JP2702377B2 - ３位を求核基で置換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含有する半合成グリコサミノグリカン類 - Google Patents
３位を求核基で置換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含有する半合成グリコサミノグリカン類Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、３位を求核基で置換さ
れたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含有する新規半合成グリ
コサミノグリカン類、より詳しくはヘパリンまたはヘパ
ラン構造を有するグリコサミノグリカン類に特有の糖単
位の１つ、とくにα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の
単位が全体的にまたは部分的に、構造修飾(structural
modification) を受けて、３位を求核基で置換されたα
−Ｌ−ガラクツロン酸に変換(transformation)された新
規半合成グリコサミノグリカン類およびその製造法に関
する。
れたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含有する新規半合成グリ
コサミノグリカン類、より詳しくはヘパリンまたはヘパ
ラン構造を有するグリコサミノグリカン類に特有の糖単
位の１つ、とくにα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の
単位が全体的にまたは部分的に、構造修飾(structural
modification) を受けて、３位を求核基で置換されたα
−Ｌ−ガラクツロン酸に変換(transformation)された新
規半合成グリコサミノグリカン類およびその製造法に関
する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】欧州
特許出願公開第０３４７５８８号明細書（以下、ＥＰ−
０３４７５８８という）において、塩基性媒体中ヘパリ
ンおよびヘパラン構造を有するグリコサミノグリカン類
の構造修飾を行ない、つづいて化学的および物理的性質
により、とくに13Ｃ−ＮＭＲスペクトルにより間違いな
く証明されるように、当時の技術に関して新規な誘導体
を反応混合物から単離することが記載されている。
特許出願公開第０３４７５８８号明細書（以下、ＥＰ−
０３４７５８８という）において、塩基性媒体中ヘパリ
ンおよびヘパラン構造を有するグリコサミノグリカン類
の構造修飾を行ない、つづいて化学的および物理的性質
により、とくに13Ｃ−ＮＭＲスペクトルにより間違いな
く証明されるように、当時の技術に関して新規な誘導体
を反応混合物から単離することが記載されている。
【０００３】つづく欧州特許出願公開第０３８０９４３
号明細書（以下、ＥＰ−０３８０９４３という）におい
て、塩基性または中性媒体中、ＥＰ−０３４７５８８に
記載の反応条件で形成される生成物から、およびＥＰ−
０３４７５８８で出発物質として用いられるヘパリンま
たはヘパラン構造を有するグリコサミノグリカン類から
出発して、化学的および物理的性質により、とくに13Ｃ
−ＮＭＲスペクトルにより間違いなく証明されるよう
に、ＥＰ−０３４７５８８に記載された化合物とは異な
り、当時の技術に関して新規な一組の生成物をつくるさ
らなる構造修飾が記載されている。
号明細書（以下、ＥＰ−０３８０９４３という）におい
て、塩基性または中性媒体中、ＥＰ−０３４７５８８に
記載の反応条件で形成される生成物から、およびＥＰ−
０３４７５８８で出発物質として用いられるヘパリンま
たはヘパラン構造を有するグリコサミノグリカン類から
出発して、化学的および物理的性質により、とくに13Ｃ
−ＮＭＲスペクトルにより間違いなく証明されるよう
に、ＥＰ−０３４７５８８に記載された化合物とは異な
り、当時の技術に関して新規な一組の生成物をつくるさ
らなる構造修飾が記載されている。
【０００４】ＥＰ−０３４７５８８に記載されている生
成物の化学的および物理的性質およびカナディアン ジ
ャーナル オブ ケミストリー(Can. J. Chem.) 67、14
49〜56(1989)においてジャセイア エム(Jaseia M.) 、
レジ アール(Rej R.)、ソウリオル エフ(Sauriol F.)
およびパーリン エイ エス(Perlin A.S.) により記載
された塩基性媒体中の構造修飾の反応のメカニズムを説
明するという特定の目的をもったのちの構造研究の結果
により、これらの誘導体は、ヘパリンまたはヘパラン構
造を有するグリコサミノグリカン類に特有な糖単位のう
ちただ１つ、さらに詳しくは２位において硫酸化された
(sulfated)α−Ｌ−イズロン酸単位に関する、２，３−
エポキシグロニック単位への変換を含む修飾を示すとい
うことが証明された。
成物の化学的および物理的性質およびカナディアン ジ
ャーナル オブ ケミストリー(Can. J. Chem.) 67、14
49〜56(1989)においてジャセイア エム(Jaseia M.) 、
レジ アール(Rej R.)、ソウリオル エフ(Sauriol F.)
およびパーリン エイ エス(Perlin A.S.) により記載
された塩基性媒体中の構造修飾の反応のメカニズムを説
明するという特定の目的をもったのちの構造研究の結果
により、これらの誘導体は、ヘパリンまたはヘパラン構
造を有するグリコサミノグリカン類に特有な糖単位のう
ちただ１つ、さらに詳しくは２位において硫酸化された
(sulfated)α−Ｌ−イズロン酸単位に関する、２，３−
エポキシグロニック単位への変換を含む修飾を示すとい
うことが証明された。
【０００５】同様に、１つの２，３−エポキシグロニッ
ク単位を有する半合成グリコサミノグリカン類およびヘ
パリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグリカ
ン類もまた、ＥＰ−０３８０９４３に記載されているの
と同様の反応の条件で、２位において硫酸化されたα−
Ｌ−イズロン酸糖単位に関する、用いられる反応の条件
によってこの糖単位を非硫酸化α−Ｌ−イズロン酸また
はα−Ｌ−ガラクツロン酸単位へ変換することを含む構
造修飾を受けることが証明されている。
ク単位を有する半合成グリコサミノグリカン類およびヘ
パリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグリカ
ン類もまた、ＥＰ−０３８０９４３に記載されているの
と同様の反応の条件で、２位において硫酸化されたα−
Ｌ−イズロン酸糖単位に関する、用いられる反応の条件
によってこの糖単位を非硫酸化α−Ｌ−イズロン酸また
はα−Ｌ−ガラクツロン酸単位へ変換することを含む構
造修飾を受けることが証明されている。
【０００６】それゆえ、ＥＰ−０３４７５８８には、出
発点として必要とされるα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−
硫酸の単位の２位および３位の間にエポキシ基を含む半
合成グリコサミノグリカン類ならびにそれらをえるため
に必要な反応の条件が記載されている。一方、ＥＰ−０
３８０９４３には、１単位の非硫酸化α−Ｌ−イズロン
酸またはα−Ｌ−ガラクツロン酸を有するとして確認さ
れる、エポキシドのさらなる変換に由来する生成物なら
びにエポキシド自体から出発して、またはその代わりに
ＥＰ−０３４７５８８において出発物質として用いられ
ているヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミ
ノグリカン類から出発して、それらをえるために必要な
反応の条件が記載されている。
発点として必要とされるα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−
硫酸の単位の２位および３位の間にエポキシ基を含む半
合成グリコサミノグリカン類ならびにそれらをえるため
に必要な反応の条件が記載されている。一方、ＥＰ−０
３８０９４３には、１単位の非硫酸化α−Ｌ−イズロン
酸またはα−Ｌ−ガラクツロン酸を有するとして確認さ
れる、エポキシドのさらなる変換に由来する生成物なら
びにエポキシド自体から出発して、またはその代わりに
ＥＰ−０３４７５８８において出発物質として用いられ
ているヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミ
ノグリカン類から出発して、それらをえるために必要な
反応の条件が記載されている。
【０００７】本発明の主題は、ヘパリンまたはヘパラン
構造を有する天然のグリコサミノグリカン類に特有のα
−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の代わりに求核基によ
って３位を置換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含むこ
とを特徴とする、新規な半合成グリコサミノグリカン類
である。ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサ
ミノグリカン類のそれとは異なるウロニック基の配置
は、化学的および物理的データにしたがって、とくに13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルにしたがって決定された。
構造を有する天然のグリコサミノグリカン類に特有のα
−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の代わりに求核基によ
って３位を置換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸を含むこ
とを特徴とする、新規な半合成グリコサミノグリカン類
である。ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサ
ミノグリカン類のそれとは異なるウロニック基の配置
は、化学的および物理的データにしたがって、とくに13
Ｃ−ＮＭＲスペクトルにしたがって決定された。
【０００８】本出願の特許請求の範囲に記載の新規誘導
体は、技術水準に関して、とくに前記の公開された２つ
の欧州特許出願に関してさらなる進歩を表わすものであ
る。実際、後者の特許においては、塩基性水性媒体中、
水を求核剤として用いてえられた生成物が特許請求の範
囲に記載されている。この特許出願では、一連の、注意
深く選択された求核剤で、ヘパリンまたはヘパラン構造
を有するグリコサミノグリカン類に特有のα−Ｌ−イズ
ロン酸−２−Ｏ−硫酸単位の３位を求核基で置換された
α−Ｌ−ガラクツロン酸単位への変換がえられるような
条件で反応させることにより新規生成物がえられる。
体は、技術水準に関して、とくに前記の公開された２つ
の欧州特許出願に関してさらなる進歩を表わすものであ
る。実際、後者の特許においては、塩基性水性媒体中、
水を求核剤として用いてえられた生成物が特許請求の範
囲に記載されている。この特許出願では、一連の、注意
深く選択された求核剤で、ヘパリンまたはヘパラン構造
を有するグリコサミノグリカン類に特有のα−Ｌ−イズ
ロン酸−２−Ｏ−硫酸単位の３位を求核基で置換された
α−Ｌ−ガラクツロン酸単位への変換がえられるような
条件で反応させることにより新規生成物がえられる。
【０００９】本発明の別の目的は、適切な求核剤からお
よびＥＰ−０３４７５８８に記載のエポキシド類から出
発して前記生成物をえるための方法である。
よびＥＰ−０３４７５８８に記載のエポキシド類から出
発して前記生成物をえるための方法である。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明は、一般式（Ｉ
Ｖ）：
Ｖ）：
【００１１】
【化５】
【００１２】（式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。
ただし、この一般式は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い）で示される新規な半合成グリコサミノグリカン類、
ならびにＥＰ−０３４７５８８記載の製造法によりえら
れる一般式（ＩＩＩ）：
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。
ただし、この一般式は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い）で示される新規な半合成グリコサミノグリカン類、
ならびにＥＰ−０３４７５８８記載の製造法によりえら
れる一般式（ＩＩＩ）：
【００１３】
【化６】
【００１４】（式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を表わす。ただし、この一般式は主な糖単
位の組成を示すことを意図するものであり、それらの配
列に言及するものではない）で示される２，３−エポキ
シグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリカン
類を、一般式（ＩＩ）：
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を表わす。ただし、この一般式は主な糖単
位の組成を示すことを意図するものであり、それらの配
列に言及するものではない）で示される２，３−エポキ
シグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリカン
類を、一般式（ＩＩ）：
【００１５】
【化７】
【００１６】で示される求核基を有する求核剤と、溶
媒、ならびに求核剤中に存在するいかなる酸基をも塩に
するのに、および（または）求核剤が酸の性質を有する
物質と共に有しうるいかなる塩からも同じ求核剤を放出
するのに、および過剰のアルカリ性を発生し反応混合物
が用いられる塩基に関して０．０１Ｎから５Ｎとなるの
に、充分な量の無機もしくは有機塩基の存在下で、任意
に不活性ガス雰囲気中で、３０分ないし２４時間の間、
３５℃から９５℃の間の温度で撹拌下に保って反応させ
て、反応溶媒が水以外であるときは水で反応混合物を希
釈し、塩酸水溶液を加えて水溶液のｐＨを中和し、任意
に水と混和しない溶媒で抽出するかまたは濾過によって
過量の求核剤を除き、任意にその水溶液を流水および蒸
留水で透析し、ならびにその水溶液を凍結乾燥または適
切な溶媒を加えて沈殿させることにより生成物を単離す
る一般式（ＩＶ）：
媒、ならびに求核剤中に存在するいかなる酸基をも塩に
するのに、および（または）求核剤が酸の性質を有する
物質と共に有しうるいかなる塩からも同じ求核剤を放出
するのに、および過剰のアルカリ性を発生し反応混合物
が用いられる塩基に関して０．０１Ｎから５Ｎとなるの
に、充分な量の無機もしくは有機塩基の存在下で、任意
に不活性ガス雰囲気中で、３０分ないし２４時間の間、
３５℃から９５℃の間の温度で撹拌下に保って反応させ
て、反応溶媒が水以外であるときは水で反応混合物を希
釈し、塩酸水溶液を加えて水溶液のｐＨを中和し、任意
に水と混和しない溶媒で抽出するかまたは濾過によって
過量の求核剤を除き、任意にその水溶液を流水および蒸
留水で透析し、ならびにその水溶液を凍結乾燥または適
切な溶媒を加えて沈殿させることにより生成物を単離す
る一般式（ＩＶ）：
【００１７】
【化８】
【００１８】（式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。
ただし、この一般式は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い）で示される半合成グリコサミノグリカン類の製造法
に関する。
ｑ＝ｍで表わされるｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部
（ＳＯ3 - ）を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。
ただし、この一般式は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い）で示される半合成グリコサミノグリカン類の製造法
に関する。
【００１９】
【実施例】本発明の分野をよりよく定義するために、
「ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグ
リカン類」の語は、スロンボシス アンド ヘモスタシ
ス(Thrombosis and Haemostasis)66、44〜48(1991)にお
いてリンダール ユー(Lindhal U.)およびクジェレン
エル(Kjellen L.)によりおよびバイオケミカル ジャー
ナル(Biochem. J.) 273 、553 〜559(1991) においてタ
ーンブル ジェイイー(Turnbull J. E.)およびガラジャ
ー ジェイ ティー(Gallagher J. T.) により記載され
ているように、１，４−グリコシド結合で交互に連なっ
た、ウロン酸（α−Ｌ−イズロン酸またはβ−Ｄ−グル
クロン酸であってよい）とα−Ｄ−グルコサミンとから
なる二糖単位を有することを特徴とする、約 3,000から
約50,000ダルトンの間の分子量を有する多糖類を示すこ
とを意図するものであることを指摘しておきたい。α−
Ｌ−イズロン酸は２位を硫酸化することができ、グルコ
サミンはＮ−アセチル化、Ｎ−硫酸化、６−Ｏ−硫酸化
および３−Ｏ−硫酸化が可能であるので、置換基の様々
な位置により、少なくとも１０の異なる二糖単位が可能
であり、その組み合わせにより多数の異なる配列がえら
れる。最も代表的な二糖単位および最も頻繁な配列を心
に留めつつ、合理的な近似でもって、ヘパリンまたはヘ
パラン構造を有するグリコサミノグリカン類は一般式
（Ｉ）：
「ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグ
リカン類」の語は、スロンボシス アンド ヘモスタシ
ス(Thrombosis and Haemostasis)66、44〜48(1991)にお
いてリンダール ユー(Lindhal U.)およびクジェレン
エル(Kjellen L.)によりおよびバイオケミカル ジャー
ナル(Biochem. J.) 273 、553 〜559(1991) においてタ
ーンブル ジェイイー(Turnbull J. E.)およびガラジャ
ー ジェイ ティー(Gallagher J. T.) により記載され
ているように、１，４−グリコシド結合で交互に連なっ
た、ウロン酸（α−Ｌ−イズロン酸またはβ−Ｄ−グル
クロン酸であってよい）とα−Ｄ−グルコサミンとから
なる二糖単位を有することを特徴とする、約 3,000から
約50,000ダルトンの間の分子量を有する多糖類を示すこ
とを意図するものであることを指摘しておきたい。α−
Ｌ−イズロン酸は２位を硫酸化することができ、グルコ
サミンはＮ−アセチル化、Ｎ−硫酸化、６−Ｏ−硫酸化
および３−Ｏ−硫酸化が可能であるので、置換基の様々
な位置により、少なくとも１０の異なる二糖単位が可能
であり、その組み合わせにより多数の異なる配列がえら
れる。最も代表的な二糖単位および最も頻繁な配列を心
に留めつつ、合理的な近似でもって、ヘパリンまたはヘ
パラン構造を有するグリコサミノグリカン類は一般式
（Ｉ）：
【００２０】
【化９】
【００２１】（式中、Ｒは水素原子または硫酸残部（Ｓ
Ｏ3 - ）を表わし、ｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす）で示されうると言うことができ
る。
Ｏ3 - ）を表わし、ｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす）で示されうると言うことができ
る。
【００２２】天然のヘパリン構造のグリコサミノグリカ
ン類では、ｍの値は高く、二糖単位Ａは二糖単位の約８
０％を示す。これに対して、天然のヘパラン構造のグリ
コサミノグリカン類では、ｎの値が高く、二糖単位Ｂが
二糖単位の約８０％を示す。
ン類では、ｍの値は高く、二糖単位Ａは二糖単位の約８
０％を示す。これに対して、天然のヘパラン構造のグリ
コサミノグリカン類では、ｎの値が高く、二糖単位Ｂが
二糖単位の約８０％を示す。
【００２３】一般式（Ｉ）および後述の一般式（ＩＩ
Ｉ）および（ＩＶ）は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い。
Ｉ）および（ＩＶ）は主な糖単位の組成を示すことを意
図するものであり、それらの配列に言及するものではな
い。
【００２４】当業者に知られているように、天然に由来
するグリコサミノグリカン類を、たとえばＮ−脱硫酸(N
-desulfatation) の反応により、あるいはつづくＮ−ア
セチル化反応により、化学修飾することが可能である。
このようにして、半合成Ｎ−脱硫酸化ヘパリン類または
Ｎ−脱硫酸化−Ｎ−アセチル化ヘパリン類をえることも
できる。さらに、これらのグリコサミノグリカン類は、
天然であろうと半合成であろうと、解重合の工程に付す
ことができ、それによって分子量は概して3,000 から1
0,000ダルトンの間の水準をとる。
するグリコサミノグリカン類を、たとえばＮ−脱硫酸(N
-desulfatation) の反応により、あるいはつづくＮ−ア
セチル化反応により、化学修飾することが可能である。
このようにして、半合成Ｎ−脱硫酸化ヘパリン類または
Ｎ−脱硫酸化−Ｎ−アセチル化ヘパリン類をえることも
できる。さらに、これらのグリコサミノグリカン類は、
天然であろうと半合成であろうと、解重合の工程に付す
ことができ、それによって分子量は概して3,000 から1
0,000ダルトンの間の水準をとる。
【００２５】新規な半合成グリコサミノグリカン類をえ
るために本発明に記載される構造修飾は、結果としてヘ
パリンまたはヘパラン構造の消失をともなう、α−Ｌ−
イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の糖単位の３位を求核基で置
換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸の糖単位への部分的ま
たは全体的変換からなる。この構造修飾は、ヘパリンま
たはヘパラン構造を有するいかなるタイプの化合物に対
してもなされうる。実際、選択的であるほかにも、本発
明において記載される化学的方法は、起こりうるすべて
の配列のヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサ
ミノグリカン類に適用可能である。すなわち、それは、
構造修飾の反応の目的であるα−Ｌ−イズロン酸−２−
Ｏ−硫酸の単位の前または後に連なる糖単位のタイプお
よび官能基の水準によらない。
るために本発明に記載される構造修飾は、結果としてヘ
パリンまたはヘパラン構造の消失をともなう、α−Ｌ−
イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の糖単位の３位を求核基で置
換されたα−Ｌ−ガラクツロン酸の糖単位への部分的ま
たは全体的変換からなる。この構造修飾は、ヘパリンま
たはヘパラン構造を有するいかなるタイプの化合物に対
してもなされうる。実際、選択的であるほかにも、本発
明において記載される化学的方法は、起こりうるすべて
の配列のヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサ
ミノグリカン類に適用可能である。すなわち、それは、
構造修飾の反応の目的であるα−Ｌ−イズロン酸−２−
Ｏ−硫酸の単位の前または後に連なる糖単位のタイプお
よび官能基の水準によらない。
【００２６】新規生成物の構造は、一般式（ＩＶ）：
【００２７】
【化１０】
【００２８】（式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋
ｑ＝ｍである。ｍ、ｎおよびＲは前記と同じ、−Ｚ（Ｒ
2 ）Ｒ1 はこの発明の方法により導入される求核基を表
わす）で示される。このようにしてえられる化合物を
“−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 が…に相当する一般式（ＩＶ）の半
合成グリコサミノグリカン類”として示す。
ｑ＝ｍである。ｍ、ｎおよびＲは前記と同じ、−Ｚ（Ｒ
2 ）Ｒ1 はこの発明の方法により導入される求核基を表
わす）で示される。このようにしてえられる化合物を
“−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 が…に相当する一般式（ＩＶ）の半
合成グリコサミノグリカン類”として示す。
【００２９】α−Ｌ−ガラクツロン酸の３位に求核基を
導入すると共に、α−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の
糖単位からα−Ｌ−ガラクツロン酸の糖単位への変換を
含む構造修飾の反応の結果、グリコサミノグリカン類の
解重合またはそれらを形成する多糖鎖の分子量分布の変
化は起こらない。このため、本発明はいかなる分子量の
ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグリ
カン類に対しても適用可能である。しかしながら、えら
れる生成物は既知の化学的または酵素的解重合の工程に
付すことができる。
導入すると共に、α−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸の
糖単位からα−Ｌ−ガラクツロン酸の糖単位への変換を
含む構造修飾の反応の結果、グリコサミノグリカン類の
解重合またはそれらを形成する多糖鎖の分子量分布の変
化は起こらない。このため、本発明はいかなる分子量の
ヘパリンまたはヘパラン構造を有するグリコサミノグリ
カン類に対しても適用可能である。しかしながら、えら
れる生成物は既知の化学的または酵素的解重合の工程に
付すことができる。
【００３０】本発明の目的は、新規な半合成グリコサミ
ノグリカン類および、一般式（Ｉ）：
ノグリカン類および、一般式（Ｉ）：
【００３１】
【化１１】
【００３２】（式中、Ｒは水素原子または硫酸残部（Ｓ
Ｏ3 - ）を表わし、ｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす）で示されるヘパリンまたはヘパ
ラン構造を有するグリコサミノグリカン類に特有の糖単
位のうちの１つが、α−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸
の３位を一般式（ＩＩ）：
Ｏ3 - ）を表わし、ｍおよびｎは１から１００の間のい
ずれかの整数を表わす）で示されるヘパリンまたはヘパ
ラン構造を有するグリコサミノグリカン類に特有の糖単
位のうちの１つが、α−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸
の３位を一般式（ＩＩ）：
【００３３】
【化１２】
【００３４】で示される求核基で置換されたα−Ｌ−ガ
ラクツロン酸への部分的または全体的変換という構造修
飾を受けて、一般式（ＩＶ）：
ラクツロン酸への部分的または全体的変換という構造修
飾を受けて、一般式（ＩＶ）：
【００３５】
【化１３】
【００３６】（式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋
ｑ＝ｍである。ｍ、ｎおよびＲは前記と同じ、−Ｚ（Ｒ
2 ）Ｒ1 は求核基を表わす）で示される新規な半合成グ
リコサミノグリカン類が形成されることに関する。
ｑ＝ｍである。ｍ、ｎおよびＲは前記と同じ、−Ｚ（Ｒ
2 ）Ｒ1 は求核基を表わす）で示される新規な半合成グ
リコサミノグリカン類が形成されることに関する。
【００３７】あらゆる求核試薬が本発明を実施するのに
有利に用いられうるのであって、事実−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1
基はどのタイプの求核試薬をも包含する。
有利に用いられうるのであって、事実−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1
基はどのタイプの求核試薬をも包含する。
【００３８】さらに詳しくは、Ｚは酸素原子、硫黄原子
またはチッ素原子、Ｒ1 は置換されたまたは非置換の、
直鎖もしくは分枝鎖状Ｃ１〜12のアルキル基、アミノ
基、アリール基、ジアゾ基または水酸基であって、なら
びにＲ2 は存在しないかまたは水素原子または直鎖もし
くは分枝鎖状Ｃ１〜６のアルキル基を表わすかまたはＲ
1 と共にヘテロ環を形成する。また、Ｒ1 で表わされる
置換基は、置換されたもしくは非置換の、ハロゲン原
子、アミノ基、アリール基、カルボキシル基、グアニジ
ノ基、ニトロ基、水酸基、スルホン基、スルフリック
（sulfuric) 基、チオール基またはウレイド基でありう
る。
またはチッ素原子、Ｒ1 は置換されたまたは非置換の、
直鎖もしくは分枝鎖状Ｃ１〜12のアルキル基、アミノ
基、アリール基、ジアゾ基または水酸基であって、なら
びにＲ2 は存在しないかまたは水素原子または直鎖もし
くは分枝鎖状Ｃ１〜６のアルキル基を表わすかまたはＲ
1 と共にヘテロ環を形成する。また、Ｒ1 で表わされる
置換基は、置換されたもしくは非置換の、ハロゲン原
子、アミノ基、アリール基、カルボキシル基、グアニジ
ノ基、ニトロ基、水酸基、スルホン基、スルフリック
（sulfuric) 基、チオール基またはウレイド基でありう
る。
【００３９】前記求核基としては、一級または二級アミ
ン、二級ヘテロ環式アミン、アミノアルコール、アミノ
チオール、アミノ酸、アミノエステル、ペプチド、アル
コール、フェノール、メルカプタン、ジチオール、チオ
フェノール、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラ
ジドおよびアジ化ナトリウムから誘導される基が、本発
明を実施するうえで好ましい。
ン、二級ヘテロ環式アミン、アミノアルコール、アミノ
チオール、アミノ酸、アミノエステル、ペプチド、アル
コール、フェノール、メルカプタン、ジチオール、チオ
フェノール、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラ
ジドおよびアジ化ナトリウムから誘導される基が、本発
明を実施するうえで好ましい。
【００４０】本発明を実施するうえでとくに好ましいの
は、以下の求核剤から生じる−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 基であ
る：グリシン、グリシルグリシン、Ｌ−システイン、ア
セチル−Ｌ−システイン、Ｌ−システインエチルエステ
ル、２−アミノチオフェノール、１，３−プロパンジチ
オール、システアミン、アジ化ナトリウム、２−アミノ
エチル重硫酸塩、タウリン、チオグリコール酸、β−ア
ラニンエチルエステル、Ｌ−シスチン、ヒドロキシルア
ミン、グリシルタウリン、システイニルタウリン、グリ
シルシステイン、グリシルフェニルアラニン、グリシル
チロシン、２−アミノエタノール、２−アミノエタノー
ルとグリシンのエステル、２−アミノエタノールとグリ
シンのアミド、アルギニルリジン、アルギニン、リジ
ン、酢酸と２−アミノエタノールのエステル、サリチル
酸、メチオニン、グリシルプロリン、γ−アミノ酪酸、
リジルプロリルアルギニン、スレオニルリジルプロリ
ン、スレオニルリジン、プロリルアルギニン、リジルプ
ロリン、コリン、４−（３−アミノプロピル）−２−ヒ
ドロキシ安息香酸または４−（２−アミノエチル）−２
−ヒドロキシ安息香酸。
は、以下の求核剤から生じる−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 基であ
る：グリシン、グリシルグリシン、Ｌ−システイン、ア
セチル−Ｌ−システイン、Ｌ−システインエチルエステ
ル、２−アミノチオフェノール、１，３−プロパンジチ
オール、システアミン、アジ化ナトリウム、２−アミノ
エチル重硫酸塩、タウリン、チオグリコール酸、β−ア
ラニンエチルエステル、Ｌ−シスチン、ヒドロキシルア
ミン、グリシルタウリン、システイニルタウリン、グリ
シルシステイン、グリシルフェニルアラニン、グリシル
チロシン、２−アミノエタノール、２−アミノエタノー
ルとグリシンのエステル、２−アミノエタノールとグリ
シンのアミド、アルギニルリジン、アルギニン、リジ
ン、酢酸と２−アミノエタノールのエステル、サリチル
酸、メチオニン、グリシルプロリン、γ−アミノ酪酸、
リジルプロリルアルギニン、スレオニルリジルプロリ
ン、スレオニルリジン、プロリルアルギニン、リジルプ
ロリン、コリン、４−（３−アミノプロピル）−２−ヒ
ドロキシ安息香酸または４−（２−アミノエチル）−２
−ヒドロキシ安息香酸。
【００４１】本発明の別の目的は、ＥＰ−０３４７５８
８記載の製造法によりえられる一般式（ＩＩＩ）：
８記載の製造法によりえられる一般式（ＩＩＩ）：
【００４２】
【化１４】
【００４３】（式中、ｐ、ｑ、ｎおよびＲは前記と同
じ）で示される２，３−エポキシグロニック構造を有す
る半合成グリコサミノグリカン類から出発して一般式
（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン類を合成するた
めに用いる方法である。
じ）で示される２，３−エポキシグロニック構造を有す
る半合成グリコサミノグリカン類から出発して一般式
（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン類を合成するた
めに用いる方法である。
【００４４】一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリ
カン類をえるための方法は、溶媒、ならびに求核剤中に
存在するいかなる酸基も塩にするのに、および（また
は）求核剤が酸の性質を有する物質とともに有しうるい
かなる塩からも同じ求核剤を放出するのに、および過剰
のアルカリ性を発生し反応混合物が用いられる塩基に関
して０．０１Ｎから５Ｎ、好ましくは１Ｎから３Ｎとな
るのに、充分な量の無機もしくは有機塩基の存在下で、
一般式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシグロニック構造を
有する半合成グリコサミノグリカンを、一般式（ＩＩ）
に含まれる基を有する求核剤と反応させることを含む。
反応は、式（ＩＩＩ）の半合成グリコサミノグリカン
を、求核剤および無機または有機塩基を含有する溶液に
加えることにより行なわれる。同じ求核剤は塩基として
はたらきうる：たとえば、メチルアミンが求核剤として
使用されるばあい、それは塩基としても使用されるので
別の塩基の添加は不要である。
カン類をえるための方法は、溶媒、ならびに求核剤中に
存在するいかなる酸基も塩にするのに、および（また
は）求核剤が酸の性質を有する物質とともに有しうるい
かなる塩からも同じ求核剤を放出するのに、および過剰
のアルカリ性を発生し反応混合物が用いられる塩基に関
して０．０１Ｎから５Ｎ、好ましくは１Ｎから３Ｎとな
るのに、充分な量の無機もしくは有機塩基の存在下で、
一般式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシグロニック構造を
有する半合成グリコサミノグリカンを、一般式（ＩＩ）
に含まれる基を有する求核剤と反応させることを含む。
反応は、式（ＩＩＩ）の半合成グリコサミノグリカン
を、求核剤および無機または有機塩基を含有する溶液に
加えることにより行なわれる。同じ求核剤は塩基として
はたらきうる：たとえば、メチルアミンが求核剤として
使用されるばあい、それは塩基としても使用されるので
別の塩基の添加は不要である。
【００４５】反応混合物は撹拌下に、求核剤は容易に酸
化されうるばあいはできる限り不活性ガス、好ましくは
チッ素雰囲気中で、３５℃から９５℃、好ましくは５０
℃から７０℃の間の温度に、３０分から２４時間の間、
好ましくは２から６時間の間保たれる。
化されうるばあいはできる限り不活性ガス、好ましくは
チッ素雰囲気中で、３５℃から９５℃、好ましくは５０
℃から７０℃の間の温度に、３０分から２４時間の間、
好ましくは２から６時間の間保たれる。
【００４６】反応の終わりに、用いられる溶媒が水でな
いときには反応混合物を水で希釈し、つぎに水溶液に塩
酸水溶液を加えてｐＨを中性にする。過量の求核剤は任
意に、たとえば水と混和しない溶媒、クロロホルムまた
はジエチルエーテルで抽出するか、または中性のｐＨで
は水性媒体に溶けないときは濾過により除いてもよい。
澄明な水溶液を、最初流水中で、つぎに蒸留水中で、３
０００ダルトン以下を除く透析を行なうことにより、の
ちの段階でさらに精製してもよい。最後に、一般式（Ｉ
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカンを、それを含有する
水溶液の凍結乾燥により、または適切な溶媒を加えて沈
殿させることにより単離する。
いときには反応混合物を水で希釈し、つぎに水溶液に塩
酸水溶液を加えてｐＨを中性にする。過量の求核剤は任
意に、たとえば水と混和しない溶媒、クロロホルムまた
はジエチルエーテルで抽出するか、または中性のｐＨで
は水性媒体に溶けないときは濾過により除いてもよい。
澄明な水溶液を、最初流水中で、つぎに蒸留水中で、３
０００ダルトン以下を除く透析を行なうことにより、の
ちの段階でさらに精製してもよい。最後に、一般式（Ｉ
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカンを、それを含有する
水溶液の凍結乾燥により、または適切な溶媒を加えて沈
殿させることにより単離する。
【００４７】用いる求核剤の量は、エポキシ基を有する
一般式（ＩＩＩ）で示されるグリコサミノグリカンの二
量体単位に関して１から２００モル当量の間であり、好
ましくは１０から１００当量が用いられる。溶媒は、水
ならびに、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン
のような極性溶媒またはそれらと水との混合物から選ば
れる。好ましい無機塩基は、アルカリまたはアルカリ土
類水酸化物、とくに好ましくは水酸化ナトリウムもしく
は水酸化カリウムであり、一方、好ましい有機塩基はト
リエチルアミンのような三級アミンである。
一般式（ＩＩＩ）で示されるグリコサミノグリカンの二
量体単位に関して１から２００モル当量の間であり、好
ましくは１０から１００当量が用いられる。溶媒は、水
ならびに、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミ
ド、アセトニトリル、ジオキサン、テトラヒドロフラン
のような極性溶媒またはそれらと水との混合物から選ば
れる。好ましい無機塩基は、アルカリまたはアルカリ土
類水酸化物、とくに好ましくは水酸化ナトリウムもしく
は水酸化カリウムであり、一方、好ましい有機塩基はト
リエチルアミンのような三級アミンである。
【００４８】本発明の好ましい態様では、反応は、一般
式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシグロニック構造を有す
る半合成グリコサミノグリカンを、エポキシ基を有する
一般式（ＩＩＩ）のグリコサミノグリカンの二量体単位
に関して１０から１００モル当量の求核剤、ならびに求
核剤中に存在するいかなる酸性基をも塩にするのに、お
よび（または）求核剤が酸の性質を有する物質と共に形
成しうる塩から同じ求核剤を放出するのに、および過剰
のアルカリ性を発生し反応混合物が用いられる塩基に関
して０．０１Ｎから５Ｎとなるのに、充分な量の水酸化
ナトリウムを含有する水溶液中に加えることにより行な
われる。反応混合物中、半合成グリコサミノグリカンの
濃度は、好ましくは１％から５％の間であり、その反応
混合物を撹拌下、任意に不活性ガス雰囲気中で、５０℃
から７０℃の間の温度に２から６時間の間保つ。反応の
終わりに混合物のｐＨを塩酸水溶液で中和し、水と混合
しない溶媒による受動抽出(passive extraction)による
かまたは濾過によって過量の求核剤を除いてもよく、そ
れから反応溶液を、最初に流水でつぎに蒸留水で、６か
ら２４時間の間、３０００ダルトン以下を除く透析に付
してもよい。最後に、その溶液を凍結乾燥に付すことよ
り、または適切な溶媒をそれに加えることにより、一般
式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカンをえる。
式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシグロニック構造を有す
る半合成グリコサミノグリカンを、エポキシ基を有する
一般式（ＩＩＩ）のグリコサミノグリカンの二量体単位
に関して１０から１００モル当量の求核剤、ならびに求
核剤中に存在するいかなる酸性基をも塩にするのに、お
よび（または）求核剤が酸の性質を有する物質と共に形
成しうる塩から同じ求核剤を放出するのに、および過剰
のアルカリ性を発生し反応混合物が用いられる塩基に関
して０．０１Ｎから５Ｎとなるのに、充分な量の水酸化
ナトリウムを含有する水溶液中に加えることにより行な
われる。反応混合物中、半合成グリコサミノグリカンの
濃度は、好ましくは１％から５％の間であり、その反応
混合物を撹拌下、任意に不活性ガス雰囲気中で、５０℃
から７０℃の間の温度に２から６時間の間保つ。反応の
終わりに混合物のｐＨを塩酸水溶液で中和し、水と混合
しない溶媒による受動抽出(passive extraction)による
かまたは濾過によって過量の求核剤を除いてもよく、そ
れから反応溶液を、最初に流水でつぎに蒸留水で、６か
ら２４時間の間、３０００ダルトン以下を除く透析に付
してもよい。最後に、その溶液を凍結乾燥に付すことよ
り、または適切な溶媒をそれに加えることにより、一般
式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカンをえる。
【００４９】このようにしてえられる半合成グリコサミ
ノグリカン類の特徴は、それらは全体的にあるいは部分
的にα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸を欠いており、
アミン、アミノ酸、アミノエステル、ペプチド、アルコ
ール、メルカプタン、フェノール、チオフェノールなど
の求核剤の一部である、ヘテロ原子、チッ素、硫黄もし
くは酸素原子によりその３位が置換されたα−Ｌ−ガラ
クツロン酸の糖単位を含有することである。このように
して共有結合が、グリコサミノグリカン類の分子と求核
基との間に導入される。求核基で前記グリコサミノグリ
カン類の構造特性を修飾することにより、グリコサミノ
グリカン類の経口で吸収される可能性が向上し、かつ出
血時間および抗凝血活性の有意な減少を示すという利点
と共にそれらに特有な抗血栓特性を維持する。対応する
ヘパリンまたはヘパラン構造を有する天然のグリコサミ
ノグリカン類に対して、本発明に記載される半合成グリ
コサミノグリカン類は、このように、動物においてイン
ビボで行なわれる薬理学的出血テストにより明らかに証
明されるように、出血の危険性の低い、根本的に等しい
抗血栓および血栓溶解活性という、および経口で吸収さ
れるという利点を有している。
ノグリカン類の特徴は、それらは全体的にあるいは部分
的にα−Ｌ−イズロン酸−２−Ｏ−硫酸を欠いており、
アミン、アミノ酸、アミノエステル、ペプチド、アルコ
ール、メルカプタン、フェノール、チオフェノールなど
の求核剤の一部である、ヘテロ原子、チッ素、硫黄もし
くは酸素原子によりその３位が置換されたα−Ｌ−ガラ
クツロン酸の糖単位を含有することである。このように
して共有結合が、グリコサミノグリカン類の分子と求核
基との間に導入される。求核基で前記グリコサミノグリ
カン類の構造特性を修飾することにより、グリコサミノ
グリカン類の経口で吸収される可能性が向上し、かつ出
血時間および抗凝血活性の有意な減少を示すという利点
と共にそれらに特有な抗血栓特性を維持する。対応する
ヘパリンまたはヘパラン構造を有する天然のグリコサミ
ノグリカン類に対して、本発明に記載される半合成グリ
コサミノグリカン類は、このように、動物においてイン
ビボで行なわれる薬理学的出血テストにより明らかに証
明されるように、出血の危険性の低い、根本的に等しい
抗血栓および血栓溶解活性という、および経口で吸収さ
れるという利点を有している。
【００５０】本発明の課題である新規半合成グリコサミ
ノグリカン類の生物学的活性は、いくつかの典型的ヘパ
リンテストで明らかにされた。より詳しくは、ＡＰＴＴ
に関するテスト、出血時間に関するテストおよび抗血栓
活性に関するテストを行なった。
ノグリカン類の生物学的活性は、いくつかの典型的ヘパ
リンテストで明らかにされた。より詳しくは、ＡＰＴＴ
に関するテスト、出血時間に関するテストおよび抗血栓
活性に関するテストを行なった。
【００５１】ＡＰＴＴ活性は、ラリー エム ジェイ(L
arrieu M. J.) およびウェイランドジー(Weiland G.)の
レビュー ド エマトロジー(Rev. Hematol.) 12、 19
9、(1957)における方法にしたがって定義した。
arrieu M. J.) およびウェイランドジー(Weiland G.)の
レビュー ド エマトロジー(Rev. Hematol.) 12、 19
9、(1957)における方法にしたがって定義した。
【００５２】試験する各生成物を絶食ラットより採集し
た血漿中に溶かし、つぎにスカラー希釈を行なって、こ
の方法に必要な濃度とした。各生成物につき１０測定を
行ない、各生成物の活性を、ＡＰＴＴの時間を２倍にす
る濃度ｍｃｇ／ｍｌによって表わした。
た血漿中に溶かし、つぎにスカラー希釈を行なって、こ
の方法に必要な濃度とした。各生成物につき１０測定を
行ない、各生成物の活性を、ＡＰＴＴの時間を２倍にす
る濃度ｍｃｇ／ｍｌによって表わした。
【００５３】えられた値により、新規な半合成グリコサ
ミノグリカン類は標準ヘパリンに関して抗凝血力におい
て減少が見られることが確かめられる。
ミノグリカン類は標準ヘパリンに関して抗凝血力におい
て減少が見られることが確かめられる。
【００５４】出血時間は、デジャナー イー(Dejana
E.) らによりスロンボシス アンドヘモスタシス 48、
108、(1982)に記載された方法にしたがってラットで測
定し、結果はコントロールのラットに対して、新規半合
成グリコサミノグリカン類で処置されたラットにおける
出血時間の延長の割合を計算することにより表わした。
E.) らによりスロンボシス アンドヘモスタシス 48、
108、(1982)に記載された方法にしたがってラットで測
定し、結果はコントロールのラットに対して、新規半合
成グリコサミノグリカン類で処置されたラットにおける
出血時間の延長の割合を計算することにより表わした。
【００５５】新規半合成グリコサミノグリカン類では、
標準ヘパリンに対して出血時間における減少が見られ
る。
標準ヘパリンに対して出血時間における減少が見られ
る。
【００５６】抗血栓活性は、レイヤーズ エス(Reyers
S.) らによりスロンボシス リサーチ(Thromb. Res.)1
8、 669〜 674、(1980)に記載された、うっ血静脈血栓
テスト(stasis venous thrombosis test) によってラッ
トで測定した。血栓の形成を妨げる能力を評価するた
め、生成物を下大静脈の結紮を行なう１０分前に大腿部
へ静脈注射した。２時間後に血栓を除き、乾燥させて重
量を測定した。
S.) らによりスロンボシス リサーチ(Thromb. Res.)1
8、 669〜 674、(1980)に記載された、うっ血静脈血栓
テスト(stasis venous thrombosis test) によってラッ
トで測定した。血栓の形成を妨げる能力を評価するた
め、生成物を下大静脈の結紮を行なう１０分前に大腿部
へ静脈注射した。２時間後に血栓を除き、乾燥させて重
量を測定した。
【００５７】抗血栓活性は発生率（血栓を示すラットの
割合）として、およびコントロール血栓に対する血栓の
重量の減少としての両方により表わした。
割合）として、およびコントロール血栓に対する血栓の
重量の減少としての両方により表わした。
【００５８】いずれのばあいにも、結果はＥＤ50（ｍｇ
／ｋｇ）として表わした。
／ｋｇ）として表わした。
【００５９】えられた結果より、新規半合成グリコサミ
ノグリカン類の抗血栓活性は標準ヘパリンの活性と同様
であることが証明された。
ノグリカン類の抗血栓活性は標準ヘパリンの活性と同様
であることが証明された。
【００６０】遊離アミノ基の測定は、サタケ ケー(Sat
ake K.) らによりジャーナル オブバイオケミストリー
(J. Biochem.) 、47、 654、(1960)に記載された方法に
したがって、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢ
Ｓ）と反応させることによりえられた生成物について３
５８ｎｍで紫外／可視分光測光により行なった。一方、
硫黄原子の測定は電位差測定によって行なった。比施光
度は１％濃度の水溶液で測定した。
ake K.) らによりジャーナル オブバイオケミストリー
(J. Biochem.) 、47、 654、(1960)に記載された方法に
したがって、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢ
Ｓ）と反応させることによりえられた生成物について３
５８ｎｍで紫外／可視分光測光により行なった。一方、
硫黄原子の測定は電位差測定によって行なった。比施光
度は１％濃度の水溶液で測定した。
【００６１】13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、５０．３ＭＨ
ｚにて、バリアン ジェミニ２００スペクトロメーター
（商品名、バリアン アソシエーツ アナリティカル
インスツルメンツ(VARIAN ASSOCIATES ANALYTICAL INST
RUMENTS)社製）で、内部標準試料として２，２位および
３，３位で重水素化（Ｄ4 ）された３−（トリメチルシ
リル）プロピオン酸のナトリウム塩を用いて行なった。
ｚにて、バリアン ジェミニ２００スペクトロメーター
（商品名、バリアン アソシエーツ アナリティカル
インスツルメンツ(VARIAN ASSOCIATES ANALYTICAL INST
RUMENTS)社製）で、内部標準試料として２，２位および
３，３位で重水素化（Ｄ4 ）された３−（トリメチルシ
リル）プロピオン酸のナトリウム塩を用いて行なった。
【００６２】本発明に記載された新規グリコサミノグリ
カン類の生物学的活性を評価するために基準として採用
された標準ヘパリンは、前記のテストにより以下の薬理
学的活性の値を示した： ＡＰＴＴ（２Ｔ）＝２．５ｍｃｇ／ｍｌ 出血時間：０．５ｍｇ／ｋｇで１１１％ 抗血栓活性（ＥＤ50）： 重量減少＝０．２０ｍｇ／ｋｇ 発生率％＝０．４０ｍｇ／ｋｇ 基準として採用された標準ヘパリンに関する、前記の方
法で測定された化学的および物理的データは：
カン類の生物学的活性を評価するために基準として採用
された標準ヘパリンは、前記のテストにより以下の薬理
学的活性の値を示した： ＡＰＴＴ（２Ｔ）＝２．５ｍｃｇ／ｍｌ 出血時間：０．５ｍｇ／ｋｇで１１１％ 抗血栓活性（ＥＤ50）： 重量減少＝０．２０ｍｇ／ｋｇ 発生率％＝０．４０ｍｇ／ｋｇ 基準として採用された標準ヘパリンに関する、前記の方
法で測定された化学的および物理的データは：
【００６３】
【化１５】
【００６４】以下の実施例は本発明の限定としてではな
く、説明として考えられなくてはならない。
く、説明として考えられなくてはならない。
【００６５】実施例１ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がグリシルに相当する一般式（ＩＶ）
の半合成グリコサミノグリカン ４００ｍｇの後述の参考例１によりえられた２，３−エ
ポキシグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリ
カン（ヘパリン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリ
コサミノグリカン）を、６０℃の恒温槽にて４５００ｍ
ｇのグリシンおよび４０００ｍｇの水酸化ナトリウムを
含有する２０ｍｌの水溶液に加えた。反応混合物を撹拌
下に６０℃で２時間保ち、それから室温に冷却し、かつ
ｐＨを塩酸の希釈水溶液を加えて中和した。つぎに溶液
を流水中で１２時間、蒸留水中で６時間、３０００ダル
トン以下を除く透析に付し、最後に凍結乾燥した。以下
の分析的および薬理学的特性を有する４２０ｍｇの標題
の生成物がえられた：
の半合成グリコサミノグリカン ４００ｍｇの後述の参考例１によりえられた２，３−エ
ポキシグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリ
カン（ヘパリン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリ
コサミノグリカン）を、６０℃の恒温槽にて４５００ｍ
ｇのグリシンおよび４０００ｍｇの水酸化ナトリウムを
含有する２０ｍｌの水溶液に加えた。反応混合物を撹拌
下に６０℃で２時間保ち、それから室温に冷却し、かつ
ｐＨを塩酸の希釈水溶液を加えて中和した。つぎに溶液
を流水中で１２時間、蒸留水中で６時間、３０００ダル
トン以下を除く透析に付し、最後に凍結乾燥した。以下
の分析的および薬理学的特性を有する４２０ｍｇの標題
の生成物がえられた：
【００６６】
【化１６】
【００６７】実施例２ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がタウリニルに相当する一般式（Ｉ
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに３７５０ｍｇのタウ
リンを用いて、実施例１に記載したのと同じ条件で反応
を行なった。
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに３７５０ｍｇのタウ
リンを用いて、実施例１に記載したのと同じ条件で反応
を行なった。
【００６８】以下の分析的および薬理学的特性を有する
４３０ｍｇの標題の生成物がえられた：
４３０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００６９】
【化１７】
【００７０】実施例３ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がグリシルグリシンに相当する一般式
（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに３９６０ｍｇのグリ
シルグリシンを用いて、実施例１に記載したと同じ条件
で反応を行なった。
（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに３９６０ｍｇのグリ
シルグリシンを用いて、実施例１に記載したと同じ条件
で反応を行なった。
【００７１】以下の分析的および薬理学的特性を有する
３９０ｍｇの標題の生成物がえられた：
３９０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００７２】
【化１８】
【００７３】実施例４ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 が１，４−ジアミノブタン−１−イル
に相当する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカ
ン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに２６３０ｍｇの１，
４−ジアミノブタンおよび水酸化ナトリウムを４０００
ｍｇでなく１６００ｍｇ用いて、実施例１に記載したの
と同じ条件で反応を行なった。
に相当する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカ
ン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに２６３０ｍｇの１，
４−ジアミノブタンおよび水酸化ナトリウムを４０００
ｍｇでなく１６００ｍｇ用いて、実施例１に記載したの
と同じ条件で反応を行なった。
【００７４】以下の分析的および薬理学的特性を有する
３８０ｍｇの標題の生成物がえられた：
３８０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００７５】
【化１９】
【００７６】実施例５ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 が１−アミノ−３−カルボキシプロパ
ンに相当する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリ
カン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに６２００ｍｇの４−
アミノ酪酸および水酸化ナトリウムを４０００ｍｇでな
く３２００ｍｇ用いて、反応時間を３時間に延長して、
実施例１に記載したのと同じ条件で反応を行なった。
ンに相当する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリ
カン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに６２００ｍｇの４−
アミノ酪酸および水酸化ナトリウムを４０００ｍｇでな
く３２００ｍｇ用いて、反応時間を３時間に延長して、
実施例１に記載したのと同じ条件で反応を行なった。
【００７７】以下の分析的および薬理学的特性を有する
４１０ｍｇの標題の生成物がえられた：
４１０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００７８】
【化２０】
【００７９】実施例６ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がグリシルに相当する一般式（ＩＶ）
の半合成グリコサミノグリカン 後述の参考例２によりえられた２，３−エポキシグロニ
ック構造を有する半合成グリコサミノグリカン（ヘパリ
ン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリコサミノグリ
カン）を使用した以外は、実施例１に記載したのと同じ
条件で反応を行なった。
の半合成グリコサミノグリカン 後述の参考例２によりえられた２，３−エポキシグロニ
ック構造を有する半合成グリコサミノグリカン（ヘパリ
ン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリコサミノグリ
カン）を使用した以外は、実施例１に記載したのと同じ
条件で反応を行なった。
【００８０】以下の分析的および薬理学的特性を有する
４３０ｍｇの標題の生成物がえられた：
４３０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００８１】
【化２１】
【００８２】実施例７ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がアジドに相当する一般式（ＩＶ）の
半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに５２００ｍｇのアジ
化ナトリウムおよび水酸化ナトリウムを４０００ｍｇで
なく１６００ｍｇ用いて、反応時間を３時間に延長し
て、実施例１に記載したのと同じ条件で反応を行なっ
た。
半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに５２００ｍｇのアジ
化ナトリウムおよび水酸化ナトリウムを４０００ｍｇで
なく１６００ｍｇ用いて、反応時間を３時間に延長し
て、実施例１に記載したのと同じ条件で反応を行なっ
た。
【００８３】以下の分析的および薬理学的特性を有する
４２０ｍｇの標題の生成物がえられた：
４２０ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００８４】
【化２２】
【００８５】実施例８ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 が（Ｎ）−ヒドロキシルアミノに相当
する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに２８００ｍｇのヒド
ロキシルアミンヒドロクロリドを用いて、実施例１に記
載したのと同じ条件で反応を行なった。
する一般式（ＩＶ）の半合成グリコサミノグリカン ４５００ｍｇのグリシンのかわりに２８００ｍｇのヒド
ロキシルアミンヒドロクロリドを用いて、実施例１に記
載したのと同じ条件で反応を行なった。
【００８６】以下の分析的および薬理学的特性を有する
４００ｍｇの標題の生成物がえられた：
４００ｍｇの標題の生成物がえられた：
【００８７】
【化２３】
【００８８】実施例９ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がメチルアミノに相当する一般式（Ｉ
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカン ５００ｍｇの後述の参考例１によりえられた２，３−エ
ポキシグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリ
カン（ヘパリン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリ
コサミノグリカン）を、１７５０ｍｇのメチルアミンを
含有する１５ｍｌの水溶液に加えた。反応混合物を撹拌
下に６０℃で２時間保ち、それから室温に冷却し、かつ
ｐＨを塩酸の希釈水溶液を加えて中和した。つぎに溶液
を流水中で１６時間および蒸留水中で６時間、３０００
ダルトン以下を除く透析に付し、最後に凍結乾燥した。
以下の分析的および薬理学的特性を有する４６０ｍｇの
標題の生成物がえられた：
Ｖ）の半合成グリコサミノグリカン ５００ｍｇの後述の参考例１によりえられた２，３−エ
ポキシグロニック構造を有する半合成グリコサミノグリ
カン（ヘパリン由来２，３−エポキシグロン酸含有グリ
コサミノグリカン）を、１７５０ｍｇのメチルアミンを
含有する１５ｍｌの水溶液に加えた。反応混合物を撹拌
下に６０℃で２時間保ち、それから室温に冷却し、かつ
ｐＨを塩酸の希釈水溶液を加えて中和した。つぎに溶液
を流水中で１６時間および蒸留水中で６時間、３０００
ダルトン以下を除く透析に付し、最後に凍結乾燥した。
以下の分析的および薬理学的特性を有する４６０ｍｇの
標題の生成物がえられた：
【００８９】
【化２４】
【００９０】実施例１０ −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 がグリシルに相当する一般式（ＩＶ）
の半合成グリコサミノグリカン 後述の参考例１の市販のヘパリンナトリウムのかわりに
ウシ脾臓からえられた市販のヘパラン（オポクリン（OP
OCRIN)、商品名、オポクリン エッセ ピ ア(OPOCRIN
S.p.A) 製）を用いて、参考例１に記載の方法を行なっ
て、以下の分析的特性を有する、一般式（ＩＩＩ）の
２，３−エポキシグロニック構造を有する半合成グリコ
サミノグリカンが製造された：
の半合成グリコサミノグリカン 後述の参考例１の市販のヘパリンナトリウムのかわりに
ウシ脾臓からえられた市販のヘパラン（オポクリン（OP
OCRIN)、商品名、オポクリン エッセ ピ ア(OPOCRIN
S.p.A) 製）を用いて、参考例１に記載の方法を行なっ
て、以下の分析的特性を有する、一般式（ＩＩＩ）の
２，３−エポキシグロニック構造を有する半合成グリコ
サミノグリカンが製造された：
【００９１】
【化２５】
【００９２】この一般式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシ
グロニック構造を有する半合成グリコサミノグリカン４
００ｍｇを、実施例１に記載したのと同じ条件でグリシ
ンと反応させ、以下の分析的特性を有する３９０ｍｇの
標題の生成物がえられた：
グロニック構造を有する半合成グリコサミノグリカン４
００ｍｇを、実施例１に記載したのと同じ条件でグリシ
ンと反応させ、以下の分析的特性を有する３９０ｍｇの
標題の生成物がえられた：
【００９３】
【化２６】
【００９４】参考例１ ２，３−エポキシグロニック構造を有する半合成グリコ
サミノグリカン 市販のヘパリンナトリウム２５ｇを水２０００ｍｌに溶
解し、水２０００ｍｌに溶解させた酢酸カルシウム一水
和物１１１．２ｇ、酢酸５７ｍｌおよびエチルアルコー
ル６００ｍｌを含有する溶液中に、前記水溶液を８〜１
０℃の温度に保ちながら、約３０分間かけて注いだ。５
℃で１５時間放置したのち、えられた懸濁液をろ過し、
ろ液にエチルアルコール１０００ｍｌを加えた。５℃で
３時間放置したのち、えられた沈澱をろ過した。沈殿物
を水２００ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を
用いてｐＨ７．０にした。そののち、Ｄｏｗｅｘ ５０
ＷＸ８（ナトリウム型）樹脂１００ｍｌおよび水７０ｍ
ｌを用いて２０分間処理した。溶液および樹脂を、同じ
樹脂８０ｍｌをつめたクロマトグラフィー用のカラム
（直径：１．６ｃｍ、長さ：１０ｃｍ）に移した。溶液
を浸出し、全溶液量が４００ｍｌになるまで蒸留水で溶
出したのち、この溶液と、酢酸ナトリウム三水和物１２
ｇおよびエチルアルコール１０００ｍｌとを合わせた。
沈澱をろ過し、真空下で乾燥して、精製されたヘパリン
ナトリウムを１９．２ｇえ、ＡＬＦＡ８７−７８とし
た。以下に用いた市販のヘパリンナトリウムおよびえら
れたＡＬＦＡ ８７−７８の物理化学的特性を示す。
サミノグリカン 市販のヘパリンナトリウム２５ｇを水２０００ｍｌに溶
解し、水２０００ｍｌに溶解させた酢酸カルシウム一水
和物１１１．２ｇ、酢酸５７ｍｌおよびエチルアルコー
ル６００ｍｌを含有する溶液中に、前記水溶液を８〜１
０℃の温度に保ちながら、約３０分間かけて注いだ。５
℃で１５時間放置したのち、えられた懸濁液をろ過し、
ろ液にエチルアルコール１０００ｍｌを加えた。５℃で
３時間放置したのち、えられた沈澱をろ過した。沈殿物
を水２００ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を
用いてｐＨ７．０にした。そののち、Ｄｏｗｅｘ ５０
ＷＸ８（ナトリウム型）樹脂１００ｍｌおよび水７０ｍ
ｌを用いて２０分間処理した。溶液および樹脂を、同じ
樹脂８０ｍｌをつめたクロマトグラフィー用のカラム
（直径：１．６ｃｍ、長さ：１０ｃｍ）に移した。溶液
を浸出し、全溶液量が４００ｍｌになるまで蒸留水で溶
出したのち、この溶液と、酢酸ナトリウム三水和物１２
ｇおよびエチルアルコール１０００ｍｌとを合わせた。
沈澱をろ過し、真空下で乾燥して、精製されたヘパリン
ナトリウムを１９．２ｇえ、ＡＬＦＡ８７−７８とし
た。以下に用いた市販のヘパリンナトリウムおよびえら
れたＡＬＦＡ ８７−７８の物理化学的特性を示す。
【００９５】市販のヘパリンナトリウム
【００９６】
【化２７】
【００９７】ＡＬＦＡ ８７−７８
【００９８】
【化２８】
【００９９】ヘパリンＡＬＦＡ ８７−７８ １．８ｇ
を水酸化ナトリウム４．８ｇ（１Ｎ）を含有する水溶液
１２０ｍｌに加えた。３．５時間６０℃に保温し、酢酸
で中性にしたのち、流水で一夜、および蒸留水で６時間
透析した。溶液に酢酸ナトリウム３．５ｇを加え、酢酸
で中性にし、エタノールを２．５倍量加えた。沈澱をろ
過し、エタノール６に対して水１の割合の混合液で洗浄
したのち、乾燥して生成物を１．７ｇえた。以下に特徴
的なシグナルをもつ13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
を水酸化ナトリウム４．８ｇ（１Ｎ）を含有する水溶液
１２０ｍｌに加えた。３．５時間６０℃に保温し、酢酸
で中性にしたのち、流水で一夜、および蒸留水で６時間
透析した。溶液に酢酸ナトリウム３．５ｇを加え、酢酸
で中性にし、エタノールを２．５倍量加えた。沈澱をろ
過し、エタノール６に対して水１の割合の混合液で洗浄
したのち、乾燥して生成物を１．７ｇえた。以下に特徴
的なシグナルをもつ13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【０１００】δ（p.p.m.）：１７７．４、１０４．６、
１０１．７、９８．６、９８．４、９７．２、９６．
８、７９．７、７９．１、７８．６、７３．５、７２．
５、７２．３、７２．１、７１．５、６８．８、６２．
６、６０．４、６０．２、５４．０、５３．１ 参考例２ ２，３−エポキシグロニック構造を有する半合成グリコ
サミノグリカン 低分子量ヘパリンナトリウム ＬＭＷ ＡＬＦＡ ８６
−０２は、国際特許公開公報(international patent pu
blication)第８６／０６７２９号明細書記載の方法にし
たがって、銅イオンの存在下、過酸化水素を用いた解重
合反応によってえた。以下に物理化学的特性を示す。
１０１．７、９８．６、９８．４、９７．２、９６．
８、７９．７、７９．１、７８．６、７３．５、７２．
５、７２．３、７２．１、７１．５、６８．８、６２．
６、６０．４、６０．２、５４．０、５３．１ 参考例２ ２，３−エポキシグロニック構造を有する半合成グリコ
サミノグリカン 低分子量ヘパリンナトリウム ＬＭＷ ＡＬＦＡ ８６
−０２は、国際特許公開公報(international patent pu
blication)第８６／０６７２９号明細書記載の方法にし
たがって、銅イオンの存在下、過酸化水素を用いた解重
合反応によってえた。以下に物理化学的特性を示す。
【０１０１】
【化２９】
【０１０２】ヘパリンＬＭＷ ＡＬＦＡ ８６−０２
１．８ｇを、水酸化ナトリウム０．０８ｇ（０．０４
Ｎ）、酢酸ナトリウム２．６ｇ（０．６２５Ｎ）および
水素化ホウ素ナトリウム１０ｍｇを含有する水溶液５０
ｍｌに加えた。２１０分間６０℃に保温し、室温に冷却
したのち、まずアニオン樹脂Ｄｏｗｅｘ １ Ｘ４（Ｏ
Ｈ- 型）をつめたカラム（直径：１．２ｃｍ、長さ：１
０ｃｍ）で、次にカチオン樹脂Ｄｏｗｅｘ ５０ ＷＸ
８（Ｈ+ 型）をつめたカラムで浸出を行なった。浸出液
および洗液を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中性にした
のち、酢酸ナトリウム４ｇを加えて、エタノールを２．
５倍量加えた。えられた沈澱を、エタノール６に対して
水１の割合の混合液で洗浄したのち、乾燥して生成物
１．４ｇをえた。特徴的なピークを示す13Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルを以下に示す。
１．８ｇを、水酸化ナトリウム０．０８ｇ（０．０４
Ｎ）、酢酸ナトリウム２．６ｇ（０．６２５Ｎ）および
水素化ホウ素ナトリウム１０ｍｇを含有する水溶液５０
ｍｌに加えた。２１０分間６０℃に保温し、室温に冷却
したのち、まずアニオン樹脂Ｄｏｗｅｘ １ Ｘ４（Ｏ
Ｈ- 型）をつめたカラム（直径：１．２ｃｍ、長さ：１
０ｃｍ）で、次にカチオン樹脂Ｄｏｗｅｘ ５０ ＷＸ
８（Ｈ+ 型）をつめたカラムで浸出を行なった。浸出液
および洗液を２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で中性にした
のち、酢酸ナトリウム４ｇを加えて、エタノールを２．
５倍量加えた。えられた沈澱を、エタノール６に対して
水１の割合の混合液で洗浄したのち、乾燥して生成物
１．４ｇをえた。特徴的なピークを示す13Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルを以下に示す。
【０１０３】δ（p.p.m.）：１７７．４、１０４．６、
１０１．９、９９．４、９８．６、９８．４、９７．
２、９６．８、７９．９、７８．６、７２．３、７１．
９、６８．８、６２．６、６０．３、５４．１、５３．
１
１０１．９、９９．４、９８．６、９８．４、９７．
２、９６．８、７９．９、７８．６、７２．３、７１．
９、６８．８、６２．６、６０．３、５４．１、５３．
１
【０１０４】
【発明の効果】本発明により、経口的にも吸収可能で、
出血の危険性が低く抗凝血活性の少ない、良好な抗血栓
性を有する新規な半合成グリコサミノグリカン類が提供
される。
出血の危険性が低く抗凝血活性の少ない、良好な抗血栓
性を有する新規な半合成グリコサミノグリカン類が提供
される。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ジャンフランコ タマニョーネ イタリア共和国、40033 カサレッキオ ジ レーノ ボローニャ、ビア ロン ザニ、55 (72)発明者 ファブリツィオ ウンガレルリ イタリア共和国、40134 ボローニャ、 ビア デルラ クロセッタ、11
Claims (11)
- 【請求項１】 一般式（ＩＶ）： 【化１】 （式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋ｑ＝ｍで表わ
されるｍおよびｎは１から１００の間のいずれかの整数
を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部（ＳＯ3 - ）
を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。ただし、この
一般式は主な糖単位の組成を示すことを意図するもので
あり、それらの配列に言及するものではない）で示され
る新規な半合成グリコサミノグリカン類。 - 【請求項２】 Ｚが酸素原子、硫黄原子またはチッ素原
子であって、Ｒ1 が置換されたまたは非置換の、直鎖も
しくは分枝鎖状Ｃ１〜12のアルキル基、アミノ基、アリ
ール基、ジアゾ基または水酸基であって、ならびにＲ2
が存在しないか、または水素原子または直鎖もしくは分
枝鎖状Ｃ１〜６のアルキル基であるかまたはＲ1 と共に
ヘテロ環を形成する請求項１記載の新規な半合成グリコ
サミノグリカン類。 - 【請求項３】 Ｒ1 で表わされる置換基が、置換された
もしくは非置換の、ハロゲン原子、アミノ基、アリール
基、カルボキシル基、グアニジノ基、ニトロ基、水酸
基、スルホン基、スルフリック基、チオール基またはウ
レイド基である請求項１記載の新規な半合成グリコサミ
ノグリカン類。 - 【請求項４】 −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 で表わされる基が、一
級もしくは二級アミン、二級ヘテロ環式アミン、アミノ
アルコール、アミノチオール、アミノ酸、アミノエステ
ル、ペプチド、アルコール、フェノール、メルカプタ
ン、ジチオール、チオフェノール、ヒドロキシルアミ
ン、ヒドラジン、ヒドラジドまたはアジ化ナトリウムに
由来する請求項１、２または３記載の新規な半合成グリ
コサミノグリカン類。 - 【請求項５】 −Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 で表わされる基が、グ
リシン、グリシルグリシン、Ｌ−システイン、アセチル
−Ｌ−システイン、Ｌ−システインエチルエステル、２
−アミノチオフェノール、１，３−プロパンジチオー
ル、システアミン、アジ化ナトリウム、２−アミノエチ
ル重硫酸塩、タウリン、チオグリコール酸、β−アラニ
ンエチルエステル、Ｌ−シスチン、ヒドロキシルアミ
ン、グリシルタウリン、システイニルタウリン、グリシ
ルシステイン、グリシルフェニルアラニン、グリシルチ
ロシン、２−アミノエタノール、２−アミノエタノール
とグリシンのエステル、２−アミノエタノールとグリシ
ンのアミド、アルギニルリジン、アルギニン、リジン、
酢酸と２−アミノエタノールのエステル、サリチル酸、
メチオニン、グリシルプロリン、γ−アミノ酪酸、リジ
ルプロリルアルギニン、スレオニルリジルプロリン、ス
レオニルリジン、プロリルアルギニン、リジルプロリ
ン、コリン、４−（３−アミノプロピル）−２−ヒドロ
キシ安息香酸または４−（２−アミノエチル）−２−ヒ
ドロキシ安息香酸に由来する請求項４記載の新規な半合
成グリコサミノグリカン類。 - 【請求項６】 一般式（ＩＩＩ）： 【化２】 （式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋ｑ＝ｍで表わ
されるｍおよびｎは１から１００の間のいずれかの整数
を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部（ＳＯ3 - ）を
表わす。ただし、この一般式は主な糖単位の組成を示す
ことを意図するものであり、それらの配列に言及するも
のではない）で示される２，３−エポキシグロニック構
造を有する半合成グリコサミノグリカン類を、一般式
（ＩＩ）： 【化３】 で示される求核基を有する求核剤と、溶媒、ならびに求
核剤中に存在するいかなる酸基をも塩にするのにおよび
（または）求核剤が酸の性質を有する物質と形成しうる
いかなる塩からも同じ求核剤を放出するのに、および過
剰のアルカリ性を発生し反応混合物が用いられる塩基に
関して０．０１Ｎから５Ｎとなるのに、充分な量の無機
もしくは有機塩基の存在下で、３０分ないし２４時間の
間、３５℃から９５℃の間の温度で撹拌下に保って反応
させて、反応溶媒が水以外であるときは水で反応混合物
を希釈し、塩酸水溶液を加えて水溶液のｐＨを中和し、
その水溶液を流水および蒸留水で透析し、ならびにその
水溶液を凍結乾燥または適切な溶媒を加えて沈殿させる
ことにより生成物を単離する一般式（ＩＶ）： 【化４】 （式中、ｐは０でない整数であって、ｐ＋ｑ＝ｍで表わ
されるｍおよびｎは１から１００の間のいずれかの整数
を表わす。Ｒは水素原子または硫酸残部（ＳＯ3 - ）
を、−Ｚ（Ｒ2 ）Ｒ1 は求核基を表わす。ただし、この
一般式は主な糖単位の組成を示すことを意図するもので
あり、それらの配列に言及するものではない）で示され
る半合成グリコサミノグリカン類の製造法。 - 【請求項７】 求核剤の量が、エポキシ基を有する一般
式（ＩＩＩ）で示される半合成グリコサミノグリカンの
二量体単位に関して１から２００モル当量の間である請
求項６記載の製造法。 - 【請求項８】 溶媒が、水ならびに、ジメチルアセトア
ミド、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキ
サン、テトラヒドロフランから選ばれた極性溶媒または
それらと水との混合物から選ばれたものである請求項６
記載の製造法。 - 【請求項９】 用いられる塩基が、水酸化ナトリウム、
水酸化カリウムまたはトリエチルアミンから選ばれたも
のである請求項６記載の製造法。 - 【請求項１０】 一般式（ＩＩＩ）の２，３−エポキシ
グロニック構造を有する半合成グリコサミノグリカン
を、撹拌下、エポキシ基を有する一般式（ＩＩＩ）のグ
リコサミノグリカンの二量体単位に関して１０から１０
０モル当量の求核剤、ならびに求核剤中に存在するいか
なる酸基をも塩にするのにおよび（または）求核剤が酸
の性質を有する物質と形成しうる塩から求核剤を放出す
るのに、および過剰のアルカリ性を発生し反応混合物が
用いられる塩基に関して０．０１Ｎから５Ｎとなるの
に、充分な量の水酸化ナトリウムを含有する水溶液中に
加え、反応混合液を５０℃から７０℃の間の温度に２か
ら６時間の間保ち、その時間ののち、反応混合物のｐＨ
を塩酸水溶液で中和し、反応溶液を６時間から２４時間
の間流水および蒸留水で透析し、ならびに生成物を凍結
乾燥によりまたは適切な溶媒を加えることによりその溶
液から単離する請求項６記載の製造法。 - 【請求項１１】 反応後に反応混合物のｐＨを中和した
のち、水と混和しない溶媒で抽出するかまたは濾過によ
って過量の求核剤を除いてから、反応溶液の透析を行な
う請求項６または１０記載の方法。
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