JP3181711B2 - カラム用分離剤 - Google Patents
カラム用分離剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、試料の前処理又は光学
異性体の分離に有用なカラム用分離剤に関し、更に詳し
くは、担体に、シクロデキストリンを化学結合してなる
カラム用分離剤に関する。
異性体の分離に有用なカラム用分離剤に関し、更に詳し
くは、担体に、シクロデキストリンを化学結合してなる
カラム用分離剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】シクロデキストリン（ＣＤ）は、６〜１
０個のグルコースがα−１、４グリコシド結合した円筒
状の環状化合物である。この円筒の内側は疎水性、外側
は水酸基が多く親水性を有する。このためフェニル基や
ナフチル基のような疎水性基を有する種々の有機化合物
を包接するホスト化合物として興味ある特徴を有してい
ることが知られている。また、シクロデキストリンを構
成しているＤ−グルコピラノシド１分子あたり５個の光
学活性な炭素を有することから不斉識別能を有する化合
物であることも知られている。近年不斉炭素を含むキラ
ルな化学物質について、その光学異性体を分離すること
が特に医薬品の分野において強く要求されている。すな
わちひとつのセラミ体を構成する複数の光学異性体の中
の一つのものが特別に顕著な生理活性を示すことが一般
事実として明らかになり、従って医薬品としてはラセミ
体として投与されるよりも、分離された光学異性体とし
て投与される方がより合理的であり、治療効果を高める
結果となるからである。従ってシクロデキストリンが有
する不斉識別能を利用する方法が高まってきている。例
えば液体クロマトグラフィーにおいて移動相にシクロデ
キストリンを添加して光学異性体を分離する方法(1),液
体クロマトグラフィー用分離剤として炭素数２個以上の
結合基を介しシリカゲルに固定させたものを使用して光
学異性体を分離、精製する方法(2),(3) 、及びポリマー
に縮合剤を反応させ、次いでシクロデキストリンを反応
させたものを利用する方法(4) 等がある。これらの方法
については下記文献に示されている。 (1) K.Shimada, T. Masue, K. Toyoda, T. Nambara: J.
Liquid Chromatogr.,11 ,1475(1988), (2)米国特許第
4,539,399 号明細書(Armstrong), (3)藤村、J.Liquid C
hromatogr., 9 607-620 (1986), Anal. Chem. 62 219
8-2205 (1990), (4)特開平２−２２８５５８号公報
０個のグルコースがα−１、４グリコシド結合した円筒
状の環状化合物である。この円筒の内側は疎水性、外側
は水酸基が多く親水性を有する。このためフェニル基や
ナフチル基のような疎水性基を有する種々の有機化合物
を包接するホスト化合物として興味ある特徴を有してい
ることが知られている。また、シクロデキストリンを構
成しているＤ−グルコピラノシド１分子あたり５個の光
学活性な炭素を有することから不斉識別能を有する化合
物であることも知られている。近年不斉炭素を含むキラ
ルな化学物質について、その光学異性体を分離すること
が特に医薬品の分野において強く要求されている。すな
わちひとつのセラミ体を構成する複数の光学異性体の中
の一つのものが特別に顕著な生理活性を示すことが一般
事実として明らかになり、従って医薬品としてはラセミ
体として投与されるよりも、分離された光学異性体とし
て投与される方がより合理的であり、治療効果を高める
結果となるからである。従ってシクロデキストリンが有
する不斉識別能を利用する方法が高まってきている。例
えば液体クロマトグラフィーにおいて移動相にシクロデ
キストリンを添加して光学異性体を分離する方法(1),液
体クロマトグラフィー用分離剤として炭素数２個以上の
結合基を介しシリカゲルに固定させたものを使用して光
学異性体を分離、精製する方法(2),(3) 、及びポリマー
に縮合剤を反応させ、次いでシクロデキストリンを反応
させたものを利用する方法(4) 等がある。これらの方法
については下記文献に示されている。 (1) K.Shimada, T. Masue, K. Toyoda, T. Nambara: J.
Liquid Chromatogr.,11 ,1475(1988), (2)米国特許第
4,539,399 号明細書(Armstrong), (3)藤村、J.Liquid C
hromatogr., 9 607-620 (1986), Anal. Chem. 62 219
8-2205 (1990), (4)特開平２−２２８５５８号公報
【０００３】しかし、これらの方法はシクロデキストリ
ンの不斉識別能が不十分であるばかりでなく、(1) はシ
クロデキストリンを多量に使用するという問題点を有
し、(2) 及び(3) はシクロデキストリンの担持量が少な
く不斉識別能が不十分であり、(4) はポリマーを担体と
しているため光学異性体用分離剤としては、理論段数が
低く不斉識別能が不十分である等の問題がある。一方、
従来より各種液体試料の分離に液体−固体抽出法の一つ
であるカラム抽出法が行われている。特に血清等の蛋白
質成分を多量に含有する生体成分中の薬物や代謝産物等
をＨＰＬＣを用いて分析する場合、蛋白質のカラム充填
剤への吸着による弊害を除去するため除蛋白等の前処理
が、液体−固体抽出法の一つであるカラム抽出法を用い
て行われている。この液体−固体抽出法の一つであるカ
ラム抽出法の充填剤としては、シリカゲル外表面にオク
タデシル基を化学結合したものがよく使用されてきた。
これは逆相クロマトグラフィーの原理に基づき疎水性の
高い蛋白質を吸着し、薬物を溶出させる方法である。こ
れとは逆に、薬物を吸着し、蛋白質を溶出させる方法も
使用されている。しかし、安価でしかも処理能力に十分
優れた前処理剤は見出されていない。
ンの不斉識別能が不十分であるばかりでなく、(1) はシ
クロデキストリンを多量に使用するという問題点を有
し、(2) 及び(3) はシクロデキストリンの担持量が少な
く不斉識別能が不十分であり、(4) はポリマーを担体と
しているため光学異性体用分離剤としては、理論段数が
低く不斉識別能が不十分である等の問題がある。一方、
従来より各種液体試料の分離に液体−固体抽出法の一つ
であるカラム抽出法が行われている。特に血清等の蛋白
質成分を多量に含有する生体成分中の薬物や代謝産物等
をＨＰＬＣを用いて分析する場合、蛋白質のカラム充填
剤への吸着による弊害を除去するため除蛋白等の前処理
が、液体−固体抽出法の一つであるカラム抽出法を用い
て行われている。この液体−固体抽出法の一つであるカ
ラム抽出法の充填剤としては、シリカゲル外表面にオク
タデシル基を化学結合したものがよく使用されてきた。
これは逆相クロマトグラフィーの原理に基づき疎水性の
高い蛋白質を吸着し、薬物を溶出させる方法である。こ
れとは逆に、薬物を吸着し、蛋白質を溶出させる方法も
使用されている。しかし、安価でしかも処理能力に十分
優れた前処理剤は見出されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】したがって本発明の目
的は、試料の前処理カラムの担体として、また光学異性
体の分離に有用な、カラム用分離剤を提供することであ
る。本発明の他の目的は、安価でしかも水系、非水系の
両移動相に使用できる、不斉識別能に優れた光学異性体
用分離剤を提供することである。
的は、試料の前処理カラムの担体として、また光学異性
体の分離に有用な、カラム用分離剤を提供することであ
る。本発明の他の目的は、安価でしかも水系、非水系の
両移動相に使用できる、不斉識別能に優れた光学異性体
用分離剤を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明の上記目的は、担
体に、炭素数５の結合基を介してシクロデキストリン又
は修飾シクロデキストリンを化学結合してなるカラム用
分離剤により達成された。以下、本発明を詳細に説明す
る。本発明に使用される担体としては、シリカゲル、ガ
ラス、カーボン、珪藻土等の無機担体、セルロース及び
ポリビニルアルコールのような合成ポリマー等の有機担
体が挙げられる。本発明に使用される炭素数５の結合基
としては、炭素数５の直鎖、分岐又は環状アルキレン基
が挙げられる。これらのうち特に好ましいものは、ｎ−
ペンチレン基である。本発明に使用される典型的なシク
ロデキストリンとしては、グルコース単位をそれぞれ６
個、７個及び８個有する、α、β及びγシクロデキスト
リンが挙げられる。本発明に使用される修飾シクロデキ
ストリンとしては、シクロデキストリンの遊離水酸基の
水素原子をフェニルカーバメート基、トルイルカーバメ
ート基、ナフチルカーバメート基等のアリールカーバメ
ート基により置換したものが挙げられる。
体に、炭素数５の結合基を介してシクロデキストリン又
は修飾シクロデキストリンを化学結合してなるカラム用
分離剤により達成された。以下、本発明を詳細に説明す
る。本発明に使用される担体としては、シリカゲル、ガ
ラス、カーボン、珪藻土等の無機担体、セルロース及び
ポリビニルアルコールのような合成ポリマー等の有機担
体が挙げられる。本発明に使用される炭素数５の結合基
としては、炭素数５の直鎖、分岐又は環状アルキレン基
が挙げられる。これらのうち特に好ましいものは、ｎ−
ペンチレン基である。本発明に使用される典型的なシク
ロデキストリンとしては、グルコース単位をそれぞれ６
個、７個及び８個有する、α、β及びγシクロデキスト
リンが挙げられる。本発明に使用される修飾シクロデキ
ストリンとしては、シクロデキストリンの遊離水酸基の
水素原子をフェニルカーバメート基、トルイルカーバメ
ート基、ナフチルカーバメート基等のアリールカーバメ
ート基により置換したものが挙げられる。
【０００６】本発明のカラム用分離剤は、５−イソシア
ネートペンチルトリエトキシシラン等のシランカップリ
ング剤を用いてシクロデキストリンを担体に化学結合さ
せて固定化したり、シクロデキストリンの未修飾の水酸
基に、フェニルイソシアネート、ｐ−トルイルイソシア
ネート、ナフチルイソシアネート等を反応させて修飾シ
クロデキストリンとした後、担体に反応させ固定化する
ことにより容易に製造することができる。さらに具体的
には、５−イソシアネートペンチルトリエトキシシラン
をまずシクロデキストリンと反応させてカーバメート化
し、次いでシランカップリング残基の端部置換基を水酸
基を持った多孔性担体と反応させることにより容易に製
造できる。また修飾シクロデキストリンは、イソシアン
酸フェニル等のイソシアン酸エステルをシクロデキスト
リンと反応させることにより容易に製造できる。
ネートペンチルトリエトキシシラン等のシランカップリ
ング剤を用いてシクロデキストリンを担体に化学結合さ
せて固定化したり、シクロデキストリンの未修飾の水酸
基に、フェニルイソシアネート、ｐ−トルイルイソシア
ネート、ナフチルイソシアネート等を反応させて修飾シ
クロデキストリンとした後、担体に反応させ固定化する
ことにより容易に製造することができる。さらに具体的
には、５−イソシアネートペンチルトリエトキシシラン
をまずシクロデキストリンと反応させてカーバメート化
し、次いでシランカップリング残基の端部置換基を水酸
基を持った多孔性担体と反応させることにより容易に製
造できる。また修飾シクロデキストリンは、イソシアン
酸フェニル等のイソシアン酸エステルをシクロデキスト
リンと反応させることにより容易に製造できる。
【０００７】例えば、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド又
はピリジン等の溶媒中にシクロデキストリンを分散させ
た後、５−イソシアネートプロピルトリエトキシシラン
をシクロデキストリン１ｇ当り８〜１２m mole、好まし
くは９〜１０m moleを加え、窒素のような不活性ガス雰
囲気下、６０〜９０℃、好ましくは８０℃で２〜６時
間、好ましくは４時間反応させる。次いでこの反応混合
物にシリカゲルをシクロデキストリン１ｇ当り0.４４ｇ
加え、還流下１５〜２５時間、好ましくは２０時間反応
させる。その後、反応液を濾過し、反応生成物を通常の
方法で後処理するとシクロデキストリンが炭素数５の結
合基を介してシリカゲル担体に化学結合された本発明の
カラム用分離剤を得ることができる。また、Ｎ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド又はピリジン等の溶媒中にシクロデ
キストリンを分散させた後、５−イソシアネートプロピ
ルトリエトキシシランを８〜１２m moleを加え、窒素の
ような不活性ガス雰囲気下、６０〜９０℃、好ましくは
８０℃で２〜６時間、好ましくは４時間反応させる。次
いでイソシアン酸フェニルのようなイソシアン酸エステ
ルを、シクロデキストリン１ｇ当り１８〜２２m mole、
好ましくは２０m mole加え、不活性ガス雰囲気下、６０
〜９０℃、好ましくは８０℃で、２〜６時間、好ましく
は４時間反応させる。次いでこの反応混合物にシリカゲ
ルを、シクロデキストリン１ｇ当り0.４４ｇ加え、還流
下で１５〜２５時間、好ましくは２０時間反応させる。
その後反応液を濾過し、反応生成物を通常の方法で後処
理すると修飾シクロデキストリンが炭素数５の結合基を
介してシリカゲル担体に化学結合された本発明のカラム
用分離剤を得ることができる。本発明のカラム用分離剤
を用いた光学異性体の分離は、主として液体クロマトグ
ラフィーによって行なわれる。
はピリジン等の溶媒中にシクロデキストリンを分散させ
た後、５−イソシアネートプロピルトリエトキシシラン
をシクロデキストリン１ｇ当り８〜１２m mole、好まし
くは９〜１０m moleを加え、窒素のような不活性ガス雰
囲気下、６０〜９０℃、好ましくは８０℃で２〜６時
間、好ましくは４時間反応させる。次いでこの反応混合
物にシリカゲルをシクロデキストリン１ｇ当り0.４４ｇ
加え、還流下１５〜２５時間、好ましくは２０時間反応
させる。その後、反応液を濾過し、反応生成物を通常の
方法で後処理するとシクロデキストリンが炭素数５の結
合基を介してシリカゲル担体に化学結合された本発明の
カラム用分離剤を得ることができる。また、Ｎ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド又はピリジン等の溶媒中にシクロデ
キストリンを分散させた後、５−イソシアネートプロピ
ルトリエトキシシランを８〜１２m moleを加え、窒素の
ような不活性ガス雰囲気下、６０〜９０℃、好ましくは
８０℃で２〜６時間、好ましくは４時間反応させる。次
いでイソシアン酸フェニルのようなイソシアン酸エステ
ルを、シクロデキストリン１ｇ当り１８〜２２m mole、
好ましくは２０m mole加え、不活性ガス雰囲気下、６０
〜９０℃、好ましくは８０℃で、２〜６時間、好ましく
は４時間反応させる。次いでこの反応混合物にシリカゲ
ルを、シクロデキストリン１ｇ当り0.４４ｇ加え、還流
下で１５〜２５時間、好ましくは２０時間反応させる。
その後反応液を濾過し、反応生成物を通常の方法で後処
理すると修飾シクロデキストリンが炭素数５の結合基を
介してシリカゲル担体に化学結合された本発明のカラム
用分離剤を得ることができる。本発明のカラム用分離剤
を用いた光学異性体の分離は、主として液体クロマトグ
ラフィーによって行なわれる。
【０００８】
【実施例】以下、比較例及び実施例により本発明を更に
具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。 比較例１ （β−シクロデキストリンを３−イソシアネートプロピ
ルトリエトキシシランを用いて固定化した担体）β−Ｃ
Ｄ１1.４ｇを脱水ピリジン１００ml中に溶解した後、３
−イソシアネートプロピルトリエトキシシラン6.６ｇを
加え、窒素気流下で８０℃、４時間反応させた。反応の
終点は、赤外吸収スペクトルにおいて２２００〜２３０
０cm-1の吸収（−Ｎ＝Ｃ＝Ｏの吸収）がでなくなる時と
した。次にシリカゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え還流
下２０時間反応させた。反応後濾過しピリジン、アセト
ン、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤ固定化
シリカゲル担体を得た。得られた分離剤をスチールカラ
ムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 比較例２ （β−シクロデキストリンをイソシアン酸フェニルで誘
導体化し３−イソシアネートプロピルトリエトキシシラ
ンを用いて固定化した担体）β−ＣＤ１1.４ｇを脱水ピ
リジン２５０ml中に溶解した後、３−イソシアネートプ
ロピルトリエトキシシラン6.６ｇを加え、窒素気流下で
８０℃、４時間反応させた。次にイソシアン酸フェニル
4.８ｇを加え、更に８０℃、４時間反応させた。次にシ
リカゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え、還流下２０時間
反応させた。反応後濾過し、ピリジン、メタノール、Ｔ
ＨＦ、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤフェ
ニル誘導体を固定化したシリカゲル担体を得た。得られ
た分離剤をスチールカラムに充填し光学異性体分離用カ
ラムとした。
具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定さ
れるものではない。 比較例１ （β−シクロデキストリンを３−イソシアネートプロピ
ルトリエトキシシランを用いて固定化した担体）β−Ｃ
Ｄ１1.４ｇを脱水ピリジン１００ml中に溶解した後、３
−イソシアネートプロピルトリエトキシシラン6.６ｇを
加え、窒素気流下で８０℃、４時間反応させた。反応の
終点は、赤外吸収スペクトルにおいて２２００〜２３０
０cm-1の吸収（−Ｎ＝Ｃ＝Ｏの吸収）がでなくなる時と
した。次にシリカゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え還流
下２０時間反応させた。反応後濾過しピリジン、アセト
ン、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤ固定化
シリカゲル担体を得た。得られた分離剤をスチールカラ
ムに充填し、光学異性体分離用カラムとした。 比較例２ （β−シクロデキストリンをイソシアン酸フェニルで誘
導体化し３−イソシアネートプロピルトリエトキシシラ
ンを用いて固定化した担体）β−ＣＤ１1.４ｇを脱水ピ
リジン２５０ml中に溶解した後、３−イソシアネートプ
ロピルトリエトキシシラン6.６ｇを加え、窒素気流下で
８０℃、４時間反応させた。次にイソシアン酸フェニル
4.８ｇを加え、更に８０℃、４時間反応させた。次にシ
リカゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え、還流下２０時間
反応させた。反応後濾過し、ピリジン、メタノール、Ｔ
ＨＦ、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤフェ
ニル誘導体を固定化したシリカゲル担体を得た。得られ
た分離剤をスチールカラムに充填し光学異性体分離用カ
ラムとした。
【０００９】実施例１ （β−シクロデキストリンを５−イソシアネートペンチ
ルトリエトキシシランを用い固定化した担体）β−ＣＤ
１1.４ｇを脱水ピリジン２５０ml中に溶解した後、５−
イソシアネートペンチルトリエトキシシラン2.９ｇを加
え、窒素気流下で８０℃、４時間反応させた。次にシリ
カゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え還流下２０時間反応
させた。反応後濾過し、ピリジン、アセトン、メタノー
ル、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤを５−イソシアネー
トペンチルトリエトキシシランを用いて固定化したシリ
カゲル担体を得た。得られた分離剤をスチールカラムに
充填し光学異性体分離用カラムとした。 実施例２ （β−シクロデキストリンをイソシアン酸フェニルで誘
導体化し５−イソシアネートペンチルトリエトキシシラ
ンを用いて固定化した担体）β−ＣＤ１1.４ｇを脱水ピ
リジン２５０ml中に溶解した後、５−イソシアネートペ
ンチルトリエトキシシラン2.９ｇを加え、窒素気流下で
８０℃、４時間反応させた。次にイソシアン酸フェニル
１６ｇを加え８０℃４時間反応させた。次にシリカゲル
（粒子径５μm ）５ｇを加え還流下２０時間反応させ
た。その後更にイソシアン酸フェニル８ｇを加え８０℃
４時間反応させた。反応後濾過し、ピリジン、メタノー
ル、ＴＨＦ、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−Ｃ
Ｄフェニル誘導体を５−イソシアネートペンチルトリエ
トキシシランを用いて固定化したシリカゲル担体を得
た。得られた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異
性体分離用カラムとした。 実施例３ 粒子径３０μm のシリカゲルを使用した他は実施例１と
同様の方法でβ−ＣＤをシリカゲルに結合した。この充
填剤200 mgを内径6.0 mm、長さ 50 mmのカラムに充填
し、前処理用カートリッジカラムを作製した。
ルトリエトキシシランを用い固定化した担体）β−ＣＤ
１1.４ｇを脱水ピリジン２５０ml中に溶解した後、５−
イソシアネートペンチルトリエトキシシラン2.９ｇを加
え、窒素気流下で８０℃、４時間反応させた。次にシリ
カゲル（粒子径５μm ）５ｇを加え還流下２０時間反応
させた。反応後濾過し、ピリジン、アセトン、メタノー
ル、水で洗浄し、乾燥後、β−ＣＤを５−イソシアネー
トペンチルトリエトキシシランを用いて固定化したシリ
カゲル担体を得た。得られた分離剤をスチールカラムに
充填し光学異性体分離用カラムとした。 実施例２ （β−シクロデキストリンをイソシアン酸フェニルで誘
導体化し５−イソシアネートペンチルトリエトキシシラ
ンを用いて固定化した担体）β−ＣＤ１1.４ｇを脱水ピ
リジン２５０ml中に溶解した後、５−イソシアネートペ
ンチルトリエトキシシラン2.９ｇを加え、窒素気流下で
８０℃、４時間反応させた。次にイソシアン酸フェニル
１６ｇを加え８０℃４時間反応させた。次にシリカゲル
（粒子径５μm ）５ｇを加え還流下２０時間反応させ
た。その後更にイソシアン酸フェニル８ｇを加え８０℃
４時間反応させた。反応後濾過し、ピリジン、メタノー
ル、ＴＨＦ、メタノール、水で洗浄し、乾燥後、β−Ｃ
Ｄフェニル誘導体を５−イソシアネートペンチルトリエ
トキシシランを用いて固定化したシリカゲル担体を得
た。得られた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異
性体分離用カラムとした。 実施例３ 粒子径３０μm のシリカゲルを使用した他は実施例１と
同様の方法でβ−ＣＤをシリカゲルに結合した。この充
填剤200 mgを内径6.0 mm、長さ 50 mmのカラムに充填
し、前処理用カートリッジカラムを作製した。
【００１０】以下の実験例によって本発明の効果を示
す。 実験例１ 実施例１で調製した光学異性体用分離カラムを用いて６
−アミノ−３−メトキシエストラエストロゲンのエナン
チオマーの分離を試みた。なお移動相は、２０ｍＭりん
酸塩緩衝液（KH2PO4)(pH＝4.６）／アセトニトリル＝１
００／４０（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.０ml／min とし
た。結果を図１に示す。図１より本発明の分離剤によっ
て各光学異性体が完全に分離されたことがわかる。 実験例２ 比較例１、比較例２及び実施例２で調製した光学異性体
用分離カラムを用いてアテノロールのエナンチオマーの
分離を試みた。なお、移動相は、２０ｍＭりん酸塩緩衝
液（KH2PO4)(pH＝4.６）／エタノール＝１００／１０
（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.２ml／min とした。結果を
図２のａ（比較例１）、ｂ（比較例２）及びｃ（実施例
２）に示す。比較例１の光学異性体用分離カラムではア
テノロールのエナンチオマーは全く分離されず、比較例
２の光学異性体用分離カラムにおいてもアテノロールの
エナンチオマーは分離不十分であった。これに対し実施
例２で調製した光学異性体用分離カラムではアテノロー
ルのエナンチオマーが完全に分離されたことがわかる。
す。 実験例１ 実施例１で調製した光学異性体用分離カラムを用いて６
−アミノ−３−メトキシエストラエストロゲンのエナン
チオマーの分離を試みた。なお移動相は、２０ｍＭりん
酸塩緩衝液（KH2PO4)(pH＝4.６）／アセトニトリル＝１
００／４０（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.０ml／min とし
た。結果を図１に示す。図１より本発明の分離剤によっ
て各光学異性体が完全に分離されたことがわかる。 実験例２ 比較例１、比較例２及び実施例２で調製した光学異性体
用分離カラムを用いてアテノロールのエナンチオマーの
分離を試みた。なお、移動相は、２０ｍＭりん酸塩緩衝
液（KH2PO4)(pH＝4.６）／エタノール＝１００／１０
（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.２ml／min とした。結果を
図２のａ（比較例１）、ｂ（比較例２）及びｃ（実施例
２）に示す。比較例１の光学異性体用分離カラムではア
テノロールのエナンチオマーは全く分離されず、比較例
２の光学異性体用分離カラムにおいてもアテノロールの
エナンチオマーは分離不十分であった。これに対し実施
例２で調製した光学異性体用分離カラムではアテノロー
ルのエナンチオマーが完全に分離されたことがわかる。
【００１１】実験例３ この実験例は、文献（２）記載の製法に従って調製され
たカラムは塩あるいは緩衝液を含む溶離液（特にりん酸
緩衝液を含む溶離液）中では非常に不安定であるのに対
して、実施例２で調製した光学異性体用分離カラムは緩
衝液を含む溶液中で非常に安定であることを示すもので
ある。アームストロング法により調製した光学異性体用
分離カラム（シクロボンドＩカラム（ＡＳＴＥＣ製、フ
ナコシ（株）販売）、及び実施例１で調製した光学異性
体分離用カラムを用いて塩酸トルペリゾンのエナンチオ
マーにおける分離を繰り返し試みた。なお移動相は２０
ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4)/(K2HPO4)(pH6.0) ／エタ
ノール＝１００／１５（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.０ml
／min とした。アームストロング法により調製した光学
異性体用分離カラムでは７０回注入でカラムの劣化が始
まり、分離が十分に行なわれなくなったのに対し、実施
例１で調製した光学異性体用分離カラムでは３５０回の
注入でもカラムの劣化が起こらなかった。
たカラムは塩あるいは緩衝液を含む溶離液（特にりん酸
緩衝液を含む溶離液）中では非常に不安定であるのに対
して、実施例２で調製した光学異性体用分離カラムは緩
衝液を含む溶液中で非常に安定であることを示すもので
ある。アームストロング法により調製した光学異性体用
分離カラム（シクロボンドＩカラム（ＡＳＴＥＣ製、フ
ナコシ（株）販売）、及び実施例１で調製した光学異性
体分離用カラムを用いて塩酸トルペリゾンのエナンチオ
マーにおける分離を繰り返し試みた。なお移動相は２０
ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4)/(K2HPO4)(pH6.0) ／エタ
ノール＝１００／１５（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速1.０ml
／min とした。アームストロング法により調製した光学
異性体用分離カラムでは７０回注入でカラムの劣化が始
まり、分離が十分に行なわれなくなったのに対し、実施
例１で調製した光学異性体用分離カラムでは３５０回の
注入でもカラムの劣化が起こらなかった。
【００１２】実験例４ 実施例２で調製した光学異性体用分離カラムを用いてト
ルペリゾンのエナンチオマーの分離を試みた。なお、移
動相は、２０ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4) (pH=6.0)／
アセトニトリル＝８０／２０（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速
1.０ml／min とした。結果を図３に示す。図３より本発
明の分離剤によって各光学異性体が完全に分離されたこ
とがわかる。 実験例５ 実施例１で調製した光学異性体用分離カラムを用いてヘ
キソバルビタールのエナンチオマーの分離を試みた。な
お、移動相はH2O/メタノール＝７０／３０（Ｖ／Ｖ）を
使用し、流速1.０ml／min とした。結果を図４に示す。
図４より本発明の分離剤によって各光学異性体が完全に
分離されたことがわかる。
ルペリゾンのエナンチオマーの分離を試みた。なお、移
動相は、２０ｍＭりん酸塩緩衝液（KH2PO4) (pH=6.0)／
アセトニトリル＝８０／２０（Ｖ／Ｖ）を使用し、流速
1.０ml／min とした。結果を図３に示す。図３より本発
明の分離剤によって各光学異性体が完全に分離されたこ
とがわかる。 実験例５ 実施例１で調製した光学異性体用分離カラムを用いてヘ
キソバルビタールのエナンチオマーの分離を試みた。な
お、移動相はH2O/メタノール＝７０／３０（Ｖ／Ｖ）を
使用し、流速1.０ml／min とした。結果を図４に示す。
図４より本発明の分離剤によって各光学異性体が完全に
分離されたことがわかる。
【００１３】実験例６ 実施例３で作製したカートリッジカラムを使用し、BSA
(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル酸) の混
合溶液１００μｌの前処理を行った。方法は以下のとお
りである。 １）アセトニトリル ５ml×２回洗浄 ２）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液；５ml×２回（平
衡化） ３）BSA(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル
酸) の混合溶液(BSA10mgとVMA 100μｇを50mM KH2PO4-K
2HPO4(pH7.0) 溶液/ アセトニトリル＝100/15に溶解し
たもの）１００μｌを50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液
１mlに加えカートリッジカラムに注入、補集した溶液を
４回再注入した。 ４）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液；５ml×3 回で洗
浄 ５）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液／アセトニトリル
＝100/30 ５ml×２回（ＶＭＡの回収）
(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル酸) の混
合溶液１００μｌの前処理を行った。方法は以下のとお
りである。 １）アセトニトリル ５ml×２回洗浄 ２）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液；５ml×２回（平
衡化） ３）BSA(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル
酸) の混合溶液(BSA10mgとVMA 100μｇを50mM KH2PO4-K
2HPO4(pH7.0) 溶液/ アセトニトリル＝100/15に溶解し
たもの）１００μｌを50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液
１mlに加えカートリッジカラムに注入、補集した溶液を
４回再注入した。 ４）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液；５ml×3 回で洗
浄 ５）50mM KH2PO4-K2HPO4(pH6.8) 溶液／アセトニトリル
＝100/30 ５ml×２回（ＶＭＡの回収）
【００１４】この前処理操作を行なって得られた試料を
ＨＰＬＣで分析した。 ＨＰＬＣ条件 カラム アサヒパックGS 320 7.6 mm(内径）×500mm
（長さ）（旭化成製） 移動相 50mM KH2PO4-K2HPO4(pH7.0) 溶液／アセトニト
リル＝100/10(V/V) 流速 1.0 ml／min 結果を図５に示す。ａは前処理をしていない試料（ＢＳ
Ａ／ＶＭＡ混合液）のクロマトグラムであり、ｂは前処
理カラムを使用し回収したＶＭＡ溶液のクロマトグラム
であり、ｃは前処理カラムを使用し除去したＢＳＡ溶液
のクロマトグラムである。以上の結果は、本発明の前処
理カラムにより試料を処理することにより、選択的にフ
ェニル基や、ナフチル基を有する化合物を分離すること
ができることを示すものである。
ＨＰＬＣで分析した。 ＨＰＬＣ条件 カラム アサヒパックGS 320 7.6 mm(内径）×500mm
（長さ）（旭化成製） 移動相 50mM KH2PO4-K2HPO4(pH7.0) 溶液／アセトニト
リル＝100/10(V/V) 流速 1.0 ml／min 結果を図５に示す。ａは前処理をしていない試料（ＢＳ
Ａ／ＶＭＡ混合液）のクロマトグラムであり、ｂは前処
理カラムを使用し回収したＶＭＡ溶液のクロマトグラム
であり、ｃは前処理カラムを使用し除去したＢＳＡ溶液
のクロマトグラムである。以上の結果は、本発明の前処
理カラムにより試料を処理することにより、選択的にフ
ェニル基や、ナフチル基を有する化合物を分離すること
ができることを示すものである。
【００１５】
【発明の効果】本発明のカラム用分離剤は、光学異性体
用分離剤として使用するとき、水系の緩衝液で溶離する
ことができ、しかも極めて高い不斉識別能を安定に示
す。またカラム分離に際し、試料の前処理剤としても優
れた分離能を示す。
用分離剤として使用するとき、水系の緩衝液で溶離する
ことができ、しかも極めて高い不斉識別能を安定に示
す。またカラム分離に際し、試料の前処理剤としても優
れた分離能を示す。
【００１６】
【図１】実施例１で調製した光学異性体分離用カラムを
用いて６−アミノ−３−メトキシエストラエストロゲン
のエナンチオマーにおける分離を試みた結果を示す図面
である。
用いて６−アミノ−３−メトキシエストラエストロゲン
のエナンチオマーにおける分離を試みた結果を示す図面
である。
【図２】比較例１及び２、並びに実施例２で調製した光
学異性体分離用カラムを用いてアテノロールのエナンチ
オマーにおける分離を試みた結果を示す図面である。 ａ：比較例１ ｂ：比較例２ ｃ：実施例２
学異性体分離用カラムを用いてアテノロールのエナンチ
オマーにおける分離を試みた結果を示す図面である。 ａ：比較例１ ｂ：比較例２ ｃ：実施例２
【図３】実施例２で調製した光学異性体分離用カラムを
用いてトルペリゾンのエナンチオマーにおける分離を試
みた結果を示す図面である。
用いてトルペリゾンのエナンチオマーにおける分離を試
みた結果を示す図面である。
【図４】実施例１で調製した光学異性体分離用カラムを
用いてヘキソバルビタールのエナンチオマーにおける分
離を試みた結果を示す図面である。
用いてヘキソバルビタールのエナンチオマーにおける分
離を試みた結果を示す図面である。
【図５】実施例３で作製したカートリッジカラムを使用
して、BSA(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル
酸) の混合溶液の分離（前処理）を試みた結果を示す図
面である。 ａ：前処理をしていない試料 ｂ：前処理カラムを使用し回収したＶＭＡ ｃ：前処理カラムを使用し除去したＢＳＡ
して、BSA(牛血清アルブミン）とVMA(バニリルマンデル
酸) の混合溶液の分離（前処理）を試みた結果を示す図
面である。 ａ：前処理をしていない試料 ｂ：前処理カラムを使用し回収したＶＭＡ ｃ：前処理カラムを使用し除去したＢＳＡ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) B01J 20/00 - 20/34
Claims (4)
- 【請求項１】 担体に、炭素数５の結合基を介してシク
ロデキストリン又は修飾シクロデキストリンを化学結合
してなるカラム用分離剤。 - 【請求項２】 担体がシリカゲル、ガラス、カーボン、
セルロースまたは合成ポリマーである請求項１記載のカ
ラム用分離剤。 - 【請求項３】 光学異性体用分離剤である請求項１記載
のカラム用分離剤。 - 【請求項４】 前処理用分離剤である請求項１記載のカ
ラム用分離剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23207892A JP3181711B2 (ja) | 1992-08-31 | 1992-08-31 | カラム用分離剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23207892A JP3181711B2 (ja) | 1992-08-31 | 1992-08-31 | カラム用分離剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0671170A JPH0671170A (ja) | 1994-03-15 |
| JP3181711B2 true JP3181711B2 (ja) | 2001-07-03 |
Family
ID=16933654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP23207892A Expired - Fee Related JP3181711B2 (ja) | 1992-08-31 | 1992-08-31 | カラム用分離剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3181711B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10047479B4 (de) * | 2000-09-26 | 2009-01-29 | Henkel Ag & Co. Kgaa | Verwendung eines Adsorptionsmittels |
| EP1366809B1 (en) * | 2001-03-07 | 2007-09-05 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Separating agent for optical isomer |
| CN100401058C (zh) * | 2006-04-14 | 2008-07-09 | 张宏业 | 一种尼群地平和阿替洛尔的联合测定方法 |
| JP7019497B2 (ja) * | 2018-04-12 | 2022-02-15 | 株式会社島津製作所 | 馬尿酸類分析用の分離カラム、馬尿酸類分析用の液体クロマトグラフ、及び馬尿酸類の分析方法 |
-
1992
- 1992-08-31 JP JP23207892A patent/JP3181711B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0671170A (ja) | 1994-03-15 |
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