JP2820402B2 - 補体成分Ｃ５ａに対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野）この発明は、ヒトＣ５ａ糖蛋白質
又はそのｄｅｓ−ａｒｇ誘導体に特異的に結合しそして
ヒトＣ５ａ及びそのｄｅｓ−ａｒｇ誘導体の不都合な生
物学的効果をブロックすることが見出されたモノクロー
ナル抗体に関する。この発明はまた、この様な抗体を使
用する免疫学的及び免疫診断的方法に関する。 （従来の技術）ヒトＣ５ａは１１，３００ダルトンの分
子量を有する糖蛋白質であり、この分子量の内８，２８
５ダルトンはポリペプチドであり、そして残りは炭水化
物である〔Ｈｕｇｌｉ及びＭｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａ
ｒｄ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２６：１（１９７
８）〕。Ｃ５ａは古典的な補体活性化方法及びこれに代
る補体活性化方法の両者における補体蛋白質Ｃ５の開裂
生成物として生成する。ヒトＣ５ａはアナフィラトキシ
ン活性、走化性活性、収縮性活性及び浸透性増強活性を
有する（Ｈｕｇｌｉ及びＭｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒ
ｄ，前掲）。ヒトＣ５ａのアナフィラトキシン活性は広
範に研究されており、そしてＣ５ａは肥満細胞及び好塩
基球から最大量のヒスタミンを放出することが示されて
いる。Ｃ５ａは血清中のカルボキシペプチダーゼにより
生体内で急速にｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに転換され
る〔Ｂｏｋｉｓｃｈ等，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１２
９：１１０９（１９６９）〕。このＣ５ａ誘導体は非常
に低下したアナフィラトキシン活性、収縮性活性及び浸
透性増強活性を有するが、高い走化性活性を維持してい
る。アスパラギン−６４の側鎖に結合しているヒトＣ５
ａの炭水化物成分はまた、そのアナフィラトキシン活
性、収縮性活性、及び浸透性活性を調節するものと考え
られる〔Ｇｅｒａｒｄ及びＨｕｇｌｉ，ＰＮＡＳ（ＵＳ
Ａ），７８：１８３３（１９８１）〕。特異的Ｃ５ａレ
セプターがヒト好中球上に同定されている。精製された
ヒトＣ５ａに対するヒト好中球の走化性応答が０．４〜
１７ｎＭの濃度において観察されている（Ｃｈｅｎｏｗ
ｅｔｈ及びＨｕｇｌｉ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
７：１５１（１９８０））。この応答は一層高い濃度に
おいて低下する。熱傷患者から単離された好中球におい
て、走化性応答の一時的特異的喪失は熱傷４日後の免疫
反応性Ｃ５ａの上昇と関連している。血管内皮細胞への
好中球の付着は、炎症の組識部位に局在化するための血
管壁を通過しての好中球の移行における最初の事象であ
る。細胞への又は蛋白質がコートされたプラスチックへ
のＣ５ａにより又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａにより
刺激された好中球の付着は急速に起こり、そして好中球
はＣ５ａ自己凝集体に暴露される。Ｃ５ａは補体により
誘導される顆粒球集塊の原因物質であることが示されて
いる〔Ｃｒａｄｄｏｃｋ等，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓ
ｔ．，６０：２６０（１９７７）〕。この様なインビボ
集塊は、血液透析患者における肺機能不全及びロイコス
タシス（ｌｅｕｋｏｓｔａｓｉｓ）、外傷又は膵炎の後
の網膜の炎症を伴う突然の失明、心筋硬塞、心肺バイパ
ス手術後のポストパンプ（ｐｏｓｔｐｕｍｐ）症候群、
全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、成人呼吸苦痛症候群（Ａ
ＲＤＳ）、熱傷、並びに肺損傷のごとき臨床状態におけ
る組織損傷の機構と予想されている。Ｃ５ａと好中球と
の間の相互作用をブロックする方策には高投与量のコル
チコステロイドによる処置が含まれる〔Ｏ′Ｆｌａｈｅ
ｒｔｙ等，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅ
ｄ．，１５４：２０６（１９７７）〕。最近、Ｂｕｍｐ
ｅｒｓ及びＢａｕｍ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅ
ｄ．，１０２：４２１（１９８３）は培養されたウォル
カー（Ｗａｌｋｅｒ）肉腫癌細胞のための走化性因子の
形成のブロックにおいて効果的な新規なＣ５阻害物質を
開示している。しかしながら、補体の活性化後のこの物
質の添加は腫瘍細胞の走化性に対して効果を有しないか
ら、この様な物質はＣ５ａの中和のために効果的でない
であろう。Ｓｔｅｖｅｍｓ等，“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ
ａｎｔｉ−Ｃ５ａＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ
Ａｄｕｌｔ ＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＤｉｓｔｒｅｓ
ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ Ｓｅｐｔｉｃ Ｐｒｉｍ
ａｔｅｓ”，プレプリント１９８５は白血球凝集試験
（ａｇｇｒｅｇｏｍｅｔｒｙ）を用いて、エンドトキシ
ンで活性化された血漿へのポリクローナルラビット抗−
ヒトｄｅｓ−ａｒｇ ７４−Ｃ５ａの添加がインビトロ
での白血球凝集を防止することを示した。さらに、ヒト
Ｃ５ａに対するポリクローナル抗体を含むアップジョン
・ラボラトリーズの市販ラジオイムノアッセイキット、
及びＫｕｎｋｅｌ等，Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，６
２：３０５（１９８３）はポリクローナル抗体を用いる
Ｃ５ａのための特異的ＥＬＩＳＡを開示している。Ｃ５
（これはＣ５ａより大きく、そして血清中に一層高濃度
で存在する）に対するポリクローナル抗体は幾つかの販
売元から市販されている。さらにＣ５に対するモノクロ
ーナル抗体も市販されている。しかしながら、阻害され
るべきものはＣ５ではなくむしろＣ５ａである。なぜな
ら、Ｃ５ａのみが走化性及び好中球凝集を惹起するから
である。最後に、Ｃｈｅｎｏｗｅｔｈ等，Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：１０３３９−１０３４５（１
９８５年８月）は、Ｃ５ａ中のＣ５ａチロシル残基との
み交差反応するネズミ抗−ヒトＣ５ａモノクローナル抗
体が使用されたと述べている。Ｃ５ａは既知の酵素活性
を有しないから、それに対する特異的結合及びその直接
中和はＣ５ａメディエーターの毒性に対抗するための最
良のアプローチのようである。 （本発明の概要）従って、本発明はヒト補体成分Ｃ５ａ
又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに特異的に結合する
（これらと反応する）モノクロー抗体を提供する。この
発明の抗体はヒト顆粒球への前記Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａ
ｒｇ７４−Ｃ５ａの結合をブロックし、且つＣ５ａ又は
ｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの効果をインビボでブロッ
クする。好ましくは、この抗体はヒトＣ５ａ又はヒトｄ
ｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに対して１０^８リットル／モ
ルの以上の親和性を有する。他の観点において、この発
明は上記の抗体を生産する安定な永久ハイブリドセルラ
インを提供する。他の観点において、有害な血管内補体
活性化と関連する（又はこれにより惹起される）状態の
処置のための組成物を提供し、この組成物は療法的有効
量の上記抗体を医薬として許容されるビヒクルと共に含
んで成る。１又は複数の前記抗体、又は上記組成物を有
効量において投与して哺乳類患者を処置することができ
る。さらに他の観点において、この発明はグラム陰性敗
血症を処置するための組成物に関し、この組成物は少な
くとも１種類の上記抗体及びグラム陰性細菌のエンドト
キシンと反応する抗体の少なくとも１種類の混合物の療
法的有効量を医薬として許容されるビヒクルと共に含ん
で成る。グラム陰性敗血症の処置のためこの組成物を有
効量において哺乳類患者に投与することができる。最後
に、この発明はヒトＣ５ａ又はヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４
−Ｃ５ａに対する上記抗体の少なくとも１種類を使用し
て流体中のヒトＣ５ａ又はヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ
５ａを検出するための改良された免疫学的又は免疫診断
的方法及び組成物に関する。 （発明の効果）この発明のモノクローナル抗体は既存の
ポリクローナル又はモノクローナル抗体技法によっては
満されない多くの要須要件を満たす。Ｃ５ａに対するポ
リクローナル抗体と同様に、これらのモノクローナル抗
体は理想的には色々な種からのＣ５ａの間で交差反応し
ヒト以外の哺乳類を処置するための潜在的用途を有す
る。しかしながら、これらのモノクローナル抗体は、そ
れらのユニークな特異性及び親和性のために、免疫予防
剤、治療剤及び診断剤としてポリクローナル抗体より有
用であろう。特異性はまた、これらのモノクローナル抗
体を、ヒトＣ５ａ及びそのｄｅｓ−ａｒｇ誘導体の免疫
学的及び生化学的研究のため、Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒ
ｇ７４−Ｃ５ａのアフィニティー精製のため、並びにＣ
５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａが存在するかも知
れない任意の試薬からのＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４
−Ｃ５ａの中和及び／又は除去のために一層有用なもの
とする。さらに、従来のポリクローナル抗体とは異り、
Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａと反応するモノ
クローナル抗体は潜在的に無限の且つ均一な供給として
製造することができ、均一質で一貫性ある結果が達成さ
れる。最後に、この発明のモノクローナル抗体はヒト顆
粒球へのＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの結合
をブロックし、そしてあるモル過剰の補体成分Ｃ５の存
在下でＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａと結合す
る。これに対して、Ｃ５ａに対するポリクローナル抗体
は典型的には１００倍以上のモル過剰のＣ５を含有する
血清中のＣ５ａ成分と結合することができない。 （具体的な説明）この明細書において使用する場合、
“流体”なる語は生物学的流体、例えば血清、尿、唾
液、涙、喀痰、汗等、又は工程流体、例えば培地、発酵
液等に関し、これらはヒトＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７
４−Ｃ５ａを含有することが知られているもの又はその
ことが疑われているものである。この明細書において使
用する場合、“有害な血管内補体の活性化”なる語は、
メディエーターであるヒトＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７
４−Ｃ５ａが放出されこれが放出された固体の健康のた
めに有害であるような補体系におけるすべての過程に関
する。この活性化に関連する状態には病的状態、例えば
炎症性疾患、グラム−陰性感染、自己免疫疾患等、及び
外傷又は損傷が含まれる。この明細書において使用する
場合、“抗体の生産をコードしそして特定する遺伝子を
含有する自己複製キャリヤー細胞”なる語は、抗体を生
産することができる任意の自己複製セルラインに関し、
これには微生物、ウイルスにより形質転換されたセルラ
イン又はハイブリドーマが含まれる。ハイブリドーマ
は、マウス×ヒトハイブリドとエプスタイン−バールウ
イルスで形質転換された末梢血リンパ球又は脾細胞との
融合に由来するトリオーマ、及び骨髄腫セルラインと脾
細胞とのハイブリドを含む意味に用いられる。この明細
書において使用する場合、“セルライン”は、言及され
るセルラインの細胞に由来する限わ個々の細胞、収得さ
れた細胞、及び細胞含有培養物に関する。ハイブリドー
マセルラインに関してこの明細書において使用する場
合、“子孫”なる語は、カリオタイプの同一性の発生に
関連なく細胞のすべての派生物、子及び子孫を含むこと
が意図される。所与の抗体についてこの明細書において
使用する場合、“機能的同等物”なる語は、言及される
抗体と同じ決定基を認識し、そしてそれを交差ブロック
する抗体を意味する。同一の又は異る免疫グロブリンク
ラスの抗体及び該抗体の抗原結合性断片（例えば、Ｆａ
ｂ、Ｆ（ａｂ′）ｚ、Ｆｖ）を包含することが意図され
る。患者に抗体及びその接合体を投与することに関して
この明細書において使用する場合、“処置”なる語は治
療及び／又は予防を意味する。この明細書において使用
する場合、“モノクローナル抗体”なる語は、その集団
が実質的に均一である、すなわち抗体集団の個々の抗体
が、自然に生ずる変異を除き同一である抗体群から選択
された抗体に関する。ハイブリドセルラインに関してこ
の明細書において使用する場合、“永久的”及び“安定
な”なる語は、このセルラインが長期間にわたって、典
型的には約６ケ月間にわたって生存し続け、そして５０
世代以上にわたって特異的モノクローナル抗体を製造す
る能力を維持することを意味する。この発明の機能的且
つ好ましい規準（Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ誘導体への
特異的結合、ブロック及び親和性）に合致するモノクロ
ーナル抗体は、マウス、ラット、ラビット、ブタ、霊長
類及びヒトを含む種々の哺乳類起原の細胞を用いて製造
することができる。抗体は、この明細書において特に例
示するＩｇＧ及びＩｇＭを包含する任意のアイソタイプ
のものでよい。この発明の抗体のヒトの具体例は、マウ
ス×ヒト親ハイブリドセルラインと、エプスタイン−バ
ールウイルス（ＥＢＶ）により形質転換されたヒト末端
血リンパ球又は免疫感作されていない志願者もしくは入
手可能なＣ５ａもしくはそのｄｅｓ−ａｒｇ誘導体によ
り免疫感作された志願者からの脾細胞とを用いる体畑胞
ハイブリダイゼーションにより合成されたトリオーマの
生産物である。所望によシ新鮮なＰＬＬ又は脾細胞（形
質転換されていない）を使用することができる。好まし
くは、ヒトＣ５ａは免疫感作の前に精製される。マウス
の抗体の具体例は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｉｓｔｅｉ
ｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：５１１−５１
９（１９７６）により最初に記載された体細胞ハイブリ
ダイガーション法を用いて、マウス骨髄腫セルラインと
Ｃ５ａ又はそのｄｅｓ−ａｒｇ誘導体により免疫感作さ
れたマウスからの脾細胞とをポリエチレングリコールの
ごとき融合剤の存在下で融合せしめることによりハイブ
リドーマを形成せしめることによって製造することがで
きる。抗体は標準的方法〔例えば、Ｏｉ及びＨｅｒｚｅ
ｎｂｅｒｇ，Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｃｅｌｌｕｌｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂ．Ｍｉ
ｓｈｅｌｌ等編，Ｗ．Ｊ．フリーマン社，サンフランシ
スコ，３５１−３７５頁（１９８０）〕により生じさ
せ、そしてハイブリドーマは適切な選択培地中で標準的
技法、例えばＦｏｕｎｇ，Ｓ．Ｋ．Ｈ．等（１９８
３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７
９：７４８４−７４８８により選択する。選択された陽
性ハイブリドを、Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５
ａと反応する（これらに特異的に結合する）その能力に
ついて特微付ける。これは、^１２５ＩラベルされたＣ５
ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａを免疫沈澱せしめる
抗体の能力、固相ＥＩＡにおいてＣ５ａ又はｄｅｓ−ａ
ｒｇ７４−Ｃ５ａに結合する抗体の能力、及びＣ５ａ又
はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａのペプチド断片を認識す
る抗体の能力を確認することにより決定される。陽性の
ハイブリドを、固相ラジオイムノアッセイのごとき標準
的方法によりＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに
対するそれらの親和性について試験する。最良の効果を
得るためには１０^８リットル／モル以上の親和定数が好
ましい。さらに、抗体をそのエピトープ及びアイソタイ
プについて特徴付ける。これらはまた、イヌ、ブタ、モ
ルモット及びモンキーのごときヒト以外の動物種におい
て生産されたＣ５ａとの交差反応性についても特徴付け
られる。抗体はまた、ヒトＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７
４−Ｃ５ａを中和するそれらの能力、すなわち関与する
特定の機構には関係なくヒト顆粒球へのヒトＣ５ａ又は
ｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの結合をブロックするそれ
らの能力についても試験する。前記の機能は、抗体がヒ
トＣ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに結合するこ
とによりその生物学的活性に影響を与える機構、Ｃ５ａ
又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの分解を生じさせる機
構、Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａのクリアラ
ンスの動態及び／又は部位を変化せしめることによりそ
の活性に影響を与える機構を含むがこれらに限定されな
い。中和活性は例えば多形核白血球に結合する^１２５Ｉ
−Ｃ５ａをブロックし、スーパオキシド陰イオンを生じ
させ、好中球の走化性を誘導し、そしてニトロブルーテ
トラゾリウム色素（ＮＢＴ）の好中球還元を刺激する抗
体の能力により示すことができる。最後に、この発明の
抗体は、あるモル過剰の補体成分Ｃ５の存在下でヒトＣ
５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに結合するその能
力について次の様にして試験される。Ｃ５のＣ５ａ及び
／又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａへの開裂を促進する
酵母細胞壁断片を添加することによりヒト又は他の動物
の血清を活性化する。次に、活性化された血清及び活性
化されていない血清の存在での^１２５Ｉ−Ｃ５ａの免疫
沈澱の阻害を抗体上清について種々の濃度において測定
する。この発明の抗体を生産するハイブリドーマは適当
な培地、例えばイスコベ（Ｉｓｃｏｖｅ）の培地もしく
はＲＰＭＩ−１６４０培地、又はインビトロで実験動物
中で増殖せしめることができる。所望により、場合に応
じて常用の技法、例えば硫酸アンモニウム沈澱、ヒドロ
キシルアパタイトクロマトグラフィー、イオン交換クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、
電気泳動、マイクロフィルトレーション、及び超遠心に
より培地又は体液から分離することができる。この発明
の抗体は、有害な血管内補体の活性化と関連する状態を
有するヒトの個体（又は他の哺乳類種）又はこの状態に
関して危険な状態にある個体、例えば免疫抑制療法を受
けた患者及び深刻な熱傷又は他の深刻な傷害を有する患
者を受動的に免疫感作するために使用することができ
る。血管内補体の活性化と関連する状態の例にはグラム
陰性敗血症、ＡＲＤＳ、熱傷、肺の炎傷又は損傷、深刻
な外傷、膵臓炎、心筋硬塞、多量輸血、血液凝固、心臓
血管疾患、医療器機への暴露（血液透析膜及び体外血液
循環装置を含むがこれらに限らない）、及び／又は慢性
自己免疫疾患（全身性紅斑性狼瘡及びリウマチ性関節炎
を含むがこれらに限定されない）が含まれるがこれらに
限定されない。さらに、抗生物質及び抗炎症剤、例えば
コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニソロン）
と１又は複数の上記抗体との組合わせを用いることがで
きる。グラム陰性細菌エンドトキシンに対する１又は複
数種類のモノクローナル抗体との組合わせにおいて１又
は複数の上記抗体を用いてグラム陰性敗血症を処置する
ことができる。これらグラム陰性細菌エンドトキシンに
対するモノクローなる抗体は１９８４年１１月２２日に
公開されたＰＣＴ Ｗ０８４／０４４５８、及び１９８
５年４月２５日に公開されたＰＣＴ Ｗ０８４／０１６
４３に記載されている様にして得ることができる。エン
ドトキシン特異的抗体がＣ５ａを中和し又はＣ５ａクリ
アランス促進し、他方Ｃ５ａ特異的抗体がトキシンを中
和する点において、これらの抗体は相乗的に作用するこ
とができる。この発明の抗体をまた免疫学的又は免疫診
断的に使用して、血液、尿等のごとき流体中のヒトＣ５
ａ又はヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの存在又は不存
在を検出するために使用することができる。流体を少な
くとも１種類の上記の抗体の存在下でインキュベートす
る。反応の存在もしくは不存在及び／又は程度は、抗体
／抗原相互作用を決定又は定量するために使用される種
々の方法（例えば赤血球凝集、ラテックス凝集、補体固
定、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、螢光
イムノアッセイ、サンドイッチアッセイ、螢光顕微鏡観
察等）のいずれかにより決定することができる。例え
ば、サンドイッチイムノアッセイを使用することがで
き、この方法においては、試験サンプルを、プラスチッ
クチューブ又はポリスチレンビーズのごとき固体支持体
上に固定化された、抗原の１つのエピトープに向けられ
た第一モノクローナル抗体と共にインキュベートし、そ
して試験サンプルを、例えば免疫的に、酵素的に、ペプ
チドにより、又は分光光度法的、化学的もしくは放射能
的手段により検出され得る検出可能な成分によりラベル
された、抗原の異るエピトープに対して向けられた第二
モノクローナル抗体と共にインキュベートする。固定化
された抗体とのインキュベーションは、ラベルされた抗
体とのインキュベーションの前、その間又はその後に行
うことができる。抗体は、検出可能な成分によりラベル
された他のリガンド（典型的には、それに対して特異的
なモノクローナル抗体）により間接的に検出することが
できる。抗体は皮下投与及び非経口投与を含む任意の適
当な技法、好ましくは非経口投与により哺乳類患者に投
与することができる。非経口投与の例には静脈内投与、
動脈内投与、筋肉内投与及び腹腔内投与が含まれ、静脈
内投与が好ましい。投与量及び投与方法は主として抗体
が治療目的で投与されるか予防目的で投与されるか、患
者、及び患者の病歴に依存するであろう。１投与当り投
与される抗体の合計有効量は典型的には患者の体重Ｋｇ
当り約０．２〜２０ｍｇの範囲であろう。非経口投与の
ため、抗体は一般に医薬として許容される非経口ビヒク
ルと共に単位投与注射形（溶液、懸濁液、乳剤）に製剤
化される。この様なビヒクルは本質的に非毒性で且つ非
療法的である。この様なビヒクルの例には水、塩溶液、
リンゲル溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清
アルブミンが含まれる。非水ビヒクル、例えば硬化油及
びオレイン酸エチルを使用することもできる。キャリヤ
ーとしてリポゾームを使用することができる。ビヒクル
は少量の添加剤、例えば等張性及び化学的安定性を増強
する物質、例えば緩衝剤及び防腐剤を含有することがで
きる。抗体は典型的にはこの様なビヒクル中に約０．１
ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で製剤化される。
次に、例によりこの発明をさらに具体的に説明するが、
これによりこの発明の範囲を限定するものではない。こ
れらの例においては、特にことわらない限りすべての％
は固体については重量により液体については容量によ
り、そしてすべての温度は℃で表わす。例１． モノクローナル抗体の製造 Ｂａｌｂ／ｃマウスに完全フロインドアジュバンド（市
販されている）中３〜１０μｇの精製されたヒトＣ５ａ
（アン・アーバー，ＭＩ，ミシガン大学Ｓｔｅｖｅｎ
Ｋｕｎｋｅｌ博士から）をまず腹腔内注射した。２週間
後、マウスに不完全フロインドアジュバンド中３〜１０
μｇの同じ精製されたＣ５ａを腹腔内注射した。リン酸
緩衝化塩溶液（ＰＢＳ）中Ｃ５ａの毎週の腹腔内追加免
疫の後、最終注射としてＰＢＳ中４μｇの精製されたＣ
５ａを静脈内注射した。最後免疫感作の３日後、マウス
を殺し、そしてその脾臓を取り出した。脾臓をダルベコ
改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に懸濁し、そして分子量
１０００のポリエチレングリコールを融合剤として用い
て、脾細胞対骨髄腫細胞の比率を５：１として、マウス
骨髄腫細胞ＳＰ２／０Ａｇ１４〔商業的に入手可能であ
り、そしてアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクシ
ョン（ＡＴＣＣ），ロックビル，ＭＤにＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．ＣＲＬ １５８１として寄託されている〕と融合せ
しめた。Ｌａｒｒｉｃｋ等によりＫｅｎｎｅｔｔ等編集
のＮｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎ
ｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ｐｒｏｇｒｅｓ ａｎｄ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ニューヨーク，プレナム，
１９８４）に記載されている様にして、ヒポキサンチン
及びアザセリンの溶液を収容するミクロタイタープレー
トウエル中に融合生成物をプレートした。次に、プレー
トウエル中の陽性クローンを多量の培地中又はネズミの
腹水中で増殖せしめた。多ウエル−免疫沈澱 次に、ハイブリドーマの上清を陽性クローンにつき免疫
沈澱によりスクリーニングした。９６−ウエルポリ塩化
ビニル製ミクロタイタープレートのウエルをリン酸緩衝
化塩溶液（ＰＢＳ）（ｐＨ７．２）中１％ウシ血清アル
ブミンにより３７℃にて６０分間ブロックした。次にプ
レートからブロック溶液を除去し、そして各ウエルに５
０μｌの上清又は精製された抗体を加えた。次に１０
０，０００ｃｐｍの^１２５Ｉ−ラベル化ヒトＣ５ａ（５
０μｌ）を各ウエルに加え、そしてこの混合物を室温に
て６０分間インキュベートした。このインキュベーショ
ンに続き、プラスチックキャリヤービーズに固定化され
たラビット抗−マウス免疫グロブリン（イムノビーズ）
（商業的に入手）の１：５稀釈物５０μを各ウエルに加
え、そして攪拌しながら室温にて６０分間インキュベー
トした。次に、イムノビーズをＰＢＳ及び０．１％トウ
ィーン２０の溶液（以後、“ＰＢＳＴ”と称する）によ
り３回洗浄し、そしてプレートを切断した。各ウエルを
ガンマーカウンターでカウントした。カウントした後、
イムノビーズを３０μｌの同じ緩衝液〔０．０６Ｍ Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．０），５％２−メルカプトエ
タノール、２％ＳＤＳ、１．５％グリセリン〕中に再懸
濁した。この懸濁液を３分間煮沸し、そして次にＬａｅ
ｍｍｌｉ，Ｎａｔｕｒｅ（ロンドン）２２７：６８０−
６８５（１９７０）のスタッキングゲル法に従って上清
をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。ケルを乾燥し、そ
してＢｏｎｎｅｒ及びＬａｓｋｅｙ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．，４６：８３−８８（１９７４）により記
載されている様にして、強化スクリーンを用いて−７０
℃にてクロネックスＸ−線フィルムに暴露した。親和性の決定 抗体を含有する液体を２倍稀釈においてタイトレート
し、そして次に２００μｌのタイトレートされた抗体を
１２×７５ｍｍのポリプロピレンチューブに入れた。次
に、合計１００，０００ｃｐｍ（１００μｌ）の^１２５
Ｉ−ラベル化Ｃ５ａをサンプルに加えた。次にサンプル
を混合し、そして室温にて２時間インキュベートした。
ラビット抗−マウス免疫グロブリンイムノビーズの１：
５稀釈物合計１００μｌを各チューブに加えそして室温
にて６０分間インキュベートし、そして４ｍｌのＰＢＳ
中で２回洗浄した。次に、混合物を２８００ｒｐｍ、４
℃にて１０分間遠心し、チューブをガンマーカウンター
上でカウントした。結果を分析し、そして７５％最大結
合を決定した。流体をＰＢＳ中５％ＢＳＡによりその適
切な濃度（７５％最大結合）に稀釈した。ラベルされて
いないヒトＣ５ａを２倍稀釈においてタイトレートし、
そして２００μｌのタイトレートされたラベルされてい
ないＣ５ａ＋２００μｌのモノクローナル上清を１２×
７５ｍｍのポリプロピレンチューブ中で室温にて２時間
混合した。次に合計１００，０００ｃｐｍの^１２５Ｉ−
ラベル化Ｃ５ａ（１００μｌ）を各サンプルに加え、混
合し、そして室温にて１時間インキーベートした。ラビ
ット抗−マウス免疫グロブリンの１：５稀釈物合計１０
０μｌを各サンプルに加え、そして室温にて６０分間イ
ンキュベートした。次に、サンプルを２回４ｍｌのＰＢ
Ｓにより洗浄し、２８００ｒｐｍ、４℃にて１０分間遠
心分離し、そしてガンマーカウンター上でカウントし
た。合計５０％の結合阻害を決定し、そしてＭｕｅｌｌ
ｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３４：３
４５−３５２（１９８０）の方法に従って親和定数を計
算した。上記の様にして決定された親和性を親和性（ｌ
／ｍｏｌｅ）Ａとして第１表に示す。上記と実質的に同
様にしてアフィニティーを再度決定した。但し、コール
ドＣ５ａの濃度をＰＢＳ中５％ＢＳＡの溶液２００μｌ
中８ｎｇ〜１０μｇ／ｍｌとした。モノクローナル抗体
の親和性をこの方法に従って決定し、そして親和性（ｌ
／ｍｏｌｅ）Ｂとして第１表に示す。抗体の精製 テトラメチルペンタデカンによりプライムされたＢａｌ
ｂ／ｃマウスに５×１０^６個の選択されたハイブリドー
マ細胞を腹腔内注射した。１４〜２８日後に腹水を集
め、遠心分離し、そして使用するまで−７６℃にて貯蔵
した。腹水液を▲ろ▼過し、そしてプロテインＡモノク
ローナル抗体カラム精製系（ＭＡＰｓ）に適用した。活
性画分を集めそしてＰＢＳに対して透析した。次に画分
を０．２μｍフィルターを通して▲ろ▼過し、そして同
じ緩衝液中で４℃にて貯蔵した。エピトープ分析 抗体のエピトープは次の様にして決定することができ
る。９６−ウエル−ポリ塩化ビニル製ミクロタイタープ
レートのウエルを５０μｌ／ウエルの１μｇ／ｍｌ精製
ヒトＣ５ａによりコートし、そして３７℃にて６０分間
インキュベートした。次にプレートを空にし、そしてウ
エルをＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１％ＢＳＡにより３７℃
にて６０分間ブロックした。次に、プレートをＰＢＳＴ
により３回洗浄した。前記のようにして精製された種々
の濃度のモノクローナル抗体合計５０μｌをウエルに加
え、そして室温にて６０分間インキュベートした。パー
オキシダーゼでラベルされたヒトＣ５ａに対するモノク
ローナル抗体の１：１０００稀釈物５０μｌ／ウエルを
ウイルに直接加え、そして室温にて６０分間インキュベ
ートした。このようなパーオキシダーゼラベルされたモ
ノクローナル抗体をＮａｋａｎｅ及びＫａｗａｏｉ，
Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，２２：
１０８４（１９７４）の方法に従って接合せしめた。プ
レートをＰＢＳＴ中で３回洗浄した。合計０．１ｍｌ／
ウエルのｏ−フェニレンジアミンを発色剤として加え、
そして１ｍｌ／ウエルの１ＮＨＣｌを添加することによ
り反応を停止せしめた。プレートをマルチスキャン分光
光度計上で４９２ｎｍにて読み取った。アイソタイプの決定 アイソタイプの決定を次の様にして行った。要約すれ
ば、９６−ウエルのポリ塩化ビニル製プレートを精製さ
れたヒトＣ５ａによりコートし、そして次にＰＢＳ（ｐ
Ｈ７．２）中１％ＢＳＡでブロックした。次に、５０μ
ｌの上記の培養上清をウエルに加え、そして室温にて６
０分間インキュベートした。プレートを洗浄し、そして
５０μｌの各サブクラス特異的ラビット抗−マウスＩｇ
抗体を別々のウエルに加えた。室温にて６０分間インキ
ュベートしそして３回洗浄した後、５０μｌのポーオキ
シダーゼラベル化ヤギ抗−ラビットＩｇＧを各ウエルに
加え、そして室温にて６０分間インキュベートした。プ
レートを３回洗浄し、そして０．１ｍｌの２，２−アジ
ノービ（３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸）を各
ウエルに加え、そして０．１ｍｌの０．１ＮＨＣｌを添
加することにより反応を停止せしめた。結果をマルチス
キャン分光光度計により読み取った。好中球の調製及び分極 ヘパリン処理した血液を６％デキストリンにより稀釈す
る（血液：デキストラン＝５：１）ことによりヒト多形
核白血球（ＰＭＮ）を単離した。赤血球を室温にて４０
分間沈降せしめた。白血球富化血漿を取り出し、そして
ハンク平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）により１：２で稀釈し
た。これをフィコールーハイパーク上に重層し、そして
１６００ｒｐｍ、室温にて２０分間遠心した。 ペレッ
ト以外のすべてを廃棄し、そして細胞をＨＢＳＳ中に
１．２５×１０^６細胞／ｍｌに稀釈した。これらを使用
するまで氷上に貯蔵した。合計０．１ｍｌ試験されるべ
き刺激剤（ストックは所望濃度の１０倍）を１２×７５
ｍｍのポリプロピレンチューブに加えた。これらは二連
で行った。陰性対照は０．１ｍｌのＨＢＳＳのみを有
し、そして陽性対照は０．１ｍｌのｎ−ホルムアルデヒ
ド−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニン（１０
^−６Ｍ）を有した。合計０．９ｍｌのＰＭＮを各チュー
ブに加えた。 得られた混合物を３７℃の水浴中で１０
分間振とうした。氷冷した０．０１Ｍリン酸緩衝化１０
％ホルムアルデヒド（ｐＨ７．２）１．０ｍｌより反応
を停止せしめた。各チューブの内容物を位相差顕微鏡に
より調べ、そして各チューブからの細胞を４００倍で調
べた。細胞を計数し、そして分極しした細胞の全細胞に
対する％を決定した。円形の未刺激細胞に比べて、刺激
された細胞は非常に不規則な形状を有していた。第１表
に、前記の方法により得られた、抗体についてのデータ
を要約する。 モル過剰のＣ５中での結合の測定 ９６−ウエル丸底ビニルアッセイプレートを１％ＰＢＳ
により３７℃にて１時間ブロックした。一方、活性化さ
れた血清のため、補体を活性化することができるサッカ
ロミセス・セレビシエー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）細胞壁抽出物（５０ｍｇ抽出
物／ｍｌ蒸留水）：血清（１：１０）で各血清サンプル
をインキュベートした。次に混合物を撹拌し、そして３
７℃にて３０分間インキュベートし、そして次にエッペ
ンドルフ遠心管中で３０分間回転せしめる。ペレットを
廃棄し、そして活性化された血清を新たなチューブに取
り出した。各試験サンプルをブロックするために合計５
０μｌの血清を稀釈しないで使用した。正常な未活性化
血清を使用する試験のため、５０μｌの未稀釈の血清
（活性化のために使用したのと同じ由来のもの）をブロ
ックのために使用した。 免疫沈澱のため、５０μｌの
モノクローナル抗体上清又は精製されたモノクローナル
抗体をＰＢＳ＋１％ＢＳＡ中に稀釈して最大結合の約７
５％にした。次に５０μｌの無稀釈の血清（活性化され
た血清又は活性化されていない血清のそれぞれ１つ）を
加え、そして室温にて１時間インキュベーションを行っ
た。次に１％ＢＳＡを含有するＰＢＳ中ヨード化Ｃ５ａ
の５０μｌを加えて試験当り約１００，０００カウント
とした。次にこの溶液を室温にて１時間インキュベート
した。合計５０μｌのヨード化Ｃ５ａをインプットカウ
ントを読み取るために使用した。次に、合計５０μｌの
ラビット抗−マウスイムノビーズ（ストックビーズをＰ
ＢＳ中に１：５稀釈したもの）を加え、そして混合物を
室温にて１時間撹拌した。次に、プレートを２分間２０
００ｒｐｍにて回転せしめ、複合体を沈降せしめた。上
清を８本１組のマニホールドにより吸引除去し、そして
１％のトウィーン２０を含むＰＢＳ溶液（２００μｌ）
により３回洗浄し、その都度注意深く吸引した。ウエル
を切断してチューブに入れ、そしてペレットをガンマー
カウンター上で読み取った。結合したカウントをインプ
ットカウントで除して１００を乗ずることにより沈澱し
た％を決定した。使用した陽性対照は血清を伴わない抗
体２６０−１１４Ｇであり、陰性対照はＰＢＳ緩衝化塩
溶液並びに血清を伴う及び伴わないＴＮＦ（ＩｇＧ_１，
Ｋ）モノクローナル抗体であった。２６０−１１−４６
Ｇと称する抗体について、結合したカウントのインプッ
トカウントに対する％の血清の稀釈（１／稀釈）の関数
としてのグラフは、Ｃ５ａへの抗体の実質的な結合が存
在し、これは抗体上清が１：２から１：１２８に稀釈さ
れるに従って減少することを示した。これに対して、Ｔ
ＮＦ対照の結合は、結合したカウントのインプットカウ
ントに対する％により決定する場合、取るに足りないも
のであった。抗体をブロックする動物細胞の試験におい
て、正常動物血清及び活性化された動物血清を用いるモ
ノクローナル抗体＋^１２５Ｉ−Ｃ５ａ（ヒト）の免疫沈
澱阻害により決定した場合、イヌ、モンキー、ブタ、又
はモルモットのＣ５又はＣ５ａとの有意な交差反応は存
在しなかった。２種類の抗体２６０−１１４Ｇ及び２６
０−７Ｃ９の試験結果を第２表に示す。 この結果は、モル過剰のＣ５を含有する未活性化血清に
ついて、インプットカウントに対する結合カウントの％
により示す場合、広範囲の動物種からのモル過剰のＣ５
の存在下で、抗体がヒトＣ５ａに結合することを示す。
この結果はさらに、活性化血清（Ｃ５ａ）及び未活性化
血清（Ｃ５）についての、インプットカウントに対する
結合カウントの％の間の差異により示す場合、抗体はヒ
トからのＣ５ａを阻害するが他の動物種からのＣ５ａを
阻害しないことを示している。インビボ研究 ２６０−９１Ｈ−２Ｇ−１０Ｄと称する抗−Ｃ５ａ抗
体、及びＣ５ａに対するものでない対照抗体を２匹のラ
ビットに静脈内注射し、そして１０分間平衡化した。各
ラビットから血清サンプルを時間０（各ラビットにＣ５
ａを注射する前）に採取した。次に２．５μｇのＣ５ａ
を各ラビットに静脈内注射し、そしてＣ５ａの注射の１
分間後及び５分間後（それぞれ時間１及び５）に血清サ
ンプルを採取した。各血液サンプルを全ポリモノヌクレ
オサイト（ＰＭＮ）及び全白血球（ＷＢＣ）について分
析した。全ＷＢＣと白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）との
差（ＰＭＮ％）を計算した。結果を第３表に示す。 時間１及び５における、対照抗体と抗−Ｃ５ａ抗体との
間の全ＰＭＮの差は、この発明の抗体がインビボでＣ５
ａの効果をブロックすることを示している。Ｃ５ａに対
する他の７種類の抗体（６８−２０３は他のものと同じ
方法で調製された）についてのラビットにおける結果を
第４表に示す。表中、００は抗体をｉｖ注射する前であ
り、０は抗体の注射の１時間後であってＣ５ａのｉｖ注
射の前であり、１はＣ５ａ注射の１分間後であり、そし
て５はＣ５ａ注射の５分間後である。 例２．ヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａに対するヒト抗
体を次の方法により調製する。抗原の精製 ヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａを補体活性化血清から
精製して、ヒトモノクローナル抗体を生じさせるための
調製物中のヒトＢリンパ球のインビトロ刺激及びスクリ
ーニングのために十分な量を製造する。まず、Ｆｅｒｎ
ａｎｄｅｚ及びＨｕｇｌｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
１７：１６８８（１９７６）により記載されたＣ５ａの
精製法の変法を用いる。精製されたｄｅｓ−ａｒｇ７４
−Ｃ５ａの一部を使用してラビットを免疫感作し、Ｍａ
ｎｄｅｒｉｎｏ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，
５３：４１（１９８２）のイムノアドソルベント精製ス
キームにおいて使用するためのポリクローナル抗血清を
生じさせる。要約すれば、ヒト血清を煮沸した酵母細胞
（２０ｇ／ｌ）と共に３７℃にて６０分間インキュベー
トして補体を活性化する。酵母を遠心分離により除去
し、そして血清を５６℃にて３０分間インキュベートす
ることにより補体を熱活性化する。活性化された血清を
１００ｍｌ／時の流速（４℃）においてイムノアドゾル
ベントカラム（セファロース６Ｂ−抗−ｄｅｓ−ａｒｇ
７４−Ｃ５ａ）に適用する。カラムをＰＢＳで洗浄し、
そして吸着した物質を２００ｍＭグリシン−ＨＣｌ緩衝
液（ｐＨ２．８）により溶出する。透析及び濃縮の後、
セファデックスＧ−７５上でのゲル▲ろ▼過を行い、そ
して走化活性を有する１０，０００〜１５，０００ダル
トンの画分をプールし、そして濃縮する。抗体の生産 Ｋｏｚｂａｒ等，Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１
０，１８７−１９４（１９７９）及びＳｔｅｉｎｉｔｚ
等Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．，２，１−７
（１９７９）により記載されているようにして、末梢血
Ｂリンパ球及び／又はヒト脾細胞を精製されたｄｅｓ−
ａｒｇ７４−Ｃ５ａ上におき、そしてＦｏｕｎｇ等，
Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．，７０，８３−９０（１９
８４）により記載されている様にしてＥＢＶにより形質
転換し、そしてＩＬ−２又は他のアジュバントの存在下
で培養する。ヒト／マウス融合パートナーＦ３Ｂ６（Ａ
ＴＣＣ＃ＨＢ８７８５）との融合を標準的技法を用いて
行う。ハイブリドーマ上清を精製されたｄｅｓ−ａｒｇ
７４−Ｃ５ａへの結合についてスクリーニングする。陽
性ハイブリドを限界稀釈法によりクローン化し、そして
標準的技法により選択されたハイブリドーマをスケール
アップのためにＨＬ−１のごとき無血清培地に適合せし
める。 下記のハイブリドーマがアメリカン・タイプカ
ルチュア・コレクション（ＡＴＣＣ）、及びシタス・コ
ーポレイションのティッシュ・カルチュア・コレクショ
ン（ＣＴＣＣ）に寄託され、それぞれ下記の受託番号を
有する。 上記の寄託はＡＴＣＣとシタス・コーポレイションとの
間の契約に基き、ブタペスト条約の規定に従って行われ
た。寄託者は、セルラインが適切な条件下で培養された
場合に死滅し、又は失われもしくは破壊された場合に、
通知の後、これらを迅速に同じセルラインの生存培養物
と置き代えることに同意する。以上の記載は、当業者が
本発明を実施するために十分であると考えられる。この
発明は寄託されたセルラインに限定されない。なぜな
ら、寄託された具体例はこの発明の１つの観点の単なる
例示に過ぎず、同等に機能する微生物は本発明の範囲内
であるからである。前記の種々の態様に加えて、この発
明の種々の変更が当業者にとって明らかであり、これら
は本発明の範囲内のものである。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 トレーシー イー．デインハート アメリカ合衆国 カリフォルニア 95117，サンホセ，ブラックフォード コート 679 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 39/395 ＢＩＯＴＥＣＨＡＢＳ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (1)

1. (57)【特許請求の範囲】 １．有害な血管内補体の活性化に関連する状態の処置の
   ための組成物であって、哺乳類の患者の症状を処置する
   ために用いられ、 過剰モルの補体成分Ｃ５の存在下又は非存在下で１０^８
   リットル／モル以上の親和性をもってヒト補体成分Ｃ５
   ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａと結合しそしてヒト
   顆粒球へのヒトＣ５ａ又はヒトｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ
   ５ａの結合をブロックするモノクローナル抗体の少なく
   とも１種の療法的有効量、又はヒトＣ５ａ又はヒトｄｅ
   ｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａの異るエピトープに結合する少
   なくとも２種の該抗体の療法的有効量を医薬として許容
   されるビヒクル中に含んでなり、 該症状が、グラム陰性菌による敗血症、成人呼吸促進症
   候群、熱傷、肺の炎症または損傷、重篤な外傷、輸血、
   血液凝固、全身性紅斑性狼蒼、リウマチ性関節炎、膵臓
   炎、心筋梗塞、および医療機器への暴露である、 組成物。 ２．前記親和性が１０^８リットル／モル〜３．３×１０
   ^９リットル／モルの範囲にある請求項１に記載の組成
   物。 ３．前記患者がヒトである請求項１に記載の組成物。 ４．グラム陰性菌による敗血症を処置するための組成物
   であって；過剰モルの補体成分Ｃ５の存在下又は非存在
   下で１０^８リットル／モル以上の親和性をもってヒト補
   体成分Ｃ５ａ又はｄｅｓ−ａｒｇ７４−Ｃ５ａと結合し
   そしてヒト顆粒球へのヒトＣ５ａ又はヒトｄｅｓ−ａｒ
   ｇ７４−Ｃ５ａの結合をブロックするモノクローナル抗
   体の少なくとも１種、及びグラム陰性細菌エンドトキシ
   ンと反応する抗体の少なくとも１種の混合物の療法的有
   効量を含み；グラム陰性細菌エンドトキシンと反応する
   該抗体がグラム陰性細菌エンドトキシンの不都合な生物
   学的効果をブロックするモノクローナル抗体であり；該
   抗体混合物が医薬として許容されるビヒクル中に含有さ
   れる；組成物。 ５．前記親和性が１０^８リットル／モル〜３．３×１０
   ^９リットル／モルの範囲にある請求項４に記載の組成
   物。 ６．哺乳類患者のグラム陰性菌による敗血症を処置する
   ために使用される請求項４に記載の組成物。 ７．前記患者がヒトである請求項６に記載の組成物。