JP2023516632A5

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Publication number: JP2023516632A5
Application number: JP2022552125A
Authority: JP
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2024-03-05
Anticipated expiration: 2041-02-26

Claims

多能性幹細胞由来ＮＫ細胞を産生する方法であって、
（Ａ）多能性幹細胞に由来する造血前駆細胞（ＨＰＣ）（ＨＰ細胞バルク）を含むバルク細胞集団を提供することと、
（Ｂ）前記ＨＰ細胞バルクを１つ以上の培養培地で培養して、ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞を産生することと、を含み、
細胞単離ステップを含まない、前記方法。
前記方法が、ステップ（Ａ）及び（Ｂ）において、細胞単離ステップを含まない、請求項１に記載の方法。
（Ａ）の前記ＨＰ細胞バルクが、ＣＤ３４＋細胞を含む、請求項１または２に記載の方法。
前記ＨＰ細胞バルク中の前記細胞の２０％以上が、ＣＤ３４＋細胞である、請求項３に記載の方法。
前記ＨＰ細胞バルクの２０％～９０％が、ＣＤ３４＋細胞である、請求項４に記載の方法。
ステップ（Ｂ）が、
（ｉ）ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地中で前記ＨＰ細胞バルクを培養して、ＣＤ４－／ＣＤ８－細胞、ＣＤ４－／ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８－、及びＣＤ４＋／ＣＤ８＋細胞を含む中間の異種細胞集団を生成することと、
（ｉｉ）ＮＫ誘導培地で前記中間の異種細胞集団を培養して、前記ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞を産生することと、を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
前記方法が、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋細胞を単離するステップを含まない、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
ステップ（Ａ）が、ＨＰＣ誘導培地において多能性幹細胞を培養して、ＨＰ細胞バルクを産生することを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
前記多能性幹細胞が、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＨＰＣ誘導培地が、骨形成タンパク質－４（ＢＭＰ４）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、アスコルビン酸、Ｆｌｔ３リガンド（Ｆｌｔ３Ｌ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）及びＴＧＦβ阻害剤から選択される少なくとも１つの化合物を含む、請求項８または９に記載の方法。
前記ＨＰＣ誘導培地が、５ｎｇ／ｍＬ～５００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＢＭＰ４を含む、請求項１０に記載の方法。
前記ＢＭＰ４が、濃度５０ｎｇ／ｍｌである、請求項１１に記載の方法。
バルク細胞培地が、５ｎｇ／ｍＬ～５００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＶＥＧＦを含む、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の方法。
前記ＶＥＧＦが、濃度約５０ｎｇ／ｍｌである、請求項１３に記載の方法。
前記ＨＰＣ誘導培地が、５ｎｇ／ｍＬ～５００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ｂＦＧＦを含む、請求項１０～１４のいずれか１項に記載の方法。
前記ｂＦＧＦが、濃度５０ｎｇ／ｍｌである、請求項１５に記載の方法。
前記バルク細胞培地が、５μｇ／ｍＬ～５００μｇ／ｍｌの濃度でアスコルビン酸を含む、請求項１０～１６のいずれか１項に記載の方法。
前記アスコルビン酸が、濃度５０μｇ／ｍｌである、請求項１７に記載の方法。
前記ＨＰＣ誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、Ｆｌｔ３Ｌを含む、請求項１０～１８のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｆｌｔ３Ｌが、濃度５０ｎｇ／ｍｌである、請求項１９に記載の方法。
前記ＨＰＣ誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～２００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＴＰＯを含む、請求項１０～２０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＰＯが、濃度１００ｎｇ／ｍｌである、請求項２１に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、アスコルビン酸、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、Ｆｌｔ３Ｌ、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ｐ３８阻害剤及びＳＤＦ－１からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む、請求項６～２２のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、５μｇ／ｍｌ～約５００μｇ／ｍｌの濃度のアスコルビン酸を含む、請求項２３に記載の方法。
前記アスコルビン酸が、濃度５０μｇ／ｍｌである、請求項２４に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、５ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＳＣＦを含む、請求項２３～２５のいずれか１項に記載の方法。
前記ＳＣＦが、濃度５０ｎｇ／ｍｌである、請求項２６に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＩＬ－７を含む、請求項２３～２７のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ－７が、濃度５０ｎｇ／ｍｌである、請求項２８に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、Ｆｌｔ３Ｌを含む、請求項２３～２９のいずれか１項に記載の方法。
前記Ｆｌｔ３Ｌが、濃度５０ｎｇ／ｍｌのＦｌｔ３Ｌである、請求項３０に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～２００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＴＰＯを含む、請求項２３～３１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＴＰＯが、濃度１００ｎｇ／ｍｌである、請求項３２に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、０．５μＭ～１００μＭの濃度で、ｐ３８阻害剤を含む、請求項２３～３３のいずれか１項に記載の方法。
前記ｐ３８阻害剤が、ＳＢ２０３５８０である、請求項３４に記載の方法。
前記ＳＢ２０３５８０が、濃度１５μＭである、請求項３５に記載の方法。
前記ＣＤ４／ＣＤ８誘導培地が、１０ｎｇ／ｍＬ～約１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＳＤＦ－１阻害剤を含む、請求項２３～３６のいずれか１項に記載の方法。
前記ＳＤＦ－１阻害剤が、濃度３０ｎＭである、請求項３７に記載の方法。
前記ＮＫ誘導培地が、ＣＤ３活性化因子、ＩＬ－２及びＩＬ７からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含む、請求項６～３８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＮＫ誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＩＬ－２を含む、請求項３９に記載の方法。
前記ＩＬ－２が、濃度１０ｎｇ／ｍｌである、請求項４０に記載の方法。
前記第２の誘導培地が、１ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍｌの濃度で、ＩＬ－７を含む、請求項３９～４１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ－７が、濃度１０ｎｇ／ｍｌである、請求項４２に記載の方法。
前記培養ステップのそれぞれが、約５％酸素で実施される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
前記培養ステップのそれぞれが、１４％を超える酸素で実施される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
前記培養ステップのそれぞれが、大気中酸素で実施される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
前記培養ステップのそれぞれが、約３～６％の酸素で実施される、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
前記バルク細胞培地中で多能性幹細胞を培養して、１０日を超えて持続して、ＨＰ細胞バルクを得る、請求項８～４７のいずれか１項に記載の方法。
前記バルク細胞培地中で多能性幹細胞を培養して、１１～１５日の間持続して、ＨＰ細胞バルクを得る、請求項４８に記載の方法。
前記バルク細胞培地中で多能性幹細胞を培養して、１４日間持続して、ＨＰ細胞バルクを得る、請求項４９に記載の方法。
前記ｉＰＳＣが、末梢血単核細胞から得られる、請求項９～５０のいずれか１項に記載の方法。
濃縮ステップなく、産生された細胞の少なくとも約５０％、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％またはそれ以上が、ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞である、請求項１～５１のいずれか１項に記載の方法。
産生された細胞の約２５％未満が、ＣＤ３＋細胞である、請求項５２に記載の方法。
産生された細胞のパーセンテージが、フローサイトメトリーによって決定される、請求項５２または５３に記載の方法。
産生された細胞のパーセンテージが、単一細胞ＲＮＡシーケンス（ｓｃＲＮＡｓｅｑ）によって決定される、請求項５２または５３に記載の方法。
ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞を単離するステップをさらに含む、請求項１～５５のいずれか１項に記載の方法。
ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞が、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）または磁気ソーティングによって単離される、請求項５６に記載の方法。
前記ＣＤ５６＋／ＣＤ３－免疫細胞が、ＮＫ細胞である、請求項１～５７のいずれか１項に記載の方法。
前記ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞が、１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変されている、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。
１つ以上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞が単離される、請求項５９に記載の方法。
前記抗原が、ＣＤ１９である、請求項６０記載の方法。
前記細胞が、ＩＬ－１５Ｒα／ＩＬ－１５複合体を発現するように、さらに遺伝子改変されている、請求項５９～６１のいずれか１項に記載の方法。
（１）血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、及びアスコルビン酸から選択される少なくとも１つの化合物を含むＨＰＣ誘導培地においてｉＰＳＣを培養し、造血前駆細胞（ＨＰＣ）を含む異種細胞集団（ＨＰ細胞バルク）得るステップと；
（２）アスコルビン酸、ｐ３８阻害剤及びＳＤＦ－１のうちの１つ以上を含むＣＤ４／ＣＤ８誘導培地において、（１）で得られた前記ＨＰ細胞バルクを培養し、中間の異種細胞集団を得るステップと；
（３）ＣＤ３活性化因子、ＩＬ－２及びＩＬ－７からなる群から選択される少なくとも１つの化合物を含むＮＫ誘導培地において、（２）の前記中間の異種細胞集団を培養するステップと、を含む、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＣＤ５６＋／ＣＤ３－免疫細胞を産生する方法。
請求項１～６３のいずれか１項に記載の方法を使用して産生されたＮＫ細胞集団。
多能性幹細胞由来ＣＤ５６＋免疫細胞全体の６０％以上の比率で、多能性幹細胞由来ＣＤ５６＋／ＣＤ３－細胞を含む、選別されていない細胞集団。
細胞の２５％未満が、ＣＤ３＋細胞である、請求項６５に記載の選別されていない細胞集団。
５％未満の細胞が、単球である、請求項６５または６６に記載の選別されていない細胞集団。
５％未満の細胞が、Ｂ細胞である、請求項６５または６６に記載の選別されていない細胞集団。
細胞のパーセンテージが、フローサイトメトリーによって決定される、請求項６５～６８のいずれか１項に記載の選別されていない集団。
細胞のパーセンテージが、単一細胞ＲＮＡシーケンス（ｓｃＲＮＡｓｅｑ）によって決定される、請求項６５～６８のいずれか１項に記載の選別されていない集団。
細胞療法のための医薬の製造のための請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法で得られるＮＫ細胞の使用。
がんを治療する医薬の製造のための請求項１～６２のいずれか１項に記載の方法で得られるＮＫ細胞の使用。
前記がんが、白血病またはリンパ腫である、請求項７２に記載の使用。