JP3337818B2 - 非特異的吸着防止剤 - Google Patents
非特異的吸着防止剤Info
- Publication number
- JP3337818B2 JP3337818B2 JP08739394A JP8739394A JP3337818B2 JP 3337818 B2 JP3337818 B2 JP 3337818B2 JP 08739394 A JP08739394 A JP 08739394A JP 8739394 A JP8739394 A JP 8739394A JP 3337818 B2 JP3337818 B2 JP 3337818B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- specific adsorption
- adsorption inhibitor
- acid
- protein
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫学的測定法などに
用いる非特異的吸着防止剤に関する。
用いる非特異的吸着防止剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、臨床検査や免疫学、生化学、分子
生物学などの研究分野で、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳ
Ａ）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ）、あるいはウエスタ
ンブロッティング法などの免疫学的測定法が多用されて
いる。この免疫学的測定法においては、プレートやニト
ロセルロース膜などの固相に目的物質を固定し、次い
で、それらの物質と特異的に結合するアイソトープまた
は酵素標識抗体（プローベ）を加え、それらの放射線レ
ベルや酵素活性を測定することにより、目的物質の定量
を行ったりしている。そして、この免疫学的測定法で重
要なことは、プローベが目的物質のみと反応することで
あり、プローベが固相に非特異的に吸着するようなこと
があってはならない。そこで、この非特異的吸着を防止
するために、固相に目的物質を固定化した後、非特異的
吸着防止剤を添加して固相上の吸着点を封鎖している。
例えば、ＥＬＩＳＡにおいては、抗原をプレートに固定
化し、非特異的吸着防止剤を添加した後、プローベを加
えるという手順で測定を行う。
生物学などの研究分野で、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳ
Ａ）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ）、あるいはウエスタ
ンブロッティング法などの免疫学的測定法が多用されて
いる。この免疫学的測定法においては、プレートやニト
ロセルロース膜などの固相に目的物質を固定し、次い
で、それらの物質と特異的に結合するアイソトープまた
は酵素標識抗体（プローベ）を加え、それらの放射線レ
ベルや酵素活性を測定することにより、目的物質の定量
を行ったりしている。そして、この免疫学的測定法で重
要なことは、プローベが目的物質のみと反応することで
あり、プローベが固相に非特異的に吸着するようなこと
があってはならない。そこで、この非特異的吸着を防止
するために、固相に目的物質を固定化した後、非特異的
吸着防止剤を添加して固相上の吸着点を封鎖している。
例えば、ＥＬＩＳＡにおいては、抗原をプレートに固定
化し、非特異的吸着防止剤を添加した後、プローベを加
えるという手順で測定を行う。
【０００３】なお、これらの免疫学的測定法を実施する
際に用いる非特異的吸着防止剤は、抗原に特異的でない
抗体がプレートに吸着したり、プローベがプレートに非
特異的に吸着することを防止する作用を有するものであ
り、従来、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を生理的リン酸
緩衝液（ＰＢＳ）に溶解したものが用いられていた。ま
た、他の非特異的吸着防止剤として、脱脂粉乳を水また
はトリス緩衝液に溶解したものが提案されている〔Gene
Anal. Technol., 1, 3-8, 1984 、Proc. Natl. Acad.
Sci., 82, 6741-6744, 1985 、細胞工学, 5, 264-270,
1986〕。そして、さらには有機酸を主成分とする緩衝液
に乳蛋白質を溶解し、滅菌処理した非特異的吸着防止剤
が提案されている〔特開平1-217266号公報〕。
際に用いる非特異的吸着防止剤は、抗原に特異的でない
抗体がプレートに吸着したり、プローベがプレートに非
特異的に吸着することを防止する作用を有するものであ
り、従来、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）を生理的リン酸
緩衝液（ＰＢＳ）に溶解したものが用いられていた。ま
た、他の非特異的吸着防止剤として、脱脂粉乳を水また
はトリス緩衝液に溶解したものが提案されている〔Gene
Anal. Technol., 1, 3-8, 1984 、Proc. Natl. Acad.
Sci., 82, 6741-6744, 1985 、細胞工学, 5, 264-270,
1986〕。そして、さらには有機酸を主成分とする緩衝液
に乳蛋白質を溶解し、滅菌処理した非特異的吸着防止剤
が提案されている〔特開平1-217266号公報〕。
【０００４】この有機酸を主成分とする緩衝液に乳蛋白
質を溶解して滅菌処理した非特異的吸着防止剤は、従来
のＢＳＡをＰＢＳに溶解した非特異的吸着防止剤に比
べ、安価でしかも非特異的吸着防止効果に優れていると
いう特徴を有するが、動物の生体分泌物である乳を主原
料としているため、この乳由来の成分が免疫学的測定を
阻害することがある。特に、臨床試験や生化学分野にお
いては、ヒトまたは動物の生体分泌物や動物細胞の分泌
物を試料とする場合が多く、その目的物質やそれに類似
の物質が乳に含まれていることも少なくない。このよう
な場合、高度に精製した単一の乳蛋白質を用いることに
より問題を解決することは可能であるが、非特異的吸着
防止剤としては非常に高価なものとなってしまうという
問題があった。
質を溶解して滅菌処理した非特異的吸着防止剤は、従来
のＢＳＡをＰＢＳに溶解した非特異的吸着防止剤に比
べ、安価でしかも非特異的吸着防止効果に優れていると
いう特徴を有するが、動物の生体分泌物である乳を主原
料としているため、この乳由来の成分が免疫学的測定を
阻害することがある。特に、臨床試験や生化学分野にお
いては、ヒトまたは動物の生体分泌物や動物細胞の分泌
物を試料とする場合が多く、その目的物質やそれに類似
の物質が乳に含まれていることも少なくない。このよう
な場合、高度に精製した単一の乳蛋白質を用いることに
より問題を解決することは可能であるが、非特異的吸着
防止剤としては非常に高価なものとなってしまうという
問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上述の
問題点を鑑み、ヒトまたは動物の生体分泌物や動物細胞
の分泌物を試料として免疫学的測定法を実施する場合に
おいても、阻害の心配が無く、しかも従来よりも優れた
非特異的吸着防止効果を示す非特異的吸着防止剤に用い
ることのできる素材について、鋭意検討を進めていたと
ころ、血液蛋白質または植物蛋白質を用いることによ
り、この目的を達成できることを見出し、本発明を完成
するに至った。したがって、本発明は、ヒトまたは動物
の生体分泌物や動物細胞の分泌物などを試料とする免疫
学的測定法を実施するに際して、阻害の心配が無く、し
かも優れた非特異的吸着防止効果を示す非特異的吸着防
止剤を提供することを課題とする。
問題点を鑑み、ヒトまたは動物の生体分泌物や動物細胞
の分泌物を試料として免疫学的測定法を実施する場合に
おいても、阻害の心配が無く、しかも従来よりも優れた
非特異的吸着防止効果を示す非特異的吸着防止剤に用い
ることのできる素材について、鋭意検討を進めていたと
ころ、血液蛋白質または植物蛋白質を用いることによ
り、この目的を達成できることを見出し、本発明を完成
するに至った。したがって、本発明は、ヒトまたは動物
の生体分泌物や動物細胞の分泌物などを試料とする免疫
学的測定法を実施するに際して、阻害の心配が無く、し
かも優れた非特異的吸着防止効果を示す非特異的吸着防
止剤を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の特徴は、血液蛋
白質および／または植物蛋白質を有効成分とし、有機酸
および有機酸塩から選ばれる１種以上の物質を主成分と
する緩衝液と組み合わせた非特異的吸着防止剤にある。
白質および／または植物蛋白質を有効成分とし、有機酸
および有機酸塩から選ばれる１種以上の物質を主成分と
する緩衝液と組み合わせた非特異的吸着防止剤にある。
【０００７】本発明で用いることのできる血液蛋白質と
しては、安価に精製できる血清アルブミンや免疫グロブ
リンなどを例示することができ、これらの蛋白質は、単
一の蛋白質画分であっても構わないし、血漿の全画分で
あっても構わない。また、本発明で用いることのできる
植物蛋白質としては、分離大豆蛋白質などを例示するこ
とができる。また、これらの蛋白質については、加水分
解されたものであっても構わないが、分解度が高過ぎる
と、遊離したアミノ酸が非特異的吸着防止効果に悪影響
を及ぼす場合があるので、そのような場合は、遊離した
アミノ酸を除去するか、あるいはアミノ酸が余り多く遊
離しない程度の部分分解を行ったものを用いれば良い。
しては、安価に精製できる血清アルブミンや免疫グロブ
リンなどを例示することができ、これらの蛋白質は、単
一の蛋白質画分であっても構わないし、血漿の全画分で
あっても構わない。また、本発明で用いることのできる
植物蛋白質としては、分離大豆蛋白質などを例示するこ
とができる。また、これらの蛋白質については、加水分
解されたものであっても構わないが、分解度が高過ぎる
と、遊離したアミノ酸が非特異的吸着防止効果に悪影響
を及ぼす場合があるので、そのような場合は、遊離した
アミノ酸を除去するか、あるいはアミノ酸が余り多く遊
離しない程度の部分分解を行ったものを用いれば良い。
【０００８】また、本発明で用いることのできる緩衝液
としては、クエン酸、マレイン酸、リンゴ酸、コハク
酸、マロン酸などの有機酸およびこれらの有機酸塩から
選ばれる１種類以上の物質を主成分とするものを例示す
ることができる。そして、この緩衝液のpHは、 5.3以上
7.0以下であることが好ましく、特に 5.5以上 6.6以下
であることが好ましい。緩衝液のpHを調整する場合に
は、有機酸および／または有機酸塩を組み合わせること
により行うか、あるいは、水酸化ナトリウムや水酸化カ
リウムなどのアルカリ溶液を用いたり、塩酸、硫酸、酢
酸などの酸溶液を用いて行うことができる。なお、緩衝
液のpHが 5.3未満では蛋白質が溶解し難い場合があり、
また、pHが 7.0を超えると有機酸の緩衝能が無くなるば
かりでなく、非特異的吸着防止効果も弱まる。
としては、クエン酸、マレイン酸、リンゴ酸、コハク
酸、マロン酸などの有機酸およびこれらの有機酸塩から
選ばれる１種類以上の物質を主成分とするものを例示す
ることができる。そして、この緩衝液のpHは、 5.3以上
7.0以下であることが好ましく、特に 5.5以上 6.6以下
であることが好ましい。緩衝液のpHを調整する場合に
は、有機酸および／または有機酸塩を組み合わせること
により行うか、あるいは、水酸化ナトリウムや水酸化カ
リウムなどのアルカリ溶液を用いたり、塩酸、硫酸、酢
酸などの酸溶液を用いて行うことができる。なお、緩衝
液のpHが 5.3未満では蛋白質が溶解し難い場合があり、
また、pHが 7.0を超えると有機酸の緩衝能が無くなるば
かりでなく、非特異的吸着防止効果も弱まる。
【０００９】さらに、本発明の非特異的吸着防止剤の蛋
白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比につい
ては、 0.1以下が好ましく、特に0.02以下が好ましい。
この蛋白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比
が 0.1を超えると滅菌した後に褐変が生じ、非特異的吸
着防止効果が低下する。なお、非特異的吸着防止剤の蛋
白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比が 0.1
以下であれば滅菌が可能であり、その滅菌条件は、オー
トクレーブを用いる場合、通常の 121℃で10分間で良
く、また、連続殺菌機を用いる場合、通常の 140℃で４
秒間、あるいは 150℃で２秒間で良い。
白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比につい
ては、 0.1以下が好ましく、特に0.02以下が好ましい。
この蛋白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比
が 0.1を超えると滅菌した後に褐変が生じ、非特異的吸
着防止効果が低下する。なお、非特異的吸着防止剤の蛋
白質濃度（重量％）／有機酸濃度（ミリモル）比が 0.1
以下であれば滅菌が可能であり、その滅菌条件は、オー
トクレーブを用いる場合、通常の 121℃で10分間で良
く、また、連続殺菌機を用いる場合、通常の 140℃で４
秒間、あるいは 150℃で２秒間で良い。
【００１０】本発明の非特異的吸着防止剤は、上述した
ような蛋白質を上述したような緩衝液に溶解し、滅菌処
理することにより得られる。このように、本発明の非特
異的吸着防止剤は、適当な滅菌容器に充填して溶液状態
で提供することができるが、ｉ）本発明の非特異的吸着
防止剤の各成分を固体状態で混和した粉末、あるいはｉ
ｉ）本発明の非特異的吸着防止剤溶液を凍結乾燥した粉
末、さらにはｉｉｉ）本発明の非特異的吸着防止剤溶液
を噴霧乾燥した粉末などの固体状態で提供し、使用時に
溶解して用いるような形態にしたものであっても構わな
い。なお、固体状態の非特異的吸着防止剤を製造するに
際しては、本発明者らが先に提案した方法〔特開平2- 3
6354号公報〕に準じて行うことが好ましい。
ような蛋白質を上述したような緩衝液に溶解し、滅菌処
理することにより得られる。このように、本発明の非特
異的吸着防止剤は、適当な滅菌容器に充填して溶液状態
で提供することができるが、ｉ）本発明の非特異的吸着
防止剤の各成分を固体状態で混和した粉末、あるいはｉ
ｉ）本発明の非特異的吸着防止剤溶液を凍結乾燥した粉
末、さらにはｉｉｉ）本発明の非特異的吸着防止剤溶液
を噴霧乾燥した粉末などの固体状態で提供し、使用時に
溶解して用いるような形態にしたものであっても構わな
い。なお、固体状態の非特異的吸着防止剤を製造するに
際しては、本発明者らが先に提案した方法〔特開平2- 3
6354号公報〕に準じて行うことが好ましい。
【００１１】
【実施例１】種々の血液蛋白質および／または植物蛋白
質を有効成分とし、緩衝液と組み合わせて非特異的吸着
防止剤を調製した。各蛋白質については〔蛋白量＝窒素
量×6.25〕の計算式により蛋白質を１重量％含有するよ
う、また、緩衝液については濃度が 0.1モル／リットル
となるよう、それぞれ調製し、表１に示す非特異的吸着
防止剤を試験に供した。
質を有効成分とし、緩衝液と組み合わせて非特異的吸着
防止剤を調製した。各蛋白質については〔蛋白量＝窒素
量×6.25〕の計算式により蛋白質を１重量％含有するよ
う、また、緩衝液については濃度が 0.1モル／リットル
となるよう、それぞれ調製し、表１に示す非特異的吸着
防止剤を試験に供した。
【００１２】
【表１】 ──────────────────────────────────── 蛋白質 緩衝液 ──────────────────────────────────── （１） ＢＳＡ リン酸ナトリウム （２） ＢＳＡ クエン酸−クエン酸ナトリウム （３） ＢＳＡ フマル酸−クエン酸ナトリウム （４） 羊全血清 クエン酸−クエン酸ナトリウム （５） 分離大豆蛋白質 クエン酸−クエン酸ナトリウム （６） 大豆ペプチド クエン酸−クエン酸ナトリウム （７） 大豆ペプチド＋ＢＳＡ（１：１） クエン酸−クエン酸ナトリウム （８） 脱脂粉乳 クエン酸−クエン酸ナトリウム （９） ホエー蛋白濃縮物（ＷＰＣ） クエン酸−クエン酸ナトリウム （１０）ＢＳＡ ＰＢＳ ────────────────────────────────────
【００１３】これらの非特異的吸着防止剤をオートクレ
ーブで 121℃、10分間の滅菌を行った後、96ウェルＥＬ
ＩＳＡ用プレートの各ウェルに 400マイクロリットルず
つ分注し、室温にて２時間放置した。次に、パーオキシ
ダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧ抗体をそれぞれの非特異
的吸着防止剤で1000倍に希釈し、各ウェルに 100マイク
ロリットルずつ分注し、室温にて２時間放置した。そし
て、0.05重量％ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモ
ノラウレイト〔polyoxyethylene(20)sorbitanmonolaura
te 〕を含む生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅ
ｎ） 400マイクロリットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３
回洗浄した後、基質として２，２' −アジノビス−（３
−エチルベンゾチオアゾリン−６−スルホン酸) 〔ＡＢ
ＴＳ〕を加え、10時間後、 405nmにおける吸光度をタイ
ターテックマルチスキャンで測定した。なお、試験はい
ずれも３連で実施した。その結果を表２に示す。
ーブで 121℃、10分間の滅菌を行った後、96ウェルＥＬ
ＩＳＡ用プレートの各ウェルに 400マイクロリットルず
つ分注し、室温にて２時間放置した。次に、パーオキシ
ダーゼで標識した抗ヒトＩｇＧ抗体をそれぞれの非特異
的吸着防止剤で1000倍に希釈し、各ウェルに 100マイク
ロリットルずつ分注し、室温にて２時間放置した。そし
て、0.05重量％ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモ
ノラウレイト〔polyoxyethylene(20)sorbitanmonolaura
te 〕を含む生理的リン酸緩衝液（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅ
ｎ） 400マイクロリットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３
回洗浄した後、基質として２，２' −アジノビス−（３
−エチルベンゾチオアゾリン−６−スルホン酸) 〔ＡＢ
ＴＳ〕を加え、10時間後、 405nmにおける吸光度をタイ
ターテックマルチスキャンで測定した。なお、試験はい
ずれも３連で実施した。その結果を表２に示す。
【００１４】
【表２】 ──────────────────────────────────── 非特異的吸着防止剤 pH 吸光度（平均値） ──────────────────────────────────── （１） 8.3 1.672 7.1 1.698 7.0 1.677 6.5 1.685 6.0 1.676 5.5 1.690 ──────────────────────────────────── （２） 7.1 1.477 7.0 0.543 6.5 0.032 6.0 0.024 5.5 0.021 5.3 0.046 5.2 0.898 ──────────────────────────────────── （３） 7.0 0.079 6.5 0.035 6.0 0.030 5.5 0.039 5.3 0.042 ──────────────────────────────────── （４） 6.5 0.019 5.5 0.017 ──────────────────────────────────── （５） 6.5 0.021 5.5 0.024 ──────────────────────────────────── （６） 6.5 0.019 5.5 0.018 ──────────────────────────────────── （７） 6.5 0.014 5.5 0.013 ──────────────────────────────────── （８） 6.5 0.125 5.5 0.136 ──────────────────────────────────── （９） 6.5 0.131 5.5 0.126 ──────────────────────────────────── （１０） 7.2 1.998 ────────────────────────────────────
【００１５】以上のように、通常、非特異的吸着防止剤
として用いられているＢＳＡ／ＰＢＳの系では、反応時
間を長くすると非特異的吸着が増幅され 1.998という吸
光度を得た。これに対し、血液蛋白質や植物蛋白質を用
いた各非特異的吸着防止剤の系では、緩衝剤が有機酸で
あり、そのpHが 5.3以上 7.0以下の場合、非特異的吸着
防止効果を顕著に発揮した。なお、この傾向はＥＬＩＳ
Ａ用プレートの種類の如何によらず同様であった。
として用いられているＢＳＡ／ＰＢＳの系では、反応時
間を長くすると非特異的吸着が増幅され 1.998という吸
光度を得た。これに対し、血液蛋白質や植物蛋白質を用
いた各非特異的吸着防止剤の系では、緩衝剤が有機酸で
あり、そのpHが 5.3以上 7.0以下の場合、非特異的吸着
防止効果を顕著に発揮した。なお、この傾向はＥＬＩＳ
Ａ用プレートの種類の如何によらず同様であった。
【００１６】
【実施例２】ＷＰＣ中に微量混入しているαS −カゼイ
ンを定量する系を開発する目的で、以下の試験を行っ
た。10重量％、 0.1重量％および 0.001重量％の濃度と
なるようＰＢＳに溶解したＷＰＣを96ウエルＥＬＩＳＡ
用プレートの各ウエルに 100マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置してＷＰＣをＥＬＩＳＡ用プレ
ートに固定した。次に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ 400マイク
ロリットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、
非特異的吸着防止剤を 400マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置した。なお、非特異的吸着防止
剤としては、 0.1モル／リットル濃度のクエン酸−クエ
ン酸ナトリウム（pH 6.5）に蛋白質として１重量％含有
するよう脱脂粉乳を溶解したもの（Ａ）、 0.1モル／リ
ットル濃度のクエン酸−クエン酸ナトリウム（pH 6.5）
に蛋白質として１重量％含有するようＢＳＡを溶解した
もの（Ｂ）、 0.1モル／リットル濃度のクエン酸−クエ
ン酸ナトリウム（pH 6.5）に蛋白質として１重量％含有
するよう大豆ペプチドを溶解したもの（Ｃ）をそれぞれ
用いた。
ンを定量する系を開発する目的で、以下の試験を行っ
た。10重量％、 0.1重量％および 0.001重量％の濃度と
なるようＰＢＳに溶解したＷＰＣを96ウエルＥＬＩＳＡ
用プレートの各ウエルに 100マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置してＷＰＣをＥＬＩＳＡ用プレ
ートに固定した。次に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ 400マイク
ロリットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、
非特異的吸着防止剤を 400マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置した。なお、非特異的吸着防止
剤としては、 0.1モル／リットル濃度のクエン酸−クエ
ン酸ナトリウム（pH 6.5）に蛋白質として１重量％含有
するよう脱脂粉乳を溶解したもの（Ａ）、 0.1モル／リ
ットル濃度のクエン酸−クエン酸ナトリウム（pH 6.5）
に蛋白質として１重量％含有するようＢＳＡを溶解した
もの（Ｂ）、 0.1モル／リットル濃度のクエン酸−クエ
ン酸ナトリウム（pH 6.5）に蛋白質として１重量％含有
するよう大豆ペプチドを溶解したもの（Ｃ）をそれぞれ
用いた。
【００１７】そして、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ 400マイクロ
リットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、Ｐ
ＢＳ−Ｔｗｅｅｎで 1/100倍に希釈した抗ウシαS −カ
ゼイン−ウサギ血清を各ウエルに 100マイクロリットル
ずつ分注し、室温にて２時間放置した。さらに、ＰＢＳ
−Ｔｗｅｅｎ 400マイクロリットルでＥＬＩＳＡ用プレ
ートを３回洗浄した後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで1000倍に
希釈したパーオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ−抗ヤギ
ＩｇＧ抗体を各ウェルに 100マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置した。
リットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、Ｐ
ＢＳ−Ｔｗｅｅｎで 1/100倍に希釈した抗ウシαS −カ
ゼイン−ウサギ血清を各ウエルに 100マイクロリットル
ずつ分注し、室温にて２時間放置した。さらに、ＰＢＳ
−Ｔｗｅｅｎ 400マイクロリットルでＥＬＩＳＡ用プレ
ートを３回洗浄した後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで1000倍に
希釈したパーオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ−抗ヤギ
ＩｇＧ抗体を各ウェルに 100マイクロリットルずつ分注
し、室温にて２時間放置した。
【００１８】最後に、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ 400マイクロ
リットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、基
質としてＡＢＴＳを加え、３時間後、 405nmにおける吸
光度をタイターテックマルチスキャンで測定した。な
お、試験はいずれも３連で実施した。その結果を表３に
示す。
リットルでＥＬＩＳＡ用プレートを３回洗浄した後、基
質としてＡＢＴＳを加え、３時間後、 405nmにおける吸
光度をタイターテックマルチスキャンで測定した。な
お、試験はいずれも３連で実施した。その結果を表３に
示す。
【００１９】
【表３】 ──────────────────────────────────── 非特異的吸着防止剤 ＷＰＣ濃度（重量％） 吸光値 ──────────────────────────────────── （Ａ） 10 0.466 0.1 0.471 0.001 0.469 ──────────────────────────────────── （Ｂ） 10 0.320 0.1 0.098 0.001 0.001 ──────────────────────────────────── （Ｃ） 10 0.322 0.1 0.099 0.001 0.001 ────────────────────────────────────
【００２０】以上のように、非特異的吸着防止剤として
（Ｂ）および（Ｃ）を用いた場合、ＥＬＩＳＡ用プレー
トに固定したＷＰＣの濃度と吸光度の関係が濃度依存的
であるため、ＷＰＣ中に微量混入しているαS −カゼイ
ンをこの系で定量する際に、（Ｂ）あるいは（Ｃ）の非
特異的吸着防止剤を用いても測定に影響を与えないこと
が判ったが、非特異的吸着防止剤として（Ａ）を用いた
場合、αS −カゼインの定量に（Ａ）の成分である脱脂
粉乳中に含まれるαS −カゼインが影響を与えることが
判った。
（Ｂ）および（Ｃ）を用いた場合、ＥＬＩＳＡ用プレー
トに固定したＷＰＣの濃度と吸光度の関係が濃度依存的
であるため、ＷＰＣ中に微量混入しているαS −カゼイ
ンをこの系で定量する際に、（Ｂ）あるいは（Ｃ）の非
特異的吸着防止剤を用いても測定に影響を与えないこと
が判ったが、非特異的吸着防止剤として（Ａ）を用いた
場合、αS −カゼインの定量に（Ａ）の成分である脱脂
粉乳中に含まれるαS −カゼインが影響を与えることが
判った。
【００２１】
【発明の効果】本発明によると、非特異的吸着防止剤と
して従来から使用されているＢＳＡの代替品として、優
れた非特異的吸着防止効果を有する非特異的吸着防止剤
が提供できる。また、ヒトまたは動物の生体分泌物や動
物細胞の分泌物を試料として免疫学的測定法を実施する
に際しても、優れた非特異的吸着防止効果を発揮する非
特異的吸着防止剤を安価に提供できる。さらには、常温
流通が可能な非特異的吸着防止剤であり、取扱が簡便で
あるという利点をも有する。
して従来から使用されているＢＳＡの代替品として、優
れた非特異的吸着防止効果を有する非特異的吸着防止剤
が提供できる。また、ヒトまたは動物の生体分泌物や動
物細胞の分泌物を試料として免疫学的測定法を実施する
に際しても、優れた非特異的吸着防止効果を発揮する非
特異的吸着防止剤を安価に提供できる。さらには、常温
流通が可能な非特異的吸着防止剤であり、取扱が簡便で
あるという利点をも有する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 - 33/579
Claims (3)
- 【請求項１】 血液蛋白質および／または植物蛋白質
と、クエン酸、マレイン酸、リンゴ酸、コハク酸、マロ
ン酸、フマル酸およびこれらの塩から選ばれる１種以上
の物質を主成分とする緩衝液、とからなる非特異的吸着
防止剤。 - 【請求項２】緩衝液のｐＨが、５．３以上７．０以下で
ある請求項１記載の非特異的吸着防止剤。 - 【請求項３】成分中の蛋白質濃度（重量％）／有機酸濃
度（ミリモル）比が０．１以下である請求項１または２
記載の非特異的吸着防止剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08739394A JP3337818B2 (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 非特異的吸着防止剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08739394A JP3337818B2 (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 非特異的吸着防止剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07270413A JPH07270413A (ja) | 1995-10-20 |
| JP3337818B2 true JP3337818B2 (ja) | 2002-10-28 |
Family
ID=13913646
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP08739394A Expired - Lifetime JP3337818B2 (ja) | 1994-03-31 | 1994-03-31 | 非特異的吸着防止剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3337818B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003066047A (ja) * | 2001-06-14 | 2003-03-05 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 免疫反応測定方法及びそれに用いる免疫反応測定用試薬 |
| JP4505281B2 (ja) * | 2003-08-20 | 2010-07-21 | 生化学工業株式会社 | 安定化剤及びブロッキング剤 |
| JP2006258666A (ja) * | 2005-03-17 | 2006-09-28 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 生体由来物質の吸着低減方法、生体由来物質保存溶液、生体由来物質保存容器、生体由来物質分析用キットおよび臨床診断キット |
-
1994
- 1994-03-31 JP JP08739394A patent/JP3337818B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07270413A (ja) | 1995-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3357163B2 (ja) | 免疫学的測定用トロポニン安定化組成物および安定化法 | |
| WO1989009402A1 (en) | FREEZE-DRIED COMPOSITION CONTAINING ENZYME-LABELED ANTIHUMAN INTERFERON-beta ANTIBODY AND ENZYMATIC IMMUNOASSAY KIT CONTAINING THE COMPOSITION | |
| JPH0926423A (ja) | 不活性担体分子に対して複合体形成された被検体もしくはその部分配列を含む免疫アツセイで使用するための合成キヤリブレーター | |
| CN108918848B (zh) | 维生素d释放剂及其制备方法与应用 | |
| WO2020066722A1 (ja) | ヘモグロビンの測定試薬、測定キット及び測定方法 | |
| JPH10160734A (ja) | イムノアッセイ用較正／対照用配合物 | |
| JP3337818B2 (ja) | 非特異的吸着防止剤 | |
| JP4502352B2 (ja) | ヘムタンパク質の安定化方法および保存溶液 | |
| US5352583A (en) | Human tissue plasminogen activator-human plasminogen activator inhibitor complex immunoassay and kit therefor | |
| JP4039590B2 (ja) | ヘモグロビン試料の安定化 | |
| JPH07198721A (ja) | 免疫測定用緩衝液 | |
| Kunihiko et al. | Effects of albumin and other proteins during assay of amylase activity | |
| JPS634147B2 (ja) | ||
| JPS61230058A (ja) | アルブミンの定量法 | |
| JP2004329214A (ja) | ヒト全血細胞溶解産物のプロテアーゼ活性の阻害 | |
| JP2516793B2 (ja) | 非特異的吸着防止剤および非特異的吸着防止方法 | |
| JPH06289025A (ja) | ブロッキング用非特異反応防止組成物及び固相担体 | |
| JP2902095B2 (ja) | ヒトヘモグロビンを含有する被検液の保存方法及びそれに用いる便溶解用緩衝液 | |
| JP2003194825A (ja) | ヘムタンパク質の安定化方法およびこれに用いる保存溶液 | |
| JP3126242B2 (ja) | 酵素組成物 | |
| JP3159750B2 (ja) | 標識ペルオキシダーゼの安定化方法及び安定化されたペルオキシダーゼ標識物 | |
| JPH0980051A (ja) | 固相化免疫試薬の安定化溶液 | |
| JPH07113805A (ja) | 免疫反応測定用標準品の製造方法、並びに該標準品による免疫学的測定方法 | |
| Kramer et al. | α2-Macroglobulin and α2-macroglobulin/proteinase complexes in human seminal fluid | |
| JP2572267B2 (ja) | 紛末状非特異的吸着防止剤の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080809 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090809 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100809 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110809 Year of fee payment: 9 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110809 Year of fee payment: 9 |
|
| R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120809 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120809 Year of fee payment: 10 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120809 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130809 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |