JP3231325B2 - 光学活性ノルボルネオールの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は微生物によりエクソ−ノルボルナン型エステ
ルを処理することにより、光学活性ノルボルネオールを
製造する方法に関する。

背景技術 ノルボルネオールの製造方法のうち化学合成による方
法としては、ノルボルネンを出発原料として有機酸と作
用させノルボルナンのエステル体とした後、このエステ
ル体を化学的に脱アセチル化してノルボルネオールを得
る方法が知られている。このような化学合成による方法
では、４種の立体異性体（（＋，−）−（endo,exo）−
ノルボルネオール）が生じるので、光学活性なノルボル
ネオールを化学合成的に得るには、煩雑な反応工程を必
要とする。

ノルボルネオールを生物学的に製造する方法として
は、ノルボルナンのエステル体を微生物と接触あるいは
酵素と反応させ、該エステルを加水分解する方法が知ら
れている。最近、オーバーハウセルら（Th.Oberhauser
et al.,Tetrahedron,43,3931−3941,1987）はカンジダ
シリンドラセアエ（Candida cylindraceae）由来のリ
パーゼを用いて（±）−ノルボルニルアセテートから
（−）−ノルボルネオールを製造する方法を報告してい
る。さらに、オリタニら（T.Oritani et al.,Agr.Biol.
Chem.,38（10）,1961−1964,1974）は、トリコデルマ・
エスピー（Trichoderma sp）、トリコデルマ コニンギ
（Trichoderma koningi）、バチルス ズブチリス ニ
ガー株（Bacillus subtilis var.Niger）およびアブシ
ディア ヒアロスポラ（Absidia hyalospora）の培養液
を用いて、（±）ボルニルアセテートおよび、（±）イ
ソボルニルアセテートから（−）ボルネオールおよび、
（−）イソボルネオールを製造する方法を報告してい
る。しかしいずれも選択性が低く、光学純度の低いもの
しか得られていない。特開平２−273196には一般に、ラ
セミ化合物の光学分割を目的として行う生物的触媒反応
で、鏡像異性体の一方の反応を選択的に阻害する阻害剤
を添加する光学分割方法が開示されており、このような
方法を光学活性ノルボルネオールの調製に使用すること
も可能である。しかし、光学活性ノルボルネオールの選
択に有効な阻害剤をスクリーニングにより得る必要があ
るうえに、反応後の分取作業において阻害剤を除去しな
ければならず操作が繁雑になる欠点を有する。上記の様
な背景から、光学活性ノルボルネオールを得るために、
エステル加水分解の際、立体選択性の高い微生物あるい
は酵素と接触させる生物学的な方法の改善が要望されて
いる。

発明の開示 本発明は微生物を利用してエクソ−ノルボルナン型エ
ステルを処理することにより高純度の光学活性ノルボル
ネオールを得る方法を提供する。

本発明の光学活性ノルボルネオールの製造方法は、式
（Ｉ）： （式中、Ｒはアシル基を、ＡおよびＢはそれぞれ水素を
表わすかまたは一緒になって結合手を表わす）で示され
る（±）−エクソ−ノルボルナン型エステルにシュード
モナス属、アセトバクター属、アースロバクター属、ロ
ドトルラ属およびサッカロミセス属に属する微生物から
選択される微生物またはその菌体処理物を接触させる工
程を包含する。

本発明によれば、上記（Ｉ）式の（±）−エクソ−ノ
ルボナン型エステル類を上記の微生物またはその菌体処
理物と接触させることによって、（2S）−エクソ−ノル
ボルナン型エステルが選択的に加水分解される。これに
より対応する光学活性なアルコールと未変化の（2R）−
エクソ−ノルボルナン型エステルが分離される。

上記方法により、反応液から（2S）−エクソ−ノルボ
ルナン型アルコール、または（2R）−エクソ−ノルボル
ナン型エステルが分取される。

本発明に使用する（±）−エクソ−ノルボルナン型エ
ステルは式（Ｉ）で表される。

（式中、Ｒはアシル基を、ＡおよびＢはそれぞれ水素を
表わすかまたは一緒になって結合手を表わす） 式（Ｉ）において、アシル基は、炭素数が２から10個の
脂肪族アシル基であり、好ましくは、炭素数２から７個
の脂肪族アシル基、例えば、アセチル、プロピオニル、
ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、ヘキサノイ
ル、特に好ましくは、ホルミル、アセチル、プロピオニ
ルまたはイソブチリルである。このアシル基はあるいは
炭素数４から10個のシクロアルキルカルボニル基であっ
てもよく、好ましくは、炭素数４ないし７個のシクロア
ルキルカルボニル基、例えば、シクロプロパンカルボニ
ル、シクロブタンカルボニル、シクロペンタンカルボニ
ル、シクロヘキサンカルボニルである。あるいはアリー
ルカルボニル基であり、好ましくは炭素数７ないし11個
のアリールカルボニル基例えば、ベンゾイル、ｐ−トル
オイル、ナフトイルをあげることができる。

この様な化合物は市販のものが使用され得、あるいは
化学合成によっても簡単に製造され得る。例えば、ノル
ボルネンを、酸触媒の存在下で適当な有機酸（例えば、
蟻酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸等）と反応させるか、
または適当な有機酸のビニルエステルとシクロペンタジ
エンをディールス・アルダー（Diels−Alder）反応に付
すことにより、所望の（±）−エクソ−ノルボルナン型
エステル（Ｉ）を高収率で得ることができる。

本発明においては、シュードモナス属、アセトバクタ
ー属、アースロバクター属、ロドトルラ属またはサッカ
ロミセス属に属する微生物が使用され得、好適には、シ
ュードモナス・エルジノーサ（Pseudomonas aeruginos
a）、アセトバクター・パストリアヌス（Acetobacter p
asteurianus）、アースロバクター・エスピー（Arthrob
acter sp.）、ロドトルラ・パリダ（Rhodotorula palli
da）、ロドトルラ・ルプラ（Rhodotorula rubra）また
はサッカロミセス・エスピー（Saccharomyces sp.）が
使用され得る。特に好適には、アセトバクター・パスト
リアヌス（Acetobacter pasteurianus）およびアースロ
バクター・エスピー（Arthrobacter sp.）が使用され
る。

具体的には、Pseudomonas aeruginosa IFO 12582、Ac
etobacter pasteurianus ATCC 9432、Acetobacter past
eurianus ATCC 12873、Arthrobacter sp.SHS−0145微工
研条寄第4060号（FERM BP−4060）、Rhodotorula palli
da IFO 0715、Rhodotorula rubra IFO 1101,Rhodotorul
a rubra ATCC 2510およびSaccharomyces sp.SHS−20030
（FERM BP−4061）などの菌株が使用される。上記、Art
hrobacter sp.SHS−0145およびSaccharomyces sp.SHS−
20030はそれぞれ、特許手続上の微生物の寄託の国際的
承認に関するブタペスト条件に従い、日本国通商産業省
工業技術院微生物工業技術研究所に1992年11月２日付で
寄託番号第微工研条寄第4060号（FERM BP−4060）およ
び同第4061号（FERM BP−4061）として寄託されてい
る。

前述した微生物は、グルコース、蔗糖、廃糖蜜、ポリ
ペプトン、肉エキス、酵母エキス、豚肉粉、大豆粉、燐
酸、マグネシウム、鉄など通常微生物の生育に用いられ
る栄養源を含む培地に生育させる。

本発明方法においては、（±）−エクソ−ノルボルナ
ンエステルに上記微生物菌体もしくは菌体処理物を接触
させる。具体的には、例えば、上記微生物の培養液に直
接（±）−エクソ−ノルボルナン型エステル（Ｉ）を0.
5−10％の濃度になるように加えさらに培養を行なうこ
とにより、該エステルが加水分解され、ノルボルナン型
アルコール2S−（II）とノルボルナン型エステル2R−
（Ｉ）とを得ることができる。この加水分解には、上記
の培養液の代わりに菌体懸濁液、菌体抽出液も用いるこ
とができる。菌体懸濁液は、培養液より遠心分離・ろ過
などの方法で菌体を集め、反応に適したpHとなる緩衝液
や有機溶媒を含む緩衝液に懸濁することにより得られ
る。菌体抽出液は、集菌した菌体を細胞溶解酵素を用い
るか、超音波・フレンチプレスその他一般に使用される
菌体破砕機を用いて破砕後、遠心分離等の方法で菌体破
砕残渣を除去して調製することができる。

本明細書において、（±）−エクソ−ノルボルナン型
エステルに微生物を接触させるとは、培養液に直接
（±）−エクソ−ノルボルナン型エステルを添加するこ
とをいい、菌体処理物を接触させるとは、培養液の代わ
りに菌体懸濁液または菌体抽出液を用いることをいう。

反応を効率よく行なわせるために、添加する（±）−
エステル（Ｉ）を、10−75％になるようにｎ−ヘキサン
などの疎水性溶媒やジメチルスルホキシド、メタノー
ル、エタノールなど親水性の溶媒に溶解して用いること
もできる。

本発明による上記加水分解の反応工程を下記反応工程
図ａに示す： 上記工程図中、Ｒ、ＡおよびＢはそれぞれ前記と同意
義。

上記工程図に示すように、エクソ−ノルボルナン型エ
ステルのうち2S−（Ｉ）のみが選択的に加水分解され、
エクソ−ノルボルナン型アルコール2S−（II）に変換さ
れる。ノルボルナン型エステル2R−（Ｉ）はほとんど未
反応のまま反応液中に残存する。このように、ノルボル
ナン型アルコール2S−（II）とノルボルナン型エステル
2R−（Ｉ）の混合物を含む反応液が得られる。

得られたアルコール2S−（II）と未反応のまま残った
エクソ−ノルボルナン型エステル2R−（Ｉ）は公知の方
法に従って分離し得る。例えば、クロマトグラフィーに
よって分離することも可能である。またアルコール2S−
（II）を適当な方法（無水フタル酸等の有機酸と反応さ
せて、ハーフエステルとするなど）により水溶性にした
後、抽出操作により分離すれば簡単に目的の光学活性な
ノルボルナン型化合物を得ることができる。

以下、（±）−エクソ−ノルボニルアセテートを使用
した場合を例にとり、本発明を説明する。

上記反応工程図ｂに示すように、本発明の処理によっ
て得られた反応液に適当な溶媒を0.1〜２倍量加えてノ
ルボルネオール（−）−２とノルボルニルアセテート
（−）−１を抽出する。溶媒としてはクロロホルム、ジ
クロロメタン、酢酸エチル、ｎ−ヘキサンなどの溶媒を
単独または混合して使用すれば良い。抽出されたノルボ
ルネオール（−）−２とノルボルニルアセテート（−）
−１は、適当に濃縮した後、生成したノルボルネオール
（−）−２に対して１〜２倍量の無水マレイン酸やフタ
ル酸などの無水有機酸を加え、ノルボルネオール（−）
−２と有機酸（マレイン酸、フタル酸等）との水溶性付
加物を形成させ、さらにこの反応液に炭酸水素ナトリウ
ムのような塩基性化合物の水溶液を加え、中和するとノ
ルボルネオール（−）−２の有機酸付加物は水溶液層
に、ノルボルニルアセテート（−）−１は有機溶媒層に
各々移行する。水層を分離し、アルカリ処理を行なった
後、ジクロロメタンなどの適当な有機溶媒で抽出・濃縮
すると、光学純度の高いノルボルネオール（−）−２が
得られる。水層と分液して得られた有機溶媒層のノルボ
ルニルアセテート（−）−１は溶媒層を濃縮することに
よって回収できる。回収の後、市販のリパーゼやエステ
ラーゼと接触させるか化学的に脱アセチル化することに
よって簡単に光学純度の高いノルボルネオール（＋）−
２が得られる。

この様にして得た（−）−エクソ−ノルボルネオール
または（＋）−エクソ−ノルボルネオールは所望により
文献記載の方法（Irwin A.,Jones J.B.:J.Am.Chem.Soc.
98,8476−8481（1976））等公知の方法に従って精製す
れば、容易に更に高純度の光学活性体が得られる。例え
ば、これらの化合物を前記の方法で水溶性化合物に変換
した後、それぞれに（−）−または（＋）−フェネチル
アミンを加え、それぞれのフェネチルアミン塩を形成さ
せることにより98％ee含量以上の高純度の光学活性体を
得ることができる。また、通常用いられるカラムクロマ
トグラフィー処理を行なって精製することもできる。

以下の諸実施例および参考例により本発明をさらに詳
しく説明するが、本発明はこれらにより何ら制限される
ものではない。

実施例１ Acetobacter pasteurianus ATCC 9432を、5L容の小型
ジャーファーメンターに予め準備した3LのGPBY培地（Ｄ
−グルコース４％，ポリペプトン２％，肉エキス２％，
酵母エキス２％，第１燐酸カリ0.2％，硫化マグネシウ
ム0.2％，炭酸カルシウム２％,pH7.0）に植菌し、28℃
で24時間培養した。培養液を1,000G,10分間の遠心分離
を行ない固形物を除いた後、20,000G,15分間高速遠心分
離を行ない菌体を集め、さらに菌体を生理食塩水で２回
洗浄した。この操作で19.8gの湿菌体を得た。この湿菌
体を600mlの燐酸バッファー（0.1M,pH6.5）に加えて懸
濁させ、この懸濁液に12.0gの（±）−エクソ−ノルボ
ルニルアセテート（（±）−１）を添加し、撹拌しなが
ら30℃で１時間反応した。反応中、0.1N水酸化ナトリウ
ムを少量づつ加えて、反応液のpHを6.5±0.2に保った。
反応終了後、反応液1mlをとりクロロホルム1mlを加え、
反応生成物ノルボルネオール（−）−２およびノルボル
ニルアセテート（−）−１を抽出し、ガスクロマトグラ
フィー（J ＆ W社製光学分割用カラムCDX−Ｂ型（φ0.2
5mmX30m）、カラム温度50℃−210℃）で分析したところ
エクソ−ノルボルニルアセテート、（−）−（1S,2S,4
R）−エクソ−ノルボルネオール（−）−２、（＋）−
（1R,2R,4S）−エクソ−ノルボルネオール（＋）−２が
それぞれ8.5mg/ml、5.2mg/ml、0.3mg/ml検出された。こ
の反応液にトルエンを添加して、２回抽出（300ml、100
ml）操作を行なった。２回の抽出で得たトルエン層を合
わせると380mlのトルエン溶液が得られた。このトルエ
ン溶液を約50mlまで濃縮し、この濃縮した液に無水マレ
イン酸4.2gを加えて115℃で４時間反応を行なわせた
後、飽和炭酸水素ナトリウム液を300ml添加し、５分間
撹拌後、10分間静置した。反応後、水層とトルエン層を
分液し、水層約300mlとトルエン層約50mlを得た。

得られた水層200mlに、濃塩酸を加えて酸性とした
後、ジクロロメタン100mlで抽出し、濃縮してマレイン
酸化合物5.9gを得た。得られたマレイン酸化合物をメタ
ノール50mlに溶解し、これに水酸化カリウム4.0gを50ml
の水に溶解した水酸化カリウムを滴下し、室温で30分反
応させた。反応終了後、ジクロロメタンを加えて抽出・
濃縮して、無色結晶の（−）−（1S,2S,4R）−エクソ−
ノルボルネオール（−）−２を得た。収量2.8g（収率64
％）、［α］²⁵D:3.01゜（Ｃ＝1.46,CHCl₃）、光学純度
90％ee。

実施例２ 実施例１と同様にして得られた菌体懸濁液と（±）−
エクソ−ノルボルニルアセテート（（±）−１）との反
応液400mlから実施例１と同様にノルボルニルアセテー
トおよび、ノルボルネオールをトルエン300mlで抽出
し、この抽出液を約50mlまで濃縮した。この濃縮した液
に4.2gの無水フタル酸を加え、115℃で４時間反応させ
た後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液200mlを添加し、室
温で約５分間撹拌後、10分間静置し、トルエン層と水層
を分液しトルエン層50mlと水層200mlを得た。得られた
水層200mlに濃塩酸を加えて酸性とした後、ジクロロメ
タン100mlを加えて抽出し、ジクロロメタンを留去して
フタル酸モノエステル体7.3gを得た。得られたフタル酸
モノエステル体を75mlの酢酸エチルで溶解した後、
（−）−フェネチルアミン3.4gを滴下しフタル酸モノエ
ステル体のフェネチルアミン塩9.0gを得た。このアミン
塩にエタノール45mlを用いて２回再結晶を行ない、さら
に得られた結晶にトルエンおよび水を加え、さらに8.3m
lの7.3％塩酸溶液を滴下した後、トルエン層を分液し
た。このトルエン層を濃縮後、メタノール20mlに溶解
し、17.4％の水酸化ナトリウム液を滴下し、50℃で２時
間反応を行なった。この反応液よりジクロロメタン抽出
を行ない濃縮して、1.3gの（−）−（1S,2S,4R）−エク
ソ−ノルボルネオール（−）−２を無色結晶として得
た。収率50％、［α］²⁵D:−3.20゜（Ｃ＝1.30,CHC
l₃）、光学純度98％ee。

実施例３ 実施例１で得られたトルエン層50mlを減圧濃縮し4.9g
のオイル様のノルボルニルアセテート（−）−１を得
た。このノルボルニルアセテートを50mlのメタノールに
溶解し、８％の水酸化ナトリウム50mlを滴下し50℃で２
時間反応を行なった後、ジクロロメタンで抽出した。得
られた抽出液を減圧濃縮し晶析させたところ、3.1gの
（＋）−（1R,2R,4S）−エクソ−ノルボルネオール
（＋）−２を無色結晶として得た。収率71％、光学純度
95％ee以上。

実施例４ 実施例１に記載したGPBY培地1Lを2L容のミニジャーフ
ァーメンターに入れAcetobacter pasteurianus ATCC 94
32を接種して30℃で24時間培養した。培養後、10.0gの
（±）−エクソ−ノルボルニルアセテートを添加し４時
間培養を続行した。この培養液に400mlのクロロホルム
を加えて抽出し、抽出液をガスクロマトグラフィーに付
し、含有される化合物の含量を測定した結果、エクソ−
ノルボルニルアセテート10.3mg/ml、（−）−（1S,2S,4
R）−エクソ−ノルボルネオール（−）−２ 6.2mg/m
l、および（＋）−（1R,2R,4S）−エクソ−ノルボルネ
オール（＋）−２ 0.5mg/mlであった。

実施例５ 実施例１と同様にして得られたAcetobacter pasteuri
anus ATCC 9432の湿菌体10gに20mlの0.1Mトリス塩酸バ
ッファー（pH7.2）を添加して菌体懸濁液を調製しフレ
ンチプレスにて菌体を破砕した。得られた菌体破砕液約
30mlに0.3mgのデオキシリボヌクレアーゼを加えて氷中
で20分間処理した後、30,000G,15分の遠心分離を行な
い、菌体およびその破砕物を除去し、約22mlの細胞抽出
液を得た。この細胞抽出液10mlに100mgの（±）−エク
ソ−ノルボルニルアセテートを添加し、30℃のインキュ
ベーター中で緩やかに撹拌しながら１時間反応を行なっ
た。反応終了後、10mlのクロロホルムを加えて抽出し、
抽出液をガスクロマトグラフィーに付して、含有される
化合物の含量を測定した。その結果、この抽出液中のエ
クソ−ノルボルニルアセテート，（−）−（1S,2S,4R）
−エクソ−ノルボルネオール（−）−2,および（＋）−
（1R,2R,4S）−エクソ−ノルボルネオール（＋）−２の
濃度は各々4.6mg/ml,3.0mg/ml,および0.3mg/mlであっ
た。

実施例６ 実施例１に記載したGPBY培地50mlを500ml容のフラス
コに入れて滅菌し、表１に示す微生物を接種し、30℃、
24時間培養した。この培養液に（±）−エクソ−ノルボ
ルニルアセテート500mgを添加し、さらにゴム栓でシー
ルした後、16時間培養を行なった。この培養液のノルボ
ルニルアセテート、ノルボルネオールを実施例１と同様
にガスクロマトグラフィーで分析した結果を表１に示
す。

実施例７ 実施例１に記載したGPBY培地1Lを2L容のミニジャーフ
ァーメンターに入れ、Pseudomonas aeruginosa IFO 125
82およびSaccharomyces sp.SHS−20030（FERM BP−406
1）をそれぞれ接触して30℃で24時間培養した。各々の
培養液を実施例１に記載したように遠心分離操作により
集菌・洗菌し、各々の菌体光学濁度（Optical Density:
660nm）が10になるようにpH7.0の0.05Mの燐酸緩衝液に
懸濁した。（±）−エクソ−ノルボルニルアセテートは
予め50W/W％濃度になるようにジメチルスルホキシドで
溶解しておいた。

各菌体の懸濁液100mlを500ml容のフラスコに入れ50％
（±）−エクソ−ノルボルニルアセテート溶液を2.0ml
添加し、ゴム栓でシールした後、30℃で反応を行なっ
た。反応の進行は、pH7.0に保つに必要な0.1N水酸化ナ
トリウムの添加量でモニターし、終点近くでは少量の反
応液（0.5ml）をとり、実施例１に述べたと同様にガス
クロマトフラフィーで反応物を確認した。添加したノル
ボルニルアセテートが約70％まで分解した時点で反応を
停止し、100mlのトルエンを加えてノルボルニルアセテ
ートおよびノルボルネオールを抽出した。この抽出液を
約25mlまで濃縮し、0.4gの無水マレイン酸を添加して11
5℃、４時間反応を行なった。飽和炭酸水素ナトリウム
を25ml添加して室温で５分間撹拌後、約10分静置し、水
層とトルエン層に分液した。トルエン層を濃縮するとオ
イル様の（−）−エクソ−ノルボルニルアセテート
（−）−１が得られた。このノルボルニルアセテートを
10mlのメタノールに溶解し、８％の水酸化ナトリウムを
滴下し、アルカリ下で50℃、２時間反応を行なった。こ
の反応液よりジクロロメタン10mlを加えて抽出し、抽出
液を濃縮して（＋）−（1R,2R,4S）−エクソ−ノルボル
ネオール（＋）−２を析出させた。この結晶をガスクロ
マトグラフィーで分析したところ、表２に示すような結
果を得た。

実施例８ Difco製Antibiotic medium 3培地50mlを500mlフラス
コに入れアースロバクター・エスピー（Arthrobacter.s
p）SHS−0145（FERM BP−4060）を接種して30℃で20時
間培養した。培養後、100mgの（±）−エクソ−ノルボ
ルニルアセテートを添加しさらに８時間培養を続行し
た。この培養液に20mlのクロロホルムを加え、ノルボル
ニルアセテート、ノルボルネオールを抽出し、抽出液中
に含まれる（−）−（1S,2S,4R）−エクソ−ノルボルネ
オール（−）−２、（＋）−（1R,2R,4S）−エクソ−ノ
ルボルネオール（＋）−２を実施例１と同様にガスクロ
マトグラフィーで含量を各々測定した。その結果、抽出
液中には、1.02mg/mlの（−）−（1S,2S,4R）−エクソ
−ノルボルネオール（−）−2,0.11mg/mlの（＋）−（1
R,2R,4S）−エクソ−ノルボルネオール（＋）−２が含
まれていた。

以下に本実施例で用いたアースロバクター・エスピー
（Arthrobacter sp.）SHS−0145（FERM BP−4060）の菌
学的性状を示す。

1.形態学的特徴 本菌はグラムポジィティブの桿菌で、菌形・大きさは
変化に富む。若い培養時相（肉汁寒天培地、30℃、８−
12時間培養）では1.0−1.1×3.0−4.0μｍの大きさの桿
菌状となるが、培養が進むと菌は短小化し（肉汁寒天培
地、30℃、24−48時間培養）、やがて培養が停止期には
いると球菌状（直径1.0−1.1μｍ、肉汁寒天培地、30℃
72−96時間培養）となる。胞子の形成は認められない。
運動性を有する。

2.培養上の性状 肉汁寒天平板上の生育（30℃、７日培養）:24時間以
内に1.4−1.6mm平滑な表面で、隆起の少ない、光沢のあ
る、淡黄色から淡黄白色の円形のコロニーを形成する。

肉汁斜面培養上の生育（30℃、７日培養）：接種画線
に沿って絲線状に、良好に、牛酪質に生育する。

肉汁高層寒天培養での生育（30℃、７日培養）：表面
に良好に生育し、突刺線の上部のみに生育が認められ
る。

肉汁液静置培養（30℃、７日培養）：培養液表層に厚
膜状に生育し、液全体に中庸に濁り、沈澱物の量は微量
である。特に臭気は認められない。

3.生育 生育温度：生育可能温度10−37℃。最適生育温度は24
−32℃（ペプトン水）。

耐熱性：スキムミルク中63℃、30分で生存できない。

生育pH:生育可能pH5.2−10。最適生育pHは6.0−9.0
（ペプトン水）。

酸素に対する挙動：好気的。嫌気下での生育（ガスパ
ック、肉汁寒天平板）は認められない。

4.細胞壁組成:meso−DAP（meso−ジアミノピメリン酸）
は検出されない。

5.DNAのＧ＋Ｃ含量:57％ 6.主な生理学的諸性質 OFテスト：オキシデイティブ（Ｄ−グルコース） 酸の生成:D−グルコース、ガラクトース、Ｄ−マンノ
ース、シュークロース、トレハロース、フラクトース
（弱）、マンニット（弱）から酸を生成するが、Ｌ−ア
ラビノース、Ｄ−キシロースから殆ど酸の生成は認めら
れない。ラクトース、リボース、ソルボース、ラムノー
ス、イノシトール、セロビオース、マルトースからの酸
の生成も認められない。

リトマスミルク：陰性 ゼラチン液化：陰性 VP反応：陰性 MR反応：陰性 硫化水素の生成：陰性 クエン酸の利用性：陽性（クリステンセン培地、シモ
ンズ培地） 無機Ｎ源の利用性：アンモニウム塩、硝酸塩とも利用
する。

ウレアーゼ：陽性 カタラーゼ：陽性 オキシダーゼ：陽性 DNエース：陰性 メチレンブルーの還元：陽性 7.分離源：日本の土壌 以下に実施例６および７で用いたサッカロミセス・エ
スピー（Saccharomyces sp.）SHS−20030（FERM BP−40
61）の菌学的性状を示す。

1.形態的特徴 菌の形状：本菌は球形ないし楕円形の3.5−4.5×５−
６μｍの酵母菌で、増殖は主に出芽により増殖する。出
芽は細胞表面から多極に認められる（麦芽エキス寒天培
地、28℃、３日間培養）。菌糸は認められない。

子嚢胞子：細胞内に１〜４個の球形からやや楕円形の
胞子を形成（Gorodokowa寒天培地、28℃、10日間培
養）。

2.糖の発酵性と同化性 グルコース、ガラクトース、シュークロース、マルト
ース、ラフィノースを同化し、発酵性が認められるが、
ラクトース、セロピオース、スターチは同化も発酵も認
められない。

3.その他の生理試験 パラフィンの同化：陰性 硝酸カリウムの同化：陰性 アルブチンの分解：陰性 ビタミン要求性：なし 産業上の利用可能性 本発明で得た光学活性なノルボルナン型アルコールの
利用方法を以下の参考例に示す。

参考例１ 実施例１で得た（−）−（1S,2S,4R）−エクソ−ノル
ボルネオール2.8g（0.025モル）を塩化メチレン56mlに
溶解し、ピリジニウムクロロクロメイト（PPC）8.1g
（1.5モル比）モレキュラシーブ4A 1gを加え25〜30℃で
１時間反応した。反応液をトルエン56mlで希釈後、シリ
カゲル28gのカラム中を通し不溶物を除去する。流出液
を濃縮乾固すると粗製の（＋）−ノルカンファーが白色
の結晶性粉末として得られる。得られた（＋）−ノルカ
ンファーをテトラヒドロフラン45mlに溶解し、LDA（1.1
モル比）のテトラヒドロフラン30ml溶液中に−10〜−15
℃で滴下する。同温度で20分間反応後、アリルブロマイ
ド3.3g（1.1モル比）を０℃以下で滴下し、室温で３時
間反応する。反応液を氷水70ml中に流入し、希塩酸水で
酸性にした後、トルエン50mlで２回抽出を行なう。トル
エン層を水洗後、溶媒を減圧下留去すると粗製の（＋）
−エクソ−３−（２−プロペニル）−ビシクロ［2,2,
1］ヘプタン−２−オンが油状残渣として得られる。こ
れを減圧蒸溜にて、沸点範囲92〜103℃/10〜12mmHgの溜
分を集めることにより、精製した。収量3.07g（収率82
％）、化学純度（GC）98.6％、エンド異性体0.4％ 光
学純度（HPLC）90％ee、比旋光度［α］²⁵D＋84.6゜
（Ｃ＝1.0,CHCl₃）。

参考例２ 実施例２で得た（−）−（1S,2S,4R）−エクソ−ノル
ボルネオールを用いて参考例１と全く同様に反応後処理
を行なった。粗生成物を減圧蒸溜にて精製し、沸点範囲
74〜86℃/3〜4mmHgの溜分を集めて目的の（＋）−エク
ソ−３−（２−プロペニル）−ピシクロ［2,2,1］ヘプ
タン−２−オンを得た。収量1.3 8g（収率78％）、化学
純度（GC）98.8％、エンド異性体0.9％、光学純度（HPL
C）98％ee、比旋光度［α］²⁵D＋89゜（Ｃ＝1.286,CHCl
₃）、IR（Film）3060,1740,1640,1460,1440,1310,1090c
m^-1。¹H NMR（CDCl₃）δ1.30−2.00（m,8H）,2.5−2.6
（m,3H）δ4.90−5.20（m,2H）,5.7−5.9（m,1H） 上記参考例により得られた化合物は例えば、文献記載
の方法（J.Med.Chem.31（９）,1847−1854（1988））に
より、医薬として有用なTXA₂レセプターアンタゴニスト
に導くことができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:02） Ｃ１２Ｒ 1:02） (Ｃ１２Ｐ 41/00 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 41/00 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:06） Ｃ１２Ｒ 1:06） (Ｃ１２Ｐ 41/00 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:85） Ｃ１２Ｒ 1:85） (Ｃ１２Ｐ 41/00 (Ｃ１２Ｐ 41/00 Ｃ１２Ｒ 1:385） Ｃ１２Ｒ 1:385） (56)参考文献 Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，Ｖｏｌ. 43，Ｎｏ．17，ｐ．3931−3944（1987) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12P 41/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式（Ｉ）： （式中、Ｒはアシル基を、ＡおよびＢはそれぞれ独立し
   て水素を表すかまたは一緒になって結合手を表す）で示
   される（±）−エクソ−ノルボルナン型エステルにシュ
   ードモナス・エルジノーサ、アセトバクター・パストリ
   アヌス、アースロバクター・エスピーSHS−0145、ロド
   トルラ・バリダ、ロドトルラ・ルブラ、およびサッカロ
   ミセス・エスピーSHS−20030に属する微生物から選択さ
   れる微生物またはその菌体処理物を接触させる工程、お
   よび （2S）−エクソ−ノルボルナン型エステルまたは（2R）
   −エクソ−ノルボルナン型エステルを分取する工程を包
   含する、（2S）−エクソ−ノルボルネオールまたは（2
   R）−エクソ−ノルボルナン型エステルの製造方法。
2. 【請求項２】前記Ｒがアセチル基である、請求項１に記
   載の方法。
3. 【請求項３】前記微生物が、アセトバクター・パストリ
   アヌスである、請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】前記微生物が、アースロバクター・エスピ
   ーSHS−0145（微工研寄第4060号）である、請求項１ま
   たは２に記載の方法。
5. 【請求項５】アースロバクター・エスピーSHS−0145
   （微工研寄第4060号）。
6. 【請求項６】式（Ｉ）： （式中、Ｒはアシル基を、ＡおよびＢはそれぞれ独立し
   て水素を表すかまたは一緒になって結合手を表す）で示
   される（±）−エクソ−ノルボルナン型エステルにシュ
   ードモナス・エルジノーサ、アセトバクター・パストリ
   アヌス、アースロバクター・エスピーSHS−0145、ロド
   トルラ・バリダ、ロドトルラ・ルブラ、およびサッカロ
   ミセス・エスピーSHS−20030に属する微生物から選択さ
   れる微生物またはその菌体処理物を接触させる工程、 （2R）−エクソ−ノルボルナン型エステルを分取する工
   程、および 得られた（2R）−エクソ−ノルボルナン型エステルを化
   学的に脱アシル化する工程を包含する、（2R）−エクソ
   −ノルボルネオールの製造方法。