JP2022125088A - 抗ｆａｍ１９ａ５抗体のアデノ関連ウイルス（ａａｖ）伝達 - Google Patents

抗ｆａｍ１９ａ５抗体のアデノ関連ウイルス（ａａｖ）伝達 Download PDF

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Abstract

【課題】本開示内容は、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及びこれらの用途を提供する。【解決手段】特定の具現例において、前記ＡＡＶベクターは、配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤、例えば抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体、例えば抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖをコードする核酸を含む。【選択図】図１

Description

発明の詳細な説明
［技術分野］
電子提出された配列目録に対する参照事項
本出願と共にＡＳＣＩＩテキストファイル（名：３７６３＿０１０ＰＣ０１＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：２６１，６４３バイト；及び生成日：２０１９年５月８日）で電子提出された配列目録の内容は、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
本開示内容は、組換えアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及びそれらの用途に関する。より具体的に、本開示内容は、配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤をコードする核酸を含むＡＡＶベクターに関する。特定の側面において、前記ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を標的にする単鎖可変断片である。
［背景技術］
ＦＡＭ１９Ａ５は、相同性の高い５個の小さいタンパク質で構成されているタンパク質のＴＡＦＡサブファミリーに属する一種である。Ｔａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８３（４）：７２７－３４（２００４）。これらのタンパク質は、所定位置に保存されたシステイン残基を含有し、ＣＣケモカインファミリーに属する一種である大食細胞炎症タンパク質１－アルファ（ＭＩＰ－１－アルファ）とかすかに関連している。大部分の他のＴＡＦＡタンパク質と同様に、ＦＡＭ１９Ａ５は、脳と脊髄の特定領域で主に発現する。ＦＡＭ１９Ａ５は、完全な中枢神経系の発生、分化及び形成の他に、中枢神経系と関連した多くの疾患の発病にも重要な役割を担うものと考えられる。したがって、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の生体内投与は、中枢神経系損傷又は疾患と関連した症状を改善することが開示されているる。米国特許番号９，５７９，３９８を参照されたい。
治療抗体は様々な疾患を治療するために成功的に使用されてきた。Ｅｃｋｅｒ Ｄ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ７：９－１４（２０１５）。しかし、これらの抗体の効能にもかかわらず、抗体には周知の限界があり、抗体の広範囲な治療用途を制限している。例えば、多数の抗体は、不十分な薬動学及び組織接近性だけでなく、免疫系との損傷した相互作用を有するものとして記載されてきた。Ｃｈａｍｅｓ Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ
Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １５７（２）：２２０－２２３（２００９）を参照されたい。そのうえ、抗体は通常、臨床効能を達成するために多量で投与されなければならず、製造コストの増加につながる。
［発明の概要］
［発明が解決しようとする課題］
したがって、疾患治療のために対象に治療用抗体、例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を伝達するための効果的且つ経済的な代替方法が要求されている。
［課題を解決するための手段］
本開示内容は、配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤をコードする核酸を含むアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供する。いくつかの具現例において、前記ＡＡＶベクターは、イントロン、信号ペプチド及び／又は一つ以上のアデノ関連ウイルス逆転された末端反復（ＩＴＲ）をさらに含む。
いくつかの具現例において、前記ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体である。したがって、いくつかの具現例において、前記ＡＡＶベクターは、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体をコードする核酸を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ｓｃＦｖである。
いくつかの具現例において、前記ＡＡＶベクターは、コドン最適化された核酸を含む。いくつかの具現例において、前記核酸は、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６又は配列番号３０１に示すヌクレオチド配列を含む。いくつかの具現例において、前記ｓｃＦｖは、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３又は配列番号２５６に示すアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：（ａ）酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；又は（ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両特性、から選択された特性を示す。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合するために、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）と交差競合し、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３０に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３１に示すアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含んだり；又は（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２１３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同じＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１９に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２９に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３０に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３１に示すアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２６に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２７に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２８に示すアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２に示すアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４に示すアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２５に示すアミノ酸配列を含んだり；（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２１３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号６又は配列番号９である少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号６又は配列番号９であるＦＡＭ１９Ａ５エピトープにのみ結合する。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する。いくつかの具現例において、前記追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及びこれらの任意の組合せからなる群から選ばれる。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１９、配列番号１６又は配列番号１３に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１７、配列番号１４、配列番号１１又は配列番号２１２に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８、配列番号１５、配列番号１２又は配列番号２１３に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２９、配列番号２６、配列番号２３又は配列番号２２２に示すアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３０、配列番号２７、配列番号２４又は配列番号２２５に示すアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３１、配列番号２８、配列番号２５又は配列番号２２４に示すアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１７、１８及び１９を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２９、３０及び３１を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１４、１５及び１６を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２６、２７及び２８を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１１、１２及び１３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２３、２４及び２５を含んだり；又は（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２１２、２１３及び１６を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２２２、２２５及び２２４を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号３７、配列番号３６、配列番号３５又は配列番号２３６を含む重鎖可変ドメイン及び／又は配列番号４１、配列番号４０、配列番号３９又は配列番号２４５を含む軽鎖可変ドメインを含む。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号３７を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号４１を含む軽鎖可変ドメインを含む。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号３６を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号４０を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号３５を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号３９を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号２３６を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２４５を含む軽鎖可変ドメインを含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、前記重鎖可変ドメインは、配列番号３７、３６、３５又は２３６に示すアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４１、４０、３９又は２４５に示すアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３７、３６、３５又は２３６に示すアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４１、４０、３９又は２４５に示すアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する基準抗体の結合を、結合阻害分析法によって測定した時、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％阻害する。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、星状細胞株（例えば、Ｃ８－Ｄ１Ａ）を含む培養培地内ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度を、ＥＬＩＳＡによって測定した時、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％減少させる。
本明細書はまた、（ａ）本明細書に開示のＡＡＶベクターを用いて形質注入させた宿主細胞を培養して細胞培養物を提供する段階、及び（ｂ）前記細胞培養物の上澄液から組換えＡＡＶ粒子を回収する段階を含む、組換えアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）粒子を製造する方法を開示する。
本開示内容はまた、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する拮抗剤を、これを必要とする対象に生体内伝達するための方法であり、前記対象に本明細書に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提供する。
本開示内容はまた、必要とする対象において疾患又は症状を治療する方法であり、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提供する。
本明細書はまた、必要とする対象において神経病症性疼痛を治療する方法であり、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を開示する。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、末梢神経病症性疼痛である。
本開示内容は、必要とする対象において外部刺激に対する閾値又は潜時（ｌａｔｅｎｃｙ）を増加させる方法であり、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提供する。いくつかの具現例において、前記外部刺激は、機械的刺激である。他の具現例において、前記外部刺激は、熱刺激である。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶベクターは、静脈内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、筋肉内、皮下、腹腔内、硝子体腔内、硬膜外、網膜下又は心室内投与される。いくつかの具現例において、前記対象はヒトである。
［図面の簡単な説明］
図１は、実施例に記載されている抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）を生成するために用いたｐｓｃＡＡＶ構造体のマップを提供している。図１に示すように、前記ｐｓｃＡＡＶ構造体は、次のような核心要素を含む：（ｉ）ＣＭＶプロモーター下のヒトベータグロビン；（ｉｉ）３－２、１－６５又は２－１３ ｓｃＦｖをコードする転移遺伝子（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）、及び（ｉｉｉ）左右逆転された末端反復（ＩＴＲ）。
図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃは、次のようなＡＡＶ構造体のいずれか一つでＨＥＫ２９３細胞を形質導入させた後、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの発現レベルを示している：（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ；又は（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ。図２Ａで、ＨＥＫ２９３細胞を、２個の異なるＭＯＩ：５×１０４（白色棒）又は１×１０５（黒色棒）のｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた。抗体濃度は、形質導入後１日、４日及び８日に測定した。図２Ｂで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。抗体濃度は、単一時点、すなわち形質導入後８日目に測定した。図２Ｃで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）又はｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ（ドット付き白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；ドット付き黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。
図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液が存在又は不在する状態でＵ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。図３Ａは、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は１－６５ｓｃＦｖを示す。図３Ｂは、ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は２－１３ ｓｃＦｖを示す。図３Ｃは、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＰＢＳ）を示し、数字“２”は３－２ｓｃＦｖを示す。
図４Ａ及び図４Ｂは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液で処理した後、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞培養物内ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度を示している。図４Ａは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた細胞の上澄液又はＰＢＳ単独と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質濃度を比較したものである。図４Ｂは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ又は対照群構造体（ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ）と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５濃度を比較したものである。図４Ａ及び図４Ｂで、“未投与（ｎａｉｖｅ）”は、活性化されず、最小ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を培養物に生産するＣ８－Ｄ１Ａ細胞を表す。
図５は、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖをＣ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内投与して１週（上段行）及び２週（下段行）後に脳内抗ＦＡＭ１９Ａ５（３－２）ｓｃＦｖの発現を示している。左列の写真は未投与動物の写真である（非投与）。右列の写真は、ＡＡＶ構造体が投与されたマウスの写真である。上段右列の写真において、矢印は陽性染色を意味する。
図６Ａ及び図６Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図６Ａ）と熱的痛覚過敏（図６Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図６Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図６Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｌａｔｅｎｃｙ、動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
図７Ａ及び図７Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図７Ａ）と熱的痛覚過敏（図７Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図７Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図７Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
図８Ａ及び図８Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図８Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図８Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
図９Ａ及び図９Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図９Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図９Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
図１０Ａ及び図１０Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図１０Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０個の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図１０Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体単独又は他の治療剤と組み合わせた効果を比較して提供している。図１１Ａで、動物は、次のいずれか一つが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｂで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｃで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。
［発明を実施するための形態］
本明細書は、配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤をコードする核酸を含む組成物、例えば、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを開示する。本明細書はまた、疾患又は障害、例えば、神経病性疼痛を治療するための遺伝子治療法として、上記の組成物を使用する方法を提供する。
本明細書に提供される開示内容の理解を容易にするために、多数の用語及び語句を定義する。追加定義は、詳細な説明全般にわたって与えられている。
＜Ｉ．定義＞
本開示内容全般にわたって、用語“一つの”又は“ある”実体は、その実体の１つ以上をいうもので、例えば、“一つの抗体”は１つ以上の抗体を表すものと理解される。このように、用語“一つ”（又は“ある”）、“１つ以上の”及び“少なくとも１つの”は、本明細書で同じ意味で使われる。
また、本明細書で使う“及び／又は”は、２個の特定された特徴又は構成要素のそれぞれ一つを、もう一つの特徴又は構成要素と共に又は単独で具体的に開示するものと見なされるべきである。したがって、本明細書で“Ａ及び／又はＢ”のような語句において使われる用語“及び／又は”は、“Ａ及びＢ”、“Ａ又はＢ”、“Ａ”（単独）及び“Ｂ”（単独）を含むものとして意図される。同様に、“Ａ、Ｂ及び／又はＣ”のような語句において使われる用語“及び／又は”は、次のような態様のそれぞれを含むものとして意図される：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。
本明細書において、態様を、用語“含む”で記載すれば、“なる”及び／又は“本質的になる”の観点で記載された他の類似の態様も提供されるものと理解される。
特に定義しない限り、本明細書で使われる全ての技術及び科学用語は、本開示内容と関連した技術分野における通常の技術者にとって通常理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、当業者に、本開示内容で使われている用語の多数を提供している。
単位、接頭辞及び記号は、これらのＳｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で認めた形態で表示される。数値範囲は、当該範囲を限定する数字を含む。特に表示されない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシに向かって左側から右側に書かれる。本明細書で提供された表題は、開示内容の様々な態様の制限ではなく、それらは全体的に明細書を参照したものであり得る。したがって、次に定義された用語は、明細書全般を参照してより完全に定義される。
本明細書において用語“約”は、ほぼ、概略、程度又はその領域内を意味するものとして使われる。用語“約”が数値範囲と共に使われる場合、記載されている数値の上と下へ境界を拡張して当該範囲を変更する。一般に、用語“約”は、明示された値の上と下の数値を、例えば、上又は下の（より高かいかより低い）１０％の変化量だけ変更可能である。
本明細書で使う用語“アデノ関連ウイルス”又は“ＡＡＶ”とは、遺伝子治療法で用いる全てのアデノ関連ウイルスを、それらの誘導体、ウイルス亜型及び自然発生及び組換え形態も含めて指す。ＡＡＶの様々な血清型は、多数の異なる細胞類型を形質導入するための組換え遺伝子伝達ウイルスとして使用可能である。ＡＡＶ血清型の非制限的な例は、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ－１）、ＡＡＶ２型（ＡＡＶ－２）、ＡＡＶ３型（ＡＡＶ－３）、ＡＡＶ４型（ＡＡＶ－４）、ＡＡＶ５型（ＡＡＶ－５）、ＡＡＶ６型（ＡＡＶ－６）、ＡＡＶ７型（ＡＡＶ－７）、ＡＡＶ８型（ＡＡＶ－８）、ＡＡＶ９型（ＡＡＶ－９）、鳥類のＡＡＶ、ウシのＡＡＶ、イヌのＡＡＶ、ウマのＡＡＶ、霊長類のＡＡＶ、非霊長類のＡＡＶ及びヒツジのＡＡＶを含む。いくつかの具現例において、前記ＡＡＶは、ＡＡＶ８型（ＡＡＶ－８）又はＡＡＶ９型（ＡＡＶ－９）である。
知られた全てのＡＡＶ血清型のゲノム組織は、非常に類似している。ＡＡＶのゲノムは、長さが約５，０００個未満のヌクレオチド（ｎｔ）である線形単鎖ＤＮＡ分子である。前記ゲノムは、３個の遺伝子ｒｅｐ（複製）、ｃａｐ（カプシド）及びａａｐ（アセンブリー）を含む。これら３個の遺伝子は、３個のプロモーター、代案翻訳開始部位及び差次的スプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｐｌｉｃｉｎｇ）の使用によって少なくとも９個の遺伝子産物を生成する。本開示内容のＡＡＶベクターは、シス又はトランスとして作用する追加要素を含むことができる。特定の具現例において、ベクターゲノムを含むＡＡＶベクターはまた、ドナー配列の５’又は３’末端に隣接している１つ以上の逆転された末端反復（ＩＴＲ）配列；構成的又は調節可能な調節要素、組織特異的発現調節要素、イントロン配列、スタッファー又はフィラーポリヌクレオチド配列と共にドナー配列を転写させる発現調節要素（例えば、プロモーター又はエンハンサー）；及び／又はドナー配列の３’に位置しているポリアデニン配列を有する。
ＡＡＶは、細胞に外来ＤＮＡを伝達するためのベクターとして魅力的なものとする独特の特徴を有する。培養物において細胞のＡＡＶ感染は一般に非細胞変性であり、ヒト及び他の動物の自然感染は、無症候性且つ無症状である。さらに、ＡＡＶは、異なる類型の多数の哺乳類細胞を感染させ、生体内の個別の多数組織を標的にする可能性がある。ＡＡＶはまた、他の形態の遺伝子伝達に比べて弱い免疫反応を促進し、分裂及び停止細胞のいずれにおいても非統合ベクター（ｎｏｎ－ｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ）として持続発現することを含め、遺伝子伝達のための特に魅力的なウイルスシステムにさせる更なる長所を有する。また、ＡＡＶは、アデノウイルスを非活性化させるのに用いられる条件（数時間において５６℃～６５℃）に耐えるので、ｒＡＡＶ基盤ワクチンの低温保存はあまり重要でなくなる。いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶは、これら特徴のいずれか１つ以上を含む。
本明細書に使われている用語“ＡＡＶベクター”は、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）の成分を含んだり、これらの成分から由来し、脳、心臓、肺、骨格筋、肝、腎臓、脾臓又は膵臓のような任意の多い組織類型のヒト細胞を含む哺乳類細胞を、試験管内又は生体内にを問わずに感染させるのに適した任意のベクターを指す。用語“ＡＡＶベクター”は、関心タンパク質をコードする少なくとも核酸分子を含むＡＡＶ型ウイルス粒子（又は、ビリオン）を指すために使われ得る。いくつかの具現例において、前記ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ起源ではなくポリヌクレオチド配列（すなわち、ＡＡＶと異種であるポリヌクレオチド、例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）、典型的に細胞の遺伝子変形のための関心配列を含むＡＡＶベクターを意味する“組換えＡＡＶベクター”である。一般に、前記異種ポリヌクレオチドの側部に少なくとも１個、一般には２個のＡＡＶ逆転された末端反復配列（ＩＴＲ）がある。用語ＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクター粒子とＡＡＶベクタープラスミドの両方を含む。
本明細書に使われている用語“ＩＴＲ”とは、逆転された末端反復のことを指す。典型的に、ＩＴＲは、原核プラスミドからパルボウイルス（例えば、ＡＡＶ）ＤＮＡ複製及び救出（ｒｅｓｃｕｅ）又は切除に関与する（Ｄａｙａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ ２１（４）：５８３－５９３（２００８））。ＩＴＲは一般に、ＡＡＶプロウイルス統合及びＡＡＶ ＤＮＡをビリオンにパッケージングするのに要求される最小配列であると考えられる。したがって、これらの要素は、パルボウイルスゲノムの効率的な増殖に必須である。
本明細書に使われている用語“血清型”とは、血清学的又はＤＮＡ配列分析方法によって同定でき、その抗原特性によって区別可能なＡＡＶの細分された一部分を意味する。また、用語“分離”をＡＡＶと関連して使用する時には、所定の供給源から得た特定ＡＡＶ血清型を意味する。当業者であれば、前記用語が使われる文脈から、ＡＡＶサンプルの相対的純度を意味する“分離されたＡＡＶ”と特定ＡＡＶ血清型のクローン由来製剤を意味する“ＡＡＶ分離物”との違いが容易に認識されるであろう。
用語“無カプシド”又は“カプシドがない”（又は、その変形）ベクター又は核酸分子とは、カプシドのないベクター構造体を指す。いくつかの具現例において、前記カプシドのないベクター又は核酸分子は、例えば、ＡＡＶ Ｒｅｐタンパク質をコードする配列を含まない。
いくつかの具現例において、本明細書に開示のＡＡＶは、ヘルパーウイルスを用いて複製する。本明細書で使うＡＡＶに対する“ヘルパーウイルス”とは、ＡＡＶ（例えば、野生型ＡＡＶ）が哺乳類細胞によって複製及びパッケージングされるようにするウイルスのことを指す。当業界には、アデノウイルス、ヘルペスウイルス及びワクシニア（ｖａｃｃｉｎａ）のようなフォックスウイルスを含むＡＡＶに対する様々な前記ヘルパーウイルスが公知されている。サブファミリーＣのアデノウイルス５型が最も普遍的に用いられているが、前記アデノウイルスは多数の異なる下位群を含む。ヒト、非ヒト哺乳類及び鳥類起源の数多くのアデノウイルスが知られており、ＡＴＣＣのような寄託機関から入手可能である。ヘルペス科ウイルスの例には、ＡＴＣＣのような寄託機関からも得られる巨大細胞ウイルス（ＣＭＶ）及び仮性狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）だけでなく、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）及びエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）を含む。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶは、明確な組織標的化能力（例えば、組織向性（ｔｉｓｓｕｅ ｔｒｏｐｉｓｍｓ）を有する。いくつかの具現例において、前記ＡＡＶは、１つ以上のヒト幹細胞類型において非変異体親カプシド（ｎｏｎ－ｖａｒｉａｎｔ ｐａｒｅｎｔ ｃａｐｓｉｄ）ポリペプチドに比べて増加した形質導入又は向性をさらに示す。いくつかの具現例において、前記ヒト幹細胞類型は、胚幹細胞、成体組織幹細胞（すなわち、体細胞幹細胞）、骨髄、前駆細胞、誘導多能性幹細胞及び逆分化幹細胞（ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）を含むが、これに限定されるものではない。いくつかの具現例において、成体幹細胞は、オルガノイド幹細胞（すなわち、身体内任意の関心器官又は器官系から由来した幹細胞）を含むことができる。いくつかの具現例において、ＡＡＶの標的組織は、生殖腺、横隔膜、心臓、胃、肝、脾臓、膵臓又は腎臓である。いくつかの具現例において、前記ＡＡＶの標的身体器官は、皮膚、毛髪、爪、感覚受容体、汗腺（ｓｗｅａｔ ｇｌａｎｄ）、脂腺（ｏｉｌ ｇｌａｎｄ）、骨、筋肉、脳、脊髄、神経、脳下垂体、松果腺、視床下部、甲状腺、副甲状腺、胸腺、副腎、膵臓（島組織）、心臓、血管、リンパ節、リンパ管、胸腺、脾臓、扁桃腺、鼻、咽頭、喉頭、気道、気管支、肺、口、咽頭、食道、胃、小腸、大腸、直腸、肛門管、歯牙、唾液腺、舌、肝、胆嚢、膵臓、虫垂、腎臓、尿管、膀胱、尿道、皐丸、精管、尿道、前立腺、陰茎、陰嚢、卵巣、子宮、卵管（ラッパ管）、膣、外陰部及び乳腺（乳房）を含むが、これに限定されるものではない。身体の器官系としては、外皮系、骨格系、筋肉系、神経系、内分泌系、心血管系、リンパ系、呼吸系、消化系、泌尿器系及び生殖系を含むが、これに限定されるものではない。いくつかの具現例において、形質導入及び／又は向性が約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％又は約１００％増加する。いくつかの具現例において、形質導入及び／又は向性が約５％～約８０％、約１０％～約７０％、約２０％～約６０％又は約３０％～約６０％増加する。
語句“向性”及び“形質導入”は、相互関連しているが、差異点がある。本明細書で使う用語“向性”は、１つ以上の特定細胞類型を感染させるＡＡＶベクター又はビリオンの能力を意味するが、ベクターが１つ以上の特定細胞類型に細胞を形質導入するように機能するかどうかも含むところ；すなわち、向性は、特定細胞又は組織類型へのＡＡＶベクター又はビリオンの優先的な導入及び／又は特定細胞又は組織類型への進入を容易にする細胞表面との優先的な相互作用後、場合によってそして好ましくは細胞においてＡＡＶベクター又はビリオンによって運搬される配列の発現（例えば、転写、及び場合によって翻訳）、例えば、組換えウイルスの場合には、異種ヌクレオチド配列の発現を意味する。本明細書で使う用語“形質導入”は、１つ以上の特定細胞類型を感染させるＡＡＶベクター又はビリオンの能力を意味するところ；すなわち、形質導入は、ＡＡＶベクター又はビリオンを細胞内導入し、ＡＡＶベクター又はビリオン内に含まれている遺伝物質を細胞に伝達してベクターゲノムから発現を得ることを意味する。全ての場合ではないが、一部の場合では形質導入と向性は相関関係があってもよい。
本明細書で使う用語“感染多重度”又は“ＭＯＩ”は、宿主細胞の形質注入又は形質導入中に用いられる統合ベクター対宿主細胞の比を意味する。例えば、１００，０００個の宿主細胞を形質導入するために１，０００，０００個のベクターを使用する場合には、感染多重度が１０である。この用語の使用は、形質導入を伴う場合に限らず、その代わりにリポフェクション、微細注入、リン酸カルシウム沈殿及び電気穿孔のような方法によって宿主にベクターを導入することを含む。
用語“神経病症性疼痛”は、中枢神経系（ＣＮＳ）及び／又は末梢神経系の任意のレベルに影響を及ぼす傷害、損傷及び／又は不適切な機能による疼痛を意味する。用語“神経病性疼痛”は、神経病症性疼痛の原因と一部及び全ての症状に関係なく、一部及び全ての類型の神経病性疼痛を含む。
神経病性疼痛は、中枢神経病性疼痛及び末梢神経病性疼痛を含む。本願で使われている用語“中枢神経病性疼痛”は、障害、先天的欠陥又は中枢神経系（すなわち、脳又は脊髄）損傷に起因する疼痛を指す。本明細書で使う用語“末梢神経病性疼痛”は、末梢感覚神経の損傷又は感染に起因する疼痛のことを指す。
神経病性疼痛の症状は、持続性／慢性疼痛、自発性疼痛だけでなく、異質痛（例えば、平常時には疼痛がない刺激に対する疼痛反応）、痛覚過敏（例えば、一般に、ピンで刺すような単なる軽症の不便を引き起こす疼痛性刺激に対する際立った反応）、感覚過敏（例えば、刺激、特に皮膚の刺激に対する過度な身体的過敏性）又は痛覚過敏（例えば、短い不便さが長期間重症の疼痛になる場合）を含むことができる。いくつかの具現例において、症状は、長く持続することがあり、１次原因が存在する場合、それを解決した後に持続することがある。Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ Ｐａｉｎ，ｍｅｒｃｋｍａｎｕａｌｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ－ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐａｉｎ／ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ－ｐａｉｎから入手可能；Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ｊ．Ｎ．ａｎｄ Ｍｅｙｅｒ Ｒ．Ａ．Ｎｅｕｒｏｎ ５２（１）：７７－９２（２００６）。
いくつかの具現例において、神経病性疼痛の類型は、（１）神経痛、（２）求心路遮断疼痛症候群（ｄｅａｆｆｅｒｅｎｔａｔｉｏｎ ｐａｉｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、（３）複合部位疼痛症候群（ＣＲＰＳ）、及び（４）神経病症（中枢又は末梢）を含むことができる。
いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は一般に、神経構造のいかなる明白な病理学的変化無しで１つ以上の特定神経（例えば、脳神経）の経路に沿って広がる疼痛を意味する神経痛である。神経痛には三叉神経痛（ＴＮ）、非定型三叉神経痛（ＡＴＮ）、喉頭神経痛、舌咽神経痛、疱疹後神経痛（帯状疱疹又はヘルペスによって誘発される）、末梢神経損傷疼痛、座骨神経痛、腰痛及び非定型顔面痛を含むが、これに限定されない。化学的刺激、慢性腎臓疾患、糖尿病、炎症、外傷（手術を含む）、近隣構造（例えば、腫瘍）による神経圧迫、特定薬物（例えば、シスプラチン、パクリタキセル又はビンクリスチン）、ポルフィリン症（血液障害）、及び感染（例えば、ヘルペス疱疹（帯状疱疹）、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ライム病又は梅毒）はいずれも神経痛につながることがある。
いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、身体一部から感覚入力（ｓｅｎｓｏｒｙ ｉｎｐｕｔ）の喪失（例えば、末梢感覚線維又は中枢神経系の神経遮断によって引き起こされる）に起因し得る求心路遮断疼痛症候群である。求心路遮断疼痛症候群は、脳又は脊髄損傷、脳卒中後疼痛、幻肢痛（ｐｈａｎｔｏｍ ｐａｉｎ）、下肢麻痺、腕神経叢剥離性損傷及び腰推部神経根病変を含むが、これに限定されるものではない。
いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、腕又は脚に最も一般的に影響を及ぼす慢性疼痛症状である“複合部位疼痛症候群”（ＣＲＰＳ）である。いくつかの具現例において、前記ＣＲＰＳは、傷害、手術、脳卒中又は心臓麻痺後に発病する。特定の具現例において、前記ＣＲＰＳは、Ｉ型ＣＲＰＳ（ＣＲＰＳ－Ｉ）（反射交感神経異常症症候群とも知られている）である。神経損傷が確診されていない個人は、しばしばＣＲＰＳ－１を持つものと分類される。他の具現例において、前記ＣＲＰＳは、確診された神経損傷と関連があるＩＩ型ＣＲＰＳ（ＣＲＰＳ－ＩＩ）（灼熱痛とも知られている）である。
いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、神経の機能的又は病理学的変化（例えば、疾患又は損傷）に起因する疼痛を意味する神経病症である。神経病症は通常、臨床的に感覚又は運動神経細胞異常を特徴とし得る。特定の具現例において、前記神経病症は、中枢神経病症（例えば、中枢神経系の機能的又は病理学的変化）である。他の具現例において、前記神経病症は、末梢神経病症（例えば、運動神経、感覚神経、自律神経又はこれらの組合せを含む１つ以上の末梢神経の機能的又は病理学的変化）である。いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、単一神経又は神経群に対する機能的又は病理学的変化を伴う（すなわち、単一神経病症）。いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は様々な神経（局所的又は全身的に）に影響を及ぼす機能的又は病理学的変化を伴う（すなわち、多発神経病症）。いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、身体の両側に略同一に影響を及ぼす（すなわち、対称性多発神経病症）。いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、身体の全く異なる領域に影響を及ぼす（例えば、多発性単一神経炎、多焦点単一神経病症又は多発性単一神経病症）。
本明細書で使う“単一神経病症”は、単一末梢神経又は神経群の損傷又は破壊によって引き起こされた領域に対する運動又は感覚の喪失を伴う末梢神経病症である。単一神経病症は、局所部位の損傷又は外傷によって最も頻繁に発生し、これは、例えば、単一神経に長期間の圧力／圧迫を招く。しかし、特定全身障害（例えば、多発性単一神経炎）また単一神経病症を起こすことがある。いくつかの具現例において、前記局所部位に対する損傷又は外傷は、神経の髄鞘（外皮）又は神経細胞（軸索）の一部破壊を引き起こして神経を通じた刺激の伝導を遅延又は防止することができる。いくつかの具現例において、前記単一神経病症は、身体のいかなる部分にも影響を及ぼし得る。単一神経病性疼痛の例は、座骨神経機能障害、一般の鼻骨神経機能障害、腰骨神経機能障害、脊骨神経機能障害、頭蓋骨単一神経病症ＶＩ、頭蓋骨単一神経病症ＶＩＩ、頭蓋骨単一神経病症ＩＩＩ（圧迫型）、頭蓋骨単一神経病症ＩＩＩ（糖尿病型）、腋窩神経機能障害、手首トンネル症候群、大腿神経機能障害、脛骨神経機能障害、顔面神経痲痺（Ｂｅｌｌ’ｓ ｐａｌｓｙ）、胸部出口症候群、手首トンネル症候群及び第６（外転）神経痲痺を含むが、これに限定されるものではない。Ｆｉｎｎｅｒｕｐ Ｎ Ｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ １５７（８）：１５９９－１６０６（２０１６）；ｎｉｎｄｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ／ｄｅｔａｉｌｊ３ｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．ｈｔｍから入手可能なＮａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ，Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔ。いくつかの具現例において、前記単一神経病症性疼痛は、座骨神経痛である。
本明細書で使う“多発神経病症”は、多数の末梢神経の損傷又は破壊によって引き起こされた領域に対する運動又は感覚の喪失を伴う末梢神経病症である。多発神経病性疼痛は、小児痲痺後症候群、乳房切除後症候群、糖尿病性神経病症、アルコール神経病症、アミロイド、毒素、ＡＩＤＳ、甲状腺機能低下症、尿毒症、ビタミン欠乏症、化学療法誘発疼痛、２’，３’－ジデオキシシチジン（ｄｄＣ）治療、ギランバレー症候群又はファブリー病を含むが、これに限定されるものではない。Ｆｉｎｎｅｒｕｐ Ｎ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｐａｉｎ １５７（８）：１５９９－１６０６（２０１６）；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ，ｎｉｎｄｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ／ｄｅｔａｉｌ３ｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．ｈｔｍから入手可能なＰｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｆａｃｔ Ｓｈｅｅｔ．いくつかの具現例において、前記多発神経病症は、糖尿病性末梢神経病症である。特定の具現例において、前記糖尿病性末梢神経病症は、糖尿病被験者の血液内高い血中グルコース濃度（血糖）及び／又は高い濃度の脂肪（例えば、トリグリセリド）によって引き起こされ、これは、患者の末梢神経を損傷させる。
いくつかの具現例において、本明細書に開示の末梢神経病症は、損傷又は影響を受ける神経細胞の部分（例えば、軸索、髄鞘又は細胞体）に基づいて分類可能である。いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、軸索の代謝又は毒性異常に起因する遠位軸索病症である。いくつかの具現例において、前記代謝異常は、糖尿病、腎不全症、栄養失調のような欠乏症候群及びアルコール中毒を含む。いくつかの具現例において、前記代謝異常は、糖尿病であり、前記遠位軸索病症は、糖尿病性神経病症である。
いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、刺激伝導の急性不全を起こす髄鞘又は髄鞘化シュワン細胞に対する主要攻撃による髄鞘病症である。最も一般的な原因は、急性炎症性脱髄鞘性多発神経病症（ＡＩＤＰ、ギランバレー症候群とも知られている。）であるが、他の原因としては、慢性炎症性脱髄鞘性症候群（ＣＩＤＰ）、遺伝的代謝障害（例えば、大脳白質萎縮症（ｌｅｕｋｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ））又は毒素を含む。
いくつかの具現例において、前記末梢神経病症は、末梢神経系（ＰＮＳ）神経細胞の破壊による神経病症である。いくつかの具現例において、前記神経病症は、運動神経細胞疾患、感覚神経病症（例えば、ヘルペス帯状疱疹）、毒素又は自律神経機能障害によって誘発される。いくつかの具現例において、前記神経病症は、化学治療剤ビンクリスチンのような神経毒によって誘発される。
神経病性疼痛は、様々な原因（例えば、身体的傷害（例えば、外傷又は反復的なストレス）、疾患又は障害、有毒物質への露出又はこれらの組合せ）によって発生したり、或いはそれと関連があり得る。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、例えば、神経圧迫損傷（例えば、神経挫滅、神経伸長、神経捕捉又は不完全な神経切開）；脊髄損傷（例えば、脊髄の半切断）；末梢神経（例えば、運動神経、感覚神経又は自律神経、又はこれらの組合せ）の傷害又は損傷、四肢切断；打撲傷；炎症（例えば、脊髄炎症）；又は外科的処置のような外傷性傷害又は損傷によって発生したり、或いはそれと関連がある。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、例えば、長期間に特定群の関節の運動を必要とする反復的で、不便で／又は強制的な活動を含む反復的なストレスに起因したり、或いはこれと関連がある。これによって生じる刺激は、いずれか一つの理論に拘束されることはないが、靭帯、腱及び筋肉に炎症を起こして腫れ上がらせ、神経の通る狭い通路を収縮させることがある（例えば、肘又は手首で閉じ込められたり圧迫された神経の神経病症である脊骨神経病症及び手首トンネル症候群）。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、例えば、虚血事例（例えば、脳卒中又は心臓麻痺）、多発性硬化症、代謝及び／又は内分泌疾患又は障害（例えば、糖尿病、代謝性疾患及び成長ホルモンの過剰生産によって誘発され、神経捕捉及び疼痛を起こす関節を含む骨格の一部が異常に大きくなることを特徴とする症状である末端肥大症）、神経組織損傷（例えば、血管炎、すなわち血管炎症）、自己免疫疾患（例えば、シェーグレン症候群、ループス、リウマチ関節炎及びギランバレー症候群とも知られた急性炎症性脱髄鞘性神経病症）につながる末梢神経に供給される酸素の減少を引き起こす小血管疾患、腎臓障害、癌又は腫瘍（例えば、血管新生腫瘍、神経腫、腫瘍随伴症候群（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、癌治療時化学治療剤と放射線の毒性、感染（例えば、ヘルペス水痘疱疹（帯状疱疹）、エプスタインバーウイルス、ウエストナイルウイルス、巨大細胞ウイルス及び単純ヘルペスウイルス、後天性免疫欠乏症候群（ＡＩＤＳ）のようなウイルス又はライム病、ジフテリア及びハンセン病のようなバクテリアによる感染）、炎症性障害、末梢神経障害（例えば、神経腫）、先天的に又は新たに（ｄｅ ｎｏｖｏ）発生する遺伝的障害（例えば、シャルコーマリートゥース（Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ）障害は、下腿と足筋肉の深刻な弱化及び損失、歩行異常、腱反射の喪失、下肢麻痺を含む）、単一神経病症又は多発神経病症を含む疾患又は障害に起因したり、或いはこれと関連がある。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、感染源（例えば、ダニ媒介感染、ヘルペス水痘疱疹、エプスタインバーウイルス、ウエストナイルウイルス、巨大細胞ウイルス、単純疱疹ウイルス、ＡＩＤＳ）に起因したり、或いはこれと関連がある。いくつかの具現例において、前記神経病症性疼痛は、例えば、薬物、アルコール、重金属（例えば、鉛、ヒ素、水銀）、産業用物質（例えば、接着剤から出る溶媒、煙）又は亜酸化窒素を含む有毒物質への露出に起因したり、或いはこれと関連がある。
疾患又は障害と“関連がある神経病症性疼痛”とは、疾患又は障害（例えば、、本明細書に開示のもの）を随伴したり、疾患又は障害（例えば、本明細書に開示のもの）によって引き起こされたり、或いはこれに起因する神経病性疼痛のことを指す。
本明細書で使う用語“治療する（ｔｒｅａｔ）”、“治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”及び“治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）”は、疾患関連症候群、合併症、症状又は生化学的徴候の進行、発達、重症度又は再発を反転、緩和、改善、阻害又は遅延又は予防しようとする目的で対象に行われた任意類型の介入又は過程、又は対象に活性剤を投与することを指す。治療は、疾患のある対象又は疾患のない対象（例えば、予防用）に対して行われ得る。
本明細書で使う“投与”は、当業者に公知の様々な方法と伝達系のうち任意のものを用いて対象に治療剤又は治療剤を含む組成物を物理的に導入することを指す。本明細書に記載の抗体に対する好ましい投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄、硝子体内、又は例えば注射又は注入による他の非経口投与経路を含む。本明細書で使う用語“非経口投与”は一般に、注射による腸内及び局所投与以外の投与方式を意味し、これに制限されないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病変内、被膜内、眼窩内、心臓内、血内、経気管、皮下、表皮下、硝子体内、関節内、皮膜下、蜘蛛膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入だけでなく、生体内電気穿孔を含む。これと違い、本明細書に記載の抗体は、非経口経路、例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下又は局所投与され得る。投与はまた、例えば１回、複数回及び／又は１回以上の延長された期間にわたって行われ得る。
本明細書で使う用語“治療有効量”は、対象の疾患又は障害を“治療”したり、疾患又は障害（例えば、神経病性疼痛）の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるのに効果的な薬物単独又は他の治療剤と組み合わせた薬物の量を指す。“治療有効量”は、疾患又は障害（例えば、本明細書に開示の神経病性疼痛）を有するか、有する危険のある対象に、一部の改善又は実益を提供する薬物又は治療剤の量を含む。これによって、“治療有効量”は、疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させたり、又は一部緩和、軽減を提供し／又は少なくとも１つの指標（例えば、神経病性疼痛）を減少させ／又は疾患又は障害の少なくとも１つの臨床症状を減少させる量である。
本明細書で使う用語“対象”は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。用語“非ヒト動物”は、全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両棲類、爬虫類などのような非哺乳類を含む。
用語“配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５”又は“ＦＡＭ１９Ａ５”は、相同性の高い５個のタンパク質のＴＡＦＡファミリー（ＦＡＭ１９ファミリーとも知られている）に属し、主に脳と脊髄で発現するタンパク質を指す。ＦＡＭ１９Ａ５は、ＴＡＦＡ５又はケモカイン様タンパク質ＴＡＦＡ－５とも知られている。
ヒトにおいてＦＡＭ１９Ａ５をコードする遺伝子は、染色体２２に位置している。選択的スプライシングによって生産されるとみられる、次のような複数のヒトＦＡＭ１９Ａ５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７）アイソ型（ｉｓｏｆｏｒｍ）がある：１３２個のアミノ酸からなるアイソ型１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１）、１２５個のアミノ酸からなるアイソ型２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２）及び５３個のアミノ酸からなるアイソ型３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）。ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質は、膜結合及び可溶性（分泌）の形態で存在するとみられる。アイソ型１は、一つの膜貫通領域を持つ膜であるとみられる。Ｔａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８３（４）：７２７－３４（２００４）に、分泌されたタンパク質（可溶性）として報告されたアイソ型２は、アミノ酸位置１－２５番に信号ペプチドを含有している。アイソ型１は、膜タンパク質であるとみられる。次は、３個の公知されたヒトＦＡＭ１９Ａ５アイソ型のアミノ酸配列である。
（Ｉ）アイソ型１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１、膜貫通タンパク質）：このアイソ型を標準配列として選定した。
ＭＡＰＳＰＲＴＧＳＲ ＱＤＡＴＡＬＰＳＭＳ ＳＴＦＷＡＦＭＩＬＡ ＳＬＬＩＡＹＣＳＱＬ ＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬ ＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴ ＩＡＲＱＴＡＲＣＡＣ ＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲ ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩ ＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ ＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬ ＬＩＮＲＳＧＷＴＣＴ ＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴ ＶＳ（配列番号１）
（ＩＩ）アイソ型２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２、可溶性タンパク質）：
ＭＱＬＬＫＡＬＷＡＬ ＡＧＡＡＬＣＣＦＬＶ ＬＶＩＨＡＱＦＬＫＥ ＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩ ＶＴＬＤＲＤＳＳＱＰ ＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲ ＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧ ＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤ ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣ ＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧ ＣＤＬＬＩＮＲＳＧＷ ＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫ ＴＴＴＶＳ（配列番号２）
（ＩＩＩ）アイソ型３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）：
ＭＹＨＨＲＥＷＰＡＲ ＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ ＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤ ＬＬＩＮＲＳＧＷＴＣ ＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴ ＴＶＳ（配列番号３）
用語“ＦＡＭ１９Ａ５”は、細胞によって自然的に発現するＦＡＭ１９Ａ５の任意の変異体又はアイソ型を含む。したがって、本明細書に記載された抗体は、同一種内の異なるアイソ型（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の異なるアイソ型）と交差反応したり、或いはヒト以外の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）と交差反応し得る。これと違い、前記抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的であり得、異なる種とはいかなる交差反応も示さないことがある。ＦＡＭ１９Ａ５又はその任意の変異体及びアイソ型は、これらを自然的に発現させる細胞又は組織から分離されたり、或いは組換えによって生産され得る。ヒトＦＡＭ１９Ａ５をコードするポリヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ０３９３９６、及び次のような配列を有する：
Figure 2022125088000002
用語“ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する拮抗剤”は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の発現を抑制する全ての拮抗剤のことを指す。このような拮抗剤は、ペプチド、核酸又は化合物であり得る。より具体的に、前記拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ５を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アプタマー、ＰＮＡ（ペプチド核酸）又はこれを含むベクターであり得る。いくつかの具現例において、前記拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分であり得る。
用語“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）”及び“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）”は、当業界の用語であり、本明細書で互換して使用可能であり、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を持つ分子を指す。本明細書で使う用語は、全抗体及びこれらの任意の抗原結合断片（すなわち、“抗原結合部分”）又は単鎖を含む。いくつかの具現例において、“抗体”は、二硫化結合によって互いに連結された少なくとも２個の重（Ｈ）鎖及び２個の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分を指す。他の具現例において、“抗体”は、単一可変ドメイン、例えばＶＨＨドメインを含む単鎖抗体を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す。）及び重鎖定常領域からなっている。特定の自然発生抗体において、前記重鎖定常領域は３個のドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなっている。特定の自然発生抗体においてそれぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す。）及び軽鎖定常領域からなっている。前記軽鎖定常領域は、一つのドメインＣＬからなっている。
前記ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称する、より保存された領域が散在している、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称する超可変性領域にさらに細分化できる。ＶＨ及びＶＬのそれぞれは、アミノ末端からカルボキシ末端まで次のような順序で配置されている３個のＣＤＲ及び４個のＦＲからなっている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。前記重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。前記抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、効果器細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）をはじめとする宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介できる。
用語“Ｋａｂａｔ番号表記（Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ）”及び類似の用語は、当業界で認定されており、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域においてアミノ酸残基の番号を表記する体系のことを指す。特定の側面において、抗体のＣＤＲはＫａｂａｔ番号表記体系にしたがって決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ
ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１ ａｎｄ
Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）。Ｋａｂａｔ番号表記体系を用いると、抗体重鎖分子内ＣＤＲは、典型的に、アミノ酸位置３１～３５番（ＣＤＲ１）（場合によって３５番以降に１個又は２個の追加アミノ酸を含んでもよい（Ｋａｂａｔ番号表記方式では３５Ａ及び３５Ｂと称する。）、アミノ酸位置５０～６５番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置９５～１０２番（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号表記体系用いると、抗体軽鎖分子内ＣＤＲは、典型的に、アミノ酸位置２４～３４番（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６番（ＣＤＲ２）及びアミノ酸位置８９～９７番（ＣＤＲ３）に存在する。特定の具現例において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号表記方式によって決定している。
語句“Ｋａｂａｔにおけると同じアミノ酸位置番号表記”、“Ｋａｂａｔ位置”及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）において抗体コンピレーションの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに対して使われる番号表記体系のことを指す。この番号表記体系を用いると、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＷ又はＣＤＲの短縮又はこれに挿入することに該当するものに該当する追加アミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２番以降に挿入された単一アミノ酸（Ｋａｂａｔによれば、残基５２ａ番）及び重鎖ＦＷ残基８２番以降に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば、残基８２ａ番、８２ｂ番及び８２ｃ番など）を含むことができる。表１Ｂを参照されたい。
Figure 2022125088000003
所定の抗体に対する残基のＫａｂａｔ番号表記は、“標準”Ｋａｂａｔ番号表記された配列と前記抗体の配列の相同性の領域において整列によって決定され得る。代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造ループの位置のことを指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔ番号表記慣例を用いて番号表記した時、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２～Ｈ３４の間で変わる（これは、Ｋａｂａｔ番号表記方式がＨ３５ＡとＨ３５Ｂで挿入（ｉｎｓｅｒｔｉｏｎｓ）を置くためである；３５Ａも３５Ｂもないと、ループは３２で終わる；３５Ａだけあると、ループは３３で終わる；３５Ａと３５Ｂの両方があると、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループ間の折衝を代弁するもので、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって用いられる。
ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）も、ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域に対する番号表記体系を提供する。例えば、本明細書に参考として含まれるＬｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（２００３）を参照されたい。ＩＭＧＴ番号表記体系は、５，０００個を超える配列の整列、構造データ及び超可変ループの特性分析に基づくものであり、全ての種に対して可変及びＣＤＲ領域の比較を容易にする。ＩＭＧＴ番号表記スキーマによれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は２６番～３５番位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は位置５１番～５７番位置にあり、ＶＨ－ＣＤＲ３は９３番～１０２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は２７番～３２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ２は５０番～５２番位置にあり、ＶＬ－ＣＤＲ３は８９番～９７番位置にある。
本開示内容で論議される全ての重鎖定常領域アミノ酸位置に対して、番号表記は、配列化された最初のヒトＩｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載したＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
６３（１）：７８－８５）に最初に記載されたＥＵインデックスに従う。Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のＥＵインデックスはまた、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａに提示されている。これによって、語句“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックス”又は“ＫａｂａｔのＥＵインデックス”及び“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスに従う位置．．．”及びこれらの文法的変形は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されたＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体に基づく残基番号表記体系のことを指す。
可変ドメイン（重鎖及び軽鎖両方）及び軽鎖定常領域アミノ酸配列に用いられた番号表記体系は、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されているものである。
抗体は、免疫グロブリン分子の任意の類型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ）、任意の類型（例えば、ＩｇＤ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、又は任意の亜型（例えば、ヒトにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４；及びマウスにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を有することができる。免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、最大限でいくつかのアミノ酸において互いに異なる様々な同種異因子型（ａｌｌｏｔｙｐｅ）で存在する。本明細書に開示の抗体は、通常知られたアイソ型、類型、亜型又は同種異因子型のいずれかからなり得る。特定の具現例において、本明細書に開示の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４亜型又はこれらの任意の混成型である。特定の具現例において、前記抗体は、ヒトＩｇＧ１亜型又はヒトＩｇＧ２又はヒトＩｇＧ４亜型を有する。
“抗体”は、例えば、自然発生及び非自然発生抗体；単クローン性及び多クローン性抗体；キメラ及びヒト化抗体；ヒト及び非ヒト抗体、全合成抗体；単鎖抗体；単一特異的抗体；多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）；２個の重鎖と２個の軽鎖分子を含むテトラマー抗体；抗体軽鎖モノマー；抗体重鎖モノマー；抗体軽鎖ダイマー；抗体重鎖ダイマー；抗体軽鎖－抗体重鎖対；細胞内抗体（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）；ヘテロコンジュゲート（ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）抗体；１価抗体；単鎖抗体；ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体；アフィボディ（ａｆｆｙｂｏｄｙ）；抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、及び完全に抗原結合可能な単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＶＬドメイン）からなる結合分子を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む（Ｈａｒｍｅｎ Ｍ．Ｍ．ａｎｄ Ｈａａｒｄ Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２（２００７））。
本明細書で使う用語、抗体の“抗原結合部分”及び“抗原結合断片”は互換的であり、抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する能力を保有した抗体の１つ以上の断片を指す。このような“断片”は、例えば、約８～約１５００個のアミノ酸長であり、好適には、約８～約７４５個アミノ酸長、好適には約８～約３００個、例えば、約８～約２００個アミノ酸又は約１０個～約５０個又は１００個アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は全長抗体の断片によって行われ得るということが明らかにされた。抗体、例えば、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の“抗原結合部分”という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域で二硫化連結部によって連結された２個のＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬ及びＶＨドメイン及び二硫化連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）からなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；及び（ｖｉ）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）又は（ｖｉｉ）場合によって合成リンカーによって接合され得る２個以上の分離されたＣＤＲの組合せを含む。また、Ｆｖ断片の２個のドメインであるＶＬとＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を用いてこれらをＶＬとＶＨ領域が対をなして１価分子を形成する単一タンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている）として作り得る合成リンカーによって接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照。このような単鎖抗体はまた、抗体の“抗原結合部分”という用語内に含まれる。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて得られ、前記断片は、無損傷抗体と同じ方式で有用性に対してスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって又は無損傷免疫グロブリンの酵素的又は化学的切断によって生成され得る。
本明細書で使われる用語“可変領域”と“可変ドメイン”は互換され、当業界において普遍的である。前記可変領域とは、典型的に抗体の一部、一般に軽鎖又は重鎖の一部を指すものであり、典型的に、前記成熟した重鎖内には約アミノ末端１１０～１２０個のアミノ酸があり、前記成熟した軽鎖内には約９０～１１５個のアミノ酸があり、これらは、抗体間において配列が広範囲に異なり、特定抗体の特定抗原に対する結合と特異性において使用される。前記配列可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中するが、前記可変ドメインにおいてより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
特定機転又は理論に限定されるわけではないが、前記軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗原と抗体の相互作用及び特異性を主に担当するものとみられる。特定の具現例において、前記可変領域は、ヒト可変領域である。特定の具現例において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲとヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の具現例において、前記可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の具現例において、前記可変領域は、齧歯類又はネズミ科のＣＤＲと霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
本明細書で使う用語“重鎖（ＨＣ）”は、抗体と関連して用いたとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてＩｇＧの亜型、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含み、それぞれ抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ類型を発生させる任意の別個のタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を指すことができる。
本明細書で使う用語“軽鎖（ＬＣ）”は、抗体と関連して用いたとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて任意の別個のタイプ、例えば、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のことを指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当業界によく公知されている。特定の具現例において、前記軽鎖は、ヒト軽鎖である。
用語“ＶＬ”及び“ＶＬドメイン”は、抗体の軽鎖可変領域のことを指すために互換的に使われる。
用語“ＶＨ”及び“ＶＨドメイン”は、抗体の重鎖可変領域のことを指すために互換的に使われる。
本明細書で使う用語“定常領域”又は“定常ドメイン”は互換的であり、当業界における通常の意味を有する。前記定常ドメインは、抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関与することはないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような様々な効果器機能を示し得る軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシ末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインに比べてより保存されたアミノ酸配列を有する。
“Ｆｃ領域”（断片結晶化可能な領域）又は“Ｆｃドメイン”又は“Ｆｃ”は、免疫系の様々な細胞（例えば、効果器細胞）上に位置しているＦｃ受容体又は古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）に対する結合を含み、宿主組織又は因子に免疫グロブリンが結合することを媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域のことを指す。これによって、Ｆｃ領域は、第１定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除く抗体の定常領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体アイソ型において、Ｆｃ領域は、抗体の２個の重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）定常ドメインから由来した２個の同じタンパク質断片を含み；ＩｇＭ及びＩｇＥ Ｆｃ領域は、それぞれのポリペプチド鎖にある３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は免疫グロブリンドメインＣγ２とＣγ３との間及びＣγ１とＣγ２との間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変わり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は一般に、Ｃ２２６番又はＰ２３０番の位置にあるアミノ酸残基（又は、これら２個のアミノ酸の間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端まで伸長されるものに限定されるが、番号表記は、Ｋａｂａｔにおけると同様にＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、約アミノ酸２３１番から約アミノ酸３４０番に延長されており、ＣＨ３ドメインは、Ｆｃ領域においてＣｍドメインのＣ末端側に位置しているところ、すなわち、ＩｇＧの約アミノ酸３４１番から約アミノ酸４４７番に延長されている。本明細書で使うＦｃ領域は、任意の同種異因子型変異体を含む天然配列Ｆｃ、又は変異体Ｆｃ（例えば、非自然発生Ｆｃ）であり得る。Ｆｃはまた、この領域が分離状態にあるか、又は“Ｆｃ融合タンパク質”（例えば、抗体又は免疫癒着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ））とも呼ばれる“Ｆｃ領域を含む結合タンパク質”のようなＦｃ含有タンパク質ポリペプチドと関連して意味するものであり得る。
“天然配列Ｆｃ領域”又は“天然配列Ｆｃ”は、自然から発見されたＦｃ領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域だけでなく、これらの自然発生変異体も含む。天然配列Ｆｃは、Ｆｃの様々な同種異因子型を含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）ｍＡｂｓ １：１；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）参照）。
“Ｆｃ受容体”又は“ＦｃＲ”は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、Ｆｃγファミリーの受容体とこれら受容体の対立遺伝子変異体及び他の方式でスプライシングされた形態を含む。前記Ｆｃγファミリーは、３個の活性化受容体（マウスのＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃγＲＩＶ；ヒトのＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＩＡ）と一つの阻害受容体（ＦｃγＲＩＩＢ）からなっている。ヒトＩｇＧ１は、大部分のヒトＦｃ受容体と結合し、最も強いＦｃ効果器機能を導き出す。ヒトＩｇＧ１は、それが結合する活性化Ｆｃ受容体の類型と関連してネズミのＩｇＧ２ａと同等なものと見なすことができる。逆に、ヒトＩｇＧ４は、最小のＦｃ効果器機能を導き出す（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）参照）。
前記定常領域は、１つ以上の効果器機能を除去するために、例えば組換え技術によって操作され得る。“効果器機能”は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドの相互作用又はそれから生じる生化学的反応を指す。例示的な“効果器機能”は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ及び抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）のようなＦｃγＲ媒介効果器機能及び細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下向き調節を含む。このような効果器機能は一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせられることを必要とする。したがって、用語 “Ｆｃ機能のない定常領域”は、Ｆｃ領域によって媒介された１つ以上の効果器機能が減
少したり又は存在しない定常領域を含む。
抗体の効果器機能は、互いに異なる接近法によって減少又は回避され得る。抗体の効果器機能は、Ｆｃ領域が欠如している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂのような）を使用することによって減少又は回避され得る。これと違い、Ｆｃ領域の他の価値ある特性（例えば、長い半減期及びヘテロダイマー化）は保有しながらＦｃ領域において特定残基に連結されている糖を除去して抗体の効果器機能を減少させることによって、いわゆる無糖化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体が生成され得る。無糖化抗体は、例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在の下に培養された細胞に抗体を生産することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞）において抗体を発現させることによって生成され得る。例えば、米国特許公開番号２０１２０１００１４０を参照する。他の接近法は、効果器機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を利用することであり、例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３に比べてより低いレベルのＦｃ効果器機能を有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域の最も近くにある残基が抗体の効果器機能を担当するが、先天免疫系の効果器細胞上でＣ１ｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重なった結合部位を含有しているわけである（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開））。したがって、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しない抗体は、例えば、ＩｇＧ４アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメインとＩｇＧ１アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域とＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）、又はＦｃ効果器機能を変更、例えばＦｃ機能を減少させたり或いはなくす突然変異を持つＦｃ領域を生成させることによって製造され得る。突然変異があるこのようなＦｃ領域は、当業界に公知されている。例えば、開示内容が全体的に本明細書に参考として含まれる米国特許公開番号２０１２０１００１４０とそこに引用されている米国出願とＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）を参照する。
“ヒンジ”、“ヒンジドメイン”又は“ヒンジ領域”又は“抗体ヒンジ領域”は、ＣＨ１ドメインをＣＨ２ドメインと接合させてヒンジの上、中及び下部を含む重鎖定常領域のドメインのことを指す（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８ １６１：４０８３）。前記ヒンジは抗体の結合及び効果器領域間の可撓性のレベル変化を提供し、また２個の重鎖定常領域間の分子間二硫化結合のための部位を提供する。本明細書に開示されているように、ヒンジは、全てのＩｇＧアイソ型に対してＧｌｕ２１６から始まってＧｌｙ２３７で終わる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４ヒンジの配列が当業界に知られている。例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）を参照する。
用語“ＣＨ１ドメイン”は、重鎖定常ドメインにおいてヒンジに可変ドメインを連結する重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ１ドメインは、Ａ１１８から始まってＶ２１５で終わる。用語“ＣＨ１ドメイン”は、野生型ＣＨ１ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ１ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ１ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変更する突然変異を持つＣＨ１ドメインを含む。
用語“ＣＨ２ドメイン”は、重鎖定常ドメインでＣＨ３ドメインにヒンジを連結する重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ２ドメインは、Ｐ２３８から始まってＫ３４０で終わる。用語“ＣＨ２ドメイン”は、野生型ＣＨ２ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ２ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ２ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば、半減期及び／又は減少したＦｃ効果器機能を変更する突然変異を持つＣＨ２ドメインを含む。
用語“ＣＨ３ドメイン”は、重鎖定常ドメインにおいてＣＨ２ドメインに対してＣ末端である重鎖定常領域のことを指す。本明細書で使うＣＨ３ドメインは、Ｇ３４１から始まってＫ４４７で終わる。用語“ＣＨ３ドメイン”は、野生型ＣＨ３ドメインだけでなく、その自然に存在する変異体（例えば、同種異因子型）を含む。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４（野生型及び同種異因子型を含む）のＣＨ３ドメイン配列は、当業界に公知されている（例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開参照）。例示的なＣＨ３ドメインは、例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されてい米国特許、公開公報及びＰＣＴ公報に記載されている抗体の生物学的活性、例えば半減期を変更する突然変異を持つＣＨ３ドメインを含む。
本明細書で使う“アイソ型”は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体類型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体）のことを指す。
“同種異因子型”は、いくつのアミノ酸を異にする特定アイソ型グループ内自然発生変異体のことを指す（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ １：１参照）。本明細書に記載されている抗体は、任意の同種異因子型を有することができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の同種異因子型は、当業界に公知されている。例えば、上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）；及びＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４，１－７（２００９）を参照する。
語句“抗原を認識する抗体”及び“抗原に特異的な抗体”は、用語“抗原に特異的に結合する抗体”と本明細書で互換して使われる。
本明細書で使う“分離された抗体”は、互いに異なる抗原特異性を持つ他の抗体が実質的にない抗体を意味する（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する分離された抗体は、ＦＡＭ１９Ａ５以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない）。しかし、ＦＡＭ１９Ａ５のエピトープに特異的に結合する分離された抗体は、互いに異なる種の他のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に交差反応性を有することができる。
“結合親和性”は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有相互作用の総和の強度を意味する。別段の提示がない限り、本明細書で使う“結合親和性”は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）間１：１相互作用を反映した固有結合親和性を意味する。パートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表現され得る。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）と平衡結合定数（ＫＡ）を含むが、これに限定されない当業界に公知の多数の方法で測定及び／又は表示され得る。前記ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算され、モル濃度（Ｍ）で表示され、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の結合速度定数を意味し、ｋｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離を意味する。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、免疫分析（例えば、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）又は力学的排除分析（ＫｉｎＥｘＡ（登録商標））のように当業者に公知の技術によって決定され得る。
本明細書で使う用語“特異的に結合”、“特異的に認識”、“特異的結合”、“選択的結合”及び“選択的に結合”は、抗体と関連して類似の用語であり、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）のことを指し、結合は、当業者によって理解されるものである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば免疫分析、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標），ＫｉｎＥｘＡ（登録商標） ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）又は当業界に公知されている他の分析法によって決定したとき、通常、より低い親和度を持つ他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。特定の具現例において、抗原に特異的に結合する分子は、この分子が他の抗原に結合するとき、ＫＡに比べて、少なくとも２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ以上さらに大きいＫＡで前記抗原に結合する。
抗体は典型的に、１０－５～１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）によって反映される高い親和度でこれらの同族抗原（ｃｏｇｎａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ）に特異的に結合する。約１０－４Ｍを超える任意のＫＤは一般に、非特異的結合を意味すると見なされる。本明細書で使う抗原に“特異的に結合する”抗体は、高い親和度で抗原及び実質的に同じ抗原に結合する抗体のことを指し、これは、例えば、前記所定の抗原を使用するＢＩＡＣＯＲＥＴＭ２０００機器で免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）又は表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定したとき、１０－７Ｍ以下、好ましくは１０－８Ｍ以下、より好ましくは１０－９Ｍ以下、最も好ましくは１０－８Ｍ～１０－１０Ｍ以下のＫＤを有することを意味するが、この抗体は、関連のない抗原には高い親和度で結合しない。
本明細書で使う“抗原”は、タンパク質、ペプチド又はハプテン（ｈａｐｔｅｎ）のような任意の天然又は合成免疫原性物質のことを指す。抗原は、ＦＡＭ１９Ａ５又はその断片であり得る。
本明細書で使う“エピトープ”は、当業界の用語で、抗体が特異的に結合できる抗原の局在化された領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接アミノ酸（線形又は隣接エピトープ）であるか、又はエピトープは、例えばポリペプチド又はポリペプチドの２個以上の隣接しない領域が集合したもの（立体形態、非線形、不連続又は非隣接エピトープ）であり得る。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、いつもではないが、典型的に変性（ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ）溶媒に露出時に維持されるのに対し、３次フォルディングによって形成されたエピトープは、典型的に変性溶媒で処理時に喪失される。エピトープは典型的に、特有の空間的立体形態内に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は２０個のアミノ酸を含む。所定の抗体によってどのエピトープが結合するかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当業界によく公知されており、例えば（例えば、ＦＭＡＭ１９Ａ５の）重複又は隣接ペプチドを所定の抗体（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）との反応性に対して試験する免疫ブロットと免疫沈殿分析を含む。エピトープの空間的立体形態を決定する方法は、当業界における技術及び本明細書に記載の技術、例えばｘ線結晶学、２次元核磁気共鳴及びＨＤＸ－ＭＳを含む（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）。
特定の具現例において、前記抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡ分析、質量分光分析と結合した水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィー電子噴霧質量分光分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャニング分析及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば、部位指向突然変異誘発マッピング）によって決定され得る。Ｘ線結晶学の場合、決定化は当業界に公知の方法のいずれかを用いて達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ａｃｔａ
Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３参照）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を用いて研究でき、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ Ｈ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４参考）及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ１）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ．（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ
Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）のようなコンピュータソフトウェアを用いて精製（ｒｅｆｉｎｅ）され得る。突然変異誘発マッピング研究は、当業者に公知された任意の方法を用いて行うことができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術の記載については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｂ．Ｃ． ＆ Ｗｅｌｌｓ Ｊ．Ａ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参考する。
用語“エピトープマッピング”は、抗体抗原認識に対する分子決定要因の同定過程を指す。
２個以上の抗体と関連して用語“同一エピトープに結合”は、所定の方法によって決定するとき、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントに結合するということを意味する。抗体が本明細書に記載の抗体と“ＦＡＭ１９Ａ５上の同一エピトープ”に結合するか否かを決定するための技術は、エピトープマッピング方法、例えばエピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。他の方法は、抗原断片又は抗原の突然変異した変異体に対する抗体の結合をモニタリングすることであり、ここで、前記抗原配列内のアミノ酸残基の変形による結合損失は、だいてい、エピトープ成分の表示として見なされる。また、エピトープマッピングのための電算組合せ法も利用可能である。これらの方法は、組合せファージディスプレイペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを親和性分離する関心抗体の能力に依存する。同じＶＨ及びＶＬ又は同じＣＤＲ１、２及び３配列を有する抗体は、同じエピトープに結合すると予想される。
“標的との結合に対して他の抗体と競合”する抗体は、前記他の抗体の標的結合を（部分的に又は完全に）阻害する抗体を指す。２個の抗体が標的との結合に対して互いに競合するか否か、すなわち一つの抗体が他の抗体の標的結合を阻害するか否か、及び阻害する程度は、公知の競合実験を用いて決定することができる。特定の具現例において、一つの抗体は他の抗体の標的結合において競合し、この結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで阻害する。阻害又は競合レベルは、抗体が“遮断抗体”（すなわち、標的とまず培養される低温抗体）であるかどうかによって異なり得る。競合分析は、例えば、Ｅ．ｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ
Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ ４２７７又はＥ．ｄ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ １９９９による“Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”の第１１章に記載されたとおりに実施できる。競合抗体は、同一エピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープ（例えば、立体障害で立証される）に結合する。
他の競合結合分析としては、固相直接又は間接放射性免疫分析（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素免疫分析（ＥＩＡ）、サンドウィッチ競合分析（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）参照）；固相直接標識化分析、固相直接標識化サンドウィッチ分析（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）参照）；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０）参照）；及び直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０）参照）を含む。
用語“単鎖Ｆｖ”又は“ｓｃＦｖ”は、伝統的な二本鎖抗体の重鎖と単鎖の可変ドメインが接合して１つの鎖を形成する単鎖Ｆｖ（“可変断片”）抗体のことを指す。
“二重特異的”又は“二重機能性抗体”は、２個の異なる重鎖／軽鎖対が２個の異なる結合部位を持つ人工混成抗体である。二重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結を含む様々な方法によって生産され得る。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）を参照する。
本明細書で使う“単クローン性抗体”は、特定エピトープに対して単一結合特異性と親和性を示す抗体であるか、又は全ての抗体が特定エピトープに対して単一結合特異性と親和性を示す抗体組成のことを指す。したがって、用語“ヒト単クローン性抗体”は、単一結合特異性を示し、ヒト生殖系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）免疫グロブリン配列から由来した可変及び選択的定常領域を有する抗体又は抗体組成のことを指す。いくつかの具現例において、ヒト単クローン性抗体は、例えば、不滅化細胞に融合されたヒト重鎖転移遺伝子と軽鎖転移遺伝子を含むゲノムを持つ遺伝子導入（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）非ヒト動物、例えば遺伝子導入マウスから得たＢ細胞を含むハイブリドーマによって生産される。
本明細書で使う用語“組換えヒト抗体”は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入又は染色体導入（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）動物（例えば、マウス）から分離された抗体又はそれから製造されたハイブリドーマ、（ｂ）抗体を発現させるために形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から分離された抗体、（ｃ）組換え組合せヒト抗体ライブラリーから分離された抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列にヒト免疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングすることを伴う任意の他の手段によって製造、発現、生成又は分離された抗体、のような組換え手段によって製造、発現、生成又は分離された全てのヒト抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、生殖系遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖系免疫グロブリン配列を用いるが、例えば、抗体成熟化中に起こる後続再配列と突然変異を含む可変及び定常領域を含む。当業界に公知された通り（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７－１１２５参照）、前記可変領域は、外来抗原に対して特異的な抗体を形成するように再配列される様々な遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含有する。再配列の他にも、前記可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために多数の単一アミノ酸変化（体細胞突然変異又は超突然変異という）によってさらに変形され得る。前記定常領域は、抗原に対する追加反応にしたがって変わるだろう（すなわち、アイソ型変化）。したがって、抗原に反応して軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再配列され体細胞突然変異した核酸分子は、本来の核酸分子と配列同一性を有することはできないが、その代わりに、実質的に同一又は類似するであろう（すなわち、少なくとも８０％同一性を有する）。
“ヒト抗体（ＨｕＭＡｂ）”は、フレームワークとＣＤＲ領域が両方ともヒト生殖系免疫グロブリン配列から由来した可変領域を有する抗体のことを指す。また、前記抗体が定常領域を含有すると、前記定常領域もヒト生殖系免疫グロブリン配列から由来する。本明細書に記載の抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、試験管内無作為又は部位特異的突然変異誘発によって又は生体内体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含むことができる。しかし、本明細書で使用する用語“ヒト抗体”は、マウスのような他の哺乳類種の生殖系から由来したＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含まない。用語“ヒト”抗体と“完全なヒト”抗体は同じ意味で使われる。
“ヒト化”抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外部のアミノ酸の一部、大部分又は全部が、ヒト免疫グロブリンから由来した相応するアミノ酸に置換された抗体のことを指す。抗体のヒト化された形態のいくつかの具現例において、ＣＤＲドメイン外部のアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト免疫グロブリンのアミノ酸に置換されており、１つ以上のＣＤＲ領域内部のアミノ酸の一部、大部分又は全部は変わらずに残っている。アミノ酸の小さい添加、欠失、挿入、置換又は変形は、これらが特定抗原に結合する抗体の能力をなくさない限り、許容可能である。“ヒト化”抗体は、原始抗体の抗原特異性に類似する抗原特異性を維持する。
“キメラ抗体”は、マウス抗体から可変領域が由来し、ヒト抗体から定常領域が由来した抗体のように、一つの種から可変領域が由来し、他の種から定常領域が由来した抗体のことを指す。
本明細書で使う用語“交差反応”は、異なる種のＦＡＭ１９Ａ５に結合する本明細書に開示の抗体の能力を指す。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する本明細書に開示の抗体は、他の種のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）にも結合できる。本明細書で使う交差反応性は、結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することによって又はＦＡＭ１９Ａ５を生理学的に発現する細胞に結合したり又はそれとも前記細胞と機能的に相互作用することによって測定され得る。交差反応性を決定するための方法は、本明細書に記載されている標準結合分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）を用いたＢＩＡＣＯＲＥＴＭ表面プラズマ共鳴（ＳＰＲ）分析、又は流細胞計数技術を含む。
本明細書に開示の用語“自然発生”を対象体に適用時に、対象体が自然から発見され得るという事実を意味する。例えば、自然のソースから分離可能であり、実験室で人によって意図的に変形されない有機体（ウイルスを含む）内に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は自然発生である。
“ポリペプチド”は、少なくとも２個の連続連結されたアミノ酸残基を含む鎖のことを指し、前記鎖の長さに上限はない。タンパク質内の１つ以上のアミノ酸残基は、グリコシル化、ホスホリル化又は二硫化結合形成のような変形を含有できるが、これに限定されるものではない。“タンパク質”は、１つ以上のポリペプチドを含むことができる。
本発明で使用する用語“核酸分子”は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含む。核酸分子は、単鎖又は二重鎖であり得、ｃＤＮＡであり得る。
本発明で使用する用語“組換え宿主細胞”（又は、簡単に“宿主細胞”）は、細胞内自然的に存在しない核酸を含む細胞のことを指し、組換え発現ベクターが導入された細胞であり得る。このような用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の子孫のことも指すものとして理解すべきである。突然変異や環境的な影響によって次の世代には特定の変形が起き得る点から、このような子孫は実際に親細胞と同一であるとはいえないが、本明細書で使う用語“宿主細胞”の範囲内に依然として含まれる。
本発明で使用する用語“連結された”は、２個以上の分子の会合を指す。前記連結は、共有連結又は非共有連結であり得る。前記連結はまた、遺伝子連結（すなわち、組換えによる融合）であり得る。このような連結は、化学的コンジュゲーション及び組換えタンパク質生産のような、当業界で認める様々な技術を用いて達成され得る。
＜ＩＩ．アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）及びそれから由来したベクター＞
本明細書に開示のＡＡＶベクターは、関心タンパク質、例えばＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤、例えば抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体をコードする核酸を含む。いくつかの具現例において、前記核酸はまた、発現、及びいくつかの具現例では例えばプロモーター、エンハンサー、ポリアデニル化信号、内部リポソーム導入部位（ＩＲＥＳ）、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）をコードする配列などのような関心タンパク質の分泌を可能にする１つ以上の調節配列を含むことができる。これによって、いくつかの具現例において、前記核酸は、感染された細胞において関心タンパク質の発現を誘発又は改善するためにコーディング配列に作動可能に連結されたプロモーター領域を含むことができる。このようなプロモーターは、例えば感染された組織においてタンパク質の効率的且つ安定した生産を可能にする、偏在性（ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ）であり、細胞又は組織特異的であり、強く、弱く、調節され、キメラ性であり得る。一般に、前記開示された方法で用いるプロモーターはヒト細胞で機能的であるが、前記プロモーターは、コードされたタンパク質に相同性又は非相同性であり得る。調節されたプロモーターの例は、Ｔｅｔオン／オフ要素含有プロモーター、ラパマイシン誘導性プロモーター、タモキシフェン誘導性プロモーター及びメタロチオネインプロモーターを含むが、これに限定されるものではない。使用可能な他のプロモーターには、腎臓、脾臓、膵臓、脳又は脊髄のような組織に対して組織特異的なプロモーターを含む。ユビキタスプロモーターの例には、特に、ＣＭＶプロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーターなどのウイルスプロモーターと、ＰＧＫ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモーター及びβ－アクチンプロモーターのような細胞プロモーターとが含まれる。
本明細書に開示のＡＡＶベクターのいくつかの具現例において、１つ以上のフィードバック要素を用いて関心タンパク質の過発現を弱化させることができる。例えば、前記ＡＡＶベクターのいくつかの具現例は、外因性転写体を標的にする１つ以上のｓｉＲＮＡ配列を含む。他の具現例において、前記ＡＡＶベクターは、阻害転写因子によって認識され得る１つ以上の追加プロモーターを含む。様々な具現例において、本明細書に開示のＡＡＶベクターは、関心タンパク質の発現レベルを生理学的レベルで保持できる恒常性（ｈｏｍｏｅｏｓｔａｔｉｃ）フィードバックループを生成できる構造体を含む。
いくつかの具現例において、本明細書に開示のＡＡＶベクターは、コードされたタンパク質の分泌を可能にするリーダ配列（又は、信号ペプチド）を含む核酸を含む。いくつかの具現例において、関心転移遺伝子を分泌信号ペプチド（通常、分泌されたポリペプチドのＮ末端に位置する）をコードする配列と融合すれば、形質導入された細胞から分泌され得る形態の治療タンパク質の生産を可能にすることができる。このような信号ペプチドの非制限的な例は、ヒトベータグロビン、アルブミン、β－グルクロニダーゼ、アルカリプロテアーゼ又はフィブロネクチン分泌信号ペプチドを含む。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶベクターから発現したｍＲＮＡは、非－ＣＮＳ組職から優先的に発現するｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ結合部位を含む。特定の具現例において、前記ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１２２に対する結合部位である。特定の具現例において、前記ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ－１に対する結合部位である。いくつかの具現例において、前記ＣＮＳ関連遺伝子から発現したｍＲＮＡは、ＣＮＳ組職から優先的に発現するｍｉＲＮＡのｍｉＲＮＡ結合部位を含まない。
パルボウイルス科に属するＡＡＶは、４．７キロ塩基（ｋｂ）～６ｋｂの単鎖線形ＤＮＡゲノムを持つ小さい外皮のない正２０面体ウイルスである。Ｇｏｎｑａｌｖｅｓ，Ｍ．，Ｖｉｒｏｌ Ｊ２：４３（２００５）を参照する。この科は、２個の亜科：脊椎動物を感染させるパルボウイリネ亜科と昆虫を感染させるデンソウイリネ亜科に分けられる。パルボウイリネ亜科に属するウイルスは、本明細書でパルボウイルスといい、デンソウイルス属を含む。これらの属の名称から推論できるように、ディペンドウイルスに属するウイルスは、これらが一般に細胞培養において生産的な感染のためにアデノウイルス又はヘルペスウイルスのようなヘルパーウイルスと共感染を必要とするという点で独特である。ディペンドウイルス属は通常、ヒト（例えば、血清型１、２、３Ａ、３Ｂ、４、５及び６）又は霊長類（例えば、血清型１及び４）を感染させるＡＡＶ及び他の温血動物を感染させる関連ウイルス（例えば、ウシ、イヌ、ウマ及びヒツジのアデノ関連ウイルス）を含む。パルボウイルス及びパルボビリダエに属する他のウイルスに対する追加情報は、Ｋｅｎｎｅｔｈ Ｉ．Ｂｅｍｓ，“Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ Ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ
Ｔｈｅｉｒ Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ”，Ｃｈａｐｔｅｒ ６９ ｉｎ Ｆｉｅｌｄｓ
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（３ｄ Ｅｄ．１９９６）に記載されている。
＜複製、カプシド及びアセンブリーＡＡＶ遺伝子＞
ＡＡＶの単鎖ゲノムは、３個の遺伝子ｒｅｐ（複製）、ｃａｐ（カプシド）及びａａｐ（アセンブリー）を含む。これら３個の遺伝子は、３個のプロモーター、代替翻訳開始部位及び差次的スプライシングの使用によって少なくとも９個の遺伝子産物を生成する。
前記ｒｅｐ遺伝子は、ウイルスゲノム複製及びパッケージングに必要な４個のタンパク質（Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２及びＲｅｐ４０）をコードする。前記ｃａｐ遺伝子発現は、ウイルスゲノムを保護するだけでなく、細胞結合と内在化に積極的に関与する外部カプシドシェルを形成するウイルスカプシドタンパク質（ＶＰ１；ＶＰ２；ＶＰ３）を生成する。前記ウイルス外皮は、正２０面体構造で配置されている６０個のタンパク質からなっていると推定される。前記ａａｐ遺伝子は、ｃａｐ遺伝子と重なる代替判読フレームにおいてアセンブリー活性化タンパク質（ＡＡＰ）をコードする。このような核タンパク質は、カプシドアセンブリーのための支持（ｓｃａｆｆｏｌｄｉｎｇ）機能を提供すると考えられ、いくつかのＡＡＶ血清型においてＶＰタンパク質の核局在化に役割を担う。
いくつかの具現例において、本明細書に開示のＡＡＶベクターは、組換えＡＡＶであり、前記ｒｅｐ遺伝子、ｃａｐ遺伝子及びａａｐ遺伝子のいずれか１つ以上が欠如している。いくつかの具現例において、前記ｒＡＡＶは、前記ｒｅｐ遺伝子、ｃａｐ遺伝子及びａａｐ遺伝子のいずれか１つ以上が突然変異するように変形され、ＡＡＶ遺伝子のいずれか１つ以上の発現が変形される。いくつかの具現例において、前記ｒｅｐ、ｃａｐ、又はａａｐ遺伝子のいずれか１つ以上は、自然発生であり、例えば、前記ｒｅｐ、ｃａｐ又はａｐｐ遺伝子は、パルボウイルスｒｅｐ、ｃａｐ又はａａｐ遺伝子の全部又は一部を含む。いくつかの具現例において、前記ｒｅｐ、ｃａｐ又はａａｐ遺伝子のいずれか１つ以上は、合成配列を含む。
本明細書に記載の特定ＡＡＶゲノムは、互いに異なるＡＡＶゲノム（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１のゲノム）を有し得るものと理解され得る。これによって、本明細書は、ｒｅｐ、ｃａｐ又はａａｐの任意の可能な変形（ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）を含むＡＡＶベクターを開示する。
＜逆転された末端反復＞
本開示内容の特定の側面は、第１のＩＴＲ、例えば５’ＩＴＲ、及び第２のＩＴＲ、例えば３’ＩＴＲを含む核酸分子に関する。いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、自然発生であり、例えば、前記ＩＴＲはパルボウイルスＩＴＲの全部又は一部を含む。いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、合成配列を含む。
いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムのＩＴＲを含む。いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１及びこれらの任意の組合せから選択されるＡＡＶゲノムのＩＴＲである。特定の具現例において、前記ＩＴＲは、ＡＡＶ８又はＡＡＶ９ゲノムのＩＴＲである。他の具現例において、前記ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムのいずれか１つ以上から由来したＩＴＲを５’及び３’末端に含むように遺伝子操作された合成配列である。いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、同じゲノムから、例えば、同じウイルスのゲノムから又は互いに異なるゲノムから、例えば２個以上の互いに異なるＡＡＶゲノムのゲノムから由来する。特定の具現例において、前記ＩＴＲは、同じＡＡＶゲノムから由来する。他の具現例において、本開示内容の核酸分子に存在する２個のＩＴＲは同一であり、特に、ＡＡＶ２ＩＴＲであり得る。いくつかの具現例において、前記第１のＩＴＲと第２のＩＴＲは同一である。
いくつかの具現例において、ＩＴＲは、ＡＡＶゲノムから由来しないＩＴＲを５’及び３’末端に含むように遺伝子操作された合成配列である。いくつかの具現例において、前記ＩＴＲ配列は、１つ以上の回文配列（ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）を含む。本明細書に開示のＩＴＲの回文配列は、天然回文配列（すなわち、自然から発見される配列）、類似回文配列のような合成配列（すなわち、自然から発見されない配列）及びこれらの組合せ又は変形形態を含むが、これに限定されるものではない。“類似回文配列”は、２次構造を形成する天然ＡＡＶ回文配列内の配列に対して７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％未満を含む８０％未満の同一性を共有したり、或いは核酸配列同一性のない不完全回文配列を含む、回文ＤＮＡ配列である。前記天然回文配列は、本明細書に開示の任意のゲノムから収得又は由来することができる。前記合成回文配列は、本明細書に開示の任意のゲノムに基づくことができる。前記回文配列は、連続又は不連続的（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｅｄ）であり得る。いくつかの具現例において、前記回文配列は、第２配列の挿入を含めて不連続的である。いくつかの具現例において、前記第２配列は、プロモーター、エンハンサー、インテグラーゼに対する統合部位（例えば、Ｃｒｅ又はＦｌｐ組換え酵素に対する部位）、遺伝子産物に対するオープンリーディングフレーム（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ）又はこれらの組合せを含む。
いくつかの具現例において、前記ＩＴＲは、ヘアピンループ構造を形成する。一具現例において、前記第１のＩＴＲは、ヘアピン構造を形成する。他の具現例において、前記第２のＩＴＲは、ヘアピン構造を形成する。さらに他の具現例において、前記第１のＩＴＲと第２のＩＴＲは両方ともヘアピン構造を形成する。
いくつかの具現例において、本明細書に記載の核酸分子のＩＴＲは、転写活性化されたＩＴＲであり得る。転写活性化されたＩＴＲは、少なくとも１つの転写活性化された要素を含むことによって、転写活性化された野生型ＩＴＲの全部又は一部を含むことができる。これと関連して様々な類型の転写活性要素を好適に使用することができる。いくつかの具現例において、前記転写活性要素は、構成的転写活性要素である。構成的転写活性要素は、持続可能なレベルの遺伝子転写を提供し、転移遺伝子の持続した発現を必要とするときに好ましい。他の具現例において、前記転写活性要素は、誘導性転写活性要素である。誘導性転写活性要素は一般に、誘導因子（又は、誘導条件）がない状態では低い活性を示し、誘導因子が存在する状態（又は、誘導条件に転換）では上向き調節される。誘導性転写活性要素は、特定時間又は特定位置でのみ発現が必要なとき、又は誘導剤を用いて発現レベルを滴定する必要があるときに好ましいだろう。転写活性要素はまた、組織特異的であり得るところ、すなわち、特定組織又は細胞類型でのみ活性を示す。
転写活性要素は、ＩＴＲに様々な方法で混入できる。いくつかの具現例において、転写活性要素は、ＩＴＲの任意の部分に５’混入されたり、或いはＩＴＲの任意の部分に３’混入される。他の具現例において、転写活性化されたＩＴＲの転写活性要素は、２個のＩＴＲ配列間に位置する。前記転写活性要素が離れているべき２個以上の要素を含む場合、これら要素はＩＴＲの一部と交互的であり得る。いくつかの具現例において、ＩＴＲのヘアピン構造は欠失し、転写要素の逆転された反復に代替される。このような後者の配列は、構造において欠失している部分を摸倣したヘアピンを生成するであろう。転写活性化されたＩＴＲには多数の直列転写活性要素が存在してもよく、これらは隣接していても離れていてもよい。また、タンパク質結合部位（例えば、Ｒｅｐ結合部位）は、転写活性化されたＩＴＲの転写活性要素に導入され得る。転写活性要素は、ＲＮＡを形成するＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡの制御された転写を可能にする任意の配列を含むことができ、例えば、次に定義されている転写活性要素を含むことができる。
転写活性化されたＩＴＲは、核酸分子から運搬及び発現し得る転移遺伝子の長さを効果的に極大化する比較的制限されたヌクレオチド配列長で核酸分子に転写活性化及びＩＴＲ機能を全て提供する。転写活性要素をＩＴＲに混入することは、様々な方法で行うことができる。ＩＴＲ配列及び転写活性要素の配列要件を比較すると、ＩＴＲ内要素をコードする方法に対する洞察力を提供できる。例えば、転写活性要素の機能的要素を複製するＩＴＲ配列内特定変化の導入によって転写活性をＩＴＲに付加できる。当業界には、特定部位において特定ヌクレオチド配列を効率的に付加、欠失及び／又は変更するための多くの技術が存在する（例えば、Ｄｅｎｇ ａｎｄ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（１９９２）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００：８１－８８参照）。転写活性化されたＩＴＲを生成する他の方法は、ＩＴＲにおける所望の位置に制限部位を導入することを含む。また、多数の転写活性要素を当業界に公知された方法を用いて、転写活性化されたＩＴＲに混入できる。
例示として、転写活性化されたＩＴＲは、ＴＡＴＡボックス、ＧＣボックス、ＣＣＡＡＴボックス、Ｓｐｌ部位、Ｉｎｒ領域、ＣＲＥ（ｃＡＭＰ調節要素）部位、ＡＴＦ－１／ＣＲＥ部位、ＡＲＢｂボックス、ＡＰＢａボックス、ＣＡｒＧボックス、ＣＣＡＣボックス又は当業界に公知の転写に関与する任意の他の要素のような１つ以上の転写活性要素を含むことによって生成され得る。
＜ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤＞
本開示内容のＡＡＶベクターは、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の１つ以上の拮抗剤をコードする核酸を含む。いくつかの具現例において、前記ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はｓｃＦｖである。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶベクターによって発現した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ）は、特定機能的特徴又は特性を特徴とする。例えば、前記抗体は、可溶性ＦＡＭ１９Ａ５及び膜結合ＦＡＭ１９Ａ５を含むヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。可溶性及び／又は膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５への特異的結合の他にも、本明細書に記載の抗体は、次のような機能的特性のいずれか１つ以上を示す：
（ａ）線維症減少、反転及び／又は予防；
（ｂ）過度な細胞外基質（ＥＣＭ）の形成減少；
（ｃ）腫瘍成長又は進行の遅延；
（ｄ）酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｅ）ＥＬＩＳＡによって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（ｆ）反応性神経膠症（ｇｌｉｏｓｉｓ）発病の減少、反転、遅延及び／又は予防；
（ｇ）反応性星状細胞の過剰増殖抑制；
（ｈ）ニューロカン及び神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチンスルフィドプロテオグリカンの発現減少；
（ｉ）神経細胞の核内ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現増加；
（ｊ）神経細胞の生存促進；
（ｋ）神経細胞内ＧＡＰ４３の発現増加；及び
（ｌ）軸索の再成長促進。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、高い親和度、例えば、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）以下、１０－１１Ｍ以下又は１０－１２Ｍ以下、例えば１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－９Ｍ～１０－７Ｍ、例えば１０－１２Ｍ、５×１０－１２Ｍ、１０－１１Ｍ、５×１０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ、５×１０－１０Ｍ、１０－９Ｍ、５×１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、５×１０－８Ｍ、１０－７Ｍ又は５×１０－７Ｍである、可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５又は膜結合ヒトに特異的に結合する。様々な種のヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体の結合能を評価するための標準分析法は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット及びＲＩＡを含め、当業界に公知されている。前記抗体の結合動力学（例えば、結合親和度）は、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥＴＭ分析又はＫＩＮＥＸＡ（登録商標）のような当業界に周知の標準分析法によって評価されてもよい。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、例えばＥＬＩＳＡによって決定した時、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ、又は１０－８Ｍ～１０－７Ｍである、可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭである、可溶性ＦＡＭ１９Ａ５に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＥＬＩＳＡによって決定した時、ＫＤが約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭである、可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、例えばＥＬＩＳＡによって決定した時、ＫＤが１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－８Ｍ～１０－７Ｍである、膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＥＬＩＳＡによって決定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下、例えば０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭである、膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＥＬＩＳＡによって決定した時、ＫＤが約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、又は約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、又は約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭである、膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。
いくつかの具現例において、本明細書に開示の方法に適する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合するために（又は、結合を阻害するために）、本明細書に開示のＣＤＲ又は可変領域を含む抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と交差競合する。
いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）が、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体の結合を阻害し、（ｉ）前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３１のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含んだり；（ｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号９２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９４のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９６のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号９８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号９９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１００のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｘ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含んだり；（ｘ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含んだり；又は（ｘｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、表２に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、表３に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの具現例において、前記基準抗体は、（ａ）それぞれ配列番号３５及び３９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｂ）それぞれ配列番号３６及び４０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｃ）それぞれ配列番号３７及び４１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｄ）それぞれ配列番号３８及び４２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｅ）それぞれ配列番号１５５及び１６６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｆ）それぞれ配列番号１５６及び１６７を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｇ）それぞれ配列番号１５７及び１６８を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｈ）それぞれ配列番号１５８及び１６９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｉ）それぞれ配列番号１５９及び１７０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｊ）それぞれ配列番号１６０及び１７１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｋ）それぞれ配列番号１６１及び１７２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｌ）それぞれ配列番号１６２及び１７３を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｍ）それぞれ配列番号１６３及び１７４を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｎ）それぞれ配列番号１６４及び１７５を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；又は（ｏ）それぞれ配列番号１６５及び１７６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの具現例において、前記基準抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、表４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、表５に示すアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対するこのような基準抗体の結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％阻害する。競合抗体は、同一のエピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープに結合する（例えば、立体障害によって立証される）。標的に結合するために２個の抗体がお互い競合するか否かは、ＲＩＡ及びＥＩＡのような当業界に公知の競合実験を用いて決定できる。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）が、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む本明細書に開示の基準抗体と同じＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２５のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号２８のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３１のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号２０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号２１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号３２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号３４のアミノ酸配列を含んだり；（ｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号９２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号９３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号９４のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号９５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９６のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号９８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号９９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１００のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含んだり；（ｖｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含んだり；（ｉｘ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含んだり；（ｘ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含んだり；（ｘｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含んだり；又は（ｘｖ）前記重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、前記重鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記基準抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、表２に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含み、前記基準抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、表３に示すＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む。
いくつかの具現例において、前記基準抗体は、（ａ）それぞれ配列番号３５及び３９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｂ）それぞれ配列番号３６及び４０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｃ）それぞれ配列番号３７及び４１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｄ）それぞれ配列番号３８及び４２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｅ）それぞれ配列番号１５５及び１６６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｆ）それぞれ配列番号１５６及び１６７を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｇ）それぞれ配列番号１５７及び１６８を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｈ）それぞれ配列番号１５８及び１６９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｉ）それぞれ配列番号１５９及び１７０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｊ）それぞれ配列番号１６０及び１７１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｋ）それぞれ配列番号１６１及び１７２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｌ）それぞれ配列番号１６２及び１７３を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｍ）それぞれ配列番号１６３及び１７４を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；（ｎ）それぞれ配列番号１６４及び１７５を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；又は（ｏ）それぞれ配列番号１６５及び１７６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの具現例において、前記基準抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、表４に示すアミノ酸配列を含み、前記ＶＬは、表５に示すアミノ酸配列を含む。
２個の抗体が同一のエピトープに結合するか否かを決定するための技術は、例えば、エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体の結晶のｘ線分析及び水素／重水素交換質量分光分析（ＨＤＸ－ＭＳ）のようなエピトープマッピング方法、抗原配列内アミノ酸残基の変形による結合損失をたいていエピトープ成分の表示として見なす抗原断片又は抗原の突然変異した変異体に対する抗体の結合をモニタリングする方法、エピトープマッピングのための電算組合せ方法（ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｍｅｔｈｏｄ）を含む。
本明細書に開示の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、例えばヒトＦＡＭ１９Ａ５の断片に対する抗体の結合によって決定された通り、成熟したヒトＦＡＭ１９Ａ５の少なくとも１つのエピトープに結合できる。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（配列番号６又は配列番号２のアミノ酸残基４２～６１）のアミノ酸配列内に位置した断片、例えば、配列番号６の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、アミノ酸残基４６～５１（すなわち、ＤＳＳＱＰＲ）、例えばアミノ酸残基４６、５０及び５２（すなわち、Ｄ－－－Ｐ－Ｒ）、例えば配列番号２のアミノ酸残基４６、４７、４８及び５０（すなわち、ＤＳＳ－Ｐ）に該当する１つ以上のアミノ酸で配列番号６に結合する。いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＣＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬＬＩＮＲＳＧのアミノ酸配列内に位置した断片（配列番号９又は配列番号２のアミノ酸９０～１０９）、例えば、配列番号９の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個アミノ酸を持つエピトープに結合する。特定の具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、１つ以上のアミノ酸残基９９～１０７（すなわち、ＥＧＣＤＬＬＩＮＲ）、例えばアミノ酸残基１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、例えばアミノ酸残基９９、１００、１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＥＧ－ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、例えば配列番号４のアミノ酸残基９９、１００及び１０７（すなわち、ＥＧ－－－－－－Ｒ）で配列番号９に結合する。
いくつかの具現例において、前記少なくとも１つのエピトープは、配列番号６と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。いくつかの具現例において、前記少なくとも１つのエピトープは、配列番号９と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５、６、７、８、９又は１０であるヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープ又は配列番号５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸配列内に位置した断片、例えば、配列番号５、６、７、８、９又は１０の３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を有するエピトープにのみ結合する。
いくつかの具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号６又は天然立体形態（すなわち、未変性）のその断片に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号９又は天然立体形態（すなわち、未変性）のその断片に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、グリコシル化及び非グリコシル化ヒトＦＡＭ１９Ａ５の両方に結合する。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、１つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する。したがって、特定抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（ｉ）配列番号６のエピトープ及び追加エピトープ、又は（ｉｉ）配列番号９のエピトープ及び追加エピトープに結合する。他の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号５、配列番号９のエピトープ及び追加エピトープに結合できる。いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号６のエピトープ、配列番号１０のエピトープ及び追加エピトープに結合する。
いくつかの具現例において、前記１つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、ＱＬＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬＤＲ（配列番号５、エピトープＦ１）、ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲＣ（配列番号６、エピトープＦ２）、ＴＡＲＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡ（配列番号７、エピトープＦ３）、ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号８、エピトープＦ４）、ＣＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬＬＩＮＲＳＧ（配列番号９、エピトープＦ５）又はＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴＶＳ（配列番号１０、エピトープＦ６）又は配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０のアミノ酸配列内に位置した断片又はこれらの任意の組合せから選択される。配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０のアミノ酸配列内に位置した断片は、配列番号５、配列番号６及び配列番号７、配列番号８、配列番号９又は配列番号１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つ断片を含む。いくつかの具現例において、前記１つ以上の追加ＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、配列番号５、６、７、８、９又は１０、又は配列番号５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸配列内に位置した断片、例えば、配列番号５、６、７、８、９又は１０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つ断片、又はこれらの任意の組合せから選択される。いくつかの具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、天然立体形態（すなわち、未変性）の前記１つ以上の追加エピトープのいずれかのエピトープに結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記グリコシル化及び非グリコシル化の１つ以上のＦＡＭ１９Ａ５エピトープの両方に結合する。
いくつかの具現例において、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＥＰ２、ＥＰ４及び／又はＥＰ８として同定された少なくとも１つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ２は、アミノ酸ＤＳＳＱＰ（配列番号６６）を含んだり、前記アミノ酸から本質的になったり、又は前記アミノ酸からなり、ＥＰ４は、アミノ酸ＡＲＣＡＣＲＫ（配列番号６８）を含んだり、前記アミノ酸から本質的になったり、又は前記アミノ酸からなり、ＥＰ８は、アミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（配列番号７２）を含んだり、前記アミノ酸から本質的になったり、又は前記アミノ酸からなる。いくつかの具現例において、前記少なくとも１つのエピトープは、ＥＰ２、ＥＰ４又はＥＰ８と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のみがＥＰ２に結合する。いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ４及びＥＰ８に結合する。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ６、ＥＰ７又はＥＰ８として同定された少なくとも１つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ６は、アミノ酸ＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（配列番号７０）を含み、ＥＰ７は、アミノ酸ＧＣＤＬＬＩＮＲ（配列番号７１）を含み、ＥＰ８は、アミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（配列番号７２）を含む。いくつかの具現例において、前記少なくとも１つのエピトープは、ＥＰ６、ＥＰ７又はＥＰ８と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ６、ＥＰ７又はＥＰ８にのみ結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ６、ＥＰ７及びＥＰ８に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭＴ９Ａ５抗体は、ＥＰ７及びＥＰ８に結合する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＥＰ７に結合する。
いくつかの具現例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２及びこれらの任意の組合せからなる群から選ばれる１つ以上のＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。
いくつかの具現例において、本明細書は、例えば免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズマ共鳴又は力学的排除分析によって測定した時、ＦＡＭ１９Ａファミリーにおける他のタンパク質に比べて２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又はより高い親和度でＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体を提供する。特定の具現例において、本明細書は、例えば免疫分析によって測定した時、ＦＡＭ１９Ａファミリーにおけるさらに他のタンパク質との交差反応性無しでＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体を提供する。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、天然抗体でないか、或いは自然発生抗体ではない。例えば、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、例えば、より多い又はより少ないか、又は互いに異なる類型の翻訳後変形を有することによって、自然発生抗体と異なる翻訳後変形を有する。
＜例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体＞
本明細書に開示のＡＡＶベクターによって発現され得る特定抗体は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５、３－２及び２－１３のＣＤＲ及び／又は可変領域配列を有する抗体、例えばｓｃＦｖ、及びこれらの可変領域又はＣＤＲ配列に少なくとも８０％同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は９９％以上の同一性）を有する抗体である。米国特許番号９，５７９，３９８；国際出願番号ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１４９０を参照する。表２及び表３はそれぞれ、例示的な重鎖及び軽鎖ＣＤＲ配列を提供する。次のような抗体に対するＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号表記体系（上記を参照）を用いて同定した：１－６５、３－２、２－１３、１－２８、Ｐ２－Ｃ１２、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１５Ａ９、Ｐｌ－Ａ０３、Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ０７、Ｐ２－Ｆ１１、ＳＳ０１－１３、ＳＳ０ｌ－１３－ｓ５及びＳ５－２．ＧＫＮＧ。次のような抗体に対するＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号表記体系（上記を参照）を用いて同定した：１－７Ａ－ＩＴ、Ｌｏｗ－ＰＩ、１－３０、１－１７、１－３２、４－１１、６－１０、２－１３Ｄ、２－１３Ｄ－３７、２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１及び２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６。本開示内容の個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列がそれぞれ表４及び５に提供されている。
Figure 2022125088000004
Figure 2022125088000005

Figure 2022125088000006
Figure 2022125088000007
Figure 2022125088000008

Figure 2022125088000009
Figure 2022125088000010
Figure 2022125088000011
Figure 2022125088000012
Figure 2022125088000013
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号：３５－３８、１５５－１６５又は２３２－２４０のアミノ酸配列を含む（表４参照）。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号：３５－３８、１５５－１６５又は２３２－２４０からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲを含む（表４参照）。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３９－４２、１６６－１７６又は２４１－２５０のアミノ酸配列を含む（表５参照）。他の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号：３９－４２、１６６－１７６又は２４１－２５０からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む（表５参照）。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭＴ９Ａ５抗体は、配列番号：３５－３８、１５５－１６５又は２３２－２４０からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲ（表４参照）及び配列番号３９－４２、１６６－１７６又は２４１－２５０からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む（表５参照）。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、重鎖及び軽鎖可変領域を含み、（ｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号３７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４１のアミノ酸配列を含み；（ｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み；（ｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号３５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３９のアミノ酸配列を含み；（ｉｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み；（ｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６６のアミノ酸配列を含み；（ｖｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６７のアミノ酸配列を含み；（ｖｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含み；（ｖｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含み；（ｉｘ）前記重鎖可変領域は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含み；（ｘ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７１のアミノ酸配列を含み；（ｘｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７２のアミノ酸配列を含み；（ｘｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６２のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７３のアミノ酸配列を含み；（ｘｉｉｉ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６３のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７４のアミノ酸配列を含み；（ｘｉｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含み；及び（ｘｖ）前記重鎖可変領域は、配列番号１６５のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記ＶＨは、表４に示すＶＨ配列を含み、前記ＶＬは、表５に示すＶＬ配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５－３８、１５５－１６５又は２３２－２４０に示すアミノ酸配列（表４参照）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３９－４２、１６６－１７６又は２４１－２５０に示すアミノ酸配列（表５参照）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は重鎖及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号３５－３８、１５５－１６５又は２３２－２４０に示すアミノ酸配列（表４参照）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号３９－４２、１６６－１７６又は２４１－２５０に示すアミノ酸配列（表５参照）と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）それぞれ配列番号３５及び３９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｂ）それぞれ配列番号３６及び４０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｃ）それぞれ配列番号３７及び４１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｄ）それぞれ配列番号３８及び４２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｅ）それぞれ配列番号１５５及び１６６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｆ）それぞれ配列番号１５６及び１６７を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｇ）それぞれ配列番号１５７及び１６８を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｈ）それぞれ配列番号１５８及び１６９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｉ）それぞれ配列番号１５９及び１７０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｊ）それぞれ配列番号１６０及び１７１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｋ）それぞれ配列番号１６１及び１７２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｌ）それぞれ配列番号１６２及び１７３を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｍ）それぞれ配列番号１６３及び１７４を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｎ）それぞれ配列番号１６４及び１７５を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｏ）それぞれ配列番号１６５及び１７６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｐ）それぞれ配列番号２３２及び２４１を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｑ）それぞれ配列番号２３３及び２４２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｒ）それぞれ配列番号２３４及び２４２を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｓ）それぞれ配列番号２３５及び２４３を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｔ）それぞれ配列番号２３６及び２４４を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｕ）それぞれ配列番号２３６及び２４５を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｖ）それぞれ配列番号２３６及び２４６を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｗ）それぞれ配列番号２３６及び２４７を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｘ）それぞれ配列番号２３６及び２４８を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｙ）それぞれ配列番号２３６及び２４９を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｚ）それぞれ配列番号２３７及び２５０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ａａ）それぞれ配列番号２３８及び２５０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｂｂ）それぞれ配列番号２３９及び２５０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；又は
（ｃｃ）それぞれ配列番号２４０及び２５０を含む重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む。
特定の具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（ｉ）１－６５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－６５の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ；（ｉｉ）３－２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は３－２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｉｉｉ）２－１３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は２－１３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｉｖ）１－２８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－２８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｖ）Ｐ２－Ｃ１２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ２－Ｃ１２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｖｉ）１３Ｂ４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１３Ｂ４の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｖｉｉ）１３Ｆ７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１３Ｆ７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｖｉｉｉ）１５Ａ９の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１５Ａ９の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｉｘ）Ｐ１－Ａ０３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ１－Ａ０３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘ）Ｐ１－Ａ０８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ１－Ａ０８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｉ）Ｐ１－Ｆ０２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ１－Ｆ０２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｉｉ）Ｐ２－Ａ０１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ２－Ａ０１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｉｉｉ）Ｐ２－Ａ０３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ２－Ａ０３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｉｖ）Ｐ２－Ｆ０７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＰ２－Ｆ０７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｖ）Ｐ２－Ｆ１１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＦ２－Ｆ１１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｖｉ）ＳＳ０１－１３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＳＳ０１－１３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｖｉｉ）ＳＳ０１－１３－ｓ５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＳＳ０１－ｌ３－ｓ５の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｖｉｉｉ）Ｓ５－２．ＧＫＮＧの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＳ５－２．ＧＫＮＧの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｉｘ）１－７Ａ－ＩＴの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－７Ａ－ＩＴの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘ）Ｌｏｗ－ＰＩの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又はＬｏｗ－ＰＩの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｉ）１－３０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－３０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｉｉ）１－１７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－１７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｉｉｉ）１－３２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は１－３２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｉｖ）４－１１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は４－１１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｖ）６－１０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は６－１０の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｖｉ）２－１３Ｄの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は２－１３Ｄの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｖｉｉ）２－１３Ｄ－３７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は２－１３Ｄ－３７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの任意の組合せ；（ｘｘｖｉｉｉ）２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は２－１３Ｄ－３７－１．５Ｗ－４１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３－４１又はこれらの任意の組合せ；又は（ｘｘｉｖ）２－１３Ｄ－３７－３Ｗ－１６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せ及び／又は２－１３Ｄ－３Ｗ－１６の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３又はこれらの組合せを含む。本明細書に開示の個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表２に提供されている。本明細書に開示の個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表３に提供されている。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＨ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、前記ＶＬ ＣＤＲの１個、２個又は３個のいずれをも含む。
いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。
いくつかの具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、前記ＣＤＲの１個、２個、３個、４個、５個又は６個を含む。いくつかの具現例において、本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、表２又は表３に提供されたＣＤＲの１個、２個、３個、４個、５個又は６個を含む。
いくつかの具現例において、本明細書に記載のＶＨドメイン及びＶＬドメインは、可撓性（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）リンカーによって連結され、単鎖Ｆｖ抗体を生産することができる。したがって、いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、表４から選択されたＶＨドメイン及び表５から選択されたＶＬドメインを含み、前記ＶＨドメイン及びＶＬドメインは可撓性リンカーによって接合されている。いくつかの具現例において、前記可撓性リンカーは、配列ＳＧＧＧＧＳＳＧＧＧＧＳ（配列番号２０７）を含む。他の具現例において、前記可撓性リンカーは、配列ＧＱＳＳＲＳＳＧＧＧＧＳＳＧＧＧＧＳ（配列番号３００）を含む。例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖのアミノ酸配列は、下表６に提供されている（ＶＨドメインは下線、ＶＬドメインは太字、リンカーは斜字で表示されている）。
Figure 2022125088000014
Figure 2022125088000015
本明細書に記載のＶＨドメイン又はその１つ以上のＣＤＲはまた、重鎖、例えば全長（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ）重鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。類似に、本明細書に記載のＶＬドメイン又はその１つ以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば全長軽鎖を形成するための定常ドメインに連結され得る。全長重鎖及び全長軽鎖は組み合わせて全長抗体を生成する。
したがって、特定の具現例において、抗体軽鎖及び重鎖、例えば、本明細書に開示の方法に有用な別個の軽鎖及び重鎖を含む抗体が提供される。前記軽鎖と関連して、特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ（ｋａｐｐａ）軽鎖である。他の特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ラムダ（ｌａｍｂｄａ）軽鎖である。さらに他の特定の具現例において、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に開示の方法に有用な抗体は、本明細書に記載された任意のＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に開示の方法に有用な抗体は、本明細書に記載されたＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、前記軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非制限的な例は、当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）を参照されたい。
前記重鎖と関連していくつかの具現例において、本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖であり得る。他の特定の具現例において、記載された抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。いくつかの具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に開示の方法に有用な抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、重鎖はヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。他の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、前記重鎖の定常領域は、本明細書に記載又は当業界に公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域配列の非制限的な例は、当業界に記載されている。例えば、米国特許番号５，６９３，７８０及び上のＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）を参照されたい。
いくつかの具現例において、本明細書に開示の方法に有用な抗体は、本明細書に記載されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲとＶＬ及びＶＬ ＣＤＲを含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子又はヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。他の特定の具現例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載された任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、前記定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子及び任意の亜型の免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２）の定常領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの具現例において、前記定常領域は、亜型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）及び同種異因子型（例えば、Ｇｌｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ及びｎＧ４ｍ）及びこれらの変種を含む天然ヒトＩｇＧの定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（２０１４年１０月２０日オンライン公開）及びＪｅｆｆｅｒｉｓ Ｒ．ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ １：４，１－７（２００９）を参照されたい。いくつかの具現例において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４又はこれらの変種の定常領域のアミノ酸配列を含む。
特定の具現例において、本明細書に開示の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆｃ効果器機能、例えば、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存性細胞性食菌作用（ＡＤＣＰ）を持たない。効果器機能は、Ｆｃ領域によって媒介され、前記Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域に最も近接した残基は、先天性免疫系の効果器細胞上でＣｌｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して大きく重なる結合部位を含むので、抗体の効果器機能を担当する。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体よりも低いレベルのＦｃ効果器機能を有する。抗体の効果器機能は、（１）Ｆｃ領域が欠如している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂのような）を用い；（２）例えば、糖が付着している残基を欠失又は変更することによって、糖を酵素的に除去することによって、グリコシル化阻害剤の存在の下に培養された細胞において抗体を生成することによって、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞、例えば米国特許公開第２０１２０１００１４０号参照）において抗体を発現させることによって、無糖化抗体を生成し；（３）効果器機能が減少したＩｇＧ亜型のＦｃ領域を用い（例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体の領域又はＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体のＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域、例えば米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びＬａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）；及び（４）Ｆｃ機能を減少させたり或いはなくす突然変異を持つＦｃ領域を生成させることを含めて当業界に公知の異なる接近法によって減少又は回避され得る。例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びそこに引用されている米国及びＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）を参照されたい。
これによって、いくつかの具現例において、本明細書に開示の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又は単量体ＶＨ又はＶＬドメインからなるｓｄＡｂである。このような抗体断片は当業界によく知られており、上に記載されている。
いくつかの具現例において、本明細書に開示の方法に有用な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域を含む。いくつかの具現例において、前記定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含み、いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４アイソ型を有する。いくつかの具現例において、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ４アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１アイソ型のＩｇＧ抗体のＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２のヒンジ領域とＩｇＧ４のＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、又はＦｃ効果器機能が減少したり或いは存在しない突然変異を持つＦｃ領域を含む。Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域は、当業界に公知されたものを含む。例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）；Ａｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ １：６，５７２－５７９（２００９）；及び米国特許公開番号２０１２０１００１４０及びそこに引用されている米国特許及び公開公報及びＰＣＴ公開公報を参照されたい。また、Ｆｃ効果器機能が減少したり或いは存在しないＦｃ領域は、当業者であれば容易に作ることができる。
＜核酸分子＞
本明細書に記載の他の側面は、本明細書に開示の抗体又はその抗原結合部分のいずれか一つをコードする１つ以上の核酸分子に関する。このような核酸分子は、本開示内容のＡＡＶベクターにおいて発現し得る。核酸は、他の細胞成分又は他の汚染物質、例えば他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然で分離されたＤＮＡに連結された染色体ＤＮＡ）又はタンパク質からアルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング（ｂａｎｄｉｎｇ）、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動及び当業界によく知られたその他の技術を含む標準技術によって精製される時、“分離”されたり或いは“実質的に純粋になる”。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照する。本明細書に記載の核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡであり、イントロン配列を含有しても含有しなくてもよい。特定の具現例において、前記核酸は、ｃＤＮＡ分子である。
本明細書に記載の特定核酸分子は、本開示内容の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及びＶＬ配列をコードするものである。このような抗体のＶＨ配列をコードする例示的なＤＮＡ配列は、配列番号４３－４６，１７７及び２６５－２７８に示されている（表７）。このような抗体のＶＬ配列をコードする例示的なＤＮＡ配列は、配列番号４７－５０、１７８及び２７９－２９２に示されている（表８）。１－６５、３－２及び２－１３ ｓｃＦｖ抗体をコードする例示的なＤＮＡ配列は、表９に提供されている。
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本明細書に開示の抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ抗体を生成するために、前記ＶＨ－及びＶＬ－コーディングＤＮＡ断片は、可撓性リンカー、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３をコードする他の断片に作動的に連結され、前記ＶＨ及びＶＬ配列は、ＶＬ及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって接合された隣接単鎖タンパク質として発現し得る（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４参照）。その後、このような核酸配列は、本明細書に開示のＡＡＶベクターに挿入でき、これは、後で、例えば実施例に立証されたようにｓｃＦｖ抗体を生産するために用いることができる。
これと違い、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（信号ペプチドがあるか又はない）の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列、例えば、それぞれ、配列番号４３及び４７、配列番号４４及び４８、配列番号４５及び４９、配列番号４６及び５０、配列番号１７７及び１７８は、本開示内容の１つ以上のＡＡＶベクターに挿入され得る。次に、このようなＡＡＶベクターを用いて全長抗体を生産できる。本開示内容のＡＡＶベクターを用いて形質導入された宿主細胞が本明細書に含まれる。
例えば、パッケージング細胞、補助ウイルス又はプラスミド及び／又はバキュロウイルスシステムを使用する方法を含めて本明細書に開示のＡＡＶベクターを生産する方法が、当業界によく知られている（例えば、Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６３，３８２２（１９８９）；Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
７２、２２２４（１９９８）；Ｉｎｏｕｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７２，７０２４（１９９８）；ＷＯ１９９８／０２２６０７；及びＷＯ２００５／０７２３６４参照）。
また、偽型（ｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ）ＡＡＶベクターを生産する方法（例えば、ＷＯ００／２８００４）の他にも、生体内投与時にＡＡＶベクターの免疫原性を減少させるためにＡＡＶベクターの様々な変形又は剤形化が知られている（例えば、ＷＯ０１／２３００１；ＷＯ００／７３３１６；ＷＯ０４／１１２７２７；ＷＯ０５／００５６１０；及びＷＯ９９／０６５６２参照）。いくつかの具現例において、ＡＡＶベクターは共に混合されたり、或いは他の類型のウイルスと混合されてキメラ（例えば、偽型）ＡＡＶウイルスを生産できる様々な血清型のＡＡＶから製造又は由来することができる。
＜ＩＩＩ．薬剤学的組成物＞
本明細書は、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）において所望の程度の純度を持つ本開示内容のＡＡＶ抗体を含む組成物を提供する。許容される担体、賦形剤又は安定化剤は、使用された投与量及び濃度において、受容者に非毒性であり、ホスフェート、シトレート及びその他の有機酸のような緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンのようなアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールのような）；低分子量（約１０個未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンのようなタンパク質；ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン（ｌｙｓｉｎｅ）のようなアミノ酸；単糖類、二糖類及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖；ナトリウムのような塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような非イオン性界面活性剤を含む。
いくつかの具現例において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体に、本明細書に記載のＡＡＶベクター及び場合によって１つ以上の追加予防剤又は治療剤を含む。特定の具現例において、薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体に、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分の有効量及び場合によって１つ以上の追加予防剤又は治療剤を含む。いくつかの具現例において、前記抗体は、前記薬剤学的組成物に含まれた唯一の活性成分である。本明細書に記載の薬剤学的組成物は、ＦＡＭ１９Ａ５活性を減少させ、中枢神経系損傷、疾患又は障害、例えば神経病性疼痛のような症状を治療するのに有用であり得る。
非経口製剤において用いられる薬剤学的に許容される担体は、水性ビークル、非水性ビークル、抗微生物剤、等張化剤、緩衝剤、抗酸化剤、局所痲酔剤、懸濁及び分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤又はキレート化剤及びその他の薬剤学的に許容される物質を含む。水性ビークルの例は、塩化ナトリウム注射液、点滴注射液、等張デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及びラクテート点滴注射液を含む。非水性非経口ビークルは、植物起源の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油及びピーナッツ油を含む。静菌又は静真菌濃度の抗微細物剤がフェノール又はクレゾール、水銀含有物質、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシベンゾ酸エステル、チメロサール、ベンザルコニウムクロリド及びベンゼトニウムクロリドを含む多回容量容器にパッケージされた非経口製剤に添加され得る。等張化剤は、塩化ナトリウム及びデキストロースを含む。緩衝剤は、ホスフェート及びシトレートを含む。抗酸化剤は、硫酸水素ナトリウムを含む。局所痲酔剤は、プロカイン塩酸塩を含む。懸濁及び分散剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標） ８０）を含む。金属イオンの封鎖剤又はキレート化剤は、ＥＤＴＡを含む。薬剤学的担体はまた、水混和性ビークル用エチルアルコール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコール；及びｐＨ調整のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸又は乳酸を含む。
本開示内容の薬剤学的組成物は、対象に対する任意の投与経路のために剤形化できる。投与経路の具体的な例は、鼻内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、皮下又は心室内経路を含む。本明細書では皮下、筋肉内又は静脈内注射を特徴とする非経口投与も考慮される。注射剤は、従来の形態であり、液体溶液や懸濁液、注射前に液体中溶液又は懸濁液に適した固体形態で製造されたり又は乳化液として製造され得る。注射剤、溶液及び乳化液はまた、１つ以上の賦形剤を含有する。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール又はエタノールである。また、必要な場合、投与する薬剤学的組成物はまた、少量の湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増進剤のような非毒性補助物質及び例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレート及びシクロデキストリンのような製剤を含有できる。
抗体の非経口投与用製剤は、注射用即席滅菌液、皮下注射用錠剤を含めて使用直前に溶媒と即席で調合できる凍結乾燥粉末のような滅菌乾燥可溶性製品、注射用即席滅菌懸濁液、使用直前にビークルと即席調合できる滅菌乾燥不溶性製品及び滅菌乳化液を含む。前記溶液は、水性又は非水性であり得る。
静脈内投与の場合、適切な担体は、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）及びグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール及びこれらの混合物のような増粘剤と可溶化剤を含有する溶液を含む。
抗体を含む局所用混合物は、局所及び全身投与に対して記載の通りに製造される。その結果として得た混合物は、溶液、懸濁液、乳化液などであり得、クリーム、ゲル、軟膏、乳化液、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、フォーム、エアゾール、灌注液（ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ又は局所投与に適した任意の他の剤形として剤形化できる。
本明細書に記載のＡＡＶ抗体は、例えば、吸入による局所用エアゾールとして剤形化できる（例えば、炎症性疾患、特に、喘息治療に有用なステロイド伝達用エアゾールを記載している米国特許第４，０４４，１２６，４，４１４，２０９号及び第４，３６４，９２３号を参照）。気道投与用のこれらの剤形は、噴霧器用エアゾール又は溶液形態であるか、吸入剤用微細粉末であり、単独又はラクトースのような非活性担体と組み合わせることができる。このような場合、剤形の粒子は、いくつかの具現例において、５０ミクロン未満の直径、いくつかの具現例では１０ミクロン未満の直径を有する。
本明細書に記載のＡＡＶ抗体は、目におけるような皮膚と粘膜への局所塗布のように局所用又は局部用に、ゲル、クリーム及びローションの形態で、及び目に適用又は槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ）又は脊髄内適用のために製剤化できる。局所投与は、経皮伝達用にそして目や粘膜投与用又は吸入療法用にも考慮される。前記抗体の点鼻液（ｎａｓａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）は、単独で、或いは他の薬剤学的に許容される賦形剤との組合せで投与できる。
いくつかの具現例において、本明細書に記載のＡＡＶ抗体を含む薬剤学的組成物は、溶液、乳化液及びその他の混合物として投与用に再構成できる凍結乾燥粉末である。前記凍結乾燥粉末はまた、固体又はゲルとして再構成及び剤形化できる。前記凍結乾燥粉末は、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合部分、又はその薬剤学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解させてなる。いくつかの具現例において、前記凍結乾燥粉末は、滅菌性である。前記溶媒は、前記粉末又は前記粉末から製造された再構成溶液の安定性又はその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有できる。使用可能な賦形剤は、デキストロース、ソルビトール、フルクトース、トウモロコシシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース又はその他の適切な製剤を含むが、これに限定されるものではない。前記溶媒はまた、シトレート、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムのような緩衝剤、又はいくつかの具現例において略中性ｐＨの他のこのような緩衝剤を含有できる。次いで、前記溶液を滅菌濾過した後、当業者に公知された標準条件で凍結乾燥させ、所望の剤形を提供する。いくつかの具現例において、前記得られた溶液は、凍結乾燥用バイアルに配分され得る。それぞれのバイアルは、前記化合物の単一投与量又は多回の投与量を含有できる。前記凍結乾燥した粉末は、約４℃～室温のような適切な条件で保管され得る。
このような凍結乾燥した粉末を注射用水によって再構成し、非経口投与用に使用するための剤形を提供する。再構成のために、前記凍結乾燥した粉末を、滅菌水又は他の適切な担体に添加する。その正確な量は、選択した化合物によって異なる。このような量は、経験的に決定できる。
本明細書に記載のＶＶＡ抗体と本明細書に提供された他の組成物はまた、治療する対象の特定組織、受容体又は他の身体領域を標的にするよう剤形化できる。このような標的化方法の多数が当業者によく知られている。本明細書において、このような標的化方法はいずれも、本組成物に使用することが考慮される。標的化方法の非制限的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、第６，２７４，５５２号、第６，２７１，３５９号、第６，２５３，８７２号、第６，１３９，８６５号、第６，１３１，５７０号、第６，１２０，７５１号、第６，０７１，４９５号、第６，０６０，０８２号、第６，０４８，７３６号、第６，０３９，９７５号、第６，００４，５３４号、第５，９８５，３０７号、第５，９７２，３６６号、第５，９００，２５２号、第５，８４０，６７４号、第５，７５９，５４２号及び第５，７０９，８７４号を参照する。特定の具現例において、本明細書に記載のＡＡＶベクターは、疾患又は障害、例えば、中枢神経系損傷、退行性脳疾患又は神経病性疼痛を治療するために標的化される。
生体内投与に用いられる組成物は、滅菌性であり得る。これは、例えば滅菌濾過膜を用いた濾過によって容易になり得る。
＜ＩＶ．キット＞
本明細書はまた、本明細書に記載の１つ以上のＡＡＶ抗体を含むキットを提供する。いくつかの具現例において、本明細書は、本明細書に提供された１つ以上のＡＡＶ抗体のような本明細書に記載の薬剤学的組成物の成分のいずれか１つ以上が満たされた１つ以上の容器及び場合によって使用説明書を含む薬剤学的パック又はキットを提供する。いくつかの具現例において、前記キットは、本明細書に記載された薬剤学的組成物及び本明細書に記載のような任意の予防剤又は治療剤を含有する。
＜Ｖ．治療用途及び方法＞
特定の側面において、本明細書は、対象においてＣＮＳに対する傷害又は損傷を軽減させるための方法として、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。
他の側面において、本明細書は、対象において神経膠症の開始又はイニシエーション及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響を阻害、遅延、抑制、制限、減少、反転又は予防するための方法として、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、本明細書は、対象において反応性星状細胞の過度又は異常な増殖及びこれに関連したＣＮＳの有害な影響を阻害、遅延、抑制、制限、減少、反転又は予防するための方法として、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、本明細書は、対象においてコンドロイチンスルフィドプロテオグリカン（ニューロカン、ＮＧ２又は両方のレベルを含む）の発現を減少、阻害又は軽減したり、又はニューロカン、ＮＧ２又は両方の活性を減少又は不活性化するための方法として、前記対象に本明細書に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、本明細書は、対象において好ましくは傷害又は損傷後に神経細胞の成長を刺激、促進、増加又は活性化するための方法として、前記対象に本明細書に記載のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。他の具現例において、本明細書は、必要とする対象においてｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、ｃ－ｆｏｓタンパク質又はｃ－ｆｏｓタンパク質活性のレベルを増加させ、好ましくは、神経細胞の核内ＥＲＫ ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性のレベルを増加させるための方法として、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象においてＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質のレベルを増大又は増加させたり、好ましくは神経細胞においてＧＡＰ４３タンパク質の活性を増加させるための方法として、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象において神経細胞の生存を増進又は促進し／又は軸索の再成長を促進させるための方法として、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、前記対象は、ヒト、好ましくは、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髓損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患から神経細胞が傷害又は損傷したヒトである。
いくつかの側面において、本明細書はまた、必要とする対象において中枢神経系損傷、脳脊髓系損傷、退行性脳障害、退行性脳脊髓又は神経障害又は神経病性疼痛を含む疾患又は障害を治療するための方法として、前記対象に本開示内容のＡＡＶベクターを投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、前記中枢神経系損傷は、外傷性脳傷害、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍又はこれらの組合せである。いくつかの具現例において、前記退行性脳障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又はこれらの組合せである。これによって、、特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象において外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中、脳腫瘍又はこれらの組合せを治療するための方法として、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクター又はその組成物を投与することを含む方法を開示する。いくつかの具現例において、本明細書は、必要とする対象においてハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳを治療するための方法として、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクター又はその組成物を投与することを含む方法を開示する。いくつかの具現例において、前記対象はヒトである。
特定の具現例において、本明細書は、必要とする対象において線維症を治療、減少、反転、予防、緩和、改善又は阻害するための方法として、前記対象に本明細書に開示のＡＡＶベクター又はその組成物を投与することを含む方法を提示する。いくつかの具現例において、前記線維症は、陽性（すなわち、症状を誘発しない）である。他の具現例において、前記線維症は、可逆的である或いは可逆的でない病理学的状態と関連がある。いくつかの具現例において、前記線維症は、肝線維症、肺線維症、腎臓線維症、骨髄線維症、膵臓線維症、皮膚線維症、心臓線維症、動脈線維症、関節線維症、乳房線維症、筋肉線維症、後腹膜線維症、甲状腺線維症、リンパ節線維症、膀胱線維症及び胸膜線維症からなる群から選ばれる。一具現例において、前記線維症は、肝線維症又は肺線維症である。他の具現例において、前記線維症は、肝癌、肺癌、腎臓癌、乳癌及び／又は膵癌のような癌から由来した腫瘍と関連がある。一具現例において、前記方法は、前記線維症、前記線維症関連症状、前記線維症の根本原因又はこれらの組合せを減少、反転、緩和、改善、阻害又は遅延又は予防する。
他の具現例において、本明細書に開示のＡＡＶベクターは、必要とする対象において線維症関連疾患又は障害を治療、減少、反転、予防、改善、制御又は阻害できる。用語“疾患又は障害関連線維症”は、疾患又は障害を伴うか、疾患又は障害によって起こったり或いはこれに起因する線維症のことを指す。前記用語は、上に開示した疾患又は障害に起因したり、これによって起こる線維症又は疾患又は障害を伴う線維症を含む。
他の具現例において、本開示内容のＡＡＶベクターは、必要とする対象において肝癌、肺癌、腎臓癌、乳癌及び／又は膵癌を治療、減少、反転、予防、遅延、改善、制御又は阻害でき、前記方法は、前記対象にＡＡＶベクターを投与することを含む。いくつかの具現例において、前記肝癌、肺癌、腎臓癌、乳癌及び／又は膵癌は、線維症と関連したり又はそれによって起こる。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶベクター又はその組成物の治療有効量を投与する。対象（例えば、ヒト）治療時に、本明細書に開示のＡＡＶベクターの治療有効量は、年齢、性別、疾患の重症度ような因子によって変わる。
いくつかの具現例において、本開示内容のＡＡＶベクター又はその組成物は、静脈内、経口、非経口、経髄、髄腔内、脳室内、筋肉内、肺、腹腔内、硝子体内、皮下、硬膜外、網膜下又は心室内投与される。
いくつかの具現例において、本明細書に開示のＡＡＶベクター又はその組成物は、線維症を治療するための１つ以上の追加製剤（例えば、特発性肺線維症の場合、ピルフェニドン（ＥＳＢＲＩＥＴ（登録商標））又はニンテダニブ（ＯＦＥＶ（登録商標）））と組み合わせて投与され得る。前記１つ以上の追加治療薬物の投与量及び投与は、例えば、それぞれの薬物の製品ラベルに指示されている通り、当業界に知られている。
いくつかの具現例において、本明細書に記載のＡＡＶベクター又はその組成物は、中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳損傷、脳脊髓損傷、脳卒中又は脳腫瘍）、脳脊髓系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髓又は神経障害又は神経病性疼痛）を治療するための１つ以上の追加製剤と組み合わせて投与され得る。例えば、ハンチントン病を治療するための非制限的な例示的な製剤は、テトラベナジン（ＸＥＮＡＺＩＮＥ（登録商標））、例えばハロペリドール（ＨＡＬＤＯＬ（登録商標））、クロルプロマジン、リスペリドン（ＲＩＳＰＥＲＤＡＬ（登録商標））及びクエチアピン（ＳＥＲＯＱＬＩＥＬ（登録商標））のような抗精神病薬物を含む。
パーキンソン病治療用製剤の非制限的な例は、レボドパ（カルビドパがあるかない）、プラミペキソール（ＭＩＲＡＰＥＸ（登録商標））のようなドパミン作用剤、ロピニロール（ＲＥＱＥＴＩＰ（登録商標））及びロチゴチン（ＮＥＥＩＰＲＯ（登録商標））及びアポモルヒネ（ＡＰＯＫＹＮ（登録商標））、セレギリン（ＥＬＤＥＰＲＹＬ（登録商標）及びＺＥＬＡＰＡＲ（登録商標））、ラサギリン（ＡＺＩＬＥＣＴ（登録商標））、エンタカポン（ＣＯＭＴＡＮ（登録商標））、ベンズトロピン（ＣＯＧＥＮＴＩＮ（登録商標））、トリヘキシフェニジル及びアマンタジンを含む。
アルツハイマー病治療用製剤の非制限的な例は、ドネペジル（ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））、ガランタミン（ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））及びリバスチグミン（ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））を含む。
多発性硬化症治療用製剤の非制限的な例は、グラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））、フマル酸ジメチル（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（登録商標））、フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（登録商標））、テリフルノミド（ＡＥＩＢＡＧＩＯ（登録商標））、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））及びミトキサントロンを含む。
ＡＬＳ治療用製剤の非制限的な例は、リルゾール（ＲＩＬＥＴＴＥＫ（登録商標））を含む。
前記１つ以上の追加治療薬物の投与量及び投与は、例えば、それぞれの薬物の製品ラベルに指示されている通り、当業界に知られている。
後述する実施例は、限定されない例示として提供される。
（実施例１：アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター作製）
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体クローン１－６５、２－１３又は３－２の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードするＡＡＶベクターを、次のように作製した。簡単に、３－２ｓｃＦｖをコードするＡＡＶベクターを作製するために、ｐｓｃＡＡＶ－ＭＣＳ発現ベクター（Ｃｅｌｌ ｂｉｏｌａｂｓ，ｃａｔ．＃ＶＰＫ－４３０）を、ＥｃｏＲＩ及びＮｏｔＩを用いて切った。次に、図１に示すように、ＣＭＶプロモーター下、ヒトベータグロビンイントロンと３－２ｓｃＦｖをコードする移植遺伝子を、ｐｓｃＡＡＶ－ＭＣＳベクターに挿入した。遺伝子発現の極大化のために、ヒトベータグロビンイントロンを挿入した。１－６５又は２－１３ ｓｃＦｖをコードするＡＡＶベクターを生成するために、上のＡＡＶベクターを、ＥｃｏＲＶ及びＮｏｔｌを用いて３－２ｓｃＦｖ移植遺伝子を除去した。その後、１－６５又は２－１３ＳｃＦｖをコードする移植遺伝子をＡＡＶベクターに挿入した。３－２、１－６５又は２－１３ＳｃＦｖをコードする移植遺伝子をマウスにおいて最適発現のためにコドン最適化した。全てのＡＡＶベクターは、移植遺伝子の前にマウスＩｇＧカッパ鎖信号ペプチドを含み、細胞から分泌を促進させた。前記ＡＡＶベクターはまた、ｓｃＦｖ移植遺伝子の後にＦＬＡＧ－タグを含み、遺伝子発現検出を助けた。一応、作製されたら、前記ＡＡＶベクターを大腸菌に形質転換し、培養し、ｍａｘｉｐｒｅｐを用いて多量のＡＡＶベクターを得た。Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ロックビル、メリーランド）が１－３０ｓｃＦｖ又はマウスＩＬ－１０又はＧＦＰをコードするＡＡＶベクターを生成して提供した。
次のような組換えＡＡＶを後述する実施例で用いた：（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（Ｓｉｒｉｏｎ、ドイツ）、（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）、（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）；（ｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）；（ｖｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）；（ｖｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）；（ｖｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（Ｓｉｇｎａｇｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国）。
（実施例２：抗ＦＡＭ１９Ａ５ＳｃＦｖ遺伝子発現分析）
上で作製したＡＡＶベクター（ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ及びｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ）を用いて、抗ＦＡＭ１９Ａ５ＳｃＦｖの発現を試験した。簡単に、ＨＥＫ２９３細胞（１．２×１０６）を６０ｍｍ２皿に接種し、２４時間培養した。その後、前記培地をｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地（低血清）に取り替え、ＨＥＫ２９３細胞を異なるＡＡＶベクター（多重感染多重度（ＭＯＩ）を使用）を用いて形質導入した。形質導入して１日、４日及び８日目に上澄液を回収した。遺伝子発現を確認するために、ＡＢＳｂｉｏＴＭ ＤＹＫＤＤＤＫタグＥＬＩＳＡキット（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｒｅａｇｅｎｔ，ｃａｔ．＃ ＳＥ００２－ｆｌａｇ）を用いてｓｃＦｖ遺伝子の後に含まれたＦＬＡＧタグを検出した（図１及び実施例１参照）。回収した上澄液を１～１０倍希釈した後、希釈された上澄液１００μＬをＥＬＩＳＡプレートのウェルに添加し、室温で３５０ｒｐｍで２時間反応させた。その後、前記プレートを洗浄し、検出抗体１００μＬをそれぞれのウェルに添加し、３５０ｒｐｍで室温で１時間反応させた。次いで、前記プレートを再び洗浄し、各ウェルに１００μＬのＴＭＢ溶液を添加し、１０～３０分間放置した。次に、ウェルに１００μＬの停止溶液を添加し、４５０ｎｍで吸光度を測定した。検量線からＦＬＡＧの量を測定し、標準物質の分子量に対するＦＬＡＧ発現比をかけてｓｃＦｖの量を計算した。
図２Ａに示すように、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ｓｃＦｖベクターの場合、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖは形質導入後、早ければ１日目から上澄液から検出できた（１×１０５ＭＯＩ）。形質導入後８日まで概略１００ｎｇ／ｍＬの３－２ｓｃＦｖが上澄液から検出された（１×１０５ＭＯＩにおいて）。ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ｓｃＦｖベクターによって形質導入後８日まで概略７０ｎｇ／ｍＬの３－２ｓｃＦｖが上澄液から検出された（２×１０５ＭＯＩ）。ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ及びｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖによっても類似の結果が観察された。図２Ｃに示すように、形質導入後４日目に上澄液からそれぞれ、概略１２０ｎｇ／ｍＬ及び１１５ｎｇ／ｍＬの１－６５ｓｃＦｖ及び２－１３ ｓｃＦｖが検出された。
前記データは、実施例１において全てのＡＡＶベクターが適切に作製され、これらは細胞に形質導入時に抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ発現を誘導できることを立証している。
（実施例３：Ｕ８７ＭＧ細胞においてＦＡＭ１９Ａ５結合抑制）
前記ＡＡＶ構造体によって生産された抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの結合能を評価するために、Ｕ８７ＭＧ細胞（ヒト原発性膠芽細胞腫細胞株としてヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃタンパク質に結合可能。）を用いて結合阻害分析を行った。簡単に、Ｕ８７ＭＧ細胞をｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－２－３－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ １×１０５）、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ ２×１０５）又はｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ ２×１０５）を用いて形質導入した。次の、形質導入後４日目に、ヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃタンパク質０．１μｇを上澄液２００μＬと混合し、この混合物を４℃で３０分間培養した。陰性対照群は、ＰＢＳ又はｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰベクターを用いて形質導入したＨＥＫ２９３細胞の上澄液を用いた。３０分培養後、前記混合物（ヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ＋抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体を用いて形質導入した細胞の上澄液）１００μＬをＵ８７ＭＧ細胞（２×１０５）に添加し、４℃で１時間反応させた。次に、前記細胞をＰＢＳで洗浄し、１００μＬのヒツジ抗ヒトＩｇＧ４８８抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｃａｔ．＃ Ａ１１０１３）（１：５０希釈）で処理し、４℃で３０分間さらに培養させた。次いで、前記細胞を再び洗浄し、Ｕ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃの結合を、流細胞計数法を用いて分析した。
図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃに示すように、前記Ｕ８７ＭＧ細胞を混合物（ヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ＋抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体を用いて形質注入された細胞の上澄液）で処理した時、前記細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃの結合が、前記細胞を対照群混合物（ヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ構造体を用いて形質注入された細胞の上澄液）で処理する時に比べて減少した。これは、試験した全ての抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体に該当している。ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを用いて形質導入された細胞の上澄液は、該当の対照群（ＡＡＶ－ＧＦＰベクターを用いて形質注入されたり又はＰＢＳ処理した細胞の上澄液）に比べて、Ｕ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃの結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、それぞれ、１９％（図３Ａ）、６８％（図３Ｂ）及び４２％（図３Ｃ）減少させた。
これらの結果は、実施例１に記載されているＡＡＶ構造体によって生産された抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖが、高い親和度でヒトＦＡＭ１９Ａ５に効果的に結合できることを立証する。
（実施例４：Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞においてＦＡＭ１９Ａ５結合の阻害）
実施例３で観察された結合阻害を確認するために、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞を結合阻害分析に用いた。Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞は星状細胞株であり、培養時にＦＡＭ１９Ａ５を周辺培地に分泌できる。前記ＡＡＶ構造体によって生産された抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖが、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に効果的に結合できる場合には、前記抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶを用いて形質導入された細胞の上澄液でＣ８－Ｄ１Ａ細胞培養培地を処理すると、培養培地内ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質濃度の減少が見られるべきである。
簡単に、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞を６ウェルプレート（２×１０５細胞／ウェル）に塗抹し、概略２４時間培養した。抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ含有上澄液は、ＨＥＫ２９３細胞を、（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ１×１０５）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ＝２×１０５）；又は（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（ＭＯＩ＝２×１０５）のいずれか一つを用いて形質注入させて生産した後、形質導入後８日目に上澄液を回収した。前記Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞を活性化するために、ＴＧＦ－β（２０ｎｇ／ｍＬ）を、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖを含有する上澄液と共に細胞に添加した。ＰＢＳ又はｓｃＡＡＶ－９－ＣＭＶ－ＧＦＰを用いて形質導入された細胞の上澄液を陰性対照群として用いた。細胞を２４時間培養させた後、ＥＬＩＳＡ分析を用いて、培養物中ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質濃度を測定した（ＥＬＩＳＡ分析に用いられた方法については実施例１を参照されたい。）。
図４Ａに示すように、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞を、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを用いて形質導入された細胞の上澄液が存在する状態で活性化させた時、該当の対照群（ＰＢＳ）に比べて、培養培地から検出されたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度が、約３８％減少した。ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖとｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖを用いて形質導入された細胞の上澄液は、該当の対照群（ＧＦＰ ＡＡＶベクターを用いて形質注入された細胞の上澄液）に比べて、培養培地内ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度がそれぞれ、約６３％及び１４％減少した。図４Ｂを参照されたい。
上のデータは、前記ＡＡＶベクターによって生産された抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖがヒトＦＡＭ１９Ａ５に効果的に結合できることをさらに立証する。
（実施例５：生体内発現分析）
生体内抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ発現を確認するために、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ構造体を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内投与した（１×１０１１ウイルスゲノム（ｖｇ）／マウス）。次いで、前記マウスを投与して１週及び２週後に犠牲させ、脊髄組織（腰推脊髄）を分析した。遺伝子発現を検出するために、抗ＦＬＡＧ抗体と蛍光顕微鏡を用いた。
図５に示すように、未投与（ｎａｉｖｅ）動物（すなわち、ＡＡＶベクターの未投与）には、投与後１週（上段左側写真）及び２週（下段左側写真）ともに、陽性抗体発現がなかった。これに対し、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ処理動物では、投与後１週目に腹角（ｖｅｎｔｒａｌ ｈｏｒｎ）神経細胞において抗ＦＬＡＧ（すなわち、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ）発現が観察された（上段右側写真）。２週までは背角（ｄｏｒｓａｌ ｈｏｒｎ）領域を含めて遥かに高い発現があった。
このデータは、上の試験管内発現データ（実施例２参照）を裏付けるものであり、抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶベクターの髄腔内投与時に周辺細胞を形質導入して抗ＦＡＭ１９Ａ５
ｓｃＦｖを生産できることを意味している。
（実施例６：ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを用いた慢性神経病性疼痛モデル（ＣＣＩ）において疼痛緩和評価）
前記抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体投与の生体内効果を評価するために、慢性収縮性損傷（ＣＣＩ）のマウスモデルを用いた。簡単に、ＰＢＳ（対照群）又はｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内（脊椎に）投与した。次いで、投与後約１週目に、前記動物から末梢神経損傷が座骨神経結紮によって誘導された。損傷後、様々な時点で、前記動物の機械的異質痛（物理的外部刺激に対する反応）及び熱的痛覚過敏（高温に対する反応）の両方を評価した。機械的異質痛は、Ｖｏｎ
Ｆｒｅｙモノフィラメント（０．１６ｇ）を、傷ついた足に数回加え、動物が疼痛で反応する回数を観察して評価した。熱的痛覚過敏は、放射熱刺激（強度：３０）を傷ついた足に加え、足引っ込め潜時を確認するＨａｒｇｒｅａｖｅｓ試験法を用いて評価した。
図６Ｂに示すように、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２が投与された動物は、対照群動物（ＰＢＳのみ）に比べて、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙモノフィラメントに少なく頻度で反応した。熱的痛覚過敏に対しては、類似の結果が観察された。図６Ｂを参照されたい。これらの結果は、抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体の生体内投与が末梢神経損傷後の神経病性疼痛を減少させることができることを立証する。
（実施例７：ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを用いた慢性神経病性疼痛モデル（ＣＣＩ）において疼痛緩和評価）
実施例６に記載された慢性収縮性損傷（ＣＣＩ）のマウスモデルを用いてｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの生体内効果も試験した。簡単に、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ構造体をＣ５７ＢＬ６マウスに髄腔内投与した。対照群動物は、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ構造体が投与された。次いで、投与して約１週後に末梢神経損傷が誘導された。その後、実施例６に記載されているように、様々な時点で前記動物の機械的異質痛及び熱的痛覚過敏の両方を評価した。
図７Ａ及び図７Ｂに示すように、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖが投与された動物は、末梢神経損傷後にさらに多くの疼痛耐性を有するものとみられた。例えば、対照群動物に比べて、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ投与マウスは、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙモノフィラメントに少ない頻度で反応し（図７Ａ）、高温に対してより高い潜時（ｌａｔｅｎｃｙ ｔｉｍｅ）を有している（図７Ｂ）。
要するに、これらの結果は、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖをＡＡＶベクターを用いて効果的に生体内伝達でき、ＡＡＶベクターによって生産された抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖが完全に機能的である（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合して神経病性疼痛を減少させる）ことを立証する。
（実施例８：ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを用いて慢性神経病性疼痛モデル（ＣＣＩ）において疼痛緩和評価）
前記効果が、使用されたＡＡＶの類型に依存するか否かをさらに評価するために、ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの生体内効果を試験した。簡単に、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内投与によって、２週間隔でｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの２回容量（各容量＝１ｘ１０１１ｖｇ／マウス）を投与した。最後の投与１週後に、末梢神経損傷を誘導し、実施例６に記載されている通りに機械的異質痛及び情熱痛覚過敏の両方を評価した。
実施例６及び７から観察されたように、ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで処理した動物は、対照群に比べて、損傷誘導して約４日後（すなわち、手術して数日後）から機械的異質痛の改善を示した（すなわち、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙモノフィラメント刺激に対して相対的に少ない頻繁で反応する）。図８Ａを参照されたい。このような改善は、損傷誘導後２４日に実験終了時まで維持された。熱的痛覚過敏の場合、損傷誘導後約５日からｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで処理した動物において改善が観察され（すなわち、熱刺激に反応するより長い潜時）、少なくとも損傷誘導後１２日まで持続した。図８Ｂを参照されたい。
これらの結果は、神経病性疼痛治療において３－２抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの効能をさらに裏付けるものであり、使用したＡＡＶベクターの類型に治療実益が依存しないことを立証する。
（実施例９：ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ又はｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖを用いて慢性神経病性疼痛モデル（ＣＣＩ）において疼痛緩和評価）
前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の他のクローンも神経病性疼痛を治療できるか否かを評価するために、実施例６に記載されている慢性収縮性損傷（ＣＣＩ）のマウスモデルを再び用いた。簡単に、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（２週間隔で２回容量、各容量＝１×１０１１ｖｇ／マウス）又はｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（単回容量、１×１０１１ｖｇ／マウス）をＣ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内投与によって投与した。対照群動物は、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰが投与された。最後に投与して略１週間後に末梢神経損傷を誘導し、損傷誘導後、様々な時点で機械的異質痛及び熱的痛覚過敏の両方を評価した（実施例６参照）。
図９Ａ、図９Ｂ、図１０Ａ及び図１０Ｂに示すように、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ又はｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖで処理した動物は、機械的異質痛及び熱的痛覚過敏の両方に対して改善を示した。これらの結果は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の個別のクローンも、神経病性疼痛を治療するために用いることができるということを立証する。
（実施例１０：抗ＦＡＭ１９Ａ５ＳｃＦｖとＩＬ－１０の組合せを用いて慢性神経病性疼痛モデル（ＣＣＩ）において疼痛緩和の評価）
他の治療剤（すなわち、ＩＬ－１０）と組み合わせた抗ＦＡＭ１９Ａ５ＳｃＦｖの効能を決定するために、次の処方（ｒｅｇｉｍｅｎ）のいずれか一つを、髄腔内投与によってＣ５７ＢＬ／６マウスに投与した：（ｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０；及び（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０。上記のそれぞれ異なる治療処方をマウスに１×１０１１μｇ／マウスの投与量で２回（２週間隔）投与した。最後に投与して１週間後に末梢神経損傷を誘導し、様々な時点で機械的異質痛を評価した（実施例６参照）。
前の実施例で観察された通り、ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖを単独で処理した動物は、対照群（すなわち、ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ）に比べて、物理的刺激に対してより耐性があった（すなわち、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙモノフィラメントの印加に相対的に少ない頻繁で反応する）。類似の反応がｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０で単独処理した動物からも観察された（図１１Ａ）。動物をｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ及びｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０の組合せで処理した時、単一治療処方で処理した動物に比べてはるかに改善された反応を示した。ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（図１１Ｂ）及びｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（図１１Ｃ）に対しても類似の結果が観察された。
これらの結果は、神経病性疼痛治療においてＡＡＶベクターを通じて伝達される抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの効能をさらに立証する。これらの結果はまた、この効能がＩＬ－１０のような他の治療剤と組合せしたとき、より増進できることを立証する。
本ＰＣＴ出願は、２０１８年５月８日に提出された米国仮出願番号６２／６６８，６３４の優先権の利益を主張し、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
図１は、実施例に記載されている抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ）を生成するために用いたｐｓｃＡＡＶ構造体のマップを提供している。図１に示すように、前記ｐｓｃＡＡＶ構造体は、次のような核心要素を含む：（ｉ）ＣＭＶプロモーター下のヒトベータグロビン；（ｉｉ）３－２、１－６５又は２－１３ ｓｃＦｖをコードする転移遺伝子（ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）、及び（ｉｉｉ）左右逆転された末端反復（ＩＴＲ）。 図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃは、次のようなＡＡＶ構造体のいずれか一つでＨＥＫ２９３細胞を形質導入させた後、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの発現レベルを示している：（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ；又は（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ。図２Ａで、ＨＥＫ２９３細胞を、２個の異なるＭＯＩ：５×１０４（白色棒）又は１×１０５（黒色棒）のｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた。抗体濃度は、形質導入後１日、４日及び８日に測定した。図２Ｂで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。抗体濃度は、単一時点、すなわち形質導入後８日目に測定した。図２Ｃで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）又はｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ（ドット付き白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；ドット付き黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。 図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃは、次のようなＡＡＶ構造体のいずれか一つでＨＥＫ２９３細胞を形質導入させた後、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの発現レベルを示している：（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ；又は（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ。図２Ａで、ＨＥＫ２９３細胞を、２個の異なるＭＯＩ：５×１０４（白色棒）又は１×１０５（黒色棒）のｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた。抗体濃度は、形質導入後１日、４日及び８日に測定した。図２Ｂで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。抗体濃度は、単一時点、すなわち形質導入後８日目に測定した。図２Ｃで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）又はｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ（ドット付き白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；ドット付き黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。 図２Ａ、図２Ｂ及び図２Ｃは、次のようなＡＡＶ構造体のいずれか一つでＨＥＫ２９３細胞を形質導入させた後、抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖの発現レベルを示している：（ｉ）ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ；又は（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ。図２Ａで、ＨＥＫ２９３細胞を、２個の異なるＭＯＩ：５×１０４（白色棒）又は１×１０５（黒色棒）のｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた。抗体濃度は、形質導入後１日、４日及び８日に測定した。図２Ｂで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。抗体濃度は、単一時点、すなわち形質導入後８日目に測定した。図２Ｃで、ＨＥＫ２９３細胞を、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ（白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；黒色棒＝２×１０５）又はｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ（ドット付き白色棒：ＭＯＩ＝１×１０５；ドット付き黒色棒＝２×１０５）で形質導入させた。 図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液が存在又は不在する状態でＵ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。図３Ａは、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は１－６５ｓｃＦｖを示す。図３Ｂは、ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は２－１３ ｓｃＦｖを示す。図３Ｃは、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＰＢＳ）を示し、数字“２”は３－２ｓｃＦｖを示す。 図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液が存在又は不在する状態でＵ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。図３Ａは、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は１－６５ｓｃＦｖを示す。図３Ｂは、ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は２－１３ ｓｃＦｖを示す。図３Ｃは、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＰＢＳ）を示し、数字“２”は３－２ｓｃＦｖを示す。 図３Ａ、図３Ｂ及び図３Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液が存在又は不在する状態でＵ８７ＭＧ細胞に対するヒトＦＡＭ１９Ａ５－Ｆｃ結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示している。図３Ａは、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は１－６５ｓｃＦｖを示す。図３Ｂは、ｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＧＦＰ）を示し、数字“２”は２－１３ ｓｃＦｖを示す。図３Ｃは、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖに対するデータを示している。数字“１”は対照群（ＰＢＳ）を示し、数字“２”は３－２ｓｃＦｖを示す。 図４Ａ及び図４Ｂは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液で処理した後、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞培養物内ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度を示している。図４Ａは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた細胞の上澄液又はＰＢＳ単独と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質濃度を比較したものである。図４Ｂは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ又は対照群構造体（ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ）と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５濃度を比較したものである。図４Ａ及び図４Ｂで、“未投与（ｎａｉｖｅ）”は、活性化されず、最小ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を培養物に生産するＣ８－Ｄ１Ａ細胞を表す。 図４Ａ及び図４Ｂは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ＡＡＶ構造体で形質導入させた細胞の上澄液で処理した後、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞培養物内ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の濃度を示している。図４Ａは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖで形質導入させた細胞の上澄液又はＰＢＳ単独と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質濃度を比較したものである。図４Ｂは、Ｃ８－Ｄ１Ａ細胞をｓｃＡＡＶ９－２－１３－ＳｃＦｖ、ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－６５－ＳｃＦｖ又は対照群構造体（ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ）と共に培養時に、ＦＡＭ１９Ａ５濃度を比較したものである。図４Ａ及び図４Ｂで、“未投与（ｎａｉｖｅ）”は、活性化されず、最小ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を培養物に生産するＣ８－Ｄ１Ａ細胞を表す。 図５は、ｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖをＣ５７ＢＬ／６マウスに髄腔内投与して１週（上段行）及び２週（下段行）後に脳内抗ＦＡＭ１９Ａ５（３－２）ｓｃＦｖの発現を示している。左列の写真は未投与動物の写真である（非投与）。右列の写真は、ＡＡＶ構造体が投与されたマウスの写真である。上段右列の写真において、矢印は陽性染色を意味する。 図６Ａ及び図６Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図６Ａ）と熱的痛覚過敏（図６Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図６Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図６Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｌａｔｅｎｃｙ、動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図６Ａ及び図６Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図６Ａ）と熱的痛覚過敏（図６Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ８－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図６Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図６Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（ｐａｗ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ ｌａｔｅｎｃｙ、動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図７Ａ及び図７Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図７Ａ）と熱的痛覚過敏（図７Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図７Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図７Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図７Ａ及び図７Ｂは、末梢神経損傷後、機械的異質痛（図７Ａ）と熱的痛覚過敏（図７Ｂ）に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図７Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物がＶｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図７Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図８Ａ及び図８Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図８Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図８Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図８Ａ及び図８Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図８Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図８Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図９Ａ及び図９Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図９Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図９Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図９Ａ及び図９Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図９Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０回の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図９Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図１０Ａ及び図１０Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図１０Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０個の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図１０Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図１０Ａ及び図１０Ｂはそれぞれ、機械的異質痛と熱的痛覚過敏に対するｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖの投与効果を示している。図１０Ａで、機械的異質痛に対する効果は、動物が（１０個の刺激のうち）Ｖｏｎ Ｆｒｅｙマイクロフィラメントを用いた刺激に対して疼痛に反応した回数として表示されている。図１０Ｂで、熱的痛覚過敏に対する効果は、足引っ込め潜時（動物が熱源から離れるまでかかった時間）として表示されている。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体単独又は他の治療剤と組み合わせた効果を比較して提供している。図１１Ａで、動物は、次のいずれか一つが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｂで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｃで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体単独又は他の治療剤と組み合わせた効果を比較して提供している。図１１Ａで、動物は、次のいずれか一つが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｂで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｃで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。 図１１Ａ、図１１Ｂ及び図１１Ｃは、互いに異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ ＡＡＶ構造体単独又は他の治療剤と組み合わせた効果を比較して提供している。図１１Ａで、動物は、次のいずれか一つが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ１－ＣＭＶ－３－２－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｂで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－２－１３－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。図１１Ｃで、動物は、次のいずれかが投与された：（ｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ＧＦＰ（白い丸）；（ｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ（黒い丸）；（ｉｉｉ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（白い四角）；（ｉｖ）ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－１－３０－ＳｃＦｖ＋ｓｃＡＡＶ９－ＣＭＶ－ｍＩＬ－１０（黒い四角）。“＊”は、対照群対比ｐ＜０．０５の統計的有意性を意味する。

Claims (19)

  1. 配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤をコードする核酸を含み、
    前記ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤が、前記ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合する単クローン性抗体またはそれらの抗原結合断片（抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）であって、
    前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、配列番号２のアミノ酸残基４６～５１（すなわち、ＤＳＳＱＰＲ）、アミノ酸残基４６、５０及び５２（すなわち、Ｄ－－－Ｐ－Ｒ）、アミノ酸残基４６、４７、４８及び５０（すなわち、ＤＳＳ－Ｐ）、アミノ酸残基９９～１０７（すなわち、ＥＧＣＤＬＬＩＮＲ）、アミノ酸残基１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、アミノ酸残基９９、１００、１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＥＧ－ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、若しくはアミノ酸残基９９、１００及び１０７（すなわち、ＥＧ－－－－－－Ｒ）に結合する；又は、
    前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ４（ＡＲＣＡＣＲＫ；配列番号６８）及びＥＰ８（ＴＣＴＱＰＧＧＲ；配列番号７２）に結合する、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
  2. イントロン、信号ペプチド及び／又は１つ以上のアデノ関連ウイルス逆転された末端反復（ＩＴＲ）をさらに含む、請求項１に記載のＡＡＶベクター。
  3. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクター。
  4. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体がｓｃＦｖである、請求項３に記載のＡＡＶベクター。
  5. 前記核酸がコドン最適化された、請求項１～４のいずれかに記載のＡＡＶベクター。
  6. 前記核酸が配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６又は配列番号３０１に示すヌクレオチド配列を含む、請求項１～４のいずれかに記載のＡＡＶベクター。
  7. 前記ｓｃＦｖが配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３又は配列番号２５６に示すアミノ酸配列を含む、請求項４に記載のＡＡＶベクター。
  8. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が：
    （ａ）酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；
    （ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定した時、ＫＤが１０ｎＭ以下である膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する特性；又は
    （ｃ）（ａ）及び（ｂ）の両方、から選択された特性を示す、請求項１～４のいずれかに記載のＡＡＶベクター。
  9. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
    （ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１４、１５及び１６を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２６、２７及び２８を含んだり；
    （ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１７、１８及び１９を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２９、３０及び３１を含んだり；
    （ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２１２、２１３及び１６を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２２２、２２５及び２２４を含んだり；又は
    （ｉｖ）前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号１１、１２及び１３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２３、２４及び２５を含む、請求項１～８のいずれかに記載のＡＡＶベクター。
  10. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、配列番号３６を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号４０を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項９に記載のＡＡＶベクター。
  11. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、配列番号２３６を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号２４５を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項９に記載のＡＡＶベクター。
  12. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、配列番号３７を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号４１を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項９に記載のＡＡＶベクター。
  13. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、配列番号３５を含む重鎖可変ドメイン及び配列番号３９を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項９に記載のＡＡＶベクター。
  14. 前記抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する基準抗体の結合を結合阻害分析法によって測定した時、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％阻害する、請求項１～１３のいずれかに記載のＡＡＶベクター。
  15. （ａ）請求項１～１３のいずれか一項のＡＡＶベクターを用いて形質注入させた宿主細胞を培養して細胞培養物を提供する段階、及び（ｂ）前記細胞培養物の上澄液から組換えＡＡＶ粒子を回収する段階を含む、組換えアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）粒子を製造する方法。
  16. 配列類似性１９を持つファミリー、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）タンパク質に対する拮抗剤（“ＦＡＭ１９Ａ５拮抗剤”）を生体内伝達するための請求項１～１３のいずれか一項のアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
  17. 必要とする対象において疾患又は症状を治療するための請求項１～１３のいずれか一項のアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
  18. 前記ＡＡＶベクターが静脈内、経口、非経口、髄腔内、脳室内、肺、筋肉内、皮下、腹腔内、硝子体腔内、硬膜外、網膜下又は心室内投与される用途のための、請求項１７に記載のＡＡＶベクター。
  19. 前記対象がヒトである用途のための、請求項１７に記載のＡＡＶベクター。
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