JP3032357B2 - リン脂質画分の分画精製方法 - Google Patents
リン脂質画分の分画精製方法Info
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- JP3032357B2 JP3032357B2 JP3319722A JP31972291A JP3032357B2 JP 3032357 B2 JP3032357 B2 JP 3032357B2 JP 3319722 A JP3319722 A JP 3319722A JP 31972291 A JP31972291 A JP 31972291A JP 3032357 B2 JP3032357 B2 JP 3032357B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、リン脂質、すなわち、
ホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥとい
う）、ホスファチジルコリン（以下、ＰＣという）、ホ
スファチジルセリン（以下、ＰＳという）、ホスファチ
ジルイノシトール（以下、ＰＩという）、スフィンゴミ
エリン（以下、ＳＰＭという）をそれぞれ効率よく高純
度に分画精製する方法に関する。
ホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥとい
う）、ホスファチジルコリン（以下、ＰＣという）、ホ
スファチジルセリン（以下、ＰＳという）、ホスファチ
ジルイノシトール（以下、ＰＩという）、スフィンゴミ
エリン（以下、ＳＰＭという）をそれぞれ効率よく高純
度に分画精製する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】リン脂質は動植物の細胞膜を構成する成
分として天然に広く存在しており、これらには、グリセ
ロリン脂質に属するＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳやスフィン
ゴリン脂質に属するＳＰＭ等がある。これらリン脂質は
界面活性作用があることが広く知られており、アセトン
沈澱等を行なって、粗精製された物が乳化剤として食品
添加物等に、あるいは医薬、その他工業原料として利用
されている。また、これらリン脂質は、それぞれ生理活
性を持つことが知られており、今後医薬あるいは試薬と
しての利用が期待されている。
分として天然に広く存在しており、これらには、グリセ
ロリン脂質に属するＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳやスフィン
ゴリン脂質に属するＳＰＭ等がある。これらリン脂質は
界面活性作用があることが広く知られており、アセトン
沈澱等を行なって、粗精製された物が乳化剤として食品
添加物等に、あるいは医薬、その他工業原料として利用
されている。また、これらリン脂質は、それぞれ生理活
性を持つことが知られており、今後医薬あるいは試薬と
しての利用が期待されている。
【０００３】これらリン脂質は、従来大豆、卵黄等から
溶剤で抽出し、これを分画精製していた。また、リン脂
質の一部は化学的に合成されていた。一方、リン脂質中
のＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳ、ＳＰＭのカラムクロマトグ
ラフ等による分画定量に関する研究は以前から行われて
きている。しかし工業的に大量かつ効率的に分画する経
済性のある分離方法がなく、また分離にも限度があっ
た。本発明者らは、先に、液液向流分配を用いて乳また
は乳由来リン脂質の分画が可能であるということを特許
出願している（特願平２−１０３６４５）。しかしなが
ら、これらのリン脂質を産業的に利用する目的で連続的
に分画精製しようとする試みは未だなされていない。
溶剤で抽出し、これを分画精製していた。また、リン脂
質の一部は化学的に合成されていた。一方、リン脂質中
のＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳ、ＳＰＭのカラムクロマトグ
ラフ等による分画定量に関する研究は以前から行われて
きている。しかし工業的に大量かつ効率的に分画する経
済性のある分離方法がなく、また分離にも限度があっ
た。本発明者らは、先に、液液向流分配を用いて乳また
は乳由来リン脂質の分画が可能であるということを特許
出願している（特願平２−１０３６４５）。しかしなが
ら、これらのリン脂質を産業的に利用する目的で連続的
に分画精製しようとする試みは未だなされていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする問題点】本発明は、従来法で
はなしえなかった、リン脂質を各画分に工業的に効率よ
く高純度に分画精製し、これを、食品素材、乳化剤、医
薬、試薬等として利用しようとするものである。
はなしえなかった、リン脂質を各画分に工業的に効率よ
く高純度に分画精製し、これを、食品素材、乳化剤、医
薬、試薬等として利用しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するためにその分離方法について鋭意研究したとこ
ろ、連続的に、クロマトグラフィーによる分離を行うこ
とのできる擬似移動床式クロマト分離装置（以下ＳＭＢ
という）を用いて、適当な溶媒を選択し、ＳＭＢの操作
条件を最適化することにより効率よくＰＣ、ＰＩ、Ｐ
Ｅ、ＰＳおよびびＳＰＭを分画することができるという
ことを見出し、この知見に基づいて成されたものであ
る。
決するためにその分離方法について鋭意研究したとこ
ろ、連続的に、クロマトグラフィーによる分離を行うこ
とのできる擬似移動床式クロマト分離装置（以下ＳＭＢ
という）を用いて、適当な溶媒を選択し、ＳＭＢの操作
条件を最適化することにより効率よくＰＣ、ＰＩ、Ｐ
Ｅ、ＰＳおよびびＳＰＭを分画することができるという
ことを見出し、この知見に基づいて成されたものであ
る。
【０００６】従来から行われていた、カラムクロマトグ
ラフィーに於いては、リン脂質を分画するためにクロロ
ホルム−メタノールなどの混合溶媒系を用い、その混合
比を段階的に変化させＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳおよびＳ
ＰＭを段階的に分取していた。また、この操作は回分的
に行われるため、１度の操作で大量に試料を処理しよう
とすれば、大口径のカラムを用い多大な労力でもって得
るより他に方法がなかった。しかし、ＳＭＢを用い最適
な溶媒系を選択することによって、連続的に、大量にリ
ン脂質をＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳおよびＳＰＭに分離す
ることに成功したものである。
ラフィーに於いては、リン脂質を分画するためにクロロ
ホルム−メタノールなどの混合溶媒系を用い、その混合
比を段階的に変化させＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳおよびＳ
ＰＭを段階的に分取していた。また、この操作は回分的
に行われるため、１度の操作で大量に試料を処理しよう
とすれば、大口径のカラムを用い多大な労力でもって得
るより他に方法がなかった。しかし、ＳＭＢを用い最適
な溶媒系を選択することによって、連続的に、大量にリ
ン脂質をＰＣ、ＰＩ、ＰＥ、ＰＳおよびＳＰＭに分離す
ることに成功したものである。
【０００７】擬似移動床式クロマト分離装置の原理およ
び装置は公知のものであり、しょ糖とオリゴ糖との分
離、マルトースとグルコースとの分離、アミノ酸の分離
等に用いられている。しかし、リン脂質のような特殊な
微量成分の分離に用いられた例はなかった。可動条件は
リン脂質の特性に応じて純度、処理量、処理速度、回収
液濃度等により適宜設定することができる。一般に原料
に対する溶離液の比を大にすることにより、それぞれの
純度、回収率は向上するが使用溶媒量など、コストの面
から考えると、その比は、４以下、好ましくは１〜２を
使用する。
び装置は公知のものであり、しょ糖とオリゴ糖との分
離、マルトースとグルコースとの分離、アミノ酸の分離
等に用いられている。しかし、リン脂質のような特殊な
微量成分の分離に用いられた例はなかった。可動条件は
リン脂質の特性に応じて純度、処理量、処理速度、回収
液濃度等により適宜設定することができる。一般に原料
に対する溶離液の比を大にすることにより、それぞれの
純度、回収率は向上するが使用溶媒量など、コストの面
から考えると、その比は、４以下、好ましくは１〜２を
使用する。
【０００８】しかし、一般的には、本発明におけるリン
脂質画分の出発物質としては、ホエー蛋白の有機溶媒抽
出液、ホエー蛋白をプロテアーゼで処理し、この処理液
を有機溶媒で抽出した溶液、あるいは市販のリン脂質、
例えば市販のレシチンの有機溶媒抽出液等が用いられ
る。有機溶媒として、リン脂質画分を抽出することので
きる溶媒ならば特に限定されないが、通常、クロロホル
ム・メタノール混液あるいはこれに水を加えた混液が用
いられる。これらの混液による抽出液をアセトンで沈澱
させ沈澱物をこれらの混液に再溶解させる操作をくり返
すことによって精製してＳＭＢ処理用液として使用す
る。また、この精製の過程でＤＥＡＥ−セファデックス
カラム等を用いて精製することもできる。
脂質画分の出発物質としては、ホエー蛋白の有機溶媒抽
出液、ホエー蛋白をプロテアーゼで処理し、この処理液
を有機溶媒で抽出した溶液、あるいは市販のリン脂質、
例えば市販のレシチンの有機溶媒抽出液等が用いられ
る。有機溶媒として、リン脂質画分を抽出することので
きる溶媒ならば特に限定されないが、通常、クロロホル
ム・メタノール混液あるいはこれに水を加えた混液が用
いられる。これらの混液による抽出液をアセトンで沈澱
させ沈澱物をこれらの混液に再溶解させる操作をくり返
すことによって精製してＳＭＢ処理用液として使用す
る。また、この精製の過程でＤＥＡＥ−セファデックス
カラム等を用いて精製することもできる。
【０００９】このようにして精製されたリン脂質画分を
ＳＭＢ処理するには、前記精製したリン脂質画分をエー
テルに溶解し、そのエーテル可溶分を有機溶媒に溶解し
ＳＭＢにかける。有機溶媒としてはヘキサン・エタノー
ル・水混液あるいはヘキサン・メタノール・水混液を用
い、ＳＭＢは充填剤としてシリカゲルを、また溶離液と
しては前記のような有機溶媒を用いることが分離効率及
び溶離される物質の純度の面からみて望ましい。このよ
うにするとラフィネートとしてＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混合
画分を、エキストラクトとしてＰＣ及びＳＰＭ混合画分
を得る。
ＳＭＢ処理するには、前記精製したリン脂質画分をエー
テルに溶解し、そのエーテル可溶分を有機溶媒に溶解し
ＳＭＢにかける。有機溶媒としてはヘキサン・エタノー
ル・水混液あるいはヘキサン・メタノール・水混液を用
い、ＳＭＢは充填剤としてシリカゲルを、また溶離液と
しては前記のような有機溶媒を用いることが分離効率及
び溶離される物質の純度の面からみて望ましい。このよ
うにするとラフィネートとしてＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混合
画分を、エキストラクトとしてＰＣ及びＳＰＭ混合画分
を得る。
【００１０】ＰＣ及びＳＰＭ混合画分からＰＣ画分及び
ＳＰＭ画分を分離するには、前記と同様のＳＭＢを用
い、その運転条件を変えることにより両者を効率よく分
離することができる。特に前記のＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混
合画分とＰＣ及びＳＰＭ混合画分との分離のときよりも
原料供給量、溶離液供給量、エキストラクト抜き出し
量、ラフィネート抜き出し量を低下させ、ステップ時間
を長くすることによって両者を効率よく高純度で分離す
ることができる。
ＳＰＭ画分を分離するには、前記と同様のＳＭＢを用
い、その運転条件を変えることにより両者を効率よく分
離することができる。特に前記のＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混
合画分とＰＣ及びＳＰＭ混合画分との分離のときよりも
原料供給量、溶離液供給量、エキストラクト抜き出し
量、ラフィネート抜き出し量を低下させ、ステップ時間
を長くすることによって両者を効率よく高純度で分離す
ることができる。
【００１１】一方ＰＩ、ＰＥ及びＰＳ混合画分の分離
は、この混合画分をジエチルエーテル・メタノール・水
混液に溶解し、この混液を溶離液とし、カラム温度を低
下させ、さらに前記したように原液供給量、溶離液供給
量、エキストラクト抜き出し量、ラフィネート抜き出し
量を、ＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混合画分とＰＣ及びＳＰＭ混
合画分の分離のときよりも低下させることによって効率
よく高純度で分離することができる。このようにすると
ラフィネートとしてＰＩ画分とＰＥ及びＰＳ混合画分と
を得ることができる。
は、この混合画分をジエチルエーテル・メタノール・水
混液に溶解し、この混液を溶離液とし、カラム温度を低
下させ、さらに前記したように原液供給量、溶離液供給
量、エキストラクト抜き出し量、ラフィネート抜き出し
量を、ＰＥ、ＰＳ及びＰＩ混合画分とＰＣ及びＳＰＭ混
合画分の分離のときよりも低下させることによって効率
よく高純度で分離することができる。このようにすると
ラフィネートとしてＰＩ画分とＰＥ及びＰＳ混合画分と
を得ることができる。
【００１２】さらに、ＰＥ画分とＰＳ画分との分離は、
このようにして得られたＰＥ及びＰＳ混合画分をターシ
ャリーブチルメチルエーテル、メタノール及び水混液に
溶液し、同液を溶離液としてＳＭＢ処理する。そして処
理液供給量、溶離液供給量、エキストラクト抜き出し
量、ラフィネート抜き出し量等を前記したＰＥ、ＰＳ及
びＰＩ混合画分とＰＣ及びＳＰＭ混合画分の分離のとき
よりも低くすることによってラフィネートに高純度のＰ
Ｅ画分を、エキストラクトに同様に高純度のＰＳ画分を
得ることができる。
このようにして得られたＰＥ及びＰＳ混合画分をターシ
ャリーブチルメチルエーテル、メタノール及び水混液に
溶液し、同液を溶離液としてＳＭＢ処理する。そして処
理液供給量、溶離液供給量、エキストラクト抜き出し
量、ラフィネート抜き出し量等を前記したＰＥ、ＰＳ及
びＰＩ混合画分とＰＣ及びＳＰＭ混合画分の分離のとき
よりも低くすることによってラフィネートに高純度のＰ
Ｅ画分を、エキストラクトに同様に高純度のＰＳ画分を
得ることができる。
【００１３】次に本発明の実施例を挙げさらに具体的に
説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものでは
ない。
説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものでは
ない。
【実施例１】１０％（Ｗ／Ｗ）ホエー蛋白溶液２．８リ
ットルをプロテアーゼで処理して蛋白分解溶液とし、こ
れを６０℃に加熱して４時間保持し酵素失活させ、１０
倍に濃縮し、クロロホルム：メタノール：水混液（４：
８：３）で抽出し、抽出液を濾過した。さらに濾液をＤ
ＥＡＥ−セファデラックスカラム（ＣＨ3 ＣＯＯ- 型）
に通液した後、０．５Ｎ ＣＨ3 ＣＯＯＮａ／メタノー
ル液を流下させ、未吸着画分を減圧濃縮して乾固物２
２．７ｇを得た。この乾固物をクロロホルム−メタノー
ル（２：１）１０００ｍｌに溶解し、２００００ｍｌの
アセトン中にゆっくりと滴下し数時間撹拌した後、この
抽出液を０〜５℃で一昼夜静置し、沈澱物を濾過してア
セトン不溶分１５．１ｇを得た。このアセトン不溶分を
クロロホルム−メタノール（２：１）１０００ｍｌに溶
解し、ジエチルエーテル５０００ｍｌ中に滴下し不溶分
を濾別しエーテル可溶分１４．４ｇを得た。このエーテ
ル可溶分を３ｍｇ／ｍｌ濃度でヘキサン：エタノール：
水混液（０．７：８：２）に溶解しＳＭＢ処理液とし
た。溶離液は、ヘキサン：エタノール：水混液（０．
７：８：２）を使用した。
ットルをプロテアーゼで処理して蛋白分解溶液とし、こ
れを６０℃に加熱して４時間保持し酵素失活させ、１０
倍に濃縮し、クロロホルム：メタノール：水混液（４：
８：３）で抽出し、抽出液を濾過した。さらに濾液をＤ
ＥＡＥ−セファデラックスカラム（ＣＨ3 ＣＯＯ- 型）
に通液した後、０．５Ｎ ＣＨ3 ＣＯＯＮａ／メタノー
ル液を流下させ、未吸着画分を減圧濃縮して乾固物２
２．７ｇを得た。この乾固物をクロロホルム−メタノー
ル（２：１）１０００ｍｌに溶解し、２００００ｍｌの
アセトン中にゆっくりと滴下し数時間撹拌した後、この
抽出液を０〜５℃で一昼夜静置し、沈澱物を濾過してア
セトン不溶分１５．１ｇを得た。このアセトン不溶分を
クロロホルム−メタノール（２：１）１０００ｍｌに溶
解し、ジエチルエーテル５０００ｍｌ中に滴下し不溶分
を濾別しエーテル可溶分１４．４ｇを得た。このエーテ
ル可溶分を３ｍｇ／ｍｌ濃度でヘキサン：エタノール：
水混液（０．７：８：２）に溶解しＳＭＢ処理液とし
た。溶離液は、ヘキサン：エタノール：水混液（０．
７：８：２）を使用した。
【００１４】ＳＭＢは、カラムの直径２５ｍｍ長さ４６
０ｍｍの６塔型で、各々シリカゲルＳＩＬ−１２０−Ｓ
５０（ＹＭＣ社製）を充填した。運転条件は、処理液供
給量６．７ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量１２．８ｍｌ／
ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１１．９ｍｌ／ｍｉ
ｎ、ラフィネート抜き出し量７．６ｍｌ／ｍｉｎ、カラ
ム温度４０℃、ステップ時間２９．８５分とした。その
結果、目的回収液として、ラフィネートＰＥ／ＰＳ／Ｐ
Ｉ混合画分溶液５８９５ｍｌ、エキストラクトＰＣ／Ｓ
ＰＭ混合画分溶液９２３０ｍｌをそれぞれ得た。このエ
キストラクトを濃縮乾固して／ＰＣ／ＳＰＭ混合画分
４．１ｇを得た。
０ｍｍの６塔型で、各々シリカゲルＳＩＬ−１２０−Ｓ
５０（ＹＭＣ社製）を充填した。運転条件は、処理液供
給量６．７ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量１２．８ｍｌ／
ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１１．９ｍｌ／ｍｉ
ｎ、ラフィネート抜き出し量７．６ｍｌ／ｍｉｎ、カラ
ム温度４０℃、ステップ時間２９．８５分とした。その
結果、目的回収液として、ラフィネートＰＥ／ＰＳ／Ｐ
Ｉ混合画分溶液５８９５ｍｌ、エキストラクトＰＣ／Ｓ
ＰＭ混合画分溶液９２３０ｍｌをそれぞれ得た。このエ
キストラクトを濃縮乾固して／ＰＣ／ＳＰＭ混合画分
４．１ｇを得た。
【００１５】
【実施例２】実施例１で得たＰＣ／ＳＰＭ混合画分を１
ｍｇ／ｍｌ濃度で、ヘキサン：エタノール：水混液
（０．７：８：２）に溶解しＳＭＢ処理液とした。溶離
後、ＳＭＢは、実施例１と同じものを使用した。運転条
件は、原料供給量０．８９ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量
１．８７ｍｌ／ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１．
３ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネート抜き出し量１．４６ｍｌ
／ｍｉｎ、カラム温度４０℃、ステップ時間４０分とし
た。その結果、目的回収液としてＳＰＭ画分溶液１２０
０ｍｌを得た。このエキストラクトを濃縮乾固して、純
度９５．２％のＳＰＭ０．６７ｇを得た。
ｍｇ／ｍｌ濃度で、ヘキサン：エタノール：水混液
（０．７：８：２）に溶解しＳＭＢ処理液とした。溶離
後、ＳＭＢは、実施例１と同じものを使用した。運転条
件は、原料供給量０．８９ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量
１．８７ｍｌ／ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１．
３ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネート抜き出し量１．４６ｍｌ
／ｍｉｎ、カラム温度４０℃、ステップ時間４０分とし
た。その結果、目的回収液としてＳＰＭ画分溶液１２０
０ｍｌを得た。このエキストラクトを濃縮乾固して、純
度９５．２％のＳＰＭ０．６７ｇを得た。
【００１６】
【実施例３】ホエー蛋白粉７５０ｇを２０％ＥｔＯＨ水
溶液３７５０ｍｌ中に溶解し一昼夜撹拌後、遠心分離に
より沈澱物と上清に分離し、さらに沈澱物を水３７５０
ｍｌを用いて同様に処理を行った。この沈澱物２００ｇ
を１０００ｍｌのアセトン中にて一昼夜振盪したのち、
濾過し高リン脂質含有粉１５８．２ｇを得た。これを７
０℃の熱エタノールを用い２０００ｍｌで１回、１００
０ｍｌで２回抽出した。分析の結果、リン脂質含量６
８．９％のリン脂質混合画分９．９２ｇが得られたこと
が解った。
溶液３７５０ｍｌ中に溶解し一昼夜撹拌後、遠心分離に
より沈澱物と上清に分離し、さらに沈澱物を水３７５０
ｍｌを用いて同様に処理を行った。この沈澱物２００ｇ
を１０００ｍｌのアセトン中にて一昼夜振盪したのち、
濾過し高リン脂質含有粉１５８．２ｇを得た。これを７
０℃の熱エタノールを用い２０００ｍｌで１回、１００
０ｍｌで２回抽出した。分析の結果、リン脂質含量６
８．９％のリン脂質混合画分９．９２ｇが得られたこと
が解った。
【００１７】該熱エタノール溶液２０００ｍｌにヘキサ
ン１７５ｍｌ、水５００ｍｌを加え、実施例１と同様の
溶離液とＳＭＢおよび運転条件で処理を行った。ラフィ
ネートにＰＩ／ＰＥ／ＰＳ混合画分、エキストラクトに
ＰＣ／ＳＰＭ混合画分を溶出した。この時、ＰＣ／ＳＰ
Ｍ混合画分は１．３０ｍｇ／ｍｌ濃度で、実施例２と同
じ溶離液とＳＭＢおよび運転条件で処理を行った。その
結果、目的回収液としてＳＰＭ画分溶液３４５０ｍｌを
得、さらに、この溶液を濃縮乾固して、純度９８．１％
のＳＰＭ１．４５ｇを得た。
ン１７５ｍｌ、水５００ｍｌを加え、実施例１と同様の
溶離液とＳＭＢおよび運転条件で処理を行った。ラフィ
ネートにＰＩ／ＰＥ／ＰＳ混合画分、エキストラクトに
ＰＣ／ＳＰＭ混合画分を溶出した。この時、ＰＣ／ＳＰ
Ｍ混合画分は１．３０ｍｇ／ｍｌ濃度で、実施例２と同
じ溶離液とＳＭＢおよび運転条件で処理を行った。その
結果、目的回収液としてＳＰＭ画分溶液３４５０ｍｌを
得、さらに、この溶液を濃縮乾固して、純度９８．１％
のＳＰＭ１．４５ｇを得た。
【００１８】
【実施例４】市販品のレシチン（リン脂質含量３０％、
大豆由来）１００ｇをクロロホルム：メタノール（２：
１）２５０ｍｌに溶解しアセトン５０００ｍｌ中に滴下
し上清を除いた後、遠心分離にて沈澱物を得た。この沈
澱物１０ｇをヘキサン：エタノール：水（０．７：８：
２）５０００ｍｌに溶解し、濾過後ＳＭＢに供給した。
溶離液とＳＭＢおよび運転条件を実施例１と同様に設定
し、運転した結果、ラフィネートにＰＩ／ＰＥ／ＰＳ混
合画分４．５１ｇがエキストラクトに純度９７．２％の
ＰＣ２．６６ｇを得た。
大豆由来）１００ｇをクロロホルム：メタノール（２：
１）２５０ｍｌに溶解しアセトン５０００ｍｌ中に滴下
し上清を除いた後、遠心分離にて沈澱物を得た。この沈
澱物１０ｇをヘキサン：エタノール：水（０．７：８：
２）５０００ｍｌに溶解し、濾過後ＳＭＢに供給した。
溶離液とＳＭＢおよび運転条件を実施例１と同様に設定
し、運転した結果、ラフィネートにＰＩ／ＰＥ／ＰＳ混
合画分４．５１ｇがエキストラクトに純度９７．２％の
ＰＣ２．６６ｇを得た。
【００１９】
【実施例５】実施例４で得られたＰＩ／ＰＥ／ＰＳ混合
画分２．０ｇをジエチルエーテル：メタノール：水
（５：８：２）に溶解しＳＭＢに供給した。溶離液は、
ジエチルエーテル：メタノール：水（５：８：２）とし
た。ＳＭＢは、実施例１と同じものを使用し、運転条件
は、処理液供給量０．８０ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量
１．９７ｍｌ／ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１．
７３ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネート抜き出し量０．８８ｍ
ｌ／ｍｉｎ、カラム温度２５℃、ステップ時間１５．１
１分とした。その結果、ラフィネートに純度９５．１％
のＰＩ０．７９ｇとＰＥ／ＰＳ混合画分１．２０ｇを得
た。
画分２．０ｇをジエチルエーテル：メタノール：水
（５：８：２）に溶解しＳＭＢに供給した。溶離液は、
ジエチルエーテル：メタノール：水（５：８：２）とし
た。ＳＭＢは、実施例１と同じものを使用し、運転条件
は、処理液供給量０．８０ｍｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量
１．９７ｍｌ／ｍｉｎ、エキストラクト抜き出し量１．
７３ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネート抜き出し量０．８８ｍ
ｌ／ｍｉｎ、カラム温度２５℃、ステップ時間１５．１
１分とした。その結果、ラフィネートに純度９５．１％
のＰＩ０．７９ｇとＰＥ／ＰＳ混合画分１．２０ｇを得
た。
【００２０】
【実施例６】実施例５で得られたＰＥ／ＰＳ混合画分
１．０ｇをターシャリーブチルメチルエーテル：メタノ
ール：水（６：８：１）に溶解しＳＭＢに供給した。溶
離液は、ターシャリーブチルメチルエーテル：メタノー
ル：水（６：８：１）とした。ＳＭＢは、実施例１と同
じものを使用し、運転条件は、処理液供給量０．４６ｍ
ｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量１．４４ｍｌ／ｍｉｎ、エキ
ストラクト抜き出し量０．９５ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネ
ート抜き出し量０．９５ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度２５
℃、ステップ時間１６．１１分とした。その結果、ラフ
ィネートに純度９８．１％のＰＥ０．８６ｇとエキスト
ラクトに純度９７．５％のＰＳ０．１６ｇを得た。
１．０ｇをターシャリーブチルメチルエーテル：メタノ
ール：水（６：８：１）に溶解しＳＭＢに供給した。溶
離液は、ターシャリーブチルメチルエーテル：メタノー
ル：水（６：８：１）とした。ＳＭＢは、実施例１と同
じものを使用し、運転条件は、処理液供給量０．４６ｍ
ｌ／ｍｉｎ、溶離液供給量１．４４ｍｌ／ｍｉｎ、エキ
ストラクト抜き出し量０．９５ｍｌ／ｍｉｎ、ラフィネ
ート抜き出し量０．９５ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温度２５
℃、ステップ時間１６．１１分とした。その結果、ラフ
ィネートに純度９８．１％のＰＥ０．８６ｇとエキスト
ラクトに純度９７．５％のＰＳ０．１６ｇを得た。
【００２１】
【発明の効果】本発明は大量リン脂質画分をＳＭＢを使
用し、溶媒、運転条件等を変更する簡単な操作を行なう
ことによって各画分に高純度及び高収率で連続的に分画
することができ、工業的有利なリン脂質の分画法であ
る。
用し、溶媒、運転条件等を変更する簡単な操作を行なう
ことによって各画分に高純度及び高収率で連続的に分画
することができ、工業的有利なリン脂質の分画法であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川成 真美 埼玉県川越市吉田新町２−12−16 (56)参考文献 特開 平３−47192（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−33389（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−227399（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−141288（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−19210（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07F 9/10
Claims (5)
- 【請求項１】 リン脂質画分を有機溶媒で溶解した後、
擬似移動床方式クロマト分離装置に供給し、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィ
ンゴミエリンの各画分に分画精製することを特徴とする
リン脂質画分の分画精製方法。 - 【請求項２】 ホスファチジルイノシトール、ホスファ
チジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンの混合
画分とホスファチジルコリン、スフィンゴミエリンの混
合画分とに分画した後、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホ
スファチジルイノシトール、スフィンゴミエリンの各画
分に分画精製する請求項１に記載のリン脂質画分の分画
精製方法。 - 【請求項３】 ホスファチジルイノシトール、ホスファ
チジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンの混合
画分をホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジ
ルセリンの混合画分とホスファチジルイノシトール画分
とに分画し、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリ
ンの混合画分をホスファチジルコリン画分とスフィンゴ
ミエリン画分とに分画精製する請求項２に記載のリン脂
質画分の分画精製方法。 - 【請求項４】 ホスファチジルエタノールアミン、ホス
ファチジルセリンの混合画分をホスファチジルエタノー
ルアミン画分とホスファチジルセリン画分に分画精製す
る請求項３に記載のリン脂質画分の分画精製方法。 - 【請求項５】 有機溶媒が、飽和炭化水素、アルコール
及び水の混合液、あるいは、飽和炭化水素、エーテル、
アルコール及び水の混合液である請求項１〜４のいずれ
かに記載のリン脂質画分の分画精製方法。
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|---|---|---|---|
| JP3319722A JP3032357B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | リン脂質画分の分画精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3319722A JP3032357B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | リン脂質画分の分画精製方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05132490A JPH05132490A (ja) | 1993-05-28 |
| JP3032357B2 true JP3032357B2 (ja) | 2000-04-17 |
Family
ID=18113445
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3319722A Expired - Lifetime JP3032357B2 (ja) | 1991-11-08 | 1991-11-08 | リン脂質画分の分画精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| JP (1) | JP3032357B2 (ja) |
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| EP2168438A1 (en) | 2008-09-05 | 2010-03-31 | Meggle Japan Co., Ltd. | Composition richly containing polar lipid and method of manufacturing the same |
| EP2163160A1 (en) | 2008-09-05 | 2010-03-17 | Meggle Japan Co., Ltd. | Composition richly containing polar lipid and method of manufacturing the same |
| CN102924506A (zh) * | 2012-11-20 | 2013-02-13 | 江南大学 | 一种高纯度卵磷脂的制备方法 |
| CN110590833B (zh) * | 2019-08-23 | 2022-06-21 | 翁源广业清怡食品科技有限公司 | 一种磷脂酰肌醇的制备方法 |
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| CN115010748B (zh) * | 2022-05-27 | 2023-10-20 | 扬州大学 | 硅胶柱层析同时分离纯化磷脂酰胆碱和鞘磷脂的方法 |
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-
1991
- 1991-11-08 JP JP3319722A patent/JP3032357B2/ja not_active Expired - Lifetime
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|---|---|
| JPH05132490A (ja) | 1993-05-28 |
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