JP2022171847A - 角膜内皮細胞接着促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
〔2〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔1〕記載の促進剤。
〔3〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔1〕記載の促進剤。
〔4〕角膜内皮障害の予防または治療用製剤である前記〔1〕~〔3〕いずれか記載の促進剤。
〔5〕前房内注射液または眼灌流液の形態である前記〔4〕記載の促進剤。
〔6〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる角膜内皮細胞の培養液。
〔7〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔6〕記載の培養液。
〔8〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔6〕記載の培養液。
〔9〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる角膜保存液。
〔10〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔9〕記載の保存液。
〔11〕角膜がヒト由来である前記〔9〕記載の保存液。
〔12〕前記〔6〕~〔8〕いずれかに記載の培養液を用いて角膜内皮細胞を培養する工程を含む、角膜内皮製剤の製造方法。
〔13〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔12〕記載の製造方法。
〔14〕角膜内皮細胞の接着促進剤を製造するための、Rhoキナーゼ阻害剤の使用。
〔15〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔14〕記載の使用。
〔16〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔14〕記載の使用。
〔17〕角膜内皮細胞の接着促進剤が角膜内皮障害の予防または治療用製剤である前記〔14〕~〔16〕いずれかに記載の使用。
〔18〕角膜内皮細胞の接着促進剤が前房内注射液または眼灌流液の形態である前記〔1
7〕記載の使用。
〔19〕角膜内皮細胞の培養液を製造するための、Rhoキナーゼ阻害剤の使用。
〔20〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔19〕記載の使用。
〔21〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔19〕記載の使用。
〔22〕角膜保存液を製造するための、Rhoキナーゼ阻害剤の使用。
〔23〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔22〕記載の使用。
〔24〕角膜がヒト由来である前記〔22〕記載の使用。
〔25〕角膜内皮細胞の接着の促進を必要とする対象または角膜内皮細胞に、Rhoキナーゼ阻害剤の有効量を接触させることを含む、角膜内皮細胞の接着を促進させる方法。
〔26〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔25〕記載の促進方法。
〔27〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔25〕記載の促進方法。
〔28〕角膜内皮障害の予防または治療を目的とする前記〔25〕記載の促進方法。
〔29〕Rhoキナーゼ阻害剤の有効量を前房内注射液または眼灌流液の形態で投与する前記〔25〕記載の促進方法。
〔30〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる培養液を用いて角膜内皮細胞を培養する工程を含む、角膜内皮細胞の培養方法。
〔31〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔30〕記載の培養方法。
〔32〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔30〕記載の培養方法。
〔33〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる角膜保護液中に角膜片または角膜内皮細胞を保持する工程を含む、角膜を保護する方法。
〔34〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔33〕記載の保護方法。
〔35〕角膜がヒト由来である前記〔33〕記載の保護方法。
〔36〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる培養液を用いて角膜内皮細胞を培養する工程を含む、角膜内皮製剤の製造方法。
〔37〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔36〕記載の製造方法。
〔38〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔36〕記載の製造方法。
〔39〕Rhoキナーゼ阻害剤を含有してなる培養液を用いて角膜内皮細胞を培養する工程、および
前記培養工程により得られた角膜内皮製剤を、角膜内皮の移植を必要とする対象に移植する工程
を含む、水疱性角膜症、角膜浮腫または角膜白斑の治療方法。
〔40〕Rhoキナーゼ阻害剤が(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(
4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジンおよびそれらの薬理学的に許容される塩からなる群より選ばれる少なくとも1種である前記〔39〕記載の治療方法。
〔41〕角膜内皮細胞がヒト由来である前記〔39〕記載の治療方法。
:Ishizaki, T.ら, The EMBO J., 15(8), 1885-1893, 1996)およびその他のセリン/スレオニンキナーゼ活性を有するタンパク質が挙げられる。
US4678783、特許3421217、WO99/20620、WO99/61403、WO02/076976、WO02/076977、WO02/100833、WO03/059913、WO03/062227、WO2004/009555、WO2004/022541、WO2004/108724、WO2005/003101、WO2005/039564、WO2005/034866、WO2005/037197、WO2005/037198、WO2005/035501、WO2005/035503、WO2005/035506、WO2005/080394、WO2005/103050、WO2006/057270、WO2007/026664などに開示された化合物があげられる。かかる化合物は、それぞれ開示された文献に記載の方法により製造することができる。一具体例として、1-(5-イソキノリンスルホニル)ホモピペラジン(ファスジル)、(+)-トランス-4-(1-アミノエチル)-1-(4-ピリジルカルバモイル)シクロヘキサン(Y-27632)などがあげられ、これらの化合物は、市販品を好適に用いることもできる。
に対し、例えば前房内注射液として使用する場合には、有効成分を0.0001~0.1w/v%、好ましくは0.0001~0.01w/v%含有する製剤を、1日あたり数回、好ましくは1~2回、より好ましくは1回、1回当たり0.01~0.1mL投与することができる。
(例、ペニシリン、ストレプトマイシン)などを含むことができる。
(1)細胞層が単層構造である。これは生体の角膜内皮細胞層が備える特徴の一つである。
(2)細胞層における細胞密度は約1,000~約4,000細胞/mm2である。特に、成人をレシピエント(移植者)とする場合には約2,000~約3,000細胞/mm2であることが好ましい。
(3)細胞層を構成する細胞の平面視形状が略六角形である。これは生体における角膜内皮細胞層を構成する細胞が備える特徴の一つである。本発明の製剤は生体の角膜内皮細胞層に類似し、生来の角膜内皮細胞層と同様の機能を発揮するとともに、生体内で増殖能も発揮することができる。
(4)細胞層において細胞が規則正しく整列している。生体の角膜内皮細胞層においてはそれを構成する細胞は規則正しく整列しており、これによって角膜内皮細胞の正常な機能と高い透明性が維持され、また角膜の水分調整機能が適切に発揮されると考えられている。したがって、このような形態的な特徴を備えることにより、本発明の製剤は、生体における角膜内皮細胞層と同様の機能を発揮することが期待される。
<1>角膜内皮細胞の採取および試験管内での培養
角膜内皮細胞はレシピエント自身または適当なドナーの角膜から常法で採取される。本発明における移植条件を考慮すれば、同種由来の角膜内皮細胞を準備すればよい。例えば、角膜組織のデスメ膜と内皮細胞層を角膜実質から剥離した後、培養皿に移し、ディスパーゼなどで処理する。これによって角膜内皮細胞はデスメ膜より脱落する。デスメ膜に残
存している角膜内皮細胞はピペッティングなどによって脱落させることができる。デスメ膜を除去した後、本発明の培養液中で角膜内皮細胞を培養する。培養液としては例えば市販のDMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)にFBS(ウシ胎仔血清)、b-FGF(basic-fibloblast growth factor)、およびペニシリン、ストレプトマイシンなどの抗生物質を適宜添加し、さらにY-27632またはファスジルを添加したものを使用することができる。培養容器(培養皿)にはその表面にI型コラーゲン、IV型コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンまたはウシ角膜内皮細胞の細胞外マトリックスなどをコーティングしてあるものを使用することが好ましい。あるいは、通常の培養容器をFNC coating mix(登録商標)等の市販のコーティング剤で処理したものを用いてもよい。かかるコーティングと本発明の培養液とを併用することにより、角膜内皮細胞の培養容器表面への接着が促され、良好な増殖が行われるからである。
培養に供された角膜内皮細胞が増殖した後に継代培養を行うことができる。好ましくはサブコンフルエントないしコンフルエントになった時点で継代培養を行う。継代培養は次のように行うことができる。まずtrypsin-EDTA等で処理することによって細胞を培養容器表面から剥がし、次いで細胞を回収する。回収した細胞に本発明の培養液を加えて細胞浮遊液とする。細胞を回収する際、あるいは回収後に遠心処理を行うことが好ましい。かかる遠心処理によって細胞密度の高い細胞浮遊液を調製することができる。好ましい細胞密度は、約1~2×106個/mLである。尚、ここでの遠心処理の条件としては、例えば、500rpm(30g)~1000rpm(70g)、1~10分を挙げることができる。
細胞浮遊液は、コラーゲンシート等の基材上に播種され、培養に供される。この際、最終的に製造される角膜内皮製剤において所望の細胞密度の細胞層が形成されるように播種する細胞数が調整される。具体的には細胞密度が約1,000~約4,000細胞/mm2の細胞層が形成されるように細胞を播種する。培養は上記の初期培養などと同様の条件で行うことができる。培養時間は使用する細胞の状態などによっても異なるが、例えば3~30日間である。
。
びに、動物の愛護及び管理に関する法律、実験動物の飼養及び保管等に関する基準に従った。また、本実験はGuidelines of the Association for Research in Vision and Ophthalmology on the Use of Animals in Ophthalmic and Vision Researchに従って行った。
ROCK阻害剤がウサギ角膜内皮細胞培養に与える影響の検討
安楽死後ただちに摘出したウサギ角膜組織から、角膜内皮細胞が付着したデスメ膜を分離した。デスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science)とと
もに37℃、5%CO2の条件下で45分間インキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、ROCK inhibitor(+)群は10μMのY-27632を添加した角膜内皮用培地を用い、ROCK
inhibitor(-)群はY-27632を添加しない角膜内皮用培地を用いて同じ濃度に
なるように攪拌し、1ウェルあたり約2000個の密度で96ウェルプレートに播種した。角膜内皮用培地として、1%ウシ胎児血清および2mg/ml bFGF (Gibco Invitrogen)を添加した培養液(DMEM、Gibco Invitrogen)を用いた。プレートにはあらかじめ、FNC coating mix(Athena ES)で10分間の前処理を施した。培養開始後72時間目に培養液の交換を行い、72時間以降は、ROCK inhibitor(+
)群、ROCK inhibitor(-)群ともにY-27632を添加しない通常の角膜内皮用培
地を用いて5日目まで培養した。培養開始24時間後の初代培養ウサギ角膜内皮細胞の位相差顕微鏡写真を図1に示す。培養開始後1日目から3日目まで、24時間毎に、CellTiter 96(登録商標)AQueous One Solution Cell Proliferation(Promega)を用い
たMTS([3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]アッセイにより細胞数を測定した(図2)。
、3)。コンフルエントに到達した3日目時点では両群間で有意差を認めず(図2)、このことからY-27632は初代培養のウサギ角膜内皮細胞において、継代後早期の細胞接着を亢進させる作用があることが明らかとなった。また継代培養したウサギ角膜内皮細胞を用いた検討でも同様の結果が得られており、初代培養および継代培養において、Y-27632は継代後早期の細胞接着に作用すると考えられた。
Y-27632がサル角膜内皮細胞培養に与える影響の検討
別の目的で安楽死させたカニクイザルから摘出した角膜組織から、角膜内皮細胞が付着
したデスメ膜を分離した。ROCK inhibitor(+)群では、デスメ膜を10μMのY-2
7632を添加した角膜内皮用培地に入れて37℃、5%CO2の条件下で10分間インキュベートした。ROCK inhibitor(-)群では、Y-27632を添加しない角膜内皮
用培地に入れて同じ条件で10分間インキュベートした。角膜内皮用培地として、実施例1と同じ細胞培養液を用いた。インキュベート後のデスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science)とともに37℃、5%CO2の条件下で45分間イ
ンキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、Y-27632(+)およびY-27632(-)の角膜内皮用培地に同じ濃度になるように攪拌し、1ウェルあたり約20000個の密度で12ウェルプレートに播種した。プレートにはあらかじめ、FNC coating mix(Athena ES)で10分間の前処理を施した。 培養開始後72時間目に培養液の交換を行い、72時間以降は、ROCK inhibitor(+)群、ROCK inhibitor(-)群ともにY-27632を添加しない通常の角膜内皮用培地を用いて培養した。
Y-27632がヒト角膜内皮細胞培養に与える影響の検討
米国アイバンクから入手したヒト角膜組織のうち、中心部の直径7mm部分を角膜移植に用いた残りの周辺部角膜組織を用いた。角膜内皮細胞が接着したデスメ膜を分離し、ROCK inhibitor(+)群では、デスメ膜を10μMのY-27632を添加した角膜内皮
用培地に入れて10分間37℃、5%CO2の条件下でインキュベートした。ROCK inhibitor(-)群では、Y-27632を添加しない角膜内皮用培地に入れて同じ条件で1
0分間インキュベートした。角膜内皮用培地としては、実施例1と同じ培養液を用いた。インキュベート後のデスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science)とともに37℃、5%CO2の条件下で45分間インキュベートした後、ピペッテ
ィング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、Y-27632(+)およびY-27632(-)の角膜内皮用培地に同じ濃度になるように攪拌し、あらかじめFNC coating mix(Athena ES)で前処理を施した48ウェルプレートに1ウェルあたり約10000個の密度で播種した。周辺部角膜組織から得られるヒト角膜内皮細胞は、きわめて細胞数が少ないために、1眼のドナー角膜から1ウェルの細胞培養を行った。本検討で使用したドナー角膜は、ROCK inhibitor(+)群が年齢69歳、ドナー死亡後培養開始まで6日間、ROCK inhibitor (-)群が年齢51歳、ドナー死亡後培養開始まで7日間のものを使用した。年齢およびドナー死亡後細胞培養までに経過した時間が、細胞培養に与える影響はほぼ等しいと考えられる。
培養開始後72時間に培養液の交換を行い、72時間以降は、ROCK inhibitor(+)
群、ROCK inhibitor(-)群ともにY-27632を添加しない通常の角膜内皮用培地
を用いて培養した。培養開始後の早期の細胞接着および細胞形態に与える影響を検討するために、培養開始後に位相差顕微鏡による細胞観察およびデジタルカメラによる写真撮影を行った(図5)。
らなる、正常な角膜内皮細胞に類似した細胞からなるコンフルエントな高密度の単層細胞層が形成されていた(図5B)のに対し、ROCK inhibitor(-)群では細胞密度の低い
線維芽細胞様に伸展した形態の内皮細胞が島状に生着していたのみであった(図5A)。本結果から、培養が非常に困難なことが知られているヒト角膜内皮初代培養において、培養開始後早期の細胞接着を亢進する作用のあるY-27632を培養液に添加することにより、良好な細胞形態、高い細胞密度を持った角膜内皮細胞層を形成することが可能であると考えられた。
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する前房内注射液
常法により下に示す前房内注射液を調製する。
Y-27632 10mg
リン酸二水素ナトリウム 0.1g
塩化ナトリウム 0.9g
水酸化ナトリウム 適量
滅菌精製水 適量
全量 100mL
(pH7)
Y-27632は和光純薬工業製を用いる。
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する眼灌流液
常法により下に示す眼灌流液を調製する。
Y-27632 1.0mg
オペガードMA 適量
全量 100mL
オペガードMAは千寿製薬製、Y-27632は和光純薬工業製を用いる。
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する角膜内皮シート調製用培養液
常法により下に示す培養液を調製する。
Y-27632 0.5mg
FBS 10mL
ペニシリン-ストレプトマイシン溶液 1mL
FGF basic 200ng
DMEM 適量
全量 100mL
FBSはインビトロジェン製、ペニシリン-ストレプトマイシン溶液はナカライテスク製(ペニシリン 5000u/mL,ストレプトマイシン 5000μg/mL含有)、FGF basicはインビトロジェン製、Y-27632は和光純薬工業製、DMEMはインビトロジェン製を用いる。
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する角膜保存液
常法により下に示す保存液を調製する。
Y-27632 0.2mg
Optisol-GS 適量
全量 100mL
Optisol-GSはボシュ・ロム製、Y-27632は和光純薬工業製を用いる。
Y-27632がサル角膜内皮細胞の初代培養に与える影響の検討
安楽死させたカニクイザルから摘出した角膜組織から、角膜内皮細胞が付着したデスメ膜を分離した。実施例2と同様に、ROCK inhibitor(+)群では、デスメ膜を10μM
のY-27632を添加した角膜内皮用培地に入れて37℃、5%CO2の条件下で10分間インキュベートした。ROCK inhibitor(-)群では、Y-27632を添加しない
角膜内皮用培地に入れて同じ条件で10分間インキュベートした。角膜内皮用培地として、実施例1と同じ細胞培養液を用いた。インキュベート後のデスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science)とともに37℃、5%CO2の条件下で4
5分間インキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、Y-27632(+)およびY-27632(-)の角膜内皮用培地に同じ濃度になるように攪拌し、1ウェルあたり約2000個の密度で96ウェルプレートに播種した。培養開始後72時間目に培養液の交換を行い、72時間以降は、ROCK inhibitor(+)群、ROCK inhibitor(-)群ともにY-27632を添加しない通常の角膜内皮用培地を用いて培養した。培養10日目に、細胞を4%パラホルムアルデヒドを用いて10分間室温で固定後、トルイジンブルーを用いて染色した(図6A、B)。細胞の総面積をImage J(アメリカ国立衛生研究所)を用いて測定して解析を行った(図6C)。
培養開始後10日目のカニクイザル初代培養角膜内皮細胞において、ROCK inhibitor
(-)(図6A)に比べてROCK inhibitor(+)(図6B)は、培養初期における接着
を促進することによって、培養細胞の総面積を約1.6倍に有意に増加させた(図6C)。このことから、生体外での細胞培養が困難であると考えられるサル角膜内皮細胞において、Y-27632は初代培養に有用な薬剤であることが示された。
Y-27632のサル角膜内皮細胞に対する至適濃度の検討
実施例2と同様に回収したサル角膜内皮細胞(初代培養)を、それぞれ1、10、33、100μMのY-27632を添加した角膜内皮用培地と、Y-27632を含まない角膜内皮用培地に入れて同じ濃度になるように攪拌し、1ウェルあたり約2000個の密度で96ウェルプレートに播種した。培養開始後24時間目にCellTiter-Glo(登録商標
)(Promega)を用いて生細胞数を測定した(図7)。
培養開始後24時間の角膜内皮細胞において、10μMのY-27632を含む培地で細胞培養を行った場合は、Y-27632を含まない角膜内皮用培地やその他の濃度のY-27632を含む角膜内皮用培地で細胞培養を行った場合と比べて、プレート上に接着した細胞数が有意に多かった(図7)。このことから、サル角膜内皮細胞において、10μMの濃度のY-27632が最も有効であることが示された。
Y-27632がサル角膜内皮細胞の継代培養に与える影響の検討
安楽死させたカニクイザルから摘出した角膜組織から、角膜内皮細胞が付着したデスメ膜を分離した。デスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science
)とともに37℃、5%CO2の条件下で45分間インキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、角膜内皮用培地に播種した。コンフルエントに達した角膜内皮細胞を、0.05%トリプシンにて37℃、5%CO2の条件下で10分間インキュベートし、継代培養を行った。4-6回の継代を行った後に、角膜内皮細胞を1/2、1/6、1/8の希釈になるように96ウェルプレートに入れ、ROCK inhibitor(+)群では10μMのY-27632
を添加した角膜内皮用培地を、ROCK inhibitor(-)群ではY-27632を添加しな
い角膜内皮用培地を用いて継代培養を続けた。継代後24時間目に、実施例5と同様にCellTiter-Glo(登録商標)(Promega)を用いて細胞数を測定した(図8)。
継代後24時間のカニクイザル培養角膜内皮細胞において、Y-27632を含む培地で継代培養を行った場合は、Y-27632を含まない角膜内皮用培地と比べて、プレー
ト上に接着した細胞数が有意に多かった(図8)。このことから、初代培養に加えてサル角膜内皮細胞の継代培養においても、Y-27632が有効であることが示された。
Y-27632がサル角膜内皮細胞の継代培養時に細胞形態に与える影響の検討
実施例6と同様に継代培養を行ったカニクイザル角膜内皮細胞を、1/4の希釈になるようにスライドガラス上に継代した。継代培養24時間目に、位相差顕微鏡にて細胞形態を観察した(図9A、B)。さらにスライドガラス上の角膜内皮細胞を4%パラホルムアルデヒドにて室温10分間の固定後、ファロイジン蛍光染色にてアクチンファイバーの染色を行った(図10A、B)。
継代後24時間のカニクイザル培養角膜内皮細胞において、Y-27632を含まない角膜内皮用培地と比べて(図9A)、Y-27632を含む培地で継代培養を行った際には(図9B)、細胞のスライドガラスへの接着が亢進しており、角膜内皮細胞様への扁平化が促進されており、細胞同士の集まりも亢進していた。また、ファロイジン蛍光染色では、Y-27632を含まない角膜内皮用培地と比べて(図10A)、Y-27632を含む培地で継代培養を行った際には(図10B)、アクチンストレスファイバーが明瞭に認められ、Y-27632が細胞骨格形成を促進することがわかった。
Y-27632がサル角膜内皮細胞の細胞周期に与える影響の検討
実施例6と同様に継代培養を行ったカニクイザル角膜内皮細胞を1/4の希釈になるようにスライドガラス上に継代した。ROCK inhibitor(+)群では10μMのY-276
32を添加した角膜内皮用培地を、ROCK inhibitor(-)群では、Y-27632を添
加しない角膜内皮用培地を用いた。継代培養1、2、14日目に、スライドガラス上の角膜内皮細胞を4%パラホルムアルデヒドにて室温10分間の固定後、抗Ki67抗体を用いて免疫染色を行った(図11)。また、同様にカニクイザル角膜内皮細胞を1/4の希釈になるようにROCK inhibitor(+)とROCK inhibitor(-)群それぞれで継代培養し、継代培養1、2日目に0.05%トリプシンを用いて回収後、抗Ki67抗体を用いてフローサイトメトリーを行い細胞周期の検討を行った(図12、13)。
ROCK inhibitor(-)群に比べてROCK inhibitor(+)群では継代培養1日目、2日目ともにKi67陽性細胞が多かった一方、14日目にほぼコンフルエントに達すると、ROCK inhibitor(+)群の陽性細胞はROCK inhibitor(-)群に比べて少なかった(図11)。フローサイトメトリーにおいても、ROCK inhibitor(-)群に比べてROCK inhibitor(+)群では継代培養1日目、2日目ともにKi67陽性細胞が多く認められた(図12、13)。 Ki67抗原は細胞増殖周期のG1、さらにSからM期までの細胞の核内に見出されることから、Y-27632は、カニクイザル角膜内皮細胞の継代培養後早期に、細胞周期を促進させる働きがあり、細胞培養を効率的に行うために有用な薬剤であることが示された。
Y-27632がサル角膜内皮細胞のアポトーシスに与える影響の検討
実施例6と同様に継代培養を行ったカニクイザル角膜内皮細胞を1/4の希釈になるように継代した。ROCK inhibitor(+)群では10μMのY-27632を添加した角膜
内皮用培地を、ROCK inhibitor(-)群ではY-27632を添加しない角膜内皮用培
地を用いた。継代培養1日目に0.05%トリプシンを用いて培地中の細胞を含めて全ての細胞を回収後、Annexin VとPI(Propidium Iodide)を用いてフローサイトメトリー
を行い、アポトーシスの検討を行った(図14、15)。
ROCK inhibitor(-)群に比べてROCK inhibitor(+)群では、継代培養1日目の全細胞におけるアポトーシス細胞率の有意な減少を認めた(図14)。さらに、1×104
細胞あたりのアポトーシス細胞数を比較するとROCK inhibitor(-)群に比べてROCK i
nhibitor(+)群では有意な減少を認めた(図15)。 このことから、Y-27632はカニクイザル角膜内皮細胞の継代培養時に、アポトーシスを抑制する働きがあることが示された。
Y-27632が培養サル角膜内皮細胞の密度に与える影響の検討
安楽死させたカニクイザルから摘出した角膜組織から、角膜内皮細胞が付着したデスメ膜を分離した。デスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science
)とともに37℃、5%CO2の条件下で45分間インキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、角膜内皮用培地に播種した。コンフルエントに達した角膜内皮細胞を、0.05%トリプシンにて37℃、5%CO2の条件下で10分間インキュベートし、継代培養を行った。ROCK inhibitor(+)群では10μMのY-27632を添加した角膜内皮用培地を、ROCK inhibitor(-)群では、Y-27632を添加しない角膜内皮用培地を用いた。培養開始後72時間目に培養液の交換を行い、72時間以降は、ROCK inhibitor(+)群
、ROCK inhibitor(-)群ともにY-27632を添加しない通常の角膜内皮用培地を
用いて培養した。毎回継代時には位相差顕微鏡を用いて細胞の写真を撮影し、細胞密度を測定してY-27632が培養サル角膜内皮細胞の密度に与える影響を検討した。
継代を7回繰り返したところ、継代培養を行った全期間においてROCK inhibitor(-
)群に比べてROCK inhibitor(+)群では高い細胞密度が認められた(図16)。この
ことから、Y-27632を用いることで高い密度の角膜内皮細胞の培養が可能となり、将来的に培養角膜内皮シート移植といった再生医療を行う上でも有用であると考えられた。
ファスジルがサル角膜内皮細胞培養に与える影響の検討
安楽死させたカニクイザルから摘出した角膜組織から、角膜内皮細胞が付着したデスメ膜を分離した。デスメ膜を1.2U/mlのディスパーゼII(Roche Applied Science
)とともに37℃、5%CO2の条件下で45分間インキュベートした後、ピペッティング操作により機械的に角膜内皮細胞を分離した。分離した角膜内皮細胞は遠心分離の後、角膜内皮用培地で継代培養した。角膜内皮用培地として、実施例1と同じ細胞培養液を用
いた。継代培養時に0.05%トリプシン処理により回収した培養サル角膜内皮細胞を分離し遠心分離の後、ファスジル群は10μMのファスジル(SIGMA-ALDRICH)を添加した
角膜内皮用培地を用い、コントロール群はファスジルを添加しない角膜内皮用培地を用いて同じ濃度になるように攪拌し、1ウェルあたり約2000個の密度で96ウェルプレートに播種した。培養開始24時間後にCellTiter-Glo(登録商標) Luminescent Cell Viability Assay (Promega)を用いて接着細胞数を測定した(図17)。ROCK inhibitorであるファスジルにおいても角膜内皮細胞の細胞接着を促進する効果が認められた。
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する前房内注射液
常法により下に示す前房内注射液を調製する。
ファスジル 10mg
リン酸二水素ナトリウム 0.1g
塩化ナトリウム 0.9g
水酸化ナトリウム 適量
滅菌精製水 適量
全量 100mL
(pH7)
Rhoキナーゼ阻害剤を含有する角膜内皮シート調製用培養液
常法により下に示す培養液を調製する。
ファスジル 0.5mg
FBS 10mL
ペニシリン-ストレプトマイシン溶液 1mL
FGF basic 200ng
DMEM 適量
全量 100mL
FBSはインビトロジェン製、ペニシリン-ストレプトマイシン溶液はナカライテスク製(ペニシリン 5000u/mL,ストレプトマイシン 5000μg/mL含有)、FGF basicはインビトロジェン製、DMEMはインビトロジェン製を用いる。
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MX2023004594A (es) * | 2020-10-22 | 2023-05-08 | Kyoto Prefectural Public Univ Corp | Un metodo de almacenamiento de celulas endoteliales de la cornea humanas y/o celulas precursoras endoteliales de la cornea humanas. |
MX2023013079A (es) | 2021-05-03 | 2023-11-16 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Metodos de generacion de celulas maduras del endotelio corneal. |
CN115006593B (zh) * | 2022-06-26 | 2023-07-25 | 中国海洋大学 | 机械增强型组织工程角膜内皮的体外构建方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007043255A1 (ja) * | 2005-09-13 | 2007-04-19 | Arblast Co., Ltd. | 培養角膜内皮シート及びその作製方法 |
Family Cites Families (45)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3421217A (en) | 1967-06-29 | 1969-01-14 | Schick Electric Inc | Hair receptacle for electric shaver |
US4678783B1 (en) | 1983-11-04 | 1995-04-04 | Asahi Chemical Ind | Substituted isoquinolinesulfonyl compounds |
JP3421217B2 (ja) * | 1995-11-20 | 2003-06-30 | 麒麟麦酒株式会社 | Rho標的タンパク質Rhoキナーゼ |
US5906819A (en) * | 1995-11-20 | 1999-05-25 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Rho target protein Rho-kinase |
HU229864B1 (en) * | 1996-08-12 | 2014-10-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Use of amide compounds for the preparation of medicaments |
JP2002502379A (ja) | 1997-05-22 | 2002-01-22 | ジー.ディー.サール アンド カンパニー | p38キナーゼインヒビターとしての3(5)−ヘテロアリール置換ピラゾール |
JP4316794B2 (ja) | 1997-10-22 | 2009-08-19 | 株式会社デ・ウエスタン・セラピテクス研究所 | イソキノリン誘導体及び医薬 |
EP1094055B1 (en) | 1998-05-25 | 2006-04-26 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | Novel vinylbenzene derivatives |
EP1034793B1 (en) * | 1998-08-17 | 2005-10-26 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Preventives/remedies for glaucoma |
CN1358102A (zh) * | 1999-04-22 | 2002-07-10 | 三菱制药株式会社 | 血管狭窄预防治疗药 |
AU2001246829A1 (en) | 2000-04-04 | 2001-10-15 | Wakamoto Pharmaceutical Co., Ltd. | Vital tissue-protecting agents |
CA2325842C (en) * | 2000-11-02 | 2007-08-07 | Lisa Mckerracher | Methods for making and delivering rho-antagonist tissue adhesive formulations to the injured mammalian central and peripheral nervous systems and uses thereof |
PT1370552E (pt) | 2001-03-23 | 2007-04-30 | Bayer Pharmaceuticals Corp | Inibidores de rho-quinase |
ATE325795T1 (de) | 2001-03-23 | 2006-06-15 | Bayer Corp | Rho-kinase inhibitoren |
KR100883077B1 (ko) * | 2001-04-11 | 2009-02-10 | 센주 세이야꾸 가부시키가이샤 | 시각 기능 장애 개선제 |
EP1403255A4 (en) | 2001-06-12 | 2005-04-06 | Sumitomo Pharma | INHIBITORS OF RHO KINASE |
US20040014755A1 (en) | 2002-01-10 | 2004-01-22 | Dhanapalan Nagarathnam | Rho-kinase inhibitors |
WO2003062227A1 (en) | 2002-01-23 | 2003-07-31 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Rho-kinase inhibitors |
JP2004024852A (ja) | 2002-04-30 | 2004-01-29 | Amniotec:Kk | 角膜内皮様シート、及びその作製方法 |
US20050214259A1 (en) * | 2002-04-30 | 2005-09-29 | Yoichiro Sano | Corneal endothelium-like sheet and method of constructing the same |
JPWO2004009555A1 (ja) | 2002-07-22 | 2005-11-17 | 旭化成ファーマ株式会社 | 5−置換イソキノリン誘導体 |
CA2400996A1 (en) | 2002-09-03 | 2004-03-03 | Lisa Mckerracher | 1,4-substituted cyclohexane derivatives |
WO2004069181A2 (en) * | 2003-02-03 | 2004-08-19 | Pharmacia Corporation | Composition for the treatment of intraocular pressure |
WO2004091662A1 (ja) | 2003-04-18 | 2004-10-28 | Senju Pharmaceutical Co. Ltd. | 角膜知覚回復剤 |
US7160894B2 (en) | 2003-06-06 | 2007-01-09 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Tricyclic compound |
CA2530389A1 (en) | 2003-07-02 | 2005-01-13 | Biofocus Discovery Limited | Pyrazine and pyridine derivatives as rho kinase inhibitors |
WO2005039564A1 (en) | 2003-10-02 | 2005-05-06 | Vertex Pharmaceuticals Incorporated | Phthalimide compounds useful as protein kinase inhibitors |
US7547779B2 (en) | 2003-10-06 | 2009-06-16 | Glaxo Group Limited | Preparation of 1,6-disubstituted azabenzimidazoles as kinase inhibitors |
US20070004771A1 (en) | 2003-10-06 | 2007-01-04 | Glaxo Group Limited | Preparation of 1,6,7-trisubstituted azabenzimidazoles as kinase inhibitors |
US20070123561A1 (en) | 2003-10-06 | 2007-05-31 | Dennis Lee | Preparation of 1,7-disubstituted azabensimidazoles as kinase inhibitors |
JP2007015928A (ja) | 2003-10-15 | 2007-01-25 | Ube Ind Ltd | 新規オレフィン誘導体 |
JP2007008816A (ja) | 2003-10-15 | 2007-01-18 | Ube Ind Ltd | 新規イソキノリン誘導体 |
EP2468729B1 (en) | 2003-10-15 | 2013-12-25 | Ube Industries, Ltd. | Novel indazole derivative |
JP4834802B2 (ja) * | 2004-02-18 | 2011-12-14 | 聡 山上 | ヒト角膜内皮細胞の培養物層積層体及びその作製方法 |
EP1720874A4 (en) | 2004-02-24 | 2010-03-03 | Bioaxone Therapeutique Inc | SUBSTITUTED PIPERIDINE DERIVATIVES IN POSITION 4 |
TW200604168A (en) | 2004-04-02 | 2006-02-01 | Vertex Pharma | Azaindoles useful as inhibitors of rock and other protein kinases |
JP4932480B2 (ja) * | 2004-06-03 | 2012-05-16 | 千寿製薬株式会社 | アミド化合物を含有する角膜知覚回復剤 |
JPWO2006057270A1 (ja) | 2004-11-26 | 2008-06-05 | 旭化成ファーマ株式会社 | 含窒素3環化合物 |
JP2008266142A (ja) | 2005-08-10 | 2008-11-06 | Mitsubishi Pharma Corp | 角膜障害の予防及び/又は治療剤 |
BRPI0614974A2 (pt) | 2005-08-30 | 2010-12-14 | Asahi Kasei Pharma Corp | composto, medicamento, inibidor da fosforilaÇço da cadeia leve regulatària da miosina, inibidor da via rho/rho quinase, e, mÉtodo para tratamento terapÊutico e/ou profilÁtico de glaucoma |
US7867999B1 (en) * | 2005-12-22 | 2011-01-11 | Alcon Research, Ltd. | Hydroxyamino- and amino-substituted pyridine analogs for treating rho kinase-mediated diseases and conditions |
EP1980274B1 (en) | 2006-01-19 | 2016-03-23 | Senju Pharmaceutical Co., Ltd. | Corneal endothelial preparation which enables cells to grow in vivo |
CN103931608B (zh) | 2007-08-29 | 2016-02-03 | 千寿制药株式会社 | 促进角膜内皮细胞粘附的药剂 |
US8550908B2 (en) * | 2010-03-16 | 2013-10-08 | Harmonix Music Systems, Inc. | Simulating musical instruments |
KR20150111645A (ko) | 2014-03-26 | 2015-10-06 | 주식회사 인프라웨어 | 단일 통신인터페이스 전송방법 및 장치 |
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2023
- 2023-03-13 US US18/182,873 patent/US20230210864A1/en active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007043255A1 (ja) * | 2005-09-13 | 2007-04-19 | Arblast Co., Ltd. | 培養角膜内皮シート及びその作製方法 |
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