JP3128544B2 - γ，δＴ細胞レセプターおよび検出方法 - Google Patents
γ，δＴ細胞レセプターおよび検出方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】本発明は、δＴ細胞レセプターまた
はγＴ細胞レセプターに反応する抗体、δＴ細胞レセプ
ターをコードする核酸、δＴ細胞レセプターとγＴ細胞
レセプターとの複合体およびこれを用いる免疫系異常の
検査法並びにδＴ細胞レセプターとγＴ細胞レセプター
との複合体に反応する抗体およびこれを用いる免疫系異
常の検査法に関する。 【０００２】 【従来の技術および発明が解決しようとする課題】抗原
のＴ細胞認識および主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）コ
ード化抗原によるプロセスの制限を理解することは、免
疫学における重要な目標となっている。主要段階は、Ｔ
細胞抗原レセプター（ＴＣＲ）αおよびβと命名される
サブユニットからなるＴ細胞上のクローン特異的ジスル
フィド結合ヘテロダイマーの免疫化学的同定とともに進
められている。ＴＣＲαおよびβサブユニットは、相対
分子質量（Ｍr ）約50,000および40,000ダルトンを有す
る（各々文献１，２，３を参照せよ、文献名は明細書の
最後に記載する）。Ｔ細胞の個体発生時に再配列し、か
つＴＣＲβ（文献４，５を参照せよ）およびＴＣＲα
（文献６〜８を参照せよ）サブユニットをコード化する
遺伝子は、消去式(subrtactive) ハイブリダイゼーショ
ンまたはオリゴヌクレオチドを用いたプロービング（pr
obing)のいずれかにより単離された。 【０００３】ヒトＴＣＲα，βの独特の特徴は、同時モ
ジュレーション(comodulation 、文献２を参照せよ）、
免疫共沈（coimmunoprecipitation 、文献９，１０を参
照せよ）により観察され、またＴＣＲα，β分子のＴ３
糖タンパクとの同時発現（coexpression) を必要とする
（文献１１を参照せよ）ことから、該２つの構造が関連
することが示された。続いて、２つのタンパク質複合体
の直接物理的会合は、ＴＣＲα，β分子をＴ３糖タンパ
クに化学的に架橋させ、架橋複合体の成分をＴＣＲβサ
ブユニットおよびＴ３糖タンパク（Ｍr 28,000）として
同定することによって証明された（文献１２を参照せ
よ）。Ｔ３複製は、同様にマウスＴＣＲα，βと会合さ
れる（文献１３，１４を参照せよ）。 【０００４】ＴＣＲγと命名される、Ｔ細胞において再
配列する第３遺伝子は、マウス（文献１５〜１７を参照
せよ）およびヒト（文献１８，１９を参照せよ）におい
て同定されている。しかしながら、その遺伝子の構造に
関しては、ヒトおよびマウスＴＣＲγ遺伝子の間で大き
な相違がある。すなわち、例えば、ヒトＴＣＲγ遺伝子
のｃＤＮＡは、ＴＣＲγ遺伝子産物中におけるＮ結合グ
リコシル化に関する５つの可能性のある部位を示し、マ
ウスＴＣＲγ遺伝子には該部位がはっきりと存在しない
こととは対照的である。したがって、ヒトＴＣＲγ遺伝
子産物は、その遺伝子配列から予想不能な高分子量を有
する。 【０００５】ＴＣＲγ遺伝子の再配列は、サプレッサー
−細胞毒性を有するリンパ球並びにヘルパー表現型でリ
ンパ球において生じ、そして多数のＴＣＲγ鎖を産生し
得る（文献１８〜２３を参照せよ）。しかしながら、Ｔ
ＣＲγ遺伝子の機能は未知である。さらに、ＴＣＲγ遺
伝子によってコードされるタンパク質および他の構造体
とのその可能な会合（ＴＣＲα，βおよびＴ３糖タンパ
クで生じる際の）のいずれも明らかにされていない。ヒ
トにおいては、多数の糖タンパク質のグリコシル化部位
によって、ＴＣＲγポリペプチド構造の性質およびサイ
ズを正確に予想するのことは不可能になる。加えて、発
行された文献では、ヒト疾病を診断し、監視しまたは段
階づけ(staging) することに関して、ＴＣＲγの有用性
を教示または示唆していない。 【０００６】ＴＣＲα，β分子のみが、少なくともいく
つかのＴ細胞上における抗原認識とＭＨＣ拘束との両方
を決定することは、非常にありそうでである（文献２
４，２５を参照せよ）。しかしながら、ＴＣＲα，βＴ
が、細胞の個体発生の際、Ｔ細胞選択のプロセスを示す
のか、または成熟Ｔ細胞による全ての抗原特異的認識を
示すのかということは明らかでない。例えば、サプレッ
サーＴリンパ球ではなぞが残る。すなわち、いくつかの
場合においては、該サプレッサーＴリンパ球は、ＴＣＲ
β遺伝子を削除するか、または再配列することができな
い（文献２６，２７を参照せよ）。したがって、第２の
Ｔ細胞レセプターが存在するかどうかを決定し、その構
造を定義し（特に、ＴＣＲγ遺伝子産物の可能な用途に
関して）、そしてひいてはこれがどんな機能を提供する
かを理解することは、非常に重要である。 【０００７】 【課題を解決するための手段】本発明は、少なくともδ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドの部分からなる精製ポリ
ペプチドを提供する。加えて、少なくとも１つのδＴ細
胞レセプターポリペプチドと特異的に複合体を形成し得
る物質を提供する。また、δＴ細胞レセプターポリペプ
チドを有する個々のＴ細胞を検出する方法を提供する。
この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをδＴ細胞レセ
プターポリペプチドと複合体を形成することができる物
質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドとの細胞性複合体を形成させることからなる。該細胞
性複合体を検出することにより、δＴ細胞レセプターポ
リペプチドを有する個々のＴ細胞が検出される。 【０００８】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、このサンプル
を少なくとも１つのδＴ細胞レセプターポリペプチドと
複合体を形成し得る物質と接触させ、該物質とＴ細胞レ
セプターポリペプチドとの細胞性複合体を形成すること
からなる。サンプル中のδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異
常を示さない正常被験者からのサンプル中のけるδＴ細
胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞のパーセンテ
ージと比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパ
ーセンテージの相異は、免疫系異常を示すはずである。 【０００９】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断する別の方法を提供する。この方法は、被験者からの
サンプルにおけるδＴ細胞レセプターポリペプチド担持
（bearing)Ｔ細胞の数を決定し、δＴ細胞レセプターポ
リペプチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリ
ペプチドの量を決定することからなる。このようにして
決定されたδＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、免
疫系異常を示さない正常被験者からのサンプル中の同数
のδＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞における
δＴ細胞レセプターポリペプチドの量と比較する。この
ようにして決定された量の相異は、免疫系異常を示すは
ずである。 【００１０】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者からのサン
プルにおいて、δＴ細胞レセプターポリペプチドを有す
るＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，
βＴ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からな
るＴ細胞の数を決定することからなる。このようにして
決定されたＴ細胞の数は、Ｔ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞の数と被験者からのサンプル中で決定
されたＴ細胞の群と同様に、表面マーカーを有する群に
おけるＴ細胞の数とを比較し、免疫異常を示さない被験
者からのこれらを比較する。このように決定された群に
おけるＴ細胞の数に対する、このようにして決定された
Ｔ細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞の数の相
違は、免疫系異常を示すはずである。 【００１１】本発明はまた、少なくともγＴ細胞レセプ
ターポリペプチドの部分からなる精製ポリペプチドを提
供する。加えて、少なくとも１つのγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと特異的に複合体を形成し得る物質を提供
する。さらにまた、γＴ細胞レセプターポリペプチドを
有する個々のＴ細胞を検出する方法を提供する。この方
法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと複合体を形成することができる物質と接
触させ、該物質とγＴ細胞レセプターポリペプチドとの
細胞性複合体を形成することからなる。該細胞性複合体
を検出することにより、各Ｔ細胞がγＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。 【００１２】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと複合
体を形成し得る物質と接触させ、該物質とＴ細胞レセプ
ターポリペプチドとの細胞性複合体を形成することから
なる。γＴ細胞レセプターポリペプチドを有するサンプ
ルにおけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異
常を示さない正常被験者からのサンプルにおけるγＴ細
胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞のパーセンテ
ージと比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパ
ーセンテージの相異は、免疫系異常を示すはずである。 【００１３】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおけるγＴ細胞レセプターポリペプチ
ド担持Ｔ細胞の数およびγＴ細胞レセプターポリペプチ
ド担持Ｔ細胞におけるγＴ細胞レセプターポリペプチド
の量を決定することからなる。このようにして決定され
たγＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、免疫系異常
を示さない正常被験者からのサンプルにおける同数のγ
Ｔ細胞ポリペプチド支持Ｔ細胞ポリペプチド支持Ｔ細胞
におけるγＴ細胞レセプターポリペプチドの量と比較す
る。このようにして決定された量の相異は、免疫系異常
を示すはずである。 【００１４】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおいてγＴ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８お
よびα，βＴ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の
群からなるＴ細胞の数を決定することからなる。このよ
うにして決定されたＴ細胞の数は、被験者、免疫系異常
を有さない被験者からのサンプル中で決定されたＴ細胞
の群と同じ表面マーカーを有する群のＴ細胞の数と、γ
Ｔ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞数およびγＴ
細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞数とを比較
する。このようにして決定された群におけるＴ細胞の数
に対する、このようにして決定されたγＴ細胞レセプタ
ーポリペプチドを有するＴ細胞の数の相違は、免疫系異
常を示すはずである。 【００１５】本発明はさらにまた、少なくともδＴ細胞
レセプターポリペプチドの部分および少なくともγＴ細
胞レセプターポリペプチドの部分からなる精製複合体を
提供する。また、少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプ
ター複合体と特異的に複合体を形成し得る物質を提供す
る。さらに、Ｔ細胞の各々が、γ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞を検出する方法を提供する。この
方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγ，δＴ細胞レセ
プター複合体と複合体を形成することができる物質と接
触させ、該物質とγ，δＴ細胞レセプター複合体との細
胞性複合体を形成させることからなる。該細胞性複合体
を検出することにより、各Ｔ細胞が、γ，δＴ細胞レセ
プター複合体を有するＴ細胞が検出される。 【００１６】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体
を形成し得る物質とを接触させ、該物質とγ，δＴ細胞
レセプター複合体との細胞性複合体を形成することから
なる。γ，δＴ細胞レセプター複合体を有するサンプル
におけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異常
を示さない正常被験者からのサンプルにおけるγ，δＴ
細胞レセプター複合体を有するＴ細胞のパーセンテージ
と比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパーセ
ンテージの相違は、免疫系異常を示すはずである。 【００１７】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプター複合体
担持Ｔ細胞の数およびγ，δＴ細胞レセプター複合体担
持Ｔ細胞におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体の量を
決定することからなる。このようにして決定されたγ，
δＴ細胞レセプター複合体の量を、免疫系異常を示さな
い正常被験者からのサンプルにおける同数のγ，δＴ細
胞複合体担持Ｔ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞におけ
るγ，δＴ細胞レセプター複合体の量と比較する。この
ようにして決定された量の相異は、免疫系異常を示すは
ずである。 【００１８】本発明により被験者における免疫系異常を
診断するさらに別の方法が提供される。この方法は、被
験者からのサンプルにおいて、γ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ
８およびα，βＴ細胞レセプター複合体のひとつを有す
るＴ細胞の群からなるＴ細胞の数を決定することからな
る。このようにして決定されたＴ細胞の数は、被験者か
らのサンプル、免疫異常を示さない被験者からのサンプ
ル中のγ，δＴ細胞レセプターの数、および決定された
Ｔ細胞の群と同一の表面マーカーを有する群におけるＴ
細胞の数と比較する。この群におけるＴ細胞の数に対す
る、このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞の数は、免疫系異常を示すはずで
ある。 【００１９】第１図：ＴＣＲα，βを認識するフレーム
ワーク(framework) モノクローナル抗体の反応性。 Ａ．レーン１：対照抗体、正常マウス血清。 レーン２：抗フレームワークＴＣＲα，βモノクローナ
ル抗体（βＦ１）。 Ｂ．レーン１：対照抗体、正常マウス血清。 【００２０】レーン２：抗Ｔ３モノクローナル抗体（Ｕ
ＣＨＴ−１）。 レーン３：抗フレームワークＴＣＲα，βモノクローナ
ル抗体（ＷＴ３１）。 Ｃ．正常成人末梢血リンパ球のフローサトメトリー分析
の３次元表示。緑色蛍光および赤色蛍光を、非特異的対
照ＦＩＴＣ−およびビオチン接合モノクローナル抗体に
比較して測定した。いずれかのモノクローナル抗体と反
応しない細胞は、非Ｔ細胞であった（左下隅）；二重陽
性、すなわちＯＫＴ（登録商標）３およびβＦ１の両方
と反応している細胞は、格子の中央におけるリンパ球の
集団を構成する；βＦ１と反応しＯＫＴ（登録商標）３
+ と反応しなかった細胞は、Ｘ軸にそって観察された、
小さいが区別が可能なリンパ球の群（４％のＴ３+ 細
胞）からなる。 【００２１】第２図：細胞表面Ｔ３およびＩＤＰ１およ
びＩＤＰ２細胞系によるＴ３会合（架橋）分子のＳＤＳ
−ＰＡＧＥ分析。 Ａ．ＩＤＰＩ細胞系２（ＷＴ３１+ ）および細胞系３
（ＷＴ３１- ）。 レーン 1,2,7および 8：正常マウス血清。 レーン 3,4,9および10：抗Ｔ３モノクローナル抗体（Ｕ
ＣＨＴ−１）。 【００２２】レーン5,6,11および12：抗フレームワーク
ＴＣＲα，βモノクローナル抗体（βＦ１）。 Ｂ．ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ） レーン 1,4,7および10：正常マウス血清。 レーン 2,5,8および11：抗フレームワークＴＣＲモノク
ローナル抗体（βＦ１）。 【００２３】レーン 3,6,9および12：抗Ｔ３モノクロー
ナル抗体（ＵＣＨＴ−１）。 ＤＳＰと架橋した 125Ｉ標識化試料ＸＬ。 Ｃ．ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）および細胞
系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ） レーン 1および 3：正常マウス血清。 【００２４】レーン 2および 4：抗Ｔ３モノクローナル
抗体（ＵＣＨＴ−１）。 第３図：ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγのｃＤＮＡ
プローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮＡ
のノーザンブロット分析。 Ａ．レーン１：ＩＤＰ２細胞系６（ＷＴ３１- ） レーン２：Ｔ白血病細胞系 ＨＢＰ−ＭＬＴ。 Ｂ．レーン１：ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ
３+ ）。 【００２５】レーン２：ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ
３１- Ｔ３+ ）。 レーン３：細胞系 ＨＰＢ−ＭＬＴ。 第４図：ＩＤＰ２細胞系７からの抗Ｖγおよび抗Ｃγペ
プチド血清の免疫沈降。Ａ．レーン１：正常マウス血
清。 レーン２：抗Ｖγペプチドマウス血清。 【００２６】レーン３：正常家兎血清。 レーン４：抗Ｃγペプチド家兎血清。 Ｂ．レーン１：正常マウス血清。 レーン２：抗Ｔ３モノクローナル抗体（ＵＣＨＴ−
１）。 レーン３：正常家兎血清。 【００２７】レーン 4,5：抗Ｃγペプチド家兎血清。 第５図：ヒト腫瘍および末梢血リンパ球系からのＴＣＲ
γ，δおよびＴ３の免疫沈降。125 Ｉ標識化細胞溶解物
からの免疫沈降を、還元(reducing)（Ｒ）または非還元
（ＮまたはＮＲ）条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１０％アク
リルアミド）によって分析した。サイズマーカー、Ｍr,
１０００。 Ａ．ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞上のＴＣＲγ，δおよ
びＴ３サブユニット。免疫沈降は、１μg 対照ｍＡｂ
Ｐ３（Ｐ３Ｘ６３．Ａｇ８骨髄腫により分泌されたｍＡ
ｂ，レーン１，３，５および６）；１μg ＵＣＨＴＩ
（抗Ｔ３、文献４０を参照せよ）（レーン２，４，７お
よび８）；１０μg 正常ラビット血清（ＮＲＳ，レーン
９）および１０μg 抗Ｃペプチド血清（抗ＴＣＲγ）
（レーン１０）を用いて行った。矢印は、ＲおよびＮＲ
条件下で、移動度が変化するＴＣＲδサブユットの位置
を示す。 【００２８】末梢血Ｔ細胞クローン、ＰＢＬ Ｃ１およ
びＷＴ３１- ＰＢＬ系上のＴＣＲγ，δおよびＴ３サブ
ユニット。免疫沈降は、対照ｍＡｂＰ３（レーン１，
４，９および１２）、１μg βＦ１（抗ＴＣＲβ）
（レーン２，５，１０および１３）、ＮＲＳ（レーン７
および１５）および抗ペプチド血清（レーン８および１
６）を用いて実行した。白抜きの矢印は、ジスルフィド
結合Ｆ１および未反応性Ｔ３会合種、黒塗りの矢印は、
ジスルフィド結合していないＴ３会合物質（Ａにおける
ＴＣＲδ等）を示し、この物質は、非還元条件下で増加
したＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動度を示す。 【００２９】第６図：ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮ
Ａのノーザンブロット分析。Ｔ白血病細胞系ＨＰＢ−Ｍ
ＬＴ（各プローブに関してレーン１）およびＰＢＬＣ１
（各プローブに関してレーン２）からの総ＲＮＡ調製物
をＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγプローブを用いて
ノーザンブロット分析した。 第７図：ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。（パネルA 〜D ）ＰＢＬ Ｃｌ細胞からの還元
（分離）および非還元（二量性）Ｔ３−会合ポリペプチ
ドの比較をＣＨＡＰＳに溶解し、抗Ｔ３ｍＡｂで免疫沈
降させた。二次元ゲル電気泳動を、還元条件下（Ａ，
Ｃ）あるいは非還元条件下（Ｂ，Ｄ）にて行った。Ｔ３
γ，δおよびε部位を標識し、ＲおよびＮの両方の条件
下にて、同様の位置にフィーカシングした。ジスルフィ
ド結合の開裂後、Ｔ３会合ポリペプチド（４０Ｋおよび
３６Ｋ）は、Ｒ条件下ではＴ３γの近くのフォーカシン
グ位置に移動したが、Ｎ条件下（二量体の両組成物が存
在する場合（６８Ｋ））、より酸性の位置にシフトし
た。分子量マーカーはＭr とした。 【００３０】第８図：ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆
体の二次元ゲル分析。（パネルE 〜H ）グリコシル化お
よび未グリコシル化ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１ ＴＣ
Ｒペプチド前駆体の分析。ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１
細胞は、35Ｓ−メチオニンでパルス標識し、変性条件下
に溶解し、抗Ｃγペプチド血清で免疫沈降した。免疫沈
降は、ついでエンド−Ｈで処理または模擬処理し、二次
元ゲル電気泳動により分析した。グリコシル化ＴＣＲγ
ペプチドを白抜き矢印で、グリコシル化されていないＴ
ＣＲγを黒塗り矢印で示す。見かけの相対分子質量をパ
ネルＡおよびＢ（図示せず）に用いた標準物質の移動か
ら計算した。各パネルにおけるひし形で示される小量の
夾雑しているアクチンは、内部マーカーとして作用し
た。Ｅ，ＩＤＰ２ ＴＣＲγ、模擬培養、Ｆ，ＩＤＰ２
ＴＣＲγ，エンド処理；Ｇ，ＰＢＬ Ｃ１ ＴＣＲγ
模擬培養、Ｈ，ＰＢＬ Ｃ１ ＴＣＲγエンド処理。 【００３１】第９図：ＴＣＲγポリペプチドを発現して
いるＴ細胞におけるγおよびβ遺伝子の再配列。ＩＤＰ
２細胞系、ＰＢＬ Ｃ１，ＰｂＬ Ｃ２，ＷＴ３１- Ｐ
ＢＬ系、胎児胸腺、新生児胸腺，ＰＢＬおよびＢ細胞系
（生殖細胞系(germline)のためのＪＹ）から単離された
ゲノムＤＮＡをＴＣＲγ（Ａ，Ｂ）およびＴＣＲβ
（Ｃ）遺伝子の再配列に関してサザンブロット分析を行
った。ゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩ（Ａ，Ｃ）またはＥｃ
ｏＲＩ（Ｂ）で消化し、アガロースゲル上で分画し、32
Ｐ−標識Ｊγ1,3 （Ａ，Ｂ）またはＣβ2プローブ
（Ｃ）でのハイブリダイゼーションのためにニトロセル
ロースフィルターに転写した。矢印およびローマ数字は
ＴＣＲγの再配列を示す。分子量マーカーはＫｂであ
る。 【００３２】第10図〜第12図（それぞれパネルA,B,C に
対応）：ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞溶
解。（パネルA,C ）ＩＤＰ２またはＰＢＬ Ｃ１エフェ
クター細胞を（表示されたエフェクター：標的（Ｅ：
Ｔ）比で）51Ｃγ- 標識ターゲット細胞Ｋ５６２（白血
球系）、Ｕ９３７（単核細胞系）、ＭＯＬＴ−４，ＣＥ
Ｍ（Ｔ白血病系）、ダウディ（Daudi)（バーキットリン
パ腫系）または同種異系または自己のＰＢＬ（ヒトＰＢ
Ｌの３日目のブラスト細胞(blasts)）とともに培養し
た。各標的に対する 51Ｃγの特異的放出％を示す。抗Ｔ
３ ｍＡｂ ＵＣＨＩを３０分間０℃でエフェクター細
胞（＋抗Ｔ３）に予備結合した後に同様のアッセイを行
った。（パネルB ）種々のｍＡＢによるＭＯＬＴ−４タ
ーゲット細胞のＩＤＰ２細胞溶解の阻害。ＩＤＰ２およ
び51Ｃγ標識化ＭＯＬＴ−４細胞を種々の希釈度の抗Ｍ
ＨＣクラス１ｍＡｂ Ｗ６／３２（抗ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，
Ｃ単形態性決定基、文献５８を参照せよ）、抗ＨＬＡ−
Ａ，Ｂ，Ｃ（単形態性決定基、文献５９を参照せよ）、
４Ｅ（抗−ＨＬＡ−ＢおよびＣ部位、文献６０を参照せ
よ）、１３１（抗ＨＬＡ−Ａ座、文献６１を参照せよ）
または抗ＭＨＣ（クラスIIｍＡＢ ＬＢ３．１（抗ＤＲ
特異的、文献６２を参照せよ）、抗Ｌｅｕ １０（抗Ｄ
Ｑ特異的、文献６３を参照せよ）、または抗Ｔ３ ｍＡ
Ｂ ＵＣＨＴＩの存在下にて、４０：１のＥ：Ｔ比で一
緒に培養した。より高い稀釈倍率は、腹水としてｍＡｂ
のために用い（Ｗ６／３２，４Ｅ，１３１，Ｌ Ｂ３．
１およびＵＣＨＴＩ）、また低い稀釈倍率は、市販のｍ
Ａｂ（抗Ｌｅｕ １０）または培養上清（抗ＨＬＡ−
Ａ，Ｂ，Ｃ）のために用いた。 【００３３】第13図：ピーア（Peer) 細胞から誘導され
たＴＣＲγ鎖の免疫沈降。レーン１〜１８は、同じハイ
ブリドーマ融合実験からの種々のハイブリドーマ培養上
清である。レーン４は、抗γ鎖モノクローナル抗体３４
Ｄ１２であり、レーン９は対照Ｐ３×６３Ａｇ８．６５
３培養上清であり、またレーン１０は、対照の正常マウ
ス血清である。 ｀第14図：ＩＤＰ２細胞からのＴＣＲδ鎖の免疫沈降。 【００３４】レーン１は対照Ｐ３×６３Ａｇ．８．６５
３は培養上澄液、レーン２および５はモノクローナル抗
体４Ａ１培養上清、レーン３はＬｅｕ４、またレーン４
は対照正常ラビット血清である。ＩＤＰ２細胞は、ラク
トペルオキシターゼを用いて125 Ｉ標識し、２％トライ
トンＸ１００（Triton Ｘ１００）に可溶化した。レー
ン４および５において、この溶解物を３分間煮沸し、４
容量の１％トライトンＸ１００で稀釈し、１％ＳＤＳ中
で４℃で１晩変性した。これによりＴＣＲγおよびδ鎖
を分離した。このようにして鎖を分離した後、モノクロ
ーナル抗体４Ａ１によって、上述のごとく、ＴＣＲδ鎖
（レーン５）が免疫沈降された。 【００３５】 【発明の実施の形態】しかして、本発明は、少なくとも
δＴ細胞レセプターの部分からなる精製ポリペプチドを
提供するものである。このポリペプチドは、少なくとも
内部鎖、共有結合、ジスルフィド架橋を有しすることが
できる。加えて、ポリペプチドは、分子量約４０，００
０ダルトンのδＴ細胞レセプターポリペプチドからなる
ものであってもよい。さらに、δＴ細胞レセプターポリ
ペプチドは、ヒトδＴ細胞レセプターポリペプチドであ
ってもよい。 【００３６】少なくとも１つのδＴ細胞レセプターポリ
ペプチドと特異的に複合体を形成し得る物質もまた、本
発明によって提供される。この発明の一実施例態様にお
いて、該物質は、１つのδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドと特異的に複合体を形成できる。この発明の他の実施
態様において、該物質は、１以上のδＴ細胞レセプター
ポリペプチドと特異的に複合体を形成できる。この発明
の他の実施態様において、該物質は、１以上のδ細胞レ
セプターポリペプチドと特異的に複合体を形成できる。
該物質は、抗体であってもよい。該抗体は、ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。 【００３７】また、Ｔ細胞の各々がδＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞を検出する方法を提供す
る。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをδＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を形成することができ
る物質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペ
プチドとの細胞性複合体を形成することからなる。該細
胞性複合体を検出することにより、各Ｔ細胞がδＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。 【００３８】したがって、この発明の一実施態様におい
て、δＴ細胞レセプターポリペプチドは、Ｔ細胞上の表
面上に存在する。この発明の別の実施態様において、δ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドは、δＴ細胞の細胞表面
上に存在する。該方法は、特異δＴ細胞レセプターポリ
ペプチド複合体を形成することによって行なわれる。こ
の発明の一実施態様において、特異δＴ細胞レセプター
ポリペプチドは、サプレッサーＴ細胞質内に存在する。 【００３９】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。本明細書において、免疫
系異常とは、正常または標準的な免疫応答と比較して亢
進したまたは減弱した免疫応答であることを特徴とす
る、抗原に対する免疫学的応答状態を意味するものであ
る。したがって、免疫系異常としては、これに限定され
るものではないが、免疫不全状態、例えば、後天性免疫
不全症候群および先天性免疫不全症等、過免疫状態およ
び過免疫症、例えば、アレルギーおよび枯草熱等が挙げ
られる。本発明の方法は、被験者からのサンプルにおけ
るＴ細胞の数を決定し、サンプルを少なくとも１つのδ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドと複合体を形成し得る物
質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドとの細胞性複合体を形成することからなる。δＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するサンプルにおけるＴ細
胞のパーセンテージを決定し、免疫系異常を示さない正
常被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプターポ
リペプチドを有するＴ細胞のパーセンテージと比較す
る。このようにして決定されたＴ細胞のパーセンテージ
の相異は、免疫系異常を表すものである。 【００４０】この発明の一実施態様における免疫系異常
は癌である。癌は、白血病またはリンパ腫であり得る。
この発明の他の実施態様における免疫系異常は、後天性
免疫不全症候群である。この発明の別の実施態様におけ
る免疫系異常は、先天性免疫不全症である。この発明の
さらに別の実施態様における免疫系異常は、自己免疫疾
患である。 【００４１】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。この発明の一実施態様における被験者は、ヒ
トである。さらにまた被験者からのサンプルは、血液ま
たは組織であってもよい。本発明は、被験者における免
疫系異常を診断する別の方法を提供する。この方法は、
被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプターポリ
ペプチド担持Ｔ細胞の数およびδＴ細胞レセプターポリ
ペプチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリペ
プチドの量を決定することからなる。このようにして決
定されたδＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、被験
者からのサンプル、免疫系異常を示さない正常被験者か
らのサンプルにおける同数のδＴ細胞レセプターポリペ
プチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリペプ
チドの量と比較する。このようにして決定された量の相
異は、免疫系異常を表す。この発明の一実施態様におい
て、単一のδＴ細胞レセプターポリペプチドの量が決定
される。 【００４２】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者からのサン
プル中でδＴ細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細
胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，βＴ細
胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からなるＴ細
胞の数を決定することからなる。このようにして決定さ
れたＴ細胞の数は、被験者からのサンプル、免疫異常を
示さない被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプ
ターポリペプチドを有するＴ細胞の数および決定された
Ｔ細胞の群と同一の表面マーカーを有する群におけるＴ
細胞の数と比較する。このようにして決定された群中の
Ｔ細胞に対するδＴ細胞レセプターポリペプチドを有す
るこのようにして決定されたＴ細胞の数の相違は、免疫
系異常を表す。 【００４３】本発明はまた、分子量約40,000ダルトンの
δＴ細胞レセプターをコードする核酸分子を提供する。
この発明の一実施態様において、該分子は、ＤＮＡ分子
である。さらにまた、δＴ細胞レセプターポリペプチド
をコードする核酸分子と相補的な核酸分子が提供され
る。少なくともγＴ細胞レセプターの部分からなる精製
ポリペプチドもまた、本発明によって提供される。該ポ
リペプチドは、分子量約55,000ダルトンのγＴ細胞レセ
プターを含む。本発明の一実施態様においては、該ポリ
ペプチドは、分子量約31,000ダルトン〜約40,000ダルト
ンを有するペプチド配列を有する。加えて、該ポリペプ
チドヒトγＴ細胞ポリペプチドであってもよい。 【００４４】本発明はさらに、お互い会合された２つの
本発明のγＴ細胞レセプターポリペプチドからなる精製
複合体を提供する。この発明の一実施態様において、該
２つのγＴ細胞レセプターポリペプチドは、少なくとも
１つの内部鎖、共有結合、ジスルフィド結合によりお互
いに会合する。この発明の他の実施態様において、該２
つのγＴ細胞レセプターは、お互い非共有結合的に会合
する。この発明の別の実施態様において、該２つのγＴ
細胞レセプターは、同一の定常ドメインを有する。この
発明のさらに別の実施態様において、該２つのγＴ細胞
レセプターポリペプチドは、異なる定常ドメインを有す
る。 【００４５】本発明はまた、少なくとも１つのγＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を特異的に形成し得る
物質を提供する。この発明の一実施例態様において、該
物質は、１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと特異
的に複合体を形成できる。この発明の他の実施態様にお
いて、該物質は、１以上のγＴ細胞レセプターポリペプ
チドと特異的に複合体を形成できる。該物質は、抗体で
あり得る。この発明の一実施態様において該抗体は、ポ
リクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得
る。 【００４６】また、Ｔ細胞の各々がγＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞を検出する方法を提供す
る。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を形成することができ
る物質と接触させ、該物質とγＴ細胞レセプターポリペ
プチドとの細胞性複合体を形成することからなる。該細
胞性複合体を検出することにより、各Ｔ細胞がγＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。
この発明の一実施態様においてγＴ細胞レセプターポリ
ペプチドは、Ｔ細胞表面上に存在する。この発明の他の
実施態様において、γＴ細胞ポリペプチドは、γＴ細胞
の細胞質内に存在する。この発明の別の実施態様におい
て、該物質は、特異的γＴ細胞ポリペプチドと複合体を
形成し得る。この該特異γＴ細胞レセプターポリペプチ
ドは、サプレッサーＴ細胞内のみに存在し得る。さらに
また、該γＴ細胞レセプターポリペプチドは、別のγＴ
細胞レセプターポリペプチドと会合し得る。この発明の
一実施態様において、該γＴ細胞レセプターポリペプチ
ドは、別のγＴ細胞レセプターポリペプチドと会合す
る。この発明の他の態様における該γＴ細胞レセプター
ポリペプチドは、主要組織適合抗原に拘束されない細胞
毒性Ｔリンパ球のみにおいて、別のγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと会合する。さらにまた、該主要組織適合
抗原に拘束されない細胞毒性Ｔリンパ球は、Ｔキラー細
胞またはナチュラルキラー様細胞であり得る。 【００４７】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと複合
体を形成し得る物質と接触させ、該物質とγＴ細胞レセ
プターポリペプチドとの細胞性複合体を形成することか
らなる。γＴ細胞レセプターポリペプチドを有するサン
プルにおけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、被験者
からのサンプル、免疫系異常を示さない正常被験者から
のサンプルにおけるγＴ細胞レセプターポリペプチドを
有するＴ細胞のパーセンテージと比較する。このように
して決定されたＴ細胞のパーセンテージの相異は、免疫
系異常を表す。この発明の一実施態様における免疫系異
常は癌である。癌は、白血病またはリンパ腫であり得
る。この発明の他の実施態様における免疫系異常は、後
天性免疫不全症候群である。この発明の別の実施態様に
おける免疫系異常は、先天性免疫不全症である。この発
明のさらに別の実施態様における免疫系異常は、自己免
疫疾患である。 【００４８】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。また免疫系異常が診断される被験者はヒトで
あってもよい。さらにまた、γＴ細胞レセプターポリペ
プチドを有するＴ細胞のパーセンテージが決定されるサ
ンプルは、血液または組織であってもよい。被験者にお
ける免疫系異常を診断するさらに別の方法は、本発明に
よって提供される。この方法は、被験者からのサンプル
におけるγＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞の
数およびγＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞に
おけるγＴ細胞レセプターポリペプチドの量を決定する
ことからなる。このようにして決定されたγＴ細胞レセ
プターポリペプチドの量を、免疫系異常を示さない正常
被験者からのサンプルにおける同数のγＴ細胞ポリペプ
チド担持Ｔ細胞におけるγＴ細胞レセプターポリペプチ
ドの量と比較する。このようにして決定された量の相異
は、免疫系異常を表す。この発明の一実施態様におい
て、単一のγＴ細胞レセプターポリペプチドの量が決定
される。 【００４９】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者らかのサン
プルにおいてγＴ細胞レセプターポリペプチドを有する
Ｔ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，β
Ｔ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からなる
Ｔ細胞の数を決定することからなる。このようにして決
定されたＴ細胞の数を、被験者からのサンプル、免疫異
常を示さない被験者からのサンプルにおけるγＴ細胞レ
セプターポリペプチドを有するＴ細胞の数および被験者
からのサンプルにおいて決定されたＴ細胞の群と同一の
表面マーカーを有する群におけるＴ細胞の数と比較す
る。このようにして決定された群におけるＴ細胞の数に
対するγＴ細胞レセプターポリペプチドを有するこのよ
うにして決定されたＴ細胞の数の相違は、免疫系異常を
表す。 【００５０】さらに、少なくともδＴ細胞レセプターポ
リペプチドの部分および少なくともγＴ細胞レセプター
ポリペプチドの部分からなる精製複合体が、本発明によ
って提供される。この複合体は、分子量約40,000ダルト
ンのδＴ細胞レセプターポリペプチドおよび分子量約5
5,000ダルトンのγＴ細胞レセプターポリペプチドを含
む。また、δＴ細胞レセプターポリペプチドはヒトγＴ
細胞ポリペプチドであってもよく、γＴ細胞レセプター
ポリペプチドはヒトγＴ細胞ポリペプチドであってもよ
い。さらにまた、δＴ細胞レセプターポリペプチドおよ
びγＴ細胞レセプターポリペプチドは、少なくとも１つ
の内部鎖、共有結合、ジスルフィド結合によりお互い会
合することができ、あるいはお互い非共有結合的に会合
することができる。 【００５１】また、少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセ
プター複合体と特異的に複合体を形成し得る物質が本発
明によって提供される。この物質は、１つのγ，δＴ細
胞レセプター複合体と複合体を形成できる。さらに、こ
の物質は、１以上のγ，δＴ細胞レセプター複合体と複
合体を形成できる。この発明の一実施態様において、該
物質は抗体である。この発明の他の実施態様において、
該物質は、ポリクローナル抗体である。この発明の別の
実施態様において、該物質は、モノクローナル抗体であ
る。 【００５２】本発明はさらに、Ｔ細胞の各々がγ，δＴ
細胞レセプター複合体を有する前記Ｔ細胞を検出する方
法を提供する。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプル
をγ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体を形成するこ
とができる物質と接触させることにより、該物質とγ，
δＴ細胞レセプター複合体との細胞性複合体を形成する
ことからなる。該細胞性複合体を検出することにより、
Ｔ細胞の各々がγ，δＴ細胞レセプター複合体を有する
前記Ｔ細胞が検出される。本発明の一つの態様におい
て、γ，δＴ細胞レセプター複合体はＴ細胞の表面上に
存在する。本発明の別の態様においては、γ，δＴ細胞
レセプター複合体は、Ｔ細胞の細胞質内に存在する。本
発明のさらに別の態様においては、前記物質は、特異的
γ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体を形成すること
ができる。該特異的γ，δＴ細胞レセプター複合体は、
サプレッサーＴ細胞のみに存在し得る。 【００５３】さらに、被験者における免疫系異常を診断
する方法が、本発明によって提供される。この方法は、
被験者から採取したサンプルにおけるＴ細胞の数を決定
し、サンプルを少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体と複合体を形成し得る物質と接触させることに
より、該物質とγ，δＴ細胞レセプター複合体との細胞
性複合体を形成することからなる。前記サンプルにおけ
る、γ，δＴ細胞レセプター複合体を有するＴ細胞のパ
ーセンテージを決定し、免疫系異常を示さない正常被験
者からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプター複合
体を有するＴ細胞のパーセンテージと比較する。このよ
うにして決定したＴ細胞のパーセンテージの相異によ
り、免疫系異常が示される。本発明の一つの態様におい
て、免疫系異常は、癌を指す。癌は、白血病またはリン
パ腫であり得る。本発明の他の態様において、免疫系異
常は、後天性免疫不全症候群を指す。本発明のさらに別
の態様において、免疫系異常は、先天性免疫不全症であ
る。本発明のさらに他の態様において、免疫系異常は、
自己免疫疾患である。 【００５４】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。さらに、免疫系異常が診断される被験者は、
ヒトである。さらにまた、γ，δＴ細胞レセプター複合
体を有するＴ細胞のパーセンテージが決定されるサンプ
ルは、血液または組織からなることができる。本発明に
より、被験者における免疫系異常を診断するさらに別の
方法が提供される。この方法は、被験者からのサンプル
におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞の数
およびγ，δＴ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞におけ
るγ，δＴ細胞レセプター複合体の量を決定することか
らなる。このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプ
ター複合体の量は、免疫系異常を示さない正常被験者か
らのサンプルにおける同数のγ，δＴ細胞レセプター複
合体担持Ｔ細胞におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体
の量と比較される。このようにして決定された量の相異
により、免疫系異常が示される。本発明の一つの態様に
おいて、単一のγ，δＴ細胞レセプター複合体の量が決
定される。 【００５５】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者から採取し
たサンプルにおいてγ，δＴ細胞レセプター複合体を有
するＴ細胞の数、および表面マーカーＴ４，Ｔ８および
α，βＴ細胞レセプター複合体のひとつを有するＴ細胞
の群からなるＴ細胞の数を決定することからなる。この
ようにして決定されたＴ細胞の数は、免疫異常を示さな
い被験者からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体を有するＴ細胞の数、および被験者からのサン
プルにおいて決定されたＴ細胞の群と同一の表面マーカ
ーを有する群におけるＴ細胞の数と比較される。このよ
うにして決定された群におけるＴ細胞の数と比較した場
合の、このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体を有するＴ細胞の数の相違により、免疫系異常
が示される。 【００５６】本発明によって提供される種々の異常を診
断する方法およびＴ細胞を検出する方法は、以下に詳述
する新規ポリペプチド類および該ポリペプチド類と複合
体を形成する物質に基づく。該方法は、これに限定され
るものではないが本発明に関して当業者に公知の蛍光活
性化細胞選別およびオートラジオグラフィ等、Ｔ細胞を
検出し、定量する方法を利用する。 【００５７】 【実施例】〔実施例１〕物質および方法 リンパ球の培養および細胞集団分析 生育可能なリンパ球をフィコール−ハイパーク高密度遠
心分離により単離し、特異的モノクローナル抗体、例え
ばＷＴ３１（文献２８，２９）、またはＯＫＴ（登録商
標）３，ＯＫＴ（登録商標）４またはＯＫＴ（登録商
標）８［Ortho Diagnostic Systems, Inc., Raritan, N
J]、を３０分間４℃で染色した。洗浄後、細胞ペレット
をさらにフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴ
Ｃ）接合ヤギ抗マウスＩｇＧ（ａｂ）’2 フラグメント
で染色した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析を先
に記載のごとく（文献３７）オルソーサイトフルオログ
ラフ（ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｇｒａｐｈ）またはコール
ター・エピシス（Coulter Epics)で行った。特異的に染
色された陽性細胞は、各細胞系（非特異的対照モノクロ
ーナル抗体で染色）に関する陰性対照プロファイルと比
較して決定された。ベースラインによる陰性対照プロフ
ァイルの妨害より大きい蛍光強度チャンネル数を有する
細胞を陽性として数え、陽性％を合計総細胞数と比較し
て計算した。 【００５８】全ＩＬ−２依存細胞を、前記のごとく（文
献３４）、ＲＰＭＩ １６４０、１０％ヒト血清および
２〜５ユニットのインターロイキン−２活性含有馴化培
地からなる培地中においてin vitroで蒔いた。同種抗原
（ａｌｌｏ）活性化培養物を１週間間隔で照射同種異系
末梢血リンパ球で刺激した。マイトジェン、すなわちフ
ィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、活性化系を培養開始
時に１：１０００稀釈ＰＨＡ［Difco, Detroit, MI］で
刺激した。 【００５９】モノクローナル抗体を用いた細胞培養物の
反応性および特徴づけ 125 Ｉ標識化リンパ球溶解産物からの免疫沈降物をドデ
シル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で分析した。放射性ヨウ素化Ｔ白
血病細胞系ＨＰＢ−ＭＬＴおよびジャーカット（Jurke
t) 、ＨＴＬＶ−１形質転換細胞系ＡＮＩＴＡおよび休
止末梢血リンパ球を１％トライトン−Ｘ−１００（ＴＸ
−１００）に可溶化し、対照抗体、正常マウス血清（Ｎ
ＭＳ）またはＴＣＲα，βに対するフレームワーク抗
体、すなわちＦ１（文献５４）で免疫沈降した。βＦ１
モノクローナル抗体を標準的な方法で調製した（文献４
６，４７，５２）。文献２８に記載のように精製したＴ
ＣＲα，βで免疫化したマウスからの脾臓細胞を融合実
験用に用いた。陽性クローン、βＦ１，が上述のごとく
Ｔ細胞系および末梢血リンパ球での免疫沈降により得ら
れた。 【００６０】125Ｉ標識化リンパ球を０．１％ＴＸ−１
００に可溶化し、ＮＭＳ、抗Ｔ３抗体ＵＣＨＴ−１（文
献４０）およびＴＣＲに対するフレームワーク抗体、す
なわちＷＴ３１で免疫沈降した。ＷＴ３１での免疫沈降
の効率をここに用いられるＴＸ−１００低濃度で改善
し、またモノクローナル抗体１８７．１（文献５３）を
第２抗体として用いた。 【００６１】正常末梢血リンパ球の２色ＦＡＣＳ分析を
抗ＴＣＲα，βモノクローナル抗体および抗Ｔ３モノク
ローナル抗体を用いて行った。末梢血リンパ球は、最初
にＦＩＴＣ接合抗モノクローナル抗体（ＯＫＴ（登録商
標）３）で染色し、ついでビオチニル抗ＴＣＲα，βモ
ノクローナル抗体（ＢＦ１）で染色し、ひきつづき藻紅
素接合アビジン［ＰＥ−アビジン、Becton Dickenson,
Mt. View, CA] で染色した。 生育可能なリンパ球をＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥおよびＦＡＣＳ分析のためにフィコール
−ハイパーク高密度遠心分離により単離した。ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ分析に関して、リンパ球は、ラクトペルオキシ
ターゼ技術により放射性ヨウ素化され、１％ＴＸ−１０
０に可溶化し、そして１マイクログラムの特異抗体、す
なわちモノクローナル抗体βＦ１またはモノクローナル
抗体ＵＣＨＴ−１、または１ｍｌのＮＭＳを用いて免疫
沈降した。免疫沈降物をついで還元条件下１０．５％Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。 125Ｉ標識化分子は、
先に記載のごとく（文献２８）オートラジオグラフィー
により可視化した。 【００６２】２色サイトフルオログラフィー分析は、ま
ず第１にＦＩＴＣ−ＯＫＴ（登録商標）３モノクローナ
ル抗体で４５分間４℃にて染色することによって行なわ
れた。洗浄後、リンパ球を１％パラホルムアルデヒドに
１５分間２３℃にて固定し、ついで７０％エタノールリ
ン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中−２０℃にて５分間培
養した。さらに洗浄後、細胞をビオチニル−βＦ１モノ
クローナル抗体で染色し、ついでＰＥ−アビジンで染色
した。分析は、オルソーサイトフルオログラフ（オルソ
ー・ダイアゴスティック・システムズ、インコーポレー
ション．，ウエウト ウッド、マサチューセッツ州）で
行なわれた。 【００６３】ＩＤＰ１およびＩＤＰ２細胞系上のＴ３分
子と会合された細胞表面分子の分析 ＩＤＰ１細胞系２（ＷＴ３１+ ）および細胞系３（ＷＴ
３１- ）を上述のごとく 125Ｉ−標識化した。放射性ヨ
ウ素化された無傷のリンパ球をついでジチオビスサクシ
ニミジルプロピオネート５０マイクログラム／ml含有Ｐ
ＢＳ（ｐＨ８）中の培養により架橋を行うかまたは模擬
培養をした。細胞をついで１％ＴＸ−１００中に可溶化
し、先に記載のごとく（文献１２）免疫沈降した。抗Ｔ
３免疫沈降におけるＴ３会合分子（Ｍr ４０，０００
〜５５，０００）は、未架橋サンプルにおいて低レベル
でまたは架橋サンプルにおいて高レベルで検出された。 【００６４】ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３
+ ）を 125Ｉ−標識化しかつＤＳＰで処理したかあるい
は模擬培養した。免疫沈降をモノクローナル抗体βＦ１
でのＴＣＲα，β分子の予備洗浄なし又はありのいずれ
かでＮＭＳ，抗Ｔ３モノクローナル抗体および抗ＴＣＲ
α，βモノクローナル抗体βＦ１を用いて行った。少フ
ラクションの放射性標識化ＴＣＲα，βは、予備洗浄さ
れないサンプル中に検出されたが、βＦ１で予備洗浄さ
れたサンプル中には検出されなかった。 【００６５】ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）お
よび細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ）を 125Ｉ標識
し、１％ＴＸ−１００に可溶化し、そしてＮＭＳまたは
抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣＨＴ−１を用いて免疫沈
降した。Ｔ３Ｈサブユニット（Ｍr ２７，０００）は、
これら２つの細胞系に同様に表われ、一方Ｔ３Ｌサブユ
ニット（Ｍr １９，０００〜２５，０００）は、表わ
れなかった。 【００６６】オートラジオグラフィーによる１０．５％
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析後、 125Ｉ−標識化、１％ＴＸ−
１００中への可溶化、免疫沈降および可視化を先に記載
のごとく（文献２８）行った。化学的架橋を先に記載の
ごとく（文献２８）ＤＰＳ（５０マイクログラム／ml）
ＰＢＳ溶液（ｐＨ８）を用いて無傷の放射性標識化リン
パ球上に２３℃で３０分間行った。免疫沈降後、全サン
プルをタンパク質サブユニット間のジスルフィド結合よ
おびＤＳＰ化学的架橋の両者を解裂する５％２−メルカ
プトエタノールを用いてて還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
により検査した。 【００６７】ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγｃＤＮ
Ａプローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮ
Ａのノーザンブロットアッセイ ＩＤＰ２細胞系６（ＷＩ３１- ）からおよびＴ白血病細
胞系ＨＢＰ−ＭＬＴから単離された総ＲＮＡ（１５ マ
イクログラム）を２．２Ｍホルムアルデヒド含有１．５
％アガロースゲル上に分画し、ニトロセルロースに形質
転換し、そしてＴＣＲα，ＴＣＲβ，およびＴＣＲγプ
ローブとハイブリダイゼーションした。 【００６８】ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ），
ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１ - Ｔ３+ ）およびＨ
ＰＢ−ＭＬＴから単離された総ＲＮＡ（３マイクログラ
ム）を上述のごとく分析した。ＲＮＡ調製、電気泳動、
ニトロセルロースへの形質および32Ｐ標識化ニック翻訳
されたプローブ（１〜３×１０8 cpm/マイクログラム）
とのハイブリダイゼーションは、先に記載のとおりであ
った（文献４１）。α鎖プローブは、ヒトｃＤＮＡクロ
ーンｐＧ４５（文献８）またはＬ１７α（文献４２）の
いずれかであった。γ鎖プローブは、ヒトＤＮＡクロー
ンＴγ−１から誘導されたＡｃｃＩに対するＥｃｏＲＩ
であった。放射線活性バンドは、強化スクリーンを用い
てオートラジオグラフィーで可視化された。全プローブ
は、ほぼ同一の特異的活性に標識化され同一感光時間を
与える。 【００６９】抗γ抗血清を用いたＩＤＰ２細胞系表面分
子の免疫沈降 ＴＸ−１００可溶化 125Ｉ標識化ＩＤＰ２細胞系７（８
８％ＷＴ３１- Ｔ３+）を変性し（下記参照）、ついで
ＮＭＳまたは正常家兎血清でおよび抗Ｖγペプチド血清
または抗Ｃγペプチド血清で免疫沈降した。特異的バン
ドは、抗Ｖγペプチド血清および抗Ｃγ免疫沈降物の両
者においてＭr ５５，０００にて観察された。Ｍr ９
０，０００における追加のバンドは、抗Ｃγ免疫沈降に
おいて再現的には観察されなかった（下記参照）。 【００７０】125Ｉ標識化ＩＤＰ２細胞系７からのＤＳ
Ｐ架橋天然溶解産物（１％ＴＸ１００）をＮＭＳでまた
は抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣＨＴ−１で免疫沈降し
た。別に、該溶解産物を変性し（下記参照）、ついで正
常家兎血清または抗Ｃγペプチド血清のいずれかで免疫
沈降した。追加のアリコートの溶解産物を２段階免疫沈
降した。ポリペプチドを抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣ
ＨＴ−１で免疫沈降し、ついでＤＳＰ架橋を切断するた
めに変性および還元条件下免疫吸収剤から溶離した。つ
いで、この溶離物からの免疫沈降を抗Ｃγペプチド血清
を用いて行った。 【００７１】125I 標識化、１％ＴＸ−１００中への可
溶化および免疫沈降を上述のごとく行った。天然の溶解
産物（１％ＴＸ−１００）をＳＤＳ（最終濃度１％）お
よびジチオスレイトール(dithiothreitol)（最終濃度２
ｍＭ）を添加しつづいて６８℃で５分間該混合物を加熱
することにより変性した。冷却句後、ヨードアセタミド
を添加し（最終濃度２０ｍＭ、サンプルを４容量の１．
５％ＴＸ−１００トリス緩衝生理食塩水（ｐＨ８）で溶
離した。該実験における初期免疫沈降物を変性し、つづ
いて部分的に再生（renatured)した（文献２８）。サン
プルを１０マイクロリットルの抗Ｃγまたは抗Ｖγペプ
チド血清、１マイクログラムのＵＣＨＴ−１または１マ
イクロ力価のＮＭＳまたは正常家兎血清で免疫沈降し、
ついで還元条件下（５％２−メルカプトエタノール）、
１０．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。 推定Ｖγま
たはＣγアミノ酸配列に相当するペプチド（残基数は、
下記の実験結果の節に記載）は、エリクソン（Erickso
n) およびメァリーフィールド（Merrifield) の方法
（文献４４）を用いてベックマン９９０ペプチドシンセ
サイザー（Beckman 990 peptide synthesizer)で合成さ
れた。ペプチド純度は、高圧液体クロマトグラフィーで
評価され、ペプチド配列は、アミノ酸分析で確認され
た。ペプチドは、キーホール・リンペット・ヘモシアニ
ン（Keyhole limpethemocyanin)( ＫＬＨ）と１ＫＬＰ
分子につき５０ペプチドの比率でカップルした（文献４
５）。マウスおよび家兎は、各々ＶγペプチドまたはＣ
γペプチドで免疫化された。動物は、３週間間隔で接種
され、血清をペプチド−ＫＬＨおよびペプチド−ウシ血
清アルブミン接合に対する反応性をバインドするためス
クリーニングし、ペプチド−特異杭体の存在を確認し
た。 【００７２】γ鎖に対するモノクローナル抗体は、文献
４７，５０に記載された標準方法により発生された。Ｂ
ＡＬＢ／ｃマウスは、エリクソンおよびメァリーフィー
ルドの方法（文献４４）を用いて上述の有効領域γ鎖ペ
プチドへのＫＬＨカップルペプチドで免疫化した。２週
間間隔での４回の免疫処理後、脾臓細胞をＤ３−Ｘ６３
−Ａｇ８Ｕ１骨髄腫細胞と融合した。陽性ハイブリドー
マクローンをスクリーニングし、文献４８に記載の酵素
免疫アッセイ法（ＥＩＡ）により同定した。 【００７３】純化タンパク質からのδポリペプチドのＤ
ＮＡ配列の単離 ＴＣＲδ遺伝子のＤＮＡ配列は、単離でき、また文献４
９，５０に記載のごとくＴＣＲβ遺伝子を単離するのに
利用される方法により決定できる。簡単に言うと、ＴＣ
Ｒδ遺伝子のアミノ酸配列は、以下に記載されるＴＣＲ
δ遺伝子の単離に従って決定され得る。アミノ酸配列を
決定した後、短い合成ＤＮＡ配列は、市販ＤＮＡシンセ
サイザー［Applied Biosystems, Inc., Foster City, C
A]を用いて調製される。該合成ＤＮＡ配列は、ＴＣＲポ
リペプチド含有細胞系のｃＤＮＡライブラリーからのＤ
ＮＡの完全配列の単離用プローブとして用いられる。タ
ンパク質の腫瘍構造は、ついで決定される（文献５
１）。 【００７４】δポリペプチドに対するおよびγ、δ複合
体に対するモノクローナル抗体の調製 δポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、標準的
な方法（文献４７，５０）により発生され得る。ＴＣＲ
δポリペプチドから誘導されるペプチドは、上述の方法
により決定された核酸配列から調製され得る。免疫処置
に有効なこのようなペプチドを選択する方法は、詳細に
記載されている（文献５５、５６、５７）。 【００７５】γ，δ複合体に対して誘導されるモノクロ
ーナル抗体は、刊行物記載方法（文献４７、５０）に従
って調製され得る。γ，δ複合体は、上述のＴ細胞系か
ら単離され得、また先の刊行物の記載の方法（文献２
８）に記載のごとくＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫化するの
に用いられ得る。別に、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、細胞
系、例えばＩＤＰ１細胞系またはＩＤＰ２細胞系で免疫
化され得る。 【００７６】ハイブリドーマ細胞系の融合、発生および
保守管理方法は、広く刊行物に記載され当業者に公知で
ある。特異的ＴＣＲγ，δ細胞系に対して誘導されるが
他のＴ細胞系と交差反応(cross react) しないモノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、選択され
回収される。ヒト腫瘍および末梢血リンパ球からのＴＣＲγ，δおよ
びＴ３の免疫沈降 生育可能なリンパ球をフィコールーハイパーク密度勾配
遠心分離により単離し、２×１０7 細胞を文献２８に記
載のごとくラクトペルオキシターゼ技術によって放射性
ヨウ素標識化した。標識化細胞は、２ｍＭフェニルメチ
ルスルフォニルフルオロイド（ＰＭＳＦ）および８ｍＭ
ヨードアセタミド（ＩＡＡ）を含有するＴＣＲ−Ｔ３会
合を保護する（文献６４）０．３％３−［（３−コラミ
ドプロピル）ジメチルアンモニノ］−１−プロパン−ス
ルフォネート（ＣＨＡＰＳ）とともに５ｍｌのＴＢＳ
（１０ｍｌトリスｐＨ８、１４０ｍＭ Ｎａｃｌ）に溶
解された。文献１２に記載の固定Staphylococcus aureu
s コーワンＩ(CowanＩ)(SACI) を用いて免疫沈降を行
い、免疫複合体を０．１％トライトンＸ−１００（ＴＸ
−１００）含有ＴＢＳ中５度洗浄した。還元サンプルを
２ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）中煮沸し、全サン
プルをＳＤＳ−ＰＡＧＥによるアッセイの前、１０ｍＡ
ＩＡＡ中２３℃にて１０分間培養した。抗Ｃγ血清を
用いた免疫沈降は、ＩＡＡを除去するために透析された
１％ＴＸ−１００溶解産物で行ない、ついで３分間煮沸
しながら３ｍＭ ＤＴＴ含有ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）１０分の１の容量の添加により変性させた。
４容量の３０ｍＭ ＩＡＡ含有ＴＢＳ中の１．５％ＴＸ
−１００による部分再生の後、抗Ｃγ血清またはＮＲＳ
を添加し、免疫沈降物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析の
前、０．５％ ＴＸ−１００、０．５％デオキシコレー
トおよび０．０５％ＳＤＳ含有ＴＢＳ中で洗浄した。ラ
ット抗マウスα鎖特異ｍＡｂ１８７．１（１５Ｍｇ）を
第２抗体として加えて、ＩｇＧＩｍＡｂβＦ１、ＵＣＨ
ＴおよびＰ３の結合タンパク質Ａを産生した（文献５
３）。 【００７７】ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮＡのノー
ザンブロットアッセイ １レーンにつき約１．５ＭｇＲＮＡを載せ、プローブを
同様な特異活性にまで、標識化し、同一オートラジオグ
ラフィ感光させた。ＲＮＡサイズは、ＴＣＲＢおよびＴ
ＣＲγ転写体に関する先に記載された長さ（文献３６、
４）に基づいて決定された。 【００７８】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の２次
元ゲル分析 ラクトペルオキシターゼでの放射性ヨード化の後、リン
パ球をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１mg／mlウシ血清ア
ルブミン、１mg／mlグルコース中の１００Ｕのニューラ
ミニターゼ［Ｇｉｂｃｏで９０分間２３℃にて処置し、
ＰＢＳ中洗浄し、ついで０．３％ＣＨＡＰＳに可溶化し
た。免疫沈降物を第１図のごとく調製し、ＮＥＰＨＧＥ
（電荷分離）をｐＨ３．５〜１０アンフォリン（ＬＫ
Ｂ，スウェーデン）、を用いあるいはｐＨ３．５〜１
０，４〜６，９〜１１アンフォリン（２：１５．５：
１．５）を用いたＩＥＦを用いて、つづいて文献１２に
記載のごとくサイズ分離のため１０．５％ ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥゲルを用いて行った。ＮＥＰＨＧＥは、酸性末端
にヨウ素化ＩＦＦサンプルを乗せて行い（Ａ，Ｂ）、一
方ＩＥＦＣ Ｃ，Ｄ）は、４０Ｖにて２０時間他の（塩
基性）末端にサンプルを乗せて行った。ブラケットは、
Ｔ３会合種を含む。 【００７９】細胞（２×１０7 ）は、１０％胎児ウシ血
清で補足された４mlメチオニン遊離ＲＰＭＩ１６４０中
３７℃にて１時間予備培養された。35Ｓ−メチオニンを
２５０μＣｉ／mlまで加え、培養を３７℃で１時間続け
た。細胞を回収、洗浄し、１％ＳＤＳ、１０ｍＭトリス
ＨＣl （ｐＨ８．０）、０．１ｍＭ ＰＭＳＦおよび１
０ｍＭ ＩＡＡの煮沸溶液０．４に溶解した。溶解産生
物を２．５％ ノニデッドＰ４０（Nonidet - P40)、１
％ゼラチン、１０mlトリス−ＨＣl （ｐＨ８）２mlおよ
び１mg／ml ＤＮアーゼ、０．５mg／ml ＲＮアーゼ、
０．５Ｍトリス−ＨＣl （ｐＨ７）、５０ｍＭ ＭｇＣ
l2０．２mlで希釈し、０℃にて２〜４時間培養した。ペ
レット不溶性片まで１２，０００×ｇで１５分間遠心分
離後、１％ゼラチンで予め沈降されたプロテインＡセフ
ァロースを用い、ついで洗浄し抗γ血清での免疫沈降を
文献６５に記載のごとく行った。免疫吸収剤からの溶離
およびエンド−Ｈ［Miles Scientific, Naperville, I
L］での処置は、文献６５に記載されている。サンプル
は、第１次元にＮＥＰＨＧＥおよび第２次元に１０％Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥを利用する２次元ゲル電気泳動、ひきつ
づきフルオログラフィーにより抗血清で分析した（文献
６６）。 【００８０】ＴＣＲγポリペプチドを発現するＴ細胞に
おけるγおよびβおよび遺伝子の再配列 ゲノムＤＮＡは、記載のごとく（ＢａｍＨＩまたはＥｃ
ｏＲＩ）単離し、０．７％アガロース（ＢａｍＨＩ消
化）または０．９％アガロース（ＥｃｏＲＩ消化）上に
サイズ分画し、ついで文献６７に記載のごとくくニトロ
セルロースに転写した。フィターをニック翻訳された32
Ｐ−標識化０．８Ｋｂ ＨｉｎｄIII −ＥｃｏＲＩ Ｊ
γ1,3プローブ（文献２０）または１．１Ｋｂ Ｅｃｏ
ＲＩ−ＨｉｎｄIII Ｃβ2 プローブ（文献６８）にハイ
ブリダイゼーションした。強度を上げたスクリーニング
を用いたオートラジオグラフィーの前、フィルターを２
％ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で洗浄し、つづいて５
５℃で０．２％ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で洗浄し
た。 【００８１】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細
胞溶解 細胞溶解アッセイを文献３４に記載のごとく51Ｃｒ−標
識化、回収および％特異放出の計算により丸底９６ウェ
ル組織培養プレートにて行った。ＩＤＰ２およびＰＢＬ
Ｃ１細胞をＵＣＨＴ１ （１：３００稀釈度）（＋抗Ｔ
３）で０℃にて３０分間予め培養し、３回洗浄するか、
あるいは模擬培養し、標識化ターゲット（標的）細胞と
お互い取り代えた。抗ＨＬＡクラスＩおよびクラスIIｍ
Ａｂ抗Ｔ３ｍＡｂを51Ｃｒ標識化ＭＯＬＴ４細胞含有ウ
ェルに０℃にて３０分間配置し、ついでＩＤＰ２細胞を
４０：１のＥ：Ｔ比で加えた。全サンプルを３回アッセ
イし、各実験を少なくとも３回行った。各々の代表的実
験の１つを第１０図〜第１２図に示す。 【００８２】実験結果 多数のヒトＴＣＲα，β６を認識するマウスフレームワ
ーク抗血清は、先に報告されている（文献２８）。つづ
いてヒトβ鎖における割り当てられた決定基と反応性で
あるマウスモノクローナル抗体、フレームワーク１（β
Ｆ１）という、が得られた（文献４６）。βＦ１モノク
ローナル抗体は、多数のＴ３陽性（Ｔ３ + ）ヒト末梢血
リンパ球（ＰＢＬ）と反応し、またα，βＴ細胞レセプ
ターを有し、かつＴ３糖タンパクを発現する試験された
全ヒトＴ細胞系からのＴＣＲα，βヘテロダイマーを免
疫沈降できる。このモノクローナル抗体を用いたＴ細胞
系のパネルからの免疫沈降は、この反応性並びに異なる
レセプターからのＴＣＲαおよびＴＣＲβサブユニット
の異質性を示す（第１図）。フレームワーク抗血清（文
献２８）と同様に、このモノクローナル抗体は、生体Ｔ
細胞の表面を染色しないが、７０％エタノールでのリン
パ球血漿膜の部分解離（ｓｏｌｕｔｉｏｎ）後、膜およ
び細胞形質Ｔ細胞レセプターの両者と特異的に反応する
であろう。フルオレセイン抗Ｔ３モノクローナル抗体お
よびビオチニル−β−Ｆ１モノクローナル抗体つづいて
アビジンでのヒトＰＢＬＳの２重染色は、βＦ１モノク
ローナル抗体が９５〜９７％の末梢血Ｔ３+ リンパ球を
認識することを明らかにする。しかしながら、これはβ
Ｆ１陰性（βＦ１- ）さらにはＴ３+ である小個体群の
Ｔ細胞を明らかに限定する（第１Ｃ図）。 【００８３】Ｔ３抗体を認識することが初期に考えられ
たＷ３１と命令されたされた第２フレームワークモノク
ローナル抗体（文献２９）は、最近、ＴＣＲα，βの共
通のエピトープと反応することが示されている（文献３
０）。抗Ｔ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ（登録商標）
３）およびＷＴ３１での二重染色は、各該モノクローナ
ル抗体が他の結合をクロスブロックすることを明らかに
したが、１色螢光は，ＷＴ３１が抗Ｔ３モノクローナル
抗体がするよりも末梢血において１〜３％少ない細胞を
代表的に認識することを示した。ＷＴ３１モノクローナ
ル抗体は、Ｔ細胞の表面に効率的に結合し（ＦＡＣＳ分
析等参照）、また放射性標識化洗浄溶解産物からは非効
率的であるがＴＣＲα，βを免疫沈降できる（文献３
０）（第１Ｂ図、レーン３）。従って、βＦ１モノクロ
ーナル抗体およびＷＴ３１モノクローナル抗体は、少フ
ラクションのヒト末梢血Ｔ３+ 細胞を除いて全てを認識
し、またＴ３+ であるがＴＣＲα，β分子に対するこれ
らのフレームワークモノクローナル抗体の両方と未反応
性である亜個体群を決定するらしい。モノクローナル抗
体βＦ１と未反応性であるＴ３+ リンパ球もまたモノク
ローナル抗体ＷＴ３１と未反応性であるという証拠を以
下に示す。ＷＴ３１は、主にＦＡＣＳ分析に用いられて
いて、またβＦ１は主に免疫沈降研究に用いられてい
た。 正常成人ＰＢＬからのＷＴ３１- Ｔ３+ 個体群の
生長に対する成果は、ＷＴ３１+ Ｔ３+ リンパ球がマイ
トジェン刺激に従うＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞が通常生長し
すぎるので困難であることが判明した。 【００８４】しかしながら、免疫不全症患者のＰＢＬか
らのＷＴ３１- Ｔ３+ 個体群の生長は、良好であった。
免疫不全症患者１（ＩＤＰ１）は、裸リンパ球症候群
（barelympocyte syndrome)に病み、リンパ系細胞にお
けるるクラスIIＭＨＣ抗原を欠いており（文献３１，３
２）、一方免疫不全症患者２（ＩＤＰ）は、外胚芽形成
異常症候群に病み、マイトジェンに対する少ない生体内
Ｔ細胞繁殖性応答を示した。 【００８５】同種抗原でのＩＤＰ１からのＰＢＬの活性
化およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）活性含有条
件地における繁殖後、得られた細胞系は、約５０％ＷＴ
３１ + Ｔ３+ および５０％ＷＴ３１- Ｔ３+ であること
が観察された（下記第１表参照、細胞系１）。ひきつづ
きこの細胞の選別によりＷＴ３１+ Ｔ３+ 細胞およびＷ
Ｔ３１- Ｔ３+ 細胞の均質個体群を得た（下記第１表参
照、各々細胞系２および ３）。 【００８６】 【表１】 【００８７】1 細胞系既述は、活性化またはリンパ球
源に関する条件を示す。ＷＴ３１+およびＷＴ３１- 選
別細胞系１および２（選別）は、ＩＤＰＩ細胞系１の螢
光活性化細胞選別によって得られた。細胞系はまたＩＤ
Ｐ２からも得られた。ＩＤＰ２からの新鮮ＰＢＬは、６
３％のＰＢＬがＴ３+ であり、１〜２％少ない細胞（６
１％）が代表的な正常ＰＢＬであるＷＴ３１+ であった
ことを明らかにした（第１表，細胞系４）。フィトヘム
アグルチニン（ＰＨＡ）または同種抗原でのこれらＩＤ
Ｐ２ＰＢＬの活性化および条件培地での生体外繁殖はい
くつかの細胞系となった。該細胞系としては、均質ＷＴ
３１+ Ｔ３+ 細胞系（第１表、細胞系５）、均質ＷＴ３
１- Ｔ３+ 細胞系（第１表，細胞系６）および第３の場
合、８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ （１２％不純ＷＴ３１+ Ｔ
３+ 細胞（第１表細胞系）であった。ＷＴ３１- Ｔ３+
固体群は、Ｔ８+ およびＴ４- Ｔ８- 細胞の両方を含ん
だ（第１表、細胞系３，６および７）。さらにに表現型
分析は、この個体群がＴ１１+ であったがＬｅｕ７、Ｌ
ｅｕ１１およびＯＫＭ１等の天然キラー細胞マーカーお
よび未熟胸腺細胞マーカーＴ６に対しては陰性であった
ことを現わした。 βＦ１モノクローナル抗体は、 125
Ｉ標識化ＷＴ３１+ Ｔ３+ ＩＤＰ１リンパ球の表面上の
ヘテロダーマー構造を免疫化学的に決定したが（第２Ａ
図、レーン５）、この同一個体からのＷＴ３１- Ｔ３+
個体群上の同様なタンパク質を確認できなかった（第２
Ｂ図、レーン１１）。ＩＤＰ２細胞系の同様な分析は、
ＷＴ３１+ Ｔ３+ 細胞での１２％染色と一致する８８％
ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系７上のＴＣＲα，βのトレース
を表わした（第２Ｂ図、レーン２）。従って、ＦＡＣＳ
分析におけるＷＴ３１- Ｔ３+モノクローナル抗体との
細胞表面反応性の欠乏によって、同定されたＷＴ３１-
Ｔ３+ 細胞はまた、免疫沈降においてＴＣＲα，βの欠
乏によって決定されたとおりβＦ１- であった。全ＷＴ
３１+ Ｔ３+ およびＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系は、ＦＡＣ
Ｓ分での免疫沈降により同様な量のＴ３を発現した（第
２Ａ図レーン３および９；第２Ｃ図、レーン２および
４）。しかしながら、ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ リンパ
球に見い出されたＴ３分子は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより
ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ３+ 細胞に見い出されたＴ３分子
とは同一でなかった。１次元（第２Ｃ図）および２次元
ゲル分析は、Ｔ３の相異が異なるＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動
度を再現的に示したライトＴ３サブユニットに制限され
たことを示した（第２Ｃ図、矢印）。 【００８８】ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ 個体群がＴＣＲ
α，β分子を欠いたか、または別に、これらのモノクロ
ーナル抗体と反応しそこなったＴＣＲα，βを発現した
かどうかを決定するために、ＴＣＲαおよびβタンパク
質をコード化するｍＲＮＡの存在が研究された。ＴＣＲ
α，βおよびＴＣＲγをコード化する32Ｐ標識化ｃＤＮ
Ａクローンは、ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ およびＷＴ３
１+ βＦ１+ Ｔ３+ ＩＤＰ２細胞系からのおよびＴＣＲ
α，ＴＣＲβおよびＴＣＲγに対するｎＲＮＡを含有す
ることが知られたＨＰＢ−ＭＬＴからの全細胞ＲＮＡを
含有するノーザンブロットを詳しく調べるのに用いられ
た。ＴＣＲαまたはＴＣＲβ、ｍＲＡＮ転写体は、ＷＴ
３１- βＦ１- Ｔ３+ ＩＤＰ２細胞系６からのＲＮＡに
おいては検出できなかったが（第３Ａ図α−プローブ、
レーン１；またはβ−プローブ，レーン１）、両者の発
現は、ＨＰＢ−ＭＬＴからのＲＮＡにおいて明らかに検
出可能であった（第３図、α−プローブ、レーン２；お
よびβ−プローブ、レーン２）。明らかに、ＴＣＲγｍ
ＲＮＡは、ＨＰＢ−ＭＬＴにおけるレベルに匹敵するレ
ベルでＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞に存在した（第３図，γ−
プローブ，レーン１および２）。従って、ＷＴ３１- β
Ｆ１- Ｔ３+ リンパ球は、ＴＣＲαおよびβｍＲＮＡを
欠いた。ほとんどＷＴ３１- Ｔ３+ である細胞系に対す
る次の実験は、これらの結果を確認した。例えば、ＩＤ
Ｐ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３ + ）に対して行な
われ、ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）並びにＨ
ＰＢ−ＭＬＴ細胞と比較されたノーザンブロット分析
は、ほんのトレースの８５％ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞（１
２％ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞での汚染と一致する）におけ
るＴＣＲαまたはＴＣＲβｍＲＮＡを現わした（第３Ｂ
図、各プローブに対するレーン２）。さらに検出できた
多数のβ転写体は、１．０であり１．３Ｋｂでなくまた
おそらく機能的でなかった（文献３５）。これに対し
て、ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）は、ＨＢＰ
−ＭＬＴに匹敵するＲＮＡ種の両方のレベルを発現した
（第３Ｂ図、各プローブに対するレーン）。しかしなが
ら、第３Ａ図に示すＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系と同様に、
ＷＴ３１- Ｔ３+ およびＷＴ３１+ Ｔ３ + 細胞系の両者
は、ＨＬＢ−ＭＬＴに匹敵するＴＣＲγＲＮＡレベルを
示した。従って、ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞は、αおよびβ
Ｔ細胞レセプターｍＲＮＡ（ノーザンブロットアッセ
イ）およびαおよびβＴ細胞レセプタータンパク質（免
疫沈降およびＦＡＣＳ分析）を欠いた。Ｔαタンパク質
発現に一致するが、ＷＴ３１ - Ｔ３+ におけるＴγｍＲ
ＮＡの存在は、正常サイズのＴγｍＲＮＡを発現する多
くのヒト細胞系が不完全Ｖ−Ｊ結合のため構造外である
十分な長さの転写体を発現し得るので（文献３６）、強
力な証拠とならなかった。 【００８９】ＴＣＲα，β分子に類似するタンパク質が
ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ 細胞上に存在するかどうかを
決定するために、化学的架橋技術が利用された。この方
法は、Ｔ３糖タンパク質とのＴＣＲα，β分子の物理的
会合を直接示すのに用いられている（文献１２）。２官
能性、分割性指示薬、ジチオビスサクシミジルプロピオ
ネート（ＤＳＰ）が、生育可能Ｔリンパ球の 125Ｉ標識
化表面タンパク質を架橋するのに利用された。架橋後、
リンパ球は、非イオン性洗浄剤に可溶化され、抗Ｔ３モ
ノクローナル抗体で免疫沈降された。期待されたとお
り、ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ３+ リンパ球は、ＴＣＲαお
よびβ鎖がＴ３と架橋されたことを表わした。例えば、
ＴＣＲα，β分子およびＴ３は、架橋ＩＤＰ１細胞系２
（ＷＴ３１ + Ｔ３+ ）からの抗Ｔ３またはβＦ１モノク
ローナル抗体中に見い出された。（第２Ａ図、レーン４
および６）。しかしながら、βＦ１モノクローナル抗体
との反応性の欠如およびＴＣＲαまたはＴＣＲβｍＲＮ
Ａの欠如にもかかわらず、ＩＤＰ１細胞系３（ＷＴ３１
- Ｔ３+ ）およびＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１ -
Ｔ３+ ）は、Ｔ３と特異的に架橋した２つのタンパク質
（Ｍr ５５，０００および４０，０００）を両方とも発
現した（第２Ａ図，レーン１０；第２Ｂ図，レーン
６）。これらＴ３会合分子の移動度は、ＷＴ３１+ Ｔ３
+ 細胞系からのＴＣＲαおよびβ鎖からのものと明らか
に異なった（第２Ａ図、レーン４および１０；または第
２Ｂ図レーン５および６と比較対照）。 【００９０】ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３
+ ）が（第２Ｂ図、レーン２）に示された弱いβＦ１免
疫沈降物を示す１２％のＷＴ３１+ Ｔ３+ を含有したの
で、これらの細胞からの溶解産物は、βＦ１モノクロー
ナル抗体を用いてＴＣＲα，βタンパク質を予め除い
た。予め除いた後、残基βＦ１反応性物質は、検出され
なかった（第２Ｂ図、レーン８および１１）。架橋細胞
からの溶解産物を予め除かれたβＦ１- は、抗Ｔ３モノ
クローナル抗体で免疫沈降され、Ｍr ５５，０００およ
び４０，００サブユットがさらに検出された（第２Ｂ
図、レーン１２）。 【００９１】これらの細胞溶解産物が検出可能レベルの
ＴＣＲαおよびＴＣＲβｍＲＮＡを示すので、該細胞表
面においてＴ３と特異的に架橋されたことが見い出され
た分子は、既知ＴＣＲαまたはＴＣＲβ遺伝子によって
コード化されたタンパク質を与えることができない。再
配列ヒトＴＣＲγ遺伝子を表わすｃＤＮＡクローンは、
予想分子量４０，０００ダルトンでポリペプチドをコー
ド化するであろう（文献３６）。しかしながら、Ｎ結合
グルコシル化部位を表わさないマウスＴＣＲγ遺伝子
（文献１５）とは異なって、ヒトＴＣＲγ遺伝子は、Ｎ
結合グリコシル化に対する５つの部位を表わす。すなわ
ち、そのうち４つは、一定領域に位置する（文献３
６）。ＴＣＲγタンパク質は、今まで単離されていない
ので、これらの可能部位のいくつが利用され得るかは、
わからない。しかしながら、十分にグルコシル化された
ヒトＴＣＲγタンパク質は、Ｍr 約５５，０００を有し
得る。ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３ + ＩＤＰ１およびＩＤ
Ｐ２細胞系上同定された非α−非βＴ３会合サブユニッ
トの重鎖は、５５，０００ダルトンのＳＤＳＰＡＧＥに
おけける相体移動度を示す（第２Ａ図および第２Ｂ
図）。 【００９２】このＴ３会合重鎖が血清学的にＴＣＲαタ
ンパク質と架橋またはＴＣＲγタンパク質と同一である
かどうかを決定するために、抗血清にヒトｃＤＮＡクロ
ーンから推定されたＴＣＲγアミノ酸配列（文献３６）
の配列： ＲＴＫＳＶＴＲＱＴＧＳＳＡＥＩＴＣ （有効領域からの残基５〜１２の１７アミノ酸範囲を示
す；抗Ｖγペプチド血清）を有する合成ペプチドおよび
配列： ＤＫＱＬＤＡＤＶＳＰＫＰＴＩＦＬＤＳＩＡ （一定領域からの残基１１７〜１３６の２０アミノ酸範
囲を示す；抗Ｃγペプチド血清）を有する合成ペプチド
を与える。抗Ｃγペプチド血清および抗Ｖγペプチド血
清の両者は、 125Ｉ−標識化されたＷＴ３１- βＦ１-
Ｔ３+ 細胞の変性溶解産物からＭr ５５，０００の分子
を免疫沈降した（第４Ａ図、レーン２および４）。該分
子は、非機能的ＴＣＲγｍＲＮＡのみを発現する 125Ｉ
標識化ＨＰＢ−ＭＬＴ細胞の溶解産物から免疫沈降され
なかった（文献３６）。 【００９３】抗ＣγおよびおよびＶγペプチド血清によ
って免疫沈降された５５，０００ダルトン分子が実際に
Ｔ３に架橋された重鎖サブユニットであることを示すた
めに、追加の実験を行った（第４Ｂ図）。ＷＴ３１- β
Ｆ１- Ｔ３+ 細胞からのＤＳＰ架橋溶解産物のサンプル
を最初に抗Ｔ３モノクローナルで免疫沈降し、再びＴ３
と会合されたＭr ５５，０００および４０，０００サブ
ユニットの存在を示した（第４Ｂ図、レーン２）。平行
して、架橋溶解産生物の別のアリコートを抗Ｔ３モノク
ローナル抗体で免疫沈降し、ついで免疫沈降Ｔ３架橋ポ
リペプチドをＤＳＰ架橋を切断するために変成および還
元条件下免疫吸収剤からら溶離した。この溶離物をつい
で抗Ｃγペプチド血清と再び沈降した。Ｔ３と架橋した
Ｍr ５５，０００サブユニットを抗γペプチド血清によ
り再び沈降し（第４Ｂ図、レーン５）、これらの２つの
アプローチにより特定されたＭr ５５，０００サブユニ
ットが同一であることを示した。 【００９４】抗Ｔ３ｍＡｂを用いた（Ｔ３からのＴＣＲ
サブユニットが解離しない条件で、第５図参照）表面ヨ
ウ素化ＩＤＰ２リンパ球の溶解産物からの免疫沈降は、
Ｔ３サブユニット（第５Ａ図）に加えて２つの種（５５
Ｋおよび４０Ｋ）をもたらした。この結果は、化学的架
橋を用いた先に報告されたものと一致した。５５Ｋ種
は、抗Ｃγおよび抗Ｖγペプチド血清と特異的に反応す
ることが見い出された。４０Ｋポリペプチドは、該抗γ
ペプチド血清と反応性がなく、従って非ＴＣＲα，βま
たはγサブユニット、すなわちδを表わすようである。
これらのサブユニットがＴＣＲαおよびβサブユニット
のように共有結合されているかどうかを決定するために
Ｔ３免疫共沈ポリペプチドを還元および非還元下、調べ
た。非還元条件下ヘテロダイマージスルフィド結合形態
にて存在するＴＣＲα，βサブユニットと明らかに対照
して、ＩＤＰ２細胞系上のＴＣＲγおよびδサブユニッ
トは、共有結合されいなかった（第５Ａ図）。非還元条
件下ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧ
Ｅ）における相対移動度の少しの増加が拡散、重グリコ
シル化（下記参照）ＴＣＲγに関して観察されたのに対
して、移動度の劇的な増加がδサブユニットに関して観
察され、これは１以上の内部鎖ジスルフィドループの存
在を提唱する（レーン２および４の矢印における種参
照）。 【００９５】ウェイスら（Weiss, et al) は、ＰＥＥＲ
細胞系がＴＣＲγｍＲＮＡの発現を欠くがＴ３−会合５
０〜６０Ｋポリペプチドを発現できるので、ＴＣＲγポ
リペプチドを発現できることを提案した（文献６９）。
さらなる実験において、この細胞系は、ＴＣＲβ鎖、β
Ｆ１上のフレームワーク決定基を認識するｍＡｂとの反
応性に欠け（第５Ａ図）、また強くヨウ素化された３８
Ｋポリペプチドを発現することが見い出された。５５Ｋ
〜６０Ｋポリペブチドは、抗Ｃγペプチド血清と特異的
に免疫沈降され、従ってＴＣＲγタンパク質の別の例を
示すようだ（第５Ａ図）。ＰＥＥＲ上のＴＣＲγおよび
δポリペプチドは、ＩＤＰ２細胞系上のものと同様なサ
イズであり、同様にジスルフィド結合されていない。Ｉ
ＤＰ２細胞上のδサブユニットと同様に、ＰＥＥＲ上の
複製分子は、還元および非還元条件下比較された際（レ
ーン７および８の矢印における種比較対照）、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ移動度において著しいシフトを受けた。従っ
て、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞糸は、同様のタイプの
ＴＣＲγおよびδサブユニットが共有結合されていない
ＴＣＲγ，δＴ３複合体を発現するらしい。 【００９６】本発明者らは、この第２抗体もまた正常末
梢血におけるＴ細胞個体群の成分として発現するかどう
かを決定しようとした。ｍＡｂβＦ１およびＯＫＴ（登
録商標）３でのヒト抹消血リンパ球（ＰＢＬ）の染色を
比較する２色サイトフルオログラフ分析は、ＴＣＲα、
β陰性であるらしい２〜５％のＴ３+ ＰＢＬを示す分離
個体群を示した。このリンパ球個体群を検査するため
に、正常成人ＰＢＬをｍＡＢＷＴ３１での染色後、サイ
トフルオログラフ細胞選別した。未染色ＰＢＬを単離
し、放射性化自系飼育細胞およびフィトヘムアグルチニ
ン（ＰＨＡ−Ｐ）の添加を２週間受けるＩＬ−２含有条
件培地中生体外培養した。細胞系誘導ＷＴ３１- ＰＢＬ
- 系を０．５細胞ウェルでプレートすることでの希釈を
制限することによってクローンし、クローン細胞をポリ
クローナル細胞系として培養した。いくつかのこのよう
な末梢血誘導Ｔ細胞クローンが得られ、ＰＢＬクローン
１（ＰＢＬ Ｃ１）を詳細に研究した。サイトフルオロ
グラフ分析により、このクローンは、Ｔ３+ Ｔ１１- で
あったが、Ｔ４- Ｔ８- およびＷＴ３１- でなかった。
ＰＢＬ Ｃ１からのＴＣＲα，βおよびγｍＲＮＡの発
現は、ノーザンブロット分析により決定された（第６
図）。ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ細胞腫瘍ＨＰＢ−ＭＬＴと
比較すると、ほんの低レベルのＴＣＲαおよびβｍＲＮ
Ａが検出された。これに対して、豊富なＴＣＲγｍＲＮ
Ａが示され（第６図、γプローブ）；興味深いことに、
ＴＣＲγｍＲＮＡは、ＨＰＢ−ＭＬＴにおよびＴＣＲγ
発現ＩＤＰ２細胞系に見い出された１．６キロベース
（Ｋｂ）メッセージよりわずかに少なかった（第６
図）。これらの観察と一致して、ＷＴ３１反応性は、サ
イトフルオログラフ分析において検出されず（データ示
さず）、またほんの限られたレベルのＴＣＲαおよびβ
ポリペプチドがｍＡｂβＦ１を用いた免疫沈降により見
い出された（第５Ｂ図、レーン２，５）。これに対し
て、ＰＢＬＣ１において検出されるトレースレベルのＴ
ＣＲαおよびβタンパク質は、このクローンの培養に用
いられる放射化自系飼育細胞での１〜２％染色によって
説明される。２つの豊富な鎖（４０Ｋおよび３６Ｋ）
は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析において還元条件下Ｔ３と会
合されることが観察された（第５Ｂ図、レーン３）。抗
Ｃγ血清は、還元および変性ＰＢＬＣ１溶解産物からこ
れらのポリペプチドの両方を免疫沈降した（第５Ｂ図、
レーン８）。 これら４０Ｋおよび３６ＫＴＣＲγポリ
ペプチドがジスルフィド結合ダイマーの一部かどうかを
決定するために、抗Ｔ３との免疫共沈が非還元条件下行
われた。Ｍr （７０Ｋ）の単一バンドが観察され、これ
は、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞と異なり、ＰＢＬＣ１
がジスルフィド結合ダイマー性複合体の部分であるＴ３
会合ＴＣＲγ遺伝子産生物を発現することを示す。 【００９７】ＴＣＲγパートナー（δ）は、ＩＤＰ２お
よびＰＥＥＲ細胞上のこのレセプター複合体の非ジスル
フィド結合形態上に存在したので、本発明物らは、ＰＢ
ＬＣ１上のレセプターのジスルフィド結合形態がホモま
たはヘテロダイマーからなるかどうかを検査した。免疫
沈降物は、２次元ゲル電気泳動（非平衡ｐＨゲル電気泳
動（ＮＥＰＨＧＥ）につづいてＳＤＳ−ＰＡＧＥ；第７
Ａ図、第７Ｂ図）によりアッセイされた。還元条件下、
両方のＴＣＲγ種（４０Ｋおよび３６Ｋ）は、同一帯電
量を有することが見い出され、またシアリル化糖タンパ
クに関して代表的な不均質性を示した。これらの特徴
は、同一アミノ酸骨組みを有するＴＣＲγペプチドの特
異的にグリコシル化された形態に関して先に記載された
もの同様である。従って、これらの種は、同一ＴＣＲγ
ペプチドの特異的にグリコシル化された形態を示すであ
ろう。この結果は、ＰＢＬＣ１において単一前駆体のみ
を現わす代謝性パレス標識の結果（下記）によって支持
される。 【００９８】これらのＴＣＲγ種の１つおよび両方から
なるジスルフィド結合ダイマーは、ＮＥＰＨＧＥまたは
平衡等電点電気泳動（ＩＥＦ）により分析された際、２
つの成分のいずれか一つのみと同様な電気泳動位置を有
するべきである。しかしＴＣＲγからなるヘテロダイマ
ーおよび個々のポリペプチドは、異なる帯電量および電
気泳動位置を有するかもしれない。ジスルフィド結合ダ
イマーの位置は、それ故、非還元条件下ＮＥＰＨＧＥを
行い、つづいて非還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行うこ
とによって検査された（第７Ｂ図）。著しく、ジスルフ
ィド結合ダイマーの位置は、還元条件下検査されたＴＣ
Ｒγポリペプチドのものより実質的により酸性であった
（第７Ａ図における４０Ｋおよび３６Ｋ種を第７Ｂ図に
おける７０Ｋ種と比較参照のこと）。この結果は、ＴＣ
Ｒγ種が別個のＮＥＰＨＧＥ移動度のポリペプチドに共
有結合されたことを提案する。従って、ＴＣＲγパート
ナーが（ 125Ｉで不十分に標識化されたかあるはここに
用いられる電気泳動系において分解されなかったかのい
ずれかのため）直接可視化され得なかったけれど、ＰＢ
ＬＣ１上のＴＣＲγポリペプチドは、ジスルフィドヘテ
ロダイマーの一部として発現されたらしい。平衡ＩＥＦ
（ＮＥＰＨＧＥよりむしろ）を用いた実験は、この観察
を確認した（第３Ｄ図）。 【００９９】ジスルフィド結合と非結合形態とのさらな
る識別は、成熟ＴＣＲγ糖タンパクのサイズであった
（ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ上の５０〜６０Ｋ対ＰＢＬＣ
１上の３６Ｋ）。このラジカルサイズ相異のいくつが特
異グリコシレーションによるのかおよびいくつが異なる
ペプチド骨組みによるのか評価するために、ＴＣＲγペ
プチドは、35Ｓ−メチオニンでパルス標識化された細胞
において分析された。還元条件下および変性条件下にお
ける可溶化の後、溶解産物は、抗Ｃγ血清で免疫沈降さ
れ、そして２次元ゲル電気泳動により検査された（第８
Ｅ〜Ｈ図）。免疫沈降物は、パルス標識化物質より未熟
高マンノースグリカン類を除くためエンドグリコシダー
ゼＨ（ｅｎｄｏ−Ｈ）で処置されるかまたは模擬処置さ
れた。同一ＮＥＰＨＧＥ移動度のＴＣＲγポリペプチド
（４８Ｋおよび４３Ｋ）は、ＩＤＰ２細胞系により合成
された。エンド−Ｈでの処置は、４０Ｋ形態まで両形態
を減じ、これは、４６Ｋおよび４３Ｋ形態が、異なる数
の炭水化物を運び、また単一ＴＣＲγポリペプチド骨組
み（４０Ｋ）が、ＩＤＰ２によって合成されることを提
案する（第８Ｅ、８Ｅ図）。これに対して、より塩基性
の３８Ｋグリコシル化形態は、エンド−Ｈ消化が非グリ
コシル化３１Ｋ骨組みを示した後、ＰＢＬＣ１によって
合成される（第８Ｇ，Ｈ図）。従って、本明細書に特徴
づけられた非ジスルフィド結合（ＩＤＰ２）およびジス
ルフィド結合ＰＢＬＣ１）形態上のＴＣＲγポリペプチ
ドは、ラジカル的に相異する骨組みサイズを示す（各
々、４０Ｋおよび３１Ｋ）。パルス標識することにより
観察されるＴＣＲγペプチドが細胞表面ヨウ素化により
見い出されるものと相異する分子量のものであるという
事実は、これらの運ぶ相異する炭化水素すなわち高マン
ノース対複合体から生じる。 【０１００】本発明者らは、ついでジスルフィド結合お
よび非共有結合の両者が正常成人末梢血に生ずるかどう
かを決定しようとした。それ故、ＰＢＬＣ１がクローン
されたポリクローナル末梢血細胞系（ＷＴ３１- ＰＢＬ
系）を非常に詳細に研究した。ＷＴ３１- ＰＢＬ系は、
均質にＴ３+ Ｔ１１+ であり５％汚染ＷＴ３１+ 細胞と
ともに９５％ＷＴ３１- Ｔ４- Ｔ８- を含有した。ヨウ
素化可溶化細胞からの免疫沈降により検査した際、弱い
が検出可能なｍＡｂβＦとの反応性が期待された５％Ｔ
ＣＲα、β陽性リンパ球と一致して観察された（第５Ｂ
図、レーン１０還元および１３非還元）。これに対し
て、抗Ｔ３ｍＡｂは、還元条件下多量のＴ３および３５
〜４５Ｋの会合ポリペプチドの両者を免疫沈降した（第
５Ｂ図、レーン１１）。これらの分画のなにがジスルフ
ィド結合したのかを決定するために、Ｔ３免疫沈降物が
非還元条件下検査された（第５Ｂ図、レーン１４）。Ｔ
３会合ポリペプチドの半分未満がジスルフィド結合され
た。この物質は、レーン１４の白抜き矢印の上に位置さ
れたジスルフィド結合α，βペプチド（サイズは、βＦ
１沈降物により同定された、レーン１３）およびより小
さいサイズのジスルフィド結合ＴＣＲγ（白抜き矢印，
レーン１４）を含有した。著しく、多数のＴ３会合種
は、ジスルフィド結合されず、還元および非還元の両方
の条件下、同一移動度で移動された。特に、これら非結
合種の分画は、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞上のＴＣＲ
δと同様にＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の著しい増加を示し
た（第５Ｂ図、レーン１４、黒塗り矢印参照）。抗Ｃγ
血清との反応性は、ＷＴ３１- ＰＢＬ系上に発現された
Ｔ３と会合された標識化物質のほとんどがＴＣＲγ遺伝
子産生物であることを確認した（レーン１６）。 【０１０１】従って、ＴＣＲγ遺伝子のタンパク質産生
物は、ジスルフイド結合および未結合分子形態の両方で
成人末梢血におけるＴ３+ リンパ球上に生じた。また、
ＴＣＲγの非ジスルフィド結合形態は、５５〜６０Ｋグ
リコシル化（ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ）または３５〜４
５グリコシル化（胸腺Ｔ細胞クローンＣ１１（文献７
０）およびＷＴ３１- ＰＢＬ系）種にさらに分割され得
る。 【０１０２】ＴＣＲγおよびβ遺伝子再配列は、その細
胞表面上にＴＣＲγポリペプチドを発現することが知ら
れているＴ細胞において検査された。サザンブロッド分
析は、０．８Ｋｂ ＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII ヒトＪγ
１，３プローブ［クェアーターモスら（Quertermous et
al.) （文献７１）による学名］を用いて行なわれた。
このプローブは、ゲノムＤＮＡのＢａｍＨＩ消化物にお
ける２３Ｋｂおよび１２Ｋｂの胚子系(germline)バンド
を検出する。２３Ｋｂバンドは、Ｃｒ１を包含し、１２
Ｋｂバンドは、Ｃｒ２をコード化する。このプローブを
用いてＩＤＰ１，ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２（ＷＴ３
１- ＰＢＬ系から誘導されたものも）、ＴＣＲγ遺伝子
の再配列を示した（ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２の両
者、同一再配列を示した；第９Ａ図）。 【０１０３】サザンブロット分析におけるＪγ１，３プ
ローおよびＥｃｏＲＩ消化ゲノムＤＮＡを用いてＰＢＬ
における７つの再配列が検出されている（文献２０）。
これら７つの再配列のうち６（Ｉ，II，III ，IV，VII
およびＶ）をＰＢＬ胎児胸腺および新生児胸腺ゲノムＤ
ＮＡに示した（第９Ｂ図；矢印および再配列番号参
照）。４つの再配列（Ｉ，II，IV，およびVII ）は、Ｔ
ＣＲγポリペプチドを発現する末梢血リンパ球によって
用いられないかまたはこれを示す細胞はＷＴ３１-ＰＢ
Ｌ系に用いられる培養条件下失われた。それにもかかわ
らず、ＷＴ３１- ＰＢＬ系ＤＮＡは、少なくともこれら
の再配列のうち３つ（III ，IVおよびVI）を現わし（第
９Ｂ図、レーン３）、またこれら同一再配列は、ＩＤＰ
２、ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２によって用いられ（Ｅ
ｃｏＲＩ消化物に関してデータ示さず）、またこれらの
再配列の全てを胎児胸腺に示した。 【０１０４】ＴＣＲβもまた、ＩＤＰ２、ＰＢＬＣ１お
よびＰＢＬＣ２細胞において再配列した。１．１ＫｂＥ
ｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII Ｃβ2プローブは、ゲノムＤＮ
ＡのＢａｍＩ消化物におけるＣβ一定領域の両方を包含
する２０Ｋｂの胚系バンドを検出する（文献６８）。Ｉ
ＤＰ２に関する１つの優位なＴＣＲβ再配列およびＰＢ
ＬＣ１およびＰＢＬＣ２に関する２つの同一な再配列が
観察された（第９Ｃ図）。これは、ＴＣＲβ再配列がこ
れらの細胞系に関する免疫沈降ならびにノーザンブロッ
ト分析に基づいて非保護的であることが推定される。Ｐ
ＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２の両者が同一のＴＣＲαおよ
びβ再配列を有するので、これらはクローン性でありま
たＷＴ３１- ＰＢＬ系内の同一細胞から誘導されるらし
い。 【０１０５】ＴＣＲγ発現細胞が成人抹消血に見い出さ
れたので、機能的研究を行いこれらがエフェクター能を
有するかどうかを決定した。ＩＤＰ２およびＰＢＬＣ１
がその51Ｃｒ放出アッセイにおいてターゲット細胞を溶
解する能力に関して検査された際、これらが自発性エフ
ェクター細胞毒能力を有することを証明した（第１０〜
１２図）。 【０１０６】ＩＤＰ２細胞は、多数の天然キラー（Ｎ
Ｋ）ターゲットまたは同種系ＰＢＬのＰＨＡ芽細胞を溶
解しないが、これらは、51Ｃｒ標識化ＭＯＬＴ−４細胞
を選択的に溶解することができた（第１０図上部）。６
つの同様なアッセイのうち２つにおいて、Ｋ５６２ター
ゲットの弱い溶解（１０〜１５％51Ｃｒ放出）もまた観
察された。ＭＯＬＴ−４細胞の溶解は、本発明者らがこ
れらｍＡｂがＭＨＣクラスＩおよびクラスII同種特異性
ＣＴＬにより殺生を閉塞することを先に見い出したが
［文献３４参照せよ。］、単系性クラスＩ（Ｗ６／３２
抗ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ，４Ｅおよび１３１）またはクラ
スII（ＬＢ３．１および抗Ｌｅｖ１０）決定基に対して
導かれる種々のｍＡｂによって禁止されなかった（第１
１図）。これらのデータは、ＭＯＬＴ−４細胞の溶解が
ＭＨＣクラスＩおよびIIが独自であることを提唱する。
抗Ｔ３ｍＡｂのみがＭＯＬＴ−４細胞の特異性溶解を部
分的にブロックした（第１１図）。一方抗Ｔ３ｍＡｂの
ＩＤＰ２への予備結合によって誘発した際、胸腺誘導Ｃ
II7 に関して先に報告されているとおりＩｇＧに関する
Ｆｃレセプターを発現する51Ｃｒ標識化ターゲット細胞
（例えば、Ｕ９３７）は、効率的に溶解された（第１０
図、 +抗Ｔ３）。このような殺生は、凝集ヒトＩｇＧに
よって完全に禁止でき、このことはこのＴ３−媒介溶解
がＩｇＧＦｃレセプターを経て増強された接合形態によ
り生じたことを確認した（データ示さず）。いくつかの
ターゲット（Ｕ９３７）に関する抗Ｔ３ｍＡｂによる溶
解の逆接的増量および特異的に認識されたターゲット
（ＭＯＬＴ−４）に関する溶解のブロックは、誘発の競
合効果およびＴ３を介する接合形態の増加から生じるが
ＴＣＲを介する立体的ブロック抗原認識によるものでは
ない。 【０１０７】ＰＢＬＣ１は、ＩＤＰ２よりより効率的キ
ラー細胞であることを立証した。ＰＢＬＣ１は、エフェ
クター；ターゲット比（Ｅ：Ｔ）２０：１で検査された
際、Ｋ５６２（ＭＨＣクラスＩおよびII陰性）に対して
自動性細胞溶解性活性を示した（第１２図上部）。さら
に、ＰＢＬはまた、ＭＯＬＴ細胞およびより少ない範囲
でＣＥＭ細胞を溶解した。ダウティ（Ｄａｕｄｉ）、Ｕ
９３７または同種系または同種異系ＰＢＬのいずれの溶
解も検出されなかった。抗Ｔ３ｍＡｂでの誘発は、ＰＢ
ＬＣ１を誘導し、Ｕ９３７細胞系を溶解した。さらに、
Ｋ５６２の溶解がわずかに増大されたがＭＯＬＴ−４の
溶解は部分的に禁止された（第１２図）。合わせると、
Ｋ５６２およびＭＯＬＴ−４等の腫瘍ターゲット上のＩ
ＤＰ２およびＰＢＬＣ１の自発性細胞溶解活性およびこ
れらのＴＣＲγリンパ球が非ＭＨＣクラスＩおよびクラ
スIIであることを示すＭＨＣｍＡｂによる該活性をブロ
ックすることの失敗は、細胞毒Ｔリンパ球を制限した。検討 ＴＣＲα、β分子に対するフレームワーク抗体、βＦ１
およびＷＴ３１は、２例の免疫不全症患者の未梢血リン
パ球からＷＴ３１- βＦＩ- Ｔ３+ リンパ球個体群を固
定し、単離するのに用いられた。フレームワークモノク
ローナル抗体での免疫沈降およびＴＣＲαおよびＴＣＲ
β特異性ＣＤＮＡプローブを用いるノーザンブロットア
ッセイの両方の診断基準によって、この表現型のポリク
ローナルヒトＴ細胞系は、ＴＣＲα、βｍＲＮＡ転写体
およびポリペブチドのいずれも発現しないことが示され
た。とはいっても、解裂性ＤＳＰ指示薬を用いた化学的
架橋の研究は、これらの細胞上のＴ３糖タンパク質と会
合されたタンパク質複合体の存在を表わした。Ｔ３と架
橋した２つのサブユニットの重い方（Ｍr ５５，００
０）は、２つの異なる抗血清、すなわち一方は、有効領
域の部分に相当する１７アミノ酸合成ペプチドに対して
発生し、他方は再配列ＴＣＲγ遺伝子の推定アミノ酸配
列の一定領域の一部分に相当する２０アミノ酸合成ペプ
チドに対して発生する抗血清によっても免疫沈降された
（文献１９，３６）。従って、Ｍr ５５，０００タンパ
ク質は、ＴＣγ遺伝子を再配列することによってコード
化されたＴＣＲγタンパク質であった（文献１５）。Ｍ
r ４０，０００ポリペプチドは、１／４Ｔ３会合タンパ
ク質、ＴＣＲσという、である（第２Ａ図および第２Ｂ
図）。ＴＣＲγおよびδポリペプチドは、前述のＴ細胞
レセプター複合体（ＴＣＲα、β）に類似したこれらの
細胞（Ｔγ、δ−Ｔ３）上のＴ３会合ヘテロダイマー性
構造を形成する。 【０１０８】本明細書で検査されたＴＣＲγリンパ球
は、非ＭＨＣ制限細胞溶解活性を示し、またＴ細胞レセ
プターが明確に特徴づけられていない他のＴ３+ ＮＫ様
細胞と同様であり得る（文献３９、７２、７３、７
４）。ＮＫ様リンパ球として、これらは、悪性腫に対す
る宿主免疫監視において関与し得る。観察された溶解の
特異性は、ＴＣＲγの可能性が全てではないがいくつか
の抗体特異性認識を媒介したことを提唱する。抗Ｔ３ｍ
Ａｂがいくつかのターゲット細胞の非特異性溶解を誘発
できたので、または別に他のターゲットの特異性溶解を
ブロックできたので、これらの細胞上のＴ３分子は、機
能的であるようだ。 〔実施例２〕物質および方法 培養方法 前述のＰＥＥＲ細胞系をＲＰＭＩ １６４０、１０％胎
児ウシ血清、ペニシリン−ストレプトマイシン（Penici
llin-streptomyin) 、およびＬ−グルタミンからなる培
地中生体外培養した。培養株は、週に２度飼育され５％
ＣＯ2 で湿されたインキュベータ中３７℃で保持され
た。 【０１０９】ＴＣＲγ鎖に対して特異なモノクローナル
抗体に関するハイプリドーマ産生 ＢＡＬＢ／ｃマウスを０．２mlリン酸緩衝食塩水（ＰＢ
Ｓ）に懸濁された２×１０7 ＰＥＥＲ細胞で腹腔内
（Ｉ．Ｐ）免疫化された。マウスを全２０接種に対して
２×１０7 ＰＥＥＲ細胞での１０日ごとのＩ．Ｐ．接種
により補助注射した。融合前３日、マウスを３日連続静
脈（Ｉ．Ｖ．）接種のため２×１０7 ＰＥＥＲ細胞での
Ｉ．Ｖ．接種により補助接種した。マウスを殺し、脾臓
を最終Ｉ．Ｖ．接種時除いた。免疫脾臓細胞を標準的な
方法によりマウス骨髄腫細胞Ｐ３×６３Ａｇ８．６５３
でポリエチレングリコール１５００の存在下５：１比で
融合した。融合後、細胞をヒポキサンチン（１×１
０-4）、アミノプテリン（８×１０ -8Ｍ）およびチミジ
ン（１．６×１０-5Ｍ）含有培養培地中に懸濁し、飼育
細胞として２×１０5 ＢＡＬＢ／ｃ胸腺細胞を含有する
マイクロタイタープレートに１ウェルにつき２×１０5
細胞でプレートした。培養株を、７日において同一培地
で飼育した。開始１４日、培養株をアミノプテリンを欠
く同一培地で飼育した。 【０１１０】ＴＣＲγ鎖に特異なモノクローナル抗体に
関するハイブリドーマスクリーニング ＰＥＥＲ細胞上のＴ細胞抗原レセプターのγおよびσ鎖
の両者がＣＤ２抗原と複合されるので、Ｔ細胞抗原レセ
プターに対する抗体は、ＯＫＴ（登録商標）３等の抗Ｃ
Ｄ３モノクローナル抗体とこれら表面タンパク質と共転
形し得るべきである（文献２）。このような共転形は、
次のとおり所望のハイブリドーマの主要スクリーニング
として利用された。ハイブリドーマ培養上澄液の各々を
生育させ、その抗ＣＤ３モノクローナル抗体と表面ＣＤ
３タンパク質複合体を共転形する能力に関してスクリー
ニングした。１００マイクロ力価の培養上澄液を１ウェ
ルにつき５×１０5 ＰＥＥＲ細胞含有９６ウェルマイク
ロ力価プレートの各ウェルに加えた。３７℃での一晩の
培養後、フルオレセインイソチオシアネート接合ＯＫＴ
（登録商標）３を各ウェルに加え、さらに０℃で３０分
間培養した。サンプルをついで流動細胞計測法で分析し
た。蛍光強度の著しい減少を誘いた上澄液を選択し、さ
らに以下に記載する免疫沈降法により特徴づけした。抗
ヒトＴ細胞抗体レセプタータンパク質を分泌した選択ウ
ェルにおける細胞をついで制限希釈度法によりクローン
した。 免疫沈降 ＰＥＥＲ細胞は、 125Ｉで放射性標識化され、上述の１
％ノニデットＰ−４０含有トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）
中に可溶化した。免疫沈降は、還元条件下各選択上澄液
での 125Ｉ標識化ＰＥＥＲ細胞溶解産物を培養すること
により実施された。免疫沈降後、サンプルは、１０％ド
デシル硫酸ナトリウウム−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分析された。ゲルを乾
燥し、オートラジオグラフ化し、そしてタンパク質の分
子量を分子量標準との比較により決定した（文献７
５）。 【０１１１】ＴＣＲδ鎖に特異なモノクローナル抗体を
産生するハイブリドーマの産生およびスクリーニング
モノクローナル抗体は、ＢＡＬＢ／ｃマウスをピーＰ
ＥＥＲからの免疫沈降ＴＣＲγ、σＣＤ３で免疫化する
ことにより作成された。簡単に言うと、文献４６に記載
された方法と同様に１グラムのピーア細胞を０．３％Ｃ
ＨＡＰＳに可溶化しついで５マイクロタイターのＵＣＨ
Ｔ１腹水と固定スタフィロコッカスアウレアスコウンＩ
(Staphylococcus aureas Cown Ｉ) 株で免疫沈降した。
洗浄免疫複合体を全５回の免疫化に関して４週間間隔で
腹腔内接種した（文献４６）。マウスをついで殺し、脾
臓細胞をＰ３×６３Ａｇ８．６５３胸腺細胞に融合し
た。ハイブリドーマをＨＡＴ選択において生長させ 125
Ｉ標識化ＰＥＥＲ細胞および文献７５に記載の他の細胞
に対してスクリーニングおよび特徴づけした。 結果 第１３図、レーン４に示すとおり、ハイブリドーマ３４
Ｄ１２上澄液(Supernate) における抗体は、ＰＥＥＲ細
胞のヨウ素標識化溶解産物から還元条件下５５ｄタンパ
ク質および２０Ｋｄタンバク質を免疫沈降した。この５
５Ｋｄタンパク質は、Ｔ細胞抗原レセプターのγ鎖およ
びＰＥＥＲ細胞上のＴ３タンパク質の２０Ｋｄタンパク
質に相当する。 【０１１２】別個の実験において、Ｔ細胞抗原レセプタ
ーδ鎖に対するモノクローナル抗体、すなわち４Ａ１
は、産生されかつ特徴づれられた。第１４図、レーン５
に示すとおり、４Ａ１は、ＩＤＰ２細胞からのＴ細胞抗
原レセプターδ鎖（４０Ｋｄ）を再免疫沈降した（文献
７５）。４Ａ１はまた、ＩＤＰ２、Ｍｏｌｔ−１３およ
びＰＢＬ系２等のいくつかの他のＴ細胞抗原レセプター
γ、δ陽性細胞系からＴ細胞抗原レセプターγ、δ複合
体を免疫沈降することが示されている。 参考文献 【０１１３】【０１１４】【０１１５】【０１１６】【０１１７】【０１１８】【０１１９】【０１２０】
はγＴ細胞レセプターに反応する抗体、δＴ細胞レセプ
ターをコードする核酸、δＴ細胞レセプターとγＴ細胞
レセプターとの複合体およびこれを用いる免疫系異常の
検査法並びにδＴ細胞レセプターとγＴ細胞レセプター
との複合体に反応する抗体およびこれを用いる免疫系異
常の検査法に関する。 【０００２】 【従来の技術および発明が解決しようとする課題】抗原
のＴ細胞認識および主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）コ
ード化抗原によるプロセスの制限を理解することは、免
疫学における重要な目標となっている。主要段階は、Ｔ
細胞抗原レセプター（ＴＣＲ）αおよびβと命名される
サブユニットからなるＴ細胞上のクローン特異的ジスル
フィド結合ヘテロダイマーの免疫化学的同定とともに進
められている。ＴＣＲαおよびβサブユニットは、相対
分子質量（Ｍr ）約50,000および40,000ダルトンを有す
る（各々文献１，２，３を参照せよ、文献名は明細書の
最後に記載する）。Ｔ細胞の個体発生時に再配列し、か
つＴＣＲβ（文献４，５を参照せよ）およびＴＣＲα
（文献６〜８を参照せよ）サブユニットをコード化する
遺伝子は、消去式(subrtactive) ハイブリダイゼーショ
ンまたはオリゴヌクレオチドを用いたプロービング（pr
obing)のいずれかにより単離された。 【０００３】ヒトＴＣＲα，βの独特の特徴は、同時モ
ジュレーション(comodulation 、文献２を参照せよ）、
免疫共沈（coimmunoprecipitation 、文献９，１０を参
照せよ）により観察され、またＴＣＲα，β分子のＴ３
糖タンパクとの同時発現（coexpression) を必要とする
（文献１１を参照せよ）ことから、該２つの構造が関連
することが示された。続いて、２つのタンパク質複合体
の直接物理的会合は、ＴＣＲα，β分子をＴ３糖タンパ
クに化学的に架橋させ、架橋複合体の成分をＴＣＲβサ
ブユニットおよびＴ３糖タンパク（Ｍr 28,000）として
同定することによって証明された（文献１２を参照せ
よ）。Ｔ３複製は、同様にマウスＴＣＲα，βと会合さ
れる（文献１３，１４を参照せよ）。 【０００４】ＴＣＲγと命名される、Ｔ細胞において再
配列する第３遺伝子は、マウス（文献１５〜１７を参照
せよ）およびヒト（文献１８，１９を参照せよ）におい
て同定されている。しかしながら、その遺伝子の構造に
関しては、ヒトおよびマウスＴＣＲγ遺伝子の間で大き
な相違がある。すなわち、例えば、ヒトＴＣＲγ遺伝子
のｃＤＮＡは、ＴＣＲγ遺伝子産物中におけるＮ結合グ
リコシル化に関する５つの可能性のある部位を示し、マ
ウスＴＣＲγ遺伝子には該部位がはっきりと存在しない
こととは対照的である。したがって、ヒトＴＣＲγ遺伝
子産物は、その遺伝子配列から予想不能な高分子量を有
する。 【０００５】ＴＣＲγ遺伝子の再配列は、サプレッサー
−細胞毒性を有するリンパ球並びにヘルパー表現型でリ
ンパ球において生じ、そして多数のＴＣＲγ鎖を産生し
得る（文献１８〜２３を参照せよ）。しかしながら、Ｔ
ＣＲγ遺伝子の機能は未知である。さらに、ＴＣＲγ遺
伝子によってコードされるタンパク質および他の構造体
とのその可能な会合（ＴＣＲα，βおよびＴ３糖タンパ
クで生じる際の）のいずれも明らかにされていない。ヒ
トにおいては、多数の糖タンパク質のグリコシル化部位
によって、ＴＣＲγポリペプチド構造の性質およびサイ
ズを正確に予想するのことは不可能になる。加えて、発
行された文献では、ヒト疾病を診断し、監視しまたは段
階づけ(staging) することに関して、ＴＣＲγの有用性
を教示または示唆していない。 【０００６】ＴＣＲα，β分子のみが、少なくともいく
つかのＴ細胞上における抗原認識とＭＨＣ拘束との両方
を決定することは、非常にありそうでである（文献２
４，２５を参照せよ）。しかしながら、ＴＣＲα，βＴ
が、細胞の個体発生の際、Ｔ細胞選択のプロセスを示す
のか、または成熟Ｔ細胞による全ての抗原特異的認識を
示すのかということは明らかでない。例えば、サプレッ
サーＴリンパ球ではなぞが残る。すなわち、いくつかの
場合においては、該サプレッサーＴリンパ球は、ＴＣＲ
β遺伝子を削除するか、または再配列することができな
い（文献２６，２７を参照せよ）。したがって、第２の
Ｔ細胞レセプターが存在するかどうかを決定し、その構
造を定義し（特に、ＴＣＲγ遺伝子産物の可能な用途に
関して）、そしてひいてはこれがどんな機能を提供する
かを理解することは、非常に重要である。 【０００７】 【課題を解決するための手段】本発明は、少なくともδ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドの部分からなる精製ポリ
ペプチドを提供する。加えて、少なくとも１つのδＴ細
胞レセプターポリペプチドと特異的に複合体を形成し得
る物質を提供する。また、δＴ細胞レセプターポリペプ
チドを有する個々のＴ細胞を検出する方法を提供する。
この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをδＴ細胞レセ
プターポリペプチドと複合体を形成することができる物
質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドとの細胞性複合体を形成させることからなる。該細胞
性複合体を検出することにより、δＴ細胞レセプターポ
リペプチドを有する個々のＴ細胞が検出される。 【０００８】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、このサンプル
を少なくとも１つのδＴ細胞レセプターポリペプチドと
複合体を形成し得る物質と接触させ、該物質とＴ細胞レ
セプターポリペプチドとの細胞性複合体を形成すること
からなる。サンプル中のδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異
常を示さない正常被験者からのサンプル中のけるδＴ細
胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞のパーセンテ
ージと比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパ
ーセンテージの相異は、免疫系異常を示すはずである。 【０００９】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断する別の方法を提供する。この方法は、被験者からの
サンプルにおけるδＴ細胞レセプターポリペプチド担持
（bearing)Ｔ細胞の数を決定し、δＴ細胞レセプターポ
リペプチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリ
ペプチドの量を決定することからなる。このようにして
決定されたδＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、免
疫系異常を示さない正常被験者からのサンプル中の同数
のδＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞における
δＴ細胞レセプターポリペプチドの量と比較する。この
ようにして決定された量の相異は、免疫系異常を示すは
ずである。 【００１０】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者からのサン
プルにおいて、δＴ細胞レセプターポリペプチドを有す
るＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，
βＴ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からな
るＴ細胞の数を決定することからなる。このようにして
決定されたＴ細胞の数は、Ｔ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞の数と被験者からのサンプル中で決定
されたＴ細胞の群と同様に、表面マーカーを有する群に
おけるＴ細胞の数とを比較し、免疫異常を示さない被験
者からのこれらを比較する。このように決定された群に
おけるＴ細胞の数に対する、このようにして決定された
Ｔ細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞の数の相
違は、免疫系異常を示すはずである。 【００１１】本発明はまた、少なくともγＴ細胞レセプ
ターポリペプチドの部分からなる精製ポリペプチドを提
供する。加えて、少なくとも１つのγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと特異的に複合体を形成し得る物質を提供
する。さらにまた、γＴ細胞レセプターポリペプチドを
有する個々のＴ細胞を検出する方法を提供する。この方
法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと複合体を形成することができる物質と接
触させ、該物質とγＴ細胞レセプターポリペプチドとの
細胞性複合体を形成することからなる。該細胞性複合体
を検出することにより、各Ｔ細胞がγＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。 【００１２】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと複合
体を形成し得る物質と接触させ、該物質とＴ細胞レセプ
ターポリペプチドとの細胞性複合体を形成することから
なる。γＴ細胞レセプターポリペプチドを有するサンプ
ルにおけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異
常を示さない正常被験者からのサンプルにおけるγＴ細
胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞のパーセンテ
ージと比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパ
ーセンテージの相異は、免疫系異常を示すはずである。 【００１３】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおけるγＴ細胞レセプターポリペプチ
ド担持Ｔ細胞の数およびγＴ細胞レセプターポリペプチ
ド担持Ｔ細胞におけるγＴ細胞レセプターポリペプチド
の量を決定することからなる。このようにして決定され
たγＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、免疫系異常
を示さない正常被験者からのサンプルにおける同数のγ
Ｔ細胞ポリペプチド支持Ｔ細胞ポリペプチド支持Ｔ細胞
におけるγＴ細胞レセプターポリペプチドの量と比較す
る。このようにして決定された量の相異は、免疫系異常
を示すはずである。 【００１４】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおいてγＴ細胞レセプターポリペプチ
ドを有するＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８お
よびα，βＴ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の
群からなるＴ細胞の数を決定することからなる。このよ
うにして決定されたＴ細胞の数は、被験者、免疫系異常
を有さない被験者からのサンプル中で決定されたＴ細胞
の群と同じ表面マーカーを有する群のＴ細胞の数と、γ
Ｔ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞数およびγＴ
細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細胞数とを比較
する。このようにして決定された群におけるＴ細胞の数
に対する、このようにして決定されたγＴ細胞レセプタ
ーポリペプチドを有するＴ細胞の数の相違は、免疫系異
常を示すはずである。 【００１５】本発明はさらにまた、少なくともδＴ細胞
レセプターポリペプチドの部分および少なくともγＴ細
胞レセプターポリペプチドの部分からなる精製複合体を
提供する。また、少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプ
ター複合体と特異的に複合体を形成し得る物質を提供す
る。さらに、Ｔ細胞の各々が、γ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞を検出する方法を提供する。この
方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγ，δＴ細胞レセ
プター複合体と複合体を形成することができる物質と接
触させ、該物質とγ，δＴ細胞レセプター複合体との細
胞性複合体を形成させることからなる。該細胞性複合体
を検出することにより、各Ｔ細胞が、γ，δＴ細胞レセ
プター複合体を有するＴ細胞が検出される。 【００１６】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体
を形成し得る物質とを接触させ、該物質とγ，δＴ細胞
レセプター複合体との細胞性複合体を形成することから
なる。γ，δＴ細胞レセプター複合体を有するサンプル
におけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、免疫系異常
を示さない正常被験者からのサンプルにおけるγ，δＴ
細胞レセプター複合体を有するＴ細胞のパーセンテージ
と比較する。このようにして決定されたＴ細胞のパーセ
ンテージの相違は、免疫系異常を示すはずである。 【００１７】本発明は、被験者における免疫系異常を診
断するさらに別の方法を提供する。この方法は、被験者
からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプター複合体
担持Ｔ細胞の数およびγ，δＴ細胞レセプター複合体担
持Ｔ細胞におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体の量を
決定することからなる。このようにして決定されたγ，
δＴ細胞レセプター複合体の量を、免疫系異常を示さな
い正常被験者からのサンプルにおける同数のγ，δＴ細
胞複合体担持Ｔ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞におけ
るγ，δＴ細胞レセプター複合体の量と比較する。この
ようにして決定された量の相異は、免疫系異常を示すは
ずである。 【００１８】本発明により被験者における免疫系異常を
診断するさらに別の方法が提供される。この方法は、被
験者からのサンプルにおいて、γ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ
８およびα，βＴ細胞レセプター複合体のひとつを有す
るＴ細胞の群からなるＴ細胞の数を決定することからな
る。このようにして決定されたＴ細胞の数は、被験者か
らのサンプル、免疫異常を示さない被験者からのサンプ
ル中のγ，δＴ細胞レセプターの数、および決定された
Ｔ細胞の群と同一の表面マーカーを有する群におけるＴ
細胞の数と比較する。この群におけるＴ細胞の数に対す
る、このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプター
複合体を有するＴ細胞の数は、免疫系異常を示すはずで
ある。 【００１９】第１図：ＴＣＲα，βを認識するフレーム
ワーク(framework) モノクローナル抗体の反応性。 Ａ．レーン１：対照抗体、正常マウス血清。 レーン２：抗フレームワークＴＣＲα，βモノクローナ
ル抗体（βＦ１）。 Ｂ．レーン１：対照抗体、正常マウス血清。 【００２０】レーン２：抗Ｔ３モノクローナル抗体（Ｕ
ＣＨＴ−１）。 レーン３：抗フレームワークＴＣＲα，βモノクローナ
ル抗体（ＷＴ３１）。 Ｃ．正常成人末梢血リンパ球のフローサトメトリー分析
の３次元表示。緑色蛍光および赤色蛍光を、非特異的対
照ＦＩＴＣ−およびビオチン接合モノクローナル抗体に
比較して測定した。いずれかのモノクローナル抗体と反
応しない細胞は、非Ｔ細胞であった（左下隅）；二重陽
性、すなわちＯＫＴ（登録商標）３およびβＦ１の両方
と反応している細胞は、格子の中央におけるリンパ球の
集団を構成する；βＦ１と反応しＯＫＴ（登録商標）３
+ と反応しなかった細胞は、Ｘ軸にそって観察された、
小さいが区別が可能なリンパ球の群（４％のＴ３+ 細
胞）からなる。 【００２１】第２図：細胞表面Ｔ３およびＩＤＰ１およ
びＩＤＰ２細胞系によるＴ３会合（架橋）分子のＳＤＳ
−ＰＡＧＥ分析。 Ａ．ＩＤＰＩ細胞系２（ＷＴ３１+ ）および細胞系３
（ＷＴ３１- ）。 レーン 1,2,7および 8：正常マウス血清。 レーン 3,4,9および10：抗Ｔ３モノクローナル抗体（Ｕ
ＣＨＴ−１）。 【００２２】レーン5,6,11および12：抗フレームワーク
ＴＣＲα，βモノクローナル抗体（βＦ１）。 Ｂ．ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ） レーン 1,4,7および10：正常マウス血清。 レーン 2,5,8および11：抗フレームワークＴＣＲモノク
ローナル抗体（βＦ１）。 【００２３】レーン 3,6,9および12：抗Ｔ３モノクロー
ナル抗体（ＵＣＨＴ−１）。 ＤＳＰと架橋した 125Ｉ標識化試料ＸＬ。 Ｃ．ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）および細胞
系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ） レーン 1および 3：正常マウス血清。 【００２４】レーン 2および 4：抗Ｔ３モノクローナル
抗体（ＵＣＨＴ−１）。 第３図：ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγのｃＤＮＡ
プローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮＡ
のノーザンブロット分析。 Ａ．レーン１：ＩＤＰ２細胞系６（ＷＴ３１- ） レーン２：Ｔ白血病細胞系 ＨＢＰ−ＭＬＴ。 Ｂ．レーン１：ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ
３+ ）。 【００２５】レーン２：ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ
３１- Ｔ３+ ）。 レーン３：細胞系 ＨＰＢ−ＭＬＴ。 第４図：ＩＤＰ２細胞系７からの抗Ｖγおよび抗Ｃγペ
プチド血清の免疫沈降。Ａ．レーン１：正常マウス血
清。 レーン２：抗Ｖγペプチドマウス血清。 【００２６】レーン３：正常家兎血清。 レーン４：抗Ｃγペプチド家兎血清。 Ｂ．レーン１：正常マウス血清。 レーン２：抗Ｔ３モノクローナル抗体（ＵＣＨＴ−
１）。 レーン３：正常家兎血清。 【００２７】レーン 4,5：抗Ｃγペプチド家兎血清。 第５図：ヒト腫瘍および末梢血リンパ球系からのＴＣＲ
γ，δおよびＴ３の免疫沈降。125 Ｉ標識化細胞溶解物
からの免疫沈降を、還元(reducing)（Ｒ）または非還元
（ＮまたはＮＲ）条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１０％アク
リルアミド）によって分析した。サイズマーカー、Ｍr,
１０００。 Ａ．ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞上のＴＣＲγ，δおよ
びＴ３サブユニット。免疫沈降は、１μg 対照ｍＡｂ
Ｐ３（Ｐ３Ｘ６３．Ａｇ８骨髄腫により分泌されたｍＡ
ｂ，レーン１，３，５および６）；１μg ＵＣＨＴＩ
（抗Ｔ３、文献４０を参照せよ）（レーン２，４，７お
よび８）；１０μg 正常ラビット血清（ＮＲＳ，レーン
９）および１０μg 抗Ｃペプチド血清（抗ＴＣＲγ）
（レーン１０）を用いて行った。矢印は、ＲおよびＮＲ
条件下で、移動度が変化するＴＣＲδサブユットの位置
を示す。 【００２８】末梢血Ｔ細胞クローン、ＰＢＬ Ｃ１およ
びＷＴ３１- ＰＢＬ系上のＴＣＲγ，δおよびＴ３サブ
ユニット。免疫沈降は、対照ｍＡｂＰ３（レーン１，
４，９および１２）、１μg βＦ１（抗ＴＣＲβ）
（レーン２，５，１０および１３）、ＮＲＳ（レーン７
および１５）および抗ペプチド血清（レーン８および１
６）を用いて実行した。白抜きの矢印は、ジスルフィド
結合Ｆ１および未反応性Ｔ３会合種、黒塗りの矢印は、
ジスルフィド結合していないＴ３会合物質（Ａにおける
ＴＣＲδ等）を示し、この物質は、非還元条件下で増加
したＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動度を示す。 【００２９】第６図：ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮ
Ａのノーザンブロット分析。Ｔ白血病細胞系ＨＰＢ−Ｍ
ＬＴ（各プローブに関してレーン１）およびＰＢＬＣ１
（各プローブに関してレーン２）からの総ＲＮＡ調製物
をＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγプローブを用いて
ノーザンブロット分析した。 第７図：ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。（パネルA 〜D ）ＰＢＬ Ｃｌ細胞からの還元
（分離）および非還元（二量性）Ｔ３−会合ポリペプチ
ドの比較をＣＨＡＰＳに溶解し、抗Ｔ３ｍＡｂで免疫沈
降させた。二次元ゲル電気泳動を、還元条件下（Ａ，
Ｃ）あるいは非還元条件下（Ｂ，Ｄ）にて行った。Ｔ３
γ，δおよびε部位を標識し、ＲおよびＮの両方の条件
下にて、同様の位置にフィーカシングした。ジスルフィ
ド結合の開裂後、Ｔ３会合ポリペプチド（４０Ｋおよび
３６Ｋ）は、Ｒ条件下ではＴ３γの近くのフォーカシン
グ位置に移動したが、Ｎ条件下（二量体の両組成物が存
在する場合（６８Ｋ））、より酸性の位置にシフトし
た。分子量マーカーはＭr とした。 【００３０】第８図：ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆
体の二次元ゲル分析。（パネルE 〜H ）グリコシル化お
よび未グリコシル化ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１ ＴＣ
Ｒペプチド前駆体の分析。ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１
細胞は、35Ｓ−メチオニンでパルス標識し、変性条件下
に溶解し、抗Ｃγペプチド血清で免疫沈降した。免疫沈
降は、ついでエンド−Ｈで処理または模擬処理し、二次
元ゲル電気泳動により分析した。グリコシル化ＴＣＲγ
ペプチドを白抜き矢印で、グリコシル化されていないＴ
ＣＲγを黒塗り矢印で示す。見かけの相対分子質量をパ
ネルＡおよびＢ（図示せず）に用いた標準物質の移動か
ら計算した。各パネルにおけるひし形で示される小量の
夾雑しているアクチンは、内部マーカーとして作用し
た。Ｅ，ＩＤＰ２ ＴＣＲγ、模擬培養、Ｆ，ＩＤＰ２
ＴＣＲγ，エンド処理；Ｇ，ＰＢＬ Ｃ１ ＴＣＲγ
模擬培養、Ｈ，ＰＢＬ Ｃ１ ＴＣＲγエンド処理。 【００３１】第９図：ＴＣＲγポリペプチドを発現して
いるＴ細胞におけるγおよびβ遺伝子の再配列。ＩＤＰ
２細胞系、ＰＢＬ Ｃ１，ＰｂＬ Ｃ２，ＷＴ３１- Ｐ
ＢＬ系、胎児胸腺、新生児胸腺，ＰＢＬおよびＢ細胞系
（生殖細胞系(germline)のためのＪＹ）から単離された
ゲノムＤＮＡをＴＣＲγ（Ａ，Ｂ）およびＴＣＲβ
（Ｃ）遺伝子の再配列に関してサザンブロット分析を行
った。ゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩ（Ａ，Ｃ）またはＥｃ
ｏＲＩ（Ｂ）で消化し、アガロースゲル上で分画し、32
Ｐ−標識Ｊγ1,3 （Ａ，Ｂ）またはＣβ2プローブ
（Ｃ）でのハイブリダイゼーションのためにニトロセル
ロースフィルターに転写した。矢印およびローマ数字は
ＴＣＲγの再配列を示す。分子量マーカーはＫｂであ
る。 【００３２】第10図〜第12図（それぞれパネルA,B,C に
対応）：ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞溶
解。（パネルA,C ）ＩＤＰ２またはＰＢＬ Ｃ１エフェ
クター細胞を（表示されたエフェクター：標的（Ｅ：
Ｔ）比で）51Ｃγ- 標識ターゲット細胞Ｋ５６２（白血
球系）、Ｕ９３７（単核細胞系）、ＭＯＬＴ−４，ＣＥ
Ｍ（Ｔ白血病系）、ダウディ（Daudi)（バーキットリン
パ腫系）または同種異系または自己のＰＢＬ（ヒトＰＢ
Ｌの３日目のブラスト細胞(blasts)）とともに培養し
た。各標的に対する 51Ｃγの特異的放出％を示す。抗Ｔ
３ ｍＡｂ ＵＣＨＩを３０分間０℃でエフェクター細
胞（＋抗Ｔ３）に予備結合した後に同様のアッセイを行
った。（パネルB ）種々のｍＡＢによるＭＯＬＴ−４タ
ーゲット細胞のＩＤＰ２細胞溶解の阻害。ＩＤＰ２およ
び51Ｃγ標識化ＭＯＬＴ−４細胞を種々の希釈度の抗Ｍ
ＨＣクラス１ｍＡｂ Ｗ６／３２（抗ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，
Ｃ単形態性決定基、文献５８を参照せよ）、抗ＨＬＡ−
Ａ，Ｂ，Ｃ（単形態性決定基、文献５９を参照せよ）、
４Ｅ（抗−ＨＬＡ−ＢおよびＣ部位、文献６０を参照せ
よ）、１３１（抗ＨＬＡ−Ａ座、文献６１を参照せよ）
または抗ＭＨＣ（クラスIIｍＡＢ ＬＢ３．１（抗ＤＲ
特異的、文献６２を参照せよ）、抗Ｌｅｕ １０（抗Ｄ
Ｑ特異的、文献６３を参照せよ）、または抗Ｔ３ ｍＡ
Ｂ ＵＣＨＴＩの存在下にて、４０：１のＥ：Ｔ比で一
緒に培養した。より高い稀釈倍率は、腹水としてｍＡｂ
のために用い（Ｗ６／３２，４Ｅ，１３１，Ｌ Ｂ３．
１およびＵＣＨＴＩ）、また低い稀釈倍率は、市販のｍ
Ａｂ（抗Ｌｅｕ １０）または培養上清（抗ＨＬＡ−
Ａ，Ｂ，Ｃ）のために用いた。 【００３３】第13図：ピーア（Peer) 細胞から誘導され
たＴＣＲγ鎖の免疫沈降。レーン１〜１８は、同じハイ
ブリドーマ融合実験からの種々のハイブリドーマ培養上
清である。レーン４は、抗γ鎖モノクローナル抗体３４
Ｄ１２であり、レーン９は対照Ｐ３×６３Ａｇ８．６５
３培養上清であり、またレーン１０は、対照の正常マウ
ス血清である。 ｀第14図：ＩＤＰ２細胞からのＴＣＲδ鎖の免疫沈降。 【００３４】レーン１は対照Ｐ３×６３Ａｇ．８．６５
３は培養上澄液、レーン２および５はモノクローナル抗
体４Ａ１培養上清、レーン３はＬｅｕ４、またレーン４
は対照正常ラビット血清である。ＩＤＰ２細胞は、ラク
トペルオキシターゼを用いて125 Ｉ標識し、２％トライ
トンＸ１００（Triton Ｘ１００）に可溶化した。レー
ン４および５において、この溶解物を３分間煮沸し、４
容量の１％トライトンＸ１００で稀釈し、１％ＳＤＳ中
で４℃で１晩変性した。これによりＴＣＲγおよびδ鎖
を分離した。このようにして鎖を分離した後、モノクロ
ーナル抗体４Ａ１によって、上述のごとく、ＴＣＲδ鎖
（レーン５）が免疫沈降された。 【００３５】 【発明の実施の形態】しかして、本発明は、少なくとも
δＴ細胞レセプターの部分からなる精製ポリペプチドを
提供するものである。このポリペプチドは、少なくとも
内部鎖、共有結合、ジスルフィド架橋を有しすることが
できる。加えて、ポリペプチドは、分子量約４０，００
０ダルトンのδＴ細胞レセプターポリペプチドからなる
ものであってもよい。さらに、δＴ細胞レセプターポリ
ペプチドは、ヒトδＴ細胞レセプターポリペプチドであ
ってもよい。 【００３６】少なくとも１つのδＴ細胞レセプターポリ
ペプチドと特異的に複合体を形成し得る物質もまた、本
発明によって提供される。この発明の一実施例態様にお
いて、該物質は、１つのδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドと特異的に複合体を形成できる。この発明の他の実施
態様において、該物質は、１以上のδＴ細胞レセプター
ポリペプチドと特異的に複合体を形成できる。この発明
の他の実施態様において、該物質は、１以上のδ細胞レ
セプターポリペプチドと特異的に複合体を形成できる。
該物質は、抗体であってもよい。該抗体は、ポリクロー
ナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよい。 【００３７】また、Ｔ細胞の各々がδＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞を検出する方法を提供す
る。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをδＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を形成することができ
る物質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペ
プチドとの細胞性複合体を形成することからなる。該細
胞性複合体を検出することにより、各Ｔ細胞がδＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。 【００３８】したがって、この発明の一実施態様におい
て、δＴ細胞レセプターポリペプチドは、Ｔ細胞上の表
面上に存在する。この発明の別の実施態様において、δ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドは、δＴ細胞の細胞表面
上に存在する。該方法は、特異δＴ細胞レセプターポリ
ペプチド複合体を形成することによって行なわれる。こ
の発明の一実施態様において、特異δＴ細胞レセプター
ポリペプチドは、サプレッサーＴ細胞質内に存在する。 【００３９】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。本明細書において、免疫
系異常とは、正常または標準的な免疫応答と比較して亢
進したまたは減弱した免疫応答であることを特徴とす
る、抗原に対する免疫学的応答状態を意味するものであ
る。したがって、免疫系異常としては、これに限定され
るものではないが、免疫不全状態、例えば、後天性免疫
不全症候群および先天性免疫不全症等、過免疫状態およ
び過免疫症、例えば、アレルギーおよび枯草熱等が挙げ
られる。本発明の方法は、被験者からのサンプルにおけ
るＴ細胞の数を決定し、サンプルを少なくとも１つのδ
Ｔ細胞レセプターポリペプチドと複合体を形成し得る物
質と接触させ、該物質とδＴ細胞レセプターポリペプチ
ドとの細胞性複合体を形成することからなる。δＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するサンプルにおけるＴ細
胞のパーセンテージを決定し、免疫系異常を示さない正
常被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプターポ
リペプチドを有するＴ細胞のパーセンテージと比較す
る。このようにして決定されたＴ細胞のパーセンテージ
の相異は、免疫系異常を表すものである。 【００４０】この発明の一実施態様における免疫系異常
は癌である。癌は、白血病またはリンパ腫であり得る。
この発明の他の実施態様における免疫系異常は、後天性
免疫不全症候群である。この発明の別の実施態様におけ
る免疫系異常は、先天性免疫不全症である。この発明の
さらに別の実施態様における免疫系異常は、自己免疫疾
患である。 【００４１】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。この発明の一実施態様における被験者は、ヒ
トである。さらにまた被験者からのサンプルは、血液ま
たは組織であってもよい。本発明は、被験者における免
疫系異常を診断する別の方法を提供する。この方法は、
被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプターポリ
ペプチド担持Ｔ細胞の数およびδＴ細胞レセプターポリ
ペプチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリペ
プチドの量を決定することからなる。このようにして決
定されたδＴ細胞レセプターポリペプチドの量を、被験
者からのサンプル、免疫系異常を示さない正常被験者か
らのサンプルにおける同数のδＴ細胞レセプターポリペ
プチド担持Ｔ細胞におけるδＴ細胞レセプターポリペプ
チドの量と比較する。このようにして決定された量の相
異は、免疫系異常を表す。この発明の一実施態様におい
て、単一のδＴ細胞レセプターポリペプチドの量が決定
される。 【００４２】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者からのサン
プル中でδＴ細胞レセプターポリペプチドを有するＴ細
胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，βＴ細
胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からなるＴ細
胞の数を決定することからなる。このようにして決定さ
れたＴ細胞の数は、被験者からのサンプル、免疫異常を
示さない被験者からのサンプルにおけるδＴ細胞レセプ
ターポリペプチドを有するＴ細胞の数および決定された
Ｔ細胞の群と同一の表面マーカーを有する群におけるＴ
細胞の数と比較する。このようにして決定された群中の
Ｔ細胞に対するδＴ細胞レセプターポリペプチドを有す
るこのようにして決定されたＴ細胞の数の相違は、免疫
系異常を表す。 【００４３】本発明はまた、分子量約40,000ダルトンの
δＴ細胞レセプターをコードする核酸分子を提供する。
この発明の一実施態様において、該分子は、ＤＮＡ分子
である。さらにまた、δＴ細胞レセプターポリペプチド
をコードする核酸分子と相補的な核酸分子が提供され
る。少なくともγＴ細胞レセプターの部分からなる精製
ポリペプチドもまた、本発明によって提供される。該ポ
リペプチドは、分子量約55,000ダルトンのγＴ細胞レセ
プターを含む。本発明の一実施態様においては、該ポリ
ペプチドは、分子量約31,000ダルトン〜約40,000ダルト
ンを有するペプチド配列を有する。加えて、該ポリペプ
チドヒトγＴ細胞ポリペプチドであってもよい。 【００４４】本発明はさらに、お互い会合された２つの
本発明のγＴ細胞レセプターポリペプチドからなる精製
複合体を提供する。この発明の一実施態様において、該
２つのγＴ細胞レセプターポリペプチドは、少なくとも
１つの内部鎖、共有結合、ジスルフィド結合によりお互
いに会合する。この発明の他の実施態様において、該２
つのγＴ細胞レセプターは、お互い非共有結合的に会合
する。この発明の別の実施態様において、該２つのγＴ
細胞レセプターは、同一の定常ドメインを有する。この
発明のさらに別の実施態様において、該２つのγＴ細胞
レセプターポリペプチドは、異なる定常ドメインを有す
る。 【００４５】本発明はまた、少なくとも１つのγＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を特異的に形成し得る
物質を提供する。この発明の一実施例態様において、該
物質は、１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと特異
的に複合体を形成できる。この発明の他の実施態様にお
いて、該物質は、１以上のγＴ細胞レセプターポリペプ
チドと特異的に複合体を形成できる。該物質は、抗体で
あり得る。この発明の一実施態様において該抗体は、ポ
リクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得
る。 【００４６】また、Ｔ細胞の各々がγＴ細胞レセプター
ポリペプチドを有するＴ細胞を検出する方法を提供す
る。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプルをγＴ細胞
レセプターポリペプチドと複合体を形成することができ
る物質と接触させ、該物質とγＴ細胞レセプターポリペ
プチドとの細胞性複合体を形成することからなる。該細
胞性複合体を検出することにより、各Ｔ細胞がγＴ細胞
レセプターポリペプチドを有するＴ細胞が検出される。
この発明の一実施態様においてγＴ細胞レセプターポリ
ペプチドは、Ｔ細胞表面上に存在する。この発明の他の
実施態様において、γＴ細胞ポリペプチドは、γＴ細胞
の細胞質内に存在する。この発明の別の実施態様におい
て、該物質は、特異的γＴ細胞ポリペプチドと複合体を
形成し得る。この該特異γＴ細胞レセプターポリペプチ
ドは、サプレッサーＴ細胞内のみに存在し得る。さらに
また、該γＴ細胞レセプターポリペプチドは、別のγＴ
細胞レセプターポリペプチドと会合し得る。この発明の
一実施態様において、該γＴ細胞レセプターポリペプチ
ドは、別のγＴ細胞レセプターポリペプチドと会合す
る。この発明の他の態様における該γＴ細胞レセプター
ポリペプチドは、主要組織適合抗原に拘束されない細胞
毒性Ｔリンパ球のみにおいて、別のγＴ細胞レセプター
ポリペプチドと会合する。さらにまた、該主要組織適合
抗原に拘束されない細胞毒性Ｔリンパ球は、Ｔキラー細
胞またはナチュラルキラー様細胞であり得る。 【００４７】本発明は、さらに被験者における免疫系異
常を診断する方法を提供する。この方法は、被験者から
のサンプルにおけるＴ細胞の数を決定し、サンプルを少
なくとも１つのγＴ細胞レセプターポリペプチドと複合
体を形成し得る物質と接触させ、該物質とγＴ細胞レセ
プターポリペプチドとの細胞性複合体を形成することか
らなる。γＴ細胞レセプターポリペプチドを有するサン
プルにおけるＴ細胞のパーセンテージを決定し、被験者
からのサンプル、免疫系異常を示さない正常被験者から
のサンプルにおけるγＴ細胞レセプターポリペプチドを
有するＴ細胞のパーセンテージと比較する。このように
して決定されたＴ細胞のパーセンテージの相異は、免疫
系異常を表す。この発明の一実施態様における免疫系異
常は癌である。癌は、白血病またはリンパ腫であり得
る。この発明の他の実施態様における免疫系異常は、後
天性免疫不全症候群である。この発明の別の実施態様に
おける免疫系異常は、先天性免疫不全症である。この発
明のさらに別の実施態様における免疫系異常は、自己免
疫疾患である。 【００４８】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。また免疫系異常が診断される被験者はヒトで
あってもよい。さらにまた、γＴ細胞レセプターポリペ
プチドを有するＴ細胞のパーセンテージが決定されるサ
ンプルは、血液または組織であってもよい。被験者にお
ける免疫系異常を診断するさらに別の方法は、本発明に
よって提供される。この方法は、被験者からのサンプル
におけるγＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞の
数およびγＴ細胞レセプターポリペプチド担持Ｔ細胞に
おけるγＴ細胞レセプターポリペプチドの量を決定する
ことからなる。このようにして決定されたγＴ細胞レセ
プターポリペプチドの量を、免疫系異常を示さない正常
被験者からのサンプルにおける同数のγＴ細胞ポリペプ
チド担持Ｔ細胞におけるγＴ細胞レセプターポリペプチ
ドの量と比較する。このようにして決定された量の相異
は、免疫系異常を表す。この発明の一実施態様におい
て、単一のγＴ細胞レセプターポリペプチドの量が決定
される。 【００４９】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者らかのサン
プルにおいてγＴ細胞レセプターポリペプチドを有する
Ｔ細胞の数および表面マーカーＴ４，Ｔ８およびα，β
Ｔ細胞レセプターのひとつを有するＴ細胞の群からなる
Ｔ細胞の数を決定することからなる。このようにして決
定されたＴ細胞の数を、被験者からのサンプル、免疫異
常を示さない被験者からのサンプルにおけるγＴ細胞レ
セプターポリペプチドを有するＴ細胞の数および被験者
からのサンプルにおいて決定されたＴ細胞の群と同一の
表面マーカーを有する群におけるＴ細胞の数と比較す
る。このようにして決定された群におけるＴ細胞の数に
対するγＴ細胞レセプターポリペプチドを有するこのよ
うにして決定されたＴ細胞の数の相違は、免疫系異常を
表す。 【００５０】さらに、少なくともδＴ細胞レセプターポ
リペプチドの部分および少なくともγＴ細胞レセプター
ポリペプチドの部分からなる精製複合体が、本発明によ
って提供される。この複合体は、分子量約40,000ダルト
ンのδＴ細胞レセプターポリペプチドおよび分子量約5
5,000ダルトンのγＴ細胞レセプターポリペプチドを含
む。また、δＴ細胞レセプターポリペプチドはヒトγＴ
細胞ポリペプチドであってもよく、γＴ細胞レセプター
ポリペプチドはヒトγＴ細胞ポリペプチドであってもよ
い。さらにまた、δＴ細胞レセプターポリペプチドおよ
びγＴ細胞レセプターポリペプチドは、少なくとも１つ
の内部鎖、共有結合、ジスルフィド結合によりお互い会
合することができ、あるいはお互い非共有結合的に会合
することができる。 【００５１】また、少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセ
プター複合体と特異的に複合体を形成し得る物質が本発
明によって提供される。この物質は、１つのγ，δＴ細
胞レセプター複合体と複合体を形成できる。さらに、こ
の物質は、１以上のγ，δＴ細胞レセプター複合体と複
合体を形成できる。この発明の一実施態様において、該
物質は抗体である。この発明の他の実施態様において、
該物質は、ポリクローナル抗体である。この発明の別の
実施態様において、該物質は、モノクローナル抗体であ
る。 【００５２】本発明はさらに、Ｔ細胞の各々がγ，δＴ
細胞レセプター複合体を有する前記Ｔ細胞を検出する方
法を提供する。この方法は、Ｔ細胞を含有するサンプル
をγ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体を形成するこ
とができる物質と接触させることにより、該物質とγ，
δＴ細胞レセプター複合体との細胞性複合体を形成する
ことからなる。該細胞性複合体を検出することにより、
Ｔ細胞の各々がγ，δＴ細胞レセプター複合体を有する
前記Ｔ細胞が検出される。本発明の一つの態様におい
て、γ，δＴ細胞レセプター複合体はＴ細胞の表面上に
存在する。本発明の別の態様においては、γ，δＴ細胞
レセプター複合体は、Ｔ細胞の細胞質内に存在する。本
発明のさらに別の態様においては、前記物質は、特異的
γ，δＴ細胞レセプター複合体と複合体を形成すること
ができる。該特異的γ，δＴ細胞レセプター複合体は、
サプレッサーＴ細胞のみに存在し得る。 【００５３】さらに、被験者における免疫系異常を診断
する方法が、本発明によって提供される。この方法は、
被験者から採取したサンプルにおけるＴ細胞の数を決定
し、サンプルを少なくとも１つのγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体と複合体を形成し得る物質と接触させることに
より、該物質とγ，δＴ細胞レセプター複合体との細胞
性複合体を形成することからなる。前記サンプルにおけ
る、γ，δＴ細胞レセプター複合体を有するＴ細胞のパ
ーセンテージを決定し、免疫系異常を示さない正常被験
者からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプター複合
体を有するＴ細胞のパーセンテージと比較する。このよ
うにして決定したＴ細胞のパーセンテージの相異によ
り、免疫系異常が示される。本発明の一つの態様におい
て、免疫系異常は、癌を指す。癌は、白血病またはリン
パ腫であり得る。本発明の他の態様において、免疫系異
常は、後天性免疫不全症候群を指す。本発明のさらに別
の態様において、免疫系異常は、先天性免疫不全症であ
る。本発明のさらに他の態様において、免疫系異常は、
自己免疫疾患である。 【００５４】免疫系異常が診断される被験者は、動物で
あり得る。さらに、免疫系異常が診断される被験者は、
ヒトである。さらにまた、γ，δＴ細胞レセプター複合
体を有するＴ細胞のパーセンテージが決定されるサンプ
ルは、血液または組織からなることができる。本発明に
より、被験者における免疫系異常を診断するさらに別の
方法が提供される。この方法は、被験者からのサンプル
におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞の数
およびγ，δＴ細胞レセプター複合体担持Ｔ細胞におけ
るγ，δＴ細胞レセプター複合体の量を決定することか
らなる。このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプ
ター複合体の量は、免疫系異常を示さない正常被験者か
らのサンプルにおける同数のγ，δＴ細胞レセプター複
合体担持Ｔ細胞におけるγ，δＴ細胞レセプター複合体
の量と比較される。このようにして決定された量の相異
により、免疫系異常が示される。本発明の一つの態様に
おいて、単一のγ，δＴ細胞レセプター複合体の量が決
定される。 【００５５】被験者における免疫系異常を診断するさら
に別の方法を提供する。この方法は、被験者から採取し
たサンプルにおいてγ，δＴ細胞レセプター複合体を有
するＴ細胞の数、および表面マーカーＴ４，Ｔ８および
α，βＴ細胞レセプター複合体のひとつを有するＴ細胞
の群からなるＴ細胞の数を決定することからなる。この
ようにして決定されたＴ細胞の数は、免疫異常を示さな
い被験者からのサンプルにおけるγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体を有するＴ細胞の数、および被験者からのサン
プルにおいて決定されたＴ細胞の群と同一の表面マーカ
ーを有する群におけるＴ細胞の数と比較される。このよ
うにして決定された群におけるＴ細胞の数と比較した場
合の、このようにして決定されたγ，δＴ細胞レセプタ
ー複合体を有するＴ細胞の数の相違により、免疫系異常
が示される。 【００５６】本発明によって提供される種々の異常を診
断する方法およびＴ細胞を検出する方法は、以下に詳述
する新規ポリペプチド類および該ポリペプチド類と複合
体を形成する物質に基づく。該方法は、これに限定され
るものではないが本発明に関して当業者に公知の蛍光活
性化細胞選別およびオートラジオグラフィ等、Ｔ細胞を
検出し、定量する方法を利用する。 【００５７】 【実施例】〔実施例１〕物質および方法 リンパ球の培養および細胞集団分析 生育可能なリンパ球をフィコール−ハイパーク高密度遠
心分離により単離し、特異的モノクローナル抗体、例え
ばＷＴ３１（文献２８，２９）、またはＯＫＴ（登録商
標）３，ＯＫＴ（登録商標）４またはＯＫＴ（登録商
標）８［Ortho Diagnostic Systems, Inc., Raritan, N
J]、を３０分間４℃で染色した。洗浄後、細胞ペレット
をさらにフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴ
Ｃ）接合ヤギ抗マウスＩｇＧ（ａｂ）’2 フラグメント
で染色した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析を先
に記載のごとく（文献３７）オルソーサイトフルオログ
ラフ（ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｇｒａｐｈ）またはコール
ター・エピシス（Coulter Epics)で行った。特異的に染
色された陽性細胞は、各細胞系（非特異的対照モノクロ
ーナル抗体で染色）に関する陰性対照プロファイルと比
較して決定された。ベースラインによる陰性対照プロフ
ァイルの妨害より大きい蛍光強度チャンネル数を有する
細胞を陽性として数え、陽性％を合計総細胞数と比較し
て計算した。 【００５８】全ＩＬ−２依存細胞を、前記のごとく（文
献３４）、ＲＰＭＩ １６４０、１０％ヒト血清および
２〜５ユニットのインターロイキン−２活性含有馴化培
地からなる培地中においてin vitroで蒔いた。同種抗原
（ａｌｌｏ）活性化培養物を１週間間隔で照射同種異系
末梢血リンパ球で刺激した。マイトジェン、すなわちフ
ィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、活性化系を培養開始
時に１：１０００稀釈ＰＨＡ［Difco, Detroit, MI］で
刺激した。 【００５９】モノクローナル抗体を用いた細胞培養物の
反応性および特徴づけ 125 Ｉ標識化リンパ球溶解産物からの免疫沈降物をドデ
シル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）で分析した。放射性ヨウ素化Ｔ白
血病細胞系ＨＰＢ−ＭＬＴおよびジャーカット（Jurke
t) 、ＨＴＬＶ−１形質転換細胞系ＡＮＩＴＡおよび休
止末梢血リンパ球を１％トライトン−Ｘ−１００（ＴＸ
−１００）に可溶化し、対照抗体、正常マウス血清（Ｎ
ＭＳ）またはＴＣＲα，βに対するフレームワーク抗
体、すなわちＦ１（文献５４）で免疫沈降した。βＦ１
モノクローナル抗体を標準的な方法で調製した（文献４
６，４７，５２）。文献２８に記載のように精製したＴ
ＣＲα，βで免疫化したマウスからの脾臓細胞を融合実
験用に用いた。陽性クローン、βＦ１，が上述のごとく
Ｔ細胞系および末梢血リンパ球での免疫沈降により得ら
れた。 【００６０】125Ｉ標識化リンパ球を０．１％ＴＸ−１
００に可溶化し、ＮＭＳ、抗Ｔ３抗体ＵＣＨＴ−１（文
献４０）およびＴＣＲに対するフレームワーク抗体、す
なわちＷＴ３１で免疫沈降した。ＷＴ３１での免疫沈降
の効率をここに用いられるＴＸ−１００低濃度で改善
し、またモノクローナル抗体１８７．１（文献５３）を
第２抗体として用いた。 【００６１】正常末梢血リンパ球の２色ＦＡＣＳ分析を
抗ＴＣＲα，βモノクローナル抗体および抗Ｔ３モノク
ローナル抗体を用いて行った。末梢血リンパ球は、最初
にＦＩＴＣ接合抗モノクローナル抗体（ＯＫＴ（登録商
標）３）で染色し、ついでビオチニル抗ＴＣＲα，βモ
ノクローナル抗体（ＢＦ１）で染色し、ひきつづき藻紅
素接合アビジン［ＰＥ−アビジン、Becton Dickenson,
Mt. View, CA] で染色した。 生育可能なリンパ球をＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥおよびＦＡＣＳ分析のためにフィコール
−ハイパーク高密度遠心分離により単離した。ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ分析に関して、リンパ球は、ラクトペルオキシ
ターゼ技術により放射性ヨウ素化され、１％ＴＸ−１０
０に可溶化し、そして１マイクログラムの特異抗体、す
なわちモノクローナル抗体βＦ１またはモノクローナル
抗体ＵＣＨＴ−１、または１ｍｌのＮＭＳを用いて免疫
沈降した。免疫沈降物をついで還元条件下１０．５％Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。 125Ｉ標識化分子は、
先に記載のごとく（文献２８）オートラジオグラフィー
により可視化した。 【００６２】２色サイトフルオログラフィー分析は、ま
ず第１にＦＩＴＣ−ＯＫＴ（登録商標）３モノクローナ
ル抗体で４５分間４℃にて染色することによって行なわ
れた。洗浄後、リンパ球を１％パラホルムアルデヒドに
１５分間２３℃にて固定し、ついで７０％エタノールリ
ン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中−２０℃にて５分間培
養した。さらに洗浄後、細胞をビオチニル−βＦ１モノ
クローナル抗体で染色し、ついでＰＥ−アビジンで染色
した。分析は、オルソーサイトフルオログラフ（オルソ
ー・ダイアゴスティック・システムズ、インコーポレー
ション．，ウエウト ウッド、マサチューセッツ州）で
行なわれた。 【００６３】ＩＤＰ１およびＩＤＰ２細胞系上のＴ３分
子と会合された細胞表面分子の分析 ＩＤＰ１細胞系２（ＷＴ３１+ ）および細胞系３（ＷＴ
３１- ）を上述のごとく 125Ｉ−標識化した。放射性ヨ
ウ素化された無傷のリンパ球をついでジチオビスサクシ
ニミジルプロピオネート５０マイクログラム／ml含有Ｐ
ＢＳ（ｐＨ８）中の培養により架橋を行うかまたは模擬
培養をした。細胞をついで１％ＴＸ−１００中に可溶化
し、先に記載のごとく（文献１２）免疫沈降した。抗Ｔ
３免疫沈降におけるＴ３会合分子（Ｍr ４０，０００
〜５５，０００）は、未架橋サンプルにおいて低レベル
でまたは架橋サンプルにおいて高レベルで検出された。 【００６４】ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３
+ ）を 125Ｉ−標識化しかつＤＳＰで処理したかあるい
は模擬培養した。免疫沈降をモノクローナル抗体βＦ１
でのＴＣＲα，β分子の予備洗浄なし又はありのいずれ
かでＮＭＳ，抗Ｔ３モノクローナル抗体および抗ＴＣＲ
α，βモノクローナル抗体βＦ１を用いて行った。少フ
ラクションの放射性標識化ＴＣＲα，βは、予備洗浄さ
れないサンプル中に検出されたが、βＦ１で予備洗浄さ
れたサンプル中には検出されなかった。 【００６５】ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）お
よび細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ ）を 125Ｉ標識
し、１％ＴＸ−１００に可溶化し、そしてＮＭＳまたは
抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣＨＴ−１を用いて免疫沈
降した。Ｔ３Ｈサブユニット（Ｍr ２７，０００）は、
これら２つの細胞系に同様に表われ、一方Ｔ３Ｌサブユ
ニット（Ｍr １９，０００〜２５，０００）は、表わ
れなかった。 【００６６】オートラジオグラフィーによる１０．５％
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析後、 125Ｉ−標識化、１％ＴＸ−
１００中への可溶化、免疫沈降および可視化を先に記載
のごとく（文献２８）行った。化学的架橋を先に記載の
ごとく（文献２８）ＤＰＳ（５０マイクログラム／ml）
ＰＢＳ溶液（ｐＨ８）を用いて無傷の放射性標識化リン
パ球上に２３℃で３０分間行った。免疫沈降後、全サン
プルをタンパク質サブユニット間のジスルフィド結合よ
おびＤＳＰ化学的架橋の両者を解裂する５％２−メルカ
プトエタノールを用いてて還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
により検査した。 【００６７】ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγｃＤＮ
Ａプローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮ
Ａのノーザンブロットアッセイ ＩＤＰ２細胞系６（ＷＩ３１- ）からおよびＴ白血病細
胞系ＨＢＰ−ＭＬＴから単離された総ＲＮＡ（１５ マ
イクログラム）を２．２Ｍホルムアルデヒド含有１．５
％アガロースゲル上に分画し、ニトロセルロースに形質
転換し、そしてＴＣＲα，ＴＣＲβ，およびＴＣＲγプ
ローブとハイブリダイゼーションした。 【００６８】ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ），
ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１ - Ｔ３+ ）およびＨ
ＰＢ−ＭＬＴから単離された総ＲＮＡ（３マイクログラ
ム）を上述のごとく分析した。ＲＮＡ調製、電気泳動、
ニトロセルロースへの形質および32Ｐ標識化ニック翻訳
されたプローブ（１〜３×１０8 cpm/マイクログラム）
とのハイブリダイゼーションは、先に記載のとおりであ
った（文献４１）。α鎖プローブは、ヒトｃＤＮＡクロ
ーンｐＧ４５（文献８）またはＬ１７α（文献４２）の
いずれかであった。γ鎖プローブは、ヒトＤＮＡクロー
ンＴγ−１から誘導されたＡｃｃＩに対するＥｃｏＲＩ
であった。放射線活性バンドは、強化スクリーンを用い
てオートラジオグラフィーで可視化された。全プローブ
は、ほぼ同一の特異的活性に標識化され同一感光時間を
与える。 【００６９】抗γ抗血清を用いたＩＤＰ２細胞系表面分
子の免疫沈降 ＴＸ−１００可溶化 125Ｉ標識化ＩＤＰ２細胞系７（８
８％ＷＴ３１- Ｔ３+）を変性し（下記参照）、ついで
ＮＭＳまたは正常家兎血清でおよび抗Ｖγペプチド血清
または抗Ｃγペプチド血清で免疫沈降した。特異的バン
ドは、抗Ｖγペプチド血清および抗Ｃγ免疫沈降物の両
者においてＭr ５５，０００にて観察された。Ｍr ９
０，０００における追加のバンドは、抗Ｃγ免疫沈降に
おいて再現的には観察されなかった（下記参照）。 【００７０】125Ｉ標識化ＩＤＰ２細胞系７からのＤＳ
Ｐ架橋天然溶解産物（１％ＴＸ１００）をＮＭＳでまた
は抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣＨＴ−１で免疫沈降し
た。別に、該溶解産物を変性し（下記参照）、ついで正
常家兎血清または抗Ｃγペプチド血清のいずれかで免疫
沈降した。追加のアリコートの溶解産物を２段階免疫沈
降した。ポリペプチドを抗Ｔ３モノクローナル抗体ＵＣ
ＨＴ−１で免疫沈降し、ついでＤＳＰ架橋を切断するた
めに変性および還元条件下免疫吸収剤から溶離した。つ
いで、この溶離物からの免疫沈降を抗Ｃγペプチド血清
を用いて行った。 【００７１】125I 標識化、１％ＴＸ−１００中への可
溶化および免疫沈降を上述のごとく行った。天然の溶解
産物（１％ＴＸ−１００）をＳＤＳ（最終濃度１％）お
よびジチオスレイトール(dithiothreitol)（最終濃度２
ｍＭ）を添加しつづいて６８℃で５分間該混合物を加熱
することにより変性した。冷却句後、ヨードアセタミド
を添加し（最終濃度２０ｍＭ、サンプルを４容量の１．
５％ＴＸ−１００トリス緩衝生理食塩水（ｐＨ８）で溶
離した。該実験における初期免疫沈降物を変性し、つづ
いて部分的に再生（renatured)した（文献２８）。サン
プルを１０マイクロリットルの抗Ｃγまたは抗Ｖγペプ
チド血清、１マイクログラムのＵＣＨＴ−１または１マ
イクロ力価のＮＭＳまたは正常家兎血清で免疫沈降し、
ついで還元条件下（５％２−メルカプトエタノール）、
１０．５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。 推定Ｖγま
たはＣγアミノ酸配列に相当するペプチド（残基数は、
下記の実験結果の節に記載）は、エリクソン（Erickso
n) およびメァリーフィールド（Merrifield) の方法
（文献４４）を用いてベックマン９９０ペプチドシンセ
サイザー（Beckman 990 peptide synthesizer)で合成さ
れた。ペプチド純度は、高圧液体クロマトグラフィーで
評価され、ペプチド配列は、アミノ酸分析で確認され
た。ペプチドは、キーホール・リンペット・ヘモシアニ
ン（Keyhole limpethemocyanin)( ＫＬＨ）と１ＫＬＰ
分子につき５０ペプチドの比率でカップルした（文献４
５）。マウスおよび家兎は、各々ＶγペプチドまたはＣ
γペプチドで免疫化された。動物は、３週間間隔で接種
され、血清をペプチド−ＫＬＨおよびペプチド−ウシ血
清アルブミン接合に対する反応性をバインドするためス
クリーニングし、ペプチド−特異杭体の存在を確認し
た。 【００７２】γ鎖に対するモノクローナル抗体は、文献
４７，５０に記載された標準方法により発生された。Ｂ
ＡＬＢ／ｃマウスは、エリクソンおよびメァリーフィー
ルドの方法（文献４４）を用いて上述の有効領域γ鎖ペ
プチドへのＫＬＨカップルペプチドで免疫化した。２週
間間隔での４回の免疫処理後、脾臓細胞をＤ３−Ｘ６３
−Ａｇ８Ｕ１骨髄腫細胞と融合した。陽性ハイブリドー
マクローンをスクリーニングし、文献４８に記載の酵素
免疫アッセイ法（ＥＩＡ）により同定した。 【００７３】純化タンパク質からのδポリペプチドのＤ
ＮＡ配列の単離 ＴＣＲδ遺伝子のＤＮＡ配列は、単離でき、また文献４
９，５０に記載のごとくＴＣＲβ遺伝子を単離するのに
利用される方法により決定できる。簡単に言うと、ＴＣ
Ｒδ遺伝子のアミノ酸配列は、以下に記載されるＴＣＲ
δ遺伝子の単離に従って決定され得る。アミノ酸配列を
決定した後、短い合成ＤＮＡ配列は、市販ＤＮＡシンセ
サイザー［Applied Biosystems, Inc., Foster City, C
A]を用いて調製される。該合成ＤＮＡ配列は、ＴＣＲポ
リペプチド含有細胞系のｃＤＮＡライブラリーからのＤ
ＮＡの完全配列の単離用プローブとして用いられる。タ
ンパク質の腫瘍構造は、ついで決定される（文献５
１）。 【００７４】δポリペプチドに対するおよびγ、δ複合
体に対するモノクローナル抗体の調製 δポリペプチドに対するモノクローナル抗体は、標準的
な方法（文献４７，５０）により発生され得る。ＴＣＲ
δポリペプチドから誘導されるペプチドは、上述の方法
により決定された核酸配列から調製され得る。免疫処置
に有効なこのようなペプチドを選択する方法は、詳細に
記載されている（文献５５、５６、５７）。 【００７５】γ，δ複合体に対して誘導されるモノクロ
ーナル抗体は、刊行物記載方法（文献４７、５０）に従
って調製され得る。γ，δ複合体は、上述のＴ細胞系か
ら単離され得、また先の刊行物の記載の方法（文献２
８）に記載のごとくＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫化するの
に用いられ得る。別に、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、細胞
系、例えばＩＤＰ１細胞系またはＩＤＰ２細胞系で免疫
化され得る。 【００７６】ハイブリドーマ細胞系の融合、発生および
保守管理方法は、広く刊行物に記載され当業者に公知で
ある。特異的ＴＣＲγ，δ細胞系に対して誘導されるが
他のＴ細胞系と交差反応(cross react) しないモノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、選択され
回収される。ヒト腫瘍および末梢血リンパ球からのＴＣＲγ，δおよ
びＴ３の免疫沈降 生育可能なリンパ球をフィコールーハイパーク密度勾配
遠心分離により単離し、２×１０7 細胞を文献２８に記
載のごとくラクトペルオキシターゼ技術によって放射性
ヨウ素標識化した。標識化細胞は、２ｍＭフェニルメチ
ルスルフォニルフルオロイド（ＰＭＳＦ）および８ｍＭ
ヨードアセタミド（ＩＡＡ）を含有するＴＣＲ−Ｔ３会
合を保護する（文献６４）０．３％３−［（３−コラミ
ドプロピル）ジメチルアンモニノ］−１−プロパン−ス
ルフォネート（ＣＨＡＰＳ）とともに５ｍｌのＴＢＳ
（１０ｍｌトリスｐＨ８、１４０ｍＭ Ｎａｃｌ）に溶
解された。文献１２に記載の固定Staphylococcus aureu
s コーワンＩ(CowanＩ)(SACI) を用いて免疫沈降を行
い、免疫複合体を０．１％トライトンＸ−１００（ＴＸ
−１００）含有ＴＢＳ中５度洗浄した。還元サンプルを
２ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）中煮沸し、全サン
プルをＳＤＳ−ＰＡＧＥによるアッセイの前、１０ｍＡ
ＩＡＡ中２３℃にて１０分間培養した。抗Ｃγ血清を
用いた免疫沈降は、ＩＡＡを除去するために透析された
１％ＴＸ−１００溶解産物で行ない、ついで３分間煮沸
しながら３ｍＭ ＤＴＴ含有ドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）１０分の１の容量の添加により変性させた。
４容量の３０ｍＭ ＩＡＡ含有ＴＢＳ中の１．５％ＴＸ
−１００による部分再生の後、抗Ｃγ血清またはＮＲＳ
を添加し、免疫沈降物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析の
前、０．５％ ＴＸ−１００、０．５％デオキシコレー
トおよび０．０５％ＳＤＳ含有ＴＢＳ中で洗浄した。ラ
ット抗マウスα鎖特異ｍＡｂ１８７．１（１５Ｍｇ）を
第２抗体として加えて、ＩｇＧＩｍＡｂβＦ１、ＵＣＨ
ＴおよびＰ３の結合タンパク質Ａを産生した（文献５
３）。 【００７７】ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮＡのノー
ザンブロットアッセイ １レーンにつき約１．５ＭｇＲＮＡを載せ、プローブを
同様な特異活性にまで、標識化し、同一オートラジオグ
ラフィ感光させた。ＲＮＡサイズは、ＴＣＲＢおよびＴ
ＣＲγ転写体に関する先に記載された長さ（文献３６、
４）に基づいて決定された。 【００７８】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の２次
元ゲル分析 ラクトペルオキシターゼでの放射性ヨード化の後、リン
パ球をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１mg／mlウシ血清ア
ルブミン、１mg／mlグルコース中の１００Ｕのニューラ
ミニターゼ［Ｇｉｂｃｏで９０分間２３℃にて処置し、
ＰＢＳ中洗浄し、ついで０．３％ＣＨＡＰＳに可溶化し
た。免疫沈降物を第１図のごとく調製し、ＮＥＰＨＧＥ
（電荷分離）をｐＨ３．５〜１０アンフォリン（ＬＫ
Ｂ，スウェーデン）、を用いあるいはｐＨ３．５〜１
０，４〜６，９〜１１アンフォリン（２：１５．５：
１．５）を用いたＩＥＦを用いて、つづいて文献１２に
記載のごとくサイズ分離のため１０．５％ ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥゲルを用いて行った。ＮＥＰＨＧＥは、酸性末端
にヨウ素化ＩＦＦサンプルを乗せて行い（Ａ，Ｂ）、一
方ＩＥＦＣ Ｃ，Ｄ）は、４０Ｖにて２０時間他の（塩
基性）末端にサンプルを乗せて行った。ブラケットは、
Ｔ３会合種を含む。 【００７９】細胞（２×１０7 ）は、１０％胎児ウシ血
清で補足された４mlメチオニン遊離ＲＰＭＩ１６４０中
３７℃にて１時間予備培養された。35Ｓ−メチオニンを
２５０μＣｉ／mlまで加え、培養を３７℃で１時間続け
た。細胞を回収、洗浄し、１％ＳＤＳ、１０ｍＭトリス
ＨＣl （ｐＨ８．０）、０．１ｍＭ ＰＭＳＦおよび１
０ｍＭ ＩＡＡの煮沸溶液０．４に溶解した。溶解産生
物を２．５％ ノニデッドＰ４０（Nonidet - P40)、１
％ゼラチン、１０mlトリス−ＨＣl （ｐＨ８）２mlおよ
び１mg／ml ＤＮアーゼ、０．５mg／ml ＲＮアーゼ、
０．５Ｍトリス−ＨＣl （ｐＨ７）、５０ｍＭ ＭｇＣ
l2０．２mlで希釈し、０℃にて２〜４時間培養した。ペ
レット不溶性片まで１２，０００×ｇで１５分間遠心分
離後、１％ゼラチンで予め沈降されたプロテインＡセフ
ァロースを用い、ついで洗浄し抗γ血清での免疫沈降を
文献６５に記載のごとく行った。免疫吸収剤からの溶離
およびエンド−Ｈ［Miles Scientific, Naperville, I
L］での処置は、文献６５に記載されている。サンプル
は、第１次元にＮＥＰＨＧＥおよび第２次元に１０％Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥを利用する２次元ゲル電気泳動、ひきつ
づきフルオログラフィーにより抗血清で分析した（文献
６６）。 【００８０】ＴＣＲγポリペプチドを発現するＴ細胞に
おけるγおよびβおよび遺伝子の再配列 ゲノムＤＮＡは、記載のごとく（ＢａｍＨＩまたはＥｃ
ｏＲＩ）単離し、０．７％アガロース（ＢａｍＨＩ消
化）または０．９％アガロース（ＥｃｏＲＩ消化）上に
サイズ分画し、ついで文献６７に記載のごとくくニトロ
セルロースに転写した。フィターをニック翻訳された32
Ｐ−標識化０．８Ｋｂ ＨｉｎｄIII −ＥｃｏＲＩ Ｊ
γ1,3プローブ（文献２０）または１．１Ｋｂ Ｅｃｏ
ＲＩ−ＨｉｎｄIII Ｃβ2 プローブ（文献６８）にハイ
ブリダイゼーションした。強度を上げたスクリーニング
を用いたオートラジオグラフィーの前、フィルターを２
％ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で洗浄し、つづいて５
５℃で０．２％ＳＳＣおよび０．１％ＳＤＳ中で洗浄し
た。 【００８１】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細
胞溶解 細胞溶解アッセイを文献３４に記載のごとく51Ｃｒ−標
識化、回収および％特異放出の計算により丸底９６ウェ
ル組織培養プレートにて行った。ＩＤＰ２およびＰＢＬ
Ｃ１細胞をＵＣＨＴ１ （１：３００稀釈度）（＋抗Ｔ
３）で０℃にて３０分間予め培養し、３回洗浄するか、
あるいは模擬培養し、標識化ターゲット（標的）細胞と
お互い取り代えた。抗ＨＬＡクラスＩおよびクラスIIｍ
Ａｂ抗Ｔ３ｍＡｂを51Ｃｒ標識化ＭＯＬＴ４細胞含有ウ
ェルに０℃にて３０分間配置し、ついでＩＤＰ２細胞を
４０：１のＥ：Ｔ比で加えた。全サンプルを３回アッセ
イし、各実験を少なくとも３回行った。各々の代表的実
験の１つを第１０図〜第１２図に示す。 【００８２】実験結果 多数のヒトＴＣＲα，β６を認識するマウスフレームワ
ーク抗血清は、先に報告されている（文献２８）。つづ
いてヒトβ鎖における割り当てられた決定基と反応性で
あるマウスモノクローナル抗体、フレームワーク１（β
Ｆ１）という、が得られた（文献４６）。βＦ１モノク
ローナル抗体は、多数のＴ３陽性（Ｔ３ + ）ヒト末梢血
リンパ球（ＰＢＬ）と反応し、またα，βＴ細胞レセプ
ターを有し、かつＴ３糖タンパクを発現する試験された
全ヒトＴ細胞系からのＴＣＲα，βヘテロダイマーを免
疫沈降できる。このモノクローナル抗体を用いたＴ細胞
系のパネルからの免疫沈降は、この反応性並びに異なる
レセプターからのＴＣＲαおよびＴＣＲβサブユニット
の異質性を示す（第１図）。フレームワーク抗血清（文
献２８）と同様に、このモノクローナル抗体は、生体Ｔ
細胞の表面を染色しないが、７０％エタノールでのリン
パ球血漿膜の部分解離（ｓｏｌｕｔｉｏｎ）後、膜およ
び細胞形質Ｔ細胞レセプターの両者と特異的に反応する
であろう。フルオレセイン抗Ｔ３モノクローナル抗体お
よびビオチニル−β−Ｆ１モノクローナル抗体つづいて
アビジンでのヒトＰＢＬＳの２重染色は、βＦ１モノク
ローナル抗体が９５〜９７％の末梢血Ｔ３+ リンパ球を
認識することを明らかにする。しかしながら、これはβ
Ｆ１陰性（βＦ１- ）さらにはＴ３+ である小個体群の
Ｔ細胞を明らかに限定する（第１Ｃ図）。 【００８３】Ｔ３抗体を認識することが初期に考えられ
たＷ３１と命令されたされた第２フレームワークモノク
ローナル抗体（文献２９）は、最近、ＴＣＲα，βの共
通のエピトープと反応することが示されている（文献３
０）。抗Ｔ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ（登録商標）
３）およびＷＴ３１での二重染色は、各該モノクローナ
ル抗体が他の結合をクロスブロックすることを明らかに
したが、１色螢光は，ＷＴ３１が抗Ｔ３モノクローナル
抗体がするよりも末梢血において１〜３％少ない細胞を
代表的に認識することを示した。ＷＴ３１モノクローナ
ル抗体は、Ｔ細胞の表面に効率的に結合し（ＦＡＣＳ分
析等参照）、また放射性標識化洗浄溶解産物からは非効
率的であるがＴＣＲα，βを免疫沈降できる（文献３
０）（第１Ｂ図、レーン３）。従って、βＦ１モノクロ
ーナル抗体およびＷＴ３１モノクローナル抗体は、少フ
ラクションのヒト末梢血Ｔ３+ 細胞を除いて全てを認識
し、またＴ３+ であるがＴＣＲα，β分子に対するこれ
らのフレームワークモノクローナル抗体の両方と未反応
性である亜個体群を決定するらしい。モノクローナル抗
体βＦ１と未反応性であるＴ３+ リンパ球もまたモノク
ローナル抗体ＷＴ３１と未反応性であるという証拠を以
下に示す。ＷＴ３１は、主にＦＡＣＳ分析に用いられて
いて、またβＦ１は主に免疫沈降研究に用いられてい
た。 正常成人ＰＢＬからのＷＴ３１- Ｔ３+ 個体群の
生長に対する成果は、ＷＴ３１+ Ｔ３+ リンパ球がマイ
トジェン刺激に従うＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞が通常生長し
すぎるので困難であることが判明した。 【００８４】しかしながら、免疫不全症患者のＰＢＬか
らのＷＴ３１- Ｔ３+ 個体群の生長は、良好であった。
免疫不全症患者１（ＩＤＰ１）は、裸リンパ球症候群
（barelympocyte syndrome)に病み、リンパ系細胞にお
けるるクラスIIＭＨＣ抗原を欠いており（文献３１，３
２）、一方免疫不全症患者２（ＩＤＰ）は、外胚芽形成
異常症候群に病み、マイトジェンに対する少ない生体内
Ｔ細胞繁殖性応答を示した。 【００８５】同種抗原でのＩＤＰ１からのＰＢＬの活性
化およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）活性含有条
件地における繁殖後、得られた細胞系は、約５０％ＷＴ
３１ + Ｔ３+ および５０％ＷＴ３１- Ｔ３+ であること
が観察された（下記第１表参照、細胞系１）。ひきつづ
きこの細胞の選別によりＷＴ３１+ Ｔ３+ 細胞およびＷ
Ｔ３１- Ｔ３+ 細胞の均質個体群を得た（下記第１表参
照、各々細胞系２および ３）。 【００８６】 【表１】 【００８７】1 細胞系既述は、活性化またはリンパ球
源に関する条件を示す。ＷＴ３１+およびＷＴ３１- 選
別細胞系１および２（選別）は、ＩＤＰＩ細胞系１の螢
光活性化細胞選別によって得られた。細胞系はまたＩＤ
Ｐ２からも得られた。ＩＤＰ２からの新鮮ＰＢＬは、６
３％のＰＢＬがＴ３+ であり、１〜２％少ない細胞（６
１％）が代表的な正常ＰＢＬであるＷＴ３１+ であった
ことを明らかにした（第１表，細胞系４）。フィトヘム
アグルチニン（ＰＨＡ）または同種抗原でのこれらＩＤ
Ｐ２ＰＢＬの活性化および条件培地での生体外繁殖はい
くつかの細胞系となった。該細胞系としては、均質ＷＴ
３１+ Ｔ３+ 細胞系（第１表、細胞系５）、均質ＷＴ３
１- Ｔ３+ 細胞系（第１表，細胞系６）および第３の場
合、８８％ＷＴ３１- Ｔ３+ （１２％不純ＷＴ３１+ Ｔ
３+ 細胞（第１表細胞系）であった。ＷＴ３１- Ｔ３+
固体群は、Ｔ８+ およびＴ４- Ｔ８- 細胞の両方を含ん
だ（第１表、細胞系３，６および７）。さらにに表現型
分析は、この個体群がＴ１１+ であったがＬｅｕ７、Ｌ
ｅｕ１１およびＯＫＭ１等の天然キラー細胞マーカーお
よび未熟胸腺細胞マーカーＴ６に対しては陰性であった
ことを現わした。 βＦ１モノクローナル抗体は、 125
Ｉ標識化ＷＴ３１+ Ｔ３+ ＩＤＰ１リンパ球の表面上の
ヘテロダーマー構造を免疫化学的に決定したが（第２Ａ
図、レーン５）、この同一個体からのＷＴ３１- Ｔ３+
個体群上の同様なタンパク質を確認できなかった（第２
Ｂ図、レーン１１）。ＩＤＰ２細胞系の同様な分析は、
ＷＴ３１+ Ｔ３+ 細胞での１２％染色と一致する８８％
ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系７上のＴＣＲα，βのトレース
を表わした（第２Ｂ図、レーン２）。従って、ＦＡＣＳ
分析におけるＷＴ３１- Ｔ３+モノクローナル抗体との
細胞表面反応性の欠乏によって、同定されたＷＴ３１-
Ｔ３+ 細胞はまた、免疫沈降においてＴＣＲα，βの欠
乏によって決定されたとおりβＦ１- であった。全ＷＴ
３１+ Ｔ３+ およびＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系は、ＦＡＣ
Ｓ分での免疫沈降により同様な量のＴ３を発現した（第
２Ａ図レーン３および９；第２Ｃ図、レーン２および
４）。しかしながら、ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ リンパ
球に見い出されたＴ３分子は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより
ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ３+ 細胞に見い出されたＴ３分子
とは同一でなかった。１次元（第２Ｃ図）および２次元
ゲル分析は、Ｔ３の相異が異なるＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動
度を再現的に示したライトＴ３サブユニットに制限され
たことを示した（第２Ｃ図、矢印）。 【００８８】ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ 個体群がＴＣＲ
α，β分子を欠いたか、または別に、これらのモノクロ
ーナル抗体と反応しそこなったＴＣＲα，βを発現した
かどうかを決定するために、ＴＣＲαおよびβタンパク
質をコード化するｍＲＮＡの存在が研究された。ＴＣＲ
α，βおよびＴＣＲγをコード化する32Ｐ標識化ｃＤＮ
Ａクローンは、ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ およびＷＴ３
１+ βＦ１+ Ｔ３+ ＩＤＰ２細胞系からのおよびＴＣＲ
α，ＴＣＲβおよびＴＣＲγに対するｎＲＮＡを含有す
ることが知られたＨＰＢ−ＭＬＴからの全細胞ＲＮＡを
含有するノーザンブロットを詳しく調べるのに用いられ
た。ＴＣＲαまたはＴＣＲβ、ｍＲＡＮ転写体は、ＷＴ
３１- βＦ１- Ｔ３+ ＩＤＰ２細胞系６からのＲＮＡに
おいては検出できなかったが（第３Ａ図α−プローブ、
レーン１；またはβ−プローブ，レーン１）、両者の発
現は、ＨＰＢ−ＭＬＴからのＲＮＡにおいて明らかに検
出可能であった（第３図、α−プローブ、レーン２；お
よびβ−プローブ、レーン２）。明らかに、ＴＣＲγｍ
ＲＮＡは、ＨＰＢ−ＭＬＴにおけるレベルに匹敵するレ
ベルでＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞に存在した（第３図，γ−
プローブ，レーン１および２）。従って、ＷＴ３１- β
Ｆ１- Ｔ３+ リンパ球は、ＴＣＲαおよびβｍＲＮＡを
欠いた。ほとんどＷＴ３１- Ｔ３+ である細胞系に対す
る次の実験は、これらの結果を確認した。例えば、ＩＤ
Ｐ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３ + ）に対して行な
われ、ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）並びにＨ
ＰＢ−ＭＬＴ細胞と比較されたノーザンブロット分析
は、ほんのトレースの８５％ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞（１
２％ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞での汚染と一致する）におけ
るＴＣＲαまたはＴＣＲβｍＲＮＡを現わした（第３Ｂ
図、各プローブに対するレーン２）。さらに検出できた
多数のβ転写体は、１．０であり１．３Ｋｂでなくまた
おそらく機能的でなかった（文献３５）。これに対し
て、ＩＤＰ２細胞系５（ＷＴ３１+ Ｔ３+ ）は、ＨＢＰ
−ＭＬＴに匹敵するＲＮＡ種の両方のレベルを発現した
（第３Ｂ図、各プローブに対するレーン）。しかしなが
ら、第３Ａ図に示すＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞系と同様に、
ＷＴ３１- Ｔ３+ およびＷＴ３１+ Ｔ３ + 細胞系の両者
は、ＨＬＢ−ＭＬＴに匹敵するＴＣＲγＲＮＡレベルを
示した。従って、ＷＴ３１- Ｔ３+ 細胞は、αおよびβ
Ｔ細胞レセプターｍＲＮＡ（ノーザンブロットアッセ
イ）およびαおよびβＴ細胞レセプタータンパク質（免
疫沈降およびＦＡＣＳ分析）を欠いた。Ｔαタンパク質
発現に一致するが、ＷＴ３１ - Ｔ３+ におけるＴγｍＲ
ＮＡの存在は、正常サイズのＴγｍＲＮＡを発現する多
くのヒト細胞系が不完全Ｖ−Ｊ結合のため構造外である
十分な長さの転写体を発現し得るので（文献３６）、強
力な証拠とならなかった。 【００８９】ＴＣＲα，β分子に類似するタンパク質が
ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３+ 細胞上に存在するかどうかを
決定するために、化学的架橋技術が利用された。この方
法は、Ｔ３糖タンパク質とのＴＣＲα，β分子の物理的
会合を直接示すのに用いられている（文献１２）。２官
能性、分割性指示薬、ジチオビスサクシミジルプロピオ
ネート（ＤＳＰ）が、生育可能Ｔリンパ球の 125Ｉ標識
化表面タンパク質を架橋するのに利用された。架橋後、
リンパ球は、非イオン性洗浄剤に可溶化され、抗Ｔ３モ
ノクローナル抗体で免疫沈降された。期待されたとお
り、ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ３+ リンパ球は、ＴＣＲαお
よびβ鎖がＴ３と架橋されたことを表わした。例えば、
ＴＣＲα，β分子およびＴ３は、架橋ＩＤＰ１細胞系２
（ＷＴ３１ + Ｔ３+ ）からの抗Ｔ３またはβＦ１モノク
ローナル抗体中に見い出された。（第２Ａ図、レーン４
および６）。しかしながら、βＦ１モノクローナル抗体
との反応性の欠如およびＴＣＲαまたはＴＣＲβｍＲＮ
Ａの欠如にもかかわらず、ＩＤＰ１細胞系３（ＷＴ３１
- Ｔ３+ ）およびＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１ -
Ｔ３+ ）は、Ｔ３と特異的に架橋した２つのタンパク質
（Ｍr ５５，０００および４０，０００）を両方とも発
現した（第２Ａ図，レーン１０；第２Ｂ図，レーン
６）。これらＴ３会合分子の移動度は、ＷＴ３１+ Ｔ３
+ 細胞系からのＴＣＲαおよびβ鎖からのものと明らか
に異なった（第２Ａ図、レーン４および１０；または第
２Ｂ図レーン５および６と比較対照）。 【００９０】ＩＤＰ２細胞系７（８８％ＷＴ３１- Ｔ３
+ ）が（第２Ｂ図、レーン２）に示された弱いβＦ１免
疫沈降物を示す１２％のＷＴ３１+ Ｔ３+ を含有したの
で、これらの細胞からの溶解産物は、βＦ１モノクロー
ナル抗体を用いてＴＣＲα，βタンパク質を予め除い
た。予め除いた後、残基βＦ１反応性物質は、検出され
なかった（第２Ｂ図、レーン８および１１）。架橋細胞
からの溶解産物を予め除かれたβＦ１- は、抗Ｔ３モノ
クローナル抗体で免疫沈降され、Ｍr ５５，０００およ
び４０，００サブユットがさらに検出された（第２Ｂ
図、レーン１２）。 【００９１】これらの細胞溶解産物が検出可能レベルの
ＴＣＲαおよびＴＣＲβｍＲＮＡを示すので、該細胞表
面においてＴ３と特異的に架橋されたことが見い出され
た分子は、既知ＴＣＲαまたはＴＣＲβ遺伝子によって
コード化されたタンパク質を与えることができない。再
配列ヒトＴＣＲγ遺伝子を表わすｃＤＮＡクローンは、
予想分子量４０，０００ダルトンでポリペプチドをコー
ド化するであろう（文献３６）。しかしながら、Ｎ結合
グルコシル化部位を表わさないマウスＴＣＲγ遺伝子
（文献１５）とは異なって、ヒトＴＣＲγ遺伝子は、Ｎ
結合グリコシル化に対する５つの部位を表わす。すなわ
ち、そのうち４つは、一定領域に位置する（文献３
６）。ＴＣＲγタンパク質は、今まで単離されていない
ので、これらの可能部位のいくつが利用され得るかは、
わからない。しかしながら、十分にグルコシル化された
ヒトＴＣＲγタンパク質は、Ｍr 約５５，０００を有し
得る。ＷＴ３１- βＦ１- Ｔ３ + ＩＤＰ１およびＩＤ
Ｐ２細胞系上同定された非α−非βＴ３会合サブユニッ
トの重鎖は、５５，０００ダルトンのＳＤＳＰＡＧＥに
おけける相体移動度を示す（第２Ａ図および第２Ｂ
図）。 【００９２】このＴ３会合重鎖が血清学的にＴＣＲαタ
ンパク質と架橋またはＴＣＲγタンパク質と同一である
かどうかを決定するために、抗血清にヒトｃＤＮＡクロ
ーンから推定されたＴＣＲγアミノ酸配列（文献３６）
の配列： ＲＴＫＳＶＴＲＱＴＧＳＳＡＥＩＴＣ （有効領域からの残基５〜１２の１７アミノ酸範囲を示
す；抗Ｖγペプチド血清）を有する合成ペプチドおよび
配列： ＤＫＱＬＤＡＤＶＳＰＫＰＴＩＦＬＤＳＩＡ （一定領域からの残基１１７〜１３６の２０アミノ酸範
囲を示す；抗Ｃγペプチド血清）を有する合成ペプチド
を与える。抗Ｃγペプチド血清および抗Ｖγペプチド血
清の両者は、 125Ｉ−標識化されたＷＴ３１- βＦ１-
Ｔ３+ 細胞の変性溶解産物からＭr ５５，０００の分子
を免疫沈降した（第４Ａ図、レーン２および４）。該分
子は、非機能的ＴＣＲγｍＲＮＡのみを発現する 125Ｉ
標識化ＨＰＢ−ＭＬＴ細胞の溶解産物から免疫沈降され
なかった（文献３６）。 【００９３】抗ＣγおよびおよびＶγペプチド血清によ
って免疫沈降された５５，０００ダルトン分子が実際に
Ｔ３に架橋された重鎖サブユニットであることを示すた
めに、追加の実験を行った（第４Ｂ図）。ＷＴ３１- β
Ｆ１- Ｔ３+ 細胞からのＤＳＰ架橋溶解産物のサンプル
を最初に抗Ｔ３モノクローナルで免疫沈降し、再びＴ３
と会合されたＭr ５５，０００および４０，０００サブ
ユニットの存在を示した（第４Ｂ図、レーン２）。平行
して、架橋溶解産生物の別のアリコートを抗Ｔ３モノク
ローナル抗体で免疫沈降し、ついで免疫沈降Ｔ３架橋ポ
リペプチドをＤＳＰ架橋を切断するために変成および還
元条件下免疫吸収剤からら溶離した。この溶離物をつい
で抗Ｃγペプチド血清と再び沈降した。Ｔ３と架橋した
Ｍr ５５，０００サブユニットを抗γペプチド血清によ
り再び沈降し（第４Ｂ図、レーン５）、これらの２つの
アプローチにより特定されたＭr ５５，０００サブユニ
ットが同一であることを示した。 【００９４】抗Ｔ３ｍＡｂを用いた（Ｔ３からのＴＣＲ
サブユニットが解離しない条件で、第５図参照）表面ヨ
ウ素化ＩＤＰ２リンパ球の溶解産物からの免疫沈降は、
Ｔ３サブユニット（第５Ａ図）に加えて２つの種（５５
Ｋおよび４０Ｋ）をもたらした。この結果は、化学的架
橋を用いた先に報告されたものと一致した。５５Ｋ種
は、抗Ｃγおよび抗Ｖγペプチド血清と特異的に反応す
ることが見い出された。４０Ｋポリペプチドは、該抗γ
ペプチド血清と反応性がなく、従って非ＴＣＲα，βま
たはγサブユニット、すなわちδを表わすようである。
これらのサブユニットがＴＣＲαおよびβサブユニット
のように共有結合されているかどうかを決定するために
Ｔ３免疫共沈ポリペプチドを還元および非還元下、調べ
た。非還元条件下ヘテロダイマージスルフィド結合形態
にて存在するＴＣＲα，βサブユニットと明らかに対照
して、ＩＤＰ２細胞系上のＴＣＲγおよびδサブユニッ
トは、共有結合されいなかった（第５Ａ図）。非還元条
件下ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧ
Ｅ）における相対移動度の少しの増加が拡散、重グリコ
シル化（下記参照）ＴＣＲγに関して観察されたのに対
して、移動度の劇的な増加がδサブユニットに関して観
察され、これは１以上の内部鎖ジスルフィドループの存
在を提唱する（レーン２および４の矢印における種参
照）。 【００９５】ウェイスら（Weiss, et al) は、ＰＥＥＲ
細胞系がＴＣＲγｍＲＮＡの発現を欠くがＴ３−会合５
０〜６０Ｋポリペプチドを発現できるので、ＴＣＲγポ
リペプチドを発現できることを提案した（文献６９）。
さらなる実験において、この細胞系は、ＴＣＲβ鎖、β
Ｆ１上のフレームワーク決定基を認識するｍＡｂとの反
応性に欠け（第５Ａ図）、また強くヨウ素化された３８
Ｋポリペプチドを発現することが見い出された。５５Ｋ
〜６０Ｋポリペブチドは、抗Ｃγペプチド血清と特異的
に免疫沈降され、従ってＴＣＲγタンパク質の別の例を
示すようだ（第５Ａ図）。ＰＥＥＲ上のＴＣＲγおよび
δポリペプチドは、ＩＤＰ２細胞系上のものと同様なサ
イズであり、同様にジスルフィド結合されていない。Ｉ
ＤＰ２細胞上のδサブユニットと同様に、ＰＥＥＲ上の
複製分子は、還元および非還元条件下比較された際（レ
ーン７および８の矢印における種比較対照）、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥ移動度において著しいシフトを受けた。従っ
て、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞糸は、同様のタイプの
ＴＣＲγおよびδサブユニットが共有結合されていない
ＴＣＲγ，δＴ３複合体を発現するらしい。 【００９６】本発明者らは、この第２抗体もまた正常末
梢血におけるＴ細胞個体群の成分として発現するかどう
かを決定しようとした。ｍＡｂβＦ１およびＯＫＴ（登
録商標）３でのヒト抹消血リンパ球（ＰＢＬ）の染色を
比較する２色サイトフルオログラフ分析は、ＴＣＲα、
β陰性であるらしい２〜５％のＴ３+ ＰＢＬを示す分離
個体群を示した。このリンパ球個体群を検査するため
に、正常成人ＰＢＬをｍＡＢＷＴ３１での染色後、サイ
トフルオログラフ細胞選別した。未染色ＰＢＬを単離
し、放射性化自系飼育細胞およびフィトヘムアグルチニ
ン（ＰＨＡ−Ｐ）の添加を２週間受けるＩＬ−２含有条
件培地中生体外培養した。細胞系誘導ＷＴ３１- ＰＢＬ
- 系を０．５細胞ウェルでプレートすることでの希釈を
制限することによってクローンし、クローン細胞をポリ
クローナル細胞系として培養した。いくつかのこのよう
な末梢血誘導Ｔ細胞クローンが得られ、ＰＢＬクローン
１（ＰＢＬ Ｃ１）を詳細に研究した。サイトフルオロ
グラフ分析により、このクローンは、Ｔ３+ Ｔ１１- で
あったが、Ｔ４- Ｔ８- およびＷＴ３１- でなかった。
ＰＢＬ Ｃ１からのＴＣＲα，βおよびγｍＲＮＡの発
現は、ノーザンブロット分析により決定された（第６
図）。ＷＴ３１+ βＦ１+ Ｔ細胞腫瘍ＨＰＢ−ＭＬＴと
比較すると、ほんの低レベルのＴＣＲαおよびβｍＲＮ
Ａが検出された。これに対して、豊富なＴＣＲγｍＲＮ
Ａが示され（第６図、γプローブ）；興味深いことに、
ＴＣＲγｍＲＮＡは、ＨＰＢ−ＭＬＴにおよびＴＣＲγ
発現ＩＤＰ２細胞系に見い出された１．６キロベース
（Ｋｂ）メッセージよりわずかに少なかった（第６
図）。これらの観察と一致して、ＷＴ３１反応性は、サ
イトフルオログラフ分析において検出されず（データ示
さず）、またほんの限られたレベルのＴＣＲαおよびβ
ポリペプチドがｍＡｂβＦ１を用いた免疫沈降により見
い出された（第５Ｂ図、レーン２，５）。これに対し
て、ＰＢＬＣ１において検出されるトレースレベルのＴ
ＣＲαおよびβタンパク質は、このクローンの培養に用
いられる放射化自系飼育細胞での１〜２％染色によって
説明される。２つの豊富な鎖（４０Ｋおよび３６Ｋ）
は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析において還元条件下Ｔ３と会
合されることが観察された（第５Ｂ図、レーン３）。抗
Ｃγ血清は、還元および変性ＰＢＬＣ１溶解産物からこ
れらのポリペプチドの両方を免疫沈降した（第５Ｂ図、
レーン８）。 これら４０Ｋおよび３６ＫＴＣＲγポリ
ペプチドがジスルフィド結合ダイマーの一部かどうかを
決定するために、抗Ｔ３との免疫共沈が非還元条件下行
われた。Ｍr （７０Ｋ）の単一バンドが観察され、これ
は、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞と異なり、ＰＢＬＣ１
がジスルフィド結合ダイマー性複合体の部分であるＴ３
会合ＴＣＲγ遺伝子産生物を発現することを示す。 【００９７】ＴＣＲγパートナー（δ）は、ＩＤＰ２お
よびＰＥＥＲ細胞上のこのレセプター複合体の非ジスル
フィド結合形態上に存在したので、本発明物らは、ＰＢ
ＬＣ１上のレセプターのジスルフィド結合形態がホモま
たはヘテロダイマーからなるかどうかを検査した。免疫
沈降物は、２次元ゲル電気泳動（非平衡ｐＨゲル電気泳
動（ＮＥＰＨＧＥ）につづいてＳＤＳ−ＰＡＧＥ；第７
Ａ図、第７Ｂ図）によりアッセイされた。還元条件下、
両方のＴＣＲγ種（４０Ｋおよび３６Ｋ）は、同一帯電
量を有することが見い出され、またシアリル化糖タンパ
クに関して代表的な不均質性を示した。これらの特徴
は、同一アミノ酸骨組みを有するＴＣＲγペプチドの特
異的にグリコシル化された形態に関して先に記載された
もの同様である。従って、これらの種は、同一ＴＣＲγ
ペプチドの特異的にグリコシル化された形態を示すであ
ろう。この結果は、ＰＢＬＣ１において単一前駆体のみ
を現わす代謝性パレス標識の結果（下記）によって支持
される。 【００９８】これらのＴＣＲγ種の１つおよび両方から
なるジスルフィド結合ダイマーは、ＮＥＰＨＧＥまたは
平衡等電点電気泳動（ＩＥＦ）により分析された際、２
つの成分のいずれか一つのみと同様な電気泳動位置を有
するべきである。しかしＴＣＲγからなるヘテロダイマ
ーおよび個々のポリペプチドは、異なる帯電量および電
気泳動位置を有するかもしれない。ジスルフィド結合ダ
イマーの位置は、それ故、非還元条件下ＮＥＰＨＧＥを
行い、つづいて非還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行うこ
とによって検査された（第７Ｂ図）。著しく、ジスルフ
ィド結合ダイマーの位置は、還元条件下検査されたＴＣ
Ｒγポリペプチドのものより実質的により酸性であった
（第７Ａ図における４０Ｋおよび３６Ｋ種を第７Ｂ図に
おける７０Ｋ種と比較参照のこと）。この結果は、ＴＣ
Ｒγ種が別個のＮＥＰＨＧＥ移動度のポリペプチドに共
有結合されたことを提案する。従って、ＴＣＲγパート
ナーが（ 125Ｉで不十分に標識化されたかあるはここに
用いられる電気泳動系において分解されなかったかのい
ずれかのため）直接可視化され得なかったけれど、ＰＢ
ＬＣ１上のＴＣＲγポリペプチドは、ジスルフィドヘテ
ロダイマーの一部として発現されたらしい。平衡ＩＥＦ
（ＮＥＰＨＧＥよりむしろ）を用いた実験は、この観察
を確認した（第３Ｄ図）。 【００９９】ジスルフィド結合と非結合形態とのさらな
る識別は、成熟ＴＣＲγ糖タンパクのサイズであった
（ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ上の５０〜６０Ｋ対ＰＢＬＣ
１上の３６Ｋ）。このラジカルサイズ相異のいくつが特
異グリコシレーションによるのかおよびいくつが異なる
ペプチド骨組みによるのか評価するために、ＴＣＲγペ
プチドは、35Ｓ−メチオニンでパルス標識化された細胞
において分析された。還元条件下および変性条件下にお
ける可溶化の後、溶解産物は、抗Ｃγ血清で免疫沈降さ
れ、そして２次元ゲル電気泳動により検査された（第８
Ｅ〜Ｈ図）。免疫沈降物は、パルス標識化物質より未熟
高マンノースグリカン類を除くためエンドグリコシダー
ゼＨ（ｅｎｄｏ−Ｈ）で処置されるかまたは模擬処置さ
れた。同一ＮＥＰＨＧＥ移動度のＴＣＲγポリペプチド
（４８Ｋおよび４３Ｋ）は、ＩＤＰ２細胞系により合成
された。エンド−Ｈでの処置は、４０Ｋ形態まで両形態
を減じ、これは、４６Ｋおよび４３Ｋ形態が、異なる数
の炭水化物を運び、また単一ＴＣＲγポリペプチド骨組
み（４０Ｋ）が、ＩＤＰ２によって合成されることを提
案する（第８Ｅ、８Ｅ図）。これに対して、より塩基性
の３８Ｋグリコシル化形態は、エンド−Ｈ消化が非グリ
コシル化３１Ｋ骨組みを示した後、ＰＢＬＣ１によって
合成される（第８Ｇ，Ｈ図）。従って、本明細書に特徴
づけられた非ジスルフィド結合（ＩＤＰ２）およびジス
ルフィド結合ＰＢＬＣ１）形態上のＴＣＲγポリペプチ
ドは、ラジカル的に相異する骨組みサイズを示す（各
々、４０Ｋおよび３１Ｋ）。パルス標識することにより
観察されるＴＣＲγペプチドが細胞表面ヨウ素化により
見い出されるものと相異する分子量のものであるという
事実は、これらの運ぶ相異する炭化水素すなわち高マン
ノース対複合体から生じる。 【０１００】本発明者らは、ついでジスルフィド結合お
よび非共有結合の両者が正常成人末梢血に生ずるかどう
かを決定しようとした。それ故、ＰＢＬＣ１がクローン
されたポリクローナル末梢血細胞系（ＷＴ３１- ＰＢＬ
系）を非常に詳細に研究した。ＷＴ３１- ＰＢＬ系は、
均質にＴ３+ Ｔ１１+ であり５％汚染ＷＴ３１+ 細胞と
ともに９５％ＷＴ３１- Ｔ４- Ｔ８- を含有した。ヨウ
素化可溶化細胞からの免疫沈降により検査した際、弱い
が検出可能なｍＡｂβＦとの反応性が期待された５％Ｔ
ＣＲα、β陽性リンパ球と一致して観察された（第５Ｂ
図、レーン１０還元および１３非還元）。これに対し
て、抗Ｔ３ｍＡｂは、還元条件下多量のＴ３および３５
〜４５Ｋの会合ポリペプチドの両者を免疫沈降した（第
５Ｂ図、レーン１１）。これらの分画のなにがジスルフ
ィド結合したのかを決定するために、Ｔ３免疫沈降物が
非還元条件下検査された（第５Ｂ図、レーン１４）。Ｔ
３会合ポリペプチドの半分未満がジスルフィド結合され
た。この物質は、レーン１４の白抜き矢印の上に位置さ
れたジスルフィド結合α，βペプチド（サイズは、βＦ
１沈降物により同定された、レーン１３）およびより小
さいサイズのジスルフィド結合ＴＣＲγ（白抜き矢印，
レーン１４）を含有した。著しく、多数のＴ３会合種
は、ジスルフィド結合されず、還元および非還元の両方
の条件下、同一移動度で移動された。特に、これら非結
合種の分画は、ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ細胞上のＴＣＲ
δと同様にＳＤＳ−ＰＡＧＥ移動度の著しい増加を示し
た（第５Ｂ図、レーン１４、黒塗り矢印参照）。抗Ｃγ
血清との反応性は、ＷＴ３１- ＰＢＬ系上に発現された
Ｔ３と会合された標識化物質のほとんどがＴＣＲγ遺伝
子産生物であることを確認した（レーン１６）。 【０１０１】従って、ＴＣＲγ遺伝子のタンパク質産生
物は、ジスルフイド結合および未結合分子形態の両方で
成人末梢血におけるＴ３+ リンパ球上に生じた。また、
ＴＣＲγの非ジスルフィド結合形態は、５５〜６０Ｋグ
リコシル化（ＩＤＰ２およびＰＥＥＲ）または３５〜４
５グリコシル化（胸腺Ｔ細胞クローンＣ１１（文献７
０）およびＷＴ３１- ＰＢＬ系）種にさらに分割され得
る。 【０１０２】ＴＣＲγおよびβ遺伝子再配列は、その細
胞表面上にＴＣＲγポリペプチドを発現することが知ら
れているＴ細胞において検査された。サザンブロッド分
析は、０．８Ｋｂ ＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII ヒトＪγ
１，３プローブ［クェアーターモスら（Quertermous et
al.) （文献７１）による学名］を用いて行なわれた。
このプローブは、ゲノムＤＮＡのＢａｍＨＩ消化物にお
ける２３Ｋｂおよび１２Ｋｂの胚子系(germline)バンド
を検出する。２３Ｋｂバンドは、Ｃｒ１を包含し、１２
Ｋｂバンドは、Ｃｒ２をコード化する。このプローブを
用いてＩＤＰ１，ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２（ＷＴ３
１- ＰＢＬ系から誘導されたものも）、ＴＣＲγ遺伝子
の再配列を示した（ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２の両
者、同一再配列を示した；第９Ａ図）。 【０１０３】サザンブロット分析におけるＪγ１，３プ
ローおよびＥｃｏＲＩ消化ゲノムＤＮＡを用いてＰＢＬ
における７つの再配列が検出されている（文献２０）。
これら７つの再配列のうち６（Ｉ，II，III ，IV，VII
およびＶ）をＰＢＬ胎児胸腺および新生児胸腺ゲノムＤ
ＮＡに示した（第９Ｂ図；矢印および再配列番号参
照）。４つの再配列（Ｉ，II，IV，およびVII ）は、Ｔ
ＣＲγポリペプチドを発現する末梢血リンパ球によって
用いられないかまたはこれを示す細胞はＷＴ３１-ＰＢ
Ｌ系に用いられる培養条件下失われた。それにもかかわ
らず、ＷＴ３１- ＰＢＬ系ＤＮＡは、少なくともこれら
の再配列のうち３つ（III ，IVおよびVI）を現わし（第
９Ｂ図、レーン３）、またこれら同一再配列は、ＩＤＰ
２、ＰＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２によって用いられ（Ｅ
ｃｏＲＩ消化物に関してデータ示さず）、またこれらの
再配列の全てを胎児胸腺に示した。 【０１０４】ＴＣＲβもまた、ＩＤＰ２、ＰＢＬＣ１お
よびＰＢＬＣ２細胞において再配列した。１．１ＫｂＥ
ｃｏＲＩ−ＨｉｎｄIII Ｃβ2プローブは、ゲノムＤＮ
ＡのＢａｍＩ消化物におけるＣβ一定領域の両方を包含
する２０Ｋｂの胚系バンドを検出する（文献６８）。Ｉ
ＤＰ２に関する１つの優位なＴＣＲβ再配列およびＰＢ
ＬＣ１およびＰＢＬＣ２に関する２つの同一な再配列が
観察された（第９Ｃ図）。これは、ＴＣＲβ再配列がこ
れらの細胞系に関する免疫沈降ならびにノーザンブロッ
ト分析に基づいて非保護的であることが推定される。Ｐ
ＢＬＣ１およびＰＢＬＣ２の両者が同一のＴＣＲαおよ
びβ再配列を有するので、これらはクローン性でありま
たＷＴ３１- ＰＢＬ系内の同一細胞から誘導されるらし
い。 【０１０５】ＴＣＲγ発現細胞が成人抹消血に見い出さ
れたので、機能的研究を行いこれらがエフェクター能を
有するかどうかを決定した。ＩＤＰ２およびＰＢＬＣ１
がその51Ｃｒ放出アッセイにおいてターゲット細胞を溶
解する能力に関して検査された際、これらが自発性エフ
ェクター細胞毒能力を有することを証明した（第１０〜
１２図）。 【０１０６】ＩＤＰ２細胞は、多数の天然キラー（Ｎ
Ｋ）ターゲットまたは同種系ＰＢＬのＰＨＡ芽細胞を溶
解しないが、これらは、51Ｃｒ標識化ＭＯＬＴ−４細胞
を選択的に溶解することができた（第１０図上部）。６
つの同様なアッセイのうち２つにおいて、Ｋ５６２ター
ゲットの弱い溶解（１０〜１５％51Ｃｒ放出）もまた観
察された。ＭＯＬＴ−４細胞の溶解は、本発明者らがこ
れらｍＡｂがＭＨＣクラスＩおよびクラスII同種特異性
ＣＴＬにより殺生を閉塞することを先に見い出したが
［文献３４参照せよ。］、単系性クラスＩ（Ｗ６／３２
抗ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ，４Ｅおよび１３１）またはクラ
スII（ＬＢ３．１および抗Ｌｅｖ１０）決定基に対して
導かれる種々のｍＡｂによって禁止されなかった（第１
１図）。これらのデータは、ＭＯＬＴ−４細胞の溶解が
ＭＨＣクラスＩおよびIIが独自であることを提唱する。
抗Ｔ３ｍＡｂのみがＭＯＬＴ−４細胞の特異性溶解を部
分的にブロックした（第１１図）。一方抗Ｔ３ｍＡｂの
ＩＤＰ２への予備結合によって誘発した際、胸腺誘導Ｃ
II7 に関して先に報告されているとおりＩｇＧに関する
Ｆｃレセプターを発現する51Ｃｒ標識化ターゲット細胞
（例えば、Ｕ９３７）は、効率的に溶解された（第１０
図、 +抗Ｔ３）。このような殺生は、凝集ヒトＩｇＧに
よって完全に禁止でき、このことはこのＴ３−媒介溶解
がＩｇＧＦｃレセプターを経て増強された接合形態によ
り生じたことを確認した（データ示さず）。いくつかの
ターゲット（Ｕ９３７）に関する抗Ｔ３ｍＡｂによる溶
解の逆接的増量および特異的に認識されたターゲット
（ＭＯＬＴ−４）に関する溶解のブロックは、誘発の競
合効果およびＴ３を介する接合形態の増加から生じるが
ＴＣＲを介する立体的ブロック抗原認識によるものでは
ない。 【０１０７】ＰＢＬＣ１は、ＩＤＰ２よりより効率的キ
ラー細胞であることを立証した。ＰＢＬＣ１は、エフェ
クター；ターゲット比（Ｅ：Ｔ）２０：１で検査された
際、Ｋ５６２（ＭＨＣクラスＩおよびII陰性）に対して
自動性細胞溶解性活性を示した（第１２図上部）。さら
に、ＰＢＬはまた、ＭＯＬＴ細胞およびより少ない範囲
でＣＥＭ細胞を溶解した。ダウティ（Ｄａｕｄｉ）、Ｕ
９３７または同種系または同種異系ＰＢＬのいずれの溶
解も検出されなかった。抗Ｔ３ｍＡｂでの誘発は、ＰＢ
ＬＣ１を誘導し、Ｕ９３７細胞系を溶解した。さらに、
Ｋ５６２の溶解がわずかに増大されたがＭＯＬＴ−４の
溶解は部分的に禁止された（第１２図）。合わせると、
Ｋ５６２およびＭＯＬＴ−４等の腫瘍ターゲット上のＩ
ＤＰ２およびＰＢＬＣ１の自発性細胞溶解活性およびこ
れらのＴＣＲγリンパ球が非ＭＨＣクラスＩおよびクラ
スIIであることを示すＭＨＣｍＡｂによる該活性をブロ
ックすることの失敗は、細胞毒Ｔリンパ球を制限した。検討 ＴＣＲα、β分子に対するフレームワーク抗体、βＦ１
およびＷＴ３１は、２例の免疫不全症患者の未梢血リン
パ球からＷＴ３１- βＦＩ- Ｔ３+ リンパ球個体群を固
定し、単離するのに用いられた。フレームワークモノク
ローナル抗体での免疫沈降およびＴＣＲαおよびＴＣＲ
β特異性ＣＤＮＡプローブを用いるノーザンブロットア
ッセイの両方の診断基準によって、この表現型のポリク
ローナルヒトＴ細胞系は、ＴＣＲα、βｍＲＮＡ転写体
およびポリペブチドのいずれも発現しないことが示され
た。とはいっても、解裂性ＤＳＰ指示薬を用いた化学的
架橋の研究は、これらの細胞上のＴ３糖タンパク質と会
合されたタンパク質複合体の存在を表わした。Ｔ３と架
橋した２つのサブユニットの重い方（Ｍr ５５，００
０）は、２つの異なる抗血清、すなわち一方は、有効領
域の部分に相当する１７アミノ酸合成ペプチドに対して
発生し、他方は再配列ＴＣＲγ遺伝子の推定アミノ酸配
列の一定領域の一部分に相当する２０アミノ酸合成ペプ
チドに対して発生する抗血清によっても免疫沈降された
（文献１９，３６）。従って、Ｍr ５５，０００タンパ
ク質は、ＴＣγ遺伝子を再配列することによってコード
化されたＴＣＲγタンパク質であった（文献１５）。Ｍ
r ４０，０００ポリペプチドは、１／４Ｔ３会合タンパ
ク質、ＴＣＲσという、である（第２Ａ図および第２Ｂ
図）。ＴＣＲγおよびδポリペプチドは、前述のＴ細胞
レセプター複合体（ＴＣＲα、β）に類似したこれらの
細胞（Ｔγ、δ−Ｔ３）上のＴ３会合ヘテロダイマー性
構造を形成する。 【０１０８】本明細書で検査されたＴＣＲγリンパ球
は、非ＭＨＣ制限細胞溶解活性を示し、またＴ細胞レセ
プターが明確に特徴づけられていない他のＴ３+ ＮＫ様
細胞と同様であり得る（文献３９、７２、７３、７
４）。ＮＫ様リンパ球として、これらは、悪性腫に対す
る宿主免疫監視において関与し得る。観察された溶解の
特異性は、ＴＣＲγの可能性が全てではないがいくつか
の抗体特異性認識を媒介したことを提唱する。抗Ｔ３ｍ
Ａｂがいくつかのターゲット細胞の非特異性溶解を誘発
できたので、または別に他のターゲットの特異性溶解を
ブロックできたので、これらの細胞上のＴ３分子は、機
能的であるようだ。 〔実施例２〕物質および方法 培養方法 前述のＰＥＥＲ細胞系をＲＰＭＩ １６４０、１０％胎
児ウシ血清、ペニシリン−ストレプトマイシン（Penici
llin-streptomyin) 、およびＬ−グルタミンからなる培
地中生体外培養した。培養株は、週に２度飼育され５％
ＣＯ2 で湿されたインキュベータ中３７℃で保持され
た。 【０１０９】ＴＣＲγ鎖に対して特異なモノクローナル
抗体に関するハイプリドーマ産生 ＢＡＬＢ／ｃマウスを０．２mlリン酸緩衝食塩水（ＰＢ
Ｓ）に懸濁された２×１０7 ＰＥＥＲ細胞で腹腔内
（Ｉ．Ｐ）免疫化された。マウスを全２０接種に対して
２×１０7 ＰＥＥＲ細胞での１０日ごとのＩ．Ｐ．接種
により補助注射した。融合前３日、マウスを３日連続静
脈（Ｉ．Ｖ．）接種のため２×１０7 ＰＥＥＲ細胞での
Ｉ．Ｖ．接種により補助接種した。マウスを殺し、脾臓
を最終Ｉ．Ｖ．接種時除いた。免疫脾臓細胞を標準的な
方法によりマウス骨髄腫細胞Ｐ３×６３Ａｇ８．６５３
でポリエチレングリコール１５００の存在下５：１比で
融合した。融合後、細胞をヒポキサンチン（１×１
０-4）、アミノプテリン（８×１０ -8Ｍ）およびチミジ
ン（１．６×１０-5Ｍ）含有培養培地中に懸濁し、飼育
細胞として２×１０5 ＢＡＬＢ／ｃ胸腺細胞を含有する
マイクロタイタープレートに１ウェルにつき２×１０5
細胞でプレートした。培養株を、７日において同一培地
で飼育した。開始１４日、培養株をアミノプテリンを欠
く同一培地で飼育した。 【０１１０】ＴＣＲγ鎖に特異なモノクローナル抗体に
関するハイブリドーマスクリーニング ＰＥＥＲ細胞上のＴ細胞抗原レセプターのγおよびσ鎖
の両者がＣＤ２抗原と複合されるので、Ｔ細胞抗原レセ
プターに対する抗体は、ＯＫＴ（登録商標）３等の抗Ｃ
Ｄ３モノクローナル抗体とこれら表面タンパク質と共転
形し得るべきである（文献２）。このような共転形は、
次のとおり所望のハイブリドーマの主要スクリーニング
として利用された。ハイブリドーマ培養上澄液の各々を
生育させ、その抗ＣＤ３モノクローナル抗体と表面ＣＤ
３タンパク質複合体を共転形する能力に関してスクリー
ニングした。１００マイクロ力価の培養上澄液を１ウェ
ルにつき５×１０5 ＰＥＥＲ細胞含有９６ウェルマイク
ロ力価プレートの各ウェルに加えた。３７℃での一晩の
培養後、フルオレセインイソチオシアネート接合ＯＫＴ
（登録商標）３を各ウェルに加え、さらに０℃で３０分
間培養した。サンプルをついで流動細胞計測法で分析し
た。蛍光強度の著しい減少を誘いた上澄液を選択し、さ
らに以下に記載する免疫沈降法により特徴づけした。抗
ヒトＴ細胞抗体レセプタータンパク質を分泌した選択ウ
ェルにおける細胞をついで制限希釈度法によりクローン
した。 免疫沈降 ＰＥＥＲ細胞は、 125Ｉで放射性標識化され、上述の１
％ノニデットＰ−４０含有トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）
中に可溶化した。免疫沈降は、還元条件下各選択上澄液
での 125Ｉ標識化ＰＥＥＲ細胞溶解産物を培養すること
により実施された。免疫沈降後、サンプルは、１０％ド
デシル硫酸ナトリウウム−ポリアクリルアミドゲル電気
泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分析された。ゲルを乾
燥し、オートラジオグラフ化し、そしてタンパク質の分
子量を分子量標準との比較により決定した（文献７
５）。 【０１１１】ＴＣＲδ鎖に特異なモノクローナル抗体を
産生するハイブリドーマの産生およびスクリーニング
モノクローナル抗体は、ＢＡＬＢ／ｃマウスをピーＰ
ＥＥＲからの免疫沈降ＴＣＲγ、σＣＤ３で免疫化する
ことにより作成された。簡単に言うと、文献４６に記載
された方法と同様に１グラムのピーア細胞を０．３％Ｃ
ＨＡＰＳに可溶化しついで５マイクロタイターのＵＣＨ
Ｔ１腹水と固定スタフィロコッカスアウレアスコウンＩ
(Staphylococcus aureas Cown Ｉ) 株で免疫沈降した。
洗浄免疫複合体を全５回の免疫化に関して４週間間隔で
腹腔内接種した（文献４６）。マウスをついで殺し、脾
臓細胞をＰ３×６３Ａｇ８．６５３胸腺細胞に融合し
た。ハイブリドーマをＨＡＴ選択において生長させ 125
Ｉ標識化ＰＥＥＲ細胞および文献７５に記載の他の細胞
に対してスクリーニングおよび特徴づけした。 結果 第１３図、レーン４に示すとおり、ハイブリドーマ３４
Ｄ１２上澄液(Supernate) における抗体は、ＰＥＥＲ細
胞のヨウ素標識化溶解産物から還元条件下５５ｄタンパ
ク質および２０Ｋｄタンバク質を免疫沈降した。この５
５Ｋｄタンパク質は、Ｔ細胞抗原レセプターのγ鎖およ
びＰＥＥＲ細胞上のＴ３タンパク質の２０Ｋｄタンパク
質に相当する。 【０１１２】別個の実験において、Ｔ細胞抗原レセプタ
ーδ鎖に対するモノクローナル抗体、すなわち４Ａ１
は、産生されかつ特徴づれられた。第１４図、レーン５
に示すとおり、４Ａ１は、ＩＤＰ２細胞からのＴ細胞抗
原レセプターδ鎖（４０Ｋｄ）を再免疫沈降した（文献
７５）。４Ａ１はまた、ＩＤＰ２、Ｍｏｌｔ−１３およ
びＰＢＬ系２等のいくつかの他のＴ細胞抗原レセプター
γ、δ陽性細胞系からＴ細胞抗原レセプターγ、δ複合
体を免疫沈降することが示されている。 参考文献 【０１１３】【０１１４】【０１１５】【０１１６】【０１１７】【０１１８】【０１１９】【０１２０】
【図面の簡単な説明】
【図１】ＴＣＲα，βを認定するフレームワークモノク
ローナル抗体の反応性。 【図２】細胞表面Ｔ３およびＩＤＰ１およびＩＤＰ２細
胞系によるＴ３会合（架橋）分子のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分
析。 【図３】ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγｃＤＮＡプ
ローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮＡの
ノーザンブロット分析。 【図４】ＩＤＰ２細胞系７からの抗Ｖγおよび抗Ｃγペ
プチド血清免疫沈降。 【図５】ヒト腫瘍および末梢血リンパ球系からのＴＣＲ
γ，δおよびＴ３の免疫沈降。 【図６】ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮＡのノーザン
ブロット分析。 【図７】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。 【図８】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。 【図９】ＴＣＲγポリペプチドを発現するＴ細胞におけ
るγおよびβ遺伝子の再配列。 【図１０】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１１】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１２】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１３】ピーア（peer) 細胞から誘導されたＴＣＲγ
鎖の免疫沈降。 【図１４】ＩＤＰ２細胞からのＴＣＲδ鎖の免疫沈降。
ローナル抗体の反応性。 【図２】細胞表面Ｔ３およびＩＤＰ１およびＩＤＰ２細
胞系によるＴ３会合（架橋）分子のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分
析。 【図３】ＴＣＲα，ＴＣＲβおよびＴＣＲγｃＤＮＡプ
ローブを用いてＩＤＰ２細胞系から単離されたＲＮＡの
ノーザンブロット分析。 【図４】ＩＤＰ２細胞系７からの抗Ｖγおよび抗Ｃγペ
プチド血清免疫沈降。 【図５】ヒト腫瘍および末梢血リンパ球系からのＴＣＲ
γ，δおよびＴ３の免疫沈降。 【図６】ＰＢＬ Ｃ１から単離されたＲＮＡのノーザン
ブロット分析。 【図７】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。 【図８】ＴＣＲγポリペプチドおよび前駆体の二次元ゲ
ル分析。 【図９】ＴＣＲγポリペプチドを発現するＴ細胞におけ
るγおよびβ遺伝子の再配列。 【図１０】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１１】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１２】ＩＤＰ２およびＰＢＬ Ｃ１細胞による細胞
溶解。 【図１３】ピーア（peer) 細胞から誘導されたＴＣＲγ
鎖の免疫沈降。 【図１４】ＩＤＰ２細胞からのＴＣＲδ鎖の免疫沈降。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
// Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｋ
Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ
(Ｃ１２Ｐ 21/08
Ｃ１２Ｒ 1:91）
(73)特許権者 592257310
プレジデント・アンド・フェロウズ・オ
ブ・ハーバード・カレッジ
アメリカ合衆国02138マサチューセッツ
州ケンブリッジ、クウィンシー・ストリ
ート17
(72)発明者 ブレンナー，マイケル，ビー
アメリカ合衆国 マサチューセッツ州
01721 アッシュランド，♯73，オーク
ストリート，99
(72)発明者 ストロミンガー，ジャック，エル.
アメリカ合衆国 マサチューセッツ州
02173， レキシントン， マサチュー
セッツ アベニュー 2030
(72)発明者 サイドマン，ジョナサン
アメリカ合衆国 マサチューセッツ州
02186， ミルトン，キャントン アベ
ニュー 1350
(72)発明者 イプ，ステファン，エイチ.
アメリカ合衆国 マサチューセッツ州
01710， フラミンハム ジョディー
ロード 45
(72)発明者 クランゲル，マイケル，エス.
アメリカ合衆国 マサチューセッツ州
02160， ニュートンビレ，アルストン
ストリート ８
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ)
ＥＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ)
ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．少なくとも１つのδＴ細胞レセプターポリペプチド
と反応性のある抗体であって、該δＴ細胞レセプターポ
リペプチドが以下の性質： （ａ）Ｔ細胞の表面に存在するとき、Ｔ３抗原との複合
体として結合している； （ｂ）αまたはβＴ細胞レセプターポリペプチドに対す
る抗体とは反応しない； （ｃ）モノクローナル抗体βＦ１とは反応しない；そし
て （ｄ）γＴ細胞レセプターポリペプチドに対する抗体と
は反応しない； を有することを特徴とする抗体。 ２．該δＴ細胞レセプターポリペプチドが分子量約40,0
00ダルトンである請求項１記載の抗体。 ３．該δＴ細胞レセプターポリペプチドがヒトδＴ細胞
レセプターポリペプチドである請求項１記載の抗体。 ４．ポリクローナル抗体である請求項１記載の抗体。 ５．モノクローナル抗体である請求項１記載の抗体。
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| US5340921A (en) * | 1986-07-03 | 1994-08-23 | T Cell Sciences, Inc. | Γ, δT cell receptor and methods and detection |
| JPH02491A (ja) * | 1987-04-25 | 1990-01-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗−Ｔ細胞レセプターγ鎖モノクローナル抗体 |
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| FR2621127B1 (fr) * | 1987-09-30 | 1992-01-31 | Roussy Inst Gustave | Anticorps monoclonal reconnaissant un epitope de la chaine gamma des recepteurs de surface des cellules t humaines, lignee de cellules d'hybridomes produisant cet anticorps, et utilisation de cet anticorps monoclonal |
| US5506126A (en) * | 1988-02-25 | 1996-04-09 | The General Hospital Corporation | Rapid immunoselection cloning method |
| WO1989008114A1 (en) * | 1988-02-25 | 1989-09-08 | The General Hospital Corporation | Rapid immunoselection cloning method |
| FI891226A (fi) * | 1988-04-28 | 1989-10-29 | Univ Leland Stanford Junior | Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom. |
| US5223426A (en) * | 1988-12-15 | 1993-06-29 | T Cell Sciences, Inc. | Monoclonal antibodies reactive with defined regions of the t-cell antigen receptor |
| US5766947A (en) * | 1988-12-14 | 1998-06-16 | Astra Ab | Monoclonal antibodies reactive with an epitope of a Vβ3.1 variable region of a T cell receptor |
| US5614192A (en) * | 1989-07-19 | 1997-03-25 | Connective Therapeutics, Inc. | T cell receptor peptides as therapeutics for immune-related disease |
| US5776459A (en) * | 1989-07-19 | 1998-07-07 | Connetics Corporation | TCR V beta 5 peptides |
| KR920703844A (ko) * | 1989-11-15 | 1992-12-18 | 원본 미기재 | 사람에 있어 t-세포 표면 항원의 측정방법 |
| FR2656532A1 (fr) * | 1989-12-29 | 1991-07-05 | Inst Nat Sante Rech Med | Proteine antigenique presente sur des cellules sat, anticorps correspondants et leurs applications. |
| EP0725277A3 (en) * | 1990-05-01 | 1996-12-04 | Univ Leland Stanford Junior | Variable T-cell receptor transcripts used as disease markers |
| US6416971B1 (en) * | 1990-05-15 | 2002-07-09 | E.R. Squibb & Sons, Inc. | Soluble single chain T cell receptors |
| FR2698880B1 (fr) * | 1992-11-25 | 1995-02-24 | Inst Nat Sante Rech Med | Procédé de production de récepteurs T solubles, produits ainsi obtenus et leur utilisation dans des compositions diagnostiques ou thérapeutiques. |
| US5552300A (en) * | 1994-01-13 | 1996-09-03 | T Cell Sciences, Inc. | T cell antigen receptor V region proteins and methods of preparation thereof |
| US6759243B2 (en) | 1998-01-20 | 2004-07-06 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | High affinity TCR proteins and methods |
| CA2335791A1 (en) * | 1998-06-30 | 2000-01-06 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Alkylamines and their precursors as specific modulators of human gamma-delta t cell function |
| US6737398B1 (en) | 1999-09-30 | 2004-05-18 | National Jewish Medical And Research Center | Modulation of γδ T cells to regulate airway hyperresponsiveness |
| AU2002220275A1 (en) * | 2000-12-08 | 2002-06-18 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Mutated class ii major histocompatibility proteins |
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Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4614720A (en) * | 1980-01-08 | 1986-09-30 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human T cell antigen, antibody, and methods |
| US4444744A (en) * | 1980-03-03 | 1984-04-24 | Goldenberg Milton David | Tumor localization and therapy with labeled antibodies to cell surface antigens |
| US4550086A (en) * | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
| US4713332A (en) * | 1984-01-13 | 1987-12-15 | The Ontario Cancer Institute | T cell specific CDNA clone |
| US4874845A (en) * | 1984-06-13 | 1989-10-17 | Massachusetts Institute Of Technology | T lymphocyte receptor subunit |
| EP0200350A3 (en) * | 1985-04-15 | 1987-05-13 | The Ontario Cancer Institute | Nucleic acid encoding a t-cell antigen receptor polypeptide |
| US4845026A (en) * | 1985-12-03 | 1989-07-04 | T Cell Sciences, Inc. | Assay systems for detecting cell-free T cell antigen receptor related molecules and the clinical utilities of the assays |
| EP0248887B1 (en) * | 1985-12-03 | 1994-12-28 | T Cell Sciences, Inc. | Cell-free t cell antigen receptor and its clinical utilities |
| US5340921A (en) * | 1986-07-03 | 1994-08-23 | T Cell Sciences, Inc. | Γ, δT cell receptor and methods and detection |
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