HU224427B1 - Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk - Google Patents
Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk Download PDFInfo
- Publication number
- HU224427B1 HU224427B1 HU9601528A HUP9601528A HU224427B1 HU 224427 B1 HU224427 B1 HU 224427B1 HU 9601528 A HU9601528 A HU 9601528A HU P9601528 A HUP9601528 A HU P9601528A HU 224427 B1 HU224427 B1 HU 224427B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ethoxycarbonyl
- mmol
- prolyl
- arg
- pro
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 title description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 63
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims abstract description 43
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 20
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 13
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims abstract description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 23
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 15
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract description 4
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 189
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 180
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 74
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 63
- 239000000047 product Substances 0.000 description 61
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 57
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 57
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 53
- 238000002143 fast-atom bombardment mass spectrum Methods 0.000 description 53
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 52
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 51
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- -1 4-methylpentanoyl Chemical group 0.000 description 46
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 45
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 38
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 35
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 35
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 33
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 33
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 30
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 29
- CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobenzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 CWNPOQFCIIFQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 25
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 23
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 21
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 21
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 21
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 19
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 19
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 19
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 19
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 18
- LVCPRLFCRFDKSQ-ULQDDVLXSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[[(2s)-1-[(2s)-2-(methylamino)-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanoic acid Chemical compound C([C@H](NC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 LVCPRLFCRFDKSQ-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 17
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 17
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 16
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 16
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 14
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 14
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 14
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 14
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 13
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 13
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 13
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 13
- JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanimidamide Chemical compound NC(=N)CC1=CC=CC=C1 JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108010019228 N-methylphenylalanyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 12
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 12
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 12
- LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-trichlorophenol Chemical compound OC1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl LHJGJYXLEPZJPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 10
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 10
- PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N cyclohexylamine Chemical compound NC1CCCCC1 PAFZNILMFXTMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 9
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 9
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 9
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 9
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- WEVKQMBWAPJFSP-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;2-pyridin-2-ylacetic acid;hydrate Chemical compound O.CCOC(C)=O.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 WEVKQMBWAPJFSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 9
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 8
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 8
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 7
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 7
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 5
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-CRCLSJGQSA-N D-allo-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 5
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 5
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 102100030951 Tissue factor pathway inhibitor Human genes 0.000 description 4
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 4
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 4
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 108010013555 lipoprotein-associated coagulation inhibitor Proteins 0.000 description 4
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- NTUPOKHATNSWCY-PMPSAXMXSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 NTUPOKHATNSWCY-PMPSAXMXSA-N 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 3
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 3
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 108010089198 phenylalanyl-prolyl-arginine Proteins 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 3
- 229940019333 vitamin k antagonists Drugs 0.000 description 3
- AUJIFNQJUIBIPX-CQSZACIVSA-N (2,4,5-trichlorophenyl) (2r)-2-(methoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoate Chemical compound C([C@@H](NC(=O)OC)C(=O)OC=1C(=CC(Cl)=C(Cl)C=1)Cl)C1=CC=CC=C1 AUJIFNQJUIBIPX-CQSZACIVSA-N 0.000 description 2
- YUBBGLSAFZJOMD-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-(ethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CCOC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YUBBGLSAFZJOMD-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- WJYLMMNPQWEDQG-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-(ethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC(C)C WJYLMMNPQWEDQG-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 2
- GASYZCCGZHDEEC-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-(ethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](C(O)=O)NC(=O)OCC GASYZCCGZHDEEC-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 2
- LJCBAPRMNYSDOP-LVCYMWGESA-N (2s)-3-(7-carbamimidoylnaphthalen-2-yl)-2-[4-[(3s)-1-ethanimidoylpyrrolidin-3-yl]oxyphenyl]propanoic acid;hydron;chloride;pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.Cl.C1N(C(=N)C)CC[C@@H]1OC1=CC=C([C@H](CC=2C=C3C=C(C=CC3=CC=2)C(N)=N)C(O)=O)C=C1 LJCBAPRMNYSDOP-LVCYMWGESA-N 0.000 description 2
- SJSSFUMSAFMFNM-NSHDSACASA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SJSSFUMSAFMFNM-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- ZYECEUZMVSGTMR-LBDWYMBGSA-N (4s)-4-[[(2s,3s)-2-benzamido-3-methylpentanoyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound N([C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZYECEUZMVSGTMR-LBDWYMBGSA-N 0.000 description 2
- GQCOIAKOAJNDFT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound CCCCC(C(O)=O)NC(=O)OCC GQCOIAKOAJNDFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 5-oxoproline Chemical compound OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 2
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N D-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical group CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 206010062506 Heparin-induced thrombocytopenia Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 description 2
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 235000015107 ale Nutrition 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 2
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N benzo-alpha-pyrone Natural products C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010031969 benzoyl-Ile-Glu-Gly-Arg-p-nitroanilide Proteins 0.000 description 2
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 2
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical compound OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007820 coagulation assay Methods 0.000 description 2
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 2
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 2
- ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N cyclohexyl D-alanine Natural products OC(=O)C(N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MVEAAGBEUOMFRX-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCOC(C)=O MVEAAGBEUOMFRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- XMJHPCRAQCTCFT-UHFFFAOYSA-N methyl chloroformate Chemical compound COC(Cl)=O XMJHPCRAQCTCFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- UDVBTTICUXAATP-BXXIVHCWSA-N (2R)-2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](N)C(O)=O.CCCC[C@@H](N)C(O)=O UDVBTTICUXAATP-BXXIVHCWSA-N 0.000 description 1
- RDFMDVXONNIGBC-ZCFIWIBFSA-N (2R)-aminoheptanoic acid Chemical compound CCCCC[C@@H](N)C(O)=O RDFMDVXONNIGBC-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- FBVVGPMIPAZFAW-RZVRUWJTSA-N (2S)-pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 FBVVGPMIPAZFAW-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- QGICDLYPUUZBIV-SECBINFHSA-N (2r)-2-(methoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QGICDLYPUUZBIV-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- SCIFESDRCALIIM-SECBINFHSA-N (2r)-2-(methylazaniumyl)-3-phenylpropanoate Chemical group CN[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-KRSQWWHXSA-N (2r)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-KRSQWWHXSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-MRVPVSSYSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-cyclohexylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- AKVBCGQVQXPRLD-SSDOTTSWSA-N (2r)-2-azaniumyloctanoate Chemical compound CCCCCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O AKVBCGQVQXPRLD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- KUNFMZSTKSLIEY-NWKMIUOTSA-N (2r)-2-azanyl-3-phenyl-propanoic acid Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 KUNFMZSTKSLIEY-NWKMIUOTSA-N 0.000 description 1
- BRHPBVXVOVMTIQ-BXXIVHCWSA-N (2r)-2-azanyl-4-methyl-pentanoic acid Chemical group CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O.CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O BRHPBVXVOVMTIQ-BXXIVHCWSA-N 0.000 description 1
- KWPACVJPAFGBEQ-IKGGRYGDSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-n-[(3s)-1-chloro-6-(diaminomethylideneamino)-2-oxohexan-3-yl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)CCl)C1=CC=CC=C1 KWPACVJPAFGBEQ-IKGGRYGDSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUNMBRGCANLOEG-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloroacetone Chemical class ClCC(=O)CCl SUNMBRGCANLOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylbutane Chemical group CC(C)C(C)C ZFFMLCVRJBZUDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GPWNWKWQOLEVEQ-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminopyrimidine-5-carbaldehyde Chemical compound NC1=NC=C(C=O)C(N)=N1 GPWNWKWQOLEVEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQLGGQARRCMYGD-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclobutylamino)acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC1CCC1 KQLGGQARRCMYGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical compound CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVWIZXOHRHIIRE-UHFFFAOYSA-N 5-cyclooctylimidazolidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)NC1C1CCCCCCC1 SVWIZXOHRHIIRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 206010048632 Atrial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- GBHKPEUYFYTIOM-DGPROHSZSA-N CCC[C@@H](N)C(O)=O.CCC[C@@H](N)C(O)=O Chemical compound CCC[C@@H](N)C(O)=O.CCC[C@@H](N)C(O)=O GBHKPEUYFYTIOM-DGPROHSZSA-N 0.000 description 1
- XDDMZVMWZMSAMX-MXARUBIBSA-N CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O.CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O Chemical group CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O.CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O XDDMZVMWZMSAMX-MXARUBIBSA-N 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N Chloroacetyl chloride Chemical compound ClCC(Cl)=O VGCXGMAHQTYDJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N D-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003182 D-alloisoleucine group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-SSDOTTSWSA-N D-alpha-phenylglycine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 229930182845 D-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-RXMQYKEDSA-N D-norleucine Chemical group CCCC[C@@H](N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 125000001711 D-phenylalanine group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 1
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-Glutamic acid Natural products OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- 108010084967 LY 294291 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOVSNECFFPLHQV-HFEGYEGKSA-N N[C@H](C1=CC=CC=C1)C(=O)O.N[C@H](C1=CC=CC=C1)C(=O)O Chemical compound N[C@H](C1=CC=CC=C1)C(=O)O.N[C@H](C1=CC=CC=C1)C(=O)O NOVSNECFFPLHQV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710184612 Protein slit Proteins 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 description 1
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N acenocoumarol Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 VABCILAOYCMVPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 150000003855 acyl compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003698 antivitamin K Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- UKXSKSHDVLQNKG-UHFFFAOYSA-N benzilic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(O)(C(=O)O)C1=CC=CC=C1 UKXSKSHDVLQNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000010523 cascade reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N chloroform;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.ClC(Cl)Cl OAIVIYSBZFEOIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N ctk5a5089 Chemical group NCC(O)=O.NCC(O)=O GICLSALZHXCILJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGBFRCHGZFHSBC-UHFFFAOYSA-N cycloheptanecarbaldehyde Chemical compound O=CC1CCCCCC1 UGBFRCHGZFHSBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IGGUWVNICWZJQU-UHFFFAOYSA-N cyclooctanecarbaldehyde Chemical compound O=CC1CCCCCCC1 IGGUWVNICWZJQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 108010073651 fibrinmonomer Proteins 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013038 irreversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- DCAOZQUVCLZCNB-YYVQYPFISA-N n-cyclohexylcyclohexanamine;(2r)-2-(methoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1.COC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DCAOZQUVCLZCNB-YYVQYPFISA-N 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 230000018341 negative regulation of fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 208000009928 nephrosis Diseases 0.000 description 1
- 231100001027 nephrosis Toxicity 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000031915 positive regulation of coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- IVRIRQXJSNCSPQ-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl carbonochloridate Chemical compound CC(C)OC(Cl)=O IVRIRQXJSNCSPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QQKDTTWZXHEGAQ-UHFFFAOYSA-N propyl carbonochloridate Chemical compound CCCOC(Cl)=O QQKDTTWZXHEGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004742 propyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000013037 reversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012622 synthetic inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108010065972 tick anticoagulant peptide Proteins 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- PKIDNTKRVKSLDB-UHFFFAOYSA-K trisodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O PKIDNTKRVKSLDB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát (I) általános képletű új peptidszármazékok –Q-D-Xaa-Pro-Arg-H (I) ahol Q jelentése Q'–O–CO– képletűacilcsoport, mely képletben Q' jelentése 1–3 szénatomszámúalkilcsoport, D-Xaa jelentése NH–CH(R)–CO képletű D-aminosav-gyök,ahol R jelentése 3–6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncúalkilcsoport, 7–8 szénatomszámú cikloalkilcsoport vagy ciklohexil-metil-csoport, Pro jelentése L-prolin-gyök és Arg jelentése L-arginin-gyök – és ezek szerves vagy szervetlen savval képzett savaddíciós sói,valamint a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítményekképezik. A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek értékesgyógyászati, közelebbről véralvadást és vérlemezke- funkciót, valaminttrombózisképződést gátló hatással rendelkeznek.
Description
A találmány tárgyát (I) általános képletű új peptidszármazékok Q-D-Xaa-Pro-Arg-H (I) ahol
Q jelentése Q’-O-CO- képletű acilcsoport, mely képletben
Q’ jelentése 1-3 szénatomszámú alkilcsoport, D-Xaa jelentése NH-CH(R)-CO képletű D-aminosav-gyök, ahol R jelentése 3-6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, 7-8 szénatomszámú cikloalkilcsoport vagy ciklohexil-metil-csoport,
Pro jelentése L-prolin-gyök és
Arg jelentése L-arginin-gyök és ezek szerves vagy szervetlen savval képzett savaddiciós sói, valamint a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények képezik.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek értékes gyógyászati, közelebbről véralvadást és vérlemezke-funkciót, valamint trombózisképződést gátló hatással rendelkeznek.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek különösen értékes képviselői az alábbiak: etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolil-L-arginin-aldehid, etoxi-karbonil-D-ciklohexil-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid, valamint a fenti vegyületek savaddíciós (elsősorban hidrogén-szulfát-) sói.
Definíciók
A leírásban szereplő aminosavak és szubsztituensek, valamint az ezekből felépített peptidek rövidítése megfelel a peptidkémiai irodalomban szokásos jelöléseknek.
Aminosavak: D-Ale=D-alloizoleucin [(2R,3S)-2amino-3-metil-pentánsav], Arg=L-arginin [(2R)-2amino-5-guanidino-pentánsav], Asp=L-aszparaginsav [(2S)-2-amino-3-karboxi-propionsavj, boroArg=L-boro-arginin [(1 R)-1-amino-4-guanidino-butil-bórsav], D-Cha=D-ciklohexil-alanin ](2R)-2-amino-3-ciklohexil-propionsav], D-Chg=D-ciklohexil-glicin, D-cHpg=Dcikloheptil-glicin [(2R)-2-amino-2-cikloheptil-ecetsavj, D-cOcg=D-ciklooktil-glicin [(2R)-2-amino-2-ciklooktil-ecetsav], Gla=gamma-karboxi-L-glutaminsav [(2S)2-amino-4,4-dikarboxi-vajsav], Glu=L-glutaminsav [(2S)-2-amino-4-karboxi-vajsavj, Glp=L-piroglutaminsav [(2S)-pirrolidon-5-karbonsavj, Gly=glicin (2-amino-ecetsav), D-Hxg=D-hexil-glicin [(2R)-2-amino-oktánsav], D-lle=D-izoleucin [(2R,3R)-2-amino-3-metil-pentánsav], D-Leu=D-leucin [(2R)-2-amino-4-metil-pentánsav], D-MePhe=N-metil-3-fenil-D-alanin [(2R)-2-metil-amino-3-fenil-propionsavj, D-MePhg=DN-metil-fenil-glicin [(2R)-2-amino-2-fenil-ecetsavj, Nal( 1 )=3-(naftil-1 )-L-alanin [(2S)-2-amino-3-(naftil-1 )-propionsav], D-Nle=D-norleucin j(2R)-2-aminohexánsav], D-Nva=D-norvalin [(2R)-2-amino-pentánsav], D-Pgl=D-pentil-glicin [(2R)-2-amino-heptánsavj, D-Phe=3-fenil-D-alanin [(2R)-2-amino-3-fenil-propionsav], D-Phg=D-fenil-glicin [(2R)-2-amino-2-fenilecetsav], Pro=L-prolin [(2S)-pirrolidin-2-karbonsav], D-Val=D-valin [(2R)-2-amino-3-metil-vajsavj. Szubsztituensek: Ac=acetil, Boc=íerc-butoxi-karbonil, Bz=benzoil, Eoc=etoxi-karbonil, Et=etil, iPoc=izopropoxi-karbonil, Me=metil, 4MeP=4-metil-pentanoil, Moc=metoxi-karbonil, pNA=p-nitro-fenil-amino, Poc=propoxi-karbonil, Tos=p-toluolszulfonil, Z=benzil-oxi-karbonil.
Peptidek és származékaik: Az aminosavrövidítések önmagukban az L-aminosavat jelölik. A D-aminosavat külön jelöljük, például a D-fenil-alanin=D-Phe. Az aminosavrövidítések előtt és után álló kötőjel azt jelzi, hogy az aminocsoportról egy H-atom, illetve a karboxilcsoportról egy OH-csoport hiányzik. Ennek megfelelően az Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H jelentése etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid, a Bz-lle-Glu-GlyArg-pNA jelentése pedig benzoil-L-izoleucil-L-glutamilglicil-L-arginin-p-nitro-anilid.
A véralvadás a szervezet védekezőmechanizmusának része. Érfalsérülés hatására indul el a folyamat, véralvadék keletkezik, hogy meggátolja az elvérzést. Emellett az ér betegsége, a vér pangása és az alvadási faktorok kóros aktiválódása is kiválthatja a véralvadást. Ilyenkor az éren belül keletkezik vérrög (trombus), ami azt részben vagy egészen eltörni, trombózis lép fel. A védekezőmechanizmus másik része a fibrinolízis. Az ebben működő enzimek végzik a véralvadék feleslegének eltávolítását, és ezek vesznek részt a trombolízisben, a trombus oldásában is.
A véralvadás folyamata egy katalizált enzimreakció-sorozat, kaszkádreakció, amelyben plazmafehérjék, az úgynevezett alvadási faktorok aktiválódnak egymás után. A faktorokat római számokkal jelölik, az aktív formára a betű utal. Néhányuk esetében a triviális név (is) használatos: például fibrinogén=l faktor (fi), fibrin=la faktor (fia), protrombin=ll faktor (fii) és trombin=lla faktor (flla). Az alvadás során keletkeznek szerin-proteázok (fXlla, fVlla, fXIa, fIXa, fXa és trombin), néhány gyorsító kofaktor (fVa és fVllla), és maga az alvadó anyag (fibrin). A keletkező proteázok sorában a fXa és a trombin a két utolsó. A fXa hatására képződik a trombin, ami a fibrinogén hasításával kialakítja a fibrinalvadékot.
A véralvadás korábbi mechanizmusa [R. G. MacFarlane: Natúré 202, 498 (1964); E. W. Davie és O. D. Ratnoff: Science 145, 1310 (1964)] szerint a fX aktiválása két úton, az úgynevezett belső vagy külső úton történik. Az előbbi esetben a valamilyen felületen aktiválódott fXII (fXlla) indítja el a folyamatot a fXI—>fXla átalakítással, amit a fIX >flXa átalakulás követ; a fX aktiválását a fIXa végzi. A külső úton egy sejtfelszíni receptor, a szöveti faktor (TF, tissue factor) megjelenésével és a [fVIITF], illetve [fVlla-TF] komplex kialakulásával indul a folyamat. A fX aktiválását a [fVlla- TF] komplex végzi.
Az újabb eredmények szerint az élő szervezetben lejátszódó véralvadás a fentiek kombinációja [E. W.
HU 224 427 Β1
Davie és munkatársai: Biochemistry 43, 10 363 (1991)], és a fontosabb lépései az alábbiak.
1. Az érfal sérülése vagy betegsége esetén a TF a felszínre kerül, és megköt valamennyit a vérben lévő VII faktorból. A képződött [fVII-TF] komplex egy alkalmas, és legalább nyomnyi mennyiségben jelen lévő proteáz (például fXlla, fXa, fIXa és trombin) hatására átalakul az aktív [fVlla-TF] enzimkomplexszé, ami aktiválja a plazmában lévő IX és X faktor kis részét (keletkezik kevés fIXa és fXa), majd inaktiválódik a TFPI [Tissue Factor Pathway Inhibitor, korábbi nevén LACI (Lipoprotein-Associated Coagulation Inhibitor)] hatására, ami a plazmában a fXa és a [fVlla-TF] komplex közös inhibitora [T. J. Girard és munkatársai: Natúré, 338, 518-520 (1989)].
2. A keletkezett fIXa a X faktorral és a fVllla gyorsítómolekulával foszfolipid- (PL) felületen, Ca++-ion jelenlétében létrehozza az úgynevezett „tenase” komplexet: [flXa fVllla fX PL Ca++], amiben a fX aktiválódik, keletkezik a fXa.
3. Az eddig keletkezett fXa a protrombinnal (fii) és a fVa gyorsítómolekulával kialakítja a „tenase”-hoz hasonló felépítésű úgynevezett protrombinázkomplexet: [fXa tVa fll PL Ca++]. Ebben megy végbe a protrombin->trombin átalakulás. A fV->fVa és fVIII—>fVllla átalakulást a fXa vagy a trombin tudja elvégezni.
4. A keletkezett kevés trombin átalakítja a fXI egy részét fXIa enzimmé, és aktivál valamennyit a Vili és V faktorból, hogy újabb fVllla, illetve fVa keletkezzen. Most már a fXIa végzi el a IX faktor átalakítását fIXa enzimmé. Ezzel újból elindulhat a Xáz-komplextől a trombin képződéséig vezető láncreakció. A folyamat ismétlődésével egyre több trombin keletkezik.
5. Kellően nagy trombinkoncentrációnál következik be a plazmában oldott fibrinogén részleges proteolízise, a fibrinmonomer képződése, ami előbb az úgynevezett oldható fibrinpolimerré asszociálódik, majd átalakul az oldhatatlan fibrinpolimerré. Ez utóbbi átalakulásban is szerepet játszik a trombin, mivel ennek hatására keletkezik a polimerizációt végző fXllla [L. Lorand és K. Konishi: Arch. Biochem. Biophys. 105, 58 (1964)].
Az oldhatatlan fibrinpolimer a véralvadék és a trombus egyik főkomponense, a másik összetevő a vérlemezke-aggregátum, mely ugyancsak a trombin hatására keletkezik elsősorban. A kialakuló trombus, illetve véralvadék magába zárja a folyamatban keletkezett trombin jelentős részét, ami újabb alvadási folyamatot indít el, amikor a trombus oldódása/oldása során oldatba kerül [A. K. Gash és munkatársai: Am. J. Cardiol. 57, 175 (1986)]; R. Kumar és munkatársai: Thromb. Haemost. 72, 713 (1994)].
A fentiekből kitűnik a trombin kulcsszerepe a trombus képződésében. Emiatt a trombózisos betegségek gyógyításában rendkívüli jelentőséggel bírnak az olyan anyagok, melyek a trombin működését és/vagy keletkezését gátolják.
A trombózis kezelésében és megelőzésében a jelenleg legelterjedtebben és legsikeresebben alkalmazott készítmények a heparinok és a K-vitamin-antagonista kumarinok (például Syncumar és Warfarin), melyek közvetve gátolják a trombint.
A heparin katalizálja a trombin és természetes inhibitora, az antitrombin-lll (ΑΤ-III) közötti reakciót. A heparin ezen hatása azonban elmarad, ha az ΑΤ-III plazmakoncentrációja a normális 75%-ánál kisebb [R. Egbring és munkatársai: Thromb. Haemost. 42, 225 (1979)]. Nem kevésbé fontos, hogy e közvetett mechanizmussal nem gátolható az említett trombus által kötött trombin, mert a heparin-AT-lll komplex számára nem hozzáférhető [J. I. Weitz és munkatársai: J. Clin. Invest. 86, 385 (1990)]. Mindemellett a kezelés hatására kialakuló vérzéses szövődmények, és immunkórfolyamat következtében kialakuló trombembóliás esetek előfordulása sem elhanyagolható [lásd például J. M. Walenga és munkatársai: Clin. Appl. Thrombosis/Hemostasis, 2(Suppl. 1), S21-S27 (1996)].
A K-vitamin-antagonisták orálisan is adhatók. Hatásuk 16-24 óra után jelentkezik, és abban nyilvánul meg, hogy meggátolják némely alvadási faktor (például a protrombin) reaktív, Gla-tartalmú formáinak kialakulását. A terápiás hatáshoz részleges (60-70%-os) gátlás szükséges [Μ. P. Esnouf és C. V. Prowse: Biochim. Biophys. Acta 490, 471 (1977)], ami a gyógyszer megfelelő adagolásával érhető el. A K-vitamin-antagonisták alkalmazását megnehezíti a keskeny terápiás sáv, valamint a táplálék összetételétől (K-vitamin) való nagyfokú függőség és a változó egyedi érzékenység.
A trombint közvetlenül gátló első nagy hatású szintetikus anyag a D-Phe-ProArg-H tripeptid-aldehid volt, amely egy reverzibilis inhibitor, és mind in vitro, mind in vivő jelentős alvadásgátló hatást mutatott [S. Bajusz és munkatársai: In: Peptides: Chemistry, Structure and Biology (R. Walter and J. Meienhofer, Eds.), Ann Arbor Publ., Ann Arbor, Michigan, USA, 1975, pp. 603-608; Int. J. Peptide Protein Rés. 12, 217 (1978)]. A D-Phe-Pro-Arg-H számos rokon vegyületét állították elő. Az elsők között volt a Boc-D-Phe-Pro-Arg-H [S. Bajusz és munkatársai: Int. J. Peptide Protein Rés. 12, 217 (1978)], valamint a klór-metil-keton-analóg (D-Phe-Pro-Arg-CH2CI), ami irreverzíbilis inhibitornak bizonyult (C. Kettner és E. Shaw: Thromb. Rés. 14, 969 (1979)]. A továbbiak közül kiemeljük a peptid és acilvegyületei boro-arginín-analógjait (D-Phe- és Boc-D-Phe-, valamint Ac-D-Phe-Pro-boroArg), melyek a trombin hatékony reverzibilis inhibitorai [C. Kettner és munkatársai: J. Bioi. Chem. 265, 18 289 (1990)] és a Boc-D-Phe-Pro-Arg-H egyéb analógjait, köztük a Boc-D-Chg-Pro-Arg-H analógot [P. D. Gesellchen és R. T. Shuman: EP 0 479 489 A2 (1992)].
Kitűnt, hogy a D-Phe-Pro-Arg-H vizes oldatban hajlamos spontán átalakulásra, de a terminális aminocsoport metilezésével kapott D-MePhe-Pro-Arg-H (GYKI-14 766) már megfelelően stabil és hasonlóan hatásos vegyület [S. Bajusz és munkatársai: 4,703,036 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás (1987); J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)]. Kísérleti állatokban jelentősen gátolja a véralvadást és trombusképződést [D. Bagdy és munkatársai: Thromb. Haemost. 67, 357 és 68, 125 (1992); J. V. Jackson és
HU 224 427 Β1 munkatársai: J. Pharm. Ex. Ther. 261, 546 (1992)]; a fibrinolízis enzimjeire gyakorolt gátlóhatása jelentéktelen, trombolitikumokkal együtt adva hatékonyan segíti a trombus oldódását [C. V. Jackson és munkatársai: J. Cardiovasc. Pharmacol. 21, 587 (1993)], amire a heparin-AT-lll komplex nem képes. A D-MePhe-Pro-Arg-H rokon vegyületeinek a szintézisére is sor került, például a D-MePhgPro-Arg-H előállítására [R. T. Shuman és munkatársai; J. Med. Chem. 36, 314 (1993)].
A véralvadásgátló hatást (a folyamat proteolitikus reakcióinak gátlását) az alvadási tesztekben mérik, például a trombin idő (TT-), aktivált parciális tromboplasztin idő (APTT-) és protrombin idő (PT-) tesztben (E. J. W. Bovie és munkatársai: Mayo Clinic Laboratory Manual of Hemostasis; W. B. Sanuders Co., Philadelphia, 1971). A spontán alvadásban gátolt plazmát, például citrátplazmát alvadásra késztetnek, és mérik az alvadási időt. Alvadásgátlók hatására az alvadási idő megnyúlik a rendszerben működő reakció(k) gátlásával arányosan. Az alvadásgátló hatás jellemezhető például azzal az anyagkoncentrációval, aminél az alvadási idő a kontroll kétszeresére nyúlik (IC50). Az alvadásgátlóknak az egyes alvadási proteázokra gyakorolt hatását pedig az úgynevezett amidolitikus módszerrel mérik [R. Lottenberg és munkatársai: Methods Enzymol. 80, 341 (1981); G. Cleason: Blood Coagulation and Fibrinolysis 5, 411 (1994)]. Az izolált aktív faktort (például trombin, fXa) és ennek kromogén vagy fluorogén peptid-amid-szubsztrátját reagáltatják az inhibitor távollétében, illetve jelenlétében. Az enzimgátló hatást például az amidolízisben mért gátlási állandóval (IC50) jellemzik.
A TT-tesztben a citrátplazmához adott trombin váltja ki az alvadást. A rendszerben működő trombin 22 pmol/ml, ennek gátlása mérhető jelen lévő fibrinogénen (a trombin egyik természetes szubsztrátján) - plazmakomponensek jelenlétében. Az APTT- és PT-tesztben az alvadási folyamat egésze zajlik. Az aktivátortól függően az úgynevezett belső, illetve külső úton aktiválódik a fX. A keletkező fXa a protrombint aktiválja trombinná, ami végül kiváltja a plazma alvadását. Az alvadási idő megnyúlik, ha az inhibitor gátolja a tesztekben működő enzimeket vagy ezek valamelyikét. Amíg a Xa faktorból legfeljebb 40 pmol/ml keletkezhet az APTTés PT-tesztben (ennyi X faktor van jelen a két rendszerben), a trombinból kb. 150 pmol/ml (APTT), illetve 350 pmol/ml (PT) képződik [vö. B. Kaiser és munkatársai: Thromb. Rés. 65, 157 (1992)].
A D-MePhe-Pro-Arg-H (C1) esetében a TT-, APTTés PT-tesztben a kétszeres alvadási időt eredményező koncentráció 87, 622, illetve 2915 nM. Ezek az értékek és a tesztekben működő trombin mennyisége (22, 150, illetve 350 pmol/ml) hasonlóan emelkedik, ami arra utal, hogy C1 az APTT- és PT-tesztben is trombingátlóként viselkedik, és például a fXa működését nem vagy alig befolyásolja. Ezzel összhangban van, hogy C1 IC50=2 nM értékkel gátolja a trombin amidolitikus hatását a Tos-Gly-Pro-Arg-pNA szubsztráton, míg a fXa amidolitikus hatását a megfelelő Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA szubsztráton csak kevéssé, IC50=9,1 μΜ értékkel gátolja (Bajusz S. és munkatársai: nem közölt eredmények).
A véralvadás mechanizmusából következik, hogy a folyamatot nemcsak a trombin közvetlen inhibitorai, de a trombin képződését akadályozó anyagok is gátolják, például a fXa inhibitorok. Jelentős véralvadást és trombusképződést gátló hatással rendelkező fXa inhibitor például a kullancsból izolált 60 tagú polipeptid, a TÁP (Tick Anticoagulant Peptide) [L. Waxman és munkatársai: Science 248, 593 (1990); A. B. Kelly és munkatársai: Circulation 86, 1411 (1992)] és a DX-9065a (C2), egy szintetikus nempeptid: (+)-(2S)-2-[4[[(3S)-1-acetimidoil-3-pirrolidinil]-oxi]-fenil]-3-[7-amidino-2-naftil]-propionsav-hidrogén-klorid-pentahidrát [T. Hara és munkatársai: Thromb. Haemost. 71, 314 (1994); T. Yokoyama és munkatársai: Circulation 92, 485 (1995)]. Ezek az anyagok erősen gátolják a fXa amidolitikus hatását és a plazma alvadását a PT- és APTT-tesztben. Vagyis egyaránt jól gátolják a szabad és a komplexben lévő Xa faktort. Ugyanakkor - mint specifikus fXa inhibitorok - a trombint nem gátolják, a TT-tesztben nem hatnak. A fXa szintetikus peptid inhibitora például a 4MeP-Asp-Pro-Arg-H (C3) (WO 93/15756 szám alatt publikált nemzetközi bejelentés) és a Boc-D-PheNal(1)-Arg-H (C4) (WO 95/13693 szám alatt publikált nemzetközi bejelentés). A közlés szerint C3 és C4 IC50=57, illetve 30 nM értékkel gátolja a fXa amidolitikus hatását a Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA szubsztráton; alvadásgátló hatásukra nincs adat. Saját méréseinkben Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA szubsztráton is jelentős gátlóhatást mutatott C3 és C4, míg alvadásgátló hatásuk a plazma alvadási tesztekben rendkívül kicsi. Az 1. táblázat mutatja a fenti szintetikus fXa inhibitorokra közölt (C2),, illetve kapott (C3-C4) aktivitási értékeket összehasonlításban a C1 trombingátló adataival.
1. táblázat
Ismert szintetikus inhibitorok Xa faktort gátló (A) és alvadásgátló (B) hatása
Inhibitor | A: IC50, nMb | 8: IC50, pMa | ||
PT | APTT | TT | ||
C1 | 9133 | 2,91 | 0,62 | 0,09 |
C2 | 70 | 0,52 | 0,97 | NAC |
C3 | 64 | 19,32 | 4,59 | 0,87 |
C4 | 86 | 53,62 | 9,96 | 17,24 |
a Peptidkoncentráció, melynél az alvadási idő a kontroll kétszeresére nyúlik a protrombin idő (PT-), aktivált parciális tromboplasztin idő (APTT-) és trombin idő (TT-) tesztben. b Izolált humán Xa faktorral Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA kromogén szubsztráton mért érték.
c NA=nem aktív.
A fenti adatokból látszik, hogy a PT- és APTT-tesztben észlelt alvadásgátló hatás C1 esetében trombingátlásra, C2-nél pedig fXa gátlására vezethető vissza. C3 és C4 jelentős fXa-gátló hatása azonban nem jár együtt számottevő alvadásgátlással. Valószínű, hogy C3 és C4 számára nem hozzáférhető a protrombinázkomplex4
HU 224 427 Β1 ben lévő fXa aktív centruma, ezek a peptidek csak a szabad, oldatban lévő Xa faktort képesek gátolni.
Újabb közlés szerint [N. A. Prager és munkatársai: Circulation 92, 962 (1995)] a trombusba/véralvadékba zárt, és az oldódás során onnan kiszabaduló alvadási 5 enzimek közül nemcsak a trombin, de a Xa faktor is hozzájárul az újabb alvadási folyamat elindításához és fenntartásához, például a [fVII TF] komplex, illetve az V és Vili faktor aktiválása révén. Előnyös tehát, ha az alvadásgátlók a trombin mellett a Xa faktor gátlására is 10 képesek, és különösen előnyös, ha e gátlóhatás az alvadókba zárt trombinra és Xa faktorra is kiterjed.
A találmány célja olyan új peptidszármazékok előállítása, melyek a véralvadás folyamatát az ismerteknél előnyösebben gátolják, és gátlóhatásuk orális adás 15 esetén is megnyilvánul.
Korábbi megfigyelésünk volt, hogy a Boc-DPhe-Pro-Arg-H (C5) alvadásgátló hatása a TT- és APTT-tesztben ugyan kisebb, mint a C1 tripeptid-aldehidé, de a PT-tesztben már valamivel aktívabb, és a Xa faktort pedig 10-szer kisebb IC50-értékkel gátolja, mint Cf. Most meglepő módon azt találtuk, hogy C5 Boc-csoportjának Eoc-csoporttal történő helyettesítése előnyösen módosítja a peptid alvadásgátló hatását, mert az ily módon előállt Eoc-D-Phe-Pro-Arg-H (C6) mindhárom tesztben nagyobb hatású, mint a C5, továbbá a C1 aktivitását már nemcsak a PT, de az APTT tesztben is meghaladja, miközben Xa faktort gátló hatása a C5 Boc-peptidéhez hasonló. A Moc-D-Phe-Pro-Arg-H (C7) alvadásgátló hatása a C6 Eoc-vegyületéhez hasonló, de Xa faktort gátló hatása valamivel nagyobb. Az elmondottakat a
2. táblázat szemlélteti.
2. táblázat
R1-D-Phe-Pro-Arg-H szerkezetű peptid-aldehidek alvadásgátló (A) és Xa faktort (B) gátló hatása
Peptid-aldehid | A: ICgo, pMa | B: IC50, pMb | |||
No. | R1 | TT | APTT | PT | |
Cf | Me | 0,09 | 0,62 | 2,93 | 9,13 |
C5 | Boc | 0,20 | 0,76 | 2,27 | 0,91 |
C6 | Eoc | 0,13 | 0,38 | 1,91 | 0,92 |
C7 | Moc | 0,20 | 0,29 | 1,96 | 0,13 |
a Peptidkoncentráció, melynél az alvadási idő a kontroll kétszeresére nyúlik.
b Izolált humán Xa faktorral Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA kromogén szubsztráton mért érték (lásd M6. módszer).
Azt találtuk továbbá, hogy még előnyösebb véralvadásgátló vegyületekhez jutunk, ha az N-terminálison lévő D-aminosav oldallánca 3-6 szénatomszámú alkilcsoport vagy 7-8 szénatomszámú cikloalkilcsoport. Különösen előnyösnek találtuk azon (I) általános képletű vegyületeket, amelyekben Q’ jelentése 1-3 szénatomszámú alkilcsoport, D-Xaa jelentése NH-CH(R)-CO képletű D-aminosav-gyök, ahol R jelentése 3-6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport.
A fentiek alapján a találmány tárgyát (I) általános képletű új peptidszármazékok Q-D-Xaa-Pro-Arg-H (I) ahol
Q jelentése Q’-O-CO- képletű acilcsoport, mely képletben
Q’ jelentése 1-3 szénatomszámú alkilcsoport, D-Xaa jelentése NH-CH(R)-CO képletű D-aminosav-gyök, ahol R jelentése 3-6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, 7-8 szénatomszámú cikloalkilcsoport vagy ciklohexil-metil-csoport,
Pro jelentése L-prolin-gyök és
Arg jelentése L-arginin-gyök és ezek szerves vagy szervetlen savval képzett savaddíciós sói, valamint a fenti vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények képezik.
A találmány tárgyát képező (I) általános képletű 35 mely képletben Q, Q’, valamint D-Xaa, Pro és Arg jelentése a fenti - vegyületek előállításánál például úgy járunk el, hogy egy Q-D-Xaa-Pro acil-dipeptidet kondenzálunk guanidinocsoportján benzil-oxi-karbonil-csoporttal védett L-arginin-laktámhoz, majd a kapott védett tripeptid-laktámot Q-D-Xaa-Pro-Arg(Z)-H képletű védett tripeptid-aldehiddé redukáljuk, végül az arginin guanidinocsoportjáról a Z-csoportot hidrogenolízissel eltávolítjuk, és az (I) általános képletű peptidszármazékot valamilyen szerves vagy szervetlen savaddíciós só formájában elkülönítjük.
A kiindulási vegyületként alkalmazott új Q-DXaa-Pro acil-dipeptidet például úgy állítjuk elő, hogy a megfelelő D-Xaa aminosavat bázikus közegben klór-szénsav valamely Q' alkil-észterével acilezünk, majd a kapott Q-D-Xaa acil-aminosavat L-prolinhoz kapcsoljuk.
Az L-prolinnal való kapcsoláshoz szükséges Q-D-Xaa acil-aminosavat előnyösen úgy állítjuk elő, hogy a DL-Xaa racém vegyületet acilezzük és me55 til-észterré alakítjuk, majd a kapott Q-DL-Xaa-OMe racém acil-aminosav-metil-észter enzimes hidrolízise után nyerhető Q-D-Xaa-OMe-t szappanosítjuk a kívánt Q-D-Xaa acil-aminosavvá.
A találmány tárgyát képező (I) általános képletű
- mely képletben Q, Xaa, Pro és Arg jelentése a fenti 5
HU 224 427 Β1 vegyületek erős véralvadásgátló hatást fejtenek ki in vitro és in vivő egyaránt, előnyös biológiai hasznosulás mellett.
Az (I) általános képletű vegyületek in vitro kifejtett véralvadásgátló hatását a protrombin idő (PT-), az akti- 5 vált parciális tromboplasztin idő (APTT-) és a trombin idő (TT-) tesztben [D. Bagdy és munkatársai: Thromb. Haemost. 67, 325 (1992)] határoztuk meg. Ugyancsak meghatároztuk a vegyületek Xa faktort gátló hatását a Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA kromogén szubsztráton (lásd 10 M6. módszer), valamint a fibrinolízist gátló hatást az úgynevezett fibrinlemezmódszerrel [D. Bagdy és munkatársai: Thromb. Haemost. 67, 325 (1992)]. A kapott eredményeket a 3. táblázatban mutatjuk be; a C1 trombingátló és a C2 fXa-gátló, valamint a C6 Eoc-D-Phe 15 analóg megfelelő adatai kontrollként szerepelnek.
A táblázat az új vegyületeket a PT-aktivitás csökkenő sorrendjében tartalmazza, miáltal könnyen belátható az Eoc mint Q-csoport előnyös befolyása. Például a Q-D-Ale-Pro-Arg-H szerkezetű 5-8 esetében az aktivitási sorrend: Eoc (5)>Poc (7)> Moc (6)>iPoc (8). Az Eoc-vegyületek (1-5, 10 és 11) PT-tesztben mért aktivitása nagyobb, mint a C1 trombingátlóé, és például a 2 jelű vegyület PT-aktivitása megközelíti a C2-re közölt értéket. A 2-4, 9 és 10 jelű vegyület az APTT-tesztben és fXa-gátlásban nemcsak a C1, de a C2 hatékonyságát is meghaladja. Emellett az új vegyületek trombingátló hatása is számottevő a TT-tesztben, melyben a fXa-gátlásra készült C2 hatástalan. Az új Eoc-peptidek plazmint gátló hatása a C1 kontrollvegyületéhez hasonlóan csekély, vagy annál is kisebb, például az 1, 2 és 4 jelű vegyületek esetében.
3. táblázat
A Q-D-Xaa-Pro-Arg-H általános képletű új peptidszármazékok alvadásgátló (A), Xa faktort gátló (B) és plazmint gátló (C) hatása a PT-aktivitás csökkenő sorrendjében
Q-D-Xaa-Pro-Arg-H | A: IC50, pMa | B: ICs,, | IC50 | ||||
Számb | Q | Xaa | PT | APTT | TT | nMc | pMd |
2 | Eoc | Hxg | 0,68 | 0,26 | 0,17 | 28 | 164 |
4 | Eoc | Pgi | 1,34 | 0,40 | 0,30 | 24 | 83 |
1 | Eoc | Nle | 1,53 | 0,25 | 0,13 | 168 | 65 |
10 | Eoc | Leu | 1,53 | 0,41 | 0,16 | 53 | 204 |
5 | Eoc | Ale | 1,67 | 0,77 | 0,41 | 61 | 31 |
3 | Eoc | Nva | 1,83 | 0,26 | 0,27 | 67 | 463 |
11 | Eoc | Cha | 1,89 | 0,24 | 0,13 | 98 | 17 |
7 | Poc | Ale | 1,99 | 0,64 | 0,52 | - | - |
6 | Moc | Ale | 2,31 | 0,68 | 0,30 | - | - |
8 | ÍPoc | Ale | 2,48 | 0,25 | 0,41 | - | - |
9 | Eoc | Ile | 2,55 | 0,51 | 0,25 | - | - |
Kontrollvegyületek | |||||||
C2 | fXa-gátlóe | 0,52 | 0,97 | NA | 70 | - | |
C6 | Eoc Phe | 1,91 | 0,38 | 0,13 | 993 | 130 | |
C1 | trombingátló | 2,91 | 0,62 | 0,09 | 9133 | 56 |
a Peptidkoncentráció, melynél az alvadási idő a kontroll kétszeresére nyúlik a protrombin idő (PT-), aktivált parciális tromboplasztin idő (APTT-) és trombin idő (TT-) tesztben. b Azonos a vegyületet leíró kiviteli példa számával.
c Izolált humán Xa faktorral Bz-lle-Glu-Gly-Arg-pNA kromogén szubsztráton mért érték.
d Peptidkoncentráció, melynél a lízisterület a kontroll 50%-a.
θ Közölt adatok, NA=nem aktív.
Az (I) általános képletű vegyületeknek a plazmaalvadékba zárt Xa faktort és trombint gátló hatását, valamint a fibringélhez kötött trombint gátló hatását a 4. táblázatban mutatjuk be az 1, 2 és 11 vegyület példáján; a C1 esetében talált megfelelő értékeket kontrollként tüntetjük fel. A plazmaalvadékot lemezkedús hu55 mán citrátplazma rekalcinálásával, a fibringélt pedig humán fibrinogén humán trombinnal történő akasztásával nyertük, a Xa faktor és trombin aktivitásának mérésére a Moc-D-ChgGly-Arg-pNA, illetve Tos-Gly-ProArg-pNA szubsztrátot használtuk az M1-M5. módszerben leírtak szerint.
HU 224 427 Β1
4. táblázat
A találmány szerinti 1, 2 és 11 új peptidil-arginin-aldehid, valamint C1 mint kontrollvegyület gátlóhatása (IC50, μΜ) plazmaalvadékba zárt Xa faktorra és trombinra, valamint fibringélhez kötött trombinra3
Peptidil-arginin-aldehid | (számb) | Plazmaalvadék | Fibringél | |
Xa faktor | trombin | trombin | ||
Eoc-D-Nle-Pro-Arg-H | (1) | 0,57 | 0,30 | 0,36 |
Eoc-D-Hxg-Pro-Arg-H | (2) | 0,40 | 0,48 | 0,47 |
Eoc-D-Cha-Pro-Arg-H | (11) | 0,30 | 0,27 | 0,31 |
D-MePhe-Pro-Arg-H | (C1) | 1,12 | 0,38 | 0,30 |
a Az IC50-értékek meghatározásánál a Xa faktor és trombin aktivitását Moc-D-Chg-Gly-Arg-pNA, illetve Tos-Gly-Pro-Arg-pNA szubsztráttal mértük (lásd M1-M5. módszer).
b Azonos az új vegyületet leíró kiviteli példa számával, illetve kontrollvegyület (C1).
Az adatokból látszik, hogy az 1, 2 és 11 jelű vegyület nemcsak a trombint, de a plazmaalvadékba zárt Xa faktort is mikromól alatti IC50-értékkel gátolja.
Az (I) általános képletű vegyületek véralvadást és lemezkeaggregációt gátló hatását új-zélandi fehér nyulakban vizsgáltuk ex vivő a korábban leírt módon [D. Bagdy és munkatársai: Thromb. Haemost. 67, 357 (1992)]. A vegyületeket pufferolt fiziológiás konyhasóban oldva adtuk intravénás injekcióban (0,04-5,0 mg/kg) vagy infúzióban (0,25-5,0 mg/kg/h), illetve 0,5-6,0 mg/kg dózisban bőr alá vagy 2,5-20 mg/kg dózisban szájon át. A vegyületek hatása a szájon át történő beadás után <30 perccel már kimutatható, a legnagyobb értéket a 60-180. percben éri el, és a terápiás hatás dózisfüggő módon fennmarad 3->6 órán át.
Részletesen az etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid (5) 10 mg/kg és 5 mg/kg orális dózisnál észlelt in vivő hatását mutatjuk be az 5-6., illetve 7-8. táblázatban; ahol a C1 esetében talált megfelelő értékeket kontrollként tüntetjük fel. A vegyület beadása után az állatok fülvénájából 30-60 percenként vett vérmintákat analizáltuk. Meghatároztuk a teljes vér alvadási idejét (WBCT), valamint a trombinnal kiváltható vérlemezke-aggregáció gátoltságának mértékét (PAI). Meghatároztuk továbbá a vérmintából nyert citrátplazma aktivált parciális tromboplasztin idejét (APTT) és trombin idejét (TT). Az APTT- és TT-értékeket az 5. és 7. táblázat, míg a WBCT- és PAI-értékeket a 6. és 8. táblázat tartalmazza.
5. táblázat
Az Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H és a D-MePhe-Pro-Arg-H véralvadásgátló hatása nyulakban 10 mg/kg orális dózisnál az APTT- és TT-tesztben relatív alvadási időkkel jellemezve3
Idő (p) | Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H (5) | D-MePhe-Pro-Arg-H (C1) | ||
APTT | TT | APTT | TT | |
0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
30 | 2,33±1,00 | 9,18±4,06 | 2,07+0,38 | 7,89±4,13 |
60 | 2,13±0,20 | 20,11 ±3,08 | 2,30±0,31 | 19,27±3,60 |
120 | 2,04±0,33 | 18,41±3,06 | 1,93±0,14 | 17,21+4,73 |
180 | 1,85±0,26 | 14,21±5,92 | 1,75±0,17 | 7,23±2,00 |
240 | 1,68±0,25 | 10,51±3,46 | 1,61±0,15 | 3,77±1,25 |
300 | 1,50±0,50 | 8,89±4,49 | 1,25±0,22 | 2,36±1,21 |
360 | 1,20±0,20 | 4,94±3,78 | - | - |
a A kezelt és nem kezelt állatokban mért alvadási idők hányadosa. A terápiás értékeket kiemeltük.
HU 224 427 Β1
6. táblázat
Az Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H és a D-MePhe-Pro-Arg-H véralvadást és vérlemezke-aggregációt (PAI) gátló hatása nyulakban 10 mg/kg orális dózisnál a WBCT-tesztben talált relatív alvadási idővel, illetve a %-os gátlással jellemezve3
Idő (p) | Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H (5) | D-MePhe-Pro-Arg-H (C1) | ||
WBCT | PAI (%) | WBCT | PAI (%) | |
0 | 1,0 | 0 | 1,0 | 0 |
30 | 1,29±0,27 | 81,6±17,9 | 1,38±0,16 | 89,0±7,5 |
60 | 1,85±0,71 | 100,0+0 | 1,49±0,13 | 96,5±2,2 |
120 | 1,75±0,24 | 85,6±12,2 | 1,45±0,09 | 100,0+0,0 |
180 | 1,40+0,22 | 87,0±13,2 | 1,25±0,08 | 94,0±3,7 |
240 | 1,34±0,16 | 77,7 ±22,2 | 1,00±0,18 | 81,8±14,0 |
300 | - | 81,0±12,8 | 1,09+0,06 | 55,0±29,3 |
360 | - | 91,3±8,8 | 1,22±0,17 | 72,0±25,0 |
a A kezelt és nem kezelt állatokban mért alvadási idők hányadosa. A terápiás értékeket kiemeltük.
7. táblázat
Az Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H és a D-MePhe-Pro-Arg-H véralvadásgátló hatása nyulakban 5 mg/kg orális dózisnál az APTT- és TT-tesztben relatív alvadási időkkel jellemezve3
Idő (p) | Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H (5) | D-MePhe-Pro-Arg-H (C1) | ||
APTT | TT | APTT | TT | |
0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
30 | 1,28±0,07 | 3,30±0,85 | 1,27±0,38 | 1,52±0,17 |
45 | 1,41 ±0,08 | 5,20±1,18 | 1,30±0,02 | 2,50±0,44 |
60 | 1,46±0,11 | 6,35±1,05 | 1,37±0,03 | 4,75±1,38 |
90 | 1,48±0,10 | 5,62±0,96 | 1,45±0,09 | 10,50±5,49 |
120 | 1,34±0,06 | 3,77±0,94 | 1,43±0,11 | 5,51 ±3,59 |
180 | 1,14±0,12 | 2,28+0,56 | 1,39±0,09 | 2,05±0,38 |
240 | 0,95±0,09 | 1,42±0,13 | 1,31±0,11 | 1,81 ±0,39 | |
a A kezelt és nem kezelt állatokban mért alvadási idők hányadosa. A terápiás értékeket kiemeltük.
8. táblázat
Az Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H és a D-MePhe-Pro-Arg-H véralvadást és vérlemezke-aggregációt (PAI) gátló hatása nyulakban 5 mg/kg orális dózisnál a WBCT-tesztben talált relatív alvadási idővel, illetve a %-os gátlással jellemezve3
Idő (p) | Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H (5) | D-MePhe-Pro-Arg-H (C1) | ||
WBCT | PAI (%) | WBCT | PAI (%) | |
0 | 1,0 | 0 | 1,0 | 0 |
30 | 1,30±0,06 | 40,2±18,2 | 1,07±0,13 | 52,8±14,7 |
45 | 1,49±0,11 | 66,7±13,7 | 1,26±0,07 | 58,4±15,6 |
60 | 1,56±0,10 | 60,7±17,4 | 1,55±0,17 | 54,2±11,6 |
90 | 1,62±0,09 | 71,8±18,0 | 1,61 ±0,34 | 83,2±8,9 |
120 | 1,53±0,04 | 75,0± 12,0 | 1,45±0,21 | 75,2±12,3 |
180 | 1,40±0,06 | 52,0±18,4 | 1,44 ±0,08 | 47,5±20,9 |
240 | 1,15±0,04 | 49,6±16,1 | 1,22±0,08 | 32,2±16,0 |
a A kezelt és nem kezelt állatokban mért alvadási idők hányadosa. A terápiás értékeket kiemeltük.
HU 224 427 Β1
A táblázatok adataiból kitűnik, hogy a hatás nagysága és tartama szempontjából egyaránt előnyösebb alvadásgátló 5, mint C1.
A találmány szerinti (I) vegyületeket az alábbi, trombózissal és/vagy fokozott véralvadékonysággal járó állapotok kezelésére és megelőzésére alkalmazzuk: mélyvénás trombózis, tüdőembólia, artériás trombózis, instabil angina, szívizomelhalás, pitvarfibrilláció, valamint trombózis alapon létrejött stroke. Használhatók még érelmeszesedés esetén a koronáriaartéria és agyi artéria trombotikus megbetegedéseinek megelőzése céljából, magas rizikójú betegek sebészi profilaxisára, illetve egyéb sebészi profilaxisra. Ezenkívül alkalmazhatók trombolízis vagy perkután transzluminális angioplasztika kapcsán az újraelzáródás megelőzésére, továbbá hemodialízis esetén és nefrózisszindróma kiegészítő terápiájára, valamint a vér fokozott alvadékonyságával együtt járó kórképekben: a rosszindulatú daganatos és gyulladásos megbetegedésekben (például ízületi gyulladás), valamint cukorbetegségben. Alkalmazhatók továbbá olyan esetekben, amikor az egyéb antikoagulánsok adása nem elég hatékony vagy kontraindikált: például heparin esetében antitrombin-llt hiánya vagy HIT (heprin indukálta trombocitopénia), kumarinok esetében például graviditás.
Gyógyászati célokra a jelen találmány szerinti vegyületeket és ezek gyógyászatilag elfogadható sóit alkalmazhatjuk önmagukban vagy célszerűen gyógyszerkészítmény formájában. Az ilyen készítmények szintén beletartoznak a jelen találmány oltalmi körébe.
E gyógyszerkészítmények hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületnek vagy gyógyászatilag elfogadható sójának a hatás kifejtéséhez szükséges mennyiségét tartalmazzák a gyógyszerkészítésben szokásosan alkalmazott, önmagában ismert vivő-, töltőanyagok, hígítószerek és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyagok kíséretében.
A fentieknek megfelelő vivő-, hígító-, illetve töltőanyagok például a víz, alkoholok, zselatin, laktóz, szacharóz, keményítő, pektin, magnézium-sztearát, sztearinsav, talkum, különböző állati vagy növényi olajok, valamint glikolok, például propilénglikol vagy polietilénglikol. A gyógyászati segédanyagok közé tartoznak a tartósítószerek, különböző természetes vagy szintetikus emulgeáló-, diszpergáló- vagy nedvesítőszerek, színezőanyagok, ízjavító szerek, pufferálóanyagok, szétesést elősegítő szerek és más, a hatóanyag biológiai hasznosulását elősegítő anyagok.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények a szokásos formákban lehetnek. Ilyen szokásos gyógyszerformák például az orális (szájon át adagolt) készítmények (tabletta, kapszula, por, pirula, drazsé vagy granulátum), valamint a parenterális (a gyomor- és bélrendszer megkerülésével adagolt) készítmények (injekciós vagy infúziós készítmények, a végbélkúp, tapasz vagy kenőcs).
Habár a jelen találmány szerinti vegyületeknek a gyógyászati hatás kifejtéséhez szükséges dózisa a kezelendő betegek egyéni állapotától és életkorától függ, ettől függően változhat, és végső soron a kezelőorvos határozza meg; az olyan betegségek megelőzésére és/vagy kezelésére, amelyben kívánatos a trombin működésének és/vagy keletkezésének gátlása, általában e vegyületeknek a testtömeg 1 kg-jára számítva körülbelül 0,01 mg és körülbelül 1000 mg közötti, és előnyösen 0,25 mg és 20 mg közötti napi orális vagy parenterális, például intravénás dózisait használhatjuk.
A találmány szerinti (I) általános képletű vegyületek trombolitikumokkal (például tPA-val vagy urokinázzal) együtt adagolva hatékonyan segíthetik elő az artériákban vagy vénákban kialakult trombusok oldódását, illetve hatékonyan gátolhatják a trombusok újraképződését. Ilyen esetekben a találmány szerinti vegyületeket a trombolitikumokkal egyidejűleg vagy a trombolitikus kezelést követően célszerű adagolni.
A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákon mutatjuk be anélkül, hogy a találmányt e példákra korlátoznánk.
A példákban megadott Rrértékeket rétegkromatográfiával határoztuk meg szilikagélen (DC-Alufolien Kieselgel 60 F254, Merck, Darmstadt) az alábbi oldószerekben:
1. Etil-acetát
2. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (480:20:6:11)
3. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11)
4. Kloroform-metanol (9:1)
5. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (45:20:6:11)
6. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (240:20:6:11)
7. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (480:10:3:55)
8. Etil-acetát-hexán (1:2)
9. Etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (120:20:6:11)
10. Etil-acetát-hexán (1:1)
11. Kloroform-aceton (98:2)
A példákban megadott kapacitásfaktor-értékeket (k’) „Pharmacia LKB analytical HPLC System Two” berendezéssel határoztuk meg az alábbiak szerint. Oszlop: „VYDAC C-18 reversed phase: 10 gm, 300 A, 4*250 mm.”
A puffer: 0,1% trifluor-ecetsav vízben.
B puffer: 0,1% trifluor-ecetsav acetonitrilben.
Az alkalmazott gradiens 1 ml/perc átfolyási sebesség mellett
I: 0-5 min. 0-25% B, majd izokratikus 25% B;
II: 0-30 min. 0-60% B.
Az eluátum peptidtartalmának detektálása UV fénnyel történt 214 nm-en. A minta töménysége 1 mg/ml A puffer, az injekciós térfogat 25 gl.
A HPLC analízisnél az alkalmazott gradienst (I vagy II) a példa egyes lépéseinél a rövidítés után zárójelben adjuk meg.
Az acil-arginin-aldehidek egyensúlyi formákban léteznek: aldehid és aldehid-hidrát, valamint két amino-ciklol formában.
Ezek közül az aldehid-hidrát és egy vagy mindkét amino-ciklol külön csúcsban jelenik meg a HPLC során. Ennek megfelelően az acil-arginin-aldehideket a talált két vagy három k’-értékkel jellemezzük a példákban.
Tömegspektroszkópia. A FAB pozitív ionizációs mérések Finnigan MÁT 8430 típusú készüléken történtek. A mintákat m-nitro-benzil-alkohol-mátrixban oldot9
HU 224 427 Β1 tűk fel, közvetlen mintabevezetéssel vittük be az ionforrásba. A peptidil-arginin-aldehidek spektrumában a molekulaion mellett az m-nitro-benzil-alkohol (NBA) oldószerrel képzett addíciós vegyület molekulaionja is megjelenik: [M+H]+, illetve [M+H+NBA]+. Ennek megfelelően adjuk meg a FAB tömegspektrum adatait a példákban. Az ESI pozitív ionizációs mérések VG Quattro (Fisons) típusú készüléken történtek. A mintákat 1 térfogat*?^ hangyasavat tartalmazó 1:1 arányú acetonitril-víz elegyben oldottuk fel, majd 10 μΙ-es mintahurok alkalmazásával, a vivőfolyadék 15-25 μΙ/perc áramlási sebessége mellett áramoltattuk az ionforrásba.
A fajlagos forgatási értékek ([a]D) 20 °C-ra vonatkoznak.
1. példa
Etoxi-karbonil-D-norieucil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Nle-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginín-laktám
6,83 g (17,5 mmol) ferc-butil-oxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] szuszpendálunk 25 ml kloroformban, majd keverés és jeges hűtés mellett hozzáadunk 25 ml sósavas etil-acetátot (töménysége 0,11-0,15 g/ml). Két óra után a reakcióelegyet 30-40 ml dietil-éterrel hígítjuk, a kivált kristályos anyagot kiszűrjük, mossuk 15 ml acetonnal és 15 ml dietil-éterrel, majd éjszakán át szárítjuk vákuumexszikkátorban kálium-hidroxid mellett. A kapott NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám-klór-hidrátot feloldjuk 25 ml dimetil-formamidban, lehűtjük -20 ’C-ra, és az alábbi vegyes anhidridhez adjuk.
4,5 g (15 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolint [1. példa, F) lépés] feloldunk 15 ml dimetil-formamidban, lehűtjük -20 ’C-ra, és keverés közben hozzáadunk 1,65 ml (15 mmol) N-metil-morfolint, 1,95 ml (15 mmol) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 10 perc keverés után az NG-benzil-oxi-karbonil-L-argininlaktámot tartalmazó fenti dimetil-formamidos oldatot, és végül 4,63 ml (33,25 mmol) trietil-amint. A reakcióelegyet 30 percen át keverjük -10 °C-on, majd 1 órán át 0 °C-on. Ezt követően a sókat kiszűrjük, és a szűrletet hígítjuk 100 ml etil-acetáttal. A kapott oldatot mossuk 3X25 ml vízzel, 25 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal és 3*25 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott terméket szilikagél oszlopon kromatografáljuk etil-acetátot alkalmazva eluensként. A terméket [Rf(1 )=0,50] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük, és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajos párlási maradékot petroléterrel eldörzsöljük.
3,5 g (40%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1 )=0,5. [a]D=-46,5° (c=1; tetrahidrofuránban).
Elemzési eredmény a C28H40N6O7.1/2H2O (581,66) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=57,81; H%=7,10; N%=14,44;
talált: C%=57,7; H%=7,1; N%=14,4.
A FAB tömegspektrum (573 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
3,02 g (5,2 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. példa,
1. lépés) feloldunk 15 ml tetrahidrofuránban, és keverés közben, -50 °C alatt hozzáadunk 4,03 mmol lítium-alumínium-hidridet tetrahidrofuránban oldva. A redukció előrehaladását rétegkromatográfiával követjük etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (480:20:6:11) rendszerben, és szükség szerint adagolunk további lítium-alumínium-hidridet. A reakcióelegyhez hűtés és keverés mellett annyi hűtött 0,5 M kénsavat csepegtetünk, hogy a pH 3 legyen, majd 35 ml vízzel hígítjuk. A kapott oldatot 2x15 ml n-hexánnal kirázzuk, majd 3*20 ml metilén-kloriddal kivonatoljuk. A metilén-kloridos oldatokat egyesítjük, mossuk 3*15 ml vízzel, 15 ml hideg 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal és 15 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot 10 ml benzolban feloldjuk, majd ciklohexánnal kicsapjuk. A csapadékot szűrjük és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 2,6 g (87%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,30. [a]D=-30,1° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (575 [M+H]+, 728 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucil-Lprolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
2,3 g (4 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (1. példa,
2. lépés) feloldunk 30 ml etanol, 4,4 ml víz és 4 ml 0,5 M kénsav elegyében, hozzáadunk 15 ml etanolban szuszpendált 0,3 g csontszenes palládiumkatalizátort, és kb. 10 ’C-on hidrogénezzük. A reakció - aminek előrehaladását rétegkromatográfiával követjük - mintegy 30 perc alatt lejátszódik. A katalizátort kiszűrjük, és az oldatot 2,0-2,5 kPa nyomáson 7-9 ml térfogatra töményítjük. A maradékot 30 ml vízzel hígítjuk, 2*10 ml metilén-kloriddal kirázzuk, majd a pH-t 3,5-re állítjuk hidroxilciklusú Dowex AG 1-X8 ioncserélő gyantával. Ezután az oldatot 24 órán át állni hagyjuk 20-22 ’C-on, majd lefagyasztjuk és liofilizáljuk. 1,55 g (79%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=3,65; 4,0 és 4,7. [a]D=-54,9° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (441 [M+H]+, 594 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolin (Eoc-D-Nle-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-DL-norleucin
19,65 g (0,15 mól) DL-norleucint feloldunk 75 ml
M nátrium-hidroxidban, az oldatot 0 ’C-ra hűtjük, és keverés mellett hozzáadunk párhuzamosan 100 ml 2 M nátrium-hidroxidot és 19,1 ml (0,2 mól) etoxi-karbonil-kloridot. A reakcióelegyet egy óra keverés után 200 ml vízzel hígítjuk, 50 ml dietil-éterrel kirázzuk, 3 M sósavval 3-as pH-ra savanyítjuk, majd 4*50 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat mossuk 50 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyo10
HU 224 427 Β1 máson bepároljuk. A párlási maradékot n-hexánnal eldörzsöljük. 22,7 g (74%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 58-60 °C. Rf(7)=0,48.
Elemzési eredmény a C9H17NO4 (203,23) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=53,18; H%=8,43; N%=6,89;
talált: C%=52,7; H%=8,4; N%=6,6.
B) lépés: Etoxi-karbonil-DL-norleucin-metil-észter
20,3 g (0,1 mól) etoxi-karbonil-DL-norleucint [1. példa, A) lépés] feloldunk 200 ml vízmentes metanolban, hozzáadunk 0,75 ml tömény kénsavat, majd az oldatot forraljuk kb. 4 órán át, amíg teljessé nem válik az észterképződés, aminek előrehaladását rétegkromatográfiával követjük [Rf(7)=0,48 (sav) és 0,54 (észter)]. Az oldatot betöményítjük kb. 20 ml térfogatra 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot hígítjuk 150 ml metilén-kloriddal, mossuk 2*15 ml vízzel és 2*15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal, majd ismét vízzel, amíg semleges nem lesz. Az oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A párlási maradékként kapott 15,7 g olajat [Rf(6)=0,88] 72 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő C) lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucin-metil-észter
Az acil-L-aminosav-metil-észterek enzimes hidrolízisét 7,5-es pH-η végezzük automata titrátorban, melynek 100 ml-es és 250 ml-es reakcióedénye van, az adagolt reagens: 1 M nátrium-hidroxid.
A fenti B) lépésben kapott etoxi-karbonil-DL-norleucin-metil-észtert belehelyezzük az automata titrátor 250 ml-es reakcióedényébe, hozzáadunk 150 ml vizet és 5 ml benzolt. Erős keverés mellett az emulzió pH-ját 7,5-re állítjuk 1 M nátrium-hidroxiddal, hozzáadunk 135 mg enzimet [Subtilisin Carlsberg, Protease, Type Vili (Sigma)], a pH-t ismét 7,5-re állítjuk, és ezen az értéken tartjuk a titrátor segítségével. Mintegy 3 óra alatt megy végbe az etoxi-karbonil-L-norleucin-metil-észter hidrolízise. A reakcióelegyből a nem hidrolizált etoxi-karbonil-D-norleucin-metil-észtert 3*30 ml benzollal kivonjuk, a benzolos oldatokat egyesítjük, 2*10 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olaj 7,8 g, amit 36 mmol cím szerinti terméknek tekintünk, és közvetlenül felhasználjuk a következő D) lépésben.
D) lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucin-diciklohexil-ammónium-só
A fenti C) lépésben kapott etoxi-karbonil-D-norleucin-metil-észtert feloldjuk 60 ml metanolban, hozzáadunk timolftaleinindikátort, majd keverés mellett 36 ml 1 M nátrium-hidroxidot csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet 40 ml vízzel meghígítjuk, 3*15 ml dietil-éterrel kirázzuk, 6 M sósavval pH=3-ra savanyítjuk, majd 2*40 ml metilén-kloriddal kivonatoljuk. A metilén-kloridos oldatokat egyesítjük, vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 70 ml dietil-éterben, és hozzáadunk 6,7 ml diciklohexil-amint. Az elkülönült kristályos sót kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk.
12,45 g (90%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 167-168 °C. Rf(7)=0,48. [a]D=-11° (c=0,5; etanolban).
Elemzési eredmény a C21H40N2O4 (384,55) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=65,59; H%=10,49; N%=7,28. talált: C%=65,0; H%=10,4; N%=7,15.
E) lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucin-pentaklór-fenil-észter
11,55 g (30 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucin-diciklohexil-ammónium-sót [1. példa, D) lépés] feloldunk 60 ml dietil-éterben és 33 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, a dietil-éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 50 ml etil-acetátban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 7,99 g (30 mmol) pentaklór-fenolt, valamint 6,2 g (30 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet kb. 16 órán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot 30 ml dietil-éterrel kristályosítjuk. A kivált anyagot kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 10,3 g (76%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 121-122 °C. Rf(2)=0,9.
Elemzési eredmény a C15H16NO4CI5 (451,57) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=39,89; H%=3,57; N%=3,10;
Cl%=39,26;
talált: C%=40,1; H%=3,35; N%=3,0;
Cl%=39,15.
F) lépés: Etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolin
9,5 g (21 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucin-pentaklór-fenil-észtert [1. példa, E) lépés] feloldunk 25 ml piridinben, hozzáadunk 2,42 g (21 mmol) L-prolint és 5,88 ml (42 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át keverjük. A reakcióelegyet bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 50 ml vízben és 50 ml dietil-éterben. A vizes fázist mossuk 20 ml dietil-éterrel, 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, majd 2*30 ml etil-acetáttal kirázzuk. Az etil-acetátos oldatokat egyesítjük, vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. 5,67 g (90%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában [Rf(6)=0,50], melynek nagyobb részét közvetlenül felhasználjuk a példa 1. lépésében, kisebb részét pedig kristályos sóvá alakítjuk az alábbi módon.
0,6 g (2 mmol) etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolint feloldunk 10 ml dietil-éterben, és hozzáadunk 0,23 ml (2,1 mmol) ciklohexil-amint, a kivált kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 0,75 g (90%) etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sót kapunk. Olvadáspont: 135-139 °C. Rj(6)=0,55.
Elemzési eredmény a C2oH37N305.H20 (417,54) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=57,53; H%=9,41; N%=10,06;
talált: C%=57,6; H%=9,2; N%=9,85.
HU 224 427 Β1
2. példa
Etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Hxg-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
3,43 g (8,8 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karboníl-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33,1729 (1990)] és 2,52 g (7,65 mmol) etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolinból [2. példa F) lépés] kiindulva az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - elvégezzük a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását. A végterméket [Rf(1 )=0,51] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és exszikkátorban szárítjuk. 2,1 g (45%) cím szerinti terméket kapunk. Rf{1 )=0,51. [a]D=-41,2° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (601 [M+H]+,
754 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
1,9 g (3,16 mmol) etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (2. példa,
1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon redukálunk arányos mennyiségű reagens és oldószer felhasználásával. 1,4 g (73%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,54. [a]D=-20,8° (c=0,5; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (603 [M+H]+, 756 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicilL-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
1,3 g (2,15 mmol) etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (2. példa,
2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,82 g (74%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(II): k’=5,83 és 6,43. [<x]D=-61,4° (c=1, vízben). A FAB tömegspektrum (469 [M+H]+, 622 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolin (Eoc-D-Hxg-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-DL-hexil-glicin
5,03 g (31,4 mmol) DL-hexil-glicint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk. Ily módon 6,67 g (91%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(7)=0,52.
B) lépés: Etoxi-karbonil-DL-hexil-glicin-metil-észter
6,5 g (28,1 mmol) etoxi-karbonil-DL-hexil-glicint az 1.
példa B) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - alakítunk át. A párlási maradékként kapott 5,23 g olajat [Rf{7)=0,59] 21,35 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő C) lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicin-metil-észter
A fenti B) lépésben kapott etoxi-karbonil-DL-hexilglicin-metil-észter enzimes hidrolízisét arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával az 1. példa C) lépésében leírt módon végezzük az automata titrátor 100 ml-es reakcióedényében. A művelet végén, a párlási maradékként kapott olajat
10,5 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő D) lépésben.
D) lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicin-diciklohexil-ammónium-só
A fenti C) lépésben kapott etoxi-karbonil-D-hexilglicin-metil-észtert az 1. példa D) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - elszappanosítva 3,94 g (91%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 128-129 °C. Rf(7)=0,52. [a]D=-12° (c=2; etanolban).
Elemzési eredmény a C23H44N2O4 (412,60) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=66,95; H%=10,75; N%=6,79. talált: C%=66,5; H%=10,8; N%=6,45.
E) lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicin-2,4,5-triklór-fenil-észter
3,87 g (9,4 mmol) etoxi-karbonil-D-hexil-glicin-diciklohexil-ammónium-sót [2. példa, D) lépés] feloldunk 20 ml dietil-éterben és 10 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, a dietil-éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 16 ml etil-acetátban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 1,86 g (9,4 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt, valamint 1,94 g (9,4 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. Az olajos maradékot vákuumexszikkátorban szárítjuk. A kapott 3,57 g olajat 8,7 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő F) lépésben.
F) lépés: Etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolin
A fenti E) lépésben kapott etoxi-karbonil-D-hexil-glicin-2,4,5-triklór-fenil-észtert és 1,0 g (8,7 mmol) L-prolint az 1. példa F) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - kondenzálunk. A művelet végén 2,52 g (88%) olajat kapunk [Rf(6)=0,6], melyet 7,65 mmol cím szerinti terméknek tekintünk, és közvetlenül felhasználjuk a példa 1. lépésében.
3. példa
Etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Nva-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
1,37 g (3,5 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 0,87 g (3 mmol) etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolinból [3. példa,
C) lépés] kiindulva az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - elvégezzük a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását. A végterméket [Rf{1 )=0,49] tisztán tartalmazó frakció12
HU 224 427 Β1 kát egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot exszikkátorban szárítjuk. Az így nyert 0,7 g (42%) olajat 1,25 mmol cím szerinti terméknek tekintjük.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,7 g (1,25 mmol) etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (3. példa,
1. lépés) feloldunk 5 ml tetrahidrofuránban, és keverés közben, -50 °C alatt hozzáadunk 0,97 mmol lítium-alumínium-hidridet tetrahidrofuránban oldva. A redukció előrehaladását rétegkromatográfiával követjük etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (480:20:6:11) rendszerben, és szükség szerint adagolunk további lítium-alumínium-hidridet. A reakcióelegyhez hűtés és keverés mellett annyi hűtött 1 M kénsavat csepegtetünk, hogy a pH 3 legyen, majd 30 ml vízzel hígítjuk. A kapott oldatot előbb kirázzuk 2*5 ml etil-acetáttal, azután telítjük konyhasóval és kivonatoljuk 2*20 ml metilén-kloriddal. Az egyesített metilén-kloridos oldatokat mossuk 2*10 ml 15%-os konyhasóoldattal, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot exszikkátorban szárítjuk. 0,15 g (21%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában. Rf(2)=0,38. A FAB tömegspektrum (561 [M+H]+, 714 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalil-Lprolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,15 g (0,26 mmol) etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (3. példa,
2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,12 g (96%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k‘=3,0; 3,19 és 3,52. A FAB tömegspektrum (427 [M+H]+, 580 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolin (Eoc-D-Nva-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalin g (42,7 mmol) D-norvalint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 7,6 g (89%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,65.
B) lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalin-2,4,5triklór-fenil-észter
7,2 g (38 mmol) etoxi-karbonil-D-norvalint [3. példa,
A) lépés] és 7,5 g (38 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt feloldunk 40 ml etil-acetátban, az oldatot 0 °C körüli hőmérsékletre hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 8,6 g (42 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet hűtés mellett 10 órán át tovább keverjük, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. Az olajos párlási maradékot 20 ml etanolban oldjuk, az oldatot 3-4 órán át 0 °C körüli hőmérsékleten tartjuk. A kivált kristályokat szűrjük, 1-2 ml hűtött etanollal mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 4 g (28%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(8)=0,70. [a]D=+40,9° (c=1; dimetil-formamidban).
Elemzési eredmény a Ci4Hi6NO4CI3 (368,64) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=45,61; H%=4,37; N%=3,79;
Cl=28,85;
talált: C%=45,2; H%=4,3; N%=3,4;
0=29,5.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolin
3,68 g (10 mmol) etoxi-karbonil-D-norvalin-2,4,5triklór-fenil-észtert [3. példa, B) lépés] feloldunk 15 ml piridinben, hozzáadunk 1,15 g (10 mmol) L-prolint és
1,4 ml (10 mmol) trietil-amint. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük 10 órán át, majd 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban és 10 ml dietil-éterben. A vizes fázist kirázzuk 3*5 ml dietil-éterrel. A dietil-éteres fázisokat egyesítjük, és kirázzuk 5 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal. A nátrium-hidrogén-karbonátos oldatokat egyesítjük, 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. Az olajos maradékot vákuumexszikkátorban szárítjuk. 1,98 g (69%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,45. A FAB tömegspektrum (287 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
4. példa
Etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Pgl-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
2,28 g (5,8 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 1,57 g (5 mmol) etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolinból [4. példa F) lépés] kiindulva az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - elvégezzük a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását. A végterméket [Rf(1 )=0,48] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olaj, melyet vákuumexszikkátorban szárítunk. 1,1 g (37%) cím szerinti terméket kapunk. A FAB tömegspektrum (587 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
1,1 g (1,87 mmol) etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (4. példa, 1. lépés) a 3. példa 2. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk, azzal az eltéréssel, hogy a reakció előrehaladását követő rétegkromatográfiát etil-acetátban végezzük [Rf(1 )=0,48 (laktám), 0,2 (aldehid)]. 0,76 g (69%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában. Rf(1 )=0,20. A FAB tömegspektrum
HU 224 427 Β1 (589 [M+H]+, 742 [M+H+NBA]®) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicilL-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,7 g (1,2 mmol) etoxi-karbonil-D-pentil-glicilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (4. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,5 g (83%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k'=4,65; 5,22 és 6,57. A FAB tömegspektrum (455 [M+Hf, 608 [M+H+NBAf) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolin (Eoc-D-Pgl-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-DL-pentil-glicin
14,1 g (96,5 mmol) DL-pentil-glicint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 21 g (98%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(7)=0,74.
B) lépés: Etoxi-karbonil-DL-pentil-glicin-metil-észter g (27,5 mmol) etoxi-karbonil-DL-pentil-glicint [4.
példa, A) lépés] feloldunk 50 ml vízmentes metanolban, hozzáadunk 0,5 ml tömény kénsavat, majd az oldatot forraljuk mintegy 8 órán át, amíg teljessé nem válik az észterképződés, aminek előrehaladását rétegkromatográfiával követjük [Rf(7)=0,74 (sav) és 0,87 (észter)]. Az oldatot bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 100 ml benzolban és 100 ml vízben. A benzolos fázist mossuk 2*20 ml vízzel és 2*20 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal, majd ismét vízzel, amíg semleges nem lesz. Az oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A párlási maradékként kapott 5,47 g olajat [Rf(7)=0,87] 23,6 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő C) lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-metil-észter
A fenti B) lépésben kapott etoxi-karbonil-DL-pentil-glicin-metil-észter enzimes hidrolízisét az 1. példa C) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük az automata titrátor 100 ml-es reakcióedényében. A művelet végén, a párlási maradékként kapott olajat 11,0 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő D) lépésben.
D) lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-diciklohexil-ammónium-só
A fenti C) lépésben kapott etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-metil-észtert az 1. példa D) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - elszappanosítva 4,3 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 119-121 °C. Rf(7)=0,74. [a]D=-10,4° (c=1; metanolban).
Elemzési eredmény a C22H42N2O4.I/2H2O (407,58) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=64,82; H%=10,63; N%=6,87. talált: C%=64,9; H%=10,6; N%=6,6.
E) lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-2,4,5-triklór-fenil-észter
9,44 g (23,7 mmol) etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-diciklohexil-ammónium-sót [4. példa, D) lépés] feloldunk 50 ml etil-acetátban és 25 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, az etil-acetátos fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 50 ml metilén-kloridban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 4,74 g (24 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt és 5,6 g (27 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet állni hagyjuk szobahőmérsékleten 10 órán át, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. Az olajos maradékot vákuumexszikkátorban szárítjuk. 9,12 g (97%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(10)=0,76.
F) lépés: Etoxi-karbonil-D-pentil-glicil-L-prolin
3,96 g (10 mmol) etoxi-karbonil-D-pentil-glicin-2,4,5triklór-fenil-észtert [4. példa, E) lépés] és 1,15 g (10 mmol) L-prolint a 3. példa C) lépésében leírt módon kapcsolva 2,51 g (80%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában. Rj(6)=0,50. [a]D=-23,5° (c=1; metanolban). Elemzési eredmény a C15H26N2O5 (314,37) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=57,30; H%=8,34; N%=8,91.
talált: C%=57,4; H%=8,5; N%=8,5.
A FAB tömegspektrum (315 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
5. példa
Etoxi-karbonH-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Ale-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
6,83 g (17,5 mmol) ferc-butil-oxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] szuszpendálunk 25 ml kloroformban, majd keverés és jeges hűtés mellett hozzáadunk 25 ml sósavas etil-acetátot (töménysége 0,11-0,15 g/ml). Két óra után a reakcióelegyet 30-40 ml dietil-éterrel hígítjuk, a kivált kristályos anyagot kiszűrjük, mossuk 15 ml acetonnal és 15 ml dietil-éterrel, majd éjszakán át szárítjuk vákuumexszikkátorban kálium-hidroxid mellett. A kapott NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám-klór-hidrátot feloldjuk 25 ml dimetil-formamidban, lehűtjük -20 °C-ra, és az alábbi vegyes anhidridhez adjuk.
7,22 g (15 mmol) etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-sót [5. példa, C) lépés] feloldunk 40 ml dietil-éterben és 16,5 ml 0,5 M kénsavban. A dietil-éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékként kapott olaj az etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin, melyet feloldunk 15 ml dimetil-formamidban, lehűtjük -20 °C-ra, és keverés közben hozzáadunk 1,65 ml (15 mmol) N-metil-morfolint, 1,95 ml
HU 224 427 Β1 (15 mmol) klór-szénsav-izobutil-észtert, majd 10 perc keverés után az NG-benzil-oxi-karbonil-L-argininlaktámot tartalmazó fenti dimetil-formamidos oldatot, és végül 4,63 ml (33,25 mmol) trietil-amint. A reakcióelegyet 30 percen át keverjük hűtés mellett, majd
1,5 órán át hűtés nélkül. Ezt követően a sókat kiszűrjük, és a szűrletet hígítjuk 100 ml benzollal. A kapott oldatot mossuk 3*25 ml vízzel, 25 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal és 3x25 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott terméket szilikagél oszlopon kromatografáljuk etil-acetátot alkalmazva eluensként. A terméket [Rf(1 )=0,53] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük, 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajos párlási maradékot petroléterrel eldörzsöljük. 3,15 g (36,7%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1 )=0,53. [a]D=-41,5° (c=1; tetrahidrofuránban). Elemzési eredmény a C28H40N6O7 (572,65) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=58,72; H%=7,04; N%=14,68;
talált: C%=58,3; H%=7,1; N%=14,2.
A FAB tömegspektrum (573 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucilL-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
2,98 g (3,8 mmol) etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (5. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. Ily módon 2,45 g (90%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,35. [a]D=-33,1° (c=0,5; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (575 [M+H]+, 728 [M+H+NBAf) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucilL-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
2,01 g (3,5 mmol) etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (5. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával átalakítva 1,19 g (71%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k-3,35; 3,65 és 4,17. [a]D=-64° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (441 [M+H]+, 594 [M+H+NBA]4) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só (Eoc-D-Ale-Pro.DCHA) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucin
3,93 g (30 mmol) D-alloizoleucint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 4,6 g (75%) cím szerinti terméket kapunk [Rf(7)=0,50], melynek nagyobb részét közvetlenül felhasználjuk a példa
B) lépésében, kisebb részét pedig kristályos sóvá alakítjuk az alábbi módon.
0,2 g (1 mmol) fenti olajos terméket feloldunk 10 ml dietil-éterben, és hozzáadunk 0,14 ml (1,2 mmol) ciklohexil-amint. A kivált kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 0,27 g (90%) etoxi-karbonil-D-alloizoleucin-ciklohexil-ammónium-sót kapunk. Olvadáspont: 143-143,5 °C.
[a]D=-11,9° (c=1; etanolban).
Elemzési eredmény a C15H30N2O4 (302,41) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=59,57; H%=10,00; N%=9,26; talált: C%=59,55; H%=10,0; N%=9,05.
B) lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észter
4,37 g (21,5 mmol) etoxi-karbonil-D-alloizoleucint [5. példa, A) lépés] és 4,24 g (21,5 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt feloldunk 25 ml tetrahidrofuránban, az oldatot 0 °C körüli hőmérsékletre hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 4,43 g (42 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet hűtés mellett 10 órán át tovább keverjük, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajat 21,5 mmol cím szerinti terméknek tekintve közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só
A fenti B) lépésben kapott, és 21,5 mmol etoxi-karbonil-D-alloizoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észternek tekintett olajos terméket feloldjuk 25 ml piridinben, hozzáadunk 2,53 g (22 mmol) L-prolint és 3,08 ml (22 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml vízben és 50 ml dietil-éterben. A vizes fázist 20 ml dietil-éterrel mossuk, 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 2x30 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 100 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 4,4 ml (22 mmol) diciklohexil-amint. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 8,5 g (82%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,53. Olvadáspont: 143-144 °C. [a]D=-21,8° (c=0,5; etanolban).
Elemzési eredmény a C26H47N3O5 (481,66) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=64,83; H%=9,83; N%=8,72;
talált: C%=64,8; H%=9,85; N%=8,25.
A FAB tömegspektrum (301 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
6. példa
Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-argininaldehid- (Moc-D-Ale-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
1,32 g (3,4 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 0,95 g (3,31 mmol) metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolinból [6. példa C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolá15
HU 224 427 Β1 sát az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük. A reakcióelegyet szűrés és benzollal történő hígítás után mossuk 3 ml 15%-os konyhasóoldattal, 3 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal és 2*3 ml 15%-os konyhasóoldattal, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olajat (1,82 g) szilikagél oszlopon kromatografáljuk etil-acetátot alkalmazva eluensként. A terméket [Rf(1 )=0,48] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük, és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajos párlási maradékot n-hexánnal eldörzsöljük. 0,88 g (47%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1 )=0,48. Olvadáspont: 124-125 °C. [a]D=-44,5° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (559 [M+H]+, 712 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,78 g (1,396 mmol) metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (6. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. 0,4 g (51%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,30. Olvadáspont: 99,5-100,6 °C. [a]D=-24,3° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (561 [M+H]+, 714 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,31 g (0,55 mmol) metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (6. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - alakítunk át. 0,23 g (90%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=3,14; 3,32 és 3,68. [a]D=-48,1° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (427 [M+H]+, 580 [M+H+NBAJ+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin (Moc-D-AlePro) előállítása
A) lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucin-ciklohexil-ammónium-só
5,24 g (40 mmol) D-alloizoleucint feloldunk 20 ml 2 M nátrium-hidroxidban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés mellett hozzáadunk párhuzamosan 22 ml 2 M nátrium-hidroxidot és 3,4 ml (44 mmol) metoxi-karbonil-kloridot. A reakcióelegyet egy óra keverés után 10 ml vízzel hígítjuk, 30 ml dietil-éterrel kirázzuk, 3 M sósavval 3-as pH-ra savanyítjuk, majd 4*20 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat mossuk 20 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 200 ml dietil-éterben, és hozzáadunk 4,52 ml (40 mmol) ciklohexil-amint. A kivált kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 9,7 g (84%) cím szerinti terméket kapunk.
Rf(6)=0,58. Olvadáspont: 170,5-172 °C. [a]D=-12,7° (c=1; etanolban).
Elemzési eredmény a C14H28N2O4 (302,41) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=58,30; H%=9,79; N%=9,71;
talált: C%=58,4; H%=9,8; N%=9,8.
B) lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucin-pentaklór-fenil-észter
5,76 g (20 mmol) metoxi-karbonil-D-alloizoleucin-ciklohexil-ammónium-sót [6. példa, A) lépés] az 1. példa E) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - alakítunk át, azzal az eltéréssel, hogy a végterméket etil-acetátból kristályosítjuk. 6,6 g (75%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(11)=0,7. Olvadáspont: 163-163,5 °C. Elemzési eredmény a C14H14NO4CI5 (437,54) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=38,43; H%=3,22; N%=3,20;
CI%=40,52;
talált: C%=38,3; H%=3,0; N%=3,1;
CI%=40,45.
C) lépés: Metoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin
6,52 g (14,9 mmol) metoxi-karbonil-D-alloizoleucin-pentaklór-fenil-észtert [6. példa, B) lépés] feloldunk 15 ml piridinben, hozzáadunk 1,71 g (14,9 mmol) L-prolint és 4,17 ml (29,8 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 15 ml vízben és 30 ml dietil-éterben. A vizes fázist 10 ml dietil-éterrel mossuk, majd 3 M sósavval pH=3-ra savanyítjuk, és 2*20 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat 10 ml telített konyhasóoldattal mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékként kapott nyersterméket [2,6 g, Rf(6)=0,40, valamint 0,12 és 0,88] szilikagél oszlopon kromatografáljuk etil-acetát-piridin-ecetsav-víz (240:20:6:11) elegyet alkalmazva eluensként. A terméket [Rf(6)=0,40] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük, és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajos párlási maradékot vákuumexszikkátorban szárítjuk. 0,95 g (22%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,40. A FAB tömegspektrum (287 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
7. példa
Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (Poc-D-Ale-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
1,5 g (3,85 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 1,37 g (3,3 mmol) propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-sóból [7. példa, C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 5. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük el. A végterméket
HU 224 427 Β1 [Rf( 1)=0,49] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olaj, melyet vákuumexszikkátorban szárítunk. 0,83 g (43%) cím szerinti terméket kapunk. [a]D=-40° (c=0,5; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (587 [M+H]+, 740 [M+H+NBA]®) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucii-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,77 g (1,31 mmol) propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (7. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket használva - redukálunk, azzal az eltéréssel, hogy a művelet végén az olajos végterméket n-hexánnal dörzsöljük el. Szűrés és vákuumexszikkátorban történő szárítás után 0,41 g (54%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(7)=0,25.
3. lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,4 g (0,68 mmol) propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (7. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,25 g (70%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=4,27; 4,91 és 5,97. [a]D=-78,3° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (455 [M+H]+, 547 [M+H+glicerin]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin (Poc-DAle-Pro) előállítása
A) lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin
1,31 g (10 mmol) D-alloizoleucint acilezünk 1,24 ml (11 mmol) propil-oxi-karbonil-kloriddal az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 1,75 g (80%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,60.
B) lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észter
1,75 g (8 mmol) propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucint [7. példa, A) lépés] és 1,73 g (8,8 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt feloldunk 10 ml tetrahidrofuránban, az oldatot 0 °C körüli hőmérsékletre hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 1,73 g (8,4 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet hűtés mellett 10 órán át tovább keverjük, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A kapott olajat 8 mmol cím szerinti terméknek tekintve közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben.
C) lépés: Propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-ciklohexil-ammónium-só
A fenti B) lépésben kapott, 8 mmol propil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észternek tekintett olajos terméket feloldjuk 8 ml piridinben, hozzáadunk 0,92 g (8 mmol) L-prolint és 1,12 ml (8 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 15 ml vízben és 15 ml dietil-éterben. A vizes fázist 5 ml dietil-éterrel mossuk, majd 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 2« 10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 0,91 ml (8 mmol) ciklohexil-amint. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 2,3 g (70%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(9)=0,70. Olvadáspont: 142 °C (135 °C-on zsugorodik). [a]D=-28,6° (c=1; metanolban).
Elemzési eredmény a C2iH39N3O5 (413,55) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=60,99; H%=9,51; N%=10,16;
talált: C%=60,3; H%=9,95; N%=10,0.
A FAB tömegspektrum (315 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
8. példa
Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (iPoc-D-Ale-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Izopropil-oxi-karbonil-D- alloizoleucil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
2,9 g (7,4 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 3,1 g (6,32 mmol) izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-sóból [8. példa, B) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 5. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük el. A végterméket [Rf(1 )=0,55] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olaj, melyet vákuumexszikkátorban szárítunk. 2,22 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. [a]D=-37° (c=1; tertrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (587 [M+H]+, 740 [M+H+NBA]®) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid g (3,4 mmol) izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (8. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket használva - redukálunk, azzal az eltéréssel, hogy a művelet végén az olajos végterméket n-hexánnal dörzsöljük el. Szűrés és vákuumexszikkátorban történő szárítás után 1,15 g (58%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(7)=0,25.
3. lépés: Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát g (0,68 mmol) izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (8. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,59 g (70%) cím szerinti
HU 224 427 Β1 terméket kapunk. HPLC(I): k-4,09; 4,57 és 5,48. [a]D=-41,85° (c=0,5; vízben). A FAB tömegspektrum (455 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só (iPoc-D-Ale-Pro.DCHA) előállítása
A) lépés: Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin-diciklohexil-ammónium-só
1,31 g (10 mmol) D-alloizoleucint feloldunk 10 ml 1 M nátrium-hidroxid és 10 ml dioxán elegyében. Keverés és hűtés (0 °C) mellett párhuzamosan hozzácsepegtetünk 10 ml 1 M nátrium-hidroxidot és 10 ml izopropil-oxi-karbonil-kloridot 1 M-os toluolos oldatban, majd a keverést tovább folytatjuk 1 órán át 0 °C-on és 5 órán át szobahőmérsékleten. A reakcióelegyből a dioxánt és toluolt kidesztilláljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradék vizes oldatot 10 ml dietil-éterrel kirázzuk, majd 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk. A keletkezett emulziót 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml dietil-éterben, hozzáadunk 2 ml (10 mmol) diciklohexil-amint, csökkentett nyomáson kb. 5 ml-re betöményítjük, majd kb. 20 ml petroléterrel (fp.: 30-40 °C) kristályosítjuk. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, petroléterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 3,54 g (88%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,70. Olvadáspont: 70-71 °C. [<x]D=—6,7° (c=2; metanolban).
Elemzési eredmény a C22H42N2O4 (398,57) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=66,29; H%=10,62; N%=7,03;
talált: C%=66,5; H%=10,8; N%=6,9.
B) lépés: Izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só g (7,5 mmol) izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin-diciklohexil-ammónium-sót [8. példa, A) lépés] feloldunk 15 ml dietil-éterben és 8 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, a dietil-éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékot feloldjuk 8 ml tetrahidrofuránban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 1,6 g (8,25 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt és 1,6 g (7,88 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet 1 órán át 0 °C-on és 4 órán át szohabőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradék olajat 7,5 mmol izopropil-oxi-karbonil-D-alloizoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észternek tekintjük, és feloldjuk 8 ml piridinben, hozzáadunk 0,86 g (7,5 mmol) L-prolint, valamint 1,05 ml (7,5 mmol) trietil-amint, majd kb. 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 15 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban és 15 ml dietil-éterben. A vizes fázist 5 ml dietil-éterrel mossuk, majd 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 10 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 1,48 ml (8 mmol) diciklohexil-amint. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 2,23 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,50. Olvadáspont: 137-138,5 °C. [a]D=-28,3° (c=1; metanolban).
Elemzési eredmény a C27H49N3O5 (495,69) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=65,42; H%=9,96; N%=8,48;
talált: C%=64,6; H%=10,6; N%=8,63.
A FAB tömegspektrum (315 (M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
9. példa
Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-lle-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
1,85 g (4,3 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 2,52 g (7,65 mmol) etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolinból [9. példa, C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük el. A végterméket [Rf(1 )=0,60] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és exszikkátorban szárítjuk. 1,23 g (49%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1)=0,60. [a]D—31,1° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (573 [M + H]+, 726 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
1,14 g (2 mmol) etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (9. példa,
1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket használva - redukálunk. 0,85 g (74%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,32. [a]D=-23° (c=0,5; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (575 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
2,01 g (3,5 mmol) etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (9. példa,
2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,49 g (78%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC: k'=3,39; 3,65 és 4,35. [a]D=-57,9° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (441 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő:
HU 224 427 Β1
Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolin (Eoc-D-lle-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucin
0,91 g (7 mmol) D-izoleucint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk, azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 1,13 g (80%) cím szerinti terméket kapunk. [Rf(7)=0,45]. A FAB tömegspektrum (204 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
B) lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucin-2,4,5triklór-fenil-észter
1,09 g (5,4 mmol) etoxi-karbonil-D-izoleucint [9. példa, A) lépés] és 1,06 g (21,5 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt az 5. példa B) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva
- kondenzálunk. A kapott olajat [Rf(10)=0,70] 5 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-izoleucil-L-prolin
A fenti B) lépésben kapott, és 5 mmol etoxi-karbonil-D-izoleucin-2,4,5-triklór-fenil-észternek tekintett olajos terméket a 3. példa C) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - 0,58 g (5 mmol) L-prolinnal kapcsolva 1,35 g (90%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában. Rf(6)=0,50. A FAB tömegspektrum (301 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
10. példa
Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-L-arginin-aldehid(Eoc-D-Leu-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
2,28 g (5,8 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 2,41 g (5 mmol) etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-sóból [10. példa, C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 5. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával
- végezzük. A végterméket [Rf(1 )=0,62] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot diizopropil-éterből kristályosítjuk. A kristályokat kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk és exszikkátorban szárítjuk. 1,93 g (67,6%) cím szerinti terméket kapunk. A FAB tömegspektrum (573 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
1,93 g (3,38 mmol) etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (10. példa,
1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk, azzal az eltéréssel, hogy a végtermék izolálásakor a metilén-kloridos oldat párlási maradékát n-hexánnal dörzsöljük el. 1,65 g (86%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(5)=0,50. A FAB tömegspektrum (575 [M+H]+, 728 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
1,6 g (2,8 mmol) etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (10. példa,
2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - átalakítva 0,96 g (72%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=3,52; 3,83 és 4,30. [a]D=-55,05° (c=1, vízben). A FAB tömegspektrum (441 [M+H]+, 594 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só (Eoc-D-Leu-Pro.DCHA) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-D-leucin
6,55 g (50 mmol) D-leucint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk, azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozása során a végterméket tartalmazó etil-acetátos oldat bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 9,2 g (90%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(7)=0,50.
B) lépés: Etoxi-karbonil-D-leucin-2,4,5triklór-fenil-észter
9,15 g (45 mmol) etoxi-karbonil-D-leucint [10. példa, A) lépés] és 9,85 g (45 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt az 5. példa B) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - kondenzálunk. A kapott 17,2 g olajat [Rf(10)=0,65] 45 mmol cím szerinti terméknek tekintjük, és közvetlenül felhasználjuk a következő lépésben.
C) lépés: Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolin-diciklohexil-ammónium-só
A fenti B) lépésben kapott etoxi-karbonil-D-leucin-2,4,5-triklór-fenil-észtert (45 mmol) és 5,18 g (45 mmol) L-prolint az 5. példa C) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - kondenzálva, majd diciklohexil-ammónium-sóvá alakítva 11,7 g (54%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(9)=0,63. Olvadáspont: 169-173 °C. [a]D=-26,2° (c= 1; etanolban).
Elemzési eredmény a C26H47N3O5 (481,66) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=64,83; H%=9,83; N%=8,72;
talált: C%=64,6; H%=10,0; N%=8,3.
A FAB tömegspektrum (295 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
11. példa
Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (Eoc-D-Cha-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
3,5 g (9 mmol) ferc-butil-oxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 2,72 g (8 mmol) etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolinból [11. példa, C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 1.
HU 224 427 Β1 példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - végezzük, azzal az eltéréssel, hogy a végterméket [Rf(2)=0,73] tisztán tartalmazó frakciók egyesítése és bepárlása után kapott olajos maradékot diizopropil-éterrel dörzsöljük el. 3 g (61%) cím szerinti terméket kapunk. [a]D=-47,2° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (613 [M+H]+, 766 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-Lprolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
2.5 g (4 mmol) etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (11. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. Ily módon 2,2 g (90%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,30. [a]D=-30,6° (c=1; tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (615 [M+H]+, 768 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
2,3 g (4 mmol) etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil L-arginin-aldehidet (11. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - alakítunk át. Ily módon 1,4 g (75%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=6,26 és 10,0. [a]D=-75,2° (c=1; vízben). A FAB tömegspektrum (481 [M+H]+, 634 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanil-L-prolin (Eoc-DCha-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanin-diciklohexil-ammónium-só
2,74 g (16 mmol) 3-ciklohexil-D-alanint feloldunk 8 ml 2 M nátrium-hidroxidban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés mellett egyidejűleg hozzáadunk 9 ml 2 M nátrium-hidroxidot és 1,73 ml (18 mmol) etoxi-karbonil-kloridot. A reakcióelegyet egy óra keverés után 20 ml vízzel hígítjuk, 5 ml dietil-éterrel kirázzuk, 3 M sósavval 3-as pH-ra savanyítjuk, majd 4*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat mossuk 10 ml vízzel, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 3,2 ml (16 mmol) diciklohexil-amint. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 5,8 g (85%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,83. Olvadáspont: 147-148 °C. [a]D=-6° (c=0,5; kloroformban).
Elemzési eredmény a C24H44N2O4 (424,61) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=67,88; H%=10,44; N%=6,60. talált: C%=68,0; H%=10,75; N%=6,3.
B) lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-Dalanin-2,4,5-triklór-fenil-észter
5.5 g (13 mmol) etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanin-diciklohexil-ammónium-sót [11. példa, A) lépés] feloldunk 35 ml etil-acetátban és 14 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, az etil-acetátos fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson mintegy 15 ml térfogatra töményítjük. A maradék oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 2,55 g (13 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt, valamint 2,67 g (13 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet kb. 16 órán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékként kapott 5,5 g olajat [Rf(4)=0,84] 13 mmol cím szerinti terméknek tekintjük.
C) lépés: Etoxi-karbonil-3-ciklohexil-Dalanil-L-prolin
A fenti B) lépésben kapott, és 13 mmol etoxi-karbonil-3-ciklohexil-D-alanin-2,4,5-triklórfenil-észternek tekintett olajos terméket feloldjuk 15 ml piridinben, hozzáadunk 1,5 g (13 mmol) L-prolint és 1,82 ml (13 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet kb. 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban, és az oldatot kirázzuk 3*5 ml dietil-éterrel. A dietil-éteres fázisokat egyesítjük, és kirázzuk 5 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal. A nátrium-hidrogén-karbonátos oldatokat egyesítjük, 3 M sósavval pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 2,6 ml (13 mmol) diciklohexil-amint. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük és diizopropil-éterrel mossuk, majd feloldjuk 30 ml etil-acetátban és 15 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, az etil-acetátos fázist vízzel semlegesre mossuk, majd nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot diizopropil-éterrel kristályosítjuk, a kristályokat kiszűrjük és levegőn szárítjuk. 3 g (68%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(6)=0,49. A FAB tömegspektrum (341 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
12. példa
Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (Eoc-D-cOcg-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
0,43 g (1,1 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 0,36 g (1,0 mmol) etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolinból [12. példa, E) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük. A végterméket [Rf(1 )=0,65] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és exszikkátorban szárítjuk. 0,30 g (50%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1 )=0,65. [a]D=-32,7° (c=1; tetrahidrofurán20
HU 224 427 Β1 bán). A FAB tömegspektrum (626 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,15 g (0,25 mmol) etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (12. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. Ily módon 0,14 g (88%) cím szerinti terméket kapunk, Rf(7)=0,30.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,14 g (0,22 mmol) etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (12. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - alakítunk át. Ily módon 0,05 g (50%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=6,17; 7,17 és 7,96. A FAB tömegspektrum (495 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolin (Eoc-D-cOcgPro) előállítása
A) lépés: DL-ciklooktil-glicin
28,05 g (0,2 mól) ciklooktán-karbaldehidből 5-ciklooktil-hidantoint készítünk, majd ezt hidrolizáljuk DL-ciklooktil-glicinné a ciklobutil-glicin előállítására közölt [T. H. Porter és munkatársai: Arch. Biochem. Biophys. 179, 266 (1977)] eljárással analóg módon. 12,2 g (33%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 222-223 °C.
Elemzési eredmény a Ci0H19NO2 (185,26) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=64,83; H%=10,34; N%=7,56. talált: C%=64,8; H%=10,3; N%=7,45.
B) lépés: Klór-acetil-DL-ciklooktil-glicin
3,7 g (20 mmol) DL-ciklooktil-glicint [12. példa, A) lépés] feloldunk 40 ml 1 M nátrium-hidroxidban. Keverés közben, 0 °C-on 3,16 ml (40 mmol) klór-acetil-kloridot és mintegy 20 ml 1 M nátrium-hidroxidot csepegtetünk az oldathoz egyidejűleg olyan módon, hogy a pH 8 legyen. A reakcióelegyet 30 percig 0 °C-on, majd 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 30 ml vízzel hígítjuk, és 2*10 ml dietil-éterrel kirázzuk. A vizes fázist pH=2-re savanyítjuk 5 M sósavval. A kivált kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 4,12 g (79%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 147-149 °C. Rf(6)=0,60.
C) lépés: D-ciklooktil-glicin
3,9 g (15 mmol) klór-acetil-DL-ciklooktil-glicint [12. példa, B) lépés] feloldunk 160 ml 0,1 M töménységű kálium-foszfát-pufferben (pH=7), majd 30 mg CoCI2.6H2O hozzáadása után az oldat pH-ját 7-re állítjuk 0,1 M kálium-hidroxiddal. Ezután néhány kristály nátrium-azidot és 200 mg Aciláz-I enzimet (Acylase-I, Grade I from Porcine kidney, SIGMA) adunk az oldathoz, és 3 napon át keverjük szobahőmérsékleten. Ezt követően a reakcióelegyet tömény ecetsavval pH=4,5-re savanyítjuk, 300 ml etanollal hígítjuk, és éjszakán át állni hagyjuk, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot 30 ml etil-acetátban és 30 ml kálium-hidrogén-szulfátban oldjuk. Az etil-acetátos oldatot vízzel savmentesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPa nyomáson. A maradékhoz 10 ml 6 M sósavat adunk, és visszafolyós hűtő alatt forraljuk 3 órán át. Ezután az oldat pH-ját 5-re állítjuk 4 M nátrium-hidroxiddal. A kivált kristályos anyagot kiszűrjük, hideg vízzel és éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 1,1 g (6 mmol, 80%) cím szerinti anyagot kapunk. Olvadáspont: 184-185 °C. [a]D=-29° (c=0,1; 1 M sósavban).
D) lépés: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicin-ciklohexil-ammónium-só
0,92 g (5 mmol) D-ciklooktil-glicint [12. példa, C) lépés] feloldunk 8 ml dioxán és 5 ml 1 M nátrium-hidroxid elegyében, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés mellett hozzáadunk párhuzamosan 5 ml 1 M nátrium-hidroxidot és 0,48 ml (5 mmol) etoxi-karbonil-kloridot. A keverést folytatjuk egy órán át hűtés mellett és 2 órán át hűtés nélkül. A reakcióelegyből a dioxánt kidesztilláljuk csökkentett nyomáson, hozzáadunk 10 ml vizet, kirázzuk 15 ml dietil-éterrel, majd 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az etil-acetátos oldatokat egyesítjük, vízzel savmentesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után bepároljuk 2,0-2,5 kPA nyomáson. A párlási maradékot feloldjuk 15 ml dietil-éterben, és hozzáadunk 0,57 ml (5 mmol) ciklohexil-amint. A kivált kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 1,3 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 178 °C (169 °C-on zsugorodik). [a]D=-21,5° (c=0,51; metanolban). Elemzési eredmény a C25H36N2O4 (428,55) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=70,06; H%=8,47; N%=6,54;
talált: C%=70,0; H%=8,5; N%=6,45.
E) lépés: Etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicil-L-prolin
0,76 g (2 mmol) etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicin-ciklohexil-ammónium-sót [12. példa, D) lépés] feloldunk 6 ml etil-acetátban és 6 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, az etil-acetátos fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPA nyomáson bepároljuk. A maradékot 8 ml tetrahidrofuránban feloldjuk, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 0,42 g (2,2 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt, valamint 0,42 g (2,05 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPA nyomáson bepároljuk. A maradékként kapott olajat 2 mmol etoxi-karbonil-D-ciklooktil-glicin-2,4,5-triklór-fenil-észternek tekintjük, feloldjuk 4 ml piridinben, hozzáadunk 0,22 g (2 mmol) L-prolint és 0,28 ml (2 mmol) trietil-amint. A reakcióelegyet 16 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 10 ml dietil-éterben és 10 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban. A vizes fázist 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 3*5 ml etil-ace21
HU 224 427 Β1 táttal kivonatoljuk. Az etil-acetátos oldatokat egyesítjük, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A párlási maradék olaj, melyet vákuumexszikkátorban szárítunk. 0,56 g (79%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,35. [a]D=-19,2° (c=1; metanolban). A FAB tömegspektrum (355 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
13. példa
Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (Eoc-D-cHpg-Pro-Arg-H) hemiszulfát előállítása
1. lépés: Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
0,43 g (1,1 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33,1729 (1990)] és 0,34 g (1,0 mmol) etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolinból [13. példa, A) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek felhasználásával - végezzük. A végterméket [Rf(2)=0,69] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot n-hexánnal eldörzsöljük és exszikkátorban szárítjuk. 0,43 g (68%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(2)=0,69. A FAB tömegspektrum (612 [M+H]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,20 g (0,32 mmol) etoxi-karbonil-D-cikloheptilglicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (13. példa, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. Ily módon 0,16 g (81%) cím szerinti terméket kapunk. Rj(6)=0,14.
3. lépés: Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,14 g (0,22 mmol) etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-al dehidet (13. példa, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagensek és oldószerek alkalmazásával - alakítunk át. Ily módon 0,06 g (42%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(3)=0,27. HPLC(I): k’=4,36; 5,36 és 5,96. A FAB tömegspektrum (481 [M+H]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolin (Eoc-DcHpg-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicil-L-prolin
Cikloheptán-karbaldehidből kiindulva a 12. példa A)-E) lépésében leírtakkal analóg módon állítjuk elő a megfelelő köztitermékeken - azaz DL-cikloheptil-glicin, klór-acetil-DL-cikloheptil-glicin, D-cikloheptil-glicin, etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicin-ciklohexil-ammónium-só és etoxi-karbonil-D-cikloheptil-glicin-2,4,5-triklór-fenil-észter - keresztül a cím szerinti terméket olaj formájában. Rf(9)=0,52. A FAB tömegspektrum (341 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
Kontrollvegyületek szintézise
1. szintézis
Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-arginin-aldehid(Eoc-D-Phe-Pro-Arg-H) hemiszulfát
1. lépés: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolilNG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
2,3 g (5,8 mmol) ferc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33, 1729 (1990)] és 1,67 g (5 mmol) etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolinból [1. szintézis, C) lépés] kiindulva a komponensek kapcsolását és a végtermék kromatográfiás tisztítását az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű oldószereket és reagenseket alkalmazva - végezzük. A végterméket [Rf(1 )=0,37] tisztán tartalmazó frakciókat egyesítjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot exszikkátorban szárítjuk. 1,18 g (60%) cím szerinti terméket kapunk olaj formájában. A FAB tömegspektrum (607 [M+H]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolilNG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
0,9 g (1,5 mmol) etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (1. szintézis, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk. Ily módon 0,33 g (36%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(1 )=0,16.
3. lépés: Etoxi-karbonil-3fenil-D-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
0,33 g (0,54 mmol) etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (1. szintézis, 2. lépés) átalakítunk az 1. példa 3. lépésében leírt módon, arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva. 0,26 g (92%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k-4,0; 4,45 és 5,45. A FAB tömegspektrum (475 [M+H]+, 628 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolin (Eoc-D-Phe-Pro) előállítása
A) lépés: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin
16.5 g (0,1 mól) 3-fenil-D-alanint az 1. példa A) lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - acilezünk, azzal az eltéréssel, hogy a reakcióelegy feldolgozásánál a végterméket tartalmazó etil-acetát bepárlásával nyert olajat vákuumexszikkátorban szárítjuk. 14,6 g (55%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(9)=0,70.
B) lépés: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin-N-hidroxi-szukcinimid-észter
14.5 g (55,4 mmol) etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanint [1. szintézis, A) lépés] és 6,4 g (56 mmol) N-hidroxi-szukcinimidet feloldunk 60 ml tetrahidrofuránban. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 11,5 g (56 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. A reakcióelegyet hűtés mellett 10 órán át tovább keverjük, majd szűrjük és 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot benzollal kristályosítjuk. A kristályokat kiszűrjük, benzollal és
HU 224 427 Β1 dietil-éterrel mossuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. 11,3 g (60%) cím szerinti terméket kapunk. Rf(10)=0,53. [ct]D=+58,1° (c=1, dimetil-formamid). Elemzési eredmény a C16H18N2O6 (334,33) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=57,48; H%=5,42; N%=8,30;
talált: C%=57,4; H%=5,4; N%=8,3.
A FAB tömegspektrum (335 (M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
C) lépés: Etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolin
3,34 g (10 mmol) etoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin-N-hidroxi-szukcinimid-észtert [1. szintézis, B) lépés] feloldunk 15 ml piridinben, hozzáadunk 1,15 g (10 mmol) L-prolint és 1,4 ml (10 mmol) trietil-amint. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük 10 órán át, majd 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 30 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban és 10 ml dietil-éterben. A vizes fázist kirázzuk 3*5 ml dietil-éterrel. A dietil-éteres fázisokat egyesítjük, és kirázzuk 5 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal. A nátrium-hidrogén-karbonátos oldatokat egyesítjük, 1 M kálium-hidrogén-szulfáttal pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. Az olajos maradékot dietil-éterrel kristályosítjuk. A kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 2,6 g (77%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 141-143 ’C. Rf(6)=0,40.
Elemzési eredmény a C17H22N2O5 (334,33) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=61,06; H%=6,63; N%=8,38;
talált: C%=61,1; H%=6,7; N%=8,1.
A FAB tömegspektrum (335 (M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. szintézis
Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid- (Moc-D-Phe-Pro-Arg-H) hemiszulfát
1. lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolilNG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktám
4,1 g (10,5 mmol) terc-butoxi-karbonil-NGbenzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámból [S. Bajusz és munkatársai: J. Med. Chem. 33,1729 (1990)] és 2,88 g (9 mmol) metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolinból [2. szintézis, C) lépés] kiindulva az 1. példa 1. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - elvégezzük a komponensek kapcsolását és a nyers végtermék elkülönítését. A nyers végterméket ciklohexánból történő kristályosítással tisztítjuk. 4,65 g (86%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 72-82,7 ’C. Rf(2)=0,56. [a]D=+72,9° (c=1, tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (593 [M+H]+, 746 [M+H+NBA]2 * 4-) a várt szerkezetet erősíti meg.
2. lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolilN6-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehid
4,13 g (7 mmol) metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-laktámot (2.
szintézis, 1. lépés) az 1. példa 2. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - redukálunk, azzal az eltéréssel, hogy a művelet végén, a metilén-kloridos oldat bepárlása után kapott olajos terméket dietil-éterrel kristályosítjuk. Szűrés, dietil-éteres mosás és vákuumexszikkátorban történő szárítás után 3,06 g (74%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 103-107 ’C. Rf(6)=0,44. [a]D=-69° (c=1, tetrahidrofuránban). A FAB tömegspektrum (595 [M+H]+, 748 [M+H+NBA]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
3. lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid-hemiszulfát
2,68 g (4,5 mmol) metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolil-NG-benzil-oxi-karbonil-L-arginin-aldehidet (2. szintézis, 2. lépés) az 1. példa 3. lépésében leírt módon - arányos mennyiségű reagenseket és oldószereket alkalmazva - átalakítunk. Ily módon 2,15 g (94%) cím szerinti terméket kapunk. HPLC(I): k’=3,3; 3,57 és 4,09. [a]D=-87,6° (c=1, vízben). A FAB tömegspektrum (461 [M+H]+, 614 [M+H+NBA]*) a várt szerkezetet erősíti meg.
A kiindulási anyagot például az alábbi módon állítjuk elő: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolin (Moc-D-PhePro) előállítása
A) lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin-diciklohexil-ammónium-só g (30 mmol) D-fenil-alanint feloldunk 15 ml 2 M nátrium-hidroxidban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés mellett hozzáadunk párhuzamosan 16,5 ml 2 M nátrium-hidroxidot és 2,55 ml (33 mmol) metoxi-karbonil-kloridot. A reakcióelegyet fél órán át hűtés mellett és 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a reakcióelegyet hígítjuk 40 ml vízzel, kirázzuk 10 ml dietil-éterrel, majd 3-as pH-ra savanyítjuk 3 M sósavval, és 4*20 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat 20 ml vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 60 ml diizopropil-éterben, és hozzáadunk 6 ml (30 mmol) diciklohexil-amint. A kivált kristályokat kiszűrjük, diizopropil-éterrel mossuk és levegőn szárítjuk. 11,5 g (28,5%) cím szerinti terméket kapunk. R,(2)=0,56. Olvadáspont: 167-170 ’C. [a]D--37,9° (c=0,5, etanolban).
Elemzési eredmény a C23H36N2O4 (404,53) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=68,28; H%=8,97; N%=6,92.
talált: C%=68,3; H%=9,15; N%=6,75.
B) lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin-2,4,5-triklór-fenil-észter
11,3 g (28 mmol) metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanint [2. szintézis, A) lépés] feloldunk 75 ml etil-acetátban és
30,5 ml 1 M kálium-hidrogén-szulfátban. A fázisokat elválasztjuk, az etil-acetátos fázist vízzel semlegesre mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson mintegy 15 ml térfogatra töményítjük. A maradék oldatot 0 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 5,5 g (28 mmol) 2,4,5-triklór-fenolt, valamint 5,75 g (28 mmol) diciklohexil-karbodiimidet, majd a reakcióelegyet mintegy
HU 224 427 Β1 órán át állni hagyjuk. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékként kapott olajos végterméket etanolból kristályosítjuk. Szűrés, dietil-éteres mosás és vákuumexszikkátorban történő szárítás után 6,86 g (61%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 109-110 °C. Rf(4)=0,84.
Elemzési eredmény a C17H14NO4CI3 (402,66) képletre vonatkoztatva:
számított: C%=50,70; H%=3,50; N%=3,48;
Cl=26,42;
talált: C%=50,8; H%=3,2; N%=3,4;
Cl=26,6.
C) lépés: Metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanil-L-prolin 4,83 g (12 mmol) metoxi-karbonil-3-fenil-D-alanin-2,4,5-triklór-fenil-észtert [2. szintézis, B) lépés] feloldunk 12 ml piridinben, hozzáadunk 1,38 g (12 mmol) L-prolint és 1,68 ml (12 mmol) trietil-amint, majd a reakcióelegyet mintegy 16 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk. A maradékot feloldjuk 40 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonátban, és az oldatot kirázzuk 3*7 ml dietil-éterrel. A dietil-éteres fázisokat egyesítjük, és kirázzuk 7 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonáttal. A nátrium-hidrogén-karbonátos oldatokat egyesítjük, 3 M sósavval pH=3-ra savanyítjuk, és 3*10 ml etil-acetáttal kivonatoljuk. Az egyesített etil-acetátos oldatokat vízmentes nátrium-szulfáton történő szárítás után 2,0-2,5 kPa nyomáson bepároljuk, majd a maradékot dietil-éterrel kristályosítjuk, a kristályokat kiszűrjük, dietil-éterrel mossuk és vákuumexszikkátorban szárítjuk. 3,05 g (79%) cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 154-157 °C. Rf(2)=0,47.
A FAB tömegspektrum (321 [M+H]+) a várt szerkezetet erősíti meg.
Módszerek
M1. módszer Plazmaalvadék készítése
a) Lemezkedús plazmát (PRP) készítünk olyan módon, hogy humán vér és 3,8%-os nátrium-citrát—víz(1 /2) 9:1 arányú elegyét 240*g-n centrifugáljuk 5 percig.
b) Egy-egy reakcióedénybe 200 μΙ PRP-t teszünk, hozzáadunk 80 μΙ 40 mM-os kalcium-kloridot, és állni hagyjuk szobahőmérsékleten 1 órán át. A kialakult plazmaalvadékot 6*2 ml 0,9%-os nátrium-kloriddal mossuk enyhe keveréssel és 5 perc ülepítéssel, hogy az oldatban maradt enzimeket (Xa faktor és trombin) eltávolítsuk. A mosófolyadék trombintartalmát a következő módon határozzuk meg.
c) 400 μΙ mosófolyadékhoz 100 μΙ 1 mM-os Tos-Gly-Pro-Arg-pNA szubsztrátoldatot adunk, 30 percet inkubáljuk 37 °C-on, majd 100 μΙ 50%-os ecetsavval leállítjuk a reakciót. Az elegyből 150-150 μΙ-t teszünk egy 96 lyukú lemez (96-well microtitre plate) mélyedéseibe, és 405 nm-en meghatározzuk az extinkciós értékeket (ELISA READER SLT Laborinstrument GmbH, Austria). Eredményes mosás esetén az extinkció értéke kisebb, mint a kontroll 5%-a.
M2. módszer
Plazmaalvadékba zárt Xa faktor gátlásának meghatározása
a) A peptidinhibitorból 0,1-1,0-10 és 100 ng/ml-es oldatot készítünk 0,1 M Tris-pufferrel, mely 0,02% humán albumint tartalmaz, pH=8,5.
b) A mosófolyadék leszívása után az alvadókra (M1. módszer) teszünk 400 μΙ peptidoldatot (minden koncentrációban 3-3 párhuzamos minta), illetve kontrollként 400 μΙ puffért, és 5 percig inkubáljuk 37 °C-on. Ezt követően hozzáadunk 100 μΙ 2 mM-os Moc-D-Chg-Gly-Arg-pNA szubsztrátoldatot, további 30 percet inkubáljuk 37 °C-on, majd 100 μΙ 50%-os ecetsavval leállítjuk a reakciót.
c) Minden reakcióelegyből 150-150 μΙ-t teszünk egy 96 lyukú lemez (96-well microtitre plate) mélyedéseibe, és 405 nm-en meghatározzuk az extinkciós értékeket (ELISA READER SLT Laborinstrument GmbH, Austria). A kontrolihoz viszonyított, átlagolt extinkcióértékekből grafikusan meghatározzuk az 50%-os gátláshoz szükséges peptidkoncentrációt (IC50).
M3. módszer
Plazmaalvadékba zárt trombin gátlásának meghatározása
a) A peptidinhibitorból oldatokat készítünk az M2. módszer a) pontjában leírtak szerint.
b) A mosófolyadék leszívása után az alvadókra (M1. módszer) teszünk 400 μΙ peptidoldatot (minden koncentrációban 3-3 párhuzamos minta), illetve kontrollként 400 μΙ puffért, és 5 percig inkubáljuk 37 °C-on. Ezt követően hozzáadunk 100 μΙ 1 mM-os Tos-Gly-Pro-Arg-pNA szubsztrátoldatot, további 30 percet inkubáljuk 37 °C-on, majd 100 μΙ 50%-os ecetsavval leállítjuk a reakciót. A továbbiakban az M2. módszer c) pontja szerint járunk el.
M4. módszer Fibringél készítése
a) Egy-egy reakcióedénybe 200 μΙ 6 mg/ml-es humán fibrinogént (SIGMA), 25 μΙ 25 NIH E/ml-es humán trombint (SIGMA) és 40 μΙ 100 mM-os kalcium-kloridot teszünk, és állni hagyjuk 1 órán át 20-22 °C-on. A kialakult fibringélt 3*2 ml fiziológiás konyhasóoldattal mossuk enyhe keveréssel és 5 perc ülepítéssel, hogy az oldatban maradt trombint eltávolítsuk. A mosás eredményességét az M1. módszer c) pontja szerint ellenőrizzük.
M5. módszer
Fibringélhez kötött trombin gátlásának meghatározása
a) A peptidinhibitorokból 0,1-1,0-10 és 100 pg/ml-es oldatot készítünk Hepes/NaCI pufferrel (0,01 M Hepes és 0,1 M nátrium-klorid, pH=7,4).
b) A továbbiakban az M3. módszer b) pontja szerint járunk el.
HU 224 427 Β1
M6. módszer
Xa faktor gátlásának mérése oldatban 96 lyukú lemezen (96-well microtitre plate)
a) A Xa faktorból (humán, SIGMA) 1,3 E/ml-es, a peptidinhibitorokból 0,1-1,0-10 és 100 pg/ml-es oldatokat készítünk foszfátpufferrel (0,1 M nátrium-foszfát és 0,05 M nátrium-klorid, pH=7,4). A Bz-lle-GluGly-Arg-pNA szubsztrátból 0,33 nM-os desztillált vizes oldatot használunk.
b) A kontroliból és minden egyes peptidoldatból 3-3 reakcióelegyet készítünk. A lemez mélyedésébe teszünk 30 μΙ peptidet, illetve kontrollként puffért, 30 μΙ Xa faktort, 90 μΙ puffért és 150 μΙ szubsztrátot, majd 10 perc múlva 405 nm-en leolvassuk az extinkcióértékeket. A továbbiakban az M2. módszer
c) pontja szerint járunk el.
Claims (10)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. (I) általános képletű új peptidszármazékok Q-D-Xaa-Pro-Arg-H (I) aholQ jelentése Q’-O-CO- képletű acilcsoport, mely képletbenQ’ jelentése 1-3 szénatomszámú alkilcsoport, D-Xaa jelentése NH-CH(R)-CO képletű D-aminosav-gyök, ahol R jelentése 3-6 szénatomszámú egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, 7-8 szénatomszámú cikloalkilcsoport vagy ciklohexil-metil-csoport,Pro jelentése L-prolin-gyök ésArg jelentése L-arginin-gyök és ezek szerves vagy szervetlen savval képzett savaddíciós sói.
- 2. Etoxi-karbonil-D-hexil-glicil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 3. Etoxi-karbonil-D-norleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 4. Etoxi-karbonil-D-leucil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 5. Etoxi-karbonil-D-alloizoleucil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 6. Etoxi-karbonil-D-norvalil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 7. Etoxi-karbonil-D-ciklohexil-alanil-L-prolil-L-arginin-aldehid és savaddíciós sói.
- 8. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyületet - ahol Q, D-Xaa, Pro és Arg jelentése az 1. igénypontban megadott - vagy ennek valamely gyógyászatilag elfogadható sóját tartalmazza, a gyógyászatban szokásosan alkalmazott oldó-, hígító-, hordozó- és töltőanyagok kíséretében.
- 9. (I) általános képletű vegyületek - ahol Q, D-Xaa, Pro és Arg jelentése az 1. igénypontban megadott gyógyszerként való alkalmazásra.
- 10. (I) általános képletű vegyületek - ahol Q, D-Xaa, Pro és Arg jelentése az 1. igénypontban megadott - alkalmazása trombózissal és/vagy fokozott véralvadékonysággal járó állapotok kezelésére és megelőzésére szolgáló gyógyszer előállítására.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU9601528A HU224427B1 (hu) | 1996-06-05 | 1996-06-05 | Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU9601528A HU224427B1 (hu) | 1996-06-05 | 1996-06-05 | Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU9601528D0 HU9601528D0 (en) | 1996-08-28 |
HUP9601528A2 HUP9601528A2 (hu) | 1998-10-28 |
HUP9601528A3 HUP9601528A3 (en) | 1999-03-01 |
HU224427B1 true HU224427B1 (hu) | 2005-09-28 |
Family
ID=89994027
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9601528A HU224427B1 (hu) | 1996-06-05 | 1996-06-05 | Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
HU (1) | HU224427B1 (hu) |
-
1996
- 1996-06-05 HU HU9601528A patent/HU224427B1/hu not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUP9601528A3 (en) | 1999-03-01 |
HUP9601528A2 (hu) | 1998-10-28 |
HU9601528D0 (en) | 1996-08-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3453357B2 (ja) | トロンビンの阻害剤および基質 | |
US5288707A (en) | Borolysine peptidomimetics | |
KR100339456B1 (ko) | 신규펩티드유도체 | |
IL99163A (en) | Peptides containing a history of boronic acid at end C with inhibitory activity for serine proteases, their preparation and pharmaceutical preparations containing them | |
US5856307A (en) | Peptide derivatives as kininogenase inhibitors | |
EP0688336B1 (en) | Peptide boronic acid derivatives having protease inhibiting activity | |
US5919765A (en) | Inhibitors of factor XA | |
EP0922054B1 (en) | Anticoagulant peptidyl-arginine aldehyde derivatives | |
US6121241A (en) | Anticoagulant peptide aldehyde derivatives | |
HU224427B1 (hu) | Véralvadásgátló hatású peptidszármazékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk | |
KR100472754B1 (ko) | 항응고성 펩티딜-아르기닌 알데히드 유도체 | |
US5648338A (en) | Inhibitors and substrates of thrombin | |
HU224426B1 (hu) | Trombin- és Xa-faktor-gátló hatású peptidil-arginin-aldehid-származékok, a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk | |
AU2002331654A1 (en) | Peptide arginals and methods for treating disseminated intravascular coagulation | |
EP1425009A2 (en) | Peptide arginals and methods for treating disseminated intravascular coagulation | |
NO300504B1 (no) | Forbindelse og terapeutisk preparat omfattende denne |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20050721 |
|
MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |