JPH03231999A - ２型エンドグリコシダーゼを使用する方法および処方物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

発明の分野 本発明は、糖タンパク質などのグリコシド含有物質を単
独または他の酵素および／または洗剤との組み合わせで
の■型エンドグリコシダーゼでの処理によって表面から
除去するための方法および処方物に関する。 発明の背景 酵素を各種の洗剤と併用してタンパク質および／または
炭水化物からなるじみを除去することは、洗剤処方物の
技術で周知である。かかる酵素処方物は、各種のじみを
布などの軟質表面および磁器、金属なとの硬質表面から
除去しようとする。かくて、例えば、トリプシン、バン
クレアチン、パパイン、プロメラインなどのプロテアー
ゼは、タンパク質じみを不定の成功度で除去するために
洗剤処方物で使用されることが報告されている。一方、
セルラーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、グルカナーゼな
どの特異性グリコシダーゼは、成る炭水化物じみの除去
のために各種の洗剤と共に処方されている。他の洗剤処
方物は、しみ処理のためにプロテアーゼとグリコシダー
ゼとを組み合わせている。 洗剤処方物で使用されているグリコシダーゼの若干、例
えば、β−アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼおよびβ
−ガラクトシダーゼは、１個以上の末端残基をオリゴ糖
または多糖から切断するエキソグリコシダーゼである。 他のグリコシダーゼ、例えば、セルラーゼおよびα−ア
ミラーゼは、オリゴ糖または多糖基質内の特異性内部結
合と反応性であるエンドグリコシダーゼである。かかる
エンドグリコシダーゼは、ここでＩ型エンドグリコシダ
ーゼと称する。１種以上のプロテアーゼおよび／または
グリコシダーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼを含めて）
を有する洗剤の処方物は、しみ抜きを大幅に改善したが
、多くのしみ、例えば、血液、糞便および体の汚れしみ
は、しばしば、処理後に残留しみを残す。 コンタクトレンズクリーニングの技術においては、同様
の酵素／洗剤処方物は、硬質および軟質コンタクトレン
ズをクリーニングし且つ滅菌するために使用されている
。多くの場合には、これらの処方物は、コンタクトレン
ズの表面上に形成し且つかかるレンズに付着するために
緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓ
ａ）　Ｓ表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）などの各種の目の病原体
によって使用されているバイオフィルムを分解するため
に使用されている。例えば、Ｊ。 Ａ、デユラン等（１９８７）　、Ａｒｃｈ、　Ｏｐｈｔ
ｈａｌｍｏｌ。 １０５　１０６−１０９；Ｇ、Ａ、　スターン等（１９
８７）　、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、９４．　１１
５−１１９（シュードモナス併行を抑制するためにムン
ン被覆コンタクトレンズをバンクレアチン、パパイン、
トリプシン、ノイラミニダーゼなどの各種の酵素で処理
ことを報告）；およびＭ、　Ｍ、スルチャー等（１，９
８７）　、　Ａｒｃｈ、　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ。 １０５．１．１０−１．１５参照。 微生物付着用バイオフィルムの使用は、コンタクトレン
ズには限定されない。かくて、ストレプトコッカス０ミ
ユータンズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌｕｔａｎｓ
）は、歯エナメル質に付着するために細胞外多糖類を使
用することを報告している。ＥＰＯ刊行物第０１９５６
７２号明細書は、歯のエナメル質に付着するためにスト
レプトコッカス・ミュータンズによって使用される細胞
外多糖類を切断するためにα−１−１３−グルカナーゼ
またはα１．６−グルカナーゼを使用することを報告し
ている。 ガラス表面に付着された細胞に対する成る酵素の効果も
、Ａ、ダニールソン等（１９７７）。 Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｍａｒｉｎａ　、　　２０．　１３
−１７に報告されている。そこに報告のように、海水か
ら単離されたシュードモナス種は、ガラススライドに付
着した。その後、スライドは、プロナーゼ、トリプシン
、α−アミラーゼ（Ｉ型エンドグリコシダーゼ）、また
はりゾチーム（また１型エンドグリコシダーゼ）で処理
した。この報告においては、タンパク分解酵素プロナー
ゼおよびトリプシンでの処理は、付着された細菌の個体
群の一部分の放出を生じる一方、細胞分解用酵素リゾチ
ームは、タンパク分解酵素と比較して減少された活性を
示した。 α−アミラーゼは、全く効果を有していないと報告され
た。微生物のコンタクトレンズ、歯エナメル質およびガ
ラス表面への結合に加えて、多くの他の表面は、微生物
結合を受けやすい。例えば、Ｔ、Ｊ、７り−等（１９８
４）　、　Ｊ、　Ｃｌ１ｎ。 Ｍｌｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、　　１９．　９９１−９１
４　（心臓ペースメーカーリードおよびパワーバックへ
の細菌結合）　　、Ｎ、　Ｂ、フレイマー等（１９７８
）　、　Ａｃｔａ。 Ｐａｔｈ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　５ｃａｎｄ、　５
ｅｃｔｂ、、　８６．　５３５７（微生物のマクロファ
ージへの結合）；およびミレルマン等（１９８２）　、
　Ｔｏｋａｉ　Ｊ　Ｅｘｐ、Ｃ１１ｎ。 Ｍｅｄ、＋　７．　７７−１８３　（＠乳動物粘膜表面
への微生物付着）参照。各種の機構は、細菌などの微生
物の無生物固体表面への付着を説明するために提案され
ている。例えば、Ｍ、フレッチャー（１９８７）　、　
Ｍｉｃｒｏｂｊｏｌｏｇｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、
　４゜１、３３−１．３６、およびＪ、　　Ｅ、ダドリ
ッジ等（１９８３）　、　Ｆａｃｔｏｒｓ　Ａｆｌ’ｅ
ｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ａｄｈｅｓｉｏｎｏ（’　Ｂａｃ
ｔｅｒｉａ　ｔｏ　５ｕｒｆａｃｅｓ　Ｉｎ　Ｍｉｃｒ
ｏｂｉａｌＣｏｒｒｏｓｉｏｎ　、デルコ・プリンティ
ング・カンパニー・リミテッド、ｐｐ、２８−３５参照
。これらの文献は各種の表面への微生物付着およびかか
る結合に包含されることがある因子を論じているが、か
かる表面上の微生物増殖の制御またはそれらからの除去
を論じていない。 ここで使用する■型エンドグリコシダーゼは、糖タンパ
ク質で見出された特異性内部グリコシド結合を切断する
ことができるエンドグリコシダーゼのカテゴリーである
。これらのエンドグリコシダーゼは、糖タンパク質中の
反応性グリコシド結合の位置に応じて糖タンパク質から
炭水化物部分のすべてまたは一部分を切断する。例とし
ては、エンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（
エンド−Ｄ１エンド−Ｈ１エンド−Ｌ、エンド−ＣＩ、
エンド−ＣＩＩ、エンド−Ｆ−Ｇａｌ型およびエンド−
Ｆ）、エンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ
およびエンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼが挙げらてい
る。例えば、Ａ、Ｌ。 タレンチノ等（１９８５）　、　Ｂｉｏｃｈｅｎｌ、　
　２４４６６５−４６７１　；Ｍ、アラカワ等（１９７
４）、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｎ＋、、７６、　３０７−
３１７　；　Ｔ、　　Ｈ。 プルマー等（１９８４）　、　Ｊ、　ＢｌｏｃｈｅＩｌ
、　　２５９゜１０７００＝１０７０４；Ａ、Ｌ、　タ
レンチノ等（１９７５）　、　ｌ３１ｏｃｈｅＩ１．　
ａｎｄ　Ｂｊｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。 Ｃｏｎｕｉ、、６７．４５５−４６２　；およびＲ，Ｂ
、　　）リンプル等（１９８４）　、　Ａｎａｌ、　）
３）ｏｃｈｅｍ、。 １４１．５１５−５２２；およびＪ、Ｇ、　　ビーレイ
による「糖タンパク質およびプロテオグリカン技術Ｊ　
　（１９８５）、第６章、１）ｐ、１５３−３００（エ
ルスビール、アムステルダム、二二一ヨーク、オックス
フォード）参照。糖タンパク質の内部グリコシド結合に
対する特異性を有することに加えて、少なくともＩＰｆ
ｆｌのエンドグリコシダゼ（エンド−β−Ｎ−アセチル
グルコザミニダーゼＨ）は、脂質結合オリゴ糖類の切断
を生ずる特異性も実証し［Ｒ，Ｊ、チャリフオア等（Ｉ
　Ｑ　８３）　、　Ａｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｒＢｉｏｃｈ
ｅｍ、　ａｎｄＢｉｏｐｈｙｓ、、　２２９．　３８６
−３９４〕且っオリゴ糖類および糖タンパク質中のジ−
Ｎ−アセチルキトビオース結合の切断を生ずる特異性も
実証していると報告されている［Ａ、　　Ｌ、　　タレ
ンチノ等（Ｉ　Ｑ　７４）　、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅｍ、、　２４９．８１１８１７）。 かかる■型エンドグリコシダーゼは、一般に、主として
分析目的、例えば、特異性糖タンパク質のタンパク質ま
たは炭水化物配列および／または構造および機能の測定
に使用されている。例えば、Ｐ、ヒシー等（１，９８２
）　、　Ｊ、　１３ｉｏ１ｃｈｃｎ１．。 ２５８．２５５５−２５６１、およびＲ，ゲイヤー等（
１９８４）　、　Ｆｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、
　１４３゜５ ５３１−５３９参照。最近の報告においては、■型エン
ドグリコシダーゼは、リーシュマニア・メキシカーナ・
アマシネンシス（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｍｅｘｉｃａｎ
ａ　ａｍａｚｏｎｅｎｓｊｓ）からの糖タンパク質抗原
を分析するために使用されると報告された。チン・ンエ
ン・チャンク等（１９８６）　、Ｍｏｌ。 Ｂｉｏｅｈｅｍ、　Ｐａｒａｓｊｔｏｌ　　］　８．１
９７−２１０．この糖タンパク質抗原は、先ず、免疫ビ
ーズに免疫学的に結合した。免疫学的に結合された糖タ
ンパク質を分析量のエンド−Ｈと反応させた後、免疫ビ
ーズは、洗浄し、ポリアクリルアミドゲル電気泳動用製
剤中のＳＤ８　１％を含有する緩衝液中で沸騰した。こ
の分析は、免疫学的に結合された糖タンパク質抗原から
の炭水化物の切断に起因する分子量の減少を示した。 しかしながら、■型エンドグリコシダーゼは、糖タンパ
ク質および糖脂質を含めた物質を布帛、コンタクトレン
ズ、金属、セラミックス、細胞、組織などの物質の表面
から除去するために使用されていない。それらは、懸濁
液中またはかかる表６ 而」−での微生物増殖を制御するためにも使用されてい
ない。 グリコシダーゼは、各種の物質の除去のために他の酵素
と併用されている。β−グリコシダーゼは、アンダーソ
ン等（１９６４）　、Ｂｊｏｃｈｅｍ。 Ｊ、、９０．３０に炭水化物代謝性酵素として記載され
ている。ノイラミニダーゼ（Ｎ−アセチルノイラミニエ
ートグリコヒドロラーゼ）抑制剤は、コーワン等（１９
７９）　、　　ＰＥＢ５　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　　８゜１
７；およびハスケル等（１９７０）　、　Ｊ、　Ｍｅｄ
。 Ｃｈｅｍ、、　１３．４８において可能な抗ウイルス抗
菌剤として検討されている。デキストラナーゼは、チャ
イエット等（１９７０）　、　Ａｐｐｌ、　Ｍｉｅｒｏ
ｂｉｏｌ、。 ２０．４２１においてイソマルトース残基に対する細菌
多糖デキストラン（α−１，６−グルカン）の加水分解
を触媒すると記載されている。リゾチーム（ムラミダー
ゼ）は、チップマン等（１９６９）、５ｃｅｊｎｅｅ、
１６５，４５４およびモンターグ（１９６４）　、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。 Ａｃｔａ、、８６．　５８８において各種の微生物のム
コ多糖細胞壁構造中のグリコシド結合を加水分解すると
記載されている。最後に、Ｄ−グルコサミン誘導体によ
るリゾチームの抑制は、ノイベルガー等（１９６７）、
Ｎａｔｕｒｅ、２１５，５２４に記載されている。 しかしながら、■型エンドグリコシダーゼ、例えば、エ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーセＨ，、Ｄ、
Ｆおよび／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆは、従来、抗菌組
成物を調製するために抗菌剤と組み合わされていない。 前記文献は、本件の出願日前の開示のためのみに与えら
れ且つかかる文献が従来技術であることまたは本発明者
等が先行発明または先願に基づく優先権によってかかる
開示に先んじるために権利を与えるのではないという承
認とは解釈すべきではない。 発明の概要 本発明の目的は、布帛、コンタクトレンズ、金属表面、
プラスチック表面、セラミック表面、細胞表面、組織な
どの物質からの糖タンパク質および糖脂質を含めた物質
の除去を容易にするために■型エンドグリコシダーゼを
単独または他の酵素、洗剤、界面活性剤および／または
ジスルフィド切断試薬との組み合わせで利用する方法を
提供することにある。 本発明の更に他の目的は、かかる方法を実施する際に有
用な■型エンドグリコシダーゼを含有する処方物を提供
することにある。 本発明の目的によれば、物質の少なくとも一部分を免疫
学的結合以外によって結合された表面から除去する方法
が提供される。物質は、表面に結合された近位部分、近
位部分から外方に延出する遠位部分、および■型エンド
グリコシドダーゼと反応性である近位部分と遠位部分と
の接合点に配置された結合を有する。方法は、結合され
た物質を■型エンドグリコシドダーゼと接触させて物質
の遠位部分を近位部分から切断し、それによって遠位部
分を表面から放出することからなる。かかる放出が遠位
部分を表面から除去しないならば、かかる除去は、遠位
部分を洗浄液、洗剤処方物、　ｑ 例えば、界面活性剤を有するものまたは第二酵素、例え
ば、異なるグリコシダーゼ、プロテアーゼ、リパーゼ、
ヌクレアーゼまたはそれらの組み合わせを含有する流体
と接触することによって容易にしてもよい。 更に、本発明は、グリコシド含有物質を少なくとも第一
酵素および第二酵素と接触してグリコシド含有物質の切
断部分を表面から放出することによって、グリコシド含
有物質の少なくとも一部分を、グリコシド含有物質が結
合されている表面から放出する方法を包含する。第−酵
素は、物質のグリコシド部分中のグリコシド結合と反応
性の■型エンドグリコシダーゼである。第二酵素は、第
一酵素が反応性であるグリコシド結合以外のグリコシド
含有物質中の第二結合と反応性である。かかる第二酵素
としては、グリコシダーゼ（第二■型エンドグリコシダ
ーゼを含めて）、プロテアーゼ、リパーゼおよびそれら
の組み合わせが挙げられる。グリコシド含有物質の一部
分の除去は、切断グリコシド含有物質を洗剤、例えば、
界面活性剤を含有するものと接触させることによって容
易にしてもよい。 また、本発明は、炭水化物部分、アグリコン部分、およ
び炭水化物部分とアグリコン部分との接合点におけるグ
リコシド結合を有するグリコシド含有物質の少なくとも
一部分を表面から放出する方法（グリコシド含有物質は
炭水化物部分を通して表面に結合されている）を包含す
る。方法は、グリコシド結合を■型エンドグリコシダー
ゼで切断して、グリコシド含有物質のアグリコン部分を
表面から放出することからなる。グリコシド含有物質の
切断部分の除去は、必要ならば、第二酵素、洗剤および
／または界面活性剤での処理によって容易にしてもよい
。 前記方法の各々においては、ジスルフィド切断試薬は、
グリコシド含有物質と関連づけられるタンパク質を変性
することによって■型エンドグリコシドまたは第二酵素
による切断または洗剤および／または界面活性剤による
除去を容易にするために使用してもよい。 また、本発明は、処方物を包含する。１９の組成物は、
少なくとも第一酵素および第二酵素を含む（第一酵素は
■型エンドグリコシダーゼである）。第二酵素は、プロ
テアーゼ、グリコシダーゼ、リパーゼおよびそれらの組
み合わせからなる酵素の群から選ばれる。かかる処方物
は、洗剤および／または界面活性剤並びにジスルフィド
切断試薬も含有してもよい。 別の組成物は、■型エンドグリコシダーゼおよび洗剤お
よび／または界面活性剤を含有する。 発明の詳細な説明 ■型エンドグリコシダーゼおよびかかるエンドグリコシ
ダーゼを使用した処方物は、■型エンドグリコシダーゼ
と反応性の物質を表面から放出し且つ／または除去する
ために本発明の方法で使用される。この反応性の機構は
、確実には既知ではない。若干の場合には、かかる物質
は、■型エンドグリコシダーゼ用の既知の切断部位であ
るグリコシド結合またはかかる切断部位に厳密に関連さ
れる結合を有すると信じられるグリコシドまたはグリコ
シド含有物質である。 ここで使用する「■型エンドグリコシダーゼ」は、糖タ
ンパク質のタンパク質単位と炭水化物単位との接合点ま
たはその付近の結合を切断することができる酵素である
。好ましくは、かかる■型エンドグリコシダーゼは、タ
ンパク質−炭水化物単位接合点の約３個のグリコシド結
合（タンパク質−炭水化物単位接合点からなるグリコシ
ド結合を含めて）内の少なくとも１個のグリコシド結合
を切断することができる。最も好ましくは、かかるグリ
コシド結合は、タンパク質−炭水化物単位接合点の約２
個のグリコシド結合内にある（第１図、第２図および第
３図参照）。 また、■型エンドグリコシダーゼは、Ｎ−および〇−結
合糖タンパク質の既知のコア構造の場合には第１図で示
す特定のグリコシド結合に対する特異性によって定義さ
れる。これらは、アミノ酸セリン、トレオニンまたはア
スパラギンと第一炭水化物残基とのグリコシド結合およ
び少なくとも第一、第二および第二炭水化物残基間のグ
リコシ３ ド結合に対応する。このコア構造は既知のコア構造に存
在する特異性グリコシド結合によって以下に詳述するで
あろうが、かかる特異性結合は、■型エンドグリコシダ
ーゼのこの定義を限定するものとは解釈すべきではない
。従って、これらのアミノ酸と炭水化物残基との間のす
べての可能なグリコシド結合は、■型エンドグリコシダ
ーゼを同定するために使用するＮ−および〇−結合糖タ
ンパク質のコア構造を規定する。 ■型エンドグリコシダーゼは、糖タンパク質コア構造の
現在の知識およびかかるコア構造に対する既知のエンド
グリコシダーゼの特異性によっては限定されない。第１
図中のコア構造と第２図中の■型エンドグリコシダーゼ
の場合の既知の基質との比較は、第１図中のコア構造中
の可能な切断部位の各々の場合の■型エンドグリコシダ
ーゼが、存在するならば、まだ同定されていないことを
示す。更に、まだ同定されていない他のコア構造も、存
在することがある。かかるまだ未知のコア構造中の結合
と反応性のエンドグリコシダーゼも、■４ 型エンドグリコシダーゼである。従って、■型エンドグ
リコシダーゼを規定する糖タンパク質中のグリコシド結
合は、糖タンパク質のタンパク質単位に最も近い最初の
３個のグリコシド結合内に配置されたものには限定され
ないが、コア構造中のより離れたグリコシド結合、例え
ば、同定されるコア構造に応じてタンパク質単位から第
四または第五グリコシド結合に拡張してもよい。 糖タンパク質のコア構造に対する特異性は、■型エンド
グリコシダーゼをＩ型エンドグリコシダーゼと区別する
■型エンドグリコシダーゼの好都合な定義を与える。Ｉ
型エンドグリコシダーゼは、オリゴ糖類または多糖類中
の特異性結合を切断するが、一般に■型エンドグリコシ
ダーゼを規定する糖タンパク質中のコア構造グリコシド
結合と反応性ではない。Ｉ型エンドグリコシダーゼおよ
び■型エンドグリコシダーゼが反応性である結合の例を
表Ｉに示す。 ■型エンドグリコシダーゼを規定し且つ好ましい■型エ
ンドグリコンダーゼを同定する糖タンパク質中の特異性
グリコシド結合を第２図に示す。 切断部位は、垂直の矢印によって同定される。第２図の
タンパク質アミノ酸、炭水化物残基および切断部位の一
般的提示を第３図に示す。わかるように、ＩＩ型エンド
グリコシダーゼは、好ましくは、Ｎ−または〇−結合糖
タンパク質中の第一、第二または第三グリコシド結合を
切断する。これらの結合は、それぞれタンパク質Ｉｌｉ
位中のアスパラギン、セリンまたはトレオニンと第一炭
水化物残基との間のグリコシド結合（１）、炭水化物残
基１．２間のグリコシド結合（２）および炭水化物残基
２．３間のグリコシド結合（３）からなる。この特異性
は、主として糖タンパク質の炭水化物配列によって規定
され、特異性および反応性は若干程度糖タンパク質のタ
ンパク質単位によって影響される。かくて、グリコシド
結合２および３（炭水化物残基間のグリコシド結合のみ
からなる）に関しては、■型エンドグリコシダーゼは、
糖タンパ７ り質のタンパク質ｔｉｉ位と炭水化物単位との接合点か
ら多分全く離れた糖タンパク質の他の領域に配置された
同一または同様のグリコシド結合と反応性であってもよ
い。 前記定義の特定の糖タンパク質への適用は、実例となる
。ウンチログロプリンは、エンド−βＮ−アセチルグル
コザミニダーセーＨ（エンド−Ｈ）、α−マンノシダー
ゼおよびβ−マンノシダゼを使用して分析１７た。Ａ、
Ｌ、　　トレンチノ等（１９７３）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、
　Ｃｈｅｍ６．２１８，５５４７゜エンド−Ｈは、２つ
のＮ−アセチルＤ−グルコサミン間のグリコシド結合を
加水分解したくそれらの一方は千ログロブリンのタンパ
ク質単位中のアスパラギンにＮ−結合した）。エンド−
Ｈでの処理時に放出されたチログロブリンのオリゴ糖ま
たは炭水化物部分も、α−およびβ−マンノシダーゼで
処理した。これらの酵素のいずれも第１図、第２図また
は第３図に示すものに対応する基質に対して特異性を有
していないので、■型エンドグリコシダーゼではなく且
つエキソグリコシダーゼ８ またはＩ型エンドグリコンダーゼのいずれかと特徴づけ
ることができる。エンド−Ｈの特異性は、第２図でエン
ド−Ｈの場合に示したものと同じであり、それゆえ、エ
ンド−Ｈは、■型エンドグリコシダーゼである。このこ
とは、勿論、自明な応用である。しかし、この特異性ま
たは第１図、第２図または第３図中の他の特異性の１以
上も実証する新しいエンドグリコシダーゼ（例えば、エ
ンド−Ｘ）が発見されるならば、そのエンド−Ｘも、■
型エンドグリコシダーゼであろう。 しかしながら、糖タンパク質に対する特異性をベースと
する■型エンドグリコシダーゼのこの定義は、物質を表
面から放出し且つ／または除去するために■型エンドグ
リコシダーゼによって利用される機構に対する限定とは
解釈すべきではない。 若干の場合には、■型エンドグリコシダーゼは、グリコ
シド中のグリコシド結合と反応させることによってグリ
コシドの少なくとも一部分を表面から切断することが仮
定されるであろうが、本発明は、かかる切断には限定さ
れない。むしろ、■型エンドグリコシダーセの作用は、
■型エンドグリコシダーゼと反応性の物質の少なくとも
一部分を表面から切断する能力によって機能的に定義さ
れる。 ここで使用する「エンドグリコシダーゼ」なる用語は、
Ｉ型および■型エンドグリコシダーゼからなる。 ここで使用する「グリコシド」は、グリコシド結合を通
して「アグリコン部分」に共有結合された１種以上の「
炭水化物部分」を有する重合体を意味する。グリコシド
のこの定義は、加水分解時に糖およびアグリコン（アグ
リコンはかかる加水分解から生ずる非糖化合物である）
を生成する化合物を意味するグリコシドの普通の定義に
由来する。ここで使用するグリコシドは、■型エンドグ
リコシダーセによって切断する時にアグリコンおよびオ
リゴ糖または多糖炭水化物部分を生ずる。 しかしながら、■型エンドグリコシダーゼはグリコシド
を力］し）ζ分解して■型エンドグリコシダーゼの切断
部位に応じて１個以上の糖残基を含有するアグリコン部
分を生ずることがあるので、アグリコン単位は、非糖化
合物には限定されない。更に、アグリコン部分は、架橋
ペプチドか炭水化物のマトリックスに結合された状態で
見出されることかあるペプチドグリカンの場合のように
全く複雑であることがある。かくて、グリコシドとして
は、■型エンドグリコシダーゼでの処理時に炭水化物部
分およびアグリコン部分（炭水化物部分およびアグリコ
ン部分は■型エンドグリコシダーゼの切断部位によって
規定される）を生ずる糖タンパク質、糖脂質、ペプチド
グリカンなどが挙げられる。 グリコシドのこの定義は、下記議論から明らかであろう
。 ここで使用する「糖タンパク質」は、ペプチドまたはタ
ンパク質に共有結合された１種以上のオリゴ糖または多
糖を有するグリコシドを意味する。 オリゴ糖および多糖は、時々、ここで「炭水化物単位」
と称する。しかしながら、かかる炭水化物中位は、グリ
コシドの「炭水化物部分Ｊと異なっていてもよい。第４
図に示すように、炭水化物単１ 位は、第二種類の分子、例えば、糖タンパク質における
ようなタンパク質またはペプチド、または糖脂質におけ
るような脂質に結合された全オリゴ糖または多糖からな
る。■型エンドグリコシダーゼが、例えば、タンパク質
との接合点における炭水化物単位を切断するならば、炭
水化物単位は、グリコシドの炭水化物と同義である。し
かしながら、■型エンドグリコシダーゼが炭水化物単位
内のグリコシド結合における炭水化物単位を切断するな
らば、かかる切断によって生成するグリコシドの炭水化
物部分は、全炭水化物単位よりも少ないであろう。この
差は、矢印によって示す■型エンドグリコシダーゼ切断
部位の場合に第４図に示す。 糖タンパク質の炭水化物単位は、１〜１０個の炭水化物
（糖）残基を含有するオリゴ糖類または通常１０〜２５
個の炭水化物残基を含有する短い多糖類であってもよい
。多くの糖タンパク質は、高等生物、例えば、真核生物
、例えば、酵母および哺乳動物細胞によって産生ずる。 炭水化物単位２ と糖タンパク質のペプチド単位またはタンパク質単位と
の間の結合は、タンパク質単位のアミノ酸側鎖と炭水化
物単位の第一残基上のアノマー炭素との縮合反応から生
ずるグリコシド結合である。 唾乳動物糖タンパク質中のかかるグリコシド結合は、Ｎ
−グリコシド結合（アスパラギンのアミド窒素に結合さ
れた炭水化物）またはＯ−グリコシド結合（セリンまた
はトレオニンのヒドロキシ酸素に結合された炭水化物）
のいずれかである。 炭水化物単位（オリゴ糖類または多糖類）の炭水化物残
基（単糖類）は、多くの異なる方法で一緒に接合しても
よい。かくて、かかる炭水化物単位は、非分枝、線状構
造であってもよく、または複雑な分枝構造であってもよ
い。しかしながら、一般に、炭水化物単位中の炭水化物
残基の各々は、１９の炭水化物残基のアノマー炭素が別
の炭水化物残基中のヒドロキシル炭素と縮合したグリコ
シド結合を介して結合される。かかるグリコシド結合は
、アノマー炭素の配置に応じてαまたはβのいずれであ
ってもよい。１９の残基のアノマー炭素は、別の炭水化
物残基中のヒドロキシル炭素のいずれかと結合してもよ
い。かくて、多くの糖タンパク質の複雑さは、かかる分
子の炭水化物単位に見出される多くの異なるグリコシド
結合に由来する。 多くの脱糖タバク質は、アスパラギン結合炭水化物単位
（Ｎ−グリコシド結合を介してペプチド中のアスパラギ
ンに結合された炭水化物単位）を担持する。かかるアス
パラギン結合糖タンパク質の構造は、全く複雑であるこ
とがある。例えば、シャチテル（１９８４）　Ｃｌ１ｎ
ｊｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｊｓｔｒｙ１７．３−１４参
照。各種の源（例えば、赤血球血漿脱糖タンパク質、ウ
ィルスエンベロープ糖タンパク質）からのこれらのアス
パラギン結合膜状糖タンパク質の多くの構造並びに非膜
状可溶性糖タンパク質の構造は、２種の糖タンパク質が
多くの構造上の特徴を共有することを示す。３で同定。 かかるアスパラギン結合糖タンパク質の普通のコア構造
を第１図および第４図に示す。 （Ｇ　Ｉ　ｃＮＡＣはＮ−アセチルＤ−グルコサミンで
あり、Ｍａｎはマンノースである）。α１〜６、α１−
３およびβ１−４の呼称は、各種の炭水化物残基間のグ
リコシド結合の種類を説明する。このコア結合は、コア
に結合された多数の炭水化物残基のいずれかを有する多
数の炭水化物の基準を構成する。５で同定。 〇−結合糖タンパク質は、糖タンパク質のタンパク質単
位がセリンまたはトレオニンのいずれかのヒドロキシル
基を通して炭水化物単位にカップリングされたコア構造
を含む。このコア構造の普通の特徴は、セリンまたはト
レオニンに結合されたＮ−アセチルＤ−ガラクトサミン （ＧａｌＮＡｃ）の存在である。かかる糖タンパク質の
他の詳細を第１図に示す（ＮｅｕＡｃはＮ−アセチルノ
イラミン酸であり、Ｇａｌはガラクトースであり、Ｌ−
ＦｕｃはＬ−フコースである）。Ｇａｌか第二炭水化物
残基である時には、Ｇａ１ＮＡｃとＧａｌとの間のグリ
コシド結合は、通常、β１−３である。Ｎ−および〇−
結合糖タンパク質を含めた糖タンパク質の構造生合成お
よび機能のレビューに関しては、Ｅ、　Ｇ、ベルガー等
（１９８２）　ＥｘｐｅｒｉＩＩｌｅｎｔｊａ、　３８
．１２２９−１２５８参照。 下等生物、例えば、原核生物、例えば、細菌大腸菌、シ
ュードモナス種、バチルス種などは、糖タンパク質より
もむしろペプチドグリカンを産生ずる。ペプチドグリカ
ンは、細菌細胞壁に見出され且つ典型的には交互のＮ−
アセチルグルコサミンとＮ−アセチルムラミン酸との多
糖主鎖を有する。ペプチド側鎖は、時々、Ｎ−アセチル
ムラミン酸残基と関連づけられ、架橋ペプチドブリッジ
はしばしばペプチド側鎖間に介在されている。ダラム陽
性菌の細胞壁は、典型的には、ペプチドグリカン約１０
％を含む一方、ダラム陰性菌の細胞壁は、典型的にはペ
プチドグリカン含量的５０％を有する。 しかしながら、ペプチドグリカンは、少なくとも糖タン
パク質中の特異性グリコシド結合が■型エンドグリコシ
ダーゼの種類を定義するために使用される程度には、糖
タンパク質ではない。かくて、エンド−Ｈは、Ｎ−結合
オリゴ糖類を含有する若干の糖タンパク質で見出される
２個のＮ−アセチルグルコサミン糖残基間のグリコシド
結合を切断するので、■型エンドグリコシダーゼである
。 第４図参照。しかしながら、エンド−Ｈは、布見本など
の表面からの糞便の除去を容品にすることができるので
、ペプチドグリカンとのまだ不確定の反応性も有するこ
とがある。かかる糞便は、腸内細菌と関連づけられたペ
プチドグリカンを含有することが既知である。リゾチー
ムは、ペプチドグリカンと反応性である酵素である。し
かしながら、鶏卵白リゾチーム、Ｔ４リゾチーム、ムタ
ノリシンなどのりゾチーム〔グツドマン等（１９８１）
　、　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、　　１４６．　７５
５）は、■型エンドグリコシダーゼではない。このこと
は、それらが■型エンドグリコシダーゼを定義するため
に使用するＮ−および〇−結合糖タンパク質で見出され
る独特のグリコシド結合との実質的な反応性を有してい
ないからである。しかしながら、それらは、ペプチドグ
リカンと反応性であって、結合ペプチド側鎖を含有する
Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＮ−アセチルムラミン
酸のコク類を生成する。そのままで、リゾチームは、よ
り適当には、Ｉ型エンドグリコシダーゼと特徴づけられ
る。かくて、リゾチームおよびエンド−Ｈがペプチドグ
リカンとの反応性においてオーバーラツプを有すること
があるとしても、■型エンドグリコシダーゼを規定する
糖タンパク質中のグリコシド結合に対するエンド−Ｈの
特異性およびグリコシド結合との反応性のリゾチームの
実質的欠如に関しては大部分相互に排他的である。 ここで使用する「グリコシド含有物質」または［糖タン
パク質含有物質」は、グリコシドまたは糖タンパク質単
独または別の成分と組み合わされたグリコシドまたは糖
タンパク質である。かくて、グリコシド含有物質として
は、グリコシド、例えば、糖タンパク質酵素、例えば、
アルカリ性ホスファターゼ、プロメライン、カルボキシ
ペプチダーゼ−Ｙ；糖タンパク質ホルモン、例えば、絨
毛性性腺刺激ホルモン、エリトロポイエチン；レシチン
、例えば、ジャガイモおよび大豆に由来するもの、血ｌ
Ｉｉ糖タンパク質、例えば、ＩｇＧ免疫グロブリン、千
ログロブリン、プロトロンビンなどおよび雑多な糖タン
パク質、例えば、ヘモグロビンおよびインターフェロン
；および複雑な炭水化物が挙げられる。別の成分と組み
合わされるグリコシドの例としては、膜成分からなる糖
タンパク質、例えば、ヒトの赤血球によって含有される
グリコホリン、インフルエンザウィルスによって含有さ
れる赤血球凝集素、ウシ網膜に含有されるロドプシン、
および繊維芽細胞によって含有されるコラーゲンが挙げ
られる。更に他のグリコシド含有物質としては、ウィル
スエンベロープ糖タンパク質および腸内細胞と関連づけ
られるペプチドグリカンを一部分含有する糞便が挙げら
れる。かくて、ウィルス、繊維芽細胞、糞便などは、グ
リコシド含有物質とみなされる。 ここで使用する「微生物」　（時々グリコシド含有微生
物と称する）は、微生物が結合された物質の表面から■
型エンドグリコシダーゼによって切断することができる
ものである。例としては、糞便で見出される腸内細菌お
よびコンタクトレンズを通常汚染する細菌が挙げられる
。他の例としては、■型エンドグリコシダーゼによって
表面から切断てぎる真菌類および藻類が挙げられる。 ここで使用する「生体外」なる用語は、本発明のプロセ
スおよび方法を実施する環境を意味する。 それは、■型エンドグリコシダーゼが自然に見出され、
例えば、■型エンドグリコシダーゼを自然に産生ずる生
物内で見出される環境を説明する「生体内」なる用語と
区別するためにだけ使用される。従って、Ｕ型エンドグ
リコシダーゼを使用する生体外法は、自然には生じない
方法またはプロセスである。しかしながら、生体外なる
用語は、「ガラス中」へのかかる方法の限定とは解釈す
べきではなく、またはかかる方法が生きている生物上ま
たは生物中で実施することを排除すべきではない。本発
明の方法は、ガラス以外の各種の表面、例えば、布帛、
コンタクトレンズ、金属表面、セラミック表面、細胞表
面、プラスチック表面、組織などの上で実施してもよい
。更に、かかる生体外法は、例えば、以下に詳述のよう
なヒトの口腔中で実施してもよい。 若干の既知の■型エンドグリコシダーゼをががる酵素の
自然の生物学的源と一緒に表■に表示する。若干の■型
エンドグリコシダーゼの場合の切断部位を第２図に示す
。Ｊ、　Ｇ、　　ビーレイによる「糖タンパク質および
プロテオグリカン技術」（１９８５）、第６章、ｐｐ、
１５Ｂ−３００（エルスビール、アムステルダム、ニュ
ーヨーク、オックスフォード）参照。表Ｈに表示してい
ない■型エンドグリコシダーゼは、時々ＰＮＧａ　ｓ　
ｅＦとも称するグリコペプチダーゼＦである。 ＰＮＧａｓｅ　　Ｆは、フラボバクテリウム・メニンゴ
セプチカム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｌｌｌｉｅｎ
ｉｎｇｏｓｅｐｔｌｃｕＩｌｌ）から得られることがあ
る。また、それは、インデイアナ州インデイアナポリス
のベリンガー・マンハイム・バイオケミカルから市販さ
れている。 わかるように、エンド−Ｈ，Ｆ、Ｄ、ＣＩおよびエンド
−Ｇ−Ｇａｌ型は、すべて糖タンパク質中の第二グリコ
シド結合を切断する。エンド−ＦＧａｌ型の場合には、
このグリコシド結合は、ＧｌｃＮＡｃとＧａｌとの間に
ある。エンド−ＨｌＦ、Ｄ、およびＣＩの場合には、切
断は、ＧｌｃＮＡｃからなる２個の残基間にあり、特異
性は置換基Ｕ、ＶＳＷ、Ｘ、ＹおよびＺによって規定さ
れる。 エンド−Ｈは、高マンノース含量を有するＮ−結合糖タ
ンパク質を切断する。かくて、第２図中、Ｗは２〜１５
０個のマンノース残基からなり、Ｙは１〜２個のマンノ
ース残基からなり、ＸＳＺ。 ■およびＵはＨ（水素）である。エンド−Ｈは、Ｗが１
〜２個のマンノース残基からなり且つＹおよび／または
Ｚが ＮｅｕＮＡｃ−にａｌ−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構造
からなり且つＶがＨまたはＧｌｃＮＡｃからなるハイブ
リッド構造も切断する。エンド−Ｈは、本発明の処方物
および方法で使用する好ましい■型エンドグリコシダー
セである。 エンド−Ｄおよびエンド−ＣＩは、異なる源に由来する
が、同様の反応性を有する。エンド−〇およびエンド−
ＣＩは、糖タンパク質のＮ−結合オリゴ糖類に対して活
性であり且つ１個よりも多い５−マンノース炭水化物残
基を含有する高マンノース構造（この場合には、第２図
中、ＸはＧ１３グリコシド結合を介してコア構造に結合
されたマンノースからなり、ＷはＧ１−６グリコシド結
合を介してコア構造に結合されたマンノースからなり且
つ残りの置換基はＨである）を切断する。 また、エンド−Ｄは、エキソグリコシダーゼでの最も触
角状残基の除去後に複合またはハイブリッド構造のコア
部分を切断する（この場合には、第２図中、ＹはＨまた
はＧｌｃＮＡｃからなり、ＵはＨまたはフコースからな
る）。 エンドグリコシダーゼエンド−Ｆは、第２図中Ｘおよび
Ｙが１個以上のマンノース残基であり且つ残りの置換基
がＨである高マンノース含量を有するＮ−結合糖タンパ
ク質に対して活性である。 また、エンド−Ｆは、ＸおよびＷがＧ１−３およびＧ１
−６グリコシド結合を介してコア構造に結合されたマン
ノースからなり且つＹが Ｎｅ　ｕＮＡｃ−Ｇａ　ｌ−Ｇ　ｌ　ｃＮＡｃまたは同
様の構造からなり且つＵがＨまたはフコースからなる二
触角状ハイブリッド構造を切断する。二触角状複合構造
も、エンド−Ｆによって切断される。 かかる構造は、ＸおよびＹが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−Ｇｌ　ｃＮＡｃまたは同様の
構造からなり且つＵがＨまたはフコースからなる第２図
中のエンド−Ｆの場合の基質コア構造からなる。 エンド−Ｌは、Ｎ−結合糖タンパク質中の第二グリコシ
ド結合を切断する際に同様の反応性を有する。エンド−
Ｌは、 Ｍａｎ−ＧｌｃＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ−Ａｓｎからなる
低分子量基質に対して特異性である。エンド−００は、
エンド−Ｈと同様の特異性を示す。 エンド−α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼは、Ｇ
ｌｃＮＡｃおよびＧａｌが最初の２個の炭水化物残基で
あるセリンまたはトレオリンにＯ−結合されたオリゴ糖
類を含有する糖タンパク質を加水分解する。Ｒ１が炭水
化物単位中のアンテナを与えることがあるマンノースの
１９であるエンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼの特異性
も、第２図に示す。 ■型グリコシダーゼグリコペプチダーゼＦ（ＰＮＧａ　
ｓ　ｅ　　Ｆ）は、アスパラギンとＧＩｃＮＡｃとの間
のＮ−結合糖タンパク質中の第一グリコシド結合を切断
する。それは、ＷｌＸおよびＹが１個以上のマンノース
残基からなり且つＶおよびＺがＨからなる高マンノース
構造（フコースは第一炭水化物残基ＧｌｃＮＡｃから不
在である）を切断する。それは、ＷおよびＸがマンノー
スからなり、Ｙおよび／またはＺがＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ
　１−Ｇ　１　ｃＮＡｃまたは同様の構造からなり、Ｖ
がＨまたはＧｌｃＮＡＣからなる混成構造（フコースは
典型的には第一炭水化物残基から不在である）も切断す
る。複合構造も、グリコペプチダーゼＦによって切断す
る。かかる構造は、ＹおよびＷが ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　１−Ｇ１．ｃＮＡｃまたは同様の
構造からなり、ＸおよびＺかＨｌ ＮｅｕＮＡｃ−Ｇａ　Ｉ−ＧｌｃＮＡｃまたは同様の構
造からなり、ＶがＨまたはＧｌｃＮＡｃからなりＨつフ
コースか時々第一炭水化物残基上に存在する第２図に示
すコア構造からなる。 エンド−β−Ｎ−ガラクトシダーゼは、糖タンパク質ま
たは糖脂質上のオリゴ糖類内のグリコシド結合を切断す
ることが既知である。エンド−βＮ−ガラクトシダーゼ
の場合の切断部位と一緒に典型的な糖タンパク質基質を
第２図に示す（Ｒ２はタンパク質、脂質または炭水化物
であり、Ｒ１は糖残基または水素である）。 勿論、本発明は、エンドグリコシダーゼの現在既知の特
異性によっては限定されない。最近まで、市販されてい
るエンドグリコシダーゼは、天然産源中の比較的少量の
発現のため高価であった。従って、かかる酵素の反応性
は、広くは研究されていない。しかしながら、分子クロ
ーニングの出現７ につれて、多量のエンドグリコンダーゼが入手でき、ま
たは入手可能にされるであろう。別の反応性および特異
性がこれらのエンドグリコシダーゼまたは他のエンドグ
リコシダーゼの場合に発見される程度で、かかる反応性
は、本発明の範囲内であることを意図する。 従って、ここで使用する「ｎ型エンドグリコンダーゼ反
応性物質」　（「■型−反応性物質」または「■型反応
性結合」を含有する物質とも称する）は、ｎ型エンドグ
リコンダーゼと反応性である物質である。勿論、■型反
応性物質内には、グリコシド含有物質および糖タンパク
質が包含される。 しかしながら、（１）グリコシド結合以外でｎ型エンド
グリコンダーゼと反応性の他のまだ未知の物質、および
（２）■型反応性結合を有する成分を含有する多成分凝
集体も包含される。 例えば、細菌などの微生物は、エンド−Ｈでの処理によ
って表面から除去できる。この結果がどのように生ずる
かは、現在既知ではない。細菌は、エンド−Ｈと通常反
応性である結合を含有するこ８ とは既知ではなく且つ表面、他の微生物および他の物質
への結合の詳細は、よくは理解されていない。しかし、
エンド−Ｈによる細菌除去は、観察された。 更に、他のしみは、物質の複合凝集体（それらの若干ま
たはすべてはｎ型エンドグリコンダーゼと反応性である
）を包含することがある。■型反応性物質なる用語は、
すべてのかかる状況をカバーする。かくて、ｎ型エンド
グリコンダーゼの用途としては、（１）■型−反応性物
質を含有する表面をクリーニングすること、（２）■型
−反応性物質を処理して表面への結合を防止すること、
（３）微生物などの■型−反応性物質を処理して抗菌効
果を生ずることが挙げられる。 本発明で使用するｎ型エンドグリコンダーゼは、当業者
に既知の方法に従って表Ｈに表示の生物から肖ることが
できる。表■中のｎ型エンドグリコンダーゼの若１−１
例えば、ストレプトミセス・ブリカフス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ｐｌｉｃａｔｕｓ　）　　Ｃ初期にはス
トレプトミセス・グリセウス（Ｓｔ　ｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓｇｒｌｓｅｕｓ）と分類〕からのエンド−Ｈおよび
Ｓ、ブリカフスまたはＳ。リビダンス（Ｉｉｖｉｄａｎ
ｓ）　中で産生ずるエンド−Ｈおよび肺炎双球菌 （Ｄ４ｐｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）か
らのエンド−Ｄは、インデイアナ州インデイアナポリス
のベーリンガー・マンハイム・バイオケミカルから市販
されている。市販の製剤に加えて、エンド−Ｈは、大腸
菌中のストレプトミセス・ブリカフスからのエンド−Ｈ
のクローニングおよび表現の場合に報告した方法〔ロビ
ング等（１９８１）　　Ｊ、　　Ｂｉｏｌ。 Ｃｈｅ＋ｍ、　２５６　；　１０６４０）と同様の方法
によってストレプトミセス・ブリカフスからのエンドＨ
遺伝子およびアルカリ性ホスファターゼからのプロモー
ターを符号化するプラスミドで形質転換された大腸菌に
由来することがある（Ｔ、才力等（１９８５）　Ｐｒｏ
ｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、　ＵＳＡ、　
８２゜７２１２−７２１６）。また、Ｒ，Ｊ、）ランブ
リー等（１９８５）　Ｊ、　Ｂｊｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、
　　２６０゜５６３８参照。また、エンド−Ｈは、スト
レプトミセス・ブリカフスに由来するエンド−Ｈを表現
するために工学的に産生されたストレプトミセス細胞に
由来してもよい（ＥＰＯ刊行物第０１７９４４９号明細
書）。或いは、エンド−Ｈは、当業者に周知の技術を使
用して、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）
などの適当な宿主細胞によって産生じてもよい。Ｓ、ブ
リ力タス（Ｓ、　グリセウス）の場合のエンド−Ｈのア
ミノ酸およびＤＮＡ配列は、公表されている。ｐ、ｗ、
　ロビング等（１，９８４）Ｊ、　Ｂｌｏｉ、　Ｃｈｅ
ｍ、、　２５９．　７５７７−７５８３゜ここの例で使
用するエンド−Ｈは、商業上行るかＳ、ブリカタスから
エンド−Ｈを表現するために形質転換された大腸菌また
は枯草菌宿主から得た。 エンド−Ｈ活性の１単位は、 （”　）Ｉ）−ｄａｎｓｙｌ−Ａｓｎ−ＧｌｃＮＡｃ　
　１　ｔｔモルをｐＨ５，５で３７℃において１分で （Ｈ）−ｄａｎｓｙｌ−Ａｓｎ−（ＧＩｃＮＡｃ）　４
（Ｍａｎ）　６から放出するために必要とされる酵素の
量である。Ａ。 タレンチノ等（１９７８）　Ｍｅｈｔｏｄｓ　ｉｎＥｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ、　　５０　、　５７４゜他の■型エ
ンドグリコシダーゼの単位活性は、適当な基質によって
同様に定義される。 勿論、また同定されていない他の■型エンドグリコシダ
ーゼは、存在してもよい。かかる■型エンドグリコシダ
ーゼ並びにここに記載のもの、例えば、かかるエンドグ
リコシダーゼの対立遺伝子変異および遺伝子工学的修正
は、本発明の範囲内である。 グリコシドおよびグリコシド含有物質は、しばしば、各
種の表面に結合するようになる。かくて、例えば、糖タ
ンパク質、例えば、血液に関連づけられるもの（例えば
、グリコジル化ヘモグロビン）は、布、リネンなどに使
用する布帛の表面を汚すことがある。かかるしみは、従
来、洗剤または本発明で利用するエンドグリコシダーゼ
ではない各種の酵素との組み合わせでの洗剤での処理に
よる完全な除去に高度に抵抗性であった。布帛などの表
面を汚し且つ既知の技術によって除去することが困難で
もある更に他のグリコシド含有物質は、糞便からなる。 かかる糞便じみとしては、各種のグリコシドおよび腸内
細菌と関連づけられるグリコシド含有物質（例えば、ペ
プチドグリカン）、異化排出物、例えば、糖タンパク質
、および非吸収栄養素などが挙げられる。 グリコシドまたはグリコシド含有物質が結合されること
がある他の表面としては、硬質および軟質コンタクトレ
ンズの表面が挙げられる。軟質コンタクトレンズは、典
型的には、ヒドロゲル構造を有する親水性架橋重合体で
あるが、シリコーン重合体から作る。例えば、米国特許
節３．４０３゜３９３号明細書および第２，９７６．５
７６号明細書参照。一方、硬質コンタクトレンズは、典
型的には、メタクリレートまたはメタクリル酸メチル重
合体から作る。他の表面としては、天然産バイオフィル
ム、心臓ペースメーカーリードおよびパワーバック、細
胞表面および粘膜表面、歯エナメル質、食品を加工する
際に細菌および粒状物質を除去するために使用する濾過
器；化学薬品など；空気調和濾過器；水性環境にさらさ
れる各種の構造部品、例えば、ボート、防波堤などの表
面；プラスチックおよび複合体、例えば、フォーマイカ
；および金属または金属合金、例えば、鋼、アルミニウ
ムなどが挙げられる。 以下に詳細に示すように、■型エンドグリコシダーゼ単
独またはズブチリシンなどの第二酵素との組み合わせ（
洗剤有無）は、布見本からの血液および糞便じみの除去
を有効に増大する。かかるじみがどのようにかかる見本
に付着するかは正確には知られていない。しかしながら
、単独または他の薬剤との組み合わせでの■型エンドグ
リコシダーゼによってこれらの見本からのかかる物質の
除去が高められることは、少なくとも１個のグリコシド
結合が布帛としみの部分との間に介在し、このじみが■
型エンドグリコンダーゼでの処理時に放出されることを
示唆する。これらの結果に基づいて、グリコシド含有物
質の表面への結合および■型エンドグリコシダーゼによ
るかかる物質の放出および／または除去の機構が提案さ
れる。しかしながら、これらの提案された機構は、本発
明の範囲の限定とは解釈すべきではない。 かくて、第５Ａ図に示すように、グリコシド含有物質は
、免疫結合以外によって表面に結合してもよい。この点
で、「免疫結合」は、抗原と抗体との間に存在するもの
（その抗原に特異性）（ポリクローナルまたはモノクロ
ーナル）である。第５Ａ図に示すように、グリコシド含
有物質は、表面に結合された近位部分および近位部分か
ら外方に延出する遠位部分を有する。近位部分および遠
位部分は、グリコシド結合（このグリコシド結合と■型
エンドグリコシダーゼは反応性である）によって結合さ
れる。第５Ａ図に更に示すように、■型エンドグリコシ
ダーゼでの処理時に、グリコシド含有物質の遠位部分は
、グリコシド含有物質の近位部分から「放出」される。 この遠位部分が他の手段によって表面に結合されない程
度で、遠位部分は、表面から容易に「除去コされ且つ流
体で洗い流されることがある。 第５Ｂ図中、グリコシド含有物質、この場合には、炭水
化物単位とタンパク質単位とを含有する糖タンパク質は
、表面に結合された状態で示す。 このグリコシド含有物質は、■型エンドグリコシダーゼ
と反応性であるグリコシド結合によって結合された炭水
化物部分とアグリコン部分とを更に含有する。この特定
の場合には、グリコシド含有物質（糖タンパク質）は、
グリコシド含有物質の炭水化物部分を通して表面に結合
されている。■型エンドグリコシダーゼでの処理時に、
アグリコン部分は、グリコシド含有物質の炭水化物部分
から放出される。第５Ａ図と同様に、アグリコン部分が
他の手段によって表面に更に結合されない程度で、アグ
リコン部分も、表面から除去される。 第５Ｃ図は、グリコシド含有物質が少なくとも２個の結
合点を介して表面に結合されている状況を示す。示すよ
うに、グリコシド第一結合は、表面とグリコシド含有物
質との間に存在する。更に、第二酵素と反応性の第二結
合も、表面と除去すべきグリコシド含有物質の部分との
間に存在する。 ■型エンドグリコシダーゼのみて処理するならば、第一
グリコシド結合から遠位のグリコシド含有物質の部分は
、少なくとも第一グリコシド含有結合を通して結合され
た程度で表面から放出される。 示す第二結合と反応性の第二酵素と接触するならば、第
一グリコシド結合および第二結合から遠位のグリコシド
含有物質の部分は、表面から放出される。この遠位部分
が表面に他の方法で結合されていない程度で、即ち、他
の酵素と反応性であるか洗剤および／または界面活性剤
に感受性であることがある他の接点によって結合されて
いない程度で、この遠位部分は、表面から有効に除去さ
れる。 第５Ｄ図は、微生物のグリコシド部分の少なくとも一部
分を通して表面に結合された微生物を示す。グリコシド
部分は、■型エンドグリコシダーゼと反応性のグリコシ
ド結合を含有する。グリコシド結合から遠位の微生物の
切断部分は、■型エンドグリコシダーゼでの処理時に表
面から放出される。この切断部分が他の方法で表面に結
合されていない程度で、切断部分も、表面から除去され
る。しかしながら、多数の接点が、他の酵素および／ま
たは洗剤または界面活性剤での更に他の処理を必要とす
ることがある表面の場合には存在してもよい。 第５Ｅ図中、■型エンドグリコシダーゼ反応性物質は、
表面に結合した状態で示す。この■副反応性物質は、表
面に結合された近位部分および近位部分から外方に延出
する遠位部分を有する。近位部分および遠位部分は、■
型エンドグリコシダーゼと反応性の結合を意味する■型
反応性結合によって結合されている。■型エンドグリコ
ンダーゼでの処理時に、■副反応性物質の遠位部分は、
■副反応性物質の近位部分から「放出」される。 ■副反応性物質は、表面に結合するようになってもよい
各種の成分の分子、微生物または凝集体からなってもよ
いことを理解すべきである。■副反応性物質の遠位部分
が他の手段によって表面に結合されない程度で、遠位部
分は、表面から容易に「除去コされ且つ流体で洗い流さ
れることがある。 図示の物質の除去を生ずるために使用する■型エンドグ
リコシダーゼの量は、表面からの特定の物質の除去に「
有効な量」と＆止的に定義される。 この量は、物質および被処理表面に応じて変化してもよ
い。典型的な量は、開示の特定の態様に関連してここに
詳述する。 第二酵素 「第二酵素」としては、プロテアーゼ、リパーゼ、グリ
コシダーゼ、例えば、リゾチームおよびそれらの組み合
わせが挙げられる。■型エンドグリコシダーゼと組み合
わせてもよい各種のプロテアーゼとしては、ズブチリシ
ン、プロメライン、パパイン、トリプシン、キモトリプ
シン、パンクレアチン、リゾチームおよびそれらの組み
合わせか挙げられる。かかる酵素は、天然物に由来して
もよく、例えば、枯草菌または遺伝子工学で産生された
クローンからのズブチリシン、例えば、ＥＰＯ刊行物第
ｆ１）　１３０７５６号明細書に記載のようなズブチリ
シンおよび突然変異ズブチリシンであってもよい。Ｊ、
Ａ、　ウェルズ等（１９８３）ＮｕｃｌｃｉｃＡｃｉｄ
ｓＲｅｓ、、コ１，７９１１−７９１５；Ｍ、ヤング等
（１９８４）　Ｊ、　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　。 ５つ １．６０．１５−２１．、Ｄ、Ａ、ニステール等（１９
８５）　　Ｊ、　　Ｂｉｏｌｏｇ４ｃａｌ　　ＣｈｅＩ
ｌｌｉｓｔｒｙ　、　　２６０６５１８−６５２１も参
照。多くのかかる酵素は、勿論、商業的源から入手でき
る。 更に、■型エンドグリコシダーゼは、リパーゼ、例えば
、細菌、哺乳動物および真菌類のリパーゼおよびそれら
の組み合わせと組み合わせてもよい。 第二酵素として使用してもよいグリコシダーゼとしては
、エキソグリコシダーセ、第二■型エンドグリコシダー
ゼおよびＩ型エンドグリコシダーゼか挙げられる。例と
しては、α−およびβ−アミラーゼ、セルラーゼ、ペク
チナーゼ、ヘミセルラーセ、デキストラナーゼ、各種の
グルカナーゼなどおよびそれらの組み合わせが挙げられ
る。 更に、■型エンドグリコンダーセは、表面からのグリコ
シド含有物質の除去を容易にするために前記種類の第二
酵素の１よりも多くと組み合わせてもよい。 ■型エンドグリコシダーゼを１一種以上の第二酵素と組
み合イ）せる時には、■型エンドグリコシダ０ 一ゼ対第二酵素の比率は、好ましくは約０．０１〜１０
０、最も好ましくは１：１である。 ジスルフィド切断試薬 また、■型エンドグリコシダーゼは、単独または洗剤処
方物を調製するための１種以上の第二酵素および／また
はジスルフィド切断試薬との組み合わせでの洗剤と併用
してもよい。ジスルフィド結合を切断することができる
物質は、変化するが、一般に３つのカテゴリー二酸化剤
、還元剤、および雑多な付加物質、例えば、フマル酸お
よび亜硫酸ナトリウムによって例証されるものに入る。 好適な酸化剤としては、過酸化水素、過ギ酸、過ホウ酸
すｌ・リウム、および酸化漂白剤が挙げられる。 有効な還元剤としては、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）
　、β−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、水素化ホウ
素ナトリウムなどが挙げられる。 容易には分類されない別のジスルフィド切断試薬として
は、塩化第二水銀、ニトロプルシド、トリブチルホスフ
、イン、およびホスホチオレートが挙げられる。特に有
用な切断試薬は、亜硫酸ナトリウムである（これは下記
反応に従ってジスルフィドの亜硫酸分解を生ずる：　Ｒ
−５−５−Ｒ十２−２ Ｓｏ　　　　Ｒ−８−３ｏ３−１−　　ＳＲ）。この反
応の平衡は、重金属イオンまたは酸化剤を使用してチオ
ール陰イオンの除去によってシフトしてもよい。酸化能
は、曝気またはＣｕＳＯ４、過ホウ酸ナトリウムなどの
酸化剤によってり−えてもよい。 ジスルフィドを切断することができる物質の前記リスト
は、包括的であることを意味せず、逆に商品にＨ効では
あるが必ずしも適当ではない物質を包含する。商業上成
功するためには、添加物質は、比較的安価でなければな
らず且つ所期用途に望ましくない性質を有していてはな
らない。かくて、例えば、塩化第二水銀の使用は本発明
の方法を実施する際に作動可能であるが、塩化第二水銀
は、商業的使用を意図する通常の洗濯製品には好適では
ない。β−メルカプトエタノールおよびＤＴＴは、温和
な不快臭を有する以外は商業上使用可能である。それゆ
え、商業的処方物に特に好ましい物質は、亜硫酸ナトリ
ウム（好ましくは酸化剤との組み合わせ）または安価で
あり口つ比較的安全である過酸化水素である。ジスルフ
ィド結合の切断で有用である物質のレビューは、例えば
、Ｃｈｅｌｌｉｃａｌ　　Ｍｏｄｉｒｉｃａｔｌｏｎ　
　ｏｌ’　　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　　、　　Ｇ、　　　Ｅ
。 ミーンズ等編（１９７１）、ホールデンーデイ・インコ
ーホレーテッド、カリフォルニア州すンフランシスコ、
第８章：およびＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅａｇｅｎｔｓｒ
ｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏｄｉｌ’ｊｃａｔｉｏｎ、
　Ｒ，Ｌ、ランドバルド等編（１９８４）　、ＣＲＣプ
レス・インコーホレーテッド、フロリダ州バコ・ラドン
、第７章に見出される。 典型的には、単独または１種以上の第二酵素との組み合
わせでの■型エンドグリコシダーゼは、本発明の洗剤組
成物の０．０１〜３％ｗｔ／ｗｔを構成シ１１９その約
１０〜４０％ｗｔ／ｗｔのジスルフィド切断試薬を包含
してもよい。存在量は、勿論、エンドグリコシダーゼ（
そして、使用するならば、第二酵素）およびジスルフィ
ド切断試薬の性状、洗浄液中の洗剤の希釈度、および洗
浄条件に依存する。しかしながら、前記範囲は、一般に
典型的である。 本発明の１態様においては、結合された物質を含有する
糖タンパク質を有する表面は、好適なｐＨ，温度におい
てジスルフィド切断試薬と■型エンドグリコンダーゼと
第二酵素との組み合わせ（同時または逐次）で適当な時
間処理する。これらの条件は、勿論、便宜に応じて変化
でき、且つ■型エンドグリコシダーゼ、プロテアーゼお
よびジスルフィドを切断する物質の選択は、成る程度、
この選択に依存する。しかしながら、１７ばしば遭遇す
る好都合な条件は、ｐＨ値５〜１２である。 温度２０〜５５℃、特に約４０〜５５℃および時間２０
分まで、通常約１０〜１５分は、典型的であり、好まし
い。商業上実用的であるためには、プロセスは使用者に
通常入手可能な条件下で実施することが必要であるので
、好ましい時間および温度は、一般に家庭洗濯機、近所
のコインランドリーおよび専門の洗濯サービスで利用さ
れているものである。 本発明の別の態様においては、市販の洗剤を使用する通
常の洗浄法は、使用され且つ■型エンドグリコシダーゼ
、第二酵素およびジスルフィド切断物質は、漂白剤を使
用する方法とほぼ同じ方式で添加剤として別個または一
緒に与える。かくて、これらは、洗浄サイクルの開始ま
たは若干の中間点、例えば、洗浄サイクルの大体半分が
完了した後に洗剤と一緒に添加してもよい。このように
取り扱うならば、固体または液体洗剤組成物の約１：５
００希釈度（固体約２ｇ／ｍｌ）を仮定すると、■型エ
ンドグリコシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断
試薬の任意量は、この希釈度によって課される上限なし
に添加してもよい（■型エンドグリコシダーゼ、第二酵
素およびジスルフィド切断試薬を最初に洗剤組成物に加
え且つ例えば、ジスルフィド切断試薬が組成物の５０％
を構成したならば、１．ｍｇ／ｍｌのみが最終洗浄液中
で生ずるであろう。しかしながら、これらの物質を別個
に加えるならば、特定の■型エンドグリコシダーゼ、ジ
スルフィド切断試薬および第二酵素に最も有効な量は、
添加してもよい）。 ■型エンドグリコシダーゼおよび第二酵素に関しては、
非常に少量で通常すむ。典型的には、■型エンドグリコ
シダーゼおよび第二酵素は、各酵素の場合に洗浄液の最
終濃度約１〜５００μｇ／ｍｌに加える。しかしながら
、ジスルフィド切断試薬の場合には、洗剤の希釈によっ
て許容されであろう量よりも多い量が、望ましいことが
ある。例えば、水素化ホウ素ナトリウムを使用してジス
ルフィド結合を切断することは、好都合には同様の量の
緩衝剤の存在下で０．２Ｍ程度の試薬の濃度実施しても
よい（Ｒ，Ｌ、ランドバルド等の前記Ｃｈｅｎｌｉｃａ
ｌ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｍｏ
ｄｉｆｊｃａｔｊｏｎ）。 かかる多量は通常であるが、必ずしも必要とされず、よ
り低い濃度が使用可能である。濃度０、ＯＩＭ程度また
はそれ以下も使用できるが、亜硫酸分解は、通例、亜硫
酸ナトリウム濃度０、ＩＭ程度で実施する。ＤＴＴは、
濃度０．０２〜０．１Ｍ程度で供給する時に有効である
。簡単には、ジスルフィド切断試薬濃度は、これらの試
薬および維持する有効性のために広範囲にわたって変化
できる。特定の応用に最適の濃度は、勿論、じみの性状
および試薬の性状、並びに洗浄法の条件、例えば、時間
、温度およびｐＨに依存するであろう。 別のより好都合なアプローチにおいては、■型エンドグ
リコシダーゼ、第二酵素およびジスルフィド切断物質は
、元の洗剤組成物に加え且つプロセスはこれらの変性洗
剤を使用して標準洗浄法として実施する。これらの状況
下では、洗剤組成物は、前記のものに対応するであろう
が、組成物の量も、再度、洗浄液および洗浄法の条件お
よび洗剤成分の溶解疫に応じて洗浄液の約０．　５＋ｎ
ｇ／ｍ１〜１０　ｍｇ／　ｍｌまたはそれ以上の範囲に
４つたって変化できる。いかなる場合にも、■型エンド
グリコシダーゼ、ジスルフィド切断試薬および第二酵素
の洗剤への配合は、洗剤の希釈度に応じてこれらの成分
の濃度を限定する。かくて、１．＋１００希釈度を使用
しく１０ａ＋ｇ／＋ｎｌ）且つジスルフィド切断試薬を
例えば洗剤組成物の５０％に限定するとしても、得られ
た洗浄液中のジスルフィド切断試７ 薬の最適濃度５ｍｇ／ｍｌが、上限である。典型的には
、勿論、洗剤中のジスルフィド切断試薬の濃度は、ジス
ルフィド切断試薬の一層低い濃度が必須であるならば、
５０％未満であろう。 本発明の洗剤組成物は、大抵の洗剤活性物質、比較的多
量のジスルフィド切断試薬（使用するならば）、および
極少量のＨ型エンドグリコンダーゼおよび第二酵素（使
用するならば；酵素成分のコストに鑑みて特に望ましい
）を含有する。かくて、一般に、製剤は、界面活性剤、
ビルダー、増白剤などの通常の市販の洗剤添加剤を含め
た洗剤活性物質６０〜９０％、■型エンドグリコシダー
ゼ＋第二酵素０．０１〜３％、およびジスルフィド切断
試薬約１０〜４０％を含有するであろう。 勿論、これらの３種の添加剤の１９のみを元の洗剤に加
え、他のものを洗浄液に別個に供給することも可能であ
る。特に、■型エンドグリコンダーゼは、予備洗浄液に
加えた後、第二酵素を含有する洗剤を加えてもよく、ま
たはエンドグリコシダーゼを含有する洗剤の添加は、第
二酵素での処８ 理の前または後に実施してもよい。 クリーニング組成物 エンドＤ、ＦおよびＨは、クリーニング組成物で使用す
るのに好ましい■型エンドグリコシダーゼである。エン
ド−Ｈが、最も好ましい。 グリセリド含有物質の除去のためには、本組成物は、好
ましくは、組成物の種類に応じて、■型エンドグリコシ
ダーゼ約０．ｌｐｐｍ　（１００万当たりの部）〜１２
００ｐｐｍ、より好ましくは約ｌｐｐｍ〜１１０００ｐ
ｐ、最も好ましくは約２０ｐｐｍ〜約２００ｐｐｍを含
む。クリーニング組成物が好ましい。洗濯洗剤組成物が
、ここで使用するのに最も好ましく、好ましくは■型エ
ンドグリコシダーゼ約０．ｌｐｐｍ〜１２００１）ｐｍ
、好ましくはエンドＤ、ＦまたはＨ約２０ｐｌ）ｍ〜２
００ｐｐｍ、最も好ましくはエンドＨ約５０ｐｐｍ〜１
２５ｐｐｍを含む。 微生物を防除または除去するために使用する時には、組
成物は、好ましくは、■型エンドグリコシダーゼ、好ま
しくはエンド−Ｈ約０．ｌｐｐｍ〜１２００ｐｐｍ、よ
り好ましくは約コｐｐｍ〜１１０００ｐｐ、最も好まし
くは約２０ｐｐｍ〜４００ｐｐｍを含む。クリーニング
組成物が好ましく、且つ好ましくは同量の■型エンドグ
リコシダーゼ、好ましくはエンド−Ｈを含む。 グリコシド含有物質および／または微生物の除去のため
に■型エンドグリコシダーゼを含む提案される種類の組
成物を以下に述べる。組成物は、酵素活性を破壊しない
方法で調製し、使用することができる。それらは、酵素
の活性を不当に妨げない成分で調製できる。組成物は、
洗濯洗剤、皿洗い洗剤、硬質表面クリーナー、歯エナメ
ル質クリーナー、液体石鹸および固形石鹸、抗アクネ組
成物、制汗剤、シャンプー、フェースクリーム、果物／
野菜表面防腐剤、または布帛柔軟剤であることができる
。 洗濯機中での普通のサイクルを使用した布帛のクリーニ
ングに加えて、本発明のクリーニング組成物は、他の表
面、例えば、外科機器、パイプライン、金属容器などで
見出されるような金属および金属合金、およびプラスチ
ックおよび複合材料、例えば、フォーマイカ（Ｆｏｒｍ
ｊｃａ）およびボート、防波堤などの表面からグリコシ
ド含有物質および／または微生物を除去するためにも使
用してもよい。特定の応用に応じて、組成物は、■型エ
ンドグリコシダーゼを単独またはジスルフィド切断試薬
、第二酵素および／または洗剤界面活性剤との組み合わ
せで含んでいてもよい。 ■型エンドグリコシダーゼは、皮膚、皮膚孔、ヘア、毛
包、組織の表面などの「生物学的表面」から酵母、真菌
類、藻類および細菌を含めてグリコシド含有物質および
／または微生物を除去するための組成物に処方してもよ
い。かくて、シャンプー処方物、コンディショナー処方
物、石鹸処方物および医薬技術の当業者は、■型エンド
グリコシダーゼをかかる応用で使用するために洗剤処方
物の場合の前記開示を容易に適応できる。このように処
方する時には、かかる組成物は、かかる表面に付着する
ことがあるグリコシド含有物質を除去する際に有用であ
る。 １ また、■型エンドグリコシダーゼは、果物、野菜などの
植物の表面からグリコシド含有物質および／または微生
物、特に酵母および真菌類を除去するための組成物に処
方してもよい。かかる組成物は、好ましくは、非イオン
界面活性剤を含有する。 更に、■型エンドグリコシダーゼは、望ましくないにお
いに応答するグリコシド含有物質および／または微生物
を除去するためにエンドグリコシダーゼ活性を与えるよ
うに当業者に既知の方法で制臭剤組成物に処方してもよ
い。■型エンドグリコンダーゼを使用したかかる制臭剤
処方物は、当業者に既知のスティック、クリームおよび
エアゾール制臭剤用処方物の修正を包含してもよい。 更に、■型エンドグリコシダーゼは、少なくとも炎症に
応答するか包含されるグリコシド含有物質および／また
は微生物が表面に結合される程度に、炎症から通常生ず
るアクネの治療のために処方してもよい。前記処方物と
同様に、当業者は、既知のアクネ処方物を修正して■型
エンドグリコ２ シダーゼを単独または他の酵素、洗剤および／または界
面活性剤との組み合わせで配合することかできる。 コンタクトレンズを処理するために使用する時には、■
型エンドグリコシダーゼは、好適には、クリーニング組
成物中で濃度約０．　１〜２０μｇ／ｍｌで供給し目、
つプロテアーゼなどの第二酵素の濃度は、かかる第二酵
素を利用するならば同じ範囲内である。処理時間は、約
５分〜約１５時間で変化できるが、標準の好都合なりリ
ーニング時間は、−晩生であり、それゆえ、着用者は寝
ている際にレンズをソーキングさせることができる。各
種のプロトコールは、好適であるが、特に好ましいもの
は、室温で１０分〜２時間または一晩生実施された■型
エンドグリコシダーゼおよび第二酵素（使用するならば
）を含有する単一溶液の使用であるが、■型エンドグリ
コシダーゼ溶液の存在下で１０分〜２時間予備ソーキン
グした後第二酵素を含有する溶液で同様に一晩生処理す
ることである。 コンタクトレンズ処方物に好ましい一般目的第二酵素と
しては、パパイン、バンクレアチン、ズブチリシンなど
のプロテアーゼが挙げられる。好ましい■型エンドグリ
コシダーゼ酵素は、ストレプトミセス・プリカタスから
のエンド−Ｈである。 単一の第二酵素プロテアーゼは、使用してもよく、また
は組成物は、第二酵素の混合物を含有してもよい。 更に、コンタクトレンズ組成物は、全体の酵素分解を助
長する追加成分を含有してもよい。これらのうち２−メ
ルカプトエタノール、塩酸システィン、ジチオトレイト
ール、ジチオエリトリトール、重硫酸ナトリウム、メタ
重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素などのジスルフィド切断
試薬が特に有用である（一般に約０．０１〜５重量％、
好ましくは０．０５〜１重量％）。更に、洗剤は、酵素
含有溶液でのレンズの濡れを助長するために組成物に配
合してもよい。好適な洗剤としては、ドデシル硫酸ナト
リウム、モノラウリン酸ナトリウム、非イオン界面活性
剤、例えば、アルコールエトキシレート（例えば、ポリ
エトキシエタノール）、陰イオン界面話性剤、例えば、
エーテルスルホネト、線状アルキルベンゼンスルホネー
ト、ラウリル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。 コンタクトレンズクリーニングに好適な緩衝剤および安
定剤も、使用してもよく、それらの例としてはクエン酸
ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸、ホウ酸、Ｅ
ＤＴＡナトリウム、各種の混合ホスフェート緩衝剤およ
びＮ　ａ　ＨＣＯ３か挙げられる。一般に、緩衝剤およ
び安定剤は、約０．００１〜約２，５重量％、好ましく
は約０．１〜１重量％の量で使用してもよい。コンタク
トレンズをクリーニングするために本発明で使用しても
よい各種の成分の量の前記説明は、溶液中の成分の％（
ｗｔ／ｖｏｌ）で述べることを理解すべきである。処方
物は、所定量の水などの好適な溶媒中で使用するのに好
適な錠剤などの１以上の通常の固体側形の形態を取って
もよい。固体側形の組成％は、特定の容量の水に溶解す
る時に、溶液が明細書に記載の範囲内の組成％を有する
ような５ ものである。固体側形を使用するならば、処方物は、通
常の潤滑剤、結合剤、および賦形剤を含有してもよく、
これらの例としてはグリセロール、ソルビトール、ホウ
酸、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、
デキストラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロースの水溶性塩、ま
たは天然産親水性物質、例えば、ゼラチン、アルギネー
ト、トラガカント、ペクチン、アラビアゴムおよび可溶
性デンプンが挙げられる。 コンタクトレンズをクリーニングする際に有用な典型的
な組成物およびプロトコールとしては、Ｆ記のものが挙
げられる。 １、　組成物は、■型エンドグリコシダーゼ１−〜１０
０μｇ　／　ｍｌを含有する。レンズは、取り外し、２
２℃で溶液との接触状態に１２時間置く。 レンズは、クリーニング溶液から取り出し、すすぐ。 ２、　溶液Ａは■型エンドグリコンダーゼ１０μｇ　／
　ｍｌを含有し、溶液Ｂはズブチリシン５μｇ６ ／ｍｌを含有する。レンズは２５℃で溶液Ａに３０分間
ソーキングし、取り出し、２５℃で溶液Ｂに１０時間浸
漬する。 ３、　　クリーニング溶液は、プロテアーゼペプシン１
０μｇ　／　ｍｌおよび■型エンドグリコシダーゼ１０
μｇ　／　ｍｌを含有する。レンズは、２０℃でこの溶
液Ａに５時間ソーキングする。 ４、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン５μｇ／ｍ
ＬＩＩ型エンドグリコシダーゼ５μｇ／ｍ＋および１０
ｍＭ２−メルカプトエタノールを含有する。レンズは、
３０℃でこの溶液に５時間浸漬する。 ５、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン７　Ｉｔｇ
　／　ｍｌ、■型エンドグリコシダーゼ３ｐｇ／ｍＩ。 １０ｍＭ　　２−メルカプトエタノールおよびドデシル
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）２％を含有する。 レンズは、２０℃でこの溶液に３時間ソーキングする。 ６、　　クリーニング溶液は、ズブチリシン４μｇ／ｍ
Ｌｌ□リブシン２μｇ／ｍ＋、■型エンドグリコシダー
ゼ１０μｇ／ｍ＋、およびＳＤＳ　　２％を含有する。 レンズは、２０℃でこの溶液に７時間ソーキングする。 ７、　溶液Ａは、ＳＤＳ　　２％中にズブチリシン４μ
ｇ　／　ｍｌおよびトリプシン２μｇ　／　ｍｌを含有
する。溶液Ｂは、■型エンドグリコシダーゼ１０μｇ　
／　ｍｌプラス１０ｍＭ２−メルカプトエタノールを含
有する。レンズは、３０°Ｃで溶液Ｂに２０分間浸漬し
、次いで、２５℃で溶液Ａに６時間浸漬する。 すべての前記例において、レンズは、着用者の目に戻す
前に食塩水中で十分にすすぐ。 本組成物は、液体、ゲル、ペーストおよび粉末、粒状物
などの固体粒子を含めて各種の物理的形態に処方できる
。組成物は、洗濯洗剤、例えば、米国特許第４，５０７
，２１９号明細書、第４．３１８，８１８号明細書、第
４，６０５，５０９号明細書および第４，４１２．９３
４号明細書に開示のもの；皿洗い洗剤、例えば、米国特
許第４．７１４，５６２号明細書、第３，６３０，９２
３号号明細書、第４．１．３３，７７９号明細書、第４
．　３１６．８２４号明細書および第４，５５５，３６
０号明細書に開示のもの；硬質表面クリーナー、例えば
、米国特許箱４．４１４□　１２８号明細書、第３．６
７９，６０８号明細書、第３，９８５，６６８号明細書
および第４，００５，０２７号明細書に開示のもの；布
帛柔軟剤、例えば、米国特許箱３．９４４．６９４号明
細書、第４，０７３，９９６号明細書、第４．４２４，
１３４号明細書および第４．６６１，２６９号明細書に
開示のもの：固形石鹸、例えば、米国特許箱３，９９３
，７２２号明細書および第３，０７０，５４７号明細書
に開示のもの；シャンプー、例えば、米国特許箱４．３
４５．０８０号明細書、第４，７０４，２７２号明細書
および第４，７４１，８５５号明細書に開示のもの；制
汗剤、例えば、米国特許箱４．７２５，４３２号明細書
に開示のもの；抗アクネ製品、例えば、米国特許箱４，
３１８，９０７号明細書および第４，６０８，３７０号
明細書に開示のもの：および口腔用組成物、例えば、米
国特許箱４，６８４，５１８号明細書に開示のものとし
て処方できる。 組成物は、好ま

【７くは、良好な酵素性能のためにｐＨ
約４〜１０、より好ましくは約５〜約８を有する。 微生物除去に関する実験室研究は、有効な除去をｉｒＪ
るためには、若干の場合に微生物を保持する表面の水浴
が微生物を除去するために物理的または化学的作用を必
要とすることを示した。試験した微生物としては、下記
のものか挙げられるタイプ１および３フインブリエを含
めた大腸菌黄色ブドウ球菌 表皮ブドウ球菌 セラチア・マルセセンズ ストレプトコッカス・ミュタンズ ストレプトコッカス・サンダイス バチルスｓｐ。 カンジダｓｐ。 アスペルギルスｓｐ。 例えば、大腸菌などの細菌の除去の場合には、表面結合
微生物は、エンド−Ｈで処理し、次いで、化学的作用に
より、例えば、抗菌剤での処理により、または物理的作
用、例えば、水でのすすぎまたは手拭きにより除去して
もよい。液体および固形石鹸、歯エナメル質クリーナー
、制汗剤、制臭剤／ｌｉ帛柔軟柔軟剤び抗アクネ組成物
の場合には、組成物はエンド−Ｈに加えて、イルガサン
（ｌｒｇａｓａｎ　　）　　（チバーガイギー）、クロ
ルヘキシジンなどの抗菌剤を含有することが好ましい。 抗菌剤は、水すすぎ、手による拭き取りなどの物理的作
用か生ずる時には、組成物（例えば、硬質表面クリーナ
ー）で必要とされない。 洗剤クリーニング組成物、特に粒状および液体洗濯洗剤
組成物が、ここで好ましい。これらの洗剤クリーニング
組成物は、好ましくは、洗剤界面活性剤約１〜９０重量
％、より好ましくは約５〜５０重量％、最も好ましくは
約１０〜４０重量％を含む。 本発明の洗剤組成物で有用な界面活性剤としては、周知
の合成陰イオン界面活性剤、合成非イオン界面活性剤、
合成両性界面活性剤、合成双性界面活性剤か挙げられる
。洗浄技術から既知であるアルキルベンゼンスルホネー
ト、アルキルサルフェートおよびアルキルエーテルサル
フェート、バラフィンスルホネ−１・、オレフィンスル
ホネート、アルコキシ化（特にエトキシ化）アルコール
およびアルキルフェノール、アミンオキシド、脂肪酸の
α−スルホネートおよび脂肪酸エステルのαスルホネー
ト、アルキルベタインなどが、これらを代表している。 一般に、かかる洗剤界面活性剤は、Ｃ９〜Ｃ１８範囲内
のアルキル基を含有する。 陰イオン洗剤界面活性剤は、ナトリウム塩、カリウム塩
またはトリエタノールアンモニウム塩の形態で使用でき
る。非イオン界面活性剤は、一般に、約５〜約１７個の
エチレンオキシド基を含有する。 Ｃ１１〜Ｃ１６アルキルベンゼンスルホネート、０１２
〜Ｃ１８パラフインスルホネートおよびアルキノはルフ
ェートが、本発明の組成物で特に好ましい。 本組成物に好適な界面活性剤の詳細なリストは、米国特
許箱３，９３６，５３７号明細書に見出すことができる
。かかる界面活性剤の商業的源は、マツカーチエオンの
乳化剤および洗剤（ノース・アメリカン編、１９８４年
、マツカテエオン・デイビジョン、ＭＣパブリッシング
・カンパニー）に見出すことができる。 本発明の洗剤組成物に有用な洗浄性ビルダーとしては、
通常の無機および有機水溶性ビルダー塩のいずれが、並
びに各種の水不溶性のいわゆる「種入り」ビルダーが挙
げられる。本発明の洗濯洗剤組成物は、好ましくは、洗
浄性ビルダー約１〜７５重量％、より好ましくは約５〜
４０重量２６、最も好ましくは約１０〜２０重量％を含
む。これらの組成物は、好ましくは、ｐ　Ｈ約６〜１０
を有する。 好適な水溶性無機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の非限定
例としては、アルカリ金属の炭酸塩、ホウ酸塩、リン酸
塩、ポリリン酸塩、トリポリリン酸塩、重炭酸塩、ケイ
酸塩および硫酸塩が挙げられる。かかる塩の特定例とし
ては、ナトリウムおよびカリウムの四ホウ酸塩、重炭酸
塩、炭酸塩、トリポリリン酸塩、ピロリン酸塩、および
ヘキサメタリン酸塩が挙げられる。 好適な有機アルカリ性洗浄性ビルダー塩の例は、（１）
水溶性アミノポリ酢酸塩、例えば、ナトリウムおよびカ
リウムのエチレンジアミン四酢酸塩、ニトリロ三酢酸塩
、およびＮ−（２−ヒドロキシエチル）二トリロニ酢酸
塩；　（２）フィチン酸の水溶性塩、例えば、フィチン
酸ナトリウムおよびフィチン酸カリウム；　（３）水溶
性ポリホスホン酸塩、例えば、エタン−１−ヒドロキシ
−１，１〜ジホスホン酸のナトリウム塩、カリウム塩お
よびリチウム塩、メチレンジホスホン酸のナトリウム塩
、カリウム塩およびリチウム塩などである。 種入りビルダーとしては、炭酸カルシウム、硫酸バリウ
ムが種として入れられた炭酸ナトリウム、ケイ酸ナトリ
ウムなどの物質が挙げられる。粒径約５μ以下を有する
水和ナトリウムゼオライトＡが、特に望ましい。 好適な洗浄性ビルダーの詳細なリストは、米国特許第３
．　９３６，５３７号明細書に見出すことかてきる。好
ましいビルダーは、脂肪酸、ポリカルボキシレート、ポ
リホスフェートおよびそれらの混合物である。 任意の洗剤組成物成分としては、酵素（例えば、プロテ
アーゼおよびアミラーゼ）、過酸素漂白剤および漂白活
性剤、ハロゲン漂白剤（例えば、ジクロロイソシアヌル
酸ナトリウムおよびジクロロイソシアヌル酸カリウム）
、汚れ放出剤（例えば、メチルセルロース）、汚れ沈殿
防止剤（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウ
ム）、布帛増白剤、酵素安定剤、着色斑点防止剤（ｃｏ
ｌｏｒｓｐｅｃｋｌｅｓ）　、泡立て増進剤または抑泡
剤、耐食剤、染料、充填剤、殺菌剤、ｐＨ調整剤、非ビ
ルダーアルカリ性源などが挙げられる。 エンドグリコシダーゼプラス抗菌剤 ■型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−β−Ｎ−ア
セチルグルコサミニダーゼＨ，Ｄ、Ｆおよび／またはＰ
ＮＧａｓｅ　　Ｆが、抗菌組成物を処方するのに且つ本
発明の抗菌法で使用するのに好ましい。エンド−Ｈが、
最も好ましい。 ■型エンドグリコンダーゼを単独で使用する時には、■
型エンドグリコシダーゼは、その濃度が抗菌効果を生ず
るように処方する。抗菌組成物が少なくとも２種の異な
る成分、即ち、■型エンドグリコシダーゼおよび１種以
上の抗菌剤からなる時には、成分の各々は、抗菌効果を
生ずるのに十分な濃度で存在する。前記組成物中の少な
くとも１種の成分の瓜は、一般に、同様の組成物で単独
で使用するならば、成分が同じ抗菌効果を生ずるのに必
要とされる量よりも少ない。 ここで使用する「抗菌効果」は、単独または抗菌剤から
なる第二成分との組み合わせでの■型エンドグリコシダ
ーゼと接触する時に微生物の除去、殺すこと、増殖抑制
、全体の形態の変化、プロトプラスト形成および／また
は細胞壁の分解を包含する。 ここで使用する「抗菌法」は、抗菌効果を生ずる方法を
意味する。本発明の１アスペクトにおいては、抗菌法は
、微生物を殺すこと、微生物増殖の抑制、および／また
は微生物の全体の形態の変化を生ずる。本発明の別のア
スペクトにおいては、抗菌法は、表面からの微生物の除
去を生ずる。表面から微生物を除去するための抗菌法に
おいては、表面は、■型エンドグリコンダーゼで処理し
た直後に追加の抗菌剤で処理するよりもむしろ、抗菌剤
および■型エンドグリコシダーゼで同時に処理すること
が好ましい。抗菌法の若干の応用においては、組み合わ
された抗菌効果は生ずることがあり、例えば、殺すこと
および／または増殖抑制は、表面からの微生物除去との
組み合わせで生ずることがある。 ここで使用する「抗菌組成物」は、少なくとも２種の成
分：■型エンドグリコシダーゼ、および抗菌剤からなる
異なる成分を含有する組成物を意味する。かかる抗菌組
成物は、■型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤の量お
よび選択に応じて可変の抗菌効果を有する。観察された
抗菌効果は、微生物を殺すことおよび／または微生物増
殖の抑制、表面からの微生物の除去および表面への微生
物付着の防＋［−を包含する。 ７ ここで使用する■型エンドグリコンダーゼの「抗菌上有
効な濃度」は、一般に、抗菌効果を生ずるように微生物
と接触させるために単独で使用する■型エンドグリコシ
ダーゼの最終濃度を意味する。 ここで使用する「抗菌剤」は、抗菌組成物の第二の異な
る成分である。かかる抗菌剤は、一般に、抗生物質であ
り且つその例としては微生物を殺す薬剤および微生物増
殖を抑制するものが挙げられる。かかる抗菌剤の例とし
ては、殺細菌剤、殺真菌剤および殺藻薬（それらの各々
はそれぞれ細菌、真菌類または藻類を殺すかそれらの増
殖を抑制することができる）が挙げられる。殺細菌剤と
しては、クロルヘキシジン、２，４．４’　４リクロロ
−２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、トリクロカル
パン（Ｔｒｉｃｌｏｃａｒｂａｎ■）、ペニシリン、テ
トラサイクリン、バシトラシン（Ｂａｃｉｔｒａｃｉ口
　）などの化合物が挙げられる。殺真菌剤としては、ナ
イスクチン（Ｎｙｓｔａｔｉｎ■）、アンホテリシンＢ
（Ａｎｌｐｈｏｔｅｒｊｃｉｎ　　Ｂ■）、ベノミル（
Ｂｅｎｏ１１ｙｌ■）、８ カプタン（Ｃａｐｔａｎ■）およびジクロラン（１）ｉ
　ｃ旧ｏｒａｎ■）が挙げられる。抗菌剤の他の例とし
ては、界面活性剤安定性β−１，３−グルカナゼ、リゾ
チーム、プロテアーゼ、キチナーゼなどの界面活性剤安
定性抗菌酵素、当業者に既知の陰イオン界面活性剤、非
イオン界面活性剤、双性界面活性剤、両性界面活性剤、
陽イオン界面活性剤などの洗剤界面活性剤が挙げられる
。後者は、抗菌効果を生ずるのに十分な瓜で使用すべき
である。一般名称または商標によって同定される前記抗
菌剤は、メルク・インデックス、第１０版（１９８３）
（メルク・エンド・カンパニー・インコーホレーテッド
、ニューシャーシー州う−ウェイ）に同定のような組成
物である。 抗菌組成物の第一成分と異なる■型エンドグリコシダー
ゼは、抗菌剤としても使用してよい。かくて、■型エン
ドグリコシダーゼがそれら自体抗菌剤である程度で（例
えば、形態変化、プロトプラスト形成などの抗菌効果を
生ずることができる）、■型エンドグリコシダーゼは、
抗菌組成物を調製するために異なる■型エンドグリコシ
ダーゼと組み合わせてもよい。それゆえ、抗菌組成物は
、■型エンドグリコシダーゼを含まない１種以上の抗菌
剤の有無で１種以上の異なる■型エンドグリコシダーゼ
を含んでもよい。 ここで使用するのに好ましい抗菌剤は、クロルヘキシジ
ン、２，４．４’　−トリクロロ−２′ヒドロキンジフ
エニルエーテル、トリクロカルパン０、ナイスタチン■
、アンホテリンンＢＯ１抗生物質、陰イオン洗剤界面活
性剤および非イオン洗剤界面活性剤である。界面活性剤
安定性抗菌リゾチームは、本願と同日出願の同時係属米
国特許出願「成るリゾチームおよびエンドグリコシダー
ゼを使用する方法および組成物」に開示されている。他
のりゾチーム、例えば、鶏卵白リゾチームは、より低い
程度であるが抗菌効果を生ずるためにエンド−Ｈと併用
された（得られた結果は変動する）。 本発明の抗菌組成物および方法は、グラム陽性菌、グラ
ム陰性菌、真菌類、藻類を含めた広範囲の微生物に対す
る抗菌効果を生ずることができる。 かかる細菌としては、大腸菌、ストレプトコッカス・ミ
ュータンズ、表皮ブドウ球菌、および黄色ブドウ球菌が
挙げられる。かかる真菌類としては、カンジダ、サツカ
ロミセスなどの酵母、および種および糸状菌、例えば、
麹カビ（八ｓｐｅｒｇ］　ｌ　１ｕｓ）、スポロボミセ
ス（Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｃｓ）　、バシデイオポ
ラス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）　、エントモフトう
（１４ｎＬｏＩｌｏｐｈｔｈｏｒａ）が挙げられる。 ■型エンドグリコシダーゼ（例えば、エンドＨ，ＤＳＦ
および／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆ）を抗菌剤と組み合
イっせる特定の利点は、抗菌効果を生ずるのに抗菌剤が
少なくてすむことである。本発明の若干のアスペクトに
おいては、■型エンドグリコシダーセと併用する時の抗
菌剤は、表面に結合された微生物の除去またはかかる表
面への結合の防止からなる抗菌効果を生ずる。他のアス
ペクトにおいては、微生物生存度または微生物形態に対
する否定的効果がある。 ■型エンドグリコシダーゼおよび抗菌剤での１１ 同量」二の表面処理は、処理にさらされた表面への微生
物の更なる増殖または結合またはイ・１着を防止するた
めに定期的に行うことができる。 ■型エンドグリコシダーゼのうち、エンド−ＨｌＤ、Ｆ
および／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆが、好ましい。これ
らのうち、エンド−Ｈが最も好ましい。 一般に、抗菌剤と併用するのに抗菌−Ｌ有効な量の■型
エンドグリコンダーゼは、エンド−Ｈ，Ｄ。 Ｆおよび／またはＰＮＧａｓｅ　　Ｆ約１〜１２００ｐ
ｐｍ、好ましくはエンド−Ｈ約１〜１２００ｐｐｍ、よ
り好ましくはエンド−Ｈ約２０〜１１０００ｐｐ、最も
好ましくはエンドＨ約５０〜４００ｐｐｍである。使用
量は、処理の種類および処理すべき表面または微生物へ
の露出量に依存する。一般に、使用する抗菌剤の種類に
依存する有効量の抗菌剤は、クロルヘキシジンまたは２
．４．４’−１−ジクロロ−２′−ヒドロキシジフエニ
ルエーテル約０．５〜１２００ｐｐｍｓ好ましくは２〜
］−２００ｐｐｍ、最も好ましくは約５〜３５０　ｐ　
ｐ　ｍ　、またはナイスタチ２ ンｏＯ７５〜１１００ｐｐである。 ■型エンドグリコシダーしか微生物を殺し且つ／または
抑制するために単独で使用する時には、実質」二より多
くの■型エンドグリコシダーゼの使用が、一般に必要と
される。例えば、エンド−Ｈ約１００１）Ｉ）　ｍ〜１
１０００ｐｐは、かかる濃度にさらされた酵母細胞の生
存度を実質上減少することを示した。しかしなから、酵
母をエンド−−Ｈ１００ｐｐ未満にさらした時には、生
存度の有意な減少が観察されなかった。酵母生存度に悪
影響を及はずのに必要なエンド−Ｈの下限はまだ確認さ
れていないが、抗菌上有効な濃度の下限は、１０〜１１
００ｐｐであると信じられる。同様の量のエンド−Ｈは
、藻類、真菌類などの他の微生物を殺し且つ／または抑
制するのに有用であると信じられる。抗菌剤と併用しな
い時に、これらの生物および他のもの、例えば、細菌に
対するエンド−Ｈおよび他の■型エンドグリコシダーゼ
の正確な効果は、まだ確認されていない。しかしながら
、かかる生物に対して使用するための■型エンドグリコ
ンダーゼの抗菌」二有効な濃度の範囲は、普通に確認で
きる。 本発明の抗菌法および組成物は、広い応用性を有し且つ
パーソナルケア、健康ケアおよび家庭クリーニングおよ
び工業クリーニング用抗菌法および組成物を包含する。 かくて、かかる方法および組成物は、抗菌洗口料、歯み
がきまたは義歯クリナー、並びに抗菌液体または固体ハ
ンドまたはボディー石鹸、抗アクネ薬、制臭剤、シャン
プーおよびフェースクリームおよび傷を洗浄するか感染
を抑制するための組成物を処方し且つ使用するために使
用してもよい。典型的家庭応用としては、液体石鹸、硬
質表面クリーナー、液体洗濯洗剤、粒状洗濯洗剤などの
抗菌クリーニング製品が挙げられる。また、ヘビーデユ
ーティ−抗菌洗剤組成物は、工業用途のために処方して
もよい。 クロルヘキシジンは、有効な口腔抗菌剤であり［ｔつ両
心用で使用するのに好ましい。２，４゜４′　−トリク
ロロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテルは、チバー
ガイギーからイルガサン■Ｄ　Ｐ　３００として入手で
き旧つパーソナルケアおよび洗濯応用で有効な広スペク
トル抗菌剤である。 モンサンドからのトリクロカルパン■は、固形石鹸で有
用な静菌薬である。伝統的抗生物質も、ここで追加の抗
菌剤として使用できる。最後に、界面活性剤安定性抗菌
酵素は、歯部用およびシャンプーおよび他の界面活性剤
含ａ処方物の保存のために使用できる。好ま］−い界面
活性剤安定性抗菌酵素は、前記の同時係属の米国特許出
願に開示のリゾチームである。抗菌酵素の界面活性剤安
定性は、例えば、代表量のアルキルエーテルサルフェー
トまたは線状アルキルベンゼンサルフェートの存在下で
の保持活性によって、ここでは評価できる。 抗菌組成物は、抗菌洗口料、歯みがきまたは義歯クリー
ナーとして処方してもよい。抗菌効果を生ずるための（
例えば、口腔中の天然または合成軟質および／または硬
質表面への微生物結合を除去するか防止し、または口腔
中で微生物を殺すか増殖を抑制するための）微生物の処
理は、本質上５ 抗菌洗口料ですすぎ、歯を抗菌歯みがきでりＩＪ−ニン
グし、ｎつ／または義歯を抗菌義歯クリーナーでクリー
ニングすることからなる。本発明の抗菌洗口料、歯みが
きまたは義歯クリーナーは、好ましくはエンド−Ｈ５お
よび抗菌剤としてのクロルヘキシジンおよび／または界
面活性剤安定性抗菌酵素を含む。クロルヘキシジンを使
用する場合には、抗菌洗口料、歯みがきまたは義歯クリ
ーナーは、好ましくはエンド−Ｈ約５０〜１２００ｐｐ
ｍおよびクロルヘキシジン約５０〜３５０ｐｐｍを含む
。界面活性剤安定性抗菌酵素を使用する場合には、抗菌
洗口料、歯みがきまたは義歯クリーナーは、好ましくは
エンド−Ｈ約５０〜１５０　ｐ　ｐ　ｍおよび界面活性
剤安定性抗菌酵素約５０〜１．０００ｐｐｍを含む。 また、抗菌組成物は、抗菌パーソナルケアまたは家庭ク
リーニング製品として処方してもよい。 かかる製品においては、エンド−Ｈは、好ましくは濃度
約１〜１２００ｐｐｍで使用される。これらの製品で使
用するための抗菌剤は、好ましくは６ クロルヘキシジン、最も好ましくは濃度約１５０〜１２
００ｐｐｍのクロロへキシジン、または２゜４．４’　
４リクロロー２′−ヒドロキシジフェニルエーテル、最
も好ましくは濃度約２〜５００ｐｐｍの２．４．４’　
−トリクロロ−２′−ヒドロキシジフェニルエーテルで
ある。好ましいバソナルケアまたは家庭クリーニング製
品は、液体ハンド石鹸、硬質表面クリーナー、洗濯洗剤
およびンヤンプー（後述）である。 好ましい抗菌液体ハンド石鹸は、エンド−Ｈ約５０〜４
００ｐｐｍ、２，４．４’　−’ｔ−リクｏロー２７−
ヒドロキシジフェニルエーテル約５〜１１００ｐｐ、お
よび好ましくは洗剤界面活性剤約１〜４０重量％を含む
。好ましくは洗剤界面活性剤（好ましくは陰イオン界面
活性剤、非イオン界面活性剤、双性界面活性剤、両性界
面活性剤および陽イオン界面活性剤からなる群から選ば
れる）約２〜２０重量％、最も好ましくは約３〜１０重
量％が使用される。液体ハンド石鹸は、エモリエント（
約３０重量％まで）および微量の香料、着色剤、溶媒、
および乳白剤を更に含むことができる。 本発明の抗菌硬質表面クリーナーは、ガラスクリーナー
、研磨硬質表面クリーナー、磨きクレンザ−１または便
器クリーナーであることができる。 これらは、ハイポクロライド発生漂白剤および他のエン
ドグリコシダーゼ不相容性成分を実質上含むべきではな
い。好ましい硬質表面クリーナーは、約１．００〜１１
０００ｐｐのエンド−Ｈおよび抗菌剤、および洗剤界面
活性剤的０，１〜２０重塁％を含む。洗剤界面活性剤（
好ましくは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、
双性界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界面活
性剤からなる群から選ばれる）約２〜１０重量％が最も
好ましい。本発明の抗菌硬質表面クリーナーは、場合に
よって、研磨剤、ビルダー、希釈剤、溶媒、沈殿防止剤
（例えば、粘土、カルボキシメチルセルロース、および
ポリアクリレート）、香料および／または着色剤を更に
含む。 本発明の抗菌洗濯洗剤は、■型エンドグリコシダーゼお
よび抗菌剤に加えて、好ましくは洗剤界面活性剤（好ま
し７くは陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤、双
性界面活性剤、両性界面活性剤および陽イオン界面活性
剤からなる群から選ばれる）約１〜９０重間９６、より
好ましくは約５〜６０重量９６、最も好ましくは約１０
〜４０重足％を含む。好ましい液体または粒状抗菌洗濯
洗剤は、エンド−Ｈ約２〜２５０ｐｐｍ、２，４．４’
トリクロロ−２′　−ヒドロキシジフェニルエーテル約
２．５〜４０ｐｐｍ、および洗剤界面活性剤約１〜９９
重量９６、好ましくは約５〜６０重量９゜を含む。本発
明の抗菌洗濯洗剤は、場合によって、ビルグー、香料、
漂白剤、希釈剤、抑泡剤、着色剤、増白剤、汚れ沈殿防
止剤、再イ９着防１ト助剤、柔軟剤、および／または汚
れ放出剤を更に含む。 ここで使用するための抗菌シャンプーは、好ましくは、
エンド−Ｈ１抗菌剤、および洗剤界面活性剤（好ましく
はラウリルザルフェ−１−、イソエチオネート、アシル
アミドベタイン、アルキルグリセリルエーテルスルホネ
ート、およびアルキル９ エーテルサルフェートからなる群から選ばれる）約５〜
６０重量９６を含む。任意成分は、泡立て増進剤、コン
ディショナー、染料、着色剤、香料および／またはふけ
とり剤である。 また、本発明の抗菌組成物は、植物表面の処理用防腐剤
または微生物防除剤の形態であってもよい。果物または
野菜の表面用防腐剤または微生物防除用作物上に適用す
べき抗菌製品が、好ましい。 後者は、好ましくは、微生物増殖の防除および防＋Ｉｔ
のためにトウモロコシ、柑橘類、小麦、タバコ、大豆、
トマト、イチゴなどの作物上に噴霧すべき溶液の形態で
ある。 下記のものは、例として提示するものであって、本発明
の範囲を限定するものとは解釈すべきではない。 例１ 布帛からの血液および糞便の除去 加温（約３７℃）洗浄サイクルを使用して、血液および
糞便で汚れた別個の（綿布帛）見本を自動洗濯機中で市
販の洗剤で洗浄した。次いで、見１．００ 本をすすぎ、風乾した。次いで、見本を試験管中で３７
℃において５０ｍＭトリス−ＭＣＩ（ｐＨ７，０）０．
７５ｍ１中の各種の量および種類のエンドグリコシダー
ゼ〔（エンド−Ｄ（ベーリンガー・マンハイム・バイオ
ケミカル）０．００５Ｕ。 またはエンド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオ
ケミカル、カタログＮｏ、　７５２　９６７のＳ。 グリセウスから）およびＮ−グリカナーゼ（ＰＮＧａ　
ｓ　ｅ　　ＦまたはペプチドエンドグリコシダーゼＦ）
ゲンザイム０．２５Ｕ、マサチュセッツ州ボストン〕と
共に３０分間インキュベートした。コントロールは、緩
衝液を含有するが、エンドグリコシダーゼを含有しなか
った。インキュベーション期間の終わりに、ズブチリシ
ンＢＰＮ’　　８０μｇ／ｍｌを含有する洗剤溶液〔１
Ｍトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ７，５）中に染料、香料、酵
素または増白剤を含有しない市販の液体洗剤組成物の希
釈度１：１．２５）Ｏ５２５ｍｌをコントロールおよび
酵素含有試料に加え、追加の２０分間インキュベートシ
た。この処理の終わりに、試験管を遠心分離し、上澄み
液中のタンパク質含量は２８０　ｎｍでの吸光度を測定
することによって求めた。各処理の場合に、検定時に見
本を含有しない反応ブランクを調製した。ブランク値を
処理試料の吸光度から引いて、インキュベーション時の
２８０　ｎｍ吸収物質の放出を求めた。より高い吸光度
は、繊維からのタンパク質の増大された放出を表わす。 結果を表■に示す。 表■ コントロール　　　　０．７９　２．０７エンドーＤ　
　　　　　　Ｏ，８４２，１４エンド−ＨＯ，８３２，
１２ Ｎ−グリカナーゼ　　０．７８　２．　１０これらの結
果は、第二酵素ズブチリシンとの組み合わせのエンドグ
リコシダーゼ、エンド−Ｄおよびエンド−Ｈがコントロ
ールと比較して血液で汚れた見本からの２８Ｏｒ＋ｎ＋
吸収物質の放出を増大することを示唆した。更に、エン
ド−Ｄ、エンドＨおよびＮ−グリカナーゼは、ずべ′Ｃ
糞便で汚れた見本からの２８０　ｎｍ吸収物質の放出の
増大を示し、た。 例２ 糞便じろの除去に対するエンド−Ｈの効果糞便で汚れた
ナイロン布帛製見本を使用することによって行った以外
は、本例は例〕と同様である。見本を洗剤溶液中で洗浄
し、すすぎ、乾燥した。洗剤は、酵素、増白剤、染料ま
たは香料を含ｆｆシない市販の液体洗剤からなっていた
。１組の見本を別にし、「未処理コントロール」と称し
た。 これらの見本をエンド−Ｈて処理しない以外は、試料見
本と同じ方法で処理した。試料見本を３７°Ｃで緩衝液
（１０ｒｎＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ６，０）中のエンド
−Ｈ（ベーリンガー・マンノ−イム・バイオケミカル、
カタログＮｏ、７５２９６７）０、ＯＩＵと共に１５分
間インキュベートした。 次いて、洗剤溶液（１，０Ｍトリス−ＨＣＩ（１）Ｈ７
，５）中の希釈度１：１２５３０．２５ｍ１を加え、追
加の１５分間インキュベ１．０３ トした。終わりに、管を遠心分離し、１−澄み液を吸引
によって除去した。見本を風乾した。見本からの繊維を
走査電子顕微鏡測定によって調べた後、臨界点乾燥した
。糞便で汚れた洗剤洗浄見本の電ｒ−顕微鏡写真を第６
Ａ図に示す。わかるように、棒状細菌および粒状物が、
布帛の表面上に見出される。第６Ｂ図は、エンド−Ｈお
よび洗剤で処理された見本を示す。この図は、エンド−
Ｈおよび洗剤が粒状物および細菌デブリの除去を容易に
することを実証する平滑な清浄布帛を示す。 例３ 糞便しみに対するエンド−Ｆの効果 糞便で汚れた見本〔直径コーインチ（約２．５４ｃｍ）
）を洗剤溶液中で洗浄し、ずずぎ、乾燥した。 見本を四半分に切断し、下記実験で使用した。 Ａ、　見本を３７℃にお゛いて１０ｍＭ酢酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ５，５）１ｍｌ中でエンド−Ｆ（ベーリン
ガー・マンハイム・バイオケミカル）（０，１５ｊ、１
１位）の有無で３０分間インキュベートシた。次いで、
管を８分間遠心分離した。上澄０４ み液を除去し、各々の吸光度を２８　Ｏｎｌ１ｌてＡｌ
１１定した。Ａ２８０の変化は、適当なブランク（例１
参照）を引くことによ−〕で求めた。より高い吸光度は
、見本から放出された２８０ｎｍで吸収するタンパク質
または物質の量の増大を包含する。コントロールの場合
には、Ａ２８０の平均変化は、０．９３であった。エン
ド−Ｆで処理された見本の場合には、Ａ２８０の平均変
化は、１．０５であった。このことは、エンド−Ｆが糞
便しみ抜き効率を増大することを示した。 Ｂ、　見本を３７℃において１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ５，５）０．７５ｍ１中でエンド−Ｆ（０，
１５単位）の有無で１５分間インキュベートした。この
処理の終わりに、プロテアーゼズブチリシンＢＰＮ’　
　　１０μｇを含有する洗剤溶液（０，ＩＭＩ−リス−
ＨＣｌ　　（ｐＨ７，５）中）０．２５ｍ１を加え、管
を３７℃において別の１５分間インキュベートした。終
わりに、管を遠心分離し、上澄み液を除去し、２８０　
ｎｉての吸光度を測定した。コントロール（エンド−Ｆ
なし）の場合には、Ａ２８０の平均変化は、１．０８で
ある一方、エンド−Ｆで処理された試料は、Ａ２８０の
変化１．３６を示した。このことは、エンド−Ｆの効果
が洗剤の存在によって高められることを示した。 Ｃ１洗剤溶液がズブチリシンの代わりに１０ｍＭ２−メ
ルカプトエタノールを含有する以外は、ｒＢＪと同様の
実験を行った。コントロールの場合のＡ２８０の平均変
化は１．０５である一方、エンド−Ｆで処理された試料
は、Ａ２８０の変化１，２４を生じた。これらの結果は
、糞便じみを除去する、ジスルフィド切断試薬の存在下
におけるエンド−Ｆの能力を実証した。 Ｄ６　　洗剤溶液が１０ｍＭ２−メルカプトエタノール
およびズブチリシンＢＰＮ’　　　１０μｇを含有する
以外は、「Ｂ」と同様の実験を行った。 コントロールの場合のＡ２８０の平均変化は１．１４で
ある一方、エンド−Ｆ処理試料は、Ａ２８０の変化１．
２９を有していた。これらの結果は、エンド−Ｆが糞便
じみを洗剤、プロテアーゼおよびジスルフィド切断試薬
（２−メルカプトエタノール）の存在下において除去す
ることができることを示す。 例４ エンド−Ｈと他の酵素との比較 ズブチリシンなどのプロテアーゼを使用しない以外は、
エンド−Ｈ（ベーリンガー譬マンハイム・バイオケミカ
ル、カタログＮｏ、１００　１１９）および他のカルボ
ヒドラーゼ酵素を使用して例３のバー）Ｂに記載の実験
と同様の実験を繰り返した。Ａ２８０の変化を監視し、
繊維を走査電子顕微鏡測定によって調べた。布帛からの
粒状および細菌デブリの除去は、エンド−Ｈおよび「溶
解酵素」　（シグマ・ケミカル・カンパニーから得られ
るプロテアーゼとグリコナーゼとの混合物）の場合には
見られた。しかしながら、酵素、リゾチーム、α−グリ
コシダーゼ、β−グルコシダーゼおよびβ−グルコリナ
ダーゼは、はとんどまたは何の利益も示さなかった（結
果を示さず）。前記酵素の白゛無での処理の場合のこの
実験の電子顕微鏡０７ ７１１１１定の結果を第７Ａ図〜第７Ｈ図に示す。第７
Ａ図は、エンドグリコシダーゼて処理しなかったコント
ロールである。第７Ｂ図は、リゾチームで処理された見
本の電子顕微鏡写真である。第７Ｃ図は、エンド−Ｈで
処理された見本の電子顕微鏡写真である。第７Ｄ図は、
α−グルコシダーゼで処理された見本の電子顕微鏡写真
である。第７Ｅ図は、β−グルコシダーゼで処理された
見本の電子顕微鏡写真である。第７Ｆ図は、「溶解酵素
」で処理された繊維の電子顕微鏡写真である。第７Ｇ図
は、β−グルコリナダーゼで処理された見本の電子顕微
鏡写真である。第７Ｈ図は、キチナーゼで処理された見
本の電子顕微鏡写真である。わかるように、エンド−Ｈ
で処理された見本（第７Ｃ図）は、糞便じみを十分に取
り除いた。同様の結果は、第７Ｆ図に示すように「溶解
酵素」で処理された見本の場合に得られた。 例５ 固体表面からの細菌の除去 固体表面（ガラス）からの細菌の除去に対する０８ エンド−Ｈの効果を試験するために、下記プロトコール
を使用した。トリプトカーゼ大豆ブイヨン（Ｔ　Ｓ　Ｂ
）　　（１０ｍ１）にストック斜面培養からの微生物種
（黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ培養＃６５３８または大腸菌
ＡＴＣＣ培養＃１０５３６）を接種し、３７℃で一晩生
インキユベートした。 ＴＳＢ約１０８個の細胞／　ｍｌの懸濁液を調製腰この
懸濁液１００μｇをガラススライド上の食刻リング内に
入れた。各スライドを３７℃で乾燥インキュベーターオ
ーブン中でインキュベートした後、過剰の微生物溶液を
注ぎ出した。次いで、スライドを滅菌蒸留水１００μΩ
ですすいだ。次いで、過剰の溶液および緩い生物を注ぎ
出した。 細菌をガラススライドに付着した後（３７℃で２時間以
上）、下記溶液１００μｇを別個のスライドに適用した
：　　（ａ）１０ｒｎＭアセテート緩衝液（ｐＨ５，５
）、（ｂ）１０ｍＭアセテート緩衝液（ｐＨ５，５）十
エンド−Ｈ（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカ
ル、カタログＮｏ。 １００　１１９）ｌｐｐｍ、（ｃ）洗剤溶液、（ｄ）洗
剤溶液子エンド−Ｈｌｐｐｍ。一連のスライドを未処理
コントロールとして別にし、いかなる溶液でも処理しな
かった。次いで、非コントロールスライドを３７℃で１
５分間インキュベートした。インキュベーションの終わ
りに、溶液を注ぎ出した。次いで、スライドを滅菌蒸留
水１００μｇですすぎ、室温で風乾した。この処理後に
残る細菌を熱固定し、標準ダラム染色法によって染色し
た。次いで、スライドを光学顕微鏡（明視野イルミネー
ション、倍率］、２５Ｘ）によって調べ、生物／視野の
数を求めた。２０視野を各スライドの場合に計数し、そ
れから平均生物／視野を計算した。 下記結果が、得られた。 Ａ、黄色ブドウ球菌の場合 （ｉ）処理なし く１１）緩衝液 （ｉｉｉ）緩衝液子エンド−Ｈ （ｊｖ）洗剤溶液 （Ｖ）洗剤子エンド−Ｈ 〉１００生物／視野 〉１００生物／視野 ＜１０生物／視野 〉１００生物／視野 ＜１０生物／視野 これらの結果は、単独または洗剤との組み合わせでのエ
ンド−Ｈ緩衝液が洗剤単独での処理と比較してガラスス
ライド−にに保持された黄色ブドウ球菌細菌の数を１０
倍減少したことを示す。 Ｂ。大腸菌の場合 （ｉ）処理なし　　　　　　〉１００生物／視野（ｉｉ
）緩衝液　　　　　　　〉１００生物／視野（ｊＨ）緩
衝液＋エンド−Ｈ＞１．００生物／視野（ＩＶ）洗剤　
　　　　　　　〉１００生物／視野（Ｖ）洗剤」−エン
ド−Ｈ＜１０生物／視野これらの結果は、洗剤との組み
合イっぜのエンドＨか洗剤単独での処理と比較してガラ
ススライド上に保持された大腸菌の数を１０倍減少した
ことを示す。 例６ 固体表面からの細菌の除去 ２種の粘液産生黄色ブドウ球菌培養を使用して、例５と
同様の実験を行った（ポリスチレン管に結合する能力に
よって測定）。顕微鏡スライドは、ネールポリッシュを
有する２個のリング（直径１１ １．７ｃｍ）を成形することによって修正した。生物の
一晩の培養を１％ペプトン溶液で１：１０に希釈した。 希釈された培養（１００μｇ）をリングに入れた。スラ
イドを１５０ｃｍのペトリ皿に入れ、３７℃でインキュ
ベートした。２時間インキュベーション後、スライドを
蒸留水ですすぎ、例５と同様に３種の異なる条件（Ａ、
酢酸ナトリウム緩衝液、Ｂ、洗剤、Ｃ１洗剤プラスエン
ド−Ｈ１μｇ／ｍｌ）で処理した。エンド−Ｈは、Ｓ、
ブリ力タスからエンド−Ｈを産生ずるために形質転換さ
れた大腸菌から得られた。１５分の終イつりに、インキ
ュベーションスライドを蒸留水ですすぎ、ダラム染色し
た。細菌の数を２０視野の場合に顕微鏡／　１．００　
Ｘ視野下で計数した。結果を細胞／視野の平均数として
表現する。 条件　　　　　　　培養Ｉ　　培養■ Ａ、コントロール　　　　　２３　　２０２Ｂ、洗剤　
　　　　　　　　　９　　５８Ｃ１洗剤＋エンド−Ｈ２
３３ ］１２ 例７ 布表面からの細菌の除去 布表面からの細菌の除去に対するエンド−Ｈの効果を試
験するために、下記プロトコールを使用した。黄色ブド
ウ球菌（ＡＴＣＣ６５３８）および表皮ブドウ球菌（Ａ
ＴＣＣ１５５）をルリアのブイヨン５ｍｌ中で別個に培
養し、３７℃で１２時間増殖した。次いで、培養を２個
の振とうフラスコ中の０．２Ｍクエン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ５，５）緩衝液３０ｍ１に細胞約１０３個／ｍｌで加
えた。接種後に、１２個の布見本（０，５ＸＯ，５イン
チ（約１２．７Ｘ１２．７ｍｍ）の綿見本〕もフラスコ
に加えた。３７℃で穏やかな回転下に（１５０ｒｐｍ）
２時間インキュベーション後、見本を滅菌管に移し、０
，２２μ濾過によって予め滅菌された２００ｍＭクエン
酸ナトリウム（ｐＨ５，５）からなる緩衝液で３回洗浄
した。次いで、６個の見本をサイトレート緩衝液３０ｍ
１中にエンド−ＨＯ，５＋ｎｇ／ｍｌを含有する振とう
フラスコに加え、６個の見本をコントロールとしてサイ
トレート緩衝液のみを含有する振とうフラスコに加えた
。エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスエンドーＨを産生ずる
大腸菌から得られた。３７℃で穏やかな回転下に（１０
０ｒｐｍ）１．．５時間インキュベーンヨン後、見本を
滅菌管に移し、前記のように洗浄した。次いで、見本を
トリブチカーゼ大豆寒天プレート上に注意深く塗布し、
見本を覆うのに十分な液体トリビチカーゼ大豆寒天を上
に置いた。プレートを乾燥した後、３７℃で１８時間イ
ンキュベートし、切開スコープを使用して、布表面上の
黄色ブドウ球菌と表皮ブドウ球菌とのコロニーを計数し
た。 下記結果が、得られた。 Ａ、黄色ブドウ球菌の場合 コントロール　見本力たりコロニー　１．０３＋／〜２
４エンド−Ｈ見本力たりコロニー　５３＋／−１８エン
ド−Ｈ処理による細菌コロニーの減少率４９％。 Ｂ１表皮ブドウ球閑の場合 コントロール　見本力たりコロニー　５７＋／−１１エ
ンド−・Ｈ見本当たりコロニー　１８＋／−［エンド−
Ｈ処理による細菌コロニーの減少率７２９６゜ これらの結果は、エンド−Ｈ処理が布表面に何着した細
菌の数を顕著に減少させることを示す。 例８ エンド−Ｈの細菌への結合 下記実験は、■型エンドグリコシダーゼ、エンド−Ｈが
細菌黄色ブドウ球菌およびストレプトコッカス・ミュー
タンズ上の表面成分と相互作用するかどうかを確認する
ために実施した。かかる相互作用は、検出された。ここ
では完全には特徴づけられないが、この相互作用は、既
知ではなく且つ表面からかかる細菌を除去するエンド−
Ｈの前記能力の基準を構成することがある。 Ｒ，Ｊ、　　トリンブル等（１９８５）　、　Ｊ、　Ｂ
ｉｏｌＣｈｅｍ、、２６０．５６３８−５６９０に記載
の方法を修正することによって精製された形質転換大腸
菌からのエンド−ＨをＴ、　Ｖ、アップダイクおよびＧ
、　Ｌ、ニコルソン（１９８６）　ｒ　Ｍｅｔｈｏｄｓ
　ｉｎ］１５ Ｅｎｚｙｉｏｌｏｇｙ、　　１２１．、　７１．７−７
２５に記載の方法に従ってビオチンで標識した。かかる
標識後、エンド−Ｈは、糖タンパク質オボアルブミンと
の反応性の大部分を保持した。 ルリ７′のブイヨン中で増殖した黄色ブドウ球菌（ＡＴ
ＣＣ６５３８）およびデイフコ・プレインａ　バー　＋
＋　＊インヒユージョン培地（Ｄｉｆｃｏ　Ｂｒａｉｎ
ｃａｒｔ　Ｉｎｆｕｓｊｏｎ　ｍｅｄｉａ）中で増殖し
たストレプトコッカス・ミュータンズ（ＡＴＣＣ２７６
０７）の−晩培養を遠心分離し、２００ｍＭクエン酸ナ
トリウム（ｐＨ５，５）緩衝液で３回洗浄し、同じ緩衝
液中で細胞約１０９個／ｍｌの濃度に懸濁した。アリコ
ート０．５ｍｌを３１．５ｍ）のエッペンドルフ（Ｅｐ
ｐｃｎｄｏｒｆ）管に入れ、各種の条件および時間ドで
インキュベーションた。 １］６ ０．２Ｈ Ｑ、　　５ｍｌ　　　５７１ｇ　　　　　　　　　　０
．　５ｍｌ　　　３００．５ｍ１．　　　−　　　　５
ｕｎ　　　　　０．５ｍｌ　　　　２０．５＋ｎｌ　　
　　−５ｔｔｆ）　　　　　０．５ｍｌ　　　３０遅速
ロツカーを使用して、インキュベーションを室温で２分
または３０分間行った。トリス緩衝化食塩水中で希釈さ
れたＢＳＡ　（ウシ血清アルブミン）をコントロール溶
液として使用して、細胞に結合する非特異性タンパク質
を防止した。インキュベーション後、管を遠心分離し、
上澄み液を捨てた。２％ＢＳＡ溶液での２回の細胞洗浄
は、ＢＳＡ　　１．０ｍｌを細胞に加え、よく渦巻き、
遠心分離し、上澄み液を捨てることによって行った。 洗浄された細胞にスト１／タビジンーＨＲＰ　（ストレ
ブタビジン標識ホースラディシュベルオキシダーゼ、カ
ーケガード・エンド・ベリー・ラボラトリーズ・インコ
ーホレーテッド）０．５ｍｌを使用し、室温で３０分間
インキュベートした。管を再度遠心分離し、前記のよう
に洗浄した。細菌細胞に結合するエンド−Ｈの検出は、
ＨＲＰ−スト１／プタビジン（これは細胞に結合された
ビオチン化エンド−Ｈに非常に堅く結合するであろう）
の検出によって確認した。ＨＲＰ検出は、過酸化水素を
含有するサイトレートホスフェ−１・緩衝液中で希釈さ
れたＩ（ＲＰ基質ＯＰＤ　（ｏ−フェニレンジアミン）
０．５ｍｌを加えることによって確認した。ＯＰＤを加
えてから１分後に、色原体発生を２Ｍ　Ｈ２ＳＯ４で消
した。細胞を遠心分離し、上澄み液を４９０ｎｍで読ん
だ。 下記結果が得られた。 黄色ブドウ球菌の場合 ０Ｄ４９０ｎｉ コントロール　　　　　　　　　０．１３エンド−Ｈ，
２分　　　　　　　１．８９エンド−８１３０分　　　
　　　１．９０ストレブトコッ力スーミュータンズの場
合０Ｄ４９０ｎｎ＋ コントロール　　　　　　　　　０．１８エンド−Ｈ，
２分　　　　　　　３．７６工ンドーＨ１３０分　　　
　　　３．８０これらの結果は、細菌黄色ブドウ球菌お
よびストレプトコッカス・ミュータンズへのエンド−Ｈ
の結合があることを示す。データは、結合するエンド−
Ｉ（の大部分が細胞との接触後最初の２分以内で生ずる
ことを示す。ストレプトコッカス・ミュータンズの場合
に得られたより高い吸光度は、より高い水準のエンド−
Ｈ結合を示すことがある。 １９ 例９ 本発明のヘビ デユーティ−液体洗濯洗剤組成 物は、 次の通りである。 成分 活性成分 重量％ ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム０．３０ 水酸化カリウム 水酸化ナトリウム １．８０ ３．８５ ギ酸カルシウム ギ酸ナトリウム ０．１２ ０．８６ 水 染料 ３５．１２ ０．０８ エンドグリコシダ ゼＨ ２０００ｐｐｍ 註 ２０ 前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに現われる順
序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加え
る前に、混合物のｐＨは、２０℃の水中の１０重重量溶
液がｐＨ約８．５を有するように調整する。 この組成物は、プロテアーゼ含有洗剤および／またはア
ミラーゼ含有洗剤と比較してさえ、炭水化物含有しみの
優れたクリーニングを与える。 例１０ 本発明のへビーデユ ティー液体洗濯洗剤組成 物は、 次の通りである。 成分 活性成分 重量％ ジエチレントリアミン五酢酸ナトリウム０．３０ 水酸化カリウム 水酸化ナトリウム １．８０ ３．８５ ギ酸カルシウム ギ酸ナトリウム ０．１２ ０．８６ 水 染料 ３７．１．２ ０．０８ ドグリコシダーゼＨ １，２５ｐｐｍ 註 前記成分をｉｐ−攪拌機をａする混合タンクに現われる
順序で加える。プロテアーゼ酵素、染料および香料を加
える前に、混合物のｐＨは、２０℃の水中の１０重量９
６溶液がｐ　Ｈ約８．５を有するように調整する。 この組成物は、炭水化物含有しみ、特に糞便じみの優れ
たクリーニングをりえる。 エンドＨｉを０．４０＋ｎｇ／ｍｌに減少し、水を３５
．７２に減少し■つ１％イルガザン（チバガイギー製の
抗菌剤）を加える時に、本発明の他の組成物が得られる
。 ２３ 例］１ 本発明の液体石鹸組成物は、次の通りである。 成分　　　　　　　　　　　　　活性成分重量％ラウリ
ル硫酸アンモニウム　　　　　６，０ラウリルザルコシ
ン酸すトリウム　　５．７ココアミドプロピルベタイン
　　　　　６．３ココナツツ脂肪酸　　　　　　　　　
　１．０第四級アミン　　　　　　　　　　　　０．３
エチレンジアミン四酢酸　　　　　　　０，２硫酸アン
モニウム　　　　　　　　　　０．４香料　　　　　　
　　　　　　　　　　０２５力トン　　　　　　　　　
　　　　　５ｐｐｍ水　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　７２，０エンドグリコシダーゼＨｌｏ０
０ｐｐｍトリクロカルパン　　　　　　　　　　１５０
前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに上に現われ
る順序で加える。 この組成物は、グリコシダーゼを含有しない抗菌石鹸と
比較した時にさえ、普通の皮膚フローラの除去用抗菌作
用を与える。 ２４ 例１２ 本発明の硬質表面磨きクレンザ−は、次の通りである。 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％偽稠度流
体相（比重１．　１）　　　　　　　９Ｌ５バラザムＮ
ＡＳ−１，００４，２５ （ナトリウムサポナイト粘土） ピロリン酸四カリウム　　　　　　　　　　６．００リ
ン酸玉カリウム　　　　　　　　　　　　２．００次亜
塩素酸ナトリウム漂白剤　　　　　　０．９０ラウリル
アルキル硫酸ナトリウム　　　　０．２５界面活性剤 染料および香料　　　　　　　　　　　　　０．２６エ
ンドグリコシダーゼＨ１０００ｐｐＩ１１軟水　　　　
　　　　　　　　　　　　　７８．８６研磨剤（膨張パ
ーライト、比重２，０、平　５．。 均粒径５０μ） ヘルコフラソト１３５充填剤（粉末状ポリ　　１．５０
プロピレン、比１１ｊ（］、９、平均粒径３５μ）研磨
剤／充填剤の平均粒径の比率−１，，４３：１組成物は
、次の通り調製する。偽稠度流体相を形成するのに必要
な程度で比較的高い剪断攪拌を使用１７て、ピロリン酸
四カリウム、リン酸三カリウム、ナトリウムサポナイト
粘土、染料、香料および脱イオン水を混合する。次いで
、アルキルサルフェート界面活性剤をこの混合物にブレ
ンドした後、ポリプロピレン充填剤物質をブレンドする
。 次亜塩素酸ナトリウムとパーライト研磨剤との別個の水
性スラリーを調製し、次いで、中位の剪断攪拌下に液化
しながら、偽稠度流体相にブレンドする。得られた磨き
組成物は、偽稠度であり、即ち、静止状態でゲル状であ
るが、剪断応力の適用によって容品に流動する。かかる
組成物は、硬質表面からのしみおよび汚れの除去に特に
有効である。 例１３ 本発明のンヤンブー組成物は、次の通りである。 成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　量アルキル
硫酸アンモニウム　　　　　　　５５．２５％（２９％
水溶液） 米国特許箱４，３４５，０８０号明細書　２．０の例Ｉ
のジンクピリジンチオン結晶 ココナツツモノエタノールアミド　　　　　３．０エチ
レングリコールジステアレート　　　　５．０クエン酸
ナトリウム　　　　　　　　　　　０．５クエン酸　　
　　　　　　　　　　　　　　　０，２着色剤溶液　　
　　　　　　　　　　　　　ｏ、ｉ香料　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．５エンドグリコシダーゼＨ
１０００１）ｐｎｌ水　　　　　　　　　　　　　　　
　　残部ｔｏｏ、ｏｏ％ ］２７ 例１４ 本発明の制汗剤スティックは、 して調製する。 成分 シクロメチコン 流体ＡＰ ステアリルアルコール ヒマシロウ タルク ジルコニウム／アルミニウム／グリシ ン複合体 芳香マスキング剤 Ｃ２ｏアルコール ピリドキサールホスフェート エンドグリコシダーゼＨ 下記成分を利用 量 ４２．５５ ４．９９ １１．４９ ４．９９ ６．９９ ２６．６７ ０．８０ ０．１２ １．００ ５００ｐｐｌＩ１ ２８ 例］５ 本発明の液体石鹸組成物は、次の通りである。 活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％ラウリル
硫酸アンモニウム　　　　　　　６，０アルキルサルコ
ンン酸ナトリウム　　　　５．７ココアミドブロビルベ
タイン　　　　　　６．３ココナツツ脂肪酸　　　　　
　　　　　　１．０エチレンジアミン四酢酸　　　　　
　　　０．２硫酸アンモニウム　　　　　　　　　　　
０．４香料　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
５染料　　　　　　　　　　　　　　　　　５ｐｐＩ。 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８
０．１５エンド−Ｈ５０ｐｐＩＩ１ ２．４．４’　４リクロロー２′−ヒ　１１００ｐｐド
ロキシジフエニルエーテル 前記成分を単一攪拌機を有する混合タンクに上に現われ
る順序で加える。染料および香料を加える前に、混合物
のｐＨは、２０℃の水中の１０重量％溶液がｐＨ約６．
５を有するように調整する。 この組成物は、普通の皮膚フロ 菌作用を与える。 うの除去用抗 例１６ 本発明の硬質表面クレンザ−は、次の通りである。 活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％ラウリル
アルキル硫酸ナトリウム　　　　０．５アルキル硫酸ナ
トリウム　　　　　　　　０．５ブチルカルピトール　
　　　　　　　　　４．０重炭酸ナトリウム　　　　　
　　　　　　０．５クエン酸　　　　　　　　　　　　
　　　　０．０４ホルムアルデヒド　　　　　　　　　
　　０，０３香料　　　　　　　　　　　　　　　　　
０゜０５タルトレートモノ／ジスクシネート　　　５．
０エンド−Ｈ１１０００ｐｐ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８
８，４前記底分を単一攪拌機を有する混合タンクに上に
現われる順序で加える。香料を加える前に、混合物のｐ
Ｈは、２０℃の水中の１０重量％溶液がｐＨ約７を有す
るように調整する。 この組成物は、硬質表面からの石鹸スカムおよびカビの
除去に有効であり■つエンドグリコシダゼなしのクレン
ザ−よりも効能がある。 例］７ 全果物、野菜または他の植物表面のクリーニングおよび
／または保存のために使用する組成物は、次の通りであ
る。 活性成分 成分　　　　　　　　　　　　　　　　重量％水　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９６．４
Ｃアルコールポリエトキシ　　　　０．１１２〜ｊ３ レート　（６，５） エンド−Ｈ３５００ｐｐｍ この組成物は、次の通り調製する。アルコールポリエト
キシレートおよびエンド−Ｈをそれぞれの量で水に混入
し、最終ｐＨを６〜７に調整する。 最終組成物は、全果物、野菜などの植物表面上に噴霧す
る時に、前記表面上の微生物増殖を防止する際に有用で
ある。 ３１ 例１８ エンド−Ｈによる抗菌剤の殺細菌効果の増強大腸菌の一
晩培養を新鮮な栄養ブイヨンに希釈し、３７℃で４時間
増殖した。細胞を遠心分離によって得、０．２Ｍクエン
酸ナトリウム緩衝液（ＳＣＢ、ｐＨ５，５）中で洗浄し
た。遠心分離後、細胞をＳＣＢに再懸濁した。下記管（
２回の実験）を調製した。 エンド−Ｈクロルヘキシジン エンド Ｈ２Ｏ０μΩ　　　　　０μρ　　　　　　０μｇ１０
μΩ エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスエンド−１（を産生ずる
大腸菌からであった。容管に細胞懸濁液７９０μｇを加
え（最終容量は今や１ｍ１）、試料１０μｇを０分コン
トロールとして取り出した。 管を３７℃で回転振とう機上でインキュベートし、試料
１０μｇを１時間および３時間で除去した。 アリコート１０μΩをＰＢＳ　（ホスフェート緩衝３２ 化食塩水）９９０μｇと混合しく希釈度１０’）、逐次
ＰＢＳ中に更に希釈した（１＋１０）（ＰＢＳ　　９０
０μρ中１００μｐ）。各希釈溶液１０μｇをルリアー
ベルタニ寒天プレート上に塗布した。プレートを３７℃
で一晩生インキユベトし、コロニーを計数した。管中の
コロニー形成細菌の数を施された希釈度に従って計算し
、この数の対数を更なるグラフおよび計算のために使用
した。 ０分　　　　　１時間　　　　３時間 条件　　　　　　　コントロール　（ｌｏｇ溶菌）　　
（ｌｏｇ溶菌）コントロール　　　　８．８２　　　８
．５７（０，０５）　　８．５３（０，０９）エンド−
Ｈ８，６４８，５５（０，０９）　　８．５５（０，０
９）００ｐｐｍ クロルヘキシジン ０ｐｐｍ ８．６０ ４．４２（４，１５） ２．４４（８，５９） エンド−Ｈ＋ クロルヘキシジン ００ｐｐｍ ８．６１ ２．４０（６，１７） ２．００　（＞（ｉ。５３） これらの結果を第８図にプロットする。わかるように、
エンド−Ｈ２００ｐｐｍは、クロルヘキシジン５０ｐｐ
ｍの殺細菌効果を高める。 同様の結果は、１時間の期間にわたって測定した時にク
ロルヘキシジンおよびエンド−Ｈのわずかに異なる濃度
の場合に得られた。これらの結果を第９図に示す。わか
るように、エンド−Ｈ１４０ｐｐｍは、クロルヘキシジ
ン４０ｐｐｍの効能を高める。 この効果を更に研究するために、エンド−Ｈの濃度を変
えながら、クロルヘキシジン２０ｐｐｍ（最終濃度）を
使用して、同様の実験を実施した。 結果を第１０Ａ図および第１０Ｂ図に示す。これらのプ
ロットは、コロニー形成単位（ＣＦ　Ｕ）のｌｏｇの変
化を表わす。わかるように、比較的線形の関係は、エン
ド−Ｈ約２８０ｐｐｍを通して加えられるエンド−Ｈの
量間に存在する。エンドＨ濃度の更なる増大は、クロル
ヘキシジン２０ｐｐｍとの組み合イつせでエンド−Ｈ少
なくとも１１０００ｐｐを通して細菌生存度に対する悪
影響を高める。 例１９ 真菌類の生存度に対する単独および抗菌剤との組み合わ
せでのエンド−Ｈの効果カンジダ・アルビカンズ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）の対数期培養を増殖し
、新鮮な増殖培地中に希釈（７，３７℃で攪拌下にイン
キュベートしながら、エンド−Ｈｏｌｌ、１０．１００
および１１０００ｐｐ　（最終濃度）で４時間処理した
。 エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスからエンド−Ｈを産生ず
るために形質転換された枯草菌からであった。希釈度１
倍、１０倍および１００倍を調製し、塗布して生存可能
な細胞計数を与えた。１９の場合には、エンド−Ｈ１，
Ｏｐｐｍはインキュベーション１８時間後に生存度を約
３６％だけ減少したが、エンド−ＨＯ〜１０ｐｐｍは、
細胞生存度を有意には減少しなかった。しかしながら、
エンド−Ｈ１１００ｐｐ　〜１１０００ｐｐは、４時間
処理した時に、エンド−Ｈで処理しないコントロールと
比較して、回収された生存可能な細胞の数をそれぞれ約
５０％〜８８％だけ減少した。 ３５− 別個の実験においては、カンジダ・アルビカンズの培養
を増殖し、新鮮な培地中に希釈し、３７℃で攪拌下にイ
ンキュベートしながら、エンドＨ０，１，１０，１００
または１０１０００ｐｐ最終濃度）に加えてナイスタチ
ン０２，５μｇ／ｍｌで１８時間処理した。希釈度１倍
、１０倍１００倍および１０００倍を調製し、塗布して
生存可能な細胞計数を与えた。エンド−Ｈは、ナイスク
チン　単独で得られたものと比較して次の通り回収され
る生存可能な細胞を減少した。 ｉｐｐｍ　　　　　　　　　　　　　６９％１０ｐｐｍ
　　　　　　　　　　　　　９３％１１００ｐＩ）　　
　　　　　　　　　　　９９％わかるように、エンド−
Ｈｌｐｐｍ程度でもナイスクチン　の殺菌効果を有意に
高める一方、エンド−Ｈ１０ｐｐｍおよび１１００ｐｐ
は、ナイスタチン０処理単独を生き延びる真菌類のほと
んどすべてを殺す。 濃度０．５μｇ　／　＋ｎ＋のアンホテリシンＢ■を使
用して、同様の実験を３時間実施した。結果は、３６ 次の通りであった。 エンド−Ｈｐｐｍ　　　　　生存度の減少率０ １　　　　　　　　１７％ １０　　　　　　　　　５％ １００　　　　　　　　　９６％ １０００　　　　　　　　　９４％ わかるように、エンド−Ｈ１１００ｐｐは、アンホテリ
シンＢ　の殺菌効果を高める。 例２０ 単独またはリゾチームとの組み 合わせてのエンド−Ｈの抗菌効果 大腸菌の４８時時間式培養（ＡＴＣＣ ３１６１，７）を使用して単独または洗剤および／また
はエンド−Ｈとの組み合わせでのりゾチームムタノリシ
ン（シグマ・ケミカル費カンパニー）の効果を試験した
。エンド−Ｈは、Ｓ、プリカタスからエンド−Ｈを産生
ずるために形質転換された大腸菌からであフた。下記プ
ロトコールおよび結果が、３７℃で２時間処理した後に
得られた。 Ｈへｎ寸い［Ｆ］ト■Ｏ ドーＨおよびムタノリシンにさらされた細菌の全体の形
態は、有意に修正された。エンド−Ｈを単独または洗剤
との組み合わせで使用する時に、最も劇的な効果がｐＨ
７で生じた。しかしながら、細胞生存度は、明らかには
影響されなかった。エンド−Ｈおよびムタノリシンは、
緩衝液コントロルと比較して塗布実験で得られたコロニ
ーの数を減少しなかった。 例２】 エンド−ＨおよびＰＮＧａｓｅ　　Ｆ によるガラス表面からの細菌除去 大腸菌（ＡＴＣＣ３１，６１７）および表皮ブドウ球菌
（ＡＴＣＣ１５５）を使用してガラススライドに接種し
た。各スライドは、２個の食刻用を含みｎつ各々に大腸
菌または表皮ブドウ球菌を接種した。細菌を３７℃で２
時間インキュベートさせた。 蒸留水ですすいだ後、スライドを（１）ＰＢＳ緩衝液、
（２）ＰＢＳ緩衝液中のエンド−Ｈ（１００ｐｐｍ）、
または（３）ＰＢＳ緩衝液中３９− のＰＮＧａｓｅ　　Ｆ　（１００ｐｐｍ）で処理した。 エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスエンドーＨを産生ずる大
腸菌に由来した。３７℃で３０分後、スライドを蒸留水
中ですすいだ。グラム染色後、スライドを光学顕微鏡で
ブライト視野オプティックスで読んた。 緩衝液コントロールの場合には、スライドに残る細菌の
数は、１００個／視野よりも多かった。 エンド−Ｈで処理されたスライドは、はるかに少ない細
菌を含有していた。表皮ブドウ球菌の場合には、約１〜
３個の細菌のみが視野当たり観察された。大腸菌の場合
には、約５〜１０個が視野当たり観察された。ＰＮＧａ
ｓｅ　　Ｆで処理されたスライドの場合には、細菌の中
位の数が表皮ブドウ球菌と大腸菌との両方の場合に観察
された（約２０個／視野）。 これらの結果は、ＰＮＧａｓｅ　　Ｆがエンド−Ｈ程効
率的ではないかガラス表面から細菌を除去することがで
きることを示した。 ４０− 例２２ エンド−Ｈを有する錠剤義歯クリーナー重炭酸ナトリウ
ム、過ホウ酸ナトリウム］水和物、酒石酸、トリポリリ
ン酸ナトリウム、スルファミン酸、ポリエチレングリコ
ール（分子■２０．０００）およびエチレンジアミン四
アセテトは、熱風床中て６０〜６５℃において３０分間
流動化することによって別個に造粒する。次いで、かか
る粒状物は、他の成分とタンブル混合して「第−層」混
合物および「第二層」混合物を調製する。そして、「第
−層」混合物は、下記組成を有する。 重炭酸ナトリウム 酒石酸 一過硫酸カリウム スルファミン酸 ピロリン酸二ナトリウム 炭酸ナトリウム ポリエチレングリコール 硫酸ナトリウム ペパーミント粉末 二酸化ケイ素 ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム重量％ ３０．００ ２３．００ ＋、６．００ １１、（１０ ８，２０ ３，９０ １２，６０ ２，００ ２，５０ １，３０ ０，５０ 「第二層」混合物は、下記組成を有する。 重量％ 過ホウ酸ナトリウム１水和物　　　　　　３０．００−
過硫酸カリウム　　　　　　　　　　２８．００重炭酸
ナトリウム　　　　　　　　　　　１．３．３４トリポ
リリン酸ナトリウム　　　　　　　１０．００重炭酸ナ
トリウム／着色剤　　　　　　　４．００トリロンＢ　
　　　　　　　　　　　　　　　３．口０炭酸ナトリウ
ム　　　　　　　　　　　　３，００ポリエチレングリ
コール　　　　　　　　２．５〇二酸化ケイ素　　　　
　　　　　　　　　２．００ペパーミント粉末　　　　
　　　　　　　１．５０ワザグエステル７　　　　　　
　　　　　０．７０ワサグエステル１５　　　　　　　
　　　０．７０硬化トリグリセリド　　　　　　　　　
　０゜５０ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム　０
，４０スクシネート洗剤　　　　　　　　　　　０．３
０ブルーレークＮｏ、１　　　　　　　　　　　　０．
０８エンド−Ｈ１，００ｐｐｍ 錠剤は、次の通り調製する。３９個のステージ４３− ョンのホーン（ＩＩＯＲＮ）回転錠剤化プレス中で圧縮
する。圧縮は、２段である。最初に、「第二層」、青色
混合物を充填によって非常に低い圧力（１，０ｋＮ／錠
剤）に圧縮する。次いで、「第−層」、白色混合物を滴
下し、７０ｋＮ／錠剤にプレスする。このようにして、
錠剤４ｇを調製する（２．７ｇが青色、１．３ｇが白色
）。 錠剤を消費者によって水に溶解して、水中に入れられた
義歯を清浄化する。 例２３ エンド−Ｈを有するライトクリーム 水中油型口やけどめ乳濁液ベースを化学名またはコスメ
テイック、トイツレトリー・エンド・フラグレンス・ア
ソシエーション（ＣＴＦＡ）名で示される下記成分から
調製する。 ４４ 成分　　　　　　　　　　　　　重量％水相 メチルパラベン（防腐剤）　　　　　　　０．２０パン
テチン（モイスチャライザー）　　　０．１０カルボマ
ー９３４（増粘剤）０．０８ 水酸化ナトリウム、１０％（中和剤）　　１．．００エ
ンド−Ｈ１００ｐｐＩ１１ 精製水　　　　　　　　　　　　　　残部１００％ 油相 重鉱油　　　　　　　　　　　　　　　　４．００ステ
アリン酸、２回プレス　　　　　　　３，００（陰イオ
ン乳化剤） コレステロール（補助乳化剤）　　　　　　１．００セ
チルアルコール（補助乳化剤）　　　　　１．８０ヒマ
シ油（エモリエント）　　　　　　　　　■、ｏ。 バルミチン酸セチル（エモリエント）　　　１．．２０
オクチルジメチルＰＡＢＡ　（紫外線吸収剤）　　１．
４０プロピルパラベン（防腐剤）　　　　　　　０．１
０機械的攪拌機を備えた混合容器において、水酸化ナト
リウムおよびエンド−Ｈ水溶液以外の水および水相成分
を加え、約７５〜８０℃に加熱しながら混合して均一な
水性分散液を調製する。次いで、水酸化ナトリウム溶液
を水相に加え、混入して酸性カルボマー増粘剤を中和す
る。 別個の混合容器において、約８０〜８２℃に加熱しなが
ら、鉱油および油相成分を加え、混合して均一な油相を
調製する。高速機械的分散装置を使用して、加熱された
油相を加熱された水相にゆっくりと加える。均一な油／
水乳濁液が得られるまで、混合を続ける。乳濁液を室温
に冷却する。 所望ならば、水溶性染料などの任意の着色剤を好ましく
は約４５〜５０℃で乳濁液に混入し、芳香油を好ましく
は約３５〜４０℃で加える。エンド−Ｈを約３５〜４０
℃で乳濁液に混入する。 例２４ 豚の皮膚からの黄色ブドウ球菌の除去 培養０．１ｃｃを皮膚表面上に広げることによって、豚
の皮膚に黄色ブドウ球菌（コロニ１．２Ｘ１０７個／ｍ
ｌ）を接種した。生物を室温で皮膚上に２時間セットさ
せた。次いで、皮膚の２片を下記のもので３０秒間処理
した。 （１）未処理コントロール （２）水単独 （３）１０９ｇ石鹸液 （４）＃３＋エンドーＨ（２０ｐＩ）ｍ）（５）緩衝液
中のエンド−Ｈ２０ｐｐｍエンドーＨは、Ｓ、ブリ力タ
スからエンド−Ｈを産生ずるために形質転換された大腸
菌から得られた。処理後、試料を蒸留水中ですすぎ、２
％四酸化オスミウムに入れた後、ライター−ケレンベル
ガー固定液中で固定した。次いで、試料をオスミウムお
よびチオセミカルビゾン中で交互に加工した。臨界点乾
燥後、すべての試料をＳＥＭで調べた。顕微鏡写真を撮
影した。 黄色ブドウ球菌コロニーは、未処理試料、水処理試料、
またはブレーン石鹸処理試料上で豊富に見出された。例
えば、液体ハンド石鹸での処理の効果を実証する第１１
図参照。エンド−Ｈ処理試料は、生物の有意な損失を実
証した。例えば、液４７ 体ハンド石鹸プラスエンド−Ｈで処理した時の豚の皮膚
からの黄色ブドウ球菌の除去を実証する第１２図参照。 例２５ シャワーカーテンからのカビ除去 プラスチックシャワーカーテンを水道水で濡らし、暗所
に３週装置いた。その時間の終わりに、カビで覆われた
カーテンの小さい試料を下記のもので処理した。 （１）蒸留水 （２）＋ジョイ（Ｊｏｙ）洗剤２０００ｐｐｍ（３）十
エンド−Ｈ１０００１００ ０ｐｐ未処理 エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスからエンド−Ｈを産生ず
るために形質転換された大腸菌から得られた。処理は、
室温で１０〜１５秒続けた。綿モツプでの処理後、シャ
ワーカーテンを拭き取った。 第１３図は、得られた結果を示す。未処理コントロール
（右下の写真−中心の写真の右下部）は、巨視的と共に
微視的に豊富なカビおよびべと病粒４８ 子を示した。 蒸留水コントロール（右上の写真−中心の写真の右上部
）は、粒子が依然として残り且つ変色が明らかであるが
、より少ない生物を示した。 ジョイ処理コントロール（左下の写真−中心の写真の左
下部）は、水処理試料よりも少ない生物を示したが、変
色は依然として明らかであった。 エンド−Ｈ処理試料（左上の写真−中心の写真の左上部
）は、生物と変色との両方を含まなかった。 例２６ 布帛からの細菌除去 布帛見本をベトリ皿の大きさに切断した。追加の布帛を
加えて５％布帛ロード（接種せず）に達した。見本をオ
ートクレーブ中で１５　１ｂｓ１２１℃で１５分間滅菌
した。１９の布帛ロードが、各処理に必要である。ガラ
スピーズ（４０ｇ）および０．２Ｍサイトレート緩衝液 （ｐＨ７，０）１００ｍｌを２５０ｍ１の三角フラスコ
に入れた。フラスコにゴム栓およびアルミニウム箔で栓
をし、オートクレーブ中で滅菌した。 大腸菌を新鮮な栄養ブイヨンに継代培養し、３７℃で４
８時間インキュベートさせた。生強度トリブチカーゼ大
豆寒天プレート（１０ｇ１５００ｍｌ）を調製し、滅菌
した。冷却後、テトラゾリウム（１ｍｌ／ｊ２）を加え
た。 寒天プレートに次の通り接種した。 （１）４８時間培養からの系列希釈液を調製した（１：
１０、ペプトン水中で更に３個の管を通して１０倍の希
釈度）。 （２）その後、各見本に最終希釈液２ｍ１（１０４）を
接種した。 （３）次いで、見本を３７℃で２時間インキュベートし
た（２個の見本／処理）。 インキュベーション後、見本を次の通り洗濯した。 洗浄 ２５０ｍ１の三角フラスコ（滅菌）中の滅菌０．２Ｍサ
イトレート緩衝液（ｐＨ７，０’１１００＋ｎｌ＋ガラ
スピ一ズ４０ｇ＋第１４図に記載の処理剤（ＡＷＡはＳ
、ブリ力タスからエンドＨを産生ずるために形質転換さ
れた大腸菌がらのエンド−Ｈである）。振とうしながら
、２個の接種見本＋５％布帛ロードを作るための滅菌見
本を９５’Ｆ（約３５，０℃）で１２分間洗浄した。 すすぎ 洗浄後、見本は、振とうしなから、滅菌２回蒸留／脱イ
オン水１００　ｍｌ＋ガラスピーズ４０ｇを２５（ｌｌ
ｎ＋１の三角フラスコ（滅菌）に室温で２時間加えるこ
とによっＣずすいだ。 次いで、布帛見本をペトリ皿に入れ、テトラゾリウムを
杓゛する１／２強度トリブチカーゼ大豆寒天−，３ｍｌ
をトに置いた。４８時間インキュベーション後、コロニ
ーを＝１数した。 結果を第１５図に示す。これらの結果は、イルガザシ士
液体タイド２０６がタイドｌ↑１独と比較して細菌増殖
の２　　ｌｏｇ減少を与えることを示す。 しかしながら、エンド−Ｈ４［１）　ｐ　ｐ　ｍの添加
は、細菌増殖の別のｌ　ｏ　ｇｉｇ位を減少する。 ５１ 例２７ 酵母に対するエンド−Ｈの効果 カンジダ・アルビカンズおよびサツカロミセス３セレビ
シアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｅｅｒｅｖｉｓ
ｊａｃ）のブイヨン培養（１８時間）をＦ記のもので処
理した。 （１）０．２Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，５
） （２）＃１プラスエンド〜Ｈ（Ｓ、　ブリ力タスエンド
ーＨを産生ずる大腸菌から）２００ｐｐｍ処理は、３７
℃で２時間続けた。 処理後、各々のアリコー用・をポルムバ（１°ｏｒｍｖ
ａｒ）被覆２００メツシユ銅グリツド」二に塗布し、Ｔ
ＥＭによって調べた。検査の顕微鏡写真を撮影し、第１
５図および第１６図に提示する。 第１５Ａ図かられかるように、緩衝液単独で処理された
カンジダは１．良好な形態状態であった。 第１．５　Ｂ図に示すように、エンド−Ｈで処理された
カンジダは、物質を迅速な速度で漏出し、構造一体性を
失った。 ］５２ 緩衝液単独で処理されたサツカロミセスは、第１６Ａ図
かられかるように良好な形態状態であった。しかしなが
ら、エンド−Ｈで処理した時には、残るすべては、非常
に限定された膜状物貿易てあった。ｍｌ、６Ｂ図参照。 例２８ 大腸菌の生存度に対するエン ド−■とリゾチームとの効果 ラウリーブイヨン（ＬＢ）中で一晩生増殖された大腸菌
Ｋ　１２の培養をＬＢ中で１　：　１０００で重訳し１
．３７℃で４時間再増殖した。細胞を遠心分離し、洗浄
し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム（ＮＡ）緩衝液（ｐＨ５，
５）に再懸濁した。８個の管を次の通り設置した。 背番号　　　　１．２３．４５．６７．８細胞μｇ　　
　　８００　　８０（１８００８［１ＯＮＡ緩衝液μｇ
　　２００　　　−　　　−　　　２００工ンド＝Ｈμ
ｇ　　−２００２００ （ｌＩＩＩｇ／ｍ＋） エンド−Ｈは、Ｓ、ブリ力タスからエンド−Ｈを産生す
るために形質転換された枯草菌からであった。管を３７
℃で１時間インキュベートした。 管を遠心分離し、洗浄し、Ｏ，ＩＭ　　ＥＤＴＡを金白
゛する０、１Ｍリン酸ナトリウム（ＮＰ）緩衝液（ｐＨ
７，２）８．ＤＯμｇに再懸濁した。緩衝液または鶏卵
白リゾチーム溶液を次の通り管に加えた。 背番号　　　　１．２３．４５．６７．８ＮＰ緩衝液μ
ｆｆ　　　２００　　２００リゾチ一ムμｇ　　−２０
０２００ （１，ｍｇ／ｍりア リコート 成単位（ＣＦＵ）（Ａ欄）を求めた。３７℃で１時間イ
ンキュベーション後、アリコートを使用してＣＦＵを求
めた（Ｂ欄）。コロニー形成単位のｌｏｇを計算した。 ＩｏｇＣＦＵの減少は、ＡからＢを引くことによって求
めた。結果を以下に示す。 １ｏｇＣＦＵ 条件　　　　　Ａ　　　Ｂ　　　ｌｏｇｃＦＵの変化コ
ントロール　７．８９　７．９０　　　　　＋０．０１
エンド−Ｈ８，２１７，９２−０，２９（２００ｐｐｍ
） リゾチーム　　７．８７　７．６８　　　　−０．１９
（２ｏＯｐｐＩ１１） エンド−Ｈ＋　　８．１７　７．５３　　　　−０．８
４リゾチーム これらの結果は、エンド−Ｈとリゾチームとの組み合イ
っぜかエンド−Ｈまたはりゾチーム単独と比較して大腸
菌の生存度を減少することを示す。 例２９ 大腸菌の生存度に対するエンド−ＨとＴ４または鶏卵白
リゾチームとの比較 大腸菌細胞を洗浄し、０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（
ｐＨ５，５）中に懸濁した。細胞を２個の管に分割した
（１０ｍｌ）。１９の管に緩衝液のみを加え（コントロ
ール）、別の管にエンド−Ｈを加えた（処理）。エンド
−Ｈは、Ｓ、プリ力５５ タスからエンド−Ｈを産生ずるために形質転換された枯
つ菌からであった。細胞を３７°Ｃで１時間インキュベ
ートした。細胞を遠心分離し、洗浄し、０．１Ｍリン酸
すトリウム緩袖ｊｌ夜（ｐＨ７，２）に再懸濁した。細
胞を等分割し、緩げｉ液またはりゾチームのいずれかと
共にインキュベーションた。 鶏卵白（ＨＬ）およびＴ４　（ＴＬ）リゾチームをこの
実験で比較１７た。管を１．５時間インキュベーション
だ。試料を希釈し、インキュベーション前（Ａ）および
インキュベーション後（Ｂ）のＣＦ　Ｕ　、’ｆｌｌＪ
定のために塗布した。ＣＦＵのｌｏｇを求めた。下記結
果が、得られた。 １５に れらの結果は、Ｔ−４リゾチームもエンドＨとの組み合
わせで大腸菌の生存度を減少する際に台効であることを
示す。 例３０ エンド−Ｈでの７ＩＯ；れたおむつ材料の処理試料を汚
れたおむつから得た。各試料を分けた。 試料の左側をタイド２０００ｐｐｍおよびＢＰＮ’　　
［バチルス・アミロリフライファシェンス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｉｆａｃｊｅｎｓ）からの
ズブチリシンプロテアーゼ）ｐｐｍ中で洗浄した。右側
をタイド２０００ｐｌ）ｍ、、ＢＰＮ’　　　ｌｐｐｍ
およびエンド−Ｈ４０ｐｐｍ（ベーリンガー・マンハイ
ム・バイオケミカル、カタログＮｏ。 １００　１．１．９）中で洗浄した。各試料を９５丁（
３５，０℃）で１２分間洗浄した。２つの実験の結果を
第１７図および第１８図に示す。わかるように、第１７
図および第１８図の右側上のおむつ材料は、第１７図お
よび第１８図の左に示すタイド−プロテアーゼ処理おむ
つと比較して実質上受ない糞便じみを含む。 本発明の好ましい態様を説明したが、各種の修正を施す
ことができること、およびかかる修正は本発明の範囲内
であることを意図することは当業者に明らかであろう。 例中のエンド−Ｈの代わりにエンド−ＤまたはＦまたは
ＰＮＧａｓｅ　　Ｆを使用する時に、本発明の他の組成
物は、得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＮ−結合および〇−結合糖タンパク質の普通の
コア構造を示す図、第２図は各種の■型エンドグリコシ
ダーゼの場合の基質および既知の切断部位を示す図、第
３図は第２図のタンパク質アミノ酸、炭水化物残基およ
び切断部位の一般図、第４図はＮ−結合糖タンパク質の
コア構造、■型エンドグリコシダーゼの切断部位および
タンパク質および炭水化物１１１位と■型エンドグリコ
シダーゼでの切断時に生成するアグリコンおよび炭水化
物部分との間の関係を示す図、第５Ａ図〜第５Ｅ図はグ
リコシド含貞物質、微生物または■型エンドグリコシダ
ーゼと反応性の物質が弔独または第二酵素との組み合わ
せでの■型エンドグリコシダーゼての処理によって表面
から放出されることがある各種の機構を示す図、第６Ａ
図および第６Ｂ図は糞便で汚され且つエンド−Ｈで処理
されるか処理されないナイロン見本の繊維の形状を示す
電子顕微鏡写真（８１００Ｘ）、第７Ａ図〜第７Ｈ図は
糞便で汚された綿見本に対するエンド−Ｈおよび他のカ
ルボヒドラーゼ酵素の効果を示すための綿繊維の形状を
示す電子顕微鏡写真 （５０００Ｘ）　、第８図、第９図、第１０Ａ図および
第１０Ｂ図は大腸菌の生存度に対する各種の５９　− 鏡写真である。 濃度のエンド−Ｈおよびクロルヘキシジン単独または組
み合わせの効果を実証するグラフ、第１１図および第１
２図はエンド−Ｈを含有する洗剤組成物が豚の皮膚から
の黄色ブドウ球菌の除去においてエンド−Ｈを含有しな
い洗剤組成物よりも有効であることを実証するための生
物の形態を示す顕微鏡写真、第１３図はエンド−Ｈがシ
ャワーカテンからカビを除去する際に水または洗剤組成
物よりも有効であることを実証するだめの前記カーテン
繊維の形状を示す顕微鏡写真（中心の写真はシャワーカ
ーテンの一部分のものであり、他の４つの写真は中心の
写真の対応四分円の拡大図である）　、ｍ１４図は異な
る抗菌剤との組み合わせでのエンド−Ｈの抗菌効果を実
証するグラフ、第１５Ａ図〜第１５Ｂ図および第１６Ａ
図〜第］６Ｂ図は異なる種の酵母に対するエンド−Ｈの
効果を実証するための繊維の形状を示す顕微鏡写真、第
１７図および第１８図はエンド−Ｈを含有する洗剤組成
物によるおむつ材料からの糞便の高められた除去を実証
するための繊維の形状を示す顕微１６〇　−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、物質、好ましくは糖タンパク質含有物質、より好ま
   しくはII型エンドグリコシダーゼ反応性物質の少なくと
   も一部分を、免疫学的結合以外によって結合された表面
   から放出するにあたり（前記物質は前記表面に結合され
   た近位部分、前記近位部分から外方に延出する遠位部分
   、およびII型エンドグリコシドダーゼと反応性である前
   記近位部分と遠位部分との接合点に配置された結合を有
   する）、前記結合をII型エンドグリコシダーゼで切断し
   て前記遠位部分を前記近位部分から放出することを特徴
   とする物質の少なくとも一部分を放出する方法。 ２、グリコシド含有物質、好ましくは糖タンパク質含有
   物質の少なくとも一部分を放出するにあたり（前記グリ
   コシド含有物質は少なくとも炭水化物部分、アグリコン
   部分、および前記炭水化物部分とアグリコン部分との接
   合点におけるグリコシド結合を有し、前記物質は前記炭
   水化物部分を通して表面に結合されている）、前記グリ
   コシド結合をII型エンドグリコシダーゼと反応させるこ
   とによって切断して、前記グリコシド含有物質のアグリ
   コン部分を前記炭水化物部分から放出することを特徴と
   するグリコシド含有物質の少なくとも一部分を放出する
   方法。 ３、表面に結合された少なくとも１個のグリコシド結合
   を有するグリコシド含有物質、好ましくは糖タンパク質
   含有物質の少なくとも一部分を放出するにあたり、前記
   結合グリコシド含有物質を少なくとも第一酵素および第
   二酵素と接触して（前記第一酵素は前記グリコシド結合
   からなる第一結合と反応性のII型エンドグリコシダーゼ
   であり且つ前記第二酵素、好ましくはズブチリシンまた
   は突然変異ズブチリシンは前記第一グリコシド結合以外
   の前記結合グリコシド含有物質中の第二結合と反応性で
   ある）、前記第一酵素および前記第二酵素の切断によっ
   て生成された前記表面から遠位の前記グリコシド含有物
   質の部分を前記表面から放出することを特徴とするグリ
   コシド含有物質の少なくとも一部分を放出する方法。 ４、グリコシド含有物質、好ましくは糖タンパク質含有
   物質が結合された表面をクリーニングするにあたり、前
   記グリコシド含有物質を前記グリコシド含有物質中のグ
   リコシド結合と反応性のII型エンドグリコシダーゼと接
   触させて、前記物質の少なくとも一部分を前記表面から
   放出することを特徴とする表面のクリーニング法。 ５、表面に結合された少なくとも１個のグリコシド結合
   を有するグリコシド含有物質、好ましくは糖タンパク質
   含有物質の少なくとも一部分を放出するにあたり、前記
   結合グリコシド含有物質をII型エンドグリコシダーゼお
   よび洗剤と接触して（前記II型エンドグリコシダーゼは
   前記グリコシド結合と反応性である）、前記グリコシド
   結合から遠位の前記グリコシド含有物質の切断部分を前
   記表面から放出することを特徴とするグリコシド含有物
   質の少なくとも一部分を放出する方法。 ６、前記II型エンドグリコシダーゼが、糖タンパク質の
   タンパク質炭水化物単位接合点の最初の３個のグリコシ
   ド結合内、好ましくは最初の２個のグリコシド結合内の
   少なくとも１個のグリコシド結合を切断することができ
   、且つより好ましくはＮ結合またはＯ結合糖タンパク質
   のコア構造内の少なくとも１個のグリコシド結合を切断
   することができる、請求項１ないし５のいずれか１項に
   記載の方法。 ７、前記表面から放出された前記物質の部分を、洗浄液
   または洗剤を含有する流体と接触させて、前記部分を前
   記洗浄液または前記流体中で前記表面から除去する、請
   求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。 ８、前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド−β−Ｎ
   −アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−α−Ｎ−アセ
   チルガラクトサミニダーゼおよびエンド−β−Ｎ−ガラ
   クトシダーゼからなる群から選ばれ、好ましくはエンド
   −Ｄ、エンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−Ｃ、エンド−
   ＣII、エンド−Ｆ−Ｇａｌ型、エンド−ＦおよびＰＮＧ
   ａｓｅＦからなる群から選ばれ、より好ましくはエンド
   −Ｈである、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の
   方法。 ９、前記物質をジスルフィド切断試薬または界面活性剤
   と接触させることを更に含む、請求項１ないし８のいず
   れか１項に記載の方法。 １０、第一酵素および第二酵素を含むクリーニング組成
   物であって、前記第一酵素はII型エンドグリコシダーゼ
   であり且つ前記第二酵素、好ましくはズブチリシンまた
   は突然変異ズブチリシンはプロテアーゼ、リパーゼ、ヌ
   クレアーゼ、前記第一酵素とは異なるグリコシダーゼ、
   好ましくはエキソグリコシダーゼ、およびそれらの組み
   合わせからなる群から選ばれることを特徴とするクリー
   ニング組成物。 １１、洗剤界面活性剤（好ましくは陰イオン界面活性剤
   、非イオン界面活性剤、両性界面活性剤、双性界面活性
   剤および陽イオン界面活性剤からなる群から選ばれる）
   またはジスルフィド切断試薬を更に含む、請求項１０に
   記載の組成物。 １２、洗剤界面活性剤を含む組成物であって、II型エン
   ドグリコシダーゼを追加的に含むことを特徴とする組成
   物。 １３、前記II型エンドグリコシダーゼが、エンド−β−
   Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、エンド−α−アセチ
   ルガラクトサミニダーゼおよびエンド−β−Ｎ−ガラク
   トシダーゼからなる群から選ばれ、好ましくはエンド−
   Ｄ、エンド−Ｈ、エンド−Ｌ、エンド−Ｃ、エンド−Ｃ
   II、エンド−Ｆ−Ｇａ型、エンド−ＦおよびＰＮＧａｓ
   ｅＦからなる群から選ばれ、より好ましくはエンド−Ｈ
   である、請求項１０、１１または１２に記載の組成物。 １４、表面からのグリコシド含有物質の除去に有効な量
   のII型エンドグリコシダーゼ（好ましくはエンド−Ｈ、
   エンド−Ｆおよびエンド−Ｄからなる群から選ばれる）
   を含むことを特徴とするクリーニング組成物。 １５、ｐＨ４〜１０、好ましくは５〜８を有する、請求
   項１４に記載のクリーニング組成物。 １６、プロテアーゼ酵素を更に含む、請求項１４または
   １５に記載のクリーニング組成物。 １７、洗剤界面活性剤１〜９０重量％、好ましくは５〜
   ５０重量％を更に含む、請求項１４、１５または１６に
   記載の洗剤組成物。 １８、洗浄性ビルダー（好ましくは脂肪酸、ポリカルボ
   キシレート、ポリホスフェート、およびそれらの混合物
   からなる群から選ばれる）１〜７５重量％、好ましくは
   ５〜４０重量％を更に含む、請求項１４、１５、１６ま
   たは１７に記載の洗濯洗剤組成物。 １９、洗剤界面活性剤１０〜４０重量％、洗浄性ビルダ
   ー１０〜２０重量％およびエンドＨ、エンド−Ｆまたは
   エンド−Ｄ２０ｐｐｍ〜２００ｐｐｍを含む、請求項１
   ８に記載の液体洗濯洗剤組成物。 ２０、グリコシド含有物質、好ましくはII型エンドグル
   コシダーゼ反応性物質、より好ましくはＮ−アセチルグ
   ルコサミン含有物質を表面から除去するにあたり、前記
   物質を、物質が結合されるか埋設された表面からの前記
   物質の除去に有効な量の請求項１０ないし１７のいずれ
   か１項に記載の組成物と接触させることを特徴とするグ
   リコシド含有物質を表面から除去する方法。