JPH11276172A

JPH11276172A - Ａｂｃトランスポーター遺伝子

Info

Publication number: JPH11276172A
Application number: JP10080597A
Authority: JP
Inventors: Takeji Shibatani; 武爾柴谷; Kenji Omori; 謙司大森; Hiroyuki Akatsuka; 浩之赤塚; Eri Kawai; 衣里河合; Akiko Idei; 晶子出井
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Current assignee: Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1998-03-27
Filing date: 1998-03-27
Publication date: 1999-10-12

Abstract

(57)【要約】【課題】シュードモナス属微生物の新規なＡＴＰ結合
カセットトランスポーター遺伝子を提供する。また、前
記遺伝子を利用してリパーゼなどの有用蛋白質を効率的
に製造する方法を提供する。【解決手段】シュードモナス・フルオレッセンスのＡ
ＴＰ結合カセットトランスポーター遺伝子。配列番号
２、３、４、６、７もしくは８で示されるアミノ酸配列
を有するポリペプチドをコードする微生物のＡＴＰ結合
カセットトランスポーター遺伝子。前記遺伝子を挿入し
た組換えプラスミドを含む形質転換微生物を培養するこ
とによる有用蛋白質の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、シュードモナス属
微生物の新規なＡＴＰ結合カセットトランスポーターの
遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】細菌の多くは酵素や毒素など種々の蛋白
質を細胞外に分泌する。グラム陰性菌（シュードモナス
属、エルウィニア属、エシェリシア属、セラチア属微生
物など）においては、少なくとも二つの異なる蛋白質分
泌経路が存在することが知られている。その一つは、Ｎ
末端にシグナル配列を有するタイプの蛋白質を分泌する
経路であり、細胞膜の内膜と外膜の間に位置するペリプ
ラズム領域に一旦滞留される２段階のシステムからな
る。もう一つの分泌経路としては、ＡＴＰ結合カセット
トランスポーター（ATP-binding cassette transporte
r）（もしくはＡＴＰ結合カセットエキスポーター）と
称される分泌装置を介して蛋白質を一段階で直接細胞膜
の外に分泌するシステムが知られており、このシステム
はＮ末端にシグナル配列を有しないタイプの蛋白質の分
泌に関与する（文献：Higgins、AnnualReview of Cell
Biology、第8巻、第67−113頁、1992年；赤塚ら、化学
と生物、第35巻、第２号、第132−137頁、1997年）。

【０００３】微生物のＡＴＰ結合カセットトランスポー
ター（以下、ＡＢＣトランスポーター）は、ＡＴＰ結合
カセット（ATP Binding Cassette：ＡＢＣ）蛋白質、膜
融合蛋白質（Membrane Fusion Protein：ＭＦＰ）及び
外膜蛋白質（Outer MembraneProtein：ＯＭＰ）と呼ば
れる３種のコンポーネント蛋白質からなり、これらコン
ポーネントで細胞膜の内外に通じる一つの分泌装置を構
成する。また、ＡＢＣトランスポーターには、同じファ
ミリーに属する複数の分子種が存在し、分泌蛋白質とこ
れを輸送するＡＢＣトランスポーターとの間には特異性
が存在することが知られている（文献：Akatsukaら、Jo
urnal of Bacteriology 第179巻、第4754−4760頁、19
97年；Binetら、EMBO Journal、第14巻、第2298−2306
頁、1995年）。

【０００４】微生物のＡＢＣトランスポーターを介して
細胞外へ分泌される蛋白質としては、例えば、エステラ
ーゼ（リパーゼなど）、プロテアーゼ、バクテリア毒素
（ヘモリシンなど）、ヘム結合蛋白質などが知られてお
り、これらの中には、例えば化合物の不斉加水分解など
に利用されるリパーゼなど、工業的に有用な蛋白質（酵
素等）も多い。

【０００５】微生物を用いたこれら有用蛋白質の生産に
おいては、蛋白質が菌体外に分泌されることは回収操作
が容易である点で有利であるが、例えば、遺伝子増幅や
変異導入等の手段で有用蛋白質（酵素等）の生産性を向
上させようとする場合に、菌体外への分泌能が十分でな
ければ、菌体内への蓄積が生じて回収操作が煩雑となっ
たり、生産性自体十分に向上しない等の問題が生じる。
ＡＢＣトランスポーターは、前記の通り、蛋白質を菌体
外に分泌させる機能を有しており、これを利用すれば、
効率よく工業的に有用な蛋白質を生産させることが可能
となる。

【０００６】例えば、セラチア属微生物においては、Ａ
ＢＣトランスポーターの遺伝子として、ヘム結合蛋白質
（ＨａｓＡ）の分泌に関与するｈａｓＤＥ及びｈａｓＦ
遺伝子、及び、リパーゼ（ＬｉｐＡ）の分泌に関与する
ｌｉｐＢＣＤ遺伝子が知られている。また、アカツカら
は、このｌｉｐＢＣＤ遺伝子を増幅することにより、エ
ステラーゼを産生する大腸菌及びセラチア属微生物のエ
ステラーゼ分泌能が顕著に増大することを報告している
（Journal of Bacteriology、第177巻、6381−6389頁、
1995年；特開平８−２５６７７５（ＥＰ７３３７０
７））。

【０００７】一方、シュードモナス属微生物において
は、ＡＢＣトランスポーターの遺伝子として、シュード
モナス・アエルギノーザ（Pseudomonas aeruginosa）の
アルカリプロテアーゼ（ＡｐｒＡ）の分泌に関与するａ
ｐｒＤＥＦ遺伝子が知られている。ドゥオングらは、こ
のシュードモナス・アエルギノーザ由来のＡＢＣトラン
スポーター（ＡｐｒＤＥＦ）によって、シュードモナス
・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）由来
のリパーゼが細胞外へ分泌されたことを報告している
（Molecular Microbiology、第11巻、1117−1126頁、19
94年）。

【０００８】しかしながら、シュードモナス属微生物由
来のＡＢＣトランスポーターの遺伝子としては、前記の
ａｐｒＤＥＦ以外のものは知られていない。また、工業
的に有用なリパーゼなどを生産するシュードモナス・フ
ルオレッセンスについてはＡＢＣトランスポーターの遺
伝子は知られていなかった。さらに、種々の有用な蛋白
質の分泌を可能にするために、シュードモナス属微生物
においても種々の特異性を有するＡＢＣトランスポータ
ーの遺伝子を見出すことが望まれていた。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、シュ
ードモナス属微生物の新規なＡＢＣトランスポーターの
遺伝子を提供することにある。また、この新規なＡＢＣ
トランスポーターの遺伝子を利用してリパーゼなどの有
用蛋白質を効率的に製造する方法を提供することにあ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意研究
の結果、シュードモナス属微生物から当該微生物リパー
ゼの分泌機構に関与するＡＢＣトランスポーターの遺伝
子を取得することに成功するとともに、この遺伝子を増
幅することにより、微生物由来の分泌蛋白質（リパー
ゼ）を分泌する能力を増大させることができることを見
出し、本発明を完成するに至った。

【００１１】すなわち、本発明は、シュードモナス・フ
ルオレッセンスのＡＴＰ結合カセットトランスポーター
（以下、ＡＢＣトランスポーターと称する）を構成する
ポリペプチドをコードする遺伝子である。

【００１２】また、本発明は、微生物のＡＴＰ結合カセ
ットトランスポーターを構成するポリペプチドをコード
する遺伝子であって、該ポリペプチドが、（１）配列番
号２記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（２）
配列番号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（３）配列番号４記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
チド、（４）配列番号２記載のアミノ酸配列において１
もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換され
たアミノ酸配列を有するポリペプチド、（５）配列番号
３記載のアミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ
酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列を有す
るポリペプチド、及び（６）配列番号４記載のアミノ酸
配列において１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠
失又は置換されたアミノ酸配列を有するポリペプチドか
ら選択される遺伝子である。

【００１３】また、本発明は、微生物のＡＴＰ結合カセ
ットトランスポーターを構成するポリペプチドをコード
する遺伝子であって、該ポリペプチドが、（１）配列番
号６記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（２）
配列番号７記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、
（３）配列番号８記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
チド、（４）配列番号６記載のアミノ酸配列において１
もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換され
たアミノ酸配列を有するポリペプチド、（５）配列番号
７記載のアミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ
酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列を有す
るポリペプチド、及び（６）配列番号８記載のアミノ酸
配列において１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠
失又は置換されたアミノ酸配列を有するポリペプチドか
ら選択される遺伝子である。

【００１４】さらに、本発明は、上記のＡＢＣトランス
ポーターを構成するポリペプチドをコードする遺伝子を
ベクタープラスミドに挿入した組換えプラスミド、該組
換えプラスミドを含む形質転換微生物、及び、該形質転
換微生物を培養することを特徴とする蛋白質の製造方法
である。

【００１５】本発明におけるＡＢＣトランスポーター
は、蛋白質（より詳細には、Ｎ末端にシグナル配列を有
しない分泌蛋白質）を微生物の細胞外に分泌させる能力
を有する。また、ＡＢＣトランスポーターは、ＡＴＰ結
合カセット（ATP Binding Cassette：ＡＢＣ）蛋白質、
膜融合蛋白質（Membrane Fusion Protein：ＭＦＰ）及
び外膜蛋白質（Outer Membrane Protein：ＯＭＰ）の３
種のコンポーネント蛋白質から構成される。従って、Ａ
ＢＣトランスポーターを構成するポリペプチドとは、Ａ
ＴＰ結合カセット蛋白質、膜融合蛋白質又は外膜蛋白質
を意味する。また、ＡＢＣトランスポーターの遺伝子と
は、ＡＢＣトランスポーターを構成するポリペプチドの
うちの少なくとも１つをコードする遺伝子を意味する。

【００１６】後記配列表の配列番号１及び５は、シュー
ドモナス・フルオレッセンス由来のＡＢＣトランスポー
ターを構成するポリペプチドをコードする遺伝子（以
下、ＡＢＣトランスポーター遺伝子と称する）を含むＤ
ＮＡの全塩基配列を示す。両配列中には、各々３つのオ
ープン・リーディング・フレーム（open reading fram
e：ＯＲＦ）が存在する。

【００１７】配列番号２、３及び４は、配列番号１で示
されるＤＮＡの翻訳領域にコードされた３つのポリペプ
チドのアミノ酸配列を示す。配列番号２のアミノ酸配列
は配列番号１記載の塩基配列の第７７８番目から２５２
６番目に、配列番号３のアミノ酸配列は配列番号１記載
の塩基配列の第２５２６番目から３８５７番目に、ま
た、配列番号４のアミノ酸配列は配列番号１記載の塩基
配列の第３８６３番目から５１９４番目にそれぞれコー
ドされている。

【００１８】配列番号６、７及び８は、配列番号５で示
されるＤＮＡの翻訳領域にコードされた３つのポリペプ
チドのアミノ酸配列を示す。配列番号６のアミノ酸配列
は配列番号５記載の塩基配列の第２７８番目から２０１
７番目に、配列番号７のアミノ酸配列は配列番号５記載
の塩基配列の第２０１７番目から３３４５番目に、ま
た、配列番号８のアミノ酸配列は配列番号５記載の塩基
配列の第３３５４番目から４６７０番目にそれぞれコー
ドされている。

【００１９】前記配列番号１から８で示される塩基配列
もしくはアミノ酸配列について、既知ＤＮＡデータベー
ス（ＧｅｎＢａｎｋおよびＥＭＢＬ）及びプロテインデ
ータベース（ＮＢＲＦ及びＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ）に含
まれる全ての配列に対してホモロジー検索を行った結
果、一致するものはなく、これらの配列は新規なもので
あると考えられる。

【００２０】

【発明の実施の形態】本発明のＡＢＣトランスポーター
遺伝子は、遺伝子源となる微生物から、公知の遺伝子組
換え技術を用いる方法により単離することができる。

【００２１】遺伝子源となる微生物は、特に限定されな
いが、シュードモナス属微生物が好ましく、とりわけシ
ュードモナス・フルオレッセンスが好適である。かかる
微生物としては、具体的には、例えばシュードモナス・
フルオレッセンスＡＴＣＣ１３５２５、シュードモナス
・フルオレッセンスＩＦＯ３４５９、シュードモナス・
フルオレッセンスＩＦＯ３０８１、シュードモナス・フ
ルオレッセンスＩＡＭ１１７６、シュードモナス・フル
オレッセンスＩＡＭ１１９９などの他、本発明の実施例
で遺伝子の単離に用いたシュードモナス・フルオレッセ
ンスＮｏ．３３株が挙げられる。

【００２２】ＡＢＣトランスポーター遺伝子の単離は、
例えば以下のようにして実施できる。すなわち、前記の
ような遺伝子源となる微生物から常法により染色体ＤＮ
Ａを調製し、これを適当な制限酵素で処理した後、ベク
タープラスミドに組込む。得られた組換えプラスミドを
宿主微生物（エシェリシア・コリ（Escherichia coli：
大腸菌）Ｋ−１２ＤＨ５など）に導入し、得られる形
質転換体からＡＢＣトランスポーター遺伝子を含むクロ
ーンを選択することにより得られる。

【００２３】目的クローンの選択は、例えば、プローブ
として、既知のＡＢＣトランスポーター遺伝子間で相同
性の高い領域や、その配列をもとに設計した合成オリゴ
ヌクレオチド、それをプライマーとして用いて微生物の
染色体ＤＮＡからポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ：Poly
merase Chain Reaction）によって増幅したＤＮＡ断片
などを用いたコロニーハイブリダイゼーションなどによ
り実施できる。プローブとして用いる領域は、特に限定
されないが、ＡＴＰ結合カセット蛋白質をコードする領
域が好ましい。また、トランスポーター遺伝子を、ファ
ージベクター（例えばｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋な
ど）に導入した場合は、プラークハイブリダイゼーショ
ンによって陽性クローンを選択できる。得られた候補ク
ローンについて、その塩基配列を決定し、ＡＢＣトラン
スポーターに特徴的な構造の類似性を調べることによ
り、目的遺伝子であることを決定することができる。

【００２４】あるいはまた、ＡＢＣトランスポーター遺
伝子の塩基配列が分かっている場合には、その配列情報
をもとに設計して合成したプライマーを用い、微生物の
染色体ＤＮＡを鋳型として通常のＰＣＲを実施すること
などにより遺伝子をクローニングすることができる。

【００２５】本発明のＡＢＣトランスポーター遺伝子を
用いて、ＡＢＣトランスポーターを宿主微生物内で発現
させることができる。ＡＢＣトランスポーター遺伝子
を、必要に応じて適当なプロモーター（λｐＬプロモー
ター、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔａ
ｃプロモーター、ｔｅｔプロモーターなど）の下流に接
続し、宿主微生物中で機能するベクターに挿入して発現
プラスミドを構築する。あるいは、適当なプロモーター
を含む発現用ベクターにＡＢＣトランスポーター遺伝子
を連結してもよい。ベクタープラスミドとしては、例え
ばｐＬＧ３３９（Gene、第18巻、332頁、1982年）、ｐ
ＢＲ３２２（Gene、第2巻、95頁、1977年）、ｐＵＣ１
８（Gene、第33巻、103頁、1985年）、ｐＵＣ１９（Gen
e、第33巻、103頁、1985年）、ｐＨＳＧ２９８（Gene、
第61巻、63頁、1987年）、ｐＨＳＧ２９９（Gene、第61
巻、63頁、1987年）、ｐＡＣＹＣ１８４（Changら、Jou
rnal of Bacteriology、第134巻、1141−1156頁、1978
年）などが挙げられる。

【００２６】組換えプラスミドを導入する宿主微生物
は、形質転換可能で、組換えプラスミド中のＡＢＣトラ
ンスポーター遺伝子が発現しうるものであればよい。か
かる宿主微生物としては、グラム陰性菌を用いることが
好ましく、例えばシュードモナス属微生物（シュードモ
ナス・フルオレッセンス、シュードモナス・アエルギノ
ーザなど）、セラチア属微生物（セラチア・マルセッセ
ンス（Serratia marcescens）など）又はエシェリシア
属微生物（エシェリシア・コリなど）があげられる。シ
ュードモナス属微生物としては、シュードモナス・フル
オレッセンスＡＴＣＣ１３５２５、シュードモナス・フ
ルオレッセンスＩＦＯ３４５９、シュードモナス・フル
オレッセンスＩＦＯ３０８１、シュードモナス・フルオ
レッセンスＩＡＭ１１７６、シュードモナス・フルオレ
ッセンスＩＡＭ１１９９などが挙げられる。セラチア属
微生物としては、セラチア・マルセッセンスＳｒ４１及
びそれから誘導される種々の変異株、例えば、セラチア
・マルセッセンスＭ−１（ＦＥＲＭＢＰ−４０６８
（特開平５−３４４８９１（ＥＰ５４４２５０）））、
同ＴＴ３９２株（Takagiら、Journal of Bacteriolog
y、第161巻、1−6頁、1985年）などが挙げられる。エシ
ェリシア属微生物としては、エシェリシア・コリＫ１２
ＤＨ５株（Maniatisら、Molecular Cloning、第2編、A
10頁（Cold SpringHarbor Laboratory、米国、1989
年））などが挙げられる。

【００２７】また、上記のような微生物に分泌蛋白質
（リパーゼなど）の遺伝子を含む組換えプラスミドを導
入した微生物を宿主微生物として使用することもでき
る。

【００２８】本発明のＡＢＣトランスポーター遺伝子を
発現させることにより、蛋白質を微生物の細胞外に分泌
させることができる。

【００２９】ＡＢＣトランスポーターによって微生物の
細胞外に分泌される蛋白質は、Ｎ末端にシグナル配列を
有しない分泌蛋白質である。また、一般にＣ末端側の領
域に、コンセンサスな配列（ＧＧＸＧＸＤＸＸＸ）の繰
返し（4〜13回）が見られ、また両親媒性のαヘリック
ス構造を有する（文献：Duongら、Molecular Microbiol
ogy、第11巻、1117−1126頁、1994年）。

【００３０】かかる分泌蛋白質としては、具体的には、
例えば、エステラーゼ（リパーゼなど）、プロテアー
ゼ、バクテリア毒素（ヘモリシンなど）、ヘム結合性蛋
白質などが挙げられる。これらのうち、エステラーゼ
（リパーゼなど）は、ＡＢＣトランスポーターによって
好適に分泌されるとともに、工業的な利用価値が高いも
のである。

【００３１】かかるエステラーゼとしては、微生物由来
のリパーゼ、例えば、シュードモナス・フルオレッセン
ス由来のリパーゼ（文献：Tanら、Applied and Environ
mental Microbiology、第58 巻、第1402−1407頁、1992
年；Chungら、Agriculturaland Biological Chemistr
y、第55巻、第2359−2365頁、1991年）、セラチア・マ
ルセッセンス由来のリパーゼ（文献：Akatsukaら、Jour
nal of Bacteriology、第176巻、第1949−1956頁、1994
年；特開平５−３４４８９１）、などが挙げられる。前
記のリパーゼは、遺伝子が既にクローニングされて配列
が報告されている。

【００３２】また、プロテアーゼとしては、シュードモ
ナス・アエルギノーザ由来のプロテアーゼ（Duongら、G
ene、第121巻、第47−54頁、1992年）、セラチア・マル
セッセンス由来のプロテアーゼ（Nakahamaら、Nucleic
Acids Research、第14巻、第5843−5855頁、1986年）、
エルウィニア・クリサンティーミ（Erwinia chrysanthe
mi）由来のプロテアーゼ（Letoffeら、EMBO Journal、
第9巻、第1375−1382頁、1990年）などが挙げられ、バ
クテリア毒素としては、大腸菌由来のヘモリシン（Felm
eleeら、Journal of Bacteriology、第163巻、第94−10
5頁、年）、パスツレラ・ヘモリティカ（Pasteurella h
aemolytica）由来のロイコトキシン（Loら、Infection
and Immunity、第55巻、第1987−1996頁、1987年）、
ボルデテラ・ペルトゥシス（Bordetella pertussis）由
来のサイクロリシン（Glaserら、EMBO Journal、第7
巻、第3997−4004頁、1988年）などが挙げられる。

【００３３】ＡＢＣトランスポーター遺伝子を用いて蛋
白質を分泌させる方法は、例えば以下のようにして実施
できる。ＡＢＣトランスポーター遺伝子を含む組換えプ
ラスミドを、目的とする分泌蛋白質の産生能を有する宿
主微生物中に導入する。あるいは、分泌蛋白質遺伝子を
含む組換えプラスミド及びＡＢＣトランスポーター遺伝
子を含む組換えプラスミドの両者を宿主微生物中に導入
する。分泌蛋白質遺伝子及びＡＢＣトランスポーター遺
伝子の両者を含むプラスミドを導入してもよい。このよ
うにして、ＡＢＣトランスポーターの発現能（及び分泌
蛋白質生産能）を付与又は増幅した微生物を得る。

【００３４】この微生物を培地中で培養することによ
り、培地中に目的蛋白質が分泌され蓄積される。ＡＢＣ
トランスポーターの機能（すなわち、ＡＢＣトランスポ
ーター遺伝子にコードされるポリペプチドが、蛋白質を
細胞外に分泌する能力を有するＡＢＣトランスポーター
を構成するかどうか）については細胞外に分泌された蛋
白質の量を指標として検定することができる。

【００３５】微生物の細胞外に分泌された蛋白質は、培
養液の培養上清から無機塩類による塩析、有機溶媒によ
る分画沈澱、イオン交換樹脂、及び各種カラムクロマト
グラフィーによる吸脱着法、ゲルろ過法、蛋白沈澱剤を
利用する方法などの公知方法により、又はこれらを適宜
組み合わせることによって分離、採取することができ
る。また、微生物の細胞内に蓄積された蛋白質は、摩擦
型破砕装置ダイノミル（Dyno Mill)など物理的な手法、
あるいは、リゾチーム処理など化学的な手法により細胞
を破砕し、その細胞抽出液から上記と同様な方法で分
離、採取することができる。

【００３６】例えば、分泌蛋白質がリパーゼの場合、リ
パーゼ遺伝子を含むプラスミドと、ＡＢＣトランスポー
ター遺伝子を含むプラスミドを宿主微生物中に導入して
形質転換し、得られた形質転換体を、リパーゼの基質で
あるトリブチン等を含有する培地中で培養するる。培地
中にリパーゼが分泌された場合、トリブチン等が分解さ
れてコロニー周辺にクリアゾーンが形成されるので、こ
のクリアゾーン形成の大小によりリパーゼの分泌を検出
できる。また、基質として三酪酸ジメルカプロールなど
を用い、培養上清についてリパーゼ活性を測定してもよ
い。検出したリパーゼの分泌量を指標として、ＡＢＣト
ランスポーターの発現と機能を確認できる。

【００３７】ＡＢＣトランスポーターを構成する３種の
コンポーネントは、異なる種又は異なる分子種由来のも
のを組み合わせてもよく、適切な組み合わせを選択する
ことにより、機能するＡＢＣトランスポーターを構成さ
せることができる。

【００３８】本発明の遺伝子がコードするポリペプチド
としては、配列番号２、３、４、６、７又は８で示され
たアミノ酸配列を有するもののほか、例えばそれらのア
ミノ酸配列において１もしくは数個のアミノ酸が付加、
欠失もしくは置換されたアミノ酸配列を有するものが挙
げられる。アミノ酸の付加、欠失もしくは置換は、蛋白
質を細胞外に分泌する能力が失われない程度であればよ
く、通常１〜約７０個、好ましくは１〜約４５個、より
好ましくは１〜約２０個である。このようなポリペプチ
ドは、配列番号２、３、４、６、７又は８で示されるア
ミノ酸配列と通常８５％以上、好ましくは９０％以上、
より好ましくは９５％以上のアミノ酸配列のホモロジー
を有する。

【００３９】また、本発明の遺伝子としては、配列番号
１又は５で示される塩基配列を有するＤＮＡを含むもの
のほか、例えば配列番号１又は５で示される塩基配列を
有するＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズし得るＤＮＡを含むものが挙げられる。このように
ハイブリダイズし得るＤＮＡは、そのＤＮＡにコードさ
れるポリペプチドが目的の蛋白質を分泌する能力を有す
るものであればよい。このようなＤＮＡは、配列番号１
又は５で示される塩基配列と、通常、８０％以上、好ま
しくは９０％以上、より好ましくは９５％以上の塩基配
列のホモロジーを有する。このようなＤＮＡとしては、
自然界で発見される変異型遺伝子、人為的に改変した変
異型遺伝子、異種生物由来の相同遺伝子等が含まれる。

【００４０】本発明において、ストリンジェントな条件
下でのハイブリダイゼーションは、通常、ハイブリダイ
ゼーションを、６ｘＳＳＣ又はこれと同等の塩濃度のハ
イブリダイゼーション溶液中、５０−５５℃の温度条件
下、約１２時間行い、６ｘＳＳＣ又はこれと同等の塩濃
度の溶液等で必要に応じて予備洗浄を行った後、１ｘＳ
ＳＣ又はこれと同等の塩濃度の溶液中５５℃で１０分〜
１時間洗浄を行うことにより実施できる。また、より高
いストリンジェンシーを得るためには、洗浄を０．１ｘ
ＳＳＣ又はこれと同等の塩濃度の溶液中６５℃で１時間
洗浄を行うことにより実施できる。

【００４１】本発明のＡＢＣトランスポーター遺伝子
は、微生物の自然に存在する遺伝子を用いてもよいが、
これに限定されるものではなく、例えば、配列番号２、
３、４、６、７又は８で示されるアミノ酸配列をコード
するＤＮＡであればよい。アミノ酸に対応するコドンは
公知であるので、ネイティブなＡＢＣトランスポーター
遺伝子に限定されることなく、アミノ酸配列に対応する
ＤＮＡを設計し、ポリペプチドをコードするＤＮＡとし
て用いることができる。ひとつのアミノ酸をコードする
コドンは各々１〜６種類知られており、用いるコドンの
選択は任意でよいが、例えば発現に利用する宿主のコド
ン使用頻度を考慮して、より発現効率の高い配列を設計
することができる。設計した塩基配列を持つＤＮＡは、
化学合成や自然に存在する遺伝子の一部改変などによっ
て取得できる。人為的な塩基配列の一部改変、変異導入
は、所望の改変をコードする合成オリゴヌクレオチドを
プライマーとして利用し、公知の部位特異的変異導入法
（Markら、Proceedings of National Academy of Scien
ces、第81巻、5662−5666頁、1984年）等によって実施
できる。

【００４２】以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的
に説明する。

【００４３】なお、下記実施例において、各操作は特に
明示がない限り、「ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎ
ｇ」（Sambrook, J.、Fritsch, E.F.及びManiatis, T.
著、Cold Spring Harbor Laboratory Pressより1989年
に発刊）に記載の方法により行うか、又は、市販の試薬
やキットを用いる場合には市販品の指示書にしたがって
使用した。

【００４４】また、リパーゼ活性の測定は、実施例にお
いては、基質として三酪酸ジメルカプロールを用いる簡
便法（大日本製薬製リパーゼキットＳを用いる方法）を
用いたが、オリーブ油を基質として用いる方法（ｐＨ
８．０、３７℃で２０分間酵素反応させ、１分間に１μ
ｍｏｌの脂肪酸を遊離する酵素量を１単位とする活性測
定法）も、必要に応じて採用することができる。

【００４５】また、以下の実施例で使用した培地の組成
は、以下に示す通りである（組成における％は、特にこ
とわらない限り、Ｗ／Ｖ％を表わす）。

【００４６】ＬＢ培地：バクトトリプトン（ディフコ社
製）１．０％、バクトイーストエキストラクト（ディフ
コ社製）０．５％、塩化ナトリウム０．５％。

【００４７】ＬＢＧ平板培地：バクトトリプトン（ディ
フコ社製）１．０％、バクトイーストエキストラクト
（ディフコ社製）０．５％、塩化ナトリウム０．５％、
ゲランガム（和光純薬製）１．０％。

【００４８】トリブチリン含有ＬＢＧ平板培地：トリブ
チリン０．５ｖ／ｖ％、ポリオキシエチレンセチルアル
コールエーテル０．５％、アンピシリン０．００５％を
含むＬＢＧ平板培地。

【００４９】

【実施例】実施例１ＡＢＣトランスポーター遺伝子の
クローニングと解析（Ｉ）（１）クローニング後記参考例１のように同定したシュードモナス・フルオ
レッセンスＮｏ．３３株を、ＬＢ培地で培養し、得られ
た菌体から染色体ＤＮＡを調製した。この染色体ＤＮＡ
（約１μｇ）を鋳型とし、ＰＣＲ（Polymerase Chain R
eaction）を行った。ＰＣＲプライマーは、種々のＡＢ
Ｃトランスポーター中のＡＴＰ結合カセット蛋白質のア
ミノ酸配列から相同性の高い部分を選択し、そのＤＮＡ
配列を参考にして設計した。用いたセンスプライマーを
配列番号９に、アンチセンスプライマーを配列番号１０
に各々示した。ＰＣＲで増幅したＤＮＡを、ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動によって分離し、約３００ｂｐの
ＤＮＡ断片を回収してこれをベクタープラスミドに結合
した。

【００５０】この挿入ＤＮＡ断片を３２Ｐで標識してプ
ローブとして用い、以下のようにコロニーハイブリダイ
ゼーションを行った。染色体ＤＮＡ（約２０μｇ）を制
限酵素ＢｇｌＩＩを用いて切断し、プラスミドベクター
ｐＵＣ１９（宝酒造社製）のＢａｍＨＩ切断部位に連結
した。得られた組換えプラスミドを大腸菌ＤＨ５株（東
洋紡社製）に導入した。これをアンピシリン含有ＬＢ平
板培地上のナイロンフィルター上で培養してコロニーバ
ンクを調製し、コロニーバイブリダイゼーションを行っ
た。ハイブリダイゼーションは、通常のストリンジェン
トな条件を用い以下のように行った。すなわち、プレハ
イブリダイゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、５ｘデンハル
ト溶液、０．１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌのサケ精子
ＤＮＡ）で約６０℃、約２時間振とう後、標識プローブ
を加え、ハイブリダイゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、５
ｘデンハルト溶液、０．１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌ
のサケ精子ＤＮＡ）中で６０℃１８時間インキュベート
した。洗浄溶液（０．１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ）を
用い、６５℃で１時間フィルターを洗浄した後、オート
ラジオグラフィーを行い、陽性クローンを選択した。得
られたクローンの保持する組換えプラスミドをｐＡＫ６
０と名づけた。

【００５１】（２）塩基配列の決定と解析ｐＡＫ６０の挿入断片について、ダイデオキシ法により
以下のように塩基配列を決定した。ｐＡＫ６０から、キ
ロベース・デレーション・キット（宝酒造製）を用い
て、種々欠失プラスミドを作成した。これら欠失プラス
ミドとダイプライム・サイクルシーケンスキット（パー
キンエルマー・アプライドバイオシステムズ社製）を用
いて反応を行い、自動シーケンサー（パーキンエルマー
・アプライドバイオシステムズ社製モデル３７３Ａ）で
塩基配列を決定した。

【００５２】その結果、シュードモナス・フルオレッセ
ンス由来の挿入断片のうち５６６０ｂｐの塩基配列が決
定され、この配列を後記配列表の配列番号１に示した。

【００５３】また、配列番号１の配列中には、ＡＢＣト
ランスポーターの３種のコンポーネント蛋白質をコード
していると考えられる３つのオープンリーディングフレ
ームが存在していた。これら３つのオープンリーディン
グフレーム、すなわち第７７８〜２５２６番目の塩基、
第２５２６〜３８５７番目の塩基、及び第３８６３〜５
１９４番目の塩基にコードされているポリペプチドのア
ミノ酸配列を、各々配列番号２、配列番号３及び配列番
号４に示した。

【００５４】これら３種のポリペプチドのアミノ酸配列
をセラチア・マルセッセンスのＬｉｐＢＣＤのアミノ酸
配列と比較すると、配列番号２はＬｉｐＢと約６０％、
配列番号３はＬｉｐＣと約４４％、配列番号４はＬｉｐ
Ｄと約４６％の相同性を有していた。

【００５５】また、配列番号１の塩基配列をセラチア・
マルセッセンスのｌｉｐＢＣＤの塩基配列と比較する
と、配列番号２をコードする領域の塩基配列はｌｉｐＢ
と約６３％、配列番号３をコードする領域の塩基配列は
ｌｉｐＣと約５６％、また、配列番号４をコードする領
域の塩基配列はｌｉｐＤと約５７％の相同性を有してい
た。

【００５６】また、上記の３種のポリペプチドは、以下
のような特徴を有していた。各アミノ酸配列について、
PROSITE Motif Dictionaryデータベースを対象にＭｏｔ
ｉｆプログラムを用いて検索したところ、配列番号２は
ＡＴＰ結合蛋白質に特有な配列及びＡＴＰ／ＧＴＰ結合
部位（GASGSGKS；Sarasteら、Trends in BiochemicalSc
ience、第15巻、第430−434頁、1990年）を含んでい
た。また、配列番号３はＨｌｙＤ蛋白質ファミリーに特
有の配列に類似した配列を含んでおり、配列番号４はＮ
末側に塩基性アミノ酸クラスタと疎水性アミノ酸クラス
タが連続したシグナル様の配列と思われる配列が認めら
れた。

【００５７】上記解析結果から、取得した遺伝子（配列
番号１）は、シュードモナス・フルオレッセンスのＡＢ
Ｃトランスポーター遺伝子（タイプＡと称する）であ
り、これにコードされる３つのポリペプチド（配列番号
２、３及び４）は、ＡＢＣトランスポーター（タイプ
Ａ）を構成するコンポーネント蛋白質であると判定し
た。

【００５８】なお、組換えプラスミドｐＡＫ６０はベク
タープラスミドｐＵＣ１９上に、シュードモナス・フル
オレッセンス由来の約５．６ｋｂのＢｇｌＩＩ断片が挿
入されており、ベクター由来のｌａｃプロモーターの下
流にＡＢＣトランスポーター遺伝子（タイプＡ）が正方
向に連結されている。組換えプラスミドｐＡＫ６０を導
入した大腸菌ＤＨ５株は、工業技術院生命工学工業技術
研究所に平成１０年３月１６日付でＦＥＲＭＰ−１６
７１１（微生物名称：大腸菌ＡＫ６０（Escherichia co
li AK60））として寄託済である。

【００５９】実施例２ＡＢＣトランスポーター遺伝子
のクローニングと解析（ＩＩ）（１）クローニング後記参考例１のように同定したシュードモナス・フルオ
レッセンスＮｏ．３３株を、ＬＢ培地で培養し、得られ
た菌体から染色体ＤＮＡを調製した。

【００６０】得られた染色体ＤＮＡ（２０μｇ）を制限
酵素ＳａｌＩを用いて切断し、切断断片を、プラスミド
ベクターｐＵＣ１８のＳａｌＩ切断部位に連結した。得
られた組換えプラスミドを大腸菌ＤＨ５株に導入した。
これをアンピシリン含有ＬＢ平板培地上のナイロンフィ
ルター上で培養してコロニーバンクを調製し、コロニー
バイブリダイゼーションを行った。プローブとしては、
セラチア・マルセッセンス由来のｌｉｐＢ遺伝子のＮ末
端側（Journal of Bacteriology、第177巻、第6381‐63
89頁、1995年）を含むＤＮＡ断片（制限酵素Ｐｓｔ１断
片、約０．９ｋｂ）を３２Ｐで標識して用いた。ハイブ
リダイゼーションは、通常のストリンジェントな条件よ
りも、やや弱い条件下で以下のように行った。すなわ
ち、プレハイブリダイゼーション溶液（６ｘＳＳＣ、５
ｘデンハルト溶液、０．１％ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌ
のサケ精子ＤＮＡ）で約６０℃、約２時間振とう後、標
識プローブを加え、ハイブリダイゼーション溶液（６ｘ
ＳＳＣ、５ｘデンハルト溶液、０．１％ＳＤＳ、１００
μｇ／ｍｌのサケ精子ＤＮＡ）中で５５℃、１８時間イ
ンキュベートした。洗浄溶液として、２ｘＳＳＣ、０．
１％ＳＤＳを用い４５℃で１０分間フィルターを洗浄し
た後、オートラジオグラフィーを行った。陽性クローン
を数個選択し、これらのプラスミド挿入断片について制
限酵素地図を作成した。予め染色体ＤＮＡについてセラ
チア・マルセッセンスｌｉｐＢを含むＤＮＡ断片をプロ
ーブとして実施したサザンハイブリダイゼーションの結
果と照合し、同様の制限酵素切断断片を有すると考えら
れたクローンを選択した。

【００６１】得られたクローンの挿入断片について、部
分的に塩基配列を決定したところ、セラチア・マルセッ
センスのｌｉｐＢに相当すると思われる遺伝子の一部分
が末端領域に存在することがわかった。そこでこの領域
を含むＢｇｌＩＩ−ＳａｌＩ断片をプローブとし、再度
コロニーハイブリダイゼーションを行った。コロニーバ
ンクは、制限酵素ＥｃｏＲＩで切断した染色体ＤＮＡと
ベクタープラスミドｐＵＣ１９とで調製したものを用
い、また、ハイブリダイゼーションは実施例１と同様通
常のストリンジェントな条件にて行った。得られた陽性
クローンの挿入断片について、セラチア・マルセッセン
スのｌｉｐＢに相当すると思われる領域の下流の塩基配
列を決定したところ、続いてｌｉｐＣに相当すると思わ
れる領域が存在することがわかった。そこで、このｌｉ
ｐＢのＣ末端領域及びｌｉｐＣのＮ末端領域を含むＳａ
ｌＩ−ＥｃｏＲＩ断片をプローブとし、再度コロニーハ
イブリダイゼーションを行った。コロニーバンクは制限
酵素ＢｇｌＩＩ−ＥｃｏＲＶで切断した染色体ＤＮＡと
ベクタープラスミドｐＡＣＹＣ１８４（ニッポンジーン
社製）で調製したものを用い、ハイブリダイゼーション
は、前記と同様通常のストリンジェントな条件にて行っ
た。かくして、ＡＢＣトランスポータの３つのコンポー
ネントの遺伝子全長を含むと考えられる目的クローンを
得た。得られたクローンの挿入断片の中から、ＡＢＣト
ランスポータの３つのコンポーネントの遺伝子全長を含
む最小領域と予想されたＢｇｌＩＩ−ＳｔｕＩ断片（約
６．４ｋｂ）をベクタープラスミドｐＢｌｕｓｃｒｉｐ
ｔＳＫ＋（東洋紡社製）のＢａｍＨＩ−ＥｃｏＲＶ部位
にサブクローニングし、この組換えプラスミドをｐＯＩ
７０と名づけた。

【００６２】（２）塩基配列の決定と解析ｐＯＩ７０の挿入断片について、前記実施例１（２）と
同様にして塩基配列を決定した。その結果、シュードモ
ナス・フルオレッセンス由来の挿入断片のうち６４００
ｂｐの塩基配列が決定され、この配列を後記配列表の配
列番号５に示した。

【００６３】配列番号５の配列中に、ＡＢＣトランスポ
ーターの３種のコンポーネント蛋白質をコードしている
と考えられる３つのオープンリーディングフレームが存
在していた。これら３つのオープンリーディングフレー
ム、すなわち第２７８〜２０１７番目の塩基、第２０１
７〜３３４５番目の塩基、及び第３３５４〜４６７０番
目の塩基にコードされているポリペプチドのアミノ酸配
列を、各々配列番号６、配列番号７及び配列番号８に示
した。

【００６４】これら３種のポリペプチドのアミノ酸配列
をセラチア・マルセッセンスのＬｉｐＢＣＤ（Journal
of Bacteriology、第177巻、第6381‐6389頁、1995年）
のアミノ酸配列と比較すると、配列番号６はＬｉｐＢと
約６０％、配列番号７はＬｉｐＣと約５０％、配列番号
８はＬｉｐＤと約５４％の相同性を有していた。

【００６５】また、配列番号５の塩基配列をセラチア・
マルセッセンスのｌｉｐＢＣＤ（Journal of Bacteriol
ogy、第177巻、第6381‐6389頁、1995年）の塩基配列と
比較すると、配列番号６をコードする領域の塩基配列は
ｌｉｐＢと約６３％、配列番号７をコードする領域の塩
基配列はｌｉｐＣと約５６％、また、配列番号８をコー
ドする領域の塩基配列はｌｉｐＤと約５９％の相同性を
有していた。

【００６６】また、実施例１で得られたタイプＡの配列
と比較すると、以下のようであった。配列番号６は配列
番号２と約６１％、配列番号７は配列番号３と約５０
％、配列番号８は配列番号４と約５７％の相同性をそれ
ぞれ有し、また、配列番号６をコードする塩基配列は配
列番号２をコードする塩基配列と約６７％、配列番号７
をコードする塩基配列は配列番号３をコードする塩基配
列と約６０％、配列番号８をコードする塩基配列は配列
番号４をコードする塩基配列と約６６％の相同性をそれ
ぞれ有していた。

【００６７】また、配列番号６、７及び８のポリペプチ
ドは、配列番号２、３及び４のポリペプチドと同様の特
徴を有していた。すなわち、配列番号６はＡＴＰ結合蛋
白質に特有な配列及びＡＴＰ／ＧＴＰ結合部位（GASGSG
KS；Sarasteら、Trends in Biochemical Science、第15
巻、第430−434頁、1990年）を含んでいた。また、配列
番号７はＨｌｙＤ蛋白質ファミリーに特有の配列に類似
した配列を含んでおり、配列番号８はＮ末側に塩基性ア
ミノ酸クラスタと疎水性アミノ酸クラスタが連続したシ
グナル様の配列と思われる配列が認められた。

【００６８】上記解析結果から、取得した遺伝子（配列
番号５）は、シュードモナス・フルオレッセンスのＡＢ
Ｃトランスポーター遺伝子（タイプＢと称する）であ
り、これにコードされる３つのポリペプチド（配列番号
６、７及び８）は、ＡＢＣトランスポーター（タイプ
Ｂ）を構成するコンポーネント蛋白質であると判定し
た。

【００６９】なお、組換えプラスミドｐＯＩ７０はベク
タープラスミドｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋（東洋紡社
製）上に、シュードモナス・フルオレッセンス由来の約
６．４ｋｂのＢｇｌＩＩ−ＳｔｕＩ断片が挿入されてお
り、ベクター由来のｌａｃプロモーター下流にＡＢＣト
ランスポーター遺伝子（タイプＢ）が正方向に連結され
ている。組換えプラスミドｐＯＩ７０を導入した大腸菌
ＤＨ５株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に平成
１０年３月１６日付でＦＥＲＭＰ−１６７１０（微生
物名称：大腸菌ＯＩ７０（Escherichia coli OI70））
として寄託済である。

【００７０】実施例３蛋白質分泌活性の測定（１）シュードモナス・フルオレッセンス由来のリパー
ゼの分泌前記実施例２で取得したシュードモナス・フルオレッセ
ンス由来ＡＢＣトランスポーター遺伝子（タイプＢ）を
含む組換えプラスミド（ｐＯＩ７０）、及び後記参考例
２に記載した方法で取得したシュードモナス・フルオレ
ッセンス由来リパーゼ遺伝子を含む組換えプラスミドｐ
ＰＦｌｉｐＣ１３を用いて、大腸菌ＤＨ５株を供形質転
換（co-transformation）した。必要に応じて薬剤（ア
ンピシリン及びクロラムフェニコール）を添加したＬＢ
培地で両プラスミドを含む形質転換体を選択した。

【００７１】得られた形質転換体を、トリブチリン含有
ＬＢＧ平板培地で培養した。その結果、両組換えプラス
ミドが導入された供形質転換体では、コロニー周辺に円
形のクリアゾーンが形成され、菌体からのリパーゼ分泌
が検出された。一方、コントロールとして用いた菌株、
すなわち、ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋（ベクタープラ
スミド）とｐＰＦｌｉｐＣ１３で供形質転換した大腸菌
ＤＨ５株では、クリアゾーン形成はほとんど認められな
かった。

【００７２】また、形質転換体を、必要に応じて薬剤を
添加したＬＢ培地で培養した後、遠心分離により培養上
清を得た。この培養上清について、簡便法によりリパー
ゼ活性を測定したところ、８５００単位／ｍｌの活性が
得られた。一方、コントロールとして用いた菌株、すな
わち、ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋とｐＰＦｌｉｐＣ１
３を供形質転換した大腸菌ＤＨ５株では、培養上清中の
リパーゼ活性は、５単位／ｍｌ以下であった。

【００７３】これらの結果から、前記実施例２で取得し
たシュードモナス・フルオレッセンス由来ＡＢＣトラン
スポーター遺伝子（タイプＢ）によって発現されたＡＢ
Ｃトランスポーターは、シュードモナス・フルオレッセ
ンスのリパーゼを細胞外に分泌する機能を有することが
判明した。

【００７４】（２）セラチア・マルセッセンス由来のリ
パーゼの分泌セラチア・マルセッセンス由来のリパーゼ遺伝子（Akat
sukaら、Journal of Bacteriology、第176巻、第1949−
1956頁、1994年；特開平５−３４４８９１）を含む組換
えプラスミド（ｐＬＩＰＥ１１１）から、リパーゼ遺伝
子を含む断片をベクタープラスミドｐＡＣＹＣ１８４に
サブクローニングし、組換えプラスミドｐＹＥ１１１を
得た。

【００７５】実施例２で取得したシュードモナス・フル
オレッセンス由来ＡＢＣトランスポーター遺伝子（タイ
プＢ）を含む組換えプラスミド（ｐＯＩ７０）、及び前
記で得られたセラチア・マルセッセンス由来リパーゼ遺
伝子を含む組換えプラスミド（ｐＹＥ１１１）を用い
て、大腸菌ＤＨ５株を供形質転換した。必要に応じて薬
剤（アンピシリン及びクロラムフェニコール）を添加し
たＬＢ培地で両プラスミドを含む形質転換体を選択し
た。

【００７６】得られた形質転換体を、トリブチリン含有
ＬＢＧ平板培地で培養した。その結果、両組換えプラス
ミドが導入された供形質転換体では、コロニー周辺に円
形のクリアゾーンが形成され、菌体からのリパーゼ分泌
が検出された。一方、コントロールとして用いた菌株、
すなわち、ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋とｐＹＥ１１１
を供形質転換した大腸菌ＤＨ５株では、クリアゾーン形
成はほとんど認められなかった。

【００７７】また、形質転換体を、必要に応じて薬剤を
添加したＬＢ培地で培養した後、遠心分離により培養上
清を得た。この培養上清について、簡便法によりリパー
ゼ活性を測定したところ、３３００単位／ｍｌの活性が
得られた。一方、コントロールとして用いた菌株、すな
わち、ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ＋とｐＹＥ１１１を供
形質転換した大腸菌ＤＨ５株では、培養上清中のリパー
ゼ活性は、５単位／ｍｌ以下であった。

【００７８】これらの結果から、前記実施例２で取得し
たシュードモナス・フルオレッセンス由来ＡＢＣトラン
スポーター遺伝子（タイプＢ）によって発現されたＡＢ
Ｃトランスポーターは、セラチア・マルセッセンスのリ
パーゼを細胞外に分泌する機能を有することが判明し
た。

【００７９】参考例１シュードモナス・フルオレッセ
ンスＮｏ．３３株の同定及び生化学的性状検査（１）マルチテストシステム（キット）による同定試験菌株（Ｎｏ．３３株）を、市販のキット、バイオテ
スト２号（栄研化学製）及びａｐｉ２０ＮＥ（日本ビオ
メリュー・バイテック製）を用いて同定し、シュードモ
ナス・フルオレッセンスであることが確認された。

【００８０】（２）生化学的性状検査試験菌株の生化学的性状検査は、医学細菌の同定の手引
き（近代出版）、病原細菌の生化学的検査法（医学書
院）、新細菌培地学講座（近代出版）などの方法に従
い、培養基は栄研製品及び自家調製品を使用した。ま
た、試験菌株は３７℃で発育しないため、検査は通常３
０℃で２４〜４８時間培養して判定を行った。

【００８１】嫌気的条件下での発育試験は、嫌気ボック
ス内で４８時間培養した。

【００８２】温度による発育試験は、５、３０、３７及
び４０℃で４８時間培養した。

【００８３】生育ｐＨの試験は、ハートインフュジョン
ブイヨン培地（栄研化学製）を用いてｐＨ３、４、５、
６、７、８、９及び１０になるように１ＮＨＣｌ又は１
ＮＮａＯＨで調整後、４８時間培養した。

【００８４】ＭａｃＣｏｎｋｅｙ寒天培地上での発育
は、ＭａｃＣｏｎｋｅｙ寒天培地（栄研化学製）を用い
た。カタラーゼ試験は、３％過酸化水素水を用いた。オ
キシダーゼ試験は、チトクローム・オキシダーゼ試験用
ろ紙（ニッスイ製）を用いた。硝酸塩の還元は、硝酸塩
ブイヨンで３日間培養した。クエン酸塩利用能確認試験
は、シモンズ・クエン酸ナトリウム培地（栄研）及びク
リステンゼン・クエン酸塩培地（栄研化学製）を用い
た。ウレアーゼ確認試験は、ＵＲＥＡＡＧＥＲＢＡＳ
Ｅ（ＯＸＯＩＤ）を用いた。ゼラチナーゼ確認試験は、
普通ゼラチン培地を用いて３日間培養した。

【００８５】ＯＦ試験及び炭水化物からの酸産生試験は
ＯＦ培地（栄研化学製）、硫化水素の産生試験はクリグ
ラー確認培地（栄研化学製）、グルコン酸酸化試験はグ
ルコン酸塩ブイヨン、マロン酸塩利用能確認試験はマロ
ン酸塩培地（栄研化学製）を用いた。アルギニン加水分
解試験、リジン脱炭酸試験、オルニチン脱炭酸試験はメ
ラーの方法により、アルギニン培地、リジン培地、オル
ニチン培地及び対照培地（栄研化学製：ポアメディア）
を用いた。ＤＮａｓｅ産生試験はＤＮＡ培地（栄研化学
製）、硫化水素産生、インドール産生、ＩＰＡ産生及び
運動性の試験はＳＩＭ培地（栄研化学製）、ＶＰ反応は
ＶＰ半流動培地（栄研化学製）、蛍光色素産生はＫｉｎ
ｇＢ寒天培地（栄研化学製）を用いた。ブドウ糖からの
ガス産生試験は寒天を除いたＯＦ培地（栄研化学製）１
０ｍｌにダーラム管を入れ、４８時間培養後のガス発生
の有無を確認した。なお、特に記述しなかったものは常
法により行い、その他の試験はハートインフュジョン寒
天培地（栄研化学製）を用いて実施した。

【００８６】検査結果を表１及び表２に示す。

【００８７】

【表１】

【００８８】

【表２】

【００８９】参考例２シュードモナス・フルオレッセ
ンスリパーゼ遺伝子のクローニング前記参考例１で同定したシュードモナス・フルオレッセ
ンスＮｏ．３３株を、ＬＢ培地で培養し、得られた菌体
から染色体ＤＮＡを調製した。この染色体ＤＮＡを制限
酵素ＥｃｏＲＩで切断し、断片をベクタープラスミドｐ
ＨＳＧ２９９（宝酒造社製）のＥｃｏＲＩ部位に連結し
た。得られた組換えプラスミドを大腸菌ＤＨ５株に導入
した。カナマイシンを含有したトリブチリンＬＢＧ平板
培地上で培養し、コロニー周辺にクリアゾーンを形成し
たクローンを選択した。得られたクローンの組換えプラ
スミドは挿入断片についてサブクローニングを行った結
果、ＳｐｈＩ−ＥｃｏＲＩ断片（約２．８ｋｂ）上にリ
パーゼ遺伝子が存在すると考えられた。このＳｐｈＩ−
ＥｃｏＲＩ（約２．８ｋｂ）を含むＤＮＡ断片を、ベク
タープラスミドｐＡＣＹＣ１８４のＳｐＨＩ部位に連結
した。かくして、ベクタープラスミド上のテトラサイク
リン（ｔｅｔ）プロモーターの下流にシュードモナス・
フルオレッセンス由来リパーゼ遺伝子が正方向に連結さ
れた組換えプラスミドｐＰＦｌｉｐＣ１３を取得した。

【００９０】リパーゼ遺伝子を含む挿入断片について塩
基配列を決定した。この塩基配列及びその中にコードさ
れるリパーゼのアミノ酸配列を、後記配列表の配列番号
１１に示した。文献に報告されたシュードモナス・フル
オレッセンスＢ５２株及びＳＩＫＷ１株由来のリパーゼ
遺伝子（Tanら、Applied and Environmental Microbiol
ogy、第58巻、第1402-1407頁、1992年；Chungら、Agricult
ural and BiologicalChemistry、第55巻、第2359−2365
頁、1991年）の配列と比較すると、前記で得られたＮ
ｏ．３３株由来リパーゼ遺伝子は、塩基配列で約８４
％、アミノ酸配列で約９０％のホモロジーを有してい
た。

【００９１】

【発明の効果】本発明のＡＢＣトランスポーター遺伝子
を用いることにより、微生物の蛋白質を分泌する能力を
付与或いは増大させることができる。このように蛋白質
分泌能を付与或いは増大させた微生物を利用すれば、有
用蛋白質（リパーゼ等の酵素等）の生産を効率よく行う
ことができる。

【００９２】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：５６６０配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomo
nas fluorescens）株名：Ｎｏ．３３配列 AGATCTTCGA CTTCACCTCG GGTTCGGACA AGATCGACCT CACCGGCATC ACCAAAGGTG 60 CAGGCCTGAC CTTCGTCAAT GCCTTCACCG GTCACGCTGG CGATGCGGTG CTGTCCTACG 120 CCTCGGGTAC TAACCTGGGC ACCTTGGCCG TGGACTTCTC CGGGCACGGA GTGGCGGATT 180 TCCTCGTCAC CACCGTCGGC CAGGCAGCGG TCAGCGACAT CGTGGCCTGA TATACGGGTA 240 AAGGAGGGCG GCGCGCACGC GCTGCCCTCT GCCCTTGCGT CCACCCCTTG AACGGGCGAT 300 GGTGATGACG TTATTTCGCA CTACAGTGGC CTGGTGTTTC CAGGCAATGC TTATGTCGGC 360 AGGAGCCTCA GCAATGGCAA GCAGTCTGGT TTTACCTACG TCGGCGCAAC TGGCCGGGCA 420 TTGGGCGCTG CACCAGCAGG AACAGGTGTG CGCGCTGGAC TTGATCGAAC AAGCCAACGC 480 GCTCGGCGGG GATGTAGCGT GCGCCGGACA ATGGCTGGGG GAAGCGCCCG TTAGTTGGAC 540 GCCGACTCCC GACGGTATTT GGTTGATGAA TGCCGAAGGC ACGGGCATTA CACATTTAAA 600 TCGCCAGAAA GAAGGCGAAT ATGAAGGGCG CTCCAAATCT GGCGCGGTGT TGTTATTACA 660 ACGCGCACCT TAATAGTTCG TTATAACGAT ATAACCCGAT TTTAATGTTT GCCCGCCCTT 720 TAATGAGGCG CCGGGCAAAC TATTGCGCGT CATTCGGCTC AGGGAAGATC AGGCAACATG 780 GCGAAGACCA CTCCCGTTGC ACCACTGTTT AAAGCACTCG GTGATTACAA AAGTATTCTG 840 ATCAGTATTG GCTGCTTCAC CGCATTGATT AACGTATTGA TGCTGGTGCC GTCGATTTAT 900 ATGTTGCAAG TCTACGACCG CGTGCTGTCG TCCCAGAACG AAACCACCCT GGTGATGTTG 960 ACGCTGATGG TGGTGGGGTT CTTCGCGTTT ATCGGCGTGC TGGAGGTGAT CCGCAGCTTT 1020 ATCGTGATTC GCATCGGTAG CCAGTTGGAG CGGCGTTTCA ACCTGCGGGT GTACAAGGCC 1080 GCCTTCGAGC GCAACCTGCA ACGGGGCGAG GGCCACGGCG GCCAATCCCT GGGGGATTTG 1140 ACCCACATCC GCCAGTTCAT CACCGGGCCT GCACTGTTCG CGTTTTTCGA TGCGCCGTGG 1200 TTTCCGATTT ATCTGTTTGT GATCTTCCTG TTCAACGTGT GGCTAGGGGT GTTGGCCAGC 1260 GCCGGGGCCG TGCTGCTGAT CGGGCTGGCG TGCCTCAACG AGTACCTGAC CAAAAAGCCC 1320 CTGGGCGAAG CCAGCGGGTA TTCCCAGCAA TCCACCCAAT TGGCTACCAG CCACCTGCAC 1380 AACGCCGAAA CCATCCAGGC CATGGGCATG CTGGGGGCGT TGCGCAAGCG CTGGTTCAAG 1440 GTGCATTCGC AGTTTCTGGG CTTGCAAAAC AAGGCCAGCG ACACCGGCTC GATCATCAGT 1500 TCCCTGAGTA AATCCCTGCG CCTGTGCCTG CAATCACTGG TGCTGGGCCT GGGTGCATTG 1560 CTGGTGATCA AGGGCGACAT GACCGCCGGG ATGATGATCG CCGGTTCGAT CCTGATGGGT 1620 CGGGTATTGA GCCCCATCGA CCAGTTGATT GCCGTGTGGA AGCAATGGAG CTCGGCCAAG 1680 CTGGCCTACC AGCGCCTCGA CAACCTGATG CGCGAGTTCC CGCCCCAGGG CGAACAGATG 1740 GCCTTGCCGG CGCCCAAGGG CAATGTGAGT TTCGAGCAGG TCAGCGCCGG CCCGCCCGGG 1800 CGGCGTGTGC CGACCTTGCA TCAGGTCAGC TTCAACCTGG CGGCCGGTGA AGTGCTCGGC 1860 GTGCTGGGCG CGTCGGGCTC CGGCAAGTCG ACCCTGGCCC GTGTGCTGGT GGGCGTGTGG 1920 CCCACCCTGG CGGGCACCGT GCGCCTGGAC GGTGCTGACA TCCATCGCTG GGACCGTGAC 1980 GACCTCGGCC CGCATATCGG CTACCTGCCC CAGGACATCG AACTGTTCAG CGGCAGCATC 2040 GCCGACAACA TCGCACGCTT TCGTGACGCC GACCCGCAGT TAGTGGTGCA GGCCGCCCAG 2100 CAAGCCGGCG TGCACGAACT GATCCTGCGT TTGCCCCACG GCTACGACAC CGTGCTCGGC 2160 GACGAAGGCA GCGGCCTGTC CGGTGGCCAG AAACAGCGGG TCGCCCTGGC TCGCGCGTTG 2220 TATGGCGGCC CGCGGCTGAT CGTACTGGAT GAGCCCAACT CCAACCTCGA CACCGTGGGC 2280 GAAGCCGCCC TGGCCAGCGC GATCATGCAG ATGAAGGCCC AGGGCAGCAC GGTGGTGCTG 2340 GTGACGCACC GCTCCTCGGC GTTGGCCCAG GCCGACAAGC TGCTGGTGCT CAACGAAGGC 2400 CGCTTGCAGG CCTTCGGACC CAGCCAGGAC GTGCTGCGGG CACTGTCCGG CCAGCAGGAA 2460 GCACCGCGAG AAAAGGCCGG GGTCAGCCTC AGCCGTCAGT ATCAAGCCGG AAGGAATCCA 2520 GGCGCATGAG CAGCGACAGC AGCATTCAAA TCAACCGCGA TTACGAACAG ACTCACCCCG 2580 AACATGGCGC ACGTTTCTTT GCCCGCATGG GCTGGCTGCT GACGGTGGTC GGCGCCGGTG 2640 GTTTCTTCCT GTGGGCCAGC CTGGCGCCGC TGGACCAGGG CATTCCGGTG CAGGGCACCG 2700 TGGTGGTCTC GGGCAAGCGC AAGGCCGTGC AAACCCTGAG CCCCGGAGTG GTCAGCCGGA 2760 TCCTGGTGCG GGAAGGCGAG GCAGTGAAGC AGGGCCAGCC GCTGTTCCGC CTCGACCAGA 2820 CGCAAAACCA GGCTGACGTG CACTCCCTGC AAGCCCAGTA CCGCATGGCC TGGGCCAGCG 2880 TGGCGCGGTG GCAGAGCGAG CGTGATAACC AGTCGACGAT CACCTTTCCG GCGGAGCTGA 2940 GCGGTAACCC GGATCAAGCC CTGGCCTTGG TTCTGGAAGG CCAGCGCCAA CTGTTCAGCA 3000 GCCGCCGCGA AGCCTTTGCC CGGGAACAGG CCGGGATTCG CGCGAACATC GAGGGCGCCA 3060 CCGCCCAACT CAACGGCATG CGCCGCGCCC GCAGTGACCT GACTGCCCAG GCCCAATCCC 3120 TGCGCGACCA GTTGAACAAC CTGCAACCCT TGGCCGACAA CGGCTACATA CCGCGCAACC 3180 GGCTGATGGA GTACCAGCGG CAGCTGTCCC AGGTGCAACA GGACCTGGCG CAGAACACCG 3240 GCGAAAGCGG GCGGGTGGAG CAGGGCATTC TTGAATCGCG GCTCAAGCTG CAACAGCACA 3300 GCGAGGAGTA TCAGAAGGAG GTCCGCAGCC AACTCGCCGA CGCGCAACTG CGCAGCCTGA 3360 CCCTGGAGCA GCAACTGACC TCCGCGGGGT TCGACCTGCA GCACAGCGAA ATCAACGCCC 3420 CGGCCGATGG CATCGCGGTC AACCTGAGCG TGCACACCGA AGGTGCCGTG GTGCGTGCCG 3480 GTGAAACCCT GCTGGAAATC GTGCCCCAGG ACACTCGCCT GGAAGTGGAA GGGCGCTTGC 3540 CGGTGCACCT GGTGGACAAG GTCGGCACCC ATTTGCCAGT GGACATCCTG TTCACCGCCT 3600 TCAACCAGAG CCGCACGCCC CGGGTGCCGG GGGAGGTGAG CCTGATTTCT GCCGACCAGA 3660 TGCTCGACGA AAAAACCGGC ATGCCGTACT ACGTGCTGCG CACCACCGTC AGCAGCAGCG 3720 CCCTGGAGAA ACTCCATGGC CTGGTGATCA AGCCGGGGAT GCCCGCCGAG ATGTTTATCC 3780 GCACCGGCGA GCGCTCCTTG CTCAACTACC TGTTCAAGCC GCTGCTGGAC CGCGCCGGCT 3840 CGGCGTTGAC CGAGGAATGA ACATGAAACC GATGTTCATC GCCTTGCTAC TCGCCTGCAG 3900 CAGCGCCCAG GCCGCCATGG GCCCGTTTGA TGTCTACGAA CAGGCCCTGC GCAACGACCC 3960 GGTGTTCCTC GGCGCCATCA AGGAACGTGA CGCCGGCCTG GAAAACCGCA CCATTGGCCG 4020 CGCCGGCCTG CTGCCCAAGC TGTCGTACAA CTACAACAAG GGGCGCAACA ACTCCCAGGC 4080 CACCTTGCCC GACGGGCGCG GCGGTAATTA TCACGACGAC CGCAACTACA ACAGCTACGG 4140 CTCCACCTTC ACCCTGCAAC AGCCGCTGTT CGACTACGAA GCCTATGCCA ACTACCGCAA 4200 GGGTGTGGCC CAGGCGCTGT TTGCCGACGA GAGTTTTCGC GACAAGAGCC AGGCGTTGCT 4260 GGTGCGGGTG CTGACCTATT ACACCCAGGC CTTGTTTGCC CAGGACCAGA TCGACATTGC 4320 CCGCGCCAAA AAGAAGGCGT ACGAGCAGCA GTTCCAGCAG AACCAGCATT TGTTCCAACA 4380 AGGCGAAGGC ACCCGTACCG ATATCCTCGA AGCCGAATCC CGTTATGAGC TGGCCACCGC 4440 CGAAGAAATC CAGGCGCTGG ATGAGCAGGA CGCCTCGCTG CGGGAGCTGG GTGCGCTGAT 4500 CGGCGTGCAG AGCGTCAACA TCAACGACCT GGCGCCACTG AACCCGGGGT TTGCCGCCTT 4560 CACCCTGACG CCGGCCAACT ACGACACCTG GCACGAACTC GCCCTGACCA ACAACCCGAC 4620 CCTGGCCTCG CAACGCCAAT CCCTGGAAGT GGCGCGCTAT GAAGTGGAGC GCAACCGTGC 4680 CGGGCATATG CCACGGGTGA CGGCCTATGC CAGTTCGCGG CAGCAGGAAT CCGACAGCGG 4740 CAACACCTAC AACCAGCGCT ACGACACCAA CACCATTGGC GTGGAAATCA GCATGCCGCT 4800 GTATGCCGGT GGCGGGGTCT CGGCCTCCAC CCGCCAGGCC AGCCGCGCCA TGGAACAGGC 4860 CGAGTACGAG CTGGAAGGCA AGACCCGCGA AACCCTGATC GAACTGCGTC GCCAGTTCAG 4920 TGCGTGCCTG TCGGGCGTCA GCAAGCTGCG CGCCTACCAG AAGGCCCTGA CCTCGGCCGA 4980 AGCGCTGGTG GTGTCGACCA AGCAAAGCAT CCTCGGCGGC GAGCGGGTCA ACCTCGATGC 5040 GCTGAACGCC GAACAGCAGC TGTACAGCAC CCGTCGCGAC CTGGCCCAGG CGCGCTACGA 5100 CTACCTGATG GCCTGGACCA AATTGCATTA CTACGCAGGC AACTTGCGCG ACACCGACCT 5160 GGCCAAGGTG GATGAGGCGT TTGGCCCCGA ACATTGAGCA CACCCATAAA AACAACAAGG 5220 GACGGTTTAG ATGATCACCG ATTCACCTCG CTTCAAACCC TTCACCGCAG GCTCCTTGCT 5280 GCTGCTGTCC GTGGCGGCCC ACGGGCAGTA CCTCGAAGCC GGCAAACCGG GCGATCCCGC 5340 CAGTTGGCGT TCGACCGAGT TCCAGAGCGA CTGGGGCCTG GACCGCATGA AAGCCAACGA 5400 GGCCTACGCG GCCGGCATCA CCGGCAGTGG CGTCAAGATC GGCGCGCTGG ACTCGGGTTT 5460 TGACCCCAAC CATCCCGAAG CCTCAAAAGA CCGTTATCAC GCGGTCACCG CCAGCGGTAC 5520 CTACGTCGAT GGCAGCCCGT TCAACACCAC CGGCGCCCTC AACCCCAACA ACGACTCCCA 5580 CGGCACCCAT GTGACCGGCA CCATGGGCGC GGCCCGTGAT GGCGTGGGCA TGCACGGCGT 5640 GGCGTACAAC GCGCAGATCT 5660 。

【００９３】配列番号：２配列の長さ：５８３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Ala Lys Thr Thr Pro Val Ala Pro Leu Phe Lys Ala Leu Gly 1 5 10 15 Asp Tyr Lys Ser Ile Leu Ile Ser Ile Gly Cys Phe Thr Ala Leu 20 25 30 Ile Asn Val Leu Met Leu Val Pro Ser Ile Tyr Met Leu Gln Val 35 40 45 Tyr Asp Arg Val Leu Ser Ser Gln Asn Glu Thr Thr Leu Val Met 50 55 60 Leu Thr Leu Met Val Val Gly Phe Phe Ala Phe Ile Gly Val Leu 65 70 75 Glu Val Ile Arg Ser Phe Ile Val Ile Arg Ile Gly Ser Gln Leu 80 85 90 Glu Arg Arg Phe Asn Leu Arg Val Tyr Lys Ala Ala Phe Glu Arg 95 100 105 Asn Leu Gln Arg Gly Glu Gly His Gly Gly Gln Ser Leu Gly Asp 110 115 120 Leu Thr His Ile Arg Gln Phe Ile Thr Gly Pro Ala Leu Phe Ala 125 130 135 Phe Phe Asp Ala Pro Trp Phe Pro Ile Tyr Leu Phe Val Ile Phe 140 145 150 Leu Phe Asn Val Trp Leu Gly Val Leu Ala Ser Ala Gly Ala Val 155 160 165 Leu Leu Ile Gly Leu Ala Cys Leu Asn Glu Tyr Leu Thr Lys Lys 170 175 180 Pro Leu Gly Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Gln Gln Ser Thr Gln Leu 185 190 195 Ala Thr Ser His Leu His Asn Ala Glu Thr Ile Gln Ala Met Gly 200 205 210 Met Leu Gly Ala Leu Arg Lys Arg Trp Phe Lys Val His Ser Gln 215 220 225 Phe Leu Gly Leu Gln Asn Lys Ala Ser Asp Thr Gly Ser Ile Ile 230 235 240 Ser Ser Leu Ser Lys Ser Leu Arg Leu Cys Leu Gln Ser Leu Val 245 250 255 Leu Gly Leu Gly Ala Leu Leu Val Ile Lys Gly Asp Met Thr Ala 260 265 270 Gly Met Met Ile Ala Gly Ser Ile Leu Met Gly Arg Val Leu Ser 275 280 285 Pro Ile Asp Gln Leu Ile Ala Val Trp Lys Gln Trp Ser Ser Ala 290 295 300 Lys Leu Ala Tyr Gln Arg Leu Asp Asn Leu Met Arg Glu Phe Pro 305 310 315 Pro Gln Gly Glu Gln Met Ala Leu Pro Ala Pro Lys Gly Asn Val 320 325 330 Ser Phe Glu Gln Val Ser Ala Gly Pro Pro Gly Arg Arg Val Pro 335 340 345 Thr Leu His Gln Val Ser Phe Asn Leu Ala Ala Gly Glu Val Leu 350 355 360 Gly Val Leu Gly Ala Ser Gly Ser Gly Lys Ser Thr Leu Ala Arg 365 370 375 Val Leu Val Gly Val Trp Pro Thr Leu Ala Gly Thr Val Arg Leu 380 385 390 Asp Gly Ala Asp Ile His Arg Trp Asp Arg Asp Asp Leu Gly Pro 395 400 405 His Ile Gly Tyr Leu Pro Gln Asp Ile Glu Leu Phe Ser Gly Ser 410 415 420 Ile Ala Asp Asn Ile Ala Arg Phe Arg Asp Ala Asp Pro Gln Leu 425 430 435 Val Val Gln Ala Ala Gln Gln Ala Gly Val His Glu Leu Ile Leu 440 445 450 Arg Leu Pro His Gly Tyr Asp Thr Val Leu Gly Asp Glu Gly Ser 455 460 465 Gly Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Leu Ala Arg Ala 470 475 480 Leu Tyr Gly Gly Pro Arg Leu Ile Val Leu Asp Glu Pro Asn Ser 485 490 495 Asn Leu Asp Thr Val Gly Glu Ala Ala Leu Ala Ser Ala Ile Met 500 505 510 Gln Met Lys Ala Gln Gly Ser Thr Val Val Leu Val Thr His Arg 515 520 525 Ser Ser Ala Leu Ala Gln Ala Asp Lys Leu Leu Val Leu Asn Glu 530 535 540 Gly Arg Leu Gln Ala Phe Gly Pro Ser Gln Asp Val Leu Arg Ala 545 550 555 Leu Ser Gly Gln Gln Glu Ala Pro Arg Glu Lys Ala Gly Val Ser 560 565 570 Leu Ser Arg Gln Tyr Gln Ala Gly Arg Asn Pro Gly Ala 575 580 583 。

【００９４】配列番号：３配列の長さ：４４４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Ser Ser Asp Ser Ser Ile Gln Ile Asn Arg Asp Tyr Glu Gln 1 5 10 15 Thr His Pro Glu His Gly Ala Arg Phe Phe Ala Arg Met Gly Trp 20 25 30 Leu Leu Thr Val Val Gly Ala Gly Gly Phe Phe Leu Trp Ala Ser 35 40 45 Leu Ala Pro Leu Asp Gln Gly Ile Pro Val Gln Gly Thr Val Val 50 55 60 Val Ser Gly Lys Arg Lys Ala Val Gln Thr Leu Ser Pro Gly Val 65 70 75 Val Ser Arg Ile Leu Val Arg Glu Gly Glu Ala Val Lys Gln Gly 80 85 90 Gln Pro Leu Phe Arg Leu Asp Gln Thr Gln Asn Gln Ala Asp Val 95 100 105 His Ser Leu Gln Ala Gln Tyr Arg Met Ala Trp Ala Ser Val Ala 110 115 120 Arg Trp Gln Ser Glu Arg Asp Asn Gln Ser Thr Ile Thr Phe Pro 125 130 135 Ala Glu Leu Ser Gly Asn Pro Asp Gln Ala Leu Ala Leu Val Leu 140 145 150 Glu Gly Gln Arg Gln Leu Phe Ser Ser Arg Arg Glu Ala Phe Ala 155 160 165 Arg Glu Gln Ala Gly Ile Arg Ala Asn Ile Glu Gly Ala Thr Ala 170 175 180 Gln Leu Asn Gly Met Arg Arg Ala Arg Ser Asp Leu Thr Ala Gln 185 190 195 Ala Gln Ser Leu Arg Asp Gln Leu Asn Asn Leu Gln Pro Leu Ala 200 205 210 Asp Asn Gly Tyr Ile Pro Arg Asn Arg Leu Met Glu Tyr Gln Arg 215 220 225 Gln Leu Ser Gln Val Gln Gln Asp Leu Ala Gln Asn Thr Gly Glu 230 235 240 Ser Gly Arg Val Glu Gln Gly Ile Leu Glu Ser Arg Leu Lys Leu 245 250 255 Gln Gln His Ser Glu Glu Tyr Gln Lys Glu Val Arg Ser Gln Leu 260 265 270 Ala Asp Ala Gln Leu Arg Ser Leu Thr Leu Glu Gln Gln Leu Thr 275 280 285 Ser Ala Gly Phe Asp Leu Gln His Ser Glu Ile Asn Ala Pro Ala 290 295 300 Asp Gly Ile Ala Val Asn Leu Ser Val His Thr Glu Gly Ala Val 305 310 315 Val Arg Ala Gly Glu Thr Leu Leu Glu Ile Val Pro Gln Asp Thr 320 325 330 Arg Leu Glu Val Glu Gly Arg Leu Pro Val His Leu Val Asp Lys 335 340 345 Val Gly Thr His Leu Pro Val Asp Ile Leu Phe Thr Ala Phe Asn 350 355 360 Gln Ser Arg Thr Pro Arg Val Pro Gly Glu Val Ser Leu Ile Ser 365 370 375 Ala Asp Gln Met Leu Asp Glu Lys Thr Gly Met Pro Tyr Tyr Val 380 385 390 Leu Arg Thr Thr Val Ser Ser Ser Ala Leu Glu Lys Leu His Gly 395 400 405 Leu Val Ile Lys Pro Gly Met Pro Ala Glu Met Phe Ile Arg Thr 410 415 420 Gly Glu Arg Ser Leu Leu Asn Tyr Leu Phe Lys Pro Leu Leu Asp 425 430 435 Arg Ala Gly Ser Ala Leu Thr Glu Glu 440 444 。

【００９５】配列番号：４配列の長さ：４４４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Lys Pro Met Phe Ile Ala Leu Leu Leu Ala Cys Ser Ser Ala 1 5 10 15 Gln Ala Ala Met Gly Pro Phe Asp Val Tyr Glu Gln Ala Leu Arg 20 25 30 Asn Asp Pro Val Phe Leu Gly Ala Ile Lys Glu Arg Asp Ala Gly 35 40 45 Leu Glu Asn Arg Thr Ile Gly Arg Ala Gly Leu Leu Pro Lys Leu 50 55 60 Ser Tyr Asn Tyr Asn Lys Gly Arg Asn Asn Ser Gln Ala Thr Leu 65 70 75 Pro Asp Gly Arg Gly Gly Asn Tyr His Asp Asp Arg Asn Tyr Asn 80 85 90 Ser Tyr Gly Ser Thr Phe Thr Leu Gln Gln Pro Leu Phe Asp Tyr 95 100 105 Glu Ala Tyr Ala Asn Tyr Arg Lys Gly Val Ala Gln Ala Leu Phe 110 115 120 Ala Asp Glu Ser Phe Arg Asp Lys Ser Gln Ala Leu Leu Val Arg 125 130 135 Val Leu Thr Tyr Tyr Thr Gln Ala Leu Phe Ala Gln Asp Gln Ile 140 145 150 Asp Ile Ala Arg Ala Lys Lys Lys Ala Tyr Glu Gln Gln Phe Gln 155 160 165 Gln Asn Gln His Leu Phe Gln Gln Gly Glu Gly Thr Arg Thr Asp 170 175 180 Ile Leu Glu Ala Glu Ser Arg Tyr Glu Leu Ala Thr Ala Glu Glu 185 190 195 Ile Gln Ala Leu Asp Glu Gln Asp Ala Ser Leu Arg Glu Leu Gly 200 205 210 Ala Leu Ile Gly Val Gln Ser Val Asn Ile Asn Asp Leu Ala Pro 215 220 225 Leu Asn Pro Gly Phe Ala Ala Phe Thr Leu Thr Pro Ala Asn Tyr 230 235 240 Asp Thr Trp His Glu Leu Ala Leu Thr Asn Asn Pro Thr Leu Ala 245 250 255 Ser Gln Arg Gln Ser Leu Glu Val Ala Arg Tyr Glu Val Glu Arg 260 265 270 Asn Arg Ala Gly His Met Pro Arg Val Thr Ala Tyr Ala Ser Ser 275 280 285 Arg Gln Gln Glu Ser Asp Ser Gly Asn Thr Tyr Asn Gln Arg Tyr 290 295 300 Asp Thr Asn Thr Ile Gly Val Glu Ile Ser Met Pro Leu Tyr Ala 305 310 315 Gly Gly Gly Val Ser Ala Ser Thr Arg Gln Ala Ser Arg Ala Met 320 325 330 Glu Gln Ala Glu Tyr Glu Leu Glu Gly Lys Thr Arg Glu Thr Leu 335 340 345 Ile Glu Leu Arg Arg Gln Phe Ser Ala Cys Leu Ser Gly Val Ser 350 355 360 Lys Leu Arg Ala Tyr Gln Lys Ala Leu Thr Ser Ala Glu Ala Leu 365 370 375 Val Val Ser Thr Lys Gln Ser Ile Leu Gly Gly Glu Arg Val Asn 380 385 390 Leu Asp Ala Leu Asn Ala Glu Gln Gln Leu Tyr Ser Thr Arg Arg 395 400 405 Asp Leu Ala Gln Ala Arg Tyr Asp Tyr Leu Met Ala Trp Thr Lys 410 415 420 Leu His Tyr Tyr Ala Gly Asn Leu Arg Asp Thr Asp Leu Ala Lys 425 430 435 Val Asp Glu Ala Phe Gly Pro Glu His 440 444 。

【００９６】配列番号：５配列の長さ：６４００配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomo
nas fluorescens）株名：Ｎｏ．３３配列 AGATCTCGGC CGGCCTGGCA GCACACGCTA CGGCAACCAC CACCGACGTC GCCCTGGTAG 60 GCGTGCAGGA CGTTGCACAG GACTGGGCAC TCGCTGCCTG ACTTTGCTGT GCAATGAAAA 120 AAGCGAATGG AAGATCGCTC TCCCATTCGC TGCGTAAACC CCGTCGTCGC CGTGAGTTTC 180 GAAGGCCAGG GCGACGGCGG TGACAAATTC TGCGGAGCGG CGCGCGGCGT GTCAAACGCG 240 GGCGGCGCTT CCCGATTTCC CCCATGAGAA TCCCTCGATG CGCCATGCCG GCAACGAAAC 300 CCTGGCCGCT CTCACGGCCT ATAAAAGTGG CTTCCTCAAC ATTGGCCTGT TTTCGGCAGT 360 GATCAACCTG TTGATGCTGG CCCCGGCGCT GTACATGTTG CAGGTCTACG ACCGGGTGCT 420 GGCCTCCGGC AACCCGATGA CCCTGTTGAT GCTGACGCTG ATGATCCTTG GCTTGTTCGG 480 CTTGATGGGC GCGCTGGAGT GGGTGCGCAG CCAGGTGGTG ATCCGCCTTG GCACACAGAT 540 GGACATGCGC CTGAACCAGC GGGTGTACGA CGCCGCGTTC GAGGCGCAAC TCAAGGGCGG 600 CACCCAGGCG GCAGGGCAGG CGTTGAGCGA CCTGACGACC TTGCGCCAGT TCGCCACCGG 660 CCAGGCGCTG TTCGCATTTT TTGATGCGCC GTGGTTTCCG GTGTACTTGC TGGTGATCTT 720 CCTGTTCCAC CCCTGGCTCG GCGTCCTGGC GCTGGCCGGT GCGCTGATGC TGATGGCGCT 780 GGCGTGGGCC AACCAGCACA TCTGCCAGGC ACCGTTGACC CAGGCCAATC AGCTGTCGAT 840 CAGCGCCAGC CAGCAGGCCA CGGCCAACCT GCGCAATGCC GAAGCCATCG AAGCCATGGG 900 CATGCTGGCA ACCCTGCGTG CGCGCTGGTT TGCCCAGCAC CAGGCGTTTC TGGCGGCGCA 960 GAACCTGGCC AGTGAAAAGA CCGCCGCCAT CAGTGCCTGG TCCAAGGGCG TGCGCCTGGC 1020 GTTGCAGTCA TTGGTTCTCG GTTTGGGCGC ATTGCTGGCG GTGCAGGGGG CGATTACGCC 1080 GGGCATGATG ATCGCCGGCT CGATCCTGAT GGGGCGGGTA CTGAGCCCTA TCGACCAACT 1140 GATCGGCGTG TGGAAACAGT GGAGTTCGGC GCGCCTGGCC TATGAGCGTT TGACCCTGAT 1200 GCTGGCGGCC AACCCGGCGC GCACCGAGCG CATGAGCTTG CCGGCGCCCA GCGGCCAGTT 1260 GACGGTCGAG CAGGTAAGCG CGTGTGCGCC GGGCAGTCGT CGGCCCGCGT TGGCCAACCT 1320 CGGGTTCAGC CTGCCTGCCG GTGACGTGCT GGGCGTGATC GGTCCTTCCG GTTGCGGCAA 1380 GTCGACCCTG GCGCGGTTGC TGGTGGGGGC CTGGACGCCG ATGGCCGGCA AGGTTCGGCT 1440 GGACGGCGCG GACCTGGCGC AATGGGACAA GCAGCAACTC GGCCCGCACA TTGGGTATCT 1500 GCCCCAGGAC ATCCAGCTGT TCGCCGGCAG CATTGCCGAC AACATCGCGC GTTTCGACAC 1560 CGTGGATTCG GACAAGGTGC TCGCTGCCGC GCAAATGGCC GGCGTGCATC AACTGATCCT 1620 GCAGTTGCCC CAAGGCTACG ACACCCAACT GGGGGAGGGC GGTGCCGGGT TGTCCGGCGG 1680 GCAGAAGCAA CGTGTCGCGC TGGCGCGGGC GCTGTACGGC TTGCCTGCGC TGATCGTACT 1740 GGATGAGCCC AATTCCAATC TCGATGAGGC CGGCGAGCAG GCCTTGCTCC ATGCCATCAC 1800 CTTGCTCAAG GCGCAGCGTC GCACGCTGGT GCTGATCACC CACAAGACCC CTGTGCTGGC 1860 GTTGACGGAC CAACTGCTGA TCCTGCGGGA CGGCCAGTTG CAGGCGTTCG GGCCCACGGC 1920 GCGGGTGTTG GAGGCCACGC AGAAACCGGC GGCCGCGCCA CCCAAACCGG TGTCGGCGAT 1980 GAGCATGAGC TACCGCCTCG GTGAAGGAAA AAAAGCATGA GCCGACCTGT GCTTGTCACG 2040 GACAACAGCG TGCCGCCGGT GAACAACGTG CTGGCGCTGG ACGATAAAAA ATACGCCCGC 2100 CTGGGCTGGT TGCTGGTGCT CGGCGGGTTT GCCGGGTTCC TCGGCTGGGC CGCGCTGGCG 2160 CCGCTGGACA AGGGCGTGGC GGTGTCCGGC AAGGTCATGG TGTCGGGGCA CCGCAAGACG 2220 GTGCAGCACC CGTCGGGCGG GATCGTCGAG CGGATCGAGG TGCGCGATGG CGAGGTGGTG 2280 AGCGCCGGCC AGGTATTGAT CCACCTGAAG GAAACTCCGT TGCGCGGCCA GATGCAGTCT 2340 TTGCGCAGCC AGTTCATTGC GTCCCAGGCC AGCGAAGCGC GCTTGAGTGC CGAGAGCGAA 2400 GGCTTGTCGG CCGTCGTTTT CGGCCCCGAA CTGCTGAACG AGCCGGAGGC CGCCGCCACC 2460 TTGAGCCTGC AACGGCAACT GTTCAGCAGT CGCGCCCAGG CCCTGGCCAC AGAGCAGCAA 2520 GGCCTGCGGG AAACCATCGC CGGGGCCGAG GCGCAATTGC GCGGCACCCG GGAATCCCAG 2580 GCCAGCAAAG TGCTGCAACG CACCGCGATG AATGAACAAC TGCAAGGTCT GCGCGAGCTG 2640 GCGCGGGACG GCTACATCCC GCGCAATCGG CTGCTGGAAA ATGAACGGCT GTATGCCCAG 2700 CTCGACGGTG CGATTGCCGA GGATTTCGGC CGCATCGGCC AGCTGCAACG GCAAGTCCTT 2760 GAACTGCGCC TGCGCATCCG CCAGCTCGGC GAAGACTTCC AGAAAGACCT GCGCGGCCAA 2820 CTGGCCGAAA CCCGCACCCG CAGCGACGAC TTGCGCAACC GGTTGGCCTC GGCCGAATTC 2880 GAACTGGCCA ACAGCCTGGC GCGCGCGCCG GCGGCTGGTG TGGTGGTGGG GCTGGACGTG 2940 TACACCGAAG GCGGCGTGAT CAAGCCCGGC CAGGCGCTGA TGGACATCGT GCCCCAGGGT 3000 GAACCACTGC TGGTGGAAGC GCGGGTGCCG GTGCAGATGG TCGACAAGGT GCACCCGGGC 3060 TTGCCGGTGG AGTTGCTGTT CTCGGCGTTC AACCAGAGCA CCACCCCACG CATTGCCGGT 3120 GAAGTGACGC TGGTGTCGGC CGACCGCCAG GTCGACGAGC GCACCGATGA GCCGTATTAC 3180 ACCTTGCGCG CCCAGGTCAG CGCAGCCGGC ATGCGCCAGC TCGACGGCTT GCAGATTCGC 3240 CCGGGCATGC CGGTGGAAGC GTTCGTCAAA ACCGGTGAGC GCTCGATGCT CAACTACCTG 3300 TTCAAACCCT TGCTGGATCG GACTCACATG GCGTTGGTGG AAGAATGAAG GCGCTGTTAT 3360 TCGGTCTGTG TTGTGCCTGC AGTGGATCGG TCCAGGCGCT GGGATTGCTC GATGCTTATG 3420 ACTTGGCCCT GCGCAACGAC CCGACGTTTC AGGCGGCAAT CCAGGAGCGC GAGGCTGGCG 3480 AGGAAAACCG CATCATCGGC CGCGCCGGGC TGTTGCCGAA CCTGTCCTGG AGCTACAACA 3540 ACTCGCGCAA TGAATCCGAA GTCACCCAGT CGACGGCGGT GGGCAACGTC ACCAGCGACC 3600 GCGATTACCG CAGCTATGCC TCGACCCTGA CCCTGCAACA ACCGCTGCTC GATTACGAAG 3660 CCTATGCGCG CTATCGCCAG GGTGCAGCGC AGGCGCTGTT TGCCGATGAA CGCTTTCGCG 3720 GCAAGAGCCA GGAACTGGCC GTGCGGGTGT TGAGCGCCTA CAGCCAGGCG TTGCTGGCCC 3780 AGGAGCGGAT CGAGCTGAGC CGCGCCCAGA AACGCGCGTA CGCCGAGCGC CTGCAACTCA 3840 ATGAACGGCT GCTCAAGGGC GGCGAGGGCA CCCGCACCGA TGTGCTGGAA ACCCAGGCAC 3900 GCCTGAGCCT GGCCCAGGCC GAAGAGATCG AATCCCAGGA CACCCAGGAC GCAGCCTTGC 3960 GCGAGCTGGA AGCGATTGTG GGCCAGCCGT TGCAGATAGA CGAGTTGGCG CCGCTGACGC 4020 GACAGTTCGA GATCCCGCCG CTGGAGCCCA ATCGCTTCGA GACCTGGCGG GAAATGGCGA 4080 TGGCCAACAA CCCGGAGCTC AAATCCCAGC ACCACGCGCT GGACGTCGCC GAATACGAAG 4140 TGGAGCGCAA GCGCGCCGGG CACATGCCCA AGGTCAGCCT GTATGCGAGC AGCCGCCAGA 4200 CCAGCTCGGA TTCGGAAAGC AGCTACAACC AGAAGTACGA CACCAACAGC GTCGGCATCC 4260 AGGTCAGCCT GCCGCTGTTC GCCGGTGGCT CGGTGTCGGC ATCGACGCGC CAGGCCGCCA 4320 ATCAACTGTC CCAGGCCCAG TACGAACTGG ACGCGCAAAC CGCCAGAACG CTGATCGAAC 4380 TGCGCAAACA ATTCAACCTC AACACCAGCG GCGCGGCCAA AGTGCGGGCG TATGAAATGG 4440 CGGTCAGCTC GGCCACGGCC TTGGTGACGG CGACCAAAAA AAGTGTGGCC GGCGGTGAGC 4500 GCGTCAACCT CGACGTGCTG GACGCCGAAC AGCAACTGTT CACGGCCCGC CGTGACCTTG 4560 CGGATGCACG GCATGCGTAC CTGCTGGCGC GGATACAGCT GAAGTATTTC GCCGGGTTGC 4620 TGAACGAGCA GGACCTGCGA GCGTTGGCGG GGTATTTCCA GCCATCGGCA TGATGGCTAT 4680 ATCGGCTAAC ACACCGATCC ACTGTGGGAG CTGTCGAGCC TTGGCGAGGC TGCGATGGCG 4740 GCGGCATGGG CGACATTTTT AGTGTCTGAC CCACCGCCAT CGCGGCCTCG CTGAAGCTCG 4800 ACGGCTCCCA CATGTGGAAC GGCACTTACC GCCGAGTCAG CAACACACCC GATTCCATGT 4860 GGTGCGTCCA CGGGAACTGG TCAAACATCG CGCACTGGGT AATCCGGTGT GTGTCATGCA 4920 GTTGCGCAAT GTTCGCCGCC AACGTCTCCG GGTTGCAGGA GATGTACAGG ATGTTCTCGA 4980 AGCGTCGGGT CAGCTCGCAG GTGTCCGGGT CCATGCCGGC ACGCGGCGGG TCGACGAACA 5040 CGCTGCCGAA CTCGTAGCTC TTGAGGTCGA TGCCGTGCAG GCGTCGGAAC GGCCGCACTT 5100 CGTTCAAGGC TTCGGTCAGT TCCTCGGCAG ACAAACGCAC CAGGGTGACG TTATCCACCG 5160 CGTTTTCATC GAGGTTGCTC AGCGCCGCGT TCACCGAAGT CTTGCTGATC TCGGTGGCCA 5220 GCACTTTGCG TACGCGGGTG GCCAGGGGCA GGGTGAAGTT GCCGTTGCCG CAGTACAGCT 5280 CCAGCAGGTC ATCACTGCGA TCGCCGAGGG CTTCGAATGC CCAGTTGAGC ATCTTCTGGT 5340 TCACCGTGCC GTTGGGCTGG GTGAACGCGC CTTCCGGCTG GCGATAGCTG AAGGTGCGAC 5400 CGCCGACATC GAGTTTCTCG ACCACGTAAT CGCGGCCGAT CACGTCACGC TTGCCCTTGG 5460 AGCGGCCGAT GATGCTCACG TTCAAATCAG CCGCCAGCTT GTTCGCGGCG GTGTGCCAAT 5520 GCTCGTCCAG CGGGCGGTGA TAGCACAGAG TGATCATCGC GTCGCCGGCC AGGGTGGTGA 5580 GGAACTCCAC CTGGAACAGC TTGTGGCTCA GGGCGGCGCT GGCTTGCCAG GCGGCCTTGA 5640 GCTGCGGCAT CAACTGGTTG ATGCGCAGGC TGGCAATCGG GAACTCTTCG ATGAGGATTG 5700 GCGTGCGCTT GTCGTCCTGG GAAAACATCG CGTAGTGACG TTCACCCCCT TCACGCCACA 5760 GGCGGAACTC CGCCCGCAGG CGGAAGTTCT GCAAGGGCGA GTCGAAAACC TGCGGCTCTG 5820 GCGCGTCGAA CGGCGCCAGC AGGTCACGCA AGCGCGTGAC CTTGTCTTGC AGTTGAGCGG 5880 TGTAGCTTGC GGCGTCAAAA GTCATGCGTT GAACCAGCCC AGCTTGATCA CAAACAGAAT 5940 CGACAGGATC ACCAGCGCCG GGTTCAGCTC ACGGTAGCGG CCCGAAAGCA GCTTGATGGC 6000 GGTCCAGGCG ATGAAACCGA AGGCAATGCC GTTGGCGATG GAATAAGTGA ATGGCATCGC 6060 CAGGGCGGTG ATCACCACCG GCGCGGCGAC AGTGATGTCG TCCCAGTCGA TTTCGGCCAG 6120 GCCAGACGTC ATCAATACGG CAACGAACAG CAGCGCCGGC GCGGTGGCGA AGGCCGGCAC 6180 GCTGGCCGCC AGTGGCGAGA AGAACAGCGC CAGCAGGAAC AGGATGGCGA CCACGACGGC 6240 GGTCAAACCG GTACGGCCAC CGGCACTCAC GCCCGCCGCC GATTCGATGT AGCTGGTGGT 6300 GGTCGAGGTG CCCAGCAGGG AGCCGGCCAT GGCCGCAGTA CTGTCGGCGA TCAGCGCACG 6360 GCCCATTTTC GGCATGTGGC CGTCCTTGCC CATCAGGCCT 6400 。

【００９７】配列番号：６配列の長さ：５８０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Arg His Ala Gly Asn Glu Thr Leu Ala Ala Leu Thr Ala Tyr 1 5 10 15 Lys Ser Gly Phe Leu Asn Ile Gly Leu Phe Ser Ala Val Ile Asn 20 25 30 Leu Leu Met Leu Ala Pro Ala Leu Tyr Met Leu Gln Val Tyr Asp 35 40 45 Arg Val Leu Ala Ser Gly Asn Pro Met Thr Leu Leu Met Leu Thr 50 55 60 Leu Met Ile Leu Gly Leu Phe Gly Leu Met Gly Ala Leu Glu Trp 65 70 75 Val Arg Ser Gln Val Val Ile Arg Leu Gly Thr Gln Met Asp Met 80 85 90 Arg Leu Asn Gln Arg Val Tyr Asp Ala Ala Phe Glu Ala Gln Leu 95 100 105 Lys Gly Gly Thr Gln Ala Ala Gly Gln Ala Leu Ser Asp Leu Thr 110 115 120 Thr Leu Arg Gln Phe Ala Thr Gly Gln Ala Leu Phe Ala Phe Phe 125 130 135 Asp Ala Pro Trp Phe Pro Val Tyr Leu Leu Val Ile Phe Leu Phe 140 145 150 His Pro Trp Leu Gly Val Leu Ala Leu Ala Gly Ala Leu Met Leu 155 160 165 Met Ala Leu Ala Trp Ala Asn Gln His Ile Cys Gln Ala Pro Leu 170 175 180 Thr Gln Ala Asn Gln Leu Ser Ile Ser Ala Ser Gln Gln Ala Thr 185 190 195 Ala Asn Leu Arg Asn Ala Glu Ala Ile Glu Ala Met Gly Met Leu 200 205 210 Ala Thr Leu Arg Ala Arg Trp Phe Ala Gln His Gln Ala Phe Leu 215 220 225 Ala Ala Gln Asn Leu Ala Ser Glu Lys Thr Ala Ala Ile Ser Ala 230 235 240 Trp Ser Lys Gly Val Arg Leu Ala Leu Gln Ser Leu Val Leu Gly 245 250 255 Leu Gly Ala Leu Leu Ala Val Gln Gly Ala Ile Thr Pro Gly Met 260 265 270 Met Ile Ala Gly Ser Ile Leu Met Gly Arg Val Leu Ser Pro Ile 275 280 285 Asp Gln Leu Ile Gly Val Trp Lys Gln Trp Ser Ser Ala Arg Leu 290 295 300 Ala Tyr Glu Arg Leu Thr Leu Met Leu Ala Ala Asn Pro Ala Arg 305 310 315 Thr Glu Arg Met Ser Leu Pro Ala Pro Ser Gly Gln Leu Thr Val 320 325 330 Glu Gln Val Ser Ala Cys Ala Pro Gly Ser Arg Arg Pro Ala Leu 335 340 345 Ala Asn Leu Gly Phe Ser Leu Pro Ala Gly Asp Val Leu Gly Val 350 355 360 Ile Gly Pro Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Leu Ala Arg Leu Leu 365 370 375 Val Gly Ala Trp Thr Pro Met Ala Gly Lys Val Arg Leu Asp Gly 380 385 390 Ala Asp Leu Ala Gln Trp Asp Lys Gln Gln Leu Gly Pro His Ile 395 400 405 Gly Tyr Leu Pro Gln Asp Ile Gln Leu Phe Ala Gly Ser Ile Ala 410 415 420 Asp Asn Ile Ala Arg Phe Asp Thr Val Asp Ser Asp Lys Val Leu 425 430 435 Ala Ala Ala Gln Met Ala Gly Val His Gln Leu Ile Leu Gln Leu 440 445 450 Pro Gln Gly Tyr Asp Thr Gln Leu Gly Glu Gly Gly Ala Gly Leu 455 460 465 Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Leu Ala Arg Ala Leu Tyr 470 475 480 Gly Leu Pro Ala Leu Ile Val Leu Asp Glu Pro Asn Ser Asn Leu 485 490 495 Asp Glu Ala Gly Glu Gln Ala Leu Leu His Ala Ile Thr Leu Leu 500 505 510 Lys Ala Gln Arg Arg Thr Leu Val Leu Ile Thr His Lys Thr Pro 515 520 525 Val Leu Ala Leu Thr Asp Gln Leu Leu Ile Leu Arg Asp Gly Gln 530 535 540 Leu Gln Ala Phe Gly Pro Thr Ala Arg Val Leu Glu Ala Thr Gln 545 550 555 Lys Pro Ala Ala Ala Pro Pro Lys Pro Val Ser Ala Met Ser Met 560 565 570 Ser Tyr Arg Leu Gly Glu Gly Lys Lys Ala 575 580 。

【００９８】配列番号：７配列の長さ：４４３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Ser Arg Pro Val Leu Val Thr Asp Asn Ser Val Pro Pro Val 1 5 10 15 Asn Asn Val Leu Ala Leu Asp Asp Lys Lys Tyr Ala Arg Leu Gly 20 25 30 Trp Leu Leu Val Leu Gly Gly Phe Ala Gly Phe Leu Gly Trp Ala 35 40 45 Ala Leu Ala Pro Leu Asp Lys Gly Val Ala Val Ser Gly Lys Val 50 55 60 Met Val Ser Gly His Arg Lys Thr Val Gln His Pro Ser Gly Gly 65 70 75 Ile Val Glu Arg Ile Glu Val Arg Asp Gly Glu Val Val Ser Ala 80 85 90 Gly Gln Val Leu Ile His Leu Lys Glu Thr Pro Leu Arg Gly Gln 95 100 105 Met Gln Ser Leu Arg Ser Gln Phe Ile Ala Ser Gln Ala Ser Glu 110 115 120 Ala Arg Leu Ser Ala Glu Ser Glu Gly Leu Ser Ala Val Val Phe 125 130 135 Gly Pro Glu Leu Leu Asn Glu Pro Glu Ala Ala Ala Thr Leu Ser 140 145 150 Leu Gln Arg Gln Leu Phe Ser Ser Arg Ala Gln Ala Leu Ala Thr 155 160 165 Glu Gln Gln Gly Leu Arg Glu Thr Ile Ala Gly Ala Glu Ala Gln 170 175 180 Leu Arg Gly Thr Arg Glu Ser Gln Ala Ser Lys Val Leu Gln Arg 185 190 195 Thr Ala Met Asn Glu Gln Leu Gln Gly Leu Arg Glu Leu Ala Arg 200 205 210 Asp Gly Tyr Ile Pro Arg Asn Arg Leu Leu Glu Asn Glu Arg Leu 215 220 225 Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Ala Ile Ala Glu Asp Phe Gly Arg Ile 230 235 240 Gly Gln Leu Gln Arg Gln Val Leu Glu Leu Arg Leu Arg Ile Arg 245 250 255 Gln Leu Gly Glu Asp Phe Gln Lys Asp Leu Arg Gly Gln Leu Ala 260 265 270 Glu Thr Arg Thr Arg Ser Asp Asp Leu Arg Asn Arg Leu Ala Ser 275 280 285 Ala Glu Phe Glu Leu Ala Asn Ser Leu Ala Arg Ala Pro Ala Ala 290 295 300 Gly Val Val Val Gly Leu Asp Val Tyr Thr Glu Gly Gly Val Ile 305 310 315 Lys Pro Gly Gln Ala Leu Met Asp Ile Val Pro Gln Gly Glu Pro 320 325 330 Leu Leu Val Glu Ala Arg Val Pro Val Gln Met Val Asp Lys Val 335 340 345 His Pro Gly Leu Pro Val Glu Leu Leu Phe Ser Ala Phe Asn Gln 350 355 360 Ser Thr Thr Pro Arg Ile Ala Gly Glu Val Thr Leu Val Ser Ala 365 370 375 Asp Arg Gln Val Asp Glu Arg Thr Asp Glu Pro Tyr Tyr Thr Leu 380 385 390 Arg Ala Gln Val Ser Ala Ala Gly Met Arg Gln Leu Asp Gly Leu 395 400 405 Gln Ile Arg Pro Gly Met Pro Val Glu Ala Phe Val Lys Thr Gly 410 415 420 Glu Arg Ser Met Leu Asn Tyr Leu Phe Lys Pro Leu Leu Asp Arg 425 430 435 Thr His Met Ala Leu Val Glu Glu 440 443 。

【００９９】配列番号：８配列の長さ：４３９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Leu Leu Phe Gly Leu Cys Cys Ala Cys Ser Gly Ser Val Gln Ala 1 5 10 15 Leu Gly Leu Leu Asp Ala Tyr Asp Leu Ala Leu Arg Asn Asp Pro 20 25 30 Thr Phe Gln Ala Ala Ile Gln Glu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Asn 35 40 45 Arg Ile Ile Gly Arg Ala Gly Leu Leu Pro Asn Leu Ser Trp Ser 50 55 60 Tyr Asn Asn Ser Arg Asn Glu Ser Glu Val Thr Gln Ser Thr Ala 65 70 75 Val Gly Asn Val Thr Ser Asp Arg Asp Tyr Arg Ser Tyr Ala Ser 80 85 90 Thr Leu Thr Leu Gln Gln Pro Leu Leu Asp Tyr Glu Ala Tyr Ala 95 100 105 Arg Tyr Arg Gln Gly Ala Ala Gln Ala Leu Phe Ala Asp Glu Arg 110 115 120 Phe Arg Gly Lys Ser Gln Glu Leu Ala Val Arg Val Leu Ser Ala 125 130 135 Tyr Ser Gln Ala Leu Leu Ala Gln Glu Arg Ile Glu Leu Ser Arg 140 145 150 Ala Gln Lys Arg Ala Tyr Ala Glu Arg Leu Gln Leu Asn Glu Arg 155 160 165 Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gly Thr Arg Thr Asp Val Leu Glu Thr 170 175 180 Gln Ala Arg Leu Ser Leu Ala Gln Ala Glu Glu Ile Glu Ser Gln 185 190 195 Asp Thr Gln Asp Ala Ala Leu Arg Glu Leu Glu Ala Ile Val Gly 200 205 210 Gln Pro Leu Gln Ile Asp Glu Leu Ala Pro Leu Thr Arg Gln Phe 215 220 225 Glu Ile Pro Pro Leu Glu Pro Asn Arg Phe Glu Thr Trp Arg Glu 230 235 240 Met Ala Met Ala Asn Asn Pro Glu Leu Lys Ser Gln His His Ala 245 250 255 Leu Asp Val Ala Glu Tyr Glu Val Glu Arg Lys Arg Ala Gly His 260 265 270 Met Pro Lys Val Ser Leu Tyr Ala Ser Ser Arg Gln Thr Ser Ser 275 280 285 Asp Ser Glu Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Tyr Asp Thr Asn Ser Val 290 295 300 Gly Ile Gln Val Ser Leu Pro Leu Phe Ala Gly Gly Ser Val Ser 305 310 315 Ala Ser Thr Arg Gln Ala Ala Asn Gln Leu Ser Gln Ala Gln Tyr 320 325 330 Glu Leu Asp Ala Gln Thr Ala Arg Thr Leu Ile Glu Leu Arg Lys 335 340 345 Gln Phe Asn Leu Asn Thr Ser Gly Ala Ala Lys Val Arg Ala Tyr 350 355 360 Glu Met Ala Val Ser Ser Ala Thr Ala Leu Val Thr Ala Thr Lys 365 370 375 Lys Ser Val Ala Gly Gly Glu Arg Val Asn Leu Asp Val Leu Asp 380 385 390 Ala Glu Gln Gln Leu Phe Thr Ala Arg Arg Asp Leu Ala Asp Ala 395 400 405 Arg His Ala Tyr Leu Leu Ala Arg Ile Gln Leu Lys Tyr Phe Ala 410 415 420 Gly Leu Leu Asn Glu Gln Asp Leu Arg Ala Leu Ala Gly Tyr Phe 425 430 435 Gln Pro Ser Ala 439 。

【０１００】配列番号：９配列の長さ：２０配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列 ATGYTGCARG TSTAYGAYCG 20 。

【０１０１】配列番号：１０配列の長さ：１８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）配列 CRTCRAARAA SGCRAACA 18 。

【０１０２】配列番号：１１配列の長さ：２７７３配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA 起源生物名：シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomo
nas fluorescens）株名：Ｎｏ．３３配列 GCATGCTGGC GGGTGTGGAC GGCGCGCTGG ACGAAGACAC CCGTTTGGGC CTGGTGGCGG 60 GCTACAGCGA CACGTCGCTG AATATGGGCA GTGACACCCA CTCCCGCGCA TCGGTCGACA 120 GCTATCACCT GGGTGCCTAT GCCGGGCACG AGATCGGCGC CTTGCGTTTG AGCGGTGGCG 180 CAACCTACAG CTGGCACCGC GCCGATGTGA AGCGCGAGCT GCAATACGGT GAAGTCGCCG 240 GCAAGCAAAA AGCCAAGGTC GATGCCCGCA GTACCCAGGT GTTTACCGAA GCGGCGTATC 300 GCCTGAACTT GCAACCCCTT GCCCTGGAAC CGTTCGCCAA CCTGGCGTAT GTGCACCTGG 360 ATGCCGACGG GTTTACCGAG AAGGGCGATG CGGCGGCGTT GAAGGGCGGG GATGACAGCC 420 GCGACCTGGT GTTGAGCACC CTGGGCGTAA GGGCGCTGAA AACCTTGAAC GTGAGCGATC 480 ACCAGCAACT GGAGCTTTCC GGCACGCTGG GCTGGCAGCA CAACCTGAGC AGCATCGACT 540 CCGAGCGCCA CCTGGCGTTT GCGTCGGGCA GCCCGTCGTT CTCCGTGGAA AGTTCGCCGA 600 TGGTGCGTGA TGCGGCCCTG GTAGGCGCGC GGGTCAGCCT GGCGTTGAGC AAGGACGCGA 660 AGGTGAATCT TGATTACAAC GGCCTGCTGG CCAGCAAGGA GAAAGTCCAT GGCGTCGGCT 720 TGAGCCTCGA CTGGGCGTTC TGAAATACCG TTGTTTGGCT TTCTCGACAA TTCCAACAAA 780 AGAGAGGCAA TACC 794 ATG GGT GTC TTT GAC TAT AAA AAC CTC GGG ACC GAG GGC TCC AAA 839 Met Gly Val Phe Asp Tyr Lys Asn Leu Gly Thr Glu Gly Ser Lys 1 5 10 15 GCG TTG TTC GCC GAT GCC ATG GCG ATC ACG TTG TAC TCC TAC CAC 884 Ala Leu Phe Ala Asp Ala Met Ala Ile Thr Leu Tyr Ser Tyr His 20 25 30 AAC CTG GAT AAC GGC TTT GCA GTG GGC TAC CAG CAC AAC GGT TTT 929 Asn Leu Asp Asn Gly Phe Ala Val Gly Tyr Gln His Asn Gly Phe 35 40 45 GGC CTG GGC CTG CCC GCA ACC CTG GTG GGC GCG TTG CTG GGC AGT 974 Gly Leu Gly Leu Pro Ala Thr Leu Val Gly Ala Leu Leu Gly Ser 50 55 60 ACT GAT TCC CAA GGG GTG ATT CCG GGG ATT CCC TGG AAC CCC GAT 1019 Thr Asp Ser Gln Gly Val Ile Pro Gly Ile Pro Trp Asn Pro Asp 65 70 75 TCG GAA AAG GCC GCC CTC GAT GCG GTG CAC AAG GCC GGC TGG ACG 1064 Ser Glu Lys Ala Ala Leu Asp Ala Val His Lys Ala Gly Trp Thr 80 85 90 CCC ATC AGC GCC AGC ACC CTG GGC TAC GGT GGC AAG GTC GAC GCC 1109 Pro Ile Ser Ala Ser Thr Leu Gly Tyr Gly Gly Lys Val Asp Ala 95 100 105 CGG GGC ACG TTC TTC GGT GAA AAA GCC GGC TAT ACC ACC GCT CAG 1154 Arg Gly Thr Phe Phe Gly Glu Lys Ala Gly Tyr Thr Thr Ala Gln 110 115 120 GTG GAA GTG CTG GGC AAG TAC GAT GGT GAC GGC AAG TTG CTG GAA 1199 Val Glu Val Leu Gly Lys Tyr Asp Gly Asp Gly Lys Leu Leu Glu 125 130 135 ATC GGC ATC GGT TTT CGC GGC ACC TCC GGC CCC CGG GAA ACC CTG 1244 Ile Gly Ile Gly Phe Arg Gly Thr Ser Gly Pro Arg Glu Thr Leu 140 145 150 ATC AGC GAT TCC ATC GGC GAT TTG GTC AGT GAC CTG CTG GCC GCG 1289 Ile Ser Asp Ser Ile Gly Asp Leu Val Ser Asp Leu Leu Ala Ala 155 160 165 CTG GGG CCG AAG GAT TAC GCG AAA AAC TAC GCG GGC GAA GCC TTT 1334 Leu Gly Pro Lys Asp Tyr Ala Lys Asn Tyr Ala Gly Glu Ala Phe 170 175 180 GGC ACC TTG CTC AAG GAT GTC GCG GCG TAT GCC GGC AGC CAT GGG 1379 Gly Thr Leu Leu Lys Asp Val Ala Ala Tyr Ala Gly Ser His Gly 185 190 195 TTG ACG GGC AAG GAC GTG GTG GTC AGC GGC CAT AGC CTG GGT GGC 1424 Leu Thr Gly Lys Asp Val Val Val Ser Gly His Ser Leu Gly Gly 200 205 210 CTG GCG GTC AAC AGC ATG GCC GAC TTG AGC GGC AAT AAA TGG TCG 1469 Leu Ala Val Asn Ser Met Ala Asp Leu Ser Gly Asn Lys Trp Ser 215 220 225 GGA TTC TAC AAG GAT TCC AAC TAC GTG GCC TAC GCC TCG CCG ACC 1514 Gly Phe Tyr Lys Asp Ser Asn Tyr Val Ala Tyr Ala Ser Pro Thr 230 235 240 CAG AGT GCC GGC GAC AAG GTG CTG AAC ATC GGG TAT GAA AAT GAC 1559 Gln Ser Ala Gly Asp Lys Val Leu Asn Ile Gly Tyr Glu Asn Asp 245 250 255 CCG GTA TTT CGT GCC CTG GAC GGT TCG TCG TTC AAT TTC TCG TCC 1604 Pro Val Phe Arg Ala Leu Asp Gly Ser Ser Phe Asn Phe Ser Ser 260 265 270 CTG GGC GTG CAC GAC AAG CCC CAT GAG TCG ACC ACC GAC AAT ATC 1649 Leu Gly Val His Asp Lys Pro His Glu Ser Thr Thr Asp Asn Ile 275 280 285 GTC AGC TTC AAC GAT CAC TAT GCG TCG ACG CTG TGG AAT GTC CTG 1694 Val Ser Phe Asn Asp His Tyr Ala Ser Thr Leu Trp Asn Val Leu 290 295 300 CCG TTT TCC ATC GTC AAT GTG CCG ACC TGG ATC TCC CAT TTG CCC 1739 Pro Phe Ser Ile Val Asn Val Pro Thr Trp Ile Ser His Leu Pro 305 310 315 ACG GCG TAT GGG GAT GGC TTG ACG CGG GTG CTG GAC TCG CAG TTC 1784 Thr Ala Tyr Gly Asp Gly Leu Thr Arg Val Leu Asp Ser Gln Phe 320 325 330 TAC GAC CTG ACC AGC CGG GAC TCG ACG ATT ATC GTG GCC AAC CTG 1829 Tyr Asp Leu Thr Ser Arg Asp Ser Thr Ile Ile Val Ala Asn Leu 335 340 345 TCG GAC CCG GCC CGC GCC AAT ACC TGG GTG CAG GAC CTT AAC CGC 1874 Ser Asp Pro Ala Arg Ala Asn Thr Trp Val Gln Asp Leu Asn Arg 350 355 360 AAC GCC GAG CCC CAC AAG GGC AAC ACG TTC ATC ATC GGC AGT GAC 1919 Asn Ala Glu Pro His Lys Gly Asn Thr Phe Ile Ile Gly Ser Asp 365 370 375 GGT AAT GAC CTG ATT CAG GGC GGC AAG GGC GTG GAC TTC ATC GAG 1964 Gly Asn Asp Leu Ile Gln Gly Gly Lys Gly Val Asp Phe Ile Glu 380 385 390 GGT GGC AAG GGC AAT GAC ACG ATC CGC GAC AAC AGT GGG CAT AAC 2009 Gly Gly Lys Gly Asn Asp Thr Ile Arg Asp Asn Ser Gly His Asn 395 400 405 ACC TTT CTG TTC GGA GGG CAG TTT GGG CAG GAC CGG GTG ATC GGC 2054 Thr Phe Leu Phe Gly Gly Gln Phe Gly Gln Asp Arg Val Ile Gly 410 415 420 TAC CAG CCC ACC GAC AAG CTG GTG TTC CGG GAT GTG GAG GGC AGT 2099 Tyr Gln Pro Thr Asp Lys Leu Val Phe Arg Asp Val Glu Gly Ser 425 430 435 GCT GAC TGG CGC GAT CAC GCC AAG GTG GTG GGT AGC GAT ACG GTG 2144 Ala Asp Trp Arg Asp His Ala Lys Val Val Gly Ser Asp Thr Val 440 445 450 CTG AGT TTT GGC GCG GAC TCG GTA ACG CTG GTG GGG GTT GGA CTG 2189 Leu Ser Phe Gly Ala Asp Ser Val Thr Leu Val Gly Val Gly Leu 455 460 465 GCC GGG GTG TGG GGC GAT GGA ATT TCC ATC AGC 2222 Ala Gly Val Trp Gly Asp Gly Ile Ser Ile Ser 470 475 476 TAAATAGCGC TGCTGTTGTG GCGAGGGAGC AAGCTCCCTC GCCACAGGGT TAGTCAGCGT 2282 CTGGGGAGGG GTTATCTCCA GTAGTGGCCG TGGTTCCAGT ACGGGCGATG GGGTTGGCCG 2342 TAGCCGTAGC CGTAGTAATG ACCGCTTGGC CAGTAGCCTC GCGGGCCGTA GCCATAACCC 2402 CAGTGGCCGT AGTAGCCGGG AGGAGGCGGT TGCACGATTA CCACGCGCGC TGGCGCCTGG 2462 CGGATGATGA GGGTGTCGGC AAACACCGGC GTACTCGCCA GCGCAGCCCA CATCACGGGA 2522 ATGAGTAGCA GAGCGCGCAC CGCTCGGGAC ATGAATGCCA TGGCCATGGT TCTCCGTCGT 2582 ACCGCTTTCG AAGATGAAGG CGGTTGATCG GTTAAACGCG GGGGCGGTGG AAATCTTCGG 2642 TAAAATTTTG TTTATTTTGC CCATGCCAAA AAAAACGCGC ATTTGCGCGG TTTTTTTTAT 2702 TTCTCCTTGA TCACGGTCGC GACGTCCGCG GCCTTGACCC GTATGTGCTT GCCGGCGATG 2762 TCGGTGAATT C 2773 。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:43） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者出井晶子大阪府大阪市都島区都島北通２丁目４番18 −505号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】シュードモナス・フルオレッセンスのＡ
ＴＰ結合カセットトランスポーターを構成するポリペプ
チドをコードする遺伝子。
【請求項２】微生物のＡＴＰ結合カセットトランスポ
ーターを構成するポリペプチドをコードする遺伝子であ
って、該ポリペプチドが、（１）配列番号２記載のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチド、（２）配列番号３記載
のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（３）配列番号
４記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（４）配
列番号２記載のアミノ酸配列において１もしくは数個の
アミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列
を有するポリペプチド、（５）配列番号３記載のアミノ
酸配列において１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、
欠失又は置換されたアミノ酸配列を有するポリペプチ
ド、及び（６）配列番号４記載のアミノ酸配列において
１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換さ
れたアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択される
遺伝子。
【請求項３】微生物のＡＴＰ結合カセットトランスポ
ーターを構成するポリペプチドが、（１）配列番号２記
載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（２）配列番
号３記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び
（３）配列番号４記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドから選択される請求項２記載の遺伝子。
【請求項４】配列番号１記載の塩基配列を有するＤＮ
Ａ、又は配列番号１記載の塩基配列を有するＤＮＡとス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡ、
からなる請求項２記載の遺伝子。
【請求項５】（１）配列番号１記載の塩基配列の第７
７８番目から２５２６番目までに相当する塩基配列を有
するＤＮＡ、（２）配列番号１記載の塩基配列の第２５
２６番目から３８５７番目までに相当する塩基配列を有
するＤＮＡ、及び（３）配列番号１記載の塩基配列の第
３８６３番目から５１９４番目までに相当する塩基配列
を有するＤＮＡから選択されるＤＮＡからなる請求項２
記載の遺伝子。
【請求項６】微生物がシュードモナス属微生物である
請求項２記載の遺伝子。
【請求項７】微生物がシュードモナス・フルオレッセ
ンスである請求項６記載の遺伝子。
【請求項８】微生物のＡＴＰ結合カセットトランスポ
ーターを構成するポリペプチドをコードする遺伝子であ
って、該ポリペプチドが、（１）配列番号６記載のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチド、（２）配列番号７記載
のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（３）配列番号
８記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（４）配
列番号６記載のアミノ酸配列において１もしくは数個の
アミノ酸残基が付加、欠失又は置換されたアミノ酸配列
を有するポリペプチド、（５）配列番号７記載のアミノ
酸配列において１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、
欠失又は置換されたアミノ酸配列を有するポリペプチ
ド、及び（６）配列番号８記載のアミノ酸配列において
１もしくは数個のアミノ酸残基が付加、欠失又は置換さ
れたアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択される
遺伝子。
【請求項９】微生物のＡＴＰ結合カセットトランスポ
ーターを構成するポリペプチドが、（１）配列番号６記
載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、（２）配列番
号７記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド、及び
（３）配列番号８記載のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドから選択される請求項８記載の遺伝子。
【請求項１０】配列番号５記載の塩基配列を有するＤ
ＮＡ、又は配列番号５記載の塩基配列を有するＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮ
Ａ、からなる請求項８記載の遺伝子。
【請求項１１】（１）配列番号５記載の塩基配列の第
２７８番目から２０１７番目までに相当する塩基配列を
有するＤＮＡ、（２）配列番号５記載の塩基配列の第２
０１７番目から３３４５番目までに相当する塩基配列を
有するＤＮＡ、及び（３）配列番号５記載の塩基配列の
第３３５４番目から４６７０番目までに相当する塩基配
列を有するＤＮＡから選択されるＤＮＡからなる請求項
８記載の遺伝子。
【請求項１２】微生物がシュードモナス属微生物であ
る請求項８記載の遺伝子。
【請求項１３】微生物がシュードモナス・フルオレッ
センスである請求項１２記載の遺伝子。
【請求項１４】ＡＴＰ結合カセットトランスポーター
が微生物のリパーゼを細胞外へ分泌する能力を有する請
求項１から１３のいずれか１項記載の遺伝子。
【請求項１５】ＡＴＰ結合カセットトランスポーター
を構成するポリペプチドをコードする請求項１から１４
記載の遺伝子をベクタープラスミドに組込んでなる組換
えプラスミド。
【請求項１６】請求項１５記載の組換えプラスミドを
含む形質転換微生物。
【請求項１７】セラチア属又はシュードモナス属微生
物のＡＴＰ結合カセットトランスポーターによって分泌
される蛋白質をコードする遺伝子をベクタープラスミド
に組込んでなる組換えプラスミドを含む請求項１６記載
の形質転換微生物。
【請求項１８】ＡＴＰ結合カセットトランスポーター
によって分泌される蛋白質がリパーゼである請求項１７
記載の形質転換微生物。
【請求項１９】宿主微生物がシュードモナス属、セラ
チア属又はエシェリシア属微生物である請求項１６又は
１７記載の形質転換微生物。
【請求項２０】請求項１６又は１７記載の形質転換微
生物を培地で培養し、培地中に蓄積した蛋白質を分離・
採取することを特徴とする蛋白質の製法。
【請求項２１】蛋白質がリパーゼである請求項２０記
載の製法。