JPS6333389A

JPS6333389A - ホスフアチジルイノシト−ルの精製方法

Info

Publication number: JPS6333389A
Application number: JP17719186A
Authority: JP
Inventors: Sachiko Murakami; 幸子村上; Koichi Iwanami; 岩並　孝一; Kenichi Fujita; 藤田　研一; Satoru Tokuyama; 悟徳山; Osamu Nakachi; 仲地　理
Original assignee: Nippon Oil and Fats Co Ltd
Current assignee: NOF Corp
Priority date: 1986-07-28
Filing date: 1986-07-28
Publication date: 1988-02-13
Also published as: JPH0529231B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明はホスファチジルイノシトールの精製方法に関す
る。

〔従来の技術〕

リン脂質は動植物生体に広く分布し、各種の生理的機能
を果している。このためリン脂質は動脈硬化症、高脂血
症、肝臓病、心臓病等の治療剤や食品、香粧品、医薬品
等の乳化剤等に利用されている。

通常リン脂質は植物種子から油脂を抽出、精製する際、
ガム質として分離、精製して得られるが、種子原料の種
類により含有されるリン脂質の組成が異なる０通常植物
種子中のリン脂質組成は、ホスファチジルコリン（以下
、ＰＣという）、ホスファチジルエタノールアミン（以
下、ＰＥという）、ホスファチジルセリン（以下、ＰＳ
という）、およびホスファチジルイノシトール（以下、
ＰＩという）が主体であり、これらは現在までの技術で
は分離が非常に困難なため、混合物のまま使用されるこ
とが多い。

従来のリン脂質を分画する方法としては、アセトンやア
ルコールを使用して目的物を濃縮し、さらにケイ酸、ア
ルミナなどでクロマトグラフィーを行っている。特にＰ
Ｉを単離する場合は、リン脂質をイソプロパツール処理
してＰＩの濃度を高めた後、ケイ酸カラムを用いてクロ
マトグラフィーにより分画を行っている（例えば生化学
実験横座３、脂質の化学Ｐ、２７８）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、このような従来の方法では、ケイ酸カラ
ムおよびアルミナカラムを使用し、２回以上カラムクロ
マトグラフィーを行う必要があり、その操作は複雑で多
大の労力と時間を要し、効率が悪いとともに、高純度の
ＰＩを得ることができず、工業的規模でＰＩの精製を行
うことができないという問題点があった。

本発明はＰＩを高純度に効率良く精製することができる
ＰＩの精製方法を提案することを目的としている。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、ホスファチジルイノシトールを多糖体系陰イ
オン交換体に吸着させ、ホスファチジルイノシトールよ
りも前記陰イオン交換体に対する親和性の高いバッファ
塩を含む有機溶媒により前記陰イオン交換体からホスフ
ァチジルイノシトールを溶離させることを特徴とするホ
スファチジルイノシトールの精製方法である。

本発明で精製の対象となるリン脂質は動物、植物、微生
物のいずれからのものでも良い、被精製物としてのリン
脂質はクロロホルム、メタノール等の有機溶媒により抽
出されたリン脂質画分でもよいが、さらにメタノール、
エタノール、プロパツール等のアルコールによりＰＣ，
ＰＥ等の他のリン脂質を抽出除去してＰＩを濃縮した粗
ＰＩ画分が好ましい。

本発明において精製に用いる多糖体系陰イオン交換体は
、セルロース、アガロース、デキストラン等の天然架橋
多糖体高分子からなる担体に、解離基として陰イオン交
換基をつけたもので、交換基量がＩｇ当り０．１〜０．
５ｍｅｑのものが好ましい。このような陰イオン交換体
としては例えばセルロース、アガロース、デキストラン
の架橋体等の高分子鎖の置換基にアミノエチル基、ジエ
チルアミノエチル基、トリエチルアミノエチル基、グア
ニドエチル基、パラアミノベンジル基等を導入したちの
；セルロース、アガロース、デキストランの架橋体等に
グリセリル基またはポリグリセリル基によりトリエタノ
ールアミンをカップルしたちの；ベンゾイル化されたジ
エチルアミノエチルセルロースまたはジエチルアミノエ
チルアガロース；ベンゾイル化−ナフトイル化されたジ
エチルアミノエチルセルロースまたはジエチルアミノエ
チルアガロース；セルロースまたはアガロース、弱くリ
ン酸化されたセルロースまたはアガロースにポリエチレ
ンイミンを吸着させたものなど、一般にイオン交換クロ
マトグラフィーに使用されているものが使用できる。

このような陰イオン交換体は、予め有機溶媒により膨潤
させ、バッファ塩と接触させて活性化した後、有機溶媒
の存在下に前記被精製物を接触させ、ＰＩを吸着させる
。陰イオン交換体と被精製物の接触方法は、被精製物と
陰イオン交換体を有機溶媒の存在下に混合攪拌するバッ
チ方式でもよいが、陰イオン交換体をカラム充填し、溶
媒に溶解した被精製物をカラム通液して接触させる連続
方式でもよい。

陰イオン交換体の活性化に使用するバッファ塩としては
、後工程の溶離に使用するものと同じものが使用でき、
例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸等のアルカリ塩、ア
ンモニウム塩、アミン塩などがある。活性化の方法はこ
れらのバッファ塩の水溶液を陰イオン交換体と接触させ
、液と分離後メタノール等により水分を除去し、その後
有機溶媒で陰イオン交換体を膨潤させる。

膨潤に使用する有機溶媒および被精製物を溶解する有機
溶媒は同じものが使用でき、例えばクロロホルム、メタ
ノール、エタノール、イソプロパツール、ブタノール、
アセトン、アセトニトリル、ジクロルメタン、四塩化炭
素等が単独でまたは混合して使用できるが、極性溶媒を
含む混合溶媒が好ましい。

こうして被精製物を陰イオン交換体に接触させることに
より、ＰＩおよび他のリン脂質は陰イオン交換体に吸着
される。そこで溶媒を陰イオン交換体から分離し、新し
い溶媒で陰イオン交換体を洗浄すると、陰イオン交換体
に吸着された他のリン脂質を完全に除去できる。

こうして分離した陰イオン交換体に、バッファ塩を含む
有機溶媒を接触させることにより、吸着されたＰＩを溶
離させ、高純度で回収することができる。バッファ塩は
ＰＩよりも陰イオン交換体に対する親和性（吸着性）が
高いもので、活性化に使用した前記例示のものが使用で
き、溶解性をよくするために少量の水を加えてもよい。

また有機溶媒も前記と同じものが使用できる。

以下、バッチ方式の場合を例にとって、ＰＩの精製方法
を具体的に説明する。まず、陰イオン交換体を常法によ
り活性化し、クロロホルム−メタノール溶媒（１０：　
Ｏ〜０　：　１０（ｖ／ｖ））溶液で膨潤させ、膨潤さ
せた陰イオン交換体と前記溶媒を１０＝１〜１：２０（
ν／ｖ）の割合で混合しておく。一方、原料リン脂質か
ら得られた粗ＰＩ画分をクロロホルム、ジクロロエタン
、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン系炭化水素
に溶解し、これを前記陰イオン交換体と溶媒の混合物に
加え、０〜４０℃の間で攪拌する。攪拌時間は適宜法め
られるが、１５分〜２時間位が好ましい。こうしてＰＩ
を吸着させた陰イオン交換体を濾過し、クロロホルム−
メタノール溶媒（１０：　Ｏ〜Ｏ：　１０（ｖ／ｖ））
に酢酸ナトリウム、酢酸アンモニウム等のバッファ塩を
０．１〜０．５％（ｖ／ｖ）の濃度に加えた溶媒で、Ｐ
Ｉのみを溶離させ精製する。

カラム通液方式の場合は、陰イオン交換体をカラム充填
して、上記に準じた条件で通液し、吸着および溶離を行
う。こうして得られるＰＩは高純度であるが、さらに高
度の精製を付加してもよい。

〔発明の効果〕

本発明によれば、ＰＩを多糖体系陰イオン交換体に吸着
させて精製を行うようにしたので、簡単な操作により、
少ない労力および時間で効率よく、大量かつ高純度に高
収率でＰＩの精製を行うことができる。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例について説明する。

実施例１乾燥酵母１ｋｇよりクロロホルム−メタノール（１：　
Ｌ（Ｖ／Ｖ））で抽出した脂質１４ｇをイソプロパツー
ルＩＱで洗浄し、粗ＰＩ画分３ｇを得た。

一方、セルロースにジエチルアミノエチル基を導入した
多糖体系陰イオン交換体ＤＥＡＥ−セファロース、ＣＬ
−６Ｂ　（ファルマシア社製、商標）　１００ｍＱをＩ
Ｎ酢酸ナトリウム（ＰＨ７，０）に懸濁した後濾過し、
水を加え緩く攪拌して濾過し、次にメタノールを加え緩
く攪拌して濾過し、さらにクロロホルム−メタノール（
１：　４（Ｖ／Ｖ））で洗浄し、前処理した。

前処理した含溶媒陰イオン交換体１００ｍＱに、上記の
粗ＰＩ画分２ｇを加え、１時間室温で攪拌して吸着させ
た。これを濾別し、クロロホルム−メタノール（１：　
４（Ｖ／Ｖ））　１００ｍＮで洗い、フラクションｌ（
Ｆ工）を得た。次にクロロホルム−メタノール（１：　
４（Ｖ／Ｖ））の０．１％酢酸ナトリウム（ｗ／ｖ）溶
液１Ωで洗浄し、フラクション２（Ｆ、）を得た。

フラクション１．２をそれぞれ濃縮、脱塩したものにつ
いて薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により分析した
結果、フラクション１には１ｇの脂質があり、ＰＳ、そ
の他のＰＩ以外のリン脂質が含まれ、フラクション２に
はＰＩのみが８００ｍｇ含まれていた。

各ワラクシ３ンのＴＬＣ図を第１図に示す。

実施例２ペースト状大豆すン脂１ｆ（２０ｇをイソプロパツール
ＩＱで洗い、３ｇの粗ＰＩ画分を得た。

一方、セルロースにトリエチルアミノエチル基を尋人し
た多糖体系陰イオン交換体ＴＥＡＥ−セルロース（セル
バ・ファインバイオケミカ社製、商標）を実施例１と同
様に前処理し、前記粗ＰＩ画分を実施例１と同様に吸着
させた。

その後クロロホルム−メタノール（１：　１．１（ｖ／
ｖ））１００＋ｍＲで洗い、フラクション１（Ｆ、）を
得た。次にクロロホルム−メタノール（１：　１（ν／
Ｖ））の０．３％酢酸アンモニウム（ｗ／ｖ）溶液ＩＱ
で洗い、フラクション２（Ｆ、）を得た。

フラクション１にはＰＩ以外の脂質が１ｇ、フラクショ
ン２にはＰＩのみが１．８ｇ含まれていた。

各フラクションのＴＬＣ図を第２図に示す。

実施例３架橋デキストランにジエチル−（２−ハイドロキシプロ
ピル）アミノエチル基を導入した多糖体系陰イオン交換
体ＱＡＥ−セファデックス（ファルマシア社製、商標）
５０ｄを実施例１と同様に前処理し、これに牛脳からの
抽出脂質のＦｏｌｃｈ画分工（シグマ社製、ＰＩＩＯ〜
２０％含有）Ｉｇを実施例１と同様にして吸着させ、そ
の後濾別してクロロホルム−メタノール（１：　１（ｖ
／ｖ））　１００＠２で洗い、フラクション１（Ｆ、）
を得た。次にクロロホルム−メタノール（１：　４（ｖ
／ｖ））の０．１％酢酸ア〉゛モニウム（ｗ／ｖ）溶液
５００ｖａＱで洗い、フラクション２（Ｆ２）を得た。

ワラクシ３ン１．２をそれぞれ濃縮、脱塩したものにつ
いて分析した結果、フラクション１にはＰＩ以外のリン
脂質がｓｏｏｍｇ含まれ、フラクション２にはＰＩのみ
が１２０ｍｇ含まれていた。

各フラクションのＴＬＣ図を第３図に示す。

比較例ケイ酸をクロロホルムに懸濁してカラムに充填し、クロ
マトグラフィーによりリン脂質の分画を行った。まず実
施例１と同様にして得られた粗Ｐ工画分３ｇをケイ酸カ
ラム（φ４．５　Ｘ　３２ｃ＋ｉ）に展着し、次にクロ
ロホルム−メタノールの混合溶媒で溶出させるが、メタ
ノールの濃度を１５％、２５％、３０％、４０％、５０
％、８０％と順次増加させて溶出させた。流す溶媒量は
それぞれ１．４Ｑ、２Ｑ、ＩＱ、２Ω、２Ｑで、２０〜
２００ｄずつ分取していき、５０両分を得た。それぞれ
の両分をまとめた後濃縮したものをＴＬＣにより分析し
た。その結果、溶出溶媒の極性を順次上げていきクロマ
トグラフィーを行っても、十分な分離はできず、またＰ
ＩとＰＳの分離も非常に困難であった。

各フラクションのＴＬＣ図を第４図に示す。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第４図はそれぞれ実施例１〜３および比較
例の結果を示すＴＬＣ図である。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ホスファチジルイノシトールを多糖体系陰イオン
交換体に吸着させ、ホスファチジルイノシトールよりも
前記陰イオン交換体に対する親和性の高いバッファ塩を
含む有機溶媒により前記陰イオン交換体からホスファチ
ジルイノシトールを溶離させることを特徴とするホスフ
ァチジルイノシトールの精製方法。
（２）多糖体系陰イオン交換体がセルロース、アガロー
スまたはデキストランの架橋体に陰イオン交換基を導入
したものである特許請求の範囲第１項記載の方法。
（３）バッファ塩が酢酸、ギ酸もしくはプロピオン酸の
アルカリ塩、アンモニウム塩またはアミン塩である特許
請求の範囲第１項または第２項記載の方法。