JP3373249B2 - 熱ショック蛋白質遺伝子および熱ショック蛋白質の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、蛋白質の再構成に関与
する好熱菌由来の熱ショック蛋白質遺伝子および熱ショ
ック蛋白質の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】細胞を急激な熱ショックに晒すと、温度
の変化に応答して熱ショック蛋白質（Heat Shock Prote
in）と称される一群の蛋白質の合成が誘導される。これ
らの蛋白質のアミノ酸配列は、大腸菌からヒトまで進化
的に極めてよく保存されており、他の蛋白質と結合して
その高次構造・複合体の形成や解離を助長したり、細胞
内での蛋白質の分解・膜透過、局在化、分子認識、細胞
周期の調節など多くの生物種に共通した生理機能に関与
することが明らかにされている。

【０００３】例えば、ＲＮＡポリメラーゼに熱を作用さ
せると速かに変性するものの、ＲＮＡポリメラーゼに大
腸菌のＤｎａＫを添加すると加熱しても失活せず、さら
に一旦変性させたＲＮＡポリメラーゼに、ＤｎａＫを添
加すると、イン・ビトロ（invitro）でＡＴＰの存在下
でＲＮＡポリメラーゼの活性が回復することが報告され
ている（D.Skowyra, et al., Cell, 62, 939-944 (199
0) ）。

【０００４】また、大腸菌においてＤｎａＫを過剰に発
現させると、ＬａｍＢ−ＬａｃＺハイブリッド蛋白質の
輸送（分泌）が促進されることも報告されている（G.J.
Phillips, et al., Nature, 344, 882-884 (1990) ）。

【０００５】このような熱ショック蛋白質ＤｎａＫによ
る変性蛋白質の再生や蛋白質の輸送の促進は、他の蛋白
質においても検討され、ＤｎａＫの一般的な性質とされ
ている。このようなｄｎａＫ遺伝子として、大腸菌（J.
C.Bardwell, et al., Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 81,
848-852 (1984)）、枯草菌（C.M.Hearne, et al.,Nucl
eic Acid Res., 17, 8373 (1989)）、およびバチルス・
メガテリウム（Bacillus megaterium）（M.D.Sussman,
et al., Nucleic Acid Res., 15, 3923 (1987) ）など
に由来する遺伝子が報告されている。

【０００６】このように、熱ショック蛋白質の一種であ
るＤｎａＫは、蛋白質変性の防止や変性蛋白質の再生を
促進する性質を有する。そのため、Ｄｎａｋは、酵素な
どの蛋白質の変性防止剤としての利用が検討されてい
る。

【０００７】一方、遺伝子組換え技術により、大腸菌な
どを用いて有用蛋白質を生産させる場合、必ずしも活性
を有する蛋白質が大量に得られるとは限らず、多くの蛋
白質が細胞内に凝集し、インクルージョン・ボディーと
して残存する。このような場合、ＤｎａＫなどの熱ショ
ック蛋白質を同時に発現させると、蛋白質の凝集が抑制
され、活性を有する可溶性蛋白質が高収率で得られるこ
と、分泌蛋白質においては効率よく蛋白質が分泌される
ことが期待される。

【０００８】そして、熱ショック蛋白質を安定かつ効率
よく発現させるためには、ＤｎａＫ自身が高い耐熱性を
有し、安定な蛋白質であることが必要である。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、蛋白質の変性を防止すると共に、変性蛋白質の再生
を促進でき、有用蛋白質を効率よく得る上で有用な耐熱
性の高い熱ショック蛋白質遺伝子を提供することにあ
る。

【００１０】本発明の他の目的は、熱ショック蛋白質を
産生させる上で有用な遺伝子、プラスミドおよび微生物
を提供することにある。

【００１１】本発明のさらに他の目的は、前記の如き熱
ショック蛋白質を効率よく産生する方法を提供すること
にある。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するため鋭意検討の結果、特定の好熱菌由来の熱
ショック蛋白質が高い耐熱安定性を示し、蛋白質の熱安
定性に優れることを見いだし、本発明を完成した。

【００１３】すなわち、本発明の遺伝子は、バチルス・
ステアロサーモフィルス（Bacillusstearothermophilu
s）由来の熱ショック蛋白質をコードする。

【００１４】また、本発明は、プロモーター、リボソー
ム結合部位を有する前記遺伝子が、ベクターＤＮＡに結
合しているプラスミド、このプラスミドにより形質転換
された微生物も提供する。本発明の方法では、前記形質
転換株を培養し、熱ショック蛋白質ＤｎａＫを製造す
る。

【００１５】熱ショック蛋白質をコードするｄｎａＫ遺
伝子は、好熱菌バチルス・ステアロサーモフィルス（Ba
cillus stearothermophilus）に由来すればよいが、好
ましいｄｎａＫ遺伝子は、耐熱性の高い好熱菌バチルス
・ステアロサーモフィルス（例えば、好熱菌バチルス・
ステアロサーモフィルスＳＩ１株（微工研菌寄第９６２
９号）、この菌株から潜在性プラスミドが自然脱落した
ＳＩＣ１株（M.Zhang,et al., Appl. Environ. Microbi
ol., 54, 3162-3164 (1988) ）などに由来する。前記熱
ショック蛋白質はＤｎａＫであるのが好ましい。

【００１６】前記ｄｎａＫ遺伝子には、例えば、下記の
塩基配列を含む遺伝子が含まれる。このような塩基配列
は、例えば、好熱菌バチルス・ステアロサーモフィルス
ＳＩ１株やＳＩＣ１株から前記遺伝子をクローニングす
ることにより確認できる。

【００１７】 ATGAGCAAAA TTATCGGCAT TGACTTAGGA ACGACAAACT CTTGCGTCGC TGTGTTGGAA 60 GGCGGCGAAG CGAAAGTCAT TCCAAACCCA GAAGGGAGCC GCACAACCCC GTCGGTTGTG 120 GCGTTTAAAA ACGGTGAACG TTTAGTCGGC GAGGTTGCCA AACGGCAAGC GATCACGAAT 180 CCGAATACGA TCATCTCGAT CAAACGCCAC ATGGGCACGG ATTACAAAGT CGAGATTGAA 240 GGAAAGCAAT ATACGCCGCA AGAAATTTCG GCGATCATTT TGCAATATTT AAAATCGTAC 300 GCTGAAGATT ATTTGGGTGA GCCGGTGACG CGCGCTGTCA TCACGTGCCG GCGTATTTCA 360 ACGATGCGCA GCGCCCAAGC GACGAAAGAG CCTGGACGCA TCGCCGGTTT GGAAGTTGAG 420 CGCATCATTA ACGAACCGAC GGCTGCGGCG CTTGCTTACG GCCTCGACAA AGGCGAGGAC 480 CAAACGATTC TCGTCTATGA CTTGGGGGGC GGAACGTTTG ACGTCTCGAT TTTGGAGCTT 540 GGCGACGGTG TGTTTGAAGT AAAAGCGACT GCTGGGGACA ACCATTTAGG TGGCGATGAT 600 TTTGACCAAG TCATTATCGA CTATTTAGTC AGCCAGTTTA AGCAAGAGAA CGGCATCGAC 660 TTGTCCAAAG ACAAAATGGC GCTCCAACGC TTAAAAGATG CGGCCGAAAA AGCGAAAAAA 720 GAACTGTCTG GTGTGACGCA GACGCAAATT TCGCTGCCGT TCATCAGTGC GAACGAAAAC 780 GGTCCGCTCC ACCTTGAGAC GACGCTCACT CGGGCAAAAT TTGAAGAGCT GTCCGCGCAC 840 CTCGTTGAGC GCTCGATGGG GCCAGTCCGT CAAGCGTTGC AAGATGCCGG TTTGACGTCT 900 GCGGATATTG ACAAGGTGAT TTTAGTCGGT GGTTCGACTC GCATTCCGGC CGTGCAAGAA 960 GCAATTAAGC GTGAGCTTGG CAAAGAGCCG CACAAAGGCG TTAATCCGGA TGAAGTCGTG 1020 GCCATCGGAG CGGCGATCCA AGGGCTCATC GCCGGTGAAG TGAAAGATAT TGTCTTGCTT 1080 GACGTTACCC TGTCGCTCGG TATTGAAACG ATGGGCGGCG TGTTTACGAA ATTGATCGAG 1140 CGGAATACGA CGATTCCGAC GAGCAAATCG CAAGTGTTCA CAACGGCGGC CGACAATCAA 1200 ACAACGGTCG ACATCCACGT TTTGCAAGGG GAGCGTCCGA TGGCGGCTGA CAACAAAACG 1260 CTTGGCCGCT TCCAGTTAAC TGACATCCCG CCGGCGCCGC GTGGTGTGCC GCAAATTGAA 1320 GTCACGTTCG ATATTGACGC CAACGGTATC GTTCATGTGC GTGCGAAAGA TTTAGGAACG 1380 AACAAAGAGC AATCCATTAC GATCAAATCG TCATCCGGCC TGTCGGAAGA GGAAATTCAG 1440 CGCATGATCA AAGAGGCGGA AGAAAACGCC GAAGCCGACC GGAAGCGGAA AGAAGCGGCC 1500 GATTTGCGCA ATGAAGCCGA TCAGCTCATC TTTACAACGG AAAAAACGGT CAAAGAGCTC 1560 GAAGGAAAAG TGAGCGCTGA TGAAATCAAA AAAGCGCAAG AAGCGAAAGA TGCATTGAAA 1620 GCAGCGCTTG AGAAAAACGA TCTTGATGAC ATCCGCAAGA AAAAAGATGC ACTGCAAGAA 1680 GCGGTGCAGC AGCTATCGAT CAAGCTGTAT GAACAAGCGG CGCAACAAGC CGAACAGGCC 1740 GAATCCGGCG CGGCCGATAA GAAAGACAAT GTGGTCGATG CGGAATTTGA AGAAGTCAAT 1800 GACGACAAA 1809 また、前記ｄｎａＫ遺伝子には、下記のアミノ酸配列を
コードする遺伝子が含まれる。

【００１８】 1 5 10 15 Met Ser Lys Ile Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys 20 25 30 Val Ala Val Leu Glu Gly Gly Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro 35 40 45 Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser Val Val Ala Phe Lys Asn Gly 50 55 60 Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys Arg Gln Ala Ile Thr Asn 65 70 75 Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His Met Gly Thr Asp Tyr 80 85 90 Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro Gln Glu Ile Ser 95 100 105 Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu Asp Tyr Leu 110 115 120 Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg Ile Ser 125 130 135 Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile Ala 140 145 150 Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 155 160 165 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val 170 175 180 Tyr Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu 185 190 195 Gly Asp Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His 200 205 210 Leu Gly Gly Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val 215 220 225 Ser Gln Phe Lys Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys 230 235 240 Met Ala Leu Gln Arg Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys 245 250 255 Glu Leu Ser Gly Val Thr Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile 260 265 270 Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr 275 280 285 Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser Ala His Leu Val Glu Arg Ser 290 295 300 Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln Asp Ala Gly Leu Thr Ser 305 310 315 Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile 320 325 330 Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu Gly Lys Glu Pro 335 340 345 His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile Gly Ala Ala 350 355 360 Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val Leu Leu 365 370 375 Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val Phe 380 385 390 Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 395 400 405 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile 410 415 420 His Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr 425 430 435 Leu Gly Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly 440 445 450 Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile 455 460 465 Val His Val Arg Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser 470 475 480 Ile Thr Ile Lys Ser Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln 485 490 495 Arg Met Ile Lys Glu Ala Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys 500 505 510 Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile 515 520 525 Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser 530 535 540 Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu Ala Lys Asp Ala Leu Lys 545 550 555 Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp Ile Arg Lys Lys Lys 560 565 570 Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser Ile Lys Leu Tyr 575 580 585 Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser Gly Ala Ala 590 595 600 Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu Val Asn Asp Asp Lys なお、前記アミノ酸配列における各アミノ酸の記号の意
味は次の通りである。Ala ；アラニン、Cys ；システイ
ン、Asp ；アスパラギン酸、Glu ；グルタミン酸、Phe
；フェニルアラニン、Gly ；グリシン、His ；ヒスチ
ジン、Ile ；イソロイシン、Lys ；リジン、Leu ；ロイ
シン、Met ；メチオニン、Asn ；アスパラギン、Pro ；
プロリン、Gln ；グルタミン、Arg ；アルギニン、Ser
；セリン、Thr ；スレオニン、Val ；バリン、Trp ；
トリプトファン、Tyr ；チロシン。

【００１９】好熱菌バチルス・ステアロサーモフィルス
のｄｎａＫ遺伝子のクローニングは、慣用の方法、例え
ば、好熱菌に属する前記微生物から染色体ＤＮＡを慣用
の方法（T. Imanaka, et al., J. Bacteriol., 147, 77
6-786 (1981)）で調製し、適当な制限酵素で消化してＤ
ＮＡ断片を調製する。このＤＮＡ断片を適当なプラスミ
ドベクターに挿入してプラスミドを構築し、このプラス
ミドを適当な宿主（例えば、大腸菌、枯草菌など）に導
入し、形質転換株により発現させることにより行なうこ
とができる。なお、形質転換株の選択は、耐性遺伝子な
どのマーカーを利用して行なうことができる。

【００２０】前記ｄｎａＫ遺伝子を含む染色体ＤＮＡ
は、制限酵素ＰｓｔＩ，ＨｉｎｄＩＩ，ＳｐｈＩ，Ｅｃ
ｏＴ２２１，ＨｉｎｄＩＩＩなどによる切断部位を有し
ている。適当な制限酵素を用いて染色体ＤＮＡを切断
し、前記遺伝子を含むＤＮＡ断片を調製する。好ましい
ＤＮＡ断片には、例えば、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよ
びＰｓｔＩによるＨｉｎｄＩＩＩ−ＰｓｔＩ断片が含ま
れる。

【００２１】本発明のプラスミドは、遺伝子の発現に関
与するプロモーター、リボソーム結合部位を有する前記
ｄｎａＫ遺伝子が、ベクターＤＮＡに結合している。プ
ロモーターとしては、例えば、枯草菌由来のアルカリプ
ロテアーゼ、中性プロテアーゼ、α−アミラーゼやレバ
ンシュークラーゼのプロモーター、黄色ブドウ球菌由来
のプロテインＡのプロモーター、大腸菌由来のβ−ガラ
クトシダーゼやトリプトファンオペロン、ファージ（Ｔ
７やλなど）由来のプロモーターなどが含まれる。な
お、安全性および分泌生産能の高いバチルス属細菌にお
いて効率的に機能するプロモーターには、例えば、枯草
菌のα−アミラーゼ遺伝子（amy Ｅ）のプロモーターな
どが含まれる。

【００２２】リボソーム結合部位として機能するＳＤ
（Shine-Dalgarno）配列は前記プロモーターの下流側に
連結されている場合が多い。ＳＤ配列は、通常、前記熱
ショック蛋白質をコードする遺伝子と前記プロモーター
との間に連結される。

【００２３】また、プラスミドベクターは、翻訳開始点
から下流側に、シグナル配列を有していてもよい。前記
ＳＤ配列の下流に連結された前記熱ショック蛋白質をコ
ードする遺伝子の下流には、ターミネーターが連結され
ていてもよい。

【００２４】前記遺伝子を含むＤＮＡ断片を、制限酵素
で切断したベクターに結合させることにより、プラスミ
ドベクターを構築できる。ベクターは、宿主内で安定に
複製可能であればよく、宿主の種類に応じて適当に選択
できる。宿主が枯草菌である場合、ベクターとしては、
例えば、プラスミドｐＵＢ１１０、ｐＣ１９４、ｐＥ１
９４、ｐＴＨＴ１５、ｐＢＤ１６やその誘導体などが使
用できる。また、宿主が大腸菌である場合には、ベクタ
ーとして、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＳＣ１０１，ｐＭ
Ｂ１やその誘導体などが使用できる。好ましいベクター
には、プラスミドベクターｐＢＲ３２２などが含まれ
る。

【００２５】前記バチルス・ステアロサーモフィルス
（Bacillus stearothermophilus）の染色体ＤＮＡのＨ
ｉｎｄＩＩＩ−ＰｓｔＩ断片、すなわちｄｎａＫ遺伝子
を含む断片がプラスミドベクターｐＢＲ３２２に導入さ
れたプラスミドをプラスミドｐＨＳ７０３と称する。

【００２６】なお、組換えプラスミドベクターの構築
は、「モレキュラークローニング」（“Molecular Clon
ing ”）、「ア ラボラトリーマニュアル」（“A Labo
ratoryMannual”, Cold Spring Harbor Laboratory, 19
89)などに記載された公知の方法、例えば、前記プロモ
ーター、ＳＤ配列、熱ショック蛋白質をコードする遺伝
子などをベクターに連結することにより、本発明の組換
えプラスミドベクターを構築できる。

【００２７】このようにした得られたプラスミドベクタ
ーを、宿主に導入して形質転換することにより、熱ショ
ック蛋白質生産性の高い微生物（形質転換株）が得られ
る。前記プラスミドベクターによる宿主の形質転換は、
慣用の方法、例えば、カルシウムイオンなどを用いるコ
ンピテントセル法、ポリエチレングリコールによるプロ
トプラスト形質転換法［Chang, S., et al., Mol. Gen.
Genet., 168, 111-115 (1979)］などを利用して行うこ
とができる。

【００２８】前記宿主としては、例えば、プラスミドに
応じて、大腸菌、枯草菌、乳酸菌、酵母などから選択で
きる。例えば、前記プラスミドベクターがｐＢＲ３２２
などの大腸菌のプラスミドである場合には、宿主とし
て、種々の大腸菌、例えば、ＪＭ１０９株などが使用で
きる。また、プラスミドベクターがｐＵＢ１１０などの
枯草菌のプラスミドである場合には、宿主として、バチ
ルス（Bacillus）属の微生物、特に安全性が高く、菌体
外に蛋白質を多量に分泌する枯草菌［バチルス・サブチ
リス（Bacillus subtilis）］に属し、プロテアーゼ活
性の低い菌株などが使用できる。

【００２９】ｄｎａＫ遺伝子が挿入されたプラスミドを
保持する形質転換株は、形質転換した遺伝子ライブラリ
ーの中から、ベクターの耐性遺伝子マーカーを利用して
選択できる。

【００３０】なお、ｄｎａＫ遺伝子が挿入されたプラス
ミドｐＨＳ７０３を保持する大腸菌ＪＭ１０９株は、大
腸菌（Escherichia coli）ＪＭ１０９（ｐＨＳ７０３）
株として、平成５年３月３１日に通産省工業技術院生命
工学工業技術研究所に、微生物寄託番号：微生物菌寄第
Ｐ−１３５７０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３５７０）として
寄託されている。

【００３１】好熱菌バチルス・ステアロサーモフィルス
に由来する熱ショック蛋白質は、前記の形質転換株を培
養することにより得ることができる。

【００３２】微生物の培養は、慣用の液体培養に準じて
行うことができる。すなわち、形質転換株の培養は、慣
用の成分、例えば、無機塩、炭素源、窒素源、増殖因子
成分などを含む液体培地で、振盪培養または通気攪拌培
養法により行うことができる。培地のｐＨは、例えば７
〜８程度である。培養は、微生物の培養に通常採用され
る条件、例えば、温度１５〜４５℃、好ましくは２５〜
４０℃、培養時間６〜６０時間程度の条件で行うことが
できる。

【００３３】宿主微生物が菌体外や菌体内などに産生す
る熱ショック蛋白質を回収することにより、熱ショック
蛋白質を得ることができる。熱ショック蛋白質の分離精
製は、慣用の方法、例えば、遠心分離、塩析、溶媒沈澱
法、透析法、限外濾過法、ＳＤＳ−アガロースゲル電気
泳動法、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法、
電気溶出法、イオン交換クロマトグラフィー法、疎水ク
ロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィ
ー法、ゲル濾過クロマトグラフィー法、逆相高速液体ク
ロマトグラフィー法、水素結合クロマトグラフィー法な
どやこれらを組合わせた方法で行うことができる。な
お、培養した宿主微生物を急激な熱ショックに晒し、生
成した熱ショック蛋白質を回収することにより、熱ショ
ック蛋白質を得てもよい。

【００３４】

【発明の効果】本発明の熱ショック蛋白質遺伝子は、バ
チルス・ステアロサーモフィルスに由来するので、耐熱
性が高く、蛋白質の変性を防止すると共に、変性蛋白質
の再生を促進できる有用蛋白質を効率よく得る上で有用
である。

【００３５】本発明のプラスミドおよび微生物は、バチ
ルス・ステアロサーモフィルスに由来する遺伝子を含む
ので、熱ショック蛋白質を産生させる上で有用である。

【００３６】本発明の方法によれば、前記プラスミドで
形質転換された微生物を培養するので、前記の如き熱シ
ョック蛋白質を効率よく産生できる。

【００３７】

【実施例】以下に、実施例に基づいて本発明をより詳細
に説明する。

【００３８】なお、実施例における操作は、特に記載し
ない限り、サムブルーク（Sambrook）らの「Molecular
Cloning 」第２版（Cold Spring Harbor, 1989）に従っ
て行なった。

【００３９】実施例１（ｄｎａＫ遺伝子のクローニン
グ） （１）染色体ＤＮＡの調製 好熱菌バチルス・ステアロサーモフィルスＳＩ１株（微
工研菌寄第９６２９号）から潜在性プラスミドが自然脱
落したＳＩＣ１株（M.Zhang,et al., Appl. Environ. M
icrobiol., 54, 3162-3164 (1988) ）を、２．０％トリ
プトン、１．０％酵母エキス、０．５％ＮａＣｌを含有
する培地（ｐＨ７．２）中、５５℃にて１６時間振蘯培
養した。得られた培養液を遠心分離して菌体を回収し、
常法（T.Imanaka, et al., J. Bacteriol., 147, 776-7
86 (1981)）に従って染色体ＤＮＡを調製した。

【００４０】（２）合成ＤＮＡの作製 既に報告されている大腸菌のｄｎａＫ遺伝子の塩基配列
（J.C.Bardwell, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. US
A, 81, 848-852 (1984)）およびバチルス・メガテリウ
ムのｄｎａＫ遺伝子の塩基配列（M.D.Sussman, et al.,
Nucleic Acid Res., 15, 3923 (1987) ）をもとに、Ｄ
ＮＡ合成機（アプライドバイオシステム社）を用いて、
下記のオリゴヌクレオチドからなる混合プライマーＰ
１、Ｐ２を合成した。

【００４１】 Ｐ１： GAATTCAAGA TAATAGGGAT AGATTTGGG Ｐ２： GAATTCGAAG GTGCCGCCGC CGAGGTCGTA （３）ＰＣＲ法によるクローニング 前記（１）で調製した染色体ＤＮＡと前記（２）で調製
したプライマーＰ１、Ｐ２を用いて、好熱菌染色体ＤＮ
Ａを鋳型としてＰＣＲ法により、ｄｎａＫ遺伝子の部分
的なクローニングを行った。その結果、約０．５ｋｂの
ＤＮＡ断片が増幅された。図１にクローニングされたｄ
ｎａＫ遺伝子の制限酵素地図を示す。なお、前記図１
中、斜線部はＰＣＲ法で増幅されたプローブのＤＮＡ断
片の位置を示す。

【００４２】この増幅されたＤＮＡ断片をプローブとし
て、各種制限酵素で消化した前記ＳＩＣ１株の染色体Ｄ
ＮＡに対してサザンハイブリダイゼーションを行ったと
ころ、図２に示されるように、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ
−ＰｓｔＩで消化したときに約３．０ｋｂ付近にハイブ
リタイズするシグナルが認められた。

【００４３】そこで、この付近のＤＮＡ断片を回収し、
ＨｉｎｄＩＩＩ−ＰｓｔＩで消化したプラスミドｐＢＲ
３２２に連結し、プラスミドｐＨＳ７０３を調製した。
このプラスミドｐＨＳ７０３で大腸菌ＪＭ１０９株を形
質転換して遺伝子ライブラリーを作製した。そして目的
とするプラスミドｐＨＳ７０３を保持する株を大腸菌
（Escherichia coli）ＪＭ１０９（ｐＨＳ７０３）株と
して得た。

【００４４】実施例２（ＤＮＡ塩基配列の解析） 得られたｄｎａＫ遺伝子についてジデオキシ法により塩
基配列の決定を行った。その結果、好熱菌ＳＩＣ１株由
来のｄｎａＫ遺伝子は、下記のように、１８０９ｂｐ、
６０３アミノ酸残基からなっており、開始コドンＡＴＧ
の１０塩基上流にはＳＤ配列、さらに上流にはプロモー
ター配列が存在していた。また、終止コドンのすぐ下流
にはパリンドローム配列が認められた。この塩基配列か
ら予想されるアミノ酸配列について大腸菌、枯草菌、及
びバチルス・メガテリウム由来のＤｎａＫと比較したと
ころ、各々５７％、８６％、及び８３％と高い相同性を
示した。

【００４５】 ACGGAAAACG AACAAGCAAA ATCGATTTTG CAAGGGGTAG AAATGGTGTA CCGTTCGCTC 60 CTTGACGCGT TAAGAAAAGA AGGTGTCGAG GTGATTGAAG CGGTTGGCAA ACCGTTTGAT 120 -35領域 C CCCATTTAC ACCAAGCAGT TATGCAGACG GATGAAGGGC CTATGAGCCG AATACCGTCG 180 -10領域 TGGAGGAGCT GCAAAAAGGC TATAAGTTAA AAGACCGCAT TCTCCGTCCC GCTATGGTAA 240 AAGTGAGCCA ATAATGGAAA C GGAGG GCGA TGAGCG ATG AGC AAA ATT ATC GGC 294 SD配列 Met Ser Lys Ile Ile Gly 1 5 ATT GAC TTA GGA ACG ACA AAC TCT TGC GTC GCT GTG TTG GAA GGC GGC 342 Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys Val Ala Val Leu Glu Gly Gly 10 15 20 GAA GCG AAA GTC ATT CCA AAC CCA GAA GGG AGC CGC ACA ACC CCG TCG 390 Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser 25 30 35 GTT GTG GCG TTT AAA AAC GGT GAA CGT TTA GTC GGC GAG GTT GCC AAA 438 Val Val Ala Phe Lys Asn Gly Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys 40 45 50 CGG CAA GCG ATC ACG AAT CCG AAT ACG ATC ATC TCG ATC AAA CGC CAC 486 Arg Gln Ala Ile Thr Asn Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His 55 60 65 70 ATG GGC ACG GAT TAC AAA GTC GAG ATT GAA GGA AAG CAA TAT ACG CCG 534 Met Gly Thr Asp Tyr Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro 75 80 85 CAA GAA ATT TCG GCG ATC ATT TTG CAA TAT TTA AAA TCG TAC GCT GAA 582 Gln Glu Ile Ser Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu 90 95 100 GAT TAT TTG GGT GAG CCG GTG ACG CGC GCT GTC ATC ACG TGC CGG CGT 630 Asp Tyr Leu Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg 105 110 115 ATT TCA ACG ATG CGC AGC GCC CAA GCG ACG AAA GAG CCT GGA CGC ATC 678 Ile Ser Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile 120 125 130 GCC GGT TTG GAA GTT GAG CGC ATC ATT AAC GAA CCG ACG GCT GCG GCG 726 Ala Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 135 140 145 150 CTT GCT TAC GGC CTC GAC AAA GGC GAG GAC CAA ACG ATT CTC GTC TAT 774 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val Tyr 155 160 165 GAC TTG GGG GGC GGA ACG TTT GAC GTC TCG ATT TTG GAG CTT GGC GAC 822 Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu Gly Asp 170 175 180 GGT GTG TTT GAA GTA AAA GCG ACT GCT GGG GAC AAC CAT TTA GGT GGC 870 Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His Leu Gly Gly 185 190 195 GAT GAT TTT GAC CAA GTC ATT ATC GAC TAT TTA GTC AGC CAG TTT AAG 918 Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val Ser Gln Phe Lys 200 205 210 CAA GAG AAC GGC ATC GAC TTG TCC AAA GAC AAA ATG GCG CTC CAA CGC 966 Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys Met Ala Leu Gln Arg 215 220 225 230 TTA AAA GAT GCG GCC GAA AAA GCG AAA AAA GAA CTG TCT GGT GTG ACG 1014 Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys Glu Leu Ser Gly Val Thr 235 240 245 CAG ACG CAA ATT TCG CTG CCG TTC ATC AGT GCG AAC GAA AAC GGT CCG 1062 Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro 250 255 260 CTC CAC CTT GAG ACG ACG CTC ACT CGG GCA AAA TTT GAA GAG CTG TCC 1110 Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser 265 270 275 GCG CAC CTC GTT GAG CGC TCG ATG GGG CCA GTC CGT CAA GCG TTG CAA 1158 Ala His Leu Val Glu Arg Ser Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln 280 285 290 GAT GCC GGT TTG ACG TCT GCG GAT ATT GAC AAG GTG ATT TTA GTC GGT 1206 Asp Ala Gly Leu Thr Ser Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly 295 300 305 310 GGT TCG ACT CGC ATT CCG GCC GTG CAA GAA GCA ATT AAG CGT GAG CTT 1254 Gly Ser Thr Arg Ile Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu 315 320 325 GGC AAA GAG CCG CAC AAA GGC GTT AAT CCG GAT GAA GTC GTG GCC ATC 1302 Gly Lys Glu Pro His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile 330 335 340 GGA GCG GCG ATC CAA GGG CTC ATC GCC GGT GAA GTG AAA GAT ATT GTC 1350 Gly Ala Ala Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val 345 350 355 TTG CTT GAC GTT ACC CTG TCG CTC GGT ATT GAA ACG ATG GGC GGC GTG 1398 Leu Leu Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val 360 365 370 TTT ACG AAA TTG ATC GAG CGG AAT ACG ACG ATT CCG ACG AGC AAA TCG 1446 Phe Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 375 380 385 390 CAA GTG TTC ACA ACG GCG GCC GAC AAT CAA ACA ACG GTC GAC ATC CAC 1494 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile His 395 400 405 GTT TTG CAA GGG GAG CGT CCG ATG GCG GCT GAC AAC AAA ACG CTT GGC 1542 Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr Leu Gly 410 415 420 CGC TTC CAG TTA ACT GAC ATC CCG CCG GCG CCG CGT GGT GTG CCG CAA 1590 Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln 425 430 435 ATT GAA GTC ACG TTC GAT ATT GAC GCC AAC GGT ATC GTT CAT GTG CGT 1638 Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile Val His Val Arg 440 445 450 GCG AAA GAT TTA GGA ACG AAC AAA GAG CAA TCC ATT ACG ATC AAA TCG 1686 Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser Ile Thr Ile Lys Ser 455 460 465 470 TCA TCC GGC CTG TCG GAA GAG GAA ATT CAG CGC ATG ATC AAA GAG GCG 1734 Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln Arg Met Ile Lys Glu Ala 475 480 485 GAA GAA AAC GCC GAA GCC GAC CGG AAG CGG AAA GAA GCG GCC GAT TTG 1782 Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu 490 495 500 CGC AAT GAA GCC GAT CAG CTC ATC TTT ACA ACG GAA AAA ACG GTC AAA 1830 Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys 505 510 515 GAG CTC GAA GGA AAA GTG AGC GCT GAT GAA ATC AAA AAA GCG CAA GAA 1878 Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu 520 525 530 GCG AAA GAT GCA TTG AAA GCA GCG CTT GAG AAA AAC GAT CTT GAT GAC 1926 Ala Lys Asp Ala Leu Lys Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp 535 540 545 550 ATC CGC AAG AAA AAA GAT GCA CTG CAA GAA GCG GTG CAG CAG CTA TCG 1974 Ile Arg Lys Lys Lys Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser 555 560 565 ATC AAG CTG TAT GAA CAA GCG GCG CAA CAA GCC GAA CAG GCC GAA TCC 2022 Ile Lys Leu Tyr Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser 570 575 580 GGC GCG GCC GAT AAG AAA GAC AAT GTG GTC GAT GCG GAA TTT GAA GAA 2070 Gly Ala Ala Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu 585 590 595 GTC AAT GAC GAC AAA TAA TGAAAAAAAG TCAAAGTCAG GCCTGCCTTG 2118 Val Asn Asp Asp Lys *** −−−−−−−−−→ ←−−−− 600 GCTTTGACTT TTTT TCTAGC ATTCACATAT TGCCATAAAA TAAAGGGAAA 2168 −−−−−−−− TGATAAAATT ATCTTTATCT GAGTGAATCG GGAGTGG 2205 なお、前記塩基配列において、ＳＤ配列およびプロモー
ターと推定される領域には、それぞれ下線を付し、終始
コドンには＊、パリンドローム配列には−→←−を付し
た。

【００４６】

【配列表】

【００４７】配列番号：１ 配列の長さ：１８０９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus
stearothermophilus） 株名：ＳＩＣ１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１．．１８０９ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ATGAGCAAAA TTATCGGCAT TGACTTAGGA ACGACAAACT CTTGCGTCGC TGTGTTGGAA 60 GGCGGCGAAG CGAAAGTCAT TCCAAACCCA GAAGGGAGCC GCACAACCCC GTCGGTTGTG 120 GCGTTTAAAA ACGGTGAACG TTTAGTCGGC GAGGTTGCCA AACGGCAAGC GATCACGAAT 180 CCGAATACGA TCATCTCGAT CAAACGCCAC ATGGGCACGG ATTACAAAGT CGAGATTGAA 240 GGAAAGCAAT ATACGCCGCA AGAAATTTCG GCGATCATTT TGCAATATTT AAAATCGTAC 300 GCTGAAGATT ATTTGGGTGA GCCGGTGACG CGCGCTGTCA TCACGTGCCG GCGTATTTCA 360 ACGATGCGCA GCGCCCAAGC GACGAAAGAG CCTGGACGCA TCGCCGGTTT GGAAGTTGAG 420 CGCATCATTA ACGAACCGAC GGCTGCGGCG CTTGCTTACG GCCTCGACAA AGGCGAGGAC 480 CAAACGATTC TCGTCTATGA CTTGGGGGGC GGAACGTTTG ACGTCTCGAT TTTGGAGCTT 540 GGCGACGGTG TGTTTGAAGT AAAAGCGACT GCTGGGGACA ACCATTTAGG TGGCGATGAT 600 TTTGACCAAG TCATTATCGA CTATTTAGTC AGCCAGTTTA AGCAAGAGAA CGGCATCGAC 660 TTGTCCAAAG ACAAAATGGC GCTCCAACGC TTAAAAGATG CGGCCGAAAA AGCGAAAAAA 720 GAACTGTCTG GTGTGACGCA GACGCAAATT TCGCTGCCGT TCATCAGTGC GAACGAAAAC 780 GGTCCGCTCC ACCTTGAGAC GACGCTCACT CGGGCAAAAT TTGAAGAGCT GTCCGCGCAC 840 CTCGTTGAGC GCTCGATGGG GCCAGTCCGT CAAGCGTTGC AAGATGCCGG TTTGACGTCT 900 GCGGATATTG ACAAGGTGAT TTTAGTCGGT GGTTCGACTC GCATTCCGGC CGTGCAAGAA 960 GCAATTAAGC GTGAGCTTGG CAAAGAGCCG CACAAAGGCG TTAATCCGGA TGAAGTCGTG 1020 GCCATCGGAG CGGCGATCCA AGGGCTCATC GCCGGTGAAG TGAAAGATAT TGTCTTGCTT 1080 GACGTTACCC TGTCGCTCGG TATTGAAACG ATGGGCGGCG TGTTTACGAA ATTGATCGAG 1140 CGGAATACGA CGATTCCGAC GAGCAAATCG CAAGTGTTCA CAACGGCGGC CGACAATCAA 1200 ACAACGGTCG ACATCCACGT TTTGCAAGGG GAGCGTCCGA TGGCGGCTGA CAACAAAACG 1260 CTTGGCCGCT TCCAGTTAAC TGACATCCCG CCGGCGCCGC GTGGTGTGCC GCAAATTGAA 1320 GTCACGTTCG ATATTGACGC CAACGGTATC GTTCATGTGC GTGCGAAAGA TTTAGGAACG 1380 AACAAAGAGC AATCCATTAC GATCAAATCG TCATCCGGCC TGTCGGAAGA GGAAATTCAG 1440 CGCATGATCA AAGAGGCGGA AGAAAACGCC GAAGCCGACC GGAAGCGGAA AGAAGCGGCC 1500 GATTTGCGCA ATGAAGCCGA TCAGCTCATC TTTACAACGG AAAAAACGGT CAAAGAGCTC 1560 GAAGGAAAAG TGAGCGCTGA TGAAATCAAA AAAGCGCAAG AAGCGAAAGA TGCATTGAAA 1620 GCAGCGCTTG AGAAAAACGA TCTTGATGAC ATCCGCAAGA AAAAAGATGC ACTGCAAGAA 1680 GCGGTGCAGC AGCTATCGAT CAAGCTGTAT GAACAAGCGG CGCAACAAGC CGAACAGGCC 1740 GAATCCGGCG CGGCCGATAA GAAAGACAAT GTGGTCGATG CGGAATTTGA AGAAGTCAAT 1800 GACGACAAA 1809

【００４８】配列番号：２ 配列の長さ：６０３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus
stearothermophilus） 株名：ＳＩＣ１ 配列 Met Ser Lys Ile Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys 1 5 10 15 Val Ala Val Leu Glu Gly Gly Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro 20 25 30 Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser Val Val Ala Phe Lys Asn Gly 35 40 45 Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys Arg Gln Ala Ile Thr Asn 50 55 60 Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His Met Gly Thr Asp Tyr 65 70 75 Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro Gln Glu Ile Ser 80 85 90 Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu Asp Tyr Leu 95 100 105 Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg Ile Ser 110 115 120 Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile Ala 125 130 135 Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 140 145 150 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val 155 160 165 Tyr Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu 170 175 180 Gly Asp Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His 185 190 195 Leu Gly Gly Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val 200 205 210 Ser Gln Phe Lys Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys 215 220 225 Met Ala Leu Gln Arg Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys 230 235 240 Glu Leu Ser Gly Val Thr Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile 245 250 255 Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr 260 265 270 Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser Ala His Leu Val Glu Arg Ser 275 280 285 Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln Asp Ala Gly Leu Thr Ser 290 295 300 Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile 305 310 315 Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu Gly Lys Glu Pro 320 325 330 His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile Gly Ala Ala 335 340 345 Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val Leu Leu 350 355 360 Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val Phe 365 370 375 Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 380 385 390 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile 395 400 405 His Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr 410 415 420 Leu Gly Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly 425 430 435 Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile 440 445 450 Val His Val Arg Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser 455 460 465 Ile Thr Ile Lys Ser Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln 470 475 480 Arg Met Ile Lys Glu Ala Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys 485 490 495 Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile 500 505 510 Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser 515 520 525 Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu Ala Lys Asp Ala Leu Lys 530 535 540 Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp Ile Arg Lys Lys Lys 545 550 555 Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser Ile Lys Leu Tyr 560 565 570 Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser Gly Ala Ala 575 580 585 Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu Val Asn 590 595 600 Asp Asp Lys 603

【００４９】配列番号：３ 配列の長さ：１８０９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus
stearothermophilus） 株名：ＳＩＣ１ 配列の特徴 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：１．．１８０９ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ATGAGCAAAA TTATCGGCAT TGACTTAGGA ACGACAAACT CTTGCGTCGC TGTGTTGGAA 60 GGCGGCGAAG CGAAAGTCAT TCCAAACCCA GAAGGGAGCC GCACAACCCC GTCGGTTGTG 120 GCGTTTAAAA ACGGTGAACG TTTAGTCGGC GAGGTTGCCA AACGGCAAGC GATCACGAAT 180 CCGAATACGA TCATCTCGAT CAAACGCCAC ATGGGCACGG ATTACAAAGT CGAGATTGAA 240 GGAAAGCAAT ATACGCCGCA AGAAATTTCG GCGATCATTT TGCAATATTT AAAATCGTAC 300 GCTGAAGATT ATTTGGGTGA GCCGGTGACG CGCGCTGTCA TCACGTGCCG GCGTATTTCA 360 ACGATGCGCA GCGCCCAAGC GACGAAAGAG CCTGGACGCA TCGCCGGTTT GGAAGTTGAG 420 CGCATCATTA ACGAACCGAC GGCTGCGGCG CTTGCTTACG GCCTCGACAA AGGCGAGGAC 480 CAAACGATTC TCGTCTATGA CTTGGGGGGC GGAACGTTTG ACGTCTCGAT TTTGGAGCTT 540 GGCGACGGTG TGTTTGAAGT AAAAGCGACT GCTGGGGACA ACCATTTAGG TGGCGATGAT 600 TTTGACCAAG TCATTATCGA CTATTTAGTC AGCCAGTTTA AGCAAGAGAA CGGCATCGAC 660 TTGTCCAAAG ACAAAATGGC GCTCCAACGC TTAAAAGATG CGGCCGAAAA AGCGAAAAAA 720 GAACTGTCTG GTGTGACGCA GACGCAAATT TCGCTGCCGT TCATCAGTGC GAACGAAAAC 780 GGTCCGCTCC ACCTTGAGAC GACGCTCACT CGGGCAAAAT TTGAAGAGCT GTCCGCGCAC 840 CTCGTTGAGC GCTCGATGGG GCCAGTCCGT CAAGCGTTGC AAGATGCCGG TTTGACGTCT 900 GCGGATATTG ACAAGGTGAT TTTAGTCGGT GGTTCGACTC GCATTCCGGC CGTGCAAGAA 960 GCAATTAAGC GTGAGCTTGG CAAAGAGCCG CACAAAGGCG TTAATCCGGA TGAAGTCGTG 1020 GCCATCGGAG CGGCGATCCA AGGGCTCATC GCCGGTGAAG TGAAAGATAT TGTCTTGCTT 1080 GACGTTACCC TGTCGCTCGG TATTGAAACG ATGGGCGGCG TGTTTACGAA ATTGATCGAG 1140 CGGAATACGA CGATTCCGAC GAGCAAATCG CAAGTGTTCA CAACGGCGGC CGACAATCAA 1200 ACAACGGTCG ACATCCACGT TTTGCAAGGG GAGCGTCCGA TGGCGGCTGA CAACAAAACG 1260 CTTGGCCGCT TCCAGTTAAC TGACATCCCG CCGGCGCCGC GTGGTGTGCC GCAAATTGAA 1320 GTCACGTTCG ATATTGACGC CAACGGTATC GTTCATGTGC GTGCGAAAGA TTTAGGAACG 1380 AACAAAGAGC AATCCATTAC GATCAAATCG TCATCCGGCC TGTCGGAAGA GGAAATTCAG 1440 CGCATGATCA AAGAGGCGGA AGAAAACGCC GAAGCCGACC GGAAGCGGAA AGAAGCGGCC 1500 GATTTGCGCA ATGAAGCCGA TCAGCTCATC TTTACAACGG AAAAAACGGT CAAAGAGCTC 1560 GAAGGAAAAG TGAGCGCTGA TGAAATCAAA AAAGCGCAAG AAGCGAAAGA TGCATTGAAA 1620 GCAGCGCTTG AGAAAAACGA TCTTGATGAC ATCCGCAAGA AAAAAGATGC ACTGCAAGAA 1680 GCGGTGCAGC AGCTATCGAT CAAGCTGTAT GAACAAGCGG CGCAACAAGC CGAACAGGCC 1740 GAATCCGGCG CGGCCGATAA GAAAGACAAT GTGGTCGATG CGGAATTTGA AGAAGTCAAT 1800 GACGACAAA 1809

【００５０】配列番号：４ 配列の長さ：６０３ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 起源 生物名：バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus
stearothermophilus） 株名：ＳＩＣ１ 配列 Met Ser Lys Ile Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys 1 5 10 15 Val Ala Val Leu Glu Gly Gly Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro 20 25 30 Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser Val Val Ala Phe Lys Asn Gly 35 40 45 Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys Arg Gln Ala Ile Thr Asn 50 55 60 Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His Met Gly Thr Asp Tyr 65 70 75 Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro Gln Glu Ile Ser 80 85 90 Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu Asp Tyr Leu 95 100 105 Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg Ile Ser 110 115 120 Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile Ala 125 130 135 Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 140 145 150 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val 155 160 165 Tyr Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu 170 175 180 Gly Asp Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His 185 190 195 Leu Gly Gly Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val 200 205 210 Ser Gln Phe Lys Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys 215 220 225 Met Ala Leu Gln Arg Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys 230 235 240 Glu Leu Ser Gly Val Thr Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile 245 250 255 Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr 260 265 270 Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser Ala His Leu Val Glu Arg Ser 275 280 285 Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln Asp Ala Gly Leu Thr Ser 290 295 300 Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile 305 310 315 Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu Gly Lys Glu Pro 320 325 330 His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile Gly Ala Ala 335 340 345 Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val Leu Leu 350 355 360 Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val Phe 365 370 375 Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 380 385 390 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile 395 400 405 His Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr 410 415 420 Leu Gly Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly 425 430 435 Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile 440 445 450 Val His Val Arg Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser 455 460 465 Ile Thr Ile Lys Ser Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln 470 475 480 Arg Met Ile Lys Glu Ala Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys 485 490 495 Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile 500 505 510 Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser 515 520 525 Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu Ala Lys Asp Ala Leu Lys 530 535 540 Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp Ile Arg Lys Lys Lys 545 550 555 Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser Ile Lys Leu Tyr 560 565 570 Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser Gly Ala Ala 575 580 585 Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu Val Asn 590 595 600 Asp Asp Lys 603

【００５１】配列番号：５ 配列の長さ：２９ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｐｒｉｍｅｒ ｂｉｎｄ 存在位置：１．．２９ 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GAATTCAAGA TAATAGGGAT AGATTTGGG

【００５２】配列番号：６ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列の特徴 特徴を表す記号：ｐｒｉｍｅｒ ｂｉｎｄ 存在位置：１．．３０ 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GAATTCGAAG GTGCCGCCGC CGAGGTCGTA

【００５３】配列番号：７ 配列の長さ：２２０５ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：バチルス・ステアロサーモフィルス（Bacillus
stearothermophilus） 株名：ＳＩＣ１ 配列の特徴 特徴を表す記号：-35 signal 存在位置：１１６．．１２１ 特徴を決定した方法：Ｅ 特徴を表す記号：-10 signal 存在位置：１４１．．１４６ 特徴を決定した方法：Ｅ 特徴を表す記号：binding-site 存在位置：２６２．．２６６ 特徴を決定した方法：Ｅ 特徴を表す記号：ＣＤＳ 存在位置：２７７．．２０８５ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ACGGAAAACG AACAAGCAAA ATCGATTTTG CAAGGGGTAG AAATGGTGTA CCGTTCGCTC 60 CTTGACGCGT TAAGAAAAGA AGGTGTCGAG GTGATTGAAG CGGTTGGCAA ACCGTTTGAT 120 CCCCATTTAC ACCAAGCAGT TATGCAGACG GATGAAGGGC CTATGAGCCG AATACCGTCG 180 TGGAGGAGCT GCAAAAAGGC TATAAGTTAA AAGACCGCAT TCTCCGTCCC GCTATGGTAA 240 AAGTGAGCCA ATAATGGAAA CGGAGGGCGA TGAGCG ATG AGC AAA ATT ATC GGC 294 Met Ser Lys Ile Ile Gly 1 5 ATT GAC TTA GGA ACG ACA AAC TCT TGC GTC GCT GTG TTG GAA GGC GGC 342 Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys Val Ala Val Leu Glu Gly Gly 10 15 20 GAA GCG AAA GTC ATT CCA AAC CCA GAA GGG AGC CGC ACA ACC CCG TCG 390 Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser 25 30 35 GTT GTG GCG TTT AAA AAC GGT GAA CGT TTA GTC GGC GAG GTT GCC AAA 438 Val Val Ala Phe Lys Asn Gly Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys 40 45 50 CGG CAA GCG ATC ACG AAT CCG AAT ACG ATC ATC TCG ATC AAA CGC CAC 486 Arg Gln Ala Ile Thr Asn Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His 55 60 65 70 ATG GGC ACG GAT TAC AAA GTC GAG ATT GAA GGA AAG CAA TAT ACG CCG 534 Met Gly Thr Asp Tyr Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro 75 80 85 CAA GAA ATT TCG GCG ATC ATT TTG CAA TAT TTA AAA TCG TAC GCT GAA 582 Gln Glu Ile Ser Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu 90 95 100 GAT TAT TTG GGT GAG CCG GTG ACG CGC GCT GTC ATC ACG TGC CGG CGT 630 Asp Tyr Leu Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg 105 110 115 ATT TCA ACG ATG CGC AGC GCC CAA GCG ACG AAA GAG CCT GGA CGC ATC 678 Ile Ser Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile 120 125 130 GCC GGT TTG GAA GTT GAG CGC ATC ATT AAC GAA CCG ACG GCT GCG GCG 726 Ala Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 135 140 145 150 CTT GCT TAC GGC CTC GAC AAA GGC GAG GAC CAA ACG ATT CTC GTC TAT 774 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val Tyr 155 160 165 GAC TTG GGG GGC GGA ACG TTT GAC GTC TCG ATT TTG GAG CTT GGC GAC 822 Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu Gly Asp 170 175 180 GGT GTG TTT GAA GTA AAA GCG ACT GCT GGG GAC AAC CAT TTA GGT GGC 870 Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His Leu Gly Gly 185 190 195 GAT GAT TTT GAC CAA GTC ATT ATC GAC TAT TTA GTC AGC CAG TTT AAG 918 Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val Ser Gln Phe Lys 200 205 210 CAA GAG AAC GGC ATC GAC TTG TCC AAA GAC AAA ATG GCG CTC CAA CGC 966 Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys Met Ala Leu Gln Arg 215 220 225 230 TTA AAA GAT GCG GCC GAA AAA GCG AAA AAA GAA CTG TCT GGT GTG ACG 1014 Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys Glu Leu Ser Gly Val Thr 235 240 245 CAG ACG CAA ATT TCG CTG CCG TTC ATC AGT GCG AAC GAA AAC GGT CCG 1062 Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro 250 255 260 CTC CAC CTT GAG ACG ACG CTC ACT CGG GCA AAA TTT GAA GAG CTG TCC 1110 Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser 265 270 275 GCG CAC CTC GTT GAG CGC TCG ATG GGG CCA GTC CGT CAA GCG TTG CAA 1158 Ala His Leu Val Glu Arg Ser Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln 280 285 290 GAT GCC GGT TTG ACG TCT GCG GAT ATT GAC AAG GTG ATT TTA GTC GGT 1206 Asp Ala Gly Leu Thr Ser Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly 295 300 305 310 GGT TCG ACT CGC ATT CCG GCC GTG CAA GAA GCA ATT AAG CGT GAG CTT 1254 Gly Ser Thr Arg Ile Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu 315 320 325 GGC AAA GAG CCG CAC AAA GGC GTT AAT CCG GAT GAA GTC GTG GCC ATC 1302 Gly Lys Glu Pro His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile 330 335 340 GGA GCG GCG ATC CAA GGG CTC ATC GCC GGT GAA GTG AAA GAT ATT GTC 1350 Gly Ala Ala Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val 345 350 355 TTG CTT GAC GTT ACC CTG TCG CTC GGT ATT GAA ACG ATG GGC GGC GTG 1398 Leu Leu Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val 360 365 370 TTT ACG AAA TTG ATC GAG CGG AAT ACG ACG ATT CCG ACG AGC AAA TCG 1446 Phe Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 375 380 385 390 CAA GTG TTC ACA ACG GCG GCC GAC AAT CAA ACA ACG GTC GAC ATC CAC 1494 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile His 395 400 405 GTT TTG CAA GGG GAG CGT CCG ATG GCG GCT GAC AAC AAA ACG CTT GGC 1542 Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr Leu Gly 410 415 420 CGC TTC CAG TTA ACT GAC ATC CCG CCG GCG CCG CGT GGT GTG CCG CAA 1590 Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln 425 430 435 ATT GAA GTC ACG TTC GAT ATT GAC GCC AAC GGT ATC GTT CAT GTG CGT 1638 Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile Val His Val Arg 440 445 450 GCG AAA GAT TTA GGA ACG AAC AAA GAG CAA TCC ATT ACG ATC AAA TCG 1686 Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser Ile Thr Ile Lys Ser ＴＣＡ ＴＣＣ ＧＧＣ ＣＴＧ ＴＣＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＴ
Ｔ ＣＡＧ ＣＧＣ ＡＴＧ ＡＴＣ ＡＡＡ ＧＡＧ ＧＣＧ 1734 Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln Arg Met Ile Lys Glu Ala 475 480 485 GAA GAA AAC GCC GAA GCC GAC CGG AAG CGG AAA GAA GCG GCC GAT TTG 1782 Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu 490 495 500 CGC AAT GAA GCC GAT CAG CTC ATC TTT ACA ACG GAA AAA ACG GTC AAA 1830 Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys 505 510 515 GAG CTC GAA GGA AAA GTG AGC GCT GAT GAA ATC AAA AAA GCG CAA GAA 1878 Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu 520 525 530 GCG AAA GAT GCA TTG AAA GCA GCG CTT GAG AAA AAC GAT CTT GAT GAC 1926 Ala Lys Asp Ala Leu Lys Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp 535 540 545 550 ATC CGC AAG AAA AAA GAT GCA CTG CAA GAA GCG GTG CAG CAG CTA TCG 1974 Ile Arg Lys Lys Lys Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser 555 560 565 ATC AAG CTG TAT GAA CAA GCG GCG CAA CAA GCC GAA CAG GCC GAA TCC 2022 Ile Lys Leu Tyr Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser 570 575 580 GGC GCG GCC GAT AAG AAA GAC AAT GTG GTC GAT GCG GAA TTT GAA GAA 2070 Gly Ala Ala Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu 585 590 595 GTC AAT GAC GAC AAA TAA TGAAAAAAAG TCAAAGTCAG GCCTGCCTTG 2118 Val Asn Asp Asp Lys 600 GCTTTGACTT TTTTTCTAGC ATTCACATAT TGCCATAAAA TAAAGGGAAA 2168 TGATAAAATT ATCTTTATCT GAGTGAATCG GGAGTGG 2205

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はクローニングされたｄｎａＫ遺伝子の制
限酵素地図である。

【図２】図２は実施例１でのサザンハイブリダイゼーシ
ョンの結果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:07 //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:19） 5/00 Ａ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:07） (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/32 C12P 21/00 - 21/02 ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 バチルス・ステアロサーモフィルス（Ba
   cillus stearothermophilus）由来の熱ショック蛋白質
   をコードする遺伝子であって、下記アミノ酸配列をコー
   ドする遺伝子。 1 5 10 15 Met Ser Lys Ile Ile Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Asn Ser Cys 20 25 30 Val Ala Val Leu Glu Gly Gly Glu Ala Lys Val Ile Pro Asn Pro 35 40 45 Glu Gly Ser Arg Thr Thr Pro Ser Val Val Ala Phe Lys Asn Gly 50 55 60 Glu Arg Leu Val Gly Glu Val Ala Lys Arg Gln Ala Ile Thr Asn 65 70 75 Pro Asn Thr Ile Ile Ser Ile Lys Arg His Met Gly Thr Asp Tyr 80 85 90 Lys Val Glu Ile Glu Gly Lys Gln Tyr Thr Pro Gln Glu Ile Ser 95 100 105 Ala Ile Ile Leu Gln Tyr Leu Lys Ser Tyr Ala Glu Asp Tyr Leu 110 115 120 Gly Glu Pro Val Thr Arg Ala Val Ile Thr Cys Arg Arg Ile Ser 125 130 135 Thr Met Arg Ser Ala Gln Ala Thr Lys Glu Pro Gly Arg Ile Ala 140 145 150 Gly Leu Glu Val Glu Arg Ile Ile Asn Glu Pro Thr Ala Ala Ala 155 160 165 Leu Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Gly Glu Asp Gln Thr Ile Leu Val 170 175 180 Tyr Asp Leu Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val Ser Ile Leu Glu Leu 185 190 195 Gly Asp Gly Val Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala Gly Asp Asn His 200 205 210 Leu Gly Gly Asp Asp Phe Asp Gln Val Ile Ile Asp Tyr Leu Val 215 220 225 Ser Gln Phe Lys Gln Glu Asn Gly Ile Asp Leu Ser Lys Asp Lys 230 235 240 Met Ala Leu Gln Arg Leu Lys Asp Ala Ala Glu Lys Ala Lys Lys 245 250 255 Glu Leu Ser Gly Val Thr Gln Thr Gln Ile Ser Leu Pro Phe Ile 260 265 270 Ser Ala Asn Glu Asn Gly Pro Leu His Leu Glu Thr Thr Leu Thr 275 280 285 Arg Ala Lys Phe Glu Glu Leu Ser Ala His Leu Val Glu Arg Ser 290 295 300 Met Gly Pro Val Arg Gln Ala Leu Gln Asp Ala Gly Leu Thr Ser 305 310 315 Ala Asp Ile Asp Lys Val Ile Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile 320 325 330 Pro Ala Val Gln Glu Ala Ile Lys Arg Glu Leu Gly Lys Glu Pro 335 340 345 His Lys Gly Val Asn Pro Asp Glu Val Val Ala Ile Gly Ala Ala 350 355 360 Ile Gln Gly Leu Ile Ala Gly Glu Val Lys Asp Ile Val Leu Leu 365 370 375 Asp Val Thr Leu Ser Leu Gly Ile Glu Thr Met Gly Gly Val Phe 380 385 390 Thr Lys Leu Ile Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Ser Lys Ser 395 400 405 Gln Val Phe Thr Thr Ala Ala Asp Asn Gln Thr Thr Val Asp Ile 410 415 420 His Val Leu Gln Gly Glu Arg Pro Met Ala Ala Asp Asn Lys Thr 425 430 435 Leu Gly Arg Phe Gln Leu Thr Asp Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly 440 445 450 Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile 455 460 465 Val His Val Arg Ala Lys Asp Leu Gly Thr Asn Lys Glu Gln Ser 470 475 480 Ile Thr Ile Lys Ser Ser Ser Gly Leu Ser Glu Glu Glu Ile Gln 485 490 495 Arg Met Ile Lys Glu Ala Glu Glu Asn Ala Glu Ala Asp Arg Lys 500 505 510 Arg Lys Glu Ala Ala Asp Leu Arg Asn Glu Ala Asp Gln Leu Ile 515 520 525 Phe Thr Thr Glu Lys Thr Val Lys Glu Leu Glu Gly Lys Val Ser 530 535 540 Ala Asp Glu Ile Lys Lys Ala Gln Glu Ala Lys Asp Ala Leu Lys 545 550 555 Ala Ala Leu Glu Lys Asn Asp Leu Asp Asp Ile Arg Lys Lys Lys 560 565 570 Asp Ala Leu Gln Glu Ala Val Gln Gln Leu Ser Ile Lys Leu Tyr 575 580 585 Glu Gln Ala Ala Gln Gln Ala Glu Gln Ala Glu Ser Gly Ala Ala 590 595 600 Asp Lys Lys Asp Asn Val Val Asp Ala Glu Phe Glu Glu Val Asn 603 Asp Asp Lys
2. 【請求項２】 下記の塩基配列を有する請求項１記載の
   遺伝子。 ATGAGCAAAA TTATCGGCAT TGACTTAGGA ACGACAAACT CTTGCGTCGC TGTGTTGGAA 60 GGCGGCGAAG CGAAAGTCAT TCCAAACCCA GAAGGGAGCC GCACAACCCC GTCGGTTGTG 120 GCGTTTAAAA ACGGTGAACG TTTAGTCGGC GAGGTTGCCA AACGGCAAGC GATCACGAAT 180 CCGAATACGA TCATCTCGAT CAAACGCCAC ATGGGCACGG ATTACAAAGT CGAGATTGAA 240 GGAAAGCAAT ATACGCCGCA AGAAATTTCG GCGATCATTT TGCAATATTT AAAATCGTAC 300 GCTGAAGATT ATTTGGGTGA GCCGGTGACG CGCGCTGTCA TCACGTGCCG GCGTATTTCA 360 ACGATGCGCA GCGCCCAAGC GACGAAAGAG CCTGGACGCA TCGCCGGTTT GGAAGTTGAG 420 CGCATCATTA ACGAACCGAC GGCTGCGGCG CTTGCTTACG GCCTCGACAA AGGCGAGGAC 480 CAAACGATTC TCGTCTATGA CTTGGGGGGC GGAACGTTTG ACGTCTCGAT TTTGGAGCTT 540 GGCGACGGTG TGTTTGAAGT AAAAGCGACT GCTGGGGACA ACCATTTAGG TGGCGATGAT 600 TTTGACCAAG TCATTATCGA CTATTTAGTC AGCCAGTTTA AGCAAGAGAA CGGCATCGAC 660 TTGTCCAAAG ACAAAATGGC GCTCCAACGC TTAAAAGATG CGGCCGAAAA AGCGAAAAAA 720 GAACTGTCTG GTGTGACGCA GACGCAAATT TCGCTGCCGT TCATCAGTGC GAACGAAAAC 780 GGTCCGCTCC ACCTTGAGAC GACGCTCACT CGGGCAAAAT TTGAAGAGCT GTCCGCGCAC 840 CTCGTTGAGC GCTCGATGGG GCCAGTCCGT CAAGCGTTGC AAGATGCCGG TTTGACGTCT 900 GCGGATATTG ACAAGGTGAT TTTAGTCGGT GGTTCGACTC GCATTCCGGC CGTGCAAGAA 960 GCAATTAAGC GTGAGCTTGG CAAAGAGCCG CACAAAGGCG TTAATCCGGA TGAAGTCGTG 1020 GCCATCGGAG CGGCGATCCA AGGGCTCATC GCCGGTGAAG TGAAAGATAT TGTCTTGCTT 1080 GACGTTACCC TGTCGCTCGG TATTGAAACG ATGGGCGGCG TGTTTACGAA ATTGATCGAG 1140 CGGAATACGA CGATTCCGAC GAGCAAATCG CAAGTGTTCA CAACGGCGGC CGACAATCAA 1200 ACAACGGTCG ACATCCACGT TTTGCAAGGG GAGCGTCCGA TGGCGGCTGA CAACAAAACG 1260 CTTGGCCGCT TCCAGTTAAC TGACATCCCG CCGGCGCCGC GTGGTGTGCC GCAAATTGAA 1320 GTCACGTTCG ATATTGACGC CAACGGTATC GTTCATGTGC GTGCGAAAGA TTTAGGAACG 1380 AACAAAGAGC AATCCATTAC GATCAAATCG TCATCCGGCC TGTCGGAAGA GGAAATTCAG 1440 CGCATGATCA AAGAGGCGGA AGAAAACGCC GAAGCCGACC GGAAGCGGAA AGAAGCGGCC 1500 GATTTGCGCA ATGAAGCCGA TCAGCTCATC TTTACAACGG AAAAAACGGT CAAAGAGCTC 1560 GAAGGAAAAG TGAGCGCTGA TGAAATCAAA AAAGCGCAAG AAGCGAAAGA TGCATTGAAA 1620 GCAGCGCTTG AGAAAAACGA TCTTGATGAC ATCCGCAAGA AAAAAGATGC ACTGCAAGAA 1680 GCGGTGCAGC AGCTATCGAT CAAGCTGTAT GAACAAGCGG CGCAACAAGC CGAACAGGCC 1740 GAATCCGGCG CGGCCGATAA GAAAGACAAT GTGGTCGATG CGGAATTTGA AGAAGTCAAT 1800 GACGACAAA 1809
3. 【請求項３】 プロモーター、リボソーム結合部位を有
   する請求項２に記載の遺伝子が、ベクターＤＮＡに結合
   しているプラスミド。
4. 【請求項４】 バチルス・ステアロサーモフィルス（Ba
   cillus stearothermophilus）の染色体ＤＮＡのＨｉｎ
   ｄＩＩＩ−ＰｓｔＩ断片が、プラスミドベクターｐＢＲ
   ３２２に導入されているプラスミドｐＨＳ７０３である
   請求項３記載のプラスミド。
5. 【請求項５】 請求項３又は４に記載のプラスミドによ
   り形質転換されている熱ショック蛋白質生産能を有する
   微生物。
6. 【請求項６】 形質転換株が、プラスミドｐＨＳ７０３
   を保持する大腸菌ＪＭ１０９株からなる大腸菌（Escher
   ichia coli）ＪＭ１０９（ｐＨＳ７０３）株（微生物菌
   寄第Ｐ−１３５７０号）である請求項５記載の微生物。
7. 【請求項７】 請求項５又は６に記載の形質転換株を培
   養し、熱ショック蛋白質を製造する方法。