JP3126242B2 - 酵素組成物 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、酵素免疫試験における
酵素溶液中のペルオキシダーゼ活性を安定化する酵素組
成物に関する。
酵素溶液中のペルオキシダーゼ活性を安定化する酵素組
成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ペルオキシダーゼは、特に酵素的検出反
応で多く利用される酵素であり、酵素免疫試験では標識
酵素として広く用いられている。しかし、ペルオキシダ
ーゼは、特に高い希釈度の溶液中では極めて不安定であ
り、０℃〜常温付近で放置すると、分解を起こし、使用
できなくなる。同様のことが、ペルオキシダーゼと免疫
活性物質との結合体においても言える。
応で多く利用される酵素であり、酵素免疫試験では標識
酵素として広く用いられている。しかし、ペルオキシダ
ーゼは、特に高い希釈度の溶液中では極めて不安定であ
り、０℃〜常温付近で放置すると、分解を起こし、使用
できなくなる。同様のことが、ペルオキシダーゼと免疫
活性物質との結合体においても言える。
【０００３】このように、遊離の状態におけるペルオキ
シダーゼはもとより、ペルオキシダーゼと免疫活性物質
との結合体においても、寿命が短いことから、試薬とし
ての普及あるいは市場性が著しく制限されている。
シダーゼはもとより、ペルオキシダーゼと免疫活性物質
との結合体においても、寿命が短いことから、試薬とし
ての普及あるいは市場性が著しく制限されている。
【０００４】従来、安定なペルオキシダーゼ組成物とし
て、特開昭６１−７８３８５号公報には、ペルオキシダ
ーゼ、血清あるいは血清蛋白質を含む媒質、及びハロゲ
ン化アルキルフェノールを含むものが開示されている。
また、特開昭６０−１９２２６０号公報には、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体に、緩衝液と、フェノー
ル又はウシ血清アルブミンのいずれか一方又は双方との
混和液を添加して安定化したものが開示されている。
て、特開昭６１−７８３８５号公報には、ペルオキシダ
ーゼ、血清あるいは血清蛋白質を含む媒質、及びハロゲ
ン化アルキルフェノールを含むものが開示されている。
また、特開昭６０−１９２２６０号公報には、ペルオキ
シダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体に、緩衝液と、フェノー
ル又はウシ血清アルブミンのいずれか一方又は双方との
混和液を添加して安定化したものが開示されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、上記のような
安定化剤を用いても、遊離のペルオキシダーゼ、あるい
は抗原又は抗体等の免疫活性物質に結合しているペルオ
キシダーゼは、いずれも高希釈溶液状態で、保存安定性
が極めて悪い。また、上記のような凍結乾燥による安定
化法を採用する場合でも、乾燥時にペルオキシダーゼの
酵素活性が相当低下することも明らかにされている。
安定化剤を用いても、遊離のペルオキシダーゼ、あるい
は抗原又は抗体等の免疫活性物質に結合しているペルオ
キシダーゼは、いずれも高希釈溶液状態で、保存安定性
が極めて悪い。また、上記のような凍結乾燥による安定
化法を採用する場合でも、乾燥時にペルオキシダーゼの
酵素活性が相当低下することも明らかにされている。
【０００６】以上のように、ペルオキシダーゼ又はこれ
と免疫活性物質との結合体を用いた酵素組成物は、寿命
が短く、市場性において制限を受けているのが現状であ
る。従って、長期保存安定性に優れるとともに、酵素活
性測定における感度を阻害することなく長期間維持する
ことのできる、遊離のペルオキシダーゼ又はこれと免疫
活性物質との結合体を含む酵素組成物の出現が望まれて
いる。
と免疫活性物質との結合体を用いた酵素組成物は、寿命
が短く、市場性において制限を受けているのが現状であ
る。従って、長期保存安定性に優れるとともに、酵素活
性測定における感度を阻害することなく長期間維持する
ことのできる、遊離のペルオキシダーゼ又はこれと免疫
活性物質との結合体を含む酵素組成物の出現が望まれて
いる。
【０００７】本発明は、このような要請に充分応えるこ
とのできる酵素組成物を提案することを目的とする。
とのできる酵素組成物を提案することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段及び作用】本発明者等は、
上記課題を解決するため鋭意検討を行った結果、フェノ
ールと血清を安定化剤として特定量配合させれば、ペル
オキシダーゼの高希釈溶液状態で長期間に亘り、活性は
もとより、酵素測定に際しての優れた感度が阻害される
ことなく維持され得ることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
上記課題を解決するため鋭意検討を行った結果、フェノ
ールと血清を安定化剤として特定量配合させれば、ペル
オキシダーゼの高希釈溶液状態で長期間に亘り、活性は
もとより、酵素測定に際しての優れた感度が阻害される
ことなく維持され得ることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
【０００９】すなわち、本発明は、遊離状態又は免疫活
性物質との結合体としてのペルオキシダーゼ、血清及び
フェノールを含有することを特徴とする酵素組成物を要
旨とする。
性物質との結合体としてのペルオキシダーゼ、血清及び
フェノールを含有することを特徴とする酵素組成物を要
旨とする。
【００１０】本発明の組成物において、ペルオキシダー
ゼとしては、動物由来、微生物由来、植物由来等、いず
れの由来のものをも使用することができる。その例とし
ては、ラクトペルオキシダーゼ、チトクロームＣペルオ
キシダーゼ、ＨＲＰ（ホースラディシュペルオキシダー
ゼ）等が挙げられるが、特にＨＲＰが好ましい。これら
のペルオキシダーゼは、遊離状態で、又は免疫活性物質
との結合体として、通常、緩衝剤を含んだ生理食塩水中
で取り扱われる。
ゼとしては、動物由来、微生物由来、植物由来等、いず
れの由来のものをも使用することができる。その例とし
ては、ラクトペルオキシダーゼ、チトクロームＣペルオ
キシダーゼ、ＨＲＰ（ホースラディシュペルオキシダー
ゼ）等が挙げられるが、特にＨＲＰが好ましい。これら
のペルオキシダーゼは、遊離状態で、又は免疫活性物質
との結合体として、通常、緩衝剤を含んだ生理食塩水中
で取り扱われる。
【００１１】ペルオキシダーゼと結合する免疫活性物質
としては、抗原、抗体、ハプテン、プロテインＡ等が挙
げられる。抗原ないしはハプテンとしては、例えば、ウ
イルス、細菌、タンパク質、薬物、ステロイド、ホルモ
ン等が挙げられる。抗体としては、従来公知の方法で、
ヤギ、ウサギ等の哺乳動物を、上記の抗原等で免疫する
ことによって得られる抗体や、細胞融合により作製され
たハイブリドーマより得られるモノクローナル抗体が挙
げられ、またこれらのフラグメント等も含まれる。
としては、抗原、抗体、ハプテン、プロテインＡ等が挙
げられる。抗原ないしはハプテンとしては、例えば、ウ
イルス、細菌、タンパク質、薬物、ステロイド、ホルモ
ン等が挙げられる。抗体としては、従来公知の方法で、
ヤギ、ウサギ等の哺乳動物を、上記の抗原等で免疫する
ことによって得られる抗体や、細胞融合により作製され
たハイブリドーマより得られるモノクローナル抗体が挙
げられ、またこれらのフラグメント等も含まれる。
【００１２】ペルオキシダーゼと免疫活性物質との結合
は、吸着等の物理的結合、イオン結合や共有結合等の化
学的結合等いずれでもよく、共有結合が好ましい。その
結合方法は、種々の公知の方法、例えば、グルタルアル
デヒドを架橋剤として免疫活性物質のアミノ基とペルオ
キシダーゼのアミノ基を共有結合する方法（Ａｖｒａｍ
ｅａｓ，Ｓ．著“Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”
６，ｐ４３〜５２，〔１９６９〕）、あるいはペルオキ
シダーゼに含まれる糖鎖を過ヨウ素酸で酸化切断してア
ルデヒド基を導入した後、該アルデヒド基と、免疫活性
物質のアミノ基とを結合させる方法（過ヨウ素酸酸化
法）（Ｎａｋａｎｅ，Ｐ．Ｋ．＆Ｋａｗａｏｉ，Ａ著
“Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．”２
２，ｐ１０８４〜１０９１，〔１９７４〕）等を用いて
共有結合させる方法等が挙げられる。
は、吸着等の物理的結合、イオン結合や共有結合等の化
学的結合等いずれでもよく、共有結合が好ましい。その
結合方法は、種々の公知の方法、例えば、グルタルアル
デヒドを架橋剤として免疫活性物質のアミノ基とペルオ
キシダーゼのアミノ基を共有結合する方法（Ａｖｒａｍ
ｅａｓ，Ｓ．著“Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”
６，ｐ４３〜５２，〔１９６９〕）、あるいはペルオキ
シダーゼに含まれる糖鎖を過ヨウ素酸で酸化切断してア
ルデヒド基を導入した後、該アルデヒド基と、免疫活性
物質のアミノ基とを結合させる方法（過ヨウ素酸酸化
法）（Ｎａｋａｎｅ，Ｐ．Ｋ．＆Ｋａｗａｏｉ，Ａ著
“Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．”２
２，ｐ１０８４〜１０９１，〔１９７４〕）等を用いて
共有結合させる方法等が挙げられる。
【００１３】遊離状態のペルオキシダーゼ又は免疫活性
物質との結合体としてのペルオキシダーゼは、約０．０
１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１
μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの量で配合することが適
している。約１ｍｇ／ｍｌより多くても、また約０．０
１μｇ／ｍｌ未満でも、測定の感度が低下してしまうか
らである。
物質との結合体としてのペルオキシダーゼは、約０．０
１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１
μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌの量で配合することが適
している。約１ｍｇ／ｍｌより多くても、また約０．０
１μｇ／ｍｌ未満でも、測定の感度が低下してしまうか
らである。
【００１４】遊離のペルオキシダーゼあるいは免疫活性
物質と結合しているペルオキシダーゼの酵素活性は、過
酸化水素と適当な発色剤、例えば４−アミノアンチピリ
ンとフェノール、０−フェニレンジアミン等を用い、比
色法により定量することができる。
物質と結合しているペルオキシダーゼの酵素活性は、過
酸化水素と適当な発色剤、例えば４−アミノアンチピリ
ンとフェノール、０−フェニレンジアミン等を用い、比
色法により定量することができる。
【００１５】本発明の組成物において、フェノールは、
ペルオキシダーゼ、特にＨＲＰの活性を上げる働きがあ
り、経時的に不活性化してしまうペルオキシダーゼ、特
にＨＲＰの安定化に寄与する。
ペルオキシダーゼ、特にＨＲＰの活性を上げる働きがあ
り、経時的に不活性化してしまうペルオキシダーゼ、特
にＨＲＰの安定化に寄与する。
【００１６】フェノールは、それ自体が使用される。
【００１７】上記のフェノールは、余り多量であると、
タンパク質が変性して酵素が失活するため、本発明の全
組成物基準で、約０．５重量％以下、好ましくは約０．
０５重量％以下がよい。また、余り少量であると、上記
した効果が発現しないため、下限は上記の基準で約０．
００５重量％、好ましくは０．０１重量％がよい。
タンパク質が変性して酵素が失活するため、本発明の全
組成物基準で、約０．５重量％以下、好ましくは約０．
０５重量％以下がよい。また、余り少量であると、上記
した効果が発現しないため、下限は上記の基準で約０．
００５重量％、好ましくは０．０１重量％がよい。
【００１８】本発明の組成物において、上記のフェノー
ルとともに使用される血清は、経時的に不活性化してし
まうペルオキシダーゼの安定化に寄与する。
ルとともに使用される血清は、経時的に不活性化してし
まうペルオキシダーゼの安定化に寄与する。
【００１９】血清としては、ウシ胎児血清、仔ウシ血
清、馬血清、家兎血清等が使用され、好ましくはウシ胎
児血清が用いられる。血清は、余り多量であっても、上
記の効果が飽和してしまい経済的に不利になるばかり
か、感度が悪くなり、さらには雑菌も増え易くなる。逆
に、余り少量であっても、上記の効果が発現しないた
め、本発明の全組成物に対して約１〜５０ｖｏｌ％、好
ましくは約２〜１５ｖｏｌ％で用いられる。遊離の又は
免疫活性物質との結合体としてのペルオキシダーゼに対
する血清の比率では、通常、約１０３〜１０９重量倍、
好ましくは約１０５〜１０７重量倍が適している。
清、馬血清、家兎血清等が使用され、好ましくはウシ胎
児血清が用いられる。血清は、余り多量であっても、上
記の効果が飽和してしまい経済的に不利になるばかり
か、感度が悪くなり、さらには雑菌も増え易くなる。逆
に、余り少量であっても、上記の効果が発現しないた
め、本発明の全組成物に対して約１〜５０ｖｏｌ％、好
ましくは約２〜１５ｖｏｌ％で用いられる。遊離の又は
免疫活性物質との結合体としてのペルオキシダーゼに対
する血清の比率では、通常、約１０３〜１０９重量倍、
好ましくは約１０５〜１０７重量倍が適している。
【００２０】本発明の組成物は、任意の緩衝剤、塩化ナ
トリウム等の塩類、さらには水を含有してもよい。緩衝
剤としては、トリス系、リン酸系、炭酸系、酢酸系等、
通常用いられているものが使用できる。水溶液中のＰＨ
は、高過ぎても、低過ぎても、ペルオキシダーゼが失活
してしまうのみならず、抗原と抗体の結合能がなくなる
ため、ＰＨ約４〜１１を示すものが好ましい。
トリウム等の塩類、さらには水を含有してもよい。緩衝
剤としては、トリス系、リン酸系、炭酸系、酢酸系等、
通常用いられているものが使用できる。水溶液中のＰＨ
は、高過ぎても、低過ぎても、ペルオキシダーゼが失活
してしまうのみならず、抗原と抗体の結合能がなくなる
ため、ＰＨ約４〜１１を示すものが好ましい。
【００２１】以上のようにして安定化された本発明のペ
ルオキシダーゼ組成物は、医療、生物学等の各種の測定
用検査薬に用いられるが、特に酵素免疫法用試薬等に好
ましく使用される。
ルオキシダーゼ組成物は、医療、生物学等の各種の測定
用検査薬に用いられるが、特に酵素免疫法用試薬等に好
ましく使用される。
【００２２】
実施例１ （酵素組成物の作製）通常の方法により作製したマウス
抗ヒトαフェトプロテインモノクローナル抗体（以下、
「抗ＡＦＰ抗体」と言う）を、過ヨウ素酸酸化法によ
り、ＨＲＰ（シグマ社製，タイプ１２，品番Ｐ８４１
５）と結合させ、未反応の遊離ＨＲＰは、ゲルろ過を行
って除去した（カラムとして、スウェーデンのファルマ
シア社製商品名“セファデックスＳ−２００ＨＲ”を使
用）。次に、ウシ胎児血清（ハイクロン社製，品番Ａ−
１１１１−Ｌ）１０容量対容量（ｖ／ｖ）％、フェノー
ル（和光純薬社製，品番１６８−１２７２１）０．０１
重量対容量（ｗ／ｖ）％を含む０．０１Ｍリン酸緩衝生
理食塩水（ｐＨ７．０）（以下、「ＰＢＳ」と言う）
に、上記のようにして作成したＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体
を１０００倍希釈になるように添加し、抗体溶液すなわ
ち免疫活性物質とペルオキシダーゼとの結合体を含む本
発明の酵素組成物を得た。この酵素組成物を３７℃で保
存した。
抗ヒトαフェトプロテインモノクローナル抗体（以下、
「抗ＡＦＰ抗体」と言う）を、過ヨウ素酸酸化法によ
り、ＨＲＰ（シグマ社製，タイプ１２，品番Ｐ８４１
５）と結合させ、未反応の遊離ＨＲＰは、ゲルろ過を行
って除去した（カラムとして、スウェーデンのファルマ
シア社製商品名“セファデックスＳ−２００ＨＲ”を使
用）。次に、ウシ胎児血清（ハイクロン社製，品番Ａ−
１１１１−Ｌ）１０容量対容量（ｖ／ｖ）％、フェノー
ル（和光純薬社製，品番１６８−１２７２１）０．０１
重量対容量（ｗ／ｖ）％を含む０．０１Ｍリン酸緩衝生
理食塩水（ｐＨ７．０）（以下、「ＰＢＳ」と言う）
に、上記のようにして作成したＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体
を１０００倍希釈になるように添加し、抗体溶液すなわ
ち免疫活性物質とペルオキシダーゼとの結合体を含む本
発明の酵素組成物を得た。この酵素組成物を３７℃で保
存した。
【００２３】（酵素組成物の長期保存安定性の測定）上
記のようにして作製した酵素組成物の貯蔵日数とＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体の活性度との関係は、以下のようにし
て測定した。“５００ｎｇ／ｍｌのＡＦＰ（日本バイオ
テスト研究所製，ヒトＡＦＰ精製抗原）を含有する０．
０１ＭＰＢＳ”（以下、「ＡＦＰ標準液」と言う）２０
μｌに、実施例１の酵素組成物を５００μｌ加え、下記
の要領で作製した抗ＡＦＰ抗体結合ビーズを１つ入れ、
３７℃にて６０分間振とうした。振とう終了後、蒸留水
にて充分洗浄した。
記のようにして作製した酵素組成物の貯蔵日数とＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体の活性度との関係は、以下のようにし
て測定した。“５００ｎｇ／ｍｌのＡＦＰ（日本バイオ
テスト研究所製，ヒトＡＦＰ精製抗原）を含有する０．
０１ＭＰＢＳ”（以下、「ＡＦＰ標準液」と言う）２０
μｌに、実施例１の酵素組成物を５００μｌ加え、下記
の要領で作製した抗ＡＦＰ抗体結合ビーズを１つ入れ、
３７℃にて６０分間振とうした。振とう終了後、蒸留水
にて充分洗浄した。
【００２４】上記のビーズを新しい試験管に移し、その
中に、１ｍｇ／ｍｌのオルトフェニレンジアミンと０．
０２重量対容量（ｗ／ｖ）％の過酸化水素水とを含むＰ
Ｈ５．０の０．１Ｍクエン酸緩衝液５００μｌを加え、
暗所、室温で３０分間反応させ、１Ｎ硫酸１ｍｌを加
え、反応を停止させた後、４９２ｎｍの吸光度を測定す
ることにより、ＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体活性度を求め
た。その結果を、表１に示す。
中に、１ｍｇ／ｍｌのオルトフェニレンジアミンと０．
０２重量対容量（ｗ／ｖ）％の過酸化水素水とを含むＰ
Ｈ５．０の０．１Ｍクエン酸緩衝液５００μｌを加え、
暗所、室温で３０分間反応させ、１Ｎ硫酸１ｍｌを加
え、反応を停止させた後、４９２ｎｍの吸光度を測定す
ることにより、ＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体活性度を求め
た。その結果を、表１に示す。
【００２５】なお、ＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体活性度は、
実施例１の酵素組成物の保存日数０，７，１４，２１日
のものについて測定し、その安定性は、０日目を１００
％としたときの残存活性を百分率で示した（以下、同様
に示す）。
実施例１の酵素組成物の保存日数０，７，１４，２１日
のものについて測定し、その安定性は、０日目を１００
％としたときの残存活性を百分率で示した（以下、同様
に示す）。
【００２６】（抗ＡＦＰ抗体結合ビーズの作製）上記の
抗ＡＦＰ抗体結合ビーズは、抗ＡＦＰ抗体を、４℃で４
８時間、ポリスチレンビーズに物理吸着させた後、ＰＨ
７．０の０．０１ＭＰＢＳにて充分洗浄し、ビーズが充
分浸漬し得る量の０．０１ＭＰＢＳ中１％ＢＳＡ（ウシ
血清アルブミン，生化学工業社製，品番２５００２１）
溶液に浸漬してブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）操作
（ビーズへの他の反応成分の付着をブロックするための
操作）を行って作製した。
抗ＡＦＰ抗体結合ビーズは、抗ＡＦＰ抗体を、４℃で４
８時間、ポリスチレンビーズに物理吸着させた後、ＰＨ
７．０の０．０１ＭＰＢＳにて充分洗浄し、ビーズが充
分浸漬し得る量の０．０１ＭＰＢＳ中１％ＢＳＡ（ウシ
血清アルブミン，生化学工業社製，品番２５００２１）
溶液に浸漬してブロッキング（ｂｌｏｃｋｉｎｇ）操作
（ビーズへの他の反応成分の付着をブロックするための
操作）を行って作製した。
【００２７】比較例１ 実施例１の酵素組成物に代えて、ウシ胎児血清、フェノ
ールを添加せず、１％ＢＳＡ／０．０１ＭＰＢＳを添加
した酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１
に示す。
ールを添加せず、１％ＢＳＡ／０．０１ＭＰＢＳを添加
した酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１
に示す。
【００２８】比較例２ 実施例１の酵素組成物に代えて、フェノールを添加しな
い酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ標
識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１に
示す。
い酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ標
識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１に
示す。
【００２９】比較例３ 実施例１の酵素組成物に代えて、ウシ胎児血清を添加し
ない酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１
に示す。
ない酵素組成物について、実施例１と同様にしてＨＲＰ
標識抗ＡＦＰ抗体活性度を測定した。この結果を、表１
に示す。
【００３０】比較例４ 実施例１の酵素組成物のウシ胎児血清に代えて、ウシ血
清アルブミン（１％ＢＳＡ）を添加する酵素組成物につ
いて、実施例１と同様にしてＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体活
性度を測定した。この結果を、表１に示す。
清アルブミン（１％ＢＳＡ）を添加する酵素組成物につ
いて、実施例１と同様にしてＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体活
性度を測定した。この結果を、表１に示す。
【００３１】
【表１】
【００３２】実施例２ （酵素組成物の作製）ＨＲＰ（シグマ社製，タイプ１
２，品番Ｐ８４１５））を、最終濃度０．１μｇ／ｍｌ
となるように、ｐＨ７．５の０．０１ＭＰＢＳに溶解し
た。さらに、最終濃度が１０（ｖ／ｖ）％のウシ胎児血
清、０．０１（ｗ／ｖ）％のフェノールを添加し、遊離
状態のペルオキシダーゼを含む本発明の酵素組成物を得
た。この酵素組成物を３７℃で保存した。
２，品番Ｐ８４１５））を、最終濃度０．１μｇ／ｍｌ
となるように、ｐＨ７．５の０．０１ＭＰＢＳに溶解し
た。さらに、最終濃度が１０（ｖ／ｖ）％のウシ胎児血
清、０．０１（ｗ／ｖ）％のフェノールを添加し、遊離
状態のペルオキシダーゼを含む本発明の酵素組成物を得
た。この酵素組成物を３７℃で保存した。
【００３３】（酵素組成物の長期保存安定性の測定）上
記のようにして作製した酵素組成物について、保存日数
０、１０、１９日における遊離性ペルオキシダーゼの活
性度を実施例１のビーズの代わりに、上記酵素組成物５
μｌを使用する以外は、実施例１と同様に測定した。こ
の結果を、表２に示す。
記のようにして作製した酵素組成物について、保存日数
０、１０、１９日における遊離性ペルオキシダーゼの活
性度を実施例１のビーズの代わりに、上記酵素組成物５
μｌを使用する以外は、実施例１と同様に測定した。こ
の結果を、表２に示す。
【００３４】実施例３ ウシ胎児血清の濃度を２（ｖ／ｖ）％とする以外は実施
例２と同様にして作製した酵素組成物について、遊離性
ペルオキシダーゼの活性度を実施例２と同様にして測定
した。この結果を、表２に示す。
例２と同様にして作製した酵素組成物について、遊離性
ペルオキシダーゼの活性度を実施例２と同様にして測定
した。この結果を、表２に示す。
【００３５】比較例５ 実施例２の酵素組成物に代えて、ウシ胎児血清、フェノ
ールを添加しない酵素組成物について、遊離性ペルオキ
シダーゼの活性度を実施例２と同様にして測定した。こ
の結果を、表２に示す。
ールを添加しない酵素組成物について、遊離性ペルオキ
シダーゼの活性度を実施例２と同様にして測定した。こ
の結果を、表２に示す。
【００３６】
【表２】
【００３７】表１、表２から明らかなように、本発明の
酵素組成物によれば、経時変化を起こすことなく、優れ
た長期保存安定性を示すことが分かる。
酵素組成物によれば、経時変化を起こすことなく、優れ
た長期保存安定性を示すことが分かる。
【００３８】実施例４ ＡＦＰ標準液の代わりに、ＡＦＰを含有しない０．０１
ＭＰＢＳを添加する以外は、実施例１と同様にしてＨＲ
Ｐ標識抗ＡＦＰ抗体の活性度を測定した。この結果を、
図１の曲線αに示す。
ＭＰＢＳを添加する以外は、実施例１と同様にしてＨＲ
Ｐ標識抗ＡＦＰ抗体の活性度を測定した。この結果を、
図１の曲線αに示す。
【００３９】比較例６ 実施例１の酵素組成物に代えて、ウシ胎児血清、フェノ
ールを添加する代わりに、ポリエチレングリコール（分
子量６０００，和光純薬社製，品番１６９−０９１２
５）３重量対容量（ｗ／ｖ）％添加した酵素組成物につ
いて、実施例４と同様にしてＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体の
活性度を測定した。この結果を、図１の曲線βに示す。
ールを添加する代わりに、ポリエチレングリコール（分
子量６０００，和光純薬社製，品番１６９−０９１２
５）３重量対容量（ｗ／ｖ）％添加した酵素組成物につ
いて、実施例４と同様にしてＨＲＰ標識抗ＡＦＰ抗体の
活性度を測定した。この結果を、図１の曲線βに示す。
【００４０】図１から明らかなように、本発明の酵素組
成物を用いれば、抗体が非特異結合を起こさないため、
ブランク吸光度の上昇がないことが分かる。従って、本
発明の酵素組成物を使用する酵素免疫法の測定に際し、
良好な感度が得られることも明らかである。
成物を用いれば、抗体が非特異結合を起こさないため、
ブランク吸光度の上昇がないことが分かる。従って、本
発明の酵素組成物を使用する酵素免疫法の測定に際し、
良好な感度が得られることも明らかである。
【００４１】
【発明の効果】本発明の酵素組成物は、上述したよう
に、高希釈のペルオキシダーゼ又はこれと免疫活性物質
との結合体に、血清とフェノールを添加することによ
り、酵素測定に際して必要な優れた感度を維持したま
ま、優れた長期保存安定性を有する。従って、本発明の
酵素組成物は、長期保存が可能な試験試薬等として極め
て有用であり、医療，生物学等の分野の各種測定に際
し、安定した一定品質の試薬を提供できるとともに、正
確な診断等に貢献できるものである。
に、高希釈のペルオキシダーゼ又はこれと免疫活性物質
との結合体に、血清とフェノールを添加することによ
り、酵素測定に際して必要な優れた感度を維持したま
ま、優れた長期保存安定性を有する。従って、本発明の
酵素組成物は、長期保存が可能な試験試薬等として極め
て有用であり、医療，生物学等の分野の各種測定に際
し、安定した一定品質の試薬を提供できるとともに、正
確な診断等に貢献できるものである。
【図１】本発明の効果を示すためのグラフである。
α 本発明例 β 比較例
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 金子 隆司 埼玉県久喜市吉羽1407−１ (72)発明者 陣内 英夫 埼玉県久喜市栗原北694 (56)参考文献 特開 平２−42982（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−192260（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−212286（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−188067（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 9/96 G01N 33/531 G01N 33/535
Claims (2)
- 【請求項１】 遊離状態又は免疫活性物質との結合体と
してのペルオキシダーゼ、血清及びフェノールを含有す
ることを特徴とする酵素組成物。 - 【請求項２】 血清が、ウシ胎児血清であることを特徴
とする請求項１記載の酵素組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04313943A JP3126242B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 酵素組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04313943A JP3126242B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 酵素組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06133772A JPH06133772A (ja) | 1994-05-17 |
| JP3126242B2 true JP3126242B2 (ja) | 2001-01-22 |
Family
ID=18047375
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04313943A Expired - Lifetime JP3126242B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 酵素組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3126242B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9615612B2 (en) | 2013-08-29 | 2017-04-11 | 3M Innovative Properties Company | Filtering face-piece respirator with stiffening member integral with filtering structure |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002005936A (ja) * | 2000-06-26 | 2002-01-09 | Shino Test Corp | 酵素免疫測定法による測定試薬及び測定方法 |
-
1992
- 1992-10-29 JP JP04313943A patent/JP3126242B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9615612B2 (en) | 2013-08-29 | 2017-04-11 | 3M Innovative Properties Company | Filtering face-piece respirator with stiffening member integral with filtering structure |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06133772A (ja) | 1994-05-17 |
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