CN112074605A - 抗fam19a5抗体的腺相关病毒（aav）递送 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了腺相关病毒(AAV)载体和其用途。在某些实施例中，所述AAV载体包括对针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂，例如抗FAM19A5抗体，例如抗FAM19A5 scFv进行编码的核酸。

Description

抗FAM19A5抗体的腺相关病毒(AAV)递送
对以电子方式提交的序列表的引用
随申请一起提交的以ASCII文本文件(名称：3763_010PC01_SeqListing_ST25.txt；大小：261,643字节；以及创建日期：2019年5月8日)以电子方式提交的序列表的内容通过全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本公开涉及重组腺相关病毒(AAV)载体和其用途。更具体地，本公开涉及包括对针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂进行编码的核酸的AAV载体。在某些方面，FAM19A5拮抗剂是靶向FAM19A5蛋白的单链可变片段。
背景技术
FAM19A5是由五种高度同源的小蛋白构成的TAFA蛋白亚家族的成员。Tang T.Y.等人，《基因组学(Genomics)》83(4)：727-34(2004)。这些蛋白质在固定的定位处含有保守的半胱氨酸残基并且与CC-趋化因子家族的成员巨噬细胞炎性蛋白质1-α(MIP-1-α)的相关性较远。像其它TAFA蛋白中的许多TAFA蛋白一样，FAM19A5主要在脑和脊髓的特定区域中表达。据认为它不仅在完整的中枢神经系统的发育、分化和形成中而且还在与中枢神经系统相关的许多疾病的发病机理中都发挥重要作用。因此，已表明体内施用抗FAM19A5抗体改善了与中枢神经系统损害或疾病相关的症状。美国专利第9,579,398号。
治疗性抗体已成功用于治疗各种疾病。Ecker D.M.等人，《MAbs》7：9-14(2015)。然而，尽管治疗性抗体具有功效，但是对抗体存在已知的限制，这限制了治疗性抗体的广泛治疗性用途。例如，许多抗体已被描述为药代动力学和组织可及性不足并且与免疫系统的相互作用受损。Chames P.等人，《英国药理学杂志(Br J Pharmacol)》157(2)：220-223(2009)。此外，抗体常常不得不大量地施用以达到临床功效，从而导致了高昂的制造成本。因此，需要用于将治疗性抗体，例如抗FAM19A5抗体递送到受试者以治疗疾病的既有效又经济的替代性方法。
发明内容
本公开提供了一种腺相关病毒(AAV)载体，其包括对针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂进行编码的核酸。在一些实施例中，所述AAV载体进一步包括内含子、信号肽和/或一个或多个腺相关病毒反向末端重复(ITR)。
在一些实施例中，所述FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体。因此，在一些实施例中，所述AAV载体包括对抗FAM19A5抗体进行编码的核酸。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv(scFv)。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体是scFv。
在一些实施例中，所述AAV载体包括已经密码子优化的核酸。在一些实施例中，所述核酸包括如SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206或SEQ ID NO：301中所示的核苷酸序列。在一些实施例中，所述scFv包括如SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ IDNO：203或SEQ ID NO：256中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体表现出选自以下的特性：(a)如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)所测量的，以10nM或更低的KD与可溶性人FAM19A5结合；(b)如通过ELISA所测量的，以10nM或更低的KD与膜结合的人FAM19A5结合；或者(c)(a)和(b)两者。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体交叉竞争与人FAM19A5表位结合，(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31中所示的氨基酸序列；(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：15中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28中所示的氨基酸序列；(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQID NO：13中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列；或者(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：212的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：213的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：222的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：225的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：224的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体结合于相同的FAM19A5表位，(i)其中所述重链CDR1包括SEQID NO：17中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：18中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31中所示的氨基酸序列；(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：15中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQID NO：28中所示的氨基酸序列；(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：12中所示的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ IDNO：13中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23中所示的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24中所示的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25中所示的氨基酸序列；或者(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：212的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：213的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：222的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：225的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：224的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体与至少一个FAM19A5表位结合，所述至少一个FAM19A5表位是SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。在其它实施例中，所述抗FAM19A5抗体仅与一个FAM19A5表位结合，所述FAM19A5表位是SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体进一步与另外的FAM19A5表位结合。在一些实施例中，所述另外的FAM19A5表位选自由以下组成的组：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10以及其任何组合。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：13中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体的所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：212中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体的所述重链CDR2包括SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：12或SEQID NO：213中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体的所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：222中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体的所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：27、SEQID NO：24或SEQ ID NO：225中所示的氨基酸序列。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体的所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：224中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中(i)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31；(ii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28；(iii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25；或者(iv)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：212、213和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：222、225和224。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：36、SEQID NO：35或SEQ ID NO：236的重链可变结构域和/或包含SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：40、SEQID NO：39或SEQ ID NO：245的轻链可变结构域。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：37的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：41的轻链可变结构域。在其它实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：36的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：40的轻链可变结构域。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：35的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：39的轻链可变结构域。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：236的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：245的轻链可变结构域。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO：37、36、35或236中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：41、40、39或245中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：37、36、35或236中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：41、40、39或245中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述抗FAM19A5抗体将参考抗体与人FAM19A5的结合抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，如通过结合抑制测定所测量的。在某些实施例中，所述抗FAM19A5抗体使包括星形细胞细胞系(例如，C8-D1A)的培养基中的FAM19A5蛋白的浓度降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，如通过ELISA所测量的。
本文还提供了一种产生重组腺相关病毒(AAV)颗粒的方法，所述方法包括(a)培养已经用本文所公开的所述AAV载体转染的宿主细胞以提供细胞培养物以及(b)从所述细胞培养物的上清液中回收所述重组AAV颗粒。
本公开还提供了一种用于向有需要的受试者体内递送针对FAM19A5蛋白的拮抗剂的方法，所述方法包括向所述受试者施用本文所描述的AAV载体。
本公开进一步提供了一种治疗有需要的受试者的疾病或病状的方法，所述包括向所述受试者施用如本文所公开的AAV载体。
本文还公开了一种治疗有需要的受试者的神经性疼痛的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的AAV载体。在一些实施例中，所述神经性疼痛是外周神经性疼痛。
本公开提供了一种增加有需要的受试者的外部刺激的阈值或潜伏期的方法，所述包括向所述受试者施用本文所公开的AAV载体。在一些实施例中，所述外部刺激是机械刺激。在其它实施例中，所述外部刺激是热刺激。
在一些实施例中，本公开的所述AAV载体静脉内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、经肺、肌内、皮下、腹膜内、玻璃体内、硬膜外、视网膜下或心室内施用。在一些实施例中，所述受试者是人。
附图说明
图1提供了pscAAV构建体的图，所述pscAAV构建体用于产生实例中所描述的抗FAM19A5 scFvAAV构建体。如图1所示，pscAAV构建体包括以下关键元件：(i)CMV启动子下的人β珠蛋白；(ii)对3-2、1-65或2-13scFv进行编码的转基因；以及(iii)左和右反向末端重复(ITR)。
图2A、2B和2C示出了用以下AAV构建体之一转导HEK293细胞之后的抗FAM19A5scFv的表达水平：(i)scAAV8-CMV-3-2-ScFv；(ii)scAAV9-CMV-3-2-ScFv；(iii)scAAV9-CMV-1-65-ScFv；或(iv)scAAV9-2-13-ScFv。在图2A中，HEK293细胞用scAAV8-CMV-3-2-ScFv以两个不同的MOI进行转导：5×104(白条)或1×105(黑条)。在转导后第1天、第4天和第8天测量抗体水平。在图2B中，HEK293细胞用scAAV9-CMV-3-2-ScFv(白条：MOI＝1×105；黑条＝2×105)进行转导。在单个时间点即转导后第8天测量抗体水平。在图2C中，HEK293细胞用scAAV9-CMV-1-65-ScFv(白条：MOI＝1×105；黑条＝2×105)或scAAV9-2-13-ScFv(带点的白条：MOI＝1×105；带点的黑条＝2×105)进行转染。
图3A、3B和3C示出了在存在或不存在来自用不同抗FAM19A5 AAV构建体转导的细胞的上清液的情况下人FAM19A5-Fc与U87MG细胞结合的平均荧光强度(MFI)。图3A示出了scAAV9-CMV-1-65-ScFv的数据。数字“1”指示对照(GFP)，并且数字“2”指示1-65scFv。图3B示出了scAAV9-2-13-ScFv的数据。数字“1”指示对照(GFP)，并且数字“2”指示2-13scFv。图3C示出了scAAV9-CMV-3-2-ScFv的数据。数字“1”指示对照(PBS)，并且数字“2”指示3-2scFv。
图4A和4B示出了用来自用不同抗FAM19A5 AAV构建体转导的细胞的上清液处理后C8-D1A细胞培养物中人FAM19A5蛋白的水平。图4A示出了当用来自单独用scAAV8-CMV-3-2-ScFv或PBS转导的细胞的上清液培养C8-D1A细胞时FAM19A5蛋白水平的比较。图4B示出了当用scAAV9-2-13-ScFv、scAAV9-CMV-1-65-ScFv或对照构建体(scAAV9-CMV-GFP)培养C8-D1A细胞时FAM19A5水平的比较。在图4A和4B中，“原初”指示未活化并且因此产生最少的FAM19A5蛋白进入培养物的C8-D1A细胞。
图5示出了鞘内施用scAAV8-CMV-3-2-ScFv到C57BL/6小鼠中后1周(顶行)和2周(底行)时抗FAM19A5(3-2)scFv在脑中的表达。左边的图像来自原初动物(无施用)。右边的图像来自接受AAV构建体的小鼠。右上方图像中的箭头指示阳性染色。
图6A和6B示出了scAAV8-CMV-3-2-ScFv施用对外周神经损伤后的机械性痛觉超敏(图6A)和热痛觉过敏(图6B)的作用。在图6A中，对机械性痛觉超敏的作用示出为动物在疼痛中对冯弗雷(Von Frey)微丝的刺激产生反应的频率。在图6B中，对热痛觉过敏的作用示出为缩爪潜伏期(动物从热源脱身所花费的时间)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
图7A和7B示出了scAAV9-CMV-3-2-ScFv施用对外周神经损伤后的机械性痛觉超敏(图7A)和热痛觉过敏(图7B)的作用。在图7A中，对机械性痛觉超敏的作用示出为动物在疼痛中对冯弗雷微丝的刺激产生反应的频率。在图7B中，对热痛觉过敏的作用示出为缩爪潜伏期(动物从热源脱身所花费的时间)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
图8A和8B示出了scAAV1-CMV-3-2-ScFv施用分别对机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用。在图8A中，对机械性痛觉超敏的作用示出为动物在疼痛中对冯弗雷微丝的刺激(在10种刺激中)产生反应的频率。在图8B中，对热痛觉过敏的作用示出为缩爪潜伏期(动物从热源脱身所花费的时间)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
图9A和9B示出了scAAV9-CMV-2-13-ScFv施用分别对机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用。在图9A中，对机械性痛觉超敏的作用示出为动物在疼痛中对冯弗雷微丝的刺激(在10种刺激中)产生反应的频率。在图9B中，对热痛觉过敏的作用示出为缩爪潜伏期(动物从热源脱身所花费的时间)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
图10A和10B示出了scAAV9-CMV-1-30-ScFv施用分别对机械性痛觉超敏和热痛觉过敏的作用。在图10A中，对机械性痛觉超敏的作用示出为动物在疼痛中对冯弗雷微丝的刺激(在10种刺激中)产生反应的频率。在图10B中，对热痛觉过敏的作用示出为缩爪潜伏期(动物从热源脱身所花费的时间)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
图11A、11B和11C提供了单独的或与另一种治疗剂组合的不同抗FAM19A5 scFvAAV构建体的作用的比较。在图11A中，动物接受以下之一：(i)scAAV1-CMV-GFP(空心圆)；(ii)scAAV1-CMV-3-2-ScFv(实心圆)；(iii)scAAV9-CMV-mIL-10(空心方形)；(iv)scAAV1-CMV-3-2-ScFv+scAAV9-CMV-mIL-10(实心方形)。在图11B中，动物接受以下之一：(i)scAAV9-CMV-GFP(空心圆)；(ii)scAAV9-CMV-2-13-ScFv(实心圆)；(iii)scAAV9-CMV-mIL-10(空心方形)；(iv)scAAV9-CMV-2-13-ScFv+scAAV9-CMV-mIL-10(实心方形)。在图11C中，动物接受以下之一：(i)scAAV9-CMV-GFP(空心圆)；(ii)scAAV9-CMV-1-30-ScFv(实心圆)；(iii)scAAV9-CMV-mIL-10(空心方形)；(iv)scAAV9-CMV-1-30-ScFv+scAAV9-CMV-mIL-10(实心方形)。“*”指示与对照组相比的统计显著性p＜0.05。
具体实施方式
本文公开了组合物，例如腺相关病毒(AAV)载体，所述组合物包括对针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂进行编码的核酸。本文还提供了使用此类组合物作为基因疗法以用于治疗疾病或病症例如神经性疼痛的方法。
为了便于理解本文提供的公开，对多个术语和短语进行了定义。另外的定义贯穿详细描述而阐述。
I.定义
贯穿本公开，术语“一个(a)”或“一种(an)”实体是指一个/种或多个/种所述实体；例如，“抗体”应理解为表示一个/种或多个/种抗体。如此，术语“一个”(或“一种”)、“一个/种或多个种”和“至少一个/种”在本文中可以可互换地使用。
此外，本文中使用“和/或”应当理解为在有或没有另一者的情况下明确公开了两个指定特征或组分中的每一者。因此，本文中如在如“A和/或B”等短语中使用的术语“和/或”旨在包含“A和B”、“A或B”、“A”(单独)以及“B”(单独)。类似地，如在如“A、B和/或C”等短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下方面中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；以及C(单独)。
应理解的是，当在本文中无论何处用语言“包括”来描述方面时，还提供了关于“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的其它类似方面。
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本公开所涉及的领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。例如，以下为技术人员提供了在本公开中使用的许多术语的常用词典：《生物医学与分子生物学简明词典(the ConciseDictionary of Biomedicine and Molecular Biology)》，Juo，Pei-Show，第2版，2002，CRC出版社；《细胞与分子生物学词典(The Dictionary of Cell and Molecular Biology)》，第3版，1999，学术出版社(Academic Press)；以及《生物化学与分子生物学牛津词典(theOxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology)》，修订版，2000，牛津大学出版社(Oxford University Press)。
单位、前缀和符号用它们的国际单位制(SI)接受形式表示。数值范围包含定义所述范围的数字。除非另有指示，否则氨基酸序列以氨基到羧基的朝向从左到右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面的限制，所述方面可以通过整体参考本说明书来获得。因此，通过以全文引用的方式参考本说明书，更完整地定义了就在下文中定义的术语。
本文中使用术语“约”意指大约、大致、左右或在其区域中。当结合数值范围使用术语“约”时，所述术语通过扩展所阐述的数值以上和以下的界限来修改所述范围。通常，术语“约”可以按向上或向下(更高或更低)例如10％的变化来修饰所述值以上和以下的数值。
如本文所使用的，术语“腺相关病毒”或“AAV”是指基因疗法中使用的所有腺相关病毒，包含其衍生物、病毒亚型以及天然存在的和重组的形式。AAV的各种血清型可以用作重组基因转移病毒，以转导许多不同的细胞类型。AAV血清型的非限制性实例包含AAV 1型(AAV-1)、AAV 2型(AAV-2)、AAV 3型(AAV-3)、AAV 4型(AAV-4)、AAV 5型(AAV-5)、AAV 6型(AAV-6)、AAV 7型(AAV-7)、AAV 8型(AAV-8)、AAV 9型(AAV-9)、禽AAV、牛AAV、犬AAV、马AAV、灵长类动物AAV、非灵长类动物AAV以及绵羊AAV。在一些实施例中，AAV是AAV 8型(AAV-8)或AAV 9型(AAV-9)。
所有已知AAV血清型的基因组组织非常类似。AAV的基因组是长度小于约5,000个核苷酸(nt)的线性单链DNA分子。基因组包括三个基因，rep(复制)、cap(衣壳)和aap(组装)。通过使用三个启动子、替代性翻译起始位点和差异剪接，这三个基因产生了至少九个基因产物。本公开的AAV载体可以包含顺式或反式起作用的另外的元件。在特定实施例中，包含载体基因组的AAV载体还具有侧接供体序列的5′或3′端的一个或多个反向末端重复(ITR)序列；驱动供体序列的转录的表达控制元件(例如，启动子或增强子)，如组成型或可调节的控制元件、组织特异性表达控制元件、内含子序列、填充物或填料多核苷酸序列；和/或定位于供体序列的3′的聚腺嘌呤序列。
AAV具有独特的特征使其可作为载体以用于将外来DNA递送到细胞。培养中细胞的AAV感染通常是非致细胞病变的，并且人类和其它动物的天然感染是沉默且无症状的。此外，AAV感染许多不同类型的哺乳动物细胞，从而使得有可能在体内靶向许多不同组织。AAV还具有另外的优势使其成为基因递送特别具有吸引力的病毒系统，包含促进了与其它形式的基因递送相比更温和的免疫应答并且在分裂和静止细胞两者中作为非整合载体来持续表达。而且，AAV承受用于灭活腺病毒的条件(56℃到65℃，持续数小时)，从而使基于rAAV的疫苗的冷保存不那么重要。在一些实施例中，本公开的AAV包括这些特征中的一个或多个特征。
如本文所使用的，术语“AAV载体”是指包括或衍生自腺相关病毒(AAV)的组分并且适合不论是体内还是体外感染多种组织类型(如脑、心脏、肺、骨骼肌、肝脏、肾脏、脾脏或胰腺)中的任何组织类型的哺乳动物细胞(包含人细胞)的任何载体。术语“AAV载体”可以用于指至少包括对所关注的蛋白质进行编码的核酸分子的AAV型病毒颗粒(或病毒粒子)。在一些实施例中，AAV载体是“重组AAV载体”，所述重组AAV载体是指包括不属于AAV来源的多核苷酸序列(即，与AAV异源的多核苷酸，例如，抗FAM19A5抗体)的AAV载体，所述多核苷酸序列通常是用于细胞的基因转化的所关注序列。异源多核苷酸通常侧接有至少一个并且通常侧接有两个AAV反向末端重复序列(ITR)。术语AAV载体涵盖AAV载体颗粒和AAV载体质粒两者。
如本文所使用的，术语“ITR”是指反向末端重复。ITR通常参与细小病毒(例如，AAV)DNA复制以及从原核质粒中拯救或切除(Daya，S.等人，《临床微生物学评论(ClinMicrobiol Rev)》21(4)：583-593(2008))。另外，ITR通常被认为是AAV前病毒整合和将AAVDNA包装到病毒粒子中所需的最小序列。因此，这些元件对于细小病毒基因组的高效繁殖是必不可少的。
如本文所使用的，术语“血清型”是指通过血清学或DNA测序方法可鉴别并且可以通过其抗原特点可区分的AAV亚门。另外，术语“分离物”在用于指AAV时意指从具体来源获得的特定AAV血清型。基于使用术语的上下文，本领域技术人员将容易认识到“分离的AAV”与“AAV分离物”之间的差异，所述分离的AAV是指AAV样品的相对纯度，所述AAV分离物是指特定AAV血清型的通过克隆衍生的制备物。
术语“不含衣壳”或“无衣壳”(或其变体)的载体或核酸分子是指不含衣壳的载体构建体。在一些实施例中，无衣壳的载体或核酸分子不含对例如AAV Rep蛋白进行编码的序列。
在一些实施例中，本文所公开的AAV使用辅助病毒进行复制。如本文所使用的，AAV的“辅助病毒”是指允许AAV(例如野生型AAV)被哺乳动物细胞复制和包装的病毒。AAV的各种这种辅助病毒是本领域已知的，包含腺病毒、疱疹病毒和如牛痘等痘病毒。腺病毒涵盖许多不同的亚组，但是最常用的是C亚组中的腺病毒5型。人、非人哺乳动物和禽类来源的许多腺病毒是已知的并且可从如ATCC等贮藏机构获得。疱疹病毒家族的病毒包含例如单纯疱疹病毒(HSV)和爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)以及巨细胞病毒(CMV)和伪狂犬病病毒(PRV)；这些也可从如ATCC等贮藏机构获得。
在一些实施例中，本公开的AAV具有独特的组织靶向能力(例如，组织向性)。在一些实施例中，与非变体亲本衣壳多肽相比，AAV在一种或多种人干细胞类型中进一步表现出增加的转导或向性。在一些实施例中，人干细胞类型包含但不限于胚胎干细胞、成体组织干细胞(即，体细胞干细胞)、骨髓、祖细胞、诱导性多能干细胞和重编程干细胞。在一些实施例中，成体干细胞可以包含类器官干细胞(即，源自身体内的任何所关注器官或器官系统的干细胞)。在一些实施例中，AAV的靶组织是性腺、隔膜、心脏、胃、肝脏、脾脏、胰腺或肾脏。在一些实施例中，AAV靶向身体的器官，所述器官包含但不限于皮肤、毛发、指甲、感觉受体、汗腺、油腺、骨、肌肉、脑、脊髓、神经、垂体、松果体、下丘脑、甲状腺、甲状旁腺、胸腺、肾上腺、胰腺(胰岛组织)、心脏、血管、淋巴结、淋巴管、胸腺、脾脏、扁桃体、鼻子、咽、喉、气管、支气管、肺、口、咽、食道、胃、小肠、大肠、直肠、肛管、牙齿、唾液腺、舌头、肝脏、胆囊、胰腺、阑尾、肾脏、输尿管、膀胱、尿道、睾丸、输精管道(血管)、尿道、前列腺、阴茎、阴囊、卵巢、子宫、子宫(输卵)管、阴道、外阴和乳腺(乳房)。身体的器官系统包含但不限于外皮系统、骨骼系统、肌肉系统、神经系统、内分泌系统、心血管系统、淋巴系统、呼吸系统、消化系统、泌尿系统和生殖系统。在一些实施例中，转导和/或向性增加了约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或约100％。在一些实施例中，转导和/或向性增加了约5％到约80％、约10％到约70％、约20％到约60％或约30％到约60％。
短语“向性”和“转导”是相互关联的，但存在差异。如本文所使用的，术语“向性”是指AAV载体或病毒粒子感染一种或多种指定细胞类型的能力，但也可以涵盖载体如何用于转导所述一种或多种指定细胞类型中的细胞；即，向性是指AAV载体或病毒粒子优先进入到某一种或多种细胞或组织类型和/或与有利于进入到某些细胞或组织类型的细胞表面优先相互作用、任选地和优选地随后表达(例如，转录和任选地翻译)由AAV载体或病毒粒子在细胞中携带的序列，例如对于重组病毒，表达一个或多个异源核苷酸序列。如本文所使用的，术语“转导”是指AAV载体或病毒粒子感染一种或多种特定细胞类型的能力；即，转导是指AAV载体或病毒粒子进入到细胞中并且将AAV载体或病毒粒子内含有的遗传材料转移到细胞中以从载体基因组获得表达。在一些情况下，但并非所有情况下，转导和向性可以相互关联。
如本文所使用的，术语“感染复数”或“MOI”是指转染或转导宿主细胞期间使用的整合载体：宿主细胞比。例如，如果使用1,000,000个载体转导100,000个宿主细胞，则感染复数为10。此术语的使用不限于涉及转导的事件，而是涵盖通过如脂质转染、显微注射、磷酸钙沉淀和电穿孔等方法将载体引入到宿主中。
术语“神经性疼痛”是指由于影响中枢神经系统(CNS)和/或外周神经系统的任何水平的损伤、损害和/或功能不当而产生的疼痛。术语“神经性疼痛”包含任何和所有类型的神经性疼痛，而与神经性疼痛的原因以及任何和所有症状无关。
神经性疼痛包含中枢神经性疼痛和外周神经性疼痛。如本文所使用的，术语“中枢神经性疼痛”是指由病症、先天性缺陷或中枢神经系统(即，脑或脊髓)损伤造成的疼痛。如本文所使用的，术语“外周神经性疼痛”是指由外周感觉神经的损伤或感染造成的疼痛。
神经性疼痛的症状可以包含持续性/慢性疼痛、自发性疼痛以及痛觉超敏(例如，对通常不疼痛的刺激的疼痛反应)、痛觉过敏(例如，对通常仅引起轻度不适的疼痛刺激的加重反应，如针刺)、感觉过敏(例如，对刺激尤其是皮肤的刺激的过度物理敏感性)或痛觉过度(例如，短暂不适变成延长的剧烈疼痛的情况)。在一些实施例中，症状可以是持久的并且在解决主要病因后(如果存在的话)仍然存在。默克手册(Merck Manual)，《神经性疼痛(Neuropathic Pain)》，可在merckmanuals.com/professional/neurologic-disorders/pain/neuropathic-pain处获得；Campbell J.N.和Meyer R.A.《神经元(Neuron)》52(1)：77-92(2006)。
在一些实施例中，神经性疼痛的类型可以包含：(1)神经痛、(2)传入神经阻滞疼痛综合征、(3)复杂性区域疼痛综合征(CRPS)以及(4)神经病(中枢或外周)。
在一些实施例中，神经性疼痛是神经痛，神经痛是指沿一个或多个具体神经(例如，颅神经)的路线放射的疼痛，通常在神经结构中没有任何可证实的病理变化。神经痛包含但不限于三叉神经痛(TN)、非典型三叉神经痛(ATN)、枕骨神经痛、舌咽神经痛、带状疱疹后神经痛(由带状疱疹或疱疹引起)、外周神经损伤疼痛、坐骨神经痛、下背痛和非典型面部疼痛。化学性刺激、慢性肾脏疾病、糖尿病、炎症、创伤(包含手术)、附近结构(例如，肿瘤)对神经的压迫、某些药物(例如，顺铂、紫杉醇或长春新碱)、卟啉症(血液病症)和感染(例如，带状疱疹(herpes zoster)(带状疱疹(shingles))、HIV/AIDS、莱姆病或梅毒)都可能会导致神经痛。
在一些实施例中，神经性疼痛是传入神经阻滞疼痛综合征，传入神经阻滞疼痛综合征可能会是由来自身体的一部分的感觉输入的丧失(例如，由外周感觉纤维或中枢神经系统的神经的中断引起)造成的。传入神经阻滞疼痛综合征包含但不限于脑或脊髓损伤、中风后疼痛、幻觉痛、截瘫、臂丛神经撕脱伤和腰椎神经根病变。
在一些实施例中，神经性疼痛是“复杂性区域疼痛综合征”(CRPS)，CRPS是最常见地影响手臂或腿部的慢性疼痛病状。在一些实施例中，CRPS在损伤、手术、中风或心脏病发作后出现。在某些实施例中，CRPS是I型CRPS(CRPS-I)(也称为反射性交感神经营养不良综合征)。无确诊的神经损伤的个体通常被分类为具有CRPS-I。在其它实施例中，CRPS是II型CRPS(CRPS-II)(也称为灼痛)，CRPS-II与确诊的神经损伤相关。
在一些实施例中，神经性疼痛是神经病，神经病是指由神经的功能或病理变化(例如，疾病或损害)造成的疼痛。临床上通常可以通过感觉或运动神经元异常来表征神经病。在某些实施例中，神经病是中枢神经病(例如，中枢神经系统的功能或病理变化)。在其它实施例中，神经病是外周神经病(例如，一个或多个外周神经的功能或病理变化，包含运动神经、感觉神经、自主神经或其组合)。在一些实施例中，外周神经病涉及对单个神经或神经群的功能或病理改变(即，单神经病)。在一些实施例中，外周神经病涉及影响多条神经(局部或全身)的功能或病理变化(即，多发性神经病)。在一些实施例中，外周神经病对身体两侧的影响大致相同(即，对称性多发性神经病)。在一些实施例中，外周神经病影响身体的不同区域(例如，多发性单神经炎、多灶性单神经病或多发性单神经病)。
如本文所使用的，“单神经病”是涉及由对单个外周神经或神经群的损害或破坏引起的对区域的移动或感觉的丧失的外周神经病。单神经病最常见是由对局部区域的损伤或创伤引起的，这例如导致对单个神经的压迫(pressure/compression)延长。然而，某些全身性病症(例如，多发性单神经炎)也可能会引起单神经病。在一些实施例中，对局部区域的损伤或创伤引起神经或神经细胞的一部分(轴突)的髓鞘(覆盖物)的破坏，这可能会减慢或阻止脉冲通过神经传导。在一些实施例中，单神经病可以影响身体的任何部位。单神经性疼痛的实例包含但不限于坐骨神经功能障碍、腓总神经功能障碍、桡神经功能障碍、尺神经功能障碍、颅单神经病VI、颅单神经病VII、颅单神经病III(压迫型)、颅单神经病III(糖尿病型)、腋神经功能障碍、腕管综合征、股神经功能障碍、胫神经功能障碍、贝尔氏麻痹、胸廓出口综合征、腕管综合征和第六(外展)神经麻痹。Finnerup N.B.等人，《疼痛(Pain)》157(8)：1599-1606(2016)；美国国立神经障碍与中风研究所(National InstituteofNeurological Disorders and Stroke)，外周神经病资料页，可在ninds.nih.gov/disorders/peripheralneuropathy/detail_peripheralneuropathy.htm处获得。在一些实施例中，单神经性疼痛是坐骨神经痛。
如本文所使用的，“多发性神经病”是涉及由对多个外周神经的损害或破坏引起的对区域的移动或感觉的丧失的外周神经病。多发性神经性疼痛包含但不限于脊髓灰质炎后综合征、乳房切除术后综合征、糖尿病性神经病、酒精性神经病、淀粉样蛋白、毒素、AIDS、甲状腺功能减退、尿毒症、维生素缺乏症、化学疗法诱发的疼痛、2′，3′-双脱氧胞苷(ddC)治疗、格林-巴利综合征或法布里氏病。Finnerup N.B.等人，《疼痛》157(8)：1599-1606(2016)；美国国立神经疾病与中风研究所，外周神经病资料页，可在ninds.nih.gov/disorders/peripheralneuropathy/detail_peripheralneuropathy.htm处获得。在一些实施例中，多发性神经病是糖尿病性外周神经病。在某些实施例中，糖尿病性外周神经病是由糖尿病受试者的血液中的高血糖水平(血糖)和/或高脂肪(例如，甘油三酯)水平引起的，这引起对受试者的外周神经的损害。
在一些实施例中，可以基于神经细胞的受损或受影响的部分(例如，轴突、髓鞘或细胞体)对本文公开的外周神经病进行分类。在一些实施例中，外周神经病是由轴突的代谢或毒性紊乱造成的远端轴突病。在一些实施例中，代谢紊乱包括糖尿病、肾衰竭、如营养不良等缺陷综合征和酗酒。在一些实施例中，代谢紊乱是糖尿病，并且远端轴突病是糖尿病性神经病。
在一些实施例中，外周神经病是髓鞘质病，髓鞘质病是由对髓磷脂或有髓鞘施万细胞的初次攻击造成的，从而引起脉冲传导的急性衰竭。尽管其它原因包含慢性炎症性脱髓鞘性综合征(CIDP)、遗传代谢障碍(例如，脑白质营养不良)或毒素，但最常见的原因是急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(AIDP；又名格林-巴利综合征)。
在一些实施例中，外周神经病是由于外周神经系统(PNS)神经元受到破坏所致的神经元病。在一些实施例中，神经元病是由运动神经元疾病、感觉神经元病(例如，带状疱疹)、毒素或自主功能障碍引起的。在一些实施例中，神经元病是由如化疗剂长春新碱等神经毒素引起的。
神经性疼痛可以由多种病因(例如，物理损伤(例如，创伤或重复性应激)、疾病或病症、暴露于毒性剂或其组合)造成或与之相关。在一些实施例中，神经性疼痛是由以下造成的或与之相关：创伤性损伤或损害，例如神经压迫损伤(例如，神经挤压、神经伸展、神经束缚或不完全的神经横切)；脊髓损伤(例如，脊髓半切)；外周神经(例如，运动神经、感觉神经或自主神经或其组合)的损伤或损害、截肢；挫伤；炎症(例如，脊髓的炎症)；或者外科手术。在一些实施例中，神经性疼痛是由重复性应激造成的或与之相关，所述重复性应激包含例如需要移动任何一组关节延长的时间段的重复、笨拙和/或有力的活动。不受任何理论的束缚，所造成的刺激可能会引起韧带、肌腱和肌肉发炎和肿胀，从而限制了神经穿过的狭窄通道(例如，尺神经病和腕管综合征，尺神经病和腕管综合征是肘部或腕部处的神经受困或受压所致的神经病)。在一些实施例中，神经性疼痛是由包含例如以下的疾病或病症造成的或与之相关：缺血事件(例如，中风或心脏病发作)、多发性硬化症、代谢和/或内分泌疾病或病症(例如，糖尿病、代谢性疾病和肢端肥大症，肢端肥大症是由生长激素过量产生引起的病状并且由骨骼的各部分(包含关节)的异常增大表征，从而导致神经卡压和疼痛)、引起外周神经供氧减少从而导致神经组织损害的小血管疾病(例如，血管炎，即血管发炎)、自身免疫性疾病(例如，舍格伦综合征、狼疮、类风湿关节炎和急性炎症性脱髓鞘性神经病(也称为格林-巴利综合征))、肾脏病症、癌症或肿瘤(例如，赘生性肿瘤、神经瘤、副肿瘤综合征以及来自癌症治疗的化疗剂和放射的毒性)、感染(例如，如水痘带状疱疹(带状疱疹)、爱泼斯坦-巴尔病毒、西尼罗河病毒、巨细胞病毒和单纯疱疹病毒等病毒、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)或者如莱姆病、白喉和麻风病等细菌的感染)、炎症性病症、外周神经病症(例如，神经瘤)、遗传性病症(无论是遗传性病症还是新出现的遗传性病症(例如，腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disorder)包含小腿和双脚的肌肉的极度虚弱和消瘦、步态异常、腱反射丧失和下肢麻木))、单神经病或多发性神经病。在一些实施例中，神经性疼痛是由感染原(例如，蜱传播的感染、水痘带状疱疹、爱泼斯坦-巴尔病毒、西尼罗河病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、AIDS)造成的或与之相关。在一些实施例中，神经性疼痛是由暴露于毒性剂造成的或与之相关，所述毒性剂包含例如药物、酒精、重金属(例如，铅、砷、汞)、工业剂(例如，溶剂、来自胶的烟雾)或一氧化二氮。
术语“与疾病或病症相关的神经性疼痛”是指伴随疾病或病症(例如，本文公开的那些疾病或病症)或由疾病或病症(例如，本文所公开的那些疾病或病症)引起或造成的神经性疼痛。
如本文所使用的，术语“治疗(treat、treating和treatment)”是指对受试者进行的任何类型的干预或过程或将活性剂施用于受试者，目的是逆转、缓和、改善、抑制或减慢或预防与疾病相关的症状、并发症、病状或生化标记的进展、发展、严重程度或复发。治疗可以是关于患有疾病的受试者或未患有疾病的受试者(例如，用于预防)。
如本文所使用的，“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任何方法和递送系统将治疗剂或包括治疗剂的组合物物理引入到受试者。本文所描述的抗体的优选施用途径包含静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊髓、玻璃体内或其它肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所使用的，短语“肠胃外施用”意指通常通过注射而不是肠内和局部施用的施用模式并且包含但不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、经气管、皮下、表皮下、玻璃体内、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注以及体内电穿孔。可替代地，本文所描述的抗体可以通过非肠胃外途径施用，如局部、表皮或粘膜施用途径，例如经鼻、经口、经阴道、经直肠、舌下或局部。也可以例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时段内执行施用。
如本文所使用的，术语“治疗有效量”是指有效“治疗”受试者的疾病或病症或降低疾病或病症(例如，神经性疼痛)的风险、潜力、可能性或发生的单独的或与另一种治疗剂组合的药物的量。“治疗有效量”包含为患有或处于患有疾病或病症(例如，本文所公开的神经性疼痛)的风险的受试者提供一定改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是减少疾病的风险、潜在性、可能性或发生或提供病症或某种缓和、减轻和/或减少至少一种指标(例如，神经性疼痛)和/或在疾病或病症的至少一种临床症状方面有所降低的量。
如本文所使用的，术语“受试者”包含任何人或非人动物。术语“非人动物”包含所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，如非人灵长类动物、绵羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
术语“具有序列相似性的家族19成员A5”或“FAM19A5”是指属于五个高度同源蛋白的TAFA家族(也称为FAM19家族)并且主要在脑和脊髓中表达的蛋白。FAM19A5也称为TAFA5或趋化因子样蛋白TAFA-5。
在人类中，对FAM19A5进行编码的基因定位于22号染色体上。存在多种人FAM19A5(UniProt：Q7Z5A7)同工型据信是通过替代性剪接产生的：同工型1(UniProt：Q7Z5A7-1)，其由132个氨基酸组成；同工型2(UniProt：Q7Z5A7-2)，其由125个氨基酸组成；以及同工型3(UniProt：Q7Z5A7-3)，其由53个氨基酸组成。据信人FAM19A5蛋白以膜结合和可溶性(分泌性)两种形式存在。据信同工型1是具有一个跨膜区域的膜。在Tang T.Y.等人，《基因组学》83(4)：727-34(2004)中报道为分泌性蛋白(可溶性)的同工型2在氨基酸定位1-25处含有信号肽。据信同工型1是膜蛋白。以下是三种已知的人FAM19A5同工型的氨基酸序列。
(I)同工型1(UniProt：Q7Z5A7-1，跨膜蛋白)：此同工型已被选为规范序列。
Figure BDA0002760798540000161
(II)同工型2(UniProt：Q7Z5A7-2，可溶性蛋白)：
Figure BDA0002760798540000162
(III)同工型3(UniProt：Q7Z5A7-3)：
Figure BDA0002760798540000171
术语“FAM19A5”包含由细胞天然表达的FAM19A5的任何变体或同工型。因此，本文所描述的抗体可以与相同物种中的不同同工型(例如，人FAM19A5的不同同工型)交叉反应或与来自除人类以外的物种的FAM19A5(例如，小鼠FAM19A5)交叉反应。可替代地，抗体可以对人FAM19A5具有特异性并且不能表现出与其它物种的任何交叉反应性。FAM19A5或其任何变体和同工型可以从天然表达它们的细胞或组织中分离或重组产生。对人FAM19A5进行编码的多核苷酸具有GenBank登录号BC039396和以下序列：
表1A.人FAM19A5的多核苷酸序列
Figure BDA0002760798540000172
术语“针对FAM19A5蛋白的拮抗剂”是指抑制FAM19A5蛋白的表达的所有拮抗剂。此类拮抗剂可以是肽、核酸或化合物。更具体地，拮抗剂可以是靶向FAM19A5的反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、PNA(肽核酸)或包含其的载体。在一些实施例中，拮抗剂可以是与FAM19A5蛋白特异性地结合的抗体或其抗原结合部分。
术语“抗体(antibody和antibodies)”是本领域的术语并且可以在本文中可互换地使用并且是指具有特异性地结合抗原的抗原结合位点的分子。所述术语如本文所使用用于包含完整抗体以及其任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或单链。在一些实施例中，“抗体”是指包括通过二硫键相互连接的至少两个重(H)链和两个轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合部分。在其它实施例中，“抗体”是指包括单个可变结构域例如VHH结构域的单链抗体。每个重链包含重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定区。在某些天然存在的抗体中，重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。在某些天然存在的抗体中，每个轻链包含轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL。
VH区和VL区可以进一步细分为被称作互补决定区(CDR)的高变区，所述高变区散布有更保守的被称作框架区(FR)的区。每个VH和VL由按照以下顺序从氨基端到羧基端布置的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包含免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
术语“Kabat编号”和类似术语在本领域中是公认的并且是指对抗体或其抗原结合部分的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，可以根据Kabat编号系统确定抗体的CDR(参见例如，Kabat EA和Wu TT(1971)《纽约科学院年报(AnnNYAcadSci)》190：382-391和Kabat EA等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》，第五版，美国卫生和人类服务部，NIH出版号91-3242)。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸定位31到35处，所述氨基酸定位在35之后任选地可以包含一个或两个另外的氨基酸(在Kabat编号方案中称为35A和35B)(CDR1)、氨基酸定位50到65(CDR2)以及氨基酸定位95到102(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸定位24到34(CDR1)、氨基酸定位50到56(CDR2)以及氨基酸定位89到97(CDR3)处。在具体实施例中，根据Kabat编号方案已经确定了本文所描述的抗体的CDR。
短语“如Kabat中的氨基酸定位编号”、“Kabat定位”以及其语法变体是指用于以下中的抗体的汇编中的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统：Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》，第5版，公共卫生署，国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达(1991)。使用此编号系统，实际线性氨基酸序列可以含有较少或另外的氨基酸，所述氨基酸对应于可变结构域的FW或CDR的缩短或到其中的插入。例如，重链可变结构域可以包含在H2的残基52之后的单个氨基酸插入物(根据Kabat的残基52a)和在重链FW残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。参见表1B。
表1B
Figure BDA0002760798540000191
通过将给定抗体的序列的同源区域与“标准”Kabat编号序列比对，可以确定抗体的残基的Kabat编号。Chothia反而是指结构环的位置(Chothia和Lesk，《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196：901-917(1987))。使用Kabat编号约定进行编号时，Chothia CDR-H1环的末尾根据环的长度在H32与H34之间变化(这是因为Kabat编号方案将插入放在H35A和H35B处；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果只存在35A，则环在33处结束；如果同时存在35A和35B，则环在34处结束)。AbM高变区表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷并且通过牛津分子公司(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件使用。
MGT(ImMunoGeneTics)还提供了用于免疫球蛋白可变区(包含CDR)的编号系统。参见例如，Lefranc，M.P.等人，《发展与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》27：55-77(2003)，所述文献通过引用的方式并入本文。IMGT编号系统基于多于5,000个序列的比对、结构数据和高变环的表征并且允许轻松比较所有物种的可变区和CDR区。根据IMGT编号方案，VH-CDR1位于定位26到35处，VH-CDR2位于定位51到57处，VH-CDR3位于定位93到102处，VL-CDR1位于定位27到32处，VL-CDR2位于定位50到52处，并且VL-CDR3位于定位第89到97处。
对于本公开中讨论的所有重链恒定区氨基酸定位，编号是根据在以下中首先描述的EU索引进行的：Edelman等人，1969，《美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》63(1)：78-85，所述文献描述了首先进行人lgG1测序的骨髓瘤蛋白EU的氨基酸序列。Edelman等人的EU索引还在Kabat等人，1991，《具有免疫学意义的蛋白质序列》，第5版，美国公共卫生署，国立卫生研究院，贝塞斯达中进行了阐述。因此，短语“如Kabat中所示的EU索引”或“Kabat的EU索引”和“根据如Kabat中所示的EU索引的定位...”以及其语法变体是指基于如Kabat 1991中所示的Edelman等人的人lgG1 EU抗体的残基编号系统。
用于可变结构域(重链和轻链两者)和轻链恒定区氨基酸序列的编号系统是在Kabat 1991中阐述的编号系统。
抗体可以属于免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如，IgD、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亚类(例如，人的IgG1、IgG2、IgG3和IgG4以及小鼠的IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)。免疫球蛋白例如IgG1以几种同种异型存在，所述同种异型在最多几个氨基酸上彼此不同。本文所公开的抗体可以来自通常已知的同种型、类别、亚类或同种异型中的任何同种型、类别、亚类或同种异型。在某些实施例中，本文所描述的抗体属于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类或其任何杂合体。在某些实施例中，抗体属于IgG2、IgG4或IgG2/IgG4亚类。
通过实例的方式，“抗体”包含天然存在的抗体和非天然存在的抗体；单克隆抗体和多克隆抗体；嵌合抗体和人源化抗体；人抗体和非人抗体；全合成抗体；单链抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(包含双特异性抗体)；包括两个重链分子和两个轻链分子的四聚体抗体；抗体轻链单体；抗体重链单体；抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体；抗体轻链-抗体重链对；胞内抗体；异源缀合抗体；单价抗体；单链抗体；骆驼化抗体；亲和抗体；抗独特型(抗Id)抗体(包含例如抗抗Id抗体)；以及单结构域抗体(sdAb)，所述sdAb包含由完全能够抗原结合单个单体可变抗体结构域(例如，VH结构域或VL结构域)组成的结合分子。Harmen M.M.和Haard H.J.《应用微生物学与生物技术(Appl Microbiol Biotechnol)》77(1)：13-22(2007)。
如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”和“抗原结合片段”是可互换的并且是指抗体的保留与抗原(例如，人FAM19A5)特异性地结合的能力的一个或多个片段。此类“片段”的长度介于例如约8个与约1500个氨基酸之间，适合地长度介于约8个与约745个氨基酸之间，适合地长度为约8个到约300个，例如约8个到约200个氨基酸，或长度为约10个到约50个或100个氨基酸。已经表明抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段执行。术语抗体例如本文所描述的抗FAM19A5抗体的“抗原结合部分”内所涵盖的结合片段的实例包含(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包括在铰链区处由二硫桥连接的两个Fab片段的双价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段以及二硫键连接的Fv(sdFv)；(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人，(1989)《自然(Nature)》341：544-546)；以及(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可以任选通过合成接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是这两个结构域可以使用重组方法通过使这两个结构域能够成为单个蛋白链的合成接头来连接，在所述单个蛋白链中，VL区和VH区配对以形成单价分子(被称为单链Fv(scFv))；参见例如，Bird等人(1988)《科学(Science)》242：423-426；以及Huston等人(1988)《美国国家科学院院刊》85：5879-5883)。此类单链抗体还旨在涵盖于术语抗体的“抗原结合部分”内。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且以与完整抗体相同的方式筛选所述片段的实用性。抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整免疫球蛋白的酶促或化学切割产生。
如本文所使用的，术语“可变区”和“可变结构域”可互换地使用并且在本领域中是常见的。可变区通常是指抗体的一部分，一般指轻链或重链的一部分，通常在成熟重链中为氨基端约110到120个氨基酸，而在成熟轻链中为约90到115个氨基酸，其在抗体之间在序列上差异很大并且用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在被称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中保守性更高的区域被称为框架区(FR)。
不希望受任何特定机制或理论的束缚的情况下，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在某些实施例中，可变区是人可变区。在某些实施例中，可变区包括啮齿动物或鼠科动物CDR以及人框架区(FR)。在特定实施例中，可变区是灵长类动物(例如，非人灵长类动物)可变区。在某些实施例中，可变区包括啮齿动物或鼠科动物CDR以及灵长类动物(例如，非人灵长类动物)框架区(FR)。
如本文所使用的，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“重链”(HC)在参考抗体使用时可以指任何不同的类型，例如α(α)、δ(δ)、ε(ε)、γ(γ)和μ(μ)，这些类型分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包含IgG的亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
如本文所使用的，基于恒定结构域的氨基酸序列，术语“轻链”(LC)在参考抗体使用时可以指任何不同的类型，例如κ(κ)或λ(λ)。轻链氨基酸序列是本领域熟知的。在具体实施例中，轻链是人轻链。
术语“VL”和“VL结构域”可互换地使用，以指代抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH结构域”可互换地使用，以指代抗体的重链可变区。
如本文所使用的，术语“恒定区”和“恒定结构域”可互换并且在本领域中具有其常见含义。恒定区是抗体部分，例如，轻链和/或重链的羧基端部分，所述抗体部分不直接参与抗体与抗原的结合，但是可以表现出各种效应子功能，如与Fc受体的相互作用。相对于免疫球蛋白可变结构域，免疫球蛋白分子的恒定区通常具有更保守的氨基酸序列。
“Fc区”(片段可结晶区)或“Fc结构域”或“Fc”是指介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合(包含与定位于免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)上的Fc受体结合或与经典补体系统的第一组分(C1q)结合)的抗体的重链的C端区。因此，Fc区包括抗体的除第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CH1或CL)之外的恒定区。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包括源自抗体的两条重链的第二(CH2)和第三(CH3)恒定结构域的两个相同的蛋白质片段；IgM和IgE Fc区在每个多肽链中包括三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG，Fc区包括免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及Cγ1与Cγ2之间的铰链。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能会发生变化，但通常将人IgG重链Fc区定义为从定位C226或P230处的氨基酸残基(或这两个氨基酸之间的氨基酸)伸展到重链的羧基端，其中编号是根据如Kabat中的EU索引进行的。人IgG Fc区的CH2结构域从约氨基酸231延伸到约氨基酸340，而CH3结构域定位于Fc区中的Cm结构域的C端侧，即，其从IgG的约氨基酸341延伸约氨基酸447。如本文所使用的，Fc区可以是天然序列Fc(包含任何同种异型变体)或变体Fc(例如，非天然存在的Fc)。Fc也可以单独地或在包括Fc的蛋白多肽(如“包括Fc区的结合蛋白”，也称为“Fc融合蛋白”(例如，抗体或免疫粘附素))的上下文中指此区域。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包括与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包含天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。天然序列Fc包含Fc的各种同种异型(参见例如，Jefferis等人(2009)《mAbs》1：1；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(FrontImmunol.)》5：520(2014年10月20日在线发布)。
“Fc受体”或“FcR”是与免疫球蛋白的Fc区结合的受体。与IgG抗体结合的FcR包括FcγR家族的受体，包含这些受体的等位基因变体和可替代地剪接的形式。FcγR家族由三个活化(小鼠的FcγRI、FcγRIII和FcγRIV；人的FcγRIA、FcγRIIA和FcγRIIIA)和一个抑制性受体(FcγRIIB)组成。人IgG1与大多数人Fc受体结合并且引发最强的Fc效应子功能。就其结合的活化Fc受体的类型而言，人IgG1被认为等同于鼠科动物IgG2a。相反，人IgG4引发最少的Fc效应子功能。Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。
恒定区可以例如通过重组技术来操纵，以消除一种或多种效应子功能。“效应子功能”是指抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用或由此产生的生化事件。示例性“效应子功能”包含C1q结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、FcγR介导的效应子功能，如ADCC和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)以及细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调。此类效应子功能通常需要组合Fc区与结合结构域(例如，抗体可变结构域)。因此，术语“不具有Fc功能的恒定区”包含具有减少的或不具有由Fc区介导的一种或多种效应子功能的恒定区。
抗体的效应子功能可以通过不同的方法减少或避免。通过使用缺少Fc区的抗体片段(例如，Fab、F(ab′)2、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)，可以减少或避免抗体的效应子功能。可替代地，可以通过去除与Fc区中的特定残基连接的糖以减少抗体的效应子功能，同时保留Fc区的其它有价值的属性(例如，延长的半衰期和异源二聚作用)来产生所谓的无糖基化抗体。可以通过例如缺失或改变糖所附接的残基、以酶促方式去除糖、在糖基化抑制剂存在的情况下培养的细胞中产生抗体或者通过在无法使蛋白质糖基化的细胞(例如，细菌宿主细胞)中表达抗体来产生无糖基化抗体。参见例如，美国公开号20120100140。另一种方法是采用来自IgG亚类的具有减少的效应子功能的Fc区，例如，IgG2和IgG4抗体由具有比IgG1和IgG3更低的水平的Fc效应子功能表征。Fc部分的CH2结构域中的最靠近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为所述Fc部分含有先天免疫系统的效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的在很大程度上重叠的结合位点。Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。因此，可以通过以下来制备具有减少的或不具有Fc效应子功能的抗体：产生例如包括来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域的嵌合Fc区或者包括来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区(参见例如，Lau C.等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》191：4769-4777(2013))或者具有导致Fc效应子功能改变例如Fc功能减少或没有Fc功能)的突变的Fc区。具有突变的此类Fc区是本领域已知的。参见例如，美国公开号20120100140和其中引用的美国申请和PCT申请以及An等人，《mAbs》1：6，572-579(2009)；所述文献的公开内容通过全文引用的方式并入本文。
“铰链”、“铰链结构域”或“铰链区”或“抗体铰链区”是指重链恒定区的将CH1结构域与CH2结构域连接的结构域并且包含铰链的上部、中间和下部(Roux等人，《免疫学杂志》1998 161：4083)。铰链在抗体的结合区与效应区之间提供了不同的柔性水平并且还提供了在两个重链恒定区之间分子间二硫键合的位点。如本文所使用的，对于所有IgG同种型，铰链均在Glu216开始并且在Gly237处结束(Roux等人，1998《免疫学杂志》161：4083)。野生型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4铰链的序列是本领域已知的。参见例如，Kabat EA等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列》，第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242；Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。
术语“CH1结构域”是指将可变结构域与重链恒定结构域中的铰链连接的重链恒定区。如本文所使用的，CH1结构域在A118处开始并且在V215处结束。术语“CH1结构域”包含野生型CH1结构域以及其天然存在的变体(例如，同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的CH1结构域序列(包含野生型和同种异型)是本领域已知的。参见例如，Kabat EA等人，(1991)同上以及Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。示例性CH1结构域包含具有突变的CH1结构域，所述突变修饰例如在美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和公开以及PCT公开中所描述的抗体的生物活性，例如半衰期。
术语“CH2结构域”是指将铰链与重链恒定结构域中的CH3结构域连接的重链恒定区。如本文所使用的，CH2结构域在P238处开始并且在K340处结束。术语“CH2结构域”包含野生型CH2结构域以及其天然存在的变体(例如，同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的CH2结构域序列(包含野生型和同种异型)是本领域已知的。参见例如，Kabat EA等人，(1991)同上以及Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。示例性CH2结构域包含具有突变的CH2结构域，所述突变修饰例如在美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和公开以及PCT公开中所描述的抗体的生物活性，例如半衰期和/或减少的Fc效应子功能。
术语“CH3结构域”是指在重链恒定结构域中的CH2结构域的C端的重链恒定区。如本文所使用的，CH3结构域在G341处开始并且在K447处结束。术语“CH3结构域”包含野生型CH3结构域以及其天然存在的变体(例如，同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的CH3结构域序列(包含野生型和同种异型)是本领域已知的。参见例如，Kabat EA等人，(1991)同上以及Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)。示例性CH3结构域包含具有突变的CH3结构域，所述突变修饰例如在美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和公开以及PCT公开中所描述的抗体的生物活性，例如半衰期。
如本文所使用的，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体)。
“同种异型”是指具体同种型组内的天然存在的变体，所述变体在几个氨基酸上有所不同(参见例如，Jefferis等人，(2009)《mAbs》1：1)。本文所描述的抗体可以属于任何同种异型。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种异型是本领域已知的。参见例如，Kabat EA等人，(1991)同上；Vidarsson G.等人，《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)；以及Lefranc MP，《mAbs》1：4，1-7(2009)。
短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“与抗原特异性地结合的抗体”可互换地使用。
如本文所使用的，“分离的抗体”旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，与FAM19A5特异性地结合的分离的抗体基本上不含特异性地结合除了FAM19A5以外的抗原的抗体)。然而，与FAM19A5的表位特异性地结合的分离的抗体对来自不同物种的FAM19A5蛋白可以具有交叉反应性。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另外指示，否则如本文所使用的，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1：1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以以本领域已知的多种方式测量和/或表达，包含但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD从koff/kon的商计算并且表达为摩尔浓度(M)，而KA从kon/koff的商计算。kon是指例如抗体与抗原的缔合速率常数，并且koff是指例如抗体与抗原的解离。kon和koff可以通过本领域普通技术人员已知的技术如免疫测定法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA))、
Figure BDA0002760798540000251
或动力学排除测定(KinExA)来确定。
如本文所使用的，术语“特异性地结合”、“特异性地识别”、“特异性结合”、“选择性结合”和“选择性地结合”是抗体上下文中的类似术语并且是指与抗原(例如，表位或免疫复合物)结合的分子(例如，抗体)，因为此类结合是本领域技术人员所理解的。例如，与抗原特异性地结合的分子通常可以以如通过例如免疫测定、
Figure BDA0002760798540000252
KinExA3000仪器(爱达荷州博伊西的Sapidyne仪器公司(Sapidyne Instruments，Boise，ID))或本领域已知的其它测定所确定的较低的亲和力与其它肽或多肽结合。在具体实施例中，与抗原特异性地结合的分子与抗原结合的KA为至少2log、2.5log、3log、4log或大于分子与另一种抗原结合时的KA。
抗体通常以由10-5到10-11M或更小的解离常数(KD)反映的高亲和力与其同源抗原特异性地结合。通常认为任何大于约10-4M的KD指示非特异性结合。如本文所使用的，与抗原“特异性地结合”的抗体是指当使用预定的抗原在BIACORE 2000仪器中通过例如免疫测定(例如，ELISA)或表面等离振子共振(SPR)技术确定时，以高亲和力与抗原和基本上相同的抗原结合但不以高亲和力与无关抗原的结合的抗体，所述高亲和力意指KD为10-7M或更小，优选地10-8M或更小，甚至更优选地10-9M或更小，并且最优选地介于10-8M与10-10M之间或更小。
如本文所使用的，术语“抗原”是指任何天然或合成的免疫原性物质，如蛋白质、肽或半抗原。抗原可以是FAM19A5或其片段。
如本文所使用的，“表位”是本领域的术语并且是指抗体可以特异性地结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以是例如来自一个或多个多肽的两个或更多个非连续区聚集在一起(构象、非线性、间断或非连续表位)。由连续氨基酸形成的表位通常但不总是在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丢失。在独特的空间构象中，表位通常包含至少3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个或20个氨基酸。用于确定给定抗体所结合的表位的方法(即，表位作图)是本领域熟知的并且包含例如免疫印迹和免疫沉淀测定，其中测试了来自(例如，来自FMAM19A5)的重叠或连续肽与指定抗体(例如，抗FAM19A5抗体)的反应性。确定表位的空间构象的方法包含本领域中的技术以及本文所描述的那些技术，例如x射线结晶学、2维核磁共振和HDX-MS(参见例如，《分子生物学方法中的表位作图指南(Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology)》，第66卷，G.E.Morris编(1996))。
在某些实施例中，可以通过例如NMR光谱法、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱法(例如，液相色谱电喷雾质谱法)结合的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)来确定抗体所结合的表位。对于X射线晶体学，可以使用任何一种本领域中已知的方法完成结晶(例如，Giege R等人，(1994)《晶体学学报D区-生物晶体学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》50(第4部分)：339-350；McPhersonA(1990)《欧洲生物化学杂志(Eur J Biochem)》189：1-23；Chayen NE(1997)《结构(Structure)》5：1269-1274；McPhersonA(1976)《生物化学杂志(J Biol Chem)》251：6300-6303)。抗体：抗原晶体可以使用熟知的X射线衍射技术进行研究并且可以使用计算机软件如X-PLOR(耶鲁大学，1992，由分子模拟公司(Molecular Simulations，Inc.)分销；参见例如，《酶学方法(Meth Enzymol)》(1985)第114和115卷，Wyckoff HW等人编；美国2004/0014194)；以及BUSTER(Bricogne G(1993)《晶体学学报D区-生物晶体学》49(第1部分)：37-60；Bricogne G(1997)《酶学方法》276A：361-423，Carter CW编；Roversi P等人，(2000)《晶体学学报D区-生物晶体学》56(第10部分)：1316-1323)进行改进。诱变作图研究可以使用本领域技术人员已知的任何方法来完成。关于诱变技术的描述，包含丙氨酸扫描诱变技术，参见例如，Champe M等人，(1995)《生物化学杂志》270：1388-1394以及Cunningham BC和WellsJA(1989)《科学》244：1081-1085。
术语“表位作图”是指鉴别用于抗体-抗原识别的分子决定簇的过程。
关于两种或更多种抗体，术语“与相同表位结合”意指抗体与氨基酸残基的相同区段结合，如通过给定方法所确定的。用于用本文所描述的抗体确定抗体是否与“FAM19A5上的相同表位”结合的技术包含例如表位作图方法，如对提供表位的原子分辨率的抗原：抗体复合物的晶体的x射线分析以及氢/氘交换质谱(HDX-MS)。其它方法监测抗体与抗原的抗原片段或突变变异的结合，其中通常认为由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失是表位组分的指示。另外，也可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于所关注的抗体从组合噬菌体展示肽库中亲和分离特异性短肽的能力。期望具有相同的VH和VL或相同的CDR1、CDR2和CDR3序列的抗体与相同的表位结合。
“与另一种抗体竞争以与靶标结合的抗体”是指抑制(部分地或完全地)另一种抗体与靶标的结合的抗体。可以使用已知的竞争实验来确定两种抗体是否彼此竞争以与靶标结合，即，一种抗体是否以及在何种程度上抑制另一种抗体与靶标的结合。在某些实施例中，抗体与另一种抗体竞争与靶标的结合并且抑制另一种抗体与靶标的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的水平可以不同，这取决于哪种抗体是“封闭抗体”(即，首先与靶标一起温育的冷抗体)。竞争测定可以如例如如在以下中所描述的进行：Ed Harlow和David Lane，《冷泉港实验方案(Cold Spring HarbProtoc)》；2006；doi：10.1101/Pdb.prot4277或第11章“使用抗体”，Harlow和David Lane编，冷泉港实验室出版社，美国纽约州冷泉港，1999年。竞争抗体与相同的表位、重叠的表位或邻近的表位结合(例如，如通过位阻证明的)。
其它竞争性结合测定包含：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人，《酶学方法(Methods in Enzymology)》9：242(1983))；固相直接生物素-亲和素EIA(参见Kirkland等人，《免疫学杂志》137：3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane，《抗体：实验室手册(Antibodies：A Laboratory Manual)》，冷泉港出版社(1988))；使用1-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人，《分子免疫学(Mol.Immunol.)》25(1)：7(1988))；固相直接生物素-亲和素EIA(Cheung等人，《病毒学(Virology)》176：546(1990))；以及直接标记RIA(Moldenhauer等人，《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J. Immunol.)》32：77(1990))。
术语“单链Fv”或“scFv”是指单链Fv(“片段可变”)抗体，其中传统两链抗体的重链和轻链的可变结构域已连接以形成一条链。
“双特异性”或“双功能抗体”是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂合抗体。双特异性抗体可以通过多种方法产生，包含融合杂交瘤或连接Fab′片段。参见例如，Songsivilai和Lachmann，《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》79：315-321(1990)；Kostelny等人，《免疫学杂志》148，1547-1553(1992)。
如本文所使用的，术语“单克隆抗体”是指对特定表位展示出单一结合特异性和亲和力的抗体或者其中所有抗体对特定表位展示出单一结合特异性和亲和力的抗体组合物。因此，术语“人单克隆抗体”是指展示出单一结合特异性并且具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和任选恒定区的抗体或抗体组合物。在一些实施例中，人单克隆抗体是由杂交瘤产生的，所述杂交瘤包含B细胞，所述B细胞从转基因非人动物例如转基因小鼠中获得，从而具有包括与永生化细胞融合的人重链转基因和轻链转基因的基因组。
如本文所使用的，术语“重组人抗体”包含所有通过重组手段制备、表达、产生或分离的人抗体，如(a)从对人免疫球蛋白基因而言是转基因的或转染色体的动物(例如，小鼠)或由其制备的杂交瘤中分离的抗体；(b)从被转化以表达抗体的宿主细胞中，例如从转染瘤中分离的抗体；(c)从重组的组合人抗体库中分离的抗体；以及(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接成其它DNA序列的任何其它手段制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体包括利用由种系基因编码的特定人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，但是包含例如在抗体成熟期间发生的随后的重新布置和突变。如本领域中已知的(参见例如，Lonberg(2005)《自然生物技术(NatureBiotech.)》23(9)：1117-1125)，可变区含有抗原结合结构域，所述抗原结合结构域由重新布置以形成对外来抗原具有特异性的抗体的各种基因编码。除重新布置外，可以通过多个单一氨基酸变化(被称为体细胞突变或超突变)来进一步修饰可变区，以增加抗体对外来抗原的亲和力。恒定区将进一步响应于抗原而改变(即，同种型转换)。因此，响应于抗原而对轻链和重链免疫球蛋白多肽进行编码的重新布置的和体细胞突变的核酸分子不能与原始核酸分子具有序列同一性，而是将基本上相同或类似(即，具有至少80％同一性)。
“人”抗体(HuMAb)是指具有可变区的抗体，在所述可变区中，构架区和CDR区两者均源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。本文所描述的抗体可以包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所使用的，术语“人抗体”不旨在包含其中衍生自如小鼠等另一种哺乳动物物种的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。术语“人”抗体和“完全人”抗体同义使用。
“人源化”抗体是指其中非人抗体的CDR结构域外的氨基酸中的一些、大部分或全部氨基酸用衍生自人免疫球蛋白的对应氨基酸替换的抗体。在抗体的人源化形式的一些实施例中，CDR结构域外的氨基酸中的一些、大多数或全部氨基酸已用来自人免疫球蛋白的氨基酸替换，而一个或多个CDR区内的一些、大多数或全部氨基酸未改变。氨基酸的小的添加、缺失、插入、取代或修饰是可允许的，只要它们不消除抗体与特定抗原结合的能力即可。“人源化”抗体保留与原始抗体的抗原特异性类似的抗原特异性。
“嵌合抗体”是指其中可变区源自一个物种并且恒定区源自另一个物种的抗体，如其中可变区源自小鼠抗体并且恒定区源自人抗体的抗体。
如本文所使用的，术语“交叉反应”是指本文所描述的抗体与来自不同物种的FAM19A5结合的能力。例如，本文所描述的结合人FAM19A5的抗体也可以结合另一物种的FAM19A5(例如，小鼠FAM19A5)。如本文所使用的，可以通过在结合测定(例如，SPR、ELISA)中检测与纯化抗原的特异性反应性或与生理表达FAM19A5的细胞结合或在功能上以其它方式相互作用来测量交叉反应性。用于确定交叉反应性的方法包含如本文所描述的标准结合测定，例如，通过使用BIACORETM 2000SPR仪器(瑞典乌普萨拉的Biacore AB公司(Biacore AB，Uppsala，Sweden))进行的BIACORETM表面等离振子共振(SPR)分析或流式细胞术技术。
如应用于本文所公开的物体的术语“天然存在”是指可以在自然界中发现物体的事实。例如，存在于可以从自然界来源中分离并且在实验室中没有由人故意进行修饰的生物体(包含病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
“多肽”是指包括至少两个连续连接的氨基酸残基的链，其中链的长度没有上限。蛋白质中的一个或多个氨基酸残基可以含有修饰，如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白质”可以包括一种或多种多肽。
如本文所使用的，术语“核酸分子”旨在包含DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的并且可以是cDNA。
如本文所使用的，术语“重组宿主细胞”(或简称为“宿主细胞”)旨在指包括非天然存在于细胞中的核酸的细胞并且可以是重组表达载体已引入其中的细胞。应当理解，此类术语旨在不仅指特定的受试者细胞，而且还指此类细胞的后代。因为某些修饰可能由于突变或环境影响而在后续世代中发生，所以此类后代实际上可能会不与亲本细胞相同，但仍包含在如本文所使用的术语“宿主细胞”的范围内。
如本文所使用的，术语“连接”是指两个或更多个分子的缔合。连接可以是共价的或非共价的。连接也可以是基因的(即，重组融合的)。可以使用多种本领域公认的技术如化学缀合和重组蛋白生产来实现此类连接。
II.腺相关病毒(AAV)和其衍生载体
本文所公开的AAV载体包含对所关注的蛋白质，例如FAM19A5拮抗剂，例如抗FAM19A5抗体进行编码的核酸。在一些实施例中，核酸还可以包含一个或多个调节序列，所述一个或多个调节序列允许表达并且在一些实施例中分泌所关注的蛋白质，例如启动子、增强子、聚腺苷酸化信号、内部核糖体进入位点(IRES)、对蛋白质转导结构域(PTD)进行编码的序列等。因此，在一些实施例中，核酸可以包括与编码序列可操作地连接的启动子区，以引起或改善所关注的蛋白质在感染的细胞中的表达。此类启动子可以是普遍存在的、细胞或组织特异性的、强的、弱的、调节型、嵌合的等，例如以允许在感染的组织中高效且稳定地产生蛋白质。尽管在所公开的方法中使用的启动子通常在人细胞中是有功能的，但是启动子可以与经过编码的蛋白质同源或异源。调节型启动子的实例包含但不限于含Tet on/off元件的启动子、雷帕霉素(rapamycin)诱导型启动子、它莫西芬(tamoxifen)诱导型启动子和金属硫蛋白启动子。可以使用的其它启动子包含对如肾脏、脾脏、胰腺、脑或脊髓等组织具有组织特异性的启动子。普遍存在的启动子的实例包含病毒启动子，特别是CMV启动子、RSV启动子、SV40启动子等，以及细胞启动子，如PGK(磷酸甘油酸激酶)启动子和β-肌动蛋白启动子。
在本文所公开的AAV载体的一些实施例中，一种或多种反馈元件可以用于减弱所关注的蛋白的过表达。例如，AAV载体的一些实施例包含一个或多个将会靶向外源转录物的siRNA序列。在其它实施例中，AAV载体包含可以被抑制性转录因子识别的一种或多种另外的启动子。在各个实施例中，本文所公开的AAV载体包括可以产生体内平衡反馈环的构建体，所述体内平衡反馈环可以将所关注的蛋白质的表达水平维持在生理水平。
在一些实施例中，本文所公开的AAV载体包括包含允许分泌经过编码的蛋白质的前导序列(或信号肽)的核酸。在一些实施例中，所关注的转基因与对分泌信号肽(通常定位于分泌性多肽的N端)进行编码的序列的融合允许产生可以从经过转导的细胞分泌的形式的治疗性蛋白。此类信号肽的非限制性实例包含人β-球蛋白、白蛋白、β-葡糖醛酸酶、碱性蛋白酶或纤连蛋白分泌性信号肽。
在一些实施例中，从本公开的AAV载体表达的mRNA包括miRNA的优先在非CNS组织中表达的miRNA结合位点。在某些实施例中，miRNA结合位点是miR-122的结合位点。在某些实施例中，miRNA结合位点是miR-1的结合位点。在一些实施例中，从CNS相关基因表达的mRNA不包括miRNA的优先在CNS组织中表达的miRNA结合位点。
细小病毒科的成员AAV是小型无包膜的二十面体病毒，其中单链线性DNA基因组为4.7千碱基(kb)到6kb。
Figure BDA0002760798540000311
M.，《病毒学杂志(Virol J)》2：43(2005)。此科可以分为两个亚科：感染脊椎动物的细小病毒科以及感染昆虫的病毒亚科。细小病毒亚科的成员在本文中被称为细小病毒并且包含依赖病毒属。如从其属名可以推论的，依赖病毒的成员是独特的，因为它们通常需要与如腺病毒或疱疹病毒等辅助病毒共同感染才能在细胞培养中有生产性感染。依赖病毒属包含通常感染人(例如，血清型1、2、3A、3B、4、5和6)或灵长类动物(例如，血清型1和4)的AAV以及感染其它温血动物的相关病毒(例如，牛、犬、马和绵羊腺相关病毒)。有关细小病毒和细小病毒科其它成员的进一步信息在以下中进行描述：Kenneth I.Berns，“细小病毒科：病毒和其复制(Parvoviridae：The Viruses and TheirReplication)”，《费氏病毒学(Fields Virology)》第69章(第3版1996)。
复制、衣壳和组装AAV基因
AAV的单链基因组包括三个基因rep(复制)、cap(衣壳)和aap(组装)。通过使用三个启动子、替代性翻译起始位点和差异剪接，这三个基因产生了至少九个基因产物。
rep基因对病毒基因组复制和包装所需的四种蛋白质(Rep78、Rep68、Rep52和Rep40)进行编码。cap基因表达产生病毒衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3)，所述病毒衣壳蛋白形成保护病毒基因组的衣壳外壳并且积极参与细胞结合和内在化。据估计，病毒外被包含布置成二十面体结构的60个蛋白质。aap基因在与cap基因重叠的替代性阅读框中对组装活化蛋白(AAP)进行编码。此核蛋白被认为为衣壳组装提供了支架功能并且在一些AAV血清型的VP蛋白的核仁定位中发挥作用。
在一些实施例中，本文所公开的AAV载体是重组AAV并且缺少rep基因、cap基因和aap基因中的一个或多个。在一些实施例中，对rAAV进行修饰使得rep基因、cap基因和aap基因中的一个或多个发生突变，从而使得AAV基因中的一个或多个的表达得到修饰。在一些实施例中，rep基因、cap基因或aap基因中的一个或多个是天然存在的，例如rep基因、cap基因或app基因包括细小病毒rep基因、cap基因或aap基因的全部或部分。在一些实施例中，rep基因、cap基因或aap基因中的所述一个或多个包括合成序列。
应当理解，本文所描述的特定AAV基因组可以具有来自不同AAV基因组(例如，来自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11的基因组)的基因。因此，本文公开了包括rep、cap或aap的任何可能排列的AAV载体。
反向末端重复
本公开的某些方面涉及包括第一ITR例如5′ITR和第二ITR例如3′ITR的核酸分子。在一些实施例中，ITR包括天然存在的，例如ITR包括细小病毒ITR的全部或一部分。在一些实施例中，ITR包括合成序列。
在一些实施例中，ITR包括来自AAV基因组的ITR。在一些实施例中，ITR是选自以下的AAV基因组的ITR：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和其任何组合。在某些实施例中，ITR是AAV8或AAV9基因组的ITR。在其它实施例中，ITR是经过基因工程化以在其5′端和3′端包含源自AAV基因组中的一个或多个的ITR的合成序列。在一些实施例中，ITR源自相同的基因组(例如，源自相同病毒的基因组)或源自不同的基因组(例如，源自两个或更多个不同AAV基因组的基因组)。在某些实施例中，ITR源自相同的AAV基因组。在其它实施例中，存在于本公开的核酸分子中的两个ITR是相同的并且可以具体是AAV2ITR。在一些实施例中，第一ITR和第二ITR是相同的。
在一些实施例中，ITR是经过基因工程化以在其5′端和3′端包含不源自AAV基因组的ITR的合成序列。在一些实施例中，ITR序列包括一个或多个回文序列。本文所公开的ITR的回文序列包含但不限于天然回文序列(即，在自然界中发现的序列)、如假回文序列等合成序列(即，在自然界中未发现的序列)以及其组合或经过修饰的形式。“假回文序列”是回文DNA序列，包含不完善的回文序列，所述回文DNA序列与形成二级结构的天然AAV回文序列中的序列共享少于80％(包含少于70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％)核酸序列同一性或没有核酸序列同一性。天然回文序列可以获自或源自本文所公开的任何基因组。合成回文序列可以基于本文所公开的任何基因组。回文序列可以是连续的或中断的。在一些实施例中，回文序列是中断的，其中回文序列包括第二序列的插入。在一些实施例中，第二序列包括启动子、增强子、整合酶的整合位点(例如，Cre或Flp重组酶的位点)、基因产物的开放阅读框或其组合。
在一些实施例中，ITR形成发夹环结构。在一个实施例中，第一ITR形成发夹结构。在另一个实施例中，第二ITR形成发夹结构。仍在另一个实施例中，第一ITR和第二ITR两者形成发夹结构。
在一些实施例中，本文所描述的核酸分子中的ITR可以是转录活化的ITR。转录活化的ITR可以包括野生型ITR的全部或一部分，所述野生型ITR已通过包含至少一个转录活性元件而被转录活化。各种类型的转录活性元件都适于在此上下文中使用。在一些实施例中，转录活性元件是组成型转录活性元件。组成型转录活性元件提供持续水平的基因转录并且当需要在持续基础上表达转基因时是优选的。在其它实施例中，转录活性元件是诱导型转录活性元件。诱导型转录活性元件通常在不存在诱导剂(或诱导条件)的情况下表现出低活性并且在存在诱导剂(或转换为诱导条件)的情况下被上调。当仅在某些时间或某些位置期望表达时或当期望使用诱导剂滴定表达水平时，诱导型转录活性元件可以是优选的。转录活性元件也可以是组织特异性的；也就是说，它们仅在某些组织或细胞类型中表现出活性。
转录活性元件可以以多种方式并入到ITR中。在一些实施例中，转录活性元件在5′并入到ITR的任何部分或在3′并入到ITR的任何部分。在其它实施例中，转录活化的ITR的转录活性元件位于两个ITR序列之间。如果转录活性元件包括两个或更多个必须间隔开的元件，则那些元件可以与ITR的各部分交替。在一些实施例中，ITR的发夹结构缺失并且用转录元件的反向重复来替换。后一种布置将会产生模仿结构中的缺失部分的发夹。多个串联的转录活性元件也可以存在于转录活化的ITR中，并且这些元件可以邻近或间隔开。另外，可以将蛋白质结合位点(例如，Rep结合位点)引入到转录活化的ITR的转录活性元件中。转录活性元件可以包括通过RNA聚合酶实现DNA的受控转录以形成RNA的任何序列并且可以包括例如如以下定义的转录活性元件。
转录活化的ITR以相对有限的核苷酸序列长度向核酸分子提供转录活化功能和ITR功能两者，这有效地最大化了可以从核酸分子携带和表达的转基因的长度。转录活性元件并入到ITR中可以以多种方式完成。ITR序列与转录活性元件的序列要求的比较可以提供对用于在ITR内对元件进行编码的方式的了解。例如，可以通过在复制转录活性元件的功能元件的ITR序列中引入具体变化来将转录活性添加到ITR。本领域中存在多种技术以高效地添加、缺失和/或改变特异性位点处的特定核苷酸序列(参见例如，Deng和Nickoloff(1992)《分析生物化学(Anal.Biochem.)》200：81-88)。用于产生转录活化的ITR的另一种方法涉及在ITR中的期望的位置处引入限制位点。另外，可以使用本领域已知的方法将多个转录活化元件并入到转录活化的ITR中。
通过说明的方式，可以通过包含如以下等一个或多个转录活性元件来产生转录活化的ITR：TATA盒、GC盒、CCAAT盒、Sp1位点、Inr区、CRE(cAMP调节元件)位点、ATF-1/CRE位点、APBβ盒、APBα盒、CArG盒、CCAC盒或任何其它参与如本领域已知的转录的元件。
FAM19A5拮抗剂
本公开的AAV载体包括对FAM19A5蛋白的一种或多种拮抗剂进行编码的核酸。在一些实施例中，FAM19A5拮抗剂是与FAM19A5蛋白特异性地结合的抗体或其抗原结合片段。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv(scFv)。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体是scFv。
在一些实施例中，由本公开的AAV载体表达的抗FAM19A5抗体(例如，抗FAM19A5scFv)由特定的功能特征或特性表征。例如，抗体特异性地结合人FAM19A5，包含可溶性FAM19A5和膜结合的FAM19A5。除了与可溶性和/或膜结合的人FAM19A5特异性地结合外，本文所描述的抗体还表现出以下功能特性中的一种或多种功能特性：
(a)减少、逆转和/或预防纤维化；
(b)减少过多的细胞外基质(ECM)的形成；
(c)延迟肿瘤生长或进展；
(d)如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)所测量的，以10nM或更小的KD与可溶性人FAM19A5结合；
(e)如通过ELISA所测量的，以10nM或更小的KD与膜结合的人FAM19A5结合；
(f)减少、逆转、延迟和/或预防反应性胶质增生的发作；
(g)抑制反应性星形细胞的过度增殖；
(h)降低硫酸软骨素蛋白聚糖(包含神经聚糖和神经元-神经胶质抗原2(NG2))的表达；
(i)增加神经元的核中c-fos和pERK的表达；
(j)促进神经元的存活；
(k)增加神经元中GAP43的表达；以及
(l)促进轴突的再生长。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以高亲和力与可溶性人FAM19A5或膜结合的人特异性地结合，例如，其中KD为10-7M或更小、10-8M或更小、10-9M(1nM)或更小、10-10M(0.1nM)或更小、10-11M或更小或10-12M或更小，例如10-12M到10-7M、10-11M到10-7M、10-10M到10-7M或10-9M到10-7M，例如10-12M、5×10-12M、10-11M、5×10-11M、10-10M、5×10-10M、10-9M、5×10-9M、10-8M、5×10-8M、10-7M或5×10-7M。用于评估抗体对各种物种的人FAM19A5的结合能力的标准测定是本领域已知的，包含例如ELISA、蛋白质印迹和RIA。抗体的结合动力学(例如，结合亲和力)也可以通过本领域中已知的标准测定来评估，如通过ELISA、BIACORETM分析或
Figure BDA0002760798540000351
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以如通过ELISA确定的以下KD与可溶性人FAM19A5结合：10-7M或更小、10-8M(10nM)或更小、10-9M(1nM)或更小、10-10M或更小、10-12M到10-7M、10-11M到10-7M、10-10M到10-7M、10-9M到10-7M或10-8M到10-7M。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以10nM或更小，例如介于0.1与10nM之间、介于0.1与5nM之间、介于0.1与1nM之间、介于0.5与10nM之间、介于0.5与5nM之间、介于0.5与1nM之间、介于1与10nM之间、介于1与5nM之间或介于5与10nM之间的KD与可溶性FAM19A5结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以如通过ELISA确定的以下KD与可溶性人FAM19A5特异性地结合：约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以例如如通过ELISA确定的以下KD与膜结合的人结合：10-7M或更小、10-8M(10nM)或更小、10-9M(1nM)或更小、10-10M或更小、10-12M到10-7M、10-11M到10-7M、10-10M到10-7M、10-9M到10-7M或10-8M到10-7M。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以如通过ELISA确定的以下KD与膜结合的人FAM19A5特异性地结合：10nM或更小，例如介于0.1与10nM之间、介于0.1与5nM之间、介于0.1与1nM之间、介于0.5与10nM之间、介于0.5与5nM之间、介于0.5与1nM之间、介于1与10nM之间、介于1与5nM之间或介于5与10nM之间。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)以如通过ELISA确定的以下KD与膜结合的人FAM19A5结合：约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM。
在一些实施例中，适于本文所公开的方法的抗FAM19A5抗体(例如，scFv)与包括本文所公开的CDR或可变区的抗FAM19A5抗体交叉竞争与人FAM19A5表位结合(或抑制其结合)。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)抑制包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体的结合，(i)其中所述参考抗体的所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13的氨基酸序列，并且所述参考抗体的所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，并且所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中所述重链CDR1包括SEQID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列，并且所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQID NO：21的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列；(v)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：90的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：91的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：92的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQID NO：93的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：95的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：96的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：97的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：98的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：99的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ IDNO：100的氨基酸序列；(vii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：102的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：104的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：108的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：110的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ IDNO：112的氨基酸序列；(ix)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：115的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：126的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：128的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中所述重链CDR1包括SEQ IDNO：131的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：137的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：138的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：139的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：140的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：141的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：142的氨基酸序列；(xiv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ IDNO：145的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或(xv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：150的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQID NO：152的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：154的氨基酸序列。在一些实施例中，参考抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括如表2中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且参考抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括如表3中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些实施例中，参考抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链可变区序列和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链可变区序列和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQ ID NO：37和41的重链可变区序列和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQID NO：38和42的重链可变区序列和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链可变区序列和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQ ID NO：156和167的重链可变区序列和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链可变区序列和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链可变区序列和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链可变区序列和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链可变区序列和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链可变区序列和轻链可变区序列；(1)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链可变区序列和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链可变区序列和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链可变区序列和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ IDNO：165和176的重链可变区序列和轻链可变区序列。在一些实施例中，参考抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包括如表4中所示的氨基酸序列，并且所述VL包括如表5中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)将此类参考抗体与人FAM19A5的结合抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。竞争抗体与相同的表位、重叠的表位或邻近的表位结合(例如，如通过位阻证明的)。可以使用如RIA和EIA等本领域已知的竞争实验来确定两种抗体是否彼此竞争以与靶标结合。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的本文所公开的参考抗体结合于相同的FAM19A5表位，(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列，并且所述重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，并且所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：1 8的氨基酸序列，并且所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列；(v)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：90的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQID NO：91的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：92的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：93的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：95的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：96的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：97的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：98的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：99的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：100的氨基酸序列；(vii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：102的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：104的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：108的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：110的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQID NO：112的氨基酸序列；(ix)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：115的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：126的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：128的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：131的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：137的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：138的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：139的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：140的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：141的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：142的氨基酸序列；(xi)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：145的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或(xv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ ID NO：150的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：152的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：154的氨基酸序列。在一些实施例中，参考抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括如表2中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列，并且参考抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括如表3中所示的CDR1、CDR2和CDR3序列。
在一些实施例中，参考抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链可变区序列和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链可变区序列和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQ ID NO：37和41的重链可变区序列和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQID NO：38和42的重链可变区序列和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链可变区序列和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQ ID NO：156和167的重链可变区序列和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链可变区序列和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链可变区序列和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链可变区序列和轻链可变区序列；(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链可变区序列和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链可变区序列和轻链可变区序列；(1)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链可变区序列和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链可变区序列和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链可变区序列和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ IDNO：165和176的重链可变区序列和轻链可变区序列。在一些实施例中，参考抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包括如表4中所示的氨基酸序列，并且所述VL包括如表5中所示的氨基酸序列。
用于确定两种抗体是否与相同表位结合的技术包含例如表位作图方法，如对提供表位的原子分辨率的抗原：抗体复合物的x射线分析以及氢/氘交换质谱(HDX-MS)；监测抗体与抗原的抗原片段或突变变异的结合的方法，其中通常认为由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失是表位组分的指示；用于表位作图的计算组合方法。
如例如通过将抗体与人FAM19A5的片段结合所确定的，将会在本文所公开的方法中有用的抗FAM19A5抗体(例如，scFv)可以与成熟的人FAM19A5的至少一个表位结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与定位于TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：2的氨基酸残基42到61)的氨基酸序列内的片段(例如，具有SEQ ID NO：6的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸的表位)结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基46到51(即，DSSQPR)例如氨基酸残基46、50和52(即，D---P-R)，例如氨基酸残基46、47、48和50(即，DSS-P)的一个或多个氨基酸处与SEQ ID NO：6结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与定位于CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：2的氨基酸90到109)的氨基酸序列内的片段(例如，具有SEQ ID NO：9的至少1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸的表位)结合。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体在SEQ ID NO：4的一个或多个氨基酸残基99到107(即，EGCDLLINR)，例如氨基酸残基102、103、105和107(即，DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100、102、103、105和107(即，EG-DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100和107(即，EG------R)处与SEQ ID NO：9结合。
在一些实施例中，所述至少一个表位的氨基酸序列与SEQ ID NO：6至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同。在一些实施例中，所述至少一个表位的氨基酸序列与SEQ ID NO：9至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)仅与作为SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10或定位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段的人FAM19A5表位(例如，具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸的表位)结合。
在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体以其天然构象(即，未变性)与SEQ IDNO：6或其片段结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体以其天然构象(即，未变性)与SEQ IDNO：9或其片段结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与糖基化人FAM19A5和未糖基化人FAM19A5两者结合。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体(例如，scFv)进一步与一个或多个另外的FAM19A5表位结合。因此，某些抗FAM19A5抗体与(i)SEQ ID NO：6的表位和另外的表位或(ii)SEQ ID NO：9的表位和另外的表位结合。其它抗FAM19A5抗体可以与SEQ ID NO：5、SEQID NO：9的表位和另外的表位结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与SEQ ID NO：6的表位、SEQ ID NO：10的表位和另外的表位结合。
在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自QLAAGTCEIVTLDR(SEQID NO：5，表位F1)、TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6，表位F2)、TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO：7，表位F3)、ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO：8，表位F4)、CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO：9，表位F5)或NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：10，表位F6)或定位于SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列内的片段或其任何组合。定位于SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列内的片段包含具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10中的任何一个的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸的片段。在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10或定位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段(例如，具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸的片段)或其任何组合。在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体以其天然构象(即，未变性)与所述一个或多个另外的表位中的任何表位结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与所述一个或多个另外的FAM19A5表位中的糖基化表位和非糖基化表位两者结合。
在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体(例如，scFv)与鉴别为EP2、EP4和/或EP8的至少一个FAM19A5表位结合，其中EP2包括氨基酸DSSQP(SEQ ID NO：66)、基本上由所述氨基酸组成或由所述氨基酸组成，其中EP4包括氨基酸ARCACRK(SEQ ID NO：68)、基本上由所述氨基酸组成或由所述氨基酸组成，并且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)、基本上由所述氨基酸组成或由所述氨基酸组成。在一些实施例中，所述至少一个表位的氨基酸序列与EP2、EP4或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体仅与EP2结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与EP4和EP8结合。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与鉴别为EP6、EP7或EP8的至少一个FAM19A5表位结合，其中EP6包括氨基酸KTKQWCDML(SEQ ID NO：70)，其中EP7包括氨基酸GCDLLINR(SEQID NO：71)，并且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)。在一些实施例中，所述至少一个表位的氨基酸序列与EP6、EP7或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体仅与EP6、EP7或EP8结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与EP6、EP7和EP8结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与EP7和EP8结合。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与EP7结合。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体与选自由以下组成的组的一个或多个FAM19A5表位结合：SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72以及其任何组合。
在一些实施例中，本文提供了以如通过例如免疫测定(例如，ELISA)、表面等离振子共振或动力学排除测定测量的20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或比FAM19A家族中的另一种蛋白质更高的亲和力与FAM19A5(例如，人FAM19A5)结合的抗体。在具体实施例中，本文提供了如例如通过免疫测定测量的与FAM19A家族中的另一种蛋白质没有交叉反应性的情况下与FAM19A5(例如，人FAM19A5)结合的抗体。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体不是天然抗体或者不是天然存在的抗体。例如，抗FAM19A5抗体具有与天然存在的抗体的翻译后修饰不同的翻译后修饰，如通过具有更多、更少或不同类型的翻译后修饰。
示例性抗FAM19A5抗体
可以由本文所公开的AAV载体表达的特定抗体是具有抗FAM19A5抗体1-65、3-2和2-13的CDR和/或可变区序列的抗体(例如，scFv)以及与其可变区序列或CDR序列具有至少80％同一性(例如，至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性)的抗体。参见美国专利第9,579,398号；国际申请号PCT/IB2017/001490。表2和表3分别提供了示例性重链和轻链CDR序列。使用Kabat编号方案(参见上文)鉴别了以下抗体的CDR：1-65、3-2、2-13、1-28、P2-C12、13B4、13F7、15A9、P1-A03、P1-A08、P1-F02、P2-A01、P2-A03、P2-F07、P2-F11、SS01-13、SS01-13-s5和S5-2.GKNG。使用IMGT编号系统(参见上文)鉴别了以下抗体的CDR：1-7A-IT、低PI(Low-PI)、1-30、1-17、1-32、4-11、6-10、2-13D、2-13D-37、2-13D-37-1.5W-41以及2-13D-37-3W-16。表4和表5中分别提供了本公开的不同抗FAM19A5抗体的VH和VL氨基酸序列。
表2.可变重链CDR氨基酸序列
Figure BDA0002760798540000441
Figure BDA0002760798540000451
Figure BDA0002760798540000461
表3可变轻链CDR氨基酸序列
Figure BDA0002760798540000462
Figure BDA0002760798540000471
表4：可变重链氨基酸序列
Figure BDA0002760798540000472
Figure BDA0002760798540000481
Figure BDA0002760798540000491
表5：可变轻链氨基酸序列
Figure BDA0002760798540000492
Figure BDA0002760798540000501
Figure BDA0002760798540000511
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35-38、155-165或232-240的氨基酸序列(参见表4)。在其它实施例中，抗FAM19A5抗体包括选自由以下组成的组的重链可变区的CDR：SEQ ID NO：35-38、155-165或232-240(参见表4)。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：39-42、166-176或241-250的氨基酸序列(参见表5)。在其它实施例中，抗FAM19A5抗体包括选自由以下组成的组的轻链可变区的CDR：SEQ ID NO：39-42、166-176或241-250(参见表5)。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括选自由以下组成的组的重链可变区的CDR：SEQ ID NO：35-38、155-165或232-240(参见表4)以及选自由以下组成的组的轻链可变区的CDR：SEQ ID NO：39-42、166-176或241-250(参见表5)。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，(i)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：37的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：41的氨基酸序列；(ii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：36的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：40的氨基酸序列；(iii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(iv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：38的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：42的氨基酸序列；(v)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：155的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：166的氨基酸序列；(vi)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：156的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：167的氨基酸序列；(vii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：157的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：168的氨基酸序列；(viii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：158的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：169的氨基酸序列；(ix)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：159的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：170的氨基酸序列；(x)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：160的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：171的氨基酸序列；(xi)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：161的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：172的氨基酸序列；(xii)其中所述重链可变区包括SEQ IDNO：162的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：173的氨基酸序列；(xiii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：163的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQID NO：174的氨基酸序列；(xiv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：164的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：175的氨基酸序列；并且(xv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：165的氨基酸序列并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：176的氨基酸序列；在一些实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中所述VH包括如表4中所示的VH序列，并且所述VL包括如表5中所示的VL序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35-38、155-165或232-240(参见表4)中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42、166-176或241-250(参见表5)中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35-38、155-165或232-240(参见表4)中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42、166-176或241-250(参见表5)中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(c)分别包括SEQ ID NO：37和41的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(f)分别包括SEQ ID NO：156和167的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(p)分别包括SEQ ID NO：232和241的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(q)分别包括SEQ ID NO：233和242的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(r)分别包括SEQ ID NO：234和242的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(s)分别包括SEQ ID NO：235和243的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(t)分别包括SEQ ID NO：236和244的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(u)分别包括SEQ ID NO：236和245的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(v)分别包括SEQ ID NO：236和246的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(w)分别包括SEQ ID NO：236和247的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(x)分别包括SEQ ID NO：236和248的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(v)分别包括SEQ ID NO：236和249的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(z)分别包括SEQ ID NO：237和250的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(aa)分别包括SEQ ID NO：238和250的重链可变区序列和轻链可变区序列；
(bb)分别包括SEQ ID NO：239和250的重链可变区序列和轻链可变区序列；或者
(cc)分别包括SEQ ID NO：240和250的重链可变区序列和轻链可变区序列。
在某些实施例中，抗FAM19A5抗体包括(i)1-65的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-65的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其组合；(ii)3-2的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或3-2的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iii)2-13的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或2-13的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iv)1-28的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-28的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(v)P2-C12的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P2-C12的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vi)13B4的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或13B4的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vii)13F7的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或13F7的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(viii)15A9的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或15A9的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(ix)P1-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P1-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(x)P1-A08的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P1-A08的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xi)P1-F02的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P1-F02的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xii)P2-A01的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P2-A01的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiii)P2-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P2-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiv)P2-F07的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P2-F07的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xv)P2-F11的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或P2-F11的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xvi)SS01-13的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或SS01-13的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xvii)SS01-13-s5的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或SS01-13-s5的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xviii)S5-2.GKNG的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或S5-2.GKNG的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xix)1-7A-IT的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-7A-IT的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xx)低PI的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或低PI的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxi)1-30的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-30的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxii)1-17的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-17的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxiii)1-32的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或1-32的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxiv)4-11的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或4-11的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxv)6-10的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或6-10的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxvi)2-13D的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或2-13D的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxvii)2-13D-37的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或2-13D-37的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xxviii)2-13D-37-1.5W-41的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或2-13D-37-1.5W-41的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；或(xxiv)2-13D-37-3W-16的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合和/或2-13D-3W-16的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合。表2中提供了本文所公开的不同抗FAM19A5抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。表3中提供了本文所公开的不同抗FAM19A5抗体的VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；和/或
(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VH CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；和/或
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VL CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VH CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VL CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VH CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VL CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VH CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括以上VL CDR中的一个、两个或全部三个。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括：
(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，本文所公开的抗FAM19A5抗体(例如，scFv)包括以上CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。在一些实施例中，本文所公开的抗FAM19A5抗体(例如，scFv)包括表2或表3中所提供的CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。
在一些实施例中，本文所描述的VH结构域和VL结构域可以通过柔性接头连接以产生单链Fv抗体。因此，在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自表4的VH结构域和选自表5的VL结构域，其中所述VH结构域和所述VL结构域通过柔性接头连接。在一些实施例中，柔性接头包括序列SGGGGSSGGGGS(SEQ ID NO：207)。在其它实施例中，柔性接头包括序列GQSSRSSGGGGSSGGGGS(SEQ ID NO：300)。示例性抗FAM19A5 scFv的氨基酸序列在下表6中提供(VH结构域用下划线标出，VL结构域用粗体标出，并且接头用斜体标出)。
表6：可变重链氨基酸序列
Figure BDA0002760798540000571
Figure BDA0002760798540000581
Figure BDA0002760798540000591
本文所描述的VH结构域或其一个或多个CDR也可以与恒定结构域连接以用于形成重链，例如全长重链。类似地，本文所描述的VL结构域或其一个或多个CDR可以与恒定结构域连接以用于形成轻链，例如全长轻链。全长重链和全长轻链组合以形成全长抗体。
因此，在具体实施例中，提供了可用于本文所公开的方法的包括抗体轻链和重链(例如，单独的轻链和重链)的抗体。关于轻链，在具体实施例中，本文所描述的抗体的轻链是κ轻链。在另一个具体实施例中，本文所描述的抗体的轻链是λ轻链。在又另一个具体实施例中，本文所描述的抗体的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在特定实施例中，可用于本文所公开的方法的与FAM19A5多肽(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所描述的任何VL或VL CDR氨基酸序列的轻链，并且其中所述轻链的恒定区包括人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在特定实施例中，可用于本文所公开的方法的所描述的与FAM19A5多肽(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所描述的VL或VL CDR氨基酸序列的轻链，并且其中所述轻链的恒定区包括人λ轻链恒定区的氨基酸序列。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中进行描述，例如参见美国专利第5,693,780号以及Kabat EA等人，(1991)同上。
关于重链，在一些实施例中，本文所描述的抗体的重链可以是α(a)、δ(δ)、ε(ε)、γ(γ)或μ(μ)重链。在另一个具体实施例中，所描述的抗体的重链可以包括人α(a)、δ(δ)、ε(ε)、γ(γ)或μ(μ)重链。在一些实施例中，可用于本文所公开的方法的所描述的与FAM19A5多肽(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所描述的VH或VH CDR氨基酸序列的重链，并且其中所述重链的恒定区包括人γ(γ)重链恒定区的氨基酸序列。在其它实施例中，本文所描述的与FAM19A5多肽(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所公开的VH或VH CDR氨基酸序列的重链，并且其中所述重链的恒定区包括本文所描述的或本领域已知的人重链的氨基酸。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中进行描述，例如参见美国专利第5，693,780号以及Kabat EA等人，(1991)同上。
在一些实施例中，可用于本文所公开的方法的所描述的与FAM19A5(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所描述的VH或VH CDR以及VL和VL CDR的VL结构域和VH结构域，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在另一个具体实施例中，本文所描述的与FAM19A5(例如，人FAM19A5)特异性地结合的抗体包括包含本文所描述的任何氨基酸序列的VL结构域和VH结构域，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)的恒定区的氨基酸序列。在一些实施例中，恒定区包括天然存在的人IgG的恒定区的氨基酸序列，包含其亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)和同种异型(例如，G1m、G2m、G3m和nG4m)以及变体。参见例如，Vidarsson G.等人《免疫学前沿》5：520(2014年10月20日在线发布)以及Jefferis R.和Lefranc MP，《mAbs》1：4，1-7(2009)。在一些实施例中，恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的恒定区的氨基酸序列。
在某些实施例中，可用于本文所公开的方法的所公开的抗FAM19A5抗体不具有Fc效应子功能，例如补体依赖性细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)。效应子功能由Fc区介导，并且Fc区的CH2结构域中的最靠近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为所述Fc区含有先天免疫系统的效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的在很大程度上重叠的结合位点。此外，IgG2和IgG4抗体具有比IgG1和IgG3抗体更低水平的Fc效应子功能。抗体的效应子功能可以通过本领域已知的不同方法减少或避免，包含(1)使用缺少Fc区的抗体片段(例如，Fab、F(ab′)2、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)；(2)产生无糖基化抗体，所述无糖基化抗体可以通过例如缺失或改变糖所附接的残基、以酶促方式去除糖、在糖基化抑制剂存在的情况下培养的细胞中产生抗体或者通过在无法使蛋白质糖基化的细胞(例如，细菌宿主细胞，参见例如美国公开号20120100140)中表达抗体来产生；(3)采用具有减少的效应子功能的IgG亚类的Fc区(例如，来自IgG2或IgG4抗体的Fc区或包括来自IgG2或IgG4抗体的CH2结构域的嵌合Fc区，参加例如，美国公开号20120100140和Lau C.等人《免疫学杂志》191：4769-4777(2013))；以及(4)产生具有导致Fc功能减少或没有的突变的Fc区。参见例如，美国公开号20120100140以及其中引用的美国申请和PCT申请以及An等人，《mAbs》1：6，572-579(2009)。
因此，在一些实施例中，可用于本文所公开的方法的抗FAM19A5抗体是Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb。此类抗体片段是本领域熟知的并且同上进行了描述。
在一些实施例中，可用于本文所公开的方法的抗FAM19A5抗体包括具有减少的或没有Fc效应子功能的Fc区。在一些实施例中，恒定区包括人IgG2或IgG4的Fc区的氨基酸序列，在一些实施例中，抗FAM19A5抗体属于IgG2/IgG4同种型。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括包含来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域的嵌合Fc区，或者包含来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区，或具有导致Fc功能减少或没有的突变的Fc区。具有减少的或没有Fc效应子功能的Fc区包含本领域已知的那些。参见例如，Lau C.等人，《免疫学杂志》191：4769-4777(2013)；An等人，《mAbs》1：6，572-579(2009)；以及美国公开号20120100140以及其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物。本领域普通技术人员还可以容易地制备具有减少的或没有Fc效应子功能的Fc区。
核酸分子
本文所描述的另一方面涉及对本文所公开的抗体或其抗原结合部分中的任何一个进行编码的一个或多个核酸分子。此类核酸分子可以在本公开的AAV载体中表达。当通过标准技术(包含碱性/SDS处理、CsCl分带、柱色谱法、限制酶、琼脂糖凝胶电泳和其它本领域熟知的技术)纯化远离其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸(例如，其它染色体DNA，例如与自然界中的分离的DNA连接的染色体DNA)或蛋白质时，核酸是“分离的”或“呈现为基本上纯的”。参见F.Ausubel等人编，(1987)《分子生物学实验指南(Current Protocolsin Molecular Biology)》，格林出版公司和威利国际科学平台(Greene Publishing andWiley Interscience)，纽约。本文所描述的核酸可以是例如DNA或RNA并且可以含有或可以不含有内含子序列。在某些实施例中，核酸是cDNA分子。
本文所描述的某些核酸分子是对本公开的抗FAM19A5抗体的VH和VL序列进行编码的那些核酸分子。对此类抗体的VH序列进行编码的示例性DNA序列在SEQ ID NO：43-46、177和265-278(表7)中所示。对此类抗体的VL序列进行编码的示例性DNA序列在SEQ ID NO：47-50、178和279-292(表8)中所示。表9中提供了对1-65、3-2和2-13scFv抗体进行编码的示例性DNA序列。
表7：可变重链多核苷酸序列
Figure BDA0002760798540000621
Figure BDA0002760798540000631
Figure BDA0002760798540000641
Figure BDA0002760798540000651
表8：可变轻链多核苷酸序列
Figure BDA0002760798540000652
Figure BDA0002760798540000661
Figure BDA0002760798540000671
Figure BDA0002760798540000681
表9：可变scFv多核苷酸序列
Figure BDA0002760798540000682
Figure BDA0002760798540000691
Figure BDA0002760798540000701
Figure BDA0002760798540000711
为了产生本文所公开的抗FAM19A5 scFv抗体，将对VH和VL进行编码的DNA片段可操作地连接到对柔性接头进行编码，例如对氨基酸序列(Gly4-Ser)3进行编码的另一个片段，使得VH和VL序列可以表达为连续的单链蛋白质，其中VL区和VH区由柔性接头连接(参见例如Bird等人，(1988)，《科学》242：423-426；Huston等人，(1988)《美国国家科学院院刊》85：5879-5883；McCafferty等人，(1990)，《自然》348：552-554)。然后可以将此类核酸序列插入本文公开的AAV载体中，所述AAV载体然后可以用于产生scFv抗体，例如，如实例所证明的。
可替代地，分别对抗FAM19A5抗体(具有或不具有信号肽)的重链和轻链进行编码的核苷酸序列，例如SEQ ID NO：43和47、SEQ ID NO：44和48、SEQ ID NO：45和49、SEQ IDNO：46和50、SEQ ID NO：177和178可以插入到本公开的一个或多个AAV载体中。然后可以将此类AAV载体用于产生全长抗体。本文涵盖已经用本公开的AAV载体转导的宿主细胞。
如本文所公开的产生AAV载体的方法是本领域熟知的，包含例如使用包装细胞、辅助病毒或质粒和/或杆状病毒系统的方法(参见例如，Samulski等人，《病毒学杂志(J.Virology)》63，3822(1989)；Xiao等人，《病毒学杂志》72，2224(1998)；Inoue等人，《病毒学杂志》72，7024(1998)；WO1998/022607；以及WO2005/072364)。
还已知产生假型AAV载体的方法(参见例如，WO00/28004)以及AAV载体的各种修饰或调配物，以在体内施用时降低其免疫原性(参见例如，WO01/23001；WO00/73316；WO04/112727；WO05/005610；以及WO99/06562)。在一些实施例中，AAV载体可以从AAV的各种血清型制备或衍生，所述AAV可以混合在一起或与其它类型的病毒混合以产生嵌合(例如，假型)AAV病毒。
III.药物组合物
本文提供了组合物，所述组合物包括呈生理上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂形式的具有期望纯度的本公开的AAV载体(《雷明顿药物科学(Remington′s PharmaceuticalSciences)》(1990)麦克出版公司(Mack Publishing Co.)，伊斯顿，宾夕法尼亚州)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒并且包含：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环已醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子，如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
在一些实施例中，药物组合物包括本文所描述的AAV载体以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂(呈药学上可接受的载剂形式)。在具体实施例中，药物组合物包括有效量的本文所描述的抗体或其抗原结合部分以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂(呈药学上可接受的载剂形式)。在一些实施例中，抗体是药物组合物中包含的唯一活性成分。本文所描述的药物组合物可以可用于降低FAM19A5活性和治疗病状如中枢神经系统损害、疾病或病症例如神经性疼痛。
在肠胃外制剂中使用的药学上可接受的载剂包含水性媒剂、非水性媒剂、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、隔绝剂或螯合剂以及其它药学上可接受的物质。水性媒剂的实例包含氯化钠注射剂、林格注射剂、等渗右旋糖注射剂、无菌水注射剂、右旋糖和乳酸林格注射剂。非水性肠胃外媒剂包含植物来源的不挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。可以将抑制细菌或抑制真菌的浓度的抗微生物剂添加到包装在多剂量容器中的肠胃外制剂中，所述多剂量容器包含苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵。等渗剂包含氯化钠和右旋糖。缓冲剂包含磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包含硫酸氢钠。局部麻醉剂包含盐酸普鲁卡因。悬浮剂和分散剂包含羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包含聚山梨酯80(
Figure BDA0002760798540000731
80)。金属离子的隔绝剂或螯合剂包含EDTA。药物载剂还包含用于水溶性媒剂的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；以及用于pH调整的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
可以调配本公开的药物组合物以用于受试者的任何施用途径。施用途径的具体实例包含鼻内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、经肺、皮下、腹膜内、玻璃体内、硬膜外、视网膜下或心室内。本文还考虑了通过皮下、肌内或静脉内注射表征的肠胃外施用。可以以常规形式作为液体溶液或悬浮液、适于在注射前溶解或悬浮于液体中的固体形式或作为乳剂制备注射剂。注射剂、溶液和乳剂也含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。另外，如果需要，待施用的药物组合物还可以含有少量的无毒辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、增溶剂和其它此类药剂，例如醋酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯和环糊精。
用于肠胃外施用抗体的制剂包含准备注射的无菌溶液、准备仅在使用前与溶剂组合的无菌干燥可溶性产品如冻干粉末(包含皮下注射片剂)、准备注射的无菌悬浮液、准备仅在使用前与媒剂组合的无菌干燥不溶性产品以及无菌乳剂。溶液可以是水性或非水性的。
如果静脉内施用，则合适的载剂包含生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)以及含有如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇以及其混合物等增稠剂和增溶剂的溶液。
如所描述的那样制备包括抗体的局部混合物以用于局部和全身施用。所产生的混合物可以是溶液、悬浮液、乳剂等并且可以被调配成乳膏、凝胶、软膏、乳剂、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、气雾剂、冲洗液、喷雾剂、栓剂、绷带、皮肤贴剂或任何其它适于局部施用的调配物。
可以将本文所描述的AAV载体调配成用于如通过吸入局部应用的气雾剂(参见例如美国专利第4,044,126号、第4,414,209号和第4,364,923号，所述专利描述了用于递送可用于治疗炎症性疾病尤其是哮喘的类固醇的气雾剂)。用于向呼吸道施用的这些调配物可以单独或与如乳糖等惰性载剂组合地呈气雾剂或溶液形式以用于雾化器或者作为微细粉形式以用于吹入。在此类情况下，调配物的颗粒的直径在一些实施例中将小于50微米，在一些实施例中小于10微米。
可以将本文所描述的AAV载体调配成用于局部或局部应用，如以凝胶、乳膏和洗剂的形式用于局部应用于皮肤和粘膜如眼睛中以及用于应用于眼睛或用于颅内或脊柱内应用。考虑了用于透皮递送以及用于向眼睛或粘膜施用或用于吸入疗法的局部施用。也可以施用单独的或与其它药学上可接受的赋形剂的组合的抗体的鼻溶液。
在一些实施例中，包括本文所描述的AAV载体的药物组合物是冻干粉末，所述冻干粉末可以重构以用于作为溶液、乳剂和其它混合物施用。也可以将所述冻干粉末重构并调配成固体或凝胶。通过将本文所描述的抗体或其抗原结合部分或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些实施例中，冻干粉末是无菌的。溶剂可以含有赋形剂，所述赋形剂改善粉末或由粉末制备的重构溶液的稳定性或其它药理学组分。可以使用的赋形剂包含但不限于右旋糖、山梨醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合适的药剂。溶剂还可以含有缓冲剂，如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其它此类缓冲剂，在一些实施例中，所述缓冲剂约为中性pH。随后对溶液进行无菌过滤、然后在本领域技术人员已知的标准条件下冻干提供了期望的调配物。在一些实施例中，将所产生的溶液分配到小瓶中以用于冻干。每个小瓶将含有单剂量或多剂量的化合物。可以在适当的条件下如在约4℃至室温下储存冻干粉末。
用注射用水重构此冻干粉末提供了用于在肠胃外施用时使用的调配物。为了重构，将冻干粉末添加到无菌水或其它合适的载剂中。精确量取决于所选的化合物。可以凭经验确定此量。
还可以将本文所描述的AAV载体和本文提供的其它组合物调配成靶向待治疗受试者的特定组织、受体或身体的其它区域。许多此类靶向方法是本领域技术人员熟知的。本文考虑了将所有此类靶向方法用于在本发明组合物中使用。对于靶向方法的非限制性实例，参见例如美国专利第6,316,652号、第6,274,552号、第6,271,359号、第6,253,872号、第6,139,865号、第6,131,570号、第6,120,751号、第6,071,495号、第6,060,082号、第6,048,736号、第6,039,975号、第6,004,534号、第5,985,307号、第5,972,366号、第5,900,252号、第5,840,674号、第5,759,542号以及第5,709,874号。在某些实施例中，靶向本文所描述的AAV载体以治疗疾病或病症，例如中枢神经系统损害、脑退行性疾病或神经性疼痛。
用于体内施用的组合物可以是无菌的。这通过穿过例如无菌过滤膜过滤而容易地实现。
IV.试剂盒
本文还提供了包括本文所描述的一种或多种AAV载体的试剂盒。在一些实施例中，本文提供了一种药物包装或试剂盒，所述药物包装或试剂盒包括一个或多个填充有本文所描述的药物组合物的成分中的一种或多种成分(如本文提供的一种或多种AAV载体)的容器，任选地使用说明。在一些实施例中，试剂盒含有如本文所描述的那些等本文所描述的药物组合物和任何预防剂或治疗剂。
V.治疗性用途和方法
在某些方面，本文呈现了用于减轻对受试者的CNS的损伤或损害的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的AAV载体。
在其它方面，本文呈现了用于抑制、减缓、压制、遏制、减少、逆转或预防受试者的CNS的神经胶质增生的开始或引发以及其相关有害作用的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的AAV载体。在一些实施例中，本文呈现了用于抑制、减缓、压制、遏制、减少、逆转或预防受试者的CNS的反应性星形细胞的过度或异常增殖以及其相关有害作用的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的AAV载体。在一些实施例中，本文呈现了用于降低、抑制或减少硫酸软骨素蛋白聚糖的表达(包含神经聚糖、NG2或两者的水平)或减少受试者的神经聚糖、NG2或两者的活性或使其失活的方法，所述方法包括向受试者施用本文所描述的AAV载体。在一些实施例中，本文呈现了用于优选地在损伤或损害之后刺激、促进、增加或活化受试者的神经元的生长的方法，所述方法包括向受试者施用如本文所描述的AAV载体。在其它实施例中，本文呈现了用于提高有需要的受试者的优选地神经元的核中的c-fosmRNA、c-fos蛋白或c-fos蛋白活性的水平以及提高ERK mRNA、ERK蛋白或pERK活性的水平的方法，所述方法包括向受试者施用本公开的AAV载体。在某些实施例中，本文呈现了用于增强或提高有需要的受试者的优选地神经元中的GAP43 mRNA、GAP43蛋白的水平或者提高GAP43蛋白的活性的方法，所述方法包括向受试者施用如本文所公开的AAV载体。在某些实施例中，本文呈现了用于增强或促进有需要的受试者的神经元的存活和/或促进轴突的再生的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的AAV载体。在一些实施例中，受试者是人，优选地因例如CNS损害、创伤、损伤、脑脊髓损害、脑瘤、感染、局部缺血、中风、自身免疫反应和/或神经退行性疾病而具有对神经元的损伤或损害的人。
在一些实施例中，本文还呈现了用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述疾病或病症包含中枢神经系统损害、脑脊髓系统损害、脑退行性病症、退行性脑脊髓或神经病症或神经性疼痛，所述方法包括向受试者施用本公开的AAV载体。在一些实施例中，中枢神经系统损害是创伤性脑损伤、脑脊髓损害、中风、脑瘤或其组合。在一些实施例中，脑退行性病症是亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)或其组合。因此，在某些实施例中，本文公开了用于治疗有需要的受试者的创伤性脑损伤、脑脊髓损害、中风、脑瘤或其组合的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的AAV载体或其组合物。在一些实施例中，本文公开了用于治疗有需要的受试者的亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、ALS的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的AAV载体或其组合物。在一些实施例中，受试者是人。
在某些实施例中，本文呈现了用于治疗、减少、逆转、预防、改善、控制或抑制有需要的受试者的纤维化的方法，所述方法包括向受试者施用本文所公开的AAV载体或其组合物。在一些实施例中，纤维化是良性的(即，不引起任何症状)。在其它实施例中，纤维化与可以可逆或不可逆的病理状态相关。在一些实施例中，纤维化选自由以下组成的组：肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、骨髓纤维化、胰腺纤维化、皮肤纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化、关节纤维化、乳腺纤维化、肌肉纤维化、腹膜后纤维化、甲状腺纤维化、淋巴结纤维化、膀胱纤维化和胸膜纤维化。在一个实施例中，纤维化是肝纤维化或肺纤维化。在另一个实施例中，纤维化与源自如肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌和/或胰腺癌等癌症的肿瘤相关。在一个实施例中，所述方法减轻、逆转、缓和、改善、抑制或减慢或预防了纤维化、与纤维化相关的症状、纤维化的根本原因或其组合。
在其它实施例中，本文所公开的AAV载体可以治疗、减少、逆转、预防、改善、控制或抑制有需要的受试者的纤维化相关疾病或病症。术语“与疾病或病症相关的纤维化”是指伴随疾病或病症或由疾病或病症引起或造成的纤维化。所述术语包含由上文所公开的疾病或病症造成或引起的纤维化或伴随疾病或病症的纤维化。
在又其它实施例中，本公开的AAV载体可以治疗、减少、逆转、预防、延迟、改善、控制或抑制有需要的受试者的肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌和/或胰腺癌，其中所述方法包括向受试者施用所述AAV载体。在一些实施例中，肝癌、肺癌、肾癌、乳腺癌和/或胰腺癌与纤维化相关或由纤维化引起。
在一些实施例中，施用治疗有效量的本公开的AAV载体或其组合物。当治疗受试者(例如，人)时，本文所公开的AAV载体的治疗有效量取决于如年龄、性别、疾病的严重程度等因素。
在一些实施例中，本公开的AAV载体或其组合物静脉内、口服、肠胃外、透鞘、鞘内、脑室内、肌内、经肺、腹膜内、玻璃体内、皮下、硬膜外、视网膜下或心室内施用。
在一些实施例中，本文所公开的AAV载体或其组合物可以与一种或多种用于治疗纤维化的另外的药剂(例如，用于特发性肺纤维化的吡非尼酮(pirfenidone)
Figure BDA0002760798540000771
或尼达尼布(nintedanib)
Figure BDA0002760798540000772
)组合地施用。一种或多种另外的治疗药物的剂量和施用是本领域已知的，例如，如相应药物的产品标签所指示的。
在一些实施例中，本文所描述的AAV载体或其组合物可以与一种或多种用于治疗中枢神经系统损害(例如，创伤性脑损伤、脑脊髓损害、中风或脑瘤)、脑脊髓系统损害，脑退行性病症(例如，亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、多发性硬化症、ALS)、退行性脑脊髓或神经病症或神经性疼痛的另外的药剂组合地施用。例如，用于治疗亨廷顿氏病的非限制性示例性药剂包含四苯喹嗪(Tetrabenazine)
Figure BDA0002760798540000773
抗精神病药如氟哌啶醇(haloperidol)
Figure BDA0002760798540000774
氯丙嗪(chlorpromazine)、利培酮(risperidone)
Figure BDA0002760798540000775
和喹硫平(quetiapine)
Figure BDA0002760798540000776
用于治疗帕金森氏病的非限制性示例性药剂包含左旋多巴(levodopa)(有或没有卡比多巴(Carbidopa))、多巴胺激动剂如普拉克索(pramipexole)
Figure BDA0002760798540000777
罗匹尼罗(ropinirole)
Figure BDA0002760798540000778
和罗替戈汀(rotigotine)
Figure BDA0002760798540000779
以及阿扑吗啡(apomorphine)
Figure BDA00027607985400007710
司来吉兰(selegiline)(
Figure BDA00027607985400007711
和
Figure BDA00027607985400007712
)、雷沙吉兰(rasagiline)
Figure BDA00027607985400007713
恩他卡朋(Entacapone)
Figure BDA00027607985400007714
苯托品(benztropine)
Figure BDA00027607985400007715
苯海索(trihexyphenidyl)和金刚烷胺(amantadine)。
用于治疗阿尔茨海默氏病的非限制性示例性药剂包含多奈哌齐(Donepezil)
Figure BDA00027607985400007716
加兰他敏(Galantamine)
Figure BDA00027607985400007717
和利伐斯的明(Rivastigmine)
Figure BDA00027607985400007718
用于治疗多发性硬化症的非限制性示例性药剂包含醋酸格拉替雷(Glatirameracetate)
Figure BDA00027607985400007719
富马酸二甲酯(Dimethyl fumarate)
Figure BDA00027607985400007720
芬戈莫德(Fingolimod)
Figure BDA0002760798540000781
特立氟胺(Teriflunomide)
Figure BDA0002760798540000782
那他珠单抗(Natalizumab)
Figure BDA0002760798540000783
阿仑单抗(Alemtuzumab)
Figure BDA0002760798540000784
和米托蒽醌(Mitoxantrone)。
用于治疗ALS的非限制性示例性药剂包含利鲁唑(riluzole)
Figure BDA0002760798540000785
所述一种或多种另外的治疗药物的剂量和施用是本领域已知的，例如，如相应药物的产品标签所指示的。
以下实例以说明性方式而不是以限制性方式提供。
实例1：腺相关病毒(AAV)载体构建
如下构建对抗FAM19A5抗体克隆1-65、2-13或3-2的单链可变片段(scFv)进行编码的AAV载体。简而言之，为了构建对3-2scFv进行编码的AAV载体，用EcoRI和NotI消化pscAAV-MCS表达载体(细胞生物学实验室公司(Cell biolabs)，目录号VPK-430)。然后，将在CMV启动子下对人β球蛋白内含子进行编码的转基因和3-2scFv插入到如图1所示的pscAAV-MCS载体中。插入人β珠蛋白内含子以最大化基因表达。为了产生对1-65或2-13cFv进行编码的AAV载体，将以上AAV载体用EcoRV和NotI消化以去除3-2scFv转基因。然后，将对1-65或2-13ScFv进行编码的转基因插入到AAV载体中。对3-2、1-65或2-13ScFv进行编码的转基因经过密码子优化以在小鼠中最佳表达。所有AAV载体都在scFv转基因的前面包含小鼠IgGκ信号肽，以促进细胞分泌。AAV载体还在scFv转基因的背面包含FLAG标签，以辅助检测基因表达。一旦构建成，AAV载体就被转化到大肠杆菌中进行培养，并且使用maxiprep获得大量的AAV载体。由Signagen实验室(Signagen Laboratories)(马里兰州罗克维尔市(Rockville，Maryland))产生并提供了对1-30scFv或小鼠IL-10或GFP进行编码的AAV载体。
以下重组AAV用于下文所描述的实例：(i)scAAV8-CMV-3-2-ScFv(德国Sirion公司(Sirion，Germany))；(ii)scAAV9-CMV-3-2-ScFv(美国Signagen实验室)；(iii)scAAV9-CMV-1-65-ScFv(美国Signagen实验室)scAAV9-CMV-2-13-ScFv(美国Signagen实验室)；(iv)scAAV1-CMV-3-2-ScFv(美国Signagen实验室)；(v)scAAV9-CMV-1-30-ScFv(美国Signagen实验室)；(vi)scAAV9-CMV-mIL-10(美国Signagen实验室)；(vii)scAAV9-CMV-GFP(美国Signagen实验室)；(viii)scAAV1-CMV-GFP(美国Signagen实验室)。
实例2：抗FAM19A5 ScFv基因表达的分析
使用上文构建的AAV载体(scAAV8-CMV-3-2-ScFv、scAAV9-CMV-3-2-ScFv、scAAV9-CMV-1-65-ScFv和scAAV9-CMV-2-13-ScFv)测试抗FAM19A5 ScFv的表达。简而言之，将HEK293细胞(1.2×106个)细胞接种在60mm2的培养皿中并培养24小时。之后，用opti-MEM培养基(低血清)替换培养基，并且用不同的AAV载体(使用多个感染复数(MOI))转导HEK293细胞。在转导后第1天、第4天和第8天回收上清液。为了确认基因表达，使用ABSbioTMDYKDDDK标签ELISA试剂盒(高级生物试剂公司(Advanced Bioreagent)，目录号SE002-flag)来检测包含在scFv基因背面处的FLAG标签(参见图1和实例1)。将收集的上清液稀释1到10倍，然后将100μL的经过稀释的上清液添加到ELISA板的孔中并且允许在室温下以350rpm反应2小时。之后，洗涤板，并且将100μL的检测抗体添加到所述孔中的每个孔中并且使其在室温下以350rpm反应1小时。接下来，再次洗涤板，将100μL的TMB溶液添加到每个孔中并且使其达到10-30分钟。然后，将100μL的终止溶液添加到孔中，并且在450nm处测量吸光度。通过校准曲线来测量FLAG的量，并且通过乘以FLAG表达与标准品的分子量的比率来计算scFv的量。
如图2A所示，对于scAAV8-CMV-3-2-scFv载体，最早可以在转导后第1天在上清液中检测到抗FAM19A5 scFv(MOI为1×105)。到转导后第8天，在上清液中检测到大约100ng/mL的3-2scFv(MOI为1×105)。利用scAAV9-CMV-3-2-scFv载体，到转导后第8天，在上清液中检测到大约70ng/mL的3-2scFv(MOI为2×105)。利用scAAV9-CMV-1-65-ScFv和scAAV9-CMV-2-13-ScFv观察到类似的结果。如图2C所示，在转导后第4天，在上清液中分别检测到大约120ng/mL和115ng/mL的1-65scFv和2-13scFv。
以上数据证明，实例1中构建的所有AAV载体均已正确构建，并且当转导到细胞中时它们可以诱导抗FAM19A5 scFv表达。
实例3：U87MG细胞中的FAM19A5结合的抑制
为了评估由以上AAV构建体产生的抗FAM19A5 scFv的结合能力，执行了使用U87MG细胞(人原发性胶质母细胞瘤细胞系并且可以与人FAM19A5-Fc蛋白结合)的结合抑制测定。简而言之，用scAAV8-CMV-2-3-ScFv(MOI为1×105)、scAAV9-CMV-1-65-ScFv(MOI为2×105)或scAAV9-CMV-2-13-ScFv(MOI为2×105)转导U87MG细胞。然后，在转导后第4天，将0.1μg的人FAM19A5-Fc蛋白与200μL的上清液混合，并且将混合物在4℃下温育30分钟。阴性对照由PBS或来自用scAAV9-CMV-GFP载体转导的HEK293细胞的上清液组成。温育30分钟后，将100μL的混合物(人FAM19A5-Fc+来自用抗FAM19A5 scFv AAV构建体转染的细胞的上清液)添加到U87MG细胞(2×105)中并且在4℃下反应1小时。然后，将细胞用PBS洗涤、用100μL的山羊抗人IgG 488抗体(英杰公司(Invitrogen)，产品目录号A11013)(1∶50稀释)处理、在4℃下再温育另外的30分钟。然后再次洗涤细胞，并且使用流式细胞术分析人FAM19A5-Fc与U87MG细胞的结合。
如图3A、3B和3C所示，当用混合物(人FAM19A5-Fc+来自用抗FAM19A5 scFv AAV构建体转染的细胞的上清液)处理U87MG细胞时，与用对照混合物(人FAM19A5-Fc+来自用scAAV9-CMV-GFP构建体转染的细胞的上清液)处理的细胞相比，人FAM19A5-Fc与细胞的结合减少。对于所有测试的抗FAM19A5 scFvAAV构建体都是如此。与对应的对照(来自用AAV-GFP载体转染或用PBS处理的细胞的上清液)相比，来自用scAAV9-CMV-1-65-ScFv、scAAV9-CMV-2-13-ScFv、scAAV8-CMV-3-2-ScFv转导的细胞的上清液分别使人FAM19A5-Fc与U87MG细胞的结合的平均荧光强度(MFI)降低19％(图3A)、68％(图3B)和42％(图3C)。
这些结果证明，由实例1中所描述的AAV构建体产生的抗FAM19A5 scFv可以以高亲和力高效地与人FAM19A5结合。
实例4：C8-D1A细胞中的FAM19A5结合的抑制
为了确认在实例3中观察到的结合抑制，将C8-D1A细胞用于结合抑制测定。C8-D1A细胞是星形细胞细胞系并且可以在培养时将FAM19A5分泌到周围的培养基中。如果由AAV构建体产生的抗FAM19A5 scFv可以有效地与人FAM19A5结合，则利用来自用抗FAM19A5 scFvAAV转导的细胞的上清液来处理C8-D1A细胞培养基应导致培养基中的FAM19A5蛋白水平降低。
简而言之，将C8-D1A细胞铺板到6孔板(2×105个细胞/孔)上并且培养大约24小时。含有抗FAM19A5 scFv的上清液是通过用以下之一转染HEK293细胞产生的：(i)scAAV8-CMV-3-2-ScFv(MOI为1×105)；(ii)scAAV9-CMV-1-65-ScFv(MOI＝2×105)；或(iii)scAAV9-CMV-2-13-ScFv(MOI＝2×105)，并且然后在转导后第8天收集上清液。为了活化C8-D1A细胞，将TGF-β(20ng/mL)添加到具有含有抗FAM19A5 scFv的上清液的细胞。使用PBS或来自用scAAV-9-CMV-GFP转导的细胞的上清液作为阴性对照。使细胞温育24小时，并且然后使用ELISA测定(ELISA测定中使用的方法参见实例1)测量培养物中的抗FAM19A5蛋白水平。
如图4A所示，当在来自用scAAV8-CMV-3-2-ScFv转导的细胞的上清液存在的情况下活化C8-D1A细胞时，与对应的对照(PBS)相比，在培养基中检测到的FAM19A5蛋白水平降低约38％。与对应的对照(来自用GFP AAV载体转染的细胞的上清液)相比，来自用scAAV9-CMV-2-13-ScFv和scAAV9-CMV-1-65-ScFv转导的细胞的上清液分别使培养基中的FAM19A5蛋白水平降低约63％和14％。参见图4B。
以上数据进一步确认了由AAV载体产生的抗FAM19A5 scFv可以有效地与人FAM19A5结合。
实例5：体内表达分析
为了确认体内抗FAM19A5 scFv表达，将scAAV8-CMV-3-2-ScFv构建体鞘内施用于C57BL/6小鼠(1×1011病毒基因组(vg)/小鼠)。然后在施用后1周和2周时处死小鼠，并且分析脊髓组织(腰脊髓)。为了检测基因表达，使用抗FLAG抗体和荧光显微术。
如图5所示，在施用后第1周(左上图)和第2周(左下图)在原初动物中(即，无AAV载体的施用)都不存在阳性抗体表达。相比之下，在scAAV8-CMV-3-2-ScFv治疗的动物中，施用后第1周在腹角神经元中观察到抗FLAG(即，抗FAM19A5 scFv)表达(右上图)。到第2周时，包含背角区在内的表达更高。
此数据确认了较早的体外表达数据(参见实例2)并且表明当鞘内施用抗FAM19A5AAV载体时，所述抗FAM19A5 AAV载体可以转导周围细胞，从而导致抗FAM19A5 scFv产生。
实例6：使用scAAV8-CMV-3-2-ScFv的慢性神经性疼痛模型(CCI)中的疼痛缓解的评估
为了评估施用抗FAM19A5 scFv AAV构建体的体内效应，使用慢性压迫性损伤(CCI)的小鼠模型。简而言之，将将PBS(对照)或scAAV8-CMV-3-2-ScFv鞘内施用于C57BL/6小鼠(进入到椎骨中)。然后，在施用后约1周，通过阴囊神经结扎在动物中诱导外周神经损伤。在损伤后的各个时间点，均评估了动物的机械性痛觉超敏(对物理外部刺激的反应)和热痛觉过敏(对温度升高的反应)两者。通过将冯弗雷微丝(0.16g)多次应用于受伤的脚并且观察动物以疼痛反应的频率来评估机械性痛觉超敏。使用Hargreaves测试评估热痛觉过敏，其中向受伤的脚应用径向热刺激(强度：30)，并且确定缩爪潜伏期。
如图6A所示，与对照动物(仅PBS)相比，接受scAAV8-CMV-3-2的动物对冯弗雷微丝的反应频率更低。对于热痛觉过敏，观察到类似的结果。参见图6B。这些结果证明，抗FAM19A5 AAV构建体的体内施用可以减轻外周神经损伤后的神经性疼痛。
实例7：使用scAAV9-CMV-3-2-ScFv的慢性神经性疼痛模型(CCI)中的疼痛缓解的评估
还使用如实例6中所描述的慢性压迫性损伤(CCI)的小鼠模型测试scAAV9-CMV-3-2-ScFv的体内效应。简而言之，将scAAV9-CMV-3-2-ScFv构建体鞘内施用于C57BL6小鼠。对照动物接受scAAV9-CMV-GFP构建体。然后，在施用后约1周，诱导外周神经损伤。然后，如实例6中所描述的在各个时间点评估动物的机械性痛觉超敏和热痛觉过敏。
如图7A和7B所示，接受scAAV9-CMV-3-2-ScFv的动物在外周神经损伤后似乎对疼痛的耐受性更高。例如，与对照动物相比，接受scAAV9-CMV-3-2-ScFv的小鼠对冯弗雷微丝的反应频率更低(图7A)并且对升高的温度有更长的潜伏期时间(图7B)。
总体而言，这些结果证明，使用AAV载体可以有效地体内递送抗FAM19A5 scFv，并且由AAV载体产生的抗FAM19A5 scFv充分起功能(例如，与人FAM19A5结合并且减轻神经性疼痛)。
实例8：使用scAAV1-CMV-3-2-ScFv的慢性神经性疼痛模型(CCI)中的疼痛缓解的评估
为了进一步评估以上效应是否取决于所使用的AAV的类型，测试scAAV1-CMV-3-2-ScFv的体内效应。简而言之，C57BL/6小鼠通过鞘内施用以两周的间隔接受两个剂量的(每个剂量＝1×1011vg/小鼠)scAAV1-CMV-3-2-ScFv。最后施用后一周，诱导外周神经损伤，并且如实例6中所描述的评估机械性痛觉超敏和热痛觉过敏。
如在实例6和7中观察到的，与对照组相比，从损伤诱导后约第4天开始(即，术后几天)，用scAAV1-CMV-3-2-ScFv治疗的动物示出机械性痛觉超敏的改善(即，对冯弗雷微丝刺激的反应不那么频繁)。图8A.维持这种改善直到损伤诱导后第24天实验结束。对于热痛觉过敏，在损伤诱导后约第5天开始并且至少持续到损伤诱导后第12天，在用scAAV1-CMV-3-2-ScFv治疗的动物中也观察到了改善(即，对热刺激的潜伏期时间更长)。图8B.
这些结果进一步确认了3-2抗FAM19A5 scFv在治疗神经性疼痛方面的功效并且证明治疗益处不取决于所使用的AAV载体的类型。
实例9：使用scAAV9-CMV-2-13-ScFv或scAAV9-CMV-1-30-ScFv的慢性神经性疼痛模型(CCI)中的疼痛缓解的评估
为了评估抗FAM19A5抗体的其它克隆是否也可以治疗神经性疼痛，再次使用实例6中所描述的慢性压迫性损伤(CCI)的小鼠模型。简而言之，通过鞘内施用将scAAV9-CMV-2-13-ScFv(按两周的间隔的两个剂量；每个剂量＝1×1011vg/小鼠)或scAAV9-CMV-1-30-ScFv(单个剂量；1×1011vg/小鼠)施用于C57BL/6小鼠。对照动物接受scAAV9-CMV-GFP。最后施用后大约一周，诱导外周神经损伤，并且在损伤诱导后的各个时间点评估机械性痛觉超敏和热痛觉过敏两者(参见实例6)。
如图9A、9B、10A和10B所示，用scAAV9-CMV-2-13-ScFv或scAAV9-CMV-1-30-ScFv治疗的动物示出机械性痛觉超敏和热痛觉过敏两者的改善。这些结果证明抗FAM19A5抗体的不同克隆可以用于治疗神经性疼痛。
实例10：结合IL-10使用抗FAM19A5 ScFv的慢性神经性疼痛模型(CCI)中的疼痛缓解的评估
为了确定抗FAM19A5 ScFv结合其它治疗剂(即，IL-10)的功效，通过鞘内施用向C57BL/6小鼠施用以下方案之一：(i)scAAV1-CMV-GFP；(ii)scAAV1-CMV-3-2-ScFv；(iii)scAAV1-CMV-3-2-ScFv+scAAV9-CMV-mIL-10；以及(iv)scAAV9-CMV-mIL-10。将不同的治疗方案以1×1011μg/小鼠的剂量两次(两周的间隔)施用于小鼠。最后施用后一周，诱导外周神经损伤，并且在各个时间点评估机械性痛觉超敏(参见实例6)。
如在较早的实例中所观察到的，与对照组(即，scAAV1-CMV-GFP)相比，单独用scAAV1-CMV-3-2-ScFv治疗的动物对物理刺激的耐受性更高(即，对冯弗雷微丝应用的反应不那么频率)。在单独用scAAV9-CMV-miL-10治疗的动物中观察到类似的反应(图11A)。与用单一治疗方案治疗的动物相比，当用scAAV1-CMV-3-2-ScFv和scAAV9-CMV-mIL-10的组合治疗动物时，动物表现出更大的改善反应。对于scAAV9-CMV-2-13-ScFv(图11B)和scAAV9-CMV-1-30-ScFv(图11C)，观察到类似的结果。
这些结果进一步证明了通过AAV载体递送的抗FAM19A5 scFv在治疗神经性疼痛方面的功效。结果还证明当与如IL-10等其它治疗剂组合地使用时，可以进一步增强这种功效。
本PCT申请要求于2018年5月8日提交的美国临时申请第62/668,634号的优先权权益，所述美国临时申请以全文引用的方式并入本文中。
序列表
<110> 神经科学有限公司（NEURACLE SCIENCE CO., LTD.）
<120> 抗FAM19A5抗体的腺相关病毒（AAV）递送
<130> 3763.010PC01/C-K/DKC
<150> US 62/668,634
<151> 2018-05-08
<160> 301
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu
1 5 10 15
Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu
20 25 30
Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
35 40 45
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
50 55 60
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
65 70 75 80
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
85 90 95
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
100 105 110
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
115 120 125
Thr Thr Val Ser
130
<210> 2
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Gln Leu Leu Lys Ala Leu Trp Ala Leu Ala Gly Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Cys Phe Leu Val Leu Val Ile His Ala Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln
20 25 30
Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser
35 40 45
Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg
50 55 60
Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp
65 70 75 80
Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu
85 90 95
Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys
100 105 110
Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr Thr Thr Val Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 53
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Met Tyr His His Arg Glu Trp Pro Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln
1 5 10 15
Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu
20 25 30
Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys
35 40 45
Thr Thr Thr Val Ser
50
<210> 4
<211> 1501
<212> DNA
<213> 智人
<400> 4
ggcggcggag gatggcgcgc gcggggcccg cacgtggagg ccggcgcggg ggcgcgggca 60
gggccggctg ctgagacgcg ctgctgcccc ccgcgcgggc gccgcggctt caatggcgcc 120
atcgcccagg accggcagcc ggcaagatgc gaccgccctg cccagcatgt cctcaacttt 180
ctgggcgttc atgatcctgg ccagcctgct catcgcctac tgcagtcagc tggccgccgg 240
cacctgtgag attgtgacct tggaccggga cagcagccag cctcggagga cgatcgcccg 300
gcagaccgcc cgctgtgcgt gtagaaaggg gcagatcgcc ggcaccacga gagcccggcc 360
cgcctgtgtg gacgcaagaa tcatcaagac caagcagtgg tgtgacatgc ttccgtgtct 420
ggagggggaa ggctgcgact tgttaatcaa ccggtcaggc tggacgtgca cgcagcccgg 480
cgggaggata aagaccacca cggtctcctg acaaacacag cccctgaggg ggccccggga 540
gtggccttgg ctccctggag agcccacgtc tcagccacag ttctccactc gcctcggact 600
tcacccgttc tctgccgccc gcccactccg tttccctgtg gtccgtgaag gacggcctca 660
ggccttggca tcctgagctt cggtctgtcc agccgacccg aggaggccgg actcagacac 720
ataggcgggg ggcggcacct ggcatcagca atacgcagtc tgtgggagcc cggccgcgcc 780
cagcccccgc cgaccgtggc gttggccctg ctgtcctcag aggaggagga ggaggaggca 840
gctccggcag ccacagaagg ctgcagccca gcccgcctga gacacgacgc ctgccccagg 900
ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960
tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020
caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080
gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140
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cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260
acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320
ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380
tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440
taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500
a 1501
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F1
<400> 5
Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg
1 5 10
<210> 6
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F2
<400> 6
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 7
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F3
<400> 7
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
1 5 10 15
Ala Arg Pro Ala
20
<210> 8
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F4
<400> 8
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
1 5 10 15
Cys Asp Met Leu
20
<210> 9
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F5
<400> 9
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
1 5 10 15
Asn Arg Ser Gly
20
<210> 10
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F6
<400> 10
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
1 5 10 15
Thr Thr Val Ser
20
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13 抗体VH-CDR1
<400> 11
Ser His Gly Met Phe
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13; 2-13D; 2-13D-37; 2-13D-37-1.5W-41; 2-13D-37-3W-16 VH-CDR2
<400> 12
Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 13
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13; 2-13D; 2-13D-37 VH-CDR3
<400> 13
Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly
1 5 10 15
Gln Ile Asp Ala
20
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH-CDR1
<400> 14
Ser Phe Asn Met Phe
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH-CDR2
<400> 15
Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2；1-7A-IT；低PI；1-30；1-17；1-32；4-11；6-10 VH-CDR3
<400> 16
Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser
1 5 10 15
Ala Gly Glu Ile Asp Ala
20
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65; SS01-13; SS01-13-s5; S5-2.GKNG VH-CDR1
<400> 17
Ser Tyr Gln Met Gly
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65; SS01-13 VH-CDR2
<400> 18
Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65; SS01-13; SS01-13-s5; S5-2.GKNG VH-CDR3
<400> 19
Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR1
<400> 20
Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR2
<400> 21
Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro
1 5
<210> 22
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR3
<400> 22
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
1 5 10 15
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala
20 25
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL-CDR1
<400> 23
Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13; 2-13D; 2-13D-37; 2-13D-37-1.5W-41; 2-13D-37-3W-16 VL-CDR2
<400> 24
Trp Asp Asp Glu Arg Pro Ser
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2; 1-7A-IT; 1-17; 1-32; 4-11; 6-10 VL-CDR1
<400> 26
Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL-CDR2
<400> 27
Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2; 1-7A-IT VL-CDR3
<400> 28
Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly Gly Ile
1 5 10
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL-CDR1
<400> 29
Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL-CDR2
<400> 30
Trp Asn Asp Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65; ss01-13; SS01-13-S5; S5-2.GKNG VL-CDR3
<400> 31
Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr Val Gly Val
1 5 10
<210> 32
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR1
<400> 32
Gly Tyr Gly Tyr Gly
1 5
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR2
<400> 33
Gln Asn Asp
1
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR3
<400> 34
Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile
1 5 10
<210> 35
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH
<400> 35
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp
100 105 110
Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 36
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH
<400> 36
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 37
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH
<400> 37
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH
<400> 38
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
100 105 110
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His
115 120 125
Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
130 135
<210> 39
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL
<400> 39
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 40
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL
<400> 40
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 41
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL
<400> 41
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp
35 40 45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly
85 90 95
Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 42
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL
<400> 42
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val
1 5 10 15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 43
<211> 388
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH
<400> 43
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacagacg 120
cccggcaagg ggttggaata tgtcgctgaa attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 300
tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcca 388
<210> 44
<211> 394
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH
<400> 44
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggctggaata cgtcgctcaa attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180
gcacccgcgg tgaggggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaaccccgg ggctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300
tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360
tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcca 394
<210> 45
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH
<400> 45
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agctatcaga tgggctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggctggaatg ggtcggtgtt attaacaaga gtggtagtga cacatcatac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc caaaggttct 300
gctagttata taactgctgc taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360
tcctcc 366
<210> 46
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH
<400> 46
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc gattatggca tgggttgggt gcgacaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggttgctgct attagaagtg atggtagtaa cccatcatac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgaaggaca acgggcgaag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccacct actactgcgc caaggatggt 300
aatggttact gtgctctcga tgcttatcgt agtggtggtt atagttgtgg tgtttatcct 360
ggtagcatcg acgcatgggg ccacgggacc gaagtcatcg tctcctcc 408
<210> 47
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL
<400> 47
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agataacctg 60
ctccgggggt agctatagct atggctggtt ccagcagaag tctcctggca gtgcccttgt 120
cactgtgatc tactgggatg atgagagacc ctcggacatc ccttcacgat tctccggtgc 180
cctatccggc tccacaaaca cattaaccat cactggggtc caagccgacg acgaggctgt 240
ctatttctgt gggactgaag acatcagcgg cactgctggt gtatttgggg ccgggacaac 300
cctgaccgtc ctggg 315
<210> 48
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL
<400> 48
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agatcacctg 60
ctccgggggt ggcagctatg ctggaagtta ctattatggc tggtaccagc agaaggcacc 120
tggcagtgcc cctgtcactc tgatctatga aagcaacaag agaccctcgg acatcccttc 180
acgattctcc ggttccacat ctggctccac agccacacta accatcactg gggtccaagc 240
cgatgacgag gctatctatt actgtgggag ctgggacagt agcaatggtg gtatatttgg 300
ggccgggaca accctgaccg tcctagg 327
<210> 49
<211> 331
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL
<400> 49
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaaccctggg gaaactgtca agatcacctg 60
ctccgggggt ggtagcagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt cacctagcag 120
tgcccctctc actgtgatct actggaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt 180
ctccggttcc aaatccggct ccacacacac attaaccatc actggggtcc aagccgagga 240
cgaggctgta tatttctgtg ggaatgatga ctacagcagt gatagtggat atgtcggtgt 300
atttggggcc gggacaaccc tgaccgtcct a 331
<210> 50
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL
<400> 50
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacctggaag gaaccgtcga gatcacctgc 60
tccgggagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt ctcctggcag tgcccctgtc 120
actgtgatct atcagaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt ctccggttcc 180
aaatccggct ccacgggcac attaaccatc actggggtcc aagtcgagga cgaggctgtc 240
tattactgtg ggagtgaaga cagcagcact cttgctggta tatttggggc cgggacaacc 300
ctgaccgtcc ta 312
<210> 51
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M3突变体
<400> 51
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ile Glu Glu Arg Ser Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 52
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M4突变体
<400> 52
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Val Lys Cys Ser Cys Phe Pro Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 53
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M5突变体
<400> 53
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Asn Lys Pro Ser Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 54
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6突变体
<400> 54
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Leu Gln Arg Trp Trp
50 55 60
Cys Gln Met Glu Leu Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 55
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M7突变体
<400> 55
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Glu Cys Lys Thr Leu Pro
65 70 75 80
Asp Asn Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 56
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M8突变体
<400> 56
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Ser Cys Ser Ser Gly Asn Lys Ile Lys
85 90 95
Thr Thr Thr Val Ser
100
<210> 57
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体HC
<400> 57
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp
100 105 110
Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
195 200 205
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
225 230 235 240
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
245 250 255
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
260 265 270
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
275 280 285
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
290 295 300
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
305 310 315 320
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
325 330 335
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
340 345 350
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
355 360 365
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
370 375 380
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
385 390 395 400
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
405 410 415
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
420 425 430
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
435 440 445
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 58
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体HC
<400> 58
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 59
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体HC
<400> 59
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 60
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体HC
<400> 60
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
100 105 110
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His
115 120 125
Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
130 135 140
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
145 150 155 160
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
165 170 175
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
180 185 190
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
195 200 205
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
210 215 220
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
225 230 235 240
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455 460
Gly Lys
465
<210> 61
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体LC
<400> 61
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 62
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体LC
<400> 62
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体LC
<400> 63
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp
35 40 45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly
85 90 95
Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 64
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体LC
<400> 64
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val
1 5 10 15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP1表位
<400> 65
Ile Val Thr Leu Asp
1 5
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP2表位
<400> 66
Asp Ser Ser Gln Pro
1 5
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP3表位
<400> 67
Arg Thr Ile Ala Arg
1 5
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP4表位
<400> 68
Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys
1 5
<210> 69
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP5表位
<400> 69
Ala Arg Pro Ala
1
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP6表位
<400> 70
Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu
1 5
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP7表位
<400> 71
Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg
1 5
<210> 72
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP8表位
<400> 72
Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg
1 5
<210> 73
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-01-BSA (#1)
<400> 73
Thr Ala Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 74
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-02-BSA (#2)
<400> 74
Thr Leu Ala Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 75
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-03-BSA (#3)
<400> 75
Thr Leu Asp Arg Ala Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 76
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-04-BSA (#4)
<400> 76
Thr Leu Asp Arg Asp Ala Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 77
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-05-BSA (#5)
<400> 77
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ala Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 78
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-06-BSA (#6)
<400> 78
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Ala Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 79
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-07-BSA (#7)
<400> 79
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Ala Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 80
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-08-BSA (#8)
<400> 80
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ala Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 81
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-09-BSA (#9)
<400> 81
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Ala Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 82
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-10-BSA (#10)
<400> 82
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ala Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 83
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-11-BSA (#11)
<400> 83
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Arg Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 84
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-12-BSA (#12)
<400> 84
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Ala Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 85
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-12-BSA (#13)
<400> 85
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Cys
20
<210> 86
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 野生型FAM19A5同工型（不具有信号肽）
<400> 86
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 87
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M1突变体
<400> 87
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Val Ile
1 5 10 15
Ala Ala His Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 88
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M2突变体
<400> 88
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Cys Cys Asn Lys Asn Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR1
<400> 89
Thr Tyr Ala Val Thr
1 5
<210> 90
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR2
<400> 90
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR3
<400> 91
Asp Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro
1 5 10 15
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR1
<400> 92
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR2
<400> 93
Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 94
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR3
<400> 94
Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn Val Trp Asn Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR1
<400> 95
Ser Ser Asn Trp Trp Ser
1 5
<210> 96
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR2
<400> 96
Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR3
<400> 97
Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val
1 5
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR1
<400> 98
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR2
<400> 99
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR3
<400> 100
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val
1 5
<210> 101
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR1
<400> 101
Gly Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR2
<400> 102
Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 103
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR3
<400> 103
Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 104
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR1
<400> 104
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR2
<400> 105
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR3
<400> 106
Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR1
<400> 107
Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR2
<400> 108
Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR3
<400> 109
Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val
1 5 10
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR1
<400> 110
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser Leu Asn
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR2
<400> 111
Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR3
<400> 112
Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg Thr
1 5
<210> 113
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VH CDR1
<400> 113
Ser Asp Tyr Met Ser
1 5
<210> 114
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VH CDR2
<400> 114
Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VH CDR3
<400> 115
Gly Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu
1 5 10
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VL CDR1
<400> 116
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser
1 5 10
<210> 117
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VL CDR2
<400> 117
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 118
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VL CDR3
<400> 118
Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Thr Gly Leu Thr
1 5 10
<210> 119
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VH CDR1
<400> 119
Thr Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 120
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VH CDR2
<400> 120
Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VH CDR3
<400> 121
Gly Asp Ser Phe Gly Tyr Gly Leu
1 5
<210> 122
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL CDR1
<400> 122
Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL CDR2
<400> 123
Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser
1 5
<210> 124
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL CDR3
<400> 124
Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn Tyr Gln Tyr Val
1 5 10
<210> 125
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH CDR1
<400> 125
Asn Tyr Tyr Met Gly
1 5
<210> 126
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH CDR2
<400> 126
Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH CDR3
<400> 127
Ile Asp Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp
1 5 10 15
Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VL CDR1
<400> 128
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser
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<220>
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<400> 129
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<220>
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Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Ile Thr
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<220>
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Gly Tyr Tyr Met Ser
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<220>
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Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
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<220>
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Val Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile
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<220>
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Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser
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<220>
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Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<220>
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Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser Thr Gly Thr His Leu Thr
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Asn Tyr Asp Met Ser
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Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
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Arg Gly Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile
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<220>
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn Leu Ala
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL CDR2
<400> 141
Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL CDR3
<400> 142
Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala Ala Tyr Val Gly Asn Ala
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<220>
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Ser Tyr Tyr Met Asn
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<220>
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Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly
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<220>
<223> P2-F07抗体VH CDR3
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Thr Val Ser Gly Tyr Phe Asp Ile
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<211> 11
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR1
<400> 146
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala Leu Ala
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR1
<400> 147
Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR3
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Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
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Ser Tyr Gly Val Ser
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<211> 16
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH CDR2
<400> 150
Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 151
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<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH CDR3
<400> 151
Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR1
<400> 152
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Lys Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR2
<400> 153
Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR3
<400> 154
Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala
1 5 10
<210> 155
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH
<400> 155
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 156
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH
<400> 156
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH
<400> 157
Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 158
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH
<400> 158
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 159
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VH
<400> 159
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VH
<400> 160
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp
85 90 95
Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 161
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH
<400> 161
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp
85 90 95
Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 162
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VH
<400> 162
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile
65 70 75 80
Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val
85 90 95
Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu
115 120
<210> 163
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VH
<400> 163
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly
85 90 95
Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val
100 105 110
Thr Val Ser Leu
115
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VH
<400> 164
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Val
85 90 95
Ser Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Leu
<210> 165
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH
<400> 165
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 166
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL
<400> 166
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn
85 90 95
Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 167
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL
<400> 167
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 168
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL
<400> 168
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 169
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 170
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VL
<400> 170
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 171
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL
<400> 171
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn
85 90 95
Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr
100 105 110
<210> 172
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VL
<400> 172
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 173
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1- A01抗体VL
<400> 173
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 174
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL
<400> 174
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala
85 90 95
Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
100 105 110
<210> 175
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL
<400> 175
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 176
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL
<400> 176
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile
100 105 110
Leu
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH
<400> 177
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcaccgtct ctggattctc cctcagtacc tatgcagtga cctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggatacatt aattggcgtg gtgggacatc ctacgcgaac 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagatgc tagtagtggt 300
gctgcttttg ggtcttacgg catggacccc tggggcccag ggaccctcgt caccgtctct 360
tca 363
<210> 178
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL
<400> 178
gagctcgata tgacccagac tccatcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agctacttat cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgaa gcatccaaac tggcctctgg ggtcccatcg 180
cggttcagcg gcagtggata tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatagta gtactaatgt ttggaatgct 300
ttcggcggag gcaccaatgt ggaaatcaaa 330
<210> 179
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12HC
<400> 179
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 180
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4HC
<400> 180
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 181
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7HC
<400> 181
Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 182
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9HC
<400> 182
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 183
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03HC
<400> 183
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 184
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08HC
<400> 184
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp
85 90 95
Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 185
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02HC
<400> 185
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
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50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp
85 90 95
Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
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20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile
65 70 75 80
Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val
85 90 95
Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
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Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
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His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
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Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
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370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
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Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly Lys
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Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp
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Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
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Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val
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Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
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Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
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Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
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Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
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Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
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Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
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Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
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Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
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Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
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275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
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Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 190
<211> 217
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<213> 人工序列
<220>
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130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
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Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
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Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
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Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列
<220>
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Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr
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65 70 75 80
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Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
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130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
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Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
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Asn Arg Gly Glu Cys
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<213> 人工序列
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro
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Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9LC
<400> 193
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1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala
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Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
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Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
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Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
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Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
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Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
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Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03LC
<400> 194
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
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Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
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100 105 110
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Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
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Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
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Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
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Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 195
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08LC
<400> 195
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr
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Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn
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100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
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130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
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Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
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Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
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Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
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<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02LC
<400> 196
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
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Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
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Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
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100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
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Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
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195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01LC
<400> 197
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
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100 105 110
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Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
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Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
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Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 198
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03LC
<400> 198
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala
85 90 95
Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
100 105 110
Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 199
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07LC
<400> 199
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 200
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11LC
<400> 200
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile
100 105 110
Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 201
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 scFv
<400> 201
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Ser Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala
130 135 140
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala
145 150 155 160
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser
165 170 175
Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg
180 185 190
Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala
195 200 205
Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro
210 215 220
Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala
225 230 235 240
Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
245 250
<210> 202
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65 scFv
<400> 202
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp
35 40 45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly
85 90 95
Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr Leu Asp Glu
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gln Met Gly Trp Val Arg
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Asn Lys Ser
165 170 175
Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val Lys Gly Arg Ala Thr Ile
180 185 190
Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu
195 200 205
Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Lys Gly Ser Ala Ser
210 215 220
Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val
225 230 235 240
Ile Val Ser Ser
<210> 203
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13 scFv
<400> 203
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln
115 120 125
Thr Pro Gly Gly Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr
130 135 140
Phe Ser Ser His Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly
145 150 155 160
Leu Glu Tyr Val Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr
165 170 175
Gly Ser Ala Val Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln
180 185 190
Ser Thr Val Arg Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly
195 200 205
Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser
210 215 220
Cys Trp Gly Asp Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu
225 230 235 240
Val Ile Val Ser Ser
245
<210> 204
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 scFv
<400> 204
gcattgactc agccctcttc cgtgagtgct aatccaggtg aaacagtaaa aataacttgc 60
agtgggggag ggtcttacgc aggatcttat tattatggat ggtaccagca aaaagcccct 120
gggtctgcac cagtcactct gatatacgag agcaataaac gcccttccga catccccagc 180
cgcttttctg gttctacctc tggcagtact gctaccttga ctattaccgg ggtccaggct 240
gacgacgaag ccatttatta ttgtggaagt tgggattcaa gcaacggggg tatattcggc 300
gctggtacta cccttaccgt gctgtccggt gggggtggga gcagtggagg tggaggaagt 360
gctgtaactc ttgatgaaag cgggggaggg ctgcaaaccc ctggcggggc cttgtccttg 420
gtttgtaagg cttccggatt tactttctca agttttaata tgttttgggt gcgacaggcc 480
ccagggaaag ggttggaata tgttgcacag atctccagct caggttcatc caccaattat 540
gcacctgccg tccgagggag ggctacaatt tctagggaca acgggcagtc aactgtacgg 600
ttgcagctta acaatcccgg agcagaagat acaggtacct attactgtgc taagagttca 660
tacgactgtc cctatggtca ctgttcctca ggtgttgact ccgcagggga gatagatgct 720
tgggggcatg ggaccgaagt gattgtgtca tct 753
<210> 205
<211> 732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65 scFv
<400> 205
gccttgacac aaccctcatc agtatctgct aaccccggcg aaacagttaa aataacatgc 60
tcaggaggtg gttcatctgg ctatggatat gggtggtatc aacagaaatc accaagttcc 120
gcccccttga ccgtgattta ttggaatgat aagcgcccct cagacattcc cagtcgcttc 180
tcaggcagta aatcaggctc aacccatact cttactatca ccggtgtcca agcagaagat 240
gaagccgtgt atttttgtgg gaatgatgac tattccagcg attctggcta tgtaggagtg 300
ttcggtgccg gtactaccct cacagtattg agtggtggtg gcggaagttc aggtggtggt 360
ggaagcgctg tcactttgga tgaatcaggt ggaggcctcc aaaccccagg tggcgcactc 420
agtctcgtat gtaaagcctc tggtttcact ttcagctcat atcaaatggg atgggtgcgg 480
caggctcccg gcaaggggtt ggagtgggtc ggtgttatca acaagagcgg ctctgatact 540
agctatggaa gcgcagtcaa ggggagagct actataagca gggataatgg gcaaagtacc 600
gtcaggcttc aattgaacaa tctcagggct gaggatacag gaacctactt ctgcgccaaa 660
gggtcagcat cttatatcac agcagctacc attgacgcat ggggacatgg cacagaggtc 720
attgtttcca gt 732
<210> 206
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13 scFv
<400> 206
gctctgacac aaccaagctc tgtcagtgca aatccaggag agaccgttaa aatcacttgc 60
agcggaggct cttattccta cggatggttc cagcaaaaaa gtcctggttc agccctcgtt 120
actgtcatct actgggacga cgagcgccct agcgatattc ctagtagatt ctcaggggct 180
cttagcggct ccactaatac tttgaccatt actggagtac aggctgatga cgaagcagtt 240
tacttctgtg gcaccgaaga tataagcgga actgcagggg tatttggggc tggtacaaca 300
ctcacagtgc tctccggggg gggcgggagc tcaggaggcg gcggatcagc tgtaaccctg 360
gacgaatctg gtggggggct tcaaacaccc ggaggagccc tctccctcgt atgcaaagct 420
tcaggattca ccttctcttc acatggaatg ttctgggtaa ggcagacacc tggcaaaggg 480
cttgaatatg tagctgagat cactaatgac ggtagcggta caaactatgg gtctgctgtg 540
aaaggccggg ctacaataag tcgagacaat ggacaaagta ccgttagact ccagctcaac 600
aacctgcgag ctgaggacac aggcacttac ttttgtgcac gcagtactta cgagtgtcca 660
ggtggatttt catgttgggg agataccgga cagatcgacg cttgggggca cggcaccgag 720
gtcattgtaa gtagc 735
<210> 207
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 207
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 208
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13-s5 Ab VH-CDR2
<400> 208
Ala Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 209
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> S5-2.GKNG Ab VH-CDR2
<400> 209
Ala Ile Asn Lys Gly Gly Ser Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 210
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-7A-IT Ab VH-CDR1
<400> 210
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Asn Met Phe
1 5 10
<210> 211
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-7A-IT Ab VH-CDR2
<400> 211
Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 212
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI；1-30；1-17；1-32；4-11；6-10 Abs VH-CDR1
<400> 212
Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe Asn Met Phe
1 5 10
<210> 213
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI；1-30；1-17；1-32；4-11；6-10 Abs VH-CDR2
<400> 213
Gln Ile Ser Ser Ser Glu Glu Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ala Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 214
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D Ab VH-CDR1
<400> 214
Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Gly Met Phe
1 5 10
<210> 215
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37; 2-13D-37-1.5W-41; 2-13D-37-3W-16 VH-CDR1
<400> 215
Gly Phe Asp Phe Ser Ser His Gly Met Phe
1 5 10
<210> 216
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-1.5W-41 VH-CDR3
<400> 216
Ser Ser Tyr Val Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly
1 5 10 15
Gln Ile Asp Ala
20
<210> 217
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-3W-16 VH-CDR3
<400> 217
Ser Asn Tyr Ala Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly
1 5 10 15
Gln Ile Asp Ala
20
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ss01-13; SS01-13-S5; S5-2.GKNG Abs VL-CDR1
<400> 218
Ser Gly Gly Ala Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 219
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ss01-13 Ab VL-CDR2
<400> 219
Lys Asp Asp Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 220
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ss01-13-S5; S5-2.GKNG Ab VL-CDR2
<400> 220
Lys Asp Ser Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 221
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-7A-IT Ab VL-CDR2
<400> 221
Glu Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 222
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI；1-30 Abs VL-CDR1
<400> 222
Ser Gly Gly Gly Ser Glu Glu Glu Gln Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10
<210> 223
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI VL-CDR2
<400> 223
Glu Asp Glu Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 224
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI；1-30；1-17；1-32；Abs VL-CDR3
<400> 224
Gly Ser Trp Asp Ser Glu Asp Glu Asp His
1 5 10
<210> 225
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-30; 1-32 Abs VL-CDR2
<400> 225
Gln Asp Glu Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 226
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-17 Ab VL-CDR2
<400> 226
Glu Asp Glu Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 227
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-11 Ab VL-CDR2
<400> 227
Glu Asp His Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 228
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-11 Ab VL-CDR3
<400> 228
Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asp Glu Asp His
1 5 10
<210> 229
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6-10 Ab VL-CDR2
<400> 229
Gln Asp Leu Leu Arg Pro Ser
1 5
<210> 230
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 6-10 Ab VL-CDR3
<400> 230
Gly Ser Trp Asp Ser Leu Ser Ser Ser His
1 5 10
<210> 231
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D; 2-13D-37; 2-13D-37-1.5W-41; 2-13D-37-3W-16 Abs VL-CDR1
<400> 231
Ser Gly Gly Val Tyr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 232
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13 Ab VH
<400> 232
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 233
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13-s5 Ab VH
<400> 233
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 234
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> S5-2.GKNG Ab VH
<400> 234
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Lys Gly Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 235
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-7A-IT Ab VH
<400> 235
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 236
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI；1-30；1-17；1-31；4-11；6-10 Abs VH
<400> 236
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Gln Ile Ser Ser Ser Glu Glu Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
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<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D VH
<400> 237
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1 5 10 15
Ala Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 238
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Ser
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<220>
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20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
Ser
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<213> 人工序列
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Ala Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ser Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
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Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
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<220>
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20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<220>
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65 70 75 80
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 249
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1 5 10 15
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Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
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50 55 60
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65 70 75 80
Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr
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100 105 110
Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
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Leu Ser Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gln
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Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr Leu
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His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
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Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ala Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
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Tyr Gln Gln Lys Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Lys Asp
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Ser Glu Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser
50 55 60
Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu
65 70 75 80
Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr
85 90 95
Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser
100 105 110
Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
115 120 125
Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gln
145 150 155 160
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ala Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val Lys
180 185 190
Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
210 215 220
Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp Gly
225 230 235 240
His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
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<211> 249
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Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala
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Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gln
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Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Leu Tyr Leu
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<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 254
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
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195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Ser
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Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser Ala
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Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
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<210> 255
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
115 120 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe Asn Met Phe
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-30 scFv
<400> 256
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65 70 75 80
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
115 120 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe Asn Met Phe
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ser Gln Ile
165 170 175
Ser Ser Ser Glu Glu Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ala Val Lys Gly Arg
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195 200 205
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Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser Ala
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Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
245 250 255
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-17 scFv
<400> 257
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1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Glu Gln Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Glu Asp Glu Asp
85 90 95
His Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Gly Gln Ser Ser Arg
100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
115 120 125
Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe Asn Met Phe
145 150 155 160
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ser Gln Ile
165 170 175
Ser Ser Ser Glu Glu Asp Glu Asn Tyr Ala Pro Ala Val Lys Gly Arg
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210 215 220
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Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
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<220>
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Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
115 120 125
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Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Glu Ser Phe Asn Met Phe
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165 170 175
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195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys Ser
210 215 220
Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser Ala
225 230 235 240
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<211> 256
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Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr
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Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr
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<212> PRT
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100 105 110
Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser
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Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly Ala Leu Arg Leu Ser Cys Ser
130 135 140
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145 150 155 160
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Ser Glu Ile Thr Asn Asp Gly
165 170 175
Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser
180 185 190
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195 200 205
Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ser Asn Tyr Ala Cys
210 215 220
Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp
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245 250
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<212> DNA
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<400> 265
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<212> DNA
<213> 人工序列
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ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accgctgttt acttctgcgc caaaggttct 300
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tcctcc 366
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> S5-2.GKNG VH
<400> 267
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctc 60
tcttgcaagg cctccgggtt caccttcagc agctatcaga tgggctgggt gcgacaggcg 120
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gctagttaca taactgctgc taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360
tcctcc 366
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI VH
<400> 269
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agctgcaagg cctctgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
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<400> 270
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<211> 393
<212> DNA
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<220>
<223> 1-17 VH
<400> 271
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<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-32 VH
<400> 272
gccgtgacgt tggatgaatc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctc 60
agctgcaagg cctctggctt tgattttgaa agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120
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<210> 273
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-11 VH
<400> 273
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<210> 274
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 6-10 VH
<400> 274
gccgtgacgt tggatgaatc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctc 60
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cccggcaagg ggctggaata cgtctcgcag attagcagca gtgaagaaga tgaaaactac 180
gcacccgcgg tgaaaggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300
tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360
tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcc 393
<210> 275
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D VH
<400> 275
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 60
agctgcagcg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 120
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cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 387
<210> 276
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37 VH
<400> 276
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 60
agctgcagcg cctccgggtt cgatttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggttggaata tgtctcggag attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240
ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 300
tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 387
<210> 277
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-1.5W-41 VH
<400> 277
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 60
agctgcagcg cctccgggtt cgatttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggttggaata tgtctcggag attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240
ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatcttct 300
tatgtttgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 387
<210> 278
<211> 387
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-3W-16 VH
<400> 278
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 60
agctgcagcg cctccgggtt cgatttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggttggaata tgtctcggag attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240
ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctaat 300
tatgcttgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 387
<210> 279
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13 VL
<400> 279
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgttcg tatcacctgc 60
tccgggggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agacgacgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcactg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtccta 327
<210> 280
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13-S5 VL
<400> 280
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgcgcg tatcacctgc 60
tccggtggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agactctgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcagcg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtccta 327
<210> 281
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S5-2.GKNG VL
<400> 281
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgcgcg tatcacctgc 60
tccggtggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agactctgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcagcg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtccta 327
<210> 282
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-7A-IT VL
<400> 282
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatgaaaac aacaagagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtagca atggtggtat atttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 283
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 低PI VL
<400> 283
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatgaaaac aacaagagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtagca atggtggtat atttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 284
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-30 VL
<400> 284
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagcgaaga agaacagtac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatcaggat gaagaaagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtgaag atgaagatca ttttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 285
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-17 VL
<400> 285
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatgaagat gaacagagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtgaag atgaagatca ttttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 286
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-32 VL
<400> 286
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatcaggat gaagaaagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtgaag atgaagatca ttttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 287
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-11 VL
<400> 287
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatgaagac cacgagagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtagcg atgaagatca ttttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 288
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 6-10 VL
<400> 288
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60
tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtatcagca gaagcctggc 120
agtgcccctg tcactctgat ctatcaggat ctgctgagac cctcggacat cccttcacga 180
ttctccggtt ccacatctgg ctccacagcc acactaacca tcactggggt ccaagccggc 240
gacgaggctg attattactg tgggagctgg gacagtctga gcagcagcca ttttggggcc 300
gggacaaccc tgaccgtcct a 321
<210> 289
<211> 309
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D VL
<400> 289
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctg 309
<210> 290
<211> 309
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37 VL
<400> 290
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctg 309
<210> 291
<211> 309
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-1.5W-41 VL
<400> 291
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctg 309
<210> 292
<211> 309
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-3W-16 VL
<400> 292
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctg 309
<210> 293
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13 scFv
<400> 293
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgttcg tatcacctgc 60
tccgggggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agacgacgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcactg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtcctaggt cagtcctcta gatcttccgg cggtggtggc 360
agctccggtg gtggcggttc cgccgtgacg ttggacgagt ccgggggcgg cctccagacg 420
cccggaggag cgctctctct ctcttgcaaa gcctccgggt tcaccttcag cagctatcag 480
atgggctggg tgcgacaggc gcccggcaag gggctggaat gggtcggtgt tattaacaag 540
tctggtagtg acacatcata cgggtcggcg gtgaagggcc gtgccaccat ctcgagggac 600
aacgggcaga gcacactgta cctgcagatg aacaacctca gggctgagga caccgctgtt 660
tacttctgcg ccaaaggttc tgctagttac ataactgctg ctaccatcga cgcatggggc 720
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 747
<210> 294
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SS01-13-s5 scFv
<400> 294
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgcgcg tatcacctgc 60
tccggtggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agactctgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcagcg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtcctaggt cagtcctcta gatcttccgg cggtggtgga 360
tcctctggtg gtggtggttc cgccgtgacg ttggacgagt ccgggggcgg cctccagacg 420
cccggaggag cgctccgcct ctcttgcaag gcctccgggt tcaccttcag cagctatcag 480
atgggctggg tgcgacaggc gcccggcaag gggctggaat gggtcagcgc gattaataag 540
agcggtagtg acacatcata cgggtcggcg gtgaagggcc gtgccaccat ctcgagggac 600
aacgggcaga gcacactgta cctgcagatg aacagcctca gggctgagga caccgctgtt 660
tacttctgcg ccaaaggttc tgctagttac ataactgctg ctaccatcga cgcatggggc 720
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 747
<210> 295
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S5-2.GKNG scFv
<400> 295
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aaccctgggg aaactgcgcg tatcacctgc 60
tccggtggtg ctagcagtgg ctatggttat ggctggtatc agcagaagcc tagcagtgcc 120
cctctcactg tgatctacaa agactctgaa agaccctcgg acatcccttc acgattctcc 180
ggttcctctt ccggctccac acacacatta accatcagcg gggtccaagc cgaggacgag 240
gctgtatatt tctgtgggaa tgatgactac agcagtgata gtggatatgt cggtgtattt 300
ggggccggga caaccctgac cgtcctaggt cagtcctcta gatcttccgg cggtggtgga 360
tcctctggtg gtggtggttc cgccgtgacg ttggacgagt ccgggggcgg cctccagacg 420
cccggaggag cgctccgcct ctcttgcaag gcctccgggt tcaccttcag cagctatcag 480
atgggctggg tgcgacaggc gcccggcaag gggctggaat gggtcagcgc gattaataag 540
ggcggtagtg acacatcata cgggtcggcg gtgaagggcc gtgccaccat ctcgagggac 600
aacgggcaga gcacactgta cctgcagatg aacagcctca gggctgagga caccgctgtt 660
tacttctgcg ccaaaggttc tgctagttac ataactgctg ctaccatcga cgcatggggc 720
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 747
<210> 296
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D scFv
<400> 296
ctgactcagc cgtcctcggt gtcagcaaac ccaggagaaa ccgcgaagat aacctgctcc 60
gggggtgtgt atagctatgg ctggttccag cagaagcctg gcagtgccct tgtcactgtg 120
atctactggg atgatgagag accctcggac atcccttcac gattctccgg tgccctatcc 180
ggctccacaa acacattaac catcactggg gtccaagccg aagacgaggc tgattattat 240
tgtgggactg aagacatcag cggcactgct ggtgtatttg gggccgggac aaccctgacc 300
gtcctgggtc agtcctctag atcttccggc ggtggtggat cctctggtgg tggtggttcc 360
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 420
agctgcagcg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 480
cccggcaagg ggttggaata tgtctcggag attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 540
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 600
ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 660
tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 720
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 747
<210> 297
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37 scFv
<400> 297
ctgactcagc cgtcctcggt gtcagcaaac ccaggagaaa ccgcgaagat aacctgctcc 60
gggggtgtgt atagctatgg ctggttccag cagaagcctg gcagtgccct tgtcactgtg 120
atctactggg atgatgagag accctcggac atcccttcac gattctccgg tgccctatcc 180
ggctccacaa acacattaac catcactggg gtccaagccg aagacgaggc tgattattat 240
tgtgggactg aagacatcag cggcactgct ggtgtatttg gggccgggac aaccctgacc 300
gtcctgggtc agtcctctag atcttccggc ggtggtggat cctctggtgg tggtggttcc 360
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctt 420
agctgcagcg cctccgggtt cgatttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacaggcg 480
cccggcaagg ggttggaata tgtctcggag attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 540
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 600
ctgcagatga acagcctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 660
tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 720
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcc 747
<210> 298
<211> 750
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-1.5W-41 scFv
<400> 298
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctgg gtcagtcctc tagatcttcc ggcggtggtg gatcctctgg tggtggtggt 360
tccgccgtga cgttggacga gtccgggggc ggcctccaga cgcccggagg agcgctccgc 420
cttagctgca gcgcctccgg gttcgatttc agcagccatg gcatgttctg ggtgcgacag 480
gcgcccggca aggggttgga atatgtctcg gagattacca atgatggtag tggcacaaac 540
tacgggtcgg cggtgaaggg ccgtgccacc atctcgaggg acaacgggca gagcacactg 600
tatctgcaga tgaacagcct cagggctgag gacaccggca cctacttctg cgccagatct 660
tcttatgttt gtcctggtgg ttttagttgt tggggtgata ctggtcaaat agacgcatgg 720
ggccacggga ccgaagtcat cgtctcctcc 750
<210> 299
<211> 750
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13D-37-3W-16 scFv
<400> 299
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgcgaa gataacctgc 60
tccgggggtg tgtatagcta tggctggttc cagcagaagc ctggcagtgc ccttgtcact 120
gtgatctact gggatgatga gagaccctcg gacatccctt cacgattctc cggtgcccta 180
tccggctcca caaacacatt aaccatcact ggggtccaag ccgaagacga ggctgattat 240
tattgtggga ctgaagacat cagcggcact gctggtgtat ttggggccgg gacaaccctg 300
accgtcctgg gtcagtcctc tagatcttcc ggcggtggtg gatcctctgg tggtggtggt 360
tccgccgtga cgttggacga gtccgggggc ggcctccaga cgcccggagg agcgctccgc 420
cttagctgca gcgcctccgg gttcgatttc agcagccatg gcatgttctg ggtgcgacag 480
gcgcccggca aggggttgga atatgtctcg gagattacca atgatggtag tggcacaaac 540
tacgggtcgg cggtgaaggg ccgtgccacc atctcgaggg acaacgggca gagcacactg 600
tatctgcaga tgaacagcct cagggctgag gacaccggca cctacttctg cgccagatct 660
aattatgctt gtcctggtgg ttttagttgt tggggtgata ctggtcaaat agacgcatgg 720
ggccacggga ccgaagtcat cgtctcctcc 750
<210> 300
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 300
Gly Gln Ser Ser Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser
<210> 301
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-30 scFv
<400> 301
gctctcacac aaccttcctc tgtctctgct aatcctggcg agactgttaa aatcacctgc 60
tccggggggg gtagtgagga agaacagtat tactatggat ggtaccaaca aaagcctggg 120
tctgcacccg taacccttat ataccaagat gaggagcgcc catccgatat accctcacgc 180
ttctcaggca gtacatctgg gtcaactgca accctcacca ttacaggagt gcaagcaggt 240
gatgaggcag attattattg tgggtcatgg gactccgagg acgaggatca ttttggagct 300
ggcactacat tgacagtact gggccagtca tcaagaagtt caggtggcgg cggaagctcc 360
gggggcggtg gatcagcagt aactctcgac gaatctggag gcggtcttca aacccctggg 420
ggggctctga gactctcatg taaagccagc ggattcgatt tcgagtcatt taacatgttt 480
tgggtccgcc aggcccccgg taaaggcctg gagtatgtgt cccaaatatc aagttcagag 540
gaggacgaga actatgcccc agccgtgaaa ggtcgagcta caatttcccg agacaacggc 600
cagtcaacac tctacttgca gatgaacagc ctgagagccg aagacactgg tacatactat 660
tgtgctaaat ccagctacga ctgtccatac ggccattgtt catcaggagt agactccgca 720
ggtgagatag acgcatgggg tcatggcact gaggtcattg tgtcctct 768

Claims (42)

1.一种腺相关病毒(AAV)载体，其包括对针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂进行编码的核酸。
2.根据权利要求1所述的AAV载体，其进一步包括内含子、信号肽和/或一个或多个腺相关病毒反向末端重复(ITR)。
3.根据权利要求1或2所述的AAV载体，其中所述FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体。
4.根据权利要求3所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv或单链Fv(scFv)。
5.根据权利要求4所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体是scFv。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的AAV载体，其中所述核酸是密码子优化的。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的AAV载体，其中所述核酸包括如SEQ ID NO：204、SEQ ID NO：205、SEQ ID NO：206或SEQ ID NO：301中所示的核苷酸序列。
8.根据权利要求5所述的AAV载体，其中所述scFv包括如SEQ ID NO：201、SEQ ID NO：202、SEQ ID NO：203或SEQ ID NO：256中所示的氨基酸序列。
9.根据权利要求3到8中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体表现出选自以下的特性：
(a)如通过酶联免疫吸附测定(ELISA)所测量的，以10nM或更低的KD与可溶性人FAM19A5结合；
(b)如通过ELISA所测量的，以10nM或更低的KD与膜结合的人FAM19A5结合；或者
(c)(a)和(b)两者。
10.根据权利要求3到9中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体交叉竞争与人FAM19A5表位结合，
(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：18的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；
(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：15的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：12的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；或者
(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：212的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：213的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：222的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：225的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：224的氨基酸序列。
11.根据权利要求3到10中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体结合于相同的FAM19A5表位，
(i)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：18的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；
(ii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：15的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(iii)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：12的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；或者
(iv)其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：212的氨基酸序列，所述重链CDR2包括SEQ IDNO：213的氨基酸序列，所述重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：222的氨基酸序列，所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：225的氨基酸序列，并且所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：224的氨基酸序列。
12.根据权利要求3到11中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体与至少一个FAM19A5表位结合，所述至少一个FAM19A5表位是SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。
13.根据权利要求3到11中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体仅与一个FAM19A5表位结合，所述FAM19A5表位是SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。
14.根据权利要求3到12所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体进一步与另外的FAM19A5表位结合。
15.根据权利要求14所述的AAV载体，其中所述另外的FAM19A5表位选自由以下组成的组：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10以及其任何组合。
16.根据权利要求3到15中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中所述重链CDR3包括SEQ ID NO：19、SEQID NO：16或SEQ ID NO：13中所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求16所述的AAV载体，其中所述重链CDR1包括SEQ ID NO：17、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：212中所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求16或17所述的AAV载体，其中所述重链CDR2包括SEQ ID NO：18、SEQID NO：15、SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：213中所示的氨基酸序列。
19.根据权利要求16到18中任一项所述的AAV载体，其中所述轻链CDR1包括SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：23或SEQ ID NO：222中所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求16到19中任一项所述的AAV载体，其中所述轻链CDR2包括SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：225中所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求16到20中任一项所述的AAV载体，其中所述轻链CDR3包括SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：25或SEQ ID NO：224中所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求16到21中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
(i)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31；
(ii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28；
(iii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25；或者
(iv)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：212、213和16，并且所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：222、225和224。
23.根据权利要求16到22中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：35或SEQ ID NO：236的重链可变结构域和/或包含SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：39或SEQ ID NO：245的轻链可变结构域。
24.根据权利要求23所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：37的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：41的轻链可变结构域。
25.根据权利要求23所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：36的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：40的轻链可变结构域。
26.根据权利要求23所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：35的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：39的轻链可变结构域。
27.根据权利要求23所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括包含SEQ ID NO：236的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：245的轻链可变结构域。
28.根据权利要求3到16中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包括与SEQ ID NO：37、36、35或236中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
29.根据权利要求3到16中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：41、40、39或245中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
30.根据权利要求3到16中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：37、36、35或236中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQ IDNO：41、40、39或245中所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
31.根据权利要求3到30中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体将参考抗体与人FAM19A5的结合抑制至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，如通过结合抑制测定所测量的。
32.根据权利要求3到31中任一项所述的AAV载体，其中所述抗FAM19A5抗体使包括星形细胞细胞系(例如，C8-D1A)的培养基中的FAM19A5蛋白的浓度降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，如通过ELISA所测量的。
33.一种产生重组腺相关病毒(AAV)颗粒的方法，其包括(a)培养已经用根据权利要求1到32中任一项所述的AAV载体转染的宿主细胞以提供细胞培养物以及(b)从所述细胞培养物的上清液中回收所述重组AAV颗粒。
34.根据权利要求1到32中任一项所述的腺相关病毒(AAV)载体，其用于体内递送针对具有序列相似性的家族19成员A5(FAM19A5)蛋白的拮抗剂(“FAM19A5拮抗剂”)。
35.根据权利要求1到32中任一项所述的腺相关病毒(AAV)载体，其用于治疗有需要的受试者的疾病或病状。
36.根据权利要求1到32中任一项所述的腺相关病毒(AAV)载体，其用于治疗有需要的受试者的神经性疼痛。
37.根据权利要求36所述的供使用的AAV载体，其中所述神经性疼痛是外周神经性疼痛。
38.根据权利要求1到32中任一项所述的腺相关病毒(AAV)载体，其用于增加有需要的受试者的外部刺激的阈值或潜伏期。
39.根据权利要求38所述的供使用的AAV载体，其中所述外部刺激是机械刺激。
40.根据权利要求38所述的供使用的AAV载体，其中所述外部刺激是热刺激。
41.根据权利要求34到40中任一项所述的供使用的AAV载体，其中所述AAV载体静脉内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、经肺、肌内、皮下、腹膜内、玻璃体内、硬膜外、视网膜下或心室内施用。
42.根据权利要求34到41中任一项所述的供使用的AAV载体，其中所述受试者是人。
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