JP3173786B2 - トロンビンの阻害剤および基質 - Google Patents

トロンビンの阻害剤および基質

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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はトロンビンの阻害剤および基質に関する。
トロンビンは凝固系で最後の酵素であり、可溶性フィ
ブリノーゲンをフィブリンに開裂し、フィブリンは次に
交叉架橋して、血栓のマトリックスを形成する不溶性ゲ
ルを形成する。血管を損傷した場合、止血するために上
記の過程が必要である。正常な環境下では、トロンビン
は血漿中にそれほど多量には存在しない。トロンビン濃
度が上昇すると、その結果凝塊を形成し、血栓塞栓症を
もたらすが、これは現代の最も一般的な重大な医療問題
の１つである。
トロンビンは数種の生物学的反応により、止血の制御
に寄与する。一次的な機能であるフィブリノーゲンのフ
ィブリンへの転換に加えて、トロンビンはフィブリンの
交叉架橋に必要である第XIII因子を活性化する。トロン
ビンはまたプロトロンビンからの形成に共に必要である
第Ｖおよび第VIII因子を活性化することを含む正のフィ
ードバック機構によっても作用する。トロンビンにはも
う１つの不可欠の役割がある：これが血小板に結合する
と、止血の初期段階に必要である血小板の放出および凝
集が始まる。
線維素溶解はフィブリノーゲンおよびフィブリン凝塊
の酵素的溶解を引き起こす過程である。血漿にはタンパ
ク、種々活性化因子の影響下プラスミンに変化するプラ
スミノーゲン、フィブリンの活性に似た活性を有するタ
ンパク溶解酵素が含まれる。プラスミンはフィブリンを
フィブリン減成生成物に分解する。
正常な状態では、線維素溶解系は凝固系と平衡状態に
ある。血流中に小さな血栓が形成されると、酵素的に溶
解され、体内の線維素溶解系の活性化により血管系の循
環は修復される。線維素溶解活性が高すぎる場合は、出
血を誘起するかまたは出血を長びかせる可能性があり、
線維溶解活性が凝固系の活性に比べて低すぎる場合は、
血栓症の危険性がある。
トロンビンの反応は血漿中の天然の阻害剤によりさら
に制御される。これらの中で最も重要なものは、抗トロ
ンビンIIIおよびヘパリンである。これら２種の化合物
は単離され、プロトロンビン活性化の危険を伴う止血機
構の平衡がくずれた状態にある時に、治療用および予防
用に使用する。
血栓の阻止には主に２種の型の治療薬が用いられる。
ヘパリンはアンチトロンビンIIIによるトロンビンの阻
害を促進することにより作用する。クマリン誘導体は経
口抗凝固薬であり、例えばワルファリンであり、プロト
ロンビン合成においてトランスレーション後のピタミン
Ｋ依存性γ−カルボキシル化を阻害することによりトロ
ンビンの発生を阻止する。ヘパリンもワルファリンも理
想的ではない。ヘパリンは非経口的に投与しなければな
らず、これは抗トロンビンIIIのコファクターとして機
能するので、この阻害剤なしでは効果はない。ワルファ
リンの効果は非常にゆっくりと発現し、個々の投与量は
頻繁に試練して調整しなければならない。これらの抗凝
固剤でトロンビンは特異的なものはなく、これらはその
他のセリン−プロテアーゼをも阻害し、両者共に投与量
を正しく調整しなければ出血を誘起する可能性がある。
従って、直接作用性の特異的トロンビン阻害剤で、経
口で活性を有するものは、上記抗凝固剤の代替として有
益であろう。この分野を十分研究した結果、異なる種類
のトロンビン阻害剤を合成した。
重要なトロンビンの天然の基質であるフィブリノーゲ
ンのアミノ酸配列を模倣することにより、いくつかの有
効な短いトロンビンのペプチド基質を合成した。トロン
ビンの活性部位に親和性を有する、一番最初に合成した
配列は、Phe−Val−Arg［１］であり、これはトロンビ
ンにより結合を切断される前のフィブリノーゲン配列に
似ている。この配列は後に改善してＤ−Phe−Pro−Arg
およびＤ−Phe−Pip−Argにしたが、これは色素原基
質、例えばＤ−Phe−Pro−Arg−pNAおよびＤ−Phe−Pip
−Arg−pNA［１］、およびトロンビン阻害剤、例えばペ
プチドアルデヒドＤ−Phe−Pro−Arg−Ｈ［２］、非可
逆性阻害剤、Ｄ−Phe−Pro−Arg−CH2Cl［３］、ケトメ
チレン結合を有する阻害剤、例えばＤ−Phe−Pro−Arg
−Ｋ−Gly−ピペリジン［４］、並びに最近合成された
ペプチド−ボロン酸阻害剤、例えばＺ−Ｄ−Phe−Pro−
boroArg［５］およびニトリル:Boc−Ｄ−Phe−Pro−Arg
CN［６］として用いられている。
従って、Ｄ−Phe−Pro−Argは約15年間最良の配列で
あると考えられており、基質（km約10-6M）および阻害
剤（k:10-7M〜10-9M）としてトロンビン活性部位に対し
て非常に良好な親和性を示している。
Ｄ−Phe−Pro−Arg配列においてPheを特定の構造を有
する合成芳香族アミノ酸と交換することにより、および
これらの新しい配列を用いて新規な基質および阻害剤を
構築することにより、著明に改善された基質および阻害
剤特性が得られることを見出した。新しい基質はより良
好な反応速度定数（kmおよびkcat）を示し、阻害剤はよ
り良好な阻害定数（Ki）を示す。
血圧降下は、ArgまたはGpa−およびApaのようなArg類
似体を含有する従来のトロンビン阻害剤［７］の多くに
観察される副作用である。この副作用が心配されるほど
に重篤である化合物もあるが、これはArgまたはArg類似
体の側鎖の正の電荷を帯びたグアニジノまたはアミジノ
基に依るものであると考えられる。驚くべきことに、本
出願の阻害剤のこの副作用は、阻害剤がArgまたはArg類
似体を有する場合でさえも著しく減少する。
また驚くべきことに、側鎖を特定の大きさの非塩基性
アルキルまたはアルキルアリール基に変えることによ
り、その他のセリン−プロテアーゼに対する親和性は非
常に低下するが、トロンビンに対する親和性は依然とし
て非常に良好である、すなわち、これらの阻害剤／基質
はArgを含有する対応する化合物よりもトロンビンに対
して、より一層特異的であることをも見出した。この非
塩基性側鎖を付けることにより、血圧を降下させる副作
用は大いに減少する。
本発明はＤ−Phe−Pro−Argまたはこれの類似体、
［式中、Pheは で置換され、Argは で置換されてもよい］に誘導されるトロンビン阻害剤お
よび基質を提供する。
阻害剤／基質は式I: ［式中、 Ｘ＝Ｈ、CH3またはＮ−保護基、例えばAc、Bz、Cbz、Bo
c;Y＝［CH2］ｎ−Ｑ、 （ここでＱ＝Ｈ、アミノ、アミジノ、イミダゾール、グ
アニジノまたはイソチオウレイドおよびｎ＝１−５、好
ましくは３−５）またはC3−C9アルキルおよびC5−C10
アリールもしくはアルキルアリールで所望により水酸基
およびC1−C4アルコキシから選択される３個までの基で
置換されてもよい;Z＝CN、COR1、 （ここでR1＝Ｈ、OH、CH2Cl、CH2−CH2CO−pip、CF2−C
F2−CO−pip、 CH2−CH2−CO−Pro−NHEt、CF2−CF2−CO−Pro−NHEtま
たはクロモホリック基、例えばpNA、MCA; R2およびR3は同一または異なっていてもよく、OH、OR
6およびNR6R7から成る群から選択されるか、またはR2お
よびR3は一緒になってジオール残基を表す；（ここでR6
およびR7は同一または異なっていてもよく、C1−C10ア
ルキル、フェニルまたはC6−C10アリールアルキルであ
る） R4およびR5は同一または異なっていてもよく、R2、
R3、Gly−pip、Ala−pipまたはGly−Pro−NHEtから選択
される）； （ここでAr1およびAr2は同一かまたは異なっていてもよ
く、フェニル、チエニル、ピリジル、ナフチル、チオナ
フチル、インドリルおよびこれらに対応する飽和基から
選択され、所望によりC1−C3アルキルおよびC1−C3アル
コキシから選択される３個までの基で置換されてもよ
い； L1およびL2は同一かまたは異なっていてもよく、C
H2、CH2−CH2、Ｏ−CH2、Ｓ−CH2からなる群から選択さ
れる； Ar−Ｌは一緒になってＨ、ジフェニル−メチル、フル
オレニルまたはこれらに対応する飽和基を意味してよい
が、一方のAr−ＬがＨまたはベンジルを意味する場合
は、もう一方のAr−ＬはＨになれない； またはこれのC1−C3アルキル置換誘導体、（ここでR8＝
CH2、CH2−CH2、Ｓ−CH2、Ｓ−Ｃ（CH3）２またはCH2−
CH2−CH2）。］ である。
Phe置換基はDpa、NalまたはDbaであるのが好ましく、
Arg置換基はIrg、Gpa、Apaおよび非塩基性アミノ酸、例
えばPgl、Mbg、Chgを含む。
本発明で好ましく用いることができる化合物の例には
以下の物が含まれる： Ac−Ｄ−βNal−Pro−boroArgピナンジオール−エステ
ル Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−boroIrgピナンジオール−エステル Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−boroPglピナコール−エステル Ac−Ｄ−βNal−Pro−boroMbgピナンジオール−エステ
ル CH3−Ｄ−Dpa−Pro−Arg−Ｈ Boc−Ｄ−Dpa−Pro−Gpa−Ｈ CH3−Ｄ−Dpa−Thi−Mbg−Ｈ Ｈ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg−Ｋ−Gly−pip Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg−CH2Cl Boc−Ｄ−Dpa−Pro−ArgCN Ｈ−Dpa−Pro−ArgP（OPh）２ Ｈ−Ｄ−βNal−Pro−PglP（OPh）−Gly−pip Ｈ−Ｄ−Dpa−Pip−Arg−pNA Ｈ−Ｄ−βNal−Pro−Chg−pNA 本発明で好ましく用いることができる化合物の例はさ
らに以下の実施例10−22に掲示する。
数種の新規な化合物の阻害結果は表１−７に示す。本
発明によるPheをアミノ酸で置換することの優越性はKi
値およびトロンビン時間の延長に示され、Ki値は新規化
合物で一般に３−10倍良くなる。Ｎ−末端アミノ酸がＤ
体であることの重要性もまた表１から明白である。本発
明による化合物では、血圧を降下させる副作用が徹底的
に減少することが表２に示される。
トロンビン阻害剤である本発明のこれらの化合物は、
抗トロンボゲン特性を有し、抗トロンボゲン剤を指示さ
れた場合に適用できる。一般に、これらの化合物は対象
に経口または非経口的に投与でき、抗トロンボゲン効果
を得ることができる。ヒトのような大きな哺乳動物の場
合、化合物は単独または医薬用担体もしくは希釈剤と組
み合わせて、0.02−15mg/kg体重、好ましくは１−10mg/
kgの投与量で投与し、抗トロンボゲン効果を得ることが
でき、１回投与もしくは分割投与または徐放製剤として
投与できる。患者の体外血液ループを確立する場合、0.
1−1mg/kgを静脈内投与できる。全血で用いる場合、リ
ットルあたり１−10mgで凝固を阻止することができる。
医薬用希釈剤は周知であり、砂糖、デンプンおよび水が
含まれ、これらは錠剤、カプセル、注射用溶液等を作る
ために使用できる。本発明の化合物は収集血液または血
液が接触する分配用容器、管を付けるもしくは埋め込み
可能な装置中に、血液凝固を阻止する目的で加えること
ができる。
本発明の化合物の優れた点は、経口で活性があり、作
用発現が急速でしかも毒性が低いという点である。さら
に、これらの化合物はヘパリンのような化合物に過敏で
ある固体の処置に特に有用である。
以下の実施例では、記号は以下の意味である： Aa＝アミノ酸 Ac＝アセチル Boc＝ｔ−ブチロキシカルボニル Bu＝ブチル Bzl＝ベンジル DCC＝ジシクロヘキシルカルボジイミド DIEA＝ジイソプロピルエチルアミン DMAP＝４−ジメチルアミノピリジン EtOAc＝酢酸エチル EtOH＝エチルアルコール HOSu＝Ｎ−ヒドロキシ−サクシンイミド MCA＝４−メチル−クマリル−７−アミド MeOH＝メチルアルコール Mtr＝４−メトキシ−2,3,6−トリメチルベンゼンスルホ
ニル NMR＝核磁気共鳴 NP＝ｐ−ニトロフェニル PinOH＝ピナンジオール PfpOH＝ペンタフルオロフェノール pip＝ピペリジド pNA＝ｐ−ニトロアニリド TLC＝薄層クロマトグラフィー THF＝テトラヒドロフラン TEA＝トリエチルアミン WSC＝水溶性カルボジイミド Ｚ＝Cbz＝ベンジルオキシカルボニル Apa＝アミジノフェニルアラニン Chg＝シクロヘキシルグリシン Dpa＝3,3−ジフェニルアラニン Gpa＝グアニジノフェニルアラニン Irg＝Argのイソチオウロニウム類似体 ArgCN＝COOHをCNで置換したArg Mbg＝２−（２−メチルブチル）グリシン Nal＝ナフチルアラニン Pgl＝ペンチルグリシン Thi＝チアゾリジンカルボキシル酸 boroAa＝Aaのボロン酸類似体 AaP＝Aaのホスホン酸類似体 −Ｋ−＝CO−CH2で置換されたアミド結合 以下の実施例は本発明を制限するものではなく、本発
明の化合物の製造を説明するものである。
種々の型の阻害剤のいくつかの合成の概要を図式１−
８に示し、詳細な説明は以下の実施例に示す。
HPLC ほとんどの化合物は以下の条件で、逆相HPLC（RP−HP
LC）に供して分析した：カラム；スーパーパックPep−
Ｓ（４×250mm）、溶出液;A＝0.1％TFAを含有する水、
Ｂ＝0.1％TFAを含有するアセトニトリル、グラジエント
（勾配）;25分でＡ中Ｂを50％−90％、流速;1.0ml/分、
検出;210nmにおけるUV吸収。
TLC 薄層クロマトグラフィー（TLC）は以下の系で予め被
覆したシリカプレート（メルク、F254）を用いて以下の
化合物で実施した:A−クロロホルム−酢酸エチル（2:
1）;B、クロロホルム−メタノール−酢酸（20:4:1）;
C、ｎ−ブタノール−酢酸−酢酸エチル−水（1:1:1:
1）;D、クロロホルム−メタノール（9:1）;E、ピリジン
−酢酸エチル−酢酸−水（5:5:1:3）;F、クロロホルム
−メタノール−アンモニア（1M）（60:35:5）。スポッ
トをニンヒドリンおよび塩素−ジカルボキシジン−噴霧
試薬により可視化した（C.M.スワーンおよびＪ、ギラン
ダー、ジャーナル・オブ・クロマトグラフィー170巻292
頁（1979年））。
NMRスペクトル ブルーカー器機を用いて、250MHzで核磁気共鳴スペク
トルを記録した。
実施例 1.Dpa、Ｚ−Boc−Dpa−ProおよびＺ−Phe−Pro−Argの
合成（反応式１参照） （ａ） DL−Dpa・HCl 第３級ブトキシ化カリウム（6.75g、0.06モル）の第
３級ブタノール（350ml）溶液に、室温でアルゴン下、
アセトアミドシアノ酢酸エチル（10g、0.059モル）を加
えた。溶液が透明になったとき、ブロモジフェニルメタ
ン（14.55g、0.059モル）を加えた。混合物を20℃で24
時間撹拌し、次いで減圧下蒸発させた。固形残留物を酢
酸エチル（500ml）および水（475ml）で処理した。有機
相を乾燥し（Na2SO4）、濃縮して黄色結晶を得た。結晶
をエーテルで繰り返し洗浄し、乾燥して２−ジフェニル
メチルアセトアミドシアノ酢酸エチル（11.61g、58％、
融点181−185℃）を得た。エステル（11.61g、34.4モ
ル）を塩酸（20％）と混合し、30時間環流した。反応混
合物を冷却し、結晶を回収し、洗浄（エーテル）し、乾
燥してHCl・D,L−Dpa（7.82g、81.8％）を得た。
（ｂ） Ｚ−DL−Dpa D,L−Dpa・HCl（0.56g、0.0021モル）のNaOH（2N、5m
l）溶液を０℃まで冷却し、激しく撹拌してクロロギ酸
ベンジル（0.39g、0.33ml、0.0023モル）を滴下した。
反応混合物はpH10で５℃−10℃に保った。溶液を室温ま
で加温し、１時間激しく撹拌した。溶液をエーテルで洗
浄（４回）し、HCl（5N）でpH3まで酸性にした。混合物
をジクロロメタンで抽出し、有機相を乾燥し、濃縮し、
Ｚ−DL−Dpa（0.73g、97％、融点214−217℃）を得た。
（ｃ） Ｚ−D,L−Dpa−ONSn Ｚ−D,L−Dpa（1.88g、0.005モル）およびＮ−ヒドロ
キシサクシンイミド（0.575g、0.005モル）の乾燥1,2−
ジメトキシエタン（30ml）溶液を０℃で撹拌して、ジシ
クロヘキシル・カルボジイミド（1.03g、0.005モル）を
加えた。混合物は０℃で４時間維持した。懸濁液を濾過
し、濾液を濃縮乾固し、油状物を得、これをエーテルで
粉砕し、濾過してＺ−D,L−Dpa−ONSn（2.15g、91％、
融点139−142℃）を得た。
（ｄ） Ｚ−Ｄ−Dpa−ProおよびＺ−Ｌ−Dpa−Pro プロリン（0.78g、0.0068モル）およびNaHCO3（0.57
g、0.0068モル）の水（8ml）溶液に、Ｚ−D,L−Dpa−ON
Sn（2.15g、0.0045ミル）の1,2−ジメトキシエタン（15
ml）溶液を加えた。２時間後、溶媒を減圧下除去し、水
（5ml）を加えた。溶液をpH2まで酸性にし（濃HCl）、
白色結晶（1.98g、融点113−117℃）を得た。EtOAcから
部分的に再結晶して、最初に固体状の１つのジアステレ
オマー（0.7g、融点180−183℃、FAB MS:M 473;1H N
MR:7.26（15H、ｍ、３×Ph）、5.66（1H、ｄ、CH）、5.
23（1H、ｍ、CH）、4.40（1H、ｄ、CH）、2.03（2H、
ｓ、CH2）、2.20（4H、ｍ、２×CH2）;13C NMR:172.19
（CO）、156.1（CO）、139.17（CO）、127−128（P
h）、66.88（CH2）、59.48（CH）、55.58（CH）、24.15
（CH2））を回収した。母液よりさらに再結晶して、２
番めにジアステレオマーの混合物（0.43g、融点126−13
0℃を）回収した。石油エーテル（沸点60−80℃）を加
えると別の異性体（0.54g、融点128−131℃）、FAB M
S:M 473:H NMR:7.29（15H、ｍ、3Ph）、5.55（1H、
ｄ、CH）、5.23（1H、ｍ、CH）、4.47（1H、ｄ、CH）、
2.04（2H、ｓ、CH2）、1.20−2.20（4H、ｍ、2CH2）;13
C:172.77（CO）、156.13（CO）、139.48（CO）、126.99
−128.72（Ph）、66.90（CH2）、59.62（CH）、55.48
（CH）、53.54（CH）、47.44（CH2）、27.94（CH2）、2
4.58（CH2）を得た。
（ｅ） Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）OPh Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−OH（0.472g、１ミリモル）および
HOSu（0.115g、１ミリモル）のジメトキシエタン（20m
l）の溶液にDCC（0.206g、１ミリモル）を氷水浴中で冷
却しながら加え、次に溶液を室温で３時間撹拌し、形成
したDCUを濾過し、溶液を濃縮凝固し、油状物を得た
（0.57g）。Ｈ−Arg（Mtr）−OH（0.42g、１ミリモル）
およびEt3N（0.12g、1.1ミリモル）のDMF（25ml）溶液
に、Ｚ−Dpa−Pro−OSn（0.57g）のジメトキシエタン
（15ml）の溶液を冷却しながら加えた。溶液を室温で３
時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をH2O（20ml）
およびMeOH（10ml）に溶解した。溶液をpH2まで酸性に
し、減圧下MeOHを除去した。形成した固体を濾過し、乾
燥してＺ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）OH（0.766g、91
％）を得た。化合物の構造は1H NMRで確認した。
FglおよびNal並びにこれらの対応するジ−およびトリ
−ペプチドを、上記の方法と類似の方法で合成した。
2.ペプチド・アミノホスホン酸阻害剤の合成（図式３参
照） （ａ） ジフェニル−１−（Ｎ−ベンジルオキシカルボ
ニル）アミノペンタンホスホネート トリフェニル−ホスファイト（9.3g、30ミリモル）、
ｎ−ヘキサナール（4.50g、45ミリモル）、ベンジルカ
ルバメート（4.53g、30ミリモル）、氷酢酸（5ml）の混
合物を45分間撹拌した。次に混合物を80−85℃で１時間
加熱し、揮発性の副産物を沸騰水浴中加熱しながら減圧
下除去した。油状残留物をメタノール（40ml）に溶解
し、−10℃で再結晶して7.28g、融点70−72℃、収率52
％を得た。構造はプロトンNMRで確認した。
（ｂ） ジフェニル−１−アミノペンタホスホネート ジフェニル−１−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）
アミノペンタンホスホネート（0.93g、2.0ミリモル）を
エタノール（30ml）に溶解し、酢酸（0.2ml）を加え
た。次に炭素（100mg）上10％パラジウムを加え、混合
物を４時間水素化した。触媒を濾過し、エタノール（５
×5ml）で洗浄した。溶媒を除去した後、油状物を得
た。油状物を水で洗浄し、酢酸を除去し、クロロホルム
に溶解し、乾燥し（MgSO4）し、濃縮乾固して油状生成
物、0.45g、収率68％を得た。構造はプロトンNMRおよび
MSで確認した。
（ｃ） Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−PglP（OPh）２ Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−OH（0.11g、0.25ミリモル）をEt3
N（0.035ml）を含有する乾燥クロロホルム（2ml）に溶
解し、５℃まで冷却した。クロロギ酸エチル（0.026m
l、0.275ミリモル）を加え、混合物を30分間−５℃に保
った。ジフェニル−１−アミノペンタン−ホスホネート
（83mg、0.25ミリモル）のEt3N（0.025g、0.25ミリモ
ル）含有乾燥クロロホルム（2ml）溶液を加えた。混合
物を室温で12時間撹拌した。溶媒を減圧下除去した。そ
の結果生じた油状物をクロマトグラフィー（CHCl3次に
２％MeOHのCHCl3溶液）に供し、結晶、123mg、収率63％
を得た。構造はプロトンおよび31P NMRで確認した。
（ｄ） Ｈ−Ｄ−Dpa−Ppo−PglP（OPh）２ Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−PglP（OPh）２（50mg、0.063ミリ
モル）をエタノール（5ml）に溶解し、酢酸（0.01ml）
を加えた。10％Pd/C（25mg）を加え、混合物を室温で３
時間水素化した。触媒を濾過し、減圧下エタノールを除
去した。その結果生じた油状物を水（5ml）およびクロ
ロホルム（20ml）で処理した。クロロホルム相を乾燥
（MgSO4）し、濃縮乾固して結晶41mg、収率91％を得
た。構造は1Hおよび31P NMRで確認した。
（ｅ） Ｈ−Ｄ−Dpa−Ppo−PglP（OH）２ Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−PglP（OPh）２（100mg、0.127ミ
リモル）をエタノール（10ml）に溶解し、酢酸（0.1m
l）を加えた。次に10％Pd/C（50mg）を加え、混合物を
室温で３時間水素化した。触媒を濾過し、PtO2（100m
g）を加え、混合物を室温で４時間水素化した。触媒を
濾過し、溶媒を除去し、残留物を水20mlおよびクロロホ
ルム（60ml）で処理した。有機相を乾燥（MgSO4）し、
濃縮乾固して、結晶67mを得ｇ、全体の収率92％であっ
た。構造は1Hおよび31P NMRで確認した。
Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−PglP（OPh）２ この化合物は上記の方法により合成し、収率は73％で
あった。構造は1Hおよび31P NMRにより確認した。
Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−PglP（OPh）２ この化合物は上記の方法で合成し、収率は90％であっ
た。構造は1Hおよび31P NMRで確認した。
Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−PglP（OH）２ この化合物は上記の方法により合成し、収率は全体で
89％であった。構造は1Hおよび31P NMRで確認した。
（ｆ） ジフェニル−１−（Ｎ−アリル）アミノ−４−
ピリジルメチル−ホスホネート ４−ピリジンカルボキシアルデヒド（1.07g、10ミリ
モル）およびアリルアミン（0.61g、10ミリモル）のエ
ーテル（30ml）溶液に、無水炭酸ナトリウム（2.76g）
を加えた。溶液を室温で１晩撹拌し、次に炭酸ナトリウ
ムを濾過した。反応混合物にジフェニルホスファイト
（2.34g、10ミリモル）およびトリエチルアミン（1.01
g、10ミリモル）を氷水浴中で冷却しながら加えた。こ
れを室温で１晩撹拌した。溶媒を除去した後、油状残留
物を得、これをクロマトグラフィー（1:1 石油エーテ
ル／酢酸エチル）に供し、油状物2.85g（65％）を得
た。
（ｇ） ジフェニル−１−（Ｎ−アリル）アミノ−４−
（第３級ブチルオキシカルボニル）ブチル−ホスホネー
ト ４−（第３級ブチルオキシカルボニル）アミノ−ブチ
ルアルデヒド−ジエチルアセタール（2.91g、10ミリモ
ル）を1N塩酸（1ml）およびPPTS（150mg）の存在下、ア
セトン（20ml）に溶解した。反応混合物を３時間環流し
た。溶媒を除去し、残留物をクロロホルムに溶解し、乾
燥（MgSO4）した。MgSO4を除去した後、溶液を撹拌し、
アリルアミン（0.61g、10ミリモル）および無水炭酸ナ
トリウム（2.76g）を加えた。反応懸濁液を室温で１晩
撹拌した。次に炭酸ナトリウムを濾過した。得られた溶
液にジフェニルホスファイト（2.34g、10ミリモル）お
よびトリエチルアミン（1.01g、10ミリモル）を加え
た。これを室温で２日間撹拌した。蒸留させた後に得ら
れた残留物をシリカゲルのクロマトグラフィー（1:1
石油／酢酸エチル）に供し、黄色の柔軟な固体200mg
（５％）を得た。
（ｈ） ジフェニル−１−アミノ−４−ピリジル−メチ
ル−ホスホネート Ｎ−アリル保護した化合物（1.0g、2.3ミリモル）を
エタノール（25ml）に溶解した。溶液に10％Pd/C（300m
g）を加え、20時間環流した。反応をHPLCで追跡し、保
持時間:10.0分が生成物、12.0分が出発物質であった。
溶媒を除去した後、クロマトグラフィーに供して、黄色
油状の生成物0.51g（56％）を得た。
反応式５に準じて以下のトリペプチドを合成した： Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−CpgP（OPh）2:0.36g（67％） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−EpgP（OPh）2:0.31g（87％） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−PygP（OPh）2:0.41g（35％） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−DmgP（OPh）2:0.25g（70％） Ｚ−Ｄ−β−Nal−Pro−MpgP（OPh）2:54mg（32％） Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−EpgP（OPh）2:126mg（71％） Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−DmgP（OPh）2:85mg（52％）。
略語： Mpg＝メトキシプロピルグリシン Cpg＝４−シアノフェニルグリシン Epg＝２−エチルプロピルグリシン Pyg＝４−ピリジルグリシン Dmg＝3,3−ジメチルプロピルグリシン Nal＝ナフチルアラニン PPTS＝ピリジニウム−ｐ−トルエンスルホネート 3.ペプチドアミノボロン酸阻害剤の合成 （ａ） （＋）−ピナンジオール−４−ブロモ−Ｒ−１
−アミノブタン−ボロネート塩酸塩 標題化合物をD.S.マッテソンら、オルガノメタリック
ス３巻1284−1288頁（1984年）および欧州特許出願第29
3881A2号に記載されるように製造した。
（ｂ） Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−Irg−OPin・HCl Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−OH（236mg、0.5ミリモル）のTHF
（5ml）溶液に、トリエチルアミン（70μ、0.5ミリモ
ル）の存在下、クロロギ酸イソブチル（65μ、0.5ミ
リモル）を−15℃で加え、溶液を−13℃で13分間撹拌し
た。（＋）−ピナンジオール−４−ブロモ−Ｒ−１−ア
ミノブタンボロネート塩酸塩（183mg、0.5ミリモル）の
CHCl3（3ml）溶液を加え、続いてEt3N（70μ、0.5ミ
リモル）を加えた後、反応混合物を同温で２時間、次に
10℃以下で２時間撹拌した。減圧下THFを除去し、残留
物を酢酸エチル（50ml）に溶解し、これを１％NaHCO3、
水、0.2N HClおよび水で洗浄し、次にNa2SO4で乾燥し
た。溶媒を除去し、油状生成物を定量的に得た。HPLC分
析により、保持時間22.8分で１本の大きなピークがあ
り、いくつかの小さなピークを伴うのが示された。
上記化合物（合成した全量の2/5、0.2ミリモル）のエ
タノール（1ml）溶液に、アルゴン雰囲気下、室温でチ
オ尿素（61mg、0.8ミリモル）を加えた。４日間撹拌し
た後、酢酸エチル（70ml）を反応混合物に加え、これを
１％NaHCO3、水、0.2N HClそしてまた水で洗浄し、Na2
SO4で乾燥した。溶媒を除去して得られた残留物をｎ−
ヘキサンで処理し、粉末状の生成物を得た。エチルエー
テルおよびｎ−ヘキサンの2:1混合物で、酢酸エチルか
ら再沈澱させ、生成物（98.9mg、60.6％、２段階の総収
率）を得た。一般法で記載した条件下でRP−HPLC分析し
た場合の保持時間は13.5分であった。ジューテリウム置
換したクロロホルムで1H NMR分析すると、分子中にプ
ロリン残基が存在するために複合パターンになるが、ピ
ナンジオールに対応する典型的な信号が適切な比率で観
察された。
4.Z−Ｄ−Phe−Pro−boroMbg−OPin（反応式４参照） ピナンジオール（ジクロロメチル）ボロネート（1m
l、1.2g、4.6ミリモル）のTHF（7ml）溶液を隔壁に装着
したフラスコ（100ml）に入れ、1,1−ジメチルプロパン
塩化マグネシウム（4.6ml、4.6ミリモル）を０℃で乾燥
注入器から滴下した。
反応混合物を窒素下、室温で撹拌した。７時間後TLC
により主に１個のスポット［Rf＝0.82、クロロホルム：
石油エーテル（1:1］）を示した。溶媒を除去し、残留
物をエーテルに溶解し（50ml）、水（２×10ml）で洗浄
し、乾燥し（MgSO4）濾過した。
エーテルを除去し、粗生成物をシリカゲルのカラムで
精製し、ヘキサンおよび10％クロロホルムで溶出し、淡
黄色油状のα−クロロボロン酸エステルを得た（0.55
g、収率40％）。
上記化合物（0.55g、1.8ミリモル）のTHF（5ml）溶液
を−78℃で二重末端針を介してリチウムビス（トリメチ
ル−シリル）アミド（1.8ml、1.8ミリモル）のTHF（5m
l）溶液に窒素下で加えた。反応混合物を一晩20℃に保
ち、次に溶媒を除去した。粗生成物を石油エーテル（40
−60℃）（25ml）に溶解して無機塩（LiCl）を沈澱させ
た。反応混合物を濾過し、−78℃まで冷却し、乾燥希HC
l1M（３当量、5.4ml、5.4ミリモル）を加えた。フラス
コを一晩冷蔵庫内に置いた。翌朝、反応混合物を濾過
し、塩酸塩（0.41g、1.29ミリモル、収率72％）を白色
固体として単離した。
Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−OH（0.45g、1.1ミリモル）をTHF
（7ml）に溶解し、当量のＮ−メチルモルホリン（0.11
g、1.1ミリモル）を加えた。溶液を−20℃まで冷却し、
１当量のイソブチルクロロホルメート（0.149g、1.1ミ
リモル）を滴下した。10分後、上記アミノ塩酸塩（0.34
8g、1.1ミリモル）のTHF（7ml）溶液を窒素下に移し、
トリエチルアミン（0.11g、1.1ミリモル）を反応混合物
に加えた。反応混合物を−20℃で１時間撹拌し、続いて
室温で２時間撹拌した。不溶物を濾過して除去し、次に
溶媒を蒸発させて除去し、残留物を酢酸エチル（30ml）
に溶解した。有機相を0.2N塩酸（10ml）５％炭酸水素ナ
トリウム水溶液、塩化ナトリウム飽和溶液および水で洗
浄した。有機相を次に無水MgSO4で乾燥し、濾過し溶媒
を蒸発させて白色固体を得、これをシリカゲルカラムで
精製し、軽油で溶出して望ましい生成物（0.59g、81
％）を得た。構造を1H NMRおよびMSで確認した。
5.α−ブロモボロン酸エステルの製造（反応式６参照） 全ての反応には、ホウ素を含めて精製した無水試薬を
用いた。
反応はガラス管を通ってシリンダーから直接出るアル
ゴンまたは窒素下で実施した。
環流冷却器の装備した250mlの反応フラスコ中に１−
ブロモ−１−プロペン（3.63g、30ミリモル）を入れ
た。
次にジブロモ−ボラン−メチルスルフィド複合体のジ
クロロメタン溶液（60ml、60ミリモル）を反応フラスコ
に滴下し、混合物を窒素下で５時間環流した。
溶媒を除去し、反応混合物を水で洗浄し、乾燥した
（MgSO4）。
隔壁を装備し窒素でフラッシュした乾燥丸底フラスコ
（100ml）にブロモボロン酸（0.5g、３ミリモル）およ
びピナンジオール（0.52g、３ミリモル）、磁気回転子
並びに乾燥エーテル（20ml）を入れた。
反応混合物を、固体が溶解するまで２時間撹拌し、有
機相を水（10ml）で洗浄し、分離し、乾燥し（MgS
O4）、濾過した。粗生成物をシリカゲルカラム（230−4
00メッシュ）で精製し、クロロホルムで溶出した（生成
物が薄い赤色の環の前に溶出した）。最初の分画（100m
l）を回収し、溶媒を蒸発させて、無色の液体であるα
−ブロモ−ボロン酸エステル（0.8g、88.6％）を得た。
6.イソステリック・ケトメチレン阻害剤の合成（反応式
２参照） （ａ） Boc−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−GlyOMe
（改変ダルキン−ウェスト反応） Boc−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−OH（0.126g、0.15
ミリモル）をモノメチルコハク酸無水物（0.259g、1.0
ミリモル）に加えた。Et3N（0.042ml、0.30ミリモ
ル）、DMAP（1.8mg、0.015ミリモル）およびピリジン
（0.12ml）を加え、反応フラスコに環流冷却器を装着
し、反応物を45−50℃に加熱した。反応混合物を１時間
撹拌し、次にNaHCO3（５％、5ml）を加え、さらに30分
間撹拌を続けた。生成物を酢酸エチルで抽出し、AcOH
（0.1N）およびブリンで洗浄した。有機相を乾燥し（Mg
SO4）、濾過し、濃縮乾固して油状残留物を得、これを
シリカゲル（グレード9385、50g）のクロマトグラフィ
ーに供した。CHCl3:CH3OH、98:2で溶出し、溶媒を除去
すると、褐色油状の生成物（0.134g、98％）を得た。構
造は1H NMR（250MHz）およびFAB質量分析により、Boc
−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−GlyOMeであると確認し
た。
（ｂ） Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−Gly−pip Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−Gly−OMe（0.1
g、0.1ミリモル）のMeOH（10ml）溶液を０℃まで冷却
し、NaOH（1N、0.22ml、0.22ミリモル）を室温で2.5時
間撹拌しながら加えた。溶液をpH7まで中性にし、減圧
下でMeOHを除去した。水溶液を酸性（pH2）にし、酢酸
エチルで抽出し乾燥した（Na2SO4）。減圧下溶媒を除去
し、油状物を得た。この油状物およびHOSu（12mg、0.1
ミリモル）のジメトキシエタン（20ml）溶液に、冷却し
ながらDCC（21mg、0.1ミリモル）を加えた。溶液を室温
で20時間撹拌し、ピペリジン（17mg、0.2ミリモル）を
冷却しながら溶液に加え、溶液を室温でさらに３時間撹
拌した。溶液を濃縮乾固し、生成物をシリカゲルのクロ
マトグラフィーで精製し（MeOH:CHCl3、92:2）、Ｚ−Ｄ
−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−Gly−pip（78mg、81％）
を得た。生成物の構造を1H NMRおよびFAB質量分析によ
り確認した。
別の実験で、上記の方法によりＬ−異性体、Ｚ−Ｌ−
Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−Gly−pipを合成し、収率は
55％であった。
（ｃ） Ｈ−Ｄ−Dpa−Pro−Arg−Ｋ−Gly−pip・2TFA Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−ArgMtr−Ｋ−Gly−pip（52mg、0.
053ミリモル）をTFA0.9mlおよびチオアニソール0.1mlに
室温で溶解した。４時間撹拌した後、TFAを減圧下除去
し、残留物をエーテルで粉砕した。結晶を回収し、エー
テルで洗浄した（Mtr脱保護生成物51mg）。次に結晶を
メタノール5mlに溶解し、10％Pd/Cの21mgを加えた。室
温で20時間水素化した後、触媒を濾過して除去し、溶媒
を蒸発させた。残留物をエーテルで粉砕し、白色結晶を
得た。34mg（75％）、融点146−151℃（崩壊）。HPLCに
より、ＤおよびＬ−Argを含有する２形態から、２本の
同等の大きなピークが示された。構造を1H NMRおよびF
AB質量分析により確認した。
別の実験でＺ−Dpa−Pro−Arg（Mtr）−Ｋ−Gly−pip
のＬ異性体を脱保護し、Ｈ−Ｌ−Dpa−Pro−Arg−Ｋ−G
ly−pip・2TFAを収率43％で得た。
7.ペプチドアルデヒドの合成（反応式８参照） （ａ） Ｚ（NO2）Arg−NCH3（OCH3） 塩酸N2O−ジメチルヒドロキシルアミン（1.45g、14.9
ミリモル）をDMF10mlに溶解し、溶液を０℃に保った。
ジイソプロピルエチルアミン（1.92g、14.9ミリモル）
を最初に加え、次にＺ−（NO2）ArgのDMF10ml溶液、HOB
T（1.92g、14.2ミリモル）およびWSC・HCl（2.99g、15.
6ミリモル）を加えた。０℃で５時間反応させた後、室
温で１晩放置した。溶媒を減圧下除去し、EtOAc100mlお
よびH2O25mlを加えた。有機相をエーテルで希釈し、Na2
CO3（0.5M）、H2O、H2SO4（0.1M）およびH2Oで洗浄し、
次いで乾燥し、溶媒を除去して生成物3.66gを得た。水
溶液を組み合わせて抽出し、上記と同じ方法で処理して
さらに1.69g得た。全部で5.35g（95％）をセファデック
スLH−20のクロマトグラフィーに供し、95％エタノール
を用いた。類似の生成物（S1およびS2のTLC）を4.60g
（82％）生成し、NMRで構造を確認した。
（ｂ） Arg（NO2）−NCH3（OCH3）・HBr 上記化合物を常法により室温で45分間、HBr/HOAc中で
脱保護した。生成物はS3、S4およびS5のTLCより類似体
であった。
（ｃ） Boc−D,L−Dpa−Pro−Arg（NO2）−NCH3（OC
H3） Arg（NO2）−NCH3（OCH3）・HBr（4.9g、13ミリモ
ル）をDMFに溶解し、溶液を−５℃まで冷却し、Et3Nを
アルカリ性反応物に加えた。Boc−DL−Dpa−Pro−OH
（5.5g、12.5ミリモル）、HOBT（1.7g、12.5ミリモル）
およびWSC（2.8g、14.5ミリモル）を加え、反応混合物
を−５℃で２時間撹拌し、次に室温で１晩撹拌した。溶
媒を減圧下蒸発させ、EtOAcおよびH2Oを加え、有機相を
分離し、0.5M NaHCO3（３×30ml）、NaCl溶液（４×20
ml）で抽出し、乾燥し（NaSO4）、溶媒を除去した。収
量は8.3g（97％）でTLC（S2）により１個のスポットが
示された。化合物の予期される構造はNMRで確認した。
（ｄ） Boc−D,L−Dpa−Pro−Arg−NCH3（OCH3）・HCl 上記化合物（2.33g、3.4ミリモル）をMeOH240mlおよ
びHCl（1M）3.6mlに溶解した。触媒、10％Pd/C（0.6g）
を加え、室温で20時間水素化した。触媒を濾過し、溶媒
を減圧下除去した。残留した固体2.3gは出発物質をいく
らか含有し、これをセファデックスQAE Cl-のイオン交
換クロマトグラフィーにより、50％EtOHを用いて除去し
た。収量1.74g（76％）。TLC（S2およびS3）で単一のス
ポットを示した。
（ｅ） Boc−D,L−Dpa−Pro−Arg−Ｈ・HCl 上記化合物（0.5g、0.74ミリモル）を乾燥（分子ふる
い、4A）THF40mlに溶解し、溶液を−40℃に冷却し、DIB
AH（1Mトルエン溶液、3.2ミリモル）3.2mlをアルゴン雰
囲気下撹拌しながら滴下した。３時間後、0.25Mクエン
酸12.8mlを加えた。アルミニウム塩を遠心にかけ、THF/
H2O（4:1）で数回洗浄した。組み合わせた液体相からTH
Fを減圧下除去し、生成物をEtOAcで抽出した。溶媒を除
去し、生成物を20％HOAc15mlに溶解し、セファデックス
G15のクロマトグラフィーに供し、溶出液として20％HOA
cを用いた。収量172mg（38％）。この化合物はTLC（S2
およびS3）で二重のスポットを示すが、これは恐らくＤ
−およびＬ−Dpaの２異性体を各々示しているのであろ
う。NMRおよびMSにより、予期される構造と合致した。
8.Boc−D,L−Dpa−Pro−ArgCN・HClの合成 （ａ） Ｚ−D,L−Dpa−Pro−Arg−NH2・HCl Arg−NH2・2HClおよびBoc−D,L−Dpa−ProOHをHOBTお
よびDCCのDMF溶液を用いて通常の方法で結合させた。
（ｂ） Boc−D,L−Dpa−Pro−ArgCN・HCl 上記トリペプチドアミド（0.50g、0.79ミリモル）お
よび塩化トシル（0.50g、2.55ミリモル）を室温でピリ
ジン2mlに溶解し、24時間撹拌した。ピリジンを減圧下
蒸発させ、次いでピリジン5mlおよび水0.5mlを加え、２
時間撹拌し続けた。減圧下で蒸発させた後、残留物を少
量の水で粉砕し、EtOAcに溶解し、乾燥し（Na2SO4）、
セファデックスQAE Clのクロマトグラフィーに供し
た。生成物を含有する分画を蒸発させ、10％HOAcに溶解
して凍結乾燥した。収量:0.33g（68％）。［α］D22゜
＝−144（Ｃ＝0.5、50％HOAc）。構造は1H NMRおよび
質量分析で確認した。
9.Dbaの合成 （ａ） Ｎ−ホルミル−N,α，β−トリベンジルアラニ
ン・シクロヘキシルアミドの製造 Bzl−NH2288μ（2.64ミリモル）およびベンジル−
フェネチルケトン592mg（2.64ミリモル）を室温でMeOH
（5ml）に溶解し、溶液を一晩撹拌した。混合物にギ酸9
9.6μ（2.64ミリモル）およびシクロヘキシルイソシ
アニド298μ（2.4ミリモル）を室温で加え、これを室
温で２週間反応させた。MeOH中の不溶物を濾過により回
収し、MeOH、エーテル、次いでｎ−ヘキサンで洗浄し
た。粗生成物をCHCl3から、エーテルおよびヘキサンの
2:1混合物で再結晶した。収量540mg（48.2％）、NMR（C
DCl3）；δ＝0.8−1.8シクロヘキシル（11H）、δ＝2.1
−4.75CH2（8H）、δ＝5.45−5.55NH（1H）、δ＝7.0−
7.4フェニル（15H）、δ＝8.25（主要）および8.4（小
さい）ホルミル（1H）。
（ｂ） Bzl−Dbaの製造 完全に保護したDba400mg（0.85ミリモル）をTFA2.5ml
および11N HCl3mlに溶解し、溶液を水冷濃縮器で145℃
に保ち、20時間撹拌した。TFAを除去した後、溶液のpH
を、10N NaOHの添加により約７に調整した。さらにエ
ーテルを加えて粉末を得、これを回収しエーテルで洗浄
した。収量124mg（40.4％）。
10.Z−Ｄ−Phe−Pro−Pgl−Ｈの合成 （ａ） Pgl ストレッカー＊合成により、ヘキサナールを用いてペ
ンチルグリシンを得、収率は31.6％であった（＊ボーゲ
ル、テキストブック・オブ・プラクティカル・オルガニ
ック・ケミストリー）。
（ｂ） Ｚ−Pgl ペンチルグリシン（0.5g、3.5ミリモル）の水（4ml）
およびTHF（4ml）混合物の0.5M溶液をトリエチルアミン
（0.64ml、1.22当量）の存在下、室温でＺ−OSu（0.963
g、3.86ミリモル）に加え、溶液は15分後に透明になっ
た。２時間後のTLCで出発物質がいくらか認められたの
で、トリエチルアミン（0.2ml）の別の分画およびＺ−O
Su（200mg）を加えた。さらに２時間後のTLCでは出発物
質は認められなかったので、溶液を水（50ml）に注ぎ、
CHCl3（50ml）で抽出した。有機相をHCl（1M、20ml）で
洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濃縮して粘着性固体のＺ−P
gl（1.18g）を得、これを再結晶（DCM/石油エーテル、
沸点60−80℃）して、白色の結晶状の固体（0.8g）を得
た。構造を1H NMRで確認した。
（ｃ） Ｚ−Pgl−NMe（OMe） ヒドロキシルアミン（184mg、1.05当量）の溶液にDIP
E Ａ（0.33ml、1.05当量）を加え、５分後にＺ−Pgl
（0.5g、1.80ミリモル）の溶液、次いでHOBT（0.242m
g、１当量）を加えた。溶液を−15℃に冷却し、WSCI・H
Cl（0.378mg、1.1当量）の溶液を加えた。溶液を30分間
−15℃を維持し、次に室温まで加温し、酢酸の添加によ
り〜pH4に調整した。16時間後のTLCでは出発物質がほと
んど認められなかったので、溶液をNaHCO3（100ml）に
注ぎ、Et2O（50ml）で抽出した。Et2O相をNaCl（20ml）
で洗浄した。水相をEt2Oで洗浄し、有機相を組み合わ
せ、次に濃縮してＺ−PglNMe（OMe）（324mg）を得た。
構造を1H NMRおよび質量分析で確認した。
（ｄ） PglNMe（OMe） Ｚ−PglNMe（OMe）（324mg）のMeOH（10ml）溶液を真
空状態下におき、次いでアルゴン下においた。パージン
グを２回繰り返したが、３回めにPd/C（〜0.5g）を加え
た。パージングをさらに２回繰り返し、３回めに溶液中
に水素を吹き込んで真空を満たした。AcOH（0.5ml）を
次に加えた。90分後のTLCでは出発物質が認められなか
ったので、溶液を濾過（セライト）し、多量のMeOHで洗
浄し、濃縮し、粘着性物質であるPglNMe（OMe）（380m
g）を得た。構造を1H NMRで確認した。
（ｃ） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−PglNMe（OMe） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro（0.187mg、１当量）のDMF（2ml）
溶液に、アルゴン下で撹拌しながらDIPEA（0.084ml、１
当量）およびPyBOP（0.25mg、１当量）を加えた。10分
後にPglNMe（OMe）（0.09mg、0.479ミリモル）のDMF（1
ml）溶液を加えた。90分後のTLCでは出発物質は認めら
れなかったので溶液をHCl（1N、50ml）に注ぎ、Et2O（5
0ml）で抽出した。Et2O相をNaHCO3（50ml、1.2N）およ
びNaCl（飽和溶液、20ml）および乾燥した（MgSO4）。
シリカゲル（メルク9385）のクロマトグラフィーを繰り
返し、CHCl3/MeOHで溶出してＺ−Ｄ−Phe−Pro−PglNMe
（OMe）（200mg）を得た。Fab MSにより要件とされる5
67（10％、Ｍ＋Ｈ）および589（100％、Ｍ＋Na）を示
し、構造はまた1H NMRでも確認した。
（ｆ） Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−Pgl−Ｈ Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−PglNMe（OMe）（33mg）のTHF（2m
l）溶液に−40℃でジ−イソブチルアルミニウム−ハイ
ドライド（1N、0.155ml、2.5当量）をアルゴン下で加え
た。溶液を室温まで温めて、18時間撹拌した。TLCによ
り出発物質は認められなかったので、H2SO4（1N、0.5m
l）で満たし、10分間撹拌した。水相を次にEtOAc（20m
l）で抽出した。有機相を乾燥し（MgSO4）、濃縮してＺ
−Ｄ−Phe−Pro−Pgl−Ｈ（31mg）を得た。構造は1H N
MRおよび質量分析により確認し、この化合物を化合物番
号33として生物学的試験に供した。
11.Z−Ｌ−Val−pNa ４−ニトロアニリン（67.5g、0.48モル）をピリジン
（4A分子ふるいで乾燥、750ml）に溶解し、溶液を氷で
冷却した。PCl3（34.3g、0.25モル）をピリジン（350m
l）に溶解し、ニトロアニリン溶液に滴下した。溶液を3
0分間室温で放置した。この溶液にZZVal−OH（112g、0.
44モル）のピリジン（250ml）溶液を加えた。反応混合
物を室温で１週間撹拌し、次いでロータリーエバポレー
ターで除去した。残留物をNaHCO3（２％）で処理した。
生成物を結晶化し、濾過し水で洗浄した。生成物を沸騰
EtOH（2000ml、95％）に溶解し、熱い溶液を濾過し、室
温で一晩放置した。結晶を濾過し、Ｚ−Ｌ−Val−pNA
（116.9g、71.6％）を得た。
12.（ａ）Boc−Dpa Boc−Dpaは実施例１（ａ）および（ｂ）の方法と類似
の方法で得られた。
（ｂ） Boc−Dpa−Pip−Arg−pNA（反応式７参照） Boc−Dpa・HCl（150mg、0.396ミリモル）のDMF（5m
l）溶液にTBTU（133.5mg、0.416ミリモル、1.05当量）
およびDIPEA（0.069ml、0.396ミリモル、１当量）を加
え、塩基性pHの溶液を得た。次にPip−Arg−pNA・TFA
（238mg、0.396ミリモル、１当量）を加えた。溶液のpH
が酸性なので、さらにDIPEAの分画（0.05ml）を加え
た。16時間撹拌した後、TLCにより出発物質は少し認め
られたので、さらにDIPEAの分画を加えた（0.034ml、0.
5当量）。さらに３時間後のTLCでは出発物質は認められ
なかったので、溶液をEtOAc（50ml）に注ぎ、HCl（0.5
N、200ml）で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、濃縮し、粘着
性物質430mgを得た。Et2および石油エーテル（沸点60−
80℃）で５分間粉砕し、得られた粉末を空気中で乾燥す
るのを防ぎながら濾過し、粉末のBoc−Dpa−Pig−Arg−
pNA・TFA、207mg、収率62％を得た。Rp HPLC（pep−
Ｓ、35−70％MeCN＋0.1％TFA、25分、1ml/分）でRfは20
分であった。
（ｃ） Dpa−Pip−Arg−pNA 固体のBoc−Dpa−Pip−Arg−pNA（100mg、0.119ミリ
モル）にTFA（2ml）を加え、氷浴中10分間冷却した。次
に氷浴をとり、溶液をさらに10分間撹拌した。TLCで出
発物質が認められなかったので、溶液を減圧下（オイル
ポンプ）濃縮した。Et2O（150ml）で濾液が中性のpHに
なるまで洗浄し、減圧下乾燥して粉末のDpa−Pip−Arg
−pNA・2TFAを92mg（90％）得、これの保持時間はRp H
PLC（pep−Ｓ ４×250mm、35−70％MeCN＋0.1％TFA）
で15.5分であった。
（ｄ） Boc−Ｄ−Nal−Pip−Arg−pNA Boc−Ｄ−Nal（150mg、0.474ミリモル）のDMF（5ml）
溶液にTBTU（164mg、0.51ミリモル、1.05当量）およびD
IPEA（.083ml、0.474ミリモル、１当量）を加えた。Pip
−Arg−pNA・TFA（285mg、0.474ミリモル、１当量）を
次に加えた。30分後にサカグチ試薬（８−ヒドロキシキ
ノリン、Br2、NaOH）を用いたTLCに供すると、大部分が
出発物質であることが認められたので、DIPEA（0.083m
l、１当量）を加えた。30分後のTLCで大部分が出発物質
であったので、反応物をEtOAc（50ml）で希釈し、HCl
（0.5N、100ml）で洗浄した。有機相を乾燥し（MgS
O4）、濃縮し油状物質（490mg）を得た。CHCl3/石油エ
ーテル、沸点60−80℃/Et2Oから再結晶し、粉末のBoc−
Dpa−Pip−Arg−pNA・TFAを90mg（収率20.1％）を得
た。
（ｅ） Ｈ−Ｄ−Nal−Pip−Arg−pNA・2TFA 固体のBoc−Ｄ−Nal−Pip−Arg−pNA・TFA（50mg、0.
055ミリモル）に、氷浴中で冷却しながらTFA（2ml）を
加え、撹拌した。10分後に氷浴をとり、30分後のTLCで
はまだいくらか出発物質が認められたので、溶液をさら
に10分間撹拌し、次に濃縮した（オイルポンプ）。Et2O
で粉砕して粉末にした。粉末は、溶出液が中性になるま
でEt2Oで洗浄し、室温で一晩乾燥して、粉末のＨ−Ｄ−
Nal−Pip−Arg−pNAを42mg、92％生成した。Rp HPLCで
の保持時間は11.5分であった。
実施例13 以下の化合物は、実質的に実施例2a−2eで概要を述べ
た系路で製造した： 実施例14 以下の化合物は実質的に実施例2a−2dに準じて合成し
た： Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−EpgP（OPh）２ 87％ Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−CpgP（OPh）２ 67％ Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−PypgP（OPh）２ 35％ Ｚ−Ｄ−β−Nal−Pro−MpgP（OPh）２ 32％ 実施例15 以下の化合物は実施例2aおよび2bに準じて合成した： MTyP（OPh）２ 実施例16 以下の化合物は実質的に実施例2fに準じて合成した： Ｄ−Phe−Pro−PygP（OPh）２ Ｄ−Phe−Pro−AegP（Boc）（OPh）２ Ｄ−Phe−Pro−NpgP（OPh）２ 実施例17 以下の化合物は実質的に実施例6a−6cに準じて合成し
た： ４ D,L−Dpa−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip ５ Ｄ−Phe−Pro−Gpa−−Ｋ−−Gly−Pip 81.2％ N
mr,FABMs,融点110−114. ６ Ｄ−Dpa−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 74.5％ N
mr,FABMs,融点146−151. ７ Ｌ−Dpa−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 42.7％ N
mr,FABMs,融点136−140. ８ Ｄ−Fgl−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 81.3％ N
mr,FABMs, ９ D,L−α−Nal−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 81％
Nmr,FABMs,融点123−127. 14 D,L−β−Nal−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 55％
FABMs. 54 Ｄ−β−Nal−Pro−Arg−−Ｋ−−Gly−Pip 41％
FABMs. 実施例18 以下の化合物は実質的に実施例10に準じて合成した： 33 Z−Ｄ−Phe−Pro−Pgl−Ｈ 99.0％ Nmr,FabMs［Ｍ
＋Ｈ］508.7％ 48 Z−Ｄ−Dpa−Pro−Pgl−Ｈ 定量的 Nmr,FabMs［Ｍ
＋Ｈ］584,35％ 53 Boc−Ｄ−Phe−Pro−His−Ｈ 90％ Nmr,FabMs［Ｍ
＋Ｈ］484 Ｚ−Ｎ−Me−Phe−Pro−Pgl−NMe（OMe） 実施例19 以下の化合物は実質的に実施例11に準じて合成した： 34 Ｈ−Ｄ−β−Nal−Pip−Arg−pNA 90.6％ Nmr 35 Ｈ−D,L−Dpa−Pip−Arg−pNA 82％ Nmr Ｈ−Ｄ−Phe−Pro−Phe−pNA 実施例20 以下の化合物は実質的に実施例４に準じて合成した： 22 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroMbg−Opin 89 Nmr 41 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroPhe−OPinac 68.6％ Nmr 59 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroMbg−OPin 90％ Nmr 実施例21 以下の化合物は実質的に実施例４に準じて合成した： 10 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroAcet−OPinac 42％ Nmr 11 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroPgl−OPinac 41.5％ Nmr 39 Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−BoroMpg−OPin 43 Ｚ−Ｄ−Phe−Pro−BoroOct−OPinac 77％ Nmr 51 Ｚ−Ｄ−Dpa−Pro−BoroMpg−OPin 定量的 Nmr 実施例22 以下の化合物は実質的に実施例3aおよび3bに準じて合
成した： 12 Z−Ｄ−Dpa−Pro−BoroIrg−OPin 61％ Nmr,FABMs
［Ｍ］780,13％ 26 Z−Ｄ−β−Ng1−Pro−BoroIrg−OPin 41.8％ Nm
r,FABMs［Ｍ＋Ｈ］755,10％． 36 Z−Ｄ−Fgl−Pro−BoroIrg−OPin 49％ Nmr,FABMs
［Ｍ＋Ｈ］778,11％． 37 Ac−Ｄ−Dpa−Pro−BoroIrg−OPin 8.1％ Nmr,FAB
Ms［Ｍ＋Ｈ］689,14％． 38 Z−Ｌ−Dpa−Pro−BoroIrg−OPin 39％ Nmr,FABMs
［Ｍ＋Ｈ］781,12％． 46 Z−Ｄ−Cha−Pro−BoroIrg−OPin 41％ Nmr,FABMs
［Ｍ＋Ｈ］711,10％． 46 Z−Ｄ−Cha−Pro−BoroIrg−OPin 41％ Nmr,FABMs
［Ｍ＋Ｈ］711,10％． 反応式１ アミノ酸Dpa、NalおよびFgl並びにProおよび
Pro−Argとのジ−およびトリ−ペプチドの合成 反応式２ ケトメチレン−イソステリック阻害剤の合成 反応式３ アミノホスホン酸阻害剤の合成 血漿トロンビン時間 クエン酸処理した正常ヒト血漿150μ容量および緩
衝液または試料20μを37℃で一時間加温した。用時調
製したウシトロンビン（5NIHu/ml生理食塩水）150μ
を添加すると凝固が始まり、凝固計で凝固時間を測定し
た。
0.1％ウシ血清アルブミンおよび0.02％アジ化ナトリ
ウムを含有するリン酸緩衝液を用いた。試料をDMSOに溶
解し、緩衝液で希釈した。阻害剤を使用しない場合は、
DMSOを緩衝液に加えて試料で用いたのと同じ濃度にし
た。阻害剤濃度を半対数グラフでトロンビン時間に対し
てプロットし、ここからトロンビン時間を２倍にする
（40秒）阻害剤濃度を決定した。
Kiの決定 ヒトα−トロンビンの阻害を、三段階濃度の色素原基
質S02238の酵素触媒加水分解の阻害により決定した。
試料または緩衝液200μおよびS00238 50μを37
℃で１分間恒温培養し、ヒトα−トロンビン（0.25NIHu
/ml）50μを加えた。阻害および非阻害反応の初期速
度を405nmで測定した。光学密度の増加をラインウィー
バーおよびバークの方法に準じてプロットした。Kmおよ
び見かけのKmを決定し、以下の関係式を用いてKiを算出
した： 心臓血管系に及ぼす効果 体重２−3kgのネコを、ネブマールを腹膜腔内注射し
て麻酔した。大腿動脈にカテーテルを挿入し、中心血圧
および心拍数をグラス・ポリグラフで記録した。
Kmの決定 基質とヒトα−トロンビンとのKmを、基質を一連に希
釈したときの吸収を測定して決定した（ロングマン・サ
イエンティフィック・アンド・テクニカル第５版753頁
（1989年））。
イン・ビトロ試料の活性化部分トロンボプラスチン時間
（APTT）の決定 クエン酸処理（3.2％）した正常ヒト血漿150μ容量
を試料（20μ）または緩衝液（20μ、対照）と共に
37℃で１時間恒温培養した。この溶液に再構成した「自
動化APTT」（オルガノン・テクニカより入手可能、0.1m
l）を加えた。各溶液を37℃で５分間活性化した。
活性化した後、塩化カルシウム（0.1ml、0.025M、予
め37℃に加温）を加え、「半自動凝固計」（ナック、シ
ュニクター・ウント・グロス）を用いて凝塊検出時間を
測定した。
イン・ビボ毒性試験結果 G.R.メイ、C.M.ヘロ、K.D.バトラー、C.P.ページ、ジ
ャーナル・オブ・ファーマコロジカル・メソッズ24巻１
−35頁（1990年）に記載される概要のとおり、111イン
ディウム−標識化血小板の沈澱を、ニュージーランド白
色ウサギの耳辺縁血管のカニーラを介して1mg/kgを静脈
内投与した後に監視した。末梢血圧を、頚動脈の圧力検
知機により監視した。
エクソ−ビボAPTT、TT 頚動脈のカニューレから麻酔したニュージーランド白
色ウサギの耳辺縁血管に1mg/kgを静脈内ボーラス注射し
た後、０、１、10、30および60分に得られた血漿試料を
用いて、イン・ビトロ試験を行った結果が得られた。
引用文献 1.クリーソン,G.およびオーレル,L、アナルス・オブ・
ニューヨーク・アカデミー・オブ・サイエンス370巻79
−811頁（1981年）。
2.バジュスツ,S.、バラバス,E.、トルネイ,P.ら、イン
ターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプチド・アンド
・プロテイン・リサーチ12巻217−221頁（1978年）。
3.ケトナー,C.およびショー,E.、トロンボシス・リサー
チ14巻969−973頁（1979年）。
4.スゲルケ,M.およびジョーンズ,D.M.、米国特許第4638
047−Ａ号。
5.ケトナー,C.およびシエニビー,A.B.、欧州特許出願第
293881号（1988年）。
6.スチューバー,W.、コシナ,H.およびハイムバーガー,
N.、インターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプチド
・アンド・プロテイン・リサーチ31巻63−70頁（1988
年）。
7.カイザー,B.ハウプトマン,J.およびマークバート,
F.、ディー・ファルマシー42巻119−121頁（1987年）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 クレッソン、ゲラン・カール イギリス国エスイー21 ７エイチアール ロンドン、ダルウィッチ、グレート・ ブローニングス 88番 (72)発明者 シェング、リーフェング イギリス国オーエックス２ ６エックス エル オックスフォード、スタバート ン・ロード、カッレッジ・アネックス フラット８ （番地の表示なし) (72)発明者 茅野 直良 大阪府豊能郡豊能町新光風台２―13―９ (72)発明者 エルゲンディ、セッド・モハメッド・ア ンワー イギリス国エヌ１ ０エイチイー ロン ドン、バーンズバリー・エステート、コ ーベット・ハウス 17番 (72)発明者 スカリー、マイクル・フィンバー イギリス国シーエム11 ２エックスエヌ エセックス、クレイズ・ヒル、ダグラ ス・ハウス （番地の表示なし) (56)参考文献 特開 昭60−146900（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07K 5/00 - 5/08 A61K 38/55 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (6)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】式 ［式中、 ＸはＨ、CH3またはＮ保護基である； ＹはC3−C9アルキル（ただし、−CH（CH3）２を除く）
    またはC1−C4アルコキシ置換C3−C9アルキルである； Z1はBR1R2（ここで、R1とR2はそれぞれOHまたは一緒に
    なってジオール残基を表す。）である］ で表されるペプチド。
  2. 【請求項２】R1とR2がそれぞれOHである、請求項１に記
    載のペプチド。
  3. 【請求項３】R1とR2が一緒になってピナコール残基また
    はピナンジオール残基を表す、請求項１に記載のペプチ
    ド。
  4. 【請求項４】Ｘがベンジルオキシカルボニルである、請
    求項１〜３のいずれかに記載のペプチド。
  5. 【請求項５】Ｙがメトキシプロピルである、請求項１〜
    ４のいずれかに記載のペプチド。
  6. 【請求項６】Cbz−Ｄ−Phe−Pro−BoroMpg−Opin、すな
    わちＸがベンジルオキシカルボニルであり、Ｙがメトキ
    シプロピルであり、Z1が である、請求項１記載のペプチド。
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