JP2968623B2 - 内因性メディエイターの新規誘導体、それらの塩、調製方法、適用及びそれらを含む組成物 - Google Patents

内因性メディエイターの新規誘導体、それらの塩、調製方法、適用及びそれらを含む組成物

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    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】本発明は、内因性メディエイターの新規誘
導体、それらの塩、それらの調製方法、それらの適用、
特に内因性メディエイターの分析、前記メディエイター
のための受容体の分析又は精製、それらの受容体部位の
可視化、抗体の調製及び内因性メディエイターの分析の
ために前記抗体の使用、薬物としてのそれらの適用及び
それらが存在する組成物に関する。
【０００２】メッセージは化学的ベクター（ホルモン又
は神経メディエイター）により細胞間に伝達され、、こ
のベクターの特異性が標的タンパク質、すなわち受容体
により確かめられる。情報を担持する分子はペプチド又
は低分子量分子である。これらの多くは１又は複数のヒ
ドロキシル基及び１又は複数のアミン基、たとえばイン
ドールアミン、カテコールアミン（神経メディエイタ
ー）及びチロキシン（ホルモン）を同時に有する。
【０００３】これらの分子は生理学的に重要な役割を演
じ；すなわち中枢及び末梢神経系における情報の伝達及
び同化におけるインドールアミン及びカテコールアミン
及び基本代謝の調整におけるチロキシンを包含する。診
断を改良し又は機能的な研究を助けるためにそれらをア
ッセイすることが不可欠である。神経メディエイターの
場合、受容体結合部位はエフェクター細胞の応答の特異
性を確かめ、すなわち内因性リガンドの局在化された化
学的変性が種々のタイプの膜受容体とサブタイプの膜受
容体との間の区別を可能にする。このようにして変性さ
れたリガンドは、これらの受容体により制御された生理
学的機能に対して特別に作用する薬物である。
【０００４】一定のホルモンがキャリヤータンパク質に
結合された形で血清に存在する。これらのタンパク質
は、これらのホルモンが合成の点から標的細胞に輸送さ
れることを確保する。甲状腺ホルモンは、ホルモンの合
計量（フリーナ結合）の１％以下のレベルで末結合形で
存在する。甲状腺ホルモンの局在化された化学的変性
は、それらのアッセイの改良を可能にする。
【０００５】出願者は、これらの目的が、第一アミンを
担持する内因性分子のヒドロキシフェニル基上でのＯ−
カルボキシメチル化を通して達成されることを発見し
た。
【０００６】カルボキシメチル化（Ｇｕｒｄ，Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，第ＸＩ巻、１９
６７，５３２〜５４１ページ）はしばしば、アミノ酸の
アミン基をブロックするために使用されて来た。ヒドロ
キシフェニル基のカルボキシメチル化は、副反応として
記載されている（Ｋｏｒｍａｎ ａｎｄ Ｃｌａｒｋ
ｅ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，２２１，１９５６，１
１３〜１３１ページ）。ヒドロキシフェニル基のカルボ
キシメチル化（ｓｐｅｃｔｏｒ，１９８２）は、抗体を
付与するためにタンパク質とモルフィン（アミン基を有
さない）とを結合するために使用されて来た。
【０００７】本発明は、第一アミン基及びヒドロキシル
化された核を含む生物学的活性分子の新規誘導体及び鉱
酸又は有機酸とのそれらの付加塩に関し、ここで前記誘
導体は、下記一般式（Ｉ）： ［Ｒ′ Ｒ″−Ｎ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ］ｎＲ１ （Ｉ） を有し、ここでｎは１〜１０の整数であり；Ａは１〜５
個及び好ましくは２個の炭素原子を含む線状又は枝分れ
アルキレン鎖であり、その枝分れ鎖はスルフヒトリル基
を含むことも可能であり；Ｂは６〜１０個の置換又は非
置換炭素原子を含む芳香族核及び適切には、ヘテロ原子
又は基−Ｂ１−Ｘ−Ｂ２−（式中、Ｂ１及びＢ２は上記
Ｂで定義された通りであり、そしてＸは酸素原子又は１
〜４個の炭素原子を含むアルキレン鎖である）であり；
Ｒ１はアミン残基又はアルコール残基であり；そして
Ｒ′及びＲ″は１〜５個の炭素原子を含むアルキル基、
水素原子、２〜５個の炭素原子を含む脂肪族アシル基、
アミノアシル又は疎水性基であり、そしてＲ′及びＲ″
が２−ヒドロキシ−３−フェノキシプロピル又は２−ヒ
ドロキシ−２−フェニルエチルから誘導された基ではな
いことを特徴とする。
【０００８】鉱酸又は有機酸との付加塩は、たとえば塩
酸、臭酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、蟻酸、プロピオ
ン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、琥珀酸、酒石
酸、クエン酸、蓚酸、グリオキシル酸及びアスパラギン
酸、アルカンスルホン酸、たとえばメタン−又はエタン
−スルホン酸、アリールスルホン酸、たとえばベンゼン
−又はパラトルエン−スルホン酸又はアリールカルボン
酸により形成される塩であり得る。カオトロピックアニ
オンの塩、たとえばシトレート又はスクシネートイオン
の塩を使用することが好ましく、これらは水性媒体にお
ける溶解を促進することができる。
【０００９】Ａにより表わされるアルキレン鎖はプロピ
レン、イソプロピレン、メチレン又は好ましくはエチレ
ン鎖であり；それはスルフヒドリル基により置換され得
る。
【００１０】芳香族核は、単一の環、たとえばフェニル
核又は２つの環、たとえばインドール核を含むことがで
きる。Ｂの１又は複数の炭素原子は、ハロゲン原子、た
とえば塩素、アルコキシ基、たとえばエトキシ又は好ま
しくはメトキシ、アルキル基、たとえばプロピル、エチ
ル又は好ましくはメチル、アルキルチオ基、たとえばメ
チルチオ及びポリハロゲノアルキル基、たとえばトリフ
ルオロメチルから選択された基により置換され得る。
【００１１】本発明の−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ基によ
り置換されたヒドロキシルは、いづれの位置にも位置す
ることができるが、しかし特に核のフェニル環上に及び
好ましくはこのヒドロキシル基が天然のメディエイター
において通常占める位置に位置することができる。
【００１２】Ｒ′及びＲ″がアルキル基である場合、そ
れらは好ましくは、メチル又はエチル基である。好都合
にはＲ′及びＲ″は水素である。アミノアシル基は、ア
ミノ残基、ペプチド又はタンパク質を意味するものとし
て理解される。疎水性基は、前記基が飽和鎖を有し、そ
して遊離アミノ又はヒドロキシル基のような基を含まな
いことを意味するものとして理解される。
【００１３】Ｒ′及びＲ″は好都合には、水素原子又は
メチル又はエチル基であり、適切には、ＮＲ′Ｒ′基を
四次化することが可能であり、そしてその例はトリメチ
ルアンモニウム又はジエチルメチルアンモニウム基であ
る。Ｒ′及びＲ″はまた特に、チロシル又はシリル基で
ある。−Ｂ１−Ｘ−Ｂ２−基においては、Ｂ１及びＢ２
は好ましくは、置換されていない又は１又は複数の基、
たとえばハロゲン原子、特にヨーソ原子又は核Ｂについ
ての上記の他の基により置換されたフェニル核である。
【００１４】Ｘがアルキレン鎖である場合、それは好ま
しくは２個又は好ましくはたった１個の炭素原子を含ん
で成る。Ｒ１が−ＮＨ−Ｒにより示されるアミン残基で
ある場合、アミド結合によりカルボキシルに結合される
残基Ｒはいづれのタイプのものでもあり得るが、しかし
好ましくは、たとえば１又は複数の放射性原子；たとえ
ば１２５Ｉによりラベルするために適切な残基である。
【００１５】この化学的タイプの残基Ｒは好ましくは、
式（Ｉ）の分子の残りとの結合のために使用されるであ
ろうアミノ酸を包含するであろう。このアミン残基はた
とえば、タンパク質又は２〜１０個のアミノ酸及び好ま
しくは２又は３個のアミノ酸を含むポリペプチド、又は
モノアミノ酸、たとえばチロシン又はジアミノ酸であろ
う。
【００１６】前記アミノ酸は好ましくは天然のアミノ酸
又はそれらのアミド誘導体であり；従って、たとえばＲ
１基がグリシル残基及びチロシル残基から成るジペプチ
ドである場合、たとえばチロシル残基とチロシンアミド
残基とを置換することが可能である。
【００１７】ジアミンは、螢光団の結合のために又は下
記一般式（Ｉ′）： Ｒ′ Ｒ″Ｎ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ−
ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−Ｂ−Ａ−Ｎ−Ｒ′ Ｒ″
（Ｉ′） 〔式中、Ｒ，Ｒ′，Ｒ″，Ａ及びＢはすでに定義された
通りである〕で表わされるダイマーの合成のために使用
され得る。
【００１８】アミン残基の中には、特にアミノ、ヒドラ
ジノ及びニトリロ（−Ｎ３）残基及び次のペプチド又は
ペプチド誘導体：チロシル−システイン、チロシル−シ
ステインアミド、チロシル−グリシン又はチロシル−グ
リシンアミドが言及される。
【００１９】カルボキシルに直接又はペプチド又はアミ
ノ酸を通して及びスルフヒドリル基及びアミノ基と反応
することができるヘテロ二価性剤、たとえばＳＭＣＣを
通して結合されるタンパク質誘導体もまたは言及され
得、そして次の残基、たとえばチロシル−システインイ
ル−タンパク質、チロシル−システインイル−ヘテロ二
価性剤、たとえば（ＳＭＣＣ）−タンパク質、グリシル
−チロシン又はグリシル−ブタン−１，４−ジアミンが
言及され得る。
【００２０】Ｒ１がアルコールの場合、置換されていな
い又はフェニル上で置換されたフェノールの誘導体、た
とえば２−又は４−ニトロフェノール、置換されていな
い又はアルキル基によりフェニル上で置換されたフェニ
ルメタノールから誘導されたもの、ヒドロキシアルキル
トリメチルシリル、特にヒドロキシエチルトリメチルシ
リルから誘導されたもの及びＣ１〜Ｃ１６の脂肪族アル
コールから誘導されたものが存在する。
【００２１】本発明の好ましい誘導体は、Ｂがフェニル
核、置換されていない又は１又は複数のハロゲン原子に
より置換されたｐ−フェノキシフェニル基、特に４−
（３，５−ジヨードフェノキシ）−３，５−ジヨードフ
ェニル基又はインドール核であることを特徴とする上記
に定義されるような式（Ｉ）の誘導体及び鉱酸又は有機
酸とのそれらの付加塩である。前記核は、ハロゲン原
子、好ましくは塩素、臭素又はヨウ素により置換され
得、特にインドール核であり、この場合、置換は好まし
くは２−位置で存在する。
【００２２】Ｂがインドール核であるこれらの誘導体の
中では、Ｒ１がジアミン、タンパク質、アミノ酸又は多
くても５個のアミノ酸から成るポリペプチド、又は前記
アミノ酸又はポリペプチドの誘導体、及び特にトリプタ
ミン−５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミ
ド〔Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２〕であることを特徴とするも
の並びに例で言及される誘導体及び鉱酸又は有機酸との
それらの付加塩を使用することが特に好ましい。
【００２３】これらの誘導体の中では、Ａが−（Ｃ
Ｈ２）２−基であり、そしてＲ′及びＲ″が１〜５個の
炭素原子を含む線状又は枝分れアルキル基であることを
特徴とするものを使用することがまた好ましい。
【００２４】本発明の特許出願は、上記誘導体を調製す
るための方法にも関し、前記方法は、下記一般式（Ｉ
Ｉ）： Ｒ′ Ｒ″Ｎ−Ａ−Ｂ−ＯＨ （ＩＩ） 〔式中、Ｒ′，Ｒ″，Ａ及びＢはすでに定義された通り
である〕で表わされる誘導体と、Ｒ′＝Ｒ″＝Ｈの場
合、アミノ基のための保護基を含む誘導体とを反応せし
め、下記一般式（ＩＩＩ）： Ｙ−ＨＮ−Ａ−Ｂ−ＯＨ （ＩＩＩ） 〔式中、Ａ及びＢはすでに定義された通りであり、そし
てＹはアミノ基のための容易に分解できる保護基であ
る〕で表わされる誘導体を得、それをハロゲノ酢酸と反
応せしめ、下記一般式（ＩＶ）： Ｙ−ＨＮ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２ＣＯＯＨ （ＩＶ） 〔式中、Ａ，Ｂ及びＹはすでに定義された通りである〕
で表わされる誘導体を得、それをアミン又はアルコール
誘導体と反応せしめ、上記定義されたような式（Ｉ）の
誘導体又はジアミンの場合、下記一般式（Ｉ′）： Ｒ′ Ｒ″−Ｎ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ
−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−Ｂ−Ａ−Ｎ−Ｒ′ Ｒ″
（Ｉ′） で表わされるダイマー又は他にポリアミンの場合、ポリ
マーを得、それを単離し、そして所望により塩に転換す
ることを特徴とする。
【００２５】一般式（Ｉ）の誘導体は塩基性特性を有す
る。一般式（Ｉ）の誘導体の塩は、所望により鉱酸又は
有機酸と前記一般式（Ｉ）の誘導体とをほぼ理論的な割
合で反応せしめることによって都合良く調製され得る。
適切には、塩はその対応する塩基を単離しないで調製さ
れ得る。
【００２６】一般式（ＩＩ）の誘導体上のアミン基のた
めの保護基をグラフトすることができる誘導体は、たと
えば酸クロリド〔９−フルオロフェニルメチルオキシカ
ルボニルクロリド（ＦｍｏｃＣｌ）又はベンジルオキシ
カルボニルクロリド（ＢｚＣｌ）〕又は好ましくは、無
水物〔ジ−ｔ−ブチルジカーボネート、（ＢＯＣ）２Ｏ
又はシトラコン酸無水物であり得る。
【００２７】式（ＩＶ）誘導体は好ましくは、金属酸化
物、たとえば酸化マグネシウム及びハロゲノ酢酸の存在
下でアルカリ性のｐＨで調製され得、前記酸は、クロリ
ドであり、そして好ましくはブロミドである。
【００２８】式（ＩＶ）の誘導体とアミン誘導体
（Ｒ１）との反応は好ましくは、アルキルクロロカルボ
キシレート、たとえばエチルクロロホルメートによる混
合された無水物の形でのカルボキシル基の活性化の後、
行なわれる。活性剤として酸クロリド及びカルボジイミ
ドを使用し、又は他方、加水分解できるＮ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステルを形成することも可能である。
【００２９】必要なら、アミンのための保護基は、酸加
水分解、特に酸、たとえばトリフルオロ酢酸により、又
はアルカリ加水分解、特にピペラジンにより分解され
る。
【００３０】一般式（ＩＩ）のメディエイター及びそれ
らの合成類似体は、種々の出版物及び特許から良く知ら
れている。一般式（Ｉ）の誘導体、又はその塩の１つ
は、式（Ｉ）の分子の残りへのアミン残基の結合につい
て記載されているように、式（Ｉ）における残基Ｒ１に
おける遊離カルボキシル基の存在を通してマーカーによ
り結合され得る。
【００３１】マーカーがヨウ素である場合、残基Ｒ１は
チロシン（又はチロシンアミド）又はヒスタミンを含む
であろう。マーカーが酵素である場合、残基Ｒ１はカル
ボキシル又はスルフヒドリル基を含むであろう。マーカ
ーが螢光元素である場合、残基Ｒ１はジアミンを含むで
あろう。
【００３２】上記式（Ｉ）の誘導体のかち、上記方法に
従ってＯ−カルボキシメチル単位上にグラフトされるタ
ンパク質を含むものが強調される。本発明の目的物を形
成する誘導体は、ひじょうに価値ある薬理学的性質を有
する。特に、インドール誘導体はセロトニン受容体、特
に５ＨＴｌＤ’Ｓに対する著しい親和性を有する。
【００３３】これらの性質は実験セクションに示され
る。それらは、上記メディエイター誘導体、及び医薬的
に許容できる酸とのそれらの付加塩、たとえば薬物の使
用を正当化する。本発明の薬物は、５−ＨＴ受容体（特
に５ＨＴｌＤ’Ｓ）、それらの解除又は内因性リガンド
（一般的にセロトニン）の変性の機能不全に関連する疾
病の治療的及び予防的な処置に使用される。それらは特
に片頭痛の処理に使用される。
【００３４】処理される対象及び問題の疾患に従って変
化する投与量は、１日当たり０．１〜１０ｍｇの例１の
誘導体であり、そしてヒトへは経口投与される。本発明
は、少なくとも１種の前記誘導体又は医薬的に許容でき
る酸とのその付加塩の１種を活性成分として含む医薬組
成物に関する。薬物として、一般式（Ｉ）の誘導体及び
医薬的に許容できる酸とのその付加塩は、消化管又は非
経口投与のために向けられた医薬組成物に導入され得
る。
【００３５】これらの医薬組成物は、固体又は液体であ
り得、そしてヒトにおける薬物として通常使用される医
薬形、たとえば単純な又は被覆された錠剤、ゼラチンカ
プセル、顆粒、スイート、坐剤、鼻用注入のための製剤
及び注入可能な製剤の形で存在することができ；それら
は従来の方法に従って調製される。前記組成物におい
て、活性成分は医薬組成物に通常使用される賦形剤、た
とえはタルク、アラビアゴム、ラクトース、スターチ、
ステアリン酸マグネシウム、ココアバター、水性又は非
水性ビークル、動物又は植物起源の脂肪、パラフィン誘
導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散剤又は乳化剤、
及び保存剤中に導入され得る。
【００３６】上記のように、式（Ｉ）の誘導体は、受容
体又はその対応する内因性分子のためのキャリヤータン
パク質に対して実質的な親和性を有する。たとえば放射
性元素、特に１２５Ｉ又は螢光元素又は酵素によりラベ
ルされ得る又はされ得ない、本特許出願の対象を形成す
る誘導体は、内因性メディエイター結合部位のインビト
ロ及び多くの場合インビボでの可視化のために特に有用
である。コロイド状金又はコントラス媒体を担持するタ
ンパク質もまた、マーカーとして使用され得る。
【００３７】従って、本特許出願は、ラベルされた形で
存在することを特徴とする上記誘導体にも関する。本特
許出願は、内因性メディエイター受容体の精製への上記
誘導体の使用にも関する。
【００３８】甲状腺ホルモンのＯ−カルボキシメチル化
は、それらのキャリヤータンパク質とそれらのホルモン
との相互作用を調節する。この性質は、これらのキャリ
ヤータンパク質へのこれらの天然の甲状腺ホルモンの結
合を排除するために利用され得る。免疫分析活性の場
合、キャリヤータンパク質への結合を阻止する、抗体に
より認識されない類似体の創造が、全体のホルモンのア
ッセイを可能にする。
【００３９】本特許出願は、全ホルモンをアッセイする
ために、上記誘導体及び特にチロキシンのＯ−カルボキ
シメチル化誘導体のキャリヤータンパク質への結合の阻
害への適用にも関する。本特許出願の誘導体（Ｒ１がタ
ンパク質である）は、式（Ｉ）の分子の残りに対応する
メディエイターに対して向けられた抗体の調製を可能に
する。
【００４０】本特許出願は、内因性メディエイター結合
部位の可視化への上記誘導体の適用にも関する。本特許
出願は、内因性メディエイターに対して向けられた抗体
の調製への式（Ｉ）の誘導体の適用にも関する。
【００４１】内因性メディエイター〔式（ＩＩ）、Ｒ′
Ｒ″−Ｎ−Ａ−Ｂ−ＯＨの〕又はそれらの誘導体は、
トレーカーとして式（Ｉ）の誘導体を用いてこれらの抗
体によりアッセイされ得る。最後に、本特許出願は、上
記式（Ｉ）の誘導体の少なくとも１種を含むことを特徴
とする分析用キットにも関する。次の例は、本発明を例
示するものであって、限定するものではない。
【００４２】
【実施例】例１． チロキシン誘導体の合成 下記一般式（Ｉ）： Ｒ′ Ｒ″−Ｎ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｒ１ （Ｉ） で表わされる誘導体の一連の例であり、ここでＲ′＝
Ｒ″＝Ｈ，Ａ＝−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ２−及びＢは
−Ｂ１−Ｘ−Ｂ２−タイプの基であり、ここでＸは酸素
であり；Ｂ１＝Ｂ２＝Ｃ６Ｈ２Ｉ２である場合、３，
３′，５，５′−テトラヨード−Ｌ−チロニン又はＬ−
チロキシン（Ｔ４）であり；Ｂ１＝Ｃ６Ｈ２Ｉ２及びＢ
２＝Ｃ６Ｈ３Ｉである場合、３，３′，５−トリヨード
−Ｌ−チロニン（Ｔ３）の誘導体である。
【００４３】段階Ａ １． Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート−Ｏ−カルボ
キシメチル−Ｔ４（ＢＯＣ−Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯ
Ｈ）又は−Ｔ３（ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯ
Ｈ）の合成 １．１． アミン基の保護 例１の合成のためには、Ｔ４又はＴ３が遊離酸又はたと
えばアミド化により変性された酸の形で使用される。Ｔ
４及びＴ３のアミン基を、ジ−ｔ−ブチルジカーボネー
ト［（ＢＯＣ）２Ｏ］により保護する（Ｔａｒｂｅｌｌ
など．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，６９，１９７２，７３０〜７３２ページ）。トリエ
チルアミン（ＴＥＡ，７．２Ｎ）３０μＬ及びジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）中、５０ｍＭの（ＢＯＣ）２
Ｏの溶液２４０μＬを、１０μモルのＴ４又はＴ３に添
加する。
【００４４】１．２． ヒドロキシフェニル基のカルボ
キシメチル化 上記で得られた溶液、酸化マグネシウム及び窒素ガスの
存在下で、１２にｐＨを調製されたブロモ酢酸の５００
ｍＭ水溶液と共に等体積で混合する。その混合物を２４
時間、暗室で撹拌する。その媒体を１０，０００ｒｐｍ
で１０分間遠心分離する。
【００４５】１．３． 高性能液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）による生成物の精製 上清液を、０．０５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の
５体積に希釈する。この混合物１ｍＬを、グラフトシリ
カを充填するμ Ｂｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１４のカラム
（１０μｍ、直径３．９ｍｍ、長さ３０ｃｍ）中に注入
する。Ｔ３の誘導体を、０．０５％のＴＦＡ５０体積及
びメタノール５０体積の混合物により３０分間溶離し、
そして次にグラジエントがメタノールにより６０分で１
００％に達する。Ｔ４の誘導体のためには、溶離のため
の初期混合物は０．０５％のＴＦＡ４０体積及びメタノ
ール６０体積から構成される。その流速は１ｍＬ／分で
ある。
【００４６】出発材料（Ｔ３，Ｔ４）を、その期間に集
める。置換された誘導体を次のグラジエントで集める： ＢＯＣ−Ｔ３：７５％のメタノール ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ：７８％のメタノ
ール ＢＯＣ−Ｔ４：８０％のメタノール ＢＯＣ−Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ：８２％のメタノ
ール （図１）集められた画分をＵＶ分光光度計により分析す
る。塩基性及び酸性媒体における吸光度のスペクトル
を、置換が実際、ヒドロキシル基上で生じたかどうかを
決定するために比較する（Ｋｏｒｍａｎ Ｃｌａｒｋ
ｅ，ｏｐ．ｃｉｔ．）。Ｏ−カルボキシメチル化された
誘導体は、塩基性媒体においていづれのスペクトル移行
も示さない（図１）。誘導体ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２
−ＣＯＯＨ及びＢＯＣ−Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨを
含む画分を蒸発せしめ、そして凍結乾燥せしめる。
【００４７】２． Ｏ−カルボキシメチル化された誘導
体とＲ−ＮＨ２基との接合 ２．１． 新しく創造された側鎖の延長 アミド結合を、カルボキシメチル基とアミノ酸、ペプチ
ド鎖又は天然又は変性タンパク質との間で創造すること
ができる。ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ又はＢ
ＯＣ−Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨのカルボキシル基を
エチルクロロホルメート（ＥＣＦ、７μＬ、これにジメ
チルホルムアミド５ｍＬ中、ＴＥＡ７μＬを添加する）
により活性化する。この溶液を、ＥＣＦが活性化される
べく生成物と等モルであるような体積で凍結乾燥物に注
ぐ。４度Ｃで５分間の活性化の後、カルボキシメチル化
された誘導体の濃度よりも５０倍高い濃度でＮＨ２−Ｒ
の水溶液の等体積を添加する。ＮＨ２−Ｒは、遊離酸又
はアミドの形でヒスタミン、Ｇｌｙ−Ｔｙｒ，Ｔｙｒ−
Ｇｌｙ，Ｃｙｓ又はＧｌｙ−Ｃｙｓである。生成物を、
０．０５％ ＴＦＡ／メタノールグラジエントでのμ
Ｂｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１５カラム上でＨＰＬＣにより
分離する。
【００４８】２．２． 高分子誘導体の分離 ２．２．１． 誘導体ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ
−ＮＨ−Ｒのタンパク質上へのグラフティング 上記１．３．又は２．１で得られたような又は遊離酸の
形で得られたような誘導体をエチルクロロホルメートに
より活性化し（２．１．を参照のこと）、そして天然の
タンパク質（ＢＳＡ、ウシ血清アルブミン）又は変性さ
れたタンパク質（Ｇｌｙ−ＢＳＡ）上にグラフトする。
【００４９】誘導体ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−
ＮＨＲを、タイプＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎ
Ｈ−Ｒ−ＢＳＡ〔式中、Ｒ＝Ｈｉｓ，Ｇｌｙ−Ｔｙｒ，
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｇｌｙ−Ｃｙｓ〕の、ＢＳＡ
により結合された誘導体から透析により分離する。これ
らの誘導体のアミン基を、３に従って保護解除すること
ができる。
【００５０】２．２．２． 誘導体Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−
ＣＯＮＨ−Ｃｙｓ又はＴ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｙｓのタンパク質上へのグラフティング タンパク質を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドタイプの
ヘテロ二官能価架橋剤、たとえばスクシンイミジル−４
−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カル
ボキシレート（ＳＭＣＣ）の添加により変性する。その
反応（Ｉｓｈｉｋａｗａなど．，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ，４，２０９〜３２７ページ）は、リ
ン酸緩衝液中においてｐＨ７．３で生じる。ＮＨ２残基
がこの方法で活性化されているタンパク質を、透析によ
り分離する。
【００５１】誘導体Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｃｙ
ｓ又はＴ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
（アミド化された）を、スルフヒドリル基を通してｐＨ
６．５で変性されたタンパク質に接合する。生成物を透
析により分離し、一般式Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ
−Ｃｙｓ−Ｓ−ＳＭＣＣ−ＢＳＡの誘導体を得る。
【００５２】３． Ｏ−カルボシキメチルチロキシン
（Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ）の分離 アミン基を、誘導体ＢＯＣ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯ
Ｈ又はＢＯＣ−Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨ（凍結乾燥
され、そして−２０度Ｃに冷却されている）にＴＦＡ
（２００ｍｇ）２００μＬを添加することにより保護解
除する。１分間の反応時間の後、窒素ガス下でＴＦＡを
蒸発せしめる。
【００５３】段階Ｂ ４． 誘導体のヨーソ化 １ｍＣｉの［１２０Ｉ］Ｎａ（２０００Ｃｉ／ミリモ
ル、ＮＥＮ）及び１０μＬのクロラミンＴ（ＣＴ，１ｍ
ｇ／ｍＬ）を、１ｎモルのＴ３，ＢＯＣ−Ｔ３又はＢＯ
Ｃ−Ｔ３−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨに添加する。９０秒
後、その反応を、２分間にわたってのナトリウムメタビ
スルフィット（ＳＭＢ）５０μＬの添加により停止す
る。２０μＬのメタノールの添加及び撹拌の後、その混
合物をＴＦＡ（０．０５％）１．５ｍＬに希釈する。
【００５４】反応生成物を、例１の誘導体についてＡ．
ｌ．に記載される手段に従って分離する。生成物を、次
のそれぞれの濃度でメタノールグラジエントで排除す
る：［１２５Ｉ］Ｔ４，６２％；ＢＯＣ［１２５Ｉ］Ｔ
４，８０％；ＢＯＣ［１２５Ｉ］Ｔ４−ＯＣＨ２ＣＯＯ
Ｈ，８２％。放射性ラベルされた誘導体をメタノールに
希釈する。ＢＯＣ［１２５Ｉ］Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ
ＯＨを３に指摘されているようにして保護解除する。
【００５５】例２． セロトニン誘導体の合成 下記一般式（Ｉ）： Ｒ′ Ｒ″−Ｎ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｒ１ （Ｉ） 〔式中、Ｒ′＝Ｒ″＝Ｈ，Ａ＝−ＣＨ２−ＣＨ２−及び
Ｂ＝インドール核（５位置にＯＨ、３位置にアミノエチ
ル）〕で表わされる一連の例。 １． Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート−５−Ｏ−カ
ルボキシメチルトリプタミン〔ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ〕の合
成 標準式（ＩＶ）：Ｙ−ＨＮ−Ａ−Ｂ−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ
ＯＨの誘導体
【００５６】段階Ａ １．１．アミノ基の保護 ５−ＨＴのアミン基を、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート
［（ＢＯＣ）２Ｏ］により保護する（Ｔａｒｂｅｌｌな
ど．，１９７２）。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
中、５０ｍＭのセロトニンオキサレート及び５０ｍＭの
（ＢＯＣ）２Ｏの等体積を、トリエチルアミン（ＴＥ
Ａ）の存在下で混合する。ＢＯＣ−Ｓに導びく反応は室
温で直ちに起こる。
【００５７】１．２． ヒドロキシフェニル基のカルボ
キシメチル化 ＢＯＣによる保護は、ブホテニンのように第三アミンを
有するセロトニン誘導体（一般式におけるＲ′及びＲ″
はメチル基である）のためには必要でない。分子の残り
（残基Ａ及びＢ）はセロトニンに同一であるので、ブホ
テニンのＯ−カルボキシメチル化は、ＢＯＣ−Ｓについ
て下記に記載される条件と同じ条件下で直接行なわれ得
る。
【００５８】上記１．１．で得られた溶液（例２）を、
酸化マグネシウム及び窒素ガスの存在下で、１２にｐＨ
調整されたブロモ酢酸の５００ｍＭ水溶液と共に同体積
で混合する。ｐＨ及び酸素及び光の不在は２４時間一定
に保たれる。媒体を１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分
離する。 １．３． 高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
による精製 カルボキシメチル−Ｏ−５−トリプタミン−ＢＯＣ（Ｂ
ＯＣ−Ｓ−ＣＭ）誘導体を、セロトニン−ＢＯＣ（ＢＯ
Ｃ−Ｓ）及び酸化生成物からＨＰＬＣにより分離する。
【００５９】上清液を、トリフルオロ酢酸の１％水溶液
２体積に希釈する。この混合物１．８ｍＬを、Ｕｌｔｒ
ａｓｙｈｅｒｅ ＯＤＳ Ｃ１６グラフトシリカ（５μ
ｍ、直径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍ）のカラム上のＨＰ
ＬＣに注入し、そして溶離（Ｈ２Ｏ／０．０５％ＴＦＡ
の５５体積、メタノールの４５体積）を行なう。溶離の
後、分光分析を行なう。
【００６０】ブホテニンのカルボキシメチル化生成物
を、μ Ｂｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１６のカラム上で分離
し、その溶離は、０．０５％のＴＦＡ ９３体積及びア
セトニトリル７体積により行なわれる。集められた画分
を分光分析により分析する。塩基性及び酸性媒体におけ
る吸収スペクトルを、置換がヒドロキシ基上で実際生じ
たかどうかを決定するために比較する（Ｋｏｒｍａｎ
Ｃｌａｒｋｅ，ｏｐ．ｃｉｔ．）。ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ誘
導体を含む画分を蒸発し、そして凍結乾燥せしめる。
【００６１】２． Ｏ−カルボキシメチル化された誘導
体とＲ−ＮＨ２基との接合 ２．１． 新しく創造された側鎖の延長 アミド結合を、エチルクロロホルメート（ＥＣＦ）によ
るＢＯＣ−Ｓ−ＣＭの酸性基の活性化の後、ペプチド鎖
と共に創造することができる。
【００６２】その活性化溶液は、ジメチルホルムアミド
（ＤＭＦ）５ｍＬ、ＴＥＡ ７μＬ及びＥＣＦ ７μＬ
から成る。この溶液を、ＥＣＦがＢＯＣ−Ｓ−ＣＭと等
モルであるような体積で凍結乾燥誘導体ＢＯＣ−Ｓ−Ｃ
Ｍに注ぐ。４度Ｃで５分間の活性化の後、グリシル−チ
ロシンアミド（又はヒスタミン，Ｔｙｒ−Ｇｌｙ，Ｇｌ
ｙ−Ｔｙｒ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ又はＧｌｙ−Ｃｙｓ，遊離
酸又はアミド化された酸の形）の水溶液の等体積を、Ｂ
ＯＣ−Ｓ−ＣＭの濃度よりも５０倍高い濃度で添加す
る。
【００６３】反応生成物を、溶離（ｐＨ６の水６０体
積、メタノール４０体積）によるＵｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ ＯＤＳ Ｃ１６のカラム上でのＨＰＬＣにより分離
する。誘導体セロトニン−ペプチド（ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ
−ＧＴＮＨ２）を含む画分を蒸発し、そして凍結乾燥せ
しめる。
【００６４】２．２． 高分子誘導体の調製 ２．２．１． タンパク質への誘導体ＢＯＣ−Ｓ−ＣＮ
−Ｒのグラフティング 上記１．３．又は２．１．で得られた又は遊離酸の形で
の誘導体を、エチルクロロホルメートにより活性化し
（２．１．を参照のこと）、そして天然のタンパク質
（ＢＳＡ）又は変性されたタンパク質（Ｇｌｙ−ＢＳ
Ａ）にグラフトする。誘導体ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−Ｒを、
ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−Ｒ−ＢＳＡタイプの、ＢＳＡにより
結合された誘導体から透析により分離する。これらの誘
導体のアミン基を、上記３に従って保護解除することが
できる。
【００６５】２．２．２． タンパク質へのＳ−ＣＭ−
Ｇｌｙ−Ｇｙｓ誘導体のグラフティング タンパク質を、ヘテロ二官能価剤の添加により変性する
（例１の２．２．２．を参照のこと）。誘導体Ｓ−ＣＭ
−Ｇｌｙ−Ｃｙｓを、スルフヒドリル基を通して上記タ
ンパク質にグラフトする。生成物を透析により分離し、
Ｓ−ＣＭ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓ−ＳＭＣＣ−ＢＳＡタイ
プの誘導体を得る。
【００６６】３． アミン基の保護解除 ＴＦＡ（２００ｍｇ）２００μＬを、ＢＯＣ−Ｓ−ＣＯ
−ＮＨＲ（ここで、Ｒ＝Ｈ，Ｇｌｙ−ＴｙｒＮＨ２，Ｈ
ｉｓ，Ｇｌｙ−ＴｙｒＯＨ，Ｔｙｒ−ＧｌｙＮＨ２，Ｇ
ｌｙ−ＧｌｙＯＨ，Ｇｌｙ−Ｃｙｓ）タイプの誘導体
（凍結乾燥され、そして−２０度Ｃに冷却されている）
に注ぐ。１分間の反応時間の後、ＴＦＡを窒素ガス下で
蒸発せしめる。
【００６７】反応生成物を、溶離（水中、０．０５％の
ＴＦＡ６５体積、メタノール３５体積）によるＵｌｔｒ
ａｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ Ｃ１６のカラム上でのＨＰＬ
Ｃにより分離する。遊離基（Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２）を
有する誘導体を含む画分を蒸発し、そして凍結乾燥せし
める。
【００６８】段階Ｂ ４． Ｓ−ＣＭ−Ｒ誘導体のヨウ素化 Ｒ基がヒスタミン又はチロシンを含む場合、クロラミン
Ｔによりヨウ素化を行なうことが可能である。１ｍＣｉ
の１２５ＩＮａ（２０００Ｃｉ／ｍモル、ＮＥＮ）及び
２０μＬのＣＴ（１ｍｇ／ｍＬ）をＳ−ＣＭ−Ｒ（ＰＢ
Ｓ媒体中、１ｎモル）１０μＬに添加する。９０秒後、
その反応を５０ｍＭのＳＭＢ ５０μＬにより停止せし
める。その混合物を１％ＴＦＡ １．６ｍＬに希釈す
る。
【００６９】反応生成物を、溶離（氷中、０．０５％の
ＴＦＡ ７２体積、メタノール２８体積）によるμ Ｂ
ｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１６のカラム上でのＨＰＬＣによ
り分離する。得られた画分をγ分光計により計数し、そ
してクレブス溶液に希釈する。
【００７０】Ｉ．チロキシン結合タンパク質へのチロキ
シン誘導体の結合の特徴 例１の段階Ｂの誘導体（０．１μＬ）を正常なヒト血清
（１００μＬ）に添加する。沈殿を、デキストランチャ
コール５００μＬにより４度Ｃで５分間誘発する。１０
００ｒｐｍで１０分間の遠心分離の後、ＰＥＬＬＥＴの
活性を計数する。初期結合を持続する結合は、［１２５
Ｉ］Ｔ４のために９９．９％、ＢＯＣ［１２５Ｉ］Ｔ４
−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨのために８０％及び
［１２５Ｉ］Ｔ４−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＨのために７５
％である。
【００７１】ＩＩ．中枢受容体へのセロトニン誘導体の
結合の研究 試験を、例２の段階Ｂの生成物により行なった。セロト
ニン（５−ＨＴ１）のために高い親和性を有する受容体
結合部位の分布はラットの中枢神経において不均等であ
る（Ｐａｚｏｓ ａｎｄ Ｐａｌａｃｉｏｓ，Ｂｒａｉ
ｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３４６，１９８５，２０５〜２
３０ページ；Ｓｅｇｕなど．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ，３８４，１９８６，２０５〜２１７ページ）。
さらに、サブタイプの５−ＨＴ２部位の含有量は、問題
の解剖学的構造に従って変化する。
【００７２】脳断片のための方法は、次のすべての研究
に共通する。動物を、抱水クロラール（ｋｇ全体重当た
り４００ｍｇ）により麻酔した後、首を切断する。脳を
すばやく頭蓋骨から取り出し、そして液体窒素により冷
却されたイソペンタンに含浸して凍結する。−２０度Ｃ
での低温保持装置で調製された２０μｍの断片を、ゼラ
チン被覆のスライド上に積層し、そして−２０度Ｃで貯
蔵する。
【００７３】その断片を、内因性リガンドを除くため
に、クレブス溶液（１１８ｍＭのＮａＣｌ；４．８ｍＭ
のＫＣｌ；１．２ｍＭのＣａＣｌ２；１．２ｍＭのＭｇ
Ｃｌ２；トリス−ＨＣｌ １５ｍＭ、ｐＨ７．４）中に
おいて４度Ｃで１時間プレインキュベーする。
【００７４】１． ラットの脳断片におけるセロトニン
の高い親和性結合のＳ−ＣＭ−Ｒ誘導体による置換 １．１． 断片のインキュベーションのための手段 インキュベーションは、１０μＭのパルジリン、５．
７．１０−４Ｍのアスコルビン酸、２ｎＭの［３Ｈ］５
−ＨＴ（ＮＥＮ，Ａｓ＝３０Ｃｉ／ミリモル）及び高濃
度のＳ−ＣＭ−Ｒ誘導体を含むクレブス溶液中において
２０度Ｃで６０分間生じる。非特異的結合を、同じ条件
下（但し、１０−５Ｍの５−ＨＴの存在下で）で拡大断
片で決定する。
【００７５】インキュベーションの後、その断片を蒸留
水により３度２０秒間すすぎ、そして熱風の流れにより
乾燥せしめる。断片を、標準（［３Ｈ］μ規模、Ａｍｅ
ｒｓｈａｍ）の存在下で６週間フィルム（Ａｍｅｒｓｈ
ａｍ）に固定する。フィルムをＫｏｄａｋ Ｄ１９によ
り６分間現像し、すすぎ、そしてＡＬ４（Ｋｏｄａｋ）
により固定する。オートラジオグラフの定量分析を像分
析システムにより行なう（Ｓｅｇｕなど．，Ｊ．Ｎｅｕ
ｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，３１，１９９０，１９
７〜２０８ページ）。
【００７６】１．２． 結果 ［３Ｈ］５−ＨＴの特異的結合は、２ｎＭのＩＣ５０値
で５−ＨＴにより単相工程で置換される。Ｓ−Ｏ−ＣＨ
２−ＣＯＯＨ（Ｓ−ＣＭ）は、１０００ｎＭのＩＣ５０
値でそれと置換し、そしてＳ−ＣＭ−Ｇｌｙ−ＴｙｒＮ
Ｈ２及びＳ−ＣＭ−Ｔｙｒ−ＧｌｙＮＨ２は第１部位に
関して２０ｎＭのＩＣ５０値で及び第２部位に関して４
００ｎＭのＩＣ５０値で二相工程でその結合を置換す
る。
【００７７】２． ラット中枢受容体上でのヨウ素化さ
れた誘導体のための結合部位の分析 ２．１． 断片のインキュベーションのための手段 インキュベーションは、１０μＭのパルジリン、５．
７．１０−４Ｍのアスコルビン酸、１０ｇ／Ｌのウシ血
清アルブミン（画分Ｖ，Ｓｉｇｍａ）及び０．０３ｎモ
ル／ＬのＳ−ＣＭ［１２５Ｉ］−Ｒ誘導体を含むクレブ
ス溶液中において２０度Ｃで６０分間生じる。非特異的
結合を、同じ条件下（但し、１０−５Ｍの５−ＨＴの存
在下で）で拡大断片上で決定する。
【００７８】インキュベーションの後、その断片を蒸留
水により２度１分間すすぎ、そして熱風の流れにより乾
燥せしめる。断片を、標準（［３Ｈ］μ規模、Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ）の存在下で１週間フィルム（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ）に固定する。フィルムをＫｏｄａｋ Ｄ１９により
６分間現像し、すすぎ、そしてＡＬ４（Ｋｏｄａｋ）に
より固定する。オートラジオグラフの定量分析を像分析
システムにより行なう（Ｓｅｇｕなど．，Ｊ．Ｎｅｕｒ
ｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，３１，１９９０，１９７
〜２０８ページ）。
【００７９】２．２． Ｓ−ＣＭ［１２５Ｉ］Ｒ画分に
よるラベリングの分布 ２．２．１． Ｓ−ＣＭ［１２５Ｉ］Ｈｉｓによるラベ
リング 誘導体Ｓ−ＣＭ［１２５Ｉ］Ｈｉｓ（Ａ．４．）の調製
物の画分はラットの脳断片をラベルしない。 ２．２．２． Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２によ
るラベリング Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２（Ａ．４．）のヨウ素化された誘
導体の調製の間に集められた画分のうち、最後の画分の
みがラットの脳の断片上に特異的に保持される。この画
分は、Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２に相当する。
【００８０】オートラジオグラフの観察は、中脳領域に
おいて、黒質（ＳＮ）及び背面の支柱（ＳＤ）に集中的
なラベリングが存在し、そして海馬（Ｈ）にはラベリン
グは存在しないことを示す。この最後の構造は、ほとん
ど独占的に５−ＨＴ２Ａタイプの結合部位を含むために
知られており、そして他は５−ＨＴ１Ｂタイプの部位を
含むことが知られている（Ｈｏｙｅｒなど．，Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１１８，１９８５，１〜１
２ページ）。前部領域においては、ストリアタム（ｓｔ
ｒｉａｔｕｍ）（ＳＴ）はラベルされ、すなわちそれは
５−ＨＴ１Ｂ部位を特に含み；脈絡叢（Ｐｘ）は５−Ｈ
Ｔ１Ｃ部を含み、そしてラベルされていない。
【００８１】結論は、Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ
２が１Ｂタイプのセロトニンのために高い親和性を有す
る結合部位に対する特異的マーカーであることである。 ３． テンジクネズミにおけるＳ−ＣＭ−Ｇ
［１２５Ｉ］ＴＮＨ２のための結合部位の分析 テンジクネズミの中枢神経系においては、５−ＨＴ１Ａ
タイプの部位を含む解剖学的構造及びこれらの部位の薬
理学はラットにおけるのと同じある。対照的に、テンジ
クネズミの黒質に含まれる部位の薬理学は、ラットにお
ける同じ構造の部位の薬理学と異なる（Ｈｅｕｒｉｎｇ
ａｎｄ Ｄｅｒｏｕｔｋａ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃ
ｉ．，７，１９８７，８９４〜９０３ページ）。従っ
て、これらの部位は５−ＨＴ２Ｄとして命名される。
【００８２】ラットに関して２．で使用される方法と同
じ断片処理方法によれば、テンジクネズミ（図６）にお
いて、Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２は黒質（図６
（ｃ））をラベルし、そして海馬（図６（ｂ））をラベ
ルしないことが示された。Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］Ｔ
ＮＨ２は、１Ｄタイプのセロトニンのために高い親和性
を有する部位のためのマーカーである。この５−ＨＴ誘
導体は、５−ＨＴ２Ａ及び５−ＨＴ１Ｃ部位と比べて、
５−ＨＴ１Ｂ及び５−ＨＴ１Ｄ部位のための好ましい親
和性を有し、これは５−ＨＴのために高い親和性を有す
る受容体を分析するためにこのリガンドを重要な手段に
する。
【００８３】それは、５−ＨＴタイプ（たとえばアドレ
ナリン性β受容体）のものではない他の受容体に結合し
ないで、そのような高い選択性を示すための唯一のリガ
ンドである。さらに、それは５−ＨＴ１Ｄ部位をラベル
するための唯一のリガンドである。従って、それはヒト
におけるこのタイプの受容体及び神経劣化疾患（ハンテ
ィングトン舞踏病）におけるそれらの変動を研究するた
めに使用される。 ４． モンキーにおける結合部位の分析 この試験は、例２、段階Ａの誘導体により行なわれた。
【００８４】Ａ．生物学的調製 体重８ｋｇの雄のモンキー（Ｍａｃａｃｃａ ｍｕｌａ
ｔｔａ ｎ．）を、バルジツレートの過剰投与及び放血
により殺した。その動物の死が完了した後すぐに、頭蓋
骨を除き、そして脳を取り出す。左半球を切り除き、そ
して液体窒素に冷却されたイソペンタンにより凍結す
る。そのブロックを−２０度Ｃで貯蔵する。１０μｍの
厚さの断片を−２０度Ｃで低温保持装置により調製し、
そしてゼラチン被覆のスライド上に置く（Ｓｅｇｕな
ど．，１９９０，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．，
３１，１９７）。それらを、必要まで−２０度Ｃで貯蔵
する。
【００８５】−放射性プローブと共にインキュベーショ
ン 断片を、内因性リガンドを除くためにクレブス溶液（１
１８ｍＭのＮａＣｌ；４．５ｍＭのＫＣｌ；１．２ｍＭ
のＣａＣｌ２；１．２ｍＭのＭｇＣｌ２；１５ｍＭのト
リス、ｐＨ７．４）に４度Ｃで１時間インキュベートす
る。次にそれらを、１０−５Ｍのパルジリン、５７ｍＭ
のアスコルビン酸、１０ｇ／Ｌのウシ血清アルブミン及
び０．０２ｎＭのＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２の
み又は高濃度のセロトニンを含む溶液において２０度Ｃ
で６０分間インキュベートする。断片のいくつかを同じ
条件下でインキュベートする。但し、放射性プローブを
２ｎＭの［３Ｈ］５−ＨＴ又は１００ｎＭの８−ヒドロ
キシ−２−〔ジ−Ｎ−プロピルアミノ〕テトラリン（８
−ＯＨ−ＤＰＡＴ）及び１００ｎＭのメスレルギンの存
在下での２ｎＭの［３Ｈ］５−ＨＴ、又は１ｎＭの［３
Ｈ］８−ＯＨ−ＤＰＡＴのいづれかと交換する。蒸留水
で２度１分間すすいだ後、断片を乾燥せしめる。
【００８６】−オートラジオグラフィー スライドをトリチウム感受性フィルムに８日間固定す
る。そのフィルムをＤ１９中で６分間現像し、すすぎ、
そして固定する。オートラジオグラフを、像分析のため
のビデオシステムにより定量化する（Ｓｅｇｕなど．，
１９９０）。
【００８７】Ｂ．結果 ２ｎＭの［３Ｈ］５−ＨＴ（図７（Ａ））の存在下での
インキュベーションは、海馬及び黒質の実質的なラベリ
ングを示す。これらの条件下で、すべてのタイプの５−
ＨＴ１Ａ部位がラベルされる。１ｎＭの［３Ｈ］８−Ｏ
Ｈ−ＤＰＡＴ（図７（Ｂ））の存在下でのインキュベー
ション（５−ＨＴ１Ａ部位を単にラベルする）は、海馬
の密集したラベリングを示すが、しかし黒質のラベリン
グは示さない。
【００８８】１００ｎＭの８−ＯＨ−ＤＰＡＴ及びメス
レルギンの存在下での［３Ｈ］５−ＨＴにおけるインキ
ュベーションの場合（図７（Ｃ））、５−ＨＴ１Ｄ部位
のみがラベルされる。そのオートラジオグラフは、黒質
との強い反応を示す。０．０２ｎＭのＳ−ＣＭ−Ｇ［
１２５Ｉ］ＴＮＨ２のみにおけるインキュベーション
（図７（Ｄ））は、これまでの場合におけるように黒質
の実質的に独占的なラベリングを示す。このセロトニン
のＯ−カルボキシメチル化誘導体は５−ＨＴ１Ｄ部位に
結合する。０．０２ｎＭのＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］Ｔ
ＮＨ２の結合がセロトニンにより置換される場合、５ｎ
Ｍの程度のＩＣ５０（結合の５０％を阻害する濃度）が
得られ、従って誘導体の結合が５−ＨＴ１Ｄ部位に対し
て特異的であることを示す。
【００８９】結論 Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２は、５−ＨＴ１Ｄ受
容体のためのマーカーである。従って、いづれかの類似
する分子は、５−ＨＴ１Ｄ部位への結合のこの特性を有
する。 ５． ヒトにおけるＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２
結合部位の分析 ａ）死後のヒトの脳を−２０度Ｃで貯蔵する。１０μｍ
の断片を、黒質又はアンモン角のいづれかを含むブロッ
クから調製する。その断片を、モンキーの脳の断片につ
いて４．で示したようにして処理する。 ｂ）オートラジオグラフィー処理の後、強いラベリング
が黒質（ラットにおける黒質に相当する構造）上に観察
され、そして弱いラベリングがアンモン角（ラットにお
ける海馬に相当する）上に観察される。
【００９０】黒質は実質的に独占的に５−ＨＴ１Ｄタイ
プの結合部位を含み、そしてアンモン角は５−ＨＴ１Ａ
タイプの部位から優先的に構成される。従って、試験さ
れるヨウ素化された誘導体は、インビトロでヒトの脳の
５−ＨＴ１Ｄ受容体をラベルする。従って、それは、ヒ
トにおけるこのタイプの受容体及び神経劣化疾患（ハン
ティングトン舞踏病）におけるそれらの変動を研究する
ために使用され得る。この性質を有し、そして血液−脳
バリヤーを通して通過する、本発明に記載される誘導体
は、問題の受容体のタイプ（５−ＨＴ１Ｄ）に関係する
機能不全の場合、治療目的のために使用され得る。
【００９１】ＩＩＩ末梢受容体へのセロトニン誘導体の
結合 １． 血液−脳バリヤーを通しての通過 分子が血液−脳バリヤーを通過する場合、それらは中枢
神経系の受容体に対して作用することができ、その効果
は多くの場合で研究された（たとえば４．）。受容体が
末梢神経系及び中枢神経系の両者に存在する場合、血液
−脳バリヤーを通過しない誘導体を有することが所望さ
れる。次にこれらの誘導体は、優先的な中枢作用を伴わ
ないで末梢受容体に対して効果を有するであろう。
【００９２】Ａ．実験手段 ２匹のマウス及び２匹のテンジクネズミに、抱水クロラ
ールにより強く麻酔をかける（体重１００ｇ当たり３５
％の溶液０．１２ｍＬの腹腔内注入）。肋骨ケージを開
き、そして心臓を暴露する。マウス及びテンジクネズミ
は、それぞれ２００μＬ及び１．５ｍＬのＳ−ＣＭ−Ｇ
［１２５Ｉ］ＴＮＨ２の心臓内注入を受ける。
【００９３】１０分後、また深い麻酔状態のそれらの動
物を殺し、そして脳を例１に記載されているようにして
凍結し、そして貯蔵する。断片を調製し、そしてオート
ラジオグラフィー処理を例１に記載されるようにして行
なう。
【００９４】Ｂ．結果 脳の異なった領域に相当する断片の試験は、特に黒質に
おいてラベリングを示さず、インキュベーションが同じ
トレーサーにおいてインビトロで行なわれる場合、それ
は十分にラベルされる。
【００９５】結論 試験されたセロトニン誘導体は、血液−脳バリヤーを通
過せず、片頭痛の最っとも苦痛効果の緩和を可能にす
る。毒性はその注入された量で観察されなかった。 ２． γカメラによるインビボでの可視化によるＳ−Ｃ
Ｍ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２誘導体の結合の分布の研究 この誘導体が１に示されるように血液−脳バリヤーを通
過しない場合、末梢ラベリングの分布は、インビボでの
可視化により研究された。
【００９６】動物（マウス）に麻酔をかけ、そしてＳ−
ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２誘導体を静脈内に注入す
る。その生成物は、心臓、全血管系及び肝臓中に拡散す
ることがひじょうにすばやく観察される。注入の１０分
後、ラベリングは血管系で低下したが、但し心臓及び大
脳血管系はそうではなかった。この後者の領域において
は、ラベリングは、ゆっくり消出する前、１５〜２０分
間保持される。膀胱のラベリングは長期間上昇し、心臓
のラベリングは相当に長い間、持続する。
【００９７】実験を、上記誘導体と同じ特異的結合を示
すが、しかし中枢５−ＨＴ１Ｂ及び５−ＨＴ１Ｄ部位に
特異的に結合する性質を有さないヨウ素化された誘導体
により行なった。この場合、γカメラにより観察される
ラベリングの低下は、Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ
２により観察されるラベリングと同一であるが、但し大
脳血管系はいづれの特別な保持も示さない。従って、Ｓ
−ＣＭ−ＧＴＮＨ２及びその誘導体は、片頭痛の攻撃の
緩和において治療目的のために使用され得る。血液−脳
バリヤーを通過できない場合、それらは、ヒトにおける
中枢セロトニン性部位上に作用することによって副作用
を引き起こさない。
【００９８】例３ 次の配合を有する錠剤を調製した： ５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミド （Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２） …０．５ｍｇ 最終錠剤のための賦形剤 （ラクトース、スターチ、タルク、ステアリン酸マグネシウム）…１００ｍｇ
【００９９】例４ 次の配合を有する分割できる錠剤を調製した： ５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミド （Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２） …２ｍｇ 最終錠剤のための賦形剤 （ラクトース、スターチ、タルク、ステアリン酸マグネシウム）…１００ｍｇ
【０１００】例５ 次の配合を有する注入可能な製剤を調製した： ５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミド （Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２） …２ｍｇ 賦形剤：注入可能な製剤のためには水 …２ｍＬ
【０１０１】例６ 次の配合を有する鼻用エアゾールを調製した： ５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミド （Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２） …３０ｍｇ 賦形剤：水溶液：塩化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、 クエン酸 蒸留水 …１５ｍＬ
【０１０２】例７ 次の配合を有するほほ用エアゾールを調製した： ５−Ｏ−カルボキシメチルグリシルチロシンアミド （Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２） …６０ｍｇ 賦形剤：水溶液：クエン酸、エチルアルコール、 甘味剤、風味剤、ポリソルベート８０、プロピレングリコール 蒸留水 …５０ｍＬ 噴射剤：窒素
【０１０３】例８：５−ＨＴ１Ｄ受容体を分析するため
のキット ５−ＨＴ１Ｄ受容体の存在及び前記受容体のための誘導
体の親和性を研究するために、及びこれらの受容体の親
和性及び数の変化を示すためにキットが調製され、ここ
で前記キットは次の成分を有する： −５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中、例２の段階Ｂの生成物（ ２０００Ｃｉ／ｍ モル） …１５ｍＬ −対照：凍結乾燥されたセロトニン（オキサレート）１
０ｎモル、及び緩衝液ｐ Ｈ６．２ −対照：例２の段階Ｂでの生成物、セロトニン１ｎモル
及び緩衝液ｐＨ６．２（バイアル当たり） −インヒビター溶液：１．２５ｍモルのパルジリン、１
２．５ｍモルの８−ＯＨ −ＤＰＡＴ、１２．５ｎモルのメスレルギン及び緩衝液
ｐＨ７．４（バイアル当たり） −希釈剤：塩緩衝液ｐＨ７．４ −フィルター：ガラス繊維
【０１０４】図１：Ｎ−ＢＯＣ−Ｔ３のカルボキシメチ
ル化生成物の精製 Ａ：μ Ｂｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１５上でのＨＰＬＣ後
のクロマトグラム。０〜３０分：５０体積の０．０５％
ＴＦＡ，５０体積のメタノール。３０〜８０分：１００
％メタノールグラジエント。ピークの高さは、２種の異
なった溶離プロフィールが存在するために、単独でな
い。 Ｂ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｔ３の吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ．横
座標：２２０〜３５０ｎｍの波長。スペクトルは、Ｔ３
に関して塩基性媒体において移行され得る。 Ｃ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｔ３−ＯＣＨ２−ＣＯＯＨの吸収スペクト
ル。縦座標：Ｏ．Ｄ．横座標：２２０〜３５０ｎｍの波
長。スペクトルは、塩基性媒体において移行され得な
い。
【０１０５】図２：セロトニン−Ｎ−ＢＯＣ（ＢＯＣ−
Ｓ）のカルボキシメチル化生成物の精製 Ａ：溶離によるＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ ＯＤＳ Ｃ
１６上でのＨＰＬＣの後でのクロマトグラム：５５体積
のＨ２Ｏ／０．０５％ＴＦＡ、４５体積のメタノール。
縦座標：種々の波長（ｎｍ）についての光学密度（Ｏ．
Ｄ．）（右に示される）。 横座標：分での時間。 Ｂ．２８分後に出現する生成物、ＢＯＣ−Ｓ（実線）及
び３６分後に出現する生成物、ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ（点
線）の、２８０ｎｍで調整された吸収スペクトル。縦座
標：Ｏ．Ｄ． 横座標：２００〜３５０ｎｍでの波長。 Ｃ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｓ−ＣＭの吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．
Ｄ． 横座標：２００〜３５０ｎｍの波長 Ｄ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るセロトニンの吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ． 横
座標：２００〜３５０ｎｍの波長。 Ｅ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｓの吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ． 横
座標：２００〜３５０ｎｍの波長。スペクトルは、セロ
トニン（図１（Ｄ））におけるように塩基性媒体におい
て移行されることを注目すべきである。これは、ＯＨ上
で置換されるＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ（図１（Ｃ））に関して
は事実でない。 図３：ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ及びＧＴＮＨ２の接合生成物の
精製 Ａ：溶離によるＵｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ Ｃ１６上での
ＨＰＬＣの後でのクロマトグラム：６０体積の水、ｐＨ
６、４０体積のメタノール。縦座標：種々の波長（ｎ
ｍ）についてのＯ．Ｄ．（右に示される）。 横座標：
分での時間。 Ｂ：１８分後に出現する生成物、ＧＴＮＨ２（実線）、
３５分後に出現する生成物、ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ（点
線）、及び４８分後に出現する生成物、ＢＯＣ−Ｓ−Ｃ
Ｍ−ＧＴＮＨ２（ダッシュ線）の、２８０ｎｍで調整さ
れた吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ． 横座標：２０
０〜３５０ｎｍでの波長。 Ｃ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｓの吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ． 横
座標：２００〜３５０ｎｍでの波長。 Ｄ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＧＴＮＨ２の吸収スペクトル。縦座標：Ｏ．Ｄ． 横
座標：２００〜３５０ｎｍでの波長。 Ｅ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２の吸収スペクトル。縦
座標：Ｏ．Ｄ． 横座標：２００〜３５０ｎｍでの波
長。 アルカリ媒体におけるスペクトル移行は、ＯＨ上で置換
されていないセロトニンのスペクトルに少しも対応せず
（図２（Ｃ））、そしてそのスペクトルはＢＯＣ−Ｓ−
ＣＭのスペクトルよりも移行される（図１（Ｃ））こと
を注目すべきである。より長い波長への移行が、ＧＴＮ
Ｈ２（図２（Ｄ））に関して観察されるが、しかしこの
変性はＯ．Ｄ．の点で小さい。 図４：ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２のアミンの保護解
除に起因する生成物の精製 Ａ：溶離によるＢｏｎｄａｐａｃｋ Ｃ１６でのＨＰＬ
Ｃの後でのクロマトグラム：６５体積のＨ２Ｏ／０．０
５％ＴＦＡ、３５体積のメタノール。縦座標：２８０及
び３００ｎｍについてのＯ．Ｄ．横座標：分での時間。 Ｂ：２４分後に出現する生成物、Ｓ−ＣＭ（実線）及び
３０分後に出現する生成物、Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２（点
線）の、２８０ｎｍで調整された吸収スペクトル。６０
分後に出現する生成物、ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２
のスペクトルは図２（Ｂ）に示されるスペクトルと同一
である。 Ｃ：酸性媒体（Ａｃ）及びアルカリ媒体（Ａｌ）におけ
るＳ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２の吸収スペクトル。縦座標：
Ｏ．Ｄ． 横座標：２００〜３５０ｎｍでの波長。ｐＨ
の機能としてのスペクトル移行は、図２（Ｅ）に示され
るＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２について得られるスペ
クトルと同一である。 図５：０．０３ｎＭのＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ
２においてインキュベートされたラット−ラット脳断片
（１０μｍ）におけるＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ
２結合部位の分析 Ａ：前方領域 Ｐｘ：脈絡叢；Ｓｔ：ストリアタム Ｂ：中脳領域 ＳＤ：背面の支柱；ＳＮ：黒質；Ｈ：海馬 Ｃ：１０−４Ｍの５−ＨＴの存在下で確立された、中脳
領域における非特異的結合。Ｐｘ及びＨはラベルされて
おらず（それらはそれぞれ５−ＨＴ１Ｃ及び５−ＨＴ
１Ａ部位を含んでいてさえ）、そしてＳｔ，ＳＤ及びＳ
Ｎ（５−ＨＴ１Ｂ部位を有する）はラベルされることを
注目すべきである。 図６：０．０３ｎＭのＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ
２においてインキュベートされたテンジクネズミ−テン
ジクネズミ脳断片（１０μｍ）におけるＳ−ＣＭ−Ｇ［
１２５Ｉ］ＴＮＨ２結合部位の分析 Ａ：前方領域 Ｐｘ：脈絡叢；Ｓｔ：ストリアタム Ｂ：海馬の領域 ＳＤ：背面の支柱；Ｈ：海馬 Ｃ：黒質の領域 ＳＮ：黒質 Ｐｘ及びＨはラベルされておらず（それらは５−ＨＴ
１Ｃ及び５−ＨＴ１Ａ部位をそれぞれ含んでいてさ
え）、そしてＳｔ，ＳＤ及びＳＮ（５−ＨＴ１Ｄ部位を
有する）はラベルされることを注目すべきである。 図７：モンキー（Ｍａｃａｃｃａ ｍｕｌａｔｔａ
ｎ．）の脳断片上での５−ＨＴ１受容体の検出。凍結さ
れた組織断片（１０μｍ）を、種々のプローブと共にイ
ンキュベートし、そしてオートラジオグラフィー処理に
ゆだねる。 Ａ：２ｎＭの［３Ｈ］５−ＨＴにおけるインキュベーシ
ョンは海馬（Ｈ）及び黒質（ＳＮ）における全５−ＨＴ
１部位を示す。 Ｂ：１ｎＭの［３Ｈ］８−ＯＨ−ＤＰＡＴにおけるイン
キュベーションは海馬に独占的に位置する５−ＨＴ１Ａ
を示す。 Ｃ：１００ｎＭの８−ＯＨ−ＤＰＡＴ及び１００ｎＭの
メスレルジンの存在下での２ｎＭの［３Ｈ］５−ＨＴに
おけるインキュベーションは、黒質に独占的に位置する
５−ＨＴ１Ｂ部位を示す。 Ｄ：０．０２ｎＭの［１２５Ｉ］Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２
におけるインキュベーションは、Ｃに示されるラベリン
グに類似する、黒質の独占的なラベリングを示す。 Ｅ：Ｄと同じインキュベーション（但し１０−５Ｍの５
−ＨＴが添加された）は、非特異的結合を示す（縮尺＝
１ｃｍ）。 Ｆ：Ｒｉｃｈｅなど．， １９６８による図解書のセク
ション５から取られた解剖構造の図。
【図面の簡単な説明】
【図１】これはＮ−ＢＯＣ−Ｔ３のカルボキシメチル化
生成物の精製であって、（Ａ）はＨＰＬＣでのクロマト
グラム；（Ｂ）はＢＯＣ−Ｔ３の吸収スペクトル；
（Ｃ）はＢＯＣ−Ｔ３−ＯＣＨ２−ＣＯＯＨの吸収スペ
クトルである。
【図２】これはセロトニン−Ｎ−ＢＯＣ（ＢＯＣ−Ｓ）
のカルボキシメチル化生成物の精製であって、（Ａ）は
ＨＰＬＣでのクロマトグラム；（Ｂ）はＢＯＣ−Ｓおよ
びＢＯＣ−Ｓ−ＣＭの吸収スペクトル；（Ｃ）はＢＯＣ
−Ｓ−ＣＭの吸収スペクトル；（Ｄ）はセロトニンの吸
収スペクトル；（Ｅ）はＢＯＣ−Ｓの吸収スペクトルで
ある。
【図３】これはＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ及びＧＴＮＨ２の接合
生成物の精製であって、（Ａ）はＨＰＬＣでのクロマト
グラム；（Ｂ）はＧＴＮＨ２，ＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ及びＢ
ＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２の吸収スペクトル；（Ｃ）
はＢＯＣ−Ｓの吸収スペクトル；（Ｄ）はＧＴＮＨ２の
吸収スペクトル；（Ｅ）はＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ
２の吸収スペクトルである。
【図４】これはＢＯＣ−Ｓ−ＣＭ−ＧＴＮＨ２のアミン
の保護解除に起因する生成物の精製であって、（Ａ）は
ＨＰＬＣでのクロマトグラム；（Ｂ）はＳ−ＣＭ及びＳ
−ＣＭ−ＧＴＮＨ２の吸収スペクトル；（Ｃ）はＳ−Ｃ
Ｍ−ＧＴＮＨ２の吸収スペクトルである。
【図５】これはＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２と共
にインキュベートされたラット−ラット脳断片における
Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２結合部位の分析であ
って、（Ａ）は前方領域；（Ｂ）は中脳領域；（Ｃ）は
中脳領域における分析であり、図面に代わる写真であ
る。
【図６】これは、Ｓ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２と
共にインキュベートされたテンジクネズミ−テンジクネ
ズミ脳断片におけるＳ−ＣＭ−Ｇ［１２５Ｉ］ＴＮＨ２
結合部位の分析であって、（Ａ）は前方領域；（Ｂ）は
海馬の領域；（Ｃ）は黒質の領域における分析であり、
図面に代わる写真である。
【図７】これはモンキーの脳断片上での５−ＨＴ１受容
体の検出を示し、（Ａ）は海馬及び黒質領域；（Ｂ）は
海馬領域；（Ｃ）は黒質領域；（Ｄ）黒質領域における
分析であり、そして（Ｅ）は非特異的結合を示し；そし
て（Ｆ）は解剖構造図であり、そしてこれらは図面に代
わる写真（Ｆを除く）である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ルイ セグ フランス国，13400 マルセイユ，シュ マン ドゥ リケ 576 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims (19)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下の式（Ｉ）〜式（IV）： 【化１】 ； 【化２】 ； 【化３】 ；及び 【化４】 ｛式中、ｍは、２〜５の整数であり； ペプチド成分中のＲ1 とＲm は、互いに独立して、アミ
    ノ酸側鎖であり； Ｒ6 は、−ＯＨ又は−ＮＨ2 であり； Ｂは、以下の式（Ｖ）〜（VII ）： 【化５】 ； 【化６】 ；及び 【化７】 〔式中、Ｒ7 〜Ｒ11基の中の１のみ、及びＲ12〜Ｒ16基
    の中の１のみが、 【化８】 の基（基中、Ａは、１〜５炭素原子を含む直鎖又は分枝
    アルキレン鎖であり；そしてＲ17とＲ18は、１〜５炭素
    原子を含むアルキル基又は水素原子である。）であり、
    そしてＲ7 〜Ｒ11の中の残りの基及びＲ12〜Ｒ16の中の
    残りの基は、互いに独立して、水素原子、ハロゲン原
    子、アルコキシ基、アルキル基、アルキルチオ基、又は
    ポリハロゲノアルキル基である。〕から成る群から選ば
    れ； ここで、ヒスタミン成分又は、Ｒ1 とＲm がチロシン側
    鎖を含む場合、そのチロシン残基は、ヨウ素化されるこ
    とができる。｝から成る群から選ばれた化合物、あるい
    は無機又は有機酸とのそれらの付加塩。
  2. 【請求項２】 式中、Ｒ1 がチロシン残基であり、ｍ＝
    ２であり、Ｒ2 ＝Ｈであり、そしてＲ6 ＝ＮＨ2 であ
    る、すなわち、ペプチド成分がチロシルグリシンアミ
    ド： 【化９】 である、請求項１に記載の式（III ）の化合物、あるい
    は無機又は有機酸とのそれらの付加塩。
  3. 【請求項３】 Ａが、基-CH2-CH2- であることを特徴と
    する、請求項１又は２に記載の化合物、あるいは無機又
    は有機酸とのそれらの付加塩。
  4. 【請求項４】 トリプタミン−５−Ｏ−カルボキシメチ
    ル・グリシルチロシンアミドである、請求項１に記載の
    化合物、あるいは無機又は有機酸とのその付加塩。
  5. 【請求項５】 トリプタミン−５−Ｏ−カルボキシメチ
    ルグリシルヨードチロシンアミドである、請求項１に記
    載の化合物、あるいは無機又は有機酸とのその付加塩。
  6. 【請求項６】 トリプタミン５−Ｏ−カルボキシメチル
    ・チロシルグリシンアミドである、請求項１に記載の化
    合物、あるいは無機又は有機酸とのその付加塩。
  7. 【請求項７】 トリプタミン５−Ｏ−カルボキシメチル
    ・ヨードチロシルグリシンアミドである、請求項１に記
    載の化合物、あるいは無機又は有機酸とのその付加塩。
  8. 【請求項８】 請求項１に記載の式（Ｉ）〜式（IV）の
    化合物、あるいは無機又は有機酸とのそれらの付加塩の
    製法であって、以下の式（VIII）： R17R18 N-A-B-OH （VIII） 〔式中、Ｒ17、Ｒ18、Ａ及びＢは請求項１において定義
    されたものと同じである〕で表わされる化合物と、Ｒ17
    ＝Ｒ18＝Ｈの場合、そのアミン基のための保護基を含む
    化合物とを反応せしめ、以下の式（IX）： Y-HN-A-B-OH （IX） 〔式中、Ａ及びＢはすでに定義された通りであり、そし
    てＹはそのアミン基のための容易に解裂可能な保護基で
    ある〕で表わされる化合物を得て、それを、ハロゲノ酢
    酸と反応せしめ、以下の式（Ｘ）： Y-HN-A-B-O-CH2COOH （Ｘ） 〔式中、Ａ，Ｂ及びＹはすでに定義された通りである〕
    で表わされる化合物を得て、それを、アミンと反応せし
    め、請求項１に記載された式（Ｉ）〜式（IV）の化合物
    を得る、前記製法。
  9. 【請求項９】 ５−ＨＴ受容体の機能不全、その内因性
    リガンドの解除又は修飾に関連する疾患の治療又は予防
    のための、活性成分として少なくとも１の請求項１に記
    載の化合物又はその塩を含むことを特徴とする医薬組成
    物。
  10. 【請求項１０】 ５−ＨＴ受容体の機能不全、その内因
    性リガンドの解除又は修飾に関連する疾患の治療又は予
    防のための、活性成分として少なくとも１の請求項２〜
    ７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含むこと
    を特徴とする医薬組成物。
  11. 【請求項１１】 放射性元素、螢光分子、酵素、コロイ
    ド状金を担持するタンパク質又はコントラスト媒体で標
    識された、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物
    又はその塩。
  12. 【請求項１２】 前記放射性元素が 125Ｉである、請求
    項１１に記載の化合物又はその塩。
  13. 【請求項１３】 内因性メディエイター受容体の可視化
    のための、請求項３又は１１に記載の化合物又はその塩
    を含む剤。
  14. 【請求項１４】 内因性メディエイター受容体の精製の
    ための、請求項４〜７又は１１のいずれか１項に記載の
    化合物又はその塩を含む剤。
  15. 【請求項１５】 内因性メディエイター又はその誘導体
    に対する抗体の調製のための、請求項４〜７のいずれか
    １項に記載の化合物又はその塩を含む剤。
  16. 【請求項１６】 全ホルモンをアッセイするために、キ
    ャリヤー・タンパク質への結合を阻害するための、請求
    項１〜７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩を含
    む剤。
  17. 【請求項１７】 メディエイター及びそれらの誘導体を
    アッセイするための分析キットであって、請求項１〜７
    又は１１のいずれか１項に記載の化合物又はその塩の中
    の少なくとも１を含むことを特徴とする、前記分析キッ
    ト。
  18. 【請求項１８】 請求項４〜７のいずれか１項に記載の
    化合物又はその塩であって、そのペプチドのＣ−末端が
    遊離酸であるもの。
  19. 【請求項１９】 Ｂが、４ブロモ置換インドールであ
    る、請求項４〜７のいずれか１項に記載の化合物又はそ
    の塩。
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