JP2749009B2 - 血清サンプル中のｌｄｌの特異的定量方法および試薬 - Google Patents
血清サンプル中のｌｄｌの特異的定量方法および試薬Info
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- Y10T436/104165—Lipid, cholesterol, or triglyceride standard or control
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＬＤＬ沈殿剤およ
び／または水溶性ポリマー、特にポリアニオン並びに界
面活性剤の１種および／または界面活性剤混合物の存在
下で、生物学的液体中のＬＤＬを特異的に定量する方法
に関するものである。本発明はまた、ＶＬＤＬの干渉を
有意に低下させる利点を有する、この方法に好適な試薬
にも関するものである。ポリマーは特定的に分枝構造を
有し、側鎖が酸性基、特に分枝アルカンスルホン基であ
るものである。
び／または水溶性ポリマー、特にポリアニオン並びに界
面活性剤の１種および／または界面活性剤混合物の存在
下で、生物学的液体中のＬＤＬを特異的に定量する方法
に関するものである。本発明はまた、ＶＬＤＬの干渉を
有意に低下させる利点を有する、この方法に好適な試薬
にも関するものである。ポリマーは特定的に分枝構造を
有し、側鎖が酸性基、特に分枝アルカンスルホン基であ
るものである。
【０００２】
【従来の技術】血漿中、特に血清中のＬＤＬ値の定量は
臨床上の重要性が高くなって来ている：総コレステロー
ル含有量の80％までがいわゆる低密度リポタンパク質
（ＬＤＬまたはβ−画分）の形態で輸送され、したがっ
てこれらが現在脂質代謝において最も重要なアテローム
誘発性成分と考えられている粒子の一部となっている。
その上、血漿中ＬＤＬ濃度の上昇は高血圧、高インスリ
ン血またはエンドトキシンなどの他の病毒に匹敵する直
接の内皮損傷作用を与え得ることが知られている。ま
た、アテローム硬化型プラーク中に蓄積されたコレステ
ロールも、当初は血漿中にＬＤＬコレステロールの形態
で存在していたものであることが知られている。
臨床上の重要性が高くなって来ている：総コレステロー
ル含有量の80％までがいわゆる低密度リポタンパク質
（ＬＤＬまたはβ−画分）の形態で輸送され、したがっ
てこれらが現在脂質代謝において最も重要なアテローム
誘発性成分と考えられている粒子の一部となっている。
その上、血漿中ＬＤＬ濃度の上昇は高血圧、高インスリ
ン血またはエンドトキシンなどの他の病毒に匹敵する直
接の内皮損傷作用を与え得ることが知られている。ま
た、アテローム硬化型プラーク中に蓄積されたコレステ
ロールも、当初は血漿中にＬＤＬコレステロールの形態
で存在していたものであることが知られている。
【０００３】現在、血漿中、特に血清中のＬＤＬまたは
β−コレステロールの定量測定に利用し得るいくつかの
方法がある（Mills,G.l.,Lane,P.A.,Weech,P.K.:A guid
ebook to lipoprotein technique.Elsevier,Amsterdam,
1984;Cremer,P.and Seidel,D.:Dtsch.Gesell.Klin.Che
m.Mittl.21,1990,215-232）。基本的な差異は、一つは
超遠心や電気泳動などの分別による手法、またもう一つ
は沈殿による手法であるという点である。前者は高価な
機器の操作を必要とし、また時間も非常にかかる。した
がってこれらは主に参考および確認試験として使用され
る。現在では、高分子量で、大部分は陰性荷電性の物質
を使用した沈殿が、実験室における常法である。現在の
臨床診断においては、特にＬＤＬ沈殿試薬として、デキ
ストラン硫酸塩、ポリビニル硫酸塩、多環式表面活性ア
ニオンまたはヘパリンが使用される。しかし、これらの
方法には欠点が一つある。酸性媒体中でのヘパリン、ま
たは脂肪分解活性が強いかまたは存在する血清サンプル
中での多環式アニオンでの沈殿は、ＬＤＬコレステロー
ルについて実際よりも高い結果を示すのである。ＬＤＬ
定量に関して最も高い精度を示すことから、現在良好な
試薬と考えられている、デキストラン硫酸塩またはポリ
ビニル硫酸塩（ＰＶＳ）を使用した場合、脂肪分解活性
が強いかまたは存在する血清サンプル中での測定値は実
際よりも低い。さらに、デキストラン硫酸塩を含有する
沈殿試薬は、検定するサンプル中に遊離脂肪酸またはト
リグリセリドが多量に存在する場合にも、実際よりも低
い結果を示す。トリグリセリドが多いサンプルにおける
干渉は、主に高濃度のＶＬＤＬの存在が原因である。こ
の干渉は、ヘパリン治療中の患者においてはさらに強
い。沈殿法のすべてに共通するもう一つの欠点は、ＬＤ
Ｌの他に、ＬＤＬ類似リポタンパク質Ｌｐ（ａ）もまた
沈殿することである。したがって、これらの方法は完全
にＬＤＬ特異的ではない。
β−コレステロールの定量測定に利用し得るいくつかの
方法がある（Mills,G.l.,Lane,P.A.,Weech,P.K.:A guid
ebook to lipoprotein technique.Elsevier,Amsterdam,
1984;Cremer,P.and Seidel,D.:Dtsch.Gesell.Klin.Che
m.Mittl.21,1990,215-232）。基本的な差異は、一つは
超遠心や電気泳動などの分別による手法、またもう一つ
は沈殿による手法であるという点である。前者は高価な
機器の操作を必要とし、また時間も非常にかかる。した
がってこれらは主に参考および確認試験として使用され
る。現在では、高分子量で、大部分は陰性荷電性の物質
を使用した沈殿が、実験室における常法である。現在の
臨床診断においては、特にＬＤＬ沈殿試薬として、デキ
ストラン硫酸塩、ポリビニル硫酸塩、多環式表面活性ア
ニオンまたはヘパリンが使用される。しかし、これらの
方法には欠点が一つある。酸性媒体中でのヘパリン、ま
たは脂肪分解活性が強いかまたは存在する血清サンプル
中での多環式アニオンでの沈殿は、ＬＤＬコレステロー
ルについて実際よりも高い結果を示すのである。ＬＤＬ
定量に関して最も高い精度を示すことから、現在良好な
試薬と考えられている、デキストラン硫酸塩またはポリ
ビニル硫酸塩（ＰＶＳ）を使用した場合、脂肪分解活性
が強いかまたは存在する血清サンプル中での測定値は実
際よりも低い。さらに、デキストラン硫酸塩を含有する
沈殿試薬は、検定するサンプル中に遊離脂肪酸またはト
リグリセリドが多量に存在する場合にも、実際よりも低
い結果を示す。トリグリセリドが多いサンプルにおける
干渉は、主に高濃度のＶＬＤＬの存在が原因である。こ
の干渉は、ヘパリン治療中の患者においてはさらに強
い。沈殿法のすべてに共通するもう一つの欠点は、ＬＤ
Ｌの他に、ＬＤＬ類似リポタンパク質Ｌｐ（ａ）もまた
沈殿することである。したがって、これらの方法は完全
にＬＤＬ特異的ではない。
【０００４】DE 42 23 355に、ある種のアルカンスルホ
ン酸基を有するポリマーを使用する、ＬＤＬの特異的定
量方法が記載されている。しかし、この方法は、特に高
比率ＶＬＤＬ含有サンプルに関し、現在の必要性を部分
的にしか満足させない。
ン酸基を有するポリマーを使用する、ＬＤＬの特異的定
量方法が記載されている。しかし、この方法は、特に高
比率ＶＬＤＬ含有サンプルに関し、現在の必要性を部分
的にしか満足させない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、簡単
で迅速であって、リポタンパク質粒子、特にＶＬＤＬに
よる、または高濃度のトリグリセリド若しくは遊離脂肪
酸またはヘパリン化サンプルによる干渉が存在しない、
ＬＤＬの特異的定量方法を提供することである。
で迅速であって、リポタンパク質粒子、特にＶＬＤＬに
よる、または高濃度のトリグリセリド若しくは遊離脂肪
酸またはヘパリン化サンプルによる干渉が存在しない、
ＬＤＬの特異的定量方法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この目的は、検定すべき
サンプルに、ＬＤＬ沈殿剤、または水溶性ポリマー、例
えばアニオン性側鎖を含有するものと界面活性剤の１種
または界面活性剤混合物を添加することによって達成さ
れる。続いて、形成されたＬＤＬ特異的凝集物（凝結
物）の含有量を比濁測定によって直接定量する。本発明
の界面活性剤または界面活性剤混合物を添加すると、沈
殿剤としてデキストランまたはＰＶＳを使用する従来の
常法においても、ＶＬＤＬの干渉を低下させることがで
きる。
サンプルに、ＬＤＬ沈殿剤、または水溶性ポリマー、例
えばアニオン性側鎖を含有するものと界面活性剤の１種
または界面活性剤混合物を添加することによって達成さ
れる。続いて、形成されたＬＤＬ特異的凝集物（凝結
物）の含有量を比濁測定によって直接定量する。本発明
の界面活性剤または界面活性剤混合物を添加すると、沈
殿剤としてデキストランまたはＰＶＳを使用する従来の
常法においても、ＶＬＤＬの干渉を低下させることがで
きる。
【０００７】可能な水溶性ポリマーは、DE 42 23 355
の、アクリル酸エステル単量体から誘導した、アニオン
性側鎖を有するものであるが、デキストラン硫酸塩およ
びヘパリンもまた使用可能である。特に好ましいのは、
一般式（Ｉ）の化合物：
の、アクリル酸エステル単量体から誘導した、アニオン
性側鎖を有するものであるが、デキストラン硫酸塩およ
びヘパリンもまた使用可能である。特に好ましいのは、
一般式（Ｉ）の化合物：
【０００８】
【化４】
【０００９】［Ｒ1 は水素または低級炭化水素残基、好
ましくはメチル基、Ｘは酸素原子またはＮＨ基、ＡはＣ
原子数２〜10の直鎖または分枝炭化水素鎖、好ましくは
分枝鎖、およびＺはＣＯＯ- 、ＳＯ2-Ｏ- またはＰＯ
（ＯＨ）Ｏ- 基である］である。
ましくはメチル基、Ｘは酸素原子またはＮＨ基、ＡはＣ
原子数２〜10の直鎖または分枝炭化水素鎖、好ましくは
分枝鎖、およびＺはＣＯＯ- 、ＳＯ2-Ｏ- またはＰＯ
（ＯＨ）Ｏ- 基である］である。
【００１０】
【化５】
【００１１】２−アクリルアミド−２−メチル−１−プ
ロパンスルホン酸、２−アクリルアミドグリコール酸の
ホモポリマーおよび／またはこれらのモノマーのコポリ
マーが特に好適であることが確認された。アニオン性側
鎖のポリマーは好ましくは分子量が２×104 〜５×106
ダルトン、特に好ましくは約５×105 ダルトン（ゲル透
過クロマトグラフィー）である。
ロパンスルホン酸、２−アクリルアミドグリコール酸の
ホモポリマーおよび／またはこれらのモノマーのコポリ
マーが特に好適であることが確認された。アニオン性側
鎖のポリマーは好ましくは分子量が２×104 〜５×106
ダルトン、特に好ましくは約５×105 ダルトン（ゲル透
過クロマトグラフィー）である。
【００１２】これらのアニオン性ポリマーは溶液、懸濁
または乳化重合を含む、当業者に知られた方法によって
製造することができる（Meth.d.Organ.Chemie(Houben-W
eyl),Vol.E 20,Makrom.Stoffe,Thieme Verlag,Stuttgar
t,1987）。Polymer 31(1990),1269-1267(Huglin and Re
go) に記載されたような溶媒重合が特に好ましい。この
重合は一般的な開始剤、殊に過酸化物、過硫酸塩若しく
は過硫酸塩／亜硫酸水素塩または水系中でフリーラジカ
ルの形態で存在するこれらに対応するアゾ化合物によっ
て促進させることができる。これもまた、当業者に知ら
れている。
または乳化重合を含む、当業者に知られた方法によって
製造することができる（Meth.d.Organ.Chemie(Houben-W
eyl),Vol.E 20,Makrom.Stoffe,Thieme Verlag,Stuttgar
t,1987）。Polymer 31(1990),1269-1267(Huglin and Re
go) に記載されたような溶媒重合が特に好ましい。この
重合は一般的な開始剤、殊に過酸化物、過硫酸塩若しく
は過硫酸塩／亜硫酸水素塩または水系中でフリーラジカ
ルの形態で存在するこれらに対応するアゾ化合物によっ
て促進させることができる。これもまた、当業者に知ら
れている。
【００１３】１種または数種の分枝ポリアニオンの濃度
は0.001〜5.0 mg/mlの範囲、好ましくは0.005〜1.0 mg/
mlの範囲である。特に好適な範囲は0.01〜0.1 mg/ml で
ある。本発明において添加される界面活性剤は、特に一
般式（II）の両性イオン特性を有するものである。
は0.001〜5.0 mg/mlの範囲、好ましくは0.005〜1.0 mg/
mlの範囲である。特に好適な範囲は0.01〜0.1 mg/ml で
ある。本発明において添加される界面活性剤は、特に一
般式（II）の両性イオン特性を有するものである。
【００１４】
【化６】
【００１５】［ｘは１〜20の数、ｙは０〜８の数、Ｒ1
は水素、コラミド基またはリン酸残基を介して結合して
いるモノ若しくはジグリセリド基、Ｒ2 は水素、ヒドロ
キシル基若しくはオキシアニオン、酸性残基、ヒドロキ
シアルキルスルホン酸基またはカルボキシル基を表す］ 好ましい界面活性剤は、ｘが11〜17の奇数、ｙが１〜３
の数、および／またはＲ2 がスルホン酸残基、ヒドロキ
シエチルスルホン酸残基、ヒドロキシプロピルスルホン
酸残基若しくはカルボキシル残基、またはＲ1 が水素、
ステロイドフレーム、レシチン若しくはリゾレシチン残
基の物質である。
は水素、コラミド基またはリン酸残基を介して結合して
いるモノ若しくはジグリセリド基、Ｒ2 は水素、ヒドロ
キシル基若しくはオキシアニオン、酸性残基、ヒドロキ
シアルキルスルホン酸基またはカルボキシル基を表す］ 好ましい界面活性剤は、ｘが11〜17の奇数、ｙが１〜３
の数、および／またはＲ2 がスルホン酸残基、ヒドロキ
シエチルスルホン酸残基、ヒドロキシプロピルスルホン
酸残基若しくはカルボキシル残基、またはＲ1 が水素、
ステロイドフレーム、レシチン若しくはリゾレシチン残
基の物質である。
【００１６】特に好適な界面活性剤は以下の物質であ
る：Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−３−
プロパン硫酸塩または対応するＮ−テトラデシル若しく
はＮ−ヘキサデシル化合物（“Zwittergent"タイプ：Zw
ittergent 3-14,3-16 ）、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメ
チル−グリシン（Empigen BB (登録商標) ）、アミノキ
シド、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯおよびα−レシチン
（α−ホスファチジルコリン）若しくはα−リゾレシチ
ン（α−リゾホスファチジルコリン）。すべての界面活
性剤が市販されている。
る：Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニオ−３−
プロパン硫酸塩または対応するＮ−テトラデシル若しく
はＮ−ヘキサデシル化合物（“Zwittergent"タイプ：Zw
ittergent 3-14,3-16 ）、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメ
チル−グリシン（Empigen BB (登録商標) ）、アミノキ
シド、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯおよびα−レシチン
（α−ホスファチジルコリン）若しくはα−リゾレシチ
ン（α−リゾホスファチジルコリン）。すべての界面活
性剤が市販されている。
【００１７】両性イオン界面活性剤は単独でまたはPlur
onic F68（ポリオキシプロピレンポリオキシエチレンブ
ロックコポリマー）および／またはTween 20（ポリオキ
シエチレン(20)ソルビタンモノラウレート）などの非イ
オン性界面活性剤と組み合わせて使用される。一般的
に、本発明の定量方法において、緩衝能が弱酸性、中性
または弱アルカリ性のｐＨ範囲であれば、緩衝物質を使
用することが可能である。特に好適な緩衝物質は酢酸ナ
トリウムおよびTris−ＨＣｌ、ビス−Trisメタン、ＭＥ
Ｓまたはイミダゾールなどのいわゆる Good 緩衝液であ
る。これらの緩衝液を使用する場合、測定ｐＨ値は好ま
しくはｐＨ５〜９、特に好ましくは7.0〜8.0の範囲であ
り、特に好適な範囲は7.3〜7.7の一つである。緩衝液の
濃度は、0.001 〜0.2 mol/l の範囲とするのがよい。特
に好適な濃度範囲は0.005〜0.07 mol/lの一つである。
onic F68（ポリオキシプロピレンポリオキシエチレンブ
ロックコポリマー）および／またはTween 20（ポリオキ
シエチレン(20)ソルビタンモノラウレート）などの非イ
オン性界面活性剤と組み合わせて使用される。一般的
に、本発明の定量方法において、緩衝能が弱酸性、中性
または弱アルカリ性のｐＨ範囲であれば、緩衝物質を使
用することが可能である。特に好適な緩衝物質は酢酸ナ
トリウムおよびTris−ＨＣｌ、ビス−Trisメタン、ＭＥ
Ｓまたはイミダゾールなどのいわゆる Good 緩衝液であ
る。これらの緩衝液を使用する場合、測定ｐＨ値は好ま
しくはｐＨ５〜９、特に好ましくは7.0〜8.0の範囲であ
り、特に好適な範囲は7.3〜7.7の一つである。緩衝液の
濃度は、0.001 〜0.2 mol/l の範囲とするのがよい。特
に好適な濃度範囲は0.005〜0.07 mol/lの一つである。
【００１８】好ましい態様においては、２価金属イオン
の存在下で、Tris−ＨＣｌ緩衝液、ビス［２−ヒドロキ
シエチル］イミノ−トリス［ヒドロキシメチル］メタン
（ビス−Tris）緩衝液、ＭＥＳまたはイミダゾールを使
用する。緩衝液の濃度は0.001〜0.2 mol/l、金属塩の濃
度は0.001〜0.20 mol/l、またｐＨ値は5.5 〜9.0 の範
囲である。特に好ましい態様においては、緩衝液の濃度
は 0.005〜0.07 mol/l、金属塩の濃度は0.01〜0.03 mol
/l、またｐＨ値は7.0〜8.0の範囲である。一般的に、す
べての既知の２価金属イオンの塩を使用することが可能
である。特に好ましいのはＭｇ2+、Ｃａ2+、Ｍｎ2+およ
びＣｕ2+である。Ｍｇ2+およびＣａ2+が特に好適である
ことが確認された。ポリアニオン濃度は上に示したよう
に選択するのがよい。
の存在下で、Tris−ＨＣｌ緩衝液、ビス［２−ヒドロキ
シエチル］イミノ−トリス［ヒドロキシメチル］メタン
（ビス−Tris）緩衝液、ＭＥＳまたはイミダゾールを使
用する。緩衝液の濃度は0.001〜0.2 mol/l、金属塩の濃
度は0.001〜0.20 mol/l、またｐＨ値は5.5 〜9.0 の範
囲である。特に好ましい態様においては、緩衝液の濃度
は 0.005〜0.07 mol/l、金属塩の濃度は0.01〜0.03 mol
/l、またｐＨ値は7.0〜8.0の範囲である。一般的に、す
べての既知の２価金属イオンの塩を使用することが可能
である。特に好ましいのはＭｇ2+、Ｃａ2+、Ｍｎ2+およ
びＣｕ2+である。Ｍｇ2+およびＣａ2+が特に好適である
ことが確認された。ポリアニオン濃度は上に示したよう
に選択するのがよい。
【００１９】本発明の別の主題は、水溶性ポリマー、両
性イオン性および／または非イオン性界面活性剤および
ｐＨ範囲を５〜９に緩衝する物質を含有する試薬であ
る。使用するポリマーの量は試薬溶液中、およそ0.005
〜1.0 mg/mlの範囲である；特に好ましいのは、0.02〜
0.04の濃度範囲、特に好ましくは0.02〜0.04の濃度範囲
の、ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−１−プ
ロパンスルホン酸）（ＰＡＭＰＳ）、ポリアクリル酸−
（２−ホスホ−１，１−ジメチル−エチルアミド）（Ｐ
ＡＰ）、ポリ−２−アクリルアミド−グリコール酸（Ｐ
ＡＡＧ）、ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−
１−プロパンスルホン酸−ＣＯ−２−アクリルアミド−
グリコール酸）［Ｐ（ＡＭＰＳ−ＡＡＧ）］および／ま
たは対応するポリマーおよび／または対応するポリ（メ
タ）アクリル酸エステルまたはさらにデキストラン硫酸
塩、ポリビニル硫酸塩またはヘパリンである。
性イオン性および／または非イオン性界面活性剤および
ｐＨ範囲を５〜９に緩衝する物質を含有する試薬であ
る。使用するポリマーの量は試薬溶液中、およそ0.005
〜1.0 mg/mlの範囲である；特に好ましいのは、0.02〜
0.04の濃度範囲、特に好ましくは0.02〜0.04の濃度範囲
の、ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−１−プ
ロパンスルホン酸）（ＰＡＭＰＳ）、ポリアクリル酸−
（２−ホスホ−１，１−ジメチル−エチルアミド）（Ｐ
ＡＰ）、ポリ−２−アクリルアミド−グリコール酸（Ｐ
ＡＡＧ）、ポリ−（２−アクリルアミド−２−メチル−
１−プロパンスルホン酸−ＣＯ−２−アクリルアミド−
グリコール酸）［Ｐ（ＡＭＰＳ−ＡＡＧ）］および／ま
たは対応するポリマーおよび／または対応するポリ（メ
タ）アクリル酸エステルまたはさらにデキストラン硫酸
塩、ポリビニル硫酸塩またはヘパリンである。
【００２０】界面活性剤の添加量は使用する界面活性剤
のタイプによって決まる。比較的に短い鎖長（ｘ，ｙ＜
４）の界面活性剤では、高濃度で使用した場合にのみ、
ＶＬＤＬ干渉の低下効果が得られる。約0.002〜1.0％(w
/v) の濃度の両性イオン性界面活性剤の添加が、この方
法において特に好適であることが確認された。特に好適
な緩衝物質は、酢酸ナトリウム、Tris−ＨＣｌ、ビス−
Tris、ＭＥＳ、およびイミダゾールである。緩衝液の好
ましい濃度は 0.001〜0.2 mol/l の範囲である。
のタイプによって決まる。比較的に短い鎖長（ｘ，ｙ＜
４）の界面活性剤では、高濃度で使用した場合にのみ、
ＶＬＤＬ干渉の低下効果が得られる。約0.002〜1.0％(w
/v) の濃度の両性イオン性界面活性剤の添加が、この方
法において特に好適であることが確認された。特に好適
な緩衝物質は、酢酸ナトリウム、Tris−ＨＣｌ、ビス−
Tris、ＭＥＳ、およびイミダゾールである。緩衝液の好
ましい濃度は 0.001〜0.2 mol/l の範囲である。
【００２１】ここに示す濃度は最終濃度、すなわち反応
混合物中の濃度である。ＬＤＬ定量用試薬のｐＨ値の範
囲は5.0〜9.0、好ましくはｐＨ7.0〜8.0、またはｐＨ7.
3〜7.7である。作用温度は10〜40℃の範囲でよいが、好
ましいのは温度約37℃である。試薬溶液に対する検定す
べきサンプルの容量比は多様である。1：6〜1：100の比
が好適であることが確認された。血清サンプル約５部
（例えば5μl）を試薬溶液 300部（例えば300μl）と混
合するのが好ましい。サンプルとしては、特に血清、血
漿または尿などの生物学的液体である。
混合物中の濃度である。ＬＤＬ定量用試薬のｐＨ値の範
囲は5.0〜9.0、好ましくはｐＨ7.0〜8.0、またはｐＨ7.
3〜7.7である。作用温度は10〜40℃の範囲でよいが、好
ましいのは温度約37℃である。試薬溶液に対する検定す
べきサンプルの容量比は多様である。1：6〜1：100の比
が好適であることが確認された。血清サンプル約５部
（例えば5μl）を試薬溶液 300部（例えば300μl）と混
合するのが好ましい。サンプルとしては、特に血清、血
漿または尿などの生物学的液体である。
【００２２】さらに、最初に２つの別の試薬溶液、すな
わち２価金属イオンを含有する第１溶液と水溶性ポリマ
ー凝集剤を含有する第２溶液を調製するのが有効である
ことが確認された。両性イオン性および／または非イオ
ン性界面活性剤は、第１試薬に添加して、その後これに
サンプルを添加するか、または両方の試薬に添加する。
わち２価金属イオンを含有する第１溶液と水溶性ポリマ
ー凝集剤を含有する第２溶液を調製するのが有効である
ことが確認された。両性イオン性および／または非イオ
ン性界面活性剤は、第１試薬に添加して、その後これに
サンプルを添加するか、または両方の試薬に添加する。
【００２３】他の既知の方法に比較して、本発明の場合
の、デキストラン硫酸塩、ポリビニル硫酸塩またはヘパ
リンなどのＬＤＬ沈殿剤、また好ましくはアニオン性ポ
リマー（ＰＡＭＰＳ）および１種または数種の界面活性
剤によって誘発される、ＬＤＬ特異的凝集または凝結
は、以下の利点を有する： １． ＬＤＬの他に、超低密度リポプロテイン（ＶＬＤ
Ｌ）、Ｌｐ（ａ）および／またはカイロミクロンのよう
なアポプロテインＢ含有リポプロテインが本発明の組合
せのいずれとも相互作用を行なわず、したがってこれら
が測定されることはない。 ２． 高グリセリド濃度が結果にマイナスの影響を与え
ることはない。 ３． 定量は、サンプルの前処理をすることなく、迅速
に実施される（約１〜10分）。 ４． 形成された凝集は極めて安定した状態で存在し、
直接測定することができ、また再現性がある。 ５． ＬＤＬコレステロールの定量は極めて広い範囲に
わたって（ＬＤＬコレステロール 50〜350 mg/dl）直線
性がある。
の、デキストラン硫酸塩、ポリビニル硫酸塩またはヘパ
リンなどのＬＤＬ沈殿剤、また好ましくはアニオン性ポ
リマー（ＰＡＭＰＳ）および１種または数種の界面活性
剤によって誘発される、ＬＤＬ特異的凝集または凝結
は、以下の利点を有する： １． ＬＤＬの他に、超低密度リポプロテイン（ＶＬＤ
Ｌ）、Ｌｐ（ａ）および／またはカイロミクロンのよう
なアポプロテインＢ含有リポプロテインが本発明の組合
せのいずれとも相互作用を行なわず、したがってこれら
が測定されることはない。 ２． 高グリセリド濃度が結果にマイナスの影響を与え
ることはない。 ３． 定量は、サンプルの前処理をすることなく、迅速
に実施される（約１〜10分）。 ４． 形成された凝集は極めて安定した状態で存在し、
直接測定することができ、また再現性がある。 ５． ＬＤＬコレステロールの定量は極めて広い範囲に
わたって（ＬＤＬコレステロール 50〜350 mg/dl）直線
性がある。
【００２４】本発明の方法および／または試薬は、１〜
５分以内にＬＤＬ粒子の完全に特異的な凝結をもたら
す。ここでは高濃度のトリグリセリドによる干渉もない
し、他のリポプロテイン画分をあらかじめ除去する必要
もない。したがって、ＬＤＬ濃度、または日常の作業上
望ましいＬＤＬコレステロールの定量のため、検定を分
析機または単純な光度計（比濁測定による）で実施する
ことができる。さらに、ＬＤＬ凝結物中に含まれるＬＤ
Ｌ粒子のアポプロテインＢ−100 および／または他の分
子成分を定量することも可能である。
５分以内にＬＤＬ粒子の完全に特異的な凝結をもたら
す。ここでは高濃度のトリグリセリドによる干渉もない
し、他のリポプロテイン画分をあらかじめ除去する必要
もない。したがって、ＬＤＬ濃度、または日常の作業上
望ましいＬＤＬコレステロールの定量のため、検定を分
析機または単純な光度計（比濁測定による）で実施する
ことができる。さらに、ＬＤＬ凝結物中に含まれるＬＤ
Ｌ粒子のアポプロテインＢ−100 および／または他の分
子成分を定量することも可能である。
【００２５】本発明の方法は、直線的測定シグナルを示
す測定範囲が広いので、診断上適切な範囲、殊に上昇し
たＬＤＬ値（＞190 mg/dl ）の範囲にわたって、ただ１
点のみの検量値しか必要でないという利点を有する。直
線範囲が増大するため、リポプロテインの電気泳動また
は超遠心などの高価な確認操作を必要とすることなく、
上昇したＬＤＬ値をより正確に定量的にモニターするこ
とも可能である。
す測定範囲が広いので、診断上適切な範囲、殊に上昇し
たＬＤＬ値（＞190 mg/dl ）の範囲にわたって、ただ１
点のみの検量値しか必要でないという利点を有する。直
線範囲が増大するため、リポプロテインの電気泳動また
は超遠心などの高価な確認操作を必要とすることなく、
上昇したＬＤＬ値をより正確に定量的にモニターするこ
とも可能である。
【００２６】本発明の方法および試薬はＬＤＬを凝結さ
せるが、ＬＤＬ類似Ｌｐ（ａ）を付加的に凝結させるこ
とはない。すべての既知のＬＤＬ沈殿試薬が少なくとも
部分的にはＬｐ（ａ）画分をも沈澱させるので、この知
見は驚くべきものである。したがって、本発明によるＬ
ＤＬの凝結および定量の後に、ジスルフィド架橋を介し
て結合しているＬｐ（ａ）粒子のＬｐ（ａ）部分を還元
によって切断するという単純な手法で、本発明を使用し
て、Ｌｐ（ａ）画分をも、定量することが可能である。
この差を得ることによって、リポプロテイン（ａ）の含
有量を定量することができる。
せるが、ＬＤＬ類似Ｌｐ（ａ）を付加的に凝結させるこ
とはない。すべての既知のＬＤＬ沈殿試薬が少なくとも
部分的にはＬｐ（ａ）画分をも沈澱させるので、この知
見は驚くべきものである。したがって、本発明によるＬ
ＤＬの凝結および定量の後に、ジスルフィド架橋を介し
て結合しているＬｐ（ａ）粒子のＬｐ（ａ）部分を還元
によって切断するという単純な手法で、本発明を使用し
て、Ｌｐ（ａ）画分をも、定量することが可能である。
この差を得ることによって、リポプロテイン（ａ）の含
有量を定量することができる。
【００２７】さらに、界面活性剤の添加はＬＤＬの沈殿
に大きな影響を与えるというこれまでの情報にもかかわ
らず、驚くべきことに、両性イオン性界面活性剤、殊に
Zwittergent または非イオン性界面活性剤の混合物を添
加することによって、ＬＤＬの特異的沈殿には影響を及
ぼすことなく、ＶＬＤＬの同時沈殿を防止することが可
能であったことに注目すべきである。反応混合物中の界
面活性剤の最適濃度を決定することが特に重要である。
低すぎる濃度を適用した場合は、干渉の低下はほとんど
見られず、一方高すぎる界面活性剤濃度ではＶＬＤＬの
同時沈殿は防止されるが、ＬＤＬ粒子の完全沈殿もまた
低下する。本発明の方法および試薬によって、ＶＬＤＬ
含有量が約130 mg/dl まで、干渉作用のないＬＤＬ定量
をすることが可能である。これはグリセリド含有量で約
800 mg/ml に相当するが、デキストラン硫酸塩沈殿など
の通常法では、トリグリセリドが400 mg/ml において、
すでに有意の干渉が示される。
に大きな影響を与えるというこれまでの情報にもかかわ
らず、驚くべきことに、両性イオン性界面活性剤、殊に
Zwittergent または非イオン性界面活性剤の混合物を添
加することによって、ＬＤＬの特異的沈殿には影響を及
ぼすことなく、ＶＬＤＬの同時沈殿を防止することが可
能であったことに注目すべきである。反応混合物中の界
面活性剤の最適濃度を決定することが特に重要である。
低すぎる濃度を適用した場合は、干渉の低下はほとんど
見られず、一方高すぎる界面活性剤濃度ではＶＬＤＬの
同時沈殿は防止されるが、ＬＤＬ粒子の完全沈殿もまた
低下する。本発明の方法および試薬によって、ＶＬＤＬ
含有量が約130 mg/dl まで、干渉作用のないＬＤＬ定量
をすることが可能である。これはグリセリド含有量で約
800 mg/ml に相当するが、デキストラン硫酸塩沈殿など
の通常法では、トリグリセリドが400 mg/ml において、
すでに有意の干渉が示される。
【００２８】各反応成分を担持物質上若しくは中にしみ
込ませるかまたは共有結合させることによって、本発明
の方法を試験片または同様の基体上で実施することも可
能である。可能な担持物質は、例えばティーバッグ用紙
などの紙または紙状のフリース材など、試験片として通
常使用されるものと同様に、膨張する能力を有する吸収
材またはフィルム形成性担持物質である。反応成分は互
いに接し合う数種の担体上に分布させるか、または成分
自体を担体とすることができる。共有結合させたポリア
ニオン類（例えばＰＡＭＰＳ）によって、試験片上でＬ
ＤＬの完全に選択的な分離ができる。ＬＤＬコレステロ
ール値は、非結合リポプロテイン粒子のコレステロール
含有量を測定し、総コレステロール含有量との差を得る
ことによって、定量することができる。
込ませるかまたは共有結合させることによって、本発明
の方法を試験片または同様の基体上で実施することも可
能である。可能な担持物質は、例えばティーバッグ用紙
などの紙または紙状のフリース材など、試験片として通
常使用されるものと同様に、膨張する能力を有する吸収
材またはフィルム形成性担持物質である。反応成分は互
いに接し合う数種の担体上に分布させるか、または成分
自体を担体とすることができる。共有結合させたポリア
ニオン類（例えばＰＡＭＰＳ）によって、試験片上でＬ
ＤＬの完全に選択的な分離ができる。ＬＤＬコレステロ
ール値は、非結合リポプロテイン粒子のコレステロール
含有量を測定し、総コレステロール含有量との差を得る
ことによって、定量することができる。
【００２９】使用する略語 ＣＨＡＰＳ＝［３−（３−コラニドプロピル）−ジメチ
ルアンモニオ］−１−プロパン硫酸 ＣＨＡＰＳＯ＝［３−（３−コラニドプロピル）−ジメ
チルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパン硫酸 ＭＥＳ＝２−Ｎ−モルホリノ−エタンスルホン酸 図１：ＶＬＤＬ含有量［mg/dl ］に対するＬＤＬの回収
率（％） −□−界面活性剤無し −ｘ−0.005％ ツビッテルゼント(Zwittergent)3-14 以下の実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
ルアンモニオ］−１−プロパン硫酸 ＣＨＡＰＳＯ＝［３−（３−コラニドプロピル）−ジメ
チルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパン硫酸 ＭＥＳ＝２−Ｎ−モルホリノ−エタンスルホン酸 図１：ＶＬＤＬ含有量［mg/dl ］に対するＬＤＬの回収
率（％） −□−界面活性剤無し −ｘ−0.005％ ツビッテルゼント(Zwittergent)3-14 以下の実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
【００３０】
（実施例１） 均一系ＬＤＬ試験におけるＶＬＤＬ干渉の低下に及ぼす
Zwittergent 濃度の影響 試薬溶液１：10 mM ビス−Trisメタン、ｐＨ7.5 12 mM ＭｇＣｌ2 ｘ％Zwittergent 3-14（＝Ｎ−テトラデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチルア ンモニオ−３−プロパンスルホン酸） 試薬溶液２：10 mM ビス−Trisメタン、ｐＨ7.5 0.05 mg/mlＰＡＭＰＳ ＶＬＤＬ低含有量（16 mg/dl）の天然サンプルにＬＤＬ
を含まないＶＬＤＬ調製物をまず添加した。次にこのサ
ンプル 5μl に試薬溶液１ 250μl を添加し、37℃で５
分間インキュベートした。続いて試薬溶液２を50μl 添
加し、さらに37℃で５分間インキュベートした。このイ
ンキュベート後すぐに、生成した濁度を505 nmで２色法
で測定した（対照波長700 nm）。
Zwittergent 濃度の影響 試薬溶液１：10 mM ビス−Trisメタン、ｐＨ7.5 12 mM ＭｇＣｌ2 ｘ％Zwittergent 3-14（＝Ｎ−テトラデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチルア ンモニオ−３−プロパンスルホン酸） 試薬溶液２：10 mM ビス−Trisメタン、ｐＨ7.5 0.05 mg/mlＰＡＭＰＳ ＶＬＤＬ低含有量（16 mg/dl）の天然サンプルにＬＤＬ
を含まないＶＬＤＬ調製物をまず添加した。次にこのサ
ンプル 5μl に試薬溶液１ 250μl を添加し、37℃で５
分間インキュベートした。続いて試薬溶液２を50μl 添
加し、さらに37℃で５分間インキュベートした。このイ
ンキュベート後すぐに、生成した濁度を505 nmで２色法
で測定した（対照波長700 nm）。
【００３１】表１から、界面活性剤を添加しない場合に
は、ＶＬＤＬ 25mg/dlで有意な干渉が観察され始めた
が、Zwittergent 0.005 および0.01％が効果的であるこ
とがわかる；すなわち、ＶＬＤＬの干渉がほぼ完全に除
去された。
は、ＶＬＤＬ 25mg/dlで有意な干渉が観察され始めた
が、Zwittergent 0.005 および0.01％が効果的であるこ
とがわかる；すなわち、ＶＬＤＬの干渉がほぼ完全に除
去された。
【００３２】
【表１】
【００３３】（実施例２） 均一系ＬＤＬ試験におけるＶＬＤＬ干渉に及ぼす各種両
性イオン性界面活性剤の影響 試薬溶液： 実施例１参照 Zwittergent 3-14の他に以下の界面活性剤を使用した。
性イオン性界面活性剤の影響 試薬溶液： 実施例１参照 Zwittergent 3-14の他に以下の界面活性剤を使用した。
【００３４】 Zwittergent 3-08(N-オクチル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロハ゜ン
スルホネ-ト) Zwittergent 3-10(N-テ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロハ゜ン
スルホネ-ト) Zwittergent 3-12(N-ト゛テ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロハ
゜ンスルホネ-ト) Zwittergent 3-16(N-ヘキサテ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロ
ハ゜ンスルホネ-ト) 実施例１において記載したように、ＶＬＤＬ低含有量
（16 mg/dl）の天然サンプルにＬＤＬを含まないＶＬＤ
Ｌ調製物を添加した。
スルホネ-ト) Zwittergent 3-10(N-テ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロハ゜ン
スルホネ-ト) Zwittergent 3-12(N-ト゛テ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロハ
゜ンスルホネ-ト) Zwittergent 3-16(N-ヘキサテ゛シル-N,N-シ゛メチル-3-アンモニオ-1-フ゜ロ
ハ゜ンスルホネ-ト) 実施例１において記載したように、ＶＬＤＬ低含有量
（16 mg/dl）の天然サンプルにＬＤＬを含まないＶＬＤ
Ｌ調製物を添加した。
【００３５】表２から、Zwittergent 3-14の他に、Zwit
tergent 3-16もまたＶＬＤＬ添加サンプルに対して極め
て良好な干渉低下効果を示すことがわかる。少し短いア
ルキル基を含有する置換体は試験した濃度においては改
善作用を示さない。
tergent 3-16もまたＶＬＤＬ添加サンプルに対して極め
て良好な干渉低下効果を示すことがわかる。少し短いア
ルキル基を含有する置換体は試験した濃度においては改
善作用を示さない。
【００３６】
【表２】
【００３７】（実施例３） ＬＤＬ試験におけるＶＬＤＬ干渉の低下に及ぼす各種両
性イオン性界面活性剤および界面活性剤混合物の影響 実施例１において記載したように、ＶＬＤＬ含有量 64
mg/dl のＬＤＬを含まないＶＬＤＬ調製物を試験した。
この調製物はＬＤＬを含有していないから、得られるＬ
ＤＬ値は０になるはずである（最適値）。
性イオン性界面活性剤および界面活性剤混合物の影響 実施例１において記載したように、ＶＬＤＬ含有量 64
mg/dl のＬＤＬを含まないＶＬＤＬ調製物を試験した。
この調製物はＬＤＬを含有していないから、得られるＬ
ＤＬ値は０になるはずである（最適値）。
【００３８】
【表３】
【００３９】（実施例４） ＶＬＤＬ干渉の低下に及ぼす各種タイプのZwittergent
の濃度の影響 ＶＬＤＬ含有量を変えた天然サンプルにおける、Zwitte
rgent タイプ3-10、3-12、および3-14の界面活性剤濃度
の影響を試験した。 実験計画：実施例１参照 表４に示される結果によると、ＶＬＤＬを130 mg/dl ま
で含有するサンプルにおける干渉を完全に除去し得るこ
とが確認される。比較的短い鎖長を有するZwittergent
の使用は、干渉を低下させるのに、より高濃度のｘを必
要とする。
の濃度の影響 ＶＬＤＬ含有量を変えた天然サンプルにおける、Zwitte
rgent タイプ3-10、3-12、および3-14の界面活性剤濃度
の影響を試験した。 実験計画：実施例１参照 表４に示される結果によると、ＶＬＤＬを130 mg/dl ま
で含有するサンプルにおける干渉を完全に除去し得るこ
とが確認される。比較的短い鎖長を有するZwittergent
の使用は、干渉を低下させるのに、より高濃度のｘを必
要とする。
【００４０】
【表４】
【図１】ＶＬＤＬ含有量に対するＬＤＬの回収率を示す
図である。 >
図である。 >
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平６−213899（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−280812（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−70566（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−16455（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−58469（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−45562（ＪＰ，Ａ) 特開 平８−201393（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−80056（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−184759（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−126498（ＪＰ，Ａ)
Claims (4)
- 【請求項１】緩衝液、ＬＤＬ沈殿剤または水溶性ポリマ
ーＬＤＬ凝集剤、並びに両性イオン性界面活性剤および
／または非イオン性界面活性剤を添加し、ＬＤＬ凝集物
を直接測定することによる、他の血清リポタンパク質の
存在下でのＬＤＬ画分の特異的定量方法。 - 【請求項２】ＬＤＬ凝集剤として、デキストラン硫酸
塩、ポリビニル硫酸塩、ヘパリンまたはアルカンスルホ
ン酸側鎖、アルカンホスホン酸側鎖および／またはアル
カンカルボン酸側鎖を有し、分子量が20,000〜5,000,00
0 ダルトン（ゲル透過クロマトグラフィー）である水溶
性ポリマーを添加し、界面活性剤として一般式（II） 【化１】 ［式中、ｘは１〜20の数、ｙは０〜８の数、Ｒ1 は水
素、コラミド基またはリン酸残基を介して結合している
モノ−若しくはジグリセリド基、Ｒ2 は水素、ヒドロキ
シル基若しくはオキシアニオン、酸性残基、ヒドロキシ
アルキルスルホン酸基またはカルボキシル基を表す］の
化合物を添加し、また緩衝液が酢酸ナトリウム、Tris−
ＨＣｌ、ビス−TrisメタンまたはＭＥＳおよび／または
イミダゾールであり、そしてｐＨが５〜９の範囲である
ことを特徴とする、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】低密度リポタンパク質、ＬＤＬコレステロ
ール、ＬＤＬアポリポタンパク質ＢまたはＬＤＬ粒子中
の他の分子成分を定量することを特徴とする、請求項１
〜２のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項４】（１）デキストラン硫酸塩、ポリビニル硫
酸塩、またはアルカンスルホン酸、アルカンホスホン酸
および／またはアルカンカルボン酸側鎖を有するポリマ
ー、（２）ｐＨを５〜９に調節するための緩衝液、およ
び（３）界面活性剤を含有する、他の血清リポタンパク
質の存在下でのＬＤＬの特異的定量用試薬であって、ポ
リアニオンの分子量が20,000〜5,000,000 ダルトン（ゲ
ル透過クロマトグラフィー）であり、界面活性剤が一般
式（II） 【化２】 ［式中、ｘは１〜20の数、ｙは０〜８の数、Ｒ1 は水
素、コラミド基またはリン酸残基を介して結合している
モノ−若しくはジグリセリド基、Ｒ2 は水素、ヒドロキ
シル基若しくはオキシアニオン、酸性残基、ヒドロキシ
アルキルスルホン酸基またはカルボキシル基を表す］の
化合物であり、また緩衝液が酢酸ナトリウム、Tris−Ｈ
Ｃｌ、ビス−TrisメタンまたはＭＥＳおよび／またはイ
ミダゾールである、試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19505894:1 | 1995-02-21 | ||
| DE19505894A DE19505894A1 (de) | 1995-02-21 | 1995-02-21 | Verfahren und Reagenz zur spezifischen Bestimmung von LDL in Serumproben |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09211002A JPH09211002A (ja) | 1997-08-15 |
| JP2749009B2 true JP2749009B2 (ja) | 1998-05-13 |
Family
ID=7754585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8034113A Expired - Fee Related JP2749009B2 (ja) | 1995-02-21 | 1996-02-21 | 血清サンプル中のｌｄｌの特異的定量方法および試薬 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5804450A (ja) |
| EP (1) | EP0729032B1 (ja) |
| JP (1) | JP2749009B2 (ja) |
| KR (1) | KR960031992A (ja) |
| AU (1) | AU720492B2 (ja) |
| CA (1) | CA2170003A1 (ja) |
| DE (2) | DE19505894A1 (ja) |
| ES (1) | ES2176370T3 (ja) |
| IL (1) | IL117182A (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3193634B2 (ja) * | 1996-05-29 | 2001-07-30 | 第一化学薬品株式会社 | Ｌｄｌコレステロールの定量方法 |
| EP0821239A3 (en) * | 1996-07-25 | 1998-06-17 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd | Method for measuring an amount of LDL-cholesterol |
| US5814472A (en) * | 1997-05-13 | 1998-09-29 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Measurement of LDL-cholesterol |
| AU9263298A (en) | 1997-08-18 | 1999-03-08 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Phospholipid analogue compounds |
| US5925534A (en) * | 1998-06-08 | 1999-07-20 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Method for measuring LDL-cholesterol |
| CN1200113C (zh) * | 1998-09-18 | 2005-05-04 | 协和梅迪克斯株式会社 | 脂蛋白中胆固醇的分别定量法和定量用试剂 |
| JP3441993B2 (ja) * | 1999-01-27 | 2003-09-02 | 松下電器産業株式会社 | コレステロールセンサ |
| CA2356364C (en) | 1999-11-22 | 2003-12-09 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Cholesterol sensor and method for determining cholesterol |
| US7491542B2 (en) * | 2004-07-12 | 2009-02-17 | Kim Scheuringer | Test device for determining the concentration of LDL-cholesterol in a sample |
| CN100365409C (zh) * | 2005-06-01 | 2008-01-30 | 王贤理 | 一种测定低密度脂蛋白胆固醇的试剂及制备方法 |
| US8217025B2 (en) * | 2006-11-17 | 2012-07-10 | Harbor Therapeutics, Inc. | Drug screening and treatment methods |
| BRPI0812412B1 (pt) * | 2007-06-08 | 2018-12-18 | Quest Diagnostics Invest Inc | processos para purificação de lipoproteínas adequadas para a análise da mobilidade diferencial de partículas carregadas da classe ou da subclasse das lipoproteínas, para obtenção de lp(a) purificado, para purificação de lipoproteínas para a análise da mobilidade diferencial de partículas carregadas, o dito processo não incluindo a centrifugação |
| EP2116613B1 (en) * | 2007-09-05 | 2016-11-02 | ARKRAY, Inc. | Method and test piece for measuring low density lipoprotein (ldl) cholesterol |
| US20100323376A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | Maine Standards Company, Llc | Method for Measuring Lipoprotein-Specific Apolipoproteins |
Family Cites Families (4)
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