JP2022517461A - Ｇｍ－ｃｓｆアンタゴニストを使用した免疫療法関連毒性の治療方法 - Google Patents

Ｇｍ－ｃｓｆアンタゴニストを使用した免疫療法関連毒性の治療方法 Download PDF

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Abstract

ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和および／または除去することを必要とする対象においてヒトＧＭ－ＣＳＦを中和および／または除去するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含む方法が提供される。標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法もまた提供される。免疫療法関連毒性を予防／治療するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）（ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が不活性化またはノックアウトされている）および／または組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む方法が提供される。【選択図】図４０Ｂ

Description

関連出願の相互参照
この出願は、２０１７年１０月２日に出願された米国仮出願第６２／５６７，１８７号および２０１８年９月１０日に提出された同第６２／７２９，０４３号に対する優先権を主張する、２０１８年１０月２日に出願された米国仮出願第１６／１４９，３４６号の一部継続出願である、２０１８年１１月２９日に出願された米国特許出願第１６／２０４，２２０号の一部継続出願である、２０１９年１月１５日に出願された米国特許出願第１６／２４８，７６２号の一部継続出願である、２０１９年２月２２日に出願された米国特許出願第１６／２８３，６９４号の一部継続出願であり、この出願は、２０１８年１０月２日に出願されたＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５３９３３に対する優先権を主張し、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、それを必要とする対象においてヒトＧＭ－ＣＳＦを中和および／または除去するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウト（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を有するＣＡＲ－Ｔ細胞を対象に投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法に関する。本発明はさらに、免疫療法関連毒性の予防／低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含み、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が方法によって不活性化またはノックアウトされている、方法に関する。
本発明は、免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を低減するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、免疫療法で治療された対象において血液脳関門の完全性を維持するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法に関する。本発明はさらに、それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法によって誘発される神経炎症を低減または予防するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法に関する。本発明は、免疫療法関連毒性の発生のない免疫療法で治療された対象において再発率を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防するための方法に関する。本発明はまた、免疫療法関連毒性の発生のある免疫療法で治療された対象において再発率を低下させるか、または腫瘍再発の発生を予防するための方法に関する。本発明はさらに、免疫療法関連毒性の発生を有する対象において、ＧＭ－ＣＳＦ以外のサイトカインまたはケモカインのレベルを低下させるための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法に関する。本発明はまた、対象における免疫療法関連毒性を治療または予防するための方法であって、対象にキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、および組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有する（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）、方法に関する。本明細書の開示はまた、対象における免疫療法関連毒性の発生および／または重症度を阻害または低減する方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法を提供する。
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）は、マクロファージ、Ｔ細胞、マスト細胞、ナチュラルキラー細胞、内皮細胞、および線維芽細胞を含む、様々な細胞型によって分泌されるサイトカインである。ＧＭ－ＣＳＦは、顆粒球および単球の分化を刺激する。単球は、次に組織に移動し、マクロファージと樹状細胞に成熟する。したがって、ＧＭ－ＣＳＦの分泌は、マクロファージ数の急速な増加につながる。ＧＭ－ＣＳＦは、中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症応答にも関与しており、血液由来の単球およびマクロファージの流入、ならびにアストロサイトおよびミクログリアの活性化を引き起こす。免疫関連毒性は、異なる免疫療法から生じる高レベルの免疫活性化の結果として生じる、生命を脅かす可能性のある免疫応答を含む。免疫関連毒性は現在、がん患者への免疫療法の適用における主要な合併症である。キメラ抗原受容体Ｔ（ＣＡＲ－Ｔ）細胞療法は、がんを治療するための新規で有望で革命的な療法として浮上している。Ｂ細胞悪性腫瘍における前例のない反応に基づいて、２つのＣＤ１９標的化ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲＴ１９）細胞製品が２０１７年にＦＤＡによって承認された。しかしながら、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の幅広い適用は、独特で潜在的に致命的な毒性の出現によって制限される。これらには、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）および神経毒性（ＮＴ）の発達が含まれる。ＣＡＲＴ１９細胞で治療された患者の最大５０％がグレード３以上のＣＲＳまたはＮＴを発症し、いくつかの死亡が報告されている。これらの毒性は、長期入院、集中治療室（ＩＣＵ）滞在に関連しており、ＮＴの長期的影響は不明である。したがって、これらのＣＡＲＴ１９細胞関連毒性を制御することは、罹患率、死亡率、入院期間、ＩＣＵ入院、必要な支持療法、およびＣＡＲ－Ｔ細胞療法に関連する重大な間接費を減らすために不可欠である。免疫関連毒性を予防および治療する方法が依然として大いに必要であることは明らかである。理想的な方法は、免疫療法の有効性に影響を与えることなく、これらの生命を脅かす合併症のリスクを最小限に抑え、例えば、免疫療法化合物の安全な投与量の増加および／またはＴ細胞の拡大を可能にすることにより、有効性を潜在的にさらに改善することができる。
一態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるヒトＧＭ－ＣＳＦを中和および／または除去する方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法を提供する。
さらなる態様では、本発明は、免疫療法関連毒性を予防／低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含み、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が、本明細書に記載の方法によって不活性化またはノックアウトされる、方法を提供する。
一態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を低減するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象において血液脳関門の完全性を維持するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む方法を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法によって誘発される神経炎症を低減または予防するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法を提供する。
別の態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を予防または低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含む方法を提供する。
一態様では、本発明は、免疫療法関連毒性の発生がない免疫療法で治療された対象における再発率を低下させるか、腫瘍再発の発生を予防または遅延させるための方法であっては、対象に組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。関連する態様では、本発明は、免疫療法関連毒性の発生のある免疫療法で治療された対象において再発率を低下させるかまたは腫瘍再発の発生を予防するための方法であって、対象に組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、免疫療法関連毒性の発生を有する対象においてＧＭ－ＣＳＦ以外のサイトカインまたはケモカインのレベルを低下させる方法であって、対象に組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、サイトカインまたはケモカインのレベルは、免疫療法関連毒性の発生中の対象におけるそれらのレベルと比較して減少する方法を提供する。
さらなる態様では、本発明は、対象における免疫療法関連毒性を予防または低減するための方法であって、対象にキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）および組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、それらのＧＭ－ＣＳＦ遺伝子「ノックアウト」（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を含む、方法を提供する。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト（組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト）と組み合わせて投与され得る。
一態様では、対象における免疫療法関連毒性の発生または重症度を阻害または低減する方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与するステップを含む方法が本明細書に開示される。
関連する態様では、免疫療法は、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインもしくはケモカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
別の態様では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む。関連する態様では、モノクローナル抗体は、抗ＣＤ３、抗ＣＤ５２、抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＴＬＡ４、抗ＣＤ２０、抗ＢＣＭＡ抗体、二重特異性抗体、または二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ）抗体、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。関連する態様では、サイトカインは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。
別の態様では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、対象の血清、組織液、またはＣＳＦ中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を低減することを含む。関連する態様では、炎症関連因子は、Ｃ反応性タンパク質、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ｓＩＬ２Ｒα、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＰ１０、ＩＬ－１５、ＭＣＰ－１（ＡＫＡ ＣＣＬ２）、ＭＩＧ、ＭＩＰ１β、ＩＦＮγ、ＣＸ３ＣＲ１、もしくはＴＮＦα、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。別の態様では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの投与は、該免疫療法の有効性を低減しない。別の態様では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの投与は、該免疫療法の有効性を増加させる。別の態様では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの投与は、免疫療法の前、同時、または後に行われる。関連する態様では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、コルチコステロイド、抗ＩＬ－６抗体、トシリズマブ、抗ＩＬ－１抗体、シクロスポリン、抗てんかん薬、ベンゾジアゼピン、アセタゾラミド、過換気療法、もしくは高浸透圧療法、またはそれらの任意の組み合わせと共投与される。
別の態様では、免疫療法関連毒性は、脳疾患、損傷、または機能不全を含む。関連する態様では、脳疾患、損傷、または機能不全は、ＣＡＲ－Ｔ細胞関連ＮＴまたはＣＡＲ－Ｔ細胞関連脳症症候群（ＣＲＥＳ）を含む。関連する態様では、脳疾患、損傷、または機能不全の発生の阻害または低減は、対象における頭痛、せん妄、不安、振戦、発作活動、混乱、覚醒状態の変化、幻覚、不全失語症、運動失調、失行症、顔面神経麻痺、運動脱力、発作、非痙攣性ＥＥＧ発作、意識レベルの変化、昏睡、内皮活性化、血管漏出、血管内凝固、またはそれらの任意の組み合わせを低減することを含む。別の態様では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ－Ｔ誘導性サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を含む。関連する態様では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、限定されないが、高熱、筋肉痛、吐き気、悪心、低血圧、低酸素、もしくはショック、またはそれらの組み合わせを低減または阻害することを含む。関連する態様では、免疫療法関連毒性は生命を脅かす。
別の態様では、対象のＡＮＧ２もしくはＶＷＦの血清濃度、または血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が低減される。関連する態様では、対象は、３８℃を超える体温、＞１６ｐｇ／ｍｌのＩＬ－６血清濃度、またはＣＡＲ－Ｔ細胞の注入後の最初の３６時間の間に１，３００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。関連する態様では、対象は、該脳疾患、損傷、または機能不全を有する素因がある。関連する態様では、対象は、該ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入前の血清中のＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が１を超える。
別の態様では、免疫療法関連毒性は、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）またはマクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）を含む。関連する態様では、ＨＬＨまたはＭＡＳの発生の阻害または低減は、生存時間および／または再発までの時間を増加させること、マクロファージ活性化を低減すること、Ｔ細胞活性化を低減すること、抹消循環におけるＩＦＮγの濃度を低減すること、もしくは抹消循環におけるＧＭ－ＣＳＦの濃度を低減すること、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
別の態様では、対象は、発熱、脾腫、２つ以上の株を伴う血球減少症、高トリグリセリド血症、低フィブリノゲン血症、血球貪食、ＮＫ細胞活性の低下または欠如、５００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度、もしくは２４００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度、またはそれらの任意の組み合わせを呈する。関連する態様では、対象は、ＨＬＨまたはＭＡＳを獲得する素因がある。関連する態様では、対象は、ＰＲＦ１、ＵＮＣ１３Ｄ、ＳＴＸ１１、ＳＴＸＢＰ２、またはＲＡＢ２７Ａから選択される遺伝子に変異を有するか、または低減されたパーフォリンの発現、またはそれらの任意の組み合わせを有する。
一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦの、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体のアルファサブユニットに対する結合を遮断する。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ポリクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢの抗体断片である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体、単鎖Ｆｖ、およびＦａｂは、ニワトリにおいて生成されてもよく、ニワトリＩｇＹは、トリにおいて哺乳類ＩｇＧ抗体に相当するものである。（Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００５）２７：２８９－２９５；Ｆｉｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，Ｍａｙ ２００６，ｐ．３３４３－３３４９）。ニワトリＩｇＹ抗体には、結合力、すなわち、抗体と抗原との間の全体的な結合強度が高い、特異性が高い（免疫原以外の哺乳類タンパク質との交差反応性が低い）、卵黄の収量が高く、バックグラウンドが低い（ＩｇＹおよびＩｇＧのＦｃ領域の構造の違いにより、偽陽性染色が少なくなる）という利点がある。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ラクダ科動物、例えば、軽鎖を欠く重鎖抗体とも呼ばれる上のラマ由来の単一可変ドメインであり得る（ｓｄＡｂ、ＶＨＨ、およびＮａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）とも呼ばれる、ＶＨＨドメイン（約１５ｋＤａ）は、完全な結合能力および親和性（従来の抗体と同等）を有する哺乳動物において生じる最小の既知の抗原認識部位である）。（Ｇａｒａｉｃｏｅｃｈｅａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ＰＬｏＳ ＯＮＥ １０（８）：ｅ０１３３６６５；Ａｒｂａｂｉ－Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ Ｍ（２０１７）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１５８９；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１８）１１，３６６－３７３）。別の実施形態では、抗体断片は、ポリエチレングリコールにコンジュゲートされる。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、約５ｐＭ～約５０ｐＭの範囲の親和性を有する。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、中和抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト可変領域を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、操作されたヒト可変領域を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト化可変領域を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、操作されたヒト可変領域を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト化可変領域を含む。
一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト軽鎖定常領域を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト重鎖定常領域を含む。別の実施形態では、ヒト重鎖定常領域は、ガンマ鎖である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３と、ＶＬ領域のＣＤＲ３とを含む。別の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。
一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含む重鎖可変領域（Ｊセグメントは、ヒトＪＨ４（ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を有し、Ｖセグメントは、ヒト生殖系列ＶＨ１ １－０２またはＶＨ１ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する）、またはＲＱＲＦＰＹを含むＣＤＲ３結合特異性決定基を含む重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、Ｊセグメントは、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む。別の実施形態では、ＣＤＲ３は、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む。別の実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ１またはＣＤＲ２は、ヒト生殖系列ＶＨ１配列であり得るか、またはＣＤＲ１およびＣＤＲ２の両方がヒト生殖系列ＶＨ１であり得る。別の実施形態では、抗体は、図１に記載されるＶＨ領域に示される、重鎖可変領域ＣＤＲ１もしくはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１およびＣＤＲ２の両方を含む。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有するＶセグメントを有する。別の実施形態では、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有するＶＨ。
別の実施形態では、例えば、上の段落に記載される重鎖可変領域を有する抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３結合特異性決定基を含む軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。一実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む。別の実施形態では、抗体ＶＬ領域ＣＤＲ３は、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬＴを含む。別の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。別の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１およびＣＤＲ２の両方を含む。別の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＫＩＩＩＡ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む。別の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する。
一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。別の実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。別の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または受容体サブユニットまたは可溶性ＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。
一実施形態では、対象におけるＣＡＲ－Ｔ免疫療法の有効性を増加させる方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与するステップを含み、投与が、該対象におけるＣＡＲ－Ｔ免疫療法の有効性を増加させる、方法が本明細書に開示される。別の実施形態では、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの該投与は、ＣＡＲ－Ｔ免疫療法の前、それと同時に、またはそれの後に行われる。別の実施形態では、該有効性の増加は、ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加、Ｔ細胞機能を阻害する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）数の低減、チェックポイント阻害剤との相乗作用、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、該ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも５０％の増加を含む。別の実施形態では、該ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも４分の１の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも半分の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも１の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して１を超える対数拡大を含む。
一実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、中和抗体を含む。別の実施形態では、中和抗体は、モノクローナル抗体である。
一実施形態では、対象におけるＣＡＲ－Ｔ関連毒性の発生または重症度を阻害または低減する方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与するステップを含み、投与が、対象におけるＣＡＲ－Ｔ関連毒性の発生または重症度を阻害または低減する、方法が本明細書に開示される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性は、ＮＴ、ＣＲＳ、またはそれらの組み合わせを含む。一実施形態では、本明細書で提供される治療方法は、それを必要とする対象におけるＣＲＳ ａｎＮＴを予防および治療する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞関連ＮＴは、ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体で治療された対象におけるＮＴの低減と比較して、約５０％低減される。様々な実施形態では、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、本明細書に記載される実施形態によるｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。
別の実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、生存時間および／または再発までの時間を増加させること、マクロファージ活性化を低減すること、Ｔ細胞活性化を低減すること、もしくは循環ｈＧＭ－ＣＳＦの濃度を低減すること、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、該対象は、発熱（以下を伴うまたは伴わない：悪寒、倦怠感、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、吐き気、嘔吐、頭痛、皮疹、下痢、頻呼吸、低酸素血症、低酸素、ショック、心血管頻脈、脈圧拡大、低血圧、毛細血管漏出、早期心拍出量の増加、後期心拍出量の減少、Ｄダイマーの上昇、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノゲン血症、高窒素血症、高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、精神状態変化、混乱、せん妄、明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行変化、発作、臓器不全、またはそれらの任意の組み合わせ）を呈する。
別の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性の発症を予防することを含む。
別の実施形態では、細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子発現をノックアウトまたはサイレンシングすることを含む、細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ発現を遮断または低減する方法が本明細書に開示される。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ発現の遮断または低減には、低分子干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲ、ＲＮＡｉ、ＤＮＡ指向ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）（これは、動物細胞の内因性ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を活性化するためにＤＮＡ構築物を使用する遺伝子サイレンシング技法である）、または操作された転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、すなわち、非配列特異的様式でＤＮＡを切断するヌクレアーゼに融合したカスタマイズ可能な配列特異的ＤＮＡ結合ドメインで構成される人工タンパク質を用いた標的化ゲノム編集が含まれる。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（Ｊｏｕｎｇ ａｎｄ Ｓａｎｄｅｒ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１３ Ｊａｎｕａｒｙ；１４（１）：４９－５５）。一実施形態では、細胞は、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。
一実施形態では、対象は、ヒトである。
一実施形態では、対象における免疫療法関連毒性の発生または重症度を阻害または低減する方法に使用するためのｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが本明細書に開示され、本方法は、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与するステップを含む。一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを含む医薬組成物が本明細書に開示される。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の例示的なＶＨおよびＶＬ配列を提供する。 ３７℃で表面プラズモン共鳴分析（Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００）により決定されたＧＭ－ＣＳＦのＡｂ１に対する結合を示す。Ａｂ１は、Ｂｉａｃｏｒｅチップに固定された抗Ｆａｂポリクローナル抗体に捕捉された。示されるように、異なる濃度のＧＭ－ＣＳＦが表面上に注入された。グローバルフィット分析は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２ソフトウェアを使用して１：１の相互作用を想定して行われた。 ３７℃で表面プラズモン共鳴分析（Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００）により決定されたＧＭ－ＣＳＦのＡｂ２に対する結合を示す。Ａｂ２は、Ｂｉａｃｏｒｅチップに固定された抗Ｆａｂポリクローナル抗体に捕捉された。示されるように、異なる濃度のＧＭ－ＣＳＦが表面上に注入された。グローバルフィット分析は、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２ソフトウェアを使用して１：１の相互作用を想定して行われた。 グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦに対するＡｂ１およびＡｂ２の結合を示す。ヒト２９３細胞から発現されたグリコシル化ＧＭ－ＣＳＦまたはＥ．ｃｏｌｉで発現された非グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦへの結合は、ＥＬＩＳＡによって決定された。単一実験からの代表的な結果が示される（実施例１）。１５００ｎｇ／ｍｌから開始するＡｂ１およびＡｂ２の２倍希釈液をＧＭ－ＣＳＦコーティングウェルに適用した。各ポイントは、３回の測定の平均±標準誤差を表す。シグモイド曲線フィットは、Ｐｒｉｓｍ ５．０ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して実施された。 非グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦに対するＡｂ１およびＡｂ２の結合を示す。ヒト２９３細胞から発現されたグリコシル化ＧＭ－ＣＳＦまたはＥ．ｃｏｌｉで発現された非グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦへの結合は、ＥＬＩＳＡによって決定された。単一実験からの代表的な結果が示される（実施例１）。１５００ｎｇ／ｍｌから開始するＡｂ１およびＡｂ２の２倍希釈液をＧＭ－ＣＳＦコーティングウェルに適用した。各ポイントは、３回の測定の平均±標準誤差を表す。シグモイド曲線フィットは、Ｐｒｉｓｍ ５．０ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して実施された。 Ａｂ１およびＡｂ２の共有エピトープに対する結合を示す競合ＥＬＩＳＡを示す。５０ｎｇ／ウェルの組換えＧＭ－ＣＳＦでコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを、様々な濃度の抗体（Ａｂ２、Ａｂ１、またはアイソタイプ対照抗体）で、５０ｎＭビオチン化Ａｂ２とともにインキュベートした。ビオチン化抗体結合は、ニュートラアビジン－ＨＲＰコンジュゲートを使用してアッセイした。ＧＭ－ＣＳＦへの結合の競合は、１時間であった。各ポイントは、３回の測定の平均±標準誤差を表す。シグモイド曲線フィットは、Ｐｒｉｓｍ ５．０ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して実施された。 Ａｂ１およびＡｂ２の共有エピトープに対する結合を示す競合ＥＬＩＳＡを示す。５０ｎｇ／ウェルの組換えＧＭ－ＣＳＦでコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを、様々な濃度の抗体（Ａｂ２、Ａｂ１、またはアイソタイプ対照抗体）で、５０ｎＭビオチン化Ａｂ２とともにインキュベートした。ビオチン化抗体結合は、ニュートラアビジン－ＨＲＰコンジュゲートを使用してアッセイした。ＧＭ－ＣＳＦへの結合の競合は、１８時間であった。各ポイントは、３回の測定の平均±標準誤差を表す。シグモイド曲線フィットは、Ｐｒｉｓｍ ５．０ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｇｒａｐｈｐａｄ）を使用して実施された。 ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＩＬ－８発現の阻害を示す。各抗体の様々な量を、０．５ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦとインキュベートし、Ｕ９３７細胞と１６時間インキュベートした。培養上清へと分泌されたＩＬ－８をＥＬＩＳＡによって決定した。 抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるヒト顆粒球上のＧＭ－ＣＳＦ刺激ＣＤ１１ｂの用量依存的阻害を示す。 抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＣＤ１４＋ヒト初代単球／マクロファージ上のＧＭ－ＣＳＦ誘導ＨＬＡ－ＤＲの用量依存的阻害を示す。 ある特定の白血病、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の特有の特徴である、ＣＡＲ－Ｔ関連活性および白血球増殖の刺激における主要なサイトカインとしてのＧＭ－ＣＳＦ（骨髄性炎症性因子）の役割を示す。 抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるヒトＧＭ－ＣＳＦの中和による、ＧＭ－ＣＳＦ依存性ヒトＴＦ－１細胞（ヒト赤白血病）増殖の阻害を示す。ＫＢ００３は、ヒトＧＭ－ＣＳＦを標的とし、中和するように設計された組換えモノクローナル抗体である。ＫＢ００２は、ｈＧＭ－ＣＳＦを標的とし、中和するマウス／ヒトキメラモノクローナル抗体である。 キメラ抗原受容体の説明である。 再発難治性ＡＬＬにおいて高い応答率をもたらすＣＡＲ－Ｔ１９療法を示す。データは、ＣＡＲ－Ｔ１９療法後、Ｒ／Ｒ ＡＬＬの歴史的転帰およびＲ／Ｒ ＡＬＬの転帰を示す。（Ｍａｕｄｅ，ｅｔ ａｌ ＮＥＪＭ ２０１４）。 再発難治性ＡＬＬにおいて高い応答率をもたらすＣＡＲ－Ｔ１９療法を示す。データは、ＣＡＲ－Ｔ１９療法後、Ｒ／Ｒ ＡＬＬの歴史的転帰およびＲ／Ｒ ＡＬＬの転帰を示す。（Ｍａｕｄｅ，ｅｔ ａｌ ＮＥＪＭ ２０１４）。 かなりのＧＭ－ＣＳＦがＮＴに関連していることを示すエビデンスを示す。ＧＭ－ＣＳＦレベルは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の重篤な有害作用と相関している。ＧＭ－ＣＳＦレベルは、ＩＬ－１５以外の他のサイトカインに先行し、それを調節する。ＧＭ－ＣＳＦの上昇は、≧グレード３のＮＴと明らかに関連している。ＩＬ－２は、この関連を持つ唯一の他のサイトカインである。 かなりのＧＭ－ＣＳＦがＮＴに関連していることを示すエビデンスを示す。ＧＭ－ＣＳＦレベルは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の重篤な有害作用と相関している。ＧＭ－ＣＳＦレベルは、ＩＬ－１５以外の他のサイトカインに先行し、それを調節する。ＧＭ－ＣＳＦの上昇は、≧グレード３のＮＴと明らかに関連している。ＩＬ－２は、この関連を持つ唯一の他のサイトカインである。 ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のＣＲＳおよびＮＴの推定時間経過を示す。症状発症のタイミングおよびＣＲＳの重症度は、導入剤、がんの種類、患者の年齢、および免疫細胞の活性化の規模に依存する。ＣＡＲ－Ｔ関連ＣＲＳ症状の発症は、典型的には、Ｔ細胞注入の数日から時折数週間後に発生し、最大Ｔ細胞拡大と一致する。ｍＡｂ療法と関連するＣＲＳと同様に、養子Ｔ細胞療法と関連するＣＲＳは、一貫して、ＩＦＮγ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、ＩＬ－５の上昇と関連している。ＣＲＳに対するＣＡＲ－Ｔ細胞の明らかな用量反応関係は存在しないが、非常に高用量のＴ細胞は、症状のより早い発症をもたらす可能性がある。 ＧＭ－ＣＳＦがＣＡＲ－Ｔ有害作用の主要なイニシエーターであることを示す。この図は、ＣＲＳおよびＮＴにおけるＧＭ－ＣＳＦの中心的な役割を示す。パーフォリンは、グランザイムが腫瘍細胞膜に浸透することを可能にする。ＣＡＲ－Ｔ産生ＧＭ－ＣＳＦは、ＣＣＬ２（ＭＣＰ１）を産生するＣＣＲ２＋骨髄細胞を腫瘍部位に動員する。ＣＣＬ２は、ＣＣＲ２＋骨髄細胞の動員により、その自身の産生を積極的に強化する。骨髄細胞からのＩＬ－１およびＩＬ－６は、ＧＭ－ＣＳＦの産生を誘導することにより、ＣＡＲ－Ｔと別の正のフィードバックループを形成する。ホスファチジルセリンは、パーフォリンおよびグランザイムの細胞膜破壊の結果として露出される。ホスファチジルセリンは、ＣＣＬ２、ＩＬ－１、ＩＬ－６、および他の炎症性エフェクターの骨髄細胞産生を刺激する。この自己強化フィードバックループの最終転帰は、内皮の活性化、血管透過性をもたらし、そして最終的には、ＣＲＳおよびＮＴをもたらす。さらに、動物モデルのエビデンスは、ＧＭ－ＣＳＦノックアウトマウスはＣＲＳの徴候を示さないが、ＩＬ－６ノックアウトマウスは依然としてＣＲＳを発達させる可能性があることを示す。ＣＣＲ２＋骨髄細胞からのＧＭ－ＣＳＦ受容体ｋ／ｏは、神経炎症モデルにおけるカスケードを無効化する。（Ｓｅｎｔｍａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．；Ｃｏｘｆｏｒｄ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１５ （４３）５１０－５１４；Ｉｓｈｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６ １２８：３３５８；Ｔｅａｃｈｅｙ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１６ Ｊｕｎｅ ６（６）：６６４－６７９；Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６ １２４：２：１８８；Ｂａｒｒｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６：１２８－６５４、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルが同様であることを示す。ａ．ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成。（実施例６を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和することを示す（実施例７を参照されたい）。 ヒトＣＲＳのマウスモデルのプロトコルおよび結果を示す。（実施例５）。 ヒトＣＲＳのマウスモデルのプロトコルおよび結果を示す。（実施例５）。 本明細書に記載される実施形態による、異種移植モデルにおけるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体と組み合わせたＣＡＲ－Ｔの有効性を示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、インビボでのＣＡＲ－Ｔの有効性を阻害しないことが示される。（実施例８を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態による、異種移植モデルにおけるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体と組み合わせたＣＡＲ－Ｔの有効性を示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、インビボでのＣＡＲ－Ｔの有効性を阻害しないことが示される。（実施例８を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態による、異種移植モデルにおけるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体と組み合わせたＣＡＲ－Ｔの有効性を示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、インビボでのＣＡＲ－Ｔの有効性を阻害しないことが示される。（実施例８を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体が生存に対するＣＡＲ－Ｔの影響を損なわないことを示すインビトロおよびインビボの前臨床データを示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＰＢＭＣの不在下で、インビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞の機能を妨げない。生存率は、ＣＡＲ－Ｔ＋対照およびＣＡＲ－Ｔ＋ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体で類似した。（実施例９を参照されたい）。 ＡおよびＢよりなり、本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体がＣＡＲ－Ｔ拡大を増加させることを示すインビトロおよびインビボの前臨床データを示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、インビトロでのＣＡＲ－Ｔがん細胞殺傷を増加させる。ＧＭ－ＣＳＦの抗体中和は、ＰＢＭＣの存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を増加させる。ＣＡＲ－Ｔの増殖は、ＰＢＭＣの存在下でＧＭ－ＣＳＦ中和抗体によって増加した。（ＰＢＭＣなしでは影響を受けなかった）。抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＡＲ－Ｔ脱顆粒、細胞内ＧＭ－ＣＳＦ産生、またはＩＬ－２産生を阻害しなかった。（実施例１０を参照されたい）。 ＣＡＲ－Ｔの拡大が全体的な応答率の改善と関連することを示す。ＣＡＲ ＡＵＣ（曲線下面積）はＣＡＲ－Ｔ投与後の最初の２８日間にわたる血液のＣＡＲ＋細胞／μＬの累積レベルとして定義された。Ｐ値はウィルコクソン順位和検定により計算された。（Ｎｅｅｌａｐｕ，ｅｔ ａｌ ＩＣＭＬ ２０１７ Ａｂｓｔｒａｃｔ ８）。（実施例１１を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の研究プロトコルを示す。（実施例１２を参照されたい）。入院中および最初の３０日間の通院中に毎日評価されるＣＲＳおよびＮＴ。ＣＡＲ－Ｔ治療の－１、＋１、および＋３日目にＧＭ－ＣＳＦ中和抗体を受ける適格な対象。追加投与は、少なくとも７日目まで延長することが考慮され得る。ベースライン、ならびに１、３、６、９、１２、１８、および２４ヶ月目に実施される腫瘍評価。血液試料（ＰＢＭＣおよび血清）、－５、－１、０、１、３、５、７、９、１１、１３、２１、２８、９０、１８０、２７０、および３６０日目。（実施例１２を参照されたい）。 ＡおよびＢよりなり、ＧＭ－ＣＳＦの枯渇がＣＡＲ－Ｔ細胞拡大を増加させることを示す。Ａは、対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞の増加したエクスビボ拡大を示す。Ｂは、本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体による治療後のより頑強なＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を示す。（実施例１３を参照されたい）。 本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の安全性プロファイルを示す。（実施例１４を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に加えられる場合、マウスの前臨床モデルにおいて神経炎症を９０％低減させることを示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体（上段）の投与後に神経毒性の徴候を示すマウスの脳と比較して、ならびに未処置（ベースライン）マウスの脳（下段）と比較して、本明細書に記載される実施形態によるＣＡＲ－Ｔ細胞およびＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の投与後にマウスの脳が神経炎症から防がれる、ＭＲＩデータ（ＢＢＢ破壊と神経炎症を示すＴ１高信号強度）を示す。 ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に加えられる場合、マウスの前臨床モデルにおいて神経炎症を９０％低減させることを示す。ベースラインからのＴ１超強度の増加パーセントを定量的に示す：ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体を投与されたマウスの１００％をわずかに超える増加と比較して、本明細書に記載される実施形態によるＣＡＲ－ＴおよびＧＭ－ＣＳＦ中和抗体を投与されたマウスでは、脳Ｔ１高信号強度がベースラインからおよそ１０％パーセント増加した。比較グラフに示されるように、ＣＡＲ－ＴおよびＧＭ－ＣＳＦ中和抗体を投与したマウスの脳Ｔ１高信号強度のベースラインからの約１０％の増加は、ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体を受けたマウスに存在する神経炎症の量と比較して、ベースラインからの脳Ｔ１高信号強度により測定されるとき、神経炎症における９０％の低減である。 ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に加えられる場合、マウスの前臨床モデルにおいて神経炎症を９０％低減させることを示す。未処置のマウス（５００，０００～１．５Ｍの白血病性細胞を有した）およびＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体（１５，０００～１００，０００の白血病性細胞を有した）と比較して、本明細書に記載される実施形態によるＣＡＲ－Ｔ＋ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体による治療が、白血病性細胞の数を大幅に低減させ（５００～５，０００細胞に減少）、全体的な疾患制御が改善されたことを示す（実施例１５を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法に加えられる場合、マウスの前臨床モデルにおいて神経炎症を９０％低減させることを示す。未処置のマウス（５００，０００～１．５Ｍの白血病性細胞を有した）およびＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体（１５，０００～１００，０００の白血病性細胞を有した）と比較して、本明細書に記載される実施形態によるＣＡＲ－Ｔ＋ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体による治療が、白血病性細胞の数を大幅に低減させ（５００～５，０００細胞に減少）、全体的な疾患制御が改善されたことを示す（実施例１５を参照されたい）。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。ＣＡＲＴ１９およびレンジルマブで処置されたＣＡＲＴ１９が、ＵＴＤ（非形質導入Ｔ細胞）（１群当たり７～８匹のマウス、ｎ＝２）と比較して、高腫瘍負荷ＮＡＬＭ６再発モデルの生存転帰において等しく有効であることを示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体が、初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス、＊ｐ＜０．０５）において、ＣＲＳ誘導体重減少を制御し、血清ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和し、血清マウスＭＣＰ－１（単球走化性因子タンパク質－１）の発現を低減したことを示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体が、初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス、＊ｐ＜０．０５）において、ＣＲＳ誘導体重減少を制御し、血清ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和し、血清マウスＭＣＰ－１（単球走化性因子タンパク質－１）の発現を低減したことを示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体が、初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス、＊ｐ＜０．０５）において、ＣＲＳ誘導体重減少を制御し、血清ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和し、血清マウスＭＣＰ－１（単球走化性因子タンパク質－１）の発現を低減したことを示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）のＭＲＩにより示されるように、レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体が脳炎症を低減したことを示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。ＣＡＲＴ１９＋レンジルマブで処理されたマウスが、抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体で処理されたマウスと比較して、改善された有効性、すなわち、ＣＡＲＴ１９＋抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、低減したＣＤ１９＋脳白血病量、および初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス）の脳マクロファージの低減した割合を示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。ＣＡＲＴ１９＋レンジルマブで処理されたマウスが、抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体で処理されたマウスと比較して、改善された有効性、すなわち、ＣＡＲＴ１９＋抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、低減したＣＤ１９＋脳白血病量、および初代ＡＬＬ異種移植ＣＡＲＴ１９ ＣＲＳ／ＮＴモデル（１群当たり３匹のマウス）の脳マクロファージの低減した割合を示す。 ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。ＧＭ－ＣＳＦのＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９ Ｋ／Ｏが、ＮＡＬＭ６刺激によるＣＡＲＴ１９およびＵＴＤにおいて、細胞内染色によりその発現を低減することを示す。（代表的な実験、ｎ＝２） ＧＭ－ＣＳＦの遮断がＣＡＲＴ１９の毒性を制御するのに役立ち、有効性を改善することを示す。ＣＡＲＴ１９およびＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲＴ１９が腫瘍量をＵＴＤよりも良好に制御し、ＧＭ／ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲＴ１９細胞が高腫瘍量ＮＡＬＭ６再発モデル（１群当たり６匹のマウス、＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）において、ＣＡＲＴ１９よりもわずかに良好に腫瘍量を制御することを示す。エラーバーＳＥＭ。 インビトロでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、単球の存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を増強し、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能を損なわないことを示す。培地のみでのＣＡＲＴ１９、またはＮＡＬＭ６と共培養したＣＡＲＴ１９で３日間培養した後、マルチプレックスでアッセイしたアイソタイプ対照処理と比較した、インビトロでＣＡＲ－Ｔ細胞が生成したｈＧＭ－ＣＳＦのレンジルマブ（ｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体）による中和をグラフで示す（ｎ＝２実験、実験ごとに２回繰り返し、代表的な実験を示し、＊＊＊ ｐ＜０．００１、レンジルマブとアイソタイプ対照処理の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 インビトロでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、単球の存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を増強し、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能を損なわないことを示す。ｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体処理が、生ＣＤ３細胞のＣＳＦＥフローサイトメトリー増殖アッセイによってアッセイされたとき、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖能力を阻害しなかったことをグラフで示す（ｎ＝３ドナー、ドナーあたり２複製、描かれている３日間の時点での代表的な実験、ｎｓ ｐ＞０．０５、レンジルマブとアイソタイプ対照治療の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。単独：培地のみのＣＡＲＴ１９、ＭＯＬＭ１３：ＣＡＲＴ１９＋ＭＯＬＭ１３、ＰＭＡ／ＩＯＮ：ＣＡＲＴ１９＋５ｎｇ／ｍＬ ＰＭＡおよび０．１μｇ／ｍＬ ＩＯＮ、ＮＡＬＭ６：ＣＡＲＴ１９＋ＮＡＬＭ６。 インビトロでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、単球の存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を増強し、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能を損なわないことを示す。ヒト単球と共培養した場合にＣＡＲＴ１９で処理したアイソタイプ対照と比較して、ｈＧＭ－ＣＳＦの中和によってＣＡＲＴ１９の増殖を促進するレンジルマブをグラフで示す（ｎ＝３ドナー、３日間の時点で、ドナーあたり２複製＊＊ｐ＜０．０００１、平均＋ＳＥＭ）。 インビトロでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、単球の存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を増強し、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能を損なわないことを示す。ＮＡＬＭ６と培養した場合、レンジルマブ処理がＣＡＲＴ１９または非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）の細胞毒性を阻害しなかったことをグラフで示す（ｎ＝３ドナー、ドナーあたり２複製、描かれている４８時間の時点での代表的な実験、ｎｓ ｐ＞０．０５、レンジルマブとアイソタイプ対照治療の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。実験スキーマを示す：ＮＳＧマウスにＣＤ１９＋ルシフェラーゼ＋細胞株ＮＡＬＭ６（マウスＩ．Ｖ．あたり１×１０６細胞）を注射した。４～６日後、マウスの撮像し、ランダム化し、翌日、レンジルマブまたは対照ＩｇＧ（１０ｍｇ／Ｋｇ、ＣＡＲ－Ｔ注射の日から始まり、１０日間毎日ＩＰ投与）とともに１～１．５×１０６ＣＡＲ－Ｔ１９または同等数の対照ＵＴＤ細胞の総細胞を投与した。ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後７日目から疾患負荷を評価するためにマウスを連続生物発光イメージングで追跡し、全生存期間を追跡した。尾静脈出血は、ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後の７～８日目に行った。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。ｈＧＭ－ＣＳＦシングルプレックスアッセイされたアイソタイプ対照処理と比較した、インビボでのＣＡＲ－Ｔ産生血清ｈＧＭＣＳＦのレンジルマブ中和を示す（ｎ＝２実験、群あたり７～８匹のマウス、代表的な実験、ＣＡＲ－Ｔ細胞／ＵＴＤ注射後８日目からの血清、＊＊＊ｐ＜０．００１、レンジルマブとアイソタイプ対照処理の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。インビボでのレンジルマブ処理ＣＡＲ－Ｔが、ＡＬＬの高腫瘍量再発異種移植モデルにおいて、アイソタイプ対照処理ＣＡＲ－Ｔと比較して、腫瘍量の制御において同等に有効であることをグラフで示す（ＣＡＲ－Ｔ注射後７日目、ｎ＝２実験、群あたり７～８匹のマウス、代表的な実験を示す、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５、ｎｓ ｐ＞０．０５、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。図２８Ｃからのマウス画像を示す。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。実験スキーマを示す：ＮＳＧマウスに、ＡＬＬの患者に由来する芽球を注射した（マウスＩ．Ｖ．あたり１×１０６細胞）。マウスを連続的に採血し、ＣＤ１９＋細胞が１／μＬを超える場合、マウスをランダム化して、レンジルマブまたは対照ＩｇＧ（１０ｍｇ／Ｋｇ、ＣＡＲ－Ｔ注射の日から開始して１０日間毎日ＩＰを投与）を含む２．５×１０６ＣＡＲＴ１９を投与した。ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後１４日目から疾患負荷を評価するためにマウスを連続尾静脈出血で追跡し、全生存期間を追跡した。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性（すなわち、腫瘍細胞殺傷）を増強することを実証する。ＣＡＲ－Ｔ療法を伴うレンジルマブ処理が、ＣＡＲ－Ｔ療法を伴うアイソタイプ対照処理と比較して、初代急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）異種移植モデルにおいて、経時的な腫瘍量のより持続的な制御をもたらすことをグラフで示す（群あたり６匹のマウス＊＊ ｐ＜０．０１、＊ ｐ＜０．０５、ｎｓ ｐ＞０．０５、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示すことを実証する。ＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９ ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９が、野生型ＣＡＲＴ１９と比較して、ＧＭ－ＣＳＦ産生を減少させたことを示すが、他のサイトカイン産生および脱顆粒は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子破壊、ＣＡＲＴ１９およびＮＡＬＭ６で刺激されたＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９によって阻害されない（ｎ＝３実験、実験ごとに２回の反復、＊＊＊ ｐ＜０．００１、＊ ｐ＜０．０５、ｎｓ ｐ＞０．０５、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９とＣＡＲ１９の比較、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示すことを実証する。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔが、マルチプレックスでアッセイするとき、ＣＡＲ－Ｔ処理と比較して、インビボで血清ヒトＧＭ－ＣＳＦを減少させたことを示す（群あたり５～６匹のマウス（出血時４～６匹、ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後８日目）、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、＊＊＊ ｐ＜０．００１、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏ ＣＡＲＴ１９と野生型ＣＡＲＴ１９の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示すことを実証する。インビボでのＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９が、ＮＡＬＭ６細胞株を利用するＡＬＬの高腫瘍量再発異種移植モデルにおいて野生型ＣＡＲＴ１９と比較して全生存を増強することを示す（群あたり５～６匹のマウス、＊＊ ｐ＜０．０１、ログランク）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示すことを実証する。ｈＧＭ－ＣＳＦ以外の血清のマルチプレックスからのヒトのサイトカインおよびケモカインが、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９と野生型ＣＡＲＴ１９の間に統計的差異を示さないことを示す。さらに重要なＴ細胞サイトカインおよびケモカインがＧＭ－ＣＳＦ発現を低下させることによって有害に枯渇しないことをほのめかす（群あたり５～６匹のマウス（出血時に４～６匹）、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、ｔ検定）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示すことを実証する。ｈＧＭ－ＣＳＦ以外の血清のマルチプレックスからのマウスサイトカインおよびケモカインが、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９と野生型ＣＡＲＴ１９の間に統計的差異を示さないことを示す。さらに重要なＴ細胞サイトカインおよびケモカインがＧＭ－ＣＳＦ発現を低下させることによって有害に枯渇しないことをほのめかす（群あたり５～６匹のマウス（出血時に４～６匹）、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、ｔ検定）。 神経炎症およびサイトカイン放出症候群の患者由来の異種移植モデルを示す。実験スキーマを示す：マウスは原発性ＡＬＬ患者の末梢血に由来する１～３×１０６の一次芽球を投与された。マウスは、尾静脈出血を介して約１０～１３週間生着についてモニターされた。血清ＣＤ１９＋細胞が１０細胞／μＬ以上の場合、マウスはＣＡＲＴ１９（２～５×１０６細胞）を投与され、示されているように合計１０日間、抗体療法を開始した。マウスの健康状態の尺度として、マウスの体重を毎日測定した。マウス脳ＭＲＩはＣＡＲＴ１９注射の５～６日後に実施され、サイトカイン／ケモカインの尾静脈出血およびＴ細胞分析はＣＡＲＴ１９注射の４～１１日後に実施された（２つの独立した実験）。 神経炎症およびサイトカイン放出症候群の患者由来の異種移植モデルを示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和とＣＡＲＴ１９の組み合わせが、ＡＬＬ細胞のＣＤ１９＋量の制御において、ＣＡＲＴ１９と組み合わせたアイソタイプ対照抗体と同等に有効であることを示す（代表的な実験、群あたり３匹のマウス、ＣＡＲＴ１９注射の１１日後、＊ ｐ＜０．０５ ＧＭ－ＣＳＦ中和＋ＣＡＲＴ１９とアイソタイプ対照＋ＣＡＲＴ１９の間、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 神経炎症およびサイトカイン放出症候群の患者由来の異種移植モデルを示す。ＣＡＲＴ１９療法がＴ１増強を示し、脳の血液脳関門破壊および浮腫の可能性を示唆することを示す脳ＭＲＩデータを示す。群あたり３匹のマウス、ＣＡＲＴ１９注射の５～６日後、代表的な画像。 神経炎症およびサイトカイン放出症候群の患者由来の異種移植モデルを示す。ＣＡＲＴ１９で処理された高腫瘍量の初代ＡＬＬ異種移植片が、未処理のＰＤＸ対照と比較して、脳のヒトＣＤ３細胞浸潤を示していることを示す。群あたり３匹のマウス、代表的な画像。 ＣＡＲＴ１９細胞による処理後に患者由来の異種移植片から脳内で変化した標準的な経路を示す。赤色のボックスは、未治療の患者由来の異種移植片と比較した、ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ対照で処理したマウスの遺伝子の上方制御を示す。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後のＣＲＳを改善することを実証する。レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＡＲＴ１９およびアイソタイプ対照抗体で処理されたマウスと比較して、ＣＲＳ誘発性の体重減少を防ぐことを示す（群あたり３匹のマウス、二元配置ａｎｏｖａ、平均＋ＳＥＭ）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後のＣＲＳを改善することを実証する。レンジルマブおよびマウスＧＭ－ＣＳＦ中和抗体で処理された患者由来の異種移植片においてヒトＧＭ－ＣＳＦが中和されたことを示す（群あたり３匹のマウス、＊＊＊ ｐ＜０．００１、＊ ｐ＜０．０５、ｔ検定、平均＋ＳＥＭ）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後のＣＲＳを改善することを実証する。ヒトサイトカイン／ケモカインヒートマップ（ＣＡＲＴ１９注射の１１日後に採取された血清）が、ＣＡＲＴ１９処理後のＣＲＳに典型的なサイトカインおよびケモカインの増加を示していることを示す。パネルに示されているように、ＧＭＣＳＦ中和は、ＣＡＲＴ１９およびアイソタイプ対照抗体で処理されたマウスと比較して、いくつかの骨髄関連サイトカインおよびケモカインを含む、いくつかのサイトカインおよびケモカインの有意な減少をもたらす（群あたり３匹のマウス、ＣＡＲＴ１９注射後１１日目からの血清、＊＊＊ ｐ＜０．００１、＊＊ ｐ＜０．０１、＊ ｐ＜０．０５、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けたＧＭ－ＣＳＦ中和抗体処理マウスとアイソタイプ対照処理マウスの比較、ｔ検定）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後のＣＲＳを改善することを実証する。マウスサイトカイン／ケモカインヒートマップ（ＣＡＲＴ１９注射の１１日後に収集された血清）が、ＣＡＲＴ１９処理後のＣＲＳに典型的なマウスサイトカインおよびケモカインの増加を示していることを示す。パネルに示されているように、ＧＭ－ＣＳＦ中和は、対照抗体を伴うＣＡＲＴ１９による処理と比較して、いくつかの骨髄分化サイトカインおよびケモカインを含む、いくつかのサイトカインおよびケモカインの有意な減少をもたらす（群あたり３匹のマウス、ＣＡＲＴ１９注射後１１日目からの血清、＊ ｐ＜０．０５、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けたＧＭ－ＣＳＦ中和抗体処理マウスとアイソタイプ対照処理マウスの比較、ｔ検定）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後の神経炎症を改善することを実証する。ガドリニウム増強Ｔ１高信号強度（立方体ｍｍ）ＭＲＩが、ＧＭ－ＣＳＦ中和がアイソタイプ対照（Ａ）と比較して、脳の炎症、血液脳関門の破壊、浮腫の可能性を軽減するのに役立つことを示す（代表的な画像、（３３Ｂ）群あたり３匹のマウス、＊＊ ｐ＜０．０１、＊ ｐ＜０．０５、一元配置ＡＮＯＶＡ、平均＋ＳＤ）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後の神経炎症を改善することを実証する。ガドリニウム増強Ｔ１高信号強度（立方体ｍｍ）ＭＲＩが、ＧＭ－ＣＳＦ中和がアイソタイプ対照（Ａ）と比較して、脳の炎症、血液脳関門の破壊、浮腫の可能性を軽減するのに役立つことを示す（代表的な画像、群あたり３匹のマウス、＊＊ ｐ＜０．０１、＊ ｐ＜０．０５、一元配置ＡＮＯＶＡ、平均＋ＳＤ）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後の神経炎症を改善することを実証する。ＣＡＲＴ１９療法による処理後にヒトＣＤ３Ｔ細胞が脳に存在したことを示す。ＧＭ－ＣＳＦ中和は、脳半球でのフローサイトメトリーで分析したとき、脳内のＣＤ３浸潤が減少する傾向をもたらした（群あたり３匹のマウス、平均＋ＳＥＭ）。 異種移植モデルにおいて、インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後の神経炎症を改善することを実証する。脳半球でのフローサイトメトリーによってアッセイしたとき、ＣＡＲ－Ｔ療法中のアイソタイプ対照と比較して、ＣＡＲ－Ｔ療法中にＧＭ－ＣＳＦ中和を受けたマウスの脳でＣＤ１１ｂ＋明るいマクロファージが減少したことを示す（群あたり３匹のマウス、平均＋ＳＥＭ）。 ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞の生成を示す図の１つであって（ｉ）～（ｉｉｉ）よりなり、実験スキーマを示す。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞を生成するために、ｇＲＮＡをＵ６プロモーターの制御下でＣａｓ９レンチウイルスベクターにクローニングし、レンチウイルスの産生に使用した。正常なドナーに由来するＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで刺激し、２４時間後にＣＡＲ１９ウイルスとＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ウイルスで二重形質導入した。ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズの除去は＋６日目に行われ、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞または対照ＣＡＲＴ１９細胞は８日目に凍結保存された。 ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞の生成を示す図の１つであり、実験スキーマを示す。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞を生成するために、ｇＲＮＡをＵ６プロモーターの制御下でＣａｓ９レンチウイルスベクターにクローニングし、レンチウイルスの産生に使用した。正常なドナーに由来するＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで刺激し、２４時間後にＣＡＲ１９ウイルスとＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ウイルスで二重形質導入した。ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズの除去は＋６日目に行われ、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞または対照ＣＡＲＴ１９細胞は８日目に凍結保存された。 ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞の生成を示す図の１つであり、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９を生成するためのｇＲＮＡ配列およびプライマー配列を示す。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞を生成するために、ｇＲＮＡをＵ６プロモーターの制御下でＣａｓ９レンチウイルスベクターにクローニングし、レンチウイルスの産生に使用した。正常なドナーに由来するＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで刺激し、２４時間後にＣＡＲ１９ウイルスとＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ウイルスで二重形質導入した。ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズの除去は＋６日目に行われ、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞または対照ＣＡＲＴ１９細胞は８日目に凍結保存された。 ＲＮＡ配列決定で使用される手順のフローチャートを示す。バイナリベースコールデータは、イルミナのｂｃｌ２ｆａｓｔｑソフトウェアを使用してｆａｓｔｑに変換された。Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃを使用してアダプター配列を除去し、ＦａｓｔＱＣを使用して品質をチェックした。最新のヒト（ＧＲＣｈ３８）およびマウス（ＧＲＣｍ３８）リファレンスゲノムはＮＣＢＩからダウンロードされた。ゲノムインデックスファイルはＳＴＡＲを使用して生成され、ペアエンドリードは各条件のゲノムにマッピングされた。ＨＴＳｅｑを使用して各遺伝子の発現カウントを生成し、ＤｅＳｅｑ２を使用して差次的発現を計算した。遺伝子オントロジーは、Ｅｎｒｉｃｈｒを使用して評価された。 ＡＬＬの高腫瘍量再発異種移植モデルにおいて、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞で処理したマウスは、アイソタイプ対照抗体＋ＣＡＲ－Ｔ細胞で処理したマウスと比較して同等の生存率を示していることを示す（ｎ＝２実験、群あたり７～８匹のマウス、代表的な実験を示す、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、＊＊＊ ｐ＜０．００１、＊ ｐ＜０．０５、ログランク）。 ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ９ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞のゲノム変化を検証するための代表的なＴＩＤＥ配列を示す（ｎ＝２の実験、代表的な実験を示す）。 インビボでのＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＡＬＬの高腫瘍量再発異種移植モデルにおいて野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して腫瘍量のわずかに増強された制御を示していることを示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後の日数をｘ軸に示す（群あたり５～６匹のマウス（１３日目にＵＴＤ群に２匹残った）、代表的な実験を示す、＊＊＊＊ ｐ＜０．０００１、＊ ｐ＜０．０５、２元配置ＡＮＯＶＡ、平均±ＳＥＭ）。 ＣＡＲＴ１９＋抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体処理による神経炎症およびＣＲＳの患者由来の異種移植モデルを示す。ＣＡＲＴ１９＋抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体処理で処理された高腫瘍量の初代ＡＬＬ異種移植片は、未処理のＰＤＸ対照（図３０Ｄ）と比較した脳のヒトＣＤ３細胞浸潤を示す。群あたり３匹のマウス、代表的な画像。 ＣＡＲ－Ｔおよびレンジルマブ療法の後、ＢＢＢの完全性が維持され、神経炎症が大幅に減少することを示す。ＣＡＲ－Ｔ療法後、ＢＢＢが著しく損なわれ、ＣＡＲ－Ｔおよびレンジルマブ療法によるＢＢＢの完全性の維持を示すことを高解像度画像で明確に示す共焦点顕微鏡を示す。 ＣＡＲ－Ｔおよびレンジルマブ療法の後、ＢＢＢの完全性が維持され、神経炎症が大幅に減少することを示す。参照によりその全体が組み込まれる、２０１８年６月７日にＯｎｌｉｎｅＦｉｒｓｔで公開されたＳａｎｔｏｍａｓｓｏ，ＢＤ，ｅｔ ａｌ．、ＤＯＩ：１０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１７－１３１９から引用したものであり、ＣＳＦ中の高レベルのタンパク質（Ｓａｎｔｏｍａｓｓｏのデータに示されている）がＢＢＢの破壊とＣＮＳへのタンパク質の漏出を示していることを示す。
本主題は、本開示の一部を形成する以下の詳細な説明を参照することにより、より容易に理解することができる。本開示は、記載される、および／または本明細書に示される特定の製品、方法、条件、またはパラメータに限定されるものではなく、また本明細書で使用される用語は、単に例として特定の実施形態を説明する目的のためであり、請求される開示を限定することは意図されていないことが理解されるべきである。
免疫療法関連毒性
当業者は、「免疫療法関連毒性」という用語が、高レベルの免疫活性化に起因する一連の炎症症状を指すことを理解するであろう。異なる種類の毒性が異なる免疫療法アプローチと関連する。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、毛細血管漏出症候群、心臓病、呼吸器疾患、ＣＡＲ－Ｔ細胞関連脳症症候群（ＣＲＥＳ）、神経毒性、大腸炎、痙攣、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、サイトカインストーム、左室駆出率の減少、下痢、播種性血管内凝固、浮腫、脳症、発疹、消化管出血、消化管穿孔、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、肝臓症、高血圧、下垂体炎、免疫関連有害事象、免疫肝炎、免疫不全、虚血、肝毒性、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、胸水、心嚢液、肺臓炎、多発性関節炎、可逆性白質脳症（ＰＲＥＳ）、肺高血圧、血栓塞栓症、および高トランスアミナーゼ血症を含む。
異なる種類の毒性は、その病態生理学および臨床症状が異なるが、通常、Ｃ反応性タンパク質、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ｓＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＰ１０、ＩＬ－１５、ＭＣＰ－１（ＡＫＡ ＣＣＬ２）、ＭＩＧ、ＭＩＰ－１β、ＩＦＮγ、ＣＸ３ＣＲ１、またはＴＮＦαなどの炎症関連因子の増加と関連している。当業者は、いくつかの実施形態では、「炎症関連因子」という用語は、炎症中に影響を受ける分子、小分子、ペプチド、遺伝子転写物、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ホルモン、およびバイオマーカーを含むことを理解するであろう。当業者は、炎症中に影響を受ける系が、上方制御、下方制御、活性化、不活性化、または任意の種類の分子修飾を含むことを理解するであろう。サイトカインなどの炎症関連因子の血清濃度は、免疫療法関連毒性の指標として使用されてもよく、サイトカインレベルまたは濃度の倍増、パーセント（％）増加、純増加、または変化率として表されてもよい。血清以外の体液中の炎症関連因子の濃度も、免疫療法関連毒性の指標として使用され得る。いくつかの実施形態では、ある特定のレベルまたは濃度を超える絶対サイトカインレベルまたは濃度は、免疫療法関連毒性を受けている、または経験しようとしている対象の指標であり得る。別の実施形態では、ある特定のレベル、例えば、対照対象において通常見られるレベルまたは濃度における絶対サイトカインレベルまたは濃度は、対象における免疫療法関連毒性の発生を阻害または低減するための方法の指標であり得る。当業者は、「サイトカインレベル」という用語が、濃度の尺度、倍率変化の尺度、パーセント（％）変化の尺度、または速度変化の尺度を包含し得ることを理解するであろう。さらに、血液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、唾液、血清、尿、および血漿中のサイトカインを測定するための方法は、当該技術分野で既知である。
神経毒性の種類を分類し、それに応じて管理するために、いくつかのアプローチが作られた。これらの分類は、発熱、低血圧、低酸素、臓器毒性、心機能不全、呼吸機能障害、消化管障害、肝機能障害、腎機能障害、凝固障害、発作の存在、頭蓋内圧、筋緊張、運動能力、フェリチンレベル、および血球貪食などの臨床的および生物学的症状に基づく。同様に、各種類の神経毒性は、その重症度により等級付けされ得る。表１Ａ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ：ｔｈｅ ＭＤＡＣＣ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｐ．Ｋｅｂｒｉａｅｉ，Ｆｅｂ．２４，２０１７から抜粋）は、神経毒性をその重症度によってグレード１、グレード２、グレード３、およびグレード４に等級付けするための方法を開示している。しかしながら、前述の症状のいくつかは、典型的には、神経毒性と関連していない。（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１４；１２４：１８８－１９５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
Figure 2022517461000002
免疫療法注入後の最初の３６時間に体温が３８．９°Ｃを超える、ＩＬ－６血清濃度が１６ｐｇ／ｍｌを超える、またはＭＣＰ－１（ＡＫＡ ＣＣＬ２）血清濃度が１，３４３．５ｐｇ／ｍｌを超える患者は、重度の神経毒性が発達する可能性が高かった（Ｇｕｓｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７ Ｏｃｔ １２）。
ＣＲＳは、異常なサイトカイン調節、したがって重度の炎症のため、重篤な状態であり、生命を脅かす有害作用である。症状には、発熱、心拍および呼吸障害、吐き気、嘔吐、ならびに発作が含まれ得るが、これらに限定されない。症状およびその重症度を評価することにより、ＣＲＳを、例えば、次のように等級付けすることができる：グレード１ ＣＲＳ：発熱、体質性症状；グレード２ＣＲＳ：低血圧－体液または１つの低用量の昇圧剤に応答、低酸素－＜４０％のＯ２に応答、臓器毒性；グレード２；グレード３ＣＲＳ：低血圧－複数の昇圧剤または高用量の昇圧剤が必要、低酸素－≧４０％のＯ２が必要、臓器毒性－グレード３、グレード４の高トランスアミナーゼ血症；グレード４ＣＲＳ：人工呼吸、臓器毒性－グレード４、高トランスアミナーゼ血症を除く。（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１４；１２４：１８８－１９５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＣＲＥＳは、例えば、神経学的評価と、乳頭浮腫、ＣＳＦ開口圧力、イメージング評価、ならびに発作および運動脱力の存在などの他のパラメータとを組み合わせることによって等級付けすることができる。ＣＲＥＳを等級付けするための方法は、Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１５（１）：４７－６２（２０１８）（Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｓｅｐ １９）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。表１Ｂ（Ｎｅｅｌａｐｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．１５（１）：４７－６２（２０１８）から抜粋）は、ＣＲＥＳをその重症度によってグレード１、グレード２、グレード３、およびグレード４に等級付けするための方法を開示している。
Figure 2022517461000003
ＮＴ、ＣＲＳ、およびＣＲＥＳの症状には、脳症、頭痛、せん妄、不安、振戦、発作活動、混乱、覚醒状態の変化、意識レベルの減少、幻覚、不全失語症、失語症、運動失調、失行症、顔面神経麻痺、運動脱力、発作、非痙攣性ＥＥＧ発作、脳浮腫、および昏睡が含まれ得る。ＣＲＥＳは、Ｃ反応性タンパク質、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ｓＩＬ２Ｒα、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＰ１０、ＩＬ－１５、ＭＣＰ－１、ＭＩＧ、ＭＩＰ１β、ＩＦＮγ、ＣＸ３ＣＲ１、およびＴＮＦαとして循環サイトカインの高濃度と関連している。
通常の状態で観察される血清とＣＳＦとの間のサイトカイン濃度勾配は、ＣＲＥＳ中に低減するかまたは失われる。加えて、ＣＡＲ Ｔ細胞および高タンパク質濃度が患者のＣＳＦにおいて観察され、状態の重症度と相関する。これはすべて、免疫療法後の血液脳関門機能傷害を示す。血管透過性の増加は、神経毒性を有する患者におけるＡＮＧ２濃度の増加およびＡＮＧ２：ＡＮＧ１比の増加によって部分的に説明することができる。ＡＮＧ１が内皮細胞の静止を誘導する一方で、ＡＮＧ２は内皮細胞の活性化および微小血管透過性を引き起こす。免疫療法の前に内皮活性化が増加した患者は、神経毒性を被る可能性が高いと報告されている（Ｇｕｓｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１７ Ｏｃｔ １２）。
血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）は、炎症性サイトカインを大量に分泌する良性リンパ球およびマクロファージの無制御な増殖によって引き起こされる重度の過炎症を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨは、サイトカインストーム症候群の１つとして分類され得る。いくつかの実施形態では、ＨＬＨは、全身感染、免疫不全、悪性腫瘍、または免疫療法などの強い免疫学的活性化の後に発生する。いくつかの実施形態では、「ＨＬＨ」という用語は、すべて同じ本質および意味を有する「血球貪食性リンパ組織球症」、「血球貪食症候群」、または「血球貪食症候群」という用語と交換可能に使用され得る。
原発性ＨＬＨは、不均一な常染色体劣性遺伝疾患を含む。いくつかの遺伝子のうちの１つにホモ接合性変異を有する患者は、細胞溶解性顆粒エキソサイトーシスに関与するタンパク質の機能喪失を示す。いくつかの実施形態では、ＨＬＨは、最小限のトリガーまたはトリガーなしで乳児期に現れ得る。二次性ＨＬＨ、または後天性ＨＬＨは、全身感染、免疫不全、基礎悪性腫瘍、または免疫療法などで発生する強い免疫学的活性化の後に発生する。ＨＬＨの両形態は、正常なＴリンパ球およびマクロファージの圧倒的な活性化を特徴とし、治療の不在下では常に臨床的および血液学的変化ならびに死につながる。
いくつかの実施形態では、ＨＬＨは、とりわけ、ウイルス感染、ＥＢＶ、ＣＭＶ、パルボウイルス、ＨＳＶ、ＶＺＶ、ＨＨＶ８、ＨＩＶ、インフルエンザ、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、細菌感染、グラム陰性桿菌、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ種およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、寄生虫感染、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ種、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ種、真菌感染、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃａｌ種、Ｃａｎｄｉｄａｌ種、およびＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ種によって開始され得る。
マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）は、マクロファージおよびＴリンパ球の無制御な活性化および増殖を含む状態を含み、ＩＦＮγおよびＧＭ－ＣＳＦなどの循環サイトカインレベルが著しく増加する。ＭＡＳは二次性ＨＬＨと密接に関連している。ＭＡＳの症状には、高熱、肝脾腫、リンパ節腫脹、汎血球減少症、肝機能障害、播種性血管内凝固、血球貪食、低フィブリノゲン血症、高フェリチン血症、および高トリグリセリド血症が含まれる。
ＣＲＳは、重篤な感染症に見られるのと同様の非抗原特異的免疫応答を含む。ＣＲＳは、次の症状のいずれかまたはすべてを特徴とする：以下を伴うまたは伴わない発熱：悪寒、倦怠感、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、吐き気、嘔吐、頭痛、皮疹、下痢、頻呼吸、低酸素血症、低酸素、ショック、心血管頻脈、脈圧拡大、低血圧、毛細血管漏出、心拍出量の増加（早期）、潜在的な心拍出量の低下（後期）、Ｄダイマーの上昇、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノゲン血症、高窒素血症、高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、頭痛、精神状態変化、混乱、せん妄、喚語困難または明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行変化、発作、臓器不全、多臓器不全。死亡も報告されている。重度のＣＲＳは、ＣＡＲ－Ｔ１９を受けている患者の最大６０％において発生すると報告されている。
サイトカインストームは、サイトカインと白血球との間の正のフィードバックループからなる免疫反応を含み、様々なサイトカインのレベルが非常に上昇する。「サイトカインストーム」という用語は、すべて同じ本質および意味を有する「サイトカインカスケード」および「高サイトカイン血症」という用語と交換可能に使用され得る。いくつかの実施形態では、サイトカインストームは、ＩＬ－２放出およびリンパ球増殖を特徴とする。サイトカインストームは、心機能不全、成人呼吸窮迫症候群、神経毒性、腎および／または肝不全、ならびに播種性血管内凝固を含む、生命を脅かす可能性のある合併症につながる。
述べたように、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は現在、生命を脅かす神経毒性およびＣＲＳのリスクによって制限されている。積極的な管理にもかかわらず、すべてのＣＡＲ－Ｔ応答者はある程度のＣＲＳを経験する。ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔで治療された患者の最大５０％が、少なくともグレード３のＣＲＳまたは神経毒性を有する。ＧＭ－ＣＳＦレベルおよびＴ細胞拡大は、グレード３以上のＣＲＳおよび神経毒性と最も関連する要因である。
ＣＡＲ－Ｔ細胞療法などの免疫療法におけるＣＲＳおよび神経毒性の軽減または排除は非常に価値があり、特徴的なＣＡＲ－Ｔの炎症応答を駆動または悪化させているものを決定することが重要である。多くのサイトカイン、シグナル伝達分子、および細胞型がこの経路に関与しているが、ＧＭ－ＣＳＦは経路の中心にあるように思われる１つのサイトカインである。通常、これは、ヒトの血清では検出されないが、炎症を極端なサイトカインストームおよび内皮細胞活性化に駆動させる周期的な正のフィードバックループの中心である。神経毒性およびサイトカインストームは、サイトカインの同時放出の結果ではなく、むしろ骨髄細胞の腫瘍部位への輸送および動員をもたらす、ＧＭ－ＣＳＦによって開始された炎症のカスケードの結果である。これらの骨髄細胞は、ＣＲＳおよび神経毒性で観察されるサイトカインを産生し、炎症カスケードを持続させる。
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）
本明細書で使用される場合、「顆粒球マクロファージコロニー刺激因子」（ＧＭ－ＣＳＦ）は、およそ２３ｋＤａの分子量を有する内部ジスルフィド結合を有する小さな天然に存在する糖タンパク質を指す。いくつかの実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦは、ヒトＧＭ－ＣＳＦを指す。いくつかの実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦは、非ヒトＧＭ－ＣＳＦを指す。ヒトでは、これは、ヒト第５染色体のサイトカインクラスター内に位置する遺伝子によってコードされる。ヒトの遺伝子およびタンパク質の配列は既知である。タンパク質は、Ｎ末端シグナル配列およびＣ末端受容体結合ドメインを有する（Ｒａｓｋｏ ａｎｄ Ｇｏｕｇｈ，Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ａ．Ｔｈｏｍｓｏｎ，ｅｔ ａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）ｐａｇｅｓ ３４９－３６９）。その三次元構造はインターロイキンと類似するが、アミノ酸配列は類似しない。ＧＭ－ＣＳＦは、造血環境および炎症の末梢部位に存在する間葉系細胞によって、いくつかの炎症性メディエーターに応答して産生される。ＧＭ－ＣＳＦは、骨髄細胞からの好中球性顆粒球、マクロファージ、および混合顆粒球－マクロファージコロニーの産生を刺激することが可能であり、胎児肝前駆細胞からの好酸球コロニーの形成を刺激することができる。ＧＭ－ＣＳＦは、成熟顆粒球およびマクロファージのいくつかの機能活性を刺激することもできる。骨髄微小環境に存在するサイトカインであるＧＭ－ＣＳＦは、炎症性単球由来樹状細胞を動員し、高レベルのＩＬ－６およびＣＣＬ２／ＭＣＰ－１の分泌を刺激し、フィードバックループをもたらし、より多くの単球、炎症性樹状細胞を炎症部位に動員する。
述べたように、ＣＲＳは、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ１α）、ならびにＧＭ－ＣＳＦを含むいくつかのサイトカインおよびケモカインの増加を伴う。（Ｔｅａｃｈｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（Ｊｕｎｅ ２０１６），Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＣＤ－１６－００４０、Ｍｏｒｇａｎ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（Ａｐｒｉｌ ２０１０），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．）。主要な炎症性サイトカインの１つであるＩＬ－６は、ＣＡＲ－Ｔ細胞によって産生されない。（Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２０１６），Ｂｌｏｏｄ）。代わりに、これは腫瘍部位に動員される骨髄細胞によって産生される。ＧＭ－ＣＳＦはこの動員を媒介し、骨髄細胞を活性化し、それらを腫瘍部位へ輸送させるケモカイン産生を誘導する。ＧＭ－ＣＳＦレベルの上昇は、ＣＲＳの予測バイオマーカー、およびその重症度の指標の両方として機能する。炎症カスケードの重要な構成成分以上に、ＧＭ－ＣＳＦは、ＣＲＳとＮＴの両方の原因となる主要なイニシエーターである。本明細書に記載されるように、マウスモデルを使用したインビボ研究は、ＧＭ－ＣＳＦの遺伝子サイレンシングがサイトカインストームを防ぐ一方で、ＣＡＲ－Ｔの有効性を依然として維持することを示す。ＧＭ－ＣＳＦノックアウトマウスは、インビボで正常レベルのＩＮＦ－γ、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＣＣＬ２（ＭＣＰ１）、ＣＣＬ３／４（ＭＩＧ－１）を有し、ＣＲＳを発達させない。（Ｓｅｎｔｍａｎ，Ｍ．－Ｌ．，ｅｔ ａｌ（２０１６），Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９７（１２），４６７４－４６８５．）。ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔモデルでは、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＣＡＲ－Ｔと比較して、ＮＫ細胞、ＣＤ８細胞、骨髄細胞、および好中球の腫瘍部位への動員は少ない。
「可溶性顆粒球マクロファージ－コロニー刺激因子受容体」（ｓＧＭ－ＣＳＦＲ）という用語は、ＧＭ－ＣＳＦに結合するが、リガンドに結合した場合、シグナルを伝達しない、非膜結合受容体を指す。
本明細書で使用される場合、「ペプチドＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト」は、ＧＭ－ＣＳＦまたはその受容体と相互作用して、さもなければＧＭ－ＣＳＦの細胞上で発現するその同族受容体への結合から生じるであろうシグナル伝達を（部分的または完全のいずれかで）低減または遮断するペプチドを指す。ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、受容体に結合するために利用可能なＧＭ－ＣＳＦリガンドの量を減らすことによって作用する（例えば、ＧＭ－ＣＳＦに結合されると、ＧＭ－ＣＳＦのクリアランス速度を増加させる抗体）か、またはＧＭ－ＣＳＦもしくは受容体のいずれかに結合することによって、リガンドがその受容体に結合するのを防ぐ（例えば中和抗体）。ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストはまた、ＧＭ－ＣＳＦまたはその受容体に結合して、シグナル伝達を部分的または完全に阻害するポリペプチドを含み得る他のペプチド阻害剤も含み得る。ペプチドＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、例えば、抗体、ＧＭ－ＣＳＦに拮抗する天然もしくは合成のＧＭ－ＣＳＦ受容体リガンド、または他のポリペプチドであり得る。ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト活性を検出するための例示的なアッセイは、実施例１に提供される。典型的には、中和抗体などのペプチドＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、１０ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本明細書で使用される場合、「精製された」ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、その天然の状態で見られる、通常それに付随する構成成分を実質的または本質的に含まないＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを指す。例えば、血液または血漿から精製される抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体などのＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、他の免疫グロブリン分子などの他の血液または血漿構成成分を実質的に含まない。純度および均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技法を使用して決定される。調製物中に存在する主要な種であるタンパク質は、実質的に精製される。典型的には、「精製された」とは、タンパク質が天然に存在する構成成分に対して、タンパク質が少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、最も好ましくは少なくとも９９％純粋であることを意味する。
抗体
本明細書で使用される場合、「抗体」は、機能的には結合タンパク質として定義され、構造的には、抗体を産生する動物の免疫グロブリンをコードする遺伝子のフレームワーク領域に由来するものとして当業者により認識されるアミノ酸配列を含むと定義されるタンパク質を指す。抗体は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなり得る。認識されている免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューの定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類され、それぞれ、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定義する。
典型的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含むことが知られている。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一対で構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は、主に抗原認識に関与する約１００～１１０以上のアミノ酸の可変領域を画定する。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖および重鎖を指す。
「抗体」という用語は、結合特異性を保持する抗体断片を含む。例えば、十分に特徴付けられた抗体断片がいくつかある。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域のジスルフィド結合の抗体Ｃ末端を消化して、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ－ＣＨ１に結合する軽鎖であるＦａｂの二量体であるＦ（ａｂ'）２を産生する。Ｆ（ａｂ'）２は、穏やかな条件下で還元されて、ヒンジ領域のジスルフィド結合を破壊し、それにより、（Ｆａｂ'）２二量体をＦａｂ'単量体に変換することができる。Ｆａｂ'単量体は、本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂである（他の抗体断片のより詳細な説明については、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９３）を参照されたい）。様々な抗体断片がインタクト抗体の消化に関して定義されるが、当業者は、断片が化学的にまたは組換えＤＮＡ方法論を利用することによるいずれかにより新規に合成することができることを理解するであろう。したがって、抗体という用語は、本明細書で使用される場合、全抗体の修飾によって産生されるか、または組換えＤＮＡ方法論を使用して合成されるかのいずれかの抗体断片も含む。
抗体には、一本鎖抗体（単一のポリペプチド鎖として存在する抗体）、例えば、可変重鎖および可変軽鎖領域が（直接またはペプチドリンカーを介して）一緒に結合されて、連続ポリペプチドを形成する一本鎖Ｆｖ抗体（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）を含む、ＶＨ－ＶＬ二量体、ＶＨ二量体、またはＶＬ二量体などの二量体が含まれる。一本鎖Ｆｖ抗体は、直接結合されるか、またはペプチドコードリンカーにより結合されるかのいずれかのＶＨ－およびＶＨコード配列を含む核酸から発現され得る、共有結合されたＶＨ－ＶＬヘテロ二量体である（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８５：５８７９－５８８３，１９８８）。ＶＨおよびＶＬは、単一のポリペプチド鎖としてそれぞれに接続されているが、ＶＨおよびＶＬドメインは、非共有結合的に会合する。あるいは、抗体は、ジスルフィド安定化Ｆｖ（ｄｓＦｖ）などの別の断片であり得る。組換え技法の使用を含む、他の断片も生成することができる。ｓｃＦｖ抗体、ならびに自然に凝集したが、抗体Ｖ領域から化学的に分離された軽および重ポリペプチド鎖を、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造に折り畳まれた分子に変換するいくつかの他の構造が当業者に既知である（例えば、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、および同第４，９５６，７７８号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体は、ファージ上に提示された、または鎖が可溶性タンパク質として分泌されるベクターを使用する組換え技術によって生成されたもの、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ'）２、または鎖が可溶性タンパク質として分泌されるベクターを使用する組換え技術によって生成されたものを含む。本発明で使用するための抗体はまた、二抗体およびミニ抗体も含み得る。
本発明の抗体はまた、ラクダ科動物からの抗体などの重鎖二量体も含む。ラクダ科動物の重鎖二量体ＩｇＧのＶＨ領域は、軽鎖と疎水性相互作用をする必要がないため、通常は軽鎖と接触する重鎖の領域が、ラクダ科動物の親水性アミノ酸残基に変更される。重鎖二量体ＩｇＧのＶＨドメインは、ＶＨＨドメインと呼ばれる。本発明で使用するための抗体は、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）およびナノボディを含む（例えば、Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：２８５３－２８５７，２００４を参照されたい）。
本明細書で使用する場合、「Ｖ領域」は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、およびフレームワーク３（ＣＤＲ３およびフレームワーク４を含む）のセグメントを含む抗体可変領域ドメインを指し、このセグメントは、Ｂ細胞分化中の重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子の再配置の結果としてＶセグメントに追加される。本明細書で使用される場合、「Ｖセグメント」は、Ｖ遺伝子によってコードされるＶ領域（重鎖または軽鎖）の領域を指す。重鎖可変領域のＶセグメントは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２およびＦＲ３をコードする。本発明の目的のために、軽鎖可変領域のＶセグメントは、ＦＲ３を通ってＣＤＲ３まで伸長すると定義される。
本明細書で使用される場合、「Ｊセグメント」という用語は、ＣＤＲ３およびＦＲ４のＣ末端部分を含む、コードされた可変領域の部分配列を指す。内因性Ｊセグメントは、免疫グロブリンＪ遺伝子によってコードされる。
本明細書で使用する場合、「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、軽鎖および重鎖可変領域によって確立された４つの「フレームワーク」領域を中断する各鎖の３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープへの結合に関与する。各鎖のＣＤＲは、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から順に番号が付けられ、典型的には、特定のＣＤＲが位置する鎖によって同定される。したがって、例えば、ＶＨ ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置しているのに対して、ＶＬ ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメインからのＣＤＲ１である。
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、つまり構成要素である軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域は、ＣＤＲを三次元空間に配置しアライメントするように機能する。
ＣＤＲおよびフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当該技術分野で既知の様々な定義、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｃｈｏｔｈｉａ，ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ （ＩＭＧＴ）およびＡｂＭ（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＶＨ ｓｅｇｍｅｎｔｓ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７，７９９－８１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ １９９７，２７３（４）を参照されたい）を使用して決定できる。抗原結合部位の定義は、以下にも記載されている：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８，２１９－２２１（２０００）、およびＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．－Ｐ．ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊａｎ １；２９（１）：２０７－９（２００１）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２（５），７３２－７４５（１９９６）；ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，９２６８－９２７２ （１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３，１２１－１５３，（１９９１）；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，１，１２６，（１９９２）；およびＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２ （１９９６）。
「エピトープ」または「抗原決定基」は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接アミノ酸またはタンパク質の三次折り畳みによって並置された非隣接アミノ酸の両方から形成され得る。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるのに対して、三次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、独特の空間的コンフォメーションにおいて少なくとも３個、より通常には少なくとも５個、または８～１０個のアミノ酸を含む。エピトープの空間的コンフォメーションを決定する方法には、例えば、Ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が含まれる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ（１９９６）を参照されたい。
本発明の文脈で使用される場合、「結合特異性決定基」または「ＢＳＤ」という用語は、抗体の結合特異性を決定するために必要なＣＤＲ領域内の最小の隣接または非隣接アミノ酸配列を指す。本発明において、最小結合特異性決定基は、抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ３配列の一部または完全長内に存在する。
本明細書で使用されるとき、「抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体」または「ＧＭ－ＣＳＦ抗体」は、ＧＭ－ＣＳＦに結合し、ＧＭ－ＣＳＦ受容体結合および活性化を阻害する抗体を指すように交換可能に使用される。そのような抗体は、ＧＭ－ＣＳＦの結合および／または機能を評価する、当該技術分野で認識されている任意の数のアッセイを使用して同定することができる。例えば、アルファ受容体サブユニットへのＧＭ－ＣＳＦ結合の阻害を測定するＥＬＩＳＡアッセイなどの結合アッセイを使用することができる。ＧＭ－ＣＳＦ曝露に応答するサイトカインの産生量、例えば、ＩＬ－８の産生量を測定するアッセイと同様に、ＧＭ－ＣＳＦ受容体シグナル伝達の細胞ベースのアッセイ（制限量のＧＭ－ＣＳＦに応答するＧＭ－ＣＳＦ依存性細胞株の増殖速度を決定するアッセイなど）も便利に用いられる。
本明細書で使用される場合、「中和抗体」は、ＧＭ－ＣＳＦに結合し、ＧＭ－ＣＳＦ受容体によるシグナル伝達を阻害する、またはＧＭ－ＣＳＦのその受容体への結合を妨げる抗体を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子」（ｈＧＭ－ＣＳＦ）は、およそ２３ｋＤａの分子量を有する内部ジスルフィド結合を有する小さな天然に存在する糖タンパク質を指し、ＧＭ－ＣＳＦの源および標的はヒトであり、そのため、本明細書の実施形態に記載されるように、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトおよび霊長類のＧＭ－ＣＳＦにのみ結合し、マウス、ラット、および他の哺乳類のＧＭ－ＣＳＦには結合しない。本明細書の実施形態に記載されるように、ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和する。いくつかの実施形態では、ヒトのｈＧＭ－ＣＳＦは、ヒト第５染色体のサイトカインクラスター内に位置する遺伝子によってコードされる。ヒトの遺伝子およびタンパク質の配列は既知である。タンパク質は、Ｎ末端シグナル配列およびＣ末端受容体結合ドメインを有する（Ｒａｓｋｏ ａｎｄ Ｇｏｕｇｈ，Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ａ．Ｔｈｏｍｓｏｎ，ｅｔ ａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）ｐａｇｅｓ ３４９－３６９）。その三次元構造はインターロイキンと類似するが、アミノ酸配列は類似しない。ＧＭ－ＣＳＦは、造血環境および炎症の末梢部位に存在するいくつかの炎症性メディエーターに応答して産生される。ＧＭ－ＣＳＦは、骨髄細胞からの好中球性顆粒球、マクロファージ、および混合顆粒球－マクロファージコロニーの産生を刺激することが可能であり、胎児肝前駆細胞からの好酸球コロニーの形成を刺激することができる。ＧＭ－ＣＳＦは、成熟顆粒球およびマクロファージのいくつかの機能的活性を刺激し、顆粒球およびマクロファージのアポトーシスを阻害することもできる。
（ＫＤ）と略される「平衡解離定数」または「親和性」という用語は、解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を会合速度定数（ｋａ、時間－１ Ｍ－１）で割ったものを指す。平衡解離定数は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して測定することができる。本発明の抗体は、高親和性抗体である。そのような抗体は、３７℃で実施された表面プラズモン共鳴分析によって決定されるように、約１０ｎＭよりも良い（未満）、そして多くの場合約５００ｐＭよりも良い、または約５０ｐＭよりも良い一価の親和性を有する。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、５０ｐＭ未満、典型的には約２５ｐＭ未満、またはさらには１０ｐＭ未満の親和性（表面プラズモン共鳴を使用して測定される）を有する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＧＭ－ＣＳＦとの一価の相互作用に関して、３７℃で表面プラズモン共鳴分析によって決定されたおよそ１０－４ ｓ－１、好ましくは５ｘ１０－５ ｓ－１未満、最も好ましくは１０－５ ｓ－１未満の解離速度定数（ｋｄ）で、遅い解離速度を有した。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が異なるまたは改変されたクラス、エフェクター機能、および／もしくは種の定常領域、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域またはその一部が改変される、置き換えられる、もしくは交換される、あるいは（ｂ）可変領域またはその一部が、異なるもしくは改変された抗原特異性を有する可変領域もしくはその一部、または別の種もしくは別の抗体クラスもしくはサブクラスからの対応する配列で改変される、それに置き換えられる、またはそれと交換される、免疫グロブリン分子を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、ドナー抗体からのＣＤＲ中の免疫グロブリン分子がヒトフレームワーク配列にグラフトされることを指す。ヒト化抗体はまた、フレームワーク配列中にドナー起源の残基も含み得る。ヒト化抗体はまた、ヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部も含み得る。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体または移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列のいずれにも見られない残基も含み得る。ヒト化は、当該技術分野で知られている方法を使用して実施することができる。（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６，１９８８；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６，１９９２；米国特許第４，８１６，５６７号、「超ヒト化」抗体（Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９，２００２）、および「リサーフェシング」（例えば、Ｓｔａｅｌｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：１２４３，２００６；およびＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：９６９，１９９４）などの技術を含む。）
本発明の文脈において、「ΗＵＭＡＮＥＥＲＥＤ（登録商標）」抗体は、参照抗体の結合特異性を有する操作されたヒト抗体を指す。本発明で使用するための操作されたヒト抗体は、ドナー免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む免疫グロブリン分子を有する。いくつかの実施形態では、操作されたヒト抗体は、参照抗体のＣＤＲ３領域からの最小限の必須結合特異性決定基のみを保持し得る。典型的には、操作されたヒト抗体は、参照抗体の重鎖のＣＤＲ３領域からの結合特異性決定基（ＢＳＤ）をコードするＤＮＡ配列をヒトＶＨセグメント配列に、そして参照抗体からの軽鎖ＣＤＲ３ ＢＳＤをヒトＶＬセグメント配列に結合することにより操作される。「ＢＳＤ」は、結合特異性を媒介するＣＤＲ３－ＦＲ４領域またはこの領域の一部である。したがって、結合特異性決定基は、ＣＤＲ３－ＦＲ４、ＣＤＲ３、ＣＤＲ３の最小限の必須結合特異性決定基（抗体のＶ領域に存在する場合に結合特異性を付与するＣＤＲ３よりも小さい任意の領域を指す）、Ｄセグメント（重鎖領域に関して）、または参照抗体の結合特異性を付与するＣＤＲ３－ＦＲ４の他の領域であり得る。ヒト抗体を操作する方法は、米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に提供されている。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、実質的にヒトである、すなわち、ヒト免疫系からのＦＲ領域、および多くの場合ＣＤＲ領域を有する抗体を指す。したがって、この用語は、ヒト化およびヒューマニア化（ｈｕｍａｎｅｅｒｅｄ）抗体、ならびにヒト免疫系で再構成されたマウスから単離された抗体および提示ライブラリーから単離された抗体を含む。
核酸の一部に関して使用される場合、「異種」という用語は、核酸が、通常、自然界において互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、典型的には、例えば、新しい機能的核酸を作製するために配置された無関係の遺伝子からの２つ以上の配列を有する核酸は、組換えにより産生される。同様に、異種タンパク質は、自然界では互いに同じ関係で見出されない２つ以上の部分配列を指すことが多い。
「組換え」という用語は、例えば、細胞、もしくは核酸、タンパク質、またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質、またはベクターが、異種の核酸もしくはタンパク質の導入または天然の核酸もしくはタンパク質の改変によって修飾されているか、または細胞がそのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）形態内に見出されない遺伝子を発現するか、そうでなければ異常に発現される、過少発現される、または全く発現されない天然遺伝子を発現する。本明細書における「組換え核酸」という用語は、一般に、例えば、自然界では通常見られない形態のポリメラーゼおよびエンドヌクレアーゼを使用した核酸の操作により、もともとインビトロで形成された核酸を意味する。このようにして、異なる配列の作動可能な連結が達成される。したがって、線状形態の単離された核酸、または通常は結合されないＤＮＡ分子をライゲートすることによりインビトロで形成される発現ベクターは、本発明の目的のために両方とも組換え体と見なされる。組換え核酸が作製され、宿主細胞または生物に再導入されると、非組換えにより、すなわち、インビトロ操作ではなく、宿主細胞のインビボ細胞機構を使用して複製されることが理解される。しかしながら、そのような核酸は、組換えにより生成されると、続いて非組換えにより複製されるが、本発明の目的のために依然として組換え体と見なされる。同様に、「組換えタンパク質」は、組換え技法を使用して、すなわち組換え核酸の発現を通じて作製されたタンパク質である。
抗体に「特異的（または選択的）に結合する」または「～と特異的（または選択的）に免疫反応性」であるという語句は、抗体が目的の抗原に結合する結合反応を指す。本発明の文脈において、抗体は、典型的には、５００ｎＭ以下の親和性で抗原、例えばＧＭ－ＣＳＦに結合し、他の抗原に対して５０００ｎＭ以上の親和性を有する。
２つ以上のポリペプチド（または核酸）配列の文脈において、「同一」またはパーセント「同一性」という用語は、以下に記載するデフォルトのパラメータを用いたＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、または手動アライメントおよび視覚的検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイトを参照されたい）により測定されるとき、同じであるか、または同じである特定の割合のアミノ酸残基（またはヌクレオチド）（すなわち、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたる最大対応について比較およびアライメントされた場合、特定の領域にわたって約６０％の同一性、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上の同一性）を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。そのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。「実質的に同一な」配列には、欠失および／または付加を有する配列、ならびに置換を有する配列、ならびに天然に存在する、例えば、多型または対立遺伝子変異型、および人工変異型も含まれる。以下に記載されるように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどからなり得る。好ましくは、タンパク質配列同一性は、長さが少なくとも約２５個のアミノ酸である領域にわたって、またはより好ましくは長さが５０～１００個のアミノ酸である領域にわたって、またはタンパク質の長さにわたって存在する。
本明細書で使用される場合、「比較ウィンドウ」は、２つの配列が最適にアライメントされた後に、配列が同じ数の隣接位置の参照配列と比較され得る、典型的には、２０～６００、通常は約５０～約２００、より通常には約１００～約１５０からなる群から選択されるいくつかの隣接位置のうちの１つのセグメントへの言及を含む。比較のための配列のアライメント方法は、当該技術分野で既知である。比較のための配列の最適なアライメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズムによって、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性を検索する方法によって、これらのアルゴリズムのコンピューター化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）、または手動によるアライメントと目視検査（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９９５ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を参照されたい）によって実行することができる。
２つのポリペプチドが実質的に同一であることの指標は、第１のポリペプチドが第２のポリペプチドに対して産生された抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、例えば、２つのペプチドが保存的置換によってのみ異なる場合、第２のポリペプチドと実質的に同一である。
配列同一性パーセントおよび配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの好ましい例には、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムが含まれ、これらは、ｄｅｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９７７）およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０ （１９９０）に記載される。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０は、本明細書に記載されているパラメータを用いて、本発明の核酸およびタンパク質のパーセント配列同一性を決定するために使用される。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとしてワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。アミノ酸配列に関して、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとしてワード長３、および期待値（Ｅ）１０、ならびにＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５（１９８９）を参照されたい）アライメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、および両方の鎖の比較を使用する。
「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、その天然の状態で見られる、通常付随する構成成分を実質的または本質的に含まない材料を指す。純度および均一性は、典型的には、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析化学技法を使用して決定される。調製物中に存在する主要な種であるタンパク質は、実質的に精製される。いくつかの実施形態では、「精製された」という用語は、タンパク質が電気泳動ゲルにおいて本質的に１つのバンドを生じさせることを示す。好ましくは、それは、タンパク質が少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、最も好ましくは少なくとも９９％純粋であることを意味する。
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書では、アミノ酸残基のポリマーを指すように交換可能に使用される。本用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー、修飾された残基を含むもの、および天然に存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するおよび合成のアミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝暗号によってコードされているもの、ならびに後に修飾されるそれらのアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、およびＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を持つ化合物、例えば、水素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基に結合しているα炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有し得るが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持している。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。
本明細書では、アミノ酸は、それらの一般的に知られている３文字記号またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）が推奨する１文字記号のいずれかによって言及され得る。同様に、ヌクレオチドは、それらの一般的に受け入れられている１文字コードによって言及され得る。
「保存的に修飾された変異型」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して、保存的に修飾された変異型は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードするそれらの核酸、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一または関連する、例えば、自然に隣接する配列を指す。遺伝暗号の縮重のため、多くの機能的に同一の核酸が大半のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、およびＧＣＵはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって特定されるすべての位置で、コドンは、コードされるポリペプチドを改変することなく、記載される対応する別のコドンに改変され得る。そのような核酸変異は「サイレント変異」であり、保存的に修飾された変異の一種である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列は、核酸のサイレント変異も説明する。ある特定の文脈では、核酸の各コドン（通常メチオニンの唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常はトリプトファンの唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を修飾して、機能的に同一の分子をもたらすことができることを、当業者は認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸のサイレント変異は、発現産物に関して記載された配列において暗黙的である場合が多いが、実際のプローブ配列に関してはそうではない。
アミノ酸配列に関して、当業者は、コード配列における単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を改変する、追加する、または欠失させる核酸、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列への個々の置換、欠失、または追加が、改変によりアミノ酸が化学的に類似したアミノ酸で置換される「保存的に修飾された変異型」であることを認識するであろう。保存的置換表、および機能的に類似したアミノ酸を提供するＢＬＯＳＵＭなどの置換行列は当該技術分野で既知である。そのような保存的に修飾された変異型は、本発明の多型変異型、種間ホモログ、および対立遺伝子に加えられ、それらを除外しない。相互の典型的な保存的置換には、次のものが含まれる：（１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；（２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；（３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；（４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；（５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；（６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；（７）セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；および（８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４）を参照されたい）。
免疫療法関連毒性の予防または治療方法
いくつかの実施形態では、対象における免疫療法関連毒性を阻害する方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本明細書は、対象における免疫療法関連毒性の発生を低減する方法である。いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦを中和する方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本方法は、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ｈＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ｈＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを含む。遺伝子サイレンシングおよび遺伝子ノックアウトの方法は、当業者に既知であり、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、ＣＲＩＳＰＲ、低分子干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、ＤＮＡ指向ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）、操作された転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）による標的化ゲノム編集、または他の好適な技法を含むが、これらに限定されない。
ＧＭ－ＣＳＦをノックアウトするための遺伝子編集技術：ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏ
いくつかの実施形態では、遺伝子編集技術は、ＧＭ－ＣＳＦの発現をノックアウトするために使用される。ゲノム編集は、ＤＮＡを遺伝子コードの部位特異的セグメントに切断するエンドヌクレアーゼ（Ｆｏｋ１またはＣａｓ９を含むがこれらに限定されない）を送達することによって達成される。エンドヌクレアーゼは、内因性のＤＮＡ修復メカニズムを引き起こすＤＮＡを切断する。
当業者は、部位特異的染色体ＤＮＡ切断を達成し、それが次に内因性ＤＮＡ修復を誘発する任意の方法が、同じ標的化ゲノム修飾をもたらすことを認識するであろう。標的化ゲノム修飾は、部位特異性がＲＮＡガイド、ＤＮＡガイド、またはＤＮＡ結合タンパク質によって決定されるか、またはどのエンドヌクレアーゼがＤＮＡ切断を達成するために使用されるかによって異ならない。ＲＮＡ誘導部位特異性の例には、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９が含まれるが、これに限定されない。ＤＮＡ誘導部位特異性の例には、フラップエンドヌクレアーゼ１（ＦＥＮ－１）が含まれるが、これに限定されない。部位特異性を達成するために使用されるＤＮＡ結合タンパク質の例には、ジンクフィンガータンパク質（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥＮＳ）、ＡＲＣＵＳ、メガヌクレアーゼを含むホーミングエンドヌクレアーゼなどが含まれるが、これに限定されない。
遺伝子サイレンシングに使用できる他の方法は、当業者によく知られており、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、短鎖干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、ＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）を含むがこれらに限定されない。
一態様では、本発明は、標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法を提供する。提供される方法の実施形態において、標的化ゲノム編集は、エンドヌクレアーゼを含み、エンドヌクレアーゼは、Ｆｏｋ１制限酵素またはフラップエンドヌクレアーゼ１（ＦＥＮ－１）である。別の実施形態において、エンドヌクレアーゼは、Ｃａｓ９ ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）である。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子は、エクソン１、エクソン２、エクソン３、またはエクソン４でＧＭ－ＣＳＦを標的とし、編集するＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によって不活性化される。さらなる実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含み、エクソン３でＧＭ－ＣＳＦを標的とし、編集する。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の不活性化は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含み、エクソン１でＧＭ－ＣＳＦ標的とし、編集する。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化は、複数のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９酵素を含み、各Ｃａｓ９酵素は、エクソン１、エクソン２、エクソン３、またはエクソン４でＧＭ－ＣＳＦの異なる配列を標的とし、編集する。特定の実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の二対立遺伝子ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９標的化およびノックアウト／不活性化を含む。提供される方法の別の態様では、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の場合、この方法は、初代Ｔ細胞をバルプロ酸で処理して、二対立遺伝子ノックアウト／不活性化を増強することをさらに含む。ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化／遺伝子ノックアウトのために提供される方法の一態様では、標的化ゲノム編集は、ジンクフィンガー（ＺｎＦ）タンパク質を含む。さらなる態様では、標的化ゲノム編集は、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥＮＳ）を含む。一実施形態では、標的化ゲノム編集は、ホーミングエンドヌクレアーゼを含み、ホーミングエンドヌクレアーゼは、ＡＲＣヌクレアーゼ（ＡＲＣＵＳ）またはメガヌクレアーゼである。本明細書で提供される方法の特定の実施形態では、細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、短鎖干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、およびＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）からなる群から選択される。
免疫療法関連毒性の予防または治療方法
いくつかの実施形態において、この方法は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを介してより低いレベルのＧＭ－ＣＳＦを発現するように改変されたＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含む。遺伝子サイレンシングおよび遺伝子ノックアウトの方法は、当業者に既知であり、これらに限定されないが、ＲＮＡｉ、ＣＲＩＳＰＲ、ｓｉＲＮＡ、ｄｄＲＮＡｉ、ＴＡＬＥＮ、ジンクフィンガー、ホーミングエンドヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼまたは他の適切な技術を含み得る。
いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、ＣＲＳおよびＮＴの発生および／または重症度を予防または有意に減少させる。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、ＢＢＢ破壊を予防または有意に減少させる。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、ＣＤ１４＋骨髄性細胞の活性化およびＣＮＳへの輸送を予防または有意に減少させる。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞が投与される場合に観察されたものよりも、より低いレベルのシステムサイトカインＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＰ１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ１２ｐ７０、ＩＬ－ＲＡ、Ｍ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦをもたらす。
いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞が投与される場合に観察されたものよりも、ＣＲＳ、ＮＴの発生または重症度をさらに低減し、ＢＢＢ破壊をさらに予防または低減し、ＣＤ１４＋骨髄細胞の活性化とＣＮＳへの輸送をさらに予防または低減し、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＰ１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＶＥＧＦ、ＩＬ－１ｒａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ１２ｐ７０、ＩＬ１－ＲＡ、Ｍ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦの全身性サイトカインレベルをさらに予防または低下させる組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストとともに起こる。
養子細胞療法の有効性を改善するための方法
いくつかの実施形態において、この方法は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを介してより低いレベルのＧＭ－ＣＳＦを発現するように改変されたＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞に対して、拡大後の分化が少なく、拡大後のナイーブ、幹細胞メモリー、および中枢メモリー特性のより高いパーセンテージを含む。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＦＡＳを発現しないか、または野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも低レベルのＦＡＳを発現する。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）に対してより耐性があり、老化に対してより耐性があり、そしてアネルギーに対してより耐性がある。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、より低いレベルのＭＤＳＣ形成およびより良好なＣＡＲ－Ｔ細胞の拡大および持続をもたらす。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも大きな拡大および持続を示す。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、より高いレベルの客観的応答（完全応答および部分応答）を示す。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、６ヶ月、１２ヶ月、および２４ヶ月でより低いレベルの再発を示す。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、改善されたレベルの無増悪生存期間および／または全生存期間を示す。
いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、拡大、持続性、老化に対する耐性、およびアネルギーに対する耐性をさらに改善する組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストとともに起こる。他の実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを伴うＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、ＭＤＳＣ形成をさらに減少させる。他の実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを伴うＧＭ－ＣＳＦサイレンシングまたは遺伝子ノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞の投与は、客観的応答（完全応答および部分応答）をさらに改善し、６ヶ月、１２ヶ月、および２４ヶ月での再発レベルを低下させ、無増悪生存期間および／または全生存期間の改善されたレベルを示す。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。他の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞はＢＭＣＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞であり、他の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、デュアルＣＤ１９／ＣＤ２２ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。他の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、デュアルＣＤ１９／ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、免疫活性化を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、毛細血管漏出症候群を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、心機能不全を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、脳症を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、大腸炎を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、痙攣を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、ＣＲＳを寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、神経毒性を寛解させることを含む。様々な実施形態では、対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞関連神経毒性は、ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体で治療された対象における神経毒性の低減と比較して、約９０％低減される。ある特定の実施形態では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗体、特に、実施例１５を含む、本明細書に記載される実施形態によるＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、サイトカインストーム症状を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、低下した左室駆出率を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、下痢を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、播種性血管内凝固を寛解させることを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、浮腫を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、発疹を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、消化管出血を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、胃腸穿孔を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、肝臓症を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、低血圧を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、下垂体炎を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、免疫関連有害事象を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、免疫肝炎を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、免疫不全を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、虚血を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、肝毒性を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、神経毒性症状を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、胸水を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、心嚢液を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、肺臓炎を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、多発性関節炎を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、可逆性白質脳症（ＰＲＥＳ）を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、肺高血圧を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、血栓塞栓症を治療することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、トランスアミナーゼ血症を低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、患者のＣＲＥＳ、神経毒性（ＮＴ）、および／またはサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）グレードを低減することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、患者のＣＡＲＴＯＸ－１０スコアを改善することを含む。
一態様では、本発明はさらに、対象における免疫療法関連毒性を治療または予防するための方法であって、実施例６および２０～２１に示されるように、対象にキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）および組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウト（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を有する。いくつかの実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＧＭ－ＣＳＦ発現のレベルと比較して、低下したレベルのＧＭ－ＣＳＦを発現する。特定の実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現された１つ以上のサイトカインおよび／またはケモカインのレベルよりも低いかまたは同等である１つ以上のサイトカインおよび／またはケモカインのレベルを発現する。特定の実施形態において、１つ以上のサイトカインは、ＩＦＮ－γ、ＧＲＯ、ＭＤＣ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＰ－１０、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦ－α、およびＶＥＧＦからなる群から選択されるヒトサイトカインである。いくつかの実施形態において、１つ以上のサイトカインは、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬＦ、ＩＬ－１３、ＬＩＸ、ＩＬ－１５、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、およびＴＮＦ－α、エオタキシン、Ｇ－ＣＳＦおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。他の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。様々な実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。特定の実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの抗腫瘍活性を増強する。特定の実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与によって治療された対象における生存と比較して、対象の全生存を改善する。特定の実施形態において、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）および組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することは、ＣＲＳ、神経毒性、神経炎症などの免疫療法関連毒性を予防または治療するための堅牢な治療である。いくつかの実施形態では、対象はがんを有している。様々な実施形態において、がんは急性リンパ性白血病である。
対象からヒトＧＭ－ＣＳＦを除去する方法
一態様では、本発明は、それを必要とする対象におけるヒトＧＭ－ＣＳＦを中和および／または除去する方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含む方法を提供する。
この方法の一実施形態では、この方法は、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することをさらに含む。特定の実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢの抗体断片である。一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。別の実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。さらなる実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。別の実施形態において、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体は、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む。追加の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦは、ＣＡＲ Ｔ由来のＧＭ－ＣＳＦまたは非ＣＡＲ Ｔ由来のＧＭ－ＣＳＦのいずれかである。いくつかの実施形態において、対象は、免疫療法関連毒性の発生を有する。
血液脳関門の破壊を減らし、ＢＢＢの完全性を保持／維持するための方法
一態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を低減するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、免疫療法関連毒性の発生を有する。
特定の実施形態では、免疫療法は、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。様々な実施形態では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。
さらなる実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。様々な実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。特定の実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、前記霊長類は、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである。
特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。様々な実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する。さらに特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３と、ＶＬ領域のＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される。
様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。特定の実施形態では、前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を有し、Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｊセグメントは、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３は、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む。さらなる実施形態では、ＶＨ領域のＣＤＲ１がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方がヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである。なおさらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む。いくつかの実施形態では、Ｖセグメント配列は、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する。様々な実施形態では、ＶＨは、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する。特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む。特定の実施形態では、抗体ＶＬ領域ＣＤＲ３は、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む。特定の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む。様々な実施形態では、ＶＬ領域は、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。なおさらなる実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。
様々な実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。特定の実施形態では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性である。より特定の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性はサイトカイン放出症候群、神経毒性、神経炎症、またはそれらの組み合わせを含む。
別の態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象において血液脳関門の完全性を維持するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む方法を提供する。
さらなる態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を予防または低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を対象に投与することを含む方法を提供する。
提供された方法の実施形態において、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。別の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。さらに別の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。さらなる実施形態において、前記霊長類は、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである。
提供される方法の特定の実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。さらなる特定の実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。なおもさらなる実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である。一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３と、ＶＬ領域のＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される。
提供される方法の一実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。様々な実施形態では、前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を有し、Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む。特定の実施形態では、Ｊセグメントは、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む。特定の実施形態では、ＣＤＲ３は、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域のＣＤＲ１がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方がヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む。一実施形態では、Ｖセグメント配列は、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する。いくつかの実施形態では、ＶＨは、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む。一実施形態では、抗体ＶＬ領域ＣＤＲ３は、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む。様々な実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む。特定の実施形態では、ＶＬ領域は、図に示されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。いくつの実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。特定の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。提供される方法の特定の実施形態では、対象は免疫療法関連毒性を有する。さらなる実施形態において、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性である。さらなる実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性はサイトカイン放出症候群、神経毒性、神経炎症、またはそれらの組み合わせを含む。
さらなる態様において、本発明は、それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法によって誘発される神経炎症を低減または予防するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを対象に投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することは、血液脳関門の破壊を低減し、それにより、その完全性を維持する。特定の実施形態では、血液脳関門の破壊を低減することは、中枢神経系への炎症誘発性サイトカインの流入を減少または予防する。様々な実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＩＰ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－１Ｒａ、ＶＥＧＦ、ＴＮＦ－α、ＦＧＦ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ｓＣＤ４０Ｌ、ＭＤＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態において、炎症誘発性サイトカインは、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、対象における神経炎症は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法および対照抗体で治療された対象と比較して７５％～９５％減少する。様々な実施形態において、神経炎症の７５％から９５％の減少は、未治療の対照対象における神経炎症と同様である。いくつかの実施形態において、対象は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）を投与される。特定の実施形態において、対象は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与される。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。様々な実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。特定の実施形態では、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。さらなる実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態では、前記霊長類は、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである。一実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。別の実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。さらなる実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。なおさらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。
様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３と、ＶＬ領域のＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される。
なおもさらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。様々な実施形態では、前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を有し、Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む。様々な実施形態では、ＪセグメントはＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む。
特定の実施形態では、ＣＤＲ３は、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域のＣＤＲ１がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２がヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方がヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む。特定の実施形態では、Ｖセグメント配列は、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する。特定の実施形態では、ＶＨは、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する。さらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。なおもさらなる実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬ領域のＣＤＲ３は、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む。特定の実施形態において、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。特定の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む。さらなる実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む。なおさらなる実施形態では、ＶＬ領域は、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する。
特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。様々な実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。
さらなる実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。いくつかの実施形態では、対象は、サイトカイン放出症候群、神経毒性、またはそれらの組み合わせから選択されるＣＡＲ－Ｔ関連毒性をさらに有する。
再発率を低下させる、または発生を防ぐための方法
一態様では、本発明は、免疫療法で治療された対象における再発を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫療法で治療された対象において再発率を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生のないときに起きる。特定の実施形態において、免疫療法関連毒性の発生のある免疫療法で治療された対象において再発率を低下させるか、または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生があるときに起きる。いくつかの実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。様々な実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。いくつかの実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。特定の実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。様々な実施形態において霊長類は、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、または類人猿から選択される。いくつかの実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。
特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。上述のように、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢの抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。いくつの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３と、ＶＬ領域のＣＤＲ３とを含む。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。様々な実施形態では、前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を有し、Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む。別の実施形態では、Ｊセグメントは、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む。追加の実施形態では、ＣＤＲ３は、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１である、ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２である、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである。
特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む。様々な実施形態では、Ｖセグメント配列は、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する。特定の実施形態では、ＶＨは、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む。特定の実施形態では、抗体ＶＬ領域ＣＤＲ３は、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬＴを含む。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む。特定の実施形態では、ＶＬ領域は、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する。他の実施形態では、ＶＨ領域もしくはＶＬ領域、またはＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列は、Ｎ末端にメチオニンを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される。特定の実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。特定の実施形態では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ関連毒性は、ＣＲＳ、ＮＴ、または神経炎症である。
特定の実施形態では、免疫療法で治療され、かつ組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与されていない対象における腫瘍再発の発生と比較して、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の４分の１年において腫瘍再発の発生が５０％～１００％減少する。特定の実施形態において、腫瘍再発の発生は、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の半年で５０％～９５％減少する。様々な実施形態において、腫瘍再発の発生は、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の年で５０％～９０％減少する。いくつかの実施形態において、腫瘍再発の発生は、長期的に予防される。本明細書で使用されるとき、「長期」という用語は、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストによる治療の最終日から少なくとも１年、すなわち１２ヶ月の長期間の間を意味する。いくつかの実施形態において、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。様々な実施形態において、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体、例えば、レンジルマブである。特定の実施形態において、腫瘍再発の発生は、１２～３６ヶ月まで予防される。いくつかの実施形態において、腫瘍再発の発生は「完全に」（１００％）予防され、これは、本明細書で使用される場合、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストによる治療の最終日から少なくとも１２ヶ月間腫瘍の再発がないことを意味する。特定の実施形態では、対象は急性リンパ芽球性白血病を有する。
免疫療法で治療された対象における再発率を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防するための本明細書で提供される方法の様々な実施形態において、対象は、本明細書で使用される場合、（ａ）手術が無効であり（ｂ）治療が化学療法、放射線またはそれらの組み合わせである場合、最初は無反応または治療に抵抗性である、悪性腫瘍（本明細書では「がん」もしくは「腫瘍」とも呼ばれる）であるか、または（ｂ）前述の治療に無反応になるかもしくは無反応になった悪性腫瘍である「難治性がん」を有する。いくつかの実施形態において、対象は、「再発した」がんを有し、これは、本明細書で使用される場合、治療に応答したが再発したがんである。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。様々な実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。特定の実施形態では、難治性がんは、難治性の侵攻性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫である。いくつかの実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、化学療法抵抗性Ｂ細胞リンパ腫である。様々な実施形態において、難治性がんまたは再発性がんは、ホルモン抵抗性前立腺がんである。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは小児癌である。いくつかの実施形態では、難治性小児癌または再発小児癌は神経芽細胞腫である。特定の実施形態では、難治性小児癌または再発性小児癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または若年性骨髄単球性白血病もしくは慢性骨髄性白血病であるまれな小児白血病からなる群から選択される小児白血病である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは小児骨癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは副腎癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは乳癌である。特定の実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、結腸癌、直腸癌、または結腸直腸癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんはＴ細胞リンパ腫である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは神経膠腫および膠芽細胞腫を含むがこれらに限定されない脳および／または脊髄癌である。追加の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは、軟骨肉腫を含むがこれに限定されない骨または軟組織の腫瘍である。様々な実施形態では、難治性がんまたは再発がんは骨癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは食道癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは胆嚢癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは腎臓癌である。様々な実施形態では、難治性がんまたは再発がんは黒色腫である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは卵巣癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは膵臓癌である。いくつかの実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、基底細胞癌、扁平上皮癌、または黒色腫から選択される皮膚癌である。様々な実施形態では、難治性がんまたは再発がんは肺癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは唾液腺癌である。追加の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは子宮平滑筋癌である。いくつかの実施形態では、難治性がんまたは再発がんは精巣癌である。様々な実施形態では、難治性がんまたは再発がんは胃癌または胃腸癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは膀胱癌である。追加の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは脂肪組織新生物である。いくつかの実施形態では、難治性小児癌または再発小児癌は腺癌である。特定の実施形態では、難治性がんまたは再発がんは胸腺腫である。様々な実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、血管肉腫、すなわち、皮膚、乳房、肝臓、脾臓、および深部組織、すなわち、深在腫瘍を含むがこれらに限定されない身体の任意の部分で発生し得る血管の内層のがんである。いくつかの実施形態において、難治性がんまたは再発がんは、前述の難治性がんまたは再発がんのうちのいずれか１つの転移である。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、活性化免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、がん治療として提供される。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞移入を含む。
いくつかの実施形態では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与を含む。当業者は、ＣＡＲが、細胞外腫瘍結合部分、最も一般的にはモノクローナル抗体からの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に融合した細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインで構成される一種の抗原標的化受容体であることを理解するであろう。ＣＡＲは、ＭＨＣ媒介提示とは関係なく、細胞表面抗原を直接認識し、すべての患者の任意の所与の抗原に特異的な単一の受容体構築物の使用を可能にする。初期のＣＡＲは、抗原認識ドメインをＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のＣＤ３ζ活性化鎖に融合させた。これらの第１世代のＣＡＲは、インビトロでＴ細胞エフェクター機能を誘導したが、インビボでの抗腫瘍効果があまりないため、主に制限された。後続のＣＡＲの反復には、ＣＤ２８または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０（ＣＤ１３４）などの様々なＴＮＦ受容体ファミリー分子からの細胞内ドメインを含む、ＣＤ３ζと並行して二次共刺激シグナルが含まれた。さらに、第３世代の受容体には、ＣＤ３ζに加えて、最も一般的にはＣＤ２８および４－１ＢＢからの２つの共刺激シグナルが含まれる。第２および第３世代のＣＡＲは、抗腫瘍効果を劇的に改善し、場合によっては進行がん患者の完全寛解を誘導する。一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲがその抗原に結合すると活性化される、ＣＡＲを発現するように修飾された免疫応答性細胞である。
一実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、その受容体がその抗原に結合すると活性化される、抗原受容体を含む免疫応答性細胞である。一実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第１世代のＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第２世代のＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第３世代のＣＡＲ Ｔ細胞である。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物および方法で使用されるＣＡＲ Ｔ細胞は、第４世代のＣＡＲ Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、養子細胞移入は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞を投与することを含む。当業者は、ＴＣＲ修飾Ｔ細胞が腫瘍組織からＴ細胞を単離し、それらのＴＣＲαおよびＴＣＲβ鎖を単離することにより製造されることを理解するであろう。これらのＴＣＲαおよびＴＣＲβは後にクローニングされ、末梢血から単離されたＴ細胞にトランスフェクトされ、これは、その後、腫瘍を認識するＴ細胞からＴＣＲαおよびＴＣＲβを発現する。
いくつかの実施形態では、養子細胞移入は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ＮＫ細胞を投与することを含む。当業者は、ＣＡＲ修飾ＮＫ細胞が、患者から単離されたＮＫ細胞、または腫瘍特異的タンパク質を認識するＣＡＲを発現するように操作された市販のＮＫを含むことを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、養子細胞移入は、樹状細胞を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、モノクローナル抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、がん細胞上の特定のタンパク質に付着し、したがって、免疫系がそれらを発見および破壊するための細胞にフラグを付ける。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、免疫チェックポイントを阻害することによって機能し、したがって、がん細胞による免疫系の阻害を妨げる。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、チェックポイント阻害剤と相乗作用するようにＣＡＲ－Ｔの有用性を改善する。
いくつかの実施形態では、抗体は、５ＡＣ、５Ｔ４、アクチビン受容体様キナーゼ１、ＡＧＳ－２２Ｍ６、アルファ－フェトプロテイン、アンジオポエチン２、アンジオポエチン３、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦ、ＢＣＭＡ、Ｃ２４２抗原、ＣＡ－１２５、炭酸脱水酵素９、ＣＣＲ４、ＣＤ１２５、ＣＤ１５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ２７６、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５４、ＣＤ５６、ＣＤ６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＦＤ、ＣＧＲＰ、ｃｈ４Ｄ５、ＣＬＤＮ１８．２、クランピング因子Ａ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２、ＣＴＧＦ、ＣＴＬＡ－４、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＰＰ４、ＤＲ５、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＲ、エンドグリン、ＥｐＣＡＭ、エフリン受容体Ａ３、エピシアリン、ＥＲＢＢ３（ＨＥＲ３）、ＦＡＰ、ＦＧＦ２３、フィブリンＩＩ、ベータ鎖、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、葉酸加水分解酵素、葉酸受容体、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、ＧＣＧＲ、ＧＤ２ガングリオシド、ＧＤ３ガングリオシド、ＧＤＦ－８、グリピカン３、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ受容体α鎖、ＧＰＮＭＢ、ＧＵＣＹ２Ｃ、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＧＦ、ＨＨＧＦＲ、ヒストン複合体、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ヒトＴＮＦ、ＩＣＯＳＬ、ＩＦＮ－α、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＨＥ、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１３、ＩＬ１Ａ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬＧＦ２、インテグリンα４、インテグリンα５β１、インテグリンα７β７、インテグリンαｖβ３、ＩＰ１０、ＫＩＲ２Ｄ、ＫＬＲＣ１、ルイス－Ｙ抗原、ＭＡＧＥ－Ａ、ＭＣＰ－１、メソセリン、ＭＩＦ、ＭＩＧ、ＭＩＰ１β、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、Ｎ－グリコリルノイラミン酸、ＮＯＧＯ－Ａ、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｈ受容体、ＮＲＰ１、ＯＸ－４０、ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、ＰＤＧＦ－Ｒα、リン酸ナトリウム共輸送体、ホスファチジルセリン、血小板由来成長因子受容体ベータ、前立腺癌細胞、ＲＨＤ、ＲＯＮ、ＲＴＮ４、ＳＤＣ１、ｓＩＬ２Ｒα、ＳＬＡＭＦ７、ＳＯＳＴ、スフィンゴシン－１－リン酸、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ－７２、Ｔ細胞受容体、ＴＥＭ１、テネイシンＣ、ＴＦＰＩ、ＴＧＦベータ１、ＴＧＦベータ２、ＴＧＦ－β、ＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー４、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＳＬＰ、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＭＵＣ１の腫瘍特異的グリコシル化、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＹＲＰ１（糖タンパク質７５）、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、およびＶＷＦを含む群から選択されるタンパク質を標的とする。
いくつかの実施形態では、抗体は二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、リツキシマブ、ＴＧＮ１４１２、アレムツズマブ、ＯＫＴ３、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、サイトカインを投与することを含む。当業者は、免疫細胞毒性細胞によるその認識および殺傷を増加させることによって腫瘍を攻撃するように免疫系を増強させるために、サイトカインが投与され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦα、またはそれらの任意の組み合わせを含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む。当業者は、免疫チェックポイントが、Ｔ細胞がそれを発現する細胞を攻撃するのを防ぐ膜タンパク質であることを理解するであろう。免疫チェックポイントは、がん細胞によって発現されることが多く、したがって、Ｔ細胞がそれらを攻撃するのを防ぐ。いくつかの実施形態では、チェックポイントタンパク質は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＣＴＬＡ－４／Ｂ７－１／Ｂ７－２を含む。チェックポイントタンパク質の遮断は、Ｔ細胞ががん細胞を攻撃し、殺傷するのを阻害することを解除することが示された。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、またはＰＤ－Ｌ１を遮断する分子を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗体またはその一部である。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、多糖類を投与することを含む。当業者は、キノコに見られるある特定の多糖類が免疫系およびその抗がん特性を増強することを理解するであろう。いくつかの実施形態では、多糖類は、ベータグルカンまたはレンチナンである。
いくつかの実施形態では、免疫療法は、がんワクチンを投与することを含む。当業者は、がんワクチンが免疫系をがん特異的抗原およびアジュバントに曝露することを理解するであろう。いくつかの実施形態では、がんワクチンは、シプリューセル－Ｔ、ＧＶＡＸ、ＡＤＸＳ１１－００１、ＡＤＸＳ３１－００１、ＡＤＸＳ３１－１６４、ＡＬＶＡＣ－ＣＥＡワクチン、ＡＣワクチン、タリモジーン・ラハーパレプベック、ＢｉｏｖａｘＩＤ、Ｐｒｏｓｔｖａｃ、ＣＤＸ１１０、ＣＤＸ１３０７、ＣＤＸ１４０１、ＣｉｍａＶａｘ－ＥＧＦ、ＣＶ９１０４、ＤＮＤＮ、ＮｅｕＶａｘ、Ａｅ－３７、ＧＲＮＶＡＣ、タルモゲン、ＧＩ－４０００、ＧＩ－６２０７、ＧＩ－６３０１、ＩｍＰＡＣＴ療法、ＩＭＡ９０１、ヘプコルテスペンリシムト（ｈｅｐｃｏｒｔｅｓｐｅｎｌｉｓｉｍｕｔ）－Ｌ、Ｓｔｉｍｕｖａｘ、ＤＣＶａｘ－Ｌ、ＤＣＶａｘ－Ｄｉｒｅｃｔ、ＤＣＶａｘ Ｐｒｏｓｔａｔｅ、ＣＢＬＩ、Ｃｖａｃ、ＲＧＳＨ４Ｋ、ＳＣＩＢ１、ＮＣＴ０１７５８３２８、およびＰＶＸ－４１０を含む群から選択される。
ＧＭ－ＣＳＦ以外のサイトカインまたはケモカインのレベルを低下させる方法
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、体液中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、血清中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、血清中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させるための方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、組織液中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させるための方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度を減少させるための方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、血清中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度が減少する。いくつかの実施形態では、組織液中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度が減少する。いくつかの実施形態では、ＣＳＦ中の少なくとも１つの炎症関連因子の濃度が減少する。炎症関連因子の濃度の減少が、対象における該炎症関連因子の産生を減少もしくは阻害すること、または対象における免疫療法関連毒性の発生もしくは重症度を阻害もしくは低減することを含むことを当業者は理解するであろう。別の実施形態では、炎症関連因子の産生の減少または阻害は、免疫療法関連毒性を治療することを含む。別の実施形態では、炎症関連因子の産生の減少または阻害は、免疫療法関連毒性を予防することを含む。別の実施形態では、炎症関連因子レベルの産生の減少または阻害は、免疫療法関連毒性を軽減することを含む。別の実施形態では、炎症関連因子の産生の減少または阻害は、免疫療法関連毒性を寛解させることを含む。
いくつかの実施形態では、炎症関連因子はサイトカインである。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、血清中の少なくとも１つのサイトカインの濃度を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性の発生または重症度の阻害または低減は、ＣＳＦ中の少なくとも１つのサイトカインの濃度を減少させることを含む。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、ｈＧＭ－ＣＳＦである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）－１βである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ｓＩＬ２Ｒαである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－５である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－６である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－８である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＰ１０である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１３である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ガンマインターフェロン（ＭＩＧ）によって誘導されるモノカインである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）１βである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、Ｃ反応性タンパク質である。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルの産生の減少または阻害は、１つのサイトカインの産生を減少または阻害することを含む。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルの産生の減少または阻害は、少なくとも１つのサイトカインの産生を減少または阻害することを含む。いくつかの実施形態では、サイトカインレベルの産生の減少または阻害は、いくつかのサイトカインの産生を減少または阻害することを含む。
一態様では、本発明は、免疫療法関連毒性の発生を有する対象においてＧＭ－ＣＳＦ以外のサイトカインまたはケモカインのレベルを低下させる方法であって、対象に組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、サイトカインまたはケモカインのレベルは、免疫療法関連毒性の発生中の対象におけるそれらのレベルと比較して減少する方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫療法は、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む。特定の実施形態では、養子細胞移入は、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である。特定の実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである。様々な実施形態において、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である。特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する。他の実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、上述のように、霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する。いくつかの実施形態において、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する。特定の実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、モノクローナル抗体である。様々な実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である。特定の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、組換えまたはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、サイトカインまたはケモカインは、実施例２２に示されるような、ＩＰ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－１Ｒａ、ＶＥＧＦ、ＴＮＦ－α、ＦＧＦ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ｓＣＤ４０Ｌ、ＭＤＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される、ヒトサイトカインまたはケモカインである。いくつかの実施形態において、サイトカインまたはケモカインは、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される（実施例２２を参照されたい）。特定の実施形態では、対象は急性リンパ芽球性白血病を有する。
一実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性に影響を与えない。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性を約５％未満低減する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性を約１０％未満低減する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性を約１５％未満低減する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性を約２０％未満低減する。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、免疫療法の有効性を約５０％未満低減する。
一実施形態では、本明細書に記載される方法は、免疫療法の有効性を増加させる。一実施形態では、有効性を増加させることにより、免疫療法の臨床管理、患者の転帰、および治療指数の改善が可能になる。別の実施形態では、有効性の増加により、より高い免疫療法用量の投与が可能になる。別の実施形態では、有効性の増加により、入院ならびに追加の治療および監視が低減する。一実施形態では、免疫療法は、ＣＡＲ－Ｔを含む。
細胞毒性を定量化する任意の適切な方法を使用して、免疫療法の有効性が実質的に変化しないままであるかどうかを決定することができる。例えば、細胞毒性は、実施例に記載される細胞毒性アッセイなどの細胞培養ベースのアッセイを使用して定量化することができる。細胞毒性アッセイでは、死細胞のＤＮＡを優先的に染色する色素を用いることができる。他の場合では、細胞集団内の生細胞と死細胞の相対数を測定する蛍光および発光アッセイが使用され得る。そのようなアッセイでは、プロテアーゼ活性は、細胞生存性および細胞毒性のマーカーとして機能し、標識された細胞透過性ペプチドは、試料中の生存細胞の数に比例する蛍光シグナルを生成する。別の実施形態では、細胞毒性の測定は、定性的であり得る。別の実施形態では、細胞毒性の測定は、定量的であり得る。
一実施形態では、該有効性の増加は、ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加、Ｔ細胞機能を阻害する骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の数および／または活性の低減、チェックポイント阻害剤との相乗作用、またはそれらの任意の組み合わせを含む。別の実施形態では、該ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも５０％の増加を含む。別の実施形態では、該ＣＡＲ－Ｔ細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも４分の１の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも半分の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して少なくとも１の対数拡大を含む。別の実施形態では、該細胞拡大の増加は、対照と比較して１を超える対数拡大を含む。
一実施形態では、免疫療法関連毒性は、免疫療法の施行後２日～４週間の間に現れる。一実施形態では、免疫療法関連毒性は、免疫療法の施行後０～２日間の間に現れる。いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、予防として免疫療法と同時に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行０～２日後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～３日後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行７日後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１０日後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１４日後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～１４日後に対象に投与される。
別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～３時間後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行７時間後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１０時間後に対象に投与される。別の実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１４時間後に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～１４時間後に対象に投与される。
代替の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、予防として免疫療法の前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～３日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行７日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１０日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１４日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～１４日前に対象に投与される。
別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～３時間前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行７日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１０日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行１４日前に対象に投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、免疫療法の施行２～１４時間前に対象に投与される。
別の実施形態では、免疫療法関連毒性が発生したら、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを治療的に投与することができる。一実施形態では、免疫療法関連毒性の開始に至るまで、またはそれを証明する病態生理学的プロセスが検出されたら、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することができる。一実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、病態生理学的プロセスを終わらせ、その続発症を回避することができる。いくつかの実施形態では、病態生理学的プロセスは、血清中のサイトカイン濃度の増加、ＣＳＦ中のサイトカイン濃度の増加、血清中のＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の増加、血清中のフェリチンの増加、血清中のＩＬ－６の増加、内皮活性化、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、ＡＮＧ２血清濃度の増加、血清中のＡＮＧ２：ＡＮＧ１比の増加、ＣＳＦ中のＣＡＲ Ｔ細胞の存在、フォン・ヴィルブランド因子（ＶＷＦ）血清濃度の増加、血液脳関門（ＢＢＢ）漏出、またはそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む。
別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、複数の時点で治療的に投与され得る。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの投与は、少なくとも２つの時点においてである。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの投与は、少なくとも３つの時点においてである。
一実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、１回投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、２回投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、３回投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、４回投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、少なくとも４回投与される。別の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、５回以上投与される。
当業者は、免疫療法関連毒性が異なる治療によって管理されることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、他の治療と共投与される。いくつかの実施形態では、他の治療は、サイトカイン指向療法、抗ＩＬ－６療法、コルチコステロイド、トシリズマブ、シルツキシマブ、低用量昇圧剤、変力剤、酸素補給、利尿、胸腔穿刺、抗てんかん薬、ベンゾジアゼピン、レベチラセタム、フェノバルビタール、過換気、高浸透圧療法、および特定の臓器毒性に対する標準療法を含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、脳疾患、損傷、または機能不全を含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ Ｔ細胞関連ＮＴを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ Ｔ細胞関連脳症症候群（ＣＲＥＳ）を含む。いくつかの実施形態では、脳疾患、損傷、または機能不全の発生を阻害または低減するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、頭痛を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、せん妄を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、不安を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、振戦を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、発作活動を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、混乱を減少させることを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、覚醒状態の変化を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、幻覚を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、不全失語症を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、運動失調を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、失行症を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、顔面神経麻痺を寛解させることを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、運動脱力を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、発作を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、非痙攣性ＥＥＧ発作を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生率または重症度の阻害または低減は、昏睡回復を改善することを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生または重症度の阻害または低減は、内皮活性化を低減することを含む。当業者は、内皮活性化が、白血球との相互作用の増加を特徴とする内皮細胞の炎症性および凝血促進状態であることを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、血管漏出を低減することを含む。「血管漏出」という用語は、すべて同じ本質および意味を有する「血管漏出症候群」および「毛細血管漏出症候群」という用語と交換可能に使用され得る。当業者は、血管漏出は内皮細胞が分離し、血漿の漏出および炎症性細胞の体組織への経内皮移動を可能にし、組織および臓器の損傷をもたらすことと関連していることを理解するであろう。さらに、好中球は微小循環閉塞を引き起こし、組織灌流を減少させる可能性がある。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の低減は、血管内凝固を低減させることを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、少なくとも１つの循環サイトカインの濃度を低減することを含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ－１、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、およびＩＬ－２を含む群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、ＡＮＧ２の血清濃度を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、血清中のＡＮＧ２：ＡＮＧ１比を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、ＣＲＥＳグレードを低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、ＣＡＲＴＯＸ－１０スコアを改善することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、頭蓋内圧の上昇を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、発作を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＥＳの発生の阻害または低減は、運動脱力を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、ＣＡＲ Ｔ細胞関連ＣＲＳを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＳおよび／またはＮＴの発生または重症度を阻害または低減するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＣＲＳまたはＮＴの発生の阻害または低減は、限定されないが、発熱（以下を伴うまたは伴わない：悪寒、倦怠感、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、吐き気、嘔吐、頭痛、皮疹、下痢、頻呼吸、低酸素血症、低酸素、ショック、心血管頻脈、脈圧拡大、低血圧、毛細血管漏出、早期心拍出量の増加、後期心拍出量の減少、Ｄダイマーの上昇、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノゲン血症、高窒素血症、高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、精神状態変化、混乱、せん妄、明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行変化、発作、臓器不全、もしくはそれらの任意の組み合わせ、またはＣＲＳと関連すると当該技術分野で既知の任意の他の症状もしくは特徴）を寛解させることを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、少なくとも１つの循環サイトカインの濃度を低減することを含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、ＩＬ－１、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、およびＩＬ－２を含む群から選択される。
いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、ＣＲＳグレードを低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴの発生の阻害または低減は、ＮＴグレードを低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、ＣＡＲＴＯＸ－１０スコアを改善することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴの発生の阻害または低減は、ＣＡＲＴＯＸ－１０スコアを改善することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、頭蓋内圧の上昇を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、発作を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＲＳの発生の阻害または低減は、運動脱力を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、発生を６０％未満に阻害または低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、発生を５０％未満に阻害または低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、発生を４０％未満に阻害または低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、発生を３０％未満に阻害または低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、発生を２０％未満の患者に阻害または低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、ＮＴまたはＣＲＳを排除することを含む。
いくつかの実施形態では、対象は、グレード１のＣＲＳおよび／またはＮＴを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード２のＣＲＳおよび／またはＮＴを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード３のＣＲＳおよび／またはＮＴを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード４のＣＲＳおよび／またはＮＴを有する。いくつかの実施形態では、対象は、上記の任意の組み合わせを有する。
いくつかの実施形態では、ＮＴまたはＣＲＳの発生の阻害または低減は、ＣＲＳグレード、ＮＴグレード、またはその両方を低減することを含む。いくつかの実施形態では、グレードは、９５％の患者において≦３のＮＴおよび／またはＣＲＳに低減される。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、３７℃を超える体温を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、３８℃を超える体温を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、３９℃を超える体温を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、４０℃を超える体温を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、４１℃を超える体温を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、４２℃を超える体温を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１０ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１２ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１４ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１６ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１８ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、２０ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、２２ｐｇ／ｍＬを超えるＩＬ－６血清濃度を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、２００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、４００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、６００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、８００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１０００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１２００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１４００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１６００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、１８００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法施行後、２０００ｐｇ／ｍｌを超えるＭＣＰ－１血清濃度を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、グレード１のＣＲＥＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード２のＣＲＥＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード３のＣＲＥＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、グレード４のＣＲＥＳを有する。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法の前に脳疾患、損傷、または機能不全を有する素因がある。いくつかの実施形態では、素因は、遺伝的である。いくつかの実施形態では、素因は、獲得される。いくつかの実施形態では、素因は、既存の医学的状態に関する。いくつかの実施形態では、素因は、免疫療法の前に診断される。いくつかの実施形態では、素因は診断されない。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法の前に免疫療法関連の脳疾患、損傷、または機能不全を獲得する素因を決定するために医学的評価を受ける。
いくつかの実施形態では、医学的評価は、体液中のＡＮＧ１濃度を決定することを含む。いくつかの実施形態では、医学的評価は、血清中のＡＮＧ１濃度を決定することを含む。いくつかの実施形態では、医学的評価は、体液中のＡＮＧ２濃度を決定することを含む。いくつかの実施形態では、医学的評価は、血清中のＡＮＧ２濃度を決定することを含む。いくつかの実施形態では、医学的評価は、血清中のＡＮＧ２：ＡＮＧ１比を計算することを含む。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が０．５を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が０．７を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が０．９を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が１を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が１．１を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が１．３を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。いくつかの実施形態では、免疫療法前に血清ＡＮＧ２：ＡＮＧ１比が１．５を超える対象は、ＣＲＥＳにかかりやすい。
いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）を含む。いくつかの実施形態では、免疫療法関連毒性は、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨの発生を阻害または低減するための方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＭＡＳの発生を阻害または低減するための方法が本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＨＬＨの発生の阻害または低減は、対象の生存を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨの発生の阻害低減は、再発までの時間を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＳの発生の阻害または低減は、対象の生存を増加させることを含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＳの発生の阻害低減は、再発までの時間を増加させることを含む。
いくつかの実施形態では、ＨＬＨまたはＭＡＳの発生の阻害または低減は、マクロファージの活性化および／または増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨまたはＭＡＳの発生の阻害または低減は、Ｔリンパ球の活性化および／または増殖を阻害することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨまたはＭＡＳの発生の阻害または低減は、循環ＩＦＮγの濃度を低減することを含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＨまたはＭＡＳの発生の阻害または低減は、ＧＭ－ＣＳＦの循環濃度を低減することを含む。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に発熱を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に脾腫を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に血球減少症を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に２つ以上の細胞株において血球減少症を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に高トリグリセリド血症を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に低フィブリノゲン血症を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に血球貪食を呈する。いくつかの実施形態では、血球貪食は、骨髄で観察される。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に低ＮＫ細胞活性を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後にＮＫ活性の欠如を呈する。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に１００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に３００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に５００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に７００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に９００Ｕ／ｍｌを超えるフェリチン血清濃度を呈する。
いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に１２００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に１５００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に１８００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に２０００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に２２００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に２４００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に２７００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法後に３０００Ｕ／ｍｌを超える可溶性ＣＤ２５血清濃度を呈する。
いくつかの実施形態では、対象は、ＨＬＨを有する素因がある。いくつかの実施形態では、素因は、遺伝的である。いくつかの実施形態では、素因は、既存の医学的状態に関する。当業者は、散発性ＨＬＨがいくつかの遺伝的変異と関連していることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＲＦ１、ＵＮＣ１３Ｄ、ＳＴＸ１１、ＳＴＸＢＰ２、もしくはＲＡＢ２７Ａ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される遺伝子に変異を有する。いくつかの実施形態では、対象は、パーフォリンの発現が低減しているか、または不在である。
ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト
使用に好適なｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦの受容体への結合を低減させることにより、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体によるシグナル伝達の誘導を選択的に妨げる。そのようなアンタゴニストには、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体に結合する抗体、ｈＧＭ－ＣＳＦに結合する抗体、Ｅ２１ＲなどのＧＭ－ＣＳＦ類似体、およびｈＧＭ－ＣＳＦのその受容体への結合について競合するか、または通常、リガンドの受容体への結合から生じるシグナル伝達を阻害する他のタンパク質もしくは小分子が含まれ得る。
多くの実施形態では、本発明で使用されるｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ポリペプチド、例えば、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、または受容体へのｈＧＭ－ＣＳＦとの結合について競合するが、不活性である修飾されたＧＭ－ＣＳＦポリペプチドである。そのようなタンパク質は、組換え発現技術を使用して生産されることが多い。そのような方法は、当該技術分野で広く知られている。発現方法を含む一般的な分子生物学的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ ３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００６）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ ＩＳＢＮ：０－４７１－５０３３８－Ｘなどの取扱説明書に見出すことができる。
様々な原核性および／または真核性ベースのタンパク質発現系を用いて、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストタンパク質を産生することができる。そのような系の多くは、商業的供給業者から広く入手可能である。
ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体
本発明のｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦに高い親和性で結合する抗体であり、ｈＧＭ－ＣＳＦのアンタゴニストである。抗体は、ヒト生殖系列のＶＨおよびＶＬ配列に対して高度の同一性を有する可変領域を含む。好ましい実施形態では、本発明の抗体のＣＤＲＨ３におけるＢＳＤ配列は、アミノ酸配列ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹを含む。ＣＤＲＬ３のＢＳＤは、ＦＮＫまたはＦＮＲを含む。
ＢＳＤがＣＤＲ３の一部を形成する完全なＶ領域を生成し、追加の配列を使用して、ＣＤＲ３を完成させ、ＦＲ４配列を追加する。典型的には、ＢＳＤを除くＣＤＲ３の部分および完全なＦＲ４は、ヒト生殖系列配列で構成されている。いくつかの実施形態では、ＢＳＤを除くＣＤＲ３－ＦＲ４配列は、各鎖上の２個以下のアミノ酸だけヒト生殖系列配列と異なる。いくつかの実施形態では、Ｊセグメントは、ヒト生殖系列Ｊセグメントを含む。ヒトの生殖系列配列は、例えば、公的に利用可能なｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）およびＶ－ｂａｓｅ（ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋのワールドワイドウェブ上）により決定することができる。
ヒト生殖系列Ｖセグメントレパートリーは、５１の重鎖Ｖ領域、４０Ｋの軽鎖Ｖセグメント、および３１のλ軽鎖Ｖセグメントの、合計３，６２１の生殖系列Ｖ領域対からなり、加えて、これらのＶセグメントの大半の安定した対立遺伝子変異型が存在するが、これらの変異型の生殖系列レパートリーの構造的多様性に対する寄与は限られている。すべてのヒト生殖系列Ｖセグメント遺伝子の配列は既知であり、ＭＲＣ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍによって提供されるＶ－ｂａｓｅデータベースにおいてアクセスすることができる（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７７６－７９８、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＥＭＢＯ Ｊ １４：４６２８－４６３８、およびＷｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６４：２２０－２３２も参照されたい）。
本明細書に記載される抗体または抗体断片は、原核性または真核性の微生物系、または哺乳類細胞などの高等真核生物の細胞において発現させることができる。
本発明で用いられる抗体は、任意の形式であってよい。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、定常領域、例えば、ヒト定常領域を含む完全な抗体であり得るか、または完全な抗体の断片もしくは誘導体、例えば、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｖ断片、またはナノボディもしくはラクダ科動物抗体などの単一ドメイン抗体であり得る。そのような抗体は加えて、当業者に既知の方法によって組換え操作され得る。上に述べたように、そのような抗体は、既知の技法を使用して産生することができる。
いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦに結合する抗体、またはｈＧＭ－ＣＳＦ受容体αもしくはβサブユニットに結合する抗体である。抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦ（またはｈＧＭ－ＣＳＦ受容体）タンパク質、または断片に対して産生され得るか、または組換えにより産生され得る。本発明で使用するためのＧＭ－ＣＳＦに対する抗体は、中和され得るか、または循環中のｈＧＭ－ＣＳＦレベルが低減されるようにＧＭ－ＣＳＦに結合し、ｈＧＭ－ＣＳＦのインビボクリアランスの速度を増加させる非中和抗体であり得る。多くの場合、ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は中和抗体である。
ポリクローナル抗体を調製する方法は当業者に既知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８８）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）。ポリクローナル抗体は、免疫剤、および必要に応じてアジュバントを１回以上注射することによって哺乳動物において産生することができる。免疫剤は、ＧＭ－ＣＳＦもしくはＧＭ－ＣＳＦ受容体タンパク質、例えば、ヒトＧＭ－ＣＳＦもしくはＧＭ－ＣＳＦ受容体タンパク質、またはそれらの断片を含む。
いくつかの実施形態では、本発明で使用するためのＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ヒト血漿から精製される。そのような実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、典型的には、ヒト血漿中に存在する他の抗体から単離されるポリクローナル抗体である。そのような単離手順は、例えば、親和性クロマトグラフィーなどの既知の技法を使用して実施することができる。
いくつかの実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）により記載されているものなどのハイブリドーマ法を使用して調製することができる。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物が、典型的には、ヒトＧＭ－ＣＳＦなどの免疫剤で免疫化されて、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生する、または産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。免疫剤は、好ましくは、ヒトＧＭ－ＣＳＦタンパク質、その断片、またはその融合タンパク質を含む。
ヒトモノクローナル抗体は、ファージ提示ライブラリーを含む、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１））．ＣｏｌｅらおよびＢｏｅｒｎｅｒらの技法は、ヒトモノクローナル抗体の調製にも利用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐ．７７（１９８５）ａｎｄ Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（ｌ）：８６－９５（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されているトランスジェニック動物、例えばマウスにヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによって作製することができる。投与すると、ヒトの抗体の産生が観察され、これは、遺伝子再構成、アセンブリ、および抗体レパートリーを含む、あらゆる点でヒトに見られるものによく似ている。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，６６１，０１６号、および以下の科学出版物：Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２－１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８４５－５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８２６（１９９６）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３（１９９５）にも記載されている。
いくつかの実施形態では、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、キメラまたはヒト化モノクローナル抗体である。上記に述べられるように、抗体のヒト化形態は、ヒト抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種のＣＤＲからの残基に置き換えられるキメラ免疫グロブリンである。
本発明のいくつかの実施形態では、抗体は、例えば、抗体が反復投与に好適であるように、免疫原性を低減させるようにさらに操作される。免疫原性が低減した抗体を生成するための方法には、例えば、１つ以上のフレームワーク領域において抗体をさらに操作して、Ｔ細胞エピトープを除去する、ヒト化／ヒューマニア化手順および脱免疫化などの修飾技法が含まれる。
いくつかの実施形態では、抗体はヒューマニア化抗体である。ヒューマニア化抗体は、参照抗体の重鎖のＣＤＲ３領域からの結合特異性決定基（ＢＳＤ）をコードするＤＮＡ配列をヒトＶＨセグメント配列に、および参照抗体からの軽鎖ＣＤＲ３ ＢＳＤをヒトＶＬセグメント配列に結合することにより得られる、参照抗体の結合特異性を有する操作されたヒト抗体である。ヒューマニア化の方法は、米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に提供されている。Ｅ．ｃｏｌｉからの抗体断片のシグナルレス分泌のための方法は、米国特許出願第２００７／００２０６８５号に記載されている。
抗体をさらに脱免疫化して、抗体のＶ領域から１つ以上の予測されるＴ細胞エピトープを除去することができる。そのような手順は、例えば、ＷＯ００／３４３１７に記載されている。
重鎖定常領域は、多くの場合、ガンマ鎖定常領域、例えば、ガンマ－１、ガンマ－２、ガンマ－３、またはガンマ－４の定常領域である。いくつかの実施形態では、例えば、抗体が断片である場合、抗体は、例えば、ポリエチレングリコール（ペグ化）または血清アルブミンなどのインビボでの延長された半減期を提供するために、別の分子にコンジュゲートされ得る。抗体断片のＰＥＧ化の例は、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９（ｆｏｒ ａｂｃｉｘｉｍａｂ）；Ｐｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７０：１１２６ （ｆｏｒ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＥＡ ａｎｔｉｂｏｄｙ）Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：７８０に提供されている。
本発明で使用するための抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦまたはｈＧＭ－ＣＳＦ受容体に結合する。抗体結合特異性を決定するために、任意の数の技法を使用することができる。抗体の特異的免疫反応性を決定するために使用され得るイムノアッセイの形式および条件の説明については、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８８）を参照されたい。
本発明で使用するのに好適な例示的な抗体は、ｃ１９／２（マウス／ヒトキメラ抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体）である。いくつかの実施形態では、ｃ１９／２と同じエピトープへの結合について競合するか、またはｃｌ１９／２と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体が使用される。特定の抗体が別の抗体と同じエピトープを認識する能力は、典型的には、第１の抗体が第２の抗体の抗原への結合を競合的に阻害する能力によって決定される。同じ抗原に対する２つの抗体間の競合を測定するために、いくつかの競合結合アッセイのいずれかを使用することができる。例えば、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイをこの目的に使用することができる。これは、捕捉抗体（ｃａｐｔｕｒｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）を使用して、ウェルの表面をコーティングすることによって行われる。次に、タグ付けされた抗原の飽和未満（ｓｕｂｓａｔｕｒａｔｉｎｇ）の濃度が捕捉表面に添加される。このタンパク質は、特異的な抗体：エピトープ相互作用により抗体に結合する。検出可能な部分（例えば、標識抗体が検出抗体として定義されるＨＲＰ）に共有結合されている二次抗体を洗浄した後、ＥＬＩＳＡに添加される。この抗体が捕捉抗体と同じエピトープを認識する場合、その特定のエピトープはもはや結合に利用できないため、標的タンパク質に結合することができない。しかしながら、この二次抗体が標的タンパク質上の異なるエピトープを認識する場合、結合することができ、この結合は、関連する基質を使用して活性（したがって抗体結合）のレベルを定量化することによって検出することができる。バックグラウンドは、単一の抗体を捕捉および検出抗体の両方として使用することによって定義されるが、最大シグナルは、抗原特異的抗体で捕捉し、抗原上のタグに対する抗体で検出することによって確立することができる。参照としてバックグラウンドおよび最大シグナルを使用することにより、抗体をペアワイズ様式で評価して、エピトープ特異性を決定することができる。
一次抗体は、二次抗体の抗原への結合が、上述のアッセイのいずれかを使用して、一次抗体の存在下で少なくとも３０％、通常は少なくとも約４０％、５０％、６０％、または７５％、多くの場合、少なくとも約９０％低減される場合、二次抗体の結合を競合的に阻害するとみなされる。
本発明のいくつかの実施形態では、既知の抗体、例えば、ｃｌ１９／２と同じエピトープへの結合と競合する、またはそれに結合する抗体が用いられる。エピトープをマッピングする方法は、当該技術分野で既知である。例えば、ヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）の機能的に活性な領域の局在化のための１つのアプローチは、抗ｈＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体を中和することにより認識されるエピトープをマッピングすることである。例えば、ｃ１９／２（中和抗体ＬＭＭ１０２と同じ可変領域を有する）が結合するエピトープは、細菌合成ｈＧＭ－ＣＳＦの酵素消化によって得られたタンパク質分解断片を使用して定義されている（Ｄｅｍｐｓｅｙ，ｅｔ ａｌ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ９：５４５－５５８，１９９０）。トリプシン消化物のＲＰ－ＨＰＬＣ分画により、６６個のアミノ酸（タンパク質の５２％）を含む免疫反応性「トリプシンコア」ペプチドが同定された。この「トリプシンコア」をＳ．ａｕｒｅｕｓ Ｖ８プロテアーゼでさらに消化することにより、残基８８と１２１の間のジスルフィド結合によって連結された２つのペプチド、残基８６～９３および１１２～１２７を含む独特の免疫反応性ｈＧＭ－ＣＳＦ産物が産生された。個々のペプチドは抗体によって認識されなかった。
いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適な抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦまたはｈＧＭ－ＣＳＦ受容体に対して高い親和性結合を有する。抗体の解離定数（ＫＤ）が＜約１０ｎＭ、典型的には＜１ｎＭ、好ましくは＜１００ｐＭの場合、抗体と抗原の間に高い親和性結合が存在する。いくつかの実施形態では、抗体は、毎秒約１０－４以上の解離速度を有する。
当業者に既知であるように、表面プラズモン共鳴アッセイ、飽和アッセイ、またはＥＬＩＳＡもしくはＲＩＡなどのイムノアッセイなどの様々な方法を使用して、その標的抗原に対する抗体の結合親和性を決定することができる。結合親和性を決定するための例示的な方法は、Ｋｒｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ，（２００７）ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｆｅｂ；４４（５）：９１６－２５．（Ｅｐｕｂ ２００６ Ｍａｙ Ｈ）により記載されているように、ＣＭ５センサーチップを使用したＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）２０００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）での表面プラズモン共鳴分析によるものである。
いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦのその受容体もしくは受容体サブユニットへの結合を妨げる様式で結合する、ｈＧＭ－ＣＳＦ、その受容体、またはその受容体サブユニットに対する中和抗体である。いくつかの実施形態では、本発明で使用するための抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体のアルファサブユニットへの結合を阻害する。そのような抗体は、例えば、ｈＧＭ－ＣＳＦが受容体に結合する領域でｈＧＭ－ＣＳＦに結合し、それにより結合を阻害することができる。別の実施形態では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体のアルファサブユニットへのその結合を遮断することなく、ｈＧＭ－ＣＳＦ機能を阻害する。
ＩＩ．重鎖
本発明の抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体の重鎖は、以下の要素を含む重鎖Ｖ領域を含む：
（１）ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３を含むヒト重鎖Ｖセグメント配列
（２）アミノ酸配列Ｒ（Ｑ／Ｄ）ＲＦＰＹを含むＣＤＲＨ３領域
（３）ヒト生殖系列Ｊ遺伝子セグメントにより提供されるＦＲ４。
相補的ＶＬ領域とともに、上述のＣＤＲ３－ＦＲ４セグメントと組み合わせてｈＧＭ－ＣＳＦへの結合を支持するＶセグメント配列の例を図１に示す。Ｖセグメントは、例えば、ヒトＶＨ１サブクラスからのものであり得る。いくつかの実施形態では、Ｖセグメントは、生殖系列セグメントＶＨ１ １－０２またはＶＨ１ １－０３に対して高度のアミノ酸配列同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、または９０％以上の同一性を有するヒトＶＨ１サブクラスセグメントである。いくつかの実施形態では、Ｖセグメントは、ＶＨ１ １－０２またはＶＨ１ １－０３と１５以下の残基、好ましくは７つ以下の残基だけ異なる。
本発明の抗体のＦＲ４配列は、ヒトＪＨ１、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、もしくはＪＨ６遺伝子生殖系列セグメント、またはヒト生殖系列ＪＨセグメントと高度のアミノ酸配列同一性を有する配列によって提供される。いくつかの実施形態では、Ｊセグメントは、ヒト生殖系列ＪＨ４配列である。
ＣＤＲＨ３は、ヒトＪセグメントに由来する配列も含む。典型的には、ＢＳＤを除くＣＤＲＨ３－ＦＲ４配列は、ヒトの生殖系列Ｊセグメントと２個以下のアミノ酸だけ異なる。典型的な実施形態では、ＣＤＲＨ３のＪセグメント配列は、ＦＲ４配列に使用されたのと同じＪセグメントからのものである。したがって、いくつかの実施形態では、ＣＤＲＨ３－ＦＲ４領域は、ＢＳＤおよび完全なヒトＪＨ４生殖系列遺伝子セグメントを含む。ＣＤＲＨ３およびＦＲ４配列の例示的な組み合わせが以下に示され、ＢＳＤは太字であり、ヒトの生殖系列ＪセグメントＪＨ４残基には下線が引かれている：
配列表１
Figure 2022517461000004
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、生殖系列セグメントＶＨ １－０２もしくはＶＨ１－０３に対して少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有するＶセグメント、あるいはＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５のＶセグメント部分などの図１に示されるＶＨ領域のＶセグメントのうちの１つを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨ領域のＶセグメントは、図１に示されるＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２を有する。例えば、本発明の抗体は、配列ＧＹＹＭＨもしくはＮＹＹＩＨを有するＣＤＲ１、または配列ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧもしくはＷＩＮＡＧＮＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧを有するＣＤＲ２を有し得る。
特定の実施形態では、抗体は、図１に示されるＶＨ領域Ｖセグメントのうちの１つからのＣＤＲ１およびＣＤＲ２と、Ｒ（Ｑ／Ｄ）ＲＦＰＹ、例えば、ＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹを含むＣＤＲ３との両方を有する。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、例えば、図１に示される配列Ｒ（Ｑ／Ｄ）ＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳならびにＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２を有するＣＤＲ３－ＦＲ４を有し得る。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体のＶＨ領域は、結合特異性決定基Ｒ（Ｑ／Ｄ）ＲＦＰＹを有するＣＤＲ３、ヒト生殖系列ＶＨ１セグメントからのＣＤＲ２、またはヒト生殖系列ＶＨ１からのＣＤＲ１を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨ１セグメントからのものである。
ＩＩＩ．軽鎖
本発明の抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体の軽鎖は、以下の要素を含む軽鎖Ｖ領域を含む：
（１）ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３を含むヒト軽鎖Ｖセグメント配列
（２）配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲＬ３領域、例えば、ＱＱＦＮＲＳＰＬＴまたはＱＱＦＮＫＳＰＬＴ。
（３）ヒト生殖系列Ｊ遺伝子セグメントにより提供されるＦＲ４。
ＶＬ領域は、ＶラムダまたはＶカッパＶセグメントのいずれかを含む。相補的なＶＨ領域と組み合わせて結合を支持するＶカッパ配列の例を図１に提供する。
ＶＬ領域のＣＤＲ３配列は、Ｊセグメント由来の配列を含む。典型的な実施形態では、ＣＤＲＬ３のＪセグメント配列は、ＦＲ４に使用されたのと同じＪセグメントからのものである。したがって、いくつかの実施形態の配列は、ヒトカッパ生殖系列のＶセグメントおよびＪセグメントの配列と２個以下のアミノ酸だけ異なり得る。いくつかの実施形態では、ＣＤＲＬ３－ＦＲ４領域は、ＢＳＤおよび完全なヒトＪＫ４生殖系列遺伝子セグメントを含む。カッパ鎖の例示的なＣＤＲＬ３－ＦＲ４の組み合わせが以下に示され、最小の必須結合特異性決定基は太字で示され、ＪＫ４配列には下線が引かれている：
配列表２
Figure 2022517461000005
Ｖカッパセグメントは、典型的には、ＶＫＩＩＩサブクラスのものである。いくつかの実施形態では、セグメントは、ヒト生殖系列ＶＫＩＩＩサブクラスに対して少なくとも８０％の配列同一性、例えば、ヒト生殖系列ＶＫＩＩＩＡ２７配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、Ｖカッパセグメントは、ＶＫＩＩＩＡ２７と１８以下の残基だけ異なり得る。他の実施形態では、本発明の抗体のＶＬ領域Ｖセグメントは、図１に示されるＶＬ領域のヒトカッパＶセグメント配列、例えば、ＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４のＶセグメント配列に対して少なくとも８５％の同一性、または少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％の同一性を有する。
いくつかの実施形態では、可変領域は、ヒトＶ遺伝子配列で構成される。例えば、可変領域配列は、ヒト生殖系列Ｖ遺伝子配列と少なくとも８０％の同一性、または少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９６％の同一性、少なくとも９７％の同一性、少なくとも９８％の同一性、または少なくとも９９％以上の同一性を有することができる。
いくつかの実施形態では、ＶＬ領域のＶセグメントは、図１に示されるＣＤＲ１および／またはＣＤＲ２を有する。例えば、本発明の抗体は、ＲＡＳＱＳＶＧＴＮＶＡもしくはＲＡＳＱＳＩＧＳＮＬＡのＣＤＲ１配列、またはＣＤＲ２配列ＳＴＳＳＲＡＴを有し得る。
特定の実施形態では、本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、図１に記載されるＶＬ領域のＶセグメントのうちの１つに示される、組み合わせでのＣＤＲ１およびＣＤＲ２と、ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３配列とを有し得、例えば、ＣＤＲ３は、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴまたはＱＱＦＮＲＳＰＬＴであり得る。いくつかの実施形態では、そのようなＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫであるＦＲ４領域を含み得る。したがって、本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、例えば、図１に示されるＶＬ領域のうちの１つからのＣＤＲ１およびＣＤＲ２と、ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫであるＣＤＲ３－ＦＲ４領域との両方を含むことができる。
ＩＶ．ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体の調製
本発明の抗体は、図１に示される、ＶＨ領域ＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５のうちのいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、図１に示される、ＶＬ領域ＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４のいずれかを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、それぞれが、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，１６８，１８３号および同第９，０１７，６７４号に記載されているように、図１に示される、ＶＨ領域ＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５、および図１に示されるＶＬ領域ＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４を有する。
抗体を試験して、抗体がｈＧＭ－ＣＳＦ活性に拮抗する活性を保持していることを確認することができる。アンタゴニスト活性は、増殖アッセイを含む任意の数のエンドポイントを使用して決定することができる。中和抗体および他のｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ｈＧＭ－ＣＳＦ機能を評価する任意の数のアッセイを使用して同定または評価され得る。例えば、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体シグナル伝達のための細胞ベースのアッセイ、例えば、限定量のｈＧＭ－ＣＳＦに応答してｈＧＭ－ＣＳＦ依存性細胞株の増殖速度を決定するアッセイが便利に使用される。ヒトＴＦ－１細胞株は、そのようなアッセイで使用するのに好適である。Ｋｒｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．を参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明の中和抗体は、９０％の最大ＴＦ－１細胞増殖を刺激するｈＧＭ－ＣＳＦ濃度が使用される場合、ｈＧＭ－ＣＳＦ刺激ＴＦ－１細胞増殖を少なくとも５０％阻害する。したがって、典型的には、本発明で使用するための中和抗体または他のｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、１０ｎＭ未満のＥＣ５０を有する（例えば、表２）。本発明での使用に好適な中和抗体の同定に使用するのに好適なさらなるアッセイは、当業者に既知であろう。他の実施形態では、中和抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦ刺激増殖を、マウスモノクローナル抗体ＬＭＭ１０２およびＣＤＲの可変領域を有する抗体キメラｃ１９／２（例えば、ＷＯ０３／０６８９２０）のアンタゴニスト活性の少なくとも約７５％、８０％、９０％、９５％、または１００％阻害する。
ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストとしての使用に好適な例示的なキメラ抗体はｃ１９／２である。ｃ１９／２抗体は、表面プラズモン共鳴分析によって決定されるとき、約ｌ０ｐＭの一価の結合親和性でｈＧＭ－ＣＳＦに結合する。ｃ１９／２抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列は既知である（例えば、ＷＯ０３／０６８９２０）。Ｋａｂａｔに従って定義されたＣＤＲは次のとおりである：
配列表３
Figure 2022517461000006
ＣＤＲは、当該技術分野で既知の他の定義、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、およびＡｂＭを使用して決定することもできる。
いくつかの実施形態では、本発明で使用される抗体は、ｃ１９／２と同じエピトープへの結合について競合するか、またはそれに結合する。ｃ１９／２によって認識されるＧＭ－ＣＳＦエピトープは、残基８８と１２１の間のジスルフィド結合によって連結された２つのペプチド、残基８６～９３および残基１１２～１２７を有する産物として同定されている。ｃ１９／２抗体は、細胞が０．５ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦで刺激されるとき、３０ｐＭのＥＣ５０でヒトＴＦ－Ｉ白血病細胞株のＧＭ－ＣＳＦ依存性増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本発明で使用される抗体は、ｃ１９／２と同じエピトープに結合する。
ｃ１９／２などの投与用の抗体をさらにヒューマニア化することができる。例えば、ｃ１９／２抗体は、ヒトＶ遺伝子セグメントを含むようにさらに操作することができる。
高親和性抗体は、結合活性および親和性を決定するための既知のアッセイを使用して同定され得る。そのような技法には、ＥＬＩＳＡアッセイ、ならびに表面プラズモン共鳴または干渉法を用いる結合決定が含まれる。例えば、親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを使用したバイオレイヤー干渉法によって決定することができる。本発明の抗体は、典型的には、グリコシル化および非グリコシル化形態の両方のｈＧＭ－ＣＳＦに類似の親和性で結合する。
本発明の抗体は、ｈＧＭ－ＣＳＦへの結合についてｃ１９／２抗体と競合する。本明細書に記載される抗体がｈＧＭ－ＣＳＦに対する結合についてｃ１９／２抗体を遮断する、またはそれと競合する能力は、抗体が同じエピトープｃ１９／２抗体、またはｃ１９／２抗体によって結合されるエピトープと近い、例えば、オーバーラップするエピトープに結合することを示す。他の実施形態では、本明細書に記載される抗体、例えば、図１に提供される表に示されるＶＨおよびＶＬ領域の組み合わせを含む抗体は、別の抗体がｈＧＭ－ＣＳＦへの結合について競合するかどうかを評価するための参照抗体として使用され得る。試験抗体は、参照抗体の抗原への結合が、試験抗体の存在下で少なくとも３０％、通常は少なくとも約４０％、５０％、６０％、または７５％、多くの場合、少なくとも約９０％低減される場合、参照抗体の結合を競合的に阻害するとみなされる。ＥＬＩＳＡならびにイムノブロットなどの他のアッセイを含む多くのアッセイを用いて、結合を評価することができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、同じ条件下でアッセイされた参照キメラｃ１９／２モノクローナル抗体よりも少なくとも２～３倍遅い解離速度を有するが、ｈＧＭ－ＣＳＦ活性を測定する細胞ベースのアッセイにおいてｈＧＭ－ＣＳＦ活性を中和する際に、参照抗体よりも少なくとも６～１０倍大きい効力を有する。
ヒト生殖系列配列に近いＶ領域配列を有する抗体を単離するための方法は、以前に記載されている（米国特許出願公開第２００５／０２５５５５２号および同第２００６／０１３４０９８号）。抗体ライブラリーは、哺乳類細胞、酵母細胞、または原核細胞を含む好適な宿主細胞において発現され得る。いくつかの細胞系での発現に関して、シグナルペプチドがＮ末端に導入されて、細胞外培地に直接分泌されてもよい。抗体は、シグナルペプチドを含むまたは含まないＥ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞から分泌され得る。Ｅ．ｃｏｌｉからの抗体断片のシグナルレス分泌のための方法は、米国特許出願第２００７／００２０６８５号に記載されている。
いくつかの実施形態では、図１に示される本発明のＶＨ領域のうちの１つからのＣＤＲを有する抗体が、図１に示されるＶＬ領域のうちの１つのＣＤＲを有する抗体と組み合わされ、好適な発現系においていくつかの形式のいずれかで発現される、本発明のｈＧＭ－ＣＳＦ結合抗体が生成される。したがって、抗体は、宿主細胞内にまたは分泌によるいずれかで、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'（免疫グロブリンヒンジ配列を含む）、Ｆ（ａｂ'）２（２つのＦａｂ'分子のヒンジ配列間のジスルフィド結合形成により形成される）、全免疫グロブリンもしくは切り詰められた免疫グロブリンとして、または原核もしくは真核宿主細胞における融合タンパク質として、発現され得る。メチオニン残基は、任意に、例えば、シグナルレス発現系において産生されたポリペプチドのＮ末端に存在してもよい。本明細書に記載されるＶＨ領域のそれぞれは、ＶＬ領域のそれぞれと対合されて、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体を生成することができる。一実施形態では、融合タンパク質は、本発明の抗ｈＧＭ－ＣＳＦ結合抗体またはその断片（非限定的な例では、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢ）、およびヒトトランスフェリンを含み、ヒトトランスフェリンは、Ｓｈｉｎ，Ｓ－Ｕ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．９２，ｐｐ．２８２０－２８２４，１９９５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、重鎖定常領域１（ＣＨ１）の末端、ヒンジの後、またはＣＨ３の後に抗体に融合される。
重鎖および軽鎖の例示的な組み合わせは、図１に提供される表に示される。いくつかの実施形態では、抗体ＶＬ領域、例えば、図１のＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４は、完全な軽鎖を形成するためにヒトカッパ定常領域と組み合わされる。さらに、いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、ヒトガンマ－１定常領域と組み合わされる。ｆ－アロタイプなどの任意の好適なガンマ－１アロタイプを選択することができる。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５から選択されるＶＨ（図１）、およびＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４から選択されるＶＬ（図１）を有する、例えば、ｆ－アロタイプを有するＩｇＧである。
本発明の抗体は、例えば、受容体へのｈＧＭ－ＣＳＦの結合を阻害することによりｈＧＭ－ＣＳＦ受容体の活性化を阻害し、ｈＧＭ－ＣＳＦへの高い親和性結合、例えば５００ｐＭを示す。いくつかの実施形態では、抗体は、毎秒約１０－４以下の解離定数を有する。理論に拘束されないが、解離定数が遅い抗体は、改善された治療利益をもたらす。例えば、ｃ１９／２抗体より３倍遅いオフ速度を有する本発明の抗体は、例えば、ＩＬ－８産生などの細胞ベースのアッセイにおいて、１０倍より強力なｈＧＭ－ＣＳＦ中和活性をもたらした（実施例２を参照されたい）。
抗体は、原核性および真核性の両方の発現系を含む、任意の数の発現系を使用して産生することができる。いくつかの実施形態では、発現系は、ＣＨＯ細胞発現系などの哺乳類細胞発現である。そのような系の多くは、商業的供給業者から広く入手可能である。抗体がＶＨおよびＶＬ領域の両方を含む実施形態では、ＶＨおよびＶＬ領域は、単一のベクターを使用して、例えば、ジシストロニック発現単位において、または異なるプロモーターの制御下で発現され得る。他の実施形態では、ＶＨおよびＶＬ領域は、別個のベクターを使用して発現され得る。本明細書に記載されるＶＨまたはＶＬ領域は、任意に、Ｎ末端にメチオニンを含み得る。
本発明の抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢを含む、任意の数の形式で産生され得る。本発明の抗体は、ヒト定常領域も含み得る。軽鎖の定常領域は、ヒトカッパまたはラムダ定常領域であり得る。重鎖定常領域は、多くの場合、ガンマ鎖定常領域、例えば、ガンマ－１、ガンマ－２、ガンマ－３、またはガンマ－４定常領域である。他の実施形態では、抗体はＩｇＡであり得る。
本発明のいくつかの実施形態では、抗体ＶＬ領域、例えば、図１のＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４は、完全な軽鎖を形成するためにヒトカッパ定常領域（例えば、配列番号：１０）と組み合わされる。
本発明のいくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、ヒトガンマ－１定常領域と組み合わされる。ｆ－アロタイプなどの任意の好適なガンマ－１ ｆアロタイプを選択することができる。したがって、いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５（図１）から選択されるＶＨを有するｆ－アロタイプ定常領域、例えば配列番号１１を有するＩｇＧである。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４（図１）から選択されるＶＬを有する（図１）。特定の実施形態では、抗体は、配列番号１０に記載されるカッパ定常領域と、配列番号１１に記載される重鎖定常領域とを有し、重鎖および軽鎖可変領域は、図１に記載される配列からの以下の組み合わせのうちの１つを含む：（ａ）ＶＨ＃２、ＶＫ ＃３；（ｂ）ＶＨ＃１、ＶＫ＃３；（ｃ）ＶＨ＃３、ＶＫ＃１；（ｄ）ＶＨ＃３、ＶＬ＃３；（ｅ）ＶＨ＃４、ＶＫ＃４；（ｆ）ＶＨ＃４、ＶＫ＃２；（ｇ）ＶＨ＃５、ＶＫ＃１；（ｈ）ＶＨ＃５、ＶＫ＃２；（ｉ）ＶＨ＃３、ＶＫ＃４；または（ｊ）ＶＨ＃３、ＶＬ＃３。
いくつかの実施形態では、例えば、抗体が断片である場合、抗体は、別の分子、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ化）または血清アルブミンにコンジュゲートされて、インビボでの延長された半減期を提供し得る。抗体断片のＰＥＧ化の例は、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９，２００４（アブシキシマブに関して）、Ｐｅｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７０：１１２６，１９９４（抗ＣＥＡ抗体に関して）、Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：７８０，１９９９、およびＨｕｍｐｈｒｅｙｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．２０：２２７，２００７に提供されている。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、Ｆａｂ'断片の形態である。完全長軽鎖は、ＶＬ領域をヒトカッパまたはラムダ定常領域に融合することによって生成される。どちらの定常領域も任意の軽鎖に使用することができるが、典型的な実施形態では、カッパ定常領域はＶカッパ可変領域と組み合わせて使用され、ラムダ定常領域は、Ｖラムダ可変領域とともに使用される。
Ｆａｂ'の重鎖は、本発明のＶＨ領域をヒト重鎖定常領域配列、第１の定常（ＣＨ１）ドメイン、およびヒンジ領域に融合することにより生成されるＦｄ'断片である。重鎖定常領域配列は、免疫グロブリンクラスのいずれかからのものであり得るが、多くの場合ＩｇＧからのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４からのものであり得る。本発明のＦａｂ'抗体はまた、ハイブリッド配列であってもよく、例えば、ヒンジ配列は、１つの免疫グロブリンサブクラスからのものであり得、ＣＨ１ドメインは、異なるサブクラスからのものであり得る。
Ｖ．ＧＭ－ＣＳＦが標的である疾患の治療のための抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体の投与。
本発明はまた、ｈＧＭ－ＣＳＦ活性を阻害することが望ましい、すなわち、ｈＧＭ－ＣＳＦが治療標的である、ｈＧＭ－ＣＳＦが関与する疾患を有する患者を治療する方法も提供する。いくつかの実施形態では、そのような患者は、慢性炎症性疾患、例えば、関節炎、例えば、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、若年性特発性関節炎、全身型スティル病、および関節の他の炎症性疾患；炎症性腸疾患、例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病、バレット症候群、回腸炎、腸炎、好酸球性食道炎、およびグルテン過敏性腸症；喘息、好酸球性喘息、成人呼吸窮迫症候群、アレルギー性鼻炎、珪肺症、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺疾患、間質性肺疾患、びまん性実質性肺疾患、気管支拡張症などの呼吸器系の炎症性障害；乾癬、強皮症、ならびに湿疹、アトピー性皮膚炎、じんま疹、そう痒症などの炎症性皮膚疾患を含む皮膚の炎症性疾患；多発性硬化症、特発性脱髄性多発ニューロパチー、ギランバレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、神経線維腫症、およびアルツハイマー病などの神経変性疾患を含む、中枢および末梢神経系の炎症を伴う障害を有する。本発明の方法を使用して、他の様々な炎症性疾患を治療することができる。これらには、全身性エリテマトーデス、免疫介在性腎疾患、例えば、糸球体腎炎、および脊椎関節症；ならびに全身性硬化症、特発性炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、血管炎、サルコイドーシス、甲状腺炎、痛風、耳炎、結膜炎、副鼻腔炎、サルコイドーシス、ベーチェット症候群、自己免疫性リンパ増殖性症候群（またはＡＬＰＳ、カナル－スミス症候群としても知られる）、Ｒａｓ関連自己免疫白血球増殖性障害（またはＲＡＬＤ）、ヌーナン症候群、肝炎などの肝胆道疾患、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎などの望ましくない慢性炎症性構成要素を伴う疾患が含まれる。いくつかの実施形態では、患者は心血管系の損傷後に炎症を有する。他の様々な炎症性疾患には、川崎病、多中心性キャッスルマン病、結核、および慢性胆嚢炎が含まれる。さらなる慢性炎症性疾患は、例えば、「Ｈａｒｒｉｓｏｎ'ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｉｎｃ．」に記載されている。いくつかの実施形態では、抗体で治療された患者は、ＧＭ－ＣＳＦが腫瘍またはがん細胞の成長に寄与するがんを有し、これには、例えば、急性骨髄性白血病、叢状神経線維腫、自己免疫リンパ増殖性症候群（またはＡＬＰＳ、カナル－スミス症候群としても知られる）、Ｒａｓ関連自己免疫性白血球増殖性障害（またはＲＡＬＤ）、ヌーナン症候群、慢性骨髄単球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、および急性骨髄性白血病が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体で治療される患者は、例えば、虚血性心疾患、脳卒中、およびアテローム性動脈硬化症などの心血管系への虚血性損傷による心不全を有するか、またはそのリスクがある。いくつかの実施形態では、本発明の抗体で治療される患者は喘息を有する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体で治療される患者は、アルツハイマー病を有する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体で治療される患者は、骨減少症、例えば、骨粗鬆症を有する。いくつかの実施形態では、本発明の抗体で治療される患者は、血小板減少性紫斑病を有する。いくつかの実施形態では、患者はＩ型またはＩＩ型糖尿病を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ＧＭ－ＣＳＦが治療標的である２つ以上の疾患を有し得、例えば、患者は、関節リウマチおよび心不全、または骨粗鬆症および関節リウマチなどを有し得る。
中和抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の他の２つの例は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ，（２００６）ＰＮＡＳ １０３（１０）：３５５７－３５６２に記載されているヒトＥ１０抗体およびヒトＧ９抗体である。Ｅ１０およびＧ９は、ＩｇＧクラスの抗体である。ＥｌＯは、ＧＭ－ＣＳＦに対して８７０ｐＭの結合親和性を有し、Ｇ９は、ＧＭ－ＣＳＦに対して１４ｐＭの親和性を有する。両抗体は、ヒトＧＭ－ＣＳＦへの結合に特異的であり、ＴＦｌ細胞増殖アッセイで評価されるとき、強い中和活性を示す。
追加の例示的な中和抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、Ｋｒｉｎｎｅｒら（ＭｏＩ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：９１６－２５，２００７；Ｅｐｕｂ ２００６ Ｍａｙ １１２００６）によって記載されているＭＴ２０３抗体である。ＭＴ２０３は、ピコモルの親和性でＧＭ－ＣＳＦに結合するＩｇＧ１クラスの抗体である。この抗体は、ＴＦ－１細胞増殖アッセイによって評価されるとき、強力な阻害活性、およびＵ９３７細胞においてＩＬ－８産生を遮断するその能力を示す。
本発明での使用に好適なさらなる抗体は、当業者に既知であろう。
抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体であるｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストはまた、本開示の方法で用いることもできる。そのようなｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストには、ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体アルファ鎖またはベータ鎖に対する抗体が含まれる。本発明で用いられる抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体は、例えば、インタクト、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、抗体断片、ヒト化、ヒューマニア化など、上記で説明された、任意の抗体形式であり得る。本発明での使用に好適な抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体の例、例えば、中和、高親和性抗体は既知である（例えば、米国特許第５，７４７，０３２号およびＮｉｃｏｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８２：１７２４，１９９３を参照されたい）。
非抗体ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト
ｈＧＭ－ＣＳＦとその受容体との生産的な相互作用を妨げる可能性のある他のタンパク質には、ｈＧＭ－ＣＳＦに結合し、細胞表面受容体への結合と競合するｈＧＭ－ＣＳＦ受容体鎖の一方または両方の細胞外部分の少なくとも一部を含む、変異ｈＧＭ－ＣＳＦタンパク質および分泌型タンパク質が含まれる。例えば、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体アンタゴニストは、ｓＧＭ－ＣＳＦＲアルファのコード領域をマウスＩｇＧ２ａのＣＨ２－ＣＨ３領域と融合させることにより調製することができる。例示的な可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体は、Ｒａｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：８２０３に記載されている。ＧＭ－ＣＳＦＲアルファ－Ｆｃ融合タンパク質の例は、例えば、Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｂｌｏｏｄ ８５：１４８８に提供されている。いくつかの実施形態では、そのような融合のＦｃ構成成分は、Ｆｃ受容体への結合を調節する、例えば、結合を増加させるように操作することができる。
他のｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストには、ｈＧＭ－ＣＳＦ変異体が含まれる。例えば、Ｈｅｒｃｕｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：５８３８，１９９４により記載される、ｈＧＭ－ＣＳＦのアミノ酸残基２１のアルギニンまたはリジン（Ｅ２１ＲまたはＥ２１Ｋ）への変異を有するｈＧＭ－ＣＳＦは、マウス異種移植モデルにおけるｈＧＭ－ＣＳＦ依存性白血病細胞の播種を防止する際にインビトロ活性を有することが示されている（Ｉｖｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ９０：４９１０，１９９７）。当業者によって理解されるように、そのようなアンタゴニストは、アミノ酸残基２１で述べられる置換などの置換を有するｈＧＭ－ＣＳＦの保存的に修飾された変異型、または例えば、半減期を延長するためにアミノ酸類似体を有するｈＧＭ－ＣＳＦ変異型を含み得る。
いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、ペプチドであり得る。例えば、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチドアンタゴニストは、受容体の結合および生物活性に関係するヒトＧＭ－ＣＳＦのＢおよびＣヘリックス上の特定の残基の位置を構造的に模倣するように設計されたペプチドであり得る（例えば、Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７１：２９６６－２９７１，１９９６）。
他の実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、抗体と同様の方法で抗原を標的とし、それに結合する「抗体模倣物」である。これらの「抗体模倣物」のいくつかは、抗体の可変領域の代替タンパク質フレームワークとして非免疫グロブリンタンパク質足場を使用する。例えば、Ｋｕら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２（１４）：６５５２－６５５６（１９９５））は、シトクロムｂ５６２のループのうちの２つをランダム化し、ウシ血清アルブミンに対する結合のために選択されたシトクロムｂ５６２に基づく抗体の代替案を開示している。個々の変異体は、抗ＢＳＡ抗体と同様にＢＳＡと選択的に結合することがわかった。米国特許第６，８１８，４１８号および同第７，１１５，３９６号は、フィブロネクチンまたはフィブロネクチン様タンパク質足場および少なくとも１つの可変ループを特徴とする抗体模倣物を開示している。アドネクチンとして知られるこれらのフィブロネクチンベースの抗体模倣物は、任意の標的リガンドに対する高い親和性および特異性を含む、天然または操作された抗体と同じ特徴の多くを示す。これらのフィブロネクチンベースの抗体模倣物の構造は、ＩｇＧ重鎖の可変領域の構造に類似する。したがって、これらの模倣物は、性質および親和性が天然の抗体のものと類似した抗原結合特性を示す。さらに、これらのフィブロネクチンベースの抗体模倣物は、抗体および抗体断片に対してある特定の利点を示す。例えば、これらの抗体模倣物は、天然の折り畳み安定性に関してジスルフィド結合に依存しないため、通常は抗体を分解する条件下で安定している。加えて、これらのフィブロネクチンベースの抗体模倣物の構造は、ＩｇＧ重鎖と類似しているため、インビボでの抗体の親和性成熟のプロセスと類似する、ループのランダム化およびシャッフリングのプロセスをインビトロで用いることができる。
Ｂｅｓｔｅら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６（５）：１８９８－１９０３（１９９９））は、リポカリン足場（Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標））に基づく抗体模倣物を開示している。リポカリンは、タンパク質の末端に４つの超可変ループを有するβバレルで構成されている。ループはランダム変異誘発を受け、例えば、フルオレセインとの結合のために選択された。３つの変異型はフルオレセインとの特異的結合を示し、１つの変異型は抗フルオレセイン抗体と同様の結合を示した。さらなる分析により、ランダム化された位置のすべてが可変であることが明らかになり、Ａｎｔｉｃａｌｉｎが抗体の代替として使用するのに好適であることを示す。したがって、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓは、典型的には１６０～１８０の残基の小さな一本鎖ペプチドであり、これは、生産コストの削減、保存時の安定性の増加、および免疫反応の減少を含む、抗体に対していくつかの利点をもたらす。
米国特許第５，７７０，３８０号は、結合部位として使用される複数の可変ペプチドループが付加された、カリックスアレーンの剛性の非ペプチド有機足場を使用する合成抗体模倣物を開示している。ペプチドループはすべて、互いに対して、カリックスアレーンから幾何学的に同じ側から突出している。この幾何学的な確認により、ループのすべてが結合に利用可能であり、リガンドへの結合親和性を増加させる。しかしながら、他の抗体模倣物と比較して、カリックスアレーンベースの抗体模倣物はペプチドのみからなるわけではなく、したがって、プロテアーゼ酵素による攻撃を受けにくい。足場も、純粋にペプチド、ＤＮＡ、またはＲＮＡからなるわけではない、つまり、この抗体模倣物は、極端な環境条件で比較的安定しており、寿命が長い。さらに、カリックスアレーンベースの抗体模倣物は比較的小さいため、免疫原性応答をもたらす可能性は低い。
Ｍｕｒａｌｉら（Ｃｅｌｌ ＭｏＩ Ｂｉｏｌ ４９（２）：２０９－２１６（２００３））は、抗体をより小さなペプチド模倣物に低減するための方法論を記載しており、これらは、「抗体様結合ペプチド模倣物」（ＡＢｉＰ）と呼ばれ、抗体の代替物としても有用であり得る。
非免疫グロブリンタンパク質フレームワークに加えて、抗体の特性は、ＲＮＡ分子および非天然オリゴマーを含む化合物（例えば、プロテアーゼ阻害剤、ベンゾジアゼピン、プリン誘導体、およびベータターン模倣物）においても模倣されている。したがって、非抗体ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、そのような化合物も含み得る。
治療的投与
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト（例えば、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体）を、ＣＲＳまたはサイトカインストームを有する対象に医薬組成物として投与することを含む。いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストは、疾患の治療に好適な投与計画を使用して治療有効量で投与される。
いくつかの実施形態では、治療有効量は、状態またはその症状を少なくとも部分的に阻止する量である。例えば、治療有効量は、免疫活性化を阻止し得る、循環サイトカインのレベルを減少させ得る、Ｔ細胞活性化を減少させ得る、または発熱、倦怠感、疲労、食欲不振、筋肉痛、関節痛、吐き気、嘔吐、頭痛、皮疹、吐き気、嘔吐、下痢、頻呼吸、低酸素血症、心血管頻脈、脈圧拡大、低血圧、心拍出量の増加（早期）、潜在的な心拍出量の減少（後期）、Ｄダイマーの上昇、出血を伴うまたは伴わない低フィブリノゲン血症、高窒素血症、高トランスアミナーゼ血症、高ビリルビン血症、頭痛、精神状態変化、混乱、せん妄、喚語困難または明らかな失語症、幻覚、振戦、測定障害、歩行変化、または発作を寛解させ得る。
本発明の方法は、疾患の治療に好適な投与計画を使用して、治療有効量で医薬組成物として抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体を患者に投与することを含む。組成物は、様々な薬物送達系で使用するために製剤化され得る。１つ以上の生理学的に許容される賦形剤または担体も、適切な製剤のために組成物に含めることができる。本発明での使用に好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５に見出される。薬物送達のための方法の簡単な概説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３（１９９０）を参照されたい。
本発明の方法で使用するための抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、注射用の無菌等張水溶液などの、患者への注射に好適な溶液で提供される。抗体は、許容される担体中に好適な濃度で溶解または懸濁される。いくつかの実施形態では、担体は、水性、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などである。組成物は、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）などの、生理学的条件に近づけるために必要とされる補助医薬物質を含み得る。
本発明の医薬組成物は、疾患または疾患の症状およびその合併症を治癒または少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で、患者、例えば、骨減少症、関節リウマチ、若年性特発性関節炎、全身型スティル病、喘息、好酸球性喘息、好酸球性食道炎、多発性硬化症、乾癬、アトピー性皮膚炎、叢状神経線維腫、自己免疫リンパ増殖性症候群（またはＡＬＰＳ、カナル－スミス症候群としても知られる）、Ｒａｓ関連自己免疫白血球増殖性障害（またはＲＡＬＤ）、ヌーナン症候群、慢性骨髄単球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、多中心性キャッスルマン病、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、びまん性実質性肺疾患、特発性血小板減少性紫斑病、アルツハイマー病、心不全、川崎病、虚血事象による心臓損傷、または糖尿病を有する患者に投与される。これを達成するのに十分な量は、「治療有効用量」と定義される。治療有効用量は、療法に対する患者の応答を監視することによって決定される。治療有効用量を示す典型的なベンチマークには、患者の疾患の症状の寛解が含まれる。この使用に有効な量は、疾患の重症度、および年齢、体重、性別、投与経路などの他の要因を含む患者の健康の一般的な状態に依存する。抗体の単回または複数回投与は、必要に応じて、および患者により認容される投与量および頻度により投与され得る。いずれにせよ、本方法は、患者を効果的に治療するのに十分な量の抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体を提供する。
抗体は、目的の疾患を治療するために、単独で、または他の療法と組み合わせて投与することができる。
抗体は、静脈内、皮下、筋肉内、または腹腔内経路を含むがこれらに限定されない任意の好適な経路を介して注射または注入によって投与することができる。いくつかの実施形態では、抗体は吹送によって投与することができる。例示的な実施形態では、抗体は、４℃で注射用の無菌等張生理食塩水溶液に１０ｍｇ／ｍｌで保存することができ、患者への投与前に注射用に１００ｍｌまたは２００ｍｌのいずれかの０．９％塩化ナトリウムで希釈される。抗体は、０．２～１０ｍｇ／ｋｇの用量で１時間かけて静脈内注入により投与される。他の実施形態では、抗体は、例えば、１５分～２時間の期間にわたって静脈内注入により投与される。さらに他の実施形態では、投与手順は、皮下または筋肉内注射による。
いくつかの実施形態では、ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニスト、例えば、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体は、脊髄周囲（ｐｅｒｉｓｐｉｎａｌ）経路によって投与される。脊髄周囲投与は、最初の投与時に治療分子を脊椎の近くに直接配置するように行われる解剖学的に局所化された送達を伴う。脊髄周囲投与は、例えば、米国特許第７，２１４，６５８号およびＴｏｂｉｎｉｃｋ＆Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ５：２，２００８に記載されている。
ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの用量は、ＣＲＳまたはサイトカインストームと診断された対象に効果的な治療を提供するために選択される。用量は、典型的には、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、または患者当たり約１ｍｇ～約２ｇの範囲である。用量は、約１～約２０ｍｇ／ｋｇまたはおよそ約５０ｍｇ～約２０００ｍｇ／患者の範囲である場合が多い。用量は、アンタゴニストの薬物動態（例えば、循環中の抗体の半減期）および薬力学的応答（例えば、抗体の治療効果の持続時間）により、１日１回～３ヶ月に１回の範囲であり得る適切な頻度で繰り返され得る。アンタゴニストが抗体または修飾された抗体断片であるいくつかの実施形態では、約７～約２５日のインビボ半減期および抗体投与は、１週間に１回～３ヶ月に１回繰り返される。他の実施形態では、抗体はおよそ月に１回投与される。
本発明のＶＨ領域および／またはＶＬ領域は、診断目的のためにも使用され得る。例えば、ＶＨおよび／またはＶＬ領域は、患者のＧＭ－ＣＳＦレベルの検出などの臨床分析に使用されてもよい。本発明のＶＨまたはＶＬ領域は、例えば、抗Ｉｄ抗体を産生するためにも使用され得る。
本明細書で別段の定義がない限り、本出願に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈で特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
一実施形態では、「治療すること」は治療上の処置を含み、「予防すること」は予防的または防止的手段を含み、その目的は、上述の標的とする病的状態または障害を予防または軽減することである。したがって、一実施形態では、治療することは、疾患、障害、もしくは状態と関連する症状、またはその組み合わせに直接影響を与える、またはそれを治癒する、抑制する、阻害する、予防する、その重症度を低減する、その発症を遅らせる、それを低減することを含み得る。したがって、一実施形態では、「治療すること」、「寛解させること」、および「軽減すること」は、とりわけ、進行を遅らせること、寛解を促進すること、寛解を誘導すること、寛解を増強させること、回復を加速させること、代替療法の有効性を増加させるもしくはそれに対する耐性を減少させること、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態では、「予防すること」は、とりわけ、症状の発症を遅らせること、疾患への再発を予防すること、再発エピソードの数もしくは頻度を減少させること、症候性エピソード間の潜伏期を増加させること、またはそれらの組み合わせを指す。一実施形態では、「抑制する」または「阻害する」は、とりわけ、症状の重症度を低減すること、急性エピソードの重症度を低減すること、症状の数を低減すること、疾患関連症状の発生を低減すること、症状の潜伏期を低減すること、症状を寛解させること、二次症状を低減させること、二次感染を低減させること、患者の生存期間を延長させること、またはこれらの組み合わせを指す。
本開示において、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、複数の参照を含み、特定の数値への参照は、文脈が明らかに別様に示さない限り、少なくともその特定の値を含む。本明細書で使用される場合、「複数」という用語は、２つ以上を意味する。値の範囲が表される場合、別の実施形態は、１つの特定の値から、および／または他の特定の値までを含む。
同様に、先行詞「約」を使用することにより、値が近似値として表される場合、特定の値が別の実施形態を形成することが理解される。すべての範囲は包括的かつ組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、示される数または数の範囲から、０．０００１～５％の偏差を指す。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、示される数または数の範囲から、１～１０％の偏差を指す。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、示される数または数の範囲から、最大２５％の偏差を指す。「含む」という用語は、列記されているすべての要素を包含することを意味するが、追加の不特定の要素も含まれる場合があり、すべて同じ本質および意味を有する「包含する（ｅｎｃｏｍｐａｓｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語と交換可能に使用され得る。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、列挙された要素またはステップで構成されることを意味し、すべて同じ本質および意味を有する「で構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」という用語と交換可能に使用され得る。
実施例１－ＧＭ－ＣＳＦに対する例示的なヒューマニア化抗体
米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号および同第２００５／０２５５５５２号に記載されるように、ｃ１９／２の特異性を有する操作されたＦａｂ'分子のパネルを、エピトープに焦点を当てたヒトＶセグメントライブラリーから生成した。エピトープに焦点を当てたライブラリーは、ヒト生殖系列Ｊセグメント配列とともにＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ３にＢＳＤ配列を含むＣＤＲ３－ＦＲ４領域に連結されたヒトＶセグメントライブラリー配列から構築された。重鎖にはヒト生殖系列ＪＨ４配列を使用し、軽鎖にはヒト生殖系列ＪＫ４配列を使用した。
組換えヒトＧＭ－ＣＳＦへの結合を支持する、Ｖｈ１制限ライブラリーからの完全長ヒューマニア化Ｖ領域が選択された。マウスｃ１９／２抗体Ｖセグメントの一部のみがヒト配列のライブラリーに最初に置き換えられた、米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている「カセット」ライブラリーの構築のベースとして、「完全長」Ｖ－カッパライブラリーを使用した。２種類のカセットを構築した。Ｖ－カッパ鎖のカセットは、フレームワーク２領域内で共通の配列が重複するブリッジＰＣＲによって作製された。このようにして、「フロント－エンド」および「中間」ヒトカセットライブラリーが、ヒトＶ－カッパＩＩＩアイソタイプ用に構築された。ＧＭ－ＣＳＦへの結合を支持したヒトＶ－カッパＩＩＩカセットは、コロニーリフト結合アッセイにより同定され、ＥＬＩＳＡの親和性によりランク付けされた。Ｖ－カッパヒト「フロント－エンド」および「中間」カセットをブリッジＰＣＲで一緒に融合して、ＧＭ－ＣＳＦ結合活性を支持した完全なヒトＶ－カッパ領域を再構築した。したがって、ヒューマニア化Ｆａｂは、ヒトＧＭ－ＣＳＦへの結合を支持するヒューマニア化Ｖ－重およびＶ－カッパ領域からなる。
結合活性は、表面プラズモン共鳴（ｓｐｒ）分析により決定された。ビオチン化ＧＭ－ＣＳＦは、ストレプトアビジンでコーティングされたＣＭ５バイオセンサーチップに捕捉された。Ｅ．ｃｏｌｉから発現されたヒューマニア化Ｆａｂ断片を、ｐＨ７．４の、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．００５％Ｐ２０において３０ ｎＭの開始濃度に希釈した。３倍希釈系列を使用して各Ｆａｂを４回希釈し、各濃度を３７℃で２回試験して、異なる密度の抗原表面との結合速度を決定した。３つのすべての表面からのデータは、解離定数を抽出するために全体的に適合された。
結合速度は、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により分析された。組換えヒトＧＭ－ＣＳＦ抗原をビオチン化し、ストレプトアビジンＣＭ５センサーチップに固定した。Ｆａｂ試料を３ｎＭの開始濃度に希釈し、３倍希釈系列で実行した。アッセイは、ｐＨ７．４および３７℃で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、および０．００５％ｐ２０において実行した。各濃度を２回試験した。Ｆａｂ'結合アッセイを、２つのデータセットを提供する２つの抗原密度表面で実行した。１：１ラングミュア結合モデルを使用して計算された、６つの様々なヒューマニア化抗ＧＭ－ＣＳＦ Ｆａｂクローンのそれぞれの平均親和性（ＫＤ）を表２に示す。
ＴＦ－１細胞増殖アッセイを使用して、ＧＭ－ＣＳＦ中和についてＦａｂを試験した。ヒトＴＦ－１細胞のＧＭ－ＣＳＦ依存性増殖を、ＭＴＳアッセイ（Ｃｅｌｌ ｔｉｔｅｒ ９６、Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して０．５ｎｇ／ｍｌのＧＭ－ＣＳＦとともに４日間インキュベートした後に測定して、生存細胞を決定した。すべてのＦａｂがこのアッセイで細胞増殖を阻害し、これらが中和抗体であることを示す。細胞ベースのアッセイでは、抗ＧＭ－ＣＳＦ Ｆａｂの相対親和性とＥＣ５０との間に良好な相関関係がある。１８ｐＭ～１０４ｐＭの範囲の一価の親和性を有する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、細胞ベースのアッセイにおいてＧＭ－ＣＳＦの効果的な中和を示す。
例示的な操作された抗ＧＭ－ＣＳＦ Ｖ領域配列を図１に示す。
Figure 2022517461000007
実施例２－ヒューマニア化ＧＭ－ＣＳＦ抗体の評価
この例では、マウス抗体ＬＭＭ１０２からの可変領域を有するキメラＩｇＧ１ｋ抗体（Ａｂ２）（Ｎｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ ３：１５９，１９９０）と比較した、細胞ベースのアッセイでヒューマニア化抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の結合活性および生物学的効力を評価する。Ａｂ１は、Ａｂ２と同一の定常領域を有するＧＭ－ＣＳＦに対するヒューマニア化ＩｇＧ１ｋ抗体である。
ヒトＧＭ－ＣＳＦのＡｂ１およびＡｂ２への結合の表面プラズモン共鳴分析
表面プラズモン共鳴分析を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００機器を使用して、Ａｂ１およびＡｂ２とグリコシル化ヒトＧＭ－ＣＳＦとの相互作用の結合速度および一価の親和性を比較した。ポリクローナル抗ヒトＦ（ａｂ'）２を使用して、Ａｂ１またはＡｂ２をＢｉａｃｏｒｅチップ表面に捕捉した。ヒト２９３細胞から発現されたグリコシル化組換えヒトＧＭ－ＣＳＦを分析物として使用した。速度定数は、２つの独立した実験において決定された（図２Ａ～２Ｂおよび表３を参照されたい）。結果は、ＧＭ－ＣＳＦがこの実験において比較可能な一価の親和性でＡｂ２およびＡｂ１に結合したことを示す。しかしながら、Ａｂ１はＡｂ２よりも２倍遅い「オン速度」であったが、およそ３倍遅い「オフ速度」であった。
Figure 2022517461000008
ＧＭ－ＣＳＦは、Ｎ結合およびＯ結合の両方のグリコシル化部位で自然にグリコシル化されるが、グリコシル化は生物学的活性には必要ない。ＧＭ－ＣＳＦグリコシル化がＡｂ１またはＡｂ２の結合に影響を与えるかどうかを決定するために、２つの異なる源；Ｅ．ｃｏｌｉで発現されたＧＭ－ＣＳＦ（非グリコシル化）およびヒト２９３細胞から発現されたＧＭ－ＣＳＦ（グリコシル化）からの組換えＧＭ－ＣＳＦを使用して、抗体をＥＬＩＳＡで比較した。図３Ａ～３Ｂおよび表４の結果は、両方の抗体がグリコシル化および非グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦに同等の活性で結合したことを示した。２つの抗体は、このアッセイにおいて比較可能なＥＣ５０値も示した。
Figure 2022517461000009
Ａｂ１は、Ａｂ２に存在するマウス可変領域に由来したヒューマニア化抗体である。Ａｂ１は、競合ＥＬＩＳＡにより重複エピトープ特異性（Ａｂ２）について試験された。
ビオチン化Ａｂ２は、既知の技法を使用して調製された。ＥＬＩＳＡにより決定されるとき、ビオチン化はＡｂ２のＧＭ－ＣＳＦへの結合に影響を与えなかった。アッセイでは、Ａｂ２またはＡｂ１を、一定量のビオチン化Ａｂ２とともに様々な濃度で添加した。ビオチン化Ａｂ２の検出は、非標識ＡｂまたはＡｂ１競合物質の存在下でアッセイされた（図４Ａ～４Ｂ）。Ａｂ１およびＡｂ２の両方がＧＭ－ＣＳＦへの結合についてビオチン化Ａｂ２と競合したため、同じエピトープへの結合が示された。Ａｂ１は、ＧＭ－ＣＳＦへの結合について、Ａｂ２よりも効果的に競合し、表面プラズモン共鳴分析によるＡｂ２と比較した場合、Ａｂ１の遅い解離速度と一致した。
Ａｂ１およびＡｂ２によるＧＭ－ＣＳＦ活性の中和
ＧＭ－ＣＳＦ活性を中和するための細胞ベースのアッセイを用いて、生物学的効力を評価した。このアッセイは、ＧＭ－ＣＳＦで誘導されたＵ９３７細胞からのＩＬ－８分泌を測定する。培養上清に分泌されたＩＬ－８は、０．５ｎｇ／ｍｌのＥ．ｃｏｌｉ由来ＧＭ－ＣＳＦで１６時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡにより決定される。
このアッセイにおけるＡｂ１およびＡｂ２の中和活性の比較は、図５の代表的なアッセイにおいて示される。３つの独立した実験において、ＩＣ５０を比較すると、Ａｂ１はＡｂ２よりも効果的にＧＭ－ＣＳＦ活性を阻害した（表５）。
Figure 2022517461000010
要約
ヒューマニア化Ａｂ１は、２５ｐＭの計算された平衡結合定数（ＫＤ）でＧＭ－ＣＳＦに結合した。Ａｂ２は、３０．５ｐＭのＫＤでＧＭ－ＣＳＦに結合した。Ａｂ２は、ＧＭ－ＣＳＦについてＡｂ１よりも２倍高い会合定数（ｋａ）を示したが、Ａｂ１は、Ａｂ２よりも３倍遅い解離速度（ｋｄ）を示した。Ａｂ２およびＡｂ１は、抗原結合ＥＬＩＳＡにおいてグリコシル化および非グリコシル化ＧＭ－ＣＳＦに対して類似した結合活性を示した。競合ＥＬＩＳＡは、両方の抗体が同じエピトープについて競合することを確認し、Ａｂ１はＡｂ２よりも高い競合結合活性を示した。加えて、Ａｂ１は、ＧＭ－ＣＳＦ誘導ＩＬ－８誘導アッセイにおいてＡｂ２よりも高いＧＭ－ＣＳＦ中和活性を示した。
実施例３－免疫療法関連毒性のマウスモデルにおける中和抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の投与
免疫療法関連毒性のマウスモデルを使用して、免疫療法関連毒性を予防および治療するための抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の有効性を示すことができる。免疫療法関連毒性の１つのモデルでは、毒性を引き起こす用量でＣＡＲ Ｔ細胞をマウスに注射する。例えば、参照により本明細書に組み込まれるｖａｎ ｄｅｒ Ｓｔｅｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １９１：４５８９－４５９８（２０１３））は、Ｔ４＋Ｔ細胞と呼ばれる３０×１０６細胞の単回用量のｉ．ｐ．注射により誘導されるＣＲＳモデルを記載する。Ｔ４＋Ｔ細胞は、キメラＡｇ受容体（ＣＡＲ）Ｔ１Ｅ２８ｚを発現する操作されたＴ細胞である。Ｔ１Ｅ２８ｚを発現するように操作されたＴ細胞は、ＥｒｂＢ１－およびＥｒｂＢ４ベースの二量体ならびにＥｒｂＢ２／３ヘテロ二量体を発現する細胞によって活性化される。
ＣＲＳの予防および治療に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の有効性を評価するために、マウスを群（ｎ＝１０）に分け、各群に次のいずれかを与える：（ａ）単一ｉ．ｐ．生理食塩水注射、（ｂ）３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射、（ｃ）Ｔ４＋Ｔ細胞と共投与した、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇの静脈内（ｉ．ｖ．）抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体２２Ｅ９（組換えラット抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体）、（ｄ）Ｔ４＋Ｔ細胞と共投与した、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇの鼻腔内（ｉ．ｎ．）抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９、（ｅ）Ｔ４＋Ｔ細胞投与の６時間前に、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇのｉ．ｖ．抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９、（ｆ）Ｔ４＋Ｔ細胞投与の６時間前に、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇのｉ．ｎ．抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９、（ｇ）Ｔ４＋Ｔ細胞投与の２時間後に、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇのｉ．ｖ．抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９、または（ｈ）Ｔ４＋Ｔ細胞投与の２時間後に、３０×１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射および０．２５ｍｇのｉ．ｎ．抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９。さらなる用量、投与時間、および投与経路が評価される。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９の効果を評価するために、臓器をマウスから収集し、ホルマリン固定し、組織病理学的分析に供する。血液を収集し、ヒトＩＦＮγ、ヒトＩＬ－２、ならびにマウスＩＬ－６、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＩＬ－１７、ＩＦＮγ、およびＴＮＦαの濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイなどの文献に十分に記載されている方法により評価する。マウスの体重、行動、臨床症状を観察する。
実施例４－免疫療法に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の効果
マウスモデルを使用して、ＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストががん免疫療法の有効性に悪影響を与えないことを示すことができる。ＳＣＩＤベージュマウスにがん細胞株を接種し、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体とともにまたはなしで、Ｔ４＋Ｔ細胞として、ＣＲＳを誘導することが知られている免疫療法剤で処置することができる。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が免疫療法の有効性に影響を与えるかどうかを評価するために、マウスを群（ｎ＝１０）に分け、各群に次にいずれかを与える：（ａ）３０ｘ１０６ ＳＫＯＶ３細胞の皮下（ｓ．ｃ．）注射、（ｂ）３０ｘ１０６ ＳＫＯＶ３細胞のｓ．ｃ．注射および３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射、または（ｃ）３０ｘ１０６ ＳＫＯＶ３細胞のｓ．ｃ．インプラント、３０ｘ１０６ Ｔ４＋Ｔ細胞のｉ．ｐ．注射、および０．２５ｍｇの抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９のｉ．ｖ．注射。
Ｔ４＋Ｔ細胞の有効性に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体２２Ｅ９の効果を評価するために、腫瘍サイズを４日ごとにキャリパーで測定し、腫瘍体積を次の式で計算した：０．５×（大径）×（小径）２。マウスの体重、行動、臨床症状を観察する。実験の終わりに、動物を屠殺し、腫瘍組織を採取し、量る。
実施例５－ヒトＣＲＳのマウスモデル
ＣＲＳの治療または予防におけるヒト化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体の効果を調査するためのＣＲＳのマウスモデルを開発した。（図１７Ａ～１７Ｂ）。
方法：使用されるモデルは原発性ＡＭＬモデルである。ヒトＳＣＦ、ＩＬ－３、およびＧＭ－ＣＳＦにさらにトランスジェニックである免疫低下状態のＮＳＧ－Ｓマウスに、ＣＤ１２３陽性のＡＭＬ患者由来のＡＭＬ芽球を移植した。２～４週間後、出血させて、移植および高疾患負荷の達成を確認した。次に、以前に研究された用量よりも１０倍高い１ ｘ １０６細胞の高用量のＣＡＲ－Ｔ１２３でマウスを処置した。
結果：ＣＡＲ－Ｔ細胞注射後１～２週間以内に、これらのマウスが脱力感、るいそう、体の丸まり、離脱症状、乏しい運動反応を特徴とする病気を発達させたことが観察された。マウスは最終的に７～１０日以内にそれらの疾患で死亡した。症状は、マウスでの大幅なＴ細胞拡大、ならびにＩＬ－６、ＭＩＰ１α、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＭＩＰ１β、およびＩＬ－２などの複数のヒトサイトカインの上昇と、ならびにＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のヒトＣＲＳに見られるものに似ているパターンにおいて相関する。ＧＭ－ＣＳＦの倍率変化は他のサイトカインよりも有意に大きかった。（図１７ ａ～ｂ）。
実施例６－ＧＭ－ＣＳＦノックアウトＣＡＲ－Ｔの生成
ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＴ細胞が生成され、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低減を示すが、免疫細胞の機能性を示した、他のサイトカインおよび脱顆粒のレベルは類似することを示した。（図１５Ａ－１～１５Ｇを参照されたい）。
実施例７－抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体はＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを中和する
抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ媒介殺傷、増殖、またはサイトカイン産生を阻害しないが、ＧＭ－ＣＳＦを良好に中和する。（図１６Ａ－１～１６Ｉを参照されたい）。
実施例８－抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体はインビボでのＣＡＲ－Ｔの有効性を阻害しない
中和ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体であるヒト化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体は、インビボでのＣＡＲ－Ｔの効果を阻害しない（図１８Ａ～１８Ｃ）。本明細書に記載される実施形態による、抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体と組み合わせた異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔの有効性。図１８Ａに示されるように、ＮＳＧマウスにＮＡＬＭ－６－ＧＦＰ／ルシフェラーゼ細胞（ヒト末梢血白血病プレＢ細胞）を注射し、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を実施して腫瘍成長を確認した。マウスを、（１）抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（１０ｍｇ／Ｋｇを１０日間毎日）および（ａ）ＣＡＲＴ１９もしくは（ｂ）非形質導入ヒトＴ細胞（ＵＴＤ）１ｘ１０６細胞、または（２）ＩｇＧ対照抗体（１０ｍｇ／Ｋｇを１０日間毎日）および（ａ）ＣＡＲＴ１９もしくは（ｂ）形質導入ヒトＴ細胞（ＵＴＤ）１ｘ１０６細胞のいずれかで処置した。図１８Ｂおよび１８Ｃは、抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体がインビボでのＣＡＲ－Ｔの有効性を阻害しなかったことを示す。
実施例９－抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は生存率に対するＣＡＲ－Ｔの影響を損なわない
インビトロおよびインビボの前臨床データは、抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（ヒト化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体）がマウスモデルの生存率に対するＣＡＲ－Ｔの影響を損なわないことを示す。（図１９）。
抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＰＢＭＣの不在下で、インビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞の機能を妨げない。ＣＡＲ－Ｔ＋対照およびＣＡＲ－Ｔ＋抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体で類似していると示された生存率。
実施例１０－抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体はＣＡＲ－Ｔ拡大を増加させ得る
インビトロおよびインビボの前臨床データは、抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（ヒト化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体）がＣＡＲ－Ｔ拡大を増加させ得ることを示す（図２０）。抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、インビトロでのＣＡＲ－Ｔがん細胞殺傷を増加させ得る。この抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を増加させ、有効性を改善し得る。ＣＡＲ－Ｔの増殖は、ＰＢＭＣの存在下でＧＭ－ＣＳＦ中和抗体によって増加した。（ＰＢＭＣなしでは影響を受けなかった）。この抗体は、脱顆粒、細胞内ＧＭ－ＣＳＦ産生、またはＩＬ－２産生を阻害しなかった。
実施例１１－全体的な応答率の改善と関連するＣＡＲ－Ｔ拡大
全体的な応答率の改善と関連するＣＡＲ－Ｔ拡大。（図２１）。ＣＡＲ ＡＵＣ（曲線下面積）はＣＡＲ－Ｔ投与後の最初の２８日間にわたる血液のＣＡＲ ＋細胞／μＬの累積レベルとして定義された。Ｐ値はウィルコクソン順位和検定により計算された。（Ｎｅｅｌａｐｕ，ｅｔ ａｌ ＩＣＭＬ ２０１７ Ａｂｓｔｒａｃｔ ８）。
実施例１２－本明細書に記載される実施形態による抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の研究プロトコル
本明細書に記載される実施形態による抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（ヒューマニア化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体）の研究プロトコル。（図２２を参照されたい）。入院中および最初の３０日間の通院中に毎日評価されるＣＲＳおよびＮＴ。ＣＡＲ－Ｔ治療の－１、＋１、および＋３日目にＧＭ－ＣＳＦ中和抗体を受ける適格な対象。ベースライン、ならびに１、３、６、９、１２、１８、および２４ヶ月目に実施される腫瘍評価。血液試料（ＰＢＭＣおよび血清）、－５、－１、０、１、３、５、７、９、１１、１３、２１、２８、９０、１８０、２７０、および３６０日目。
実施例１３－ＧＭ－ＣＳＦ枯渇はＣＡＲ－Ｔ細胞拡大を増加させる
ＧＭ－ＣＳＦ枯渇はＣＡＲ－Ｔ細胞拡大を増加させる。（図２３）Ａは、対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増加したエクスビボ拡大を示す。Ｂは、本明細書に記載される実施形態による抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（ヒト化抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体）でのインビボ処理後のより頑強な増殖を示す。
実施例１４－＞１００人のヒト患者における抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の安全性プロファイル＊
第Ｉ相：健康な成人ボランティアにおける単一用量、用量漸増。目的は、安全性／忍容性、ＰＫ、および免疫原性を分析することであった。
登録数／用量：
（ｎ＝１２）
３／１ｍｇ／ｋｇ
３／３ｍｇ／ｋｇ
３／１０ｍｇ／ｋｇ
３／プラセボ
安全性の結果：
クリーン安全性プロファイル：
薬物に関連した深刻な有害作用（ＳＡＥ）なし
非免疫原性
第ＩＩ相：（１）関節リウマチ患者における０、２、４、８、１２週目の用量。目的は、有効性、安全性／忍容性、ＰＫ、および免疫原性を分析することであった。
登録数／用量：
（ｎ＝９）
７／６００ｍｇ
２／プラセボ
安全性の結果：
クリーン安全性プロファイル：
薬物に関連した深刻な有害作用（ＳＡＥ）なし
非免疫原性
（２）重度の喘息患者における０、２、４、８、１２、１６ ２０週目の用量。目的は、有効性、安全性／忍容性、ＰＫ、および免疫原性を分析することであった。
登録数／用量：
（ｎ＝１６０）
７８／４００ｍｇ
８２／プラセボ
安全性の結果：
クリーン安全性プロファイル：
薬物に関連した深刻な有害作用（ＳＡＥ）なし
非免疫原性
＊上に示す研究の９４人の患者＋進行中のＣＭＭＬ第Ｉ相試験（薬物は十分に忍容されている）の１２人の患者。追加の７６人の患者が、ＧＭ－ＣＳＦ中和Ａｂ（ＫＢ００２）のキメラ型を受け、同様の安全性プロファイルを示した。
すべての研究は無作為化二重盲検プラセボ対照、ＩＶ内投与。（実施例２４を参照されたい。）
実施例１５－ＣＡＲＴ活性および毒性に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の効果
この研究では、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲＴ）の活性および毒性に対する、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＧＭＣＳＦ遮断の効果を調査する。これは、これら２つのＡＩＭによって達成され得る：
ＡＩＭ＃１：ＣＡＲＴ細胞エフェクター機能に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＧＭＣＳＦ遮断の効果を調査すること
ＡＩＭ＃２：ＣＡＲＴ細胞療法研究戦略後のサイトカイン放出症候群の低減に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＧＭＣＳＦ遮断の効果を研究すること。以下の実験を提案する：
モデル：ＡＬＬに対するＣＡＲＴ１９を使用して、骨髄細胞の存在下または不在下で、４つの異なる用量の、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＧＭＣＳＦ遮断とＣＡＲＴ細胞（サイトカイン産生（ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＮＦｇ、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＭＣＰ－１を含む３０プレックスＬｕｍｉｅｘ）、抗原特異的殺傷、脱顆粒、増殖、および消耗）とを組み合わせたインビトロ研究。
以下の２つのモデルを使用して、異なる用量の、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（マウスＧＭＣＳＦ遮断あり／なし）によるＧＭＣＳＦ遮断とＣＡＲＴ細胞とを組み合わせたインビボ研究：
ＣＤ１９陽性細胞株（ＮＡＬＭ６）を移植した異種移植片、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体を伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置；および
原発性ＡＬＬの患者由来異種移植片、次いで、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体を伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体１０ｍｇ／ｋｇを、ＣＡＲＴ細胞移植の直前および１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間、マウスにｉ．ｐ．投与する。腫瘍応答および生存についてマウスを追跡する。後眼窩出血を、ＣＡＲＴ細胞療法の１週間後から開始し、その後毎週得る。疾患の負荷、Ｔ細胞拡大速度、消耗マーカーの発現、およびサイトカインレベル（３０プレックス）を分析する。実験の完了時に、脾臓および骨髄を採取し、腫瘍の特徴およびＣＡＲ－Ｔ細胞数を分析する。
以下のモデルを使用した、ＰＢＭＣの存在下で、ＣＲＳモデルにおいて抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体によるＧＭＣＳＦ遮断（マウスＧＭＣＳＦ遮断ありまたはなし）とＣＡＲＴ細胞とを組み合わせたインビボ研究（このモデルでは、高用量のＣＡＲＴ細胞を使用してＣＲＳを誘導する）：
原発性ＡＬＬ患者由来異種移植片、次いで抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体を伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体１０ｍｇ／ｋｇを、ＣＡＲＴ細胞移植の直前および１０ｍｇ／ｋｇ／日で１０日間、マウスにｉ．ｐ．投与する。腫瘍応答、ＣＲＳの毒性症状、および生存についてマウスを追跡する。後眼窩出血を、ベースライン、ＣＡＲＴ細胞療法の２日後、１週間後、およびその後毎週得る。疾患の負荷、Ｔ細胞拡大速度、消耗マーカーの発現、およびサイトカインレベル（３０プレックス）を分析する。実験の完了時に、脾臓および骨髄を採取し、腫瘍の特徴およびＣＡＲ－Ｔ細胞数を分析する。
インビボ神経毒性アッセイ
上記＃３で説明したモデルを使用して、ＣＡＲＴ細胞療法後の神経毒性の発達を評価するために、病気のマウスをＭＲＩで画像化する。ＣＡＲＴ細胞および抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体対対照抗体を与えられたマウス間の画像を比較する。繰り返し実験を実施する。これらの繰り返し実験では、ＣＡＲＴ細胞の１４日後にマウスを安楽死させる。脳組織は、マルチプレックスアッセイによるサイトカイン、単球、ヒトＴ細胞の存在、ならびにＩＨＣ、フロー、および顕微鏡による血液脳関門の完全性について分析される。
実施例１６－抗ｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体は、ＣＡＲ－Ｔ細胞関連神経毒性（ＮＴ）における神経炎症を低減する
ＧＭ－ＣＳＦがＣＡＲ－Ｔ細胞療法の開始後に見られるサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、神経毒性（ＮＴ）、および炎症カスケードの開始に不可欠であることを示す広範な科学的根拠がある。研究された仮説は、中和抗体（レンジルマブ）で可溶性ＧＭ－ＣＳＦを遮断することにより、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法で観察されるＣＲＳおよびＮＴの両方の発症および重症度が無効化されるか、または予防されるというものである。重要なことに、ＣＡＲ－Ｔ細胞の活性は保存されるか、または可能であれば改善される必要がある。実験設計は、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能、腫瘍異種移植モデルにおけるＣＡＲ－Ｔの有効性、ＣＲＳ異種移植モデルにおけるＣＲＳの発達、ならびにＭＲＩイメージングおよび容量分析を使用してＣＡＲ－Ｔ細胞療法で見られる神経炎症を定量化するＮＴの発達に対する、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（レンジルマブ）によるＧＭ－ＣＳＦ遮断の効果を試験する。ヒトＰＢＭＣの存在下および不在下の両方でＣＡＲ－Ｔ＋／－レンジルマブを用いたインビトロおよびインビボ実験を検討した。（実施例９および１０、図１９および２０ａ～２０ｂを参照されたい）。
方法
ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体レンジルマブとヒトＣＤ１９＋ＣＡＲ－Ｔ細胞との組み合わせを、ヒトＰＢＭＣの存在下または不在下で、抗原特異的殺傷、脱顆粒、増殖、および消耗について評価するために、インビトロ研究が行われた。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖および有効性に対する抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（レンジルマブ）の影響を評価するために、続いて、以下のモデル（マウスＧＭ－ＣＳＦ遮断あり／なし）を使用して、インビボ研究を行った：
エフェクター／標的対照実験：ＣＤ１９陽性細胞株（ＮＡＬＭ６）を移植した異種移植片、ヒトＰＢＭＣの不在下で抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（レンジルマブ）を伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置。
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（レンジルマブ）１０ｍｇ／ｋｇを、ＣＡＲ－Ｔ細胞移植の直前およびその後同じ用量で毎日１０日間、ＮＳＧマウスにｉ．ｐ．投与した後、腫瘍応答および生存を評価した。後眼窩出血を、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の１週間後から開始し、その後毎週得た。疾患の負荷、Ｔ細胞拡大速度、消耗マーカーの発現、およびサイトカインレベル（３０プレックス）も分析した。実験の完了時に、脾臓および骨髄を採取し、腫瘍の特徴およびＣＡＲ－Ｔ細胞数を分析した。
ＣＲＳ／ＮＴ実験：原発性ＡＬＬの患者由来異種移植片、その後、ヒトＰＢＭＣの存在下でレンジルマブを伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置：
ＣＡＲ－Ｔ誘導ＣＲＳおよびＮＴの発症および重症度の無効化または予防に対するレンジルマブの影響を評価するために、レンジルマブを伴うまたは伴わないＣＡＲＴ１９で処置された原発性ＡＬＬ患者由来異種移植片を使用して、ＰＢＭＣの存在下で、ＣＲＳモデル（高用量のＣＡＲ－Ｔ細胞を使用してＣＲＳを不法化した）においてヒトＣＡＲ－Ｔ細胞（マウスＧＭ－ＣＳＦ遮断ありおよびなし）を用いてインビボ研究を行った。レンジルマブ１０ｍｇ／ｋｇを、ＣＡＲ－Ｔ細胞移植の直前およびその後１０日間毎日、ＮＳＧマウスにｉ．ｐ．投与した。腫瘍応答、生存、ＣＲＳ、およびＮＴの症状についてマウスを追跡した。脳ＭＲＩスキャンをベースライン、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法中および終了時に実施し、容量分析を行って、治療群全体の神経炎症およびＭＲＩ Ｔ１高信号強度を評価および定量化した。体重および後眼窩出血を、ベースライン、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法の２日後、１週間後、およびその後毎週得た。疾患の負荷、Ｔ細胞拡大速度、消耗マーカーの発現、およびサイトカインレベル（３０プレックス）を分析した。実験の完了時に、脾臓および骨髄を採取し、腫瘍の特徴およびＣＡＲ－Ｔ細胞数を分析した。
結果
インビトロモデル
この実験では、ＣＡＲ－Ｔ細胞のエフェクター機能に対するレンジルマブによるＧＭ－ＣＳＦ中和の影響を調査した。ＧＭ－ＣＳＦは非常に高レベル（１，５００ｐｇ／ｍｌを超える）でＣＡＲ－Ｔ細胞によって分泌され、レンジルマブの使用によりＧＭ－ＣＳＦが完全に中和されるが、ＣＡＲ－Ｔの脱顆粒、細胞内ＧＭ－ＣＳＦ産生、またはＩＬ２生産を阻害しなかったことを示した。さらに、レンジルマブは、ＣＡＲ－Ｔ抗原特異的増殖またはＣＡＲ－Ｔ殺傷を阻害しなかった。エフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）は、ＣＡＲ－Ｔ＋レンジルマブ対ＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体で類似した（ｐ＝ｎｓ）（図１６Ａ－１～１６Ｄおよび１６Ｊ）。
インビボモデル
エフェクター／標的対照実験
インビボでのＣＡＲＴ１９細胞機能に対するレンジルマブの効果を研究するために、ヒトＰＢＭＣの不在下で免疫低下状態のＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ｇ－／－にＣＤ１９＋ＡＬＬ細胞株ＮＡＬＭ６を移植した。レンジルマブと組み合わせたＣＡＲＴ１９による治療は、これらのマウスのＧＭ－ＣＳＦレベルが完全に中和されているにもかかわらず、対照抗体を伴うＣＡＲＴ１９と同様に、強力な抗腫瘍活性および全体的な生存の改善をもたらし、ＰＢＭＣの不在下で、ＧＭ－ＣＳＦがインビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞活性を損なわないことを示す（図１６Ｆおよび１６Ｇ）。
ＣＲＳおよびＮＴ実験
定量的ＭＲＩ Ｔ１高信号強度により評価されるとき、ヒトＡＬＬ芽球、ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ、およびヒトＰＢＭＣを使用して、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と組み合わせたレンジルマブが、ＣＡＲ－Ｔ単独と比較して、神経炎症を約９０％低減することがわかった。これは画期的な発見であり、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法によって引き起こされた神経炎症が効果的に無効化され得ることがインビボで示されたのは初めてである。著しく増加した炎症を示した対照抗体＋ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のＭＲＩ画像とは際立って対照的に、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のＭＲＩ画像は、ベースライン前処置スキャンと類似した。さらに、骨髄細胞の減少は、ＣＡＲ－Ｔおよび対照抗体で処置されたマウスと比較して、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔで処置されたマウスの脳で見られた。この発見は、重篤なグレード＞３の神経毒性を有する患者のＣＳＦで骨髄細胞の増加が観察された、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を用いた臨床試験で報告されたデータと一致する。加えて、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と組み合わせたレンジルマブは、ＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体と比較して、ＣＲＳの発症および重症度を低減することがわかった。この発見は、インビボで見られるＣＲＳの最も客観的なマーカーおよび特徴的な症状である、ＣＡＲ－Ｔ＋対照で治療されたマウスに見られる体重の統計的に有意な低減により支持される。レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔで処置されたマウスでは、体重は、ＣＡＲ－Ｔ＋対照と比較してベースラインレベルで維持された（ｐ＜０．０５）。さらに、ＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体で処置されたマウスは、丸まった姿勢、離脱症状、および脱力を含むＣＲＳと一致する身体症状を示したが、ＣＡＲ－Ｔ＋レンジルマブで治療したマウスは健康に見えた。重要なことに、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔは、ＰＢＭＣを含んだこれらのＣＲＳ／ＮＴ実験において、ＣＡＲ－Ｔ＋対照と比較して、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖が有意に５倍増加することも示す。これは、ＣＡＲ－Ｔの増殖または拡大の改善が有効性の改善（ＯＲＲ、ＣＲを含む）と相関する様々なＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を用いた臨床試験で以前に示されており、レンジルマブが抗腫瘍応答を潜在的に改善し得ることを示唆する。この発見は一部、ＧＭ－ＣＳＦによって広まることが知られているＭＤＳＣ拡大および輸送の減少によって説明され得る。最後に、ＣＡＲ－Ｔおよび対照抗体と比較して、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔの組み合わせは、フローサイトメトリーによって定量化されるとき、有意に良好な白血病性制御をもたらす。未処置のマウス（５００，０００～１．５Ｍの白血病性細胞を有した）およびＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体（１５，０００～１００，０００の白血病性細胞を有した）と比較して、ＣＡＲ－Ｔ＋レンジルマブによる処置は、白血病性細胞の数を大幅に低減させ（５００～５，０００細胞に減少）、全体的な疾患制御が改善された（図２５Ａ～２５Ｄを参照されたい）。
図２５ＡのＭＲＩ画像は、本明細書に記載される実施形態による、ＣＡＲ－Ｔ細胞および抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体を投与されたマウスの脳における神経毒性（ＮＴ）（神経炎症）の明らかな改善を示す。対照的に、ＣＡＲ－Ｔ細胞および対照抗体を投与されたマウスの脳は、ＭＲＩ画像において神経毒性の徴候を示した。図２５Ｂは、群２のマウスにおいて増加したＮＴと比較して、群１のマウスにおいてＮＴが９０％低減したことをグラフで示す。本明細書に記載される実施形態によるＣＡＲ－Ｔ細胞および抗ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体の投与後の定量的改善の程度（ＮＴの９０％低減）は、予想外の発見であった。
結論
抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（レンジルマブ）は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法と組み合わせたとき、ＣＲＳおよびＮＴの発症および重症度を予防する可能性を示し、一方でヒトＡＬＬ芽球、ヒトＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ、およびヒトＰＢＭＣを使用してＣＡＲ－Ｔの拡大／増殖およびインビボでの全体的な白血病性制御を改善する。ＣＡＲ－Ｔ誘導神経毒性がインビボで無効化され得ることが示されたのはこれが初めてである。ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を組み合わせたレンジルマブを用いた主要な臨床試験を計画して、安全性および有効性の改善に関するこれらの発見を検証する。
実施例１７－キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法中のＧＭ－ＣＳＦ遮断は、サイトカイン放出症候群および神経毒性を低減し、それらのエフェクター機能を増強し得る
その有効性にもかかわらず、キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法（ＣＡＲＴ）は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）および神経毒性（ＮＴ）の発達によって制限される。ＣＲＳはサイトカインの極端な上昇および大幅なＴ細胞拡大に関連しているが、ＮＴの正確な機構はまだ解明されていない。予備研究では、ＮＴは血液脳関門を横断する骨髄細胞によって媒介され得ることが示唆されている。これは、重度のＮＴを発達させた患者の脳脊髄液でＣＤ１４＋細胞数が増加したＣＡＲＴ１９主要試験からの相関分析によって支持される（Ｌｏｃｋｅ ｅｔ ａｌ，ＡＳＨ ２０１７）。したがって、この研究の目的は、単球制御を介したＣＡＲＴ細胞療法後のＣＲＳおよびＮＴの予防におけるＧＭ－ＣＳＦ中和の役割を調査することであった。
最初に、ＣＡＲＴ細胞のエフェクター機能に対するＧＭ－ＣＳＦ遮断の効果を調査した。ここでは、第ＩＩ相臨床試験で安全であることが示されているヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（レンジルマブ、Ｈｕｍａｎｉｇｅｎ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用した。レンジルマブ（１０μｇ／ｋｇ）は、ＣＡＲＴ１９細胞がＣＤ１９＋ルシフェラーゼ＋急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）細胞株ＮＡＬＭ６で刺激されるときにＧＭ－ＣＳＦを中和するが、インビトロでのＣＡＲＴ細胞の機能を損なわない。悪性腫瘍関連マクロファージがＣＡＲＴの増殖を低減することがわかった。レンジルマブによるＧＭ－ＣＳＦの中和は、単球の存在下でＣＡＲＴ細胞抗原特異的増殖の増強をもたらす。これをインビボで確認するために、ＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ｇ－／－マウスに高い疾患負荷のＮＡＬＭ６を移植し、レンジルマブまたはアイソタイプ対照抗体と組み合わせて、低用量のＣＡＲＴ１９または対照Ｔ細胞（腫瘍の再発を誘導するため）で処置した。ＣＡＲＴ１９およびレンジルマブの組み合わせは、対照Ｔ細胞と比較して有意な抗腫瘍活性および全体的な生存利益をもたらし（図２６Ａ）、アイソタイプ対照抗体と組み合わせたＣＡＲＴ１９で処置されたマウスと類似し、ＧＭ－ＣＳＦの中和がインビボでのＣＡＲＴ細胞活性を損なわないことを示す。この抗腫瘍活性は、ＡＬＬ患者由来の異種移植モデルにおいて検証された。
次に、新規患者由来の異種移植モデルにおいて、ＣＡＲＴ細胞関連毒性に対するＧＭ－ＣＳＦ中和の影響を調査した。ここでは、ＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ｇ－／－マウスに、ＡＬＬ再発リスクの高い患者に由来する白血病芽球（１～３ｘ１０６細胞）を移植した。次に、マウスを高用量のＣＡＲＴ１９細胞（静脈内に２～５ｘ１０６）で処置した。ＣＡＲＴ１９処置の５日後、マウスは、循環ヒトサイトカインレベルの大幅な上昇と相関する進行性の運動脱力、体の丸まり、および体重減少を発達させ始めた。この症候群中の脳の磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）は、ＣＡＲＴ細胞およびマウス活性化骨髄細胞の中枢神経系（ＣＮＳ）浸潤と関連するびまん性亢進および浮腫を示した。これは、重度のＮＴ患者のＣＡＲＴ１９臨床試験で報告されたものと類似する。ＣＡＲＴ１９、レンジルマブ（ヒトＧＭ－ＣＳを中和するため）、およびマウスＧＭ－ＣＳＦ遮断抗体（マウスＧＭ－ＣＳＦを中和するため）の組み合わせにより、体重減少が予防され（図２６Ｂ）、重要な骨髄性サイトカインが減少し（図２６Ｃ～２６Ｄ）、脳浮腫が低減され（図２６Ｅ）、脳の白血病制御が増強され（図２６Ｆ）、脳マクロファージが低減した（図２６Ｇ）。
最後に、ＣＡＲＴ細胞製造のプロセス中にＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９遺伝子編集を介してＧＭ－ＣＳＦを破壊することにより、ＧＭ－ＣＳＦの分泌が低減した機能的ＣＡＲＴ細胞がもたらされるであろうという仮説を立てた。ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子のエクソン３を標的とするガイドＲＮＡを設計し、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏ ＣＡＲＴ１９細胞を生成した。予備データは、これらのＣＡＲＴが活性化時に著しく少ないＧＭ－ＣＳＦを産生するが、他のサイトカインを同様に産生し続け、インビトロで正常なエフェクター機能を示すことを示唆する（図２６Ｈ）。上述のＮＡＬＭ６高腫瘍量再発異種移植モデルを使用して、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞は、ＣＡＲＴ１９細胞と比較してわずかに増強された疾患制御をもたらした（図２６Ｉ）。
したがって、ＧＭ－ＣＳＦ遮断を介した骨髄細胞の挙動の調節は、ＣＡＲＴ媒介毒性の制御に役立ち得、それらの免疫抑制の特徴を低減して、白血病性制御を改善し得る。これらの研究は、潜在的にＣＡＲＴ細胞機能も増強するＧＭ－ＣＳＦの中和を介してＮＴおよびＣＲＳを無効化する新しいアプローチを明らかにする。これらの結果に基づいて、第ＩＩ相臨床試験は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者においてＣＡＲＴ関連毒性を予防するためのモダリティとしてレンジルマブを使用して設計された。
実施例１８－インビトロでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、単球の存在下でＣＡＲ－Ｔ細胞増殖を増強し、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能を損なわない
細胞株と初代細胞
ＮＡＬＭ６細胞株はＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡから購入し、ＭＯＬＭ１３細胞株はメイヨークリニックジェリネック研究所（ＤＳＭＺ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙから購入）からの贈り物であった。これらの細胞株は、ルシフェラーゼ－ＺｓＧｒｅｅｎレンチウイルス（Ａｄｄｇｅｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）で形質導入され、１００％の純度に分類された。細胞株は、Ｒ１０（ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳ））、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）、および１％ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳ）で培養された。初代培養は、メイヨークリニック機関審査委員会（ＩＲＢ）が承認したプロトコルに基づいて、急性白血病患者のためのメイヨークリニックバイオバンクから入手した。実験室での組換えＤＮＡの使用は、メイヨークリニックの施設内バイオセーフティ委員会（ＩＢＣ）によって承認された。
初代培養とＣＡＲ－Ｔ細胞
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ＳｅｐＭａｔｅチューブ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、メイヨークリニックＩＲＢ承認プロトコルの下で取得された匿名化された正常なドナー血液アフェレーシスコーンから分離された。ＥａｓｙＳｅｐ（登録商標）ヒトＴ細胞単離キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、ネガティブセレクション磁気ビーズでＴ細胞を分離した。単球は、ＣＤ１４＋単球を分離する、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙのヒト単球単離キットを使用して分離した。初代細胞は、１０％ヒト血清アルブミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ，ＵＳＡ）および１％ペニシリン－ストレプトマイシン－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）を補充したＸ－Ｖｉｖｏ１５（Ｌｏｎｚａ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）で作製されたＴ細胞培地中で培養された。ＣＡＲＴ１９細胞は、以下に記載するように、正常なドナーＴ細胞のレンチウイルス形質導入によって生成された。第２世代のＣＡＲＴ１９コンストラクトをｄｅ ｎｏｖｏ合成（ＩＤＴ）し、ＥＦ－１αプロモーターの制御下で第３世代のレンチウイルスにクローニングした。ＣＤ１９に向けられた単鎖可変領域断片はクローンＦＭＣ６３に由来した。第２世代の４－１ＢＢ共刺激（ＦＭＣ６３－４１ＢＢｚ）ＣＡＲコンストラクトを合成し、これらの実験に使用した。レンチウイルス粒子は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ＶＳＶ－Ｇ、およびパッケージングプラスミド（Ａｄｄｇｅｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）の存在下で、２９３Ｔウイルス産生細胞（メイヨークリニックのＩｋｅｄａ ｌａｂからの贈り物）へのプラスミドの一過性トランスフェクションによって生成された。正常なドナーから単離されたＴ細胞は、Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）を使用して１：３の比率で刺激され、感染多重度（ＭＯＩ）３．０で刺激の２４時間後にレンチウイルス粒子で形質導入された。力価とその後のＭＯＩを決定するために、レンチウイルス粒子を濃縮した後、１００μｌのＴ細胞培地に１×１０５個の初代Ｔ細胞を５０μｌのレンチウイルスで形質導入することにより力価を決定した。最初に、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで刺激し、２４時間後にレンチウイルス粒子で形質導入した。形質導入は、３重および段階希釈で行った。１日後に新鮮なＴ細胞培地を加えた。２日後、細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、Ｔ細胞でのＣＡＲ発現をフローサイトメトリーで測定した。力価は、ＣＡＲ陽性細胞のパーセンテージ（ＣＡＲ＋細胞のパーセンテージ×形質導入時のＴ細胞数×特定の希釈／容量）に基づいて決定され、形質導入単位／ｍＬ（ＴＵ／ｍＬ）として表された。磁気ビーズの除去は６日目に行われ、ＣＡＲ－Ｔ細胞は回収され、将来の実験のために８日目に凍結保存された。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、実験で使用する１２時間前に解凍し、Ｔ細胞培地で静置した。
ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体およびアイソタイプ対照
本明細書に記載され、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第８，１６８，１８３号および同第９，０１７，６７４号に記載されている実施形態によるｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体であるレンジルマブ（Ｈｕｍａｎｉｇｅｎ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）は、新規であり、ヒトＧＭ－ＣＳＦを中和するクラス初のヒューマニア化（登録商標）モノクローナル抗体である。インビトロ実験では、レンジルマブまたはＩｎＶｉｖｏＭＡｂヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照（ＢｉｏＸＣｅｌｌ，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ，ＵＳＡ）、１０μｇ／ｍＬを使用した。インビボ実験では、１０ｍｇ／ｋｇのレンジルマブまたはアイソタイプ対照を、ＣＡＲＴ１９注射の日から始めて１０日間毎日腹腔内注射した。いくつかの実験では、抗マウスＧＭ－ＣＳＦ中和抗体（ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ抗マウスＧＭ－ＣＳＦ、ＢｉｏＸＣｅｌ，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ，ＵＳＡ）または対応するアイソタイプ対照（ＩｎＶｉｖｏＭＡｂラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照ＢｉｏＸＣｅｌ、Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ、ＮＨ、ＵＳＡ）はまた、実験スキーマに示されているように使用された。
Ｔ細胞機能実験
サイトカインアッセイは、示されているように、ＣＡＲ－Ｔ細胞とそれらの標的との１：１の比率での共培養の２４時間または７２時間後に実施された。ヒト高感度Ｔ細胞磁気ビーズパネル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）、マルチプレックスヒトサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズプレミックス３８プレックスキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）、またはマルチプレックスマウスサイトカイン／ケモカイン磁気ビーズプレミックス３２プレックスキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）は、示されているように、これらの実験から収集された上清または血清に対して実施された。これは、Ｌｕｍｉｎｅｘ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を使用して分析された。細胞内サイトカイン分析およびＴ細胞脱顆粒アッセイは、モネンシン（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）、ｈＣＤ４９ｄ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）、およびｈＣＤ２８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）の存在下で、ＣＡＲ－ｔの標的との１：５の比率で４時間のインキュベーションの後に実施された。４時間後、細胞を回収し、表面染色後に細胞内染色を行い、続いて固定培地ＡおよびＢ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）で固定および透過処理を行った。増殖アッセイでは、ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）で標識されたエフェクター細胞（ＣＡＲＴ１９）と、照射された標的細胞を１：１の比率で共培養した。いくつかの実験では、ＣＤ１４＋単球を、示されているように１：１：１の比率で共培養に添加した。特定の実験で示されているように、細胞を３～５日間共培養した後、細胞を回収し、抗ｈＣＤ３（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で表面染色し、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を実施した。ＰＭＡ／イオノマイシン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を、特定の実験で示されるように、異なる濃度で、Ｔ細胞の陽性の非特異的刺激剤として使用した。殺傷アッセイのために、ＣＤ１９＋ルシフェラーゼ＋ＡＬＬ細胞株ＮＡＬＭ６またはＣＤ１９－ルシフェラーゼ＋対照ＭＯＬＭ１３細胞を、特定の実験に記載されているように、２４、４８、または７２時間エフェクターＴ細胞と、示された比でインキュベートした。殺傷は、残留生細胞の尺度として、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ－２００ Ｓｐｅｃｔｒｕｍカメラ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）での生物発光イメージングによって計算された。試料は、イメージングの前に１０分間、１００μｌの試料量あたり１μｌのＤ－ルシフェリン（３０μｇ／ｍＬ）（Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）で処理された。
マルチパラメトリックフローサイトメトリー
抗ヒトおよび抗マウス抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、またはＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から購入した。細胞は、インビトロ培養または動物の末梢血から単離された。ＢＤ ＦＡＣＳ ｌｙｓｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）後、２％ＦＢＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）および１％アジ化ナトリウム（Ｒｉｃｃａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を添加したリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、４℃で染色した。細胞数の定量化のために、Ｃｏｕｎｔｂｒｉｇｈｔビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を製造者の使用説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）に従って使用した。全ての分析において、目的の集団は前方散乱特性と側方散乱特性に基づいてゲートされ、続いて一重項ゲートされ、生細胞はＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ａｑｕａ死細胞染色キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）で染色した後にゲートされた。ＣＡＲの表面発現は、ヤギ抗マウスＦ（ａｂ'）２抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）で染色することにより検出された。フローサイトメトリーは、Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）およびＣｙｔｏＦＬＥＸ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ，ＵＳＡ）の３レーザーサイトメーターで実施した。分析は、ＦｌｏｗＪｏ Ｘ１０．０．７ｒ２ソフトウェア（Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ，ＵＳＡ）およびＫａｌｕｚａ ２．０ソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｃｈａｓｋａ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用して実施された。
結果
ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のＧＭ－ＣＳＦ中和をＣＲＳおよび神経毒性を予防するための戦略として利用する場合、ＣＡＲ－Ｔ細胞の有効性を阻害してはならない。したがって、最初の実験は、ＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能に対するＧＭ－ＣＳＦ中和の影響を調査することを目的とした。ＣＡＲＴ１９細胞は、レンジルマブ（ｈＧＭ－ＣＳＦ中和抗体）またはアイソタイプ対照（ＩｇＧ）の存在下で、ＣＤ１９＋ＡＬＬ細胞株ＮＡＬＭ６を伴って、または伴わずに共培養された。ＩｇＧ対照抗体ではなくレンジルマブが実際にｈＧＭ－ＣＳＦを完全に中和することができたが（図２７Ａ）、ＣＡＲ－Ｔ細胞抗原特異的増殖を阻害しなかった（図２７Ｂ）ことが確証された。ＣＡＲＴ１９細胞を単球の存在下でＣＤ１９＋細胞株ＮＡＬＭ６と共培養した場合、ＣＡＲＴ１９と組み合わせたレンジルマブは、ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ対照ＩｇＧと比較して抗原特異的ＣＡＲＴ１９増殖の指数関数的増加を示した（Ｐ＜０．０００１、図２７Ｃ）。ＣＡＲ－Ｔ特異的細胞毒性を調べるために、ＣＡＲＴ１９または対照ＵＴＤ Ｔ細胞をルシフェラーゼ＋ＣＤ１９＋ＮＡＬＭ６細胞株と培養し、アイソタイプ対照抗体またはＧＭ－ＣＳＦ中和抗体で処理した（図２７Ｄ）。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体処理は、ＣＡＲ－Ｔ細胞がＮＡＬＭ６標的細胞を殺傷する能力を阻害しなかった（図２７Ｄ）。全体として、これらの結果は、レンジルマブがインビトロでＣＡＲ－Ｔ細胞機能を阻害せず、単球の存在下でＣＡＲＴ１９細胞増殖を増強することを示し、ＧＭ－ＣＳＦ中和がＣＡＲ－Ｔ細胞媒介効力を改善できることを示唆している。
実施例１９－インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和が異種移植モデルにおいてＣＡＲ－Ｔ細胞抗腫瘍活性を増強する
異種移植マウスモデル
オスとメスの８～１２週齢のＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ＩＬ２ｒγ－／－（ＮＳＧ）マウスは、メイヨークリニックの施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された繁殖プロトコルの下で、メイヨークリニックの比較医学部内で飼育および世話された。マウスは、ＢＳＬ２＋レベルの実験のためにＩＢＣによって承認された動物バリアスペースで維持された。
ＮＡＬＭ６細胞株異種移植片
ＣＤ１９＋、ルシフェラーゼ＋ＡＬＬ ＮＡＬＭ６細胞株を使用して、ＩＡＣＵＣ承認プロトコルの下でＡＬＬ異種移植片を確立した。ここでは、１×１０６細胞を尾静脈注射により静脈内（ＩＶ）注射した。注射の４－６日後、マウスはＸｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ－２００ Ｓｐｅｃｔｒｕｍカメラ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して生物発光イメージングを行い、生着を確認した。イメージングは、１０μｌ／ｇ Ｄ－ルシフェリン（１５ｍｇ／ｍＬ、Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）の腹腔内（ＩＰ）注射の１０分後に実行された。次いで、特定の実験で概説されているように、マウスは生物発光イメージングに基づいてランダム化され、様々な処理を受けた。通常、１～１．５×１０６ＣＡＲ－Ｔ細胞（および非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞の総Ｔ細胞数に相当）をマウスごとにＩＶ注射した。ＣＡＲ－Ｔ細胞の形質導入効率は通常約５０％であった。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞の５０％の形質導入効率では、１．５×１０６ＣＡＲ－Ｔ細胞を受けたマウスは、３万個のＴ細胞を受け、対応するＵＴＤマウスは３×１０６ＵＴＤを受けた。疾患負荷を評価して追跡するために、毎週のイメージングが行われた。Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ－２００ Ｓｐｅｃｔｒｕｍカメラ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用して生体発光画像を取得し、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅバージョン４．４（Ｃａｌｉｐｅｒ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して分析した。尾静脈出血は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の注射の７～８日後に行われ、Ｔ細胞の増殖とサイトカインおよびケモカインを評価し、その後必要に応じて行われた。マウス末梢血は、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｌｙｓｅ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して赤血球溶解にかけられ、フローサイトメトリー研究に使用された。抗体処理マウスは、ＣＡＲＴ細胞療法の同じ日に合計１０日間、毎日の抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇレンジルマブまたはアイソタイプ対照）ＩＰを開始した。
マウス脳組織のＲＮＡ－Ｓｅｑ
ｍｉＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏキット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用してＲＮＡを単離し、ＲＮａｓｅフリーＤＮａｓｅセット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）で処理した。ＲＮＡ－ｓｅｑは、メイヨークリニックのゲノム分析コアによってイルミナＨＴＳｅｑ ４０００（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）で実行された。バイナリベースコールデータは、イルミナのｂｃｌ２ｆａｓｔｑソフトウェアを使用してｆａｓｔｑに変換された。アダプター配列は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＢｏｌｇｅｒ，ＡＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１４；３０（１５）：２１１４－２１２０．１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｕ１７０に記載されるＴｒｉｍｍｏｍａｔｉｃを使用して除去され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｅｇｇｅｔｔ ＲＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｇｅｎｅｔ．２０１３；４：２８８．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／０１／０２ ａｓ ＤＯＩ １０．３３８９／ｆｇｅｎｅ．２０１３．００２８８に記載されるＦａｓｔＱＣを使用して品質をチェックした。最新のヒト（ＧＲＣｈ３８）およびマウス（ＧＲＣｍ３８）リファレンスゲノムはＮＣＢＩからダウンロードされた。ゲノムインデックスファイルは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＤｏｂｉｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１３；２９（１）：１５－２１．１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｓ６３５によって記載されるＳＴＡＲを使用して生成され、ペアエンドリードは、各条件のゲノムにマッピングされた。参照によりその全体が組み込まれるＡｎｄｅｒｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１５；３１（２）：１６６－１６９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／０９／２８ ａｓ ＤＯＩ １０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｕ６３８に記載されるＨＴＳｅｑは、各遺伝子の発現カウントを生成するために使用され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＬｏｖｅ ＭＩ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．２０１４；１５（１２）：５５０．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／１２／１８ ａｓ ＤＯＩ １０．１１８６／ｓ１３０５９－０１４－０５５０－８に記載されるＤｅＳｅｑ２３８を使用して差次的発現を計算した。遺伝子オントロジーは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｕｌｅｓｈｏｖ ＭＶ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１６；４４（Ｗ１）：Ｗ９０－Ｗ９７．１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｗ３７７によって記載されるＥｎｒｉｃｈｒを使用して評価された。図３５は、上述の手順をまとめたものである。ＲＮＡ配列決定データは、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｍｎｉｂｕｓで、受託番号ＧＳＥ１２１５９１で入手できる。
統計
Ｐｒｉｓｍ Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）とＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ，ＵＳＡ）を使用してデータを分析した。Ｐｒｉｓｍによって、ヒートマップの高サイトカイン濃度は「１」に正規化され、低濃度は「０」に正規化された。統計的検定は、図の凡例に記載されている。
結果
ＧＭ－ＣＳＦの枯渇がＣＡＲＴ１９エフェクター機能を阻害しないことを確認するために、ＣＡＲＴ１９抗腫瘍活性に対するレンジルマブによるＧＭ－ＣＳＦ中和の役割を異種移植モデルで調査した。最初に、ＣＡＲＴ１９細胞の抗腫瘍活性がＧＭ－ＣＳＦ中和によって影響を受けるかどうかを精力的に調査することを目的とした再発モデルを使用した。ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／インターロイキン２受容体ガンマヌル（ＮＳＧ）マウスは、１×１０６個のルシフェラーゼ＋ＮＡＬＭ６細胞を注射した後、マウスが非常に高い腫瘍量を達成するために十分な時間を許容する、６日後に画像化した。ＣＡＲＴ１９またはＵＴＤ細胞のいずれかを単回注射し、アイソタイプ対照抗体またはレンジルマブのいずれかを１０日間投与するように、マウスをランダム化した（図２８Ａ）。ＣＡＲＴ１９注射の８日後に収集された血清のＧＭ－ＣＳＦアッセイは、レンジルマブがＣＡＲＴ１９療法に関連してＧＭ－ＣＳＦを首尾よく中和することを明らかにした（図２８Ｂ）。ＣＡＲＴ１９注射の１週間後の生物発光イメージングは、レンジルマブと組み合わせたＣＡＲＴ１９が、この高腫瘍量再発モデルにおいて白血病を効果的に制御し、対照ＵＴＤ細胞よりも有意に優れていることを示した（図２８Ｃ～２８Ｄ）。レンジルマブと組み合わせたＣＡＲＴ１９による治療は、ＧＭ－ＣＳＦレベルが中和されているにもかかわらず、対照抗体を伴うＣＡＲＴ１９と同様に、強力な抗腫瘍活性および全体的な生存の改善をもたらし、ＧＭ－ＣＳＦがインビボでのＣＡＲ－Ｔ細胞活性を損なわないことを示す（図３６）。第二に、これらの実験は、ヒトＰＢＭＣの存在下で、初代ＡＬＬ患者由来の異種移植モデルで実施された。これは、より関連性の高い異種モデルを表すためである。ブスルファンによる化学療法のコンディショニング後、ＡＬＬが再発した患者に由来する芽球をマウスに注射した。連続的な尾静脈出血を通して生着についてマウスを数週間モニターし、血中のＣＤ１９＋芽球が約１／μＬになったときに、ＣＡＲＴ １９注射の日から開始して１０日間の、レンジルマブ＋抗マウスＧＭ－ＣＳＦ中和抗体またはアイソタイプ対照ＩｇＧ抗体のいずれかを伴うＰＢＭＣと組み合わせてＣＡＲＴ１９処理を受けるようにマウスをランダム化した（図２８Ｅ）。この初代ＡＬＬ異種移植モデルでは、ＣＡＲＴ１９療法と組み合わせたＧＭ－ＣＳＦ中和により、ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ対照と比較して、ＣＡＲＴ１９投与後少なくとも３５日間持続する白血病性疾患制御に有意な改善が見られた（図２８Ｆ）。これは、ＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９細胞療法後の再発を減らし、永続的な完全応答を増加させる役割を果たすことができることを示唆している。
実施例２０－ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９の生成
参照により全体が本明細書に記載されるＳａｎｊａｎａ ＮＥ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｆｏｒ ＣＲＩＳＰＲ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４；１１（８）：７８３－７８４．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／０７／３１ ａｓ ＤＯＩ １０．１０３８／ｎｍｅｔｈ．３０４７に記載されているように、ヒトＧＭ－ＣＳＦのエクソン３を標的化するガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）は、ヒトＧＭ－ＣＳＦに対して高効率であると以前に報告されたｇＲＮＡのスクリーニングによって選択された。このｇＲＮＡは、ＣＡＳ９第３世代レンチウイルスコンストラクト（ｌｅｎｔｉＣＲＩＳＰＲｖ２）で注文され、Ｕ６プロモーター（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｔｏｗｎｓｈｉｐ，ＮＪ，ＵＳＡ）の下で制御された。このコンストラクトをコードするレンチウイルス粒子は、上記のように生成された。ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで刺激してから２４時間後に、Ｔ細胞にＣＡＲ１９およびＧＭ－ＣＳＦｇＲＮＡ－ｌｅｎｔｉＣＲＩＳＰＲｖ２レンチウイルスを二重形質導入した。次いで、ＣＡＲ－Ｔ細胞の拡大を上記のように続けた。ＧＭ－ＣＳＦを標的化する効率を分析するために、ＰｕｒｅＬｉｎｋ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞からゲノムＤＮＡを抽出した。目的のＤＮＡをＣｈｏｉｃｅ Ｔａｑ Ｂｌｕｅ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）を使用してＰＣＲ増幅し、ＱＩＡｑｕｉｃｋゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ，ＵＳＡ）を使用してゲル抽出して編集を決定した。ＰＣＲ増幅産物はＥｕｒｏｆｉｎｓ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ，ＵＳＡ）に送られ、対立遺伝子修飾頻度は、２つの並行ＰＣＲ反応とそれに続く１対の標準キャピラリー配列決定分析のみを必要とする方法であるＴＩＤＥ（Ｔｒａｃｋｉｎｇ ｏｆ Ｉｎｄｅｌｓ ｂｙ Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；分解によるインデルの追跡）を使用して計算された。次いで、結果として得られた２つの配列決定レースは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＢｒｉｎｋｍａｎ ＥＫ，ｅｔ ａｌ．，Ｅａｓｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｂｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｒａｃｅ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１４；４２（２２）：ｅ１６８．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／１０／１１ ａｓ ＤＯＩ １０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｕ９３６に記載されるように、単純なウェブツールおよびｔｉｄｅ．ｎｋｉ．ｎｌで入手可能なＲコードとして提供される特別に設計されたソフトウェアを使用して分析される。図３４ＢはｇＲＮＡ配列とプライマー配列を示し、図３４Ａ－１はＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９スキーマを生成するためのスキーマを示す。
実施例２１－ＧＭ－ＣＳＦ ＣＲＩＳＰＲノックアウトＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦの発現の低下、同様のレベルの主要なサイトカインおよびケモカイン、ならびに増強された抗腫瘍活性を示す
ＣＡＲ－Ｔ細胞機能に重要なＧＭ－ＣＳＦの役割を確実に排除するために、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳａｎｊａｎａ ＮＥ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４；１１（８）：７８３－７８４．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１４／０７／３１ ａｓ ＤＯＩ １０．１０３８／ｎｍｅｔｈ．３０４７に基刺される、高効率のノックアウトをもたらすことが報告されている、ＣＲＩＳＰＲレンチウイルスバックボーンにクローニングされたｇＲＮＡを使用して、ＣＡＲ－Ｔ細胞の製造中に破壊された。このｇＲＮＡを使用して、ＣＡＲＴ１９細胞で約６０％のノックアウト効率を達成した（図３７）。ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＤ１９＋細胞株ＮＡＬＭ６で刺激した場合、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、野生型ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子座を持つＣＡＲＴ１９（「野生型ＣＡＲＴ１９細胞」）と比較して、統計的に有意に少ないＧＭ－ＣＳＦを産生した。ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＧＭ－ＣＳＦノックアウトは、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、またはＣＡＲ－Ｔ細胞抗原特異的脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）（図２９Ａ）を含む他の重要なＴ細胞サイトカインの産生を損なうことはなかったが、ＧＭ－ＣＳＦの低下した発現を示した（図２９Ｂ）。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が引き続き正常な機能を示すことを確認するために、ＡＬＬの高腫瘍量再発異種移植モデルにおけるそれらのｉｎ ｖｉｖｏ有効性を試験した（図２８Ａに記載）。この異種移植モデルでは、野生型ＣＡＲＴ１９の代わりにＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９を使用すると、ＣＡＲＴ１９処理後７日でヒトＧＭ－ＣＳＦの血清レベルが著しく低下した（図２９Ｂ）。生物発光イメージングデータは、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞が、このモデルのＣＡＲＴ１９と比較して白血病の制御が強化されていることを示す（図３８）。重要なことに、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞は、野生型ＣＡＲＴ１９細胞と比較して全生存期間の有意な改善を示した（図２９Ｃ）。ヒトＧＭ－ＣＳＦは、野生型ＣＡＲＴ１９と比較してＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞でｔ検定により統計的に有意に減少した（図２９Ｄ）。マウスＧＭ－ＣＳＦは視覚的に増加しているように見えるが、これはｔ検定では統計的に有意ではない（Ｐ＝０．４７２３６７）（図２９Ｅ）。ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞（これはヒトである）はノックアウトを有するマウス内の唯一の細胞であり、したがってマウスＧＭＣＳＦが直接影響を受ける可能性は低いため、このマウスＧＭ－ＣＳＦの減少の欠如は必ずしも驚くべきことではない。目視検査によると、Ｔ細胞および単球を含む多くの細胞タイプを誘引するケモカインであるマウスＩＰ－１０は、ＣＡＲＴ１９と比較してＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９で逆説的に増加しているように見えるが、これも統計的に有意ではない（ｔ検定でｐ＝０．４８７７）（図２９Ｅ）。目視検査によると、マウスＭＩＰ１α（好中球誘引に重要な炎症性サイトカイン）およびマウスＭ－ＣＳＦ（マクロファージ分化に重要なサイトカイン）は減少しているように見えるが、統計的に有意ではない（Ｐ＝０．２４３７およびＰ＝０．３６１９）（図２９Ｅ）。マクロファージによって産生される重要な炎症性サイトカインであるマウスＩＬ－１ｂ、およびＮＫ細胞増殖を助けるマクロファージによって産生されるサイトカインであるマウスＩＬ－１５は、ＣＡＲＴ１９と比較してＧＭＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９で減少しているように見える（図２９Ｅ）（それぞれＰ＝０．０７４１およびＰ＝０．０９００）（図２９Ｅ）。重要なヒトＴ細胞サイトカインはＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏによって阻害されなかった（図２９Ｄ）。これらの異種移植片はＮＡＬＭ６細胞株の高い負荷で生産され、ＣＲＳ／ＮＩモデル（図３０Ａ～３０Ｄ、３１、３２Ａ～３２Ｄおよび３３Ａ～３３Ｄ）では初代ＡＬＬ細胞を使用して生成する必要があることを強調しておく必要がある。したがって、ＮＡＬＭ６異種移植片（図２９Ａ～２９Ｅ）はＣＲＳまたはＮＩを発生させないため、サイトカインプロファイルは２つのモデル間で当然異なる。まとめると、ＣＲＳのないＮＡＬＭ６高腫瘍量モデルの文脈において、図２９Ａ～２９Ｅの結果は図２７Ａ～２７Ｄおよび２８Ａ～２８Ｆを確認し、ＧＭ－ＣＳＦの枯渇がＣＡＲ－Ｔの有効性の機能に重要な正常なサイトカインまたはケモカインを損なわないことを示す。さらに、図２９Ａ～２９Ｅの結果は、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴが、ＣＡＲ－Ｔ細胞製造中の修正として「組み込み」ＧＭ－ＣＳＦ制御の治療オプションを表し得ることを示す。
実施例２２－神経炎症（ＮＩ）およびサイトカイン放出症候群の患者由来の異種移植モデル／インビボでのＧＭ－ＣＳＦ中和は、異種移植モデルでＣＡＲＴ１９療法後のサイトカイン放出症候群および神経炎症を改善する。
初代の患者由来のＡＬＬ異種移植片
初代ＡＬＬ異種移植片を確立するために、ＮＳＧマウスは最初に３０ｍｇ／ｋｇのブスルファンＩＰ（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を投与された。翌日、マウスに再発性または難治性ＡＬＬを有する患者の末梢血由来の２．５×１０６の初代芽細胞を注射した。マウスの生着を約１０～１３週間モニターした。ＣＤ１９＋細胞が血中で一貫して観察された場合（約１細胞／μＬ）、抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇレンジルマブまたはアイソタイプ対照ＩＰ、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法を受けた日に開始して合計１０日間）を伴うか、または伴わず、ＣＡＲＴ１９（２．５×１０６細胞ＩＶ）および同じドナー由来のＰＢＭＣ（１×１０５細胞ＩＶ）の異なる処理を受けるようにランダム化された。尾静脈出血による白血病負荷についてマウスを定期的にモニターした。
ＣＲＳ／ＮＩ用の初代の患者由来のＡＬＬ異種移植片
上記の実験と同様に、マウスに３０ｍｇ／ｋｇのブスルファン（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）をＩＰ注射した。翌日、マウスが再発ＡＬＬ患者の末梢血由来１～３×１０６初代芽球を投与された。マウスは、尾静脈出血を介して約１０～１３週間生着についてモニターされた。血清ＣＤ１９＋細胞が１０細胞／μｌ以上の場合、マウスはＣＡＲＴ１９（２～５×１０６細胞ＩＶ）を投与され、示されているように合計１０日間、抗体療法を開始した。マウスの健康状態の尺度として、マウスの体重を毎日測定した。マウス脳ＭＲＩはＣＡＲＴ１９注射の５～６日後に実施され、サイトカイン／ケモカインの尾静脈出血およびＴ細胞分析はＣＡＲＴ１９注射の４～１１日後に実施された。
ＭＲＩ取得
Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩ ７ Ｔｅｓｌａ垂直ボア小動物ＭＲＩシステム（Ｂｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｉｎ）を画像取得に使用して、中枢神経系（ＣＮＳ）の血管透過性を評価した。吸入麻酔は、３～４％のイソフルランを介して誘発および維持された。呼吸数は、ＭＲＩ互換のバイタルサイン監視システム（Ｍｏｄｅｌ １０３０；ＳＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔｏｎｙ Ｂｒｏｏｋ，ＮＹ）を使用して取得セッション中にモニターされた。マウスに、１００ｍｇ／ｋｇの体重ベースの投与を使用してガドリニウムのＩＰ注射を行い、１５分の標準遅延の後、容量取得Ｔ１強調スピンエコーシーケンスを使用し（繰り返し時間＝１５０ｍｓ、エコー時間＝８ｍｓ、視野：３２ｍｍ×１９．２ｍｍ×１９．２ｍｍ、マトリックス：１６０×９６×９６；平均数＝１）、Ｔ１強調画像を取得した。ガドリニウム造影ＭＲＩの変化は、血液脳関門の破壊を示した。２４容量分析は、メイヨークリニックのＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｒｅｓｏｕｒｃｅによって開発されたＡｎａｌｙｚｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージを使用して実行された。
結果
このモデルでは、コンディショニングされたＮＳＧマウスに初代ＡＬＬ芽球を移植し、高い疾患負荷が発生するまで数週間、移植をモニターした（図３０Ａ）。末梢血中のＣＤ１９＋芽球のレベルが＞１０／μＬの場合、示されているように、マウスをランダム化して様々な治療を受けた（図３０Ａ）。ＣＡＲＴ１９（対照ＩｇＧ抗体またはＧＭ－ＣＳＦ中和抗体）による治療は、疾患を根絶することに成功した（図３０Ｂ）。ＣＡＲＴ１９による治療後４～６日以内に、ＣＲＳおよびＮＩと一致する症状である、マウスは運動衰弱、体のむくみ、および進行性の体重減少を発症し始めた。これは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後のヒトＣＲＳで見られるものと同様に、ＣＡＲＴ１９注射の４～１１日後の主要な血清サイトカインおよびケモカイン（ヒトＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＰ－１０、ＭＤＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１β、ならびにマウスＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－９、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－１、およびＭＩＧを含む）の上昇と関連していた。ＣＡＲＴ１９で治療されたこれらのマウスは、血液脳関門の破壊とおそらく脳浮腫を示唆する異常なＴ１増強を明らかにする脳ＭＲＩ分析（図３０Ｃ）と、ヒトＣＡＲＴ１９細胞の浸潤を明らかにする採取された脳のフローサイトメトリー分析によって示されるようにＮＩも発症していた（図３０Ｄ）。さらに、ＮＩのこれらの兆候を示したマウスから採取した脳切片のＲＮＡ－ｓｅｑ分析は、Ｔ細胞受容体、サイトカイン受容体、Ｔ細胞免疫活性化、Ｔ細胞輸送、Ｔ細胞および骨髄細胞の分化を調節する遺伝子の有意な上方制御を示した（図３１、表６）。
Figure 2022517461000011
図３０Ａに示すＮＩおよびＣＲＳの異種移植患者由来モデルを使用して、ＣＡＲＴ１９毒性に対するＧＭ－ＣＳＦ中和の影響を調査した。マウスＧＭ－ＣＳＦの共創効果を除外するために、マウスは、１０日間のＧＭ－ＣＳＦ抗体療法（１０ｍｇ／ｋｇレンジルマブおよび１０ｍｇ／ｋｇ抗マウスＧＭ－ＣＳＦ中和抗体）またはアイソタイプ対照抗体と組み合わせてＣＡＲＴ１９細胞を投与された。ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体療法は、ＣＡＲＴ１９療法後のＣＲＳ誘発体重減少を統計的に有意に減少させた（図３２Ａ）。ＣＡＲＴ１９細胞療法の１１日後のサイトカインおよびケモカイン分析は、ヒトＧＭ－ＣＳＦが抗体によって中和されたことを示した（図３２Ｂ）。さらに、ＧＭ－ＣＳＦ中和により、いくつかのヒト（ＩＰ－１０、ＩＬ－３、ＩＬ－２、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－１２ｐ４０、ＶＥＧＦ、ＧＭ－ＣＳＦ）（図３２Ｃ）およびマウス（ＭＩＧ、ＭＣＰ－１、ＫＣ、ＩＰ－１０）（図３２Ｄ）のサイトカインおよびケモカインの有意な減少がもたらされた。インターフェロンガンマ誘導タンパク質（ＩＰ－１０、ＣＸＣＬ１０）は、他の細胞タイプの中でもとりわけ単球によって産生され、単球、マクロファージ、およびＴ細胞を含む多くの細胞タイプの化学誘引物質として機能する。ＩＬ－３は骨髄系前駆細胞の分化に関与している。ＩＬ－２は重要なＴ細胞サイトカインである。インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１Ｒａ）はＩＬ－１を阻害する。（ＩＬ－１はマクロファージによって産生され、重要な炎症性サイトカインのファミリーである。）ＩＬ－１２ｐ４０はＩＬ－１２のサブユニットであり、他の細胞タイプの中でもとりわけマクロファージによって産生され、Ｔｈ１分化を促進することができる。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は血管形成を促進する。ガンマインターフェロン（ＭＩＧ、ＣＸＣＬ９）によって誘導されるモノカインはＴ細胞化学誘引物質である。単球化学誘引物質タンパク質１（ＭＣＰ－１、ＣＣＬ２）は、単球、Ｔ細胞、および樹状細胞を誘引する。ＫＣ（ＣＸＣＬ１）は、他の細胞タイプの中でもとりわけマクロファージによって産生され、好中球などの骨髄細胞を誘因する。ＧＭ－ＣＳＦ中和後、他のいくつかのヒトおよびマウスサイトカインおよびケモカインの統計的に有意でない減少もあった。これは、ＧＭＣＳＦが、ＣＲＳおよびＮＩをもたらすカスケードに役立ついくつかのサイトカインおよびケモカインの下流活性において役割を果たすことを示唆している。
ＣＡＲ１９処理の５日後の脳ＭＲＩは、ＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９＋対照抗体と比較して、脳の炎症、血液脳関門の破壊、およびおそらく浮腫の尺度としてＴ１の増強を減少させることを示した。ＧＭ－ＣＳＦ中和（レンジルマブおよび抗マウスＧＭ－ＣＳＦ抗体を使用）後のＭＲＩ画像は、ベースラインの処理前スキャンと類似しており、ＧＭ－ＣＳＦ中和がＣＡＲＴ１９療法に関連するＮＩの無効化に効果的に役立ったことを示唆している（図３３Ａおよび３３Ｂ）。この患者由来の異種移植モデルでヒトＡＬＬ芽球とヒトＣＡＲＴ１９を使用すると、ＣＡＲＴ１９後のＧＭ－ＣＳＦ中和により、ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ対照と比較して神経炎症が７５％減少した（図３３Ｂ）。これは画期的な発見であり、ＣＡＲ１９によって引き起こされたＮＩが効果的に無効化され得ることがインビボで実証されたのは初めてである。フローサイトメトリーでアッセイしたＣＡＲＴ１９療法後、ヒトＣＤ３ Ｔ細胞が脳に存在し、ＧＭ－ＣＳＦ中和により、脳ＣＤ３ Ｔ細胞の減少に伴う生の平均に差があったが、統計的有意性は満たされなかった（図３３Ｃ、３０Ｄ、および３９）。最後に、ＣＤ１１ｂ＋明るいマクロファージの減少に伴う生の平均の違い（これは統計的有意性に達しなかったが）が、ＣＡＲ－Ｔ療法中のアイソタイプ対照と比較してＣＡＲ－Ｔ細胞療法中にＧＭ－ＣＳＦ中和を受けたマウスの脳で観察され（図３３Ｄ）、おそらくＧＭ－ＣＳＦ中和が脳内のマクロファージの減少に役立つことを示唆している。
実施例１８～１９および２２の結果は、ＧＭ－ＣＳＦの中和が、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の毒性を無効にし、それらの治療活性を増強し得ることを実証している。具体的には、ＣＡＲＴ１９療法と組み合わせたＧＭ－ＣＳＦ中和は、ＣＲＳの発症を防ぎ、ヒトＡＬＬ芽球とヒトＣＡＲＴ１９を使用した異種移植モデルにおけるＮＩの重症度を有意に軽減することが示された。ＧＭ－ＣＳＦ中和は、ＩＰ－１０、ＭＣＰ－１、ＫＣ、およびその他の炎症性サイトカインおよびケモカインなどの骨髄輸送に関連するケモカインの減少をもたらし、脳内のＴ細胞浸潤と骨髄細胞の活性化の生平均（統計的に有意ではない）の減少に関連している。興味深いことに、本明細書の実験はまた、ＧＭ－ＣＳＦ阻害がＣＡＲＴ１９増殖、抗腫瘍活性、およびインビボでの全生存を増強することを示唆している。これらの結果に基づいて、ＧＭ－ＣＳＦ中和は、ルーチンのＣＡＲ－Ｔ細胞免疫療法を可能にする潜在的な次世代戦略と見なすことができる。
本明細書に記載の研究において、レンジルマブによるＧＭ－ＣＳＦ中和は、インビトロでのＣＡＲＴ１９エフェクター機能を損なうことはなかった。２つの異なる異種移植モデル（ＮＡＬＭ６異種移植および患者由来の異種移植）では、レンジルマブと組み合わせたＣＡＲＴ１９は、ＧＭ－ＣＳＦ中和にもかかわらず腫瘍を効果的に根絶し、治療後３５日で白血病性疾患制御を大幅に改善したが、ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ制御は３５日後に疾患制御を維持できなかった。最後に、実施例２１～２２において、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞は、インビトロで強力なエフェクター機能を示し、インビボでのＣＡＲＴ１９と比較して有意に改善された全生存を示した。
本明細書に記載のＣＲＳおよびＮＩモデルは、ヒトＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の毒性の治療法を開発するための、独特で関連性のあるＡＬＬ患者由来の異種移植モデルである。本明細書に記載のモデルでは、ＣＡＲ－Ｔ細胞注入から症状の発症、脳ＭＲＩの変化、サイトカインとケモカインの上昇、およびエフェクター細胞のＣＮＳへの浸潤までの時間間隔は全て、ＣＡＲＴ１９療法後に毒性を発現させる患者で報告されているものと同様である。マウスは、ＣＲＳおよびＮＩの症状（体重減少、運動機能の低下、および体のむくみ）を発症した。脳ＭＲＩの変化は、ＣＡＲＴ１９細胞の注入後４～６日で検出された。脳ＭＲＩＴ１の取り込みは、血液脳関門の破壊とおそらく脳浮腫を示唆しており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる Ｇｕｓｔ ｅｔ ａｌ．２０１７ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（１２）：１４０４－１４１９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎ ２０１７／１０／１４ ａｓ ＤＯＩ １０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１７－０６９８に記載される、重篤な神経毒性の場合にヒト脳ＭＲＩで注目される変化と同等である。
興味深いことに、Ｇｕｓｔ ｅｔ ａｌ．２０１７はさらに、血液脳関門の透過性が全身性サイトカインからのＣＳＦの保護を妨げ、血管周皮細胞ストレスと内皮活性化サイトカインの分泌を誘発し、患者が内皮活性化の証拠を示したことを記載している。本明細書に記載のＣＲＳ／ＮＩモデルにおいて、ＧＭ－ＣＳＦは、ＣＡＲＴ１９およびアイソタイプ対照抗体と比較して、ＧＭ－ＣＳＦ中和抗体によるＣＡＲＴ１９療法を受けているマウスの血清において中和されることが見出された。したがって、マウスの脳内のＴ細胞自体がＧＭ－ＣＳＦ産生を提供する可能性があり、他のサイトカインおよびケモカインの中でもとりわけ血清ＧＭ－ＣＳＦがＣＳＦに到達する可能性がある。さらに、内皮細胞はＧＭ－ＣＳＦを産生することができ、これは悪化のサイクルをもたらす可能性がある。ＮＩは、ＣＡＲ－Ｔ誘発神経毒性のある患者、および非ヒト霊長類モデルにおけるＣＳＦの変化と同様に、ＣＮＳにおけるＴ細胞の浸潤および骨髄細胞の活性化と関連していた。本明細書に記載のモデルは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後にＣＲＳが発生した以前に報告された患者由来の異種移植モデルに類似している。最近の報告では、ＩＬ－１の遮断が骨髄細胞の枯渇を通じてＮＩを予防することが示唆されている。ただし、そのモデルでのＮＩの発症は遅れており、本明細書に記載のモデルおよびＣＡＲＴ１９療法を受けている患者で観察されたものとは異なり、髄膜肥厚に関連していた。したがって、本明細書に記載のモデルは、ＣＡＲＴ１９細胞療法後のＣＲＳおよび神経毒性の予防および治療のための新規介入を調査するための信頼できる方法として提供されている。本明細書に記載の結果は、ＧＭ－ＣＳＦ中和が主要な骨髄性およびいくつかの炎症性サイトカインおよびケモカインの減少をもたらすことを示し、ＧＭ－ＣＳＦがいくつかのサイトカインおよびケモカインの下流活性化における重要なサイトカインであることを示唆している。遮断は、脳／ＣＮＳにおける骨髄性およびＴ細胞浸潤の生の平均の減少に寄与する（統計的有意性には達していないが）。遮断は、見かけの神経毒性の神経炎症を軽減するのに役立つ。
興味深いことに、ＣＡＲＴ１９細胞増殖の指数関数的増加が観察され、抗腫瘍活性が増強され、ＧＭ－ＣＳＦ遮断により全生存期間が改善された。例えば、単球の存在下でのＣＡＲＴ１９抗原特異的増殖は、ＧＭ－ＣＳＦ中和後にインビトロで増加した。さらに、ＡＬＬ患者由来の異種移植片において、ＣＡＲＴ１９細胞は、レンジルマブと組み合わせた場合、より堅牢な疾患制御をもたらした。さらに、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＮＡＬＭ６異種移植片の白血病を制御するのにより効果的であり、全生存期間の改善を示したことがわかった。ＧＭ－ＣＳＦ枯渇後の強化されたＣＡＲＴエフェクター機能のメカニズムは現在不明であるが、本明細書で提供される結果は、単球がエクスビボでＴ細胞の増殖を損ない、Ｍ２極性化マクロファージがＣＡＲＴ１９抗原特異的増殖を阻害することを示す以前の報告と一致している。これは重要な発見である。なぜなら、ＣＡＲ－Ｔ臨床試験全体で、ＣＡＲ－Ｔ細胞増殖の改善は、一貫して有効性と反応の改善（すなわち、全体的および完全な応答率）と関連していたからである。
活性化されたＴ細胞がＧＭ－ＣＳＦを産生することが知られている。Ｔ細胞はＧＭ－ＣＳＦ受容体の全てのサブユニットを持っているわけではないため、通常の状況では、ＧＭ－ＣＳＦは通常、Ｔ細胞に直接フィードバックしないが、状況によっては非常に高いレベルであり得る。代わりに、このＧＭ－ＣＳＦは、マクロファージおよび樹状細胞を含む他の多くの細胞タイプの挙動に影響を与える。その後のこれらの細胞の活性化は、サイトカイン産生および抗原提示などのＴ細胞を刺激する働きをする作用をもたらす。Ｔ細胞刺激は、ＧＭ－ＣＳＦおよび他のサイトカインの産生をさらに促進し、マクロファージおよび樹状細胞などの他の細胞タイプに作用して、サイクルを促進する。ＣＡＲ－Ｔ細胞療法では、非常に短いタイムラインで生成された多数の活性化Ｔ細胞が、このサイクルを極端な状況に追いやる可能性がある。本明細書に記載の結果は、ＧＭ－ＣＳＦを遮断することにより、Ｔ細胞機能を損なうことなくこの免疫過剰刺激を防ぎ、実際にそれらを増強することを示唆している。ＧＭ－ＣＳＦ遮断後の強化されたＣＡＲ－Ｔ細胞エフェクター機能の正確なメカニズムは不明である。
最後に、本明細書で提供される結果は、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲＴ１９細胞の開発が、現在のＣＡＲ－Ｔ細胞製造に組み込むことができるＧＭ－ＣＳＦ産生を部分的に制御する新しい方法を表し得ることをさらに示唆する。これらの結果は、これらの細胞が正常に機能し、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の治療ウィンドウを強化するための独立した治療アプローチを表し得ることを示している。レンジルマブなどの抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体は、ＧＭ－ＣＳＦを中和し、ＣＲＳと明らかな神経毒性の神経炎症の両方を無効にし、ＣＡＲ－Ｔ細胞機能を改善する可能性のある臨床段階の治療ソリューションである。
本明細書に記載されている研究は、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法後の毒性の理解および予防における重要な進歩を表している。これらの結果は、ＧＭ－ＣＳＦ遮断を介して骨髄細胞の挙動を調節することで、ＣＡＲ－Ｔ細胞を介した毒性を制御し、免疫抑制機能を低下させて白血病の制御を改善することを強く示唆している。これらの研究は、潜在的にＣＡＲ細胞機能も増強するＧＭ－ＣＳＦの中和を介して見かけの神経毒性の神経炎症およびＣＲＳを無効化する新しいアプローチを明らかにする。
実施例２３－抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体（レンジルマブ）の投与が、ＣＡＲ－Ｔ療法によって引き起こされる神経炎症を有意に軽減し、異種移植モデルにおける血液脳関門の完全性を維持した。
この前臨床試験は、ＣＡＲ－Ｔ臨床試験で観察された所見を厳密に再現するように設計され、ヒト急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ヒトＣＤ１９標的化ＣＡＲ－Ｔ（ＣＡＲＴ１９）、およびヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を利用し、マウスで実施された。
初代の患者由来のＡＬＬ異種移植片
ＡＬＬ異種移植片は、本質的に実施例２２に記載されているようにマウスで確立された。
ＭＲＩ取得
ＢＢＢの完全性は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって非侵襲的にモニターできる。ガドリニウムを含む従来のＭＲ造影剤（ＣＡ）は、ＭＲＩと組み合わせて使用され、ＢＢＢの漏れを検出および定量化する。通常の状況では、ＣＡは無傷のＢＢＢを通過しない。しかしながら、サイズが小さいため、ＢＢＢが部分的に損なわれている場合でも、ＣＡは血液から脳組織に溢れ出る。
ＭＲＩは、基本的に実施例２２で記載されているように取得された。参照によりその全体が組み込まれるＫｕ，ＭＣ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１８；１７１８：３９５－４０８．ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－１－４９３９－７５３１－０＿２３に記載されるように、ＣＡ注入の前および後に取得されたＴ１強調画像に基くガドリニウム増強ＭＲＩ法は、レンジルマブおよびＣＡＲＴ１９の現在の前臨床試験で使用されているものと一致している。このガドリニウム造影ＭＲＩ法は、インビボマウスモデルのＢＢＢ透過性を調査するのに役立ち、神経炎症障害を含む多くの実験的疾患状態に簡単に適用したり、（不要な）有用な薬物効果を評価したりできる。
共焦点顕微鏡
共焦点顕微鏡を使用して、血液脳関門（本明細書ではＢＢＢとも呼ばれる）の障害／破壊を評価した。この顕微鏡技術は、空間フィルタリングを使用して、焦点面よりも厚い標本の焦点が合っていない光またはフレアを排除する。そのため、共焦点顕微鏡法は、制御可能な被写界深度、画像劣化の焦点外れ情報の排除、厚い標本から連続光学切片を収集する機能を含む、従来の光学顕微鏡法に比べていくつかの利点を提供する。
結果
ＣＡＲ－Ｔおよびレンジルマブ療法の後、ＢＢＢの完全性が維持され、神経炎症が大幅に減少する
本研究では、５日目に撮影されたＭＲＩ画像は、ＣＡＲ－Ｔ療法によるびまん性神経炎症を定性的に明らかにしたが、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔの組み合わせ後に取得されたＭＲＩ画像は、未処理の対照群と同様に、有意に少ない神経炎症を示した（図３３Ａを参照されたい）。ガドリニウム増強Ｔ１高信号強度を介したＭＲＩの定量化は、ＣＡＲ－Ｔ＋対照抗体に対して、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔによる神経炎症およびＢＢＢ障害の有意な７５％の減少を示した（図３３Ａ）。さらに、共焦点顕微鏡は、ＣＡＲ－Ｔ療法後、ＢＢＢが著しく損なわれていることを高解像度画像で明確に示す（図４０Ａ）。これは、ＣＡＲ－Ｔ療法でびまん性神経炎症を定性的に示したＭＲＩ画像と一致している（図３３Ａを参照されたい）。対照的に、共焦点顕微鏡は、ＣＡＲ－Ｔと組み合わせたレンジルマブによるＢＢＢの完全性の維持を示す（図４０Ａ）。これは、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔの組み合わせ後に取得された定性的および定量的ＭＲＩ画像と一致しており、ＣＡＲ－Ｔとアイソタイプ対照と比較した神経炎症の有意な減少を示した。図４０Ａは、共焦点顕微鏡のＢＢＢデータを示す。図３３Ａは、ガドリニウム増強Ｔ１高信号強度を使用する実証的な定量的ＭＲＩであり、未処理対ＣＡＲＴ１９＋レンジルマブ対ＣＡＲＴ１９＋アイソタイプ対照の３つの処理群を示す。共焦点顕微鏡の結果は、ＣＡＲ－Ｔによって誘発される神経炎症の病理を説明するのに役立つため、非常に重要である。このデータは、ＣＡＲ－Ｔ投与後、ＢＢＢが損なわれ、神経炎症を伝播すると考えられているＣＮＳへの炎症誘発性サイトカインの大量流入を可能にすることを示唆している。このデータは、ＣＡＲ－Ｔ臨床試験で報告されたデータと一致している。２×１０６抗ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞／ｋｇの標的用量で静脈内投与されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）形質導入自家Ｔ細胞（イエスカルタ）におけるＺＵＭＡ－１研究では、グレード３以上の神経毒性を発症した患者のＣＮＳにおいて炎症誘発性サイトカインの有意な増加が見られた。現在の共焦点顕微鏡データは、レンジルマブの添加がＣＡＲ－Ｔ誘発性神経炎症を有意に減少させる理由と方法を説明するのに役立つ。
ＭＲＩ画像は、ＣＡＲ－Ｔ療法（ＣＡＲＴ１９）の投与後５日目にびまん性神経炎症とＢＢＢの障害を定性的に示した。レンジルマブをＣＡＲ－Ｔと同時投与した場合、ＢＢＢの完全性が保存／維持され、レンジルマブ＋ＣＡＲ－Ｔの組み合わせ後５日目に取得されたＭＲＩ画像は、未処理の対照群と同様に、神経炎症が有意に少なかった（図３３Ａを参照されたい）。さらに、共焦点顕微鏡は、この結果が、ＣＡＲ－Ｔおよび対照抗体と比較して、レンジルマブおよびＣＡＲ－Ｔ後の神経炎症およびＢＢＢ障害の７５％の減少を示すＭＲＩ画像データと完全に一致することを明らかにした（この分析のＹ軸はガドリニウム強化されたＴ１高信号強度である）。
ＣＡＲＴおよびレンジルマブ療法後、ＣＡＲＴ１９細胞増殖は指数関数的に増加し、白血病性疾患の制御は大幅に改善された
実施例２２に記載されるように、ＣＡＲＴ１９治療後のレンジルマブ投与はまた、ＣＡＲＴ１９＋対照と比較して、ＣＡＲＴ１９細胞増殖の指数関数的増加およびＣＡＲＴ１９注入後少なくとも３５日間持続する白血病性疾患制御の有意な改善をもたらした。これらの結果は、抗ＧＭ－ＣＳＦモノクローナル抗体（レンジルマブ）によるＧＭ－ＣＳＦ中和が、ＣＡＲＴ１９療法後の再発を減らし、持続的な完全応答を増加させる役割を果たすことができることを示唆している。ＣＡＲＴ１９療法に最初に応答した成人リンパ腫患者の５０％以上が、その後追跡の最初の１年以内に再発することを考えると、これは重要な発見である。
図４０Ｂ（参照によりその全体が組み込まれる、２０１８年６月７日にＯｎｌｉｎｅＦｉｒｓｔで公開されたＳａｎｔｏｍａｓｓｏ，ＢＤ，ｅｔ ａｌ．、ＤＯＩ：１０．１１５８／２１５９－８２９０．ＣＤ－１７－１３１９から引用したもの）は、ＣＳＦ中の高レベルのタンパク質（Ｓａｎｔｏｍａｓｓｏのデータに示されている）がＢＢＢの破壊とＣＮＳへのタンパク質の漏出（神経毒性中の血液脳脊髄液（ＣＳＦ）障壁透過性の増加による）を示していることを示す。これは、ＢＢＢ破壊がＮＩの病態生理学の中心であり、本明細書で提供される異種移植モデルの所見をＳａｎｔｏｍａｓｓｏの臨床所見にリンクしていることを示す。本明細書で提供される方法の実施形態では、方法は、腰椎穿刺を（臨床医によって）実行し、ＮＴのグレードのその後の臨床的期待および先制措置を予測できるタンパク質／卵白のＣＳＦレベルを測定することをさらに含む。
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例証および例としてある程度詳細に説明されてきたが、本発明の教示に照らして、ある特定の変更および修正が添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなくそれに対してなされてもよいことは、当業者には容易に明らかであろう。
実施例２４－Ｔ細胞のＧＭ－ＣＳＦ遺伝子をノックアウトする遺伝子編集技術
様々ながんの治療のための次世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の開発に遺伝子編集を組み込むために、様々なグループによっていくつかの戦略が追求されている。重度の毒性（サイトカイン放出症候群および神経毒性）は、ＣＡＲ Ｔ細胞療法に関連しており、患者の転帰を悪化させる可能性がある。毒性プロセスの重要なイニシエーターは、ＣＡＲＴ細胞由来のＧＭ－ＣＳＦのようである。
遺伝子編集（例えば、操作されたヌクレアーゼによる）は、Ｔ細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子および／またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子発現に不可欠なタンパク質をコードする遺伝子をＫＯするために使用され得る。このようなゲノム編集に有用なヌクレアーゼには、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ヌクレアーゼ、およびメガヌクレアーゼとしても知られるホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）が含まれるが、これらに限定されない。
ＧＭ－ＣＳＦにジンクフィンガーヌクレアーゼを使用
ＣＡＲＴ細胞のＧＭ－ＣＳＦ遺伝子は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）技術を使用して不活性化することができまる。ＤＮＡ配列特異的ヌクレアーゼはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子（複数可）を切断し、ＤＮＡ二本鎖切断修復は遺伝子（複数可）の不活性化をもたらす。配列特異的ヌクレアーゼは、配列特異的ＤＮＡ結合ドメイン（ジンクフィンガー）をＦｏｋ１エンドヌクレアーゼドメインと組み合わせることによって作成される。標的化ヌクレアーゼは二量体として機能し、２つの異なるＤＮＡ認識ドメインを使用して部位特異的切断を提供する。Ｆｏｋ １エンドヌクレアーゼの操作により、ホモ二量体ではなくヘテロ二量体が確実に形成される。したがって、強制的ヘテロダイマーＦｏｋ１－ＥＬバリアントは、より高いレベルの特異性を提供する。
ＺＦＮ技術を使用する遺伝子ＫＯアプローチに関するこれまでの臨床経験は限られている。しかしながら、ＣＣＲ５受容体がＺＦＮテクノロジーを使用してノックアウトされ、Ｔ細胞がＨＩＶ患者に再導入された小規模な安全性研究では、抗レトロウイルス薬療法が停止されたとき、改変Ｔ細胞と非改変Ｔ細胞の生存上の顕著な利点があった。
二対立遺伝子の遺伝子破壊が達成されたときに最良の効果が観察された。これは、最大の遺伝子破壊％を達成するＫＯ技術が最も効果的である可能性が高いことを示唆する（Ｓｉｎｇｈ ２０１７、Ｔｅｂａｓ ２０１４）。一部のヒト細胞タイプでは、ＲＡＤ５１の過剰発現とバルプロ酸処理により、二対立遺伝子の標的化効率が向上する（Ｔａｋａｙａｍａ ２０１７）。
ヒトＧＭ－ＣＳＦ遺伝子のエクソン１～４は、選択した標的領域内でペアを形成するＺＦＮで標的化できる。ＤＮＡ配列内の翻訳開始コドンの近くを標的化することの潜在的な利点は、遺伝子ノックアウトがまだ合成されているタンパク質の大きな断片をもたらさないことを保証することである。そのようなタンパク質断片は、望ましくない生物活性を有する可能性がある。
特定の標的配列における潜在的なジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）部位の同定には、様々なツールが利用可能である。このようなツールの例は、ｈｔｔｐ：／／ｂｉｎｄｒ．ｇｄｃｂ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／ＺｉＦｉＴ／に見出せる。この方法で同定されたＺＦＮのペアの発現のためのベクター（ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ＫＯで使用するため）は、ＧＭ－ＣＳＦを発現するヒト細胞で試験され、各ペアの遺伝子破壊の有効性は、細胞のプール内のＧＭ－ＣＳＦ産生の変化によって測定された。ＧＭ－ＣＳＦレベルの最大の低下を示すＺＦＮのペアが、ヒトＣＡＲＴ細胞での試験用に選択される。
例えば、自家Ｔ細胞は、ＧＭ－ＣＳＦ特異的ＺＦＮの対をコードする複製欠損組換えＡｄ５ウイルスベクターでエクスビボで形質導入され得、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の改変をもたらす。ベクターは、ベクターによってコードされる遺伝子の一過性発現のみをサポートする。２つのＺＦＮは、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の変異導入用に選択された領域（エクソン１、２、３、または４内）に特異的に見られる複合ｂｐ配列に結合する。ＧＭ－ＣＳＦ特異的ＺＦＮの発現は、細胞ＤＮＡに二本鎖切断を誘発し、これは細胞機構によって修復され、形質導入された細胞にランダムな配列の挿入または欠失をもたらす。これらの挿入と欠失は、ＧＭ－ＣＳＦコード配列を破壊し、フレームシフト変異とタンパク質発現の停止をもたらす。
Ｔ細胞製造／患者固有の試料
被験者は、＞１０９の白血球を収集するために１０リットルの白血球アフェレーシスを受ける。白血球アフェレーシス製品は、向流遠心エルトリエーションを介して単球を枯渇させることにより、およびＣＤ８＋Ｔ細胞を磁気的に枯渇させることにより、ＣＤ４＋細胞が濃縮され、どちらもシングルユースのクローズドシステム使い捨てセットを採用している。得られた濃縮ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ｍＡｂでコーティングされた常磁性ビーズで活性化され、ＣＡＲ ＴをコードするベクターとＺＦＮをコードするベクターで形質導入される。次いで、細胞を拡大し、閉鎖系で培養する。Ｔ細胞の拡大は、灌流条件下でさらに拡大するためにＷＡＶＥバイオリアクターに移した後も継続する。培養期間の終わりに、細胞は磁気ビーズを枯渇させ、洗浄され、濃縮され、凍結保存される。
初代Ｔ細胞は、ＺＦＮの二対立遺伝子標的化効率を高めるために、他の薬剤、例えばバルプロ酸で処理することもできる。
推定上の標的化配列
エクソン１
配列表４
Figure 2022517461000012
エクソン２
配列表５
Figure 2022517461000013
設計エクソン３
配列表６
Figure 2022517461000014
エクソン４
配列表７
Figure 2022517461000015
ＴＡＬＥＮＳ
Ｔ細胞のＧＭ－ＣＳＦ遺伝子（複数可）は、アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮＳ）を使用して不活性化することもできる。ＴＡＬＥＮＳは、配列特異的なＤＮＡ結合ドメインに融合したＦｏｋ１ヌクレアーゼドメインを含むという点でＺＦＮに似ている。次いで、標的化ヌクレアーゼはＤＮＡに二本鎖切断を行い、エラーが発生しやすい修復により、変異した標的遺伝子が作成される。ＴＡＬＥＮＳは、結合部位の個々の塩基へのＤＮＡ結合ＴＡＬＥ（転写活性化因子のようなエフェクター）リピートドメインを使用する単純なタンパク質－ＤＮＡコードを使用して簡単に設計できる。ＴＡＬＥＮの堅牢性は、ゲノム編集が信頼性が高く簡単なプロセスであることを意味する（参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、Ｒｅｙｏｎ Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２ Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１２ Ｍａｙ；３０（５）：４６０－５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｂｔ．２１７０）。
例として、ヒトＧＭ－ＣＳＦ遺伝子のエクソン１内のいくつかのＴＡＬＥ標的配列は次のとおりである。
配列表８
Figure 2022517461000016
ヒトＧＭ－ＣＳＦ遺伝子のエクソン４のＴＡＬＥ標的配列の例：
配列表９
Figure 2022517461000017
ＣＲＩＳＰＲ Ｃａｓ－９は初代Ｔ細胞でＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ＫＯを媒介した。
ＣＲＩＳＰＲ（クラスター化等間隔短鎖回分リピート）、Ｃａｓ－９システムは、Ｃａｓ９、ＲＮＡガイドヌクレアーゼ、および細胞内因性メカニズムによって修復される部位特異的ＤＮＡ切断の生成を促進するショートガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）で構成されている。初代ヒトＴ細胞へのＣａｓ９／ｇＲＮＡ ＲＮＰ送達は、非常に効率的な標的遺伝子改変をもたらす。ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子をノックアウトするためのＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を介した方法は、詳細なプロトコルで説明され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｏｈ，Ｓ．Ａ．，Ｓｅｋｉ，Ａ．，＆ Ｒｕｔｚ，Ｓ．（２０１８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１２４，ｅ６９．ｄｏｉ：１０．１００２／ｃｐｉｍ．６９、およびＳｅｋｉ ａｎｄ Ｒｕｔｚ，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１８ Ｖｏｌ．２１５ Ｎｏ．３ ９８５－９９７を参照されたい。
遺伝子ＫＯによるＧＭ－ＣＳＦの不活性化は、サイトカイン放出症候群と神経毒性を低減し、腫瘍異種移植片を有するＣＡＲ Ｔ処理マウスの抗腫瘍活性を改善することが報告されている（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｔｅｒｎｅｒ ＲＭ ｅｔ ａｌ．，２０１８ Ｂｌｏｏｄ ２０１８：ｂｌｏｏｄ－２０１８－１０－８８１７２２；ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１８－１０－８８１７２２に記載されるように）。
エクソン１または２または３または４を標的化するＣＲＩＳＰＲアプローチによるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の不活性化。
全ての試料で効率的な遺伝子不活性化を確実にするために、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子内の３つの異なる配列を標的化する複数の、例えば、３つのＣａｓ９コンストラクトを使用することができる。（これは、他の遺伝子編集方法と比較して、ＣＲＩＳＰＲで簡単に実行できる。）
Ｃａｓ９を使用して報告された二対立遺伝子ＫＯの高頻度（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１４ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ；６９（２）：１７１－１７８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｅｔｈ．２０１４．０５．００３に記載されるように）。この高頻度の二対立遺伝子ＫＯは、潜在的な利点を提供する。
ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ ＫＯのための他の遺伝子サイレンシング技術
遺伝子サイレンシングに使用できる他の方法は、当業者によく知られており、メガヌクレアーゼとしても知られるホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、短鎖干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、ＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）を含むがこれらに限定されない。
ＣＡＲ Ｔ細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ＫＯと非ＣＡＲ Ｔ由来ＧＭ－ＣＳＦに対する中和抗体の組み合わせ。
患者の全てのＧＭ－ＣＳＦの除去／中和には、ＣＡＲＴ細胞でＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ＫＯと組み合わせて使用される抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体または抗受容体抗体または可溶性受容体－Ｆｃ融合体が必要である（これらの組み合わせに対するクレームが必要である）。
本明細書で引用されるすべての刊行物、受入番号、特許、および特許出願は、それぞれが具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の例示的なＶＨ領域配列：
配列番号：１（ＶＨ＃１、図１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＳＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号：２（ＶＨ＃２、図１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＮＡＧＮＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号：３（ＶＨ＃３、図１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＮＡＧＮＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号４（ＶＨ＃４、図１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＮＡＧＮＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号５（ＶＨ＃５、図１）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＮＹＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＷＩＮＡＧＮＧＮＴＫＹＳＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＲＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＶＲＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
本発明の抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体の例示的なＶＬ領域配列：
配列番号６（ＶＫ＃１、図１）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＶＬＩＹＳＴＳＳＲＡＴＧＩＴＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＦＮＲＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号７（ＶＫ＃２、図１）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＶＬＩＹＳＴＳＳＲＡＴＧＩＴＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＦＮＫＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８（ＶＫ＃３、図１）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＧＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＶＬＩＹＳＴＳＳＲＡＴＧＩＴＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＦＮＲＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号９（ＶＫ＃４、図１）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＧＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＶＬＩＹＳＴＳＳＲＡＴＧＩＴＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＦＮＫＳＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１０ 例示的なカッパ定常領域
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１１ 例示的な重鎖定常領域、ｆ－アロタイプ：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ

Claims (342)

  1. ＣＡＲ－Ｔ細胞で治療された対象においてヒトＧＭ－ＣＳＦ（ｈＧＭ－ＣＳＦ）を中和および／または除去するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化または遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を前記対象に投与することを含む方法。
  2. 組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、またはｄＡＢである組換え抗体断片である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項４に記載の方法。
  6. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項４に記載の方法。
  7. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項２に記載の方法。
  8. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項７に記載の方法。
  9. 前記ＧＭ－ＣＳＦが、ＣＡＲ Ｔ由来のＧＭ－ＣＳＦおよび／または非ＣＡＲ Ｔ由来のＧＭ－ＣＳＦのいずれかである、請求項１に記載の方法。
  10. 前記対象が免疫療法関連毒性の発生を有する、請求項１に記載の方法。
  11. 前記対象が免疫療法で治療される前に、前記対象に（ａ）ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞および／または（ｂ）抗ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを予防的に投与することをさらに含み、前記対象が、（ａ）および／または（ｂ）の予防的投与後に免疫療法関連毒性を発達させることから予防される、請求項１に記載の方法。
  12. 前記対象が免疫療法で治療され、前記免疫療法が、ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
  13. 標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法。
  14. 核酸切断酵素としてエンドヌクレアーゼをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記エンドヌクレアーゼがＦｏｋ１制限酵素またはフラップエンドヌクレアーゼ１（ＦＥＮ－１）である、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記エンドヌクレアーゼがＣａｓ９ ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）である、請求項１４に記載の方法。
  17. ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９による前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化が、エクソン１、エクソン２、エクソン３、またはエクソン４でＧＭ－ＣＳＦ遺伝子を標的化し、編集する、請求項１３に記載の方法。
  18. ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化が、エクソン３で前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子を標的化し、編集する、請求項１３に記載の方法。
  19. ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を含む前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化が、エクソン１で前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子を標的化し、編集する、請求項１３に記載の方法。
  20. 前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化が複数のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９酵素を含み、各Ｃａｓ９酵素が、エクソン１、エクソン２、エクソン３またはエクソン４で前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の異なる配列を標的化し、編集する、請求項１４に記載の方法。
  21. 前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化が、前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子の二対立遺伝子ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９標的化およびノックアウト／不活性化を含む、請求項１４に記載の方法。
  22. 初代Ｔ細胞をバルプロ酸で処理して、二対立遺伝子のノックアウト／不活性化を増強することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記標的化ゲノム編集がジンクフィンガー（ＺｎＦ）タンパク質を含む、請求項１３に記載の方法。
  24. 前記標的化ゲノム編集が、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮＳ）を含む、請求項１３に記載の方法。
  25. 前記標的化ゲノム編集が、ホーミングエンドヌクレアーゼを含み、前記ホーミングエンドヌクレアーゼが、ＡＲＣヌクレアーゼ（ＡＲＣＵＳ）またはメガヌクレアーゼである、請求項１３に記載の方法。
  26. 前記標的化ゲノム編集がフラップエンドヌクレアーゼ（ＦＥＮ－１）を含む、請求項１３に記載の方法。
  27. 前記細胞がＣＡＲ Ｔ細胞である、請求項１３に記載の方法。
  28. 前記ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記ＣＡＲ Ｔ細胞がＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項２７に記載の方法。
  30. 前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングが、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）、短鎖干渉ＲＮＳ（ｓｉＲＮＡ）、およびＤＮＡ指向性ＲＮＡ干渉（ｄｄＲＮＡｉ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
  31. 免疫療法関連毒性を予防または低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を前記対象に投与することを含み、前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が、請求項１３～２６のいずれか１項に記載の方法によって不活性化またはノックアウトされる、方法。
  32. 前記免疫療法関連毒性が、サイトカイン放出症候群、神経毒性、またはそれらの組み合わせから選択されるＣＡＲ－Ｔ関連毒性である、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞をｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストと組み合わせて投与することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
  34. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項３１に記載の方法。
  36. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体もしくは受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 免疫療法で治療された対象における再発を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
  41. 前記免疫療法が、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記対象が、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、および濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを有する、請求項４０に記載の方法。
  43. 前記養子細胞移入が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、請求項４１に記載の方法。
  44. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項４０に記載の方法。
  45. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項４０に記載の方法。
  46. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項４５に記載の方法。
  48. 前記霊長類が、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、または類人猿から選択される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項４５に記載の方法。
  50. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項４５に記載の方法。
  51. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項５０に記載の方法。
  54. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換え、ヒト化、ＣＤＲグラフト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項５０に記載の方法。
  55. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項５０に記載の方法。
  56. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２と同じエピトープに結合する、請求項５０～５５のいずれか１項に記載の方法。
  57. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２のＶＨ領域のＣＤＲ３およびＶＬ領域のＣＤＲ３を含む、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  58. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  59. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、前記Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を含み、前記Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  60. 前記Ｊセグメントが、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記ＣＤＲ３が、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む、請求項５９または６０のいずれかに記載の方法。
  62. 前記ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである、請求項５９または６０のいずれかに記載の方法。
  63. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む、請求項５９または６０のいずれかに記載の方法。
  64. 前記Ｖセグメント配列が、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する、請求項５９または６０のいずれかに記載の方法。
  65. 前記ＶＨが、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する、請求項５９または６０のいずれかに記載の方法。
  66. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、前記アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  67. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記ＶＬ領域のＣＤＲ３が、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬＴを含む、請求項６６または６７に記載の方法。
  69. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む、請求項６６に記載の方法。
  71. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む、請求項６６に記載の方法。
  72. 前記ＶＬ領域が、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する、請求項６６に記載の方法。
  73. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  74. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  75. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項５０～５５のいずれかに記載の方法。
  76. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項４４に記載の方法。
  77. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項４３に記載の方法。
  79. 前記免疫療法で治療された対象において再発率を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生のないときに起きる、請求項４０に記載の方法。
  80. 前記免疫療法関連毒性の発生のある免疫療法で治療された対象において再発率を低下させるか、または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生があるときに起きる、請求項４０に記載の方法。
  81. 前記免疫療法関連毒性がＣＡＲ－Ｔ関連毒性である、請求項８０記載の方法。
  82. 前記ＣＡＲ－Ｔ関連毒性がサイトカイン放出症候群、神経毒性、または神経炎症である、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記免疫療法で治療され、かつ組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与されていない対象における腫瘍再発の発生と比較して、前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の４分の１年において前記腫瘍再発の発生が５０％～１００％減少する、請求項４０に記載の方法。
  84. 前記腫瘍再発の発生が、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の半年で５０％～９５％減少する、請求項４０に記載の方法。
  85. 前記腫瘍再発の発生が１２～３６ヶ月まで予防される、請求項４０に記載の方法。
  86. 前記腫瘍再発の発生が約１０年間完全に（１００％）予防される、請求項４０に記載の方法。
  87. 前記対象が急性リンパ性白血病を有する、請求項４０に記載の方法。
  88. 前記ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞をｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストと組み合わせて投与することをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
  89. 免疫療法で治療された（かつ免疫療法関連毒性の発生率を有する）対象においてＧＭ－ＣＳＦ以外のサイトカインまたはケモカインのレベルを低下させる方法であって、前記免疫療法の前に、またはその最中に前記対象に組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することを含み、前記サイトカインまたはケモカインのレベルが、免疫療法関連毒性の発生中の対象におけるそれらのレベルと比較して減少する、方法。
  90. 前記免疫療法が、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８９に記載の方法。
  91. 前記養子細胞移入が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項９１に記載の方法。
  93. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項８９に記載の方法。
  94. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項９０に記載の方法。
  95. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項９０に記載の方法。
  96. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項９０に記載の方法。
  97. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項９０に記載の方法。
  98. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項９０に記載の方法。
  99. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項９４に記載の方法。
  100. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項９４に記載の方法。
  101. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項９４に記載の方法。
  102. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換え、ヒト化、ＣＤＲグラフト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項９４に記載の方法。
  103. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項９４に記載の方法。
  104. サイトカインまたはケモカインが、ＩＦＮ－γ、ＧＲＯ、ＭＤＣ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＰ－１０、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるヒトサイトカインまたはケモカインである、請求項８９に記載の方法。
  105. サイトカインまたはケモカインが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬＦ、ＩＬ－１３、ＬＩＸ、ＩＬ－１５、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ－ａ、エオタキシン、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ｓＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項８９に記載の方法。
  106. 前記対象が、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを有する、請求項８９に記載の方法。
  107. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項８９に記載の方法。
  108. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項１０７に記載の方法。
  109. 対象における免疫療法関連毒性を治療または予防するための方法であって、前記対象にキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を投与することを含み、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化または遺伝子ノックアウトを有する（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）、方法。
  110. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＧＭ－ＣＳＦ発現のレベルと比較して、低下したレベルのＧＭ－ＣＳＦを発現する、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現された１つ以上のサイトカインおよび／またはケモカインのレベルよりも低いかまたは同等である１つ以上のサイトカインおよび／またはケモカインのレベルを発現する、請求項１０９に記載の方法。
  112. 前記１つ以上のサイトカインがＩＦＮ－γ、ＧＲＯ、ＭＤＣ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＰ－１０、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるヒトサイトカインおよび／またはケモカインである、請求項１０９に記載の方法。
  113. 前記１つ以上のサイトカインが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬＦ、ＩＬ－１３、ＬＩＸ、ＩＬ－１５、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ－ａ、エオタキシン、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ｓＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０９に記載の方法。
  114. 前記ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項１０９に記載の方法。
  115. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞で治療された対象の再発率と比較して再発率を改善する、請求項１０９に記載の方法。
  116. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与によって治療された対象と比較して、客観的応答率（完全応答および部分応答）を改善する、請求項１０９に記載の方法。
  117. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与によって治療された対象における無増悪生存期間と比較して、前記対象の無増悪生存期間を改善する、請求項１０９に記載の方法。
  118. 前記対象が、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを有する、請求項１０９に記載の方法。
  119. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストの抗腫瘍活性を増強する、請求項１０９に記載の方法。
  120. 前記ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞が、野生型ＣＡＲ－Ｔ細胞の投与によって治療された対象における生存と比較して、前記対象の全生存を改善する、請求項１０９に記載の方法。
  121. 前記対象が急性リンパ性白血病を有する、請求項１０９に記載の方法。
  122. 組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することをさらに含む、請求項１０９に記載の方法。
  123. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１２２に記載の方法。
  125. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１２４に記載の方法。
  126. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１２４に記載の方法。
  127. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１２４に記載の方法。
  128. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１２４に記載の方法。
  129. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１２８に記載の方法。
  130. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項１２８に記載の方法。
  131. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項１２８に記載の方法。
  132. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項１２８に記載の方法。
  133. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項１２８に記載の方法。
  134. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１２３に記載の方法。
  135. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項１３４に記載の方法。
  136. 免疫療法で治療された対象における再発率を低下させる、または腫瘍再発の発生を予防するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
  137. 前記対象が、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを有する、請求項１３６に記載の方法。
  138. 前記対象が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または化学療法抵抗性Ｂ細胞リンパ腫である難治性／再発性がんを有する、請求項１３６に記載の方法。
  139. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項１３６に記載の方法。
  140. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１３６に記載の方法。
  141. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１３６に記載の方法。
  142. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１３６に記載の方法。
  143. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１３６に記載の方法。
  144. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１３６に記載の方法。
  145. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１４４に記載の方法。
  146. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項１４４に記載の方法。
  147. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項１４４に記載の方法。
  148. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項１４４に記載の方法。
  149. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項１４４に記載の方法。
  150. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１３９に記載の方法。
  151. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項１５０に記載の方法。
  152. 前記ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞をｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストと組み合わせて投与することをさらに含む、請求項１３６に記載の方法。
  153. 前記ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウトを有し（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）、前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が、請求項１２～２５のいずれか１項に記載の方法によって不活性化またはノックアウトされる、請求項１３９に記載の方法。
  154. 免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を低減するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
  155. 前記対象が免疫療法関連毒性の発生を有する、請求項１５４に記載の方法。
  156. 前記免疫療法が、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１５４に記載の方法。
  157. 前記養子細胞移入が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、請求項１５６に記載の方法。
  158. 前記ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項１５７に記載の方法。
  159. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項１５４に記載の方法。
  160. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１５４に記載の方法。
  161. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合するか、または霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１６０に記載の方法。
  162. 前記霊長類が、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである、請求項１６１に記載の方法。
  163. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１５９に記載の方法。
  164. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される、請求項１６３に記載の方法。
  165. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１６３に記載の方法。
  166. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１６３に記載の方法。
  167. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項１６３に記載の方法。
  168. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項１６３に記載の方法。
  169. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項１６３に記載の方法。
  170. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項１６３に記載の方法。
  171. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する、請求項１６３～１７０のいずれか１項に記載の方法。
  172. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３およびＶＬ領域のＣＤＲ３を含む、請求項１６３～１７０のいずれかに記載の方法。
  173. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項１６３～１７０のいずれかに記載の方法。
  174. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、前記Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を含み、前記Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む、請求項１６３～１７０のいずれかに記載の方法。
  175. 前記Ｊセグメントが、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む、請求項１７４に記載の方法。
  176. 前記ＣＤＲ３が、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む、請求項１７４または１７５のいずれかに記載の方法。
  177. 前記ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである、請求項１７４または１７５のいずれかに記載の方法。
  178. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む、請求項１７４または１７５のいずれかに記載の方法。
  179. 前記Ｖセグメント配列が、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する、請求項１７４または１７５のいずれかに記載の方法。
  180. 前記ＶＨが、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する、請求項１７４または１７５のいずれかに記載の方法。
  181. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、前記アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項１６３に記載の方法。
  182. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む、請求項１８１に記載の方法。
  183. 前記ＶＬ領域のＣＤＲ３が、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む、請求項１８１または１８２に記載の方法。
  184. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項１８３に記載の方法。
  185. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む、請求項１８１に記載の方法。
  186. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む、請求項１８１に記載の方法。
  187. 前記ＶＬ領域が、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する、請求項１８１に記載の方法。
  188. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する、請求項１６３～１７０のいずれかに記載の方法。
  189. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項１８８に記載の方法。
  190. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項１８８に記載の方法。
  191. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１５９に記載の方法。
  192. 前記免疫療法関連毒性がＣＡＲ－Ｔ関連毒性である、請求項１５５記載の方法。
  193. 前記ＣＡＲ－Ｔ関連毒性が、サイトカイン放出症候群、神経毒性、神経炎症、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５５に記載の方法。
  194. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１５９に記載の方法。
  195. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項１９４に記載の方法。
  196. 免疫療法で治療された対象において血液脳関門の完全性を維持するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
  197. 前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１９６に記載の方法。
  198. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合するか、または霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項１９７に記載の方法。
  199. 前記霊長類が、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである、請求項１９８に記載の方法。
  200. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項１９７に記載の方法。
  201. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される、請求項２００に記載の方法。
  202. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２００に記載の方法。
  203. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２００に記載の方法。
  204. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項２００に記載の方法。
  205. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項２００に記載の方法。
  206. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項２００に記載の方法。
  207. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項２００に記載の方法。
  208. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する、請求項２００～２０７のいずれか１項に記載の方法。
  209. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３およびＶＬ領域のＣＤＲ３を含む、請求項２００～２０７のいずれかに記載の方法。
  210. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項２００～２０７のいずれかに記載の方法。
  211. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、前記Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を含み、前記Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む、請求項２００～２０７のいずれかに記載の方法。
  212. 前記Ｊセグメントが、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む、請求項２１１に記載の方法。
  213. 前記ＣＤＲ３が、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む、請求項２１１または２１２のいずれかに記載の方法。
  214. 前記ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである、請求項２１１または２１２のいずれかに記載の方法。
  215. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む、請求項２１１または２１２のいずれかに記載の方法。
  216. 前記Ｖセグメント配列が、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する、請求項２１１または２１２のいずれかに記載の方法。
  217. 前記ＶＨが、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する、請求項２１１または２１２のいずれかに記載の方法。
  218. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、前記アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項２００に記載の方法。
  219. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む、請求項２１８に記載の方法。
  220. 前記ＶＬ領域のＣＤＲ３が、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む、請求項２１８または２１９に記載の方法。
  221. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項２２０に記載の方法。
  222. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む、請求項２２０に記載の方法。
  223. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む、請求項２１８に記載の方法。
  224. 前記ＶＬ領域が、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する、請求項２１８に記載の方法。
  225. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する、請求項２００～２０７のいずれかに記載の方法。
  226. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項２２５に記載の方法。
  227. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項２２５に記載の方法。
  228. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１９６に記載の方法。
  229. 前記対象が免疫療法関連毒性を有する、請求項１９６に記載の方法。
  230. 前記免疫療法関連毒性がＣＡＲ－Ｔ関連毒性である、請求項２２９記載の方法。
  231. 前記ＣＡＲ－Ｔ関連毒性が、サイトカイン放出症候群、神経毒性、神経炎症、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２３０に記載の方法。
  232. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項１９６に記載の方法。
  233. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項２３２に記載の方法。
  234. それを必要とする対象におけるＣＡＲ－Ｔ細胞療法によって誘発される神経炎症を低減または予防するための方法であって、組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む、方法。
  235. 前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与することが、血液脳関門の破壊を低減し、それによりその完全性を維持する、請求項２３４に記載の方法。
  236. 前記血液脳関門の破壊を低減することが、中枢神経系への炎症誘発性サイトカインの流入を減少または予防する、請求項２３５に記載の方法。
  237. 前記炎症誘発性サイトカインがＩＦＮ－γ、ＧＲＯ、ＭＤＣ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＰ－１０、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ｓＣＤ４０Ｌ、ＶＥＧＦ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるヒトサイトカインである、請求項２３６に記載の方法。
  238. 前記炎症誘発性サイトカインが、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ７、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬＦ、ＩＬ－１３、ＬＩＸ、ＩＬ－１５、ＩＰ－１０、ＫＣ、ＭＣＰ－１、ＭＩＰ－１ａ、ＭＩＰ－１ｂ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＩＰ－２、ＭＩＧ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＮＦ－ａ、エオタキシン、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１Ｒａ、ＦＧＦ－２、ｓＣＤ４０Ｌ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２３６に記載の方法。
  239. 前記対象における神経炎症が、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法および対照抗体で治療された対象と比較して７５％～９５％減少する、請求項２３４に記載の方法。
  240. 前記神経炎症の７５％～９５％の減少が、未治療の対照対象における神経炎症と同様である、請求項２３９に記載の方法。
  241. 前記対象がキメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）を投与される、請求項２３４に記載の方法。
  242. 前記対象が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与される、請求項２３４に記載の方法。
  243. 前記ＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項２４１に記載の方法。
  244. 前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項２３４に記載の方法。
  245. 前記組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２３４に記載の方法。
  246. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合するか、または霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２４５に記載の方法。
  247. 前記霊長類が、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、類人猿、またはヒトである、請求項２４５に記載の方法。
  248. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２４６に記載の方法。
  249. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、免疫療法の前に、それと同時に、それの後に、またはそれらの組み合わせで投与される、請求項２４８に記載の方法。
  250. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２４８に記載の方法。
  251. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２４８に記載の方法。
  252. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項２４８に記載の方法。
  253. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項２４８に記載の方法。
  254. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項２４８に記載の方法。
  255. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項２４８に記載の方法。
  256. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体と同じエピトープに結合する、請求項２４８～２５５のいずれか１項に記載の方法。
  257. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域のＣＤＲ３およびＶＬ領域のＣＤＲ３を含む、請求項２４８～２５５のいずれかに記載の方法。
  258. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項２４８～２５５のいずれかに記載の方法。
  259. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、前記Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を含み、前記Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む、請求項２４８～２５５のいずれかに記載の方法。
  260. 前記Ｊセグメントが、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む、請求項２５９に記載の方法。
  261. 前記ＣＤＲ３が、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む、請求項２５９または２６０のいずれかに記載の方法。
  262. 前記ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである、請求項２５９または２６０のいずれかに記載の方法。
  263. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む、請求項２５９または２６０のいずれかに記載の方法。
  264. 前記Ｖセグメント配列が、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する、請求項２５９または２６０のいずれかに記載の方法。
  265. 前記ＶＨが、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する、請求項２５９または２６０のいずれかに記載の方法。
  266. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、前記アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項２４８に記載の方法。
  267. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む、請求項２４８に記載の方法。
  268. 前記ＶＬ領域のＣＤＲ３が、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬを含む、請求項２６６または２６７に記載の方法。
  269. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項２６８に記載の方法。
  270. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む、請求項２６８に記載の方法。
  271. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む、請求項２６８に記載の方法。
  272. 前記ＶＬ領域が、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する、請求項２６８に記載の方法。
  273. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する、請求項２４８～２５５のいずれかに記載の方法。
  274. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項２７３に記載の方法。
  275. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項２６８に記載の方法。
  276. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項２３４に記載の方法。
  277. 前記対象が、サイトカイン放出症候群、神経毒性、またはそれらの組み合わせから選択されるＣＡＲ－Ｔ関連毒性をさらに有する、請求項２３４に記載の方法。
  278. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物、で構成される群から選択される、請求項２３４に記載の方法。
  279. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項２７８に記載の方法。
  280. 免疫療法で治療された対象における血液脳関門破壊を予防または低減するための方法であって、ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子ノックアウトを有するＣＡＲ－Ｔ細胞（ＧＭ－ＣＳＦｋ／ｏＣＡＲ－Ｔ細胞）を前記対象に投与することを含む方法。
  281. 組換えｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することをさらに含む、請求項２８０に記載の方法。
  282. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項２８１に記載の方法。
  283. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２８２に記載の方法。
  284. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項２８３に記載の方法。
  285. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項２８３に記載の方法。
  286. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項２８３に記載の方法。
  287. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項２８２に記載の方法。
  288. 前記対象が、サイトカイン放出症候群、神経毒性、またはそれらの組み合わせから選択されるＣＡＲ－Ｔ関連毒性をさらに有する、請求項２８０に記載の方法。
  289. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体または受容体サブユニット、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項２８２に記載の方法。
  290. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項２８９に記載の方法。
  291. 前記ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞をｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストと組み合わせて投与することをさらに含み、前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が、請求項１２～２５のいずれか１項に記載の方法によって不活性化またはノックアウトされている、請求項２８０に記載の方法。
  292. 免疫療法で治療された対象における免疫療法に関連する毒性を予防または治療するためにｈＧＭ－ＣＦＳ発現を遮断または低減するための方法であって、組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを前記対象に投与することを含む方法。
  293. 前記免疫療法が、養子細胞移入、モノクローナル抗体の投与、サイトカインの投与、がんワクチンの投与、Ｔ細胞誘導療法、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２９２に記載の方法。
  294. 前記養子細胞移入が、キメラ抗原受容体発現Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）修飾Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾ナチュラルキラー細胞、もしくは樹状細胞、またはそれらの任意の組み合わせを投与することを含む、請求項２９３に記載の方法。
  295. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストがｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストである、請求項２９２に記載の方法。
  296. 前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２９２に記載の方法。
  297. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２９２～２９４のいずれかに記載の方法。
  298. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が霊長類ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２９６に記載の方法。
  299. 前記霊長類が、サル、ヒヒ、マカク、チンパンジー、ゴリラ、キツネザル、ロリス、メガネザル、ガラゴ、ポット、シファカ、インドリ、アイアイ、または類人猿から選択される、請求項２９８に記載の方法。
  300. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が哺乳動物ＧＭ－ＣＳＦに結合する、請求項２９６に記載の方法。
  301. 前記抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体が抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体である、請求項２９６に記載の方法。
  302. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項３０１に記載の方法。
  303. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、ｓｃＦｖ、またはｄＡＢである抗体断片である、請求項３０１に記載の方法。
  304. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒトＧＭ－ＣＳＦ中和抗体である、請求項３０１に記載の方法。
  305. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、組換えまたはキメラ抗体である、請求項３０１に記載の方法。
  306. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項３０１に記載の方法。
  307. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２と同じエピトープに結合する、請求項３０１～３０２のいずれか１項に記載の方法。
  308. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２のＶＨ領域のＣＤＲ３およびＶＬ領域のＣＤＲ３を含む、請求項３０１～３０２のいずれかに記載の方法。
  309. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、キメラ１９／２のＶＨ領域およびＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む、請求項３０１～３０２のいずれかに記載の方法。
  310. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、Ｊセグメント、およびＶセグメントを含むＶＨ領域であって、前記Ｊセグメントが、ヒトＪＨ４（ＹＦＤ ＹＷＧＱＧＴＬ ＶＴＶＳＳ）に対して少なくとも９５％の同一性を含み、前記Ｖセグメントが、ヒト生殖系列ＶＨｌ １－０２もしくはＶＨｌ １－０３配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む、ＶＨ領域、またはＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹを含むＶＨ領域を含む、請求項３０１～３０２のいずれかに記載の方法。
  311. 前記Ｊセグメントが、ＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳを含む、請求項３１０に記載の方法。
  312. 前記ＣＤＲ３が、ＲＱＲＦＰＹＹＦＤＹまたはＲＤＲＦＰＹＹＦＤＹを含む、請求項３１０または３１１のいずれかに記載の方法。
  313. 前記ＶＨ領域のＣＤＲ１が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ１であるか、前記ＶＨ領域のＣＤＲ２が、ヒト生殖系列ＶＨｌ ＣＤＲ２であるか、または前記ＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方が、ヒト生殖系列ＶＨｌ配列からのものである、請求項３１０または３１１のいずれかに記載の方法。
  314. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域に示される、ＶＨ ＣＤＲ１、またはＶＨ ＣＤＲ２、またはＶＨ ＣＤＲ１とＶＨ ＣＤＲ２の両方を含む、請求項３１０または３１１のいずれかに記載の方法。
  315. 前記Ｖセグメント配列が、図１に示されるＶＨ Ｖセグメント配列を有する、請求項３１０または３１１のいずれかに記載の方法。
  316. 前記ＶＨが、図１に記載されるＶＨ＃１、ＶＨ＃２、ＶＨ＃３、ＶＨ＃４、またはＶＨ＃５の配列を有する、請求項３１０または３１１のいずれかに記載の方法。
  317. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、前記アミノ酸配列ＦＮＫまたはＦＮＲを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項３０１～３０６のいずれかに記載の方法。
  318. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ヒト生殖系列ＪＫ４領域を含む、請求項３１３～３１５に記載の方法。
  319. 前記ＶＬ領域のＣＤＲ３が、ＱＱＦＮ（Ｋ／Ｒ）ＳＰＬＴを含む、請求項３１７または３１８に記載の方法。
  320. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を含む、ＶＬ領域を含む、請求項３１９に記載の方法。
  321. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＬ領域のＣＤＲ１、またはＣＤＲ２、またはＣＤＲ１とＣＤＲ２の両方を含む、請求項３１７に記載の方法。
  322. 前記ＶＬ領域が、図１に示されるＶＫＩＩＩ Ａ２７ Ｖセグメント配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するＶセグメントを含む、請求項３１７に記載の方法。
  323. 前記ＶＬ領域が、図１に記載されるＶＫ＃１、ＶＫ＃２、ＶＫ＃３、またはＶＫ＃４の配列を有する、請求項３１７に記載の方法。
  324. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、ＶＨ領域のＣＤＲ３結合特異性決定基ＲＱＲＦＰＹまたはＲＤＲＦＰＹ、およびＱＱＦＮＫＳＰＬＴを含むＣＤＲ３を有するＶＬ領域を有する、請求項３０１～３０６のいずれかに記載の方法。
  325. 前記抗ｈＧＭ－ＣＳＦ抗体が、図１に記載されるＶＨ領域配列、および図１に記載されるＶＬ領域配列を有する、請求項３０１～３０６のいずれかに記載の方法。
  326. 前記ＶＨ領域もしくは前記ＶＬ領域、または前記ＶＨおよびＶＬ領域の両方のアミノ酸配列が、Ｎ末端にメチオニンを含む、請求項３０１～３０６のいずれかに記載の方法。
  327. 前記ｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストが、抗ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体抗体または可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体、シトクロムｂ５６２抗体模倣物、ｈＧＭ－ＣＳＦペプチド類似体、アドネクチン、リポカリン足場抗体模倣物、カリックスアレーン抗体模倣物、および抗体様結合ペプチド模倣物で構成される群から選択される、請求項２９５に記載の方法。
  328. 前記可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体が、可溶性ｈＧＭ－ＣＳＦ受容体－Ｆｃ融合タンパク質を含む、請求項３２７に記載の方法。
  329. 前記ＣＡＲ－Ｔ細胞がＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞である、請求項２９２に記載の方法。
  330. ｈＧＭ－ＣＦＳ発現を遮断または低減することは、前記対象における再発率をさらに低下させるか、または腫瘍再発の発生を予防し、前記対象における再発率の低下または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生がない場合に起きる、請求項２９２に記載の方法。
  331. 前記免疫療法関連毒性の発生のある免疫療法で治療された対象において再発率を低下させるか、または腫瘍再発の発生を予防することが、免疫療法関連毒性の発生があるときに起きる、請求項３２９に記載の方法。
  332. 前記免疫療法関連毒性がＣＡＲ－Ｔ関連毒性である、請求項３３０記載の方法。
  333. 前記ＣＡＲ－Ｔ関連毒性がサイトカイン放出症候群、神経毒性、または神経炎症である、請求項３３１に記載の方法。
  334. 前記免疫療法で治療され、かつ組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与されていない対象における腫瘍再発の発生と比較して、前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の４分の１年において前記腫瘍再発の発生が５０％～１００％減少する、請求項３３０に記載の方法。
  335. 前記腫瘍再発の発生が、前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の半年で５０％～９５％減少する、請求項３３０に記載の方法。
  336. 前記腫瘍再発の発生が、前記組換えＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストを投与した後の最初の１年で５０％～９０％減少する、請求項３３０に記載の方法。
  337. 前記腫瘍再発の発生が長期的に予防される、請求項３３０に記載の方法。
  338. 前記腫瘍再発の発生が１２～３６ヶ月予防される、請求項３３０に記載の方法。
  339. 前記腫瘍再発の発生が完全に（１００％）予防される、請求項２９２に記載の方法。
  340. 前記対象が、急性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または濾胞性リンパ腫に起因するＤＬＢＣＬを有する、請求項２９２に記載の方法。
  341. 前記対象が急性リンパ性白血病を有する、請求項２９２に記載の方法。
  342. ＧＭ－ＣＳＦ Ｋ／Ｏ ＣＡＲ Ｔ細胞をｈＧＭ－ＣＳＦアンタゴニストと組み合わせて投与することをさらに含み、前記ＧＭ－ＣＳＦ遺伝子が、標的化ゲノム編集またはＧＭ－ＣＳＦ遺伝子サイレンシングを含む細胞におけるＧＭ－ＣＳＦ遺伝子不活性化またはＧＭ－ＣＳＦノックアウト（ＫＯ）の方法によって、不活性化またはノックアウトされている、請求項２９２に記載の方法。
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