JP2694399B2 - ペプチド誘導体 - Google Patents
ペプチド誘導体Info
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アルギニン−グリシン
−アスパラギン酸のトリペプチド単位を有する、リポソ
ームあるいはミセル等の分子集合体を形成するのに最適
なペプチド誘導体に関する。
−アスパラギン酸のトリペプチド単位を有する、リポソ
ームあるいはミセル等の分子集合体を形成するのに最適
なペプチド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのアルギニン−グリ
シン−アスパラギン酸（以下、Arg-Gly-Asp と略す）配
列を特異的に認識することが明らかにされ、レセプター
との相互作用に重要なものであることが報告されている
（Nature、第３０９巻、３０頁、１９８４年）。以来、
Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるいはポリペプチド
を用いる研究が成されている。例えば、Arg-Gly-Asp 配
列を有する種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用
いて血小板凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集（Po
lymer Preprints, Japan）、第３８巻、３１４９頁、１
９８９年、特開平２−１７４７９７号）、Arg-Gly-Asp
配列を有するペプチドを細胞移動抑制剤として用いる方
法（特開平２−４７１６号）、Arg-Gly-Asp を固定化し
たPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法（高分子学会予
稿集（Polymer Preprints, Japan）、第３７巻、７０５
頁、１９８８年）が報告されている。さらに、ポリマー
にArg-Gly-Asp を必須構成単位とするペプチドを共有結
合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体とし
て用いる方法（特開平１−３０９６８２号、特開平１−
３０５９６０号）、Arg-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリ
ペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方法が
開示されている（特開昭６４−６２１７号）。また、Ar
g-Gly-Asp 配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰
り返し構造を有するポリペプチドを用いて、ガン転移を
抑制する方法が知られている(Int. J. Biol. Macromo
l.、第１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１１巻、
２２６頁、１９８９年、Jpn. J. Cancer Res.,第６０
巻、７２２頁、１９８９年）。
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのアルギニン−グリ
シン−アスパラギン酸（以下、Arg-Gly-Asp と略す）配
列を特異的に認識することが明らかにされ、レセプター
との相互作用に重要なものであることが報告されている
（Nature、第３０９巻、３０頁、１９８４年）。以来、
Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるいはポリペプチド
を用いる研究が成されている。例えば、Arg-Gly-Asp 配
列を有する種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用
いて血小板凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集（Po
lymer Preprints, Japan）、第３８巻、３１４９頁、１
９８９年、特開平２−１７４７９７号）、Arg-Gly-Asp
配列を有するペプチドを細胞移動抑制剤として用いる方
法（特開平２−４７１６号）、Arg-Gly-Asp を固定化し
たPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法（高分子学会予
稿集（Polymer Preprints, Japan）、第３７巻、７０５
頁、１９８８年）が報告されている。さらに、ポリマー
にArg-Gly-Asp を必須構成単位とするペプチドを共有結
合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体とし
て用いる方法（特開平１−３０９６８２号、特開平１−
３０５９６０号）、Arg-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリ
ペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方法が
開示されている（特開昭６４−６２１７号）。また、Ar
g-Gly-Asp 配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰
り返し構造を有するポリペプチドを用いて、ガン転移を
抑制する方法が知られている(Int. J. Biol. Macromo
l.、第１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１１巻、
２２６頁、１９８９年、Jpn. J. Cancer Res.,第６０
巻、７２２頁、１９８９年）。
【０００３】一方、リポソームやミセル等の分子集合体
をドラッグキャリアーとして用いる方法が多数検討され
ている（例えば、リポソーム、２４５頁〜２７１頁、南
江堂、１９８８年、Cancer Res. 第４３巻、５３２８
頁、１９８３年、J. Controlled Release ２６９頁、１
９９０年）。
をドラッグキャリアーとして用いる方法が多数検討され
ている（例えば、リポソーム、２４５頁〜２７１頁、南
江堂、１９８８年、Cancer Res. 第４３巻、５３２８
頁、１９８３年、J. Controlled Release ２６９頁、１
９９０年）。
【０００４】例えばRGD 配列含有ペプチドにミリスチン
酸を導入した化合物がＷＯ９０／１１２９７号明細書に
開示されている。しかしこの化合物の分子集合体形成能
は未知であり、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造
を有する、リポソームあるいはシセル等の分子集合体を
形成するのに適当なペプチド誘導体は知られていない。
酸を導入した化合物がＷＯ９０／１１２９７号明細書に
開示されている。しかしこの化合物の分子集合体形成能
は未知であり、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造
を有する、リポソームあるいはシセル等の分子集合体を
形成するのに適当なペプチド誘導体は知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Arg-
Gly-Asp のトリペプチド単位を有する、リポソームある
いはミセル等の分子集合体を形成するのに最適なペプチ
ド脂質誘導体及びその合成法を提供することである。
Gly-Asp のトリペプチド単位を有する、リポソームある
いはミセル等の分子集合体を形成するのに最適なペプチ
ド脂質誘導体及びその合成法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の化合物は下記、
一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体またはその塩か
ら成るペプチド誘導体である。
一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体またはその塩か
ら成るペプチド誘導体である。
【０００７】
【化２】
【０００８】式中のＡｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐはそれぞれ
アルギニン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。
〔Ｘ〕はＧｌｙまたは単結合、〔Ｙ〕はＳｅｒまたは単
結合を示す。ｍは２または３、ｎは１を示す。Ｒ１およ
びＲ２は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分
岐のアシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和
基を有していても良い。好ましい炭素数としては、１２
から１８まである。アシル基としては、ミリストイル
基、パルミトイル基、ステアロイル基が好ましい例とし
て示される。アルキル基としては、ミリスチル基、パル
ミチル基、ステアリル基、フィタニル基が好ましい例と
して示される。Ｒ１、Ｒ２は同じであっても異なっても
よい。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラ
セミ体でも光学活性体のいずれでもよい。本発明の化合
物の好ましい塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、塩酸塩、硫酸
塩、硝酸塩、酢酸塩等が挙げられる。
アルギニン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。
〔Ｘ〕はＧｌｙまたは単結合、〔Ｙ〕はＳｅｒまたは単
結合を示す。ｍは２または３、ｎは１を示す。Ｒ１およ
びＲ２は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分
岐のアシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和
基を有していても良い。好ましい炭素数としては、１２
から１８まである。アシル基としては、ミリストイル
基、パルミトイル基、ステアロイル基が好ましい例とし
て示される。アルキル基としては、ミリスチル基、パル
ミチル基、ステアリル基、フィタニル基が好ましい例と
して示される。Ｒ１、Ｒ２は同じであっても異なっても
よい。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラ
セミ体でも光学活性体のいずれでもよい。本発明の化合
物の好ましい塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム
塩、アンモニウム塩、マグネシウム塩、塩酸塩、硫酸
塩、硝酸塩、酢酸塩等が挙げられる。
【０００９】以下に本発明の好ましい具体例を示すが、
本発明はこれに限定されるものではない。
本発明はこれに限定されるものではない。
【００１０】
【化３】
【００１１】
【化４】
【００１２】次に本発明の化合物の合成法について説明
する。本発明の化合物は基本的に以下の方法により合成
することができる。 ジアルキル（ジアシル）グリセロール（II）の合成
する。本発明の化合物は基本的に以下の方法により合成
することができる。 ジアルキル（ジアシル）グリセロール（II）の合成
【００１３】
【化５】
【００１４】グリセロール誘導体（ＩＩ）より、保護
アミノ酸の逐次延長による保護ペプチド の合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルタリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
アミノ酸の逐次延長による保護ペプチド の合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルタリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
【００１５】以下各段階について具体的に説明する。 式（II）で表わされるジアルキル（ジアシル）グリセ
ロールは、公知の方法（例えば Biochemistry 第２巻３
９４頁１９６３年）により合成することができ、また市
販品を購入することもできる。 保護アミノ酸を逐次伸長する方法は、既知の方法、す
なわち、泉屋ら著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸
善）や Bodanszky著 "PRINCIPLES OF PEPTIDE SYNTHESI
S"、"THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS" (Springer
Verlag, New York)に記載されている方法がいずれも有
効である。縮合反応の段階では、DCC-additive法、アジ
ド法、混酸無水物法、活性エステル法のいずれを採用し
てもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとジシ
クロヘキシルカルボジイミドを併用するDCC-additive法
が最も良好な結果を与えた。またグリセロール誘導体
（II）に最初の保護アミノ酸を導入する工程では、ジシ
クロヘキシルカルボジイミドと触媒量のＮ，Ｎ−ジメチ
ルアミノピリジンを用いる方法が有効である。 アミンのマロニル化、スクシニル化、またはグルタリ
ル化反応には、それぞれ対応する環状酸無水物または酸
二塩化物を用いることが好ましい。 保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた保
護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護条
件は、接触水素添加、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。
ロールは、公知の方法（例えば Biochemistry 第２巻３
９４頁１９６３年）により合成することができ、また市
販品を購入することもできる。 保護アミノ酸を逐次伸長する方法は、既知の方法、す
なわち、泉屋ら著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸
善）や Bodanszky著 "PRINCIPLES OF PEPTIDE SYNTHESI
S"、"THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS" (Springer
Verlag, New York)に記載されている方法がいずれも有
効である。縮合反応の段階では、DCC-additive法、アジ
ド法、混酸無水物法、活性エステル法のいずれを採用し
てもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとジシ
クロヘキシルカルボジイミドを併用するDCC-additive法
が最も良好な結果を与えた。またグリセロール誘導体
（II）に最初の保護アミノ酸を導入する工程では、ジシ
クロヘキシルカルボジイミドと触媒量のＮ，Ｎ−ジメチ
ルアミノピリジンを用いる方法が有効である。 アミンのマロニル化、スクシニル化、またはグルタリ
ル化反応には、それぞれ対応する環状酸無水物または酸
二塩化物を用いることが好ましい。 保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた保
護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護条
件は、接触水素添加、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。
【００１６】
【実施例】実施例１ 以下に本発明の化合物（１）の合成例を示す。化合物
（１）を以下の合成経路で合成した。なお、アミノ酸、
各種保護基および脱保護試薬等は通常用いられて略号を
使って表した。また、化合物例（２）〜（４）もここに
例示した方法で合成できる。 Bzl:ベンジル基 TFA:トリフルオロ酢酸 t-Boc:ｔ−ブトキシカルボニル基 HOBt: １−ヒドロキシベンゾトリアゾール Z:ベンジルオキシカルボニル基 DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド
（１）を以下の合成経路で合成した。なお、アミノ酸、
各種保護基および脱保護試薬等は通常用いられて略号を
使って表した。また、化合物例（２）〜（４）もここに
例示した方法で合成できる。 Bzl:ベンジル基 TFA:トリフルオロ酢酸 t-Boc:ｔ−ブトキシカルボニル基 HOBt: １−ヒドロキシベンゾトリアゾール Z:ベンジルオキシカルボニル基 DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド
【００１７】
【化６】
【００１８】文献(Synthesis ５０３頁１９８５年）記
載の方法により調製した（１ａ）１２．０ｇをトルエン
３００mlに溶かし、この溶液に粉末水酸化カリウム１
６．０ｇと１−ブロモヘキサデカン８２ｇを加え、反応
混合物を８時間加熱還流した。反応液を室温になるまで
放冷したのちヘキサン４００mlで希釈した。水２００ml
で２回洗浄後無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。硫酸ナ
トリウムを濾過して除き、濾液を減圧濃縮して無色油状
物を得た。このものをシリカゲルクロマトグラフィー
（溶出液 ヘキサン／酢酸エチル＝４０／１）で精製
し、（１ｂ）を４１．２ｇ（収率９５．５％）得た。物
性値は文献（Biochemistry第２巻，３９４頁１９６３
年）記載のそれと一致した。得られた（１ｂ）を酢酸エ
チル２５０mlに溶解し、１０％パラジウム−炭素１．５
ｇを加えて、反応混合物を水素雰囲気下８時間反応し
た。不溶性物質をセライト濾過して除き、セライト層を
酢酸エチルで洗浄した。濾液、洗液をあわせて減圧濃縮
した。残渣を酢酸エチルから再結晶して（１ｃ）を無色
結晶（３４．４ｇ）として得た。物性値は文献（Bioche
mistry第２巻，３９４頁１９６３年）記載のそれと一致
した。
載の方法により調製した（１ａ）１２．０ｇをトルエン
３００mlに溶かし、この溶液に粉末水酸化カリウム１
６．０ｇと１−ブロモヘキサデカン８２ｇを加え、反応
混合物を８時間加熱還流した。反応液を室温になるまで
放冷したのちヘキサン４００mlで希釈した。水２００ml
で２回洗浄後無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。硫酸ナ
トリウムを濾過して除き、濾液を減圧濃縮して無色油状
物を得た。このものをシリカゲルクロマトグラフィー
（溶出液 ヘキサン／酢酸エチル＝４０／１）で精製
し、（１ｂ）を４１．２ｇ（収率９５．５％）得た。物
性値は文献（Biochemistry第２巻，３９４頁１９６３
年）記載のそれと一致した。得られた（１ｂ）を酢酸エ
チル２５０mlに溶解し、１０％パラジウム−炭素１．５
ｇを加えて、反応混合物を水素雰囲気下８時間反応し
た。不溶性物質をセライト濾過して除き、セライト層を
酢酸エチルで洗浄した。濾液、洗液をあわせて減圧濃縮
した。残渣を酢酸エチルから再結晶して（１ｃ）を無色
結晶（３４．４ｇ）として得た。物性値は文献（Bioche
mistry第２巻，３９４頁１９６３年）記載のそれと一致
した。
【００１９】（１ｃ）３．２５ｇ（６mmol）、t-Boc-Se
r(Bzl)２．０５ｇ（７mmol）、ジメチルアミノピリジン
７３mgを塩化メチレン５０mlに溶解し、氷冷しながらDC
C １．５ｇを加えた。氷冷下で２時間、室温で終夜かく
はんした後生成したDCC 尿素を濾別し、濾液を濃縮後残
留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製（ｎ−ヘキ
サン／酢酸エチル＝６／１）して、無色油状の（１ｄ）
４．７ｇ（５．７４mmol）を得た。収率９７％。（１
ｄ）４．７ｇ（５．７４mmol）を塩化メチレン２０mlに
溶解し、トリフルオロ酢酸（TFA)１０mlを加え、室温で
３０分かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物に酢
酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｄ）の脱保護体を塩化メチレン３０mlとDMF １５mlの混
合溶媒に溶解し、t-Boc-Asp(OBzl）２．２ｇ（６．８mm
ol）とHOBt／H2O １ｇ（６．５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC １．４ｇ（６．８mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。生成したDC
C 尿素を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エ
チルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。酢酸エチル層を水および食塩水で洗浄した後減圧濃
縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し
て（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）、白
色固体の（１ｅ）５．３６ｇ（５．２４mmol）を得た。
収率９１％。
r(Bzl)２．０５ｇ（７mmol）、ジメチルアミノピリジン
７３mgを塩化メチレン５０mlに溶解し、氷冷しながらDC
C １．５ｇを加えた。氷冷下で２時間、室温で終夜かく
はんした後生成したDCC 尿素を濾別し、濾液を濃縮後残
留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製（ｎ−ヘキ
サン／酢酸エチル＝６／１）して、無色油状の（１ｄ）
４．７ｇ（５．７４mmol）を得た。収率９７％。（１
ｄ）４．７ｇ（５．７４mmol）を塩化メチレン２０mlに
溶解し、トリフルオロ酢酸（TFA)１０mlを加え、室温で
３０分かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物に酢
酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｄ）の脱保護体を塩化メチレン３０mlとDMF １５mlの混
合溶媒に溶解し、t-Boc-Asp(OBzl）２．２ｇ（６．８mm
ol）とHOBt／H2O １ｇ（６．５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC １．４ｇ（６．８mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。生成したDC
C 尿素を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エ
チルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。酢酸エチル層を水および食塩水で洗浄した後減圧濃
縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し
て（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）、白
色固体の（１ｅ）５．３６ｇ（５．２４mmol）を得た。
収率９１％。
【００２０】（１ｅ）５．２４ｇ（５．１２ｍｍｏｌ）
を塩化メチレン２０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ１０ｍｌを加
えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残
留物を酢酸エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：
２）で再結晶して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ
（４．７５ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。 （１ｆ）４．８ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ０．９６ｇ（５．５ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ・Ｈｚ
０８４２ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３０ｍ
ｌとＤＭＦ１５ｍｌの混合溶媒に溶解した。ここに、ジ
イソプロピルエチルアミン６３０ｍｇ（４．９ｍｍｏ
ｌ）とＤＣＣ１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加え、氷冷
下で２時間、室温で終夜かくはんした。以降（１ｄ）と
同様の後処理を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーで精製して（ｎ−へキサン／酢酸エチル＝３／
２）、白色固体（１ｇ）３．９５ｇ（３．６６ｍｍｏ
ｌ）を得た。収率７９％。 （１ｇ）２．０ｇ（１．８５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン
１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを加え、室温で３０分
かくはんした。溶媒を減圧で残留後、残留物に酢酸エチ
ルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。（この時、水層のｐＨがアルカリ性であることを確
認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネ
シウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。得ら
れた（１ｇ）の脱保護体を塩化メチレン２０ｍｌとＤＭ
Ｆ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、ｔ−Ｂｏｃ−Ａｒｇ
（Ｚ）Ｚ１．２ｇ（２．１５ｍｍｏ１）とＨｏＢｔ／Ｈ
ｚ０３３０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、ＤＣＣ４６０ｍｇ（２．２ｍｍｏ
ｌ）を加え氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。
以降（１ｆ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢酸エ
チル＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ（１．
４８ｍｍｏｌ）を得た。収率８０％。
を塩化メチレン２０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ１０ｍｌを加
えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残
留物を酢酸エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：
２）で再結晶して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ
（４．７５ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。 （１ｆ）４．８ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ０．９６ｇ（５．５ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ・Ｈｚ
０８４２ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３０ｍ
ｌとＤＭＦ１５ｍｌの混合溶媒に溶解した。ここに、ジ
イソプロピルエチルアミン６３０ｍｇ（４．９ｍｍｏ
ｌ）とＤＣＣ１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加え、氷冷
下で２時間、室温で終夜かくはんした。以降（１ｄ）と
同様の後処理を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーで精製して（ｎ−へキサン／酢酸エチル＝３／
２）、白色固体（１ｇ）３．９５ｇ（３．６６ｍｍｏ
ｌ）を得た。収率７９％。 （１ｇ）２．０ｇ（１．８５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン
１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを加え、室温で３０分
かくはんした。溶媒を減圧で残留後、残留物に酢酸エチ
ルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。（この時、水層のｐＨがアルカリ性であることを確
認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネ
シウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去した。得ら
れた（１ｇ）の脱保護体を塩化メチレン２０ｍｌとＤＭ
Ｆ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、ｔ−Ｂｏｃ−Ａｒｇ
（Ｚ）Ｚ１．２ｇ（２．１５ｍｍｏ１）とＨｏＢｔ／Ｈ
ｚ０３３０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、ＤＣＣ４６０ｍｇ（２．２ｍｍｏ
ｌ）を加え氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。
以降（１ｆ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢酸エ
チル＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ（１．
４８ｍｍｏｌ）を得た。収率８０％。
【００２１】 （１ｈ）１・０ｇ（０．６６４ｍｍｏ
ｌ）を塩化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを
加えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧で留去
後、残留物にクロロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液
を加えて抽出、分液した。（この時、水層のｐＨがアル
カリ性であることを確認した。）クロロホルム層を食塩
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後に減圧留去
した。得られた（１ｈ）の脱ｔ−Ｂｃｏ体を塩化メチレ
ン１０ｍｌに溶解し、無水コハク酸１２０ｍｇを加えて
室温でかくはんした。反応進行にともない白沈が生成し
た。１時間後溶媒を減圧濃縮し、残留物をアセトニトリ
ルとクロロホルムの混合溶媒（５：１）より再結晶し
て、白色固体（１ｉ）９２０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）
を得た。収率９２％。 （１ｉ）８００ｍｇ（０．５３２ｍｍｏｌ）を酢酸２０
ｍｌに５５℃で溶解し、１０％パラジウム炭素を１００
ｍｇ加えてこの温度で常圧水素添加を４時間行った。触
媒をセライトで濾別して濾液を減圧濃縮し、残留物にア
セトニトリルを加えるを白色固体が析出した。これを濾
取することにより、化合物（１）３９０ｍｇ（０．３６
９ｍｍｏｌ）を得た。収率６９％。 （Ｍ−Ｈ）− １０５５（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（１．０３）、Ｇｌｙ（１．０
１）、Ａｓｐ（１．０２）、 ｓｅｒ
（０．９１）
ｌ）を塩化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを
加えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧で留去
後、残留物にクロロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液
を加えて抽出、分液した。（この時、水層のｐＨがアル
カリ性であることを確認した。）クロロホルム層を食塩
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後に減圧留去
した。得られた（１ｈ）の脱ｔ−Ｂｃｏ体を塩化メチレ
ン１０ｍｌに溶解し、無水コハク酸１２０ｍｇを加えて
室温でかくはんした。反応進行にともない白沈が生成し
た。１時間後溶媒を減圧濃縮し、残留物をアセトニトリ
ルとクロロホルムの混合溶媒（５：１）より再結晶し
て、白色固体（１ｉ）９２０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）
を得た。収率９２％。 （１ｉ）８００ｍｇ（０．５３２ｍｍｏｌ）を酢酸２０
ｍｌに５５℃で溶解し、１０％パラジウム炭素を１００
ｍｇ加えてこの温度で常圧水素添加を４時間行った。触
媒をセライトで濾別して濾液を減圧濃縮し、残留物にア
セトニトリルを加えるを白色固体が析出した。これを濾
取することにより、化合物（１）３９０ｍｇ（０．３６
９ｍｍｏｌ）を得た。収率６９％。 （Ｍ−Ｈ）− １０５５（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（１．０３）、Ｇｌｙ（１．０
１）、Ａｓｐ（１．０２）、 ｓｅｒ
（０．９１）
【００２２】実施例２ 化合物（２）の合成 化合物（１ａ）の合成において１−ブロモヘキサデカン
の代わりに１−ブロモテトラデカンを用い、以後同様の
操作を行って化合物（２）を合成した。 (M−H)- ９９９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．１０）、Gly （１．０
３）、Asp （０．９８）、Ser （０．８９）
の代わりに１−ブロモテトラデカンを用い、以後同様の
操作を行って化合物（２）を合成した。 (M−H)- ９９９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．１０）、Gly （１．０
３）、Asp （０．９８）、Ser （０．８９）
【００２３】実施例３ 化合物（３）の合成 化合物（１ｉ）の合成において、コハク酸無水物の代わ
りにグルタル酸無水物を用い、以後同様の操作を行って
化合物（３）を合成した。 (M−H)- １０６９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０２）、Gly （０．９
８）、Asp （１．００）、Ser （０．９５）
りにグルタル酸無水物を用い、以後同様の操作を行って
化合物（３）を合成した。 (M−H)- １０６９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０２）、Gly （０．９
８）、Asp （１．００）、Ser （０．９５）
【００２４】実施例４ 化合物（４）の合成 化合物（１ｄ）の合成において、（１ｃ）の代わりに市
販のジミリストイルーｓｙｎ−グリセロールを用い、以
後同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 （ＭーＨ）− １０２７（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（０．９６）、Ｇｌｙ（１．０
４）、Ａｓｐ（０．９２）、 ｓｅｒ
（０．９０）
販のジミリストイルーｓｙｎ−グリセロールを用い、以
後同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 （ＭーＨ）− １０２７（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（０．９６）、Ｇｌｙ（１．０
４）、Ａｓｐ（０．９２）、 ｓｅｒ
（０．９０）
【００２５】本発明の化合物は、いずれも中性のpH領域
の水溶液中で、二分子膜構造を基本構造とするベシクル
を形成することができる。このベシクルの表面に存在す
るArg-Gly-Asp ペプチドが、ガン細胞、血小板、あるい
はリンパ球等の表面に存在するフィブロネクチンレセプ
ターと結合できることを利用して、ガン転移抑制、血小
板凝集抑制あるいはリンパ球活性化の目的に使用するこ
とができる。また、内水相あるいは脂質二重膜層に各種
抗ガン剤を保持させて、言わゆるガン細胞へのターゲッ
ティグ療法に用いることができる。
の水溶液中で、二分子膜構造を基本構造とするベシクル
を形成することができる。このベシクルの表面に存在す
るArg-Gly-Asp ペプチドが、ガン細胞、血小板、あるい
はリンパ球等の表面に存在するフィブロネクチンレセプ
ターと結合できることを利用して、ガン転移抑制、血小
板凝集抑制あるいはリンパ球活性化の目的に使用するこ
とができる。また、内水相あるいは脂質二重膜層に各種
抗ガン剤を保持させて、言わゆるガン細胞へのターゲッ
ティグ療法に用いることができる。
【００２６】以下に本発明の化合物を用いたベシクルの
調整例、及びそのベシクル分散液が強い細胞接着能力を
有していることを示す実験例を示す。
調整例、及びそのベシクル分散液が強い細胞接着能力を
有していることを示す実験例を示す。
【００２７】ベシクルの調整例 化合物（１）３０mgをクロロホルム１０mlとメタノール
１０mlの混合溶媒に６０℃で溶解し、ロータリーエバポ
レーターを用いて６０℃で溶媒を減圧留去した。さらに
真空ポンプを用いて室温で３０分乾燥させた。形成され
た化合物（１）の薄膜にpH７．０のリン酸緩衝液３mlを
加え、８０℃に加温した後ボルテックスミキシングを行
って膜はがしを行った。次いでプローグ型超音波を用い
て３０Ｗ５分の処理を行ったところ、均一の白乳色分散
液が得られた。NICOMPを用いて粒径分布を調べた結果、
平均が約８０nmの単分散分布を示した。またプリバロフ
型DSC を用いて相転位点を調べた結果、５３℃であるこ
とがわかった。化合物（２）を用いて同様の操作を行っ
ても、やはり均一分散液が得られた。この場合相転移点
は３８．５℃であった。
１０mlの混合溶媒に６０℃で溶解し、ロータリーエバポ
レーターを用いて６０℃で溶媒を減圧留去した。さらに
真空ポンプを用いて室温で３０分乾燥させた。形成され
た化合物（１）の薄膜にpH７．０のリン酸緩衝液３mlを
加え、８０℃に加温した後ボルテックスミキシングを行
って膜はがしを行った。次いでプローグ型超音波を用い
て３０Ｗ５分の処理を行ったところ、均一の白乳色分散
液が得られた。NICOMPを用いて粒径分布を調べた結果、
平均が約８０nmの単分散分布を示した。またプリバロフ
型DSC を用いて相転位点を調べた結果、５３℃であるこ
とがわかった。化合物（２）を用いて同様の操作を行っ
ても、やはり均一分散液が得られた。この場合相転移点
は３８．５℃であった。
【００２８】細胞接着阻害の測定 本発明のペプチド誘導体は、細胞のフィブロネクチンに
対する接着を阻害する。その活性測定方法は、基本的に
生化学の分野で広く用いられている競争法であり、例え
ば特開平１−３０９６８２、特開平２−１７４７９７、
Methods in Enzymology 第８２巻、８０３（１９８１）
に開示されている。
対する接着を阻害する。その活性測定方法は、基本的に
生化学の分野で広く用いられている競争法であり、例え
ば特開平１−３０９６８２、特開平２−１７４７９７、
Methods in Enzymology 第８２巻、８０３（１９８１）
に開示されている。
【００２９】１．吸着プレートの作製 市販のヒト由来のフィブロネクチン（コスモバイオ
（株）から購入）をPBS （リン酸緩衝液）で１０μｇ／
mlに溶解し、その溶液５０μリットルを９６wellのポリ
スチレンプレートに入れ、４℃で一晩保温してコーティ
ングした。次に非特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミ
ン（BSA)１％を加え、３７℃、１時間保温し、その後洗
浄操作（PBS)を行い充分に水切りして吸着プレートを作
製した。
（株）から購入）をPBS （リン酸緩衝液）で１０μｇ／
mlに溶解し、その溶液５０μリットルを９６wellのポリ
スチレンプレートに入れ、４℃で一晩保温してコーティ
ングした。次に非特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミ
ン（BSA)１％を加え、３７℃、１時間保温し、その後洗
浄操作（PBS)を行い充分に水切りして吸着プレートを作
製した。
【００３０】２．細胞阻害実験 先に述べた化合物（１）のベシクル調整法において、リ
ン酸緩衝液の代わりにDulbecos Modified Eagles Mediu
n （以下DMEMと略記する）を用いる以外は同様の操作を
行って、化合物（１）のベシクル分散液を得た。この分
散液を０．２〜５mg／mlの濃度になるように希釈し、５
０μリットルを上記の方法で作製したプレートに入れ、
そこへNRK ４９F （１×１０6 cells ／ml）懸濁液を５
０μリットル加え、３７℃で１時間保温し細胞を接着さ
せた。PBS で３回洗浄し、未接着の細胞を除去した後、
０．０５％トリプシン・０．０２％EDTA溶液で接着した
細胞を剥離し、０．２％トリパンブルーで染色して細胞
数を計測した。結果を表１に示す。表１中のGRGDS はGl
y-Arg-Gly-Asp-Ser をあらわす。なお別途実験により、
化合物（１）の分散液が細胞溶解性をもたないことを確
認した。
ン酸緩衝液の代わりにDulbecos Modified Eagles Mediu
n （以下DMEMと略記する）を用いる以外は同様の操作を
行って、化合物（１）のベシクル分散液を得た。この分
散液を０．２〜５mg／mlの濃度になるように希釈し、５
０μリットルを上記の方法で作製したプレートに入れ、
そこへNRK ４９F （１×１０6 cells ／ml）懸濁液を５
０μリットル加え、３７℃で１時間保温し細胞を接着さ
せた。PBS で３回洗浄し、未接着の細胞を除去した後、
０．０５％トリプシン・０．０２％EDTA溶液で接着した
細胞を剥離し、０．２％トリパンブルーで染色して細胞
数を計測した。結果を表１に示す。表１中のGRGDS はGl
y-Arg-Gly-Asp-Ser をあらわす。なお別途実験により、
化合物（１）の分散液が細胞溶解性をもたないことを確
認した。
【００３１】
【表１】
【００３２】以上の実験で、本発明の化合物がベシクル
状に分散し、強い細胞接着阻害活性を有することが明ら
かとなった。
状に分散し、強い細胞接着阻害活性を有することが明ら
かとなった。
【００３３】
【００３４】 配列番号：１ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端フラグメント
【００３５】 配列番号：２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端フラグメント
【００３６】 配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/06 Ｂ０１Ｊ 13/02 Ｚ
Claims (1)
- 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘
導体またはその塩。 一般式（Ｉ） 【化１】 式中、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐはそれぞれアルギニン、
グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕はＧｌｙ
または単結合、〔Ｙ〕はＳｅｒまたは単結合を示す。ｍ
は２または３、ｎは１を示す。Ｒ１およびＲ２は、水素
あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐のアシル基ま
たはアルキル基であり、置換基、不飽和基を有していて
も良い。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、
ラセミ体でも光学活性体のいずれでもよい。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14276791A JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14276791A JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320190A JPH05320190A (ja) | 1993-12-03 |
| JP2694399B2 true JP2694399B2 (ja) | 1997-12-24 |
Family
ID=15323113
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14276791A Expired - Lifetime JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2694399B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101421293B (zh) * | 2006-03-01 | 2013-09-25 | 福冈县政府 | 含有肽脂质的载体和使用该载体将化合物引入细胞的方法 |
| KR101220162B1 (ko) * | 2009-07-02 | 2013-01-14 | 한양대학교 산학협력단 | 아르기닌―기제 양친성 펩티드 마이셀 |
-
1991
- 1991-05-20 JP JP14276791A patent/JP2694399B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05320190A (ja) | 1993-12-03 |
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