JPH05320190A - ペプチド誘導体 - Google Patents
ペプチド誘導体Info
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- JPH05320190A JPH05320190A JP14276791A JP14276791A JPH05320190A JP H05320190 A JPH05320190 A JP H05320190A JP 14276791 A JP14276791 A JP 14276791A JP 14276791 A JP14276791 A JP 14276791A JP H05320190 A JPH05320190 A JP H05320190A
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- amino acid
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
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- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【目的】リポソームやミセル等の分子集合体を形成する
ことができるArg-Gly-Asp 単位を有するペプチド誘導体
を提供する。 【構成】下式で表わされるペプチド誘導体またはその
塩。なお式中、Arg 、Gly 、Asp はそれぞれアルギニ
ン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕は、存在するかあるいは存在しないアミノ酸また
はペプチド残基を示す。ｍは１から５までの整数を示
す。ｎは１から５までの整数を示す。Ｒ1 およびＲ
2 は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐の
アシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和基を
有していても良い。また、分子内に存在する不斉炭素に
関しては、ラセミ体でも光学活性体のいずれでもよい。 【化１】
ことができるArg-Gly-Asp 単位を有するペプチド誘導体
を提供する。 【構成】下式で表わされるペプチド誘導体またはその
塩。なお式中、Arg 、Gly 、Asp はそれぞれアルギニ
ン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕は、存在するかあるいは存在しないアミノ酸また
はペプチド残基を示す。ｍは１から５までの整数を示
す。ｎは１から５までの整数を示す。Ｒ1 およびＲ
2 は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐の
アシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和基を
有していても良い。また、分子内に存在する不斉炭素に
関しては、ラセミ体でも光学活性体のいずれでもよい。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アルギニン−グリシン
−アスパラギン酸のトリペプチド単位を有する、リポソ
ームあるいはミセル等の分子集合体を形成するのに最適
なペプチド誘導体に関する。
−アスパラギン酸のトリペプチド単位を有する、リポソ
ームあるいはミセル等の分子集合体を形成するのに最適
なペプチド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】フィブロネクチンは細胞−細胞外基質の
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのアルギニン−グリ
シン−アスパラギン酸（以下、Arg-Gly-Asp と略す）配
列を特異的に認識することが明らかにされ、レセプター
との相互作用に重要なものであることが報告されている
（Nature、第３０９巻、３０頁、１９８４年）。以来、
Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるいはポリペプチド
を用いる研究が成されている。例えば、Arg-Gly-Asp 配
列を有する種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用
いて血小板凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集（Po
lymer Preprints, Japan）、第３８巻、３１４９頁、１
９８９年、特開平２−１７４７９７号）、Arg-Gly-Asp
配列を有するペプチドを細胞移動抑制剤として用いる方
法（特開平２−４７１６号）、Arg-Gly-Asp を固定化し
たPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法（高分子学会予
稿集（Polymer Preprints, Japan）、第３７巻、７０５
頁、１９８８年）が報告されている。さらに、ポリマー
にArg-Gly-Asp を必須構成単位とするペプチドを共有結
合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体とし
て用いる方法（特開平１−３０９６８２号、特開平１−
３０５９６０号）、Arg-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリ
ペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方法が
開示されている（特開昭６４−６２１７号）。また、Ar
g-Gly-Asp 配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰
り返し構造を有するポリペプチドを用いて、ガン転移を
抑制する方法が知られている(Int. J. Biol. Macromo
l.、第１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１１巻、
２２６頁、１９８９年、Jpn. J. Cancer Res.,第６０
巻、７２２頁、１９８９年）。
接着に関与するタンパク質であり、血小板凝集やガン転
移にも関与していると考えられている。これらの相互作
用は一連の細胞表面のレセプターにより仲介され、フィ
ブロネクチンは分子量約２５万の巨大分子であるにもか
かわらず、これらのレセプターがそのアルギニン−グリ
シン−アスパラギン酸（以下、Arg-Gly-Asp と略す）配
列を特異的に認識することが明らかにされ、レセプター
との相互作用に重要なものであることが報告されている
（Nature、第３０９巻、３０頁、１９８４年）。以来、
Arg-Gly-Asp 配列を有するオリゴあるいはポリペプチド
を用いる研究が成されている。例えば、Arg-Gly-Asp 配
列を有する種々の鎖状および環状のオリゴペプチドを用
いて血小板凝集を阻害する方法（高分子学会予稿集（Po
lymer Preprints, Japan）、第３８巻、３１４９頁、１
９８９年、特開平２−１７４７９７号）、Arg-Gly-Asp
配列を有するペプチドを細胞移動抑制剤として用いる方
法（特開平２−４７１６号）、Arg-Gly-Asp を固定化し
たPMMA膜を細胞接着膜として用いる方法（高分子学会予
稿集（Polymer Preprints, Japan）、第３７巻、７０５
頁、１９８８年）が報告されている。さらに、ポリマー
にArg-Gly-Asp を必須構成単位とするペプチドを共有結
合させ動物細胞培養基体、生体複合人工臓器用基体とし
て用いる方法（特開平１−３０９６８２号、特開平１−
３０５９６０号）、Arg-Gly-Asp-Ser 配列を有するポリ
ペプチドを体外血液用血小板保護剤として用いる方法が
開示されている（特開昭６４−６２１７号）。また、Ar
g-Gly-Asp 配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰
り返し構造を有するポリペプチドを用いて、ガン転移を
抑制する方法が知られている(Int. J. Biol. Macromo
l.、第１１巻、２３頁、１９８９年、同誌、第１１巻、
２２６頁、１９８９年、Jpn. J. Cancer Res.,第６０
巻、７２２頁、１９８９年）。
【０００３】一方、リポソームやミセル等の分子集合体
をドラッグキャリアーとして用いる方法が多数検討され
ている（例えば、リポソーム、２４５頁〜２７１頁、南
江堂、１９８８年、Cancer Res. 第４３巻、５３２８
頁、１９８３年、J. Controlled Release ２６９頁、１
９９０年）。
をドラッグキャリアーとして用いる方法が多数検討され
ている（例えば、リポソーム、２４５頁〜２７１頁、南
江堂、１９８８年、Cancer Res. 第４３巻、５３２８
頁、１９８３年、J. Controlled Release ２６９頁、１
９９０年）。
【０００４】例えばRGD 配列含有ペプチドにミリスチン
酸を導入した化合物がＷＯ９０／１１２９７号明細書に
開示されている。しかしこの化合物の分子集合体形成能
は未知であり、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造
を有する、リポソームあるいはシセル等の分子集合体を
形成するのに適当なペプチド誘導体は知られていない。
酸を導入した化合物がＷＯ９０／１１２９７号明細書に
開示されている。しかしこの化合物の分子集合体形成能
は未知であり、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸
配列を有するオリゴペプチドあるいはその繰り返し構造
を有する、リポソームあるいはシセル等の分子集合体を
形成するのに適当なペプチド誘導体は知られていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、Arg-
Gly-Asp のトリペプチド単位を有する、リポソームある
いはミセル等の分子集合体を形成するのに最適なペプチ
ド脂質誘導体及びその合成法を提供することである。
Gly-Asp のトリペプチド単位を有する、リポソームある
いはミセル等の分子集合体を形成するのに最適なペプチ
ド脂質誘導体及びその合成法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の化合物は下記、
一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体またはその塩か
ら成るペプチド誘導体である。
一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘導体またはその塩か
ら成るペプチド誘導体である。
【０００７】
【化２】
【０００８】式中のArg 、Gly 、Asp はそれぞれアルギ
ニン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕は存在するかあるいは存在しないアミノ酸残基ま
たはペプチド残基を示す。存在する場合には、〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕がセリン、グリシン、バリン、アスパラギン、プ
ロリン、システイン、トレオニン残基から選択されるア
ミノ酸残基またはペプチド残基であることが好ましい。
特に、〔Ｙ〕がセリン残基であることが好ましい。ま
た、〔Ｘ〕、〔Ｙ〕がともに存在しない場合も特に好ま
しい。ｍは１から５までの整数を表し、ｍが１から３ま
での整数が好ましい。ｎは１から５までの整数を表し、
ｎが１から３までの整数が好ましい。Ｒ1およびＲ
2 は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐の
アシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和基を
有していても良い。好ましい炭素数としては、１２から
１８まである。アシル基としては、ミリストイル基、パ
ルミトイル基、ステアロイル基が好ましい例として示さ
れる。アルキル基としては、ミリスチル基、パルミチル
基、ステアリル基、フィタニル基が好ましい例として示
される。Ｒ1 、Ｒ2 は同じであっても異なってもよい。
また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体
でも光学活性体のいずれでもよい。本発明の化合物の好
ましい塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩、マグネシウム塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、酢酸塩等が挙げられる。
ニン、グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕は存在するかあるいは存在しないアミノ酸残基ま
たはペプチド残基を示す。存在する場合には、〔Ｘ〕、
〔Ｙ〕がセリン、グリシン、バリン、アスパラギン、プ
ロリン、システイン、トレオニン残基から選択されるア
ミノ酸残基またはペプチド残基であることが好ましい。
特に、〔Ｙ〕がセリン残基であることが好ましい。ま
た、〔Ｘ〕、〔Ｙ〕がともに存在しない場合も特に好ま
しい。ｍは１から５までの整数を表し、ｍが１から３ま
での整数が好ましい。ｎは１から５までの整数を表し、
ｎが１から３までの整数が好ましい。Ｒ1およびＲ
2 は、水素あるいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐の
アシル基またはアルキル基であり、置換基、不飽和基を
有していても良い。好ましい炭素数としては、１２から
１８まである。アシル基としては、ミリストイル基、パ
ルミトイル基、ステアロイル基が好ましい例として示さ
れる。アルキル基としては、ミリスチル基、パルミチル
基、ステアリル基、フィタニル基が好ましい例として示
される。Ｒ1 、Ｒ2 は同じであっても異なってもよい。
また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体
でも光学活性体のいずれでもよい。本発明の化合物の好
ましい塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、ア
ンモニウム塩、マグネシウム塩、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、酢酸塩等が挙げられる。
【０００９】以下に本発明の好ましい具体例を示すが、
本発明はこれに限定されるものではない。
本発明はこれに限定されるものではない。
【００１０】
【化３】
【００１１】
【化４】
【００１２】次に本発明の化合物の合成法について説明
する。本発明の化合物は基本的に以下の方法により合成
することができる。 ジアルキル（ジアシル）グリセロール（II）の合成
する。本発明の化合物は基本的に以下の方法により合成
することができる。 ジアルキル（ジアシル）グリセロール（II）の合成
【００１３】
【化５】
【００１４】グリセロール誘導体（II）より、保護ア
ミノ酸の逐次延長による保護ペプチドの合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルチリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
ミノ酸の逐次延長による保護ペプチドの合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルチリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
【００１５】以下各段階について具体的に説明する。 式（II）で表わされるジアルキル（ジアシル）グリセ
ロールは、公知の方法（例えば Biochemistry 第２巻３
９４頁１９６３年）により合成することができ、また市
販品を購入することもできる。 保護アミノ酸を逐次伸長する方法は、既知の方法、す
なわち、泉屋ら著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸
善）や Bodanszky著 "PRINCIPLES OF PEPTIDE SYNTHESI
S"、"THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS" (Springer
Verlag, New York)に記載されている方法がいずれも有
効である。縮合反応の段階では、DCC-additive法、アジ
ド法、混酸無水物法、活性エステル法のいずれを採用し
てもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとジシ
クロヘキシルカルボジイミドを併用するDCC-additive法
が最も良好な結果を与えた。またグリセロール誘導体
（II）に最初の保護アミノ酸を導入する工程では、ジシ
クロヘキシルカルボジイミドと触媒量のＮ，Ｎ−ジメチ
ルアミノピリジンを用いる方法が有効である。 アミンのマロニル化、スクシニル化、またはグルタリ
ル化反応には、それぞれ対応する環状酸無水物または酸
二塩化物を用いることが好ましい。 保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた保
護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護条
件は、接触水素添加、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。
ロールは、公知の方法（例えば Biochemistry 第２巻３
９４頁１９６３年）により合成することができ、また市
販品を購入することもできる。 保護アミノ酸を逐次伸長する方法は、既知の方法、す
なわち、泉屋ら著「ペプチド合成の基礎と実験」（丸
善）や Bodanszky著 "PRINCIPLES OF PEPTIDE SYNTHESI
S"、"THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS" (Springer
Verlag, New York)に記載されている方法がいずれも有
効である。縮合反応の段階では、DCC-additive法、アジ
ド法、混酸無水物法、活性エステル法のいずれを採用し
てもよいが、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールとジシ
クロヘキシルカルボジイミドを併用するDCC-additive法
が最も良好な結果を与えた。またグリセロール誘導体
（II）に最初の保護アミノ酸を導入する工程では、ジシ
クロヘキシルカルボジイミドと触媒量のＮ，Ｎ−ジメチ
ルアミノピリジンを用いる方法が有効である。 アミンのマロニル化、スクシニル化、またはグルタリ
ル化反応には、それぞれ対応する環状酸無水物または酸
二塩化物を用いることが好ましい。 保護基を脱保護するのに用いられる条件は、用いた保
護基の種類に大きく依存する。通常使用される脱保護条
件は、接触水素添加、トリフルオロ酢酸、無水フッ化水
素、トリフルオロメタンスルホン酸−チオアニソール混
合系、トリフルオロ酢酸−チオアニソール混合系等であ
るが、保護基の種類によってはさらに多様な手段が可能
である。
【００１６】
【実施例】実施例１ 以下に本発明の化合物（１）の合成例を示す。化合物
（１）を以下の合成経路で合成した。なお、アミノ酸、
各種保護基および脱保護試薬等は通常用いられて略号を
使って表した。また、化合物例（２）〜（４）もここに
例示した方法で合成できる。 Bzl:ベンジル基 TFA:トリフルオロ酢酸 t-Boc:ｔ−ブトキシカルボニル基 HOBt: １−ヒドロキシベンゾトリアゾール Z:ベンジルオキシカルボニル基 DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド
（１）を以下の合成経路で合成した。なお、アミノ酸、
各種保護基および脱保護試薬等は通常用いられて略号を
使って表した。また、化合物例（２）〜（４）もここに
例示した方法で合成できる。 Bzl:ベンジル基 TFA:トリフルオロ酢酸 t-Boc:ｔ−ブトキシカルボニル基 HOBt: １−ヒドロキシベンゾトリアゾール Z:ベンジルオキシカルボニル基 DCC:ジシクロヘキシルカルボジイミド
【００１７】
【化６】
【００１８】文献(Synthesis ５０３頁１９８５年）記
載の方法により調製した（１ａ）１２．０ｇをトルエン
３００mlに溶かし、この溶液に粉末水酸化カリウム１
６．０ｇと１−ブロモヘキサデカン８２ｇを加え、反応
混合物を８時間加熱還流した。反応液を室温になるまで
放冷したのちヘキサン４００mlで希釈した。水２００ml
で２回洗浄後無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。硫酸ナ
トリウムを濾過して除き、濾液を減圧濃縮して無色油状
物を得た。このものをシリカゲルクロマトグラフィー
（溶出液 ヘキサン／酢酸エチル＝４０／１）で精製
し、（１ｂ）を４１．２ｇ（収率９５．５％）得た。物
性値は文献（Biochemistry第２巻，３９４頁１９６３
年）記載のそれと一致した。得られた（１ｂ）を酢酸エ
チル２５０mlに溶解し、１０％パラジウム−炭素１．５
ｇを加えて、反応混合物を水素雰囲気下８時間反応し
た。不溶性物質をセライト濾過して除き、セライト層を
酢酸エチルで洗浄した。濾液、洗液をあわせて減圧濃縮
した。残渣を酢酸エチルから再結晶して（１ｃ）を無色
結晶（３４．４ｇ）として得た。物性値は文献（Bioche
mistry第２巻，３９４頁１９６３年）記載のそれと一致
した。
載の方法により調製した（１ａ）１２．０ｇをトルエン
３００mlに溶かし、この溶液に粉末水酸化カリウム１
６．０ｇと１−ブロモヘキサデカン８２ｇを加え、反応
混合物を８時間加熱還流した。反応液を室温になるまで
放冷したのちヘキサン４００mlで希釈した。水２００ml
で２回洗浄後無水硫酸ナトリウムにて乾燥した。硫酸ナ
トリウムを濾過して除き、濾液を減圧濃縮して無色油状
物を得た。このものをシリカゲルクロマトグラフィー
（溶出液 ヘキサン／酢酸エチル＝４０／１）で精製
し、（１ｂ）を４１．２ｇ（収率９５．５％）得た。物
性値は文献（Biochemistry第２巻，３９４頁１９６３
年）記載のそれと一致した。得られた（１ｂ）を酢酸エ
チル２５０mlに溶解し、１０％パラジウム−炭素１．５
ｇを加えて、反応混合物を水素雰囲気下８時間反応し
た。不溶性物質をセライト濾過して除き、セライト層を
酢酸エチルで洗浄した。濾液、洗液をあわせて減圧濃縮
した。残渣を酢酸エチルから再結晶して（１ｃ）を無色
結晶（３４．４ｇ）として得た。物性値は文献（Bioche
mistry第２巻，３９４頁１９６３年）記載のそれと一致
した。
【００１９】（１ｃ）３．２５ｇ（６mmol）、t-Boc-Se
r(Bzl)２．０５ｇ（７mmol）、ジメチルアミノピリジン
７３mgを塩化メチレン５０mlに溶解し、氷冷しながらDC
C １．５ｇを加えた。氷冷下で２時間、室温で終夜かく
はんした後生成したDCC 尿素を濾別し、濾液を濃縮後残
留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製（ｎ−ヘキ
サン／酢酸エチル＝６／１）して、無色油状の（１ｄ）
４．７ｇ（５．７４mmol）を得た。収率９７％。（１
ｄ）４．７ｇ（５．７４mmol）を塩化メチレン２０mlに
溶解し、トリフルオロ酢酸（TFA)１０mlを加え、室温で
３０分かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物に酢
酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｄ）の脱保護体を塩化メチレン３０mlとDMF １５mlの混
合溶媒に溶解し、t-Boc-Asp(OBzl）２．２ｇ（６．８mm
ol）とHOBt／H2O １ｇ（６．５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC １．４ｇ（６．８mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。生成したDC
C 尿素を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エ
チルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。酢酸エチル層を水および食塩水で洗浄した後減圧濃
縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し
て（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）、白
色固体の（１ｅ）５．３６ｇ（５．２４mmol）を得た。
収率９１％。
r(Bzl)２．０５ｇ（７mmol）、ジメチルアミノピリジン
７３mgを塩化メチレン５０mlに溶解し、氷冷しながらDC
C １．５ｇを加えた。氷冷下で２時間、室温で終夜かく
はんした後生成したDCC 尿素を濾別し、濾液を濃縮後残
留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製（ｎ−ヘキ
サン／酢酸エチル＝６／１）して、無色油状の（１ｄ）
４．７ｇ（５．７４mmol）を得た。収率９７％。（１
ｄ）４．７ｇ（５．７４mmol）を塩化メチレン２０mlに
溶解し、トリフルオロ酢酸（TFA)１０mlを加え、室温で
３０分かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物に酢
酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｄ）の脱保護体を塩化メチレン３０mlとDMF １５mlの混
合溶媒に溶解し、t-Boc-Asp(OBzl）２．２ｇ（６．８mm
ol）とHOBt／H2O １ｇ（６．５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC １．４ｇ（６．８mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。生成したDC
C 尿素を濾別し、濾液を減圧濃縮した。残留物に酢酸エ
チルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液し
た。酢酸エチル層を水および食塩水で洗浄した後減圧濃
縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し
て（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）、白
色固体の（１ｅ）５．３６ｇ（５．２４mmol）を得た。
収率９１％。
【００２０】（１ｅ）５．２４ｇ（５．１２mmol）を塩
化メチレン２０mlに溶解し、TFA １０mlを加えて室温で
１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残留物を酢酸
エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：２）で再結晶
して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ（４．７５mmol）
を得た。収率９３％。（１ｆ）４．８ｇ（４．６２mmo
l）、t-Boc-Gly ０．９６ｇ（５．５mmol）、HOBt・H2O
８４２mg（５．５mmol）を塩化メチレン３０mlとDMF
１５mlの混合溶媒に溶解した。ここに、ジイソプロピル
エチルアミン６３０mg（４．９mmol）とDCC １．１ｇ
（５．３mmol）を加え、氷冷下で２時間、室温で終夜か
くはんした。以降（０８１５ｂ）と同様の後処理を行
い、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して
（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／２）、白色固体（１
ｇ）３．９５ｇ（３．６６mmol）を得た。収率７９％。
（１ｇ）２．０ｇ（１．８５mmol）を塩化メチレン１０
mlに溶解し、TFA ５mlを加え、室温で３０分かくはんし
た。溶媒を減圧で残留後、残留物に酢酸エチルと４％炭
酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液した。（この
時、水層のpHがアルカリ性であることを確認した。）酢
酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
した後、酢酸エチルを減圧留去した。得られた（１ｇ）
の脱保護体を塩化メチレン２０mlとDMF ５mlの混合溶媒
に溶解し、t-Boc-Arg(Z)2 １．２ｇ（２．１５mmol）と
HOBt／H2O ３３０mg（２．１５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC ４６０mg（２．２mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。以降（０８
１５ｂ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢酸エチル
＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ（１．４８
mmol）を得た。収率８０％。
化メチレン２０mlに溶解し、TFA １０mlを加えて室温で
１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残留物を酢酸
エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：２）で再結晶
して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ（４．７５mmol）
を得た。収率９３％。（１ｆ）４．８ｇ（４．６２mmo
l）、t-Boc-Gly ０．９６ｇ（５．５mmol）、HOBt・H2O
８４２mg（５．５mmol）を塩化メチレン３０mlとDMF
１５mlの混合溶媒に溶解した。ここに、ジイソプロピル
エチルアミン６３０mg（４．９mmol）とDCC １．１ｇ
（５．３mmol）を加え、氷冷下で２時間、室温で終夜か
くはんした。以降（０８１５ｂ）と同様の後処理を行
い、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して
（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／２）、白色固体（１
ｇ）３．９５ｇ（３．６６mmol）を得た。収率７９％。
（１ｇ）２．０ｇ（１．８５mmol）を塩化メチレン１０
mlに溶解し、TFA ５mlを加え、室温で３０分かくはんし
た。溶媒を減圧で残留後、残留物に酢酸エチルと４％炭
酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分液した。（この
時、水層のpHがアルカリ性であることを確認した。）酢
酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
した後、酢酸エチルを減圧留去した。得られた（１ｇ）
の脱保護体を塩化メチレン２０mlとDMF ５mlの混合溶媒
に溶解し、t-Boc-Arg(Z)2 １．２ｇ（２．１５mmol）と
HOBt／H2O ３３０mg（２．１５mmol）を加えて氷冷かく
はんした。ここに、DCC ４６０mg（２．２mmol）を加え
氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんした。以降（０８
１５ｂ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢酸エチル
＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ（１．４８
mmol）を得た。収率８０％。
【００２１】（１ｈ）１．０ｇ（０．６６４mmol）を塩
化メチレン１０mlに溶解し、TFA ５mlを加えて室温で１
時間かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物にクロ
ロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）クロロホルム層を食塩水で洗浄し、硫酸マ
グネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｈ）の脱t-Bco 体を塩化メチレン１０mlに溶解し、無水
コハク酸１２０mgを加えて室温でかくはんした。反応進
行にともない白沈が生成した。１時間後溶媒を減圧濃縮
し、残留物をアセトニトリルとクロロホルムの混合溶媒
（５：１）より再結晶して、白色固体（１ｉ）９２０mg
（０．６１mmol）を得た。収率９２％。（１ｉ）８００
mg（０．５３２mmol）を酢酸２０mlに５５℃で溶解し、
１０％パラジウム炭素を１００mg加えてこの温度で常圧
水素添加を４時間行った。触媒をセライトで濾別して濾
液を減圧濃縮し、残留物にアセトニトリルを加えるを白
色固体の（０８１５）が析出した。これを濾取すること
により、（０８１５）３９０mg（０．３６９mmol）を得
た。収率６９％。 (M−H)- １０５５（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０３）、Gly （１．０
１）、Asp （１．０２）、Ser （０．９１）
化メチレン１０mlに溶解し、TFA ５mlを加えて室温で１
時間かくはんした。溶媒を減圧で留去後、残留物にクロ
ロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽出、分
液した。（この時、水層のpHがアルカリ性であることを
確認した。）クロロホルム層を食塩水で洗浄し、硫酸マ
グネシウムで乾燥した後に減圧留去した。得られた（１
ｈ）の脱t-Bco 体を塩化メチレン１０mlに溶解し、無水
コハク酸１２０mgを加えて室温でかくはんした。反応進
行にともない白沈が生成した。１時間後溶媒を減圧濃縮
し、残留物をアセトニトリルとクロロホルムの混合溶媒
（５：１）より再結晶して、白色固体（１ｉ）９２０mg
（０．６１mmol）を得た。収率９２％。（１ｉ）８００
mg（０．５３２mmol）を酢酸２０mlに５５℃で溶解し、
１０％パラジウム炭素を１００mg加えてこの温度で常圧
水素添加を４時間行った。触媒をセライトで濾別して濾
液を減圧濃縮し、残留物にアセトニトリルを加えるを白
色固体の（０８１５）が析出した。これを濾取すること
により、（０８１５）３９０mg（０．３６９mmol）を得
た。収率６９％。 (M−H)- １０５５（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０３）、Gly （１．０
１）、Asp （１．０２）、Ser （０．９１）
【００２２】実施例２ 化合物（２）の合成 化合物（１ａ）の合成において１−ブロモヘキサデカン
の代わりに１−ブロモテトラデカンを用い、以後同様の
操作を行って化合物（２）を合成した。 (M−H)- ９９９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．１０）、Gly （１．０
３）、Asp （０．９８）、Ser （０．８９）
の代わりに１−ブロモテトラデカンを用い、以後同様の
操作を行って化合物（２）を合成した。 (M−H)- ９９９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．１０）、Gly （１．０
３）、Asp （０．９８）、Ser （０．８９）
【００２３】実施例３ 化合物（３）の合成 化合物（１ｉ）の合成において、コハク酸無水物の代わ
りにグルタル酸無水物を用い、以後同様の操作を行って
化合物（３）を合成した。 (M−H)- １０６９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０２）、Gly （０．９
８）、Asp （１．００）、Ser （０．９５）
りにグルタル酸無水物を用い、以後同様の操作を行って
化合物（３）を合成した。 (M−H)- １０６９（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （１．０２）、Gly （０．９
８）、Asp （１．００）、Ser （０．９５）
【００２４】実施例４ 化合物（４）の合成 化合物（１ｄ）の合成において、（１ｃ）の代わりに市
販のジシリストイル−syn −グリセロールを用い、以後
同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 (M−H)- １０２７（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （０．９６）、Gly （１．０
４）、Asp （０．９２）、Ser （０．９０）
販のジシリストイル−syn −グリセロールを用い、以後
同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 (M−H)- １０２７（FAB ，NEGA) アミノ酸分析、：Arg （０．９６）、Gly （１．０
４）、Asp （０．９２）、Ser （０．９０）
【００２５】本発明の化合物は、いずれも中性のpH領域
の水溶液中で、二分子膜構造を基本構造とするベシクル
を形成することができる。このベシクルの表面に存在す
るArg-Gly-Asp ペプチドが、ガン細胞、血小板、あるい
はリンパ球等の表面に存在するフィブロネクチンレセプ
ターと結合できることを利用して、ガン転移抑制、血小
板凝集抑制あるいはリンパ球活性化の目的に使用するこ
とができる。また、内水相あるいは脂質二重膜層に各種
抗ガン剤を保持させて、言わゆるガン細胞へのターゲッ
ティグ療法に用いることができる。
の水溶液中で、二分子膜構造を基本構造とするベシクル
を形成することができる。このベシクルの表面に存在す
るArg-Gly-Asp ペプチドが、ガン細胞、血小板、あるい
はリンパ球等の表面に存在するフィブロネクチンレセプ
ターと結合できることを利用して、ガン転移抑制、血小
板凝集抑制あるいはリンパ球活性化の目的に使用するこ
とができる。また、内水相あるいは脂質二重膜層に各種
抗ガン剤を保持させて、言わゆるガン細胞へのターゲッ
ティグ療法に用いることができる。
【００２６】以下に本発明の化合物を用いたベシクルの
調整例、及びそのベシクル分散液が強い細胞接着能力を
有していることを示す実験例を示す。
調整例、及びそのベシクル分散液が強い細胞接着能力を
有していることを示す実験例を示す。
【００２７】ベシクルの調整例 化合物（１）３０mgをクロロホルム１０mlとメタノール
１０mlの混合溶媒に６０℃で溶解し、ロータリーエバポ
レーターを用いて６０℃で溶媒を減圧留去した。さらに
真空ポンプを用いて室温で３０分乾燥させた。形成され
た化合物（１）の薄膜にpH７．０のリン酸緩衝液３mlを
加え、８０℃に加温した後ボルテックスミキシングを行
って膜はがしを行った。次いでプローグ型超音波を用い
て３０Ｗ５分の処理を行ったところ、均一の白乳色分散
液が得られた。NICOMPを用いて粒径分布を調べた結果、
平均が約８０nmの単分散分布を示した。またプリバロフ
型DSC を用いて相転位点を調べた結果、５３℃であるこ
とがわかった。化合物（２）を用いて同様の操作を行っ
ても、やはり均一分散液が得られた。この場合相転移点
は３８．５℃であった。
１０mlの混合溶媒に６０℃で溶解し、ロータリーエバポ
レーターを用いて６０℃で溶媒を減圧留去した。さらに
真空ポンプを用いて室温で３０分乾燥させた。形成され
た化合物（１）の薄膜にpH７．０のリン酸緩衝液３mlを
加え、８０℃に加温した後ボルテックスミキシングを行
って膜はがしを行った。次いでプローグ型超音波を用い
て３０Ｗ５分の処理を行ったところ、均一の白乳色分散
液が得られた。NICOMPを用いて粒径分布を調べた結果、
平均が約８０nmの単分散分布を示した。またプリバロフ
型DSC を用いて相転位点を調べた結果、５３℃であるこ
とがわかった。化合物（２）を用いて同様の操作を行っ
ても、やはり均一分散液が得られた。この場合相転移点
は３８．５℃であった。
【００２８】細胞接着阻害の測定 本発明のペプチド誘導体は、細胞のフィブロネクチンに
対する接着を阻害する。その活性測定方法は、基本的に
生化学の分野で広く用いられている競争法であり、例え
ば特開平１−３０９６８２、特開平２−１７４７９７、
Methods in Enzymology 第８２巻、８０３（１９８１）
に開示されている。
対する接着を阻害する。その活性測定方法は、基本的に
生化学の分野で広く用いられている競争法であり、例え
ば特開平１−３０９６８２、特開平２−１７４７９７、
Methods in Enzymology 第８２巻、８０３（１９８１）
に開示されている。
【００２９】１．吸着プレートの作製 市販のヒト由来のフィブロネクチン（コスモバイオ
（株）から購入）をPBS （リン酸緩衝液）で１０μｇ／
mlに溶解し、その溶液５０μリットルを９６wellのポリ
スチレンプレートに入れ、４℃で一晩保温してコーティ
ングした。次に非特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミ
ン（BSA)１％を加え、３７℃、１時間保温し、その後洗
浄操作（PBS)を行い充分に水切りして吸着プレートを作
製した。
（株）から購入）をPBS （リン酸緩衝液）で１０μｇ／
mlに溶解し、その溶液５０μリットルを９６wellのポリ
スチレンプレートに入れ、４℃で一晩保温してコーティ
ングした。次に非特異吸着を防ぐ目的で牛血清アルブミ
ン（BSA)１％を加え、３７℃、１時間保温し、その後洗
浄操作（PBS)を行い充分に水切りして吸着プレートを作
製した。
【００３０】２．細胞阻害実験 先に述べた化合物（１）のベシクル調整法において、リ
ン酸緩衝液の代わりにDulbecos Modified Eagles Mediu
n （以下DMEMと略記する）を用いる以外は同様の操作を
行って、化合物（１）のベシクル分散液を得た。この分
散液を０．２〜５mg／mlの濃度になるように希釈し、５
０μリットルを上記の方法で作製したプレートに入れ、
そこへNRK ４９F （１×１０6 cells ／ml）懸濁液を５
０μリットル加え、３７℃で１時間保温し細胞を接着さ
せた。PBS で３回洗浄し、未接着の細胞を除去した後、
０．０５％トリプシン・０．０２％EDTA溶液で接着した
細胞を剥離し、０．２％トリパンブルーで染色して細胞
数を計測した。結果を表１に示す。表１中のGRGDS はGl
y-Arg-Gly-Asp-Ser をあらわす。なお別途実験により、
化合物（１）の分散液が細胞溶解性をもたないことを確
認した。
ン酸緩衝液の代わりにDulbecos Modified Eagles Mediu
n （以下DMEMと略記する）を用いる以外は同様の操作を
行って、化合物（１）のベシクル分散液を得た。この分
散液を０．２〜５mg／mlの濃度になるように希釈し、５
０μリットルを上記の方法で作製したプレートに入れ、
そこへNRK ４９F （１×１０6 cells ／ml）懸濁液を５
０μリットル加え、３７℃で１時間保温し細胞を接着さ
せた。PBS で３回洗浄し、未接着の細胞を除去した後、
０．０５％トリプシン・０．０２％EDTA溶液で接着した
細胞を剥離し、０．２％トリパンブルーで染色して細胞
数を計測した。結果を表１に示す。表１中のGRGDS はGl
y-Arg-Gly-Asp-Ser をあらわす。なお別途実験により、
化合物（１）の分散液が細胞溶解性をもたないことを確
認した。
【００３１】
【表１】
【００３２】以上の実験で、本発明の化合物がベシクル
状に分散し、強い細胞接着阻害活性を有することが明ら
かとなった。
状に分散し、強い細胞接着阻害活性を有することが明ら
かとなった。
【００３３】
【００３４】 配列番号：１ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端フラグメント
【００３５】 配列番号：２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｎ末端フラグメント
【００３６】 配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：Ｃ末端フラグメント
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成３年８月１６日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
【化１】 式中、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｐはそれぞれアルギニン、
グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、〔Ｙ〕
は、存在するかあるいは存在しないアミノ酸またはペプ
チド残基を示す。ｍは１から５までの整数を示す。ｎは
１から５までの整数を示す。Ｒ１およびＲ２は、水素あ
るいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐のアシル基また
はアルキル基であり、置換基、不飽和基を有していても
良い。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラ
セミ体でも光学活性体のいずれでもよい。
グリシン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、〔Ｙ〕
は、存在するかあるいは存在しないアミノ酸またはペプ
チド残基を示す。ｍは１から５までの整数を示す。ｎは
１から５までの整数を示す。Ｒ１およびＲ２は、水素あ
るいは炭素数８〜２４の直鎖または分岐のアシル基また
はアルキル基であり、置換基、不飽和基を有していても
良い。また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラ
セミ体でも光学活性体のいずれでもよい。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００７】
【化２】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１４】グリセロール誘導体（ＩＩ）より、保護
アミノ酸の逐次延長による保護ペプチド の合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルタリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
アミノ酸の逐次延長による保護ペプチド の合成 保護ペプチドのＮ末端アミノ基の選択的脱保護とそれ
に続くマロニル化、スクシニル化、またはグルタリル化
反応。 側鎖保護基の除去および精製
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２０】（１ｅ）５．２４ｇ（５．１２ｍｍｏｌ）
を塩化メチレン２０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ１０ｍｌを加
えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残
留物を酢酸エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：
２）で再結晶して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ
（４．７５ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。（１ｆ）
４．８ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ
０．９６ｇ（５．５ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ・Ｈｚ０８４
２ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３０ｍｌとＤ
ＭＦ１５ｍｌの混合溶媒に溶解した。ここに、ジイソプ
ロピルエチルアミン６３０ｍｇ（４．９ｍｍｏｌ）とＤ
ＣＣ１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下で２時
間、室温で終夜かくはんした。以降（１ｄ）と同様の後
処理を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精
製して（ｎ−へキサン／酢酸エチル＝３／２）、白色固
体（１ｇ）３．９５ｇ（３．６６ｍｍｏｌ）を得た。収
率７９％。（１ｇ）２．０ｇ（１．８５ｍｍｏｌ）を塩
化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを加え、室
温で３０分かくはんした。溶媒を減圧で残留後、残留物
に酢酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽
出、分液した。（この時、水層のｐＨがアルカリ性であ
ることを確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、
硫酸マグネシウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去
した。得られた（１ｇ）の脱保護体を塩化メチレン２０
ｍｌとＤＭＦ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、ｔ−Ｂｏｃ−
Ａｒｇ（Ｚ）Ｚ１．２ｇ（２．１５ｍｍｏ１）とＨｏＢ
ｔ／Ｈｚ０３３０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を加えて氷
冷かくはんした。ここに、ＤＣＣ４６０ｍｇ（２．２ｍ
ｍｏｌ）を加え氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんし
た。以降（１ｆ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢
酸エチル＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ
（１．４８ｍｍｏｌ）を得た。収率８０％。
を塩化メチレン２０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ１０ｍｌを加
えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧濃縮し、残
留物を酢酸エチルとアセトニトリルの混合溶媒（１：
２）で再結晶して、白色固体の（１ｆ）４．９３ｇ
（４．７５ｍｍｏｌ）を得た。収率９３％。（１ｆ）
４．８ｇ（４．６２ｍｍｏｌ）、ｔ−Ｂｏｃ−Ｇｌｙ
０．９６ｇ（５．５ｍｍｏｌ）、ＨｏＢｔ・Ｈｚ０８４
２ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン３０ｍｌとＤ
ＭＦ１５ｍｌの混合溶媒に溶解した。ここに、ジイソプ
ロピルエチルアミン６３０ｍｇ（４．９ｍｍｏｌ）とＤ
ＣＣ１．１ｇ（５．３ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下で２時
間、室温で終夜かくはんした。以降（１ｄ）と同様の後
処理を行い、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精
製して（ｎ−へキサン／酢酸エチル＝３／２）、白色固
体（１ｇ）３．９５ｇ（３．６６ｍｍｏｌ）を得た。収
率７９％。（１ｇ）２．０ｇ（１．８５ｍｍｏｌ）を塩
化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを加え、室
温で３０分かくはんした。溶媒を減圧で残留後、残留物
に酢酸エチルと４％炭酸ナトリウム水溶液を加えて抽
出、分液した。（この時、水層のｐＨがアルカリ性であ
ることを確認した。）酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、
硫酸マグネシウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧留去
した。得られた（１ｇ）の脱保護体を塩化メチレン２０
ｍｌとＤＭＦ５ｍｌの混合溶媒に溶解し、ｔ−Ｂｏｃ−
Ａｒｇ（Ｚ）Ｚ１．２ｇ（２．１５ｍｍｏ１）とＨｏＢ
ｔ／Ｈｚ０３３０ｍｇ（２．１５ｍｍｏｌ）を加えて氷
冷かくはんした。ここに、ＤＣＣ４６０ｍｇ（２．２ｍ
ｍｏｌ）を加え氷冷下で２時間、室温で終夜かくはんし
た。以降（１ｆ）と同様の後処理を行い、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフィーで精製して（クロロホルム／酢
酸エチル＝３／１）、白色固体の（１ｈ）２．０９ｇ
（１．４８ｍｍｏｌ）を得た。収率８０％。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２１】 （１ｈ）１・０ｇ（０．６６４ｍｍｏ
ｌ）を塩化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを
加えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧で留去
後、残留物にクロロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液
を加えて抽出、分液した。（この時、水層のｐＨがアル
カリ性であることを確認した。）クロロホルム層を食塩
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後に減圧留去
した。得られた（１ｈ）の脱ｔ−Ｂｃｏ体を塩化メチレ
ン１０ｍｌに溶解し、無水コハク酸１２０ｍｇを加えて
室温でかくはんした。反応進行にともない白沈が生成し
た。１時間後溶媒を減圧濃縮し、残留物をアセトニトリ
ルとクロロホルムの混合溶媒（５：１）より再結晶し
て、白色固体（１ｉ）９２０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）
を得た。収率９２％。（１ｉ）８００ｍｇ（０．５３２
ｍｍｏｌ）を酢酸２０ｍｌに５５℃で溶解し、１０％パ
ラジウム炭素を１００ｍｇ加えてこの温度で常圧水素添
加を４時間行った。触媒をセライトで濾別して濾液を減
圧濃縮し、残留物にアセトニトリルを加えるを白色固体
が析出した。これを濾取することにより、化合物（１）
３９０ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）を得た。収率６９
％。 （Ｍ−Ｈ）− １０５５（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（１．０３）、Ｇｌｙ（１．０
１）、Ａｓｐ（１．０２）、 ｓｅｒ
（０．９１）
ｌ）を塩化メチレン１０ｍｌに溶解し、ＴＦＡ５ｍｌを
加えて室温で１時間かくはんした。溶媒を減圧で留去
後、残留物にクロロホルムと４％炭酸ナトリウム水溶液
を加えて抽出、分液した。（この時、水層のｐＨがアル
カリ性であることを確認した。）クロロホルム層を食塩
水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後に減圧留去
した。得られた（１ｈ）の脱ｔ−Ｂｃｏ体を塩化メチレ
ン１０ｍｌに溶解し、無水コハク酸１２０ｍｇを加えて
室温でかくはんした。反応進行にともない白沈が生成し
た。１時間後溶媒を減圧濃縮し、残留物をアセトニトリ
ルとクロロホルムの混合溶媒（５：１）より再結晶し
て、白色固体（１ｉ）９２０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）
を得た。収率９２％。（１ｉ）８００ｍｇ（０．５３２
ｍｍｏｌ）を酢酸２０ｍｌに５５℃で溶解し、１０％パ
ラジウム炭素を１００ｍｇ加えてこの温度で常圧水素添
加を４時間行った。触媒をセライトで濾別して濾液を減
圧濃縮し、残留物にアセトニトリルを加えるを白色固体
が析出した。これを濾取することにより、化合物（１）
３９０ｍｇ（０．３６９ｍｍｏｌ）を得た。収率６９
％。 （Ｍ−Ｈ）− １０５５（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（１．０３）、Ｇｌｙ（１．０
１）、Ａｓｐ（１．０２）、 ｓｅｒ
（０．９１）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２４】実施例４ 化合物（４）の合成 化合物（１ｄ）の合成において、（１ｃ）の代わりに市
販のジミリストイルーｓｙｎ−グリセロールを用い、以
後同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 （ＭーＨ）− １０２７（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（０．９６）、Ｇｌｙ（１．０
４）、Ａｓｐ（０．９２）、 ｓｅｒ
（０．９０）
販のジミリストイルーｓｙｎ−グリセロールを用い、以
後同様の操作を行って化合物（４）を合成した。 （ＭーＨ）− １０２７（ＦＡＢ，ＮＥＧＡ） アミノ酸分析、：Ａｒｇ（０．９６）、Ｇｌｙ（１．０
４）、Ａｓｐ（０．９２）、 ｓｅｒ
（０．９０）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｋ 99:00
Claims (2)
- 【請求項１】 下記一般式（Ｉ）で示されるペプチド誘
導体またはその塩。 一般式（Ｉ） 【化１】 式中、Arg 、Gly 、Asp はそれぞれアルギニン、グリシ
ン、アスパラギン酸残基を示す。〔Ｘ〕、〔Ｙ〕は、存
在するかあるいは存在しないアミノ酸またはペプチド残
基を示す。ｍは１から５までの整数を示す。ｎは１から
５までの整数を示す。Ｒ1 およびＲ2 は、水素あるいは
炭素数８〜２４の直鎖または分岐のアシル基またはアル
キル基であり、置換基、不飽和基を有していても良い。
また、分子内に存在する不斉炭素に関しては、ラセミ体
でも光学活性体のいずれでもよい。 - 【請求項２】 一般式（Ｉ）において、〔Ｘ〕、〔Ｙ〕
が存在するアミノ酸残基またはペプチド残基を表し、
〔Ｘ〕、〔Ｙ〕がセリン、グリシン、バリン、アスパラ
ギン、プロリン、システイン、トレオニン残基から選択
されるアミノ酸残基またはペプチド残基である請求項１
記載のペプチド誘導体またはその塩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14276791A JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14276791A JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320190A true JPH05320190A (ja) | 1993-12-03 |
| JP2694399B2 JP2694399B2 (ja) | 1997-12-24 |
Family
ID=15323113
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14276791A Expired - Lifetime JP2694399B2 (ja) | 1991-05-20 | 1991-05-20 | ペプチド誘導体 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2694399B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009528258A (ja) * | 2006-03-01 | 2009-08-06 | 福岡県 | ペプチド脂質を含んだキャリア及びそれを用いた化合物の細胞内導入法 |
| KR101220162B1 (ko) * | 2009-07-02 | 2013-01-14 | 한양대학교 산학협력단 | 아르기닌―기제 양친성 펩티드 마이셀 |
-
1991
- 1991-05-20 JP JP14276791A patent/JP2694399B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009528258A (ja) * | 2006-03-01 | 2009-08-06 | 福岡県 | ペプチド脂質を含んだキャリア及びそれを用いた化合物の細胞内導入法 |
| US8299129B2 (en) | 2006-03-01 | 2012-10-30 | Fukuoka Prefectural Government | Peptide lipid-containing carrier and method for introducing compound into cells using same |
| KR101220162B1 (ko) * | 2009-07-02 | 2013-01-14 | 한양대학교 산학협력단 | 아르기닌―기제 양친성 펩티드 마이셀 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2694399B2 (ja) | 1997-12-24 |
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