシピリジンを生産する
微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】従
来、２，５−ジヒドロキシピリジンを製造するには、２
−ヒドロキシピリジンまたは３−ヒドロキシピリジンを
ペルオキソ二硫酸および硫酸の存在下において反応を行
い、２，５−ジヒドロキシピリジンを得る化学合成方法
が知られている。
来、２，５−ジヒドロキシピリジンを製造するには、２
−ヒドロキシピリジンまたは３−ヒドロキシピリジンを
ペルオキソ二硫酸および硫酸の存在下において反応を行
い、２，５−ジヒドロキシピリジンを得る化学合成方法
が知られている。
【０００３】しかし、位置特異的に水酸基を導入するこ
とは、このような化学合成法では困難であり、２，５−
ジヒドロキシピリジンの収率は１１〜３４％と低く
〔Ｅ．Ｊ．Ｂｅｈｒｍａｎ ａｎｄ Ｂ．Ｍ．Ｐｉｔ
ｔ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ
ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，ｖｏｌ．８０，
ｐ．３７１７〜３７１８，１９５８，参照〕、工業的に
実用的な製造方法は確立されていない。
とは、このような化学合成法では困難であり、２，５−
ジヒドロキシピリジンの収率は１１〜３４％と低く
〔Ｅ．Ｊ．Ｂｅｈｒｍａｎ ａｎｄ Ｂ．Ｍ．Ｐｉｔ
ｔ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎ
ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，ｖｏｌ．８０，
ｐ．３７１７〜３７１８，１９５８，参照〕、工業的に
実用的な製造方法は確立されていない。
【０００４】ジヒドロキシピリジン、特に２，５−ジヒ
ドロキシピリジンは、農薬原料などとして有用な物質で
あり、その工業的な製造方法が切望されている。
ドロキシピリジンは、農薬原料などとして有用な物質で
あり、その工業的な製造方法が切望されている。
【０００５】従来の化学合成法においては、上記に示し
た通り、ヒドロキシピリジンに位置選択的に水酸基を導
入する工程が最も困難となっている。
た通り、ヒドロキシピリジンに位置選択的に水酸基を導
入する工程が最も困難となっている。
【０００６】一方、２，５−ジヒドロキシピリジンは、
ピコリン酸、ニコチン酸、ヒドロキシピリジンの微生物
代謝における中間体として知られており、微生物の有す
る酵素反応においては、位置特異的に水酸化反応が起き
ることが知られている（Ｏ．Ｐ．ＳＨＵＫＬＡ ｅｔ．
ａｌ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ １０，
ｐ．１７６〜１７８，１９７３、Ｒ．Ｃ．ＧＵＰＴＡ
ｅｔ．ａｌ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ １
５，ｐ．４６２〜４６４，１９７８、Ｃ．ＨＯＵＧＨＴ
ＯＮ ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１３０．ｐ．
８７９−８９３，１９７２参照）。
ピコリン酸、ニコチン酸、ヒドロキシピリジンの微生物
代謝における中間体として知られており、微生物の有す
る酵素反応においては、位置特異的に水酸化反応が起き
ることが知られている（Ｏ．Ｐ．ＳＨＵＫＬＡ ｅｔ．
ａｌ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ １０，
ｐ．１７６〜１７８，１９７３、Ｒ．Ｃ．ＧＵＰＴＡ
ｅｔ．ａｌ．Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ １
５，ｐ．４６２〜４６４，１９７８、Ｃ．ＨＯＵＧＨＴ
ＯＮ ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１３０．ｐ．
８７９−８９３，１９７２参照）。
【０００７】しかし、２，５−ジヒドロキシピリジン
は、さらに微生物により代謝、分解されるため、蓄積量
は低く、工業的に利用されるような製造方法は確立され
ていない。
は、さらに微生物により代謝、分解されるため、蓄積量
は低く、工業的に利用されるような製造方法は確立され
ていない。
【０００８】また、微生物を用い、工業的に有効な２，
５−ジヒドロキシピリジンの製造方法として、本発明者
らは、先に、６−ヒドロキシニコチン酸を原料として、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する微生物および、その
産する２，５−ジヒドロキシピリジン合成酵素を用いた
２，５−ジヒドロキシピリジンの製造方法が提案されて
いる（特願平５−３０２３９２号、特願平６−５９９０
３号）。
５−ジヒドロキシピリジンの製造方法として、本発明者
らは、先に、６−ヒドロキシニコチン酸を原料として、
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する微生物および、その
産する２，５−ジヒドロキシピリジン合成酵素を用いた
２，５−ジヒドロキシピリジンの製造方法が提案されて
いる（特願平５−３０２３９２号、特願平６−５９９０
３号）。
【０００９】本発明は、これら先提案の微生物とは異な
る微生物を用い、高効率に２，５−ジヒドロキシピリジ
ンを製造する方法、およびこれまで知られていない２，
５−ジヒドロキシピリジン生産菌を提案することを目的
とする。
る微生物を用い、高効率に２，５−ジヒドロキシピリジ
ンを製造する方法、およびこれまで知られていない２，
５−ジヒドロキシピリジン生産菌を提案することを目的
とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために、先ず、高効率に２，５−ジヒドロ
キシピリジンを製造する能力を有する微生物の検索を行
ったところ、アゾトバクター属に属する微生物であっ
て、これまでその存在が知られていない微生物が、３−
ヒドロキシピリジンに生育可能で、２，５−ジヒドロキ
シピリジンを蓄積する能力を有するとの知見を得た。
的を達成するために、先ず、高効率に２，５−ジヒドロ
キシピリジンを製造する能力を有する微生物の検索を行
ったところ、アゾトバクター属に属する微生物であっ
て、これまでその存在が知られていない微生物が、３−
ヒドロキシピリジンに生育可能で、２，５−ジヒドロキ
シピリジンを蓄積する能力を有するとの知見を得た。
【００１１】次いで、本発明者らは、上記の微生物、あ
るいはその他のアゾトバクター属に属し、上記の特性を
有する微生物を使用すれば、３−ヒドロキシピリジンを
原料として、２，５−ジヒドロキシピリジンを高効率で
製造することができるとの知見を得た。
るいはその他のアゾトバクター属に属し、上記の特性を
有する微生物を使用すれば、３−ヒドロキシピリジンを
原料として、２，５−ジヒドロキシピリジンを高効率で
製造することができるとの知見を得た。
【００１２】本発明は、上記の知見に基づいてなされた
ものであり、アゾトバクター属に属する微生物、および
３−ヒドロキシピリジンを用いることを特徴とする２，
５−ジヒドロキシピリジンの製造方法を要旨とする。こ
の製造方法において、上記の微生物は、工業技術院生命
工学工業技術研究所にＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．
ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４５５５）として寄託さ
れているものが好ましい。
ものであり、アゾトバクター属に属する微生物、および
３−ヒドロキシピリジンを用いることを特徴とする２，
５−ジヒドロキシピリジンの製造方法を要旨とする。こ
の製造方法において、上記の微生物は、工業技術院生命
工学工業技術研究所にＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．
ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４５５５）として寄託さ
れているものが好ましい。
【００１３】また、本発明は、３−ヒドロキシピリジン
に生育可能で、２，５−ジヒドロキシピリジン生産活性
を有し、工業技術院生命工学工業技術研究所にＡｚｏｔ
ｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１
４５５５）として寄託されている２，５−ジヒドロキシ
ピリジン生産菌をも要旨とする。
に生育可能で、２，５−ジヒドロキシピリジン生産活性
を有し、工業技術院生命工学工業技術研究所にＡｚｏｔ
ｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１
４５５５）として寄託されている２，５−ジヒドロキシ
ピリジン生産菌をも要旨とする。
【００１４】以下、本発明菌および２，５−ジヒドロキ
シピリジンの製造方法の詳細を説明する。本発明菌は、
３−ヒドロキシピリジンの６位に水酸基を導入して２，
５−ジヒドロキシピリジンを蓄積するアゾトバクター属
の微生物であり、その一例としては工業技術院生命工学
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１４５５５号として寄
託されているＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３
０株を挙げることができる。
シピリジンの製造方法の詳細を説明する。本発明菌は、
３−ヒドロキシピリジンの６位に水酸基を導入して２，
５−ジヒドロキシピリジンを蓄積するアゾトバクター属
の微生物であり、その一例としては工業技術院生命工学
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１４５５５号として寄
託されているＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３
０株を挙げることができる。
【００１５】本発明菌は、３−ヒドロキシピリジンに生
育する際、２，５−ジヒドロキシピリジンを蓄積する微
生物として、本発明者らにより土壌から分離されたもの
である。
育する際、２，５−ジヒドロキシピリジンを蓄積する微
生物として、本発明者らにより土壌から分離されたもの
である。
【００１６】このような３−ヒドロキシピリジンに生育
可能で、２，５−ジヒドロキシピリジン生産活性を有す
る微生物の取得は、集積培養法などの一般的なスクリー
ニング手法により行うことができる。具体的には、一般
的な微生物の生育に必要な栄養源を含む培地に３−ヒド
ロキシピリジンを添加した培地で、土壌や雨水などの微
生物源を培養し、生育した微生物が２，５−ジヒドロキ
シピリジンを生産する活性を有するかどうかを判定する
ことにより行うことができる。また、培養時に３−ヒド
ロキシピリジンを予め添加しておき、培養に伴うその減
少あるいは２，５−ジヒドロキシピリジンの生成量を測
定することによっても行うことができる。
可能で、２，５−ジヒドロキシピリジン生産活性を有す
る微生物の取得は、集積培養法などの一般的なスクリー
ニング手法により行うことができる。具体的には、一般
的な微生物の生育に必要な栄養源を含む培地に３−ヒド
ロキシピリジンを添加した培地で、土壌や雨水などの微
生物源を培養し、生育した微生物が２，５−ジヒドロキ
シピリジンを生産する活性を有するかどうかを判定する
ことにより行うことができる。また、培養時に３−ヒド
ロキシピリジンを予め添加しておき、培養に伴うその減
少あるいは２，５−ジヒドロキシピリジンの生成量を測
定することによっても行うことができる。
【００１７】このスクーリニング方法の一例を以下に説
明する。細菌の増殖に必要な培地成分と３−ヒドロキシ
ピリジンを添加した培地を試験管に分注し、滅菌後、採
取した土壌や雨水などの微生物源を添加し、振とうまた
は静置培養する。次に、この培養液を適当に希釈して寒
天培地などに撒き、生育した菌のコロニーを得る。得ら
れたコロニーについて、再度、上記と同様の培地を用い
て培養を行い、その培養液について、例えば高速液体ク
ロマトグラフィ（以下、ＨＰＬＣ）で、３−ヒドロキシ
ピリジンの残存濃度、２，５−ジヒドロキシピリジンの
蓄積量を分析し、３−ヒドロキシピリジンを２，５−ジ
ヒドロキシピリジンに変換する能力を有する微生物を選
抜する。
明する。細菌の増殖に必要な培地成分と３−ヒドロキシ
ピリジンを添加した培地を試験管に分注し、滅菌後、採
取した土壌や雨水などの微生物源を添加し、振とうまた
は静置培養する。次に、この培養液を適当に希釈して寒
天培地などに撒き、生育した菌のコロニーを得る。得ら
れたコロニーについて、再度、上記と同様の培地を用い
て培養を行い、その培養液について、例えば高速液体ク
ロマトグラフィ（以下、ＨＰＬＣ）で、３−ヒドロキシ
ピリジンの残存濃度、２，５−ジヒドロキシピリジンの
蓄積量を分析し、３−ヒドロキシピリジンを２，５−ジ
ヒドロキシピリジンに変換する能力を有する微生物を選
抜する。
【００１８】なお、３−ヒドロキシピリジン、２，５−
ジヒドロキシピリジン共に速やかに代謝するような強い
活性を持つ菌の場合であって、しかも上述の分析方法で
は２，５−ジヒドロキシピリジンの蓄積量を正確に測定
できない場合には、培養後の菌体を用いて３−ヒドロキ
シピリジンと反応させ、２，５−ジヒドロキシピリジン
生産活性を測定することにより、２，５−ジヒドロキシ
ピリジン生産菌を選抜する。
ジヒドロキシピリジン共に速やかに代謝するような強い
活性を持つ菌の場合であって、しかも上述の分析方法で
は２，５−ジヒドロキシピリジンの蓄積量を正確に測定
できない場合には、培養後の菌体を用いて３−ヒドロキ
シピリジンと反応させ、２，５−ジヒドロキシピリジン
生産活性を測定することにより、２，５−ジヒドロキシ
ピリジン生産菌を選抜する。
【００１９】細菌の増殖に必要な培地成分としては、一
般的な培地成分を利用することができる。具体的には、
炭素源として、グルコース，シュークロースなどの糖
類、酢酸，コハク酸などの有機酸類、エタノール，グリ
セロールなどのアルコール類などから１種類あるいは２
種類以上を混合して用いることができる。窒素源とし
て、硝酸ナトリウム，硫酸ナトリウム，硫酸アンモニウ
ムなどの無機塩類、酵母エキス，ペプトン，肉エキス，
尿素，グルタミン酸などの有機化合物を添加することが
できる。これら炭素源、窒素源の他に、必要に応じて、
無機塩類、金属、ビタミンなどを添加することもでき
る。
般的な培地成分を利用することができる。具体的には、
炭素源として、グルコース，シュークロースなどの糖
類、酢酸，コハク酸などの有機酸類、エタノール，グリ
セロールなどのアルコール類などから１種類あるいは２
種類以上を混合して用いることができる。窒素源とし
て、硝酸ナトリウム，硫酸ナトリウム，硫酸アンモニウ
ムなどの無機塩類、酵母エキス，ペプトン，肉エキス，
尿素，グルタミン酸などの有機化合物を添加することが
できる。これら炭素源、窒素源の他に、必要に応じて、
無機塩類、金属、ビタミンなどを添加することもでき
る。
【００２０】３−ヒドロキシピリジンは、一般に、微生
物に対し強い毒性を示すことから、その添加濃度は、あ
まり高くすることができず、培地に対し２０〜３０ｍＭ
程度の濃度となるようにすることが適している。
物に対し強い毒性を示すことから、その添加濃度は、あ
まり高くすることができず、培地に対し２０〜３０ｍＭ
程度の濃度となるようにすることが適している。
【００２１】培養条件としては、培地のｐＨは約３〜
８、好ましくは約５〜７であり、培養温度は１５〜４０
℃、好ましくは２０〜３７℃である。また、基質が十分
に供給されるように、適宜攪拌、振とうを行うことが望
ましい。
８、好ましくは約５〜７であり、培養温度は１５〜４０
℃、好ましくは２０〜３７℃である。また、基質が十分
に供給されるように、適宜攪拌、振とうを行うことが望
ましい。
【００２２】上記のスクリーニング操作によって土壌よ
り得られた本発明菌（ＨＰ３０株）は、以下のような菌
学的特性を有する。
り得られた本発明菌（ＨＰ３０株）は、以下のような菌
学的特性を有する。
【００２３】（ａ）形態
１）細胞の形および大きさ
悍菌、３．０〜３．５×１．５〜２．０μｍ
２）細胞の多形性 なし
３）運動性 なし
４）胞子の有無 なし
５）グラム染色性 陰性
６）抗酸性 なし
【００２４】（ｂ）各培地における生育状態
１）肉汁寒天平板培養
良好な生育、オレンジ色のコロニー、（形）円形、（隆
起）半レンズ状、（周縁）全縁、（光沢）光沢あり ２）肉汁寒天斜面培養 良好な生育、（表面）平滑、（色）オレンジ色、（光
沢）光沢あり ３）肉汁液体培養 中程度の生育、菌膜なし ４）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチンを液化しない ５）リトマス・ミルク ペプトン化、沈澱、凝固は認められない
起）半レンズ状、（周縁）全縁、（光沢）光沢あり ２）肉汁寒天斜面培養 良好な生育、（表面）平滑、（色）オレンジ色、（光
沢）光沢あり ３）肉汁液体培養 中程度の生育、菌膜なし ４）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチンを液化しない ５）リトマス・ミルク ペプトン化、沈澱、凝固は認められない
【００２５】（ｃ）生理学的性質
１）硝酸塩の還元 陰性
２）脱窒反応 陰性
３）ＭＲテスト 陰性
４）ＶＰテスト 陰性
５）インドールの生成 生成しない
６）硫化水素の生成 生成しない
７）デンプンの加水分解 陰性
８）クエン酸の利用
Ｋｏｓｅｒの培地 利用する
Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地 利用する
９）無機窒素源の利用
硝酸塩の利用 利用する
アンモニウム塩の利用 利用する
１０）色素の生成 −
１１）ウレアーゼ −
１２）オキシダーゼ ＋
１３）カタラーゼ ＋
１４）生育の範囲
ｐＨ ６．０〜９．０
温度 １８〜３８℃
１５）酸素に対する態度 好気性
１６）Ｏ−Ｆテスト 陰性
【００２６】
【００２７】
（ｄ）その他
窒素固定 陽性
【００２８】以上の菌学的性質をバージェイズ・マニュ
アル オブ システマティック バクテライオロジー
（ＢＥＲＧＥＹ’Ｓ ＭＡＮＵＡＬ ＯＦ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）などに照らし
合わせた結果から、本発明菌は、アゾトバクター（Ａｚ
ｏｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属する細菌であると認めら
れ、工業技術院生命工学工業技術研究所に、Ａｚｏｔｏ
ｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４
５５５）として寄託されている。
アル オブ システマティック バクテライオロジー
（ＢＥＲＧＥＹ’Ｓ ＭＡＮＵＡＬ ＯＦ Ｓｙｓｔｅ
ｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）などに照らし
合わせた結果から、本発明菌は、アゾトバクター（Ａｚ
ｏｔｏｂａｃｔｅｒ）属に属する細菌であると認めら
れ、工業技術院生命工学工業技術研究所に、Ａｚｏｔｏ
ｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４
５５５）として寄託されている。
【００２９】本発明菌は、３−ヒドロキシピリジンを
２，５−ジヒドロキシピリジンに変換し、位置特異的か
つ高効率に２，５−ジヒドロキシピリジンを生産する。
２，５−ジヒドロキシピリジンに変換し、位置特異的か
つ高効率に２，５−ジヒドロキシピリジンを生産する。
【００３０】上記のようにして得られた２，５−ジヒド
ロキシピリジン生産菌、あるいはこの他のＡｚｏｔｏｂ
ａｃｔｅｒ属に属し２，５−ジヒドロキシピリジンを生
産する微生物を用いて、２，５−ジヒドロキシピリジン
を製造する方法は、次のように行われる。
ロキシピリジン生産菌、あるいはこの他のＡｚｏｔｏｂ
ａｃｔｅｒ属に属し２，５−ジヒドロキシピリジンを生
産する微生物を用いて、２，５−ジヒドロキシピリジン
を製造する方法は、次のように行われる。
【００３１】２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌を、
上記のスクリーニングの際と同様の培養条件にて、１２
〜４８時間、好ましくは１７〜２０時間培養し、遠心分
離器などにより菌体を得る。次に、リン酸緩衝液などを
用いて再懸濁して反応液を調製する。この反応液中の菌
体濃度は、乾燥菌体重量で、１ミリリットル（以下、
「ｍＬ」と記し、リットルを「Ｌ」と記す）当たり４〜
５０ｍｇ、好ましくは１０〜３０ｍｇとすることが望ま
しい。
上記のスクリーニングの際と同様の培養条件にて、１２
〜４８時間、好ましくは１７〜２０時間培養し、遠心分
離器などにより菌体を得る。次に、リン酸緩衝液などを
用いて再懸濁して反応液を調製する。この反応液中の菌
体濃度は、乾燥菌体重量で、１ミリリットル（以下、
「ｍＬ」と記し、リットルを「Ｌ」と記す）当たり４〜
５０ｍｇ、好ましくは１０〜３０ｍｇとすることが望ま
しい。
【００３２】この反応液に、３−ヒドロキシピリジンを
１０〜１００ｍＭ、好ましくは２０〜３０ｍＭの濃度と
なるように添加し、温度１０〜４０℃、好ましくは１５
〜３５℃にて、反応を１０〜１２０分間行う。その際、
菌体と原料が良好に混合されるように、適切に攪拌する
ことが望ましい。また、反応に必要となる酸素を効率よ
く供給するために、空気、あるいは酸素ガスを吹き込む
こともできる。
１０〜１００ｍＭ、好ましくは２０〜３０ｍＭの濃度と
なるように添加し、温度１０〜４０℃、好ましくは１５
〜３５℃にて、反応を１０〜１２０分間行う。その際、
菌体と原料が良好に混合されるように、適切に攪拌する
ことが望ましい。また、反応に必要となる酸素を効率よ
く供給するために、空気、あるいは酸素ガスを吹き込む
こともできる。
【００３３】さらに、反応液調製のための培養中、また
は反応中、原料である３−ヒドロキシピリジンの残存濃
度を測定し、適宜原料を追加することにより、さらに効
率よく反応を行うこともできる。このとき、３−ヒドロ
キシピリジンは、前述のように、微生物に対し強い毒性
を示すため、その添加濃度は、１回の添加につき上記し
た範囲となるようにすることが適している。
は反応中、原料である３−ヒドロキシピリジンの残存濃
度を測定し、適宜原料を追加することにより、さらに効
率よく反応を行うこともできる。このとき、３−ヒドロ
キシピリジンは、前述のように、微生物に対し強い毒性
を示すため、その添加濃度は、１回の添加につき上記し
た範囲となるようにすることが適している。
【００３４】以下に、２，５−ジヒドロキシピリジンの
製造実施例を示すが、本発明はこれらの実施例のみに限
定されるものではない。
製造実施例を示すが、本発明はこれらの実施例のみに限
定されるものではない。
【００３５】
実施例１
表１に示す培地５０ｍＬにＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓ
ｐ．ＨＰ−３０株を接種し、３０℃にて１７時間、好気
的条件下で培養した。培養後、遠心分離により菌体を集
菌し、これをｐＨ７．０、０．１Ｍのリン酸緩衝液に懸
濁して洗浄後、同緩衝液に再懸濁して菌体濃縮液を得
た。
ｐ．ＨＰ−３０株を接種し、３０℃にて１７時間、好気
的条件下で培養した。培養後、遠心分離により菌体を集
菌し、これをｐＨ７．０、０．１Ｍのリン酸緩衝液に懸
濁して洗浄後、同緩衝液に再懸濁して菌体濃縮液を得
た。
【００３６】この菌体濃縮液０．３５ｍＬと、上記の緩
衝液１．４５ｍＬと、２００ｍＭの３−ヒドロキシピリ
ジン水溶液０．２ｍＬとを混合して全容を２ｍＬとし
（３−ヒドロキシピリジン濃度は２０ｍＭ）、３０℃に
て２０分間の反応を行った。
衝液１．４５ｍＬと、２００ｍＭの３−ヒドロキシピリ
ジン水溶液０．２ｍＬとを混合して全容を２ｍＬとし
（３−ヒドロキシピリジン濃度は２０ｍＭ）、３０℃に
て２０分間の反応を行った。
【００３７】反応終了後、ＨＰＬＣ分析により２，５−
ジヒドロキシピリジンの生成量を分析したところ、３．
２ｍＭの２，５−ジヒドロキシピリジンが蓄積された。
ジヒドロキシピリジンの生成量を分析したところ、３．
２ｍＭの２，５−ジヒドロキシピリジンが蓄積された。
【００３８】
【表１】
【００３９】
【表２】
【００４０】実施例２
表３に示す培地１．８Ｌにて、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ．ＨＰ−３０株を、３０℃にて１７時間、好気的
条件下で培養した。培養後、遠心分離により菌体を集菌
し、これをｐＨ７．０、０．１Ｍのリン酸緩衝液に懸濁
して洗浄後、同緩衝液に再懸濁して菌体濃縮液を得た。
ｓｐ．ＨＰ−３０株を、３０℃にて１７時間、好気的
条件下で培養した。培養後、遠心分離により菌体を集菌
し、これをｐＨ７．０、０．１Ｍのリン酸緩衝液に懸濁
して洗浄後、同緩衝液に再懸濁して菌体濃縮液を得た。
【００４１】この菌体濃縮液１５ｍＬと、上記の緩衝液
５０ｍＬと、３００ｍＭの３−ヒドロキシピリジン水溶
液５ｍＬとを混合して全容を７０ｍＬとし（３−ヒドロ
キシピリジン濃度は２１ｍＭ）、３０℃にて６０分間の
反応を行った。
５０ｍＬと、３００ｍＭの３−ヒドロキシピリジン水溶
液５ｍＬとを混合して全容を７０ｍＬとし（３−ヒドロ
キシピリジン濃度は２１ｍＭ）、３０℃にて６０分間の
反応を行った。
【００４２】反応終了後、ＨＰＬＣ分析により２，５−
ジヒドロキシピリジンの生成量を分析したところ、１
５．３ｍＭの２，５−ジヒドロキシピリジンが蓄積され
た。
ジヒドロキシピリジンの生成量を分析したところ、１
５．３ｍＭの２，５−ジヒドロキシピリジンが蓄積され
た。
【００４３】
【表３】
【００４４】実施例３
表３に示す培地５０ｍＬにて２時間培養する以外は、実
施例１と同様に反応を行い、反応中、３−ヒドロキシピ
リジン残存量を測定し、１０ｍＭ以下となった時点で３
０ｍＭとなるように３−ヒドロキシピリジンを添加しな
がら反応を続行した。この結果、２，５−ジヒドロキシ
ピリジンは、２７ｍＭ蓄積されていた。
施例１と同様に反応を行い、反応中、３−ヒドロキシピ
リジン残存量を測定し、１０ｍＭ以下となった時点で３
０ｍＭとなるように３−ヒドロキシピリジンを添加しな
がら反応を続行した。この結果、２，５−ジヒドロキシ
ピリジンは、２７ｍＭ蓄積されていた。
【００４５】
【発明の効果】本発明によれば、微生物反応が示す酵素
反応の基質特異性を利用することにより、位置特異的に
水酸基の導入が可能となり、高い収率で２，５−ジヒド
ロキシピリジンを製造できるだけでなく、常温常圧下で
反応を行うことが可能になり、危険性がなく工業的に有
利である。
反応の基質特異性を利用することにより、位置特異的に
水酸基の導入が可能となり、高い収率で２，５−ジヒド
ロキシピリジンを製造できるだけでなく、常温常圧下で
反応を行うことが可能になり、危険性がなく工業的に有
利である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ｃ１２Ｒ 1:065）
(56)参考文献 特開 平４−304893（ＪＰ，Ａ)
特開 昭60−196193（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12P 17/00 - 17/18
C12N 1/20
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＰｕｂＭｅｄ
Claims (3)
- 【請求項１】 アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅ
ｒ）属に属する微生物、および３−ヒドロキシピリジン
を用いることを特徴とする２，５−ジヒドロキシピリジ
ンの製造法。 - 【請求項２】 微生物が工業技術院生命工学工業技術研
究所にＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．ＨＰ−３０（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１４５５５）として寄託されていることを
特徴とする請求項１記載の２，５−ジヒドロキシピリジ
ンの製造法。 - 【請求項３】 ３−ヒドロキシピリジンに生育可能で、
２，５−ジヒドロキシピリジン生産活性を有し、工業技
術院生命工学工業技術研究所にＡｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ．ＨＰ−３０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４５５５）とし
て寄託されている２，５−ジヒドロキシピリジン生産
菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27055694A JP3413294B2 (ja) | 1994-10-07 | 1994-10-07 | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27055694A JP3413294B2 (ja) | 1994-10-07 | 1994-10-07 | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08107791A JPH08107791A (ja) | 1996-04-30 |
| JP3413294B2 true JP3413294B2 (ja) | 2003-06-03 |
Family
ID=17487823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27055694A Expired - Fee Related JP3413294B2 (ja) | 1994-10-07 | 1994-10-07 | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3413294B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60037819T2 (de) * | 1999-08-27 | 2009-01-08 | Invitrogen Corp., Carlsbad | Metallbindende verbindungen und deren verwendung in zusammensetzungen für zellkulturmedien |
-
1994
- 1994-10-07 JP JP27055694A patent/JP3413294B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08107791A (ja) | 1996-04-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0217159B2 (ja) | ||
| JP3014171B2 (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造法 | |
| JPS6255097A (ja) | Ｌ−アミノ酸の製造法 | |
| JPH069504B2 (ja) | フェニルアラニン―デヒドロゲナーゼを含有するロドコッカス・スペック及びその取得法 | |
| JP3413294B2 (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
| CA1302931C (en) | Preparation of pyruvic acid | |
| EP0206595B1 (en) | Thermally stable tryptophanase process for producing the same, and thermally stable tryptophanase-producing microorganism | |
| Behrendt et al. | The Production of l‐serine with a methylotrophic microorganism using the l‐serine pathway and coupling with an l‐tryptophan‐producing process | |
| US5496715A (en) | Process for preparing indigo | |
| JP2692457B2 (ja) | 発酵法によるピルビン酸の製造法 | |
| JP3778496B2 (ja) | 耐熱性ｌ−チロシンフェノールリアーゼとｌ−トリプトファンインドールリアーゼを生産する新規な絶対共生高温菌シンビオバクテリウムトエビｓｃ−１及びその関連微生物の探索方法。 | |
| JP2970932B2 (ja) | 新規耐熱性β―ガラクトシル基転移酵素、その製造法及びその用途 | |
| JPH01148192A (ja) | カルニチンの製造法 | |
| JP2991395B2 (ja) | ５−アミノレブリン酸生産微生物および５−アミノレブリン酸の製造方法 | |
| JPH0753104B2 (ja) | 細菌の培養法 | |
| JPH08107790A (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造方法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
| JPS6058068A (ja) | 新規なアミンデヒドロゲナーゼｍ | |
| JP3433300B2 (ja) | 酵母細胞壁溶解酵素高生産菌及びこれを用いる酵母細胞壁の溶解方法 | |
| JP3011472B2 (ja) | 酵素法によるインジゴの製造法 | |
| JPS6324895A (ja) | Ｌ―アミノ酸の製造法 | |
| JPH06245782A (ja) | トランス−４−ハイドロキシ−ｌ−プロリンの製造法 | |
| JPH0353890A (ja) | ４‐ハロ‐３‐ヒドロキシブチロニトリルの製造法 | |
| JPH01252281A (ja) | 新規エキソキシラナーゼ２、その製法、及び該酵素によるキシロース等の製法 | |
| JPH0515394A (ja) | 光学活性（ｓ）−３−フエニル−１，３−プロパンジオールの製造法 | |
| JPH07123990A (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造方法および２，５−ジヒドロキシピリジンの合成酵素 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |