JP2694004B2 - 血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法 - Google Patents
血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法Info
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- JP2694004B2 JP2694004B2 JP1073391A JP7339189A JP2694004B2 JP 2694004 B2 JP2694004 B2 JP 2694004B2 JP 1073391 A JP1073391 A JP 1073391A JP 7339189 A JP7339189 A JP 7339189A JP 2694004 B2 JP2694004 B2 JP 2694004B2
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- fructosamine
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- serum
- plasma
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、血清・血漿中のフルクトサミンの効率的な
測定法に関する。
測定法に関する。
〔従来の技術〕 フルクトサミンは、現在糖尿病診断のマーカとしてグ
リコヘモグロビンと同様、たいへん注目されており、最
近その検査が急速に増えてきた。グリコヘモグロビン
が、過去２カ月間の血糖状態を反映すると言われるが、
フルクトサミンは１〜２週間の血糖状態を反映すると言
われる。現在フルクトサミンの測定法として、血清中の
蛋白質がグルコースと結合して生ずるケトアミン（フル
クトサミン）が、弱アルカリ溶液中でテトラゾリウム塩
を還元して生ずるホルマザン発色を利用して測定する方
法がよく用いられている。
リコヘモグロビンと同様、たいへん注目されており、最
近その検査が急速に増えてきた。グリコヘモグロビン
が、過去２カ月間の血糖状態を反映すると言われるが、
フルクトサミンは１〜２週間の血糖状態を反映すると言
われる。現在フルクトサミンの測定法として、血清中の
蛋白質がグルコースと結合して生ずるケトアミン（フル
クトサミン）が、弱アルカリ溶液中でテトラゾリウム塩
を還元して生ずるホルマザン発色を利用して測定する方
法がよく用いられている。
上述した従来の方法は、システインやグルタチオン等
のSH化合物、アスコルビン酸等の還元物質の影響を受け
る点が非常に問題とされている。特に、アスコルビン酸
による影響が大きく、試薬中にアスコルビン酸を加えた
だけでもかなり強く発色する、アスコルビン酸の影響を
避けるために、通常、アスコルビン酸の発色を終わらせ
た後測定ポイントを２点選んでその吸高度差をとって測
定されている。しかし、アスコルビン酸の発色は、完結
するまで10〜15分かかり、さらにブランク値が高いレベ
ルから測定しなければならず、正確な測定が難しい上、
最近の測定時間の短い自動分析装置にはのりにくいとい
う問題があった。
のSH化合物、アスコルビン酸等の還元物質の影響を受け
る点が非常に問題とされている。特に、アスコルビン酸
による影響が大きく、試薬中にアスコルビン酸を加えた
だけでもかなり強く発色する、アスコルビン酸の影響を
避けるために、通常、アスコルビン酸の発色を終わらせ
た後測定ポイントを２点選んでその吸高度差をとって測
定されている。しかし、アスコルビン酸の発色は、完結
するまで10〜15分かかり、さらにブランク値が高いレベ
ルから測定しなければならず、正確な測定が難しい上、
最近の測定時間の短い自動分析装置にはのりにくいとい
う問題があった。
さらにもう一つの大きな問題は、充分な感度が得られ
ない点であった。
ない点であった。
また、従来の方法では、pH10〜11でNBT等（ニトロブ
ルーテトラゾリウム塩）のテトラゾリウム塩に検体中の
フルクトサミンを反応させて測定を行っている。この反
応に於て、PMS等の電子伝達体を介せず直接NBTを還元さ
せるので充分な感度が得られない。pH10以下では、フル
クトサミンはほとんどテトラゾリウム塩を還元できず感
度を上げるためには、pH10以上にしなければならない。
しかし反面pH10以上にした場合アスコルビン酸等の影響
を大きく受けるようになる。
ルーテトラゾリウム塩）のテトラゾリウム塩に検体中の
フルクトサミンを反応させて測定を行っている。この反
応に於て、PMS等の電子伝達体を介せず直接NBTを還元さ
せるので充分な感度が得られない。pH10以下では、フル
クトサミンはほとんどテトラゾリウム塩を還元できず感
度を上げるためには、pH10以上にしなければならない。
しかし反面pH10以上にした場合アスコルビン酸等の影響
を大きく受けるようになる。
本発明は、特にpH10以上にこだわらずPMS（フェナジ
ンメトスルフェイト）、１−メトキシ−PMS（１−メト
キシフェナジンメトスルフェイト）等の電子伝達体を加
えることにより従来の問題点を解決できるようにした方
法を提供することを目的とするものである。
ンメトスルフェイト）、１−メトキシ−PMS（１−メト
キシフェナジンメトスルフェイト）等の電子伝達体を加
えることにより従来の問題点を解決できるようにした方
法を提供することを目的とするものである。
また、本発明は、従来のアスコルビン酸等の還元物質
の影響を回避するとともに高感度に測定できるようにし
た方法を提供することを目的とするものである。
の影響を回避するとともに高感度に測定できるようにし
た方法を提供することを目的とするものである。
上記目的を達成するために、本発明方法においては、
テトラゾリウム塩を用いて血清又は血漿中のフルクトサ
ミンを定量する方法において、アニオン性界面活性剤の
存在下で電子伝達体を加えることによって測定するよう
にしたものである。
テトラゾリウム塩を用いて血清又は血漿中のフルクトサ
ミンを定量する方法において、アニオン性界面活性剤の
存在下で電子伝達体を加えることによって測定するよう
にしたものである。
本発明で使用されるテトラゾリウム塩には、INT（３
−（パラ−ヨウドフェニル）−２−（パラニトロフェニ
ル）−５−フェニル−2H−テトラゾリウムクロライ
ド）、NBT（ニトロブル−テトラゾリウム）などがあ
る。
−（パラ−ヨウドフェニル）−２−（パラニトロフェニ
ル）−５−フェニル−2H−テトラゾリウムクロライ
ド）、NBT（ニトロブル−テトラゾリウム）などがあ
る。
本発明に用いられる電子伝達体としては、フェナジン
メトスルフェイト、１−メトキシ−フェナジンメトスル
フェイト等が挙げられる。
メトスルフェイト、１−メトキシ−フェナジンメトスル
フェイト等が挙げられる。
また、上記フェナジンメトスルフェイトや１−メトキ
シ−フェナジンメトスルフェイト等の電子伝達体を加え
た場合のブランク反応を安定させるためにアニオン性界
面活性剤が非常に効果的でありより高感度かつ精度よく
測定できるようになるものである。
シ−フェナジンメトスルフェイト等の電子伝達体を加え
た場合のブランク反応を安定させるためにアニオン性界
面活性剤が非常に効果的でありより高感度かつ精度よく
測定できるようになるものである。
本発明に有効なアニオン性界面活性剤として次のよう
なものを用いることができる。すなわちアルキル硫酸
塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、Ｎ−
アシルアミノ酸とその塩、Ｎ−アシルメチルタウリン
塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩、アル
キルスルホカルボン酸塩、α−オレフィンスルホン酸
塩、アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテルリン酸塩等を用いることができる。
なものを用いることができる。すなわちアルキル硫酸
塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、Ｎ−
アシルアミノ酸とその塩、Ｎ−アシルメチルタウリン
塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩、アル
キルスルホカルボン酸塩、α−オレフィンスルホン酸
塩、アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテルリン酸塩等を用いることができる。
電子伝達体及びアニオン性界面活性剤を適宜第一試薬
又は、第二試薬に添加することによって従来のようにア
スコルビン酸の影響を避けるために特に待ち時間をおか
ないで短時間に測定が可能になり反応時間の短い最近の
自動分析装置に容易に適用できる。
又は、第二試薬に添加することによって従来のようにア
スコルビン酸の影響を避けるために特に待ち時間をおか
ないで短時間に測定が可能になり反応時間の短い最近の
自動分析装置に容易に適用できる。
（実施例） 以下に本発明の実施例を挙げてさらに具体的に説明す
るが、本発明がこれらの実施例の記載に限定されるもの
でないことは勿論である。
るが、本発明がこれらの実施例の記載に限定されるもの
でないことは勿論である。
実施例１ 試薬の組成 第一試薬： トリス−塩酸緩衝液 ……10mM,pH8.0 １−ｍ−PMS …………………0.075mM 第二試薬： 炭酸緩衝液 ……………50mM,pH10.3 NBT ………………………………0.75mM α−オレフィンスルホン酸ナトリウム ……………………………0.5％ （NBT:ニトロブルーテトラゾリウム） 第一試薬2mlにアスコルビン酸20mg/dlの試料を100μ
加え、37℃５分間反応させたのち、第二試薬1ml加
え、37℃で反応させる。540nmで吸光度を測定し反応の
経時変化を記録し、第１図に示した。
加え、37℃５分間反応させたのち、第二試薬1ml加
え、37℃で反応させる。540nmで吸光度を測定し反応の
経時変化を記録し、第１図に示した。
比較例１ 試薬： 炭酸緩衝液 …………100mM,pH10.3 NBT ………………………………0.25mM 試薬2mlにアスコルビン酸20mg/dlの試料を100μ加
え、37℃で反応させる。540nm吸光度を測定し反応の経
時変化を記録し、第１図に示した。
え、37℃で反応させる。540nm吸光度を測定し反応の経
時変化を記録し、第１図に示した。
第１図に示されるごとく、比較例１に於いては、アス
コルビン酸の反応が急激に進行するが本発明の実施例１
では、アスコルビン酸の反応が著しく抑制されているこ
とがわかる。
コルビン酸の反応が急激に進行するが本発明の実施例１
では、アスコルビン酸の反応が著しく抑制されているこ
とがわかる。
実施例２ 第一試薬： 炭酸緩衝液 ……………100mM,pH9.8 NBT ………………………………0.31mM α−オレフィンスルホン酸ナトリウム ……………………………0.4％ 第二試薬： 炭酸緩衝液 ……………100mM,pH9.8 １−ｍ−PMS …………………0.075mM 第一試薬1mlに検体を50μ加え、37℃５分間反応さ
せたのち、第二試薬0.25ml加え、37℃で反応させる。54
0nmで１分間あたりの吸光度変化を測定した。
せたのち、第二試薬0.25ml加え、37℃で反応させる。54
0nmで１分間あたりの吸光度変化を測定した。
比較例２ 試薬： 炭酸緩衝液 …………100mM,pH10.3 NBT ………………………………0.25mM 試薬1mlに検体を50μ加え、37℃で反応させる。540
nmで１分間あたりの吸光度変化を測定する。
nmで１分間あたりの吸光度変化を測定する。
実施例２及び比較例２の吸光度変化を第１表に示し
た。第１表から本発明の実施例に於ては測定感度が大き
く改善されることがわかった。
た。第１表から本発明の実施例に於ては測定感度が大き
く改善されることがわかった。
〔発明の効果〕 以上のように、本発明によれば、pH10以上にこだわら
ずPMS（フェナジンメトスルフェイト）、１−メトキシ
−PMS（１−メトキシフェナジンメトスルフェイト）等
の電子伝達体を加えることにより、従来のアスコルビン
酸等の還元物質の影響を回避するとともに高感度にフル
クトサミンを測定できるという大きな効果を奏する。
ずPMS（フェナジンメトスルフェイト）、１−メトキシ
−PMS（１−メトキシフェナジンメトスルフェイト）等
の電子伝達体を加えることにより、従来のアスコルビン
酸等の還元物質の影響を回避するとともに高感度にフル
クトサミンを測定できるという大きな効果を奏する。
第１図は、実施例１及び比較例１における反応の経時変
化を示すグラフである。
化を示すグラフである。
Claims (2)
- 【請求項１】テトラゾリウム塩を用いて血清又は血漿中
のフルクトサミンを定量する方法において、アニオン性
界面活性剤の存在下で電子伝達体を加えることによって
測定することを特徴とする血清又は血漿中のフルクトサ
ミンの測定法。 - 【請求項２】電子伝達体がフェナジンメトスルフェイ
ト、１−メトキシ−フェナジンメトスルフェイト等であ
ることを特徴とする請求項（１）記載の血清又は血漿中
のフルクトサミンの測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1073391A JP2694004B2 (ja) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | 血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1073391A JP2694004B2 (ja) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | 血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02251766A JPH02251766A (ja) | 1990-10-09 |
| JP2694004B2 true JP2694004B2 (ja) | 1997-12-24 |
Family
ID=13516849
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1073391A Expired - Lifetime JP2694004B2 (ja) | 1989-03-24 | 1989-03-24 | 血清又は血漿中のフルクトサミンの測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2694004B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2775847B2 (ja) * | 1989-05-12 | 1998-07-16 | 東洋紡績株式会社 | フルクトサミン測定用試薬 |
| AU2001258819A1 (en) * | 2000-05-23 | 2001-12-03 | Koji Sode | Kit for assaying saccharified protein |
| TWI322007B (en) * | 2006-11-24 | 2010-03-21 | Health & Life Co Ltd | Biosensor, biostrip, and manufacture method of determination of uric acid by non-enzymatic reagent |
| CN112326639B (zh) * | 2020-11-25 | 2024-01-05 | 迈克生物股份有限公司 | 检测果糖胺的试剂盒和方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3620817A1 (de) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
| JPH0668490B2 (ja) * | 1987-02-17 | 1994-08-31 | 東洋紡績株式会社 | 生体試料中の還元物質の除去法 |
-
1989
- 1989-03-24 JP JP1073391A patent/JP2694004B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02251766A (ja) | 1990-10-09 |
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