JP2023054356A - 高親和性抗ｍｅｒｔｋ抗体およびその使用 - Google Patents

高親和性抗ｍｅｒｔｋ抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】高親和性抗ＭＥＲＴＫ抗体およびその使用を提供すること。【解決手段】本開示は、Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ；例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体（例えば、ヒト化抗体）、およびそのような抗体を含む組成物を提供する。本開示は、（ｉ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および（ｉｉ）抗体に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗体にコンジュゲートされている細胞傷害剤を含む抗体－薬物コンジュゲート、ならびにそのような抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物も提供する。【選択図】なし

Description

１．分野
本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０１９年２月２６日に出願された米国仮出願第６２／８１０，８４１号の利益を主張する。
本出願は、２０２０年２月１９日に作成され、９４，２７４バイトのサイズを有する「１３２５６－００８－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ」という名称のＡＳＣＩＩフォーマットのテキストファイルとして本出願とともに提出された配列表を参照によって組み込む。
本開示は、Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ；例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体（例えば、ヒト化抗体）、およびそのような抗体を含む組成物を提供する。本開示は、（ｉ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および（ｉｉ）抗体に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗体にコンジュゲートされている細胞傷害剤を含む抗体－薬物コンジュゲート、ならびにそのような抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物も提供する。本開示は、がんを処置するための方法であって、それを必要とするヒト対象に、（ａ）本明細書に記載のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または（ｂ）（ｉ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、および（ｉｉ）抗体に直接コンジュゲートされているか、もしくはリンカーを介して抗体にコンジュゲートされている細胞傷害剤を含む抗体－薬物コンジュゲートを投与するステップを含む方法も提供する。
２．背景
ｃ－ｍｅｒ、ＭＥＲ、原癌遺伝子ｃ－Ｍｅｒ、受容体チロシンキナーゼＭｅｒＴＫ、チロシン－プロテインキナーゼＭｅｒ、ＳＴＫキナーゼ、ＲＰ３８またはＭＧＣ１３３３４９とも称される、Ｍｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）は、受容体チロシンキナーゼのＴＡＭファミリーのメンバーであり、ＡＸＬおよびＴＹＲＯ３キナーゼも含む。ＭＥＲＴＫは、リガンド、中でも注目すべきは、可溶性タンパク質であるＧａｓ－６の結合による活性化を介して、細胞外空間からシグナルを変換する。Ｇａｓ－６がＭＥＲＴＫに結合すると、その細胞内ドメインでＭＥＲＴＫの自己リン酸化が誘導され、下流のシグナル活性化が生じる（Cummings CT et al., (2013) Clin Cancer Res 19: 5275-5280；Verma A et al., (2011) Mol Cancer Ther 10: 1763-1773）。
ＭＥＲＴＫは、膜結合型と可溶型の両方で存在する。細胞外ドメインは、切断されて、可溶性の細胞外ドメインを生成することができ、これは、膜結合型ＭＥＲＴＫに結合する可溶性Ｇａｓ－６リガンドの能力および／または利用可能性を低下させることによって、細胞上のＭＥＲＴＫ受容体の活性化を負に制御するデコイ受容体として作用すると仮説が立てられている（Sather S et al., (2007) Blood 109: 1026-1033）。その結果、ＭＥＲＴＫは、がんの進行、血管新生および転移に関する２つの役割を有する。一方、内皮細胞におけるＭＥＲＴＫのＧａｓ－６活性化は、共培養系において、がん細胞による内皮細胞の動員の阻害をもたらす。内皮動員は、腫瘍の血管新生、腫瘍成長および転移を可能にするがん細胞の重要な特色である。転移性乳がん細胞におけるＭＥＲＴＫの下方制御も、内皮動員を阻害することを示した（Png KJ et al., (2012) Nature 481: 190-194）。しかしながら、他方で、ＭＥＲＴＫは、がん細胞において反対の役割を果たし、その過剰発現は、おそらく切断されたＭＥＲＴＫを放出して可溶性のＭＥＲＴＫ細胞外ドメインタンパク質をデコイ受容体として生成することによって、転移の増加をもたらす。さらに、がん細胞におけるリガンド依存性のＭＥＲＴＫの活性化は、ＡＫＴ経路を含む発癌経路を刺激する（Linger RM, Cohen RA, Cummings CT, Sather S, Migdall-Wilson J, Middleton DH, Lu X, Baron AE, Franklin WA, Merrick DT, Jedlicka P, DeRyckere D, Heasley LE, Graham DK. Mer or Axl receptor tyrosine kinase inhibition promotes apoptosis, blocks growth and enhances chemosensitivity of human non-small cell lung cancer (Oncogene. 2013 Jul 18;32(29):3420-31)）。そのため、腫瘍細胞は、ＭＥＲＴＫを過剰発現して、発癌シグナル伝達を促進する。また、腫瘍細胞は、デコイ受容体として作用する可溶型の細胞外ＭＥＲＴＫ受容体を分泌して、可溶性Ｇａｓ－６リガンドが内皮細胞上のＭＥＲＴＫを活性化する能力（および／または利用可能性）を低減し、最終的に内皮動員、血管新生およびがんの進行をもたらす（Png KJ et al., (2012) Nature 481: 190-194）。
ＭＥＲＴＫは、マクロファージホメオスタシスのモジュレートおよび抗炎症状態の維持にも関与する。マクロファージにおいて、ＭＥＲＴＫは、アポトーシス細胞の貪食性クリアランス、ならびにＩＬ－１０および急性炎症性サイトカインの放出を媒介し、その発現は、ＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６依存性結合によって刺激される（Zizzo et al., (2012) J. Immunology Oct 1;189(7):3508-20；Cook et al., J Clin Invest. 2013;123(8):3231-3242）。
歴史的に、ＭＥＲＴＫが、癌遺伝子としてのみ機能すると思われていたので、がんの処置のために、ＭＥＲＴＫの阻害剤を生成しようと努力されてきた（例えば、抗がん化合物として開発された強力な小分子ＭＥＲＴＫ阻害剤である、化合物ＵＮＣ１０６２）（Liu J et al., (2013) Eur J Med Chem 65: 83-93; Cummings CT et al., (2013) Clin Cancer Res 19: 5275-5280；Verma A et al., (2011) Mol Cancer Ther 10: 1763-1773）。近年、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、最も急速に成長しているがん治療薬のクラスの１つになっている（Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225）。
本明細書における参考文献の引用は、それが本開示に対する先行技術であるという自認として解釈されるべきではない。
Cummings CT et al., (2013) Clin Cancer Res 19: 5275-5280 Verma A et al., (2011) Mol Cancer Ther 10: 1763-1773 Sather S et al., (2007) Blood 109: 1026-1033 Png KJ et al., (2012) Nature 481: 190-194 Linger RM, Cohen RA, Cummings CT, Sather S, Migdall-Wilson J, Middleton DH, Lu X, Baron AE, Franklin WA, Merrick DT, Jedlicka P, DeRyckere D, Heasley LE, Graham DK. Mer or Axl receptor tyrosine kinase inhibition promotes apoptosis, blocks growth and enhances chemosensitivity of human non-small cell lung cancer (Oncogene. 2013 Jul 18;32(29):3420-31) Zizzo et al., (2012) J. Immunology Oct 1;189(7):3508-20 Cook et al., J Clin Invest. 2013;123(8):3231-3242 Liu J et al., (2013) Eur J Med Chem 65: 83-93 Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337 Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225
３．概要
本明細書において、高親和性でＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片を開示する。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の細胞外ドメインを特異的に認識し、細胞外ドメインは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、細胞表面からのＭＥＲＴＫの内部移行をもたらす。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｇａｓ－６が誘導するＡＫＴのリン酸化を遮断する。別の具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ＭＥＲＴＫの活性化を防止する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫの細胞外部分を特異的に認識する。別の具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞によるコロニー形成を低減する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体または抗原結合性断片は、モノクローナルである。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体は、ヒト化抗体である。
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｂ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｂ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、重鎖定常領域もしくは軽鎖定常領域、またはその両方を含む。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２からなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、ＩｇＧκおよびＩｇＧλからなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のヒトＦｃガンマ受容体に対する結合親和性が増加している定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗体は、１つまたは複数のヒトＦｃガンマ受容体に対する結合親和性が減少している定常領域を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１０６のアミノ酸を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１０７のアミノ酸を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖のそれぞれは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＨ）を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、軽鎖のそれぞれは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号１０６を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号１１１を含む可変領域（ＶＬ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号１０５を含む可変領域（ＶＨ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号１０７を含む可変領域（ＶＨ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号１０８を含む可変領域（ＶＨ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号１０９を含む可変領域（ＶＨ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである実施形態の具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号１１０を含む可変領域（ＶＨ）を含む。
抗体が２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンである、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト由来定常領域を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、重鎖定常領域は、ガンマ１、ガンマ２、ガンマ３およびガンマ４からなる群から選択されるアイソタイプを有する。
本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体は、細胞上のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に、約１ｎＭ～１５ｎＭ（例えば、６．５ｎＭ～８ｎＭ）の範囲のＥＣ５０で結合する。
本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、がん細胞（例えば、黒色腫細胞系ＳＫＭＥＬ５）におけるＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの別の具体的な実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ヒトＭ２マクロファージにおけるＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの別の具体的な実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したヒトＭ２マクロファージにおけるＭＥＲＴＫのレベルを減少させる。
本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト由来定常領域を含む。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化免疫グロブリンである。
抗体がモノクローナル抗体でも、２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖を含む免疫グロブリンでもない、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片のいずれかの具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性抗体である。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する免疫グロブリンであって、（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、免疫グロブリンを提供する。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する免疫グロブリンであって、（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、免疫グロブリンを提供する。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する免疫グロブリンであって、（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸を含む軽鎖可変領域を含む、免疫グロブリンを提供する。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する免疫グロブリンであって、（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、免疫グロブリンを提供する。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合するヒト化免疫グロブリンであって、
（Ａ）（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（Ｂ）（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（Ｃ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または
（Ｄ）（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、ヒト化免疫グロブリンを提供する。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ＩｇＧである。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片である。
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合するキメラ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、キメラ抗体は、配列番号１１０のアミノ酸を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、キメラ抗体は、配列番号１１１のアミノ酸を含む可変軽鎖領域（ＶＬ）を含む。具体的な実施形態では、キメラ抗体は、配列番号１１０のＶＨおよび配列番号１１１のＶＬを含む。
別の具体的な実施形態では、抗体は、配列番号１１２、１１４、１１５、１１６または１１７のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１３または１１８のアミノ酸を含む軽鎖を含む。別の具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体は、
（Ａ）配列番号１１２のアミノ酸を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（Ｂ）配列番号１１４のアミノ酸を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（Ｃ）配列番号１１５のアミノ酸を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（Ｄ）配列番号１１６のアミノ酸を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（Ｅ）配列番号１１７のアミノ酸を含む重鎖、および配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体は、二重特異性抗体であり、これは、２つの異なる抗原結合領域を含み、一方の結合領域がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、目的の抗原（例えば、免疫細胞受容体、チェックポイント受容体または腫瘍関連抗原）に結合する。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫに結合する結合領域は、本明細書に記載のｚ１０、ｚ１１またはｚ１３抗体の可変領域（例えば、以下の表１１、１２および１３に示されるもの）を含む。一部の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＣＤ３に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＰＤ－Ｌ１に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＬＲＰ１に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＬＰＲ８に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＴＧＦ－βに結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＩＣＯＳに結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＣＤ４０に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＮＫＧＤ２に結合する。他の具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＴＩＧＩＴに結合する。特定の実施形態では、ＣＤ４０に結合する結合領域は、アンタゴニスト抗体である。別の特定の実施形態では、ＩＣＯＳに結合する結合領域は、アンタゴニスト抗体である。別の特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１に結合する結合領域は、遮断抗体である。
別の実施形態では、本明細書において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体として、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の同じエピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ヒト化もしくはヒト抗体、またはその抗原結合性断片）を提供する。別の実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）と結合するために、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ヒト化もしくはヒト抗体、またはその抗原結合性断片）を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）と結合するために、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片と競合する第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、競合が、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の存在下、８０％を超える（例えば、８５％、９０％、９５％もしくは９８％、または８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％、もしくは８５％～９５％の間）、第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合の低減として示される、第１の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫと同じエピトープに結合する（または抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片への結合と競合する）抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、マウス抗体でも、その抗原結合性断片でもない。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体は、本明細書に記載のようなアッセイにおいて、約１ｎＭ～１０ｎＭの範囲のＥＣ５０でＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫに結合しないか、または認識できるほどに結合しない。一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫおよびカニクイザルＭＥＲＴＫに結合する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体は、単離されている。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体は、モノクローナル抗体である。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、二価であり、２つのＭＥＲＴＫ分子（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ分子）に結合することができる。
別の態様では、本明細書において、抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド配列を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、重鎖可変領域をコードする核酸分子を含むポリヌクレオチド配列であって、核酸分子が、配列番号１１９、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３の核酸配列を含む、ポリヌクレオチド配列を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、軽鎖可変領域をコードする核酸分子を含むポリヌクレオチド配列であって、核酸分子が、配列番号１２０または配列番号１２４の核酸配列を含む、ポリヌクレオチド配列を提供する。具体的な実施形態では、核酸分子またはポリヌクレオチド配列は、単離されている。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。ある特定の実施形態では、ベクター（例えば、単離されたベクター）は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体の、重鎖可変領域および／もしくは軽鎖可変領域、または重鎖および／もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、ポリヌクレオチドまたはベクターを含む。宿主細胞の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、酵母、２９３Ｆ、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、および組織培養中のヒト細胞が挙げられる。具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、ポリヌクレオチドが発現され、抗体が産生されるように、宿主細胞を培養するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片のいずれか、または本明細書に記載の免疫グロブリンのいずれかをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を提供する。具体的な実施形態では、ｅｘ ｖｉｖｏ細胞は、
（ａ）（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブリン；
（ｂ）（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；ならびに
（ｃ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第３の免疫グロブリン；
（ｄ）（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第４の免疫グロブリン；ならびに
（ｅ）（ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第５の免疫グロブリン
からなる群から選択される抗体をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体の重鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体の軽鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を提供する。別の態様では、本明細書において、抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法であって、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片のいずれかをコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を、１つまたは複数のポリヌクレオチドが細胞によって発現されて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体またはその抗原結合性断片を産生するような条件下で培養するステップを含む、方法を提供する。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法は、
（ａ）（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブリン；
（ｂ）（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；
（ｃ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第３の免疫グロブリン；
（ｄ）（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第４の免疫グロブリン；ならびに
（ｅ）（ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第５の免疫グロブリン、
からなる群から選択される抗体をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を、１つまたは複数のポリヌクレオチドが細胞によって発現されて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体を産生するような条件下で培養するステップを含む。
別の態様では、本明細書において、抗体の重鎖を産生する方法であって、本明細書に記載の抗体の重鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を、ポリヌクレオチドが細胞によって発現されて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体の重鎖を産生するような条件下で培養するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、抗体の軽鎖を産生する方法であって、本明細書に記載の抗体の軽鎖のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞を、ポリヌクレオチドが細胞によって発現されて、ポリヌクレオチドによってコードされる抗体の軽鎖を産生するような条件下で培養するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、（ａ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片である本明細書に記載の抗体部分、（ｂ）１つまたは複数の薬物部分であって、各薬物部分が、細胞傷害剤である、薬物部分、および（ｃ）必要に応じて、リンカーを含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、細胞傷害剤が、抗体部分に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗体部分にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
具体的な実施形態では、抗体部分の薬物部分に対するモル比は、１：１～１：１２の間である。
具体的な実施形態では、抗体部分の薬物部分に対するモル比は、１：１～１：８の間である。
別の具体的な実施形態では、抗体部分の薬物部分に対するモル比は、１：３～１：５の間である。
別の具体的な実施形態では、抗体部分の薬物部分に対するモル比は、１：９である。
具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、切断性リンカーである。
別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、非切断性リンカーである。
別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ」としても公知）である（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣの構造について、図１３Ａを参照されたい）。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、ＣＬ２である（ＣＬ２の構造について、図１３ＢおよびCardillo et al. 2011, Clin Cancer Res; 17(10); 3157-69を参照されたい）。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、ＣＬ２Ａである（ＣＬ２Ａの構造について、図１３ＢおよびGoldberg et al. 2018, Oncotarget; 9(48); 28989-29006、およびCardillo et al. 2011, Clin Cancer Res; 17(10); 3157-69を参照されたい）。
具体的な実施形態では、細胞傷害剤は、小分子、ヌクレオチド、ペプチドまたは非抗体タンパク質である。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、細胞傷害剤は、小分子である。
別の具体的な実施形態では、細胞傷害剤は、アウリスタチン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、カリケアマイシン、カンプトテシンアナログ、デュオカルマイシン、チューブリン阻害剤、チューブリシンもしくはチューブリシンアナログ、アンバースタチン２６９、ドキソルビシン、抗生物質、アントラサイクリン、微小管阻害剤、スプライソスタチン、またはタイランスタチンである。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、細胞傷害剤は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、細胞傷害剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、細胞傷害剤は、ＳＮ－３８である。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、リンカーが存在せず、方法が、（ａ）細胞傷害剤を直接抗体部分にコンジュゲートして抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｂ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、抗体－薬物コンジュゲートが、リンカーを含み、方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）リンカーを直接抗体部分にコンジュゲートして、リンカー－抗体部分を産生するステップ、（ｂ）リンカー－抗体部分のリンカーを直接細胞傷害剤にコンジュゲートして、抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、抗体－薬物コンジュゲートが、リンカーを含み、方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）リンカーを直接細胞傷害剤にコンジュゲートして、リンカー－細胞傷害剤部分を産生するステップ、（ｂ）リンカー－細胞傷害剤部分のリンカーを直接抗体部分にコンジュゲートして、抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、治療有効量の本明細書に記載の抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかまたは本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートのいずれかを含む医薬組成物を提供する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブリン；
（ｂ）（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；
（ｃ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第３の免疫グロブリン；
（ｄ）（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第４の免疫グロブリン；または
（ｅ）（ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第４の免疫グロブリン、
ならびに薬学的に許容される担体を含む。
一部の実施形態では、医薬組成物は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド配列を含む。
別の態様では、本明細書において、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを投与するステップを含む、方法を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に本明細書に記載の医薬組成物のいずれかを投与するステップを含む、方法を提供する。
一部の実施形態では、対象由来の腫瘍試料は、本明細書に記載の方法に従って、処置の前にリン酸化ＭＥＲＴＫの過剰発現について評価される。ある特定の実施形態では、対象は、腫瘍試料がリン酸化ＭＥＲＴＫを過剰発現する場合に処置される。
がんを処置する方法の先行する態様の具体的な実施形態では、がんは、頭頸部、肺、乳房、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆管、結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺のがんである。そのような具体的な実施形態のある特定の実施形態では、がんは、乳がんである。そのようなある特定の実施形態のさらなる実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳がんである。
がんを処置する方法の先行する態様の具体的な実施形態では、がんは、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、胃がん、結腸直腸がん、非小細胞肺癌またはカポジ肉腫である。がんを処置する方法の態様の具体的な実施形態では、がんは、白血病またはリンパ腫である。さらなる具体的な実施形態では、がんは、急性骨髄性白血病である。別のさらなる具体的な実施形態では、がんは、急性リンパ性白血病である。別のさらなる実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、ＭＥＲＴＫを過剰発現するか、構成的に活性なＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に関連するか、またはその両方である。別の具体的な実施形態では、がんのがん性細胞は、リン酸化ＭＥＲＴＫを過剰発現する。
がんを処置する方法の具体的な実施形態では、方法は、対象に追加の治療剤を投与するステップをさらに含む。
方法が対象に追加の治療剤を投与するステップをさらに含む実施形態の具体的な実施形態では、追加の治療剤は、がんを処置するためのものである。追加の治療剤は、同じ医薬組成物で、あるいは抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート以外の異なる医薬組成物で、投与されてもよい。
追加の治療薬剤ががんを処置するためのものである実施形態の具体的な実施形態では、追加の治療剤は、乳がんを処置するために使用される薬剤、黒色腫を処置するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。そのような具体的な実施形態のさらなる一実施形態では、追加の治療剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブおよび二トシル酸ラパチニブからなる群から選択される乳がんを処置するために使用される薬剤である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびダカルバジンからなる群から選択される黒色腫を処置するために使用される薬剤である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療剤は、免疫チェックポイントシグナル伝達を遮断する薬剤である。別のさらなる実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。そのような具体的な実施形態の別のさらなる実施形態では、追加の治療剤は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブおよびソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である。
がんを処置する方法の具体的な実施形態では、対象は、ヒトである。具体的な実施形態では、本明細書において、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、ＶＨが、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、抗体部分が、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥに連結されている、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、ＶＨが、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、抗体部分が、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８に連結されている、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、免疫グロブリンである抗体部分を含む。一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、抗体部分を含み、抗体部分は、免疫グロブリンであり、免疫グロブリンは、ヒト定常領域を含む。
４．図面の簡単な説明
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）測定を使用する、ヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体およびキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体についての解離速度（Ｋｄ）の決定。
３つのヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体（ｚ１０、ｚ１１およびｚ１３）およびキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体（ｘＡｂ）についてのタンパク質精製の要約。
図３Ａ．黒色腫細胞によって発現したヒトＭＥＲＴＫに対するｚ１０抗体の結合親和性のフローサイトメトリー分析。図３Ｂ．ｚ１０抗体のヒト細胞外ＭＥＲＴＫへの結合のＳＰＲ測定。
ｚ１０抗体は、ＥＬＩＳＡを使用する親和性結合アッセイにおいて測定されるように、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する（図４Ａ）。しかしながら、ｚ１０抗体は、ＥＬＩＳＡを使用する親和性結合アッセイにおいて評価されるように、ヒトＡｘｌ（図４Ｂ）、ヒトＴｙｒｏ３（図４Ｃ）またはマウスＭＥＲＴＫ（図４Ｄ）の細胞外ドメインに結合しない。ヒトＭＥＲＴＫ、ヒトＡｘｌおよびマウスＭＥＲＴＫの細胞外ドメインは、ＩｇＧ Ｆｃドメインにコンジュゲートされ、ＥＬＩＳＡにおいて使用した。
ｚ１０抗体は、がん細胞（特に、ＳＫＭＥＬ５細胞）においてヒトＭＥＲＴＫの分解を誘導する。ＳＫＭＥＬ５細胞を、ヒトＭＥＲＴＫのレベルをウェスタンブロット分析によって評価する前に、さまざまな濃度のｚ１０抗体と２４時間（図５Ａ）、または０．３μｇ／ｍＬの抗体とさまざまな期間（図５Ｂ）、インキュベートした。 ｚ１０抗体は、がん細胞（特に、ＳＫＭＥＬ５細胞）においてヒトＭＥＲＴＫの分解を誘導する。ＳＫＭＥＬ５細胞を、ヒトＭＥＲＴＫのレベルをウェスタンブロット分析によって評価する前に、さまざまな濃度のｚ１０抗体と２４時間（図５Ａ）、または０．３μｇ／ｍＬの抗体とさまざまな期間（図５Ｂ）、インキュベートした。
ｚ１０抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化ヒトＭ２マクロファージにおいて、ヒトＭＥＲＴＫを分解する。ｉｎ ｖｉｔｒｏのＭ２マクロファージを、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧで処置し、細胞を、ヒトＭＥＲＴＫのレベルをウェスタンブロット分析によって評価する前に、さまざまな期間インキュベートした。図６Ａは、ウェスタンブロットの結果を提供し、図６Ｂは、ヒトＭＥＲＴＫのチューブリンに対する相対的な定量化を提供する。
ヒトＭＥＲＴＫの分解は、ＳＫＭＥＬ５細胞のヒトＭＥＲＴＫの内部移行を介して媒介される。ＳＫＭＥＬ５細胞を、例えば、リソソームへの取り込みの際に低ｐＨ条件でのみ測定可能なｐＨｒｏｄｏで両方とも標識された対照ＩｇＧまたはｚ１０抗体とともにインキュベートした。表面のヒトＭＥＲＴＫを、市販のＭＥＲＴＫ抗体を使用して測定した。図７Ａは、経時的な蛍光を示し、図７Ｂは、代表画像である。
ｚ１０抗体は、ヒトがん細胞において、Ｇａｓ６が誘導するＡＫＴのリン酸化を遮断する。ＳＫＭＥＬ５細胞を、０．３μｌ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧとともに２時間インキュベートした後、２００ｎＭのＧａｓ６とともに１０分間インキュベートした。図８Ａは、ウェスタンブロットの結果を示し、図８Ｂは、チューブリンと比べたヒトＭＥＲＴＫの量を示し、図８Ｃは、チューブリンに対するリン酸化ＡＫＴの量を示す。
ｚ１０抗体は、ヒトがん細胞のコロニー形成を阻害する。図は、５００個のＳＫＭＥＬ５細胞を対照ＩｇＧとともに１２日間培養した場合に観察されたコロニーの数と比べて、５００個のＳＫＭＥＬ５細胞を０．３μｇ／ｍＬまたは１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体の存在下で１２日間培養した後に観察されたコロニーの数の低減を示す。図９Ａは、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後のがん細胞のコロニー形成を示す。図９Ｂは、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後のがん細胞のコロニー形成を示す。図９Ｃは、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後に形成されたコロニーの数を示す。図９Ｄは、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後に形成されたコロニーの数を示す。 ｚ１０抗体は、ヒトがん細胞のコロニー形成を阻害する。図は、５００個のＳＫＭＥＬ５細胞を対照ＩｇＧとともに１２日間培養した場合に観察されたコロニーの数と比べて、５００個のＳＫＭＥＬ５細胞を０．３μｇ／ｍＬまたは１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体の存在下で１２日間培養した後に観察されたコロニーの数の低減を示す。図９Ａは、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後のがん細胞のコロニー形成を示す。図９Ｂは、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後のがん細胞のコロニー形成を示す。図９Ｃは、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後に形成されたコロニーの数を示す。図９Ｄは、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧ抗体との１２日間のインキュベーション後に形成されたコロニーの数を示す。
ｚ１０抗体は、Ｍ２マクロファージおよびＣＤ１４＋単球においてサイトカイン応答を誘導する。
ｚ１０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでがん細胞の生存を阻害する。１，０００個のＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞（図１１Ａ）または２００個のＳＫＭＥＬ５黒色腫細胞（図１１Ｂ）を、ＩｇＧ対照またはｚ１０のいずれかの存在下で培養した。６日目（ＲＰＭＩ８２２６）または４日目（ＳＫＭｅｌ５）に、生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ２．０細胞生存率アッセイを使用して評価した。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２：ｚ１０のネイキッド抗体の抗腫瘍有効性。５０，０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２ ＴＮＢＣ細胞を、ＮＳＧマウスの尾静脈に注射した。処置を、週に２回ｉ．ｐ．で研究期間の間、腫瘍細胞接種の日に開始した。図１２Ａは、ＩＶＩＳイメージングを使用した、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２トリプルネガティブ乳がん細胞の肺コロニー形成を示す。図１２Ｂは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２トリプルネガティブ乳がん細胞の肺コロニー形成を定量化する。＊は、０．０５未満のｐ値を表す。
図１３Ａは、抗体（Ａｂ）にコンジュゲートされたマレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル－モノメチルアウリスタチンＥ（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ）の構造を示す。図１３Ｂは、ＣＬ２またはＣＬ２Ａリンカーを介して抗体（Ａｂ）にコンジュゲートされたＳＮ－３８の構造を示す。「Ａｂ」は、抗体を表し、これは、例として、限定されるものではないが、ｚ１０または対照ＩｇＧであり得る。ＣＬ２リンカーは、カテプシンＢ切断部位（ＡＡがフェニルアラニン－リシンである場合、図１３Ｂを参照されたい）を有するが、ＣＬ２Ａリンカーは、カテプシンＢ切断部位（ＡＡがリシンである場合、図１３Ｂを参照されたい）を有さない。 図１３Ａは、抗体（Ａｂ）にコンジュゲートされたマレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル－モノメチルアウリスタチンＥ（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ）の構造を示す。図１３Ｂは、ＣＬ２またはＣＬ２Ａリンカーを介して抗体（Ａｂ）にコンジュゲートされたＳＮ－３８の構造を示す。「Ａｂ」は、抗体を表し、これは、例として、限定されるものではないが、ｚ１０または対照ＩｇＧであり得る。ＣＬ２リンカーは、カテプシンＢ切断部位（ＡＡがフェニルアラニン－リシンである場合、図１３Ｂを参照されたい）を有するが、ＣＬ２Ａリンカーは、カテプシンＢ切断部位（ＡＡがリシンである場合、図１３Ｂを参照されたい）を有さない。
図１４Ａおよび図１４Ｂは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされたｚ１０（ｚ１０－ＭＭＡＥ、図１３Ａを参照されたい、Ａｂはｚ１０である）（図１４Ａ）およびＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされたｚ１０（ｚ１０－ＳＮ－３８、図１３Ｂを参照されたい、Ａｂはｚ１０であり、ＡＡはリシンである）（図１４Ｂ）の純度を測定する、サイズ排除高圧液体クロマトグラフィーの結果を示す。 図１４Ａおよび図１４Ｂは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされたｚ１０（ｚ１０－ＭＭＡＥ、図１３Ａを参照されたい、Ａｂはｚ１０である）（図１４Ａ）およびＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされたｚ１０（ｚ１０－ＳＮ－３８、図１３Ｂを参照されたい、Ａｂはｚ１０であり、ＡＡはリシンである）（図１４Ｂ）の純度を測定する、サイズ排除高圧液体クロマトグラフィーの結果を示す。
ｚ１０－ＡＤＣは、ｚ１０と同様のＫｄでＭＥＲＴＫに結合する。図１５は、ｚ１０－ＡＤＣの結合親和性データを提供する。ｈＭＥＲ組換えタンパク質（Ｍｅｒ－Ｆｃコンジュゲート）（５０ｎＭ～０．０５ｎＭ）を、それぞれ、０．３ｎＭのｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８で平衡化した後、ｈＭＥＲ組換えタンパク質で事前にコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに添加した。抗体の結合を、ＡＰコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用して検出し、ＧｌｏＭａｘマイクロプレートリーダーを使用して発色させた。
図１６Ａおよび１６Ｂは、ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８とのインキュベーション後、ＭＥＲＴＫがＳＫＭｅｌ５細胞によって内部移行し（図１６Ａ）、ＭＥＲＴＫが分解される（図１６Ｂ）ことを示す。ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８は、同様の程度までＭＥＲＴＫを分解する。ＳＫＭｅｌ５細胞を、６．７ｎＭのｐＨｒｏｄｏ標識化ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８とともにインキュベートした。ｐＨｒｏｄｏのシグナルは、例えば、リソソームへの取り込みの際に、低ｐＨ条件においてのみ測定可能である。表面のＭＥＲＴＫは、ＢＶ４２１コンジュゲートＭＥＲＴＫ抗体で染色した。結合をフローサイトメトリーによって測定した。
ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８は、ＭＥＲＴＫ発現がん細胞を死滅させる。ＳＫＭｅｌ５（図１７Ａ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｂ）細胞を、ＩｇＧ対照、ｍｃ－ｍｖ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＭＭＡＥ、図１３Ａを参照されたい、ＡｂはＩｇＧである）またはｚ１０－ＭＭＡＥとともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。－ＳＫＭｅｌ５（図１７Ｃ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｄ）細胞を、示された濃度のＩｇＧ対照、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＳＮ－３８、図１３Ｂを参照されたい、ＡｂはＩｇＧであり、ＡＡはリシンである）またはｚ１０－ＳＮ－３８とともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。図１７Ｅは、ＳＫＭｅｌ５またはＲＰＭＩ８２２６細胞から調製された全細胞溶解物のウェスタンブロット分析を示す。 ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８は、ＭＥＲＴＫ発現がん細胞を死滅させる。ＳＫＭｅｌ５（図１７Ａ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｂ）細胞を、ＩｇＧ対照、ｍｃ－ｍｖ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＭＭＡＥ、図１３Ａを参照されたい、ＡｂはＩｇＧである）またはｚ１０－ＭＭＡＥとともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。－ＳＫＭｅｌ５（図１７Ｃ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｄ）細胞を、示された濃度のＩｇＧ対照、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＳＮ－３８、図１３Ｂを参照されたい、ＡｂはＩｇＧであり、ＡＡはリシンである）またはｚ１０－ＳＮ－３８とともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。図１７Ｅは、ＳＫＭｅｌ５またはＲＰＭＩ８２２６細胞から調製された全細胞溶解物のウェスタンブロット分析を示す。 ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８は、ＭＥＲＴＫ発現がん細胞を死滅させる。ＳＫＭｅｌ５（図１７Ａ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｂ）細胞を、ＩｇＧ対照、ｍｃ－ｍｖ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＭＭＡＥ、図１３Ａを参照されたい、ＡｂはＩｇＧである）またはｚ１０－ＭＭＡＥとともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。－ＳＫＭｅｌ５（図１７Ｃ）またはＲＰＭＩ８２２６（図１７Ｄ）細胞を、示された濃度のＩｇＧ対照、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされたＩｇＧ対照（ＩｇＧ－ＳＮ－３８、図１３Ｂを参照されたい、ＡｂはＩｇＧであり、ＡＡはリシンである）またはｚ１０－ＳＮ－３８とともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。図１７Ｅは、ＳＫＭｅｌ５またはＲＰＭＩ８２２６細胞から調製された全細胞溶解物のウェスタンブロット分析を示す。
ｚ１０－ＭＭＡＥは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２ ＴＮＢＣ細胞の肺コロニー形成を阻害する。図１８Ａは、ＩＶＩＳイメージングを使用したＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２トリプルネガティブ乳がん細胞の肺コロニー形成を示す。図１８Ｂは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２トリプルネガティブ乳がん細胞の肺コロニー形成を定量化する。５０，０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２ ＴＮＢＣ細胞を、ＮＳＧマウスの尾静脈に注射した。処置を、腫瘍細胞接種の日に開始し、肺転移性コロニー形成を、生物発光イメージングによってモニターした。図１８Ｂ中の矢印は投薬の日を示す。＊＊は、０．０１未満のｐ値を示す。
ｚ１０／ｚ１０－ＡＤＣは、ＭＥＲＴＫ発現Ｍ１マクロファージ（図１９Ａ）またはＭ２マクロファージ（図１９Ｂ）の生存率に影響を与えない。Ｍ２マクロファージを、８×１０４個の単球をＰＢＭＣ培地中でＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）とともに８日間培養することによって分化させた。Ｍ１マクロファージを、８×１０４個の単球をＰＢＭＣ培地中でＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）とともに５日間培養することによって分化させ、次いで、ＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＦＮｇ（２０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－６（２０ｎｇ／ｍＬ）およびＬＰＳ（１０ｐｇ／ｍＬ）とともにさらに３日間培養した。Ｍ２およびＭ１マクロファージを、分化培地中、示された抗体またはＡＤＣで４日間処置し、生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ２．０細胞生存率アッセイを使用して評価した。
５．詳細な説明
本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、モノクローナル抗体）およびその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の細胞外ドメインを特異的に認識する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のまたは本明細書に記載の技法によって検出されるように、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫに結合しない。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、下記のセクション６．２において記載するようなＥＬＩＳＡを使用する親和性結合アッセイで評価されるように、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫに結合しない。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫタンパク質に特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むヒトＭＥＲＴＫの細胞外領域に特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、配列番号１３２に特異的に結合する。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、二価である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する２つの抗原結合部位を含む。特定の実施形態では、２つの抗原結合部位は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）上の同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、２つの抗原結合部位は、同一のＣＤＲを含む。
ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のまたは本明細書に記載の技法を使用して決定される約１ｐＭ～１０ｎＭのＫＤで、組換えＭＥＲＴＫ－Ｆｃキメラ（例えば、組換えヒトＭＥＲＴＫ－Ｆｃキメラ）に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、下記のセクション６に記載のような表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される約１ｐＭ～約６ｐＭのＫＤで、組換えＭＥＲＴＫ－Ｆｃキメラ（例えば、組換えヒトＭＥＲＴＫ－Ｆｃキメラ）に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して、約１ｎＭ～２０ｎＭのＥＣ５０で、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。具体的なある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、下記のセクション６に記載のアッセイにおいて、約１ｎＭ～１０ｎＭのＫＤで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗体断片は、例えば本明細書に記載または当業者に公知のフローサイトメトリーによって評価されるように、約１ｎＭ～２０ｎＭのＥＣ５０で、ヒトＭＥＲＴＫ発現細胞（例えば、ヒトＭＥＲＴＫがん細胞またはＭ２マクロファージ）に結合する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、例えば下記のセクション６．２に記載のフローサイトメトリーによって評価されるように、１ｎｍ～１０ｎＭのＥＣ５０で、ヒトＭＥＲＴＫ発現細胞（例えば、ヒトＭＥＲＴＫがん細胞またはＭ２マクロファージ）に結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、がん細胞におけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、黒色腫細胞系のＳＫＭＥＬ５におけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ヒトＭ２マクロファージにおけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ＭＥＲＴＫの内部移行によってヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、リソソームへの内部移行によってヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを減少させる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ヒトＭＥＲＴＫ発現細胞（例えば、がん細胞）におけるＧａｓ６が誘導するＡＫＴのリン酸化を低減する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、例えば、黒色腫ＳＫＭＥＬ５細胞などのヒトＭＥＲＴＫ発現がん細胞におけるＧａｓ－６が誘導するＡＫＴのリン酸化を防止する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ヒトＭＥＲＴＫ発現細胞におけるＧａｓ－６が誘導するヒトＭＥＲＴＫのリン酸化を低減する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のアッセイによって評価されるように、ヒトＭＥＲＴＫ発現がん細胞（例えば、黒色腫細胞、例えば、ＳＫＭＥＬ５など）におけるＧａｓ６が誘導するＭＥＲＴＫの活性化を遮断する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）または抗原結合性断片は、本明細書（例えば、下記セクション６．２）に記載のアッセイまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、がん細胞のコロニー形成能を低減する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、がん細胞（例えば、ＳＫＭＥＬ５などの黒色腫細胞）のコロニー形成を阻害する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して評価されるように、例えば、図１０に提供される、Ｍ２マクロファージ、ＣＤ１４＋単球、またはその両方におけるサイトカイン応答を誘導する。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片は、単離されている。
本明細書に記載の抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体を含み得る。具体的な実施形態では、抗体は、免疫グロブリン、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖のペア、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗Ｉｄ抗体を含む）であり得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、多重特異性または二重特異性であってもよい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、二重特異性モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、一価である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、二価である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、細胞上のヒトＭＥＲＴＫに結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単一特異性である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は組換えで産生される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、合成抗体である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒト化抗体である。他の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体であってもよい。
本明細書に記載の抗体は、免疫グロブリン分子の、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラスもしくはサブクラスである。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、ヒト化抗体）は、モノクローナル抗体である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、ＩｇＧ抗体である。
本明細書で使用される場合、「抗原結合性断片」、「抗原結合領域」という用語および類似の用語は、抗原に対するその特異性を抗体分子に付与するアミノ酸残基を含む抗体分子の一部を指す（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、マウス、ラットまたはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来し得る。例として、抗原結合性断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、および上に記載の抗体のいずれかの抗原結合性断片が挙げられる。具体的な実施形態では、ヒト化抗体の抗原結合性断片は、本明細書に記載のｚ１０、ｚ１１またはｚ１３抗体の可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方を含む。
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用され、当技術分野において一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般的に軽鎖または重鎖の一部を指し、これは、一般に、抗体間で配列が大幅に異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性において使用される。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中するが、可変ドメイン中のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定の機構または理論に拘束されることを望まないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲが抗体と抗原との相互作用および特異性の主な原因であると考えられる。
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴおよびＥｘｅｍｐｌａｒｙの定義を含む、当技術分野におけるさまざまな方法で定義される。Ｋａｂａｔの定義は、配列の可変性に基づいており、ＣＤＲ領域を予測するために最も一般的に使用される定義である（Kabat, Elvin A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. Bethesda: National Institutes of Health, 1983）。Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造ループ領域の位置に基づく（Chothia et al., (1987) J Mol Biol 196: 901-917）。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義の間の妥協案であるＡｂＭの定義は、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐ（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）によって作成された抗体構造モデリングのためのプログラムの統合パッケージソフトである（Martin ACR et al., (1989) PNAS 86: 9268-9272）。ｃｏｎｔａｃｔの定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく（ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）（MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 5: 732-745を参照されたい）。ＩＭＧＴの定義は、ＩＭＧＴからである（「ＩＭＧＴ（登録商標）、ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）ウェブサイトｉｍｇｔ．ｏｒｇ、創設者およびディレクター：Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ、モンペリエ、フランス）。Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの定義は、ＡｂＭおよびＫａｂａｔの組合せである（Presta et al., (1997) Cancer Res 57: 4593-4599）。
具体的な実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方を含み、可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方は、ｚ１０、ｚ１１またはｚ１２抗体の可変重鎖領域、可変重鎖領域またはその両方であり、これは、それぞれ、表１１、１２および１３に提供される。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体または抗原結合性断片は、可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方を含み、可変重鎖は、表１４の可変重鎖領域のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、下記の表１１、１２または１３の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、ヒト化抗体は、モノクローナルである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、および抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖のペア、単一ドメイン抗体、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖまたは抗イディオタイプ抗体である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン分子の、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡまたはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。具体的な実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体は、ＩｇＧ、またはそのクラスもしくはサブクラスである。
本出願は、本明細書に開示される配列（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク領域、可変領域）を含む抗体およびその抗原結合性断片だけでなく、本明細書に開示される配列からなるか、またはそれらから本質的になる抗体およびその抗原結合性断片も企図する。例えば、抗体は、本明細書に記載のｚ１０、ｚ１１またはｚ１３抗体の軽鎖および重鎖配列からなってもよい。
具体的な実施形態では、本明細書において、可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方を含むキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、可変軽鎖が、下記の表１５の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を含み、可変重鎖が、下記の表１５の可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、キメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。具体的な実施形態では、キメラ抗体は、モノクローナルである。一部の実施形態では、キメラ抗体は、免疫グロブリン、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖のペア、単一ドメイン抗体、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖまたは抗イディオタイプ抗体である。キメラ抗体は、免疫グロブリン分子の、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡまたはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ）のものであり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のキメラ抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラスもしくはサブクラスである。
別の態様では、本明細書において、多重特異性抗体およびヘテロコンジュゲート抗体を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合し、本明細書に記載の抗体（例えば、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ抗体）の可変重鎖領域、可変軽鎖領域またはその両方を含み、他方の結合領域が、目的の抗原に結合する、二重特異性抗体を提供する。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原結合領域を含み、結合領域の一方は、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域は、目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域は、本明細書に記載のｚ１０、ｚ１２またはｚ１３抗体の可変重鎖領域および可変軽鎖領域を含む。具体的な実施形態では、目的の抗原は、免疫細胞受容体または腫瘍関連抗原である。二重特異性抗体に関して、下記のセクション５．１．３を参照されたい。
本明細書において、ヘテロコンジュゲート抗体も提供する。具体的な実施形態では、ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの異なる抗原に対する特異性を有する２つのモノクローナル抗体を含み、モノクローナル抗体の一方が、本明細書に記載の可変重鎖領域および可変軽鎖領域を含む（例えば、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ抗体）。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体およびその抗原結合性断片をコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）などの単離された核酸（ポリヌクレオチド）も提供する。ある特定の実施形態では、本明細書において、表２１、２２、２３または２４に示される、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ抗体のＶＨ、ＶＬまたはその両方の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、本明細書において、表２５、２６、２７または２８に示される、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ抗体の重鎖、軽鎖またはその両方を含むポリヌクレオチドを提供する。
さらに、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）および細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。そのような抗体を作製する方法も提供する。
別の態様では、本明細書において、（ａ）本明細書に記載のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片である抗体部分、（ｂ）１つまたは複数の薬物部分であって、各薬物部分が、細胞傷害剤である、薬物部分、および（ｃ）必要に応じて、リンカーを含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、細胞傷害剤が、抗体部分に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗体部分にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。本開示において使用される「コンジュゲートされる」という用語は、共有結合を意味するものとし、これは、直接、または介在する共有結合構造を介してであり得る。
細胞傷害剤がペプチドもしくはタンパク質であるか、または細胞傷害剤およびリンカー（存在する場合）がペプチドもしくはタンパク質である場合では、抗体－薬物コンジュゲートをコードする核酸も提供する。他の態様では、本明細書において、（ｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および（ｉｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくは抗原結合性断片に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくは抗原結合性断片にコンジュゲートされている細胞傷害剤を含む抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤またはその両方、および必要に応じて１つまたは複数の他の治療剤を含む。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、１つまたは複数の薬学的に許容される担体、賦形剤またはその両方、および必要に応じて１つまたは複数の他の治療剤を含む。
別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、有効量の、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、またはその組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のヒト化抗体または抗原結合性断片である。他の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載の二重特異性抗体またはヘテロコンジュゲート抗体である。一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、キメラ抗体またはその抗原結合性断片である。
別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、有効量の、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを投与するステップを含む、方法を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、（ｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および（ｉｉ）抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片にコンジュゲートされている細胞傷害剤を含む、有効量の抗体－薬物コンジュゲートを投与するステップを含む、方法を提供する。
５．１．抗体
５．１．１．配列およびバリアント
下記の表１および７または８に提供されるのは、異なるシステムを使用して定義される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の、それぞれ、ＶＨ ＣＤＲおよびＶＬ ＣＤＲである。下記の表２、３、４、５および６は、表１のＣＤＲと組み合わされてもよい、異なるシステムを使用して定義されるＶＨフレームワーク領域を提供する。具体的な実施形態では、表１のＣＤＲは、同じ番号付けシステムを使用してＶＨフレームワーク領域１、２および４と一緒に、１つの番号付けシステムを使用して、コンセンサス配列のＶＨフレームワーク領域３と組み合わされ、これを表２、３、４または６に提供する。下記の表９および１０は、表７または８のＣＤＲと組み合わされてもよい、異なるシステムを使用して定義されるＶＬフレームワーク領域を提供する。表１１、１２、１３および１５は、特定の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列を提供する。表１４は、表１１、１２、１３または１５に提供されるＶＬと組み合わされてもよいＶＨのアミノ酸配列を提供する。表１６、１７、１８および２０は、特定の抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を提供する。表１９は、表１６、１７または１８の軽鎖アミノ酸配列と組み合わされてもよい重鎖アミノ酸配列を提供する。表２１、２２、２３および２４は、特定の抗体の可変領域をコードする核酸配列を提供する。表２５、２６、２７および２８は、特定の抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列を提供する。表２９および３０は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片が結合し得る例示的なヒトＭＥＲＴＫアミノ酸配列を提供する。
具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表１の抗体のＶＨ ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表１の抗体のＶＨ ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表１の抗体のＶＨ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、１つの番号付けシステムによって決定される、表１の抗体のＶＨ ＣＤＲのうちの１つ、２つまたは３つすべてを含む。
具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表７の抗体のＶＬ ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表７の抗体のＶＬ ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴまたはＥｘｅｍｐｌａｒｙによって定義される、表７の抗体のＶＬ ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、１つの番号付けシステムによって決定される、表７の抗体のＶＬ ＣＤＲのうちの１つ、２つまたは３つすべてを含む。
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具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫまたはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫまたはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変重鎖領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、１つの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ４が、同じ番号付けシステムを使用して表２、３または４に示されるＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＦＲ３が、同じ番号付けシステムを使用して表５に示されるＦＲ３のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）を含み、ＶＨが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、１つの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ４が、同じ番号付けシステムを使用して表２、３または４に示されるＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＦＲ３が、同じ番号付けシステムを使用して表５に示されるＦＲ３のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＬが、フレームワーク領域（ＦＲ）１、可変軽鎖領域（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＦＲ４を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ３が、ＩＧＭＴの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表９に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、Ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、ｅｘｅｍｐｌａｒｙの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、Ｋａｂａｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、ＡｂＭの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、Ｃｏｎｔａｃｔの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表２、３、４または５に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、ＩＭＧＴの番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨが、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＦＲ３、ＶＨ ＣＤＲ３およびＶＨ ＦＲ４を含み、ＶＬが、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＣＤＲ２、ＶＬ ＦＲ３、ＶＬ ＣＤＲ３およびＶＬ ＦＲ４を含み、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３が、１つの番号付けシステムを使用して表１に示されるＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３およびＶＨ ＦＲ４が、同じ番号付けシステムを使用して表２、３または４に示されるＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２およびＶＨ ＦＲ４のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＦＲ３が、表５に示されるＶＨ ＦＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３が、同じ番号付けシステムを使用して表７に示されるＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４が、同じ番号付けシステムを使用して表９に示されるＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３およびＶＬ ＦＲ４のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号７１のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号９のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体またはその抗原結合性断片が、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨ ＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ２が、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＶＨ ＣＤＲ３が、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ１が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ２が、配列番号６９のアミノ酸配列を含み、ＶＬ ＣＤＲ３が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載のヒト化抗ＭＥＲＴＫまたはその抗原結合性断片は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域（ＶＬ）を含む。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。
別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６または１１１のアミノ酸配列を含む。
別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、表１１に示されるＶＨのアミノ酸配列を含み、ＶＬは、表１１に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合するヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、表１２に示されるＶＨのアミノ酸配列を含み、ＶＬは、表１２に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、表１３に示されるＶＨのアミノ酸配列を含み、ＶＬは、表１３に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、表１４に示されるＶＨのアミノ酸配列を含み、ＶＬは、表１１、１２または１３に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む。
ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体は、そのＶＨドメイン単独、またはそのＶＬドメイン単独によって記載してもよい。例えば、相補的な軽鎖または重鎖をヒト軽鎖または重鎖のライブラリーからそれぞれ同定することによる、マウス抗αｖβ３抗体のヒト化が、高親和性または元の抗体の親和性よりも高い親和性を有するヒト化抗体バリアントをもたらすことを記載している、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるRader C et al., (1998) PNAS 95: 8910-8915を参照されたい。特定のＶＨドメイン（またはＶＬドメイン）を使用し、相補的な可変ドメインについてライブラリーをスクリーニングすることによって、特定の抗原に結合する抗体を産生する方法を記載している、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるClackson T et al., (1991) Nature 352: 624-628も参照されたい。特定のＶＨドメインを使用し、相補的なＶＬドメインについてライブラリー（例えば、ヒトＶＬライブラリー）をスクリーニングし、選択されたＶＬドメインを次に使用して、追加の相補的な（例えば、ヒトの）ＶＨドメインの選択を導くことができることによって、特定の抗原に結合する抗体を産生する方法を記載している、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるKim SJ & Hong HJ, (2007) J Microbiol 45: 572-577も参照されたい。
本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」および「特異的に認識する」という用語は、当業者によって理解されるように、抗体の文脈における類似の用語であって、抗原結合部位を介して抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する抗体およびその抗原結合性断片を指し、抗体または抗原結合性断片と他の抗原との交差反応性を排除するものではない。当技術分野において公知の任意の方法を使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への免疫特異的な結合が維持されているか否かを確かめることができる。
具体的な態様では、本明細書において、抗体の重鎖および／または軽鎖、例えば、重鎖単独、軽鎖単独、または重鎖および軽鎖の両方を含む、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を提供する。軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖は、カッパ軽鎖である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、軽鎖を含み、軽鎖は、可変軽鎖領域（ＶＬ）およびカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、互換可能であり、当技術分野におけるその共通の意味を有する。定常領域は、抗体の部分であり、例えば、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などのさまざまなエフェクター機能を示し得る、軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比べて、より保存されたアミノ酸配列を有する。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、軽鎖を含み、軽鎖は、可変軽鎖領域（ＶＬ）およびヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域を含み、ＶＬは、配列番号１０６または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野において記載されており、例えば、Kabat EA et al., (1991)を参照されたい。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１１３または配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。
重鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の重鎖は、ヒトのアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）重鎖であり得る。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖を含み、重鎖は、本明細書に記載または当技術分野において公知の定常領域またはその一部（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３、またはそれらの組合せ）、および本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体の可変重鎖領域（ＶＨ）（例えば、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８、１０９または配列番号１１０）を含む。
特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖を含み、重鎖は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体の可変重鎖領域（ＶＨ）（例えば、配列番号１０５、１０７、１０８、１０９または１１０）、およびヒトガンマ重鎖定常領域可変領域の定常領域またはその部分（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２もしくはＣＨ３、またはそれらの組合せ）を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６または配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当技術分野において記載されており、例えば、上記のKabat EA et al., (1991)を参照されたい。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、（ｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、（ｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、（ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、（ｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸を含む軽鎖を含む。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、定常領域は、ヒトのＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＨおよびＶＬを含み、定常領域は、ヒトのＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡもしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列（例えば、表１１、１２、１３または１５に示されるもの）を含む。
ある特定の実施形態では、１つ、２つまたはそれよりも多くの突然変異（例えば、アミノ酸置換）を、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片のＦｃ領域に導入して、抗体の１つまたは複数の機能特性を変更する。
一部の実施形態では、１つ、２つまたはそれよりも多くの突然変異（例えば、アミノ酸置換）を、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片のＦｃ領域（例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵインデックス）に従った番号付けによるＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１～３４０）および／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１～４４７）および／またはヒンジ領域）に導入して、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化Ｆｃ受容体）に対する抗体またはその抗原結合性断片の親和性を増加または減少させる。Ｆｃ受容体に対する抗体の親和性を減少または増加させる抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片のＦｃ領域における突然変異、およびそのような突然変異をＦｃ受容体またはその断片に導入するための技法は、当業者に公知である。Ｆｃ受容体に対する抗体またはその抗原結合性断片の親和性を変化させ得る抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片のＦｃ受容体における突然変異の例は、例えば、Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186、米国特許第６，７３７，０５６号、ならびに国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号；第ＷＯ９８／２３２８９号；および第ＷＯ９７／３４６３１号に記載されており、これらは参照によって本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、グリコシル化定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、非グリコシル化定常領域を含む。低減したフコース含量を有する抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａなどのＦｃ受容体に対する増加した親和性を有することが報告されている。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、低減されたフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない。そのような抗体またはその抗原結合性断片は、当業者に公知の技法を使用して産生することができる。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、フコシル化の能力が不十分であるか、または欠如している細胞で発現させることができる。具体的な例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞系を使用して、低減したフコース含量を有する抗体を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合性断片を産生するために使用することができるそのようなシステムの例である。あるいは、低減したフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない抗体または抗原結合性断片は、例えば、（ｉ）フコシル化を防止または低減する条件下で細胞を培養する；（ｉｉ）フコースの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素を用いる）；（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後、所望の炭水化物の翻訳後付加；または（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合性断片について選択するための糖タンパク質の精製によって産生することができる。フコース含量を有さないか、または低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合性断片を産生するための方法については、例えば、Longmore GD & Schachter H (1982) Carbohydr Res 100: 365-92およびImai-Nishiya H et al., (2007) BMC Biotechnol. 7: 84を参照されたい。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖または軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８もしくは配列番号１０９のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；または（ｉｉ）軽鎖は、（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒト軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖および軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；ならびに（ｉｉ）軽鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。
別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖または軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；または（ｉｉ）重鎖は、（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。別の特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖および軽鎖を含み、（ｉ）重鎖は、（ａ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトＩｇＧの定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインを含み；ならびに（ｉｉ）軽鎖は、（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変領域、および（ｂ）ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインを含む。
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）の間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して、達成することもできる。２つの配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの具体的な非限定的な例は、Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877で修正された、Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２に対して設定されたＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムのパラメーターを用いて行って、本明細書に記載の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、例えば、スコア５０、ワード長＝３に設定されたＸＢＬＡＳＴプログラムのパラメーターを用いて行って、本明細書に記載のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップ付きアライメントを得るために、ギャップ付きＢＬＡＳＴを、Altschul SF et al., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389 3402に記載されているようにして利用することができる。あるいは、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の離れた関係を検出する反復探索を行うことができる（上記）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブの全米バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）。配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の具体的な非限定的な例は、Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11 17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０の重み残差表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティがを使用することができる。
２つの配列の間の同一性パーセントは、ギャップの許可のありまたはなしで、上に記載の技法と同様の技法を使用して決定することができる。同一性パーセントの計算において、典型的には、完全一致のみがカウントされる。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８または配列番号１０９のＶＨのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０のＶＨのアミノ酸配列と少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨを含む。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０６のＶＬのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１のＶＨと少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８または配列番号１０９のＶＨドメインのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨドメイン；および（ｉｉ）配列番号１０６のＶＬドメインのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１１０のＶＨドメインと少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＨドメイン、および（ｉｉ）配列番号１１１のＶＬドメインと少なくとも９９％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体として、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の同じまたは重複するエピトープに結合する抗体を提供する。本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、当技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局所的な領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形または隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、ポリペプチド（単数または複数）の２つもしくはそれよりも多くの非隣接領域と一体となり得る（立体配座、非線形、不連続、または非隣接のエピトープ）。ある特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、ＭＡＬＤＩ質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチドスキャニングアッセイ、および／または突然変異誘発マッピング（例えば、部位特異的突然変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当技術分野においていずれかの公知の方法を使用して達成され得る（例えば、Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350；McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23；Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究してもよく、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ， Ｉｎｃ．により配布；例えば、Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.；米国特許出願第２００４/００１４１９４号を参照されたい)、およびＢＵＳＴＥＲ（Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60；Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW；Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）などのコンピューターソフトウェアを使用して精緻化してもよい。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に公知の任意の方法を使用して達成してもよい。例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発技法を含む突然変異誘発技法の説明について、Champe M et al., (1995) and Cunningham BC & Wells JA (1989)を参照されたい。加えて、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の同じまたは重複するエピトープを認識およびそれに結合する抗体は、イムノアッセイなどの日常的な技法を使用して、例えば、別の抗体の標的抗原への結合を遮断するある抗体の能力を示すこと、すなわち、競合的結合アッセイによって、同定することができる。競合結合アッセイを使用して、２つの抗体がエピトープに対して同様の結合特異性を有するか否かを決定することもできる。競合的結合は、試験下の免疫グロブリンが、ＭＥＲＴＫなどの共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。多くの種類の競合的結合アッセイ例えば、固相の直接的または間接的なラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接的または間接的な酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9: 242-253を参照されたい）；固相の直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137: 3614-9を参照されたい）；固相の直接標識化アッセイ、固相の直接標識化サンドイッチアッセイ（Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Pressを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用する固相の直接標識ＲＩＡ（Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25(1): 7-15を参照されたい）；固相の直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Cheung RC et al., (1990) Virology 176: 546-52）；および直接標識化ＲＩＡ（Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82）が公知である。典型的には、そのようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ））またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識化試験免疫グロブリンおよび標識化参照免疫グロブリンの使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下、固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも５０～５５％、５５～６０％、６０～６５％、６５～７０％、７０～７５％またはそれよりも多く阻害する。競合結合アッセイは、標識化抗原または標識化抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成され得る。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原は、９６ウェルプレートに固定されている。次いで、標識化抗体の抗原への結合を遮断する非標識化抗体の能力を、放射性または酵素標識を使用して、測定する。さらなる詳細について、例えば、Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315；Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68: 269-274；Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50: 4872-4879；Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21: 523-538；Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407およびAntibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors 上記, pp. 386-389を参照されたい。
ある特定の態様では、２つの抗体が、標識化抗原または標識化抗体のいずれかを使用するいくつかの異なる形式で構成され得る競合ＥＬＩＳＡアッセイなどの競合結合アッセイにおいて、同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、競合結合アッセイを使用して、抗体が、例えば、用量依存的な様式で、別の抗体、例えば、参照抗体と本質的に同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体によって、競合的に遮断されるか否かを決定することができる。特定の実施形態では、抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体ｚ１０、ｚ１１またはｚ１３）を用いる競合結合アッセイにおいて試験することができる。
別の態様では、本明細書において、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合的アッセイまたは表面プラズモン共鳴）を使用して決定される、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）と本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ）との結合について（例えば、用量依存的な様式で）競合する抗体を提供する。別の態様では、本明細書において、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合的アッセイ、または懸濁液アレイ、または表面プラズモン共鳴）を使用して決定される、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ）がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合するのを（例えば、用量依存的な様式で）競合的に阻害する抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、本明細書において、本明細書に記載の抗体がＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について自己競合するのと同程度に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する抗ＭＥＲＴＫ抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体と競合する第１の抗体であって、競合が、８０％を超える（例えば、８５％、９０％、９５％もしくは９８％、または８０％～８５％、８０％～９０％、８５％～９０％もしくは８５％～９５％の間）、第１の抗体のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合の低減として示される、第１の抗体を提供する。
具体的な態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への特異的な結合について、配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９または配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および配列番号１０６または配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体と（例えば、用量依存的な様式で）競合する抗ＭＥＲＴＫ抗体を提供する。
具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の同じまたは重複するエピトープに特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０７のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号１０６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン、および配列番号１１１のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む抗体の同じまたは重複するエピトープに免疫特異的に結合する。当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、Ｘ線結晶学、ＥＬＩＳＡアッセイなど）を使用して、２つの抗体が同じエピトープに結合するかを決定することができる。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について、本明細書に記載の抗体と競合する抗体またはその抗原結合性断片は、マウス抗体ではない。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の同じまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合性断片は、マウス抗体ではない。
親和性は、限定されるものではないが、平衡解離定数（ＫＤ）および平衡会合定数（ＫＡ）を含む当技術分野において公知のいくつかの方法で、測定および／または表すことができる。ＫＤは、バイオレイヤー干渉分光法または表面プラズモン共鳴などの当業者に公知の技法によって決定することができる。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片は、約８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭまたは０．１ｎＭのＫＤで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイなどのアッセイにおいて、０．１ｎＭ～１０ｎＭ、０．５ｎＭ～１０ｎＭ、１ｎＭ～１０ｎＭ、２ｎＭ～１０ｎＭ、２ｎＭ～５ｎＭ、４ｎＭ～１０ｎＭのＫＤで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合について本明細書に記載の抗体と競合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体の同じもしくは重複するエピトープに結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して、約２ｐＭ～８ｐＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて約３ｎＭのＫＤで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて約１ｐＭ～１５ｐＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて約１．４６ｎＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて約５．７４ｐＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて約３．６８ｐＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて約２．９９ｐＭのＫＤアビディティーで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、数値または数値範囲を改変するために使用される場合、値または範囲の５％～１０％上回るおよび５％～１０％下回る偏差が、列挙された値または範囲の意図する意味内に留まることを示す。
具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイによって評価されるように、１ｎＭ～２０ｎＭのＥＣ５０で、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイによって評価されるように、１ｎＭ～１０ｎＭのＥＣ５０で、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。別の具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のもしくは当技術分野において公知のアッセイによって評価されるように、約１ｎＭ、約２ｎＭ、約３ｎＭ、約４ＮＭ、約５ｎＭ、約６ｎＭ、約７ｎＭ、約８ｎＭ、約９ｎＭまたは約１０ｎＭのＥＣ５０で、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。
具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のセクション６に記載されるものである。
５．１．２．機能的特徴
一部の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞（例えば、ＳＫＭＥＬ５黒色腫細胞）におけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く減少させる。一部の態様では、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭ２マクロファージにおけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く減少させる。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知の方法によって評価されるように、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合するが、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫに結合しない。
一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫおよびカニクイザルＭＥＲＴＫに結合する。
一部の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、図１０に示されるように、Ｍ２マクロファージ、ＣＤ１４＋単球またはその両方によるサイトカイン分泌応答を誘導する。ある特定の態様では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、図１０に示されるように、Ｍ２マクロファージ、ＣＤ１４＋単球またはその両方によるある特定のサイトカインの発現を、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く、変更する（例えば、抗体またはその抗原結合性断片はある特定のサイトカインの発現を増加させる）。
一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞において、Ｇａｓ－６によって誘導されるＭＥＲＴＫリン酸化のレベルを（例えば、部分的または完全に）遮断する。具体的な実施形態では、ＭｅｒＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞において、Ｇａｓ－６によって誘導されるヒトＭＥＲＴＫリン酸化のレベルを、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、低減する。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞におけるヒトＭＥＲＴＫの分解を誘導する。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞の表面におけるヒトＭＥＲＴＫのレベルを、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、低減する。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞におけるヒトＭＥＲＴＫの内部移行を誘導する。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）、Ｍ２マクロファージまたはその両方などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞によるヒトＭＥＲＴＫの内部移行を、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、増加させる。
一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）によるコロニー形成を（例えば、部分的または完全に）阻害する。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）によるコロニー形成のレベルを、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、低減する。一部の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、がん細胞（例えば、ＳＫＭＥＬ５黒色腫細胞）のコロニー形成能を、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く低減する。
一部の態様では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて、Ｇａｓ６が誘導するＡＫＴのリン酸化を防止する。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫへの結合について、Ｇａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）と競合する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｇａｓ－６がヒトＭＥＲＴＫも結合するのを阻害する（例えば、完全に阻害する、または部分的にのみ阻害する）。一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６（例えば、ヒトまたはマウスＧａｓ－６）の結合を、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く阻害する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の存在下でのヒトＭＥＲＴＫへのＧａｓ－６（例えば、ヒトＧａｓ－６）の結合の阻害を評価するために使用されるアッセイは、国際公開第ＷＯ２０１６／１０６２２１号（例えば、国際公開第ＷＯ２０１６／１０６２２１号の実施例１）に記載されるような、当業者に公知の抗体捕捉ＥＬＩＳＡである。
一部の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、ヒトＭＥＲＴＫ発現がん細胞（例えば、黒色腫細胞）においてＧａｓ－６によって誘導されるＡＫＴのリン酸化のレベルを、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、低減する。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、腫瘍内の血管新生を阻害する。一部の実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％である。具体的な実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％または７０％である。血管新生の阻害は、本明細書に記載のおよび／または当業者に公知の方法によって評価することができる。阻害は、任意の抗体なし、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫに免疫特異的に結合しない抗体）ありでの血管新生のレベルと比べることができる。
ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、腫瘍の進行を阻害する。腫瘍の進行の阻害は、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％である。腫瘍の進行は、当業者に公知の方法によって評価することができる。腫瘍の進行は、任意の抗体なし、または無関係の抗体（例えば、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合しない抗体）ありでがんの状態と比べることができる。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のセクション６に記載の抗体の１つ、２つ、３つまたはそれよりも多くの特徴を有する。
５．１．３．二重特異性抗体
具体的な態様では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片である、二重特異性抗体を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の可変重鎖領域を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１１に示される抗体ｚ１０の可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１２に示される抗体ｚ１１の可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１３に示される抗体ｚ１３の可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１４に示されるアミノ酸配列を含む可変重鎖領域を含む、二重特異性抗体を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の可変軽鎖領域を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１１に示される抗体ｚ１０の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１２に示される抗体ｚ１１の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１３に示される抗体ｚ１３の可変軽鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、可変軽鎖領域を含み、可変軽鎖領域が、表１１、１２または１３に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。
別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片の可変軽鎖領域および可変重鎖領域を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１１に示される抗体ｚ１０の可変軽鎖領域および可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１２に示される抗体ｚ１１の可変軽鎖領域および可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、表１３に示される抗体ｚ１３の可変軽鎖領域および可変重鎖領域のアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。別の具体的な実施形態では、本明細書において、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、結合領域の一方が、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、他方の結合領域が、別の目的の抗原に結合し、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する結合領域が、可変軽鎖領域および可変重鎖領域を含み、可変重鎖領域が、表１４に示されるアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域が、表１１、１２または１３に示されるＶＬのアミノ酸配列を含む、二重特異性抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域が結合する目的の抗原は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞または樹状細胞）上に存在する抗原である。一部の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域が結合する目的の抗原は、免疫チェックポイント受容体（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＧＩＴＲまたはＯＸ４０）である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体またはアゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む。具体的な実施形態では、二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４またはＬＡＧ３に結合する遮断抗体またはその抗原結合性断片を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域が結合する目的の抗原は、Ｔ細胞受容体である。具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域が結合する目的の抗原は、ＣＤ３、ＰＤ－Ｌ１、ＬＲＰ１、ＬＲＰ８、ＴＧＦ－β、ＮＫＧＤ２またはＴＩＧＩＴである。一部の実施形態では、目的の抗原は、腫瘍関連抗原である。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ニボルマブまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ランブロリズマブまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＭＥＤＩ－４７３６またはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、イピリムマブまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ＭＰＤＬ－３２８０Ａまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ピディリズマブまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、アベルマブまたはその抗原結合性断片である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の二重特異性抗体の他方の結合領域は、ペムブロリズマブまたはその抗原結合性断片である。
５．２．抗体－薬物コンジュゲート
本明細書において、（ａ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片である抗体部分、（ｂ）１つまたは複数の薬物部分であって、各薬物部分が、細胞傷害剤である、薬物部分、および（ｃ）必要に応じて、リンカーを含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、細胞傷害剤が、抗体部分に直接コンジュゲートされているか、またはリンカーを介して抗体部分にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲートを提供する。本開示において使用される「コンジュゲートされる」という用語は、共有結合を意味するものとし、これは、直接、または介在する共有結合構造を介してであり得る。本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートの抗体部分は、セクション５．１またはセクション６に記載の抗体であってもよい。抗体－薬物コンジュゲートは、セクション６に記載の抗体－薬物コンジュゲートであってもよい。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：１～１：２０の間である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：１～１：１５の間である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：１～１：１２の間である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：１～１：８の間である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。好ましい実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：３～１：５の間である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：３である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：４である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：５である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、１：９である抗体部分の薬物部分に対するモル比を有する。
薬物部分は、抗体部分の１つまたは複数の鎖にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の１つの鎖にコンジュゲートされている（例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合、または抗体部分が免疫グロブリン（四量体である）などの多鎖抗体もしくはその抗原結合性断片である場合）。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の２つまたはそれよりも多くの鎖にコンジュゲートされている（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合性断片である場合）。具体的な実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンの２つの同一の鎖、例えば、重鎖または軽鎖にコンジュゲートされている。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分のすべての鎖にコンジュゲートされている（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合性断片である場合）。一部の実施形態では、薬物部分は、下記のセクション６．４に記載の方法によって抗体にコンジュゲートされている。
具体的な実施形態では、薬物部分は、抗体の定常領域中の１つまたは複数の部位にコンジュゲートされている。具体的な実施形態では、薬物部分は、抗体の可変領域中の１つまたは複数の部位にコンジュゲートされている。具体的な実施形態では、薬物部分は、抗体中の１つまたは複数のリシン残基にコンジュゲートされている。具体的な実施形態では、薬物部分は、例えば、ＭＭＡＥまたはＳＮ－３８が薬物部分である場合、抗体中の１つまたは複数のシステイン残基にコンジュゲートされている。特定の実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンである抗体のＦｃ領域にコンジュゲートされている。具体的な実施形態では、薬物部分は、（直接、またはペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）抗体部分の１つまたは複数の鎖のＮ末端またはＣ末端に融合されたペプチドまたはタンパク質である。
例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合、薬物部分は、（直接、またはペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）ｓｃＦｖのＮまたはＣ末端に融合され得る。具体的な実施形態では、抗体部分が、多鎖抗体またはその抗原結合性断片である場合、薬物部分は、（直接、またはペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）抗体部分の鎖の１つに融合され得る。免疫グロブリンである抗体の場合では、具体的な実施形態では、両方の重鎖は、（直接、またはペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）薬物部分に融合され得るか、および／または両方の軽鎖は、（直接、またはペプチドもしくはタンパク質であるリンカーを介して）薬物部分に融合され得る。そのような具体的な実施形態では、本明細書において、宿主細胞、好ましくは、哺乳動物細胞における組換え発現のための、薬物部分および抗体部分またはそれらの鎖、ならびに薬物部分および抗体部分の間のリンカー（存在する場合）で構成される融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。本明細書において、薬物部分および抗体部分またはそれらの鎖、ならびに薬物部分および抗体部分の間のリンカー（存在する場合）で構成される融合タンパク質を組換えで発現させるためのそのようなベクターを含むｅｘ ｖｉｖｏ宿主細胞も提供する。そのようなベクターおよびｅｘ ｖｉｖｏ宿主細胞の特徴および生成するための方法は、抗ＭＥＲＴＫ抗体について下に記載するものと同じであり得る。また、本明細書において、薬物部分および抗体部分またはそれらの鎖、ならびに薬物部分および抗体部分の間のリンカー（存在する場合）で構成される融合タンパク質を生成する方法であって、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドがｅｘ ｖｉｖｏ宿主細胞によって発現されて、融合タンパク質を産生するような条件下で、そのようなｅｘ ｖｉｖｏ宿主細胞を培養するステップを含む、方法を提供する。本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、当技術分野において公知のまたは下記のセクション６に記載の方法によって産生され得る。
一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、図１３Ａまたは図１３Ｂ、特に、図１３Ａに示される構造を有する。図１３Ａは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介して抗体（Ａｂ）に連結されたＭＭＡＥの構造を示す。図１３Ｂは、ＣＬ２またはＣＬ２Ａリンカーを介して抗体（Ａｂ）に連結されたＳＮ－３８の構造を示す。図１３Ｂにおいて「ＡＡ」がフェニルアラニン－リシンである場合には、図１３Ｂは、ＣＬ２リンカー（カテプシンＢ切断部位を含む）を介してＳＮ－３８に連結された抗体を示す。図１３Ｂにおいて「ＡＡ」がリシンである場合には、図１３Ｂは、ＣＬ２Ａリンカー（カテプシンＢ切断部位を含まない）を介してＳＮ－３８に連結された抗体を示す。
具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートの抗体部分は、抗体ｚ１０の可変領域を含む。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、ＶＨは、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、抗体部分は、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされている。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、ＶＨは、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、抗体部分は、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされている。
本開示全体にわたって記載の抗体－薬物コンジュゲートの代替の実施形態では、薬物部分は、必ずしも細胞傷害剤ではない。例えば、薬物部分は、使用のために好適な当技術分野において公知の任意の薬物であり得、限定されるわけではないが、下記のセクション５．２．３に記載のものを含んでいてもよく、または例えば疾患の診断もしくはモニタリングの目的のために、イメージング剤であり得る。
本開示全体にわたって記載の抗体－薬物コンジュゲートの好ましい実施形態では、薬物部分は、リンカーを介して抗体（本明細書において「抗体部分」とも称する）にコンジュゲートされている。
５．２．１．抗体－薬物コンジュゲートの機能的特徴
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、約８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．１７ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０８１ｎＭまたは０．０２１ｎＭのＫＤで、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する。一部の態様では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、がん細胞（例えば、ＳＫＭＥＬ５黒色腫細胞）におけるヒトＭＥＲＴＫの発現レベルを、当業者に公知のまたは本明細書に記載のアッセイによって評価されるように、例えば、下記のセクション６に記載のように、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％よりも多く減少させる。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知の方法によって評価されるように、ＭＥＲＴＫに結合する（例えば、ヒトＭＥＲＴＫに結合するが、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫに結合しない）。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、抗体部分を含み、抗体－薬物コンジュゲートは、コンジュゲートされていない抗体部分よりも高い親和性でＭＥＲＴＫに結合する。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートはｉｎ ｖｉｔｒｏでＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）発現細胞（例えば、Ｍ２マクロファージ、がん細胞、またはその両方）の細胞死を引き起こす。一部の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートの存在下で一定期間培養されたＭＥＲＴＫ発現細胞の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞死を測定するための当業者に公知の方法によって評価されるように、期間の最後に死滅する。他の具体的な実施形態では、細胞死を受けたＭＥＲＴＫ発現細胞（例えば、Ｍ２マクロファージ、がん細胞、またはその両方）のパーセンテージは、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートの存在下で一定期間培養した場合に、抗体－薬物コンジュゲートなしで培養した場合（例えば、任意の抗体－薬物コンジュゲートなしで培養されるか、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合しない抗体）を含む抗体－薬物コンジュゲートとともに培養されるか、または本明細書に記載のコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗原結合性断片とともに培養される）と比べて、少なくとも５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍高い。期間は、例えば、約１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、１６時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日または１週間であり得る。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞死を測定するための当業者に公知の方法、または本明細書、例えば下記のセクション６に記載の方法によって評価されるように、ＭＥＲＴＫ発現マクロファージの生存能に影響を与えない。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞死を測定するための当業者に公知の方法、または本明細書、例えば下記のセクション６に記載の方法によって評価されるように、Ｍ１マクロファージの生存能に影響を与えない。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞死を測定するための当業者に公知の方法、または本明細書、例えば下記のセクション６に記載の方法によって評価されるように、Ｍ２マクロファージの生存能に影響を与えない。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）などのＭＥＲＴＫ発現細胞においてＭＥＲＴＫの分解を誘導する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞の表面上のヒトＭＥＲＴＫのレベルを、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％低減する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイにおいて評価されるように、コンジュゲートされていない抗体部分よりも高いＭＥＲＴＫ発現細胞におけるＭＥＲＴＫの分解を誘導する。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）などのＭＥＲＴＫ発現細胞においてＭＥＲＴＫの内部移行を誘導する。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイにおいて、例えば、がん細胞（例えば、黒色腫細胞）などのヒトＭＥＲＴＫ発現細胞によるヒトＭＥＲＴＫの内部移行を、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％増加させる。ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、抗体部分を含み、抗体－薬物は、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイによって評価されるように、コンジュゲートされていない抗体部分よりも高いＭＥＲＴＫ発現細胞の内部移行を誘導する。
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、腫瘍の進行を阻害する。腫瘍の進行の阻害は、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％である。腫瘍の進行は、当業者に公知の方法によって評価することができる。腫瘍の進行は、任意の抗体での処置なし、無関係の抗体（例えば、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合しない抗体）で処置されたか、ＳＮ－３８で処置されたか、ＭＭＡＥで処置されたか、抗体－薬物コンジュゲートのコンジュゲートされていない抗体部分で処置された、がんの状態と比べることができる。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のセクション６に記載の抗体の１つ、２つ、３つまたはそれよりも多くの特徴を有する。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、腫瘍内の血管新生を阻害する。一部の実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％である。具体的な実施形態では、血管新生の阻害は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％または７０％である。血管新生の阻害は、本明細書に記載のおよび／または当業者に公知の方法によって評価することができる。阻害は、抗体－薬物コンジュゲートなし（例えば、任意の抗体－薬物コンジュゲートなしで培養されるか、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合しない抗体）を含む抗体－薬物コンジュゲートとともに培養されるか、または本明細書に記載のコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗原結合性断片とともに培養される）の血管新生のレベルと比べることができる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、腫瘍（例えば、ヒト乳がん細胞の腫瘍）の進行を阻害する。腫瘍の進行の阻害は、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％である。腫瘍の進行は、当業者に公知の方法によって評価することができる。腫瘍の進行は、抗体－薬物コンジュゲートなし（例えば、任意の抗体－薬物コンジュゲートなしで培養されるか、または無関係の抗体（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合しない抗体）を含む抗体－薬物コンジュゲートとともに培養されるか、または本明細書に記載のコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはコンジュゲートされていない抗ＭＥＲＴＫ抗原結合性断片とともに培養される）のがんの状態と比べることができる。具体的な実施形態では、腫瘍の進行を評価するために使用されるアッセイは、マウス腫瘍移植モデルである。
５．２．２．抗体部分
本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される任意の抗ＭＥＲＴＫ抗体を含んでいてもよい。例えば、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートの抗体部分の例についてのセクション５．１．１を参照されたい。具体的な実施形態では、抗体部分は、免疫グロブリン、例えば、ヒト定常ドメインを含む免疫グロブリンまたはヒト化免疫グロブリンである。別の具体的な実施形態では、抗体部分は、例えば、本明細書のセクション５．１．１に記載の抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むｓｃＦｖである。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に開示されるＶＨ、例えば、セクション５．１．１に記載のＶＨを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に開示されるＶＬ、例えば、セクション５．１．１に記載のＶＬを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、例えば、セクション５．１．１に記載のような、本明細書に開示される抗体のＶＨおよびＶＬを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＨを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体部分に必要に応じてリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＨを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＬを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＨを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＬを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＨおよびＶＬを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、ＶＨおよびＶＬを含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される重鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される重鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される重鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）本明細書に提供される重鎖、および（ｉｉ）本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖および軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）本明細書に提供される重鎖、および（ｉｉ）本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖および軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）本明細書に提供される重鎖、および（ｉｉ）本明細書に提供される軽鎖、例えば、セクション５．１．１に記載の重鎖および軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。一部の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。一部の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。一部の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされた薬物部分を含む。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＭＭＡＥを含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体－薬物コンジュゲートは、（ｉ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖、および（ｉｉ）配列番号１１３のアミノ酸を含む軽鎖を含む抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされたＳＮ－３８を含む。
５．２．３．薬物部分およびリンカー
抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、しばしば、ペイロードまたは弾頭とも呼ばれる。抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤のほとんどは、ＤＮＡまたは微小管を標的にし、細胞傷害性の高い効力を有する（およそ１０－１０～１０－１２ＭのＩＣ５０範囲）（Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337を参照されたい）。しかしながら、強力ではない細胞傷害剤を使用してもよい。細胞傷害剤は、小分子、ヌクレオチド、ペプチドまたは非抗体タンパク質であり得る。具体的な実施形態では、細胞傷害剤は、小分子である。別の具体的な実施形態では、細胞傷害剤は、非抗体タンパク質である。本発明による抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用することができる非限定的な例示的な細胞傷害剤は、Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225；McCombs JR and Owen SC (2015) The AAPS Journal 17: 339-351；Jackson DY (2016) Org Process Res Dev 20: 852-866；およびOlivier KJ and Hurvitz SA ed., (2016) Antibody-Drug Conjugates: Fundamentals, Drug Development, and Clinical, Wileyに記載されている。
ある特定の実施形態では、細胞傷害剤は、表３０または３１に列挙された薬剤の１つである。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、アウリスタチン（モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ａｕｒ０１０１、ＰＦ０６３８０１０１、アウリスタチンＷまたはアウリスタチンＦなど）もしくはその誘導体、メイタンシノイド（ＤＭ１またはＤＭ４など）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）（ＳＧＤ１８８２またはＳＧ３１９９など）、インドリノベンゾジアゼピン（ＤＧＮ４６２またはＤＧＮ５４９など）、カリケアマイシン（オゾガマイシン）（ＣＭ１など）、カンプトテシンアナログ（ＳＮ－３８、ＤＸ－８９５１ｆまたはＤＸ－８９５１ｆ誘導体など）、デュオカルマイシン（ｓｅｃｏ－デュオカルマイシン－ヒドロキシ－ベンズアミド－アザインドール（ｓｅｃｏ－ＤＵＢＡ）、マイナーグルーブ結合アルキル化剤（ＭＧＢＡ）またはＭＥＤ－２４６０など）、チューブリン阻害剤（クリプトフィシンなど）、チューブリシンまたはチューブリシンアナログ（ＡＺ１３５９９１８５など）、アンバースタチン２６９、ドキソルビシン、抗生物質（リファログなど）、アントラサイクリン（ＰＮＵ－１５９６８２など）、微小管阻害剤（リゾキシンなど）、スプライソスタチン、またはタイランスタチンである。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、ＭＭＡＥまたはＭＭＡＦである。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、ＭＭＡＥ（例えば、図１３Ａを参照されたい）である。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、ＤＭ１またはＤＭ４である。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、ＳＮ－３８である。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用される細胞傷害剤は、図１３Ｂに示されるＳＮ－３８である。
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本明細書で使用される場合、「小分子」という用語は、１モルあたり約１０，０００グラム未満の分子量を有する有機または無機化合物（例えば、ヘテロ有機化合物または有機金属化合物であり得る）を指す。具体的な実施形態では、小分子は、１モルあたり約５，０００グラム未満、または１モルあたり約２，０００グラム未満、または１モルあたり約１，０００グラム未満、または１モルあたり約５００グラム未満、または１モルあたり約１００グラム未満の分子量を有する。
一部の実施形態では、細胞傷害剤は、抗体部分に直接コンジュゲートされている。他の実施形態では、細胞傷害剤は、抗体部分にリンカーを介してコンジュゲートされている。本発明により使用される適切なリンカーは、好ましくは、オフターゲットの毒性を制限するために血流中で安定であり、細胞傷害剤の放出を可能にするためにがんの部位で不安定である（Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225を参照されたい）。本発明により使用することができる非限定的な例示的なリンカーは、Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225；McCombs JR and Owen SC (2015) The AAPS Journal 17: 339-351；Jackson DY (2016) Org Process Res Dev 20: 852-866；およびOlivier KJ and Hurvitz SA ed., (2016) Antibody-Drug Conjugates: Fundamentals, Drug Development, and Clinical, Wileyに記載されている。一部の実施形態では、リンカーは、例えば、リソソームプロテアーゼに感受性のモチーフ（例えば、カテプシンＢ）、酸性ｐＨに感受性のモチーフ（例えば、ヒドラゾン）、またはグルタチオンによって還元され得るジスルフィド架橋を含有するモチーフを有する、切断性リンカーである。他の実施形態では、リンカーは、非切断性リンカーである。限定ではないが例として、リンカーは、小分子、ヌクレオチド、ペプチドまたは非抗体タンパク質であり得る。具体的な実施形態では、リンカーは、小分子である。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用されるリンカーは、カテプシンＢ、ヒドラゾン、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、マレイミドカプロン酸（ｍｃ）、バリン－シトルリン（ｖｃ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）－２－スルホブタノエート（スルホＳＰＤＢ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ（pyridydithio））ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、バリン－アラニン（ｖａ）、ポリエチレングリコール８－バリン－シトルリン（ＰＥＧ８－ｖａ）、ｍｂ－ｖｃ、ＣＬ２Ａ、切断性ｖｃベースのリンカー、またはフレキシマーポリマーリンカーである。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、その抗原、細胞傷害剤、またはその両方への抗体部分の結合を妨げない。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ）である。他の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、ＣＬ２である。他の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、ＣＬ２Ａである。一部の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、図１３Ａに示されるリンカーである。他の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、ＡＡがリシンである図１３Ｂに示されるリンカーである。他の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、ＡＡがフェニルアラニン－リシンである図１３Ｂに示されるリンカーである。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ」としても公知）である（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣの構造について、図１３Ａを参照されたい）。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、ＣＬ２である（ＣＬ２の構造について、図１３ＢおよびCardillo et al. 2011, Clin Cancer Res; 17(10); 3157-69を参照されたい）。別の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、リンカーを含み、リンカーは、ＣＬ２Ａである（ＣＬ２Ａの構造について、図１３ＢおよびGoldberg et al. 2018, Oncotarget; 9(48); 28989-29006、およびCardillo et al. 2011, Clin Cancer Res; 17(10); 3157-69を参照されたい）。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、１つまたは複数の切断部位を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、カテプシンＢプロテアーゼ部位を含有する。他の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおける使用のために選択されるリンカーは、カテプシンＢプロテアーゼ部位およびｐＨ依存性切断部位を含有する。
本発明に記載の抗体－薬物コンジュゲートにおいて使用することができる非限定的な例示的なリンカー－薬物部分のペアは、Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225；McCombs JR and Owen SC (2015) The AAPS Journal 17: 339-351；Jackson DY (2016) Org Process Res Dev 20: 852-866；およびOlivier KJ and Hurvitz SA ed., (2016) Antibody-Drug Conjugates: Fundamentals, Drug Development, and Clinical, Wileyに記載されている。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおけるリンカー－薬物部分のペアは、ｖｃ－ＭＭＡＥ、ｍｃ－ＭＭＡＦ、ＳＭＣＣ－ＤＭ１、スルホＳＰＤＢ－ＤＭ４、ＳＰＤＢ－ＤＭ４、ＳＰＰ－ＤＭ１、ｖａ－ＳＧＤ１８８２、ポリエチレングリコール８（ＰＥＧ８）－ｖａ－ＳＧ３１９９、スルホＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２、ヒドラゾン－ＣＭ１、ｖｃ－ｓｅｃｏ－ＤＵＢＡ、ｍｂ－ｖｃ－ＭＧＢＡ、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８、ＤＸ－８９５１誘導体を有するペプチドリンカー、ヒドラゾン－ドキソルビシン、Ａｕｒ０１０１を有する切断性ｖｃベースのリンカー、ｖｃ－ＰＦ０６３８０１０１、アウリスタチンＦを有するフレキシマーポリマーリンカー、切断性リンカー－チューブリン阻害剤、またはｖｃ－リファログである。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおけるリンカー－薬物部分のペアは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（図１３Ａに示す通り）である。他の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおけるリンカー－薬物部分のペアは、ＣＬ２－ＳＮ－３８（図１３Ｂに示す通り、ＡＡがフェニルアラニン－リシンである場合）である。他の具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートにおけるリンカー－薬物部分のペアは、ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（図１３Ｂに示す通り、ＡＡがリシンである場合）である。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートの薬物部分は、その抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ））への抗体部分の結合を妨げない。
５．３．抗体産生
５．３．１．抗体の産生およびスクリーニング
別の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を産生する方法を提供する。
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体の合成のための当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技法によって、産生することができる。本明細書に記載の方法は、他に指示されない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに当業者の範囲内の関連分野における従来の技法を用いる。これらの技法は、例えば、本明細書で引用された参考文献に記載されており、文献中で十分に説明されている。例えば、Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)；Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press；Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press；Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照されたい。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、例えば、ＤＮＡ配列の合成、遺伝子操作を介した作出を含む任意の手段によって、調製、発現、作出または単離された抗体（例えば、組換え抗体）である。ある特定の実施形態では、そのような抗体は、動物または哺乳動物（例えば、ヒト）のｉｎ ｖｉｖｏでの抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然に存在しないＤＮＡ配列によってコードされる配列を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＭＥＲＴＫ（配列番号１３１）またはその細胞外ドメイン（配列番号１３２）を免疫原として使用するステップを含む方法によって作製される。
ある特定の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養するステップを含む、方法を提供する。ある特定の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を使用して、抗体またはその抗原結合性断片を発現させる（例えば、組換えで発現させる）ステップを含む、方法を提供する。特定の実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の実施形態では、外因性ポリヌクレオチドが、細胞に導入されている。特定の実施形態では、方法は、細胞または宿主細胞から得られた抗体またはその抗原結合性断片を精製するステップをさらに含む。
ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当技術分野において公知である（例えば、Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New Yorkを参照されたい）。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ハイブリドーマ技術によって産生される抗体に限定されない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換えおよびファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せの使用を含む、当技術分野において公知の多種多様な技法を使用して、調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載の抗体またはその断片、例えば、そのような抗体の軽鎖および／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換えで産生することができる。クローン細胞系およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の調製のための方法は、当技術分野において周知である（例えば、上記のChapter 11 in Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al.を参照されたい）。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野において公知の技法、および例えば、Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)；Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)；およびKohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495において教示される技法を含むハイブリドーマ技法を使用して、産生することができる。ハイブリドーマ技術を使用して特異的抗体を産生およびスクリーニングするための方法は、当技術分野において、日常的かつ周知である。一部の実施形態では、マウス（または、ラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスターもしくはイヌなどの他の動物）を、抗原（例えば、ヒト）で免疫することができ、免疫応答が検出されると、例えば、抗原に特異的な抗体がマウス血清中で検出されると、マウスの脾臓を回収し、脾臓細胞を単離する。次いで、脾臓細胞を、周知の技法によって、任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手可能な細胞系ＳＰ２／０からの細胞に融合して、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、限界希釈によって選択およびクローニングされる。
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含有する好適な培養培地に播種され、成長する。ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを、標準的な方法（上記のGoding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice）によって、サブクローニングし、成長させ、培養培地から分離し得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当技術分野において公知の方法、例えば、免疫沈降法、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。
具体的な実施形態では、本明細書において、単一細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生されるモノクローナル抗体であって、抗体が、例えば、当技術分野において公知であるか、または本明細書のセクション６に記載のＥＬＩＳＡまたは他の抗原結合もしくは競合的結合アッセイによって決定されるように、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合する、モノクローナル抗体を開示する。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は単一特異性抗体または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）を認識する抗体断片は、当業者に公知の任意の技法によって生成することができる。例えば、本明細書に記載のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を産生する）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生する）などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって産生することができる。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一アームの１つに相当し、重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインと対形成した完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって連結された抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
さらに、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、当技術分野において公知のさまざまなファージディスプレイ法を使用して、生成することもできる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインを、それらをコードするポリヌクレオチド配列を運ぶファージ粒子の表面に表示する。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物のｃＤＮＡライブラリー（例えば、罹患組織のヒトまたはマウスのｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと一緒に組み換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞にエレクトロポレーションされ、Ｅ．ｃｏｌｉは、ヘルパーファージに感染する。これらの方法において使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含むフィラメント状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは、通常、ファージの遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えで融合される。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、例えば、標識化抗原、または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を使用して、抗原により選択または同定することができる。本明細書に記載の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186；Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958；Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18；Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号；国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、第ＷＯ９１／１０７３７号、第ＷＯ９２／０１０４７号、第９２／１８６１９号、第ＷＯ９３／１１２３６号、第ＷＯ９５／１５９８２号、第ＷＯ９５／２０４０１号および第ＷＯ９７／１３８４４；ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号および第５，９６９，１０８号に開示されるものが挙げられる。
上記の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージからの抗体コード領域を単離し、ヒト化抗体、キメラ抗体または任意の他の所望の抗原結合性断片を含む抗体全体を生成するために使用し、例えば、下に記載するように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母および細菌を含む任意の所望の宿主中で発現させることができる。ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号；Mullinax RL et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9；Sawai H et al., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34；およびBetter M et al., (1988) Science 240: 1041-1043に開示されるものなどの当技術分野において公知の方法を使用する、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２断片などの抗体断片を組換えで産生する技術を用いることもできる。
一態様では、抗体全体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するフランキング配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、鋳型、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技法を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインを、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを、ＶＬ定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、当業者に公知の技法を使用して、細胞系に同時トランスフェクトして、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性の細胞系を生成する。
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウスまたはラットのモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当技術分野において公知である。例えば、Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7；Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221；Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202；ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、第４，８１６，３９７号および第６，３３１，４１５号を参照されたい。具体的な実施形態では、キメラ抗体は、可変重鎖領域（ＶＨ）および可変軽鎖領域（ＶＬ）を含み、ＶＨおよびＶＬは、それぞれ、表１３に示されるＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列をそれぞれ含む。
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域、および非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含む。抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４領域も含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、限定されるものではないがＣＤＲグラフティング（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号；ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号および第ＥＰ５１９５９６号；Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498；Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6):
805-814；ならびにRoguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号；Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25；Caldas C et al., (2000) Protein Eng. 13(5): 353-60；Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79；Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84；Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904；Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s；Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22；Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10およびPedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73に開示される技法を含む、当技術分野において公知のさまざまな技法を使用して産生することができる。その全体が参照によって本明細書に組み込まれる、米国出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４（Ａ１）号（２００５年２月２４日）も参照されたい。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、抗体ｚ１０のＶＨおよびＶＬ（表１１を参照されたい）、抗体ｚ１１のＶＨおよびＶＬ（表１２を参照されたい）または抗体ｚ１３のＶＨおよびＶＬ（表１３を参照されたい）を含む。多重特異性（例えば、二重特異性抗体）を作製するための方法が記載されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号；第７，１８３，０７６号；第８，２２７，５７７号；第５，８３７，２４２号；第５，９８９，８３０号；第５，８６９，６２０号；第６，１３２，９９２号および第８，５８６，７１３号を参照されたい。
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠く抗体は、当技術分野において周知の方法によって産生することができる。Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38；Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263；Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302；米国特許第６，００５，０７９号；ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、第ＷＯ９４／２５５９１号および第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたい。
さらに、次に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）抗原に免疫特異的に結合する抗体を利用して、当業者に周知の技法を使用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成することができる。（例えば、Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444；およびNissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片として、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の同じまたは重複するエピトープに結合する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、ｚ１０、ｚ１１もしくはｚ１３、またはｘＡｂ）のいずれか１つをＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）への結合から（例えば、用量依存的な様式で）競合的に遮断する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片である。ヒト抗体は、当技術分野において公知の任意の方法を使用して産生することができる。例えば、機能的な内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用することができる。特に、ヒトの重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子の複合体を、無作為または相同組換えによってマウス胚性幹細胞に導入することができる。あるいは、ヒトの可変領域、定常領域および多様性領域を、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚性幹細胞に導入することができる。マウスの重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と別にまたはそれと同時に、非機能的にすることができる。特に、ＪＨ領域のホモ接合性欠失は、内因性の抗体産生を防止する。改変胚性幹細胞を拡大し、胚盤胞にマイクロインジェクションして、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性の子孫を産生する。トランスジェニックマウスを、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＭＥＲＴＫ）の全部または一部を用いて、通常の方法で免疫する。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して、免疫されたトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスによって保有されるヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞の分化の間に再配列し、その後、クラススイッチングおよび体細胞突然変異を受ける。そのため、そのような技法を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、例えば、Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコールの詳細な議論については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９６／３４０９６号および第ＷＯ９６／３３７３５号；ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号および第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することができるマウスの例としては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍ；米国特許第５，５４５，８０６号および第５，５６９，８２５号）、Ｔｒａｎｓ Ｃｈｒｏｍｏ Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｋｉｒｉｎ）およびＫＭ Ｍｏｕｓｅ（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）が挙げられる。
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを使用して、上に記載のファージディスプレイ法を含む当技術分野において公知のさまざまな方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号および第５，８８５，７９３号；ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、第ＷＯ９８／５０４３３号、第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９８／１６６５４号、第ＷＯ９６／３４０９６号、第ＷＯ９６／３３７３５号および第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
一部の実施形態では、ヒト抗体を、マウス－ヒトハイブリドーマを使用して産生することができる。例えば、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球を、マウス骨髄腫細胞と融合させて、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス－ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。そのような方法は公知であり、当技術分野において記載されている、例えば、Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23；Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31を参照されたい。
具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片をスクリーニングおよび選択する方法は、下記の実施例１に記載の通りである。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片が産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製のための当技術分野において公知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニティー、特に、プロテインＡ後の特異的抗原に対するアフィニティーによる、およびサイズカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、較差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技法によって、精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体は、精製を容易にするために、本明細書に記載の、またはそうでなければ当技術分野において公知の異種ポリペプチド配列に融合させることができる。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、単離または精製されている。一般に、単離された抗体は、単離された抗体と異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体である。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体の調製物は、細胞の材料および／または化学前駆体を実質的に含まない。「細胞の材料を実質的に含まない」という語句は、単離または組換えで産生される細胞の細胞構成成分から分離された抗体の調製物を含む。そのため、細胞の材料を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％もしくは０．１％（乾燥重量）未満の異種のタンパク質（本明細書において「混入タンパク質」とも称する）を有する抗体の調製物および／または抗体のバリアント、例えば、抗体の異なる翻訳後修飾形態もしくは抗体の他の異なるバージョン（例えば、抗体断片）を含む。抗体が組換えで産生される場合、それはまた、一般に、培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％または０．１％未満を示す。抗体が化学合成によって産生される場合、それは、一般に、化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、それは、タンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のそのような調製物は、約３０％、２０％、１０％または５％（乾燥重量で）未満の目的の抗体以外の化学前駆体または化合物を有する。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単離または精製されている。
５．３．２．ポリヌクレオチド
ある特定の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）抗原に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、およびベクター、例えば、宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよび哺乳動物細胞）においてそれらの高効率の発現のためにそのようなポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離または精製されている。
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然起源（例えば、マウスまたはヒト）に存在する他の核酸分子から分離されたものである。また、ｃＤＮＡ分子などの「単離された」核酸分子は、組換え技法によって産生される場合に他の細胞の材料または培養培地を実質的に含まなくてもよく、化学的に合成される場合に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まなくてもよい。例えば、「実質的に含まない」という語句は、約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％または０．１％未満の他の材料、例えば細胞の材料、培養培地、他の核酸分子、化学前駆体および／または他の化学物質を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製物を含む。
特定の態様では、本明細書において、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）ポリヌクレオチドに特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、およびＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）ポリペプチドへの（例えば、用量依存的な様式の）結合についてそのような抗体と競合するか、またはそのような抗体のものと同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体を提供する。
ある特定の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のアミノ酸配列（配列番号１０５、配列番号１０７、配列番号１０８または配列番号１０９）を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書に記載のアミノ酸配列（配列番号１０６または配列番号１１１）を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０のアミノ酸を含む重鎖可変領域および配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０９のアミノ酸を含む重鎖可変領域および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＨをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１１９、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３の核酸配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＬをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１２０または配列番号１２４の核酸配列を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＨおよびＶＬをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１１９の核酸配列を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号１２０の核酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＨおよびＶＬをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１２１の核酸配列を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号１２０の核酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＨおよびＶＬをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１２２の核酸配列を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号１２０の核酸配列を含む。別の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、ＶＨおよびＶＬをコードし、ポリヌクレオチドは、配列番号１２３の核酸を含み、ポリヌクレオチドは、配列番号１２４の核酸配列を含む。
具体的な態様では、本明細書において、軽鎖および重鎖、例えば別々の軽鎖および重鎖を含む抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。軽鎖に関して、具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１０６の可変軽鎖領域、およびヒトカッパまたはラムダ軽鎖のヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１１１の可変軽鎖領域、およびヒトカッパまたはラムダ軽鎖のヒト軽鎖定常領域を含む。
特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、軽鎖を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０６または配列番号１１１の任意のアミノ酸配列を含み得、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、軽鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖の可変領域のアミノ酸配列は、配列番号１０６または配列番号１１１の任意のアミノ酸配列を含み得、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１１３または１１８のアミノ酸配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２６または１３０を含む。
特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列、および重鎖定常領域を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、重鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列、および重鎖定常領域を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、重鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖は、配列番号１０８のアミノ酸配列、および重鎖定常領域を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、重鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖は、配列番号１０９のアミノ酸配列、および重鎖定常領域を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合し、重鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖は、配列番号１１０のアミノ酸配列、および重鎖定常領域を含む。
特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、重鎖を含み、重鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１１９、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２５を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２１、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドは、配列番号１２７を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２２、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２８を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は、配列番号１２３、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチドは、配列番号１２９を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１１９、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２１、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２２、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２４、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２３、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、（１）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域およびヒト重鎖定常領域、ならびに（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、（１）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域およびヒト重鎖定常領域、ならびに（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、（１）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域およびヒト重鎖定常領域、ならびに（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、（１）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域およびヒト重鎖定常領域、ならびに（２）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。
別の具体的な態様では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、抗体は、（１）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域およびヒト重鎖定常領域、ならびに（２）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む可変軽鎖領域およびヒト軽鎖定常領域を含む。
別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方のヌクレオチド配列は抗体の軽鎖をコードし、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２５を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２６を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方のヌクレオチド配列は抗体の軽鎖をコードし、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２７を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２６を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方のヌクレオチド配列は抗体の軽鎖をコードし、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２８を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２６を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方のヌクレオチド配列は抗体の軽鎖をコードし、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２９を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１３０を含む。
別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方は抗体の軽鎖をコードし、重鎖は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方は抗体の軽鎖をコードし、重鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方は抗体の軽鎖をコードし、重鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方は抗体の軽鎖をコードし、重鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含み、一方のヌクレオチド配列は、抗体の重鎖をコードし、他方は抗体の軽鎖をコードし、重鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、ポリヌクレオチド、核酸またはヌクレオチドは、デオキシリボ核酸、リボ核酸、リボヌクレオチド、およびそれらのポリマー形態を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド、核酸またはヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖である。具体的な実施形態では、ポリヌクレオチド、核酸またはヌクレオチドの配列は、ｃＤＮＡ配列である。
一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする本明細書に記載のポリヌクレオチド配列（例えば、核酸配列）は、当業者に公知の方法論を使用してコドン最適化される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片をコードする最適化ポリヌクレオチド配列、またはその抗原結合性断片（例えば、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン）は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン）をコードする非最適化ポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的な）ポリヌクレオチドにハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする最適化ヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー条件下で、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする非最適化ポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする最適化ヌクレオチド配列は、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードする非最適化ヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドにハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報は記載されており、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２～７３）を参照されたい。
当技術分野において公知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドを得、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定することができる。本明細書に記載の抗体およびこれらの抗体の修飾バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当技術分野において周知の方法を使用して決定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが公知のヌクレオチドコドンは、抗体をコードする核酸配列を生成するためのそのような方法で組み立てられる。抗体をコードするそのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てることができ（例えば、Kutmeier G et al., (1994), BioTechniques 17: 242-6に記載の通り）、簡潔には、これは、抗体をコードする配列の部分を含有するオリゴヌクレオチドを重複させ、それらのオリゴヌクレオチドをアニーリングおよびライゲーションし、次いで、ライゲーションされたオリゴヌクレオチドをＰＣＲにより増幅する合成を含む。
あるいは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドは、当技術分野において周知の方法（例えば、ＰＣＲおよび他の分子クローニング法）を使用して、好適な起源（例えば、ハイブリドーマ）からの核酸から生成することができる。例えば、公知の配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅を、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを使用して、行うことができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の軽鎖および／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。そのようなＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の可変軽鎖領域および／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、例えば、ヒト化抗体を生成するために、宿主細胞における発現およびさらなるクローニングのためにベクターにクローニングすることができる。
特定の抗体をコードする核酸配列を含有するクローンが入手可能ではないが、抗体分子の配列が公知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸を、化学的に合成するか、または好適な起源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、あるいは本明細書に記載の抗体を発現するために選択されたハイブリドーマ細胞などの抗体を発現する任意の組織もしくは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー、またはそれらから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から、配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを同定するための特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって、得ることができる。次いで、ＰＣＲによって生成された、増幅された核酸を、当技術分野において周知の任意の方法を使用して複製可能なクローニングベクターにクローニングすることができる。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗ＭＥＲＴＫ抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離および配列決定することができる。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの起源として機能し得る。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置することができ、次いで、これを、そうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞）、２９３Ｆ細胞、ＨＥＫ２９３細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトして、組換え宿主細胞においてＭＥＲＴＫアゴニスト抗体の合成物を得る。
抗体全体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するフランキング配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に公知のクローニング技法を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインを、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインを、軽鎖定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ある特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、プロモーター、分泌シグナル、可変ドメインのためのクローニング部位、定常ドメイン、および選択マーカーを含む。ＶＨおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることもできる。次いで、重鎖変換ベクターおよび軽鎖変換ベクターを、当業者に公知の技法を使用して、細胞系に同時トランスフェクトして、全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性の細胞系を生成する。
ＤＮＡは、例えば、マウス配列の代わりにヒトの重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列で置換することによって、または非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全部または一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合的に接合することによって、修飾することもできる。
また、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドに、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを提供する。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下で、本明細書に提供されるＶＨ（配列番号１１９、１２１、１２２または１２３）および／またはＶＬ（配列番号１２０または１２４）をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズする。
ハイブリダイゼーション条件は、当技術分野において記載されており、当業者に公知である。例えば、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃での６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中のフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、それに続く約５０～６５℃での０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での１回または複数の洗浄を含むことができ；高ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃での６×ＳＳＣ中のフィルター結合核酸へのハイブリダイゼーション、それに続く約６８℃での０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中での１回または複数の洗浄を含むことができる。他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に公知であり、記載されており、例えば、Ausubel FM et al., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc.およびJohn Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3を参照されたい。
５．３．３．細胞およびベクター
ある特定の態様では、本明細書において、宿主細胞、好ましくは、哺乳動物細胞における組換え発現のための本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。発現ベクターは、例えば、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、ニューカッスル病ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ワクシニアなど）であってもよい。本明細書において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を組換え発現するためのそのようなベクターを含む宿主細胞も提供する。
ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、本明細書に記載の全長抗体、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、または単鎖抗体）の組換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を含む。本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖および／もしくは軽鎖、またはそれらの抗原結合性断片（例えば、重鎖および／または軽鎖可変領域）をコードするポリヌクレオチドが得られたら、抗体分子の産生のためのベクターを、当技術分野において周知の技法を使用する組換えＤＮＡ技術によって産生することができる。そのため、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖もしくは重鎖、またはその両方）を含有するポリヌクレオチドを発現させることによってタンパク質を調製するための方法を本明細書に記載する。当業者に周知の方法を使用して、抗体または抗体断片（例えば、軽鎖もしくは重鎖、またはその両方）のコード配列、ならびに適切な転写および翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技法、合成技法、およびｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子組換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、または抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片の重鎖もしくは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供する。そのようなベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号および第ＷＯ８９／０１０３６号；ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）を含むことができ、抗体の可変ドメインを、重鎖全体、軽鎖全体、または重鎖全体および軽鎖全体の両方の発現のためにそのようなベクターにクローニングすることができる。
発現ベクターは、従来の技法によって、細胞（例えば、宿主細胞）に移入することができ、次いで、得られた細胞を、従来の技法によって培養して、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を産生することができる。そのため、本明細書において、宿主細胞におけるそのような配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結した、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはその断片、または本明細書に記載の単鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を提供する。本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養中の細胞、または細胞系由来の細胞であり得る。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞およびそのような細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。そのような細胞の子孫は、例えば、後の世代または核酸分子の宿主細胞ゲノムへの組み込みで起こり得る突然変異または環境の影響に起因して、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でなくてもよい。
さまざまな宿主－発現ベクター系を利用して、本明細書に記載の抗体分子を発現させることができる。そのような宿主－発現系は、それによって目的のコード配列を産生し、その後精製することができる媒体を表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトした場合に、本明細書に記載の抗体分子をインサイチュで発現することができる細胞も表す。これらとしては、限定されるものではないが、抗体のコード配列を含有する、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体のコード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｐｉｃｈｉａ）；抗体のコード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体のコード配列を含有する、組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したか、または組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された、植物細胞系（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉなどの緑藻）；あるいは、哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）、または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、およびＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、２９３Ｆ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０およびＢＭＴ１０細胞）が挙げられる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ ＧＳ Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞系である。具体的な実施形態では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の実施形態では、特に組換え抗体分子全体の発現のために、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉなどの細菌細胞または真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）が、組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中間初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと併せた、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞は、抗体のための効果的な発現系である（Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5；およびCockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）を免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーターまたは組織特異的プロモーターによって調節される。
細菌系では、いくつかの発現ベクターを、発現される抗体分子について意図される使用に応じて、有利に選択することができる。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のために、大量のそのような抗体を産生する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ましくあり得る。そのようなベクターとしては、限定されるものではないが、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794）、ここで抗体のコード配列は、ｌａｃ Ｚコード領域とインフレームでベクターに個々にライゲーションすることができ、これにより融合タンパク質が産生される；ｐＩＮベクター（Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109；Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509）などが挙げられる。例えば、ｐＧＥＸベクターを使用して、外来ポリペプチドをグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着および結合、それに続く遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼの切断部位を含むように設計される。
昆虫系では、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体ウイルス（ＡｃＮＰＶ）をベクターとして使用して、外来遺伝子を発現させることができる。ウイルスは、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞中で成長する。抗体のコード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個々にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。
哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、目的の抗体のコード配列を、アデノウイルスの転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーターおよび三要素リーダー配列にライゲーションすることができる。次いで、このキメラ遺伝子を、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの組換えによって、アデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）への挿入は、生存可能であり、かつ感染した宿主において抗体分子を発現することができる、組換えウイルスを生じる（例えば、Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9を参照されたい）。特異的な開始シグナルはまた、挿入された抗体のコード配列の効率的な翻訳のために必要であり得る。これらのシグナルとしては、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列が挙げられる。さらにまた、開始コドンは、挿入物全体の翻訳を確実にするために、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方のさまざまな起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーターなどの包含によって増強することができる（例えば、Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544を参照されたい）。
加えて、挿入された配列の発現をモジュレートするか、または所望の特異的な様式で遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能のために重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞系または宿主系を選択して、発現した外来タンパク質の正しい修飾およびプロセシングを確実にすることができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写物の適切なプロセシング、グリコシル化およびリン酸化のための細胞の仕組みを有する真核生物宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞としては、限定されるものではないが、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、２９３Ｆ、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２ＯおよびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（任意の免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞系）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞で産生される。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、低減されたフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない。そのような抗体は、当業者に公知の技法を使用して産生することができる。例えば、抗体は、フコシル化する能力が不十分であるか、または欠如している細胞で発現させることができる。具体的な例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞系を使用して、低減したフコース含量を有する低減した抗体またはその抗原結合性断片を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合性断片を産生するために使用することができるそのようなシステムの例である。
組換えタンパク質の長期間の高収量での産生のために、安定発現細胞を生成することができる。例えば、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片を安定的に発現する細胞系、または本明細書に記載のキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片を操作することができる。具体的な実施形態では、本明細書に提供される細胞は、会合して本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を形成する、軽鎖／軽鎖可変ドメインおよび重鎖／重鎖可変ドメインを安定的に発現する。
ある特定の態様では、ウイルスの複製開始点を含有する発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）、および選択可能マーカーによって制御されたＤＮＡで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞を富化培地中で１～２日間成長させ、次いで、選択培地に切り替えることができる。組換えプラスミドにおける選択可能マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞が、プラスミドをそれらの染色体に安定的に組み込み、成長して、次にクローニングおよび細胞系に拡大することができる増殖巣を形成することを可能にする。この方法は、本明細書に記載のヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載のキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片を発現する細胞系を操作するために有利に使用することができる。操作されたそのような細胞系は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。
いくつかの選択系を使用することができ、限定されるものではないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034）およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23）の遺伝子が挙げられ、それぞれ、ｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞またはａｐｒｔ細胞において用いることができる。また、代謝拮抗剤耐性は、以下の遺伝子についての選択の基礎として使用することができる：メトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70；O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6）；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95；Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596；Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932；およびMorgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217；Nabel GJ & Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5）；およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Santerre RF et al., (1984) Gene 30(1-3): 147-56）。組換えＤＮＡ技術の分野において一般に公知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、そのような方法は、例えば、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ausubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993)；Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990)；およびChapters 12 and 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994)；Colbere-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14に記載されている。
抗体分子の発現レベルは、ベクターの増幅によって増加させることができる（総説については、Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルが増加すると、マーカー遺伝子のコピーの数が増加する。増幅領域は抗体遺伝子に関連しているので、抗体の産生も増加する（Crouse GF et al., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66）。
宿主細胞は、本明細書に記載の２つまたはそれよりも多くの発現ベクターである、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターで同時トランスフェクトすることができる。２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの同等の発現を可能にする同一の選択可能マーカーを含有することができる。宿主細胞は、異なる量の２つまたはそれよりも多くの発現ベクターで同時トランスフェクトすることができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターおよび第２の発現ベクターの以下の比：１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５または１：５０のいずれか１つでトランスフェクトすることができる。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変軽鎖領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変重鎖領域（ＶＨ）をコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１０６のアミノ酸を含む可変軽鎖領域、およびヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域、およびヒト重鎖定常領域を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変軽鎖領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変重鎖領域（ＶＨ）をコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１０６のアミノ酸を含む可変軽鎖領域、およびヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む可変重鎖領域、およびヒト重鎖定常領域を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体のＶＬをコードするヌクレオチド配列、および抗体のＶＨをコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬ、およびヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＨ、およびヒト重鎖定常領域を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体のＶＬをコードするヌクレオチド配列、および抗体のＶＨをコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬは、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖は、配列番号１０８の可変軽鎖領域、およびヒト軽鎖定常領域を含み、重鎖は、配列番号１０５の可変重鎖領域のヌクレオチド配列、およびヒト重鎖定常領域を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体のＶＬをコードするヌクレオチド配列、および抗体のＶＨをコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、ＶＨは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。
別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１１９、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。
別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２１、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２０、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２２、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の軽鎖をコードするヌクレオチド配列、および抗体の重鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２４、およびヒト軽鎖定常領域のヌクレオチド配列を含み、重鎖をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２３、およびヒト重鎖定常領域のヌクレオチド配列を含む。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、第１のベクターおよび第２のベクターを含み、第１のベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含み、第２のベクターは、抗体の可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、第１のベクターおよび第２のベクターを含み、第１のベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含み、第２のベクターは、抗体の可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、第１のベクターおよび第２のベクターを含み、第１のベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含み、第２のベクターは、抗体の可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、第１のベクターおよび第２のベクターを含み、第１のベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含み、第２のベクターは、抗体の可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、第１のベクターおよび第２のベクターを含み、第１のベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含み、第２のベクターは、抗体の可変軽鎖領域を含み、可変重鎖領域は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、第１のベクターは、重鎖定常領域を含み、および／または第２のベクターは、軽鎖定常領域を含む。
あるいは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用することができる。そのような発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写は、共通のプロモーターによって駆動され得るが、第１の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存性スキャン機構によることができ、第２の遺伝子からのｍＲＮＡの翻訳はキャップ非依存性機構による、例えば、ＩＲＥＳによることができる。
具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変軽鎖領域をコードするヌクレオチドを含み、可変重鎖領域は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変軽鎖領域をコードするヌクレオチドを含み、可変重鎖領域は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変軽鎖領域をコードするヌクレオチドを含み、可変重鎖領域は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変軽鎖領域をコードするヌクレオチドを含み、可変重鎖領域は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。別の具体的な態様では、本明細書に提供される宿主細胞は、ベクターを含み、ベクターは、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体の可変重鎖領域をコードするヌクレオチド配列、および抗体の可変軽鎖領域をコードするヌクレオチドを含み、可変重鎖領域は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、可変軽鎖領域は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ベクターは、重鎖定常領域および／または軽鎖定常領域を含む。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の宿主細胞（例えば、ｅｘ ｖｉｖｏ宿主細胞）は、当技術分野において公知の技法を使用して、宿主細胞に含有されるポリヌクレオチド配列によってコードされる抗体またはその抗原結合性断片を産生する条件下で培養される。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、当技術分野において公知の技法を使用して、宿主細胞から単離または精製されている。
５．４．抗体－薬物コンジュゲートの産生
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、リンカーが存在せず、方法が、（ａ）細胞傷害剤を直接抗体部分にコンジュゲートして抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｂ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法の例は、セクション６（例えば、実施例４）に記載する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、抗体－薬物コンジュゲートが、リンカーを含み、方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）リンカーを直接抗体部分にコンジュゲートして、リンカー－抗体部分を産生するステップ、（ｂ）リンカー－抗体部分のリンカーを直接細胞傷害剤にコンジュゲートして、抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、抗体－薬物コンジュゲートが、リンカーを含み、方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）リンカーを直接細胞傷害剤にコンジュゲートして、リンカー－細胞傷害剤部分を産生するステップ、（ｂ）リンカー－細胞傷害剤部分のリンカーを直接抗体部分にコンジュゲートして、抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法を提供する。
コンジュゲートおよび精製するステップは、抗体－薬物コンジュゲートを産生するために使用される当技術分野において公知の方法、例えば、Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225；McCombs JR and Owen SC (2015) The AAPS Journal 17: 339-351；Jackson DY (2016) Org Process Res Dev 20: 852-866；またはOlivier KJ and Hurvitz SA ed., (2016) Antibody-Drug Conjugates: Fundamentals, Drug Development, and Clinical, Wileyに記載の方法によって行うことができる。一部の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の１つの鎖にコンジュゲートされている（例えば、抗体部分がｓｃＦｖである場合、または抗体部分が免疫グロブリン（四量体である）などの多鎖抗体もしくはその抗原結合性断片である場合）。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分の２つまたはそれよりも多くの鎖にコンジュゲートされている（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合性断片である場合）。具体的な実施形態では、薬物部分は、免疫グロブリンの２つの同一の鎖、例えば、重鎖または軽鎖にコンジュゲートされている。他の実施形態では、薬物部分は、抗体部分のすべての鎖にコンジュゲートされている（抗体部分が免疫グロブリンなどの多鎖抗体またはその抗原結合性断片である場合）。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、クロマトグラフによって精製される。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、遠心分離によって精製される。限定ではないが例として、抗体－薬物コンジュゲートを生成するために使用することができるコンジュゲーション化学は、チオールとマレイミド、チオールと自己加水分解マレイミド、チオールとフェニルオキサジアゾールスルホン、オキシムライゲーション、アルコキシアミンとケト基の反応、ひずみ促進アジド－アルキン環化付加（ＳＰＡＡＣ）、銅を含まないクリック化学、ホルミルグリシンに酸化されたシステイン、ヒドラジノ－イソ－ピクテ－シュペングラー（ＨＩＰＳ）ライゲーション、グルタミン残基と第１級アミンからのγ－カルボキシアミド基のライゲーション、ライゲーションＬＰＥＴＧとポリグリシンモチーフの第１級アミン、マレイミドと６－チオフコース、ヒドラジドのフコース特異的コンジュゲーション、過ヨウ素酸塩酸化（アルデヒド）とアミノオキシペイロード、ひずみ促進アルキン－アジド環状付加、Ｃ２－ケト－ｇａｌオキシム化、部位選択的アルデヒド酸化とオキシムライゲーション、オキシムライゲーションＮＨ２とインドールベースの５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン誘導体、チオールとビススルホン、チオールとジブロモマレイミド、チオールとマレイミドとそれに続くｐＨ９．２処置（４５℃、４８時間）、またはチオールとアリールプロピオニトリルであり得る（Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337を参照されたい）。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、下記の５．３に記載するようにして生成することができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、薬物部分とのコンジュゲーションを容易にするため、特に、薬物部分との部位特異的なコンジュゲーションを促進するために、当技術分野において公知の方法によって、例えば、Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337；Peters C and Brown S, (2015) Biosci Rep 35: art:e00225; McCombs JR and Owen SC (2015) The AAPS Journal 17: 339-351；Jackson DY (2016) Org Process Res Dev 20: 852-866；またはOlivier KJ and Hurvitz SA ed., (2016) Antibody-Drug Conjugates: Fundamentals, Drug Development, and Clinical, Wileyに記載の方法によって、操作または修飾される。薬物部分とのコンジュゲーションを容易にするために抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を操作または修飾するために使用することができる非限定的な例示的な方法（Beck A et al., (2017) Nat Rev Drug Discov 16: 315-337を参照されたい）には、１つまたは複数の追加のシステインまたはセレノシステインの付加、非天然アミノ酸操作、コンジュゲートを支援することができるある特定の酵素により認識可能な１つまたは複数のアミノ酸タグの付加、グリカンのリモデリング、アミノ末端セリンの付加、およびネイティブのシステイン架橋が挙げられる。
リンカーおよび細胞傷害剤は、それぞれ、リンカーおよび細胞傷害剤を産生するための当技術分野において公知の任意の方法によって生成することができる。
５．５．医薬組成物
本明細書において、（ａ）本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）またはその抗原結合性断片、および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、精製されている。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、治療有効量で医薬組成物中に存在する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗体ｚ１０）を含む。別の具体的な実施形態では、医薬組成物は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗体ｚ１１）を含む。別の具体的な実施形態では、医薬組成物は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗体ｚ１３）を含む。別の具体的な実施形態では、医薬組成物は、配列番号１０９のアミノ酸配列および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を含む。
本明細書において、（ａ）本明細書に記載のキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、精製されている。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、治療有効量で医薬組成物中に存在する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含むキメラ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗体ｘＡｂ）を含む。本明細書において、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクター、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。
本明細書において、（ａ）本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。具体的な実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、治療有効量で医薬組成物中に存在する。
本明細書において、（ａ）ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）および別の目的の抗原に結合する二重特異性抗体（例えば、本明細書に記載の通り）、および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も提供する。具体的な実施形態では、二重特異性抗体は精製されている。具体的な実施形態では、二重特異性抗体は、治療有効量で医薬組成物中に存在する。
具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、１～２０の間の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有する。ＤＡＲは、抗体にコンジュゲートされた細胞傷害剤の平均数である。別の具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、１～１５の間のＤＡＲを有する。別の具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、１～１２の間のＤＡＲを有する。別の具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、１～８の間のＤＡＲを有する。別の具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、３～５の間のＤＡＲを有する。別の具体的な実施形態では、医薬組成物に含有される抗体－薬物コンジュゲートの集団は、３．５～４の間のＤＡＲを有する。
賦形剤または安定剤であり得る許容される担体は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、限定されるものではないが、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む単糖、二糖および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／または、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
具体的な実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および必要に応じて１つまたは複数の追加の予防剤または治療剤を含む。具体的な実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、有効量の本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片、および必要に応じて１つもしくは複数の追加の予防剤または治療剤を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物および／または抗体もしくはその抗原結合性断片は、治療有効量の本明細書に記載の追加の治療剤のいずれかと組み合わせることができる（下記のセクション５．４．２を参照されたい）。
具体的な実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、および必要に応じて１つまたは複数の追加の予防剤または治療剤を含む。具体的な実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に、有効量の本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、および必要に応じて１つまたは複数の追加の予防剤または治療剤を含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物および／または抗体－薬物コンジュゲートは、治療有効量の本明細書に記載の追加の治療剤のいずれかと組み合わせることができる（下記のセクション５．４．２を参照されたい）。
一部の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、医薬組成物に含まれる唯一の活性成分である。
一部の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体は、医薬組成物に含まれる唯一の活性成分である。具体的な実施形態では、本明細書に記載のヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、医薬組成物に含まれる唯一の活性成分である。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドまたはベクターは、医薬組成物中の唯一の活性成分である。
本明細書に記載の医薬組成物は、がんを処置するために使用することができる。医薬組成物は、任意の投与の経路（例えば、非経口、局所、腫瘍内など）のために製剤化されてもよい。
非経口調製物において使用される薬学的に許容される担体としては、水性媒体、非水性媒体、抗菌剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、局部麻酔剤、懸濁化剤および分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が挙げられる。水性媒体の例としては、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロースおよび乳酸リンゲル注射液が挙げられる。非水性の非経口媒体としては、植物起源の固定油、綿実油、コーン油、ゴマ油およびピーナッツ油が挙げられる。静菌性または静真菌性の濃度の抗菌剤は、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムを含む、複数回用量容器に包装された非経口調製物に添加することができる。等張剤としては、塩化ナトリウムおよびデキストロースが挙げられる。緩衝剤としては、リン酸塩およびクエン酸塩が挙げられる。抗酸化剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局部麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁化剤および分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が挙げられる。金属イオンの金属イオン封鎖剤またはキレート剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。医薬担体としては、水混和性媒体のためのエチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコール、ならびにｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸も挙げられる。
医薬組成物は、対象への投与の任意の経路のために製剤化されてもよい。投与の経路の具体的な例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内および非経口が挙げられる。本明細書において、皮下、筋肉内または静脈内注射のいずれかによって特徴付けられる非経口投与も企図される。注射剤は、液体の液剤もしくは懸濁液剤、注射前の液体中の液剤もしくは懸濁液剤に好適な固体形態、または乳剤のいずれかとして、従来の形態で調製することができる。注射剤、液剤および乳剤は、１つまたは複数の賦形剤も含有する。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールである。加えて、所望により、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解度増強剤、ならびに例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンおよびシクロデキストリンなどの他のそのような薬剤などの少量の非毒性補助物質を含有することもできる。
抗体の非経口投与のための調製物としては、注射の準備ができた無菌溶液、皮下注射錠剤を含む、使用直前に溶媒と組み合わせる準備ができた凍結乾燥粉末などの無菌乾燥可溶性製品、注射の準備ができた無菌懸濁液、使用直前に媒体と組み合わせる準備ができた無菌乾燥不溶性製品、および無菌乳液が挙げられる。溶液は、水性または非水性のいずれかであり得る。
静脈内投与する場合、好適な担体としては、生理的食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびにグルコース、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールならびにそれらの混合物などの増粘剤および可溶化剤を含有する溶液が挙げられる。
抗体を含む局所混合物は、局部および全身投与のために記載されているように調製される。得られる混合物は、溶液、懸濁液、乳液などであり得、クリーム剤、ゲル剤、軟膏、乳剤、液剤、エリキシル剤、ローション剤、懸濁液剤、チンキ剤、ペースト剤、フォーム剤、エアロゾル剤、潅注剤、スプレー剤、坐剤、包帯、皮膚パッチ、または局所投与のために好適な任意の他の製剤として製剤化され得る。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートは、吸入などの局所適用のためのエアロゾル剤として製剤化され得る（例えば、炎症性疾患、特に、喘息の処置のために有用なステロイドの送達のためのエアロゾル剤を記載している、米国特許第４，０４４，１２６号、第４，４１４，２０９号および第４，３６４，９２３号を参照されたい）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独またはラクトースなどの不活性担体と組み合わせて、噴霧器用のエアロゾル剤もしくは液剤の形態で、または吹送法用の微粉末であり得る。そのような場合、製剤の粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有する。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートは、眼中などの皮膚または粘膜への局所適用のためなどの局部または局所適用のために、ゲル剤、クリーム剤およびローション剤の形態で、および眼への適用のために、または嚢内もしくは脊髄内への適用のために、製剤化することができる。局所投与は、経皮送達のために、および眼もしくは粘膜への投与のためにも、または吸入療法のために、企図される。抗体の点鼻液剤を、単独または他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、投与することもできる。
イオン導入および電気泳動デバイスを含む経皮パッチは、当業者に周知であり、抗体を投与するために使用することができる。例えば、そのようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、第６，２６１，５９５号、第６，２５６，５３３号、第６，１６７，３０１号、第６，０２４，９７５号、第６，０１０，７１５号、第５，９８５，３１７号、第５，９８３，１３４号、第５，９４８，４３３号および第５，８６０，９５７号に開示されている。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、凍結乾燥粉末であり、これは、溶液、乳液および他の混合物としての投与のために再構成することができる。これはまた、固体またはゲルとして再構成および製剤化されてもよい。凍結乾燥粉末は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート、またはその薬学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解することによって調製される。一部の実施形態では、凍結乾燥粉末は、無菌である。溶媒は、粉末、もしくは粉末から調製された再構成溶液の安定性または他の薬理学的構成成分を改善する賦形剤を含有してもよい。使用され得る賦形剤としては、限定されるものではないが、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロースまたは他の好適な薬剤が挙げられる。溶媒はまた、一実施形態では、ほぼ中性のｐＨで、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウムなどの緩衝剤、または当業者に公知の他のそのような緩衝剤を含有してもよい。当業者に公知の標準条件下での溶液のその後の滅菌濾過とそれに続く凍結乾燥により、所望の製剤が提供される。一実施形態では、得られる溶液は、凍結乾燥のためにバイアルに分配される。各バイアルは、化合物の単回投薬量または複数回投薬量を含有する。凍結乾燥粉末は、約４℃～室温などの適切な条件下で保管することができる。
この凍結乾燥粉末の注射用水による再構成は、非経口投与における使用のための製剤を提供する。再構成のために、凍結乾燥粉末は、滅菌水または他の好適な担体に添加される。正確な量は、選択された化合物に依存する。そのような量は、経験的に決定することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、再構成の必要がない液体形態で供給される。
本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、および本明細書に提供される他の組成物は、処置される対象の身体の特定の組織、受容体または他のエリアを標的とするように製剤化することもできる。多くのそのような標的化方法は、当業者に周知である。そのような標的化方法はすべて、本組成物における使用のために本明細書で企図される。標的化方法の非限定的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、第６，２７４，５５２号、第６，２７１，３５９号、第６，２５３，８７２号、第６，１３９，８６５号、第６，１３１，５７０号、第６，１２０，７５１号、第６，０７１，４９５号、第６，０６０，０８２号、第６，０４８，７３６号、第６，０３９，９７５号、第６，００４，５３４号、第５，９８５，３０７号、第５，９７２，３６６号、第５，９００，２５２号、第５，８４０，６７４号、第５，７５９，５４２号および第５，７０９，８７４号を参照されたい。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、腫瘍を標的にする。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために使用される組成物は、無菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって、容易に達成される。
５．６ 使用および方法
５．６．１ 治療的使用および方法
５．６．１．１ がん
一態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。具体的な実施形態では、がんを処置するための方法は、それを必要とする対象に、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、抗体ｚ１０）を投与するステップを含む。別の具体的な実施形態では、がんを処置するための方法は、それを必要とする対象に、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、抗体ｚ１１）を投与するステップを含む。具体的な実施形態では、がんを処置するための方法は、それを必要とする対象に、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、抗体ｚ１３）を投与するステップを含む。具体的な実施形態では、がんを処置するための方法は、それを必要とする対象に、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、抗体ｚ１３）を投与するステップを含む。
別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載のキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載のキメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。具体的な実施形態では、がんを処置するための方法は、それを必要とする対象に、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＶＨ、および配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＶＬを含むキメラ抗体（例えば、抗体ｘＡｂ）を投与するステップを含む。
別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の二重特異性抗体、または本明細書に記載の二重特異性抗体を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。別の態様では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドもしくはベクター、または本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドもしくはベクターを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。
具体的な実施形態では、本明細書において、対象におけるがんを処置するための方法であって、それを必要とする対象に、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提示する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置するための方法は、腫瘍生検、腫瘍試料またはがん細胞試料を対象から得るステップ、および本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現のレベルを評価するステップを含む。一部の実施形態では、対象から得られたがん細胞、腫瘍試料または腫瘍生検によるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のリン酸化のレベルは、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して評価される。一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置するための方法は、腫瘍生検、腫瘍試料またはがん細胞試料を対象から得るステップ、および本明細書に記載のまたは当技術分野において公知のアッセイを使用して、突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異体ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルを評価するステップを含む。当業者に公知の技法は、腫瘍生検またはがん細胞試料を得るために使用され得る。一部の実施形態では、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現レベルを評価する。ある特定の実施形態では、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のリン酸化のレベルを評価する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または当業者に公知の抗ＭＥＲＴＫ（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６１０６２２１号に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体）を使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）レベルを測定する。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される対象は、ＭＥＲＴＫを過剰発現しているがん細胞、構成的に活性化されたＭＥＲＴＫを発現しているがん細胞、またはその両方を有する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置するための方法は、ＰＭＢＣを対象から得るステップ、マクロファージを単離するステップ、および本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現のレベルを評価するステップを含む。一部の実施形態では、対象からのＰＭＢＣが得られ、マクロファージが単離され、マクロファージによるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現のリン酸化のレベルもしくは突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルまたはその両方が、本明細書に記載のまたは当業者に公知のアッセイを使用して評価される。当業者に公知の技法を使用して、ＰＭＢＣを得、マクロファージを単離してもよい。一部の実施形態では、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現レベルを評価する。ある特定の実施形態では、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡを使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のリン酸化のレベルを評価する。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または当業者に公知の抗ＭＥＲＴＫ（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６１０６２２１号に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体）を使用して、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）レベルを測定する。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置される対象は、ＭＥＲＴＫを過剰発現しているがん細胞、構成的に活性化されたＭＥＲＴＫを発現しているがん細胞、またはその両方を有する。
ある特定の実施形態では、がん細胞、マクロファージ、またはその両方におけるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現のレベルは、本明細書に記載の方法に従って対象を処置する前に評価される。ある特定の実施形態では、がん細胞における突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルは、本明細書に記載の方法に従って対象を処置する前に評価される。一部の実施形態では、リン酸化ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベル、およびがん細胞、マクロファージ、またはその両方によって発現する突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルは、本明細書に記載の方法に従って対象を処置する前に評価される。ある特定の実施形態では、がん細胞、マクロファージ、またはその両方におけるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現およびリン酸化のレベルは、本明細書に記載の方法に従って対象を処置する前に評価される。
ある特定の実施形態では、がん細胞、マクロファージ、またはその両方におけるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現のレベルは、処置の有効性を評価するために、本明細書に記載の方法に従って対象を処置している間に評価される。一部の実施形態では、がん細胞、マクロファージ、またはその両方によって発現するリン酸化ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルは、処置の有効性を評価するために、本明細書に記載の方法に従って対象を処置している間に評価される。一部の実施形態では、突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルは、処置の有効性を評価するために、本明細書に記載の方法に従って対象を処置している間に評価される。ある特定の実施形態では、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）の発現およびリン酸化のレベル、ならびにがん細胞、マクロファージ、またはその両方における突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、突然変異ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルは、処置の有効性を評価するために、本明細書に記載の方法に従って対象を処置している間に評価される。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくは抗原結合性断片または抗体－薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の医薬組成物の、がんを有する対象への投与は、以下の効果のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多くを達成する：（ｉ）がんの１つまたは複数の症状の重症度の減少または回復；（ｉｉ）がんに関連する１つまたは複数の症状の期間の低減；（ｉｉｉ）がんに関連する症状の再発の防止；（ｉｖ）対象の入院の低減；（ｖ）入院期間の低減；（ｖｉ）対象の生存の増加；（ｖｉｉ）別の療法の治療効果の増強または改善；（ｖｉｉｉ）がんに関連する１つまたは複数の症状の発生または発症の阻害；（ｉｘ）がんに関連する症状の数の低減；（ｘ）当技術分野において周知の方法によって評価されるクオリティオブライフの改善；（ｘ）腫瘍の再発の阻害；（ｘｉ）腫瘍および／またはそれに関連する１つまたは複数の症状の退縮；（ｘｉｉ）腫瘍および／またはそれに関連する１つまたは複数の症状の進行の阻害；（ｘｉｉｉ）腫瘍の成長の低減；（ｘｉｖ）腫瘍サイズ（例えば、体積または直径）の減少；（ｘｖ）新たに形成される腫瘍の形成の低減；（ｘｖｉ）原発性、局所性および／または転移性腫瘍の防止、根絶、除去または制御；（ｘｖｉｉ）転移の数またはサイズの減少；（ｘｖｉｉｉ）死亡率の低減；（ｘｉｘ）無再発生存期間の増加；（ｘｘ）磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ダイナミック造影ＭＲＩ（ＤＣＥ－ＭＲＩ）、Ｘ線、およびコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、または陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャンなどの当業者に利用可能な従来の方法によって測定した場合に、腫瘍のサイズが維持されて増加しないか、または、標準療法の投与後の腫瘍の増加よりも少なく増加する；ならびに／あるいは（ｘｘｉ）患者の寛解期間の増加。
一部の実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、またはそれよりも多くをもたらす：完全奏効、部分奏効、客観的応答、全生存期間の増加、無病生存の増加、客観的奏功率の増加、無増悪期間の増加、安定疾患、無進行生存の増加、治療成功期間の増加、およびがんの１つまたは複数の症状の改善または排除。具体的な実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、全生存期間の増加をもたらす。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、無進行生存の増加をもたらす。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のがんを処置する方法は、全生存期間の増加、および無進行生存の増加をもたらす。
具体的な実施形態では、完全奏効は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、完全奏効は、処置に応答した、がんのすべての兆候の消失を指す。完全奏効は、がんが治癒していることを意味しない場合があるが、患者は寛解である。具体的な実施形態では、結腸直腸がんは、臨床的に検出可能な疾患が、Ｘ線検査、骨髄、および生検またはタンパク質測定などの公知の技法によって検出されない場合に、完全寛解である。
具体的な実施形態では、部分奏効は、当業者によって理解される意味を有する。例えば、部分奏効は、処置に応答した、ヒト身体における結腸直腸がんのサイズの減少を指し得る。具体的な実施形態では、部分奏効は、新たな病変の非存在下で、すべての測定可能な腫瘍負荷（例えば、対象に存在する悪性細胞の数、または腫瘍塊の測定容積、または異常なモノクローナルタンパク質の量）における少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％の減少を指す。
具体的な実施形態では、全生存期間は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、全生存期間は、結腸直腸がんの診断または処置の開始のいずれかの日から、結腸直腸がんと診断されたヒト対象が依然として生存している時間の長さを指す。全生存期間の統計学的に有意な改善の実証は、毒性プロファイルが許容され、しばしば新たな薬物の承認を支持する場合、臨床的に有意であると考えることができる。
いくつかのエンドポイントは、典型的には、腫瘍の評価に基づく。これらのエンドポイントとしては、無病生存（ＤＦＳ）、客観的奏功率（ＯＲＲ）、無増悪期間（ＴＴＰ）、無進行生存（ＰＦＳ）および治療成功期間（ＴＴＦ）が挙げられる。これらの時間依存性のエンドポイントにおけるデータの収集および分析は、多くの場合、間接的な評価、計算および推定（例えば、腫瘍測定）に基づく。
具体的な実施形態では、無病生存（ＤＦＳ）は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、無病生存は、結腸直腸がんに対する一次処置が終わった後、ヒト対象ががんの任意の兆候または症状なしで生存している時間の長さを指し得る。ＤＦＳは、生存が延長され得る状況において重要なエンドポイントであり得、生存エンドポイントを非実用的にする。ＤＦＳは、臨床的有用性に代わることができ、またはこれは、臨床的有用性の直接的な証拠を提供し得る。この決定は、典型的には、効果の高さ、そのリスク－有用性の関係、および疾患の状況に基づく。ＤＦＳの定義は、特に、死亡が腫瘍進行の事前考証なく認められる場合に、複雑であり得る。これらの事象は、疾患の再発として、または打ち切られた事象としてのいずれかでスコア化され得る。死亡の統計分析のためのすべての方法は、いくつかの制約があるが、再発としてすべての死亡（すべての原因からの死亡）を考慮することでバイアスを最小化することができる。ＤＦＳは、この定義を使用して、特に、観察なしで長期間の後死亡した患者において、過大評価され得る。バイアスは、長期間のフォローアップ来診の頻度が研究群の間で異なる場合、またはドロップアウトが毒性のために無秩序でない場合に、導入され得る。
具体的な実施形態では、客観的奏功率は、当業者によって理解される意味を有する。一実施形態では、客観的奏功率は、事前に定義された量の腫瘍サイズの低減を有する患者の割合として、最小期間について定義される。応答の期間は、最初の応答の時から、腫瘍の進行の考証まで測定され得る。一般に、ＦＤＡは、ＯＲＲを部分奏効と完全奏効の合計として定義している。このように定義すると、ＯＲＲは、薬物抗腫瘍活性の直接的な測定であり、これは、単一群研究において評価することができる。利用可能である場合、標準化された基準を使用して、応答を確かめなければならない。さまざまな応答基準が適切だと考慮されている（例えば、ＲＥＣＩＳＴ１．１基準）（例えば、Eisenhower et al., 2009, European J. of Cancer, 45: 228-247を参照されたい）。ＯＲＲの有意性は、その高さおよび期間、ならびに完全奏効（腫瘍の検出可能な証拠なし）のパーセンテージによって評価される。
具体的な実施形態では、無増悪期間（ＴＴＰ）は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、無増悪期間は、結腸直腸がんの診断日または処置の開始日から、がんが悪化するか、またはヒト身体の他の部分に広がるまでの時間の長さを指す。
具体的な実施形態では、ＴＴＰは、無作為化から客観的な腫瘍の進行までの時間であり、ＴＴＰは、死亡を含まない。
具体的な実施形態では、無進行生存（ＰＦＳ）は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、ＰＦＳは、結腸直腸がんの処置の間およびその後に、ヒト患者ががんとともに生きるが、悪化しない時間の長さを指す。具体的な実施形態では、ＰＦＳは、無作為化から客観的な腫瘍の進行または死亡までの時間として定義される。ＰＦＳは、死亡を含んでもよく、そのため、全生存期間とより良好に関連付けることができる。
具体的な実施形態では、治療成功期間（ＴＴＦ）は、当業者によって理解される意味を有する。具体的な実施形態では、ＴＴＦは、無作為化から、疾患進行、処置の毒性および死亡を含む任意の理由のための処置の中止までの時間を測定する複合エンドポイントである。
具体的な実施形態では、安定疾患は、程度または重症度が減少も増加もしていない結腸直腸がんを指す。
具体的な実施形態では、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準を、いかに良くヒト対象が本明細書に記載の処置方法に応答するかを測定するために使用する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、頭頸部、肺、乳房、骨、卵巣、胃（stomach）、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、胃（gastric）、耳下腺、胆管、結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺または甲状腺のがんである。一部の実施形態では、がんは、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部がん、結腸直腸がんまたはカポジ肉腫である。一部の実施形態では、がんは、白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、方法に従って処置されるがんは、転移性である。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、乳がんである。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、トリプルネガティブ乳がんである。トリプルネガティブ乳がんは、Ｈｅｒ２（Ｎｅｕとしても公知）、エストロゲン受容体（ＥＲとしても公知）またはプロゲステロン受容体（ＰＲとしても公知）の遺伝子を発現しない乳房組織に由来するか、またはそこで成長する任意の腫瘍または細胞を指す。
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、急性骨髄性白血病である。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、急性リンパ性白血病である。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんのがん性細胞は、ＭＥＲＴＫを過剰発現する。具体的な実施形態では、ＭＥＲＴＫは、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんのがん性細胞において構成的に活性である。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、構成的に活性なＭＥＲＴＫに関連する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、ＭＥＲＴＫの過剰発現に関連する。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の方法に従って処置されるがんは、構成的に活性なＭＥＲＴＫの過剰発現に関連する。
本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は、互換的に使用される。一部の実施形態では、対象は、霊長類（例えば、サルまたはヒト）などの哺乳動物であり、最も好ましくは、ヒトである。
具体的な実施形態では、本明細書に記載の、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ｚ１０、ｚ１１、ｚ１３またはｘＡｂ抗体）、または抗体－薬物コンジュゲートが、対象に投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する２つまたはそれよりも多くの異なる抗体またはその抗原結合性断片が、対象に投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の、ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片は、対象に、１つまたは複数の他の療法と組み合わせて投与される（下記セクション５．４．２を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、２つまたはそれよりも多くの異なる本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートが、対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートは、対象に、１つまたは複数の他の療法と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、ヒト化抗体）もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートは、対象に、１つまたは複数の他の療法と組み合わせて投与される（下記セクション５．４．２を参照されたい）。具体的な実施形態では、１つまたは複数の他の療法は、抗がん療法である。
５．６．１．２ 投与の経路および投薬量
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、キメラ抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の医薬組成物は、さまざまな経路で対象に送達され得る。これらとしては、限定されるものではないが、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、腫瘍内および皮下の経路が挙げられる。例えば、吸入器または噴霧器の使用、およびスプレーとしての使用のためのエアロゾル化剤による製剤によって、肺投与を用いることもできる。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体－薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の医薬組成物は、対象に非経口投与される。具体的な実施形態では、前記非経口投与は、静脈内、筋肉内または皮下である。
状態の処置および／または予防において効果的な、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート、または医薬組成物の量は、疾患の性質に依存し、標準的な臨床技法によって、決定することができる。
医薬組成物において用いられる抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片または抗体－薬物コンジュゲートの正確な用量は、投与の経路、およびがんの種類にも依存し、医師の判断および各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態（年齢、体重および健康を含む）、患者がヒトまたは動物であるか、投与される他の医薬、または処置が予防的もしくは治療的であるかに応じても変わり得る。処置の投薬量は、安全性および有効性を最適化するために最適に漸増される。
ある特定の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを、最適な投薬量範囲の特定を支援するために用いる。有効用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から推定してもよい。
抗体（またはその抗原結合性断片）または抗体－薬物コンジュゲートについて、投薬量は、患者の体重の、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般には、０．０１～１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投薬量は、１ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、または言い換えれば、７０ｋｇの患者について、それぞれ、７０ｍｇまたは７００ｍｇまたは７０～７００ｍｇの範囲内であり得る。一部の実施形態では、患者に投与される投薬量は、患者の体重の約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇである。
例示的な処置レジメンは、１年もしくは数年にわたる期間、または数年の間隔にわたる期間に、２週間ごとに１回、または１か月に１回、または３～６か月ごとに１回の投与を伴う。一部の方法では、異なる結合特異性を有する２つまたはそれよりも多くの抗体またはその抗原結合性断片が、対象に同時に投与される。抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートは、通常、複数の機会に投与される。単回投薬の間の間隔は、毎週、毎月、３か月ごと、６か月ごと、または１年ごとであり得る。５．６．１．３ 併用療法
具体的な態様では、本明細書に記載のがんを処置するための方法は、抗がん療法（例えば、手術、放射線、化学療法または追加の治療剤）などの１つまたは複数の他の療法を投与するステップをさらに含む。具体的な実施形態では、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を投与するステップを含む、対象におけるがんを処置するための本明細書に提供される方法は、対象に、１つまたは複数の追加の治療剤を投与するステップをさらに含む。具体的な実施形態では、追加の治療剤は、がんを処置するためのものである。具体的な実施形態では、追加の治療剤は、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートによる処置の任意の副作用を処置するためのものである。
具体的な実施形態では、追加の薬剤は、乳がんを処置するために使用される薬剤、黒色腫を処置するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である。
具体的な実施形態では、追加の治療剤は、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブおよび二トシル酸ラパチニブからなる群から選択される、乳がんを処置するために使用される薬剤である。
具体的な実施形態では、追加の治療剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびダカルバジンからなる群から選択される、黒色腫を処置するために使用される薬剤である。
具体的な実施形態では、追加の治療剤は、免疫チェックポイントシグナル伝達を遮断する薬剤である。具体的な実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＴＬＡ－４遮断抗体、抗ＰＤ－１遮断抗体または抗ＰＤ－Ｌ１遮断抗体である。
具体的な実施形態では、追加の治療剤は、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブおよびソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である。
他の実施形態では、追加の治療剤は、表３２に列挙される薬剤である。
Figure 2023054356000046
Figure 2023054356000047
Figure 2023054356000048
Figure 2023054356000049
Figure 2023054356000050
Figure 2023054356000051
具体的な実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与するステップを含む、本明細書に記載のがんを処置するための方法は、抗ＰＤ１抗体（例えば、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、ピディリズマブまたはニボルマブ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバニアブ（durvaniab）、ＢＭＳ－９３６５５２またはＣＫ－３０１）、抗ＬＡＧ３抗体、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＴＧＦ－ベータ抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、ＣＡＲ－Ｔ療法（例えば、キムリア、ＪＣａｒ０１７またはイエスカルタ）、ＲＧＸ－１０４またはＲＧＸ－２０２を投与するステップをさらに含み得る。
本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートは、追加の治療剤とともに、同時にまたは逐次的に（前および／または後）投与することができる。抗体もしくはその抗原結合性断片および追加の治療剤、または抗体－薬物コンジュゲートおよび追加の治療剤は、同じまたは異なる組成物中で、同じまたは異なる投与の経路によって投与することができる。第１の療法（本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート、または追加の治療剤である）は、がんを有する患者への第２の療法（本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲート、または追加の治療剤）の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、同時またはその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与することができる。ある特定の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートと組み合わせて対象に投与される追加の治療剤は、同じ組成物（医薬組成物）で投与される。他の実施形態では、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートと組み合わせて投与される追加の治療剤は、対象に、抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または抗体－薬物コンジュゲートとは異なる組成物で投与される（例えば、２つまたはそれよりも多くの医薬組成物が使用される）。
５．７ キット
本明細書において、１つもしくは複数の本明細書に記載の抗体もしくは抗体－薬物コンジュゲート、またはその抗原結合性断片を含むキットも提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、本明細書に記載の１つもしくは複数の抗体もしくはその抗原結合性断片、または１つもしくは複数の抗体－薬物コンジュゲートなどの本明細書に記載の医薬組成物の１つまたは複数の成分で満たされた１つまたは複数の容器を含む医薬パックまたはキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の医薬組成物、および予防剤または治療剤を含有する。
そのような容器に必要に応じて関連するのは、医薬品もしくは生物学的製品の製造、使用もしくは販売を規制する政府機関によって規定された形態の通知、剤形、および／またはそれらの使用説明書であり得る。ある特定の実施形態では、キットに含まれる説明書は、医薬組成物の投与のための投薬量および／または投薬レジメンに関するガイダンスを提供する。
医薬品包装材料の例としては、限定されるものではないが、ブリスターパック、ボトル、パケット、サシェ、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル、容器、シリンジ、ならびに選択された医薬組成物および投与と処置の意図された様式に好適な任意の包装材料が挙げられる。
本明細書に提供されるキットは、活性成分を投与するために使用されるデバイスをさらに含むことができる。そのようなデバイスの例としては、限定されるものではないが、シリンジ、無針注射器、点滴バッグ、パッチおよび吸入器が挙げられる。
本明細書に提供されるキットは、成分を投与するために使用することができる薬学的に許容される媒体をさらに含むことができる。例えば、成分が、非経口投与のために再構成されなければならない固体形態で提供される場合、キットは、成分が溶解して非経口投与のために好適な粒子状物質を含まない無菌溶液を形成することができるか、または経口投与のための懸濁液として再構成することができる、好適な媒体の密封容器を含むことができる。薬学的に許容される媒体の例としては、限定されるものではないが、注射用水ＵＳＰ、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、ならびに乳酸リンゲル注射液を含むがこれらに限定されない水性媒体；エチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない水混和性媒体；ならびにコーン油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピルおよび安息香酸ベンジルを含むがこれらに限定されない非水性媒体が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のキットは、本明細書に記載の方法に従って対象を処置する前および／またはその間に、対象からの細胞（例えば、がん細胞、マクロファージ、またはその両方）におけるＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルを測定するための試薬（例えば、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または当業者に公知の抗ＭＥＲＴＫ抗体（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６１０６２２１号に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体））を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、本明細書に記載の方法に従って処置される対象からの細胞（例えば、がん細胞、マクロファージ、またはその両方）によるリン酸化ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルを測定するための試薬を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載のキットは、本明細書に記載の方法に従って処置される対象からの細胞（例えば、がん細胞、マクロファージ、またはその両方）による突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルを測定するための試薬を含む。一部の実施形態では、キットは、以下のＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）発現レベル、リン酸化ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベル、突然変異ＭＥＲＴＫ（例えば、ヒトＭＥＲＴＫ）のレベルのうちの１つ、２つまたはすべての読み出し情報に関する臨床医／医師を導く情報を含む。
以下の実施例は、限定の目的ではなく例示の目的で提供される。
６．実施例
６．１．
（実施例１）
ヒトＭＥＲＴＫに特異的なヒト化高親和性特異的抗体の生成
本実施例は、内部移行による細胞表面からのＭＥＲＴＫの分解をもたらすモノクローナル抗体を記載する。
６．１．１．候補抗体のヒト化、発現および精製
ヒト化抗ＭＥＲＴＫを生成するために、米国特許第１０，２２１，２４８号に開示のマウス抗ＭＥＲＴＫ抗体であるＭ６抗体のサブクローンの重鎖および軽鎖フレームワーク領域を、必要に応じて１つまたは複数の逆突然変異を伴って、ヒト重鎖および軽鎖フレームワーク領域によってそれぞれ置き換えた。重鎖（Ｓ２４、Ｓ２５、Ｓ２６、Ｓ２７、Ｓ２８、Ｓ２９、Ｓ３０、Ｓ３１）および軽鎖（Ｓ３２、Ｓ３３）の組合せは、合計で１６のヒト化抗体を産生した。ヒト化抗体候補をＨＥＫ－２９３細胞または２９３Ｆ細胞において発現させ、発現をゲル電気泳動によって確認した（データは示さない）。バンドは、ヒト化抗体ｚ１からｚ１６、ならびにｘＡｂ（キメラ抗体、レーン１７）および２つのハイブリドーマ系（ＨｙＡｂ１およびＨｙＡｂ２、レーン１８および１９）についておよそ１５０ｋＤの予想サイズで存在した。候補抗体のヒトＭＥＲＴＫへの結合親和性をＳＰＲによって測定した。ＳＰＲの結果を図１にまとめる。図１における１×１０－６未満の解離速度（Ｋｄ）値は、Ｋｄが機器の検出限界を下回ることを示す。可変軽鎖領域に関して、可変軽鎖領域のフレームワーク領域３（例示的な定義の下で）中の４番目の残基（セリン、Ｓ）のアスパラギン酸（Ｄ）への逆突然変異が、ヒト化抗体のヒトＭＥＲＴＫへの結合親和性の増加に関連することが分かった。可変重鎖領域に関して、２７番目の残基（チロシン、Ｔ、最後から２番目の残基）の逆突然変異が、ヒト化抗体のヒトＭＥＲＴＫへのより低い結合親和性に関連することが分かった。図２に示されるように、同一である、ｚ１０、ｚ１１およびｚ１３についてのフレームワーク領域を有する重鎖の可変領域、ならびにｚ１０、ｚ１１およびｚ１３についてのフレームワーク領域を有する軽鎖の可変領域の組合せは、ｚ１０、ｚ１１およびｚ１３についてのフレームワーク領域を有する可変領域の重鎖を、下記の表３３のフレームワーク領域を有する可変領域の軽鎖と組み合わせた場合よりも高い親和性を有するヒト化抗体をもたらした。
下記の表３４は、ＳＰＲを使用するｚ１０、ｚ１１およびｚ１３抗体のアビディティーを提供する。下記の表３４は、ＳＰＲおよびＥＬＩＳＡ細胞ベースのアッセイを使用するｚ１０抗体の親和性を提供する。ＳＰＲを使用するアビディティーおよび親和性の測定に関して、下記のプロトコールを使用した。この研究で使用したｚ１０抗体は、表１６に示される重鎖および軽鎖を含む。この研究で使用したｚ１１抗体は、表１７に示される重鎖および軽鎖を含む。この研究で使用したｚ１３抗体は、表１８に示される重鎖および軽鎖を含む。
ＳＰＲを使用するｚ１０のヒトＭＥＲＴＫへの親和性測定
ＣＭ５センサーチップを、４００ｍＭのＥＤＣおよび１００ｍＭのＮＨＳの混合物で４２０秒間活性化した。次いで、１０ｍＭのＮａＡｃ（ｐＨ４．５）中の３０μｇ／ｍＬの抗ヒトＦｃ ＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ、１０９－００５－０９８）を、１０μＬ／分の流速で４２０秒間注入した。チップを、１Ｍのエタノールアミン－ＨＣｌによって不活性化した。ランニング緩衝液（１×ＨＢＳ－ＥＰ＋）中の５μｇ／ｍＬのｚ１０抗体を、１０μＬ／分の流速で１５秒間注入した。６つの濃度（２．７８、５．５６、１１．１１、２２．２２、４４．４４および８８．８８ｎＭ）の細胞外ＭＥＲＴＫドメイン（Ｗ３７２５－ｈＰｒｏ１、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０２９８－ＨＣＣＨ）およびランニング緩衝液を、３０μＬ／分の流速で、１８０秒の会合フェーズ、続いて６００秒の解離フェーズで注入した。再生緩衝液として１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．５を、すべての解離フェーズ後に注入した。チップを、１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．５で再生した。１つの表面チャネル（捕捉されたリガンドなし）を、参照減算のための対照表面として使用した。各相互作用の最終データを、参照チャネルおよび緩衝液チャネルのデータから差し引いた。Ｗ３７２５－ｈＰｒｏ１に結合するｚ１０抗体の実験データは、１：１の結合モードによってフィットした。５４ｋＤａの分子量を使用して、分析物のモル濃度を計算した。
ＳＰＲを使用するｚ１０、ｚ１１およびｚ１３のヒトＭＥＲＴＫへのアビディティー測定
活性化因子を、注入の直前に、４００ｍＭのＥＤＣおよび１００ｍＭのＮＨＳの混合物を用いて調製した。ＣＭ５センサーチップを、混合物で４２０秒間活性化した。次いで、１０ｍＭのＮａＡｃ（ｐＨ４．５）中の５μｇ／ｍＬのｒｈＭｅｒ／Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、８９１０ＭＲ）を、１０μＬ／分の流速で３０秒間注入した。チップを、１Ｍのエタノールアミン－ＨＣｌによって不活性化した。Ｚ１０、ｚ１１およびｚ１３抗体を、ランニング緩衝液（１×ＨＢＳ－ＥＰ＋）で希釈した。８つの濃度（０．３１２５、０．６２５、１．２５、２．５、５、１０、２０および４０ｎＭ）の抗体およびランニング緩衝液を、３０μＬ／分の流速で、２４０秒の会合フェーズ、続いて４８００秒の解離フェーズで注入した。再生緩衝液として１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．５を、すべての解離フェーズ後に注入した。チップを、１０ｍＭのグリシン、ｐＨ１．５で再生した。リガンドを捕捉しない１つの表面チャネルを、参照減算のための対照表面として使用した。各相互作用の最終データを、参照チャネルおよび緩衝液チャネルのデータから差し引いた。ｒｈＭｅｒ／Ｆｃキメラに結合する抗体の実験データは、１：１の結合モードによってフィットした。４０ｎＭおよび０．３１２５ｎＭの抗体の曲線を、より良好にフィットさせるために除去した。１５０ｋＤａの分子量を使用して、抗体のモル濃度を計算した。
Figure 2023054356000052
Figure 2023054356000053
ＭＥＲＴＫに対するそれらの高親和性に基づいて、ｚ１０、ｚ１１およびｚ１３をさらなる研究のために選択した。抗体を、プロテインＡを使用して精製し、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ ＨＰＬＣ）によって分析した。図２は、４つの抗体の純度分析の要約を示す。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して、４つの抗体を特徴付けた。予想通り、１５０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび２５ｋＤａのバンドが、ゲル上で見え、抗体が正常であることを示唆した。
６．２．
（実施例２）
ヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体の活性
この実施例は、特定のヒト化抗体が、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫの細胞外ドメインに結合しないことを実証する。この実施例は、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合するヒト化抗体が、Ｇａｓ６が誘導する活性化を遮断し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでがん細胞のコロニー形成を阻害することも実証する。さらに、実施例は、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合するヒト化抗体が、ヒトＭＥＲＴＫの内部移行および分解を誘導することによって、がん細胞およびマクロファージの表面上のヒトＭＥＲＴＫの発現を低減することを実証する。
６．２．１．材料および方法
細胞系、抗体および試薬
ＳＫＭＥＬ５細胞をＡＴＣＣ（ａｔｃｃ、ＨＴＢ－７０）から入手し、１０％のＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中、３７℃、５％のＣＯ２で培養した。フローサイトメトリーのための抗体を、以下の供給源から入手した：抗ＭＥＲＴＫ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３６７６０３）、抗ＣＤ８６（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、１２－０８６９－４１）および抗ＣＤ１６３（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、１７－１６３９－４１）。Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ｅＦｌｕｏｒ７８０）を、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒから入手した。ウェスタンブロットのための抗体を、以下の供給源から入手した：抗ＭＥＲＴＫ（ａｂｃａｍ、ａｂ５２９６８）、抗ＡＫＴ（ａｂｃａｍ、ａｂ３２５０５）、抗ＡＫＴ１ホスホＳ４７３（ａｂｃａｍ、ａｂ８１２８３）、抗β－アクチン（Ｓｉｇｍａ、Ａ５３１６）および抗α－チューブリン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ５１６８）。
細胞表面結合アッセイ
Ｚ１０およびヒトＩｇＧ対照（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１－００１－Ａ）を、Ｚｅｎｏｎアロフィコシアニン（ＡＰＣ）ヒトＩｇＧ標識キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｚ２５４５１）を用いて、製造者の指示書に従って、標識した。ＳＫＭＥＬ５細胞を、トリプシンを用いて回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、７０μｍのフィルターを通して濾した。５０，０００個の細胞を、１０％のヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ、Ｈ４５２２）を含有する６０μＬのＦＡＣＳ緩衝液（Ｃａ／Ｍｇ不含ＰＢＳ中、２％のＢＳＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のアジ化ナトリウム）に再懸濁させた。細胞を、ＤＡＰＩ（５００ｎｇ／ｍＬ）およびＡＰＣ標識化Ｚ１０またはＩｇＧ対照で、０．００２～１３．５μｇ／ｍＬ（０．１３～９０ｎＭ）の範囲の濃度で２０分間氷上で染色し、次いで、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、フローサイトメーター分析（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ）に供した。生単一細胞からのＡＰＣシグナルをＦｌｏｗＪｏで分析し、ＭＦＩをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍでプロットした。単一色の対照試料を使用して、補正マトリックスを作出した。
内部移行アッセイ
Ｚ１０およびヒトＩｇＧ対照（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、ｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄ Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ標識化キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｃａｔ番号）を使用して、製造者の指示書に従って、ｐＨ感受性色素であるｐＨｒｏｄｏ Ｒｅｄで標識した。抗体の内部移行を、中性ｐＨで最小であり、リソソームなどの酸性環境下で最大である、ｐＨｒｏｄｏ蛍光を検出するフローサイトメトリーによって決定した。１００万個のＳＫＭＥＬ５を、６ウェルプレートに蒔き、１μｇ／ｍＬのｐＨｒｏｄｏ標識化Ｚ１０またはＩｇＧ対照抗体とともに、１、３、６または２４時間インキュベートした。細胞を、細胞解離緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて回収し、２回洗浄し、７０μｍのフィルターを通して濾し、１０％のヒトＡＢ血清を含有する２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（Ｃａ／Ｍｇ不含ＰＢＳ中、２％のＢＳＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のアジ化ナトリウム）に再懸濁させた。細胞を、逐次的に、ＭＥＲＴＫに対するＢＶ４２１コンジュゲート抗体で氷上で２０分間で染色し、次いで、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ｅＦｌｕｏｒ７８０）で氷上で２０分間染色した。５，０００事象のマルチスペクトル画像を、ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍイメージングフローサイトメーター（Ａｍｉｎｉｓ）によって、各試料について取得した。単一色の対照試料を使用して、補正マトリックスを作出し、得られた補正済みのデータを、ＩＤＥＡソフトウェア（Ａｍｎｉｓ）およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍによって分析した。
ＰＢＭＣ由来細胞の培養およびマクロファージの分化
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーの軟膜から、室温で３０分間の２５０ｘｇでのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Ｓｉｇｍａ、１０７７１）密度勾配遠心分離によって調製した。ＰＢＭＣを含有する中間層を収集し、細胞を、２ｍＭのＥＤＴＡを有するＰＢＳで３回洗浄した。ヒト単球を、ｈｕｍａｎ Ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、１３０－１１７－３３７）を使用して、製造者の指示書に従って、磁気分離によってＰＢＭＣから単離した。２．５×１０５個の単球を、２４ウェルプレートにおいて、１０％のヒトＡＢ血清、１０％のＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、１１８７５０９３）中、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。単球を、１μｇ／ｍＬのＺ１０またはＩｇＧ対照で２４時間処置し、上清をサイトカイン分析のために回収した。Ｍ１またはＭ２マクロファージに分化するために、単球を、それぞれ、ＧＭ－ＣＳＦ（１００ｎｇ／ｍＬ；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、１３０－０９３－８６４）またはＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ；Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、１３０－０９６－４８５）とともに７日間インキュベートし、分化に対するＺ１０の効果を、分化の全時間にわたって、０．３～１μｇ／ｍＬのＺ１０またはＩｇＧの存在下で培養することによって評価した。Ｍ２マクロファージのサイトカイン産生に対する効果を決定するために、培養培地を、分化の５日目に、無血清Ｘ－Ｖｉｖｏ１５培地（Ｌｏｎｚａ、０４－４１８Ｑ）をＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）で置き換え、示される通り、１μｇ／ｍＬのＺ１０またはＩｇＧで４８時間処置した。サイトカインを測定するために、細胞培養上清を収集し、ヒトサイトカイン／ケモカインアレイ（ＨＤ４２）分析のために、Ｅｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カナダに送った。
マクロファージ上の表面分子の分析
極性化マクロファージを、細胞解離緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて回収し、２回洗浄し、７０μｍのフィルターを通して濾し、１０％のヒトＡＢ血清を含有するＦＡＣＳ緩衝液（Ｃａ／Ｍｇ不含ＰＢＳ中、２％のＢＳＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のアジ化ナトリウム）に再懸濁させた。細胞を、ＭＥＲＴＫに対するフルオロフォアコンジュゲート抗体（ＢＶ４２１）、ＣＤ８６（ＰＥ）およびＣＤ１６３（ＡＰＣ）で氷上で２０分間、次いで、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ｅＦｌｕｏｒ７８０）で氷上で２０分間染色した。蛍光シグナルを、フローサイトメーター（ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏおよびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍで分析した。単一色の対照試料を使用して、補正マトリックスを作出した。
増殖アッセイ
ＳＫＭＥＬ５細胞を、０．１、０．３、０．９、２．７、８．１および２４．３μｇ／ｍＬの濃度でＺ１０またはＩｇＧ対照を有する９６ウェルアッセイプレートに、２，０００個細胞／ウェルで播種した。７２時間の培養後、細胞増殖を、ＷＳＴ－８細胞増殖アッセイキット（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、１００１０１９９）によって決定した。細胞を、ＷＳＴ－８混合物とともに１時間インキュベートし、光学密度を、ＧｌｏＭａｘマルチ検出プレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して４５０ｎｍで読み取った。細胞なしの対照ウェルからのバックグラウンド値を減算し、３連のウェルの平均を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してプロットした。
コロニー形成アッセイ
ＳＫＭＥＬ５細胞を、６ウェルプレートに、５００個細胞／ウェルで蒔いた。細胞を、０．３もしくは１μｇ／ｍＬのＩｇＧ対照またはＺ１０で、３連で処置した。培養の７日後、培地を、同じ濃度の物を含有する新たな培地と交換した。細胞を１２日目に染色した。ウェルを、最初にＰＢＳで１回洗浄し、次いで、２ｍＬのＰＢＳ中の６％のグルタルアルデヒド（ｖ／ｖ）、０．５％のクリスタルバイオレット（ｗ／ｖ）で室温で３０分間染色した。次いで、プレートを、水道水で満たされた容器に浸漬することによって、２回すすいだ。次いで、それらを室温で乾燥させた。プレートが完全に乾燥したら、５０個細胞よりも多くのコロニーの数を、顕微鏡観察によってカウントした。結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、棒グラフとしてプロットした。
ウェスタンブロット
ＳＫＭＥＬ５細胞を、６ウェルプレートにおいて、３×１０５個細胞／ウェルで終夜培養し、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３および１０μｇ／ｍＬのＺ１０で２４時間、または０．３μｇ／ｍＬのＺ１０で１０分、３０分、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間および７２時間、処置した。ＧＡＳ６刺激研究のために、ＳＫＭＥＬ５細胞を、２４ウェルプレートにおいて、１×１０５個細胞／ウェルで終夜培養し、０．３μｇ／ｍＬのＺ１０またはＩｇＧ対照で２時間処置し、次いで、２００ｎＭのＧＡＳ６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、８８５－ＧＳＢ－０５０）で１０分間刺激した。
全細胞溶解物を、プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ、４６９３１５９００１）およびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ、Ｐ２８５０およびＰ５７２６）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ、２０－１８８）中で調製した。タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、２３２２５）を使用して測定した。等しいタンパク質量を、４～２０％のトリス－グリシンゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、４５６１０９４）にロードし、次いで、ＰＶＤＦ膜（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、１６２０１７７）に移した。５％のＢＳＡでブロッキングした後、膜を、一次抗体で、室温で１時間プロービングした。結合した抗体を、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｓｉｇｍａ、ＡＰ１８７ＰおよびＡＰ１８１Ｐ）で検出し、ＣｈｅｍｉＤｏｃイメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、ＥＣＬウェスタンブロッティング基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３２１０６）によって可視化した。
ｈＭＥＲ、ｍＭＥＲ、ｈＡｘｌおよびｈＴｙｒｏ３の競合ＥＬＩＳＡによる親和性測定
９６ウェルのＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ平底プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、４４－２４０４－２１）を、０．０１ｕｇ／ｍＬのｈＭＥＲ組換えタンパク質（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ、８９１－ＭＲ－１００）で４℃で終夜コーティングした。プレートを、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、ＰＢＳ中の３％の脱脂粉乳で２時間ブロッキングした。
飽和ステップの間、抗原のｈＡｘｌ（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１５４－ＡＬ－１００）、ｈＴｙｒｏ３（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ、８５９－ＤＫ－１００）またはｍＭＥＲ（ＲｎＤ Ｓｙｓｔｅｍｓ、５９１－ＭＲ－１００）の希釈物を、最高濃度として５０ｎＭで調製し、ＰＢＳ中１：１～０．０９８ｎＭに連続希釈した。抗原の各希釈物を、１５０ｕＬの６ｎＭのＭＥＲＴＫ（ｚ１０）抗体とともに室温で１時間インキュベートした。次いで、飽和したプレートを、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、抗原－抗体混合物を、２連でウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、ＰＢＳ中の１：３０００の希釈で、抗ヒトアルカリホスファターゼ抗体（Ｓｉｇｍａ、ＳＡＢ３７０１２４８）とともに室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄した後、１００ｕＬのアルカリホスファターゼイエロー（ｐＮＰＰ）液体基質システム（Ｓｉｇｍａ、Ｐ７９９８）を、各ウェルに添加し、室温で７０分間インキュベートした。プレートを、Ｐｒｏｍｅｇａ製のＧｌｏｍａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒシステムを使用して、プレートの不一致を補正するために４０５ｎｍおよび５７０ｎｍで読み取った。吸光度を、抗原濃度の関数としてプロットし、Ｋｄを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７．０ｃを使用して計算した。
６．２．２．結果
ＭＥＲＴＫ発現黒色腫細胞（ＳＫＭＥＬ５）を、のＡＰＣ標識化ｚ１０抗体とともにその濃度を上げながら（０．００２～１３．５μｇ／ｍＬ、（０．０１３～９０ｎＭ））インキュベートし、次いで、ＡＰＣ ＭＦＩについてフローサイトメトリーによって評価した。図３Ａに示されるように、ｚ１０抗体は、高い親和性（ＥＣ５０＝６．７ｎＭ）でヒトＭＥＲＴＫ発現黒色腫細胞に結合する。ＳＰＲ測定も、ｚ１０抗体が、ヒトＭＥＲＴＫに対して高い親和性（ＫＤ＝３ｎＭ）を有することを実証する。
図４Ａ～４Ｄに示されるように、ｚ１０抗体は、ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合し、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３またはマウスＭＥＲＴＫの細胞外ドメインに結合しない。ｚ１０抗体（０．６ｎＭ）とヒトＭＥＲＴＫ、ヒトＡｘｌ、ヒトＴｙｒｏ３およびマウスＭＥＲＴＫ細胞外ドメイン（５０ｎＭ～０．１ｎＭ）の間の平衡を、固相の抗原（ヒトＭＥＲＴＫ）に結合する前に確立した。結合したｚ１０抗体を、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）二次抗体で標識し、ＥＬＩＳＡのために発色させた。
ｚ１０抗体は、がん細胞のヒトＭＥＲＴＫ分解を誘導することを示した（図５Ａ～５Ｂを参照されたい）。特に、ヒトＭＥＲＴＫの実質的な分解が、ＳＫＭＥＬ５細胞において、０、０．０３、０．１、０．３および１μｇ／ｍＬの濃度のｚ１０抗体を使用して、２４時間後に観察された。さらに、ＳＫＭＥＬ５細胞におけるヒトＭＥＲＴＫの実質的な分解が、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体を使用して、４時間後に観察された。
加えて、ｚ１０抗体が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したＭ２マクロファージのヒトＭＥＲＴＫの分解を誘導することを実証した（図６Ａ～６Ｂを参照されたい）。ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したＭ２マクロファージを０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体で処置したおよそ４時間後、ヒトＭＥＲＴＫの５０％を超える減少を、ウェスタンブロット分析によって検出した（図６Ａ～６Ｂを参照されたい）。ｉｎ ｖｉｔｒｏで分化したＭ２マクロファージにおけるヒトＭＥＲＴＫのさらに大きな減少が、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体での処置の８時間後に検出された（図６Ａ～６Ｂを参照されたい）。
ｚ１０抗体は、ヒトＭＥＲＴＫの内部移行およびその後のリソソームへの輸送を介して、ＳＫＭＥＬ５ヒトがん細胞上のヒトＭＥＲＴＫを分解すると思われる。図７Ａ～７Ｂに示されるように、ＳＫＭＥＬ５細胞のｚ１０抗体とのインキュベーションの２４時間後、大部分のＭＥＲＴＫシグナルはリソソーム中で見出され、最小限のシグナルのみ（＜２０％）が、細胞表面上で検出される。
ｚ１０抗体は、ヒトＭＥＲＴＫ発現ＳＫＭＥＬ５細胞におけるＧａｓ６が誘導するＡＫＴのリン酸化を防止する（図８Ａ～８Ｃを参照されたい）。特に、Ｇａｓ６によって誘導されるＡＫＴのリン酸化は、ｚ１０抗体で細胞を処置することによって遮断される。ＳＫＭＥＬ５細胞を、０．３μｇ／ｍＬのｚ１０抗体またはＩｇＧ対照とともに２時間インキュベートし、続いて２００ｎＭで１０分間のＧａｓ６処置または緩衝液の処置を行った。図８Ａ～８Ｃに示されるように、Ｇａｓ６とのインキュベーション前のＳＫＭＥＬ５細胞のｚ１０抗体とのインキュベーションは、Ｇａｓ６によって誘導されるＡＫＴのリン酸化のレベルを低減する。図８Ｂは、総溶解物中のヒトＭＥＲＴＫレベルが、ｚ１０抗体での処置後に減少したことを示す。
図９Ａ～９Ｄに示されるように、ｚ１０抗体は、がん細胞のコロニー形成を阻害する。５００個のＳＫＭＥＬ５細胞を、対照ＩｇＧまたはｚ１０抗体（０．３および１μｇ／ｍＬ）の存在下、６ウェルプレートで１２日間培養した。５０個細胞を超えるコロニーをカウントした。ＳＫＭＥＬ５細胞がｚ１０抗体とともにインキュベートされた場合にカウントされたコロニーの数は、細胞が対照ＩｇＧとともにインキュベートされた場合にカウントされたコロニーと比べて大幅に低減された。
ｚ１０抗体は、Ｍ２マクロファージおよびＣＤ１４＋単球においてサイトカイン応答を誘導した（図１０を参照されたい）。特に、Ｍ２マクロファージを、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧとともに４８時間インキュベートし、ある特定のサイトカインの発現を評価した。ＣＤ１４＋単球を、１μｇ／ｍＬのｚ１０抗体または対照ＩｇＧとともに２４時間インキュベートし、ある特定のサイトカインの発現を評価した。対照ＩｇＧと比べて、ｚ１０抗体は、Ｍ２マクロファージおよびＣＤ１４＋単球によるある特定のサイトカインの発現の増加を含む（図１０を参照されたい）。Ｍ２マクロファージは、抗腫瘍応答を抑制することが示されており（J. Immunol. Cancer 5(1):53 (2017)を参照されたい）、ヒトＭＥＲＴＫ発現は、主にＭ２マクロファージに制限される（Crittenden et al. Oncotarget. 2016; 7:78653-78666）。したがって、ｚ１０抗体は、がん細胞における間接的な抗がん効果を有し得、ｚ１０抗体を毒物のがん細胞への送達のために有用にする。加えて、ヒトＭＥＲＴＫは、さまざまながん細胞系によって発現されることが見出されている（ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ［アクセス日２０１９年２月２６日］から利用可能なＴｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＡｔｌａｓにおけるＭＥＲＴＫについてのエントリーを参照されたい）。したがって、ヒトＭＥＲＴＫに対する高親和性および特異性を有するｚ１０抗体は、免疫細胞によるサイトカイン応答を誘導し、がん細胞によるコロニー形成を阻害し、さまざまながんを処置するための治療可能性を有する。
加えて、抗体ｚ１１およびｚ１３のＥＣ５０を、ｚ１０について上記のセクション６．２に記載のものと同様の細胞ベースのアッセイを使用して決定した。ｚ１１抗体は、ヒトＭＥＲＴＫに対して７．９ｎＭのＥＣ５０を有するが、ｚ１３抗体は、ヒトＭＥＲＴＫに対して７．６ｎＭのＥＣ５０を有する。
６．３．
（実施例３）
がん細胞生存率および生存に対するｚ１０の効果
６．３．１．材料および方法
生存率アッセイ
１０００個のＳＫＭＥＬ５細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞を９６ウェルプレートのウェルに蒔き、３および３０μｇ／ｍＬのＩｇＧ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＢＥ００９２）またはｚ１０のいずれかを含有する１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補充した１００μＬのＲＰＭＩ－１６４０培地（ＡＴＣＣ）中で培養した。４日目（ＳＫＭＥＬ５）または６日目（ＲＰＭＩ８２２６）に、１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ２．０細胞生存率アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を各ウェルに添加し、１０分間インキュベートし、発光シグナルをＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて検出した。２連のウェルからの平均相対ルミノメーター単位（ＲＬＵ）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてプロットした。
転移アッセイ
ルシフェラーゼレポーター遺伝子（Minn et al., Nature. 2005 July 28; 436(7050): 518-524）を保有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２ ＴＲトリプルネガティブ乳がん細胞（Ｓｏｈａｉｌ Ｔａｖａｚｏｉｅ教授、ロックフェラー大学、ＮＹＣから受領）を、Ｄ１０Ｆ培養培地（ＤＭＥＭ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１１９６５－０９２）、１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｆ４１３５－５００ｍｌ）、１％のＮＥＡＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、１１１４０－０５０）、１％のピルビン酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ、１１３６０－０７０）、１％のＨｅｐｅｓ（Ｆｉｓｈｅｒ、１５６３０－０８０）および１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｆｉｓｈｅｒ、１５１４０－１２２）中で培養した。注入の日に、細胞を、ＤＰＢＳ（Ｆｉｓｈｅｒ、１４１９０－１４４）で洗浄し、１５ｃｍの細胞培養皿あたり３ｍＬの０．２５％のトリプシン－ＥＤＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、２５２００－０５６）を使用して、３７℃で５分間、細胞培養インキュベーターで脱離した。脱離した細胞を、５ｍＬのＤ１０Ｆに再懸濁させ、血球計を使用してカウントし、室温で５分間、２２０ｘｇで遠心分離した。ペレットを、５００，０００個細胞／ｍＬの濃度でＤＰＢＳに再懸濁させた。８週齢のＮＳＧ雌マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ、００５５５７）を、小動物太陽灯（Ｍｏｒｇａｎｖｉｌｌｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＨＬ０１００）に２～３分間曝露した。１００μｌの細胞懸濁液（５０，０００個細胞）を８週齢の雌ＮＳＧマウスの拡張させた外側尾静脈に注射した。ＩｇＧアイソタイプ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＢＥ００９２）またはｚ１０を、０．９％の無菌ＮａＣｌ溶液中で調製し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２細胞注入の日に開始して３．５日ごとにｉ．ｐ．投薬した。ＩｇＧアイソタイプ対照を１０ｍｇ／ｋｇで投薬し、ｚ１０を１、３、１０および３０ｍｇ／ｋｇで投薬した。肺コロニー形成を、１５０ｍｇ／ｋｇのＤ－ルシフェリン（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）のｉ．ｐ．投与の際にＩＶＩＳイメージングを使用してモニターした。各時点についての発光データを、０日目または腫瘍注入の日に対して正規化し、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用してプロットした。片側マンホイットニーＵ検定を使用して、生物発光イメージングによって測定される転移の有意性を評価した。
６．３．２．結果
ＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫またはＳＫＭＥＬ５黒色腫細胞を、それぞれ、ＩｇＧ対照またはｚ１０のいずれかの存在下で培養した。６日目（ＲＰＭＩ８２２６）または４日目（ＳＫＭｅｌ５）に、生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ２．０細胞生存率アッセイを使用して評価した。図１１Ａおよび１１Ｂは、ｚ１０が、それぞれＲＰＭｉ８２２６細胞およびＳＫＭＥＬ５細胞における細胞生存を阻害することを示す。
５０，０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２ ＴＮＢＣ細胞を、ＮＳＧマウスの尾静脈に注射した。処置を、研究期間の間、２回／週のｉ．ｐ．で、腫瘍細胞接種の日に開始した。図１２Ａは、ｚ１０で処置されたマウスにおける腫瘍の低減を示す。データは、図１２Ｂにおいて定量化される。
６．４．
（実施例４）
ヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートの活性
この実施例は、ヒト化抗ＭＥＲＴＫ抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートが、ＭＥＲＴＫの内部移行および分解をもたらし、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでがん細胞の成長を阻害することを実証する。
６．４．１．材料および方法
ＩｇＧ１－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（本明細書において「ＩｇＧ－ＭＭＡＥ」とも称する）の合成
ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ：６３１７．７μＬのＩｇＧ１アイソタイプ対照（１１．０８ｍｇ／ｍＬ、ＷｕＸｉ、５６２）を、１２．６ｍＬの最終体積で、４０ｍＭのＰＢ ｐＨ７．０溶液（Ｓｉｇｍａ、１０１９４３３８０および１０１９００５１２）中の４３２．６μＬのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）（２．５ｍＭ、Ｓｉｇｍａ、１００２０６８５８８）とともに、穏やかな回転で、３７℃で３時間インキュベートした。次いで、ＤＭＡ中の８３０．５μＬのジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）（Ｓｉｇｍａ、ＡＲＫ２１９０）および５６９．５μＬのｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（１０ｍｇ／ｍＬ、Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ、ＬＮ１０１－００６）を、１０％ｖ／ｖの最終ＤＭＡ含有量およびマレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル－モノメチルアウリスタチンＥ（ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ）／ｍＡｂの比が９で添加した。反応混合物を、２２℃で１時間、穏やかな回転でインキュベートした。
反応の間、４０ＫＤのスピン脱塩カラムを、ＰＢＳ ｐＨ７．２で平衡化した。この脱塩カラムを、最終産物の緩衝液交換および精製のために使用した。産物を、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．５中で保管した。この産物のタンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって、ＥＣ２８０を１．６１として決定した。産物の純度および凝集レベルを、下記の表３５に示す条件を用いるサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって決定した。この産物の凝集レベルは０．５７％であり、産物の単量体純度は９９．４３％であった。産物の薬物対抗体比（ＤＡＲ）をＨＩＣ－ＨＰＬＣで４．０６として測定した。
ｚ１０－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（本明細書において「ｚ１０－ＭＭＡＥ」とも称する）の合成
９００２．８μＬのｚ１０（７．２２ｍｇ／ｍＬ）を、１１．７ｍＬの最終体積で、４０ｍＭのＰＢ ｐＨ７．０溶液中の４１０．５３５μＬのＴＣＥＰ（２．５ｍＭ）とともに、３７℃で３時間、穏やかな回転でインキュベートした。次いで、７７１．２μＬのＤＭＡおよびＤＭＡ中の５２８．７６μＬのｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（１０ｍｇ／ｍＬ）を、１０％ｖ／ｖの最終ＤＭＡ含有量およびｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ／ｍＡｂの比が９で添加した。反応混合物を、４℃で２２時間、穏やかな回転でインキュベートした。反応の間、４０ＫＤのスピン脱塩カラムを、ＰＢＳ ｐＨ７．２で平衡化した。この脱塩カラムを、緩衝液交換および精製のために使用した。産物を、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ５．５中で保管した。この産物のタンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって、ＥＣ２８０を１．５３として決定した。産物の純度および凝集レベルを、下記の表３５に示す条件を用いるサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって決定した。産物の単量体純度は１００％であった。産物のＤＡＲを、ＨＩＣ－ＨＰＬＣで３．８８として決定した。
ＩｇＧ１－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（本明細書において「ＩｇＧ－ＳＮ－３８」とも称する）の合成
６２７２μＬのＩｇＧ１アイソタイプ対照（１１．１６ｍｇ／ｍＬ、ＷｕＸｉ、５６２）を、１２．６ｍＬの総体積で、ＰＢ ｐＨ７．０溶液中８当量のＴＣＥＰ（７６９μＬ、５ｍＭ）とともにインキュベートした。反応物を、３７℃で３時間、穏やかな回転でインキュベートした。その後、反応混合物を氷浴上で４℃に冷却し、続いて、３２７μＬのＤＭＡおよびＤＭＡ中の１０７３μＬのＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（１０ｍｇ／ｍＬ、Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ、ＬＮ２９１－６０）を添加した。混合物を４℃で１時間保持した。反応の間、４０ＫＤのスピン脱塩カラムを、酢酸ｐＨ６．０で平衡化した。この脱塩カラムを、最終産物の緩衝液交換および精製のために使用した。産物を、２０ｍＭの酢酸ｐＨ６．０中で保管した。この産物のタンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸光度および７００ｎｍの参照波長によって、ＥＣ２８０を１．８８として決定した。産物の凝集および純度を、下記の表３６に示す条件を用いるＳＥＣ－ＨＰＬＣで決定した。この産物の凝集レベルは１．１４％であり、純度は９９．１４％であった。産物のＤＡＲを、ＬＣ－ＭＳで７．７８として決定した。
ｚ１０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（本明細書において「ｚ１０－ＳＮ－３８」とも称する）の合成
９００２μＬのｚ１０（７．２２ｍｇ／ｍＬ）を、１１．７ｍＬの総体積で、ＰＢ ｐＨ７．０溶液中８当量のＴＣＥＰ（７１４μＬ、５ｍＭ）とともにインキュベートした。反応混合物を、３７℃で３時間、穏やかな回転でインキュベートした。その後、反応混合物を氷浴上で４℃に冷却し、続いて、９０μＬのＤＭＡおよびＤＭＡ中の１２１０μＬのＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（１０ｍｇ／ｍｌ、Ｌｅｖｅｎａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ、ＬＮ２９１－６０）を添加した。混合物を４℃で１時間保持した。反応の間、４０ＫＤのスピン脱塩カラムを、酢酸ｐＨ６．０で平衡化した。この脱塩カラムを、最終産物の緩衝液交換および精製のために使用した。産物を、２０ｍＭの酢酸ｐＨ６．０中で保管した。この産物のタンパク質濃度を、２８０ｎｍでの吸光度によって、ＥＣ２８０を１．８２として決定した。産物の単量体純度を、下記の表３６に示す条件を用いるＳＥＣ－ＨＰＬＣで決定した。したがって、この産物の凝集レベルは１．１４％であり、産物の単量体純度は９８．８６％である。産物のＤＡＲを、ＬＣ－ＭＳで７．４９として決定した。
純度および凝集レベルの決定
表３５および３６は、抗体－薬物コンジュゲートの精製および凝集を決定するＳＥＣ－ＨＰＬＣのパラメーターを提示する。
Figure 2023054356000054
Figure 2023054356000055
内部移行アッセイ
ＩｇＧ対照（Ｒ＆Ｄ １－００１－Ａ）、ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８を、ｐＨｒｏｄｏ ｉＦＬ Ｒｅｄマイクロスケールタンパク質標識化キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ｐ３６０１４）を使用して、製造者の指示書に従って、ｐＨ感受性色素であるｐＨｒｏｄｏ ｉＦＬ Ｒｅｄで標識した。抗体の内部移行を、中性ｐＨで最小であり、リソソームなどの酸性環境下で最大である、ｐＨｒｏｄｏ蛍光を検出するフローサイトメトリーによって決定した。
ウェルあたり１０万個のＳＫＭＥＬ５細胞を、２４ウェルプレートにおいて、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補充した１ｍＬのＲＰＭＩ－１６４０培地（ＡＴＣＣ）に蒔き、それぞれ、１０ｎＭのｐＨｒｏｄｏ標識化ＩｇＧ、ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８とともに、３または６時間インキュベートした。細胞を、トリプシン処理し、７０μｍのフィルターを通して濾し、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸブロッキング試薬（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４２２３０１）を含有するＦＡＣＳ緩衝液（Ｃａ／Ｍｇ不含ＰＢＳ中、２％のＢＳＡ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のアジ化ナトリウム）に再懸濁させた。細胞を、逐次的に、表面のＭＥＲＴＫレベルを検出するためのＭＥＲＴＫに対するＢＶ－４２１コンジュゲート抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３６７６０３）で氷上で２０分間で染色し、次いで、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ｅＦｌｕｏｒ７８０）（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ、６５－０８６５－１４）で氷上で２０分間染色した。
ｐＨｒｏｄｏおよびＢＶ－４２１の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析し、補正済みのデータを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてプロットした。ｐＨｒｏｄｏのＭＦＩを、ｐＨｒｏｄｏ標識化ＩｇＧ、ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ３８の標識化度（ＤＯＬ）で正規化した。ＤＯＬを、製造者によって提供された式に従って、標識後のタンパク質のＡ２８０およびＡ５６０の吸光度から計算した。
がん細胞系の生存率アッセイ
ウェルあたり２００個のＳＫＭＥＬ５細胞または１０００個のＲＰＭＩ８２２６細胞を、９６ウェルプレートのウェルに蒔き、０．０１５、０．０４６、０．１３７、０．４１２、１．２４、３．７０、１１．１、３３．３および１００ｎＭのＩｇＧ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＢＥ００９２）、ＩｇＧ１－ＭＭＡＥ、ｚ１０－ＭＭＡＥ、ＩｇＧ１－ＳＮ－３８またはｚ１０－ＳＮ－３８のいずれかをそれぞれ含有する、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補充した１００μＬのＲＰＭＩ－１６４０培地（ＡＴＣＣ）中で培養した。７日目に、１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ２．０細胞生存率アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を各ウェルに添加し、１０分間インキュベートし、発光シグナルをＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて検出した。２連のウェルからの平均相対ルミノメーター単位（ＲＬＵ）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてプロットした。
マクロファージの生存率アッセイ
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーの軟膜から、室温で３０分間の２５０ｘｇでのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ－１０７７（Ｓｉｇｍａ、１０７７１）密度勾配遠心分離によって調製した。ＰＢＭＣを含有する中間層を収集し、細胞を、ＰＢＳ／２ｍＭのＥＤＴＡで３回洗浄した。ヒト単球を、ｈｕｍａｎ Ｃｌａｓｓｉｃａｌ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、１３０－１１７－３３７）を使用して、製造者の指示書に従って、磁気分離によってＰＢＭＣから単離した。ウェルあたり８万個の単球を、９６ウェルプレートにおいて、１５０μＬのＰＢＭＣ培地（１０％のヒトＡＢ血清、１０％のＦＢＳ、Ｌ－グルタミン、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、１１８７５０９３））中、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。単球を、ＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、７６６１０２）またはＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、５７４８０４）で８日間処置して、Ｍ１またはＭ２マクロファージにそれぞれ分化させた。次いで、分化したマクロファージを、分化培地を含有する１００μＬのＧＭ－ＣＳＦまたはＭ－ＣＳＦ中、ＩｇＧ対照（２または２０ｎＭ；ＢｉｏＸＣｅｌｌ、ＢＥ００９２）、ｚ１０（２または２０ｎＭ）、ＩｇＧ１－ＭＭＡＥ（１または１０ｎＭ）、ｚ１０－ＭＭＡＥ（１または１０ｎＭ）、ＩｇＧ１－ＳＮ－３８（０．０３または０．３ｎＭ）、ｚ１０－ＳＮ－３８（０．０３または０．３ｎＭ）または１μＭの小分子ＭＥＲＴＫ阻害剤のＵＮＣ－１０６２（Ａｏｂｉｏｕｓ、ＡＯＢ４４８８）で処置した。４日目に、１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ２．０細胞生存率アッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４１）を各ウェルに添加し、１０分間インキュベートし、発光シグナルをＧｌｏＭａｘ Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて検出した。２連のウェルからの平均相対ルミノメーター単位（ＲＬＵ）をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてプロットした。
ウェスタンブロット
ＳＫＭＥＬ５細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞を、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地（ＡＴＣＣ）中で培養および維持した。全細胞溶解物を、プロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ、４６９３１５９００１）およびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ、Ｐ２８５０およびＰ５７２６）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ、２０－１８８）中で調製した。タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、２３２２５）を使用して測定した。等しいタンパク質量（３０μｇ）を、４～２０％のトリス－グリシンゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、４５６１０９４）にロードし、次いで、ＰＶＤＦ膜（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、１６２０１７７）に移した。５％のＢＳＡでブロッキングした後、膜を、１％のＢＳＡを有するＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．１％のＴｗｅｅｎ－２０）中、一次抗体で、室温で１時間プロービングした。１％のＢＳＡを有するＰＢＳＴ中での３回の洗浄ステップの後、ＨＲＰコンジュゲート二次抗体を、１％のＢＳＡを有するＰＢＳＴに添加し、１時間インキュベートした（Ｓｉｇｍａ、ＡＰ１８７ＰおよびＡＰ１８１Ｐ）。ブロットを、ＰＢＳＴで洗浄し、ＣｈｅｍｉＤｏｃイメージングシステム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、ＥＣＬウェスタンブロッティング基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３２１０６）を使用して発色させた。シグナルを、内部対照として使用したチューブリンに対して正規化した。以下の一次抗体をウェスタンブロットアッセイにおいて使用した；ＭＥＲＴＫ（ａｂｃａｍ、ａｂ５２９６８）、ホスホＭＥＲＴＫ（ａｂｃａｍ、ａｂ１４９２１）、ＡＸＬ（ＣＳＴ、８６６１）、Ｔｙｒｏ３（ＣＳＴ、５５８５）、ＡＫＴ（ａｂｃａｍ、ａｂ３２５０５）、ホスホＡＫＴ（ａｂｃａｍ、ａｂ８１２８３）、チューブリン（Ｓｉｇｍａ、Ｔ５１６８）。
転移アッセイ
ルシフェラーゼレポーター遺伝子（Minn et al., Nature. 2005 July 28; 436(7050): 518-524）を保有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２ ＴＲトリプルネガティブ乳がん細胞（Ｓｏｈａｉｌ Ｔａｖａｚｏｉｅ教授、ロックフェラー大学、ＮＹＣから受領）を、Ｄ１０Ｆ培養培地（ＤＭＥＭ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、１１９６５－０９２）、１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｆ４１３５－５００ｍｌ）、１％のＮＥＡＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、１１１４０－０５０）、１％のピルビン酸ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ、１１３６０－０７０）、１％のＨｅｐｅｓ（Ｆｉｓｈｅｒ、１５６３０－０８０）および１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｆｉｓｈｅｒ、１５１４０－１２２）中で培養した。注入の日に、細胞を、ＤＰＢＳ（Ｆｉｓｈｅｒ、１４１９０－１４４）で洗浄し、１５ｃｍの細胞培養皿あたり３ｍＬの０．２５％のトリプシン－ＥＤＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、２５２００－０５６）を使用して、３７℃で５分間、細胞培養インキュベーターで脱離した。脱離した細胞を、５ｍＬのＤ１０Ｆに再懸濁させ、血球計を使用してカウントし、室温で５分間、２２０ｘｇで遠心分離した。ペレットを、５００，０００個細胞／ｍＬの濃度でＤＰＢＳに再懸濁させた。８週齢のＮＳＧ雌マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ、００５５５７）を、小動物太陽灯（Ｍｏｒｇａｎｖｉｌｌｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＨＬ０１００）に２～３分間曝露した。１００μＬの細胞懸濁液（５０，０００個細胞）を８週齢の雌ＮＳＧマウスの拡張させた外側尾静脈に注射した。ＩｇＧ－ＭＭＡＥアイソタイプ対照およびｚ１０－ＭＭＡＥを、無菌ＰＢＳ中で調製し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ ＬＭ２細胞注入の後、０、３、１０、１８、３３および４１日目にｉ．ｐ．投与した。ＩｇＧ－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＭＭＡＥを、最初３ｍｇ／ｋｇで投薬し、１８日目に２ｍｇ／ｋｇに、３３日目に１ｍｇ／ｋｇに低減した。
肺コロニー形成を、１５０ｍｇ／ｋｇのＤ－ルシフェリン（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）のｉ．ｐ．投与の際にＩＶＩＳイメージングを使用してモニターした。各時点についての発光データを、０日目または腫瘍注入の日に対して正規化し、Ｐｒｉｓｍ（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用してプロットした。片側マンホイットニーＵ検定を使用して、生物発光イメージングによって測定される転移の有意性を評価した。
競合的ＥＬＩＳＡによる親和性測定
９６ウェルのＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐ平底プレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、４４－２４０４－２１）を、０．０１μｇ／ｍＬのｈＭＥＲ組換えタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、８９１－ＭＲ－１００）で４℃で終夜コーティングした。プレートを、ＰＢＳ０．１％Ｔｗｅｅｎで３回洗浄し、ＰＢＳ中の３％の脱脂粉乳で２時間ブロッキングした。プレートのプレインキュベーションの間、さまざまな濃度（５０、２５、１２．５、６．２５、３．１３、１．５６、０．７８、０．３９、０．２０、０．１０、０．０５および０ｎＭ）のＰＢＳ中のｈＭＥＲ組換えタンパク質を、それぞれ０．３ｎＭのｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８で、室温で１時間平衡化した。次いで、ｈＭＥＲでコーティングしたプレートを、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．１％のＴｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄し、抗原－抗体混合物を、２連でウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳＴで３回洗浄し、ＰＢＳ中の１：３０００の希釈で、アルカリホスファターゼコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ、ＳＡＢ３７０１２４８）とともに室温で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、１００μＬのアルカリホスファターゼイエロー（ｐＮＰＰ）液体基質（Ｓｉｇｍａ、Ｐ７９９８）を、各ウェルに添加し、室温で７０分間インキュベートした。ＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒマイクロプレートリーダー（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、プレートの４０５ｎｍおよび５６０ｎｍで吸光度を測定した。４０５ｎｍの吸光度を、５６０ｎｍの吸光度で正規化した。２連のウェルからの平均値を、抗原濃度の関数としてプロットし、Ｋｄを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７．０ｃによる非線形回帰分析によって決定した。
６．４．２．結果
Ａｂ（抗体タンパク質）がそれぞれｚ１０および対照ＩｇＧである図１３Ａに示される構造を有するｚ１０－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ｚ１０－ＭＭＡＥ）およびＩｇＧ１－ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ（ＩｇＧ－ＭＭＡＥ）を合成した。Ａｂ（抗体タンパク質）がそれぞれｚ１０および対照ＩｇＧである図１３Ｂに示される構造を有するｚ１０－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（ｚ１０－ＳＮ－３８）およびＩｇＧ１－ＣＬ２Ａ－ＳＮ－３８（ＩｇＧ－ＳＮ－３８）を合成した。
抗体－薬物コンジュゲートの純度を、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって評価した。図１４Ａおよび１４Ｂは、それぞれｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８についてのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果を示す。両方のコンジュゲートについて、まったく凝集は測定されなかったか、または最小限の凝集が測定され、高純度のコンジュゲートを示した。
抗体－薬物コンジュゲートおよびｚ１０の結合親和性を評価するために、ｈＭＥＲ組換えタンパク質（５０ｎＭ～０．０５ｎＭ）を、それぞれ、０．３ｎＭのｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥまたはｚ１０－ＳＮ－３８で平衡化した後、ｈＭＥＲ組換えタンパク質で事前にコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに添加した。抗体の結合を、ＡＰコンジュゲート抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用して検出し、ＧｌｏＭａｘマイクロプレートリーダーを使用して発色させた。図１５は、ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８が、それぞれ０．１７ｎＭ、０．０８１ｎＭおよび０．０２１ｎＭのＫｄ値で、ヒトＭＥＲに結合することを示す。
ＳＫＭｅｌ５細胞を、６．７ｎＭのｐＨｒｏｄｏ標識化ｚ１０、ｚ１０－ＭＭＡＥ、ｚ１０－ＳＮ－３８またはＩｇＧ対照とともにインキュベートした。表面のＭＥＲＴＫを、ＢＶ４２１コンジュゲートＭＥＲＴＫ抗体で染色した。結合をフローサイトメトリーによって測定した。図１６Ａに示されるデータは、ｚ１０、ならびにｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８コンジュゲートがＭＥＲＴＫの内部移行を誘導することを実証する。図１６Ｂに示されるデータは、ｚ１０、ならびにｚ１０－ＭＭＡＥおよびｚ１０－ＳＮ－３８コンジュゲートがＭＥＲＴＫの分解を誘導することを実証する。
ＳＫＭｅｌ５細胞またはＲＰＭＩ８２２６細胞を、ＩｇＧ対照、ＩｇＧ－ＭＭＡＥ、ｚ１０－ＭＭＡＥ、ＩｇＧ－ＳＮ－３８またはｚ１０－ＳＮ－３８とともに７日間インキュベートした。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏを使用して測定した。図１７Ａおよび１７Ｂに示されるデータは、ｚ１０－ＭＭＡＥが、ＳＫＭｅｌ５黒色腫細胞およびＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞の生存率を、それぞれ、ＩｇＧ－ＭＭＡＥまたはＩｇＧ対照とのインキュベーション後のこれらの細胞の生存率と比較して減少させたことを実証する。図１７Ｃおよび１７Ｄに示されるデータは、ｚ１０－ＳＮ－３８が、ＳＫＭｅｌ５黒色腫細胞およびＲＰＭＩ８２２６多発性骨髄腫細胞の生存率を、それぞれ、ＩｇＧ－ＳＮ－３８またはＩｇＧ対照とともにインキュベートされたそれらの細胞の生存率と比較して減少させたことを実証する。図１７Ｅは、ＳＫＭｅｌ５細胞およびＲＰＭＩ８２２６細胞から調製された全細胞溶解物中のＭＥＲＴＫ、ホスホＭＥＲＴＫ、ＡＸＬ、Ｔｙｒｏ３、ＡＫＴ、ホスホＡＫＴおよびチューブリンの発現を示す。
５０，０００個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＬＭ２ ＴＮＢＣ細胞を、ＮＳＧマウスの尾静脈に注射した。処置を、腫瘍細胞接種の日に開始し、肺転移性コロニー形成を、生物発光イメージングによってモニターした。図１８Ａは、ｚ１０－ＭＭＡＥが、ｉｎ ｖｉｖｏでＩｇＧ－ＭＭＡＥと比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１トリプルネガティブ乳がん細胞の肺コロニー形成を阻害することを示す。データは、図１８Ｂにおいて定量化される。
Ｍ２マクロファージを、８×１０４個の単球をＰＢＭＣ培地中でＭ－ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）とともに８日間培養することによって分化させた。Ｍ１マクロファージを、８×１０４個の単球をＰＢＭＣ培地中でＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）とともに５日間培養することによって分化させ、次いで、ＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＦＮｇ（２０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ－６（２０ｎｇ／ｍＬ）およびＬＰＳ（１０ｐｇ／ｍＬ）とともにさらに３日間培養した。Ｍ２およびＭ１マクロファージを、分化培地中、示された抗体またはＡＤＣで４日間処置し、生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ２．０細胞生存率アッセイを使用して評価した。図１９Ａに示されるデータは、ｚ１０も、ｚ１０－ＭＭＡＥも、ｚ１０－ＳＮ－３８も、ＭＥＲＴＫ阻害剤のＵＮＣ１０６２も、ＭＥＲＴＫ発現Ｍ１マクロファージの生存率に影響を与えないことを実証する。図１９Ｂに示されるデータは、ｚ１０も、ｚ１０－ＭＭＡＥも、ｚ１０－ＳＮ－３８も、ＭＥＲＴＫ阻害剤のＵＮＣ１０６２も、ＭＥＲＴＫ発現Ｍ２マクロファージの生存率に影響を与えないことを実証する。
前述は、本明細書の具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきではない。実際に、本明細書に記載のものに加えて、本明細書に提供される抗体および方法のさまざまな改変物ならびにそれらの等価物は、前述の記載および添付の図面から当業者に明らかになる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内であることが意図される。
本明細書に引用されるすべての参考文献は、各個々の刊行物または特許もしくは特許出願が、すべての目的のためにその全体が参照によって組み込まれることが具体的かつ個々に示されているのと同程度に、それらの全体がすべての目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
ヒトＭｅｒチロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体または抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体または抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１０７または１０８の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体または抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１０８または１０９の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４）
ヒトＭＥＲＴＫに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体または抗原結合性断片が、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨが、配列番号１１０の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５）
前記抗体が、モノクローナル抗体である、項目１から４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６）
前記抗体が、２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含む免疫グロブリンである、項目１から５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７）
前記抗体が、ヒト由来の重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含む、項目１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目８）
前記抗体が、ＩｇＧである、項目１から７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目９）
前記抗体が、ヒト由来の重鎖定常領域および軽鎖定常領域の一部を含む、項目１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０）
前記抗原結合性断片が、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片である、項目１から９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１）
２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性抗体であって、一方の抗原結合領域が、項目１から４のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片を含み、他方の抗原結合領域が、目的の抗原に結合する、二重特異性抗体。
（項目１２）
前記目的の抗原が、免疫細胞受容体または腫瘍関連抗原である、項目１１に記載の二重特異性抗体。
（項目１３）
前記目的の抗原が、ＣＤ３、ＰＤ－Ｌ１、ＬＲＰ１、ＬＰＲ８、ＴＧＦ－β、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＮＫＧＤ２またはＴＩＧＩＴである、項目１１に記載の二重特異性抗体。
（項目１４）
（ａ）項目１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片である抗体部分、（ｂ）１つまたは複数の薬物部分であって、各薬物部分が、細胞傷害剤である、薬物部分、および（ｃ）必要に応じて、リンカーを含む、抗体－薬物コンジュゲートであって、前記細胞傷害剤が、前記抗体部分に直接コンジュゲートされているか、または前記リンカーを介して前記抗体部分にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲート。
（項目１５）
１：３～１：１２の間の前記抗体部分の前記薬物部分に対するモル比を有する、項目１４に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目１６）
１：９の前記抗体部分の前記薬物部分に対するモル比を有する、項目１４に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目１７）
前記細胞傷害剤が、小分子、ヌクレオチド、ペプチドまたは非抗体タンパク質である、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目１８）
前記細胞傷害剤が、小分子である、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目１９）
前記細胞傷害剤が、アウリスタチン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、カリケアマイシン、カンプトテシンアナログ、デュオカルマイシン、チューブリン阻害剤、チューブリシンもしくはチューブリシンアナログ、アンバースタチン２６９、ドキソルビシン、ＳＮ－３８、抗生物質、アントラサイクリン、微小管阻害剤、スプライソスタチン、またはタイランスタチンである、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２０）
前記細胞傷害剤が、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）またはモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）である、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２１）
前記細胞傷害剤が、ＤＭ１またはＤＭ４である、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２２）
前記細胞傷害剤が、モノメチルアウリスタチンＥである、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２３）
前記細胞傷害剤が、ＳＮ－３８である、項目１４から１６のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２４）
前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記リンカーが、切断性リンカーである、項目１４から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２５）
前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記リンカーが、非切断性リンカーである、項目１４から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２６）
前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記リンカーが、マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニルである、項目１４から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２７）
前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記リンカーが、ＣＬ２である、項目１４から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２８）
前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記リンカーが、ＣＬ２Ａである、項目１４から２３のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目２９）
項目１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸配列。
（項目３０）
項目１から１０のいずれか一項に記載のＶＨをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸配列。
（項目３１）
項目１から１０のいずれか一項に記載のＶＬをコードするポリヌクレオチドを含む、単離された核酸配列。
（項目３２）
配列番号１から１０のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片をコードする１つまたは複数のポリヌクレオチドを含有するｅｘ ｖｉｖｏ細胞。
（項目３３）
抗体または抗原結合性断片を産生する方法であって、項目２６に記載の細胞を、前記１つまたは複数のポリヌクレオチドが前記細胞によって発現されて、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記抗体または抗原結合性断片を産生するような条件下で培養するステップを含む、方法。
（項目３４）
項目１４から２８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、前記リンカーが存在せず、前記方法が、（ａ）前記細胞傷害剤を直接前記抗体部分にコンジュゲートして、前記抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｂ）前記抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法。
（項目３５）
項目１４から２８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）前記リンカーを直接前記抗体部分にコンジュゲートして、リンカー－抗体部分を産生するステップ、（ｂ）前記リンカー－抗体部分の前記リンカーを直接前記細胞傷害剤にコンジュゲートして、前記抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）前記抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法。
（項目３６）
項目１４から２８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲートを産生する方法であって、前記抗体－薬物コンジュゲートが、前記リンカーを含み、前記方法が、述べた順序で以下のステップ：（ａ）前記リンカーを直接前記細胞傷害剤にコンジュゲートして、リンカー－細胞傷害剤部分を産生するステップ、（ｂ）前記リンカー－細胞傷害剤部分の前記リンカーを直接前記抗体部分にコンジュゲートして、前記抗体－薬物コンジュゲートを産生するステップ、および（ｃ）前記抗体－薬物コンジュゲートを精製するステップを含む、方法。
（項目３７）
治療有効量の項目１から１０のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合性断片または項目１４から２８のいずれか一項に記載の抗体－薬物コンジュゲート、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
（項目３８）
それを必要とする対象におけるがんを処置する方法であって、前記対象に項目３７に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
（項目３９）
前記がんが、頭頸部、肺、乳房、骨、卵巣、胃、膵臓、喉頭、食道、精巣、肝臓、耳下腺、胆管、結腸、直腸、子宮頸部、子宮、子宮内膜、腎臓、膀胱、前立腺もしくは甲状腺のがんであるか、または前記がんが、黒色腫、肉腫もしくは白血病である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記がんが、肉腫、扁平上皮癌、黒色腫、神経膠腫、神経膠芽腫、神経芽細胞腫、カポジ肉腫、胃がん、結腸直腸がん、非小細胞肺癌、頭頸部がんまたは多発性骨髄腫である、項目３８に記載の方法。
（項目４１）
前記がんが、白血病またはリンパ腫である、項目３８に記載の方法。
（項目４２）
前記白血病が、急性骨髄性白血病または急性リンパ性白血病である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記がんが、乳がんである、項目３８に記載の方法。
（項目４４）
前記がんが、トリプルネガティブ乳がんである、項目３８に記載の方法。
（項目４５）
前記がんのがん性細胞が、ＭＥＲＴＫを過剰発現する、項目３８から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４６）
前記がんのがん性細胞が、リン酸化ＭＥＲＴＫを過剰発現する、項目３８から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４７）
ＭＥＲＴＫが、前記がんのがん性細胞上で構成的に活性である、項目３８から４６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４８）
前記がんが、ＭＥＲＴＫの過剰発現に関連する、項目３８から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目４９）
前記がんが、構成的に活性なＭＥＲＴＫに関連する、項目３８から４４または４８のいずれか一項に記載の方法。
（項目５０）
リン酸化ＭＥＲＴＫが、前記対象を処置する前の前記対象由来の腫瘍試料において過剰発現しているか否かを評価するステップ、およびリン酸化ＭＥＲＴＫが前記腫瘍試料において過剰発現している場合に前記対象を処置するステップをさらに含む、項目３８から４４のいずれか一項に記載の方法。
（項目５１）
前記対象に追加の治療剤を投与するステップをさらに含む、項目３８から５０のいずれか一項に記載の方法。
（項目５２）
前記追加の治療剤が、前記がんを処置するためのものである、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記追加の治療剤が、乳がんを処置するために使用される薬剤、黒色腫を処置するために使用される薬剤、免疫療法、または血管新生阻害剤である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記追加の治療剤が、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ２阻害剤、スニチニブおよびソラフェニブからなる群から選択される血管新生阻害剤である、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
前記追加の治療剤が、タモキシフェン、ラロキシフェン、パクリタキセル、シクロホスファミド、ドセタキセル、ビンブラスチン、フルオロウラシル、エベロリムス、トラスツズマブ、トラスツズマブ－エムタンシン、ペルツズマブおよび二トシル酸ラパチニブからなる群から選択される乳がんを処置するために使用される薬剤である、項目５２に記載の方法。
（項目５６）
前記追加の治療剤が、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤およびダカルバジンからなる群から選択される黒色腫を処置するために使用される薬剤である、項目５２に記載の方法。
（項目５７）
前記追加の治療剤が、免疫チェックポイントシグナル伝達を遮断する薬剤である、項目５２に記載の方法。
（項目５８）
前記追加の治療剤が、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤＬ１抗体である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記追加の治療剤が、抗Ｌａｇ３抗体、アゴニストＧＩＴＲ抗体、アゴニストＯＸ４０抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＮＫＧＤ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＴＧＦ－β抗体、ＣＡＲ－Ｔ療法、ＡｐｏＥミメティック、ＲＧＸ－１０４またはＲＧＸ－２０２である、項目３８から５８のいずれか一項に記載の方法。
（項目６０）
前記対象が、ヒトである、項目３８から５９のいずれか一項に記載の方法。
（項目６１）
重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、前記ＶＨが、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、前記抗体部分が、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢＣリンカーを介してＭＭＡＥにコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲート。
（項目６２）
重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、前記ＶＨが、配列番号１０５の配列のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号１０６のアミノ酸配列を含み、前記抗体部分が、ＣＬ２Ａリンカーを介してＳＮ－３８にコンジュゲートされている、抗体－薬物コンジュゲート。
（項目６３）
前記抗体部分が、免疫グロブリンである、項目６１または６２に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
（項目６４）
前記免疫グロブリンが、ヒト定常領域を含む、項目６３に記載の抗体－薬物コンジュゲート。
別の態様では、本明細書において、本明細書に記載の抗ＭＥＲＴＫ抗体もしくはその抗原結合性断片、または本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。具体的な実施形態では、本明細書において、治療有効量の本明細書に記載の抗体もしくは抗原結合性断片のいずれかまたは本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートのいずれかを含む医薬組成物を提供する。具体的な実施形態では、医薬組成物は、
（ａ）（ｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第１の免疫グロブリン；
（ｂ）（ｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第２の免疫グロブリン；
（ｃ）（ｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第３の免疫グロブリン；
（ｄ）（ｉ）配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖領域、および（ｉｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第４の免疫グロブリン；または
（ｅ）（ｉ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および（ｉｉ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む第５の免疫グロブリン、
ならびに薬学的に許容される担体を含む。

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