TW202413400A - 用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法 - Google Patents

用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202413400A
TW202413400A TW112118549A TW112118549A TW202413400A TW 202413400 A TW202413400 A TW 202413400A TW 112118549 A TW112118549 A TW 112118549A TW 112118549 A TW112118549 A TW 112118549A TW 202413400 A TW202413400 A TW 202413400A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
subject
hbv
seq
sirna
nucleotide
Prior art date
Application number
TW112118549A
Other languages
English (en)
Inventor
丹尼爾 克勞提爾
斯內哈 古普塔
凱莉 黃
奧黛麗 羅
莉莉安 蕭
瓦伊德希 塔納瓦拉
瑞秋 王
Original Assignee
美商維爾生物科技公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商維爾生物科技公司 filed Critical 美商維爾生物科技公司
Publication of TW202413400A publication Critical patent/TW202413400A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本揭示內容提供使用聯合療法治療HBV感染之方法以及所用之相關套組和組成物。聯合療法之成分可包括一或多種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。

Description

用於治療Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染和ＨＢＶ相關疾病之組成物及方法
本揭示內容提供使用聯合療法治療HBV感染之方法以及所用之相關套組和組成物。聯合療法之成分可包括一或多種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 電子序列表之參照
電子序列表的內容(441TW_SeqListing.xml；大小：70.5 KB；創建日期：2023年5月4日)係藉由引用方式整體納入本文中。
B型肝炎病毒(HBV)是一種DNA病毒，其感染、複製並在人類肝細胞中持續存在(Protzer U et al., Living in the liver: hepatic infections, Nature Reviews Immunology 2012, 12: 201-213)。小病毒基因體(3.2 kb)係由部分雙股、鬆弛環狀DNA(rcDNA)所組成，並具有編碼7種蛋白之4個開讀框：HBcAg(HBV核心抗原、病毒殼體蛋白)、HBeAg(B型肝炎e-抗原)、HBV Pol/RT(聚合酶、逆轉錄酶)、PreS1/PreS2/HBsAg(大、中、小表面外膜糖蛋白)以及HBx(HBV×抗原，感染起始所需的轉錄調節因子)(Seeger C et al., Molecular biology of hepatitis B virus infection, Virology 2015, 479-480:672-686；Tong S et al., Overview of viral replication and genetic variability, Journal of Hepatology, 2016, 64(1):S4-S16)。
在肝細胞中，rcDNA(由感染病毒粒子所導入的HBV核酸形式)被轉化成共價閉合之環狀DNA (cccDNA)，其係以游離基因(episomal)染色質結構持續存在於宿主細胞核中(Allweiss L et al., The Role of cccDNA in HBV Maintenance, Viruses 2017, 9: 156)。cccDNA充當所有病毒轉錄物的轉錄模板(Lucifora J et al., Attacking hepatitis B virus cccDNA-The holy grail to hepatitis B cure, Journal of Hepatology 2016, 64(1): S41-S48)。前基因體RNA(pgRNA)轉錄物被逆轉錄成新病毒粒子的新rcDNA，其被分泌時不會引起細胞毒性。除了感染性病毒粒子之外，感染之肝細胞還分泌大量不含基因體之次病毒粒子，其數量可能超過分泌之病毒粒子數量的10,000倍(Seeger等人，2015，同上)。亦可發生病毒隨機嵌入宿主基因體中，其為有助於肝細胞轉化之機制(Levrero M et al., Mechanisms of HBV-induced hepatocellular carcinoma, Journal of Hepatology 2016, 64(1):S84-S101)。HBV係以cccDNA和嵌入型DNA(intDNA)之形式持續存在於肝細胞中。
B型肝炎感染的特徵為血清病毒標記物和抗體。在急性緩解感染中，病毒係藉由有效的先天性和適應性免疫反應而清除，該等免疫反應包括導致感染之肝細胞死亡的細胞毒性T細胞，以及誘發B細胞產生防止病毒擴散之中和抗體(Bertoletti A, Adaptive immunity in HBV infection, Journal of Hepatology 2016, 64(1):S71-S83；Maini MK et al., The role of innate immunity in the immunopathology and treatment of HBV infection, Journal of Hepatology 2016, 64(1):S60-S70; Li Y et al., Genome-wide association study identifies 8p21.3 associated with persistent hepatitis B virus infection among Chinese, Nature Communications 2016, 7:11664)。相反地，慢性感染與T細胞和B細胞功能障礙相關，係由多重調節機制所介導，包括肝細胞上病毒表位的呈遞和次病毒粒子的分泌(Bertoletti等人，2016，同上；Maini等人，2016，同上；Burton AR et al., Dysfunctional surface antigen specific memory B cells accumulate in chronic hepatitis B infection, EASL International Liver Congress, Paris, France 2018)。因此，由於肝細胞中cccDNA的持續存在而導致病毒蛋白之持續表現和分泌被認為是宿主無法清除感染的關鍵步驟。
慢性HBV感染仍然是一個具有顯著發病率和死亡率之重要全球公共衛生課題(Trepo C, A brief history of hepatitis milestones, Liver Int. 2014, Feb;34Suppl 1:29-37)。慢性HBV感染是一種以病毒複製和宿主免疫反應的交互作用為特徵之動態程序。基於B型肝炎e抗原(HBeAg)、HBV DNA、丙胺酸胺基轉移酶(ALT)以及肝發炎水平，可將患者分為不同的疾病階段(European Association for the Study of the Liver, EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection, J Hepatol. 2017 Aug, 67(2):370-398; Sarin SK et al., Asian-Pacific clinical practice guidelines on the management of hepatitis B: a 2015 update, Hepatol Int. 2016 Jan, 10(1):1-98; Terrault NA et al., Update on prevention, diagnosis, and treatment of chronic hepatitis B: AASLD 2018 hepatitis B guidance, Hepatology 2018 Apr, 67(4):1560-1599)。在3億名慢性感染HBV之患者中，HBeAg陰性之患者為最大的次群組。此等患者的範圍為不活動帶原者到可進展成嚴重的肝併發症(包括肝細胞癌(HCC))之患有慢性活動性肝炎。不活動帶原者為HBeAg陰性和抗HBe陽性，且具有持續較低(＜2,000 IU/mL)的HBV DNA水平且維持至少1年之正常ALT。此等患者具有良好的長期預後，且具有低速率之組織學進展、低風險之硬化或HCC以及長期B型肝炎表面抗原(HBsAg)之高清除率(EASL，2017，同上；Invernizzi F et al., The prognosis and management of inactive HBV carriers, Liver Int. 2016 Jan, 36 Suppl 1:100-4；Terrault等人，2018，同上；Yeo YH et al., Incidence, Factors, and Patient-Level Data for Spontaneous HBsAg Seroclearance: A Cohort Study of 11,264 Patients, Clin Transl Gastroenterol 2020 Sep, 11(9):e00196)。不活動帶原者缺乏目前可用的旨在HBV DNA減抑之治療之適應症，但彼等最有可能達成功能性治癒，從而變得無感染性且具有較低風險之疾病復發。
在慢性HBV感染之非硬化患者中，目前建議對具有高水平之病毒血症(HBV DNA)和升高水平之丙胺酸轉胺酶(ALT)之子集(subset)進行治療(EASL，2017，同上；Sarin等人，2016，同上；Terault等人，2018，同上)。目前慢性HBV感染之治療選擇僅限於核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)和聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEG-IFNα-2a或「PEG-IFNa-2a」)(Liang TJ et al., Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure, Hepatology 2015 Dec, 62(6):1893-908)。長期療法NRTI療法可減抑HBV DNA，但不能消除cccDNA或嵌入型DNA。與NRTI相比，PEG-IFNa可誘發長期病毒控制，但僅限於少部分患者(＜10%)且在48週療程後(Konerman MA et al., Interferon Treatment for Hepatitis B, Clin Liver Dis. 2016 Nov, 20(4):645-665)。因此，對於可達成功能性治癒的更佳治療選項仍有未滿足的需求。
目前可用的治療皆無法恢復大部分患者對HBV的免疫控制。因此，仍然需要可抑制大多數患者的病毒複製且恢復該等患者的免疫控制之針對HBV感染的有效治療。
在一些態樣中，本揭示內容提供治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA；以及 (c)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；以及 其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
在一些態樣中，本揭示內容提供治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA； (c)干擾素-α；以及 (d)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；以及 其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前之具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。
在一些態樣中，提供用於治療之組成物、用於製造藥劑之組成物以及套組。
本揭示內容提供用於治療B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法和組成物，其中向對象投予抗HBV抗體、抗HBV siRNA、干擾素 α以及NRTI中之一或多者，以及相關套組。在一些具體例中，此類聯合療法係用於治療慢性B型肝炎。在一些具體例中，此類聯合療法係用於治療D型肝炎病毒(HDV)感染。 I. 詞彙
下列部分提供用於治療HBV感染或HBV相關疾病之聯合療法以及與該等聯合療法相關之套組之詳細描述。在更詳細地闡述本揭示內容之前，提供本文中所用之某些術語的定義可能有助於理解本揭示內容。貫穿本揭示內容闡述額外的定義。
在本說明書中，除非另有說明，否則術語「約」表示指定範圍、值或結構的±20%。
術語「包含(comprise)」(以及類似的術語，諸如，「包含...(comprising of)」和「由...所組成」)表示請求項中所提及的所述特徵、整數、步驟或組分之存在，但其並不排除一或多個其他特徵、整數、步驟、組分或其群組的存在或添加。術語「基本上由...所組成」將請求項的範圍限制為指定的材料或步驟以及彼等不會實質上影響所請求保護之發明的基本和新穎特徵者。
應當理解本文中所用之術語「一(a)」和「一(an)」是指所列舉的組分中的「一或多個」。替代用語(例如，「或」)的使用應理解為表示替代用語中的一個、兩個或其任何組合，並且可與「及/或」同義地使用。如本文中所用，術語「包括(include)」和「具有」同義地使用，該等術語及其變體旨在被解釋為非限制性的或開放式的。
詞語「實質上」不排除「完全」；例如，「實質上不含」Y之組成物可為完全不含Y。必要時，可以從本文中所提供的定義中忽略詞語「實質上」。
本文中所用之術語「疾病」通常與術語「病症」和「病況」(如「醫療狀況」中)同義，並且可互換地使用，因為皆反映人體或動物體或其某一部分的損害正常運作之異常狀況，通常表現為明顯的徵象和症狀，並且造成人類或動物具有縮短的壽命或生活品質。
如本文中所用，術語「肽」、「多肽」以及「蛋白質」以及此等術語的變異是指分子，特別是肽、寡肽、多肽或蛋白質(包括融合蛋白)，其分別包含藉由正常肽鍵或修飾之肽鍵而彼此連結之至少兩個胺基酸，諸如，例如，在等排肽(isosteric peptide)的情況下。例如，肽、多肽或蛋白質可由選自由遺傳密碼所定義之20種胺基酸之胺基酸所組成，藉由正常肽鍵(「經典」多肽)彼此連接。肽、多肽或蛋白質可由L-胺基酸及/或D-胺基酸所組成。具體地，術語「肽」、「多肽」以及「蛋白質」亦包括「肽擬似物(peptidomimetic)」，其係定義為含有非肽結構元件之肽類似物，其肽能夠模擬或拮抗天然原構胜肽(parent peptide)之(多次)生物作用。肽擬似物缺乏經典的肽特徵，諸如，酶促斷裂的肽鍵。特別地，除了此等胺基酸之外，肽、多肽或蛋白質還可包含除了由遺傳密碼所定義之20種胺基酸之外的胺基酸，或者其可由除了由遺傳密碼所定義之20種胺基酸之外的胺基酸所組成。特別地，本揭示內容上下文中的肽、多肽或蛋白質可同樣地由藉由自然程序(諸如，轉譯後之成熟程序)或化學程序修飾之胺基酸所組成，此等程序係發明所屬技術領域中的技術人員眾所周知的。此類修飾在文獻中有詳細描述。此等修飾可出現在多肽的任何地方：肽骨架中、胺基酸鏈中、甚至羧基端或胺基端。特別地，肽或多肽可在泛素化後分支，或者可為具有或不具有分支的環狀。此類修飾可為發明所屬技術領域中的技術人員眾所周知的天然或合成的轉譯後程序的結果。在本揭示內容之上下文中，術語「肽」、「多肽」或「蛋白質」特別地亦包括經修飾之肽、多肽以及蛋白質。例如，肽、多肽或蛋白質修飾可特別包括乙醯化、醯化、ADP-核糖基化、醯胺化、核苷酸或核苷酸衍生物之共價固定、脂質或脂質衍生物之共價固定、磷脂酸肌醇之共價固定、共價或非共價交聯、環化、二硫鍵形成、去甲基化、糖基化(包括聚乙二醇化)、羥基化、碘化、甲基化、肉荳蔻醯化、氧化、蛋白分解程序、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒醯化(seneloylation)、硫酸化、胺基酸添加(諸如，精胺酸化)或泛素化。此類修飾在文獻中有詳細描述(Proteins Structure and Molecular Properties, 2nd Ed., T. E. Creighton, New York (1993); Post-translational Covalent Modifications of Proteins, B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York (1983)；Seifter et al., Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors, Meth. Enzymol. 1990, 182:626-46；以及Rattan et al., Protein Synthesis: Post-translational Modifications and Aging, Ann NY Acad Sci 1992, 663:48-62)。因此，術語「肽」、「多肽」以及「蛋白質」包括例如脂肽、脂蛋白、糖肽、糖蛋白等。
如本文中所用，「(多)肽」包含藉由如上說明之肽鍵而連接之單鏈胺基酸單體。如本文中所用，「蛋白質」包含一或多種，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(多)肽，亦即，藉由如上說明之肽鍵而連接之一或多個鏈的胺基酸單體。在特別具體例中，根據本揭示內容之蛋白質包含1、2、3或4個多肽。
本文中所用之術語「重組」(例如，重組抗體、重組蛋白、重組核酸等)是指藉由重組方式而製備、表現、產生或單離，且不是天然存在的任何分子(抗體、蛋白質、核酸、siRNA等)。如本文中所用，術語「核酸」、「核酸分子」以及「多核苷酸」可互換地使用，並且旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可為單股或雙股的。在特別具體例中，核酸分子為雙股RNA。
如本文中所用，術語「細胞」、「細胞系」以及「細胞培養物」可互換地使用，並且所有此類名稱包括後代。因此，詞語「轉形體」和「轉形之細胞」包含初代個體細胞和衍生自其之培養物，而不考慮轉移的次數。亦瞭解由於有意或無意的突變，所有後代的DNA含量可能不會完全相同。包括在最初轉形之細胞中篩選出的具有相同功能或生物活性的變體後代。如果有不同的名稱，將可從上下文中清楚地看出。
如本文中所用，術語「序列變體」是指與參考序列相比具有一或多個改變的任何序列，其中參考序列為序列表中所列的任何序列，亦即，SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：61。因此，術語「序列變體」包括核苷酸序列變體和胺基酸序列變體。對於核苷酸序列的背景下的序列變體，參考序列亦為核苷酸序列，而對於胺基酸序列的背景下的序列變體，參考序列亦為胺基酸序列。本文中所用之「序列變體」與參考序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同。除非另有說明，否則序列同一性通常是根據參考序列(亦即，申請案中記載的序列)的全長來計算。如本文中所指的百分比同一性可例如使用BLAST，使用NCBI(美國國家生物技術資訊中心；http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)所指定的預設參數來確定[Blosum 62矩陣；空位開放罰分=1 1，以及空位延伸罰分=1]。在核酸(核苷酸)序列的背景下的「序列變體」具有改變的序列，其中參考序列中的一或多個核苷酸被刪除或取代，或者一或多個核苷酸被插入該參考核苷酸序列的序列中。核苷酸在本文中係以標準的單一字母符號(A、C、G或T)所指。由於遺傳密碼的簡併性，核苷酸序列的「序列變體」可能或可能不導致各別參考胺基酸序列(亦即，胺基酸「序列變體」)的變化。在某些具體例中，核苷酸序列變體為不導致胺基酸序列變體之變體(亦即，緘默突變)。然而，導致「非緘默」突變之核苷酸序列變體亦在範疇內，特別是產生與參考核苷酸至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的胺基酸序列的此類核苷酸序列變體。胺基酸序列的背景下的「序列變體」具有改變的序列，其中與參考胺基酸序列相比，一或多個胺基酸被刪除、取代或插入。作為改變的結果，此類序列變體具有與參考胺基酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的胺基酸序列。例如，參考序列的每100個胺基酸具有不超過10個改變(亦即，刪除、插入或取代的任何組合)的變體序列與該參考序列「至少90%相同」。
雖然可能具有非保守性胺基酸取代，但在某些具體例中，取代係保守性胺基酸取代，其中經取代之胺基酸與參考序列中的相應胺基酸具有相似的結構或化學性質。舉例來說，保守性胺基酸取代涉及一種脂族胺基酸或疏水性胺基酸(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸以及異白胺酸)經另一者取代；一種含羥基之胺基酸(例如，絲胺酸和蘇胺酸)經另一者取代；一種酸性殘基(例如，麩胺酸或天冬胺酸)經另一者取代；一種含醯胺之殘基(例如，天冬醯胺和麩醯胺)經另一者置換；一種芳香族殘基(例如，苯丙胺酸和酪胺酸)經另一者置換；一種鹼性殘基(例如，離胺酸、精胺酸以及組胺酸)經另一者置換；以及一種小胺基酸替代(例如，丙胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、甲硫胺酸以及甘胺酸)經另一者置換。
胺基酸序列插入包括長度範圍為一個殘基到含有一百或更多個殘基的多肽之胺基端及/或羧基端融合，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括胺基酸序列之N端或C端與報告分子(reporter molecule)或酶之融合。
除非另有說明，否則序列變體的改變不會廢除各別參考序列的功能性，例如，在本案中，抗HBV抗體或siRNA的序列的功能性足以分別中和HBV之感染或降低HBV之蛋白質表現。藉由使用發明所屬技術領域中眾所周知的電腦程式可找到確定哪些核苷酸和胺基酸殘基分別可經取代、插入或刪除而不廢除此類功能性的導引。
如本文中所用，「衍生自」指定核酸、肽、多肽或蛋白質的核酸序列或胺基酸序列是指該核酸、肽、多肽或蛋白質的來源。在一些具體例中，衍生自特定序列的核酸序列或胺基酸序列具有與其衍生自的序列或其一部分基本上相同的胺基酸序列，由此「基本上相同」包括如上所定義之序列變體。在某些具體例中，衍生自特定肽或蛋白質的核酸序列或胺基酸序列係衍生自特定肽或蛋白質中的相應結構域。從而，「相應」是特別指相同的功能性。例如，「胞外結構域」對應於(另一種蛋白質的)另一個「胞外結構域」，或者「跨膜結構域」對應於(另一種蛋白質的)另一個「跨膜結構域」。因此，肽、蛋白質以及核酸的「相應」部分對於發明所屬技術領域中具有通常知識者而言係可識別的。同樣地，「衍生自」其他序列的序列通常可被發明所屬技術領域中具有通常知識者識別為其起源在該序列中。
在一些具體例中，衍生自另一種核酸、肽、多肽或蛋白質的核酸序列或胺基酸序列可與(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白質相同。然而，衍生自另一種核酸、肽、多肽或蛋白質的核酸序列或胺基酸序列相對於(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白質亦可具有一或多個突變，特別是衍生自另一種核酸、肽、多肽或蛋白質的核酸序列或胺基酸序列可為(其衍生自的)起始核酸、肽、多肽或蛋白質的如上述的功能性序列變體。例如，在肽/蛋白質中，一或多個胺基酸殘基可經其他胺基酸殘基取代，或者可發生一或多個胺基酸殘基插入或刪除。
如本文中所用，術語「突變」有關與參考序列(例如，相應基因體序列)相比核酸序列及/或胺基酸序列的變化。例如，與基因體序列相比，突變可為(天然存在的)體細胞突變、自發突變、誘發突變(例如，由酶、化學品或輻射誘發或藉由定點誘變(對核酸序列及/或胺基酸序列中製造特異性和有意改變的分子生物學方法)而獲得的突變。因此，術語「突變(mutation)」或「使…突變(mutating)」應理解為亦包括例如在核酸序列中或胺基酸序列中物理地製造突變。突變包括一或多個核苷酸或胺基酸之取代、刪除以及插入以及幾個鄰接核苷酸或胺基酸的倒位。為了達成胺基酸序列的突變，可將突變導入編碼所述胺基酸序列的核苷酸序列中，以表現(重組)突變的多肽。突變可藉由改變(例如，藉由定點誘變)編碼一個胺基酸的核酸分子的密碼子以產生編碼不同胺基酸的密碼子，或藉由合成序列變體(例如，藉由知道編碼多肽的核酸分子的核苷酸序列，及藉由在不需要使核酸分子的一或多個核苷酸突變下而設計包含編碼多肽變體的核苷酸序列的核酸分子的合成)。
如本文中所用，術語「編碼序列」意指編碼蛋白質產物的胺基酸序列的多核苷酸分子。編碼序列的邊界通常由開讀框所確定，該開讀框通常以ATG起始密碼子開始。
本文中所用之術語「表現」是指涉及多肽產生的任何步驟，包括轉錄、轉錄後修飾、轉譯、轉譯後修飾、分泌等。
本文中所用之術語「疫苗」通常理解為提供至少一種抗原或免疫原的預防或治療材料，包括包含編碼(多個)抗原或(多個)免疫原的核酸的病毒載體疫苗。抗原或免疫原可衍生自適合疫苗接種的任何材料。例如，抗原或免疫原可衍生自病原體(諸如，來自細菌或病毒粒子等之病原體)，或者衍生自腫瘤或癌組織。抗原或免疫原刺激身體的適應性免疫系統以提供適應性免疫反應。特別地，「抗原」或「免疫原」通常是指可被免疫系統(例如，適應性免疫系統)識別，並且其能夠觸發抗原特異性免疫反應(例如，藉由抗體及/或抗原特異性T細胞的形成作為適應性免疫反應的一部分)的物質。通常，抗原可為或可包含可由MHC呈遞給T細胞之肽或蛋白質。
如本文中所用，「B型肝炎病毒」與術語「HBV」可互換地使用，是指眾所周知的屬於肝病毒科(Hepadnaviridae family)的非致細胞病變、嗜肝DNA病毒。HBV基因體係部分雙股之環狀DNA，具有四個重疊閱讀框(本文中可稱為「基因」、「開讀框」或「轉錄物」)：C、X、P以及S。核心蛋白係由C基因(HBcAg)所編碼。B型肝炎e抗原(HBeAg)係藉由前核心(pre-C)蛋白的蛋白分解加工而產生。DNA聚合酶係由P基因所編碼。S基因係編碼表面抗原(HBsAg)之基因。HBsAg基因係一個長的開讀框，其含有三個框內「起始」(ATG)密碼子，產生三種不同大小的多肽，稱為大、中以及小S抗原、pre-S1+pre-S2+S、pre-S2+S或S。表面抗原除了修飾(decorating)HBV之外膜外，亦為次病毒粒子的一部分，其與病毒粒子相比，產生大量過剩，並在免疫耐受性和隔離抗HBsAg抗體中發揮作用，從而使感染性粒子能夠逃避免疫偵測。X基因編碼的蛋白質在轉錄轉活化和複製中發揮作用，並與肝癌的發展相關。
業經確定9種HBV基因型(指定為A至I)，並提出額外的基因型J，各基因型有不同的地理分布(Velkov S et al., The Global Hepatitis B Virus Genotype Distribution Approximated from Available Genotyping Data, Genes 2018, 9(10):495)。術語「HBV」包括任何HBV基因型(A至J)。可在例如GenBank登錄號GI：21326584和GI：3582357中找到HBV基因體之參考序列的完整編碼序列。可在例如NCBI登錄號YP_009173857.1(C蛋白)；YP_009173867.1和BAA32912.1(X蛋白)；YP_009173866.1和BAA32913.1(P蛋白)；以及YP_009173869.1、YP_009173870.1、YP_009173871.1以及BAA32914.1(S蛋白)中找到C、X、P以及S蛋白之胺基酸序列。可使用公共資料庫(例如 GenBank、UniProt以及OMIM)獲得，HBV信使RNA(mRNA)序列的額外實例。B型肝炎病毒株數據之國際存儲庫(International Repository)可造訪http://www.hpA-bioinformatics.org.uk/HepSEQ/main.php。本文中所用之術語「HBV」亦指HBV基因體之天然存在的DNA序列變異，亦即，基因型A至J及其變體。
在一些具體例中，本揭示內容提供包括抗HBV siRNA之聯合療法以治療HBV。siRNA經由RNA誘發之緘默複合(RISC)途徑介導 RNA轉錄物之靶向切割，從而抑制基因表現。此程序通常被稱為「RNA 干擾」(RNAi)。不希望受特定理論的束縛，導入植物和無脊椎動物細胞中的長雙股RNA(dsRNA)被稱為Dicer的III型內切核酸酶降解成siRNA(Sharp et al., Genes Dev. 2001, 15:485)。Dicer為一種核糖核酸酶-III樣酶，將dsRNA加工成具有特性兩個鹼基3’突出端之19至23個鹼基對siRNA(Bernstein et al., Nature 2001, 409:363)。接著，將siRNA引入RISC，於此處一或多個解旋酶解開siRNA雙股螺旋，使互補之反義股能夠引導標靶識別(Nykanen et al., Cell 2001, 107:309)。與適當的標靶mRNA結合後，RISC內的一或多種核酸內切酶切割標靶以誘發緘默(Elbashir et al., Genes Dev. 2001, 15:188)。
術語「緘默」、「抑制...的表現」、「下調...的表現」、「減抑...的表現」等，就其意指的HBV基因而言，在本文中是指 HBV基因的表現的至少部分降低，如可由HBV mRNA的量的降低所表現(其可從其中HBV基因係經轉錄且已用HBV基因表現抑制劑處理之第一細胞或細胞群單離或在其中檢測)，使得與第一細胞或細胞群實質上相同但未經如此處理之第二細胞或細胞群(對照細胞)相比，HBV基因的表現受到抑制。例如，抑制程度可以對照細胞中的mRNA表現程度減去處理細胞中的mRNA表現程度的差而測量。替代地，抑制程度可與HBV基因表現之功能性地相關的參數的降低而給出，例如，由HBV基因所編碼之蛋白質的量，或表現出某種表型(例如，HBV病毒感染表型)的細胞數量。原則上，可在表現HBV基因的任何細胞 (例如，HBV感染之細胞或經工程改造以表現HBV基因之細胞)中以任何適當的測定法確定HBV基因緘默。
可使用發明所屬技術領域中已知的用於評估mRNA表現的任何方法(諸如，國際申請公開號WO 2016/077321A1之實施例2和美國專利申請公開號US2017/0349900A1中提供的rtPCR方法，此等方法係藉由引用方式納入本文中)來測定由細胞或細胞群所表現之HBV RNA的水平或循環HBV RNA的水平。在一些具體例中，樣本中之HBV基因(例如，總HBV RNA、HBV轉錄物，例如，HBV 3.5kb轉錄物)的表現水平係藉由檢測轉錄之多核苷酸或其部分(例如，HBV基因轉錄物之RNA)而測定。可使用RNA提取技術從細胞提取RNA，包括例如使用酸性苯酚/異硫氰酸胍提取(RNAzol B; Biogenesis)、RNeasy RNA製備套組(Qiagen®)或PAXgene(PreAnalytix, Switzerland)。利用核糖核酸雜交之典型測定法形式包括核連續測定法、RT-PCR、RNase保護測定法(Melton DA et al., Efficient in vitro synthesis of biologically active RNA and RNA hybridization probes from plasmids containing a bacteriophage SP6 promoter, Nuc. Acids Res. 1984, 12:7035-56)、北方印漬法、原位雜交以及微陣列分析。循環HBV mRNA可使用國際申請公開號WO 2012/177906A1和美國專利申請公開號US2014/0275211A1中描述之方法來檢測，此等方法係藉由引用方式納入本文中。
如本文中所用，「標靶序列」是指在HBV基因轉錄期間形成的mRNA分子的核苷酸序列的連續部分，包括作為初級轉錄產物的RNA加工產物的mRNA。序列的標靶部分將至少足夠長以充當在該部分或附近進行RNAi引導之切割之受質。例如，標靶序列將通常為9至36個核苷酸長，例如，15至30個核苷酸長，包括其間的所有次範圍。作為非限制性實例，標靶序列可為15至30個核苷酸、15至26個核苷酸、15至23個核苷酸、15至22個核苷酸、15至21個核苷酸、15至20個核苷酸、15至19個核苷酸、15至18個核苷酸、15至17個核苷酸、18至30個核苷酸、18至26個核苷酸、18至23個核苷酸、18至22個核苷酸、18至21個核苷酸、18至20個核苷酸、19至30個核苷酸、19至26個核苷酸、19至23個核苷酸、19至22個核苷酸、19至21個核苷酸、19至20個核苷酸、20至30個核苷酸、20至26個核苷酸、20至25個核苷酸、20至24個核苷酸、20至23個核苷酸、20至22個核苷酸、20至21個核苷酸、21至30個核苷酸、21至26個核苷酸、21至25個核苷酸、21至24個核苷酸、21至23個核苷酸或21至22個核苷酸。
如本文中所用，術語「包含序列之股」是指包含核苷酸鏈之寡核苷酸，該核苷酸鏈係由使用標準核苷酸命名法提及的序列所述。
如本文中所用，除非另有說明，否則將如技術人員將理解的，當用於描述與第二核苷酸序列相關的第一核苷酸序列時，術語「互補」是指包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸在某些條件下與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸雜交且形成雙股螺旋結構之能力。此類條件可為例如嚴格條件，其中該等嚴格條件可包括：400 mM NaCl、40 mM PIPES pH 6.4、1 mM EDTA、50℃或70℃持續12至16小時，隨後洗滌。可應用其他條件，諸如，生物體內部可能遇到的生理相關條件。技術人員將能夠根據雜交之核苷酸的最終應用確定最適合兩個序列的互補性測試的條件組。
如本文中所述之siRNA內的互補序列包括包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸在一或兩個核苷酸序列的全長上的鹼基配對。此類序列在本文中可稱為彼此「完全互補」。然而，當本文中第一序列相對於第二序列被稱為「實質上互補」時，這兩個序列可為完全互補的，或者可形成一或多個(但對於具有高達30個鹼基對之雙股螺旋而言通常不超過5、4、3或2個雜交時之錯配個鹼基對)，同時保留在與最終應用(例如，經由RISC途徑抑制基因表現)最相關的條件下雜交的能力。然而，當兩個寡核苷酸被設計為在雜交時形成一或多個單鏈突出端時，就互補性的測定而言，此類突出端不應被視為錯配。例如，包含一個21個核苷酸長之寡核苷酸和另一個23個核苷酸長之寡核苷酸(其中較長的寡核苷酸包含與較短的寡核苷酸完全互補的21個核苷酸的序列)之siRNA亦可用於本文中所述之目的而被稱為「完全互補」。
如本文中所用，「互補」序列亦可包括或完全由非華生-克里克(Watson-Crick)個鹼基對及/或由非天然和經修飾之核苷酸所形成之個鹼基對形成，只要滿足以上關於其雜交能力之要求即可。此類非華生-克里克個鹼基對包括但不限於G：U搖擺(Wobble)或胡斯坦(Hoogstein)鹼基配對。
本文中的術語「互補」、「完全互補」以及「實質上互補」可用於指siRNA之有義股和反義股之間的鹼基配對或siRNA劑之反義股和標靶序列之間的鹼基配對，如從其使用的背景下可理解。
如本文中所用，與mRNA的至少一部分「實質上互補」的多核苷酸是指與感興趣的mRNA(例如，編碼HBV蛋白的mRNA)的連續部分實質上互補的多核苷酸。例如，若多核苷酸的序列與HBV mRNA的非中斷部分實質上互補，則多核苷酸與HBV mRNA的至少一部分互補。
如本文中所用，術語「siRNA」是指包括具有雜交之雙股螺旋區之RNA分子或分子複合體的RNA干擾分子，該雜交雙股螺旋區包含兩條反向平行且實質上互補之核酸股，其將被稱為具有相對於標靶RNA之「有義」和「反義」方向。雙股螺旋區可具有允許通過RISC途徑特異性降解所需標靶RNA的任何長度，但將通常具有範圍為9至36個鹼基對長，例如，15至30個鹼基對長。考慮到9和36個鹼基對之間的雙股螺旋，雙股螺旋可為此範圍內的任何長度，例如，9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36及其間的任何次範圍，包括但不限於15至30個鹼基對、15至26個鹼基對、15至23個鹼基對、15至22個鹼基對、15至21個鹼基對、15至20個鹼基對、15至19個鹼基對、15至18個鹼基對、15至17個鹼基對、18至30個鹼基對、18至26個鹼基對、18至23個鹼基對、18至22個鹼基對、18至21個鹼基對、18至20個鹼基對、19至30個鹼基對、19至26個鹼基對、19至23個鹼基對、19至22個鹼基對、19至21個鹼基對、19至20個鹼基對、20至30個鹼基對、20至26個鹼基對、20至25個鹼基對、20至24個鹼基對、20至23個鹼基對、20至22個鹼基對、20至21個鹼基對、21至30個鹼基對、21至26個鹼基對、21至25個鹼基對、21至24個鹼基對、21至23個鹼基對以及21至22個鹼基對。藉由用Dicer和類似酶處理而在細胞中產生的siRNA通常在範圍為19至22個鹼基對長內。
siRNA的雙股螺旋區的一股包含與標靶RNA之區域實質上互補的序列。形成雙股螺旋結構之兩股可來自具有至少一個自互補(self-complementary)區之單一RNA分子，或者可以由二或更多個別的RNA分子所形成。當雙股螺旋區係由單一分子的兩股形成時，該分子可具有形成雙股螺旋結構的一股之3’端和各別另一股之5’端之間的核苷酸之單股鏈(本文中被稱為「髮夾環」)分開之雙股螺旋區。髮夾環可包含至少一個未配對之核苷酸；在一些具體例中，髮夾環可包含至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少20個、至少23個或更多個未配對之核苷酸。在siRNA之兩個實質上互補的股係由個別的RNA分子組成時，彼等分子不需要，但可共價連接。當兩股以髮夾環以外的方式共價連接時，連接結構被稱為「連接子」。
如本文中所述之siRNA可藉由發明所屬技術領域中已知的標準方法合成，例如，藉由使用自動化DNA合成儀，諸如，可從例如Biosearch, Applied Biosystems，Inc.商購。
術語「反義股」或「引導股」是指包括與標靶序列實質上互補之區域的siRNA股。如本文中所用，術語「互補區」是指反義股上與序列(例如，本文中所定義之標靶序列)實質上互補之區域。當互補區與標靶序列不與標靶序列完全互補時，分子的內部或末端區域可能有錯配。一般而言，末端區域(例如，在5’端及/或3’端之5、4、3或2個核苷酸內)有最能容許之錯配。
本文中所用之術語「有義股」或「隨從股」是指siRNA股，其包括與如本文中所定義之反義股之區域實質上互補的區域。
術語「RNA分子」或「核糖核酸分子」不僅涵蓋如在自然界中表現或發現的RNA分子，亦涵蓋包含本文中所述或發明所屬技術領域中已知的一或多種核糖核苷酸/核糖核苷類似物或衍生物的RNA類似物和衍生物。嚴格來說，「核糖核苷」包括核苷鹼基和核糖，而「核糖核苷酸」是具有一、二或三個磷酸部分的核糖核苷。然而，如本文中所用，術語「核糖核苷」和「核糖核苷酸」可被認為是等效的。RNA可在核鹼基結構或核糖-磷酸骨架結構中修飾，例如，如後文更詳細地描述。然而，包含核糖核苷類似物或衍生物之siRNA分子保留形成雙股螺旋的能力。作為非限制性實例，RNA分子亦可包括至少一種經修飾之核糖核苷，包括但不限於2’-O-甲基修飾之核苷、包含5’硫代磷酸酯基之核苷、與膽固醇衍生物或十二烷酸雙癸醯胺基連接之末端核苷、鎖核苷、無鹼基核苷、2’-去氧-2’-氟修飾之核苷、2’-胺基修飾之核苷、2’-烷基修飾之核苷、啉基核苷、胺基磷酸酯(phosphoramidate)或包含核苷之非天然鹼基或其任何組合。在另一個實例中，RNA分子可包含至少兩個經修飾之核糖核苷，至少3個、至少4個、至少5個、至少6個、至少7個、至少8個、至少9個、至少10個、至少15個、至少20個或更多，直至siRNA分子的整個長度。對於RNA分子中的此類複數個經修飾之核糖核苷中之各者，修飾不必要是相同的。在一些具體例中，經修飾之核糖核苷包括去氧核糖核苷。例如，siRNA可包含一或多種去氧核苷，包括例如(多個)去氧核苷突出端或siRNA的雙股部分內的一或多種去氧核苷。然而，本文中所用之術語「siRNA」不包括完整的DNA分子。
如本文中所用，術語「核苷酸突出端」是指從siRNA的雙股螺旋結構突出的至少一個未配對之核苷酸。例如，當siRNA的一股之3’端延伸超出另一股之5’端時，反之亦然，則存在核苷酸突出端。siRNA可包含至少一個核苷酸之突出端；替代地，突出端可包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多。核苷酸突出端可包含核苷酸/核苷類似物(包括去氧核苷酸/核苷)或由其所組成。有義股、反義股或其任何組合上可有(多個)突出端。此外，突出端之(多個)核苷酸可存在於siRNA之反義股或有義股之5’端、3’端或兩端上。
如本文中所用，關於siRNA的術語「鈍的」或「有鈍端」是指在siRNA的給定末端不存在未配對之核苷酸或核苷酸類似物，亦即，無核苷酸突出端。siRNA的一或兩端可為鈍的。當siRNA的兩端皆為鈍端時，該siRNA被稱為「有鈍端」。「有鈍端」之siRNA為兩端皆為鈍端之siRNA，亦即，在分子的任一端不具有核苷酸突出端。通常此類分子在其整個長度上皆為雙股的。
在一些具體例中，本揭示內容提供包括抗HBV抗體之聯合療法以治療HBV。在某些具體例中，抗HBV抗體或其抗原結合片段結合HBsAg之抗原環區且中和B型肝炎病毒之感染。在某些具體例中，抗HBV抗體或其抗原結合片段結合HBsAg之抗原環區且中和D型肝炎病毒之感染。
如本文中所用，術語「抗體」涵蓋各種形式的抗體，包括但不限於完整抗體、抗體片段、抗原結合片段、人類抗體、嵌合抗體、人源化抗體、重組抗體以及基因工程改造之抗體(變體或突變抗體)，只要保留抗體的特性即可。在一些具體例中，抗體為人類抗體及/或單株抗體。在特別具體例中，抗體為人類單株抗體。在某些特別具體例中，抗體為重組人類單株抗體。如本文中所用，術語「抗原結合片段」、「片段」以及「抗體片段」可互換地使用，是指保留抗體之抗原結合活性的聯合療法之抗體的任何片段。抗體片段之實例包括但不限於單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。此外，本文中所用之術語「抗體」包括抗體及其抗原結合片段。
如本文中所用，「中和抗體」為可中和(亦即，預防、抑制、減少、阻礙或干擾病原體在宿主中引發及/或持續感染的能力的抗體。術語「中和抗體(neutralizing antibody)」和「中和之抗體(an antibody that neutralizes)」或「中和之抗體(antibodies that neutralize)」在本文中可互換地使用。此等抗體可單獨或組合使用、在適當調配時作為預防劑或治療劑、與主動疫苗接種相關聯、作為診斷工具或作為本文中所述之生產工具。
人類抗體在現有技術中是眾所周知的(van Dijk MA and van de Winkel JC, Curr. Opin. Chem. Biol. 2001, 5:368-74)。人類抗體亦可在轉基因動物(例如，小鼠)中產生，該等轉基因動物在免疫後能夠在無內源免疫球蛋白的情況下產生完整之組庫(repertoire)或人類抗體之選擇。在此類生殖細胞系突變小鼠中之轉移人類生殖細胞系免疫球蛋白基因陣列將導致在抗原攻擊後產生人類抗體(參見，例如，Jakobovits A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90:2551-55; Jakobovits A. et al., Nature 1993, 362:255-258; Bruggemann M. et al., Year Immunol. 1993, 7:3340)。人類抗體亦可在噬菌體展示庫(display library)中產生(Hoogenboom HR and Winter G, Mol. Biol. 1992, 227:381-88; Marks JD et al., Mol Biol. 1991, 222:581-97)。Cole等人和Boerner等人之技術亦可用於製備人類單株抗體(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner P et al., Immunol. 1991, 147:86-95)。在一些具體例中，如Traggiai E等人(Nat Med. 2004, 10(8):871-5)中所述，藉由使用改善的EBV-B細胞永生化而製備人類單株抗體。本文中所用之術語「人類抗體」亦包括經修飾(例如，在可變區中)以產生本文中性質特性之抗體。
聯合療法之抗體可為任何同型(例如，IgA、IgG、IgM，亦即，κ、γ或μ重鏈)，但在某些特別具體例中，抗體為IgG。在IgG 同型中，抗體可為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4次類別。在特別具體例中，抗體為IgG1。聯合療法之抗體可具有κ或λ輕鏈。基於IgG通過FcRN-IgG受體進入肝細胞之與抗原無關之攝取，IgG型HBsAg特異性抗體亦可有利地阻斷HBV和HBsAg從感染之細胞釋放。因此，IgG型HBsAg特異性抗體可在細胞內結合，從而阻斷HBV病毒粒子和HBsAg之釋放。
如本文中所用，術語「可變區」(輕鏈可變區(V L)、重鏈可變區(V H))表示包含互補決定區(「CDR」)和框架區(「FR」)之抗體輕鏈(LC)或重鏈(HC)之部分(通常在成熟抗體重鏈或輕鏈之105至120個胺基端胺基酸周圍)，並且直接涉及抗體與抗原結合。術語「互補決定區」和「CDR」與「高變區」或「HVR」同義，並且在發明所屬技術領域中已知是指賦予抗原特異性及/或結合親和力之抗體可變區內的非連續胺基酸序列。一般來說，免疫球蛋白結合蛋白之各可變區有三個CDR；例如，對於抗體而言，V H和V L區通常包含六個CDR(CDRH1、CDRH2、CDRH3；CDRL1、CDRL2、CDRL3)。免疫球蛋白序列可按照編號方案(例如，Kabat、EU、國際免疫遺傳學資訊系統(IMGT)以及Aho)進行排比，其可允許等效殘基位置被註釋，並且使用抗原受體編號和受體分類(Antigen receptor Numbering And Receptor Classification，ANARCI)軟體工具來比較不同的分子(Bioinformatics 2016, 15: 298-300)。應將理解在某些具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段可包含重鏈(HC)、輕鏈(LC)或兩者之全部或部分。例如，全長的完整IgG抗體單體通常包括V H、CH1、CH2、CH3、V L以及CL。
在某些具體例中，根據本揭示內容之聯合療法之抗HBV抗體或其抗原結合片段為純化之抗體、單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。因此，聯合療法之抗體可為人類抗體、單株抗體、人類單株抗體、重組抗體及/或純化抗體。本揭示內容亦提供抗體之片段，特別是保留抗體之抗原結合活性之片段。此類片段包括但不限於單鏈抗體、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。儘管在一些地方，本揭示內容可明確地指抗體之(多個)抗原結合片段、(多個)抗體片段、(多個)變體及/或(多個)衍生物，如本文中所用，術語「抗體」或「聯合療法之抗體」包括所有類別的抗體，亦即，抗體之(多個)抗原結合片段、(多個)抗體片段、(多個)變體以及(多個)衍生物。
可藉由包括用酶(諸如，胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)消化及/或藉由化學還原而裂解二硫鍵之方法從抗體獲得抗體之片段。替代地，可藉由選殖和表現重鏈或輕鏈之部分序列來獲得抗體的片段。本揭示內容亦涵蓋衍生自本揭示內容之抗體之重鏈和輕鏈的單鏈Fv片段(scFv)。例如，本揭示內容包括包含來自本揭示內容之抗體之CDR的scFv。亦包括重鏈或輕鏈單體和二聚體、單結構域重鏈抗體、單結構域輕鏈抗體以及單鏈抗體，例如，其中重鏈和輕鏈可變結構域係藉由肽連接子而連結之單鏈Fv。
本揭示內容之抗體片段可賦予單價或多價交互作用，並且含在如上述的多種結構中。例如，可合成scFv分子以產生三價「三鏈抗體(triabody)」或四價「四鏈抗體(tetrabody)」。scFv分子可包括Fc區之結構域，導致二價微型抗體(minibody)。另外，抗體/抗體片段之序列可為多特異性分子之組分，其中該等序列靶向本文中所述之表位，並且該多特異性分子之其他區域結合其他標靶。例示性多特異性分子包括但不限於雙特異性Fab2、三特異性Fab3、雙特異性scFv以及雙鏈抗體(diabody)(Holliger and Hudson, Nature Biotechnology 2005, 9: 1126-36)。
根據本揭示內容之抗體可以純化形式提供。通常，抗體將存在於實質上不含其他多肽之組成物中，例如，其中該組成物之小於90%(按重量計)，通常小於60%，以及更通常小於50%係由其他多肽所組成。
在具體例中，本揭示內容之抗體和抗原結合片段可為多特異性的(例如，雙特異性、三特異性、四特異性等)，並且可以本文中所揭露的任何多特異性形式提供。在某些具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段為多特異性抗體，諸如，雙特異性或三特異性抗體。雙特異性抗體之形式係揭露於例如Spiess等人(Mol. Immunol. 2015, 67(2):95)以及Brinkmann和Kontermann (mAbs 2017, 9(2):182-212)，此等雙特異性形式及其製造方法係藉由引用方式納入本文中，並且包括例如雙特異性T細胞銜接蛋白(BiTE)、DART、杵臼(Knobs-Into-Holes，KIH)組裝、scFv-CH3-KIH組裝、KIH通用輕鏈抗體、TandAb、三體(triple body)、TriBi微型抗體、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab’)2-scFv2、四價 HCab、胞內抗體(Intrabody)、CrossMab、雙作用Fab (DAF)(二合一或四合一)、DutaMabs、DT-IgG、電荷對(Charge Pair)、Fab臂交換、股交換工程改造之結構域小體(SEED-body)、Triomabs、LUZ-Y組裝、Fcabs、κλ-體、正交Fabs、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L,H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIH IgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody以及DVI-IgG(四合一)。雙特異性或多特異性抗體可包含本揭示內容之HBV及/或HDV特異性結合結構域與本揭示內容之另一種此類結合結構域之組合，或與特異性地結合HBV及/或HDV(例如，在相同或不同的表位)的不同結合結構域之組合，或與具有特異性地結合不同抗原的結合結構域之組合。 II. 靶向 HBV 之 siRNA
在一些具體例中，本揭示內容提供涉及投予靶向HBV mRNA之siRNA之治療方法以及相關組成物和套組。
在一些具體例中，靶向HBV mRNA之siRNA為SIRNA01。SIRNA01為靶向HBV RNA之合成的經化學修飾之siRNA，其具有允許被肝細胞特異性地攝取之共價連接的三觸足(triantennary) N-乙醯基-半乳糖胺 (GalNAc) 配體。SIRNA01 靶向由所有HBV病毒轉錄物共有的HBV基因體區域所編碼之mRNA，並且對HBV A至J基因型具有藥理活性。在臨床前模式中，已顯示SIRNA01會抑制病毒複製、轉譯和以及HBsAg之分泌，並且可提供或有助於慢性HBV感染之功能性治癒。SIRNA可具有多重抗病毒功效，包括pgRNA之降解，因此抑制病毒複製和所有病毒mRNA轉錄物之降解，從而預防病毒蛋白之表現。這可導致針對HBV的功能性免疫反應之恢復，無論是單獨或組合使用。SIRNA01降低含有HBsAg之非感染性次病毒粒子的能力亦使其與目前可用的治療方法區分。
SIRNA01靶向且抑制由根據NCBI參考序列NC_003977.2(GenBank登錄號GI：21326584)(SEQ ID NO：1)之HBV基因體所編碼之mRNA的表現。更具體地，SIRNA01靶向由包含序列GTGTGCACTTCGCTTCAC (SEQ ID NO：2)之HBV基因體之一部分所編碼的mRNA，該序列對應於SEQ ID NO：1之核苷酸1579至1597。由於HBV基因體的轉錄會導致多順反子且重疊之RNA，SIRNA01 會導致大多數或全部HBV轉錄物的表現之顯著抑制。用於合成SIRNA01之例示性方法以及證明HBV基因表現緘默之實驗數據係描述於國際申請公開號WO 2020/036862A1中，該等方法和數據係藉由引用方式納入本文中。
SIRNA01具有包含5’- GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：3)之有義股和包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之反義股，其中該等核苷酸包括2’-氟(2’F)和2’-O-甲氧基(2’OMe)核糖修飾、硫代磷酸酯骨架修飾、二醇核酸(GNA)修飾以及與三觸足N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)配體於有義股之3’端之接合(conjugation)，以促進通過去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)遞送至肝細胞。包括修飾，SIRNA01之有義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96 -3’(SEQ ID NO：5)，並且反義股包含5’- usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)，其中該等修飾係縮寫係如表1所示。 表1.經修飾之核酸序列表示中所用之核苷酸單體的縮寫。應將理解除非另有說明，否則當此等單體存在於寡核苷酸時，係藉由5’-3’-磷酸二酯鍵相互連接。
縮寫 ( 多個 ) 核苷酸
A 腺苷-3’-磷酸酯
Af 2’-氟腺苷-3’-磷酸酯
Afs 2’-氟腺苷-3’-硫代磷酸酯
As 腺苷-3’-硫代磷酸酯
C 胞苷-3’-磷酸酯
Cf 2’-氟胞苷-3’-磷酸酯
Cfs 2’-氟胞苷-3’-硫代磷酸酯
Cs 胞苷-3’-硫代磷酸酯
G 鳥苷-3’-磷酸酯
Gf 2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯
Gfs 2’-氟鳥苷-3’-硫代磷酸酯
Gs 鳥苷-3’-硫代磷酸酯
T 5’-甲基尿苷-3’-磷酸酯
Tf 2’-氟-5-甲基尿苷-3’-磷酸酯
Tfs 2’-氟-5-甲基尿苷-3’-硫代磷酸酯
Ts 5-甲基尿苷-3’-硫代磷酸酯
U 尿苷-3’-磷酸酯
Uf 2’-氟尿苷-3’-磷酸酯
Ufs 2’-氟尿苷-3’-硫代磷酸酯
Us 尿苷-3’-硫代磷酸酯
a 2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯
as 2’-O-甲基腺苷-3’-硫代磷酸酯
c 2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯
cs 2’-O-甲基胞苷-3’-硫代磷酸酯
g 2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯
gs 2’-O-甲基鳥苷-3’-硫代磷酸酯
t 2’-O-甲基-5-甲基尿苷-3’-磷酸酯
ts 2’-O-甲基-5-甲基尿苷-3’-硫代磷酸酯
u 2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯
us 2’-O-甲基尿苷-3’-硫代磷酸酯
s 硫代磷酸酯鍵聯
L96 N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇(「Hyp-(GalNAc-烷基)3」)
(Agn) 腺苷-二醇核酸(GNA)
dA 2’-去氧腺苷-3’-磷酸酯
dAs 2’-去氧腺苷-3’-硫代磷酸酯
dC 2’-去氧胞苷-3’-磷酸酯
dCs 2’-去氧胞苷-3’-硫代磷酸酯
dG 2’-去氧鳥苷-3’-磷酸酯
dGs 2’-去氧鳥苷-3’-硫代磷酸酯
dT 2’-去氧胸苷-3’-磷酸酯
dTs 2’-去氧胸苷-3’-硫代磷酸酯
dU 2’-去氧尿苷
dUs 2’-去氧尿苷-3’-硫代磷酸酯
在一些具體例中，本文中所述之方法、組成物或套組中所用之siRNA為SIRNA01。在一些具體例中，本文中所述之方法、組成物或套組中所用之siRNA包含SIRNA01之序列變體。在特別具體例中，SIRNA01之序列變體所靶向的(多個)HBV轉錄物之部分與SIRNA01所靶向之(多個)HBV轉錄物之部分重疊。
在一些具體例中，siRNA包含有義股和反義股，其中(1)有義股包含SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5，或與SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5分別相差不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個核苷酸之序列；或(2)反義股包含SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6，或與SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6分別相差不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個核苷酸之序列。
在一些具體例中，使用具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6之序列中之一者僅在一或兩端減去一些核苷酸之較短雙股螺旋。因此，本文中考慮具有來自SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6中之一或兩者的至少15、16、17、18、19、20或更多個鄰接核苷酸之部分序列的siRNA，並且其抑制HBV基因的表現的能力與包含完整序列之siRNA相差不超過5、10、15、20、25或30%的抑制。在一些具體例中，提供藉由從SIRNA01之一或兩端移除核苷酸而形成的在一或兩端具有鈍端的siRNA。
在一些具體例中，siRNA包含有義股和反義股，其中(1)有義股包含SEQ ID NO：7，或與SEQ ID NO：7分別相差不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個核苷酸之序列；或(2)反義股包含SEQ ID NO：8，或與SEQ ID NO：8分別相差不超過4個、不超過3個、不超過2個或不超過1個核苷酸之序列。
在一些具體例中，使用具有SEQ ID NO：8之序列僅在一或兩端減去幾個一些核苷酸之較短雙股螺旋。因此，本文中考慮具有來自SEQ ID NO：8的至少15、16、17、18、19、20或更多個鄰接核苷酸之部分序列的siRNA，並且其抑制HBV基因的表現的能力與包含完整序列之siRNA相差不超過5、10、15、20、25或30%的抑制。在一些具體例中，提供藉由從SEQ ID NO：8之一或兩端移除核苷酸而形成的在一或兩端具有鈍端的siRNA。
在一些具體例中，本文中所述之siRNA可含有與標靶序列的一或多個錯配。在一些具體例中，本文中所述之siRNA含有不超過3個錯配。在一些具體例中，若siRNA之反義股含有與標靶序列的錯配，則錯配區不位於互補區之中心。在特別具體例中，若反義股含有與標靶序列的錯配，則錯配被限制在互補區之5’端或3’端之最後5個核苷酸內。例如，對於與HBV基因之區域互補的23個核苷酸之siRNA股，該RNA股可能不包含在中央13個核苷酸內的任何錯配。本文中所述之方法或發明所屬技術領域中已知的方法可用以確定含有與標靶序列錯配之siRNA是否有效抑制HBV基因的表現。
在一些具體例中，本文中所述之方法、組成物和套組中所用之siRNA包括兩種寡核苷酸，其中一種寡核苷酸被描述為有義股，而第二種寡核苷酸被描述為該有義股之相應反義股。如本文中所述和發明所屬技術領域中已知的，siRNA之互補序列亦可作為單一核酸分子之自互補區(相對於在個別的寡核苷酸上)而被包含。
在一些具體例中，將包含本文中所述之siRNA之反義股的單股反義RNA分子用於本文中所述之方法、組成物和套組中。反義RNA分子可具有與標靶互補的15至30個核苷酸。
在一些具體例中，將包含SIRNA01之反義股或其序列變體之單股反義RNA分子用於本文中所述之方法、組成物和套組中。反義RNA分子可具有與標靶互補的15至30個核苷酸。例如，反義RNA分子可具有來自SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：6之至少15、16、17、18、19、20、21或更多個鄰接核苷酸的序列。
在一些具體例中，siRNA包含有義股和反義股，其中該有義股包含SEQ ID NO：5且該反義股包含SEQ ID NO：6，並且進一步包含如本文中所述之額外的核苷酸、修飾或接合物。例如，在一些具體例中，除了彼等SEQ ID NO：5和6所示者外，siRNA可包括進一步的修飾。此類修飾可使用發明所屬技術領域中所建立之方法產生，例如，「Current protocols in nucleic acid chemistry」, Beaucage SL et al. (Edrs.), John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA，該等方法係藉由引用方式納入本文中。後文更詳細地描述此類修飾之實例。
在一些具體例中，siRNA之有義股的實質上所有或所有核苷酸和反義股之實質上所有或所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸。核苷酸可以如下所述進行修飾。 a. 經修飾之 siRNA
本文中揭露之修飾包括，例如，(a)糖修飾(例如，在2’位置或4’位置)或糖之置換；(b)骨架修飾，包括磷酸二酯鍵聯之修飾或置換；(c)鹼基修飾，例如，用穩定鹼基、去穩定鹼基或與擴充的配偶體(partner)組庫鹼基配對之鹼基之置換，鹼基(無鹼基核苷酸)之移除或共軛鹼基；(d)端修飾，例如，5’端修飾(磷酸化、接合、反向鍵聯等)、3’端修飾(接合、DNA核苷酸、反向鍵聯等)。可引入本申請案之siRNA中之一些修飾的具體實例係顯示於表1。
修飾包括經取代之糖部分。本文中出現之siRNA可在2’位置包括下列之一者：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基；其中該烷基、烯基以及炔基可為經取代或未經取代之C 1至C 10烷基或C 2至C 10烯基和炔基。例示性合適的修飾包括O[(CH 2) nO] mCH 3、O(CH 2). nOCH 3、O(CH 2) nNH 2、O(CH 2) nCH 3、O(CH 2) nONH 2以及O(CH 2) nON[(CH 2) nCH 3)] 2，其中n和m為1至約10。在一些其他具體例中，siRNA在2’位置包括下列之一者：C 1至C 10低級烷基、經取代之低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH 3、OCN、CI、Br、CN、CF 3、OCF 3、SOCH 3、SO 2CH 3、ONO 2、NO 2、N 3、NH 2、雜環烷基、雜環烷芳基、胺基烷基胺基、多烷基胺基、經取代之矽基、RNA裂解基團、報告基團(reporter group)、嵌入劑(intercalator)、用於改善siRNA的藥物動力學(pharmacokinetic)性質之基團、或用於改善siRNA之藥效動力學(pharmacodynamic)性質之基團以及具有類似性質之其他取代基。在一些具體例中，修飾包括2’-甲氧基乙氧基(2'-O-CH 2CH 2OCH 3，亦稱為2’-O-(2-甲氧基乙基)或2’-MOE)(Martin et al., Helv. Chim. Acta 1995, 78:486-504)，亦即，烷氧基-烷氧基。另一種例示性修飾為2’-二甲基胺基氧基乙氧基(亦即，O(CH 2) 2ON(CH 3) 2基，亦稱為2’-DMAOE)和2’-二甲基胺基乙氧基乙氧基((發明所屬技術領域中亦稱為2*-O-二甲基胺基乙氧基乙基或2 *-DMAEOE)，亦即，2 *-O-CH 2-O-CH 2-N(CH 2) 2)。其他例示性修飾包括2’-甲氧基(2’-OCH 3)、2’-胺基丙氧基(2-OCH 2CH 2CH 2NH 2)以及2’-氟(2’-F)。類似的修飾亦可在siRNA之RNA上的其他位置進行，特別是在3’端核苷酸上或2’-5’連接之siRNA中的糖之3’位置以及5’端核苷酸之5’位置。修飾亦可包括以糖擬似物(例如，環丁基部分)代替呋喃戊糖基糖。
教示此類經修飾之糖的結構之製備的代表性美國專利包括但不限於美國專利號4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；以及5,700,920；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
經修飾之RNA骨架包括，例如，硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、胺基烷基磷酸三酯、膦酸甲酯和其他膦酸烷基酯(包括3’-伸烷基膦酸酯和手性膦酸酯)、次膦酸鹽(phosphinate)、胺基磷醯胺(phosphoramidate)(包括3’-胺基胺基磷醯胺和胺基烷基胺基磷醯胺)、硫代胺基磷醯胺(thionophosphoramidate)、硫代烷基膦酸酯(thionoalkylphosphonate)、硫代烷基磷三酯(thionoalkylphosphotriester)、以及具有正常3’-5’鍵聯之硼代磷酸酯(boranophosphate)、此等之2’-5’鍵聯類似物，以及彼等具有反極性(inverted polarity)(其中相鄰的核苷單元對以3’-5’至5’-3’或2’-5’至5’-2’連接)者。亦包括各種鹽、混合鹽和游離酸形式。
教示上述含磷之鍵聯之製備的代表性美國專利包括但不限於美國專利號3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,195；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,316；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；5,625,050；6,028,188；6,124,445；6,160,109；6,169,170；6,172,209；6,239,265；6,277,603；6,326,199；6,346,614；6,444,423；6,531,590；6,534,639；6,608,035；6,683,167；6,858,715；6,867,294；6,878,805；7,015,315；7,041,816；7,273,933；7,321,029；以及美國專利RE39464；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
具有經修飾之骨架之RNA包括彼等骨架中不具有磷原子者。為了本說明書的目的且如發明所屬技術領域中有時所引用的，在其核苷間骨架中不具有磷原子之經修飾之RNA亦可被認為是寡核苷。其中不包括磷原子之經修飾之RNA骨架具有由短鏈烷基或環烷基核苷間鍵聯、混合之雜原子和烷基或環烷基核苷間鍵聯或一或多個短鏈雜原子或雜環核苷間鍵聯所形成之骨架。此等包括彼等具有啉基鍵聯(部分由核苷之糖部分所形成)；矽氧烷骨架；硫化物、亞碸以及碸骨架；甲醯基和硫代甲醯基骨架；亞甲基甲醯基和硫代甲醯基骨架；含烯烴之骨架；胺基磺酸酯骨架；亞甲基亞胺基和亞甲基肼骨架；磺酸酯和磺醯胺骨架；醯胺骨架；以及其他含有混合之N、O、S以及CH 2組分部分者。
教示上述寡核苷之製備的代表性美國專利包括但不限於美國專利號5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,64,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；以及5,677,439；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
在一些具體例中，核苷酸單元之糖和核苷間鍵聯(亦即，骨架)係經新穎基團取代。維持鹼基單元以用於與適當的核酸標靶化合物雜交。一種此類寡聚化合物(亦即，RNA擬似物)已顯示具有優異的雜交性質，且被稱為肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，RNA之糖骨架係經含醯胺之骨架(特別是胺基乙基甘胺酸骨架)置換。核鹼基被保留且直接或間接結合骨架之醯胺部分之氮雜氮原子。教示PNA化合物之製備包括但不限於美國專利號5,539,082；5,714,331；以及5,719,262；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。PNA化合物之進一步教導可在例如Nielsen等人(Science 1991, 254:1497-1500)中找到。
本文中所述之技術的一些具體例包括具有硫代磷酸酯骨架之RNA和具有雜原子骨架之寡核苷，特別是美國專利號5,489,677之-CH 2-NH-CH 2-、-CH 2-N(CH 3)-O-CH 2-[稱為亞甲基(甲基亞胺基)或MMI骨架]、-CH 2-O-N(CH 3)-CH 2-、-CH 2-N(CH 3)-N(CH 3)-CH 2-以及-N(CH 3)-CH 2-CH 2-[其中天然磷酸二酯骨架表示為-O-P-O-CH 2-]和美國專利號5,602,240之醯胺骨架。在一些具體例中，本文中出現之RNA具有美國專利號5,034,506之啉基骨架結構。
本文中揭露之siRNA的修飾亦可包括核鹼基(在發明所屬技術領域中通常簡稱為「鹼基」)修飾或取代。如本文中所用，「未經修飾」或「天然」的核鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)，以及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)以及尿嘧啶(U)。經修飾之核鹼基包括其他合成和天然的核鹼基，諸如，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羥甲基胞嘧啶，黃嘌呤，次黃嘌呤，2-胺基腺嘌呤，腺嘌呤和鳥嘌呤之6-甲基和其他烷基衍生物，腺嘌呤和鳥嘌呤之2-丙基和其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶以及2-硫胞嘧啶，5-鹵尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-偶氮基尿嘧啶、胞嘧啶以及胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶、8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫烷基、8-羥基以及其他8-取代之腺嘌呤和鳥嘌呤，5-鹵基(特別是5-溴、5-三氟甲基以及其他5-取代之尿嘧啶和胞嘧啶)，7-甲基鳥嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮雜鳥嘌呤和8-氮雜腺嘌呤，7-去氮雜鳥嘌呤和7-去氮雜腺嘌呤，以及3-去氮雜鳥嘌呤和3-去氮雜腺嘌呤。另外的核鹼基包括彼等揭露於美國專利號US 3,687,808中者、彼等揭露於Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine (Herdewijn P, ed., Wiley-VCH, 2008)中者；彼等接露於The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering (pages 858-859, Kroschwitz JL, ed., John Wiley & Sons, 1990)中者；彼等由Englisch等人(Angewandte Chemie, International Edition, 30, 613, 1991)揭露者，以及彼等由Sanghvi YS(Chapter 15, dsRNA Research and Applications, pages 289-302, Crooke ST and Lebleu B, ed., CRC Press, 1993)揭露者。此等核鹼基中之某些特別有用於增加本文中所述之技術中所出現的寡聚化合物之結合親和力。此等包括5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶以及N-2、N-6及0至6個經取代之嘌呤(包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶以及5-丙炔基胞嘧啶)。業經顯示5-甲基胞嘧啶取代可將核酸雙股螺旋穩定性提高0.6至1.2℃(Sanghvi YS et al., Eds., dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, pp. 276-278, 1993)且為例示性鹼基取代，甚至更具體地當與2’-O-甲氧基乙基糖修飾組合時。
教示某些上述經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基之製備的代表性美國專利包括但不限於美國專利號3,687,808；美國專利號4,845,205；5,130,30；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,681,941；5,750,692；6,015,886；6,147,200；6,166,197；6,222,025；6,235,887；6,380,368；6,528,640；6,639,062；6,617,438；7,045,610；7,427,672；以及7,495,088；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
siRNA亦可經修飾以包括一或多種二醇核酸，諸如，腺苷-二醇核酸(GNA)。腺苷-GNA之描述可在例如Zhang等人(JACS 2005, 127(12):4174-75)的文獻中找到，其係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備GNA修飾之方法相關的教導。
siRNA之RNA亦可經修飾以包括一或多種鎖核酸(LNA)。鎖核酸為具有經修飾之核糖部分(moiety)之核苷酸，其中該核糖部分包含連接2’碳和4’碳之額外橋。此結構有效地將核糖「鎖」在3’-內結構構形中。業經顯示向siRNA添加鎖核酸會增加血清中之siRNA穩定性，並減少脫靶效應(Elmen J et al., Nucleic Acids Research 2005, 33(l):439-47; Mook OR et al., Mol Cane Ther 2007, 6(3):833-43; Grunweller A et al., Nucleic Acids Research 2003, 31(12):3185-93)。
教示鎖核酸核苷酸之製備的代表性美國專利包括但不限於下列者：6,268,490；6,670,461；6,794,499；6,998,484；7,053,207；7,084,125；以及7,399,845；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
在一些具體例中，siRNA包括涉及將一或多種增強siRNA之活性、細胞分布或細胞攝取的配體、部分或接合物化學連接RNA之修飾。此類部分包括但不限於脂質部分，諸如，膽固醇部分(Letsinger et al., Proc. Natl. Acid. Sci. USA 1989, 86:6553-56)、膽酸(Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let. 1990, 4:1053-60)、硫醚(例如，己基-S-三苯甲基硫醇(beryl-S-tritylthiol))(Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992, 660:306-9)；Manoharan et al., Biorg. Med. Chem. Let. 1993, 3:2765-70)、硫膽固醇(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res. 1992, 20:533-38)、脂族鏈(例如，十二烷二醇或十一烷基殘基)(Saison-Behmoaras et al., EMBO J 1991, 10:1111-18; Kabanov et al., FEBS Lett. 1990, 259:327-30; Svinarchuk et al., Biochimie 1993, 75:49-54)、磷脂(例如，二-十六基-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六基-消旋性-甘油基-3-膦酸三乙基銨(Manoharan et al., Tetrahedron Lett. 1995, 36:3651-54; Shea et al., Nucl. Acids Res. 1990, 18:3777-83)、多胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides 1995, 14:969-73)或金剛烷乙酸(Manoharan et al., Tetrahedron Lett. 1995, 36:3651-54)、棕櫚基部分(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta 1995, 1264:229-37)或十八基胺或己基胺基-羰基氧基膽固醇部分(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996, 277:923-37)。
在一些具體例中，配體改變其所引入之siRNA之分布、靶向或壽命。在一些具體例中，配體提供對所選標靶(例如，分子、細胞或細胞類型、區室(例如，細胞或器官區室、組織、器官或身體區域))之增強的親和力，例如，與對於缺乏此類配體的物種相比。在此類具體例中，配體將不參與雙股螺旋之核酸中之雙股螺旋配對。
配體可包括天然存在的物質，諸如，蛋白質(例如，人類血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)或球蛋白)；碳水化合物(例如，葡聚醣、普藍多醣(pullulan)、幾丁質、幾丁聚醣、菊糖、環糊精或玻尿酸)；或脂質。配體亦可為重組或合成分子，諸如，合成聚合物，例如，合成聚胺基酸。聚胺基酸之實例包括聚胺基酸為聚離胺酸(PLL)、聚L-天冬胺酸、聚L-麩胺酸、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物、二乙烯基醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺基甲酸酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯醯胺聚合物或聚磷腈。聚胺之實例包括：聚乙烯亞胺、聚離胺酸(PLL)、精胺、精脒、聚胺、偽肽-聚胺、擬肽似性聚胺、樹枝狀聚胺、精胺酸、脒、魚精蛋白、陽離子性脂質、陽離子性紫質、聚胺的四級鹽以及α螺旋肽。
配體亦可包括靶向基團，例如，靶向細胞或組織之製劑，例如，凝集素、醣蛋白、脂質或蛋白質，例如，結合特定細胞類型(諸如，肝細胞)之抗體。靶向基團可為促甲狀腺激素、促黑激素、凝集素、醣蛋白、表面活性蛋白A、黏蛋白碳水化合物、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺、多價甘露糖、多價岩藻糖、糖基化聚胺基酸、多價半乳糖、轉鐵蛋白、雙膦酸、聚麩胺酸、聚天冬胺酸、脂質、膽固醇、類固醇、膽汁酸、葉酸鹽、維生素B12、維生素A、生物素或RGD肽或RGD肽擬似物。配體之其他實例包括染劑、嵌合劑(例如，吖啶類)、交聯劑(例如，補骨脂內酯、絲裂黴素C)、紫質(TPPC4、德紫質(texaphyrin)、噻啉(Sapphyrin))、多環狀芳香烴(例如，吩、二氫吩)、人造內切核酸酶(例如，EDTA)、親脂性分子(例如，膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪酮、1,3-雙-O(十六基)甘油、香葉基氧基己基、十六基甘油、龍腦、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油基)石膽酸、O3-(油基)膽烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩 )與肽接合物(例如，觸足肽(antennapedia peptide)、Tat肽)、烷化劑、磷酸鹽、胺基、巰基、PEG(例如，PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代之烷基、標記放射性之標記物、酶、半抗原(例如，生物素)、轉運/吸收促進劑(例如，阿斯匹靈、維生素E、葉酸)、合成核糖核酸酶(例如，咪唑、雙咪唑、組織胺、咪唑簇集物、吖啶-咪唑接合物、四氮雜大環之Eu3+複合體)、二硝基苯基、HRP以及AP。
配體可為蛋白質(例如，醣蛋白)或肽(例如，對輔配體具有特異親和性之分子)或抗體(例如，結合特定細胞類型(如：肝細胞)之抗體)。配體亦可包括激素與激素受體。其亦可包括非肽物質，諸如，脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔因子、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡萄糖胺多價甘露糖或多價岩藻糖。配體可為例如，脂多醣、p38 MAP激酶之活化劑以及NF-κB之活化劑。
配體可為物質(例如，藥物)，其可藉由例如，破壞細胞之細胞骨架，例如，破壞細胞之微小管、微絲、及/或中間絲而促進細胞吸收siRNA劑。該藥物可為例如，紫杉酚(taxon)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、細胞鬆弛素(cytochalasin)、諾考達唑(nocodazole)、促進微絲聚合劑(japlakinolide)、微絲解聚劑(latrunculin A)、毒傘素(phalloidin)、紅海海綿抗菌素(swinholide A)、茚達諾辛(indanocine)或邁爾素(myoservin)。
在一些具體例中，配體為經標靶細胞(例如，肝細胞)攝取之部分，例如，維生素。例示性維生素包括維生素A、E以及K。其他例示性維生素包括B群維生素，例如，葉酸、B12、核黃素、生物素、吡哆醛或由標靶細胞(例如，肝細胞)攝取之其他維生素或營養素。亦包括HSA和低密度脂蛋白(LDL)。
在一些具體例中，附接本文中所述之siRNA之配體作用為藥物動力學調節劑(PK調節劑)。如本文中所用，「PK調節劑」是指藥物動力學調節劑。如本文中所用，PK調節劑包括親脂物、膽汁酸、類固醇、磷脂類似物、肽、蛋白質結合劑、PEG、維生素等。例示性PK調節劑包括但不限於：膽固醇、脂肪酸、膽酸、石膽酸、二烷基甘油酯、二醯基甘油酯、磷脂、鞘脂類、納普生(naproxen)、布洛芬(ibuprofen)、維生素E、生物素等。亦已知包含許多硫代磷酸酯鍵聯之寡核苷酸可結合血清蛋白，因此在骨架中包含許多硫代磷酸酯鍵聯之短寡核苷酸，例如，約5個鹼基、10個鹼基、15個鹼基或20個鹼基之寡核苷酸亦適用為本文中所述配體(例如，作為PK調節配體)的技術。此外，在本文中所述之具體例中，可結合血清組分(例如，血清蛋白)之適體亦適用為PK調節配體。
(i) 脂質接合物 . 在一些具體例中，配體或接合物為脂質或脂質系分子。脂質或脂質系分子可(a)提高接合物對降解之抗性，(b)提高靶向或轉運至標靶細胞或細胞膜，及/或(c)可用以調整與血清蛋白(例如，HSA)之結合性。此類脂質或脂質系分子可結合血清蛋白，例如，人類血清白蛋白(HSA)。HSA結合性配體可讓接合物分布在標靶組織，例如，身體之非腎臟標靶組織。例如，標靶組織可為肝臟，包括肝之實質細胞。其他可結合HSA之分子亦可作為配體使用。例如，可使用納普生或阿斯匹靈。
脂質系配體可用以抑制(例如，控制)接合物與標靶組織之結合性。例如，脂質或脂質系配體與HSA之結合性越強時，將越不容易靶向腎臟，因此越不容易從身體清除。與HSA之結合性較低之脂質或脂質系配體可用以將該接合物靶向腎臟。
在一些具體例中，脂質系配體結合HSA。脂質系配體可與HSA具有充分結合親和性，使得接合物將分布至非腎臟組織。在某些特別具體例中，HSA-配體結合為可逆的。
在一些具體例中，脂質系配體與HSA結合之親和性弱或完全沒有親和性，因此接合物將分布至腎臟。除了脂質系配體外，亦可改用或額外使用其他靶向腎臟細胞之部分。
(ii) 細胞滲透肽和製劑 . 在另一個態樣中，配體為細胞滲透劑，諸如，螺旋細胞滲透劑。在一些具體例中，製劑較佳為兩親性。例示性製劑為肽，諸如，tat或觸足肽。若製劑為肽，則其可經修飾，包括肽基擬似物、反轉異構體、非肽或偽肽鍵聯，及D-胺基酸之使用。在一些具體例中，螺旋劑較佳為α-螺旋劑。在某些具體例中，螺旋劑具有親脂相與疏脂相。
「細胞滲透肽」可以滲透細胞，例如，微生物細胞(諸如，細菌或真菌細胞)或哺乳動物細胞(諸如，人類細胞)。可滲透微生物細胞之肽可為例如，α-螺旋線性肽(例如，LL-37或Ceropin P1)、含有二硫鍵之肽(例如，α-防禦素(defensin)、β-防禦素或牛抗菌肽(bactenecin))，或僅包含一或兩個主要胺基酸之肽(例如，PR-39或吲哚抗胜肽(indolicidin))。
配體可為肽或肽擬似物。肽擬似物(本文中亦稱為寡肽擬似物)為能折疊成類似天然肽之限定三度空間結構之分子。在肽及肽擬似物附接siRNA劑時，可藉由增強細胞識別與吸收而影響RNAi之藥物動力學分布。肽或擬肽部分可為約5至50個胺基酸長，例如約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸長。
肽或肽擬似物可為例如，細胞滲透肽、陽離子性肽、兩親性肽或疏水性肽(例如，主要由Tyr、Trp或Phe所組成)。肽部分可為樹枝狀肽、限定肽或交聯肽。在另一種選擇中，肽部分可包括疏水性跨膜序列(MTS)。例示性含疏水性MTS之肽為RFGF，其具有胺基酸序列AAVALLPAVLLALLAP (SEQ ID NO：9)。含有疏水性MTS之RFGF類似物(例如，胺基酸序列AALLPVLLAAP (SEQ ID NO：10))亦可作為靶向部分。肽部分可為「遞送」肽，其可攜帶大型極性分子(包括肽、寡核苷酸以及蛋白質)穿越細胞膜。例如，業經發現來自HIV Tat蛋白質(GRKKRRQRRRPPQ (SEQ ID NO：11)與果蠅觸足(Drosophila Antennapedia)蛋白(RQIKIWFQNRRMKWK (SEQ ID NO：12)之序列具有能作用為遞送肽之功能。肽或肽擬似物可由DNA之隨機序列所編碼，諸如，從噬菌體展示庫或一珠粒一化合物(one-bead-one-compound(OBOC))組合庫(Lam et al., Nature 1991, 354:82-84)識別之肽。
細胞滲透肽亦可包括核定位訊號(NLS)。例如，細胞滲透肽可為二部組合之兩親性肽(諸如，MPG)，其係衍生自HIV-1 gp41之融合肽結構域與SV40大型T抗原之NLS(Simeoni et al., Nucl. Acids Res. 1993, 31:2717-24)。
(iii) 碳水化合物接合物.在一些具體例中，本文中所述之siRNA寡核苷酸進一步包含碳水化合物接合物。碳水化合物接合物可能有利於在活體內遞送核酸，且其組成物適合活體內之醫療用途。如本文中所用，「碳水化合物」是指其本身即為由一或多個具有至少6個碳原子(其可為線性、分支或環狀)與鍵結各碳原子之氧、氮或硫原子之單醣單元所組成碳水化合物之化合物；或具有由一或多個各自具有至少六個碳原子(其可為線性、分支或環狀)與鍵結各碳原子之氧、氮或硫原子之單醣單元所組成之碳水化合物作為其一部分之化合物。代表性碳水化合物包括糖類(單醣、雙醣、三醣與含有約4至9個單醣單元之寡醣類)與多醣類(諸如，澱粉、肝醣、纖維素以及多醣膠質)。特定單醣包括C5與更多碳(在一些具體例中，C5-C8)之糖類；雙醣與三醣包括具有二或三個單醣單元(在一些具體例中，C5-C8)之糖類。
在一些具體例中，碳水化合物接合物係選自由下列各者所組成群組： 。
用於本文中所述之具體例之另一種代表性碳水化合物接合物包括 (式XXII)，其中當X或Y中之一者為寡核苷酸時，另一者為氫。
在一些具體例中，碳水化合物接合物進一步包含另外的配體，諸如，但不限於，PK調節劑、胞內體溶解配體或細胞滲透肽。
(iv) 連接子.在一些具體例中，本文中所述之接合物可使用各種可裂解或不可裂解之連接子附接siRNA寡核苷酸。
術語「連接子」或「連接基」表示連接化合物之兩個部分之有機部分。連接子通常包含直接鍵或原子(諸如，氧或硫)、單元(諸如，NR8、C(O)、C(O)NH、SO、SO2、SO2NH或原子鏈)，諸如但不限於經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環基烷基、雜環基烯基、雜環基炔基、芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、環烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環基烷基、烷基雜環基烯基、烷基雜環基炔基、烯基雜環基烷基、烯基雜環基烯基、烯基雜環基炔基、炔基雜環基烷基、炔基雜環基烯基、炔基雜環基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基以及炔基雜芳基(其中一或多個亞甲基可穿插(interrupted)或末端為O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O))、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、或經取代或未經取代之雜環；其中R8為氫、醯基、脂族或經取代之脂族。在某些具體例中，連接子為1至24個原子之間、4至24個原子之間、6至18個原子之間、8至18個原子之間或8至16個原子之間。
可裂解連接基為在細胞外具有充分穩定性，但當進入標靶細胞內時即裂解以釋放被連接子接在一起之兩個部分。在某些具體例中，可裂解之連接基在標靶細胞中或在第一參考條件(其可為，例如，選擇以模擬或代表細胞內條件)下比在對象之血液中或在第二參考條件(其可為，例如，選擇以模擬或代表血液或血清中之條件)下裂解快至少10倍或至少100倍。
可裂解連接基易受到裂解劑之作用，例如，pH、氧化還原電位或降解性分子之存在。通常，裂解劑於細胞內部之更常見或含量或活性水平高於其在血清或血液中。此類降解劑之實例包括針對特定受質選擇或沒有受質專一性之氧化還原劑包括，例如，存在於細胞中之氧化性或還原性酶或還原劑(諸如，硫醇)，該等氧化還原劑可藉由還原作用而降解氧化還原性可裂解連接基；酯酶；胞內體或可產生酸性環境之製劑，例如，彼等造成pH 5或更低之製劑；可水解或降解酸可裂解連接基之酶，其係藉由作用為一般酸類、肽酶(其可為有受質專一的)以及磷酸酯酶。可裂解連接基(諸如，二硫鍵)可對pH敏感。人類血清之pH為7.4，而平均細胞內pH稍低，在約7.1至7.3之範圍內。胞內體具有在5.5至6.0之範圍內之較酸的pH，而溶菌酶具有在5.0左右之甚至更酸的pH。一些連接子將具有在特定pH裂解之可裂解連接基，從而從細胞內之配體釋放陽離子性脂質或進入所欲之細胞區室內。
連接子可包括可被特定酶裂解之可裂解連接基。導入連接子之可裂解連接基之類型可取決於欲靶向之細胞。例如，靶向肝之配體可通過包括酯基之連接子連接陽離子性脂質。肝細胞富含酯酶，因此連接子在肝細胞中之裂解效率高於在沒有富含酯酶之細胞類型中之效率。其他富含酯酶之細胞類型包括肺、腎皮質與睪丸之細胞。
當靶向富含肽酶之細胞類型(諸如，肝細胞與滑膜細胞)時，可使用包含肽鍵之連接子。
通常，可藉由測試降解劑裂解候選連接基之能力(或條件)而評估該候選之可裂解連接基之合適性。可亦期望測試候選之可裂解連接基於血液中或當與其他非標靶組織接觸時抗拒裂解之能力。因此，可決定第一與第二條件之間對裂解作用之相對敏感性，其中所選之第一條件係其於標靶細胞中之裂解指標，而所選之第二條件係其於其他組織或生物液體(例如，血液或血清)中之裂解指標。該評估可於無細胞系統、細胞、細胞培養物、器官或組織培養物或在完整動物中進行。其適用於在無細胞或培養條件下進行初次評估，並在完整動物中進一步評估而確認。在某些具體例中，有用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)之裂解比在血液或血清(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)快至少2、至少4、至少10或至少100倍。
一類可裂解連接基為氧化還原可裂解連接基，其可在還原或氧化時裂解。還原可裂解連接基之實例為二硫連接基(-S-S-)。可參見本文中所述之方法來決定候選之可裂解連接基是否為合適之「還原可裂解連接基」，或例如，是否適合與特定RNAi部分與特定靶向劑使用。例如，可藉由與二硫蘇糖醇(DTT)或其他還原劑培養，使用發明所屬技術領域中已知的擬似細胞(例如，標靶細胞)中所觀察到之裂解速率之試劑來評估候選物。該等候選物亦可在選擇擬似血液或血清之條件下評估。在一些具體例中，候選化合物在血液中至多裂解約10%。在某些具體例中，有用之候選化合物在細胞(或在選擇擬似細胞內條件之活體外條件下)裂解比在血液(或在選擇擬似細胞外條件之活體外條件下)快至少2、至少4、至少10或至少100倍。候選化合物之裂解速率可採用標準酶動力學分析法，在選擇擬似細胞內介質條件下測定，並與選擇擬似細胞外介質之條件下之結果比較。
磷酸酯系可裂解連接基係被降解或水解磷酸酯基之製劑裂解。於細胞中裂解磷酸酯之製劑之實例為酶，諸如，細胞中之磷酸酯酶。磷酸酯系連接基之實例為-O-P(O)(ORk)-O-、-O-P(S)(ORk)-O-、-O-P(S)(SRk)-O-、 -S-P(O)(ORk)-O-、-O-P(O)(ORk)-S-、-S-P(O)(ORk)-S-、 -O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(ORk)-O-、-O-P(O)(Rk)-O-、 -O-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-O-、-S-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-S-、-O-P(S)(Rk)-S-。在某些具體例中，磷酸酯系連接基係選自：-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-以及-O-P(S)(H)-S-。在特別具體例中，磷酸酯連接基為-O-P(O)(OH)-O-。此等候選物可使用類似上述之方法評估。
酸可裂解連接基為可在酸性條件下裂解之連接基。在一些具體例中，酸可裂解連接基在pH約6.5或更低(例如，約6.0、5.5、5.0或更低)之酸性環境下裂解，或被如同一般酸之作用之製劑(諸如，酶)。在細胞中，特定低pH細胞器(諸如，胞內體與溶菌酶)可提供作為酸可裂解連接基之裂解環境。酸可裂解連接基之實例包括但不限於腙類、酯類以及胺基酸之酯類。酸可裂解基團可具有通式-C=N-、C(O)O，或-OC(O)。在一些具體例中，附接酯之氧(烷氧基)之碳為芳基、經取代之烷基或三級烷基(諸如，二甲基戊基或三級丁基)。此等候選物可採用類似彼等上述方法評估。
酯系可裂解連接基係被細胞中之酶(諸如，酯酶與醯胺酶)裂解。酯系可裂解連接基之實例包括但不限於伸烷基、伸烯基與伸炔基之酯類。可裂解之酯連接基具有通式-C(O)O-或-OC(O)-。此等候選物可採用類似彼等上述方法評估。
肽系可裂解連接基係被細胞中酶(諸如，肽酶與蛋白酶)裂解。肽系可裂解連接基為在胺基酸之間形成以產生寡肽(例如，二肽、三肽等)與多肽之肽鍵。肽系可裂解連接基不包括醯胺基(-C(O)NH-)。醯胺基可在任何伸烷基、伸烯基或伸炔基之間形成。肽鍵為在胺基酸之間形成以產生肽與蛋白質之醯胺鍵的特別類型。肽系裂解基團通常限於在胺基酸之間形成以產生肽與蛋白質，且不包括整個醯胺官能基之肽鍵(亦即，醯胺鍵)。肽系可裂解連接基具有通式-NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-，其中RA與RB為兩個相鄰的胺基酸之R基團。此等候選物可採用彼等類似上述者評估。
代表性具有連接子之碳水化合物接合物包括但不限於： 其中當X或Y中之一者寡核苷酸時，另一者為氫。
在本文中所述之組成物和方法之某些具體例中，配體係通過二價或三價分支連接子附接之一或多種「GalNAc」(N-乙醯基半乳糖胺)衍生物。例如，在一些具體例中，siRNA與GalNAc配體接合，如下圖所示： 其中X為O或S。在此等具體例中之一些者中，X為O。
在一些具體例中，聯合療法包括與選自由式(XXXI)至(XXXIV)中任一者所示之結構所組成群組之二價或三價分支連接子接合之siRNA： 其中： q2A、q2B、q3A、q3B、q4A、q4B、q5A、q5B以及q5C每次出現時獨立地表示0至20，以及其中重複單元可為相同或不同； P 2A、P 2B、P 3A、P 3B、P 4A、P 4B、P 5A、P 5B、P 5C、T 2A、T 2B、T 3A、T 3B、T 4A、T 4B、T 4A、T 5B以及T 5C每次出現時各自獨立地為不存在、CO、NH、O、S、OC(O)、NHC(O)、CH 2、CH 2NH或CH 2O； Q 2A、Q 2B、Q 3A、Q 3B、Q 4A、Q 4B、Q 5A、Q 5B以及Q 5C每次出現時獨立地為不存在、伸烷基或經取代之伸烷基(其中一或多個亞甲基可被O、S、S(O)、SO 2、N(R N)、C(R’)=C(R”)、C≡C或C(O)中之一或多者插入或終止)； R 2A、R 2B、R 3A、R 3B、R 4A、R 4B、R 5A、R 5B以及R 5C每次出現時各自獨立地為不存在、NH、O、S、CH 2、C(O)O、C(O)NH、NHCH(R a)C(O)、-C(O)-CH(R a)-NH-、CO、CH=N-O、 、 或雜環基； L 2A、L 2B、L 3A、L 3B、L 4A、L 4B、L 5A、L 5B以及L 5C表示配體；亦即，每次出現時各自獨立地為單醣(諸如，GalNAc)、雙醣、三醣、四醣、寡醣或多醣；以及R a為H或胺基酸側鏈。三價接合GalNAc衍生物特別有用於與siRNA劑使用來抑制標靶基因表現，諸如，彼等具式(XXXV)者： 其中L 5A、L 5B以及L 5C表示單醣，諸如，GalNAc衍生物。
接合GalNAc衍生物之合適二價與三價之分支連接基之實例包括但不限於如上述式I、VI、X、IX、與XII之結構。
教示RNA接合物之製備的代表性美國專利包括但不限於美國專利號4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717,5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241；5,391,723；5,416,203, 5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,599,923；5,599,928以及5,688,941；6,294,664；6,320,017；6,576,752；6,783,931；6,900,297；以及7,037,646；其中各者係藉由引用方式納入本文中以獲取與製備此類修飾之方法相關的教導。
某些情況下，siRNA之RNA可藉由非配體基團修飾。許多非配體分子已與siRNA接合，以增強siRNA之活性、細胞分布或細胞攝取，且進行此等接合之程序可從科學文獻中取得。此等非配體部分包括脂質部分，諸如，膽固醇(Kubo T. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 2007, 365(1):54-61; Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989, 86:6553)、膽酸(Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1994, 4:1053)、硫醚(例如，己基-S-三苯甲基硫醇)(Manoharan et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 1992, 660:306；Manoharan et al., Bioorg. Med. Chem. Let. 1993, 3:2765)、硫代膽固醇(Oberhauser et al., Nucl. Acids Res. 1992, 20:533)、脂族鏈(例如，十二烷二醇或十一基)(Saison-Behmoaras et al., EMBO J. 1991, 10:111; Kabanov et al., FEBS Lett. 1990, 259:327; Svinarchuk et al., Biochimie 1993, 75:49)、磷脂(例如，二-十六基-消旋性-甘油或1,2-二-O-十六基-消旋性-甘油基-3-H-膦酸三乙基銨(Manoharan et al., Tetrahedron Lett. 1995, 36:3651; Shea et al., Nucl. Acids Res. 1990, 18:3777)、聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al., Nucleosides & Nucleotides 1995, 14:969)或金剛烷乙酸(Manoharan et al., Tetrahedron Lett. 1995, 36:3651)、棕櫚基部分(Mishra et al., Biochim. Biophys. Acta 1995, 1264:229)或十八胺或己基胺基-羰基-氧膽固醇部分(Crooke et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996, 277: 923)。
典型接合規程(protocol)涉及合成在序列之一或多個位置帶有胺基連接子之RNA。胺基接著使用適當偶合或活化試劑，與接合之分子反應。接合反應可在RNA仍結合在固態支撐體時進行或可在裂解RNA後，在溶液相中進行。通常以HPLC純化RNA接合物以產生純接合物。 b. 醫藥組成物和 siRNA 之遞送
在一些具體例中，提供含有本文中所述之siRNA和醫藥上可接受之載劑或賦形劑之醫藥組成物。含有siRNA之醫藥組成物可用於治療HBV感染。此類醫藥組成物通常係基於遞送模式而調配。例如，可調配組成物以用於經由腸胃外遞送，例如，藉由皮下(SC)遞送而進行全身投予。
「醫藥上可接受之載劑」或「賦形劑」為醫藥上可接受之溶劑、懸浮劑或任何其他用於將一或多種製劑(例如，核酸)遞送至動物之藥理學惰性媒劑。賦形劑可為液體或固體，並且根據計劃之投予方式而選擇，以便當製劑(例如，核酸)與給定之醫藥組成物其他組分組合時，提供所需的體積、稠度等。典型的醫藥上可接受之載劑或賦形劑包括但不限於黏合劑(例如，預膠化玉米澱粉、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如，乳糖和其他糖、微晶纖維素、果膠、明膠、硫酸鈣、乙基纖維素、聚丙烯酸酯、磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石、二氧化矽、膠體二氧化矽、硬脂酸、金屬硬脂酸鹽、氫化植物油、玉米澱粉、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉)；崩解劑(例如，澱粉、乙醇酸澱粉鈉)；以及潤濕劑(例如，十二基硫酸鈉)。
適合非腸胃外投予且不與核酸產生有害反應的醫藥上可接受之有機或無機賦形劑亦可用於調配siRNA組成物。用於非腸胃外遞送之調配物之合適的醫藥上可接受之載劑包括但不限於水、鹽溶液、醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、直鏈澱粉、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等。
用於核酸之局部投予之製劑可包括無菌和非無菌水溶液、在常見溶劑(諸如，醇)中之非水溶液或液體或固體油基質中之核酸溶液。溶液亦可含有緩衝劑、稀釋劑以及其他合適的添加劑。可使用適合於非腸胃外投予且不與核酸產生有害反應的醫藥上可接受之有機或無機賦形劑。
在一些具體例中，本文中所述之醫藥組成物和製劑之投予可為局部的(例如，藉由透皮貼劑)、肺部的(例如，藉由吸入或吹入粉末或氣霧劑，包括藉由噴霧器)；氣管內；鼻內；表皮和透皮；經口；或腸胃外。腸胃外投予包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內以及肌內注射或輸注；皮下投予(例如，經由植入裝置)；或顱內投予(例如，腦實質內、脊髓內或心室內投予)。
在一些具體例中，醫藥組成物包含在水中調配之用於皮下注射的siRNA(例如，SIRNA01)無菌溶液。在一些具體例中，醫藥組成物包含以200 mg/mL之游離酸濃度在用於皮下注射之水中調配之SIRNA01無菌溶液。
在一些具體例中，含有本文中所述之siRNA之醫藥組成物以足以抑制HBV基因表現之劑量投予。在一些具體例中，siRNA之劑量為受體(recipient)之每天每公斤體重為0.001至200.0毫克之範圍內，或在每天每公斤體重為1至50毫克之範圍內。例如，可以每單劑0.01 mg/kg、0.05 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、2 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg或50 mg/kg投予siRNA。醫藥組成物可每日投予一次，或者可全天以適當的間隔作為二、三或更多個次劑量投予，或者甚至通過控制釋放型調配物使用連續輸注或遞送。在那情況下，各次劑量中所含的siRNA必須相應較小，才能達成每日總劑量。劑量單位亦可混配(compounded)以在幾天內遞送，例如，使用在幾天的期間內提供siRNA的持續釋放之傳統持續釋放型調配物。持續釋放製劑是發明所屬技術領域中眾所周知的，並且特別有用於在特定位點遞送藥劑，例如可以與本文描述的技術的藥劑一起使用。在此類具體例中，劑量單位包含相應倍數的每日劑量。
在一些具體例中，包含靶向本文中所述之HBV mRNA之siRNA (例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為0.8 mg/kg、1.7 mg/kg、3.3 mg/kg、6.7 mg/kg或15 mg/kg之siRNA。
在一些具體例中，包含本文中所述之包含siRNA(例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為20 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg、250 mg、300 mg、350 mg、400 mg、450 mg、500 mg、550 mg、600 mg、650 mg、700 mg、750 mg、800 mg、850 mg或900 mg的siRNA。在一些具體例中，包含本文中所述之siRNA(例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為20 mg至900 mg的siRNA。在一些具體例中，包含本文中所述之siRNA(例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為100 mg至300 mg的siRNA。
在一些具體例中，包含本文中所述之包含siRNA(例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為20 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg、250 mg、300 mg、400 mg或450 mg的siRNA。
在一些具體例中，包含本文中所述之siRNA(例如，SIRNA01)之醫藥組成物含有劑量為200 mg的siRNA。 III. 抗 HBV 抗體
本揭示內容亦提供用於治療HBV或HBV相關疾病之聯合療法之抗HBV抗體。 a. 與 HBV 蛋白結合之抗體
在一些具體例中，聯合療法之抗HBV抗體或其抗原結合片段結合HBsAg之抗原環區。B型肝炎病毒之外膜含有三種「HBV外膜蛋白」(又稱為「HBsAg」、「B型肝炎表面抗原」)：S蛋白(為「小」，亦稱為S-HBsAg)、M蛋白(代表「中」，亦稱為M-HBsAg)以及L蛋白(代表「大」，亦稱為L-HBsAg)。S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg共享相同的C端末端(extremity)(亦稱為「S結構域」，226個胺基酸)，其對應於S蛋白(S-HBsAg)，並涉及病毒之組裝和感染性。S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg在內質網(ER)中合成、組裝，並且以粒子形式通過高基體分泌。S結構域包含四個預測之跨膜(TM)結構域，由此S結構域之N端和C端均暴露於管腔。跨膜結構域 TM1和TM2 皆為共轉譯蛋白嵌入ER膜中所必需的，並且跨膜結構域 TM3和TM4位於S結構域之C端之三分之一。HBsAg之「抗原環區」位於HBsAg之S結構域之預測之TM3和TM4跨膜結構域之間，由此抗原環區包含S結構域之胺基酸101至172(Salisse J and Sureau C, Journal of Virology 2009, 83:9321-8)。感染性之重要決定因素在於HBV外膜蛋白之抗原環區。特別地，HBsAg之119和125之間的殘基含有CXXC基序，該基序已顯示為HBV感染性所需的最重要序列(Jaoude GA and Sureau C, Journal of Virology 2005, 79:10460-6)。
如本文中所用，HbsAg之S結構域是指如SEQ ID NO：13(如下所示)所示之胺基酸序列或其天然或人工序列變體。 (SEQ ID NO：13；胺基酸101至172用下劃線顯示)
例如，表述「S結構域之胺基酸101至172」是指根據SEQ ID NO：13之多肽的位置101至172之胺基酸殘基。然而，發明所屬技術領域中的技術人員將理解突變或變異(包括但不限於取代、刪除及/或添加，例如，本文中所述之不同基因型的HBsAg或不同HBsAg突變體)可天然存在於HBsAg之S結構域之胺基酸序列中或人工導入HBsAg之S結構域之胺基酸序列中，而不影響其生物學性質。因此，術語「HBsAg之S結構域」包含所有此類多肽，例如，包括根據SEQ ID NO：13之多肽及其天然或人工突變體。另外，當本文中所述之HBsAg之S結構域的序列片段(例如，HBsAg之S結構域之胺基酸101至172或胺基酸120至130)時，彼等不僅包括SEQ ID NO：13之相應序列片段，還有其天然或人工突變體之相應序列片段。例如，表述「HBsAg之S結構域之位置101至172之胺基酸殘基」包括SEQ ID NO：13之位置101至172之胺基酸殘基及其突變體(天然或人工突變體)的相應片段。
如本文中所用，表述「相應序列片段」或「相應片段」是指當對序列進行最佳化排比時(亦即，對序列進行排比以獲得最高同一性百分比)時，位於序列之相同位置之片段。M蛋白(M-HBsAg)對應於由55個胺基酸之N端結構域延伸之S蛋白(稱為「pre-S2」)。L蛋白(L-HBsAg)對應於由108個胺基酸之N端結構域延伸之M蛋白(稱為「pre-S1」(基因型D)。L蛋白之pre-S1和pre-S2結構域可存在於病毒粒子之內表面(ER之細胞質側)以在病毒組裝中發揮關鍵作用，或亦可存在於外表面(ER之管腔側)以可用於與標靶細胞交互作用且為病毒感染性所必需的。此外，HBV表面蛋白(HBsAg)不僅導入病毒粒子外膜中，還自發地從ER-高基體中間區室膜出芽體(bud)以形成空的且藉由分泌而從細胞中釋放出來之「次病毒粒子」(SVP)。
由於所有三種HBV外膜蛋白S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg均包含S結構域，所有三種HBV外膜蛋白S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg 亦包含「抗原環區」。因此，結合HBsAg之抗原環區的抗體或其抗原結合片段結合所有三種HBV外膜蛋白：S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg。
此外，在一些具體例中，聯合療法之抗HBV抗體或其抗原結合片段中和B型肝炎病毒之感染。換句話說，抗體或其抗原結合片段可降低B型肝炎病毒之病毒感染性。在一些具體例中，聯合療法之抗HBV抗體或其抗原結合片段中和D型肝炎病毒之感染。換句話說，抗體或其抗原結合片段可降低D型肝炎病毒之病毒感染性(參見後文對D型肝炎病毒作為B型肝炎病毒之專屬衛星(obligate satellite)之進一步解釋)。
為了在實驗室中研究和定量病毒感染性(或「中和」)，發明所屬技術領域中的技術人員瞭解各種標準「中和測定法」。對於中和測定法，動物病毒通常在細胞及/或細胞系中繁殖。在本揭示內容之上下文中，對於中和測定法，可在欲測試之抗體存在(或不存在)的情況下，將培養之細胞與固定量的HBV一起培養。對於讀出，可使用分泌到細胞培養物上清液中之B型肝炎表面抗原(HBsAg)或B型肝炎e抗原(HBeAg)之水平及/或可評估HBcAg染色。在HBV中和測定法之一個具體例中，將培養之細胞(例如，HepaRG細胞，特別是分化之HepaRG細胞)在存在或不存在欲測試之抗體的情況下，與固定量的HBV一起培養，例如，於37℃下培養16小時。可在培養基(例如，補充有4% PEG 8000)中進行培養。培養後，可洗滌細胞並進一步培養。為了測量病毒感染性，可藉由酵素結合免疫吸附測定法(ELISA)而測定分泌到培養物上清液中之B型肝炎表面抗原(HBsAg)和B型肝炎e抗原(HBeAg)之水平(例如，從感染後第7天到第11天)。此外，HBcAg 染色可於免疫螢光測定法中評估。
在一些具體例中，抗體和抗原結合片段具有高中和效力。50%中和B型肝炎病毒(HBV)所需的本揭示內容之抗體的濃度為例如約10 pg/ml或更低。在某些具體例中，HBV之50%中和所需的本揭示內容抗體的濃度為約5 pg/ml、約1 pg/ml或約750 ng/ml。在某些具體例中，HBV之50%中和所需的本揭示內容抗體的濃度為500 ng/ml或更低，例如，450、400、350、300、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60或約50 ng/ml或更少。這表示僅需要低濃度的抗體即可達成HBV之50%中和。可使用發明所屬技術領域中的技術人員已知的標準測定法來測量特異性和效力。
在一些具體例中，作為聯合療法之組分之抗HBV抗體可用於預防及/或治療B型肝炎或B型肝炎相關疾病。
在一些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段促進HBsAg和HBV之清除。特別地，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段可促進HBV和B型肝炎病毒之次病毒粒子(SVP)兩者之清除。可藉由測量血液樣本(例如來自B型肝炎患者)中之HBsAg水平而評估HBsAg或次病毒粒子之清除。類似地，可藉由測量血液樣本(例如，來自B型肝炎患者)中之HBV水平而評估HBV之清除。
在感染HBV之患者之血清中，除了感染性粒子(HBV)之外，通常還存在過量(通常為1,000至100,000倍)的僅由以相對較小的球體和可變長度的細絲之形式的HBV外膜蛋白(HBsAg)所組成之空次病毒粒子(SVP)。次病毒粒子顯示強烈地增強HBV之細胞內病毒複製和基因表現(Bruns M et al., J Virol 1998, 72(2):1462-8)。這在含有HBV之血清之感染性的背景下亦為重要的，因為感染性不僅取決於病毒的數量而且還取決於SVP的數量(Bruns等人，1998，同上)。此外，過量的次病毒粒子可藉由吸收中和抗體而作為誘餌，從而延遲感染之清除。通常，B型肝炎表面抗原(HBsAg)消失之達成被認為是理想的治療終點，且為治癒慢性B型肝炎(CHB)之最接近結果。因此，在一些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段促進HBsAg之清除，並且特別是B型肝炎病毒之次病毒粒子和HBV之清除，能夠改善B型肝炎的治療(特別是在慢性B型肝炎的背景下)。從而，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段可有效中和HBV，因為較少的抗體被充當誘餌之SVP吸收。另外，在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段促進B型肝炎病毒之次病毒粒子的清除，且降低血清中HBV之感染性。
根據基因體序列，HBV可分化為多種基因型。迄今為止，業經定義了HBV基因體的八種眾所周知的基因型(A至H)。此外，已識別兩種新的基因型I和J (Sunbul M, World J Gastroenterol 2014, 20(18):5427-34)。已知基因型會影響疾病的進展，並且已確定基因型之差異對抗病毒治療反應的差異。例如，基因型A具有慢性傾向，而基因型C則經常遇到病毒突變。基因型D中之慢性和突變頻率皆為很常見。此外，HBV之基因型在世界各地的分布存在差異(Sunbul，2014，同上)。在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合HBsAg基因型A、B、C、D、E、F、G、H、I以及J中之至少6種、至少8種或全部10種。在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合HBsAg基因型A、B、C、D、E、F、G、H、I以及J中之1、2、3、4、5、6、7、8、9或10種。HBsAg之不同基因型之實例包括下列者：GenBank登錄號J02203(HBV-D, ayw3)、GenBank登錄號FJ899792.1(HBV-D, adw2)、GenBank登錄號AM282986(HBV-A)、GenBank登錄號D23678(HBV-B1 Japan)、GenBank登錄號AB1 1 7758(HBV-C1 Cambodia)、GenBank登錄號AB205192 (HBV-E Ghana)、GenBank登錄號X69798(HBV-F4 Brazil)、GenBank登錄號AF160501(HBV-G USA)、GenBank登錄號AY090454(HBV-H Nicaragua)、GenBank登錄號AF241409(HBV-I Vietnam)以及GenBank登錄號AB486012 (HBV-J Borneo)。不同基因型之HBsAg之S結構域之抗原環區的胺基酸序列係顯示於表2 (SEQ ID NO：14至42)。 表2. 各種HBV基因型之抗原環序列。
在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18種具有在抗原環區的突變之HBsAg突變體：HBsAg Y100C/P120T、HBsAg P120T、HBsAg P120T/S143L、HBsAg C121 S、HBsAg R122D、HBsAg R122I、HBsAg T123N、HBsAg Q129H、HBsAg Q129L、HBsAg M133H、HBsAg M133L、HBsAg M133T、HBsAg K141 E、HBsAg P142S、HBsAg S143K、HBsAg D144A、HBsAg G145R以及HBsAg N146A。此等突變體係基於HBsAg基因型D之S結構域(SEQ ID NO：43)的天然存在的突變體，Genbank登錄號 FJ899792(其中(多個)突變之胺基酸殘基在名稱中標明)。 (抗原環區(亦即，胺基酸101至172)用下劃線顯示)。
在特別具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合至少12種、至少15種或全部18種具有在抗原環區中之突變之感染性HBsAg突變體：HBsAg Y100C/P120T、HBsAg P120T、HBsAg P120T/S143L、HBsAg C121S、HBsAg R122D、HBsAg R122I、HBsAg T123N、HBsAg Q129H、HBsAg Q129L、HBsAg M133H、HBsAg M133L、HBsAg M133T、HBsAg K141E、HBsAg P142S、HBsAg S143K、HBsAg D144A、HBsAg G145R以及HBsAg N146A。
在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合包含HBsAg之抗原環區之至少一個、至少兩個、至少三個胺基酸或至少四個胺基酸之表位，其中該至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸係選自HBsAg之S結構域之胺基酸115至133、HBsAg之S結構域之胺基酸120至133或HBsAg S結構域之胺基酸120至130。值得注意的是，胺基酸之位置(例如，115至133、120至133、120至130)是指如上述之HBsAg之S結構域，其存在於所有三種HBV外膜蛋白S-HBsAg、M-HBsAg以及L-HBsAg。
在特定具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合HBsAg之抗原環區中的表位，由此該表位由位於選自由HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、胺基酸位置120至133或胺基酸位置120至130的位置之一或多個胺基酸所形成。
本文中在表位的背景下所用之術語「由…所形成」是指本揭示內容之抗體或其抗原結合片段所結合之表位可為線性的(連續的)或構形的(不連續)。線性或連續表位為抗體由其線性胺基酸序列或一級結構所識別之表位。相反地，構形表位具有特定的三維形狀和蛋白質結構。因此，若表位為線性表位並且包含位於選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133或胺基酸位置120之133的位置之超過一個胺基酸，則該表位所包含之胺基酸可位於一級結構之相鄰的位置(亦即，胺基酸序列中之連續胺基酸)。相反地，在構形表位(3D結構)的情況下，胺基酸序列通常形成3D結構作為表位，因此，形成表位之胺基酸(或表位「所包含」之胺基酸)可能或可能不位於一級結構之相鄰位置(亦即，可能或可能不為胺基酸序列中之連續胺基酸)。在某些具體例中，本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合之表位係僅由選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、胺基酸位置120至133或胺基酸位置120至130的位置之(多個)胺基酸所形成。在特別具體例中，不需要位於位置(其位於位置115至133、位置120至133或位置120至130之外之胺基酸)以形成本揭示內容之抗體其抗原結合片段所結合之(另外)表位。
在某些具體例中，本揭示內容之抗體或其抗原結合片段所結合之HBsAg之抗原環區中的表位係由位於選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、胺基酸位置120至133或胺基酸位置120至130的位置之二或更多個胺基酸所形成。在某些具體例中，本揭示內容之抗體或其抗原結合片段所結合之HBsAg之抗原環區中的表位係由位於選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、胺基酸位置120至133以及胺基酸位置120至130的位置之三或更多個胺基酸所形成。在一些具體例中，本揭示內容之抗體或其抗原結合片段所結合之HBsAg之抗原環區中的表位係由位於選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、胺基酸位置120至133以及胺基酸位置120至130的位置之四或更多個胺基酸所形成。因此，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段可結合選自HBsAg之S結構域之胺基酸位置115至133、HBsAg之S結構域之胺基酸位置120至133以及HBsAg之S結構域之胺基酸位置120至130之至少一個、至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸。在特別具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段結合包含HBsAg之抗原環區之至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸的表位，其中該至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸係選自HBsAg之S結構域之胺基酸120至133或胺基酸120至130，以及其中該至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸係位於相鄰的位置(亦即，胺基酸序列/一級結構中為連續的胺基酸)。
在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段所結合之表位為構形表位。因此，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段可結合包含HBsAg之抗原環區之至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸之表位，其中該至少兩個、至少三個或至少四個胺基酸係選自HBsAg之S結構域之胺基酸120至133或胺基酸120至130，以及其中至少兩個或至少三個或至少四個胺基酸不是位於(一級結構之)相鄰位置。
在某些特定具體例中，本揭示內容之抗體為雙特異性抗體，其具有針對HBsAg之第一特異性和刺激免疫效應細胞之第二特異性(例如，藉由靶向T細胞表面蛋白，諸如，例如，CD3蛋白胞外部分)。第二特異性可造成例如細胞毒性作用或疫苗作用。 b. Fc 部分
在一些具體例中，結合蛋白(例如，抗體或其抗原結合片段)包含Fc部分。在某些具體例中，Fc部分可衍生自人類來源，例如，衍生自人類IgGl、IgG2、IgG3及/或IgG4。在特定具體例中，抗體或抗原結合片段可包含衍生自人類IgG1之Fc部分。
如本文中所用，術語「Fc部分」是指包含或衍生自免疫球蛋白重鏈之一部分之序列，該部分起始於木瓜蛋白酶切割位點上游之鉸鏈區(例如，天然IgG中之殘基216(取重鏈恆定區之第一個殘基為114))，並且終止於免疫球蛋白重鏈之C端。因此，Fc部分可為完整的Fc部分或其一部分(例如，結構域)。在某些具體例中，完整的Fc部分包含鉸鏈結構域、CH2結構域以及CH3結構域(例如，EU胺基酸位置216至446)。有時Fc部分之末端(extreme)C端會存在一個額外的離胺酸殘基(K)，但通常會從成熟抗體中切割。Fc部分內之胺基酸位置已根據Kabat之EU編號系統進行編號(參見，例如，Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 1983 and 1987)。Fc部分之胺基酸位置亦可根據IMGT編號系統(包括C結構域之獨特編號和外顯子編號)和Kabat編號系統編號。
在一些具體例中，Fc部分包含下列之至少一者：鉸鏈(例如，上鉸鏈區、中鉸鏈區及/或下鉸鏈區)結構域、CH2結構域、CH3結構域或其變體、部分或片段。在一些具體例中，Fc部分至少包含鉸鏈結構域、CH2結構域或CH3結構域。在另外的具體例中，Fc部分為完整的Fc部分。人類IgG1同型之例示性Fc部分之胺基酸序列係提供於SEQ ID NO：60。Fc部分亦可包含相對於天然存在的Fc部分之一或多個胺基酸插入、刪除或取代。例如，鉸鏈結構域、CH2結構域或CH3結構域或其部分中之至少一者可經刪除。例如，Fc部分可包含下列者或由其所組成：(i)與CH2結構域(或其部分)融合之鉸鏈結構域(或其部分)，(ii)與CH3結構域(或其部分)融合之鉸鏈結構域(或其部分)，(iii)與CH3結構域(或其部分)融合之CH2結構域(或其部分)，(iv)鉸鏈結構域(或其部分)，(v)CH2結構域(或其部分)，或(vi)CH3結構域或其部分。
本揭示內容之Fc部分可經修飾，使得其胺基酸序列與天然存在的免疫球蛋白分子的完整Fc部分不同，同時保留(或增強)由天然存在的Fc部分賦予的至少一種所欲功能。此類功能包括，例如，Fc受體(FcR)結合、抗體半衰期調節(例如，藉由結合FcRn)、ADCC功能、蛋白A結合、蛋白G結合以及補體結合。業經於發明所屬技術領域中描述涉及此類功能之天然存在的Fc部分之部分(portion)。
例如，為了活化補體級聯，當(多個)免疫球蛋白分子附著抗原標靶時，C1q蛋白複合體可結合至少兩個IgG1分子或一個IgM分子(Ward ES and Ghetie V, Ther. Immunol. 1995, 277-94)。包含胺基酸殘基318至337之重鏈區涉及補體固定(Burton DR, Mol. Immunol. 1985, 22: 161-206)。Duncan AR和Winter G. (Nature 1988, 332:738-40)使用定點誘變，報告Glu318、Lys320以及Lys322形成C1q之結合位點。藉由含有此等殘基之短合成肽抑制補體介導之裂解的能力，而證明Glu318、Lys320以及Lys 322殘基在C1q結合中之角色。
例如，FcR結合可藉由(抗體之)Fc部分與Fc受體(FcR)之交互作用而介導，該等Fc受體是包括造血細胞之細胞上的特化細胞表面受體。Fc受體屬於免疫球蛋白超家族，且顯示會介導藉由免疫複合體之吞噬作用而移除經抗體塗佈之病原體以及經由抗體依賴性細胞介導之細胞毒性裂解紅血球和經相應抗體塗佈之各種其他細胞標靶(例如，腫瘤細胞)兩者(ADCC; Van de Winkel JG and Anderson CL, J. Leukoc. Biol. 1991, 49:511-24)。FcR係由其對免疫球蛋白類別之特異性來定義；IgG抗體之Fc受體被稱為FcγR，IgE之Fc受體被稱為FcεR，IgA之Fc受體被稱為FcαR等，以及新生兒之Fc受體被稱為FcRn。Fc受體結合係描述於，例如，Ravetch JV and Kinet JP, Annu. Rev. Immunol. 1991, 9:457-92；Capel PJ et al., Immunomethods 1994, 4:25-34；de Haas M et al., J Lab. Clin. Med. 1995, 126:330-41；以及Gessner JE et al., Ann. Hematol. 1998, 76:231-48。
天然IgG抗體(FcγR)之Fc結構域與受體之交聯觸發廣泛多種效應功能，包括吞噬作用、抗體依賴性細胞毒性、發炎介導物之釋放，以及免疫複合體之清除以及抗體產生之調節。本文中考慮提供受體交聯之Fc部分(例如，FcγR)。在人類中，已特性識別(characterized)三類 FcγR：(i)FcγRI (CD64)，其係以高親和力結合單體IgG，且在巨噬細胞、單核細胞、嗜中性球以及嗜酸性球上表現；(ii)FcγRII (CD32)，其係以中至低親和力結合複合之IgG，廣泛表現(特別是在白血球上)，被認為是抗體介導之免疫中的核心角色，以及可分為FcγRIIA、FcγRIIB以及FcγRIIC，該FcγRIIA、FcγRIIB以及FcγRIIC在免疫系統中發揮不同的功能，但與IgG-Fc之結合親和力同樣低，且此等受體的胞外結構域高度同源；(iii) FcγRIII (CD16)，其係以中至低親和力結合IgG，且已發現兩種形式：FcγRIIIA，其已在NK細胞、巨噬細胞、嗜酸性球以及一些單核細胞和T細胞上發現，且咸信會介導ADCC；以及FcγRIIIB，其係在嗜中性球上高度表現。
FcγRIIA存在於許多涉及殺傷之細胞(例如，巨噬細胞、單核細胞、嗜中性球)上，並且似乎能夠活化殺傷程序。FcγRIIB似乎在抑制程序中發揮作用，且存在於B細胞、巨噬細胞、肥大細胞以及嗜酸性球上。業經顯示所有FcγRIIB中之75%於肝臟中發現(Ganesan LP et al., Journal of Immunology 2012, 189:4981-8)。FcγRIIB在被稱為LSEC之肝竇內皮以及肝臟中的庫弗氏(Kupffer)細胞上大量表現，且LSEC為小型免疫複合體清除之主要位點(Ganesan等人，2012，同上)。
在一些具體例中，本文中揭露之抗體及其抗原結合片段包含用於結合FcγRIIb之Fc部分，特別是Fc區，諸如，例如，IgG型抗體。此外，可藉由導入突變S267E和L328F而工程改造Fc部分以增強FcγRIIB結合，如Chu SY et al. (Molecular Immunology, 2008, 45: 3926-33)所述。藉此，可增強免疫複合體之清除(Chu S et al., Am J Respir Crit, American Thoracic Society International Conference Abstracts 2014)。在一些具體例中，本揭示內容之抗體或其抗原結合片段包含具有突變S267E和L328F之工程改造之Fc部分，特別是如Chu SY等人所述(2008，同上)。
在B細胞上，FcγRIIB似乎起到抑制進一步免疫球蛋白產生和同型轉換(例如，IgE類別)之作用。在巨噬細胞上，FcγRIIB被認為可通過FcγRIIA介導抑制吞噬作用。在嗜酸性球和肥大細胞上，b型可能有助於通過IgE與其個別的受體結合而抑制此等細胞之活化。
關於FcγRI結合，E233至G236、P238、D265、N297、A327以及P329中之至少一種天然IgG中之修飾降低與FcγRI之結合。在位置233至236之IgG2殘基係經取代到相應位置IgG1和IgG4，使IgG1和IgG4與FcγRI之結合降低10 3倍，且消除人類單核細胞對抗體致敏之紅血球的反應(Armour KL et al., Eur. J. Immunol. 1999, 29:2613-2624)。
關於FcγRII結合，發現FcγRIIA之結合降低，例如，對於E233至G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、R292以及K414中之至少一者之IgG突變。
關於FcγRIII結合，發現與FcγRIIIA之結合降低，例如，對於E233至G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、S239、E269、E293、Y296、V303、A327、K338以及D376中之至少一者之突變。
人類IgGl上針對Fc受體之結合位點的定位(mapping)、上述突變位點以及用於測量與FcγRI和FcγRIIA之結合之方法係描述於Shields RL等人(J. Biol. Chem. 2001, 276:6591-6604)。
關於與FcγRII之結合，天然IgG Fc之兩個區域似乎涉及FcγRII和IgG之間的交互作用，亦即，(i)IgG Fc之下鉸鏈位點，特別是胺基酸殘基L、L、G以及G (234至237，EU編號)，以及(ii) IgG Fc之CH2結構域之相鄰的區域，特別是與下鉸鏈區相鄰的上CH2結構域中的環和股，例如，在P331之區域中(Wines BD et al., J. Immunol. 2000, 164:5313-8)。此外，FcγRI似乎結合IgG Fc上之相同位點，而FcRn和蛋白A結合IgG Fc上之不同位點(其似乎位於CH2-CH3介面處)(Wines BD等人，2000，同上)。
亦考慮增加本揭示內容之Fc部分與(亦即，一或多種)Fcγ受體之結合親和力的突變(例如，與不包含(多個)突變之參考Fc部分或抗體相比))。參見，例如，Delillo and Ravetch, Cell 2015, 161(5):1035-45和Ahmed et al., J. Struc. Biol. 2016, 194(1):78，其Fc突變和技術係藉由引用方式納入本文中。在任何本文中所揭露之具體例中，結合蛋白可包含Fc部分，該Fc部分包含選自G236A；S239D；A330L；以及I332E；或包含彼之組合；例如，S239D/I332E；S239D/A330L/I332E；G236A/S239D/I332E；G236A/A330L/I332E；以及G236A/S239D/A330L/I332E之突變。
在某些具體例中，Fc部分可包含涉及FcRn結合之Fc部分的至少一部分或由其所組成。在某些具體例中，Fc部分包含一或多種改善對FcRn之結合親和力之胺基酸修飾，並且在一些具體例中，從而延長包含Fc部分之分子之活體內半衰期(例如，與不包含(多種)修飾之參考Fc部分或抗體相比)。在某些具體例中，Fc部分包含或衍生自IgG Fc，並且半衰期延長突變包含下列之任一或多者：M428L；N434S；N434H；N434A；N434S；M252Y；S254T；T256E；T250Q；P257I；Q311I；D376V；T307A；以及E380A(EU編號)。在某些具體例中，半衰期延長突變包含M428L/N434S。在某些具體例中，半衰期延長突變包含M252Y/S254T/T256E。在某些具體例中，半衰期延長突變包含T250Q/M428L。在某些具體例中，半衰期延長突變包含P257I/Q311I。在某些具體例中，半衰期延長突變包含P257I/N434H。在某些具體例中，半衰期延長突變包含D376V/N434H。在某些具體例中，半衰期延長突變包含T307A/E380A/N434A。
在特別具體例中，結合蛋白包括包含下列取代突變之Fc部分：M428L/N434S和G236A/A330L/I332E。在某些具體例中，抗體或抗原結合片段包括包含下列取代突變之Fc部分：M428L/N434S和G236A/S239D/A330L/ I332E。
在特別具體例中，結合蛋白包括包含下列取代突變之Fc部分：G236A/A330L/I332E。在某些具體例中，抗體或抗原結合片段包括包含下列取代突變之Fc部分：G236A/S239D/A330L/I332E。
替代地或另外，本揭示內容之結合蛋白之Fc部分可包含發明所屬技術領域中已知的蛋白A結合所需的至少一部分；以及/或本揭示內容之抗體之Fc部分至少包含發明所屬技術領域中已知的蛋白G結合所需的Fc分子之一部分。在一些具體例中，保留之功能包含清除HBsAg和HBVg。因此，在某些具體例中，Fc部分包含發明所屬技術領域中已知的FcγR結合所需的至少一部分。如上述，Fc部分可因此至少包含(i)天然IgG Fc之下鉸鏈位點，特別是胺基酸殘基L、L、G以及G(234至237，EU編號)，以及(ii)天然IgG Fc之CH2結構域之相鄰的區域，特別是與下鉸鏈區相鄰的上CH2結構域中之環和股，例如，在P331之區域中，例如，在P331周圍之天然IgG Fc之上CH2結構域中的至少3、4、5、6、7、8、9或10個連續胺基酸之區域，例如，天然IgG Fc之胺基酸320和340(EU編號)之間。
在一些具體例中，根據本揭示內容之結合蛋白包含Fc區。如本文中所用，術語「Fc區」是指由抗體重鏈之二或更多個Fc部分所形成之免疫球蛋白之部分。例如，Fc區可為單體或「單鏈」Fc區(亦即，scFc區)。單鏈Fc區係由在單一多肽鏈內連接之Fc部分所組成(例如，在單一連續核酸序列中編碼)。例示性scFc區係揭露於WO 2008/143954A2中，並且藉由引用方式納入本文中。Fc區可為或包含二聚Fc區。「二聚Fc區」或「dcFc」是指由兩條個別的免疫球蛋白重鏈之Fc部分所形成之二聚體。二聚Fc區可為兩個相同Fc部分之同源二聚體(例如，天然存在的免疫球蛋白的Fc區)或兩個不同Fc部分之異源二聚體(例如，二聚Fc區之一個Fc單體包含至少一個在另一個Fc單體中不存在之胺基酸修飾(例如，取代、刪除、插入或化學修飾)，或者一個Fc單體與另一個相比可為截短的)。
目前所揭露之Fc部分可包含相同或不同類別及/或次類別之Fc序列或區域。例如，Fc部分可衍生自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4次類別之免疫球蛋白(例如，人類免疫球蛋白)，或衍生自其任何組合。在某些具體例中，Fc區之Fc部分屬於同一類別和次類別。然而，Fc區(或Fc區之一或多個Fc部分)亦可為嵌合的，由此嵌合Fc區可包含衍生自不同免疫球蛋白類別及/或次類別之Fc部分。例如，二聚體或單鏈Fc區之至少兩個Fc部分可來自不同的免疫球蛋白類別及/或次類別。在某些具體例中，二聚Fc區可包含來自二或更多種不同同型或次類別之序列；例如，SEEDbody(「股交換工程改造之結構域」)(參見 Davis et al., Protein Eng. Des. Sel. 2010, 23(4):195)。
另外或替代地，嵌合Fc區可包含一或多個嵌合Fc部分。例如，嵌合Fc區或部分可包含衍生自第一次類別之免疫球蛋白(例如，IgGl、IgG2或IgG3次類別)之一或多個部分，而Fc區或部分之其餘部分屬於不同次類別。例如，Fc多肽之Fc區或部分可包含衍生自第一次類別之免疫球蛋白(例如，IgGl、IgG2或IgG4次類別)之CH2及/或CH3結構域以及衍生自第二次類別之免疫球蛋白(例如，IgG3次類別)之鉸鏈區。例如，Fc區或部分可包含衍生自第一次類別之免疫球蛋白(例如，IgG4次類別)之鉸鏈及/或CH2結構域和衍生自第二次類別之免疫球蛋白(例如，IgGl、IgG2或IgG3次類別)之CH3結構域。例如，嵌合Fc區可包含來自第一次類別之免疫球蛋白(例如，IgG4次類別)之Fc部分(例如，完整的Fc部分)和來自第二次類別之免疫球蛋白(例如，IgG1、IgG2或IgG3次類別)之Fc部分。例如，Fc區或部分可包含來自IgG4免疫球蛋白之CH2結構域和來自IgG1免疫球蛋白之CH3結構域。例如，Fc區或部分可包含來自IgG4分子之CH1結構域和CH2結構域以及來自IgG1分子之CH3結構域。例如，Fc區或部分可包含來自特定抗體次類別之CH2結構域之一部分，例如，CH2結構域之EU位置292至340。例如，Fc區或部分可包含衍生自IgG4部分之CH2的位置292至340之胺基酸和衍生自IgGl部分之CH2之其餘部分(替代地，CH2之292至340可衍生自IgGl部分且 CH2之其餘部分係衍生自IgG4部分)。
此外，Fc區或部分可(另外或替代地)例如包含嵌合鉸鏈區。例如，嵌合鉸鏈可部分衍生自IgGl、IgG2或IgG4分子(例如，上和下中鉸鏈序列)，並且部分衍生自IgG3分子(例如，中鉸鏈序列)。在另一個實例中，Fc區或部分可包含部分衍生自IgG1分子且部分衍生自IgG4分子之嵌合鉸鏈。在另一個實例中，嵌合鉸鏈可包含來自IgG4分子之上和下鉸鏈結構域以及來自IgG1分子之中鉸鏈結構域。此類嵌合鉸鏈可例如藉由在IgG4鉸鏈區之中鉸鏈結構域之EU位置228導入脯胺酸取代(Ser228Pro)而製備。在一些其他具體例中，嵌合鉸鏈可包含來自IgG2抗體之EU位置233至236之胺基酸及/或Ser228Pro突變，其中該鉸鏈之剩餘胺基酸係來自IgG4抗體(例如，序列ESKYGPPCPPCPAPPVAGP (SEQ ID NO：61)之嵌合鉸鏈)。可用於根據本揭示內容之抗體之Fc部分的其他嵌合鉸鏈係描述於美國專利申請公開號US 2005/0163783 A1。
在一些具體例中，Fc部分或Fc區包含衍生自人類免疫球蛋白序列(例如，來自人類IgG分子之Fc區或Fc部分)之胺基酸序列或由衍生自人類免疫球蛋白序列之胺基酸序列或由其所組成。然而，多肽可包含來自另一種哺乳動物物種之一或多種胺基酸。例如，靈長類動物Fc部分或靈長類動物結合位點可包括主題多肽中。替代地，一或多種鼠胺基酸可存在於Fc部分或Fc區中。 c. HBC34 抗體
在某些具體例中，抗HBV抗體為HBC34或其工程改造之變體。HBC34為具有針對HBsAg之高中和活性之人類抗體。HBC34以高親和力(在pM範圍內)結合HBsAg的抗原環，識別所有10種HBV基因型和18種突變體，並以低化學計量結合球狀SVP。如免疫測定法所診斷測量，HBC34之活性為5000 IU/mg。作為比較，HBIG之活性為~1 IU/mg。
如本文中所提及，術語「HBC34抗體」和「HBC抗體」可包括野生型HBC34抗體或其工程改造之變體(例如，表3所述之HBC34和HBC34變體)，除非另有說明。
表3顯示HBC34及其工程改造之變體之CDR、重鏈可變區(V H)以及輕鏈可變區(V L)之胺基酸序列。亦顯示本揭示內容之例示性抗體之全長重鏈(HC)和輕鏈(LC)胺基酸序列。 表3. HBC34抗體之序列。
在某些具體例中，抗HBV抗體包含表3所列之一或多個胺基酸序列。在某些具體例中，根據本揭示內容之抗體或其抗原結合片段包含如表3所示之CDR序列、V H序列、V L序列、HC序列及/或LC序列具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少88%、至少90%、至少92%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%同一性之胺基酸序列。在任何目前所揭露之具體例中，抗體或抗原結合片段可包含表3所示之CDR、V H、V L、HC及/或LC序列。用於合成具有表3所示之序列之抗體的例示性方法，以及證明以AB01結合和中和之實驗數據係描述於國際申請公開號WO 2020/132091A2中，其方法和數據係藉由引用方式納入本文中。
在一些具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段包含：(i)分別根據SEQ ID NO：44、45或46以及47之CDRHl、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；(ii)分別根據SEQ ID NO：48、49或50以及51或52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
因此，在一些具體例中，CDRH1、CDRH2以及CDRH3係分別根據SEQ ID NO：44、45以及47。在一些具體例中，CDRH1、CDRH2以及CDRH3係分別根據SEQ ID NO：44、46以及47。在一些具體例中，CDRL1、CDRL2以及CDRL3係分別根據SEQ ID NO：48、49以及52。在一些具體例中，CDRL1、CDRL2以及CDRL3係分別根據SEQ ID NO：48、50以及52。
應將理解本揭示內容之抗體或抗原結合片段可包含根據SEQ ID NO：44至50以及52之CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列之任何組合。
在特別具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段包含：分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRHl、CDRH2和CDRH3胺基酸序列；以及分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
在某些具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段包含：(a)包含與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之胺基酸序列或由其所組成之輕鏈可變結構域(V L)；以及(b)包含與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之胺基酸序列或由其所組成之重鏈可變結構域(V H)。
在特別具體例中，本揭示內容之抗體或抗原結合片段包含(a)包含SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列或由其所組成之輕鏈，以及(b)包含SEQ ID NO：57所示之胺基酸序列或由其所組成之重鏈。 d. 醫藥組成物
在一些具體例中，提供聯合療法之抗體或其抗原結合片段作為醫藥組成物，其包括抗HBV抗體和視需要之醫藥上可接受之載劑。在一些具體例中，組成物可包含抗HBV抗體，其中該抗體可佔該組成物中的總蛋白質之至少50%重量(例如，60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多)。在此類組成物中，抗體可呈純化形式。
抗HBV抗體之醫藥組成物可包括抗微生物劑，特別是若以多劑量形式包裝。彼等可包含去污劑，例如，Tween(聚山梨醇酯)，諸如，Tween 80。當存在時，去污劑通常以低水平存在，例如，小於0.01%。組成物亦可包括鈉鹽(例如，氯化鈉)以維持張力。例如，在一些具體例中，醫藥組成物包含濃度為10±2mg/ml的NaCl。
此外，醫藥組成物可包含例如約15至30 mg/ml(例如，25 mg/ml)之糖醇(例如，甘露醇)或二醣(例如，蔗糖或海藻糖)，特別是若彼等為凍乾的，或者若彼等包含從凍乾材料復水之材料。用於凍乾之組成物之pH可在凍乾之前調節至5至8、或5.5至7之間或6.1左右。
本揭示內容之抗體組成物亦可包含一或多種免疫調節劑。在一些具體例中，一或多種免疫調節劑包括佐劑。
製備抗HBV抗體之醫藥組成物之方法可包括下列步驟：(i)製備抗體；以及(ii)將純化之抗體與一或多種醫藥上可接受之載劑混合。
在一些具體例中，包含本文中所述之抗HBV抗體(例如，AB01)之醫藥組成物含有劑量為100 mg、150 mg、200 mg、250 mg或300 mg的抗體。在一些具體例中，包含本文中所述之抗HBV抗體(例如，AB01)之醫藥組成物含有劑量為100 mg至300 mg的抗體。在一些具體例中，包含本文中所述之抗HBV抗體(例如，AB01)之醫藥組成物含有劑量為100 mg至200 mg的抗體。
在一些具體例中，包含本文中所述之抗HBV抗體(例如，AB01)之醫藥組成物含有劑量為200 mg的抗體。 IV. 使用聯合療法之治療方法
在一些具體例中，本揭示內容提供用於治療對象之HBV感染或HBV相關疾病之方法。
在一些具體例中，提供用於治療對象之HBV感染或HBV相關疾病之方法，其中該方法包含向該對象投予本文中所述之siRNA和抗體。在一些具體例中，向對象投予SIRNA01和AB01。
在一些具體例中，提供用於治療對象之HBV感染或HBV相關疾病之方法，其中該方法包含向該對象投予本文中所述之siRNA和抗體，以及亦向該對象投予核苷/核苷酸逆轉錄酶抑制劑。如本文中所用，「核苷/核苷酸逆轉錄酶抑制劑」或「核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑」(NRTI)是指DNA複製抑制劑，其結構上與核苷酸或核苷類似，並且藉由抑制HBV聚合酶的作用而特異性地抑制HBV cccDNA複製，以及不會顯著地抑制宿主(例如，人類)DNA之複製。此類抑制劑包括替諾福韋(tenofovir)、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate，TDF)、替諾福韋二吡呋酯(tenofovir disoproxil，TD)、替諾福韋艾拉酚胺(tenoforvir alafenamide，TAF)、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韋(adefovir)、阿德福韋地匹福酯(adefovir dipivoxil)、恩替卡韋(entecavir，ETV)、替比夫定(telbivudine)、AGX-1009、恩曲他濱(emtricitabine，FTC)、克左夫定(clevudine)、利托那韋(ritonavir)、迪夫昔(dipivoxil)、洛布卡韋(lobucavir)、抗濾兒(famvir)、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇(theradigm)-HBV、胸腺肽-α、更昔洛韋(ganciclovir)、貝西福韋(ANA-380/LB-80380)以及替諾夫韋-抑利德斯(tenofvir-exaliades)(TLX/CMX157)。在一些具體例中，NRTI為替諾福韋。在一些具體例中，NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。在一些具體例中，NRTI為替諾福韋二吡呋酯(TD)。在一些具體例中，NRTI為恩替卡韋(ETV)。在一些具體例中，NRTI為拉米夫定。在一些具體例中，NRTI為阿德福韋或阿德福韋地匹福酯。在該等方法之一些具體例中，對象為HBeAg陰性；治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平；治療前具有＜2000 IU/mL之HBV DNA水平；及/或為非硬化及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＜正常值上限(ULN)。在一些具體例中，女性之ALT ULN值為34 IU/mL，而男性之ALT ULN值為43 IU/mL。在該等方法之一些具體例中，對象先前未經投予聯合療法之一或多種要素(例如，對象先前未經投予NRTI；對象先前未經投予抗HIV抗體；及/或對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA)。在該等方法之一些具體例中，在用聯合療法治療前24週內，對象先前未經投予或先前未接受NRTI。
在一些具體例中，提供用於治療對象之HBV感染或HBV相關疾病之方法，其中該方法包含向該對象投予本文中所述之siRNA和抗體，以及亦向該對象投予核苷/核苷酸逆轉錄酶抑制劑和干擾素α(例如，PEG-IFNα)。在該等方法之一些具體例中，對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性；治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平；以及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍 ULN。在該方法之一些具體例中，對象先前未經投予聯合療法之一或多種要素(例如，對象先前未經投予NRTI；對象先前未經投予干擾素α；對象先前未經投予抗HIV抗體；及/或對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。在一些具體例中，女性之ALT ULN值為34 IU/mL，而男性之ALT ULN值為43 IU/mL。
如本文中所用，「對象」為動物，諸如，哺乳動物，包括可被HBV感染之任何哺乳動物(例如，靈長類動物(諸如，人類、非人類之靈長類動物，例如，猴或黑猩猩)，或被認為是可接受之HBV感染臨床模式之動物、HBV-AAV小鼠模式(參見，例如，Yang et al., Cell and Mol Immunol 2014, 11:71)或HBV 1.3xfs轉基因小鼠模式(Guidotti et al., J. Virol. 1995, 69:6158)。在一些具體例中，對象有B型肝炎病毒(HBV)感染。在一些其他具體例中，對象有B型肝炎病毒(HBV)感染和D型肝炎病毒(HDV)感染兩者。在一些其他具體例中，對象為人類，諸如，有HBV感染(尤其是慢性B型肝炎病毒(CHBV)感染)之人類。
如本文中所用，術語「治療(treating)」或「治療(treatment)」是指有益或所欲結果，包括但不限於減輕或改善與不需要的HBV基因表現或HBV複製相關的一或多種徵象或症狀，例如，血清或肝HBV cccDNA之存在、血清HBV DNA之存在、血清或肝HBV抗原(例如，HBsAg或HBeAg)之存在、升高之ALT、升高之AST(正常範圍通常被認為約10至34 U/L)、抗HBV抗體之不存在或低水平；肝損傷；硬化；D型肝炎；急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝纖維化；末期肝病；肝細胞癌；血清病樣症候群(serum sickness-like syndrome)；厭食症；噁心；嘔吐，低燒；肌痛；疲勞性；味覺敏銳度和嗅覺紊亂(厭惡食物和香煙)；或右上腹和上腹疼痛(間歇性，輕度至中度)；肝性腦病；嗜睡；睡眠模式紊亂；精神混亂；昏迷；腹水；消化道出血；凝血障礙；黃疸；肝腫大(肝臟輕度增大、變軟)；脾腫大；手掌紅斑；蜘蛛痣；肌肉萎縮；蜘蛛狀血管瘤；血管炎；靜脈曲張出血；外周水腫；男性女乳症；睪丸萎縮；腹部側支靜脈(蛇女頭狀臍圍靜脈曲張(caput medusa))；ALT水平高於AST水平；升高之γ-麩胺醯轉肽酶(GGT)(正常範圍通常被認為約8至65 U/L)和鹼性磷酸酯酶(ALP)水平(正常範圍通常被認為約44至147 IU/L(每公升之國際單位)，而不是超過ULN之3倍)；略低之白蛋白水平；升高之血清鐵水平；白血球減少症(亦即，顆粒球減少症)；淋巴細胞增多症；增加之紅血球沉降率(ESR)；縮短之紅血球存活時間；溶血；血小板減少症；國際標準化比值(INR)之延長；血清或肝HBsAg、HBeAg、B型肝炎核心抗體(抗HBc)免疫球蛋白M(IgM)之存在；B型肝炎表面抗體(抗HBs)、B型肝炎e抗體(抗HBe)或HBV DNA；增加之膽紅素水平；高球蛋白血症；組織非特異性抗體(諸如，抗平滑肌抗體(ASMA)或抗核抗體(ANA)(10至20%))之存在；組織特異性抗體(諸如，針對甲狀腺的抗體(10至20%))之存在；類風濕因子(RF)之升高水平；低血小板和白血球計數；小葉的(lobular)，有退行性和再生性肝細胞變化，且伴有發炎；以及主要是小葉中心壞死，無論可檢出還是未檢出。例如，當具有一或多種肝纖維化風險因子(例如，慢性B型肝炎感染)之個體相對於具有相同風險因子且未接受本文中所述之治療之群體，未發展成肝纖維化或發展成相對不嚴重的肝纖維化時，發展成例如肝纖維化之可能性降低。「治療(treatment)」亦可意指與無治療的情況下之預期存活相比之延長存活。
如本文中所用，術語「預防(preventing)」或「預防(prevention)」是指未發展成疾病、病症或病況，或與此類疾病、病症或病況相關的徵象或症狀之發展的降低(例如，藉由臨床相關量)，或延遲之徵象或症狀(例如，延遲數天、數週、數月或數年)之展現。預防可能需要投予超過一劑。
劑量通常與體重有關。因此，以[g、mg或其他單位]/kg(或g、mg等)表示之劑量通常是指「每kg(或g、mg等)體重」之[g、mg或其他單位]，即使沒有明確提及術語「體重」。
在一些具體例中，HBV感染之治療導致B型肝炎之「功能性治癒」。如本文中所用，功能性治癒被理解為循環HBsAg之清除，並且可能伴隨著轉化為在使用臨床相關測定法時HBsAg抗體變成可檢出之狀態。例如，可檢出之抗體可包括如化學發光微粒免疫測定法(Chemiluminescent Microparticle Immunoassay，CMIA)或任何其他免疫測定法所測量之高於10 mIU/ml之訊號。功能性治癒不需要清除HBV之所有複製形式(例如，來自肝臟之cccDNA)。每年約0.2至1%的慢性感染患者自發性地發生抗HBs血清轉化。然而，即使在抗HBs血清轉化後，仍經常觀察到HBV之低水平持續存在數十年，這表明發生了功能性治癒，而不是完全治癒。在不受特定機制約束的情況下，免疫系統可能能夠在已達成功能性治癒之條件下控制HBV。功能性治癒允許中斷任何HBV感染之治療。然而，應當理解HBV感染之「功能性治癒」可能不足以預防或治療由HBV感染引起的疾病或病況，例如，肝纖維化、HCC或硬化。在一些特定具體例中，「功能性治癒」可指在治療方案起始或治療方案之完成後持續至少3個月、至少6個月或至少一年，血清HBsAg持續降低(sustained reduction)(例如，＜1 IU/mL)。
如本文中所用，術語「B型肝炎病毒相關疾病」或「HBV相關疾病」係由HBV感染或複製所引起或與之相關之疾病或病症。術語「HBV相關疾病」包括會受益於HBV基因表現或複製之降低之疾病、病症或病況。HBV相關疾病之非限制性實例包括，例如，D型肝炎病毒感染、D型肝炎、急性B型肝炎；急性猛爆性B型肝炎；慢性B型肝炎；肝纖維化；末期肝病；以及肝細胞癌。
在一些具體例中，HBV相關疾病為慢性B型肝炎。慢性B型肝炎係由下列標準中之一者所定義：(1)間隔至少6個月之兩次陽性血清HBsAg、HBV DNA或HBeAg (間隔6個月進行的此等測試之任何組合皆為可接受)；(2)陰性HBV核心抗原免疫球蛋白M(IgM)抗體(IgM抗HBc)，以及下列測試中之一者為陽性結果：HBsAg、HBeAg或HBV DNA。慢性B型肝炎通常包括持續超過六個月之肝發炎。患有慢性HBV之對象為HBsAg陽性，並且具有高病毒血症(≥10 4HBV-DNA複製數/ml血液)或低病毒血症(＜10 3HBV-DNA複製數/ml血液)。在某些具體例中，對象已感染HBV至少五年。在某些具體例中，對象已感染HBV至少十年。在某些具體例中，對象在出生時就感染了HBV。患有慢性B型肝炎疾病之對象可具有免疫耐受性，或者具有不活動慢性感染而沒有任何活動性疾病的證據，並且彼等亦為無症狀的。慢性活動性肝炎患者(尤其是處於複製狀態之患者)可能具有與急性肝炎相似的症狀。患有慢性B型肝炎疾病之對象可能患有活動性慢性感染並伴有壞死性發炎性肝病，在無可檢出之壞死性發炎的情況下有增加之肝細胞替換率(turn-over)，或者具有不活動慢性感染而沒有任何活動性疾病的證據，並且彼等亦為無症狀的。慢性HBV對象之HBV感染之持續存在為cccHBV DNA之結果。在一些具體例中，患有慢性HBV之對象為HBeAg陽性。在一些其他具體例中，患有慢性HBV之對象為HBeAg陰性。患有慢性HBV之對象具有低於105之血清HBV DNA水平，以及持續升高之轉胺酶(例如，ALT、AST以及γ-麩胺醯轉移酶)。患有慢性HBV之對象可能具有低於4之肝切片指數(liver biopsy score)(例如，壞死性發炎指數)。
在一些具體例中，HBV相關疾病為D型肝炎病毒感染。D型肝炎病毒(hepatitis D virus)或D型肝炎病毒(hepatitis delta virus，HDV)為人類病原體。然而，該病毒係有缺陷的，並且依賴於HBV提供的強制性輔助功能來傳播；事實上，HDV需要相關或預先存在的HBV感染才能變成有感染性和繁殖(thrive)，特別是含有B型肝炎表面抗原之病毒外膜。HDV可導致與HBV相關的嚴重急性和慢性型式之肝病。D型肝炎感染或D型肝炎在一些非洲國家、亞馬遜地區以及中東地區高度流行，而在除地中海以外的工業化國家中，其患病率低。
HDV的傳播可經由同時感染HBV(合併感染(coinfection))或疊加在慢性B型肝炎或B型肝炎帶原者狀態(重複感染(superinfection))而發生。與單獨感染HBV相比，HDV重複感染和合併感染通常會導致更嚴重的併發症。此等併發症包括在急性感染中經歷肝衰竭及快速進展成肝硬化，以及增加在慢性感染中患肝癌之機會的更大可能性。與B型肝炎病毒結合，D型肝炎具有所有肝炎感染中最高的死亡率，達20%。
在一些具體例中，HBV相關疾病為急性B型肝炎。急性B型肝炎包括持續少於六個月之肝發炎。急性B型肝炎之典型症狀為疲勞、厭食症、噁心以及嘔吐。經常觀察到非常高的轉胺酶值(＞1000 U/L)和高膽紅素血症。嚴重的急性B型肝炎病例可快速進展成急性肝衰竭，其特點為肝合成功能差。在既往無肝病的情況下，這通常定義為16秒的凝血酶原時間(PT)或1.5之國際標準化比值(INR)。急性B型肝炎可能演變成慢性B型肝炎。
在一些具體例中，HBV相關疾病為急性猛爆性B型肝炎。患有急性猛爆性B型肝炎之對象具有急性肝炎的症狀以及認定混淆(confusion)或昏迷(由於肝臟無法將化學物質解毒)和瘀傷或出血之附加症狀(由於缺乏凝血因子)。
有HBV感染(例如，慢性HBV)之對象可能發展成肝纖維化。因此，在一些具體例中，HBV相關疾病為肝纖維化。肝纖維化或硬化在組織學上係定義為以纖維化(過多的纖維結締組織)和正常肝臟結構轉化成結構異常的結節為特徵之瀰漫性肝臟過程。
有HBV感染(例如，慢性HBV)之對象可能發展成末期肝病。因此，在一些具體例中，HBV相關疾病為末期肝病。例如，肝纖維化可能進展成身體可能不再能夠代償的程度，例如，由於肝纖維化而導致的肝功能降低(亦即，代償不全之肝臟)，並導致例如精神和神經症狀和肝衰竭。
有HBV感染(例如，慢性HBV)之對象可能發展成肝細胞癌(HCC)，亦稱為惡性肝腫瘤。因此，在一些具體例中，HBV相關疾病為HCC。HCC通常發生在患有CHB之對象中，並且可為纖維板狀、假腺體的(腺樣的)、多形性(巨細胞)或透明細胞。
「HDV相關病症」或「D型肝炎病毒相關病症」係與HDV表現相關之疾病或病症。例示性HDV相關病症包括B型肝炎病毒感染、急性B型肝炎、急性D型肝炎；急性猛爆性肝炎D型肝炎；慢性D型肝炎；肝纖維化；末期肝病；以及肝細胞癌。
如本文中所用，「治療有效量」旨在包括siRNA、抗HBV抗體或其他活性劑(例如，PEG-IFNα、替諾福韋)的量，當向患者投予該量以治療患有HBV感染或HBV相關疾病之對象時足以達成疾病的治療(例如，藉由減輕或維持現有疾病或疾病的一或多種症狀)。「治療有效量」可取決於(多種)活性劑、彼等如何被投予、疾病及其嚴重程度以及病史、年齡、體重、家族史、基因構成、由HBV基因表現所介導之病理過程的階段、先前或伴隨治療的類型(若有任何)以及待治療患者之其他個體特徵而不同。治療有效量可能需要投予超過一劑。
「治療有效量」亦包括siRNA、抗HBV抗體或其他活性劑以適用於任何治療之合理效益/風險比產生一些所欲效果的量。本揭示內容之方法中所用之治療劑(例如，siRNA、抗HBV抗體)可以足夠的量投予以產生適用於此類治療之合理益處/風險比。
本文中所用之術語「樣本」包括從對象單離之類似流體、細胞或組織之集合，以及對象內存在的流體、細胞或組織之集合。生物流體之實例包括血液、血清以及漿液、血漿、淋巴液、尿液、唾液等。組織樣本可包括來自組織、器官或局部區域之樣本。例如，樣本可衍生自特定器官、器官之部分或彼等器官內之液體或細胞。在某些具體例中，樣本可衍生自肝臟(例如，整個肝臟或肝臟的某些片段或肝臟中的某些類型的細胞，諸如，例如，肝細胞)。在某些具體例中，「衍生自對象之樣本」是指從對象抽取的血液獲得之血液或血漿或血清。在另外的具體例中，「衍生自對象之樣本」是指衍生自對象之肝組織(或其子成分)或血液組織(或其子成分，例如，血清)。
在本文中所述方法之一些具體例中，皮下投予抗HBV抗體。在一些具體例中，每4週投予抗HBV抗體。在一些具體例中，每8至12週、每8週或每12週投予抗HBV抗體。在一些具體例中，向對象投予抗HBV抗體為期44週。在一些具體例中，向對象投予抗HBV抗體為期48週。在一些具體例中，向對象投予抗HBV抗體為期至少44週、44週、44週或更長、至少48週、48週或48週或更長。在一些具體例中，向對象投予抗HBV抗體為期20週、40週、44週或48週。在一些具體例中，以100 mg至300 mg的劑量投予抗HBV抗體。在一些具體例中，以100 mg的劑量投予抗HBV抗體。在一些具體例中，以150 mg的劑量投予抗HBV抗體。在一些具體例中，以200 mg的劑量投予抗HBV抗體。在一些具體例中，以250 mg的劑量投予抗HBV抗體。在一些具體例中，以300 mg的劑量投予抗HBV抗體。
在本文中所述方法之一些具體例中，皮下投予siRNA。在一些具體例中，每4週投予siRNA。在一些具體例中，向對象投予siRNA為期20週、44週或48週。在一些具體例中，向對象投予siRNA為期44週。在一些具體例中，向對象投予siRNA為期48週。在一些具體例中，向對象投予siRNA為期至少44週、44週、44週或更長、至少48週、48週或48週或更長。在一些具體例中，以20 mg至900 mg的劑量投予siRNA。在一些具體例中，以100 mg至300 mg的劑量投予siRNA。在一些具體例中，以20 mg、50 mg、100 mg、150 mg、200 mg、250 mg、300 mg、400 mg或450 mg的劑量投予siRNA。在一些具體例中，以200 mg的劑量投予siRNA。
在本文中所述方法之一些具體例中，皮下投予干擾素-α。在一些具體例中，每週投予一次干擾素-α。在一些具體例中，向對象投予干擾素-α為期44週。在一些具體例中，向對象投予干擾素-α為期48週。在一些具體例中，向對象投予干擾素-α為期至少44週、44週、44週或更長、至少48週、48週或48週或更長。在一些具體例中，以至少120 mcg的劑量投予干擾素-α。在一些具體例中，以120 mcg至180 mcg的劑量投予干擾素-α。在一些具體例中，以180 mcg的劑量投予干擾素-α。
在本文中所述方法之一些具體例中，經口投予NRTI。在一些具體例中，每日投予NRTI。在一些具體例中，向對象投予NRTI為期44週。在一些具體例中，向對象投予NRTI為期48週。在一些具體例中，向對象投予NRTI為期至少44週、44週、44週或更長、至少48週、48週或48週或更長。在一些具體例中，以300 mg的劑量投予NRTI。在一些具體例中，以245 mg的劑量投予NRTI。
在本文中所述方法之一些具體例中，從同一天開始向對象投予siRNA和抗HBV抗體。
在本文中所述方法之一些具體例中，從同一天開始向對象投予siRNA和抗HBV抗體且為期20週、44週或48週。
在本文中所述方法之一些具體例中，對象在治療後(例如，在24週、在48週或之後)為HBsAg陰性。在本文中所述方法之一些具體例中，對象達成功能性治癒，亦即，在治療後(例如，在24週、在48週或之後)具有未檢出之HBsAg(HBsAg陰性)及HBV DNA之持續減抑(未檢出之HBV DNA)。在本文中所述方法之一些具體例中，對象具有未檢出之HBeAg及/或在治療後(例如，在24週、48週或之後)達成抗HBe血清轉化。在本文中所述方法之一些具體例中，對象在治療後(例如，在24週、在48週或之後)具有正常的丙胺酸轉胺酶(ALT)水平。
本揭示內容亦提供用於上述方法之本文中所述之抗體、siRNA、NRTI及/或干擾素，以及包含彼等之醫藥組成物。亦提供本文中所述之抗體、siRNA、NRTI及/或干擾素於製造用於上述方法之藥劑中之用途。 V. 聯合療法套組
本文中亦提供包括用於治療HBV感染或HBV相關疾病之療法的組分之套組。套組可包括siRNA(例如，SIRNA01)、抗HBV抗體(例如，AB01)以及NRTI(例如，富馬酸替諾福韋二吡呋酯、替諾福韋二吡呋酯)。套組可包括siRNA(例如，SIRNA01)、抗HBV抗體(例如，AB01)、PEG-IFNα以及NRTI(例如，富馬酸替諾福韋二吡呋酯、替諾福韋二吡呋酯)。套組可額外包括用於製備及/或投予HBV聯合療法之組分之說明書。 VI. 例示性具體例
在一些具體例中，本揭示內容提供： 1.一種治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA；以及 (c)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 2.具體例1之方法，其中該對象為HBeAg陰性。 3.具體例1或具體例2之方法，其中該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平。 4.具體例1或具體例2之方法，其中該對象在治療前具有＜2000 IU/mL之HBV DNA水平。 5.具體例1至4中任一例之方法，其中該對象為非硬化及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)。 6.具體例1至4中任一例之方法，其中該對象為非硬化及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＜正常值上限(ULN)。 7.具體例1至6中任一例之方法，其中該對象先前未經投予NRTI。 8.具體例1至6中任一例之方法，其中該對象在治療前24週內未接受NRTI。 9.具體例1至8中任一例之方法，其中該對象先前未經投予抗HIV抗體。 10.具體例1至9中任一例之方法，其中該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。 11.一種治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA； (c)干擾素-α；以及 (d)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 12.具體例11之方法，其中該對象為HBeAg陰性。 13.具體例11之方法，其中該對象為HBeAg陽性。 14.具體例11至13中任一例之方法，其中該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平。 15.具體例11至14中任一例之方法，其中該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN。 16.具體例11至15中任一例之方法，其中該對象先前未經投予NRTI。 17.具體例11至16中任一例之方法，其中該對象先前未經投予抗HIV抗體。 18.具體例11至17中任一例之方法，其中該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。 19.具體例11至18中任一例之方法，其中該對象先前未經投予干擾素-α。 20.具體例1至19中任一例之方法，其中該對象在治療前為HBsAg陽性。 21.具體例11至20中任一例之方法，其中該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。 22.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體識別HBV基因型A、B、C、D、E、F、G、H、I以及J。 23.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體為人類抗體。 24.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗體為HBC34或HBC34之非天然變體。 25.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45或46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49或50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。 26.根據具體例25之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。 27.具體例25之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。 28.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈可變結構域(V L)；以及(b)與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈可變結構域(V H)。 29.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：55之輕鏈可變結構域(V L)胺基酸序列；以及(b)根據SEQ ID NO：53之重鏈可變結構域(V H)胺基酸序列。 30.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈，以及(b)與根據SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈。 31.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列，以及(b)根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列。 32.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體為單株抗體。 33.根據前述具體例中任一例之方法，其中該抗HBV抗體為雙特異性抗體，其具有針對HBsAg之第一特異性和刺激免疫效應物之第二特異性。 34.根據具體例33之方法，其中該第二特異性刺激細胞毒性或疫苗作用。 35.根據前述具體例中任一例之方法，其中該對象為人類，並且投予治療有效量的該抗HBV抗體；其中該治療有效量為約3 mg/kg至約30 mg/kg。 36.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA抑制編碼HBsAg蛋白、HBcAg蛋白以及HBx蛋白或HBV DNA聚合酶蛋白之HBV轉錄物之表現。 37.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含形成雙股區之有義股和反義股，其中該有義股包含與SEQ ID NO：1之核苷酸1579至1597相差不超過3個核苷酸之至少15個鄰接核苷酸，其中T係經U置換。 38.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含有義股和反義股，其中該有義股包含SEQ ID NO：1之核苷酸1579至1597，其中T係經U置換。 39.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA結合由下列者所編碼之標靶之至少15個鄰接核苷酸：P基因，NC_003977.2之核苷酸2309至3182和1至1625；S基因(編碼L、M以及S蛋白)，NC_003977.2之核苷酸2850至3182和1至837；HBx，NC_003977.2之核苷酸1376至1840；或C基因，NC_003977.2之核苷酸1816至2454。 40.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列之至少15個鄰接核苷酸。 41.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列之至少19個鄰接核苷酸。 42.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列。 43.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該反義股係由5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列所組成。 44.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該有義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：3)之核苷酸序列。 45.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該有義股係由5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：3)之核苷酸序列所組成。 46.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之至少一股包含至少1個核苷酸之3’突出端。 47.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之至少一股包含至少2個核苷酸之3’突出端。 48.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為15至30個核苷酸對長。 49.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為17至23個核苷酸對長。 50.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為17至25個核苷酸對長。 51.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為23至27個核苷酸對長。 52.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為19至21個核苷酸對長。 53.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該雙股區為21至23個核苷酸對長。 54.根據具體例1至40中任一例之方法，其中該RNAi劑之各股具有15至30個核苷酸。 55.根據前述具體例中任一例之方法，其中該RNAi劑之各股具有19至30個核苷酸。 56.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該有義股之實質上所有核苷酸和該siRNA之該反義股之實質上所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸，以及 其中該有義股與附接於3’端之配體接合。 57.根據具體例56之方法，其中該配體係通過單價連接子、二價分支連接子或三價分支連接子連接之一或多種GalNAc衍生物。 58.根據具體例56或57之方法，其中該配體為 。 59.根據具體例58之方法，其中該siRNA與以下結構所示之配體接合： 其中X為O或S。 60.根據具體例59之方法，其中X為O。 61.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸，其包含去氧核苷酸、3’端去氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、經2’-O-甲基修飾之核苷酸、經2’-氟修飾之核苷酸、經2’-去氧修飾之核苷酸、鎖核苷酸、非鎖核苷酸、構形限制核苷酸、受限乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、經2’-胺基修飾之核苷酸、經2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、經2’-C-烷基修飾之核苷酸、經2’-羥基修飾之核苷酸、經2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、經2’-O-烷基修飾之核苷酸、啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、經四氫吡喃修飾之核苷酸、經1,5-脫水己醇修飾之核苷酸、經環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、腺苷-二醇核酸或包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。 62.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含磷酸骨架修飾、2’核糖修飾、5’三磷酸修飾或GalNAc接合修飾。 63.根據前述具體例中任一例之方法，其中該磷酸骨架修飾包含硫代磷酸酯鍵。 64.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含2’-氟或2’-O-甲基取代。 65.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA之該有義股之所有核苷酸和該反義股之所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸。 66.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含有義股和反義股，該有義股包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)和該反義股包含5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇。 67.根據前述具體例中任一例之方法，其中該siRNA包含有義股和反義股，該有義股包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3 ’(SEQ ID NO：7)和該反義股包含5’-usGfsugaAfgCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：8)， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇。 68.根據具體例66或具體例67之方法，其中該L96與以下結構所示之有義股接合： 其中X為O。 69.根據前述具體例中任一例之方法，其中該對象為人類，並且向該對象投予治療有效量的siRNA；以及其中該siRNA之該有效量為約1 mg/kg至約8 mg/kg。 70.根據前述具體例中任一例之方法，其中每日兩次、每日一次、每兩天、每三天、每週兩次、每週一次、每隔一週、每四週或每月一次向該對象投予該siRNA。 71.根據前述具體例中任一例之方法，其中每四週向該對象投予所該siRNA。 72.根據具體例11至71中任一例之方法，其中該干擾素-α為干擾素-α-2a。 73.根據具體例11至72中任一例之方法，其中該干擾素-α係經聚乙二醇化。 74.根據具體例11至73中任一例之方法，其中該干擾素-α為聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEG-IFNα-2a)。 75.根據前述具體例中任一例之方法，其中該NRTI為替諾福韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)、替諾福韋二吡呋酯(TD)、替諾福韋艾拉酚胺(TAF)、拉米夫定、阿德福韋地匹福酯、恩替卡韋(ETV)、替比夫定、AGX-1009、恩曲他濱(FTC)、克左夫定、利托那韋、迪夫昔、洛布卡韋、抗濾兒、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇-HBV、胸腺肽-α和更昔洛韋、貝西福韋(ANA-380/LB-80380)或替諾夫韋-抑利德斯(TLX/CMX157)。 76.根據前述具體例中任一例之方法，其中該NRTI為替諾福韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)或替諾福韋二吡呋酯(TD)。 77.根據前述具體例中任一例之方法，其中該NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。 78.根據前述具體例中任一例之方法，其中： (a)該抗HBV抗體包含：根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列和根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列； (b)該siRNA包含：包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)之有義股和包含5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)之反義股， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及 (c)該NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。 79.根據具體例11至78中任一例之方法，其中： (a)該抗HBV抗體包含：根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列和根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列； (b)該siRNA包含：包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)之有義股和包含5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)之反義股， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯；以及 (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及 (c)該干擾素-α為PEG-IFNα-2a；以及 (d)該NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。 80.根據前述具體例中任一例之方法，其中： (a)該抗HBV抗體係由下列者所組成：根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列和根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列； (b)該siRNA係由下列者所組成：由5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)所組成之有義股和由5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)所組成之反義股， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯；以及 (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及 (c)該NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。 81.根據具體例11至78中任一例之方法，其中： (a)該抗HBV抗體由係由下列者所組成：根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列和根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列； (b)該siRNA係由下列者所組成：由5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)所組成之有義股和由5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)所組成之反義股， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯；以及 (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及； (c)該干擾素-α為PEG-IFNα-2a；以及 (d)該NRTI為富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。 82.根據前述具體例中任一例之方法，其中根據圖1A、圖1B、圖2A、圖2B或圖3A至4D所示之程序向對象投予該抗HBV抗體、該siRNA以及該NRTI。 83.根據前述具體例中任一例之方法，其中根據圖6A、圖6B、圖7A、圖7B或圖8A至11E所示之程序向該對象投予該抗HBV抗體、該siRNA、該干擾素-α以及該NRTI。 84.根據前述具體例中任一例之方法，其中皮下投予該抗HBV抗體。 85.根據前述具體例中任一例之方法，其中皮下投予該siRNA。 86.根據具體例11至85中任一例之方法，其中皮下投予該干擾素-α。 87.根據前述具體例中任一例之方法，其中經口投予該NRTI。 88.根據前述具體例中任一例之方法，其中每4週投予該抗HBV抗體。 89.根據具體例1至87中任一例之方法，其中每8至12週投予該抗HBV抗體。 90.根據前述具體例中任一例之方法，其中每4週投予該siRNA。 91.根據具體例11至90中任一例之方法，其中每週投予一次該干擾素-α。 92.根據前述具體例中任一例之方法，其中每日投予該NRTI。 93.根據前述具體例中任一例之方法，其中以300 mg的劑量投予該抗HBV抗體。 94.根據具體例93之方法，其中投予6至13劑之該抗HBV抗體。 95.根據具體例93之方法，其中投予12劑之該抗HBV抗體。 96.根據具體例93之方法，其中投予13劑之該抗HBV抗體。 97.根據具體例93至97中任一例之方法，其中投予該抗HBV抗體之該等劑為期44週。 98.根據具體例93至97中任一例之方法，其中投予該抗HBV抗體之該等劑為期44週或更長。 99.根據具體例93至97中任一例之方法，其中投予該抗HBV抗體之該等劑為期48週。 100.根據具體例93至97中任一例之方法，其中投予該抗HBV抗體之該等劑為期48週或更長。 101.根據前述具體例中任一例之方法，其中以200 mg的劑量投予該siRNA。 102.根據具體例94之方法，其中投予6至13劑之該siRNA。 103.根據具體例94之方法，其中投予12劑之該siRNA。 104.根據具體例94之方法，其中投予13劑之該siRNA。 105.根據具體例100至104中任一例之方法，其中投予該siRNA之該等劑為期44週。 106.根據具體例100至104中任一例之方法，其中投予該siRNA之該等劑為期44週或更長。 107.根據具體例100至104中任一例之方法，其中投予該siRNA之該等劑為期48週。 108.根據具體例100至104中任一例之方法，其中投予該siRNA之該等劑為期48週或更長。 109.根據具體例11至108中任一例之方法，其中以180 mcg的劑量投予該干擾素-α。 110.根據具體例109之方法，其中投予至少308劑之該干擾素-α。 111.根據具體例109至110中任一例之方法，其中投予該干擾素-α之該等劑為期44週。 112.根據具體例109至110中任一例之方法，投予該干擾素-α之該等劑為期44週或更長。 113.根據具體例109至110中任一例之方法，其中投予該干擾素-α之該等劑為期48週。 114.根據具體例109至110中任一例之方法，投予該干擾素-α之該等劑為期48週或更長。 115.根據前述具體例中任一例之方法，其中以300 mg的劑量投予該NRTI。 116.根據具體例195中任一例之方法，其中以245 mg的劑量投予該NRTI。 117.根據具體例96或具體例97之方法，其中投予140至308劑之該NRTI。 118.根據具體例96或具體例97之方法，其中投予308劑之該NRTI。 119.根據具體例116至118中任一例之方法，其中投予該NRTI之該等劑為期44週。 120.根據具體例116至118中任一例之方法，其中投予該NRTI之該等劑為期44週或更長。 121.根據具體例116至118中任一例之方法，其中投予該NRTI之該等劑為期48週。 122.根據具體例116至118中任一例之方法，其中投予該NRTI之該等劑為期48週或更長。 123.根據前述具體例中任一例之方法，其中從同一天開始向該對象投予該siRNA和該抗HBV抗體。 124.根據前述具體例中任一例之方法，其中該對象患有慢性HBV。 125.根據前述具體例中任一例之方法，其中該對象有D型肝炎病毒(HDV)感染。 126.根據前述具體例中任一例之方法，其中該HBV相關疾病為慢性HBV。 127.根據前述具體例中任一例之方法，其中該HBV相關疾病為HDV感染。 128.根據前述具體例中任一例之方法，其中該對象為人類。 129.一種用於根據具體例1至128中任一例之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及NRTI。 130.一種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及NRTI；於製造用於根據具體例1至128中任一例之方法之藥劑之用途。 131.一種抗HBV抗體於製造第一藥劑之用途；靶向HBV mRNA之siRNA於製造第二藥劑之用途；以及NRTI於製造第三藥劑之用途；其中該第一、第二以及第三藥劑係用於根據具體例1至128中任一例之方法之聯合療法。 132.一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；其中： 該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象未在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA和核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 133.一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。 134.一種用於製造用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之藥劑之抗HBV抗體，其中： 該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA和核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 135.一種用於製造第一藥劑之抗HBV抗體；用於製造第二藥劑之靶向HBV mRNA之siRNA；以及用於製造第三藥劑之核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，其中該第一、第二以及第三藥劑係用於聯合療法以治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病；其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。 136.一種用於根據具體例11至128中任一例之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及NRTI。 137.一種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及NRTI；於製造用於根據具體例11至128中任一例之方法之藥劑之用途。 138.一種抗HBV抗體於製造第一藥劑之用途；靶向HBV mRNA之siRNA於製造第二藥劑之用途；干擾素-α於製造第三藥劑之用途；以及NRTI於製造第四藥劑之用途；其中該第一、第二、第三以及第四藥劑係用於根據具體例11至128中任一項之方法之聯合療法。 139.一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；其中： 該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA、干擾素-α以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 140.一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。 141.一種用於製造用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之藥劑之抗HBV抗體；其中： 該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA、干擾素-α以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。 142.一種用於製造第一藥劑之抗HBV抗體、用於製造第二藥劑之靶向HBV mRNA之siRNA、用於製造第三藥劑之干擾素-α以及用於製造第四藥劑之核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，其中該第一、第二、第三以及第四藥劑係用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病；其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。 143.一種套組，其包含： 包含抗HBV抗體和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含靶向HBV mRNA之siRNA和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物；以及 包含NRTI和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物。 144.根據具體例143之套組，進一步包含用於完成根據具體例1至128中任一例之方法之說明書。 145.一種套組，其包含： 包含抗HBV抗體和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含靶向HBV mRNA之siRNA和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含干擾素-α和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物；以及 包含NRTI和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物。 146.根據具體例145之套組，進一步包含用於完成根據具體例11至128中任一例之方法之說明書。 實施例 實施例 1 治療有低病毒負荷的慢性 HBV 感染之 HB E A G 陰性參與者之聯合療法之臨床評估
在第2期、多中心、開放性研究臨床研究中評估有低病毒負荷的慢性HBV感染之HBeAg陰性、非硬化之人類患者的抗HBV抗體(視需要地與抗HBV siRNA及/或核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑替諾福韋組合)的安全性和功效。 背景
慢性HBV感染仍然是一個具有顯著發病率和死亡率之重要全球公共衛生課題(Trepo C, A brief history of hepatitis milestones, Liver Int. 2014 Feb, 34 Suppl 1:29-37)。慢性HBV感染是一種以病毒複製和宿主免疫反應的交互作用為特徵之動態程序。基於B型肝炎e抗原(HBeAg)、B型肝炎病毒(HBV)DNA、丙胺酸轉胺酶(ALT)以及肝發炎水平，可將患者分為不同的疾病階段(European Association for the Study of the Liver, EASL 2017 Clinical Practice Guidelines on the management of hepatitis B virus infection, J Hepatol. 2017 Aug, 67(2):370-398; Sarin SK et al. Asian-Pacific clinical practice guidelines on the management of hepatitis B: a 2015 update, Hepatol Int. 2016 Jan, 10(1):1-98; Terrault NA et al., Update on prevention, diagnosis, and treatment of chronic hepatitis B: AASLD 2018 hepatitis B guidance, Hepatology 2018 Apr, 67(4):1560-1599)。
慢性HBV感染是一種取決於病毒複製和宿主免疫反應之間的關係之動態程序。患者可能在疾病的不同階段之間搖擺，並且對生物標記物(諸如，HBV DNA、ALT以及HBV抗原)之連續監測有助於確定疾病的自然史。在3億名感染HBV之患者中，彼等HBeAg陰性者代表最大的次群組。此等患者的範圍從免疫不活躍(亦稱為「不活動帶原者」或「不活動肝炎」)到患有可進展成嚴重肝併發症(包括肝細胞癌(HCC))之慢性活動性肝炎。不活動帶原者為HBeAg陰性和抗HBe陽性，且有持續低水平之HBV DNA(≤2,000 IU/mL)及維持至少1年的正常ALT。此等患者具有良好的長期預後，且有低的組織學進展率、硬化或HCC之低風險、高的長期HBsAg清除率(EASL，2017，同上；Invernizzi等人，2016，同上；Terault等人，2018，同上；Yeo等人，2020，同上)。不活動帶原者缺乏旨在減抑HBV DNA之目前可用的治療的適應症，但彼等最有可能達成功能性治癒，從而變得無感染性且疾病復發的風險較低。
AB01為靶向B型肝炎表面抗原(HBsAg)之單株抗體(mAb)，具有多種潛在的作用機制，包括強的中和活性和由於Fc結構域工程改造而增強的免疫活性。AB01 (HBC34v35-MLNS-GAALIE)包含SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列和SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列。
在慢性HBV感染患者中，先前的研究顯示免疫不活躍患者的藉由PD-1阻斷而恢復的HBV 特異性CD8+T細胞功能與T細胞分化相關(Bengsch B et al., Restoration of HBV-specific CD8+T cell function by PD-1 blockade in inactive carrier patients is linked to T cell differentiation, J Hepatol. 2014 Dec, 61(6):1212-9)。此研究的報告顯示AB01之作為具有T細胞銜接活性之疫苗mAb的提議機制可具有在免疫不活躍群體中復還原HBV 特異性T細胞的潛力。AB01係通過靶向HBsAg和抑制病毒進入肝細胞來中和HBV病毒和次病毒粒子，為治療慢性HBV感染提供新策略。此外，AB01之Fc區係經基因改造，以增加與新生兒Fc受體(FcRn)之結合親和力，並促進與活化受體之Fc-γ受體(FcγR)的結合概況。此等修飾可延長血清半衰期、增加效力以及誘發「疫苗」作用(誘發抗原特異性T細胞反應)。IgG的正常血清半衰期為約21天，並且受FcRn介導之內吞作用和再循環相對胞內體降解之平衡調節。為了生產具有針對HBV有持續活性之產品，經充分特性識別之LS修飾(M428L和N434S) (Gaudinski MR et al., Safety and pharmacokinetics of the Fc-modified HIV-1 human monoclonal antibody VRC01LS: A Phase 1 open-label clinical trial in healthy adults, PLoS Med. 2018 Jan 24, 15(1):e1002493; Ko SY et al., Enhanced neonatal Fc receptor function improves protection against primate SHIV infection, Nature 2014 Oct 30, 514(7524):642-5; Zalevski J et al., Enhanced antibody half-life improves in vivo activity, Nat Biotechnol. 2010 Feb, 28(2):157-9)包括在AB01之Fc區中。LS修飾僅在胞內體區室的酸性pH條件下增加IgG1與FcRn的結合，從而增加IgG 再循環回到循環。先前已於人類研究含有LS突變之單株抗體(Gaudinski等人，2018，同上)。例如，VRC01LS為針對HIV-1糖蛋白之CD4結合位點之單株抗體，在健康志願者中，IV 5至40 mg/kg和SC 5 mg/kg的劑量被認為是安全的且耐受性良好。48週內未檢出抗藥物抗體(ADA)。同樣預期AB01在人類的半衰期會延長，導致暴露時間延長。AB01之活體外數據暗示預期LS突變不會干擾下述額外的Fc修飾。AB01之Fc區亦經工程改造以包括藉由增強與活化受體FcγRIIa和FcγRIIIa之結合，同時降低與抑制性受體FcγRIIb之結合而調節與人類FcγR之結合之修飾。Fc修飾係設計成增強HBsAg和HBV病毒粒子之ADCP以及抗原呈遞，結果為促進T細胞反應的誘發(「疫苗作用」)。類似修飾對mAb功效之影響已在FcγR-人源化淋巴瘤小鼠模式中進行了研究。在此模式中，抗CD20抗體係經由巨噬細胞和單核細胞上之FcγRIIIa之銜接促進對腫瘤細胞之直接殺傷。此外，抗CD20免疫複合體係經由以樹突狀細胞進行腫瘤抗原之FcγRIIa依賴性呈遞來誘發CD8+T細胞反應。整體而言，抗CD20抗體之Fc工程改造增加FcγRIIa和FcγRIIIa結合(GASDALIE突變)具有優異的治療活性(DiLillo DJ et al., Differential Fc-Receptor Engagement Drives an Anti-tumor Vaccinal Effect, Cell 2015 May 21,161(5)：1035-1045)。與抑制性FcγRIIb結合的平行降低有進一步增大此類疫苗作用之潛力(DiLillo等人，2015，同上)。
關於使用針對HBsAg之抗體治療慢性HBV感染患者的現有數據暗示此等分子具有降低HBsAg水平，同時維持可接受之安全性和耐受性概況之潛力。GC1102為開發用於慢性HBV感染和預防肝移植後之復發性HBV的全人類抗HBsAg mAb，可有效地降低HBsAg 2至3 log 10IU/mL且在慢性HBV感染患者之第1期研究中具有良好的耐受性，沒有證據表明存嚴重後遺症(諸如，免疫複合體疾病)(Lee HW et al., A prospective, open‐label, dose‐escalation, single‐center, phase 1 study for GC1102, a recombinant human immunoglobulin for chronic hepatitis B patients, American Association for the Study of Liver Diseases, The Liver Meeting 2018, Abstract 453)。HBV-ABXTL(HepeX-B)為兩種人類抗HBsAg mAb之混合物，將其向27位HBsAg水平範圍為約20至85,000 IU/mL之患者投予。經發現每週投予高達80 mg，共4劑HBV-ABXTL時具有良好的安全性和耐受性，並且沒有報告免疫複合體疾病或肝毒性之跡象(Galun E et al., Clinical evaluation (phase I) of a combination of two human monoclonal antibodies to HBV: safety and antiviral properties, Hepatology 2002 Mar, 35(3):673-9)。同樣地，兩項慢性HBV患者接受高劑量B型肝炎免疫球蛋白(HBIG)以預防肝移植後再次感染之研究亦沒有報告不良事件(Reed WD et al., Infusion of hepatitis-B antibody in antigen-positive active chronic hepatitis, Lancet 1973 Dec 15, 2(7842):1347-51; Tsuge M et al., Antiviral effects of anti-HBs immunoglobulin and vaccine on HBs antigen seroclearance for chronic hepatitis B infection, J Gastroenterol 2016 Nov, 51(11):1073-1080)。
來自腫瘤學設定之臨床數據暗示被設計成增強ADCC/ADCP和抗原呈遞之Fc工程改造可在不損害安全性或耐受性的情況下提高功效(Im S-A et al., Long-term responders to single-agent margetuximab, an Fc-modified anti-HER2 monoclonal antibody, in metastatic HER2+breast cancer patients with prior anti-HER2 therapy, DOI: 10.1158/1538-7445.SABCS18-P6-18-11 February 2019)。馬吉妥昔單抗(margetuximab)為曲妥珠單抗(trastuzumab)之修飾版，已被FDA核准用於治療HER2陽性癌症。馬吉妥昔單抗含有被設計成增強ADCC/ADCP和抗原呈遞之修飾。在針對HER-2陽性癌症患者之首次於人體執行(FIH)第1期研究中，馬吉妥昔單抗具有良好的耐受性。常見的毒性主要為≤2級，包括沒有心臟毒性之證據(Bang YJ et al., First-in-human phase 1 study of margetuximab (MGAH22), an Fc-modified chimeric monoclonal antibody, in patients with HER2-positive advanced solid tumors, Ann Oncol. 2017 Apr 1, 28(4):855-861)，已在後期臨床試驗中觀察到未經Fc修飾之親本單株抗體(曲妥珠單抗)有此現象(Pondé NF et al., Twenty years of anti-HER2 therapy-associated cardiotoxicity, ESMO Open. 2016 Jul 21;1(4):e000073; Riccio G et al., Trastuzumab and target-therapy side effects: Is still valid to differentiate anthracycline Type I from Type II cardiomyopathies?, Hum Vaccin Immunother. 2016 May 3, 12(5):1124-31)。
總而言之，此等數據暗示經Fc工程改造以延長血清半衰期和最佳化免疫效應細胞活性之mAb有在不損害安全性的情況下改善治療性mAb之功效。預期AB01會減少血清HBsAg，抑制肝內病毒傳播，消除感染之肝細胞，以及刺激HBV特異性免疫反應。因此，AB01可在有或沒有其他藥劑(諸如，SIRNA01和NRTI(富馬酸替諾福韋二吡呋酯，「TDF」))的情況下達成慢性HBV感染之功能性治癒。
隊列1b將評估AB01對聯合療法的貢獻及其在沒有任何其他研究藥劑的情況下達成功能性治癒的潛力。為了評估參與者反應和AB01之潛在疫苗作用，將採集外周血單核細胞(PBMC)以進行針對HBV抗原之宿主細胞免疫反應(例如，T細胞)的評估。隊列1b將以反應引導方式評估每4週給藥6至12劑AB01和20至44週的NRTI(TDF)。到第20週達成HBsAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者可能有資格停止AB01和TDF。到第20週仍未達成HBsAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者將繼續接受AB01和TDF直到第44週。
SIRNA01為與慢性HBV感染患者之HBsAg大幅降低相關之siRNA。SIRNA01具有包含SEQ ID NO：5之核苷酸序列之有義股和包含SEQ ID NO：6之核苷酸序列之反義股。siRNA之使用提供治療慢性HBV感染之新策略。siRNA為19至21個鹼基對之RNA雙股螺旋，其利用內源RNA干擾途徑使序列特異性RNA切割和降解能進行。一種siRNA可具有多種抗病毒作用，包括降解pgRNA，因此抑制病毒複製，以及降解所有病毒信使RNA(mRNA)轉錄物，從而預防病毒蛋白之表現。這可導致針對HBV之功能性免疫反應的恢復，無論是單獨使用還是與其他療法組合使用。相反地，NRTI作用於病毒生命週期的不同部分，並且具有與SIRNA01不同的作用機制。NRTI抑制HBV聚合酶，阻斷病毒pgRNA逆轉錄為病毒DNA，以及預防感染性病毒粒子之產生。然而，NRTI不會直接影響病毒蛋白(諸如，HBsAg)之產生。SIRNA01為靶向所有HBV病毒RNA之接合GalNAc之siRNA，從而抑制病毒粒子和次病毒粒子之產生和分泌。SIRNA01減少含有HBsAg之非感染性次病毒粒子被認為是與目前可用治療方法之重要差別。
新出現之臨床數據暗示可能需要多種治療方式之組合才能達成大多數慢性HBV患者之功能性治癒(Revill PA et al., Meeting the Challenge of Eliminating Chronic Hepatitis B Infection, Genes (Basel) 2019 Apr 1, 10(4):260; Zoulim F et al., Antiviral therapies and prospects for a cure of chronic hepatitis B, Cold Spring Harb Perspect Med. 2015 Apr 1, 5(4):a021501)。慢性HBV感染中非病毒粒子引入之HBsAg之過度分泌被認為會導致T和B細胞功能障礙，並且損害宿主清除或控制病毒之能力(Bertoletti等人，2016，同上；Burton等人，2018，同上；Maini等人，2016，同上)。因此，功能性治癒之發展可能需要減少或消除HBsAg，同時誘發針對感染之宿主免疫力。當單獨投予時，AB01和SIRNA01與慢性HBV感染患者之HBsAg大幅降低相關(Gane E et al., Safety and Antiviral Activity of VIR-2218, An X-Targeting RNAi Therapeutic, In Participants With Chronic Hepatitis B Infection: Week 48 Follow-Up Results, Oral Presentation, Presented at the EASL Digital International Liver Conference, June 23-26, 2021; Yuen MF et al., Preliminary Results From a Phase 2 Study Evaluating VIR-2218 Alone and in Combination With Pegylated Interferon Alfa-2a in Participants With Chronic Hepatitis B Infection, Oral Presentation, Presented at AASLD: The Liver Meeting (Virtual), November 12-15, 2021)。AB01和SIRNA01之組合可導致HBsAg之急遽、持續降低。這是由其中用AB01和SIRNA01之聯合治療與HBsAg 顯著降低相關的慢性HBV感染之AAV-HBV小鼠模式所支持。此外，用SIRNA01之先前或伴隨治療達成較低的HBsAg水平可增大AB01之效果。HBsAg之減少亦可增大AB01之潛在免疫作用。AB01之Fc修飾被設計成增強ADCC/ADCP和抗原呈遞，結果促進CD4和CD8 T細胞反應之誘發。鑑於HBsAg對免疫功能之假定影響，AB01之此等潛在作用可在較低HBsAg的設定下增大，這可藉由SIRNA01的導入(lead-in)及/或同時治療來達成。較長期間的AB01投藥亦可能增強此等效果。
該子試驗計畫書(sub-protocol)中包含之參與者群體具有低病毒負荷和正常ALT，並且不適合接受NRTI治療。然而，NRTI(諸如，TDF)有助於減少病毒複製，從而降低HBV DNA水平。因此，除了AB01具有潛在的免疫調節作用外以最終達成HBV DNA之持續抑制(有或無HBsAg消失)，NRTI被包括本試驗計畫書中之所有方案的一部分以允許此等具有低HBV DNA水平之參與者達成HBV DNA＜LLOQ。
使用反應引導之方法評估AB01和TDF與SIRNA01之組合的時機和持續時間以達成功能性治癒。隊列2b將評估含有6至12劑AB01和20至44週NRTI(TDF)之組合方案中的6至12劑SIRNA01(200 mg)。為了評估參與者反應和AB01之潛在疫苗作用，將採集PBMC以進行針對HBV抗原之宿主細胞免疫反應(例如，T細胞)的評估。到第20週達成HBsAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者可能有資格停止AB01、TDF以及SIRNA01療法。到第20週仍未達成HBsAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者將繼續接受AB01、TDF以及SIRNA01療法直到第44週。 研究設計
表4顯示研究之治療組。各隊列最初將招募大約15位參與者。額外30位參與者可加入任何隊列。所有參與者之研究總持續時間長達100週-包括長達56天(8週)的篩選期、20至44週的治療期以及48週的追蹤期。於治療期的期間，若參與者到第20週的連續2次訪視時達成未檢出之HBsAg(＜0.05 IU/mL)，則可在於20週中斷所有研究干預，並進入追蹤期。替代地，所有參與者之治療期可為44週，並無於第20週中斷研究干預之選項。 表4. 臨床研究之治療組。 a富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)劑量按照標籤將為300 mg。美國境外的供應可為替諾福韋二吡呋酯(TD)，並且相應劑量按照標籤將為245 mg。
整體研究方案係顯示於圖1A和圖1B所示，並且所有隊列之投藥方案係顯示於圖2A和圖2B所示。
AB01係以復水之凍乾粉末形式提供，每4週皮下(SC)投予300 mg，總共6至12劑。SIRNA01係以液體形式提供，每4週SC投予200 mg，總共6至12劑。富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)(Viread®)係以錠劑形式提供，每日經口投予300 mg，總共140至308劑。替諾福韋在美國境外可以替諾福韋二吡呋酯(TD)形式提供，其中替諾福韋二吡呋酯(TD)係以錠劑形式提供，係以每日245 mg經口投予，總共140至308劑。
可平行招募本研究中之隊列。隊列可為開放、封閉或中斷。隊列1b和2b中之參與者的總持續時間將長達100週(包括篩選期、治療期以及追蹤期)。所有參與者之篩選期將長達56天(8週)。隊列1b和2b之治療期將長達20至44週。特別地，治療期可為44週(參見圖2B)。若參與者到第20週的連續2次訪視達成未檢出之HBsAg(＜0.05 IU/mL)且HBV DNA＜LLOQ，則可能有資格於第20週中斷研究干預，並在隨後訪視進入追蹤期(參見圖2A)。替代地，所有參與者的治療期可為44週，並無於第20週中斷研究干預之選項(參見圖2B)。所有其他參與者將繼續研究干預直到治療期結束，並於治療期結束後1週進入追蹤期。一旦參與者完成各自隊列之治療期，將進入追蹤期。追蹤期的最長持續時間為(多個)研究干預之最後一劑後48週。若參與者符合下列任何標準，則可於追蹤期的期間的任何時間開始商業NRTI：2週期內HBV DNA增加≥2 log 10IU/mL；在任何追蹤期訪視，HBV DNA＞100,000 IU/mL(無論其他生化參數或ALT值為何)；確認之HBV DNA增加＞20,000 IU/mL(亦即，在連續2次採集，無論其他生化參數或ALT值為何)；HBV DNA＞2,000 IU/mL，在同一次訪視同時符合下列任何標準：確認之總膽紅素＞2x ULN且ALT＞ ULN，任何肝功能代償不全徵象(包括但不限於確認之凝血酶原時間[PT]之增加≥2或國際標準化比值[INR]≥相對於基線之0.5、黃疸、腹水、腦病等)、ALT＞10x ULN、ALT＞ 2x ULN持續≥連續12週、ALT＞5x ULN持續≥連續4週；確認之HbeAg血清逆轉(亦即，HbeAg陰性後之HbeAg陽性)；或任何其他(多個)保證起始NRTI療法之臨床上顯著事件。符合於追蹤期的期間開始NRTI治療的標準之參與者將繼續被追蹤直到研究結束。
HBsAg消失率將在治療結束(EOT)和EOT後24週進行評估。確定在EOT HBsAg消失(定義為HBsAg＜ LLOQ，或HBsAg＜0.05 IU/mL)之參與者比例。亦確定在EOT達成HBV DNA減抑(＜LLOQ)且HBsAg消失(＜0.05 IU/mL)之參與者比例。亦確定在EOT後24週HBsAg消失(定義為HBsAg＜LLOQ，或HBsAg＜0.05 IU/mL)之參與者比例。確定之其他終點包括：(i)在中斷所有治療後24週和48週達成HBV DNA之持續抑制＜LLOQ之參與者比例；(ii)於第24週和第48週中斷所有治療後，達成HBV DNA之持續減抑(＜LLOQ)且HBsAg消失(＜0.05 IU/mL)之參與者比例；(iii)研究中橫跨時間點之血清HBsAg水平相對於基線之平均變化；(iv)研究中橫跨時間點達成未檢出之HBV DNA (＜LLOQ)之參與者比例；(v)研究中橫跨時間點之HBV DNA水平以及相對於基線之變化；(vi)研究中HBV DNA相對於基線之最低點和最大變化；(vii)追蹤期內符合NRTI治療標準之參與者比例；(viii)病毒學復發之參與者比例(定義為(1)在至少連續2次訪視有比最低點高≥1 log 10HBV DNA IU/mL之增加，或(2)在＜LLOQ後至少連續2次訪視有比LLOQ高≥1 log 10IU/mL之定量HBV DNA)。
亦評估藥物動力學(PK)、免疫原性以及不良事件。AB01和SIRNA01 PK之濃度將使用驗證之生物分析測定法定量。PK參數可包括C max、C last、T max、T last、AUC inf、AUC last、%AUC exp、t 1/2、λ z、V z/F以及CL/F。免疫原性數據可包括發生率、效價以及中和數據(例如，針對AB01之抗體)。評估額外的抗病毒活性，例如，抗HBs、HBV RNA以及B型肝炎核心相關抗原(HbcrAg)。評估展現抗HBs和抗Hbe血清轉化之參與者數量和百分比。
圖3A至5C提供隊列活動和追蹤期時間表。肝臟彈性影像可使用FibroScan或等效物進行。此外，體重(和BMI)將於篩選和各研究訪視時確定。篩選和在D8將記錄12導聯安全性心電圖(ECG)，在參與者已舒適地休息大約10分鐘後在仰臥位測量。對於圖4A至4C所示之隊列2b，可以不同的間隔評估AB01和SIRNA01之PK參數，諸如，彼等表5所示者。對於圖5A至5C所示之追蹤期，可包括於第2、6、10、28、32、40以及44週之額外訪視。例如，追蹤期之活動可如圖5D至5I所示。 表5. 隊列2b之PK評估之時機。 AB01 PK樣本採集包括用於游離和總PK測定法之樣本(若適用)。將在投藥前1小時採集投藥前樣本。 將在D1投藥後22至28小時之間採集第2天AB01 PK投藥後樣本。 可在D8訪視期間的任何時間採集AB01 PK投藥後樣本。 將在投藥前1小時採集SIRNA01PK投藥前樣本。 將在投藥後2至6小時之間採集第1天、第20週以及第44週SIRNA01PK投藥後樣本。 將在D1投藥後22至28小時之間採集第2天SIRNA01 PK樣本。 患者群體
參與者將有慢性HBV感染，且為HbeAg陰性，以及於篩選前一年期間內具有低HBV DNA(≤2,000 IU/mL)且ALT水平低於或等於(≤)ULN(或ALT水平低於(＜)ULN)。出於研究目的，慢性HBV感染係定義為基於先前或目前的實驗室文件，有相隔至少6個月2次陽性血清HBsAg、HBV DNA或HBeAg(此等測試相隔6個月進行之任何組合皆為可以接受的)。ALT之ULN值可為，例如，女性為34 IU/mL，男性為43 IU/mL。參與者年齡≥18歲(或法定同意年齡，以較大者為準)至＜66歲。參與者亦具有HBsAg ＞篩選時檢測下限，且身體質量指數(BMI)≥18 kg/m 2至≤35 kg/m 2。
其他納入標準包括下列者： ˙ 必須由病史確定為身體健康，體檢、生命徵象以及實驗室值無臨床上顯著的發現 ˙ 女性參與者必須具有陰性妊娠試驗或停經後狀態之確認。停經後狀態係定義為在無其他醫療原因的情況下12個月無月經。有生育潛力之婦女(WOCBP)必須於篩選時具有陰性血液妊娠試驗，並且第1天具有陰性尿液妊娠試驗，不能餵母乳，以及必須願意從研究干預投予前14天直至最後一劑AB01或SIRNA01後48週使用高效避孕方法。女性參與者亦必須同意從研究干預投予之時直至最後一劑AB01或SIRNA01後48週避免捐卵和體外受精。 ˙ 具有有生育潛力之女性伴侶的男性參與者必須同意從研究干預投予之時直至最後一劑AB01或SIRNA01後48週符合下列避孕要求之一：輸精管切除術或無精子症的記錄，或使用男用保險套加上伴侶使用WOCBP 避孕所列之避孕選項中之一項。男性參與者亦必須同意從第一研究干預投予之時直至最後一劑AB01或SIRNA01後48週不捐精。 ˙ 能夠理解並遵守研究要求且能夠提供書面受試者同意書。
排除標準包括下列者： ˙ 非HBV病因引起的臨床上顯著的肝病史 ˙ 肝功能代償不全的病史或目前證據，包括腹水、肝性腦病及/或食管或胃靜脈曲張 ˙ 5年內診斷或治療過惡性腫瘤的病史或目前懷疑(允許對鱗狀或非侵襲性基底細胞皮膚癌之局部治療；若於篩選前適當治療，則允許子宮頸原位癌)；接受惡性腫瘤評估之參與者不符合資格。 ˙ 骨髓或實體器官移植史 ˙ 於第1天前7天內，已知除慢性HBV感染外的活動性感染或任何臨床上顯著的急性病況，諸如，發燒(＞38℃)或急性呼吸道疾病 ˙ 合併感染人類免疫缺陷病毒(HIV)、A型肝炎病毒(HAV)、C型肝炎病毒(HCV)、D型肝炎病毒(HDV)或E型肝炎病毒(HEV)。 ˙ HCV抗體或HDV抗體陽性，但分別記錄HCV RNA或HDV RNA陰性之參與者符合資格。陽性HAV免疫球蛋白M(IgM)或HEV IgM，但無症狀，且陽性HAV免疫球蛋白G(IgG)或HEV IgG之參與者符合資格。 ˙ 篩選前12個月內有酗酒或藥物濫用史或臨床證據，或篩選時有陽性藥物篩選，除非可用處方用藥來解釋(診斷和處方必須得到試驗主持人的核准)。註：允許使用大麻 ˙ 在研究干預投予前或在涉及介入治療的另一項臨床研究的追蹤期處於活躍狀態時(以較長者為準)，以90天或5個半衰期(若已知)內接受研究藥劑。參與者亦必須同意在參與此研究期間的任何時間(包括追蹤期)不參與任何其他干預研究。 ˙ 由試驗主持人所確定，可能干擾研究干預、評估或遵守試驗計畫書或以其他方式使參與者不適合參與研究的任何臨床上顯著的醫療或精神狀況。 ˙ 顯著纖維化或硬化係定義為篩選時肝臟彈性影像(FibroScan或等效物)結果＞8.5 kPa，或一年內肝切片有Metavir F3纖維化或F4硬化。 ˙ 免疫複合體疾病史 ˙ 自體免疫疾病史 ˙ HBV相關肝外疾病史，包括但不限於HBV相關皮疹、關節炎或腎小球腎炎 ˙ 對單株抗體、抗體片段或任何AB01之賦形劑有過敏反應、高敏反應或不耐症史 ˙ 於第1天前24週內之先前NRTI治療或用PEG-IFNα之任何先前療法 ˙ 在研究干預投予前14天內以及整個研究中使用任何下列全身性用藥： ˙ 撲熱息痛(paracetamol)(對乙醯胺基酚)≥3 g/天 ˙ 異煙肼(isoniazid) ˙ 全身性類固醇(潑尼松(prednisone)等效＞10 mg/天)或其他免疫抑制劑(註：允許使用皮質類固醇投予以治療免疫介導之AE。) ˙ 於研究干預投予前48週內接受具有針對HBV之活性之寡核苷酸(例如，siRNA、反義寡核苷酸) ˙ 第1天前24週內接受AB01 ˙ 參與者在實驗室試驗篩選時具有下列實驗室參數： ˙ 篩選時以及研究招募前12個月內的任何時間為ALT＞ULN ˙ 篩選時以及研究招募前12個月內的任何時間為HBeAg陽性 ˙ 篩選時以及研究招募前12個月內的任何時間HBV DNA＞2,000 IU/mL ˙ 直接膽紅素或國際標準化比值(INR)＞1.5 ULN ˙ 篩選時根據克羅夫特-高爾特(Cockcroft-Gault)式計算出的肌酐清除率(CLcr)＜30 mL/min ˙ 篩選時12導聯心電圖有臨床上顯著的異常(由試驗主持人所確定) 伴隨療法˙ 研究期間不允許伴隨療法 ˙ 禁止於第1天前使用NRTI。於研究期間，參與者將按照試驗計畫書接受TDF。治療期的期間不允許使用其他NRTI。若參與者於追蹤期的期間需要NRTI療法，則可開始商業NRTI。 ˙ 於研究干預投予前14天內以及整個研究中禁止使用任何下列全身性用藥： ○  全身性類固醇(潑尼松等效＞10 mg/天)或其他免疫抑制劑(註：允許使用皮質類固醇投予以治療免疫介導之AE。) ○  撲熱息痛(對乙醯胺基酚)≥3 g/天 ○  異煙肼 ˙ 此外，應僅於無法確定治療替代方案並仔細考慮參與者的潛在風險和益處後，才考慮在研究期間投予任何潛在的肝毒性藥物。具有潛在肝毒性或與藥物誘發之肝損傷相關的用藥包括但不限於下列者(Björnsson 2016)：阿司匹林＞3 g/天或布洛芬≥1.2 g/天；三環抗抑鬱藥；丙戊酸鹽；苯妥英(Phenytoin)；胺碘酮(Amiodarone)；同化類固醇；別嘌呤醇；阿莫西林-克拉維酸(Amoxillin-clavulanate)；米諾環素(Minocycline)；呋喃妥因(Nitrofurantoin)；磺胺甲唑(Sulfamethoxale)/甲氧苄啶(trimethoprim)；紅黴素(Erythromycin)；利福平(Rifampin)；唑類抗真菌劑；以及草藥或自然療法。 實施例 2 抗體、 SI RNA 、 PEG-IFNα 以及 NRTI 抑制劑聯合療法治療慢性 HBV 感染之臨床評估
於第2期、多中心、開放性研究臨床研究中評估未接受先前NRTI或PEG-IFNα治療之有慢性HBV感染的非硬化之人類患者的抗HBV抗體(AB01)與抗HBV siRNA (SiRNA01)、PEG-IFNα及NRTI替諾福韋組合的安全性和功效。 背景
慢性HBV感染仍然是一個具有顯著發病率和死亡率之重要全球公共衛生課題(Trepo，2014，同上)。慢性HBV感染是一種動態程序，並且取決於病毒複製和宿主免疫反應之間的關係。患者可能在疾病的不同期之間搖擺，並且對生物標記物(諸如，HBV DNA、丙胺酸轉胺酶(ALT)以及HBV抗原)之連續監測有助於確定疾病的自然史。感染後，HBV病毒可能在沒有宿主免疫反應的情況下以隱形病毒形式複製。經過多年的病毒複製(高 HBV DNA)後，免疫系統會對感染之肝細胞做出反應，導致B型肝炎e抗原(HBeAg)陽性患者之ALT升高。在此疾病階段，患者的特徵亦包括肝臟之中度至重度發炎和纖維化之加速進展。週產期感染的患者可能在感染後10至30年後達到慢性HBV感染的這一階段，而成年或兒童時期感染的患者進展更快，甚至可能完全跳過這一階段。此群體的結果亦各不相同。在HBeAg陽性的患者中，一些患者快速變為HBeAg陰性，而另一些患者在治療或不治療的情況下需要更長的時間才能變為HBeAg陰性且抗HBe陽性(EASL，2017，同上；Fattovich G et al., Natural history of chronic hepatitis B: special emphasis on disease progression and prognostic factors, J Hepatol. 2008 Feb, 48(2):335-52；Terrault，2018，同上；Wang G and Duan Z, Guidelines for Prevention and Treatment of Chronic Hepatitis B, J Clin Transl Hepatol. 2021 Oct 28,9(5):769-791)。
ALT升高及HBeAg陽性且HBV DNA＞20,000 IU/mL或HBeAg陰性且 HBV DNA＞2,000 IU/mL的患者有資格接受核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)及/或聚乙二醇化干擾素-α-2a (PEG-IFNα)(Liang TJ et al., Present and future therapies of hepatitis B: From discovery to cure, Hepatology 2015 Dec, 62(6):1893-908)。NRTI可用長期治療減抑HBV DNA，但不能消除cccDNA或嵌入DNA。與NRTI相比，PEG-IFNα可誘發長期病毒控制，但僅限於一小部分患者(＜10%)且在48週療程後(Konerman MA and Lok AS, Interferon Treatment for Hepatitis B, Clin Liver Dis. 2016 Nov, 20(4):645-665)。因此，尚未滿足對能夠達成功能性治癒之更好治療選項之需求。
在慢性HBV感染患者中，每週投予PEG-IFNα 180 μg持續48至52週，通常會導致整體大約≤10%的患者的HBsAg消失(Konerman和Lok，2016，同上)。然而，在基線HBsAg值低於大約1,000至1,500 IU/mL的患者子集中，接受PEG-IFNα與或不與NRTI後之HBsAg消失率為大約20至40%(He LT et al., Effect of switching from treatment with nucleos(t)ide analogs to pegylated interferon α-2a on virological and serological responses in chronic hepatitis B patients, World J Gastroenterol. 2016, 22(46):10210-10218; Huang J et al., Switching to PegIFNα-2b leads to HbsAg loss in patients with low HbsAg levels and HBV DNA suppressed by Nas, Sci Rep. 2017, 7(1):13383; Lee et al., 2020, supra; Li et al., 2016, supra; Ning Q et al., Switching from entecavir to PegIFN alfa-2a in patients with HBeAg-positive chronic hepatitis B: a randomized open-label trial (OSST trial), J Hepatol. 2014, 61(4):777-84; Takkenberg B et al., Baseline HbsAg level predict HbsAg loss in chronic hepatitis B patients treated with a combination of peginterferon alfa-2a and adefovir: an interim analysis, EASL International Liver Congress, Copengahen, Denmark, 2009)。這暗示在PEG-IFNα療法期間或之前減少HBsAg可實質地增加HBsAg消失率。因此，由SIRNA01和AB01(兩者均與HBsAg的實質降低相關)所組成之方案加上PEG-IFNα可提高功能性治癒率，超過PEG-IFNα單一療法的功能性治癒率。
SIRNA01和PEG-IFNα之組合與HBsAg的實質降低相關，超過彼等單獨使用任一藥劑者。在PEG-IFNα 附加療法的研究中，第24週的平均HBsAg下降為0.57 log 10IU/mL(Farag MS et al., Addition of Peginterferon Alfa-2a Increases HBsAg Decline in HBeAg-negative Chronic Hepatitis B Patients Treated with Long-Term Nucleos(t)ide Analogue Therapy, Presented at AASLD The Liver Meeting, November 8-12, 2019, Boston, MA.)。相反地，在接受SIRNA01和PEG-IFNα兩者之參與者中，第24週的平均HBsAg下降為2.55 log 10IU/mL(Yuen等人，2021，同上)。然而，很少觀察到HBsAg消失的事件。添加AB01可導致更大程度減少之HBsAg、更高之HBsAg消失率以及功能性治癒。
此外，PEG-IFNα對免疫系統具有重要效果，其可增大投予AB01後HBV特異性免疫之潛在發展。I型干擾素係經由對輔助細胞(諸如，抗原呈遞細胞)之效果直接或間接調節抗病毒T細胞(Crouse J et al., Regulation of antiviral T cell responses by type I interferons, Nat Rev Immunol. 2015 Apr, 15(4):231-42)和浸潤或肝臟駐留免疫細胞(Dill MT et al., Pegylated IFN-α regulates hepatic gene expression through transient Jak/STAT activation, J Clin Invest. 2014Apr, 124(4):1568-81)。正如最近所述，肝臟駐留免疫細胞(諸如，庫佛氏(Kuffer)細胞)在引發強大的HBV 特異性T細胞反應中發揮著重要作用(De Simone G et al., Identification of a Kupffer cell subset capable of reverting the T cell dysfunction induced by hepatocellular priming, Immunity 2021 Sep 14, 54(9):2089-2100.e8)。此等效果可進一步增加在含有AB01之聯合療法後誘發持久T細胞反應(「疫苗作用」)之可能性。 研究設計
整體研究方案係如圖6A和圖6B所示，並且所有隊列的投藥方案係如圖7A和圖7B所示。
表6顯示研究之治療組。隊列1a、2a和3a將各自招募大約10位參與者。隊列4a和隊列5a將各自招募大約15位參與者。此外，任何隊列中最多可添加30位流動(floater)參與者。隊列1a、2a以及4a中之所有參與者的研究總持續時間長達100週；隊列3a中之所有參與者的研究總持續時間為92至96週；以及隊列5a中之所有參與者的研究總持續時間為104週。這包括長達56天(8週)的篩選期；隊列1a和2a的治療期為44週，隊列3a的治療期為36或40週，隊列4a的治療期為20至44週，隊列5a為20至48週；以及長達48週的追蹤期。替代地，隊列4a中之參與者的治療期可為44週，隊列5a中之參與者的治療期可為48週。若隊列4a和5a之參與者到第20週的連續2次訪視達成所有下列者，則可能有資格於第20週後中斷研究干預(NRTI 除外)，並在隨後訪視進入追蹤期：未檢出之HBeAg(基於定量HBeAg)；未檢出之HBsAg(＜0.05 IU/mL)；以及減抑之HBV DNA(＜LLOQ)。所有其他參與者將繼續研究干預直到治療期結束，並於治療期結束後1週進入追蹤期。替代地，隊列4a和5a中之參與者的治療期可為44或48週，並無於第20週中斷研究干預之選項。
一旦參與者完成各自隊列之治療期，將進入追蹤期。追蹤期的最長持續時間為最後一劑(多個)研究干預後48週。若參與者基於可用數據符合中斷NRTI的標準，則將於追蹤期的F1或F12訪視時中斷NRTI。如活動時間表所示，於追蹤期內中斷NRTI之參與者需要額外的研究訪視(圖12A至12C)。肝臟彈性影像可使用FibroScan或等效物進行。此外，體重(和BMI)將於篩選和各研究訪視時確定。篩選和在D8將記錄12導聯安全性心電圖(ECG)，在參與者已舒適地休息大約10分鐘後在仰臥位測量。在F1訪視時中斷NRTI之參與者將需要返回試驗機構進行F2、F6以及F10的額外訪視，或者需要返回試驗機構進行 F2、F6、F10、F28、F32、F40以及F44的額外訪視。在F12訪視時中斷NRTI之參與者將需要返回試驗機構進行額外訪視F14、F18以及F22，或者將需要返回試驗機構進行額外訪視F14、F18、F22、F28、F32、F40以及F44。對於隊列1a、2a以及3a，將在投藥前採集AB01 PK樣本(在投藥前1小時採集)。 表6. 臨床研究之治療組。 a將於隊列招募參與者前確定AB01之劑量。 b富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)劑量將按照標籤為300 mg。美國境外的供應可為替諾福韋二吡呋酯(TD)，並且相應劑量將按照標籤為245 mg。 c參與者所接受的最少劑。參與者將繼續接受額外劑的TDF直到有資格進行NRTI中斷。 d將在隊列招募參與者前最終確定投藥方案。
對於圖10A至10C所示之隊列4a和圖11A至11E所示之隊列5a，AB01和SIRNA01之PK參數可以不同的時間進行評估，諸如，彼等下表7所示者。 表7. 隊列4a和5a之PK評估之時機。 AB01 PK樣本採集包括用於游離和總PK測定法之樣本(若適用)。將在投藥前1小時採集投藥前樣本。 將在D1投藥後22至28小時之間採集第2天 AB01 PK投藥後樣本。 可在D8訪視期間的任何時間採集AB01 PK投藥後樣本。 將在投藥前1小時採集SIRNA01PK投藥前樣本。 將在投藥後2至6小時之間採集第1天、第20週以及第44週SIRNA01PK投藥後樣本。 將在D1投藥後22至28小時之間採集第2天SIRNA01 PK樣本。
對於圖12A至12C所示之追蹤期，可包括額外訪視。例如，追蹤期的活動可如圖12D至12I所示。
基線HBsAg＞3,000 IU/mL之參與者可參與AB01 PK次研究。此次研究之參與者將於治療期的期間有高達兩次額外研究訪視，以採集AB01 PK樣本。將於第3、4或5劑AB01後5至7天出現PK次研究訪視1。將於第7、8或9劑AB01後5至7天出現PK次研究訪視2(視需要的)。除PK樣本外，同一次訪視亦將採集HBsAg、HBV DNA以及肝功能測試樣本。隊列3a所招募之參與者被排除在視需要的AB01 PK次研究外。
AB01以復水之凍乾粉末形式提供，每4至12週皮下(SC)投予高達300mg。SIRNA01係以液體形式提供，每4週SC投予200 mg。PEG-IFNα (Pegasys®)係以液體形式提供，每週SC投予 180 mcg。富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)(Viread®)係以錠劑形式提供，每日經口投予300 mg。替諾福韋在美國境外可以替諾福韋二吡呋酯(TD)形式提供，其中替諾福韋二吡呋酯(TD)係以每日245 mg經口投予之錠劑形式提供。
隊列1a/2a中之參與者將從第1天到第44週每4週接受高達300 mg的AB01，且從第1天開始每日接受300 mg TDF(或245 mg TD)直到有資格中斷NRTI或追蹤期結束(以較晚者為準)。隊列3a中之參與者將從第1天到第44週每8到12週接受300 mg的AB01，且從第1天開始每日接受300 mg TDF(或245 mg TD)直到有資格中斷NRTI或追蹤期結束(以較晚者為準)。隊列4a中之參與者將從第1天到第20週或第44週每4週接受300 mg的AB01和200 mg的SIRNA01，且從第1天開始每日接受300 mg TDF(或245 mg TD)直到有資格中斷NRTI或追蹤期結束(以較晚者為準)。隊列5a中之參與者將從第1天到第20週或第48週每4週接受300 mg的AB01和200 mg的SIRNA01，且從第1天到第48週每週接受180 mcg的PEG-IFNα，以及從第1天開始每日接受300 mg TDF(或245 mg TD)直到有資格中斷NRTI或追蹤期結束(以較晚者為準)。
將使用反應引導之方法評估達成功能性治癒之AB01和TDF組合或不組合SIRNA01之時機和持續時間。於隊列4a中，將從第1天開始每4週投予AB01和SIRNA01，且每日投予TDF。到第20週達成HBsAg和HBeAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者可能有資格停止AB01和SIRNA01療法。到第20週未達成HBsAg和HBeAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者將繼續接受AB01和SIRNA01療法直到第44週。將從第1天開始每日投予TDF，並於追蹤期第12週符合NRTI中斷標準時結束。
將使用反應引導之方法評估達成功能性治癒之AB01和TDF組合或不組合SIRNA01和PEG-IFNα之時機和持續時間。於隊列5a中，將從第1天開始每4週投予AB01和SIRNA01，且每日投予TDF及每週投予PEG-IFNα。到第20週達成HBsAg和HBeAg消失且HBV DNA＜LLOQ之參與者可能有資格停止AB01、SIRNA01以及PEG-IFNα療法，而到第20週未達成HBsAg和HBeAg消失且 HBV DNA＜LLOQ之參與者會繼續接受AB01、SIRNA01以及PEG-IFNα直到第48週。將從第1天開始每天投予TDF，並可能於追蹤期第1週或第12週達成NRTI中斷標準時結束。
若參與者符合所有下列標準，則可於追蹤期的F1或F12訪視時中斷NRTI：HBsAg＜100 IU/mL且≥相對於基線HBsAg水平之1 log 10IU/mL下降；減抑之HBV DNA (定義為＜LLOQ)；未檢出之HBeAg(基於定量HBeAg)；ALT≤正常值上限(ULN)之2 倍。符合中斷NRTI治療標準之參與者將繼續按照追蹤期的活動時間表。基於試驗主持人的意見，達成NRTI中斷標準但由於其他原因不適合中斷NRTI之參與者可繼續接受NRTI治療。
對於具有下列者之參與者，試驗主持人將考慮於追蹤期的期間用NRTI療法再治療：兩週內HBV DNA增加≥2 log 10IU/mL；任何追蹤期訪視時HBV DNA＞ 100,000 IU/mL(無論其他生化參數或ALT值為何)；確認之HBV DNA增加＞20,000 IU/mL(亦即，在連續2次採集時，無論其他生化參數或ALT值為何)；HBV DNA＞2,000 IU/mL，在同一次訪視時同時達成下列任何標準：確認之總膽紅素＞2x ULN且ALT＞ULN，任何肝功能代償不全徵象(包括但不限於確認之凝血酶原時間[PT]增加≥2或國際標準化比值[INR]≥相對於基線為0.5(黃疸、腹水、腦病等)、ALT＞10x ULN、ALT＞2x ULN持續≥連續12週以及ALT＞5x ULN持續≥連續4週；確認之HBeAg血清逆轉(亦即，在NRTI中斷時HBeAg陰性後為HBeAg陽性)；或任何其他(多個)保證起始NRTI療法的臨床上顯著事件。
HBsAg消失率將在治療結束(EOT)和EOT後24週進行評估。確定在EOT時HBsAg消失(定義為HBsAg＜ LLOQ或＜0.05 IU/mL)之參與者比例。亦確定在EOT時達成HBV DNA減抑(＜LLOQ)且HBsAg消失(＜0.05 IU/mL)之參與者比例。確定在EOT後24週和F48追蹤訪視時HBsAg消失(定義為HBsAg＜LLOQ或＜0.05 IU/mL)之參與者比例。對於HBeAg陽性參與者，評估HBeAg消失(未檢出之HBeAg)之參與者比例、HBeAg消失(未檢出之HBeAg)所需時間、抗HBs和抗HBe血清轉化之參與者比例以及抗HBe血清轉化所需的時間。中斷所有治療後、第24週以及F48追蹤訪視時，達成HBV DNA持續減抑(＜LLOQ)且HBsAg消失(＜0.05 IU/mL)之參與者比例；研究中橫跨時間點之血清HBsAg水平相對於基線的平均變化；研究中橫跨時間點達成HBV DNA＜LLOQ之參與者比例；研究中橫跨時間點之HBV DNA水平以及相對於基線之變化；研究中 HBV DNA相對於基線之最低點和最大變化；病毒學復發之參與者比例(定義為(1)在至少連續2次訪視有≥高於最低點1 log 10HBV DNA IU/mL之增加，或(2)在＜LLOQ 後至少連續2次訪視有≥高於LLOQ之1 log 10IU/mL之定量HBV DNA)。
亦確定研究中符合NRTI中斷或再治療標準之參與者的比例以及研究中橫跨時間點達成ALT≤ULN之參與者的比例。評估AB01及/或SIRNA01之藥物動力學(PK)、免疫原性以及不良事件。AB01和SIRNA01 PK之濃度將使用驗證之生物分析測定法定量。PK參數可包括C max、C last、T max、T last、AUC inf、AUC last、%AUC exp、t 1/2、λ z、V z/F以及CL/F。AB01之免疫原性數據可包括抗藥物抗體之發生率和效價以及中和數據。評估其他抗病毒活性，諸如，抗HBs、HBV RNA以及B型肝炎核心相關抗原(HBcrAg)。
圖8A至12C提供隊列之活動時間表和追蹤期。 患者群體
參與者將有慢性HBV感染，且將為HBeAg陽性或陰性及有高HBV DNA(＞2,000 IU/mL)和ALT水平(＞ULN且≤5x ULN)。將招募大約40%的於篩選時有基線HBsAg大於10,000 IU/mL之參與者。此外，將鎖定大約30%的HBeAg陽性參與者以招募到隊列中。出於研究目的，慢性HBV感染係定義為基於先前或目前的實驗室文件，有相隔至少6個月2次出現血清HBsAg、HBV DNA或HBeAg陽性(此等測試相隔6個月進行之任何組合皆為可以接受的)。ALT之ULN值可為，例如，女性為34 IU/mL，男性為43 IU/mL。參與者年齡≥18歲(或法定同意年齡，以較大者為準)至＜66歲。篩選時參與者之HBsAg＞10 IU/mL，且身體質量指數(BMI)≥18 kg/m 2至≤35 kg/m 2。
其他納入標準包括下列者： ˙ 除了慢性HBV感染外，還必須由病史確定為身體健康，以及體檢、生命徵象以及實驗室值沒有臨床上顯著的發現 ˙ 女性參與者必須具有妊娠試驗陰性或停經後狀態之確認。停經後狀態係定義為在沒有其他醫療原因的情況下12個月無月經。有生育潛力之婦女(WOCBP)必須於篩選時具有陰性血液妊娠試驗，並且第1天具有陰性尿液妊娠試驗，不能餵母乳，以及必須願意從研究干預投予前14天直至最後一劑AB01、SIRNA01或PEG-IFNα後48週使用高效避孕方法。女性參與者亦必須同意從研究干預投予之時直至最後一劑AB01、SIRNA01或PEG-IFNα後48週避免捐卵和體外受精。 ˙ 具有有生育潛力之女性伴侶的男性參與者必須同意從研究干預投予之時直至最後一劑AB01、SIRNA01或PEG-IFNα後48週符合下列避孕要求之一：輸精管切除術或無精子症的記錄，或使用男用保險套加上伴侶使用WOCBP 避孕所列之避孕選項中之一項。男性參與者亦必須同意從第一研究干預投予之時直至最後一劑AB01、SIRNA01或PEG-IFNα後48週不捐精。 ˙ 能夠理解並遵守研究要求且能夠提供書面受試者同意書。
排除標準包括下列者： ˙ 非HBV病因引起的臨床上顯著的肝病史 ˙ 肝功能代償不全的病史或目前證據，包括腹水、肝性腦病及/或食管或胃靜脈曲張 ˙ 5年內診斷或治療過惡性腫瘤的病史或診斷或治療過目前懷疑的惡性腫瘤(允許對鱗狀或非侵襲性基底細胞皮膚癌之局部治療；若於篩選前進行適當治療，則允許子宮頸原位癌)；接受惡性腫瘤評估之參與者不符合資格。 ˙ 骨髓或實體器官移植史 ˙ 於第1天前7天內，已知除慢性HBV感染外的活動性感染或任何臨床上顯著的急性病況，諸如，發燒 (＞38℃)或急性呼吸道或GI疾病 ˙ 合併感染人類免疫缺陷病毒(HIV)、A型肝炎病毒(HAV)IgM、C型肝炎病毒(HCV)、D型肝炎病毒(HDV)或E型肝炎病毒(HEV)IgM。HCV抗體或HDV抗體陽性，但分別記錄 HCV RNA或HDV RNA陰性之參與者符合資格。陽性HAV免疫球蛋白M(IgM)或HEV IgM陽性，但無症狀，且陽性HAV免疫球蛋白G(IgG)或HEV IgG之參與者符合資格。 ˙ 篩選前12個月內有酗酒或藥物濫用史或臨床證據，或篩選時有陽性藥物篩選，除非可用處方用藥來解釋(診斷和處方必須得到試驗主持人的核准)。註：允許使用大麻 ˙ 在研究干預投予前或在涉及介入治療的另一項臨床研究的追蹤期處於活躍狀態時(以較長者為準)，以90天或5個半衰期(若已知)內接受研究藥劑。參與者亦必須同意在參與此研究期間的任何時間(包括追蹤期)不參與任何其他干預研究。 ˙ 由試驗主持人所確定，可能干擾研究干預、評估或遵守試驗計畫書或以其他方式使參與者不適合參與研究的任何臨床上顯著的醫療或精神狀況。 ˙ 顯著纖維化或硬化係定義為篩選時肝臟彈性影像(FibroScan或等效物)結果＞8.5 kPa，或一年內肝切片有Metavir F3纖維化或F4硬化。 ˙ 免疫複合體疾病史 ˙ 自體免疫疾病史 ˙ HBV相關肝外疾病史，包括但不限於HBV相關皮疹、關節炎或腎小球腎炎 ˙ 對單株抗體、抗體片段或任何AB01之賦形劑有過敏反應、高敏反應或不耐症史 ˙ 先前NRTI或PEG-IFNα療法 ˙ 在研究干預投予前14天內以及整個研究中使用任何下列全身性用藥： 撲熱息痛(對乙醯胺基酚)≥3 g/天 異煙肼 全身性類固醇(潑尼松等效＞10 mg/天)或其他免疫抑制劑(註：允許使用皮質類固醇投予以治療免疫介導之AE。) 僅隊列5a：茶鹼 僅隊列5a：美沙酮 ˙ 在研究干預投予前48週內接受具有針對HBV之活性之寡核苷酸(例如，siRNA、反義寡核苷酸) ˙ 第1天前24週內接受AB01 ˙ 參與者在實驗室試驗篩選時具有下列實驗室參數： 直接膽紅素或INR＞1.5 ULN 總膽紅素＞1.5倍ULN 血小板＜150,000個細胞/μL 僅隊列5a：血清澱粉酶或脂肪酶≥3倍ULN 僅隊列5a：促甲狀腺激素(TSH)和游離T4高於ULN或低於LLN 僅隊列5a：絕對嗜中性球數(ANC)＜1,500個細胞/mm 3。 ˙ 篩選時根據克羅夫特-高爾特式計算出的肌酐清除率(CLcr)＜30 mL/min ˙ 僅隊列5a：已知對干擾素產品過敏或有禁忌症 ˙ 僅隊列5a：目前或先前的精神病、雙極性情感疾患、思覺失調症、中度至重度抑鬱症病史、自殺意念、企圖或舉動，或自殺高風險 ˙ 僅隊列5a：目前或先前的臨床上顯著之視網膜疾病史 ˙ 僅隊列5a：篩選時目前或先前的慢性不受控制的低血糖症或不受控制的高血糖症/糖尿病(定義為HbA1c≥8%)史 ˙ 僅隊列5a：目前或先前的結腸炎病史 ˙ 篩選時12導聯心電圖出現臨床上顯著異常(由試驗主持人所確定) 伴隨療法˙ 研究期間不允許伴隨療法 ˙ 禁止於第1天前使用NRTI。在研究期間，參與者將按照試驗計畫書接受TDF。研究的期間不允許使用其他NRTI。 ˙ 在研究干預投予前14天內以及整個研究中禁止使用任何下列全身性用藥： ○  全身性類固醇(潑尼松等效＞10 mg/天)或其他免疫抑制劑(註：允許使用皮質類固醇投予以治療免疫介導之AE。) ○  撲熱息痛(對乙醯胺基酚)≥3 g/天 ○  異煙肼 ○  僅隊列5a：茶鹼 ○  僅隊列5a：美沙酮 ˙ 此外，應僅於無法確定治療替代方案並仔細考慮參與者的潛在風險和益處後，才考慮在研究期間投予任何潛在的肝毒性藥物。具有潛在肝毒性或與藥物誘發之肝損傷相關的用藥包括但不限於下列者(Björnsson 2016)：阿司匹林＞3 g/天或布洛芬≥1.2 g/天；三環抗抑鬱藥；丙戊酸鹽；苯妥英；胺碘酮；同化類固醇；別嘌呤醇；阿莫西林-克拉維酸；米諾環素；呋喃妥因；磺胺甲唑/甲氧苄啶；紅黴素；利福平；唑類抗真菌劑；以及草藥或自然療法。
雖然已經闡釋和描述特定具體例，將容易理解的是，可組合上述各種具體例以提供另外的具體例，並且可在其中做出各種改變而不悖離本發明之精神和範疇。
本說明書中提及的或申請案數據表中所列的所有美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、國外專利、國外專利申請案和以及非專利公開案，包括於2022年5月19日提交之美國臨時專利申請號63/343,896和於2022年6月17日提交之美國臨時專利申請號63/353,383(其係藉由引用方式整體納入本文中，除非另有說明)。若需要採用各種專利、申請案以及公開案的概念來提供另外的具體例，則可修飾具體例的各種態樣。
根據上述說明，可對具體例進行此等和其他改變。一般而言，在下列請求項中，所用之術語不應被解釋為將請求項限制於說明書和請求項中所揭露之具體實施例，而應被解釋為包括所有可能的具體例以及此等請求項所享有的等效的完整範疇。因此，請求項不受本揭示內容之限制。
[ 圖 1A 至 1B]描繪實施例1中臨床研究之研究方案。
[ 圖 2A 至 2B]描繪實施例1中臨床研究之按照隊列(cohort)之投藥(dosing)方案。
[ 圖 3A 至 3D]描繪實施例1中臨床研究中的隊列1b之活動時間表。
[ 圖 4A 至 4D]描繪實施例1中臨床研究中的隊列2b之活動時間表。
[ 圖 5A 至 5I]描繪實施例1中臨床研究中的所有隊列之追蹤期之活動時間表。
[ 圖 6A 至 6B]描繪實施例2中臨床研究之研究方案。
[ 圖 7A 至 7B]描繪實施例2中臨床研究之按照隊列之投藥方案。
[ 圖 8A 至 8D]描繪實施例2中臨床研究中的隊列1a/2a之活動時間表。
[ 圖 9A 至 9E]描繪實施例2中臨床研究中的隊列3a之活動時間表。
[ 圖 10A 至 10E]描繪實施例2中臨床研究中的隊列4a之活動時間表。
[ 圖 11A 至 11E]描繪實施例2中臨床研究中的隊列5a之活動時間表。
[ 圖 12A 至 12I]描繪實施例2中臨床研究中的所有隊列之追蹤期之活動時間表。
TW202413400A_112118549_SEQL.xml

Claims (113)

  1. 一種治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA；以及 (c)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；以及 其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
  2. 一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體，其中： 其中該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA和核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。
  3. 一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
  4. 一種用於製造用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之藥劑之抗HBV抗體；其中： 該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA和核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。
  5. 一種用於製造第一藥劑之抗HBV抗體；用於製造第二藥劑之靶向HBV mRNA之siRNA；以及用於製造第三藥劑之核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，其中該第一、第二以及第三藥劑係用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病，其中：該對象為HBeAg陰性，該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，及/或該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
  6. 如請求項1之方法，其中該對象為HBeAg陰性。
  7. 如請求項1之方法，其中該對象在治療前具有≤2000 IU/mL之HBV DNA水平。
  8. 如請求項1之方法，其中該對象在治療前具有＜2000 IU/mL之HBV DNA水平。
  9. 如請求項1之方法，其中該對象為非硬化及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平≤正常值上限(ULN)。
  10. 如請求項1之方法，其中該對象為非硬化及/或具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＜正常值上限(ULN)。
  11. 如請求項1之方法，其中該對象先前未經投予NRTI。
  12. 如請求項1之方法，其中該對象在治療前24週內未接受NRTI。
  13. 如請求項1之方法，其中該對象先前未經投予抗HIV抗體。
  14. 如請求項1之方法，其中該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
  15. 一種治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法，其包含向該對象投予： (a)抗HBV抗體； (b)靶向HBV mRNA之siRNA； (c)干擾素-α；以及 (d)核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；以及 其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。
  16. 一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體，其中： 該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA、干擾素-α以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。
  17. 一種用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)；其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。
  18. 一種用於製造用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病之藥劑之抗HBV抗體；其中： 該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平；以及 該對象亦經投予靶向HBV mRNA之siRNA、干擾素-α以及核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)。
  19. 一種用於製造第一藥劑之抗HBV抗體、用於製造第二藥劑之靶向HBV mRNA之siRNA、用於製造第三藥劑之干擾素-α以及用於製造第四藥劑之核苷(酸)逆轉錄酶抑制劑(NRTI)，其中該第一、第二、第三以及第四藥劑係用於治療有此需求之對象之B型肝炎病毒(HBV)感染或HBV相關疾病；其中：該對象為HBeAg陰性或HBeAg陽性，該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平，該對象為非硬化，該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN，該對象先前未經投予NRTI，該對象在治療前24週內未接受NRTI，該對象先前未經投予抗HIV抗體，該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA，該對象先前未經投予干擾素-α，該對象在治療前為HBsAg陽性，及/或該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。
  20. 如請求項15之方法，其中該對象為HBeAg陰性。
  21. 如請求項15之方法，其中該對象為HBeAg陽性。
  22. 如請求項15之方法，其中該對象在治療前具有＞2000 IU/mL之HBV DNA水平。
  23. 如請求項15之方法，其中該對象具有丙胺酸轉胺酶(ALT)水平＞正常值上限(ULN)且≤5倍ULN水平。
  24. 如請求項15之方法，其中該對象先前未經投予NRTI。
  25. 如請求項15之方法，其中該對象先前未經投予抗HIV抗體。
  26. 如請求項15之方法，其中該對象先前未經投予靶向HBV mRNA之siRNA。
  27. 如請求項15之方法，其中該對象先前未經投予干擾素-α。
  28. 如請求項15之方法，其中該對象在治療前為HBsAg陽性。
  29. 如請求項15之方法，其中該對象在治療前具有＞10 IU/mL之HBsAg水平。
  30. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體為人類抗體。
  31. 如請求項1之方法，其中該抗體為HBC34或HBC34之非天然變體。
  32. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45或46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49或50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  33. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  34. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  35. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈可變結構域(V L)；以及(b)與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈可變結構域(V H)。
  36. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：55之輕鏈可變結構域(V L)胺基酸序列；以及(b)根據SEQ ID NO：53之重鏈可變結構域(V H)胺基酸序列。
  37. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈，以及(b)與根據SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈。
  38. 如請求項1之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列，以及(b)根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列。
  39. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體為人類抗體。
  40. 如請求項15之方法，其中該抗體為HBC34或HBC34之非天然變體。
  41. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45或46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49或50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  42. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  43. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (i)分別根據SEQ ID NO：44、46以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列；以及 (ii)分別根據SEQ ID NO：48、50以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列。
  44. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈可變結構域(V L)；以及(b)與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈可變結構域(V H)。
  45. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：55之輕鏈可變結構域(V L)胺基酸序列；以及(b)根據SEQ ID NO：53之重鏈可變結構域(V H)胺基酸序列。
  46. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)與SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈，以及(b)與根據SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈。
  47. 如請求項15之方法，其中該抗HBV抗體包含： (a)根據SEQ ID NO：59之輕鏈胺基酸序列，以及(b)根據SEQ ID NO：57之重鏈胺基酸序列。
  48. 如請求項1之方法，其中該siRNA包含形成雙股區之有義股和反義股，其中該有義股包含與SEQ ID NO：1之核苷酸1579至1597相差不超過3個核苷酸之至少15個鄰接核苷酸，其中T係經U置換。
  49. 如請求項1之方法，其中該siRNA之該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列或由其所組成。
  50. 如請求項49之方法，其中該siRNA之該有義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：3)之核苷酸序列或由其所組成。
  51. 如請求項50之方法，其中該siRNA之至少一股包含至少1個核苷酸之3’突出端。
  52. 如請求項50之方法，其中該siRNA之該雙股區為15至30個核苷酸對長。
  53. 如請求項50之方法，其中該RNAi劑之各股具有15至30個核苷酸。
  54. 如請求項50之方法，其中該siRNA之該有義股之實質上所有核苷酸和該siRNA之該反義股之實質上所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸，以及 其中該有義股與附接於3’端之配體接合。
  55. 如請求項54之方法，其中該配體係通過單價連接子、二價分支連接子或三價分支連接子附接之一或多種GalNAc衍生物。
  56. 如請求項55之方法，其中該配體為 。
  57. 如請求項56之方法，其中該siRNA與以下結構所示之配體接合： 其中X為O或S。
  58. 如請求項57之方法，其中X為O。
  59. 如請求項50之方法，其中該siRNA之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸，其包含去氧核苷酸、3’端去氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、經2’-O-甲基修飾之核苷酸、經2’-氟修飾之核苷酸、經2’-去氧修飾之核苷酸、鎖核苷酸、解鎖核苷酸、構形限制核苷酸、受限乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、經2’-胺基修飾之核苷酸、經2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、經2’-C-烷基修飾之核苷酸、經2’-羥基修飾之核苷酸、經2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、經2’-O-烷基修飾之核苷酸、啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、經四氫吡喃修飾之核苷酸、經1,5-脫水己醇修飾之核苷酸、經環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、腺苷-二醇核酸或包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
  60. 如請求項50之方法，其中該siRNA包含磷酸骨架修飾、2’核糖修飾、5’三磷酸修飾或GalNAc接合修飾。
  61. 如請求項50之方法，其中該siRNA之該有義股之所有核苷酸和該反義股之所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸。
  62. 如請求項50之方法，其中該siRNA包含有義股和反義股，該有義股包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)和該反義股包含5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇。
  63. 如請求項62之方法，其中該L96與以下結構所示之有義股接合： 其中X為O。
  64. 如請求項15之方法，其中該siRNA包含形成雙股區之有義股和反義股，其中該有義股包含與SEQ ID NO：1之核苷酸1579至1597相差不超過3個核苷酸之至少15個鄰接核苷酸，其中T係經U置換。
  65. 如請求項15之方法，其中該siRNA之該反義股包含5’-UGUGAAGCGAAGUGCACACUU-3’(SEQ ID NO：4)之核苷酸序列或由其所組成。
  66. 如請求項65之方法，其中該siRNA之該有義股包含5’-GUGUGCACUUCGCUUCACA-3’(SEQ ID NO：3)之核苷酸序列或由其所組成。
  67. 如請求項66之方法，其中該siRNA之至少一股包含至少1個核苷酸之3’突出端。
  68. 如請求項66之方法，其中該siRNA之該雙股區為15至30個核苷酸對長。
  69. 如請求項66之方法，其中該RNAi劑之各股具有15至30個核苷酸。
  70. 如請求項66之方法，其中該siRNA之該有義股之實質上所有核苷酸和該siRNA之該反義股之實質上所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸，以及 其中該有義股與附接於3’端之配體接合。
  71. 如請求項70之方法，其中該配體係通過單價連接子、二價分支連接子或三價分支連接子附接之一或多種GalNAc衍生物。
  72. 如請求項71之方法，其中該配體為 。
  73. 如請求項72之方法，其中該siRNA與以下結構所示之配體接合： 其中X為O或S。
  74. 如請求項73之方法，其中X為O。
  75. 如請求項66之方法，其中該siRNA之至少一個核苷酸為經修飾之核苷酸，其包含去氧核苷酸、3’端去氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、經2’-O-甲基修飾之核苷酸、經2’-氟修飾之核苷酸、經2’-去氧修飾之核苷酸、鎖核苷酸、解鎖核苷酸、構形限制核苷酸、受限乙基核苷酸、無鹼基核苷酸、經2’-胺基修飾之核苷酸、經2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、經2’-C-烷基修飾之核苷酸、經2’-羥基修飾之核苷酸、經2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、經2’-O-烷基修飾之核苷酸、啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、經四氫吡喃修飾之核苷酸、經1,5-脫水己醇修飾之核苷酸、經環己烯基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基之核苷酸、包含甲基膦酸酯基之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、腺苷-二醇核酸或包含5’-磷酸酯擬似物之核苷酸。
  76. 如請求項66之方法，其中該siRNA包含磷酸骨架修飾、2’核糖修飾、5’三磷酸修飾或GalNAc接合修飾。
  77. 如請求項66之方法，其中該siRNA之該有義股之所有核苷酸和該反義股之所有核苷酸皆為經修飾之核苷酸。
  78. 如請求項66之方法，其中該siRNA包含有義股和反義股，該有義股包含5’- gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)和該反義股包含5’-usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6)， 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇。
  79. 如請求項78之方法，其中該L96與以下結構所示之有義股接合： 其中X為O。
  80. 如請求項1之方法，其中該NRTI為替諾福韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)、替諾福韋二吡呋酯(TD)、替諾福韋艾拉酚胺(TAF)、拉米夫定、阿德福韋地匹福酯、恩替卡韋(ETV)、替比夫定、AGX-1009、恩曲他濱(FTC)、克左夫定、利托那韋、迪夫昔、洛布卡韋、抗濾兒、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇-HBV、胸腺肽-α和更昔洛韋、貝西福韋(ANA-380/LB-80380)或替諾夫韋-抑利德斯(TLX/CMX157)。
  81. 如請求項15之方法，其中該NRTI為替諾福韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)、替諾福韋二吡呋酯(TD)、替諾福韋艾拉酚胺(TAF)、拉米夫定、阿德福韋地匹福酯、恩替卡韋(ETV)、替比夫定、AGX-1009、恩曲他濱(FTC)、克左夫定、利托那韋、迪夫昔、洛布卡韋、抗濾兒、N-乙醯基-半胱胺酸(NAC)、PC1323、特拉奇-HBV、胸腺肽-α和更昔洛韋、貝西福韋(ANA-380/LB-80380)或替諾夫韋-抑利德斯(TLX/CMX157)。
  82. 如請求項15之方法，其中該干擾素-α為干擾素-α-2a。
  83. 如請求項82之方法，其中該干擾素-α係經聚乙二醇化。
  84. 如請求項83之方法，其中該干擾素-α為聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEG-IFNα-2a)。
  85. 如請求項1之方法，其中： (i)該抗HBV抗體包含： (a)分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列，以及分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列；及/或 (b)與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈可變結構域(V L)；以及與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈可變結構域(V H)；及/或 (c)與SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈，以及(b)與根據SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈；以及 (ii)該siRNA包含有義股和反義股或由其所組成，該有義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)和該反義股包含5’- usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6) 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及 (iii)該NRTI為替諾福韋或富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。
  86. 如請求項15之方法，其中： (i)該抗HBV抗體包含： (a)分別根據SEQ ID NO：44、45以及47之CDRH1、CDRH2以及CDRH3胺基酸序列，以及分別根據SEQ ID NO：48、49以及52之CDRL1、CDRL2以及CDRL3胺基酸序列；及/或 (b)與根據SEQ ID NO：55之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈可變結構域(V L)；以及與根據SEQ ID NO：53之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈可變結構域(V H)；及/或 (c)與SEQ ID NO：59所示之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之輕鏈，以及(b)與根據SEQ ID NO：57之胺基酸序列至少90%、至少95%或100%相同之重鏈；以及 (ii)該siRNA包含有義股和反義股或由其所組成，該有義股包含5’-gsusguGfcAfCfUfucgcuucacaL96-3’(SEQ ID NO：5)和該反義股包含5’- usGfsuga(Agn)gCfGfaaguGfcAfcacsusu-3’(SEQ ID NO：6) 其中a、c、g以及u分別為2’-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯、2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯； Af、Cf、Gf以及Uf分別為2’-氟腺苷-3’-磷酸酯、2’-氟胞苷-3’-磷酸酯、2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯以及2’-氟尿苷-3’-磷酸酯； (Agn)為腺苷-二醇核酸(GNA)； s為硫代磷酸酯鍵聯；以及 L96為N-[三(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇；以及 (iii)該干擾素-α為聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEG-IFNα-2a)；以及 (iv)該NRTI為替諾福韋或富馬酸替諾福韋二吡呋酯(TDF)。
  87. 如請求項1之方法，其中每4週投予該抗HBV抗體和siRNA。
  88. 如請求項15之方法，其中每4週投予該抗HBV抗體和siRNA。
  89. 如請求項15之方法，其中每週投予一次該干擾素-α。
  90. 如請求項1或請求項15之方法，其中每日投予該NRTI。
  91. 如前述請求項中任一項之方法，其中以300 mg的劑量投予該抗HBV抗體。
  92. 如請求項91之方法，其中在44週、48週或更長的治療期內投予該抗HBV抗體。
  93. 如前述請求項中任一項之方法，其中以200 mg的劑量投予該siRNA。
  94. 如請求項93之方法，其中在44週、48週或更長的治療期內投予該siRNA。
  95. 如請求項15、20至29、39至47、64至79、81至84、86以及88至94中任一項之方法，其中以180 mcg的劑量投予該干擾素-α。
  96. 如請求項95之方法，其中在44週、48週或更長的治療期內投予該干擾素-α的劑。
  97. 如前述請求項中任一項之方法，其中以300 mg的劑量投予該NRTI。
  98. 如請求項1至96中任一項之方法，其中以245 mg的劑量投予該NRTI。
  99. 如請求項97或請求項98之方法，其中在44週、48週或更長的治療期內投予該NRTI。
  100. 如前述請求項中任一項之方法，其中從同一天開始向該對象投予該siRNA和該抗HBV抗體。
  101. 如前述請求項中任一項之方法，其中該對象患有慢性HBV。
  102. 如前述請求項中任一項之方法，其中該對象有D型肝炎病毒(HDV)感染。
  103. 如前述請求項中任一項之方法，其中該HBV相關疾病為慢性HBV。
  104. 如前述請求項中任一項之方法，其中該HBV相關疾病為HDV感染。
  105. 如前述請求項中任一項之方法，其中該對象為人類。
  106. 一種用於如請求項1、6至14、30至38、48至63、80、85、87、89至94以及97至105中任一項之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及NRTI。
  107. 一種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；以及NRTI於製造用於如請求項1、6至14、30至38、48至63、80、85、87、89至94以及97至105中任一項之方法之藥劑之用途。
  108. 一種抗HBV抗體於製造第一藥劑之用途；靶向HBV mRNA之siRNA於製造第二藥劑之用途；以及NRTI於製造第三藥劑之用途；其中該第一、第二以及第三藥劑係用於如請求項1、6至14、30至38、48至63、80、85、87、89至94以及97至105中任一項之方法之聯合療法。
  109. 一種用於如請求項15、20至29、39至47、64至79、81至84、86以及88至105中任一項之方法之抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及NRTI。
  110. 一種抗HBV抗體；靶向HBV mRNA之siRNA；干擾素-α；以及NRTI於製造用於如請求項15、20至29、39至47、64至79、81至84、86以及88至105中任一項之方法之藥劑之用途。
  111. 一種抗HBV抗體於製造第一藥劑之用途；靶向HBV mRNA之siRNA於製造第二藥劑之用途；干擾素-α於製造第三藥劑之用途；以及NRTI於製造第四藥劑之用途；其中該第一、第二、第三以及第四藥劑係用於如請求項15、20至29、39至47、64至79、81至84、86以及88至105中任一項之方法之聯合療法。
  112. 一種套組，其包含： 包含抗HBV抗體和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含靶向HBV mRNA之siRNA和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物；以及 包含NRTI和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物。
  113. 一種套組，其包含： 包含抗HBV抗體和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含靶向HBV mRNA之siRNA和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物； 包含干擾素-α和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物；以及 包含NRTI和醫藥上可接受之賦形劑之醫藥組成物。
TW112118549A 2022-05-19 2023-05-18 用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法 TW202413400A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202263343896P 2022-05-19 2022-05-19
US63/343,896 2022-05-19
US202263353383P 2022-06-17 2022-06-17
US63/353,383 2022-06-17

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202413400A true TW202413400A (zh) 2024-04-01

Family

ID=88836133

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW112118549A TW202413400A (zh) 2022-05-19 2023-05-18 用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法

Country Status (2)

Country Link
TW (1) TW202413400A (zh)
WO (1) WO2023225598A2 (zh)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SI3898668T1 (sl) * 2018-12-19 2024-02-29 Humabs Biomed Sa Protitelesa, ki nevtralizirajo virus hepatitisa B in njihove uporabe
US20220056110A1 (en) * 2018-12-20 2022-02-24 Vir Biotechnology, Inc. Combination hbv therapy

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023225598A3 (en) 2024-01-25
WO2023225598A2 (en) 2023-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3897672B1 (en) Combination hbv therapy
US20230242621A1 (en) Engineered hepatitis b virus neutralizing antibodies and uses thereof
WO2016020538A1 (en) Hbv vaccine and antibody combination therapy to treat hbv infections
CN114630680B (zh) 用于治疗乙型肝炎病毒感染的抗体组合物和方法
US20220339256A1 (en) Compositions and methods for treating hepatitis b virus (hbv) infection
TW202413400A (zh) 用於治療ｂ型肝炎病毒（ｈｂｖ）感染和ｈｂｖ相關疾病之組成物及方法
TW202411245A (zh) 用於治療ｄ型肝炎病毒（ｈｄｖ）感染和相關疾病之組成物及方法
JP2023540255A (ja) 肝細胞癌のためのｌａｇ－３アンタゴニスト療法
OA21025A (en) Engineered hepatitis B virus neutralizing antibodies and uses thereof.
JPWO2021262840A5 (zh)
AU2019373090B2 (en) Compositions and methods for treating viral infections
CN117042797A (zh) 用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合物和方法
EA046489B1 (ru) Композиции и способы лечения инфекции вируса гепатита b (вгв)
OA20553A (en) Compositions and methods for treating hepatitis B virus (HBV) infection.
WO2012107589A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
Fafi-Kremer et al. Monoclonal antibodies that target the hepatitis C virus envelope proteins prevent in vivo infection of an escape variant isolated from a liver transplant patient: 89