JP2023510972A - 抗ｓｔ２抗体及びその適用 - Google Patents
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Abstract
抗ＳＴ２抗体又はその断片を提供する。この抗体又はその断片は、ヒトＳＴ２に特異的に結合することで、ＩＬ－３３及びヒトＳＴ２の組み合わせを阻害し、ＩＬ－３３／ＳＴ２細胞内シグナル伝達経路をブロッキングし、細胞由来ＩＬ５、ＩＬ６及びＩＬ８産生におけるＩＬ－３３の異なる型の促進効果を阻害することができる。既知の抗ＳＴ２抗体と比較して、この抗ＳＴ２抗体は、より高い生物学的活性を有し、ＳＴ２発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路障害に関連する疾患を予防するか、治療するか又は改善させるために使用され得る。【選択図】図３
Description
本出願は、２０２０年１月２１日に出願された中国特許出願第２０２０１００７２０８５．Ｘ号の優先権の利益を主張し、その全体が引用することで本明細書の一部をなす。
本発明は、抗体薬剤の分野に、特にヒトＳＴ２に対する抗体、及び薬剤を調製する際のその使用に関する。
インターロイキン３３（ＩＬ－３３）は、ＩＬ－１及びＩＬ－１８と関連するサイトカインであり、ＮＦ－ＨＥＶ又はＩＬ－１Ｆ１１としても知られる。ＳＴ２（ＳＴ２Ｌ、ＩＬ－１ＲＬ１、Ｔ１、Ｆｉｔ－１、ＤＥＲ－４、ＩＬ－１Ｒ４又はＳＴ２α）は、ＩＬ－３３の結合受容体であり、Ｔｏｌｌ／ＩＬ－１受容体ファミリーのメンバーであって、リンパ球、特にＩＬ－５及びＩＬ－１３を発現しているヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及びナチュラルキラー－Ｔ（ＮＫＴ）細胞、並びに多くのいわゆる自然免疫細胞、例えばマスト細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージ及び自然ヘルパー細胞（新規免疫細胞（ニュオサイト）としても知られる（非特許文献１））を含む多様な免疫細胞の細胞表面上に発現される。
ＳＴ２はＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及びＴＬＲ９の反応性を下方制御することができ、そのリガンドＩＬ－３３による活性化及びアクセサリータンパク質ＩＬ－１ＲＡｃＰとの会合を通じて、２型サイトカインの放出を誘導し得る。関連文献は、ＳＴ２、ＩＬ－３３及びＩＬ－１ＲＡｃＰの間の相互作用、並びにＩＬ－１Ｒ１及びＩＬ－１ＲＡｃＰの間の相互作用のモデルを提唱している（非特許文献２、非特許文献３）。
ＩＬ－３３は、ホメオスタシスの間は全長型で上皮細胞及び内皮細胞の核中に存在するが、細胞壊死（ネクローシス）中には切断され、放出され得るため、「アラーミン（Alarmin）」と記載されている。ＩＬ－３３誘導性細胞反応の例には、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＴＮＦ、ＩＦＮ－γ、及びＧＭ－ＣＳＦ等の炎症性サイトカインの産生、並びにＣＸＣＬ８、ＣＣＬ１７、及びＣＣＬ２４等のケモカインの産生が含まれる。ＩＬ－３３はまた、ＩｇＥ受容体シグナル伝達又は他のマスト細胞及び好塩基球活性化因子によって誘発されるマスト細胞及び好塩基球活性化の増強によって、急性アレルギー反応を増進させることも分かってきている。ＩＬ－３３はまた、ＳＴ２発現免疫細胞の補充、生存及び接着特性を増進させ、したがって、局所組織における細胞性炎症の興奮及び維持に非常に重要である。
ＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全は、喘息、関節リウマチ、炎症性腸疾患、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、及び全身性硬化症を含む、多様な免疫仲介性疾患と関連することが分かってきている。したがって、ＩＬ－３３／ＳＴ２経路の療法性ブロッキングは、過免疫反応を克服することを補助し得る。この経路の阻害剤には、主に、ＩＬ３３抗体（例えば、ＭＥＤＩ３５０６、ＡＮＢ０２０、ＲＥＧＮ３５００、ＭＴ－２９９０、ＬＹ－３３７５８８０、ＰＦ－０６８１７０２４）及びＳＴ２抗体（例えば、ＣＮＴＯ７１６０、ＡＭＧ－２８２）が含まれ、これらは、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息等を含む適応症に関して、臨床試験第１相及び第２相で開発中である。
現在、アレルギー性炎症及び呼吸器疾患の発症率は次第に増加しており、市場で入手可能な医薬は、主に、グルココルチコイド及びβ２受容体アゴニストに留まっている。現在までに報告されている抗体は全て、ＳＴ２とそのリガンドとの相互作用をブロッキング可能であるが、生じる生物学的活性は異なる。生物学的活性の相違は、抗体の臨床効果及び投薬量の相違につながる場合があり、したがって、当該技術分野には、高いアフィニティ、高い安定性、及び高い生物学的活性を提供するＳＴ２抗体に関する必要性がなおある。
Neill, Wong et al, 2010
Lingel et al, Cell 17: 1398-1410, 2009
Wang et al, Nat Immunol, 11: 905-11, 2010
本発明によって解決されるべき技術的問題は、免疫原としてのヒトＳＴ２でのマウスの免疫、Ｂ細胞パニングを通じたネズミ抗体の獲得、並びに更なる抗体操作及びヒト化技術によって、ＳＴ２に結合し、ＩＬ－３３／ＳＴ２経路に関連する疾患又は任意の適応症の治療に適している、新規高アフィニティ抗体を得ることである。
上記技術的問題のため、本発明の目的は、ＳＴ２に特異的に結合する抗体又はその機能的断片を提供し、その使用を提供することである。
本発明の技術的解決法は以下の通りである。
本明細書で記載される際、本発明において記載されるような抗体の「断片」は、抗体の多様な機能的又は活性断片、例えばその抗原結合部分、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、又はｓｃＦｖを含む。
１つの態様において、本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体又はその断片であって、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、以下の組み合わせ：
（Ｉ－１）配列番号１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号２９に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－２）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－３）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－４）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－５）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－１）配列番号４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－２）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－３）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－４）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－５）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－６）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－７）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－１）配列番号７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－２）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－３）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－４）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－５）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－１）配列番号１０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－２）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－３）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－４）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－５）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－６）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－７）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－８）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－９）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１）配列番号１５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４２に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－２）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－３）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－４）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－５）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－６）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－７）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－８）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－９）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１０）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１１）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１２）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１３）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－１）配列番号２０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－２）配列番号２１として示される重鎖可変領域及び配列番号４７として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩ－３）配列番号２１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－４）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－５）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－６）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－７）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－８）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－９）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１）配列番号２５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－２）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－３）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－４）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－５）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－６）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５２として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－７）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－８）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５０として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－９）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１０）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１１）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１２）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、並びに、
（ＶＩＩ－１３）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５１に示されるような軽鎖可変領域、
より選択されるいずれか１つに示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域からの重鎖ＣＤＲ１（Ｈ－ＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（Ｈ－ＣＤＲ２）、重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）及び軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ－ＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ－ＣＤＲ２）、軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む、抗体又はその断片を提供する。
（Ｉ－１）配列番号１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号２９に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－２）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－３）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－４）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－５）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－１）配列番号４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－２）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－３）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－４）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－５）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－６）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－７）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－１）配列番号７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－２）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－３）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－４）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－５）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－１）配列番号１０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－２）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－３）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－４）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－５）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－６）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－７）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－８）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－９）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１）配列番号１５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４２に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－２）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－３）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－４）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－５）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－６）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－７）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－８）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－９）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１０）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１１）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１２）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１３）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－１）配列番号２０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－２）配列番号２１として示される重鎖可変領域及び配列番号４７として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩ－３）配列番号２１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－４）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－５）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－６）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－７）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－８）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－９）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１）配列番号２５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－２）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－３）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－４）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－５）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－６）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５２として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－７）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－８）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５０として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－９）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１０）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１１）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１２）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、並びに、
（ＶＩＩ－１３）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５１に示されるような軽鎖可変領域、
より選択されるいずれか１つに示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域からの重鎖ＣＤＲ１（Ｈ－ＣＤＲ１）、重鎖ＣＤＲ２（Ｈ－ＣＤＲ２）、重鎖ＣＤＲ３（Ｈ－ＣＤＲ３）及び軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ－ＣＤＲ１）、軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ－ＣＤＲ２）、軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ３）を含む、抗体又はその断片を提供する。
上述のような軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の所定のアミノ酸配列に基づいて、当業者は、ルーチンに、こうした領域に含まれる重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を決定し得る。例えば、本発明の特定の実施の形態に従って、可変領域アミノ酸配列中のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＡＢＭ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームを使用して決定される。当該技術分野に知られる他の方法によって得られる軽鎖ＣＤＲ及び重鎖ＣＤＲ並びにその組み合わせもまた、本発明の範囲内に含まれる。
好ましくは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、以下の組み合わせより選択されるいずれか１つに示される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。
（Ｉ）配列番号５６、６３、７０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＤＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＶＩＤＳＭＤＹ）、及び配列番号８５、９３、９７に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＨＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＦＴ）、
（ＩＩ－１）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＤ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＲＹＳＧＤＴＹＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＭＭＤＴＭＤＹ）、及び配列番号８６、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＮＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＬＴ）、
（ＩＩ－２）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＤ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＲＹＳＧＤＴＹＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＭＭＤＴＭＤＹ）、及び配列番号８７、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＮＴＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＬＴ）、
（ＩＩＩ）配列番号５８、６５、７２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＧ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＨＩＷＷＤＤＶＫＱＹＮＰＡＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＩＧＧＤＹＤＹＦＤＦ）、及び配列番号８８、９４、９９に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＥＳＶＥＹＳＧＴＳＬＭＱ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＶＡＳＮＶＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＳＲＫＶＰＷＴ）、
（ＩＶ－１）配列番号５９、６６、７３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＩＶ－２）配列番号５９、６６、７４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＩＶ－３）配列番号５９、６６、７５に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（Ｖ－１）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－２）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（Ｖ－３）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－４）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（Ｖ－５）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－６）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（ＶＩ－１）配列番号６１、６８、７９に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩ－２）配列番号６１、６８、８０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩ－３）配列番号６１、６８、８１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩＩ－１）配列番号６２、６９、８２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）、
（ＶＩＩ－２）配列番号６２、６９、８３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）、並びに、
（ＶＩＩ－３）配列番号６２、６９、８４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）。
（Ｉ）配列番号５６、６３、７０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＤＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＶＩＤＳＭＤＹ）、及び配列番号８５、９３、９７に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＨＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＦＴ）、
（ＩＩ－１）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＤ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＲＹＳＧＤＴＹＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＭＭＤＴＭＤＹ）、及び配列番号８６、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＮＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＬＴ）、
（ＩＩ－２）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＳＩＴＳＤＹＡＷＤ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＹＩＲＹＳＧＤＴＹＹＮＰＳＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＴＭＭＤＴＭＤＹ）、及び配列番号８７、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＮＴＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＬＡＳＮＬＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＨＳＲＥＦＰＬＴ）、
（ＩＩＩ）配列番号５８、６５、７２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＦＳＬＳＴＳＧＭＧＶＧ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＨＩＷＷＤＤＶＫＱＹＮＰＡＬＫＳ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＩＧＧＤＹＤＹＦＤＦ）、及び配列番号８８、９４、９９に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＲＡＳＥＳＶＥＹＳＧＴＳＬＭＱ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＶＡＳＮＶＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＳＲＫＶＰＷＴ）、
（ＩＶ－１）配列番号５９、６６、７３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＩＶ－２）配列番号５９、６６、７４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＩＶ－３）配列番号５９、６６、７５に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＳＥＭＹ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＡＩＤＰＥＴＧＤＴＡＦＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＤＮＤＮＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＳＳＶＮＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（Ｖ－１）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－２）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（Ｖ－３）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－４）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（Ｖ－５）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＳＳＰＬＴ）、
（Ｖ－６）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＴＤＹＥＬＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＤＴＶＹＮＱＫＦＫＡ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＹＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＶＳＳＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＮＴＳＰＬＴ）、
（ＶＩ－１）配列番号６１、６８、７９に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩ－２）配列番号６１、６８、８０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩ－３）配列番号６１、６８、８１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＲＦＴＤＳＥＭＨ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＴＩＤＰＥＴＧＧＴＶＹＮＱＫＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＡＦＹＮＤＦＤＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＳＡＳＴＳＶＳＹＭＨ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＤＴＳＫＬＡＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ）、
（ＶＩＩ－１）配列番号６２、６９、８２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＤＧＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）、
（ＶＩＩ－２）配列番号６２、６９、８３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＥＧＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）、並びに、
（ＶＩＩ－３）配列番号６２、６９、８４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１（ＧＹＴＦＩＮＹＧＭＮ）、Ｈ－ＣＤＲ２（ＷＩＮＴＹＩＧＥＰＴＹＧＤＮＦＫＧ）、Ｈ－ＣＤＲ３（ＥＧＤＡＦＡＹ）、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１（ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＧＮＱＮＮＹＬＡ）、Ｌ－ＣＤＲ２（ＧＡＳＴＲＥＳ）、Ｌ－ＣＤＲ３（ＱＮＤＨＳＹＰＹＴ）。
特に、本発明の抗体又はその断片は、少なくとも重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、この両方が、上記ＣＤＲ及びその間にあるフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域中のドメインは、以下のように、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４と配置されている。さらに、任意選択で、「少なくとも７５％の同一性」のため、アミノ酸配列に関して、最大２５％の相違が、重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域中の任意のフレームワーク領域中に、又は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域以外の本発明の抗体若しくはその断片中の任意のドメイン若しくは配列中に、存在してもよい。相違は、任意の位置で、アミノ酸欠失、付加又は置換から生じてもよく、置換は、保存的置換又は非保存的置換であってもよい。
好ましくは、重鎖可変領域は、配列番号１～配列番号２８のいずれか１つに示されるようなアミノ酸配列、若しくは示されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は軽鎖可変領域は、配列番号２９～配列番号５３のいずれか１つに示されるようなアミノ酸配列、若しくは示されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本発明の特定の実施の形態に従って、本発明の抗体又はその断片は、以下の組み合わせ：
（Ｉ－１）配列番号１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号２９に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－２）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－３）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－４）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－５）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－１）配列番号４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－２）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－３）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－４）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－５）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－６）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－７）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－１）配列番号７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－２）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－３）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－４）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－５）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－１）配列番号１０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－２）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－３）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－４）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－５）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－６）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－７）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－８）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－９）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１）配列番号１５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４２に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－２）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－３）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－４）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－５）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－６）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－７）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－８）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－９）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１０）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１１）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１２）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１３）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－１）配列番号２０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－２）配列番号２１として示される重鎖可変領域及び配列番号４７として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩ－３）配列番号２１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－４）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－５）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－６）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－７）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－８）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－９）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１）配列番号２５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－２）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－３）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－４）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－５）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－６）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５２として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－７）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－８）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５０として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－９）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１０）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１１）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１２）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、並びに、
（ＶＩＩ－１３）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５１に示されるような軽鎖可変領域、
より選択されるいずれか１つに示されるような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
（Ｉ－１）配列番号１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号２９に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－２）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－３）配列番号２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－４）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｉ－５）配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－１）配列番号４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－２）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－３）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－４）配列番号５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－５）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－６）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩ－７）配列番号６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－１）配列番号７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－２）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－３）配列番号８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－４）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－５）配列番号９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－１）配列番号１０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－２）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－３）配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－４）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－５）配列番号１２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－６）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－７）配列番号１３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－８）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＩＶ－９）配列番号１４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１）配列番号１５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４２に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－２）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－３）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－４）配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－５）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－６）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－７）配列番号１７に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－８）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－９）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１０）配列番号１８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１１）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１２）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域、
（Ｖ－１３）配列番号１９に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－１）配列番号２０に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４６に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－２）配列番号２１として示される重鎖可変領域及び配列番号４７として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩ－３）配列番号２１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－４）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－５）配列番号２２に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－６）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－７）配列番号２３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－８）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩ－９）配列番号２４に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１）配列番号２５に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４９に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－２）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－３）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－４）配列番号２６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－５）配列番号２６として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－６）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５２として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－７）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５３として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－８）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５０として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－９）配列番号２７として示される重鎖可変領域及び配列番号５１として示される軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１０）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１１）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５３に示されるような軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１２）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような軽鎖可変領域、並びに、
（ＶＩＩ－１３）配列番号２８に示されるような重鎖可変領域及び配列番号５１に示されるような軽鎖可変領域、
より選択されるいずれか１つに示されるような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
本発明によって提供される抗体又はその断片は、ＳＴ２、好ましくは哺乳動物ＳＴ２、より好ましくは霊長類ＳＴ２、更に好ましくはヒトＳＴ２又はカニクイザル（cynomolgus）ＳＴ２、特にヒトＳＴ２に結合する。実験によって、本発明によって提供される抗体が以下の活性を有することが立証された。
（１）ヒトＳＴ２に特異的に結合、
（２）ヒトＳＴ２へのＩＬ－３３の結合を阻害、
（３）ＩＬ－３３／ＳＴ２の細胞内シグナル伝達経路をブロッキング、
（４）ＩＬ５の細胞性産生に対するＩＬ－３３の異なる型の促進効果を阻害、
（５）ＩＬ５、ＩＬ６及びＩＬ８の細胞性産生に対するＩＬ－３３の促進効果の阻害、及び、
（６）ｉｎ ｖｉｖｏでの長い半減期の所持。
（１）ヒトＳＴ２に特異的に結合、
（２）ヒトＳＴ２へのＩＬ－３３の結合を阻害、
（３）ＩＬ－３３／ＳＴ２の細胞内シグナル伝達経路をブロッキング、
（４）ＩＬ５の細胞性産生に対するＩＬ－３３の異なる型の促進効果を阻害、
（５）ＩＬ５、ＩＬ６及びＩＬ８の細胞性産生に対するＩＬ－３３の促進効果の阻害、及び、
（６）ｉｎ ｖｉｖｏでの長い半減期の所持。
概して、本発明によって提供される抗体又はその断片は、任意の型であり、例えばモノクローナル抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ナノボディ、完全若しくは部分的ヒト化抗体、若しくはキメラ抗体等、又はそれらの断片である。好ましくは、抗体はＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭ、より好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体である。
好ましくは、断片は、ＳＴ２又はその任意の部分に特異的に結合可能である、抗体の機能的活性断片である。より好ましくは、断片は、抗体の、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、二価一本鎖可変断片（ＢｓＦｖ）、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ジスルフィド安定化Ｆｖ断片）２（（ｄｓＦｖ）２）、抗原結合断片（Ｆａｂ）、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、又は可変断片（Ｆｖ）である。
更に好ましくは、抗体又はその断片は、ヒト定常領域又はネズミ定常領域、好ましくはヒト重鎖定常領域（ＣＨ）及び／又は軽鎖定常領域（ＣＬ）又はネズミ重鎖定常領域（ＣＨ）及び／又は軽鎖定常領域（ＣＬ）を更に含む。好ましくは、抗体又はその断片は、重鎖及び軽鎖を含み、より好ましくは、抗体は、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。
好ましくは、抗体又はその断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥの定常領域からなる群より選択される重鎖定常領域、及び／又はκ型軽鎖定常領域若しくはλ型軽鎖定常領域を含む。本発明の特定の実施の形態に従って、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、若しくはＩｇＧ４サブタイプのものである重鎖定常領域を含むか、又は抗体は、κサブタイプのものである軽鎖定常領域を含む。更に好ましくは、重鎖定常領域は、配列番号５４に示されるようなアミノ酸配列又は示されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖定常領域は、配列番号５５に示されるようなアミノ酸配列又は示されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本発明の文脈に記載の少なくとも７５％の同一性は、７５％以上の任意のパーセント同一性、例えば少なくとも７５％、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、更に好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は更に９９％の同一性であり得る。
本発明の特定の実施の形態に従って、本発明は特に好ましくは、以下のような抗体：
配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８８－１１６－Ｈ０Ｌ１」と称される抗体、
配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８８－１５３－Ｈ０Ｌ１」と称される抗体、並びに、
配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８６－１５６－Ｈ１Ｌ０」と称される抗体、
を提供し、上記各抗体は、配列番号５４に示されるような重鎖定常領域及び配列番号５５に示されるような軽鎖定常領域を有する。抗体は、各々、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む、モノクローナル抗体である。
配列番号１１に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８８－１１６－Ｈ０Ｌ１」と称される抗体、
配列番号１６に示されるような重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８８－１５３－Ｈ０Ｌ１」と称される抗体、並びに、
配列番号３に示されるような重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような軽鎖可変領域を有する、「５８８６－１５６－Ｈ１Ｌ０」と称される抗体、
を提供し、上記各抗体は、配列番号５４に示されるような重鎖定常領域及び配列番号５５に示されるような軽鎖定常領域を有する。抗体は、各々、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む、モノクローナル抗体である。
本発明によって提供される抗体又はその断片に基づいて、本発明はまた、本発明の抗体又はその断片を含むコンジュゲート又は融合タンパク質も提供する。コンジュゲート又は融合タンパク質は、他の部分、例えば細胞表面受容体、小分子化合物、例えばアミノ酸及び炭水化物、小分子ポリマー若しくは本発明の抗体を修飾する任意の他の部分、又は更に、本発明の抗体若しくはその断片に化学的若しくは物理的に結合している活性タンパク質若しくはポリペプチドを含み得る。
別の態様において、本発明は、本発明に従った任意の抗体又はそのフラグメントに含まれる重鎖ＣＤＲ、軽鎖ＣＤＲ、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。
更に別の態様において、本発明は、本発明の核酸分子を含むベクターを提供する。ベクターは、真核発現ベクター、原核発現ベクター、人工染色体、ファージベクター等であり得る。
本発明のベクター又は核酸分子は、抗体保存若しくは発現等のため、宿主細胞を形質転換若しくはトランスフェクションするか、又は任意の方法で宿主細胞に進入するために使用され得る。したがって、更なる態様において、本発明は、本発明に従った核酸分子及び／又はベクターを含む宿主細胞、又は本発明に従った核酸分子及び／又はベクターで形質転換若しくはトランスフェクションされた宿主細胞を提供する。宿主細胞は、原核又は真核細胞、例えば細菌又は昆虫、真菌、植物又は動物細胞であり得る。
本発明の開示に従って、本発明によって提供される抗体又はその断片、並びに適宜、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、及び／又は宿主細胞は、当該技術分野に知られる任意の慣用的技術を使用して得られ得る。抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、及び／又は宿主細胞が、実際に必要とされる多様な目的のために使用されるべき組成物中、より具体的には医薬組成物、例えば医薬品中に含まれ得る。
したがって、更に更なる態様において、本発明はまた、本発明に従った抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、及び／又は宿主細胞を含む組成物も提供する。好ましくは、組成物は、任意選択で医薬的に許容され得る賦形剤を含む医薬組成物である。
本発明はまた、ＳＴ２又はその任意の部分に特異的に結合可能である抗体又はその断片に基づく、上述の主題の以下の関連する使用も提供する。
更なる態様において、本発明は、疾患を予防するか、治療するか又は改善させるための薬剤製造における、抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物の使用を提供し、好ましくは、疾患は、ＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全に関連する。好ましくは、疾患は、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、疾患は、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である。
さらに、本発明は、疾患を予防するか、治療するか又は改善させる方法であって、その必要がある被験体に、本発明の抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物、並びに任意選択で更なる薬剤又は手段を投与することを含む、方法を提供する。好ましくは、疾患は、ＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全に関連する。好ましくは、疾患は、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、疾患は、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である。任意選択の更なる薬剤又は手段は、本発明の抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物と組み合わせて投与され得る任意の他のホルモン又は免疫調節薬剤又は手段、例えば、グルココルチコイド、メポリズマブ、デュピルマブ、テゼペルマブ等を指す。２つの共投与は、同時、連続又は間隔を空けるものを含む、いかなる方式であってもよい。被験体は、哺乳動物、好ましくは霊長類、更に好ましくはヒト又はカニクイザルであり、好ましくは、被験体はヒトである。
したがって、本発明はまた、本発明の抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物、並びに任意選択で更なる薬剤の医薬的組み合わせも提供する。任意選択の更なる薬剤は、本発明の抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物と組み合わせて投与され得る任意の他のホルモン又は免疫調節薬剤又は手段、例えば、グルココルチコイド、メポリズマブ、デュピルマブ、テゼペルマブ等を指す。
本発明は、疾患を検出するか又は診断する方法であって、被験体からの試料に、抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物を接触させることを含む、方法を提供する。好ましくは、疾患は、ＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全に関連する。好ましくは、疾患は、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、疾患は、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である。被験体は、哺乳動物、好ましくは霊長類、更に好ましくはヒト又はカニクイザルであり、好ましくは、被験体はヒトである。
更に別の態様において、本発明は、本発明の抗体若しくはその断片、コンジュゲート若しくは融合タンパク質、核酸分子、ベクター、宿主細胞及び／又は組成物を含むキットを提供する。キットは、例えば上述のような疾患を検出又は診断する方法において、検出又は診断のために使用され得る。
本発明において、マウスをヒトＳＴ２で免疫し、Ｂ細胞パニングを通じて培養上清を得て、ＥＬＩＳＡ及び更なる機能アッセイスクリーニングを介して陽性クローンを得て、さらに、抗体操作を通じて、ネズミ抗体をヒト化することによって、ヒト化抗体を得た。抗体によるｉｎ ｖｉｔｒｏリガンド結合、リガンドのｉｎ ｖｉｔｒｏでのエフェクター細胞活性化の抗体による阻害、及びリガンドがエフェクター細胞を促進してＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８等を産生させることの抗体による阻害に関する活性スクリーニング実験、抗体のアフィニティ決定、並びに動物における薬剤代謝実験等を通じて、本発明の抗体は、現在入手可能である抗ＳＴ２抗体と比較して、より高い生物学的活性を有することが立証されている。
本発明の実施形態は、添付の図に関連して以下に詳細に記載される。
本発明は、特定の実施例に関連して以下に例示される。これらの実施例は、本発明の単なる例示であり、いかなる意味でも本発明の範囲を限定しないことが当業者には理解されるであろう。
以下の実施例における実験法は、別に明記しない限り、全て慣用的なものである。以下の実施例で使用される原材料及び試薬は、別に明記しない限り、全て市販の入手可能な製品である。
ヒトＳＴ２：ＮＰ＿００３８４７．２（Ｍｅｔ１～Ｐｈｅ３２８）
ヒトＳＴ２－ｈｉｓ：Ｃ末端で６－ヒスチジンタグと融合されたヒトＳＴ２
ヒトＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたヒトＳＴ２
ヒトＩＬ３３：ＮＰ＿２５４２７４．１（Ｓｅｒ１１２～Ｔｈｒ２７０）
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：Ｃ末端で６－ヒスチジンタグと融合されたヒトＩＬ３３
酸化ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：ヒトＩＬ－３３－ｈｉｓをＩＭＤＭで３００μｇ／ｍｌに希釈し、３７℃で１８時間インキュベーションし、次いでＳ７５ １６：６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラム（GE Healthcare）を使用して精製した。
還元ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：Ｃｙｓ２０８Ｓｅｒ及びＣｙｓ２５９Ｓｅｒを有するヒトＩＬ３３－ｈｉｓ
対照抗体ＣＮＴＯ７１６０：配列番号１０４に示されるような重鎖及び配列番号１０５に示されるような軽鎖を有する
カニクイザルＳＴ２：ＸＰ＿００５５７５２１４．１（Ｍｅｔ１～Ｃｙｓ３３１）
カニクイザルＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたカニクイザルＳＴ２
マウスＳＴ２：ＮＰ＿００１０２０７７３．１（Ｍｅｔ１～Ａｒｇ３３２）
マウスＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたマウスＳＴ２
ヒトＳＴ２－ｈｉｓ：Ｃ末端で６－ヒスチジンタグと融合されたヒトＳＴ２
ヒトＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたヒトＳＴ２
ヒトＩＬ３３：ＮＰ＿２５４２７４．１（Ｓｅｒ１１２～Ｔｈｒ２７０）
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：Ｃ末端で６－ヒスチジンタグと融合されたヒトＩＬ３３
酸化ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：ヒトＩＬ－３３－ｈｉｓをＩＭＤＭで３００μｇ／ｍｌに希釈し、３７℃で１８時間インキュベーションし、次いでＳ７５ １６：６００ Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラム（GE Healthcare）を使用して精製した。
還元ヒトＩＬ３３－ｈｉｓ：Ｃｙｓ２０８Ｓｅｒ及びＣｙｓ２５９Ｓｅｒを有するヒトＩＬ３３－ｈｉｓ
対照抗体ＣＮＴＯ７１６０：配列番号１０４に示されるような重鎖及び配列番号１０５に示されるような軽鎖を有する
カニクイザルＳＴ２：ＸＰ＿００５５７５２１４．１（Ｍｅｔ１～Ｃｙｓ３３１）
カニクイザルＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたカニクイザルＳＴ２
マウスＳＴ２：ＮＰ＿００１０２０７７３．１（Ｍｅｔ１～Ａｒｇ３３２）
マウスＳＴ２－ｆｃ：Ｃ末端でヒトＩｇＧ１ Ｆｃタグと融合されたマウスＳＴ２
実施例１：ネズミ抗体スクリーニング
１．１ 動物免疫
ＣＨＯ－Ｋ１細胞を使用して、ヒトＳＴ２－ｈｉｓを発現させ、次いで、慣用的な免疫プログラムに従って、フロイントのアジュバントで６匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。各々３匹のマウスを含むマウスの２つのバッチで免疫を行い、バッチ間は２週間であった。マウス各バッチを４回免疫し、ヒトＳＴ２－ｈｉｓを使用したＥＬＩＳＡによって試験し、いかなるマウスも１：１０００００を上回る血清力価を有するならば最終的に免疫されており、３日～４日後に脾臓を収集した。
１．１ 動物免疫
ＣＨＯ－Ｋ１細胞を使用して、ヒトＳＴ２－ｈｉｓを発現させ、次いで、慣用的な免疫プログラムに従って、フロイントのアジュバントで６匹のＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。各々３匹のマウスを含むマウスの２つのバッチで免疫を行い、バッチ間は２週間であった。マウス各バッチを４回免疫し、ヒトＳＴ２－ｈｉｓを使用したＥＬＩＳＡによって試験し、いかなるマウスも１：１０００００を上回る血清力価を有するならば最終的に免疫されており、３日～４日後に脾臓を収集した。
１．２ Ｂ細胞パニング及び培養
正式な実験を行う２日前に、４枚の１０ｃｍプレート（Corning、カタログ番号４３０１６７）内に培養培地を使用してフィーダー細胞をプレーティングし、正式な実験の１日前に、２５μｇ／ｍＬのＭＭＣで６時間処理し、次いで、１００００細胞／ウェル及び１００μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（Corning、カタログ番号３５９９）中にプレーティングした。さらに、抗原ヒトＳＴ２－ｈｉｓを６ウェルプレート中に４℃で一晩コーティングした。
正式な実験を行う２日前に、４枚の１０ｃｍプレート（Corning、カタログ番号４３０１６７）内に培養培地を使用してフィーダー細胞をプレーティングし、正式な実験の１日前に、２５μｇ／ｍＬのＭＭＣで６時間処理し、次いで、１００００細胞／ウェル及び１００μＬ／ウェルで９６ウェルプレート（Corning、カタログ番号３５９９）中にプレーティングした。さらに、抗原ヒトＳＴ２－ｈｉｓを６ウェルプレート中に４℃で一晩コーティングした。
免疫マウスの収集された脾臓をすりつぶし、濾過し、遠心分離して、赤血球可溶化液をその中に添加し、赤血球を除去した。明らかな赤血球が全く存在しなくなるまで、赤血球可溶化液での処理を何度も反復し、次いで、脾臓細胞からＤＣ細胞を除去した。１つの脾臓から得られた脾臓細胞を、パニングのため上記抗原でコーティングされた６ウェルプレート内に均一にプレーティングし、抗原パニング後のＢ細胞をトリプシンで収集し、計数して、上記のフィーダー細胞でコーティングされた９６ウェルプレート内にプレーティングした。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で１０日間～１４日間培養し、明らかなクローンが形成されたウェル中のＢ細胞培養上清を以下のスクリーニングのために収集した。
１．３ ネズミ抗体を含む上清のスクリーニング
（１）ヒトＳＴ２－ｈｉｓに結合するネズミ抗体のＥＬＩＳＡスクリーニング
上記のような免疫原ヒトＳＴ２－ｈｉｓをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、ＥＬＩＳＡプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄し、Ｂ細胞培養上清をＥＬＩＳＡプレート内に添加し、室温で１時間インキュベーションした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、これを続いて室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。
（１）ヒトＳＴ２－ｈｉｓに結合するネズミ抗体のＥＬＩＳＡスクリーニング
上記のような免疫原ヒトＳＴ２－ｈｉｓをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、ＥＬＩＳＡプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄し、Ｂ細胞培養上清をＥＬＩＳＡプレート内に添加し、室温で１時間インキュベーションした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、これを続いて室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。
検出結果によって、５８８３及び５８８４と番号付けされた２匹のマウス由来のＢ細胞クローンが、ヒトＳＴ２－ｈｉｓに結合するネズミ抗体スクリーニングのためのＥＬＩＳＡにおいて、９７％を超える陽性率を有することが示された。この検出において、陰性対照（ブランク培地）のものより１０倍高いＯＤ値を陽性の判定基準として使用した。
１．４ ＫＵ８１２－ＮＦ－κＢレポーター遺伝子アッセイスクリーニング
対数増殖期の１×１０６ ＫＵ８１２細胞を採取し、１回遠心分離して洗浄し、Ｎｅｏｎトランスフェクション系１０μＬキットの２０μＬの緩衝液Ｒ中に再懸濁した。１μｇのｐＧＬ４．３２［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦ－κＢ－ＲＥ／Ｈｙｇｒо］ベクターを細胞に添加し、次いで１０００Ｖ及び５０ｍｓで１回電気ショックを与えることによってトランスフェクションした。トランスフェクション後、ハイグロマイシンＢを使用して、圧スクリーニングを行い、最終的に細胞株ＫＵ８１２／ＮＦ－κＢ－１＃を得た。
対数増殖期の１×１０６ ＫＵ８１２細胞を採取し、１回遠心分離して洗浄し、Ｎｅｏｎトランスフェクション系１０μＬキットの２０μＬの緩衝液Ｒ中に再懸濁した。１μｇのｐＧＬ４．３２［ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦ－κＢ－ＲＥ／Ｈｙｇｒо］ベクターを細胞に添加し、次いで１０００Ｖ及び５０ｍｓで１回電気ショックを与えることによってトランスフェクションした。トランスフェクション後、ハイグロマイシンＢを使用して、圧スクリーニングを行い、最終的に細胞株ＫＵ８１２／ＮＦ－κＢ－１＃を得た。
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で１μｇ／ｍＬに希釈し、各Ｂ細胞培養上清と１：１の比で混合して、試験試料を得た。さらに、陰性対照試料（１：１の比でブランク培地と混合された、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ）及び陽性対照試料（１：１の比で１μｇ／ｍＬ ＣＮＴＯ７１６０と混合された、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ）を調製した。各々２０μＬ／ウェルで試料を３８４ウェルプレート内に添加した。対数増殖期のＫＵ８１２／ＮＦ－κＢ－１＃細胞を採取し、２００００／ウェル及び２０μＬ／ウェルで３８４プレート内に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で一晩（１６時間～２４時間）インキュベーションした。続いて、試薬Ｂｒｉｇｈｔ－ｇｌｏを４０μＬ／ウェルで３８４ウェルプレート内に添加し、プレートを３分間振盪し、マイクロプレート読み取り装置によって検出して、ＲＬＵ値を読み取った。
陰性対照及び陽性対照の値と関連して、各クローンの阻害率を計算し、結果を図１～図５に示す。
実施例２：抗体操作
２．１ Ｂ細胞における抗体の配列決定
キット中の指示に従って、ＰｕｒｅＬｉｎｋ（商標）ＲＮＡミニキットを使用してＢ細胞クローンからｍＲＮＡを抽出し、サブパッケージングし、－８０℃で保存した。抽出されたｍＲＮＡをテンプレートとして使用し、キット中の指示に従って、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩ第一鎖ｃＤＮＡ合成キットを使用して、ｃＤＮＡに逆転写し、次いでこれをサブパッケージングし、－８０℃で保存した。
２．１ Ｂ細胞における抗体の配列決定
キット中の指示に従って、ＰｕｒｅＬｉｎｋ（商標）ＲＮＡミニキットを使用してＢ細胞クローンからｍＲＮＡを抽出し、サブパッケージングし、－８０℃で保存した。抽出されたｍＲＮＡをテンプレートとして使用し、キット中の指示に従って、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＩＩ第一鎖ｃＤＮＡ合成キットを使用して、ｃＤＮＡに逆転写し、次いでこれをサブパッケージングし、－８０℃で保存した。
Ｅｘ Ｔａｑ酵素を使用し、表１－１及び表１－２に示される重鎖ＶＨ増幅プライマー及び軽鎖ＶＬ増幅プライマーを使用して、テンプレートとして上記ｃＤＮＡを用い、ＶＨ配列及びＶＬ配列を増幅し、次いで、配列決定のため、ｐＭＤ１８Ｔベクター内に連結した。
２．２ ネズミ抗体の組換え発現及びスクリーニング
（１）ネズミ抗体の組換え発現
同じクローン（例えば図１～図５に示されるもの）由来の軽鎖及び重鎖を対でＣＨＯ－Ｋ１細胞に同時トランスフェクションし、トランスフェクション２４時間後、１０μｇ／ｍＬ ＭＳＸを圧スクリーニングのために添加した。細胞密度及び生存度を回復した後、細胞を流加培養（Feed-batch）発現のために接種し、発現が完了したら上清を遠心分離して、プロテインＡによって精製した。ＢＣＡ法によって抗体濃度を決定した後、得られた抗体を定量的スクリーニングのために使用した。
（１）ネズミ抗体の組換え発現
同じクローン（例えば図１～図５に示されるもの）由来の軽鎖及び重鎖を対でＣＨＯ－Ｋ１細胞に同時トランスフェクションし、トランスフェクション２４時間後、１０μｇ／ｍＬ ＭＳＸを圧スクリーニングのために添加した。細胞密度及び生存度を回復した後、細胞を流加培養（Feed-batch）発現のために接種し、発現が完了したら上清を遠心分離して、プロテインＡによって精製した。ＢＣＡ法によって抗体濃度を決定した後、得られた抗体を定量的スクリーニングのために使用した。
ネズミ抗体の軽鎖及び重鎖（Ｈ＋Ｌ）の由来元である細胞クローン番号にちなんで、ネズミ抗体を名付けた。例えば、ネズミ抗体「５８８３－１０５Ｈ＋Ｌ」は、５８８３－１０５と番号付けられた細胞クローン由来のネズミ抗体を示し、その重鎖は５８８３－１０５Ｈであり、その軽鎖は５８８３－１０５Ｌである。
（２）ヒトＳＴ２に対するネズミ抗体の結合活性のスクリーニング
ヒトＳＴ２－ｈｉｓをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、５０μＬ／ウェルでプレート内に添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して、室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。１００ｎｇ／ｍＬから出発して、各ネズミ抗体を３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得て、次いで、これを５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。プレートを室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで９６ウェルプレート内に、５０μＬ／ウェルで、ヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）を添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。結果を表２に示す。
ヒトＳＴ２－ｈｉｓをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、５０μＬ／ウェルでプレート内に添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して、室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。１００ｎｇ／ｍＬから出発して、各ネズミ抗体を３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得て、次いで、これを５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。プレートを室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで９６ウェルプレート内に、５０μＬ／ウェルで、ヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）を添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。結果を表２に示す。
（３）ヒトＳＴ２へのＩＬ３３の結合に対する、ネズミ抗体のブロッキングアッセイスクリーニング
ヒトＳＴ２－ｆｃをコーティング緩衝液で１０μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、冷蔵庫中、４℃で一晩コーティングした。コーティングされたプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで、ブロッキング緩衝液を１００μＬ／ウェルでプレート内に添加した後、室温で１時間インキュベーションし、続いてプレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを希釈溶液中で２００ｎｇ／ｍＬに希釈し、各ネズミ抗体を希釈溶液中で２００μｇ／ｍＬに希釈し、次いで２００μｇ／ｍＬから出発して３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得た。希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ及び各々の希釈されたネズミ抗体を１：１の比で混合し、次いで混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでＨｉｓタグ化二次抗体（１：２５００）を５０μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルで添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍ及び６５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。結果を表３に示す。
ヒトＳＴ２－ｆｃをコーティング緩衝液で１０μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、冷蔵庫中、４℃で一晩コーティングした。コーティングされたプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いで、ブロッキング緩衝液を１００μＬ／ウェルでプレート内に添加した後、室温で１時間インキュベーションし、続いてプレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを希釈溶液中で２００ｎｇ／ｍＬに希釈し、各ネズミ抗体を希釈溶液中で２００μｇ／ｍＬに希釈し、次いで２００μｇ／ｍＬから出発して３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得た。希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ及び各々の希釈されたネズミ抗体を１：１の比で混合し、次いで混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでＨｉｓタグ化二次抗体（１：２５００）を５０μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルで添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍ及び６５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。結果を表３に示す。
（４）ＩＬ３３によるＫＵ８１２－ＮＦ－κＢレポーター遺伝子の活性化に対する、ネズミ抗体のスクリーニング
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で１μｇ／ｍＬに希釈した。ネズミ抗体及び対照抗体ＣＮＴＯ７１６０を各々、培養培地で５０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで３倍希釈して、総数１２個の濃度の連続希釈を得た。抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと１：１の比で混合して、試験試料を得た。さらに、陰性対照試料（１：１の比でブランク培地と混合された、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ）及び陽性対照試料（ブランク培地）を調製した。試料を各々２０μＬ／ウェルで３８４ウェルプレート内に添加した。
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で１μｇ／ｍＬに希釈した。ネズミ抗体及び対照抗体ＣＮＴＯ７１６０を各々、培養培地で５０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで３倍希釈して、総数１２個の濃度の連続希釈を得た。抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと１：１の比で混合して、試験試料を得た。さらに、陰性対照試料（１：１の比でブランク培地と混合された、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓ）及び陽性対照試料（ブランク培地）を調製した。試料を各々２０μＬ／ウェルで３８４ウェルプレート内に添加した。
対数増殖期のＫＵ８１２／ＮＦ－κＢ－１＃細胞を遠心分離し、新鮮な培地に移し、上記の３８４ウェルプレート内に、２００００／ウェル及び２０μＬ／ウェルで添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩（１６時間～２４時間）インキュベーションした。続いて、現像剤Ｂｒｉｇｈｔ－ｇｌｏを３８４ウェルプレート内に４０μＬ／ウェルで添加し、プレートを３分間振動させ、マイクロプレート読み取り装置によって検出し、ＲＬＵ値を読み取った。結果を表４に示す。
（５）ネズミ抗体のアフィニティスクリーニング
上記ネズミ抗体の定量的スクリーニングの合わせた結果に基づいて、１９のネズミ抗体をアフィニティ決定及びｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究のために選択した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００を使用して、抗ヒトＳＴ２抗体及びヒトＳＴ２－ｈｉｓの間の相互作用に対する実験を行い、ＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ７．４）中、２５℃で行った。
上記ネズミ抗体の定量的スクリーニングの合わせた結果に基づいて、１９のネズミ抗体をアフィニティ決定及びｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究のために選択した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００を使用して、抗ヒトＳＴ２抗体及びヒトＳＴ２－ｈｉｓの間の相互作用に対する実験を行い、ＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ７．４）中、２５℃で行った。
各抗ヒトＳＴ２抗体を１０ｎＭに希釈し、プロテインＡチップの表面上に捕捉した（６０秒間の捕捉時間）。抗体捕捉後、ヒトＳＴ２－ｈｉｓ溶液（１１．８ｎＭ～０．７３７５ｎＭの２倍勾配希釈、総数５つの濃度）を注入した。会合を４分間、解離を１０分間監視し、ｐＨ２．０のグリシン溶液を注入することによって、センサー表面を再生した。ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、動力学及びアフィニティアッセイに関して生成されたデータを分析した。単純１：１結合モデルを使用して、動力学データを分析し、結果を表５に示す。
（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で８０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ネズミ抗体を培養培地で４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。対数増殖期のＫＵ８１２細胞を遠心分離し、１０００００／ウェル及び５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、次いで４８時間インキュベーションした。
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で８０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ネズミ抗体を培養培地で４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。対数増殖期のＫＵ８１２細胞を遠心分離し、１０００００／ウェル及び５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、次いで４８時間インキュベーションした。
あらかじめ１日前に、指示に従って、２４０μｇ／ｍＬのストック溶液をＰＢＳで１２０倍希釈することによって得られる２μｇ／ｍＬ作業溶液として、ヒトＩＬ－５ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット中に含まれる捕捉抗体を、ＥＬＩＳＡプレート中、５０μＬ／ウェルで、４℃で一晩コーティングした。次いで、ブロッキング緩衝液を使用してプレートを１時間ブロッキングし、次いで３回洗浄した。１２０ｎｇ／ｍＬ標準を３００ｐｇ／ｍＬまで４００倍希釈し、次いで２倍希釈して、総数７つの濃度の連続希釈を得た。上記細胞の培養上清及び希釈標準の１つを各５０μＬ、ＥＬＩＳＡプレート内にピペッティングし、２時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄し、検出抗体（７．５μｇ／ｍＬのストック溶液中）を６０倍希釈することによって得られる１２５ｎｇ／ｍＬ作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いで、これを２時間インキュベーションした。プレートを再び３回洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰを４０倍希釈することによって得られる１２５ｎｇ／ｍＬ作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いで、これを２０分間～３０分間インキュベーションした。基質溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で５分間～１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルで添加して反応を停止させ、マイクロプレート読み取り装置によって４５０ｎｍ及び６５０ｎｍのＯＤ値を読み取った。結果を表６及び図６Ａ、６Ｂに示す。
（７）マウスＳＴ２及びカニクイザルＳＴ２とネズミ抗体との交差反応に関する実験
カニクイザルＳＴ２－ｆｃをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。１０００ｎｇ／ｍＬから出発し、各ネズミ抗体を３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得て、次いでこれを５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。プレートを室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって４５０ｎｍのＯＤ値を読み取った。結果を表７及び図７に示す。ネズミ抗体がカニクイザルＳＴ２に結合し得ることがわかり、結合傾向はヒトＳＴ２への結合に一致した。
カニクイザルＳＴ２－ｆｃをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。１０００ｎｇ／ｍＬから出発し、各ネズミ抗体を３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得て、次いでこれを５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。プレートを室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって４５０ｎｍのＯＤ値を読み取った。結果を表７及び図７に示す。ネズミ抗体がカニクイザルＳＴ２に結合し得ることがわかり、結合傾向はヒトＳＴ２への結合に一致した。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００を使用して、抗ヒトＳＴ２抗体及びカニクイザルＳＴ２－ｆｃの間の相互作用に関する実験を、ＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ７．４）中、２５℃で行った。アミノカップリングキットを使用して、ＣＭ５チップの表面上に各抗体を固定した。抗体固定後、カニクイザルＳＴ２－ｆｃ溶液（８ｎＭの出発濃度から２倍勾配希釈して、総数６つの濃度を得た；いくつかの試料のシグナルが低すぎるならば、出発濃度を増加させてもよい）を注入した。会合を２分間、解離を１０分間監視し、ｐＨ１．５のグリシン溶液を注入することによって、センサー表面を再生した。単純１：１結合モデルを使用して、動力学データを分析し、結果を表８に示す。
マウスＳＴ２－ｆｃをコーティング緩衝液で１μｇ／ｍＬに希釈し、５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、４℃で一晩コーティングした。翌日、コーティングされたプレートを取り、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでブロッキング緩衝液を使用して室温で１時間インキュベーションした。続いて、プレートを再びＰＢＳＴで３回洗浄した。１０００ｎｇ／ｍＬから出発して、各ネズミ抗体を３倍希釈して、総数８つの濃度の連続希釈を得て、次いでこれを５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。プレートを室温で１時間インキュベーションし、ＰＢＳＴで３回洗浄し、次いでヤギ抗マウス二次抗体（１：１００００）を９６ウェルプレート内に５０μＬ／ウェルで添加し、続いてこれを室温で１時間インキュベーションした。９６ウェルプレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ＴＭＢを５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を添加して反応を停止し、マイクロプレート読み取り装置によって、４５０ｎｍでのＯＤ値を読み取った。結果を図８に示す。ネズミ抗体が、対照抗体ＣＮＴＯ７１６０と同様に、マウスＳＴ２に弱く結合し得ることがわかる。
２．３ ヒト化
７つのマウス抗体である、５８８６－１５６Ｈ＋Ｌ、５８８７－４１Ｈ＋Ｌ、５８８７－５３７Ｈ３Ｈ＋Ｌ１、５８８８－１１６Ｈ１＋Ｌ１、５８８８－１５３Ｈ１＋Ｌ２、５８８８－３５７Ｈ＋Ｌ、５８８８－３７９Ｈ１＋Ｌ２をヒト化設計のために選択した。
７つのマウス抗体である、５８８６－１５６Ｈ＋Ｌ、５８８７－４１Ｈ＋Ｌ、５８８７－５３７Ｈ３Ｈ＋Ｌ１、５８８８－１１６Ｈ１＋Ｌ１、５８８８－１５３Ｈ１＋Ｌ２、５８８８－３５７Ｈ＋Ｌ、５８８８－３７９Ｈ１＋Ｌ２をヒト化設計のために選択した。
ＩＭＧＴデータベース中のｂｌａｓｔ検索によって、７つのネズミ抗体の重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を、ヒト生殖系列配列と比較した。重複遺伝子及び非対形成システインを含むものをヒト生殖系列遺伝子から除去した。最もマッチしたフレームワーク及びＣＤＲ領域を有する残りのものの中のヒト生殖系列遺伝子を選択し、その中のフレームワーク領域をヒトアクセプターフレームワークとして使用した。ＩＧＨＪ／ＩＧＪＫ生殖系列遺伝子の配列類似性に基づいて、ＦＲ－４を選択した。表９～表１５は、それぞれ、７つのネズミ抗体である、５８８６－１５６Ｈ＋Ｌ、５８８７－４１Ｈ＋Ｌ、５８８７－５３７Ｈ３Ｈ＋Ｌ１、５８８８－１１６Ｈ１＋Ｌ１、５８８８－１５３Ｈ１＋Ｌ２、５８８８－３５７Ｈ＋Ｌ、５８８８－３７９Ｈ１＋Ｌ２のヒト化配列を示し、ＨＺ０型はＣＤＲのみを移植したものを示し、ＨＺ１型は導入された逆突然変異（複数の場合もある）を有し、ＨＺ２型及び更なる型は配列中に存在するＰＴＭ部位に向けられる突然変異（複数の場合もある）を有する。ヒト化後の特定の配列を表９～表１５に示し、対応するＣＤＲ（改良Ｃｈｏｔｈｉａ／ＡｂＭによって定義される）を下線で示す。
２．４ ヒト化抗体の組換え発現及びスクリーニング
（１）ヒト化抗体の組換え発現
配列番号５４に示されるような重鎖定常領域及び配列番号５５に示されるような軽鎖定常領域を使用して、同じネズミ抗体に由来するヒト化軽鎖及び重鎖を構築し、ＣＨＯ－Ｋ１細胞内に対で同時トランスフェクションした。トランスフェクション２４時間後、１０μｇ／ｍＬ ＭＳＸを圧スクリーニングのために添加した。細胞密度及び生存性を回復した後、細胞を流加培養発現のために接種し、発現が完了したら上清を遠心分離して、プロテインＡによって精製した。ＢＣＡ法によって抗体濃度を決定した後、得られた抗体を定量的スクリーニングのために使用した。
（１）ヒト化抗体の組換え発現
配列番号５４に示されるような重鎖定常領域及び配列番号５５に示されるような軽鎖定常領域を使用して、同じネズミ抗体に由来するヒト化軽鎖及び重鎖を構築し、ＣＨＯ－Ｋ１細胞内に対で同時トランスフェクションした。トランスフェクション２４時間後、１０μｇ／ｍＬ ＭＳＸを圧スクリーニングのために添加した。細胞密度及び生存性を回復した後、細胞を流加培養発現のために接種し、発現が完了したら上清を遠心分離して、プロテインＡによって精製した。ＢＣＡ法によって抗体濃度を決定した後、得られた抗体を定量的スクリーニングのために使用した。
ヒト化抗体、並びにこの抗体に含まれる対の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を、表１６～表２２に示す。「ｉｘ」が末尾に付け加えられた名称を有する抗体は、それに応じたキメラ抗体である。
（２）ヒトＳＴ２へのＩＬ３３の結合に対する、ヒト化抗体のブロッキングアッセイスクリーニング
上記セクション２．２の「（３）ヒトＳＴ２へのＩＬ３３の結合に対する、ネズミ抗体のブロッキングアッセイスクリーニング」に記載される実験法に従って、検出を行った。結果を図９Ａ、Ｂ、Ｃ及び表２３に示す。図９Ａ、Ｂ、Ｃでは、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
上記セクション２．２の「（３）ヒトＳＴ２へのＩＬ３３の結合に対する、ネズミ抗体のブロッキングアッセイスクリーニング」に記載される実験法に従って、検出を行った。結果を図９Ａ、Ｂ、Ｃ及び表２３に示す。図９Ａ、Ｂ、Ｃでは、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（３）ＩＬ－３３によるＫＵ８１２－ＩＬ５産生の促進に対する、ヒト化抗体の阻害活性
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で８０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１０Ａ、Ｂ及び表２４に示す。図１０Ａ、Ｂでは、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で８０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１０Ａ、Ｂ及び表２４に示す。図１０Ａ、Ｂでは、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（４）ＩＬ３３によるＫＵ８１２－ＮＦ－κＢレポーター遺伝子の活性化に対する、ヒト化抗体のスクリーニング
上記セクション２．２の「（４）ＩＬ３３によるＫＵ８１２－ＮＦ－κＢレポーター遺伝子の活性化に対する、ネズミ抗体のスクリーニング」に記載される実験法に従って、検出を行った。結果を表２５に示す。
上記セクション２．２の「（４）ＩＬ３３によるＫＵ８１２－ＮＦ－κＢレポーター遺伝子の活性化に対する、ネズミ抗体のスクリーニング」に記載される実験法に従って、検出を行った。結果を表２５に示す。
（５）酸化ＩＬ－３３によるＫＵ８１２－ＩＬ５産生の促進に対する、ヒト化抗体の阻害活性
酸化ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で２００ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１１及び表２６に示す。図１１では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
酸化ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で２００ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１１及び表２６に示す。図１１では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（６）還元ＩＬ－３３によるＫＵ８１２－ＩＬ５産生の促進に対する、ヒト化抗体の阻害活性
還元ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で６ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１２及び表２７に示す。図１２では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
還元ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で６ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で６４０μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。続く実験法は、上記セクション２．２の「（６）ネズミ抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ薬理学的研究」に記載されるものと同じであった。結果を図１２及び表２７に示す。図１２では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（７）ＩＬ３３によるＨＵＶＥＣ－ＩＬ６産生の促進に対する、ヒト化抗体の阻害活性
９６ウェルプレートにおいて、ＨＵＶＥＣ細胞を１００００／ウェル及び１００μＬ／ウェル、３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で１０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で４００μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで上記の９６ウェルプレート内に添加し、次いで、これを３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。
９６ウェルプレートにおいて、ＨＵＶＥＣ細胞を１００００／ウェル及び１００μＬ／ウェル、３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを培養培地で１０ｎｇ／ｍＬに希釈した。各ヒト化抗体を培養培地で４００μｇ／ｍＬに希釈し、次いで４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで上記の９６ウェルプレート内に添加し、次いで、これを３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。
あらかじめ１日前に、指示に従って、２４０μｇ／ｍＬのストック溶液をＰＢＳで１２０倍希釈することによって得られる２μｇ／ｍＬ作業溶液として、ヒトＩＬ－６ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット中に含まれる捕捉抗体を、ＥＬＩＳＡプレート中、５０μＬ／ウェルで、４℃で一晩コーティングした。次いで、ブロッキング緩衝液を使用してプレートを１時間ブロッキングし、次いで３回洗浄した。１８０ｎｇ／ｍＬ標準を６００ｐｇ／ｍＬまで３００倍希釈し、次いで２倍希釈して、総数７つの濃度の連続希釈を得た。上記細胞の培養上清及び希釈標準の１つを各５０μＬ、ＥＬＩＳＡプレート内にピペッティングし、２時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄し、検出抗体（３μｇ／ｍＬのストック溶液中）を６０倍希釈することによって得られる５０ｎｇ／ｍＬ作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いで、これを２時間インキュベーションした。プレートを再び３回洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰを４０倍希釈することによって得られる１２５ｎｇ／ｍＬ作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いで、これを２０分間～３０分間インキュベーションした。基質溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で５分間～１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルで添加して反応を停止させ、マイクロプレート読み取り装置によって４５０ｎｍ及び６５０ｎｍのＯＤ値を読み取った。結果を表２８及び図１３に示す。図１３では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（８）ＩＬ３３によるＨＭＣ－１ ＩＬ８産生の促進に対する、ヒト化抗体の阻害活性
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを１０００ｎｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。６４０μｇ／ｍＬから出発して、ヒト化抗体各々を４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。対数増殖期のＨＭＣ－１細胞を取り、５００００／ウェル及び５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。
ヒトＩＬ３３－ｈｉｓを１０００ｎｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。６４０μｇ／ｍＬから出発して、ヒト化抗体各々を４倍希釈して、総数１１個の濃度の連続希釈を得た。希釈された抗体を、希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓと、１：１の比で混合し、得られた混合物を５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加した。対数増殖期のＨＭＣ－１細胞を取り、５００００／ウェル及び５０μＬ／ウェルで９６ウェルプレート内に添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１８時間～２４時間インキュベーションした。
あらかじめ１日前に、指示に従って、ＰＢＳで１２０倍希釈することによって得られる作業溶液として、ヒトＩＬ－８ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット中に含まれる捕捉抗体を、ＥＬＩＳＡプレート中、５０μＬ／ウェルで、４℃で一晩コーティングした。次いで、ブロッキング緩衝液を使用してプレートを１時間ブロッキングし、次いで３回洗浄した。標準を２０００ｐｇ／ｍＬまで４０倍希釈し、次いで２倍希釈して、総数７つの濃度の連続希釈を得た。上記細胞の培養上清及び希釈標準の１つを各５０μＬ、ＥＬＩＳＡプレート内にピペッティングし、２時間インキュベーションした。プレートを３回洗浄し、検出抗体を６０倍希釈することによって得られる作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いでこれを２時間インキュベーションした。プレートを再び３回洗浄し、ＳＡ－ＨＲＰを４０倍希釈することによって得られる１２５ｎｇ／ｍＬ作業溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、次いで、これを２０分間～３０分間インキュベーションした。基質溶液をプレート内に５０μＬ／ウェルで添加して、暗所で５分間～１０分間発色させた。その後、２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルで添加して反応を停止させ、マイクロプレート読み取り装置によって４５０ｎｍ及び６５０ｎｍのＯＤ値を読み取った。結果を表２９及び図１４に示す。図１４では、陰性対照は、１：１の比のブランク培地及び希釈されたヒトＩＬ３３－ｈｉｓの混合物であり、陽性対照はブランク培地である。
（９）ヒト化抗体のアフィニティの決定
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００を使用して、抗ヒトＳＴ２抗体及びヒトＳＴ２－ｈｉｓの間の相互作用に対する実験を行った。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００を使用して、抗ヒトＳＴ２抗体及びヒトＳＴ２－ｈｉｓの間の相互作用に対する実験を行った。
（９－１）ｐＨ７．４でのヒト化抗体からのヒトＳＴ２の解離動力学のアフィニティ実験：ＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ７．４）中、２５℃で実験を行った。
各抗ヒトＳＴ２抗体を２μｇ／ｍＬに希釈し、６０秒間の捕捉時間でプロテインＡチップの表面上に捕捉した。抗体捕捉後、ヒトＳＴ２－ｈｉｓ溶液（２０ｎＭの出発濃度からの２倍勾配で希釈し、総数６つの濃度を得た）を注入した。会合を１８０秒間監視し、解離を７００秒間監視し、ｐＨ２．０のグリシン溶液を注入することによって、センサー表面を再生した。単純１：１結合モデルを使用して、動力学データを分析した。
各抗ヒトＳＴ２抗体を２μｇ／ｍＬに希釈し、６０秒間の捕捉時間でプロテインＡチップの表面上に捕捉した。抗体捕捉後、ヒトＳＴ２－ｈｉｓ溶液（２０ｎＭの出発濃度からの２倍勾配で希釈し、総数６つの濃度を得た）を注入した。会合を１８０秒間監視し、解離を７００秒間監視し、ｐＨ２．０のグリシン溶液を注入することによって、センサー表面を再生した。単純１：１結合モデルを使用して、動力学データを分析した。
（９－２）ｐＨ５．５でのヒト化抗体からのヒトＳＴ２の解離動力学のアフィニティ実験：
解離をＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ５．５）で行い、解離を６００秒間監視した点が異なるが、（９－１）に記載されるような実験法に従って、実験を行った。
解離をＨＢＳ－ＥＰ（１×）緩衝液（ｐＨ５．５）で行い、解離を６００秒間監視した点が異なるが、（９－１）に記載されるような実験法に従って、実験を行った。
結果を表３０に示す。
実施例３：マウスにおける抗体の薬物動態学
順応期間後、２０匹のマウスを、各５匹のマウスの４つの群にランダムに分けた。投与情報を表３１に示す。
順応期間後、２０匹のマウスを、各５匹のマウスの４つの群にランダムに分けた。投与情報を表３１に示す。
グループ分けに従ってマウスに投与し、投与時間を記録した。各群のマウスの血液を、投与前（０時間）、並びに投与の４時間後、８時間後、２４時間後（１日後）、７２時間後（３日後）、１２０時間後（５日後）、１６８時間後（７日後）、２４０時間後（１０日後）、２８８時間後（１２日後）、及び３３６時間後（１４日後）にサンプリングし、血清を収集して－６０℃～－８０℃で保存した。
マウスにおけるＰＫ研究のための血液薬剤濃度を以下のように検出した。
（１）コーティング。ヒトＳＴ２－ｈｉｓをＰＢＳ（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４）で１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに５０μＬ／ウェルで添加し、次いでフィルムで密封した。プレートを２℃～８℃で１５時間～２０時間置き（stewing）、次いでＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４）を含む）で３回洗浄した。
（２）ブロッキング及び乾燥。プレートを、２００μＬ／ウェルのＮ５０２で、室温で１時間～２時間ブロッキングした。ブロッキング溶液を吸い取った後、プレートを２５℃で１時間超、インキュベーター中で乾燥させ、次いで、直ちに使用するか、又はフィルムで密封し、２℃～８℃で保存した。
（３）標準曲線のプロット及び品質管理に使用される標準の調製。マウス血漿（ＥＤＴＡ－Ｋ）を使用して、抗体試料を１０００ｎｇ／ｍＬに希釈した後、１５ｎｇ／ｍＬまで、２倍勾配希釈した（１０００ｎｇ／ｍＬを含めて７つの濃度）。加えて、標準曲線をプロットするために使用されたものと同じ抗体試料を、定量的分析用の濃度範囲内の濃度まで、定量的に希釈して、品質管理（ＱＣ）として使用した。特に、抗体試料を、それぞれ、１０００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ及び２０ｎｇ／ｍＬに希釈した。
（４）検出される試料の調製。異なる血液サンプリング時点の試料を得て、標準曲線をプロットするために使用される濃度範囲内の濃度に希釈した。
（５）標準、品質管理及び試料の希釈。標準、品質管理及び試料を０．１％カゼイン（ｐＨ６．２、ＰＢＳ（ｐＨ６．２）でカゼインのストック溶液を希釈することによって得た）で１０倍希釈（例えば１０μＬを９０μＬで希釈）し、乾燥したプレートに５０μＬ／ウェルで添加し、試料あたり２つの複製物を作製した。プレートをフィルムで密封し、室温で２時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４））で３回洗浄した。
（６）二次抗体とのインキュベーション。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＨＲＰを１０％ヤギ血清で５００００倍希釈し、プレートに５０μＬ／ウェルで添加し、次いでこれを密封し、室温で１時間インキュベーションした。その後、プレートをＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４））で３回洗浄した。
（７）発色。室温に温めておいたＴＭＢを５０μＬ／ウェルでプレートに添加して、暗所で２０分間発色させた。
（８）反応停止及びＯＤ値の読み取り。２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルでプレート内に添加し、次いで軽く叩いて硫酸を均一に混合した。６５０ｎｍを参照として、４５０ｎｍでのＯＤ読み取り値を使用して、試験した各試料の濃度を計算した。
（１）コーティング。ヒトＳＴ２－ｈｉｓをＰＢＳ（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４）で１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに５０μＬ／ウェルで添加し、次いでフィルムで密封した。プレートを２℃～８℃で１５時間～２０時間置き（stewing）、次いでＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４）を含む）で３回洗浄した。
（２）ブロッキング及び乾燥。プレートを、２００μＬ／ウェルのＮ５０２で、室温で１時間～２時間ブロッキングした。ブロッキング溶液を吸い取った後、プレートを２５℃で１時間超、インキュベーター中で乾燥させ、次いで、直ちに使用するか、又はフィルムで密封し、２℃～８℃で保存した。
（３）標準曲線のプロット及び品質管理に使用される標準の調製。マウス血漿（ＥＤＴＡ－Ｋ）を使用して、抗体試料を１０００ｎｇ／ｍＬに希釈した後、１５ｎｇ／ｍＬまで、２倍勾配希釈した（１０００ｎｇ／ｍＬを含めて７つの濃度）。加えて、標準曲線をプロットするために使用されたものと同じ抗体試料を、定量的分析用の濃度範囲内の濃度まで、定量的に希釈して、品質管理（ＱＣ）として使用した。特に、抗体試料を、それぞれ、１０００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ及び２０ｎｇ／ｍＬに希釈した。
（４）検出される試料の調製。異なる血液サンプリング時点の試料を得て、標準曲線をプロットするために使用される濃度範囲内の濃度に希釈した。
（５）標準、品質管理及び試料の希釈。標準、品質管理及び試料を０．１％カゼイン（ｐＨ６．２、ＰＢＳ（ｐＨ６．２）でカゼインのストック溶液を希釈することによって得た）で１０倍希釈（例えば１０μＬを９０μＬで希釈）し、乾燥したプレートに５０μＬ／ウェルで添加し、試料あたり２つの複製物を作製した。プレートをフィルムで密封し、室温で２時間インキュベーションし、次いでＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４））で３回洗浄した。
（６）二次抗体とのインキュベーション。ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－ＨＲＰを１０％ヤギ血清で５００００倍希釈し、プレートに５０μＬ／ウェルで添加し、次いでこれを密封し、室温で１時間インキュベーションした。その後、プレートをＰＢＳＴ（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ｐＨ７．２～ｐＨ７．４））で３回洗浄した。
（７）発色。室温に温めておいたＴＭＢを５０μＬ／ウェルでプレートに添加して、暗所で２０分間発色させた。
（８）反応停止及びＯＤ値の読み取り。２Ｍ硫酸を１００μＬ／ウェルでプレート内に添加し、次いで軽く叩いて硫酸を均一に混合した。６５０ｎｍを参照として、４５０ｎｍでのＯＤ読み取り値を使用して、試験した各試料の濃度を計算した。
実験結果は、３つの抗体が１００時間より長い半減期を有し、特に５８８６－１５６－Ｈ１Ｌ０＞５８８８－１５３－Ｈ０Ｌ１＞５８８８－１１６－Ｈ０Ｌ１の順序であることを示した。３つの抗体のうち、抗体５８８６－１５６Ｈ１Ｌ０は、ＣＮＴＯ７１６０のものと同等の、１０日に達する半減期を有した。結果を図１５Ａ、Ｂ及び表３２に示す。
本発明の実施形態に関する以上の説明は、本発明を限定することを意図するものではなく、当業者は、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で本発明に種々の変更及び修正を加えることができ、これは添付の特許請求の範囲に含まれるべきである。
Claims (15)
- 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体又はその断片であって、前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、以下の組み合わせ：
（Ｉ）配列番号５６、６３、７０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８５、９３、９７に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＩ－１）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８６、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＩ－２）配列番号５７、６４、７１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８７、９３、９８に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＩＩ）配列番号５８、６５、７２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８８、９４、９９に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＶ－１）配列番号５９、６６、７３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＶ－２）配列番号５９、６６、７４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＩＶ－３）配列番号５９、６６、７５に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号８９、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－１）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－２）配列番号６０、６７、７６に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－３）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－４）配列番号６０、６７、７７に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－５）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０１に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（Ｖ－６）配列番号６０、６７、７８に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９０、９５、１０２に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＶＩ－１）配列番号６１、６８、７９に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＶＩ－２）配列番号６１、６８、８０に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＶＩ－３）配列番号６１、６８、８１に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９１、９５、１００に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＶＩＩ－１）配列番号６２、６９、８２に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
（ＶＩＩ－２）配列番号６２、６９、８３に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、並びに、
（ＶＩＩ－３）配列番号６２、６９、８４に順次示されるようなＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ２、Ｈ－ＣＤＲ３、及び配列番号９２、９６、１０３に順次示されるようなＬ－ＣＤＲ１、Ｌ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ３、
より選択されるいずれか１つに示される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、抗体又はその断片。 - 前記重鎖可変領域が配列番号１～配列番号２８のいずれか１つに示されるようなアミノ酸配列、若しくは示されるような前記アミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び／又は前記軽鎖可変領域が配列番号２９～配列番号５３のいずれか１つに示されるようなアミノ酸配列、若しくは示されるような前記アミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体又はその断片。
- 前記抗体又はその断片が、以下の組み合わせ：
（Ｉ－１）配列番号１に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号２９に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｉ－２）配列番号２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｉ－３）配列番号２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｉ－４）配列番号３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｉ－５）配列番号３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－１）配列番号４に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３２に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－２）配列番号５に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－３）配列番号５に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－４）配列番号５に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－５）配列番号６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－６）配列番号６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩ－７）配列番号６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－１）配列番号７に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３６に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－２）配列番号８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－３）配列番号８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－４）配列番号９に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３７に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＩＩ－５）配列番号９に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－１）配列番号１０に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号３９に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－２）配列番号１１に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－３）配列番号１１に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－４）配列番号１２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－５）配列番号１２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－６）配列番号１３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－７）配列番号１３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－８）配列番号１４に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＩＶ－９）配列番号１４に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４１に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－１）配列番号１５に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４２に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－２）配列番号１６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－３）配列番号１６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－４）配列番号１６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－５）配列番号１７に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－６）配列番号１７に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－７）配列番号１７に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－８）配列番号１８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－９）配列番号１８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－１０）配列番号１８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－１１）配列番号１９に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－１２）配列番号１９に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４４に示されるような前記軽鎖可変領域、
（Ｖ－１３）配列番号１９に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４５に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－１）配列番号２０に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４６に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－２）配列番号２１として示される前記重鎖可変領域及び配列番号４７として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－３）配列番号２１に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－４）配列番号２２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－５）配列番号２２に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－６）配列番号２３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－７）配列番号２３に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－８）配列番号２４に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４７に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩ－９）配列番号２４に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４８に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１）配列番号２５に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号４９に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－２）配列番号２６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－３）配列番号２６として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５３として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－４）配列番号２６に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－５）配列番号２６として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５１として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－６）配列番号２７として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５２として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－７）配列番号２７として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５３として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－８）配列番号２７として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５０として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－９）配列番号２７として示される前記重鎖可変領域及び配列番号５１として示される前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１０）配列番号２８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５２に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１１）配列番号２８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５３に示されるような前記軽鎖可変領域、
（ＶＩＩ－１２）配列番号２８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５０に示されるような前記軽鎖可変領域、並びに、
（ＶＩＩ－１３）配列番号２８に示されるような前記重鎖可変領域及び配列番号５１に示されるような前記軽鎖可変領域、
より選択されるいずれか１つに示されるような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその断片。 - 前記抗体又はその断片がＳＴ２、好ましくは哺乳動物ＳＴ２、より好ましくは霊長類ＳＴ２、更に好ましくはヒトＳＴ２又はカニクイザルＳＴ２、特にヒトＳＴ２に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
- 前記抗体が任意の型であり、例えばモノクローナル抗体、一本鎖抗体、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ナノボディ、完全又は部分的ヒト化抗体、又はキメラ抗体等であり、好ましくは前記抗体がＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭ、より好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体であり、
好ましくは、前記断片が、ＳＴ２又はその任意の部分に特異的に結合可能な、前記抗体の機能的活性断片であり、より好ましくは、前記断片が前記抗体のｓｃＦｖ、ＢｓＦｖ、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦｖであり、
より好ましくは、前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、若しくはＩｇＧ４サブタイプのものである重鎖定常領域を更に含むか、又は前記抗体がκサブタイプのものである軽鎖定常領域を含み、更に好ましくは、前記重鎖定常領域が、配列番号５４に示されるようなアミノ酸配列又は示されるような前記アミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖定常領域が、配列番号５５に示されるようなアミノ酸配列又は示されるような前記アミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記少なくとも７５％の同一性が、７５％以上の任意のパーセント同一性、例えば少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、更に好ましくは少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は更に９９％の同一性である、
請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。 - 請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその断片を含む、コンジュゲート又は融合タンパク質。
- 請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又はそのフラグメントに含まれる重鎖ＣＤＲ、軽鎖ＣＤＲ、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
- 請求項７に記載の核酸分子を含むベクター。
- 請求項７に記載の核酸分子及び／又は請求項８に記載のベクターを含む、又は、請求項７に記載の核酸分子及び／又は請求項８に記載のベクターで形質転換若しくはトランスフェクトされた、宿主細胞。
- 請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、及び／又は請求項９に記載の宿主細胞を含む、組成物であって、好ましくは、前記組成物が医薬組成物であり、任意選択で医薬的に許容され得る賦形剤を含む、組成物。
- 疾患を予防するか、治療するか、又は改善させるための薬剤製造における、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１０に記載の組成物の使用であって、
好ましくは、前記疾患がＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全と関連し、
好ましくは、前記疾患が、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、前記疾患が、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である、
使用。 - 疾患を予防するか、治療するか又は改善させる方法であって、その必要がある被験体に、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１０に記載の組成物、並びに任意選択で更なる薬剤又は手段を投与することを含み、
好ましくは、前記疾患がＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全と関連し、
好ましくは、前記疾患が、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、前記疾患が、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である、
方法。 - 請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１０に記載の組成物、並びに任意選択で更なる薬剤を含む、医薬的組み合わせ。
- 疾患を検出するか又は診断する方法であって、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１０に記載の組成物を、被験体由来の試料と接触させることを含み、
好ましくは、前記疾患がＳＴ２の発現又はＩＬ－３３／ＳＴ２経路の制御不全と関連し、
好ましくは、前記疾患が、炎症性疾患又は自己免疫疾患であり、より好ましくは、前記疾患が、心不全、アレルギー性鼻炎、鼻ポリープ、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、肺線維症、敗血症、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、全身性硬化症、ウェゲナー肉芽腫症、又は化学療法に伴う下痢である、
方法。 - 請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体若しくはその断片、請求項６に記載のコンジュゲート若しくは融合タンパク質、請求項７に記載の核酸分子、請求項８に記載のベクター、請求項９に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１０に記載の組成物を含む、キット。
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