JP2900238B2 - 天然メナキノン−７高含量脂質 - Google Patents
天然メナキノン−７高含量脂質Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は納豆菌に代表される
枯草菌で発酵せしめた食品素材を原料として得られる天
然メナキノン−７高含量の脂質およびその製造方法、並
びに該脂質を主成分とする骨粗鬆症の予防または／かつ
治療用組成物に関するものである。
枯草菌で発酵せしめた食品素材を原料として得られる天
然メナキノン−７高含量の脂質およびその製造方法、並
びに該脂質を主成分とする骨粗鬆症の予防または／かつ
治療用組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ビタミンＫは古くから血液凝固に関与す
るビタミンとして知られ、ビタミンＫ欠乏性出血症の治
療に医薬品として合成ビタミンＫ1 およびＫ2 が用いら
れ、予防に食品として天然ビタミンＫ1 濃縮物が利用さ
れている。骨粗鬆症は、老化、疾病などの原因によって
起こる、骨がもろくなる病態で、骨折したり、激しい痛
みなどを伴い、老人医療の面から大きな社会問題となり
つつある。骨粗鬆症の治療、予防には、主にカルシウ
ム、ビタミンＤ類が医薬品あるいは食品として利用され
ているが、最近になって骨粗鬆症の治療、予防にビタミ
ンＫが単独、あるいは既知の有効物質との併用で有効で
あることが見いだされた。出血症の治療、予防に必要な
ビタミンＫは極めて微量（一日当たりμｇオーダー）で
あるが、骨粗鬆症の治療、予防には一日当たり数〜数十
mgのビタミンＫを必要とする。
るビタミンとして知られ、ビタミンＫ欠乏性出血症の治
療に医薬品として合成ビタミンＫ1 およびＫ2 が用いら
れ、予防に食品として天然ビタミンＫ1 濃縮物が利用さ
れている。骨粗鬆症は、老化、疾病などの原因によって
起こる、骨がもろくなる病態で、骨折したり、激しい痛
みなどを伴い、老人医療の面から大きな社会問題となり
つつある。骨粗鬆症の治療、予防には、主にカルシウ
ム、ビタミンＤ類が医薬品あるいは食品として利用され
ているが、最近になって骨粗鬆症の治療、予防にビタミ
ンＫが単独、あるいは既知の有効物質との併用で有効で
あることが見いだされた。出血症の治療、予防に必要な
ビタミンＫは極めて微量（一日当たりμｇオーダー）で
あるが、骨粗鬆症の治療、予防には一日当たり数〜数十
mgのビタミンＫを必要とする。
【０００３】ビタミンＫ類の中で、自然界に存在するの
はビタミンＫ1 およびＫ2 群のみである。Ｋ1 は主に植
物によって合成される。Ｋ2 群の中には側鎖長の違いに
よりメナキノン（ＭＫ）−１〜１４までが知られてお
り、ＭＫ−４は主に動物体内の腸内細菌によって合成さ
れ、ＭＫ−７は主に納豆菌によって合成される。食品中
では、Ｋ1 は特に緑色野菜、植物油、海藻等に多く含ま
れており、Ｋ2 の代表的な物質であるＭＫ−７は納豆に
多く含まれている。主な食品あるいは食品素材中のビタ
ミンＫ含量は、海藻・海苔・茶葉などにビタミンＫ1 が
数十ppm 、大豆油・ほうれん草・ブロッコリなどにビタ
ミンＫ1 が数ppm 、納豆中にＭＫ−７が数〜十数ppm で
ある。大豆油や納豆の原料である大豆中には１ppm 以下
のビタミンＫ1 しか含有されていない。
はビタミンＫ1 およびＫ2 群のみである。Ｋ1 は主に植
物によって合成される。Ｋ2 群の中には側鎖長の違いに
よりメナキノン（ＭＫ）−１〜１４までが知られてお
り、ＭＫ−４は主に動物体内の腸内細菌によって合成さ
れ、ＭＫ−７は主に納豆菌によって合成される。食品中
では、Ｋ1 は特に緑色野菜、植物油、海藻等に多く含ま
れており、Ｋ2 の代表的な物質であるＭＫ−７は納豆に
多く含まれている。主な食品あるいは食品素材中のビタ
ミンＫ含量は、海藻・海苔・茶葉などにビタミンＫ1 が
数十ppm 、大豆油・ほうれん草・ブロッコリなどにビタ
ミンＫ1 が数ppm 、納豆中にＭＫ−７が数〜十数ppm で
ある。大豆油や納豆の原料である大豆中には１ppm 以下
のビタミンＫ1 しか含有されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】市販の食品から骨粗鬆
症に有効な量のビタミンＫを摂取する場合、仮にビタミ
ンＫを１ppm 含有する食品あるいは食品素材より一日１
０mgのビタミンＫを摂取しようとすると、一日に１０kg
もの量を食する必要があり不可能である。十数ppm 含有
する納豆でも一日数百ｇを食さなくてはならず、嗜好
上、これだけの量を毎日食することは困難である。市販
の、出血症予防のために調製粉乳に添加している天然ビ
タミンＫ1 濃縮物は高価であるため、大量のビタミンＫ
1 を摂取するには価格面で困難である。一方、医薬品の
合成ビタミンＫは食品に使用することはできない。
症に有効な量のビタミンＫを摂取する場合、仮にビタミ
ンＫを１ppm 含有する食品あるいは食品素材より一日１
０mgのビタミンＫを摂取しようとすると、一日に１０kg
もの量を食する必要があり不可能である。十数ppm 含有
する納豆でも一日数百ｇを食さなくてはならず、嗜好
上、これだけの量を毎日食することは困難である。市販
の、出血症予防のために調製粉乳に添加している天然ビ
タミンＫ1 濃縮物は高価であるため、大量のビタミンＫ
1 を摂取するには価格面で困難である。一方、医薬品の
合成ビタミンＫは食品に使用することはできない。
【０００５】天然ＭＫ−７は、自然界には極微量しか存
在しないため、単離が非常に困難とされており、これま
で、ＭＫ−７高含量の脂質を調製した例は知られていな
い。蛋白質との複合体の形で存在するＭＫ−７を水によ
る抽出によって分離した例はあるが、ＭＫ−７の一部し
か複合体で存在していないので抽出効率に問題がある。
納豆から、ステロールを主成分とする組成物を抽出した
例もあるが、ステロール含量を高めるためにケン化反応
を必須としており、使用する強アルカリによってＭＫ−
７は分解してしまうため、得られた組成物中にＭＫ−７
はほとんど含有されない。
在しないため、単離が非常に困難とされており、これま
で、ＭＫ−７高含量の脂質を調製した例は知られていな
い。蛋白質との複合体の形で存在するＭＫ−７を水によ
る抽出によって分離した例はあるが、ＭＫ−７の一部し
か複合体で存在していないので抽出効率に問題がある。
納豆から、ステロールを主成分とする組成物を抽出した
例もあるが、ステロール含量を高めるためにケン化反応
を必須としており、使用する強アルカリによってＭＫ−
７は分解してしまうため、得られた組成物中にＭＫ−７
はほとんど含有されない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、通常の
食品からは充分な量の摂取ができない、または摂取困難
な天然ビタミンＫ、特に納豆菌に代表される可食の枯草
菌によって作り出された天然ＭＫ−７を、食品あるいは
補助食品として簡単に日常的摂取ができるようにした天
然ＭＫ−７高含量の濃縮脂質、およびそれを主成分とす
る食品あるいは補助食品を提供することにある。
食品からは充分な量の摂取ができない、または摂取困難
な天然ビタミンＫ、特に納豆菌に代表される可食の枯草
菌によって作り出された天然ＭＫ−７を、食品あるいは
補助食品として簡単に日常的摂取ができるようにした天
然ＭＫ−７高含量の濃縮脂質、およびそれを主成分とす
る食品あるいは補助食品を提供することにある。
【０００７】本発明者らは、上記の目的を達成すべく鋭
意研究を重ねた結果、枯草菌で発酵した食品素材より脂
質を取り出すか、あるいは抽出または抽出、精製するこ
とによって天然ＭＫ−７高含量脂質を得ることができる
ことを見出して本発明を完成した。本発明において、脂
質の原料となるものは、納豆菌に代表される枯草菌を繁
殖させ発酵させることができるものであれば使用できる
が、発酵物より取り出した脂質を食用に供することから
食品素材が好ましい。食品素材は、一般食品の材料とな
るものの他に、それらの加工過程で発生する粕や煮汁な
どの副産物を用いてもよい。一般食品としては、特に大
豆などの穀類が好ましい。上記の他にも、食することが
可能で枯草菌が繁殖できるものであれば特に限定するも
のでない。
意研究を重ねた結果、枯草菌で発酵した食品素材より脂
質を取り出すか、あるいは抽出または抽出、精製するこ
とによって天然ＭＫ−７高含量脂質を得ることができる
ことを見出して本発明を完成した。本発明において、脂
質の原料となるものは、納豆菌に代表される枯草菌を繁
殖させ発酵させることができるものであれば使用できる
が、発酵物より取り出した脂質を食用に供することから
食品素材が好ましい。食品素材は、一般食品の材料とな
るものの他に、それらの加工過程で発生する粕や煮汁な
どの副産物を用いてもよい。一般食品としては、特に大
豆などの穀類が好ましい。上記の他にも、食することが
可能で枯草菌が繁殖できるものであれば特に限定するも
のでない。
【０００８】接種する枯草菌としては、上記素材と同様
な理由から可食の枯草菌が好ましい。可食の枯草菌とし
ては、納豆菌が最も一般的である。市販の納豆菌が使用
できるが、その中でも天然ＭＫ−７産生能力の高いもの
が望ましい。また、人為的に天然ＭＫ−７産生能力を高
めたものも使用できる。発酵方法は、一般的に知られて
いる納豆の発酵方法の他に液体培養などの公知の発酵方
法を用いてもよい。通常、納豆の発酵は３６〜３９℃で
１５〜２０時間かけて行われるが、さらに４２℃以上の
温度で、４８時間以上の長時間発酵させることによっ
て、脂質中の天然ＭＫ−７含量を高めることができる。
な理由から可食の枯草菌が好ましい。可食の枯草菌とし
ては、納豆菌が最も一般的である。市販の納豆菌が使用
できるが、その中でも天然ＭＫ−７産生能力の高いもの
が望ましい。また、人為的に天然ＭＫ−７産生能力を高
めたものも使用できる。発酵方法は、一般的に知られて
いる納豆の発酵方法の他に液体培養などの公知の発酵方
法を用いてもよい。通常、納豆の発酵は３６〜３９℃で
１５〜２０時間かけて行われるが、さらに４２℃以上の
温度で、４８時間以上の長時間発酵させることによっ
て、脂質中の天然ＭＫ−７含量を高めることができる。
【０００９】取り出す方法は抽出、圧搾、遠心分離など
物性の相違を利用して分ける方法を選択できるが、特に
抽出法が効果的である。抽出方法は、発酵物に対して最
も効果的な方法を選択すればよく、特に限定されるもの
ではないが、発酵物の固形分量が多ければ固−液抽出法
が、少なければ液−液抽出法が効果的である。固−液抽
出法を選択する場合、発酵物は固体でも多量の水分を含
有しているので、あらかじめ水分含量を測定して、その
水分含量に対して等倍〜１０倍量の親水性有機溶媒を混
合するか、減圧下で１００℃以下の温度で加熱するかし
て水を除去してから、親油性有機溶媒を等倍〜１０倍量
添加して、粉砕・抽出すると抽出効率が向上する。
物性の相違を利用して分ける方法を選択できるが、特に
抽出法が効果的である。抽出方法は、発酵物に対して最
も効果的な方法を選択すればよく、特に限定されるもの
ではないが、発酵物の固形分量が多ければ固−液抽出法
が、少なければ液−液抽出法が効果的である。固−液抽
出法を選択する場合、発酵物は固体でも多量の水分を含
有しているので、あらかじめ水分含量を測定して、その
水分含量に対して等倍〜１０倍量の親水性有機溶媒を混
合するか、減圧下で１００℃以下の温度で加熱するかし
て水を除去してから、親油性有機溶媒を等倍〜１０倍量
添加して、粉砕・抽出すると抽出効率が向上する。
【００１０】親水性有機溶媒と混合して脱水を行う場合
は、親水性溶媒−水混液を分離・除去してから脂質を抽
出してもまた除去せずに抽出してもよい。親水性溶媒−
水混液を除去してから抽出する場合は、分離した親水性
溶媒−水混液を、親油性有機溶媒を用いて更に脂質分を
抽出するとよい。脱水後の発酵物を粉砕し、抽出した
後、ろ過してろ液の親油性有機溶媒層を分取後、減圧下
で溶媒を留去すると抽出脂質が得られる。
は、親水性溶媒−水混液を分離・除去してから脂質を抽
出してもまた除去せずに抽出してもよい。親水性溶媒−
水混液を除去してから抽出する場合は、分離した親水性
溶媒−水混液を、親油性有機溶媒を用いて更に脂質分を
抽出するとよい。脱水後の発酵物を粉砕し、抽出した
後、ろ過してろ液の親油性有機溶媒層を分取後、減圧下
で溶媒を留去すると抽出脂質が得られる。
【００１１】液−液抽出法では、水を除去せずに抽出を
行うことができるが、水に対して親和性の低い溶媒か混
合溶媒を選択して、抽出時に二層に分離させる必要があ
る。発酵液に対して１／１０〜１０倍量の水との親和性
の低い溶媒か混合溶媒を発酵液と混合後、静置、または
加速度を与え強制的に二層を分離して親油性有機溶媒層
を分取後、減圧下で溶媒を留去すると抽出脂質が得られ
る。残った水層に同様の操作を繰り返すと一層効果的で
ある。
行うことができるが、水に対して親和性の低い溶媒か混
合溶媒を選択して、抽出時に二層に分離させる必要があ
る。発酵液に対して１／１０〜１０倍量の水との親和性
の低い溶媒か混合溶媒を発酵液と混合後、静置、または
加速度を与え強制的に二層を分離して親油性有機溶媒層
を分取後、減圧下で溶媒を留去すると抽出脂質が得られ
る。残った水層に同様の操作を繰り返すと一層効果的で
ある。
【００１２】有機溶媒としては、炭素数１〜１０の炭化
水素あるいはアルコール、エーテル、エステル、ケトン
の群から選ばれる単独あるいは２種以上の混合物が使用
できる。抽出法は、固−液、液−液共にバッチ式でも連
続式でもよい。抽出温度は、溶媒の沸点以下であれば使
用できるが、天然ＭＫ−７の化学的分解を抑えるために
は室温〜１００℃程度の温度が望ましい。
水素あるいはアルコール、エーテル、エステル、ケトン
の群から選ばれる単独あるいは２種以上の混合物が使用
できる。抽出法は、固−液、液−液共にバッチ式でも連
続式でもよい。抽出温度は、溶媒の沸点以下であれば使
用できるが、天然ＭＫ−７の化学的分解を抑えるために
は室温〜１００℃程度の温度が望ましい。
【００１３】以上の抽出操作のみによっても、得られた
抽出脂質中の天然ＭＫ−７含有量は２００ppm 〜１％程
度にまで高まる。このとき、脂質中に含有されるＭＫ−
７以外の物質は、油脂、ステロールおよびその誘導体、
トコフェロール、リン脂質、炭化水素等である。
抽出脂質中の天然ＭＫ−７含有量は２００ppm 〜１％程
度にまで高まる。このとき、脂質中に含有されるＭＫ−
７以外の物質は、油脂、ステロールおよびその誘導体、
トコフェロール、リン脂質、炭化水素等である。
【００１４】より高含有量の脂質を得るためには、さら
に精製処理を施す必要がある。精製方法としては、溶媒
分別、吸着分別、蒸留、クロマトグラフィー、膜分離の
操作を単独もしくはそれらを２種以上複合した方法が効
果的であるが、油脂中の脂質精製法として一般的なアル
カリ精製法は、使用する強アルカリによってＭＫ−７が
分解してしまうため好ましくない。溶媒分別法には、次
の二種の方法がある。上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もし
くはその混合物で互いに混ざり合わない二種の溶媒を選
択し、そのいずれか一方あるいは両方に抽出脂質を溶解
し、二液相間でバッチまたは連続で混合−分離を繰り返
し行うことによって、天然ＭＫ−７の分配率の高い溶媒
層に天然ＭＫ−７を濃縮する。それを分取して減圧下で
溶媒を留去して天然ＭＫ−７高含量脂質を得る。溶媒の
混合比率は、一方の溶媒１倍量に対して、他方の溶媒を
１／５〜５倍量とすることが望ましい。別法として、抽
出脂質１倍量に対して１／２〜１０倍量の、上記の抽出
溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物に抽出脂質を加熱
溶解した後に、冷却して生成したステロール類を主成分
とする不溶物を、ろ過、遠心分離等の方法により除去す
ることによって、天然ＭＫ−７高含量の脂質を得る。
に精製処理を施す必要がある。精製方法としては、溶媒
分別、吸着分別、蒸留、クロマトグラフィー、膜分離の
操作を単独もしくはそれらを２種以上複合した方法が効
果的であるが、油脂中の脂質精製法として一般的なアル
カリ精製法は、使用する強アルカリによってＭＫ−７が
分解してしまうため好ましくない。溶媒分別法には、次
の二種の方法がある。上記の抽出溶媒の範囲の溶媒もし
くはその混合物で互いに混ざり合わない二種の溶媒を選
択し、そのいずれか一方あるいは両方に抽出脂質を溶解
し、二液相間でバッチまたは連続で混合−分離を繰り返
し行うことによって、天然ＭＫ−７の分配率の高い溶媒
層に天然ＭＫ−７を濃縮する。それを分取して減圧下で
溶媒を留去して天然ＭＫ−７高含量脂質を得る。溶媒の
混合比率は、一方の溶媒１倍量に対して、他方の溶媒を
１／５〜５倍量とすることが望ましい。別法として、抽
出脂質１倍量に対して１／２〜１０倍量の、上記の抽出
溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物に抽出脂質を加熱
溶解した後に、冷却して生成したステロール類を主成分
とする不溶物を、ろ過、遠心分離等の方法により除去す
ることによって、天然ＭＫ−７高含量の脂質を得る。
【００１５】吸着分別法は、ＭＫ−７が炭素系吸着剤に
選択的に吸着される性質を利用して、吸着・溶離を行う
方法である。抽出脂質の有機溶媒溶液に活性炭を添加・
混合するか、活性炭を詰めたカラムに抽出脂質の有機溶
媒溶液を通液するかして、活性炭にＭＫ−７を吸着せし
めた後、有機溶媒で活性炭を洗浄して不純物を洗い流
し、有機溶媒でＭＫ−７を溶離して、天然ＭＫ−７高含
量の脂質を得る。ここで使用する有機溶媒は、上記の抽
出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物であるが、吸着
・洗浄には溶離作用の弱い溶媒、主にアルコール類を、
溶離には溶離作用の強い溶媒、主に炭化水素類を使用す
ることによって、より効率的に濃縮を行うことができ
る。
選択的に吸着される性質を利用して、吸着・溶離を行う
方法である。抽出脂質の有機溶媒溶液に活性炭を添加・
混合するか、活性炭を詰めたカラムに抽出脂質の有機溶
媒溶液を通液するかして、活性炭にＭＫ−７を吸着せし
めた後、有機溶媒で活性炭を洗浄して不純物を洗い流
し、有機溶媒でＭＫ−７を溶離して、天然ＭＫ−７高含
量の脂質を得る。ここで使用する有機溶媒は、上記の抽
出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物であるが、吸着
・洗浄には溶離作用の弱い溶媒、主にアルコール類を、
溶離には溶離作用の強い溶媒、主に炭化水素類を使用す
ることによって、より効率的に濃縮を行うことができ
る。
【００１６】蒸留法は、天然ＭＫ−７が高沸点かつ高温
で分解する物質であることから、高真空蒸留である分子
蒸留法または水蒸気蒸留法が効果的である。両方法と
も、蒸発対象物の蒸気圧を小さくして、高沸点の物質で
も低い温度で蒸発させることができる。これらの蒸留法
は、バッチ式でも連続式でもよい。この方法を適用する
ことによって得られた天然ＭＫ−７高含量の脂質は、溶
媒の残留もなく、無臭であるためそのまま食用に供する
ことができる。分子蒸留法では、５Pa以下の圧力で２０
０℃〜３００℃の温度範囲で、抽出脂質を分子蒸留装置
に付し、段階的温度にて蒸発留分を分取することによっ
て天然ＭＫ−７高含量の脂質を得る。水蒸気蒸留法で
は、１kPa 以下の圧力で２００〜３５０℃の温度範囲
で、水または水蒸気を導入しながら蒸留を行い、段階的
温度にて蒸発留分を分取することによって天然ＭＫ−７
高含量の脂質を得る。
で分解する物質であることから、高真空蒸留である分子
蒸留法または水蒸気蒸留法が効果的である。両方法と
も、蒸発対象物の蒸気圧を小さくして、高沸点の物質で
も低い温度で蒸発させることができる。これらの蒸留法
は、バッチ式でも連続式でもよい。この方法を適用する
ことによって得られた天然ＭＫ−７高含量の脂質は、溶
媒の残留もなく、無臭であるためそのまま食用に供する
ことができる。分子蒸留法では、５Pa以下の圧力で２０
０℃〜３００℃の温度範囲で、抽出脂質を分子蒸留装置
に付し、段階的温度にて蒸発留分を分取することによっ
て天然ＭＫ−７高含量の脂質を得る。水蒸気蒸留法で
は、１kPa 以下の圧力で２００〜３５０℃の温度範囲
で、水または水蒸気を導入しながら蒸留を行い、段階的
温度にて蒸発留分を分取することによって天然ＭＫ−７
高含量の脂質を得る。
【００１７】クロマトグラフィー法は、カラムクロマト
グラフィー法が効果的である。カラムに充填する固定相
は、市販のクロマトグラフィー用充填剤でよい。実用
上、シリカゲルベースの吸着剤もしくは有機ポリマーを
骨格に持った合成吸着剤が望ましい。移動相は、上記の
抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物から選択す
る。以上の精製方法を、単独もしくはそれらを複合して
行うことによって、天然ＭＫ−７高含量脂質を得ること
ができる。このときのＭＫ−７含有量は１％以上であ
る。精製を重ねることによってほぼ１００％のものも調
製できる。蒸留して得られた天然ＭＫ−７高含量脂質に
は脂質以外のものとして、若干量の溶媒が残留している
と共に、発酵物由来の臭気も残留している場合がある。
これらの両方を完全に除去するためには、最後に１００
〜２５０℃にて水蒸気蒸留を行うとよい。水蒸気蒸留
は、流動性がないと適用が困難であるため、溶媒留去時
にペースト状あるいは固体になる場合は、１／２〜５倍
量の植物油に溶解してから水蒸気蒸留処理を行う。
グラフィー法が効果的である。カラムに充填する固定相
は、市販のクロマトグラフィー用充填剤でよい。実用
上、シリカゲルベースの吸着剤もしくは有機ポリマーを
骨格に持った合成吸着剤が望ましい。移動相は、上記の
抽出溶媒の範囲の溶媒もしくはその混合物から選択す
る。以上の精製方法を、単独もしくはそれらを複合して
行うことによって、天然ＭＫ−７高含量脂質を得ること
ができる。このときのＭＫ−７含有量は１％以上であ
る。精製を重ねることによってほぼ１００％のものも調
製できる。蒸留して得られた天然ＭＫ−７高含量脂質に
は脂質以外のものとして、若干量の溶媒が残留している
と共に、発酵物由来の臭気も残留している場合がある。
これらの両方を完全に除去するためには、最後に１００
〜２５０℃にて水蒸気蒸留を行うとよい。水蒸気蒸留
は、流動性がないと適用が困難であるため、溶媒留去時
にペースト状あるいは固体になる場合は、１／２〜５倍
量の植物油に溶解してから水蒸気蒸留処理を行う。
【００１８】
【発明の効果】本発明により得られた天然ＭＫ−７高含
量脂質は、原料が天然物であり、かつ食することのでき
るものであることから、出血症はもちろん骨粗鬆症の予
防のために、食品あるいは補助食品として安全性が高く
簡易に日常的摂取ができる。また、この脂質は無味・無
臭であることから、嗜好上の問題もなく、様々な形態の
食品に応用することが可能である。
量脂質は、原料が天然物であり、かつ食することのでき
るものであることから、出血症はもちろん骨粗鬆症の予
防のために、食品あるいは補助食品として安全性が高く
簡易に日常的摂取ができる。また、この脂質は無味・無
臭であることから、嗜好上の問題もなく、様々な形態の
食品に応用することが可能である。
【００１９】
【発明の実施の形態】次に実施例によって本発明を詳し
く説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、以下の実施例においてＭＫ−７含量は（財）
日本食品分析センターの高速液体クロマトグラフ法に準
じて測定した値を、その他の分析値は公定法に準じて測
定した値を示す。
く説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、以下の実施例においてＭＫ−７含量は（財）
日本食品分析センターの高速液体クロマトグラフ法に準
じて測定した値を、その他の分析値は公定法に準じて測
定した値を示す。
【００２０】実施例１ 室温下、市販の挽き割り納豆（ＭＫ−７含量１７．２ｐ
ｐｍ；水分５７．７％）３ｋｇにイソプロピルアルコー
ル２．３Ｌを加えて粉砕後、ｎ−ヘキサン４．６Ｌを加
えて再度粉砕した。全量をろ過した後に、ろ液を静置し
て分離したｎ−ヘキサン層（上層）を分取した。上層は
５．２Ｌであった。上層の溶媒を２ｋＰａ，６０℃で留
去し、１５３ｇの残渣を得た。この残渣を３ｈＰａ，１
７０℃，１．５ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行っ
て、黄色、無味、無臭、油状の脂質（）１４４ｇを得
た。この脂質には、ＭＫ−７ ３５１ｐｐｍ，トコフェ
ロール １３５ｐｐｍが含有されており、ＴＬＣ（薄層
クロマトグラフィー）で観察したところ大部分はトリグ
リセライドで微量のステロールおよびその誘導体、リン
脂質、炭化水素類がみられた。この脂質の酸価は１．
２、過酸化物価は０．６であった。ＭＫ−７を高回収率
で得た。
ｐｍ；水分５７．７％）３ｋｇにイソプロピルアルコー
ル２．３Ｌを加えて粉砕後、ｎ−ヘキサン４．６Ｌを加
えて再度粉砕した。全量をろ過した後に、ろ液を静置し
て分離したｎ−ヘキサン層（上層）を分取した。上層は
５．２Ｌであった。上層の溶媒を２ｋＰａ，６０℃で留
去し、１５３ｇの残渣を得た。この残渣を３ｈＰａ，１
７０℃，１．５ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行っ
て、黄色、無味、無臭、油状の脂質（）１４４ｇを得
た。この脂質には、ＭＫ−７ ３５１ｐｐｍ，トコフェ
ロール １３５ｐｐｍが含有されており、ＴＬＣ（薄層
クロマトグラフィー）で観察したところ大部分はトリグ
リセライドで微量のステロールおよびその誘導体、リン
脂質、炭化水素類がみられた。この脂質の酸価は１．
２、過酸化物価は０．６であった。ＭＫ−７を高回収率
で得た。
【００２１】実施例２ 納豆製造時に副生成する大豆煮汁に納豆菌を接種し、納
豆の製造と同じ条件で培養したもの（ＭＫ−７含量１
０．８ppm ）１０kgにジエチルエーテル１０Ｌを加えて
震とう後、静置して分離したジエチルエーテル層（上
層）を分取した。上層の溶媒を２kPa ，６０℃で留去
し、７．９ｇの残渣を得た。この残渣を５hPa，１８０
℃，０．０８ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行って、
黄色、無味、無臭、油状の脂質（）７．２ｇを得た。
この脂質には、ＭＫ−７ １．４％，トコフェロール
８５ppm が含有されており、ＴＬＣで観察したところ上
記の他にトリグリセライド、ステロールおよびその誘導
体、リン脂質、炭化水素類がみられた。この脂質の酸価
は０．８、過酸化物価は０．２であった。ＭＫ−７の回
収率は９３％であった。
豆の製造と同じ条件で培養したもの（ＭＫ−７含量１
０．８ppm ）１０kgにジエチルエーテル１０Ｌを加えて
震とう後、静置して分離したジエチルエーテル層（上
層）を分取した。上層の溶媒を２kPa ，６０℃で留去
し、７．９ｇの残渣を得た。この残渣を５hPa，１８０
℃，０．０８ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行って、
黄色、無味、無臭、油状の脂質（）７．２ｇを得た。
この脂質には、ＭＫ−７ １．４％，トコフェロール
８５ppm が含有されており、ＴＬＣで観察したところ上
記の他にトリグリセライド、ステロールおよびその誘導
体、リン脂質、炭化水素類がみられた。この脂質の酸価
は０．８、過酸化物価は０．２であった。ＭＫ−７の回
収率は９３％であった。
【００２２】実施例３ 市販の納豆（ＭＫ−７含量８．５ppm ）１０Kgを８０℃
で２４時間減圧乾燥して乾燥物４．７５kgを得た。乾燥
物の温度が下がらない内に末広鉄工所製２軸エクストル
ーダーに付し、３１５ｇの粗油を得た。８０℃で粗油に
温水１５mlを添加，攪拌し、遠心分離後上層の油層を分
け取った。さらに２０％水酸化ナトリウム水溶液６mlを
添加，攪拌し、遠心分離後上層の油層を分け取った。油
層を真空乾燥後、１００℃で活性白土１５ｇを添加し，
攪拌，ろ過した。ろ液を３hPa ，１８０℃，３ｇ水蒸気
／時間で６０分間脱臭を行って、黄色、無味、無臭、油
状の脂質２９６ｇを得た。この脂質には、ＭＫ−７ １
７２ppm ，トコフェロール ７５２ppm が含有されてお
り、ＴＬＣで観察したところ大部分はトリグリセライド
で微量のステロールおよびその誘導体、リン脂質、炭化
水素類がみられた。この脂質の酸価は０．２、過酸化物
価は０．１であった。ＭＫ−７の回収率は６０％であっ
た。
で２４時間減圧乾燥して乾燥物４．７５kgを得た。乾燥
物の温度が下がらない内に末広鉄工所製２軸エクストル
ーダーに付し、３１５ｇの粗油を得た。８０℃で粗油に
温水１５mlを添加，攪拌し、遠心分離後上層の油層を分
け取った。さらに２０％水酸化ナトリウム水溶液６mlを
添加，攪拌し、遠心分離後上層の油層を分け取った。油
層を真空乾燥後、１００℃で活性白土１５ｇを添加し，
攪拌，ろ過した。ろ液を３hPa ，１８０℃，３ｇ水蒸気
／時間で６０分間脱臭を行って、黄色、無味、無臭、油
状の脂質２９６ｇを得た。この脂質には、ＭＫ−７ １
７２ppm ，トコフェロール ７５２ppm が含有されてお
り、ＴＬＣで観察したところ大部分はトリグリセライド
で微量のステロールおよびその誘導体、リン脂質、炭化
水素類がみられた。この脂質の酸価は０．２、過酸化物
価は０．１であった。ＭＫ−７の回収率は６０％であっ
た。
【００２３】実施例４ 上記実施例１で得られた脂質（）５０ｇを流下膜式分
子蒸留装置に付した。３Paの圧力で２００℃から２８０
℃まで１０℃刻みで昇温した。２３０℃〜２８０℃まで
に留出した蒸発物を分取して、黄褐色、無味、無臭、ペ
ースト状の脂質１０．３ｇを得た。この脂質には、ＭＫ
−７ １５６０ppm 、トコフェロール １６３ppm が含
有されており、ＴＬＣで観察したところ上記の他にトリ
グリセライド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素
類がみられた。この脂質の酸価は０、過酸化物価は０．
１であった。ＭＫ−７の回収率は９２％であった。
子蒸留装置に付した。３Paの圧力で２００℃から２８０
℃まで１０℃刻みで昇温した。２３０℃〜２８０℃まで
に留出した蒸発物を分取して、黄褐色、無味、無臭、ペ
ースト状の脂質１０．３ｇを得た。この脂質には、ＭＫ
−７ １５６０ppm 、トコフェロール １６３ppm が含
有されており、ＴＬＣで観察したところ上記の他にトリ
グリセライド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素
類がみられた。この脂質の酸価は０、過酸化物価は０．
１であった。ＭＫ−７の回収率は９２％であった。
【００２４】実施例５ 市販の顆粒状活性炭５０ｇをイソプロピルアルコールで
充填したカラムに、上記実施例１で得られた脂質（）
５０ｇをイソプロピルアルコール１５０mlに溶解した溶
液を、４０℃、空間速度（ＳＶ）１．０で通液してＭＫ
−７を吸着せしめた。同様の温度および流速でイソプロ
ピルアルコール１Ｌを通液してカラムを洗浄した後に、
トルエン５００mlを通液してカラムから流出した液の５
０〜５００mlの画分を分取した。この画分を２kPa ，６
０℃で溶媒留去し、４．５ｇの残渣を得た。この残渣に
９mlのアセトンを加えて５０℃で溶解後、−２０℃で１
時間冷却して、生成した沈殿物をろ別した。ろ液を２kP
a ，６０℃で溶媒留去し、３．９ｇの残渣を得た。この
残渣に大豆油３ｇを加えて、３hPa ，１８０℃，０．０
７ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行って、黄色、無
味、無臭、油状の脂質６．８ｇを得た。この脂質には、
ＭＫ−７ ２２００ppm ，トコフェロール １２ppm が
含有されており、ＴＬＣで観察したところ大部分はトリ
グリセライドで微量のステロールおよびその誘導体、炭
化水素類がみられた。この脂質の酸価は１．５、過酸化
物価は１．８であった。ＭＫ−７の回収率は８５％であ
った。
充填したカラムに、上記実施例１で得られた脂質（）
５０ｇをイソプロピルアルコール１５０mlに溶解した溶
液を、４０℃、空間速度（ＳＶ）１．０で通液してＭＫ
−７を吸着せしめた。同様の温度および流速でイソプロ
ピルアルコール１Ｌを通液してカラムを洗浄した後に、
トルエン５００mlを通液してカラムから流出した液の５
０〜５００mlの画分を分取した。この画分を２kPa ，６
０℃で溶媒留去し、４．５ｇの残渣を得た。この残渣に
９mlのアセトンを加えて５０℃で溶解後、−２０℃で１
時間冷却して、生成した沈殿物をろ別した。ろ液を２kP
a ，６０℃で溶媒留去し、３．９ｇの残渣を得た。この
残渣に大豆油３ｇを加えて、３hPa ，１８０℃，０．０
７ｇ水蒸気／時間で６０分間脱臭を行って、黄色、無
味、無臭、油状の脂質６．８ｇを得た。この脂質には、
ＭＫ−７ ２２００ppm ，トコフェロール １２ppm が
含有されており、ＴＬＣで観察したところ大部分はトリ
グリセライドで微量のステロールおよびその誘導体、炭
化水素類がみられた。この脂質の酸価は１．５、過酸化
物価は１．８であった。ＭＫ−７の回収率は８５％であ
った。
【００２５】実施例６ 上記実施例２で得られた脂質（）５ｇを２０mlのｎ−
ヘキサンに溶解して、２０mlの５％含水エタノールを加
えて震とう後、ヘキサン層（上層）と含水エタノール層
（下層）をそれぞれ分け取り、上層には２０mlの５％含
水エタノールを、下層には２０mlのｎ−ヘキサンを加え
て再度震とうした。それぞれの上層を分け取り、２kPa
，６０℃で溶媒留去し、４．５ｇの残渣を得た。１０
０ｇのシリカゲルをｎ−ヘキサンで充填したカラムに、
前記残渣を５mlのｎ−ヘキサンで溶解した溶液をＳＶ
１．０で通液した後に、ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテ
ル（２０：１）５００mlを通液してカラムから流出した
液の３２０〜４８０mlの画分を分取した。この画分を２
kPa ，６０℃で溶媒留去し、０．３１ｇの脂質を得た。
この脂質には、ＭＫ−７ １５．４％が含有されてお
り、ＴＬＣで観察したところ上記の他にトリグリセライ
ド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素類がみられ
た。ＭＫ−７の回収率は６８％であった。
ヘキサンに溶解して、２０mlの５％含水エタノールを加
えて震とう後、ヘキサン層（上層）と含水エタノール層
（下層）をそれぞれ分け取り、上層には２０mlの５％含
水エタノールを、下層には２０mlのｎ−ヘキサンを加え
て再度震とうした。それぞれの上層を分け取り、２kPa
，６０℃で溶媒留去し、４．５ｇの残渣を得た。１０
０ｇのシリカゲルをｎ−ヘキサンで充填したカラムに、
前記残渣を５mlのｎ−ヘキサンで溶解した溶液をＳＶ
１．０で通液した後に、ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテ
ル（２０：１）５００mlを通液してカラムから流出した
液の３２０〜４８０mlの画分を分取した。この画分を２
kPa ，６０℃で溶媒留去し、０．３１ｇの脂質を得た。
この脂質には、ＭＫ−７ １５．４％が含有されてお
り、ＴＬＣで観察したところ上記の他にトリグリセライ
ド、ステロールおよびその誘導体、炭化水素類がみられ
た。ＭＫ−７の回収率は６８％であった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＴ Ａ６１Ｋ 31/12 ＡＤＴ Ｃ０７Ｃ 46/10 Ｃ０７Ｃ 46/10 Ｃ１１Ｂ 1/10 Ｃ１１Ｂ 1/10 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07C 50/14 A23L 1/30 A61K 31/12 C11B 1/10 C11B 3/10 - 3/12 ＷＰＩ／Ｌ（ＱＵＥＳＴＥＬ)
Claims (13)
- 【請求項１】 枯草菌で発酵した食品素材より圧搾分離
および／または抽出することにより取り出した天然メナ
キノン−７高含量脂質。 - 【請求項２】 取り出す方法が抽出することである請求
項第１項記載の天然メナキノン−７高含量脂質。 - 【請求項３】 取り出す方法が抽出および天然メナキノ
ン−７が分解しない条件下で精製することである請求項
第１項記載の天然メナキノン−７高含量脂質。 - 【請求項４】 食品素材が食用植物あるいはそれらの加
工過程で発生する粕、煮汁などの副産物である請求項第
１項ないし第３項のいずれか一項記載の天然メナキノン
−７高含量脂質。 - 【請求項５】 枯草菌による発酵条件が、温度４２℃以
上、時間４８時間以上であることを特徴とする請求項第
１項ないし第４項のいずれか一項記載の天然メナキノン
−７高含量脂質。 - 【請求項６】 枯草菌が納豆菌である請求項第１項ない
し第５項のいずれか一項記載の天然メナキノン−７高含
量脂質。 - 【請求項７】 天然メナキノン−７含有量が２００ppm
以上である請求項第１項ないし第６項のいずれか一項記
載の天然メナキノン−７高含量脂質。 - 【請求項８】 抽出および天然メナキノン−７が分解し
ない条件下における精製方法が、溶媒抽出、溶媒分別、
吸着分別、蒸留、クロマトグラフィーまたは膜分離の単
独もしくはそれらを２以上複合した方法である請求項第
３項ないし第７項のいずれか一項記載の天然メナキノン
−７高含量脂質。 - 【請求項９】 抽出または精製に使用する溶媒が、有機
溶媒あるいは含水有機溶媒である請求項第２項ないし第
８項のいずれか一項記載の天然メナキノン−７高含量脂
質。 - 【請求項１０】 吸着分別法が、活性炭に対する吸着、
溶離によって成される請求項第８項記載の天然メナキノ
ン−７高含量脂質。 - 【請求項１１】 蒸留方法が、分子蒸留、水蒸気蒸留等
の高真空蒸留である請求項第８項記載の天然メナキノン
−７高含量脂質。 - 【請求項１２】 有機溶媒が、炭素数１〜１０の炭化水
素あるいはアルコール、エーテル、エステル、ケトンで
ある請求項第９項記載の天然メナキノン−７高含量脂
質。 - 【請求項１３】 請求項第１項ないし第１２項のいずれ
か一項記載の天然メナキノン−７高含量脂質を主成分と
する、骨粗鬆症の予防または／かつ治療用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7196007A JP2900238B2 (ja) | 1994-07-07 | 1995-07-07 | 天然メナキノン−７高含量脂質 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6-179504 | 1994-07-07 | ||
| JP17950494 | 1994-07-07 | ||
| JP7196007A JP2900238B2 (ja) | 1994-07-07 | 1995-07-07 | 天然メナキノン−７高含量脂質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0873396A JPH0873396A (ja) | 1996-03-19 |
| JP2900238B2 true JP2900238B2 (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=26499337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7196007A Expired - Lifetime JP2900238B2 (ja) | 1994-07-07 | 1995-07-07 | 天然メナキノン−７高含量脂質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
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|---|---|---|---|---|
| JP3459932B2 (ja) * | 1996-07-23 | 2003-10-27 | 株式会社ホーネンコーポレーション | 抗骨粗鬆症組成物 |
| US6677143B2 (en) | 1998-05-17 | 2004-01-13 | Honda Trading Company | Method for culturing Bacillus subtilis natto to produce water-soluble vitamin K and food product, beverage, or feed containing the cultured microorganism or the vitamin K derivative |
| WO2001036591A1 (fr) * | 1999-11-16 | 2001-05-25 | Honda Trading Corporation | Souche yunnan sl-001 |
| WO2006118167A1 (ja) * | 2005-04-27 | 2006-11-09 | National University Corporation Toyohashi University Of Technology | 圧縮二酸化炭素を用いて抽出されたキノン化合物を利用したキノンプロファイル法等 |
| JP3911282B2 (ja) * | 2006-06-15 | 2007-05-09 | 株式会社日本生物科学研究所 | ビタミンｋ２の回収方法 |
| EP2033634A4 (en) | 2006-06-23 | 2010-12-22 | J Oil Mills Inc | AGENT FOR INCREASING TESTOSTERONE RATE |
| CN101646429B (zh) | 2007-04-05 | 2012-08-29 | J-制油株式会社 | 镇定剂及功能性食品 |
| JP5718614B2 (ja) * | 2010-11-02 | 2015-05-13 | 花王株式会社 | オートインデューサー−２阻害剤、並びに歯周病又は齲蝕病の予防及び／又は治療剤 |
| EP2561869B1 (en) * | 2011-02-14 | 2016-12-14 | J-Oil Mills, Inc. | Skin collagen production promoter |
| JP5483786B1 (ja) | 2012-07-24 | 2014-05-07 | 株式会社Ｊ−オイルミルズ | 組成物 |
| CN106795541B (zh) * | 2014-08-19 | 2021-12-03 | 不二制油集团控股株式会社 | 含有甲萘醌-7的培养物以及甲萘醌-7的制造法 |
| US20220127652A1 (en) * | 2019-07-02 | 2022-04-28 | Sungen Bioscience Co., Ltd. | Bacillus subtilis natto and method for producing protein mk-7 |
| EP4001421A1 (en) | 2020-11-16 | 2022-05-25 | Endektovet Ltd | Method for obtaining oil extract of menaquinone-7 from fermentation broth |
| KR102523928B1 (ko) * | 2021-09-17 | 2023-04-21 | 주식회사 지에프퍼멘텍 | 바실러스 서브틸리스 낫또 배양균체 추출물을 포함하는 기억력 개선용 조성물 |
-
1995
- 1995-07-07 JP JP7196007A patent/JP2900238B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0873396A (ja) | 1996-03-19 |
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