CN104961765A - 一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法。其步骤包括：以大豆粉末磷脂或脱油蛋黄粉为原料，经提取、氧化铝处理，得到吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝，再向吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝中加入由有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂进行解吸附获得含有磷脂酰乙醇胺溶液，经浓缩、干燥得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂。本发明所得磷脂产品中磷脂酰乙醇胺的含量不低于50%。

Description

一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，属于制药工程技术领域。

技术背景

磷脂酰乙醇胺（简称PE）又称乙醇胺磷酸甘油酯、脑磷脂，是一种良好的营养补充剂、乳化剂、抗氧化剂，临床上可用做止血药和肝功能检查的试剂。近期研究显示，口服磷脂酰乙醇胺能直接为人脑利用，令神经细胞膜修复，恢复神经元的正常代谢。磷脂酰乙醇胺还是一种天然乳化剂，在食品业和化妆品业中应用广泛，不同磷脂酰乙醇胺含量的磷脂，其乳化性能也不同，另外也是其他重要的脂质体辅料如合成磷脂（DOPE、DEPE等）的关键起始原料。因此磷脂酰乙醇胺在医药领域等方面拥有巨大的潜力。

磷脂酰乙醇胺在鸡蛋及大豆中的含量较低，其中来源于鸡蛋的脱油蛋黄粉中磷脂酰乙醇胺含量约为4~10%，来源于大豆的粉末磷脂中的磷脂酰乙醇胺含量约为8~20%。目前富集磷脂酰乙醇胺的方法有超临界CO₂萃取法、溶剂萃取法、吸附法、柱层析法等。超临界CO₂萃取法适合于混合磷脂的脱油，对磷脂的富集纯化无选择性。磷脂酰乙醇胺与其他磷脂的分子量较接近，膜分离法要得到单一磷脂酰乙醇胺仍存在困难。溶剂提取法是通过磷脂酰乙醇胺在两相溶剂中的溶解度的差异达到富集纯化的目的，对理化性质非常相似的各类磷脂杂质的选择性较差。

硅胶柱层析法是另一种较常用的分离纯化方法，该方法虽然能分离得到磷脂酰乙醇胺，但是其载样量有限，对分离前磷脂酰乙醇胺含量有较高要求，起始原料含量不高分离效率低下，不利用工业化生产。

吸附法是一种较常用的纯化方法，通过选择不同理化特性的吸附剂对待吸附原料液进行搅拌吸附，达到纯化的效果，常见的吸附剂有:三氧化二铝等，因为氧化铝对磷脂酰乙醇胺吸附力强，该方法对磷脂酰乙醇胺有很好的富集效果，但因存在死吸附，如何将磷脂酰乙醇胺从氧化铝中解吸附一直是行业内的技术难题。

从氧化铝中解吸附得到磷脂酰乙醇胺的专利及文献较少，其中有一篇日本专利JP 10265485A公开了以混合磷脂为原料，以含有氨的乙醇作萃取剂，得到磷脂酰乙醇胺含量为64.5%的磷脂，该方法选择溶剂为乙醇、氨水，解吸附过程中，磷脂酰乙醇胺容易发生水解使得产品不稳定。同时，柳叶发表的《氧化铝柱层析分离纯化磷脂的工艺优化》（浙江大学硕士论文2006）也报道了类似以三氯甲烷-甲醇-氨水与三氯甲烷-甲醇-三乙胺进行洗脱氧化铝中磷脂酰乙醇胺的方法，研究结果显示在洗脱溶剂中添加胺类有利于磷脂酰乙醇胺在氧化铝中的洗脱，但是其研究也表明磷脂酰乙醇胺在三氯甲烷-甲醇-氨水或三氯甲烷-甲醇-三乙胺体系下分解导致PE含量明显下降，不利于工业化生产。

中国专利授权号CN100336818C公开了以已钝化的氧化铝为填充剂，甲醇为洗脱剂进行色谱分离得到70%以上的磷脂酰乙醇胺，该方法虽然会有利于解吸附获得产品，但由于氧化铝经过钝化，对磷脂酰乙醇胺的吸附能力较弱，同时钝化的氧化铝对磷脂酰乙醇胺与磷脂酰胆碱的区分能力差，采用该方法不利用大规模富集纯化磷脂酰乙醇胺。

上述几篇专利及文献报道显示现有的技术对大规模富集纯化磷脂酰乙醇胺的效果不理想，难以保证产品的收率及质量，不利用工业化生产。

因此，开发一种通过氧化铝吸附富集并解吸附得到PE的方法，有效解决产业化生产过程中PE在氧化铝中死吸附以及降解等问题将具有重要的意义。不仅可以获得高附加值的磷脂酰乙醇胺，还能将氧化铝废渣中的PE回收利用，有利于降低企业生产成本，并推动磷脂酰乙醇胺在医药行业的发展和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，包括如下的步骤：以大豆粉末磷脂或脱油蛋黄粉为原料，经提取、氧化铝处理，得到吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝，再向吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝中加入由有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂进行解吸附获得含有磷脂酰乙醇胺溶液，经浓缩、干燥得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂。

在上述制备方法中，有机溶剂包括石油醚、正己烷、三氯甲烷、二氯甲烷。

有机碱包括三乙胺、二乙胺、乙二胺。

有机溶剂-有机碱比例为1:1~100:1（v/v）。

解吸附温度在10℃~80℃之间。

有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂总体积（v）与吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝重量（w）比例为2:1~40:1（L/Kg）。

解吸附的手段包括搅拌提取解吸附、超声提取解吸附以及直接冲洗吸附柱解吸附。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

（1）本发明使用有机溶剂-有机胺体系，解决了磷脂酰乙醇胺在氧化铝上解吸附问题，极大地提高了PE的转移率，获得以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂，且该方法操作简单，有利于产品的工业化生产。

（2）本发明使用有机溶剂进行解吸附，避免了磷脂酰乙醇胺在有机碱-醇或水并存的溶剂体系中时发生降解的问题。

（3）本发明将氧化铝废渣中的PE回收利用，有效避免资源浪费，减少废渣的环境污染，降低企业生产成本。

具体实施方式

实施例1：

取脱油蛋黄粉1kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经2kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于超声波提取器中，加入4L三氯甲烷-三乙胺（2:1）混合溶剂室温提取0.5小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为73.4%，氧化铝中PE转移率为66.7%）。

实施例2：

取大豆粉末磷脂1kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经2kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于超声波提取器中，加入石油醚-三乙胺（1:1）混合溶剂室温提取2次，每次4L， 每次0.5小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为62.1%，氧化铝中PE转移率为70.3%）。

实施例3：

取大豆粉末磷脂2kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经4kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于超声波提取器中，加入正己烷-三乙胺（4:1）混合溶剂室温提取3次，每次16L， 每次3小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为62.9%，氧化铝中PE转移率为82.7%）。

实施例4：

取脱油蛋黄粉2kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经4kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于提取罐中，加入二氯甲烷-二乙胺（8:1），80℃下回流搅拌提取2次，每次20L，每次1小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为67.3%，氧化铝中PE转移率为80.4%）。

实施例5：

取脱油蛋黄粉50kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经100kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于提取罐中，加入二氯甲烷-三乙胺（15:1），10℃下回流搅拌提取3次，每次400L，每次1小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为64.0%，氧化铝中PE转移率为82.9%）。

实施例6：

取大豆粉末磷脂10kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经20kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于提取罐中，加入三氯甲烷-乙二胺（5:1），45℃下回流搅拌提取2次，每次100L，每次4小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为68.7%，氧化铝中PE转移率为89.3%）。

实施例7：

取大豆粉末磷脂50kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经100kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于提取罐中，加入三氯甲烷-二乙胺（10:1），60℃下回流搅拌提取2次，每次500L，每次1小时，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为64.7%，氧化铝中PE转移率为80.9%）。

实施例8：

取脱油蛋黄粉1kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经2kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于层析柱中，加入80L二氯甲烷-二乙胺（20:1）洗脱，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为83.6%，氧化铝中PE转移率为85.1%）。

实施例9：

取脱油蛋黄粉1kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经2kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于层析柱中，加入80L石油醚-二乙胺（40:1）洗脱，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为63.4%，氧化铝中PE转移率为84.1%）。

实施例10：

取脱油蛋黄粉50kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经100kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于层析柱中，加入2000L石油醚-乙二胺（80:1）洗脱，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为74.6%，氧化铝中PE转移率为91.5%）。

实施例11：

取大豆粉末磷脂20kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经40kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于层析柱中，加入1200L二氯甲烷-乙二胺（60:1）洗脱，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为89.6%，氧化铝中PE转移率为80.5%）。

实施例12：

取大豆粉末磷脂50kg，通过乙醇提取，过滤后提取液经100kg氧化铝吸附，待吸附完全后，将氧化铝洗涤、过滤至干。洗涤后的氧化铝置于层析柱中，加入1800L正己烷-三乙胺（100:1）洗脱，过滤，滤液浓缩、干燥，得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂（含量为67.9%，氧化铝中PE转移率为90.5%）。

      在50℃下，不同溶剂体系中磷脂酰乙醇胺稳定性数据如下表1：

                         表1

溶剂体系	加入溶剂前原料PE含量	加入溶剂后3小时PE含量	加入溶剂后6小时PE含量	加入溶剂后24小时PE含量
					本发明实施例1（三氯甲烷-三乙胺）	73.4%	73.4%	73.3%	73.3%
本发明实施例3（正己烷-三乙胺）	62.9%	62.9%	62.8%	62.9%
					甲醇-水-氨水	63.4%	57.6%	52.7%	34.7%
甲醇-水-三乙胺	63.4%	59.0%	55.6%	36.3%
					乙醇-水-氨水	63.4%	59.1%	53.3%	36.5%
乙醇-水-三乙胺	63.4%	58.0%	53.8%	38.2%
					三氯甲烷-甲醇-氨水	63.4%	60.4%	56.0%	40.9%
三氯甲烷-甲醇-三乙胺	63.4%	61.8%	57.5%	42.7%

稳定性对比结果显示，含有水或醇的碱性溶剂体系下磷脂酰乙醇胺容易发生水解或醇解导致产品不稳定，而磷脂酰乙醇胺在本发明选用的有机溶剂-有机胺体系中稳定。

Claims (7)

1.一种以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征在于包括如下的步骤：以大豆粉末磷脂或脱油蛋黄粉为原料，经提取、氧化铝处理，得到吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝，再向吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝中加入由有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂进行解吸附获得含有磷脂酰乙醇胺溶液，经浓缩、干燥得到以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂。

2.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是：所述有机溶剂包括石油醚、正己烷、三氯甲烷或二氯甲烷。

3.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是：所述有机碱包括三乙胺、二乙胺或乙二胺。

4.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是：有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂中有机溶剂-有机碱的体积比例为1:1~100:1。

5.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是：解吸附温度在10℃~80℃之间。

6.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是，有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂总体积与吸附有磷脂酰乙醇胺的氧化铝重量比例为2:1~40:1 L/Kg。

7.根据权利要求1所述以磷脂酰乙醇胺为主成分的磷脂的制备方法，其特征是：加入由有机溶剂-有机碱组成的混合溶剂解吸附磷脂酰乙醇胺的手段包括搅拌提取解吸附、超声提取解吸附以及直接冲洗吸附柱解吸附。