JP2888961B2 - ▲ｉｉ▼型エンドグリコシダーゼを使用する方法および処方物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 発明の分野 本発明は、糖タンパク質などのグリコシド含有物質を
単独または他の酵素および／または洗剤との組み合わせ
でのII型エンドグリコシダーゼでの処理によって表面か
ら除去するための方法および処方物に関する。

発明の背景 酵素を各種の洗剤と併用してタンパク質および／また
は炭水化物からなるしみを除去することは、洗剤処方物
の技術で周知である。かかる酵素処方物は、各種のしみ
を布などの軟質表面および磁器、金属などの硬質表面か
ら除去しようとする。かくて、例えば、トリプシン、パ
ンクレアチン、パパイン、ブロメラインなどのプロテア
ーゼは、タンパク質しみを不定の成功度で除去するため
に洗剤処方物で使用されることが報告されている。一
方、セルラーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、グルカナー
ゼなどの特異性グリコシダーゼは、或る炭水化物しみの
除去のために各種の洗剤と共に処方されている。他の洗
剤処方物は、しみ処理のためにプロテアーゼとグリコシ
ダーゼとを組み合わせている。

洗剤処方物で使用されているグリコシダーゼの若干、
例えば、β−アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼおよび
β−ガラクトシダーゼは、１個以上の末端残基をオリゴ
糖または多糖から切断するエキソグリコシダーゼであ
る。他のグリコシダーゼ、例えば、セルラーゼおよびα
−アミラーゼは、オリゴ糖または多糖基質内の特異性内
部結合と反応性であるエンドグリコシダーゼである。か
かるエンドグリコシダーゼは、ここでＩ型エンドグリコ
シダーゼと称する。１種以上のプロテアーゼおよび／ま
たはグリコシダーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼを含め
て）を有する洗剤の処方物は、しみ抜きを大幅に改善し
たが、多くのしみ、例えば、血液、糞便および体の汚れ
しみは、しばしば、処理後に残留しみを残す。

コンタクトレンズクリーニングの技術においては、同
様の酵素／洗剤処方物は、硬質および軟質コンタクトレ
ンズをクリーニングし且つ滅菌するために使用されてい
る。多くの場合には、これらの処方物は、コンタクトレ
ンズの表面上に形成し且つかかるレンズに付着するため
に緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）、表皮ブドウ球菌
（Staphylococcus epidermidis）などの各種の目の病原
体によって使用されているバイオフィルムを分解するた
めに使用されている。例えば、J.A.デュラン等（198
7）、Arch.Ophthalmol,105 106−109;G.A.スターン等
（1987）、Ophthalmology,94,115−119（シュードモナ
ス付着を抑制するためにムシン被覆コンタクトレンズを
パンクレアチン、パパイン、トリプシン、ノイラミニダ
ーゼなどの各種の酵素で処理ことを報告）；およびM.M.
スルチャー等（1987）,Arch.Ophthalmol,105,110−115
参照。

微生物付着用バイオフィルムの使用は、コンタクトレ
ンズには限定されない。かくて、ストレプトコッカス・
ミュータンズ（Streptococcus mutans）は、歯エナメル
質に付着するために細胞外多糖類を使用することを報告
している。EPO刊行物第0195672号明細書は、歯のエナメ
ル質に付着するためにストレプトコッカス・ミュータン
ズによって使用される細胞外多糖類を切断するためにα
−1,3−グルカナーゼまたはα−1,6−グルカナーゼを使
用することを報告している。

ガラス表面に付着された細胞に対する或る酵素の効果
も、A.ダニールソン等（1977）,Botanica Marina,20,13
−17に報告されている。そこに報告のように、海水から
単離されたシュードモナス種は、ガラススライドに付着
した。その後、スライドは、プロナーゼ、トリプシン、
α−アミラーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼ）、または
リゾチーム（またＩ型エンドグリコシダーゼ）で処理し
た。この報告においては、タンパク分解酵素プロナーゼ
およびトリプシンでの処理は、付着された細菌の個体群
の一部分の放出を生じる一方、細胞分解用酵素リゾチー
ムは、タンパク分解酵素と比較して減少された活性を示
した。α−アミラーゼは、全く効果を有していないと報
告された。微生物のコンタクトレンズ、歯エナメル質お
よびガラス表面への結合に加えて、多くの他の表面は、
微生物結合を受けやすい。例えば、T.J.マリー等（198
4）,J.Clin.Microbiology,19,991−914（心臓ペースメ
ーカーリードおよびパワーパックへの細菌結合）;N.B.
フレイマー等（1978）,Acta.Path.Microbiol.Scand.Sec
tb.,86,53−57（微生物のマクロファージへの結合）；
およびミレルマン等（1982）,Tokai J Exp.Clin.Med.,
７,77−183（哺乳動物粘膜表面への微生物付着）参照。
各種の機構は、細菌などの微生物の無生物固体表面への
付着を説明するために提案されている。例えば、M.フレ
ッチャー（1987）,Microbiological Sciences,４,133−
136、およびJ.E.ダドリッジ等（1983）,Factors Affect
ing the Adhesion of Bacteria to Surfaces in Microb
ial corrosion,デルコ・プリンティング・カンパニー・
リミテッド,pp.28−35参照。これらの文献は各種の表面
はの微生物付着およびかかる結合に包含されることがあ
る因子を論じているが、かかる表面上の微生物増殖の制
御またはそれからの除去を論じていない。

ここで使用するII型エンドグリコシダーゼは、糖タン
パク質で見出された特異性内部グリコシド結合を切断す
ることができるエンドグリコシダーゼのカテゴリーであ
る。これらのエンドグリコシダーゼは、糖タンパク質中
の反応性グリコシド結合の位置に応じて糖タンパク質か
ら炭水化物部分のすべてまたは一部分を切断する。例と
しては、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ
（エンド−Ｄ、エンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−C
I、エンド−C II、エンド−Ｆ−Gal型およびエンド−
Ｆ）、エンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ
およびエンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼが挙げられて
いる。例えば、A.L.タレンチノ等（1985）,Biochem,24,
4665−4671;M.アラカワ等（1974）,J.Biochem.,76,307
−317;T.H.プルマー等（1984）,J.Biochem,259,10700−
10704;A.L.タレンチノ等（1975）,Biochem.and Biophy
s.Res.Comm.,67,455−462;およびR.B.トリンブル等（19
84）,Anal.Biochem.,141,515−522;およびJ.G.ビーレイ
による「糖タンパク質およびプロテオグリカン技術」
（1985）、第６章、pp.153−300（エルスビール、アム
ステルダム、ニューヨーク、オックスフォード）参照。
糖タンパク質の内部グリコシド結合に対する特異性を有
することに加えて、少なくとも１種のエンドグリコシダ
ーゼ（エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ
Ｈ）は、脂質結合オリゴ糖類の切断を生ずる特異性も実
証し〔R.J.チャリフォア等（1983）,Archives of Bioch
em.and Biophys.,229,386−394〕且つオリゴ糖類および
糖タンパク質中のジ−Ｎ−アセチルキトビオース結合の
切断を生ずる特異性も実証していると報告されている
〔A.L.タレンチノ等（1974）,J.Biol.Chem.,249,811−8
17〕。

かかるII型エンドグリコシダーゼは、一般に、主とし
て分析目的、例えば、特異性糖タンパク質のタンパク質
または炭水化物配列および／または構造および機能の測
定に使用されている。例えば、P.ヒシー等（1984）,J.B
iolchem.,258,2555−2561、およびR.ゲイヤー等（198
4）,Eur.J.Biochem.,143,531−539参照。最近の報告に
おいては、II型エンドグリコシダーゼは、リーシュマニ
ア・メキシカーナ・アマゾネンシス（Leishmania mexic
ana amazonesis）からの糖タンパク質抗原を分析するた
めに使用されると報告された。チン・シェン・チャング
等（1986）、Mol.Biochem.Parasitol 18,197−210。こ
の糖タンパク質抗原は、先ず、免疫ビーズに免疫学的に
結合した。免疫学的に結合された糖タンパク質を分析量
のエンド−Ｈと反応させた後、免疫ビーズは、洗浄し、
ポリアクリルアミドゲル電気泳動用製剤中のSDS 1％を
含有する緩衝液中で沸騰した。この分析は、免疫学的に
結合された糖タンパク質抗原からの炭水化物の切断に起
因する分子量の減少を示した。

しかしながら、II型エンドグリコシダーゼは、糖タン
パク質および糖脂質を含めた物質を布帛、コンタクトレ
ンズ、金属、セラミックス、細胞、組織などの物質の表
面から除去するために使用されていない。それらは、懸
濁液中またはかかる表面上での微生物増殖を制御するた
めにも使用されていない。

グリコシダーゼは、各種の物質の除去のために他の酵
素と併用されている。β−グリコシダーゼは、アンダー
ソン等（1964）、Biochem.J.,90,30に炭水化物代謝性酵
素として記載されている。ノイラミニダーゼ（Ｎ−アセ
チルノイラミニエートグリコヒドロラーゼ）抑制剤は、
コーリン等（1979）,FEBS Letters,８,17;およびハスケ
ル等（1970）,J.Med.Chem.,13,48において可能な抗ウイ
ルス抗菌剤として検討されている。デキストラナーゼ
は、チャイエット等（1970）,Appl.Microbiol,20,421に
おいてイソマルトース残基に対する最近多糖デキストラ
ン（α−1,6−グルカン）の加水分解を触媒すると記載
されている。リゾチーム（ムラミダーゼ）は、チップマ
ン等（1969）,Sceince,165,454およびモンターグ（196
4）,Biochem.Biophys.Acta.,86,588において各種の微生
物のムコ多糖細胞壁構造中のグリコシド結合を加水分解
すると記載されている。最後に、Ｄ−グルコサミン誘導
体によるリゾチームの抑制は、ノイベルガー等（196
7）,Nature,215,524に記載されている。

しかしながら、II型エンドグリコシダーゼ、例えば、
エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＨ、Ｄ、
Ｆおよび／またはPNGase Fは、従来、抗菌組成物を調製
するために抗菌剤と組み合わされていない。

前記文献は、本件の出願日前の開示のためのみに与え
られ且つかかる文献が従来技術であることまたは本発明
者等が先行発明または先頭に基づく優先権によってかか
る開示に先んじるために権利を与えるのではないという
承認とは解釈すべきではない。

発明の概要 本発明の目的は、布帛、コンタクトレンズ、金属表
面、プラスチック表面、セラミック表面、細胞表面、組
織などの物質からの糖タンパク質および糖脂質を含めた
物質の除去を容易にするためにII型エンドグリコシダー
ゼを単独または他の酵素、洗剤、界面活性剤および／ま
たはジスルフィド切断試薬との組み合わせで利用する方
法を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、かかる方法を実施する際に
有用なII型エンドグリコシダーゼを含有する処方物を提
供することにある。

本発明の目的によれば、物質の少なくとも一部分を免
疫学的結合以外によって結合された表面から除去する方
法が提供される。物質は、表面に結合された近位部分、
近位部分から外方に延出する遠位部分、およびII型エン
ドグリコシドダーゼと反応性である近位部分と遠位部分
との接合点に配置された結合を有する。方法は、結合さ
れた物質をII型エンドグリコシドダーゼと接触させて物
質の遠位部分を近位部分から切断し、それによって遠位
部分を表面から放出することからなる。かかる放出が遠
位部分を表面から除去しないならば、かかる除去は、遠
位部分を洗浄液、洗剤処方物、例えば、界面活性剤を有
するものまたは第二酵素、例えば、異なるグリコシダー
ゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、ヌクレアーゼまたはそれ
らの組み合わせを含有する流体と接触することによって
容易にしてもよい。

更に、本発明は、グリコシド含有物質を少なくとも第
一酵素および第二酵素と接触してグリコシド含有物質の
切断部分を表面から放出することによって、グリコシド
含有物質の少なくとも一部分を、グリコシド含有物質が
結合されている表面から放出する方法を包含する。第一
酵素は、物質のグリコシド部分中のグリコシド結合と反
応性のII型エンドグリコシダーゼである。第二酵素は、
第一酵素が反応性であるグリコシド結合以外のグリコシ
ド含有物質中の第二結合と反応性である。かかる第二酵
素としては、グリコシダーゼ（第二II型エンドグリコシ
ダーゼを含めて）、プロテアーゼ、リパーゼおよびそれ
らの組み合わせが挙げられる。グリコシド含有物質の一
部分の除去は、切断グリコシド含有物質を洗剤、例え
ば、界面活性剤を含有するものと接触させることによっ
て容易にしてもよい。

また、本発明は、炭水化物部分、アグリコン部分、お
よび炭水化物部分とアグリコン部分との接合点における
グリコシド結合を有するグリコシド含有物質の少なくと
も一部分を表面から放出する方法（グリコシド含有物質
は炭水化物部分を通して表面に結合されている）を包含
する。方法は、グリコシド結合をII型エンドグリコシダ
ーゼで切断して、グリコシド含有物質のアグリコン部分
を表面から放出することからなる。グリコシド含有物質
の切断部分の除去は、必要ならば、第二酵素、洗剤およ
び／または界面活性剤での処理によって容易にしてもよ
い。

前記方法の各々においては、ジスルフィド切断試薬
は、グリコシド含有物質と関連づけられるタンパク質を
変性することによってII型エンドグリコシドまたは第二
酵素による切断または洗剤および／または界面活性剤に
よる除去を容易にするために使用してもよい。

また、本発明は、処方物を包含する。１つの組成物
は、少なくとも第一酵素および第二酵素を含む（第一酵
素はII型エンドグリコシダーゼである）。第二酵素は、
プロテアーゼ、グリコシダーゼ、リパーゼおよびそれら
の組み合わせからなる酵素の群から選ばれる。かかる処
方物は、洗剤および／または界面活性剤並びにジスルフ
ィド切断試薬も含有してもよい。

別の組成物は、II型エンドグリコシダーゼおよび洗剤
および／または界面活性剤を含有する。

発明の具体的な説明 II型エンドグリコシダーゼおよびかかるエンドグリコ
シダーゼを使用した処方物は、II型エンドグリコシダー
ゼと反応性の物質を表面から放出し且つ／または除去す
るために本発明の方法で使用される。この反応性の機構
は、確実には既知ではない。若干の場合には、かかる物
質は、II型エンドグリコシダーゼ用の既知の切断部位に
あるグリコシド結合またはかかる切断部位に厳密に関連
される結合を有すると信じられるグリコシドまたはグリ
コシド含有物質である。

ここで使用する「II型エンドグリコシダーゼ」は、糖
タンパク質のタンパク質単位と炭水化物単位との接合点
またはその付近の結合を切断することができる酵素であ
る。好ましくは、かかるII型エンドグリコシダーゼは、
タンパク質−炭水化物単位接合点の約３個のグリコシド
結合（タンパク質−炭水化物単位接合点からなるグリコ
シド結合を含めて）内の少なくとも１個のグリコシド結
合を切断することができる。最も好ましくは、かかるグ
リコシド結合は、タンパク質−炭水化物単位接合点の約
２個のグリコシド結合内にある（第１図、第２図および
第３図参照）。

また、II型エンドグリコシダーゼは、Ｎ−およびＯ−
結合糖タンパク質の既知のコア構造の場合には第１図で
示す特定のグリコシド結合に対する特異性によって定義
される。これらは、アミノ酸セリン、トレオニンまたは
アスパラギンと第一炭水化物残基とのグリコシド結合お
よび少なくとも第一、第二および第三炭水化物残基間の
グリコシド結合に対応する。このコア構造は既知のコア
構造に存在する特異性グリコシド結合によって以下に詳
述するであろうが、かかる特異性結合は、II型エンドグ
リコシダーゼのこの定義を限定するものとは解釈すべき
ではない。従って、これらのアミノ酸と炭水化物残基と
の間のすべての可能なグリコシド結合は、II型エンドグ
リコシダーゼを同定するために使用するＮ−およびＯ−
結合糖タンパク質のコア構造を規定する。

II型エンドグリコシダーゼは、糖タンパク質コア構造
の現在の知識およびかかるコア構造に対する既知のエン
ドグリコシダーゼの特異性によっては限定されない。第
１図中のコア構造と第２図中のII型エンドグリコシダー
ゼの場合の既知の基質との比較は、第１図中のコア構造
中の可能な切断部位の各々の場合のII型エンドグリコシ
ダーゼが、存在するならば、まだ同定されていないこと
を示す。更に、まだ同定されていない他のコア構造も、
存在することがある。かかるまだ未知のコア構造中の結
合と反応性のエンドグリコシダーゼも、II型エンドグリ
コシダーゼである。従って、II型エンドグリコシダーゼ
を規定する糖タンパク質中のグリコシド結合は、糖タン
パク質のタンパク質単位に最も近い最初の３個のグリコ
シド結合内に配置されたものには限定されないが、コア
構造中のより離れたグリコシド結合、例えば、同定され
るコア構造に応じてタンパク質単位から第四または第五
グリコシド結合に拡張してもよい。

糖タンパク質のコア構造に対する特異性は、II型エン
ドグリコシダーゼをＩ型エンドグリコシダーゼと区別す
るII型エンドグリコシダーゼの好都合な定義を与える。
Ｉ型エンドグリコシダーゼは、オリゴ糖類または多糖類
中の特異性結合を切断するが、一般にII型エンドグリコ
シダーゼを規定する糖タンパク質中のコア構造グリコシ
ド結合と反応性ではない。Ｉ型エンドグリコシダーゼお
よびＩ型エンドグリコシダーゼが反応性である結合の例
を表Ｉに示す。

II型エンドグリコシダーゼを規定し且つ好ましいII型
エンドグリコシダーゼを同定する糖タンパク質中の特異
性グリコシド結合を第２図に示す。切断部位は、垂直の
矢印によって同定される。第２図のタンパク質アミノ
酸、炭水化物残基および切断部位の一般的提示を第３図
に示す。わかるように、II型エンドグリコシダーゼは、
好ましくは、Ｎ−またはＯ−結合糖タンパク質中の第
一、第二または第三グリコシド結合を切断する。これら
の結合は、それぞれタンパク質単位中のアスパラギン、
セリンまたはトレオニンと第一炭水化物残基との間のグ
リコシド結合（１）、炭水化物残基１、２間のグリコシ
ド結合（２）および炭水化物残基２、３間のグリコシド
結合（３）からなる。この特異性は、主として糖タンパ
ク質の炭水化物配列によって規定され、特異性および反
応性は若干程度糖タンパク質のタンパク質単位によって
影響される。かくて、グリコシド結合２および３（炭水
化物残基間のグリコシド結合のみからなる）に関して
は、II型エンドグリコシダーゼは、糖タンパク質のタン
パク質単位と炭水化物単位との接合点から多分全く離れ
た糖タンパク質の他の領域に配置された同一または同様
のグリコシド結合と反応性であってもよい。

前記定義の特定の糖タンパク質への適用は、実例とな
る。ウシチログロブリンは、エンド−β−Ｎ−アセチル
グルコサミニダーゼ−Ｈ（エンド−Ｈ）、α−マンノシ
ダーゼおよびβ−マンノシダーゼを使用して分析してい
た。A.L.トレンチノ等（1973）J.Biol.Chem.,218,554
7。エンド−Ｈは、２つのＮ−アセチルＤ−グルコサミ
ン間のグリコシド結合を加水分解した（それらの一方は
チログロブリンのタンパク質単位中のアスパラギンにＮ
−結合した）。エンド−Ｈでの処理時に放出されたチロ
グロブリンのオリゴ糖または炭水化物部分も、α−およ
びβ−マンノシダーゼで処理した。これらの酵素のいず
れも第１図、第２図または第３図に示すものに対応する
基質に対して特異性を有していないので、II型エンドグ
リコシダーゼではなく且つエキソグリコシダーゼまたは
Ｉ型エンドグリコシダーゼのいずれかと特徴づけること
ができる。エンド−Ｈの特異性は、第２図でエンド−Ｈ
の場合に示したものと同じであり、それゆえ、エンド−
Ｈは、II型エンドグリコシダーゼである。このことは、
勿論、自明な応用である。しかし、この特異性または第
１図、第２図または第３図中の他の特異性の１以上も実
証する新しいエンドグリコシダーゼ（例えば、エンド−
Ｘ）が発見されるならば、そのエンド−Ｘも、II型エン
ドグリコシダーゼであろう。

しかしながら、糖タンパク質に対する特異性をベース
とするII型エンドグリコシダーゼのこの定義は、物質を
表面から放出し且つ／または除去するためにII型エンド
グリコシダーゼによって利用される機構に対する限定と
は解釈すべきではない。若干の場合には、II型エンドグ
リコシダーゼは、グリコシド中のグリコシド結合と反応
させることによってグリコシドの少なくとも一部分を表
面から切断することが仮定されるであろうが、本発明
は、かかる切断には限定されない。むしろ、II型エンド
グリコシダーゼの作用は、II型エンドグリコシダーゼと
反応性の物質の少なくとも一部分を表面から切断する能
力によって機能的に定義される。

ここで使用する「エンドグリコシダーゼ」なる用語
は、Ｉ型およびII型エンドグリコシダーゼからなる。

ここで使用する「グリコシド」は、グリコシド結合を
通して「アグリコン部分」に共有結合された１種以上の
「炭水化物部分」を有する重合体を意味する。グリコシ
ドのこの定義は、加水分解時に糖およびアグリコン（ア
グリコンはかかる加水分解から生ずる非糖化合物であ
る）を生成する化合物を意味するグリコシドの普通の定
義に由来する。ここで使用するグリコシドは、II型エン
ドグリコシダーゼによって切断する時にアグリコンおよ
びオリゴ糖または多糖炭水化物部分を生ずる。しかしな
がら、II型エンドグリコシダーゼはグリコシドを加水分
解してII型エンドグリコシダーゼの切断部位に応じて１
個以上の糖残基を含有するアグリコン部分を生ずること
があるので、アグリコン単位は、非糖化合物には限定さ
れない。更に、アグリコン部分は、架橋ペプチドが炭水
化物のマトリックスに結合された状態で見出されること
があるペプチドグリカンの場合のように全く複雑である
ことがある。かくて、グリコシドとしては、II型エンド
グリコシダーゼでの処理時に炭水化物部分およびアグリ
コン部分（炭水化物部分およびアグリコン部分はII型エ
ンドグリコシダーゼの切断部位によって規定される）を
生ずる糖タンパク質、糖脂質、ペプチドグリカンなどが
挙げられる。グリコシドのこの定義は、下記議論から明
らかであろう。

ここで使用する「糖タンパク質」は、ペプチドまたは
タンパク質に共有結合された１種以上のオリゴ糖または
多糖を有するグリコシドを意味する。オリゴ糖および多
糖は、時々、ここで「炭水化物単位」と称する。しかし
ながら、かかる炭水化物単位は、グリコシドの「炭水化
物部分」と異なっていてもよい。第４図に示すように、
炭水化物単位は、第二種類の分子、例えば、糖タンパク
質におけるようなタンパク質またはペプチド、または糖
脂質におけるような脂質に結合された全オリゴ糖または
多糖からなる。II型エンドグリコシダーゼが、例えば、
タンパク質との接合点における炭水化物単位を切断する
ならば、炭水化物単位は、グリコシドの炭水化物と同義
である。しかしながら、II型エンドグリコシダーゼが炭
水化物単位内のグリコシド結合における炭水化物単位を
切断するならば、かかる切断によって生成するグリコシ
ドの炭水化物部分は、全炭水化物単位よりも少ないであ
ろう。この差は、矢印によって示すII型エンドリコシダ
ーゼ切断部位の場合に第４図に示す。

糖タンパク質の炭水化物単位は、１〜10個の炭水化物
（糖）残基を含有するオリゴ糖類または通常10〜25個の
炭水化物残基を含有する短い多糖類であってもよい。多
くの糖タンパク質は、高等生物、例えば、真核生物、例
えば、酵母および哺乳動物細胞によって産生する。炭水
化物単位と糖タンパク質のペプチド単位またはタンパク
質単位との間の結合は、タンパク質単位のアミノ酸側鎖
と炭水化物単位の第一残基上のアノマー炭素との縮合反
応から生ずるグリコシド結合である。哺乳動物糖タンパ
ク質中のかかるグリコシド結合は、Ｎ−グリコシド結合
（アスパラギンのアミド窒素に結合された炭水化物）ま
たはＯ−グリコシド結合（セリンまたはトレオニンのヒ
ドロキシ酸素に結合された炭水化物）のいずれかであ
る。

炭水化物単位（オリゴ糖類または多糖類）の炭水化物
残基（単糖類）は、多くの異なる方法で一緒に接合して
もよい。かくて、かかる炭水化物単位は、非分岐、線状
構造であってもよく、または複雑な分岐構造であっても
よい。しかしながら、一般に、炭水化物単位中の炭水化
物残基の各々は、１つの炭水化物残基のアノマー炭素が
別の炭水化物残基中のヒドロキシル炭素と縮合したグリ
コシド結合を介して結合される。かかるグリコシド結合
は、アノマー炭素の配置に応じてαまたはβのいずれで
あってもよい。１つの残基のアノマー炭素は、別の炭水
化物残基中のヒドロキシル炭素のいずれかと結合しても
よい。かくて、多くの糖タンパク質の複雑さは、かかる
分子の炭水化物単位に見出される多くの異なるグリコシ
ド結合に由来する。

多くの膜糖タパク質は、アスパラギン結合炭水化物単
位（Ｎ−グリコシド結合を介してペプチド中のアスパラ
ギンに結合された炭水化物単位）を担持する。かかるア
スパラギン結合糖タンパク質の構造は、全く複雑である
ことがある。例えば、シャチテル（1984）Clinical Bio
chemistry 17,3−14参照。各種の源（例えば、赤血球血
漿膜糖タンパク質、ウイルスエンベロープ糖タンパク
質）からのこれらのアスパラギン結合膜状糖タンパク質
の多くの構造並びに非膜状可溶性糖タンパク質の構造
は、２種の糖タンパク質が多くの構造上の特徴を共有す
ることを示す。３で同定。かかるアスパラギン結合糖タ
ンパク質の普通のコア構造を第１図および第４図に示
す。

（GlcNACはＮ−アセチルＤ−グルコサミンであり、Man
はマンノースである）。α１−６、α１−３およびβ１
−４の呼称は、各種の炭水化物残基間のグリコシド結合
の種類を説明する。このコア結合は、コアに結合された
多数の炭水化物残基のいずれかを有する多数の炭水化物
の基準を構成する。５で同定。

Ｏ−結合糖タンパク質は、糖タンパク質のタンパク質
単位がセリンまたはトレオニンのいずれかのヒドロキシ
ル基を通して炭水化物単位にカップリングされたコア構
造を含む。このコア構造の普通の特徴は、セリンまたは
トレオニンに結合されたＮ−アセチルＤ−ガラクトサミ
ン（GalNAc）の存在である。かかる糖タンパク質の他の
詳細を第１図に示す（NeuAcはＮ−アセチルノイラミン
酸であり、Galはガラクトースであり、Ｌ−FucはＬ−フ
コースである）。Galが第二炭水化物残基である時に
は、GalNAcとGalとの間のグリコシド結合は、通常、β
１−３である。Ｎ−およびＯ−結合糖タンパク質を含め
た糖タンパク質の構造生合成および機能のレビューに関
しては、E.G.ベルガー等（1982）Experimentia,38,1229
−1258参照。

下等生物、例えば、原核生物、例えば、細菌大腸菌、
シュードモナス種、バチルス種などは、糖タンパク質よ
りもむしろペプチドグリカンを産生する。ペプチドグリ
カンは、細菌細胞壁に見出され且つ典型的には交互のＮ
−アセチルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸との
多糖主鎖を有する。ペプチド側鎖は、時々、Ｎ−アセチ
ルムラミン酸残基と関連づけられ、架橋ペプチドブリッ
ジはしばしばペプチド側鎖間に介在されている。グラム
陽性菌の細胞壁は、典型的には、ペプチドグリカン約10
％を含む一方、グラム陰性菌の細胞壁は、典型的にはペ
プチドグリカン含量約50％を有する。

しかしながら、ペプチドグリカンは、少なくとも糖タ
ンパク質中の特異性グリコシド結合がII型エンドグリコ
シダーゼの種類を定義するために使用される程度には、
糖タンパク質ではない。かくて、エンド−Ｈは、Ｎ−結
合オリゴ糖類を含有する若干の糖タンパク質で見出され
る２個のＮ−アセチルグルコサミン糖残基間のグリコシ
ド結合を切断するので、II型エンドグリコシダーゼであ
る。第４図参照。しかしながら、エンド−Ｈは、布見本
などの表面からの糞便の除去を容易にすることができる
ので、ペプチドグリカンとのまだ不確定の反応性も有す
ることがある。かかる糞便は、腸内細菌と関連づけられ
たペプチドグリカンを含有することが既知である。リゾ
チームは、ペプチドグリカンと反応性である酵素であ
る。しかしながら、鶏卵白リゾチーム、T4リゾチーム、
ムタノリシンなどのリゾチーム〔グッドマン等（198
1）,J.Bacteriol,146,755〕は、II型エンドグリコシダ
ーゼではない。このことは、それらがII型エンドグリコ
シダーゼを定義するために使用するＮ−およびＯ−結合
糖タンパク質で見出される独特のグリコシド結合との実
質的な反応性を有していないからである。しかしなが
ら、それらは、ペプチドグリカンと反応性であって、結
合ペプチド側鎖を含有するＮ−アセチルグルコサミンお
よびＮ−アセチルムラミン酸の二糖類を生成する。その
ままで、リゾチームは、より適当には、Ｉ型エンドグリ
コシダーゼと特徴づけられる。かくて、リゾチームおよ
びエンド−Ｈがペプチドグリカンとの反応性においてオ
ーバーラップを有することがあるとしても、II型エンド
グリコシダーゼを規定する糖タンパク質中のグリコシド
結合に対するエンド−Ｈの特異性およびグリコシド結合
との反応性のリゾチームの実質的欠如に関しては大部分
相互に排他的である。

ここで使用する「グリコシド含有物質」または「糖タ
ンパク質含有物質」は、グリコシドまたは糖タンパク質
単独または別の成分と組み合わされたグリコシドまたは
糖タンパク質である。かくて、グリコシド含有物質とし
ては、グリコシド、例えば、糖タンパク質酵素、例え
ば、アルカリ性ホスファターゼ、ブロメライン、カルボ
キシペプチダーゼ−Y;糖タンパク質ホルモン、例えば、
絨毛性性腺刺激ホルモン、エリトロポイエチン；レシチ
ン、例えば、ジョガイモおよび大豆に由来するもの；血
清糖タンパク質、例えば、IgG免疫グロブリン、チログ
ロブリン、プロトロンビンなどおよび雑多な糖タンパク
質、例えば、ヘモグロビンおよびインターフェロン；お
よび複雑な炭水化物が挙げられる。別の成分と組み合わ
されるグリコシドの例としては、膜成分からなる糖タン
パク質、例えば、ヒトの赤血球によって含有されるグリ
コホリン、インフルエンザウイルスによって含有される
赤血球凝集素、ウシ網膜に含有されるロドプシン、およ
び繊維芽細胞によって含有されるコラーゲンが挙げられ
る。更に他のグリコシド含有物質としては、ウイルスエ
ンベロープ糖タンパク質および腸内細胞と関連づけられ
るペプチドグリカンを一部分含有する糞便が挙げられ
る。かくて、ウイルス、繊維芽細胞、糞便などは、グリ
コシド含有物質とみなされる。

ここで使用する「微生物」（時々グリコシド含有微生
物と称する）は、微生物が結合された物質の表面からII
型エンドグリコシダーゼによって切断することができる
ものである。例としては、糞便で見出される腸内細菌お
よびコンタクトレンズを通常汚染する細菌が挙げられ
る。他の例としては、II型エンドグリコシダーゼによっ
て表面から切断できる真菌類および藻類が挙げられる。

ここで使用する「生体外」なる用語は、本発明のプロ
セスおよび方法を実施する環境を意味する。それは、II
型エンドグリコシダーゼが自然に見出され、例えば、II
型エンドグリコシダーゼを自然に産生する生物内で見出
される環境を説明する「生体内」なる用語と区別するた
めにだけ使用される。従って、II型エンドグリコシダー
ゼを使用する生体外法は、自然には生じない方法または
プロセスである。しかしながら、生体外なる用語は、
「ガラス中」へのかかる方法の限定とは解釈すべきでは
なく、またはかかる方法が生きている生物上または生物
中で実施することを排除すべきではない。本発明の方法
は、ガラス以外の各種の表面、例えば、布帛、コンタク
トレンズ、金属表面、セラミック表面、細胞表面、プラ
スチック表面、組織などの上で実施してもよい。更に、
かかる生体外法は、例えば、以下に詳述のようなヒトの
口腔中で実施してもよい。

若干の既知のII型エンドグリコシダーゼをかかる酵素
の自然の生物学的源と一緒に表IIに表示する。若干のII
型エンドグリコシダーゼの場合の切断部位を第２図に示
す。J.G.ビーレイによる「糖タンパク質およびプロテオ
グリカン技術」（1985）、第６章、pp.153−300（エル
スビール、アムステルダム、ニューヨーク、オックスフ
ォード）参照。表IIに表示していないII型エンドグリコ
シダーゼは、時々PNGase Fとも称するグリコペプチダー
ゼＦである。PNGase Fは、フラボバクテリウム・メヌン
ゴセプチカム（Flavobacterium meningosepticum）から
得られることがある。また、それは、インディアナ州イ
ンデイアナポリスのベーリンガー・マンハイム・バイオ
ケミカルから市販されている。

わかるように、エンド−Ｈ、Ｆ、Ｄ、CIおよびエンド
−Ｇ−Gal型は、すべて糖タンパク質中の第二グリコシ
ド結合を切断する。エンド−Ｆ−Gal型の場合には、こ
のグリコシド結合は、GlcNAcとGalとの間にある。エン
ド−Ｈ、Ｆ、ＤおよびCIの場合には、切断は、GlcNAcか
らなる２個の残基間にあり、特異性は置換基Ｕ、Ｖ、
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺによって規定される。

エンド−Ｈは、高マンノース含量を有するＮ−結合糖
タンパク質を切断する。かくて、第２図中、Ｗは２〜15
0個のマンノース残基からなり、Ｙは１〜２個のマンノ
ース残基からなり、Ｘ、Ｚ、ＶおよびＵはＨ（水素）で
ある。エンド−Ｈは、Ｗが１〜２個のマンノース残基か
らなり且つＹおよび／またはＺがNeuNAc−Gal−GlcNAc
または同様の構造からなり且つＶがＨまたはGlcNAcから
なるハイブリッド構造も切断する。エンド−Ｈは、本発
明の処方物および方法で使用する好ましいII型エンドグ
リコシダーゼである。

エンド−Ｄおよびエンド−C_Iは、異なる源に由来する
が、同様の反応性を有する。エンド−Ｄおよびエンド−
C_Iは、糖タンパク質のＮ−結合オリゴ糖類に対して活性
である且つ１個よりも多い５−マンノース炭水化物残基
を含有する高マンノース構造（この場合には、第２図
中、Ｘはα１−３グリコシド結合を介してコア構造に結
合されたマンノースからなり、Ｗはα１−６グリコシド
結合を介してコア構造に結合されたマンノースからなり
且つ残りの置換基はＨである）を切断する。また、エン
ド−Ｄは、エキソグリコシダーゼでの最も触角状残基の
除去後に複合またはハイブリッド構造のコア部分を切断
する（この場合には、第２図中、ＹはＨまたはGlcNAcか
らなり、ＵはＨまたはフコースからなる）。

エンドグリコシダーゼエンド−Ｆは、第２図中Ｘおよ
びＹが１個以上のマンノース残基であり且つ残りの置換
基がＨである高マンノース含量を有するＮ−結合糖タン
パク質に対して活性である。また、エンド−Ｆは、Ｘお
よびＷがα１−３およびα１−６グリコシド結合を介し
てコア構造に結合されたマンノースからなり且つＹがNe
uNAc−Gal−GlcNAcまたは同様の構造からなり且つＵが
Ｈまたはフコースからなる二触角状ハイブリッド構造を
切断する。二触角状複合構造も、エンド−Ｆによって切
断される。かかる構造は、ＸおよびＹがNeuNAc−Gal−G
lcNAcまたは同様の構造からなり且つＵがＨまたはフコ
ースからなる第２図中のエンド−Ｆの場合の基質コア構
造からなる。

エンド−Ｌは、Ｎ−結合糖タンパク質中の第二グリコ
シド結合を切断する際に同様の反応性を有する。エンド
−Ｌは、Man−GlcNAc−GlcNAc−Asnからなる低分子量基
質に対して特異性である。エンド−C_IIは、エンド−Ｈ
と同様の特異性を示す。エンド−α−Ｎ−アセチルガラ
クトサミニダーゼは、GlcNAcおよびGalが最初の２個の
炭水化物残基であるセリンまたはトレオリンにＯ−結合
されたオリゴ糖類を含有する糖タンパク質を加水分解す
る。R1が炭水化物単位中のアンテナを与えることがある
マンノースの１つであるエンド−β−Ｎ−ガラクトシダ
ーゼの特異性も、第２図に示す。

II型グリコシダーゼグリコペプチダーゼＦ（PNGase
F）は、アスパラギンとGlcNAcとの間のＮ−結合糖タン
パク質中の第一グリコシド結合を切断する。それは、
Ｗ、ＸおよびＹが１個以上のマンノース残基からなり且
つＶおよびＺがＨからなる高マンノース構造（フコース
は第一炭水化物残基GlcNAcから不在である）を切断す
る。それは、ＷおよびＸがマンノースからなり、Ｙおよ
び／またはＺがNeuNAc−Gal−GlcNAcまたは同様の構造
からなり、ＶがＨまたはGlcNAcからなる混成構造（フコ
ースは典型的には第一炭水化物残基から不在である）も
切断する。複合構造も、グリコペプチダーゼＦによって
切断する。かかる構造は、ＹおよびＷがNeuNAc−Gal−G
lcNAcまたは同様の構造からなり、ＸおよびＺがＨ、Neu
NAc−Gal−GlcNAcまたは同様の構造からなり、ＶがＨま
たはGlcNAcからなり且つフコースが時々第一炭水化物残
基上に存在する第２図に示すコア構造からなる。

エンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼは、糖タンパク質
または糖脂質上のオリゴ糖類内のグリコシド結合を切断
することが既知である。エンド−β−Ｎ−ガラクトシダ
ーゼの場合の切断部位と一緒に典型的な糖タンパク質基
質を第２図に示す（R₂はタンパク質、脂質または炭水化
物であり、R₁は糖残基または水素である）。

勿論、本発明は、エンドグリコシダーゼの現在既知の
特異性によっては限定されない。最近まで、市販されて
いるエンドグリコシダーゼは、天然産源中の比較的少量
の発現のため高価であった。従って、かかる酵素の反応
性は、広くは研究されていない。しかしながら、分子ク
ローニングの出現につれて、多量のエンドグリコシダー
ゼが入手でき、または入手可能にされるであろう。別の
反応性および特異性がこれらのエンドグリコシダーゼま
たは他のエンドグリコシダーゼの場合に発見される程度
で、かかる反応性は、本発明の範囲内であることを意図
する。

従って、ここで使用する「II型エンドグリコシダーゼ
反応性物質」（「II型−反応性物質」または「II型反応
性結合」を含有する物質とも称する）は、II型エンドグ
リコシダーゼと反応性である物質である。勿論、II型反
応性物質内には、グリコシド含有物質および糖タンパク
質が包含される。しかしながら、（１）グリコシド結合
以外でII型エンドグリコシダーゼと反応性の他のまだ未
知の物質、および（２）II型反応性結合を有する成分を
含有する多成分凝集体も包含される。

例えば、細菌などの微生物は、エンド−Ｈでの処理に
よって表面から除去できる。この結果がどのように生ず
るかは、現在既知ではない。細菌は、エンド−Ｈと通常
反応性である結合を含有することは既知ではなく且つ表
面、他の微生物および他の物質への結合の詳細は、よく
は理解されていない。しかし、エンド−Ｈによる細菌除
去は、観察された。

更に、他のしみは、物質の複合凝集体（それらの若干
またはすべてはII型エンドグリコシダーゼと反応性であ
る）を包含することがある。II型反応性物質なる用語
は、すべてのかかる状況をカバーする。かくて、II型エ
ンドグリコシダーゼの用途としては、（１）II型−反応
性物質を含有する表面をクリーニングすること、（２）
II型−反応性物質を処理して表面への結合を防止するこ
と、（３）微生物などのII型−反応性物質を処理して抗
菌効果を生ずることが挙げられる。

本発明で使用するII型エンドグリコシダーゼは、当業
者に既知の方法に従って表IIに表示の生物から得ること
ができる、表II中のII型エンドグリコシダーゼの若干、
例えば、ストレプトミセス・プリカタス（Streptomyces
plicatus）〔初期にはストレプトミセス・グリセウス
（Streptomyces griseus）と分類〕からのエンド−Ｈお
よびS.プリタカスまたはS.リビダンス（lividans）中で
産生するエンド−Ｈおよび肺炎双球菌（Diplococcus pn
eumoniae）からのエンド−Ｄは、インディアナ州インデ
ィアナポリスのベーリンガー・マンハイム・バイオケミ
カルから市販されている。市販の製剤に加えて、エンド
−Ｈは、大腸菌中のストレプトミセス・プリカタスから
のエンド−Ｈのクローニングおよび表現の場合に報告し
た方法〔ロビンズ等（1981）,J.Biol.Chem.256;10640〕
と同様の方法によってストレプトミセス・プリタカスか
らのエンド−Ｈ遺伝子およびアルカリ性ホスファターゼ
からのプロモーターを符号化するプラスミドで形質転換
された大腸菌に由来することがある〔T.オカ等（1985）
Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82,7212−7216〕。また、R.J.
トランブリー等（1985）J.Biol.Chem.,260,5638参照。
また、エンド−Ｈは、ストレプトミセス・プリカタスに
由来するエンド−Ｈを表現するために工学的に産生され
たストレプトミセス細胞に由来してもよい（EPO刊行物
第0179449号明細書。）或いは、エンド−Ｈは、当業者
に周知の技術を使用して、枯草菌（Bicillus subtili
s）などの適当な宿主細胞によって産生してもよい。S.
プリカタス（S.グリセウス）の場合のエンド−Ｈのアミ
ノ産およびDNA配列は、公表されている。P.W.ロビンズ
等（1984）J.Biol.Chem.,259,7577−7583。

ここの例で使用するエンド−Ｈは、商業上得るかS.プ
リカタスからエンド−Ｈを表現するために形質転換され
た大腸菌または枯草菌宿主から得た。

エンド−Ｈ活性の１単位は、（³H）−dansyl−Asn−G
lcNAc 1μモルをpH5.5で37℃において１分で（³H）−da
nsyl−Asn−（GlcNAc）_４（Man）_６から放出するために
必要とされる酵素の量である。A.タレンチノ等（1978）
Mehtods in Enzymology,50,574。他のII型エンドグリコ
シダーゼの単位活性は、適当な基質によって同様に定義
される。

勿論、まだ同定されていない他のII型エンドグリコー
シダーゼは、存在してもよい。かかるII型エンドグリコ
シダーゼ並びにここに記載のもの、例えば、かかるエン
ドグリコシダーゼの対立遺伝子変異および遺伝子工学的
修正は、本発明の範囲内である。

グリコシドおよびグリコシド含有物質は、しばしば、
各種の表面に結合するようになる。かくて、例えば、糖
タンパク質、例えば、血液に関連づけられるもの（例え
ば、グリコシル化ヘモグロビン）は、布、リネンなどに
使用する布帛の表面を汚すことがある。かかるしみは、
従来、洗剤または本発明で利用するエンドグリコシダー
ゼではない各種の酵素との組み合わせでの洗剤での処理
による完全な除去に高度に抵抗性であった。布帛などの
表面を汚し且つ既知の技術によって除去することが困難
でもある更に他のグリコシド含有物質は、糞便からな
る。かかる糞便しみとしては、各種のグリコシドおよび
腸内細菌と関連づけられるグリコシド含有物質（例え
ば、ペプチドグリカン）、異化排出物、例えば、糖タン
パク質、および非吸収栄養素などが挙げられる。

グリコシドまたはグリコシド含有物質が結合されるこ
とがある他の表面としては、硬質および軟質コンタクト
レンズの表面が挙げられる。軟質コンタクトレンズは、
典型的には、ヒドロゲル構造を有する親水性架橋重合体
であるか、シリコーン重合体から作る。例えば、米国特
許第3,403,393号明細書および第2,976,576号明細書参
照。一方、硬質コンタクトレンズは、典型的には、メタ
クリレートまたはメタクリル酸メチル重合体から作る。
他の表面としては、天然産バイオフィルム、心臓ペース
メーカーリードおよびパワーパック、細胞表面および粘
膜表面、歯エナメル質、食品を加工する際に細菌および
粒状物質を除去するために使用する濾過器；化学薬品な
ど；空気調和濾過器；水性環境にさらされる各種の構造
部品、例えば、ボート、防波堤などの表面；プラスチッ
クおよび複合体、例えば、フォーマイカ；および金属ま
たは金属合金、例えば、鋼、アルミニウムなどが挙げら
れる。

以下に詳細に示すように、II型エンドグリコシダーゼ
単独またはズブチリシンなどの第二酵素との組み合わせ
（洗剤有無）は、布見本からの血液および糞便しみの除
去を有効に増大する。かかるしみがどのようなかかる見
本に付着するかは正確には知られていない。しかしなが
ら、単独または他の薬剤との組み合わせでのII型エンド
グリコシダーゼによってこれらの見本からのかかる物質
の除去が高められることは、少なくとも１個のグリコシ
ド結合が布帛としみの部分との間に介在し、このしみが
II型エンドグリコシダーゼでの処理時に放出されること
を示唆する。これらの結果に基づいて、グリコシド含有
物質の表面への結合およびII型エンドグリコシダーゼに
よるかかる物質の放出および／または除去の機構が提案
される。しかしながら、これらの提案された機構は、本
発明の範囲の限定とは解釈すべきではない。

図 かくて、第5A図に示すように、グリコシド含有物質
は、免疫結合以外によって表面に結合してもよい。この
点で、「免疫結合」は、抗原と抗体との間に存在するも
の（その抗原に特異性）（ポリクローナルまたはモノク
ローナル）である。第5A図に示すように、グリコシド含
有物質は、表面に結合された近位部分および近位部分か
ら外方に延出する遠位部分を有する。近位部分および遠
位部分は、グリコシド結合（このグリシド結合とII型エ
ンドグリコシダーゼは反応性である）によって結合され
る。第5A図に更に示すように、II型エンドグリコシダー
ゼでの処理時に、グリコシド含有物質の遠位部分は、グ
リコシド含有物質の近位部分から「放出」される。この
遠位部分が他の手段によって表面に結合されない程度
で、遠位部分は、表面から容易に「除去」され且つ流体
で洗い流されることがある。

第5B図中、グリコシド含有物質、この場合には、炭水
化物単位とタンパク質単位とを含有する糖タンパク質
は、表面に結合された状態で示す。このグリコシド含有
物質は、II型エンドグリコシダーゼと反応性であるグリ
コシド結合によって結合された炭水化物部分とアグリコ
ン部分とを更に含有する。この特定の場合には、グリコ
シド含有物質（糖タンパク質）は、グリコシド含有物質
の炭水化物部分を通して表面に結合されている。II型エ
ンドグリコシダーゼでの処理時に、アグリコン部分は、
グリコシド含有物質の炭水化物部分から放出される。第
5A図と同様に、アグリコン部分が他の手段によって表面
に更に結合されない程度で、アグリコン部分も、表面か
ら除去される。

第5C図は、グリコシド含有物質が少なくとも２個の結
合点を介して表面に結合されている状況を示す。示すよ
うに、グリコシド第一結合は、表面とグリコシド含有物
質との間に存在する。更に、第二酵素と反応性の第二結
合も、表面と除去すべきグリコシド含有物質の部分との
間に存在する。II型エンドグリコシダーゼのみで処理す
るならば、第一グリコシド結合から遠位のグリコシド含
有物質の部分は、少なくとも第一グリコシド含有結合を
通して結合された程度で表面から放出される。示す第二
結合と反応性の第二酵素と接触するならば、第一グリコ
シド結合および第二結合から遠位のグリコシド含有物質
の部分は、表面から放出される。この遠位部分が表面に
他の方法で結合されていない程度で、即ち、他の酵素と
反応性であるか洗剤および／または界面活性剤に感受性
であることがある他の接点によって結合されていない程
度で、この遠位部分は、表面から有効に除去される。

第5D図は、微生物のグリコシド部分の少なくとも一部
分を通して表面に結合された微生物を示す。グリコシド
部分は、II型エンドグリコシダーゼと反応性のグリコシ
ド結合を含有する。グリコシド結合から遠位の微生物の
切断部分は、II型エンドグリコシダーゼでの処理時に表
面から放出される。この切断部分が他の方法で表面に結
合されていない程度で、切断部分も、表面から除去され
る。しかしながら、多数の接点が、他の酵素および／ま
たは洗剤または界面活性剤での更に他の処理を必要とす
ることがある表面の場合には存在してもよい。

第5E図中、II型エンドグリコシダーゼ反応性物質は、
表面に結合した状態で示す。このII型反応性物質は、表
面に結合された近位部分および近位部分から外方に延出
する遠位部分を有する。近位部分および遠位部分は、II
型エンドグリコシダーゼと反応性の結合を意味するII型
反応性結合によって結合されている。II型エンドグリコ
シダーゼでの処理時に、II型反応性物質の遠位部分は、
II型反応性物質の近位部分から「放出」される」II型反
応性物質は、表面に結合するようになってもよい各種の
成分の分子、微生物または凝集体からなってもよいこと
を理解すべきである。II型反応性物質の遠位部分が他の
手段によって表面に結合されない程度で、遠位部分は、
表面から容易に「除去」され且つ流体で洗い流されるこ
とがある。

図示の物質の除去を生ずるために使用するII型エンド
グリコシダーゼの量は、表面からの特定の物質の除去に
「有効な量」と機能的に定義される。この量は、物質お
よび被処理表面に応じて変化してもよい。典型的な量
は、開示の特定の態様に関連してここに詳述する。

第二酵素 「第二酵素」としては、プロテアーゼ、リパーゼ、グ
リコシダーゼ、例えば、リゾチームおよびそれらの組み
合わせが挙げられる。II型エンドグリコシダーゼと組み
合わせてもよい各種のプロテアーゼとしては、ズブチリ
シン、ブロメライン、パパイン、トリプシン、キモトリ
プシン、パンクレアチン、リゾチームおよびそれらの組
み合わせが挙げられる。かかる酵素は、天然物に由来し
てもよく、例えば、枯草菌または遺伝子工学で産生され
たクローンからのズブチリシン、例えば、EPO刊行物第0
130756号明細書に記載のようなズブチリシンおよび突然
変異ズブチリシンであってもよい。J.A.ウェルズ等（19
83）Nucleic Acids Res.,11,7911−7915;M.ヤング等（1
984）J.Bacteriology,160,15−21;D.A.エステール等（1
985）J.Biological Chemistry,260,6518−6521も参照。
多くのかかる酵素は、勿論、商業的源から入手できる。

更に、II型エンドグリコシダーゼは、リパーゼ、例え
ば、細菌、哺乳動物および真菌類のリパーゼおよびそれ
らの組み合わせと組み合わせてもよい。

第二酵素として使用してもよいグリコシダーゼとして
は、エキソグリコシダーゼ、第二II型エンドグリコシダ
ーゼおよびＩ型エンドグリコシダーゼが挙げられる。例
としては、α−およびβ−アミラーゼ、セルラーゼ、ペ
クチナーゼ、ヘミセルラーゼ、デキストラナーゼ、各種
のグルカナーゼなどおよびそれらの組み合わせが挙げら
れる。

更に、II型エンドグリコシダーゼは、表面からのグリ
コシド含有物質の除去を容易にするために前記種類の第
二酵素の１よりも多くと組み合わせてもよい。

II型エンドグリコシダーゼを１種以上の第二酵素と組
み合わせる時には、II型エンドグリコシダーゼ対第二酵
素の比率は、好ましくは約0.01〜100、最も好ましくは
1:1である。

ジスルフィド切断試薬 また、II型エンドグリコシダーゼは、単独または洗剤
処方物を調製するための１種以上の第二酵素および／ま
たはジスルフィド切断試薬との組み合わせでの洗剤と併
用してもよい。ジスルフィド結合を切断することができ
る物質は、変化するが、一般に３つのカテゴリー：酸化
剤、還元剤、および雑多な付加物質、例えば、フマル酸
および亜硫酸ナトリウムによって例証されるものに入
る。好適な酸化剤としては、過酸化水素、過ギ酸、過ホ
ウ酸ナトリウム、および酸化漂白剤が挙げられる。有効
な還元剤としては、ジチオトレイトール（DTT）、β−
メルカプトエタノール（BME）、水素化ホウ素ナトリウ
ムなどが挙げられる。

容易には分類されない別のジスルフィド切断試薬とし
ては、塩化第二水銀、ニトロプルシド、トリブチルホス
フィン、およびホスホチオレートが挙げられる。特に有
用な切断試薬は、亜硫酸ナトリウムである（これは下記
反応に従ってジスルフィドの亜硫酸分解を生ずる:R−Ｓ
−Ｓ−Ｒ＋SO₃ ^-2R−Ｓ−SO₃ ^-2＋^-SR）。この反応の平衡
は、重金属イオンまたは酸化剤を使用してチオール陰イ
オンの除去によってシフトしてもよい。酸化能は、曝気
またはCuSO₄、過ホウ酸ナトリウムなどの酸化剤によっ
て与えてもよい。

ジスルフィドを切断することができる物質の前記リス
トは、包括的であることを意味せず、逆に商品に有効で
はあるが必ずしも適当ではない物質を包含する。商業上
成功するためには、添加物質は、比較的安価でなければ
ならず且つ所期用途に望ましくない性質を有していては
ならない。かくて、例えば、塩化第二水銀の使用は本発
明の方法を実施する際に作動可能であるが、塩化第二水
銀は、商業的使用を意図する通常の洗濯製品には好適で
はない。β−メルカプトエタノールおよびDTTは、温和
な不快臭を有する以外は商業上使用可能である。それゆ
え、商業的処方物に特に好ましい物質は、亜硫酸ナトリ
ウム（好ましくは酸化剤との組み合わせ）または安価で
あり且つ比較的安全である過酸化水素である。ジスルフ
ィド結合の切断で有用である物質のレビューは、例え
ば、Chemical Modification of Proteins、G.E.ミーン
ズ等編（1971）、ホールデン−デイ・インコーポレーテ
ッド、カリフォルニア州サンフランシスコ、第８章；お
よびChemical Reagents for Protein Modification、R.
L.ランドバルド等編（1984）、CRCプレス・インコーポ
レーテッド、フロリダ州バコ・ラトン、第７章に見出さ
れる。

典型的には、単独または１種以上の第二酵素との組み
合わせでのII型エンドグリコシダーゼは、本発明の洗剤
組成物の0.01〜３％wt/wtを構成し且つその約10〜40％w
t/wtのジスルフィド切断試薬を包含してもよい。存在量
は、勿論、エンドグリコシダーゼ（そして、使用するな
らば、第二酵素）およびジスルフィド切断試薬の性状、
洗浄液中の洗剤の希釈度、および洗浄条件に依存する。
しかしながら、前記範囲は、一般に典型的である。

本発明の１態様においては、結合された物質を含有す
る糖タンパク質を有する表面は、好適なpH、温度におい
てジスルフィド切断試薬とII型エンドグリコシダーゼと
第二酵素との組み合わせ（同時または逐次）で適当な時
間処理する。これらの条件は、勿論、便宜に応じて変化
でき、且つII型エンドグリコシダーゼ、プロテアーゼお
よびジスルフィドを切断する物質の選択は、或る程度、
この選択に依存する。しかしながら、しばしば遭遇する
好都合な条件は、pH値５〜12である。温度20〜55℃、特
に約40〜55℃および時間20分まで、通常約10〜15分は、
典型的であり、好ましい。商業上実用的であるために
は、プロセスは使用者に通常入手可能な条件下で実施す
ることが必要であるので、好ましい時間および温度は、
一般に家庭洗濯機、近所のコインランドリーおよび専門
の洗濯サービスで利用されているものである。

本発明の別の態様においては、市販の洗剤を使用する
通常の洗浄法は、使用され且つII型エンドグリコシダー
ゼ、第二酵素およびジスルフィド切断物質は、漂白剤を
使用する方法とほぼ同じ方式で添加剤として別個または
一緒に与える。かくて、これらは、洗浄サイクルの開始
または若干の中間点、例えば、洗浄サイクルの大体半分
が完了した後に洗剤と一緒に添加してもよい。このよう
に取り扱うならば、固体または液体洗剤組成物の約1:50
0希釈度（固体約2g/ml）を仮定すると、II型エンドグリ
コシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断試薬の任
意量は、この希釈度によって課される上限なしに添加し
てもよい（II型エンドグリコシダーゼ、第二酵素および
ジスルフィド切断試薬を最初に洗剤組成物に加え且つ例
えば、ジスルフィド切断試薬が組成部の50％を構成した
ならば、1mg/mlのみが最終洗浄液中で生ずるであろう。
しかしながら、これらの物質を別個に加えるならば、特
定のII型エンドグリコシダーゼ、ジスルフィド切断試薬
および第二酵素に最も有効な量は、添加してもよい）。

II型エンドグリコシダーゼおよび第二酵素に関して
は、非常に少量で通常すむ。典型的には、II型エンドグ
リコシダーゼおよび第二酵素は、各酵素の場合に洗浄液
の最終濃度約１〜500μg/mlに加える。しかしながら、
ジスルフィド切断試薬の場合には、洗剤の希釈によって
許容されであろう量よりも多い量が、望ましいことがあ
る。例えば、水素化ホウ素ナトリウムを使用してジスル
フィド結合を切断することは、好都合には同様の量の緩
衝剤の存在下で0.2M程度の試薬の濃度実施してもよい
（R.L.ランドバルド等の前記Chemical Reagents for Pr
otein Modification）。

かかる多量は通常であるが、必ずしも必要とされず、
より低い濃度が使用可能である。濃度0.01M程度または
それ以下も使用できるが、亜硫酸分解は、通例、亜硫酸
ナトリウム濃度0.1M程度で実施する。DTTは、濃度0.02
〜0.1M程度で供給する時に有効である。簡単には、ジス
ルフィド切断試薬濃度は、これらの試薬および維持する
有効性のために広範囲にわたって変化できる。特定の応
用に最適の濃度は、勿論、しみの性状および試薬の性
状、並びに洗浄法の条件、例えば、時間、温度およびpH
に依存するであろう。

別のより好都合なアプローチにおいては、II型エンド
グリコシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断物質
は、元の洗剤組成物に加え且つプロセスはこれらの変性
洗剤を使用して標準洗浄法として実施する。これらの状
況下では、洗剤組成物は、前記のものに対応するであろ
うが、組成物の最も、再度、洗浄液および洗浄法の条件
および洗剤成分の溶解度に応じて洗浄液の約0.5mg/ml〜
10mg/mlまたはそれ以上の範囲にわたって変化できる。
いかなる場合にも、II型エンドグリコシダーゼ、ジスル
フィド切断試薬および第二酵素の洗剤への配合は、洗剤
の希釈度に応じてこれらの成分の濃度を限定する。かく
て、1:100希釈度を使用し（10mg/ml）且つジスルフィド
切断試薬を例えば洗剤組成物の50％の限定するとして
も、得られた洗浄液中のジスルフィド切断試薬の最適濃
度5mg/mlが、上限である。典型的には、勿論、洗浄中の
ジスルフィド切断試薬の濃度は、ジスルフィド切断試薬
の一層低い濃度が必須であるならば、50％未満であろ
う。

本発明の洗剤組成物は、大抵の洗剤活性物質、比較的
多量のジスルフィド切断試薬（使用するならば）、およ
び極少量のII型エンドグリコシダーゼおよび第二酵素
（使用するならば；酵素成分のコストに鑑みて特に望ま
しい）を含有する。かくて、一般に、製剤は、界面活性
剤、ビルダー、増白剤などの通常の市販の洗剤添加剤を
含めた洗剤活性物質60〜90％、II型エンドグリコシダー
ゼ＋第二酵素0.01〜３％、およびジスルフィド切断試薬
約10〜40％を含有するであろう。

勿論、これらの３種の添加剤の１つのみを元の洗剤に
加え、他のものを洗浄液に別個に供給することも可能で
ある。特に、II型エンドグリコシダーゼは、予備洗浄液
に加えた後、第二酵素を含有する洗剤を加えてもよく、
またはエンドグリコシダーゼを含有する洗剤の添加は、
第二酵素での処理の前または後に実施してもよい。

クリーニング組成物 エンドＤ、ＦおよびＨは、クリーニング組成物で使用
するのに好ましいII型エンドグリコシダーゼである。エ
ンド−Ｈが、最も好ましい。

グリセリド含有物質の除去のためには、本組成物は、
好ましくは、組成物の種類に応じて、II型エンドグリコ
シダーゼ約0.1ppm（100万当たりの部）〜1200ppm、より
好ましくは約1ppm〜1000ppm、最も好ましくは約20ppm〜
約200ppmを含む。クリーニング組成物が好ましい。洗濯
洗剤組成物が、ここで使用するのに最も好ましく、好ま
しくはII型エンドグリコシダーゼ約0.1ppm〜1200ppm、
好ましくはエンドＤ、ＦまたはＨ約20ppm〜200ppm、最
も好ましくはエンドＨ約50ppm〜125ppmを含む。

微生物を防除または除去するために使用する時には、
組成物は、好ましくは、II型エンドグリコシダーゼ、好
ましくはエンド−Ｈ約0.1ppm〜1200ppm、より好ましく
は約1ppm〜1000ppm、最も好ましくは約20ppm〜400ppmを
含む。クリーニング組成物が好ましく、且つ好ましくは
同量のII型エンドグリコシダーゼ、好ましくはエンド−
Ｈを含む。

グリコシド含有物質および／または微生物の除去のた
めにII型エンドグリコシダーゼを含む提案される種類の
組成物を以下に述べる。組成物は、酵素活性を破壊しな
い方法で調製し、使用することができる。それらは、酵
素の活性を不当に妨げない成分で調製できる。組成物
は、洗濯洗剤、皿洗い洗剤、硬質表面クリーナー、歯エ
ナメル質クリーナー、液体石鹸および固形石鹸、抗アク
ネ組成物、制汗剤、シャンプー、フェースクリーム、果
物／野菜表面防腐剤、または布帛柔軟剤であることがで
きる。

洗濯機中での普通のサイクルを使用した布帛のクリー
ニングに加えて、本発明のクリーニング組成物は、他の
表面、例えば、外科機器、パイプライン、金属容器など
で見出されるような金属および金属合金、およびプラス
チックおよび複合材料、例えば、フォーマイカ（Formic
a）およびボート、防波堤などの表面からグリコシド含
有物質および／または微生物を除去するためにも使用し
てもよい。特定の応用に応じて、組成物は、II型エンド
グリコシダーゼを単独またはジスルフィド切断試薬、第
二酵素および／または洗剤界面活性剤との組み合わせで
含んでいてもよい。

II型エンドグリコシダーゼは、皮膚、皮膚孔、ヘア、
毛包、組織の表面などの「生物学的表面」から酵母、真
菌類、藻類および細菌を含めてグリコシド含有物質およ
び／または微生物を除去するための組成物に処方しても
よい。かくて、シャンプー処方物、コンディショナー処
方物、石鹸処方物および医薬技術の当業者は、II型エン
ドグリコシダーゼをかかる応用で使用するために洗剤処
方物の場合の前記開示を容易に適応できる。このように
処方する時には、かかる組成物は、かかる表面に付着す
ることがあるグリコシド含有物質を除去する際に有用で
ある。

また、II型エンドグリコシダーゼは、果物、野菜など
の植物の表面からグリコシド含有物質および／または微
生物、特に酵母および真菌類を除去するための組成物に
処方してもよい。かかる組成物は、好ましくは、非イオ
ン界面活性剤を含有する。

更に、II型エンドグリコシダーゼは、望ましくないに
おいに応答するグリコシド含有物質および／または微生
物を除去するためにエンドグリコシダーゼ活性を与える
ように当業者に既知の方法で制臭剤組成物に処方しても
よい。II型エンドグリコシダーゼを使用したかかる制臭
剤処方物は、当業者に既知のスティック、クリームおよ
びエアゾール制臭剤用処方物の修正を包含してもよい。

更に、II型エンドグリコシダーゼは、少なくとも炎症
に応答するか包含されるグリコシド含有物質および／ま
たは微生物が表面に結合される程度に、炎症から通常生
ずるアクネの治療のために処方してもよい。前記処方物
と同様に、当業者は、既知のアクネ処方物を修正してII
型エンドグリコシダーゼを単独または他の酵素、洗剤お
よび／または界面活性剤との組み合わせで配合すること
ができる。

コンタクトレンズを処理するために使用する時には、
II型エンドグリコシダーゼは、好適には、クリーニング
組成物中で濃度約0.1〜20μg/mlで供給し且つプロテア
ーゼなどの第二酵素の濃度は、かかる第二酵素を利用す
るならば同じ範囲内である。処理時間は、約５分〜約15
時間で変化できるが、標準の好都合なクリーニング時間
は、一晩中であり、それゆえ、着用者は寝ている際にレ
ンズをソーキングさせることができる。各種のプロトコ
ールは、好適であるが、特に好ましいものは、室温で10
分〜２時間または一晩中実施されたII型エンドグリコシ
ダーゼおよび第二酵素（使用するならば）を含有する単
一溶液の使用であるか、II型エンドグリコシダーゼ溶液
の存在下で10分〜２時間予備ソーキングした後第二酵素
を含有する溶液で同様に一晩中処理することである。

コンタクトレンズ処方物に好ましい一般目的第二酵素
としては、パパイン、パンクレアチン、ズブチリシンな
どのプロテアーゼが挙げらる。好ましいII型エンドグリ
コシダーゼ酵素は、ストレプトミセス・プリカタスから
のエンド−Ｈである。単一の第二酵素プロテアーゼは、
使用してもよく、または組成物は、第二酵素の混合物を
含有してもよい。

更に、コンタクトレンズ組成物は、全体の酵素分解を
助長する追加成分を含有してもよい。これらのうち２−
メルカプトエタノール、塩酸システイン、ジチオトレイ
トール、ジチオエリトリトール、重硫酸ナトリウム、メ
タ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素などのジスルフィド切
断試薬が特に有用である（一般に約0.01〜５重量％、好
ましくは0.05〜１重量％）。更に、洗剤は、酵素含有溶
液でのレンズの漏れを助長するために組成物に配合して
もよい。好適な洗剤としては、ドデシル硫酸ナトリウ
ム、モノラウリン酸ナトリウム、非イオン界面活性剤、
例えば、アルコールエトキシレート（例えば、ポリエト
キシエタノール）、陰イオン界面活性剤、例えば、エー
テルスルホネート、線状アルキルベンゼンスルホネー
ト、ラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。

コンタクトレンズクリーニングに好適な緩衝剤および
安定剤も、使用してもよく、それらの例としてはクエン
酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、ホウ酸、
EDTAナトリウム、各種の混合ホスフェート緩衝剤および
NaHCO₃が挙げられる。一般に、緩衝剤および安定剤は、
約0.001〜約2.5重量％、好ましくは約0.1〜１重量％の
量で使用してもよい。コンタクトレンズをクリーニング
するために本発明で使用してもよい各種の成分の量の前
記説明は、溶液中の成分の％（wt/vol）で述べることを
理解すべきである。処方物は、所定量の水などの好適な
溶媒中で使用するのに好適な錠剤などの１以上の通常の
固体剤形の形態を取ってもよい。固体剤形の組成％は、
特定の容量の水に溶解する時に、溶液が明細書に記載の
範囲内の組成％を有するようなものである。固体剤形を
使用するならば、処方物は、通常の潤滑剤、結合剤、お
よび賦形剤を含有してもよく、これらの例としてはグリ
セロール、ソルビトール、ホウ酸、プロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、デキストラン、メチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメ
チルセルロースの水溶性塩、または天然産親水性物質、
例えば、ゼラチン、アルギネート、トラガカント、ペク
チン、アラビアゴムおよび可溶性デンプンが挙げられ
る。

コンタクトレンズをクリーニングする際に有用な典型
的な組成物およびプロトコールとしては、下記のものが
挙げられる。

1. 組成物は、II型エンドグリコシダーゼ１〜100μg/m
lを含有する。レンズは、取り外し、22℃で溶液との接
触状態に12時間置く。レンズは、クリーニング溶液から
取り出し、すすぐ。

2. 溶液ＡはII型エンドグリコシダーゼ10μg/mlを含有
し、溶液Ｂはズブチリシン５μg/mlを含有する。レンズ
は25℃で溶液Ａに30分間ソーキングし、取り出し、25℃
で溶液Ｂに10時間浸漬する。

3. クリーニング溶液は、プロテアーゼペプシン10μg/
mlおよびII型エンドグリコシダーゼ10μg/mlを含有す
る。レンズは、20℃でこの溶液Ａに５時間ソーキングす
る。

4. クリーニング溶液は、ズブチリシン５μg/ml、II型
エンドグリコシダーゼ５μg/mlおよび10mM ２−メルカ
プトエタノールを含有する。レンズは、30℃でこの溶液
に５時間浸漬する。

5. クリーニング溶液は、ズブチリシン７μg/ml、II型
エンドグリコシダーゼ３μg/ml、10mM ２−メルカプト
エタノールおよびドデシル硫酸ナトリウム（SDS）２％
を含有する。レンズは、20℃でこの溶液に３時間ソーキ
ングする。

6. クリーニング溶液は、ズブチリシン４μg/ml、トリ
プシン２μg/ml、II型エンドグリコシダーゼ10μg/ml、
およびSDS ２％を含有する。レンズは、20℃でこの溶
液に７時間ソーキングする。

7. 溶液Ａは、SDS ２％中にズブチリシン４μg/mlお
よびトリプシン２μg/mlを含有する。溶液Ｂは、II型エ
ンドグリコシダーゼ10μg/mlプラス10mM ２メルカプト
エタノールを含有する。レンズは、30℃で溶液Ｂに20分
間浸漬し、次いで、25℃で溶液Ａに６時間浸漬する。

すべての前記例において、レンズは、着用者の目に戻
す前に食塩水中で十分にすすぐ。

本組成物は、液体、ゲル、ペーストおよび粉末、粒状
物などの固体粒子を含めて各種の物理的形態に処方でき
る。組成物は、洗濯洗剤、例えば、米国特許第4,507,21
9号明細書、第4,318,818号明細書、第4,605,509号明細
書および第4,412,934号明細書に開示のもの；皿洗い洗
剤、例えば、米国特許第4,714,562号明細書、第3,630,9
23号号明細書、第4,133,779号明細書、第4,316,824号明
細書および第4,555,360号明細書に開示のもの；硬質表
面クリーナー、例えば、米国特許第4,414,128号明細
書、第3,679,608号明細書、第3,985,668号明細書および
第4,005,027号明細書に開示のもの；布帛柔軟剤、例え
ば、米国特許第3,944,694号明細書、第4,073,996号明細
書、第4,424,134号明細書および第4,661,269号明細書に
開示のもの；固形石鹸、例えば、米国特許第3,993,722
号明細書および第3,070,547号明細書に開示のもの；シ
ャンプー、例えば、米国特許第4,345,080号明細書、第
4,704,272号明細書および第4,741,855号明細書に開示の
もの；制汗剤、例えば、米国特許第4,725,432号明細書
に開示のもの；抗アクネ製品、例えば、米国特許第4,31
8,907号明細書および第4,608,370号明細書に開示のも
の；および口腔用組成物、例えば、米国特許第4,684,51
8号明細書に開示のものとして処方できる。

組成物は、好ましくは、良好な酵素性能のためにpH約
４〜10、より好ましくは約５〜約８を有する。

微生物除去に関する実験室研究は、有効な除去を得る
ためには、若干の場合に微生物を保持する表面の水浴が
微生物を除去するために物理的または化学的作用を必要
とすることを示した。試験した微生物としては、下記の
ものが挙げられる： タイプ１および３フィンブリエを含めた大腸菌 黄色ブドウ球菌 表皮ブドウ球菌 セラチア・マルセセンズ ストレプトコッカス・ミュタンズ ストレプトコッカス・サングイス バチルスsp. カンジダsp. アスペルギルスsp. 例えば、大腸菌などの細菌の除去の場合には、表面結
合微生物は、エンド−Ｈで処理し、次いで、化学的作用
により、例えば、抗菌剤での処理により、または物理的
作用、例えば、水でのすすぎまたは手拭きにより除去し
てもよい。液体および固形石鹸、歯エナメル質クリーナ
ー、制汗剤、制臭剤布帛柔軟剤および抗アクネ組成物の
場合には、組成物はエンド−Ｈに加えて、イルガサン
（Irgasan）（チバーガイギー）、クロルヘキシジンな
どの抗菌剤を含有することが好ましい。抗菌剤は、水す
すぎ、手による拭き取りなどの物理的作用が生ずる時に
は、組成物（例えば、硬質表面クリーナー）で必要とさ
れない。

洗剤クリーニング組成物、特に粒状および液体洗濯洗
剤組成物が、ここで好ましい。これらの洗剤クリーニン
グ組成物は、好ましくは、洗剤界面活性剤約１〜90重量
％、より好ましくは約５〜50重量％、最も好ましくは約
10〜40重量％を含む。

本発明の洗剤組成物で有用な界面活性剤としては、周
知の合成陰イオン界面活性剤、合成非イオン界面活性
剤、合成両性界面活性剤、合成双性界面活性剤が挙げら
れる。洗浄技術から既知であるアルキルベンゼンスルホ
ネート、アルキルサルフェートおよびアルキルエーテル
サルフェート、パラフィンスルホネート、オレフィンス
ルホネート、アルコキシ化（特にエトキシ化）アルコー
ルおよびアルキルフェノール、アミンオキシド、脂肪酸
のα−スルホネートおよび脂肪酸エステルのα−スルホ
ネート、アルキルベタインなどが、これらを代表してい
る。一般に、かかる洗剤界面活性剤は、C₉〜C₁₈範囲内
のアルキル基を含有する。陰イオン洗剤界面活性剤は、
ナトリウム塩、カリウム塩またはトリエタノールアンモ
ニウム塩の形態で使用できる。非イオン界面活性剤は、
一般に、約５〜約17個のエチレンオキシド基を含有す
る。C₁₁〜C₁₆アルキルベンゼンスルホネート、C₁₂〜C₁₈
パラフィンスルホネートおよびアルキルサルフェート
が、本発明の組成物で特に好ましい。

本組成物に好適な界面活性剤の詳細なリストは、米国
特許第3,936,537号明細書に見出すことができる。かか
る界面活性剤の商業的源は、マッカーテェオンの乳化剤
および洗剤（ノース・アメリカン編、1984年、マッカテ
ェオン・ディビジョン、MCパブリッシング・カンパニ
ー）に見出すことができる。

本発明の洗剤組成物に有用な洗浄性ビルダーとして
は、通常の無機および有機水溶性ビルダー塩のいずれ
か、並びに各種の水不溶性のいわゆる「種入り」ビルダ
ーが挙げられる。本発明の洗濯洗剤組成物は、好ましく
は、洗浄性ビルダー約１〜75重量％、より好ましくは約
５〜40重量％、最も好ましくは約10〜20重量％を含む。
これらの組成物は、好ましくは、pH約６〜10を有する。

好適な水溶性無機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の非限
定例としては、アルカリ金属の炭酸塩、ホウ酸塩、リン
酸塩、ポリリン酸塩、トリポリリン酸塩、重炭酸塩、ケ
イ酸塩および硫酸塩が挙げられる。かかる塩の特定例と
しては、ナトリウムおよびカリウムの四ホウ酸塩、重炭
酸塩、炭酸塩、トリポリリン酸塩、ピロリン酸塩、およ
びヘキサメタリン酸塩が挙げられる。

好適な有機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の例は、
（１）水溶性アミノポリ酢酸塩、例えば、ナトリウムお
よびカリウムのエチレンジアミン四酢酸塩、ニトリロ三
酢酸塩、およびＮ−（２−ヒドロキシエチル）ニトリロ
二酢酸塩；（２）フィチン酸の水溶性塩、例えば、フィ
チン酸ナトリウムおよびフィチン酸カリウム；（３）水
溶性ポリホスホン酸塩、例えば、エタン−１−ヒドロキ
シ−1,1−ジホスホン酸のナトリウム塩、カリウム塩お
よびリチウム塩、メチレンジホスホン酸のナトリウム
塩、カリウム塩およびリチウム塩などである。

種入りビルダーとしては、炭酸カルシウム、硫酸バリ
ウムが種として入れられた炭酸ナトリウム、ケイ酸ナト
リウムなどの物資が挙げられる。粒径約５μ以下を有す
る水和ナトリウムゼオライトＡが、特に望ましい。

好適な洗浄性ビルダーの詳細なリストは、米国特許第
3,936,537号明細書に見出すことができる。好ましいビ
ルダーは、脂肪酸、ポリカルボキシレート、ポリホスフ
ェートおよびそれらの混合物である。

任意の洗剤組成物成分としては、酵素（例えば、プロ
テアーゼおよびアミラーゼ）、過酸素漂白剤および漂白
活性剤、ハロゲン漂白剤（例えば、ジクロロイソシアヌ
ル酸ナトリウムおよびジクロロイソシアヌル酸カリウ
ム）、汚れ放出剤（例えば、メチルセルロース）、汚れ
沈殿防止剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナト
リウム）、布帛増白剤、酵素安定剤、着色斑点防止剤
（color speckles）、泡立て増進剤または抑泡剤、耐食
剤、染料、充填剤、殺菌剤、pH調整剤、非ビルダーアル
カリ性源などが挙げられる。

エンドグリコシダーゼプラス抗菌剤 II型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−β−Ｎ−
アセチルグルコサミニダーゼＨ、Ｄ、Ｆおよび／または
PNGase Fが、抗菌組成物を処方するのに且つ本発明の抗
菌法で使用するのに好ましい。エンド−Ｈが、最も好ま
しい。

II型エンドグリコシダーゼを単独で使用する時には、
II型エンドグリコシダーゼは、その濃度が抗菌効果を生
ずるように処方する。抗菌組成物が少なくとも２種の異
なる成分、即ち、II型エンドグリコシダーゼおよび１種
以上の抗菌剤からなる時には、成分の各々は、抗菌効果
を生ずるのに十分な濃度で存在する。前記組成物中の少
なくとも１種の成分の量は、一般に、同様の組成物で単
独で使用するならば、成分が同じ抗菌効果を生ずるのに
必要とされる量よりも少ない。

ここで使用する「抗菌効果」は、単独または抗菌剤か
らなる第二成分との組み合わせでのII型エンドグリコシ
ダーゼと接触する時に微生物の除去、殺すこと、増殖抑
制、全体の形態の変化、プロトプラスト形成および／ま
たは細胞壁の分解を包含する。

ここで使用する「抗菌法」は、抗菌効果を生ずる方法
を意味する。本発明の１アスペクトにおいては、抗菌法
は、微生物を殺すこと、微生物増殖の抑制、および／ま
たは微生物の全体の形態の変化を生ずる。本発明の別の
アスペクトにおいては、抗菌法は、表面からの微生物の
除去を生ずる。表面から微生物を除去するための抗菌法
においては、表面は、II型エンドグリコシダーゼで処理
した直後に追加の抗菌剤で処理するよりもむしろ、抗菌
剤およびII型エンドグリコシダーゼで同時に処理するこ
とが好ましい。抗菌法の若干の応用においては、組み合
わされた抗菌効果は生ずることがあり、例えば、殺すこ
とおよび／または増殖抑制は、表面からの微生物除去と
の組み合わせて生ずることがある。

ここで使用する「抗菌組成物」は、少なくとも２種の
成分:II型エンドグリコシダーゼ、および抗菌剤からな
る異なる成分を含有する組成物を意味する。かかる抗菌
組成物は、II型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤の量
および選択に応じて可変の抗菌効果を有する。観察され
た抗菌効果は、微生物を殺すことおよび／または微生物
増殖の抑制、表面からの微生物の除去および表面への微
生物付着の防止を包含する。

ここで使用するII型エンドグリコシダーゼの「抗菌上
有効な濃度」は、一般に、抗菌効果を生ずるように微生
物と接触させるために単独で使用するII型エンドグリコ
シダーゼの最終濃度を意味する。

ここで使用する「抗菌剤」は、抗菌組成物の第二の異
なる成分である。かかる抗菌剤は、一般に、抗生物質で
あり且つその例としては微生物を殺す薬剤および微生物
増殖を抑制するものが挙げられる。かかる抗菌剤の例と
しては、殺細菌剤、殺真菌剤および殺藻薬（それらの各
々はそれぞれ細菌、真菌類または藻類を殺すかそれらの
増殖を抑制することができる）が挙げられる。殺細菌剤
としては、クロルヘキシジン、2,4,4′−トリクロロ−
２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、トリクロカルバ
ン（Triclocarban）、ペニシリン、テトラサイクリ
ン、バシトラシン（Bacitracin）などの化合物が挙げら
れる。殺真菌剤としては、ナイスタチン（Nystatin
）、アンホテリシンＢ）（Amphotericin B）、ベノ
ミル（Benomyl）、カプタン（Captan）およびジク
ロラン（Dichloran）が挙げられる。抗菌剤の他の例
としては、界面活性剤安定性β−1,3−グルカナーゼ、
リゾチウム、プロテアーゼ、チキナーゼなどの界面活性
剤安定性抗菌酵素、当業者に既知の陰イオン界面活性
剤、非イオン界面活性剤、双性界面活性剤、両性界面活
性剤、陽イオン界面活性剤などの洗剤界面活性剤が挙げ
られる。後者は、抗菌効果を生ずるのに十分な量で使用
すべきである。一般名称または商標によって同定される
前記抗菌剤は、メルク・インデックス、第10版（1983）
（メルク・エンド・カンパニー・インコーポレーテッ
ド、ニュージャージー州ラーウェイ）に同定のような組
成物である。

抗菌組成物の第一成分と異なるII型エンドグリコシダ
ーゼは、抗菌剤としても使用してよい。かくて、II型エ
ンドグリコシダーゼがそれら自体抗菌剤である程度で
（例えば、形態変化、プロトプラスト形成などの抗菌効
果を生ずることができる）、II型エンドグリコシダーゼ
は、抗菌組成物を調製するために異なるII型エンドグリ
コシダーゼと組み合わせてもよい。それゆえ、抗菌組成
物は、II型エンドグリコシダーゼを含まない１種以上の
抗菌剤の有無で１種以上の異なるII型エンドグリコシダ
ーゼを含んでもよい。

ここで使用するのに好ましい抗菌剤は、クロルヘキシ
ジン、2,4,4′−トリクロロ−２′−ヒドロキシジフェ
ニルエーテル、トリクロカルバン、ナイスタチン、
アンホテリシンＢ、抗生物質、陰イオン洗剤界面活性
剤および非イオン洗剤界面活性剤である。界面活性剤安
定性抗菌リゾチームは、本願と同日出願の同時係属米国
特許出願「或るリゾチームおよびエンドグリコシダーゼ
を使用する方法および組成物」に開示されている。他の
リゾチーム、例えば、鶏卵白リゾチームは、より低い程
度であるが抗菌効果を生ずるためにエンド−Ｈと併用さ
れた（得られた結果は変動する）。

本発明の抗菌組成物および方法は、グラム陽性菌、グ
ラム陰性菌、真菌類、藻類を含めた広範囲の微生物に対
する抗菌効果を生ずることができる。かかる殺菌として
は、大腸菌、ストレプトコッカス・ミュータンズ、表皮
ブドウ球菌、および黄色ブドウ球菌が挙げられる。かか
る真菌類としては、カンジダ、サッカロミセスなどの酵
母、および種および糸状菌、例えば、麹カビ（Aspergil
lus）、スポロボミセス（Sporobolomyces）、バジディ
オボラス（Basidiobolus）、エントモフトラ（Entomoph
thora）が挙げられる。

II型エンドグリコシダーゼ（例えば、エンド−Ｈ、
Ｄ、Ｆおよび／またはPNGase F）を抗菌剤と組み合わせ
る特定の利点は、抗菌効果を生ずるのに抗菌剤が少なく
てすむことである。本発明の若干のアスペクトにおいて
は、II型エンドグリコシダーゼと併用する時の抗菌剤
は、表面に結合された微生物の除去またはかかる表面へ
の結合の防止からなる抗菌効果を生ずる。他のアスペク
トにおいては、微生物生存度または微生物形態に対する
否定的効果がある。

II型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤での１回以上
の表面処理は、処理にさらされた表面への微生物の更な
る増殖または結合または付着を防止するために定期的に
行うことができる。

II型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−Ｈ、Ｄ、
Ｆおよび／またはPNGase Fが、好ましい。これらのう
ち、エンド−Ｈが最も好ましい。一般に、抗菌剤と併用
するのに抗菌上有効な量のII型エンドグリコシダーゼ
は、エンド−Ｈ、Ｄ、Ｆおよび／またはPNGase F約１〜
1200ppm、好ましくはエンド−Ｈ約１〜1200ppm、より好
ましくはエンド−Ｈ約20〜1000ppm、最も好ましくはエ
ンド−Ｈ約50〜400ppmである。使用量は、処理の種類お
よび処理すべき表面または微生物への露出量に依存す
る。一般に、使用する抗菌剤の種類に依存する有効量の
抗菌剤は、クロルヘキシジンまたは2,4,4′−トリクロ
ロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテル約0.5〜1200p
pm、好ましくは２〜1200ppm、最も好ましくは約５〜350
ppm、またはナイスタチン0.5〜100ppmである。

II型エンドグリコシダーゼが微生物を殺し且つ／また
は抑制するために単独で使用する時には、実質上より多
くのII型エンドグリコシダーゼの使用が、一般に必要と
される。例えば、エンド−Ｈ約100ppm〜1000ppmは、か
かる濃度にさらされた酵母細胞の生存度を実質上減少す
ることを示した。しかしながら、酵母をエンド−H100pp
m未満にさらした時には、生存度の有意な減少が観察さ
れなかった。酵母生存度に悪影響を及ぼすのに必要なエ
ンド−Ｈの下限はまだ確認されていないが、抗菌上有効
な濃度の下限は、10〜100ppmであると信じられる。同様
の量のエンド−Ｈは、藻類、真菌類などの他の微生物を
殺し且つ／または抑制するのに有用であると信じられ
る。抗菌剤と併用しない時に、これらの生物および他の
もの、例えば、細菌に対するエンド−Ｈおよび他のII型
エンドグリコシダーゼの正確な効果は、まだ確認されて
いない。しかしながら、かかる生物に対して使用するた
めのII型エンドグリコシダーゼの抗菌上有効な濃度の範
囲は、普通に確認できる。

本発明の抗菌法および組成物は、広い応用性を有し且
つパーソナルケア、健康ケアおよび家庭クリーニングお
よび工業クリーニング用抗菌法および組成物を包含す
る。かくて、かかる方法および組成物は、抗菌洗口料、
歯みがきまたは義歯クリーナー、並びに抗菌液体または
固体ハンドまたはボディー石鹸、抗アクネ薬、制臭剤、
シャンプーおよびフェースクリームおよび傷を洗浄する
か感染を抑制するための組成物を処方し且つ使用するた
めに使用してもよい。典型的家庭応用としては、液体石
鹸、硬質表面クリーナー、液体洗濯洗剤、粒状洗濯洗剤
などの抗菌クリーニング製品が挙げられる。また、ヘビ
ーデューティー抗菌洗剤組成物は、工業用途のために処
方してもよい。

クロルヘキシジンは、有効な口腔抗菌剤であり且つ歯
応用で使用するのに好ましい。2,4,4′−トリクロロ−
２′−ヒドロキシジフェニルエーテルは、チバ−ガイギ
ーからイルガサンDP300として入手でき且つパーソナ
ルケアおよび洗濯応用で有効な広スペクトル抗菌剤であ
る。モンサントからのトリクロカルバンは、固形石鹸
で有用な静菌薬である。伝統的抗生物質も、ここで追加
の抗菌剤として使用できる。最後に、界面活性剤安定性
抗菌酵素は、歯応用およびシャンプーおよび他の界面活
性剤含有処方物の保存のために使用できる。好ましい界
面活性剤安定性抗菌酵素は、前記の同時係属の米国特許
出願に開示のリゾチームである。抗菌酵素の界面活性剤
安定性は、例えば、代表量のアルキルエーテルサルフェ
ートまたは線状アルキルベンゼンサルフェートの存在下
での保持活性によって、ここでは評価できる。

抗菌組成物は、抗菌洗口料、歯みがきまたは義歯クリ
ーナーとして処方してもよい。抗菌効果を生ずるための
（例えば、口腔中の天然または合成軟質および／または
硬質表面への微生物結合を除去するか防止し、または口
腔中で微生物を殺すか増殖を抑制するための）微生物の
処理は、本質上抗菌洗口料ですすぎ、歯を抗菌歯みがき
でクリーニングし、且つ／または義歯を抗菌義歯クリー
ナーでクリーニングすることからなる。本発明の抗菌洗
口料、歯みがきまたは義歯クリーナーは、好ましくはエ
ンド−Ｈ、および抗菌剤としてのクロルヘキシジンおよ
び／または界面活性剤安定性抗菌酵素を含む。クロルヘ
キシジンを使用する場合には、抗菌洗口料、歯みがきま
たは義歯クリーナーは、好ましくはエンド−Ｈ約50〜12
00ppmおよびクロレヘキシジン約50〜350ppmを含む。界
面活性剤安定性抗菌酵素を使用する場合には、抗菌洗口
料、歯みがきまたは義歯クリーナーは、好ましくはエン
ド−Ｈ約50〜150ppmおよび界面活性剤安定性抗菌酵素的
50〜1,000ppmを含む。

また、抗菌組成物は、抗菌パーソナルケアまたは家庭
クリーニング製品として処方してもよい。かかる製品に
おいては、エンド−Ｈは、好ましくは濃度約１〜1200pp
mで使用される。これらの製品で使用するための抗菌剤
は、好ましくはクロルヘキシジン、最も好ましくは濃度
約150〜1200ppmのクロロヘキシジン、または2,4,4′−
トリクロロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、最
も好ましくは濃度約２〜500ppmの2,4,4′−トリクロロ
−２′−ヒドロキシジフェニルエーテルである。好まし
いパーソナルケアまたは家庭クリーニング製品は、液体
ハンド石鹸、硬質表面クリーナー、洗濯洗剤およびシャ
ンプー（後述）である。

好ましい抗菌液体ハンド石鹸は、エンド−Ｈ約50〜40
0ppm、2,4,4′−トリクロロ−２′−ヒドロキシジフェ
ニルエーテル約５〜100ppm、および好ましくは洗剤界面
活性剤約１〜40重量％を含む。好ましくは洗剤界面活性
剤（好ましくは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性
剤、双性界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界
面活性剤からなる群から選ばれる）約２〜20重量％、最
も好ましくは約３〜10重量％が使用される。液体ハンド
石鹸は、エモリエント（約30重量％まで）および微量の
香料、着色剤、溶媒、および乳白剤を更に含むことがで
きる。

本発明の抗菌硬質表面クリーナーは、ガラスクリーナ
ー、研磨硬質表面クリーナー、磨きクレンザー、または
便器クリーナーであることができる。これらは、ハイポ
クロライト発生漂白剤および他のエンドグリコシダーゼ
不相容性成分を実質上含むべきではない。好ましい硬質
表面クリーナーは、約100〜1000ppmのエンド−Ｈおよび
抗菌剤、および洗剤界面活性剤約0.1〜20重量％を含
む。洗剤界面活性剤（好ましくは陰イオン界面活性剤、
非イオン界面活性剤、双性界面活性剤、両性界面活性剤
および陽イオン界面活性剤からなる群から選ばれる）約
２〜10重量％が最も好ましい。本発明の抗菌硬質表面ク
リーナーは、場合によって、研磨剤、ビルダー、希釈
剤、溶媒、沈殿防止剤（例えば、粘土、カルボキシメチ
ルセルロース、およびポリアクリレート）、香料および
／または着色剤を更に含む。

本発明の抗菌洗濯洗剤は、II型エンドグリコシダーゼ
および抗菌剤に加えて、好ましくは洗剤界面活性剤（好
ましくは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、双
性界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界面活性
剤からなる群から選ばれる）約１〜99重量％、より好ま
しくは約５〜60重量％、最も好ましくは約10〜40重量％
を含む。好ましい液体または粒状抗菌洗濯洗剤は、エン
ド−Ｈ約２〜250ppm、2,4,4′−トリクロロ−２′−ヒ
ドロキシジフェニルエーテル約2.5〜40ppm、および洗剤
界面活性剤約１〜99重量％、好ましくは約５〜60重量％
を含む。本発明の抗菌洗濯洗剤は、場合によって、ビル
ダー、香料、漂白剤、希釈剤、抑泡剤、着色剤、増白
剤、汚れ沈殿防止剤、再付着防止助剤、柔軟剤、および
／または汚れ放出剤を更に含む。

ここで使用するための抗菌シャンプーは、好ましく
は、エンド−Ｈ、抗菌剤、および洗剤界面活性剤（好ま
しくはラウリルサルフェート、イソエチオネート、アシ
ルアミドベタイン、アルキルグリセリルエーテルスルホ
ネート、およびアルキルエーテルサルフェートからなる
群から選ばれる）約５〜60重量％を含む。任意成分は、
泡立て増進剤、コンディショナー、染料、着色剤、香料
および／またはふけとり剤である。

また、本発明の抗菌組成物は、植物表面の処理用防腐
剤または微生物防除剤の形態であってもよい。果物また
は野菜の表面用防腐剤または微生物防除用作物上に適用
すべき抗菌製品が、好ましい。後者は、好ましくは、微
生物増殖の防除および防止のためにトウモロコシ、柑橘
類、小麦、タバコ、大豆、トマト、イチゴなどの作物上
に噴霧すべき溶液の形態である。

下記のものは、例として提示するものであって、本発
明の範囲を限定するものとは解釈すべきではない。

例１ 布帛からの血液および糞便の除去 加温（約37℃）洗浄サイクルを使用して、血液および
糞便で汚れた別個の（綿布帛）見本を自動洗濯機中で市
販の洗剤で洗浄した。次いで、見本をすすぎ、風乾し
た。次いで、見本を試験管中で37℃において50mMトリス
−HCl（pH7.0）0.75ml中の各種の量および種類のエンド
グリコシダーゼ〔（エンド−Ｄ（ベーリンガー・マンハ
イム・バイオケミカル）0.005U、またはエンド−Ｈ（ベ
ーリンガー・マンハイム・バイオケミカル、カタログN
o.752 967のS.グリセウス）からおよびＮ−グリカナー
ゼ（PNGase FまたはペプチドエンドグリコシダーゼＦ）
ゲンザイム0.25U、マサチュセッツ州ボストン〕と共に3
0分間インキュベートした。コントロールは、緩衝液を
含有するが、エンドグリコシダーゼを含有しなかった。
インキュベーション期間の終わりに、ズブチリシン BP
N′ 80μg/mlを含有する洗剤溶液〔1Mトリス−HCl（pH
7.5）中に染料、香料、酵素または増白剤を含有しな
い市販の液体洗剤組成物の希釈度1:125〕0.25mlをコン
トロールおよび酵素含有試料に加え、追加の20分間イン
キュベートした。この処理の終わりに、試験管を遠心分
離し、上澄み液中のタンパク質含量は280nmでの吸光度
を測定することによって求めた。各処理の場合に、検定
時に見本を含有しない反応ブランクを調製した。ブラン
ク値を処理試料の吸光度から引いて、インキュベーショ
ン時の280nm吸収物質の放出を求めた。より高い吸光度
は、繊維からのタンパク質の増大された放出を表わす。
結果を表IIIに示す。

これらの結果は、第二酵素ズブチリシンとの組み合わ
せのエンドグリコシダーゼ、エンド−Ｄおよびエンド−
Ｈがコントロールと比較して血液で汚れた見本からの28
0nm吸収物質の放出を増大することを示唆した。更に、
エンド−Ｄ、エンド−ＨおよびＮ−グリカナーゼは、す
べての糞便で汚れた見本からの280nm吸収物質の放出の
増大を示した。

例２ 糞便しみの除去に対するエンド−Ｈの効果 糞便で汚れたナイロン布帛製見本を使用することによ
って行った以外は、本例は例１と同様である。見本を洗
剤溶液中で洗浄し、すすぎ、乾燥した。洗剤は、酵素、
増白剤、染料または香料を含有しない市販の液体洗剤か
らなっていた。１組の見本を別にし、「未処理コントロ
ール」と称した。これらの見本をエンド−Ｈで処理しな
い以外は、試料見本と同じ方法で処理した。試料見本を
37℃で緩衝液（10mM酢酸ナトリウム、pH6.0）中のエン
ド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカル、
カタログNo.752967）0.01Uと共に15分間インキュベート
した。次いで、洗剤溶液〔1.0Mトリス−HCl（pH 7.5）
中の希釈度1:125〕0.25mlを加え、追加の15分間インキ
ュベートした。終わりに、管を遠心分離し、上澄み液を
吸引によって除去した。見本を風乾した。見本からの繊
維を走査電子顕微鏡測定によって調べた後、臨界点乾燥
した。糞便で汚れた洗剤洗浄見本の電子顕微鏡写真を第
6A図に示す。わかるように、棒状細菌および粒状物が、
布帛の表面上に見出される。第6B図は、エンド−Ｈおよ
び洗剤で処理された見本を示す。この図は、エンド−Ｈ
および洗剤が粒状物および細菌デブリの除去を容易にす
ることを実証する平滑な清浄布帛を示す。

例３ 糞便しみに対するエンド−Ｆの効果 糞便で汚れた見本〔直径１インチ（約2.54cm）〕を洗
剤溶液中で洗浄し、すすぎ、乾燥した。見本を四半分に
切断し、下記実験で使用した。

A. 見本を37℃において10mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH
5.5）1ml中でエンド−Ｆ（ベーリンガー・マンハイム
・バイオケミカル）（0.15単位）の有無で30分間インキ
ュベートした。次いで、管を８分間遠心分離した。上澄
み液を除去し、各々の吸光度を280nmで測定した。A280
の変化は、適当なブランク（例１参照）を引くことによ
って求めた。より高い吸光度は、見本から放出された28
0nmで吸収するタンク質または物質の量の増大を包含す
る。コントロールの場合には、A280の平均変化は、0.93
であった。エンド−Ｆで処理された見本の場合には、A2
80の平均変化は、1.05であった。このことは、エンド−
Ｆが糞便しみ抜き効率を増大することを示した。

B. 見本を37℃において10mM酢酸ナトリウム緩衝液（pH
5.5）0.75ml中でエンド−Ｆ（0.15単位）の有無で15
分間インキュベートした。この処理の終わりに、プロテ
アーゼズブチリシンBPN′ 10μｇを含有する洗剤溶液
〔0.1Mトリス−HCl（pH 7.5）中〕0.25mlを加え、管を
37℃において別の15分間インキュベートした。終わり
に、管を遠心分離し、上澄み液を除去し、280nmでの吸
光度を測定した。コントロール（エンド−Ｆなし）の場
合には、A280の平均変化は、1.08である一方、エンド−
Ｆで処理された試料は、A280の変化1.36を示した。この
ことは、エンド−Ｆの効果が洗剤の存在によって高めら
れることを示した。

C. 洗剤溶液がズブチリシンの代わりに10mM ２−メル
カプトエタノールを含有する以外は、「Ｂ」と同様の実
験を行った。コントロールの場合のA280の平均変化は1.
05である一方、エンド−Ｆで処理された試料は、A280の
変化1.24を生じた。これらの結果は、糞便しみを除去す
る、ジスルフィド切断試薬の存在下におけるエンド−Ｆ
の能力を実証した。

D. 洗剤溶液が10mM ２−メルカプトエタノールおよび
ズブチリシンBPN′ 10μｇを含有する以外は、「Ｂ」
と同様の実験を行った。コントロールの場合のA280の平
均変化は1.14である一方、エンド−Ｆ処理試料は、A280
の変化1.29を有していた。これらの結果は、エンド−Ｆ
が糞便しみを洗剤、プロテアーゼおよびジスルフィド切
断試薬（２−メルカプトエタノール）の存在下において
除去することができることを示す。

例４ エンド−Ｈと他の酵素との比較 ズブチリシンなどのプロテアーゼを使用しない以外
は、エンド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケ
ミカル、カタログNo.100 119）および他のカルボヒドラ
ーゼ酵素を使用して例３のパートＢに記載の実験と同様
の実験を繰り返した。A280の変化を監視し、繊維を走査
電子顕微鏡測定によって調べた。布帛からの粒状および
細菌デブリの除去は、エンド−Ｈおよび「溶解酵素」
（シグマ・ケミカル・カンパニーから得られるプロテア
ーゼとグリコナーゼとの混合物）の場合には見られた。
しかしながら、酵素、リゾチーム、α−グリコシダー
ゼ、β−グルコシダーゼおよびβ−グルコリナダーゼ
は、ほとんどまたは何の利益も示さなかった（結果を示
さず）。前記酵素の有無での処理の場合のこの実験の電
子顕微鏡測定の結果を第7A図〜第7H図に示す。第7A図
は、エンドグリコシダーゼで処理しなかったコントロー
ルである。第7B図は、リゾチームで処理された見本の電
子顕微鏡写真である。第7C図は、エンド−Ｈで処理され
た見本の電子顕微鏡写真である。第7D図は、α−グルコ
シダーゼで処理された見本の電子顕微鏡写真である。第
7E図は、β−グルコシダーゼで処理された見本の電子顕
微鏡写真である。第7F図は、「溶解酵素」で処理された
繊維の電子顕微鏡写真である。第7G図は、β−グルコリ
ナダーゼで処理された見本の電子顕微鏡写真である。第
7H図は、キチナーゼで処理された見本の電子顕微鏡写真
である。わかるように、エンド−Ｈで処理された見本
（第7C図）は、糞便しみを十分に取り除いた。同様の結
果は、7F図に示すように「溶解酵素」で処理された見本
の場合に得られた。

例５ 固体表面からの細菌の除去 固体表面（ガラス）からの細菌の除去に対するエンド
−Ｈの効果を試験するために、下記プロトコールを使用
した。トリプトカーゼ大豆ブイヨン（TSB）（10ml）に
ストック斜面培養からの微生物種（黄色ブドウ球菌ATCC
培養＃6538または大腸菌ATCC培養＃10536）を接種し、3
7℃で一晩中インキュベートした。TSB約10⁸個の細胞/ml
の懸濁液を調製し、この懸濁液100μをガラススライ
ド上の食刻リング内に入れた。各スライドを37℃で乾燥
インキュベーターオーブン中でインキュベートした後、
過剰の微生物溶液を注ぎ出した。次いで、スライドを滅
菌蒸留水100μですすいだ。次いで、過剰の溶液およ
び緩い生物を注ぎ出した。

殺菌をガラススライドに付着した後（37℃で２時間以
上）、下記溶液100μを別個のスライドに適用した：
（ａ）10mMアセテート緩衝液（pH5.5）、（ｂ）10mMア
セテート緩衝液（pH5.5）＋エンド−Ｈ（ベーリンガー
・マンハイム・バイオケミカル、カタログNo.100 119）
1ppm、（ｃ）洗剤溶液、（ｄ）洗剤溶液＋エンド−H 1p
pm。一連のスライドを未処理コントロールとして別に
し、いかなる溶液でも処理しなかった。次いで、非コン
トロールスライドを37℃で15分間インキュベートした。
インキュベーションの終わりに、溶液を注ぎ出した。次
いで、スライドを滅菌蒸留水100μですすぎ、室温で
風乾した。この処理後に残る細菌を熱固定し、標準グラ
ム染色法によって染色した。次いで、スライドを光学顕
微鏡（明視野イルミネーション、倍率125X）によって調
べ、生物／視野の数を求めた。20視野を各スライドの場
合に計数し、それから平均生物／視野を計算した。

下記結果が、得られた。

A.黄色ブドウ球菌の場合 （ｉ）処理なし ＞100生物／視野 （ii）緩衝液 ＞100生物／視野 （iii）緩衝液＋エンド−Ｈ ＜10生物／視野 （iv）洗剤溶液 ＞100生物／視野 （ｖ）洗剤＋エンド−Ｈ ＜10生物／視野 これらの結果は、単独または洗剤との組み合わせでの
エンド−Ｈ緩衝液が洗剤単独での処理と比較してガラス
スライド上に保持された黄色ブドウ球菌細菌の数を10倍
減少したことを示す。

B.大腸菌の場合 （ｉ）処理なし ＞100生物／視野 （ii）緩衝液 ＞100生物／視野 （iii）緩衝液＋エンド−Ｈ ＜100生物／視野 （iv）洗剤 ＞100生物／視野 （ｖ）洗剤＋エンド−Ｈ ＜10生物／視野 これらの結果は、洗剤との組み合わせのエンド−Ｈが
洗剤単独での処理と比較してガラススライド上に保持さ
れた大腸菌の数を10倍減少したことを示す。

例６ 固体表面からの細菌の除去 ２種の粘液産生黄色ブドウ球菌培養を使用して、例５
と同様の実験を行った（ポリスチレン管に結合する能力
によって測定）。顕微鏡スライドは、ネールポリッシュ
を有する２個のリング（直径1.7cm）を成形することに
よって修正した。生物の一晩の培養を１％ペプトン溶液
で1:10に希釈した。希釈された培養（100μ）をリン
グに入れた。スライドを150cmのペトリ皿に入れ、37℃
でインキュベートした。２時間インキュベーション後、
スライドを蒸留水ですすぎ、例５と同様に３種の異なる
条件（A.酢酸ナトリウム緩衝液、B.洗剤、C.洗剤プラス
エンド−Ｈ １μg/ml）で処理した。エンド−Ｈは、S.
プリカタスからエンド−Ｈを産生するために形質転換さ
れた大腸菌から得られた。15分の終わりに、インキュベ
ーションスライドを蒸留水ですすぎ、グラム染色した。
細菌の数を20視野の場合に顕微鏡/100X視野下で計数し
た。結果を細胞／視野の平均数として表現する。

条件 培養Ｉ 培養II A.コントロール 23 202 B.洗剤 ９ 58 C.洗剤＋エンド−Ｈ ２ 33 例７ 布表面からの細菌の除去 布表面からの細菌の除去に対するエンド−Ｈの効果を
試験するために、下記プロトコールを使用した。黄色ブ
ドウ球菌（ATCC6538）および表皮ブドウ球菌（ATCC15
5）をルリアのブイヨン5ml中で別個に培養し、37℃で12
時間増殖した。次いで、培養を２個の振とうフラスコ中
の0.2Mクエン酸ナトリウム（pH5.5）緩衝液30mlに細胞
約10³個/mlで加えた。接種後に、12個の布見本〔0.5×
0.5インチ（約12.7×12.7mm）の綿見本〕もフラスコに
加えた。37℃で穏やかな回転下に（150rpm）２時間イン
キュベーション後、見本を滅菌管に写し、0.22μ濾過に
よって予め滅菌された200mMクエン酸ナトリウム（pH5.
5）からなる緩衝液で３回洗浄した。次いで、６個の見
本をサイトレート緩衝液30ml中にエンド−Ｈ 0.5mg/ml
を含有する振とうフラスコに加え、６個の見本をコント
ロールとしてサイトレート緩衝液のみを含有する振とう
フラスコに加えた。エンド−Ｈは、S.プリカタスエンド
−Ｈを産生する大腸菌から得られた。37℃で穏やかな回
転下に（100rpm）1.5時間インキュベーション後、見本
を滅菌管に移し、前記のように洗浄した。次いで、見本
をトリプチカーゼ大豆寒天プレート上に注意深く塗布
し、見本を覆うのに十分な液体トリピチカーゼ大豆寒天
を上に置いた。プレートを乾燥した後、37℃で18時間イ
ンキュベートし、切開スコープを使用して、布表面上の
黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌とのコロニーを計数し
た。

下記結果が、得られた。

A.黄色ブドウ球菌の場合 コントロール 見本当たりコロニー 103＋／−24 エンド−Ｈ 見本当たりコロニー 53＋／−18 エンド−Ｈ処理による細菌コロニーの減少率49％。

B.表皮ブドウ球菌の場合 コントロール 見本当たりコロニー 57＋／−11 エンド−Ｈ 見本当たりコロニー 16＋／−10 エンド−Ｈ処理による細菌コロニーの減少率72％。

これらの結果は、エンド−Ｈ処理が布表面に付着した
細菌の数を顕著に減少させることを示す。

例８ エンド−Ｈの細菌への結合 下記実験は、II型エンドグリコシダーゼ、エンド−Ｈ
が細菌黄色ブドウ球菌およびストレプトコッカス・ミュ
ータンズ上の表面成分と相互作用するかどうかを確認す
るために実施した。かかる相互作用は、検出された。こ
こでは完全には特徴づけられないが、この相互作用は、
既知ではなく且つ表面からかかる細菌を除去するエンド
−Ｈの前記能力の基準を構成することがある。

R.J.トリンブル等（1985）,J.Biol.Chem.,260,5638−
5690に記載の方法を修正することによって精製された形
質転換大腸菌からのエンド−ＨをT.V.アップダイクおよ
びG.L.ニコルソン（1986）,Methods in Enzymology,12
1,717−725に記載の方法に従ってビオチンで標識した。
かかる標識後、エンド−Ｈは、糖タンパク質オボアルブ
ミンとの反応性の大部分を保持した。

ルリアのブイヨン中で増殖した黄色ブドウ球菌（ATCC
6538）およびディフコ・ブレイン・ハート・インヒュー
ジョン培地（Difco Brain Heart Infusion media）中で
増殖したストレプトコッカス・ミュータンズ（ATCC2760
7）の一晩培養を遠心分離し、200mMクエン酸ナトリウム
（pH 5.5）緩衝液で３回洗浄し、同じ緩衝液中で細胞
約10⁹個/mlの濃度に懸濁した。アリコート0.5mlを31.5m
lのエッペンドルフ（Eppendorf）管に入れ、各種の条件
および時間下でインキュベートした。

遅速ロッカーを使用して、インキュベーションを室温
で２分または30分間行った。トリス緩衝化食塩水中で希
釈されたBSA（ウシ血清アルブミン）をコントロール溶
液として使用して、細胞に結合する非特異性タンパク質
を防止した。インキュベーション後、管を遠心分離し、
上澄み液を捨てた。２％BSA溶液での２回の細胞洗浄
は、BSA 1.0mlを細胞に加え、よく渦巻き、遠心分離
し、上澄み液を捨てることによって行った。洗浄された
細胞にストレプタビジン−HRP（ストレプタビジン標識
ホースラディシュペルオキシダーゼ、カーケガード・エ
ンド・ペリー・ラボラトリーズ・インコーポレーテッ
ド）0.5mlを使用し、室温で30分間インキュベートし
た。管を再度遠心分離し、前記のように洗浄した。細菌
細胞に結合するエンド−Ｈの検出は、HRP−ストレプタ
ビジン（これは細胞に結合されたビオチン化エンド−Ｈ
に非常に堅く結合するであろう）の検出によって確認し
た。HRP検出は、過酸化水素を含有するサイトレートホ
スフェート緩衝液中で希釈されたHRP基質OPD（ｏ−フェ
ニレンジアミン）0.5mlを加えることによって確認し
た。OPDを加えてから１分後に、色原体発生を2M H₂SO₄
で消した。細胞を遠心分離し、上澄み液を490nmで読ん
だ。

下記結果が得られた。

黄色ブドウ球菌の場合 OD490nm コントロール 0.13 エンド−Ｈ、２分 1.89 エンド−Ｈ、30分 1.90 ストレプトコッカス・ミュータンズの場合 OD490nm コントロール 0.18 エンド−Ｈ、２分 3.76 エンド−Ｈ、30分 3.80 これらの結果は、細菌黄色ブドウ球菌およびストレプ
トコッカス・ミュータンズへのエンド−Ｈの結合がある
ことを示す。データは、結合するエンド−Ｈの大部分が
細胞との接触後最初の２分以内で生ずることを示す。ス
トレプトコッカス・ミュータンズの場合に得られたより
高い吸光度は、より高い水準のエンド−Ｈ結合を示すこ
とがある。

例９ 本発明のヘビーデューティー液体洗濯洗剤組成物は、
次の通りである。

前記成分を単一撹拌機を有する混合タンクに現われる
順序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加
える前に、混合物のpHは、20℃の水中の10重量％溶液が
pH約8.5を有するように調整する。

この組成物は、プロテアーゼ含有洗剤および／または
アミラーゼ含有洗剤と比較してさえ、炭水化物含有しみ
の優れたクリーニングを与える。

例10 本発明のヘビーデューティー液体洗濯洗剤組成物は、
次の通りである。

前記成分を単一撹拌機を有する混合タンクに現われる
順序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加
える前に、混合物のpHは、20℃の水中の10重量％溶液が
pH約8.5を有するように調整する。

この組成物は、炭水化物含有しみ、特に糞便しみの優
れたクリーニングを与える。

エンドＨ量を0.40mg/mlに減少し、水を35.72に減少し
且つ１％イルガサン（チバーガイギー製の抗菌剤）を加
える時に、本発明の他の組成物が得られる。

例11 本発明の液体石鹸組成物は、次の通りである。

成分 活性成分重量％ ラウリル硫酸アンモニウム 6.0 ラウリルサルコシン酸ナトリウム 5.7 ココアミドプロピルベタイン 6.3 ココナッツ脂肪酸 1.0 第四級アミン 0.3 エチレンジアミン四酢酸 0.2 硫酸アンモニウム 0.4 香料 0.25 カトン 5ppm 水 72.0 エンドグリコシダーゼＨ 1000ppm トリクロカルバン 1.50 前記節分を単一撹拌機を有する混合タンクに上に現わ
れる順序で加える。

この組成物は、グリコシダーゼを含有しない抗菌石鹸
と比較した時にさえ、普通の皮膚フローラルの除去用抗
菌作用を与える。

例12 本発明の硬質表面磨きクレンザーは、次の通りであ
る。

成分 重量％ 偽稠度流体相（比重1.1） 93.5 バラサムNAS−100 4.25 （ナトリウムサポナイト粘土） ピロリン酸四カリウム 6.00 リン酸三カリウム 2.00 次亜鉛素酸ナトリウム漂白剤 0.90 ラウリルアルキル硫酸ナトリウム 0.25 界面活性剤 染料および香料 0.26 エンドグリコシダーゼＨ 1000ppm 軟水 78.86 研磨剤（膨張パーライト、比重2.0、平均粒径50μ）
5.0 ヘルコフラット135充填剤（粉末状ポリ 1.50 プロピレン、比重0.9、平均粒径35μ） 研磨剤／充填剤の平均粒径の比率＝1.43:1 組成物は、次の通り調製する。偽稠度流体相を形成す
るのに必要な程度で比較的高い剪断撹拌を使用して、ピ
ロリン酸四カリウム、リン酸三カリウム、ナトリウムサ
ポナイト粘土、染料、香料および脱イオン水を混合す
る。次いで、アルキルサルフェート界面活性剤をこの混
合物にブレンドした後、ポリプロピレン充填剤物質をブ
レンドする。次亜鉛素酸ナトリウムとパーライト研磨剤
との別個の水性スラリーを調製し、次いで、中位の剪断
撹拌下に液化しながら、偽稠度流体相にブレンドする。
得られた磨き組成物は、偽稠度であり、即ち、静止状態
でゲル状であるが、剪断応力の適用によって容易に流動
する。かかる組成物は、硬質表面からのしみおよび汚れ
の除去に特に有効である。

例13 本発明のシャンプー組成物は、次の通りである。

成分 量 アルキル硫酸アンモニウム 55.25％ （29％水溶液） 米国特許第4,345,080号明細書 2.0 の例Ｉのジンクピリジンチオン結晶 ココナッツモノエタノールアミド 3.0 エチレングリコールジステアレート 5.0 クエン酸ナトリウム 0.5 クエン酸 0.2 着色剤溶液 0.1 香料 0.5 エンドグリコシダーゼＨ 1000ppm 水 残部 100.00％ 例14 本発明の制汗剤スティックは、下記成分を利用して調
製する。

成分 量 シクロメチコン 42.55 流体AP 4.99 ステアリルアルコール 11.49 ヒマシロウ 4.99 タルク 6.99 ジルコニウム／アルミニウム／グリシ 26.67 ン複合体 芳香マスキング剤 0.80 C₂₀アルコール 0.12 ピリドキサールホスフェート 1.00 エンドグリコシダーゼＨ 500ppm 例15 本発明の液体石鹸組成物は、次の通りである。

活性成分 成分 重量％ ラウリル硫酸アンモニウム 6.0 アルキルサルコシン酸ナトリウム 5.7 ココアミドプロピルベタイン 6.3 ココナッツ脂肪酸 1.0 エチレンジアミン四酢酸 0.2 硫酸アンモニウム 0.4 香料 0.25 染料 5ppm 水 80.15 エンド−Ｈ 50ppm 2,4,4′−トリクロロ−２′−ヒ 100ppm ドロキシジフェニルエーテル 前記成分を単一撹拌機を有する混合タンクに上に現わ
れる順序で加える。染料および香料を加える前に、混合
物のpHは、20℃の水中の10重量％溶液がpH約6.5を有す
るように調整する。

この組成物は、普通の皮膚フローラの除去用抗菌作用
を与える。

例16 本発明の硬質表面クレンザーは、次の通りである。

活性成分 成分 重量％ ラウリルアルキル硫酸ナトリウム 0.5 アルキル硫酸ナトリウム 0.5 ブチルカルビトール 4.0 重炭酸ナトリウム 0.5 クエン酸 0.04 ホルムアルデヒド 0.03 香料 0.05 タルトレートモノ／ジスクシネート 5.0 エンド−Ｈ 1000ppm 水 88.4 前記成分を単一撹拌機を有する混合タンクに上に現わ
れる順序で加える。香料を加える前に、混合物のpHは、
20℃の水中の10重量％溶液がpH約７を有するように調整
する。

この組成物は、硬質表面からの石鹸スカムおよびカビ
の除去に有効であり且つエンドグリコシダーゼなしのク
レンザーよりも効能がある。

例17 全果物、野菜または他の植物表面のクリーニングおよ
び／または保存のために使用する組成物は、次の通りで
ある。

活性成分 成分 重量％ 水 96.4 Ｃ_12〜13アルコールポリエトキシ 0.1 レート（6.5） エンド−Ｈ 3500ppm この組成物は、次の通り調製する。アルコールポリエ
トキシレートおよびエンド−Ｈをそれぞれの量で水に混
入し、最終pHを６〜７に調整する。最終組成物は、全果
物、野菜などの植物表面上に噴霧する時に、前記表面上
の微生物増殖を防止する際に有用である。

例18 エンド−Ｈによる抗菌剤の殺細菌効果の増強 大腸菌の一晩培養を新鮮な栄養ブイヨンに希釈し、37
℃で４時間増殖した。細胞を遠心分離によって得、0.2M
クエン酸ナトリウム緩衝液（SCB、pH 5.5）中で洗浄し
た。遠心分離後、細胞をSCBに再懸濁した。下記管（２
回の実験）を調製した。

エンド−Ｈは、S.プリカタスエンド−Ｈを産生する大
腸菌からであった。各管に細胞懸濁液790μを加え
（最終容量は今や1ml）、試料10μを０分コントロー
ルとして取り出した。管を37℃で回転振とう機上でイン
キュベートし、試料10μを１時間および３時間で除去
した。アリコート10μをPBS（ホスフェート緩衝化食
塩水）990μと混合し（希釈度10^-2）、逐次PBS中に更
に希釈した（1:10）（PBS 900μ中100μ）。各希
釈溶液10μをルリアーベルタニ寒天プレート上に塗布
した。プレートを37℃で一晩中インキュベートし、コロ
ニーを計数した。管中のコロニー形成細菌の数を施され
た希釈度に従って計算し、この数の対数を更なるグラフ
および計算のために使用した。

これらの結果を第８図にプロットする。わかるよう
に、エンド−Ｈ 200ppmは、クロルヘキシジン50ppmの
殺菌効果を高める。

同様の結果は、１時間の期間にわたって測定した時に
クロルヘキシジンおよびエンド−Ｈのわずかに異なる濃
度の場合に得られた。これらの結果を第９図に示す。わ
かるように、エンド−Ｈ 140ppmは、クロルヘキシジン
40ppmの効能を高める。

この効果を更に研究するために、エンド−Ｈの濃度を
変えながら、クロルヘキシジン20ppm（最終濃度）を使
用して、同様の実験を実施した。結果を第10A図および
第10B図に示す。これらのプロットは、コロニー形成単
位（CPU）のlogの変化を表わす。わかるように、比較的
線形の関係は、エンド−Ｈ約280ppmを通して加えられる
エンド−Ｈの量間に存在する。エンド−Ｈ濃度の更なる
増大は、クロルヘキシジン20ppmとの組み合わせでエン
ド−Ｈ少なくとも1000ppmを通して細菌生存度に対する
悪影響を高める。

例19 真菌類の生存度に対する単独および抗菌剤との組み合わ
せでのエンド−Ｈの効果 カンジダ・アルビカンズ（Candida albicans）の対数
期培養を増殖し、新鮮な増殖培地中に希釈し、37℃で撹
拌下にインキュベートしながら、エンド−Ｈ ０、１、
10、100および1000ppm（最終濃度）で４時間処理した。
エンド−Ｈは、S.プリカタスからエンド−Ｈを産生する
ために形質転換された枯草菌からであった。希釈度１
倍、10倍および100倍を調製し、塗布して生存可能な細
胞計数を与えた。１つの場合には、エンド−Ｈ 100ppm
はインキュベーション18時間後に生存度を約36％だけ減
少したが、エンド−Ｈ ０〜10ppmは、細胞生存度を有
意には減少しなかった。しかしながら、エンド−Ｈ 10
0ppm〜1000ppmは、４時間処理した後に、エンド−Ｈで
処理しないコントロールと比較して、回収された生存可
能な細胞の数をそれぞれ約50％〜88％だけ減少した。

別個の実験においては、カンジダ・アルビカンズの培
養を増殖し、新鮮な培地中に希釈し、37℃で撹拌下にイ
ンキュベートしながら、エンド−Ｈ ０、１、10、100
または1000ppm（最終濃度）に加えてナイスタチン2.5
μg/mlで18時間処理した。希釈度１倍、10倍 100倍お
よび1000倍を調製し、塗布して生存可能な細胞計数を与
えた。エンド−Ｈは、ナイスタチン 単独で得られたも
のと比較して次の通り回収される生存可能な細胞を減少
した。

エンド−Ｈ ppm 減少率 ０ ０％ 1ppm 69％ 10ppm 93％ 100ppm 99％ わかるように、エンド−Ｈ 1ppm程度でもナイスタチ
ン の殺菌効果を有意に高める一方、エンド−Ｈ 100p
pmおよび1000ppmは、ナイスタチン処理単独を生き延
びる真菌類のほとんどすべてを殺す。

濃度0.5μg/mlのアンホテリシンＢを使用して、同
様の実験を３時間実施した。結果は、次の通りであっ
た。

エンド−Ｈ ppm 生存度の減少率 ０ ０％ １ 17％ 10 ５％ 100 96％ 1000 94％ わかるように、エンド−Ｈ 100ppmは、アンホテリシ
ンＢ の殺菌効果を高める。

例20 単独またはリゾチームとの組み合わせでのエンド−Ｈの
抗菌効果 大腸菌の48時間継代培養（ATCC31617）を使用して単
独または洗剤および／またはエンド−Ｈとの組み合わせ
でのリゾチームムタノリシン（シグマ・ケミカル・カン
パニー）の効果を試験した。エンド−Ｈは、S.プリカタ
スからエンド−Ｈを産生するために形質転換された大腸
菌からであった。下記プロトコールおよび結果が、37℃
で２時間処理した後に得られた。

ド−Ｈおよびムタノリシンにさらされた細菌の全体の
形態は、有意に修正された。エンド−Ｈを単独または洗
剤との組み合わせで使用する時に、最も劇的な効果がpH
7で生じた。しかしながら、細胞生存度は、明らかには
影響されなかった。エンド−Ｈおよびムタノリシンは、
緩衝液コントロールと比較して塗布実験で得られたコロ
ニーの数を減少しなかった。

例21 エンド−ＨおよびPNGase Fによるガラス表面からの細菌
除去 大腸菌（ATCC31617）および表皮ブドウ球菌（ATCC15
5）を使用してガラススライドに接種した。各スライド
は、２個の食刻円を含み且つ各々に大腸菌または表皮ブ
ドウ球菌を接種した。細菌を37℃で２時間インキュベー
トさせた。

蒸留水ですすいだ後、スライドを（１）PBS緩衝後、
（２）PBS緩衝液中のエンド−Ｈ（100ppm）、または
（３）PBS緩衝液中のPNGase F（100ppm）で処理した。
エンド−Ｈは、S.プリカタスエンド−Ｈを産生する大腸
菌に由来した。37℃で30分後、スライドを蒸留水中です
すいだ。グラム染色後、スライドを光学顕微鏡でブライ
ト視野オプティックスで読んだ。

緩衝液コントロールの場合には、スライドに残る細菌
の数は、100個／視野よりも多かった。エンド−Ｈで処
理されたスライドは、はるかに少ない細菌を含有してい
た。表皮ブドウ球菌の場合には、約１〜３個の細菌のみ
が視野当たり観察された。大腸菌の場合には、約５〜10
個が視野当たり観察された。PNGase Fで処理されたスラ
イドの場合には、細菌の中位の数が表皮ブドウ球菌と大
腸菌との両方の場合に観察された（約20個／視野）。

これらの結果は、PNGase Fがエンド−Ｈ程効率的では
ないがガラス表面から細菌を除去することができること
を示した。

例22 エンド−Ｈを有する錠剤義歯クリーナー 重炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム１水和物、酒
石酸、トリポリリン酸ナトリウム、スルファミン酸、ポ
リエチレングリコール（分子量20,000）およびエチレン
ジアミン四アセテートは、熱風床中で60〜65℃において
30分間流動化することによって別個に造粒する。次い
で、かかる粒状物は、他の成分とタンブル混合して「第
一層」混合物および「第二層」混合物を調製する。そし
て、「第一層」混合物は、下記組成を有する。

重量％ 重炭酸ナトリウム 30.00 酒石酸 23.00 一過硫酸カリウム 16.00 スルファミン酸 11.00 ピロリン酸二ナトリウム 8.20 炭酸ナトリウム 3.90 ポリエチレングリコール 12.60 硫酸ナトリウム 2.00 ペパーミント粉末 2.50 二酸化ケイ素 1.30 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 0.50 「第二層」混合物は、下記組成を有する。

重量％ 過ホウ酸ナトリウム１水和物 30.00 一過硫酸カリウム 28.00 重炭酸ナトリウム 13.34 トリポリリン酸ナトリウム 10.00 重炭酸ナトリウム／着色剤 4.00 トリロンＢ 3.00 炭酸ナトリウム 3.00 ポリエチレングリコール 2.50 二酸化ケイ素 2.00 ペパーミント粉末 1.50 ワサグエステル７ 0.70 ワサグエステル15 0.70 硬化トリグリセリド 0.50 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム 0.40 スクシネート洗剤 0.30 ブルーレークNo.1 0.06 エンド−Ｈ 100ppm 錠剤は、次の通り調製する。39個のステーションのホ
ーン（HORN）回転錠剤化プレス中で圧縮する。圧縮は、
２段である。最初に、「第二層」、青色混合物を充填に
よって非常に低い圧力（10kN/錠剤）に圧縮する。次い
で、「第一層」、白色混合物を滴下し、70kN/錠剤にプ
レスする。このようにして、錠剤4gを調製する（2.7gが
青色、1.3gが白色）。

錠剤を消費者によって水に溶解して、水中に入れられ
た義歯を清浄化する。

例23 エンド−Ｈを有するライトクリーム 水中油型日やけどめ乳濁液ベースを化学名またはコス
メティック、トイッレトリー・エンド・フラグレンス・
アソシエーション（CTFA）名で示される下記成分から調
製する。

成分 重量％ 水相 メチルパラベン（防腐剤） 0.20 パンテチン（モイスチャライザー） 0.10 カルボマー934（増粘剤） 0.08 水酸化ナトリウム、10％（中和剤） 1.00 エンド−Ｈ 100ppm 精製水 残部 100％ 油相 重鉱油 4.00 ステアリン酸、２回プレス 3.00 （陰イオン乳化剤） コレステロール（補助乳化剤） 1.00 セチルアルコール（補助乳化剤） 1.80 ヒマシ油（エモリエント） 1.00 パルミチン酸セチル（エモリエント） 1.20 オクチルジメチルPABA（紫外線吸収剤） 1.40 プロピルパラベン（防腐剤） 0.10 機械的撹拌機を備えた混合容器において、水酸化ナト
リウムおよびエンド−Ｈ水溶液以外の水および水相成分
を加え、約75〜80℃に加熱しながら混合して均一な水性
分散液を調製する。次いで、水酸化ナトリウム溶液を水
相に加え、混入して酸性カルボマー増粘剤を中和する。

別個の混合容器において、約80〜82℃に加熱しなが
ら、鉱油および油相成分を加え、混合して均一な油相を
調製する。高速機械的分散装置を使用して、加熱された
油相を加熱された水相にゆっくりと加える。均一な油／
水乳濁液が得られるまで、混合を続ける。乳濁液を室温
に冷却する。所望ならば、水溶性染料などの任意の着色
剤を好ましくは約45〜50℃で乳濁液に混入し、芳香油を
好ましくは約35〜40℃で加える。エンド−Ｈを約35〜40
℃で乳濁液に混入する。

例24 豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去 培養0.1ccを皮膚表面上に広げることによって、豚の
皮膚に黄色ブドウ球菌（コロニー1.2×10⁷個/ml）を接
種した。生物を室温で皮膚上に２時間セットさせた。次
いで、皮膚の２片を下記のもので30秒間処理した。

（１）未処理コントロール （２）水単独 （３）10％石鹸液 （４）＃３＋エンド−Ｈ（20ppm） （５）緩衝液中のエンド−Ｈ 20ppm エンド−Ｈは、S.プリカタスからエンド−Ｈを産生す
るために形質転換された大腸菌から得られた。処理後、
試料を蒸留水中ですすぎ、２％四酸化オスミウムに入れ
た後、ライター−ケレンベルガー固定液中で固定した。
次いで、試料をオスミウムおよびチオセミカルビゾン中
で交互に加工した。臨界点乾燥後、すべての試料をSEM
で調べた。顕微鏡写真を撮影した。

黄色ブドウ球菌コロニーは、未処理試料、水処理試
料、またはプレーン石鹸処理試料上で豊富に見出され
た。例えば、液体ハンド石鹸での処理の効果を実証する
第11図参照。エンド−Ｈ処理試料は、生物の有意な損失
を実証した。例えば、液体ハンド石鹸プラスエンド−Ｈ
で処理した時の豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去を
実証する第12図参照。

例25 シャワーカーテンからのカビ除去 プラスチックシャワーカーテンを水道水で濡らし、暗
所に３週間置いた。その時間の終わりに、カビで覆われ
たカーテンの小さい試料を下記のもので処理した。

（１）蒸留水 （２）＋ジョイ（Joy）洗剤2000ppm （３）＋エンド−Ｈ 1000ppm （４）未処理 エンド−Ｈは、S.プリカタスからエンド−Ｈを産生す
るために形質転換された大腸菌から得られた。処理は、
室温で10〜15秒続けた。綿モップでの処理後、シャワー
カーテンを拭き取った。

第13図は、得られた結果を示す。未処理コントロール
（右下の写真−中心の写真の右下部）は、巨視的と共に
微視的に豊富なカビおよびべと病粒子を示した。

蒸留水コントロール（右上の写真−中心の写真の右上
部）は、粒子が依然として残り且つ変色が明らかである
が、より少ない生物を示した。

ジョイ処理コントロール（左下の写真−中心の写真の
左下部）は、水処理試料よりも少ない生物を示したが、
変色は依然として明らかであった。

エンド−Ｈ処理試料（左上の写真−中心の写真の左上
部）は、生物と変色との両方を含まなかった。

例26 布帛からの細菌除去 布帛見本をペトリ皿の大きさに切断した。追加の布帛
を加えて５％布帛ロード（接種せず）に達した。見本を
オートクレーブ中で15 lbs 121℃で15分間滅菌した。１
つの布帛ロードが、各処理に必要である。ガラスビーズ
（40g）および0.2Mサイトレート緩衝液（pH 7.0）100m
lを250mlの三角フラスコに入れた。フラスコにゴム栓お
よびアルミニウム箔で栓をし、オートクレーブ中で滅菌
した。大腸菌を新鮮な栄養ブイヨンに継代培養し、37℃
で48時間インキュベートさせた。半強度トリプチカーゼ
大豆寒天プレート（10g/500ml）を調製し、滅菌した。
冷却後、テトラゾリウム（1ml/）を加えた。

寒天プレートに次の通り接種した。

（１）48時間培養からの系列希釈液を調製した（1:10、
ペプトン水中で更に３個の管を通して10倍の希釈度）。

（２）その後、各見本に最終希釈液2ml（10⁴）を接種し
た。

（３）次いで、見本を37℃で２時間インキュベートした
（２個の見本／処理）。

インキュベーション後、見本を次の通り洗濯した。

洗浄 250mlの三角フラスコ（滅菌）中の滅菌0.2Mサイトレ
ート緩衝液（pH 7.0）100ml＋ガラスビーズ40g＋第14
図に記載の処理剤（AWAはS.プリカタスからエンド−Ｈ
を産生するために形質転換された大腸菌からのエンド−
Ｈである。）振とうしながら、２個の接種見本＋５％布
帛ロードを作るための滅菌見本を95゜F（約35.0℃）で1
2分間洗浄した。

すすぎ 洗浄後、見本は、振とうしながら、滅菌２回蒸留／脱
イオン水100ml＋ガラスビーズ40gを250mlの三角フラス
コ（滅菌）に室温で２時間加えることによってすすい
だ。

次いで、布帛見本をペトリ皿に入れ、テトラゾリウム
を有する1/2強度トリプチカーゼ大豆寒天3mlを上に置い
た。48時間インキュベーション後、コロニーを計数し
た。

結果を第15図に示す。これらの結果は、イルガサン＋
液体タイド２％がタイド単独と比較して細菌増殖の2 lo
g減少を与えることを示す。しかしながら、エンド−Ｈ
40ppmの添加は、細菌増殖の別のlog単位を減少する。

例27 酵母に対するエンド−Ｈの効果 カンジダ・アルビカンズおよびサッカロミセス・セレ
ビシアエ（Saccharomyces cerevisiae）のブイヨン培養
（18時間）を下記のもので処理した。

（１）0.2Mクエン酸ナトリウム緩衝液（pH 5.5） （２）＃１プラスエンド−Ｈ（S.プリカタスエンド−Ｈ
を産生する大腸菌から）200ppm 処理は、37℃で２時間続けた。

処理後、各々のアリコートをホルムバー（formvar）
被覆200メッシュ銅グリッド上に塗布し、TEMによって調
べた。検査の顕微鏡写真を撮影し、第15図および第16図
に提示する。

第15A図からわかるように、緩衝液単独で処理された
カンジダは、良好な形態状態であった。第15B図に示す
ように、エンド−Ｈで処理されたカンジダは、物質を迅
速な速度で漏出し、構造一体性を失った。

緩衝液単独で処理されたサッカロミセスは、第16A図
からわかるように良好な形態状態であった。しかしなが
ら、エンド−Ｈで処理した時には、残るすべては、非常
に限定された膜状物質片であった。第16B図参照。

例28 大腸菌の生存度に対するエンド−Ｈとリゾチームとの効
果 ライリーブイヨン（LB）中で一晩中増殖された大腸菌
K12の培養をLB中で1:1000で希釈し、37℃で４時間再増
殖した。細胞を遠心分離し、洗浄し、0.1M酢酸ナトリウ
ム（NA）緩衝液（pH 5.5）に再懸濁した。８個の管を
次の通り設置した。

管番号 １、２ ３、４ ５、６ ７、８ 細胞μ 800 800 800 800 NA緩衝液μ 200 − − 200 エンド−Ｈμ − 200 200 − （1mg/ml） エンド−Ｈは、S.プリカタスからエンド−Ｈを産生す
るために形質転換された枯草菌からであった。管を37℃
で１時間インキュベートした。管を遠心分離し、洗浄
し、0.1M EDTAを含有する0.1Mリン酸ナトリウム（NP）
緩衝液（pH7.2）8.00μに再懸濁した。緩衝液または
鶏卵白リゾチーム溶液を次の通り管に加えた。

管番号 １、２ ３、４ ５、６ ７、８ NA緩衝液μ 200 200 リゾチームμ − − 200 200 （1mg/ml） アリコートをこの時点で採取して、コロニー形成単位
（CFU）（Ａ欄）を求めた。37℃で１時間インキュベー
ション後、アリコールを使用してCPUを求めた（Ｂ
欄）。コロニー形成単位のlogを計算した。logCFUの減
少は、ＡからＢを引くことによって求めた。結果を以下
に示す。

logCFU 条件 Ａ Ｂ logCFUの変化 コントロール 7.89 7.90 ＋0.01 エンド−ｈ（200ppm） 8.21 7.92 −0.29 リゾチーム（200ppm） 7.87 7.68 −0.19 エンド−Ｈ＋リゾチーム 8.17 7.53 −0.64 これらの結果は、エンド−Ｈとリゾチームとの組み合
わせがエンド−Ｈまたはリゾチーム単独と比較して大腸
菌の生存度を減少することを示す。

例29 大腸菌の生存度に対するエンド−ＨとＴ−４または鶏卵
白リゾチームとの比較 大腸菌細胞を洗浄し、0.1M酢酸ナトリウム緩衝液（pH
5.5）中に懸濁した。細胞を２個の管に分割した（10m
l）。１つの管に緩衝液のみを加え（コントロール）、
別の管にエンド−Ｈを加えた（処理）。エンド−Ｈは、
S.プリカタスからエンド−Ｈを産生するために形質転換
された枯草菌からであった。細胞を37℃で１時間インキ
ュベートした。細胞を遠心分離し、洗浄し、0.1Mリン酸
ナトリウム緩衝液（pH7.2）に再懸濁した。細胞を等分
割し、緩衝液またはリゾチームのいずれかと共にインキ
ューベートした。鶏卵白（HL）およびT4（TL）リゾチー
ムをこの実験で比較した。管を1.5時間インキュベート
した。試料を希釈し、インキュベーション前（Ａ）およ
びインキュベーション後（Ｂ）のCFU測定のために塗布
した。CFUのlogを求めた。下記結果が、得られた。

これらの結果は、Ｔ−４リゾチームもエンド−Ｈとの
組み合わせで大腸菌の生存度を減少する際に有効である
ことを示す。

例30 エンド−Ｈでの汚れたおむつ材料の処理 試料を汚れたおむつから得た。各試料を分けた。試料
の左側をタイド2000ppmおよびBPN′〔バチルス・アミロ
リクィイファシエンス（Bacillus amyloliquifaciens）
からのズブチリシンプロテアーゼ〕ppm中で洗浄した。
右側をタイド2000ppm、BPN′ 1ppmおよびエンド−H40p
pm（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカル、カタ
ログNo.100 119）中で洗浄した。各試料を95゜F（35.0
℃）で12分間洗浄した。２つの実験の結果を第17図およ
び第18図に示す。わかるように、第17図および第18図の
右側上のおむつ材料は、第17図および第18図の左に示す
タイド−プロテアーゼ処理おむつと比較して実質上少な
い糞便しみを含む。

本発明の好ましい態様を説明したが、各種の修正を施
すことができること、およびかかる修正は本発明の範囲
内であることを意図することは当業者に明らかであろ
う。例中のエンド−Ｈの代わりにエンド−ＤまたはＦま
たはPNGase Fを使用する時に、本発明の他の組成物は、
得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＮ−結合およびＯ−結合糖タンパク質の普通の
コア構造を示す図、第２図は各種のII型エンドグリコシ
ダーゼの場合の基質および既知の切断部位を示す図、第
３図は第２図のタンパク質アミノ酸、炭水化物残基およ
び切断部位の一般図、第４図はＮ−結合糖タンパク質の
コア構造、II型エンドグリコシダーゼの切断部位および
タンパク質および炭水化物単位とII型エンドグリコシダ
ーゼでの切断時に生成するアグリコンおよび炭水化物部
分との間の関係を示す図、第5A図〜第5E図はグリコシド
含有物質、微生物またはII型エンドグリコシダーゼと反
応性の物質が単独または第二酵素との組み合わせでのII
型エンドグリコシダーゼでの処理によって表面から放出
されることがある各種の機構を示す図、第6A図および第
6B図は糞便で汚され且エンド−Ｈで処理されるか処理さ
れないナイロン見本の繊維の形状を示す電子顕微鏡写真
（8100X）、第7A図〜第7H図は糞便で汚された綿見本に
対するエンド−Ｈおよび他のカルボヒドラーゼ酵素の効
果を示すための綿繊維の形状を示す電子顕微鏡写真（50
00X）、第８図、第９図、第10A図および第10B図は大腸
菌の生存度に対する各種の濃度のエンド−Ｈおよびクロ
ルヘキシジン単独または組み合わせの効果を実証するグ
ラフ、第11図および第12図はエンド−Ｈを含有する洗剤
組成物が豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去において
エンド−Ｈを含有しない洗剤組成物よりも有効であるこ
とを実証するための生物の形態を示す顕微鏡写真、第13
図はエンド−Ｈがシャワーカーテンからカビを除去する
際に水または洗剤組成物よりも有効であることを実証す
るための前記カーテン繊維の形状を示す顕微鏡写真（中
心の写真はシャワーカーテンの一部分のものであり、他
の４つの写真は中心の写真の対応四分円の拡大図であ
る）、第14図は異なる抗菌剤との組み合わせでのエンド
−Ｈの抗菌効果を実証するグラフ、第15A図〜第15B図お
よび第16A図〜第16B図は異なる種の酵母に対するエンド
−Ｈの効果を実証するための繊維の形状を示す顕微鏡写
真、第17図および第18図はエンド−Ｈを含有する洗剤組
成物によるおむつ材料からの糞便の高められた除去を実
証するための繊維の形状を示す顕微鏡写真である。

フロントページの続き (72)発明者 リチャード、シェパード、カーペンター アメリカ合衆国オハイオ州、シンシナ チ、グローリア、アベニュ、10655 (72)発明者 アーウィン、ジョセフ、ゴールドスタイ ン アメリカ合衆国ミシガン州、アン、アー バー、ロック、アルパイン、ドライブ、 3980 (72)発明者 プシカラジ、ジョガナス、ラド アメリカ合衆国カリフォルニア州、サン マテオ、エヌ、デラウェア、ストリー ト、814 (72)発明者 アン、マーガレット、ウルフ アメリカ合衆国オハイオ州、シンシナ チ、ブーマー、ロード、4570 (56)参考文献 特開 昭61−286756（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C11D 3/386

Claims (17)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】グリコシド含有物質、好ましくは糖タンパ
   ク質含有物質が結合された表面をクリーニングするにあ
   たり、前記グリコシド含有物質を前記グリコシド含有物
   質中のグリコシド結合と反応性のII型エンドグリコシダ
   ーゼと接触させて、前記物質の少なくとも一部分を前記
   表面から放出することを特徴とする表面のクリーニング
   法。
2. 【請求項２】表面に結合された少なくとも１個のグリコ
   シド結合を有するグリコシド含有物質、好ましくは糖タ
   ンパク質含有物質の少なくとも一部分を放出するにあた
   り、前記結合グリコシド含有物質をII型エンドグリコシ
   ダーゼおよび洗剤と接触して（前記II型エンドグリコシ
   ダーゼは前記グリコシド結合と反応性である）、前記グ
   リコシド結合から遠位の前記グリコシド含有物質の切断
   部分を前記表面から放出することを特徴とするグリコシ
   ド含有物質の少なくとも一部分を放出する方法。
3. 【請求項３】前記II型エンドグリコシダーゼが、糖タン
   パク質のタンパク質炭水化物単位接合点の最初の３個の
   グリコシド結合内、好ましくは最初の２個のグリコシド
   結合内の少なくとも１個のグリコシド結合を切断するこ
   とができ、且つより好ましくはＮ結合またはＯ結合糖タ
   ンパク質のコア構造内の少なくとも１個のグリコシド結
   合を切断することができる、請求項１ないし２のいずれ
   か１項に記載の方法。
4. 【請求項４】前記表面から放出された前記物質の部分
   を、洗浄液または洗剤を含有する流体と接触させて、前
   記部分を前記洗浄液または前記流体中で前記表面から除
   去する、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方
   法。
5. 【請求項５】前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド
   −β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−α−
   Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼおよびエンド−β−
   Ｎ−ガラクトシダーゼからなる群から選ばれ、好ましく
   はエンド−Ｄ、エンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−Ｃ、
   エンド−C II、エンド−Ｆ−Gal型、エンド−ＦおよびP
   NGaseFからなる群から選ばれ、より好ましくはエンド−
   Ｈである、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の方
   法。
6. 【請求項６】前記物質をジスルフィド切断試薬または界
   面活性剤と接触させることを更に含む、請求項１ないし
   ５のいずれか１項に記載の方法。
7. 【請求項７】第一酵素および第二酵素を含むクリーニン
   グ組成物であって、前記第一酵素はII型エンドグリコシ
   ダーゼであり且つ前記第二酵素、好ましくはズブチリシ
   ンまたは突然変異ズブチリシンはプロテアーゼ、リパー
   ゼ、ヌクレアーゼ、前記第一酵素とは異なるグリコシダ
   ーゼ、好ましくはエキソグリコシダーゼ、およびそれら
   の組み合わせからなる群から選ばれることを特徴とする
   クリーニング組成物。
8. 【請求項８】洗剤界面活性剤（好ましくは陰イオン界面
   活性剤、非イオン界面活性剤、両性界面活性剤、双性界
   面活性剤および陽イオン界面活性剤からなる群から選ば
   れる）またはジスルフィド切断試薬を更に含む、請求項
   ７に記載の組成物。
9. 【請求項９】洗剤界面活性剤を含む組成物であって、II
   型エンドグリコシダーゼを追加的に含むことを特徴とす
   る組成物。
10. 【請求項１０】前記II型エンドグリコシダーゼが、エン
    ド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−α
    −アセチルガラクトサミニダーゼおよびエンド−β−Ｎ
    −ガラクトシダーゼからなる群から選ばれ、好ましくは
    エンド−Ｄ、エンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−Ｃ、エ
    ンド−C II、エンド−Ｆ−Gal型、エンド−ＦおよびPNG
    aseFからなる群から選ばれ、より好ましくはエンド−Ｈ
    である、請求項７、８または９のいずれかに記載の組成
    物。
11. 【請求項１１】表面からのグリコシド含有物質の除去に
    有効な量のII型エンドグリコシダーゼ（好ましくはエン
    ド−Ｈ、エンド−Ｆおよびエンド−Ｄからなる群から選
    ばれる）を含むことを特徴とするクリーニング組成物。
12. 【請求項１２】pH4〜10、好ましくは５〜８を有する、
    請求項11に記載のクリーニング組成物。
13. 【請求項１３】プロテアーゼ酵素を更に含む、請求項11
    または12に記載のクリーニング組成物。
14. 【請求項１４】洗剤界面活性剤１〜90重量％、好ましく
    は５〜50重量％を更に含む、請求項11、12または13に記
    載の洗剤組成物。
15. 【請求項１５】洗浄性ビルダー（好ましくは脂肪酸、ポ
    リカルボキシレート、ポリホスフェート、およびそれら
    の混合物からなる群から選ばれる）１〜75重量％、好ま
    しくは５〜40重量％を更に含む、請求項11、12、13また
    は14に記載の洗濯洗剤組成物。
16. 【請求項１６】洗剤界面活性剤10〜40重量％、洗浄性ビ
    ルダー10〜20重量％およびエンドＨ、エンド−Ｆまたは
    エンド−D 20ppm〜200ppmを含む、請求項15に記載の液
    体洗濯洗剤組成物。
17. 【請求項１７】グリコシド含有物質、好ましくはII型エ
    ンドグルコシダーゼ反応性物質、より好ましくはＮ−ア
    セチルグルコサミン含有物質を表面から除去するにあた
    り、前記物質を、物質が結合されるか埋設された表面か
    らの前記物質の除去に有効な量の請求項７ないし14のい
    ずれか１項に記載の組成物と接触させることを特徴とす
    るグリコシド含有物質を表面から除去する方法。