JP2023525840A - メチルフォレートを含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、顆粒形態のメチルフォレートを、カルニチン誘導体塩、薬学的に許容可能な添加剤、及び必要に応じて他の医薬活性成分又は栄養補助活性成分とともに含む医薬組成物及び／又は栄養組成物を記載する。前記組成物は、経口投与に有用である。本発明はまた、顆粒形態でメチルフォレートを含む組成物を得るための方法、及びメチルフォレートの減少に伴う障害の治療のためのその使用に関するものであり、ここではメチルフォレートが有用である。【選択図】なし

Description

発明の分野
本発明は、メチルフォレート（メチル葉酸又はメチル葉酸塩、methylfolate）を含む顆粒を、カルニチン誘導体塩を含む顆粒、薬学的に許容可能な添加剤（医薬品添加物、excipients）、及び必要に応じて他の医薬活性成分又は栄養補助（nutraceutical）活性成分とともに含む、医薬組成物及び／又は栄養組成物を記載する。前記組成物は、経口投与に、好ましくは錠剤又はサシェ（小袋、sachet）の形態で有用である。

本発明はまた、メチルフォレートを顆粒形態で含む前記組成物を得るための方法、及びメチルフォレートの減少に伴う障害（異常、疾患）の治療（処置）のための前記組成物の使用に関するものであり、ここではメチルフォレートが有用である。

技術水準
Ｌ－５－メチルフォレート（Ｌ－５－メチル葉酸塩、L-5-methylfolate）は、葉酸（ビタミンＢ９）の代謝的に活性な型であり、メチル基の転移によって、遺伝的欠損の存在下であってもホモシステインをメチオニンに変換することができる。

Ｌ－メチルフォレート（L-methylfolate）又は６（Ｓ）－５－メチルテトラヒドロフォレート（6(S)-5-methyltetrahydrofolate）［６（Ｓ）－５－ＭＴＨＦ］は、フォレート（folate）の主要な生物学的に活性なジアステレオマー（diastereoisomer）であり、かつ循環におけるフォレートの第１の型である。Ｌ－メチルフォレートはまた、膜を通って末梢組織へ、すなわち、血液脳関門を通って輸送される型である。細胞において、６（Ｓ）－５－ＭＴＨＦはホモシステインのメチル化に用いられて、メチオニン及びテトラヒドロフォレート（テトラヒドロ葉酸、tetrahydrofolate、ＴＨＦ）を形成する。ＴＨＦは、チミジン－ＤＮＡ、プリン類（ＲＮＡ及びＤＮＡ）並びにメチオニンの合成のための炭素単位の即時受容体（immediate acceptor）である。食品葉酸（food folate）及び細胞葉酸（cell folate）の約７０％は、６（Ｓ）－５－ＭＴＨＦからなる。葉酸（folic acid）、すなわち、フォレートの合成型は、メチレンテトラヒドロフォレートレダクターゼ（メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素、ＭＴＨＦＲ）により酵素還元され、生物学的に活性になる。ＭＴＨＦＲが遺伝子突然変異すると、細胞は葉酸を６（Ｓ）－５－ＭＴＨＦに変換できない。Ｄ－メチルフォレート又は６（Ｒ）－５－メチルテトラヒドロフォレート［６（Ｒ）－５－ＭＴＨＦ］は、フォレートのもう一つのジアステレオマーである。１日あたり２．５ｍｇ以上の用量を投与した研究では、Ｌ－メチルフォレートよりもＤ－メチルフォレートの血漿タンパク結合が大きくなり、その結果、Ｄ－メチルフォレートよりもＬ－メチルフォレートの腎クリアランスが有意に高くなった。さらに、Ｄ－メチルフォレートは、体内組織、主として肝臓に貯蔵される。Ｄ－メチルフォレートは、体内で代謝されず、調節酵素を阻害すると仮定されている。

脳代謝及びその代謝経路におけるフォレートの重要な役割が知られており、うつ症状がフォレート欠乏症（葉酸塩欠乏症、folate deficiency）の場合の最も一般的な神経精神医学的発現の一つであることが注目されている。うつ病患者の血中フォレート（葉酸塩）レベルは、健康な対照よりも平均で２５％低く、フォレートレベルが低いことは、抗うつ薬療法の好ましくない結果に対する強力な素因となる（Papakostas G.I.ら、Am J Psychiatry, 2012; 169 (12): 1267-74（非特許文献１））。

カルニチン又はその誘導体及びビタミン類などの他の化合物は、うつ病に関連する障害及び神経障害の治療に有用であり得る。ほとんどのフォレート受容体（葉酸受容体、folate receptors）は、小腸にみられる。

メチルフォレートは、糖尿病及び末梢神経障害の治療にも有用である。神経障害は、手、腕、足及び脚のしびれを引き起こし、疼痛及び脱力（weakness）を引き起こすこともある。これらの神経学的問題はまた、消化管、心臓及び生殖器官を含む他の器官においても生じ得る。糖尿病患者は、いつでも神経障害性の問題を発症し得るが、糖尿病が重篤になるにつれ、前記の合併症を発症する危険性が高くなる。

ＥＰ ２７８１２１４（特許文献１）には、安定化剤として非晶質Ｌ－５－メチルテトラヒドロフォレートカルシウム及びシステインを含む処方物が記載され、この処方物は、ＭＴＨＦとシステインとを混合（blending）する工程、及び得られた混合物から剤形を形成する工程を含む方法（プロセス）を経て調製される。前記組成物は、避妊薬としての使用のために、ドロスペリドン（drosperidone）及びエストラジオールを含んでもよい。

ＣＮ １０７８１２１９５（特許文献２）には、ＭＴＨＦと、ビタミンＣ及びその塩、イソビタミンＣ（isovitamin C）及びその塩、メルカプトエタノール、システイン、メルカプトエチルスルホン酸（mercaptoethyl sulfonic acid）、ジチオトレイトール、還元型グルタチオン、リポ酸から選択される還元性物質とを含む組成物が記載され、この組成物は、避妊薬としての使用のために、エストロゲン及び／又はプロゲステロンをさらに含んでもよい。

http://www.gnpd.com（非特許文献２）に報告されているMonster Multi Dietary Supplement aeは、心臓血管、骨の健康及び免疫系に対して機能的に使用するための２０のビタミン類及びミネラル類を含む市販の処方物である。ＭＴＨＦ及びＬ－カルニチンは、カプセル中に含まれるいくつかの成分のリストに含まれている。

米国特許第６，４４１，１６８号（特許文献３）には、５－メチル－（６Ｒ，Ｓ）、－（６Ｒ）－及び－（６Ｓ）－テトラヒドロ葉酸のカルシウム塩の４つの安定な結晶形、その調製方法、並びに薬剤及び食品添加物を製造するためのその使用が記載されている。

また、カルニチン及びカルニチン誘導体は、うつ病に伴う疾患及び神経学的疾患に有益な効果をもたらすことが知られている。

ＵＳ ４，３４６，１０７（特許文献４）には、老年期（senile）及び初老期（presenile）の精神運動性退行（psychomotor involution）の状態並びに老年期及び初老期の認知症などの脳代謝障害を有する患者を治療的に処置するためにアセチル－Ｌ－カルニチンを使用することが記載されている。

ＵＳ ４，３４３，８１６（特許文献５）には、レイノー病などの末梢血管疾患を有する患者を治療的に処置するためにアセチル－Ｌ－カルニチンを使用することが記載されている。

ＷＯ ９８／５７６２９（特許文献６）には、向精神性物質の明確な乱用を伴う、気分変調、及び抑うつ性、易刺激性（irritable）、気分循環性（cyclothymic）人格又は気質として分類可能な気分障害に罹患している若者を治療的に処置するためにアセチル－Ｌ－カルニチンを使用することが記載されている。

ＷＯ ０３／０６６０４１（特許文献７）には、主要な抑うつ性障害を有する非認知症の高齢者（ＮＤＧ－ＭＤＤ）においてうつ病を治療的に処置するためにアセチル－Ｌ－カルニチンを使用することが記載されている。

ＥＰ ０２５６９９９（特許文献８）には、急性及び／又は慢性末梢神経障害を治療するためにアセチル－Ｌ－カルニチンを使用することが記載されている。

ＥＰ １１７１１１１（特許文献９）には、活性成分が分解（劣化）することなく錠剤を調製するのに適したアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒が記載され、少量の水の存在下におけるカルニチン及びその誘導体の不安定性の問題を解決する。

ビタミンＢ群は、前記ビタミン類の欠乏に伴う神経障害の治療及び予防に有用であるが、それらの鎮痛、神経保護及び抗炎症効果に起因して、非欠損性神経障害（non-deficient neuropathies）の場合には有益な助剤でもある。ビタミンＢ類、特にＢ６（ピリドキシン）及びＢ１２（コバラミン）（とりわけ組み合わせて摂取される場合）は、鎮痛作用を有する。この作用は、侵害受容性疼痛の伝達において阻害作用を発揮する神経伝達物質であるノルエピネフリン及び５－ヒドロキシトリプタミンの利用可能性及び／又は有効性（efficacy）がより大きくなることに起因する。前記ビタミン類は、用量依存的な鎮痛効果により、神経障害性疼痛に関与するいくつかの病態生理学的プロセスを特異的に阻害する。より高い用量は、疼痛症状へのより即時的かつ持続的な利益に対応する。最終的に、ビタミンＢ類は、それらの神経保護作用に起因して、末梢神経障害の治療における重要な治療選択肢である。ビタミンＢ類は、アミノ酸代謝（ビタミンＢ６）、ＤＮＡ及び脂肪酸の合成及び調節、エネルギー産生並びにフォレートのメチル化（folate methylation）（ビタミンＢ１２）などの多数の細胞代謝反応に関与する。ビタミンＢ１２はまた、ミエリン形成プロセスを刺激し、ミエリン繊維の主要成分であるリン脂質の置換に関与する。

フォレート、特にカルシウム塩は、神経障害及び抑うつ状態などの、体内でこの化合物が欠乏している場合のすべての用途に使用され、販売されているが、その安定性は、ｐＨの変化、温度、酸素又は光曝露などの様々な環境条件に影響を受ける。

また、ＭＴＨＦが分解（劣化）することなく経時的に安定して抑うつ性及び神経障害性症候群を治療するために、メチルフォレートと、カルニチン又はその誘導体、ビタミン類などの活性成分とを含む医薬組成物又は栄養組成物も必要とされていた。後者の場合、組成物にビタミンＢ６及びビタミンＢ１２などのビタミン類を含むことも有用であった。

５－メチルテトラヒドロフォレートの安定性の問題は、医薬組成物及び栄養補助組成物の製造及び保管に特に関連し、これらの組成物は、最終組成物の安定性に影響を与える可能性のある他の活性成分も含む。ＭＴＨＦは、ｐＨの変化、温度、酸素又は光曝露などの様々な環境条件において不安定であるので、フードシステムとの一体化が困難になる。

メチルフォレートの不安定性及びその強い分解傾向を考慮すると、経時的に安定なメチルフォレートを含む組成物が必要であった。従って、前記組成物中のＭＴＨＦは、塩及び／又は水和成分などの、前記組成物の他の成分によっても分解されないことが重要であった。低い安定性の問題を解決するために、Svarc P.Lらは、J. of Food Eng. 277, 2020, 109901（非特許文献３）において、生体高分子の存在下でエレクトロスプレープロセスによってＭＴＨＦをカプセル化した。

Liu Y.らは、J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 1, 247-254（非特許文献４）において、アスコルベートマイクロカプセル化技術によってＭＴＨＦの安定性の問題を解決している。

フォレート欠乏症のすべての個体及びメチルフォレートが有益な作用をもたらすすべての個体に有用であり、再現可能なプロセスによって得ることができる医薬組成物又は栄養補助組成物に含まれるのに適した、安定で産業的にスケールアップ可能なＭＴＨＦの調製物（preparations）を得ることが必要であった。

また、Ｌ－５－メチルテトラヒドロフォレートを、最終製品の安定性を維持する他の活性成分と組み合わせて含む医薬組成物又は栄養補助組成物の製造方法を見出すことも必要であった。

メチルフォレートを含む顆粒と、カルニチン誘導体塩、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩を含む顆粒とを、薬学的に許容可能な添加剤、及び必要に応じて他の天然又は合成活性成分とともに含む安定な組成物を見出した。これは、本発明の目的であり、本発明の主題である。

前記組成物は、最終組成物の重量基準で、５～４０％（ｗ／ｗ）の量の結晶形のＬ－メチルフォレートカルシウム（Ｌ－メチル葉酸カルシウム）（ＭＴＨＦ）を含む顆粒と、５０～９０％の量のカルニチン誘導体塩、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩を含む顆粒とを、薬学的に許容可能な添加剤とともに含む。

前記組成物は、２５℃で少なくとも６か月間、ＭＴＨＦが分解することなく安定である。

最終組成物中に含まれるメチルフォレート顆粒（造粒物）は、前記造粒物（又は顆粒、granulate）の重量に対して２～１０重量％の範囲の量のメチルフォレートを含むことを特徴としてもよい。

ＥＰ ２７８１２１４ ＣＮ １０７８１２１９５ 米国特許第６，４４１，１６８号 ＵＳ ４，３４６，１０７ ＵＳ ４，３４３，８１６ ＷＯ ９８／５７６２９ ＷＯ ０３／０６６０４１ ＥＰ ０２５６９９９ ＥＰ １１７１１１１

Papakostas G.I.ら、Am J Psychiatry, 2012; 169 (12): 1267-74 http://www.gnpd.com Svarc P.Lら、J. of Food Eng. 277, 2020, 109901 Liu Y.ら、J. Agric. Food Chem. 2013, 61, 1, 247-254

発明の概要
本発明は、固体（固形）組成物に関し、前記組成物は、最終組成物の重量に対して５～４０％（ｗ／ｗ）の量の結晶形のＬ－メチルフォレートカルシウム（ＭＴＨＦ）を含む顆粒であって、好ましくは前記顆粒の重量に対して３～３０％（ｗ／ｗ）の量の酸化防止剤又は安定化剤を含む顆粒と、最終組成物の重量に対して５０～９０％（ｗ／ｗ）の量のアセチル－Ｌ－カルニチン塩を含む顆粒とを、薬学的に許容可能な添加剤（又は賦形剤）、及び必要に応じて他の医薬活性成分又は栄養補助活性成分とともに含む。

前記メチルフォレート顆粒は、酸化防止剤又は安定化剤を、メチルフォレート／酸化防止剤の重量比１：１～１：２０で含むことを特徴としてもよい。

本発明は、以下の工程：
（ａ）ＭＴＨＦを含む顆粒を調製する工程であって、前記造粒物（又は顆粒）の重量に対して、３～１０％（ｗ／ｗ）の量のＭＴＨＦを、３～３０％（ｗ／ｗ）、好ましくは３～１５％（ｗ／ｗ）の量の酸化防止剤又は安定化剤、並びに必要に応じて５０～９０％（ｗ／ｗ）の量の希釈剤（又は賦形剤、diluent）及び４～１０％（ｗ／ｗ）の量の結合剤と混合した後、乾式又は湿式造粒することを含む工程、
（ｂ）カルニチン誘導体塩、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩を含む顆粒を調製する工程であって、前記造粒物（又は顆粒）の重量に対して、７５～９０％（ｗ／ｗ）のカルニチン誘導体塩、好ましくはＬ－アセチルカルニチン塩酸塩を、必要に応じて５～１０％（ｗ／ｗ）の微結晶セルロース及び５～１０％（ｗ／ｗ）のポリビニルピロリドンと造粒することを含む工程、
（ｃ）工程（ａ）で得られたＭＴＨＦを含む顆粒と、工程（ｂ）で得られたカルニチン誘導体塩、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチンの塩を含む顆粒の顆粒と、顆粒以外の添加剤（顆粒外添加剤又は顆粒外賦形剤、extragranular excipients）とを混合する工程、及び必要に応じて
（ｄ）工程（ｃ）において得られた混合物を圧縮する工程
を含む、本発明に係る組成物の調製方法を記載する。

本発明に係る、ＭＴＨＦ顆粒を含む組成物は、メチルフォレートが有用でありかつ有益な効果をもたらすすべての個体、食事摂取が不十分な個体、脳脊髄液、血漿及び／又は血液中のＬ－メチルフォレート値が低い個体、任意の種類のうつ病（気分障害）、双極性障害、認知障害、精神病性障害、統合失調症、及び神経障害、末梢神経障害又は糖尿病性神経障害などの内皮機能不全に関係する障害に伴う症状を有する個体に有用である。

図面の説明
図１は、生理食塩水で３日間腹腔内に（i.p.）処置した対照（Ctrl）マウス、及び生理食塩水、ＭＦ ３ｍｇ／Ｋｇ、ＬＡＣ ３０ｍｇ／Ｋｇ、又はＬＡＣ ３０＋ＭＦ ３ｍｇ／Ｋｇで３日間腹腔内に処置したＣＵＳマウスに対するＦＳＴにおける無動時間（Immobility time）（Ａ）を示す。処置の３日後、無動時間は、ＬＡＣ ３０ｍｇ／Ｋｇ＋ＭＦ ３ｍｇ／ＫｇによるＣＵＳマウスにおいて有意に短縮した。ｎ＝８、平均±ＳＥＭ（標準誤差）。^＊ｐ＜０．０５ ｖｓ ＣＵＳ 生理食塩水、ＣＵＳ ＬＡＣ ３０ｍｇ／Ｋｇ及びＣＵＳ ＭＦ ３ｍｇ／Ｋｇ（Ａ）、並びにｖｓ 対照 生理食塩水（Ｂ）。Ｆ（４，３５）＝１０，９５（Ａ）、及びＦ（４，３５）＝３，０２８（Ｂ）。 図２は、生理食塩水で１４日間腹腔内に処置した対照マウス、及び生理食塩水、ＭＦ ３ｍｇ／Ｋｇ、ＬＡＣ ３０ｍｇ／Ｋｇ、又はＬＡＣ ３０＋ＭＦ ３で１４日間腹腔内に処置したＣＵＳマウスの前頭皮質におけるＢＤＮＦタンパク質（成熟型）のウエスタンブロット解析及び代表的なブロットを示す。１群あたりｎ＝２～６匹のマウス。^＊ｐ＜０．０５ ｖｓ すべての他の群。Ｆ（４．２０）＝７．４５９。

発明の説明
本発明は、Ｌ－５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロフォレートカルシウム［Ｌ－５－ＭＴＨＦ、Ｌ－メチルフォレート、Ｌ－５メチルテトラヒドロフォレート又は（６Ｓ）－５－ＭＴＨＦ、Ｌ－５－Ｍｅ－ＴＨ ＦＡ、Ｌ－５－Ｍｅ－Ｈ４ＦＡ、Ｌ－５－Ｍｅ－Ｈ４Ｆ、Ｌ－メチルフォレート及びＭｅｔａｆｏｌｉｎ（登録商標）としても公知であり、以下、メチルフォレート又はＭＨＴＦ又はメチルフォレートカルシウムとも表される］を含む顆粒（以下、ＭＴＨＦ顆粒とも表される）を、カルニチン誘導体塩を含む顆粒（以下、カルニチン顆粒とも表される）及び薬学的に許容可能な添加剤、並びに必要に応じて他の医薬活性成分又は栄養補助活性成分とともに含む固体（固形）組成物を記載する。

本発明の組成物に含まれるＬ－５－メチル－（６Ｓ）－テトラヒドロフォレートカルシウム（ＭＴＨＦ）は、ＵＳ ６，４４１，１６８に記載されるように、Ｉ形、ＩＩ形、ＩＩＩ形、ＩＶ形から選択される結晶形であり、好ましくはＩ形である。

顆粒形態のＭＴＨＦと顆粒形態のカルニチン誘導体塩とを含む前記組成物は、ＭＴＨＦ及びカルニチン誘導体が有用でありかつ有益な効果をもたらすすべての個体に有用である。ＭＴＨＦは、脳脊髄液、血漿及び／又は血液中のＬ－メチルフォレート値が低く、うつ病、統合失調症、認知障害又は精神病性障害に伴う症状を有する個体に有用である。本発明に係る組成物は、うつ病、認知障害又は精神病性障害に伴う症状の治療及び／又は予防に有用である。

ＭＴＨＦは、神経障害、末梢神経障害及び糖尿病性神経障害などの内皮機能不全に関係する障害の治療にも有用である。本発明に係る組成物は、うつ病及び／又は統合失調症に関係する障害、末梢神経障害並びに糖尿病性神経障害の治療及び／又は予防に有用である。

前記組成物は、医薬組成物若しくは栄養補助組成物又はフードサプリメント（food supplement）である。

前記固形組成物は、経口投与向けに、錠剤、カプセル剤、又は懸濁剤用の顆粒の形態であってもよい。

前記組成物は、最終組成物の重量の５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の顆粒形態のＭＴＨＦと、前記組成物の総重量に比べて５０～９０％のアセチル－Ｌ－カルニチンとを含む。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、酸化防止剤及び／又は安定化剤を、メチルフォレート：酸化防止剤／安定化剤の重量比１：１～１：２０の範囲で含むことを特徴とする。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、２～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦと、３～３０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の酸化防止剤及び／又は安定化剤とを、薬学的に許容可能な添加剤とともに含む。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、以下の成分を含んでもよい：
・天然若しくは合成剤（天然若しくは合成活性物質、natural or synthetic agents）又はその混合物を含む群から選択される酸化防止剤又は安定化剤。前記天然剤は、アスコルビン酸、クエン酸、レスベラトロール、ビタミンＥ、カロテノイド類、コエンザイムＱ１０、ヒドロキシアセトフェノン、シクロデキストリン類及びソルビトール、又はその混合物を含む群から選択され、好ましくは、前記酸化防止剤又は安定化剤は、アスコルビン酸、クエン酸、又はその混合物から選択される。前記合成剤は、Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）（シクロデキストリン）、Ｖｉｖａｐｕｒ（登録商標）（カルボキシメチルセルロース及び微結晶セルロース）、又はその混合物を含む群から選択される。前記顆粒はまた、以下の成分を含んでもよい：
・マンニトール、トウモロコシデンプン、セルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、スクロース、キシリトール、ソルビトール、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム、カオリン、無水若しくは水和硫酸カルシウム、天然ゴム類、麦芽、ゼラチン、又はその混合物を含む群から選択される希釈剤（又は賦形剤）、
・アルファー化デンプン、セルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ＰＥＧ、スクロース、ソルビトール、セルロース誘導体、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アラビアガム、コポビドン、デンプン指示薬、又はその混合物を含む群から選択される結合剤。

前記ＭＴＨＦ顆粒はまた、以下の成分を含んでもよい：
・ホスフェート類（phosphates）、リン酸カリウム若しくはナトリウム、水酸化ナトリウム若しくはカリウム、又はその混合物を含む群から選択される緩衝剤、
・エチレンジアミン四酢酸ナトリウム塩、クエン酸、ソルビトール、酒石酸、リン酸、又はその混合物を含む群から選択されるキレート剤、
・微結晶セルロース、ラクトース、コロイダルシリカ、カオリン、酸化チタン、アルミナ、ラウリル硫酸ナトリウム、ケイ酸アルミニウム及びマグネシウム、ポリエステル及びポリエチレン、又はその混合物を含む群から選択される脱水剤。

一つの態様において、前記ＭＴＨＦ顆粒は、最終造粒物（又は顆粒）の重量に対して、２～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ、３～３０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の酸化防止剤及び／又は安定化剤、５０％～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の希釈剤、並びに２～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の結合剤を含む。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、最終造粒物の重量に対して、２～８％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ、５～２５％（ｗ／ｗ）の酸化防止剤及び／又は安定化剤（好ましくはアスコルビン酸、クエン酸、又はその混合物から選択される酸化防止剤及び／又は安定化剤）、６０～９０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、並びに３～８％（ｗ／ｗ）の結合剤を含んでもよい。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、最終造粒物の重量に対して、２～８％（ｗ／ｗ）のＭＴＨＦ、５～２５％（ｗ／ｗ）のクエン酸若しくはアスコルビン酸、又はその混合物、６０～９０％（ｗ／ｗ）のトウモロコシデンプン又は微結晶セルロース、及び３～８％（ｗ／ｗ）のアルファー化デンプン又はヒドロキシプロピルセルロースを含む。

他の態様において、前記顆粒は、最終造粒物の重量に対して、２～８％（ｗ／ｗ）のＭＴＨＦ、５～１５％（ｗ／ｗ）のアスコルビン酸、７０～９０％（ｗ／ｗ）のマンニトール又は加工デンプン、及び２～６％（ｗ／ｗ）のヒドロキシプロピルセルロースを含む。

他の態様において、前記顆粒は、最終造粒物の重量に対して、２～８％（ｗ／ｗ）のＭＴＨＦ、５～１５％（ｗ／ｗ）のクエン酸、２～６％（ｗ／ｗ）のアルファー化デンプン、及び７０％～９０％（ｗ／ｗ）のトウモロコシデンプンを含む。

他の態様において、前記顆粒は、最終造粒物の重量に対して、３～８％（ｗ／ｗ）のＭＴＨＦ、５～１５％（ｗ／ｗ）のアスコルビン酸、２～６％（ｗ／ｗ）のヒドロキシプロピルセルロース、及び７０～９０％（ｗ／ｗ）の微結晶セルロースを含む。

特定の態様において、前記造粒物は、３０グラムのメチルフォレートカルシウム、６０グラムのアスコルビン酸、１２００グラムのトウモロコシデンプン、及び５０グラムのアルファー化デンプンを含む。

前記組成物は、最終組成物の重量に対して、５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒及び６０～９５％（ｗ／ｗ）の範囲の量のカルニチン誘導体塩を含む顆粒を含む。

前記カルニチン誘導体は、アセチル－Ｌ－カルニチン、プロピオニルカルニチン、及びその塩から選択されてもよく、前記塩は、塩酸塩、フマル酸塩、タウリン酸塩（taurinate）、又はその混合物から選択されてもよく、好ましくは、前記カルニチン誘導体は、アセチル－Ｌ－カルニチン、より好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩である。

一つの態様において、前記カルニチン誘導体塩は、顆粒形態である。

一つの態様において、ポリビニルピロリドン及び微結晶セルロースを有する顆粒形態のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩は、最終組成物の重量に対して、５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量で存在する。

他の態様において、前記カルニチン顆粒は、最終造粒物の重量に対して、７５～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩、５～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のカルボキシメチルセルロース、及び５～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のポリビニルピロリドンを含む。特定の態様において、前記アセチル－Ｌ－カルニチン顆粒は、ＥＰ １１７１１１１に従って調製される。

一つの態様において、前記組成物は、経口投与用の錠剤又は造粒物（顆粒剤）の形態である。

前記錠剤は、最終組成物の重量に対して、５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９５％（ｗ／ｗ）の範囲の量のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒を含んでもよい。

一つの態様において、前記錠剤形態の組成物は、錠剤の重量に対して、５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒、５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒、０．１～１５％（ｗ／ｗ）の範囲の量の滑沢剤、０．１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の量の流動化剤（glidant）、及び０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の希釈剤を含む。

前記ＭＴＨＦ顆粒及びアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒は、単回用量（１回分）のサシェ（小袋）に含まれていてもよく、この投薬量は、必要に応じて変更することができる。

前記顆粒外添加剤（顆粒以外の添加剤）は、崩壊剤（disintegrant）、流動化剤、滑沢剤及び希釈剤（又は賦形剤）、ビタミン類、他の活性成分、又はその混合物から選択することができる。

前記崩壊剤（disintegrating agent）は、デンプングリコール酸ナトリウム、ポビドン（ビニルピロリドン共重合体）、クロスポビドン（ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体）、アルファー化デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウム（カルメロース）、架橋カルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、デンプングリコール酸ナトリウム、ケイ酸カルシウム、又はその混合物を含む群から選択される。

前記滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム若しくはカルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム、水添植物油類、鉱物油類、ポリエチレングリコール類、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリド類、安息香酸ナトリウム、又はその混合物を含む群から選択される。

前記流動化剤は、タルク、コロイダルシリカ、沈降シリカ、又はその混合物を含む群から選択される。

前記錠剤は、防腐剤、着香料（香料）、着色料、甘味料、又はその混合物を含んでもよい。

前記錠剤は、フィルムコーティングでコーティング（被覆）されてもよく、このフィルムコーティングは、必要に応じて放出制御コーティングであってもよい。

ある態様において、前記錠剤形態の単位組成は、表１に示されるとおりである。

一つの態様において、前記錠剤組成物は、５０～５００ｍｇの範囲のＭＴＨＦ顆粒、５００～８００ｍｇの範囲のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒、及び前記錠剤の調製に有用な薬学的に許容可能な添加剤（又は賦形剤）を含む。

一つの態様において、前記錠剤組成物は、２～３０ｍｇの範囲のＭＴＨＦ、４００～７００ｍｇの範囲のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩、２０～５０ｍｇの範囲のアスコルビン酸若しくはクエン酸又はその混合物、１～５０ｍｇの範囲の滑沢剤、０．１～１０ｍｇの範囲の流動化剤、及び０～１００ｍｇの範囲の希釈剤を、前記錠剤の調製のための薬学的に有用な添加剤とともに含む。

特定の態様において、前記錠剤形態の単位組成を表２に示す。

他の態様において、前記錠剤形態の単位組成を表３に示す。

他の態様において、前記錠剤形態の組成物は、ビタミン類を含んでもよく、前記ビタミン類は、水溶性ビタミン類及び脂溶性ビタミン類、又はその混合物から選択されてもよい。

前記水溶性ビタミン類は、ビタミンＢ１（チアミン又はアノイリン）、ビタミンＢ２（リボフラビン又はラクトフラビン）、ビタミンＢ３又はビタミンＰＰ（ナイアシン又はニコチン酸）、ビタミンＢ５又はビタミンＷ（パントテン酸）、ビタミンＢ６又はビタミンＹ（ピリドキシン又はピリドキサミン又はピリドキサール）、ビタミンＢ８又はビタミンＨ又はビタミンＩ（ビオチン）、ビタミンＢ９又はビタミンＢＣ又はビタミンＭ（葉酸又はプテロイル（モノ）グルタミン酸又はフォラシン）、及びビタミンＢ１２（コバラミン）を含む群から選択される。

前記脂溶性ビタミン類は、ビタミンＡ（レチノール及びレチノイド類）、ビタミンＤ（Ｄ２：エルゴカルシフェロール、Ｄ３：コレカルシフェロール）、ビタミンＥ（トコフェロール）、ビタミンＫ（Ｋ１：ナフトキノン、Ｋ２：フィロキノン、Ｋ３：メナキノン類、メナジオン）、ビタミンＦ（α－リノレン酸、オメガ３）、及びビタミンＱ（ユビキノン、コエンザイムＱ）を含む群から選択される。

前記ビタミン類は、粉末及び／又は顆粒の形態で含まれてもよい。

一つの態様において、前記組成物は、最終錠剤の重量に対して、５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒、５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒、０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の水溶性ビタミン類、０．１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の滑沢剤、０．１～１％（ｗ／ｗ）の範囲の流動化剤、及び０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の希釈剤を含み、前記錠剤は、必要に応じて、フィルムコーティングされてもよい。

前記錠剤は、前記活性成分の放出制御を達成するように設計されたコーティング（被覆）でコーティングされてもよい。

一つの態様において、前記組成物は、錠剤の重量に対して、５～３０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒、６０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒、１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の水溶性ビタミン類、１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の滑沢剤、０．１～１％（ｗ／ｗ）の範囲の流動化剤、及び０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の希釈剤を含み、前記錠剤は、必要に応じて、フィルムコーティングされてもよい。

他の態様において、前記錠剤組成物は、５０～５００ｍｇの範囲のＭＴＨＦ顆粒、５００～８００ｍｇの範囲のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒、２～５０ｍｇの範囲の水溶性ビタミン類、１～５０ｍｇの範囲の滑沢剤、１～１０ｍｇの範囲の流動化剤、及び１～１００ｍｇの範囲の希釈剤を、薬学的に許容可能な添加剤とともに含む。

他の態様において、前記錠剤組成物は、４００～７００ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒、２～２５ｍｇの範囲の量のＭＴＨＦに相当するＭＴＨＦ顆粒、１０～５０ｍｇの範囲のビタミンＢ６、１～１０ｍｇの範囲のビタミンＢ１２、５～５０ｍｇの範囲のアスコルビン酸又はクエン酸、１～５０ｍｇの範囲の滑沢剤、１～１０ｍｇの範囲の流動化剤、及び０～１００ｍｇの範囲の希釈剤を含む。

特定の態様において、前記錠剤形態の単位組成を表４に示す。

本発明によれば、５～４０％（ｗ／ｗ）の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９０％の量のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒（ｗ／ｗ）を含む錠剤は、２５℃、ＲＨ（相対湿度）６０％で保存したときに少なくとも６か月間安定であり、及び４０℃、ＲＨ７５％で保存したときに６か月間安定であるという利点を有し、安定性は、９０％を超えるＭＴＨＦアッセイ値を保っていることとして定義される。

５～４０％（ｗ／ｗ）の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９０％（ｗ／ｗ）の量のアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）を含む本発明の錠剤は、カール・フィッシャー法によって測定される含水量が５％よりも低く、硬度（hardness value）が４～２０Ｋｐの範囲にあり、かつ摩損度（friability value）が０．１～１％の範囲にあることを特徴とする。

顆粒形態のＭＴＨＦを、薬学的に許容可能な添加剤、及び必要に応じて他の活性成分とともに含む前記組成物は、分解を受けないという利点を有する。顆粒中のＭＴＨＦは、ビタミン類又は塩類などの、通常ＭＴＨＦの分解をもたらす含水成分（hydrated ingredients）の存在下でさえも、安定なままである。

顆粒中にＭＴＨＦを含む前記組成物は、Ｔ０と比較して前記アッセイ値の回復をもたらし、このことは、ＭＴＨＦがメチルフォレートカルシウム塩（methylfolate calcium salt）粉末の形態で錠剤組成物中に存在し、直接圧縮される組成物（比較例）とは異なる。

ＭＴＨＦ顆粒を含む前記組成物は安定であり、前記ＭＴＨＦアッセイ値は、メチルフォレートが分解することなく、２５℃の温度で少なくとも６か月間維持される。

本発明の他の態様は、最終組成物に比べて、５～４０％（ｗ／ｗ）の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９０％（ｗ／ｗ）の量のアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）顆粒を含む錠剤組成物を得るための方法である。

本発明に係る錠剤の調製方法は、以下：
（ａ）ＭＴＨＦ顆粒を調製する工程、
（ｂ）カルニチン誘導体塩（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン、好ましくは塩酸塩）顆粒を調製する工程、
（ｃ）工程（ａ）及び（ｂ）で得られた顆粒を顆粒外添加剤と混合する工程、
（ｄ）工程（ｃ）で得られた混合物を圧縮する工程、及び
（ｅ）必要に応じてフィルムコーティングする工程
を含む。

好ましい実施形態によれば、前記方法は、以下：
・ＭＴＨＦ顆粒及びカルニチン誘導体塩（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン、好ましくは塩酸塩）顆粒を、顆粒外添加剤と混合する工程、
・このようにして得られた混合物を圧縮する工程、及び
・必要に応じてフィルムコーティングする工程
を含む。

工程（ａ）に従って得られた顆粒は、必要に応じて、他の活性成分及び薬学的に許容可能な添加剤とともに用いて、これらと混合して単回用量（１回分）のサシェ（小袋）に組成物を調製してもよい。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、造粒物の重量に対して、３～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦを、３～１５％（ｗ／ｗ）の範囲の量の酸化防止剤又は安定化剤、５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の希釈剤、及び４～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の結合剤と混合する乾式又は湿式造粒によって調製されてもよい。

カルニチン顆粒の前記調製は、造粒物の重量に対して、７５～９０％（ｗ／ｗ）の範囲のカルニチン誘導体塩、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン、より好ましくは塩酸塩を、５～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の微結晶セルロース及び５～１０％（ｗ／ｗ）の範囲のポリビニルピロリドンと造粒することを含む。

得られた顆粒は、好ましくは４００～８００μｍのメッシュスクリーンによって篩分けされる。

前記ＭＴＨＦ顆粒は、前記カルニチン顆粒、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒と、重量比１：３～１：１０の範囲で混合され、得られた均質混合物は、前記顆粒外添加剤と混合される。

５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量の前記ＭＴＨＦ顆粒は、５５～８５％（ｗ／ｗ）の範囲の量のカルニチン顆粒、好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒と混合され、この均質混合物に、０．１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の量の滑沢剤、０．１～５％（ｗ／ｗ）の範囲の流動化剤、及び０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の希釈剤を添加する。他の薬学的に許容可能な添加剤及び天然又は合成活性成分を、前記混合物に添加してもよい。

ビタミンＢ類は、最終組成物の重量の０～１０％（ｗ／ｗ）の範囲の量で、工程（ｃ）で得られたＭＴＨＦ顆粒及びカルニチン顆粒、好ましくはそのアセチル－Ｌ－カルニチン塩の混合物に添加されてもよい。最終的に、均質な混合物を圧縮し、得られた錠剤をフィルムコーティングする。

本発明は、in vivoうつ病動物モデルにおいて、ＭＴＨＦとＬＡＣ（アセチル－Ｌ－カルニチン）とを組み合わせると相乗効果によりうつ病の処置（治療）に有効である（efficacious）ことを実証している。

動物実験は、J H Cryanら、J. Neubiorev. 2005, 03, 009に記載されるように、４週間の期間、慢性予測不能ストレス（ＣＵＳ）を受け、うつ病表現型ＣＵＳ（depressive phenotype CUS）を誘発した検証実験モデル（validate experimental model）において実施した。ＣＵＳにより、標準的な抗うつ薬処置に反応するうつ病表現型を、哺乳類においてin vivoで再現することができる。動物を５つの群に分け、ＭＴＨＦとＬＡＣとを併用投与した群を、ＭＴＨＦ及びＬＡＣを別々に投与した群と比較した。すべての群を、生理食塩水を投与した群及びＣＵＳを受けなかった群と比較した。

マウスを４週間ＣＵＳに曝し、そして薬物処置をＣＵＳ下の第３週目に開始して、４週間の処置が終了するまで継続した。

選択した製品ＬＡＣ及びＭＴＨＦの抗うつ効果（antidepressant effects）を評価するために、J H Cryanら、J. Neubiorev. 2005, 03, 009に記載されるように、動物は強制水泳試験（「ＦＳＴ」）を受け、４つの群の動物において、みられた総無動時間（Total Immobility Time）を測定した。

その結果、ＭＴＨＦとＬＡＣとで３日間処置した後の動物群では、強制水泳の無動時間が、他の処置群に比べて有意に短縮した。

この動物実験によって、うつ病のモデルにおけるＭＴＨＦ及びＬＡＣの有効性が確認され、この組み合わせの有効性により、５～９５ｍｇ／日のＭＴＨＦ及び１００～１０００ｍｇ／日のＬＡＣのヒト投薬量に変換することができ、１日１回又は２回、単独で又は他の抗うつ化合物と組み合わせて投与できる。

得られた結果から、以下のことがいえる：
（１）生理食塩水で処置した第Ｉ群と、生理食塩水で処置し、かつ慢性ストレス（ＣＵＳ）を受けた第ＩＩ群との比較によって示されるように、ＣＵＳへの曝露は、ストレスのない状態に制御する場合と比べて、総無動時間の増大をもたらした。
（２）対照群（第ＩＩＩ群）と比較して、ＭＴＨＦで処置された第ＩＩＩ群によって示されるように、慢性ストレス（ＣＵＳ）の影響は、３ｍｇ／ｋｇのＭＴＨＦによって軽減（緩和）されなかった。
（３）対照群（第ＩＩ群）に比べて、ＬＡＣで処置された群（第ＩＶ群）によって示されるように、慢性ストレス（ＣＵＳ）の影響は、３０ｍｇ／ｋｇのＬＡＣによって軽減（緩和）されなかった。
（４）第ＩＩ群と第Ｖ群との比較によって示されるように、慢性ストレス（ＣＵＳ）の影響は、ＬＡＣ及びＭＴＨＦをそれぞれ上記と同じ用量で同時投与（co-administration）すること（ＬＡＣ＋ＭＴＨＦ）によって軽減（緩和）された。

興味深いことに、３ｍｇ／ｋｇのＭＴＨＦで処置されたマウス群及びＬＡＣ ３０ｍｇ／ｋｇで処置されたマウス群は、それらの総無動時間が、対照群（第Ｉ群）の対照非ストレス（unstressed）マウスの総無動時間と相違なかったことを示した。

これらのデータは、ＬＡＣ＋ＭＴＨＦの同時投与により、それらを単独で投与したときにＦＴＳパフォーマンス（FTS performance）が改善されなかった用量で試験しても、総無動時間を短縮できたことを示す。in vivo研究では、ＬＡＣとＭＴＨＦとの同時投与によって有意な抗うつ様効果（antidepressant-like effect）が得られることが実証されている。

前述のように、４週間のＣＵＳ処置及び２週間の薬理学的処置後のマウスは、第５週の最後に犠死させ、ＢＤＮＦタンパク質のレベルを、前頭皮質においてウエスタンブロットによって測定した。

ＢＤＮＦは、重要な神経栄養因子（neuronal trophic factor）であり、辺縁系構造（limbic structures）（すなわち、前頭皮質及び海馬）内のＢＤＮＦレベルの低下は、慢性ストレス及びうつ病によって生じる神経可塑性の全体的な減衰に関連している（Licznerski et Jonas, Proc Natl Acad Sci U S A.; 115(15): 3742-3744, 2018)。

ＢＤＮＦレベルは、生理食塩水で処置した対照ＣＵＳマウス（第ＩＩ群）と比較した場合、ＣＵＳへの曝露後にＬＡＣ ３０ｍｇ／ＫｇとＭＦ ３ｍｇ／Ｋｇとの組み合わせによる同時処置（co-treatment）を受けたマウス（第Ｖ群）の前頭皮質の両方の辺縁系構造（both limbic structures）において増加した。これらのデータは、ＬＡＣ＋ＭＴＨＦの同時投与がＢＤＮＦに対する効果をもたらしたことを実証し、同じ実験においてＬＡＣ＋ＭＴＨの同時処置によってもたらされた抗うつ様効果の行動結果と一致している。

図２は、マウス前頭皮質においてウエスタンブロットによって測定されたＢＤＮＦタンパク質発現レベルを示す。マウス前頭皮質におけるＢＤＮＦレベルは、ＬＡＣ及びＭＴＨＦで別々に処置した群（第ＩＩＩ群及び第ＩＶ群）と比較して、３０ｍｇ／ｋｇ ＬＡＣとＭＴＨＦ ３ｍｇ／Ｋｇとで処置した群（第Ｖ群）において増加を示した。

ＭＴＨＦ顆粒及びカルニチン顆粒を含む前記組成物は、構造的神経可塑性プロセス（structural neuronal plasticity process）に影響を及ぼすのに有用である。

状態の種類及びレベルに応じて、治療剤を、１日あたり１～６回、例えば、１日１回、２回、３回、４回、５回又は６回投与してもよい。被験体がＭＤＤ（大うつ病性障害）を有するおそれがある場合、本発明の処方物と抗うつ薬との併用療法（combination therapy）又は補助療法（adjunctive therapy）を推奨、選択又は実施することができる。場合によっては、前記抗うつ薬は、選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）又は選択的ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）である。いくつかの場合には、前記併用療法又は補助療法には、フォレート処方物及びＳＳＲＩが含まれる。あるいは、前記併用療法又は補助療法は、フォレート処方物及びＳＮＲＩを含む。様々なタイプ又はクラスの抗うつ薬が公知であり、市販されている。抗うつ薬としては特に制限はないが、例えば、セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＲＩｓ）、セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩｓ）、セロトニン及びドーパミン再取り込み阻害薬（ＳＤＲＩｓ）、セロトニン－ノルエピネフリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩｓ）、セロトニン－ノルアドレナリン－ドーパミン再取り込み阻害薬（ＳＮＤＲＩｓ）、ノルアドレナリン作動性・特異的セロトニン作動性抗うつ薬（ＮＡＳＳＡｓ）、ノルエピネフリン－ドーパミン再取り込み阻害薬（ＮＤＲＩｓ）、ノルエピネフリン（ノルアドレナリン）再取り込み阻害薬（ＮＲＩｓ）、モノアミン酸化酵素阻害薬（ＭＡＯＩｓ）、選択的セロトニン再取り込み促進薬（ＳＳＲＥｓ）、メラトニン作動性アゴニスト類、トリプタミン類、三環系抗うつ薬（ＴＣＡｓ）、及び非定型抗うつ薬が挙げられる。ＳＳＲＩｓは、シナプス前ニューロンによるセロトニンの再取り込みを妨げるように作用して、それにより、シナプス中のセロトニンを高いレベルに維持している。

本発明に係る組成物は、ＭＴＨＦの投与が有用なすべての個体に有用である。ＭＴＨＦ及びアセチル－Ｌ－カルニチン（好ましくはアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩）を含む前記組成物は、有益な効果を達成するために必要な用量であり、ガイドラインに示されている古典的な薬理学的治療（処置）を有用にサポートするので、うつ病に関係する障害、認知障害若しくは精神病性障害を有する個体、又は神経障害、末梢神経障害及び糖尿病性神経障害、糖尿病性末梢神経障害のような内皮機能不全の患者の治療及び／又は予防に有用である。

本発明に係る組成物は、うつ病疾患に使用するために、１日１回、２回、３回又は４回、１錠、２錠又は３錠の投薬量で投与されてもよく、ＭＴＨＦ用量が５～９０ｍｇ／日の範囲、及びアセチル－Ｌ－カルニチン用量が１００ｍｇ～３グラム／日であってもよく、副作用がない。

本発明に係る組成物は、使用中の抗うつ治療との同時治療（concomitant treatment）として投与されてもよい。

最終組成物の重量に対して５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒を、薬学的に許容可能な添加剤とともに含む前記固体組成物は、うつ病又は統合失調症に関係する障害の治療及び／又は予防に有用である。５～２０ｍｇのＭＴＨＦ顆粒及び４００～７５０ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒を含む前記組成物は、１日１回、２回、３回又は４回、１錠、２錠又は３錠の投薬量で投与されてもよく、うつ病又は統合失調症に関係する障害における使用のために、ＭＴＨＦの１日投薬量が５～９０ｍｇ／日の範囲、及びアセチル－Ｌ－カルニチンの１日投薬量が１００ｍｇ～１０００ｍｇ／日の範囲であってもよい。

特に、７．５及び１５ｍｇのＭＴＨＦ顆粒及び５００ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン（約５９０ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩に相当する）顆粒を含む本発明に係る組成物は、抑うつ状態に関係する障害の治療及び予防に有用である。

また、ビタミンＢ群は、ＭＴＨＦ及びＬＡＣを含む前記組成物中に含まれてもよく、ここで、０．１～１０％（ｗ／ｗ）の量のビタミンＢ群が、最終組成物に比べて５～４０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のＭＴＨＦ顆粒及び５０～９０％（ｗ／ｗ）の範囲の量のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒とともに組成物中に含まれ、前記組成物は、神経障害に関連する障害、特に末梢神経障害又は糖尿病性神経障害の治療及び／又は予防に有用である。

２～６ｍｇのＭＴＨＦ顆粒、１００～１０００ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒、及び２～５０ｍｇの範囲の量のビタミン類、特にビタミンＢ６及び／又はＢ１２などのビタミンＢ類を含む前記組成物は、神経障害の治療又は予防における使用のために、１日１回、２回、３回又は４回、１錠、２錠又は３錠のペース（rate）で投与されてもよく、この投与により、ＭＴＨＦ用量が２～２４ｍｇ／日の範囲、アセチル－Ｌ－カルニチン用量が４００ｍｇ～３ｇ／日の範囲、及びビタミンＢ６及びＢ１２が２～２００ｍｇ／日の範囲となる。

３ｍｇのＭＴＨＦ顆粒、５００ｍｇのアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒、及び２～５０ｍｇの範囲の量のビタミン類、特にビタミンＢ６及び／又はＢ１２などのビタミンＢ類を含む本発明に係る組成物は、末梢神経障害又は糖尿病性神経障害などの神経障害の治療及び／又は予防に有用である。前記錠剤は、１日１回、２回、３回又は４回投与されてもよく、この投与により、１日用量は、ＭＴＨＦが２～１２ｍｇ、アセチル－Ｌ－カルニチンが０．５～２ｇ、ビタミンＢ類が２～１４０ｍｇとなる。

前記組成物は有効であり、忍容性が高く、かつ副作用がない。

本発明に係る顆粒形態のメチルフォレートを含む組成物を、うつ病の治療に使用するための医薬製品と同時使用（concomitant use）することにより、相乗効果を得ることができる。

以下の実施例は、本発明をさらに説明する。

実施例
実施例１：アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒の調製
アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩５９０ｇを、微結晶セルロース３５ｇ及びポリビニルピロリドン５６ｇとともに流動層（流動床）を用いて湿式造粒した。この顆粒を乾燥し、６００μｍメッシュスクリーンを通して篩分けした。

実施例２：Ｌ－５－メチルフォレートカルシウム（ＭＴＨＦ）顆粒の調製
メチルフォレートカルシウム顆粒を、乾式造粒プロセス及び湿式造粒プロセスによって得た。

（ａ）乾式造粒
顆粒調製成分を、表５に示される量でミキサーに入れ、次いで混合した。得られた混合物を、乾式圧縮機（dry compactor）で造粒した。この顆粒を粉砕し、６００μｍメッシュスクリーンを通して篩分けして、得られた顆粒を使用した。

ＧＲ１顆粒及びＧＲ２顆粒は、嵩密度（ＢＤ）が０．６８ｇ／ｍｌであり、かつタップ密度（ＴＤ）が０．７９ｇ／ｍｌである。

ＧＲ１顆粒及びＧＲ２顆粒は、以下の粒度分布（ＰＳＤ）を特徴とする：
１０％＜１２５μｍ；５０％＜４２５μｍ；９０％＜６００μｍ。

（ｂ）湿式造粒
Ｌ－５－メチルフォレートカルシウムを、表６に示される割合で、相応量（proportional amounts）の種々の成分とともに高剪断ミキサーに入れた。

同時に、安定化剤／酸化防止剤（アスコルビン酸又はクエン酸）及び結合剤（加工デンプン又はヒドロキシプロピルセルロース）を含む水溶液を、表５に示される量で、ホモジナイザーで調製し、この結合剤溶液を、固体混合物に添加した。

得られた顆粒を、流動層装置中で乾燥させた。

次いで、得られた顆粒を粉砕し、６００μｍメッシュスクリーンを通して篩分けした。

ＧＲ３顆粒、ＧＲ４顆粒及びＧＲ５顆粒は、嵩密度（ＢＤ）が０．５８ｇ／ｍｌであり、かつタップ密度（ＴＤ）が０．６７ｇ／ｍｌである。

ＧＲ３顆粒、ＧＲ４顆粒及びＧＲ５顆粒は、以下の粒度分布（ＰＳＤ）を特徴とする：１０％＜５３μｍ；５０％＜１８０μｍ；９０％＜４２５μｍ。

ＧＲ６顆粒は、嵩密度（ＢＤ）が０．３８ｇ／ｍｌであり、かつタップ密度（ＴＤ）が０．４６ｇ／ｍｌである。

ＧＲ６顆粒は、以下の粒度分布（ＰＳＤ）を特徴とする：１０％＜５３μｍ；５０％＜１８０μｍ；９０％＜４２５μｍ。

得られた顆粒は、直ちに使用してもよいし、固形製剤に使用するために保存してもよい。

実施例３：メチルフォレートカルシウム顆粒の安定性の測定
実施例２で調製したＧＲ１～ＧＲ６顆粒の安定性を、４０±２℃、ＲＨ７５％で１か月間試験した。

ＧＲ１～ＧＲ６顆粒におけるＭＴＨＦアッセイ値を、標準曲線を用いてＨＰＬＣによって測定した。５μｍ粒子を含むＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂ－ＳＣＸ ４．６ｘ２５０ｍｍクロマトグラフィーカラムを使用した。ＭＴＨＦを、イソクラティック条件下、５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４／ＣＨ_３ＣＮ（３２／６８）溶出液を用いて、ｐＨ２．５で溶出した。流速は１．２ｍＬ／分であり、２２０ｎｍ波長ＵＶ検出器を用いた。

このアッセイ値は、Ｔ０と比較したメチルフォレートの回収率として表される。

表７は、４０℃、ＲＨ７５％におけるＧＲ１～ＧＲ６顆粒のアッセイ値を示す。

実施例４：メチルフォレートとビタミンＢ６及びビタミンＢ１２とを含む顆粒の調製
（ａ）乾式造粒
顆粒調製成分を、表８に示される量でミキサーに入れた。得られた混合物を、乾式圧縮機で造粒した。この顆粒を粉砕し、６００μｍメッシュスクリーンを通して篩分けして使用した。

（ｂ）湿式造粒
表９に示される顆粒を調製した。

ＧＲ８、ＧＲ９、ＧＲ１０及びＧＲ１１の調製：Ｌ－５－メチルフォレートカルシウム塩、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２及び希釈剤（マンニトール又はトウモロコシデンプンＦＵ）を、表９に示される量で高剪断ミキサーに入れた。この混合物を、結合剤又は安定化剤／酸化防止剤（表９に示される量で、ＰＶＰ又はアスコルビン酸又はアセチルシステイン）を脱塩水に可溶化（又は溶解）して調製した造粒溶液を用いて造粒し、次いで、含水量が＜５％に到達するまでオーブン又は流動層乾燥機中で乾燥した。得られた造粒物を、６００μｍメッシュスクリーンを通して粉砕した。

ＧＲ１２の調製：Ｌ－５－メチルフォレートカルシウム塩を、クエン酸の存在下で水に可溶化した。この溶液に、表９に示される量で、加工デンプン並びにビタミンＢ６及びビタミンＢ１２を添加した。得られた混合物を凍結乾燥し、６００μｍメッシュスクリーンを通して粉砕（pulverized）した。

ＧＲ１３の調製：Ｌ－５－メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２及びトウモロコシデンプンＦＵを、表９に示される量で高剪断ミキサーに入れた。同時に、ＵｌｔｒａＴｕｒｒａｘ又はＳｉｌｖｅｒｓｏｎホモジナイザーを用いて加工デンプン及びアスコルビン酸を脱塩水中に分散させることによって、造粒溶液を調製した。この混合物を造粒して、含水量が＜５％に到達するまで乾燥した。この顆粒を粉砕し、６００μｍメッシュ篩上で乾燥した。

ＧＲ８～ＧＲ１３顆粒の安定性を、４０±２℃、ＲＨ７５％で１か月間試験した。

ＧＲ８～ＧＲ１３顆粒におけるＭＴＨＦアッセイ値を、ＨＰＬＣによって測定した。Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ－ＳＣＸ ４．６ｘ２５０ｍｍ、５μｍクロマトグラフィーカラムを用いた。ＭＴＨＦを、イソクラティック条件下、溶出液５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４／ＣＨ_３ＣＮ（３２／６８）を用いて、ｐＨ＝２．５で溶出した。流速＝１．２ｍＬ／分で、２２０ｎｍ波長ＵＶ検出器を用いた。

このアッセイ値は、Ｔ０と比較した回収率として表される。

４０℃、ＲＨ７５％におけるＧＲ８～ＧＲ１３顆粒中のＭＴＨＦの安定性を表１０に示す。

実施例５：ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２を含む顆粒の調製
顆粒調製成分を、表１０に示される量でミキサーに入れ、次いで混合した。得られた混合物を、乾式圧縮機で造粒した。この顆粒を粉砕し、６００μｍメッシュスクリーンを通して篩分けして、得られた顆粒を使用した。

この顆粒の組成を表１１に示す。

実施例６：メチルフォレートカルシウム塩及びアセチル－Ｌ－カルニチンを含む錠剤の調製（錠剤１）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをミキサーに入れ、ＧＲ４に準じて（従って）調製したメチルフォレートカルシウム顆粒２４３ｇ相当量を添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１０ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

この錠剤の単位あたりの組成を表１２に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．８％、硬度が１０±３Ｋｐ、及び摩損度が０．４％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤１）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１０に示されるように、Ｔ０との比較によって決定した。

実施例７：メチルフォレートカルシウム塩及びアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む錠剤の調製（錠剤２）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをミキサーに入れ、ＧＲ５に準じて調製して得られたメチルフォレートカルシウム顆粒２４３ｇ相当量を添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１０ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

この錠剤の単位あたりの組成を表１３に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．８％、硬度が１７±３Ｋｐ、及び摩損度が０．２％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤２）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１０に示されるように、Ｔ０と比較して決定した。

実施例８：メチルフォレートカルシウム塩及びアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む錠剤の調製（錠剤３及び錠剤１２）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをバイコニカルミキサー（biconical mixer）に入れ、ＧＲ６に準じて調製して得られたメチルフォレートカルシウム顆粒２４３ｇ相当量を添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１０ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

この錠剤の単位あたりの組成を表１４に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．８％、硬度が１２±１Ｋｐ、及び摩損度が０．３％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤３）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレートアッセイ値を、実施例１０に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例９：メチルフォレートカルシウム塩及びアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む錠剤の調製（錠剤４－比較例）
アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩５９０ｇをミキサーに入れ、メチルフォレートカルシウム１５ｇを、微結晶セルロース３５ｇ、ポリビニルピロリドン５６ｇ、アスコルビン酸３３ｇ、トウモロコシデンプン１７２ｇ及び加工デンプン２３ｇとともに添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１０ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

この錠剤の単位あたりの組成を表１５に示す。

コーティング錠（錠剤４）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、２か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１０に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１０：錠剤１～４における組成物の安定性
錠剤１～４の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で１２か月間、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で６か月間試験した。

メチルフォレートアッセイ値を、粒径５μｍのＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂ ＳＣＸ ４．６ｘ２５０ｍｍカラム、及び２２０ｎｍ波長ＵＶ検出器を用いて、ＨＰＬＣによって測定した。メチルフォレートを、イソクラティック条件下、溶出液５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４／ＣＨ_３ＣＮ：（３２／６８）を用いて、ｐＨ２．５で溶出した。

安定性は、Ｔ０と比較した回収率として表され、表１６及び表１７に示される。

実施例１１：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤５－比較例）
実施例１に準じて調製したアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒６８１ｇ、メチルフォレートカルシウム３ｇ、ビタミンＢ６ ３５ｇ及びビタミンＢ１２ ２ｇを、幾何学的希釈技術（geometric dilution technique）を用いて４５分間混合した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１４ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを混合した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤５の単位あたりの組成を表１８に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．７％、硬度が１２±２Ｋｐ、及び摩損度が０．７％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤５）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１２：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤６－比較例）
実施例１に準じて調製したアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒６８１ｇ、メチルフォレートカルシウム３ｇ、ビタミンＢ６ ３５ｇ、ビタミンＢ１２ ２ｇ及びアスコルビン酸５０ｇを、約４５分間混合した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１４ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤６の単位あたりの組成を表１９に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．２％、硬度が１０±２Ｋｐ、及び摩損度が０．９％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤６）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１３：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤７）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをバイコニカルミキサーに入れ、ＧＲ１に準じて調製して得られたメチルフォレートカルシウム顆粒７４．５ｇ相当量、及びＧＲ１４に準じて調製して得られたビタミンＢ６及びビタミンＢ１２を含む顆粒１０８．５ｇを添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム７ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

この単位組成を表２０に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．５％、硬度が１９±３Ｋｐ、及び摩損度が０．１％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤７）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１４：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤８）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩の顆粒６８１ｇ、ＧＲ２に準じて調製して得られたメチルフォレートカルシウム顆粒１００．５ｇ相当量、及びＧＲ１４に準じて調製して得られたビタミンＢ６及びビタミンＢ１２を含む顆粒１０８．５ｇをミキサーに入れた。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム７ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤８の単位あたりの組成を表２１に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．８％、硬度が１９±３Ｋｐ、及び摩損度が０．２％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤８）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレートアッセイ値を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して決定した。

実施例１５：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤９）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをミキサーに入れ、そしてＧＲ３に準じて調製して得られたメチルフォレートカルシウム顆粒８６ｇ相当量、ビタミンＢ６ ３５ｇ及びビタミンＢ１２ ２ｇを、あらかじめトウモロコシデンプン４８ｇで希釈して添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム１０ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤９の単位あたりの組成を表２２に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．７％、硬度が９±２Ｋｐ、及び摩損度が０．４％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤９）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１６：メチルフォレートカルシウム塩、アセチル－Ｌ－カルニチン及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤１０）
ＧＲ１３に準じてアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩、メチルフォレートカルシウム、ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２で調製された顆粒７１３ｇと、ステアリン酸マグネシウム８ｇと、コロイダルシリカ３ｇとをバイコニカルミキサーに入れた。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤５の単位あたりの組成を表２３に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．５％、硬度が５±１Ｋｐ、及び摩損度が０．１％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤１０）の安定性を、２５±２℃、ＲＨ６０％で、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で、６か月間試験し、メチルフォレート含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１７：メチルフォレート、アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩及びビタミン類を含む錠剤の調製（錠剤１１）
実施例１によるアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩顆粒６８１ｇをミキサーに入れ、ＧＲ７に準じてメチルフォレートカルシウム、ビタミンＢ６及びビタミンＢ１２で調製された顆粒１４０．８ｇ相等量を添加した。この均質混合物に、ステアリン酸マグネシウム７ｇ及びコロイダルシリカ３ｇを添加した。この混合物を５分間（２０ｒｐｍ）攪拌し、次いで打錠機で圧縮した。得られた錠剤を、Ｏｐａｄｒｙ ＡＭＢ ＩＩを用いてコーティングした。

錠剤５の単位あたりの組成を２４に示す。

素錠は、カール・フィッシャー法によって測定された含水量が１．７％、硬度が１９±３Ｋｐ、及び摩損度が０．３％であることを特徴とする。

コーティング錠（錠剤１１）の安定性を試験し、含量を、実施例１８に示されるように、Ｔ０と比較して経時的に決定した。

実施例１８：錠剤５～１１の安定性
安定性 錠剤５～１１を、２５±２℃、ＲＨ６０％で１２か月間、及び４０±２℃、ＲＨ７５％で６か月間試験した。

メチルフォレートアッセイ値を、粒径５μｍのＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂ ＳＣＸ ４．６ｘ２５０ｍｍカラム、及び２２０ｎｍ波長ＵＶ検出器を用いて、ＨＰＬＣによって測定した。メチルフォレートを、イソクラティック条件下、溶出液５０ｍＭ ＫＨ_２ＰＯ_４／ＣＨ_３ＣＮ：（３２／６８）を用い、ｐＨ２．５で溶出した。

この安定性は、Ｔ０での濃度と比較した回収率として表され、表２５及び表２６に示される。

実施例１９：ヒトうつ病の検証済み動物モデル（validated animal model）におけるメチルフォレート及びＬ－アセチルカルニチンの同時投与の効果
７週齢雄性Ｃ５７Ｂｌａｃｋ／６Ｊマウス４０匹をＣＵＳ（「慢性予測不能軽度ストレス（Chronic Unpredictable Mild Stress）」に曝し、J H Cryanら、J. Neubiorev. 2005, 03, 009に記載されるように、うつ病（又は抑うつ）表現型を許容する検証モデルとした。

これらの動物を５つの群に分け、以下の処置を実施した：
第Ｉ群：８匹の動物、対照、生理食塩水
第ＩＩ群：８匹の動物、ＣＵＳ、生理食塩水
第ＩＩＩ群：８匹の動物、ＣＵＳ、メチルフォレート（ＭＴＨＦ） ３ｍｇ／ｋｇ
第ＩＶ群：８匹の動物；ＣＵＳ、Ｌ－アセチルカルニチン（ＬＡＣ） ３０ｍｇ／ｋｇ及び生理食塩水
第Ｖ群：８匹の動物；ＣＵＳ、ＬＡＣ ３０ｍｇ／ｋｇ及びＭＴＨＦ ３ｍｇ／ｋｇを同時投与。

マウスを１ケージあたり４～５匹飼育した。ケージは、１２時間の明／暗周期（light/dark period）のある制御された温度（２１～２３℃）の部屋で食餌及び水へ自由にアクセスできるようにした。ＡＣＬ及びＭＦの組み合わせの抗うつ効果を、ＣＵＳに曝した動物及び非ストレス対照動物の両方において評価した。

マウスを４週間のＣＵＳに曝し、その間、様々なタイプのストレスを、ランダムかつ予測不能な方法で１日２回動物に与えた：１～３時間続く日中の１セッション、及び夜間の（１２時間続く）１セッションがあり、この２つのセッションの間には少なくとも６時間の間隔がある。適用されたストレスを与える手順は、以下のとおりである：摂食制限（food deprivation）；回転プラットフォーム上に配置されたケージ；４５°に傾斜したケージ；濡れた寝わら（７５０ｍｌの寝わらにつき２１℃で２５０ｍｌの水）；夜間に点灯；日中に消灯；０．４ｃｍの開口部を備え通気性がよく、１２５ｘ５ｃｍのサイズの特殊な透明プレキシガラス（Plexiglas）シリンダー内に封じ込め、その中では、動物は小さな前後運動をすることはできるが、向きを変えることはできない；ケージの変更（マウスは、以前に他のマウスが入れられていたケージに入れられる）；夜間のストロボ。ＣＵＳ動物及びそれぞれの対照に対し、うつ病様表現型及びその後の薬理学的処置によって誘発される抗うつ効果の両方を評価するのに適した行動試験を行った。

薬物処置は、ＣＵＳの第３週目に開始して２週間維持され、この実験は、実験開始の第５週に終了した。行動試験は、処置開始の３日後に実施され、一方、マウス脳の死後タンパク質研究は、処置の１４日後、第５週の終わりに実施された。

選択した製品ＬＡＣ及びＭＥＦの抗うつ行動効果（antidepressant behavioural effects）を評価するために、動物は、J H Cryanら、J. Neubiorev. 2005, 03, 009に記載されるように、強制水泳試験（「ＦＳＴ」）を受け、総無動時間（Total Immobility Time）を５つの動物群において測定した。

ＦＳＴは、以前にいくつかの文献で検証されており、セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）などの標準的な抗うつ薬を用いた急性、亜急性及び慢性の処置によって、総無動時間は一貫して短縮している。この試験中、透明プレキシガラスシリンダー（高さ２５ｃｍ及び直径２２ｃｍ）を、マウスの後肢がシリンダーの底部に触れないように十分な量の温水（２８℃）で満たし、マウスをこのシリンダーに個別に６分間入れた。動物をビデオ録画し、次いで試験の最後の４分間の無動時間（秒単位）を測定した。表２７は、マウスにおける抗うつ行動試験（behavioural Antidepressant Test）を示す。

Anova Fisherの正確確率検定で実行された統計解析は、有意な効果を示した：Ｆ（４．３５）＝１０．９５。

実施例２０：慢性的なストレス曝露、及びＭＴＨＦ及び／又はＬＡＣでの処置によるマウスの辺縁系構造におけるＢＤＮＦの発現
マウスを、実施例１９に記載されるように処置した。４週間のＣＵＳ及び２週間の薬理学的処置の後（実施例１９に記載されるように）、第５週の最後に動物を犠死させ、ＢＤＮＦタンパク質のレベルを、海馬及び前頭皮質においてウエスタンブロットによって測定した。表２８は、マウスの前頭皮質におけるＢＤＮＦ（慢性ストレス及びうつ病に関連する神経栄養因子）のタンパク質レベルを示す。

前頭皮質におけるＢＤＮＦのウエスタンブロットでは、Anova Fisherの正確値（正確確率検定）は、以下のとおりであった：Ｆ（６．２３）＝５．８８６。

図２は、ウエスタンブロットによってマウスＩ前頭皮質において測定されたＢＤＮＦタンパク質発現レベルを示す。この抗体は、１７ＫＤａ ＢＤＮＦの成熟型を認識する。ＬＡＣ ３０ｍｇとＭＴＨＦ ３ｍｇとを組み合わせて処置すると、ＬＡＣ及びＭＴＨＦで別々に処置した群と比較して、ＢＤＮＦをブロットする特異的な抗体を用いるウエスタンブロットの強度を有意に増加させた。

Claims (22)

1. 最終組成物の重量に対して、５～４０％（ｗ／ｗ）の量の結晶形のＬ－メチルフォレートカルシウム（ＭＴＨＦ）を含む顆粒と、５０～９０％（ｗ／ｗ）の量のカルニチン誘導体塩を含む顆粒とを、薬学的に許容可能な添加剤、及び必要に応じて他の医薬活性成分又は栄養補助活性成分とともに含む、固体組成物。
2. 前記メチルフォレート顆粒が、酸化防止剤又は安定化剤を、前記顆粒の重量に対して３～３０％（ｗ／ｗ）の量で含む請求項１記載の組成物。
3. 前記ＭＴＨＦ顆粒が、酸化防止剤又は安定化剤を、メチルフォレート／酸化防止剤の重量比１：１～１：２０で含む請求項１記載の組成物。
4. 前記メチルフォレート顆粒が、
   ・２～１０％（ｗ／ｗ）のメチルフォレートカルシウム、
   ・３～３０％（ｗ／ｗ）の酸化防止剤（単数又は複数）又は安定化剤（単数又は複数）、
   ・５０～９０％（ｗ／ｗ）の希釈剤（単数又は複数）、
   ・４～１０％（ｗ／ｗ）の結合剤（単数又は複数）
   を含む請求項１記載の組成物。
5. 前記ＭＴＨＦ顆粒が、
   ・２～８％（ｗ／ｗ）のメチルフォレートカルシウム、
   ・５～２５％（ｗ／ｗ）の酸化防止剤（単数又は複数）又は安定化剤（単数又は複数）、
   ・６０～９０％（ｗ／ｗ）の希釈剤（単数又は複数）、
   ・３～８％（ｗ／ｗ）の結合剤（単数又は複数）
   を含む請求項４記載の組成物。
6. 前記顆粒が、
   ・２～８％（ｗ／ｗ）のメチルフォレートカルシウム、
   ・５～２５％（ｗ／ｗ）のクエン酸又はアスコルビン酸、
   ・６０～９０％（ｗ／ｗ）のトウモロコシデンプン又は微結晶セルロース、
   ・３～８％（ｗ／ｗ）のアルファー化デンプン又はヒドロキシプロピルセルロース
   を含む請求項５記載の組成物。
7. 前記カルニチン誘導体塩が、アセチル－Ｌ－カルニチン（ＬＡＣ）塩である請求項１記載の組成物。
8. アセチル－Ｌ－カルニチン塩が、アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩である請求項７記載の組成物。
9. 前記顆粒が、前記顆粒の重量に対して、８０％～９０％（ｗ／ｗ）の量のアセチル－Ｌ－カルニチン、３～１０％（ｗ／ｗ）の量のポリビニルピロリドン及び３～１０％（ｗ／ｗ）の量の微結晶セルロースを含む請求項７又は８記載の組成物。
10. ・５～４０％（ｗ／ｗ）のＭＴＨＦ顆粒、
    ・５０～９０％（ｗ／ｗ）のアセチル－Ｌ－カルニチン顆粒、
    ・０．１～１５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤、
    ・０．１～５％（ｗ／ｗ）の流動化剤、
    ・０～１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、
    ・０～１０％（ｗ／ｗ）のビタミン類、
    を含む錠剤の形態の請求項７又は８記載の組成物であって、
    必要に応じてフィルム形成コーティングで被覆されている組成物。
11. アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩５９０ｍｇ、微結晶セルロース３５ｍｇ、ポリビニルピロリドン５６ｍｇ、メチルフォレートカルシウム塩１５ｍｇ、アスコルビン酸３３ｍｇ、トウモロコシデンプン１７２ｍｇ、アルファー化デンプン２３ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム１０ｍｇ、コロイダルシリカ３ｍｇ、及びフィルム形成コーティングからなる請求項９記載の組成物。
12. アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩５９０ｍｇ、微結晶セルロース３５ｍｇ、ポリビニルピロリドン５６ｍｇ、メチルフォレートカルシウム塩７．５ｍｇ、アスコルビン酸３３ｍｇ、トウモロコシデンプン１９０ｍｇ、アルファー化デンプン２３ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム１０ｍｇ、コロイダルシリカ３ｍｇ、及びフィルム形成コーティングからなる請求項９記載の組成物。
13. アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩５９０ｍｇ、微結晶セルロース３５ｍｇ、ポリビニルピロリドン５６ｍｇ、メチルフォレートカルシウム塩３ｍｇ、アスコルビン酸６ｍｇ；トウモロコシデンプン１２０ｍｇ；アルファー化デンプン５ｍｇ、ビタミンＢ６ ３５ｍｇ、ビタミンＢ１２ ２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム１０ｍｇ、コロイダルシリカ３ｍｇ、及びフィルム形成コーティングからなる請求項９記載の組成物。
14. 経口投与のための請求項１～１３記載の組成物。
15. 錠剤の形態である請求項１４記載の組成物。
16. 以下の工程：
    （ａ）ＭＴＨＦ顆粒を調製する工程であって、前記造粒物の重量に対して、３～１０％（ｗ／ｗ）の量のＭＴＨＦを、３～１５％（ｗ／ｗ）の量の酸化防止剤又は安定化剤、５０～９０％（ｗ／ｗ）の量の希釈剤及び４～１０％（ｗ／ｗ）の量の結合剤と乾式又は湿式造粒混合することを含む工程、
    （ｂ）カルニチン顆粒を調製する工程であって、前記造粒物の重量に対して、７５～９０％（ｗ／ｗ）のアセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を、５～１０％（ｗ／ｗ）の微結晶セルロース及び５～１０％（ｗ／ｗ）ポリビニルピロリドンと造粒することを含む工程、
    （ｃ）工程（ａ）で得られたＭＴＨＦ顆粒と、工程（ｂ）で得られたカルニチン顆粒と、顆粒外添加剤とを混合する工程
    を含む請求項１記載の組成物の調製方法。
17. 工程（ｃ）において、工程（ａ）及び（ｂ）で得られた顆粒を、最終組成物の重量に対して０～１０％の量のビタミンＢ群と混合する請求項１６記載の方法。
18. 前記顆粒を圧縮して、錠剤の形態の前記組成物を得る請求項１６又は１７記載の方法。
19. うつ病及び／又は統合失調症に関係する病状の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～１５記載の組成物。
20. 請求項１９記載の使用のための組成物であって、前記ＭＴＨＦの投薬量が５～９０ｍｇ／日であり、ＬＡＣが１００～１０００ｍｇ／日の投薬量であり、前記組成物が、１日１回又は２回、単独で又は他の抗うつ化合物と組み合わせて投与可能な組成物。
21. 神経障害に関係する病状の治療及び／又は予防に使用するための請求項１～１５記載の組成物。
22. ＭＴＨＦが２～６ｍｇの投薬量であり、アセチル－Ｌ－カルニチンが１００ｍｇ～１０００ｍｇの投薬量であり、ビタミンＢ６及び／又はＢ１２としてのビタミンＢが２～５０ｍｇの範囲の量である請求項２１記載の使用のための組成物。

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