JP3394982B2 - ガン療法用副作用防止剤 - Google Patents
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はガン療法用副作用防止剤
に関し、より詳細には肝実質細胞増殖因子(以下、ＨＧ
Ｆという）を有効成分として含有し、ガン治療における
副作用を軽減ないし防止することのできる薬剤に関す
る。
に関し、より詳細には肝実質細胞増殖因子(以下、ＨＧ
Ｆという）を有効成分として含有し、ガン治療における
副作用を軽減ないし防止することのできる薬剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】厚生省による人口動態統計によれば、現
在、わが国の死因の第一位は悪性新生物、すなわちガン
であり、これまでのところ死亡者数は毎年増加してい
る。我国のガン患者は推定８０万人であり、毎年３０万
人以上の新しい患者が発生していると言われている。新
規なガン治療法あるいは新規な制ガン剤の開発は医療・
医薬研究者の最大の関心事であり、また今日の医療にお
ける最大の課題である。ガンの治療法としては、従来か
ら制ガン剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生
物質、ホルモン類、生体反応修飾物質等）の投与、放射
線の照射及び外科的処置が単独又は組み合わされて実施
されている。
在、わが国の死因の第一位は悪性新生物、すなわちガン
であり、これまでのところ死亡者数は毎年増加してい
る。我国のガン患者は推定８０万人であり、毎年３０万
人以上の新しい患者が発生していると言われている。新
規なガン治療法あるいは新規な制ガン剤の開発は医療・
医薬研究者の最大の関心事であり、また今日の医療にお
ける最大の課題である。ガンの治療法としては、従来か
ら制ガン剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生
物質、ホルモン類、生体反応修飾物質等）の投与、放射
線の照射及び外科的処置が単独又は組み合わされて実施
されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来から行われている
ガン療法は、主としてガン病巣の除去、消滅を目的とす
るものであるが、生体のトータルな機能の改善の中で治
療を考える必要があり、副作用の一層の軽減を図ること
の重要性が認識され、かかる見地からのガン療法が検討
されている。即ち、従来の化学療法に用いられている制
ガン剤は、ガン細胞と正常細胞との質的な差異が少ない
ため、制ガン効果の強いものほど副作用が強く、副作用
のない制ガン剤は効果もないとさえいわれている。現今
の制ガン剤の毒性は不可避であるため、化学療法に際し
ては、この毒性を軽減しつつ、その有効性を最大限に利
用することが必要である。また、放射線療法において
は、本来、生体に悪影響を及ぼす放射線を利用するもの
であり、生体の受ける副作用も大きいので、副作用の軽
減を図ることは極めて重要である。このように、ガンの
化学療法及び放射線療法においては、ガン細胞のみなら
ず、正常細胞・組織も傷害を受け、例えば、骨髄抑制、
悪心嘔吐、心障害、肺線維症、肝障害、腎障害、脱毛、
皮膚症状等の副作用をもたらす。特に、増殖速度の高い
細胞・組織は大きな傷害を受け易い。かかる副作用のた
め、より強力な治療を行い難い問題があり、ガン治療の
ネックとなっている。このような問題から、正常細胞・
組織に対する毒性を軽減させるための研究がされてお
り、γ−グロブリン、チトクロームＣ、アデニン、ＳＨ
化合物、ビタミンＢ群等が副作用防止剤として用いられ
ることがあるが、その効果は不十分である。最近、造血
組織に対する毒性の緩和にコロニー刺激因子（ＣＳＦ）
が用いられ、制ガン剤療法に伴う白血球減少症を軽減で
きることが報告されており（Motoyosi, K. et al, Exp.
Hematol., 14: 1069-1075, 1986）、中胚葉由来の細胞
・組織の受ける傷害の緩和にＣＳＦが有効であることが
知られているが、外胚葉・内胚葉由来の細胞・組織に対
する副作用を軽減できる物質は知られておらず、かかる
物質が求められている。本発明は上記の問題を解決する
ためになされたもので、ガン治療において、正常細胞・
組織の受ける傷害を緩和し、副作用を軽減することがで
きるガン療法用副作用防止剤を提供することを目的とす
る。
ガン療法は、主としてガン病巣の除去、消滅を目的とす
るものであるが、生体のトータルな機能の改善の中で治
療を考える必要があり、副作用の一層の軽減を図ること
の重要性が認識され、かかる見地からのガン療法が検討
されている。即ち、従来の化学療法に用いられている制
ガン剤は、ガン細胞と正常細胞との質的な差異が少ない
ため、制ガン効果の強いものほど副作用が強く、副作用
のない制ガン剤は効果もないとさえいわれている。現今
の制ガン剤の毒性は不可避であるため、化学療法に際し
ては、この毒性を軽減しつつ、その有効性を最大限に利
用することが必要である。また、放射線療法において
は、本来、生体に悪影響を及ぼす放射線を利用するもの
であり、生体の受ける副作用も大きいので、副作用の軽
減を図ることは極めて重要である。このように、ガンの
化学療法及び放射線療法においては、ガン細胞のみなら
ず、正常細胞・組織も傷害を受け、例えば、骨髄抑制、
悪心嘔吐、心障害、肺線維症、肝障害、腎障害、脱毛、
皮膚症状等の副作用をもたらす。特に、増殖速度の高い
細胞・組織は大きな傷害を受け易い。かかる副作用のた
め、より強力な治療を行い難い問題があり、ガン治療の
ネックとなっている。このような問題から、正常細胞・
組織に対する毒性を軽減させるための研究がされてお
り、γ−グロブリン、チトクロームＣ、アデニン、ＳＨ
化合物、ビタミンＢ群等が副作用防止剤として用いられ
ることがあるが、その効果は不十分である。最近、造血
組織に対する毒性の緩和にコロニー刺激因子（ＣＳＦ）
が用いられ、制ガン剤療法に伴う白血球減少症を軽減で
きることが報告されており（Motoyosi, K. et al, Exp.
Hematol., 14: 1069-1075, 1986）、中胚葉由来の細胞
・組織の受ける傷害の緩和にＣＳＦが有効であることが
知られているが、外胚葉・内胚葉由来の細胞・組織に対
する副作用を軽減できる物質は知られておらず、かかる
物質が求められている。本発明は上記の問題を解決する
ためになされたもので、ガン治療において、正常細胞・
組織の受ける傷害を緩和し、副作用を軽減することがで
きるガン療法用副作用防止剤を提供することを目的とす
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、年余にわた
り肝実質細胞の増殖因子を研究し、その結果ＨＧＦを単
離精製することに成功した。本発明者は、ＨＧＦが増殖
因子として肝細胞のみならず広く上皮系細胞に働くこと
を明らかにし、いくつかの発明を成就した。特願平２−
１５８８４１号においては、ＨＧＦが腎の近位尿細管細
胞の増殖を促進することより、腎疾患治療剤としての応
用開発を、また特願平２−４１９１５８号においては、
ＨＧＦがメラノサイト、ケラチノサイトなど正常上皮細
胞の増殖を促進することより、上皮細胞促進剤として創
傷治療や皮膚潰瘍治療、毛根細胞の増殖剤などへの応用
開発を成就し、その詳細を開示した。特に、ＨＧＦはＥ
ＧＦ等他の多くの増殖因子に見られるガン化作用やガン
細胞増殖活性を有さないことから、より実用に適してい
る。さらに本発明者らは、特願平３−１４０８１２号に
おいてＨＧＦのヒト肝ガン由来ＨｅｐＧ２細胞株、リン
パ芽球ガン由来ＩＭ９細胞株などに対するガン細胞増殖
抑制活性を利用し、制ガン剤としても利用可能であるこ
とを開示した。本発明者は、ＨＧＦの活性を更に研究し
た結果、ガン治療において正常細胞・組織が受ける傷害
をＨＧＦが緩和し、副作用を軽減できることを見出して
本発明を完成した。即ち、本発明は、ＨＧＦを有効成分
とするガン療法用副作用防止剤に関する。
り肝実質細胞の増殖因子を研究し、その結果ＨＧＦを単
離精製することに成功した。本発明者は、ＨＧＦが増殖
因子として肝細胞のみならず広く上皮系細胞に働くこと
を明らかにし、いくつかの発明を成就した。特願平２−
１５８８４１号においては、ＨＧＦが腎の近位尿細管細
胞の増殖を促進することより、腎疾患治療剤としての応
用開発を、また特願平２−４１９１５８号においては、
ＨＧＦがメラノサイト、ケラチノサイトなど正常上皮細
胞の増殖を促進することより、上皮細胞促進剤として創
傷治療や皮膚潰瘍治療、毛根細胞の増殖剤などへの応用
開発を成就し、その詳細を開示した。特に、ＨＧＦはＥ
ＧＦ等他の多くの増殖因子に見られるガン化作用やガン
細胞増殖活性を有さないことから、より実用に適してい
る。さらに本発明者らは、特願平３−１４０８１２号に
おいてＨＧＦのヒト肝ガン由来ＨｅｐＧ２細胞株、リン
パ芽球ガン由来ＩＭ９細胞株などに対するガン細胞増殖
抑制活性を利用し、制ガン剤としても利用可能であるこ
とを開示した。本発明者は、ＨＧＦの活性を更に研究し
た結果、ガン治療において正常細胞・組織が受ける傷害
をＨＧＦが緩和し、副作用を軽減できることを見出して
本発明を完成した。即ち、本発明は、ＨＧＦを有効成分
とするガン療法用副作用防止剤に関する。
【０００５】本発明のガン療法用副作用防止剤におい
て、有効成分であるＨＧＦは、本発明者らが再生肝ラッ
ト血清中から成熟肝実質細胞をin vitroで増殖させる因
子として見出した蛋白質である(Biochem Biophys Res C
ommun, 122, 1450, 1984)。本発明者らはさらに、ＨＧ
Ｆをラット血小板より単離することに成功し(FEBS Lett
er, 22, 311, 1987)、そのアミノ酸配列を一部決定し
た。さらに、本発明者らは解明されたＨＧＦアミノ酸配
列をもとにヒト及びラット由来のＨＧＦｃＤＮＡクロー
ニングを行い、そのｃＤＮＡを動物組織に組換えてＨＧ
Ｆを蛋白質として得ることに成功した（ヒトＨＧＦ：Na
ture, 342, 440, 1989; ラットＨＧＦ：Proc. Natl. A
cad. Sci, 87, 3200、 1990)。
て、有効成分であるＨＧＦは、本発明者らが再生肝ラッ
ト血清中から成熟肝実質細胞をin vitroで増殖させる因
子として見出した蛋白質である(Biochem Biophys Res C
ommun, 122, 1450, 1984)。本発明者らはさらに、ＨＧ
Ｆをラット血小板より単離することに成功し(FEBS Lett
er, 22, 311, 1987)、そのアミノ酸配列を一部決定し
た。さらに、本発明者らは解明されたＨＧＦアミノ酸配
列をもとにヒト及びラット由来のＨＧＦｃＤＮＡクロー
ニングを行い、そのｃＤＮＡを動物組織に組換えてＨＧ
Ｆを蛋白質として得ることに成功した（ヒトＨＧＦ：Na
ture, 342, 440, 1989; ラットＨＧＦ：Proc. Natl. A
cad. Sci, 87, 3200、 1990)。
【０００６】上記のＨＧＦは、ＳＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動より分子量８２〜８５ｋＤである。ラ
ットＨＧＦ分子は４６３アミノ酸残基からなるα鎖と２
３３アミノ酸残基からなるβ鎖が１個のジスルフィド結
合により架橋したヘテロダイマー構造をもち、α、β両
鎖とも２個のグルコサミン型糖鎖結合部位が存在する。
ヒトＨＧＦもまたほぼ同じ生理活性を有し、４６３アミ
ノ酸残基からなるα鎖と２３４アミノ酸残基からなるβ
鎖とからなる。α鎖中には線溶酵素プラスミンと同様の
クリングル構造が４個存在し、β鎖のアミノ酸配列にお
いてもセリンプロテアーゼ活性を有するプラスミンのＢ
鎖と約３７％のホモロジーを有する。ヒトＨＧＦ前駆体
のアミノ酸配列及びこれをコードする遺伝子の塩基配列
をそれぞれ図１〜図３及び図４〜図５に示した。ヒトＨ
ＧＦは図１〜図３に示される７２８個のアミノ酸からな
る前駆体として生合成され、その後４６３アミノ酸残基
（図１の配列の第３２位のGlnから図２の配列の第４９
４位のArgまで)からなるα鎖と、２３４アミノ酸残基
（図２の配列の第４９５位のValから図３の配列の第728
位のSerまで)からなるβ鎖にわかれる。ラットＨＧＦと
ヒトＨＧＦのアミノ酸配列のホモロジーはα鎖において
91.6%、β鎖において88.9%と非常に高い相同性をもち、
その活性は全く互換性がある。
ミドゲル電気泳動より分子量８２〜８５ｋＤである。ラ
ットＨＧＦ分子は４６３アミノ酸残基からなるα鎖と２
３３アミノ酸残基からなるβ鎖が１個のジスルフィド結
合により架橋したヘテロダイマー構造をもち、α、β両
鎖とも２個のグルコサミン型糖鎖結合部位が存在する。
ヒトＨＧＦもまたほぼ同じ生理活性を有し、４６３アミ
ノ酸残基からなるα鎖と２３４アミノ酸残基からなるβ
鎖とからなる。α鎖中には線溶酵素プラスミンと同様の
クリングル構造が４個存在し、β鎖のアミノ酸配列にお
いてもセリンプロテアーゼ活性を有するプラスミンのＢ
鎖と約３７％のホモロジーを有する。ヒトＨＧＦ前駆体
のアミノ酸配列及びこれをコードする遺伝子の塩基配列
をそれぞれ図１〜図３及び図４〜図５に示した。ヒトＨ
ＧＦは図１〜図３に示される７２８個のアミノ酸からな
る前駆体として生合成され、その後４６３アミノ酸残基
（図１の配列の第３２位のGlnから図２の配列の第４９
４位のArgまで)からなるα鎖と、２３４アミノ酸残基
（図２の配列の第４９５位のValから図３の配列の第728
位のSerまで)からなるβ鎖にわかれる。ラットＨＧＦと
ヒトＨＧＦのアミノ酸配列のホモロジーはα鎖において
91.6%、β鎖において88.9%と非常に高い相同性をもち、
その活性は全く互換性がある。
【０００７】上記のＨＧＦは種々の方法により得ること
ができる。例えば、ラット、ウシなどの哺乳動物の肝
臓、脾臓、肺臓、骨髄、脳、腎臓、胎盤等の臓器、血小
板、白血球等の血液細胞や血漿、血清などから抽出、精
製して得ることができる。また、ＨＧＦを産生する初代
培養細胞や株化細胞を培養し、培養物から分離精製して
ＨＧＦを得ることもできる。あるいは遺伝子工学的手法
によりＨＧＦをコードする遺伝子を適切なベクターに組
込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換し、この形
質転換体の培養物から目的とする組換えＨＧＦを得るこ
とができる(Nature, 342, 440, 1989)。上記の宿主細胞
は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いら
れている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草菌、酵
母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いることができ
る。
ができる。例えば、ラット、ウシなどの哺乳動物の肝
臓、脾臓、肺臓、骨髄、脳、腎臓、胎盤等の臓器、血小
板、白血球等の血液細胞や血漿、血清などから抽出、精
製して得ることができる。また、ＨＧＦを産生する初代
培養細胞や株化細胞を培養し、培養物から分離精製して
ＨＧＦを得ることもできる。あるいは遺伝子工学的手法
によりＨＧＦをコードする遺伝子を適切なベクターに組
込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換し、この形
質転換体の培養物から目的とする組換えＨＧＦを得るこ
とができる(Nature, 342, 440, 1989)。上記の宿主細胞
は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いら
れている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草菌、酵
母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いることができ
る。
【０００８】より具体的には、ＨＧＦを生体組織から抽
出精製する方法としては、例えば参考例１に示すように
ラットに四塩化炭素を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラ
ットの肝臓を摘出して粉砕し、Ｓ−セファロース、ヘパ
リンセファロースなどのゲルカラムクロマトグラフィー
にて精製することができる。あるいは参考例２に示すよ
うに遺伝子組換え法を用い、図４〜図５に示したヒトＨ
ＧＦのアミノ酸配列をコードする遺伝子を、ウシパピロ
ーマウィルスＮＤＡなどのベクターに組み込んだ発現ベ
クターによって動物細胞、例えばチャイニーズハムスタ
ー卵巣（ＣＨＯ）細胞、マウスＣ１２７細胞や、サルＣ
ＯＳ細胞などを形質転換し、その培養上清より得ること
ができる。
出精製する方法としては、例えば参考例１に示すように
ラットに四塩化炭素を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラ
ットの肝臓を摘出して粉砕し、Ｓ−セファロース、ヘパ
リンセファロースなどのゲルカラムクロマトグラフィー
にて精製することができる。あるいは参考例２に示すよ
うに遺伝子組換え法を用い、図４〜図５に示したヒトＨ
ＧＦのアミノ酸配列をコードする遺伝子を、ウシパピロ
ーマウィルスＮＤＡなどのベクターに組み込んだ発現ベ
クターによって動物細胞、例えばチャイニーズハムスタ
ー卵巣（ＣＨＯ）細胞、マウスＣ１２７細胞や、サルＣ
ＯＳ細胞などを形質転換し、その培養上清より得ること
ができる。
【０００９】こうして得られたＨＧＦは、そのアミノ酸
配列の一部が欠失又は他のアミノ酸により置換されてい
たり、他のアミノ酸配列が一部挿入されていたり、Ｎ末
端及び／又はＣ末端に１又は２以上のアミノ酸が結合し
ていたり、あるいは糖類が同様に欠失又は置換されてい
てもよい。かかるＨＧＦ同効物としては、例えば、特開
平３−１３００９１号公報、国際公開ＷＯ９０／１０６
５１号公報などに記載の物質が挙げられ、これらも本発
明に適用でき、本発明の範囲に含まれる。本発明のガン
療法用副作用防止剤の有効成分であるＨＧＦは、ヒトを
含むウシ、ウマ、ラット、ヒツジなどいずれの哺乳動物
に由来するものであってもよく、またいずれの哺乳動物
のガン治療に対しても有効な副作用防止作用を示す。す
なわち、本発明の薬剤はヒトの医薬品のみならず動物用
医薬品としても用いることができる。
配列の一部が欠失又は他のアミノ酸により置換されてい
たり、他のアミノ酸配列が一部挿入されていたり、Ｎ末
端及び／又はＣ末端に１又は２以上のアミノ酸が結合し
ていたり、あるいは糖類が同様に欠失又は置換されてい
てもよい。かかるＨＧＦ同効物としては、例えば、特開
平３−１３００９１号公報、国際公開ＷＯ９０／１０６
５１号公報などに記載の物質が挙げられ、これらも本発
明に適用でき、本発明の範囲に含まれる。本発明のガン
療法用副作用防止剤の有効成分であるＨＧＦは、ヒトを
含むウシ、ウマ、ラット、ヒツジなどいずれの哺乳動物
に由来するものであってもよく、またいずれの哺乳動物
のガン治療に対しても有効な副作用防止作用を示す。す
なわち、本発明の薬剤はヒトの医薬品のみならず動物用
医薬品としても用いることができる。
【００１０】本発明のガン療法用副作用防止剤は、制ガ
ン剤による化学療法や放射線療法と併用してガン治療に
利用され、それらの処置に起因する副作用の低減を図る
ことが可能となる。ＨＧＦは肝細胞、腎の近位尿細管細
胞の増殖を促進するので、肝障害、腎障害の緩和が図れ
るが、広く上皮系細胞に対しても増殖促進作用を有する
ので、悪心・嘔吐、脱毛などの副作用も軽減できる。即
ち、悪心・嘔吐は消化管上皮細胞が損傷を受け、近位の
末梢神経が刺激されて生ずるものであり、また脱毛は毛
根周辺の増殖の激しい組織が損傷を受けるために生ずる
ものである。ＨＧＦは、上皮細胞、メラノサイト、ケラ
チノサイトを含め、主として外胚葉・内胚葉由来の細胞
・組織に対して選択的に増殖促進作用を及ぼすので、こ
れらの細胞・組織に対する制ガン剤及び放射線の副作用
を軽減し、より強力なガン治療法の適用を可能とし、制
ガン効果の向上が図れる。また、ＨＧＦで処理された細
胞は細胞傷害を受けにくくなるので、化学療法及び放射
線療法に際しての前処置剤としても有用であり、ＨＧＦ
で前処置をすることにより、副作用を予防することがで
きる。ＨＧＦの医薬品としての実用性を考える上でさら
に重要な点は、ＨＧＦがＧ１期、すなわち増殖期に入っ
た細胞のみを増殖促進し、Ｇ０期、すなわち静止期にあ
る細胞には作用しないことである。このことは、傷害の
ある組織の増殖再生は促進するが、傷害を受けていない
組織に対しては全く作用を及ぼさないことを意味する。
従って、過剰にＨＧＦを投与しても、あるいは血液など
を介して非患部にＨＧＦが到達しても、正常組織にガン
化を誘導したり過剰な増殖を起こすことがないと考えら
れる。
ン剤による化学療法や放射線療法と併用してガン治療に
利用され、それらの処置に起因する副作用の低減を図る
ことが可能となる。ＨＧＦは肝細胞、腎の近位尿細管細
胞の増殖を促進するので、肝障害、腎障害の緩和が図れ
るが、広く上皮系細胞に対しても増殖促進作用を有する
ので、悪心・嘔吐、脱毛などの副作用も軽減できる。即
ち、悪心・嘔吐は消化管上皮細胞が損傷を受け、近位の
末梢神経が刺激されて生ずるものであり、また脱毛は毛
根周辺の増殖の激しい組織が損傷を受けるために生ずる
ものである。ＨＧＦは、上皮細胞、メラノサイト、ケラ
チノサイトを含め、主として外胚葉・内胚葉由来の細胞
・組織に対して選択的に増殖促進作用を及ぼすので、こ
れらの細胞・組織に対する制ガン剤及び放射線の副作用
を軽減し、より強力なガン治療法の適用を可能とし、制
ガン効果の向上が図れる。また、ＨＧＦで処理された細
胞は細胞傷害を受けにくくなるので、化学療法及び放射
線療法に際しての前処置剤としても有用であり、ＨＧＦ
で前処置をすることにより、副作用を予防することがで
きる。ＨＧＦの医薬品としての実用性を考える上でさら
に重要な点は、ＨＧＦがＧ１期、すなわち増殖期に入っ
た細胞のみを増殖促進し、Ｇ０期、すなわち静止期にあ
る細胞には作用しないことである。このことは、傷害の
ある組織の増殖再生は促進するが、傷害を受けていない
組織に対しては全く作用を及ぼさないことを意味する。
従って、過剰にＨＧＦを投与しても、あるいは血液など
を介して非患部にＨＧＦが到達しても、正常組織にガン
化を誘導したり過剰な増殖を起こすことがないと考えら
れる。
【００１１】本発明の副作用防止剤は種々の製剤形態
（例えば、液剤、固形剤、カプセル剤など）をとりうる
が、一般的には有効成分であるＨＧＦ単独若しくは慣用
の担体と共に注射剤とされるか、又は慣用の担体と共に
外用薬とされる。当該注射剤は常法により調製すること
ができ、例えば、ＨＧＦを適切な溶剤（例えば、滅菌
水、緩衝液、生理食塩水等）に溶解した後、フィルター
等で濾過して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填するこ
とにより調製することができる。注射剤中のＨＧＦ含量
としては、通常0.0002〜0.2(W/V%)程度、好ましくは0.0
01〜0.1(W/V%)程度に調整される。また、外用薬として
は、例えば、軟膏状、ゲル状、液状などの剤形に製剤化
され、製剤中のＨＧＦ含量は、外用薬の適用疾患、適用
部位などに応じて適宜調整することができる。製剤化に
際して、好ましくは安定化剤が添加され、安定化剤とし
ては、例えば、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マ
ンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリ
コールなどが挙げられる。さらに、本発明の薬剤は製剤
化に必要な添加物、例えば、賦形剤、溶解補助剤、酸化
防止剤、無痛化剤、等張化剤等を含んでいてもよい。液
状製剤とした場合は凍結保存、又は凍結乾燥等により水
分を除去して保存するのが望ましい。
（例えば、液剤、固形剤、カプセル剤など）をとりうる
が、一般的には有効成分であるＨＧＦ単独若しくは慣用
の担体と共に注射剤とされるか、又は慣用の担体と共に
外用薬とされる。当該注射剤は常法により調製すること
ができ、例えば、ＨＧＦを適切な溶剤（例えば、滅菌
水、緩衝液、生理食塩水等）に溶解した後、フィルター
等で濾過して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填するこ
とにより調製することができる。注射剤中のＨＧＦ含量
としては、通常0.0002〜0.2(W/V%)程度、好ましくは0.0
01〜0.1(W/V%)程度に調整される。また、外用薬として
は、例えば、軟膏状、ゲル状、液状などの剤形に製剤化
され、製剤中のＨＧＦ含量は、外用薬の適用疾患、適用
部位などに応じて適宜調整することができる。製剤化に
際して、好ましくは安定化剤が添加され、安定化剤とし
ては、例えば、アルブミン、グロブリン、ゼラチン、マ
ンニトール、グルコース、デキストラン、エチレングリ
コールなどが挙げられる。さらに、本発明の薬剤は製剤
化に必要な添加物、例えば、賦形剤、溶解補助剤、酸化
防止剤、無痛化剤、等張化剤等を含んでいてもよい。液
状製剤とした場合は凍結保存、又は凍結乾燥等により水
分を除去して保存するのが望ましい。
【００１２】本発明の副作用防止剤は該製剤組成物の形
態に応じた適当な投与経路により投与され得る。例え
ば、注射剤の形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内等に
投与することができる。その投与量は、患者の症状、年
齢、体重などにより適宜調整されるが、通常ＨＧＦとし
て0.01mg〜100mgであり、これを１日１回ないし数回に
分けて投与するのが適当である。
態に応じた適当な投与経路により投与され得る。例え
ば、注射剤の形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内等に
投与することができる。その投与量は、患者の症状、年
齢、体重などにより適宜調整されるが、通常ＨＧＦとし
て0.01mg〜100mgであり、これを１日１回ないし数回に
分けて投与するのが適当である。
【００１３】
【発明の効果】本発明のガン療法用副作用防止剤はＨＧ
Ｆを有効成分として含有し、ＨＧＦは化学療法、放射線
療法等における正常細胞・組織が受ける傷害を緩和し、
副作用を軽減できるので、より強力なガン治療を行うこ
とが可能となり、制ガン効果の向上が図れるので、臨床
上極めて有用である。また、ＨＧＦは正常上皮系細胞の
み増殖促進し、肝非実質細胞や線維芽細胞など正常間葉
系細胞の増殖になんら影響せず、また細胞をガン化させ
る活性を持たないため、特異性の高い、また副作用の少
ない薬剤とすることができる。
Ｆを有効成分として含有し、ＨＧＦは化学療法、放射線
療法等における正常細胞・組織が受ける傷害を緩和し、
副作用を軽減できるので、より強力なガン治療を行うこ
とが可能となり、制ガン効果の向上が図れるので、臨床
上極めて有用である。また、ＨＧＦは正常上皮系細胞の
み増殖促進し、肝非実質細胞や線維芽細胞など正常間葉
系細胞の増殖になんら影響せず、また細胞をガン化させ
る活性を持たないため、特異性の高い、また副作用の少
ない薬剤とすることができる。
【００１４】
【実施例】本発明をより詳細に説明するために参考例、
試験例及び実施例を挙げるが、本発明はこれらによって
なんら限定されるものではない。 参考例１ラット肝臓からのＨＧＦの単離 Wister系ラットに体重の0.2%の量の四塩化炭素を、腹腔
内投与し投与後約30時間目で肝臓を摘出した。肝臓はワ
ーリングブレンダーで破砕後、日立20PR-52型冷却遠心
機を用いて10,000rpm20分間遠心し、上清を得た。上清
を、0.15M ＮａＣｌ、10mMヘペス、2mM ＣａＣｌ2及び
0.01%Tween80を加えた50mMトリス塩酸緩衝液(pH8.5)で4
℃一昼夜透析した。透析内液を透析液で平衡化したＳ−
セファロース(FF)（ファルマシア社製）カラムに注入
し、洗浄後ＮａＣｌの濃度勾配により溶出を行い、ＨＧ
ＦはＮａＣｌ濃度0.7M付近に溶出した。次にこのＨＧＦ
をブルートリスアクリルＭ（ＩＢＦ社製）クロマトグラ
フィーにて精製した。溶出はアルギニンの濃度勾配によ
り行い、ＨＧＦはアルギニン濃度0.25M付近で溶出し
た。得られた分画を次にヘパリン-セファロース(ファル
マシア社製)クロマトグラフィーにより精製した。溶出
はＮａＣｌの濃度勾配により行い、ＨＧＦは1M前後のＮ
ａＣｌ濃度付近で溶出した。次にフェニル５ＰＷ（東ソ
ー社製）クロマトグラフィーにより精製した。溶出はＮ
ａＣｌ濃度減少及びエチレングリコール濃度上昇勾配に
より行った。ラット100匹の肝臓当たり10μgのＨＧＦが
得られた。精製ＨＧＦの比活性は約50万単位/mgであっ
た。得られたＨＧＦは0.25%ＢＳＡ（牛血清アルブミ
ン）を加え、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）にて透析し
た。
試験例及び実施例を挙げるが、本発明はこれらによって
なんら限定されるものではない。 参考例１ラット肝臓からのＨＧＦの単離 Wister系ラットに体重の0.2%の量の四塩化炭素を、腹腔
内投与し投与後約30時間目で肝臓を摘出した。肝臓はワ
ーリングブレンダーで破砕後、日立20PR-52型冷却遠心
機を用いて10,000rpm20分間遠心し、上清を得た。上清
を、0.15M ＮａＣｌ、10mMヘペス、2mM ＣａＣｌ2及び
0.01%Tween80を加えた50mMトリス塩酸緩衝液(pH8.5)で4
℃一昼夜透析した。透析内液を透析液で平衡化したＳ−
セファロース(FF)（ファルマシア社製）カラムに注入
し、洗浄後ＮａＣｌの濃度勾配により溶出を行い、ＨＧ
ＦはＮａＣｌ濃度0.7M付近に溶出した。次にこのＨＧＦ
をブルートリスアクリルＭ（ＩＢＦ社製）クロマトグラ
フィーにて精製した。溶出はアルギニンの濃度勾配によ
り行い、ＨＧＦはアルギニン濃度0.25M付近で溶出し
た。得られた分画を次にヘパリン-セファロース(ファル
マシア社製)クロマトグラフィーにより精製した。溶出
はＮａＣｌの濃度勾配により行い、ＨＧＦは1M前後のＮ
ａＣｌ濃度付近で溶出した。次にフェニル５ＰＷ（東ソ
ー社製）クロマトグラフィーにより精製した。溶出はＮ
ａＣｌ濃度減少及びエチレングリコール濃度上昇勾配に
より行った。ラット100匹の肝臓当たり10μgのＨＧＦが
得られた。精製ＨＧＦの比活性は約50万単位/mgであっ
た。得られたＨＧＦは0.25%ＢＳＡ（牛血清アルブミ
ン）を加え、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）にて透析し
た。
【００１５】参考例２遺伝子組換え法によるＨＧＦの製造
遺伝子組換え法によりヒト細胞由来のＨＧＦを製造し
た。Wiglerらの方法(Cell, 11, 223, 1977)に記載され
た方法に従って、ヒトＨＧＦのアミノ酸配列をコードす
る遺伝子により形質転換されたチャイニーズハムスター
卵巣（ＣＨＯ）細胞を培養し、その培養上清より、ヒト
ＨＧＦを得た。すなわち、ヒト肝臓のｍＲＮＡから造ら
れたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、ヒトＨ
ＧＦのアミノ酸配列をコードするクローンＨＡＣ１９と
ＨＢＣ２５を得た。ＨＡＣ１９からのＤＮＡをＢａｍＨ
ＩとＳｃａＩで、ＨＢＣ２５からのＤＮＡをＳｃａＩと
ＰｓｔＩで消化し、それぞれ得られた２つのＤＮＡフラ
グメントをブルースクリプトＫＳＩＩのＢａｍＨＩとＰ
ｓｔＩ部位に連結して挿入し、ｐＢＳ［ｈＨＧＦＩＩ］
を得た。ｐＢＳ［ｈＨＧＦＩＩ］をＸｂａＩとＳａｌＩ
とＮａｅＩで消化し、更にＴ4ＤＮＡポリメラーゼで平
滑末端とした後、ヒトＨＧＦをコードする約３ＫｂのＤ
ＮＡフラグメントをウシパピローマウィルスＮＤＡをベ
クターとする発現ベクターｐＢＰＭＴのＥｃｏＲＶ部位
に挿入し、ｐＢＰＭＴ［ｈＨＧＦＩＩ］を得た。得られ
たＨＧＦ発現ベクターｐＢＰＭＴ［ｈＨＧＦＩＩ］を用
いて、ＤＥＡＥデキストラン法によりＣＨＯ細胞を形質
転換した。形質転換体の選択は、Ｇ４１８を含む培地で
増殖させることにより行った。得られた形質転換体の中
から、高いＨＧＦ産生能を示す細胞株ＢＰＨ８９を選び
だした。ＢＰＨ８９細胞を牛胎児血清を加えた培地で増
殖させた後、培地を２日おきに交換して、ＨＧＦを実施
例１の精製法に準じた方法により精製した。
た。Wiglerらの方法(Cell, 11, 223, 1977)に記載され
た方法に従って、ヒトＨＧＦのアミノ酸配列をコードす
る遺伝子により形質転換されたチャイニーズハムスター
卵巣（ＣＨＯ）細胞を培養し、その培養上清より、ヒト
ＨＧＦを得た。すなわち、ヒト肝臓のｍＲＮＡから造ら
れたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、ヒトＨ
ＧＦのアミノ酸配列をコードするクローンＨＡＣ１９と
ＨＢＣ２５を得た。ＨＡＣ１９からのＤＮＡをＢａｍＨ
ＩとＳｃａＩで、ＨＢＣ２５からのＤＮＡをＳｃａＩと
ＰｓｔＩで消化し、それぞれ得られた２つのＤＮＡフラ
グメントをブルースクリプトＫＳＩＩのＢａｍＨＩとＰ
ｓｔＩ部位に連結して挿入し、ｐＢＳ［ｈＨＧＦＩＩ］
を得た。ｐＢＳ［ｈＨＧＦＩＩ］をＸｂａＩとＳａｌＩ
とＮａｅＩで消化し、更にＴ4ＤＮＡポリメラーゼで平
滑末端とした後、ヒトＨＧＦをコードする約３ＫｂのＤ
ＮＡフラグメントをウシパピローマウィルスＮＤＡをベ
クターとする発現ベクターｐＢＰＭＴのＥｃｏＲＶ部位
に挿入し、ｐＢＰＭＴ［ｈＨＧＦＩＩ］を得た。得られ
たＨＧＦ発現ベクターｐＢＰＭＴ［ｈＨＧＦＩＩ］を用
いて、ＤＥＡＥデキストラン法によりＣＨＯ細胞を形質
転換した。形質転換体の選択は、Ｇ４１８を含む培地で
増殖させることにより行った。得られた形質転換体の中
から、高いＨＧＦ産生能を示す細胞株ＢＰＨ８９を選び
だした。ＢＰＨ８９細胞を牛胎児血清を加えた培地で増
殖させた後、培地を２日おきに交換して、ＨＧＦを実施
例１の精製法に準じた方法により精製した。
【００１６】参考例３成熟ラット肝細胞の単離及び初代培養
成熟ラット肝実質細胞は、Seglenの方法(Meth. Cell Bi
ol. 13: 29-33, 1976)に準じて、コラーゲンを用いた肝
臓の灌流により単離した。初代培養の概要は以下のとお
りである。ウイリアムズ培地(5%ウシ血清、10-9Mインス
リン及び10-9Mデキサメサゾン含有)に分散させた単離肝
細胞を、Ｉ型コラーゲンでコーティングした１２穴プラ
スチックディシュ（コーニング社製）に蒔いた。培養培
地は２時間後に血清及びホルモンを含有せず、0.5μg/m
lのアプロチニンを含有する培地に交換した。
ol. 13: 29-33, 1976)に準じて、コラーゲンを用いた肝
臓の灌流により単離した。初代培養の概要は以下のとお
りである。ウイリアムズ培地(5%ウシ血清、10-9Mインス
リン及び10-9Mデキサメサゾン含有)に分散させた単離肝
細胞を、Ｉ型コラーゲンでコーティングした１２穴プラ
スチックディシュ（コーニング社製）に蒔いた。培養培
地は２時間後に血清及びホルモンを含有せず、0.5μg/m
lのアプロチニンを含有する培地に交換した。
【００１７】本発明のガン療法用副作用防止剤の有効成
分であるＨＧＦの肝細胞保護作用を下記試験例１〜４に
示す。ＨＧＦの肝細胞保護作用は、初代培養肝細胞から
の細胞質酵素の漏出により試験した。即ち、四塩化炭素
は肝毒性物質であり、生体内で肝炎を引き起こす。この
四塩化炭素を実験動物に投与すると、投与量に応じて肝
臓からグルタメートオキサロアセテート トランスフェ
ラーゼ（ＧＯＴ）、グルタメート ピルベート アミノ
−トランスフェラーゼ（ＧＰＴ）、ラクテート デヒド
ロゲナーゼ（ＬＤＨ）などの細胞質酵素を血液中に漏出
する。この現象を模して、初代培養肝細胞に肝毒性物質
を添加した系で、ＧＯＴなどの細胞質酵素を漏出させ、
この系にＨＧＦを添加し、ＧＯＴなどの細胞質酵素の漏
出を抑制する程度によりＨＧＦの肝細胞保護作用を試験
した。なお、以下の試験例１〜４において、ＨＧＦは参
考例２の方法に準じて調製した組換え体ヒトＨＧＦを用
いた。また、四塩化炭素溶液は、四塩化炭素をＤＭＦに
１Ｍとなるように溶解し、次いでウイリアムズ培地で希
釈し、最終濃度が5mMとなるように調整した溶液を用い
た。
分であるＨＧＦの肝細胞保護作用を下記試験例１〜４に
示す。ＨＧＦの肝細胞保護作用は、初代培養肝細胞から
の細胞質酵素の漏出により試験した。即ち、四塩化炭素
は肝毒性物質であり、生体内で肝炎を引き起こす。この
四塩化炭素を実験動物に投与すると、投与量に応じて肝
臓からグルタメートオキサロアセテート トランスフェ
ラーゼ（ＧＯＴ）、グルタメート ピルベート アミノ
−トランスフェラーゼ（ＧＰＴ）、ラクテート デヒド
ロゲナーゼ（ＬＤＨ）などの細胞質酵素を血液中に漏出
する。この現象を模して、初代培養肝細胞に肝毒性物質
を添加した系で、ＧＯＴなどの細胞質酵素を漏出させ、
この系にＨＧＦを添加し、ＧＯＴなどの細胞質酵素の漏
出を抑制する程度によりＨＧＦの肝細胞保護作用を試験
した。なお、以下の試験例１〜４において、ＨＧＦは参
考例２の方法に準じて調製した組換え体ヒトＨＧＦを用
いた。また、四塩化炭素溶液は、四塩化炭素をＤＭＦに
１Ｍとなるように溶解し、次いでウイリアムズ培地で希
釈し、最終濃度が5mMとなるように調整した溶液を用い
た。
【００１８】試験例１
参考例３に示した初代培養肝細胞を1.2×105細胞／cm2
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、Ｈ
ＧＦ(10ng/ml)及び／又は四塩化炭素(5mM)を添加した。
所定時間培養後に、培地を集めて遠心分離し、上清を回
収した。上清中のＧＯＴ活性を常法により測定した。そ
の結果（それぞれ、３穴の試験の平均値）を図６に示
す。なお、同図中、○は無添加の系（コントロール）、
●は四塩化炭素を添加した系、□は四塩化炭素とＨＧＦ
を添加した系である。図６に示されるように、四塩化炭
素のみを添加した系においては、培地へのＧＯＴの漏出
が認められ、細胞が傷害を受けている。それに対し、Ｈ
ＧＦを共存させた系においては、ＧＯＴの漏出はコント
ロールと同程度であり、細胞傷害が抑制されていること
が明らかとなった。なお、上記の上清中のＬＤＨ活性及
びＧＰＴ活性についても測定したが、これらの酵素の肝
細胞からの漏出もＨＧＦの存在により抑制されているこ
とが確認された。
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、Ｈ
ＧＦ(10ng/ml)及び／又は四塩化炭素(5mM)を添加した。
所定時間培養後に、培地を集めて遠心分離し、上清を回
収した。上清中のＧＯＴ活性を常法により測定した。そ
の結果（それぞれ、３穴の試験の平均値）を図６に示
す。なお、同図中、○は無添加の系（コントロール）、
●は四塩化炭素を添加した系、□は四塩化炭素とＨＧＦ
を添加した系である。図６に示されるように、四塩化炭
素のみを添加した系においては、培地へのＧＯＴの漏出
が認められ、細胞が傷害を受けている。それに対し、Ｈ
ＧＦを共存させた系においては、ＧＯＴの漏出はコント
ロールと同程度であり、細胞傷害が抑制されていること
が明らかとなった。なお、上記の上清中のＬＤＨ活性及
びＧＰＴ活性についても測定したが、これらの酵素の肝
細胞からの漏出もＨＧＦの存在により抑制されているこ
とが確認された。
【００１９】試験例２
参考例３に示した初代培養肝細胞を1.2×105細胞／cm2
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、最
終濃度で3 mMの四塩化炭素を加え、更に種々の濃度のＨ
ＧＦを添加した。24時間培養後に、培地を集めて遠心分
離し、上清を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常法によ
り測定した。その結果（それぞれ、３穴の試験の平均
値）を図７に示す。なお、四塩化炭素を添加していない
系（コントロール）における24時間後のＧＯＴ活性は6.
0mU/mlであった。図７に示されるように、肝細胞からの
ＧＯＴの漏出は、ＨＧＦにより０〜８ng/mlの範囲で用
量依存的に抑制され、ＨＧＦが肝細胞保護作用を有する
ことが明らかとなった。
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、最
終濃度で3 mMの四塩化炭素を加え、更に種々の濃度のＨ
ＧＦを添加した。24時間培養後に、培地を集めて遠心分
離し、上清を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常法によ
り測定した。その結果（それぞれ、３穴の試験の平均
値）を図７に示す。なお、四塩化炭素を添加していない
系（コントロール）における24時間後のＧＯＴ活性は6.
0mU/mlであった。図７に示されるように、肝細胞からの
ＧＯＴの漏出は、ＨＧＦにより０〜８ng/mlの範囲で用
量依存的に抑制され、ＨＧＦが肝細胞保護作用を有する
ことが明らかとなった。
【００２０】試験例３
参考例３に示した初代培養肝細胞を1.2×105細胞／cm2
の密度で蒔き、所定時間、ＨＧＦ(10ng/ml)又は四塩化
炭素(5mM)に曝した。翌日に血清を含まない培地に交換
し、ＨＧＦ(10ng/ml)及び／又は四塩化炭素(5mM)を添加
した。24時間培養後に、培地を集めて遠心分離し、上清
を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常法により測定し
た。その結果（それぞれ、３穴の試験の平均値）を図８
に示す。同図中、０ｈは培地交換時を示し、また白抜き
バーは細胞を四塩化炭素に曝した時間を、淡点付きバー
は細胞をＨＧＦに曝した時間を示す。図８に示されるよ
うに、四塩化炭素に曝す前に細胞をＨＧＦで処理した場
合にもＧＯＴの漏出は抑制され、また四塩化炭素に曝さ
れた細胞にＨＧＦを添加した場合であってもＧＯＴの漏
出は抑制された。
の密度で蒔き、所定時間、ＨＧＦ(10ng/ml)又は四塩化
炭素(5mM)に曝した。翌日に血清を含まない培地に交換
し、ＨＧＦ(10ng/ml)及び／又は四塩化炭素(5mM)を添加
した。24時間培養後に、培地を集めて遠心分離し、上清
を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常法により測定し
た。その結果（それぞれ、３穴の試験の平均値）を図８
に示す。同図中、０ｈは培地交換時を示し、また白抜き
バーは細胞を四塩化炭素に曝した時間を、淡点付きバー
は細胞をＨＧＦに曝した時間を示す。図８に示されるよ
うに、四塩化炭素に曝す前に細胞をＨＧＦで処理した場
合にもＧＯＴの漏出は抑制され、また四塩化炭素に曝さ
れた細胞にＨＧＦを添加した場合であってもＧＯＴの漏
出は抑制された。
【００２１】試験例４
参考例３に示した初代培養肝細胞を1.2×105細胞／cm2
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、Ｈ
ＧＦ(10ng/ml)並びに四塩化炭素(5mM)又はマイトマイシ
ンＣ(8μM)を添加した。24時間培養後に、培地を集めて
遠心分離し、上清を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常
法により測定した。その結果（それぞれ、３穴の試験の
平均値）を表１に示す。表１に示されるように、ＨＧＦ
は、肝毒性物質である四塩化炭素及びマイトマイシンＣ
によるＧＯＴの漏出を抑制していることが明らかとなっ
た。
の密度で蒔き、翌日に血清を含まない培地に交換し、Ｈ
ＧＦ(10ng/ml)並びに四塩化炭素(5mM)又はマイトマイシ
ンＣ(8μM)を添加した。24時間培養後に、培地を集めて
遠心分離し、上清を回収した。上清中のＧＯＴ活性を常
法により測定した。その結果（それぞれ、３穴の試験の
平均値）を表１に示す。表１に示されるように、ＨＧＦ
は、肝毒性物質である四塩化炭素及びマイトマイシンＣ
によるＧＯＴの漏出を抑制していることが明らかとなっ
た。
【００２２】
【００２３】試験例５ＨＧＦの近位尿細管細胞に対する増殖効果
ＨＧＦの近位尿細管細胞に対する増殖効果を下記の方法
で確認した。 ラット腎近位尿細管細胞の単離 バルビタール系麻酔剤によりWister系ラットを麻酔し、
腹部を切開して腎臓を摘出し、氷で冷却したプレートに
取り出した。皮質部分を集め、小片に刻んでダウンスホ
モジナイザーにかけた。得られたホモジェネートを245
μm孔ナイロンメッシュで濾過し、さらに尿細管細胞と
顆粒細胞を分離するために105μm孔ナイロンメッシュで
濾過した後、メッシュ上に残った画分を氷で冷却したイ
ーグルの最少栄養培地に移した。この画分に少量の顆粒
細胞が残存していたので、0.01%コラゲナーゼを培地に
添加し37℃で3分間処理し、フィブロブラストを除去し
た後、80g×2分間の遠心分離を行い、精製近位尿細管細
胞を得た。
で確認した。 ラット腎近位尿細管細胞の単離 バルビタール系麻酔剤によりWister系ラットを麻酔し、
腹部を切開して腎臓を摘出し、氷で冷却したプレートに
取り出した。皮質部分を集め、小片に刻んでダウンスホ
モジナイザーにかけた。得られたホモジェネートを245
μm孔ナイロンメッシュで濾過し、さらに尿細管細胞と
顆粒細胞を分離するために105μm孔ナイロンメッシュで
濾過した後、メッシュ上に残った画分を氷で冷却したイ
ーグルの最少栄養培地に移した。この画分に少量の顆粒
細胞が残存していたので、0.01%コラゲナーゼを培地に
添加し37℃で3分間処理し、フィブロブラストを除去し
た後、80g×2分間の遠心分離を行い、精製近位尿細管細
胞を得た。
【００２４】ＨＧＦの近位尿細管細胞に対する増殖活
性 上記で単離した腎近位尿細管細胞の培養系にＨＧＦを添
加し、細胞増殖効果をＤＮＡ合成の増加により調べた。
すなわち、上記により得られた近位尿細管細胞を、1×1
0-8Mインスリン(シグマ社、米国)、1×10-8Mデキサメサ
ゾン(和光純薬社)、５μｇ／mlトランスフェリン(シグ
マ社、米国)、５Ｕ／mlアプロチニン(持田製薬社)を添
加したＤＭＥ・Ｆ−１２混合培地（ＤＭＥ培地：Ｆ−１
２培地＝１：１、日水製薬社）に懸濁し、24穴のマルチ
プレートに４×104個／ウェルの濃度で蒔いた。５％Ｃ
Ｏ2、３０％Ｏ2、６５％Ｎ2の存在下、37℃で24時間培
養後、５Ｕ／mlアプロチニンを添加したＤＭＥ・Ｆ−１
２混合培地に交換し、同培養条件下で48時間培養した。
培地を新しく調製した５Ｕ／mlアプロチニン添加ＤＭＥ
・Ｆ−１２混合培地に交換すると共に被検試料として参
考例１で得られたラットＨＧＦ（0.25%ＢＳＡを加え、
ＰＢＳで透析したもの）、及び陽性対照として10ng/ml
ＥＧＦ（上皮細胞成長因子、雄マウス顎下腺由来）＋1
×10-7Mインスリンを所定量添加した。16時間培養後、
１μＣｉ／mlの［125Ｉ］デオキシウリジン（ニューイ
ングランドニュークレア社、米国)10μl/ウェルを添加
した。4時間後、ＰＢＳで細胞を洗浄し、10%トリクロロ
酢酸溶液に移し、5分間インキュベートした。トリクロ
ロ酢酸を除去し、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液で細胞を溶
解し、放射能をガンマカウンターにて測定した。その結
果を図９に示す。図９から明らかなように、ラットＨＧ
Ｆはラット腎臓の近位尿細管細胞を用量依存的に増殖さ
せる活性を示した。すなわち、2ng/mlのＨＧＦを添加す
ることにより、該培養細胞のＤＮＡ合成は約２倍に、10
ng/mlのＨＧＦにより約３倍に促進された。これにより
本発明の有効成分であるＨＧＦは培養腎細胞を増殖させ
る活性を有することが明らかになると共に、生体内にお
ける腎再生を促進させる活性を有することが明らかとな
った。
性 上記で単離した腎近位尿細管細胞の培養系にＨＧＦを添
加し、細胞増殖効果をＤＮＡ合成の増加により調べた。
すなわち、上記により得られた近位尿細管細胞を、1×1
0-8Mインスリン(シグマ社、米国)、1×10-8Mデキサメサ
ゾン(和光純薬社)、５μｇ／mlトランスフェリン(シグ
マ社、米国)、５Ｕ／mlアプロチニン(持田製薬社)を添
加したＤＭＥ・Ｆ−１２混合培地（ＤＭＥ培地：Ｆ−１
２培地＝１：１、日水製薬社）に懸濁し、24穴のマルチ
プレートに４×104個／ウェルの濃度で蒔いた。５％Ｃ
Ｏ2、３０％Ｏ2、６５％Ｎ2の存在下、37℃で24時間培
養後、５Ｕ／mlアプロチニンを添加したＤＭＥ・Ｆ−１
２混合培地に交換し、同培養条件下で48時間培養した。
培地を新しく調製した５Ｕ／mlアプロチニン添加ＤＭＥ
・Ｆ−１２混合培地に交換すると共に被検試料として参
考例１で得られたラットＨＧＦ（0.25%ＢＳＡを加え、
ＰＢＳで透析したもの）、及び陽性対照として10ng/ml
ＥＧＦ（上皮細胞成長因子、雄マウス顎下腺由来）＋1
×10-7Mインスリンを所定量添加した。16時間培養後、
１μＣｉ／mlの［125Ｉ］デオキシウリジン（ニューイ
ングランドニュークレア社、米国)10μl/ウェルを添加
した。4時間後、ＰＢＳで細胞を洗浄し、10%トリクロロ
酢酸溶液に移し、5分間インキュベートした。トリクロ
ロ酢酸を除去し、１Ｍ水酸化ナトリウム溶液で細胞を溶
解し、放射能をガンマカウンターにて測定した。その結
果を図９に示す。図９から明らかなように、ラットＨＧ
Ｆはラット腎臓の近位尿細管細胞を用量依存的に増殖さ
せる活性を示した。すなわち、2ng/mlのＨＧＦを添加す
ることにより、該培養細胞のＤＮＡ合成は約２倍に、10
ng/mlのＨＧＦにより約３倍に促進された。これにより
本発明の有効成分であるＨＧＦは培養腎細胞を増殖させ
る活性を有することが明らかになると共に、生体内にお
ける腎再生を促進させる活性を有することが明らかとな
った。
【００２５】試験例６ヒト正常表皮メラノサイトの増殖に対する効果
本発明の副作用防止剤の有効成分であるＨＧＦの、メラ
ノサイトに対する増殖促進作用を以下の方法により確認
した。ＭＣＤＢ１５３（高アミノ酸タイプ）培地にイン
スリン５μg/ml、ヒドロコーチゾン0.5μg/ml、フォル
ボール １２−ミリステート １３−アセテート（ＰＭ
Ａ）10ng/mlを加えた無血清基礎培地を用いてヒト正常
表皮メラノサイト（クラボウ株式会社）を懸濁し、12穴
プラスチックプレートに104個／ウェルになるように蒔
いた。１０％ＣＯ2、２５％Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37
℃で培養した。24時間培養後、無血清基礎培地にＨＧＦ
を０から20ng/mlの範囲で段階的に加えた試験培地に交
換し、培養を続けた。培養開始９日後に再びＨＧＦを加
えた試験培地を用いて培地交換をした後、15日後培養を
終了し、最終細胞数をヘモサイトメーターにてカウント
した。その結果を図１０に示す。図１０に示されるよう
に、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から10ng/mlの
範囲で用量依存的に増殖を促進され、最適濃度において
約５倍にまで高められることが確認された。
ノサイトに対する増殖促進作用を以下の方法により確認
した。ＭＣＤＢ１５３（高アミノ酸タイプ）培地にイン
スリン５μg/ml、ヒドロコーチゾン0.5μg/ml、フォル
ボール １２−ミリステート １３−アセテート（ＰＭ
Ａ）10ng/mlを加えた無血清基礎培地を用いてヒト正常
表皮メラノサイト（クラボウ株式会社）を懸濁し、12穴
プラスチックプレートに104個／ウェルになるように蒔
いた。１０％ＣＯ2、２５％Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37
℃で培養した。24時間培養後、無血清基礎培地にＨＧＦ
を０から20ng/mlの範囲で段階的に加えた試験培地に交
換し、培養を続けた。培養開始９日後に再びＨＧＦを加
えた試験培地を用いて培地交換をした後、15日後培養を
終了し、最終細胞数をヘモサイトメーターにてカウント
した。その結果を図１０に示す。図１０に示されるよう
に、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から10ng/mlの
範囲で用量依存的に増殖を促進され、最適濃度において
約５倍にまで高められることが確認された。
【００２６】試験例７ヒト正常表皮メラノサイトの複製ＤＮＡ合成に対する効
果 試験例６に記載された無血清基礎培地にヒト正常表皮メ
ラノサイトを懸濁し、24穴プラスチックプレートに4×1
04個／ウェルになるように蒔き、１０％ＣＯ2、２５％
Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間培養
後、無血清基礎培地にＨＧＦを０から20ng/mlの範囲で
段階的に加えた試験培地に交換し、培養を続けた。24時
間培養後、0.5μＣｉの［125Ｉ］デオキシウリジンを各
ウェルに添加した。さらに４時間培養して細胞に［125
Ｉ］を取り込ませた後、細胞をｐＨ7.4のＰＢＳにて洗
浄し、冷10％トリクロロ酢酸水溶液で固定した。細胞を
１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で可溶化し、その放射能を
ガンマーカウンターにより測定した。また、放射能測定
後の試料の一部をとってMicro BCA Protein Assay Syst
em(ピアース社)により蛋白質量を測定した。細胞内に取
り込まれた標識デオキシウリジンの量をコントロールと
のカウント差として求め、これをヒト正常表皮メラノサ
イト蛋白質１mg当りに換算してＤＮＡ合成活性(dpm/mg
蛋白質)とした。その結果を図１１に示す。図１１に示
されるように、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から
10ng/mlの範囲で用量依存的に複製ＤＮＡ合成が促進さ
れ、最適濃度において約４倍にまで高められることが確
認された。
果 試験例６に記載された無血清基礎培地にヒト正常表皮メ
ラノサイトを懸濁し、24穴プラスチックプレートに4×1
04個／ウェルになるように蒔き、１０％ＣＯ2、２５％
Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間培養
後、無血清基礎培地にＨＧＦを０から20ng/mlの範囲で
段階的に加えた試験培地に交換し、培養を続けた。24時
間培養後、0.5μＣｉの［125Ｉ］デオキシウリジンを各
ウェルに添加した。さらに４時間培養して細胞に［125
Ｉ］を取り込ませた後、細胞をｐＨ7.4のＰＢＳにて洗
浄し、冷10％トリクロロ酢酸水溶液で固定した。細胞を
１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で可溶化し、その放射能を
ガンマーカウンターにより測定した。また、放射能測定
後の試料の一部をとってMicro BCA Protein Assay Syst
em(ピアース社)により蛋白質量を測定した。細胞内に取
り込まれた標識デオキシウリジンの量をコントロールと
のカウント差として求め、これをヒト正常表皮メラノサ
イト蛋白質１mg当りに換算してＤＮＡ合成活性(dpm/mg
蛋白質)とした。その結果を図１１に示す。図１１に示
されるように、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から
10ng/mlの範囲で用量依存的に複製ＤＮＡ合成が促進さ
れ、最適濃度において約４倍にまで高められることが確
認された。
【００２７】試験例８ヒト正常表皮ケラチノサイトの増殖に対する効果
本発明の副作用防止剤の有効成分であるＨＧＦの、ケラ
チノサイトに対する増殖促進作用を以下の方法により確
認した。試験例６に記載された無血清基礎培地にウシ視
床下部抽出物150μg蛋白質/mlを加えた培地にヒト正常
表皮ケラチノサイトを懸濁し、12穴プラスチックプレー
トに104個／ウェルになるように蒔いた。１０％ＣＯ2、
２５％Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間
培養後、カルシウムイオン濃度を1.8mMに調整した無血
清基礎培地に交換し、さらに24時間培養後ＨＧＦを０か
ら20ng/mlの範囲で段階的に添加し、培養を続けた。培
養開始６日後、培地をＨＧＦを加えた新しい培地に交換
して培養を続け、４日後（培養開始から10日後）培養を
終了し、最終細胞数をヘモサイトメーターにてカウント
した。その結果を図１２に示す。図１２に示されるよう
に、正常ケラチノサイトはＨＧＦにより０から2.5ng/ml
の範囲で用量依存的に増殖を促進され、最適濃度におい
て約３倍にまで高められることが確認された。
チノサイトに対する増殖促進作用を以下の方法により確
認した。試験例６に記載された無血清基礎培地にウシ視
床下部抽出物150μg蛋白質/mlを加えた培地にヒト正常
表皮ケラチノサイトを懸濁し、12穴プラスチックプレー
トに104個／ウェルになるように蒔いた。１０％ＣＯ2、
２５％Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間
培養後、カルシウムイオン濃度を1.8mMに調整した無血
清基礎培地に交換し、さらに24時間培養後ＨＧＦを０か
ら20ng/mlの範囲で段階的に添加し、培養を続けた。培
養開始６日後、培地をＨＧＦを加えた新しい培地に交換
して培養を続け、４日後（培養開始から10日後）培養を
終了し、最終細胞数をヘモサイトメーターにてカウント
した。その結果を図１２に示す。図１２に示されるよう
に、正常ケラチノサイトはＨＧＦにより０から2.5ng/ml
の範囲で用量依存的に増殖を促進され、最適濃度におい
て約３倍にまで高められることが確認された。
【００２８】試験例９ヒト正常表皮ケラチノサイトの複製ＤＮＡ合成に対する
効果 試験例６記載された無血清基礎培地にウシ視床下部抽出
物150μg蛋白質/mlを加えた培地にヒト正常表皮ケラチ
ノサイトを懸濁し、24穴プラスチックプレートに4×104
個／ウェルになるように蒔いた。１０％ＣＯ2、２５％
Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間培養
後、カルシウムイオン濃度を1.8mMに調整した無血清基
礎培地に交換し、さらに24時間培養後ＨＧＦを０から20
ng/mlの範囲で段階的に添加し、培養を続けた。24時間
培養後0.5μＣｉの［125Ｉ］デオキシウリジンを各ウェ
ルに添加した。さらに４時間培養して細胞に［125Ｉ］
を取り込ませた後、細胞をｐＨ7.4のＰＢＳにて２回洗
浄し、冷10％トリクロロ酢酸水溶液で固定した。細胞を
１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で可溶化し、その放射能を
ガンマーカウンターにより測定した。また放射能測定後
の試料の一部をとってMicro BCA Protein Assay System
(ピアース社)により蛋白質量を測定した。細胞内に取り
込まれた標識デオキシウリジンの量をコントロールとの
カウント差として求め、これをヒト正常表皮メラノサイ
ト蛋白質１mg当りに換算してＤＮＡ合成活性(dpm/mg蛋
白質)とした。その結果を図１３に示す。図１３に示さ
れるように、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から５
ng/mlの範囲で用量依存的に複製ＤＮＡ合成を促進さ
れ、最適濃度において約２倍にまで高められることが確
認された。
効果 試験例６記載された無血清基礎培地にウシ視床下部抽出
物150μg蛋白質/mlを加えた培地にヒト正常表皮ケラチ
ノサイトを懸濁し、24穴プラスチックプレートに4×104
個／ウェルになるように蒔いた。１０％ＣＯ2、２５％
Ｏ2、６５％Ｎ2の条件下37℃で培養した。24時間培養
後、カルシウムイオン濃度を1.8mMに調整した無血清基
礎培地に交換し、さらに24時間培養後ＨＧＦを０から20
ng/mlの範囲で段階的に添加し、培養を続けた。24時間
培養後0.5μＣｉの［125Ｉ］デオキシウリジンを各ウェ
ルに添加した。さらに４時間培養して細胞に［125Ｉ］
を取り込ませた後、細胞をｐＨ7.4のＰＢＳにて２回洗
浄し、冷10％トリクロロ酢酸水溶液で固定した。細胞を
１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で可溶化し、その放射能を
ガンマーカウンターにより測定した。また放射能測定後
の試料の一部をとってMicro BCA Protein Assay System
(ピアース社)により蛋白質量を測定した。細胞内に取り
込まれた標識デオキシウリジンの量をコントロールとの
カウント差として求め、これをヒト正常表皮メラノサイ
ト蛋白質１mg当りに換算してＤＮＡ合成活性(dpm/mg蛋
白質)とした。その結果を図１３に示す。図１３に示さ
れるように、正常メラノサイトはＨＧＦにより０から５
ng/mlの範囲で用量依存的に複製ＤＮＡ合成を促進さ
れ、最適濃度において約２倍にまで高められることが確
認された。
【００２９】試験例１０動物におけるＨＧＦの保護作用
本発明のガン療法用副作用防止剤の有効成分であるＨＧ
Ｆの動物における保護作用を下記試験例に示す。ＨＧＦ
による保護作用は、体重、肝重量及び腎重量により試験
した。即ち、制ガン剤であるシスプラチンを実験動物に
投与すると、体重、肝重量、腎重量が減少する。この
時、ＨＧＦを動物に投与し、保護作用を試験した。動物
は、ＢＡＬＢ／ｃ雄性マウス９週令を使用した。シスプ
ラチンは、日本化薬社製ランダ注を腹腔内に５mg/kg又
は10mg/kgとなるように投与した。ＨＧＦ溶解液は0.25%
BSA、0.01% Tween 80を含むＰＢＳ（−）を用い、0.1m
g/mlとなるようにＨＧＦを溶解して、マウス１匹当り0.
1mlを尾静脈より１日２回、12時間毎に投与した（10μ
ｇ／マウス × ２回／日 × ４日）。ＨＧＦは、シスプ
ラチン投与日を含めて連続４日間投与し、５日目に開腹
し、肝、腎を摘出し重量を測定した。その結果（それぞ
れ、一群６匹の試験の平均値）を図１４（体重）及び表
２（肝重量及び腎重量）に示す。図１４及び表２に示さ
れるように、ＨＧＦの投与により体重、肝重量及び腎重
量の減少を抑制できることが確認された。
Ｆの動物における保護作用を下記試験例に示す。ＨＧＦ
による保護作用は、体重、肝重量及び腎重量により試験
した。即ち、制ガン剤であるシスプラチンを実験動物に
投与すると、体重、肝重量、腎重量が減少する。この
時、ＨＧＦを動物に投与し、保護作用を試験した。動物
は、ＢＡＬＢ／ｃ雄性マウス９週令を使用した。シスプ
ラチンは、日本化薬社製ランダ注を腹腔内に５mg/kg又
は10mg/kgとなるように投与した。ＨＧＦ溶解液は0.25%
BSA、0.01% Tween 80を含むＰＢＳ（−）を用い、0.1m
g/mlとなるようにＨＧＦを溶解して、マウス１匹当り0.
1mlを尾静脈より１日２回、12時間毎に投与した（10μ
ｇ／マウス × ２回／日 × ４日）。ＨＧＦは、シスプ
ラチン投与日を含めて連続４日間投与し、５日目に開腹
し、肝、腎を摘出し重量を測定した。その結果（それぞ
れ、一群６匹の試験の平均値）を図１４（体重）及び表
２（肝重量及び腎重量）に示す。図１４及び表２に示さ
れるように、ＨＧＦの投与により体重、肝重量及び腎重
量の減少を抑制できることが確認された。
【００３０】
【００３１】実施例１
生理食塩水100ml中にＨＧＦ100mg、マンニトール１ｇ及
びポリソルベート80 10mgを含む溶液を無菌的に調製
し、バイアル瓶に１mlずつ無菌的に分注し、常法に準じ
て凍結乾燥し、凍結乾燥製剤を得た。
びポリソルベート80 10mgを含む溶液を無菌的に調製
し、バイアル瓶に１mlずつ無菌的に分注し、常法に準じ
て凍結乾燥し、凍結乾燥製剤を得た。
【００３２】実施例２
0.15M ＮａＣｌと0.01%ポリソルベート80を含むpH7.4の
0.02Mリン酸緩衝液100mlにＨＧＦ100mgとヒト血清アル
ブミン100mgを添加した水溶液を無菌的に調製し、バイ
アル瓶に１mlずつ無菌的に分注し、常法に準じて凍結乾
燥し、凍結乾燥製剤を得た。
0.02Mリン酸緩衝液100mlにＨＧＦ100mgとヒト血清アル
ブミン100mgを添加した水溶液を無菌的に調製し、バイ
アル瓶に１mlずつ無菌的に分注し、常法に準じて凍結乾
燥し、凍結乾燥製剤を得た。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトＨＧＦ前駆体のアミノ酸配列（１〜２４０
番）を示す図である。
番）を示す図である。
【図２】ヒトＨＧＦ前駆体のアミノ酸配列（２４１〜４
９５番）を示す図である。
９５番）を示す図である。
【図３】ヒトＨＧＦ前駆体のアミノ酸配列（４９６〜７
２８番）を示す図である。
２８番）を示す図である。
【図４】ヒトＨＧＦ前駆体のアミノ酸配列（図１〜図
３）をコードする遺伝子の塩基配列（１〜１５６０番）
を示す図である。
３）をコードする遺伝子の塩基配列（１〜１５６０番）
を示す図である。
【図５】ヒトＨＧＦ前駆体のアミノ酸配列（図１〜図
３）をコードする遺伝子の塩基配列（１５６１〜２１８
４番）を示す図である。
３）をコードする遺伝子の塩基配列（１５６１〜２１８
４番）を示す図である。
【図６】四塩化炭素に曝された肝細胞からのＧＯＴ漏出
量の時間変化を示す図である。同図中、○は無添加の系
（コントロール）、●は四塩化炭素を添加した系、□は
四塩化炭素とＨＧＦを添加した系を示す。
量の時間変化を示す図である。同図中、○は無添加の系
（コントロール）、●は四塩化炭素を添加した系、□は
四塩化炭素とＨＧＦを添加した系を示す。
【図７】四塩化炭素に曝された肝細胞からのＧＯＴ漏出
に対するＨＧＦの抑制効果（添加量−応答曲線）を示す
図である（試験例２参照）。
に対するＨＧＦの抑制効果（添加量−応答曲線）を示す
図である（試験例２参照）。
【図８】四塩化炭素に曝された肝細胞からのＧＯＴ漏出
に対するＨＧＦの抑制効果を示す図である（試験例３参
照）。
に対するＨＧＦの抑制効果を示す図である（試験例３参
照）。
【図９】ラット近位尿細管細胞に対するラットＨＧＦの
増殖促進活性の測定結果を示す図である（試験例５参
照）。同図中、●はＨＧＦを添加した系、□はＥＧＦ＋
インスリン（陽性対照）を示す。
増殖促進活性の測定結果を示す図である（試験例５参
照）。同図中、●はＨＧＦを添加した系、□はＥＧＦ＋
インスリン（陽性対照）を示す。
【図１０】ヒト正常表皮メラノサイトに対するＨＧＦの
増殖促進活性（細胞数）を示す図である（試験例６参
照）。
増殖促進活性（細胞数）を示す図である（試験例６参
照）。
【図１１】ヒト正常表皮メラノサイトに対するＨＧＦの
増殖促進活性（複製ＤＮＡ合成）を示す図である（試験
例７参照）。
増殖促進活性（複製ＤＮＡ合成）を示す図である（試験
例７参照）。
【図１２】ヒト正常表皮ケラチノサイトに対するＨＧＦ
の増殖促進活性（細胞数）を示す図である（試験例８参
照）。
の増殖促進活性（細胞数）を示す図である（試験例８参
照）。
【図１３】ヒト正常表皮ケラチノサイトに対するＨＧＦ
の増殖促進活性（複製ＤＮＡ合成）を示す図である（試
験例９参照）。
の増殖促進活性（複製ＤＮＡ合成）を示す図である（試
験例９参照）。
フロントページの続き
(56)参考文献 特開 昭63−99017（ＪＰ，Ａ)
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂ
ｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃ
ｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｏ
ｌ．122，Ｎｏ．３（1984）ｐ．1450−
1459
四国医誌，Ｖｏｌ．46，Ｎｏ．３
（1990年６月25日発行）ｐ．157−166
Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．342，Ｎｏ.
23（1989）ｐ．440−443
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 38/18
Claims (4)
- 【請求項１】 肝実質細胞増殖因子(Hepatocyto Grow
th Factor）を有効成分として含有することを特徴とす
るガン療法用副作用防止剤。 - 【請求項２】 肝実質細胞増殖因子が、ヒト又は動物
の組織又は血液成分由来である請求項１記載のガン療法
用副作用防止剤。 - 【請求項３】 肝実質細胞増殖因子が遺伝子組換えに
より製造したものである請求項１記載のガン療法用副作
用防止剤。 - 【請求項４】 遺伝子組換えの宿主細胞が大腸菌、枯
草菌、酵母、糸状菌、植物又は動物細胞の何れかである
請求項３記載のガン療法用副作用防止剤。
Priority Applications (5)
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|---|---|---|---|
| JP32141291A JP3394982B2 (ja) | 1991-11-07 | 1991-11-07 | ガン療法用副作用防止剤 |
| EP92923166A EP0724884B1 (en) | 1991-11-07 | 1992-11-05 | Side effect inhibitor for cancer therapy |
| DE69232596T DE69232596T2 (de) | 1991-11-07 | 1992-11-05 | Inhibitor von nebenwirkungen zur krebstherapy |
| AT92923166T ATE216892T1 (de) | 1991-11-07 | 1992-11-05 | Inhibitor von nebenwirkungen zur krebstherapy |
| PCT/JP1992/001433 WO1993008821A1 (en) | 1991-11-07 | 1992-11-05 | Side effect inhibitor for cancer therapy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32141291A JP3394982B2 (ja) | 1991-11-07 | 1991-11-07 | ガン療法用副作用防止剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06340546A JPH06340546A (ja) | 1994-12-13 |
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Family
ID=18132263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32141291A Expired - Fee Related JP3394982B2 (ja) | 1991-11-07 | 1991-11-07 | ガン療法用副作用防止剤 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0724884B1 (ja) |
| JP (1) | JP3394982B2 (ja) |
| AT (1) | ATE216892T1 (ja) |
| DE (1) | DE69232596T2 (ja) |
| WO (1) | WO1993008821A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08501314A (ja) * | 1992-09-16 | 1996-02-13 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | Ｈｇｆによる肝臓障害に対する保護 |
| JP3962097B2 (ja) * | 1994-03-18 | 2007-08-22 | 敏一 中村 | 免疫抑制剤による副作用の軽減剤 |
| AU1757100A (en) * | 1994-03-18 | 2000-05-11 | Toshikazu Nakamura | Drug for relieving side effects caused by immunosuppressants |
| CA2218864A1 (en) * | 1995-04-21 | 1996-10-24 | Tsutomu Yonehana | Agent for preventing and/or treating ischemic diseases |
| KR100725199B1 (ko) | 1995-08-29 | 2007-08-16 | 안제스에무지 가부시키가이샤 | 에이치지에프유전자를함유하는약제 |
| US5855918A (en) * | 1995-09-12 | 1999-01-05 | Genentech, Inc. | Cystic fibrosis therapy |
| JP4006058B2 (ja) | 1997-03-11 | 2007-11-14 | 第一三共株式会社 | 多臓器不全予防及び／又は治療剤 |
| CA2253629A1 (en) | 1997-03-14 | 1998-09-24 | Snow Brand Milk Products Co., Ltd. | Agent for preventing and/or treating cachexia |
| CN1222310C (zh) * | 1998-08-05 | 2005-10-12 | 住友制药株式会社 | 肝实质细胞增殖因子药用制剂 |
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