CN102924506A

CN102924506A - 一种高纯度卵磷脂的制备方法

Info

Publication number: CN102924506A
Application number: CN201210468185XA
Authority: CN
Inventors: 汤鲁宏; 赵绘绘; 曹雅晴; 滕霏
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2012-11-20
Filing date: 2012-11-20
Publication date: 2013-02-13

Abstract

本发明属天然产物的分离提取技术领域。具体涉及一种高纯度卵磷脂的制备方法。本工艺适用于药用级高纯度卵磷脂的制备。它提供了一种高效、廉价的药用辅料注射用高纯度卵磷脂的大规模制备生产工艺，采用模拟移动床连续色谱分离技术确保卵磷脂与原料脂质中所含其他成分的有效分离，得到高纯度的卵磷脂产品，并可实现副产物的回收和溶剂的循环回用，避免原辅材料的不合理消耗和浪费，彻底杜绝废水和废渣的产生，使产品的收率以及产品纯度均达到98％以上的水平，确保卵磷脂产品的品质满足药用辅料的技术要求，使生产成本大幅度降低，实现卵磷脂生产的清洁化、无污染化，具有广阔的应用前景。

Description

一种高纯度卵磷脂的制备方法

技术领域

本发明属于天然产物的分离提取技术领域，具体讲是属于一种高纯度卵磷脂的制备方法。

背景技术

卵磷脂，又称磷脂酰胆碱，是含磷的极性脂质之一，由法国人Gobley于1846～1847年从蛋黄和脑中首先发现，由Levenzai于1925年从其他磷脂中分离出来。

研究表明，卵磷脂具有乳化、增溶、润湿、抗氧化、发泡、晶化控制、与蛋白结合以及防止淀粉老化等多种理化功能。此外，卵磷脂也是生物膜的构成成分，是神经递质—乙酰胆碱的主要来源，可以修复线粒体，参与机体代谢。同时，卵磷脂还可促使胆固醇和蛋白质分子之间的结合，减轻血管壁类脂质的浸润，抑制动脉粥样硬化的产生和改善动脉壁的组织结。纯度高达98％以上的高纯度卵磷脂更是载药脂质体/脂微球的首选乳化剂，是制药行业不可或缺的药用辅料。

由于卵磷脂的用途广泛，有关卵磷脂的提取与纯化技术也已经有大量研究。

1980年Jorn^[1]采用色谱法生产出以鲜鸡蛋为原料的高纯度卵磷脂产品，其纯度可达化学纯标准。其采用体积分数为96％的乙醇提取，同时并使用了氯化镉和乙醚。而纯化过程以Al2O3为柱材料，二氯甲烷和甲醇为洗脱剂。

1999年Sim^[2]研究了乙醇溶剂法生产卵黄卵磷脂工艺，并采用低温冷藏工序来去除中性脂肪，可提出至少86％的磷脂。此法将溶剂提取法和超临界萃取相结合，提取蛋黄卵磷脂。提过过程只采用了一种单一溶剂乙醇，方法简便。但与超临界萃取相结合，过程繁复。

2003年西北大学的赵彬侠等人^[3]用柱层析法分离纯化蛋黄卵磷脂，其采用蛋黄磷脂为原料在硅胶柱上进行分离，并以氯仿甲醇混合液梯度洗脱。

2009年江南大学食品学院的杨严俊博士申请了题为《高纯度蛋黄卵磷脂及其生产方法与它们的用途》的专利^[4]，主要采用了乙醇萃取，而后用环糊精脱除胆固醇与低温冷藏分离蛋黄油的技术，得到了含量达到90～98％的蛋黄总磷脂，并含有1.5％左右的叶黄素。

[1]Jom R.Nielsen.A Lipids，1980，15(6)：480～484

[2]Sim J S.New extraction and fraction method for lecithin and natural oil from egg yolk.Nakai：CABInternational，2001.129～138

[3]赵彬侠等，用柱层析法分离纯化蛋黄卵磷脂，西北大学学报(自然科学版)2003，Vol.33P171～173

[4]杨严俊等，ZL200910136630.0

上述已公开的提取方法，由于产品纯度达不到药用级卵磷脂的要求，或受限于设备的操作规模或有毒有害溶剂的使用等问题，均不宜作为药用辅料注射用高纯度卵磷脂的大规模生产工艺进行推广和使用。

发明内容

本专利涉及一种环境友好的，以模拟移动床连续色谱分离的方式进行的，相对廉价的，高效率的，注射用高纯度卵磷脂的清洁生产工艺。更为独特的是，它涉及一种经过改进的工艺，这种工艺以乙醇水溶液为卵磷脂的提取溶剂与模拟移动床连续色谱分离系统的洗脱剂，通过模拟移动床连续色谱分离，确保卵磷脂与原料脂质中其他组分的彻底分离，得到纯度达到药典要求(PC≥98％)的注射用高纯度卵磷脂产品，同步实现其他组分作为副产物的回收以及溶剂的循环回用。按照本专利进行操作，与此前的传统方法相比，能够以经济可行的方法连续分离纯化，使产品的收率以及产品纯度均提高到98％以上的水平，确保卵磷脂产品的品质满足药用辅料的技术要求，使生产成本大幅度降低，彻底杜绝废水和废渣的产生，实现卵磷脂生产的清洁化、无污染化。以上这些改进对于注射用高纯度卵磷脂的生产而言是至关重要的。

本发明的最重要的目的之一，就是要解决卵磷脂与原料脂质中其他组分，尤其是溶血磷脂，的连续、彻底分离问题，以确保产品的使用安全。作为一个顺带的结果，本发明的另一个目的，是要实现溶剂的无毒无害化，实现卵磷脂的环境友好化生产。

具体来说，首先，我们发现，以乙醇水溶液为洗脱剂，采用模拟移动床色谱分离系统，可以有效地将待分离混合物中的卵磷脂跟脑磷脂、溶血磷脂、色素、胆固醇等其他成分彻底分离，得到不含任何其他磷脂组分的纯度极高的卵磷脂。由此奠定了以乙醇为洗脱剂的卵磷脂分离纯化工艺的基础。

其次，我们发现，以乙醇为溶剂，可有效抑制磷脂酶对卵磷脂的活性，从而可大大减少溶血磷脂的生成压力，并且所用乙醇溶剂可以不经任何处理，直接循环回用。由此奠定了模拟移动床连续色谱法卵磷脂清洁生产工艺的基础。

我们发现，适用的原料可以是鸡蛋黄、鸭蛋黄、鹅蛋黄等各种禽类卵黄来源的脂质或以其为原料加工而成的磷脂粗品，也可以是大豆、棉籽、花生、菜籽等各种植物来源的含有磷脂的脂质或以其为原料加工而成的磷脂粗品。乙醇水溶液的适宜浓度为70％～100％(v/v)。静置分层应当在0-40℃，常压下进行。分离可以以过滤的方式进行，也可以以离心沉降的方式进行。过滤可以用板框过滤机、叶滤机、滤过式离心机或转鼓式真空过滤机中的任何一种过滤机械进行。离心沉降可以用高速管式离心机、碟片式离心机或沉降式过滤机中的任何一种离心沉降机械进行。溶剂回收处理可在10～180℃，最好是30～150℃，0.0001～1.0MPa，的条件下进行。模拟移动床色谱分离系统所使用的洗脱剂可以是二氯甲烷、三氯甲烷、异丙醚、乙醚、丙酮、甲基叔丁基醚、甲醇、乙醇、水、甲苯以及由它们中的两种或两种以上按任意比例所组成的混合溶剂。所使用的吸附剂可以是活性炭、硅胶、变性硅胶、活性氧化铝、聚丙烯酰胺、离子交换树脂或其他任何能够与特定洗脱剂配合将上层中的磷脂酰胆碱与其余组分加以分离的吸附材料。模拟移动床色谱分离在温度为0～100℃，最好是10～60℃，压力为0.1～3.5MPa的条件下进行。

本发明中所提及的所有重要参数全部最优化后磷脂的收率和溶剂的回收率均可提高至98％以上。产品的纯度可提高至98％(色谱纯度)以上。

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。

实例一

将新鲜蛋黄液46.5g加入155ml无水乙醇中，边加边搅拌，然后抽滤，得到滤液和滤饼。将滤饼放入索氏抽提装置内用无水乙醇进行抽提，80℃下抽提12h。将抽提液旋蒸除去溶剂后与滤液合并，得到含卵磷脂的脂质与乙醇的混合物。混合物置4℃下静置分层过夜，然后在4℃下3000rpm离心30min，收集上清液。上清液置以硅胶为吸附剂，以无水乙醇和70％(v/v)乙醇水溶液为梯度洗脱剂构成的模拟移动床色谱分离系统中分离，洗脱梯度为无水乙醇：70％(v/v)乙醇＝10：1～1：9，得到含卵磷脂的组分和含有脑磷脂等其余成分的组分。含卵磷脂的组分置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，然后冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂。

卵磷脂经磷含量和氮含量测定和高效液相检验，产品纯度达到了98％(光谱纯)。离心残渣与含有脑磷脂等其余成分的组分合并，置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，得到副产物蛋黄油。溶剂经回收循环使用。

实例二

将新鲜蛋黄液喷雾干燥，得到蛋黄粉。将30g蛋黄粉放入索氏抽提装置内用96％(v/v)乙醇进行抽提，80℃下抽提12h，得到含卵磷脂的脂质与乙醇的混合物。混合物置0℃下静置分层过夜，然后在10℃下过滤，收集滤液。将滤液置以聚丙烯酰胺为吸附剂，以96％乙醇溶剂为洗脱剂构成的模拟移动床色谱分离系统中分离，得到含卵磷脂的组分和含有脑磷脂等其余成分的组分。含卵磷脂的组分置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，然后冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂。

卵磷脂经磷含量和氮含量测定和高效液相检验，产品纯度达到了98％(光谱纯)。滤饼与含有脑磷脂等其余成分的组分合并，置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，得到副产物蛋黄油。溶剂经回收循环使用。

实例三

将市售大豆磷脂10g加入5000ml浓度为70％(v/v)的乙醇中，边加边搅拌，然后抽滤，得到含卵磷脂的脂质与乙醇的混合物。混合物置0℃下静置分层过夜，然后在4℃下8000rpm离心10min，收集上清液。将上清液置以活性氧化铝为吸附剂，以70％(v/v)乙醇为洗脱剂构成的模拟移动床色谱分离系统中分离，得到含卵磷脂的组分和含有脑磷脂等其余成分的组分。含卵磷脂的组分置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，然后冷冻干燥，得到高纯度卵磷脂。

卵磷脂经磷含量和氮含量测定和高效液相检验，产品纯度达到了98％(光谱纯)。离心残渣与含有脑磷脂等其余成分的组分合并，置旋转蒸发仪上回收脱除洗脱剂，得到副产物大豆磷脂。溶剂经回收循环使用。

Claims

1.一种高纯度卵磷脂的制备方法。该工艺由下列步骤组成：

1)制备一个含卵磷脂的混合物。该混合物由(i)含卵磷脂的脂质，和(ii)乙醇按照1：0.1～500(v/v)的配比组成；

2)让混合物静置分层，然后分离，得到上层(以卵磷脂的乙醇溶液为主，同时含有其他极性成分)和下层(以中性脂质为主)；

3)下层经溶剂回收处理，得到中性脂质，作为产品销售。回收得到的溶剂循环使用；

4)上层用模拟移动床进行色谱分离，得到洗脱液(仅含磷脂酰胆碱)和洗余液(含有上层中除磷脂酰胆碱外的其余所有成分)。洗余液经溶剂回收处理脱除洗脱剂后得到含有胆固醇、色素和脑磷脂的副产物，作为产品销售。洗脱剂回收，循环使用；

5)洗脱液经溶剂回收处理脱除洗脱剂后，得到磷脂酰胆碱含量达到98％以上的高纯度卵磷脂。洗脱剂回收，循环使用。

2.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的含卵磷脂的脂质，可以是鸡蛋黄、鸭蛋黄、鹅蛋黄等各种禽类卵黄来源的脂质或以其为原料加工而成的磷脂粗品，也可以是大豆、棉籽、花生、菜籽等各种植物来源的含有磷脂的脂质或以其为原料加工而成的磷脂粗品。

3.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的乙醇为浓度为70％～100％(v/v)的乙醇水溶液。

4.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的静置分层在0-40℃，常压下进行。

5.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的分离可以以过滤的方式进行，也可以以离心沉降的方式进行。过滤可以用板框过滤机、叶滤机、滤过式离心机或转鼓式真空过滤机中的任何一种过滤机械进行。离心沉降可以用高速管式离心机、碟片式离心机或沉降式过滤机中的任何一种离心沉降机械进行。

6.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的溶剂回收处理系指加热使溶剂蒸发，然后冷凝回收的过程，在10～180℃，最好是30～150℃，0.0001～1.0MPa，的条件下进行。

7.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的模拟移动床色谱分离系统所使用的洗脱剂可以是二氯甲烷、三氯甲烷、异丙醚、乙醚、丙酮、甲基叔丁基醚、甲醇、乙醇、水、甲苯以及由它们中的两种或两种以上按任意比例所组成的混合溶剂。

8.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于所述的模拟移动床色谱分离系统所使用的吸附剂可以是活性炭、硅胶、变性硅胶、活性氧化铝、聚丙烯酰胺、离子交换树脂或其他任何能够与特定洗脱剂配合将上层中的磷脂酰胆碱与其余组分加以分离的吸附材料。

9.如权利要求1所述的高纯度卵磷脂的制备方法，其特征在于模拟移动床色谱分离在温度为0～100℃，最好是10～60℃，压力为0.1～3.5MPa的条件下进行。