JP2022537931A

JP2022537931A - Ｃｄ２２及びｃｄ３に結合する多重特異性重鎖抗体

Info

Publication number: JP2022537931A
Application number: JP2021573407A
Authority: JP
Inventors: ネイサントリンクライン，; ウダヤランガスワーミィ，; スハシーニアイヤー，; キルタナプラバカール，; ハルシャドウガムラジ，
Original assignee: テネオバイオ，インコーポレイテッド
Priority date: 2019-06-14
Filing date: 2020-06-12
Publication date: 2022-08-31
Also published as: MX2021015337A; CN114206927A; PE20220575A1; UY38748A; BR112021024956A2; US11905326B2; IL288749A; CL2021003343A1; ECSP21090414A; US20210047402A1; CA3140816A1; EA202290054A1; KR20220020810A; CR20210622A; TW202108628A; EP3983438A1; AU2020291938A1; JOP20210323A1; WO2020252366A1; CO2021016907A2

Abstract

ＣＤ２２及びＣＤ３に結合する多重特異性ヒト重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））が、そのような抗体を作製する方法、そのような抗体を含む薬学的組成物を含む組成物、及びＣＤ２２の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用とともに開示されている。【選択図】図１４Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月１４日出願の米国仮特許出願第６２／８６１，７０８号の出願日の優先権を主張し、この出願の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明は、ＣＤ２２及びＣＤ３に結合する多重特異性ヒト重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））に関する。本発明はさらに、そのような抗体を作製する方法、そのような抗体を含む薬学的組成物を含む組成物、及びＣＤ２２の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用に関する。

ＣＤ２２
ＳＩＧＬＥＣ－２（ＵｎｉＰｒｏｔＰ２０２７３）としても知られるＣＤ２２は、成熟Ｂ細胞上に発現する細胞表面受容体である。ＣＤ２２は、複数のＩｇドメインを含有し、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ２２の細胞外ドメインは、ＣＤ４５細胞表面タンパク質に存在するものを含む、シアル酸部分と相互作用する。ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体シグナル伝達の阻害性受容体として機能すると考えられている。ＣＤ２０及びＣＤ１９とともに、ＣＤ２２は、制限されたＢ細胞発現のため、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療的処置のための関心を引く標的である。ＣＤ２２に特異的なモノクローナル抗体は、文献に記載されており（例えば、Ｊａｂｂｏｕｒ，Ｅｌｉａｓ，ｅｔａｌ．“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ．”Ｂｌｏｏｄ１２５．２６（２０１５）：４０１０－４０１６）、これらは、標準的なモノクローナル（例えば、エプラツズマブ）だけでなく、抗体－薬物コンジュゲート（イノツズマブオゾガマイシン）として治療的に使用されてきた。加えて、抗ＣＤ２２キメラ抗原受容体Ｔ細胞は、白血病を治療するために臨床で使用されてきた（Ｆｒｙ，ＴｅｒｒｙＪ．，ｅｔａｌ．“ＣＤ２２－ｔａｒｇｅｔｅｄＣＡＲＴｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｒｅｍｉｓｓｉｏｎｉｎＢ－ＡＬＬｔｈａｔｉｓｎａｉｖｅｏｒｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏＣＤ１９－ｔａｒｇｅｔｅｄＣＡＲｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．”Ｎａｔｕｒｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１７））。

重鎖抗体
従来のＩｇＧ抗体では、重鎖と軽鎖との会合は、軽鎖定常領域と重鎖のＣＨ１定常ドメインとの間の疎水性相互作用に一部起因している。重鎖と軽鎖との間のその疎水性相互作用にも寄与する、重鎖フレームワーク２（ＦＲ２）及びフレームワーク４（ＦＲ４）領域に追加の残基がある。

しかしながら、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマを含むラクダ亜目）の血清は、対をなすＨ鎖のみからなる主要なタイプの抗体（重鎖のみ抗体またはＵｎｉＡｂ（商標））を含有することが知られている。ラクダ科（ヒトコブラクダ、フタコブラクダ、ラマ、グアナコ、アルパカ、及びヴィクーニャ）のＵｎｉＡｂ（商標）は、単一可変ドメイン（ＶＨＨ）、ヒンジ領域、及び２つの定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）からなる独特の構造を有し、それらは古典的抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインと非常に相同性が高い。これらのＵｎｉＡｂ（商標）は、定常領域の最初のドメイン（ＣＨ１）を欠き、このドメインは、ゲノムに存在するが、ｍＲＮＡプロセシングの間にスプライスアウトされる。ＣＨ１ドメインの非存在は、このドメインが軽鎖の定常ドメインの固定場所であるため、ＵｎｉＡｂ（商標）中に軽鎖が存在しないことを説明する。そのようなＵｎｉＡｂ（商標）は、従来の抗体またはその断片からの３つのＣＤＲによって抗原結合特異性及び高親和性を付与するように自然に進化した（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２００１；ＪＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ７４：２７７－３０２、Ｒｅｖｅｔｓｅｔａｌ．，２００５；ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＢｉｏｌＴｈｅｒ５：１１１－１２４）。サメなどの軟骨魚は、軽鎖ポリペプチド鎖を欠き、完全に重鎖で構成されている、ＩｇＮＡＲと呼ばれる独自のタイプの免疫グロブリンも進化させてきた。ＩｇＮＡＲ分子は、分子工学によって操作され、単一の重鎖ポリペプチド（ｖＮＡＲ）の可変ドメインを生成することができる（Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３－３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ５５，１８７－１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４０，２５－３３（２００３））。

軽鎖を欠く重鎖のみ抗体が抗原に結合する能力は、１９６０年代に確立された（Ｊａｔｏｎｅｔａｌ．（１９６８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，４１８５－４１９５）。軽鎖から物理的に分離された重鎖免疫グロブリンは、四量体抗体に対して８０％の抗原結合活性を保持していた。Ｓｉｔｉａｅｔａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ，６０，７８１－７９０で、再配列されたマウスμ遺伝子からＣＨ１ドメインを除去すると、哺乳動物細胞培養において、軽鎖を欠く重鎖のみ抗体が産生されることが示された。産生された抗体は、ＶＨ結合特異性及びエフェクター機能を保持していた。

高い特異性及び親和性を有する重鎖抗体は、免疫感作を通して種々の抗原に対して生成することができ（ｖａｎｄｅｒＬｉｎｄｅｎ，Ｒ．Ｈ．，ｅｔａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４３１，３７－４６（１９９９））、ＶＨＨ部分は容易にクローン化し、酵母中で発現させることができる（Ｆｒｅｎｋｅｎ，Ｌ．Ｇ．Ｊ．，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７８，１１－２１（２０００））。それらの発現レベル、溶解性、及び安定性は、古典的なＦ（ａｂ）またはＦｖ断片のレベルよりも有意に高い（Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔａｌ．ＦＥＢＳＬｅｔｔ．４１４，５２１－５２６（１９９７））。

λ（ラムダ）軽（Ｌ）鎖遺伝子座、及び／または、λもしくはκ（カッパ（ｋａｐｐａ））Ｌ鎖遺伝子座が機能的にサイレンシングされているマウス、ならびにそのようなマウスによって産生される抗体は、米国特許第７，５４１，５１３号及び同第８，３６７，８８８号に記載されている。マウス及びラットにおける重鎖のみ抗体の組換え産生は、例えば、ＷＯ２００６００８５４８、米国特許出願公開第２０１００１２２３５８号、Ｎｇｕｙｅｎｅｔａｌ．，２００３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；１０９（１），９３－１０１、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．；２００６，２６（５）：３７７－９０、及びＺｏｕｅｔａｌ．，２００７，ＪＥｘｐＭｅｄ；２０４（１３）：３２７１－３２８３において報告されている。ジンクフィンガーヌクレアーゼの胚マイクロインジェクションによるノックアウトラットの生成は、Ｇｅｕｒｔｓｅｔａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２５（５９３９）：４３３に記載されている。可溶性重鎖のみ抗体及びそのような抗体を産生する異種重鎖遺伝子座を含むトランスジェニックげっ歯類は、米国特許第８，８８３，１５０号及び同第９，３６５，６５５号に記載されている。結合（標的化）ドメインとして単一ドメイン抗体を含むＣＡＲ－Ｔ構造は、例えば、Ｉｒｉ－Ｓｏｆｌａｅｔａｌ．，２０１１，ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈ３１７：２６３０－２６４１及びＪａｍｎａｎｉｅｔａｌ．，２０１４，ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，１８４０：３７８－３８６に記載されている。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有するＵｎｉＡｂ（商標）を含むが、これらに限定されない、重鎖抗体に関する。本発明のさらなる態様は、そのような抗体を作製する方法、そのような抗体を含む組成物、及びＣＤ２２の発現を特徴とする障害の治療におけるそれらの使用に関する。

本発明の態様は、ＣＤ３に結合する多重特異性結合化合物を含み、この結合化合物は、（ａ）配列番号８５に２つ以下の置換を有するＣＤＲ１配列、及び／または（ｂ）配列番号８６に２つ以下の置換を有するＣＤＲ２配列、及び／または（ｃ）配列番号８７に２つ以下の置換を有するＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、ヒトＶＨフレームワーク中に重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、各ＣＤＲ配列は、配列番号８５～８７のうちのいずれか１つと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含み、結合化合物は、軽鎖可変領域も含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、（ａ）配列番号８５に２つ以下の置換を有するＣＤＲ１配列、及び（ｂ）配列番号８６に２つ以下の置換を有するＣＤＲ２配列、及び（ｃ）配列番号８７に２つ以下の置換を有するＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、結合化合物は、軽鎖可変領域も含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、結合化合物は、軽鎖可変領域も含む。

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、ヒトＶＬフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、各ＣＤＲ配列は、配列番号９２のＣＤＲ配列もしくはＣＤＲ配列のセットに対して３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか、または、これらのＣＤＲ配列は、配列番号９２のＣＤＲ配列もしくはＣＤＲ配列のセットと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号９１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号９２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、（ａ）配列番号１～１０のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ１、及び／または（ｂ）配列番号１１～１７のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ２、及び／または（ｃ）配列番号１８～２３のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合単位のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列はヒトフレームワーク中に存在する。いくつかの実施形態では、第１の結合単位は、ＣＨ１配列の非存在下で重鎖定常領域配列をさらに含む。

いくつかの実施形態では、第１の結合単位は、（ａ）配列番号１～１０からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、及び／または（ｂ）配列番号１１～１７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、及び／または（ｃ）配列番号１８～２３からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を含む、重鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、（ａ）配列番号１～１０からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、及び（ｂ）配列番号１１～１７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、及び（ｃ）配列番号１８～２３からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号２４～８４の配列のうちのいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号２４～８４からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、（ａ）式ＧＸ_１ＳＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｙ（配列番号１０４、式中、Ｘ_１はＤまたはＧであり、Ｘ_２はＳ、Ｔ、ＩまたはＮであり、Ｘ_３はＳまたはＤであり、Ｘ_４はＧ、ＳまたはＮであり、Ｘ_５はＤ、ＧまたはＳであり、Ｘ_６はＹまたはＨである）のＣＤＲ１配列、及び（ｂ）式Ｘ_７Ｘ_８ＹＸ_９ＧＸ_１０Ｘ_１１（配列番号１０５、式中、Ｘ_７はＩまたはＶであり、Ｘ_８はＹまたはＨであり、Ｘ_９はＳまたはＴであり、Ｘ_１０はＡ、ＶまたはＳであり、Ｘ_１１はＴまたはＡである）のＣＤＲ２配列、及び（ｃ）式Ｘ_１２ＲＸ_１３ＤＳＳＸ_１４ＷＲＳ（配列番号１０６、式中、Ｘ_１２はＴ、ＡまたはＫであり、Ｘ_１３はＤまたはＥであり、Ｘ_１４はＮまたはＳである）のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ配列は、配列番号１～２３からなる群から選択されるＣＤＲ配列中に２つ以下の置換を有する配列を含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲ配列は、配列番号１～２３からなる群から選択される。

本発明の態様は、ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物を含み、第１の結合単位は、ヒトＶＨフレームワーク中に、（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、または（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、二重特異性である。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、ＣＡＲ－Ｔ形式である。

本発明の態様は、（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む多重特異性結合化合物を含む。

本発明の態様は、（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む多重特異性結合化合物を含む。

本発明の態様は、（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域と、（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む多重特異性結合化合物を含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域は、サイレンシングされたヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、多重特異性結合化合物は、ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域は、サイレンシングされたヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域である。

本発明の態様は、本明細書に記載される多重特異性結合化合物を含む薬学的組成物を含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の治療のための方法を含み、この方法は、上記障害を有する対象に、本明細書に記載の多重特異性結合化合物または薬学的組成物を投与することを含む。

本発明の態様は、ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の治療のための薬剤の調製における多重特異性結合化合物の使用を含む。

いくつかの実施形態では、障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態では、障害は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。いくつかの実施形態では、障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。いくつかの実施形態では、障害は、関節リウマチ（ＲＡ）である。いくつかの実施形態では、障害は、多発性硬化症（ＭＳ）である。

本発明の態様は、本明細書に記載される多重特異性結合化合物をコードするポリヌクレオチドを含む。本発明の態様は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターを含む。本発明の態様は、本明細書に記載されるベクターを含む細胞を含む。

本発明の態様は、結合化合物の発現を許容する条件下で、本明細書に記載の細胞を増殖させることと、この細胞から結合化合物を単離することとを含む、本明細書に記載の多重特異性結合化合物を産生する方法を含む。

本発明の態様は、ＵｎｉＲａｔ動物をＣＤ２２で免疫することと、ＣＤ２２結合重鎖配列を同定することとを含む、本明細書に記載の多重特異性結合化合物を作製する方法を含む。

本発明の態様は、個体に有効量の本明細書に記載の多重特異性結合化合物または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む治療方法を含む。

これら及びさらなる態様は、実施例を含め、本開示の残りの部分でさらに説明される。

休止ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞（Ｄａｕｄｉ）のＴ細胞媒介性細胞毒性を示すグラフである。ＣＤ２２陽性細胞（Ｄａｕｄｉ）とともにインキュベートし、抗ＣＤ２２×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆ多重特異性結合化合物及び陽性対照で処理した休止ヒト汎Ｔ細胞によるサイトカイン放出の用量応答曲線を示すグラフである。休止ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞（ＳＵＤＨＬ１０）のＴ細胞媒介性細胞毒性を示すグラフである。ＣＤ２２陽性細胞（ＳＵＤＨＬ１０）とともにインキュベートし、抗ＣＤ２２×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆ多重特異性結合化合物及び陽性対照で処理した休止ヒト汎Ｔ細胞によるサイトカイン放出の用量応答曲線を示すグラフである。休止ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞（ＲＩ－１）のＴ細胞媒介性細胞毒性を示す一連のグラフを示す。ＣＤ２２陽性細胞（ＲＩ－１）とともにインキュベートし、抗ＣＤ２２×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆ多重特異性結合化合物及び陽性対照で処理した休止ヒト汎Ｔ細胞によるサイトカイン放出の用量応答曲線を示す一連のグラフを示す。活性化ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞のＴ細胞媒介性細胞毒性を示す一連のグラフを示す。ＣＤ２２及びＣＤ３に対する二重特異性抗体の細胞結合を示す一連のグラフを示す。Ｄａｕｄｉ異種移植片における抗ＣＤ２２×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆ多重特異性結合化合物のインビボ有効性を決定するための治療計画を示す。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として平均腫瘍体積を示すグラフである。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として体重を示すグラフである。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として体重パーセント変化を示すグラフである。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として平均腫瘍体積を示すグラフである。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として個々の腫瘍測定値を示す一連のグラフを示す。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として体重を示すグラフである。マウスＤａｕｄｉ異種移植片における腫瘍移植後の日数を関数として体重パーセント変化を示すグラフである。ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合単位と、ＣＤ２２に特異的に結合する１つの結合単位とを有する二重特異性結合化合物の概略図である。本発明の実施形態に従って、１つ以上の結合ドメインを組み込むことができる様々なＣＡＲ－Ｔ構築物の図である。ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合単位と、ＣＤ２２に特異的に結合する１つの結合単位（ＣＤ２２に対して一価かつ単一特異的）とを有する二重特異性結合分子の概略図である。ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合単位と、ＣＤ２２に特異的に結合する２つの結合単位（ＣＤ２２に対して二価かつ単一特異的）とを有する二重特異性結合分子の概略図である。ＣＤ３に特異的に結合する１つの結合単位と、ＣＤ２２に特異的に結合する２つの結合単位（ＣＤ２２に対して二価かつ二重パラトピック）とを有する二重特異性結合分子の概略図である。本発明の実施形態に合致した抗ＣＤ２２抗体の種々の生物学的活性に関するデータを示す表である。希釈を関数として血清力価を示す一連のグラフである。

本発明の実施は、他に示さない限り、当技術分野の範囲内である分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技術を使用する。そのような技術は、“ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．，１９８９）、“ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、“ＡｎｉｍａｌＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、“ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、“ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄｐｅｒｉｏｄｉｃｕｐｄａｔｅｓ）、“ＰＣＲ：ＴｈｅＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓｅｔａｌ．，ｅｄ．，１９９４）、“ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅｔｏＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ”（ＰｅｒｂａｌＢｅｒｎａｒｄＶ．，１９８８）、“ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ”（Ｂａｒｂａｓｅｔａｌ．，２００１）、Ｈａｒｌｏｗ，ＬａｎｅａｎｄＨａｒｌｏｗ，ＵｓｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ：ＰｏｒｔａｂｌｅＰｒｏｔｏｃｏｌＮｏ．Ｉ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９９８）、及びＨａｒｌｏｗａｎｄＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ；（１９８８）のような文献において十分に説明されている。

値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、及びその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。それらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれ得、また、表示範囲内の任意の具体的な除外限度に従って、本明細書にも包含される。表示範囲がそれらの上限値及び下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値及び下限値のいずれか一方または両方を除外する範囲も本発明に包含される。

特記しない限り、本明細書中の抗体残基は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って番号付けされる（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。

以下の説明では、本発明の完全な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が述べられている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細のうちの１つ以上なしに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を曖昧にすることを避けるために、当業者に即知である特徴及び手順は説明されていない。

特許出願及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

Ｉ．定義
「含む」とは、列挙された要素が組成物／方法／キットに必要とされることを意味するが、請求項の範囲内で組成物／方法／キットなどを形成するために他の要素が含まれ得る。

「～から本質的になる」とは、記載された組成物または方法の範囲を、本発明の基本的及び新規な特徴（複数可）に実質的に影響を与えない特定の材料または工程に限定することを意味する。

「～からなる」とは、任意の要素の組成、方法、またはキット、請求項で指定されていない工程、または成分の除外を意味する。

本明細書における抗体残基は、Ｋａｂａｔ番号付けシステム及びＥＵ番号付けシステムに従って番号付けされる。Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン中の残基（重鎖の残基約１～１１３）（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））を指す場合に使用される。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，（上記）に報告されているＥＵインデックス）を指す場合に使用される。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書に別段の定めがない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書に別段の定めがない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号への言及は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。

免疫グロブリンとも称される抗体は、従来、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含み、重鎖及び軽鎖のアミノ末端ドメインは配列上可変であるため、一般に可変領域ドメイン、または可変重鎖（ＶＨ）もしくは可変軽鎖（ＶＨ）ドメインと称される。２つのドメインは、従来、特異的結合領域を形成するように会合するが、本明細書で論じられるように、特異的結合は、重鎖のみの可変配列でも得ることができ、抗体の様々な非天然構造が知られており、当技術分野で使用されている。

「機能的」または「生物学的に活性な」抗体または抗原結合分子（本明細書に記載される重鎖のみ抗体及び多重特異性（例えば、二重特異性）三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む）は、構造的、調節的、生化学的、または生物物理学的事象においてその天然活性のうちの１つ以上を発揮することができるものである。例えば、機能的抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡは、抗原に特異的に結合する能力を有し得、結合は次いで、シグナル伝達または酵素活性などの細胞または分子事象を誘発または改変させ得る。機能的抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡはまた、受容体のリガンド活性化を遮断し得るか、またはアゴニストもしくはアンタゴニストとして機能し得る。抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡが、その天然活性のうちの１つ以上を発揮する能力は、ポリペプチド鎖の適切な折り畳み及び組み立てを含むいくつかの因子に依存する。

本明細書における「抗体」という用語は、最も広義で使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、一量体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、重鎖のみ抗体、三本鎖抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ナノボディなどを含み、所望の生物学的活性を示す限り、抗体断片も含む（Ｍｉｌｌｅｒｅｔａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７０：４８５４－４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラ、または他の種に由来してもよい。

抗体という用語は、全長重鎖、全長軽鎖、無傷の免疫グロブリン分子、またはこれらのポリペプチドのいずれかの免疫学的に活性な部分、すなわち、目的とする標的またはその一部の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含むポリペプチドを指してもよく、そのような標的には、がん細胞、または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、低減または増強されたエフェクター細胞活性を提供する、改変されたＦｃ部分を有する操作されたサブクラスを含む、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子であり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来してもよい。一態様では、免疫グロブリンは、ほぼヒト由来である。

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用されるとき、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個別の抗体は、微量で存在する可能性のある自然発生の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位を対象としている。さらに、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。本発明によるモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒｅｔａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、例えば、組換えタンパク質産生方法を介して作製することもできる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。

抗体に関連して使用される「可変」という用語は、抗体可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で広範に異なるという事実を指し、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用される。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等には分布していない。これは、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。本来の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、主にβシート構成を採用する４つのＦＲを含み、それらは、３つの超可変領域により連結され、それら超可変領域はβシート構造を連結し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖内の超可変領域は、ＦＲによって近接近し一緒に保持されており、他方の鎖の超可変領域とともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照されたい）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。

「超可変領域」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、重鎖可変ドメイン中の残基３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、及び／または「超可変ループ」由来の残基（例えば、重鎖可変ドメイン中の残基２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）、ＣｈｏｔｈｉａａｎｄＬｅｓｋＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。

本明細書には例示的なＣＤＲ呼称が示されるが、当業者は、Ｋａｂａｔ定義（“Ｚｈａｏｅｔａｌ．Ａｇｅｒｍｌｉｎｅｋｎｏｗｌｅｄｇｅｂａｓｅｄｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｓ．”ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４７：６９４－７００を参照されたい）を含むＣＤＲのいくつかの定義が、一般的に使用されていることを理解するであろう。Ｋａｂａｔ定義は、配列の可変性に基づいており、最も一般的に使用される。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づく（Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｎａｔｕｒｅ．１９８９；３４２：８７７－８８３）。目的とする代替となるＣＤＲ定義には、限定されないが、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，“Ｙｅｔａｎｏｔｈｅｒｎｕｍｂｅｒｉｎｇｓｃｈｅｍｅｆｏｒｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｖａｒｉａｂｌｅｄｏｍａｉｎｓ：ａｎａｕｔｏｍａｔｉｃｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｔｏｏｌ．”ＪＭｏｌＢｉｏｌ．２００１；３０９：６５７－６７０、Ｏｆｒａｎｅｔａｌ．“Ａｕｔｏｍａｔｅｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｓ（ＣＤＲｓ）ｒｅｖｅａｌｓｐｅｃｕｌｉａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＣＤＲｓａｎｄＢｃｅｌｌｅｐｉｔｏｐｅｓ．”ＪＩｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８１：６２３０－６２３５、Ａｌｍａｇｒｏ“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｓｉｄｕｅｓｏｆａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｔｈａｔｒｅｃｏｇｎｉｚｅａｎｔｉｇｅｎｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｉｚｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｒａｔｉｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｏｆａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．”ＪＭｏｌＲｅｃｏｇｎｉｔ．２００４；１７：１３２－１４３、及びＰａｄｌａｎｅｔａｌ．“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｓｉｄｕｅｓｉｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”ＦａｓｅｂＪ．１９９５；９：１３３－１３９が含まれる。これらのそれぞれは、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。

「重鎖のみ抗体」及び「重鎖抗体」という用語は、本明細書で互換的に使用され、最も広義では、従来の抗体の軽鎖を欠く抗体を指す。これらの用語は、限定されないが、ＣＨ１ドメインの非存在下でＶＨ抗原結合ドメイン、ならびにＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインを含むホモ二量体抗体、そのような抗体の機能的（抗原結合）変異体、可溶性ＶＨ変異体、１つの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲ）及び５つのＣ様定常ドメイン（Ｃ－ＮＡＲ）のホモ二量体を含むＩｇ－ＮＡＲ、ならびにそれらの機能断片、ならびに可溶性単一ドメイン抗体（ｓＵｎｉＤａｂ（商標））を特異的に含む。一実施形態では、重鎖のみ抗体は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、フレームワーク３、ＣＤＲ３、及びフレームワーク４からなる可変領域抗原結合ドメインから構成される。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインから構成される。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、及びＣＨ２ドメインから構成される。さらなる実施態様では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、及びＣＨ３ドメインから構成される。ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインが切断されている重鎖のみ抗体もまた本明細書に含まれる。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、及び少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメインから構成されるが、ヒンジ領域は含まない。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメイン、及びヒンジ領域の少なくとも一部から構成される。重鎖のみ抗体は、２つの重鎖がジスルフィド結合している、またはそうでなければ共有結合もしくは非共有結合で互いに結合している二量体の形態であり得る。重鎖のみ抗体はＩｇＧサブクラスに属し得るが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する抗体もまた本明細書に含まれる。特定の実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特にＩｇＧ１サブタイプのものである。一実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ４サブタイプのものであり、ＣＨドメインのうちの１つ以上が、抗体のエフェクター機能を改変させるように修飾される。一実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１サブタイプのものであり、ＣＨドメインのうちの１つ以上が、抗体のエフェクター機能を改変させるように修飾される。エフェクター機能を改変させるＣＨドメインの修飾は、本明細書にさらに記載される。重鎖抗体の非限定的な例は、例えば、ＷＯ２０１８／０３９１８０に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

一実施形態では、本明細書の重鎖のみ抗体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合（標的化）ドメインとして使用される。この定義は、ＵｎｉＡｂ（商標）と呼ばれる、ヒト免疫グロブリントランスジェニックラット（ＵｎｉＲａｔ（商標））によって産生されるヒト重鎖のみ抗体を特異的に含む。ＵｎｉＡｂ（商標）の可変領域（ＶＨ）は、ＵｎｉＤａｂ（商標）と呼ばれ、これは、多重特異性、増加した効力、及び延長した半減期を有する新規治療法を開発するための、Ｆｃ領域または血清アルブミンに連結することができる汎用性のある構築ブロックである。ホモ二量体ＵｎｉＡｂ（商標）は軽鎖を欠き、したがってＶＬドメインを欠くため、抗原は１つの単一ドメイン、すなわち重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（抗原結合ドメイン、ＶＨ）によって認識される。

「無傷の抗体鎖」は、本明細書においては、全長可変領域及び全長定常領域（Ｆｃ）を含むものである。無傷の「従来の」抗体は、無傷の軽鎖及び無傷の重鎖、ならびに分泌型ＩｇＧのための軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＩｇＭまたはＩｇＡなどの他のアイソタイプは、異なるＣＨドメインを有し得る。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であり得る。無傷の抗体は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に帰属する生物学的活性を指す１つ以上の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、及び細胞表面受容体の下方制御が含まれる。定常領域変異形としては、エフェクタープロファイルを改変させるもの、Ｆｃ受容体への結合などが挙げられる。

抗体及び種々の抗原結合タンパク質は、それらの重鎖のＦｃ（定常ドメイン）のアミノ酸配列に応じて、異なるクラスとして提供され得る。重鎖Ｆｃ領域には、以下の５つの主要なクラスがある。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、ならびにこれらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。抗体の異なるクラスに対応するＦｃ定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμとして参照され得る。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は周知である。Ｉｇ形態は、ヒンジ修飾またはヒンジなし形態を含む（Ｒｏｕｘｅｔａｌ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３－４０９０、Ｌｕｎｄｅｔａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６－７２５６、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ及びλと呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。

「機能性Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。エフェクター機能の非限定的な例には、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御などが含まれる。そのようなエフェクター機能は、概して、Ｆｃ領域が、受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦｃγＲＩＩＢ２、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体、及び低親和性ＦｃＲｎ受容体と相互作用することを必要とし、当技術分野において周知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「死んだ」または「サイレンシングされた」Ｆｃは、例えば、血清半減期の延長に関して活性を保持するように変異されているが、高親和性Ｆｃ受容体を活性化しないか、またはＦｃ受容体に対する親和性が低減しているものである。

「天然配列Ｆｃ領域」は、自然界に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域としては、例えば、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、ならびにそれらの自然発生の変異体が挙げられる。

「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）により、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異型Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、例えば、親ポリペプチドの天然配列Ｆｃ領域またはＦｃ領域において、約１～約１０個のアミノ酸置換を有し、好ましくは、約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異型Ｆｃ領域は、好ましくは、親ポリペプチドの天然配列Ｆｃ領域及び／またはＦｃ領域との少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは、それらとの少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらとの少なくとも約９５％の相同性を有する。

変異型Ｆｃ配列は、ＥＵインデックス２３４、２３５、及び２３７番目におけるＦｃγＲＩ結合を低減するために、ＣＨ２領域内に３つのアミノ酸置換を有してもよい（Ｄｕｎｃａｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：５６３を参照されたい）。ＥＵインデックス３３０及び３３１番目における補体Ｃ１ｑ結合部位における２つのアミノ酸置換は、補体結合を低減する（Ｔａｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６１（１９９３）及びＣａｎｆｉｅｌｄａｎｄＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３（１９９１）を参照されたい）。２３３～２３６番目におけるヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２残基、ならびに３２７、３３０、及び３３１番目のＩｇＧ４残基への置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低減する（例えば、ＡｒｍｏｕｒＫＬ．ｅｔａｌ．，１９９９ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４、及びＳｈｉｅｌｄｓＲＬ．ｅｔａｌ．，２００１．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４を参照されたい）。ヒトＩｇＧ１アミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｐ０１８５７）は、配列番号９３として本明細書に提供される。ヒトＩｇＧ４アミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｐ０１８６１）は、配列番号９４として本明細書に提供される。サイレンシングされたＩｇＧ１は、例えば、Ｂｏｅｓｃｈ，Ａ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，“ＨｉｇｈｌｙｐａｒａｌｌｅｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｇＧＦｃｂｉｎｄｉｎｇｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．”ＭＡｂ，２０１４．６（４）：ｐ．９１５－２７に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

他のＦｃ変異体も可能であるが、これには、ジスルフィド結合を形成することができる領域が欠失しているか、または天然ＦｃのＮ末端で特定のアミノ酸残基が除去されているか、もしくはメチオニン残基がそれに付加されている変異体が含まれるが、これらに限定されない。したがって、いくつかの実施形態では、結合化合物の１つ以上のＦｃ部分が、ヒンジ領域に１つ以上の変異を含んでジスルフィド結合を排除してもよい。さらに別の実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域は、完全に除去してもよい。さらに別の実施形態では、結合化合物は、Ｆｃ変異体を含んでもよい。

さらに、Ｆｃ変異体は、補体結合またはＦｃ受容体結合をもたらすためにアミノ酸残基を置換（変異）、欠失、または付加することによって、エフェクター機能を除去または実質的に低減するように構築することができる。例えば、限定するものではないが、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位において欠失が生じ得る。免疫グロブリンＦｃ断片のかかる配列誘導体を調製するための技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号及び第ＷＯ９６／３２４７８号に開示されている。加えて、Ｆｃドメインは、リン酸化、硫酸化、アシル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。

「Ｆｃ領域含有抗体」という用語は、Ｆｃ領域を含む抗体を指す。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の精製中に、または抗体をコードする核酸の組換え操作によって除去され得る。したがって、本発明のＦｃ領域を有する抗体は、Ｋ４４７を有するか、または有しない抗体を含んでもよい。

本発明の態様は、二重特異性、三重特異性などを含むがこれらに限定されない多重特異性構造を有する結合化合物を含む。二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などにおいて、多種多様な方法及びタンパク質構造が知られており、使用されている。

２つ以上の抗体の可変ドメインを組換え融合することによって、多価人工抗体の産生のための様々な方法が開発されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチド上の第１及び第２の抗原結合ドメインは、ポリペプチドリンカーによって接続される。かかるポリペプチドリンカーの１つの非限定的な例は、４つのグリシン残基、続いて１つのセリン残基のアミノ酸配列を有するＧＳリンカーであり、この配列はｎ回繰り返され、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、または９などの１～約１０の範囲の整数である。かかるリンカーの非限定的な例としては、ＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）（ｎ＝１）及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０３）（ｎ＝２）が挙げられる。他の好適なリンカーも使用することができ、例えば、Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖＲｅｖ．２０１３Ｏｃｔｏｂｅｒ１５；６５（１０）：１３５７－６９に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

「三本鎖抗体様分子」または「ＴＣＡ」という用語は、本明細書では、３つのポリペプチドサブユニットを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる抗体様分子を指すために使用され、その３つのポリペプチドサブユニットのうち２つは、抗原結合領域及び少なくとも１つのＣＨドメインを含む、モノクローナル抗体の１つの重鎖及び１つの軽鎖、もしくはそのような抗体鎖の機能的抗原結合断片を含むか、それらから本質的になるか、もしくはそれらからなる。この重鎖／軽鎖対は第１の抗原に対する結合特異性を有する。第３のポリペプチドサブユニットは、ＣＨ１ドメインの非存在下で、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む重鎖のみ抗体、ならびに第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する１つ以上の抗原結合ドメイン（例えば、２つの抗原結合ドメイン）を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなり、結合ドメインは抗体重鎖または軽鎖の可変領域に由来するか、またはそれと配列同一性を有する。そのような可変領域の一部は、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ遺伝子セグメント、Ｄ及びＪ_Ｈ遺伝子セグメント、またはＪ_Ｌ遺伝子セグメントによってコードされ得る。可変領域は、再構成されたＶ_ＨＤＪ_Ｈ、Ｖ_ＬＤＪ_Ｈ、Ｖ_ＨＪ_Ｌ、またはＶ_ＬＪ_Ｌ遺伝子セグメントによってコードされ得る。ＴＣＡタンパク質は、上に定義したような重鎖のみ抗体を利用する。

ＴＣＡ結合化合物は、「重鎖のみ抗体」または「重鎖抗体」または「重鎖ポリペプチド」を利用し、これらは、本明細書で使用される場合、重鎖定常領域ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４を含むが、ＣＨ１ドメインを含まない単鎖抗体を意味する。一実施形態では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインから構成される。別の実施形態では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、及びＣＨ２ドメインから構成される。さらなる実施態様では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、少なくともヒンジ領域のうちの一部、及びＣＨ３ドメインから構成される。ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインが切断されている重鎖抗体もまた本明細書に含まれる。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、及び少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメインから構成されるが、ヒンジ領域は含まない。重鎖のみ抗体は、２つの重鎖がジスルフィド結合している、またはそうでなければ共有結合もしくは非共有結合で互いに結合している二量体の形態であり得、任意選択で、ポリペプチド鎖間の適切な対合を容易にするために、２つ以上のＣＨドメイン間の非対称界面を含んでもよい。重鎖抗体は、ＩｇＧサブクラスに属し得るが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する抗体もまた本明細書に含まれる。特定の実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特にＩｇＧ１サブタイプまたはＩｇＧ４サブタイプのものである。ＴＣＡ結合化合物の非限定的な例は、例えば、ＷＯ２０１７／２２３１１１及びＷＯ２０１８／０５２５０３に記載されており、それらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

重鎖抗体は、ラクダ科、例えばラクダ及びラマによって産生されるＩｇＧ抗体の約４分の１を占める（Ｈａｍｅｒｓ－ＣａｓｔｅｒｍａｎＣ．，ｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ３６３，４４６－４４８（１９９３））。これらの抗体は、２つの重鎖によって形成されるが、軽鎖を欠く。結果として、可変抗原結合部位は、ＶＨＨドメインと称され、これは、最も小さな自然発生の無傷の抗原結合部位を表し、長さがアミノ酸約１２０個分しかない（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ，Ａ．，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，２６２８５－２６２９０（２００１））。高い特異性及び親和性を有する重鎖抗体は、免疫感作を通して種々の抗原に対して生成することができ（ｖａｎｄｅｒＬｉｎｄｅｎ，Ｒ．Ｈ．，ｅｔａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４３１，３７－４６（１９９９））、ＶＨＨ部分は容易にクローン化し、酵母中で発現させることができる（Ｆｒｅｎｋｅｎ，Ｌ．Ｇ．Ｊ．，ｅｔａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７８，１１－２１（２０００））。それらの発現レベル、溶解性、及び安定性は、古典的なＦ（ａｂ）またはＦｖ断片のレベルよりも有意に高い（Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔａｌ．ＦＥＢＳＬｅｔｔ．４１４，５２１－５２６（１９９７））。サメもまた、抗体中に、ＶＮＡＲと呼ばれる、単一のＶＨ様ドメインを有することが示されている（Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３－３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌｅｔａｌ．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ５５，１８７－１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４０，２５－３３（２００３））。

「ＣＤ２２」及び「表面抗原分類２２」という用語は、本明細書で使用されるとき、成熟Ｂ細胞の表面上、及びそれほど多くはないが、一部の未成熟Ｂ細胞上で見られるレクチンのＳＩＧＬＥＣファミリーに属する分子を指す。「ＣＤ２２」という用語は、任意のヒト及び非ヒト動物種のＣＤ２２タンパク質を含み、ヒトＣＤ２２及び非ヒト哺乳動物のＣＤ２２を特異的に含む。

「ヒトＣＤ２２」という用語は、本明細書で使用されるとき、ヒトＣＤ２２（ＵｎｉＰｒｏｔＰ２０２７３）の任意の変異体、アイソフォーム、及び種相同体を、その供給源または調製様式に関係なく含む。したがって、「ヒトＣＤ２２」は、ヒトＣＤ２２遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現した細胞及びＣＤ２２によって自然に発現したヒトＣＤ２２を含む。

「抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体」、「ＣＤ２２重鎖のみ抗体」、「抗ＣＤ２２重鎖抗体」、及び「ＣＤ２２重鎖抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトＣＤ２２を含む、上で定義されたようなＣＤ２２に免疫特異的に結合する、上で定義されたような重鎖のみ抗体を指す。この定義には、限定されないが、上で定義されたようなヒト抗ＣＤ２２ＵｎｉＡｂ（商標）抗体を産生するＵｎｉＲａｔ（商標）を含む、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックラットまたはトランスジェニックマウスなどのトランスジェニック動物によって産生されるヒト重鎖抗体が含まれる。

参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインし、必要に応じてギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当技術分野内の様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするために適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のためには、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。

「単離」抗体とは、その自然環境の成分から、同定及び分離、及び／または回収されたものである。その自然環境の混入成分は、抗体の診断上または治療上の使用を妨げる材料であり、これには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、抗体は、次の程度まで精製される（１）ローリー法により判定した場合に抗体の９５重量％を上回り、最も好ましくは９９重量％を上回る、（２）スピニングカップシーケネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇｃｕｐｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度、または（３）クーマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を用いて還元もしくは非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、均質になるまで。単離抗体には、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内でインサイツの抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製されるであろう。

本発明の抗体は多重特異性抗体を含む。多重特異性抗体は２つ以上の結合特異性を有する。「多重特異性」という用語は、「二重特異性」、及び「三重特異性」と、高次ポリエピトープ特異性などの高次独立の特異的結合親和性と、四価抗体及び抗体断片とを特異的に含む。「多重特異性抗体」、「多重特異性重鎖のみ抗体」、「多重特異性重鎖抗体」、「多重特異性ＵｎｉＡｂ（商標）」、及び「多重特異性結合化合物」という用語は、本明細書では最も広義で使用され、２つ以上の結合特異性を有する全ての抗体を包含する。本発明の多重特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体は、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の１つの単一エピトープ、及び、例えば、ＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する（すなわち、二価かつモノパラトピック）抗体を特異的に含む。本発明の多重特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体は、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の２つ以上の非重複エピトープに免疫特異的に結合する（すなわち、二価かつ二重パラトピック）抗体を特異的に含む。本発明の多重特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体はまた、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上のエピトープ、及び、例えば、ヒトＣＤ３などのＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する（すなわち、二価かつ二重パラトピック）抗体を特異的に含む。本発明の多重特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体はまた、ヒトＣＤ２２タンパク質などのＣＤ２２タンパク質上の２つ以上の非重複または部分的に重複するエピトープ、及び、例えば、ヒトＣＤ３タンパク質などのＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する（すなわち、三価かつ二重パラトピック）抗体を特異的に含む。

本発明の抗体は、１つの結合特異性を有する単一特異性抗体を含む。単一特異性抗体は、単一の結合特異性を含む抗体と、同じ結合特異性を有する２つ以上の結合単位を含む抗体とを特異的に含む。「単一特異性抗体」、「単一特異性重鎖のみ抗体」、「単一特異性重鎖抗体」、及び「単一特異性ＵｎｉＡｂ（商標）」という用語は、本明細書では最も広義で使用され、１つの結合特異性を有する全ての抗体を包含する。本発明の単一特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体は、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の１つのエピトープに免疫特異的に結合する（一価かつ単一特異性）抗体を特異的に含む。本発明の単一特異性重鎖抗ＣＤ２２抗体はまた、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する２つ以上の結合単位を有する抗体（例えば、多価抗体）を特異的に含む。例えば、本発明の実施形態による単一特異性抗体は、２つの抗原結合ドメインを含む重鎖可変領域を含み得、各抗原結合ドメインは、ＣＤ２２タンパク質上の同じエピトープに結合する（すなわち、二価かつ単一特異性）。

「エピトープ」は、単一の抗体分子が結合する抗原分子の表面上の部位である。一般的には、抗原はいくつかのまたは多くの異なるエピトープを有し、そして多くの異なる抗体と反応する。この用語は、具体的には、線状エピトープ及び立体配座エピトープを含む。

「エピトープマッピング」は、それらの標的抗原上の抗体の結合部位またはエピトープを同定するプロセスである。抗体エピトープは、線状エピトープまたは立体配座エピトープであり得る。線状エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の連続配列によって形成される。立体配座エピトープは、タンパク質配列において不連続であるが、タンパク質のその三次元構造への折り畳みの際に結合するアミノ酸から形成される。

「ポリエピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。上記のように、本発明は、ポリエピトープ特異性を有する抗ＣＤ２２重鎖抗体、すなわち、ヒトＣＤ２２などのＣＤ２２タンパク質上の１つ以上の非重複エピトープに結合する抗ＣＤ２２重鎖抗体と、ＣＤ２２タンパク質上の１つ以上のエピトープ、及び、例えば、ＣＤ３タンパク質などの他のタンパク質上のエピトープに結合する抗ＣＤ２２重鎖抗体とを特異的に含む。抗原の「非重複エピトープ（複数可）」または「非競合エピトープ（複数可）」という用語は、本明細書では、抗原特異性抗体の対の一方のメンバーによって認識されるが、他方のメンバーによって認識されないエピトープ（複数可）を意味すると定義される。非重複エピトープを認識する、多重特異性抗体上の同じ抗原を標的とする抗原結合領域または抗体の対は、その抗原への結合について競合せず、その抗原に同時に結合することができる。

２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、抗体は参照抗体として「本質的に同じエピトープ」に結合する。２つのエピトープが同一または立体的に重複するエピトープに結合するかを決定するために、最も広く使用されている迅速な方法は競合アッセイであり、それは標識抗原または標識抗体を使用してあらゆる形式で構成できる。通常、抗原は９６ウェルプレートに固定され、未標識抗体が標識抗体の結合を遮断する能力は放射性または酵素標識を用いて測定される。

「価」という用語は、本明細書で使用されるとき、抗体分子中の特定数の結合部位をいう。

「一価」抗体は、１つの結合部位を有する。したがって、一価抗体は、単一特異的でもある。

「多価」抗体は２つ以上の結合部位を有する。したがって、「二価」、「三価」、及び「四価」という用語は、それぞれ２つの結合部位、３つの結合部位、及び４つの結合部位の存在を指す。したがって、本発明による二重特異性抗体は、少なくとも二価であり、三価、四価、またはそうでなければ多価であり得る。本発明の実施形態による二価抗体は、同じエピトープに対する２つの結合部位（すなわち、二価かつモノパラトピック）、または２つの異なるエピトープに対する２つの結合部位（すなわち、二価かつ二重パラトピック）を有し得る。

多種多様な方法及びタンパク質の構造が知られており、二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などの調製に使用される。

「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」という用語は、本明細書では最も広義で使用され、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインに対して、所望の結合特異性を融合する人工受容体（例えば、モノクローナル抗体または他のリガンドの抗原結合領域）を指す。典型的には、受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を作製するためにモノクローナル抗体の特異性をＴ細胞上に融合するために使用される（ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ，２０１５；１０８（７）：ｄｖｊ４３９、及びＪａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６；１３：３７０－３８３）。

「ヒト抗体」という用語は、本明細書では、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する抗体を含んで使用される。本明細書におけるヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異誘発によって、もしくはインビボでの体細胞変異によって導入される変異を含み得る。「ヒト抗体」という用語は、上に定義したようなトランスジェニックラットまたはマウスなどのトランスジェニック動物によって産生されるヒト重鎖可変領域配列を有する重鎖のみ抗体、具体的には、ＵｎｉＲａｔ（商標）によって産生されるＵｎｉＡｂ（商標）を特異的に含む。

「キメラ抗体」または「キメラ免疫グロブリン」とは、少なくとも２つの異なるＩｇ遺伝子座からのアミノ酸配列を含む免疫グロブリン分子、例えばヒトＩｇ遺伝子座によってコードされる部分とラットＩｇ遺伝子座によってコードされる部分とを含むトランスジェニック抗体を意味する。キメラ抗体は、非ヒトＦｃ領域または人工Ｆｃ領域を有するトランスジェニック抗体、及びヒトイデオタイプを含む。そのような免疫グロブリンは、そのようなキメラ抗体を産生するように操作された本発明の動物から単離することができる。

本明細書中で使用されるとき、「エフェクター細胞」という用語は、免疫応答の認知及び活性化相とは対照的に、免疫応答のエフェクター相に関与する免疫細胞を指す。いくつかのエフェクター細胞は、特異的なＦｃ受容体を発現し、特異的な免疫機能を実行する。いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞が、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を誘発することができる。例えば、ＦｃＲを発現する単球及びマクロファージは、標的細胞の特異的な殺傷及び免疫系の他の構成要素に抗原を提示すること、または抗原を提示する細胞に結合することに関与する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、標的抗原または標的細胞を貪食し得る。

「ヒトエフェクター細胞」は、Ｔ細胞受容体またはＦｃＲなどの受容体を発現し、エフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞、及び好中球が含まれ、ＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、本明細書に記載されるように、その天然源から、例えば、血液またはＰＢＭＣから単離され得る。

「免疫細胞」という用語は、本明細書では最も広義で使用され、骨髄またはリンパ系由来の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好酸球、多形核細胞、例えば、好中球、顆粒球、肥満細胞、及び好塩基球を含むが、これらに限定されない。

抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に帰属する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などが含まれる。

「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」及び「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈａｎｄＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ９：４５７－９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施することができる。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓｅｔａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価され得る。

「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分の、同種抗原と複合した分子（例えば、抗体）との結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えばＧａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０２：１６３（１９９６）に記載されるＣＤＣアッセイが実施され得る。

「親和性」とは、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一結合部位の間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途指示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）で表され得る。親和性は、当技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原に結合するのが遅く、容易に解離する傾向があり、一方、高親和性抗体は、一般に、抗原に結合するのがより速く、結合したままである傾向がある。

本明細書中で使用されるとき、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」とは、速度論様式で、ＯｃｔｅｔＱＫ３８４機器（ＦｏｒｔｅＢｉｏＩｎｃ．，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，ＣＡ）を使用して、ＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法によって決定される解離定数を指す。例えば、抗マウスＦｃセンサーにマウス－Ｆｃ融合抗原を負荷し、次いで抗体含有ウェルに浸して濃度依存的会合速度（ｋｏｎ）を測定する。抗体解離速度（ｋｏｆｆ）は最終工程で測定され、センサーは緩衝液のみを含有するウェルに浸される。Ｋｄは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比である（さらなる詳細については、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ，Ｊ，ｅｔａｌ．，ＣｏｍｂＣｈｅｍＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｃｒｅｅｎ，１２（８），７９１－８００，２００９を参照されたい）。

「治療」、「治療すること」などの用語は、本明細書では一般に、所望の薬理学的及び／または生理的効果を得ることを意味するために使用される。その効果は、その疾患もしくは症状を、完全にもしくは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び／または疾患及び／またはその疾患に起因する副作用の部分的もしくは完全な治癒という観点において治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物における疾患の任意の治療を包含し、（ａ）その疾患にかかりやすいが、まだそれを有すると診断されていない対象における疾患の発生を予防すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち、その発現を阻止すること、または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退行を引き起こすことを含む。治療薬は、疾患または傷害の発症前、発症中または発症後に投与することができる。進行中の疾患の治療は、治療が患者の望ましくない臨床症状を安定化または低減する場合、特に興味深い。そのような治療は、罹患組織における機能の完全な喪失の前に実施されることが望ましい。本療法は、疾患の兆候段階の間、いくつかの場合には疾患の兆候段階の後に投与することができ得る。

「治療有効量」は、対象に治療上の利益を与えるのに必要な活性剤の量を意味する。例えば、「治療有効量」は、病理学的症状、疾患の進行、もしくは疾患に関連する生理的状態を軽減するか、またはそうでなければ改善を引き起こすか、あるいは障害への抵抗性を改善することを誘発する量である。

本発明の文脈における「Ｂ細胞腫瘍」または「成熟Ｂ細胞腫瘍」という用語は、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫、リンパ芽球性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞腫瘍、例えば、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、単クローン性免疫グロブリン沈着症、重鎖疾患、マルトリンパ腫、結節性辺縁性Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、リンパ腫様顆粒腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、原発性体液性リンパ腫、及びエイズ関連非ホジキン腫を含む。

「ＣＤ２２の発現を特徴とする」という用語は、ＣＤ２２の発現が、その疾患または障害の特徴である１つ以上の病理学的プロセスに関連するか、またはそれに関与する任意の疾患または障害を広義に指す。そのような障害としては、限定されないが、Ｂ細胞腫瘍が挙げられる。

「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、治療のために評価されている及び／または治療されている哺乳動物を指す。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、がんを有する個体、自己免疫疾患を有する個体、病原体感染を有する個体などを含むがこれらに限定されない。対象はヒトであり得るが、他の哺乳動物、特にヒトの疾患の実験室モデルとして有用なそれらの哺乳動物、例えばマウス、ラットなども含み得る。

「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容できないほど毒性を有する追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は無菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される活性成分の有効用量を提供するために対象哺乳動物に合理的に投与することができるものである。

「無菌」製剤は、無菌であるか、もしくは全ての生体微生物及びその胞子を含まないか、または本質的に含まない。「凍結」製剤は、０℃未満の温度での製剤である。

「安定」製剤は、その中のタンパク質が、保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持するものである。好ましくは、この製剤は、保管時にその物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術は、当技術分野で利用可能であり、例えば、ＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１．ＶｉｎｃｅｎｔＬｅｅＥｄ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ．Ａ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖ．１０：２９－９０）（１９９３）で概説されている。安定性は、選択された温度において、選択された期間測定することができる。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／または目視検査によって）、カチオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点（ｉｃＩＥＦ）、またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用した電荷異質性の評価、アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析、質量分析、還元された抗体と無傷抗体とを比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析、ペプチドマップ（例えば、トリプチックまたはＬＹＳ－Ｃ）分析、抗体の生物学的活性または抗原結合機能の評価などを含む、様々な異なる方法で定性的に及び／または定量的に評価することができる。不安定性には、凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、非対システイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化差異などのうちのいずれか１つ以上が関与し得る。

ＩＩ．詳細な説明
抗ＣＤ２２抗体
本発明の態様は、抗ＣＤ２２結合ドメインを含む多重特異性結合化合物を含む。ヒトＣＤ２２に結合する密接に関連した重鎖のみ抗体結合ドメインのファミリーが本明細書に提供される。このファミリーの抗体は、本明細書に定義され、表１に示される一組のＣＤＲ配列を含み、表２に示される配列番号２４～８４に提供される重鎖可変領域（ＶＨ）配列によって例示される。本明細書に記載の抗体は、臨床的治療薬（複数可）としての有用性に寄与する多くの利点を提供する。抗体は、所望の結合親和性を有する特定の配列の選択を可能にする、ある範囲の結合親和性を有するメンバーを含む。

適切な抗体は、開発及び治療的または他の使用のために本明細書に提供されるものから選択され得、二重特異性抗体、例えば、図１４Ａに示されるようなもの、または三重特異性抗体、またはＣＡＲ－Ｔ構造の一部（例えば、図１４Ｂに示されるようなもの）としての使用を含むがこれらに限定されない。図１４Ａは、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２２多重特異性抗体の非限定的な例の図であり、抗ＣＤ２２ドメインは一価であり、かつ単一特異性である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３ドメインは、ＣＨ１ドメインを含有し、軽鎖と対合するが、抗ＣＤ２２ドメイン（複数可）は、重鎖のみ抗体に由来し、ＣＨ１ドメインを含有せず、軽鎖と相互作用しない。いくつかの実施形態では、２つの重鎖は、例えば、ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ技術を使用して対合される。

図１５に示される抗体を参照すると、図１５Ａは、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２２二重特異性抗体を示し、抗ＣＤ２２結合アームは一価かつ単一特異性であり、抗ＣＤ２２アームの抗原結合ドメインは単一の構成であり、これは、１つの抗原結合ドメインのみが存在することを意味する。図１５Ｂは、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２２二重特異性抗体を示し、抗ＣＤ２２結合アームは二価かつ単一特異性であり、抗ＣＤ２２アームの抗原結合ドメインはタンデム構成であり、これは、タンデム配置された２つの同一の抗原結合ドメインが存在することを意味する。図１５Ｃは、抗ＣＤ３×抗ＣＤ２２二重特異性抗体を示し、抗ＣＤ２２結合アームは二価かつ二重パラトピックであり、抗ＣＤ２２アームの抗原結合ドメインはタンデム配置である。

候補タンパク質に対する親和性の決定は、Ｂｉａｃｏｒｅ測定などの当技術分野において公知の方法を使用して実施することができる。抗体ファミリーのメンバーは、約１０^－６～約１０^－１１のＫｄでＣＤ２２に対する親和性を有し得、限定されることなく、約１０^－６～約１０^－１０、約１０^－６～約１０^－９、約１０^－６～約１０^－８、約１０^－８～約１０^－１１、約１０^－８～約１０^－１０、約１０^－８～約１０^－９、約１０^－９～約１０^－１１、約１０^－９～約１０^－１０、またはこれらの範囲内の任意の値を含む。親和性の選択は、インビトロアッセイ、前臨床モデル、及び臨床試験を含む、ＣＤ２２生物学的活性を調節する、例えば遮断するための生物学的評価、ならびに潜在的な毒性の評価によって確認することができ得る。

本明細書における抗体ファミリーのメンバーは、カニクイザルのＣＤ２２タンパク質と交差反応性ではないが、所望ならば、カニクイザルのＣＤ２２タンパク質、または任意の他の動物種のＣＤ２２との交差反応性を提供するように操作することができる。

本明細書中のＣＤ２２特異的抗体のファミリーは、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含むＶＨドメインを含む。ＣＤＲ配列は、一例として、配列番号２４～８４に記載の提供された例示的可変領域配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３それぞれについて、アミノ酸残基２６～３５、５３～５９、及び９８～１１７の前後の領域内に位置し得る。一般に配列の順序は同じままであるが、異なるフレームワーク配列が選択される場合、ＣＤＲ配列は異なる位置であり得ることが当業者には理解されるであろう。

本発明の抗ＣＤ２２抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列は、以下の構造式によって包含され得、ここでＸは可変アミノ酸を示し、それは以下に示されるような特定のアミノ酸であり得る。
ＣＤＲ１
ＧＸ_１ＳＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｙ（配列番号１０４）
式中、Ｘ_１はＤまたはＧであり、
Ｘ_２はＳ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
Ｘ_３はＳまたはＤであり、
Ｘ_４はＧ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ_５はＤ、Ｇ、またはＳであり、
Ｘ_６はＹまたはＨである。
ＣＤＲ２
Ｘ_７Ｘ_８ＹＸ_９ＧＸ_１０Ｘ_１１（配列番号１０５）
式中、Ｘ_７はＩまたはＶであり、
Ｘ_８はＹまたはＨであり、
Ｘ_９はＳまたはＴであり、
Ｘ_１０はＡ、Ｖ、またはＳであり、
Ｘ_１１はＴまたはＡである。
ＣＤＲ３
Ｘ_１２ＲＸ_１３ＤＳＳＸ_１４ＷＲＳ（配列番号１０６）
式中、Ｘ_１２はＴ、Ａ、またはＫであり、
Ｘ_１３はＤまたはＥであり、
Ｘ_１４はＮまたはＳである。

代表的なＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を表１及び３に示す。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１～１０のうちのいずれか１つのＣＤＲ１配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ１配列は配列番号１である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１１～１７のうちのいずれか１つのＣＤＲ２配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ２配列は配列番号１１である。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１８～２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ３配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ２配列は配列番号１８である。

さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む。

さらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号２４～８４の重鎖可変領域アミノ酸配列のうちのいずれか（表２）を含む。

なおさらなる実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体は、配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む。

いくつかの実施形態では、本発明の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体のＣＤＲ配列は、配列番号１～２３のうちのいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、もしくはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列のセットに対する１つまたは２つのアミノ酸置換を含む（図１）。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換（複数可）は、上に提供された式に対して、ＣＤＲ１のアミノ酸位置４～６のうちの１つもしくは２つ、及び／またはＣＤＲ２のアミノ酸位置２、４～７のうちの１つもしくは２つ、及び／またはＣＤＲ３のアミノ酸位置５もしくは１２のうちの１つもしくは２つである。いくつかの実施形態では、本明細書の重鎖のみ抗ＣＤ２２抗体は、（表２に示す）配列番号２４～８４の重鎖可変領域配列のうちのいずれか１つに対して、少なくとも約８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域配列を含み得る。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体が提供され、それらは、限定されないが、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む、本明細書で論じられる構成のいずれかを有し得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、少なくとも２つの抗原結合ドメインを含む重鎖可変領域を含み得、抗原結合ドメインのそれぞれは、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は第１の抗原（例えば、ＣＤ３）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対と、重鎖のみ抗体からの重鎖とを含み得る。特定の実施形態では、重鎖のみ抗体からの重鎖は、ＣＨ１ドメインの非存在下で、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む。１つの特定の実施形態では、二重特異性抗体が、エフェクター細胞上の抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対と、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体からの重鎖とを含む。

いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、軽鎖可変ドメインと対になるＣＤ３結合ＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、軽鎖は固定軽鎖である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、ヒトＶＨフレームワーク中に、配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、ヒトＶＬフレームワーク中に、配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む。ＣＤ３結合ＶＨドメイン及び軽鎖可変ドメインは、合わさると、ＣＤ３に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、配列番号９１の重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、配列番号９１の重鎖可変領域配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、配列番号９２の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、配列番号９２の重鎖可変領域配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含む。

上述のＣＤ３結合ＶＨドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む多重特異性抗体は、例えば、公開されたＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／０５２５０３号に記載されているように、有利な特性を有し、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＣＤ２２に対する結合親和性を有する、本明細書に記載の多重特異性抗体及び抗原結合ドメインのいずれかを、本明細書に記載のＣＤ３結合ドメイン及び固定軽鎖ドメインと組み合わせて、１つ以上のＣＤ２２エピトープ及びＣＤ３に対する結合親和性を有する多重特異性抗体を生成することが可能である。

いくつかの実施形態では、二重特異性抗体または多重特異性抗体が提供され、それらは、二重特異性三本鎖抗体様分子を含むが、これらに限定されず、本明細書で論じられる構成のいずれかを有し得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域、及びＣＤ２２以外のタンパク質に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、第１の抗原に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対と、ＣＨ１ドメインの非存在下で、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む重鎖のみ抗体からの重鎖と、第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する抗原結合ドメインとを含み得る。１つの特定の実施形態では、二重特異性抗体が、エフェクター細胞上の抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖対と、ＣＤ２２に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体からの重鎖とを含む。

本発明の結合化合物が二重特異性抗体であるいくつかの実施形態では、抗体の一方のアーム（１つの結合部分、または１つの結合単位）はヒトＣＤ２２に特異的であり、他方のアームは標的細胞、腫瘍関連抗原、標的抗原、例えばインテグリンなど、病原体抗原、チェックポイントタンパク質などに特異的であり得る。標的細胞は、下記のように、血液腫瘍、例えばＢ細胞腫瘍からの細胞を含むがこれに限定されないがん細胞を特異的に含む。いくつかの実施形態では、抗体の一方のアーム（１つの結合部分、または１つの結合単位）は、ヒトＣＤ２２に特異的であり、他方のアームは、ＣＤ３に特異的である。

いくつかの実施形態では、結合化合物は、配列番号９７の配列に結合した配列番号９２の配列を含む抗ＣＤ３軽鎖ポリペプチド、配列番号９８、９９、１００、または１０１のうちのいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ３重鎖ポリペプチド、及び配列番号９３、９４、９５、または９６のうちのいずれか１つの配列に結合した配列番号２４～８４のうちのいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ２２重鎖ポリペプチドを含む。これらの配列は、様々な方法で組み合わせて、所望のＩｇＧサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、サイレンシングされたＩｇＧ１、サイレンシングされたＩｇＧ４の二重特異性抗体を産生することができる。

単鎖ポリペプチド、二本鎖ポリペプチド、三本鎖ポリペプチド、四本鎖ポリペプチド、及びそれらの倍数を含むがこれらに限定されず、様々な形式の二重特異性抗体が本発明の範囲内である。本明細書における多重特異性抗体は、成熟Ｂ細胞上に選択的に発現されるＣＤ２２（抗ＣＤ２２×抗ＣＤ３抗体）及びＣＤ３に結合するＴ細胞多重特異性（例えば、二重特異性）抗体を特異的に含む。そのような抗体は、ＣＤ２２を発現する細胞の強力なＴ細胞媒介殺傷を誘導する。

抗体の調製
本発明の多重特異性結合化合物は、当技術分野において周知の方法によって調製することができる。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子がノックアウトまたは無効化される、トランスジェニックマウス及びラット、好ましくはラットを含むトランスジェニック動物によって産生される。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生される。ＵｎｉＲａｔ（商標）は、内因性免疫グロブリン遺伝子がサイレンシングされており、ヒト免疫グロブリン重鎖トランスローカスを使用して、完全ヒトＨＣＡｂの多様で自然に最適化されたレパートリーを発現する。ラットにおける内因性免疫グロブリン遺伝子座は、様々な技術を使用してノックアウトまたはサイレンシングすることができるが、ＵｎｉＲａｔ（商標）では、ジンクフィンガー（エンド）ヌクレアーゼ（ＺＮＦ）技術を使用して、内因性ラット重鎖Ｊ遺伝子座、軽鎖Ｃκ遺伝子座、及び軽鎖Ｃλ遺伝子座を不活性化した。卵母細胞へのマイクロインジェクションのためのＺＮＦ構築物は、ＩｇＨ及びＩｇＬノックアウト（ＫＯ）株を産生することができる。詳細は、例えば、Ｇｅｕｒｔｓｅｔａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ３２５：４３３を参照されたい。Ｉｇ重鎖ノックアウトラットの特徴付けは、Ｍｅｎｏｒｅｔｅｔａｌ．，２０１０，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０：２９３２－２９４１によって報告されている。ＺＮＦ技術の利点は、最大数ｋｂの欠失を介して遺伝子または遺伝子座をサイレンシングするために結合する非相同末端が、相同組込みのための標的部位も提供することができることである（Ｃｕｉｅｔａｌ．，２０１１，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２９：６４－６７）。ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生されるヒト重鎖抗体は、ＵｎｉＡｂ（商標）と呼ばれ、従来の抗体では攻撃できないエピトープに結合することができる。ＵｎｉＡｂ（商標）はその高い特異性、親和性、及び小さなサイズにより、単一及びポリ特異的用途に理想的である。

ＵｎｉＡｂ（商標）に加えて、本明細書には、ラクダ科のＶＨＨフレームワーク及び変異を欠く重鎖のみ抗体、ならびにその機能的ＶＨ領域が特異的に含まれる。かかる重鎖のみ抗体は、例えば、ＷＯ２００６／００８５４８に記載されているように、完全ヒト重鎖のみ遺伝子座を含むトランスジェニックラットまたはマウスにおいて産生され得るが、ウサギ、モルモット、ラットなどの他のトランスジェニック哺乳動物も使用され得、ラット及びマウスが好ましい。重鎖のみ抗体は、そのＶＨＨまたはＶＨ機能断片を含め、組換えＤＮＡ技術によって、例えば、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉ、または酵母を含む好適な真核生物または原核生物宿主におけるコード核酸の発現によっても産生され得る。

重鎖のみ抗体のドメインは、抗体及び小分子薬物の次の利点を組み合わせる。単価または多価であり得、低い毒性を有し、製造の費用対効果が高い。これらのドメインは、サイズが小さいため、経口または局所投与を含む投与が容易であり、消化管の安定性を含む高い安定性を特徴とし、それらの半減期は、所望の使用または適応に合わせて調整することができる。加えて、ＨＣＡｂのＶＨ及びＶＨＨドメインは、費用対効果の高い方法で製造することができる。

特定の実施形態では、ＵｎｉＡｂ（商標）を含む本発明の重鎖抗体は、ＦＲ４領域の第１の位置（Ｋａｂａｔ番号付けシステムによるアミノ酸位置１０１）に天然アミノ酸残基を有し、これが、その位置の天然アミノ酸残基を含むかまたはそれと関連付けられた表面曝露疎水性パッチを破壊することができる別のアミノ酸残基によって置換される。そのような疎水性パッチは、通常、抗体軽鎖定常領域との界面に埋め込まれるが、ＨＣＡｂにおいては表面に曝露され、少なくとも部分的に、ＨＣＡｂの望ましくない凝集及び軽鎖会合のためのものである。置換アミノ酸残基は、好ましくは荷電し、より好ましくは、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、好ましくはアルギニン（Ｒ）などのように正荷電している。好ましい実施形態では、トランスジェニック動物に由来する重鎖のみ抗体は、１０１位にＴｒｐからＡｒｇの変異を含有する。得られるＨＣＡｂは、好ましくは、凝集の非存在下、生理的条件下で高い抗原結合親和性及び溶解性を有する。

本発明の一部として、ＥＬＩＳＡタンパク質及び細胞結合アッセイにおいてヒトＣＤ２２に結合する、ＵｎｉＲａｔ（商標）動物からの独特な配列を有するヒト抗ＣＤ２２重鎖抗体（ＵｎｉＡｂ（商標））を同定した。同定された重鎖可変領域（ＶＨ）配列（例えば、表２を参照されたい）は、ヒトＣＤ２２タンパク質結合及び／またはＣＤ２２＋細胞への結合に対して陽性であり、ＣＤ２２を発現しない細胞への結合に対して全て陰性である。

ＣＤ２２タンパク質上の非重複エピトープに結合する重鎖抗体、例えば、ＵｎｉＡｂ（商標）は、競合結合アッセイ、例えば、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡアッセイ）またはフローサイトメトリー競合結合アッセイによって同定することができる。例えば、標的抗原に結合する既知の抗体と目的とする抗体との間の競合を使用することができる。このアプローチを使用することにより、一組の抗体を、参照抗体と競合するものと競合しないものとに分けることができる。非競合抗体は、参照抗体によって結合されるエピトープと重複しない別個のエピトープに結合しているものとして同定される。多くの場合、１つの抗体が固定され、抗原が結合され、第２の標識（例えば、ビオチン化）抗体がＥＬＩＳＡアッセイで捕捉された抗原に結合する能力について試験される。これはまた、ＰｒｏｔｅＯｎＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ）、Ｂｉａｃｏｒｅ２０００及びＢｉａｃｏｒｅＴ２００（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）、ならびにＭＸ９６ＳＰＲイメージャー（ＩｂｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＢ．Ｖ．）を含む表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）プラットフォーム、ならびにＯｃｔｅｔＲｅｄ３８４及びＯｃｔｅｔＨＴＸ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，ＰａｌｌＩｎｃ）などのバイオレイヤー干渉法プラットフォームを使用することによっても実施することができる。さらなる詳細については、本明細書の実施例を参照されたい。

典型的には、抗体は、上述の競合結合アッセイなどの標準技術によって決定される、参照抗体の標的抗原への結合における約１５～１００％の低減を引き起こす場合、参照抗体と「競合する」。種々の実施形態では、相対的阻害は、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％以上である。

薬学的組成物、使用及び治療方法
本発明の別の態様は、適切な薬学的に許容される担体と混合した本発明の１つ以上の多重特異性結合化合物を含む薬学的組成物を提供することである。本明細書で使用される薬学的に許容される担体は、限定されないが、アジュバント、固体担体、水、緩衝液、または治療成分を保持するために当技術分野で使用される他の担体、またはそれらの組み合わせに例示される。

一実施形態では、薬学的組成物は、ＣＤ２２に結合する重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。別の実施形態では、薬学的組成物は、ＣＤ２２タンパク質上の２つ以上の非重複エピトープに対する結合特異性を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。好ましい実施形態では、薬学的組成物は、ＣＤ２２に対する結合特異性を有し、かつエフェクター細胞上の結合標的（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質などのＴ細胞上の結合標的）に対する結合特異性を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。

本発明に従って使用される抗体の薬学的組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態など、所望の純度を有するタンパク質を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することにより保管用に調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）を参照されたい）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される用量及び濃度ではレシピエントに無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖類、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）、及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤を含む。

非経口投与のための薬学的組成物は、好ましくは、無菌であり、実質的に等張性であり、かつ適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で製造される。薬学的組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与のための用量）で提供され得る。製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書の抗体は、静脈内注射もしくは注入によって、または皮下投与することができる。注射投与に関して、本明細書の抗体は、水溶液中、好ましくは生理的に適合する緩衝液中で製剤化して、注射部位の不快感を低減することができる。溶液は、上記のように担体、賦形剤、または安定剤を含有し得る。あるいは、抗体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、滅菌された発熱原を含まない水との構成のために凍結乾燥された形態であり得る。

抗体製剤は、例えば、米国特許第９，０３４，３２４号に開示されている。同様の製剤をＵｎｉＡｂ（商標）を含む本発明の重鎖抗体に使用することができる。皮下抗体製剤は、例えば、ＵＳ２０１６０３５５５９１及びＵＳ２０１６０１６６６８９に記載されている。

使用方法
本明細書に記載の重鎖のみ抗ＣＤ２２抗体、多重特異性抗体、及び薬学的組成物は、本明細書にさらに記載の状態及び疾患を含むが、これらに限定されない、ＣＤ２２の発現を特徴とする疾患及び状態を治療するために使用することができる。

ＣＤ２２は、１３５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質であり、前成熟及び未成熟Ｂ細胞上で、低レベルで発現し、成熟Ｂ細胞上で最大限に発現し、形質細胞上で最終的に下方制御される（例えば、Ｗａｌｋｅｒｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８Ｍａｒ；１２３（３）３１４－２５）。ＣＤ２２は、濾胞性（一次及び二次Ｂ細胞帯）、マントル、及び辺縁帯Ｂ細胞において強く発現し、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者からの試料の６０％～８０％に存在することが報告されている（Ａｌｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００９；１５（３）Ｆｅｂｒｕａｒｙ１１，２００９）。いくつかの血液悪性腫瘍において発現が観察されているため、ＣＤ２２は、抗体ベースの治療法の有望な標的である。

一態様では、本明細書におけるＣＤ２２重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））及び薬学的組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、及びＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含むが、これらに限定されない、ＣＤ２２の発現を特徴とする血液悪性腫瘍を治療するために使用することができる。

びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬまたはＤＬＢＬ）は、成人における非ホジキンリンパ腫の最も一般的な形態であり（Ｂｌｏｏｄ１９９７８９（１１）：３９０９－１８）、米国及び英国では、１００，０００人当たり７～８例の推定年間発症率を有する。それは、事実上身体のあらゆる部分で生じ得る侵襲性がんとして特徴付けられる。ＤＬＢＣＬの原因はよく分かっておらず、正常なＢ細胞だけでなく、他のタイプのリンパ腫または白血病細胞の悪性形質転換からも生じ得る。治療アプローチは、一般に化学療法及び放射線を伴い、成人の全体的な５年生存率平均は約５８％となっている。いくつかのモノクローナル抗体は、ＤＬＢＣＬを治療するための見込みを示しているが、一貫した臨床効果はまだ決定的には示されていない。そのため、ＤＬＢＣＬの免疫療法を含む新しい療法が非常に必要とされている。

別の態様では、本明細書のＣＤ２２重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））及び薬学的組成物は、ＣＤ２２を発現する病原性Ｂ細胞を特徴とする自己免疫障害を治療するために使用することができ、これには、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、及び多発性硬化症（ＭＳ）が含まれるが、これらに限定されない。

疾患の治療のための本発明の組成物の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び処置が予防的なものであるか治療的なものであるかを含む多くの異なる要因によって変化する。通常、患者はヒトであるが、ヒト以外の哺乳動物、例えばイヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオン動物、ウサギ、マウス、ラットなどの実験動物なども治療することができる。治療投与量は、安全性及び有効性を最適化するために滴定されることが可能である。

投与量レベルは、当業者によって容易に決定することが可能であり、必要に応じて、例えば、対象の治療への応答を修正するために必要とされる場合、修正することが可能である。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることが可能である活性成分の量は、治療する宿主及び特定の投与様式に応じて異なる。一般的に単位剤形は、約１ｍｇ～約５００ｍｇの間の活性成分を含有する。

いくつかの実施形態では、薬剤の治療投与量は、宿主の体重の、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、及びより通常では０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例えば、投与量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療計画は、２週間に１回または１ヶ月に１回または３～６ヶ月に１回の投与を伴う。本発明の治療実体は、通常、複数の機会に投与される。単回投与の際の間隔は、毎週、毎月または毎年であり得る。また間隔は、患者の治療実体の血中レベルを測定することによって指定される場合、不定期でもあり得る。あるいは、本発明の治療実体は、徐放性製剤として投与されることが可能であり、その場合、あまり頻繁な投与を必要としない。投与量及び頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期によって変化する。

典型的に、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、また、注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに好適な固体形態も調製することができる。本明細書の薬学的組成物は、直接または固体（例えば、凍結乾燥された）組成物を再構築した後の静脈内または皮下投与に適している。調製物はまた、上記のように、増強されたアジュバント効果のために、リポソームまたはポリラクチド、ポリグリコリド、もしくはコポリマーなどのマイクロ粒子中に乳化またはカプセル化され得る。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：１５２７，１９９０及びＨａｎｅｓ，ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ２８：９７－１１９，１９９７。本発明の薬剤は、活性成分の持続放出またはパルス放出を可能にするような方法で製剤化することができる蓄積注射またはインプラント調製物の形態で投与することができ得る。薬学的組成物は、一般に、無菌であり、実質的に等張性であり、及び米国食品医薬品局の全ての適正製造基準（ＧＭＰ）規制に完全に準拠して製剤化される。

本明細書中に記載される抗体及び抗体構造の毒性は、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致命的な用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に致命的な用量）を決定することによって決定され得る。毒性と治療効果との間の用量比が治療指数である。それらの細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータは、ヒトに使用するのに毒性のない投与量範囲を処方するのに使用することができる。本明細書に記載の抗体の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、採用される剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。正確な処方、投与経路、及び投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。

投与用組成物は、一般に、薬学的に許容される担体、好ましくは水性担体に溶解した抗体または他の薬剤（例えば、別の削摩剤）を含むであろう。様々な水性担体、例えば緩衝食塩水などを使用することができる。それらの溶液は無菌であり、及び一般的に望ましくない物質を含まない。それらの組成物は、従来の周知の滅菌技術によって滅菌することができ得る。本発明の組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされるような薬学的に許容される補助物質（ｐＨ調整剤、緩衝剤及び毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム及び乳酸ナトリウムなど）を含有することができ得る。これらの製剤中の活性剤の濃度は広く変動し得、選択される特定の投与様式及び患者の必要性に従って主に体液量、粘度、体重などに基づいて選択されるであろう（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈｅｄ．，１９８０）及びＧｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｌｍａｎ，ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈａｒｄｍａｎｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，１９９６））。

本発明の活性剤及びその製剤、ならびに使用説明書を含むキットも本発明の範囲内である。キットはさらに少なくとも１つの追加の試薬、例えば化学療法薬などを含有することができる。キットは、典型的に、キットの内容物の意図される使用を示すラベルを含む。本明細書で使用される「ラベル」という用語には、キット上にもしくはキットとともに供給される、または他の方法でキットに付随する、あらゆる書面または記録物が含まれる。

ここで十分に説明されている本発明は、本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行うことができることが当業者に明らかとなるであろう。

材料及び方法
ＣＤ２２タンパク質結合
抗原－抗体親和性を決定するための動態結合実験は、二重層干渉法を使用してＯｃｔｅｔＱＫ－３８４システム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上で実施した。抗ヒトＩｇＧＦｃ捕捉（ＡＨＣ）バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、パート番号：１８－５０６４）をアッセイ緩衝液（１×ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．２）中で水和し、１００ｍＭグリシンｐＨ１．５中で前処理した。ベースラインをアッセイ緩衝液中に１２０秒間確立した。次いで、ＡＨＣバイオセンサーを、５μｇ／ｍＬの濃度のＵｎｉＡｂ（商標）で１２０秒間固定した。別のベースライン（１２０秒）をアッセイ緩衝液中に確立した。次に、２５０ｎＭから開始して、これらをアッセイ緩衝液中のヒトＣＤ２２タンパク質の７点の１：２の希釈系列に浸した。分析物カラムの最後のウェルは、緩衝液と負荷されたバイオセンサーとの間の非特異的結合を試験するためのアッセイ緩衝液のみを含有し、参照ウェルとして使用した。会合を６００秒間観察し、続いて解離を９００秒間観察した。ＯｃｔｅｔＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓｖ９．０（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いてデータ解析を実施した。結合動態を標準的な１：１結合モデルを使用して分析した。

ＣＤ２２細胞結合
ＣＤ２２陽性細胞への結合を、Ｄａｕｄｉ細胞株（ＡＴＣＣ）を用いてフローサイトメトリー（ＧｕａｖａｅａｓｙＣｙｔｅ８ＨＴ，ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって評価した。簡潔に述べると、１００，０００個の標的細胞を、４℃で３０分間、精製したＵｎｉＡｂ（商標）の希釈系列で染色した。インキュベーション後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液（１×ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ_３）で２回洗浄し、Ｒ－フィコエリスリン（ＰＥ）（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４２－０９）にコンジュゲートしたヤギＦ（ａｂ’）_２抗ヒトＩｇＧで染色し、細胞結合抗体を検出した。４℃で２０分間のインキュベーション後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄し、次いで平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメトリーにより測定した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７を使用して計算した。カニクイザルＣＤ２２陽性細胞への結合は、同じプロトコルを使用して以下を修正して決定した：標的細胞は、カニクイザルＣＤ２２の細胞外ドメインを発現するように安定的にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞からであり、各抗体は、単一の濃度（約１．７μｇ／ｍＬ）で試験されたため、ＥＣ５０値は計算されなかった。

実施例１：重鎖のみ抗体を発現する遺伝子操作ラット
「ヒト－ラット」のＩｇＨ遺伝子座は、いくつかの部分に分けて構築され、組み立てられた。これには、ヒトＪ_Ｈ下流におけるラットＣ領域遺伝子の修飾及び結合に続き、ヒトＶ_Ｈ６－Ｄ断片領域の上流付加が伴った。次いで、ヒトＶ_Ｈ遺伝子の別々の集団を有する２つのＢＡＣ［ＢＡＣ６及びＢＡＣ３］に、ヒトＶ_Ｈ６、全てのＤ、全てのＪ_Ｈ、及び修飾されたラットＣγ２ａ／１／２ｂ（ΔＣ_Ｈ１）を含む、組み立てられ修飾された領域をコードするＧｅｏｒｇと呼ばれるＢＡＣを同時注入した。

再配置されていない立体配置の人工重鎖免疫グロブリン遺伝子座を有するトランスジェニックラットを作製した。ＩｇＧ２ａ（ΔＣ_Ｈ１）、ＩｇＧ１（ΔＣ_Ｈ１）、ＩｇＧ２ｂ（ΔＣ_Ｈ１）遺伝子はＣ_Ｈ１セグメントを欠いていた。定常領域遺伝子ＩｇＥ、ＩｇＡ、及び３’エンハンサーが、ＧｅｏｒｇＢＡＣに含まれた。トランスジェニックラットのＲＴ－ＰＣＲ及び血清分析（ＥＬＩＳＡ）は、トランスジェニック免疫グロブリン遺伝子座の生産的な再配列及び血清中の様々なアイソタイプの重鎖のみ抗体の発現を示した。トランスジェニックラットを、米国特許公開第２００９／００９８１３４Ａ１号に以前に記載された変異内因性重鎖及び軽鎖遺伝子座を有するラットと交雑させた。そのような動物の分析は、ラット免疫グロブリン重鎖及び軽鎖発現の不活性化、ならびにヒトＶ、Ｄ、及びＪ遺伝子によってコードされる可変領域を有する重鎖抗体の高レベル発現を示した。トランスジェニックラットの免疫化は、抗原特異性重鎖抗体の高力価血清応答の生成をもたらした。ヒトＶＤＪ領域を有する重鎖抗体を発現するこれらのトランスジェニックラットは、ＵｎｉＲａｔ（商標）と呼ばれた。

実施例２：免疫
ＣＤ２２の組換え細胞外ドメインによる免疫
１２匹のＵｎｉＲａｔ動物（６匹のＨＣ２７、６匹のＨＣ２８）を組換えヒトＣＤ２２タンパク質で免疫した。Ｔｉｔｅｒｍａｘ／Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバントを使用して標準的なプロトコルに従って動物を免疫した。ＣＤ２２の組換え細胞外ドメインは、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから購入し、滅菌生理食塩水で希釈し、そしてアジュバントと組み合わせた。免疫原をＴｉｔｅｒｍａｘ及びＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌアジュバントと組み合わせた。Ｔｉｔｅｒｍａｘ中の免疫原による初回免疫（プライミング）を左右の脚に投与した。その後の追加免疫をＡｌｈｙｄｒｏｇｅｌの存在下で行い、採取３日前に追加免疫をＰＢＳ中の免疫原で実施した。血清は、血清力価を決定するために最終採血時にラットから採取した。

血清力価結果
血清力価概要情報を、図１７に示す。図１７に示すグラフでは、各行は個々の動物を表している。グラフの凡例は、各個々の動物の識別番号を示す。血清の８点の希釈系列の結合活性は、ｈｕＣＤ２２＋Ｆｃタンパク質、ｈｕＣＤ２２＋Ｈｉｓタグタンパク質、アカゲザルＣＤ２２＋Ｈｉｓタグタンパク質、及びＨｉｓタグオフターゲットタンパク質に対してＥＬＩＳＡにより試験した。この群の動物の中で、ヒト及びアカゲザルＣＤ２２タンパク質の両方に対する多岐にわたる血清反応性レベルが観察された。Ｈｉｓタンパク質タグに対する血清応答も観察された。

実施例３：ＣＤ２２発現細胞株への結合
図１６は、本明細書に記載の抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体の標的結合活性を要約する。列１は、抗ＣＤ２２重鎖のみ抗体のクローン識別番号を示す。列２は、モル濃度で測定したタンパク質に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。列３は、秒単位で測定されたタンパク質への結合の解離定数（Ｋ－ｏｆｆ率）を示す。列４は、バックグラウンドＭＦＩシグナルに対する倍率として測定されたＤａｕｄｉ細胞への結合を示す。列５は、バックグラウンドＭＦＩシグナルに対する倍率として測定されたカニクイザルＣＤ２２を安定的に発現するＣＨＯ細胞への結合を示す。列６は、バックグラウンドＭＦＩシグナルに対する倍率として測定されたＣＤ２２タンパク質を発現しないＣＨＯ細胞への結合を示す。

実施例４：休止ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞のＴ細胞媒介性細胞毒性
非刺激ヒトＴ細胞をＣＤ２２陽性細胞（Ｄａｕｄｉ）及び異なる濃度の二重特異性抗体とともにインキュベートした。４８時間後、細胞に対してフローサイトメトリーを実施し、細胞毒性を測定した。細胞培養物からの上清を使用して、サイトカインＩＬ－２の放出を測定した。ＰＯＳＣＴＲＬ抗体は、同じ抗ＣＤ２２アームを含むが、より強い親和性の抗ＣＤ３アームを含む抗体を指す。結果を図１Ａ及び図１Ｂに示す。

非刺激ヒトＴ細胞をＣＤ２２陽性細胞（ＳＵＤＨＬ１０）及び異なる濃度の二重特異性抗体とともにインキュベートした。７２時間後、細胞に対してフローサイトメトリーを実施し、細胞毒性を測定した。細胞培養物からの上清を使用して、サイトカインＩＬ－２の放出を測定した。ＰＯＳＣＴＲＬ抗体は、同じ抗ＣＤ２２アームを含むが、より強い親和性の抗ＣＤ３アームを含む抗体を指す。結果を図２Ａ及び図２Ｂに示す。

非刺激ヒトＴ細胞を、ＣＤ２２陽性ＤＬ－ＢＣＬ細胞株（ＲＩ－１）及び異なる濃度の二重特異性抗体とともに、１０：１、５：１、または１：１という様々なエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比でインキュベートした。７２時間後、細胞に対してフローサイトメトリーを実施し、細胞毒性を測定した。細胞培養物からの上清を使用して、サイトカインＩＬ－２の放出を測定した。ＰＯＳＣＴＲＬ抗体は、同じ抗ＣＤ２２アームを含むが、より強い親和性の抗ＣＤ３アームを含む抗体を指す。データは、細胞毒性％がＥ：Ｔ比に依存することを示す。結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。

実施例５：活性化ヒト汎Ｔ細胞を使用したＣＤ２２陽性細胞のＴ細胞媒介性細胞毒性
活性化ヒトＴ細胞をＣＤ２２陽性細胞（Ｄａｕｄｉ及びＲＩ－１）またはＣＤ２２陰性細胞株（Ｋ５６２）及び異なる濃度の二重特異性抗体とともにインキュベートした。細胞溶解をカルセインベースの蛍光読み出しを使用して測定した。二重特異性ＣＤ２２×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆ結合化合物は、ＣＤ２２＋細胞の溶解を特異的に引き起こしたが、ＣＤ２２－Ｋ５６２細胞の溶解は引き起こさなかった。ＰＯＳＣＴＲＬ抗体は、同じ抗ＣＤ２２アームを含むが、より強い親和性の抗ＣＤ３アームを含む抗体を指す。ＮＥＧＣＴＲＬは、非特異的な腫瘍アーム及び抗ＣＤ３＿Ｆ２Ｆと同じ抗ＣＤ３アームを有する抗体を指す。結果を図４に示す。

実施例６：ＣＤ２２及びＣＤ３に対する二重特異性抗体の細胞結合
ＣＤ２２陽性細胞Ｄａｕｄｉ、Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ及びＣＤ２２陰性細胞Ｋ５６２を二重特異性抗体とともにインキュベートした。細胞結合を、抗ヒトＩｇＧ二次抗体試薬を使用してフローサイトメトリーにより測定した。データは、二重特異性抗体がＣＤ２２＋細胞に結合するが、ＣＤ２２－細胞には結合しないことを示す。ＰＯＳＣＴＲＬ抗体は、同じ抗ＣＤ２２アームを含むが、より強い親和性の抗ＣＤ３アームを含む抗体を指す。ＮＥＧＣＴＲＬは、非特異的な腫瘍アーム及び抗ＣＤ３＿Ｆ２Ｆと同じ抗ＣＤ３アームを有する抗体を指す。結果を図５に示す。

実施例７：Ｄａｕｄｉ異種移植片におけるＣＤ２２－１×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆを用いたインビボ有効性試験
ＣＤ２２－１×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆのインビボ有効性を試験するために、様々な用量のＣＤ２２－１×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆを、図６に示すように、Ｄａｕｄｉ細胞（５ｅ６細胞／マウス）を移植した雌のＮＳＧマウスに投与した。治療スケジュールを以下の表７に示す。平均腫瘍体積、体重、体重変化パーセント、及び個々の腫瘍体積を使用して治療の有効性を評価した。

ＣＤ２２－１×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆからのデータを、陰性対照及びリツキシマブと比較して、図７～１３に示しており、このデータは、ＣＤ２２－１×ＣＤ３＿Ｆ２Ｆの有効性を示している。

本発明の好ましい実施形態が、本明細書に示され、説明されたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは、当業者には明らかであろう。ここで、当業者は、多数の変化形、変更、及び置換を本発明から逸脱することなく想到するであろう。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する種々の代替手段が、本発明の実施において採用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの等価物を包含することが意図される。

Claims

ＣＤ３に結合する多重特異性結合化合物であって、
重鎖可変領域であって、
（ａ）配列番号８５に２つ以下の置換を有するＣＤＲ１配列、及び／または
（ｂ）配列番号８６に２つ以下の置換を有するＣＤＲ２配列、及び／または
（ｃ）配列番号８７に２つ以下の置換を有するＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
軽鎖可変領域と、を含む、前記多重特異性結合化合物。
前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列がヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項１に記載の多重特異性結合化合物。
ヒトＶＨフレームワーク中に重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、各ＣＤＲ配列が、配列番号８５～８７のうちのいずれか１つと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、前記重鎖可変領域と、
軽鎖可変領域と、を含む、請求項１に記載の多重特異性結合化合物。
重鎖可変領域であって、
（ａ）配列番号８５に２つ以下の置換を有するＣＤＲ１配列、及び
（ｂ）配列番号８６に２つ以下の置換を有するＣＤＲ２配列、及び
（ｃ）配列番号８７に２つ以下の置換を有するＣＤＲ３配列を含む、前記重鎖可変領域と、
軽鎖可変領域と、を含む、請求項１に記載の多重特異性結合化合物。
配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、
軽鎖可変領域と、を含む、請求項４に記載の多重特異性結合化合物。
前記軽鎖可変領域が、ヒトＶＬフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、各ＣＤＲ配列が、配列番号９２のＣＤＲ配列もしくはＣＤＲ配列のセットに対して３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を含むか、または前記ＣＤＲ配列が、配列番号９２のＣＤＲ配列もしくはＣＤＲ配列のセットと少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記軽鎖可変領域が、配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記重鎖可変領域が、配列番号９１と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記重鎖可変領域が、配列番号９１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記軽鎖可変領域が、配列番号９２と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記軽鎖可変領域が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、
（ａ）配列番号１～１０のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）配列番号１１～１７のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）配列番号１８～２３のアミノ酸配列のうちのいずれかに２つ以下の置換を有するＣＤＲ３を含む、前記多重特異性結合化合物。
前記第１の結合単位の前記ＣＤＲ１、前記ＣＤＲ２、及び前記ＣＤＲ３配列がヒトフレームワーク中に存在する、請求項１２に記載の多重特異性結合化合物。
前記第１の結合単位が、ＣＨ１配列の非存在下で重鎖定常領域配列をさらに含む、請求項１２または１３に記載の多重特異性結合化合物。
前記第１の結合単位が、
（ａ）配列番号１～１０からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、及び／または
（ｂ）配列番号１１～１７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、及び／または
（ｃ）配列番号１８～２３からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
（ａ）配列番号１～１０からなる群から選択されるＣＤＲ１配列、及び
（ｂ）配列番号１１～１７からなる群から選択されるＣＤＲ２配列、及び
（ｃ）配列番号１８～２３からなる群から選択されるＣＤＲ３配列を含む、請求項１５に記載の多重特異性結合化合物。
（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、
（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む、請求項１２～１６のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
配列番号２４～８４の配列のうちのいずれか１つと少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項１２に記載の多重特異性結合化合物。
配列番号２４～８４からなる群から選択される重鎖可変領域配列を含む、請求項１８に記載の多重特異性結合化合物。
配列番号２４の重鎖可変領域配列を含む、請求項１９に記載の多重特異性結合化合物。
ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、
重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、
（ａ）次式のＣＤＲ１配列
ＧＸ_１ＳＩＸ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｙ（配列番号１０４）
（式中、Ｘ_１はＤまたはＧであり、
Ｘ_２はＳ、Ｔ、Ｉ、またはＮであり、
Ｘ_３はＳまたはＤであり、
Ｘ_４はＧ、Ｓ、またはＮであり、
Ｘ_５はＤ、Ｇ、またはＳであり、
Ｘ_６はＹまたはＨである）と、
（ｂ）次式のＣＤＲ２配列
Ｘ_７Ｘ_８ＹＸ_９ＧＸ_１０Ｘ_１１（配列番号１０５）
（式中、Ｘ_７はＩまたはＶであり、
Ｘ_８はＹまたはＨであり、
Ｘ_９はＳまたはＴであり、
Ｘ_１０はＡ、Ｖ、またはＳであり、
Ｘ_１１はＴまたはＡである）と、
（ｃ）次式のＣＤＲ３配列
Ｘ_１２ＲＸ_１３ＤＳＳＸ_１４ＷＲＳ（配列番号１０６）
（式中、Ｘ_１２はＴ、Ａ、またはＫであり、
Ｘ_１３はＤまたはＥであり、
Ｘ_１４はＮまたはＳである）と、を含む、前記多重特異性結合化合物。
ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ配列が、配列番号１～２３からなる群から選択されるＣＤＲ配列中に２つ以下の置換を有する配列を含む、前記多重特異性結合化合物。
ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、ヒトＶＨフレームワーク中にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ配列が、配列番号１～２３からなる群から選択される、前記多重特異性結合化合物。
ＣＤ２２に対する結合親和性を有する第１の結合単位と、ＣＤ３に対する結合親和性を有する第２の結合単位とを含む多重特異性結合化合物であって、前記第１の結合単位が、
重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、ヒトＶＨフレームワーク中に、
（ａ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列、または
（ｂ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列、または
（ｃ）配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列、を含む、前記多重特異性結合化合物。
二重特異性である、請求項２４に記載の多重特異性結合化合物。
ＣＡＲ－Ｔ形式である、先行請求項のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
多重特異性結合化合物であって、
（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、
（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域と、
（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１１のＣＤＲ２配列、及び配列番号１８のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む、前記多重特異性結合化合物。
多重特異性結合化合物であって、
（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、
（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域と、
（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号１９のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む、前記多重特異性結合化合物。
多重特異性結合化合物であって、
（ｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号８５のＣＤＲ１配列、配列番号８６のＣＤＲ２配列、及び配列番号８７のＣＤＲ３配列を含む、ＣＤ３に対する結合親和性を有する重鎖可変領域と、
（ｉｉ）ヒトＶＬフレームワーク中に配列番号８８のＣＤＲ１配列、配列番号８９のＣＤＲ２配列、及び配列番号９０のＣＤＲ３配列を含む、軽鎖可変領域と、
（ｉｉｉ）ヒトＶＨフレームワーク中に配列番号１のＣＤＲ１配列、配列番号１２のＣＤＲ２配列、及び配列番号２０のＣＤＲ３配列を含む、抗ＣＤ２２重鎖抗体の抗原結合ドメインと、を含む、前記多重特異性結合化合物。
ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域がサイレンシングされたヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域である、請求項３０に記載の多重特異性結合化合物。
ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域がサイレンシングされたヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域である、請求項３２に記載の多重特異性結合化合物。
請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物を含む、薬学的組成物。
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の治療のための方法であって、前記障害を有する対象に、請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物、または請求項３４に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の治療のための薬剤の調製における、請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物の使用。
ＣＤ２２の発現を特徴とするＢ細胞障害の治療に使用するための、請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物。
前記障害が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
前記障害が、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
前記障害が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
前記障害が、関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
前記障害が、多発性硬化症（ＭＳ）である、請求項３５～３７のいずれか１項に記載の方法、使用、または多重特異性結合化合物。
請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物をコードする、ポリヌクレオチド。
請求項４３に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
請求項４４に記載のベクターを含む、細胞。
請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物を産生する方法であって、前記結合化合物の発現を許容する条件下で、請求項４５に記載の細胞を増殖させることと、前記細胞から前記結合化合物を単離することと、を含む、前記方法。
請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物を作製する方法であって、ＵｎｉＲａｔ動物をＣＤ２２で免疫することと、ＣＤ２２結合重鎖配列を同定することと、を含む、前記方法。
治療方法であって、個体に、有効用量の請求項１～３３のいずれか１項に記載の多重特異性結合化合物、または請求項３４に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。