JP2023531520A - 操作されたｂ型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用 - Google Patents

操作されたｂ型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2023531520A
JP2023531520A JP2022579734A JP2022579734A JP2023531520A JP 2023531520 A JP2023531520 A JP 2023531520A JP 2022579734 A JP2022579734 A JP 2022579734A JP 2022579734 A JP2022579734 A JP 2022579734A JP 2023531520 A JP2023531520 A JP 2023531520A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
antibody
antigen
amino acid
binding fragment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022579734A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2021262840A5 (ja
Inventor
ローラ ローゼン，
ナディーン チュドゥノコウスキ，
フロリアン エー． レンプ，
ジョルジュ スネル，
ダビデ コルティ，
エリザベッタ カメロニ，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Vir Biotechnology Inc
Original Assignee
Vir Biotechnology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vir Biotechnology Inc filed Critical Vir Biotechnology Inc
Publication of JP2023531520A publication Critical patent/JP2023531520A/ja
Publication of JPWO2021262840A5 publication Critical patent/JPWO2021262840A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
    • C12N2740/15041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本開示は、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の抗原性ループ領域に結合でき、必要に応じて、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染を中和でき、さらに必要に応じて、デルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）感染を中和できる、抗体、およびその抗原結合断片に一部関する。本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、参照抗体または抗原結合断片と比較して、有利な産生特徴、例えば、凝集体の形成の低減および／または形質転換された宿主細胞における改善された産生力価を有する。本開示はまた、抗原結合断片を含む融合タンパク質、ならびにかかる抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質をコードする核酸、ならびにかかる抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を産生する細胞に関する。【選択図】図１９

Description

配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、紙の写しの代わりにテキストフォーマットで提供され、これは、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、９３０４８５．４１４ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは、１０１ＫＢであり、２０２１年６月２２日に作製され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
背景
Ｂ型肝炎ウイルスは、潜在的に命にかかわる急性および慢性の肝臓感染を引き起こす。急性Ｂ型肝炎は、症状を伴うまたは伴わない、劇症肝炎発生のリスクを伴うウイルス血症によって特徴付けられる（Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo JT, Locarnini S, Zoulim F, Chang KM, Lok AS. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology. 2015 Aug 3. doi: 10.1002/hep.28025. [Epub ahead of print]）。１９８２年以降、Ｂ型肝炎に対する有効なワクチンが利用可能であるにもかかわらず、ＷＨＯは、２億４千万人がＢ型肝炎に慢性的に感染しており、毎年７８０，０００人より多くが、Ｂ型肝炎合併症に起因して死亡することを報告している。慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）患者のおおよそ３分の１が、肝硬変、肝不全および肝細胞癌を発症し、１年に６００，０００例の死亡の主要因となっている（Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo JT, Locarnini S, Zoulim F, Chang KM, Lok AS. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology. 2015 Aug 3. doi: 10.1002/hep.28025. [Epub ahead of print]）。
ＨＢＶに感染した患者について、重症合併症が、ＨＤＶによる共感染または重感染の結果として発症し得る。ＷＨＯによれば、Ｄ型肝炎は、世界中で約１千５百万人に感染している。ＨＤＶは、ＨＢＶの存在下でのみ拡大増殖できるので、サブウイルスサテライトとみなされる。ＨＤＶは、そのゲノムがわずか１．６ｋｂであり、ＳおよびＬ ＨＤＡｇをコードする、最も小さい公知の動物ウイルス（４０ｎｍ）のうちの１つである。ＲＮＡポリメラーゼを含む、ＨＤＶのゲノム複製のために必要とされる全ての他のタンパク質は、宿主細胞によって提供され、ＨＤＶエンベロープは、ＨＢＶによって提供される。許容的な細胞中に導入されると、ＨＤＶ ＲＮＡゲノムは複製し、複数コピーのＨＤＶコードされるタンパク質と会合して、リボヌクレオタンパク質（ＲＮＰ）複合体をアセンブルする。ＲＮＰは、分泌される前にプレゴルジ区画のルーメン中に出芽するリポタンパク質小胞をアセンブルすることができるＨＢＶエンベロープタンパク質によって、細胞から排出される。さらに、ＨＢＶエンベロープタンパク質は、未感染の細胞へのＨＤＶの標的化のための機構もまた提供し、それにより、ＨＤＶの伝播を確実にする。
ＨＤＶによって引き起こされる合併症としては、慢性感染における肝臓がんを発症する増加した危険性と共に、急性感染において肝不全を経験するより高い可能性、および肝硬変への迅速な進行が挙げられる。Ｂ型肝炎ウイルスと組み合わさると、Ｄ型肝炎は、２０％の、全ての肝炎感染のなかで最も高い致死率を有する（Fattovich G, Giustina G, Christensen E, Pantalena M, Zagni I, Realdi G, Schalm SW. Influence of hepatitis delta virus infection on morbidity and mortality in compensated cirrhosis type B. Gut. 2000 Mar;46(3):420-6）。慢性ＨＤＶ感染のために承認された唯一の治療は、インターフェロン－アルファである。しかし、インターフェロン－アルファによるＨＤＶの処置は、比較的非効率であり、十分な耐容性が示されない。インターフェロン－アルファによる処置は、４分の１の患者において、処置の６か月後に、持続性のウイルス学的応答を生じる。また、ヌクレオシ（チ）ドアナログ（ＮＡ）がデルタ型肝炎において広く試験されているが、無効なようである。ＮＡとインターフェロンとを使用する併用処置もまた、期待外れであることが証明されている（Zaigham Abbas, Minaam Abbas Management of hepatitis delta: Need for novel therapeutic Options. World J Gastroenterol 2015 August 28; 21(32): 9461-9465）。
したがって、新たな治療選択肢、例えば、Ｂ型肝炎および／またはＤ感染に対する中和活性を有する新たな治療が必要とされている。
Liang TJ, Block TM, McMahon BJ, Ghany MG, Urban S, Guo JT, Locarnini S, Zoulim F, Chang KM, Lok AS. Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure. Hepatology. 2015 Aug 3. doi: 10.1002/hep.28025. [Epub ahead of print] Fattovich G, Giustina G, Christensen E, Pantalena M, Zagni I, Realdi G, Schalm SW. Influence of hepatitis delta virus infection on morbidity and mortality in compensated cirrhosis type B. Gut. 2000 Mar;46(3):420-6 Zaigham Abbas, Minaam Abbas Management of hepatitis delta: Need for novel therapeutic Options. World J Gastroenterol 2015 August 28; 21(32): 9461-9465
本明細書に提供される図は、本開示に包含される主題をより詳細に例示することを意図したものである。図は、本開示をいかようにも限定するものではない。
図１は、配列番号３８に記載のＶＨおよび配列番号５７に記載のＶＬを含み、Ｆｃにおいて変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓを含む抗ＨＢＶ抗体「ＨＢＣ３４－ｖ３５－ＧＡＡＬＩＥ－ＭＬＮＳ」（ｒＩｇＧ１ｍ１７，１）によるＨＢｓＡｇへの結合（左側）およびＨＢＶ感染の中和（右側）を示す。１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの種々の濃度の抗体の結合が左側に示されている。示されている通り、中和をＨＢｓＡｇ濃度（ＩＵ／ｍｌ）およびＨＢｅＡｇ指標によって測定した。ＨＢＣ３４－ｖ３５－ＧＡＡＬＩＥ－ＭＬＮＳは、ＨＢｓＡｇの保存された立体構造エピトープにピコモルの親和性で結合し、１０種のＨＢＶ遺伝子型を強力に中和する。
図２は、精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５－ＧＡＡＬＩＥ－ＭＬＮＳおよびＨＢＣ３４－ｖ３５－ＭＬＮＳ（ＨＢＣ３４－ｖ３５－ＧＡＡＬＩＥ－ＭＬＮＳとは、Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、およびＩ３３２Ｅ Ｆｃ変異を含まないことによって異なる）ＩｇＧにおいて、１週間の室温でのインキュベーション（およそ７５ｍｇ／ｍＬ）後に存在する高分子量種を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。最大ピークがグラフの右上隅の挿入画像に示されている。
図３は、精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂにおける経時的な高分子量種を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。最大ピークがグラフの右上隅の挿入画像に示されている。
図４は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５ ＩｇＧ（パネルの上の行）およびＦａｂ（パネルの下の行）の単量体（中央のパネル）および富化させた二量体（右側のパネル）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。左側は、ＩｇＧおよびＦａｂのＨＢｓＡｇへの結合を示す概略図である。使用したＨＢｓＡｇ濃度は図凡例に示されている通りであった。
図５Ａおよび５Ｂは、（Ａ）単離されたＨＢＣ３４－ｖ３５組換えＦａｂ二量体（左側のピーク）を例示する分取ＳＥＣデータおよび（Ｂ）Ｆａｂ二量体の結晶化を示す。 図５Ａおよび５Ｂは、（Ａ）単離されたＨＢＣ３４－ｖ３５組換えＦａｂ二量体（左側のピーク）を例示する分取ＳＥＣデータおよび（Ｂ）Ｆａｂ二量体の結晶化を示す。
図６Ａおよび６Ｂは、（Ａ）単離されたＨＢＣ３４－ｖ３５組換えＦａｂ単量体の分取ＳＥＣデータおよび（Ｂ）Ｆａｂ単量体の結晶化を示す。 図６Ａおよび６Ｂは、（Ａ）単離されたＨＢＣ３４－ｖ３５組換えＦａｂ単量体の分取ＳＥＣデータおよび（Ｂ）Ｆａｂ単量体の結晶化を示す。
図７は、（左側）抗体ＣＤＲが関与する二量体形成の概略図および（右側）ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂ二量体を示すリボンモデルを提供する。
図８は、（右側）ＨＢＣ３４－ｖ３５の二量体形成にＶＬ－ＶＬ相互作用が関与すること、および（左側）Ｌ－ＣＤＲ２内の相互作用の要約を例示する。
図９は、Ｌ－ＣＤＲ２および軽鎖フレームワーク領域におけるＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂ－Ｆａｂ相互作用の別の図表を提供する。
図１０は、（左側）二量体のＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂおよび（右側）Ｆａｂ単量体のコンフォメーションの図表を提供する。
図１１Ａ～１１Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂと比較して生殖細胞系列配列に３つのＬ－ＣＤＲ２残基を復帰変異させたものである、ＨＢＣ３４－ｖ３５から操作されたバリアントＦａｂ（バリアントは図１１Ａに「Ｌ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ」として示されており、また、本明細書ではＨＢＣ３４－ｖ３６とも呼ばれる）による二量体形成の低減を示す。（Ａ）０日および５～７日時点における絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）による、精製されたＦａｂにおけるパーセント二量体。（Ｂ）０日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。（Ｃ）５日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。 図１１Ａ～１１Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂと比較して生殖細胞系列配列に３つのＬ－ＣＤＲ２残基を復帰変異させたものである、ＨＢＣ３４－ｖ３５から操作されたバリアントＦａｂ（バリアントは図１１Ａに「Ｌ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ」として示されており、また、本明細書ではＨＢＣ３４－ｖ３６とも呼ばれる）による二量体形成の低減を示す。（Ａ）０日および５～７日時点における絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）による、精製されたＦａｂにおけるパーセント二量体。（Ｂ）０日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。（Ｃ）５日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。 図１１Ａ～１１Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂと比較して生殖細胞系列配列に３つのＬ－ＣＤＲ２残基を復帰変異させたものである、ＨＢＣ３４－ｖ３５から操作されたバリアントＦａｂ（バリアントは図１１Ａに「Ｌ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ」として示されており、また、本明細書ではＨＢＣ３４－ｖ３６とも呼ばれる）による二量体形成の低減を示す。（Ａ）０日および５～７日時点における絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）による、精製されたＦａｂにおけるパーセント二量体。（Ｂ）０日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。（Ｃ）５日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。 図１１Ａ～１１Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂと比較して生殖細胞系列配列に３つのＬ－ＣＤＲ２残基を復帰変異させたものである、ＨＢＣ３４－ｖ３５から操作されたバリアントＦａｂ（バリアントは図１１Ａに「Ｌ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ」として示されており、また、本明細書ではＨＢＣ３４－ｖ３６とも呼ばれる）による二量体形成の低減を示す。（Ａ）０日および５～７日時点における絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）による、精製されたＦａｂにおけるパーセント二量体。（Ｂ）０日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。（Ｃ）５日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。 図１１Ａ～１１Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５ Ｆａｂと比較して生殖細胞系列配列に３つのＬ－ＣＤＲ２残基を復帰変異させたものである、ＨＢＣ３４－ｖ３５から操作されたバリアントＦａｂ（バリアントは図１１Ａに「Ｌ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ」として示されており、また、本明細書ではＨＢＣ３４－ｖ３６とも呼ばれる）による二量体形成の低減を示す。（Ａ）０日および５～７日時点における絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）による、精製されたＦａｂにおけるパーセント二量体。（Ｂ）０日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。（Ｃ）５日時点における圧力を加えたＬ－ＣＤＲ２ ＧＬ Ｆａｂ試料のＳＥＣ分析。
図１２は、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５およびＨＢＣ３４－ｖ３６のＨＢｓＡｇへの結合を示す。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。
図１３は、ＨＢＣ３４－ｖ３５およびＨＢＣ３４－ｖ３６によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＨＢＶ遺伝子型Ｄ感染の中和を示す。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。中和を、ＨＢｓＡｇ（左側）またはＨＢｅＡｇ（右側）を発現する標的細胞のパーセンテージによって測定した。Ｎ＝１の実験。
図１４Ａ～１４Ｅは、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、追加の抗体ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０（ＣＨＯ細胞からの精製されていない上清）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５を対照として含めた。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。算出ＥＣ５０値が各グラフの下に示されている。 図１４Ａ～１４Ｅは、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、追加の抗体ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０（ＣＨＯ細胞からの精製されていない上清）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５を対照として含めた。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。算出ＥＣ５０値が各グラフの下に示されている。 図１４Ａ～１４Ｅは、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、追加の抗体ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０（ＣＨＯ細胞からの精製されていない上清）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５を対照として含めた。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。算出ＥＣ５０値が各グラフの下に示されている。 図１４Ａ～１４Ｅは、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、追加の抗体ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０（ＣＨＯ細胞からの精製されていない上清）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５を対照として含めた。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。算出ＥＣ５０値が各グラフの下に示されている。 図１４Ａ～１４Ｅは、ＥＬＩＳＡによって決定したときの、追加の抗体ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０（ＣＨＯ細胞からの精製されていない上清）のＨＢｓＡｇへの結合を示す。精製されたＨＢＣ３４－ｖ３５を対照として含めた。抗体を、野生型Ｆｃを有するＩｇＧ１（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として発現させた。算出ＥＣ５０値が各グラフの下に示されている。
図１５は、ＨＢｅＡｇをウイルス読み出し情報として用いた、ＨＢＣ３４－ｖ３５および本開示のある特定の抗体によるＨＢＶ遺伝子型Ｄの中和を示す。各ｍＡｂの算出ＥＣ５０値が右側に示されている。ＨＢＣ３４－ｖ３５（精製されたＩｇＧおよび上清）ならびにＨＢＣ３４－ｖ３６（精製されたＩｇＧ）を対照として使用した。
図１６Ａ～１６Ｄは、３２日間の経過にわたる、ＨＢＣ３４－ｖ３５および９種の精製された本開示のバリアント抗体に存在する高分子量種（ＨＭＷＳ）を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。ＨＢＣ３４－ｖ３５およびバリアント抗体をおよそ２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、異なる温度でインキュベートした。－１日目、０日目、５日目、１５日目、および３２日目にＨＭＷＳをＳＥＣによって評価した。－１日目の試料は濃縮前に評価した。抗体組成物を実験の経過にわたって４℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、または４０℃（図１６Ｃ）でインキュベートした。４０℃で３２日間のインキュベーション後のＨＭＷＳの頻度が図１６Ｄに要約されている。 図１６Ａ～１６Ｄは、３２日間の経過にわたる、ＨＢＣ３４－ｖ３５および９種の精製された本開示のバリアント抗体に存在する高分子量種（ＨＭＷＳ）を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。ＨＢＣ３４－ｖ３５およびバリアント抗体をおよそ２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、異なる温度でインキュベートした。－１日目、０日目、５日目、１５日目、および３２日目にＨＭＷＳをＳＥＣによって評価した。－１日目の試料は濃縮前に評価した。抗体組成物を実験の経過にわたって４℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、または４０℃（図１６Ｃ）でインキュベートした。４０℃で３２日間のインキュベーション後のＨＭＷＳの頻度が図１６Ｄに要約されている。 図１６Ａ～１６Ｄは、３２日間の経過にわたる、ＨＢＣ３４－ｖ３５および９種の精製された本開示のバリアント抗体に存在する高分子量種（ＨＭＷＳ）を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。ＨＢＣ３４－ｖ３５およびバリアント抗体をおよそ２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、異なる温度でインキュベートした。－１日目、０日目、５日目、１５日目、および３２日目にＨＭＷＳをＳＥＣによって評価した。－１日目の試料は濃縮前に評価した。抗体組成物を実験の経過にわたって４℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、または４０℃（図１６Ｃ）でインキュベートした。４０℃で３２日間のインキュベーション後のＨＭＷＳの頻度が図１６Ｄに要約されている。 図１６Ａ～１６Ｄは、３２日間の経過にわたる、ＨＢＣ３４－ｖ３５および９種の精製された本開示のバリアント抗体に存在する高分子量種（ＨＭＷＳ）を示すサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）データを提供する。ＨＢＣ３４－ｖ３５およびバリアント抗体をおよそ２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、異なる温度でインキュベートした。－１日目、０日目、５日目、１５日目、および３２日目にＨＭＷＳをＳＥＣによって評価した。－１日目の試料は濃縮前に評価した。抗体組成物を実験の経過にわたって４℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、または４０℃（図１６Ｃ）でインキュベートした。４０℃で３２日間のインキュベーション後のＨＭＷＳの頻度が図１６Ｄに要約されている。
図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１７Ａ～１７Ｊは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型のＨＢｓＡｇへの結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。
図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。 図１８Ａ～１８Ｋは、ＦＡＣＳによって決定したときの、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０による、ＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄおよび１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合を示す。データが抗体濃度（ｎｇ／ｍｌ）に対する平均蛍光強度（ＭＦＩ）として報告されている。ニセ染色を陰性対照として含める。
図１９は、ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０のトランスフェクションによって生じた抗体力価を示す。５ｍｌ規模および１００ｍｌ規模のトランスフェクションシステムの両方を評価し、１００ｍｌのシステムは２連または３連で試験した。個々の５ｍｌ規模および１００ｍｌ規模の試験からの抗体力価、ならびに１００ｍｌ規模の試験からの平均力価が示されている（ｍｇ／Ｌとして報告されている）。
図２０は、ＨＢＣ３４－ｖ３５（図凡例における「ＨＢＣ３５」）、ＨＢＣ３４－ｖ４０（「ＨＢＣ４０」）、ＨＢＣ３４－ｖ４４（「ＨＢＣ４４」）、ＨＢＣ３４－ｖ４５（「ＨＢＣ４５」）、およびＨＢＣ３４－ｖ５０（「ＨＢＣ５０」）の熱安定性（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を反映するＳＥＣデータを示す。抗体を２５ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、４０℃で４日間インキュベートした後、ＨＭＷＳの定量を行った。
図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。 図２１Ａ～２１Ｃ、２２Ａ～２２Ｃ、および２３Ａ～２３Ｃは、ＨＢＣ３４－ｖ３５において見られた凝集が低減するように操作するために選択された軽鎖アミノ酸残基を示す。図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａは、操作のために選択されたＨＢＣ３４－ｖ３５の軽鎖ＣＤＲ２残基を示す。図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂは、操作のために選択されたフレームワーク残基を示す。図２１Ｃ、２２Ｃ、および２３Ｃは、バリアント抗体の部分的なＶＬ配列の配列アラインメントを示す。
詳細な説明
本開示は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）およびデルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）に対する免疫療法の分野に関する。開示される結合タンパク質、例えば、抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質は、ＨＢＶエンベロープタンパク質（ＨＢｓＡｇ）のＳドメインの抗原性ループ領域中に位置するエピトープに結合することが可能であり、ＨＢＶ感染、および一部の実施形態ではＨＤＶ感染を中和することが可能である。
本明細書で開示される結合タンパク質は、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０２０／１３２０９１号に開示される「ＨＢＣ３４－ｖ３５」のＣＤＲと、必要に応じてＶＨおよびＶＬとを含む参照抗ＨＢＶ抗体と比較して、有利な産生特性（例えば、抗体二量体の形成の低減および／または宿主細胞における産生の増加）を有する。簡潔に述べると、ＨＢＣ３４－ｖ３５抗体は、好ましい結合特性および中和特性を有するが、本明細書で開示されるように、抗体産生／精製の間に軽鎖間相互作用を介して抗体二量体を形成し得る。ＨＢＣ３４－ｖ３５二量体は、ＨＢＣ３４－ｖ３５抗体単量体と比較して、ＨＢｓＡｇに結合する低減された能力を有する。二量体形成を低減させることで、例えば、抗体（または抗原結合断片）産生の効率および抗体（または抗原結合断片）の用量の有効性を改善し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される結合タンパク質は、公知のＨＢｓＡｇ遺伝子型のいずれかまたは全て、ならびにＨＢｓＡｇバリアントに結合することができ、ＨＢＶ感染、ならびにＨＤＶ感染を中和することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で開示される結合タンパク質は、ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較して類似のまたはさらには増加した有効性で、ＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶに結合することができる、ならびに／またはこれらを中和することができる。
かかる結合タンパク質をコードする核酸、およびかかる結合タンパク質を発現する宿主細胞もまた、本明細書で提供される。さらに、本開示は、疾患の診断、予防、および処置において、ならびにスクリーニングする方法において、本明細書に記載される結合タンパク質を使用する方法を提供する。
例えば、本明細書の記載による抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質の実施形態は、ＨＢＶおよびＨＤＶを予防、処置、または弱毒化、または診断する方法において使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の２つまたはそれより多くの異なる遺伝子型およびＢ型肝炎ウイルス表面抗原の２つまたはそれより多くの異なる感染性変異体に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に記載される抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の全ての公知の遺伝子型およびＢ型肝炎ウイルス表面抗原の全ての公知の感染性変異体に結合する。
本開示は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片を、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤と組み合わせて被験体に投与することを含む方法もまた提供する。本開示は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片を、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤と組み合わせて被験体に投与することを含む方法もまた提供する。
本明細書に記載される一部の方法、使用のための組成物、または使用では、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤またはＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、ＲＮＡｉ剤（例えば、ｓｉＲＮＡ、例えば、ＨＢＶ００１またはＨＢＶ００２またはＨＢＶ００３）である。
本開示をより詳細に記載する前に、本明細書で使用されるある特定の用語の定義を提供することはその理解を助け得る。追加の定義は、本開示全体を通して記載される。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。
本開示を通じて、文脈が他を要求しない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、およびその変形形態、例えば、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、例えば、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」などと同意語として使用され、述べられたメンバー、比率、整数（必要に応じて、その分数；例えば、整数の１０分の１および１００分の１を含む）、濃度、またはステップを含むが、任意の他の述べられていないメンバー、比率、整数、濃度、またはステップを排除しないことを含意すると理解される。任意の濃度範囲、パーセンテージの範囲、比の範囲、または整数の範囲は、他に指示されない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合には、その分数（整数の１０分の１、および１００分の１など）を含むことが理解されるべきである。また、ポリマーサブユニット、サイズ、または厚さなどの任意の物理的特徴に関して本明細書に列挙される任意の数の範囲は、他に指示されない限り、列挙された範囲内の任意の整数を含むことが理解されるべきである。
「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と等価ではなく、特許請求の範囲の指定される材料もしくはステップ、または特許請求の範囲に記載された主題の基本的な特徴に実質的に影響を及ぼさないものを指す。例えば、タンパク質ドメイン、領域、またはモジュール（例えば、結合ドメイン）、またはタンパク質は、ドメイン、領域、モジュール、またはタンパク質のアミノ酸配列が、組み合わせて、ドメイン、領域、モジュール、またはタンパク質の長さの多くて２０％（例えば、多くて１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％または１％）に寄与し、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）、またはタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、活性を、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、または１％以下など、５０％よりも大きくは低減しない）、伸長、欠失、変異、またはこれらの組み合わせ（例えば、アミノもしくはカルボキシ末端の、またはドメイン間のアミノ酸）を含む場合、特定のアミノ酸配列「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」。
さらに、本明細書に記載される構造および置換基の種々の組合せに由来する個々の化合物、または化合物の群は、各化合物または化合物の群が個々に記載されたのと同じ程度まで、本出願によって開示されることを理解すべきである。したがって、特定の構造または特定の置換基の選択は、本開示の範囲内である。
本開示を記載することに関して（特許請求の範囲に関してを含む）使用される用語「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「この（ｔｈｅ）」ならびに類似の言及は、本明細書で他に示されない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方をカバーすると解釈される。選択肢（例えば、「または」）の使用は、それらの選択肢のうちの１つ、両方、または任意の組合せのいずれかを意味すると理解すべきである。本明細書の値の範囲の列挙は、その範囲内に入る各別々の値に個々に言及する簡略化された方法として機能する意図である。本明細書で他に示されない限り、各個々の値は、それが本明細書で個々に列挙されたのと同様に、本開示に組み込まれる。本明細書中の言語は、特許請求されていない任意の要素を、本明細書で開示される主題の実施に必須なものとして示していると解釈すべきではない。
単語「実質的に」は、「完全に」を排除しない；例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。ある特定の実施形態では、「実質的に」は、参照組成物、方法、または使用の量、効果、または活性と比較した、本開示の組成物、方法、または使用の所与の量、効果、または活性を指し、参照組成物、方法、または使用の量、効果、または活性の５０％以下、例えば、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％もしくは１％以下、またはそれ未満の、量、効果、または活性における低減を記載する。
本明細書で使用される場合、用語「約」は、他に示されない限り、示された範囲、値、または構造の±２０％を意味する。ある特定の実施形態では、「約」は、±１５％、±１０％、または±５％を含む。
「必要に応じた」または「必要に応じて」は、それに続いて記載される要素、構成成分、事象、または状況が存在してもよく、または存在しなくてもよいこと、ならびにその記載が、その要素、構成成分、事象、または状況が存在する例、およびそれらが存在しない例を含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸ミメティックを指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝コードによってコードされるもの、ならびに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、およびＯ－ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合しているα－炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのようなアナログは、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸ミメティックは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と類似の様式で機能する化合物を指す。
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」、ならびにこれらの用語の変形形態は、（通常のまたは改変された）ペプチド結合によって互いに接続された少なくとも２つのアミノ酸を含む分子を指す。したがって、タンパク質またはポリペプチドは、アミノ酸残基のポリマーを含む。例えば、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、ペプチド結合によって各々が少なくとも互いに連結されている、遺伝コードによって規定される２０種のアミノ酸、またはアミノ酸アナログもしくは模倣物から選択される複数のアミノ酸を含み得るか、またはこれらから構成され得る。ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、Ｌ－アミノ酸および／またはＤ－アミノ酸（またはそのアナログもしくは模倣物）を含み得るか、またはこれらから構成され得る。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、非ペプチド性の構造的要素を含有するペプチドアナログとして定義される「ペプチド模倣物」も含み、これらのペプチドは、天然親ペプチドの生物学的作用（複数可）を模倣またはアンタゴナイズすることが可能である。ある特定の実施形態では、ペプチド模倣物は、酵素的に開裂可能なペプチド結合などの特徴を欠如する。
ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、これらのアミノ酸に加えて、遺伝コードによって規定される２０種のアミノ酸以外のアミノ酸を含み得るか、または遺伝コードによって規定される２０種のアミノ酸以外のアミノ酸から構成され得る。ある特定の実施形態では、本開示に関して、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質は、当技術分野で公知であり、本明細書に記載されるものが挙げられる、天然プロセス、例えば、翻訳後成熟プロセスによって、または化学的プロセス（例えば、合成プロセス）によって改変されたアミノ酸を含み得る。かかる改変は、ポリペプチド中；例えば、ペプチド骨格中；アミノ酸鎖中；またはカルボキシ末端もしくはアミノ末端の、いずれの場所にも出現し得る。ペプチドまたはポリペプチドは、例えばユビキチン化後に分岐され得るか、または分岐ありもしくはなしで環状であり得る。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、改変されたペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質もまた含む。例えば、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、ヌクレオチドもしくはヌクレオチド誘導体の共有結合的固定、脂質もしくは脂質誘導体の共有結合的固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合的固定、共有結合的もしくは非共有結合的架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、ペグ化を含むグリコシル化、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化（ｓｅｎｅｌｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アミノ酸付加、例えば、アルギニル化またはユビキチン化が挙げられ得る。かかる改変は、文献中に記載されている（Proteins Structure and Molecular Properties (1993) 2nd Ed., T. E. Creighton, New York; Post-translational Covalent Modifications of Proteins (1983) B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York；Seifter et al. (1990) Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors, Meth. Enzymol. 182: 626-646およびRattan et al., (1992) Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging, Ann NY Acad Sci, 663: 48-62を参照されたい）。したがって、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、例えば、リポペプチド、リポタンパク質、糖ペプチド、糖タンパク質などを含み得る。本開示のタンパク質、ペプチド、およびポリペプチドのバリアントも企図される。ある特定の実施形態では、バリアントのタンパク質、ペプチド、およびポリペプチドは、本明細書に記載される定義されたアミノ酸配列または参照アミノ酸配列のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる。
本明細書で使用される場合、「（ポリ）ペプチド」および「タンパク質」は、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸残基、例えば、複数のアミノ酸単量体のポリマーに関して、相互交換可能に使用され得る。
「核酸分子」または「ポリヌクレオチド」または「ポリ核酸」は、共有結合的に連結したヌクレオチドを含むポリマー化合物を指し、これは、天然のサブユニット（例えば、プリンまたはピリミジン塩基）または非天然サブユニット（例えば、モルホリン環）で構成され得る。プリン塩基としては、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、およびキサンチンが挙げられ、ピリミジン塩基としては、ウラシル、チミン、およびシトシンが挙げられる。核酸単量体は、ホスホジエステル結合またはかかる連結のアナログによって連結され得る。ホスホジエステル連結のアナログとしては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロジセレノエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉｓｅｌｅｎｏａｔｅ）、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホラニリデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌｉｄａｔｅ）、ホスホロアミダート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ）などが挙げられる。
核酸分子は、ポリリボ核酸（ＲＮＡ）、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および合成ＤＮＡを含むポリデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含み、これらはいずれも一本鎖または二本鎖であり得る。一本鎖の場合、核酸分子は、コード鎖または非コード（アンチセンス鎖）であり得る。ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ウイルスゲノムＲＮＡ、および合成ＲＮＡもまた企図される。ポリヌクレオチド（オリゴヌクレオチドを含む）、およびその断片は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってもしくはｉｎ ｖｉｔｒｏ翻訳によって生成され得るか、またはライゲーション、開裂、エンドヌクレアーゼ作用、もしくはエキソヌクレアーゼ作用のいずれかによって生成され得る。
アミノ酸配列をコードする核酸分子は、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。ヌクレオチド配列の一部のバージョンは、イントロン（複数可）が共転写のまたは転写後の機構により除去され得る程度にイントロン（複数可）も含み得る。異なるヌクレオチド配列は、遺伝コードの重複性もしくは縮重の結果として、またはスプライシングにより、あるいはその両方で、同じアミノ酸配列をコードし得る。
本開示の核酸分子のバリアントも企図される。バリアント核酸分子は、本明細書に記載される定義されたまたは参照ポリヌクレオチドの核酸分子と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％同一であり、あるいは、これは、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、約６５～６８℃の、または０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、および５０％ホルムアミド、約４２℃のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でポリヌクレオチドにハイブリダイズする。核酸分子バリアントは、標的分子の特異的結合などの本明細書に記載される機能性を有する融合タンパク質またはその結合ドメインをコードする能力を保持する。
本明細書で使用される場合、用語「配列バリアント」は、参照配列と比較して１つまたは複数の変化を有する任意の配列を指し、それにより、参照配列は、任意の公開された配列であるおよび／または本明細書の「配列および配列番号の表」（配列表）に列挙された配列のものである。したがって、用語「配列バリアント」は、ヌクレオチド配列バリアントおよびアミノ酸配列バリアントを含む。ヌクレオチド配列に関する配列バリアントについてのある特定の実施形態では、参照配列は、ヌクレオチド配列でもあり、一方、アミノ酸配列に関する配列バリアントについてのある特定の実施形態では、参照配列は、アミノ酸配列でもある。「配列バリアント」は、本明細書で使用される場合、参照配列に対して少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であり得る。
「配列同一性パーセント」は、配列を比較することによって決定される、２つまたはそれより多くの配列間の関係を指す。配列同一性を決定するための方法は、比較される配列間の最良の一致を与えるように設計され得る。例えば、最適な比較の目的で、配列を整列させ得る（例えば、最適な整列のために、第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方にギャップを導入することができる）。さらに、非相同配列は、比較の目的で、無視してもよい。本明細書において言及される配列同一性パーセントは、他に指示されない限り、参照配列の長さにわたって算出される。配列同一性および類似性を決定する方法は、公に利用可能なコンピュータープログラムに見出すことができる。配列の整列および同一性パーセントの算出は、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ ２．０、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＢＬＡＳＴＸ）を使用して行ってもよい。ＢＬＡＳＴプログラムにおいて使用される数学アルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５：３３８９－３４０２， １９９７に見出すことができる。本開示の文脈内では、配列解析ソフトウェアを解析のために使用する場合、解析の結果は、言及されるプログラムの「デフォルト値」に基づくことが理解される。「デフォルト値」は、最初に初期化された場合に、ソフトウェアに元々ロードされた任意の値またはパラメータのセットを意味する。
核酸（ヌクレオチド）配列に関して、「配列バリアント」は、参照配列中のヌクレオチドのうちの１つもしくは複数が欠失もしくは置換されているか、または１つもしくは複数のヌクレオチドが参照ヌクレオチド配列の配列中に挿入されている、変化された配列を有する。ヌクレオチドは、標準的な１文字指定（Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＴ）によって本明細書で言及される。遺伝コードの縮重に起因して、ヌクレオチド配列の「配列バリアント」は、それぞれの参照アミノ酸配列中に変化を生じ得る、即ち、アミノ酸「配列バリアント」中の変化を生じ得るか、または生じない。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列バリアントは、アミノ酸配列バリアントを生じない（例えば、サイレント変異）。一部の実施形態では、１つまたは複数の「非サイレント」変異を生じるヌクレオチド配列バリアントが企図される。一部の実施形態では、本開示のヌクレオチド配列バリアントは、参照アミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一なアミノ酸配列をコードする。本明細書で開示されるヌクレオチドおよびアミノ配列は、参照または野生型のヌクレオチドまたはアミノ酸配列のコドン最適化されたバージョンもまた指す。本明細書に記載される実施形態のいずれかでは、本開示のポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドを含有する宿主細胞のためにコドン最適化され得る。コドン最適化は、公知の技法およびツールを使用して、例えば、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）ツール、またはＧｅｎｅＡｒｔ Ｇｅｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｔｏｏｌ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して実施され得る。コドン最適化された配列としては、部分的にコドン最適化された（即ち、少なくとも１つのコドンが、宿主細胞における発現のために最適化されている）配列および完全にコドン最適化された配列が挙げられる。
アミノ酸配列に関して、「配列バリアント」は、アミノ酸のうちの１つまたは複数が参照アミノ酸配列と比較して欠失、置換、または挿入されている、変化された配列を有する。変化の結果として、かかる配列バリアントは、参照アミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有する。例えば、参照配列の１００アミノ酸当たり、１０個以下の変化、即ち、欠失、挿入または置換の任意の組合せを有するバリアント配列は、参照配列に対して「少なくとも９０％同一」である。
「保存的置換」は、特定のタンパク質の結合特徴に有意に影響を及ぼさないか、またはそれを有意に変更しない、アミノ酸置換を指す。一般に、保存的置換は、置換されたアミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。保存的置換は、以下の群の１つにおいて見出される置換を含む：群１：アラニン（ＡｌａまたはＡ）、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、トレオニン（ＴｈｒまたはＴ）；群２：アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＺ）；群３：アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）；群４：アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、リシン（ＬｙｓまたはＫ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）；群５：イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、バリン（ＶａｌまたはＶ）；および群６：フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）。加えて、または代わりに、アミノ酸は、類似の機能、化学構造、または組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、または硫黄含有）によって保存的置換の群に分類することができる。例えば、脂肪族の分類は、置換の目的について、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅを含み得る。他の保存的置換群としては、硫黄含有：Ｍｅｔおよびシステイン（ＣｙｓまたはＣ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ；小さな脂肪族の、非極性の、またはわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、およびＧｌｙ；極性の、負に荷電した残基、およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、およびＧｌｎ；極性の、正に荷電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、およびＬｙｓ；大きな脂肪族の、非極性の残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、およびＣｙｓ；ならびに大きな芳香族の残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、およびＴｒｐが挙げられる。追加の情報は、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ
（１９８４） Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに見出すことができる。
アミノ酸配列挿入としては、１残基から、１００もしくはそれよりも多い残基を含有するポリペプチドまでの範囲の長さの、アミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられ得る。末端挿入の例としては、レポーター分子または酵素への、アミノ酸配列のＮ末端またはＣ末端への融合が挙げられる。
一般に、配列バリアント中の変化は、それぞれの参照配列の所望の機能性を消失させることも、有意に低減させることもない。例えば、本開示のバリアント配列は、参照配列を有する（または参照配列によってコードされる）抗体または抗原結合断片と比較して、抗体、もしくはその抗原結合断片の配列が同じエピトープに結合する機能性、ＨＢＶおよびＨＤＶの感染を十分に中和する機能性を有意に低減することも無効にすることもなく、および／または抗体二量体の形成を引き起こすことも増加させることもなく、および／または宿主細胞においてより低い力価で産生されることがないことが好ましい。
本明細書で使用される場合、特定された核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質「に由来する」核酸配列またはアミノ酸配列は、その核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の起源を指す。特定の配列に由来する核酸配列またはアミノ酸配列は、それが由来する配列またはその部分に対して本質的に同一なアミノ酸配列を有し得、それにより、「本質的に同一な」は、上で定義された配列バリアントを含む。特定のペプチドまたはタンパク質に由来する核酸配列またはアミノ酸配列は、特定のペプチドまたはタンパク質中の対応するドメインに由来し得る。これに関して、「対応する」は、目的の同じ機能性または特徴の所有を指す。例えば、「細胞外ドメイン」は、別の「細胞外ドメイン」（別のタンパク質の）に対応するか、または「膜貫通ドメイン」は、別の「膜貫通ドメイン」（別のタンパク質の）に対応する。したがって、ペプチド、タンパク質および核酸の「対応する」部分は、当業者にとって容易に同定可能である。同様に、別の（例えば、「供給源」）配列「に由来する」配列は、供給源配列中にその起源を有するとして、当業者によって同定され得る。
別の核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に由来する核酸配列またはアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に対して同一であり得る。しかし、別の核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に由来する核酸配列またはアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質と比較して、１つまたは複数の変異もまた有し得、特に、別の核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質に由来する核酸配列またはアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の上記機能的配列バリアントであり得る。例えば、ペプチド／タンパク質中、１つもしくは複数のアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基で置換され得るか、または１つもしくは複数のアミノ酸残基挿入もしくは欠失が存在し得る。
本明細書で使用される場合、用語「変異」は、参照配列、例えば、対応するゲノム、野生型、または参照配列と比較した、核酸配列中および／またはアミノ酸配列中の変化に関する。例えば、参照ゲノム配列と比較した変異は、例えば、（天然に存在する）体細胞変異、自発的変異、誘導された変異、例えば、酵素、化学物質もしくは放射線によって誘導された変異、または部位特異的変異誘発（核酸配列中および／またはアミノ酸配列中に特異的かつ意図的な変化を起こさせるための分子生物学の方法）によって得られた変異であり得る。したがって、用語「変異」または「変異させる」は、例えば、核酸配列中またはアミノ酸配列中に変異を物理的に生じさせるまたは誘導することもまた含むと理解すべきである。変異としては、１つまたは複数のヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、欠失および／または挿入、ならびにいくつかの連続するヌクレオチドまたはアミノ酸の逆位が挙げられる。アミノ酸配列中の変異を達成するために、変異は、（組換え）変異したポリペプチドを発現させるために、当該アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列中に導入され得る。変異は、例えば、異なるアミノ酸をコードするコドンもしくは同じアミノ酸をコードするコドンを提供するために、１つのアミノ酸をコードする核酸分子のコドンを（例えば、部位特異的変異誘発によって）変化させることによって（例えば、その中の１つ、２つ、または３つのヌクレオチド塩基を変化させることによって）、または配列バリアントを合成することによって、達成され得る。
「機能的バリアント」は、本開示の親化合物または参照化合物と構造的に類似しているか、または実質的に構造的に類似しているが、組成がわずかに異なる（例えば、１つの塩基、原子または官能基が異なる、付加されている、または除去されている）ポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指し、その結果、ポリペプチドまたはコードされるポリペプチドは、親ポリペプチドの少なくとも１つの機能を、少なくとも５０％の効率で、好ましくは、親ポリペプチドの活性の少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のレベルで行うことができる。言い換えれば、本開示のポリペプチドまたはコードされるポリペプチドの機能的バリアントは、結合親和性を測定するためのアッセイ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）または会合定数（Ｋａ）または解離定数（ＫＤ）を測定する四量体染色）などの選択されたアッセイにおいて、親化合物または参照ポリペプチドと比較して、機能的バリアントが性能の５０％以下の低減を示す場合、「類似の結合性」、「類似の親和性」、または「類似の活性」を有する。
本明細書で使用される場合、「機能的部分」または「機能的断片」は、親化合物または参照化合物のドメイン、部分または断片のみを含むポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指し、ポリペプチドまたはコードされるポリペプチドは、親化合物または参照化合物のドメイン、部分または断片に関連する少なくとも５０％の活性、好ましくは、親ポリペプチドの活性の少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、または１００％のレベルを保持するか、あるいは生物学的利益（例えば、エフェクター機能）を提供する。本開示のポリペプチドまたはコードされるポリペプチドの「機能的部分」または「機能的断片」は、選択されたアッセイにおいて、親ポリペプチドまたは参照ポリペプチドと比較して、機能的部分または断片が、５０％以下（好ましくは、２０％以下または１０％以下、あるいは親和性に関して、親または参照と比較して対数差以下）の性能の低減を示す場合、「類似の結合性」または「類似の活性」を有する。
「単離された」という用語は、材料が、その元々の環境（例えば、それが天然に存在する場合、天然の環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生きている動物中に存在する天然に存在する核酸またはポリペプチドは、単離されていないが、同じ核酸またはポリペプチドが、天然の系中で共存している材料の一部または全部から分離されている場合、単離されている。そのような核酸は、ベクターの部分であり得、かつ／あるいは、そのような核酸またはポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の部分であり得、それでもなお、そのようなベクターまたは組成物が核酸またはポリペプチドについて天然の環境の一部ではないという点で、単離されている。「単離された」は、一部の実施形態では、ヒト身体の外側にある抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または組成物を記載し得る。
用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡまたはＲＮＡのセグメントを意味する；ある特定の文脈では、用語「遺伝子」は、コード領域に先行するおよびその後に続く領域（例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）および３’ＵＴＲ）ならびに個々のコードセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。
核酸分子を細胞中に挿入することに関して、用語「導入された」は、「トランスフェクション」、または「形質転換」または「形質導入」を意味し、真核生物または原核生物細胞中への核酸分子の取り込みに対する言及を含み、この核酸分子は、細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、色素体、またはミトコンドリアＤＮＡ）中に取り込まれ得るか、自律的レプリコンへと変換され得るか、または一過的に発現され得る（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡ）。
用語「組換え」は、本明細書で使用される場合（例えば、組換え抗体、組換えタンパク質、組換え核酸など）、組換え手段によって調製、発現、創出または単離された、および天然に存在しない、任意の分子（抗体、タンパク質、核酸など）を指す。「組換え」は、「操作された」または「非天然」と同意語として使用され得、少なくとも１つの遺伝的変化を含むか、または外因性核酸分子の導入によって改変されている、生物、微生物、細胞、核酸分子、またはベクターを指し得、かかる変化または改変は、遺伝子操作（即ち、ヒトの介入）によって導入される。遺伝的変更としては、例えば、タンパク質、融合タンパク質または酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する改変、あるいは他の核酸分子の付加、欠失、置換、または細胞の遺伝子材料の他の機能的破壊が挙げられる。追加の改変には、例えば、改変がポリヌクレオチド、遺伝子、またはオペロンの発現を変更する、非コード調節領域を含む。
本明細書で使用される場合、「異種」、または「非内因性」、または「外因性」は、宿主細胞または被験体に対してネイティブではない任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、または活性、あるいは、宿主細胞または被験体に対してネイティブであるが変更されている任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、または活性を指す。異種、非内因性、または外因性としては、ネイティブなおよび変更された遺伝子、タンパク質、化合物、または核酸分子の間で構造、活性、またはその両方が異なるように変異しているか、またはそうでなければ変更されている、遺伝子、タンパク質、化合物、または核酸分子が挙げられる。ある特定の実施形態では、異種、非内因性、または外因性の遺伝子、タンパク質、または核酸分子は、宿主細胞または被験体に対して内因性でなくてもよいが、代わりに、そのような遺伝子、タンパク質、または核酸分子をコードする核酸が、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔などによって宿主細胞に付加されていてもよく、ここで、付加された核酸分子は、宿主細胞のゲノムに組み込まれていてもよく、または染色体外遺伝子材料として（例えば、プラスミド、または他の自己複製性ベクターとして）存在することができる。「相同な」または「ホモログ」という用語は、宿主細胞、種、または株において見出されるか、またはそれに由来する、遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、または活性を指す。例えば、ポリペプチドをコードする異種または外因性のポリヌクレオチドまたは遺伝子は、ネイティブなポリヌクレオチドまたは遺伝子と相同であってもよく、相同なポリペプチドまたは活性をコードするが、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、変更された構造、配列、発現レベル、またはこれらの任意の組み合わせを有していてもよい。非内因性のポリヌクレオチドまたは遺伝子、ならびにコードされるポリペプチドまたは活性は、同じ種、異なる種、またはこれらの組み合わせ由来であってもよい。
本明細書で使用される場合、「内因性」または「ネイティブ」という用語は、宿主細胞または被験体に通常存在する、ポリヌクレオチド、遺伝子、タンパク質、化合物、分子、または活性を指す。
「発現」という用語は、本明細書で使用される場合、遺伝子などの核酸分子のコード配列に基づいてポリペプチドが産生されるプロセスを指す。プロセスは、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾、またはこれらの任意の組み合わせを含み得る。発現される核酸分子は、典型的には、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結されている。
「作動可能に連結される」という用語は、一方の機能が他方によって影響を受けるような、単一の核酸断片上の２つまたはそれより多くの核酸分子の会合を指す。例えば、プロモーターは、コード配列の発現に影響を及ぼすことができる場合、コード配列と作動可能に連結されている（すなわち、コード配列は、プロモーターの転写制御下にある）。「連結されていない」とは、関連する遺伝エレメントが互いに密接に関連せず、一方の機能が他方に影響を及ぼさないことを意味する。
本明細書に記載されるように、１つより多くの異種核酸分子は、別々の核酸分子として、複数の個々に制御される遺伝子として、ポリシストロニックな核酸分子として、タンパク質（例えば、抗体の重鎖）をコードする単一の核酸分子として、またはこれらの任意の組み合わせで、宿主細胞に導入することができる。２つまたはそれより多くの異種核酸分子が宿主細胞に導入される場合、２つまたはそれより多くの異種核酸分子を、単一の核酸分子として（例えば、単一のベクターにおいて）、別々のベクターにおいて、宿主染色体の単一の部位または複数の部位に組み込んで、あるいはこれらの任意の組み合わせで導入することができることが理解される。言及される異種核酸分子、またはタンパク質活性の数は、宿主細胞に導入される別々の核酸分子の数ではなく、コードする核酸分子の数またはタンパク質活性の数を指す。
本明細書で使用される場合、用語「細胞」、「細胞系」および「細胞培養物」は、相互交換可能に使用され、全てのかかる名称は、子孫を含む。したがって、用語「形質転換体」および「形質転換された細胞」および「宿主細胞」は、移入の回数にかかわりなく、初代対象細胞およびそれに由来する培養物を含む。故意または不慮の変異に起因して、全ての子孫がＤＮＡ内容において正確に同一ではない場合があることも理解される。元々形質転換された細胞においてスクリーニングされたのと同じまたは実質的に同じ機能、表現型、または生物活性を有するバリアント子孫が含まれる。明確に異なる名称が意図される場合、それは文脈から明らかである。
用語「構築物」は、組換え核酸分子を含有する任意のポリヌクレオチド（または文脈が明らかに示す場合には、本開示の融合タンパク質）を指す。
ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ベクターのある特定のエレメントに機能的に連結されていてもよい。例えば、ライゲーションされるコード配列の発現およびプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列が、機能的に連結されていてもよい。発現制御配列は、妥当な転写開始、終結、プロモーター、およびエンハンサー配列；スプライシングおよびポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質安定性を増強する配列；ならびに場合により、タンパク質分泌を増強する配列を含んでいてもよい。発現制御配列は、それらが、目的の遺伝子と、トランスにまたは目的の遺伝子が制御される距離で作用する発現制御配列とが近接する場合、機能的に連結され得る。
抗体および抗原結合断片
本明細書で開示される実施形態は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり（ＨＢｓＡｇおよび抗原性ループ領域は、本明細書でさらに詳細に記載される）、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せ；即ち、これらの遺伝子型のうちのいずれか１つ、いずれか２つ、いずれか３つ、いずれか４つ、いずれか５つ、いずれか６つ、いずれか７つ、いずれか８つ、いずれか９つ、または１０個全てのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体、およびその抗原結合断片を含む。本明細書でさらに議論される場合、本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、例えば、宿主細胞における産生に有利に働く特徴、および望ましくない凝集体、例えば二量体を形成する傾向の低減が挙げられるがこれらに限定されない他の利点を有する。
本明細書で使用される場合、文脈が明確に他を示さない限り、「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む無傷抗体（しかし、軽鎖を欠如する重鎖抗体は、一般にはなおも用語「抗体」によって包含されるが、本開示の好ましい実施形態は、ＶＨおよびＶＬの両方、一部の実施形態では、重鎖および軽鎖の両方を含むことが理解される）、ならびに無傷抗体によって認識される抗原標的分子に結合する能力を有するかまたは保持する無傷抗体の任意の抗原結合性部分または断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ’）２断片などを指す。そのため、本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を含み、完全な抗体、ならびに断片抗原結合（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む一本鎖抗体断片、およびシングルドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を含むその機能的（抗原結合）抗体断片を含む。この用語は、免疫グロブリンの遺伝子操作された形態および／または他の方法で改変された形態、例えば、イントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多特異性、例えば、二特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、ならびに当該分野で公知の他の抗体形式を包含する。他に言及されない限り、「抗体」という用語は、その機能的抗体断片を包含することが理解されるべきである。「抗体」という用語は、完全な抗体または全長抗体も包含し、ＩｇＧおよびそのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む、任意のクラスまたはそのサブクラスの抗体を含む。
本明細書で使用される場合、抗体に関して、用語「抗原結合断片」、「断片」、および「抗体断片」は、抗体の抗原結合活性を保持する本開示の抗体の任意の断片を指すために、相互交換可能に使用される。抗体断片の例としては、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖが挙げられるがこれらに限定されない。
ヒト抗体は公知である（例えば、van Dijk, M. A., and van de Winkel, J. G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。ヒト抗体は、免疫化の際に、内因性免疫グロブリンの産生なしにヒト抗体の完全なレパートリーまたは選集を産生することが可能なトランスジェニック動物（例えば、マウス）において産生され得る。かかる生殖細胞系列変異体マウスにおけるヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生を生じる（例えば、Jakobovits, A., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 2551-2555；Jakobovits, A., et al., Nature 362 (1993) 255-258；Bruggemann, M., et al., Year Immunol. 7 (1993) 3340を参照されたい）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーでも産生され得る（Hoogenboom, H. R., and Winter, G., J. Mol. Biol. 227 (1992) 381-388；Marks, J. D., et al., J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597）。ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技法もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用可能である（Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985)；およびBoerner, P., et al., J. Immunol. 147 (1991) 86-95）。ヒトモノクローナル抗体は、Traggiai E, Becker S, Subbarao K, Kolesnikova L, Uematsu Y, Gismondo MR, Murphy BR, Rappuoli R, Lanzavecchia A. (2004): An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus. Nat Med. 10(8):871-5に記載されるような改善されたＥＢＶ－Ｂ細胞不死化を使用することによって調製され得る。用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、本開示の抗体および抗体断片による特性を生成するために、例えば可変領域または定常領域が改変されたかかる抗体もまた含む。
本開示による抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ；即ち、α、γ、μ、ε、またはδ重鎖を含む）のものであり得る。ＩｇＧアイソタイプのうち、例えば、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４サブクラスであり得る。具体的な実施形態では、本開示の抗体は、ＩｇＧ１抗体である。本明細書で提供される抗体または抗原結合断片は、κまたはλ軽鎖を含み得る。好ましくは、抗体または抗原結合断片は、λ軽鎖を含み得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されるＨＢｓＡｇ特異的抗体は、ＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１Ｍ，１７ １アロタイプ）のものであり、感染細胞からのＨＢＶおよびＨＢｓＡｇの放出を遮断し得る。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書の記載による抗体は、細胞内で結合でき、それにより、ＨＢＶビリオンおよびＨＢｓＡｇの放出を遮断する。
用語「ＶＬ」または「ＶＬ」および「ＶＨ」または「ＶＨ」は、それぞれ抗体軽鎖および抗体重鎖由来の可変領域（可変ドメインとも呼ばれる）を指す；典型的には、これらの領域は、抗原への抗体または抗原結合断片の結合に直接関与する。ＶＬ（ならびにＣＬまたは軽鎖）は、カッパ（κ）クラス（本明細書で「ＶＫ」とも）またはラムダ（λ）クラスであり得る。可変結合領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）および「フレームワーク領域」（ＦＲ）として公知の別個の下位領域を含む。用語「相補性決定領域」、および「ＣＤＲ」は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同意語であり、抗体の抗原特異性および／または結合親和性を一般には一緒になって付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指し、連続したＣＤＲ（即ち、ＣＤＲ１とＣＤＲ２、ＣＤＲ２とＣＤＲ３）は、一次アミノ酸配列中でフレームワーク領域によって互いに分離されている。各可変領域中には３つのＣＤＲが存在する（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３；それぞれＣＤＲＨおよびＣＤＲＬとも呼ばれる）。ある特定の実施形態では、抗体ＶＨは、次のように４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含む：ＦＲ１－ＨＣＤＲ１－ＦＲ２－ＨＣＤＲ２－ＦＲ３－ＨＣＤＲ３－ＦＲ４；抗体ＶＬは、次のように４つのＦＲおよび３つのＣＤＲを含む：ＦＲ１－ＬＣＤＲ１－ＦＲ２－ＬＣＤＲ２－ＦＲ３－ＬＣＤＲ３－ＦＲ４。一般に、ＶＨおよびＶＬは一緒になって、そのそれぞれのＣＤＲによって抗原結合部位を形成するが、一部の場合には、結合部位は、１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＣＤＲによって形成され得るか、またはこれらを含み得、これらのＣＤＲは、ＶＨ中に、ＶＬ中に、またはその両方中に配置され得ることが理解される。
ある特定の実施形態では、抗体ＣＤＲと可変領域のアミノ酸番号付けとは、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（「ＣＣＧ」）によって開発されたシステムに従う；例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）ソフトウェア（ｗｗｗ．ｃｈｅｍｃｏｍｐ．ｃｏｍ）を使用する。
ある特定の実施形態では、抗体ＣＤＲと可変領域のアミノ酸番号付けとは、ＩＭＧＴ番号付けスキームに従う（例えば、Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003を参照されたい）。
等価の残基位置を、Ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＡＮＡＲＣＩ）ソフトウェアツール（２０１６， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２９８－３００）を使用して、比較される異なる分子についてアノテートすることができる。
本明細書で使用される場合、ＣＤＲの「バリアント」は、最大で１～３つのアミノ酸置換、欠失、またはこれらの組合せを有する、ＣＤＲ配列の機能的バリアント（本明細書で提供される）を指す。
ある特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３５または配列番号３６のアミノ酸配列、および配列番号３７のアミノ酸配列を中に含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号４１、４０、４２、および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号４９、４４～４８、および５０～５３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のアミノ配列を中に含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、
必要に応じて、ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せを含み、置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、なおさらに必要に応じて、ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれのさらなる変異も含まず、
抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、
抗体、またはその抗原結合断片を提供する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４５、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｉ）ＶＨ中に、配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４６、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｉｉ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４７、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｖ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４８、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４９、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５０、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉｉ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５１、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉｉｉ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５２、および５５に記載のアミノ酸配列；または（ｉｘ）ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびにＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５３、および５５に記載のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、（ｉ）配列番号３４に記載のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３５または３６に記載のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３７に記載のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号４０～４３のうちのいずれか１つに記載されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４５～５３のうちのいずれか１つに記載のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号５５または５６に記載のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、ＣＤＲが、ＣＣＧに従い、この抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列は、（ｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４５、および５５；（ｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４６、および５５；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４７、および５５；（ｉｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４８、および５５；（ｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４９、および５５；（ｖｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５０、および５５；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５１、および５５；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５２、および５５；または（ｉｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５３、および５５に記載され、ＣＤＲは、ＣＣＧに従う。
表１は、ある特定の抗体のＣＤＲアミノ酸配列番号を提供し、ＣＤＲは、ＣＣＧに従って規定されている。
Figure 2023531520000002
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲは、ＣＣＧに従い、必要に応じて、ＶＬは、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、置換変異のアミノ酸番号付けは、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、ＶＬは、配列番号５８と比較して、いずれの他の変異も含まない。
表２は、ある特定の抗体のＣＤＲアミノ酸配列番号を提供し、ＣＤＲは、ＩＭＧＴに従って規定されている（ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＬ２の短いおよび長いバージョンが開示される）。
Figure 2023531520000003
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲは、ＩＭＧＴに従い、必要に応じて、ＶＬは、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、置換変異のアミノ酸番号付けは、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、ＶＬは、配列番号５８と比較して、いずれの他の変異も含まない。
表３は、ある特定の抗体のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列番号を提供する。
Figure 2023531520000004
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、（ｉ）ＶＨは、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／または（ｉｉ）ＶＬは、配列番号５８～６６、６９、７１、もしくは７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる。特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。非限定的な例として、ある特定の実施形態では、ＶＨは、配列番号３８に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号６２に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／またはＶＬは、配列番号５８～６６、６９、７１、もしくは７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる。特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる。
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるＶＨと、配列番号５８～７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなるＶＬとを含む。
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＶＨと、配列番号５９～７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなるＶＬとを含む。
別の態様では、本開示は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体または抗原結合断片であって、ＶＨおよびＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６７；または（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および６８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなり、抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体または抗原結合断片を提供する。
配列番号３８または３９に記載のＶＨと、次の変異（フレームワーク領域３中、ＣＣＧ番号付けによって決定される）：Ｒ６０Ａ、Ｒ６０Ｎ、Ｒ６０Ｋ、Ｓ６４Ａ、Ｉ７４Ａのうちのいずれか１つまたは複数を含む配列番号５７～７２のうちのいずれか１つのＶＬバリアントとを含む、抗体または抗原結合断片もまた提供される。ある特定のさらなる実施形態では、ＶＬバリアントは、配列番号５７～７２（それぞれ）と比較して、いずれのさらなる変異も含まない。
配列番号３８に記載のＶＨと、Ｑ７８、Ｄ８１、またはその両方（ＣＣＧ番号付け）において置換変異（例えば、保存的アミノ酸置換、または生殖細胞系列にコードされるアミノ酸への変異など）を含む配列番号５７～７２のうちのいずれか１つのＶＬバリアントとを含む、抗体または抗原結合断片もまた提供される。
配列番号３９に記載のＶＨと、Ｑ７８、Ｄ８１、またはその両方（ＣＣＧ番号付け）において置換変異（例えば、保存的アミノ酸置換、または生殖細胞系列にコードされるアミノ酸への変異など）を含む配列番号５７～７２のうちのいずれか１つのＶＬバリアントとを含む、抗体または抗原結合断片もまた提供される。
本明細書でさらに議論されるように、本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、本明細書で開示される参照抗体と比較して、凝集体（例えば、二量体）を形成する傾向の低減を有し、ならびに／または宿主細胞における改善された生産性（例えば、より高い力価）を有し、ならびに／または類似のもしくは実質的に同一なもしくはさらには改善された：ＨｂｓＡｇへの結合；ＨＢＶ中和；および／もしくは熱安定性を有する。
「参照」抗体または抗原結合断片は、同定または列挙された特色（例えば、ＣＤＲおよび／または可変領域フレームワーク配列（複数可）における差異）を除き、それぞれ対象抗体または抗原結合断片と同一な抗体または抗原結合断片を指すことが理解される。一部の実施形態では、参照抗体は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む。
非限定的な例として、本開示の抗体または抗原結合断片は、ＩｇＧ１アイソタイプであり得、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含み得、参照抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含み、ＩｇＧ１アイソタイプであり、野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ部分を含む。本明細書で開示される抗体または抗原結合断片をある特定の条件下で参照抗体または抗原結合断片と比較する場合、この条件（例えば、出発材料の量、温度、緩衝液、宿主細胞系の正体、培養条件、適切な期間の持続時間、コードするポリヌクレオチドのコドン最適化など）は、他に明示的に述べられない限り、本明細書で開示される分子（複数可）と参照分子（複数可）との間で同一であるか、または条件が許容する限り同一に近く（例えば、２つの抗体は、１つまたはいくつかのアミノ酸により、それらのアミノ酸配列が異なり得るが、他の点では同一である）、匹敵するポリヌクレオチドによってコードされる（例えば、各抗体は、それぞれのコドン最適化されたポリヌクレオチドによってコードされ得る）ことがさらに理解される。
非限定的な例として、本明細書で開示される抗体および抗原結合断片は、それぞれ参照抗体または抗原結合断片と比較して、より少ない凝集体（例えば、抗体：抗体二量体、抗体：抗原結合断片二量体、または抗原結合断片：抗原結合断片二量体の形態の）を産生し、および／または宿主細胞におけるより高い産生力価を有する。
これに関して、二量体は、２つの抗体または抗原結合断片分子を含む複合体または凝集体（例えば、抗体：抗体二量体、Ｆａｂ：Ｆａｂ二量体、または抗体：Ｆａｂ二量体）である。本明細書でさらに議論される場合、これに関する二量体化は、無傷四量体抗体、Ｆｖ、もしくはＦａｂの形成において生じる、抗体重鎖構成要素と抗体軽鎖構成要素との間、または２つの抗体重鎖ポリペプチド間での典型的な会合とは明確に異なり、２つの単量体間での会合が関与し得る。したがって、本文脈において、「二量体」は、機能的Ｆａｂを含む半抗体を提供する抗体重鎖と抗体軽鎖との会合を指すかもしくは指さず、また、抗体の２つの重鎖の会合（例えば、ヒンジ－ヒンジおよびＦｃ－Ｆｃ）または、例えば、Ｆｖ中もしくはＦａｂ中のＶＨ－ＶＬ会合（例えば、ジスルフィド結合を介して生じる）を含まないことが理解される。
ある特定の実施形態では、二量体は、２つの別個の抗体または抗原結合断片分子のＶＬ間の会合によって形成される。別個の抗体分子の２つのＶＬの会合によって形成された二量体の図は、本明細書の図７に示されている。かかる二量体化は、例えば、その中に含まれる抗体または抗原結合断片分子のうちの一方または両方の結合価および／または結合親和性および／またはアビディティーおよび／または中和有効性を低減させ得る。一般に、組成物中の、複数の抗体または抗原結合断片を含むかかる二量体の存在の増加は、組成物の全体的な結合および／または中和有効性を低減させる。
抗体または抗原結合断片二量体は、公知の技法、例えば、サイズ排除クロマトグラフィーなどを使用して同定され得る。二量体は、その各個々の（単量体）サブユニットの分子量よりも高い分子量、典型的には、その各個々のサブユニットの分子量の合計と等しいまたは近い分子量を有する。例えば、ホモ二量体（即ち、これは、それらのアミノ酸配列が同一なまたは実質的に同一な２つの抗体分子を含む）は、一般に、その各単量体サブユニットの分子量の約２倍の分子量を有する。例えば、典型的なヒトＩｇＧ１免疫グロブリン分子は、およそ１５０キロダルトンの分子量を有し（例えば、２つの重鎖の各々は、およそ５０キロダルトンの重量であり、２つの軽鎖の各々は、およそ２５キロダルトンの重量である）、２つのかかる免疫グロブリン分子を含む二量体は、およそ３００キロダルトンの分子量を有する。もちろん、例えば、それぞれのアミノ酸配列中の任意の差異に少なくとも一部起因して、１つの抗体が、同じ一般構造およびアイソタイプの異なる抗体とは僅かにまたは幾分異なる分子量を有し得ることが理解される。
別の非限定的な例として、抗体分子は、１４０キロダルトンと１６０キロダルトンとの間の分子量を有し得、２つの抗体分子を含む抗体二量体は、２８０キロダルトンと３２０キロダルトンとの間の分子量を有し得る。二量体は、「高分子量種」または「ＨＭＷＳ」と呼ばれ得る。
複数の抗体（および／または抗原結合断片）分子を含む組成物または試料中の二量体の存在は、例えば、絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）を使用して評価され得る。組成物または試料中の二量体の量は、組成物または試料中の、二量体として含まれる総抗体または抗原結合断片分子のパーセンテージとして表され得る。例として、１２％の二量体を含む抗体組成物について、試料中の総抗体分子の８８％は、単量体として存在する。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、複数の抗体または抗原結合断片（即ち、複数の抗体または抗原結合断片分子）を含む試料が約４０℃で約１２０～約１６８時間インキュベートされた場合に、前記試料中に、その複数のうちの１２％未満、１１％もしくはそれ未満、１０％もしくはそれ未満、９％もしくはそれ未満、８％もしくはそれ未満、７％もしくはそれ未満、６％もしくはそれ未満、５％もしくはそれ未満、４％もしくはそれ未満、３％もしくはそれ未満、または２％もしくはそれ未満が二量体として含まれ、必要に応じて、二量体の存在は、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、複数の本明細書で開示される抗体または抗原結合断片分子のインキュベーションは、複数の参照抗体または抗原結合断片分子のインキュベーションと比較して、二量体の形成の低減を生じ、参照抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含み、必要に応じて、抗体二量体の存在は、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される。かかる参照抗体または抗原結合断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ）は、一部の実施形態では、試料中に（例えば、約４０℃で約１２０～約１６８時間インキュベートされた場合に）、その抗体または抗原結合断片分子の２％より多く、３％もしくはそれより多く、４％もしくはそれより多く、５％もしくはそれより多く、６％もしくはそれより多く、７％もしくはそれより多く、８％もしくはそれより多く、９％もしくはそれより多く、１０％もしくはそれより多く、１１％もしくはそれより多く、または最大で１２％を集合的に含む二量体を形成し得る。言い換えると、一部の実施形態では、参照抗体または抗原結合断片分子のうちの最大で１２％またはそれより多くが、二量体として含まれるが、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片分子のより低いパーセンテージ、好ましくは２％またはそれ未満が、二量体として含まれる。
一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片は、（ｉ）４℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；（ｉｉ）２５℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；ならびに／または（ｉｉｉ）４０℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて、参照抗体と比較して、より低い量の二量体を形成し、ならびに／あるいは低減された頻度で、および／または試料もしくは組成物中の総抗体もしくは抗原結合断片分子のより低いパーセンテージとして、二量体を形成し（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して決定される）、参照抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、組成物中の、二量体として含まれる本明細書で開示される抗体または抗原結合断片分子のパーセンテージは、組成物中の、二量体として存在する参照抗体分子のパーセンテージの、それぞれ４／５未満、３／４未満、１／２未満、１／３未満、１／４未満、１／５未満、１／６未満、１／７未満、１／８未満、１／９未満、または１／１０未満である。非限定的な例として、４０℃で３２日間（７６８時間）インキュベートされた後、組成物中の参照抗体分子の２２％またはそれより多くが二量体として含まれ得るが、組成物中の本明細書で開示される抗体または抗原結合断片分子のそれぞれ１７％もしくはそれ未満、１６％もしくはそれ未満、１５％もしくはそれ未満、１４％もしくはそれ未満、１３％もしくはそれ未満、１２％もしくはそれ未満、１１％もしくはそれ未満、１０％もしくはそれ未満、９％もしくはそれ未満、８％もしくはそれ未満、７％もしくはそれ未満、６％もしくはそれ未満、５％もしくはそれ未満、４％もしくはそれ未満、３％もしくはそれ未満、または２％もしくはそれ未満が、二量体として含まれる。
一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、例えば、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞）は、参照抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた参照宿主細胞よりも、それぞれ１．５倍もしくはそれより多くの、２倍もしくはそれより多くの、３倍もしくはそれより多くの、または４倍もしくはそれより多くの量の抗体または抗原結合断片を提供し（例えば、ｍｇ／ｍＬでの濃度として測定される）、参照抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片は、トランスフェクトされた参照細胞において産生される参照抗体または抗原結合断片と比較してより高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書で開示される抗体またはその抗原結合断片は、参照抗体または抗原結合断片が産生される力価よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、抗体または抗原結合断片は、３．５もしくはそれ未満、約３．２もしくはそれ未満、３．０未満、２．５未満、２．０未満、１．５未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、３．５未満、３．４未満、３．３未満、３．２未満、３．１未満、３．０未満、２．９未満、２．８未満、２．７未満、２．６未満、２．５未満、２．４未満、２．３未満、２．１未満、２．０未満、１．９未満、１．８未満、１．７未満、１．６未満、１．５未満、１．４未満、１．３未満、１．２未満、１．１未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である。一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、０．９と２．０との間の、または０．９と１．９との間の、または０．９と１．８との間の、または０．９と１．７との間の、または０．９と１．６との間の、または０．９と１．５との間の、または０．９と１．４との間の、または０．９と１．３との間の、または０．９と１．２との間の、または０．９と１．１との間の、または０．９と１．０との間の、または１．０と２．０との間のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、２．０またはそれ未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である。一部の実施形態では、結合ＥＣ５０は、ＥＬＩＳＡ（例えば、直接的抗原結合ＥＬＩＳＡアッセイであり、結合曲線は、Ｇｒａｐｈｐａｄ ｐｒｉｓｍを使用して曲線をフィットさせることによって決定される）によって決定される。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、抗体またはその抗原結合断片は、２０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１５ｎｇ／ｍｌまたはそれ未満、より好ましくは１０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満の感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７ｎｇ／ｍＬの感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む参照抗体または抗原結合断片の感染中和ＥＣ５０（同じアッセイを使用する）よりも低い感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である。一部の実施形態では、感染中和ＥＣ５０は、培養された細胞、例えば、分化したＨｅｐａＲＧ細胞の、試験される抗体の存在下または非存在下での固定量のＨＢＶとのインキュベーションの後に決定される。かかる実施形態では、インキュベーションは、例えば、３７℃で１６時間にわたって実施され得る。このインキュベーションは、培地（例えば、４％ＰＥＧ８０００を補充した）中で実施され得る。インキュベーションの後、細胞は、洗浄され得、さらにカルチベートされ得る。ウイルス感染力を測定するために、例えば、感染の７日後から１１日後までに培養上清中に分泌されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）および／またはＢ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレベルは、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。処置された細胞からのＨＢｓＡｇおよび／またはＨＢｅＡｇのレベルは、中和の存在および程度を決定するために、未処置の細胞のものと比較され得る。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および抗原結合部位を含有する小さな抗体断片である。この断片は、一般に、密接に非共有結合的に会合した１つの重鎖可変領域ドメインおよび１つの軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または、抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識し、かつそれに結合する能力を有することができるが、典型的には、結合部位全体よりも親和性が低い。
「一本鎖Ｆｖ」は、「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略され、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のために所望の構造を保持または形成することを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメインの間に配置され、ＶＨおよびＶＬドメインを連結するポリペプチドリンカーを含む。そのようなペプチドリンカーは、当技術分野において周知の標準的な技法を使用して、融合ポリペプチドに組み込むことができる。さらにまたはあるいは、Ｆｖは、ＶＨとＶＬとの間で形成され、ＶＨおよびＶＬを安定化するジスルフィド結合を有し得る。ｓｃＦｖの概説について、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， ｖｏｌ． １１３， Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ｐｐ． ２６９－３１５ （１９９４）；以下のＢｏｒｒｅｂａｅｃｋ １９９５を参照されたい。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、およびＶＨドメインをＶＬドメインに連結するペプチドリンカーを含むｓｃＦｖを含む。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ペプチドリンカーによってＶＬドメインに連結されたＶＨドメインを含み、これは、ＶＨ－リンカー－ＶＬの方向、またはＶＬ－リンカー－ＶＨの方向であり得る。本開示の任意のｓｃＦｖは、ＶＬドメインのＣ末端が短いペプチド配列によってＶＨドメインのＮ末端に連結されるように、またはその逆のように（すなわち、（Ｎ）ＶＬ（Ｃ）－リンカー－（Ｎ）ＶＨ（Ｃ）または（Ｎ）ＶＨ（Ｃ）－リンカー－（Ｎ）ＶＬ（Ｃ））、操作されていてもよい。あるいは、一部の実施形態では、リンカーは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその両方のＮ末端部分またはＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその両方の末端に連結されていてもよい。
ペプチドリンカー配列は、例えば、（１）可撓性の伸長コンフォメーションを採用するそれらの能力、（２）第１および第２のポリペプチド上のおよび／または標的分子上の機能的エピトープと相互作用し得る二次構造を採用できないこと、またはこれを採用する能力の欠如、ならびに／あるいは（３）ポリペプチドおよび／または標的分子と反応する可能性がある疎水性または荷電残基の欠如または相対的な欠如に基づいて選択され得る。リンカー設計に関する他の考慮事項（例えば、長さ）は、ＶＨおよびＶＬが機能的抗原結合部位を形成することができるコンフォメーションまたはコンフォメーションの範囲を含み得る。ある特定の実施形態では、ペプチドリンカー配列は、例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、およびＳｅｒ残基を含有する。ＴｈｒおよびＡｌａなどの他のほぼ中性アミノ酸もまた、リンカー配列に含まれていてもよい。リンカーとして有用に用いられ得る他のアミノ酸配列としては、Ｍａｒａｔｅａ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ ４０：３９ ４６ （１９８５）；Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８３：８２５８ ８２６２ （１９８６）；米国特許第４，９３５，２３３号、および米国特許第４，７５１，１８０号に開示されているものが挙げられる。リンカーの他の例示的な非限定的な例としては、例えば、Chaudhary et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1066-1070 (1990)およびBird et al., Science 242:423-426 (1988)によって開示されたもの、ならびに単一の反復で存在する場合、あるいは１～５もしくはそれより多くの回数、またはそれより多く反復される場合の、その連続のＣ末端グリシンが単一のセリンに連結された、連続して連結された４つのグリシン残基の五量体が挙げられ得る。任意の適切なリンカーが使用され得、一般に、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、１５、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００アミノ酸長、または約２００アミノ酸長未満であり得、好ましくは、可撓性の構造を含み（リンカーによって接続された２つの領域、ドメイン、モチーフ、断片、またはモジュールの間のコンフォメーションの動きのための可撓性および場所を提供することができる）、好ましくは、生物学的に不活性であり、かつ／またはヒトにおいて免疫原性の低い危険性を有する。
ｓｃＦｖは、本明細書に開示される、ＶＨおよびＶＬ配列の任意の組み合わせ、またはＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列の任意の組み合わせを使用して、構築することができる。一部の実施形態では、例えば、第１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを分離し、立体的な干渉を防止するために使用され得る非必須Ｎ末端アミノ酸領域を有する場合、リンカー配列は必要ではない。
一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、軽鎖定常領域（またはその部分もしくは断片）、重鎖定常領域（またはその部分もしくは断片）、またはその両方を含む。用語「ＣＬ」は、「免疫グロブリン軽鎖定常領域」または「軽鎖定常領域」、即ち、抗体軽鎖由来の定常領域を指す。用語「ＣＨ」は、抗体アイソタイプに依存してＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、またはＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）へとさらに分割可能な、「免疫グロブリン重鎖定常領域」または「重鎖定常領域」を指す。抗体重鎖のＦｃ領域は、本明細書でさらに記載される。本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、本開示の抗体または抗原結合断片は、ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３のうちのいずれか１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、ＣＬは、配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３は、配列番号７３のアミノ酸配列に対して９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、または次のアミノ酸置換（ＥＵ番号付け）：Ｇ２３６Ａ；Ａ３３０Ｌ；Ｉ３３２Ｅ；Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓのうちの１つもしくは複数を含むそのバリアントを含む。Ｆｃ部分は、本明細書の他の箇所に記載される。
例えば、哺乳動物細胞系における産生は、抗体重鎖の１つまたは複数のＣ末端リシンを除去し得ることが理解される（例えば、Liu et al. mAbs 6(5):1145-1154 (2014)を参照されたい）。したがって、本開示の抗体または抗原結合断片は、重鎖、ＣＨ１－ＣＨ３、ＣＨ３、またはＦｃポリペプチドを含み得、Ｃ末端残基は、存在するかまたは存在しない；言い換えると、重鎖、ＣＨ１－ＣＨ３、またはＦｃ部分のＣ末端残基がリシンでない実施形態、およびリシンがＣ末端残基である実施形態が包含される。ある特定の実施形態では、組成物は、本開示の複数の抗体および／または抗原結合断片を含み、１つまたは複数の抗体または抗原結合断片は、重鎖、ＣＨ１－ＣＨ３、またはＦｃ部分のＣ末端にリシン残基を含まず、１つまたは複数の抗体または抗原結合断片は、重鎖、ＣＨ１－ＣＨ３、またはＦｃ部分のＣ末端にリシン残基を含む。
「Ｆａｂ」（抗原に結合する断片）は、抗原に結合する抗体の部分であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に連結された重鎖の可変領域およびＣＨ１を含む。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、二価抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結されたＦａｂ断片に大まかに対応し、抗原を架橋することがなおも可能である、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片を生じる。ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２は共に、「抗原結合断片」の例である。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む、ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端におけるさらなる残基をほとんど有さないことによって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。Ｆａｂ断片は、本明細書で「ｓｃＦａｂ」とも呼ばれる単鎖Ｆａｂを形成するために、例えば、ペプチドリンカーによって接続され得る。これらの実施形態では、ネイティブＦａｂ中に存在する鎖間ジスルフィド結合は、存在しなくてもよく、リンカーは、単一のポリペプチド鎖でＦａｂ断片を連結または接続するように、全体でまたは一部において機能する。重鎖由来のＦａｂ断片（例えば、ＶＨ＋ＣＨ１、または「Ｆｄ」を含むか、これからなるか、または本質的にこれからなる）および軽鎖由来Ｆａｂ断片（例えば、ＶＬ＋ＣＬを含むか、これからなるか、または本質的にこれからなる）は、任意の配置で連結されて、ｓｃＦａｂを形成し得る。例えば、ｓｃＦａｂは、Ｎ末端からＣ末端への方向で、（重鎖Ｆａｂ断片－リンカー－軽鎖Ｆａｂ断片）または（軽鎖Ｆａｂ断片－リンカー－重鎖Ｆａｂ断片）に従って配置されていてもよい。ｓｃＦａｂにおいて使用するためのペプチドリンカーおよび例示的なリンカー配列は、本明細書でさらに詳細に議論される。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、抗体、またはその抗原結合断片は、ヒト抗体、モノクローナル抗体、精製された抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。
本明細書に記載される抗体の断片は、酵素、例えば、ペプシンもしくはパパインによる消化を含む方法によって、および／または化学的還元によるジスルフィド結合の切断によって、抗体から得ることができる。あるいは、抗体の断片は、重鎖または軽鎖の配列の一部のクローニングおよび発現によって得ることができる。本開示は、例えば、本明細書の記載による抗体由来のＣＤＲ（および必要に応じて可変領域）を含むｓｃＦｖが挙げられる本明細書に記載される抗体の重鎖および軽鎖に由来する単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、重鎖または軽鎖の単量体および二量体（即ち、ＶＨ－ＶＬ二量体、ＨＣ－ＬＣ二量体、ＨＣ－ＨＣ二量体）、単一ドメイン重鎖抗体、単一ドメイン軽鎖抗体、ならびに重鎖および軽鎖の可変ドメインまたは領域がペプチドリンカーによって接続された単鎖抗体を包含する。
ある特定の実施形態では、本開示による抗体、またはその抗原結合断片は、精製された抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖまたはｓｃＦｖを含む。
本開示の抗体および抗原結合断片は、実施形態では、多特異性（例えば、二特異性、三特異性、四特異性など）であり得、本明細書で開示される任意の多特異性形式で提供され得る。ある特定の実施形態では、本開示の抗体または抗原結合断片は、多特異性抗体、例えば、二特異性または三特異性抗体である。二特異性抗体についての形式は、例えば、Spiess et al., Mol. Immunol. 67(2):95 (2015)およびBrinkmann and Kontermann, mAbs 9(2):182-212 (2017)に開示されており、これらの二特異性形式およびそれを作製する方法は、参照により本明細書に組み込まれ、これらとしては、例えば、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ）、ＤＡＲＴ、Ｋｎｏｂｓ－Ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（ＫＩＨ）アセンブリ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ＫＩＨアセンブリ、ＫＩＨ Ｃｏｍｍｏｎ Ｌｉｇｈｔ－Ｃｈａｉｎ抗体、ＴａｎｄＡｂ、Ｔｒｉｐｌｅ Ｂｏｄｙ、ＴｒｉＢｉ Ｍｉｎｉｂｏｄｙ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、四価ＨＣａｂ、Ｉｎｔｒａｂｏｄｙ、ＣｒｏｓｓＭａｂ、Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｏｎ Ｆａｂ（ＤＡＦ）（ツーインワンまたはフォーインワン）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、Ｃｈａｒｇｅ Ｐａｉｒ、Ｆａｂ－ａｒｍ Ｅｘｃｈａｎｇｅ、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ－Ｙアセンブリ、Ｆｃａｂ、κλ－ｂｏｄｙ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）－Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、およびＤＶＩ－ＩｇＧ（フォーインワン）が挙げられる。二特異性または多特異性抗体は、本開示の別のＨＢＶ特異的および／もしくはＨＤＶ特異的結合ドメインと組み合わせて、あるいはＨＢＶおよび／もしくはＨＤＶに（例えば、同じまたは異なるエピトープにおいて）特異的に結合する異なる結合ドメインと、または異なる抗原に特異的に結合する結合ドメインと組み合わせて、本開示のＨＢＶ特異的および／またはＨＤＶ特異的結合ドメインを含み得る。
本開示の抗体断片は、一価または多価の相互作用を付与し得、上記のように種々の構造で含有され得る。例えば、ｓｃＦｖ分子は、三価「トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）」または四価「テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）」を創出するために合成され得る。ｓｃＦｖ分子は、Ｆｃ領域のドメインを含んで、二価ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）を生じ得る。さらに、本開示の配列は、多特異性分子の構成要素であり得、ここで、本開示の配列は、本開示のエピトープを標的とし、分子の他の領域は、他の標的に結合する。例示的な分子としては、二特異性Ｆａｂ２、三特異性Ｆａｂ３、二特異性ｓｃＦｖ、およびディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）が挙げられるがこれらに限定されない（Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 9: 1126-1136）。
抗体またはその抗原結合断片、例えば、ｓｃＦｖが挙げられるがこれに限定されない本明細書に記載されるものは、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗原に特異的に結合することが可能な融合タンパク質中に含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」は、単鎖中に少なくとも２つの明確に異なるドメインまたはモチーフを有するタンパク質を指し、これらのドメインまたはモチーフは、タンパク質中で、天然には一緒には見出されないか、または所与の配置では見出されない。融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＰＣＲを使用して構築され得、組換え操作され得るなどであり、またはかかる融合タンパク質は、合成され得る。
一部の実施形態では、融合タンパク質は、宿主細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞の表面における発現が可能である。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含む細胞外構成要素；（ｉｉ）膜貫通構成要素（例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメイン、またはその機能的バリアントもしくは部分、あるいはこれらの任意の組合せ）；ならびに（ｉｉｉ）共刺激タンパク質由来のシグナル伝達ドメイン、またはその機能的バリアントもしくは部分（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＭＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、もしくはこれらの機能的バリアント、またはこれらの任意の組合せ由来のシグナル伝達ドメイン）、および／またはエフェクタードメイン（例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２５、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、Ｌｃｋ、ＬＡＧ３、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、Ｗｎｔ、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、ＳＬＡＭＦ１、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２、またはこれらの任意の組合せ由来）を含む細胞内構成要素を含む。
ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合断片を含む融合タンパク質は、宿主細胞、例えば、細胞免疫療法における使用のためのＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞の細胞表面上で発現され得るキメラ抗原受容体分子（ＣＡＲ）を含む。ＣＡＲ分子および設計の原理は、例えば、Sadelain et al., Cancer Discov., 3(4):388 (2013)；Harris and Kranz, Trends Pharmacol. Sci., 37(3):220 (2016)；Stone et al., Cancer Immunol. Immunother., 63(11):1163 (2014)；Xu et al., 2018 Oncotarget 9:13991；Androulla et al., 2018 Curr. Pharm. Biotechnol. Volume 19 (April 2018)；Wu et al., 2016 Expert Opin. Biol. Ther. 16:1469；およびRen et al., 2017 Protein Cell 8:634に記載されており、これらのＣＡＲ分子、ＣＡＲ設計、およびＣＡＲ設計原理は、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本開示を通じて、抗体、その抗原結合断片、および融合タンパク質は、個々にまたは集合的に（例えば、任意の組合せで）、「結合タンパク質」と呼ばれ得る。
本開示による結合タンパク質は、精製された形態で提供され得る。例えば、抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し得、例えば、このとき、組成物の９０％（重量）未満、通常は６０％未満およびより通常は５０％未満は、他のポリペプチドでできている。
本開示による結合タンパク質は、ヒトにおいておよび／または非ヒト（または異種）宿主において；例えば、マウスにおいて、免疫原性であり得る。例えば、抗体は、非ヒト宿主において免疫原性であるがヒト宿主においては免疫原性でないイディオトープを有し得る。ヒト使用のための本開示の抗体としては、宿主、例えば、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳動物などからは典型的には単離されない、一部の場合には、ヒト化によってもゼノ－マウスからも得られない、抗体が挙げられる。既知のもしくは潜在的な免疫原性および／もしくは他の潜在的不利益を低減させるように、または非ヒト動物、例えば、マウスにおいて抗体の所望の構造および／もしくは機能性を付与するように操作された（例えば、１つまたは複数のヒトアミノ酸残基、配列、またはモチーフが、低減されたもしくは無効にされた免疫原性もしくは他の不利益を有するか、またはマウスにおいて所望の構造および／もしくは機能を有する残基、配列、またはモチーフによって置き換えられた、「マウス化」抗体；例えば、マウスを使用するモデル研究のため）、開示される抗体のバリアント形態もまた、本明細書で企図される。
本明細書で使用される場合、「中和抗体」（または抗原結合断片、または融合タンパク質）は、病原体が宿主（例えば、宿主生物または宿主細胞）において感染を開始および／または永続化する能力を中和、即ち、防止、阻害、低減、妨害または干渉することができる抗体である。用語「中和抗体」および「中和する抗体（単数）」または「中和する抗体（複数）」は、本明細書で相互交換可能に使用される。これらの抗体は、単独で、または組み合わせて（例えば、組み合わされた、本明細書で開示される抗体のうちの２つもしくはそれより多く、またはＨＢＶ Ｂおよび／もしくはＨＢＶ Ｄ感染を中和することが可能な抗体を含む抗体薬剤であってもなくてもよい別の薬剤と組み合わせた本開示の抗体）、本明細書に記載されるように、適切な製剤化により予防剤もしくは治療剤として、積極的なワクチン接種と関連して、診断ツールとして、または産生ツールとして、使用され得る。したがって、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片は、ＨＢＶ、ＨＤＶ、またはその両方による感染を中和することが可能である。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」または「～に対して特異的な」は、試料中のいずれの他の分子ともいずれの構成要素とも有意に会合も合体もしない、１０５Ｍ－１と等しいかもしくはそれよりも大きい親和性またはＫａ（即ち、１／Ｍの単位を有する、特定の結合相互作用の平衡会合定数）（これは、この会合反応についてのオンレート（ｏｎ－ｒａｔｅ）［Ｋｏｎ］のオフレート（ｏｆｆ ｒａｔｅ）［Ｋｏｆｆ］に対する比と等しい）での、標的分子への結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）または結合ドメインの会合または合体を指す。結合タンパク質または結合ドメインは、「高親和性」結合タンパク質または結合ドメインとして、あるいは「低親和性」結合タンパク質または結合ドメインとして分類され得る。「高親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、または少なくとも１０１３Ｍ－１のＫａを有する結合タンパク質または結合ドメインを指す。「低親和性」結合タンパク質または結合ドメインは、最大で１０７Ｍ－１、最大で１０６Ｍ－１、または最大で１０５Ｍ－１のＫａを有する結合タンパク質または結合ドメインを指す。あるいは、親和性は、Ｍの単位（例えば、１０－５Ｍ～１０－１３Ｍ）を有する、特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義され得る。用語「結合する」および「特異的に結合する」および類似の言及は、非特異的付着を包含しない。
結合タンパク質の結合は、適切なアッセイ、例えば、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム；速度論的排除アッセイ、例えば、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）；およびＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用する）；等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）など、例えば、４５０ｎｍでの光学密度による、またはフローサイトメトリーによるイメージングを用いた抗原結合ＥＬＩＳＡ（例えば、直接的または間接的）などを使用して、決定または評定され得る。
ある特定の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することができる。Ｂ型肝炎ウイルスのエンベロープは、一般に、３つの「ＨＢＶエンベロープタンパク質」（「ＨＢｓＡｇ」、「Ｂ型肝炎表面抗原」としても公知）：Ｓタンパク質（「小さい（ｓｍａｌｌ）」を示し、Ｓ－ＨＢｓＡｇとも呼ばれる）、Ｍタンパク質（「中程度（ｍｉｄｄｌｅ）」を示し、Ｍ－ＨＢｓＡｇとも呼ばれる）およびＬタンパク質（「大きい（ｌａｒｇｅ）」を示し、Ｌ－ＨＢｓＡｇとも呼ばれる）を含有する。Ｓ－ＨＢｓＡｇ、Ｍ－ＨＢｓＡｇおよびＬ－ＨＢｓＡｇは、Ｓタンパク質（Ｓ－ＨＢｓＡｇ）に対応し、ウイルスのアセンブリおよび感染力にとって重要な、同じＣ末端先端（「Ｓドメイン」とも呼ばれる、２２６アミノ酸）を共有する。Ｓ－ＨＢｓＡｇ、Ｍ－ＨＢｓＡｇおよびＬ－ＨＢｓＡｇは、小胞体（ＥＲ）中で合成され、アセンブルされ、ゴルジ体を介して粒子として分泌される。Ｓドメインは、４つの予測された膜貫通（ＴＭ）ドメインを含み、それにより、ＳドメインのＮ末端ならびにＣ末端は共に、ルーメンに曝露される。膜貫通ドメインＴＭ１およびＴＭ２は共に、ＥＲ膜中への共翻訳的なタンパク質組込みに必要と考えられ、膜貫通ドメインＴＭ３およびＴＭ４は、ＳドメインのＣ末端３分の１に位置する。ＨＢｓＡｇの「抗原性ループ領域」は、ＨＢｓＡｇのＳドメインの予測されたＴＭ３膜貫通ドメインとＴＭ４膜貫通ドメインとの間に位置し、それにより、抗原性ループ領域は、合計で２２６アミノ酸を含有するＳドメインのアミノ酸１０１～１７２を含む（Salisse J. and Sureau C., 2009, Journal of Virology 83: 9321-9328）。感染力の決定因子は、ＨＢＶエンベロープタンパク質の抗原性ループ領域中に存在する。特に、ＨＢｓＡｇの１１９と１２５との間の残基は、ＣＸＸＣモチーフを含有し、これは、ＨＢＶおよびＨＤＶの感染力にとって重要であると考えられている（Jaoude GA, Sureau C, Journal of Virology, 2005;79:10460-6）。
ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸配列中の位置が本明細書で言及される場合、かかる位置は、配列番号３（以下に示される）に記載されるアミノ酸配列に対して、またはその天然のもしくは人工的な配列バリアントに対してである。
Figure 2023531520000005
 （配列番号３；アミノ酸１０１～１７２は下線で示される）
例えば、表現「Ｓドメインのアミノ酸１０１～１７２」は、配列番号３に記載のポリペプチドの１０１～１７２位由来のアミノ酸残基を指す。しかし、当業者は、変異または変形形態（置換、欠失および／または付加、例えば、本明細書に記載される異なる遺伝子型のＨＢｓＡｇまたは異なるＨＢｓＡｇ変異体が挙げられるがこれらに限定されない）が、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸配列中に天然に存在し得ること、またはその生物学的特性に影響を与えることなくＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸配列中に人工的に導入され得ることを理解する。したがって、本明細書で使用される場合、用語「ＨＢｓＡｇのＳドメイン」は、例えば、配列番号３に記載のポリペプチドおよびその天然のまたは人工的な変異体を含む全てのかかるポリペプチドを包含する。さらに、ＨＢｓＡｇのＳドメインの配列断片が本明細書に記載されている場合（例えば、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１０１～１７２またはアミノ酸１２０～１３０）、これらは、配列番号３の対応する配列断片だけでなく、その天然のまたは人工的な変異体の対応する配列断片もまた含む。例えば、語句「ＨＢｓＡｇのＳドメインの１０１～１７２位由来のアミノ酸残基」は、配列番号３の１０１～１７２位由来のアミノ酸残基、およびその変異体（天然のまたは人工的な変異体）の対応する断片を包含する。本明細書で使用される場合、語句「対応する配列断片」および「対応する断片」は、配列が最適化されたアラインメントに供される場合、即ち、配列が最も高いパーセンテージの同一性を得るようにアラインされる場合に、配列の等しい位置に位置する断片を指す。
Ｍタンパク質（Ｍ－ＨＢｓＡｇ）は、「プレ－Ｓ２」と呼ばれる５５アミノ酸のＮ末端ドメイン分延長されたＳタンパク質に対応する。Ｌタンパク質（Ｌ－ＨＢｓＡｇ）は、「プレ－Ｓ１」と呼ばれる１０８アミノ酸のＮ末端ドメイン分延長されたＭタンパク質に対応する（遺伝子型Ｄ）。Ｌタンパク質のプレ－Ｓ１およびプレ－Ｓ２ドメインは、いずれも、ウイルス粒子の内面（ＥＲの細胞質側）に存在し得、ウイルスアセンブリにおいて重要な役割を果たすと考えられるか、またはウイルス粒子の外面（ＥＲのルーメン側）上に存在し得、標的細胞との相互作用のために利用可能であり、ウイルス感染力にとって重要であると考えられる。さらに、ＨＢＶ表面タンパク質（ＨＢｓＡｇ）は、ビリオンエンベロープ中に取り込まれるだけでなく、ＥＲ－ゴルジ中間区画膜から自発的に出芽して、分泌によって細胞から放出される空の「サブウイルス粒子」（ＳＶＰ）を形成することができる。
一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合し、Ｓ－ＨＢｓＡｇ、Ｍ－ＨＢｓＡｇおよびＬ－ＨＢｓＡｇの全てに結合することが可能である。
一部の実施形態では、結合タンパク質は、Ｂ型肝炎ウイルスおよびデルタ型肝炎ウイルスによる感染を中和する。一部の実施形態では、結合タンパク質は、Ｂ型肝炎ウイルスおよびデルタ型肝炎ウイルスのウイルス感染力を低減させる。
ウイルス感染力（または「中和」）を実験室において研究および定量するために、標準的な「中和アッセイ」が利用され得る。中和アッセイのために、動物ウイルスは、典型的には、細胞および／または細胞系において拡大増殖される。培養された細胞が、試験される抗体（または抗原結合断片または融合タンパク質）の存在下（または非存在下）で固定量のＨＢＶまたはＨＤＶと共にインキュベートされる、中和アッセイが使用され得る。かかるアッセイでは、細胞培養上清中に分泌されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）もしくはＢ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレベルが使用され得、および／またはＨＢｃＡｇ染色が、読み出しを提供するために評定され得る。ＨＤＶについて、例えば、デルタ抗原免疫蛍光染色が評定され得る。
ＨＢＶ中和アッセイの特定の実施形態では、培養された細胞、例えば、ＨｅｐａＲＧ細胞、例えば、分化したＨｅｐａＲＧ細胞が、試験される抗体の存在下または非存在下で、固定量のＨＢＶと共にインキュベートされる。かかる実施形態では、インキュベーションは、例えば、３７℃で１６時間にわたって実施され得る。このインキュベーションは、培地（例えば、４％ＰＥＧ８０００を補充した）中で実施され得る。インキュベーションの後、細胞は、洗浄され得、さらにカルチベートされ得る。ウイルス感染力を測定するために、例えば、感染の７日後から１１日後までに培養上清中に分泌されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）および／またはＢ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）のレベルは、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定され得る。さらに、ＨＢｃＡｇ染色は、免疫蛍光アッセイで評定され得る。ＨＤＶ中和アッセイの実施形態では、ＨＢＶと本質的に同じアッセイが使用され得、ＨＤＶキャリアー由来の血清が、分化したＨｅｐａＲｇ細胞に対するＨＤＶ感染接種材料として使用され得る（ＨＢＶの代わり）という差異を伴う。検出のために、デルタ抗原免疫蛍光染色が読み出しとして使用され得る。
本開示の結合タンパク質の実施形態は、高い中和有効性を有する。ある特定の実施形態では、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）およびデルタ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）の５０％中和のために要求される本明細書に記載される抗体の濃度は、例えば、約１０μｇ／ｍｌまたはそれ未満である。他の実施形態では、ＨＢＶおよびＨＤＶの５０％中和のために要求される結合タンパク質の濃度は、約５μｇ／ｍｌである。他の実施形態では、ＨＢＶおよびＨＤＶの５０％中和のために要求される本明細書に記載される結合タンパク質の濃度は、約１μｇ／ｍｌである。なお他の実施形態では、ＨＢＶおよびＨＤＶの５０％中和のために要求される結合タンパク質の濃度は、約７５０ｎｇ／ｍｌである。さらにさらなる実施形態では、ＨＢＶおよびＨＤＶの５０％中和のために要求される本明細書に記載される結合タンパク質の濃度は、５００ｎｇ／ｍｌまたはそれ未満である。かかる実施形態では、ＨＢＶおよびＨＤＶの５０％中和のために要求される本明細書に記載される結合タンパク質の濃度は、４５０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、４００ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、３５０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、３００ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、２５０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、２００ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、１７５ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、１５０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、１２５ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、１００ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、９０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、８０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、７０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、６０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、５０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、または２０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１５ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、より好ましくは１０ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満、例えば、７ｎｇ／ｍｌもしくはそれ未満から選択され得る。
ＨＢＶおよびＨＤＶの両方を中和することができる本開示による結合タンパク質は、Ｂ型肝炎およびＤ型肝炎の予防および処置において有用である。ＨＤＶによる感染は、典型的には、ＨＢＶによる感染と同時であるかまたはこれに引き続いて生じ（例えば、ＨＢＶの非存在下でのＨＤＶによる接種は、Ｄ型肝炎を引き起こさないが、それは、ＨＤＶが、それ自身の複製のためにＨＢＶのサポートを要求するからである）、Ｄ型肝炎は、典型的には、慢性ＨＢＶキャリアーにおいて観察される。
開示される結合タンパク質の実施形態は、ＨＢｓＡｇおよびＨＢＶのクリアランスを促進する。特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢＶとＢ型肝炎ウイルスのサブウイルス粒子（ＳＶＰ）との両方のクリアランスを促進する。ＨＢｓＡｇまたはサブウイルス粒子のクリアランスは、例えばＢ型肝炎患者由来の血液試料中の例えばＨＢｓＡｇのレベルを測定することによって評定され得る。同様に、ＨＢＶのクリアランスは、例えばＢ型肝炎患者由来の血液試料中の例えばＨＢＶのレベルを測定することによって評定され得る。
ＨＢＶに感染した患者の血清中には、感染性粒子（ＨＢＶ）に加えて、比較的小さい球体および変動する長さのフィラメントの形態で、ＨＢＶエンベロープタンパク質（ＨＢｓＡｇ）のみから構成される過剰量（典型的には１，０００倍～１００，０００倍）の空のサブウイルス粒子（ＳＶＰ）が典型的には存在する。サブウイルス粒子は、ＨＢＶの細胞内ウイルス複製および遺伝子発現を強く増強することが示されている（Bruns M. et al. 1998 J Virol 72(2): 1462-1468）。これは、ＨＢＶを含有する血清の感染力に関しても関連するが、それは、感染力が、ウイルスの数だけでなくＳＶＰの数にも依存するからである（Bruns M. et al. 1998 J Virol 72(2): 1462-1468）。さらに、過剰量のサブウイルス粒子は、中和抗体を吸収することによってデコイとして機能することができ、したがって、感染のクリアランスを遅延させることができる。Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）喪失の達成は、一部の場合には、処置の理想的なエンドポイントであり、慢性Ｂ型肝炎（ＣＨＢ）の治癒と最も近い転帰であるとみなされる。
本開示の結合タンパク質の実施形態は、ＨｂｓＡｇのクリアランスを促進し得る。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ｂ型肝炎ウイルスのサブウイルス粒子のクリアランスを促進し得る。一部の実施形態では、結合タンパク質は、慢性Ｂ型肝炎を処置するために使用され得る。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、本開示の結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪ、またはこれらの任意の組合せから選択される遺伝子型のＨＢｓＡｇに結合することが可能である。
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪのうちのいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つまたは１０個に結合することが可能である。異なるＨＢｓＡｇ遺伝子型の例としては、次が挙げられる：ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｊ０２２０３（ＨＢＶ－Ｄ、ａｙｗ３）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＦＪ８９９７９２．１（ＨＢＶ－Ｄ、ａｄｗ２）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＭ２８２９８６（ＨＢＶ－Ａ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｄ２３６７８（ＨＢＶ－Ｂ１ Ｊａｐａｎ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＢ１１７７５８（ＨＢＶ－Ｃ１ Ｃａｍｂｏｄｉａ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＢ２０５１９２（ＨＢＶ－Ｅ Ｇｈａｎａ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ６９７９８（ＨＢＶ－Ｆ４ Ｂｒａｚｉｌ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ１６０５０１（ＨＢＶ－Ｇ ＵＳＡ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ０９０４５４（ＨＢＶ－Ｈ Ｎｉｃａｒａｇｕａ）；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ２４１４０９（ＨＢＶ－Ｉ Ｖｉｅｔｎａｍ）；およびＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＢ４８６０１２（ＨＢＶ－Ｊ Ｂｏｒｎｅｏ）。異なる遺伝子型のＨＢｓＡｇのＳドメインの抗原性ループ領域の例示的なアミノ酸配列は、本明細書に記載されている（例えば、配列番号５～１５）。
一部の実施形態では、結合タンパク質は、１０個のＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪのうちの１つまたは複数、一部の場合には少なくとも６つに結合することが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、１０個のＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪのうちの少なくとも８つに結合することが可能である。一部の実施形態では、結合タンパク質は、１０個のＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪのうちの１０個全てに結合することが可能である。ＨＢＶは、ゲノム配列に従って、いくつかの遺伝子型へと区別される。今日までに、８つの周知の遺伝子型（Ａ～Ｈ）のＨＢＶゲノムが定義されている。さらに、２つの他の遺伝子型ＩおよびＪもまた同定されている（Sunbul M., 2014, World J Gastroenterol 20(18): 5427-5434）。遺伝子型は、疾患の進行に影響を与えることが公知であり、抗ウイルス処置に対する応答における遺伝子型間での差異が決定されている。
一部の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、抗原性ループ領域中に変異を有するＨＢｓＡｇ変異体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個または１８個に結合することが可能であり、かかる変異体は、ＨＢｓＡｇ Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ Ｇ１４５ＲおよびＨＢｓＡｇ Ｎ１４６Ａのうちの１つまたは複数から選択される。これらの変異体は、ＨＢｓＡｇ遺伝子型ＤのＳドメイン、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＦＪ８９９７９２（配列番号４）に基づく天然に存在する変異体である。本明細書で注目される変異体の各々中の変異したアミノ酸残基は、名称中に示される。
配列番号４：
Figure 2023531520000006
 （抗原性ループ領域、即ち、アミノ酸１０１～１７２は下線で示される）。
異なる変異体のＨＢｓＡｇのＳドメインの抗原性ループ領域のアミノ酸配列は、配列番号１６～３３に示される。
ある特定の実施形態では、本明細書で開示される結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇ Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ Ｇ１４５ＲおよびＨＢｓＡｇ Ｎ１４６Ａから選択される１つまたは複数の、一部の場合には少なくとも１２個の感染性ＨＢｓＡｇ変異体に結合することが可能である。一部のかかる実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇ Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ Ｇ１４５ＲおよびＨＢｓＡｇ Ｎ１４６Ａから選択される少なくとも１５個の感染性ＨＢｓＡｇ変異体に結合することが可能である。一部の実施形態では、結合タンパク質は、次の感染性ＨＢｓＡｇ変異体：ＨＢｓＡｇ Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ；ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ；ＨＢｓＡｇ Ｐ１２０Ｔ／Ｓ１４３Ｌ；ＨＢｓＡｇ Ｃ１２１Ｓ；ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｄ；ＨＢｓＡｇ Ｒ１２２Ｉ；ＨＢｓＡｇ Ｔ１２３Ｎ；ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｈ；ＨＢｓＡｇ Ｑ１２９Ｌ；ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｈ；ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｌ；ＨＢｓＡｇ Ｍ１３３Ｔ；ＨＢｓＡｇ Ｋ１４１Ｅ；ＨＢｓＡｇ Ｐ１４２Ｓ；ＨＢｓＡｇ Ｓ１４３Ｋ；ＨＢｓＡｇ Ｄ１４４Ａ；ＨＢｓＡｇ Ｇ１４５Ｒ；およびＨＢｓＡｇ Ｎ１４６Ａの各々に結合することが可能である。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片を含む）は、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢＶ ＤＮＡの血清濃度を低減させることが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｓＡｇの血清濃度を低減させることが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｅＡｇの血清濃度を低減させることが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｃｒＡｇの血清濃度を低減させることが可能である。一部の実施形態では、結合タンパク質は、結合タンパク質の単一の投与後、約１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、またはそれより長い期間にわたって、哺乳動物においてＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、および／またはＨｂｃｒＡｇの血清濃度を低減させることが可能である。
用語「エピトープ」または「抗原性エピトープ」は、同族結合分子、例えば、免疫グロブリン、キメラ抗原受容体、または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質によって認識され、これらによって特異的に結合される、任意の分子、構造、アミノ酸配列、またはタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、一般に、分子、例えば、アミノ酸または糖側鎖の化学的に活性な表面グルーピングを含有し、特定の三次元構造特徴、ならびに特定の電荷特徴を有し得る。
一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのアミノ酸を含むエピトープに結合することが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１１５～１３３、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３、またはＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３０から選択される少なくとも２つのアミノ酸に結合することが可能である。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１１５～１３３、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３、またはＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３０から選択される少なくとも３つのアミノ酸に結合することが可能である。一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１１５～１３３、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３、またはＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３０から選択される少なくとも４つのアミノ酸に結合することが可能である。本明細書で使用される場合、アミノ酸の位置（例えば、１１５～１３３、１２０～１３３、１２０～１３０）は、上記のようにＨＢｓＡｇのＳドメインを指し、これは、３つ全てのＨＢＶエンベロープタンパク質Ｓ－ＨＢｓＡｇ、Ｍ－ＨＢｓＡｇ、およびＬ－ＨＢｓＡｇ中に存在し、それにより、Ｓ－ＨＢｓＡｇが、典型的には、ＨＢｓＡｇのＳドメインに対応する。
エピトープに関して、用語「～によって形成される」は、本明細書で使用される場合、結合タンパク質が結合するエピトープが、直鎖状（連続）または立体構造（不連続）であり得ることを意味する。直鎖状または連続的エピトープは、アミノ酸のその線状配列、または一次構造に従う、抗体によって認識されるエピトープである。立体構造エピトープは、三次元形状およびタンパク質構造に従って認識され得る。したがって、エピトープが直鎖状エピトープであり、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸位置１１５～１３３からまたはアミノ酸位置１２０～１３３から選択される位置に位置する１つより多くのアミノ酸を含む場合、そのエピトープによって含まれるアミノ酸は、一次構造の隣接する位置に位置し得る（例えば、アミノ酸配列中の連続したアミノ酸である）。立体構造エピトープ（３Ｄ構造）の場合、アミノ酸配列は、典型的には、３Ｄ構造をエピトープとして形成し、したがって、エピトープを形成するアミノ酸は、一次構造の隣接する位置に位置してもしなくてもよい（即ち、アミノ酸配列中の連続したアミノ酸であってもなくてもよい）。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質が結合するエピトープは、立体構造エピトープである。一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域の少なくとも２つのアミノ酸を含むエピトープに結合し、少なくとも２つのアミノ酸は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３からまたはアミノ酸１２０～１３０から選択され、少なくとも２つのアミノ酸は、（一次構造の）隣接する位置に位置しない。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域の少なくとも３つのアミノ酸を含むエピトープに結合し、少なくとも３つのアミノ酸は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３からまたはアミノ酸１２０～１３０から選択され、３つのアミノ酸のうちの少なくとも２つは、（一次構造の）隣接する位置に位置しない。一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域の少なくとも４つのアミノ酸を含むエピトープに結合し、少なくとも４つのアミノ酸は、ＨＢｓＡｇのＳドメインのアミノ酸１２０～１３３からまたはアミノ酸１２０～１３０から選択され、４つのアミノ酸のうちの少なくとも２つは、（一次構造の）隣接する位置に位置しない。
一次構造の隣接する位置に位置しない、本明細書で開示される抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質が結合するアミノ酸（即ち、エピトープを形成するアミノ酸）は、一部の場合には、抗体も抗原結合断片も融合タンパク質も結合しない１つまたは複数のアミノ酸によって相隔たっている。一部の実施形態では、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアミノ酸が、エピトープによって含まれる、隣接する位置に位置しない２つのアミノ酸間に位置し得る。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇのＳドメインの少なくともアミノ酸Ｐ１２０、Ｃ１２１、Ｒ１２２およびＣ１２４を含むエピトープに結合する。他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１１５：
ＰＣＲＸＣ
に記載のアミノ酸配列を含むエピトープに結合し、式中、Ｘは、任意のアミノ酸であるかもしくはアミノ酸でない；Ｘは、任意のアミノ酸である；Ｘは、Ｔ、Ｙ、Ｒ、Ｓ、もしくはＦである；Ｘは、Ｔ、ＹもしくはＲである；またはＸは、ＴもしくはＲである。
他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１０７：
ＴＧＰＣＲＴＣ
に記載のアミノ酸配列を含むエピトープに結合するか、または配列番号１０７と少なくとも８０％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列に結合する。
他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１１２：
ＳＴＴＳＴＧＰＣＲＴＣ
に記載のアミノ酸配列を含むエピトープに結合するか、または配列番号１１２と少なくとも８０％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列に結合する。
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＨＢｓＡｇのＳドメインの少なくともアミノ酸１４５～１５１：
ＧＮＣＴＣＩＰ
（配列番号１０８）を含むアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。
なお他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１０７に記載のアミノ酸配列および配列番号１０８に記載のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。
他の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１１２に記載のアミノ酸配列および／または配列番号１１４に記載のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する。
上記のように、本開示の結合タンパク質が結合するエピトープは、直鎖状（連続）または立体構造（不連続）であり得る。一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、立体構造エピトープに結合し、ある特定のかかる実施形態では、立体構造エピトープは、非還元条件下でのみ存在する。
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、直鎖状エピトープに結合する。ある特定のかかる実施形態では、直鎖状エピトープは、非還元条件および還元条件の両方の下で存在する。
特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、配列番号１：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＴＣＸ４Ｘ５Ｘ６ＡＸ７Ｇ
に記載のアミノ酸配列によって形成されるＨＢｓＡｇの抗原性ループ中のエピトープに結合し、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、任意のアミノ酸であり得る（配列番号１）。
一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、配列番号３のアミノ酸１２０～１３０と比較して保存的に置換されたアミノ酸である。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７は、配列番号５～３３のうちのいずれかのアミノ酸２０～３０と比較して保存的に置換されたアミノ酸である。
具体的な実施形態では、配列番号１のＸ１は、小さいアミノ酸である。「小さい」アミノ酸は、本明細書で使用される場合、アラニン、アスパラギン酸、アスパラギン、システイン、グリシン、プロリン、セリン、スレオニンおよびバリンからなる群から選択される任意のアミノ酸を指す。ある特定のかかる実施形態では、Ｘ１は、プロリン、セリンまたはスレオニンである。
ある特定の実施形態では、配列番号１のＸ２は、小さいアミノ酸である。ある特定の実施形態では、Ｘ２は、システインまたはスレオニンから選択され得る。
一部の実施形態では、配列番号１のＸ３は、荷電アミノ酸または脂肪族アミノ酸である。「荷電」アミノ酸は、本明細書で使用される場合、アルギニン、リシン、アスパラギン酸、グルタミン酸およびヒスチジンなる群から選択される任意のアミノ酸を指す。「脂肪族」アミノ酸は、本明細書で使用される場合、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、およびバリンからなる群から選択される任意のアミノ酸を指す。ある特定の実施形態では、Ｘ３は、アルギニン、リシン、アスパラギン酸またはイソロイシンから選択される。
一部の実施形態では、配列番号１のＸ４は、小さいアミノ酸および／または疎水性アミノ酸である。「疎水性」アミノ酸は、本明細書で使用される場合、アラニン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、トリプトファン、チロシン、メチオニン、プロリンおよびグリシンからなる群から選択される任意のアミノ酸を指す。ある特定の実施形態では、Ｘ４は、メチオニンまたはスレオニンから選択される。
一部の実施形態では、配列番号１のＸ５は、小さいアミノ酸および／または疎水性アミノ酸である。ある特定の実施形態では、Ｘ５は、スレオニン、アラニンまたはイソロイシンから選択される。
一部の実施形態では、配列番号１のＸ６は、小さいアミノ酸および／または疎水性アミノ酸である。ある特定の実施形態では、Ｘ６は、スレオニン、プロリンまたはロイシンから選択される。
一部の実施形態では、配列番号１のＸ７は、極性アミノ酸または脂肪族アミノ酸である。「極性」アミノ酸は、本明細書で使用される場合、アスパラギン酸、アスパラギン、アルギニン、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、グルタミン、トリプトファン、チロシン、セリン、およびスレオニンからなる群から選択される任意のアミノ酸を指す。ある特定のかかる実施形態では、Ｘ７は、グルタミン、ヒスチジンまたはロイシンである。
一部の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、配列番号２：
Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＴＣＸ４Ｘ５Ｘ６ＡＸ７Ｇ
に記載のアミノ酸配列によって形成されるＨＢｓＡｇの抗原性ループ中のエピトープに結合し、式中、
Ｘ１は、Ｐ、ＴまたはＳであり、
Ｘ２は、ＣまたはＳであり、
Ｘ３は、Ｒ、Ｋ、ＤまたはＩであり、
Ｘ４は、ＭまたはＴであり、
Ｘ５は、Ｔ、ＡまたはＩであり、
Ｘ６は、Ｔ、ＰまたはＬであり、
Ｘ７は、Ｑ、ＨまたはＬである
（配列番号２）。
配列番号１または２に記載のアミノ酸配列によって形成されるエピトープに関して、用語「～によって形成される」は、本明細書で使用される場合、開示される結合タンパク質が、配列番号１または２の各々および全てのアミノ酸に必然的に結合することを含意する意図でないことが注目される。特に、結合タンパク質は、配列番号１または２のアミノ酸の一部にのみ結合し得、それにより、他のアミノ酸残基は、「スペーサー」として作用し得る。
特定の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、表４中に以下に示される配列番号５～３３から選択されるアミノ酸配列の１つもしくは複数の、２つもしくはそれより多くの、３つもしくはそれより多くの、または４つもしくはそれより多くのアミノ酸によって形成されるＨＢｓＡｇの抗原性ループ中のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、表４中に以下に示される配列番号５～３３のうちのいずれか１つもしくは複数に記載のアミノ酸配列を有するＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に、またはその配列バリアントに結合する。ある特定の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、表４中に以下に示される配列番号５～３３のうちのいずれかに記載のアミノ酸配列を有するＨＢｓＡｇの抗原性ループバリアントの全てに結合する。
Figure 2023531520000007
Figure 2023531520000008
Figure 2023531520000009
Figure 2023531520000010
Ｆｃ部分
一部の実施形態では、本開示の結合タンパク質（例えば、抗体またはその抗原結合断片）は、Ｆｃ部分（Ｆｃポリペプチドとも呼ばれる）を含む。ある特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒト起源に、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、および／もしくはＩｇＧ４に、または別のＩｇクラスもしくはアイソタイプに由来し得る。具体的な実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃ部分を含み得る。特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ１ｍ１７，１（ＩｇＨＧ１＊０１）アロタイプを含むか、またはこれに由来する（例えば、ＩｇＧ１ｍ１７，１（ＩｇＨＧ１＊０１）アロタイプと比較して１つまたは複数の変異を含む）。
本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ部分」は、パパイン切断部位（例えば、重鎖定常領域の最初の残基を１１４として、ネイティブＩｇＧにおいてＥＵ番号付けによって残基２１６）の直ぐ上流のヒンジ領域で始まり、免疫グロブリン重鎖のＣ末端において終わる免疫グロブリン重鎖の部分を含むか、これからなるか、本質的にこれからなるか、またはこれに由来する配列を指す。したがって、Ｆｃ部分は、完全なＦｃ部分またはその部分（例えば、ドメイン）であり得る。ある特定の実施形態では、完全なＦｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン（例えば、ＥＵアミノ酸位置２１６～４４６）を含む。本明細書で注目されるように、さらなるリシン残基（Ｋ）が、時折、Ｆｃ部分の最遠のＣ末端に存在するが、これは、成熟抗体からは切断されている場合が多い。Ｆｃ部分内のアミノ酸位置は、ＫａｂａｔのＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされている。例えば、Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest", U.S. Dept. Health and Human Services, 1983 and 1987を参照されたい。Ｆｃ部分のアミノ酸位置は、ＩＭＧＴ番号付けシステム（Ｃ－ドメインについての独特の番号付けおよびエクソン番号付けを含む）およびＫａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けすることもできる。
一部の実施形態では、Ｆｃ部分は、次のうちの少なくとも１つを含む：ヒンジ（例えば、上部、中央部、および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそのバリアント、部分、もしくは断片。一部の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメインを少なくとも含む。さらなる実施形態では、Ｆｃ部分は、完全なＦｃ部分である。ヒトＩｇＧ１アイソタイプの例示的なＦｃ部分のアミノ酸配列は、配列番号７３に提供されている。Ｆｃ部分はまた、天然に存在するＦｃ部分と比較して、１つまたは複数のアミノ酸挿入、欠失、または置換を含み得る。例えば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン、もしくはＣＨ３ドメイン、またはその部分のうちの少なくとも１つが欠失され得る。例えば、Ｆｃ部分は、（ｉ）ＣＨ２ドメイン（もしくはその部分）に融合されたヒンジドメイン（もしくはその部分）、（ｉｉ）ＣＨ３ドメイン（もしくはその部分）に融合されたヒンジドメイン（もしくはその部分）、（ｉｉｉ）ＣＨ３ドメイン（もしくはその部分）に融合されたＣＨ２ドメイン（もしくはその部分）、（ｉｖ）ヒンジドメイン（もしくはその部分）、（ｖ）ＣＨ２ドメイン（もしくはその部分）、または（ｖｉ）ＣＨ３ドメインもしくはその部分を含み得るか、またはこれらからなり得る。
本開示のＦｃ部分は、天然に存在するＦｃ部分によって付与される少なくとも１つの望ましい機能を保持もしくは増強しつつ、および／または天然に存在するＦｃ部分の所望されない機能を低減させつつ、天然に存在する免疫グロブリン分子の完全なＦｃ部分からアミノ酸配列が変動するように、改変され得る。かかる機能としては、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体半減期モジュレーション（例えば、ＦｃＲｎへの結合による）、ＡＤＣＣ機能、プロテインＡ結合、プロテインＧ結合、および補体結合が挙げられる。かかる機能に関与する天然に存在するＦｃ部分の部分は、当技術分野で記載されている。
例えば、補体カスケードを活性化するために、Ｃ１ｑタンパク質複合体は、免疫グロブリン分子（複数可）が抗原標的に結合する場合、少なくとも２分子のＩｇＧ１または１分子のＩｇＭに結合することができる（Ｗａｒｄ， Ｅ． Ｓ．， ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ， Ｖ．， Ｔｈｅｒ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２ （１９９５） ７７－９４）。Ｂｕｒｔｏｎ， Ｄ． Ｒ．は、アミノ酸残基３１８～３３７を含む重鎖領域が補体固定に関与することを記載した（Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２２ （１９８５） １６１－２０６）。Ｄｕｎｃａｎ， Ａ． Ｒ．， ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ， Ｇ． （Ｎａｔｕｒｅ ３３２ （１９８８） ７３８－７４０）は、部位特異的変異誘発を使用して、Ｇｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、およびＬｙｓ３２２がＣ１ｑに対する結合部位を形成することを報告した。Ｃ１ｑの結合におけるＧｌｕ３１８、Ｌｙｓ３２０、およびＬｙｓ３２２残基の役割は、これら残基を含有する短い合成ペプチドの補体媒介性溶解を阻害する能力によって確認された。
例えば、ＦｃＲ結合は、（抗体の）Ｆｃ部分と、造血細胞を含む細胞上の特殊な細胞表面受容体であるＦｃ受容体（ＦｃＲ）との相互作用によって媒介され得る。Ｆｃ受容体は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、免疫複合体のファゴサイトーシスによる抗体コーティング病原体の除去、および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ；Ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｊ． Ｇ．， ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｃ． Ｌ．， Ｊ． Ｌｅｕｋｏｃ． Ｂｉｏｌ． ４９ （１９９１） ５１１－５２４）を介した、対応する抗体でコーティングされた赤血球およびさまざまな他の細胞標的（例えば、腫瘍細胞）の溶解の両方を媒介することを示した。ＦｃＲは、免疫グロブリンクラスに対するそれらの特異性によって定義され、ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体はＦｃγＲと称され、ＩｇＥに対するＦｃ受容体はＦｃεＲと称され、ＩｇＡに対するＦｃ受容体はＦｃαＲと称されるなどであり、新生児のＦｃ受容体はＦｃＲｎと称される。Ｆｃ受容体結合は、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ， Ｊ． Ｖ．， ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ｊ． Ｐ．， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９ （１９９１） ４５７－４９２；Ｃａｐｅｌ， Ｐ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４ （１９９４） ２５－３４；ｄｅ Ｈａａｓ， Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｌａｂ． Ｃｌｉｎ． Ｍｅｄ． １２６ （１９９５） ３３０－３４１；およびＧｅｓｓｎｅｒ， Ｊ． Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ７６ （１９９８） ２３１－２４８に記載されている。
ネイティブＩｇＧ抗体のＦｃドメインによる受容体（ＦｃγＲ）の架橋は、ファゴサイトーシス、抗体依存性細胞性細胞傷害、および炎症メディエーターの放出、ならびに免疫複合体のクリアランス、および抗体産生の調節を含む多種多様なエフェクター機能を引き起こす。受容体（例えば、ＦｃγＲ）の架橋を提供するＦｃ部分が本明細書で企図される。ヒトでは、これまでに、ＦｃγＲの３つのクラスが特徴付けられており、以下である：（ｉ）ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、これは、単量体ＩｇＧに高い親和性で結合し、マクロファージ、単球、好中球、および好酸球上で発現される；（ｉｉ）ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、これは、中から低い親和性で複合体化ＩｇＧに結合し、特に、白血球上で広く発現され、抗体媒介性免疫の中心的なプレーヤーであると考えられ、かつ、これは、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＣに分けることができ、これらは、免疫系において異なる機能を行うが、ＩｇＧ－Ｆｃに対して類似の低い親和性で結合し、これらの受容体の細胞外ドメインは高度に相同（ｈｏｍｏｌｏｇｕｏｕｓ）である；ならびに（ｉｉｉ）ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、これは、中から低い親和性でＩｇＧに結合し、２つの形態で見出されている：ＦｃγＲＩＩＩＡ、これは、ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、ならびに一部の単球およびＴ細胞において見出されており、ＡＤＣＣを媒介すると考えられる；ならびにＦｃγＲＩＩＩＢ、これは、好中球において高度に発現される。
ＦｃγＲＩＩＡは、殺傷に関与する多くの細胞（例えば、マクロファージ、単球、好中球）において見出され、殺傷プロセスを活性化すると考えられる。ＦｃγＲＩＩＢは、阻害プロセスにおいて役割を果たすと考えられており、Ｂ細胞、マクロファージ、ならびに、肥満細胞および好酸球において見出される。重要なことには、全ＦｃγＲＩＩＢの７５％が肝臓中で見出されることが示されている（Ｇａｎｅｓａｎ， Ｌ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．， ２０１２： ”ＦｃγＲＩＩｂ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｃｌｅａｒｓ ｓｍａｌｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９： ４９８１－４９８８）。ＦｃγＲＩＩＢは、ＬＳＥＣと呼ばれる肝類洞内皮、および肝臓におけるクッパー細胞において多量に発現され、ＬＳＥＣは、小さな免疫複合体のクリアランスの主要部位である（Ｇａｎｅｓａｎ， Ｌ． Ｐ． ｅｔ ａｌ．， ２０１２： ＦｃγＲＩＩｂ ｏｎ ｌｉｖｅｒ ｓｉｎｕｓｏｉｄａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｃｌｅａｒｓ ｓｍａｌｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９： ４９８１－４９８８）。
一部の実施形態では、本明細書に開示される抗体およびその抗原結合断片は、ＦｃγＲＩＩｂへの結合のためのＦｃ部分、特に、例えばＩｇＧ型抗体などのＦｃ領域を含む。また、Ｃｈｕ， Ｓ． Ｙ． ｅｔ ａｌ．， ２００８： Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１９ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ ｗｉｔｈ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５， ３９２６－３９３３に記載されるように、変異Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆを導入することによって、Ｆｃ部分を操作してＦｃγＲＩＩＢ結合を増強することが可能である。それによって、免疫複合体のクリアランスを増強することができる（Ｃｈｕ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， ２０１４： Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ＩｇＥ Ｉｎ Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ Ｉｓ Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｂｙ Ｘｍａｂ７１９５， Ａｎ Ｆｃ－Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｗｉｔｈ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｆｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＦｃγＲＩＩｂ． Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）。一部の実施形態では、本開示の抗体またはその抗原結合断片は、特に、Ｃｈｕ， Ｓ． Ｙ． ｅｔ ａｌ．， ２００８： Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｈｕｍａｎ Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｃｏｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ１９ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩｂ ｗｉｔｈ Ｆｃ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５， ３９２６－３９３３に記載されるように、変異Ｓ２６７ＥおよびＬ３２８Ｆを有する操作されたＦｃ部分を含む。
Ｂ細胞において、ＦｃγＲＩＩＢは、さらなる免疫グロブリン産生、および例えば、ＩｇＥクラスへのアイソタイプスイッチングを抑制するように機能するようである。マクロファージにおいて、ＦｃγＲＩＩＢは、ＦｃγＲＩＩＡを通して媒介されるファゴサイトーシスを阻害すると考えられる。好酸球および肥満細胞において、Ｂ形態は、ＩｇＥのその別々の受容体への結合を通して、これら細胞の活性化を抑制するのに役立ち得る。
ＦｃγＲＩ結合に関して、ネイティブＩｇＧのＥ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、およびＰ３２９の少なくとも１つの改変は、ＦｃγＲＩへの結合を低減し得る。２３３～２３６位のＩｇＧ２残基が、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４の対応する位置へと置換されることで、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４のＦｃγＲＩへの結合が１０３倍低減し、抗体で感作された赤血球に応答するヒト単球応答が排除される（Ａｒｍｏｕｒ， Ｋ． Ｌ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２９ （１９９９）
２６１３－２６２４）。
ＦｃγＲＩＩ結合に関して、例えば、Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｒ２９２、およびＫ４１４の少なくとも１つのＩｇＧ変異について、ＦｃγＲＩＩＡに対する結合の低減が見出される。
ヒトＦｃγＲＩＩＡの２つの対立形質は、高親和性でＩｇＧ１ Ｆｃに結合する「Ｈ１３１」バリアント、および低親和性でＩｇＧ１ Ｆｃに結合する「Ｒ１３１」バリアントである。例えば、Ｂｒｕｈｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１３：３７１６－３７２５ （２００９）を参照されたい。
ＦｃγＲＩＩＩ結合に関して、例えば、Ｅ２３３～Ｇ２３６、Ｐ２３８、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ａ３２７、Ｐ３２９、Ｄ２７０、Ｑ２９５、Ａ３２７、Ｓ２３９、Ｅ２６９、Ｅ２９３、Ｙ２９６、Ｖ３０３、Ａ３２７、Ｋ３３８、およびＤ３７６の少なくとも１つの変異について、ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合の低減が見出される。Ｆｃ受容体についてのヒトＩｇＧ１上の結合部位のマッピング、上記で言及された変異部位、ならびにＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＡへの結合を測定するための方法は、Ｓｈｉｅｌｄｓ， Ｒ． Ｌ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７６ （２００１） ６５９１－６６０４に記載されている。
ヒトＦｃγＲＩＩＩＡの２つの対立形質は、低親和性でＩｇＧ１ Ｆｃに結合する「Ｆ１５８」バリアント、および高親和性でＩｇＧ１ Ｆｃに結合する「Ｖ１５８」バリアントである。例えば、Ｂｒｕｈｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ １１３：３７１６－３７２５ （２００９）を参照されたい。
ＦｃγＲＩＩへの結合に関して、ネイティブＩｇＧ Ｆｃの２つ領域、すなわち、（ｉ）ＩｇＧ Ｆｃの下部ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４～２３７、ＥＵ番号付け）、ならびに（ｉｉ）ＩｇＧ ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接領域、特に、例えば、Ｐ３３１の領域における、下部ヒンジ領域に隣接する上部ＣＨ２ドメインにおけるループおよび鎖が、ＦｃγＲＩＩおよびＩｇＧの間の相互作用に関与するようである（Ｗｉｎｅｓ， Ｂ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０００； １６４： ５３１３ － ５３１８）。また、ＦｃγＲＩは、ＩｇＧ Ｆｃ上の同じ部位に結合するようであるが、ＦｃＲｎおよびプロテインＡは、ＣＨ２－ＣＨ３境界面にあるようであるＩｇＧ Ｆｃ上の異なる位置に結合する（Ｗｉｎｅｓ， Ｂ．Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０００； １６４： ５３１３ － ５３１８）。
本開示のＦｃ部分の、（すなわち、１つまたは複数の）Ｆｃγ受容体への結合親和性を増加させる（例えば、参照Ｆｃ部分または変異（複数可）を含まないそれを含有する抗体と比較して）変異も企図される。例えば、Ｄｅｌｉｌｌｏ ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃｈ， Ｃｅｌｌ １６１（５）：１０３５－１０４５ （２０１５）およびＡｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｓｔｒｕｃ． Ｂｉｏｌ． １９４（１）：７８ （２０１６）を参照されたく、このＦｃ変異および技法は、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、（ＥＵ番号付け）Ｇ２３６Ａ；Ｓ２３９Ｄ；Ａ３３０Ｌ；およびＩ３３２Ｅ；またはこれらのうちのいずれか２つもしくはそれより多くを含む組合せ；例えば、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ；Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（本明細書で「ＧＡＡＬＩＥ」とも呼ばれる）；もしくはＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅから選択される変異を含む（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ１由来の）Ｆｃ部分を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ部分は、Ｓ２３９Ｄを含まない。一部の実施形態では、Ｆｃ部分は、２３９位においてネイティブセリンを含む。
ある特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ＦｃＲｎ結合への結合に関与するＦｃ部分の少なくとも一部を含み得るか、またはこれからなり得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ＦｃＲｎ（例えば、約６．０のｐＨで）に対する結合親和性を改善する（例えば、結合を増強する）１つまたは複数のアミノ酸改変を含み、一部の実施形態では、それによって、Ｆｃ部分を含む分子のｉｎ ｖｉｖｏ半減期が延長される（例えば、参照Ｆｃポリペプチドまたはその断片、あるいは改変（複数可）を含まないこと以外は同じ抗体と比較して）。ある特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ Ｆｃを含むか、またはこれに由来し、半減期を延長する変異は、Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓ；Ｎ４３４Ｈ；Ｎ４３４Ａ；Ｎ４３４Ｓ；Ｍ２５２Ｙ；Ｓ２５４Ｔ；Ｔ２５６Ｅ；Ｔ２５０Ｑ；Ｐ２５７Ｉ；Ｑ３１１Ｉ；Ｄ３７６Ｖ；Ｔ３０７Ａ；Ｅ３８０Ａ（ＥＵ番号付け）のいずれか１つまたは複数を含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（本明細書では「ＭＬＮＳ」とも称される）を含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅを含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌを含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１Ｉを含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈを含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈを含む。ある特定の実施形態では、半減期を延長する変異は、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａを含む。
一部の実施形態では、結合タンパク質は、置換変異Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含むＦｃ部分を含む。一部の実施形態では、結合タンパク質は、置換変異Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含むＦｃ部分を含む。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、Ｇ２３６Ａ変異、Ａ３３０Ｌ変異、およびＩ３３２Ｅ変異（ＧＡＡＬＩＥ）を含むが、Ｓ２３９Ｄ変異を含まない（例えば、２３９位においてネイティブＳを含む）（例えば、ＩｇＧ）Ｆｃ部分を含む。特定の実施形態では、結合タンパク質は、置換変異：Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳおよびＧ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含み、必要に応じて、Ｓ２３９Ｄを含まない（例えば、３２９位においてネイティブＳを含み得る）Ｆｃ部分を含む。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、置換変異：Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４ＳおよびＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含むＦｃ部分を含む。ある特定のさらなる実施形態では、結合タンパク質は、Ｆｃ部分中に置換変異を含み、これらの置換変異は、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、もしくはＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ／Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓからなるか、または本質的にこれらからなる。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、本開示の結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチド（即ち、ＧＡＡＬＩＥ変異を含まないＦｃ部分を含む、結合タンパク質であり得るポリペプチド）と比較して、ヒトＦｃγＲＩＩａおよび／またはヒトＦｃγＲＩＩＩａへの増強された結合を有する。
ある特定の実施形態では、参照ポリペプチドは、野生型Ｆｃ部分（例えば、同じアイソタイプの）であるか、または１つもしくは複数の置換変異（または挿入または欠失）を含むＦｃ部分であるＦｃ部分を含み、ただし、この置換変異は、ＧＡＡＬＩＥではないか、またはこれを含まない。ある特定の実施形態では、参照ポリペプチドは、ヒトＦｃγＲＩＩａへのおよび／またはヒトＦｃγＲＩＩＩａへの結合に影響を与えることが公知であるか、またはそのように考えられている置換変異を含まない。
ポリペプチド間の結合、例えば、Ｆｃ部分（またはこれを含む結合タンパク質）とヒトＦｃγ受容体、例えば、ヒトＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、もしくはヒトＦｃ ＦｃγＲＩＩＢ、または補体タンパク質、例えば、Ｃ１ｑとの間の結合は、当技術分野で公知の方法を使用して決定または検出することができる。例えば、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイは、目的の第１のポリペプチド（例えば、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分）と、センサー基板上に捕捉された目的の第２のポリペプチド（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）、またはＦｃγＲＩＩｂ）との間のリアルタイムの会合および解離を決定するために、製造業者の使用説明書に従ってＯｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡ）装置を使用して実施され得る。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、ＧＡＡＬＩＥ変異を含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）、またはこれらの任意の組合せへの増強された結合を有する。ある特定の実施形態では、増強された結合は、ＢＬＩアッセイにおける、参照結合タンパク質と比較したシグナルシフトにおける増加（例えば、より高いピークシグナル；より速い会合速度；より緩徐な解離速度；より大きい曲線下面積のうちの１つまたは複数）によって決定される。ある特定の実施形態では、ＢＬＩアッセイは、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡ）装置の使用を含む。さらなる実施形態では、ＢＬＩアッセイは、抗ペンタ－タグセンサー上に捕捉され、結合タンパク質に曝露されたタグ化ヒトＦｃγＲを含む。一部の実施形態では、結合タンパク質は、ＩｇＧ Ｆａｂを含み、ＢＬＩアッセイは、Ｆａｂ断片を介して結合タンパク質を架橋するために、捕捉されたヒトＦｃγＲを、抗ＩｇＧ Ｆａｂ結合断片の存在下で結合タンパク質に曝露させることをさらに含む。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）、および／またはヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された結合を有し、この増強された結合は、参照結合タンパク質を使用して観察されたシグナルシフトよりも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、またはそれより大きい、ＢＬＩアッセイにおけるシグナルシフト（ナノメートル）を含み得る。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）、およびヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）への増強された結合を有する。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＢへの低減された結合を有する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、例えば、ＢＬＩアッセイにおける、ベースラインと比較した統計的に有意なシグナルシフトの非存在によって決定されるように、ヒトＦｃγＲＩＩＢには結合しない。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドと比較して、ヒトＣ１ｑ（補体タンパク質）への低減された結合を有する。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、ＢＬＩアッセイにおける、ベースラインと比較した統計的に有意なシグナルシフトの非存在によって決定されるように、ヒトＣ１ｑには結合しない。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチド（即ち、ＧＡＡＬＩＥ変異を含まないＦｃ部分を含む、ＨＢｓＡｇ特異的結合タンパク質であり得るポリペプチド）よりも高い程度まで、ヒトＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方を活性化する。ある特定の実施形態では、参照ポリペプチドは、野生型Ｆｃ部分であるか、または１つもしくは複数の置換変異を含むＦｃ部分を含み、ただし、この置換変異は、ＧＡＡＬＩＥではない。
ヒトＦｃγＲの活性化は、当技術分野で公知の方法を使用して決定または検出され得る。例えば、十分に検証された市販のバイオレポーターアッセイには、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下で（ｉ）目的のＦｃγＲおよび（ｉｉ）ホタルルシフェラーゼレポーターを安定に発現するＪｕｒｋａｔエフェクター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ；カタログ番号：Ｇ９７９８）の存在下で、ＨＢｓＡｇ特異的結合タンパク質を組換えＨＢｓＡｇ（Ｅｎｇｅｒｉｘ Ｂ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）と共にインキュベートすることが関与する。細胞表面発現されたＦｃγＲへのＦｃの結合は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の、ＮＦＡＴ媒介性の発現を駆動する。次いで、発光が、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ－（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の使用説明書に従って使用して、ルミノメーター（例えば、Ｂｉｏ－Ｔｅｋ）を用いて測定される。活性化は、次の式：（濃度［ｘ］での結合タンパク質（例えば、ｍＡｂ）のＲＬＵ－背景のＲＬＵ）を適用することによって、背景を超える相対発光単位（ＲＬＵ）の平均として表される。
ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）、および／またはヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）を活性化する。ある特定の実施形態では、より高い程度の活性化は、本明細書に記載されるように発光バイオレポーターアッセイを使用して決定した、より高いピーク発光および／またはより大きい発光曲線下面積を指す。ある特定の実施形態では、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｈ１３１）、ヒトＦｃγＲＩＩＡ（Ｒ１３１）、およびヒトＦｃγＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）を活性化し、より高い程度の活性化は、参照結合タンパク質を使用して観察されたピークＲＬＵよりも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、またはそれより大きい、ピークＲＬＵを含む。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、上記のような発光バイオレポーターアッセイにおける、統計的に有意なおよび／または測定可能なＲＬＵの非存在によって決定されるように、ヒトＦｃγＲＩＩＢを活性化しない。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＨＢｓＡｇの存在下でヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞の活性化は、ＣＤ１０７ａ発現によって（例えば、フローサイトメトリーによって）決定される。ある特定の実施形態では、ＮＫ細胞は、Ｖ１５８／Ｖ１５８ホモ接合性、Ｆ１５８／Ｆ１５８ホモ接合性、またはＶ１５８／Ｆ１５８ヘテロ接合性のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型を含む細胞を含む。
本開示によるＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含む任意の結合タンパク質は、本明細書に記載される特色のうちのいずれか１つもしくは複数を実施できるか、またはこれらを有し得ることが理解される；例えば、参照ポリペプチドと比較した、ヒトＦｃγＲＩＩＡおよび／またはヒトＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された結合；参照ポリペプチドと比較した、ヒトＦｃγＲＩＩＢへの低減された結合（および／またはヒトＦｃγＲＩＩＢへの結合なし）；参照ポリペプチドと比較した、ヒトＣ１ｑへの低減された結合（および／またはヒトＣ１ｑへの結合なし）；参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方を活性化する；ヒトＦｃγＲＩＩＢを活性化しない；ならびに／あるいは参照ポリペプチド（例えば、ＨＢｓＡｇに対して特異的であり、ＧＡＡＬＩＥ変異を含まないＦｃ部分を含む抗体）よりも高い程度まで、ＨＢｓＡｇの存在下でヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する。
ある特定の実施形態では、本開示の結合タンパク質は、ＧＡＡＬＩＥ変異を含むＦｃ部分を含み、（ｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方への増強された結合を有し、ヒトＦｃγＲＩＩＡは、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１であり、および／またはヒトＦｃγＲＩＩＩＡは、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；（ｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＢへの低減された結合を有する；（ｉｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢに結合しない；（ｉｖ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＣ１ｑへの低減された結合を有する；（ｖ）ヒトＣ１ｑに結合しない；（ｖｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方を活性化し、ヒトＦｃγＲＩＩＡは、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１であり、および／またはヒトＦｃγＲＩＩＩＡは、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；（ｖｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢを活性化しない；（ｖｉｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＨＢｓＡｇの存在下でヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化し、参照ポリペプチドは、必要に応じて、ＨＢ Ａｇ、必要に応じてＨＢｓＡｇに結合する抗体である；（ｉｘ）ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントに結合することが可能である；（ｘ）ＨＢｓＡｇに結合し、Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照抗体または抗原結合断片と比較して、ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントへの改善された結合を有する。
あるいはまたはさらに、本開示の結合タンパク質のＦｃ部分は、プロテインＡ結合のために要求されることが当技術分野で公知の部分を少なくとも含み得；および／または本開示の抗体のＦｃ部分は、プロテインＧ結合のために要求されることが当技術分野で公知のＦｃ分子の部分を少なくとも含む。一部の実施形態では、保持された機能は、ＨＢｓＡｇおよびＨＢＶｇのクリアランスを含む。したがって、ある特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、ＦｃγＲ結合のために要求されることが当技術分野で公知の部分を少なくとも含む。したがって、上で概説したように、Ｆｃ部分は、（ｉ）ネイティブＩｇＧ Ｆｃの下部ヒンジ部位、特に、アミノ酸残基Ｌ、Ｌ、Ｇ、Ｇ（２３４～２３７、ＥＵ番号付け）と、（ｉｉ）ネイティブＩｇＧ ＦｃのＣＨ２ドメインの隣接する領域、特に、下部ヒンジ領域に隣接する上部ＣＨ２ドメイン中、例えば、Ｐ３３１の領域中のループおよび鎖、例えば、Ｐ３３１周囲の、例えば、ネイティブＩｇＧ Ｆｃのアミノ酸３２０と３４０との間（ＥＵ番号付け）の、ネイティブＩｇＧ Ｆｃの上部ＣＨ２ドメイン中の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、または１０連続したアミノ酸の領域とを、少なくとも含み得る。
一部の実施形態では、本開示による結合タンパク質は、Ｆｃ領域を含む。本明細書で使用される場合、用語「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖の２つまたはそれより多くのＦｃ部分によって形成される免疫グロブリンの部分を指す。例えば、Ｆｃ領域は、単量体または「単鎖」Ｆｃ領域（即ち、ｓｃＦｃ領域）であり得る。単鎖Ｆｃ領域は、単一のポリペプチド鎖（例えば、単一の連続する核酸配列中にコードされる）内に連結されたＦｃ部分から構成される。例示的なｓｃＦｃ領域は、ＷＯ２００８／１４３９５４Ａ２号に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。Ｆｃ領域は、二量体Ｆｃ領域であり得るか、またはこれを含み得る；二量体Ｆｃ領域は、例えば、上記されるような、一実施形態では図７に示されるような、所望されない（例えば、抗体：抗体、抗体：抗原結合断片、または抗原結合断片：抗原結合断片）二量体と同じではないことが理解される。ある特定の好ましい実施形態では、抗体または抗原結合断片は、僅かな抗体含有二量体または抗原結合断片含有二量体を産生しながら、二量体Ｆｃ領域を含む。
「二量体Ｆｃ領域」または「ｄｃＦｃ」は、２つの別々の免疫グロブリン重鎖のＦｃ部分によって形成された二量体を指す。二量体Ｆｃ領域は、２つの同一なＦｃ部分（例えば、天然に存在する免疫グロブリンのＦｃ領域）のホモ二量体、または２つの非同一なＦｃ部分のヘテロ二量体（例えば、二量体Ｆｃ領域の一方のＦｃ単量体が、他方のＦｃ単量体中には存在しない少なくとも１つのアミノ酸改変（例えば、置換、欠失、挿入、または化学的改変）を含むか、または一方のＦｃ単量体が、他方と比較して短縮され得る）であり得る。
本明細書で開示されるＦｃ部分は、同じまたは異なるクラスおよび／またはサブクラスのＦｃ配列または領域を含み得る。例えば、Ｆｃ部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４サブクラスの免疫グロブリン（例えば、ヒト免疫グロブリン）に、またはこれらの任意の組合せに由来し得る。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃ部分は、同じクラスおよびサブクラスのものである。しかし、Ｆｃ領域（またはＦｃ領域の１つもしくは複数のＦｃ部分）は、キメラでもあり得、それにより、キメラＦｃ領域は、異なる免疫グロブリンクラスおよび／またはサブクラスに由来するＦｃ部分を含み得る。例えば、二量体または単鎖Ｆｃ領域のＦｃ部分のうちの少なくとも２つは、異なる免疫グロブリンクラスおよび／またはサブクラス由来であり得る。ある特定の実施形態では、二量体Ｆｃ領域は、２つまたはそれより多くの異なるアイソタイプまたはサブクラス由来の配列を含み得る；例えば、ＳＥＥＤｂｏｄｙ（「鎖交換操作されたドメイン」）、Davis et al., Protein Eng. Des. Sel. 23(4):195 (2010)を参照されたい。
さらにまたはあるいは、キメラＦｃ領域は、１つまたは複数のキメラＦｃ部分を含み得る。例えば、キメラＦｃ領域または部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリンに由来する１つまたは複数の部分を含み得るが、Ｆｃ領域または部分の残部は、異なるサブクラスのものである。例えば、ＦｃポリペプチドのＦｃ領域または部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリン由来のヒンジ領域とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域または部分は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリンに由来するヒンジおよび／またはＣＨ２ドメインと、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリン由来のＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、キメラＦｃ領域は、第１のサブクラス（例えば、ＩｇＧ４サブクラス）の免疫グロブリン由来のＦｃ部分（例えば、完全なＦｃ部分）と、第２のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３サブクラス）の免疫グロブリン由来のＦｃ部分とを含み得る。例えば、Ｆｃ領域または部分は、ＩｇＧ４免疫グロブリン由来のＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１免疫グロブリン由来のＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域または部分は、ＩｇＧ４分子由来のＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメインと、ＩｇＧ１分子由来のＣＨ３ドメインとを含み得る。例えば、Ｆｃ領域または部分は、抗体の特定のサブクラス由来のＣＨ２ドメインの部分、例えば、ＣＨ２ドメインのＥＵ位置２９２～３４０を含み得る。例えば、Ｆｃ領域または部分は、ＩｇＧ４部分に由来するＣＨ２のアミノ酸位置２９２～３４０と、ＩｇＧ１部分に由来するＣＨ２の残部とを含み得る（あるいは、ＣＨ２の２９２～３４０は、ＩｇＧ１部分に由来し得、ＣＨ２の残部は、ＩｇＧ４部分に由来し得る）。
本開示の任意の抗体、抗原結合断片、またはＦｃ領域もしくは部分が、任意のアロタイプおよび／またはハプロタイプのものであり得ることも理解される。例えば、ヒト免疫グロブリンＧアロタイプとしては、Jefferis and LeFranc, mAbs 1(4):1-7 (2009)に開示されたものが挙げられ、これらのアロタイプ（Ｇ１ｍ（１（ａ）；２（ｘ）；３（ｆ）；および１７（ｚ））；Ｇ２ｍ（２３（ｎ））；Ｇ３ｍ（２１（ｇ１）；２８（ｇ５）；１１（ｂ０）；５（ｂ２）；１３（ｂ３）；１４（ｂ４）；１０（ｂ５）；１５（ｓ）；１６（ｔ）；６（ｃ３）；２４（ｃ５）；２６（ｕ）；および２７（ｖ））；Ａ２ｍ（１および２）；およびＫｍ（１；２；および３）を含む）ならびにハプロタイプ、および得られたアミノ酸配列、ならびにこれらの組合せは、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、本開示の抗体、抗原結合断片、またはＦｃ領域もしくは部分は、ＩｇＧ１アロタイプｇ１ｍ１７，ｋ１を含む。
さらに、Ｆｃ領域または部分は、例えば、キメラヒンジ領域を（さらにまたはあるいは）含み得る。例えば、キメラヒンジは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４分子に一部由来し得（例えば、上部および下部中央部ヒンジ配列）、ＩｇＧ３分子に一部由来し得る（例えば、中央部ヒンジ配列）。別の例では、Ｆｃ領域または部分は、ＩｇＧ１分子に一部由来し、ＩｇＧ４分子に一部由来する、キメラヒンジを含み得る。別の例では、キメラヒンジは、ＩｇＧ４分子由来の上部および下部ヒンジドメインと、ＩｇＧ１分子由来の中央部ヒンジドメインとを含み得る。かかるキメラヒンジは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ領域の中央部ヒンジドメイン中のＥＵ位置２２８にプロリン置換（Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ）を導入することによって作製され得る。別の実施形態では、キメラヒンジは、ＩｇＧ２抗体由来のＥＵ位置２３３～２３６におけるアミノ酸、および／またはＳｅｒ２２８Ｐｒｏ変異を含み得、ヒンジの残りのアミノ酸は、ＩｇＧ４抗体由来である（例えば、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰ（配列番号７４）のキメラヒンジ）。本開示による抗体のＦｃ部分において使用され得るさらなるキメラヒンジは、ＵＳ２００５／０１６３７８３Ａ１号に記載されている。
本明細書で開示される結合タンパク質の一部の実施形態では、Ｆｃ部分、またはＦｃ領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる（例えば、ヒトＩｇＧ分子由来のＦｃ領域またはＦｃ部分由来）。しかし、ポリペプチドは、別の哺乳動物種由来の１つまたは複数のアミノ酸を含み得る。例えば、霊長類Ｆｃ部分または霊長類結合部位が、対象ポリペプチド中に含まれ得る。あるいは、１つまたは複数のマウスアミノ酸が、Ｆｃ部分中またはＦｃ領域中に存在し得る。
一部の実施形態では、必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７５に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号５８～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む抗体が提供される。
一部の実施形態では、必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号５８～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む抗体が提供される。
一部の実施形態では、必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号５８～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む抗体が提供される。
一部の実施形態では、必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号５８～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む抗体が提供される。
核酸分子／ポリヌクレオチド
別の態様では、本開示は、本開示による抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。例えば、第１の核酸分子は、抗体の重鎖をコードし得、第２の核酸分子は、抗体の軽鎖をコードし得る；これらの第１および第２の核酸分子は、抗体をコードする「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」となおも呼ばれ得ることが理解される。言い換えると、ポリヌクレオチドまたは核酸分子としては、抗体または抗原結合断片の部分（例えば、鎖）が、別々の核酸分子によっておよび／または核酸分子の別々の部分によってコードされる実施形態が挙げられる。例示的なポリヌクレオチド配列は、配列番号８０～９９に提供されている。一部の実施形態では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８１に記載されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれからなり、抗体ＶＬまたはＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８５～９９のうちのいずれか１つに記載されるポリヌクレオチド配列を含む。他の実施形態では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８３に記載されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれからなり、抗体ＶＬまたはＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８５～９９のうちのいずれか１つに記載されるポリヌクレオチド配列を含む。なお他の実施形態では、抗体重鎖をコードするポリヌクレオチドは、配列番号８４に記載されるポリヌクレオチド配列を含むか、またはこれからなり、抗体ＶＬまたはＬＣをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８５～９９のうちのいずれか１つに記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
遺伝コードの縮重に起因して、本開示は、これらの核酸配列の配列バリアント、特に、同じアミノ酸配列をコードするかかる配列バリアントもまた含む。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、配列番号８０～９９のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列と少なくとも５０％（即ち、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を共有するヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列は、宿主細胞による発現のためにコドン最適化されている。
特定の実施形態では、本開示による核酸分子は、配列番号８０～９９のうちのいずれか１つに記載の核酸配列を含むか、またはこれらからなる。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するＶＨコードヌクレオチド配列と、配列番号８５～９７のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するＶＬコードヌクレオチド配列とを含む。
本明細書で開示される実施形態のいずれかでは、ポリヌクレオチドは、配列番号８４に記載のＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３コードヌクレオチド配列を含み得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号９８または９９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するＣＬコードヌクレオチド配列を含む。
ベクター
ベクター、例えば、本開示による核酸分子を含む発現ベクターが、本開示の範囲内にさらに含まれる。
用語「ベクター」は、核酸分子を含む構築物を指す。本開示に関して、ベクターは、所望の核酸配列を取り込むまたは保有するのに適切である。かかるベクターは、貯蔵ベクター、発現ベクター、クローニングベクター、移入ベクターなどであり得る。貯蔵ベクターは、核酸分子の簡便な貯蔵を可能にするベクターである。したがって、ベクターは、例えば、本明細書の記載による所望の抗体またはその抗体断片に対応する配列を含み得る。
本明細書で使用される場合、「発現ベクター」は、適切な宿主において核酸分子の発現をもたらすことが可能な適切な制御配列に作動可能に連結した核酸分子を含むＤＮＡ構築物を指す。かかる制御配列としては、転写をもたらすプロモーター（例えば、異種プロモーター）、かかる転写を制御するための必要に応じたオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、ならびに転写および翻訳の終結を制御する配列が挙げられる。目的の核酸分子の転写に寄与する発現ベクターのエレメントのうちのいずれかは、ベクターに対して異種であり得る。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子、ウイルス、または単なる潜在的なゲノム挿入物であってもよい。適切な宿主に形質転換されたら、ベクターは、宿主ゲノムとは独立して複製および機能し得、あるいは、一部の例では、ゲノムにそれ自体が組み込むことができる。本明細書では、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」および「ベクター」は、相互交換可能に使用される場合が多い。
クローニングベクターは、典型的には、核酸配列をベクター中に取り込むために使用され得るクローニング部位を含有するベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクターまたはバクテリオファージベクターであり得る。
移入ベクターは、核酸分子を細胞または生物中に移入させるのに適切なベクター、例えば、ウイルスベクターであり得る。本開示に関して、ベクターは、例えば、ＲＮＡベクターまたはＤＮＡベクターであり得る。ベクターは、ＤＮＡ分子であり得る。例えば、本出願の意味におけるベクターは、クローニング部位、選択マーカー、例えば、抗生物質耐性因子、およびベクターの増殖に適切な配列、例えば、複製起点を含む。
ある特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクター、またはウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター、またはγ－レトロウイルスベクター）を含む。ウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病および水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹およびセンダイ）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ピコルナウイルスおよびアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、ならびにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型および２型、エプスタインバーウイルス、サイトメガロウイルス）、およびポックスウイルス（例えば、ワクシニア、鶏痘、およびカナリアポックス）を含む二本鎖ＤＮＡウイルスが挙げられる。他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、および肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血症肉腫、哺乳動物Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，
Ｊ． Ｍ．， Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ： Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｂ． Ｎ． Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．， Ｅｄｓ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， １９９６）。
「レトロウイルス」は、逆転写酵素を使用してＤＮＡへと逆転写されるＲＮＡゲノムを有するウイルスであり、次いで、この逆転写されたＤＮＡは、宿主細胞ゲノム中に取り込まれる。「ガンマレトロウイルス」は、レトロウイルス科の１つの属を指す。ガンマレトロウイルスの例としては、マウス幹細胞ウイルス、マウス白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、およびトリ細網内皮症ウイルスが挙げられる。
「レンチウイルスベクター」は、遺伝子送達のためのＨＩＶに基づくレンチウイルスベクターを含み、これは、組込みまたは非組込みであり得、比較的大きなパッケージング容量を有し、異なる細胞型の範囲に形質導入することができる。レンチウイルスベクターは、通常、３つ（パッケージング、エンベロープ、および移入）またはそれより多くのプラスミドの産生細胞への一過性トランスフェクション後に生成される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターは、標的細胞に、ウイルス表面糖タンパク質と細胞表面上の受容体との相互作用により侵入する。侵入したら、ウイルスＲＮＡは、ウイルス逆転写酵素複合体によって媒介される逆転写を受ける。逆転写の産物は、二本鎖直鎖状ウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡへのウイルス組込みのための基質である。
ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ガンマレトロウイルス、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクターであり得る。他の実施形態では、ウイルスベクターは、より複雑なレトロウイルス由来ベクター、例えば、レンチウイルス由来ベクターであり得る。ＨＩＶ－１由来ベクターは、このカテゴリーに属する。他の例としては、ＨＩＶ－２、ＦＩＶ、ウマ伝染性貧血ウイルス、ＳＩＶ、およびマエディビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）に由来するレンチウイルスベクターが挙げられる。導入遺伝子を含有するウイルス粒子を用いて哺乳動物宿主細胞を形質導入するために、レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクター、ならびにパッケージング細胞を使用する方法は当技術分野において公知であり、以前に、例えば、米国特許第８，１１９，７７２号；Ｗａｌｃｈｌｉ ｅｔ ａｌ．， ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６：３２７９３０， ２０１１；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７４：４４１５， ２００５；Ｅｎｇｅｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． １４：１１５５， ２００３；Ｆｒｅｃｈａ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｔｈｅｒ． １８：１７４８， ２０１０；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ５０６：９７， ２００９に記載されている。レトロウイルスベクターおよびレンチウイルスベクターの構築物および発現系も市販されている。他のウイルスベクターはまた、ポリヌクレオチド送達のために使用することができ、例えば、アデノウイルスに基づくベクターおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくベクターを含むＤＮＡウイルスベクター；アンプリコンベクター、複製欠損ＨＳＶおよび弱毒化ＨＳＶを含む単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に由来するベクターを含む（Ｋｒｉｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ５：１５１７， １９９８）。
本開示の組成物および方法とともに使用することができる他のベクターとしては、バキュロウイルスおよびα－ウイルスに由来するベクター（Ｊｏｌｌｙ， Ｄ Ｊ． １９９９． Ｅｍｅｒｇｉｎｇ Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ． ｐｐ ２０９－４０ ｉｎ Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ Ｔ． ｅｄ． Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ）、またはプラスミドベクター（ｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙ、または他のトランスポゾンベクターなど）が挙げられる。
ウイルスベクターゲノムが、宿主細胞において発現される複数のポリヌクレオチドを別々の転写物として含む場合、ウイルスベクターはまた、バイシストロン性または多シストロン性発現を可能にする２つ（またはそれより多くの）転写物の間に追加の配列を含んでいてもよい。ウイルスベクターにおいて使用されるそのような配列の例としては、配列内リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、ウイルス２Ａペプチド、またはこれらの任意の組み合わせが挙げられる。
被験体への直接投与のためのＤＮＡに基づく抗体または抗原結合断片をコードするプラスミドベクターを含むプラスミドベクターは、本明細書でさらに記載される。
細胞
さらなる態様では、本開示は、本開示による抗体、抗原結合断片、もしくは融合タンパク質を発現する；または本開示によるベクターもしくはポリヌクレオチドを含む細胞（「宿主細胞」とも呼ばれる）も提供する。
そのような細胞の例としては、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞；およびＥ．ｃｏｌｉをはじめとする原核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。ある特定のそのような実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞系、例えば、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ ７７：４２１６ （１９８０）、ＣＨＯ－ＫＳＶ、ＥｘｐｉＣＨＯ）、ヒト胎児腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞．ヒト肝細胞、例えばＨｅｐａ ＲＧ細胞、骨髄腫細胞、またはハイブリドーマ細胞である。哺乳動物宿主細胞系の他の例としては、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）；ＳＶ４０により形質転換されたサル腎ＣＶ１系（ＣＯＳ－７）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６）；サル腎細胞（ＣＶ１）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞が挙げられる。抗体生成に好適な哺乳動物宿主細胞系は、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ２４８ （Ｂ． Ｋ． Ｃ． Ｌｏ， ｅｄ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．）， ｐｐ． ２５５－２６８ （２００３）に記載されているものも含む。
ある特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞である。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞におけるペプチドの発現は、十分に確証されている（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ａ． Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５－５５１ （１９９１）を参照されたい）。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、抗体を細菌において生成することができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。
本開示の結合タンパク質の発現に有用な昆虫細胞は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ Ｓｆ９細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＢＴＩ－ＴＮ５Ｂ１－４細胞、およびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ ＳｆＳＷＴ０１「Ｍｉｍｉｃ（商標）」細胞を含む。例えば、Ｐａｌｍｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １５３（３－４）：１６０－１６６ （２０１１）を参照されたい。非常に多数のバキュロウイルス株が同定されており、それらは、特に、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併用され得る。
糸状菌または酵母などの真核微生物も、タンパク質コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主であり、該真核微生物は、部分的にまたは完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす「ヒト化」グリコシル化経路を有する真菌および酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２２：１４０９－１４１４ （２００４）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． ２４：２１０－２１５ （２００６）を参照されたい。
植物細胞も、本開示の結合タンパク質の発現のための宿主として利用することができる。例えば、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号に記載されている）は、トランスジェニック植物を利用して抗体を生成する。
一部の実施形態では、融合タンパク質は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＮＫ－Ｔ細胞、またはこれらの任意のサブタイプによって細胞表面において発現される。
本開示に適合する任意のタンパク質発現系を使用して、本開示の結合タンパク質を産生させることができる。適切な発現系としては、Gene Expression Systems, Academic Press, eds. Fernandez et al., 1999に記載されているトランスジェニック動物が挙げられる。
特定の実施形態では、細胞に、本記載によるベクターを発現ベクターと共にトランスフェクトすることができる。用語「トランスフェクション」は、核酸分子、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子などを、細胞、例えば真核細胞などに導入することを指す。本記載に関して、用語「トランスフェクション」は、核酸分子の細胞への導入、例えば、哺乳動物細胞への導入を含む、真核細胞への導入、のための、当業者に公知の任意の方法を包含する。そのような方法は、例えば、電気穿孔、リポフェクション、例えばカチオン性脂質および／もしくはリポソームに基づくリポフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、ナノ粒子に基づくトランスフェクション、ウイルスに基づくトランスフェクション、またはカチオン性ポリマー、例えばＤＥＡＥ－デキストランもしくはポリエチレンイミン、に基づくトランスフェクションなどを包含する。ある特定の実施形態では、導入は、ウイルスによらないものである。
さらに、例えば、本記載による抗体、またはその抗原結合断片を発現させるために、本開示の細胞を本記載によるベクターで安定にまたは一過性にトランスフェクトすることができる。かかる実施形態では、細胞を、結合タンパク質をコードする本明細書に記載のベクターで安定にトランスフェクトする。あるいは、細胞を、本記載による結合タンパク質をコードする本開示によるベクターで一過性にトランスフェクトすることができる。ここに開示される実施形態のいずれにおいても、ポリヌクレオチドは、宿主細胞に対して異種であり得る。
関連する態様では、本開示は、抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を産生させる方法であって、本開示の宿主細胞を、抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を産生させるために十分な条件下で、そのために十分な時間にわたって培養することを含む、方法を提供する。
したがって、本開示は、本開示の抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を異種性に発現する組換え宿主細胞も提供する。例えば、細胞は、抗体を完全にまたは部分的に得る種（例えば、ヒト抗体または操作されたヒト抗体を発現するＣＨＯ細胞）とは異なる種のものであり得る。一部の実施形態では、宿主細胞の細胞型は、抗体または抗原結合断片を天然には発現しない。さらに、宿主細胞は、ネイティブな状態の結合タンパク質（またはネイティブな状態の、対象結合タンパク質がそれから操作されるまたはそれに由来するところの親結合タンパク質）には存在しない結合タンパク質に対して翻訳後修飾（ＰＴＭ；例えば、グリコシル化またはフコシル化）を付与し得る。かかるＰＴＭにより、機能的差異（例えば、免疫原性の低減）がもたらされ得る。したがって、本明細書に開示される宿主細胞によって産生される本開示の結合タンパク質は、ネイティブな状態にある結合タンパク質または親結合タンパク質とは明確に異なる１つまたは複数の翻訳後修飾を含み得る（例えば、ＣＨＯ細胞によって産生されるヒト抗体は、ヒトから単離された、および／またはネイティブなヒトＢ細胞もしくは形質細胞によって産生された抗体とは明確に異なる翻訳後修飾を含み得る）。
抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質の必要に応じたさらなる特色
本開示の抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を、例えば、処置部位への送達のために薬物とカップリングすることもでき、目的の細胞を含む部位のイメージングを容易にするために検出可能な標識とカップリングすることもできる。抗体と薬物および検出可能な標識をカップリングさせるための方法は当技術分野で周知であり、同様に、検出可能な標識を使用したイメージングの方法も当技術分野で周知である。標識された抗体を多種多様なアッセイに使用することができ、多種多様な標識を使用することができる。本開示の抗体（または抗原結合断片または融合タンパク質）とＨＢｓＡｇ上の目的のエピトープ、特にＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域との間の抗体－抗原複合体の形成の検出を、検出可能な物質を抗体に付着させることによって容易にすることができる。適切な検出手段としては、例えば、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化学発光体、色素原、酵素基質または補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素などの標識の使用が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍光材料の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光材料の例は、ルミノールである；生物発光材料の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリンが挙げられる；適切な放射性材料の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、または３Ｈが挙げられる。かかる標識された試薬を種々の周知のアッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイなどに使用することができる。したがって、本開示による標識された抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を、例えば、ＵＳ３，７６６，１６２；ＵＳ３，７９１，９３２；ＵＳ３，８１７，８３７；およびＵＳ４，２３３，４０２に記載されている通り、かかるアッセイに使用することができる。
本開示による抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を、治療用部分、例えば、細胞毒、治療剤、または放射性金属イオンもしくは放射性同位元素とコンジュゲートすることができる。放射性同位元素の例としては、これだけに限定されないが、Ｉ－１３１、Ｉ－１２３、Ｉ－１２５、Ｙ－９０、Ｒｅ－１８８、Ｒｅ－１８６、Ａｔ－２１１、Ｃｕ－６７、Ｂｉ－２１２、Ｂｉ－２１３、Ｐｄ－１０９、Ｔｃ－９９、Ｉｎ－１１１などが挙げられる。かかるコンジュゲートを、所与の生物学的応答を改変するために使用することができる；薬物部分は、古典的な化学治療剤に限定されるものと解釈されるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。かかるタンパク質には、例えば、毒素、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素が含まれ得る。
かかる治療用部分を抗体とコンジュゲートするための技法は周知である。例えば、Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy", in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp. 243-256；ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery, " in Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp. 623-653；Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp. 475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985）；"Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp. 303-316；およびThorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62: 119-158を参照されたい。
あるいは、例えば、ＵＳ４，６７６，９８０に記載されている通り、抗体、抗体断片、または融合タンパク質を、第２の抗体、またはその抗体断片（または第２の融合タンパク質）とコンジュゲートして、ヘテロコンジュゲートを形成することができる。さらに、例えばＵＳ４，８３１，１７５に記載されている通り、標識と本記載の抗体の間にリンカーを使用することができる。例えば、ＵＳ５，５９５，７２１に記載されている通り、抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を放射性ヨウ素、インジウム、イットリウム、または当技術分野で公知の他の放射性粒子と直接標識することができる。例えば、ＷＯ００／５２０３１；ＷＯ００／５２４７３に記載されている通り、処置は、同時にまたは後に続いて投与される、コンジュゲートしたならびにコンジュゲートしていない抗体、抗原結合断片、および／または融合タンパク質を用いた処置の組合せからなり得る。
本明細書に記載の抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を固体支持体に付着させることもできる。さらに、本開示の抗体、その機能的な抗体断片、または融合タンパク質を、例えば、それらの循環半減期（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ）を増大させるために、ポリマーとの共有結合コンジュゲーションによって化学改変することができる。ポリマー、およびそれらをペプチドに付着させる方法の例は、ＵＳ４，７６６，１０６；ＵＳ４，１７９，３３７；ＵＳ４，４９５，２８５およびＵＳ４，６０９，５４６に示されている。一部の実施形態では、ポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）から選択することができる。ＰＥＧは、室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｎＯ－Ｒを有し、式中、Ｒは、水素、または保護基、例えば、アルキル基もしくはアルカノール基であり得る。ある特定の実施形態では、保護基は、１個から８個の間の炭素を有し得る。例えば、保護基は、メチルであり得る。符号ｎは正の整数である。一実施形態では、ｎは、１～１，０００の間である。別の実施形態では、ｎは、２～５００の間である。一部の実施形態では、ＰＥＧの平均分子量は、１，０００～４０，０００の間、２，０００～２０，０００の間、および３，０００～１２，０００の間から選択される。さらに、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し得、例えば、ＰＥＧは、末端ヒドロキシ基を有し得る。例えば、末端ヒドロキシ基は、阻害剤の遊離のアミノ基と反応するように活性化された末端ヒドロキシ基である。しかし、反応性基の型および量を、共有結合によりコンジュゲートしたＰＥＧ／本記載の抗体が実現されるように変動させることができることが理解されよう。
本明細書に記載の抗体および抗原結合断片に関して、水溶性ポリオキシエチル化ポリオールを利用することもできる。水溶性ポリオキシエチル化ポリオールとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。一実施形態では、ＰＯＧを使用する。いかなる理論にも縛られることなく、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格は、例えば、動物およびヒトにおいてモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドとして天然に存在する同じ骨格であるので、この分枝は、必ずしも体内で外来薬剤として見られるとは限らない。ＰＯＧはＰＥＧと同じ範囲の分子量を有し得る。循環半減期を増大させるために使用することができる別の薬物送達系は、リポソームである。リポソーム送達系を調製する方法は当業者には公知である。他の薬物送達系は当技術分野で公知であり、例えば、Poznansky et al. (1980)およびPoznansky (1984)において記載されており、言及されている。
本開示の抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質は、精製された形態で提供することができる。典型的には、抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質は、他のポリペプチドを実質的に含まない組成物中に存在し、例えば、組成物の９０％未満（重量で）、通常では６０％未満、およびより通常では５０％未満が他のポリペプチドで構成される。
本開示の抗体、融合タンパク質、または抗原結合断片は、非ヒト（または異種）宿主において、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。特に、抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質は、非ヒト宿主においては免疫原性であるが、ヒト宿主においては免疫原性ではないイディオトープを有し得る。特に、ヒトへの使用のための本開示のかかる分子には宿主、例えば、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳動物などから容易に単離することができず、一般にヒト化によってまたはゼノマウスから得ることができないものが含まれる。
抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質の産生
本開示による抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質は、当技術分野で公知の任意の方法によって作製することができる。例えば、ハイブリドーマ技術を使用してモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法体系が周知である（Kohler, G. and Milstein, C., 1975；Kozbar et al. 1983）。一実施形態では、ＷＯ２００４／０７６６７７に記載されているＥＢＶ不死化法を使用する。
一実施形態では、ＷＯ２００４／０７６６７７に記載されている方法を使用して抗体を産生させる。かかる方法では、抗体を産生するＢ細胞をＥＢＶおよびポリクローナルＢ細胞活性化因子で形質転換する。効率をさらに増強するために、細胞の増殖および分化の追加の刺激物質を必要に応じて形質転換ステップの間に添加することができる。これらの刺激物質は、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－１５であり得る。一態様では、不死化の効率をさらに改善するためにＩＬ－２を不死化ステップの間に添加するが、この使用は必須ではない。次いで、これらの方法を使用して産生された不死化Ｂ細胞を、当技術分野で公知の方法を使用して培養し、それらから抗体を単離することができる。
抗体を産生させるための別の方法は、ＷＯ２０１０／０４６７７５に記載されている。かかる方法では、形質細胞を、限られた数で、または単一の形質細胞としてマイクロウェル培養プレートで培養する。抗体を形質細胞培養物から単離することができる。さらに、形質細胞培養物から、ＲＮＡを抽出することができ、当技術分野で公知の方法を使用してＰＣＲを実施することができる。抗体のＶＨおよびＶＬ領域をＲＴ－ＰＣＲ（逆転写酵素ＰＣＲ）によって増幅し、シークエンシングし、発現ベクターにクローニングし、次いでその発現ベクターをＨＥＫ２９３Ｔ細胞または他の宿主細胞にトランスフェクトすることができる。発現ベクターへの核酸のクローニング、宿主細胞のトランスフェクション、トランスフェクトされた宿主細胞の培養および産生された抗体の単離は、当業者に公知の任意の方法を使用して行うことができる。
所望であれば、抗体を、濾過、遠心分離および様々なクロマトグラフィー法、例えば、ＨＰＬＣまたはアフィニティークロマトグラフィーを使用してさらに精製することができる。抗体、例えばモノクローナル抗体を精製するための技法は、医薬グレードの抗体を産生させるための技法を含め、当技術分野で周知である。
分子生物学の標準の技法を使用して、本記載の抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列を調製することができる。所望のＤＮＡ配列は、完全にまたは部分的にオリゴヌクレオチド合成技法を使用して合成することができる。部位特異的変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技法を必要に応じて使用することができる。
本開示の抗体または融合タンパク質分子またはその断片をコードするＤＮＡ配列を発現させるために、任意の適切な宿主細胞／ベクター系を使用することができる。抗体断片、例えば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片、特にＦｖ断片および単鎖抗体断片、例えば、単鎖Ｆｖを発現させるために、細菌、例えばＥ．ｃｏｌｉ、および他の微生物の系を一部使用することができる。完全な抗体分子を含めた、より大きな抗体分子を産生させるために、真核生物、例えば哺乳動物宿主細胞発現系を使用することができる。適切な哺乳動物宿主細胞としては、これだけに限定されないが、本明細書に開示される例示的な宿主細胞および細胞系が挙げられる。
本開示は、本開示による抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質分子を産生させるためのプロセスであって、本開示の核酸をコードするベクターを含む宿主細胞を、本記載の抗体分子をコードするＤＮＡからタンパク質を発現させるために適した条件下で培養すること、および抗体分子を単離することを含む、プロセスも提供する。
抗体分子または抗体断片は、重鎖または軽鎖ポリペプチドのみを含むものであってもよく、その場合、重鎖または軽鎖ポリペプチドコード配列のみを使用して宿主細胞をトランスフェクトする必要がある。重鎖および軽鎖の両方を含む産物を産生させるために、細胞系に、２つのベクター、軽鎖ポリペプチドをコードする第１のベクターと重鎖ポリペプチドをコードする第２のベクターをトランスフェクトすることができる。あるいは、単一のベクターを使用することができ、そのベクターは、軽鎖ポリペプチドおよび重鎖ポリペプチドをコードする配列を含むものである。
あるいは、本開示による抗体、抗原結合断片、および融合タンパク質を、（ｉ）例えば、本記載によるベクターを使用することによって本開示による核酸配列を宿主細胞において発現させ、（ｉｉ）発現された所望の産物を単離することによって産生させることができる。さらに、この方法は、（ｉｉｉ）単離された抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を精製することを含み得る。形質転換されたＢ細胞および培養された形質細胞を、所望の特異性または機能の抗体、抗原結合断片、または融合タンパク質を産生するものについてスクリーニングすることができる。
スクリーニングは、任意のイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡによって、組織もしくは細胞（トランスフェクトされた細胞を含む）の染色によって、中和アッセイによって、または、所望の特異性もしくは機能を同定するための多数の当技術分野で公知の他の方法のうちの１つによって、実施することができる。アッセイは、１つまたは複数の抗原の単純な認識に基づいて選択を行うものであってもよく、追加で所望の機能に基づいて選択を行うもの、例えば、単に抗原に結合する抗体ではなく、中和抗体を選択するために、ターゲティングされる細胞の特徴、例えば、それらのシグナル伝達カスケード、それらの形状、それらの成長速度、それらの他の細胞に影響を及ぼす能力、それらの他の細胞によるもしくは他の試薬によるまたは条件の変化による影響に対する応答、それらの分化の状態などを変化させ得る抗体を選択するためのものであってもよい。
次いで、陽性の形質転換されたＢ細胞培養物から、個々の形質転換されたＢ細胞クローンを生じさせることができる。陽性細胞の混合物から個々のクローンを分離するためのクローニングステップは、限界希釈、顕微操作、細胞選別による単一細胞沈着または当技術分野で公知の別の方法を使用して実施することができる。
当技術分野で公知の方法を使用して、培養された形質細胞から核酸を単離し、クローニングし、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞または他の公知の宿主細胞において発現させることができる。
本明細書に記載の不死化Ｂ細胞クローンまたはトランスフェクトされた宿主細胞を様々なやり方で、例えば、モノクローナル抗体の供給源として、目的のモノクローナル抗体をコードする核酸（ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）の供給源として、研究のためなどに、使用することができる。
ＨＢＶタンパク質発現の阻害剤および送達系
本開示は、ＨＢＶを処置するための併用療法の方法および組成物における使用のための、ＨＢＶタンパク質発現の阻害剤であって、併用療法が、本明細書で提供される結合タンパク質を含む、ＨＢＶタンパク質発現の阻害剤も提供する。ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、ＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用される場合、用語「ＲＮＡ干渉剤」または「ＲＮＡｉ剤」は、本明細書において用語が定義されているＲＮＡを含有し、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路によるＲＮＡ転写物の標的切断を媒介する薬剤を指す。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、ＨＢＶ遺伝子の発現の阻害をもたらすものである。
一態様では、ＲＮＡ干渉剤は、標的ＲＮＡ配列と相互作用して、標的ＲＮＡの切断を方向づける一本鎖ＲＮＡを含む。特定の理論に縛られることを望むものではなく、植物および無脊椎動物細胞に導入された長い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、ダイサーとして公知のＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによって分解されてｓｉＲＮＡになる（Sharp, et al., Genes Dev. 15: 485 (2001)）。リボヌクレアーゼ－ＩＩＩ様酵素であるダイサーは、ｄｓＲＮＡをプロセシングして、特徴的な２塩基３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）にする（Bernstein, et al., Nature 409: 363 (2001)）。次いで、ｓｉＲＮＡがＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み入れられ、そこで、１つまたは複数のヘリカーゼによりｓｉＲＮＡ２重鎖が巻き戻され、それにより、相補的なアンチセンス鎖が標的認識をガイドすることが可能になる（Nykanen, et al., Cell 107: 309 (2001)）。適切な標的ｍＲＮＡに結合すると、ＲＩＳＣ内の１つまたは複数のエンドヌクレアーゼにより標的が切断されて、サイレンシングが誘導される（Elbashir, et al, Genes Dev. 15: 188 (2001)）。したがって、一態様では、本明細書に記載の技術は、ＲＩＳＣ複合体の形成を促進して、標的遺伝子のサイレンシングをもたらす一本鎖ＲＮＡに関する。
用語「サイレンシングする」、「の発現を阻害する」、「の発現をダウンレギュレートする」、「の発現を抑制する」などは、ＨＢＶ遺伝子を指す限りでは、本明細書では、ＨＢＶ遺伝子が転写され、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤で処理されており、したがって、ＨＢＶ遺伝子の発現が阻害される第１の細胞または細胞の群から単離されるまたはそれにおいて検出されるＨＢＶ ｍＲＮＡの量が、第１の細胞または細胞の群と実質的に同一であるが、かかる処理をした、またはしていない第２の細胞または細胞の群（対照細胞）と比較して低減することによって顕在化する、ＨＢＶ遺伝子の発現の少なくとも部分的な低減を指す。阻害の程度は、例えば、対照細胞におけるｍＲＮＡ発現の程度から処理細胞におけるｍＲＮＡ発現の程度を引いた差によって測定することができる。あるいは、阻害の程度は、ＨＢＶ遺伝子発現と機能的に結び付けられるパラメータ、例えば、ＨＢＶ遺伝子によってコードされるタンパク質の量、もしくは、ある特定の表現型、例えば、ＨＢＶ感染などのＨＢＶ感染表現型を示す細胞の数の低減、ＨＢＶタンパク質発現（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＢｓＡｇなど）、または細胞におけるＨＢＶ遺伝子発現を反映する遺伝子発現（例えば、Ｓｍｃ５／６発現および局在）の変化に関して示すことができる。阻害の程度は、ＨＢＶ ＲＮＡ発現を反映するレポーター遺伝子を発現するように操作された細胞を使用して測定することもできる。原理上は、ＨＢＶ遺伝子サイレンシングは、ＨＢＶ遺伝子を発現するように操作されたＨＢＶ遺伝子を発現する任意の細胞、例えば、ＨＢＶ感染細胞または細胞において、任意の適切なアッセイによって決定することができる。
細胞もしくは細胞の群によって発現されるＨＢＶ ＲＮＡのレベル、または循環ＨＢＶ ＲＮＡのレベルは、ｍＲＮＡ発現を評定するための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、その方法が参照により本明細書に組み込まれる、国際出願公開第ＷＯ２０１６／０７７３２１Ａ１号の実施例２および米国特許出願第ＵＳ２０１７／０３４９９００号Ａ１において提供されるｒｔＰＣＲ法を使用して決定することができる。一部の実施形態では、試料中のＨＢＶ遺伝子の発現のレベル（例えば、総ＨＢＶ ＲＮＡ、ＨＢＶ転写物、例えば、ＨＢＶ ３．５ｋｂの転写物）を、転写されたポリヌクレオチドまたはその一部、例えば、ＨＢＶ遺伝子のＲＮＡを検出することによって決定する。ＲＮＡは、例えば、酸性フェノール／グアニジンイソチオシアネート抽出（ＲＮＡｚｏｌ Ｂ； Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）、ＲＮｅａｓｙ ＲＮＡ調製キット（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標））、またはＰＡＸｇｅｎｅ（ＰｒｅＡｎａｌｙｔｉｘ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の使用を含めたＲＮＡ抽出技法を使用して細胞から抽出することができる。リボ核酸ハイブリダイゼーションを利用する典型的なアッセイ形式としては、核ｒｕｎ－ｏｎアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護アッセイ（Melton et al., Nuc. Acids Res. 12: 7035）、ノーザンブロット法、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、およびマイクロアレイ解析が挙げられる。循環ＨＢＶ ｍＲＮＡは、その方法が参照により本明細書に組み込まれる、国際出願公開第ＷＯ２０１２／１７７９０６号Ａ１および米国特許出願第ＵＳ２０１４／０２７５２１１号Ａ１に記載されている方法を使用して検出することができる。
本明細書で使用される場合、「標的配列」は、一次転写産物のＲＮＡプロセシングの産物であるｍＲＮＡを含めた、ＨＢＶ遺伝子の転写の間に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続する部分を指す。配列の標的部分は、少なくとも、その部分またはその部分の付近における、ＲＮＡｉにより方向づけられる切断の基質として機能するのに十分な長さになる。例えば、標的配列は、一般に、間の全ての部分範囲を含めて、９～３６ヌクレオチドの長さ、例えば、１５～３０ヌクレオチドの長さになる。非限定的な例として、標的配列は、１５～３０ヌクレオチド、１５～２６ヌクレオチド、１５～２３ヌクレオチド、１５～２２ヌクレオチド、１５～２１ヌクレオチド、１５～２０ヌクレオチド、１５～１９ヌクレオチド、１５～１８ヌクレオチド、１５～１７ヌクレオチド、１８～３０ヌクレオチド、１８～２６ヌクレオチド、１８～２３ヌクレオチド、１８～２２ヌクレオチド、１８～２１ヌクレオチド、１８～２０ヌクレオチド、１９～３０ヌクレオチド、１９～２６ヌクレオチド、１９～２３ヌクレオチド、１９～２２ヌクレオチド、１９～２１ヌクレオチド、１９～２０ヌクレオチド、２０～３０ヌクレオチド、２０～２６ヌクレオチド、２０～２５ヌクレオチド、２０～２４ヌクレオチド，２０～２３ヌクレオチド、２０～２２ヌクレオチド、２０～２１ヌクレオチド、２１～３０ヌクレオチド、２１～２６ヌクレオチド、２１～２５ヌクレオチド、２１～２４ヌクレオチド、２１～２３ヌクレオチド、または２１～２２ヌクレオチドであり得る。
本明細書で使用される場合、用語「配列を含む鎖」は、標準のヌクレオチド命名法を使用して呼ばれる配列によって記載されるヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。
本明細書で使用される場合、別段の指定のない限り、用語「相補的な」は、第１のヌクレオチド配列を第２のヌクレオチド配列との関連で記載するために使用される場合、当業者には理解される通り、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが、ある特定の条件下で、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズし、２重鎖構造を形成することができることを指す。かかる条件は、例えば、ストリンジェントな条件であり得、ストリンジェントな条件は、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０℃または７０℃で１２～１６時間、その後、洗浄、を含み得る。他の条件、例えば、生物体内で生じ得る生理的に関連する条件を適用することができる。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な適用に応じて、２つの配列の相補性の試験に最適な条件のセットを決定することができる。
ＲＮＡｉ剤内、例えば、本明細書に記載のｓｉＲＮＡ内の相補配列は、一方または両方のヌクレオチド配列の全長にわたって、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの塩基対合を含む。かかる配列は、本明細書では、互いに対して「完全に相補的な」と言及され得る。しかし、本明細書において第１の配列が第２の配列に対して「実質的に相補的な」と言及される場合、その２つの配列は完全に相補的な場合もあり、最大３０塩基対の２重鎖にハイブリダイズした際に１つまたは複数、しかし一般に５つ以下、４つ以下、３つ以下または２つ以下のミスマッチ塩基対を形成する一方で、それらの最終的な適用、例えば、ＲＩＳＣ経路による遺伝子発現の阻害に最も関連性の高い条件下でハイブリダイズする能力を保持する場合もある。しかし、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイズした際に、１つまたは複数の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されている場合、かかるオーバーハングは、相補性の決定に関してミスマッチとはみなされないものとする。例えば、ｓｉＲＮＡを構成する一方のオリゴヌクレオチドが２１ヌクレオチドの長さであり、他方のオリゴヌクレオチドが２３ヌクレオチドの長さであり、長い方のオリゴヌクレオチドが短い方のオリゴヌクレオチドと完全に相補的な２１ヌクレオチドの配列を含む場合、本明細書に記載の目的に関しては、それでも「完全に相補的な」と称することができる。
「相補的な」配列は、本明細書で使用される場合、ハイブリダイズする能力に関する上記の要件を満たす限りでは、非ワトソン・クリック塩基対および／もしくは非天然および改変ヌクレオチドで形成された塩基対も含んでよい、またはそれから完全に形成されていてよい。かかる非ワトソン・クリック塩基対としては、これだけに限定されないが、Ｇ：Ｕゆらぎ塩基対合またはフーグスティーン塩基対合が挙げられる。
用語「相補的な」、「完全に相補的な」、および「実質的に相補的な」は、本明細書では、これらが使用される文脈から理解される通り、ｓｉＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と標的配列との間の塩基マッチングに関して使用され得る。
本明細書で使用される場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の少なくとも一部と「実質的に相補的な」ポリヌクレオチドは、目的のｍＲＮＡ（例えば、ＨＢＶタンパク質をコードするｍＲＮＡ）の連続する部分と実質的に相補的なポリヌクレオチドを指す。例えば、ポリヌクレオチドは、配列がＨＢＶ ｍＲＮＡの中断されていない一部分と実質的に相補である場合、ＨＢＶ ｍＲＮＡの少なくとも一部と相補的である。
ａ．ｓｉＲＮＡ
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡを含む。用語「ｓｉＲＮＡ」は、本明細書で使用される場合、標的ＲＮＡに対して「センス」および「アンチセンス」方向づけを有すると呼ばれる、２つの逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含むハイブリダイズした２重鎖領域を有する、ＲＮＡ分子または分子の複合体を含むＲＮＡｉを指す。２重鎖領域は、所望の標的ＲＮＡのＲＩＳＣ経路を通じた特異的分解が可能になる任意の長さのものであってよいが、典型的には、９塩基対の長さから３６塩基対の長さにわたり、例えば、１５～３０塩基対の長さになる。９塩基対と３６塩基対との間の２重鎖を考えると、２重鎖は、この範囲内の任意の長さ、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１ 、３２、３３、３４、３５、または３６、ならびに、これだけに限定されないが、１５～３０塩基対、１５～２６塩基対、１５～２３塩基対、１５～２２塩基対、１５～２１塩基対、１５～２０塩基対、１５～１９塩基対、１５～１８塩基対、１５～１７塩基対、１８～３０塩基対、１８～２６塩基対、１８～２３塩基対、１８～２２塩基対、１８～２１塩基対、１８～２０塩基対、１９～３０塩基対、１９～２６塩基対、１９～２３塩基対、１９～２２塩基対、１９～２１塩基対、１９～２０塩基対、２０～３０塩基対、２０～２６塩基対、２０～２５塩基対、２０～２４塩基対、２０～２３塩基対、２０～２２塩基対、２０～２１塩基対、２１～３０塩基対、２１～２６塩基対、２１～２５塩基対、２１～２４塩基対、２１～２３塩基対、および２１～２２塩基対を含めたそれらの間の任意の部分範囲であってよい。細胞においてダイサーおよび同様の酵素によるプロセシングによって生成されるｓｉＲＮＡは、一般に１９～２２塩基対の長さの範囲である。用語「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」も本明細書において上記のｓｉＲＮＡを指すように同義で使用される。
ｓｉＲＮＡの２重鎖領域の一方の鎖は、標的ＲＮＡのある領域と実質的に相補的な配列を含む。２重鎖構造を形成する２つの鎖は、少なくとも１つの自己相補領域を有する単一のＲＮＡ分子に由来する場合もあり、２つまたはそれよりも多くの別々のＲＮＡ分子から形成される場合もある。２重鎖領域が単一分子の２つの鎖から形成される場合、分子は、２重鎖構造を形成する一方の鎖の３’末端とそれぞれの他方の鎖の５’末端との間のヌクレオチドの一本鎖の鎖（本明細書では「ヘアピンループ」と呼ばれる）によって分離された２重鎖領域を有し得る。ヘアピンループは、少なくとも１つの対合していないヌクレオチドを含み得る；一部の実施形態では、ヘアピンループは、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれよりも多くの対合していないヌクレオチドを含み得る。ｓｉＲＮＡの２つの実質的に相補的な鎖が別々のＲＮＡ分子によって構成されている場合、それらの分子は共有結合により接続している必要はないが、共有結合により接続していてもよい。２つの鎖がヘアピンループ以外の手段によって共有結合により接続している場合、接続している構造は「リンカー」と呼ばれる。
用語「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」は、標的配列と実質的に相補的な領域を含むＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡの鎖を指す。本明細書で使用される場合、用語「相補性領域」は、配列、例えば、本明細書で定義されている標的配列と実質的に相補的である、アンチセンス鎖上の領域を指す。相補性領域が標的配列と完全には相補的でない場合、分子の内部領域または末端領域内にミスマッチが存在し得る。
一般に、最も許容されるミスマッチは、末端領域内、例えば、５’および／または３’末端から５ヌクレオチド、４ヌクレオチド、３ヌクレオチド、または２ヌクレオチド以内のものである。
用語「センス鎖」または「パッセンジャー鎖」は、本明細書で使用される場合、その用語が本明細書において定義されているアンチセンス鎖の領域と実質的に相補的な領域を含むＲＮＡｉの鎖を指す。
別の態様では、薬剤は、一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子である。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的と相補的な１５～３０ヌクレオチドを有し得る。例えば、アンチセンスＲＮＡ分子は、本明細書に開示されるアンチセンス配列の１つから少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、またはそれよりも多くの連続するヌクレオチドの配列を有し得る。
用語「ＲＮＡ分子」または「リボ核酸分子」は、天然に発現されるまたは見いだされるＲＮＡ分子だけでなく、本明細書に記載のまたは当技術分野で公知の１つまたは複数のリボヌクレオチド／リボヌクレオシドアナログまたは誘導体を含むＲＮＡのアナログおよび誘導体も包含することが当業者には理解されよう。厳密に言えば、「リボヌクレオシド」は、ヌクレオシド塩基およびリボース糖を含み、「リボヌクレオチド」は、１つ、２つまたは３つのリン酸部分を有するリボヌクレオシドである。しかし、用語「リボヌクレオシド」と「リボヌクレオチド」は、本明細書で使用される場合、等価であるとみなされ得る。ＲＮＡは、例えば、下でより詳細に説明されている通り、核酸塩基構造またはリボース－リン酸骨格構造に改変されたものであってよい。しかし、リボヌクレオシドアナログまたは誘導体を含むｓｉＲＮＡ分子は、２重鎖を形成する能力を保持する。非限定的な例として、ＲＮＡ分子は、これだけに限定されないが、２’－Ｏ－メチル改変ヌクレオシド、５’ホスホロチオエート基を含むヌクレオシド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアアミド基に連結した末端ヌクレオシド、ロックドヌクレオシド、無塩基ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロ改変ヌクレオシド、２’－アミノ－改変ヌクレオシド、２’－アルキル－改変ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、ホスホロアミダート、または非天然塩基を含むヌクレオシド、またはこれらの任意の組合せを含めた、少なくとも１つの改変リボヌクレオシドも含み得る。あるいは、ＲＮＡ分子は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、またはそれよりも多く、最大ｓｉＲＮＡ分子の全長の改変リボヌクレオシドを含み得る。改変は、ＲＮＡ分子におけるかかる複数の改変リボヌクレオシドの各々について同じである必要はない。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物における使用が企図される改変ＲＮＡは、必要な２重鎖構造を形成する能力を有し、標的ＲＮＡのＲＩＳＣ経路を介した特異的分解を可能にするまたは媒介するペプチド核酸（ＰＮＡ）である。
一部の実施形態では、改変リボヌクレオシドは、デオキシリボヌクレオシドを含む。例えば、ＲＮＡｉ剤は、例えば、デオキシヌクレオシドオーバーハング、またはｓｉＲＮＡの二本鎖部分内の１つもしくは複数のデオキシヌクレオシドを含めた１つまたは複数のデオキシヌクレオシドを含み得る。しかし、用語「ＲＮＡｉ剤」は、本明細書で使用される場合、完全なＤＮＡ分子を包含しない。
本明細書で使用される場合、用語「ヌクレオチドオーバーハング」は、ＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡの２重鎖構造から突出した少なくとも１つの対合していないヌクレオチドを指す。例えば、ｓｉＲＮＡの一方の鎖の３’末端が他方の鎖の５’末端を越えて伸長している場合、またはその逆の場合、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｓｉＲＮＡは、少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを含み得る；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２ヌクレオチド、少なくとも３ヌクレオチド、少なくとも４ヌクレオチド、少なくとも５ヌクレオチド、またはそれよりも多くのヌクレオチドを含み得る。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドを含めたヌクレオチド／ヌクレオシドアナログを含み得るまたはそれからなり得る。オーバーハング（複数可）は、センス鎖上、アンチセンス鎖上、またはこれらの任意の組合せ上に存在し得る。さらに、オーバーハングのヌクレオチド（複数可）は、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端、または両方の末端に存在し得る。
一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’末端および／または５’末端に１～１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、３’末端および／または５’末端に１～１０ヌクレオチドオーバーハングを有する。一部の他の実施形態では、オーバーハング内のヌクレオチドの１つまたは複数がヌクレオシドチオホスフェートで置き換えられている。
一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡの少なくとも一方の末端が、１～４、一般に１または２ヌクレオチドの一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを有する。少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを有するｓｉＲＮＡは、それらの平滑末端対応物と比較して予想外に優れた阻害特性を有し得る。
用語「平滑」または「平滑末端」は、ｓｉＲＮＡに関して本明細書で使用される場合、ｓｉＲＮＡに所与の末端に対合していないヌクレオチドまたはヌクレオチドアナログが存在しないこと、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングが存在しないことを意味する。ｓｉＲＮＡの一方の末端または両方の末端が平滑であり得る。ｓｉＲＮＡの両方の末端が平滑である場合、ｓｉＲＮＡは、「平滑末端」であると言える。「平滑末端」ｓｉＲＮＡは、両方の末端が平滑である、すなわち、分子のいずれの末端にもヌクレオチドオーバーハングを有さないｓｉＲＮＡである。かかる分子はその全長にわたって二本鎖になることが多い。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の併用療法は、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害する１つまたは複数のＲＮＡｉ剤を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、哺乳動物、例えばＨＢＶ感染したヒトにおけるＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するための低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）分子を含み、ここで、ｓｉＲＮＡは、ＨＢＶ遺伝子の発現において形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部と相補的な相補性領域を有するアンチセンス鎖を含み、相補性領域は、３０ヌクレオチドまたはそれ未満の長さ、一般に１９～２４ヌクレオチドの長さであり、ｓｉＲＮＡは、ＨＢＶ遺伝子を発現する細胞と接触すると、ＨＢＶ遺伝子の発現を、例えば、ＰＣＲもしくは分枝ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）に基づく方法によって、またはタンパク質に基づく方法によって、例えば、ウエスタンブロットによってアッセイしたときに少なくとも１０％阻害する。細胞培養物におけるＨＢＶ遺伝子の発現、または、例えば、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、初代肝細胞、ＨｅｐＧ２細胞、初代培養細胞、または被験体由来の生体試料における、ＨＢＶ遺伝子発現の代理としての細胞内遺伝子の発現（例えば、Ｓｍｃ５／６）を、例えば、ｂＤＮＡもしくはＴａｑＭａｎアッセイによってＨＢＶ ｍＲＮＡレベルを測定することにより、または、例えば、免疫蛍光法分析によって、例えば、ウエスタンブロッティングもしくはフローサイトメトリー技法を使用してタンパク質レベルを測定することにより、アッセイすることができる。
ｓｉＲＮＡは、相補的であり、ｓｉＲＮＡが使用される条件下でハイブリダイズして２重鎖構造を形成する、２つのＲＮＡ鎖を含む。ｓｉＲＮＡの一方の鎖（アンチセンス鎖）は、標的配列と実質的に相補的であり、一般に完全に相補的である、相補性領域を含む。標的配列は、ＨＢＶ遺伝子の発現の間に形成されるｍＲＮＡの配列に由来し得る。他方の鎖（センス鎖）は、アンチセンス鎖と相補的な領域を含み、したがって、これらの２つの鎖は、適切な条件下で組み合わせるとハイブリダイズし、２重鎖構造を形成する。一般に、２重鎖構造は、両端を含めて１５塩基対と３０塩基対との間、より一般的には両端を含めて１８塩基対と２５塩基対との間、さらにより一般的には両端を含めて１９塩基対と２４塩基対との間、および最も一般的には両端を含めて１９塩基対と２１塩基対との間の長さである。同様に、標的配列に対する相補性領域は、両端を含めて１５ヌクレオチドと３０ヌクレオチドとの間、より一般的には両端を含めて１８ヌクレオチドと２５ヌクレオチドとの間、さらにより一般的には両端を含めて１９ヌクレオチドと２４ヌクレオチドとの間、および最も一般的には両端を含めて１９ヌクレオチドと２１ヌクレオチドの間の長さである。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、両端を含めて１５ヌクレオチドと２０ヌクレオチドとの間の長さであり、他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、両端を含めて２５ヌクレオチドと３０ヌクレオチドとの間の長さである。当業者には理解される通り、切断の標的とされるＲＮＡの標的とされる領域は、より大きなＲＮＡ分子、多くの場合、ｍＲＮＡ分子の一部であることが多い。妥当な場合、ｍＲＮＡ標的の「一部」は、ＲＮＡｉにより方向づけられる切断（すなわち、ＲＩＳＣ経路を通じた切断）の基質になるのに十分な長さのｍＲＮＡ標的の連続する配列である。９塩基対という短さの２重鎖を有するｓｉＲＮＡも、一部の状況下では、ＲＮＡｉにより方向づけられるＲＮＡ切断を媒介し得る。標的は、少なくとも１５ヌクレオチドの長さであることが多い。ある特定の実施形態では、標的は１５～３０ヌクレオチドの長さである。
２重鎖領域、例えば、９～３６塩基対、例えば、１５～３０塩基対の２重鎖領域がｓｉＲＮＡの主要な機能的部分であることも当業者には理解されよう。したがって、一部の実施形態では、所望のＲＮＡを切断の標的とする、例えば１５～３０塩基対の機能的な２重鎖にプロセシングされる限りでは、３０塩基対よりも大きな２重鎖領域を有するＲＮＡ分子またはＲＮＡ分子の複合体もｓｉＲＮＡである。したがって、一部の実施形態では、したがって、ｍｉＲＮＡはｓｉＲＮＡであることが当業者には理解されよう。一部の他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡではない。一部の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子の発現を標的とするために有用なＲＮＡｉ剤は、標的細胞においてより大きな二本鎖ＲＮＡから切断されて生成されるものではない。
本明細書に記載のｓｉＲＮＡは、当技術分野で公知の標準の方法によって、例えば、例えばＢｉｏｓｅａｒｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃから市販されている自動ＤＮＡ合成機を使用することによって合成することができる。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＨＢＶ ｍＲＮＡを標的とし、その発現を阻害するｓｉＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ＮＣ＿００３９７７．２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２１３２６５８４）（配列番号１１６）によるＨＢＶゲノムによってコードされるｍＲＮＡを標的とし、その発現を阻害するｓｉＲＮＡを含む。ＨＢＶゲノムの転写により、ポリシストロニックな、重複するＲＮＡがもたらされ、したがって、一部の実施形態では、単一のＨＢＶ遺伝子を標的とする併用療法のｓｉＲＮＡにより、大多数のまたは全てのＨＢＶ転写物の発現の著しい阻害をもたらすことができる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのｍＲＮＡ標的は、Ｐ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．１のヌクレオチド２３０９～３１８２および１－１６２５；Ｓ遺伝子（Ｌ、Ｍ、およびＳタンパク質をコードする）、ＮＣ＿００３９７７のヌクレオチド２８５０～３１８２および１～８３７；Ｘタンパク質、ＮＣ＿００３９７７のヌクレオチド１３７６～１８４０；および／またはＣ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７のヌクレオチド１８１６～２４５４によってコードされるｍＲＮＡであり得る。
一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＨＢＶのＸ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡを標的とし、その発現を阻害する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡは、ＮＣ＿００３９７７．２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２１３２６５８４）（配列番号１１６）のヌクレオチド１５７９～１５９７に対応する配列ＧＴＧＴＧＣＡＣＴＴＣＧＣＴＴＣＡＣ（配列番号１１７）を含むＨＢＶゲノムの一部によってコードされるｍＲＮＡを標的とする。
さらに別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）を含むセンス鎖および５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）を含むアンチセンス鎖を有する。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、ここで、センス鎖は、配列番号１１８、または配列番号１１８から４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、もしくは１ヌクレオチド以下異なる配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１１９、または配列番号１１９から４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、もしくは１ヌクレオチド以下異なる配列を含む。
一態様では、ｓｉＲＮＡは、少なくとも２つのヌクレオチド配列、センス配列およびアンチセンス配列を含み、ここで、センス配列は、配列番号１１８を含み、対応するアンチセンス配列は、配列番号１１９を含む。この態様では、２つの配列の一方は２つの配列の他方と相補的であり、これらの配列のうちの一方は、ＨＢＶ遺伝子の発現において生成されるｍＲＮＡの配列と実質的に相補的である。したがって、この態様では、ｓｉＲＮＡは２つのオリゴヌクレオチドを含み、ここで、一方のオリゴヌクレオチドはセンス鎖と記載され、第２のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の対応するアンチセンス鎖と記載される。本明細書の他の箇所に記載の通りおよび当技術分野で公知の通り、ｓｉＲＮＡの相補配列は、別々のオリゴヌクレオチド上にあるのとは対照的に、単一の核酸分子の自己相補領域として含有される場合もある。
さらに別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）を含むセンス鎖および５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）を含むアンチセンス鎖を有する。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、ここで、センス鎖は、配列番号１２０、または配列番号１２０から４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、もしくは１ヌクレオチド以下異なる配列を含み、アンチセンス鎖は、配列番号１２１、または配列番号１２１から４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、もしくは１ヌクレオチド以下異なる配列を含む。
一態様では、ｓｉＲＮＡは、少なくとも２つのヌクレオチド配列、センス配列およびアンチセンス配列を含み、ここで、センス配列は、配列番号１２０を含み、対応するアンチセンス配列は、配列番号１２１を含む。この態様では、２つの配列の一方は２つの配列の他方と相補的であり、これらの配列のうちの一方は、ＨＢＶ遺伝子の発現において生成されるｍＲＮＡの配列と実質的に相補的である。したがって、この態様では、ｓｉＲＮＡは２つのオリゴヌクレオチドを含み、ここで、一方のオリゴヌクレオチドはセンス鎖と記載され、第２のオリゴヌクレオチドは、センス鎖の対応するアンチセンス鎖と記載される。本明細書の他の箇所に記載の通りおよび当技術分野で公知の通り、ｓｉＲＮＡの相補配列は、別々のオリゴヌクレオチド上にあるのとは対照的に、単一の核酸分子の自己相補領域として含有される場合もある。
当業者は、２０塩基対と２３塩基対との間であるが、特に２１塩基対の２重鎖構造を有するｓｉＲＮＡがＲＮＡ干渉の誘導に関して特に効果的であるとして認められていることをよく理解している（Elbashir, et al., EMBO 20: 6877-88 (2001)）。しかし、他者により、より短いまたはより長いＲＮＡ２重鎖構造も同様に効果的であり得ることが見いだされた。上記の実施形態では、本明細書に記載のｓｉＲＮＡは、最小で２１ヌクレオチドの長さの鎖を少なくとも１つ含み得る。一部の実施形態では、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２１のうちの１つから一方の末端または両方の末端のほんの数ヌクレオチドを引いた配列を有する、より短い２重鎖が、上記のｓｉＲＮＡと比較して同様に効果的である。したがって、配列番号１１８および配列番号１１９の一方または両方からの少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれよりも多くの連続するヌクレオチドの部分配列を有し、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するそれらの能力が、完全な配列を含むｓｉＲＮＡから５％阻害以下、１０％阻害以下、１５％阻害以下、２０％阻害以下、２５％阻害以下、または３０％阻害以下だけ異なるｓｉＲＮＡが本明細書に記載の技術に従って企図されている。本明細書に記載の技術に従って企図されている、配列番号１２０および配列番号１２１の一方または両方からの少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれよりも多くの連続するヌクレオチドの部分配列を有し、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するそれらの能力が、完全な配列を含むｓｉＲＮＡから５％阻害以下、１０％阻害以下、１５％阻害以下、２０％阻害以下、２５％阻害以下、または３０％阻害以下だけ異なるｓｉＲＮＡも本開示の範囲内に入る。
さらに、本明細書において提供されるｓｉＲＮＡは、ＨＢＶ遺伝子転写物内の、ＲＩＳＣ媒介性切断を受けやすい部位を同定する。したがって、本明細書に記載の技術は、かかる配列のうちの１つの内部を標的とするＲＮＡｉ剤をさらに特色とする。本明細書で使用される場合、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉにより特定の部位内の任意の場所における転写物の切断が促進される場合、ＲＮＡ転写物のその特定の部位内を標的とするといえる。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＨＢＶ遺伝子内の選択された配列と連続する領域から取得した追加のヌクレオチド配列とカップリングした、配列番号１１８および配列番号１１９の配列の一方または両方からの少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＨＢＶ遺伝子内の選択された配列と連続する領域から取得した追加のヌクレオチド配列とカップリングした、配列番号１２０および配列番号１２１の配列の一方または両方からの少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む。
標的配列は一般に１５～３０ヌクレオチドの長さであるが、任意の所与の標的ＲＮＡの切断を方向づけることに関するこの範囲内の特定の配列の適合性は広範に変動する。本明細書で示されている様々なソフトウェアパッケージおよびガイドラインにより、任意の所与の遺伝子標的についての最適な標的配列を同定するためのガイダンスが提供されるが、所与のサイズ（非限定的な例として、２１ヌクレオチド）の「ウインドウ」または「マスク」を文字通りまたは比喩的に（例えば、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏを含む）標的ＲＮＡ配列に置いて、標的配列としての機能を果し得る、そのサイズ範囲内の配列を同定する、経験的な手法を取ることもできる。選択された任意の所与の標的サイズについて可能性のある配列の完全なセットが同定されるまで、配列「ウインドウ」を最初の標的配列の場所の上流または下流に１ヌクレオチドずつ徐々に移動させることにより、次の潜在的な標的配列を同定することができる。このプロセスを同定された配列の系統的な合成および試験（本明細書に記載のまたは当技術分野で公知のアッセイを使用する）とカップリングして最適に機能する配列を同定することにより、ＲＮＡｉ剤の標的とした場合に、標的遺伝子発現の最良の阻害を媒介するＲＮＡ配列を同定することができる。等しいまたはより良好な阻害特徴を有する配列を同定するために所与の配列の上流または下流に１ヌクレオチドずつ徐々に「ウインドウを進むこと」ことにより、阻害効率のさらなる最適化を実現することができることが企図されている。
さらに、同定された任意の配列、例えば、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２１について、ヌクレオチドを系統的に付加するかまたは除去のいずれかをして、より長いまたはより短い配列を生成し、それらおよびその点から標的ＲＮＡの上流または下流により長いまたはより短いサイズのウインドウを進むことによって生成された配列を試験することにより、さらなる最適化を実現することができることが企図されている。再度、新しい候補標的を生成するためのこの手法を、当技術分野で公知のまたは本明細書に記載の阻害アッセイにおける標的配列に基づくＲＮＡｉ剤の効果の試験とカップリングすることにより、阻害の効率のさらなる改善を導くことができる。さらにまた、かかる最適化された配列を、例えば、本明細書に記載のもしくは当技術分野で公知の改変ヌクレオチドの導入、オーバーハングの付加または変化、または当技術分野で公知のおよび／または本明細書で考察されている他の改変によって調整して、分子を発現阻害剤としてさらに最適化すること（例えば、血清の安定性または循環半減期を増大させること、熱安定性（ｔｈｅｒｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を増大させること、膜貫通送達を増強すること、特定の場所または細胞型をターゲティングすること、サイレンシング経路酵素との相互作用を増大させること、エンドソームからの放出を増大させることなど）ができる。
本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、標的配列との１つまたは複数のミスマッチを含有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤は、３つ以下のミスマッチを含有する。一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が標的配列とのミスマッチを含有する場合、ミスマッチの領域は、相補性領域の中央には位置しない。特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖が標的配列とのミスマッチを含有する場合、ミスマッチは相補性領域の５’末端または３’末端のいずれかからの最後の５ヌクレオチド以内に制限される。例えば、２３ヌクレオチドのＲＮＡｉ剤のＨＢＶ遺伝子の領域と相補的なＲＮＡ鎖に関しては、ＲＮＡ鎖は、中央の１３ヌクレオチド以内にはいかなるミスマッチも含有しない可能性がある。本明細書に記載の方法または当技術分野で公知の方法を使用して、標的配列とのミスマッチを含有するＲＮＡｉ剤が、ＨＢＶ遺伝子の発現の阻害に関して効果的であるかどうかを決定することができる。ミスマッチを有するＲＮＡｉ剤の、ＨＢＶ遺伝子の発現の阻害に関する有効性を考慮することは、特に、ＨＢＶ遺伝子内の特定の相補性領域が多型配列バリエーションを有することが分かっている場合に、重要である。
ｂ．化学的に改変されたＲＮＡｉ剤
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤のＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡを、安定性または他の有益な特徴が増強されるように化学的に改変する。本明細書に記載の技術の特色をなす核酸は、当技術分野において十分に確立された方法、例えば、その方法が参照により本明細書に組み込まれる"Current protocols in nucleic acid chemistry," Beaucage, S.L., et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USAに記載されている方法によって合成および／または改変することができる。
改変としては、例えば、（ａ）末端改変、例えば、５’末端改変（リン酸化、コンジュゲーション、逆連結など）、３’末端改変（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結など）、（ｂ）塩基改変、例えば、安定化塩基、不安定化塩基、またはパートナーの拡張されたレパートリーと塩基対合する塩基、塩基の除去（無塩基ヌクレオチド）、またはコンジュゲートした塩基での置換え、（ｃ）糖改変（例えば、２’位もしくは４’位におけるもの）または糖の置換え、ならびに（ｄ）リン酸ジエステル連結の改変または置換えを含めた骨格改変が挙げられる。本明細書に記載の実施形態において有用なＲＮＡ化合物の特定の例としては、これだけに限定されないが、改変骨格を含有するまたは天然のヌクレオシド間連結を含有しないＲＮＡが挙げられる。改変骨格を有するＲＮＡとしては、とりわけ、骨格にリン原子を有さないものが挙げられる。本明細書の目的に関して、および時には当技術分野において言及される通り、ヌクレオシド間の骨格にリン原子を有さない改変ＲＮＡもオリゴヌクレオシドとみなすことができる。特定の実施形態では、改変ＲＮＡはヌクレオシド間骨格にリン原子を有する。
所与の化合物内の全ての位置が一様に改変されている必要はなく、実際、上述の改変の１つよりも多くが単一の化合物内に、またはさらにはＲＮＡｉ剤内の単一のヌクレオシドに組み入れられていてよい。本明細書に記載の技術はまた、キメラ化合物であるＲＮＡｉ剤化合物も含む。「キメラ」ＲＮＡｉ剤化合物または「キメラ」は、本開示に関しては、各々が少なくとも１つの単量体単位、すなわち、ｓｉＲＮＡ化合物の場合ではヌクレオチドで構成される２つまたはそれよりも多くの化学的に明確に異なる領域を含有するｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤化合物である。これらのＲＮＡｉ剤は、典型的には少なくとも１つの領域を含有し、ＲＮＡは、ＲＮＡｉ剤に、ヌクレアーゼ分解に対する抵抗性の増大、細胞内取り込みの増大、および／または標的核酸に対する結合親和性の増大が付与されるように改変されている。ＲＮＡｉ剤の追加の領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することが可能な酵素の基質としての機能を果し得る。例として、ＲＮａｓｅ Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ２重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞内エンドヌクレアーゼである。したがって、ＲＮａｓｅ Ｈの活性化により、ＲＮＡ標的の切断がもたらされ、それにより、ＲＮＡｉ剤による遺伝子発現の阻害の効率が著しく増強される。したがって、キメラｓｉＲＮＡを使用した場合、同じ標的領域とハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシｓｉＲＮＡと比較して、より短いＲＮＡｉ剤を用いて同等の結果を得ることができることも多い。ＲＮＡ標的の切断は、ゲル電気泳動、および必要であれば、当技術分野で公知の関連する核酸ハイブリダイゼーション技法によって常套的に検出することができる。
改変ＲＮＡ骨格としては、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含めたメチルおよび他のアルキルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含めたホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、および通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、これらの２’－５’連結アナログ、および、ヌクレオシド単位の隣接する対の連結が３’－５’から５’－３’になったまたは２’－５’から５’－２’になった逆極性を有するものが挙げられる。様々な塩、混合塩、および遊離酸形態も含まれる。
上記のリン含有連結の調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、米国特許第３，６８７，８０８号；同第４，４６９，８６３号；同第４，４７６，３０１号；同第５，０２３，２４３号；同第５，１７７，１９５号；同第５，１８８，８９７号；同第５，２６４，４２３号；同第５，２７６，０１９号；同第５，２７８，３０２号；同第５，２８６，７１７号；同第５，３２１，１３１号；同第５，３９９，６７６号；同第５，４０５，９３９号；同第５，４５３，４９６号；同第５，４５５，２３３号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７６，９２５号；同第５，５１９，１２６号；同第５，５３６，８２１号；同第５，５４１，３１６号；同第５，５５０，１１１号；同第５，５６３，２５３号；同第５，５７１，７９９号；同第５，５８７，３６１号；同第５，６２５，０５０号；同第６，０２８，１８８号；同第６，１２４，４４５号；同第６，１６０，１０９号；同第６，１６９，１７０号；同第６，１７２，２０９号；同第６、２３９，２６５号；同第６，２７７，６０３号；同第６，３２６，１９９号；同第６，３４６，６１４号；同第６，４４４，４２３号；同第６，５３１，５９０号；同第６，５３４，６３９号；同第６，６０８，０３５号；同第６，６８３，１６７号；同第６，８５８，７１５号；同第６，８６７，２９４号；同第６，８７８，８０５号；同第７，０１５，３１５号；同第７，０４１，８１６号；同第７，２７３，９３３号；同第７，３２１，０２９号；および米国特許第ＲＥ３９４６４号が挙げられる；これらのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる。
リン原子をその中に含まない改変ＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間連結、ヘテロ原子とアルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド間連結の混合、または１つまたは複数の短鎖ヘテロ原子または複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらとしては、モルホリノ連結（一部においてヌクレオシドの糖部分によって形成される）；シロキサン骨格；硫化物、スルホキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファミン酸骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホン酸およびスルホンアミド骨格；アミド骨格を有するもの；ならびにＮ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２構成部分の混合を有するその他が挙げられる。
上記のオリゴヌクレオシドの調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、米国特許第５，０３４，５０６号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；同第５，２１４，１３４号；同第５，２１６，１４１号；同第５，２３５，０３３号；同第５，６４，５６２号；同第５，２６４，５６４号；同第５，４０５，９３８号；同第５，４３４，２５７号；同第５，４６６，６７７号；同第５，４７０，９６７号；同第５，４８９，６７７号；同第５，５４１，３０７号；同第５，５６１，２２５号；同第５，５９６，０８６号；同第５，６０２，２４０号；同第５，６０８，０４６号；同第５，６１０，２８９号；同第５，６１８，７０４号；同第５，６２３，０７０号；同第５，６６３，３１２号；同第５，６３３，３６０号；同第５，６７７，４３７号；および同第５，６７７，４３９号が挙げられる；これらのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
他の実施形態では、適切なＲＮＡ模倣物が、糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわち、ヌクレオチド単位の骨格が新規の基で置き換えられたＲＮＡｉ剤における使用のために企図されている。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。かかるオリゴマー化合物の１つである、優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているＲＮＡ模倣物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物では、ＲＮＡの糖骨格がアミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格で置き換えられている。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子と直接的または間接的に結合する。ＰＮＡ化合物の調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、米国特許第５，５３９，０８２号；同第５，７１４，３３１号；および同第５，７１９，２６２号が挙げられる；そのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。ＰＮＡ化合物に関するさらなる教示は、例えば、Nielsen, et al. (Science, 254: 1497-1500 (1991))に見いだすことができる。
本明細書に記載の技術の特色をなす一部の実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡおよびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシド、特に、米国特許第５，４８９，６７７号の－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｏ－ＣＨ２－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として公知］、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－、および－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ２－ＣＨ２－［ここで、ネイティブなリン酸ジエステル骨格は－Ｏ－Ｐ－Ｏ－ＣＨ２－と表される］、および米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を含む。一部の実施形態では、本発明の特色をなすＲＮＡは、米国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ骨格構造を有する。
改変ＲＮＡはまた、１つまたは複数の置換された糖部分も含有することができる。本発明の特色をなすＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡは、２’位に以下のうちの１つを含み得る：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキル；ここで、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換もしくは非置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的な適切な改変としては、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）．ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２が挙げられ、ここで、ｎおよびｍは、１から約１０である。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、２’位に以下のうちの１つを含む：Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリール、アラルキル、Ｏ－アルカリールまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、ＣＩ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、ＲＮＡｉ剤の薬物動態特性を改善するための基、またはＲＮＡｉ剤の薬力学的特性を改善するための基、および同様の特性を有する他の置換基。一部の実施形態では、改変として、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても公知）（Martin, et al., Helv. Chim. Acta 78: 486-504 (1995)）、すなわち、アルコキシ－アルコキシ基が挙げられる。別の例示的な改変は、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、２’－ＤＭＡＯＥとしても公知のＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野では２＊－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２＊－ＤＭＡＥＯＥとしても公知）、すなわち、２＊－Ｏ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ２）２である。
他の例示的な改変としては、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ３）、２’－アミノプロポキシ（２－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、および２’－フルオロ（２’－Ｆ）が挙げられる。ＲＮＡｉ剤のＲＮＡの他の部分、特に、３’末端ヌクレオチドの糖の３’部分または２’－５’連結したｓｉＲＮＡおよび５’末端ヌクレオチドの５’部分にも同様の改変を行うことができる。ＲＮＡｉ剤はまた、糖模倣物、例えば、シクロブチル部分をペントフラノシル糖の代わりに有し得る。
かかる改変糖構造の調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、米国特許第４，９８１，９５７号；同第５，１１８，８００号；同第５，３１９，０８０号；同第５，３５９，０４４号；同第５，３９３，８７８号；同第５，４４６，１３７号；同第５，４６６，７８６号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５１９，１３４号；同第５，５６７，８１１号；同第５，５７６，４２７号；同第５，５９１，７２２号；同第５，５９７，９０９号；同第５，６１０，３００号；同第５，６２７，０５３号；同第５，６３９，８７３号；同第５，６４６，２６５号；同第５，６５８，８７３号；同第５，６７０，６３３号；および同第５，７００，９２０号が挙げられる；そのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
ＲＮＡｉ剤はまた、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」と呼ばれることも多い）の改変または置換も含み得る。本明細書で使用される場合、「改変されていない」または「天然の」核酸塩基には、プリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）が含まれる。改変核酸塩基としては、他の合成核酸塩基および天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチル シトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に、５－ブロモ、５－トリフルオロメチル、および他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－デアザアデニン、ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンが挙げられる。さらなる核酸塩基としては、米国特許第３，６８７，８０８号に開示されているもの、Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine (Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, (2008))に開示されているもの；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering (pages 858-859, Kroschwitz, J. L, ed. John Wiley & Sons (1990))に開示されているもの、Englisch et al. (Angewandte Chemie, International Edition, 30, 613 (1991))により開示されているもの、およびSanghvi, Y S. (Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke, S. T. and Lebleu, B., Ed., CRC Press (1993))により開示されているものが挙げられる。これらの核酸塩基のうちのある特定のものは、本明細書に記載の技術の特色をなすオリゴマー化合物の結合親和性を増大させるために特に有用である。それらとしては、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシンを含めた５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、ならびにＮ－２、Ｎ－６、および０－６置換プリンが挙げられる。５－メチルシトシン置換は、核酸２重鎖安定性を０．６～１．２℃増大させることが示されており（Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. and Lebleu, B., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, pp. 276-278 (1993)）、例示的な塩基置換であり、２’－Ｏ－メトキシエチル糖改変と組み合わせるとさらにいっそう格別である。
ある特定の上記の改変核酸塩基ならびに他の改変核酸塩基の調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、米国特許第３，６８７，８０８号；米国特許第４，８４５，２０５号；同第５，１３０，３０号；同第５，１３４，０６６号；同第５，１７５，２７３号；同第５，３６７，０６６号；同第５，４３２，２７２号；同第５，４５７，１８７号；同第５，４５９，２５５号；同第５，４８４，９０８号；同第５，５０２，１７７号；同第５，５２５，７１１号；同第５，５５２，５４０号；同第５，５８７，４６９号；同第５，５９４，１２１号；同第５，５９６，０９１号；同第５，６１４，６１７号；同第５，６８１，９４１号；同第５，７５０，６９２号；同第６，０１５，８８６号；同第６，１４７，２００号；同第６，１６６，１９７号；同第６，２２２，０２５号；同第６，２３５，８８７号；同第６，３８０，３６８号；同第６，５２８，６４０号；同第６，６３９，０６２号；同第６，６１７，４３８号；同第７，０４５，６１０号；同第７，４２７，６７２号；および同第７，４９５，０８８号が挙げられる；そのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
ＲＮＡｉ剤のＲＮＡを、１つまたは複数のロックド核酸（ＬＮＡ）を含むように改変することもできる。ロックド核酸は、リボース部分が２’炭素と４’炭素を接続する追加的な橋を有する改変リボース部分を有するヌクレオチドである。この構造により、３’末端のリボースが構造的なコンフォメーションに有効に「ロック」される。ｓｉＲＮＡへのロックド核酸の付加により、血清中のｓｉＲＮＡ安定性が増大すること、およびオフターゲットの影響が低減することが示されている（Elmen, J., et al., Nucleic Acids Research 33 (1): 439-47 (2005)；Mook, O.R., et al., Mol Cane Ther 6 (3): 833-43 (2007)；Grunweller, A., et al, Nucleic Acids Research 31 (12): 3185-93 (2003)）。
ロックド核酸ヌクレオチドの調製が教示されている代表的な米国特許としては、これだけに限定されないが、以下が挙げられる：米国特許第６，２６８，４９０号；同第６，６７０，４６１号；同第６，７９４，４９９号；同第６，９９８，４８４号；同第７，０５３，２０７号；同第７，０８４，１２５号；および同第７，３９９，８４５号；そのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、併用療法は、１つまたは複数のアデノシン－グリコール核酸（「ＧＮＡ」）を含むように改変されたｓｉＲＮＡを含む。アデノシン－ＧＮＡの説明は、例えば、Zhang, et al.（JACS 127 (12): 4174-75 (2005)）に見いだすことができる。
一部の実施形態では、本開示は、ＲＮＡｉが、１つまたは複数の改変ヌクレオチドを有するオリゴヌクレオチド配列を含むｓｉＲＮＡである方法および関連する組成物を提供する。本明細書で使用される改変核酸配列内のヌクレオチド単量体の略語を表５に提供する。
Figure 2023531520000011
Figure 2023531520000012
Figure 2023531520000013
一部の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、ｓｉＲＮＡを含み、ここで、ｓｉＲＮＡは、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２２）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａＡｆｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２３）を含むアンチセンス鎖を有する。
さらに別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２４）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａ（Ａｇｎ）ｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２５）を含むアンチセンス鎖を有する。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、ここで、センス鎖は、配列番号１２２もしくは配列番号１２４、または配列番号１２２もしくは配列番号１２４からそれぞれ４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、または１ヌクレオチド以下異なる配列を含む。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、ここで、アンチセンス鎖は、配列番号１２３もしくは配列番号１２５、または配列番号１２３もしくは配列番号１２５からそれぞれ４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、または１ヌクレオチド以下異なる配列を含む。
一部の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、ｓｉＲＮＡを含み、ここで、ｓｉＲＮＡは、５’－ｇｓｇｓｕｇｇａＣｆｕＵｆＣｆＵｆｃｕｃａＡｆＵｆｕｕｕａＬ９６－３’（配列番号１２６）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＡｆｓａａａＵｆｕＧｆＡｆｇａｇａＡｆｇＵｆｃｃａｃｃｓａｓｃ－３’（配列番号１２７）を含むアンチセンス鎖を有する。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、ここで、センス鎖は、配列番号１２６、または配列番号１２６から４ヌクレオチド以下、３ヌクレオチド以下、２ヌクレオチド以下、もしくは１ヌクレオチド以下異なる配列を含む。
ｃ．リガンド－コンジュゲートしたＲＮＡｉ剤
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡに、ＲＮＡｉ剤の活性、細胞分布、または細胞内取り込みを増強する１つまたは複数のリガンド、部分、またはコンジュゲートを化学的に連結することを伴う改変を含む。かかる部分としては、これだけに限定されないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分（Letsinger, et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA 86: 6553-56 (1989)）、コール酸（Manoharan, et al., Biorg. Med. Chem. Let. 4: 1053-60 (1994)）、チオエーテル、例えば、ベリル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 660: 306-9 (1992)；Manoharan, et al., Biorg. Med. Chem. Let. 3: 2765-70 (1993)）、チオコレステロール（Oberhauser, et al., Nucl. Acids Res. 20: 533-38 (1992)）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras, et al., EMBO J 10: 1111-18 (1991)；Kabanov, et al., FEBS Lett. 259: 327-30 (1990)；Svinarchuk, et al., Biochimie 75: 49-54 (1993)）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホネート（Manoharan, et al., Tetrahedron Lett. 36: 3651-54 (1995)；Shea, et al., Nucl. Acids Res. 18: 3777-83 (1990)）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan, et al., Nucleosides ＆ Nucleotides 14: 969-73 (1995)）、またはアダマンタン酢酸（Manoharan, et al., Tetrahedron Lett. 36: 3651-54 (1995)）、パルミチル部分（Mishra, et al., Biochim. Biophys. Acta 1264: 229-37 (1995)）、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニルオキシコレステロール部分（Crooke, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 277: 923-37 (1996)）が挙げられる。
一部の実施形態では、リガンドは、それが組み入れられるＲＮＡｉ剤の分布、ターゲティング、または寿命を変更するものである。一部の実施形態では、リガンドは、選択された標的、例えば、分子、細胞、または細胞型、コンパートメント、例えば、細胞内もしくは器官内コンパートメント、組織、器官、または体の領域に対する、例えば、かかるリガンドが存在しない種と比較して増強された親和性をもたらす。かかる実施形態では、リガンドは、２重鎖核酸の２重鎖形成には関与しない。
リガンドは、天然に存在する物質、例えば、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、またはグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、またはヒアルロン酸）；または脂質を含み得る。リガンドはまた、組換えまたは合成分子、例えば、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸であってもよい。ポリアミノ酸の例としては、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸、スチレン－無水マレイン酸共重合体、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）共重合体、ジビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド共重合体（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（アクリル酸２－エチル）、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマー、またはポリホスファジンが挙げられる。ポリアミンの例としては、ポリエチレンイミン、ポリリシン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、偽ペプチド－ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの四級塩、またはアルファヘリックスペプチドが挙げられる。
リガンドには、ターゲティング基、例えば、細胞または組織ターゲティング剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば、特定の細胞型、例えば肝細胞に結合する抗体も含まれ得る。ターゲティング基は、甲状腺刺激ホルモン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタントタンパク質Ａ、ムチン型糖鎖、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、ビオチン、またはＲＧＤペプチドまたはＲＧＤペプチド模倣物であり得る。リガンドの他の例としては、色素、挿入剤（例えば、アクリジン）、クロスリンカー（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子（例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－０（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、０３－（オレオイル）リトコール酸、０３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射標識されたマーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進因子（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、テトラアザ大環状化合物のＥｕ３＋複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰ、およびＡＰが挙げられる。
リガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチド、例えば、共リガンドに対して特定の親和性を有する分子、または抗体、例えば、特定の細胞型、例えば肝細胞に結合する抗体であり得る。リガンドには、ホルモンおよびホルモン受容体も含まれ得る。リガンドには、非ペプチド性種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補助因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン多価マンノース、および多価フコースも含まれ得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの活性化因子、またはＮＦ－ＫＢの活性化因子であり得る。
リガンドは、物質、例えば、ＲＮＡｉ剤の細胞への取り込みを、例えば、細胞の細胞骨格を破壊することによって、例えば、細胞の微小管、マイクロフィラメント、および／または中間径フィラメントを破壊することによって、増大させることができる薬物であり得る。薬物は、例えば、タキソン（ｔａｘｏｎ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャプラキノリド（ｊａｐｌａｋｉｎｏｌｉｄｅ）、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシン、またはミオセルビンであり得る。
別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば肝細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンである。例示的なビタミンとしては、ビタミンＡ、Ｅ、およびＫが挙げられる。他の例示的なビタミンとしては、ビタミンＢ、例えば、葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサール、または標的細胞、例えば肝細胞によって取り込まれる他のビタミンもしくは栄養分が挙げられる。ＨＳＡおよび低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）も含まれる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤に付着させるリガンドは、薬物動態（ＰＫ）モジュレーターとして作用するものである。本明細書で使用される場合、「ＰＫモジュレーター」は、薬物動態モジュレーターを指す。ＰＫモジュレーターとしては、脂肪親和体、胆汁酸、ステロイド、リン脂質アナログ、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミンなどが挙げられる。例示的なＰＫモジュレーターとしては、これだけに限定されないが、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチンなどが挙げられる。いくつかのホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドも血清タンパク質に結合することが分かっており、したがって、短いオリゴヌクレオチド、例えば、骨格内に複数のホスホロチオエート連結を含む約５塩基、１０塩基、１５塩基、または２０塩基のオリゴヌクレオチドも、本明細書に記載の技術にリガンドとして（例えば、ＰＫモジュレートリガンドとして）適用できる。さらに、血清成分（例えば、血清タンパク質）に結合するアプタマーも、本明細書に記載の実施形態におけるＰＫモジュレートリガンドとしての使用に適する。
（ｉ）脂質コンジュゲート。一部の実施形態では、リガンドまたはコンジュゲートは、脂質または脂質に基づく分子である。脂質または脂質に基づくリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する抵抗性を増大し得る、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜へのターゲティングもしくは輸送を増大し得る、および／または（ｃ）血清タンパク質、例えばＨＳＡへの結合を調整するために使用することができる。かかる脂質または脂質に基づく分子は、血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合し得る。ＨＳＡに結合するリガンドにより、コンジュゲートを体の標的組織、例えば、腎臓ではない標的組織に分布させることが可能になる。例えば、標的組織は、肝臓の実質細胞を含めた肝臓であり得る。ＨＳＡに結合し得る他の分子もリガンドとして使用することができる。例えば、ネプロキシンまたはアスピリンを使用することができる。
脂質に基づくリガンドを使用して、コンジュゲートの標的組織への結合を阻害する、例えば、制御することができる。例えば、ＨＳＡにより強力に結合する脂質または脂質に基づくリガンドは、腎臓にターゲティングされる可能性が低くなり、したがって、体内から取り除かれる可能性が低くなる。コンジュゲートを腎臓にターゲティングするためには、ＨＳＡにあまり強力に結合しない脂質または脂質に基づくリガンドを使用することができる。
一部の実施形態では、脂質に基づくリガンドは、ＨＳＡに結合する。脂質に基づくリガンドは、ＨＳＡに十分な親和性で結合し得、したがって、コンジュゲートは腎臓ではない組織に分布する。いくつかの特定の実施形態では、ＨＳＡ－リガンド結合は可逆的である。
一部の他の実施形態では、脂質に基づくリガンドはＨＳＡに弱く結合するまたは全く結合せず、したがって、コンジュゲートは腎臓に分布する。脂質に基づくリガンドの代わりにまたはそれに加えて、腎臓細胞にターゲティングされる他の部分を使用することもできる。
（ｉｉ）細胞透過ペプチドおよび薬剤。別の態様では、リガンドは、細胞透過剤、例えば、ヘリックス細胞透過剤である。一部の実施形態では、薬剤は両親媒性である。例示的な薬剤は、ｔａｔまたはアンテナペディア（antennopedia）などのペプチドである。薬剤がペプチドである場合、ペプチジル模倣物、逆転異性体、非ペプチドまたは偽性ペプチド連結、およびＤ－アミノ酸の使用を含めた、改変されたものであってよい。一部の実施形態では、ヘリックス薬剤は、アルファヘリックス薬剤である。いくつかの特定の実施形態では、ヘリックス薬剤は、親油相および疎油相を有する。
「細胞透過ペプチド」は、細胞、例えば、微生物細胞、例えば、細菌もしくは真菌細胞、または哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞を透過することが可能である。微生物細胞透過性ペプチドは、例えば、アルファヘリックス直鎖ペプチド（例えば、ＬＬ－３７またはＣｅｒｏｐｉｎ ＰＩ）、ジスルフィド結合含有ペプチド（例えば、ａ－デフェンシン、β－デフェンシン、もしくはバクテネシン）、または優勢なアミノ酸を１つまたは２つのみ含有するペプチド（例えば、ＰＲ－３９またはインドリシジン）であり得る。
リガンドは、ペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。ペプチド模倣物（本明細書ではオリゴペプチド模倣物とも呼ばれる）は、天然のペプチドと同様の定義された三次元構造にフォールディングすることが可能な分子である。ペプチドおよびペプチド模倣物をＲＮＡｉ剤に付着させることにより、例えば、細胞による認識および吸収を増強することによって、ＲＮＡｉの薬物動態分布に影響を及ぼすことができる。ペプチドまたはペプチド模倣物部分は、約５～５０アミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。
ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、細胞透過ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプチド、または疎水性ペプチド（例えば、主にＴｙｒ、ＴｒｐまたはＰｈｅからなる）であり得る。ペプチド部分は、デンドリマーペプチド、拘束されたペプチドまたは架橋結合したペプチドであり得る。別の代替では、ペプチド部分は、疎水性膜移行配列（ＭＴＳ）を含み得る。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号１２８）を有するＲＦＧＦである。疎水性ＭＴＳを含有するＲＦＧＦアナログ（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（配列番号１２９）もターゲティング部分になり得る。ペプチド部分は、ペプチド、オリゴヌクレオチド、およびタンパク質を含めた大きな極性分子を、細胞膜を横切って運ぶことができる「送達」ペプチドであり得る。例えば、ＨＩＶ Ｔａｔタンパク質由来の配列（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ（配列番号１３０）およびＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａタンパク質由来の配列（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫ（配列番号１３１）は、送達ペプチドとして機能することが可能であることが見いだされている。ペプチドまたはペプチド模倣物は、例えば、ファージディスプレイライブラリー、または１ビーズ１化合物（ｏｎｅ－ｂｅａｄ－ｏｎｅ－ｃｏｍｐｏｕｎｄ）（ＯＢＯＣ）コンビナトリアルライブラリー（Lam, et al., Nature 354: 82-84 (1991)）から同定されたペプチドなど、ＤＮＡのランダムな配列によってコードされるものであり得る。
細胞透過ペプチドには、核局在化シグナル（ＮＬＳ）も含まれ得る。例えば、細胞透過ペプチドは、２つの部分からなる両親媒性ペプチド、例えば、ＨＩＶ－１ ｇｐ４１とＳＶ４０ラージＴ抗原のＮＬＳの融合ペプチドドメインに由来するＭＰＧであり得る（Simeoni, et al., Nucl. Acids Res. 31: 2717-24 (2003)）。
（ｉｉｉ）炭水化物コンジュゲート。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤オリゴヌクレオチドは、炭水化物コンジュゲートをさらに含む。炭水化物コンジュゲートは、核酸、ならびにｉｎ ｖｉｖｏ治療的使用に適した組成物のｉｎ ｖｉｖｏ送達に有利であり得る。本明細書で使用される場合、「炭水化物」は、少なくとも６つの炭素原子を有し（直鎖、分枝、もしくは環状であり得る）、各炭素原子に酸素、窒素、もしくは硫黄原子が結合した１つもしくは複数の単糖単位で構成される炭水化物自体であるか；または、各々が少なくとも６つの炭素原子を有し（直鎖、分枝、もしくは環状であり得る）、各炭素原子に酸素、窒素、もしくは硫黄原子が結合した１つもしくは複数の単糖単位で構成される炭水化物部分をその一部として有する化合物であるかのいずれかの化合物を指す。代表的な炭水化物としては、糖（約４～９の単糖単位を含有する単糖、二糖、三糖、およびオリゴ糖）、ならびに多糖、例えば、デンプン、グリコーゲン、セルロース、および多糖ゴムが挙げられる。具体的な単糖としてはＣ５およびそれを超える（一部の実施形態では、Ｃ５～Ｃ８）糖が挙げられ、二糖および三糖には２つまたは３つの単糖単位（一部の実施形態では、Ｃ５～Ｃ８）を有する糖が含まれる。
一部の実施形態では、炭水化物コンジュゲートは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023531520000014
Figure 2023531520000015
Figure 2023531520000016
Figure 2023531520000017
Figure 2023531520000018
本明細書に記載の実施形態における使用のための別の代表的な炭水化物コンジュゲートとしては、これだけに限定されないが、
Figure 2023531520000019
 （式ＸＸＩＩ）、（式中、ＸまたはＹのうちの一方がオリゴヌクレオチドである場合、他方は水素である）
が挙げられる。
一部の実施形態では、炭水化物コンジュゲートは、例えば、これだけに限定されないが、ＰＫモジュレーター、エンドソーム溶解性リガンド、または細胞透過ペプチドなどの別のリガンドをさらに含む。
（ｉｖ）リンカー。一部の実施形態では、本明細書に記載のコンジュゲートをＲＮＡｉ剤オリゴヌクレオチドに、切断可能または切断不可能であり得る様々なリンカーを用いて付着させることができる。
用語「リンカー」または「連結基」は、化合物の２つの部分を接続する有機部分を意味する。リンカーは、典型的には、直接結合または原子、例えば、酸素もしくは硫黄、単位、例えば、ＮＲ８、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、ＳＯ２ＮＨ、または、例えば、これだけに限定されないが、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、アリールアルキル、アリールアルケニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールアルキニル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロシクリルアルケニル、ヘテロシクリルアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アルキルアリールアルキル、アルキルアリールアルケニル、アルキルアリールアルキニル、アルケニルアリールアルキル、アルケニルアリールアルケニル、アルケニルアリールアルキニル、アルキニルアリールアルキル、アルキニルアリールアルケニル、アルキニルアリールアルキニル、アルキルヘテロアリールアルキル、アルキルヘテロアリールアルケニル、アルキルヘテロアリールアルキニル、アルケニルヘテロアリールアルキル、アルケニルヘテロアリールアルケニル、アルケニルヘテロアリールアルキニル、アルキニルヘテロアリールアルキル、アルキニルヘテロアリールアルケニル、アルキニルヘテロアリールアルキニル、アルキルヘテロシクリルアルキル、アルキルヘテロシクリルアルケニル、アルキルヘテロシクリルアルキニル、アルケニルヘテロシクリルアルキル、アルケニルヘテロシクリルアルケニル、アルケニルヘテロシクリルアルキニル、アルキニルヘテロシクリルアルキル、アルキニルヘテロシクリルアルケニル、アルキニルヘテロシクリルアルキニル、アルキルアリール、アルケニルアリール、アルキニルアリール、アルキルヘテロアリール、アルケニルヘテロアリール、およびアルキニルヘテロアリールなどの原子の鎖であって、１つもしくは複数のメチレンがＯ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（Ｒ８）、Ｃ（Ｏ）、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、または置換もしくは非置換複素環式によって中断もしくは終止されていてよく、ここで、Ｒ８は、水素、アシル、脂肪族、もしくは置換脂肪族である、原子の鎖、を含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、１～２４原子、４～２４原子、６～１８原子、８～１８原子、または８～１６原子である。
切断可能な連結基は、細胞の外側では十分に安定であるが、標的細胞に進入すると、切断されて、リンカーによって保持されていた２つの部分が放出される。ある特定の実施形態では、切断可能な連結基は、標的細胞内または第１の参照条件下（例えば、細胞内条件を模倣するまたは表すように選択することができる）では、被験体の血液中または第２の参照条件下（例えば、血液中または血清中で見いだされる条件を模倣するまたは表すように選択することができる）よりも少なくとも１０倍、または少なくとも１００倍の速さで切断される。
切断可能な連結基は、切断因子、例えば、ｐＨ、酸化還元電位、または分解性分子の存在の影響を受けやすい。一般に、切断因子は、細胞の内側に、血清中または血液中よりも広く行き渡っている、またはより高いレベルもしくは活性で見いだされる。かかる分解性剤の例としては、例えば、特定の基質に対して選択されるまたは基質特異性を有さない酸化還元剤が挙げられ、それらには、酸化もしくは還元酵素または還元剤、例えば、酸化還元により切断可能な連結基を還元によって分解し得る、細胞内に存在するメルカプタン；エステラーゼ；エンドソームまたは酸性環境を創出し得る薬剤、例えば、５またはそれ未満のｐＨをもたらすもの；酸により切断可能な連結基を、一般酸、ペプチダーゼ（基質特異的であり得る）、およびホスファターゼとして作用することによって加水分解または分解する酵素が含まれる。切断可能な連結基、例えば、ジスルフィド結合は、ｐＨの影響を受けやすい可能性がある。ヒト血清のｐＨは７．４であるが、一方、細胞内の平均ｐＨはわずかに低く、約７．１から７．３までにわたる。エンドソームのｐＨはより酸性であり、５．５～６．０の範囲であり、リソソームのｐＨはさらにいっそう酸性であり、およそ５．０である。一部のリンカーは、特定のｐＨで切断され、それにより、カチオン性脂質を細胞の内側のリガンドから、または細胞の所望のコンパートメント内に放出する、切断可能な連結基を有する。
リンカーは、特定の酵素によって切断可能である、切断可能な連結基を含み得る。リンカーに組み入れられる切断可能な連結基の型は、標的とされる細胞に依存し得る。例えば、肝臓を標的とするリガンドをカチオン性脂質にエステル基を含むリンカーを通じて連結することができる。肝細胞はエステラーゼに富み、したがって、リンカーは肝細胞においてエステラーゼに富まない細胞型よりも効率的に切断される。エステラーゼに富む他の細胞型としは、肺、腎皮質、および精巣の細胞が挙げられる。
ペプチダーゼに富む細胞型、例えば、肝細胞および滑膜細胞を標的とする場合には、ペプチド結合を含有するリンカーを使用することができる。
一般に、切断可能な連結基の候補の適合性は、分解性薬剤（または条件）の、候補連結基を切断する能力を試験することによって評価することができる。切断可能な連結基の候補を、血液中でまたは他の非標的組織と接触した際に切断に抵抗する能力も試験することが望ましい場合がある。したがって、第１の条件と第２の条件との間の相対的な切断されやすさを決定することができ、ここで、第１の条件は、標的細胞における切断を示すように選択され、第２の条件は、他の組織または生体液、例えば、血液もしくは血清における切断を示すように選択される。評価は、無細胞系において、細胞において、細胞培養物において、器官または組織培養物において、または動物全体において行うことができる。無細胞または培養条件で最初の評価を行うこと、および動物全体におけるさらなる評価によって確認することが有用であり得る。ある特定の実施形態では、有用な候補化合物は、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎ ｖｉｔｒｏにおける条件下で）、血液または血清（または細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎ ｖｉｔｒｏにおける条件下）と比較して少なくとも２倍、少なくとも４倍、少なくとも１０倍または少なくとも１００倍の速さで切断される。
切断可能な連結基の１つのクラスは、還元または酸化時に切断される、酸化還元により切断可能な連結基である。還元により切断可能な連結基の例は、ジスルフィド連結基（－Ｓ－Ｓ－）である。切断可能な連結基の候補が適切な「還元により切断可能な連結基」であるかどうか、または、例えば、特定のＲＮＡｉ部分および特定のターゲティング剤との使用に適するものであるかどうかを決定するために、本明細書に記載の方法に頼ることができる。例えば、候補を、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）または他の還元剤と共に、細胞、例えば標的細胞において観察される切断速度を模倣する当技術分野で公知の試薬を使用してインキュベートすることによって評価することができる。候補を、血液または血清条件を模倣するように選択される条件下で評価することもできる。一部の実施形態では、血液中で切断される候補化合物は多くても１０％である。ある特定の実施形態では、有用な候補化合物は、細胞において（または細胞内条件を模倣するように選択されたｉｎ ｖｉｔｒｏにおける条件下で）、血液（または細胞外条件を模倣するように選択されたｉｎ ｖｉｔｒｏにおける条件下）と比較して少なくとも２倍、少なくとも４倍、少なくとも１０倍、または少なくとも１００倍の速さで分解される。候補化合物の切断速度を、標準の酵素キネティクスアッセイを使用し、細胞内媒体を模倣するように選択された条件下で決定し、細胞外媒体を模倣するように選択された条件と比較することができる。
リン酸に基づく切断可能な連結基は、リン酸基を分解または加水分解する薬剤によって切断される。細胞内のリン酸基を切断する薬剤の例は、酵素、例えば細胞内のホスファターゼである。リン酸に基づく連結基の例は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＲｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＲｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｒｋ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｒｋ）－Ｓ－である。ある特定の実施形態では、リン酸に基づく連結基は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＳＨ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（０）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｓ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）－Ｏ－、－Ｏ－Ρ（Ｏ）（Η）－Ｏ－、－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｏ－、－Ｓ－Ｐ（Ｏ）（Ｈ）－Ｓ－、および－Ｏ－Ｐ（Ｓ）（Ｈ）－Ｓ－から選択される。特定の実施形態では、リン酸連結基は、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）－Ｏ－である。これらの候補を、上記のものと類似の方法を使用して評価することができる。
酸により切断可能な連結基は、酸性条件下で切断される連結基である。一部の実施形態では、酸により切断可能な連結基は、ｐＨが約６．５またはそれ未満（例えば、約６．０、５．５、５．０、またはそれ未満）の酸性の環境において、または、一般酸として作用し得る酵素などの薬剤によって切断される。細胞では、特定の低ｐＨ細胞小器官、例えば、エンドソームおよびリソソームにより、酸により切断可能な連結基に対する切断環境がもたらされ得る。酸により切断可能な連結基の例としては、これだけに限定されないが、ヒドラゾン、エステル、およびアミノ酸のエステルが挙げられる。酸により切断可能な基は、一般式－Ｃ＝Ｎ－、Ｃ（Ｏ）Ｏ、または－ＯＣ（Ｏ）を有し得る。一部の実施形態では、エステル（アルコキシ基）の酸素に付着した炭素は、アリール基、置換アルキル基、または第三級アルキル基、例えば、ジメチルペンチルまたはｔ－ブチルである。これらの候補を、上記のものと類似の方法を使用して評価することができる。
エステルに基づく切断可能な連結基は、酵素、例えば、細胞内のエステラーゼおよびアミダーゼによって切断される。エステルに基づく切断可能な連結基の例としては、これだけに限定されないが、アルキレン基、アルケニレン基、およびアルキニレン基のエステルが挙げられる。エステルに基づく切断可能な連結基は、一般式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、または－ＯＣ（Ｏ）－を有する。これらの候補を、上記のものと類似の方法を使用して評価することができる。
ペプチドに基づく切断可能な連結基は、酵素、例えば、細胞内のペプチダーゼおよびプロテアーゼによって切断される。ペプチドに基づく切断可能な連結基は、アミノ酸間で形成されて、オリゴペプチド（例えば、ジペプチド、トリペプチドなど）およびポリペプチドを生じさせるペプチド結合である。ペプチドに基づく切断可能な基は、アミド基（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）を含まない。アミド基は、任意のアルキレン、アルケニレン、またはアルキニレンの間で形成され得る。ペプチド結合は、アミノ酸間で形成されてペプチドおよびタンパク質を生じさせる、特別な型のアミド結合である。ペプチドに基づく切断基は、一般に、アミノ酸間で形成されてペプチドおよびタンパク質を生じさせる、アミド官能基全体は含まない、ペプチド結合（すなわち、アミド結合）に限定される。ペプチドに基づく切断可能な連結基は、一般式－ＮＨＣＨＲＡＣ（Ｏ）ＮＨＣＨＲＢＣ（Ｏ）－を有し、式中、ＲＡおよびＲＢは、２つの隣接するアミノ酸のＲ基である。これらの候補を、上記のものと類似の方法を使用して評価することができる。
リンカーを用いた代表的な炭水化物コンジュゲートとしては、これだけに限定されないが、
Figure 2023531520000020
Figure 2023531520000021
 （式中、ＸまたはＹの一方がオリゴヌクレオチドである場合、他方は水素である）
が挙げられる。
組成物および方法のある特定の実施形態では、リガンドは、二価または三価の分枝リンカーを通じて付着した１つまたは複数の「ＧａｌＮＡｃ」（Ｎ－アセチルガラクトサミン）誘導体である。例えば、一部の実施形態では、以下の構造に示す通り、ｓｉＲＮＡはＧａｌＮＡｃリガンドとコンジュゲートしている：
Figure 2023531520000022
 （ここで、ＸはＯまたはＳである）。
一部の実施形態では、以下の構造に示す通り、ｓｉＲＮＡのセンス鎖とリガンドがコンジュゲートしており、リガンドはセンス鎖の３’末端にリンカーを通じて付着している：
Figure 2023531520000023
 （ここで、ＸはＯまたはＳである）。
一部の実施形態では、併用療法は、式（ＸＸＸＩ）～（ＸＸＸＩＶ）のいずれかに示される構造の群から選択される二価または三価の分枝リンカーとコンジュゲートしたｓｉＲＮＡを含む：
Figure 2023531520000024
 （式中：
ｑ２Ａ、ｑ２Ｂ、ｑ３Ａ、ｑ３Ｂ、ｑ４Ａ、ｑ４Ｂ、ｑ５Ａ、ｑ５Ｂ、およびｑ５Ｃは、各出現について独立に、０～２０を表し、ここで、反復単位は同じであっても異なってもよい；
Ｐ２Ａ、Ｐ２Ｂ、Ｐ３Ａ、Ｐ３Ｂ、Ｐ４Ａ、Ｐ４Ｂ、Ｐ５Ａ、Ｐ５Ｂ、Ｐ５Ｃ、Ｔ２Ａ、Ｔ２Ｂ、Ｔ３Ａ、Ｔ３Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ４Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ５Ｂ、およびＴ５Ｃは、各出現について各々独立に、非存在、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨ、またはＣＨ２Ｏである；
Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｂ、Ｑ３Ａ、Ｑ３Ｂ、Ｑ４Ａ、Ｑ４Ｂ、Ｑ５Ａ、Ｑ５Ｂ、およびＱ５Ｃは、各出現について独立に、非存在、アルキレン、または置換アルキレンであり、ここで、１つまたは複数のメチレンは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｒ’）＝Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ≡ＣまたはＣ（Ｏ）のうちの１つまたは複数によって中断または終止されていてよい；
Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、およびＲ５Ｃは、各出現について各々独立に、非存在、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣＨ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒａ）－ＮＨ－、ＣＯ、ＣＨ＝Ｎ－Ｏ、
Figure 2023531520000025
 、またはヘテロシクリルである；
Ｌ２Ａ、Ｌ２Ｂ、Ｌ３Ａ、Ｌ３Ｂ、Ｌ４Ａ、Ｌ４Ｂ、Ｌ５Ａ、Ｌ５Ｂ、およびＬ５Ｃは、リガンドを表す；すなわち、各出現について各々独立に、単糖（例えば、ＧａｌＮＡｃなど）、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、または多糖を表す；Ｒａは、Ｈまたはアミノ酸側鎖である。標的遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤との使用のためには、三価のコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃ誘導体、例えば、式（ＸＸＸＩＶ）：
Figure 2023531520000026
 （式中、Ｌ５Ａ、Ｌ５ＢおよびＬ５Ｃは、単糖、例えば、ＧａｌＮＡｃ誘導体を表す）
のものが特に有用である。
適切な二価および三価の分枝リンカー基とコンジュゲートしたＧａｌＮＡｃ誘導体の例としては、これだけに限定されないが、式Ｉ、ＶＩ、Ｘ、ＩＸ、およびＸＩＩとして上に列挙されている構造が挙げられる。
ＲＮＡコンジュゲートの調製が教示されている代表的な米国特許としては、米国特許第４，８２８，９７９号；同第４，９４８，８８２号；同第５，２１８，１０５号；同第５，５２５，４６５号；同第５，５４１，３１３号；同第５，５４５，７３０号；同第５，５５２，５３８号；同第５，５７８，７１７号、同第５，５８０，７３１号；同第５，５９１，５８４号；同第５，１０９，１２４号；同第５，１１８，８０２号；同第５，１３８，０４５号；同第５，４１４，０７７号；同第５，４８６，６０３号；同第５，５１２，４３９号；同第５，５７８，７１８号；同第５，６０８，０４６号；同第４，５８７，０４４号；同第４，６０５，７３５号；同第４，６６７，０２５号；同第４，７６２，７７９号；同第４，７８９，７３７号；同第４，８２４，９４１号；同第４，８３５，２６３号；同第４，８７６，３３５号；同第４，９０４，５８２号；同第４，９５８，０１３号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，０８２，８３０号；同第５，１１２，９６３号；同第５，２１４，１３６号；同第５，２４５，０２２号；同第５，２５４，４６９号；同第５，２５８，５０６号；同第５，２６２，５３６号；同第５，２７２，２５０号；同第５，２９２，８７３号；同第５，３１７，０９８号；同第５，３７１，２４１号、同第５，３９１，７２３号；同第５，４１６，２０３号、同第５，４５１，４６３号；同第５，５１０，４７５号；同第５，５１２，６６７号；同第５，５１４，７８５号；同第５，５６５，５５２号；同第５，５６７，８１０号；同第５，５７４，１４２号；同第５，５８５，４８１号；同第５，５８７，３７１号；同第５，５９５，７２６号；同第５，５９７，６９６号；同第５，５９９，９２３号；同第５，５９９，９２８号および同第５，６８８，９４１号；同第６，２９４，６６４号；同第６，３２０，０１７号；同第６，５７６，７５２号；同第６，７８３，９３１号；同第６，９００，２９７号；および同第７，０３７，６４６号が挙げられる；そのそれぞれが、かかる調製方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の場合には、ＲＮＡｉ剤のＲＮＡを、非リガンド基によって改変することができる。ＲＮＡｉ剤の活性、細胞分布または細胞内取り込みを増強するために多数の非リガンド分子がＲＮＡｉ剤とコンジュゲートされており、かかるコンジュゲーションを実施するための手順は科学文献において入手可能である。かかる非リガンド部分には、脂質部分、例えば、コレステロール（Kubo, T., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 365 (1): 54-61 (2007)；Letsinger, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 6553 (1989)）、コール酸（Manoharan, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 1053 (1994)）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Manoharan, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 660: 306 (1992)；Manoharan, et al., Bioorg. Med. Chem. Let. 3: 2765 (1993)）、チオコレステロール（Oberhauser, et al., Nucl. Acids Res. 20: 533 (1992)）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基（Saison-Behmoaras, et al., EMBO J. 10: 111 (1991)；Kabanov, et al., FEBS Lett. 259: 327 (1990)；Svinarchuk, et al., Biochimie 75: 49 (1993)）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Manoharan, et al., Tetrahedron Lett. 36: 3651 (1995)；Shea, et al., Nucl. Acids Res. 18: 3777 (1990)）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Manoharan, et al., Nucleosides & Nucleotides 14: 969 (1995)）またはアダマンタン酢酸（Manoharan, et al., Tetrahedron Lett. 36: 3651 (1195)）、パルミチル部分（Mishra, et al., Biochim. Biophys. Acta 1264: 229 (1995)）、またはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Crooke, et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 277: 923 (1996)）が含められている。
典型的なコンジュゲーションプロトコールは、配列の１つまたは複数の位置にアミノリンカーを有するＲＮＡの合成を伴う。次いで、アミノ基を、適切なカップリングまたは活性化試薬を使用してコンジュゲートした分子と反応させる。コンジュゲーション反応は、まだ固体支持体に結合しているＲＮＡを用いて、またはＲＮＡの切断後、液相においてのいずれかで実施することができる。ＨＰＬＣによるＲＮＡコンジュゲートの精製により、典型的には、純粋なコンジュゲートがもたらされる。
ｄ．ＲＮＡｉ剤送達
「細胞に導入すること」は、ＲＮＡｉ剤について言及する場合、当業者に理解される通り、細胞内への取り込みまたは吸収を容易にすることまたはもたらすことを意味する。
ＲＮＡｉ剤の吸収または取り込みは、助力なしの拡散性もしくは能動的な細胞プロセスを通じて、または補助的な薬剤もしくはデバイスによって起こり得る。この用語の意味は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける細胞に限定されない；ＲＮＡｉ剤はまた、細胞が生きている生物体の一部である場合にも「細胞に導入」され得る。かかる場合では、細胞に導入することには、生物体への送達も含まれる。例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ送達に関して、ＲＮＡｉ剤を組織部位に注射すること、または全身投与することができる。ｉｎ ｖｉｖｏ送達は、ベータ－グルカン送達系、例えば、かかる送達系に関連する教示について参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，０３２，４０１号および同第５，６０７，６７７号、および米国特許出願公開第２００５／０２８１７８１号に記載されているものによるｉｎ ｖｉｖｏ送達であり得る。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける細胞への導入は、当技術分野で公知の方法、例えば、電気穿孔およびリポフェクションを含む。さらなる手法が本明細書において下に記載されている、または当技術分野で公知である。
それを必要とする被験体へのＲＮＡｉ剤の送達は、多数の異なるやり方で実現することができる 。ｉｎ ｖｉｖｏ送達を、ＲＮＡｉ剤、例えばｓｉＲＮＡを含む組成物を被験体に投与することによって直接実施することができる。あるいは、送達を、ＲＮＡｉ剤をコードし、その発現を方向づける１つまたは複数のベクター投与することによって間接的に実施することができる。これらの代替を以下にさらに考察する。
一般に、核酸分子を送達する任意の方法をＲＮＡｉ剤との使用のために適合させることができる（例えば、かかる送達方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれるAkhtar S. and Julian RL., Trends Cell. Biol. 2 (5): 139-44 (1992)およびＷＯ９４／０２５９５を参照されたい）。ＲＮＡｉ剤をｉｎ ｖｉｖｏで首尾よく送達することに関して３つの因子が特に重要である：（ａ）送達される分子の生物学的安定性、（２）非特異的な影響の防止、および（３）送達される分子の標的組織内への蓄積。ＲＮＡｉ剤の非特異的な影響は、局所投与によって、例えば、組織内への直接注射または埋め込み（非限定的な例として、腫瘍）または調製物を局部的に投与することによって最小化することができる。処置部位への局所投与により、薬剤の局所的濃度が最大になり、そうでなければ薬剤による害を受ける恐れがあるまたは薬剤を分解する可能性がある薬剤の全身組織への曝露が限定され、投与されるＲＮＡｉ剤の総用量を減少させることが可能になる。いくつかの研究により、ＲＮＡｉ剤を局所的に投与した場合の遺伝子産物の上首尾のノックダウンが示された。例えば、ＶＥＧＦ ｓｉＲＮＡの、カニクイザルにおける硝子体内注射（Tolentino, M.J., et al., Retina 24: 132-38 (2004)）およびマウスにおける網膜下注射（Reich, S.J., et al., Mol. Vis. 9: 210-16 (2003)）による眼内送達のどちらによっても、加齢黄斑変性症の実験モデルにおける血管新生が予防されることが示された。さらに、マウスにおけるｓｉＲＮＡの直接腫瘍内注射により、腫瘍体積が縮小し（Pille, J., et al., Mol. Ther. 11: 267-74 (2005)）、腫瘍担持マウスの生存を延長することができる（Kim, W.J., et al., Mol. Ther. 14: 343-50 (2006)；Li, S., et al., Mol. Ther. 15: 515-23 (2007)）。直接注射によるＣＮＳへの局所送達（Dorn, G., et al., Nucleic Acids 32: e49 (2004)；Tan, P.H., et al., Gene Ther. 12: 59-66 (2005)；Makimura, H., et al., BMC Neurosci. 3: 18 (2002)；Shishkina, G.T., et al., Neuroscience 129: 521-28 (2004)；Thakker, E.R., et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101: 17270-75 (2004)；Akaneya,Y., et al., J. Neurophysiol. 93: 594-602 (2005)）、および鼻腔内投与による肺への局所送達（Howard, K.A., et al., Mol. Ther. 14: 476-84 (2006)；Zhang, X., et al., J. Biol. Chem. 279: 10677-84 (2004)；Bitko, V., et al., Nat. Med. 11: 50-55 (2005)）に関しても、ＲＮＡ干渉の成功が示されている。疾患を処置するためにＲＮＡｉ剤を全身投与するために、ＲＮＡを改変する、またはあるいは、薬物送達系を使用して送達することができる；どちらの方法も、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによるｓｉＲＮＡの迅速な分解が防止されるように作用する。ＲＮＡまたは医薬キャリアーの改変により、ＲＮＡｉ剤組成物を標的組織にターゲティングし、望ましくないオフターゲットの影響を回避することも可能になり得る。ＲＮＡｉ剤を、親油基、例えば、コレステロールとの化学的なコンジュゲーションにより、細胞内取り込みが増強され、分解が防止されるように改変することができる。例えば、親油性コレステロール部分とコンジュゲートしたＡｐｏＢに指向されるＲＮＡｉ剤をマウスに全身注射し、肝臓および空腸の両方においてａｐｏＢ ｍＲＮＡのノックダウンがもたらされた（Soutschek, J., et al., Nature 432: 173-78 (2004)）。一部の他の実施形態では、ＲＮＡｉ剤を、薬物送達系、例えば、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン送達系を使用して送達することができる。正に荷電したカチオン送達系により、典型的には、ＲＮＡｉ剤（負に荷電している）の、負に荷電した細胞膜への結合が容易になり、そこでの相互作用が増強されて、細胞によるＲＮＡｉ剤の効率的な取り込みが可能になる。カチオン性脂質、デンドリマー、またはポリマーをＲＮＡｉに結合させるか、またはＲＮＡｉ剤を包み込む小胞もしくはミセルが形成されるように誘導することができるのいずれかである（例えば、Kim, S,H., et al., Journal of Controlled Release 129 (2): 107-16 (2008)を参照されたい）。小胞またはミセルの形成により、全身投与した場合のＲＮＡｉ剤の分解がさらに防止される。カチオン－ＲＮＡｉ剤複合体を作製し、投与する方法は、当業者の能力の範囲内に十分に入る（例えば、Sorensen, D.R., et al., J. Mol. Biol 327: 761-66 (2003)；Verma, U.N., et al., Clin. Cancer Res. 9: 1291-1300 (2003)；Arnold, A.S. et al., J. Hypertens. 25: 197-205 (2007)を参照されたい；その方法が参照により本明細書に組み込まれる）。ＲＮＡｉ剤の全身送達のために有用な薬物送達系のいくつかの非限定的な例としては、ＤＯＴＡＰ（Sorensen, D.R., et al. (2003), supra；Verma, U.N., et al., (2003), supra）オリゴフェクタミン、「固体核酸脂質粒子」（Zimmermann, T.S., et al., Nature 441: 111-14 (2006)）、カルジオリピン（Chien, P.Y., et al., Cancer Gene Ther. 12: 321-28 (2005)；Pal, A., et al., Int J. Oncol. 26: 1087-91 (2005)）、ポリエチレンイミン（Bonnet, M.E., et al., Pharm. Res. 25 (12): 2972-82；Aigner, A., J. Biomed. Biotechnol. 2006 (4): 71659 (2006)）、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド（Liu, S., Mol. Pharm. 3: 472-487 (2006)）、およびポリアミドアミン（Tomalia, D.A., et al., Biochem. Soc. Trans. 35: 61-7 (2007)；Yoo, H., et al., Pharm. Res. 16: 1799-1804 (1999)）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「ＳＮＡＬＰ」は、安定な核酸－脂質粒子を指す。ＳＮＡＬＰは、核酸、例えば、ＲＮＡｉ剤またはそれからＲＮＡｉ剤が転写されるところのプラスミドを含む還元状態の水性内部を被覆している脂質の小胞を表す。ＳＮＡＬＰは、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００６／０２４００９３号および同第ＵＳ２００７／０１３５３７２号、ならびに国際出願公開第ＷＯ２００９／０８２８１７号に記載されている。これらの出願はＳＮＡＬＰに関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、全身投与のために、ＲＮＡｉとシクロデキストリンの複合体を形成する。ＲＮＡｉおよびシクロデキストリンの投与方法および医薬組成物は、かかる組成物および方法に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，４２７，６０５号に見いだすことができる。一部の実施形態では、ＲＮＡｉをコードする遺伝子は、発現ベクターにコードされ、それにより発現される。ベクターおよびＲＮＡｉの送達におけるそれらの使用の例は、その例が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第ＵＳ２０１７／０３４９９００Ａ１号に記載されている。
ｅ．ＲＮＡｉ剤の医薬組成物および製剤
一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤、および薬学的に許容されるキャリアーまたは賦形剤を含有する医薬組成物が本明細書で提供される。ＲＮＡｉ剤を含有する医薬組成物は、被験体におけるＨＢＶ感染を処置するまたはＨＢＶウイルス負荷量を低減するための併用療法において有用である。かかる医薬組成物は、送達の方式に基づいて製剤化される。例えば、組成物を、非経口送達による、例えば、静脈内（ＩＶ）送達による全身投与用に、または、例えば、連続的なポンプ注入によるものなどの脳への注入による脳実質への直接送達用に製剤化することができる。
一部の状況では、「薬学的に許容されるキャリアー」または「賦形剤」は、１つまたは複数の核酸を動物に送達するための、薬学的に許容される溶媒、懸濁化剤、または任意の他の薬理学的に不活性なビヒクルである。賦形剤は液体のことも固体のこともあり、計画された投与様式を考慮して、核酸および所与の医薬組成物の他の成分と組み合わせた際に所望のかさ、一貫性などがもたらされるように選択される。典型的な薬学的に許容されるキャリアーまたは賦形剤としては、これだけに限定されないが、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトースおよび他の糖、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、リン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、ステアリン酸金属塩、硬化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム）；崩壊剤（例えば、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム）；および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）が挙げられる。
一部の実施形態では、核酸と有害に反応しない、注射によらない（ｎｏｎ－ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）投与に適した薬学的に許容される有機または無機賦形剤を使用して、本開示の組成物を製剤化することができる。適切な薬学的に許容されるキャリアーとしては、これだけに限定されないが、水、塩類溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
ある特定の状況では、核酸を局部的に投与するための製剤は、滅菌されたおよび滅菌されていない水溶液、一般的な溶媒、例えばアルコール中の非水溶液、または液体もしくは固体の油基剤中の核酸の溶液を含み得る。溶液は、緩衝剤、希釈剤および他の適切な添加剤も含み得る。核酸と有害に反応しない、注射によらない投与に適した薬学的に許容される有機または無機賦形剤を使用することができる。
適切な薬学的に許容される賦形剤としては、これだけに限定されないが、水、塩類溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡｉ剤を含有する医薬組成物を、ＨＢＶ遺伝子の発現を阻害するために十分な投薬量で投与する。一般に、ＲＮＡｉ剤の適切な用量は、１日当たりレシピエントの体重１キログラム当たり０．００１～２００．０ミリグラムの範囲内に入り、より典型的には、１日当たり体重１キログラム当たり１～５０ｍｇの範囲内に入る。例えば、ｓｉＲＮＡを、単回投薬当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇで投与することができる。医薬組成物を１日１回投与することができる、またはＲＮＡｉ剤を２回、３回、またはそれよりも多くの副用量（ｓｕｂ－ｄｏｓｅ）として１日を通して適切な間隔で、またはさらには制御放出製剤による連続的な注入もしくは送達を使用して投与することができる。その場合、１日の総投薬量を実現するために、各副用量に含有されるＲＮＡｉ剤を対応して少なくしなければならない。投薬量単位はまた、例えば数日間にわたるＲＮＡｉの持続放出をもたらす従来の持続放出製剤を使用した数日にわたる送達用に配合することもできる。持続放出製剤は当技術分野で周知であり、特定の部位への薬剤の送達のために特に有用であり、例えば、本明細書に記載の技術の薬剤と共に使用することができる。この実施形態では、投薬量単位は、対応する複数の１日用量を含有する。
ＨＢＶ遺伝子の発現のレベルに対する単回投薬の効果は長続きするものであり得、したがって、その後の用量を３日以下、４日以下、もしくは５日以下の間隔で、または１週間以下、２週間以下、３週間以下、もしくは４週間以下の間隔で投与することができる。
被験体を有効に処置するために必要な投薬量およびタイミングは、これだけに限定されないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、被験体の全般的な健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含めた、ある特定の因子の影響を受ける可能性があることが当業者には理解されよう。さらに、治療有効量の組成物を用いた被験体の処置は、単一の処置または一連の処置を含み得る。本明細書に記載の技術に包含される個々のＲＮＡｉ剤についての効果的な投薬量およびｉｎ ｖｉｖｏ半減期の推定は、従来の方法体系を使用して、または本明細書の他の箇所に記載の適切な動物モデルを使用したｉｎ ｖｉｖｏ試験に基づいて、行うことができる。
ＨＢＶ感染の研究のためにマウスモデルが利用可能であり、かかるモデルを、ＲＮＡｉのｉｎ ｖｉｖｏ試験のため、ならびにＨＢＶ遺伝子発現の低減に関して効果的な用量を決定するために使用することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物および製剤の投与は、外用（例えば、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）吸収パッチによるもの）、肺内（例えば、ネブライザーによるものを含めた、散剤またはエアロゾルの吸入もしくは吹送によるもの）；気管内；鼻腔内；表皮および経皮；経口；または非経口であり得る。非経口投与としては、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、および筋肉内注射もしくは注入；皮下投与（例えば、埋め込まれたデバイスを介したもの）；または頭蓋内投与（例えば、実質内、くも膜下腔内、もしくは脳室内投与によるもの）であり得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示されるＨＢＶを処置するための併用療法において使用されるＲＮＡｉ剤を皮下送達する。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤を、特定の組織、例えば肝臓（例えば、肝臓の肝細胞）が標的となるような様式で送達することができる。
外用投与用の医薬組成物および製剤は、経皮吸収パッチ、軟膏剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル、滴下剤、坐剤、噴霧剤、液剤、および散剤を含み得る。従来の医薬キャリアー、水性、粉末、または油性基剤、増粘剤などが必要であるまたは望ましい場合がある。被覆されたコンドーム、手袋なども有用であり得る。適切な外用製剤としては、本明細書に記載の技術の特色をなすＲＮＡｉが脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート剤、および界面活性物質などの外用送達剤と混和しているものが挙げられる。適切な脂質およびリポソームとしては、中性（例えば、ジオレオイルホスファチジルＤＯＰＥエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルコリンＤＭＰＣ、ジステアロイルホスファチジルコリン）、陰イオン性（例えば、ジミリストイルホスファチジルグリセロールＤＭＰＧ）、ならびにカチオン性（例えば、ジオレオイルテトラメチルアミノプロピルＤＯＴＡＰおよびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンＤＯＴＭＡ）が挙げられる。ＲＮＡｉ剤をリポソームに封入することもでき、リポソーム、特にカチオン性リポソームと複合体を形成させることもできる。あるいは、ＲＮＡｉ剤を脂質、特にカチオン性脂質と複合体を形成させることができる。適切な脂肪酸およびエステルとしては、これだけに限定されないが、アラキドン酸、オレイン酸、エイコサン酸、ラウリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、モノオレイン、ジラウリン、グリセリル １－モノカプレート、１－ドデシルアザシクロヘプタン－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、またはＣ１～２０アルキルエステル（例えば、イソプロピルミリステートＩＰＭ）、モノグリセリド、ジグリセリド、または薬学的に許容されるその塩が挙げられる。外用製剤の例は、かかる外用製剤に関連する教示に関して参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，７４７，０１４号に詳しく記載されている。
リポソームなどの小胞を、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤を送達するための製剤に使用することができる；かかる製剤は、望ましい特性、例えば、特異性および作用持続時間を有し得る。本明細書で使用される場合、用語「リポソーム」は、球状二重層（複数可）に配置された両親媒性脂質で構成される小胞を意味する。
リポソームは、親油性材料および水性内部から形成された膜を有する単層または多重膜小胞である。水性部分は、送達される組成物を含有する。カチオン性リポソームには、細胞壁と融合することができるという利点があり得る。非カチオン性リポソームは細胞壁と効率的に融合することはできないが、ｉｎ ｖｉｖｏではマクロファージによって取り込まれる可能性がある。リポソーム製剤の調製における重要な考慮事項は、リポソームの脂質表面電荷、小胞サイズ、および水性体積である。
一部の実施形態では、リポソーム送達には、以下の有利な特性があり得る：高度に変形可能であり、皮膚の細かい孔を通過することができること；生体適合性かつ生分解性であること；広範囲の水溶性および脂質可溶性薬物を組み入れることができること；それらの内部コンパートメントに封入された薬物を代謝および分解から保護することができること（Rosoff, in Pharmaceutical Dosage Forms, Lieberman, Rieger and Banker (Eds.), Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., volume 1, p. 245 (1998)）；外用送達に関しては、投与される薬物の高い全身吸収に関連する副作用が低減すること、投与された薬物が所望の標的にさらに蓄積すること、および、親水性および疎水性の両方の多種多様な薬物を皮膚内に投与することができること；ならびに、高分子量の核酸、鎮痛薬、抗体、およびホルモンを含む薬剤を皮膚に送達することができること。
リポソームは、２つの広範なクラスに入る。カチオン性リポソームは、正に荷電したリポソームであり、負に荷電した核酸分子と相互作用して安定な複合体を形成する。正に荷電したＤＮＡ／リポソーム複合体は、負に荷電した細胞表面に結合し、エンドソームに内部移行する。エンドソーム内の酸性ｐＨに起因してリポソームが破裂し、それらの内容物が細胞質中に放出される（Wang, et al., Biochem. Biophys. Res. Commun.147, 980-985 (1987)）。
ｐＨ感受性であるまたは負に荷電したリポソームは、核酸と複合体を形成するのではなく、核酸を捕える。ＤＮＡと脂質はどちらも同様に荷電しているので、複合体の形成ではなく反発が生じる。それにもかかわらず、一部のＤＮＡはこれらのリポソームの水性内部に補足される。ｐＨ感受性リポソームは、核酸を培養下の細胞単層に送達するために使用されている（例えば、Zhou, et al., Journal of Controlled Release 19, 269-74 (1992)）。
一部の実施形態では、リポソーム組成物は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、例えば、ダイズＰＣおよび卵ＰＣなどから形成される。一部の実施形態では、リポソーム組成物は、天然に由来のホスファチジルコリン以外のリン脂質を含む。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）またはジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から形成することができる。アニオン性リポソーム組成物はジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成することができ、一方、アニオン性融合性リポソームはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）から形成することができる。さらに他の実施形態では、リポソーム組成物は、リン脂質および／またはホスファチジルコリンおよび／またはコレステロールの混合物から形成される。
一部の実施形態では、リポソーム薬物製剤を皮膚に外用送達する。
一部の実施形態では、例えば、ＳＰＬＰ、ｐＳＰＬＰ、ＳＮＡＬＰ、または他の核酸－脂質粒子を形成するために、本明細書に記載の併用療法において使用するＲＮＡｉ剤を脂質製剤中に完全に封入する。本明細書で使用される場合、用語「ＳＮＡＬＰ」は、ＳＰＬＰを含めた安定な核酸－脂質粒子を指す。本明細書で使用される場合、用語「ＳＰＬＰ」は、脂質小胞内に封入されたプラスミドＤＮＡを含む核酸－脂質粒子を指す。ＳＮＡＬＰおよびＳＰＬＰは、典型的には、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、および粒子の凝集を防止する脂質（例えば、ＰＥＧ－脂質コンジュゲート）を含む。ＳＮＡＬＰおよびＳＰＬＰは、静脈内（ｉ．ｖ．）注射後の循環寿命の延長を示し、遠位部位（例えば、投与部位から物理的に隔てられた部位）に蓄積するので、全身適用のために使用することができる。ＳＰＬＰは、国際出願公開第ＷＯ００／０３６８３号に記載されている封入された縮合剤－核酸複合体を含む「ｐＳＰＬＰ」を含む。本明細書に記載の技術の粒子は、典型的には、平均直径が約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、より典型的には約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、より典型的には約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、および最も典型的には約７０ｎｍ～約９０ｎｍであり、また、実質的に非毒性である。さらに、一部の実施形態では、核酸は、核酸－脂質粒子として存在する場合、水溶液中で、ヌクレアーゼによる分解に対して抵抗性である。核酸－脂質粒子および関連する調製方法は、例えば、米国特許第５，９７６，５６７号；同第５，９８１，５０１号；同第６，５３４，４８４号；同第６，５８６，４１０号；同第６，８１５，４３２号；および国際出願公開第ＷＯ９６／４０９６４号に開示されている。
一部の実施形態では、ＲＮＡｉ剤をリポソームまたは他の脂質製剤によって送達し、ここで、脂質と薬物の比（質量／質量比）（例えば、脂質とｓｉＲＮＡの比）は、約１：１から約５０：１まで、約１：１から約２５：１まで、約３：１から約１５：１まで、約４：１から約１０：１まで、約５：１から約９：１まで、または約６：１から約９：１までの範囲である。
抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、および／または宿主細胞を含む医薬組成物
本開示は、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクターおよび／または本開示による細胞を含む医薬組成物も提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＨＢＶタンパク質発現の阻害剤および送達系（例えば、ＲＮＡｉ剤）をさらに含む。
医薬組成物は、薬学的に許容されるキャリアー、希釈剤および／または賦形剤も含有し得る。キャリアーまたは賦形剤は、投与を容易にし得るが、それ自体は、組成物を受け取る個体に害となる抗体の産生を誘導するものではない。また、毒性であるべきでない。適切なキャリアーは、大きな、ゆっくりと代謝される巨大分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アミノ酸共重合体および不活性ウイルス粒子などであり得る。一般に、本開示による医薬組成物中の薬学的に許容されるキャリアーは、活性構成要素または不活性構成要素であり得る。
薬学的に許容される塩、例えば、鉱酸塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩および硫酸塩など、または有機酸の塩、例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩および安息香酸塩などを使用することができる。
医薬組成物中の薬学的に許容されるキャリアーは、液体、例えば、水、生理食塩水、グリセロールおよびエタノールなどをさらに含有し得る。さらに、湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝物質などの補助物質がかかる組成物中に存在し得る。かかるキャリアーは、医薬組成物を、被験体による摂取用の錠剤、ピル、糖剤、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ剤、スラリー剤および懸濁剤として製剤化することを可能にするものである。
本開示の医薬組成物は、様々な形態に調製することができる。例えば、組成物を注射剤として、溶液剤または懸濁剤のいずれかとして調製することができる。注射前に液体ビヒクル中の溶液剤または懸濁液にするために適した固体形態も調製することができる（例えば、保存剤を含有する滅菌水を用いて再構成するための、Ｓｙｎａｇｉｓ（商標）およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）と同様の凍結乾燥組成物）。組成物を外用投与用に、例えば、軟膏剤、クリーム剤または散剤として調製することができる。組成物を経口投与用に、例えば、錠剤もしくはカプセル剤として、噴霧剤として、またはシロップ剤（必要に応じて風味を付けたもの）として調製することができる。組成物を経肺投与用に、例えば、細末または噴霧剤を使用する吸入器として調製することができる。組成物を坐薬または膣坐薬として調製することができる。組成物を鼻、耳または眼への投与用に、例えば、滴下剤として調製することができる。組成物は、組み合わされた組成物を被験体への投与の直前に再構成するように設計されたキットの形態にすることができる。例えば、凍結乾燥抗体を、滅菌水または滅菌緩衝剤を伴うキットの形態で提供することができる。
特定の実施形態では、本開示による組成物中の活性成分は、抗体分子、抗体断片またはそのバリアントもしくは誘導体であり、特に、組成物中の活性成分は、本明細書に記載の抗体、抗体断片、融合タンパク質、またはそのバリアントおよび誘導体である。したがって、組成物中の活性成分は、胃腸管内での分解を受けやすい可能性がある。したがって、組成物を胃腸管を使用する経路によって投与する場合、組成物は、抗体を分解から保護するが、胃腸管に吸収されると抗体を放出する薬剤を含有し得る。
薬学的に許容されるキャリアーの詳細な考察は、Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472において入手可能である。
本開示の医薬組成物のｐＨは５．５から８．５の間であり得、一部の実施形態では、ｐＨは６から８の間であり得る。他の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のｐＨは、約７であり得る。ｐＨは、緩衝剤を使用することによって維持することができる。組成物は、滅菌されたおよび／または発熱物質を含まないものであり得る。組成物は、ヒトに対して等張性であり得る。ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、密封容器に入った状態で供給される。
いくつかの投与形態で存在する組成物が本開示の範囲内に入る；形態としては、これだけに限定されないが、非経口投与、例えば、注射または注入による投与、例えば、ボーラス注射または連続的な注入による投与に適した形態が挙げられる。製品が注射または注入用のものである場合、油性または水性ビヒクル中の懸濁剤、溶液剤または乳化剤の形態をとり得、懸濁化剤、保存剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤化用作用剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含有し得る。あるいは、抗体分子は、使用前に適切な滅菌液体で再構成するための乾燥形態であってもよい。ビヒクルは、典型的には、化合物、例えば、薬学的に活性な化合物、特に、本記載による抗体を保管、輸送、および／または投与するために適した材料であると理解される。例えば、ビヒクルは、薬学的に活性な化合物、特に、本記載による抗体を保管、輸送、および／または投与するために適した、生理的に許容される液体であり得る。本開示の組成物は、製剤化されたら、被験体に直接投与することができる。一実施形態では、組成物を哺乳動物、例えば、ヒト被験体への投与に適合させる。
本明細書に記載の医薬組成物は、これだけに限定されないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、外用、皮下、鼻腔内、経腸、舌下、膣内または直腸経路を含めた任意の数の経路によって投与することができる。ハイポスプレーを使用して本記載の医薬組成物を投与することもできる。特定の実施形態では、医薬組成物を、経口投与用に、例えば、錠剤、カプセル剤などとして、外用投与用に、または注射剤として、例えば、溶液剤もしくは懸濁剤として、調製することができる。注射前に液体ビヒクル中の溶液剤または懸濁液にするために適した固体形態を利用することもでき、これは、例えば、医薬組成物が凍結乾燥形態のものである。
注射、例えば、静脈内注射、皮膚注射もしくは皮下注射、または苦痛部位への注射に関しては、活性成分を、パイロジェンフリーであり、かつ適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態で提供することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤および／または他の添加剤を必要に応じて含めることができる。
組成物は、固体の形態であることもあり、または液体の形態であることもある。一部の実施形態では、キャリアー（複数可）は粒状であり、組成物は例えば錠剤または粉末形態である。組成物が、例えば、経口油、注射可能な液体、または例えば吸入投与に有用であるエアロゾルである場合、キャリアー（複数可）は液体であり得る。経口投与が意図される場合、医薬組成物は、好ましくは、固体形態または液体形態のどちらかであり、半固体、半液体、懸濁液およびゲル形態は、本明細書で固体または液体のどちらかとみなされる形態の中に含まれる。
経口投与のための固体組成物として、医薬組成物を、粉剤・散剤（ｐｏｗｄｅｒ）、顆粒剤、圧縮錠剤、丸剤、カプセル剤、チューインガム剤、カシェ剤などに製剤化することができる。そのような固体組成物は、１つまたは複数の不活性希釈剤または食用キャリアーを通常は含有する。加えて、次のうちの１つまたは複数が存在することもある：結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトースまたはデキストリン；崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、トウモロコシデンプンなど；滑沢剤、例えば、ステアリン鎖マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘ；流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、スクロースまたはサッカリン；着香剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味料；ならびに着色剤。組成物が、カプセル、例えばゼラチンカプセル、の形態である場合、その組成物は、上記のタイプの材料に加えて、液体キャリアー、例えば、ポリエチレングリコールまたは油を含有し得る。
組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、乳剤または懸濁液、の形態であることもある。液体は、２つの例として、経口投与のためのもの、または注射による送達のためのものであり得る。経口投与が意図される場合、好ましい組成物は、本化合物に加えて、甘味剤、保存剤、色素／着色剤および風味増強剤のうちの１つまたは複数を含有する。注射により投与することが意図される組成物には、界面活性剤、保存剤、湿潤剤、分散化剤、懸濁化剤、緩衝液、安定剤および等張剤のうちの１つまたは複数を含めることができる。
液体医薬組成物は、それらが溶液であるか、懸濁液であるか、他のこれらに類する形態であるかを問わず、次のアジュバントのうちの１つまたは複数を含み得る：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、固定油、例えば、溶媒もしくは懸濁媒体として役立ち得る合成モノもしくはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝液、例えば、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液またはリン酸緩衝液；および等張性の調整用の剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口調製物を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てのシリンジまたは複数回用量のバイアルに封入することができる。生理食塩水は、好ましいアジュバントである。注射用医薬組成物は、好ましくは無菌である。
非経口投与または経口投与のどちらかが意図される液体組成物は、本明細書で開示される抗体または抗原結合断片の量を、好適な投与量が得られるように、含有するべきである。通常は、この量は、組成物中、少なくとも０．０１％の抗体または抗原結合断片である。経口投与が意図される場合、この量を、組成物の重量の０．１％～約７０％の間になるように変動させることができる。ある特定の経口医薬組成物は、約４％～約７５％の間の抗体または抗原結合断片を含有する。ある特定の実施形態では、本発明による医薬組成物および調製物は、非経口投与単位が希釈前に０．０１～１０重量％の間の抗体または抗原結合断片を含有するように調製される。
組成物は、局所投与が意図されたものであることがあり、その場合、キャリアーは、溶液、乳剤、軟膏またはゲル基剤を適切に含み得る。基剤は、例えば、次のうちの１つまたは複数を含み得る：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤、例えば水およびアルコール、ならびに乳化剤および安定剤。増粘剤が局所投与のための組成物中に存在してよい。経皮投与が意図される場合、組成物は、経皮パッチまたはイオン導入デバイスを含み得る。医薬組成物は、直腸内で融解して薬物を放出する形態、例えば座薬の形態での、直腸投与が意図されたものであることもある。直腸投与のための組成物は、油性基剤を好適な無刺激賦形剤として含有し得る。そのような基剤としては、ラノリン、カカオ脂、およびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
組成物は、固体または液体投与単位の物理的形態を改変する様々な材料を含み得る。例えば、組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する材料を含み得る。コーティングシェルを形成する材料は、通常は不活性であり、例えば、糖、セラック、および他の腸溶コーティング剤から選択され得る。あるいは、活性成分は、ゼラチンカプセルに封入され得る。固体または液体形態の組成物は、本開示の抗体または抗原結合断片に結合し、それによって化合物の送達を補助する、作用物質を含み得る。この能力で作用し得る好適な作用物質は、モノクローナルもしくはポリクローナル抗体、１つもしくは複数のタンパク質、またはリポソームを含む。組成物は、エアロゾルとして投与することができる投与単位から本質的になり得る。用語エアロゾルは、コロイド状の性質のものから、加圧パッケージからなる系までの幅がある、様々な系を示すために使用される。送達は、液化もしくは圧縮ガスによることもあり、または活性成分を分注する好適なポンプシステムによることもある。エアロゾルは、活性成分（複数可）を送達するために単相、二相または三相系で送達され得る。エアロゾルの送達は、必要なコンテナ、アクチベーター、バルブ、サブコンテナなどを含み、これらが一緒にキットを形成し得る。当業者は、過度の実験をしなくても、好ましいエアロゾルを決定することができる。
本開示の組成物が、本明細書に記載されるようなポリヌクレオチドのためのキャリアー分子（例えば、脂質ナノ粒子、ナノスケール送達プラットフォームなど）も包含することは、理解されよう。
ある特定の実施形態では、組成物は、第１のプラスミドを含む第１のベクター、および第２のプラスミドを含む第２のベクターを含み、第１のプラスミドは、重鎖、ＶＨ、またはＶＨ＋ＣＨをコードするポリヌクレオチドを含み、第２のプラスミドは、抗体またはその抗原結合断片のコグネイト軽鎖、ＶＬ、またはＶＬ＋ＣＬをコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、好適な送達ビヒクルまたはキャリアーに連結されたポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。ヒト被験体への投与のための例示的なビヒクルまたはキャリアーとしては、脂質または脂質由来の送達ビヒクル、例え
ば、リポソーム、固体脂質ナノ粒子、油性懸濁液、サブミクロン脂質乳剤、脂質マイクロバブル、逆脂質ミセル、渦巻型リポソーム（ｃｏｃｈｌｅａｒ ｌｉｐｏｓｏｍｅ）、脂質マイクロチューブル（ｌｉｐｉｄ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ）、脂質マイクロシリンダー（ｌｉｐｉｄ ｍｉｃｒｏｃｙｌｉｎｄｅｒ）、または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）もしくはナノスケールプラットフォーム（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ． Ｗｉｌｅｒｙ Ｉｎｔｅｒｄｉｓｃｉｐ Ｒｅｖ． Ｎａｎｏｍｅｄ Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １１（２）：ｅ１５３０ （２０１９）を参照されたい）が挙げられる。適切なｍＲＮＡを設計するための、および（ａｎｄ ａｎｄ）ｍＲＮＡ－ＬＮＰを製剤化するための、およびそれを送達するための、原理、試薬および技法は、例えば、Ｐａｒｄｉ ｅｔ ａｌ． （Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２１７３４５－３５１ （２０１５））；Ｔｈｅｓｓ ｅｔ ａｌ． （Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２３： １４５６－１４６４ （２０１５））；Ｔｈｒａｎ ｅｔ ａｌ． （ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ９（１０）：１４３４－１４４８ （２０１７）；Ｋｏｓｅ ｅｔ ａｌ． （Ｓｃｉ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ４ ｅａａｗ６６４７ （２０１９）；およびＳａｂｎｉｓ ｅｔ ａｌ． （Ｍｏｌ．
Ｔｈｅｒ． ２６：１５０９－１５１９ （２０１８））に記載されており、その技法は、キャッピング、コドン最適化、ヌクレオシド改変、ｍＲＮＡの精製、ｍＲＮＡの安定した脂質ナノ粒子（例えば、イオン化可能なカチオン性脂質／ホスファチジルコリン／コレステロール／ＰＥＧ－脂質；イオン化可能な脂質：ジステアロイルＰＣ：コレステロール：ポリエチレングリコール脂質）への組込みを含み、ならびにその皮下、筋肉内、皮内、静脈内、腹腔内および気管内投与を含む、これらの技法は、参照により本明細書に組み込まれる。
医薬組成物は、製薬技術分野で周知の方法論により調製することができる。例えば、注射により投与されることが意図される組成物は、本明細書に記載の抗体、その抗原結合断片、または他の組成物と、必要に応じて塩、緩衝液および／または安定剤のうちの１つまたは複数とを含む組成物を、溶液を形成するための滅菌蒸留水と合わせることにより、調製することができる。界面活性剤を添加して、均一な溶液または懸濁液の形成を促進することができる。界面活性剤は、ペプチド組成物と非共有結合的に相互作用して水性送達系への抗体またはその抗原結合断片の溶解または均一な懸濁を促進する化合物である。
本開示によるポリペプチド、ペプチド、または核酸分子、細胞、または他の薬学的に有用な化合物のいずれを個体に与薬するかにかかわらず、投与は、一般に、「予防有効量」または「治療有効量」または「有効量」（場合によって）でなされ、この量は、個体に対する利益（例えば、臨床転帰の改善；疾患に付随する症状の緩和または軽減；症状の出現の減少；生活の質の改善；無疾患状態の延長；疾患の程度の減弱、病態の安定化；疾患増悪の遅延；寛解；生存；または統計的に有意な様式での生存の延長）が示されるのに十分なものである。単独で投与される個々の活性成分について言及する場合、治療有効量は、その成分またはその成分を発現する細胞の単独での効果を指す。組合せに言及する場合、治療有効量は、連続的に投与されるのか、逐次的に投与されるのか、同時に投与されるのかを問わず、治療効果をもたらす、活性成分の合わせた量、または活性成分を発現する細胞と組み合わせた補助活性成分の合わせた量を指す。
組成物を有効量（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を処置するための）で投与し、この有効量は、利用される具体的な化合物の活性；化合物の代謝安定性および作用の長さ；被験体の年齢、体重、一般的健康、性別および食事；投与の方法およびタイミング；排泄率；薬物の組合せ；特定の障害または状態の重症度；ならびに治療を受けている被験体を含む、様々な因子に依存して変わる。ある特定の実施形態では、本開示の製剤および方法による治療の投与後（ｔｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、試験被験体は、プラセボで処置される被験体または他の好適な対照被験体と比較して、処置される疾患または障害に関連する１つまたは複数の症状の約１０％から約９９％までの低減を示す。
一般に、抗体または抗原結合断片の治療有効１日用量は、（７０ｋｇの哺乳動物について）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．０７ｍｇ）～約１００ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７．０ｇ）であり；好ましくは、治療有効用量は、（７０ｋｇの哺乳動物について）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、０．７ｍｇ）～約５０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、３．５ｇ）であり；より好ましくは、治療有効用量は、（７０ｋｇの哺乳動物について）約１ｍｇ／ｋｇ（すなわち、７０ｍｇ）～約２５ｍｇ／ｋｇ（すなわち、１．７５ｇ）である。抗体または抗原結合断片の他の用量は本明細書で提供される。
本開示のポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、および関連する組成物に関しては、治療有効用量は、抗体または抗原結合断片とは異なる可能性がある。
投与される実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、処置されるものの性質および重症度に依存する。注射に関しては、本開示による医薬組成物を、例えば、充填済みシリンジに入った状態で提供することができる。
本明細書に開示される医薬組成物は、これだけに限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または溶液剤を含めた任意の経口的に許容される剤形で経口投与することもできる。経口使用のための錠剤の場合では、一般に使用されるキャリアーとして、ラクトースおよびトウモロコシデンプンが挙げられる。ステアリン酸マグネシウムなどの平滑剤も典型的に添加される。カプセル剤の形態での経口投与に関しては、有用な希釈剤として、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使用のために水性懸濁剤が必要な場合、活性成分、すなわち、上で定義されている本発明の輸送体カーゴコンジュゲート分子を乳化剤および懸濁化剤と合わせる。所望であれば、ある特定の甘味剤、香味剤または着色料も添加することができる。
本記載による医薬組成物は、特に、例えば皮膚の疾患または任意の他の到達可能な上皮組織の疾患を含め、処置の標的に外用適用によって容易に到達可能な領域または器官が含まれる場合、外用投与することもできる。適切な外用製剤は、これらの領域または器官の各々に対して容易に調製される。外用適用に関しては、医薬組成物を、本発明の医薬組成物、特に上で定義されているその成分が１つまたは複数のキャリアーに懸濁または溶解して含有される、適切な軟膏剤に製剤化することができる。外用投与用のキャリアーとしては、これだけに限定されないが、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化蝋および水が挙げられる。あるいは、医薬組成物を適切なローション剤またはクリーム剤に製剤化することができる。本記載に関しては、適切なキャリアーとして、これだけに限定されないが、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。
用量は、体重との関連で表され得る。したがって、［ｇ、ｍｇ、または他の単位］／ｋｇ（またはｇ、ｍｇなど）と表される用量は、通常は、用語「体重（ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ）」または「体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）」が明確に記載されていない場合であっても、「体重１ｋｇ（またはｇ、ｍｇなど）当たり」の［ｇ、ｍｇ、または他の単位］を指す。
特定の実施形態では、単回投薬、例えば、１日１回、週に１回または月に１回の投薬では、医薬組成物中の抗体またはその抗原結合断片の量は１ｇを超えない。ある特定のかかる実施形態では、単回投薬は、５００ｍｇ、２５０ｍｇ、１００ｍｇ、および５０ｍｇから選択される用量を超えない。用量のさらなる実施形態は本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、方法は、抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または組成物を被験体に２、３、４、５、６、７、８、９、１０回またはそれより多くの回数投与することを含む。
ある特定の実施形態では、方法は、抗体、抗原結合断片、または組成物を被験体に複数回投与することを含み、第２のまたは次に続く投与は、それぞれ、第１のまたは前の投与の少なくとも約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約２４、約４８、約７４、約９６時間後またはそれより後に行われる。
ある特定の実施形態では、方法は、被験体に、以前に少なくとも１回、抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、または組成物を投与することを含む。
本開示の抗体、抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞または組成物を含む組成物を、１つもしくは複数の他の治療剤の投与と同時に、その前に、またはその後に投与することもできる。そのような併用療法は、本発明の化合物と１つまたは複数の追加の活性薬剤とを含有する単一の医薬投与製剤の投与はもちろん、本開示の抗体または抗原結合断片を含む組成物および各活性薬剤を含む組成物のその独自の別個の投与製剤での投与も含み得る。例えば、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片と他の活性薬剤とを、患者に、錠剤もしくはカプセル剤などの単一経口投与組成物で一緒に投与することができ、または各薬剤を別個の経口投与製剤で投与することができる。同様に、本明細書に記載の抗体もしくは抗原結合断片と他の活性薬剤とを、被験体に、単一非経口投与組成物で、例えば、食塩溶液もしくは他の生理的に許容される溶液で、一緒に投与することができ、または各薬剤を別個の非経口投与製剤で投与することができる。別個の投与製剤が使用される場合、抗体または抗原結合断片を含む組成物と、１つまたは複数の追加の活性薬剤を含む組成物とを、本質的に同時に、すなわち並行して、投与することができ、または別々にずらした時間で、すなわち、逐次的にかつ任意の順序で投与することができ、併用療法は、これらのレジメン全てを含むと理解される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物またはキットは、次のものをさらに含む：（ｉ）ポリメラーゼ阻害剤、ここで、ポリメラーゼ阻害剤は、必要に応じて、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、またはこれらの任意の組合せを含む；（ｉｉ）インターフェロン、ここで、インターフェロンは、必要に応じて、ＩＦＮベータおよび／またはＩＦＮアルファを含む；（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤、ここで、チェックポイント阻害剤は、必要に応じて、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む；（ｉｖ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の組成物または組合せを含み、Ｂ型肝炎感染および／またはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／または診断するために構成要素を使用するための使用説明書をさらに含む。
ある特定の実施形態では、本開示の組成物（例えば、抗体、抗原結合断片、宿主細胞、核酸、ベクター、または医薬組成物）を、ＰＤ－１阻害剤、例えば、ＰＤ－１特異的抗体またはその結合断片、例えば、ピジリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０（以前はＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＢＭＳ－９３６５５８またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＰＤ－Ｌ１特異的抗体またはその結合断片、例えば、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＬＡＧ３阻害剤、例えば、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＣＴＬＡ４の阻害剤と組み合わせて使用する。特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＣＴＬＡ４特異的抗体またはその結合断片、例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（例えば、アバタセプト、ベラタセプト）、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、Ｂ７－Ｈ３特異的抗体またはその結合断片、例えば、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６、またはその両方と組み合わせて使用する。抗Ｂ７－Ｈ３抗体結合断片は、ｓｃＦｖ、または、例えば、Dangaj et al., Cancer Res. 73: 4820, 2013に記載されているｓｃＦｖを含む融合タンパク質、ならびに米国特許第９，５７４，０００号およびＰＣＴ特許公開第ＷＯ／２０１６４０７２４Ａ１号および同第ＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１号に記載されているものであり得る。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＣＤ２４４の阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＢＬＴＡの阻害剤、ＨＶＥＭの阻害剤、ＣＤ１６０の阻害剤、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。抗ＣＤ－１６０抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０８４１５８号に記載されている。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＴＩＭ３の阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、Ｇａｌ９の阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、アデノシンシグナル伝達の阻害剤、例えば、デコイアデノシン受容体と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、Ａ２ａＲの阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＫＩＲの阻害剤、例えば、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、阻害性サイトカインの阻害剤（典型的には、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）またはＴｒｅｇ発生もしくは活性の阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＩＤＯ阻害剤、例えば、レボ－１－メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Liu et al., Blood 115: 3520-30, 2010）エブセレン（Terentis et al., Biochem. 49: 591-600, 2010）インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Mautino et al., American Association for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013; Apr 6-10, 2013）、１－メチルトリプトファン（１－ＭＴ）－チラ－パザミン（１－ｍｅｔｈｙｌ－ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ（１－ＭＴ）－ｔｉｒａ－ｐａｚａｍｉｎｅ）、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、アルギナーゼ阻害剤、例えば、Ｎ（オメガ）－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル（Ｌ－ＮＡＭＥ）、Ｎ－オメガ－ヒドロキシ－ノル－１－アルギニン（ｎｏｒ－ＮＯＨＡ）、Ｌ－ＮＯＨＡ、２（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ－（２－ボロノエチル）－Ｌ－システイン（ＢＥＣ）、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＶＩＳＴＡの阻害剤、例えば、ＣＡ－１７０（Ｃｕｒｉｓ、Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＴＩＧＩＴの阻害剤、例えばＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｏｎｔａｒｉｏ Ｃａｎａｄａ）など、ＣＤ１５５の阻害剤、例えばＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）など、またはその両方と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＰＶＲＩＧの阻害剤、ＰＶＲＬ２の阻害剤、またはその両方と組み合わせて使用する。抗ＰＶＲＩＧ抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１３４３３３号に記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０２１５２６号に記載されている。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＬＡＩＲ１阻害剤と組み合わせて使用する。ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、ＣＥＡＣＡＭ－１の阻害剤、ＣＥＡＣＡＭ－３の阻害剤、ＣＥＡＣＡＭ－５の阻害剤、またはこれらの任意の組合せと組み合わせて使用する。
ある特定の実施形態では、本開示の組成物を、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増大させる（すなわち、アゴニストである）薬剤と組み合わせて使用する。例えば、本開示の組成物を、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、ウレルマブなど）、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト（例えば、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３、またはＭＥＤＩ０５６２など）、レナリドマイド、ポマリドミド、ＣＤ２７アゴニスト（例えば、ＣＤＸ－１１２７など）、ＣＤ２８アゴニスト（例えば、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０、またはＣＤ８６など）、ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ＣＰ－８７０，８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ、またはＳＧＮ－４０など）、ＣＤ１２２アゴニスト（例えば、ＩＬ－２など）、ＧＩＴＲのアゴニスト（例えば、ＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載されているヒト化モノクローナル抗体など）、ＩＣＯＳのアゴニスト（ＣＤ２７８）（例えば、ＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ １４５－１、Ｉｃｏｓ ３１４－８、またはこれらの任意の組合せなど）と組み合わせて使用することができる。
本明細書に開示される実施形態のいずれかでは、方法は、本開示の組成物を、前述のいずれかを含めた１つまたは複数の刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト単独または任意の組合せと共に投与することを含み得る。
本開示による抗体、抗原結合断片または融合タンパク質と追加の活性構成要素は同じ医薬組成物中に存在してもよく、あるいは、本開示による抗体、抗原結合断片または融合タンパク質を第１の医薬組成物中に含めることができ、追加の活性構成要素を第１の医薬組成物とは異なる第２の医薬組成物に含めることができる。
使用
さらなる態様では、本開示は、（ｉ）Ｂ型肝炎および／もしくはＤ型肝炎の予防、処置もしくは弱毒化において；または（ｉｉ）Ｂ型肝炎および／もしくはＤ型肝炎（例えば、ヒト被験体における）の診断において、抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、ベクター、細胞、医薬組成物、組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）、または本開示によるキットを使用するための方法を提供する。
診断方法（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ）は、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合断片）または融合タンパク質を試料と接触させることを含み得る。かかる試料は、被験体から単離されたもの、例えば、鼻腔、洞腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、耳、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚または血液から取得した単離された組織試料であり得る。診断方法はまた、特に、抗体、抗体断片または融合タンパク質を試料と接触させた後に抗原／抗体または抗原／融合タンパク質複合体を検出することも含み得る。かかる検出ステップは、典型的には、実験台上で（ａｔ ｔｈｅ ｂｅｎｃｈ）、すなわち、ヒトまたは動物の体へのいかなる接触も伴わずに実施される。検出方法の例は、当業者には周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）が挙げられる。
本開示は、（ａ）Ｂ型肝炎および／もしくはＤ型肝炎を予防、処置もしくは弱毒化するための医薬の製造における、または（ｂ）Ｂ型肝炎および／もしくはＤ型肝炎の診断のための、（ｉ）本開示による抗体、抗体断片、融合タンパク質、またはそのバリアントおよび誘導体、（ｉｉ）本開示による宿主細胞（不死化Ｂ細胞であり得る）、（ｉｉｉ）本開示による核酸またはベクター（ｉｖ）本開示の医薬組成物あるいは（ｖ）組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）の使用も提供する。
用語「疾患」は、本明細書で使用される場合、用語「障害」および「状態」（医学的状態のように）は、これらは全て、典型的には際立って特徴的な徴候および症状によって顕在化し、影響を受けたヒトまたは動物の寿命または生活の質の低減を引き起こす、ヒトまたは動物の体またはその一部の１つの正常な機能を損なう異常な状態を反映するという点で、概して同義であることが意図されており、互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、被験体または患者の「処置」への言及は、予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）、弱毒化、好転および治療を含むものと意図し、被験体の疾患、障害、または状態の医学的管理を指す。処置の利益としては、臨床転帰の改善；疾患に付随する症状の緩和もしくは軽減；症状の出現の減少；生活の質の改善；無疾患状態の延長；疾患の程度の減弱；病態の安定化；疾患増悪の遅延；寛解；生存；生存の延長；またはこれらの任意の組合せを挙げることができる。用語「被験体」または「患者」は、本明細書では、ヒトを含めた全ての哺乳動物を意味するように互換的に使用される。被験体の例としては、ヒト、ウシ、イヌ、ネコ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、およびウサギが挙げられる。ある特定の実施形態では、患者は、ヒトである。被験体は、雄であっても雌であってもよく、乳幼児、若年、青年期、成体、および高齢の被験体を含めた任意の適切な年齢であってよい。
本開示は、Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎を予防または処置するための医薬として使用するための、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、および／または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）も提供する。本開示は、被験体の処置および／または被験体に関する診断のための医薬の製造における、本開示の抗体、抗原結合断片または融合タンパク質の使用も提供する。本開示は、被験体（例えば、ヒト被験体）を処置するための方法であって、本明細書に記載の組成物または組合せの有効量を被験体に投与することを含む、方法も提供する。一部の実施形態では、被験体は、ヒトであり得る。治療的な処置の有効性を調査する１つのやり方は、組成物の投与後に疾患症状をモニターすることを伴う。処置は、単回投薬スケジュールであってもよく、複数回投薬スケジュールであってもよい。
一実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、宿主細胞（例えば、融合タンパク質を発現する不死化Ｂ細胞クローン、またはＴ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、またはＮＫ細胞）、医薬組成物、または組合せを、かかる処置を必要とする被験体に投与する。かかる被験体としては、これだけに限定されないが、特に、Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎のリスクがあるまたはそれにかかりやすい被験体が挙げられる。
本開示による抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、医薬組成物、およびこれらの組合せはまた、Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎を予防、処置、弱毒化、および／または診断するためのキットに使用することもできる。一部の実施形態では、キットは、Ｂ型肝炎感染および／またはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／または診断するために構成要素を使用するための使用説明書をさらに含む。さらに、保護的な抗ＨＢＶ抗体の存在を検出することまたはその力価を決定することによって適用手順の有効性をモニターするために、本明細書に記載の本開示の抗体、抗原結合断片または融合タンパク質が結合することが可能なＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域内のエピトープをキットに使用することができる。
ある特定の実施形態では、本開示の組成物またはキットは、次のものをさらに含む：ポリメラーゼ阻害剤、ここで、ポリメラーゼ阻害剤は、必要に応じて、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、もしくはこれらの任意の組合せを含む；（ｉｉ）インターフェロン、ここで、インターフェロンは、必要に応じて、ＩＦＮベータおよび／もしくはＩＦＮアルファを含む；（ｉｉｉ）チェックポイント阻害剤、ここで、チェックポイント阻害剤は、必要に応じて、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む；（ｉｖ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｖ）（ｖｉｉｉ）～（ｘｉｉ）の任意の組合せ。
一部の実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、および／または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を、Ｂ型慢性肝炎感染の処置または弱毒化において使用する。
特定の実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片または融合タンパク質は、（ｉ）ＨＢＶ感染を中和する、（ｉｉ）Ｌ－ＨＢｓＡｇ（感染性ＨＢＶ粒子に存在する、大きなＨＢＶエンベロープタンパク質）に結合し、それにより、ＨＢＶの伝播を予防する、（ｉｉｉ）Ｓ－ＨＢｓＡｇに結合し、それにより、サブウイルス粒子（ＳＶＰ）のクリアランスを促進する、および／または（ｉｖ）セロコンバージョン、すなわち、ウイルスに対する活発な免疫応答を誘導し得る。
特定の実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、または本開示による医薬組成物を、特にＢ型肝炎誘導型肝不全に対する肝移植後のＢ型肝炎（再）感染の予防において使用することができる。
さらなる実施形態では、本開示による抗体、その抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本明細書において提供される記載によるベクター、本開示による細胞、医薬組成物、および／または本開示による組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を、免疫されていない被験体におけるＢ型肝炎の予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）／予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）において使用することができる。これは、例えば、ＨＢＶに対する（想定される）偶発的な曝露の場合である（曝露後予防）。用語「免疫されていない被験体」は、ワクチン接種を受けたことがなく、したがって、免疫されていない被験体、および、ワクチン接種後に免疫応答を示さない（例えば、測定可能な抗Ｂ型肝炎抗体を示さない）被験体を包含する。
一部の実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を、血液透析患者におけるＢ型肝炎の予防において使用する。
一部の実施形態では、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を、新生児におけるＢ型肝炎の予防において使用する。かかる実施形態では、本開示による抗体、またはその抗原結合断片、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を、出生時にまたは出生後できるだけ早く投与することができる。ワクチン接種後にセロコンバージョンが起こるまで投与を繰り返すことができる。
さらに、本開示は、Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎の診断（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏ）における、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞または本開示による医薬組成物の使用も提供する。
さらに、単離された血液試料がＢ型肝炎ウイルスおよび／またはデルタ肝炎ウイルスに感染しているかどうかの決定における、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞または本開示による医薬組成物の使用が提供される。
上記の通り、診断方法は、抗体、抗体断片または融合タンパク質を試料と接触させることを含み得る。かかる試料は、被験体から単離されたもの、例えば、例えば、鼻腔、洞腔、唾液腺、肺、肝臓、膵臓、腎臓、耳、眼、胎盤、消化管、心臓、卵巣、下垂体、副腎、甲状腺、脳、皮膚または血液から取得した単離された組織試料であり得る。診断方法はまた、特に抗体または抗体断片を試料と接触させた後に、抗原／抗体複合体を検出することも含み得る。かかる検出ステップは、典型的には、実験台上で、すなわち、ヒトまたは動物の体へのいかなる接触も伴わずに実施される。検出方法の例は当業者には周知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）が挙げられる。
本開示は、被験体におけるＢ型肝炎および／またはＤ型肝炎を処置、予防および／または弱体化する方法であって、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、および／または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）を被験体に投与することを含む、方法も提供する。ある特定の実施形態では、方法は、以下のうちの１つまたは複数を被験体に投与することをさらに含む：（ｖｉｉ）ポリメラーゼ阻害剤、ここで、ポリメラーゼ阻害剤は、必要に応じて、ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、またはこれらの任意の組合せを含む；（ｖｉｉｉ）インターフェロン、ここで、インターフェロンは、必要に応じて、ＩＦＮベータおよび／またはＩＦＮアルファを含む；（ｉｘ）チェックポイント阻害剤、ここで、チェックポイント阻害剤は、必要に応じて、抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を含む；（ｘ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｘｉ）（ｖｉｉ）～（ｘ）の任意の組合せ。
一部の実施形態では、Ｂ型肝炎感染は、Ｂ型慢性肝炎感染である。一部の実施形態では、被験体は、肝移植を受けた。一部の実施形態では、被験体は、Ｂ型肝炎に対して免疫されていない。ある特定の実施形態では、被験体は、新生児である。一部の実施形態では、被験体は、血液透析を受けているか、または受けた。
本開示は、肝移植を受けた被験体を処置する方法であって、本開示による抗体、抗原結合断片もしくは融合タンパク質、本開示による核酸、本開示によるベクター、本開示による細胞、本開示による医薬組成物、または本開示の組合せ（例えば、ここに開示される抗体もしくは抗原結合断片とここに開示されるＨＢＶタンパク質発現および送達系の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ剤）の組合せ）の有効量を、肝移植を受けた被験体に投与することを含む、方法も提供する。
抗Ｂ型肝炎および／または抗Ｄ型肝炎ワクチン中の正確なコンフォメーションにあるエピトープの存在または非存在を検出するための方法であって、：（ｉ）ワクチンを、本開示のいずれか１つの抗体、抗原結合断片または融合タンパク質と接触させること；および（ｉｉ）抗原と抗体とを含む複合体、または抗原と抗原結合断片とを含む複合体、または抗原と融合タンパク質とを含む複合体が形成されたかどうかを決定することを含む、方法も本明細書で提供される。
用語「ワクチン」は、本明細書で使用される場合、典型的には、少なくとも１つの抗原、例えば、免疫原を提供する予防用または治療用材料であると理解される。抗原または免疫原は、ワクチン接種に適した任意の材料に由来するものであり得る。例えば、抗原または免疫原は、病原体、例えば、細菌粒子、ウイルス粒子、腫瘍（固形腫瘍もしくは液性腫瘍を含む）、または他のがん性組織に由来するものであり得る。抗原または免疫原は、体の適応免疫系を刺激して、適応免疫応答をもたらす。ある特定の実施形態では、「抗原」または「免疫原」は、免疫系、例えば適応免疫系によって認識され得、例えば、適応免疫応答の一部として抗体および／または抗原特異的Ｔ細胞を形成することにより、抗原特異的免疫応答を誘発することが可能な、物質を指す。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣ複合体（例えば、ＭＨＣクラスＩ；ＭＨＣクラスＩＩ）によってＴ細胞に提示され得るペプチドまたはタンパク質であり得るまたはそれを含み得る。ある特定の実施形態では、抗原は、ＨＢＶおよび／またはＨＢＤ抗原；例えば、ＨＢｓＡｇ抗原を含む。
本開示の一部の実施形態は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置する方法であって、（ｉ）ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を被験体に投与すること；および（ｉｉ）抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の前に投与する。ある特定の実施形態では、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の前に投与することにより、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を投与する際のウイルス負荷量の低減が引き起こされる。ある特定の実施形態では、併用療法の抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の治療有効量は、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤が被験体に投与されていない場合（例えば、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を単独療法として単独で投与する場合）に送達される抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の治療有効量よりも少ない。一部の実施形態では、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤は、ＨＢＶ転写物の発現を阻害するＲＮＡｉ剤（例えば、ｓｉＲＮＡ）である。
ある特定の実施形態では、本開示は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置する方法であって、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を被験体に投与すること；および抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を投与する前後に被験体由来の血液試料中に存在するＨＢｓＡｇの量を測定することをさらに含み、ＨＢｓＡｇの減少により、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現の低減が示される、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患の処置における使用のための、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を提供し、ここで、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片をその後に被験体に投与する。ある特定の他の実施形態では、本開示は、被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患の処置における使用のための、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を提供し、被験体は、その前にＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を投与されている。さらなる実施形態では、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤の投与後に少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減し、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減したら、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与する。
ある特定の実施形態では、本開示は、慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置するための医薬の製造における、ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤および／または抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
本開示の一部の実施形態は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置する方法であって、（ｉ）ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を被験体に投与すること；および（ｉｉ）抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を抗ＨＢＶ抗体の前に投与する。ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の前に投与することにより、抗ＨＢＶ抗体を投与する際のウイルス負荷量の低減が引き起こされる。ある特定の実施形態では、併用療法の抗ＨＢＶ抗体の治療有効量は、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤が被験体に投与されていない場合（例えば、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を単独療法として単独で投与する場合）に送達される抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の治療有効量よりも少ない。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を投与した後に少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減し、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減したら、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与する。特定の実施形態では、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶ Ｘ遺伝子および／またはＨＢｓＡｇである。
ある特定の実施形態では、本開示は、それを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置する方法であって、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を被験体に投与すること；および抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与することを含み、ＨＢＶ発現の阻害剤の投与の前後に被験体由来の血液試料中に存在するＨＢｓＡｇの量を測定することをさらに含み、ＨＢｓＡｇの減少により、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現の低減が示される、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患の処置における使用のための、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を提供し、ここで、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片をその後に被験体に投与する。ある特定の他の実施形態では、本開示は、被験体における慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患の処置における使用のための、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を提供し、被験体は、以前に遺伝子発現の阻害剤を投与されている。さらなる実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤の投与後に、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減し、少なくとも１つのＨＢＶ遺伝子の発現が低減したら、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を被験体に投与する。
ある特定の実施形態では、本開示は、慢性ＨＢＶ感染またはＨＢＶ関連疾患を処置するための医薬の製造における、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤および／または抗ＨＢＶ抗体もしくはその抗原結合断片の使用を提供する。
上記の方法のいずれかでは、使用のための組成物、または製造における使用、方法および組成物を、慢性ＨＢＶ感染を処置するために使用することができる。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を、単回投薬、２回投薬、３回投薬、４回投薬、または５回投薬で投与する。いくつかの特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤の少なくとも最初の投薬を、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を投与する前に投与する。
ある特定の実施形態では、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を単回投薬、２回投薬、３回投薬、４回投薬、または５回投薬、６回投薬、７回投薬、または８回投薬で投与する。投薬を、例えば、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、４週間毎、または１か月に１回、投与することができる。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を投与することは、抗ＨＢＶまたはその抗原結合断片抗体を１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、２週間毎、または１か月に１回投与することを含む。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片を投与することは、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の治療有効量を少なくとも２回投薬を投与することを含む。ある特定のさらなる実施形態では、少なくとも２回投薬を１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、２週間毎、または１か月に１回、投与する。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の投与を、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を投与してから少なくとも１週間後に開始する。ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体の投与を、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を投与してから２週間後に開始する。ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片の投与を、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を投与してから８週間後に開始する。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片およびＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を各々皮下投与する。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片は、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪを認識し得る。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片は、ヒト抗体もしくはその抗原結合断片；モノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片；または、ＨＢｓＡｇに対する第１の特異性および免疫エフェクターを刺激する第２の特異性（例えば、細胞傷害性もしくはワクチン効果を刺激する第２の特異性）を有する二特異性抗体もしくはその抗原結合断片であり得る。本明細書に開示される上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用のある特定の他の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体は、モノクローナル抗体である。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に開示されるＨＢＣ３４の非天然バリアントを含む。例えば、ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体は、（ｉ）配列番号３４に記載のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３５または３６に記載のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３７に記載のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号４０～４３のいずれか１つに記載されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４５～５３のいずれか１つに記載のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＣＤＲは、ＣＣＧ番号付けシステムに従って決定され、抗体またはその抗原結合断片は、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合し、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である。
ある特定の実施形態では、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列は、（ｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４５、および５５；（ｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４６、および５５；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４７、および５５；（ｉｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４８、および５５；（ｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４９、および５５；（ｖｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５０、および５５；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５１、および５５；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５２、および５５；または（ｉｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５３、および５５に記載される。
ある特定のさらなる実施形態では、抗体または抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、ここで、（ｉ）ＶＨは、配列番号３８または３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（すなわち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／あるいは（ｉｉ）ＶＬは、配列番号５８～６６、６９、７１、または７２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（すなわち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／またはＶＬは、配列番号５８～６６、６９、７１、もしくは７２のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる。
特定の実施形態では、ＶＨおよびＶＬは、（ｉ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる。
別の態様では、本開示は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合断片であって、ＶＨおよびＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６７；または（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および６８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなり、抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合し、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
配列番号３８または３９に記載のＶＨ、および、ＣＣＧ番号付けによって決定したときに、それぞれ配列番号５７～７２と比較してフレームワーク領域３内に次の変異：Ｒ６０Ａ、Ｒ６０Ｎ、Ｒ６０Ｋ、Ｓ６４Ａ、Ｉ７４Ａのうちの１つまたは複数を含む配列番号５７～７２のいずれか１つのＶＬバリアントを含む抗体または抗原結合断片も提供される。一部の実施形態では、バリアントには、それぞれ配列番号５７～７２と比較して、さらなる変異は含まれない。
配列番号３８または３９に記載のＶＨ、および、Ｑ７８、Ｄ８１、またはその両方において、置換変異（例えば、保存的アミノ酸置換、または生殖細胞系列にコードされるアミノ酸に対する変異など）を含む、配列番号５７～７２のいずれか１つのＶＬバリアントを含む抗体または抗原結合断片も提供される。一部の実施形態では、バリアントには、それぞれ配列番号５７～７２と比較して、さらなる変異は含まれない。
ここに開示される実施形態のいずれにおいても、複数の抗体または抗原結合断片を含む試料中の、複数のうちの１２％未満、１１％もしくはそれ未満、１０％もしくはそれ未満、９％もしくはそれ未満、８％もしくはそれ未満、７％もしくはそれ未満、６％もしくはそれ未満、５％もしくはそれ未満、４％もしくはそれ未満、３％もしくはそれ未満、または２％もしくはそれ未満が、試料を約４０℃で約１２０～約１６８時間インキュベートした場合に、抗体二量体に含まれ、必要に応じて、抗体二量体の存在は、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される。本明細書で使用される場合、抗体二量体または多量体は、２つまたはそれよりも多くの本開示の抗体または抗原結合断片を含む複合体（例えば、抗体：抗体二量体、Ｆａｂ：Ｆａｂ二量体、または抗体：Ｆａｂ二量体）である。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片の治療有効量は、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤が被験体に投与されていない場合に送達される抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片の治療有効量よりも少ない。例えば、併用療法では、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片の有効用量が、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片単独での投与と比較して減少する。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体または抗原結合断片を少なくとも２回の別々の投薬で投与する。特定の実施形態では、少なくとも２回投薬を、１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、２週間毎、または１か月に１回、投与する。
ある特定の実施形態では、被験体は、ヒトであり、抗ＨＢＶ抗体の治療有効量が投与され、ここで、治療有効量は、約３ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、阻害剤は、ＨＢＶ転写物の発現を阻害するＲＮＡｉ剤である。一部の実施形態では、ＨＢＶ転写物の発現の阻害はｒｔＰＣＲによって測定される。一部の実施形態では、ＨＢＶ転写物の発現の阻害は、ＥＬＩＳＡによって測定したときのタンパク質レベルの低減によって測定される。
ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、センス鎖は、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７から３ヌクレオチド以下異なる少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７を含む。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドまたは少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含み得る。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の二本鎖領域は、１５～３０ヌクレオチド対の長さ；１７～２３ヌクレオチド対の長さ；１７～２５ヌクレオチド対の長さ；２３～２７ヌクレオチド対の長さ；１９～２１ヌクレオチド対の長さ；または２１～２３ヌクレオチド対の長さであり得る。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤の各鎖は、１５～３０ヌクレオチドまたは１９～３０ヌクレオチドであり得る。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡである。特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＨＢｓＡｇタンパク質、ＨＢｃＡｇタンパク質、およびＨＢｘタンパク質、またはＨＢＶ ＤＮＡポリメラーゼタンパク質をコードするＨＢＶ転写物の発現を阻害する。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、Ｐ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２３０９～３１８２および１～１６２５；Ｓ遺伝子（Ｌ、Ｍ、およびＳタンパク質をコードする）、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２８５０～３１８２および１～８３７；ＨＢｘ、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１３７６～１８４０；またはＣ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１８１６～２４５４、によってコードされる標的の少なくとも１５連続するヌクレオチドに結合する。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドまたは１９連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列からなる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列からなる。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡであり、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドまたは１９連続するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、アンチセンス鎖は、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡのセンス鎖は、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなる。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡであり、ここで、前記センス鎖のヌクレオチドの実質的に全ておよび前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが改変ヌクレオチドであり、ここで、前記センス鎖は、３’末端において付着されるリガンドにコンジュゲートされる。特定の実施形態では、リガンドは、一価リンカー、二価分枝リンカー、または三価分枝リンカーを介して付着される１つまたは複数のＧａｌＮＡｃ誘導体である。ある特定の実施形態では、リンカーを介して付着されるＧａｌＮＡｃ誘導体は、
Figure 2023531520000027
 であるか、またはこれを含む。
特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、次の概略図に示される通り、リガンドにコンジュゲートされ（すなわち、リンカーを介して付着されるＧａｌＮＡｃ誘導体は次の概略図に示される通りである）：
Figure 2023531520000028
 式中、ＸはＯまたはＳである。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、ｓｉＲＮＡであり、ここで、ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのヌクレオチドは、デオキシ－ヌクレオチド、３’末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル改変ヌクレオチド、２’－フルオロ改変ヌクレオチド、２’－デオキシ－改変ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、アンロックドヌクレオチド、コンフォメーション的に制限されたヌクレオチド、拘束されたエチルヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル－改変ヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル－改変ヌクレオチド、２’－ヒドロキシル－改変ヌクレオチド、２’－メトキシエチル改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル－改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン改変ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール改変ヌクレオチド、シクロヘキセニル改変ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’－リン酸を含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸、または５’－リン酸模倣物を含むヌクレオチドを含む改変ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、リン酸骨格改変、２’リボース改変、５’三リン酸改変、またはＧａｌＮＡｃコンジュゲーション改変を含む。ある特定の実施形態では、リン酸骨格改変は、ホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態では、２’リボース改変は、フルオロまたは－Ｏ－メチル置換を含む。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２２）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａＡｆｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２３）を含むアンチセンス鎖を有するｓｉＲＮＡであり、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
ｓは、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６は、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２４）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａ（Ａｇｎ）ｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２５）を含むアンチセンス鎖を有するｓｉＲＮＡであり、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
（Ａｇｎ）は、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）であり；
ｓは、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６は、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、５’－ｇｓｇｓｕｇｇａＣｆｕＵｆＣｆＵｆｃｕｃａＡｆＵｆｕｕｕａＬ９６－３’（配列番号１２６）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＡｆｓａａａＵｆｕＧｆＡｆｇａｇａＡｆｇＵｆｃｃａｃｃｓａｓｃ－３’（配列番号１２７）を含むアンチセンス鎖を有するｓｉＲＮＡであり、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
ｓは、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６は、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである。
上記の方法、使用のための組成物、または製造における使用の特定の実施形態では、被験体はヒトであり、ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡの治療有効量が被験体に投与され；ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡの有効量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇである。
本明細書に開示される方法、使用のための組成物、または使用の一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、４週間毎、または１か月に１回、被験体に投与される。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、４週間毎に被験体に投与される。
ある特定の実施形態では、方法は、２つのＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を抗ＨＢＶ抗体と共に投与することを含む。２つのＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、２つのｓｉＲＮＡ、例えば、異なるＨＢＶ遺伝子を標的とする２つのｓｉＲＮＡであり得る。２つの異なるＨＢＶ遺伝子は、例えば、ＨＢｓＡｇとＨＢＶ Ｘであり得る。２つのＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、同時に投与され得る。ある特定の実施形態では、各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡは、配列番号１１９、配列番号１２３、または配列番号１２５を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡは、配列番号１１６のヌクレオチド２８５０～３１８２の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有するｓｉＲＮＡを含む。ある特定の実施形態では、各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡは、配列番号１２１または配列番号１２７を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡは、配列番号１１６のヌクレオチド２８５０～３１８２の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有するｓｉＲＮＡを含む。ある特定の実施形態では、各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡは、配列番号１１９、配列番号１２３または配列番号１２５を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡは、配列番号１２１または配列番号１２７を含むアンチセンス鎖を有する。ある特定の実施形態では、第１のｓｉＲＮＡは、配列番号１１８、配列番号１２２、または配列番号１２４を含むセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡは、配列番号１２０または配列番号１２６を含むセンス鎖を有する。
ある特定の実施形態では、抗ＨＢＶ抗体およびＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、相乗的な治療効果を示す。用語「相乗作用」は、それぞれの活性薬剤各々の個々の効果の合計よりも大きい、２つまたはそれよりも多くの活性薬剤の組み合わさった効果を記載するように使用される。したがって、２つまたはそれよりも多くの薬剤の組み合わさった効果により、活性またはプロセスの「相乗的な阻害」がもたらされ、活性またはプロセスの阻害は、それぞれの活性薬剤各々の阻害効果の合計よりも大きいことが意図されている。用語「相乗的な治療効果」は、２つまたはそれよりも多くの治療の組合せを用いて観察される治療効果を指し、ここで、治療効果（多数のパラメータのいずれかによって測定されたときの）は、それぞれの個々の治療を用いて観察される個々の治療効果の合計よりも大きい。
一部の実施形態では、ＨＢＶ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉ剤をＨＢＶ感染および／またはＨＢＶ関連疾患を有する被験体に投与し、その結果、例えば、被験体の細胞、組織、血液、または体液における１つまたは複数のＨＢＶ遺伝子の発現、ＨＢＶ ｃｃｃ ＤＮＡレベル、ＨＢＶ抗原レベル、ＨＢＶウイルス負荷量レベル、ＡＬＴ、および／またはＡＳＴが、少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６２％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％またはそれよりも大きく低減する。
一部の実施形態では、ＨＢＶ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉ剤をＨＢＶ感染および／またはＨＢＶ関連疾患を有する被験体に投与し、ＨＢＶ遺伝子発現が、少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％、または約１００％、すなわち、アッセイの検出レベルを下回るまで、阻害される。
一部の実施形態では、本開示による併用療法は、ヌクレオチ（シ）ドアナログを第３の成分として投与することを含む。本明細書で使用される場合、用語「ヌクレオチ（シ）ドアナログ」（または「ポリメラーゼ阻害剤」または「逆転写酵素阻害剤」）は、ヌクレオチドまたはヌクレオシドと構造的に類似しており、ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ複製を特異的に阻害し、宿主（例えば、ヒト）ＤＮＡの複製は著しくは阻害しないＤＮＡ複製の阻害剤である。かかる阻害剤としては、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）、テルビブジン、ＡＧＸ－１００９、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、クレブジン、リトナビル、ジピボキシル、ロブカビル、ファムビル、Ｎ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）、ＰＣ１３２３、ｔｈｅｒａｄｉｇｍ－ＨＢＶ、チモシン－アルファ、ガンシクロビル、ベシホビル（ＡＮＡ－３８０／ＬＢ－８０３８０）、およびテノホビル－エキサリアデス（ＴＬＸ／ＣＭＸ１５７）が挙げられる。ある特定の実施形態では、ヌクレオチ（シ）ドアナログは、エンテカビル（ＥＴＶ）である。ヌクレオチ（シ）ドアナログは、多数の供給源から市販されており、本明細書で提供される方法において、それらのラベルの指示に従って（例えば、典型的には特定の用量で経口投与される）またはＨＢＶの処置の当業者によって決定される通り、使用される。
抗ＨＢＶ抗体またはＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤は、同じ医薬組成物中に第３の活性構成要素として存在してもよく、あるいは、抗ＨＢＶ抗体、ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤、および第３の活性構成要素は、３つの異なる医薬組成物中に存在する。かかる異なる医薬組成物は、組み合わせて／同時に投与することもでき、別々の時間にまたは別々の場所（例えば、体の別々の部分）に投与することもできる。
本開示は、以下の実施形態も提供する：
実施形態１． （ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３５または配列番号３６のアミノ酸配列、および配列番号３７のアミノ酸配列を中に含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号４１、４０、４２、および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号４９、４４～４８、および５０～５３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のアミノ配列を中に含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せを含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、なおさらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれのさらなる変異も含まず、前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態２． （ｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４９、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｉ）前記ＶＨ中に、配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４６、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４７、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｉｖ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４８、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４５、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５０、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５１、および５５に記載のアミノ酸配列；（ｖｉｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５２、および５５に記載のアミノ酸配列；または（ｉｘ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５３、および５５に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３． （ｉ）配列番号３４に記載のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３５または３６に記載のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３７に記載のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに（ｉｉ）配列番号４０～４３のうちのいずれか１つに記載のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４９、４４～４８、および５０～５３のうちのいずれか１つに記載のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、ＣＤＲが、ＣＣＧ番号付けシステムに従って規定され、前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能であり、ただし、前記抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および４５に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含まない
抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態４． 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列が、（ｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４９、および５５；（ｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４６、および５５；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４７、および５５；（ｉｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４８、および５５；（ｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４５、および５５；（ｖｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５０、および５５；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５１、および５５；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５２、および５５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５３、および５５；または（ｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載される、実施形態３に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態５． 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、前記ＣＤＲが、ＩＭＧＴ番号付けに従って規定され、必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれのさらなる変異も含まない抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態６． 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、前記ＣＤＲが、ＣＣＧ番号付けに従って規定され、必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれの他の変異も含まない抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態７． （ｉ）前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；ならびに／または（ｉｉ）前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、および７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、実施形態１～６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態８． （ｉ）前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／あるいは（ｉｉ）前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、および７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態９． 前記ＶＨおよび前記ＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる、実施形態１～８のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１０． 配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６２、５７～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記バリアントが、次の変異：Ｒ６０Ａ；Ｒ６０Ｎ；Ｒ６０Ｋ；Ｓ６４Ａ；およびＩ７４Ａのうちのいずれか１つまたは複数を含み、必要に応じて、前記ＶＬバリアントが、それぞれ配列番号６２、５７～６１、および６３～７２と比較して、いずれのさらなる変異も含まない、抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態１１． 配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６２、５７～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記バリアントが、Ｑ７８、Ｄ８１、またはその両方において、置換変異（例えば、保存的アミノ酸置換、または生殖細胞系列にコードされるアミノ酸への変異など）を含み、必要に応じて、前記ＶＬバリアントが、それぞれ配列番号６２、５７～６１、および６３～７２と比較して、いずれのさらなる変異も含まない、抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態１２． 前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／または前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、もしくは７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、実施形態１～９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１３． 前記ＶＨおよび前記ＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる、実施形態１～９および１２のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１４． 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体または抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６７；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６８；または（ｖ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなり、
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、抗体または抗原結合断片。
実施形態１５． Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）による感染を中和することが可能である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１６． 複数の前記抗体または抗原結合断片を含む試料が約４０℃で約１２０～約１６８時間インキュベートされた場合に、前記試料中に、前記複数のうちの１２％未満、１１％もしくはそれ未満、１０％もしくはそれ未満、９％もしくはそれ未満、８％もしくはそれ未満、７％もしくはそれ未満、６％もしくはそれ未満、５％もしくはそれ未満、４％もしくはそれ未満、３％もしくはそれ未満、または２％もしくはそれ未満が二量体として含まれ、必要に応じて、二量体の存在が、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１７． 複数の前記抗体または抗原結合断片のインキュベーションが、複数の参照抗体または抗原結合断片のインキュベーションと比較して、二量体の形成の低減を生じ、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含み、必要に応じて、抗体二量体の存在が、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１８．
（ｉ）４℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；
（ｉｉ）２５℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；ならびに／または
（ｉｉｉ）４０℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて、参照抗体と比較して、より低い量の二量体を形成し、ならびに／あるいは低減された頻度で、および／または試料もしくは組成物中の総抗体もしくは抗原結合断片分子のより低いパーセンテージとして、二量体を形成し、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１９． 組成物中の、二量体として含まれる抗体または抗原結合断片分子のパーセンテージが、組成物中の、二量体として存在する参照抗体分子のパーセンテージの、それぞれ４／５未満、３／４未満、１／２未満、１／３未満、１／４未満、１／５未満、１／６未満、１／７未満、１／８未満、１／９未満、または１／１０未満である、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２０． 前記抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた宿主細胞が、参照抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた参照宿主細胞よりも、それぞれ１．５倍もしくはそれより多くの、２倍もしくはそれより多くの、３倍もしくはそれより多くの、または４倍もしくはそれより多くの量の抗体または抗原結合断片を提供し、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２１． 前記抗体またはその抗原結合断片が、トランスフェクトされた参照細胞において産生される参照抗体または抗原結合断片と比較してより高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２２． 前記抗体またはその抗原結合断片が、参照抗体または抗原結合断片が産生される力価よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２３． 前記抗体または抗原結合断片が、約３．２もしくはそれ未満、３．０未満、２．５未満、２．０未満、１．５未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（ａｄｗ）に結合することが可能である、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２４． 前記抗体または抗原結合断片が、３．５未満、３．４未満、３．３未満、３．２未満、３．１未満、３．０未満、２．９未満、２．８未満、２．７未満、２．６未満、２．５未満、２．４未満、２．３未満、２．１未満、２．０未満、１．９未満、１．８未満、１．７未満、１．６未満、１．５未満、１．４未満、１．３未満、１．２未満、１．１未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２５． 前記抗体または抗原結合断片が、０．９と２．０との間の、または０．９と１．９との間の、または０．９と１．８との間の、または０．９と１．７との間の、または０．９と１．６との間の、または０．９と１．５との間の、または０．９と１．４との間の、または０．９と１．３との間の、または０．９と１．２との間の、または０．９と１．１との間の、または０．９と１．０との間の、または１．０と２．０との間のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２６． 前記抗体または抗原結合断片が、２．０またはそれ未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（ａｄｗ）に結合することが可能である、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２７． ２０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１５ｎｇ／ｍｌまたはそれ未満、より好ましくは１０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満の、Ｂ型肝炎ウイルス感染中和ＥＣ５０を有する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２８． 前記抗体またはその抗原結合断片が、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７ｎｇ／ｍＬの感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態２９． 前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む参照抗体または抗原結合断片の感染中和ＥＣ５０よりも低い感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３０． 前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒト抗体、モノクローナル抗体、精製された抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む、実施形態１～２９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３１． 前記抗体または抗原結合断片が、多特異性抗体または抗原結合断片である、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３２． 前記抗体または抗原結合断片が、二特異性抗体または抗原結合断片である、実施形態１～３１のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３３． 前記抗体または抗原結合断片が、Ｆｃ部分を含む、実施形態１～３２のいずれか１つに記載の抗体、またはその抗原結合断片。
実施形態３４． 前記Ｆｃ部分が、参照Ｆｃ部分と比較して、ＦｃＲｎへの結合を増強する変異を含み、前記参照Ｆｃ部分が当該変異を含まないものである、実施形態３３に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３５． 前記Ｆｃ部分が、参照Ｆｃ部分と比較して、ＦｃγＲ、好ましくはＦｃγＲＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を増強する変異を含み、前記参照Ｆｃ部分が当該変異を含まないものである、実施形態３３または３４に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３６． 前記Ｆｃ部分が、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１であるか、またはＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１に由来する、実施形態３３～３５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３７． ＩｇＧ１ｍ１７，１（ＩｇＨＧ１＊０１）を含むか、またはこれに由来する、実施形態３３～３６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３８． ＦｃＲｎへの結合を増強する前記変異が、（ｉ）Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；（ｉｉ）Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；（ｉｉｉ）Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；（ｉｖ）Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１Ｉ；（ｖ）Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ；（ｖｉ）Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ；（ｖｉｉ）Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；または（ｖｉｉｉ）（ｉ）～（ｖｉｉ）の任意の組合せを含み、前記Ｆｃ部分のアミノ酸番号付けが、ＥＵ番号付けシステムに従う、実施形態３４～３７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態３９． ＦｃＲｎへの結合を増強する前記変異が、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む、実施形態３８に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４０． ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、Ｓ２３９Ｄ；Ｉ３３２Ｅ；Ａ３３０Ｌ；Ｇ２３６Ａ；またはこれらの任意の組合せを含み、前記Ｆｃ部分のアミノ酸番号付けが、前記ＥＵ番号付けシステムに従う、実施形態３５～３９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４１． ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、（ｉ）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；（ｉｉ）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ；（ｉｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；または（ｉｖ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含む、実施形態４０に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４２． ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含むか、またはこれからなり、必要に応じて、前記抗体または抗原結合断片が、Ｓ２３９Ｄを含まず、前記抗体または抗原結合断片が、さらに必要に応じて、２３９位においてネイティブＳを含む、実施形態４０または４１に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４３． 前記Ｆｃ部分が、前記アミノ酸置換変異：Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓ；Ｇ２３６Ａ；Ａ３３０Ｌ；およびＩ３３２Ｅを含み、必要に応じて、Ｓ２３９Ｄを含まない、実施形態３３～４２のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４４． 配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、実施形態１～４３のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４５． 配列番号７３のアミノ酸配列に対して９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれからなるＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、または次のアミノ酸置換（ＥＵ番号付け）：Ｇ２３６Ａ；Ａ３３０Ｌ；Ｉ３３２Ｅ；Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓのうちの１つもしくは複数を含むそのバリアントを含む、実施形態１～４４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４６． 前記ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３から、Ｃ末端リシンが除去されている、実施形態４５に記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態４７． 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７５に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
実施形態４８． 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態４７に記載の抗体。
実施形態４９． 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
実施形態５０． 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態４９に記載の抗体。
実施形態５１． 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
実施形態５２． 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態５１に記載の抗体。
実施形態５３． 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
実施形態５４． 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、実施形態５３に記載の抗体。
実施形態５５． 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪ、またはこれらの任意の組合せから選択される遺伝子型のＨＢｓＡｇに結合することが可能である、実施形態１～５４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態５６． 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢＶ ＤＮＡの血清濃度を低減させることが可能である、実施形態１～５５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態５７． 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｓＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、実施形態１～５６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態５８． 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｅＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、実施形態１～５７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態５９． 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｃｒＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、実施形態１～５８のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態６０． 実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体、または抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
実施形態６１． 実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体、または抗原結合断片の軽鎖可変領域（ＶＬ）および必要に応じて軽鎖定常領域（ＣＬ）をコードするポリヌクレオチド。
実施形態６２． 前記抗体または抗原結合断片をコードする前記ヌクレオチド配列が、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されている、実施形態６１に記載のポリヌクレオチド。
実施形態６３． 配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、実施形態６２に記載のポリヌクレオチド。
実施形態６４． （ｉ）配列番号８１または配列番号８２に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、実施形態６０～６３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。
実施形態６５． （ｉ）配列番号８３に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、実施形態６０～６３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。
実施形態６６． （ｉ）配列番号８４に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、実施形態６０～６３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。
実施形態６７． 実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
実施形態６８． レンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターを含む、実施形態６７に記載のベクター。
実施形態６９． 実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドおよび／または実施形態６７もしくは６８に記載のベクターを含む宿主細胞。
実施形態７０． （ｉ）実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）実施形態６９に記載の宿主細胞；または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ、ならびに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤またはキャリアーを含む、医薬組成物。
実施形態７１．
（ａ）（ｉ）実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）実施形態６９に記載の宿主細胞；（ｖ）実施形態７０に記載の医薬組成物；または（ｖｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組合せから選択される構成要素；ならびに
（ｂ）（１）Ｂ型肝炎感染および／もしくはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／もしくは診断するために前記構成要素を使用するための使用説明書、ならびに／または（２）前記構成要素を被験体に投与するための手段、例えば、シリンジを含むキット。
実施形態７２． （ｉ）ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、もしくはこれらの任意の組合せを必要に応じて含む、ポリメラーゼ阻害剤；（ｉｉ）ＩＦＮベータおよび／もしくはＩＦＮアルファを必要に応じて含む、インターフェロン；（ｉｉｉ）抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を必要に応じて含む、チェックポイント阻害剤；（ｉｖ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せをさらに含む、実施形態７０に記載の組成物または実施形態７１に記載のキット。
実施形態７３． 前記ポリメラーゼ阻害剤が、ラミブジンを含む、実施形態７２に記載の組成物またはキット。
実施形態７４． 実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片を産生する方法であって、前記抗体または抗原結合断片を産生するのに十分な条件下でかつそのような時間にわたって、実施形態６９に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
実施形態７５． 被験体におけるＢ型肝炎感染および／またはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／または診断するための医薬の製造における、（ｉ）実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）実施形態６９に記載の宿主細胞；および／または（ｖ）実施形態７０、７２、もしくは７３に記載の医薬組成物、の使用。
実施形態７６． 被験体におけるＢ型肝炎および／またはＤ型肝炎感染を処置、予防、および／または弱毒化する方法であって、（ｉ）実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）実施形態６０～６６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）実施形態６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）実施形態６９に記載の宿主細胞；および／または（ｖ）実施形態７０、７２、もしくは７３に記載の医薬組成物、の有効量を前記被験体に投与することを含む、方法。
実施形態７７． （ｖｉ）ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、もしくはこれらの任意の組合せを必要に応じて含む、ポリメラーゼ阻害剤；（ｖｉｉ）ＩＦＮベータおよび／もしくはＩＦＮアルファを必要に応じて含む、インターフェロン；（ｖｉｉｉ）抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を必要に応じて含む、チェックポイント阻害剤；（ｉｘ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｘ）（ｖｉ）～（ｉｘ）の任意の組合せ、のうちの１つまたは複数を、前記被験体に投与することをさらに含む、実施形態７６に記載の方法。
実施形態７８． 前記Ｂ型肝炎感染が、慢性Ｂ型肝炎感染である、実施形態７６または７７に記載の方法。
実施形態７９． 前記被験体が、肝臓移植を受けた、実施形態７６～７８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８０． 前記被験体が、Ｂ型肝炎に対して免疫されていない、実施形態７６～７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８１． 前記被験体が、新生児である、実施形態７６～８０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８２． 前記被験体が、血液透析を受けているか、または受けた、実施形態７６～８１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８３． 前記方法が、前記抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物の単一用量を前記被験体に投与することを含む、実施形態７６～８２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８４． 前記医薬組成物の前記単一用量が、２～１８ｍｇ／ｋｇ（被験体体重）の範囲内の前記抗体を含む、実施形態８３に記載の方法。
実施形態８５． 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で６ｍｇ、最大で１０ｍｇ、最大で１５ｍｇ、最大で１８ｍｇ、最大で２５ｍｇ、最大で３０ｍｇ、最大で３５ｍｇ、最大で４０ｍｇ、最大で４５ｍｇ、最大で５０ｍｇ、最大で５５ｍｇ、最大で６０ｍｇ、最大で７５ｍｇ、最大で９０ｍｇ、最大で３００ｍｇ、最大で９００ｍｇ、もしくは最大で３０００ｍｇの前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは７５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは９００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１５００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２０００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは７５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは４００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むような量で、前記医薬組成物の前記単一用量が前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～３００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは２０ｍｇ～２５ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～５０ｍｇの範囲内、もしくは１ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～５０ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１０～５０ｍｇの範囲内、もしくは１０～２５ｍｇの範囲内、もしくは１～１５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～１５ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～１５ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、もしくは１０００ｍｇ、またはそれより多くの前記抗体を含むか、または
前記医薬組成物の前記単一用量が、３０００ｍｇ未満、２５００ｍｇ未満、２０００ｍｇ未満、１５００ｍｇ未満、１０００ｍｇ未満、９００ｍｇ未満、５００ｍｇ未満、３００ｍｇ未満、２００ｍｇ未満、１００ｍｇ未満、９０ｍｇ未満、７５ｍｇ未満、５０ｍｇ未満、２５ｍｇ未満、もしくは１０ｍｇ未満であるが、１ｍｇよりも多い、２ｍｇよりも多い、３ｍｇよりも多い、４ｍｇよりも多い、もしくは５ｍｇよりも多い量で前記抗体を含む、
実施形態８３または８４に記載の方法。
実施形態８６． 前記医薬組成物の前記単一用量が、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含む、実施形態８３～８５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８７． 前記医薬組成物の前記単一用量が、約７５ｍｇの前記抗体を含む、実施形態８３～８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８８． 前記医薬組成物の前記単一用量が、約９０ｍｇの前記抗体を含む、実施形態８３～８７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８９． 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で３００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態８３～８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９０． 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で９００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態８３～８９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９１． 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で３，０００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態８３～９０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９２． 前記方法が、前記単一用量を皮下注射によって投与することを含み、必要に応じて、前記単一用量が、６ｍｇの前記抗体または１８ｍｇの前記抗体を含むか、またはこれらからなる、実施形態８３～９１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９３． 前記方法が、前記単一用量を静脈内注射によって投与することを含む、実施形態８３～９２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９４． 前記医薬組成物が、水、必要に応じてＵＳＰ水をさらに含む、実施形態８３～９３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９５． 前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に、ヒスチジンを、必要に応じて、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内の濃度、例えば、２０ｍＭでさらに含む、実施形態８３～９４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９６． 前記医薬組成物が、二糖、例えば、スクロースを、必要に応じて、５％、６％、７％、８％、または９％、好ましくは約７％（ｗ／ｖ）でさらに含む、実施形態８３～９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９７． 前記医薬組成物が、界面活性剤またはトリブロックコポリマー、必要に応じて、ポリソルベートまたはポロクサマー－１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）をさらに含み、必要に応じて、前記ポリソルベートまたはポロクサマー－１８８が、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲内、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で存在する、実施形態８３～９６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９８． 前記医薬組成物が、５．８～６．２の範囲内の、５．９～６．１の範囲内の、または５．８の、５．９の、６．０の、６．１の、もしくは６．２のｐＨを有する、実施形態８３～９７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９９． 前記医薬組成物が、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの前記抗体；
（ｉｉ）ＵＳＰ水；
（ｉｉｉ）２０ｍＭヒスチジン；
（ｉｖ）７％スクロース；および
（ｖ）０．０２％ＰＳ８０
を含み、前記医薬組成物が、６のｐＨを含む、実施形態９８に記載の方法。
実施形態１００． 前記被験体が成体である、実施形態８３～９９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０１． 前記被験体が、１８歳～６５歳の範囲内である、実施形態１００に記載の方法。
実施形態１０２． 前記被験体が、４０ｋｇ～１２５ｋｇの体重である、および／または前記被験体が、１８～３５ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する、実施形態８３～１０１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０３． 前記被験体が、例えば、２回の機会にわたる陽性血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ、および／またはＨＢｅＡｇによって定義される慢性ＨＢＶ感染を有し、前記２回の機会が、少なくとも６か月離れている、実施形態８３～１０２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０４． 前記被験体が、肝硬変を有さない、実施形態８３～１０３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０５． 肝硬変の非存在が、
Ｆｉｂｒｏｓｃａｎ評価（例えば、前記医薬組成物の前記単一用量を投与する前６か月以内の）；または
肝臓生検（例えば、前記医薬組成物の前記単一用量を投与する前１２か月以内の）
によって決定され、
好ましくは、肝硬変の非存在が、Ｍｅｔａｖｉｒ Ｆ３線維症の非存在またはＦ４肝硬変の非存在によって決定される、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６． 前記被験体が、ヌクレオシ（チ）ド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）を、必要に応じて、前記単一用量が投与される前１２０日以内、さらに必要に応じて、６０日以内に受けた、実施形態８３～１０５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０７． 前記ＮＲＴＩが、テノホビル；テノホビルジソプロキシル（例えば、テノホビルジソプロキシル（disproxil）フマル酸塩）；テノホビルアラフェナミド；エンテカビル；ラミブジン；アデホビル；およびアデホビルジピボキシルのうちの１つまたは複数を含む、実施形態１０６に記載の方法。
実施形態１０８． 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、１００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢＶ ＤＮＡ濃度を有する、実施形態８３～１０７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０９． 前記被験体が、前記単一用量が投与される前に、３，０００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢｓＡｇ濃度を有し、必要に応じて、前記単一用量が投与される前に、１，０００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢｓＡｇ濃度を有する、実施形態８３～１０８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１０． 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、３，０００ＩＵ／ｍＬよりも高いまたはそれと等しい血清ＨＢｓＡｇ濃度を有し、必要に応じて、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、１，０００ＩＵ／ｍＬよりも高いまたはそれと等しい血清ＨＢｓＡｇ濃度を有する、実施形態８３～１０９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１１． 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、ＨＢｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）陰性であった、実施形態８３～１１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１２． 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、抗ＨＢ抗体について陰性であった、実施形態８３～１１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１３． 前記被験体が、前記単一用量の投与の前に、
（ｉ）線維症を有さない、および／もしくは肝硬変を有さない；ならびに／または
（ｉｉ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＜２×正常上限（ＵＬＮ）を有する、
実施形態８３～１１２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１４． 前記単一用量の投与の５６日後に、前記被験体が、前記単一用量の投与の０日～２８日前の前記被験体の血清ＨＢｓＡｇと比較して、血清ＨＢｓＡｇ（例えば、Ａｂｂｏｔｔ ＡＲＣＨＩＴＥＣＴアッセイを使用して決定される、例えば、血清中のＨＢｓＡｇの濃度）における２分の１未満の低減を有する、実施形態８３～１１３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１５． 前記単一用量の投与後に（例えば、前記単一用量の投与の５６日後に）、前記被験体が、
（ｉ）参照被験体と比較して、ＨＢＶの低減したもしくは重症度が低い肝内伝播を有する；および／または
（ｉｉ）ＨＢＶに対する適応免疫応答を含む、
実施形態８３～１１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１６． 前記被験体が男性である、実施形態８３～１１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１７． 前記被験体が女性である、実施形態８３～１１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１８． １００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬの、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片、および薬学的に許容されるキャリアー、賦形剤、または希釈剤を含む医薬組成物。
実施形態１１９． 前記医薬組成物が、最大で６ｍｇ、最大で１８ｍｇ、最大で７５ｍｇ、最大で９０ｍｇ、最大で３００ｍｇ、最大で９００ｍｇ、または最大で３０００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８に記載の医薬組成物。
実施形態１２０． 前記医薬組成物が、約７５ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８または１１９に記載の医薬組成物。
実施形態１２１． 前記医薬組成物が、約９０ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８または１１９に記載の医薬組成物。
実施形態１２２． 前記医薬組成物が、約３００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８または１１９に記載の医薬組成物。
実施形態１２３． 前記医薬組成物が、約９００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８または１１９に記載の医薬組成物。
実施形態１２４． 前記医薬組成物が、約３，０００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態１１８または１１９に記載の医薬組成物。
実施形態１２５． 前記医薬組成物が、水、必要に応じてＵＳＰ水を含む、実施形態１１８～１２４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１２６． 前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に、ヒスチジンを、必要に応じて、１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度、例えば、２０ｍＭで含む、実施形態１１８～１２５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１２７． 前記医薬組成物が、二糖、例えば、スクロースを、必要に応じて、５％、６％、７％、８％、または９％、好ましくは約７％（ｗ／ｖ）で含む、実施形態１１８～１２６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１２８． 前記医薬組成物が、界面活性剤、必要に応じて、ポリソルベート、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、必要に応じて、前記ポリソルベートが、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲内、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で存在する、実施形態１１８～１２７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１２９． 前記医薬組成物が、５．８～６．２の範囲の、５．９～６．１の範囲の、または５．８の、５．９の、６．０の、６．１の、もしくは６．２のｐＨを有する、実施形態１１８～１２８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１３０． 前記医薬組成物が、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの前記抗体；
（ｉｉ）ＵＳＰ水；
（ｉｉｉ）２０ｍＭヒスチジン；
（ｉｖ）７％スクロース；および
（ｖ）０．０２％ＰＳ８０
を含み、前記医薬組成物が、６のｐＨを含む、実施形態１１８～１２９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
実施形態１３１． 前記単一用量の投与後に、前記被験体の血清ＨＢｓＡｇが、ベースラインと比較して、１．０ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ、１．５ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ、またはそれよりも大きく低減され、必要に応じて、前記低減が、前記単一用量の投与後に、１、２、３、４、５、６、７、８日間にわたって、またはそれより長く持続する、実施形態８３～１１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３２． 前記単一用量の投与後に、前記被験体の血清ＨＢｓＡｇが、ベースラインと比較して、少なくとも８、少なくとも１５、少なくとも２２、または少なくとも２９日間にわたって低減される、実施形態８３～１１７および１３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３３． Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎感染のｉｎ ｖｉｔｒｏ診断のための方法であって、
（ｉ）被験体由来の試料を、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片と接触させること；および
（ｉｉ）抗原と前記抗体とを含む複合体、または抗原と前記抗原結合断片とを含む複合体を検出すること
を含む、方法。
実施形態１３４． 前記試料が、前記被験体から単離された血液を含む、実施形態１３３に記載の方法。
実施形態１３５． 抗Ｂ型肝炎および／または抗Ｄ型肝炎ワクチン中の正確な立体構造にあるエピトープの存在または非存在を検出するための方法であって、
（ｉ）前記ワクチンを、実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片と接触させること；および
（ｉｉ）抗原と前記抗体とを含む複合体、または抗原と前記抗原結合断片とを含む複合体が形成されたかどうかを決定すること
を含む、方法。
実施形態１３６． 前記医薬組成物が、
（ｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方への増強された結合を有し、前記ヒトＦｃγＲＩＩＡが、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１である、および／または前記ヒトＦｃγＲＩＩＩＡが、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；
（ｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＢへの低減された結合を有する；
（ｉｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢに結合しない；
（ｉｖ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＣ１ｑへの低減された結合を有する；
（ｖ）ヒトＣ１ｑに結合しない；
（ｖｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方を活性化し、前記ヒトＦｃγＲＩＩＡが、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１である、および／または前記ヒトＦｃγＲＩＩＩＡが、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；
（ｖｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢを活性化しない；
（ｖｉｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＨＢｓＡｇの存在下でヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化し、前記参照ポリペプチドが、必要に応じて、ＨＢ Ａｇ、必要に応じてＨＢｓＡｇに結合する抗体である；
（ｉｘ）ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントに結合することが可能である；ならびに／あるいは
（ｘ）ＨＢｓＡｇに結合し、Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照抗体もしくは抗原結合断片と比較して、ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントへの改善された結合を有する、
実施形態１～５９のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合断片。
実施形態１３７． 慢性ＨＢＶ感染を処置することを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、
ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を前記被験体に投与すること；および
実施形態１～５９のいずれか１つからの抗ＨＢＶ抗体を前記被験体に投与すること
を含む、方法。
実施形態１３８． 慢性ＨＢＶ感染を処置することを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、
ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を前記被験体に投与すること；および
実施形態１～５９のいずれか１つからの抗ＨＢＶ抗体を前記被験体に投与すること
を含む、方法。
実施形態１３９． ＲＮＡｉ剤が、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７から３ヌクレオチド以下異なる少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、実施形態１３７または１３８に記載の方法。
実施形態１４０． 前記ＲＮＡｉ剤が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７を含む、実施形態１３７～１３９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４１． 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖が、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、実施形態１３７～１４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４２． 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖が、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、実施形態１３７～１４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４３． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１５～３０ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４４． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１７～２３ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４５． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１７～２５ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４６． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、２３～２７ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４７． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１９～２１ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４８． 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、２１～２３ヌクレオチド対の長さである、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４９． 前記ＲＮＡｉ剤の各鎖が、１５～３０ヌクレオチドを有する、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５０． 前記ＲＮＡｉ剤の各鎖が、１９～３０ヌクレオチドを有する、実施形態１３７～１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５１． 前記ＲＮＡｉ剤が、ｓｉＲＮＡである、実施形態１３７～１５０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５２． 前記ｓｉＲＮＡが、ＨＢｓＡｇタンパク質、ＨＢｃＡｇタンパク質、およびＨＢｘタンパク質、またはＨＢＶ ＤＮＡポリメラーゼタンパク質をコードするＨＢＶ転写物の発現を阻害する、実施形態１５１に記載の方法。
実施形態１５３． 前記ｓｉＲＮＡが、Ｐ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２３０９～３１８２および１～１６２５；Ｓ遺伝子（Ｌ、Ｍ、およびＳタンパク質をコードする）、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２８５０～３１８２および１～８３７；ＨＢｘ、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１３７６～１８４０；またはＣ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１８１６～２４５４、によってコードされる標的の少なくとも１５連続するヌクレオチドに結合する、実施形態１５１または実施形態１５２に記載の方法。
実施形態１５４． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、実施形態１５１または実施形態１５２に記載の方法。
実施形態１５５． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列の少なくとも１９連続するヌクレオチドを含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１５６． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列を含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１５７． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列からなる、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１５８． 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列を含む、実施形態１５４～１５７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５９． 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列からなる、実施形態１５４～１５７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６０． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１６１． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列の少なくとも１９連続するヌクレオチドを含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１６２． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列を含む、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１６３． 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、実施形態１５１または１５２に記載の方法。
実施形態１６４． 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列を含む、実施形態１５４～１５７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６５． 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなる、実施形態１５４～１５７のいずれか１つに記載の方法、使用のための組成物、または使用。
実施形態１６６． 前記センス鎖のヌクレオチドの実質的に全ておよび前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが、改変ヌクレオチドであり、前記センス鎖が、３’末端において結合されるリガンドにコンジュゲートされる、実施形態１５１～１６５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６７． 前記リガンドが、一価リンカー、二価分岐リンカー、または三価分岐リンカーを介して結合される１つまたは複数のＧａｌＮＡｃ誘導体である、実施形態１６６に記載の方法。
実施形態１６８． 前記リガンドが、
Figure 2023531520000029
 である、実施形態１６６または１６７に記載の方法。
実施形態１６９． 前記ｓｉＲＮＡが、次の構造：
Figure 2023531520000030
 で示される通り、前記リガンドにコンジュゲートされ、式中、ＸがＯまたはＳである、実施形態１６８に記載の方法。
実施形態１７０． 前記ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのヌクレオチドが、デオキシ－ヌクレオチドを含む改変ヌクレオチド、３’末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル改変ヌクレオチド、２’－フルオロ改変ヌクレオチド、２’－デオキシ－改変ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、アンロックドヌクレオチド、立体構造的に制限されたヌクレオチド、拘束されたエチルヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル－改変ヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル－改変ヌクレオチド、２’－ヒドロキシル－改変ヌクレオチド、２’－メトキシエチル改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル－改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン改変ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール改変ヌクレオチド、シクロヘキセニル改変ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’－リン酸を含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸、または５’－リン酸模倣物を含むヌクレオチドである、実施形態１５１～１６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７１． 前記ｓｉＲＮＡが、リン酸骨格改変、２’リボース改変、５’三リン酸改変、またはＧａｌＮＡｃコンジュゲーション改変を含む、実施形態１５１～１６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７２． 前記リン酸骨格改変が、ホスホロチオエート結合を含む、実施形態１７１に記載の方法。
実施形態１７３． 前記２’リボース改変が、フルオロまたは－Ｏ－メチル置換を含む、実施形態１７１または実施形態１７２に記載の方法。
実施形態１７４． 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２２）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａＡｆｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２３）を含むアンチセンス鎖を有し、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである
実施形態１５１～１５９および１６６～１７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７５． 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２４）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａ（Ａｇｎ）ｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２５）を含むアンチセンス鎖を有し、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
（Ａｇｎ）が、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）であり；
ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである、
実施形態１５１～１５９および１６６～１７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７６． 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｇｓｕｇｇａＣｆｕＵｆＣｆＵｆｃｕｃａＡｆＵｆｕｕｕａＬ９６－３’（配列番号１２６）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＡｆｓａａａＵｆｕＧｆＡｆｇａｇａＡｆｇＵｆｃｃａｃｃｓａｓｃ－３’（配列番号１２７）を含むアンチセンス鎖を有し、
式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである、
実施形態１５１～１５３および１６０～１７３のいずれか１つに記載の方法、使用のための組成物、または使用。
実施形態１７７． 前記被験体がヒトであり、ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡの治療有効量が前記被験体に投与され；前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡの前記有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇである、実施形態１３７～１７６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７８． 前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡが、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、４週間毎、または１か月に１回、前記被験体に投与される、実施形態１３７～１７７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７９． 前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡが、４週間毎に前記被験体に投与される、実施形態１３７～１７７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８０． 各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２６を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１１６のヌクレオチド２８５０～３１８２の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有するｓｉＲＮＡを含む、実施形態１５１～１７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８１． ＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、前記２つのｓｉＲＮＡが、ＨＢＶ Ｘ遺伝子に指向されるｓｉＲＮＡおよびＨＢＶ Ｓ遺伝子に指向されるｓｉＲＮＡを含む、実施形態１５１～１７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８２． 各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１９、配列番号１２３、または配列番号１２５を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１２１または配列番号１２７を含むアンチセンス鎖を有する、実施形態１５１～１７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８３． 第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１８、配列番号１２２、または配列番号１２４を含むセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１２０または配列番号１２６を含むセンス鎖を有する、実施形態１８１に記載の方法。
実施形態１８４． 前記２つのｓｉＲＮＡが同時に投与される、実施形態１７９～１８３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８５． ヌクレオチ（シ）ドアナログを前記被験体に投与することをさらに含むか、または前記被験体がヌクレオチ（シ）ドアナログもまた投与される、実施形態１３７～１８４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８６． 前記ヌクレオチ（シ）ドアナログが、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）、テルビブジン、ＡＧＸ－１００９、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、クレブジン、リトナビル、ジピボキシル、ロブカビル、ファムビル、Ｎ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）、ＰＣ１３２３、ｔｈｅｒａｄｉｇｍ－ＨＢＶ、サイモシン－アルファ、およびガンシクロビル、ベシホビル（ｂｅｓｉｆｏｖｉｒ）（ＡＮＡ－３８０／ＬＢ－８０３８０）、またはテノホビル－エクサリアデス（ｔｅｎｏｆｖｉｒ－ｅｘａｌｉａｄｅｓ）（ＴＬＸ／ＣＭＸ１５７）である、実施形態１８５に記載の方法、使用のための組成物、または使用。
一部の場合では、本明細書で提供される抗体、抗原結合断片、融合タンパク質、核酸、細胞、組成物、組合せ、使用、および方法の要素が実施形態または実施例を参照して記載または列挙されている。しかし、本明細書に記載の実施例および実施形態を様々なやり方で組み合わせて、追加的な実施形態を創出することができることが理解されるべきである。
以下に、本開示の様々な実施形態および態様を例示する特定の実施例を提示する。しかし、本開示は、本明細書に記載の特定の実施形態による範囲に限定されるものではない。
（実施例１）
抗ＨＢＶ抗体による二量体形成
抗ＨＢＶ抗体は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０６０５０４号に開示されている。抗ＨＢＶ抗体「ＨＢＣ３４－ｖ７」を操作することにより、とりわけ、それぞれ配列番号３８および５７に記載のＶＨおよびＶＬアミノ酸配列を有する抗体「ＨＢＣ３４－ｖ３５」が産生される（ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２０／１３２０９１号）。ＨＢＣ３４－ｖ３５は、ＨＢｓＡｇにピコモルの親和性で結合し、１０種のＨＢＶ遺伝子型およびＤ型肝炎ウイルスを強力に中和し、これは、保存された立体構造エピトープに結合する。ＨＢＣ３４－ｖ３５（ＩｇＧ１として発現され、Ｆｃ変異Ｇ２３６Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓ（ＥＵ番号付け；集合的に「ＧＡＡＬＩＥ－ＭＬＮＳ」または「ＧＡＡＬＩＥ＋ＭＬＮＳ」または「ＭＬＮＳ－ＧＡＡＬＩＥ」または「ＭＬＮＳ＋ＧＡＡＬＩＥ」と呼ばれる）を含む）についての代表的な結合および中和データを図１に示す。
ＨＢＣ３４－ｖ３５を組換えＩｇＧ（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として宿主細胞系において発現させ、上清から精製し、投与のために製剤化した。製剤を１週間インキュベートした後のサイズ排除クロマトグラフィー分析により、抗体単量体（すなわち、２本の重鎖と２本の軽鎖で構成される単一の抗体分子）に対応するピークおよび抗体二量体（すなわち、２つの単一の抗体分子によって形成された凝集体）に対応する高分子量種が明らかになった（図２）。
二量体形成はＦａｂ－Ｆａｂ相互作用によって媒介されること、および組換えＦａｂも二量体を形成するはずであることが仮定された。サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、富化させたＩｇＧ二量体およびＦａｂ二量体を精製した。図３は、Ｆａｂ二量体画分が経時的にゆっくりと増加することを示す；二量体形成キネティクスも温度と共に増大した（データは示していない）。
異なる方式のＦａｂ二量体形成が記載されている（例えば、Plath et al. MAbs 8 (5): 928-940 (2016)を参照されたい）。Ｆａｂ二量体形成の方式に応じて、Ｆａｂは抗原に結合する能力を保持するかまたは失う。例えば、ＩｇＧ二量体は、４つのＦａｂのうちの２つは影響を受けず、結合能を最大５０％失うことが予測され得る。図４に示したように、ＨＢＣ３４－ｖ３５二量体（全長ＩｇＧまたはＦａｂ）は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；同様の量（質量で）の単量体および二量体抗体が表面上に捕捉される）によって判定したときのＨＢｓＡｇに対する結合が低減しており、これは、二量体形成にＣＤＲが関与することと一致する。
次に、ＨＢＣ３４－ｖ３５ ｒＦａｂ二量体または単量体の結晶化を実施した。ｒＦａｂ二量体を分取サイズ排除クロマトグラフィーによって単離した（図５Ａ）。３×９６条件を室温（濃度：５．５ｍｇ／ｍｌ）でセットアップした。結晶は３つの異なる条件で得られたが、回折は不十分であり、多結晶であった。新しいラウンドのインキュベーションおよび結晶化最適化により、高品質の回析が導かれた（図５Ｂ）。ｒＦａｂ単量体に関しては、分取サイズ排除クロマトグラフィーを精製のために使用した（図６Ａ）。４０℃でのインキュベーション後に得られた材料では結晶はもたらされなかった（３つのトレー、室温、５ｍｇ／ｍＬまたは９ｍｇ／ｍＬ）。単量体の第２のバッチをインキュベーションステップなしで調製した；結晶は４℃では形成されたが室温では形成されなかった（それぞれ４つのトレー、２つの濃度）（図６Ｂ）。Ｆａｂ二量体結晶構造の解析により、二量体形成にはＬ－ＣＤＲ２が関与すること（図７～９）、二量体形態で存在するＦａｂが同様のコンフォメーションを有すること、および単量体と二量体の間でＬ－ＣＤＲ２がコンフォメーションの変化を受けること（図１０）が示された。Ｌ－ＣＤＲ２とフレームワーク残基との間の潜在的な相互作用が同定された。
（実施例２）
二量体形成の低減を有する操作された抗体
ＨＢＣ３４－ｖ３５は、生殖細胞系列配列と比較して、Ｌ－ＣＤＲ２におけるものを含めた、軽鎖におけるいくつかの変異を含む。Ｌ－ＣＤＲ２に存在し、Ｆａｂ－Ｆａｂ相互作用に関与すると考えられる３つの隣接するアミノ酸を生殖細胞系列に復帰させて、さらなるバリアント抗体ＨＢＣ３４－ｖ３６を生成した。別々の実験において、ＨＢＣ３４－ｖ３５ ＦａｂおよびＨＢＣ３４－ｖ３６ Ｆａｂ（＞１０ｍｇ／ｍＬ）を４０℃で５～７日間インキュベートし、パーセント二量体を絶対的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって評価した。図１１Ａに示したように、生殖細胞系列配列への復帰により、二量体形成が劇的に低減した。ＨＢＣ３４－ｖ３６全長ＩｇＧ、３ｍｇ／ｍＬは、４０℃で２週間の後、二量体を形成しなかった（データは示していない）。
（実施例３）
抗体による結合およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける中和
ＨＢＣ３４－ｖ３５とＨＢＣ３４－ｖ３６の、ＨＢｓＡｇに結合し、ＨＢＶ感染を中和する能力を比較した。結合をＥＬＩＳＡによって評定し、ＨＢＣ３４－ｖ３６がＨＢＣ３４－ｖ３５と同様の結合活性を有することが示された（それぞれＥＣ５０＝０．７ｎｇ／ｍＬ対０．６ｎｇ／ｍＬ、図１２）。中和を、ＮＴＣＰを発現するＨＢＶ感染ＨｅｐＧ２細胞の細胞培養上清中のＨＢｅＡｇ（遺伝子型Ｄ）のレベルを測定することによって評定した。データを図１３に示し、ＨＢＶ遺伝子型Ｄの中和が、ＨＢＣ３４－ｖ３６ではＨＢＣ３４－ｖ３５のおよそ３分の１であることが示される。これらの実験については、抗体に野生型ＩｇＧ１ Ｆｃを含めた。
（実施例４）
追加の操作された抗体の設計および試験
ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較してＬ－ＣＤＲ２および／またはフレームワーク配列における変異を有する追加の操作されたバリアント抗体を、ＨＢＣ３４－ｖ３６を出発点として使用して生成した。これらのバリアントをＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０と名付けた。様々な抗体からの軽鎖可変領域配列、およびＨＢＣ３４－ｖ３５に対する変異の要約が表６に提供される。表６に示されるＣＤＲ配列およびアミノ酸残基の番号付けは、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ （ｃｈｅｍｃｏｍｐ．ｃｏｍ）によって開発されたシステムに従ったものである。
Figure 2023531520000031
Figure 2023531520000032
Figure 2023531520000033
ＨＢＣ３４－ｖ３７－ＨＢＣ３４－ｖ５０のＨＢｓＡｇ結合およびＨＢＶ中和活性を、本明細書に記載のアッセイを使用して試験した。結合アッセイからの結果が図１４Ａ～１４Ｅに提供され、試験したバリアント抗体のうちＨＢＣ３４－ｖ４７およびＨＢＣ３４－ｖ４８以外の全てが、ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較して同様のまたはさらにはより強力な結合を有したことが示される。ＨＢＣ３４－ｖ４７およびＨＢＣ３４－ｖ４８は、産生収率も低く、さらなる試験には選択しなかった。中和アッセイからの結果が図１５に提供され、いくつかの抗体（ＨＢＣ３４－ｖ４０－ＨＢＣ３４－ｖ４６、ＨＢＣ３４－ｖ４９、およびＨＢＣ３４－ｖ５０）がＨＢＣ３４－ｖ３５と比較して同様のまたはさらには改善された中和活性（ＥＣ５０）を有したことが示される。ＨＢＣ３４－ｖ３６－ＨＢＣ３４－ｖ３９は中和活性があまり強力でなかった。
（実施例５）
ある特定の操作された抗体の精製
操作されたバリアント抗体を、３２日間の経過にわたって異なる温度でインキュベートした後の凝集体の形成について評価した。９種のＨＢＣ３４－ｖ３５抗体バリアントおよび親ＨＢＣ３４－ｖ３５を組換えＩｇＧ（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として宿主細胞系において発現させ、上清から精製した。抗体を産生後１週間よりも後に受取り、２５ｍｇ／ｍｌまで濃縮させた。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を使用して、抗体二量体に対応する高分子量種（ＨＭＷＳ）を－１日目、０日目、５日目、１５日目、および３２日目にモニターした。－１日目の試料は濃縮前に評価した。抗体組成物を３２日間の分析の経過にわたって４℃（図１６Ａ）、２５℃（図１６Ｂ）、または４０℃（図１６Ｃ）でインキュベートした。４０℃で３２日間のインキュベーション後のＨＭＷＳの頻度の要約を図１６Ｄに示す。４種のバリアント抗体（－ｖ４０、－ｖ４４、－ｖ４５、－ｖ５０）がＨＭＷＳの低生成を示し（図１６Ｄ）、それらをさらなる研究のために選択した。
（実施例６）
ある特定の操作された抗体による結合およびｉｎ ｖｉｔｒｏにおける中和
ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０の、１０種の（（Ａ）～（Ｊ））遺伝子型由来のＨＢｓＡｇへの結合をＦＡＣＳによって試験した。ＨＢＣ３４－ｖ３５を参照として含めた。試験したバリアントの全てがＨＢｓＡｇに結合し、ＨＢＣ３４－ｖ４０が最も強力な結合を示した（図１７Ａ～１７Ｊ）。ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０の１０種のＨＢｓＡｇ－遺伝子型Ｄ変異体への結合をＦＡＣＳによって試験した。ＨＢＣ３４－ｖ３５を参照として含めた。操作されたバリアントの全てがＨＢｓＡｇに結合した（図１８Ａ～１８Ｋ）。
（実施例７）
ある特定の操作された抗体の産生
ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０の抗体力価を測定して、宿主細胞における生産性を評価した。抗体を組換えＩｇＧ（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として宿主細胞系において発現させ、上清から精製した。５ｍｌ規模および１００ｍｌ規模の両方のトランスフェクションシステムを評価し、１００ｍｌのシステムは２連または３連で試験した。個々の５ｍｌ規模および１００ｍｌ規模の試験からの抗体力価ならびに１００ｍｌ規模の試験からの平均力価を図１９に示す。
（実施例８）
ある特定の操作された抗体の熱安定性
ＨＢＣ３４－ｖ３５、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０を組換えＩｇＧ（アロタイプＧ１ｍ１７，１）として宿主細胞系において発現させ、上清から精製した。抗体を２５ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、４０℃で４日間インキュベートした。図２０に示す通り、４日目にサイズ排除クロマトグラフィー分析を使用して、抗体二量体に対応する高分子量種（ＨＭＷＳ）を定量した。ＨＢＣ３４－ｖ３５のみが４日後に著しいＨＭＷＳを示した。
（実施例９）
抗体二量体の形成に関与する軽鎖アミノ酸の解析
構造研究により、抗体：抗体二量体の形成に関与するＨＢＣ３４－ｖ３５ ＶＬ領域内のアミノ酸残基の数が同定された。２つのＨＢＣ３４－ｖ３５抗体分子（本明細書では、「抗体分子１」および「抗体分子２」）の軽鎖残基間の相互作用を図２１Ａ、２２Ａ、および２３Ａに例示し、そこで、Ｅ４９（抗体分子１）がＳ６４およびＫ５１（抗体分子２）と相互作用し、Ｖ５０（抗体分子１）がＶ５０（抗体分子２）と相互作用し、Ｋ５１（抗体分子１）がＥ４９（抗体分子２）と相互作用し、Ｓ６４（抗体分子１）がＥ４９（抗体分子２）と相互作用する。２つのＨＢＣ３４－ｖ３５抗体の他の軽鎖アミノ酸間の相互作用を図２１Ｂ、２２Ｂ、および２３Ｂに示し、そこで、Ｒ６０（抗体分子１）がＤ８１およびＱ７８（抗体分子２）と相互作用し、Ｆ６１（抗体１）がＩ７４（抗体分子２）と相互作用し、Ｉ７４（抗体分子１）がＦ６１（抗体分子２）と相互作用し、Ｑ７８（抗体分子１）がＲ６０（抗体分子２）と相互作用し、Ｄ８１（抗体分子１）がＲ６０（抗体分子２）と相互作用する。
４種の操作された抗体、ＨＢＣ３４－ｖ４０、ＨＢＣ３４－ｖ４４、ＨＢＣ３４－ｖ４５、およびＨＢＣ３４－ｖ５０は、凝集する傾向は小さい一方で、強力な結合を維持すると判定された。
図２１Ｃに示す通り、ＨＢＣ３４－ｖ４０は、親ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較して、Ｌ－ＣＤＲ２にＥ４９Ｑ、Ｖ５０Ｄ、およびＫ５１Ｓ変異を含む（ＣＣＧ番号付け）。塩橋の喪失だけでは凝集を低減させるのに十分ではないが、これらの変異は疎水性相互作用から静電気的反発および塩橋の喪失まで変化する（Ｅ４９ＱおよびＫ５１Ｓ変異を含むがＶ５０Ｄは含まないＨＢＣ３４－ｖ４１と比較して、図１６Ｄを参照されたい）。
図２２Ｃに示す通り、ＨＢＣ３４－ｖ４４は、ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較してＬ－ＣＤＲ２にＥ４９Ａ変異を含む。この変異により、塩橋の喪失がもたらされる。
図２３Ｃに示す通り、ＨＢＣ３４－ｖ４５およびＨＢＣ３４－ｖ５０は、ＨＢＣ３４－ｖ３５と比較してＲ６０にフレームワーク変異を含む。それぞれＨＢＣ３４－ｖ４５およびＨＢＣ３４－ｖ５０におけるＲ６０Ｎ変異およびＲ６０Ｋ変異により、二量体形成が低減する。ＨＢＣ３４－ｖ４６におけるＲ６０Ａ変異は、二量体形成を低減させる効果が低かった（図１６Ｄを参照されたい）。
Figure 2023531520000034
Figure 2023531520000035
Figure 2023531520000036
Figure 2023531520000037
Figure 2023531520000038
Figure 2023531520000039
Figure 2023531520000040
Figure 2023531520000041
Figure 2023531520000042
Figure 2023531520000043
Figure 2023531520000044
Figure 2023531520000045
Figure 2023531520000046
Figure 2023531520000047
Figure 2023531520000048
Figure 2023531520000049
Figure 2023531520000050
Figure 2023531520000051
Figure 2023531520000052
上記の種々の実施形態を組み合わせて別の実施形態をもたらすことができる。本明細書で言及するおよび／または本出願データシートに列挙する米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物の全ては、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。様々な特許、出願および公表文献の概念を利用するために必要に応じて実施形態の態様を変更して、またさらなる実施形態を得ることができる。
２０２０年６月２４日に出願された米国仮出願第６３／０４３，６９２号はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
上記の詳細な説明に照らして、これらおよび他の変更を実施形態に加えることができる。一般に、下記の特許請求の範囲において使用する用語は、本特許請求の範囲を、本明細書および本特許請求の範囲で開示する特定の実施形態に限定するように解釈すべきでなく、当該特許請求の範囲に権利がある均等物の全範囲とともに全ての可能な実施形態を含むように解釈すべきである。したがって、本特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

Claims (186)

  1. （ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列、配列番号３５または配列番号３６のアミノ酸配列、および配列番号３７のアミノ酸配列を中に含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
    （ｉｉ）配列番号４１、４０、４２、および４３のうちのいずれか１つのアミノ酸配列、配列番号４９、４４～４８、および５０～５３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のアミノ配列を中に含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、
    必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せを含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、なおさらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれのさらなる変異も含まず、
    前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、
    抗体、またはその抗原結合断片。
  2. （ｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４９、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｉｉ）前記ＶＨ中に、配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４６、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｉｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４７、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｉｖ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４８、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｖ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、４５、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｖｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５０、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５１、および５５に記載のアミノ酸配列；
    （ｖｉｉｉ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５２、および５５に記載のアミノ酸配列；または
    （ｉｘ）前記ＶＨ中に、それぞれ配列番号３４、３５、および３７に記載のアミノ酸配列、ならびに前記ＶＬ中に、それぞれ配列番号４１、５３、および５５に記載のアミノ酸配列
    を含む、請求項１に記載の抗体または抗原結合断片。
  3. （ｉ）配列番号３４に記載のＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号３５または３６に記載のＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号３７に記載のＣＤＲＨ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに
    （ｉｉ）配列番号４０～４３のうちのいずれか１つに記載のＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号４９、４４～４８、および５０～５３のうちのいずれか１つに記載のＣＤＲＬ２アミノ酸配列、ならびに配列番号５５または５６に記載のＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）
    を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、
    ＣＤＲが、ＣＣＧ番号付けシステムに従って規定され、
    前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、必要に応じて、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能であり、ただし、前記抗体または抗原結合断片は、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および４５に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含まない
    抗体、またはその抗原結合断片。
  4. 前記ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列が、
    （ｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４９、および５５；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４６、および５５；
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４７、および５５；
    （ｉｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４８、および５５；
    （ｖ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４５、および５５；
    （ｖｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５０、および５５；
    （ｖｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５１、および５５；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５２、および５５；
    （ｉｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、５３、および５５；または
    （ｘ）それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５
    に記載される、請求項３に記載の抗体または抗原結合断片。
  5. 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、
    前記ＣＤＲが、ＩＭＧＴ番号付けに従って規定され、必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれのさらなる変異も含まない
    抗体、またはその抗原結合断片。
  6. 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、それぞれＨＢＣ３４－ｖ４０；ＨＢＣ３４－ｖ３６；ＨＢＣ３４－ｖ３７；ＨＢＣ３４－ｖ３８；ＨＢＣ３４－ｖ３９；ＨＢＣ３４－ｖ４１；ＨＢＣ３４－ｖ４２；ＨＢＣ３４－ｖ４３；ＨＢＣ３４－ｖ４４；ＨＢＣ３４－ｖ４５；ＨＢＣ３４－ｖ４６；ＨＢＣ３４－ｖ４７；ＨＢＣ３４－ｖ４８；ＨＢＣ３４－ｖ４９；またはＨＢＣ３４－ｖ５０に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３を含み、
    前記ＣＤＲが、ＣＣＧ番号付けに従って規定され、必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、Ｒ６０Ｎ置換変異、Ｒ６０Ａ置換変異、Ｒ６０Ｋ置換変異、Ｓ６４Ａ置換変異、Ｉ７４Ａ置換変異、またはこれらの任意の組合せをさらに含み、前記置換変異のアミノ酸番号付けが、配列番号５８に従い、さらに必要に応じて、前記ＶＬが、配列番号５８と比較して、いずれの他の変異も含まない
    抗体、またはその抗原結合断片。
  7. （ｉ）前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；ならびに／または
    （ｉｉ）前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、および７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、
    請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  8. （ｉ）前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／あるいは
    （ｉｉ）前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、および７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、
    請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  9. 前記ＶＨおよび前記ＶＬが、（ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；（ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；（ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；（ｖ）それぞれ配列番号３８および５８；（ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；（ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；（ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または（ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれらの間の任意の非整数値）の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  10. 配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６２、５７～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記バリアントが、次の変異：Ｒ６０Ａ；Ｒ６０Ｎ；Ｒ６０Ｋ；Ｓ６４Ａ；およびＩ７４Ａのうちのいずれか１つまたは複数を含み、必要に応じて、前記ＶＬバリアントが、それぞれ配列番号６２、５７～６１、および６３～７２と比較して、いずれのさらなる変異も含まない、抗体、またはその抗原結合断片。
  11. 配列番号３８または３９のアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号６２、５７～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つのバリアントを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む抗体、またはその抗原結合断片であって、前記バリアントが、Ｑ７８、Ｄ８１、またはその両方において、置換変異（例えば、保存的アミノ酸置換、または生殖細胞系列にコードされるアミノ酸への変異など）を含み、必要に応じて、前記ＶＬバリアントが、それぞれ配列番号６２、５７～６１、および６３～７２と比較して、いずれのさらなる変異も含まない、抗体、またはその抗原結合断片。
  12. 前記ＶＨが、配列番号３８もしくは３９に記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる；および／または前記ＶＬが、配列番号６２、５８～６１、６３～６６、６９、７１、もしくは７２のうちのいずれか１つに記載されるアミノ酸配列を含むか、もしくはこれらからなる、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  13. 前記ＶＨおよび前記ＶＬが、
    （ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号３８および５９；
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６０；
    （ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６１；
    （ｖ）それぞれ配列番号３８および５８；
    （ｖｉ）それぞれ配列番号３８および６３；
    （ｖｉｉ）それぞれ配列番号３８および６４；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６５；
    （ｉｘ）それぞれ配列番号３８および６６；
    （ｘ）それぞれ配列番号３８および７１；または
    （ｘｉ）それぞれ配列番号３８および７２
    に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる、請求項１～９および１２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  14. 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体または抗原結合断片であって、前記ＶＨおよび前記ＶＬが、
    （ｉ）それぞれ配列番号３８および６２；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号３８および６６；
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号３８および６７；
    （ｉｖ）それぞれ配列番号３８および６８；または
    （ｖ）それぞれ配列番号３８および７２
    に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなり、
    前記抗体またはその抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇの抗原性ループ領域に結合することが可能であり、遺伝子型Ｄ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、もしくはＪ、またはこれらの任意の組合せのＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）による感染を中和することが可能である、
    抗体または抗原結合断片。
  15. Ｄ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）による感染を中和することが可能である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  16. 複数の前記抗体または抗原結合断片を含む試料が約４０℃で約１２０～約１６８時間インキュベートされた場合に、前記試料中に、前記複数のうちの１２％未満、１１％もしくはそれ未満、１０％もしくはそれ未満、９％もしくはそれ未満、８％もしくはそれ未満、７％もしくはそれ未満、６％もしくはそれ未満、５％もしくはそれ未満、４％もしくはそれ未満、３％もしくはそれ未満、または２％もしくはそれ未満が二量体として含まれ、必要に応じて、二量体の存在が、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  17. 複数の前記抗体または抗原結合断片のインキュベーションが、複数の参照抗体または抗原結合断片のインキュベーションと比較して、二量体の形成の低減を生じ、
    前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含み、
    必要に応じて、抗体二量体の存在が、絶対的サイズ排除クロマトグラフィーによって決定される、
    請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  18. （ｉ）４℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；
    （ｉｉ）２５℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて；ならびに／または
    （ｉｉｉ）４０℃での５日間、１５日間、および／もしくは３２日間のインキュベーションにおいて、
    参照抗体と比較して、より低い量の二量体を形成し、ならびに／あるいは低減された頻度で、および／または試料もしくは組成物中の総抗体もしくは抗原結合断片分子のより低いパーセンテージとして、二量体を形成し、
    前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、
    請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  19. 組成物中の、二量体として含まれる抗体または抗原結合断片分子のパーセンテージが、組成物中の、二量体として存在する参照抗体分子のパーセンテージの、それぞれ４／５未満、３／４未満、１／２未満、１／３未満、１／４未満、１／５未満、１／６未満、１／７未満、１／８未満、１／９未満、または１／１０未満である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  20. 前記抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた宿主細胞が、参照抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドがトランスフェクトされた参照宿主細胞よりも、それぞれ１．５倍もしくはそれより多くの、２倍もしくはそれより多くの、３倍もしくはそれより多くの、または４倍もしくはそれより多くの量の抗体または抗原結合断片を提供し、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  21. 前記抗体またはその抗原結合断片が、トランスフェクトされた参照細胞において産生される参照抗体または抗原結合断片と比較してより高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  22. 前記抗体またはその抗原結合断片が、参照抗体または抗原結合断片が産生される力価よりも少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、または少なくとも４倍高い力価で、トランスフェクトされた細胞において産生され、前記参照抗体または抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  23. 前記抗体または抗原結合断片が、約３．２もしくはそれ未満、３．０未満、２．５未満、２．０未満、１．５未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（ａｄｗ）に結合することが可能である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  24. 前記抗体または抗原結合断片が、３．５未満、３．４未満、３．３未満、３．２未満、３．１未満、３．０未満、２．９未満、２．８未満、２．７未満、２．６未満、２．５未満、２．４未満、２．３未満、２．１未満、２．０未満、１．９未満、１．８未満、１．７未満、１．６未満、１．５未満、１．４未満、１．３未満、１．２未満、１．１未満、または１．０未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  25. 前記抗体または抗原結合断片が、０．９と２．０との間の、または０．９と１．９との間の、または０．９と１．８との間の、または０．９と１．７との間の、または０．９と１．６との間の、または０．９と１．５との間の、または０．９と１．４との間の、または０．９と１．３との間の、または０．９と１．２との間の、または０．９と１．１との間の、または０．９と１．０との間の、または１．０と２．０との間のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（例えば、サブタイプａｄｗのもの）に結合することが可能である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  26. 前記抗体または抗原結合断片が、２．０またはそれ未満のＥＣ５０（ｎｇ／ｍｌ）でＨＢｓＡｇ（ａｄｗ）に結合することが可能である、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  27. ２０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは１５ｎｇ／ｍｌまたはそれ未満、より好ましくは１０ｎｇ／ｍＬまたはそれ未満の、Ｂ型肝炎ウイルス感染中和ＥＣ５０を有する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  28. 前記抗体またはその抗原結合断片が、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、または７ｎｇ／ｍＬの感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  29. 前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号３４、３５、３７、４１、４４、および５５に記載されるアミノ酸配列に記載のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３アミノ酸配列を含み、必要に応じて、配列番号３８に記載されるＶＨアミノ酸配列および配列番号５７に記載されるＶＬアミノ酸配列を含む参照抗体または抗原結合断片の感染中和ＥＣ５０よりも低い感染中和ＥＣ５０でＢ型肝炎ウイルス感染を中和することが可能である、請求項１～２８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  30. 前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒト抗体、モノクローナル抗体、精製された抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  31. 前記抗体または抗原結合断片が、多特異性抗体または抗原結合断片である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  32. 前記抗体または抗原結合断片が、二特異性抗体または抗原結合断片である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  33. 前記抗体または抗原結合断片が、Ｆｃ部分を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合断片。
  34. 前記Ｆｃ部分が、参照Ｆｃ部分と比較して、ＦｃＲｎへの結合を増強する変異を含み、前記参照Ｆｃ部分が当該変異を含まないものである、請求項３３に記載の抗体または抗原結合断片。
  35. 前記Ｆｃ部分が、参照Ｆｃ部分と比較して、ＦｃγＲ、好ましくはＦｃγＲＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を増強する変異を含み、前記参照Ｆｃ部分が当該変異を含まないものである、請求項３３または３４に記載の抗体または抗原結合断片。
  36. 前記Ｆｃ部分が、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１であるか、またはＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１に由来する、請求項３３～３５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  37. ＩｇＧ１ｍ１７，１（ＩｇＨＧ１＊０１）を含むか、またはこれに由来する、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  38. ＦｃＲｎへの結合を増強する前記変異が、
    （ｉ）Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ；
    （ｉｉ）Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ；
    （ｉｉｉ）Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ；
    （ｉｖ）Ｐ２５７Ｉ／Ｑ３１１Ｉ；
    （ｖ）Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ；
    （ｖｉ）Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ；
    （ｖｉｉ）Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ；または
    （ｖｉｉｉ）（ｉ）～（ｖｉｉ）の任意の組合せ
    を含み、
    前記Ｆｃ部分のアミノ酸番号付けが、ＥＵ番号付けシステムに従う、
    請求項３４～３７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  39. ＦｃＲｎへの結合を増強する前記変異が、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓを含む、請求項３８に記載の抗体または抗原結合断片。
  40. ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、Ｓ２３９Ｄ；Ｉ３３２Ｅ；Ａ３３０Ｌ；Ｇ２３６Ａ；またはこれらの任意の組合せを含み、前記Ｆｃ部分のアミノ酸番号付けが、前記ＥＵ番号付けシステムに従う、請求項３５～３９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  41. ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、
    （ｉ）Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；
    （ｉｉ）Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ；
    （ｉｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ；または
    （ｉｖ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ
    を含む、請求項４０に記載の抗体または抗原結合断片。
  42. ＦｃγＲへの結合を増強する前記変異が、Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含むか、またはこれからなり、必要に応じて、前記抗体または抗原結合断片が、Ｓ２３９Ｄを含まず、前記抗体または抗原結合断片が、さらに必要に応じて、２３９位においてネイティブＳを含む、請求項４０または４１に記載の抗体または抗原結合断片。
  43. 前記Ｆｃ部分が、前記アミノ酸置換変異：Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓ；Ｇ２３６Ａ；Ａ３３０Ｌ；およびＩ３３２Ｅを含み、必要に応じて、Ｓ２３９Ｄを含まない、請求項３３～４２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  44. 配列番号７９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  45. 配列番号７３のアミノ酸配列に対して９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、もしくはこれからなるＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３、または次のアミノ酸置換（ＥＵ番号付け）：Ｇ２３６Ａ；Ａ３３０Ｌ；Ｉ３３２Ｅ；Ｍ４２８Ｌ；Ｎ４３４Ｓのうちの１つもしくは複数を含むそのバリアントを含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  46. 前記ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３から、Ｃ末端リシンが除去されている、請求項４５に記載の抗体または抗原結合断片。
  47. 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７５に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
  48. 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の抗体。
  49. 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
  50. 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載の抗体。
  51. 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
  52. 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の抗体。
  53. 必要に応じてＣ末端リシンが除去された、配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる重鎖（ＨＣ）と、（ｉ）配列番号６２、５８～６１、および６３～７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列ならびに（ｉｉ）配列番号７９に記載されるＣＬアミノ酸配列を含むか、またはこれらからなる軽鎖（ＬＣ）とを含む、抗体。
  54. 前記ＬＣが、配列番号６２、６６、６７、および７２のうちのいずれか１つに記載されるＶＬアミノ酸配列を含む、請求項５３に記載の抗体。
  55. 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢｓＡｇ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪ、またはこれらの任意の組合せから選択される遺伝子型のＨＢｓＡｇに結合することが可能である、請求項１～５４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  56. 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢＶ ＤＮＡの血清濃度を低減させることが可能である、請求項１～５５のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  57. 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｓＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  58. 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｅＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、請求項１～５７のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  59. 前記抗体または抗原結合断片が、ＨＢＶ感染を有する哺乳動物においてＨＢｃｒＡｇの血清濃度を低減させることが可能である、請求項１～５８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  60. 請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体、または抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド。
  61. 請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体、または抗原結合断片の軽鎖可変領域（ＶＬ）および必要に応じて軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）をコードするポリヌクレオチド。
  62. 前記抗体または抗原結合断片をコードする前記ヌクレオチド配列が、宿主細胞における発現のためにコドン最適化されている、請求項６０または６１に記載のポリヌクレオチド。
  63. 配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも５０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項６２に記載のポリヌクレオチド。
  64. （ｉ）配列番号８１または配列番号８２に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項６０～６３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  65. （ｉ）配列番号８３に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項６０～６３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  66. （ｉ）配列番号８４に記載されるポリヌクレオチド配列、ならびに（ｉｉ）配列番号８９、８５～８８、および９０～９９のうちのいずれか１つまたは複数に記載されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項６０～６３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  67. 請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  68. レンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターを含む、請求項６７に記載のベクター。
  69. 請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドおよび／または請求項６７もしくは６８に記載のベクターを含む宿主細胞。
  70. （ｉ）請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片；
    （ｉｉ）請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド；
    （ｉｉｉ）請求項６７もしくは６８に記載のベクター；
    （ｉｖ）請求項６９に記載の宿主細胞；または
    （ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ、ならびに
    薬学的に許容される賦形剤、希釈剤またはキャリアー
    を含む、医薬組成物。
  71. （ａ）
    （ｉ）請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片；
    （ｉｉ）請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド；
    （ｉｉｉ）請求項６７もしくは６８に記載のベクター；
    （ｉｖ）請求項６９に記載の宿主細胞；
    （ｖ）請求項７０に記載の医薬組成物；または
    （ｖｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組合せ
    から選択される構成要素；ならびに
    （ｂ）
    （１）Ｂ型肝炎感染および／もしくはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／もしくは診断するために前記構成要素を使用するための使用説明書、ならびに／または
    （２）前記構成要素を被験体に投与するための手段、例えば、シリンジ
    を含むキット。
  72. （ｉ）ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、もしくはこれらの任意の組合せを必要に応じて含む、ポリメラーゼ阻害剤；
    （ｉｉ）ＩＦＮベータおよび／もしくはＩＦＮアルファを必要に応じて含む、インターフェロン；
    （ｉｉｉ）抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を必要に応じて含む、チェックポイント阻害剤；
    （ｉｖ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは
    （ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組合せ
    をさらに含む、請求項７０に記載の組成物または請求項７１に記載のキット。
  73. 前記ポリメラーゼ阻害剤が、ラミブジンを含む、請求項７２に記載の組成物またはキット。
  74. 請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片を産生する方法であって、前記抗体または抗原結合断片を産生するのに十分な条件下でかつそのような時間にわたって、請求項６９に記載の宿主細胞を培養することを含む、方法。
  75. 被験体におけるＢ型肝炎感染および／またはＤ型肝炎感染を予防、処置、弱毒化、および／または診断するための医薬の製造における、（ｉ）請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）請求項６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）請求項６９に記載の宿主細胞；および／または（ｖ）請求項７０、７２、もしくは７３に記載の医薬組成物、の使用。
  76. 被験体におけるＢ型肝炎および／またはＤ型肝炎感染を処置、予防、および／または弱毒化する方法であって、（ｉ）請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片；（ｉｉ）請求項６０～６６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド；（ｉｉｉ）請求項６７もしくは６８に記載のベクター；（ｉｖ）請求項６９に記載の宿主細胞；および／または（ｖ）請求項７０、７２、もしくは７３に記載の医薬組成物、の有効量を前記被験体に投与することを含む、方法。
  77. （ｖｉ）ラミブジン、アデホビル、エンテカビル、テルビブジン、テノホビル、もしくはこれらの任意の組合せを必要に応じて含む、ポリメラーゼ阻害剤；（ｖｉｉ）ＩＦＮベータおよび／もしくはＩＦＮアルファを必要に応じて含む、インターフェロン；（ｖｉｉｉ）抗ＰＤ－１抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片、および／または抗ＣＴＬＡ４抗体もしくはその抗原結合断片を必要に応じて含む、チェックポイント阻害剤；（ｉｘ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニスト；あるいは（ｘ）（ｖｉ）～（ｉｘ）の任意の組合せ、のうちの１つまたは複数を、前記被験体に投与することをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記Ｂ型肝炎感染が、慢性Ｂ型肝炎感染である、請求項７６または７７に記載の方法。
  79. 前記被験体が、肝臓移植を受けた、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記被験体が、Ｂ型肝炎に対して免疫されていない、請求項７６～７９のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記被験体が、新生児である、請求項７６～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記被験体が、血液透析を受けているか、または受けた、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の方法。
  83. 前記方法が、前記抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物の単一用量を前記被験体に投与することを含む、請求項７６～８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 前記医薬組成物の前記単一用量が、２～１８ｍｇ／ｋｇ（被験体体重）の範囲内の前記抗体を含む、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で６ｍｇ、最大で１０ｍｇ、最大で１５ｍｇ、最大で１８ｍｇ、最大で２５ｍｇ、最大で３０ｍｇ、最大で３５ｍｇ、最大で４０ｍｇ、最大で４５ｍｇ、最大で５０ｍｇ、最大で５５ｍｇ、最大で６０ｍｇ、最大で７５ｍｇ、最大で９０ｍｇ、最大で３００ｍｇ、最大で９００ｍｇ、もしくは最大で３０００ｍｇの前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは５００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは７５０ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは９００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは１５００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内、もしくは２０００ｍｇ～３０００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは５００ｍｇ～９００ｍｇの範囲内、もしくは７５０ｍｇ～９００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは３００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内、もしくは４００ｍｇ～５００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むような量で、前記医薬組成物の前記単一用量が前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～３００ｍｇの範囲内、もしくは２００ｍｇ～３００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１００ｍｇ～２００ｍｇの範囲内、もしくは１５０ｍｇ～２００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは２５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは３０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは５０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは６０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは７５ｍｇ～１００ｍｇの範囲内、もしくは９０ｍｇ～１００ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは２０ｍｇ～２５ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１ｍｇ～５０ｍｇの範囲内、もしくは１ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～５０ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～２５ｍｇの範囲内、もしくは１０～５０ｍｇの範囲内、もしくは１０～２５ｍｇの範囲内、もしくは１～１５ｍｇの範囲内、もしくは５ｍｇ～１５ｍｇの範囲内、もしくは１０ｍｇ～１５ｍｇの範囲内の量で前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２０５、２１０、２１５、２２０、２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、２７０、２７５、２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３０５、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、３４５、３５０、３５５、３６０、３６５、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、４１５、４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、５００、５０５、５１０、５１５、５２０、５２５、５３０、５３５、５４０、５４５、５５０、５５５、５６０、５６５、５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、６３０、６３５、６４０、６４５、６５０、６５５、６６０、６６５、６７０、６７５、６８０、６８５、６９０、６９５、７００、７０５、７１０、７１５、７２０、７２５、７３０、７３５、７４０、７４５、７５０、７５５、７６０、７６５、７７０、７７５、７８０、７８５、７９０、７９５、８００、８０５、８１０、８１５、８２０、８２５、８３０、８３５、８４０、８４５、８５０、８５５、８６０、８６５、８７０、８７５、８８０、８８５、８９０、８９５、９００、９０５、９１０、９１５、９２０、９２５、９３０、９３５、９４０、９４５、９５０、９５５、９６０、９６５、９７０、９７５、９８０、９８５、９９０、９９５、もしくは１０００ｍｇ、またはそれより多くの前記抗体を含むか、または
    前記医薬組成物の前記単一用量が、３０００ｍｇ未満、２５００ｍｇ未満、２０００ｍｇ未満、１５００ｍｇ未満、１０００ｍｇ未満、９００ｍｇ未満、５００ｍｇ未満、３００ｍｇ未満、２００ｍｇ未満、１００ｍｇ未満、９０ｍｇ未満、７５ｍｇ未満、５０ｍｇ未満、２５ｍｇ未満、もしくは１０ｍｇ未満であるが、１ｍｇよりも多い、２ｍｇよりも多い、３ｍｇよりも多い、４ｍｇよりも多い、もしくは５ｍｇよりも多い量で前記抗体を含む、
    請求項８３または８４に記載の方法。
  86. 前記医薬組成物の前記単一用量が、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲内の濃度、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含む、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記医薬組成物の前記単一用量が、約７５ｍｇの前記抗体を含む、請求項８３～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記医薬組成物の前記単一用量が、約９０ｍｇの前記抗体を含む、請求項８３～８７のいずれか一項に記載の方法。
  89. 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で３００ｍｇの前記抗体を含む、請求項８３～８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で９００ｍｇの前記抗体を含む、請求項８３～８９のいずれか一項に記載の方法。
  91. 前記医薬組成物の前記単一用量が、最大で３，０００ｍｇの前記抗体を含む、請求項８３～９０のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記方法が、前記単一用量を皮下注射によって投与することを含み、必要に応じて、前記単一用量が、６ｍｇの前記抗体または１８ｍｇの前記抗体を含むか、またはこれらからなる、請求項８３～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記方法が、前記単一用量を静脈内注射によって投与することを含む、請求項８３～９２のいずれか一項に記載の方法。
  94. 前記医薬組成物が、水、必要に応じてＵＳＰ水をさらに含む、請求項８３～９３のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に、ヒスチジンを、必要に応じて、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲内の濃度、例えば、２０ｍＭでさらに含む、請求項８３～９４のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記医薬組成物が、二糖、例えば、スクロースを、必要に応じて、５％、６％、７％、８％、または９％、好ましくは約７％（ｗ／ｖ）でさらに含む、請求項８３～９５のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記医薬組成物が、界面活性剤またはトリブロックコポリマー、必要に応じて、ポリソルベートまたはポロクサマー－１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）をさらに含み、必要に応じて、前記ポリソルベートまたはポロクサマー－１８８が、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲内、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項８３～９６のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記医薬組成物が、５．８～６．２の範囲内の、５．９～６．１の範囲内の、または５．８の、５．９の、６．０の、６．１の、もしくは６．２のｐＨを有する、請求項８３～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記医薬組成物が、
    （ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの前記抗体；
    （ｉｉ）ＵＳＰ水；
    （ｉｉｉ）２０ｍＭヒスチジン；
    （ｉｖ）７％スクロース；および
    （ｖ）０．０２％ＰＳ８０
    を含み、前記医薬組成物が、６のｐＨを含む、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記被験体が成体である、請求項８３～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記被験体が、１８歳～６５歳の範囲内である、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記被験体が、４０ｋｇ～１２５ｋｇの体重である、および／または前記被験体が、１８～３５ｋｇ／ｍ２のボディマスインデックス（ＢＭＩ）を有する、請求項８３～１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 前記被験体が、例えば、２回の機会にわたる陽性血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ、および／またはＨＢｅＡｇによって定義される慢性ＨＢＶ感染を有し、前記２回の機会が、少なくとも６か月離れている、請求項８３～１０２のいずれか一項に記載の方法。
  104. 前記被験体が、肝硬変を有さない、請求項８３～１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 肝硬変の非存在が、
    Ｆｉｂｒｏｓｃａｎ評価（例えば、前記医薬組成物の前記単一用量を投与する前６か月以内の）；または
    肝臓生検（例えば、前記医薬組成物の前記単一用量を投与する前１２か月以内の）
    によって決定され、
    好ましくは、肝硬変の非存在が、Ｍｅｔａｖｉｒ Ｆ３線維症の非存在またはＦ４肝硬変の非存在によって決定される、
    請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記被験体が、ヌクレオシ（チ）ド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）を、必要に応じて、前記単一用量が投与される前１２０日以内、さらに必要に応じて、６０日以内に受けた、請求項８３～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記ＮＲＴＩが、テノホビル；テノホビルジソプロキシル（例えば、テノホビルジソプロキシル（disproxil）フマル酸塩）；テノホビルアラフェナミド；エンテカビル；ラミブジン；アデホビル；およびアデホビルジピボキシルのうちの１つまたは複数を含む、請求項１０６に記載の方法。
  108. 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、１００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢＶ ＤＮＡ濃度を有する、請求項８３～１０７のいずれか一項に記載の方法。
  109. 前記被験体が、前記単一用量が投与される前に、３，０００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢｓＡｇ濃度を有し、必要に応じて、前記単一用量が投与される前に、１，０００ＩＵ／ｍＬ未満の血清ＨＢｓＡｇ濃度を有する、請求項８３～１０８のいずれか一項に記載の方法。
  110. 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、３，０００ＩＵ／ｍＬよりも高いまたはそれと等しい血清ＨＢｓＡｇ濃度を有し、必要に応じて、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、１，０００ＩＵ／ｍＬよりも高いまたはそれと等しい血清ＨＢｓＡｇ濃度を有する、請求項８３～１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、ＨＢｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）陰性であった、請求項８３～１１０のいずれか一項に記載の方法。
  112. 前記被験体が、前記単一用量が投与されるより２８日以下前に、抗ＨＢ抗体について陰性であった、請求項８３～１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記被験体が、前記単一用量の投与の前に、
    （ｉ）線維症を有さない、および／もしくは肝硬変を有さない；ならびに／または
    （ｉｉ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＜２×正常上限（ＵＬＮ）を有する、
    請求項８３～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記単一用量の投与の５６日後に、前記被験体が、前記単一用量の投与の０日～２８日前の前記被験体の血清ＨＢｓＡｇと比較して、血清ＨＢｓＡｇ（例えば、Ａｂｂｏｔｔ ＡＲＣＨＩＴＥＣＴアッセイを使用して決定される、例えば、血清中のＨＢｓＡｇの濃度）における２分の１未満の低減を有する、請求項８３～１１３のいずれか一項に記載の方法。
  115. 前記単一用量の投与後に（例えば、前記単一用量の投与の５６日後に）、前記被験体が、
    （ｉ）参照被験体と比較して、ＨＢＶの低減したもしくは重症度が低い肝内伝播を有する；および／または
    （ｉｉ）ＨＢＶに対する適応免疫応答を含む、
    請求項８３～１１４のいずれか一項に記載の方法。
  116. 前記被験体が男性である、請求項８３～１１５のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記被験体が女性である、請求項８３～１１５のいずれか一項に記載の方法。
  118. １００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、または２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬの、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片、および
    薬学的に許容されるキャリアー、賦形剤、または希釈剤
    を含む医薬組成物。
  119. 前記医薬組成物が、最大で６ｍｇ、最大で１８ｍｇ、最大で７５ｍｇ、最大で９０ｍｇ、最大で３００ｍｇ、最大で９００ｍｇ、または最大で３０００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８に記載の医薬組成物。
  120. 前記医薬組成物が、約７５ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。
  121. 前記医薬組成物が、約９０ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。
  122. 前記医薬組成物が、約３００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。
  123. 前記医薬組成物が、約９００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。
  124. 前記医薬組成物が、約３，０００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１１８または１１９に記載の医薬組成物。
  125. 前記医薬組成物が、水、必要に応じてＵＳＰ水を含む、請求項１１８～１２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  126. 前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に、ヒスチジンを、必要に応じて、１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度、例えば、２０ｍＭで含む、請求項１１８～１２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  127. 前記医薬組成物が、二糖、例えば、スクロースを、必要に応じて、５％、６％、７％、８％、または９％、好ましくは約７％（ｗ／ｖ）で含む、請求項１１８～１２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  128. 前記医薬組成物が、界面活性剤、必要に応じて、ポリソルベート、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、必要に応じて、前記ポリソルベートが、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲内、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で存在する、請求項１１８～１２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  129. 前記医薬組成物が、５．８～６．２の範囲の、５．９～６．１の範囲の、または５．８の、５．９の、６．０の、６．１の、もしくは６．２のｐＨを有する、請求項１１８～１２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  130. 前記医薬組成物が、
    （ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの前記抗体；
    （ｉｉ）ＵＳＰ水；
    （ｉｉｉ）２０ｍＭヒスチジン；
    （ｉｖ）７％スクロース；および
    （ｖ）０．０２％ＰＳ８０
    を含み、前記医薬組成物が、６のｐＨを含む、請求項１１８～１２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  131. 前記単一用量の投与後に、前記被験体の血清ＨＢｓＡｇが、ベースラインと比較して、１．０ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ、１．５ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍＬ、またはそれよりも大きく低減され、必要に応じて、前記低減が、前記単一用量の投与後に、１、２、３、４、５、６、７、８日間にわたって、またはそれより長く持続する、請求項８３～１１７のいずれか一項に記載の方法。
  132. 前記単一用量の投与後に、前記被験体の血清ＨＢｓＡｇが、ベースラインと比較して、少なくとも８、少なくとも１５、少なくとも２２、または少なくとも２９日間にわたって低減される、請求項８３～１１７および１３１のいずれか一項に記載の方法。
  133. Ｂ型肝炎および／またはＤ型肝炎感染のｉｎ ｖｉｔｒｏ診断のための方法であって、
    （ｉ）被験体由来の試料を、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片と接触させること；および
    （ｉｉ）抗原と前記抗体とを含む複合体、または抗原と前記抗原結合断片とを含む複合体を検出すること
    を含む、方法。
  134. 前記試料が、前記被験体から単離された血液を含む、請求項１３３に記載の方法。
  135. 抗Ｂ型肝炎および／または抗Ｄ型肝炎ワクチン中の正確な立体構造にあるエピトープの存在または非存在を検出するための方法であって、
    （ｉ）前記ワクチンを、請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片と接触させること；および
    （ｉｉ）抗原と前記抗体とを含む複合体、または抗原と前記抗原結合断片とを含む複合体が形成されたかどうかを決定すること
    を含む、方法。
  136. 前記医薬組成物が、
    （ｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方への増強された結合を有し、前記ヒトＦｃγＲＩＩＡが、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１である、および／または前記ヒトＦｃγＲＩＩＩＡが、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；
    （ｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＦｃγＲＩＩＢへの低減された結合を有する；
    （ｉｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢに結合しない；
    （ｉｖ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドと比較して、ヒトＣ１ｑへの低減された結合を有する；
    （ｖ）ヒトＣ１ｑに結合しない；
    （ｖｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＦｃγＲＩＩＡ、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ、またはその両方を活性化し、前記ヒトＦｃγＲＩＩＡが、必要に応じて、Ｈ１３１もしくはＲ１３１である、および／または前記ヒトＦｃγＲＩＩＩＡが、必要に応じて、Ｆ１５８もしくはＶ１５８である；
    （ｖｉｉ）ヒトＦｃγＲＩＩＢを活性化しない；
    （ｖｉｉｉ）Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照ポリペプチドよりも高い程度まで、ＨＢｓＡｇの存在下でヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化し、前記参照ポリペプチドが、必要に応じて、ＨＢ Ａｇ、必要に応じてＨＢｓＡｇに結合する抗体である；
    （ｉｘ）ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントに結合することが可能である；ならびに／あるいは
    （ｘ）ＨＢｓＡｇに結合し、Ｇ２３６Ａ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅを含まないＦｃ部分を含む参照抗体もしくは抗原結合断片と比較して、ＨＢｓＡｇ－Ｙ１００Ｃ／Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１２０Ｓ／Ｓ１４３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｃ１２１Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｄ、ＨＢｓＡｇ－Ｒ１２２Ｉ、ＨＢｓＡｇ－Ｔ１２３Ｎ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｑ１２９Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｈ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｌ、ＨＢｓＡｇ－Ｍ１３３Ｔ、ＨＢｓＡｇ－Ｋ１４１Ｅ、ＨＢｓＡｇ－Ｐ１４２Ｓ、ＨＢｓＡｇ－Ｓ１４３Ｋ、ＨＢｓＡｇ－Ｄ１４４Ａ、ＨＢｓＡｇ－Ｇ１４５Ｒ、ＨＢｓＡｇ－Ｎ１４６Ａ、またはこれらの任意の組合せを含むＨＢｓＡｇバリアントへの改善された結合を有する、
    請求項１～５９のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
  137. 慢性ＨＢＶ感染を処置することを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、
    ＨＢＶ抗原負荷を低減させる薬剤を前記被験体に投与すること；および
    請求項１～５９のいずれか一項からの抗ＨＢＶ抗体を前記被験体に投与すること
    を含む、方法。
  138. 慢性ＨＢＶ感染を処置することを必要とする被験体における慢性ＨＢＶ感染を処置する方法であって、
    ＨＢＶ遺伝子発現の阻害剤を前記被験体に投与すること；および
    請求項１～５９のいずれか一項からの抗ＨＢＶ抗体を前記被験体に投与すること
    を含む、方法。
  139. ＲＮＡｉ剤が、二本鎖領域を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７から３ヌクレオチド以下異なる少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、請求項１３７または１３８に記載の方法。
  140. 前記ＲＮＡｉ剤が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖が、配列番号１１６のヌクレオチド１５７９～１５９７を含む、請求項１３７～１３９のいずれか一項に記載の方法。
  141. 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖が、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１３７～１４０のいずれか一項に記載の方法。
  142. 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つの鎖が、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１３７～１４０のいずれか一項に記載の方法。
  143. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１５～３０ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  144. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１７～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  145. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１７～２５ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  146. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、２３～２７ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  147. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、１９～２１ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  148. 前記ＲＮＡｉ剤の前記二本鎖領域が、２１～２３ヌクレオチド対の長さである、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  149. 前記ＲＮＡｉ剤の各鎖が、１５～３０ヌクレオチドを有する、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  150. 前記ＲＮＡｉ剤の各鎖が、１９～３０ヌクレオチドを有する、請求項１３７～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  151. 前記ＲＮＡｉ剤が、ｓｉＲＮＡである、請求項１３７～１５０のいずれか一項に記載の方法。
  152. 前記ｓｉＲＮＡが、ＨＢｓＡｇタンパク質、ＨＢｃＡｇタンパク質、およびＨＢｘタンパク質、またはＨＢＶ ＤＮＡポリメラーゼタンパク質をコードするＨＢＶ転写物の発現を阻害する、請求項１５１に記載の方法。
  153. 前記ｓｉＲＮＡが、Ｐ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２３０９～３１８２および１～１６２５；Ｓ遺伝子（Ｌ、Ｍ、およびＳタンパク質をコードする）、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド２８５０～３１８２および１～８３７；ＨＢｘ、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１３７６～１８４０；またはＣ遺伝子、ＮＣ＿００３９７７．２のヌクレオチド１８１６～２４５４、によってコードされる標的の少なくとも１５連続するヌクレオチドに結合する、請求項１５１または請求項１５２に記載の方法。
  154. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、請求項１５１または請求項１５２に記載の方法。
  155. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列の少なくとも１９連続するヌクレオチドを含む、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  156. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列を含む、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  157. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＧＵＧＡＡＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＣＡＣＵＵ－３’（配列番号１１９）のヌクレオチド配列からなる、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  158. 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列を含む、請求項１５４～１５７のいずれか一項に記載の方法。
  159. 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＵＧＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＵＵＣＡＣＡ－３’（配列番号１１８）のヌクレオチド配列からなる、請求項１５４～１５７のいずれか一項に記載の方法。
  160. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含む、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  161. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列の少なくとも１９連続するヌクレオチドを含む、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  162. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列を含む、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  163. 前記ｓｉＲＮＡの前記アンチセンス鎖が、５’－ＵＡＡＡＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣ－３’（配列番号１２１）のヌクレオチド配列からなる、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  164. 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列を含む、請求項１５４～１５７のいずれか一項に記載の方法。
  165. 前記ｓｉＲＮＡの前記センス鎖が、５’－ＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＵＵＵＡ－３’（配列番号１２０）のヌクレオチド配列からなる、請求項１５４～１５７のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、または使用。
  166. 前記センス鎖のヌクレオチドの実質的に全ておよび前記アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが、改変ヌクレオチドであり、
    前記センス鎖が、３’末端において結合されるリガンドにコンジュゲートされる、
    請求項１５１～１６５のいずれか一項に記載の方法。
  167. 前記リガンドが、一価リンカー、二価分岐リンカー、または三価分岐リンカーを介して結合される１つまたは複数のＧａｌＮＡｃ誘導体である、請求項１６６に記載の方法。
  168. 前記リガンドが、
    Figure 2023531520000053
     である、請求項１６６または１６７に記載の方法。
  169. 前記ｓｉＲＮＡが、次の構造：
    Figure 2023531520000054
     で示される通り、前記リガンドにコンジュゲートされ、式中、ＸがＯまたはＳである、請求項１６８に記載の方法。
  170. 前記ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのヌクレオチドが、デオキシ－ヌクレオチドを含む改変ヌクレオチド、３’末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル改変ヌクレオチド、２’－フルオロ改変ヌクレオチド、２’－デオキシ－改変ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、アンロックドヌクレオチド、立体構造的に制限されたヌクレオチド、拘束されたエチルヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’－アミノ－改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル－改変ヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル－改変ヌクレオチド、２’－ヒドロキシル－改変ヌクレオチド、２’－メトキシエチル改変ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル－改変ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホロアミダート、非天然塩基を含むヌクレオチド、テトラヒドロピラン改変ヌクレオチド、１，５－アンヒドロヘキシトール改変ヌクレオチド、シクロヘキセニル改変ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’－リン酸を含むヌクレオチド、アデノシン－グリコール核酸、または５’－リン酸模倣物を含むヌクレオチドである、請求項１５１～１６９のいずれか一項に記載の方法。
  171. 前記ｓｉＲＮＡが、リン酸骨格改変、２’リボース改変、５’三リン酸改変、またはＧａｌＮＡｃコンジュゲーション改変を含む、請求項１５１～１６９のいずれか一項に記載の方法。
  172. 前記リン酸骨格改変が、ホスホロチオエート結合を含む、請求項１７１に記載の方法。
  173. 前記２’リボース改変が、フルオロまたは－Ｏ－メチル置換を含む、請求項１７１または請求項１７２に記載の方法。
  174. 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２２）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａＡｆｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２３）を含むアンチセンス鎖を有し、
    式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
    Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
    ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
    Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである
    請求項１５１～１５９および１６６～１７３のいずれか一項に記載の方法。
  175. 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｕｓｇｕＧｆｃＡｆＣｆＵｆｕｃｇｃｕｕｃａｃａＬ９６－３’（配列番号１２４）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＧｆｓｕｇａ（Ａｇｎ）ｇＣｆＧｆａａｇｕＧｆｃＡｆｃａｃｓｕｓｕ－３’（配列番号１２５）を含むアンチセンス鎖を有し、
    式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
    Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
    （Ａｇｎ）が、アデノシン－グリコール核酸（ＧＮＡ）であり；
    ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
    Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである、
    請求項１５１～１５９および１６６～１７３のいずれか一項に記載の方法。
  176. 前記ｓｉＲＮＡが、５’－ｇｓｇｓｕｇｇａＣｆｕＵｆＣｆＵｆｃｕｃａＡｆＵｆｕｕｕａＬ９６－３’（配列番号１２６）を含むセンス鎖および５’－ｕｓＡｆｓａａａＵｆｕＧｆＡｆｇａｇａＡｆｇＵｆｃｃａｃｃｓａｓｃ－３’（配列番号１２７）を含むアンチセンス鎖を有し、
    式中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕが、それぞれ２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸、２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸、および２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸であり；
    Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆが、それぞれ２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸、２’－フルオロシチジン－３’－リン酸、２’－フルオログアノシン－３’－リン酸、および２’－フルオロウリジン－３’－リン酸であり；
    ｓが、ホスホロチオエート連結であり；
    Ｌ９６が、Ｎ－［トリス（ＧａｌＮＡｃ－アルキル）－アミドデカノイル）］－４－ヒドロキシプロリノールである、
    請求項１５１～１５３および１６０～１７３のいずれか一項に記載の方法、使用のための組成物、または使用。
  177. 前記被験体がヒトであり、ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡの治療有効量が前記被験体に投与され；前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡの前記有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ～約８ｍｇ／ｋｇである、請求項１３７～１７６のいずれか一項に記載の方法。
  178. 前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡが、１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、１週間に２回、１週間に１回、１週間おき、４週間毎、または１か月に１回、前記被験体に投与される、請求項１３７～１７７のいずれか一項に記載の方法。
  179. 前記ＲＮＡｉ剤またはｓｉＲＮＡが、４週間毎に前記被験体に投与される、請求項１３７～１７７のいずれか一項に記載の方法。
  180. 各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２６を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１１６のヌクレオチド２８５０～３１８２の少なくとも１５連続するヌクレオチドを含むセンス鎖を有するｓｉＲＮＡを含む、請求項１５１～１７９のいずれか一項に記載の方法。
  181. ＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、前記２つのｓｉＲＮＡが、ＨＢＶ Ｘ遺伝子に指向されるｓｉＲＮＡおよびＨＢＶ Ｓ遺伝子に指向されるｓｉＲＮＡを含む、請求項１５１～１７９のいずれか一項に記載の方法。
  182. 各々がＨＢＶ遺伝子に指向される２つのｓｉＲＮＡが投与され、第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１９、配列番号１２３、または配列番号１２５を含むアンチセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１２１または配列番号１２７を含むアンチセンス鎖を有する、請求項１５１～１７９のいずれか一項に記載の方法。
  183. 第１のｓｉＲＮＡが、配列番号１１８、配列番号１２２、または配列番号１２４を含むセンス鎖を有し；第２のｓｉＲＮＡが、配列番号１２０または配列番号１２６を含むセンス鎖を有する、請求項１８１に記載の方法。
  184. 前記２つのｓｉＲＮＡが同時に投与される、請求項１７９～１８３のいずれか一項に記載の方法。
  185. ヌクレオチ（シ）ドアナログを前記被験体に投与することをさらに含むか、または前記被験体がヌクレオチ（シ）ドアナログもまた投与される、請求項１３７～１８４のいずれか一項に記載の方法。
  186. 前記ヌクレオチ（シ）ドアナログが、テノホビルジソプロキシルフマル酸塩（ＴＤＦ）、テノホビルアラフェナミド（ＴＡＦ）、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、エンテカビル（ＥＴＶ）、テルビブジン、ＡＧＸ－１００９、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、クレブジン、リトナビル、ジピボキシル、ロブカビル、ファムビル、Ｎ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）、ＰＣ１３２３、ｔｈｅｒａｄｉｇｍ－ＨＢＶ、サイモシン－アルファ、およびガンシクロビル、ベシホビル（ｂｅｓｉｆｏｖｉｒ）（ＡＮＡ－３８０／ＬＢ－８０３８０）、またはテノホビル－エクサリアデス（ｔｅｎｏｆｖｉｒ－ｅｘａｌｉａｄｅｓ）（ＴＬＸ／ＣＭＸ１５７）である、請求項１８５に記載の方法、使用のための組成物、または使用。
JP2022579734A 2020-06-24 2021-06-23 操作されたｂ型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用 Pending JP2023531520A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063043692P 2020-06-24 2020-06-24
US63/043,692 2020-06-24
PCT/US2021/038667 WO2021262840A1 (en) 2020-06-24 2021-06-23 Engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023531520A true JP2023531520A (ja) 2023-07-24
JPWO2021262840A5 JPWO2021262840A5 (ja) 2024-06-27

Family

ID=77155848

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022579734A Pending JP2023531520A (ja) 2020-06-24 2021-06-23 操作されたｂ型肝炎ウイルス中和抗体およびその使用

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20230242621A1 (ja)
EP (1) EP4171747A1 (ja)
JP (1) JP2023531520A (ja)
KR (1) KR20230042023A (ja)
CN (1) CN116390943A (ja)
AR (1) AR122722A1 (ja)
AU (1) AU2021296848A1 (ja)
BR (1) BR112022026316A2 (ja)
CA (1) CA3182458A1 (ja)
IL (1) IL299201A (ja)
MX (1) MX2022015765A (ja)
TW (1) TW202208422A (ja)
WO (1) WO2021262840A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023205186A2 (en) * 2022-04-19 2023-10-26 Aegis Life, Inc. Dna therapeutic encoding an antibody or antigen binding fragment
WO2023230445A2 (en) 2022-05-23 2023-11-30 Humabs Biomed Sa Broadly neutralizing antibodies against influenza neuraminidase
TW202411246A (zh) 2022-05-23 2024-03-16 美商維爾生物科技股份有限公司 經工程化之b型肝炎病毒中和抗體及其用途

Family Cites Families (216)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154600B (nl) 1971-02-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen.
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3766162A (en) 1971-08-24 1973-10-16 Hoffmann La Roche Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4233402A (en) 1978-04-05 1980-11-11 Syva Company Reagents and method employing channeling
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
JPS5896026A (ja) 1981-10-30 1983-06-07 Nippon Chemiphar Co Ltd 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
EP0098110B1 (en) 1982-06-24 1989-10-18 NIHON CHEMICAL RESEARCH KABUSHIKI KAISHA also known as JAPAN CHEMICAL RESEARCH CO., LTD Long-acting composition
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US4831175A (en) 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5032401A (en) 1989-06-15 1991-07-16 Alpha Beta Technology Glucan drug delivery system and adjuvant
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
CA2071510C (en) 1989-10-24 2004-07-06 Chris A. Buhr 2' modified oligonucleotides
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
US7037646B1 (en) 1990-01-11 2006-05-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US6783931B1 (en) 1990-01-11 2004-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
WO1991013080A1 (en) 1990-02-20 1991-09-05 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
JPH0874B2 (ja) 1990-07-27 1996-01-10 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド 遺伝子発現を検出および変調するヌクレアーゼ耐性、ピリミジン修飾オリゴヌクレオチド
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
WO1992002534A2 (en) 1990-08-03 1992-02-20 Sterling Drug, Inc. Compounds and methods for inhibiting gene expression
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
WO1992005186A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 Gilead Sciences Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
ATE198598T1 (de) 1990-11-08 2001-01-15 Hybridon Inc Verbindung von mehrfachreportergruppen auf synthetischen oligonukleotiden
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
CA2116774C (en) 1991-09-19 2003-11-11 Paul J. Carter Expression in e. coli antibody fragments having at least a cysteine present as a free thiol. use for the production of bifunctional f(ab') 2 antibodies
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US6277603B1 (en) 1991-12-24 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
EP0618925B2 (en) 1991-12-24 2012-04-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
WO1994002595A1 (en) 1992-07-17 1994-02-03 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for treatment of animal diseases
US6346614B1 (en) 1992-07-23 2002-02-12 Hybridon, Inc. Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
DK0691968T3 (da) 1993-03-30 1998-02-23 Sanofi Sa Acykliske nukleosid-analoge og oligonukleotidsekvenser indeholdende disse
EP0691977B1 (en) 1993-03-31 1997-11-26 Sanofi Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
DE4311944A1 (de) 1993-04-10 1994-10-13 Degussa Umhüllte Natriumpercarbonatpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Wasch-, Reinigungs- und Bleichmittelzusammensetzungen
US5955591A (en) 1993-05-12 1999-09-21 Imbach; Jean-Louis Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
US6294664B1 (en) 1993-07-29 2001-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
JPH09507836A (ja) 1993-11-16 1997-08-12 ジンタ・インコーポレイテッド 非ホスホネート・ヌクレオシジル間結合と混合したキラリティー的に純粋なホスホネート・ヌクレオシジル間結合を有する合成オリゴマー
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5599922A (en) 1994-03-18 1997-02-04 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide N3'-P5' phosphoramidates: hybridization and nuclease resistance properties
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US6608035B1 (en) 1994-10-25 2003-08-19 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
EP0813539B1 (en) 1995-03-06 2006-05-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Improved process for the synthesis of 2'-o-substituted pyrimidines and oligomeric compounds therefrom
US7422902B1 (en) 1995-06-07 2008-09-09 The University Of British Columbia Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
EP0832271B8 (en) 1995-06-07 2005-03-02 INEX Pharmaceuticals Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US6444423B1 (en) 1996-06-07 2002-09-03 Molecular Dynamics, Inc. Nucleosides comprising polydentate ligands
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
US6576752B1 (en) 1997-02-14 2003-06-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy functionalized oligomers
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6887906B1 (en) 1997-07-01 2005-05-03 Isispharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the delivery of oligonucleotides via the alimentary canal
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
US7273933B1 (en) 1998-02-26 2007-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthesis of oligonucleotides
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
US6531590B1 (en) 1998-04-24 2003-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Processes for the synthesis of oligonucleotide compounds
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
JP2002520038A (ja) 1998-07-20 2002-07-09 アイネックス ファーマシューティカルズ コーポレイション リポソームカプセル化核酸複合体
US6465628B1 (en) 1999-02-04 2002-10-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the synthesis of oligomeric compounds
MY133346A (en) 1999-03-01 2007-11-30 Biogen Inc Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
NZ514348A (en) 1999-05-04 2004-05-28 Exiqon As L-ribo-LNA analogues
US6593466B1 (en) 1999-07-07 2003-07-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Guanidinium functionalized nucleotides and precursors thereof
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
CA2385347C (en) 1999-10-04 2009-12-15 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
DE60119562T2 (de) 2000-10-04 2007-05-10 Santaris Pharma A/S Verbesserte synthese von purin-blockierten nukleinsäure-analoga
US6878805B2 (en) 2002-08-16 2005-04-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide-conjugated oligomeric compounds
EP1597280B2 (en) 2003-02-26 2016-08-24 Institute for Research in Biomedicine Monoclonal antibody production by ebv transformation of b cells
US7700097B2 (en) 2003-06-27 2010-04-20 Biogen Idec Ma Inc. Purification and preferential synthesis of binding molecules
ES2559828T3 (es) 2003-07-16 2016-02-16 Protiva Biotherapeutics Inc. ARN de interferencia encapsulado en lípidos
EP1661905B9 (en) 2003-08-28 2012-12-19 IMANISHI, Takeshi Novel artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type
US7740861B2 (en) 2004-06-16 2010-06-22 University Of Massachusetts Drug delivery product and methods
DK1866414T3 (da) 2005-03-31 2012-04-23 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitorer af ribonukleotidreduktase-underenhed 2 og anvendelser deraf.
CA2628300C (en) 2005-11-02 2018-04-17 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified sirna molecules and uses thereof
DK1984381T3 (da) 2006-01-27 2010-11-01 Isis Pharmaceuticals Inc 6-modificerede bicycliske nukleinsyreanaloger
WO2008042814A2 (en) 2006-09-29 2008-04-10 California Institute Of Technology Mart-1 t cell receptors
KR20100021601A (ko) 2007-05-14 2010-02-25 바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드 단일-쇄 Ｆｃ(ＳｃＦｃ) 부분, 이를 포함하는 결합 폴리펩타이드, 및 이에 관련된 방법
US9006191B2 (en) 2007-12-27 2015-04-14 Protiva Biotherapeutics, Inc. Silencing of polo-like kinase expression using interfering RNA
JP5837820B2 (ja) 2008-10-22 2015-12-24 インスティテュート・フォー・リサーチ・イン・バイオメディシンＩｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ 形質細胞から抗体を産生する方法
EP2210903A1 (en) 2009-01-21 2010-07-28 Monoclonal Antibodies Therapeutics Anti-CD160 monoclonal antibodies and uses thereof
AU2012272908A1 (en) 2011-06-21 2013-12-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Assays and methods for determining activity of a therapeutic agent in a subject
AU2012296613B2 (en) 2011-08-15 2016-05-12 Amplimmune, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and their uses
EP2934575A2 (en) 2012-12-19 2015-10-28 Amplimmune, Inc. B7-h4 specific antibodies, and compositions and methods of use thereof
CN113698485A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
RU2017115315A (ru) 2014-10-03 2018-11-08 Дана-Фарбер Кэнсер Инститьют, Инк. Антитела к рецептору глюкокортикоид-индуцированного фактора некроза опухоли (gitr) и способы их применения
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
WO2016134333A1 (en) 2015-02-19 2016-08-25 Compugen Ltd. Anti-pvrig antibodies and methods of use
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
WO2017059878A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Humabs Biomed Sa Antibodies that potently neutralize hepatitis b virus and uses thereof
HRP20231440T1 (hr) 2018-12-19 2024-03-01 Humabs Biomed Sa Protutijela koja neutraliziraju virus hepatitisa b i njihova upotreba
AU2019405961A1 (en) * 2018-12-20 2021-07-22 Humabs Biomed Sa Combination HBV therapy

Also Published As

Publication number Publication date
MX2022015765A (es) 2023-03-27
TW202208422A (zh) 2022-03-01
AU2021296848A1 (en) 2023-02-09
BR112022026316A2 (pt) 2023-03-07
KR20230042023A (ko) 2023-03-27
US20230242621A1 (en) 2023-08-03
CN116390943A (zh) 2023-07-04
IL299201A (en) 2023-02-01
EP4171747A1 (en) 2023-05-03
WO2021262840A1 (en) 2021-12-30
CA3182458A1 (en) 2021-12-30
AR122722A1 (es) 2022-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6731403B2 (ja) 免疫応答およびがん治療の増強に使用するための組成物および方法
US20230242621A1 (en) Engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof
WO2020168554A1 (zh) 改造的Fc片段，包含其的抗体及其应用
WO2017165681A1 (en) Trispecific inhibitors for cancer treatment
ES2961791T3 (es) Anticuerpos que neutralizan el virus de la hepatitis B y usos de los mismos
JP7505148B2 (ja) Ｌａｇ３に結合する抗体およびその使用
EP3897672B1 (en) Combination hbv therapy
TWI834867B (zh) Cd73阻斷抗體
JP2022122972A (ja) Ｄｌｌ３標的多重特異性抗原結合分子およびその使用
JP2024506449A (ja) Ｐｄ－ｌ１と結合する抗体及びその使用
OA21025A (en) Engineered hepatitis B virus neutralizing antibodies and uses thereof.
JP7513616B2 (ja) 併用ｈｂｖ療法
EP4382540A1 (en) Use of anti-pd-l1/cd47 bispecific antibody in treatment of diseases
WO2024041651A1 (en) Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies and anti-lag3 antibodies
WO2022257279A1 (en) Antibodies binding tigit and uses thereof
WO2024044675A1 (en) Methods of cancer treatment using anti-pd1 antibodies in combination with anti-tim3 antibodies
TW202413400A (zh) 用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240619

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240619