JP2022501336A

JP2022501336A - ｍＲＮＡ治療薬を使用したがんを治療するための方法及び組成物

Info

Publication number: JP2022501336A
Application number: JP2021514344A
Authority: JP
Inventors: ジョシュア・フレデリック; スシュマ・グルムルティ; アンキタ・ミシュラ; アイリン・バイ
Original assignee: ModernaTx Inc
Current assignee: ModernaTx Inc
Priority date: 2018-09-14
Filing date: 2019-09-13
Publication date: 2022-01-06
Also published as: CN113015540A; US20230081530A1; EP3849589A1; WO2020056304A1; AU2019338535A1; CA3112781A1

Abstract

本開示は、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、ＩＬ−１２ポリペプチド、ＩＬ−１５ポリペプチド、及びこれらの組み合わせをコードする１種または複数種のｍＲＮＡを使用して、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを含むがんを治療するための方法を特徴とする。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１８年９月１４日出願の米国仮出願連番第６２／７３１，３３５号、２０１８年１１月２０日出願の米国仮出願連番第６２／７７０，０２４号、及び２０１９年７月３１日出願の米国仮出願第６２／８８１，３２２号の利益を主張する。上で参照した出願の全ての内容はこの参照により本明細書に組み込まれる。

がんは体内における無秩序な細胞分裂及び増殖を特徴とする疾患である。米国では、全女性のおおよそ３分の１及び全男性のおおよそ半数が自身の一生中にがんを経験する。がんは一般的に、２つのカテゴリー、固形腫瘍及び播種性がんに分類することができる。それぞれのタイプは、有効な治療アプローチを開発するための異なる検討を必要とする。

播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などは、かなりの集団のがんに相当し、米国内だけで毎年３０，０００件を超える新たな症例が診断されており、その５年生存率はわずか約２０％である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の症例は約６０，０００〜１７０，０００件あり、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へと進行する場合がある。播種性がん、例えば、ＡＭＬを含む骨髄性悪性腫瘍などのための治療選択肢は限られており、従来のアプローチ、例えば、化学療法剤及び／または免疫調節サイトカインまたは免疫調節抗体などはＡＭＬに対してあまり有効ではない。例えば、インターロイキン−２治療薬単独では、ＡＭＬ患者の寛解維持療法において有効ではないことが判明している（Ｂｕｙｓｅ，Ｍ．ｅｔａｌ．（２０００）Ｂｌｏｏｄ１１７：２６）。同様に、薬剤リノミドは自家骨髄移植後のＡＭＬ患者においてプラセボを超える効果を示さないことが判明している（Ｓｉｍｏｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔａｌ．（２０１１）ＢｏｎｅＭａｒｒｏｗＴｒａｎｓｐｌ．２５：１１２１）。様々な治療選択肢があるにもかかわらず、再発性または難治性のＡＭＬを有する患者の予後は概ね不良である。

固形腫瘍の治療としては、外科手術、化学療法及び／または放射線療法が挙げられる。外科手術では、腫瘍の大部分または更に浸潤器官を切除する。化学療法は、がん細胞を破壊する薬剤の使用を含む。化学療法で治療可能ながんもあれば、そうではないがんもある。化学療法剤は、がん細胞だけでなくその他の急速に分裂している正常細胞、例えば、胃腸管、骨髄、毛嚢、及び生殖系における正常細胞などにも影響を及ぼす場合があり、それにより数種類の副作用がもたらされる場合がある。放射線療法は、がんを治療するＸ線の使用を含む。放射線療法で治療可能なものもあれば、そうではないものもある。現在用いられている標準治療、例えば、化学療法及び放射線療法などがもたらす多くの望ましくない結果に対し、遺伝子療法及び免疫療法のアプローチは、疾患を診断、治療、及び管理するためのより的を絞ったアプローチを提供する。それゆえ、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどを含むがんを治療するための優れた治療アプローチが求められている。

本開示は、対象におけるがんを治療するための方法及び組成物に関する。本開示は少なくとも部分的に、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を誘導する１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡ及び１種または複数種の細胞結合共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与することにより、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）などにおける抗腫瘍効果がもたらされるという発見に基づいている。２種の細胞結合サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与することにより抗腫瘍効果が向上することもまた発見された。ｍＲＮＡの組み合わせは、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を効果的に誘導するための様々なシグナルをもたらす。

更に、本開示は、トランス提示ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを提供する。ＩＬ−１５は、その高親和性受容体であるＩＬ−１５Ｒαに結合した状態で存在する独特なサイトカインである。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、細胞表面を往復し、β／γＣ受容体複合体を介して相対する細胞を刺激する。それゆえ、理論に束縛されるものではないが、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ（共に、例えば、ＩＬ−１５Ｒαに機能的に連結したＩＬ−１５のポリペプチド融合物をコードする単一のｍＲＮＡとして、または別々に、例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒαをそれぞれがコードする２種の独立したｍＲＮＡとして）は、トランス提示をもたらすことにより、β／γＣ受容体複合体を有する相対する細胞を刺激する。

理論に束縛されるものではないが、１種または複数種の細胞結合サイトカイン及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせは、それら細胞結合サイトカイン及び共刺激分子がより強力ながん細胞：免疫細胞接合部を形成して、それらが相互作用する細胞（例えば、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の高い長期的または持続的な活性化をもたらす能力により、可溶性サイトカイン（複数可）または同一サイトカインの分泌形態と比較して、固形腫瘍及び、骨髄性悪性腫瘍を含む播種性がんに対する高い抗腫瘍効果をもたらす。Ｔ細胞の活性化には、３つのシグナル：ＭＨＣのペプチドとの相互作用がもたらすシグナル１、共刺激分子、例えば、ＯＸ４０Ｌなどがもたらすシグナル２、及び、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５などを含む免疫増強分子がもたらすシグナル３が必要となる。Ｔ細胞が促進する抗腫瘍免疫を確立するためには、３つ全てのシグナルが必要となる。しかしながら、腫瘍微小環境では、Ｔ細胞を活性化して抗腫瘍免疫応答を増強するために必要なシグナルがもたらされない場合が多い。細胞（例えば、白血病細胞または抗原提示細胞、例えば、樹状細胞など）によるｍＲＮＡの発現によって、共刺激分子、例えば、ヒトＯＸ４０ＬなどをコードするｍＲＮＡを、１種または複数種の細胞結合免疫増強分子をコードするｍＲＮＡ、例えば、シグナル３をもたらす１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡと組み合わせて、腫瘍微小環境中のＴ細胞に供給することにより、Ｔ細胞を活性化させて抗腫瘍免疫応答を誘導する。更に、ｍＲＮＡを発現する細胞へのサイトカイン及び共刺激分子の曝露を制限することにより、全身曝露、及び潜在的に望ましくない毒性が回避される。

ＡＭＬについては、白血病細胞が共刺激分子ＣＤ８０及びＣＤ８６の発現を抑制及び／または下方制御していることが知られている（Ｙａｈｏ，Ｓ．ａｎｄＣｈｅｎ，Ｌ．，ＥｕｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３，４３（３）：５７６−５７９；及びＨｉｒａｎｏＮ，ｅｔａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１９９６，１０：１１６８−１１７６）。ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを投与することにより、例えば、共刺激シグナルが存在していないまたは存在していても下方制御されていることがある樹状細胞などに強力な共刺激シグナルをもたらし、既存の共刺激シグナルを増強または向上させて、Ｔ細胞とＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを発現する白血病細胞及び／または樹状細胞の間のより強力な接合部をもたらして、Ｔ細胞による抗腫瘍免疫応答を誘導することができる。本明細書に記載するとおり、共刺激分子をコードするｍＲＮＡ（例えば、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）の量を１０分の１に低下させているにもかかわらず、共刺激分子を用いない治療と比較して強力な抗腫瘍効果がもたらされ、その結果、本明細書に記載の理論が証明された。

重要なことに、１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを全身投与することにより、造血組織を移植した播種性がんモデルにおいて、ＡＭＬ患者において認められるのと類似した様式で持続的な抗がんメモリー応答が誘導された。このモデルでは、抗がん免疫応答により疾患の再燃及び再発が予防された。この作用は、播種性がんモデルにおいて初めて実証された、ｍＲＮＡ治療薬の投与による抗がんメモリー応答であると考えられる。

本明細書において更に実証されたのは、分割投与レジメンの予想外な効果である。複数回の用量、すなわち、３回以上の用量に分割され、同一の治療期間中に毎週の単回用量で投与された同一用量のｍＲＮＡが、播種性がんモデルにおいて、単回用量と比較して、持続的な抗がんメモリー応答の誘導を含む高い抗がん効果をもたらすことが発見された。理論に束縛されるものではないが、このような分割投与により、対象におけるｍＲＮＡコードポリペプチドへのより多いまたは高い曝露がもたらされ、その結果として、毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果が向上し得る。

本明細書に記載するとおり、体内分布試験により、ｍＲＮＡ封入脂質ナノ粒子が白血病細胞だけでなく樹状細胞を含む様々な免疫細胞に取り込まれていることが示された。これらの試験は、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせ療法が、かなりの骨髄集団を有するがん、例えば、ＡＭＬなどに加えて多発性骨髄腫及びＢ細胞性白血病を含む様々な播種性がんを治療するのに有用となり得ることを示唆している。

本明細書に記載の組み合わせ療法はまた、様々な腫瘍微小環境を有する動物モデルの固形腫瘍における抗腫瘍免疫を確立するのに効果的であることが示された。理論に束縛されるものではないが、免疫チェックポイント抵抗性腫瘍モデル及び免疫抑制性腫瘍モデルにおいて認められた抗腫瘍効果が、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの投与後におけるＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、及び樹状細胞活性化の効果を証明しているものと考えられる。本明細書で開示するとおり、１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの投与により、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）における自然免疫及び適応免疫の細胞集団が活性化及び増加することに加え、ＮＨＰにおける免疫活性化サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ及びＣＸＣＬ）の発現が誘導される。本明細書で開示するとおり、ｍＲＮＡの組み合わせを投与した際にＤＣ細胞集団が活性化及び増殖したが、異常ＤＣ機能を有するＡＭＬの動物モデルにおける抗腫瘍効果にとって機能性ＤＣは必要ではなかった。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＩＦＮ−γを枯渇させた動物を用いた実験が疾患負荷量の増加及び生存率の低下をもたらしたことから、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの投与が関与する抗腫瘍効果には、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞に加えてＩＦＮ−γが必要である。

更に、組み合わせ療法薬の固形腫瘍への腫瘍内投与により、遠い未治療腫瘍に対して効果的な抗腫瘍免疫応答を示すアブスコパル効果が誘導されることが判明した。

それゆえ、本明細書では、細胞結合サイトカインをコードする２種またはそれ以上のｍＲＮＡ（複数可）及び特定の免疫細胞を活性化させることによりがんに対する免疫応答を増強させる共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供することによる、がん（例えば、固形腫瘍及び／または播種性がん）を治療するための組成物及び方法を提供する。骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどを含むがんは、様々なメカニズムにより免疫応答を回避することが知られている。本開示の組成物及び方法は、がん、例えば、固形腫瘍及び／または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどに対する自然免疫を活性化させる、適応免疫を活性化させる、及び／またはメモリー応答を活性化させるのに有用である。一部の態様では、ｍＲＮＡは修飾ｍＲＮＡである。

それゆえ、一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に投与することを含む、ヒト患者におけるがんを治療するための方法を提供する。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に投与することを含む、ヒト患者におけるがんを治療するための方法を提供し、
第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与することを含む、がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。

上記または関連する態様のいずれかでは、がんは播種性がんであり、第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは全身投与される。一部の態様では、播種性がんは血液がんである。一部の態様では、播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される。その他の態様では、がんは固形腫瘍であり、第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは腫瘍内投与される。

その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、腫瘍内で）ことを含む、固形腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、静脈内注射により、例えば、全身的に）ことを含む、播種性がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、静脈内注射により、例えば、全身的に）ことを含む、骨髄性悪性腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。

上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に全身投与することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、
第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。

その他の態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を患者に全身投与することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、ＬＮＰは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を含む。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。

更なる態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ及び免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡを含む第１の分割用量の医薬組成物（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、及び、
（ｉｉ）少なくとも１回の第２の分割用量の医薬組成物、
を含む投与レジメンを患者に実施することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、
第１の分割用量及び第２の分割用量は、同一投与期間中の単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して、患者におけるｍＲＮＡコードポリペプチドへの曝露を増加させることにより、患者における播種性がんを治療する。一部の態様では、第１の分割用量及び第２の分割用量は、単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して治療の抗腫瘍効果を向上させる。一部の態様では、第１の分割用量及び第２の分割用量は、毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果を向上させる。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。

上記または関連する態様のいずれかでは、細胞結合サイトカインは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドである。その他の態様では、細胞結合サイトカインはトランス提示ヒトＩＬ−１５である。一部の態様では、トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである。その他の態様では、トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている。

上記または関連する態様のいずれかでは、ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）内に配合される。上記または関連する態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは別々のＬＮＰ内に配合される。

一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。更にその他の態様では、ＬＮＰは、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。更なる態様では、ＬＮＰは、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む。

一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。その他の態様では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される。一部の態様では、イオン性脂質は化合物Ｘを含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、ＬＮＰは、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である。一部の態様では、ＬＮＰは、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。その他の態様では、ＬＮＰは、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは、フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の態様では、フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール

またはその塩もしくはエステルである。

その他の態様では、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

一部の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。その他の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。

一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：２０：１８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。上記または関連する態様のいずれかでは、がんは播種性がんである。一部の態様では、播種性がんは血液がんである。一部の態様では、播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である。

上記または関連する態様のいずれかでは、骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである。

上記または関連する態様のいずれかでは、がんは固形腫瘍である。一部の態様では、固形腫瘍はチェックポイント阻害剤療法に対して反応を示さない。一部の態様では、固形腫瘍は免疫抑制性腫瘍微小環境を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも２種のｍＲＮＡは腫瘍内投与される。一部の態様では、少なくとも２種のｍＲＮＡは静脈内投与される。一部の態様では、ｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に封入されており、腫瘍内注射に好適な液剤中に配合される。一部の態様では、ｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に封入されており、静脈内注射に好適な液剤中に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは１種または複数種の別々のＬＮＰ内に封入されており、腫瘍内注射に好適な液剤中に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは１種または複数種の別々のＬＮＰ内に封入されており、静脈内注射に好適な液剤中に配合される。

上記または関連する態様のいずれかでは、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するための方法は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または抗体をコードするｍＲＮＡである。一部の態様では、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである。一部の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブである。一部の態様では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである。

その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を含むＬＮＰを提供する。

その他の態様では、本開示は、
（ｉ）イオン性脂質、
（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０をコードする第１のｍＲＮＡ、
（ｉｖ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
（ｖ）任意選択的に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び、
（ｖｉ）任意選択的に、ＰＥＧ脂質、
を含むＬＮＰを提供する。

一部の態様では、本開示は、少なくとも２種の封入メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含むＬＮＰを提供し、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本開示は脂質ナノ粒子を提供し、ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。

一部の態様では、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。

一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、を含む脂質ナノ粒子を提供する。

一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第１の脂質ナノ粒子、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第２の脂質ナノ粒子、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第３の脂質ナノ粒子、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第４の脂質ナノ粒子、を含む組成物を提供する。

一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第１の脂質ナノ粒子、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第２の脂質ナノ粒子、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第３の脂質ナノ粒子、を含む組成物を提供する。

上記または関連する態様のいずれかでは、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。

上記または関連する態様のいずれかでは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む。一部の態様では、ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している。一部の態様では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列または配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列または配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。一部の態様では、ＩＬ−１２ＢポリペプチドはＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端またはペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、ＩＬ−１２ＡポリペプチドはＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端またはペプチドリンカーの５’末端に位置している。

一部の態様では、膜ドメインは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している。その他の態様では、膜ドメインは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している。一部の態様では、膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される。

一部の態様では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む。

その他の態様では、膜ドメインは細胞内ドメインを含む。一部の態様では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している。その他の態様では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している。一部の態様では、細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される。

一部の態様では、細胞内ドメインは、配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである。一部の態様では、細胞内ドメインは、Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである。一部の態様では、Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは、配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は、配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む。その他の態様では、細胞内ドメインは、配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである。

一部の態様では、膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む膜ドメインを含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡはｓｕｓｈｉドメインを含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、ｓｕｓｈｉドメイン、細胞内ドメイン、及び膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαに由来している。その他の態様では、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインは非相同ポリペプチドに由来している。

一部の態様では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。

一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。

一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列または配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列または配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。

その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは配列番号：１７に記載のアミノ酸配列を含む）、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、
を含むＬＮＰを提供し、
ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。

一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列または配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
を含むＬＮＰを提供し、
ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。

一実施形態では、ＬＮＰは、０．１〜１：０．１〜１：０．１〜１の範囲の重量（質量）比率のＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−１５＋ＩＬ−１５Ｒａ：ＩＬ−１２を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、１：１：１の重量（質量）比率のＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５＋ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡを含む。一部の態様では、ＬＮＰは、１：１：１の重量（質量）比率のＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡを含む。一部の態様では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量は、ＬＮＰ内における残りのｍＲＮＡの量の１０分の１である。

上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは腫瘍内送達用に製剤化される。その他の態様では、ＬＮＰは静脈内送達用に製剤化される。

一部の態様では、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される。一部の態様では、イオン性脂質は化合物Ｘを含む。

一部の態様では、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。

一部の態様では、脂質ナノ粒子内のＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。

一部の態様では、ＬＮＰは、フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の態様では、フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール

またはその塩もしくはエステルである。

一部の態様では、ＬＮＰは、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：２０：１８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。

上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の態様では、３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む。一部の態様では、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位である。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む。上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。

上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の態様では、５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む。

上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む。一部の態様では、化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される。

上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである。一部の態様では、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである。一部の態様では、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである。

一部の態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、本開示は、播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、本開示は、固形腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを投与することを更に含む。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または抗体をコードするｍＲＮＡである。一部の態様では、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである。一部の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブである。一部の態様では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである。

その他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。その他の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。更にその他の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。

一部の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。

更なる態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。更なる態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。更なる態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。

一部の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象における免疫応答を向上させるための方法を提供する。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象における免疫細胞活性化を向上させるための方法を提供する。一部の態様では、免疫細胞活性化は、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を含む。

その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象におけるＮＫ細胞活性化を向上させるための方法を提供する。

上記の方法のいずれかでは、対象は骨髄性悪性腫瘍を有する。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである。上記の方法のいずれかでは、対象は固形腫瘍を有する。

上記の態様のいずれかでは、方法は、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを投与することを更に含む。

上記の態様のいずれかでは、本明細書に記載のｍＲＮＡ、医薬組成物、またはＬＮＰは、（ａ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または樹状細胞（ＤＣ）の集団を増加させること、（ｂ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／またはＤＣの増殖を増強させること、（ｃ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または樹状細胞の活性化を向上させること、（ｄ）ＤＣの成熟を促進させること、（ｅ）治療対象における疾患負荷量を低下させること、（ｆ）治療対象の生存率を高めること、（ｇ）ＩＦＮγまたはＩＰ１０の発現を増加させること、及び（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組み合わせ、からなる群から選択される１つまたは複数の活性を有する。

上記の態様のいずれかでは、本明細書に記載のｍＲＮＡ、医薬組成物、またはＬＮＰが影響を及ぼすＤＣ集団は、ＣＤ８＋ｃＤＣ１集団、ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１集団、ｃＤＣ２集団、またはｉＤＣ集団である。

ヒト血清の不在下または存在下における、異なるＰＥＧ修飾脂質（ＰＥＧＤＭＧまたは化合物４２８）を含有する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）のＡＭＬ細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−１）へのｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効果を示すグラフを提供する。ヒト血清の存在下における、異なるＰＥＧ修飾脂質（ＰＥＧＤＭＧまたは化合物４２８）を含有するＬＮＰの原発性ＡＭＬ試料へのｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効果を示すグラフを提供する。Ａは、Ｐ３８８Ｄ１ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたマウスＯＸ４０Ｌ（ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。Ｂは、Ｐ３８８Ｄ１ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。Ｃは、Ｐ３８８Ｄ１ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びマウスＩＬ−１２（ｍＩＬ−１２）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。Ａは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。ＩＬ−１５ポリペプチド（左）及び、ｓｕｓｈｉドメイン及び膜貫通ドメインを含むＩＬ−１５Ｒαポリペプチド（右）を示し、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメインに高親和性で結合することにより、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα発現細胞に限定する。Ｂは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。テザー型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、全長ＩＬ−１５Ｒαに連結することにより、ＩＬ−１５を細胞膜にテザーする。Ｃは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。分泌型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインに連結する。Ｄは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。テザー型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、非相同ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０）の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに連結したＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインに連結する。図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードするｍＲＮＡをリポフェクタミン２０００を用いてＨｅＬａ細胞にトランスフェクションした際の、上清中または溶解物中におけるＩＬ−１５のタンパク質発現を示す。図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードするｍＲＮＡをリポフェクタミン２０００を用いてトランスフェクションしたＨｅＬａ細胞と共培養した際の、Ｔ細胞の増殖を示す。図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードする異なるｍＲＮＡ型をＨｅＬａ細胞にトランスフェクションした際の、上清中または溶解物中におけるＩＬ−１５のタンパク質発現を示す。図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。上清中に分断したタンパク質のパーセント（上清発現／溶解物発現＋上清発現）を示す。Ａは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、ＮＳＴ−ｍＯＸ４０Ｌ（ＮＳＴ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｂは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｃは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｄは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、膜テザー型ｍＩＬ−１２（ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｅは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｆは、Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ａは、様々な単一薬剤（ｍＯＸ４０ＬｍＲＮＡまたはｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα ｍＲＮＡまたはｍＩＬ−１２ＴＭｍＲＮＡ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。Ｂは、様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα二重ｍＲＮＡをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。Ｃは、様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。Ａは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、マウスＯＸ４０Ｌ（すなわち、ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、細胞結合ヒトＩＬ−１５（すなわち、ｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型マウスＩＬ−１２（ＰＤＧＦＲ膜貫通ドメインに連結したｍＩＬ−１２、すなわち、ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせ（２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ）で静脈内治療されたマウスにおける疾患負荷量を示す。生物発光イメージング（ＢＬＩ）を示す。Ｂは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、マウスＯＸ４０Ｌ（すなわち、ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、細胞結合ヒトＩＬ−１５（すなわち、ｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型マウスＩＬ−１２（ＰＤＧＦＲ膜貫通ドメインに連結したｍＩＬ−１２、すなわち、ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせ（２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ）で静脈内治療されたマウスにおける疾患負荷量を示す。フローサイトメトリーで測定した血液中のＧＦＰ＋細胞の数を示す。ＡＭＬ細胞の移植の２１日後に、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせで静脈内治療したマウスの血液中における白血病負荷量の低下を示すグラフを提供する。フローサイトメトリーを用いて、血液中のＧＦＰ＋細胞の数（左）に加えてＣＤ４５＋細胞のＧＦＰ＋の％（右）を測定した。様々な投与レジメン（すなわち、１回（ＱＤ×１）の２ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に１回（Ｑ７Ｄ×３）の２ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に１回（Ｑ７Ｄ×３）の０．６７ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に３回（ＴＩＷ×３）の０．２２ｍｇ／ｋｇ）の、図９のマウス、及び、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせで治療したマウスを示すカプランマイヤー生存率グラフを提供する。様々な投与レジメンのｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせ療法に対して完全に応答し、ＡＭＬ細胞で再誘発された図９のマウスにおける、生物発光イメージング（ＢＬＩ）で測定した防御免疫を示すグラフを提供する。図１１に記載のＡＭＬ細胞で再誘発したマウスのカプランマイヤー生存率グラフを提供する。フローサイトメトリーで測定した、図１１に記載のＡＭＬ細胞で再誘発したマウスの血液中におけるＧＦＰ＋細胞の数を示すグラフを提供する。３回目の０．２２ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ用量の、化合物Ｘ及び化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）または化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡの静脈内投与の２４時間後に、ＡＭＬ細胞を有するマウスの末梢血、脾臓、または骨髄から単離した示す細胞型におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセンテージを示すグラフを提供する。第１の静脈内用量の６、２４、４８、及び５４時間後における、別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせを週に３回（ＴＩＷ）の０．２２ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの単回用量のいずれかの用量で投与されたマウスの、マウスＩＦＮγ（左）、内在性マウスＩＬ−１５／１５Ｒ（中央）、及びマウスＩＰ−１０（右）の血清サイトカインレベルを示すグラフを提供する。第１及び第２の静脈内ＴＩＷ用量の６及び２４時間後における、ＬＮＰ１またはＬＮＰ２内に配合された、ｍＯＸ４０Ｌ、細胞結合ｈＩＬ−１５、テザー型ｍＩＬ−１２、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２、細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２、またはｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２のいずれかをコードするｍＲＮＡを投与されたマウスの、マウスＩＦＮγ（左）及び内在性マウスＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ（右）の血清サイトカインレベルを示すグラフを提供する。Ａは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｂは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｃは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｄは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの単回腫瘍内用量を投与されたＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスの腫瘍容積を示すグラフを提供する。Ｂは、免疫チェックポイント阻害剤、すなわち、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体と組み合わせて、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの単回腫瘍内用量を投与されたＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスの腫瘍容積を示すグラフを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｃＤＣ２細胞数を提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｉＤＣ細胞数を提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｃＤＣ２細胞数を提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｉＤＣ細胞数を提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ｃＤＣ２細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ｉＤＣ細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ｃＤＣ２細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ｉＤＣ細胞のＣＤ８６ＭＦＩを提供する。ＡＭＬを有するＣ５７ＢＬ／６マウスまたはＢａｔｆ３ＫＯマウスの生存率を示すグラフを提供する。腫瘍保有Ｃ５７ＢＬ／６は、未治療とする、対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与する、または、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与した。腫瘍保有Ｂａｔｆ３ＫＯマウスには、０．２２ｍｇ／ｋｇの対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×３）投与した。対照ｍＲＮＡまたはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与してから、未治療としたマウス、アイソタイプｍＡｂで治療したマウス、または抗ＣＤ４＋ｍＡｂで治療したマウスの生存率を示すグラフを提供する。対照ｍＲＮＡまたはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与してから、未治療としたマウス、アイソタイプｍＡｂで治療したマウス、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療したマウスの生存率を示すグラフを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、単球上のＭＨＣＩＩ発現を単球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、単球上のＭＨＣＩＩ発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、骨髄細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を骨髄細胞のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、骨髄細胞上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、顆粒球上のＰＤ−Ｌ１発現を顆粒球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、顆粒球上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ａは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、単球上のＰＤ−Ｌ１発現を単球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ ｍＡｂで治療した後における、単球上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ａは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｂは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｃは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｄは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。Ｅは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。Ｆは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。Ａは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＮＫ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＮＫＴ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｃは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＣＤ８＋Ｔ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ａは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｃは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｄは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。

がんを治療するための特にエキサイティングなアプローチは、免疫療法として知られている、免疫応答を刺激する物質を用いた疾患の予防または治療を含む。当該技術分野においてはがん免疫学とも呼ばれる免疫療法は、腫瘍ではなく宿主免疫系を標的とする療法を導入することによってがん治療を根本から変え始めている。これらの療法は独特な薬理学的応答プロファイルを有しており、その結果、多くの異なるタイプのがんを治癒し得る療法となっている。その中でも肺、腎臓、膀胱、及び皮膚のがんでは、生存率または腫瘍応答の点でがん免疫学を用いた治療からかなりの効果を得ており、おそらくは黒色腫において最も優れた効果が示されている。

播種性がんは重大な健康問題であり、従来の療法では効果的に治療されていない。詳細には、転移性がん及び、通常は固形腫瘍を形成しない血液のがん、例えば、骨髄性悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）などを含む播種性がんは、様々なメカニズムにより免疫応答を回避することが知られており、その結果、効果的な免疫応答の発現が妨げられている。例えば、ＡＭＬは、ＮＫ阻害剤タンパク質を上方制御する、ＮＫ活性化リガンドを抑制する、及び／またはＮＫ細胞のアネルギーを誘導することによって、ＮＫ細胞の溶解を回避することが知られている。加えて、ＡＭＬにおいては体細胞変異の発生率が低く、狭い新生抗原スペクトルにつながることから、結果として、ＡＭＬ特異的Ｔ細胞応答が低下して抗腫瘍免疫が低下する（例えば、ＧｒｏｖｅａｎｄＶａｓｓｉｌｏｕ（２０１４）Ｄｉｓ．ＭｏｄｅｌｓＭｅｃｈ．７：９４を参照のこと）。

固形腫瘍を従来の療法（例えば、外科手術）を用いて治療できるとはいえ、数多くのがんはこのような療法に対して反応を示さないまたは再発する。更に、腫瘍微小環境は複雑であり、治療処置のアウトカムに影響を及ぼすことが多い。

それゆえ、がんを治療するのに有用な方法及び組成物、及びとりわけ、がんに対する免疫応答を増強する（例えば、ＮＫ細胞及び／またはＴ細胞により）方法及び組成物は、大いに注目されている。

本明細書では、特定の免疫細胞集団の刺激を必要とする対象においてそれを実施するための１種または複数種のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、修飾ｍＲＮＡ）を含む、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するのに使用する組成物を提供する。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも２種のｍＲＮＡ（例えば、修飾ｍＲＮＡ）を含む、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するのに使用する組成物を提供し、少なくとも２種のｍＲＮＡは、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチド、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチド、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、及びこれらの組み合わせをコードしている。一部の実施形態では、組成物は、
（ａ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｂ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｃ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｄ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｅ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｆ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｇ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む。

一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０ＬポリペプチドであるヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの膜貫通を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＯＸ４０Ｌの膜貫通、及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、膜テザー形態のヒトＩＬ−１２ポリペプチドであるヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしている。例えば、一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、膜ドメインは膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜ドメインは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは同一のポリペプチドに由来している。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは異なるポリペプチドに由来している。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、可溶性ヒトＩＬ−１５ポリペプチドであるヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡはヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードしており、その結果、細胞内におけるｍＲＮＡの発現時に膜テザー形態（例えば、複合体）のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαを形成する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡを提供し、その結果、別々のｍＲＮＡによってコードされた膜テザー形態（例えば、複合体）のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαを提供する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＩＬ−１５に対する高い親和性を有する、ｓｕｓｈｉドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ｓｕｓｈｉドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαをコードしている。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインはヒトＩＬ−１５Ｒαの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインはＩＬ−１５Ｒαに対して非相同である。

ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
ヒトＯＸ４０Ｌは、Ｔａｎａｋａｅｔａｌ．によって、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）に感染させたヒトリンパ球の表面上において初めて同定された（Ｔａｎａｋａｅｔａｌ．，ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＣａｎｃｅｒ（１９８５），３６（５）：５４９−５５）。ＯＸ４０ＬはＯＸ４０（ＣＤ１３４）のリガンドである。ＯＸ４０Ｌはまた、ＣＤ２５２（分化抗原群２５２）、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー４、ｔａｘ転写活性化糖タンパク質１、ＴＸＧＰ１、またはｇｐ３４と呼ばれている。ヒトＯＸ４０Ｌは、１８３アミノ酸長であり、３つのドメイン：アミノ酸１〜２３の細胞質ドメイン、アミノ酸２４〜５０の膜貫通ドメイン、及びアミノ酸５１〜１８３の細胞外ドメインを含有している。

一部の実施形態では、本開示の組成物または方法は、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドはマウスＯＸ４０Ｌポリペプチドである。一部の実施形態では、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドはヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドである。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列または配列番号：４〜１１に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドはＯＸ４０受容体に結合することができる。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ＯＸ４０受容体に結合することができる。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１から本質的になるヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ＯＸ４０受容体に結合することができる。

特定の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、任意選択的に１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、保存的置換は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＯＸ４０ＬポリペプチドはＯＸ４０受容体に結合する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。

その他の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：４〜１１に記載の核酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９〜１１のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９〜１１のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用なｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。更にその他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＯＸ４０Ｌの膜貫通、及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。

天然のシグナル配列及び配列番号：１〜１１に暗に開示されているプロペプチド配列（前駆体形態中に存在しその対応する成熟形態中に存在しない配列）ならびに非天然のシグナルペプチドに加えて、その他のシグナル配列を使用してもよいということを当業者は理解するであろう。それゆえ、ＯＸ４０Ｌポリペプチドまたは配列番号：１〜１１に記載のｍＲＮＡへの言及は、当該技術分野において周知の代替シグナルペプチド（またはコード配列）が上記ＯＸ４０Ｌポリペプチド（またはｍＲＮＡ）に結合したバリアントを包含する。本出願にわたる配列番号：１〜１１に開示されている配列への言及は、一様に使用可能であり、本出願提出時点における当該技術分野において周知のオルソログ及び機能的バリアント（例えば、多型バリアント）ならびにそれらの配列のアイソフォームを包含するということもまた理解されたい。

細胞結合サイトカインをコードするｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、細胞結合サイトカインをコードするｍＲＮＡを利用している。サイトカインは、細胞間の相互作用及びコミュニケーションに特定の影響を及ぼす、細胞が放出する小さな分泌型タンパク質である。可溶性サイトカインの望ましくない／オフターゲット効果及び潜在的な全身毒性を最小限とするために、本開示は、細胞結合サイトカインをコードする少なくとも１種のｍＲＮＡを利用している。細胞結合サイトカインは、天然または設計によるのいずれかで細胞表面に結合した細胞結合サイトカインである。例えば、一部の実施形態では、可溶性／分泌型サイトカインは膜貫通ドメインを含むように改変されており、その結果、可溶性／分泌型サイトカインは細胞表面に結合する。一部の実施形態では、サイトカインを細胞表面へと「アンカーすること」または「テザーすること」により、可溶性サイトカインの投与で一般的に認められる全身効果が抑制される。

一部の実施形態では、細胞結合サイトカインは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる。Ｔ細胞の活性化及びＮＫ細胞の活性化を測定するための方法は当業者に周知である。例えば、ＮＫ細胞の活性化及びＴ細胞の活性化は、例えば、フローサイトメトリーを用いて、ＮＫ細胞またはＴ細胞上の活性化マーカー（例えば、ＣＤ２５及びＣＤ６９）の表面発現を解析することによって測定することができる。

一部の実施形態では、細胞結合サイトカインとして好適なサイトカインは、ＩＬ−１２ファミリーメンバーである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ファミリーメンバーは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−２７、ＩＬ−３５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドである。

一部の実施形態では、細胞結合サイトカインとして好適なサイトカインは本明細書に記載のＩＬ−１５である。

テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを利用している。

インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、自然免疫及び適応免疫において重要な役割を果たす炎症性サイトカインである（Ｇａｔｅｌｙ，ＭＫｅｔａｌ．，ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１（１９９８））。ＩＬ−１２は主に、２つのジスルフィド結合したｐ３５（ＩＬ−１２Ａ）及びｐ４０（ＩＬ−１２Ｂ）サブユニットで構成される７０ｋＤａのヘテロ二量体タンパク質として機能する。ＮＫ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞の両方を活性化させるその能力により、ＩＬ−１２タンパク質は、１９９４年から有望な抗がん治療薬として研究されている。Ｎａｓｔａｌａ，Ｃ．Ｌ．ｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ１５３：１６９７−１７０６（１９９４）を参照されたい。

ＩＬ−１２に対する治療薬としての高い期待にもかかわらず、初期の臨床試験においては良好な結果がもたらされなかった（ＬａｓｅｋＷ．ｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ６３：４１９−４３５，４２４（２０１４））。ＩＬ−１２の反復投与により、ほとんどの患者において、適応応答及び血中ＩＬ−１２誘導インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベルの漸減がもたらされた（同上）。更に、ＩＬ−１２誘導抗がん活性の大部分にＩＦＮγの二次分泌が関与しているものと認識された一方で、その他のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）またはケモカイン（ＩＰ−１０またはＭＩＧ）と同調したＩＬ−１２によるＩＦＮγの付随誘導が重度の毒性を引き起こした（同上）。

ＩＬ−１２は通常、可溶性であるが、毒性を抑制するために、膜アンカー型のＩＬ−１２が作製されている。ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３３４３６号はテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡについて記載しており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。

それゆえ、一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、ヒトＩＬ−１２は膜ドメインに機能的に連結している。

一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドはマウスＩＬ−１２ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドはヒトＩＬ−１２ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、直接またはリンカーにより融合したＩＬ−１２Ｂポリペプチド及びＩＬ−１２Ａポリペプチドを含む単一のポリペプチド鎖を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、２種のポリペプチド、ＩＬ−１２Ｂを含む第１のポリペプチド及びＩＬ−１２Ａを含む第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示はＩＬ−１２Ａポリペプチド及びＩＬ−１２Ｂポリペプチドを提供し、ＩＬ−１２Ａポリペプチド及びＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、同一の鎖上にあるまたは異なる鎖上にある。

本開示で使用する場合、用語「ＩＬ−１２ポリペプチド」とは、例えば、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結した、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（すなわち、ＩＬ−１２Ｂ）、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（すなわち、ＩＬ−１２Ａ）、またはＩＬ−１２ｐ４０サブユニットポリペプチド及びＩＬ−１２ｐ３５サブユニットポリペプチドを含む融合タンパク質のことを意味する。一部の態様では、融合タンパク質は、
（ｉ）全長ＩＬ−１２Ｂポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−１２Ｂと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１２Ｂ野生型よりも短いがＩＬ−１２Ｂ機能活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１２Ｂタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１２Ｂポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１２Ｂ活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、Ｖ３３Ｉ、Ｖ２９８Ｆ、または当該技術分野において周知の任意のその他の天然バリアントもしくは合成バリアントなど））、または、
（ｉｖ）（ｉ）全長ＩＬ−１２Ｂ野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｉｉ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択されるＩＬ−１２Ｂポリペプチド、
及び／または、
（ｉ）全長ＩＬ−１２Ａポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−１２Ａと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ＩＬ−１２Ａポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１２Ａ野生型よりも短いがＩＬ−１２Ａ機能活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１２Ａタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１２Ａポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１２Ａ活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、当該技術分野において周知の天然バリアントまたは合成バリアントなど））、または、
（ｉｖ）（ｉ）全長ＩＬ−１２Ａ野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｉｉ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択されるＩＬ−１２Ａポリペプチド、
を含む。

一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列または配列番号：３４、３６、または４６に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドはＩＬ−１２受容体に結合することができる。

特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするＩＬ−１２ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１２ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１２ポリペプチドはＩＬ−１２受容体に結合する。

その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３４、３６、または４６に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

天然のシグナル配列及び配列番号：３３〜４０及び４６に暗に開示されているプロペプチド配列（前駆体形態中に存在しその対応する成熟形態中に存在しない配列）ならびに非天然のシグナルペプチドに加えて、その他のシグナル配列を使用してもよいということを当業者は理解するであろう。それゆえ、ＩＬ−１２ポリペプチドまたは配列番号：３３〜４０及び４６に記載のｍＲＮＡへの言及は、当該技術分野において周知の代替シグナルペプチド（またはコード配列）が上記ＩＬ−１２ポリペプチド（またはｍＲＮＡ）に結合したバリアントを包含する。本出願にわたる配列番号：３３〜４０及び４６に開示されている配列への言及は、一様に使用可能であり、本出願提出時点における当該技術分野において周知のオルソログ及び機能的バリアント（例えば、多型バリアント）ならびにそれらの配列のアイソフォームを包含するということもまた理解されたい。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＬ−１２ポリペプチドを細胞膜にテザーする（すなわち、アンカーする）膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン）を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、膜貫通ドメイン、及び任意選択的に細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。

一部の実施形態では、膜ドメインは内在性膜タンパク質に由来している。

内在性膜タンパク質としては、例えば、疎水性のαヘリックス構造またはβバレル（すなわち、βシート）構造を有するドメインを含む、タンパク質を細胞表面にテザーする１回貫通型または複数回貫通型の膜貫通ドメインを含有する内在性ポリトピック型タンパク質を挙げることができる。Ｉ型内在性膜タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）が細胞外空間に位置する一方で、ＩＩ型内在性膜タンパク質のカルボキシ末端（すなわち、Ｃ末端）は細胞外空間に位置している。

一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、内在性ポリトピック型タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、Ｉ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内ドメイン（すなわち、細胞の細胞内空間に局在するドメイン、例えば、細胞の細胞質に局在するドメイン）を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは膜貫通ドメインから切り離されている。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内ドメインを含まない膜ドメインを含む。

内在性膜タンパク質としてはまた、例えば、細胞膜全体には及んでいないがタンパク質を細胞表面にテザーしている膜ドメインを含有する内在性モノトピック型タンパク質を挙げることができる。一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、内在性モノトピック型タンパク質に由来する膜ドメインを含む。

一部の実施形態では、膜ドメインは、分化抗原群（ＣＤ）タンパク質、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ４、受容体、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、トランスフェリン受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）受容体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＴＣＲβ鎖、Ｆｃ受容体、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃεＲＩ、インターフェロン受容体、Ｉ型インターフェロン受容体、増殖因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＴＮＦ−α、Ｂ７−１、アシアロ糖タンパク質、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＩＣＡＭ−１、免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ウイルス糖タンパク質、狂犬病ウイルス糖タンパク質、呼吸器合胞体ウイルス糖タンパク質Ｇ（ＲＳＶＧ）、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶＧ）、ウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、インフルエンザＨＡ、ワクシニアウイルスＨＡ、またはこれらの任意の組み合わせに由来している。

一部の実施形態では、膜ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＰＤＧＦ−Ｒ膜貫通ドメイン、ＣＤ８０膜貫通ドメイン、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列は配列番号：４１〜４３に記載されている。

一部の実施形態では、膜ドメインは、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８α鎖（ＣＤ８ＡまたはＴリンパ球分化抗原Ｔ８／Ｌｅｕ−２としても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０１７３２の膜貫通を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４１に記載のＣＤ８膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６９に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６９に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、膜ドメインは、血小板由来増殖因子受容体β（ＥＣ：２．７．１０．１）（ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＰＤＧＦＲβ、β血小板由来増殖因子受容体、β型血小板由来増殖因子受容体、ＣＤ１４０抗原様ファミリーメンバーＢ、血小板由来増殖因子受容体１、ＰＤＧＦＲ−１、またはＣＤ１４０ｂとしても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０９６１９の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４２に記載のＰＤＧＦＲβ膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、膜ドメインは、Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０（活性化Ｂ７−１抗原、ＢＢ１、ＣＴＬＡ−４カウンター受容体Ｂ７．１、またはＢ７としても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３３６８１の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８０膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４３に記載のＣＤ８０膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメインは、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、またはこれらの任意の組み合わせに対して少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、膜ドメインは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞内において伝播シグナルとして機能することが知られている任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドである。一部の実施形態では、膜ドメインは、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドを安定させるための細胞内ドメインを含む。

本開示の方法及び組成物に有用な細胞内ドメインとしては、少なくとも、上記の、膜貫通ドメインが由来するポリペプチドのいずれかに由来する細胞内ドメインが挙げられる。例えば、好適な細胞内ドメインとしては、ＣＤ８０、ＰＤＧＦＲ、またはこれらの任意の組み合わせに由来する細胞内ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、膜ドメインは、血小板由来増殖因子受容体β（ＥＣ：２．７．１０．１）（ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＰＤＧＦＲβ、β血小板由来増殖因子受容体、β型血小板由来増殖因子受容体、ＣＤ１４０抗原様ファミリーメンバーＢ、血小板由来増殖因子受容体１、ＰＤＧＦＲ−１、またはＣＤ１４０ｂとしても周知）の細胞内ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０９６１９の細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４８に記載のＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態では、膜ドメインはＰＤＧＦＲβのトランケート細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβのトランケート細胞内ドメインは、野生型ＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインと比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドを安定させる。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４９に記載のトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：５０に記載のトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６３に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６３に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６４に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６４に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

その他の実施形態では、膜ドメインは、Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０（活性化Ｂ７−１抗原、ＢＢ１、ＣＴＬＡ−４カウンター受容体Ｂ７．１、またはＢ７としても周知）の細胞内ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３３６８１の細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８０細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４７に記載のＣＤ８０細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、同一のポリペプチドに由来する（すなわち、相同の）、膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、異なるポリペプチドに由来する（すなわち、非相同の）、膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及び細胞内ドメイン（例えば、ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン、またはＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン）を含む。

一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列（すなわち、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２Ｂ、またはＩＬ−１２ＡとＩＬ−１２Ｂの両方（テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内にその両方が含まれる場合）の任意のアミノ酸配列）のＣ末端側に位置している。語句「のＣ末端側に位置する」は、ポリペプチドのＣ末端に対する、ポリペプチド内のその他の配列を基準としたポリペプチド内における位置を示す。任意のＩＬ−１２アミノ酸配列「のＣ末端側」にある膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）とは、膜ドメインが、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列と比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドのＣ末端に近いところに位置していることを意味する。

一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、ＩＬ−１２ポリペプチドのＮ末端側に位置している。任意のＩＬ−１２アミノ酸配列「のＮ末端側」にある膜ドメインとは、膜ドメインが、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列と比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドのＮ末端に近いところに位置していることを意味する。

一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、リンカーによってＩＬ−１２ポリペプチドに連結されており、そのリンカーは、本明細書において、「膜ドメインリンカー」または「膜貫通ドメインリンカー」（膜ドメインが膜貫通ドメイン及び任意選択的に細胞内ドメインである場合）と呼ばれる。リンカーの非限定例については本明細書の他の箇所に開示されている。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメインは、ＩＬ−１２ポリペプチドに直接融合している。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５５に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５４に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５４に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８０膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８０膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５６〜６０のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５６〜６０のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。

細胞結合ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ
ＩＬ−１５は、４αヘリックスバンドルファミリーのサイトカインのメンバーであり、効果的な免疫応答の発現において重要な役割を果たしている（Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３：２１９−２２７（２０１５））。ＩＬ−１５は、ＮＫ細胞の適切な発現及びメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の長期的な維持に不可欠である。ＩＬ−１５遺伝子は、４８アミノ酸のシグナルペプチドを有する１６２アミノ酸前駆体タンパク質（成熟タンパク質は１１４アミノ酸長である）をコードしている（Ｂａｍｆｏｒｄ，Ｒ．Ｎ．，ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：２８９７−２９０２（１９９６））。例えば、ホモサピエンスＩＬ−１５転写バリアント３ｍＲＮＡ配列についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０００５８５、及び対応するＩＬ−１５アイソフォーム１プロタンパク質前駆体についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００５７６もまた参照されたい。

ＩＬ−１５は、インターロイキン−２（ＩＬ２）に対するある一定の構造類似性を共有している。ＩＬ−２と同様に、ＩＬ−１５は、ＩＬ−２受容体のβ鎖（ＣＤ１２２）及び共通γ鎖（ＣＤ１３２）を介してシグナルを伝達する。しかし、ＩＬ−２とは異なり、ＩＬ−１５は、ＣＤ１２２及びＣＤ１３２に単独で効果的に結合することができない。ＩＬ−１５は先ずＩＬ−１５α受容体サブユニット（ＩＬ−１５Ｒα）に結合する必要がある。ＩＬ−１５Ｒα遺伝子は、３０アミノ酸のシグナルペプチドを有する２６７アミノ酸前駆体タンパク質（成熟タンパク質は２３７アミノ酸長である）をコードしている。例えば、ホモサピエンスＩＬ−１５Ｒα転写バリアント１ｍＲＮＡについてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００２１８９、及びホモサピエンスＩＬ−１５Ｒαアイソフォーム１前駆体アミノ酸配列についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿００２１８０を参照されたい。

ヒトＩＬ−１５Ｒαは主に、細胞、例えば、活性化樹状細胞及び活性化単球などの表面上のＩＬ−１５に結合する膜貫通タンパク質である（Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３：２１９−２２７（２０１５））。次に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの膜結合複合体は、ＣＤ１２２サブユニット及びＣＤ１３２サブユニットにＩＬ−１５をトランスで提示する。それゆえ、ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５活性の不可欠な構成要素であり、その結果、ＩＬ−１５は通常、細胞結合サイトカインである。

それゆえ、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。

一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチド及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒα配列を基準とした置換、及び挿入及び／または付加、欠失、及び／または共有結合修飾を含有するバリアント、ペプチド、またはポリペプチドである。本明細書で言及する場合、用語「ＩＬ−１５ポリペプチド」とは成熟ＩＬ−１５ポリペプチド（すなわち、シグナルペプチド及びプロペプチドを含まない）のことを意味する。一実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドはシグナルペプチド及び／またはプロペプチドを含む。

用語「ＩＬ−１５Ｒαポリペプチド」は、本明細書で使用する場合、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのうちの少なくともｓｕｓｈｉドメイン及びヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのｓｕｓｈｉドメインは、配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの細胞外ドメインは、配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインは、配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、非相同ポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインを含む。例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン及び／または細胞内ドメインのいずれかを、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの非相同膜貫通ドメイン及び／または細胞内ドメインとして利用してもよい。

一部の実施形態では、例えば、局在化のために、配列タグまたはアミノ酸を、本発明のポリヌクレオチドがコードする配列に付加してもよい（例えば、Ｎ末端またはＣ末端に）。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドのカルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域に位置するアミノ酸残基を任意選択的に欠失させてもよい。

一部の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。その他の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド及び少なくともｓｕｓｈｉドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを含む融合タンパク質をコードしており、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは機能的に連結している。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、２種のポリペプチド鎖、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドを含む第１の鎖、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを含む第２の鎖をコードしている。

一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、
（ｉ）シグナルペプチドを含むまたは含まない成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ−１５と同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１５野生型よりも短いがＩＬ−１５活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長、成熟、またはトランケートＩＬ−１５タンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１５活性の全てまたは大部分を保持するバリアント）、及び、
（ｉｖ）（ａ）シグナルペプチドを含むまたは含まない、成熟ヒトＩＬ−１５野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｂ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択される。

一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、
（ｉ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒαと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１５Ｒα野生型よりも短いがＩＬ−１５Ｒα活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１５Ｒαタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒα活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、当該技術分野において周知の天然バリアントまたは合成バリアントなど））、及び、
（ｉｖ）（ａ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒα野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｂ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択される。

特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、哺乳動物ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、例えば、非ヒト（例えば、霊長類）ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、その機能性フラグメントまたはバリアントなどをコードしている。

一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１６、１９、２０、及び１２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含み、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドはヒトＩＬ−１５受容体に結合することができる。

特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１５及び１７に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１５ポリペプチドはＩＬ−１５受容体に結合する。

その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１４、２１、及び２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含み、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドはヒトＩＬ−１５ポリペプチドに結合することができる。

特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１４、２１、及び２２に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのそのリガンドへの結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１５ＲαポリペプチドはＩＬ−１５に結合する。

その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１４、２１、及び２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドをコードしている。

特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：２３、２７、及び１２３に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない。

その他の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

サイトカイン及び共刺激分子の組成物
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の少なくとも２種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の２種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の３種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の４種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択される配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、４種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、４種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、４種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。

ｍＲＮＡ構築物構成要素
ｍＲＮＡは、天然または非天然のｍＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡは、以下で説明する１種または複数種の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含んでいてもよく、その場合、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれることもある。本明細書に記載するとおり、「ヌクレオシド」は、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書ではまた、「核酸塩基」と呼ぶ）と組み合わせた、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含有する化合物と定義される。本明細書に記載するとおり、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドと定義される。

ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含んでいてもよい。構築物に用いる例示的な５’ＵＴＲを配列番号：７５に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：７６に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：１３３に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：１２に示す。構築物に用いる例示的な３’ＵＴＲを配列番号：７７に示す。構築物に用いるｍｉＲ−１２２結合部位及びｍｉＲ−１４２．３ｐ結合部位を含む例示的な３’ＵＴＲを配列番号：７８に示す。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００）または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含む、任意の好適な数の塩基対を含んでいてもよい。任意の数（例えば、全て、一部、またはなし）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、置換された、修飾された、または別様に非天然の、標準的な種の類似体であってもよい。特定の実施形態では、特定の核酸塩基型の全てを修飾してもよい。

一部の実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖停止ヌクレオチド、任意選択的にコザック配列（コザックコンセンサス配列としても周知）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。

５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって連結した２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然キャップ、非天然キャップもしくはキャップアナログ、またはアンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）から選択してもよい。キャップ種は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含んでいてもよい。例えば、天然ｍＲＮＡキャップは、５’位のトリホスフェート連結部によって連結した、グアニンヌクレオチド及び７位がメチル化したグアニン（Ｇ）ヌクレオチド、例えば、ｍ^７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（一般的にはｍ^７ＧｐｐｐＧと表記する）を含んでいてもよい。キャップ種はまた、アンチリバースキャップアナログであってもよい。考えられるキャップ種の非限定的なリストとしては、ｍ^７ＧｐｐｐＧ、ｍ^７Ｇｐｐｐｍ^７Ｇ、ｍ^７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ２’}ＧｐｐｐｐＧ、ｍ^７Ｇｐｐｐｍ^７Ｇ、ｍ^７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐＧ、ｍ_２ ^{７，Ｏ３’}ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ_２ ^{７，Ｏ２’}ＧｐｐｐｐＧが挙げられる。

ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、鎖停止ヌクレオシドを含んでいてもよい。例えば、鎖停止ヌクレオシドとしては、その糖基の２’位及び／または３’位が脱酸素化した鎖停止ヌクレオシドを挙げてもよい。このような種としては、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３’−デオキシチミン、ならびに２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、及び２’，３’−ジデオキシチミンなどを挙げてもよい。一部の実施形態では、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されているように、例えば、３’末端における、鎖停止ヌクレオチドのｍＲＮＡへの導入により、ｍＲＮＡの安定化がもたらされ得る。

ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、ステムループ、例えば、ヒストンステムループなどを含んでいてもよい。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８のヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置していてもよい。例えば、ステムループは、非翻訳領域の前もしくは後（５’非翻訳領域または３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくはポリＡ尾部に位置していてもよい。一部の実施形態では、ステムループは、ｍＲＮＡの１種または複数種の機能（複数可）、例えば、翻訳の開始、翻訳効率、及び／または転写停止などに影響を及ぼし得る。

ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。ポリＡ配列は、完全にまたは主に、アデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体で構成されていてもよい。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置する尾部であってもよい。一部の実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外移行、翻訳、及び／または安定性に影響を及ぼし得る。

ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、マイクロＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域と第２のコード領域の間の内部翻訳開始を可能とする配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有する、または２Ａペプチドなどの自己開裂ペプチドをコードする介在配列を有する、第１のコード領域及び第２のコード領域を含むバイシストロン性ｍＲＮＡである。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは一般的に、同一のベクターに由来する複数種のタンパク質の発現を増強するために使用される。様々なＩＲＥＳ配列が当該技術分野において周知かつ入手可能であり、それらを使用してもよく、それらとしては、例えば、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳが挙げられる。

一実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、自己開裂ペプチドをコードする配列を含んでいてもよい。自己開裂ペプチドは、限定するわけではないが、２Ａペプチドであってもよい。様々な２Ａペプチドが当該技術分野において周知かつ入手可能であり、それらを使用してもよく、それらとしては、例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス２Ａペプチド、及びブタテシオウイルス−１２Ａペプチドが挙げられる。２Ａペプチドは、２Ａペプチド配列において正常なペプチド結合が阻害されて、１つの翻訳イベントから２種の不連続なタンパク質が生じることになるように、リボソームスキッピングにより１つの転写物から２種のタンパク質を生成するために、数種類のウイルスが使用している。非限定例として、２Ａペプチドは、タンパク質配列：ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号：７９）、そのフラグメントまたはバリアントを有していてもよい。一実施形態では、２Ａペプチドは、最後のグリシンと最後のプロリンの間を開裂する。別の非限定例として、本開示のポリヌクレオチドは、タンパク質配列ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号：７９）、そのフラグメントまたはバリアントを有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含んでいてもよい。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の１つの例は、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号：８０）である。１つの例示的な実施形態では、２Ａペプチドは、以下の配列：５’−ＴＣＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＣＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＣＡＡＴＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＣ−３’（配列番号：８１）がコードしている。本明細書に記載及び／または当該技術分野において周知の方法を用いて、２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列を修飾またはコドン最適化してもよい。

一実施形態では、この配列を使用して、２種またはそれ以上の目的のポリペプチドのコード領域を分離してもよい。非限定例として、Ｆ２Ａペプチドをコードする配列は、第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂの間にあってもよい（Ａ−Ｆ２Ａｐｅｐ−Ｂ）。Ｆ２Ａペプチドが存在することにより、Ｆ２Ａペプチド配列の末端におけるグリシンとプロリンの間で１つの長いタンパク質の開裂が生じ（ＮＰＧＰが開裂してＮＰＧ及びＰとなる）、その結果、独立したタンパク質Ａ（Ｆ２Ａペプチドの２１アミノ酸が結合しＮＰＧで終了している）及び独立したタンパク質Ｂ（Ｆ２Ａペプチドの１アミノ酸Ｐが結合している）が生成される。同様に、その他の２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びＥ２Ａ）では、長いタンパク質内におけるそのペプチドの存在により、２Ａペプチド配列の末端におけるグリシンとプロリンの間で開裂が生じる（ＮＰＧＰが開裂してＮＰＧ及びＰとなる）。タンパク質Ａ及びタンパク質Ｂは、同一の目的のペプチドまたはポリペプチドであってもよく、または異なる目的のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。特定の実施形態では、タンパク質Ａは、免疫原性細胞死を誘導するポリペプチドであり、タンパク質Ｂは、炎症反応及び／または免疫応答を刺激する及び／または免疫応答性を制御する別のポリペプチドである（以下で更に説明する）。

一部の実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡ構築物はリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１アミノ酸〜約２００アミノ酸を含むペプチドリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、または少なくとも４０アミノ酸を含む。

一部の実施形態では、リンカーは、例えば、（Ｇ_ｎＳ）_ｍを含むＧＳ（Ｇｌｙ／Ｓｅｒ）リンカーであってもよく、式中、ｎは１〜２０の整数であり、ｍは１〜２０の整数である。一部の実施形態では、ＧＳリンカーは（ＧＧＧＧＳ）_ｏ（配列番号：８６）を含んでいてもよく、式中、ｏは１〜５の整数である。一部の実施形態では、ＧＳリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号：８７）、ＧＧＳＧＧＧＧＧ（配列番号：８８）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号：８９）を含んでいてもよい。特定の実施形態では、リンカーはＧ_６Ｓ（ＧＧＧＧＧＧＳ）（配列番号：９０）である。

一部の実施形態では、リンカーは、例えば、（Ｇｌｙ）_ｐを含むＧｌｙリッチリンカーであってもよく、式中、ｐは１〜４０の整数である。一部の実施形態では、Ｇｌｙリッチリンカーは、ＧＧＧＧＧ（配列番号：９１）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９２）、ＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９３）、またはＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９４）を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）_ｑ（配列番号：９５）を含んでいてもよく、式中、ｑは１〜５の整数である。一実施形態では、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）_３、すなわち、ＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫ（配列番号：９６）を含んでいてもよい。

更なる例示的なリンカーとしては、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：９７）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号：９８）、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧ（配列番号：９９）、ＧＧＳＧＧＨＭＧＳＧＧ（配列番号：１００）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号：１０１）、ＧＧＳＧＧ（配列番号：１０２）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号：１０３）、ＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧ（配列番号：１０４）、ＡＡＧＡＡＴＡＡ（配列番号：１０５）、ＧＧＳＳＧ（配列番号：１０６）、ＧＳＧＧＧＴＧＧＧＳＧ（配列番号：１０７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＧＳＧ（配列番号：１０８）、ＧＳＧＧＳＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号：１０９）、及びＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号：１１０）が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書で開示するリンカーをコードするヌクレオチドを構築して、本明細書で開示するＯＲＦまたはポリヌクレオチドのＯＲＦを融合してもよい。

修飾ｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１種または複数種の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照未修飾ｍＲＮＡと比較した、高い安定性、細胞内維持、向上した翻訳、及び／または、ｍＲＮＡを導入する細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含む有用な特性を有していてもよい。それゆえ、修飾ｍＲＮＡの使用は、タンパク質産生の効率、核酸の細胞内維持を向上させることに加えて、低い免疫原性を維持することを可能とする。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１種または複数種（例えば、１、２、３、または４種）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１種または複数種（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００種、またはそれ以上）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する未修飾ｍＲＮＡと比較した、ｍＲＮＡを導入する細胞内における低い分解性を示していてもよい。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ^２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ^４Ｕ）、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ^５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ^３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ^５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ^５Ｕ）、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ^５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ^５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ^５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ^５ｓ^２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ^５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ^５ｓｅ^２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ^５Ｕ）、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（τｍ^５ｓ^２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ^５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−シュードウリジン（ｍ^１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ^５ｓ^２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ^１ｓ^４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ^３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ^５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ^３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ^３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ^５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ^２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ^５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕｍ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕｍ）、３，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ^３Ｕｍ）、及び、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’−Ｆ−アラ−ウリジン、２’−Ｆ−ウリジン、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン、ならびに、５−［３−（１−Ｅ−プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ^３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ^４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ^５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ^４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ^５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ^２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン、リシジン（ｋ^２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ^５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ^４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ^４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ^５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ^４ _２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’−Ｆ−アラ−シチジン、２’−Ｆ−シチジン、及び２’−ＯＨ−アラ−シチジンが挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α−チオ−アデノシン、２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ^１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ^２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ^６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ^２ｍ^６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ^６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ^２ｉ^６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ^６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ^２ｉｏ^６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ^６Ａ）、Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ^６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ^６ｔ^６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ^２ｇ^６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ^６ _２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ^６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ^２ｈｎ^６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ^６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ^６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ^６ _２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ^１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’−Ｆ−アラ−アデノシン、２’−Ｆ−アデノシン、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）−アデノシンが挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α−チオ−グアノシン、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ^１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−脱メチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ_２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、未修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ^＊）、７−デアザ−グアノシン、クエウオシン（Ｑ）、エポキシクエウオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−クエウオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−クエウオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ_０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ_１）、アルカエオシン（Ｇ^＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ^７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ^１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ^２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ^２ _２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ^２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ^{２，２，７}Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ^２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ^２ _２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ^１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ^２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ^１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’−Ｆ−アラ−グアノシン、及び２’−Ｆ−グアノシンが挙げられる。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ^１ψ）、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メトキシウリジン、または２’−Ｏ−メチルウリジンである。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ^４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ^５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ^２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ^１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ^２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ^６Ａ）が挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ^１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ_０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ_１）、７−メチル−グアノシン（ｍ^７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ^１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ^１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）、シュードウリジン（ψ）、α−チオ−グアノシン、またはα−チオ−アデノシンである。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡはシュードウリジン（ψ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはシュードウリジン（ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは１−メチル−シュードウリジン（ｍ^１ψ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは１−メチル−シュードウリジン（ｍ^１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２−チオウリジン（ｓ^２Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ^５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはＮ６−メチル−アデノシン（ｍ^６Ａ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはＮ６−メチル−アデノシン（ｍ^６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）を含む。

特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾で均一に修飾（すなわち、完全に修飾、全配列にわたり修飾）されている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは修飾されており、特定のヌクレオチドまたは核酸塩基のうちの少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％は、修飾されている。例えば、ｍＲＮＡは５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）で均一に修飾することができ、それは、ｍＲＮＡ配列中の全てのシトシン残基が５−メチル−シチジン（ｍ^５Ｃ）で置換されることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、上記したような修飾残基で置換することにより、配列中に存在する任意の型のヌクレオシド残基で均一に修飾することができる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１−メチルシュードウリジン（ｍ^１ψ）で均一に修飾されており、それは、ｍＲＮＡ配列中の全てのウリジン残基が１−メチルシュードウリジン（ｍ^１ψ）で置換されることを意味する。一部の実施形態では、ウリジンのうちの少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％は、１−メチルシュードウリジン（ｍ^１ψ）である。

一部の実施形態では、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）において、本開示のｍＲＮＡを修飾してもよい。その他の実施形態では、コード領域を除く領域において、ｍＲＮＡを修飾してもよい。例えば、一部の実施形態では、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲを提供し、それらの一方または両方は独立して、１つまたは複数の異なるヌクレオシド修飾を含有していてもよい。このような実施形態では、ヌクレオシド修飾はまた、コード領域内に存在し得る。

本開示のｍｍＲＮＡ内に存在し得るヌクレオシド修飾及びその組み合わせの例としては、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、及びＷＯ２０１４１５９８１３に記載されているヌクレオシド修飾及びその組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結部に対する修飾の組み合わせを含んでいてもよい。これらの組み合わせとしては、本明細書に記載の任意の１つまたは複数の修飾を挙げることができる。

特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、本開示のｍＲＮＡの天然ヌクレオチドで部分的または完全に置換されていてもよい。非限定例として、天然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドで置換されていてもよい。別の非限定例では、天然ヌクレオシドウリジンは、本明細書で開示する修飾ヌクレオシドのうちの少なくとも１つで部分的（例えば、天然ウリジンのうちの約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９．９％）に置換されていてもよい。

本開示のｍＲＮＡまたはその領域はコドン最適化されていてもよい。コドン最適化法は当該技術分野において周知であり、様々な目的、宿主生物のコドン頻度を揃えて適切なフォールディングを確保すること、ＧＣ含有量にバイアスをかけてｍＲＮＡ安定性を高めるまたは二次構造を縮小すること、遺伝子合成または遺伝子発現を低下させ得るタンデムリピートコドンまたは塩基配列を最小限とすること、転写制御領域及び翻訳制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入または除去すること、コードされたタンパク質内の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加すること、タンパク質ドメインを付加、除去または再編成させること、制限部位を挿入または欠失させること、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、タンパク質の様々なドメインが適切に折り畳まれるように、または、ポリヌクレオチドの二次構造の課題が減少または解消するように翻訳速度を調節することに有用であり得る。コドン最適化用のツール、アルゴリズム及びサービスは、当技術分野において周知であり、非限定例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（ＭｅｎｌｏＰａｒｋＣＡ）が提供するサービス、及び／または、所有権のある方法が挙げられる。一実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、例えば、哺乳動物細胞内における発現を最適化するまたはｍＲＮＡ安定性を向上させるための最適化アルゴリズムを用いて最適化されている。

特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列のいずれかに対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。

ｉｎｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）及び合成法を含むがこれらに限定されない当該技術分野において利用可能な方法を用いて、本開示のｍＲＮＡを作製してもよい。酵素（ＩＶＴ）合成法、固相合成法、液相合成法、複合合成法、小領域合成法、及びライゲーション法を利用してもよい。一実施形態では、ＩＶＴ酵素合成法を用いてｍＲＮＡを作製する。ＩＶＴを用いてポリヌクレオチドを作製するための方法は当技術分野において周知であり、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。それゆえ、本開示はまた、本明細書に記載のｍＲＮＡをｉｎｖｉｔｒｏ転写するのに使用可能なポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、構築物、及びベクターを含む。

合成中または合成後に、非天然修飾核酸塩基をポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡに導入してもよい。特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間連結部上、プリン塩基もしくはピリミジン塩基上、または糖上にあってもよい。特定の実施形態では、化学合成を用いてまたはポリメラーゼ酵素を用いて、ポリヌクレオチド鎖の末端またはポリヌクレオチド鎖内の他の任意の場所に修飾を導入してもよい。修飾核酸及びその合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成はまた、ＶｅｒｍａａｎｄＥｃｋｓｔｅｉｎ，ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９−１３４（１９９８）に記載されている。

酵素ライゲーション法または化学ライゲーション法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはその領域を、異なる機能性部分、例えば、標的化用物質または送達用物質、蛍光標識、液剤、ナノ粒子などにコンジュゲートしてもよい。ポリヌクレオチドのコンジュゲート及び修飾ポリヌクレオチドについては、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５−１８７（１９９０）において考察されている。

非翻訳領域（ＵＴＲ）
ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドの翻訳は、様々なシス作用性核酸構造がもたらす様々なメカニズムにより制御及び調節することができる。例えば、ヘアピンまたはその他の高次（例えば、シュードノット）分子内ｍＲＮＡ二次構造を形成する天然のシス作用性ＲＮＡエレメントは、ポリヌクレオチドに翻訳調節活性をもたらし得、とりわけ、ＲＮＡエレメントが、５’キャップ構造に近接した５’ＵＴＲ内に位置している場合、ＲＮＡエレメントはポリヌクレオチド翻訳の開始に影響を及ぼすまたはポリヌクレオチド翻訳の開始を調節する（ＰｅｌｌｅｔｉｅｒａｎｄＳｏｎｅｎｂｅｒｇ（１９８５）Ｃｅｌｌ４０（３）：５１５−５２６；Ｋｏｚａｋ（１９８６）ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ８３：２８５０−２８５４）。

非翻訳領域（ＵＴＲ）は、開始コドンの前の翻訳されないポリヌクレオチドの核酸区画（５’ＵＴＲ）、及び終止コドンの後の翻訳されないポリヌクレオチドの核酸区画（３’ＵＴＲ）である。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む本発明のポリヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））は、ＵＴＲ（例えば、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの組み合わせ）を更に含む。

シス作用性ＲＮＡエレメントはまた、多数のフレームシフトイベントに関与する翻訳伸長に影響を及ぼし得る（Ｎａｍｙｅｔａｌ．，（２００４）ＭｏｌＣｅｌｌ１３（２）：１５７−１６８）。内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）は、一般的には５’ＵＴＲ内に位置しているが天然ｍＲＮＡのコード領域内において発見されたこともまた報告されている別のタイプのシス作用性ＲＮＡエレメントである（Ｈｏｌｃｉｋｅｔａｌ．（２０００）ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ１６（１０）：４６９−４７３）。細胞性ｍＲＮＡ内において、ＩＲＥＳは、５’キャップ構造と共存していることが多く、キャップ依存性翻訳が妨げられた条件下で翻訳される機能的能力をｍＲＮＡにもたらす（Ｇｅｂａｕｅｒｅｔａｌ．，（２０１２）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂＰｅｒｓｐｅｃｔＢｉｏｌ４（７）：ａ０１２２４５）。別のタイプの天然シス作用性ＲＮＡエレメントは上流オープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）を含む。天然ｕＯＲＦは多数のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に単数または多数存在しており、下流主要ＯＲＦの翻訳に、一般的には悪い方に、影響を及ぼす（とりわけ、酵母菌におけるＧＣＮ４ｍＲＮＡ及び哺乳動物におけるＡＴＦ４ｍＲＮＡを除くが、それらにおいては、ｕＯＲＦが、高いｅＩＦ２リン酸化の条件下で下流主要ＯＲＦの翻訳を促進するように機能している（Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ（２００５）ＡｎｎｕＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ５９：４０７−４５０））。ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む構成要素、構造、エレメント、モチーフ、及び／または特定の配列がもたらす別の例示的な翻訳調節活性としては、ｍＲＮＡの安定化または不安定化（Ｂａｋｅｒ＆Ｐａｒｋｅｒ（２００４）ＣｕｒｒＯｐｉｎＣｅｌｌＢｉｏｌ１６（３）：２９３−２９９）、翻訳の活性化（Ｖｉｌｌａｌｂａｅｔａｌ．，（２０１１）ＣｕｒｒＯｐｉｎＧｅｎｅｔＤｅｖ２１（４）：４５２−４５７）、及び翻訳の抑制（Ｂｌｕｍｅｒｅｔａｌ．，（２００２）ＭｅｃｈＤｅｖ１１０（１−２）：９７−１１２）が挙げられるがこれらに限定されない。導入することで非相同ポリヌクレオチドを修飾するために天然シス作用性ＲＮＡエレメントを使用する場合、天然シス作用性ＲＮＡエレメントがそれらの対応する機能を付与し得るということを研究が示している（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ−Ｃｏｈｅｎｅｔａｌ．，（２００２）ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７７（１６）：１３６３５−１３６４０）。

機能性ＲＮＡエレメント
一部の実施形態では、本開示は、修飾を含むポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡエレメント）を提供し、修飾は所望の翻訳調節活性をもたらす。このような修飾については、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３３５１９号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

一部の実施形態では、本開示は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、開始コドン、ポリペプチドをコードする完全オープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの修飾を含むポリヌクレオチドを提供し、少なくとも１つの修飾、例えば、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強及び／または向上させる修飾は、所望の翻訳調節活性をもたらす。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性はシス作用性調節活性である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンにおけるまたは開始コドンに隣接したところにおける、４３Ｓ開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームの滞留時間の延長である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンにおけるまたは開始コドンからの、ポリペプチド合成の開始の増加である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、完全オープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の増加である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドン解読の忠実度の向上である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる読み漏らしの抑制または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドン解読速度の低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ｍＲＮＡ内の開始コドン以外の任意のコドンにおけるポリペプチド合成の開始の阻害または抑制である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ｍＲＮＡ内の完全オープンリーディングフレーム以外の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の抑制または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、異常翻訳産物の生成の阻害または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、上記の翻訳調節活性のうちの１つまたは複数の組み合わせである。

それゆえ、本開示は、本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡを提供する。一部の態様では、ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強及び／または向上させる配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。一部の態様では、ｍＲＮＡは、所望の翻訳調節活性、例えば、読み漏らしを抑制及び／または低下させることなどをもたらす配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。一部の態様では、本開示は、読み漏らしを抑制及び／または低下させることによってｍＲＮＡの翻訳忠実度を増強する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含むｍＲＮＡを提供する。

一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは天然ヌクレオチド及び／または修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは、本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは、安定したＲＮＡ二次構造を形成するまたは安定したＲＮＡ二次構造へと折り畳まれる、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、ＲＮＡ二次構造は本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす。ＲＮＡエレメントは、エレメント（例えば、ＧＣリッチエレメント）の一次配列に基づいて、エレメントが形成するＲＮＡ二次構造（例えば、ステムループ）により、ＲＮＡ分子内におけるエレメントの位置（例えば、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に位置している）により、エレメント（例えば、「翻訳エンハンサーエレメント」）の生物学的機能及び／または生物学的活性により、及びこれらの任意の組み合わせにより、同定及び／または特性決定することができる。

一部の実施形態では、本開示は、読み漏らしを抑制する及び／またはｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強する１つまたは複数の構造的修飾を有するｍＲＮＡを提供し、構造的修飾のうちの少なくとも１つはＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。

一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３ヌクレオチドの配列、その誘導体または類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、７０〜８０％シトシン塩基、６０〜７０％シトシン塩基、５０％〜６０％シトシン塩基、４０〜５０％シトシン塩基、３０〜４０％シトシン塩基である。一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３ヌクレオチドの配列、その誘導体または類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。

一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、７０〜８０％シトシン、６０〜７０％シトシン、５０％〜６０％シトシン、４０〜５０％シトシン、または３０〜４０％シトシンである。一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置しており、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、任意の順番で連結した３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、配列組成は＞５０％シトシンである。一部の実施形態では、配列組成は、＞５５％シトシン、＞６０％シトシン、＞６５％シトシン、＞７０％シトシン、＞７５％シトシン、＞８０％シトシン、＞８５％シトシン、または＞９０％シトシンである。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置しており、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、約３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、または約２０、約１５、約１２、約１０、約６、もしくは約３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、配列は繰り返しＧＣモチーフを含み、繰り返しＧＣモチーフは［ＣＣＧ］ｎであり、式中、ｎ＝１〜１０、ｎ＝２〜８、ｎ＝３〜６、またはｎ＝４〜５である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、３、４、または５である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、または３である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝２である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝３である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝４（配列番号：１１１）である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝５（配列番号：１１２）である。

一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは本明細書で提供する配列のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１３に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１４に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１５に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１３に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、本明細書に記載の５’ＵＴＲ配列内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含み、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に示す配列を含む。

その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含み、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲは配列番号：１１７に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲは配列番号：１１８に記載の配列を含む。

一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ヘアピンまたはステムループを形成する順番に連結したヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含む、安定したＲＮＡ二次構造を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造はコザックコンセンサス配列の上流にある。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約５、約４、約３、約２、約１ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、約１５〜２０、約１５〜２５、約１０〜１５、または約５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の１２〜１５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、約−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０〜−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０〜−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−５〜−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌのΔＧを有している。

別の実施形態では、修飾は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームに機能的に連結しており、修飾及びオープンリーディングフレームは非相同である。

別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントの配列は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及びシトシン（Ｃ）核酸塩基のみで構成されている。

本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらすＲＮＡエレメントは、周知の技術、例えば、リボソームプロファイリングなどを使用して同定及び特性決定することができる。リボソームプロファイリングは、ｍＲＮＡに結合したＰＩＣ及び／またはリボソームの位置の同定を可能とする技術である（例えば、Ｉｎｇｏｌｉａｅｔａｌ．，（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ３２４（５９２４）：２１８−２３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。この技術は、ＰＩＣ及び／またはリボソームでｍＲＮＡの領域またはセグメントをヌクレアーゼ消化から保護することをベースとしている。保護により、「フットプリント」と呼ばれる、ＲＮＡの３０ｂｐフラグメントの生成がもたらされる。ＲＮＡフットプリントの配列及び頻度は、当該技術分野において周知の方法（例えば、ＲＮＡ−ｓｅｑ）を用いて解析することができる。フットプリントはリボソームのＡ部位のほぼ中央にある。ＰＩＣまたはリボソームがｍＲＮＡに沿った特定の位置または場所に滞留している場合、これらの位置で生成されるフットプリントは比較的一般的なものとなり得る。ＰＩＣ及び／またはリボソームが低いプロセッシビティを示す位置においてより多くのフットプリントが生成され、ＰＩＣ及び／またはリボソームが高いプロセッシビティを示す位置においてより少ないフットプリントが生成されることを研究が示している（Ｇａｒｄｉｎｅｔａｌ．，（２０１４）ｅＬｉｆｅ３：ｅ０３７３５）。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡエレメントのうちのいずれか１つまたは複数を含むポリヌクレオチドに沿った不連続な位置または場所におけるＰＩＣまたはリボソームの滞留時間または占有時間をリボソームプロファイリングで測定する。

ＵＴＲは、ポリヌクレオチド内のコード領域に対して相同または非相同であってもよい。一部の実施形態では、ＵＴＲは、ポリペプチドをコードするＯＲＦに対して相同である。一部の実施形態では、ＵＴＲは、ポリペプチドをコードするＯＲＦに対して非相同である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の５’ＵＴＲまたはその機能性フラグメントを含み、そのそれぞれは同一のまたは異なるヌクレオチド配列を有している。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の３’ＵＴＲまたはその機能性フラグメントを含み、そのそれぞれは同一のまたは異なるヌクレオチド配列を有している。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの任意の組み合わせは、配列最適化されている。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの任意の組み合わせは、少なくとも１つの化学修飾核酸塩基、例えば、Ｎ１−メチルシュードウラシルまたは５−メトキシウラシルを含む。

ＵＴＲは、調節する役割、例えば、高いまたは低い安定性、局在化、及び／または翻訳効率をもたらす機能を有していてもよい。ＵＴＲを含むポリヌクレオチドを細胞、組織、または生物に投与してもよく、通常の方法を用いて１種または複数種の調節機能を測定してもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲの機能性フラグメントまたは３’ＵＴＲの機能性フラグメントはそれぞれ、全長５’ＵＴＲまたは全長３’ＵＴＲの１種または複数種の調節機能を含む。

天然５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす機能を有している。それら天然５’ＵＴＲは、一般的に、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが知られているコザック配列と同様の特徴を有している。コザック配列はコンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（配列番号：１３５）を有しており、式中、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）であり、開始コドン（ＡＵＧ）に別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲはまた、伸長因子結合に関与する二次構造を形成することが知られている。

特定の標的器官に豊富に発現している遺伝子において一般的に存在している機能を改変することにより、ポリヌクレオチドの安定性及びタンパク質産生を向上させることができる。例えば、肝臓発現ｍＲＮＡ、例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、αフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子などの５’ＵＴＲを導入することにより、肝細胞株または肝臓におけるポリヌクレオチドの発現を増強させることができる。同様に、その他の組織特異的ｍＲＮＡに由来する５’ＵＴＲを使用して、それらの組織、筋肉（例えば、ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、ミオゲニン、ハーキュリン）、内皮細胞（例えば、Ｔｉｅ−１、ＣＤ３６）、骨髄細胞（例えば、Ｃ／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ１１ｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ−１、ｉ−ＮＯＳ）、白血球（例えば、ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（例えば、ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ３０、アディポネクチン）、及び肺上皮細胞（例えば、ＳＰ−Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）における発現を向上させることが可能である。

一部の実施形態では、ＵＴＲは、それらのタンパク質が共通の機能、構造、特徴、または特性を共有する転写産物のファミリーから選択される。例えば、コードポリペプチドは、特定の細胞、組織において、または発達中の一定の期間において発現するタンパク質のファミリーに属していてもよい（すなわち、少なくとも１つの機能、構造、特徴、局在化、起源、または発現パターンを共有する）。遺伝子またはｍＲＮＡのいずれかに由来するＵＴＲを、同一のまたは異なるファミリーのタンパク質の任意のその他のＵＴＲと交換して、新しいポリヌクレオチドを作製してもよい。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは非相同であってもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、３’ＵＴＲとは異なる種に由来していてもよい。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、５’ＵＴＲとは異なる種に由来していてもよい。

共同所有する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２１５２２号（公開番号ＷＯ／２０１４／１６４２５３、その全体は参照により本明細書に組み込まれる）は、本発明のポリヌクレオチドにおいて、ＯＲＦに隣接する領域として利用可能な例示的なＵＴＲのリストを提供している。

本出願の例示的なＵＴＲとしては、グロビン、例えば、αグロビンまたはβグロビン（例えば、Ｘｅｎｏｐｕｓ、マウス、ウサギ、またはヒトのグロビン）など、強力なコザック翻訳開始シグナル、ＣＹＢＡ（例えば、ヒトシトクロムｂ−２４５αポリペプチド）、アルブミン（例えば、ヒトアルブミン７）、ＨＳＤ１７Ｂ４（ヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ）、ウイルス（例えば、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）、デング熱ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶ前初期１（ＩＥ１））、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、シンドビスウイルス、またはＰＡＶオオムギ黄萎ウイルス）、熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０）、翻訳開始因子（例えば、ｅｌＦ４Ｇ）、グルコース輸送体（例えば、ｈＧＬＵＴ１（ヒトグルコース輸送体１））、アクチン（例えば、ヒトαアクチンまたはβアクチン）、ＧＡＰＤＨ、チューブリン、ヒストン、クエン酸回路酵素、トポイソメラーゼ（例えば、５’ＴＯＰモチーフを欠くＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ（オリゴピリミジントラクト））、リボソームタンパク質大３２（Ｌ３２）、リボソームタンパク質（例えば、ヒトまたはマウスのリボソームタンパク質、例えば、ｒｐｓ９など）、ＡＴＰ合成酵素（例えば、ＡＴＰ５Ａ１、またはミトコンドリアＨ^＋−ＡＴＰ合成酵素のβサブユニット）、成長ホルモンｅ（例えば、ウシ（ｂＧＨ）またはヒト（ｈＧＨ））、伸長因子（例えば、伸長因子１ α１（ＥＥＦ１Ａ１））、マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）、筋細胞増強因子２Ａ（ＭＥＦ２Ａ）、β−Ｆ１−ＡＴＰアーゼ、クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ型α２（Ｃｏｌ１Ａ２）、コラーゲンＩ型α１（Ｃｏｌ１Ａ１）、コラーゲンＶＩ型α２（Ｃｏｌ６Ａ２）、コラーゲンＶＩ型α１（Ｃｏｌ６Ａ１））、リボフォリン（例えば、リボフォリンＩ（ＲＰＮＩ））、低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質（例えば、ＬＲＰ１）、カルジオトロフィン様サイトカイン因子（例えば、Ｎｎｔ１）、カルレティキュリン（Ｃａｌｒ）、プロコラーゲン−リジン２−オキソグルタレート５−ジオキシゲナーゼ１（Ｐｌｏｄ１）、及びヌクレオビンジン（例えば、Ｎｕｃｂ１）の核酸配列に由来する１つまたは複数の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、βグロビン５’ＵＴＲ、強力なコザック翻訳開始シグナルを含有する５’ＵＴＲ、シトクロムｂ−２４５αポリペプチド（ＣＹＢＡ）５’ＵＴＲ、ヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ１７Ｂ４）５’ＵＴＲ、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）５’ＵＴＲ、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）５’ＵＴＲ、非構造タンパク質をコードする風疹ウイルス（ＲＶ）ＲＮＡの５’隣接オープンリーディングフレーム、デング熱ウイルス（ＤＥＮ）５’ＵＴＲ、熱ショックタンパク質７０（Ｈｓｐ７０）５’ＵＴＲ、ｅＩＦ４Ｇ５’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１５’ＵＴＲ、その機能性フラグメント及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、βグロビン３’ＵＴＲ、ＣＹＢＡ３’ＵＴＲ、アルブミン３’ＵＴＲ、成長ホルモン（ＧＨ）３’ＵＴＲ、ＶＥＥＶ３’ＵＴＲ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）３’ＵＴＲ、αグロビン３’ＵＴＲ、ＤＥＮ３’ＵＴＲ、ＰＡＶオオムギ黄萎ウイルス（ＢＹＤＶ−ＰＡＶ）３’ＵＴＲ、伸長因子１ α１（ＥＥＦ１Ａ１）３’ＵＴＲ、マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）３’ＵＴＲ、ミトコンドリアＨ（＋）−ＡＴＰ合成酵素のβサブユニット（β−ｍＲＮＡ）３’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１３’ＵＴＲ、ＭＥＦ２Ａ３’ＵＴＲ、β−Ｆ１−ＡＴＰアーゼ３’ＵＴＲ、その機能性フラグメント及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。

任意の遺伝子またはｍＲＮＡに由来する野生型ＵＴＲを本発明のポリヌクレオチドに導入してもよい。一部の実施形態では、例えば、ＯＲＦに対するＵＴＲの方向または位置を変化させることにより、または、別のヌクレオチドを付加する、ヌクレオチドを欠失させる、ヌクレオチドを交換または転移することにより、野生型ＵＴＲまたは天然ＵＴＲに対してＵＴＲを変化させてバリアントＵＴＲを作製してもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲのバリアントまたは３’ＵＴＲのバリアント、例えば、野生型ＵＴＲの変異体、または、１つまたは複数のヌクレオチドをＵＴＲの末端に付加したまたはＵＴＲの末端から除去したバリアントを利用してもよい。

加えて、１つまたは複数の合成ＵＴＲを１つまたは複数の非合成ＵＴＲと組み合わせて使用してもよい。例えば、ＭａｎｄａｌａｎｄＲｏｓｓｉ，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２０１３８（３）：５６８−８２（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

ＵＴＲまたはその一部を、それらが選択された転写産物と同一の方向に配置してもよく、または、ＵＴＲまたはその一部の方向または位置を変化させてもよい。それゆえ、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを反転、短縮、延長してもよく、または、１つまたは複数のその他の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲと組み合わせてもよい。

一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、多重ＵＴＲ、例えば、二重、三重、または四重の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを含む。例えば、二重ＵＴＲは、直列または実質的に直列のいずれかの、同一ＵＴＲの２つのコピーを含む。例えば、二重βグロビン３’ＵＴＲを使用してもよい（ＵＳ２０１０／０１２９８７７（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。

特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書で開示するＵＴＲのいずれかから選択される５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、
５’ＵＴＲ−００１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：７６）、
５’ＵＴＲ−００２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３６）、
５’ＵＴＲ−００３（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照のこと）、
５’ＵＴＲ−００４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＣＡＵＵＣＣＧＧＵＡＣＵＧＵＵＧＧＵＡＡＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３７）、
５’ＵＴＲ−００６（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照のこと）、
５’ＵＴＲ−００８（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＵＵＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３８）、
５’ＵＴＲ−００９（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＣＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３９）、
５’ＵＴＲ−０１０、上流（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４０）、
５’ＵＴＲ−０１１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＣＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４１）、
５’ＵＴＲ−０１２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＵＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４２）、
５’ＵＴＲ−０１３（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４３）、
５’ＵＴＲ−０１４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＵＡＧＡＡＵＵＡＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４４）、
５’ＵＴＲ−０１５（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＵＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４５）、
５’ＵＴＲ−０１６（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４６）、
５’ＵＴＲ−０１７（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４７）、または、
５’ＵＴＲ−０１８（上流ＵＴＲ）５’ＵＴＲ（ＵＣＡＡＧＣＵＵＵＵＧＧＡＣＣＣＵＣＧＵＡＣＡＧＡＡＧＣＵＡＡＵＡＣＧＡＣＵＣＡＣＵＡＵＡＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：７５）、
を含む。

特定の実施形態では、本発明の５’ＵＴＲ配列及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号：７５〜７６、１１６〜１１８、１３２〜１３４、または１３６〜１４７のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列及び／または配列番号：４、７７〜７８、または１２１のいずれかを含む３’ＵＴＲ配列及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

特定の実施形態では、本発明の５’ＵＴＲ配列及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列及び／または配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１のいずれかを含む３’ＵＴＲ配列及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なヌクレオチド配列を含む。

一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４に記載のヌクレオチド配列を含み、３’ＵＴＲは、配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む。

本発明のポリヌクレオチドは、特徴部の組み合わせを含んでいてもよい。例えば、ＯＲＦは、強力なコザック翻訳開始シグナルを含む５’ＵＴＲ及び／またはポリＡ尾部の鋳型付加用のオリゴ（ｄＴ）配列を含む３’ＵＴＲに隣接していてもよい。５’ＵＴＲは、同一の及び／または異なるＵＴＲに由来する第１のポリヌクレオチドフラグメント及び第２のポリヌクレオチドフラグメントを含んでいてもよい（例えば、ＵＳ２０１０／０２９３６２５（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。

その他の非ＵＴＲ配列を本発明のポリヌクレオチド内の領域またはサブ領域として使用してもよい。例えば、イントロンまたはイントロン配列の一部を本発明のポリヌクレオチドに導入してもよい。イントロン配列の導入により、タンパク質産生の増加に加えて、ポリヌクレオチド発現レベルの上昇が可能となる。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＵＴＲの代わりにまたはＵＴＲに加えて配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む（例えば、Ｙａｋｕｂｏｖｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０３９４（１）：１８９−１９３（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは５’ＵＴＲ配列の代わりにＩＲＥＳを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドはＯＲＦ及びウイルスキャプシド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、非合成３’ＵＴＲと組み合わせた合成５’ＵＴＲを含む。

一部の実施形態では、ＵＴＲはまた、少なくとも１つの翻訳エンハンサーポリヌクレオチド、翻訳エンハンサーエレメント（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｅｎｈａｎｃｅｒｅｌｅｍｅｎｔ）、または翻訳エンハンサーエレメント（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｅｎｈａｎｃｅｒｅｌｅｍｅｎｔｓ）（ひとまとめに「ＴＥＥ」と呼び、ポリペプチドの量またはポリヌクレオチドから生成されるタンパク質の量を増加させる核酸配列のことを意味する）を含んでいてもよい。非限定例として、ＴＥＥは転写プロモーターと開始コドンの間に位置していてもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲはＴＥＥを含む。

一態様では、ＴＥＥは、核酸の翻訳、限定するわけではないが例えば、キャップ依存性翻訳またはキャップ非依存性翻訳などの活性を促進させることができる、ＵＴＲ内の保存エレメントである。

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
本開示のｍＲＮＡは、調節エレメント、例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化されたｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内在核酸結合分子用の擬似受容体として機能するように改変された人工結合部位、及びこれらの組み合わせを含んでいてもよい。一部の実施形態では、このような調節エレメントを含むｍＲＮＡは、「センサー配列」を含むものと呼ばれる。センサー配列の非限定例については、米国公開２０１４／０２００２６１（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を更に含む。ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）の組み込みまたは導入により、天然ｍｉＲＮＡの組織特異的及び／または細胞型特異的発現を基準とした、本開示のポリヌクレオチドの調節がもたらされ、それにより、それからコードされるポリペプチドの調節がもたらされる。

ｍｉＲＮＡ、例えば、天然ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡに結合して、安定性を低下させることまたはポリヌクレオチドの翻訳を阻害することのいずれかにより遺伝子発現を下方制御する、１９〜２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位の領域内の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位または２〜７位を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデノシン（Ａ）に隣接している。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデノシン（Ａ）に隣接している。例えば、ＧｒｉｍｓｏｎＡ，ＦａｒｈＫＫ，ＪｏｈｎｓｔｏｎＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ−ＥｎｇｅｌｅＰ，ＬｉｍＬＰ，ＢａｒｔｅｌＤＰ；ＭｏｌＣｅｌｌ．２００７Ｊｕｌ６；２７（１）：９１−１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングを実施して、細胞または組織内におけるｍｉＲＮＡの有無を確認してもよい。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ相補配列、またはマイクロＲＮＡシード相補配列を含む。このような配列は、米国公開ＵＳ２００５／０２６１２１８及び米国公開ＵＳ２００５／００５９００５（そのそれぞれの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）において教示されているマイクロＲＮＡなどの任意の周知のマイクロＲＮＡに相当し得る、例えば、それらに対する相補性を有し得る。

本明細書で使用する場合、用語「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」とは、ｍｉＲＮＡと相互作用する、それと会合する、またはそれに結合する上で、ｍｉＲＮＡの全てまたは領域に対する十分な相補性を有し、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に含まれる、ｍＲＮＡ内の配列のことを意味する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を更に含む。例示的な実施形態では、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含む。

ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性調節、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性翻訳抑制または分解を促進するのに十分な相補性の度合いのことを意味する。本開示の例示的な態様では、ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性分解、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡガイドＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）介在性開裂を促進するのに十分な相補性の度合いのことを意味する。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９〜２５ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、１９〜２３ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列に対する相補性を有していてもよい。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部のみ、例えば、天然ｍｉＲＮＡ配列の全長のうちの１ヌクレオチド未満、２ヌクレオチド未満、３ヌクレオチド未満、または４ヌクレオチド未満の部分に対して相補的であってもよい。所望の調節がｍＲＮＡ分解である場合、完全または完璧な相補性（例えば、天然ｍｉＲＮＡの全長の全てまたはかなりの部分に対する完全な相補性または完璧な相補性）が好ましい。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との相補性（例えば、部分的または完璧な相補性）を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との完璧な相補性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との相補性（例えば、部分的または完璧な相補性）を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との完璧な相補性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、１、２、または３ヌクレオチドの置換、末端付加、及び／またはトランケートを別にすれば、ｍｉＲＮＡ配列との完璧な相補性を有する。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同一の長さである。その他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヌクレオチド（複数可）短い。更にその他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡよりも２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、それでもなお、ｍｉＲＮＡ結合部位のうちの１つまたは複数を導入したｍＲＮＡを分解することができる、または、ｍＲＮＡが翻訳されるのを防止することができる。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ダイサーを含有する活性ＲＩＳＣの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位がＲＩＳＣ内の対応するｍｉＲＮＡに結合すると、ｍｉＲＮＡ結合部位を含有するｍＲＮＡが分解される、または、ｍＲＮＡが翻訳されることが防止される。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドを開裂させる。その他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチド内における不安定性を生じさせる。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドの転写を抑制する。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のミスマッチ（複数可）を有する。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１連続ヌクレオチドに対してそれぞれ相補的な、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１連続ヌクレオチドを有している。

本開示のｍＲＮＡに１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位を導入することにより、問題のｍｉＲＮＡが利用可能である場合、ｍＲＮＡを分解または翻訳抑制用に標的化することができる。これにより、ｍＲＮＡの送達時におけるオフターゲット効果を抑制することができる。例えば、本開示のｍＲＮＡが組織または細胞への送達を意図したものではないがその最終到達地点が上記組織または細胞である場合、組織または細胞内に豊富に存在するｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡの１つまたは複数の結合部位がｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに導入された場合に、目的の遺伝子の発現を阻害し得る。

逆の言い方をすれば、特定の組織内におけるタンパク質発現を増強させるために、通常は存在するｍｉＲＮＡ結合部位をｍＲＮＡ配列から除去してもよい。例えば、特定のｍｉＲＮＡ用の結合部位をｍＲＮＡから除去して、ｍｉＲＮＡを含有する組織または細胞内におけるタンパク質発現を向上させてもよい。

一実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の細胞、限定するわけではないが例えば、正常細胞及び／またはがん性細胞などに対する細胞傷害性または細胞保護的なｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。別の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、特定の細胞、限定するわけではないが例えば、正常細胞及び／またはがん性細胞などに対する細胞傷害性または細胞保護的なｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲ内に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。

複数の組織内における発現の調節は、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、１つまたは複数の異なるｍｉＲＮＡ結合部位の導入または除去により実施することができる。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去するかまたは挿入するかの決定は、発達中の組織及び／または細胞内及び／または疾患部内におけるｍｉＲＮＡ発現パターン及び／またはそのプロファイリングに基づいて行うことができる。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ならびにその発現パターン及び生物学における役割の同定については報告されている（例えば、Ｂｏｎａｕｅｒｅｔａｌ．，ＣｕｒｒＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓ２０１０１１：９４３−９４９；ＡｎａｎｄａｎｄＣｈｅｒｅｓｈＣｕｒｒＯｐｉｎＨｅｍａｔｏｌ２０１１１８：１７１−１７６；ＣｏｎｔｒｅｒａｓａｎｄＲａｏＬｅｕｋｅｍｉａ２０１２２６：４０４−４１３（２０１１Ｄｅｃ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；ＢａｒｔｅｌＣｅｌｌ２００９１３６：２１５−２３３；Ｌａｎｄｇｒａｆｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ，２００７１２９：１４０１−１４１４；ＧｅｎｔｎｅｒａｎｄＮａｌｄｉｎｉ，ＴｉｓｓｕｅＡｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２８０：３９３−４０３、及びこれらの中の全ての参照文献（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる））。

ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、米国公開第２０１４／０２００２６１号、第２００５／０２６１２１８号、及び第２００５／００５９００５号（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている非限定例を含む任意の周知の配列に対応していてもよい。

ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを調節することによりタンパク質発現を調節することが知られている組織の例としては、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が挙げられるがこれらに限定されない。

とりわけ、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）、マクロファージ、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラー細胞などにおいて他と異なるように発現していることが知られている。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染症に対する免疫応答、炎症に加えて、遺伝子療法及び組織／臓器移植後における望ましくない免疫応答に関与している。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡはまた、造血細胞（免疫細胞）の発生、増殖、分化、及びアポトーシスにおける多くの局面を調節している。例えば、ｍｉＲ−１４２及びｍｉＲ−１４６は免疫細胞においてのみ発現しており、骨髄系樹状細胞においてとりわけ豊富に存在している。ポリヌクレオチドの３’−ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を付加することにより、ポリヌクレオチドに対する免疫応答を遮断することができ、組織及び細胞におけるより安定した遺伝子導入が可能となるということが実証されている。ｍｉＲ−１４２は抗原提示細胞において外来ポリヌクレオチドを効率的に分解し、導入細胞の細胞傷害性除去を抑制する（例えば、ＡｎｎｏｎｉＡｅｔａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００９，１１４，５１５２−５１６１；ＢｒｏｗｎＢＤ，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｍｅｄ．２００６，１２（５），５８５−５９１；ＢｒｏｗｎＢＤ，ｅｔａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（１３）：４１４４−４１５２（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる））。

抗原介在性免疫応答とは外来抗原が引き起こす免疫応答のことを意味し得、外来抗原は、生体に侵入すると、抗原提示細胞によって処理されて抗原提示細胞の表面上に提示される。Ｔ細胞は提示抗原を認識して、その抗原を発現する細胞の細胞傷害性除去を引き起こすことができる。

本開示のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を導入することによって、ｍｉＲ−１４２介在性分解を介して、抗原提示細胞における遺伝子発現を選択的に抑制し、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）における抗原提示を制限することにより、ｍＲＮＡの送達後における抗原介在性免疫応答を予防することができる。そのため、ｍＲＮＡは、細胞傷害性除去を引き起こすことなく、標的組織または細胞において安定的に発現する。

一実施形態では、免疫細胞、とりわけ、抗原提示細胞において発現することが知られているｍｉＲＮＡ用の結合部位を本開示のｍＲＮＡに導入し、ｍｉＲＮＡ介在性ＲＮＡ分解を介して、抗原提示細胞におけるポリヌクレオチドの発現を抑制し、抗原介在性免疫応答を抑制することができる。ｍＲＮＡの発現は、免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡが発現していない非免疫細胞において維持される。例えば、一部の実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性反応を予防するために、任意のｍｉＲ−１２２結合部位を除去してもよく、ｍｉＲ−１４２（及び／またはｍｉＲ−１４６）結合部位を本開示のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに導入してもよい。

ＡＰＣ及びマクロファージにおける選択的な分解及び抑制を更に促進させるために、本開示のｍＲＮＡは、単独、または、ｍｉＲ−１４２結合部位及び／またはｍｉＲ−１４６結合部位との組み合わせのいずれかで、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に更なる負の調節エレメントを含んでいてもよい。非限定例として、更なる負の調節エレメントは構成的崩壊エレメント（ＣｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅＤｅｃａｙＥｌｅｍｅｎｔ）（ＣＤＥ）である。

免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡとしては、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｈｓａ−７ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｃ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１１８４、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−１−−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−２−−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７９、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４７ａ、ｍｉＲ−１４７ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ｂ、ｍｉＲ−１５５−３ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｍｉＲ−１６−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍｉＲ−１９７−３ｐ、ｍｉＲ−１９７−５ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９０９、ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−５ｐ、、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３３１−５ｐ、ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−３ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−３４６、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｍｉＲ−３７７−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−５４２、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｊ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−５９８、ｍｉＲ−７１８、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐが挙げられるがこれらに限定されない。更に、マイクロアレイハイブリダイゼーション及びミクロトーム解析により、免疫細胞における新規のｍｉＲＮＡを同定してもよい（例えば、ＪｉｍａＤＤｅｔａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６：ｅ１１８−ｅ１２７；ＶａｚＣｅｔａｌ．，ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，１１，２８８（それぞれの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる））。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡはｍｉＲＮＡ結合部位を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、７２〜７４及び８２〜８３（ｍｉＲＮＡ結合部位配列のうちのいずれか１種または複数種の１つまたは複数のコピーを含む）から選択される１種または複数種のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、配列番号：７２〜７４及び８２〜８３（これらの任意の組み合わせを含む）から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の同一のまたは異なるｍｉＲＮＡ結合部位を更に含む。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも２つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも３つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも４つのｍｉＲ−１２２結合部位、または少なくとも５つのｍｉＲ−１２２結合部位を含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合するまたはｍｉＲ−１２２に対して相補的である。別の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐに結合する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号：７４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。別の特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号：８３に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリヌクレオチドの任意の位置（例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）において、本開示のｍＲＮＡに挿入されている。一部の実施形態では、５’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。ｍＲＮＡ内の挿入部位は、ｍＲＮＡ内へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入が対応するｍｉＲＮＡの不在下における機能性ポリペプチドの翻訳を妨げない限り、またｍｉＲＮＡの存在下において、ｍＲＮＡ内へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入及び対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合が、ｍＲＮＡの分解またはｍＲＮＡの翻訳の防止を可能とする限りにおいて、ｍＲＮＡ内の任意の場所であってもよい。

一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ＯＲＦを含む本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから少なくとも約３０ヌクレオチド下流に挿入されている。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約３５ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約４５ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約５５ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約６５ヌクレオチド、少なくとも約７０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流に挿入されている。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから約１０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド〜約９０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド〜約８０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド〜約７０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド〜約６０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド〜約６５ヌクレオチド下流に挿入されている。

ｍｉＲＮＡ遺伝子調節は、ｍｉＲＮＡの周囲の配列、限定するわけではないが例えば、周囲の配列の種類、配列のタイプ（例えば、非相同、相同、外来、内在性、または人工）、周囲の配列内の調節エレメント及び／または周囲の配列内の構造エレメントなどに影響され得る。ｍｉＲＮＡは５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに影響され得る。非限定例として、非ヒト３’ＵＴＲは、同一配列タイプのヒト３’ＵＴＲと比較して、目的のポリペプチドの発現時にｍｉＲＮＡ配列の調節作用を増強し得る。

一実施形態では、５’ＵＴＲのその他の調節エレメント及び／または構造エレメントは、ｍｉＲＮＡ介在性遺伝子調節に影響を及ぼし得る。調節エレメント及び／または構造エレメントの１つの例は、タンパク質翻訳を開始するための翻訳伸長因子の結合に必要な、５’ＵＴＲ内の構造化ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）である。５’−ＵＴＲ内のこの二次構造化エレメントに結合したＥＩＦ４Ａ２は、ｍｉＲＮＡ介在性遺伝子発現に必要である（ＭｅｉｊｅｒＨＡｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４０，８２−８５（その全体は参照により本明細書に組み込まれる））。本開示のｍＲＮＡは、マイクロＲＮＡ介在性遺伝子調節を増強するために、この構造化５’ＵＴＲを更に含んでいてもよい。

少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。この文脈では、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。例えば、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、２、または１つのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡに導入されたｍｉＲＮＡ結合部位は、同一のｍｉＲＮＡ部位であってもよく、または異なるｍｉＲＮＡ部位であってもよい。本開示のｍＲＮＡに導入された異なるｍｉＲＮＡ結合部位の組み合わせとしては、異なるｍｉＲＮＡ部位のいずれかの２つ以上のコピーが導入された組み合わせを挙げることができる。別の実施形態では、本開示のｍＲＮＡに導入されたｍｉＲＮＡ結合部位は、体内の同一のまたは異なる組織を標的とし得る。非限定例として、本開示のｍＲＮＡの３’−ＵＴＲへの組織特異的、細胞型特異的、または疾患特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入により、特定の細胞型（例えば、肝細胞、骨髄細胞、内皮細胞、がん細胞など）における発現の度合いが低下し得る。

一実施形態では、本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲの５’末端近傍、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端の間のほぼ中間、及び／または３’ＵＴＲの３’末端近傍に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。非限定例として、３’ＵＴＲの５’末端近傍及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。別の非限定例として、３’ＵＴＲの３’末端近傍及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。更に別の非限定例として、３’ＵＴＲの５’末端近傍及び３’ＵＴＲの３’末端近傍に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。

別の実施形態では、３’ＵＴＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡシード配列、及び／またはシード配列前後のｍｉＲＮＡ配列に対して相補的であってもよい。

異なる組織、細胞型、または生物学的条件におけるｍｉＲＮＡの発現パターンに基づいて、特定の組織、細胞型、または生物学的条件により的を絞って発現させるために、本開示のｍＲＮＡを改変してもよい。組織特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入により、組織もしくは細胞における、または生物学的条件に関するタンパク質発現を最適化するために、本開示のｍＲＮＡを設計してもよい。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的の組織または細胞内におけるコードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含んでいてもよい。非限定例として、本開示のｍＲＮＡは、肝臓内における目的のコードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位を含んでいてもよい。別の非限定例として、本開示のｍＲＮＡは、少なくとも１つの、ｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−３ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４６結合部位、ｍｉＲ−１４６シード配列、及び／またはシード配列を含まないｍｉＲ−１４６結合部位を含んでいてもよい。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、免疫細胞におけるｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解して、治療薬送達により引き起こされる望ましくない免疫原性反応を抑制するために、３’ＵＴＲ内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。非限定例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、抗原提示細胞において、本開示のｍＲＮＡをより不安定にし得る。これらのｍｉＲＮＡの非限定例としては、ｍｉｒ−１４２−５ｐ、ｍｉｒ−１４２−３ｐ、ｍｉｒ−１４６ａ−５ｐ、及びｍｉｒ−１４６−３ｐが挙げられる。

一実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＲＮＡ結合タンパク質と相互作用し得るｍＲＮＡの領域内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ配列を含む。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡ（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、（ｉ）配列最適化ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）及び（ｉｉ）ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位）を含む。

一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、本明細書で開示するポリペプチドをコードするウラシル修飾配列及び、本明細書で開示するｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列は、少なくとも１つの化学修飾核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。一部の実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列内の核酸塩基のタイプ（例えば、ウラシル）のうちの少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列内のウラシルのうちの少なくとも９５％は、５−メトキシウリジンである。一部の実施形態では、本明細書で開示するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及びｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡは、送達用物質、例えば、式（Ｉ）を有する化合物、例えば、化合物Ｘと配合されている。

脂質ナノ粒子
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。本明細書に記載の脂質組成物を、治療薬及び／または予防薬、例えば、ｍＲＮＡを哺乳動物の細胞または器官に送達するための脂質ナノ粒子組成物に有利に使用してもよい。例えば、本明細書に記載の脂質は免疫原性をほとんど有していないまたは有していない。例えば、本明細書で開示する脂質化合物は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）と比較してより低い免疫原性を有している。例えば、本明細書で開示する脂質及び治療薬または予防薬、例えば、ｍＲＮＡを含む製剤は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）及び同一の治療薬または予防薬を含む対応する製剤と比較して、高い治療指数を有している。

特定の実施形態では、本出願は、
（ａ）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むｍＲＮＡ、及び、
（ｂ）送達用物質、
を含む医薬組成物を提供する。

特定の実施形態では、本出願は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
及び送達用物質、
を含む医薬組成物を提供する。

一部の実施形態では、本出願は、
（ｉ）第１の送達用物質、及びヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）第２の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）第３の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）第４の送達用物質、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む医薬組成物を提供する。

一部の実施形態では、本出願は、
（ｉ）第１の送達用物質、及びヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）第２の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉｉ）第３の送達用物質、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む医薬組成物を提供する。

ＬＮＰの脂質成分
一部の実施形態では、ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質、（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質を含む。これらのカテゴリーの脂質については以下でより詳細に記載している。

（ｉ）イオン性脂質
本開示の脂質ナノ粒子は１種または複数種のイオン性脂質を含む。特定の実施形態では、本開示のイオン性脂質は、中心アミン部分及び少なくとも１つの生分解性基を含む。本明細書に記載のイオン性脂質を、核酸分子を哺乳動物の細胞または器官へと送達するための本開示の脂質ナノ粒子に有利に使用してもよい。以下に記載するイオン性脂質の構造は、それらを本発明のその他の脂質と区別するための接頭辞Ｉを含む。

本発明の第１の態様では、本明細書に記載の化合物は、式（ＩＩ）の化合物、

（ＩＩ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
Ｒ^１は、Ｃ_５−３０アルキル、Ｃ_５−２０アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
Ｒ^４は、水素、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）_２、及び非置換Ｃ_１−６アルキルからなる群から選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
それぞれのＲ^５は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^６は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ_１−１３アルキル、またはＣ_２−１３アルケニルであり、
Ｒ^７は、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ^８は、Ｃ_３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ^９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ_２、Ｃ_１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ^１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、及びＣ_２−３アルケニルからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのｑは、１、２、及び３から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ_１−１８アルキル、Ｃ_２−１８アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ_３−１５アルキル及びＣ_３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^＊は、Ｃ_１−１２アルキル及びＣ_２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ_３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、Ｒ^４が−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）_２であるとき、（ｉ）ｎが１、２、３、４、または５の場合、Ｑは−Ｎ（Ｒ）_２ではない、または、（ｉｉ）ｎが１または２の場合、Ｑは５、６、または７員環ヘテロシクロアルキルではない。

別の態様では、本開示は、式（ＩＩＩ）の化合物、

（ＩＩＩＩ）もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体に関し、
式中、
Ｒ^１は、Ｃ_５−３０アルキル、Ｃ_５−２０アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
Ｒ^４は、水素、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）_２、及び非置換Ｃ_１−６アルキルからなる群から選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、Ｎ（Ｒ）Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
Ｒ^ｘは、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、−（ＣＨ_２）_ｖＯＨ、及び−（ＣＨ_２）_ｖＮ（Ｒ）_２からなる群から選択され、
式中、ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
それぞれのＲ^５は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^６は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ_１−１３アルキル、またはＣ_２−１３アルケニルであり、
Ｒ^７は、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ^８は、Ｃ_３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ^９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ_２、Ｃ_１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ^１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、及びＣ_２−３アルケニルからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのｑは、１、２、及び３から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ_１−１８アルキル、Ｃ_２−１８アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ_３−１５アルキル及びＣ_３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^＊は、Ｃ_１−１２アルキル及びＣ_２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ_３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。

特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＡ）の化合物、

（ＩＩＡ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ_１は結合またはＭ’であり、Ｒ^４は、水素、非置換Ｃ_１−３アルキル、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ_２）_ｎＱであり、式中、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ^８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２である。例えば、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒまたは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒである。

特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＢ）の化合物、

（ＩＩＢ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、全ての可変因子は本明細書において定義したとおりである。例えば、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＩ）の化合物、

（ＩＩＩ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ_１は結合またはＭ’であり、Ｒ^４は、水素、非置換Ｃ_１−３アルキル、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ_２）_ｎＱであり、式中、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ^８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。

本開示の別の態様は、式（ＩＶＩ）の化合物、

（ＩＶＩ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体に関し、
式中、
Ｒ^１は、Ｃ_５−３０アルキル、Ｃ_５−２０アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
それぞれのＲ^５は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^６は、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ_１−１３アルキル、またはＣ_２−１３アルケニルであり、
Ｒ^７は、Ｃ_１−３アルキル、Ｃ_２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｈ、Ｃ_１−３アルキル、及びＣ_２−３アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ^ＮはＨまたはＣ_１−３アルキルであり、
それぞれのＲ’は、Ｃ_１−１８アルキル、Ｃ_２−１８アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ_３−１５アルキル及びＣ_３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ^＊は、Ｃ_１−１２アルキル及びＣ_２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ_３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
Ｘ^ａ及びＸ^ｂはそれぞれ独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ^１０は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｒ、−Ｎ（Ｒ）_２、−ＣＮ、−Ｎ_３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２ＯＲ、−ＮＯ_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｔ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ）_２、炭素環、複素環、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは０または１であり、
ｔ^１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ^１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ^１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｓ^１は、１、２、３、４、及び５から選択される。

一実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩ−ａ）の化合物、

（ＩＶＩ−ａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
Ｒ^１ａ及びＲ^１ｂは、Ｃ_１−１４アルキル及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_１−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成する。

別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩ）の化合物、

（ＩＶＩＩ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ_１は結合またはＭ’であり、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩＩ）の化合物、

（ＩＶＩＩＩ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ_１は結合またはＭ’であり、
Ｒ^ａ’及びＲ^ｂ’は、Ｃ_１−１４アルキル及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_１−１４アルキル及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。

式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、（ＩＶＩ）、（ＩＶＩ−ａ）、（ＩＶＩＩ）、または（ＩＶＩＩＩ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。

一部の実施形態では、Ｍ_１はＭ’である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。

特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−ＯＣ（Ｏ）−である。

特定の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｓ−Ｓ−である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−Ｓ−Ｓ−である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、もう一方は−Ｓ−Ｓ−である。例えば、Ｍが−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’が−Ｓ−Ｓ−である、または、Ｍ’が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍが−Ｓ−Ｓ−である。

一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ_１−１３アルキル、またはＣ_２−１３アルケニルである。その他の実施形態では、Ｍ’’はＣ_１−６アルキルまたはＣ_２−６アルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’はＣ_１−４アルキルまたはＣ_２−４アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_４アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_２アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_３アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_４アルケニルである。

一部の実施形態では、ｌは、１、３、または５である。

一部の実施形態では、Ｒ^４は水素である。

一部の実施形態では、Ｒ^４は水素ではない。

一部の実施形態では、Ｒ^４は非置換メチルまたは−（ＣＨ_２）_ｎＱであり、式中、ＱはＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒである。

一部の実施形態では、ＱはＯＨである。

一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒである。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＲである。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｒ^８である。

一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２である。

一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。

一部の実施形態では、ｎは２である。

一部の実施形態では、ｎは３である。

一部の実施形態では、ｎは４である。

一部の実施形態では、Ｍ_１は不在である。

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^５はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ^５はヒドロキシルである。

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ^６はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ^６はヒドロキシルである。

一部の実施形態では、Ｒ^５及びＲ^６のうちの１つはヒドロキシルである。例えば、１つのＲ^５はヒドロキシルであり、それぞれのＲ^６は水素である。例えば、１つのＲ^６はヒドロキシルであり、それぞれのＲ^５は水素である。

一部の実施形態では、Ｒ^ｘはＣ_１−６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｘはＣ_１−３アルキルである。例えば、Ｒ^ｘはメチルである。例えば、Ｒ^ｘはエチルである。例えば、Ｒ^ｘはプロピルである。

一部の実施形態では、Ｒ^ｘは−（ＣＨ_２）_ｖＯＨであり、ｖは、１、２、または３である。例えば、Ｒ^ｘはメタノイルである。例えば、Ｒ^ｘはエタノイルである。例えば、Ｒ^ｘはプロパノイルである。

一部の実施形態では、Ｒ^ｘは−（ＣＨ_２）_ｖＮ（Ｒ）_２であり、ｖは、１、２、または３であり、それぞれのＲはＨまたはメチルである。例えば、Ｒ^ｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒ^ｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒ^ｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒ^ｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。

一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_１−１８アルキル、Ｃ_２−１８アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、または−ＹＲ’’である。

一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は独立して、Ｃ_３−１４アルキルまたはＣ_３−１４アルケニルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_１−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_２−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_３−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_１−８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_１−５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_１−３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１ｂは、Ｃ_１アルキル、Ｃ_２アルキル、Ｃ_３アルキル、Ｃ_４アルキル、及びＣ_５アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_４アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＣ_５アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１は−（ＣＨＲ^５Ｒ^６）_ｍ−Ｍ−ＣＲ^２Ｒ^３Ｒ^７とは異なる。

一部の実施形態では、−ＣＨＲ^１ａＲ^１ｂ−は−（ＣＨＲ^５Ｒ^６）_ｍ−Ｍ−ＣＲ^２Ｒ^３Ｒ^７とは異なる。

一部の実施形態では、Ｒ^７はＨである。一部の実施形態では、Ｒ^７はＣ_１−３アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^７はＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^７はＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^７はＣ_３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^７は、Ｃ_４アルキル、Ｃ_４アルケニル、Ｃ_５アルキル、Ｃ_５アルケニル、Ｃ_６アルキル、Ｃ_６アルケニル、Ｃ_７アルキル、Ｃ_７アルケニル、Ｃ_９アルキル、Ｃ_９アルケニル、Ｃ_１１アルキル、Ｃ_１１アルケニル、Ｃ_１７アルキル、Ｃ_１７アルケニル、Ｃ_１８アルキル、及びＣ_１８アルケニルから選択される。

一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_１−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_２−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_３−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_１−８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_１−５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_１−３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’は、Ｃ_１アルキル、Ｃ_２アルキル、Ｃ_３アルキル、Ｃ_４アルキル、及びＣ_５アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ｂ’はＣ_４アルキルである。

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）の化合物、

（ＩＩＩａ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ^４は、本明細書に記載のとおりである。

別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）の化合物、

（ＩＩＩｂ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ^４は、本明細書に記載のとおりである。

別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）または式（ＩＩｅ）の化合物、

（ＩＩＩｃ）または

（ＩＩＩｅ）
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ^４は、本明細書に記載のとおりである。

別の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩｆ）の化合物、

（ＩＩＩｆ）もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’’はＣ_１−６アルキルまたはＣ_２−６アルケニルであり、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_５−１４アルキル及びＣ_５−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。

更なる実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩｄ）の化合物、

（ＩＩＩｄ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ^２〜Ｒ^６は、本明細書に記載のとおりである。例えば、Ｒ^２及びＲ^３のそれぞれは、Ｃ_５−１４アルキル及びＣ_５−１４アルケニルからなる群から独立して選択されてもよい。

更なる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｇ）の化合物、

（ＩＩＩｇ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ_１は結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｈ、Ｃ_１−１４アルキル、及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、Ｍ’’は、Ｃ_１−６アルキル（例えば、Ｃ_１−４アルキル）またはＣ_２−６アルケニル（例えば、Ｃ_２−４アルケニル）である。例えば、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_５−１４アルキル及びＣ_５−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩａ）の化合物、

（ＩＶＩＩａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩＩａ）の化合物、

（ＩＶＩＩＩａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩＩｂ）の化合物、

（ＩＶＩＩＩｂ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩｂ−１）の化合物、

（ＩＶＩＩｂ−１）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩｂ−２）の化合物、

（ＩＶＩＩｂ−２）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩｂ−３）の化合物、

（ＩＶＩＩｂ−３）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｃ）の化合物、

（ＩＶＩＩｃ）
を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｄ）の化合物、

（ＩＶＩＩｄ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩＩｃ）の化合物、

（ＩＶＩＩＩｃ）
を含む。

別の実施形態では、式（ＩＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＩＶＩＩＩｄ）の化合物、

（ＩＶＩＩＩｄ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。

式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＩＩｆ）、（ＩＩＩｇ）、Ｉ（ＩＩＩ）、（ＩＶＩ）、（ＩＶＩ−ａ）、（ＩＶＩＩ）、（ＩＶＩＩＩ）、（ＩＶＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩｂ）、（ＩＶＩＩｂ−１）、（ＩＶＩＩｂ−２）、（ＩＶＩＩｂ−３）、（ＩＶＩＩｃ）、（ＩＶＩＩｄ）、（ＩＶＩＩＩｃ）、または（ＩＶＩＩＩｄ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。

一部の実施形態では、Ｒ^４は、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）_２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ_３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環の芳香族または非芳香族複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。

別の実施形態では、Ｒ^４は、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）_２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ_３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、及び、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ_１−３アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で置換された、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロシクロアルキルから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。

別の実施形態では、Ｒ^４は、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）_２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ_３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され、Ｑが５〜１４員環複素環、また（ｉ）Ｒ^４が、ｎは１または２である−（ＣＨ_２）_ｎＱ、（ｉｉ）Ｒ^４が、ｎは１である−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、または（ｉｉｉ）Ｒ^４が−ＣＨＱＲ及び−ＣＱ（Ｒ）_２であるとき、Ｑは、５〜１４員環ヘテロアリールまたは８〜１４員環ヘテロシクロアルキルのいずれかである。

別の実施形態では、Ｒ^４は、Ｃ_３−６炭素環、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）_２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ_３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＸ_２Ｈ、−ＣＸＨ_２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。

別の実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。更なる実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８であり、式中、Ｒ^８は、Ｃ_３−６炭素環、例えば、Ｃ_３−６シクロアルキルなどであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。例えば、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_３ＮＨＳ（Ｏ）_２Ｒ^８であり、Ｒ^８はシクロプロピルである。

別の実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。更なる実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、ＲはＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、ｎは、１、２、３、４及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。別の実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｏＣ（Ｒ^１０）_２（ＣＨ_２）_ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、ＲはＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、ｎは３であり、ｏは１である。一部の実施形態では、Ｒ^１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ_１−３アルキル、またはＣ_２−３アルケニルである。例えば、Ｒ^４は３−アセトアミド−２，２−ジメチルプロピルである。

一部の実施形態では、１つのＲ^１０はＨであり、１つのＲ^１０はＣ_１−３アルキルまたはＣ_２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ^１０はＣ_１−３アルキルまたはＣ_２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ^１０はＣ_１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、またはプロピル）である。例えば、１つのＲ^１０はメチルであり、１つのＲ^１０はエチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ^１０はエチルであり、１つのＲ^１０はメチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ^１０はプロピルであり、１つのＲ^１０はメチルまたはエチルである。例えば、それぞれのＲ^１０はメチルである。例えば、それぞれのＲ^１０はエチルである。例えば、それぞれのＲ^１０はプロピルである。

一部の実施形態では、１つのＲ^１０はＨであり、１つのＲ^１０はＯＨである。別の実施形態では、それぞれのＲ^１０はＯＨである。

別の実施形態では、Ｒ^４は、非置換Ｃ_１−４アルキル、例えば、非置換メチルである。

別の実施形態では、Ｒ^４は水素である。

特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱまたは−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）_２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。

特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ^４は、−（ＣＨ_２）_ｎＱ、−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）_２からなる群から選択され、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）_２であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。

特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_２−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱまたは−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）_２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。

特定の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_２−１４アルキル、Ｃ_２−１４アルケニル、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_２−１４アルキル及びＣ_２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。

一部の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃ_５−２０アルキル及びＣ_５−２０アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ^１は、ヒドロキシルで置換されたＣ_５−２０アルキルである。

その他の実施形態では、Ｒ^１は、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択される。

特定の実施形態では、Ｒ^１は、−Ｒ^＊ＹＲ’’及び−ＹＲ’’から選択される。一部の実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。一部の実施形態では、Ｒ^＊はＣ_８アルキルまたはＣ_８アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’’はＣ_３−１２アルキルである。例えば、Ｒ’’はＣ_３アルキルであってもよい。例えば、Ｒ’’はＣ_４−８アルキル（例えば、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、またはＣ_８アルキル）であってもよい。

一部の実施形態では、Ｒは（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ^＊は、アミノ、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルアミノ、及びＣ_１−Ｃ_６ジアルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されたＣ_１−１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ^＊は、Ｃ_１−Ｃ_６ジアルキルアミノで置換されたＣ_１−１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ^＊は、Ｃ_１−Ｃ_６ジアルキルアミノで置換されたＣ_１−３アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ_２）_ｑＯＲ^＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ^＊は、ジメチルアミノで置換されたＣ_１−３アルキル（例えば、ジメチルアミノエタニル）である。

一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_５−２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_８アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ^１はＣ_９アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ^１はＣ_１４アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ^１はＣ_１８アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_{２１−３０}アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_２６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_２８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ^１は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１はＣ_５−２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ^１はＣ_１８アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ^１はリノレイルである。

特定の実施形態では、Ｒ^１は分枝鎖（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）である。特定の実施形態では、Ｒ^１は

である。

特定の実施形態では、Ｒ^１は非置換Ｃ_５−２０アルキルまたはＣ_５−２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’は置換Ｃ_５−２０アルキルまたはＣ_５−２０アルケニル（例えば、１−シクロプロピルノニルなどのＣ_３−６炭素環で置換された、または、ＯＨまたはアルコキシで置換された）である。例えば、Ｒ^１は

である。

その他の実施形態では、Ｒ^１は−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’である。特定の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。例えば、Ｒ^１は

であり、式中、ｘ^１は、１〜１３の整数（例えば、３、４、５、及び６から選択される）であり、ｘ^２は、１〜１３の整数（例えば、１、２、及び３から選択される）であり、ｘ^３は、２〜１４の整数（例えば、４、５、及び６から選択される）である。例えば、ｘ^１は、３、４、５、及び６から選択され、ｘ^２は、１、２、及び３から選択され、ｘ^３は、４、５、及び６から選択される。

その他の実施形態では、Ｒ^１は−（ＣＨＲ^５Ｒ^６）_ｍ−Ｍ−ＣＲ^２Ｒ^３Ｒ^７とは異なる。

一部の実施形態では、Ｒ’は−Ｒ^＊ＹＲ’’及び−ＹＲ’’から選択される。一部の実施形態では、ＹはＣ_３−８シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＹはＣ_６−１０アリールである。一部の実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。一部の実施形態では、Ｙはシクロヘキシル基である。特定の実施形態では、Ｒ^＊はＣ_１アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ_３−１２アルキル及びＣ_３−１２アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ’’はＣ_８アルキルである。一部の実施形態では、Ｙに隣接したＲ’’はＣ_１アルキルである。一部の実施形態では、Ｙに隣接したＲ’’はＣ_４−９アルキル（例えば、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、もしくはＣ_８、またはＣ_９アルキル）である。

一部の実施形態では、Ｒ’’は置換Ｃ_３−１２（例えば、例えば、ヒドロキシルで置換されたＣ_３−１２アルキル）である。例えば、Ｒ’’は

である。

一部の実施形態では、Ｒ’はＣ_４アルキル及びＣ_４アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’はＣ_５アルキル及びＣ_５アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ_６アルキル及びＣ_６アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ_７アルキル及びＣ_７アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ_９アルキル及びＣ_９アルケニルから選択される。

一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_４アルキル、Ｃ_４アルケニル、Ｃ_５アルキル、Ｃ_５アルケニル、Ｃ_６アルキル、Ｃ_６アルケニル、Ｃ_７アルキル、Ｃ_７アルケニル、Ｃ_９アルキル、Ｃ_９アルケニル、Ｃ_１１アルキル、Ｃ_１１アルケニル、Ｃ_１７アルキル、Ｃ_１７アルケニル、Ｃ_１８アルキル、及びＣ_１８アルケニルから選択され、そのそれぞれは直鎖または分枝鎖のいずれかである。

一部の実施形態では、Ｒ’は直鎖である。一部の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖である。

一部の実施形態では、Ｒ’は

または

である。一部の実施形態では、Ｒ’は

または

であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。その他の実施形態では、Ｒ’は

または

であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

その他の実施形態では、Ｒ’はＣ_１１アルキル及びＣ_１１アルケニルから選択される。その他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１２アルケニル、Ｃ_１３アルキル、Ｃ_１３アルケニル、Ｃ_１４アルキル、Ｃ_１４アルケニル、Ｃ_１５アルキル、Ｃ_１５アルケニル、Ｃ_１６アルキル、Ｃ_１６アルケニル、Ｃ_１７アルキル、Ｃ_１７アルケニル、Ｃ_１８アルキル、及びＣ_１８アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’は直鎖Ｃ_４−１８アルキルまたはＣ_４−１８アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）である。特定の実施形態では、Ｒ’は

である。

特定の実施形態では、Ｒ’は非置換Ｃ_１−１８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’は置換Ｃ_１−１８アルキル（例えば、例えば、メトキシなどのアルコキシもしくは１−シクロプロピルノニルなどのＣ_３−６炭素環、またはＣ（Ｏ）ＯＣＨ_３もしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ_３などのＣ（Ｏ）Ｏ−アルキルもしくはＯＣ（Ｏ）−アルキルで置換された、Ｃ_１−１５アルキル）である。例えば、Ｒ’は、

、

、または

である。

特定の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖Ｃ_１−１８アルキルである。例えば、Ｒ’は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ_３−１５アルキル及びＣ_３−１５アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ_３アルキル、Ｃ_４アルキル、Ｃ_５アルキル、Ｃ_６アルキル、Ｃ_７アルキル、またはＣ_８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ_９アルキル、Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１１アルキル、Ｃ_１２アルキル、Ｃ_１３アルキル、Ｃ_１４アルキル、またはＣ_１５アルキルである。

一部の実施形態では、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

一部の実施形態では、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、式中、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’’はＣ_１−４アルキルまたはＣ_２−４アルケニルである。

その他の実施形態では、Ｍ’はアリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。

一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

その他の実施形態では、Ｍはアリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。

一部の実施形態では、ＭはＭ’と同一である。その他の実施形態では、ＭはＭ’とは異なる。

一部の実施形態では、Ｍ’’は結合である。一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_１−１３アルキルまたはＣ_２−１３アルケニルである。一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ_１−６アルキルまたはＣ_２−６アルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’は直鎖アルキルまたはアルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’は、分枝鎖、例えば、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２−である。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^５はＨである。一部の実施形態では、それぞれのＲ^６はＨである。特定のこのような実施形態では、それぞれのＲ^５及びそれぞれのＲ^６はＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^７はＨである。その他の実施形態では、Ｒ^７はＣ_１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはｉ−プロピル）である。

一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は独立して、Ｃ_５−１４アルキルまたはＣ_５−１４アルケニルである。

一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は同一である。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_２アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_４アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_５アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３はＣ_７アルキルである。

その他の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は異なる。特定の実施形態では、Ｒ^２はＣ_８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_１−７（例えば、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、またはＣ_７アルキル）またはＣ_９アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_１アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^３はＣ_９アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^７及びＲ^３はＨである。

特定の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

一部の実施形態では、ｍは、５、６、７、８、または９である。一部の実施形態では、ｍは、５、７、または９である。例えば、一部の実施形態では、ｍは５である。例えば、一部の実施形態では、ｍは７である。例えば、一部の実施形態では、ｍは９である。

一部の実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱ及び−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲから選択される。

一部の実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）_２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、炭素環、及び複素環からなる群から選択される。

特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｒ^８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、または−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。

特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２、または−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である。

特定の実施形態では、Ｑは、チオ尿素またはその等価体、例えば、

または−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である。

特定の実施形態では、Ｑは−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である。例えば、Ｑが−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２である場合、ｎは４または５である。例えば、Ｒ^９は−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２である。

特定の実施形態では、Ｑは、−Ｃ（＝ＮＲ^９）Ｒまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、例えば、−ＣＨ（＝Ｎ−ＯＣＨ_３）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＣＨ_３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）−ＯＨ、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ_３）−ＯＣＨ_３である。

特定の実施形態では、Ｑは−ＯＨである。

特定の実施形態では、Ｑは、置換または非置換の５〜１０員環ヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、トリアゾール、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２−アミノ−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン−９−イル（またはグアニン−９−イル）、アデニン−９−イル、シトシン−１−イル、またはウラシル−１−イルであり、そのそれぞれは、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、−アルキル−ＯＨ、−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており、置換基は更に置換されていてもよい。特定の実施形態では、Ｑは、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノまたはジアルキルアミノ、及びＣ_１−３アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で置換された置換５〜１４員環ヘテロシクロアルキルである。例えば、Ｑは、４−メチルピペラジニル、４−（４−メトキシベンジル）ピペラジニル、イソインドリン−２−イル−１，３−ジオン、ピロリジン−１−イル−２，５−ジオン、またはイミダゾリジン−３−イル−２，４−ジオンである。

特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＲ^８であり、式中、Ｒ^８は、オキソ（＝Ｏ）、アミノ（ＮＨ_２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ_１−３アルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ_３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ^８は、シクロブテニル、例えば、３−（ジメチルアミノ）−シクロブタ−３−エン−４−イル−１，２−ジオンである。更なる実施形態では、Ｒ^８は、オキソ（＝Ｏ）、チオ（＝Ｓ）、アミノ（ＮＨ_２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ_１−３アルキル、ヘテロシクロアルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ_３−６シクロアルキルであり、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ_１−３アルキル、及びヘテロシクロアルキルは更に置換されている。例えば、Ｒ^８は、オキソ、アミノ、及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノは、例えば、Ｃ_１−３アルコキシ、アミノ、モノまたはジアルキルアミノ、及びハロのうちの１つまたは複数で更に置換されている。例えば、Ｒ^８は３−（（（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）シクロブタ−３−エニル−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ、チオ、及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は３−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは２−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ^８は、チオ及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ、チオ、及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は２−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは３−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ^８は、チオ及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びアルキルアミノまたはジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノまたはジアルキルアミノは、例えば、１つまたは複数のアルコキシで更に置換されている。例えば、Ｒ^８は３−（ビス（２−メトキシエチル）アミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及び、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキルは、例えば、１つまたは複数のＣ_１−３アルキルで更に置換されている。例えば、Ｒ^８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキル（例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニル）はメチルで更に置換されている。

特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＲ^８であり、式中、Ｒ^８は、アミノ（ＮＨ_２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ_１−３アルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたヘテロアリールである。例えば、Ｒ^８はチアゾールまたはイミダゾールである。

特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２であり、式中、Ｒ^９は、ＣＮ、Ｃ_１−６アルキル、ＮＯ_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）ＮＨＣＨ_３、−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）ＮＨ_２である。一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２であり、式中、Ｒ^９はＣＮであり、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ_１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２であり、式中、Ｒ^９は、Ｃ_１−６アルキル、ＮＯ_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、またはＨであり、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ_１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。

特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（Ｒ）_２であり、式中、Ｒ^９は、ＮＯ_２、ＣＮ、Ｃ_１−６アルキル、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）Ｎ（ＣＨ_３）_２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）ＮＨＣＨ_３、または−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ^９）ＮＨ_２である。

特定の実施形態では、Ｑは、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、例えば、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ_３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、−Ｎ（ＯＣＨ_３）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ_３、−Ｎ（ＯＣＨ_３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、−Ｎ（ＯＨ）Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ_３などである。

特定の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ_１−３アルコキシルまたはＳ（Ｏ）_ｚＣ_１−３アルキルで任意選択的に置換されたアルキルであり、式中、ｚは、０、１、または２である。

特定の実施形態では、Ｑは、非置換または置換のＣ_６−１０アリール（例えば、フェニルなど）またはＣ_３−６シクロアルキルである。

一部の実施形態では、ｎは１である。その他の実施形態では、ｎは２である。更なる実施形態では、ｎは３である。特定のその他の実施形態では、ｎは４である。例えば、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_２ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_３ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_４ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ^４はベンジルであってもよい。例えば、Ｒ^４は４−メトキシベンジルであってもよい。

一部の実施形態では、Ｒ^４はＣ_３−６炭素環である。一部の実施形態では、Ｒ^４はＣ_３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ^４は、例えば、ＯＨ、ハロ、Ｃ_１−６アルキルなどで任意選択的に置換されたシクロヘキシルであってもよい。例えば、Ｒ^４は２−ヒドロキシシクロヘキシルであってもよい。

一部の実施形態では、ＲはＨである。

一部の実施形態では、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ_１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。

一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ_１−３アルコキシル、アミノ、及びＣ_１−Ｃ_３ジアルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されたＣ_１−６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒは非置換Ｃ_１−３アルキルまたは非置換Ｃ_２−３アルケニルである。例えば、Ｒ^４は、−ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＯＨ、または−ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＣＨ_３であってもよい。

一部の実施形態では、Ｒは、置換Ｃ_１−３アルキル、例えば、ＣＨ_２ＯＨである。例えば、Ｒ^４は、−ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＢｎ、−（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_２ＯＨ、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨ_２ＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_３ＮＨＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_３、ＣＨ_２ＳＣＨ_３、ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、または−ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）_２であってもよい。

一部の実施形態では、Ｒ^４は、以下の基、

のいずれかから選択される。

一部の実施形態では、

は、以下の基、

のいずれかから選択される。

一部の実施形態では、Ｒ^４は、以下の基、

のいずれかから選択される。

一部の実施形態では、

は、以下の基、

、

のいずれかから選択される。

一部の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物はアニオンを更に含む。本明細書に記載するとおり、アニオンは、アミンと反応してアンモニウム塩を形成することができる任意のアニオンであってもよい。例としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ジフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、及びリン酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本明細書に記載の式のいずれかの化合物は、筋肉内投与用のナノ粒子組成物を作製するのに好適である。

一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環の芳香族または非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、芳香族または非芳香族のいずれかの、任意選択的に置換されたＣ_３−２０炭素環（例えば、Ｃ_３−１８炭素環、Ｃ_３−１５炭素環、Ｃ_３−１２炭素環、またはＣ_３−１０炭素環）を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ_３−６炭素環を形成する。その他の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ_６炭素環、例えば、シクロヘキシル基またはフェニル基などを形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ_３−６炭素環は、１つまたは複数のアルキル基で置換されている（例えば、同一の環原子または隣接もしくは非隣接環原子において）。例えば、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、１つまたは複数のＣ_５アルキル置換を有するシクロヘキシル基またはフェニル基を形成していてもよい。特定の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３が形成する複素環またはＣ_３−６炭素環は、炭素環基で置換されている。例えば、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、シクロヘキシルで置換されたシクロヘキシル基またはフェニル基を形成していてもよい。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ_７−１５炭素環、例えば、シクロヘプチル基、シクロペンタデカニル基、またはシクロナフチル基などを形成する。

一部の実施形態では、Ｒ^４は−（ＣＨ_２）_ｎＱ及び−（ＣＨ_２）_ｎＣＨＱＲから選択される。一部の実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ_３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）_２Ｒ^８、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群から選択される。その他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群から選択される。

一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ_３−６炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ_６炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、フェニル基を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、シクロヘキシル基を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、複素環を形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ_３−６炭素環は、１つまたは複数のアルキル基で置換されている（例えば、同一の環原子または隣接もしくは非隣接環原子において）。例えば、Ｒ^２及びＲ^３は、それらが結合している原子と共に、１つまたは複数のＣ_５アルキル置換を有するフェニル基を形成していてもよい。

一部の実施形態では、Ｒ^５及びＲ^６のうちの少なくとも１つの存在は、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ^５及びＲ^６のうちの１つは、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ^５及びＲ^６のうちの１つは、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨであり、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

一部の実施形態では、Ｒ^５及びＲ^６のうちの多くて１つの存在は、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ^５及びＲ^６のうちの１つは、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ^５及びＲ^６のうちの１つは、Ｃ_１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨであり、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。

一部の実施形態では、Ｒ^５及びＲ^６のうちの少なくとも１つの存在はメチルである。

式（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）、または（ＶＩＩＩｄ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。

一部の実施形態では、ｒは０である。一部の実施形態では、ｒは１である。

一部の実施形態では、ｎは、２、３、または４である。一部の実施形態では、ｎは２である。一部の実施形態では、ｎは４である。一部の実施形態では、ｎは３ではない。

一部の実施形態では、Ｒ^ＮはＨである。一部の実施形態では、Ｒ^ＮはＣ_１−３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ＮはＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ＮはＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^ＮはＣ_２アルキルである。

一部の実施形態では、Ｘ^ａはＯである。一部の実施形態では、Ｘ^ａはＳである。一部の実施形態では、Ｘ^ｂはＯである。一部の実施形態では、Ｘ^ｂはＳである。

一部の実施形態では、Ｒ^１０は、Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｔ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ）_２、及び複素環からなる群から選択される。

一部の実施形態では、Ｒ^１０は、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｔ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ）_２、及び複素環からなる群から選択される。

一部の実施形態では、式中、Ｒ^１０は−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｏＮ（Ｒ）_２であり、ｏは、２、３、または４である。

一部の実施形態では、式中、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２であり、ｐ^１は２である。一部の実施形態では、式中、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２であり、ｑ^１は２である。

一部の実施形態では、式中、Ｒ^１０は−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ）_２であり、ｓ^１は２である。

一部の実施形態では、式中、Ｒ^１０は、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｏＮ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐＯ（ＣＨ_２）_ｑＮ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｓＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓＯＲ）_２であり、ＲはＨまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＣ_２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ_１−Ｃ_３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ_１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ_２アルキルである。一部の実施形態では、式中、Ｒ^１０は、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｔ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｐ１Ｏ（ＣＨ_２）_ｑ１Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＨ（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ_２）_ｓ１ＯＲ）_２であり、それぞれのＲはＣ_２−Ｃ_４アルキルである。

例えば、一部の実施形態では、１つのＲはＨであり、１つのＲはＣ_２−Ｃ_４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１０は複素環である。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１０はモルホリニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ^１０はメチルピペラジニルである。

一部の実施形態では、Ｒ^５及びＲ^６のうちのそれぞれの存在はＨである。

一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、

からなる群から選択される。

更なる実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、

からなる群から選択される。

一部の実施形態では、式（ＩＩ）または式（ＩＩＶ）の化合物は、

からなる群から選択される。

一部の実施形態では、本開示の脂質は、化合物Ｉ−３４０Ａ、

（化合物Ｉ−３４０Ａ）を含む。

式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、Ｉ（ＩＢ）、Ｉ（ＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＩＩｆ）、（ＩＩＩｇ）、（ＩＩＩＩ）、（ＩＶＩ）、（ＩＶＩ−ａ）、（ＩＶＩＩ）、（ＩＶＩＩＩ）、（ＩＶＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩｂ）、（ＩＶＩＩｂ−１）、（ＩＶＩＩｂ−２）、（ＩＶＩＩｂ−３）、（ＩＶＩＩｃ）、（ＩＶＩＩｄ）、（ＩＶＩＩＩｃ）、または（ＩＶＩＩＩｄ）の脂質の中心アミン部分は、生理学的ｐＨにおいて、プロトン化されていてもよい。それゆえ、脂質は、生理学的ｐＨにおいて、正電荷または部分的な正電荷を有していてもよい。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれることもある。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷と負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。

一部の態様では、本開示のイオン性脂質は、式Ｉ（ＩＩＸ）の化合物、

（ＩＩＸ）、
またはその塩もしくは異性体のうちの１つまたは複数であってもよく、
式中、
Ｗは

または

であり、
環Ａは

または

であり、
ｔは１または２であり、
Ａ_１及びＡ_２はそれぞれ、ＣＨまたはＮから独立して選択され、
ＺはＣＨ_２または不在であり、式中、ＺがＣＨ_２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し、Ｚが不在である場合、破線（１）及び（２）は両方とも不在であり、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５は、Ｃ_５−２０アルキル、Ｃ_５−２０アルケニル、−Ｒ’’ＭＲ’、−Ｒ^＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ^＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択され、
Ｒ_Ｘ１及びＲ_Ｘ２はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ_１−_３アルキルであり、
それぞれのＭは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から独立して選択され、
Ｍ^＊はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｗ^１及びＷ^２はそれぞれ、−Ｏ−及び−Ｎ（Ｒ_６）−からなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ_６は、Ｈ及びＣ_１−５アルキルからなる群から独立して選択され、
Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３は、結合、−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨＲ−、−ＣＨＹ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｎ−、−（ＣＨ_２）_ｎ−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ_２）_ｎ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｓ）−、及び−ＣＨ（ＳＨ）−からなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ_３−６炭素環であり、
それぞれのＲ^＊は、Ｃ_１−１２アルキル及びＣ_２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲは、Ｃ_１−３アルキル及びＣ_３−６炭素環からなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ_１−１２アルキル、Ｃ_２−１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ_３−１２アルキル、Ｃ_３−１２アルケニル、及び−Ｒ^＊ＭＲ’からなる群から独立して選択され、
ｎは、１〜６の整数であり、
式中、環Ａが

である場合、
ｉ）Ｘ^１、Ｘ^２、及びＸ^３のうちの少なくとも１つは−ＣＨ_２−ではない、及び／または、
ｉｉ）Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_５のうちの少なくとも１つは−Ｒ’’ＭＲ’である。

一部の実施形態では、化合物は、式（ＩＩＸａ１）〜（ＩＩＸａ８）のいずれかの化合物、

（ＩＩＸａ１）、

（ＩＩＸａ２）、

（ＩＩＸａ３）、

（ＩＩＸａ４）、

（ＩＩＸａ５’）、

（ＩＩＸａ６）、

（ＩＩＸａ７）、または、

（ＩＩＸａ８）
である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／２７１，１４６号、第６２／３３８，４７４号、第６２／４１３，３４５号、及び第６２／５１９，８２６号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００号に記載されている化合物のうちの１つまたは複数である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１５６から選択される。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１６、４２〜６６、６８〜７６、及び７８〜１５６から選択される。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、

（化合物Ｉ−３５６（本明細書ではまた、化合物Ｍと呼ぶ））またはその塩である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、

［化合物Ｉ−Ｎ］またはその塩である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、

［化合物Ｉ−Ｏ］またはその塩である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、

［化合物Ｉ−Ｐ］またはその塩である。

一部の実施形態では、イオン性脂質は、

［化合物Ｉ−Ｑ］またはその塩である。

本明細書の式のいずれかの脂質、例えば、式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の中心アミン部分は、生理学的ｐＨにおいて、プロトン化されていてもよい。それゆえ、脂質は、生理学的ｐＨにおいて、正電荷または部分的な正電荷を有していてもよい。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれることもある。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷と負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。

一部の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約１ｍｏｌ％〜９９ｍｏｌ％の範囲である。

一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９ｍｏｌ％である。

一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約３０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％〜約６５ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、及び約４５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％の範囲である。

１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約４５ｍｏｌ％である。

１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約４０ｍｏｌ％である。

１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約５０ｍｏｌ％である。

本明細書で開示するイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物に加えて、本明細書で開示する脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、別の構成成分、例えば、コレステロール及び／またはコレステロール類似体、非カチオン性ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、及びこれらの任意の組み合わせなどを含んでいてもよい。

本発明の別のイオン性脂質は、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定群から選択してもよい。これらに加えて、イオン性アミノ脂質はまた、環状アミン基を含む脂質であってもよい。

本発明のイオン性脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１７／０７５５３１Ａ１号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物であってもよい。例えば、イオン性アミノ脂質としては、

、

、

、
及びこれらの任意の組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

本発明のイオン性脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１５／１９９９５２Ａ１号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物であってもよい。例えば、イオン性アミノ脂質としては、

、

及びこれらの任意の組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、任意の化合物、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物中に含まれている化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１〜３５６のいずれかを含む化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８（化合物Ｘまたは化合物ＩＩとも呼ばれる）、Ｉ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ４８、Ｉ５０、Ｉ１０９、Ｉ１１１、Ｉ１１３、Ｉ１８１、Ｉ１８２、Ｉ２４４、Ｉ２９２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、Ｉ３２２、Ｉ３２６、Ｉ３２８、Ｉ３３０、Ｉ３３１、及びＩ３３２からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８（化合物Ｘまたは化合物ＩＩとも呼ばれる）、Ｉ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ４８、Ｉ５０、Ｉ１０９、Ｉ１１１、Ｉ１８１、Ｉ１８２、Ｉ２９２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、Ｉ３２６、Ｉ３２８、及びＩ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、及びＩ３２６からなる群から選択される化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本発明の化合物、例えば、化合物番号１〜３５６のいずれかを含む化合物の合成は、２０１８年９月１９日出願の米国仮特許出願第６２／７３３，３１５号の合成の記述に従う。

代表的な合成経路：
化合物Ｉ−１８２：ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン

１００ｍＬのジエチルエーテル中の３，４−ジメトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオン（１ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中の２Ｍメチルアミン溶液（３．８ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）を加えると、ほぼ直ちに沈澱物が形成された。混合物を室温で２４時間攪拌してから、濾過し、濾過固体をジエチルエーテルで洗浄し、空気乾燥した。濾過固体を高温ＥｔＯＡｃ中に溶解し、濾過してから、濾液を室温まで冷まし、その後、０℃まで冷却して沈澱物を得た。この沈殿物を濾過で単離し、冷却ＥｔＯＡｃで洗浄してから空気乾燥し、その後、減圧下で乾燥させて、３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（０．７０ｇ、５ｍｍｏｌ、７３％）を白色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６） δ：ｐｐｍ８．５０（ｂｒ．ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６９Ｈｚ）；４．２７（ｓ，３Ｈ）；３．０２（ｓｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４２Ｈｚ，４．５Ｈｚ）．

ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート

１０ｍＬのエタノール中のヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、得られた無色溶液を室温で２０時間攪拌したが、その後、ＬＣ／ＭＳによると、出発アミンは残っていなかった。その溶液を減圧下で濃縮してから、残分をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜１００％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ_４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合液））で精製して、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０％）をゴム状の白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３分間。Ｃ_５１Ｈ_９５Ｎ_３Ｏ_６のＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（ＭＨ^＋）８３３．４。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ：ｐｐｍ７．８６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）；４．８６（五重項，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）；４．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）；３．２０（ｓ，６Ｈ）；２．６３（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）；２．４２（ｂｒ．ｓ，３Ｈ）；２．２８（ｍ，４Ｈ）；１．７４（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）；１．６１（ｍ，８Ｈ）；１．５０（ｍ，５Ｈ）；１．４１（ｍ，３Ｈ）；１．２５（ｂｒ．ｍ，４７Ｈ）；０．８８（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．

化合物Ｉ−３０１：ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート

ヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエートの代わりにヘプタデカン−９−イル８−（（３−アミノプロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（５００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を使用した以外は化合物１８２と同様に、化合物Ｉ−３０１を調製した。水溶液の精密検査後、残分をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜５０％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ_４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合液））で精製して、ヘプタデカン−９−イル８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（１８０ｍｇ、３２％）を白色ろう状固体として得た。ＨＰＬＣ／ＵＶ（２５４ｎｍ）：ＲＴ＝６．７７分間。Ｃ_５２Ｈ_９７Ｎ_３Ｏ_６のＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ（ＭＨ^＋）８６０．７。^１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）： δ ｐｐｍ４．８６−４．７９（ｍ，２Ｈ）；３．６６（ｂｓ，２Ｈ）；３．２５（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）；２．５６−２．５２（ｍ，２Ｈ）；２．４２−２．３７（ｍ，４Ｈ）；２．２８（ｄｄ，４Ｈ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，７．４Ｈｚ）；１．７８−１．６８（ｍ，３Ｈ）；１．６４−１．５０（ｍ，１６Ｈ）；１．４８−１．３８（ｍ，６Ｈ）；１．３２−１．１８（ｍ，４３Ｈ）；０．８８−０．８４（ｍ，１２Ｈ）．

（ｉｉ）コレステロール／構造脂質
一部の実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰは、１種または複数種の構造脂質を含む。本明細書で使用する場合、用語「構造脂質」は、ステロール及び、ステロール部分を含有する脂質をも意味する。脂質ナノ粒子中に構造脂質を組み込むことは、粒子中におけるその他の脂質の凝集を軽減させるのに役立ち得る。構造脂質としては、コレステロール、フェコステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、及びこれらの混合物を挙げることができるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質としては、コレステロール、及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。

一部の実施形態では、構造脂質はステロールである。本明細書で定義するとおり、「ステロール」は、ステロイドアルコールで構成される、ステロイドのサブグループである。特定の実施形態では、構造脂質はステロイドである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールの類似体である。特定の実施形態では、構造脂質はαトコフェロールである。構造脂質の例としては、以下、

、

、及び

が挙げられるがこれらに限定されない。

本明細書に記載のＬＮＰは、１種または複数種の構造脂質を含む。

本明細書で使用する場合、用語「構造脂質」は、ステロール及び、ステロール部分を含有する脂質をも意味する。脂質ナノ粒子中に構造脂質を組み込むことは、粒子中におけるその他の脂質の凝集を軽減させるのに役立ち得る。特定の実施形態では、構造脂質としては、コレステロール、及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。

一部の実施形態では、構造脂質はステロールである。本明細書で定義するとおり、「ステロール」は、ステロイドアルコールで構成される、ステロイドのサブグループである。構造脂質としては、ステロール（例えば、フィトステロールまたはズーステロール）を挙げることができるがこれらに限定されない。

特定の実施形態では、構造脂質はステロイドである。例えば、ステロールとしては、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、または、本明細書の表１〜表１６中の化合物Ｓ１〜１４８のうちのいずれか１つを挙げることができるがこれらに限定されない。

特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールの類似体である。

特定の実施形態では、構造脂質はαトコフェロールである。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩの構造を有する化合物、

式ＳＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、または

であり、
Ｒ^ｂ１、Ｒ^ｂ２、及びＲ^ｂ３のそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、
それぞれの

は独立して、単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ^４ａまたはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、
Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲ^Ａであり、または、Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

を形成し、
Ｌ^１ａは、不在、

、または

であり、
Ｌ^１ｂは、不在、

、または

であり、
ｍは１、２、または３であり、
Ｌ^１ｃは、不在、

、または

であり、
Ｒ^６は、任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリール、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_９ヘテロシクリル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_９ヘテロアリールである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩａの構造、

式ＳＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｂの構造、

式ＳＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｃの構造、

式ＳＩｃ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｄの構造、

式ＳＩｄ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｌ^１ａは不在である。一部の実施形態では、Ｌ^１ａは

である。一部の実施形態では、Ｌ^１ａは

である。

一部の実施形態では、Ｌ^１ｂは不在である。一部の実施形態では、Ｌ^１ｂは

である。一部の実施形態では、Ｌ^１ｂは

である。

一部の実施形態では、ｍは１または２である。一部の実施形態では、ｍは１である。一部の実施形態では、ｍは２である。

一部の実施形態では、Ｌ^１ｃは不在である。一部の実施形態では、Ｌ^１ｃは

である。一部の実施形態では、Ｌ^１ｃは

である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は

であり、式中、
ｎ１は、０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ^７は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^７は独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、ｎ１は、０、１、または２である。一部の実施形態では、ｎ１は０である。一部の実施形態では、ｎ１は１である。一部の実施形態では、ｎ１は２である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０シクロアルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０モノシクロアルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は、

、

、または

であり、式中、
ｎ２は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ３は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ４は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ５は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
ｎ６は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３であり、
それぞれのＲ^８は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^８は独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０ポリシクロアルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_１０シクロアルケニルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は、

、

、または

であり、式中、
ｎ７は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ８は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ９は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
それぞれのＲ^９は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^９は独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_９ヘテロシクリルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は、

、

、または

であり、式中、
ｎ１０は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１１は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１２は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ１３は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
それぞれのＲ^１０は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｙ^１及びＹ^２のそれぞれは独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ^Ｂ、またはＣＲ^１１ａＲ^１１ｂであり、
式中、Ｒ^ＢはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１１ａ及びＲ^１１ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｙ^２がＣＲ^１１ａＲ^１１ｂである場合、Ｙ^１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ^Ｂである。

一部の実施形態では、Ｙ^１はＯである。

一部の実施形態では、Ｙ^２はＯである。一部の実施形態では、Ｙ^２はＣＲ^１１ａＲ^１１ｂである。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^１０は独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^６は任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_９ヘテロアリールである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は

であり、式中、
Ｙ^３は、ＮＲ^Ｃ、Ｏ、またはＳであり、
ｎ１４は０、１、２、３、または４であり、
Ｒ^ＣはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
それぞれのＲ^１２は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^６は

である。一部の実施形態では、Ｒ^６は

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩの構造を有する化合物、

式ＳＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ^４ａまたはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、
Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲ^Ａであり、または、Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

を形成し、
Ｌ^１は任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキレンであり、
Ｒ^１３ａ、Ｒ^１３ｂ、及びＲ^１３ｃのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩａの構造、

式ＳＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩｂの構造、

式ＳＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｌ^１は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１３ａ、Ｒ^１３ｂ、及びＲ^１３ｃのそれぞれは独立して、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩＩの構造を有する化合物、

式ＳＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、
それぞれの

は独立して、単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ^４ａまたはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ^４ａＲ^４ｂであり、
Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｒ^４ｃであり、式中、Ｒ^４ｃは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールであり、
Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲ^Ａであり、または、Ｒ^５ａ及びＲ^５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

を形成し、
Ｒ^１４はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１５は、

、

、または

であり、式中、
Ｒ^１６はＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１７ｂは、Ｈ、ＯＲ^１７ｃ、任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリール、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１７ｃはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
ｏ１は０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
ｐ１は０、１、または２であり、
ｐ２は０、１、または２であり、
Ｚは、ＣＨ_２、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ^Ｄであり、式中、Ｒ^ＤはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
それぞれのＲ^１８は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩａの構造、

式ＳＩＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩｂの構造、

式ＳＩＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^１４は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１４は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１５は

である。一部の実施形態では、Ｒ^１５は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１６はＨである。一部の実施形態では、Ｒ^１６は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１７ａはＨである。一部の実施形態では、Ｒ^１７ａは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１７ｂはＨである。一部の実施形態では、Ｒ^１７ｂは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ^１７ｂはＯＲ^１７ｃである。

一部の実施形態では、Ｒ^１７ｃは、Ｈ、

、または

である。一部の実施形態では、Ｒ^１７ｃはＨである。一部の実施形態では、Ｒ^１７ｃは

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１５は

である。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^１８は独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、ＺはＣＨ_２である。一部の実施形態では、ＺはＯである。一部の実施形態では、ＺはＮＲ^Ｄである。

一部の実施形態では、ｏ１は、０、１、２、３、４、５、または６である。

一部の実施形態では、ｏ１は０である。一部の実施形態では、ｏ１は１である。一部の実施形態では、ｏ１は２である。一部の実施形態では、ｏ１は３である。一部の実施形態では、ｏ１は４である。一部の実施形態では、ｏ１は５である。一部の実施形態では、ｏ１は６である。

一部の実施形態では、ｐ１は０または１である。一部の実施形態では、ｐ１は０である。一部の実施形態では、ｐ１は１である。

一部の実施形態では、ｐ２は０または１である。一部の実施形態では、ｐ２は０である。一部の実施形態では、ｐ２は１である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＶの構造を有する化合物、

式ＳＩＶ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
ｓは０または１であり、
Ｒ^１９はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２０はＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２１はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＶａの構造、

式ＳＩＶａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＶｂの構造、

式ＳＩＶｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^１９は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^１９は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２０は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２１は、Ｈ、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶの構造を有する化合物、

式ＳＶ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^２２はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２３は、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６ヘテロアルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶａの構造、

式ＳＶａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶｂの構造、

式ＳＶｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^２２は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２２は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２３は、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩの構造を有する化合物、

式ＳＶＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^２４はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２５ａ及びＲ^２５ｂのそれぞれはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩａの構造、

式ＳＶＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩｂの構造、

式ＳＶＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^２４は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２４は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２５ａ及びＲ^２５ｂのそれぞれは独立して、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩの構造を有する化合物、

式ＳＶＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニル、または

であり、式中、Ｒ^１ｃ、Ｒ^１ｄ、及びＲ^１ｅのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
ｑは０または１であり、
Ｒ^２６ａ及びＲ^２６ｂのそれぞれは独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、または、Ｒ^２６ａ及びＲ^２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

または

を形成し、式中、Ｒ^２６ｃ及びＲ^２６のそれぞれは独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２７ａ及びＲ^２７ｂのそれぞれは、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩａの構造、

式ＳＶＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩｂの構造、

式ＳＶＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^２６ａ及びＲ^２６ｂは独立して、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２６ａ及びＲ^２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

または

を形成する。

を形成する。一部の実施形態では、Ｒ^２６ａ及びＲ^２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、

を形成する。

一部の実施形態では、式中、Ｒ^２６ｃ及びＲ^２６のそれぞれは独立して、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２７ａ及びＲ^２７ｂのそれぞれは、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_３アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^２７ａ及びＲ^２７ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ヒドロキシル、

、

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩＩの構造を有する化合物、

式ＳＶＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^２８はＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
ｒは１、２、または３であり、
それぞれのＲ^２９は独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３０ａ、Ｒ^３０ｂ、及びＲ^３０ｃのそれぞれはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩａの構造、

式ＳＶＩＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩｂの構造、

式ＳＶＩＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^２８は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^２８は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３０ａ、Ｒ^３０ｂ、及びＲ^３０ｃのそれぞれは独立して、

、

、または

である。

一部の実施形態では、ｒは１である。一部の実施形態では、ｒは２である。一部の実施形態では、ｒは３である。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^２９は独立して、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、それぞれのＲ^２９は独立して、Ｈまたは

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＸの構造を有する化合物、

式ＳＩＸ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^３１はＨまたはＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３２ａ及びＲ^３２ｂのそれぞれはＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＸａの構造、

式ＳＩＸａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＸｂの構造、

式ＳＩＸｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^３１は、Ｈ、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３１は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３２ａ及びＲ^３２ｂのそれぞれは独立して、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸの構造を有する化合物、

式ＳＸ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^３３ａは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは

であり、式中、Ｒ^３５は任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_６−Ｃ_１０アリールであり、
Ｒ^３３ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、または、
Ｒ^３５及びＲ^３３ｂは、それぞれが結合している原子と共に、任意選択的に置換されたＣ_３−Ｃ_９ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ^３４は、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６ヘテロアルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸａの構造、

式ＳＸａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸｂの構造、

式ＳＸｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^３３ａは

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３５は、

、

、または

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３５は

であり、式中、
ｔは０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ^３６は独立して、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、または任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６ヘテロアルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^３４は

であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。

一部の実施形態では、ｕは３または４である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩの構造を有する化合物、

式ＳＸＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｒ^３７ａ及びＲ^３７ｂのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６ヘテロアルキル、ハロ、またはヒドロキシルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩａの構造、

式ＳＸＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩｂの構造、

式ＳＸＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、Ｒ^３７ａはヒドロキシルである。

一部の実施形態では、Ｒ^３７ｂは、

、

、または

である。

一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩＩの構造を有する化合物、

式ＳＸＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ^１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキル、任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_２−Ｃ_６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ^２はＨまたはＯＲ^Ａであり、式中、Ｒ^ＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３はＨまたは

であり、

を形成し、
Ｑは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ^Ｅであり、式中、Ｒ^ＥはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^３８は任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩａの構造、

式ＳＸＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩｂの構造、

式ＳＸＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。

一部の実施形態では、ＱはＮＲ^Ｅである。

一部の実施形態では、Ｒ^ＥはＨまたは

である。

一部の実施形態では、Ｒ^ＥはＨである。一部の実施形態では、Ｒ^Ｅは

である。

一部の実施形態では、Ｒ^３８は

であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。

一部の実施形態では、ＸはＯである。

一部の実施形態では、Ｒ^１ａはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１ａはＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ_１−Ｃ_６アルキルである。

一部の実施形態では、Ｒ^１ｂはＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^２はＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^４ａはＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^４ｂはＨである。

一部の実施形態では、

は二重結合を表す。

一部の実施形態では、Ｒ^３はＨである。一部の実施形態では、Ｒ^３は

である。

一部の実施形態では、Ｒ^５ａはＨである。

一部の実施形態では、Ｒ^５ｂはＨである。

一態様では、本発明は、表１中の化合物Ｓ−１〜４２、Ｓ−１５０、Ｓ−１５４、Ｓ−１６２〜１６５、Ｓ−１６９〜１７２、及びＳ−１８４のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。本明細書で使用する場合、「ＣＭＰＤ」とは「化合物」のことを意味する。
表１．式ＳＩの化合物

一態様では、本発明は、表２中の化合物Ｓ−４３〜５０及びＳ−１７５〜１７８のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表２．式ＳＩＩの化合物

一態様では、本発明は、表３中の化合物Ｓ−５１〜６７、Ｓ−１４９、及びＳ−１５３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表３．式ＳＩＩＩの化合物

一態様では、本発明は、表４中の化合物Ｓ−６８〜７３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表４．式ＳＩＶの化合物

一態様では、本発明は、表５中の化合物Ｓ−７４〜７８のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表５．式ＳＶの化合物

一態様では、本発明は、表６中の化合物Ｓ−７９またはＳ−８０のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表６．式ＳＶＩの化合物

一態様では、本発明は、表７中の化合物Ｓ−８１〜８７、Ｓ−１５２、及びＳ−１５７のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表７．式Ｓ−ＶＩＩの化合物

一態様では、本発明は、表８中の化合物Ｓ−８８〜９７のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表８．式ＳＶＩＩＩの化合物

一態様では、本発明は、表９中の化合物Ｓ−９８〜１０５及びＳ−１８０〜１８２のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表９．式ＳＩＸの化合物

一態様では、本発明は、表１０中の化合物Ｓ−１０６の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１０．式ＳＸの化合物

一態様では、本発明は、表１１中の化合物Ｓ−１０７またはＳ−１０８の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１１．式ＳＸＩの化合物

一態様では、本発明は、表１２中の化合物Ｓ−１０９の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１２．式ＳＸＩＩの化合物

一態様では、本発明は、表１３中の化合物Ｓ−１１０〜１３０、Ｓ−１５５、Ｓ−１５６、Ｓ−１５８、Ｓ−１６０、Ｓ−１６１、Ｓ−１６６〜１６８、Ｓ−１７３、Ｓ−１７４、及びＳ−１７９のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１３．本発明の化合物

一態様では、本発明は、表１４中の化合物Ｓ−１３１〜１３３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１４．本発明の化合物

一態様では、本発明は、表１５中の化合物Ｓ−１３４〜１４８、Ｓ−１５１、及びＳ−１５９のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１５．本発明の化合物

本発明の脂質ナノ粒子の１種または複数種の構造脂質は、構造脂質の組成物（例えば、２種またはそれ以上の構造脂質の混合物、３種またはそれ以上の構造脂質の混合物、４種またはそれ以上の構造脂質の混合物、または５種またはそれ以上の構造脂質の混合物）であってもよい。構造脂質の組成物としては、ステロール（例えば、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、または、表１５中の化合物１３４〜１４８、１５１、及び１５９のうちのいずれか１つ）の任意の組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。例えば、本発明の脂質ナノ粒子の１種または複数種の構造脂質は、表１６中の組成物１８３であってもよい。
表１６．構造脂質組成物

組成物Ｓ−１８３は、化合物Ｓ−１４１、Ｓ−１４０、Ｓ−１４３、及びＳ−１４８の混合物である。一部の実施形態では、組成物Ｓ−１８３は、約３５％〜約４５％の化合物Ｓ−１４１、約２０％〜約３０％の化合物Ｓ−１４０、約２０％〜約３０％の化合物Ｓ−１４３、及び約５％〜約１５％の化合物Ｓ−１４８を含む。一部の実施形態では、組成物１８３は、約４０％の化合物Ｓ−１４１、約２５％の化合物Ｓ−１４０、約２５％の化合物Ｓ−１４３、及び約１０％の化合物Ｓ−１４８を含む。

一部の実施形態では、構造脂質はフィトステロールである。一部の実施形態では、フィトステロールは、単独または組み合わせの、シトステロール、スティグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β−シトステロール、スティグマスタノール、β−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナステロール、Δ７−アベナステロール、またはΔ７−スティグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、単一のフィトステロールである。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６種の異なるフィトステロール）の混合物である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、１種または複数種のフィトステロール及び１種または複数種のズーステロールのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、シトステロール、例えば、β−シトステロールなど）及びコレステロールのブレンドなどである。

化合物の比率
本発明の脂質ナノ粒子は本明細書に記載の構造構成成分を含んでいてもよい。脂質ナノ粒子の構造構成成分は、化合物Ｓ−１〜１４８のうちのいずれか１つ、本発明の１種または複数種の構造化合物の混合物、及び／または、コレステロール及び／またはフィトステロールと組み合わせた化合物Ｓ−１〜１４８のうちのいずれか１つであってもよい。

例えば、脂質ナノ粒子の構造構成成分は、コレステロールを含む本発明の１種または複数種の構造化合物（例えば、化合物Ｓ−１〜１４８のいずれか）の混合物であってもよい。コレステロールに対する、脂質ナノ粒子中に含まれる構造化合物のｍｏｌ％は、０〜９９ｍｏｌ％であってもよい。コレステロールに対する、脂質ナノ粒子中に含まれる構造化合物のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、６０ｍｏｌ％、７０ｍｏｌ％、８０ｍｏｌ％、または９０ｍｏｌ％であってもよい。

一態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールは、β−シトステロール、シトスタノール、カンペステロール、スティグマステロール、及びブラシカステロールのうち少なくとも２種を含む。組成物はコレステロールを追加的に含んでいてもよい。一実施形態では、β−シトステロールは、組成物中における非コレステロールステロールのうちの約３５〜９９％、例えば、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上を含む。

別の態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。

一部の実施形態では、組成物はシトスタノールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。

別の態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。

一部の実施形態では、組成物はカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。

一部の実施形態では、組成物はカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの７５〜８０％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの５〜１０％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの１０〜１５％を含む。

一部の実施形態では、組成物は別のステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの３５〜４５％を含み、スティグマステロールは組成物中におけるステロールのうちの２０〜３０％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの２０〜３０％を含み、ブラシカステロールは組成物中におけるステロールのうちの１〜５％を含む。

別の態様では、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数種の脂質ナノ粒子はイオン性脂質及び２種またはそれ以上のステロールを含み、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。

一部の実施形態では、２種またはそれ以上のステロールはシトスタノールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。

別の態様では、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数種の脂質ナノ粒子はイオン性脂質及び２種またはそれ以上のステロールを含み、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。

一部の実施形態では、２種またはそれ以上のステロールはカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。

（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質／リン脂質
一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）は、１種または複数種の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質はリン脂質である。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質代用品または代替品である。

本明細書で使用する場合、用語「非カチオン性ヘルパー脂質」とは、少なくとも８炭素長の少なくとも１つの脂肪酸鎖及び少なくとも１つの極性先端基部分を含む脂質のことを意味する。一実施形態では、ヘルパー脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質代用品である。一部の実施形態では、リン脂質またはリン脂質代用品は、例えば、１つまたは複数の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質もしくはリン脂質代用品、またはこれらの組み合わせであってもよい。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含む。

リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択することができる。

脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレン酸、αリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定群から選択することができる。

リン脂質としては、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸などが挙げられるがこれらに限定されない。リン脂質としてはまた、スフィンゴリン脂質、例えば、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。

一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ代用品、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。

一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、非ホスファチジルコリン（ＰＣ）両性イオン脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｉ７７−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代用品である。

リン脂質
本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物は、１種または複数種の非カチオン性ヘルパー脂質を含んでいてもよい。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、例えば、１種または複数種の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質またはこれらの組み合わせである。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含む。本明細書で使用する場合、「リン脂質」は、リン酸エステル部分及び１つまたは複数の炭素鎖、例えば、不飽和脂肪酸鎖などを含む脂質である。リン脂質は、１つまたは複数の多重（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つまたは複数の不飽和結合）を含んでいてもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含んでいてもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含んでいなくてもよい。特定のリン脂質は膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つまたは複数の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質が膜に融合することにより、脂質含有組成物の１種または複数種の要素が膜を通過することが可能となり得、それにより、例えば、１種または複数種の要素の細胞への送達が可能となる。

特定のリン脂質は膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つまたは複数の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質が膜に融合することにより、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１種または複数種の要素（例えば、治療薬）が膜を通過することが可能となり得、それにより、例えば、１種または複数種の要素の標的組織への送達が可能となる。

本開示の脂質ナノ粒子の脂質構成成分は、１種または複数種のリン脂質、例えば、１種または複数種の（ポリ）不飽和脂質などを含んでいてもよい。リン脂質は１つまたは複数の脂質二重層へと自己組織化し得る。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含んでいてもよい。例えば、リン脂質は、式（ＨＩＩＩ）の脂質、

（ＨＩＩＩ）、
であってもよく、
式中、Ｒ_ｐはリン脂質部分を表し、Ｒ_１及びＲ_２は、同一でも異なっていてもよい不飽和結合を含有するまたは含有しない脂肪酸部分を表す。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択してもよい。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレン酸、αリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定群から選択してもよい。分枝化、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然化学種を含む非天然化学種もまた検討される。例えば、リン脂質を、１つまたは複数のアルキン（例えば、１つまたは複数の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）で官能化してもよく、または、１つまたは複数のアルキン（例えば、１つまたは複数の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）に架橋してもよい。適切な反応条件下、アルキン基は、アジドに曝露されると、銅触媒付加環化を受け得る。このような反応は、ＬＮＰの脂質二重層を官能化して膜浸透または細胞認識を促進するのに、または、有用な構成成分、例えば、標的化部分またはイメージング部分（例えば、染料）などにＬＮＰをコンジュゲートするのに有用であり得る。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。

本明細書に記載の組成物及び方法に有用なリン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミサクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：３（シス）ＰＣ）、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：６（シス）ＰＣ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（４ＭＥ１６．０ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ（１８：２／１８：２））、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＡＰＥ１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２２：６（シス）ＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択してもよい。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。

一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＳＰＣを含む。特定の実施形態では、ＬＮＰはＤＯＰＥを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＭＰＥを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＳＰＣとＤＯＰＥの両方を含む。

一実施形態では、ＬＮＰに用いる非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＤＯＰＣ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。

リン脂質の例としては、以下、

、
（ＤＳＰＣ）、

、
（ＤＯＰＣ）、

、
（ＰＣ（１８：２（９２，１２２）／１８：２（９２，１２２））、

、
（ＤＡＰＣ）、

、
（２２：６（シス）ＰＣ）、

、
（ＤＳＰＥ）、

、
（ＤＯＰＥ）、

、
ＰＥ１８：２／１８：２、

、
ＰＥ（１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ／１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、

、
ＤＡＰＥ、

、
２２：６ＰＥ、

、
（ＬｙｓｏＰＣ１８：１）、

、
ＣｍｐｄＨ４１６

、
ＭＡＰＣＨＯ−１６、

、
エデルトシン、及び

ＣｍｐｄＨ４１７

ＤＰＰＣ

ＤＭＰＣ

ＣｍｐｄＨ４１８

ＣｍｐｄＨ４１９

ＣｍｐｄＨ４２０

ＣｍｐｄＨ４２１

ＣｍｐｄＨ４２２
が挙げられるがこれらに限定されない。

特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の類似体またはバリアントである。特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（ＨＩＸ）の化合物

（ＨＩＸ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのＲ^１は独立して、任意選択的に置換されたアルキルであり、または任意選択的に、２つのＲ^１は、介在原子と共に連結して、任意選択的に置換された単環式カルボシクリルまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロシクリルを形成し、または任意選択的に、３つのＲ^１は、介在原子と共に連結して、任意選択的に置換された二環式カルボシクリルまたは任意選択的に置換された二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは式

または

であり、
Ｌ^２のそれぞれの例は独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ_１−６アルキレンの１つのメチレンユニットは、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキニルであり、任意選択的に、式中、Ｒ^２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
化合物が式の化合物、

、
ではない場合、
ｐは１または２であり、
式中、Ｒ^２のそれぞれの例は独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである。

ｉ）リン脂質先端部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾リン脂質先端部（例えば、修飾コリン基）を含む。特定の実施形態では、修飾先端部を有するリン脂質は、修飾第四級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ^１のうちの少なくとも１つはメチルではない。特定の実施形態では、Ｒ^１のうちの少なくとも１つは水素またはメチルではない。特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩であり、
式中、
それぞれのｔは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
それぞれのｕは独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
それぞれのｖは独立して、１、２、または３である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ）の化合物は、以下の式、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ）の化合物は、以下、

（化合物Ｈ−４００）、

（化合物Ｈ−４０１）、

（化合物Ｈ−４０２）、

（化合物Ｈ−４０３）、

（化合物Ｈ−４０４）、

（化合物Ｈ−４０５）、

（化合物Ｈ−４０６）、

（化合物Ｈ−４０７）、

（化合物Ｈ−４０８）、

（化合物Ｈ−４０９）、
のうちの１つまたはその塩である。

一実施形態では、ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質として化合物Ｈ−４０９を含む。

（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾尾部を含む。特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾尾部を有するＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）またはその類似体である。本明細書に記載するとおり、「修飾尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分枝が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つまたは複数のメチレンが環式基またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはこれらの任意の組み合わせを有する尾部であってもよい。例えば、特定の実施形態では、（ＨＩＸ）の化合物は、式（ＨＩＸ−ａ）の化合物またはその塩であり、式中、Ｒ^２の少なくとも１つの例、Ｒ^２のそれぞれの例は、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキルであり、式中、Ｒ^２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されている。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ）の化合物は、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物、

（ＨＩＸ−ｃ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのｘは独立して、０〜３０の整数（０及び３０を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩＸ−ｃ−１）の化合物、

（ＨＩＸ−ｃ−１）、
またはその塩であり、
式中、
ｖのそれぞれの例は独立して、１、２、または３である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩＸ−ｃ−２）の化合物、

（ＨＩＸ−ｃ−２）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＩＸ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物は、以下、

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩＸ−ｃ−３）の化合物、

（ＨＩＸ−ｃ−３）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、

、
またはその塩である。

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、式中、第四級アミンをホスホリル基に連結させているアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。それゆえ、特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（ＨＩＸ）の化合物であり、式中、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、特定の実施形態では、式（ＨＩＸ）の化合物は、以下の式、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩＸ）の化合物は、以下、

（化合物Ｈ−４１１）

（化合物Ｈ−４１２）、

（化合物Ｈ−４１３）、

（化合物Ｈ−４１４）、
のうちの１つまたはその塩である。

特定の実施形態では、本発明のリン脂質の代わりに代替脂質を使用する。このような代替脂質の非限定例としては、以下、

、

、

、

、

、

、及び、

が挙げられる。

リン脂質尾部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は修飾尾部を含む。特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載するとおり、「修飾尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分枝が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つまたは複数のメチレンが環式基またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはこれらの任意の組み合わせを有する尾部であってもよい。例えば、特定の実施形態では、（ＨＩ）の化合物は、式（ＨＩ−ａ）の化合物またはその塩であり、式中、Ｒ^２の少なくとも１つの例、Ｒ^２のそれぞれの例は、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキルであり、式中、Ｒ^２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されている。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ａ）の化合物は、式（ＨＩ−ｃ）の化合物、

（ＨＩ−ｃ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのｘは独立して、０〜３０の整数（０及び３０を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩ−ｃ−１）の化合物、

（ＨＩ−ｃ−１）、
またはその塩であり、
式中、
ｖのそれぞれの例は独立して、１、２、または３である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩ−ｃ−２）の化合物、

（ＨＩ−ｃ−２）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、以下、

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、式（ＨＩ−ｃ−３）の化合物、

（ＨＩ−ｃ−３）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、

、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ−ｃ）の化合物は、以下、

、
またはその塩である。

ホスホコリンリンカーの修飾
特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、式中、第四級アミンをホスホリル基に連結させているアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。それゆえ、特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、式（ＨＩ）の化合物であり、式中、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、特定の実施形態では、式（ＨＩ）の化合物は、以下の式、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＨＩ）の化合物は、以下、

（ＣｍｐｄＨ１６２）

（ＣｍｐｄＨ１５４）

（ＣｍｐｄＨ１５６）

（ＣｍｐｄＨ１６３）、
のうちの１つまたはその塩である。

以下の実施例において示すとおり、ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多数のＬＮＰ製剤を調製し、活性についての試験を行った。

リン脂質代用品または代替品
一部の実施形態では、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりにオレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。一部の実施形態では、オレイン酸類似体は、修飾オレイン酸尾部、修飾カルボン酸部分、またはその両方を含む。一部の実施形態では、オレイン酸類似体は、オレイン酸のカルボン酸部分が異なる基で置換された化合物である。

一部の実施形態では、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに異なる両性イオン基を含む。

例示的なリン脂質代用品及び／または代替品は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０９９８２３（参照により本明細書に組み込まれる）において提供されている。

（ｉｖ）ＰＥＧ脂質
ＰＥＧ脂質の非限定例としては、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ−セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ならびにＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミンが挙げられる。このような脂質はまた、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であってもよい。

一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質としては、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、ＰＥＧ−ジパルメトレイル、ＰＥＧ−ジオレイル、ＰＥＧ−ジステアリル、ＰＥＧ−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ−１，２−ジミリスチルオキソプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。

一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される。

一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分は、約Ｃ_１４〜約Ｃ_２２、好ましくは約Ｃ_１４〜約Ｃ_１６の長さを有する脂質部分を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ−ＮＨ_２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。一実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ_２ｋ−ＤＭＧである。

一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含んでいてもよい。非拡散性ＰＥＧの非限定例としてはＰＥＧ−ＤＳＧ及びＰＥＧ−ＤＳＰＥが挙げられる。

ＰＥＧ脂質は当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４Ａ２号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＰＥＧ脂質などである。

一般的に、本明細書に記載の、様々な式のその他の脂質構成成分（例えば、ＰＥＧ脂質）の一部は、２０１６年１２月１０日出願、表題「ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｇｅｎｔｓ」の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号（その全体は参照により組み込まれる）に記載されているとおりに合成することができる。

脂質ナノ粒子組成物の脂質構成成分は、ポリエチレングリコールを含む１種または複数種の分子、例えば、ＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質などを含んでいてもよい。このような化学種を、代替的に、ＰＥＧ化脂質と呼んでもよい。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物を含む非限定群から選択してもよい。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であってもよい。

一部の実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ−ＤＭＧは、以下の構造、

を有する。

一実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＰＥＧ化脂質であってもよい。本明細書に記載のこれらの例示的なＰＥＧ脂質のいずれかを修飾して、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含ませてもよい。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＯＨ脂質である。本明細書において一般的に定義しているとおり、「ＰＥＧ−ＯＨ脂質」（本明細書ではまた、「ヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質」と呼ぶ）は、脂質上に１つまたは複数のヒドロキシル（−ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖上に１つまたは複数のヒドロキシル基を含む。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨ脂質またはヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に−ＯＨ基を含む。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。

一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ）の化合物、

（ＰＩ）、
またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
ｒは、１〜１００の整数であり、
Ｒ^５ＰＥＧは、Ｃ_{１０−４０}アルキル、Ｃ_{１０−４０}アルケニル、またはＣ_{１０−４０}アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ^５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ_３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ_６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、または窒素保護基である。

例えば、Ｒ^５ＰＥＧはＣ_１７アルキルである。例えば、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ−ａ）の化合物、

（ＰＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｒは、１〜１００の整数である。

例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物

（ＰＥＧ１、以下の化合物４２８または化合物Ｉとも呼ばれる）、
またはその塩もしくは異性体である。

ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ）の化合物

（ＰＩＩ）、
またはその塩もしくは異性体であってもよく、
式中、
ｓは、１〜１００の整数であり、
Ｒ’’は、水素、Ｃ１_−１０アルキル、または酸素保護基であり、
Ｒ^７ＰＥＧは、Ｃ_{１０−４０}アルキル、Ｃ_{１０−４０}アルケニル、またはＣ_{１０−４０}アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ^５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ_３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ_６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、または窒素保護基である。

一部の実施形態では、Ｒ^７ＰＥＧはＣ_{１０−６０}アルキルであり、Ｒ^７ＰＥＧのメチレン基のうちの１つまたは複数は−Ｃ（Ｏ）−で置換されている。例えば、Ｒ^７ＰＥＧはＣ_３１アルキルであり、Ｒ^７ＰＥＧのメチレン基のうちの２つは−Ｃ（Ｏ）−で置換されている。

一部の実施形態では、Ｒ’’はメチルである。

一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ−ａ）の化合物、

（ＰＩＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１〜１００の整数である。

例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物

（ＰＥＧ−２）、
またはその塩もしくは異性体である。

特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は式（ＰＩＩＩ）の化合物である。本明細書では、式（ＰＩＩＩ）の化合物

（ＰＩＩＩ）、
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ^３は−ＯＲ^Ｏであり、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１〜１００の整数（１及び１００を含む）であり、
Ｌ^１は任意選択的に置換されたＣ_１−１０アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ_１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）で置換されており、
Ｄは、クリックケミストリーにより得られた部分または生理学的条件下で開裂可能な部分であり、
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは式

または

であり、
Ｌ^２のそれぞれの例は独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ_１−６アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ_１−６アルキレンの１つのメチレンユニットは、Ｏ、Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）で任意選択的に置換されており、
Ｒ^２のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_１−３０アルキニルであり、任意選択的に、式中、Ｒ^２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）、Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）_２、Ｓ（Ｏ）_２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）_２、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、またはＮ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏで置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
ｐは１または２である。

特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物はＰＥＧ−ＯＨ脂質（すなわち、Ｒ^３は−ＯＲ^Ｏであり、Ｒ^Ｏは水素である）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ＯＨ）の化合物

（ＰＩＩＩ−ＯＨ）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、Ｄはクリックケミストリーにより得られた部分（例えば、トリアゾール）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ａ−１）または（ＰＩＩＩ−ａ−２）の化合物

または

（ＰＩＩＩ−ａ−１）（ＰＩＩＩ−ａ−２）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩であり、
式中、
ｓは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

、

、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

（化合物Ｐ−４１５Ａ）、

（化合物Ｐ−４１５）

（化合物Ｐ−４１６Ａ）、

（化合物Ｐ−４１６）

（化合物Ｐ−４１７）、

（化合物Ｐ−４１８）、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

特定の実施形態では、Ｄは生理学的条件下で開裂可能な部分（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、ウレア）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１）または（ＰＩＩＩ−ｂ−２）の化合物

（ＰＩＩＩ−ｂ−１）（ＰＩＩＩ−ｂ−２）、
またはその塩である。

特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）または（ＰＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）の化合物

（ＰＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）（ＰＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）、
またはその塩である。

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

、

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

、

、
のうちの１つの化合物またはその塩である。

特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質はＰＥＧ化脂肪酸である。特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は式（ＰＩＶ）の化合物である。本明細書では、式（ＰＩＶ）の化合物

（ＰＩＶ）、
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ^３は−ＯＲ^Ｏであり、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１〜１００の整数（１及び１００を含む）であり、
Ｒ^５は、任意選択的に置換されたＣ_{１０−４０}アルキル、任意選択的に置換された_{Ｃ１０−４０}アルケニル、または任意選択的に置換された_{Ｃ１０−４０}アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ^５の１つまたは複数のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）、Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）、ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）_２、Ｓ（Ｏ）_２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）_２、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２、Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）、またはＮ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏで置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である。

特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、式（ＰＩＶ−ＯＨ）の化合物、

（ＰＩＶ−ＯＨ）、
またはその塩である。一部の実施形態では、ｒは４０〜５０である。一部の実施形態では、ｒは４５である。

特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、以下の式、

（化合物Ｐ−４１９）、

（化合物Ｐ−４２０）、

（化合物Ｐ−４２１）、

（化合物Ｐ−４２２）、

（化合物Ｐ−４２３）、

（化合物Ｐ−４２４）、

（化合物Ｐ−４２５）、

（化合物Ｐ−４２６）、
のうちの１つの化合物またはその塩である。一部の実施形態では、ｒは４０〜５０である。一部の実施形態では、ｒは４５である。

更にその他の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、

（化合物Ｐ−４２７）、
またはその塩である。

一実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、

（化合物Ｐ−４２８）
である。

一態様において、本明細書では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質、

（ＰＶ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｌ^１は、結合、任意選択的に置換されたＣ_１−３アルキレン、任意選択的に置換されたＣ_１−３ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ_２−３アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ_２−３アルキニレンであり、
Ｒ^１は、任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキニルであり、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）である。

特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式のＰＥＧ脂質、

、
またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｙ^１は、結合、−ＣＲ_２−、−Ｏ−、−ＮＲ^Ｎ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
Ｒ^Ｎは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基である。

特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、

、

、または、

、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルである。

、

、または、

、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ｓは、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。

、

、または、

、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、

（ＰＬ１）、

（ＰＬ２）、

（ＰＬ３）、

（ＰＬ４）、

（ＰＬ５）、

（ＰＬ６）、

（ＰＬ７）、

（ＰＬ８）、

（ＰＬ９）、

（ＰＬ１０）、

（ＰＬ１１）、

（ＰＬ１２）、

（ＰＬ１３）、

（ＰＬ１４）、及び、

（ＰＬ１５）、
及びその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。

別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質、

（ＰＶＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）であり、
ｍは、５〜１５の整数（５及び１５を含む）、または１９〜３０の整数（１９及び３０を含む）である。

特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、

、

、または、

（ＰＬ１６）、

（ＰＬ１７）、

（ＰＬ１８）、または、

（ＰＬ１９）、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。

別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質、

（ＰＶＩＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｙ^２は、−Ｏ−、−ＮＲ^Ｎ−、または−Ｓ−であり、
Ｒ^１のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキニルであり、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
Ｒ^Ｎは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）である。

特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、

、または、

、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ｓのそれぞれの例は独立して、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。

、または、

特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、

（ＰＬ２０）、

（ＰＬ２１）、

（ＰＬ２２Ａ）、及び、

（ＰＬ２２）

（ＰＬ２３Ａ）、

（ＰＬ２３）
ならびにその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。

別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質、

（ＰＶＩＩＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｌ^１は、結合、任意選択的に置換されたＣ_１−３アルキレン、任意選択的に置換されたＣ_１−３ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ_２−３アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ_２−３アルキニレンであり、
Ｒ^１のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ_３−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ_５−３０アルキニルであり、
Ｒ^Ｏは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）であり、
Ｌ^１が−ＣＨ_２ＣＨ_２−または−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏはメチルではない。

特定の実施形態では、Ｌ^１が任意選択的に置換されたＣ_２またはＣ_３アルキレンである場合、Ｒ^Ｏは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ^１が任意選択的に置換されたＣ_２またはＣ_３アルキレンである場合、Ｒ^Ｏは水素である。特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＨ_２ＣＨ_２−または−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＨ_２ＣＨ_２−または−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏは水素である。

特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、式、

、
のＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｙ^１は、結合、−ＣＲ_２−、−Ｏ−、−ＮＲ^Ｎ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
Ｒ^Ｎは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基であり、
Ｙ^１が結合または−ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏはメチルではない。

特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＲ_２−である場合、Ｒ^Ｏは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＲ_２−である場合、Ｒ^Ｏは水素である。特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ^１が−ＣＨ_２−である場合、Ｒ^Ｏは水素である。

特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、

、

、

、

、

、

、

、

、

、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
それぞれのｓは独立して、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。

、

、

、

、

特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、

（ＰＬ２４）、

（ＰＬ２５）、

（ＰＬ２６）、

（ＰＬ２７）、

（ＰＬ２８）、

（ＰＬ２９）、

（ＰＬ３０）、

（ＰＬ３１）、

（ＰＬ３２）、

（ＰＬ３３）、

（ＰＬ３４）、
及びその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。

上記または関連する態様のいずれかでは、本発明のＰＥＧ脂質は主要部分であり、式中、ｒは４０〜５０である。

本明細書で提供するＬＮＰは、特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質を含む既存ＬＮＰ製剤と比較して、高いＰＥＧ分断を示す。「ＰＥＧ分断」とは、本明細書で使用する場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂のことを意味する。多くの場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂は、血清が促進するエステラーゼ開裂または加水分解によって生じる。特定の実施形態では、本明細書で提供するＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ分断の比率を制御するように設計されている。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、６０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、７０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、８０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、９０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、９０％超のＰＥＧ分断を示す。

その他の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、９５％未満、または９８％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、６０％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、７０％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、８０％未満のＰＥＧ分断を示す。

本明細書で提供するＰＥＧ脂質に加えて、ＬＮＰは、１種または複数種の別の脂質構成成分を含んでいてもよい。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜１５％のモル比率でＬＮＰ中に含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜５％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して１〜５％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して１〜２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して約１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、または２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して約１．５％のモル比率で含まれる。

一実施形態では、本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は、約０．１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％の範囲である。

一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は約２ｍｏｌ％である。一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は約１．５ｍｏｌ％である。

一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５ｍｏｌ％である。

例示的な合成：
化合物：ＨＯ−ＰＥＧ_２０００−エステル−Ｃ１８

パラジウム炭素（１０重量％、７４ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を入れた窒素充填フラスコに、ベンジル−ＰＥＧ_２０００−エステル−Ｃ１８（８２２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を加えた。そのフラスコにおいて真空引き及びＨ_２充填を３回行い、室温及び１気圧Ｈ_２で１２時間攪拌した。混合液をセライトに通して濾過し、ＤＣＭですすいでから、濾液を減圧下で濃縮して所望の生成物（６９２ｍｇ、８８％）を得た。この方法を使用すると、ｎ＝４０〜５０である。一実施形態では、得られる多分散混合物のｎは平均４５を示す。

例えば、ｒの値は、ＰＥＧ脂質内のＰＥＧ部分の分子量に基づいて決定することができる。例えば、２，０００の分子量（例えば、ＰＥＧ２０００）は、約４５のｎの値に対応している。ポリマーが多くの場合異なるポリマー鎖長の分布で存在していることから、任意の組成物におけるｎの値は、技術分野において許容される範囲内における値の分布を含み得る。例えば、このようなポリマー組成物の多分散性を了解している当業者は、実際のＰＥＧ含有組成物、例えば、ＤＭＧＰＥＧ２００ｐｅｇ脂質組成物における４５のｎ値（例えば、構造式中の）が４０〜５０の間の値の分布を示し得るということを理解するであろう。

一部の態様では、本明細書で開示する医薬組成物のＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含まない。

一実施形態では、本開示のＬＮＰはＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧＤＭＧではない。一部の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される。一部の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される。その他の態様では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである。

一実施形態では、本開示のＬＮＰは、分枝鎖である場合、約１４よりも長いまたは約１０よりも長い鎖長を有するＰＥＧ脂質を含む。

一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ４１９、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、及びＰＬ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１７、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、及びＰＬ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。

一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ１、及びＰＬ２からなる群から選択される。

例示的なＬＮＰ脂質
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質（Ｉで示す）は、任意の化合物、例えば、式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＩＩｆ）、（ＩＩＩｇ）、（ＩＩＩＩ）、（ＩＶＩ）、（ＩＶＩ−ａ）、（ＩＶＩＩ）、（ＩＶＩＩＩ）、（ＩＶＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩｂ）、（ＩＶＩＩｂ−１）、（ＩＶＩＩｂ−２）、（ＩＶＩＩｂ−３）、（ＩＶＩＩｃ）、（ＩＶＩＩｄ）、（ＩＶＩＩＩｃ）、（ＩＶＩＩＩｄ）、（ＩＩＸ）、（ＩＩＸａ１）、（ＩＩＸａ２）、（ＩＩＸａ３）、（ＩＩＸａ４）、（ＩＩＸａ５）、（ＩＩＸａ６）、（ＩＩＸａ７）、または（ＩＩＸａ８）のいずれかを有する化合物中、及び／または、化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ４８、Ｉ５０、Ｉ１０９、Ｉ１１１、Ｉ１１３、Ｉ１８１、Ｉ１８２、Ｉ２４４、Ｉ２９２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、Ｉ３２２、Ｉ３２６、Ｉ３２８、Ｉ３３０、Ｉ３３１、Ｉ３３２、またはＩＭのいずれかの中に含まれている化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、または化合物Ｉ−１８１として本明細書に記載されている化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ４８、Ｉ５０、Ｉ１０９、Ｉ１１１、Ｉ１１３、Ｉ１８１、Ｉ１８２、Ｉ２４４、Ｉ２９２、Ｉ３０１、Ｉ３０９、Ｉ３１７、Ｉ３２１、Ｉ３２２、Ｉ３２６、Ｉ３２８、Ｉ３３０、Ｉ３３１、Ｉ３３２、Ｉ３４７、Ｉ３４８、Ｉ３４９、Ｉ３５０、Ｉ３５１、及びＩ３５２からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ４８、Ｉ５０、Ｉ１０９、Ｉ１１１、Ｉ１８１、Ｉ１８２、Ｉ２９２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、Ｉ３２６、Ｉ３２８、Ｉ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ１８２、Ｉ３０１、Ｉ３２１、及びＩ３２６からなる群から選択される化合物を含む。

一実施形態では、イオン性脂質のブレンドを採用してもよい。

一実施形態では、ＬＮＰはステロールを含む。別の実施形態では、ＬＮＰは天然ステロールを含む。別の実施形態では、ＬＮＰは修飾ステロールを含む。一実施形態では、ＬＮＰは１種または複数種のフィトステロールを含む。一実施形態では、ＬＮＰはフィトステロール／コレステロールブレンドを含む。

用語「フィトステロール」とは、フィトステロイド（その塩またはエステルを含む）である植物性ステロール及びスタノールのグループのことを意味する。

用語「ステロール」とは、ステロイドアルコールとしても周知のステロイドのサブグループのことを意味する。ステロールは一般的に、２つの部類、（１）「フィトステロール」としても周知の植物ステロール、及び（２）コレステロールなどの「ズーステロール」としても周知の動物ステロールに分類される。用語「スタノール」とは、ステロール環構造中に二重結合を有していない飽和ステロールの部類のことを意味する。

一部の実施形態では、フィトステロールは、単独または組み合わせの、シトステロール、スティグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β−シトステロール、スティグマスタノール、β−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナステロール、Δ７−アベナステロール、またはΔ７−スティグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、単一のフィトステロールである。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６種の異なるフィトステロール）の混合物である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、１種または複数種のフィトステロール及び１種または複数種のズーステロールのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、シトステロール、例えば、β−シトステロールなど）及びコレステロールのブレンドなどである。

一部の実施形態では、シトステロールはβ−シトステロールである。

一部の実施形態では、β−シトステロールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはスティグマステロールである。

一部の実施形態では、スティグマステロールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはカンペステロールである。

一部の実施形態では、カンペステロールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはシトスタノールである。

一部の実施形態では、シトスタノールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはカンペスタノールである。

一部の実施形態では、カンペスタノールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはブラシカステロールである。

一部の実施形態では、ブラシカステロールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、シトステロールはフコステロールである。

一部の実施形態では、フコステロールは、式、

、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。

一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は７０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は８０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は９０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は９５％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は、９７％超、９８％超、または９９％超の純度を有する。

一実施形態では、ＬＮＰは、２種以上の構造脂質を含む。

例えば、一実施形態では、ＬＮＰはフィトステロールを含む。一実施形態では、フィトステロールは、ＬＮＰ中に含まれる唯一の構造脂質である。別の実施形態では、ＬＮＰは構造脂質のブレンドを含む。

一実施形態では、本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、約２０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４５ｍｏｌ％の範囲である。

一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、約２５ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約３５ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％の範囲である。

一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の量は、約２４ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、または約３９ｍｏｌ％である。

一部の実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０ｍｏｌ％である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１種または複数種のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１種または複数種の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は１５〜４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が３０〜４０ｍｏｌ％となるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子はそれぞれ、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。

特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。

一態様では、ＬＮＰはフィトステロールを含み、ＬＮＰは別の構造脂質を含まない。それゆえ、ＬＮＰの構造脂質（ステロール）構成成分はフィトステロールで構成される。別の態様では、ＬＮＰは、フィトステロール及び別の構造脂質を含む。それゆえ、ＬＮＰのステロール構成成分は、フィトステロール及び１種または複数種の別のステロールまたは構造脂質を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４１と呼ぶ）、カンペステロール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４３と呼ぶ）、β−シトスタノール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４４と呼ぶ）、ブラシカステロール、もしくはスティグマステロール、またはこれらの組み合わせもしくはブレンドとして、本明細書に記載の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール、カンペステロール、β−シトスタノール、ブラシカステロール、スティグマステロール、β−シトステロール−ｄ７、化合物Ｓ−３０、化合物Ｓ−３１、化合物Ｓ−３２、またはこれらの組み合わせもしくはブレンドから選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４１と呼ぶ）、カンペステロール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４３と呼ぶ）、β−シトスタノール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４４と呼ぶ）、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４４、ブラシカステロール（本明細書ではまた、ＣｍｐｄＳ１４８と呼ぶ）、または組成物Ｓ−１８３（約４０％の化合物Ｓ−１４１、約２５％の化合物Ｓ−１４０、約２５％の化合物Ｓ−１４３、及び約１０％のブラシカステロール）として、本明細書に記載の化合物を含む。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質は、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１６７、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、または化合物Ｓ−１７５として、本明細書に記載の化合物を含む。

一実施形態では、ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質を含む。上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、またはＨ−４０９として、本明細書に記載の化合物を含む。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質は、ＤＳＰＣである。その他の実施形態では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＭＰＣ、Ｈ−４０９、Ｈ−４１８、Ｈ−４２０、Ｈ−４２１、またはＨ−４２２として、本明細書に記載の化合物を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択され得る本明細書に記載の化合物を含む。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ４１９、Ｐ４２０、Ｐ４２３、Ｐ４２４、Ｐ４２８、ＰＬ５、ＰＬ１、ＰＬ２、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ２２、ＰＬ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、及びＤＳＧからなる群から選択される。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ１８、ＰＬ１９、ＰＬ５、ＰＬ１、及びＰＬ２からなる群から選択される。

その他の実施形態では、本開示は、イオン性脂質としての化合物Ｘ、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロールブレンド、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８、を含む脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｘ含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、以下のとおり、（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であってもよい。構造脂質構成成分用に、一実施形態では、構造脂質は専ら、３８％または２８％のコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の総パーセンテージのコレステロール／β−シトステロールであり、ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ−シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ−シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ−シトステロールを含んでいてもよい。別の実施形態では、構造脂質は、３８．５％の総パーセンテージのコレステロール／β−シトステロールであり、ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８．５％のβ−シトステロール、または（ｉｉ）１０％のコレステロール及び２８．５％のβ−シトステロールを含んでいてもよい。

その他の実施形態では、本開示は、イオン性脂質としての、化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ−３２１、Ｉ−２９２、Ｉ−３２６、Ｉ−１８２、Ｉ−３０１、Ｉ−４８、Ｉ−５０、Ｉ−３２８、Ｉ−３３０、Ｉ−１０９、Ｉ−１１１、またはＩ−１８１のいずれか、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としての、コレステロール、コレステロール／β−シトステロールブレンド、β−シトステロール／β−シトスタノールブレンド、β−シトステロール／カンペステロールブレンド、β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、コレステロール／カンペステロールブレンド、コレステロール／β−シトスタノールブレンド、コレステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、またはコレステロール／β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８、を含む脂質ナノ粒子を提供する。これらの組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、以下のとおり、（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２、（ｖ）４０：１８．５：４０：１．５、または（ｖｉ）４５：２０：３３．５：１．５であってもよい。一実施形態では、構造脂質構成成分用に、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ−シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のカンペステロール、（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ−シトスタノール、（ｉｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ−シトステロール、及び１０％のカンペステロール、（ｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ−シトステロール、及び１０％のβ−シトスタノール、（ｖｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉｉ）１０％のコレステロール、２０％のカンペステロール、及び１０％のβ−シトスタノール、（ｉｘ）１０％のコレステロール、１０％のカンペステロール、及び２０％のβ−シトスタノール、または（ｘ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、１０％のカンペステロール、及び１０％のβ−シトスタノールで構成される４０％の構造脂質を含んでいてもよい。別の実施形態では、構造脂質構成成分用に、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）３３．５％のコレステロール、（ｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のβ−シトステロール、（ｉｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロール、または（ｉｖ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロールで構成される３３．５％の構造脂質を含んでいてもよい。

その他の実施形態では、本開示は、構造脂質としての、カンペステロール、β−シトスタノール、またはスティグマステロール、を含む脂質ナノ粒子を提供する。ＬＮＰのその他の構成成分は、本明細書で開示する構成成分、例えば、イオン性脂質としての、化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、または化合物Ｉ−２４４、リン脂質としてのＤＳＰＣ、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８から選択してもよい。

例示的な別のＬＮＰ構成成分
界面活性剤
特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子は、１種または複数種の界面活性剤を任意選択的に含む。

特定の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。本明細書で使用する場合、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。例えば、両親媒性ポリマーは、オリゴマーフラグメント、例えば、２つまたはそれ以上のＰＥＧモノマーユニットなどを含んでいてもよい。例えば、本明細書に記載の両親媒性ポリマーはＰＳ２０であってもよい。

例えば、両親媒性ポリマーはブロックコポリマーである。

例えば、両親媒性ポリマーは凍結乾燥保護剤である。

例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧の水中において、２×１０^−４Ｍ未満の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。

例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧の水中において、約０．１×１０^−４Ｍ〜約１．３×１０^−４Ｍの範囲の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。

例えば、製剤中における両親媒性ポリマーの濃度は、例えば、凍結または凍結乾燥の前において、そのＣＭＣあたりからＣＭＣの約３０倍（例えば、そのＣＭＣの最大約２５倍、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、または約３倍）の間の範囲である。

例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマー（プルロニック（登録商標））、ポロキサミン（テトロニック（登録商標））、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選択される。

例えば、両親媒性ポリマーはポロキサマーである。例えば、両親媒性ポリマーは、以下の構造の両親媒性ポリマー、

、
であり、
式中、ａは１０〜１５０の整数であり、ｂは２０〜６０の整数である。例えば、ａは約１２でありｂは約２０である、またはａは約８０でありｂは約２７である、またはａは約６４でありｂは約３７である、またはａは約１４１でありｂは約４４である、またはａは約１０１でありｂは約５６である。

例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１２４、Ｐ１８８、Ｐ２３７、Ｐ３３８、またはＰ４０７である。

例えば、両親媒性ポリマーはＰ１８８（例えば、ポロキサマー１８８、ＣＡＳ番号９００３−１１−６、コリフォールＰ１８８としても周知）である。

例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサミン、例えば、テトロニック３０４またはテトロニック９０４である。

例えば、両親媒性ポリマーは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、例えば、３ｋＤａ、１０ｋＤａ、または２９ｋＤａの分子量を有するＰＶＰなどである。

例えば、両親媒性ポリマーは、ポリソルベート、例えば、ＰＳ２０などである。

特定の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は界面活性剤を含む。一部の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。一部の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。

例えば、非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールエーテル（Ｂｒｉｊ）、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタン、及びその誘導体からなる群から選択される。

例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ）の化合物、

（ＶＩＩＩ）、
またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
ｔは、１〜１００の整数であり、
Ｒ^{１ＢＲＩＪ}は独立して、Ｃ_{１０−４０}アルキル、Ｃ_{１０−４０}アルケニル、またはＣ_{１０−４０}アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ^５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ_３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ_６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−Ｃ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（＝ＮＲ^Ｎ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲ^ＮＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、−ＯＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^Ｎ）−、または−Ｎ（Ｒ^Ｎ）Ｓ（Ｏ）_２Ｏ−で置換されており、
Ｒ^Ｎのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、または窒素保護基である。

一部の実施形態では、Ｒ^{１ＢＲＩＪ}はＣ_１８アルキルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ａ）の化合物、

（ＶＩＩＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体である。

一部の実施形態では、Ｒ^{１ＢＲＩＪ}はＣ_１８アルケニルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ｂ）の化合物、

（ＶＩＩＩ−ｂ）、
またはその塩もしくは異性体である。

一部の実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、及びポロキサマー４０７からなる群から選択される。

一部の実施形態では、ポリソルベートは、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０である。

一部の実施形態では、ソルビタンの誘導体は、スパン（登録商標）２０、スパン（登録商標）６０、スパン（登録商標）６５、スパン（登録商標）８０、またはスパン（登録商標）８５である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中における非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．００００１％（重量／体積）〜約１％（重量／体積）、例えば、約０．００００５％（重量／体積）〜約０．５％（重量／体積）、または約０．０００１％（重量／体積）〜約０．１％（重量／体積）の範囲である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中における非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．０００００１重量％〜約１重量％、例えば、約０．０００００２重量％〜約０．８重量％、または約０．０００００５重量％〜約０．５重量％の範囲である。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中におけるＰＥＧ脂質の濃度は、約０．０１モル％〜約５０モル％、例えば、約０．０５モル％〜約２０モル％、約０．０７モル％〜約１０モル％、約０．１モル％〜約８モル％、約０．２モル％〜約５モル％、または約０．２５モル％〜約３モル％の範囲である。

アジュバント
一部の実施形態では、本発明のＬＮＰは、１種または複数種のアジュバント、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４を任意選択的に含む。

その他の構成成分
本発明のＬＮＰは、上記のセクションに記載の構成成分に加えて、１種または複数種の構成成分を任意選択的に含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種または複数種の小さな疎水性分子、例えば、ビタミン（例えば、ビタミンＡまたはビタミンＥ）またはステロールなどを含んでいてもよい。

脂質ナノ粒子はまた、１種または複数種の浸透促進分子、糖質、ポリマー、表面改質剤、またはその他の構成成分を含んでいてもよい。浸透促進分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載されている分子であってもよい。糖質としては、単糖（例えば、グルコース）及び多糖（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）を挙げることができる。

ポリマーは脂質ナノ粒子中に含まれていてもよく、及び／または、脂質ナノ粒子を封入または部分的に封入するのに使用されてもよい。ポリマーは生分解性及び／または生体適合性であってもよい。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択してもよいがこれらに限定されない。例えば、ポリマーとしては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレンビニルアセテートポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−グリコール酸コポリマー）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−グリコール酸コポリマー）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−カプロラクトンコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−カプロラクトン−グリコリドコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ＰＥＯ−Ｄ，Ｌ−ラクチドコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ＰＰＯ−Ｄ，Ｌ−ラクチドコポリマー）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレンなど、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）など、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）など、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（ビニルアセテート）など、ポリビニルハライド、例えば、ポリ（ビニルクロリド）（ＰＶＣ）など、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースなど、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）及びコポリマーならびにこれらの混合物など、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−カプロラクトンコポリマー）、トリメチレンカーボネート、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、及びポリグリセロールを挙げることができる。

表面改質剤としては、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、カチオン性界面活性剤、例えば、ジメチルジオクタデシル−アンモニウムブロミドなど）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドルム、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルソリン、チモシンβ４ドルナーゼα、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、及びＤＮａｓｅ（例えば、ｒｈＤＮａｓｅ）を挙げることができるがこれらに限定されない。表面改質剤は、ナノ粒子内に配置してもよく、及び／または、ＬＮＰの表面上に配置してもよい（例えば、コーティング、吸着、共有結合、またはその他のプロセスにより）。

脂質ナノ粒子はまた、１種または複数種の官能化脂質を含んでいてもよい。例えば、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露すると環化付加反応を受け得るアルキン基で官能化されていてもよい。詳細には、脂質二重層は、膜浸透、細胞認識、またはイメージングを容易とするのに有用な１つまたは複数の基でこのように官能化されていてもよい。ＬＮＰの表面はまた、１種または複数種の有用な抗体とコンジュゲートしていてもよい。標的細胞送達、イメージング、及び膜浸透に有用な官能基及びコンジュゲートは当該技術分野において周知である。

これらの構成成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または補助成分を含んでいてもよく、限定するわけではないが例えば、１種または複数種の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体溶媒、結合剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油剤、防腐剤、及びその他の種などである。賦形剤、例えば、ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味剤、及び着香剤などもまた含まれていてもよい。薬学的に許容される賦形剤は当該技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２１^ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照のこと）。

希釈剤の例としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖、及び／またはこれらの組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。造粒剤及び分散剤は、ポテトスターチ、コーンスターチ、タピオカスターチ、デンプングリコール酸ナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、柑橘類の果肉、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材、天然スポンジ、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、非水溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニア化合物、及び／またはこれらの組み合わせからなる非限定リストから選択してもよい。

界面活性剤及び／または乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド状のクレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びビーガム（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［スパン（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［スパン（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［スパン（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［スパン（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシレート化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びソルトール（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、クレモフォア（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルロニック（登録商標）Ｆ６８、ポロキサマー（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム、及び／またはこれらの組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。

結合剤は、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）、ゼラチン、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、天然ゴム及び合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイルランドゴケの抽出物、パンワーゴム、ガティゴム、イサポールハスクの粘液）、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン、アルギン酸塩、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、無機カルシウム塩、ケイ酸、ポリメタクリレート、ワックス、水、アルコール、ならびにこれらの組み合わせ、または任意のその他の好適な結合剤であってもよい。

防腐剤の例としては、酸化防止剤、キレート化剤、抗菌防腐剤、抗真菌防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤、及び／またはその他の防腐剤を挙げることができるがこれらに限定されない。酸化防止剤の例としては、αトコフェロール、アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられるがこれらに限定されない。キレート化剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌防腐剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられるがこれらに限定されない。抗真菌防腐剤の例としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられるがこれらに限定されない。アルコール防腐剤の例としては、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール系化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられるがこれらに限定されない。酸性防腐剤の例としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられるがこれらに限定されない。その他の防腐剤としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴＰＬＵＳ（登録商標）、フェノニップ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられるがこれらに限定されない。

緩衝剤の例としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノ−スルホネート緩衝剤（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱物質を含まない水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、及び／またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、鉱化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせからなる非限定群から選択してもよい。

油剤の例としては、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロフサスグリ種子、ルリヂサ、杜松、カミツレ、キャノーラ、ヒメウイキョウ、カルナバ、トウゴマ、桂皮、カカオバター、ココナッツ、タラ肝臓、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、マツヨイグサ、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウ種子、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、イソプロピルミリステート、ホホバ、ククイナッツ、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リツエアクベバ、マカデミアナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ニクズク、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、ヤシ、パーム核、桃仁、ピーナッツ、けしの実、カボチャ種子、菜種、コメヌカ、ローズマリー、ベニバナ、ビャクダン、サスクアナ、セイボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ナガバクコ、アザミ、ツバキ、ベチベル、クルミ、及び小麦粉芽油に加えて、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、イソプロピルミリステート、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーンオイル、及び／またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。

ＬＮＰ組成物
１つまたは複数の特定の用途または標的用に、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を設計してもよい。脂質ナノ粒子の要素及びその相対量は、特定の用途または標的に基づいて、及び／または、１種または複数種の要素の効果、毒性、費用、使いやすさ、利用能、またはその他の特徴に基づいて、選択してもよい。同様に、例えば、特定の要素の組み合わせの効果及び毒性に応じて、特定の用途または標的用に、脂質ナノ粒子の詳細な配合を選択してもよい。脂質ナノ粒子製剤の安定性は、製剤の効果及び忍容性に影響を及ぼし得る。

様々な構成要素の要素を特定の分率、例えば、モルパーセント分率で提供してもよい。

例えば、上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは構造脂質またはその塩を含む。一部の態様では、構造脂質はコレステロールまたはその塩である。更なる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。その他の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。一部の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。更なる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

特定の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質構成成分は、総ｍｏｌ％が１００％を超えない場合、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質構成成分は、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、脂質構成成分は、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。別の特定の実施形態では、脂質構成成分は、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、フィトステロールはβ−シトステロールであってもよく、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣなどのリン脂質、または、オレイン酸などのリン脂質代用品であってもよい。その他の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧであってもよく、及び／または、構造脂質はコレステロールであってもよい。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。

本明細書の実施形態に関する一部の態様では、本開示のＬＮＰのフィトステロール及び構造脂質構成成分は、約１０：１〜１：１０のフィトステロール：構造脂質、例えば、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、及び１：１０のフィトステロール：構造脂質（例えば、β−シトステロール：コレステロール）などを含む。

一部の実施形態では、ＬＮＰのフィトステロール構成成分は、フィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロールなど）のブレンドであり、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び構造脂質（例えば、コレステロール）はそれぞれ、個々のｍｏｌ％で含まれている。例えば、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は１５〜４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が３０〜４０ｍｏｌ％となるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子はそれぞれ、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。

脂質ナノ粒子中における核酸分子の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的及び／または用途、またはその他の特性に加えて、治療薬及び／または予防薬の特性に依存し得る。例えば、脂質ナノ粒子に有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及びその他の特徴に依存し得る。脂質ナノ粒子中における１種または複数種の核酸分子及びその他の要素（例えば、脂質）の相対量はまた変化し得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中におけるイオン性脂質構成成分：１種または複数種の核酸分子の（重量／重量）比率は、約５：１〜約６０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１などであってもよい。例えば、イオン性脂質構成成分：１種または複数種の核酸分子の（重量／重量）比率は、約１０：１〜約４０：１であってもよい。特定の実施形態では、（重量／重量）比率は約２０：１である。ＬＮＰ中における１種または複数種の核酸分子の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外−可視分光法）を用いて測定することができる。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１種または複数種のＲＮＡ及び１種または複数種のイオン性脂質を含み、それらの量を選択して特定のＮ：Ｐ比率をもたらしてもよい。組成物のＮ：Ｐ比率とは、１種または複数種の脂質中における窒素原子：ＲＮＡ中におけるリン酸基の数のモル比率のことを意味する。一般的に、より低いＮ：Ｐ比率が好ましい。１種または複数種のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量を選択して、約２：１〜約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１などのＮ：Ｐ比率をもたらしてもよい。特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約２：１〜約８：１であってもよい。その他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約５：１〜約８：１である。例えば、Ｎ：Ｐ比率は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約５．７：１、約５．８：１、約５．９：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であってもよい。例えば、Ｎ：Ｐ比率は約５．６７：１であってもよい。別の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約５．８：１であってもよい。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、塩、例えば、塩化物塩などを更に含んでいてもよい。

一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、糖、例えば、二糖などを更に含んでいてもよい。一部の実施形態では、製剤は、塩、例えば、塩化物塩などではなく、糖を更に含む。

物理的特性
脂質ナノ粒子の特徴はその構成成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含む脂質ナノ粒子は、異なる構造脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。同様に、脂質ナノ粒子の特徴は、その構成成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、より高いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子は、より低いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。特徴はまた、脂質ナノ粒子の調製方法及び調製条件に依存して変化し得る。

様々な方法を用いて脂質ナノ粒子を特性決定してもよい。例えば、顕微鏡（例えば、透過型電子顕微鏡または走査型電子顕微鏡）を使用して、脂質ナノ粒子の形態及び粒度分布を確認してもよい。動的光散乱法または電位差測定法（例えば、電位差滴定法）を使用して、ゼータ電位を測定してもよい。動的光散乱法をまた使用して、粒径を測定してもよい。ＺｅｔａｓｉｚｅｒＮａｎｏＺＳ（ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＬｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの機器をまた使用して、脂質ナノ粒子の複数の特徴、例えば、粒径、多分散指数、及びゼータ電位などを測定してもよい。

脂質ナノ粒子の平均径は、例えば、動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いて測定した際に、数十ｎｍ〜数百ｎｍであってもよい。例えば、平均径は、約４０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍなどであってもよい。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均径は、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約６０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約８０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約８０ｎｍ〜約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ〜約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均径は約７０ｎｍ〜約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、平均径は約８０ｎｍであってもよい。その他の実施形態では、平均径は約１００ｎｍであってもよい。

脂質ナノ粒子は比較的均一であってもよい。多分散指数を使用して、ＬＮＰの均一性、例えば、脂質ナノ粒子の粒径分布を示してもよい。本明細書で使用する場合、「多分散指数」は、系の粒径分布の均一性を表す比率である。小さな値、例えば、０．３未満は、狭い粒径分布を表す。小さな（例えば、０．３未満）多分散指数は一般的に、狭い粒径分布を表す。脂質ナノ粒子は、約０〜約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５などの多分散指数を有していてもよい。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の多分散指数は約０．１０〜約０．２０であってもよい。

脂質ナノ粒子のゼータ電位を使用して、組成物の界面動電位を示してもよい。本明細書で使用する場合、「ゼータ電位」は、例えば、粒子組成物中における、脂質の界面動電位である。

例えば、ゼータ電位は、脂質ナノ粒子の表面電荷を表し得る。より高荷電種が体内の細胞、組織、及びその他の要素と不所望に相互作用し得ることから、比較的低い電荷（正または負）を有する脂質ナノ粒子が一般的に望ましい。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子のゼータ電位は、約−１０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約０ｍＶ、約−１０ｍＶ〜約−５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約−５ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約−５ｍＶ〜約０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋１０ｍＶ、約０ｍＶ〜約＋５ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋２０ｍＶ、約＋５ｍＶ〜約＋１５ｍＶ、または約＋５ｍＶ〜約＋１０ｍＶであってもよい。

核酸分子の封入効率は、準備した初期量を基準とした、調製後に脂質ナノ粒子内に封入されているまたは別様に脂質ナノ粒子に結合している核酸分子の量を表す。封入効率は高いことが望ましい（例えば、１００％に近い）。封入効率は、例えば、１種または複数種の有機溶媒または界面活性剤で脂質ナノ粒子を分解する前後における、脂質ナノ粒子を含有する溶液中における核酸分子の量を比較することによって測定することができる。蛍光を使用して、溶液中における遊離核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の量を測定してもよい。本明細書に記載の脂質ナノ粒子における核酸分子の封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であってもよい。一部の実施形態では、封入効率は少なくとも８０％であってもよい。特定の実施形態では、封入効率は少なくとも９０％であってもよい。

脂質ナノ粒子は、１種または複数種のコーティング剤を任意選択的に含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、コーティング剤を有するカプセル剤、フィルム剤、または錠剤に製剤化されていてもよい。本明細書に記載の組成物を含むカプセル剤、フィルム剤、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引張り強度、硬度、または密度を有していてもよい。

医薬組成物
本開示は、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤と組み合わせた、本明細書に記載のｍＲＮＡまたはナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）を含む医薬組成物を含む。特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、ナノ粒子、例えば、脂質ナノ粒子中に含まれている。特定の実施形態では、ｍＲＮＡまたはナノ粒子は医薬組成物中に含まれている。様々な実施形態では、医薬組成物中に含まれる１種または複数種のｍＲＮＡは、ナノ粒子、例えば、脂質ナノ粒子内に封入されている。特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ：第２のｍＲＮＡのモル比率は、約１：５０、約１：２５、約１：１０、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、約１：１、約２：１、約３：１、約４：１、もしくは約５：１、約１０：１、約２５：１、または約５０：１である。特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ：第２のｍＲＮＡのモル比率は１：１超である。

一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ、及び少なくとも、細胞結合ＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡは、様々な重量比率、例えば、当量（重量）のそれぞれのｍＲＮＡ、またはその他のｍＲＮＡの量（重量）の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、または１００倍で含まれるｍＲＮＡのうちのいずれか１種で、共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。

一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ、及び少なくとも、細胞結合ＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡは、様々な質量のそれぞれのｍＲＮＡ、または製剤中に含まれるｍＲＮＡのうちのいずれか１種で、共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。例えば、第１のｍＲＮＡは、製剤中の第２及び／または第３のｍＲＮＡを基準として、第１のｍＲＮＡが、第２のｍＲＮＡ及び／または第３のｍＲＮＡの量の１０〜１００％、２０〜８０％、３０〜７０％、または４０〜５０％の質量の量で含まれるように、共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。別の実施形態では、第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡは、製剤中の第３のｍＲＮＡを基準として、第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡが、第３のｍＲＮＡの１０〜１００％、２０〜８０％、３０〜７０％、または４０〜５０％の質量の量で含まれるように、共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。

一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２ｍＲＮＡ：細胞結合ＩＬ−１５ｍＲＮＡは、テザー型ＩＬ−１２ｍＲＮＡ及び細胞結合ＩＬ−１５ｍＲＮＡがほぼ当量であり、ＯＸ４０ＬｍＲＮＡがより少ない重量（質量）量、例えば、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、または５．０倍より少ない重量（質量）量などで含まれるような重量（質量）比率で、共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２ｍＲＮＡ：細胞結合ＩＬ−１５ｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２ｍＲＮＡ：細胞結合ＩＬ−１５ｍＲＮＡは、０．１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。

一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡのうちのいずれか１種は、その他のｍＲＮＡの１０％〜１００％の質量でその他のｍＲＮＡと共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２ｍＲＮＡ：細胞結合ＩＬ−１５ｍＲＮＡは、０．１〜１：０．１〜１：０．１〜１の重量（質量）比率で共配合されている（例えば、ＬＮＰ内に）。

一部の実施形態では、細胞結合ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）は、１：１のモル比率で共配合された（例えば、ＬＮＰ内に）ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡである。一部の実施形態では、細胞結合ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）は、１：１．４の重量（質量）比率で共配合された（例えば、ＬＮＰ内に）ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡである。それゆえ、一部の実施形態では、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡの重量（質量）比率は２．４：２．４：１：１．４である。一実施形態では、本開示は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを２．４：２．４：１：１．４の重量（質量）比率で含むＬＮＰを提供する。

一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５Ｒαに機能的に連結したＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡの重量（質量）比率は１：１：１である。一実施形態では、本開示は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを１：１：１の重量（質量）比率で含むＬＮＰを提供する。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５Ｒαに機能的に連結したＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡの重量（質量）比率は約０．１：１：１である。一実施形態では、本開示は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを０．１：１：１の重量（質量）比率で含むＬＮＰを提供する。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５Ｒαをコードする第４のｍＲＮＡの重量（質量）比率は２．４：２．４：１：１．４である。一実施形態では、本開示は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを２．４：２．４：１：１．４の重量（質量）比率で含むＬＮＰを提供する。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードする第２のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードする第３のｍＲＮＡ：ＩＬ−１５Ｒαをコードする第４のｍＲＮＡのモル比率は約０．２４：２．４：１：１．４である。一実施形態では、本開示は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを０．２４：２．４：１：１．４の重量（質量）比率で含むＬＮＰを提供する。

医薬組成物は、１種または複数種の別の活性物質、例えば、治療的及び／または予防的に活性な物質を任意選択的に含んでいてもよい。本開示の医薬組成物は滅菌及び／または発熱性物質非含有であってもよい。薬剤の配合及び／または製造に関する一般的な検討については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ２１^ｓｔｅｄ．，ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。特定の実施形態では、医薬組成物は、ｍＲＮＡ及び脂質ナノ粒子またはそれらの複合体を含む。

本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学分野において周知または今後開発される任意の方法を用いて調製することができる。一般的に、このような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／または１種または複数種のその他補助成分と結合させてから、必要に応じて及び／または望ましい場合、その生成物に対して分離、成形及び／または包装を施して所望の単回用量単位または複数回用量単位とする工程を含む。

本開示による医薬組成物中における活性成分、薬学的に許容される賦形剤、及び／または、任意の追加成分の相対量は、治療する対象の個性、サイズ及び症状に応じて変化し、更に、組成物の投与経路に応じて変化する。例として、組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５％〜７０％、１％〜３０％、５％〜８０％、または少なくとも８０％（重量／重量）の活性成分を含んでいてもよい。

（１）安定性を向上させる、（２）細胞トランスフェクションを向上させる、（３）持続性放出または遅延放出（例えば、ｍＲＮＡのデポー製剤から）を可能とする、（４）体内分布（例えば、特定の組織または細胞型へとｍＲＮＡを向かわせる）を変化させる、（５）ｍＲＮＡがコードするポリペプチドのｉｎｖｉｖｏ翻訳を増加させる、及び／または（６）ｍＲＮＡがコードするポリペプチドのｉｎｖｉｖｏ放出特性を変化させるための１種または複数種の賦形剤を使用して、本開示のｍＲＮＡを製剤化してもよい。全ての溶媒、分散媒、希釈剤またはその他液体溶媒、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、防腐剤など通常の賦形剤に加えて、本開示の賦形剤としては、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子（例えば、リポソーム及びミセル）、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、糖質、ｍＲＮＡをトランスフェクションした細胞（例えば、対象への移植用の）、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣薬、及びこれらの組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。それゆえ、本開示の製剤は、それぞれ共に、ｍＲＮＡの安定性を向上させる、ｍＲＮＡによる細胞トランスフェクションを向上させる、ｍＲＮＡがコードするポリペプチドの発現を増加させる、及び／またはｍＲＮＡコードポリペプチドの放出特性を変化させる量で、１種または複数種の賦形剤を含んでいてもよい。更に、本開示のｍＲＮＡは、自己組織化核酸ナノ粒子を使用して製剤化されていてもよい。

医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物を調製するための技術は、当該技術分野において周知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。通常の賦形媒体の使用は、任意の通常の賦形媒体が物質またはその誘導体と不適合であり得る場合、例えば、任意の望ましくない生物学的作用を生じさせるまたは別様に医薬組成物の任意のその他の構成成分（複数可）と有害に相互作用する場合を除き、本開示の範囲内において検討され得る。賦形剤としては、例えば、抗付着剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染料（色素）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、被膜形成剤もしくはコーティング剤、流動促進剤（流動強化剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤もしくは分散剤、甘味剤、または水和水を挙げてもよい。例示的な賦形剤としては、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウムデンプン、ソルビトール、デンプン（コーン）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、本明細書に記載の製剤は、少なくとも１種の薬学的に許容される塩を含んでいてもよい。本開示の製剤中に含まれていてもよい薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の酸付加塩、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、無機酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるがこれらに限定されない。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどに加えて、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがこれらに限定されない非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の製剤は少なくとも１種のｍＲＮＡを含有していてもよい。非限定例として、製剤は、本明細書に記載の１、２、３、４、５、または５超のｍＲＮＡを含有していてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の製剤は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種のｍＲＮＡ、及び少なくとも１種の核酸配列、限定するわけではないが例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡなどを含有していてもよい。

例えば、非経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容されるエマルション剤、マイクロエマルション剤、ナノエマルション剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、及び／またはエリキシル剤が挙げられるがこれらに限定されない。活性成分に加えて、液体剤形は、当該技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、例えば、水またはその他の溶媒など、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油剤（とりわけ、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステルなど、ならびにこれらの混合物を含んでいてもよい。不活性希釈剤の他に、経口組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び／または懸濁剤などを含んでいてもよい。非経口投与用の特定の実施形態では、組成物は、可溶化剤、例えば、クレモフォア（登録商標）、アルコール、油剤、修飾油剤、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマーなど、及び／またはこれらの組み合わせと混合される。

好適な分散剤、湿潤剤、及び／または懸濁剤を使用して、周知の技術に従い、注射用製剤、例えば、滅菌注射用の水性懸濁剤または油性懸濁剤を製剤化してもよい。滅菌注射用製剤は、非毒性で非経口において許容される希釈剤及び／または溶媒中の滅菌注射用の液剤、懸濁剤、及び／またはエマルション剤、例えば、１，３−ブタンジオール中の液剤などであってもよい。使用可能で許容される媒体及び溶媒としては、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、及び等張食塩水が挙げられる。滅菌固定油は通常、溶媒または懸濁媒として用いられている。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の無刺激固定油を用いてもよい。脂肪酸、例えば、オレイン酸などを注射剤の調製に用いてもよい。例えば、細菌保持フィルターを通して濾過することにより、及び／または、使用前に滅菌水またはその他の滅菌注射用媒体中に溶解または分散させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を混合することにより、注射製剤を滅菌してもよい。

一部の実施形態では、本明細書に記載の少なくとも１種のｍＲＮＡを含む医薬組成物を哺乳動物（例えば、ヒト）に投与する。本明細書で提供する医薬組成物に関する記載は主としてヒトへの投与に好適な医薬組成物を指しているが、このような組成物が通常、任意のその他の動物、例えば、非ヒト哺乳動物への投与に好適であるということは当業者に理解されるであろう。様々な動物への投与に好適な組成物とするために、ヒトへの投与に好適な医薬組成物に変更を加えることはよく知られており、当業者である獣医薬理学者であれば、必要に応じて通常の実験を行うだけで、このような変更を設計及び／または実施することができる。医薬組成物の投与を検討する対象としては、ヒト及び／またはその他の霊長類、商業関連の哺乳動物、例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／またはラットなどを含む哺乳動物、及び／または、商業関連の鳥類、例えば、家禽、ニワトリ、カモ、ガン、及び／またはシチメンチョウなどを含む鳥類が挙げられるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、本明細書に記載の２種またはそれ以上のｍＲＮＡを対象に提供する。特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡを、同時に、または異なる時間、例えば、連続的に、対象に提供する。特定の実施形態では、第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡを、例えば、同一細胞による両方のｍＲＮＡの取り込みを促進させるために、同一の医薬組成物または製剤で、対象に提供する。

本開示はまた、免疫応答を増強するポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む容器を含むキットを含む。別の実施形態では、キットは、免疫応答を増強するポリペプチドをコードするｍＲＮＡに加えて、１種または複数種の目的の抗原をコードする１種または複数種の別のｍＲＮＡを含む容器を含む。その他の実施形態では、キットは、免疫応答を増強するポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む第１の容器、及び１種または複数種の目的の抗原をコードする１種または複数種のｍＲＮＡを含む第２の容器を含む。特定の実施形態では、免疫応答を増強するためのｍＲＮＡ、及び抗原（複数可）をコードするｍＲＮＡ（複数可）は、同一のまたは異なるナノ粒子及び／または医薬組成物中に含まれている。特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、凍結乾燥、乾燥、またはフリーズドライされている。

使用方法
一部の実施形態では、本開示は、がんの治療を必要とする対象、例えば、ヒト対象においてそれを実施するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、がんに対する免疫応答を増強するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、白血病細胞（例えば、ＡＭＬ細胞）に対する免疫応答を増強するための方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、固形腫瘍に対する免疫応答を増強するための方法を提供する。一部の実施形態では、免疫応答を増強することは、サイトカイン産生を刺激することを含む。別の実施形態では、免疫応答を増強することは、細胞性免疫（Ｔ細胞応答）を増強すること、例えば、Ｔ細胞を活性化させることなどを含む。一部の実施形態では、免疫応答を増強することは、ＮＫ細胞を活性化させることを含む。対象における免疫応答の増強は、活性化マーカーの細胞内染色によりＴ細胞活性化及びＮＫ細胞活性化のレベルを測定することを含むがこれらに限定されない、免疫応答を評価するための当該技術分野において確立されている様々な方法を用いて評価することができる。

播種性がん
一部の実施形態では、本開示は、播種性がんの治療を必要とする対象、例えば、ヒト対象においてそれを実施するための方法を提供する。一部の実施形態では、播種性がんの治療は、播種性がんに対する免疫応答を増強することを含む。播種性がんとしては、転移性がん及び、通常は固形腫瘍を形成しない、対象の循環、例えば、血液内にあるがんが挙げられる。通常は固形腫瘍を形成しない播種性がんとしては、かなりの骨髄集団を有するがんに加えて、多発性骨髄腫及びＢ細胞性白血病が挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、播種性がんは血液がんである。本明細書で使用する場合、用語「血液がん」としては、リンパ腫、白血病、骨髄腫、またはリンパ性悪性腫瘍に加えて、脾臓及びリンパ節のがんが挙げられる。例示的なリンパ腫としては、Ｂ細胞リンパ腫（Ｂ細胞性血液がん）とＴ細胞リンパ腫の両方が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫としては、ホジキンリンパ腫とほとんどの非ホジキンリンパ腫の両方が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫の非限定例としては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、小細胞リンパ球性リンパ腫（慢性リンパ性白血病と重複する）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫、縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。Ｔ細胞リンパ腫の非限定例としては、節外性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、及び血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫が挙げられる。血液悪性腫瘍としてはまた、白血病、限定するわけではないが例えば、二次性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、及び急性リンパ芽球性白血病などが挙げられる。血液悪性腫瘍としては更に、骨髄腫、限定するわけではないが例えば、多発性骨髄腫及びくすぶり型多発性骨髄腫などが挙げられる。その他の血液がん及び／またはＢ細胞またはＴ細胞関連がんは用語「血液悪性腫瘍」に包含される。

一部の実施形態では、播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である。骨髄性悪性腫瘍としては、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患または腫瘍（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）が挙げられる。

一部の実施形態では、播種性がんは原発性腫瘍の転移である。一部の実施形態では、播種性がんは、原発性腫瘍のこれまでの転移の転移である。一部の実施形態では、播種性がん細胞は、原発性腫瘍または転移部から分離して、循環血液に入っている。このような播種性がん細胞は、細胞が由来する原発性腫瘍または転移部から遠い場所に腫瘍を形成し得る。

固形腫瘍
一部の実施形態では、本開示は、固形腫瘍の治療を必要とする対象、例えば、ヒト対象においてそれを実施するための方法を提供する。一部の実施形態では、固形腫瘍の治療は、固形腫瘍に対する免疫応答を増強することを含む。

一部の実施形態では、方法は、本明細書で開示する組成物及び／またはｍＲＮＡの腫瘍内投与を含む。一部の実施形態では、腫瘍内投与は免疫応答を全身的に増強する。一部の実施形態では、腫瘍内投与は、免疫応答を全身的に増強することにより、未治療腫瘍の縮小または遅延をもたらす。

「固形腫瘍」としては、肉腫、黒色腫、癌腫、またはその他の固形腫瘍がんが挙げられるがこれらに限定されない。「肉腫」とは、胎児結合組織のような組織で構成された腫瘍のことを意味し、通常は、筋原線維組織または均質組織内に埋め込まれ密につまった細胞で構成されている。肉腫としては、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバーネシー肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅｓａｒｃｏｍａ）、脂肪肉腫（ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫肉腫、絨毛がん、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞性肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素沈着性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イェンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉肉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫が挙げられるがこれらに限定されない。

用語「黒色腫」とは、皮膚及びその他の器官におけるメラニン細胞系から生じる腫瘍のことを意味する。黒色腫としては、例えば、末端黒子型黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング−パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫が挙げられる。

用語「癌腫」とは、周囲組織に浸潤して転移を誘発する傾向のある上皮細胞から構成される悪性新生物のことを意味する。例示的な癌腫としては、例えば、小葉癌（ａｃｉｎａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小葉癌（ａｃｉｎｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺様嚢胞癌（ａｄｅｎｏｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺様嚢胞癌（ａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺様癌、副腎皮質の癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底扁平細胞癌、細気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原性癌、脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌、面皰癌、子宮体癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱癌、円柱細胞癌、管癌、硬性癌、胎児性癌、髄様癌（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、類表皮癌、腺上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維癌、ゼラチン状癌（ｇｅｌａｔｉｎｉｆｏｒｍｃａｒｃｉｎｏｍａ）、ゼラチン状癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌、巨大細胞癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子状癌、副腎様癌、乳児胎児性癌、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｏｌｌｅ）、粘液癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液分泌癌、粘液細胞癌、粘液性類表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｏｓｕｍ）、粘液癌（ｍｕｃｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌、鼻咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭状癌、門脈周囲癌、浸潤前癌、有棘細胞癌、軟性癌（ｐｕｌｔａｃｅｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、スキルス癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、バレイショ状癌、球状細胞癌、紡錘形細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、数珠様癌、血管拡張癌、毛細血管拡張癌、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣贅癌、または絨毛様癌が挙げられる。

本発明の方法による治療の対象となるがん及び／または腫瘍としては、直接的な腫瘍内投与及び／または局所投与、すなわち、標的腫瘍の領域における投与を介してアクセス可能ながん及び／または腫瘍が挙げられる。例えば、単純な注射器注射を用いた投与でアクセス可能な腫瘍は、容易に治療の対象となる。注射に何らかのイメージング及び／またはガイド投与が必要となる腫瘍、及び／または、イメージガイド経皮注射、もしくは部位に直接入れたカテーテル／カニューレ、または内視鏡検査を介した注射が可能な腫瘍もまた治療の対象となる。

一部の実施形態では、固形腫瘍は、免疫原性である腫瘍微小環境を含む。一部の実施形態では、免疫原性腫瘍微小環境は、より高いＴ細胞浸潤及びＴｈ１サイトカイン発現を特徴とする。一部の実施形態では、固形腫瘍は、免疫学的に不毛な腫瘍微小環境を含む。一部の実施形態では、免疫学的に不毛な腫瘍微小環境は散在性のＴ細胞浸潤を特徴とする。一部の実施形態では、固形腫瘍は、免疫チェックポイント療法に耐性を示す及び／または免疫チェックポイント療法に対して反応を示さない。Ｍｏｓｌｅｙｅｔａｌ．は、これらの様々な腫瘍微小環境について記載している（Ｍｏｓｌｅｙｅｔａｌ．ＲａｔｉｏｎａｌＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＳｙｎｇｅｎｉｃＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌＴｕｍｏｒＭｏｄｅｌｓｆｏｒＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈ，ｄｏｉ：１０．１１５８／２３２６−６０６６．ＣＩＲ−１６−０１１４（２０１６）（参照により本明細書に組み込まれる））。

特定の実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡを使用して腫瘍微小環境を調節してもよい、及び／または、治療する対象における腫瘍微小環境に基づいた治療用に本明細書に記載のｍＲＮＡを選択してもよい。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを使用して、炎症性腫瘍微小環境を有する腫瘍を治療する。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを使用して、免疫抑制性腫瘍微小環境を有する腫瘍を治療する。一部の実施形態では、ｍＲＮＡを使用して、免疫学的に不毛な腫瘍微小環境を有する腫瘍を治療する。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む本開示の組成物（またはその脂質ナノ粒子、もしくはその医薬組成物）を対象に投与することを含む。

複数種のｍＲＮＡを使用する場合、それらのｍＲＮＡを、例えば、同一の脂質ナノ粒子内に共配合してもよい、及び／または、それらのｍＲＮＡを同時投与してもよい。代替的に、異なるｍＲＮＡを異なる時間に対象に投与してもよい。例えば、第２のｍＲＮＡ組成物（例えば、ＩＬ−１２ポリペプチド及び／またはＩＬ−１５ポリペプチドをコードする）を投与する１〜３０日前、例えば、３日前、５日前、７日前、１０日前、１４日前、２１日前、２８日前に、１種のｍＲＮＡ組成物（例えば、ＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする）を投与してもよい。

本開示の組成物は有効量で対象に投与される。一般的に、有効量の組成物は、細胞内におけるコードポリペプチドの効率的な産生を可能とする。効率の測定基準としては、ポリペプチド翻訳（ポリペプチド発現によって示される）、ｍＲＮＡ分解のレベル、及び免疫応答指標を挙げることができる。

がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するための本開示の方法を様々な臨床用途または治療用途に使用してもよい。例えば、方法を使用して、がんを有する対象における抗がん免疫（例えば、骨髄性悪性腫瘍を有する対象における抗悪性腫瘍免疫）を刺激してもよい。

特定の実施形態では、本明細書に記載の少なくとも１種のｍＲＮＡ組成物を対象に投与する。関連実施形態では、ｍＲＮＡ（複数可）を含むナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）を対象に提供するまたは投与する。更なる関連実施形態では、対象用の本開示の医薬組成物を対象に提供するまたは投与する。特定の実施形態では、医薬組成物は本明細書に記載のｍＲＮＡ（複数可）を含む、または、医薬組成物はｍＲＮＡ（複数可）を含むナノ粒子を含む。特定の実施形態では、ｍＲＮＡ（複数可）は、ナノ粒子、例えば、脂質ナノ粒子中に含まれている。特定の実施形態では、ｍＲＮＡ（複数可）またはナノ粒子は医薬組成物中に含まれている。

一部の実施形態では、ｍＲＮＡ（複数可）、ナノ粒子、または医薬組成物は、非経口で患者に投与される。特定の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトである。様々な実施形態では、有効量のｍＲＮＡ（複数可）を対象に提供する。

がんを治療するための方法は、対象における抗腫瘍応答を増強する別の薬剤及び／または腫瘍に対して細胞傷害性である別の薬剤（例えば、化学療法剤）を用いた対象の治療を更に含んでいてもよい。組み合わせ療法に用いる好適な治療薬としては、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤を含む低分子化学療法剤に加えて、生物学的抗がん剤、例えば、抗がん抗体（以下に更に記載する抗がん抗体を含むがこれらに限定されない）などが挙げられる。組み合わせ療法としては、抗腫瘍免疫を増強させるための免疫チェックポイント阻害剤、例えば、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、及びＣＴＬＡ−４阻害剤、ならびにこれらの組み合わせ（例えば、ＰＤ−１阻害剤＋ＣＴＬＡ−４阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤＋ＣＴＬＡ−４阻害剤、またはＰＤ−１阻害剤＋ＰＤ−Ｌ１阻害剤）などを対象に投与することを挙げることができる。一実施形態では、免疫チェックポイントを調節する薬剤は抗体である。別の実施形態では、免疫チェックポイントを調節する薬剤はタンパク質調節因子または低分子調節因子である。別の実施形態では、薬剤（例えば、ｍＲＮＡなど）は、免疫チェックポイントの抗体調節因子をコードしている。組み合わせ療法に用いることができる免疫チェックポイント阻害剤の非限定例としては、ペンブロリズマブ、アレムツズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、オファツムマブ、ＭＥＤＩ０６８０及びＰＤＲ００１、ＡＭＰ−２２４、ＰＦ−０６８０１５９１、ＢＧＢ−Ａ３１７、ＲＥＧＮ２８１０、ＳＨＲ−１２１０、ＴＳＲ−０４２、アフィマー、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ９３６５５９、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＡＧＥＮ１８８４、ＭＥＤＩ６４６９及びＭＯＸＲ０９１６が挙げられる。

一実施形態では、単回用量の本開示のｍＲＮＡ（複数可）（例えば、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（またはヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ））を、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１、またはこれらの組み合わせ）を用いた治療と組み合わせて使用する。別の実施形態では、複数回用量（例えば、Ｑ７Ｄ×３）の本開示のｍＲＮＡ（複数可）（例えば、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ＋ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（またはヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ））を、少なくとも１種の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１、またはこれらの組み合わせ）を用いた治療と組み合わせて使用する。免疫チェックポイント阻害剤（複数可）を用いた治療は、単回用量のチェックポイント阻害剤（複数可）の投与、または、より一般的には、複数回用量のチェックポイント阻害剤（複数可）の投与を含んでいてもよい。

本開示の１種または複数種のｍＲＮＡを含む医薬組成物を任意の好適な経路で対象に投与してもよい。一部の実施形態では、本開示の組成物は、非経口（例えば、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、硬膜内、病巣内、または頭蓋内の注射に加えて、任意の好適な注入手法）、経口、経皮または皮内、皮膚内、直腸、膣内、局所（例えば、粉末剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤、及び／またはドロップ剤による）、粘膜、経鼻、頬側、経腸、硝子体内、腫瘍内、舌下、鼻腔内、経口スプレー剤及び／または経口粉末剤、経鼻スプレー剤及び／または経鼻エアロゾル剤としての気管内注入、気管支注入、及び／または吸入によるもの、及び／または、門脈カテーテルによるものを含む様々な経路のうちの１つまたは複数で投与される。一部の実施形態では、組成物を静脈内、筋肉内、皮内、動脈内、腫瘍内、皮下、または吸入で投与してもよい。一部の実施形態では、組成物を筋肉内投与する。しかしながら、本開示は、薬物送達技術の進歩の可能性を考慮した任意の適切な経路による、本開示の組成物の送達を包含する。一般的に、最も適切な投与経路は、１種または複数種のｍＲＮＡを含む医薬組成物の性質（例えば、様々な身体環境、例えば、血流及び胃腸管などにおける医薬組成物の安定性）、及び患者の状態（例えば、患者が特定の投与経路に耐えることができるかどうか）を含む様々な因子によって決まる。

特定の実施形態では、任意の用量で、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルで本開示の組成物を投与してもよく、１ｍｇ／ｋｇの用量は、対象の体重１ｋｇあたり１ｍｇのｍＲＮＡまたはナノ粒子をもたらす。特定の実施形態では、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量の本開示のｍＲＮＡまたはナノ粒子を投与してもよい。

用量を、１日あたり１回または複数回、同一のまたは異なる量で投与して、所望のレベルのｍＲＮＡ発現及び／または効果（例えば、治療効果）を得てもよい。所望の用量を、例えば、１日３回、１日２回、１日１回、隔日、３日に１回、毎週、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回、送達してもよい。特定の実施形態では、所望の用量を、単回用量の複数回投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはそれ以上の回数の投与）を用いて送達するが、それは「分割投与」と呼ばれる。例えば、２ｍｇ／ｋｇの単回ボーラス用量の代わりに０．６７ｍｇ／ｋｇを１週間に３回投与することにより、週に２ｍｇ／ｋｇの所望の用量を週にわたって対象に投与してもよい。一部の実施形態では、分割投与レジメンは、同一総用量の単回ボーラスと比較して高い抗がん効果をもたらす。一部の実施形態では、分割投与レジメンは、同一総用量の単回ボーラスと比較してより少ない毒性をもたらす。一部の実施形態では、分割投与レジメンは、単回ボーラス用量と比較してより良好に対象に許容される。一部の実施形態では、分割投与の高い効果は、ｍＲＮＡコードポリペプチドへのより多いまたは高い曝露によるものである。曝露を測定するための方法としては、試料中のｍＲＮＡコードポリペプチドの濃度を測定すること、ｍＲＮＡコードポリペプチドの半減期を測定すること、及び／または、時間に対する試料（例えば、血漿）中の薬物濃度の曲線下面積（ＡＵＣ）を測定することが挙げられるがこれらに限定されない。

一部の実施形態では、例えば、外科的処置の前後、または、急性の疾患、障害、または症状の発生時に、単回用量を投与してもよい。任意の個々の患者における、個々の治療的に有効、予防的に有効、または別様に適切な用量レベルは、治療する障害の重症度及び個性（ある場合）、用いる１種または複数種のｍＲＮＡ、用いる個々の組成物、患者の年齢、体重、全身健康、性別、及び栄養、用いる個々の医薬組成物の投与期間、投与経路、及び排出速度、治療期間、用いる個々の医薬組成物と組み合わせて用いるまたは同時に用いる薬物、ならびに医学技術分野において周知の類似の因子を含む様々な因子によって決まる。

一部の実施形態では、別の薬剤、例えば、別の治療薬、予防薬、及び／または診断薬と組み合わせて、本開示の医薬組成物を投与してもよい。「と組み合わせて」は、薬剤を同時に投与する及び／または共に送達するために製剤化する必要があるということを意味することを意図するものではないが、これらの送達方法は本開示の範囲内である。例えば、１種または複数種の異なるｍＲＮＡを含む１種または複数種の組成物を組み合わせて投与してもよい。１種または複数種のその他の所望の治療薬または医学的処置と同時に、その前に、またはその後に、組成物を投与してもよい。一般的に、それぞれの薬剤は、その薬剤用に決められた用量及び／またはタイムスケジュールで投与される。一部の実施形態では、本開示は、本開示の組成物、またはそのイメージング用、診断用、もしくは予防用組成物の生物学的利用能を向上させる、その代謝を低下及び／または変化させる、その排出を抑制する、及び／または体内におけるその分布を変化させる薬剤と組み合わせた、本開示の組成物、またはそのイメージング用、診断用、もしくは予防用組成物の送達を包含する。

本開示の組成物と組み合わせて投与してもよい例示的な治療薬としては、細胞傷害剤、化学療法剤、脱メチル化剤、プロアポトーシス剤、低分子／キナーゼ阻害剤、及び、現時点または後日において、がん、例えば、ＡＭＬまたはＭＤＳ用に承認される治療薬を含むその他の治療薬が挙げられるがこれらに限定されない。細胞傷害剤としては、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、メイタンシノイド、ラケルマイシン、及びそれらの類似体を挙げてもよい。放射性イオンもまた治療薬として使用することができ、それらとしては、例えば、放射性のヨウ素、ストロンチウム、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、コバルト、イットリウム、サマリウム、及びプラセオジムを挙げてもよい。その他の治療薬としては、例えば、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、及び５−フルオロウラシル、ならびにデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、ラケルマイシン、メルファラン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）、ならびにシスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン）、及び抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、及びメイタンシノイド）を挙げてもよい。

組み合わせレジメンに用いるための療法（治療薬または処置）の個々の組み合わせについては、所望の治療薬及び／または処置と得られる所望の治療効果の適合性を考慮に入れる。用いる療法が同一障害用の所望の効果を達成し得る（例えば、がんを治療するのに有用な組成物を化学療法剤と同時に投与してもよい）、または用いる療法が異なる効果（例えば、任意の副作用の制御）を達成し得るということもまた理解されるであろう。

キット
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のｍＲＮＡを含むキットを提供する。例えば、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子内に共配合された、（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉｉ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｖ）ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子内に共配合された、（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを含む。それゆえ、一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載のｍＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体または医薬組成物を含む容器、及び脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与のための取扱説明書を含む添付文書を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載のｍＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体または医薬組成物を含む容器、及び個体におけるがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するまたはがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）の進行を遅らせるための脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与のための取扱説明書を含む添付文書を含む。一部の態様では、添付文書は、個体におけるがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するまたはがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）の進行を遅らせるための、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子または医薬組成物の投与のための取扱説明書を更に含む。

一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載のｍＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体または医薬組成物を含む薬剤、及び薬剤単独またはチェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載のｍＲＮＡを封入した脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体または医薬組成物を含む薬剤、及び薬剤単独または、個体におけるがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するまたはがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）の進行を遅らせるための、チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書を含む。一部の態様では、キットは、個体におけるがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するまたはがん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）の進行を遅らせるための第２の薬剤の投与の前の、それと同時の、またはそれの後の、第１の薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書を更に含む。

定義
アブスコパル効果：本明細書で使用する場合、「アブスコパル効果」とは、治療薬（例えば、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ）の腫瘍への局所投与が治療腫瘍のサイズ縮小だけではなく治療領域の外側の腫瘍のサイズ縮小もまたもたらす、転移性がんを含むがんの治療における現象のことを意味する。一部の実施形態では、アブスコパル効果は、治療腫瘍に対して近接しているまたは近い腫瘍が影響を受ける局所領域性のアブスコパル効果である。一部の実施形態では、アブスコパル効果は、治療腫瘍に対して遠い腫瘍において生じる。一部の実施形態では、治療薬（例えば、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ）は腫瘍内注射により投与され、注射を行った腫瘍及び注射を行っていない近接しているまたは遠い腫瘍における腫瘍サイズの縮小がもたらされる。

投与すること：本明細書で使用する場合、「投与すること」とは、組成物を対象または患者に送達するための方法のことを意味する。投与の方法は、体の特定の領域または系へと標的送達する（例えば、特異的に送達する）ために選択され得る。例えば、投与は、非経口（例えば、皮下、皮内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、硬膜内、病巣内、または頭蓋内の注射に加えて、任意の好適な注入手法）、経口、経皮または皮内、皮膚内、直腸、膣内、局所（例えば、粉末剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、ローション剤、及び／またはドロップ剤による）、粘膜、経鼻、頬側、経腸、硝子体内、腫瘍内、舌下、鼻腔内、経口スプレー剤及び／または経口粉末剤、経鼻スプレー剤及び／または経鼻エアロゾル剤としての気管内注入、気管支注入、及び／または吸入によるもの、及び／または、門脈カテーテルによるものであってもよい。

約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）、約（ａｂｏｕｔ）：本明細書で使用する場合、１つまたは複数の目的の値に適用する用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」とは、明記した基準値に類似した値のことを意味する。特定の実施形態では、用語「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」または「約（ａｂｏｕｔ）」とは、特に明記しない限りまたは文脈から明らかでない限りにおいて、明記した基準値のいずれかの方向（超または未満）における２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の％内に含まれる値の範囲のことを意味する（このような数値が可能な値の１００％を超え得る場合を除く）。

がん：本明細書で使用する場合、「がん」は、異常及び／または不規則な細胞増殖を伴う症状である。用語「がん」は良性のがん及び悪性のがんを包含する。例示的な非限定のがんとしては、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児期がん、原発起源不明のがん、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリーの腫瘍、眼球癌、胆嚢癌、胃腸カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭癌及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄異形成症候群（不応性貧血及び不応性血球減少症を含む）、骨髄増殖性腫瘍または骨髄増殖性疾患（真性多血症、特発性血小板増加症、及び原発性骨髄線維症を含む）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び口咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織肉腫、基底細胞皮膚癌及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、腟癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、ならびに、がん治療により生じた二次性のがんが挙げられる。一部の実施形態では、がんは、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、卵巣癌、または結腸直腸癌である。その他の実施形態では、がんは血液系がんまたは造血系がんである。一部の実施形態では、がんは、骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどである。

細胞結合：本明細書で使用する場合、用語「細胞結合」とは、天然（例えば、野生型形態）またはｍＲＮＡコードポリペプチドの改変（例えば、組換え技術による）に起因した設計によるのいずれかにおける、細胞の表面上におけるｍＲＮＡコードポリペプチドの位置のことを意味し、その結果、発現するとポリペプチドは細胞表面に結合する。一部の実施形態では、「細胞結合」とは、細胞表面（例えば、膜貫通ドメインを含む）に天然に結合したｍＲＮＡコードポリペプチド、または発現すると、細胞表面に結合した、結合する（例えば、複合体を形成する）ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（複数可）の組み合わせのことを意味する。例えば、ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡは、発現すると、ＩＬ−１５が膜結合受容体と結合した複合体を形成することにより、受容体に結合した際にＩＬ−１５を細胞の表面に固定する。その他の実施形態では、「細胞結合」とは、ポリペプチドを細胞の表面に固定する、膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン）を含むように改変された天然に可溶性のポリペプチド（例えば、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１２など）をコードするｍＲＮＡのことを意味する。この「細胞結合」はまた、本明細書において、テザー型ポリペプチドまたはテザー型サイトカインのことを意味する。

開裂可能なリンカー：本明細書で使用する場合、用語「開裂可能なリンカー」とは、リンカー、一般的には、同一ｍＲＮＡから等モルレベルの複数種の遺伝子を生成することができるマルチシストロン性ｍＲＮＡ構築物に導入可能なペプチドリンカー（例えば、約５〜３０アミノ酸長、一般的には、約１０〜２０アミノ酸長）のことを意味する。開裂可能なリンカーの非限定例としては、ｍＲＮＡ構築物に導入されると（例えば、２つのポリペプチドドメイン間に）、２ＡエレメントのＣ末端におけるペプチド結合の合成をリボソームにスキップさせることで２Ａ配列の末端と下流の次のペプチドの間の分離をもたらすことによって機能する、ピコルナウイルスにおいて初めて発見された、Ｆ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びＥ２Ａを含む２Ａファミリーのペプチドが挙げられる。

コンジュゲートした：本明細書で使用する場合、２つまたはそれ以上の部分に関して使用する場合の用語「コンジュゲートした」とは、それらの部分が、直接的にまたは連結因子として機能する１つまたは複数の別の部分を介してのいずれかで、互いに物理的に結合または連結し、十分に安定な構造物を形成し、その結果、それらの部分が、その構造物を使用する条件下、例えば、生理学的条件下で物理的に結合した状態を保っていることを意味する。一部の実施形態では、２つまたはそれ以上の部分は直接的な共有化学結合によってコンジュゲートされていてもよい。その他の実施形態では、２つまたはそれ以上の部分はイオン結合または水素結合によってコンジュゲートされていてもよい。

接触させること：本明細書で使用する場合、用語「接触させること」とは、２つまたはそれ以上の要素間における物理的な連結を構築することを意味する。例えば、細胞をｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子組成物と接触させることは、それら細胞及びｍＲＮＡまたは脂質ナノ粒子に物理的な連結を共有させることを意味する。ｉｎｖｉｖｏ、ｉｎｖｉｔｒｏと、ｅｘｖｉｖｏの両方で、細胞を外部の要素と接触させるための方法は、生物学的技術分野において周知である。本開示の例示的な実施形態では、哺乳動物細胞を組成物（例えば、本開示の単離したｍＲＮＡ、ナノ粒子、または医薬組成物）と接触させる工程をｉｎｖｉｖｏで実施する。例えば、脂質ナノ粒子組成物及び生物（例えば、哺乳動物）内に配置可能な細胞（例えば、哺乳動物細胞）を接触させることは、任意の好適な投与経路（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、及び皮下投与を含む、生物への非経口投与）によって実施することができる。ｉｎｖｉｔｒｏで存在する細胞においては、組成物（例えば、脂質ナノ粒子または単離ｍＲＮＡ）及び細胞は、例えば、組成物を細胞の培地に加えることによって接触させてもよく、トランスフェクションさせるまたはトランスフェクションをもたらしてもよい。更に、２種以上の細胞をナノ粒子組成物と接触させてもよい。

播種性がん：本明細書で使用する場合、用語「播種性がん」とは、対象内における血中がん細胞のことを意味する。一部の実施形態では、播種性がん細胞は原発性腫瘍または転移部から分離している。一部の実施形態では、播種性がんとしては、通常は固形腫瘍を形成せず対象の循環中、例えば、対象の血液中に存在する播種性がんが挙げられる。一部の実施形態では、播種性がん細胞は、造血系に由来する播種性がん細胞である。一部の実施形態では、播種性がんとしては、かなりの骨髄集団を有する播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などに加えて、リンパ腫、白血病などが挙げられる。

封入する：本明細書で使用する場合、用語「封入する」とは、密閉する、囲む、または包むことを意味する。一部の実施形態では、化合物、ｍＲＮＡ、またはその他の組成物は、完全に封入されていてもよく、部分的に封入されていてもよく、または、実質的に封入されていてもよい。例えば、一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子、例えば、リポソーム内に封入されていてもよい。

有効量：本明細書で使用する場合、用語「有効量」の薬剤は、有利または望ましい結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量の薬剤であり、それゆえ、「有効量」はそれが適用される状況によって決まる。例えば、がんを治療する薬剤を投与する状況における薬剤の有効量は、例えば、その薬剤を投与せずに得られる応答と比較して、がんの本明細書で定義する治療を達成するのに十分な量である。一部の実施形態では、治療有効量は、感染症、疾患、障害、及び／または症状を患っているまたはそれらにかかりやすい対象に投与する際に、感染症、疾患、障害、及び／または症状を治療する、それらの症候を改善する、それらを診断する、それらを予防する、及び／またはそれらの発症を遅らせるのに十分な、送達される薬剤（例えば、核酸、薬物、治療薬、診断薬、または予防薬）の量である。

発現：本明細書で使用する場合、核酸配列の「発現」とは、以下のイベント、（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）、（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、エディティング、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）、（３）ＲＮＡのポリペプチドまたはタンパク質への翻訳、及び（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾、のうちの１つまたは複数のことを意味する。

分割投与：本明細書で使用する場合、「分割投与」とは、所定用量のｍＲＮＡ（例えば、総量のｍＲＮＡ）を採用してそれを特定の期間（投与間隔、例えば、毎週、隔週、隔月）にわたる少なくとも２回の用量に分割することにより、その結果、所定用量または総量のｍＲＮＡが所定用量の単回ボーラス用量ではなく複数回用量でその期間にわたり対象に投与される、投与レジメンのことを意味する。一部の実施形態では、用量は、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回の用量に分割される。一部の実施形態では、分割投与は、用量を経時的に一定でもたらす注入を含む。

フラグメント：「フラグメント」とは、本明細書で使用する場合、部分のことを意味する。例えば、タンパク質のフラグメントとしては、培養細胞から単離した全長タンパク質を消化することによって得られたポリペプチド、または組換えＤＮＡ技術によって得られたポリペプチドを挙げることができる。

非相同：本明細書で使用する場合、「非相同」は、配列（例えば、アミノ酸配列またはアミノ酸配列をコードする核酸）が、通常は、任意のポリペプチドまたは核酸内に存在していないことを示す。例えば、あるタンパク質のドメインまたはモチーフに対応するアミノ酸配列は、第２のタンパク質に対して非相同であり得る。

疎水性アミノ酸：本明細書で使用する場合、「疎水性アミノ酸」は、非荷電の非極性側鎖を有するアミノ酸である。天然疎水性アミノ酸の例は、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、及びトリプトファン（Ｔｒｐ）である。

同一性：本明細書で使用する場合、用語「同一性」とは、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間における全体の相関性のことを意味する。２つのｍＲＮＡ配列におけるパーセント同一性の計算は、例えば、最適比較目的で２つの配列をアラインすることにより行うことができる（例えば、最適アライメントのために第１の核酸配列及び第２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入してもよく、比較目的で同一でない配列を無視してもよい）。特定の実施形態では、比較目的でアラインした配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。それから、対応するヌクレオチド位置におけるヌクレオチドを比較する。第１の配列内の位置に、第２の配列内の対応する位置にあるものと同じヌクレオチドが存在する場合、その分子はその位置において同一である。２つの配列間のパーセント同一性は、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアライメントを導くのに必要である。配列の比較及び２つの配列間のパーセント同一性測定については、数学的アルゴリズムを用いて実施することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：ＩｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄＧｅｎｏｍｅＰｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９３；ＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎＨｅｉｎｊｅ，Ｇ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９８７；ＣｏｍｐｕｔｅｒＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＳｅｑｕｅｎｃｅＤａｔａ，ＰａｒｔＩ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ，１９９４；及び、ＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓＰｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，ＭＳｔｏｃｋｔｏｎＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９１；に記載されるような方法を用いて測定することができる（それぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＭｅｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて測定することができ、そのアルゴリズムは、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を用いるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。代替的に、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いるＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを用いて測定することができる。配列間のパーセント同一性を測定するために通常用いられる方法としては、Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄＬｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭＪＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に開示されている方法が挙げられるがこれらに限定されない（参照により本明細書に組み込まれる）。同一性を測定するための技術は、一般に利用可能なコンピュータプログラムに分類されている。２つの配列間の相同性を測定するための例示的なコンピュータソフトウェアとしては、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，１２（１）：３８７，１９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５，４０３，１９９０）が挙げられるがこれらに限定されない。

免疫チェックポイント阻害剤：「免疫チェックポイント阻害剤」または簡潔に「チェックポイント阻害剤」とは、免疫細胞ががん細胞によって解除されるのを防止する分子のことを意味する。本明細書で使用する場合、用語「チェックポイント阻害剤」とは、抑制性チェックポイント分子、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ−４）、プログラム死１受容体（ＰＤ−１）、またはＰＤ−１リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）などを中和または阻害する、ポリペプチド（例えば、抗体）またはこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）のことを意味する。

免疫応答：用語「免疫応答」とは、例えば、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞、または、自己免疫または病理学的な炎症の場合における正常ヒト細胞もしくは組織への選択的な損傷、それらの破壊、または、人体からのそれらの排除をもたらす、リンパ球、抗原提示細胞、食細胞、顆粒球、及び上記の細胞または肝臓が産生する可溶性巨大分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用のことを意味する。一部の例では、脂質構成成分及び封入治療薬を含むナノ粒子の投与は免疫応答を誘発し得るが、その免疫応答は、（ｉ）封入治療薬（例えば、ｍＲＮＡ）、（ｉｉ）このような封入治療薬の発現産物（例えば、ｍＲＮＡがコードするポリペプチド）、（ｉｉｉ）ナノ粒子の脂質構成成分、または（ｉｖ）これらの組み合わせ、によって引き起こされ得る。

挿入：本明細書で使用する場合、「挿入」または「付加」とは、参照配列、例えば、天然分子中に存在する配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸残基またはヌクレオチドの分子への付加をそれぞれもたらす、アミノ酸またはヌクレオチド配列における変化のことを意味する。例えば、非相同ポリペプチドのアミノ酸配列（例えば、ＢＨ３ドメイン）を、スキャフォールドポリペプチド（例えば、ＳｔｅＡスキャフォールドポリペプチド）の挿入に適した部位に挿入してもよい。一部の実施形態では、挿入は、例えば、スキャフォールドポリペプチドのループ（例えば、ＳｔｅＡまたはＳｔｅＡ誘導体のループ１またはループ２）を形成するアミノ酸配列が非相同ポリペプチドのアミノ酸配列で置換されている場合、置換であってもよい。

挿入部位：本明細書で使用する場合、「挿入部位」は、非相同ポリペプチドのアミノ酸配列の挿入に適した、スキャフォールドポリペプチドの位置または領域である。挿入部位はまた、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの位置または領域（例えば、スキャフォールドポリペプチド内の任意のアミノ酸をコードするｍＲＮＡのコドン）のことを意味し得るということを理解すべきである。一部の実施形態では、非相同ポリペプチドのアミノ酸配列のスキャフォールドポリペプチドへの挿入は、スキャフォールドポリペプチドの安定性（例えば、配座安定性）、発現レベル、または全体的な二次構造にほとんど影響を及ぼさない。

細胞内ドメイン：本明細書で使用する場合、用語「細胞内ドメイン」、「ＩＣ」、及び「ＩＣＤ」とは、細胞の内部に位置する、ポリペプチドの領域のことを意味する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは細胞へとシグナルを伝播する。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）がコードするテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、細胞へとシグナルを伝播する細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）がコードするテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、細胞へとシグナルを伝播しない細胞内ドメインを含む。

単離：本明細書で使用する場合、用語「単離」とは、物質または要素が結合した構成成分のうちの少なくとも一部から分離された物質または要素（自然であるかまたは実験環境であるかを問わない）のことを意味する。単離物質は、単離物質が結合していた物質を基準とした様々なレベルの純度を示し得る。単離物質及び／または要素は、単離物質及び／または要素が当初結合していた少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上の％のその他の構成成分から分離され得る。一部の実施形態では、単離薬剤は、約８０％超、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超の純度である。本明細書で使用する場合、物質がその他の構成成分を実質的に含まない場合、その物質は「純粋」である。

リポソーム：本明細書で使用する場合、「リポソーム」とは、水溶性内部を囲む脂質含有膜を含む構造物のことを意味する。リポソームは１つまたは複数の脂質膜を有し得る。リポソームとしては、単層リポソーム（当該技術分野においてはユニラメラリポソームとしてもまた周知）及び多層リポソーム（当該技術分野においてはマルチラメラリポソームとしてもまた周知）が挙げられる。

リンカー：本明細書で使用する場合、「リンカー」（本明細書で参照する場合、膜リンカー、サブユニットリンカー、及び非相同ポリペプチドリンカーを含む）とは、原子、例えば、１０〜１，０００原子の基のことを意味し、原子または基、限定するわけではないが例えば、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどで構成され得る。第１の末端の核酸塩基上の修飾ヌクレオシドもしくはヌクレオチドまたは糖部分、及び第２の末端のペイロード、例えば、検出可能薬または治療薬にリンカーを結合することができる。リンカーは、核酸配列への導入を妨げないほどの十分な長さのリンカーであってもよい。任意の有用な目的、例えば、ポリヌクレオチド多量体（例えば、２つまたはそれ以上のキメラポリヌクレオチド分子またはＩＶＴポリヌクレオチドの連結による）またはポリヌクレオチドコンジュゲートを形成することに加えて、本明細書に記載のペイロードを投与することなどのために、リンカーを使用してもよい。リンカーに導入可能な化学基の例としては、本明細書に記載のアルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、またはヘテロシクリル（そのそれぞれは任意選択的に置換されていてもよい）が挙げられるがこれらに限定されない。リンカーの例としては、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレンまたはプロピレングリコールモノマーユニット、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、またはテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマー、ならびにその誘導体が挙げられるがこれらに限定されない。その他の例としては、リンカー内の開裂可能な部分、例えば、還元剤または光分解を用いて開裂させることができるジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）またはアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）などが挙げられるがこれらに限定されない。選択的に開裂させることができる結合の非限定例としては、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）またはその他の還元剤及び／または光分解を用いることにより開裂させることができるアミド結合に加えて、例えば、酸性または塩基性の加水分解により開裂させることができるエステル結合が挙げられる。

転移：本明細書で使用する場合、用語「転移」とは、がんが原発性腫瘍として最初に生じた場所から体内の離れた場所へとがんが拡散するプロセスのことを意味する。このプロセスの結果として生じた二次性腫瘍は「転移」と呼ばれることもある。

ｍＲＮＡ：本明細書で使用する場合、「ｍＲＮＡ」とはメッセンジャーリボ核酸のことを意味する。ｍＲＮＡは天然または非天然であってもよい。例えば、ｍＲＮＡは、修飾及び／または非天然の構成要素、例えば、１つまたは複数の核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはリンカーなどを含んでいてもよい。ｍＲＮＡは、キャップ構造、鎖停止ヌクレオシド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。ｍＲＮＡは、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有していてもよい。ｍＲＮＡの翻訳、例えば、哺乳動物細胞の内部におけるｍＲＮＡのｉｎｖｉｖｏ翻訳により、ポリペプチドが生成され得る。従来より、ｍＲＮＡ分子の基本構成要素としては少なくとも、コード領域、５’−非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ、及びポリＡ配列が挙げられる。

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）：本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）」は、遺伝子発現の転写後制御において機能し得る（例えば、ＲＮＡサイレンシングにより、例えば、ｍＲＮＡの開裂、ｍＲＮＡのポリＡ尾部を短縮することによるｍＲＮＡの不安定化、及び／または、リボソームによるｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳効率を妨げることなどにより）小さな非コードＲＮＡ分子である。成熟ｍｉＲＮＡは一般的に約２２ヌクレオチド長である。

マイクロＲＮＡ−１２２（ｍｉＲ−１２２）：本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ−１２２（ｍｉＲ−１２２）」とは、特に明記しない限り、例えば、ヒトを含む任意の脊椎動物供給源に由来する任意の天然ｍｉＲ−１２２のことを意味する。ｍｉＲ−１２２は一般的に肝臓内において高発現しており、そこで脂肪酸代謝を制御し得る。ｍｉＲ−１２２レベルは、肝臓癌、例えば、肝細胞癌において低下している。ｍｉＲ−１２２は肝臓内において最も高発現しているｍｉＲＮＡのうちの１つであり、そこで、ＣＡＴ−１、ＣＤ３２０、ＡｌｄｏＡ、Ｈｊｖ、Ｈｆｅ、ＡＤＡＭ１０、ＩＧＦＲ１、ＣＣＮＧ１、及びＡＤＡＭ１７を含むがこれらに限定されない標的を制御している。成熟ヒトｍｉＲ−１２２は、ＡＡＣＧＣＣＡＵＵＡＵＣＡＣＡＣＵＡＡＡＵＡの配列（配列番号：７３、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２２−３ｐに相当する）またはＵＧＧＡＧＵＧＵＧＡＣＡＡＵＧＧＵＧＵＵＵＧの配列（配列番号：８２、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２２−５ｐに相当する）を有していてもよい。

マイクロＲＮＡ−２１（ｍｉＲ−２１）：本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ−２１（ｍｉＲ−２１）」とは、特に明記しない限り、例えば、ヒトを含む任意の脊椎動物供給源に由来する任意の天然ｍｉＲ−２１のことを意味する。ｍｉＲ−２１レベルは、正常な肝臓と比較して、肝臓癌、例えば、肝細胞癌において上昇している。成熟ヒトｍｉＲ−２１は、ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡの配列（配列番号：８４、ｈａｓ−ｍｉＲ−２１−５ｐに相当する）または５’−ＣＡＡＣＡＣＣＡＧＵＣＧＡＵＧＧＧＣＵＧＵ−３’の配列（配列番号：８５、ｈａｓ−ｍｉＲ−２１−３ｐに相当する）を有していてもよい。

マイクロＲＮＡ−１４２（ｍｉＲ−１４２）：本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ−１４２（ｍｉＲ−１４２）」とは、特に明記しない限り、例えば、ヒトを含む任意の脊椎動物供給源に由来する任意の天然ｍｉＲ−１４２のことを意味する。ｍｉＲ−１４２は一般的に骨髄細胞において高発現している。成熟ヒトｍｉＲ−１４２は、ＵＧＵＡＧＵＧＵＵＵＣＣＵＡＣＵＵＵＡＵＧＧＡの配列（配列番号：１２７、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−３ｐに相当する）またはＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＡＡＡＧＣＡＣＵＡＣＵの配列（配列番号：１２８、ｈｓａ−ｍｉＲ−１４２−５ｐに相当する）を有していてもよい。

マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位：本明細書で使用する場合、「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位」とは、ｍｉＲＮＡ標的部位もしくはｍｉＲＮＡ認識部位、またはｍｉＲＮＡが結合または会合する任意のヌクレオチド配列のことを意味する。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの少なくとも「シード」領域が結合する、ｍＲＮＡのヌクレオチドの位置または領域に相当する。「結合」は、従来のワトソンクリック型ハイブリダイゼーション法則に従い得る、またはマイクロＲＮＡ部位におけるまたはマイクロＲＮＡ部位付近におけるｍｉＲＮＡの標的配列との任意の安定した会合を反映し得ると理解すべきである。

ｍｉＲＮＡシード：本明細書で使用する場合、ｍｉＲＮＡの「シード」領域とは、成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位の領域内の配列のことを意味し、一般的に、ｍｉＲＮＡ結合部位に対する完全なワトソンクリック相補性を有する。ｍｉＲＮＡシードは成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位または２〜７位を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデニン（Ａ）に隣接している。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデニン（Ａ）に隣接している。ｍｉＲＮＡ結合部位に言及する場合、ｍｉＲＮＡシード配列が、ｍｉＲＮＡ結合部位に結合するｍｉＲＮＡのシード配列との相補性（例えば、部分的、実質的、または完全な相補性）を有するものと理解すべきである。

修飾：本明細書で使用する場合、「修飾」とは、本開示の分子の変化した状態または構造のことを意味する。化学的、構造的、及び機能的を含む様々な方法で分子を修飾してもよい。一実施形態では、例えば、天然リボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関する場合、本開示のｍＲＮＡ分子は、非天然ヌクレオシド及び／またはヌクレオチドの導入によって修飾される。非標準ヌクレオチド、例えば、キャップ構造などは、それらがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるとはいえ、「修飾」されたとはみなされない。

骨髄性悪性腫瘍：本明細書で使用する場合、「骨髄性悪性腫瘍」とは、造血前駆細胞における後天性体細胞変異（複数可）を特徴とする慢性クローン病と急性クローン病の両方、例えば、骨髄異形成障害（ＭＤＳ）及び骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）などのことを意味する。例示的な骨髄性悪性腫瘍としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。更に、ＭＰＮは、様々な障害、例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびに非ＣＭＬＭＰＮ、例えば、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、及び原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）などを含む。

ナノ粒子：本明細書で使用する場合、「ナノ粒子」とは、同一原料のバルク試料と比較して新規の特性を示す約１０００ｎｍ未満規模の任意の１つの構造的特徴を有する粒子のことを意味する。慣例的に、ナノ粒子は、約５００ｎｍ未満、約２００ｎｍ未満、または約１００ｎｍの規模の任意の１つの構造的特徴を有する。また慣例的に、ナノ粒子は、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、または約７０〜約１２０ｎｍの規模の任意の１つの構造的特徴を有する。例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１〜１０００ｎｍの規模の１つまたは複数の寸法を有する粒子である。その他の例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約１０〜５００ｎｍの規模の１つまたは複数の寸法を有する粒子である。その他の例示的な実施形態では、ナノ粒子は、約５０〜２００ｎｍの規模の１つまたは複数の寸法を有する粒子である。球状のナノ粒子は、例えば、約５０〜１００または７０〜１２０ナノメートルの直径を有し得る。ナノ粒子はほとんど、その輸送及び特性の観点から、ユニットとして振る舞うことが多い。ナノ粒子を対応するバルク原料と区別する新規の特性は一般的に１０００ｎｍ未満のサイズ規模または約１００ｎｍのサイズで発現するが、ナノ粒子は、より大きなサイズのもの、例えば、楕円形、管状などである粒子用のものであってもよいということに留意されたい。ほとんどの分子のサイズが上の特徴に適合し得るとしても、個々の分子は通常、ナノ粒子とは呼ばれない。

核酸：本明細書で使用する場合、用語「核酸」はその最も広い意味で使用され、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質を包含する。これらポリマーは多くの場合ポリヌクレオチドと呼ばれる。例示的な本開示の核酸またはポリヌクレオチドとしては、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導因子、ＲＮＡｉ因子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒性ＤＮＡ、三重ヘリックス形成を誘導するＲＮＡ、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、β−Ｄ−リボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能化を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、またはこれらのハイブリッドが挙げられるがこれらに限定されない。

機能的に連結した：本明細書で使用する場合、語句「機能的に連結した」とは、２つまたはそれ以上の分子、構築物、転写物、要素、部分などの間における機能的な連結のことを意味する。

患者：本明細書で使用する場合、「患者」とは、治療を探し求め得るまたは治療を必要とし得る、治療を要求する、治療を受けている、治療を受ける予定の対象、または熟練した専門家による特定の疾患または症状の治療を受けている対象のことを意味する。特定の実施形態では、患者はヒト患者である。一部の実施形態では、患者は、がん（例えば、肝臓癌または結腸直腸癌）を患う患者である。

薬学的に許容される：語句「薬学的に許容される」は、適切な医学的良識の範囲内において、過度の毒性、炎症、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは合併症を伴わずに、妥当な利益／リスク比に見合った、ヒト及び動物の組織との接触に用いるのに好適な化合物、物質、組成物及び／または剤形のことを意味するために本明細書で使用される。

薬学的に許容される賦形剤：語句「薬学的に許容される賦形剤」とは、本明細書で使用する場合、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁または溶解させることができる溶媒）のことを意味し、患者にとって実質的に無毒かつ非炎症性の性質を有するものである。賦形剤としては、例えば、抗付着剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染料（色素）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（賦形剤）、被膜形成剤もしくはコーティング剤、風味剤、芳香剤、流動促進剤（流動強化剤）、滑沢剤、防腐剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤もしくは分散剤、甘味剤、または水和水を挙げてもよい。例示的な賦形剤としては、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウムデンプン、ソルビトール、デンプン（コーン）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが挙げられるがこれらに限定されない。

薬学的に許容される塩：本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」とは、親化合物が、既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することにより改変されている（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることにより）、開示化合物の誘導体のことを意味する。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるがこれらに限定されない。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、酢酸、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどに加えて、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがこれらに限定されない非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩としては、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の通常の非毒性塩が挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩は、通常の化学的方法により塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的に、このような塩は、これら化合物の遊離酸または塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中で、またはこれら２種の混合液中で、化学量論量の好適な塩基または酸と反応させることにより調製することができるが、通常は、エーテル、エチルアセテート、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈｅｄ．，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄＵｓｅ，Ｐ．Ｈ．ＳｔａｈｌａｎｄＣ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８，及びＢｅｒｇｅｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，６６，１−１９（１９７７）に記載されており、それぞれの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる。

ポリペプチド：本明細書で使用する場合、用語「ポリペプチド」または「目的のポリペプチド」とは、一般的には、自然（例えば、単離または精製）または合成的に生成可能なペプチド結合によって連結したアミノ酸残基のポリマーのことを意味する。

対象：本明細書で使用する場合、用語「対象」とは、例えば、実験、診断、予防、及び／または治療の目的のために、本開示による組成物を投与してもよい任意の生物のことを意味する。標準的な対象としては、動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなど）及び／または植物が挙げられる。一部の実施形態では、対象は患者であってもよい。

実質的に：本明細書で使用する場合、用語「実質的に」とは、完全またはほぼ完全な度合いまたは程度の目的の特徴または特性を示す定性的状態のことを意味する。生物学的技術分野の当業者は、生物学的現象及び化学的現象が、たとえあるとしても、めったに完結しない及び／または完全へと移行しないまたは絶対的な結果に達しない、すなわち絶対的な結果が回避されるということを理解するであろう。それゆえ、用語「実質的に」は本明細書において、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の完全性の潜在的な欠如を表現するために使用される。

患う：疾患、障害、及び／または症状を「患う」個体は、疾患、障害、及び／または症状を有すると診断されている、または疾患、障害、及び／または症状の１種または複数種の症候を示す。

標的化部分：本明細書で使用する場合、「標的化部分」は、特定の細胞種、組織種、及び／または器官種へとナノ粒子を向かわせることができる化合物または薬剤である。

治療薬：用語「治療薬」とは、対象に投与されると治療効果、診断効果、及び／または予防効果を示す、及び／または、所望の生物学的効果及び／または薬理学的効果を誘発する、任意の薬剤のことを意味する。

トランスフェクション：本明細書で使用する場合、用語「トランスフェクション」とは、化学種（例えば、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡなど）を細胞に導入するための方法のことを意味する。

膜貫通ドメイン：本明細書で使用する場合、用語「膜貫通ドメイン」、「ＴＭ」、及び「ＴＭＤ」とは、細胞の原形質膜を横断する、ポリペプチドの領域のことを意味する。

治療すること：本明細書で使用する場合、用語「治療すること」とは、特定の感染症、疾患、障害、及び／または症状を部分的または完全に緩和、改善、向上、軽減すること、それらの発症を遅延させること、それらの進行を阻害すること、それらの重症度を低下させること、及び／またはそれらの１種または複数種の症候または特性の発症率を低下させることを意味する。例えば、がんを「治療すること」とは、腫瘍の生存、増殖、及び／または転移を阻害することを意味し得る。疾患、障害、及び／または症状の徴候を示さない対象及び／または疾患、障害、及び／または症状の初期徴候のみを示す対象に、その疾患、障害、及び／または症状と関連する病状を発症するリスクを低下させる目的で、治療を実施してもよい。

腫瘍微小環境：本明細書で使用する場合、「腫瘍微小環境」とは、浸潤性の免疫細胞及び／または炎症性細胞の有無に応じた腫瘍内における細胞組成に加えて、腫瘍内におけるこのような細胞の種類（複数可）のことを意味する。一部の実施形態では、腫瘍微小環境は「炎症性腫瘍微小環境」であり、腫瘍内に浸潤した免疫細胞及び／または炎症性細胞が存在していることを意味し、主な細胞種は顆粒球である。一部の実施形態では、腫瘍微小環境は「免疫抑制性腫瘍微小環境」であり、腫瘍内に浸潤した免疫細胞及び／または炎症性細胞が存在していることを意味し、主な細胞種は単球細胞及びマクロファージである。一部の実施形態では、腫瘍微小環境は「免疫学的に不毛な腫瘍微小環境」であり、免疫細胞及び／または炎症性細胞の腫瘍への有意な浸潤が無いことを意味する。

Ｉ型内在性膜タンパク質：本明細書で使用する場合、用語「Ｉ型内在性膜タンパク質」とは、そのアミノ末端が細胞外空間にあり１つのαヘリックス膜貫通ドメインを含む内在性膜タンパク質（すなわち、脂質二重層を横断する少なくとも１つの膜貫通ドメインを有するタンパク質）のことを意味する。

予防すること：本明細書で使用する場合、用語「予防すること」とは、治療奏効後における再燃または再発を予防することを含む、がんの１種または複数種の症候または特性の発症を部分的または完全に阻害することを意味する。

腫瘍：本明細書で使用する場合、「腫瘍」は、良性であるかまたは悪性であるかを問わない組織の異常増殖である。

未修飾：本明細書で使用する場合、「未修飾」とは、任意の方法で変更される前の任意の物質、化合物、または分子のことを意味する。しかし、未修飾が常に野生型または天然形態の生体分子を意味するとは限らないこともある。分子が一連の修飾を受けている場合もあり、それにより、それぞれの修飾分子が続く修飾用の「未修飾」出発分子として機能することもある。

等価物及び範囲
本明細書に記載の本開示による特定の実施形態に対する多くの等価物について、当業者は理解する、または、通常の実験を行うだけで確認することが可能であろう。本開示の範囲は、以下の記載に限定されることを意図するものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲における記載により制限される。

特許請求の範囲における「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対のことを指し示さない限りまたは文脈から明らかでない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。ある群の１つまたは複数の要素間に「または」を含む請求項または記載は、１つ、２つ以上、または全ての群要素が、任意の生成物またはプロセス中に存在する、採用される、または関連する場合、反対のことを指し示さない限りまたは文脈から明らかでない限り、条件を満たすとみなされる。本開示は、群における厳密な１つの要素が任意の生成物またはプロセス中に存在する、採用される、または関連する実施形態を含む。本開示は、２つ以上または全ての群要素が任意の生成物またはプロセス中に存在する、採用される、または関連する実施形態を含む。

用語「含む」はオープンであることを意図し、追加の要素または工程の包含を可能とするが、追加の要素または工程の包含を必要としないという点もまた留意されたい。用語「含む」を本明細書で使用する場合、それにより、用語「からなる」はまた包含され開示される。

範囲を示す場合、終点は含まれる。更に、特に明記しない限り、または文脈及び当業者の理解から明らかでない限りにおいて、範囲として表される値は、本開示の異なる実施形態において明示した範囲内における任意の特定の値または下位範囲（文脈上特に明確に定めない限り、その範囲の下限値の単位の１０分の１まで）とみなされ得ると理解すべきである。

引用した全ての出典、例えば、本明細書で引用した参照文献、刊行物、データベース、データベースエントリー、及び技術は、引用において明示的に記載されていなかったとしても、参照により本出願に組み込まれる。引用出典及び本出願において記載の矛盾がある場合には、本出願の記載が優先されるものとする。

その他の実施形態
本開示は以下の実施形態に関する。本セクションの全体にわたり、用語「実施形態」は「Ｅ」（序数が続く）と略される。例えば、Ｅ１は実施形態１と同等である。
Ｅ１．骨髄性悪性腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、実施形態１に記載の方法。
Ｅ３．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１または実施形態２に記載の方法。
Ｅ４．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態３に記載の方法。
Ｅ５．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、実施形態１から実施形態４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列または配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態５に記載の方法。
Ｅ７．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列または配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態６に記載の方法。
Ｅ８．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、実施形態５に記載の方法。
Ｅ９．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、実施形態８に記載の方法。
Ｅ１０．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、前記膜ドメインに機能的に連結している、実施形態１から実施形態９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１．前記ＩＬ−１２ポリペプチドに機能的に連結した前記膜ドメインの前記膜貫通ドメインは、Ｉ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１から実施形態１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２．前記ＩＬ−１２ポリペプチドに機能的に連結した前記膜ドメインの前記膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、実施形態１から実施形態１０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３．前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載の方法。
Ｅ１４．前記ＩＬ−１２ポリペプチドに機能的に連結した前記膜ドメインは細胞内ドメインを含む、実施形態１から実施形態１３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５．前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、実施形態１４に記載の方法。
Ｅ１６．前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、実施形態１４に記載の方法。
Ｅ１７．前記細胞内ドメインは、配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１８．前記細胞内ドメインは、Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ１９．前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１８に記載の方法。
Ｅ２０．前記細胞内ドメインは、配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、実施形態１６に記載の方法。
Ｅ２１．前記ＩＬ−１２ポリペプチドに機能的に連結した前記膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、実施形態１から実施形態２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２．前記膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、実施形態１から実施形態２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含む、実施形態２３に記載の方法。
Ｅ２５．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαに由来している、実施形態２４に記載の方法。
Ｅ２６．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインは非相同ポリペプチドに由来している、実施形態２４に記載の方法。
Ｅ２７．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１から実施形態２６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２８．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態２７に記載の方法。
Ｅ２９．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１から実施形態２８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３０．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態２９に記載の方法。
Ｅ３１．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列または配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３２．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列または配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態３１に記載の方法。
Ｅ３３．それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３４．前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む、実施形態３３に記載の方法。
Ｅ３５．前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位である、実施形態３４に記載の方法。
Ｅ３６．前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、実施形態３５に記載の方法。
Ｅ３７．前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、実施形態３６に記載の方法。
Ｅ３８．それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態１から実施形態３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ３９．それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４０．前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：７６に記載のヌクレオチド配列を含む、実施形態３９に記載の方法。
Ｅ４１．それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４２．前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、実施形態４１に記載の方法。
Ｅ４３．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態１から実施形態４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４４．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態４３に記載の方法。
Ｅ４５．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態４３に記載の方法。
Ｅ４６．それぞれのｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に配合されている、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４７．それぞれのｍＲＮＡは別々の脂質ナノ粒子内に配合されている、実施形態１から実施形態４５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ４８．前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ４９．前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ５０．前記脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ５１．前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、実施形態４８から実施形態５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５２．前記イオン性脂質は化合物ＩＩを含む、実施形態４８から実施形態５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５３．前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率の化合物ＩＩ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ５４．前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物ＩＩ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態５３に記載の方法。
Ｅ５５．前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｉである、実施形態４８から実施形態５４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５６．前記脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ５７．前記脂質ナノ粒子は、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態４６または実施形態４７に記載の方法。
Ｅ５８．前記骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される、実施形態１から実施形態５７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ５９．前記骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである、実施形態５８に記載の方法。
Ｅ６０．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは腫瘍内投与される、実施形態１から実施形態５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６１．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは静脈内投与される、実施形態１から実施形態５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６２．チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含む、実施形態１から実施形態６１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ６３．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、実施形態６２に記載の方法。
Ｅ６４．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、実施形態６３に記載の方法。
Ｅ６５．前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、実施形態６４に記載の方法。
Ｅ６６．前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、実施形態６５に記載の方法。
Ｅ６７．少なくとも２種の封入メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む脂質ナノ粒子であって、前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、前記脂質ナノ粒子。
Ｅ６８．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、実施形態６７に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ６９．ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、を含む、脂質ナノ粒子。
Ｅ７０．
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは配列番号：１７に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
を含み、
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、
脂質ナノ粒子。
Ｅ７１．
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列または配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
を含み、
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、
脂質ナノ粒子。
Ｅ７２．１：１：１：１の比率のＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−１５：ＩＬ−１５Ｒα：ＩＬ−１２を含む、実施形態６８から実施形態７１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７３．腫瘍内送達用に製剤化される、実施形態６７から実施形態７２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７４．静脈内送達用に製剤化される、実施形態６７から実施形態７２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７５．約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態６７から実施形態６９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７６．約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態７０から実施形態７５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７７．５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態６７から実施形態７４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７８．前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、実施形態７０から実施形態７７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ７９．前記イオン性脂質は化合物ＩＩを含む、実施形態７０から実施形態７８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８０．約２０〜６０％のモル比率の化合物ＩＩ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態６７から実施形態７４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８１．約５０％のモル比率の化合物ＩＩ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態８０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８２．前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｉである、実施形態７０から実施形態８１のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８３．５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態６７から実施形態８２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８４．４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態６７から実施形態８２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ８５．骨髄性悪性腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ８６．免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む、実施形態８５に記載の方法。
Ｅ８７．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、実施形態８６に記載の方法。
Ｅ８８．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、実施形態８７に記載の方法。
Ｅ８９．前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、実施形態８８に記載の方法。
Ｅ９０．前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、実施形態８９に記載の方法。
Ｅ９１．個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体であって、前記治療は前記脂質ナノ粒子の投与を含む、前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体。
Ｅ９２．個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体であって、前記治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記脂質ナノ粒子の投与を含む、前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体。
Ｅ９３．個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用であって、前記薬剤は前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、前記治療は前記薬剤の投与を含む、前記使用。
Ｅ９４．個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用であって、前記薬剤は前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、前記治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記薬剤の投与を含む、前記使用。
Ｅ９５．実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるための前記脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキット。
Ｅ９６．前記添付文書は、個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む、実施形態９５に記載のキット。
Ｅ９７．実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における骨髄性悪性腫瘍を治療するまたは前記骨髄性悪性腫瘍の進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた前記薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキット。
Ｅ９８．対象における免疫応答を向上させるための方法であって、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ９９．対象におけるＴ細胞活性化を向上させるための方法であって、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ１００．対象におけるＮＫ細胞活性化を向上させるための方法であって、実施形態６７から実施形態８４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ１０１．前記対象は骨髄性悪性腫瘍を有する、実施形態９８から実施形態１００のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０２．免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む、実施形態９８から実施形態１０１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０３．がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ１０４．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、実施形態１０３に記載の方法。
Ｅ１０５．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０３または実施形態１０４に記載の方法。
Ｅ１０６．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１０５に記載の方法。
Ｅ１０７．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、実施形態１０３から実施形態１０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０８．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、実施形態１０７に記載の方法。
Ｅ１０９．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、実施形態１０８に記載の方法。
Ｅ１１０．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１０３から実施形態１０９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１１．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、実施形態１０３から実施形態１０９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１２．前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１に記載の方法。
Ｅ１１３．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含む、実施形態１０３から実施形態１１２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１４．前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、実施形態１１３に記載の方法。
Ｅ１１５．前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、実施形態１１３に記載の方法。
Ｅ１１６．前記細胞内ドメインは、配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１１５に記載の方法。
Ｅ１１７．前記細胞内ドメインは、Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１１５に記載の方法。
Ｅ１１８．前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１１７に記載の方法。
Ｅ１１９．前記細胞内ドメインは、配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、実施形態１１５に記載の方法。
Ｅ１２０．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、実施形態１０３から実施形態１１９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２１．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、実施形態１０３から実施形態１２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２２．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、実施形態１０３から実施形態１２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２３．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含む、実施形態１２２に記載の方法。
Ｅ１２４．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαに由来している、実施形態１２３に記載の方法。
Ｅ１２５．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインは非相同ポリペプチドに由来している、実施形態１２３に記載の方法。
Ｅ１２６．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０３から実施形態１２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２７．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１２６に記載の方法。
Ｅ１２８．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０３から実施形態１２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２９．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１２８に記載の方法。
Ｅ１３０．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列または配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０３から実施形態１２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３１．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列または配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１３０に記載の方法。
Ｅ１３２．前記がんは固形腫瘍である、実施形態１０３から実施形態１３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３３．前記固形腫瘍は免疫抑制性腫瘍微小環境を含む、実施形態１３２に記載の方法。
Ｅ１３４．前記固形腫瘍は免疫チェックポイント阻害剤療法に対して反応を示さない、実施形態１３２から実施形態１３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３５．前記がんは播種性がんである、実施形態１０３から実施形態１３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３６．前記播種性がんは血液がんである、実施形態１３５に記載の方法。
Ｅ１３７．前記播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である、実施形態１３５に記載の方法。
Ｅ１３８．前記骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される、実施形態１３７に記載の方法。
Ｅ１３９．前記骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである、実施形態１３８に記載の方法。
Ｅ１４０．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは腫瘍内投与される、実施形態１０３から実施形態１３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４１．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは静脈内投与される、実施形態１０３から実施形態１３９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４２．前記がんは固形腫瘍であり、前記少なくとも２種のｍＲＮＡは腫瘍内投与される、実施形態１０３から実施形態１３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４３．前記がんは播種性がんであり、前記少なくとも２種のｍＲＮＡは静脈内投与される、実施形態１０３から実施形態１３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４４．ヒト患者における播種性がんを治療するための方法であって、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を前記患者に全身投与することを含み、
前記第１のｍＲＮＡ及び前記第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている、
前記方法。
Ｅ１４５．ヒト患者における播種性がんを治療するための方法であって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を前記患者に全身投与することを含み、前記ＬＮＰは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を含む、前記方法。
Ｅ１４６．ヒト患者における播種性がんを治療するための方法であって、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ及び免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡを含む第１の分割用量の医薬組成物であって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記第１の分割用量の医薬組成物、
（ｉｉ）少なくとも１回の第２の分割用量の前記医薬組成物、
を含む投与レジメンを前記患者に実施することを含み、
前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、同一投与期間中の単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して、前記患者における前記ｍＲＮＡコードポリペプチドへの曝露を増加させることにより、前記患者における前記播種性がんを治療する、
前記方法。
Ｅ１４７．前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して前記治療の抗腫瘍効果を向上させる、実施形態１４６に記載の方法。
Ｅ１４８．前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果を向上させる、実施形態１４６及び実施形態１４７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４９．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１４４から実施形態１４６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５０．前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１４９に記載の方法。
Ｅ１５１．前記細胞結合サイトカインは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドである、実施形態１４４から実施形態１５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５２．前記細胞結合サイトカインはトランス提示ヒトＩＬ−１５である、実施形態１４４から実施形態１５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５３．前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである、実施形態１５２に記載の方法。
Ｅ１５４．前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている、実施形態１５２に記載の方法。
Ｅ１５５．第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含む、実施形態１５０から実施形態１５４のいずれか１つに記載の方法であって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記方法。
Ｅ１５６．前記第２の免疫増強因子は、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドである、実施形態１５５に記載の方法。
Ｅ１５７．前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、実施形態１５０及び実施形態１５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５８．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、実施形態１５７に記載の方法。
Ｅ１５９．前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、実施形態１５８に記載の方法。
Ｅ１６０．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、実施形態１５０及び実施形態１５５から実施形態１５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６１．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、実施形態１５０及び実施形態１５５から実施形態１５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６２．前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１６１に記載の方法。
Ｅ１６３．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含む、実施形態１５０及び実施形態１５５から実施形態１６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６４．前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、実施形態１６３に記載の方法。
Ｅ１６５．前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、実施形態１６３に記載の方法。
Ｅ１６６．前記細胞内ドメインは、配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１６５に記載の方法。
Ｅ１６７．前記細胞内ドメインは、Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、実施形態１６５に記載の方法。
Ｅ１６８．前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１６７に記載の方法。
Ｅ１６９．前記細胞内ドメインは、配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、実施形態１６５に記載の方法。
Ｅ１７０．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、実施形態１４８及び実施形態１５３から実施形態１５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７１．前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、実施形態１５０及び実施形態１５５から実施形態１７０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７２．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、実施形態１５３から実施形態１７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７３．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含む、実施形態１７２に記載の方法。
Ｅ１７４．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαに由来している、実施形態１７３に記載の方法。
Ｅ１７５．前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインは非相同ポリペプチドに由来している、実施形態１７３に記載の方法。
Ｅ１７６．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１５３から実施形態１７５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７７．前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１７６に記載の方法。
Ｅ１７８．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１５３から実施形態１７７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１７９．前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１７８に記載の方法。
Ｅ１８０．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列または配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１５２及び実施形態１５４から実施形態１７１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８１．ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結した前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列または配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、実施形態１８０に記載の方法。
Ｅ１８２．それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８３．前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む、実施形態１８２に記載の方法。
Ｅ１８４．前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位である、実施形態１８３に記載の方法。
Ｅ１８５．前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、実施形態１８４に記載の方法。
Ｅ１８６．前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、実施形態１８５に記載の方法。
Ｅ１８７．それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、実施形態１０３から実施形態１８１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８８．それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８９．前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：７６に記載のヌクレオチド配列を含む、実施形態１８８に記載の方法。
Ｅ１９０．それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９１．前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、実施形態１９０に記載の方法。
Ｅ１９２．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態１０３から実施形態１８９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９３．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態１９２に記載の方法。
Ｅ１９４．それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、実施形態１９２に記載の方法。
Ｅ１９５．それぞれのｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に配合されている、先行実施形態のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９６．それぞれのｍＲＮＡは別々の脂質ナノ粒子内に配合されている、実施形態１０３から実施形態１４４及び実施形態１４６から実施形態１９４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９７．前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９８．前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１９９．前記脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２００．前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、実施形態１９７から実施形態１９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０１．前記イオン性脂質は化合物ＩＩを含む、実施形態１９７から実施形態１９９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０２．前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率の化合物ＩＩ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０３．前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物ＩＩ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２０２に記載の方法。
Ｅ２０４．前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｉである、実施形態１９７から実施形態２０３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０５．前記脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０６．前記脂質ナノ粒子は、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態１９５から実施形態１９６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０７．チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含む、実施形態１０３から実施形態２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０８．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、実施形態２０７に記載の方法。
Ｅ２０９．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、実施形態２０８に記載の方法。
Ｅ２１０．前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、実施形態２０９に記載の方法。
Ｅ２１１．前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、実施形態２１０に記載の方法。
Ｅ２１２．少なくとも２種の封入メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む脂質ナノ粒子であって、前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、前記脂質ナノ粒子。
Ｅ２１３．前記少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される、実施形態２１２に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２１４．ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、を含む脂質ナノ粒子。
Ｅ２１５．
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは配列番号：１７に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、前記ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
を含み、
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、
脂質ナノ粒子。
Ｅ２１６．
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡであって、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列または配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む、前記ｍＲＮＡ、
を含み、
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、
脂質ナノ粒子。
Ｅ２１７．１：１：１：１の比率のＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−１５：ＩＬ−１５Ｒα：ＩＬ−１２を含む、実施形態２１３から実施形態２１６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２１８．腫瘍内送達用に製剤化される、実施形態２１２から実施形態２１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２１９．静脈内送達用に製剤化される、実施形態２１２から実施形態２１７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２０．約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２１２から実施形態２１４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２１．約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２１５から実施形態２２０のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２２．５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２１２から実施形態２１９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２３．前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、実施形態２１５から実施形態２２２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２４．前記イオン性脂質は化合物ＩＩを含む、実施形態２１５から実施形態２２３のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２５．約２０〜６０％のモル比率の化合物ＩＩ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２１２から実施形態２１９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２６．約５０％のモル比率の化合物ＩＩ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、実施形態２２５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２７．前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｉである、実施形態２１５から実施形態２２６のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２８．５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態２１２から実施形態２２７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２２９．４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物ＩＩ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｉまたは化合物ＩＩ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｉを含む、実施形態２１２から実施形態２２７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２３０．がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法であって、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２３１．前記がんは播種性がんまたは固形腫瘍である、実施形態２３０に記載の方法。
Ｅ２３２．前記播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である、実施形態２３１に記載の方法。
Ｅ２３３．免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む、実施形態２３０から実施形態２３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３４．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、実施形態２３３に記載の方法。
Ｅ２３５．前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、実施形態２３４に記載の方法。
Ｅ２３６．前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、実施形態２３５に記載の方法。
Ｅ２３７．前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、実施形態２３６に記載の方法。
Ｅ２３８．個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるのに使用する、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体であって、前記治療は前記脂質ナノ粒子の投与を含む、前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体。
Ｅ２３９．個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるのに使用する、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体であって、前記治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記脂質ナノ粒子の投与を含む、前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体。
Ｅ２４０．前記がんは播種性がんまたは固形腫瘍である、実施形態２３８から実施形態２３９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２４１．個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用であって、前記薬剤は前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、前記治療は前記薬剤の投与を含む、前記使用。
Ｅ２４２．個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用であって、前記薬剤は前記脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、前記治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記薬剤の投与を含む、前記使用。
Ｅ２４３．前記がんは播種性がんまたは固形腫瘍である、実施形態２４１から実施形態２４２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子の使用。
Ｅ２４４．実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるための前記脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキット。
Ｅ２４５．前記添付文書は、個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、前記脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む、実施形態２４４に記載のキット。
Ｅ２４６．実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体におけるがんを治療するまたは前記がんの進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた前記薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキット。
Ｅ２４７．前記がんは播種性がんまたは固形腫瘍である、実施形態２４４から実施形態２４６のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ２４８．対象における免疫応答を向上させるための方法であって、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２４９．対象におけるＴ細胞活性化を向上させるための方法であって、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２５０．対象におけるＮＫ細胞活性化を向上させるための方法であって、実施形態２１２から実施形態２２９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子を前記対象に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２５１．前記対象はがんを有する、実施形態２４８から実施形態２５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５２．前記がんは播種性がんまたは固形腫瘍である、実施形態２５１に記載の方法。
Ｅ２５３．免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む、実施形態２４８から実施形態２５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２５４．
（ｉ）イオン性脂質、
（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、
（ｉｉｉ）請求項１から請求項７６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、
（ｉｖ）任意選択的に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び、
（ｖ）任意選択的に、ＰＥＧ脂質、
を含む、実施形態２１２から実施形態２１４及び実施形態２１８から実施形態２１９のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５５．フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、実施形態２５４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５６．前記フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態２５５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５７．前記フィトステロールはシトステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、実施形態２５５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５８．前記フィトステロールはスティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、実施形態２５５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２５９．前記フィトステロールはβ−シトステロール

またはその塩もしくはエステルである、実施形態２５５に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６０．前記フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、実施形態２５４に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６１．前記フィトステロールはβ−シトステロールである、実施形態２６０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６２．前記フィトステロールはβ−シトスタノールである、実施形態２６０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６３．前記フィトステロールはカンペステロールである、実施形態２６０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６４．前記フィトステロールはブラシカステロールである、実施形態２６０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６５．前記イオン性脂質は、式（ＩＩ）、（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、（ＩＩＩｅ）、（ＩＩＩｆ）、（ＩＩＩｇ）、（ＩＩＩＩ）、（ＩＶＩ）、（ＩＶＩ−ａ）、（ＩＶＩＩ）、（ＩＶＩＩＩ）、（ＩＶＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩａ）、（ＩＶＩＩＩｂ）、（ＩＶＩＩｂ−１）、（ＩＶＩＩｂ−２）、（ＩＶＩＩｂ−３）、（ＩＶＩＩｃ）、（ＩＶＩＩｄ）、（ＩＶＩＩＩｃ）、（ＩＶＩＩＩｄ）、（ＩＩＸ）、（ＩＩＸａ１）、（ＩＩＸａ２）、（ＩＩＸａ３）、（ＩＩＸａ４）、（ＩＩＸａ５）、（ＩＩＸａ６）、（ＩＩＸａ７）、または（ＩＩＸａ８）のいずれかの化合物を含む、実施形態２５４から実施形態２６４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６６．前記イオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１１３、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−２４４、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−３０９、化合物Ｉ−３１７、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−３２２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−３３１、化合物Ｉ−３３２、化合物Ｉ−３４７、化合物Ｉ−３４８、化合物Ｉ−３４９、化合物Ｉ−３５０、化合物Ｉ−３５２、及び化合物Ｉ−Ｍからなる群から選択される化合物を含む、実施形態２５４から実施形態２６４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６７．前記イオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、及び化合物Ｉ−１８１からなる群から選択される化合物を含む、実施形態２５４から実施形態２６４のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６８．前記ＬＮＰはリン脂質を含み、前記リン脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及び化合物Ｈ−４０９からなる群から選択される化合物を含む、実施形態２５４から実施形態２６７のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２６９．前記ＬＮＰはＰＥＧ脂質を含む、実施形態２５４から実施形態２６８のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７０．前記ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、実施形態２６９に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７１．前記ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ−４１５、化合物Ｐ−４１６、化合物Ｐ−４１７、化合物Ｐ−４１９、化合物Ｐ−４２０、化合物Ｐ−４２３、化合物Ｐ−４２４、化合物Ｐ−４２８、化合物Ｐ−Ｌ１、化合物Ｐ−Ｌ２、化合物Ｐ−Ｌ３、化合物Ｐ−Ｌ４、化合物Ｐ−Ｌ６、化合物Ｐ−Ｌ８、化合物Ｐ−Ｌ９、化合物Ｐ−Ｌ１６、化合物Ｐ−Ｌ１７、化合物Ｐ−Ｌ１８、化合物Ｐ−Ｌ１９、化合物Ｐ−Ｌ２２、化合物Ｐ−Ｌ２３、及び化合物Ｐ−Ｌ２５からなる群から選択される化合物を含む、実施形態２７０に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７２．前記ＰＥＧ脂質は、化合物Ｐ−４２８、化合物ＰＬ−１６、化合物ＰＬ−１７、化合物ＰＬ−１８、化合物ＰＬ−１９、化合物ＰＬ−１、及び化合物ＰＬ−２からなる群から選択される化合物を含む、実施形態２７１に記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７３．約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、実施形態２５４から実施形態２７２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７４．約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、実施形態２５４から実施形態２７２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７５．約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む、実施形態２５４から実施形態２７２のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７６．前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、実施形態２５４から実施形態２７５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。
Ｅ２７７．前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、実施形態２５４から実施形態２７５のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子。

本開示は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解されるであろう。しかしながら、以下の実施例は、本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例及び実施形態は、単に例示目的のためであること、それらを鑑みた様々な修正または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲、ならびに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれるということを理解されたい。

実施例１：ＡＭＬ細胞株のＬＮＰトランスフェクション効率
本実施例では、ＡＭＬ細胞のｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効率を最適化するために、トランスフェクション条件及びＬＮＰ構成成分についての試験を行った。

第１のシリーズの実験では、ヒト血清、マウス血清、ヒト免疫グロブリン（ＩｇＭまたはＩｇＧ）、ヒトＰＢＭＣ、またはヒト補体（ヒト血清、ヒトＩｇＭ、及び／またはヒトＩｇＧと共にまたはそれなしで）の存在下または不在下の条件で、ＬＮＰ内のｍＲＮＡをＡＭＬ細胞にトランスフェクションした。結果（データは省略）は、ヒト血清、ヒトＰＢＭＣ、ヒト補体、またはヒト補体及びヒト免疫グロブリンを加えると、ＡＭＬ細胞株のｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクション効率が上昇することを示した。結果は、ＬＮＰ内のｍＲＮＡのＡＭＬ細胞取り込みには、免疫グロブリン認識と、免疫グロブリン上への補体の付着に続く補体受容体結合の両方が必要であることを示唆している。

第２のシリーズの実験では、異なるＰＥＧ修飾脂質を含有するＬＮＰを用いた、ＡＭＬ細胞のｉｎｖｉｔｒｏトランスフェクションを比較した。５０％のイオン性アミノ脂質（化合物Ｘ）、１０％のリン脂質、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ修飾脂質を含むように脂質ナノ粒子を配合したが、ＰＥＧ修飾脂質は、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）または化合物４２８のいずれかであった。ヒト血清の存在下または不在下において、（ｉ）ＬＮＰなし、（ｉｉ）化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰ、または（ｉｉｉ）化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰを、Ｋａｓｕｍｉ−１ＡＭＬ細胞にｉｎｖｉｔｒｏでトランスフェクションした。結果を図１に示すが、ヒト血清の存在下における、化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰまたは化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰのいずれかのＡＭＬ細胞への効率的なトランスフェクションを示している。

第３のシリーズの実験では、化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰ及び化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰを比較したトランスフェクション効果について、一連のＡＭＬ細胞株（ＡＴＣＣまたはＤＳＭＺ）を試験した。結果を以下の表１７にまとめる。
表１７：異なるＬＮＰを用いたＡＭＬ細胞のトランスフェクション効率の比較

*HS = ヒト血清

更なる実験では、原発性ＡＭＬ細胞へのＬＮＰのトランスフェクション効率を評価した。具体的には、ＬＮＰをヒト血清でオプソニン化した後、化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰまたは化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰを、８種の異なる原発性ＡＭＬ試料にトランスフェクションした。結果を図２に示すが、化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰまたは化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰのいずれかのＡＭＬ細胞への効率的なトランスフェクションを示している。

結果は、化合物Ｘ／ＰＥＧ−ＤＭＧＬＮＰ及び化合物Ｘ／化合物４２８ＬＮＰが、試験した異なる細胞株において同等のトランスフェクション効率を発揮していることを示している。

実施例２：ＯＸ４０ＬｍＲＮＡ、ＩＬ−１２ｍＲＮＡ、及びＩＬ−１５ｍＲＮＡを用いた組み合わせ療法による腫瘍増殖の阻害
本実施例では、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のマウス腫瘍モデルを使用して、固形腫瘍及び播種性がんにおける、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及びｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを用いた組み合わせ療法の効果を試験した。

ＤＢＡ／２マウスの皮下にＡＭＬ腫瘍を樹立した。マウスＡＭＬ細胞Ｐ３８８Ｄ１（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−４６；ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を供給業者の取扱説明書に従い培養した。細胞をマウスに皮下接種して皮下腫瘍を生成した。サイズ及び触知性について腫瘍をモニターした。この株の細胞起源及びマウスにおけるその増殖特性を考慮すると、Ｐ３８８Ｄ１細胞は、播種性がんと固形腫瘍の両方のためのモデルとして機能している。

腫瘍が樹立されると、動物を３つの群に分けた。群１は、対照ｍＲＮＡＮＳＴ（１２．５μｇ）で治療し、群２は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ（５μｇ）、及びｈＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメイン（ｈＩＬ−１５ＲＬＩ）に連結したｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ（５μｇ）で治療し、群３は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ（５μｇ）、ｈＩＬ−１５ＲＬＩをコードするｍＲＮＡ（５μｇ）、及びｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ（２．５μｇ）で治療した。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３に記載のアミノ酸配列をコードしている。ＩＬ−１５ＲＬＩをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３２を含むオープンリーディングフレームを含み、配列番号：３１に記載のアミノ酸配列をコードしている。群２においては、動物あたり１２．５μｇの総ｍＲＮＡ用量を達成するために、対照ｍＲＮＡＮＳＴもまた含ませた。５０％のイオン性アミノ脂質（化合物Ｘ）、１０％のリン脂質、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む別々の脂質ナノ粒子内にｍＲＮＡを配合した。それぞれの群の腫瘍内投与は、腫瘍移植の７日後に開始して、７日に１回（Ｑ７Ｄ）とした。群１及び群２は、３回の用量で治療した。群３は、使用した用量レベルで若干の毒性が認められたことから、単回用量で治療した。

結果を図３Ａ（群１）、図３Ｂ（群２）、及び図３Ｃ（群３）のグラフで示すが、それらは時間の経過に伴う腫瘍容積を示している。

ｍＯＸ４０Ｌのみを用いた治療と比較して、ｍＯＸ４０Ｌ及びｈＩＬ−１５ＲＬＩを用いた二重組み合わせ療法がより緩やかな腫瘍増殖をもたらし、その一方で、ｍＯＸ４０Ｌ、ｈＩＬ−１５ＲＬＩ、及びｍＩＬ−１２を用いた三重組み合わせ療法が有意な腫瘍増殖阻害（１匹については完全寛解が認められた）をもたらしたことを結果が示している。これらの結果は、がんにおけるｍＲＮＡ組み合わせ療法の効果を示している。

実施例３：細胞結合ＩＬ−１５構築物及びテザー型ＩＬ−１５構築物のｉｎｖｉｔｒｏ発現及び生物活性
がんにおける抗腫瘍効果を向上させる潜在能を評価するために、ＩＬ−１５をトランス提示することができる、細胞結合ＩＬ−１５構築物をコードするｍＲＮＡ（複数可）を作製した。

具体的には、ＩＬ−１５ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及びｍｉＲＮＡ結合部位（ｍｉＲ−１２２）を３’ＵＴＲ内に含むｍＲＮＡを調製した。配列は、ヒトＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒα（ｓｕｓｈｉドメイン及び膜貫通ドメインを含む）をコードするｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒα（細胞結合ＩＬ−１５、それぞれ配列番号：１７及び１３）（図４Ａ）、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαに連結したヒトＩＬ−１５をコードするｈＩＬ−１５＿ＩＬ−１５Ｒα（テザー型ＩＬ−１５、配列番号：２７）（図４Ｂ）、及び、リンカーを介してＩＬ−１５に連結したＩＬ−１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメインのキメラをコードするｈＩＬ−１５ＲＬＩ（配列番号：３１）（図４Ｃ）、ｓｕｓｈｉドメインならびにＣＤ８０に由来する膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに連結したヒトＩＬ−１５をコードするｈＩＬ−１５＿ＣＤ８０ＴＩＤ（テザー型ＩＬ−１５、配列番号：１２３）（図４Ｄ）、であった。ｍＲＮＡオープンリーディングフレーム配列をそれぞれ、配列番号：１２２、２２、２８、３２、及び１２４に示す。それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：１１７または配列番号：１２に記載の配列を有する５’ＵＴＲ、及び配列番号：１２１または配列番号：７７に記載の配列を有する３’ＵＴＲを含んでいた。

細胞結合ＩＬ−１５構築物は、別々の構成要素をコードする２種の独立したｍＲＮＡを含み、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒα ｓｕｓｈｉドメインに高親和性で結合することにより、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα発現細胞に限定する。テザー型ＩＬ−１５は、細胞膜上に天然に発現しているＩＬ−１５Ｒαに連結したＩＬ−１５サイトカインを有する融合タンパク質をもたらすことにより、ＩＬ−１５Ｒαが発現している細胞にＩＬ−１５をテザーする。

トランスフェクションの前日に、ＨｅＬａ細胞を６ウェルプレート（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＵＳＡ）上に播種した。次に、ウェルあたり１５０μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭ中の２μｇのｍＲＮＡ及び４μＬのリポフェクタミン２０００を使用して、ｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒαを含むｍＲＮＡ、ｈＩＬ−１５＿ＩＬ−１５Ｒαを含むｍＲＮＡ、ｈＩＬ−１５ＲＬＩを含むｍＲＮＡ、またはｈＩＬ−１５＿ＣＤ８０ＴＩＤを含むｍＲＮＡを個別に、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクションしてから、培養を行った。トランスフェクション試薬に曝露した、ｍＲＮＡを含まないＨｅＬａ細胞は、陰性対照（すなわち、「模擬」）としての役割を果たした。４時間後にトランスフェクション培地を除去して、残りの培養期間用に新鮮な増殖培地に交換した。２４時間後、それぞれのウェルから上清を回収し、一定量の溶解バッファーを使用してそれぞれのウェル内の細胞を溶解した。その後、それぞれのウェルの上清中及び溶解物中におけるＩＬ−１５の量（ｎｇ／ウェル）を標準的なＥＬＩＳＡアッセイで定量した。

図５Ａは、テザー型ＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５＿ＩＬ−１５Ｒα）が溶解物中においてのみ発現し、上清においては発現していないことを示しており、細胞への正常なテザーが暗示されている。それに対し、ｈＩＬ−１５ＲＬＩに加えて、ｈＩＬ−１５及びｈＩＬ−１５Ｒαをコードする独立したｍＲＮＡは、上清と溶解物の両方においてＩＬ−１５発現をもたらした。

生物活性を評価するために、言及した構築物のうちの１種をトランスフェクションしたＨｅＬａ細胞培養液に由来する固定数のマイトマイシンＣ処理済みＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ細胞培養液に由来する固定希釈率の上清を更に含む）と共に、２５，０００のＣＴＬＬ−２細胞を培養した。１：１のモル比率で共に混合した組換えヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒα（ｒｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をまた、陰性対照培養液の一部に加えた（「模擬＋ｒｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα」）。７２時間の培養後、製造業者の取扱説明書に従いＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存アッセイキット（ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、それぞれの培養液中のＣＴＬＬ−２細胞の増殖を測定した。

図５Ｂは、試験した全てのＩＬ−１５構築物がＴ細胞増殖を誘導していることを示しており、それぞれの構築物の生物活性を暗示している。

同一構築物をコードする異なるｍＲＮＡ型を使用した追加の実験を実施して、ＩＬ−１５構築物の発現を試験した。方法は上記と同一であった。具体的には、リポフェクタミンを用いたＨｅＬａ細胞のトランスフェクションの２４時間後に、溶解物及び上清を回収した。Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓのＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体ＥＬＩＳＡキット（ＤＹ６９２４）を使用して発現を測定した。ｔＰＡ６シグナルペプチドを有するｈＩＬ−１５＿ＩＬ−１５Ｒα（「ｔＰＡ６ＩＬ１５−ＩＬ−１５Ｒα」）は、配列番号：２８、２９（ｖａｒ２）、または３０（ｖａｒ３）によってコードされ、ＩｇＥシグナルペプチドを有するｈＩＬ−１５＿ＩＬ−１５Ｒａ（「ＩｇＥＩＬ１５−ＩＬ１５Ｒα」）は、配列番号：２４、２５（ｖａｒ２）、または２６（ｖａｒ３）によってコードされ、ｈＩＬ−１５＿ＣＤ８０ＴＩＤ（「ｔＰＡ６ＩＬＲリンカー８０ＴＩＤ」）は、配列番号：１２４、１２５（ｖａｒ２）、または１２６（ｖａｒ３）によってコードされていた。独立したｍＲＮＡがｈＩＬ−１５及びｈＩＬ−１５Ｒａをコードしている（ＨｓＩＬ１５＿ｍｏｄ／ＨｓＩＬ１５Ｒａｍｏｄ１）。図５Ｃは、様々なｍＲＮＡをトランスフェクションした細胞の上清中及び溶解物中におけるＩＬ−１５のタンパク質発現を示している。図５Ｄは、上清発現／溶解物発現＋上清発現として算出した、タンパク質分断のパーセントを示している。これらの結果は、上清中における低発現がひとえに全体的な低発現によるものではなく、上清中において最終的に翻訳された総タンパク質のより低いパーセンテージによるものであるということを暗示した。更に、これらの結果は、ＣＤ８０の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに連結したｈＩＬ−１５をトランスフェクションした細胞の上清中において発現がほとんどないことを示している。

実施例４：テザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡを用いたＡＭＬ治療の更なる特性解析
本実施例では、Ｃ１４９８腫瘍モデルを使用して、テザー型サイトカインｍＲＮＡ構築物及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡ構築物を用いた治療の効果について更に試験を行った。Ｃ１４９８ＡＭＬ細胞が皮下腫瘍（すなわち、固形腫瘍）を形成するために使用されることから、Ｃ１４９８腫瘍モデルを使用して、播種性がんと固形腫瘍の両方における効果を確認した。実施例３に記載の細胞結合ヒトＩＬ−１５構築物をコードするｍＲＮＡを使用することに加えて、テザー型マウスＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡもまた使用した。具体的には、リンカーによりマウスＰＧＦＲＢ膜貫通ドメインに連結したマウスＩＬ−１２ポリペプチド（ｍＩＬ−１２ＰＴＭ）をコードするｍＲＮＡを調製した。アミノ酸配列は配列番号：４５において提供され、オープンリーディングフレームは配列番号：４４において提供されている。

Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにＣ１４９８同系皮下腫瘍を樹立してから、ＬＮＰ内の単一ｍＲＮＡ（ｍＯＸ４０Ｌまたは細胞結合ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαまたはｍＩＬ−１２ＴＭ）構築物、二重ｍＲＮＡ（ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）構築物、または三重ｍＲＮＡ（ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ）構築物を用いて、それらのマウスを腫瘍内治療した。５０％のイオン性アミノ脂質（化合物Ｘ）、１０％のリン脂質、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ修飾脂質を含むようにＬＮＰを配合したが、ＰＥＧ修飾脂質は１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロールメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）であった。ＬＮＰ内の合計１２．５μｇのｍＲＮＡでマウスを治療した。ｍＯＸ４０Ｌ構築物及びｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をそれぞれ５μｇのｍＲＮＡで使用し、ｍＩＬ−１２ＴＭ構築物を、５μｇのｍＲＮＡで単一の薬剤として使用し、組み合わせで使用する場合、必要に応じてＮＳＴ対照ｍＲＮＡを使用して総ｍＲＮＡが１２．５μｇとなるように、２．５μｇのｍＲＮＡで使用した。

図６Ａ〜図６Ｆに提供する結果は、単一ｍＲＮＡ薬剤（図６Ｂ、図６Ｃ、及び図６Ｄ）、二重ｍＲＮＡ組み合わせ（図６Ｅ）、または三重ｍＲＮＡ組み合わせ（図６Ｆ）のいずれかで治療したマウスの６５日間にわたる腫瘍容積で測定した腫瘍の増殖を示している。Ｃ１４９８皮下腫瘍モデルにおいて三重組み合わせが非常に効果的（６匹においては完全寛解（ＣＲ）が認められた）であることを結果が示している。

図７Ａ〜図７Ｃに提供する結果は、様々な単一薬剤（図７Ａ）、様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα二重（図７Ｂ）、及び様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重（図７Ｃ）で治療したマウスの生存率を示している。テザー型サイトカインを使用したｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重組み合わせが、Ｃ１４９８皮下腫瘍モデルにおいて、マウスの生存率を有意に向上させたことを結果が示した。

反復実験は類似した腫瘍増殖阻害を示し、三重腫瘍内治療の効果が再現可能であることを示した。第２の試験の結果（ｎ＝１５）及び２つの試験の合算結果（ｎ＝３０）を表１８にまとめるが、対照、一重ｍＲＮＡ、または三重ｍＲＮＡ組み合わせのいずれかで治療したマウスの６５日間にわたる腫瘍容積で測定した腫瘍の増殖を示している。
表１８：Ｃ１４９８腫瘍モデルにおける組み合わせｍＲＮＡの効果

ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの組み合わせが４７％の完全寛解（ＣＲ）率を示した一方で、単一薬剤のＣＲ率は１３〜１７％であり、腫瘍内投与した際に、三重組み合わせが任意の単一薬剤と比較してより効果的であることを示した。更に、全ての応答動物の再誘発が再増殖をもたらさなかったことから、持続的な抗腫瘍免疫応答が示唆された。

加えて、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重を用いた単回用量の治療の効果及び、三重を用いた複数回用量の治療（Ｑ７Ｄ×３）の効果について、合計４回の独立した試験（合計でｎ＝５９）で比較を行った。加えて、三重の単回用量レジメンまたは複数回用量レジメンを、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｍＩＬ−１２ＴＭ及びｍＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの二重組み合わせと比較した。代表的な試験（ｎ＝１５）の結果（ＮＳＴ対照と比較）を表１９にまとめ、三重組み合わせの４回の腫瘍内試験の結果もまたまとめている（表１９）。
表１９：単回用量及び複数可用量の組み合わせｍＲＮＡの効果

単回用量腫瘍内治療レジメンと複数回用量腫瘍内治療レジメンの両方が腫瘍増殖の阻害に効果的であり、複数回投与に有意な利点が認められないことを結果が示した。結果はまた、二重組み合わせの効果を示し、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｍＩＬ−１２ＴＭの組み合わせは、このモデルにおいて、複数回用量の三重組み合わせと同様に効果的であった。

総じて、これらの結果は、テザー型サイトカインまたは細胞結合サイトカイン及び共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）の組み合わせが、播種性がん及び固形腫瘍を含むがんにおける抗腫瘍効果をもたらすことを示している。

実施例５：テザー型サイトカインｍＲＮＡ及び免疫チェックポイント阻害剤を用いたＡＭＬの組み合わせ治療
本実施例では、実施例４に記載のＣ１４９８腫瘍モデルを使用して、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、テザー型サイトカインｍＲＮＡ構築物及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡ構築物を用いた治療の効果について試験を行った。ＬＮＰ封入三重ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭｍＲＮＡ構築物を単独で、または、ＢｉｏＸＣｅｌｌの抗ｍＣＴＬＡ−４抗体、抗ｍＰＤ−Ｌ１抗体、または抗ｍＰＤ−１抗体のいずれかを用いた治療と組み合わせて用いて、マウスを腫瘍内治療した。三重ｍＲＮＡ用の単回用量治療レジメン及び複数回用量治療レジメンを試験した。複数回投与では、２週間にわたり週に１回（Ｑ７Ｄ×２）または３週間にわたり週に１回（Ｑ７Ｄ×３）でｍＲＮＡ構築物を投与した。ＮＳＴｍＲＮＡ構築物を、単独でまたは免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、陰性対照として使用した。

第１のシリーズの実験では、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体治療（１０ｍｇ／ｋｇ、２週間にわたり週に２回、合計４回の用量）と組み合わせた単回用量のｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ組み合わせ（１２．５μｇ、腫瘍内）を用いて、マウス（ｎ＝１２）を治療した。結果を表２０に示す。
表２０：抗ｍＣＴＬＡ−４抗体との組み合わせの効果

抗ｍＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤を追加すると、単回用量のｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ構築物における完全寛解（ＣＲ）率の向上がもたらされることを結果が示した。より具体的には、単回用量の三重を単独で用いた腫瘍内治療では５０％のＣＲ率（６／１２）が認められた一方で、単回用量の三重及び抗ｍＣＴＬＡ−４治療の組み合わせでは７５％のＣＲ率（９／１２）がもたらされた。

第２のシリーズの実験では、抗ｍＰＤ−Ｌ１抗体治療（１０ｍｇ／ｋｇ、２週間にわたり週に２回、合計４回の用量）と組み合わせた単回用量または複数回用量のいずれか（３週間にわたり週に１回、合計３回の用量）のｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ組み合わせ（１２．５μｇ、腫瘍内）を用いて、マウス（ｎ＝１５）を治療した。単回用量実験では、抗ｍＰＤ−Ｌ１治療を追加した場合、三重ｍＲＮＡを単独で用いた治療と比較して、ＣＲに有意な向上は認められなかった（データは省略）。複数回用量の三重ｍＲＮＡ治療の結果を表２１に示す。
表２１：免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせｍＲＮＡの効果

抗ｍＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤を追加すると、複数回用量レジメンのｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ構築物における完全寛解（ＣＲ）率の向上がもたらされることを結果が示した。より具体的には、複数回用量レジメンの三重を単独で用いた腫瘍内治療では４０％のＣＲ率（６／１５）が認められた一方で、複数回用量の三重及び抗ｍＰＤ−Ｌ１治療の組み合わせでは８０％のＣＲ率（１２／１５）がもたらされた。

第３のシリーズの実験では、抗ｍＰＤ−Ｌ１抗体治療（１０ｍｇ／ｋｇ、２週間にわたり週に２回、合計４回の用量）または抗ｍＰＤ−１抗体治療（１０ｍｇ／ｋｇ、２週間にわたり週に２回、合計４回の用量）と組み合わせた複数回用量（２週間にわたり週に１回、合計２回の用量）のｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ構築物（１２．５μｇ、腫瘍内）を用いて、マウス（ｎ＝１５）を治療した。結果を表２１に示すが、抗ｍＰＤ−Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤または抗ｍＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤を追加すると、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡ構築物における完全寛解（ＣＲ）率の向上がもたらされることを示している。より具体的には、複数回用量レジメンの三重を単独で用いた腫瘍内治療では３３％のＣＲ率（５／１５）が認められた一方で、三重及び抗ｍＰＤ−Ｌ１治療の組み合わせでは６０％のＣＲ率（９／１５）がもたらされ、三重及び抗ｍＰＤ−１治療の組み合わせでは９３％のＣＲ率（１４／１５）がもたらされた。

これらの実験では、単回用量または複数回用量のいずれかを腫瘍内で用いた三重ｍＲＮＡ構築物単独における抗腫瘍効果が確認され、免疫チェックポイント阻害剤との組み合わせ治療が療法の効果を更に向上させ得ることが示された。

実施例６：播種性ＡＭＬモデル及びｍＲＮＡを用いた治療の特性解析
ＡＭＬの治療における上記のｍＲＮＡ構築物の組み合わせの効果を更に評価するために、ＡＭＬの播種性モデルを作製して、ヒトにおけるＡＭＬ疾患の生理学的特性を再現した。ＡＭＬ細胞がＧＦＰ及びルシフェラーゼを発現することから、血液中のＧＦＰ＋細胞の生物発光イメージング（ＢＬＩ）及びフローサイトメトリー測定による白血病負荷量のモニターが可能となった。このようなＡＭＬ細胞を尾静脈注射でＣ５７ＢＬ／６マウスに静脈内移植した。ＢＬＩシグナルが移植後５日目の長骨及び脾臓において明白である一方で、ＧＦＰ＋細胞は移植後１５日目の循環血液中においてフローサイトメトリーで検出可能であった（データは省略）。それゆえ、このモデルは、疾患進行の期間にわたり様々な造血組織を増殖させることによりヒト疾患を再現する。

ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、ｍＩＬ−１２ＴＭ（マウスＰＤＧＦＲ膜貫通ドメインに連結したマウスＩＬ−１２を含むテザー型ＩＬ−１２構築物）をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５（ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする独立したｍＲＮＡ）をコードするｍＲＮＡを上記のとおり調製した。５０％のイオン性アミノ脂質（化合物Ｘ）、１０％のリン脂質、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ修飾脂質のモル比率を有する別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合したが、ＰＥＧ修飾脂質は化合物４２８であった。

移植の９日後に、トリス／スクロースを対照として、または２ｍｇ／ｋｇ（総ｍＲＮＡ）の、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、ｍＩＬ−１２ＴＭをコードするｍＲＮＡ、ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びｈＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡをマウスに静脈内投与した。ＩＶＩＳｉｎｖｉｖｏイメージングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）でマウスをイメージングする５〜１０分前にルシフェリンをマウスに腹腔内投与することにより、９０日間にわたり、ＢＬＩで光の放射量を測定した。図８Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与した場合に、３／５のマウスが測定可能なＡＭＬ疾患を有していないことを示している。これらのマウスをＡＭＬ細胞で再誘発すると、３／３のマウスは、７０日目において測定可能なＢＬＩシグナルを有していなかった（データは省略）。更に、再誘発後の２１日目に血液を採取し、マウスＣＤ４５で共染色した組織試料中のＡＭＬ細胞からの固有のＧＦＰ蛍光を検出してからＢＤＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターで解析することにより、血液１マイクロリットルあたりのＧＦＰ＋細胞の数をフローサイトメトリーで測定した。図８Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたマウスが、トリス／スクロースを投与されたマウスと比較して、ＧＦＰ＋細胞を減少させたことを示している。

このモデルにおいて、単回用量の２ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡで効果を得られたが、この用量レベルの毎週の反復用量で毒性イベントが認められたことがこれまでに判明したことから、別の試験を実施して投与レジメンに基づいた効果の変化を評価した。それゆえ、マウスＡＭＬ細胞をマウスに移植してから、９日目に、移植の７日後に毎秒５×１０^５〜５×１０^６光子のＢＬＩシグナルを有するマウスに、上記のｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰを静脈内投与した。３週間にわたり週に１回（Ｑ７Ｄ×３）で２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ、３週間にわたる合計２ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡ（「分割用量」）、すなわち、３週間にわたる週に３回の０．２２ｍｇ／ｋｇ（ＴＩＷ×３）、すなわち、週に０．６７ｍｇ／ｋｇ、または、３週間にわたる週に１回の０．６７ｍｇ／ｋｇのいずれかをマウスに投与した。表２２は移植後最大４９日目までのＢＬＩ測定を示し、分割した低用量のｍＲＮＡは、ボーラスで送達した毎週の同一用量よりも優れた効果、及び、３倍のｍＲＮＡ総量を送達する高ボーラス用量群と等しい効果を誘導した。
表２２：分割用量の組み合わせｍＲＮＡの効果

加えて、同一マウスの血液中のＧＦＰ＋細胞の数を上記のとおり測定した。図９は、血液１マイクロリットルあたりのＧＦＰ＋細胞の総数（左）、及びＧＦＰ＋ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージ（右）を示している。両方の投与レジメンが類似したレベルの血中ＧＦＰ＋細胞をもたらしたが、それは、対照を投与されたマウスと比較してより低いものであった。

様々な用量を投与されたマウスの生存率もまた算出した。上記の投与レジメンに加えて、１群のマウスは、ｍＲＮＡの組み合わせの２ｍｇ／ｋｇの１回の用量を投与された。図１０は、３週間にわたる週に１回の２ｍｇ／ｋｇまたは３週間にわたる週に３回の０．２２ｍｇ／ｋｇを投与されたマウスにおけるより高い生存率を示す結果を提供する。

ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせが防御免疫をもたらすかどうかを確認するために、組み合わせ治療に対して完全に応答したマウスを、尾静脈注射のマウスＡＭＬ細胞で再誘発した。持続的なメモリー応答が再発を予防することから、効果的な免疫療法を開発する上で防御免疫は重要である。図１１に示すとおり、全ての再誘発させた完全寛解動物は、再誘発後７０日間、白血病を有さなかった。図１２及び図１３はそれぞれ、全ての再誘発マウスが生存し、血液中のＧＦＰ＋細胞の数を測定した際に疾患負荷量を有していないことを示している。

これらの結果は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせが、がん免疫療法における重要な特徴である防御免疫をもたらすことを示している。重要なことに、この効果はｍＲＮＡの静脈内投与で認められた。

実施例７：播種性ＡＭＬモデル及び分割用量のｍＲＮＡを用いた治療の更なる特性解析
播種性ＡＭＬモデルにおける、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの効果は、実施例６に記載の投与レジメンに基づいて変化することが予想外に判明した。この発見を更に評価するために、２種の異なるＬＮＰ配合物を用いてｍＲＮＡの体内分布を評価した。

具体的には、マウスＡＭＬ細胞をマウスに移植した１５日後に、実施例６に記載のＬＮＰ（ＬＮＰ１）または５０：１０：１０：２８．５：１．５の比率で化合物Ｘ／コレステロール／β−シトステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡをマウスに投与した。β−シトステロールを含有するこのような脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）については、２０１９年１月３０日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／１５９１３号（その内容全体は参照により明示的に本明細書に組み込まれる）において更に記載されている。

２ｍｇ／ｋｇ、０．６７ｍｇ／ｋｇ、または０．２２ｍｋ／ｋｇの単回用量でｍＲＮＡを投与してから、投与の２４時間後、フローサイトメトリーでｍＯＸ４０Ｌ発現を解析した。代替的に、１週間にわたり週に３回（ＴＩＷ）０．２２ｍｇ／ｋｇをマウスに投与してから、第３の用量の２４時間後、ｍＯＸ４０Ｌ発現を測定した。

発現解析用に、末梢血、脾臓、及び骨髄から細胞を採取した。ｍＯＸ４０Ｌ発現用に、個々の細胞型、すなわち、ＧＦＰ＋ＡＭＬ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、ＣＤ１９＋Ｂ細胞、ＣＤ１１ｂ＋顆粒球／単球細胞、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞、その他のＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１ｃ＋骨髄細胞、及びＴｅｒ１１９＋赤血球系細胞を評価した。図１４は、０．２２ｍｇ／ｋｇをＴＩＷで投与された両方のＬＮＰの結果を提供しているが、トランスフェクション細胞の数または生成されるタンパク質の量に関し、ボーラス用量と比較して分割用量に明らかな利点がないことを示しており、試験した全ての投与レジメンにおいて一貫していた（データは省略）。ＡＭＬ細胞に加えて様々な正常造血細胞をｉｎｖｉｖｏでトランスフェクションした。評価した全ての造血組織において、樹状細胞が最もトランスフェクションされた細胞型であった。

分割投与の効果を更に評価するために、播種性ＡＭＬ細胞を有するマウスにおける血清サイトカインレベルを評価した。２ｍｇ／ｋｇボーラスのｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または０．２２ｍｇ／ｋｇの組み合わせのいずれかを、１週間にわたり週に３回マウスに投与した。５４時間にわたり血清を採取し、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズベース多検体イムノアッセイ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して、いくつかの時点における、マウスＩＦＮγ、内在性マウスＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ、及びマウスＩＰ−１０の発現を評価した。図１５は結果を提供しているが、ボーラス用量が第１の用量の後に、送達するより多いｍＲＮＡ用量に対応するより高いサイトカインレベルを誘導したが、第２の分割用量後に、投与後６時間においてサイトカインレベルがピークに到達している（より多いボーラス用量で達成されたサイトカインレベルよりも更に高い）ことを示している。

ｍＯＸ４０Ｌをコードする単一のｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードする単一のｍＲＮＡ、または細胞結合ｈＩＬ−１５をコードする単一のｍＲＮＡ、または、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び／または細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与されたマウスにおける血清サイトカインレベルを評価するために、追加の試験を実施した。上記のＬＮＰ１またはＬＮＰ２内に封入されたｍＲＮＡを週に３回投与し、それぞれの用量の６時間後及び２４時間後に、マウスＩＦＮγ及びマウスＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒの解析用に血清を採取した。図１６は結果を提供しているが、ＬＮＰ配合物とは関係ない、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの三重組み合わせと、テザー型ｍＩＬ−１２及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードする二重組み合わせの両方に、血清レベルのスパイクを示している。この結果を追加の試験で確認した（データは省略）。これら３種の構成要素のその他の組み合わせでサイトカインもまた誘導されたが、血清サイトカインのより高いスパイクは、テザー型ｍＩＬ−１２と細胞結合ｈＩＬ−１５の両方を含む治療においてのみ認められた。

別の試験では、異なる期間の長さにわたり同一用量で投与した、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの効果を評価した。具体的には、１週間、２週間、または３週間にわたる週に３回、または、３週間にわたる週に２回のいずれかで、別々のＬＮＰ（ＬＮＰ１またはＬＮＰ２）内に配合された、０．２２ｍｇ／ｋｇのｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、マウスに投与した。表２３は、これらのｍＲＮＡの組み合わせの効果が、２週間または３週間にわたり投与した場合には類似しているが、１週間のみにわたり投与した場合には顕著により低いことを示している。投与スケジュールを１週間以上延長することにより、完全寛解率が４０％から７０〜８０％へと改善する。３週間にわたる週に２回または週に３回の投与においても類似した効果が示された。
表２３：異なる投与スケジュールにおける組み合わせｍＲＮＡの効果

実施例８：播種性ＡＭＬモデルにおけるｍＲＮＡ組み合わせ治療の効果の特性解析
とりわけ、分割投与を用いた、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの高い抗白血病効果については、上記の実施例において記載している。この効果を更に評価するために、分割用量で投与される単一の治療薬及び二重組み合わせについて評価を行った。

具体的には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡを実施例６に記載のとおりにＬＮＰ内に配合してから、マウス播種性ＡＭＬ細胞の移植後９日目に、単一の薬剤または組み合わせで、７日目において毎秒５×１０^５〜５×１０^６光子のＢＬＩ測定を有するマウスに投与した。０．２２ｍｇ／ｋｇのｍＲＮＡ（０．２２ｍｐｋ）を３週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×３）マウスに投与した。表２４は、ＢＬＩで測定した疾患負荷量を示している。対象と比較して、ｍＯＸ４０Ｌ及びテザー型ｍＩＬ−１２が単一の薬剤で疾患負荷量を低下させた一方で、細胞結合ｈＩＬ−１５は疾患負荷量を低下させなかった。テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡまたは細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡにｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを追加すると抗腫瘍効果が向上した一方で、テザー型ｍＩＬ−１２及び細胞結合ｈＩＬ−１５の組み合わせは極めてわずかな効果をもたらした。注目すべきことに、全てのｍＲＮＡ（ｍＯＸ４０Ｌ、テザー型ｍＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５）の組み合わせが最も効果的であった。
表２４：播種性ＡＭＬにおける単一ｍＲＮＡまたは組み合わせｍＲＮＡの効果

加えて、様々な組み合わせを投与されたマウスの体重について評価を行った。具体的には、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２、細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２、またはｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２を投与されたマウスにおける、体重変化のパーセンテージを測定した。図１７Ａ〜図１７Ｄは結果を提供しているが、テザー型ｍＩＬ−１２及び細胞結合ｈＩＬ−１５の二重組み合わせが第１週において体重減少を引き起こしていることを示している。総じて、細胞結合ｈＩＬ−１５及びテザー型ｍＩＬ−１２を投与されたマウスにおける体重減少、サイトカインの強力な誘導、及び抗白血病効果の欠乏は、サイトカイン誘導が、必要とはなり得るが、効果を生じさせるには十分ではないことを示唆している。本実施例はまた、ＯＸ４０Ｌが抗白血病効果に必要な構成要素であることを示した。

実施例９：様々な用量の個々のｍＲＮＡにおける、播種性ＡＭＬモデルにおけるｍＲＮＡ組み合わせ治療の効果の特性解析
これまでの実施例では、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、同一の重量（質量）比率（１：１：１）の組み合わせで投与した。細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡがｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ及びｈＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを含む場合、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で配合された。組み合わせ内における個々の構成要素の化学量論の影響を評価するために、異なる比率についての評価を行った。

実施例６に記載のとおりに、播種性マウスＡＭＬ細胞をマウスに移植した。移植の９日後、毎秒５×１０^５〜５×１０^６光子のＢＬＩ測定を有するマウスに、特定の比率の以下のｍＲＮＡ、１：１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：細胞結合ｈＩＬ−１５：テザー型ｍＩＬ−１２、１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：細胞結合ｈＩＬ−１５、１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：テザー型ｍＩＬ−１２、１：１の重量（質量）比率のテザー型ｍＩＬ−１２：細胞結合ｈＩＬ−１５、１：１：０．１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：細胞結合ｈＩＬ−１５：テザー型ｍＩＬ−１２、１：０．１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：細胞結合ｈＩＬ−１５：テザー型ｍＩＬ−１２、または０．１：１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：細胞結合ｈＩＬ−１５：テザー型ｍＩＬ−１２を、０．２２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ用量で３週間にわたり週に３回投与した。表２５は結果を提供しているが、テザー型ｍＩＬ−１２及び細胞結合ｈＩＬ−１５の組み合わせが効果的ではなく場合により毒性ではあるが、ｍＯＸ４０Ｌをテザー型ｍＩＬ−１２の量及び細胞結合ｈＩＬ−１５の量の１０分の１でも含ませることにより効果が援助され、また体重減少が緩和されることを示している（データは省略）。
表２５：組み合わせｍＲＮＡ比率の効果

ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの投与を更に評価するために、２週間にわたる週に３回の０．２２ｍｇ／ｋｇまたは０．１１ｍｇ／ｋｇのいずれかで総ｍＲＮＡを投与した。表２６は、用量を半減した場合に、三重組み合わせの類似した抗腫瘍効果を示している。しかしながら、ｍＯＸ４０Ｌ及びテザー型ｍＩＬ−１２または細胞結合ｈＩＬ−１５の二重組み合わせをより低用量（すなわち、０．１１ｍｇ／ｋｇ）で投与した場合には、抗腫瘍効果がほとんど失われた。具体的には、完全寛解率が６０〜８０％から２０％に低下した。それゆえ、三重組み合わせは、このモデルにおける任意の対応する二重組み合わせと比較してより優れた効果を示している。
表２６：組み合わせｍＲＮＡ用量の効果

実施例１０：ｍＲＮＡ及び免疫チェックポイント阻害剤を用いた播種性ＡＭＬの組み合わせ治療
本実施例では、実施例６に記載の播種性マウスＡＭＬモデルを使用して、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせた、テザー型サイトカインｍＲＮＡ構築物及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡ構築物を用いた治療の効果について試験を行った。

具体的には、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを０．１１ｍｇ／ｋｇで２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×２）投与されているマウスに、抗ｍＰＤ−Ｌ１抗体または抗ｍＣＴＬＡ−４抗体（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を１０ｍｇ／ｋｇの用量で２週間にわたり週に２回（ＢＩＷ×２）投与した。実施例６に記載のとおりに、ｍＲＮＡを調製して配合した。表２７は結果を提供しているが、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体による抗腫瘍効果のわずかな向上を示している。
表２７：組み合わせｍＲＮＡ及び免疫チェックポイント阻害剤の効果

別の試験では、ｍＯＸ４０Ｌ及びテザー型ｍＩＬ−１２または細胞結合ｈＩＬ−１５の組み合わせに免疫チェックポイント阻害剤を追加することの効果について評価を行った。具体的には、０．１１ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ（ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡまたは細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ）を２週間にわたり週に３回投与されているマウスに、抗ｍＰＤ−Ｌ１抗体または抗ｍＣＴＬＡ−４抗体を２週間にわたり週に２回（ＢＩＷ×２）投与した。表２７は結果を提供しているが、二重組み合わせ及び免疫チェックポイント阻害剤を組み合わせた場合の、効果の有意な向上を示している。

総じて、これらの結果は、本明細書に記載のｍＲＮＡの組み合わせに免疫チェックポイント阻害剤を追加すると、ＡＭＬに対する抗腫瘍効果が向上することを示している。

実施例１１：チェックポイント療法耐性固形腫瘍におけるテザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡの効果
テザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡと共刺激ｍＲＮＡの組み合わせが、固形腫瘍における抗腫瘍効果を誘導するかどうかを確認するために、ＭＣ３８−Ｒ同系結腸腺癌モデルを使用した。ＭＣ３８−Ｒモデルは免疫抑制性であり免疫チェックポイント阻害剤治療に耐性を示し、それに対し、ＭＣ３８−Ｓモデルは免疫抑制性がより低く免疫チェックポイント阻害剤治療の影響を部分的に受けやすい。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの皮下にＭＣ３８−Ｒ腫瘍を樹立した。上記のｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び／または細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、化合物Ｘを含む別々のＬＮＰ内に配合してから、単回用量の１０μｇの総ｍＲＮＡで腫瘍内投与して腫瘍を樹立した。表２８は結果を提供しているが、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの三重組み合わせが、腫瘍容積を縮小させる上で、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５、及びテザー型ｍＩＬ−１２＋細胞結合ｈＩＬ−１５の二重組み合わせと比較してより効果的であることを示している。
表２８：チェックポイント療法耐性モデルにおける組み合わせｍＲＮＡの効果

注目すべきことに、二重組み合わせと比較した三重組み合わせの高い効果は、Ｃ１４９８モデルで認められた効果とは対照的である（表１９を参照のこと）。両方のモデルにおいて効果的ではあるが、この実験では、三重がｍＯＸ４０Ｌ及びテザー型ｍＩＬ−１２の二重組み合わせと比較して有意により効果的であった。

次に、ＭＣ３８−ＲモデルにおけるｍＲＮＡの組み合わせの複数回投与の効果について評価を行った。具体的には、化合物Ｘを含み、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び／または細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰを、３週間にわたる週に１回（Ｑ７Ｄ×３）の１０μｇの総ｍＲＮＡの用量で腫瘍内投与した。表２８は結果を提供しているが、ｍＯＸ４０Ｌ、テザー型ｍＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５の三重組み合わせの複数回用量が、単回用量と比較してより効果的であることを示している。加えて、テザー型ｍＩＬ−１２及び細胞結合ｈＩＬ−１５の二重組み合わせの効果は、複数回投与で向上した。注目すべきことに、三重組み合わせの抗腫瘍効果は、二重組み合わせと比較してより効果的なままであった。

固形腫瘍における三重組み合わせの効果を更に評価するために、チェックポイント阻害剤との組み合わせについて評価を行った。具体的には、化合物Ｘを含み、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰの単回用量（すなわち、１０μｇの総ｍＲＮＡ）を、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ）と組み合わせて、ＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスに投与した。図１８Ａ〜図１８Ｂは、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体と共に投与した際の三重組み合わせの高い効果を示している。

ＬＮＰ配合物が三重組み合わせの効果を付与するかどうかを確認するために、化合物Ｘを含むＬＮＰを、化合物４２８及び化合物Ｘを含むＬＮＰと比較した。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、別々のＬＮＰ内に配合してから、単回用量または複数回用量（すなわち、３週間にわたり週に１回）の１０μｇの総ｍＲＮＡで、ＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスに投与した。表２９は、単回用量の２種のＬＮＰ配合物間における同等の抗腫瘍効果、及び、複数回用量の化合物Ｘを含み化合物４２８を含むＬＮＰと化合物Ｘを含み化合物４２８を含まないＬＮＰの両方における高い効果を示している。
表２９：異なるＬＮＰ配合物中のｍＲＮＡ組み合わせの効果

総じて、これらの結果は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせが、単回投与レジメン及び複数回投与レジメンで、固形腫瘍において効果的であることを示した。

実施例１２：固形腫瘍におけるテザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡのアブスコパル効果
固形腫瘍におけるｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの抗腫瘍効果を更に評価するために、組み合わせのアブスコパル効果について評価を行った。具体的には、未治療腫瘍が、治療腫瘍に認められる抗腫瘍効果の恩恵を受け得るかどうかを試験した。

１つの試験では、ＣＴ２６同系結腸癌モデルを使用した。ＣＴ２６は、最も広く試験されている同系マウス腫瘍モデルのうちの１つであり、がん免疫療法に用いる低分子細胞傷害剤及び生物学的応答調節物質のスクリーニング及び評価に使用されている。ＢＡＬＢ／ｃマウスのそれぞれの脇腹にＣＴ２６腫瘍細胞を注射して、皮下腫瘍を樹立した。ｍＲＮＡの三重組み合わせのアブスコパル効果を解析するために、化合物Ｘを含む別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、１つの腫瘍のみに投与した（「治療」）。ｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：テザー型ｍＩＬ−１２：細胞結合ｈＩＬ−１５の、単回用量または複数回用量（３週間にわたり週に１回、「Ｑ７Ｄ×３」）の５μｇの総ｍＲＮＡのいずれかで投与した。表３０は、治療腫瘍と未治療腫瘍の両方が、投与スケジュールに関係なく、ｍＲＮＡの三重組み合わせに対して反応を示したことを示している。
表３０：ｍＲＮＡ組み合わせのアブスコパル効果

第２の試験では、Ａ２０マウスＢ細胞リンパ腫細胞（Ａ２０、ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−２０８；ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）をＢＡＬＢ／ｃマウスに注射して皮下腫瘍を作製した。マウスの両方の脇腹に腫瘍を樹立して、アブスコパル効果を評価した。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、化合物Ｘを含む別々のＬＮＰ内に配合してから、腫瘍のうちの一方に投与した（「治療」）。ｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率のｍＯＸ４０Ｌ：テザー型ｍＩＬ−１２：細胞結合ｈＩＬ−１５の、単回用量または複数回用量（すなわち、２週間にわたり週に１回）の５μｇの総ｍＲＮＡのいずれかで腫瘍内投与した。表３０は、治療腫瘍と未治療腫瘍の両方が、投与スケジュールに関係なく、ｍＲＮＡの三重組み合わせに対して反応を示したことを示している。

実施例１３：ＡＭＬ細胞を接種したマウスにおけるテザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡの投与による免疫活性化
本実施例では、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを用いた治療後における免疫活性化について、上の実施例６に記載のとおりにＧＦＰ＋ＡＭＬ細胞を接種したマウスを用いて試験を行った。治療せずにおくと、高いＢＬＩシグナルによって測定されるように、ＡＭＬ細胞は様々な造血組織において増殖する。ＡＭＬ移植後１２日目に、１：１：１の重量（質量）比率で脂質ナノ粒子内に封入され、０．２２ｍｇ／ｋｇ／投与の用量で２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×２）（投与間に少なくとも４８時間をおいて）静脈内投与されたｍＯＸ４０ＬｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２ｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５ｍＲＮＡの組み合わせで、腫瘍保有マウスを治療した。５０％のイオン性アミノ脂質（化合物Ｘ）、１０％のリン脂質、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ修飾脂質を含むように脂質ナノ粒子を配合したが、ＰＥＧ修飾脂質は化合物４２８であった。対照として、同一の脂質ナノ粒子配合物内に封入された対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を、同一の用量レベル及びスケジュールで、同様に接種したマウスに投与した。

この治療組み合わせが免疫細胞集団にどのように影響を及ぼすかを評価するために、２４時間時点（１回目の用量の２４時間後）、６日目（３回目の用量の２４時間後）、及び１３日目（６回目の用量の２４時間後）に、組織（脾臓、骨髄、及びリンパ節）及び末梢血を採取してから、フローサイトメトリーで解析した。以下のゲーティング戦略、
ＮＫ細胞：ＣＤ３−ＣＤ４９ｂ＋、
ＮＫＴ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ４９ｂ＋、
ＣＤ４＋Ｔ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ４９ｂ−ＣＤ８−ＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３−、
ＣＤ８＋Ｔ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ４９ｂ−ＣＤ８＋ＣＤ４−、
ＣＤ８＋ｃＤＣ１：ＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣＩＩ＋Ｂ２２０−ＣＤ８＋、
ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１：ＣＤ１１ｃ＋ＭＨＣＩＩ＋Ｂ２２０−ＣＤ１０３＋、
ｃＤＣ２：ＣＤ１１ｃ＋、ＭＨＣＩＩ＋Ｂ２２０−Ｌｙ６Ｃ−ＣＤ２４＋、
ｉＤＣ：ＣＤ１１ｃ＋、ＭＨＣＩＩ＋Ｂ２２０−ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃ＋、
を使用して、生ＣＤ４５＋細胞の中から免疫細胞集団を同定した。

早くも１回目の用量の２４時間後に、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与されたマウスの末梢血中におけるＮＫ細胞の総数は、対照ｍＲＮＡを投与されたマウスの血液と比較して増加した。しかしながら、ＮＫ細胞数は、６回目の用量の２４時間後（すなわち、１３日目）までには末梢血と免疫組織（脾臓、骨髄、及びリンパ節）の両方において減少しており、ＮＫ細胞レベルがベースラインまで戻ったことを示している（データは省略）。生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を解析した際にも同一の結果が認められた（図１９Ａ〜図１９Ｄ）。マーカーＫｉ−６７を使用したＮＫ細胞増殖の更なる試験では、ＮＫ細胞が、末梢血、脾臓、骨髄、及び比較的程度は低いが鼠径リンパ節において、早くも１回目の用量の２４時間後に高い増殖を示すことが判明した（データは省略）。ＮＫ細胞活性化をまた、ＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒα）マーカー（データは省略）及びＣＤ６９（図２０Ａ〜図２０Ｄ）マーカーを使用して評価した。ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせが、治療マウスの複数種の造血組織におけるＮＫ細胞の活性化、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、及び増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）を誘導したことを結果が示している。

ＮＫＴ細胞応答の動態についても試験を行った。具体的には、総ＮＫＴ細胞数（データは省略）及びＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてのＮＫＴ細胞（図２１Ａ〜図２１Ｄ）を解析し、ＮＫＴ細胞の増殖が認められた。Ｋｉ−６７発現の評価では、ＮＫＴ細胞の増殖もまた高くなっていることが示された（データは省略）。活性化マーカーＣＤ２５（データは省略）及びＣＤ６９（図２２Ａ〜図２２Ｄ）の発現もまた、対照マウスと比較して三重治療マウスにおいて高くなった（データは省略）。

ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを用いた治療はまた、生ＣＤ４５＋細胞の絶対数またはパーセンテージで測定したＣＤ８＋Ｔ細胞（図２３Ａ〜図２３Ｄ）の増殖を６日目（３回目の用量の２４時間後）までに誘導し、１３日目（６回目の用量の２４時間後）まで誘導し続けた。ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖（Ｋｉ−６７発現）もまた、６日目までに高くなり、１３日間の試験にわたり高さを維持した（データは省略）。同様に、活性化マーカーＣＤ２５（データは省略）及びＣＤ６９（図２４Ａ〜図２４Ｄ）もまた、６日目までに上方制御され、１３日目まで上昇し続けた。

ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを用いた治療はまた、生ＣＤ４５＋細胞の絶対数またはパーセンテージで測定したＣＤ４＋Ｔ細胞（図２５Ａ〜図２５Ｄ）の増殖、高いＣＤ４＋Ｔ細胞増殖（データは省略）、及びＣＤ４＋Ｔ細胞活性化マーカー（図２６Ａ図〜２６Ｄ）の上方制御をもたらした。

樹状細胞集団（ＣＤ８＋ｃＤＣ１、ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１、ｃＤＣ２、及びｉＤＣ）もまた、脾臓（図２７Ａ〜図２７Ｄ）及びリンパ節（図２８Ａ〜図２８Ｄ）においてそれぞれ測定した際、生ＣＤ４５＋細胞の細胞数及びパーセンテージにおいて増加した。ＤＣ集団はまた、１３日目までにベースラインレベルへと徐々に減少して戻るＣＤ８６成熟マーカーの初期の発現上昇を示した（図２９Ａ〜図２９Ｄ、図３０Ａ〜図３０Ｄ）。この試験は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせが免疫刺激性であり、自然免疫細胞及び適応免疫細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋ｃＤＣ１、ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１、ｃＤＣ２、及びｉＤＣ）の数、増殖、及び活性化における上昇、ならびに、成熟マーカーの発現における上昇をもたらすことを示している。

実施例１４：Ｂａｔｆ３ＫＯマウスを用いた播種性ＡＭＬの治療におけるテザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡの効果
Ｂａｔｆ３ノックアウト（ＫＯ）マウスにおけるＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの効果を評価して、抗白血病効果を介在する樹状細胞の役割を評価した。Ｂａｔｆ３ＫＯマウスは、Ｂａｔｆ３（塩基性ロイシンジッパー転写因子、ＡＴＦ様）遺伝子のエキソン１〜２を欠いている。Ｂａｔｆ３はＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８α＋古典的樹状細胞（ｃＤＣ）において高発現しており、抗原クロスプレゼンテーションにおいて役割を果たしている。Ｂａｔｆ３ＫＯマウスは、ＣＤ８α＋樹状細胞を欠き、ＴＬＲ−３誘導ＩＬ−１２産生が不十分であり、また、肺、腸、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、真皮、及び皮膚所属リンパ節においてＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ−ＤＣを欠いている。Ｂａｔｆ３ＫＯマウスは、ＣＤ８＋Ｔ細胞プライミングに異常があり、高免疫原性同系腫瘍を拒絶することができない（ＨｉｌｄｎｅｒＫｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ３２２（５９０４）：１０９７−１１００（２００８））。

この試験では、表３１にまとめた試験デザインに従い、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを、Ｃ５７ＢＬ／６マウスまたはＢａｔｆ３ＫＯマウスのいずれかに静脈内投与した。
表３１：ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの効果

上の実施例６に記載のとおり、０日目に、ＧＦＰを発現するＡＭＬ細胞をマウスに接種した。ＡＭＬ細胞が樹立されると、実施例１３に記載のＬＮＰ内に封入されたｍＲＮＡを、２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×２）静脈内投与した。週に２回マウスのイメージングを行い疾患負荷量をモニターした。ＡＭＬ細胞は、未治療マウス及び対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）治療マウスにおいて増殖し続けた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢａｔｆ３ＫＯマウスの両方において、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰの投与は、ＡＭＬ疾患負荷量を低下させた（例えば、ＢＬＩシグナルが低下した）。表３１は、Ｃ５７ＢＬ／６群（ＣＲ＝７）とＢａｔｆ３ＫＯ群（ＣＲ＝６）の両方における完全寛解動物を示している。

これらの結果は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与が様々なクロスプレゼンテーションを行うＤＣの増殖及び活性化をもたらしている（例えば、実施例１３を参照のこと）が、ｍＲＮＡ組み合わせが抗腫瘍応答に影響を及ぼす能力は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢａｔｆ３ＫＯマウスの両方におけるＡＭＬ疾患負荷量の抑制及び治療後１００日間にわたる高い生存率（図３１）によって示されているとおり、機能的なクロスプレゼンテーションを行うＤＣ集団を有することに依存していないことを示している。

実施例１５：テザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡの抗腫瘍効果は、播種性ＡＭＬの治療におけるＩＦＮγ中和またはＴ細胞枯渇によって阻害される
ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの効果を介在するＴ細胞の役割について、上の実施例に記載のマウスＡＭＬ試験で更なる評価を行った。簡潔に説明すると、１×１０^６ＭＬＬ−ＡＦ９細胞を尾静脈注射でＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した（０日目）。ＡＭＬ移植後９日目に、１：１：１の重量（質量）比率で脂質ナノ粒子内に封入され、０．１１ｍｇ／ｋｇ／投与の用量で２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×２）静脈内投与されたｍＯＸ４０ＬｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２ｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５ｍＲＮＡの組み合わせで、腫瘍保有マウス（ｎ＝１５）を治療した。対照として、脂質ナノ粒子内に封入された対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を、同一の用量及び同一のスケジュールで、同様に接種したマウスに投与した。ｍＲＮＡ投与開始の前日に始め、表３２にまとめているとおりに、ＣＤ８＋枯渇抗体（２．４３，ＢＰ００６１，ＢｉｏＸＣｅｌｌ）またはラットＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照（ＬＴＦ−２，ＢＰ００９０，ＢｉｏＸＣｅｌｌ）のマウスへの腹腔内注射を４回行った。
表３２：ＣＤ８＋枯渇マウスにおけるｍＯＸ４０Ｌ＋ｍＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα ｍＲＮＡ

^ａ９、１１、１４、１６、１８、及び２１日目にｉｖ投与したｍＲＮＡ
^ｂ８、９、１０、及び１４日目にｉｐ投与した抗体

抗ＣＤ８抗体の投与は早くも移植後１１日目（１回目のｍＲＮＡ用量の２日後）にＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇をもたらし、その枯渇は２２日目まで持続した（データは省略）。ＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇は、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの治療効果の阻害をもたらした（表３２）。アイソタイプ抗体と共にｍＲＮＡ組み合わせを投与すると、ＡＭＬ疾患負荷量が成功裏に低下し、移植後６０日目までに１０匹の完全寛解動物がもたらされた。それに対し、ｍＲＮＡ組み合わせで治療したＣＤ８＋Ｔ細胞枯渇マウスにおいては、寛解動物数（ＣＲ＝１）の有意な減少が示すとおり、ＡＭＬ疾患負荷量を制御することができなかった。アイソタイプ対照抗体を投与されたかまたは抗ＣＤ８抗体を投与されたかにかかわらず、対照ｍＲＮＡを投与されたマウスがＡＭＬ進行を制御することができなかったことから、ＡＭＬ進行の阻害はｍＲＮＡ組み合わせに特異的である。これらの結果は、ＡＭＬを制御するｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの効果がＣＤ８＋Ｔ細胞の機能に依存していることを示している。

別の実験では、抗ＣＤ４抗体（ＧＫ１．５，ＢＰ０００３−１，ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を使用してＧＦＰ＋ＡＭＬ細胞を接種しＬＮＰ内に封入されたｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭｍＲＮＡで治療したマウスにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させることにより、ＡＭＬに対するｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの効果を介在するＣＤ４＋Ｔ細胞の役割について試験を行った。試験デザインを表３３にまとめる。
表３３：ＣＤ４＋枯渇マウスにおけるｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの効果

抗ＣＤ４抗体の投与は早くも移植後１１日目（１回目のｍＲＮＡ用量の２日後）にＣＤ４＋Ｔ細胞の枯渇をもたらし、その枯渇は２２日目まで持続した（データは省略）。ＣＤ４＋Ｔ細胞の枯渇は、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせの治療効果の阻害をもたらした（表３３）。ｍＲＮＡ組み合わせの投与により、抗体を投与しなかったマウス（ＣＲ＝８）またはアイソタイプ抗体を投与したマウス（ＣＲ＝４）におけるＡＭＬ疾患負荷量が成功裏に低下した。それに対し、ｍＲＮＡ組み合わせで治療したＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇マウスにおいては、ＡＭＬ疾患負荷量を制御することができなかった。アイソタイプ対照抗体を投与されたかまたは抗ＣＤ４抗体を投与されたかにかかわらず、対照ｍＲＮＡを投与されたマウスがＡＭＬ進行を制御することができなかったことから、ＡＭＬ進行の阻害は三重を用いた治療に特異的である。移植後３０日目までの動物の生存曲線を図３２に示す。ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭを投与された腫瘍保有マウスのうちの大多数（１１／１５）は移植後３０日目まで生存した。それに対し、ｍＲＮＡ組み合わせで治療したＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇マウスはいずれも、移植後２２日目を越えて生存しなかった。これらの結果は、ＡＭＬを制御するｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの効果がまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞依存性であることを示している。

このｍＲＮＡ組み合わせの抗白血病活性を介在するＩＦＮγの役割を確認するために更なる実験を行った。ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）の投与と同時に、ＩＦＮγ中和抗体（ＸＭＧ１．２，ＢｉｏＸＣｅｌｌ）をＡＭＬ接種マウス（ｎ＝１５）に腹腔内投与した。試験デザインを表３４にまとめる。
表３４：抗ＩＦＮγ治療マウスにおけるｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの効果

^ａ抗体投与の９、１２、１４、１６、１９、及び２１日後にｉｖ投与したｍＲＮＡ
^ｂｍＲＮＡ投与の９、１２、１４、１６、１９、及び２１日前にｉｐ投与した抗体

ＢＬＩで測定したＡＭＬ疾患負荷量は、マウスに抗ＩＦＮγ抗体を投与した場合にｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの抗白血病効果が著しく低下することを示した（表３４）。ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭの投与により、抗体を投与されなかったマウス（ＣＲ＝５）またはアイソタイプ対照抗体を投与されたマウス（ＣＲ＝５）において、ＡＭＬ疾患負荷量が移植後６０日目までに成功裏に低下した。それに対し、抗ＩＦＮγ抗体治療マウスは、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭで治療した場合であっても、ＡＭＬ疾患負荷量を制御することができなかった。アイソタイプ対照抗体を投与されたかまたは抗ＩＦＮγ抗体を投与されたかにかかわらず、対照ｍＲＮＡを投与されたマウスがＡＭＬ進行を制御することができなかったことから、ＡＭＬ進行の阻害はｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ特異的である。移植後５０日目までの動物の生存曲線を図３３に示す。ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ及び抗ＩＦＮγ抗体で治療した全てのマウスが移植後２２日目までに疾患で死亡した一方で、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭで治療した全てのその他のマウスの生存率は同一時点において約７０％であり、移植後５０日目までの生存率は約２５％であった。

ＩＦＮγ中和の下流効果について更に試験を行ったが、それらの結果を図３４Ａ〜図３４Ｂ、図３５Ａ〜図３５Ｂ、図３６Ａ〜図３６Ｂ、及び図３７Ａ〜図３７Ｂに示す。結果は、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ治療が、ＩＦＮγシグナル伝達が誘導するマーカー、単球上のＭＨＣＩＩ（図３４Ａ〜図３４Ｂ）及び、顆粒球上（図３６Ａ〜図３６Ｂ）及び単球上（図３７Ａ〜図３７Ｂ）の両方を含む骨髄細胞上のチェックポイントタンパク質ＰＤ−Ｌ１（図３５Ａ〜図３５Ｂ）の上方制御をもたらすことを示している。抗ＩＦＮγ抗体を投与すると、対応する細胞集団におけるＭＨＣＩＩ及びＰＤ−Ｌ１がベースラインレベルへと低下し、ＩＦＮγシグナル伝達の完全な遮断が示された。これらの結果は、ＩＦＮγが、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭｍＲＮＡ組み合わせの抗白血病効果を介在する重要な役割を果たしていることを示している。

実施例１６：非ヒト霊長類におけるテザー型サイトカインｍＲＮＡ及び細胞結合サイトカインｍＲＮＡの投与
ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの組み合わせを非ヒト霊長類（ＮＨＰ）に投与して、その組み合わせの免疫活性効果を更に評価した。表３５にまとめている試験において、異なる投与経路−皮下（ＳＣ）または静脈内（ＩＶ）−及び投与スケジュールを評価した。
表３５：ＮＨＰにおけるｈＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／１５Ｒα

用量レベルは、組み合わせの０．１、０．３、または１．０ｍｇ／ｋｇ／投与の総ｍＲＮＡ用量とするための、それぞれ１：１：１の重量（質量）比率、例えば、０．０３３、０．１、または０．３ｍｇ／ｋｇ／投与の、実施例１３に記載のＬＮＰ内に配合されたｈＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαで投与したｍＲＮＡの総量を表す。それぞれの霊長類におけるＩＦＮγサイトカイン発現及びＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）サイトカイン発現の誘導を測定するために、投与前（０日目）及び投与後の様々な時点で血清を採取した。採取した血清は、市販のＰｒｉｍａｔｅＩＦＮγ ＥＬＩＳＡキット（ＤＹ９６１，Ｒ＆Ｄ）及びＣｙｎｏＣＸＣＬ１０ＥＬＩＳＡキット（ＤＩＹ１２６６Ｙ−００３，ＫｉｎｇｆｉｓｈｅｒＢｉｏｔｅｃｈ）を製造業者の取扱説明書に従い実施して使用し、１：１０、１：３０、１：９０、及び１：２７０の希釈で試験を行った。

図３８Ａ〜図３８Ｆに示すとおり、ｍＲＮＡ組み合わせの投与により、それぞれの投与後における、用量依存的で投与経路に依存しない、ＩＦＮγ（図３８Ａ〜図３８Ｃ）及びＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）（図３８Ｄ〜図３８Ｆ）の誘導がもたらされた。この試験は、ｈＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα ｍＲＮＡがＮＨＰにおいて生物活性であり、免疫活性化に関与する下流のサイトカインを用量依存的に誘導することを示している。

免疫系に対するｈＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの局所効果及び全身効果を更に評価するために、組織（最終の用量の２４時間後に採取した脾臓切片及び全大腿部）もまた、群１（対照）及び群２（０．１ｍｇ／ｋｇ／投与）のカニクイザルから採取した。以下のゲーティング戦略、
ＮＫ細胞：ＣＤ３−ＣＤ７＋ＣＤ１６＋、
ＮＫＴ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ１６＋、
ＣＤ４＋Ｔ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ１６−ＣＤ８−ＣＤ４＋、
ＣＤ８＋Ｔ細胞：ＣＤ３＋ＣＤ１６−ＣＤ８＋ＣＤ４−、
を使用して、生ＣＤ４５＋の中から免疫細胞集団を同定した。

ｈＩＬ−１２ＴＭ＋ｈＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα組み合わせの投与により、対照物品で治療したカニクイザルのＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の数と比較して、カニクイザルの脾臓と骨髄の両方における同一細胞集団の増殖がもたらされた（図３９Ａ〜図３９Ｃ）。骨髄における免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＮＫＴ細胞）の数の増加は、脾臓試料に認められた同一細胞集団の増加と比較して劇的ではなかったが、骨髄における免疫細胞集団の更なる解析は、ＣＤ６９の高い発現で測定した際に、対照物品を投与された動物の骨髄における細胞と比較して、これらの免疫細胞のより大きな集団が活性化していることを示している（図４０Ａ〜図４０Ｄ）。

その他の実施形態
本開示についてその発明を実施するための形態と関連させて説明してきたが、上記の説明は例示を目的としたものであり、本開示の範囲を限定するものではなく、本開示は添付の特許請求の範囲の範囲によって定義されるものであるということを理解されたい。その他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

本明細書に記載の全ての参照文献の全体は参照により組み込まれる。

配列表の一覧

Claims

ヒト患者におけるがんを治療するための方法であって、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を前記患者に投与することを含み、
前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている、
前記方法。
前記がんは播種性がんであり、前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは全身投与される、請求項１に記載の方法。
前記播種性がんは血液がんである、請求項２に記載の方法。
前記播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である、請求項２に記載の方法。
前記骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
前記がんは固形腫瘍であり、前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは腫瘍内投与される、請求項１に記載の方法。
前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、（ｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである、または（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている、請求項７に記載の方法。
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、任意選択的にペプチドリンカーを介して、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、請求項７から請求項１０のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、請求項１１に記載の方法。
（ｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、または（ｉｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、請求項７から請求項１２のいずれか１項に記載の方法。
前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の方法。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含み、（ｉ）前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、または（ｉｉ）前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、請求項７から請求項１４のいずれか１項に記載の方法。
前記細胞内ドメインは、（ｉ）配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、（ｉｉ）Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、または（ｉｉｉ）配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、請求項１５に記載の方法。
前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の方法。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、請求項７から請求項１７のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、請求項７から請求項１８のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、請求項７から請求項１９のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含み、前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに由来しているまたは非相同ポリペプチドに由来している、請求項２０に記載の方法。
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７から請求項２１のいずれか１項に記載の方法。
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされており、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項２２に記載の方法。
前記固形腫瘍は免疫抑制性腫瘍微小環境を含む、または、前記固形腫瘍は免疫チェックポイント阻害剤療法に対して反応を示さない、請求項６から請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
（ｉ）前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡを含む第１の分割用量の医薬組成物、及び、
（ｉｉ）少なくとも１回の第２の分割用量の前記医薬組成物、
を含み、
前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、同一投与期間中の単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して、前記患者における前記ｍＲＮＡコードポリペプチドへの曝露を増加させることにより、前記患者における前記播種性がんを治療する、
請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の方法。
前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、（ｉ）単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して前記治療の抗腫瘍効果を向上させる、（ｉｉ）毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果を向上させる、または、（ｉ）及び（ｉｉ）をもたらす、請求項２５に記載の方法。
それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含み、前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位であり、前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項２７に記載の方法。
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２８に記載の方法。
それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項１から請求項２６のいずれか１項に記載の方法。
それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の方法。
それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
（ｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、（ｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、または（ｉｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、請求項３６から請求項３８のいずれか１項に記載の方法。
前記イオン性脂質は化合物Ｘを含む、請求項３６から請求項３９のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項４１に記載の方法。
前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である、請求項３６から請求項４２のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子はフィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、請求項３６から請求項４３のいずれか１項に記載の方法。
前記フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
前記フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、請求項４４に記載の方法。
前記フィトステロールはβ−シトステロール

またはその塩もしくはエステルである、請求項４４に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、（ｉ）５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８、または（ｉｉ）４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項４４から請求項４７のいずれか１項に記載の方法。
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項４４から請求項４７のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、
（ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質であって、前記イオン性脂質は化合物Ｘである、前記イオン性脂質、
（ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質であって、前記リン脂質はＤＳＰＣである、前記リン脂質、
（ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質であって、前記構造脂質はβ−シトステロール及びコレステロールから選択される、前記構造脂質、及び、
（ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質であって、前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである、前記ＰＥＧ脂質、
を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
前記脂質ナノ粒子は、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含み、前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、請求項５３に記載の方法。
前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、請求項５４に記載の方法。
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項５５に記載の方法。
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を含む脂質ナノ粒子。
（ｉ）イオン性脂質、
（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０をコードする第１のｍＲＮＡ、
（ｉｖ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
（ｖ）任意選択的に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び、
（ｖｉ）任意選択的に、ＰＥＧ脂質、
を含む脂質ナノ粒子。
前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である、請求項５７から請求項５８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、（ｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである、または（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている、請求項５９に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５７から請求項６０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項５７から請求項６１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、任意選択的にペプチドリンカーを介して、ＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、請求項５９から請求項６２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、請求項６３に記載の脂質ナノ粒子。
（ｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、または（ｉｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、請求項５９から請求項６４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含み、（ｉ）前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、または（ｉｉ）前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、請求項５９から請求項６６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記細胞内ドメインは、（ｉ）配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、（ｉｉ）Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、または（ｉｉｉ）配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、請求項６７に記載の脂質ナノ粒子。
前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、請求項５９から請求項６９のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、請求項５９から請求項７０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、請求項５９から請求項７１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含み、前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに由来しているまたは非相同ポリペプチドに由来している、請求項７３に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９から請求項７３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされており、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項７４に記載の脂質ナノ粒子。
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第１のｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第２のｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第３のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第４のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第４のｍＲＮＡ、
を含む脂質ナノ粒子。
それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項５７から請求項７６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含み、前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位であり、前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項７７に記載の脂質ナノ粒子。
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項７８に記載の脂質ナノ粒子。
それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項５７から請求項７６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項５７から請求項８０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項８１に記載の脂質ナノ粒子。
それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項５７から請求項８２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、請求項８３に記載の脂質ナノ粒子。
（ｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、（ｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、または（ｉｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、、請求項５７から請求項８２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、請求項８６から請求項８８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記イオン性脂質は化合物Ｘを含む、請求項８６から請求項８９のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項９１に記載の脂質ナノ粒子。
前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である、請求項８６から請求項９２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、請求項８６から請求項９３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
前記フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
前記フィトステロールはβ−シトステロール

またはその塩もしくはエステルである、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
（ｉ）５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８、または（ｉｉ）４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項９４から請求項９７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項９４から請求項９７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
（ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質であって、前記イオン性脂質は化合物Ｘである、前記イオン性脂質、
（ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質であって、前記リン脂質はＤＳＰＣである、前記リン脂質、
（ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質であって、前記構造脂質はβ−シトステロール及びコレステロールから選択される、前記構造脂質、及び、
（ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質であって、前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである、前記ＰＥＧ脂質、
を含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
腫瘍内送達用に製剤化される、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
静脈内送達用に製剤化される、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、前記ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、前記テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び前記細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
前記細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、前記２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている、請求項１０５に記載の脂質ナノ粒子。