JP7045724B2 - 配列類似性を持つ抗ファミリー１９、メンバーａ５抗体及びその用途 - Google Patents

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Description

本発明は、配列類似性を持つファミリー１９、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する抗体、該抗体を含む組成物及び対象の中枢神経系損傷のような障害や疾患を予防又は治療するための前記抗体の用途に関する。
ＦＡＭ１９Ａ５はタンパク質ＴＡＦＡサブファミリーの一員であり、５個の高度に相同性である小さなタンパク質からなる（Ｔａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ８３（４）：７２７－３４（２００４））。このようなタンパク質は、固定した位置で保存されたシステイン残基を含有し、ＣＣ－ケモカインファミリーの一員である大食細胞炎症タンパク質１－アルファ（ＭＩＰ－１－アルファ）と関連している。ＴＡＦＡタンパク質は脳と脊髄の特定領域で優先的に発現する。このようなタンパク質は、神経発生過程及び成体神経幹細胞によって生成されて分泌されるものと知られている。
ＦＡＭ１９Ａ５は、脊椎動物の脳から優先的に発現するが、中枢神経系の発生、分化、形成において重要なものとされ、中枢神経系の損傷及び／又は疾患の予防や治療に使用することができる（特許文献１）。
米国特許公開第２０１５／０１１８２３０号公報
ＦＡＭ１９Ａ５の抑制は、中枢神経系の治療において重要な役割を担うことができ、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合してＦＡＭ１９Ａ５活性を調節できる抗体を開発することが必要である。
ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体、例えば、単クローン性抗体又はその抗原結合部分（抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）、抗体又はその抗原結合部分を含む組成物、抗体又はその抗原結合部分を暗号化する核酸、核酸を含むベクター又はベクターを含む細胞が開示される。
一具体例（一実施形態）において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する競合において、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む基準抗体と相互競合する。一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は基準抗体として同一のＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸残基９９～１０７（すなわち、ＥＧＣＤＬＬＩＮＲ）、例えば、アミノ酸残基１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、アミノ酸残基９９、１００、１０２、１０３、１０５及び１０７（すなわち、ＥＧ－ＤＬ－Ｉ－Ｒ）、アミノ酸残基９９、１００及び１０７（すなわち、ＥＧ－－－－－－Ｒ）に相応する一つ以上のアミノ酸において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＥＰ６、ＥＰ７及び／又はＥＰ８と確認された少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ６は、アミノ酸ＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）を含む、又はこれらから本質的に構成され、又はこれらから構成され、ＥＰ７は、アミノ酸ＧＣＤＬＬＩＮＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）を含む、又はこれらから本質的に構成され、又はこれらから構成され、ＥＰ８は、アミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）を含む、又はこれらから本質的に構成され、又はこれらから構成される。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、（ｉ）重鎖ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１を含み；（ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９を含み；（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０を含み；（ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２を含み；（ｖ）軽鎖ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３を含み；及び／又は（ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４を含む。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５及び１０３～１１３に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、及び／又は軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６及び１１４～１２４に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：２７及び１４５～１５５を含む重鎖及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：２８及び１５６～１６６を含む軽鎖を含む。
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、次の特性のいずれか一つ以上を表す：
（ａ）酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｃ）反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延、及び／又は予防する；
（ｄ）反応性星状細胞の過度な増殖を抑制する；
（ｅ）ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる；
（ｆ）ニューロンの核でｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる；
（ｇ）ニューロンの生存を促進する；
（ｈ）ニューロンでＧＡＰ４３の発現を増加させる；及び
（ｉ）軸索突起の再成長を促進する。
一具体例において、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：２及び１３９～１４１と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列から本質的に構成され、又はこれらから構成されるＦＡＭ１９Ａ５エピトープを提供し、該エピトープはそれぞれ表４及び表５に提示されたような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む基準抗体に特異的に結合され得る。
一具体例において、本発明は、開示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はエピトープを暗号化する核酸を提供する。
一具体例において、本発明は、開示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体及び担体を含む組成物を提供する。
一具体例において、本発明は、疾患又は状態の治療療法で使用するための抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を提供する。
具体例
具体例１
配列類似性を持つヒトファミリー１９、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合し、次の特性のいずれか一つ以上を表す、分離された単クローン性抗体又はその抗原結合部分：
（ａ）酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｃ）反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延、及び／又は予防する；
（ｄ）反応性星状細胞の過度な増殖を抑制する；
（ｅ）ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる；
（ｆ）ニューロンの核でｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる；
（ｇ）ニューロンの生存を促進する；
（ｈ）ニューロンでＧＡＰ４３の発現を増加させる；及び
（ｉ）軸索突起の再成長を促進する。
具体例２
ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合において重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と相互競合し、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含む、分離された単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例３
重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体と同じＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含み、重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含む、分離された単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例４
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する、具体例２又は３の単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例５
抗体又はその抗原結合部分がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、ＦＡＭ１９Ａ５にだけ結合する、具体例２～４のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例６
抗体又はその抗原結合部分が追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する、具体例２～４のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例７
抗体又はその抗原結合部分がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びそれらの任意の組合せからなる群から選ばれる追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する、具体例２～４のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例８
単クローン性抗体又はその抗原結合部分が重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例９
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の重鎖ＣＤＲ３がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含む、具体例８の単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１０
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の重鎖ＣＤＲ１がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を含む、具体例８又は９の単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１１
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の重鎖ＣＤＲ２がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を含む、具体例８～１０のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１２
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の軽鎖ＣＤＲ１がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含む、具体例８～１１のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１３
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の軽鎖ＣＤＲ２がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１を含む、具体例８～１２のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１４
単クローン性抗体又はその抗原結合部分の軽鎖ＣＤＲ３がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２を含む、具体例８～１３のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１５
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変ドメイン及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変ドメインを含む、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１６
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１７
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例１８
抗体が単一ドメイン抗体である、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体。
具体例１９
抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４及びそれらの変異体から構成される群から選ばれる、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例２０
抗体がＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ４抗体又はそれらの組合せである、具体例１９の単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例２１
抗体がＩｇＧ２／ＩｇＧ４イソタイプ抗体を含む、具体例１９の単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例２２
Ｆｃ機能がない不変領域をさらに含む、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例２３
キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体である、前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例２４
単クローン性抗体がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７を含む重鎖及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８を含む軽鎖を含む、具体例１～２３のいずれか一つの単クローン性抗体。
具体例２５
その抗原結合部分がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、具体例１～２３のいずれか一つのその抗原結合部分。
具体例２６
第２結合部分を持つ分子に結合された前述した具体例のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分を含む二重特異的分子。
具体例２７
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列から本質的に構成されたり又はこれらから構成され、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５の重鎖可変領域及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６の軽鎖可変領域を含む基準抗体に特異的に結合され得る、配列類似性を持つヒトファミリー１９、メンバーＡ５（ＦＡＭ１９Ａ５）エピトープ。
具体例２８
具体例１～２５のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例２７のエピトープを暗号化する核酸。
具体例２９
具体例２８の核酸を含むベクター。
具体例３０
遺伝子治療法で使用するための、具体例２９のベクター。
具体例３１
具体例２９の発現ベクターで形質転換された細胞。
具体例３２
製剤に結合された、具体例１～２５のいずれか一つによる単クローン性抗体又はその抗原結合部分又は具体例２６の二重特異的分子を含む免疫コンジュゲート。
具体例３３
具体例１～２５のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲート及び担体を含む組成物。
具体例３４
具体例１～２５のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子、又は具体例３２の免疫コンジュゲート及び使用説明書を含むキット。
具体例３５
非ヒト動物を具体例２７のエピトープで免疫化する段階及び抗体又はその抗原結合部分を生成する段階を含む、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を作製する方法。
具体例３６
適切な条件下に具体例３１の宿主細胞を培養する段階及び抗体又はその抗原結合部分を分離する段階を含む、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を生成する方法。
具体例３７
神経膠症の開始が遅延されるように、具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを投与する段階を含む、対象の反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延及び／又は予防する方法。
具体例３８
反応性星状細胞の過度な増殖が抑制されるように、具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを投与する段階を含む、対象の反応性星状細胞の過度な増殖を抑制する方法。
具体例３９
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含み、ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンが減少する、対象のニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる方法。
具体例４０
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含み、ニューロンの生存が促進される、対象のニューロンの生存を促進する方法。
具体例４１
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含み、軸索突起の再成長が促進される、対象の軸索突起の再成長を促進する方法。
具体例４２
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含む、対象の中枢神経系損傷を治療する方法。
具体例４３
中枢神経系損傷は、外傷性脳傷害、脳脊髄損傷、脳卒中及び脳腫瘍を含む、具体例４２の方法。
具体例４４
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含む、対象の脳脊髄又は神経障害を治療する方法。
具体例４５
退行性脳障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む、具体例４４の方法。
具体例４６
具体例１～２５の単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートを対象に投与する段階を含む、対象の神経病症性疼痛を治療する方法。
具体例４７
単クローン性抗体又はその抗原結合部分は静脈内、経口、非経口、脊椎腔内、脳室内、肺、皮下又は心室内の経路で投与される、具体例３５～４６のいずれか一つの方法。
具体例４８
対象がヒトである、具体例３５～４７のいずれか一つの方法。
具体例４９
中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経病症性疼痛の治療のための医薬の作製のための、具体例１～２５のいずれか一つによる単クローン性抗体又はその抗原結合部分、具体例２６の二重特異的分子又は具体例３２の免疫コンジュゲートの用途。
具体例５０
疾患又は状態の治療療法で使用するための具体例１～４９のいずれか一つの単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例５１
疾患又は状態は、脳脊髄系損傷、退行性脳脊髄又は神経障害、又は神経病症性疼痛である、具体例５０の使用のための、単クローン性抗体又はその抗原結合部分。
具体例５２
対象の生物学的サンプルを具体例１～４９のいずれか一つの単クローン性抗体と接触させる段階を含む、対象を診断する方法。
ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合分析を示す。吸光度は４０５ｎＭで測定された。クローンナンバーはＸ軸に表示される。第１ニワトリから由来した３次バイオパンニング（ｂｉｏ－ｐａｎｎｉｎｇ）からの９６個のクローンの分析を示す。 ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合分析を示す。吸光度は４０５ｎＭで測定された。クローンナンバーはＸ軸に表示される。第２ニワトリから由来した４次バイオパンニングからの９６個のクローンの分析を示す。 ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する個別ｓｃＦｖクローンの結合分析を示す。吸光度は４０５ｎＭで測定された。クローンナンバーはＸ軸に表示される。第３ニワトリから由来した５次バイオパンニングからの９６個のクローンの分析を示す。 図２は、哺乳類発現バクターへの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（ｓｃＦｖ）のサブクローニングのための図式的ダイヤグラムを示す。 図３は、キメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）のＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果を示す。左パネルは還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示し、右側パネルは非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示す。 図４は、キメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）がヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合することを示す。 図５Ａは、キメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）がＦＡＭ１９Ａ５タンパク質には特異的であるが、ＦＡＭ１９Ａサブファミリーの他のタンパク質には結合しないことを示す。 図５Ｂは、ＦＡＭ１９Ａ５発現に対する免疫細胞化学染色（ＩＣＣ、左パネル）及び免疫組織化学染色（ＩＨＣ、右の３つパネル）分析を示す。ＩＣＣの結果は、キメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）がＨｉｓタグとコンジュゲートされたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に結合するということを表す。ＩＨＣ結果は、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質が正常マウス（左側）の脳室下帯のＧＦＡＰタンパク質発現細胞で発現するということを表し、５日間外傷性脳傷害を持つマウスの損傷された半影（ＴＢＩ５Ｄ、中央）で、そして７日間虚血性脳傷害を持つラットの損傷された半影（ＩＢＩ７Ｄ、右）で発現する。 図６は、キメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）（下部パネル）が外傷性脳傷害（ＴＢＩ）マウスモデルにおいて神経膠症の開始を抑制、減少、遅延、及び／又は逆転させることを示す。正常ヒト対照群免疫グロブリン（ＨＣＩ）が対照群として使用された（上部パネル）。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又は対照群抗体は、０．１μｇ、０．３μｇ、１μｇ、３μｇ、５μｇ又は１０μｇの濃度のいずれか一つでマウスに投与された。 図７は、外傷性脳傷害マウスモデルにおいてキメラ抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４単クローン性抗体（１－６５）（右パネル）の神経保護効果を示す。正常ヒト対照群免疫グロブリン（ＨＣＩ）が対照群として使用された（左パネル）。動物は、抗体５μｇを投与した。上部パネルは、損傷された領域の半影（ｐｅｎｕｍｂｒａ）内でＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質）発現を示す。下部パネルは、ＴＢＩマウスにおいて損傷された領域の拡大された区域内でＧＦＡＰとＮｅｕＮ（ニューロン核）の共発現を示す。点線は、外傷性脳傷害に露出後の病巣境界を表示する。 図８は、ヒト化抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４抗体（１－６５）（円、Ｃグループ）、ウサギ抗ＦＡＭ１９Ａ５多クローン性抗体（四角、Ｂグループ）、又はビークル対照群（ダイアモンド、Ａグループ）で治療された脊髄傷害を持つ動物の機能回復結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体による動物の治療は、ＢＢＢ運動能分析（左）と傾斜面試験（右）の両方において運動活性を改善する。各図の下の表は、ＴＢＩ誘導後異なる日数（“ｄｐｉ”）で測定された特定点数を表す。 図９は、異なる種（すなわち、ヒト、マウス、ラット及びニワトリ）のＦＡＭ１９Ａ５アミノ酸配列の整列を示す。エピトープマッピング分析に使用された断片Ｆ１－Ｆ６が表示される。信号ペプチドは下線で表示される。 図１０は、エピトープＦ１－Ｆ６（ＢＳＡにコンジュゲート）のアミノ酸配列とヒトＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド上でアミノ酸の位置を示す。上部のアミノ酸配列は、野生型ＦＡＭ１９Ａ５イソフォーム２（信号ペプチド無し）である。下部のアミノ酸配列は、同一の配列であるが、ペプチド合成の間に非特異的活性を減少させるためにシステイン残基がセリンに突然変異された。個別のエピトープ断片の大きさは括弧中に表示される。 図１１は、エピトープ断片Ｆ１～Ｆ６に対する単クローン性抗体クローン１－６５の結合に対するウェスタンブロット結果を示す（それぞれレーン３～８）。ＦＡＭ１９Ａ５－ＣＫ（レーン１）、ＰＳＡ－ＣＫ（レーン２）、ペプチドＮＤＶ－ＢＳＡ（レーン９）及びＢＳＡ（レーン１０）が対照群として使用された。使用された抗原のそれぞれの大きさは、ブロットの右側に表示される。ウェル当たりに使用された抗原の量は、３００ｎｇである。ウェスタンブロットに使用された１次抗体は、１－６５－ｓｃＦｖ－ウサギ－Ｆｃ－ＳＳＳ（２μｇ／ｍｌ）であり、使用された２次抗体は、抗ウサギＩｇＧ（Ｆｃ特異的）－ＨＲＰ（１：４０００）である。 エピトープ断片Ｆ１～Ｆ６に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５、２－１３、及び３－２に対する結果を示す。３－２抗体に対して、２個の次のような異なるイソタイプが示される：ヒトＩｇＧ１（“ｈ３－２”）及びマウスＩｇＧ１（“ｍ３－２”）。 エピトープ断片Ｆ１～Ｆ６に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５Ｐ２－Ｃ１２抗体に対する結果を示す。それぞれの抗体に対して、１ｓｔ、２ｎｄ、３ｒｄ、４ｔｈ、５ｔｈ及び６ｔｈ棒（左側から始まって）はそれぞれ、エピトープ断片Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５及びＦ６に対する結合を示す。一番右の棒（黒い色）は陽性対照群（すなわち、ＨｉｓタグＦＡＭ１９Ａ５タンパク質）を表す。正確なＯ．Ｄ．値は、各棒の上部に表示される。 ８個の異なるＦＡＭ１９Ａ５断片５突然変異ペプチド（Ｆ５－１～Ｆ５－８）に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は、各棒の上部に表示される。 ８個の異なるＦＡＭ１９Ａ５断片５突然変異ペプチド（Ｆ５－１～Ｆ５－８）に対する抗ＦＡＭ１９Ａ５Ｐ２－Ｃ１２の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。正確なＯ．Ｄ．値は、各棒の上部に表示される。 図１４は、ＦＡＭ１９Ａファミリー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１－５）の個別メンバーのアミノ酸配列整列を示す。メンバーのうち、最大のアミノ酸多様性を持つ領域がボックスで表示され、ＥＰ１～ＥＰ８と表す。 ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１～Ｍ８に対する個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５、１－２８、２－１３及び３－２に対する結果を示す。抗体に対する８個の棒は、突然変異Ｍ１～Ｍ８に相応する（左から右へ）。 ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１～Ｍ８に対する個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１３Ｂ４、１３Ｆ７及び１５Ａ９に対する結果を示す。抗体に対する８個の棒は、突然変異Ｍ１～Ｍ８に相応する（左から右へ）。 ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１～Ｍ８に対する個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ１－Ｇ０９、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｃ１２、Ｐ２－Ｆ０７及びＰ２－Ｆ１１に対する結果を示す。抗体に対する８個の棒は、突然変異Ｍ１～Ｍ８に相応する（左から右へ）。 異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体間の相互競合を評価するために使用された２部位サンドウィッチＥＬＩＳＡ分析の図式的ダイヤグラムを示す。 ６個の異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体：１－６５、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ１１、１３Ｂ４、２－１３及び３－２に対する相互競合分析の結果を示す。用語“Ｓ／Ｎ”は、信号対ノイズ比率のことを指し、これは次のように測定される：［１０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］／［０ｎｇ／ｍＬ抗原のＯ．Ｄ．］。灰色のボックスは、相互競合を表す（すなわち、２未満のＳ／Ｎ比率）。 ＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体１－６５の結合に対するＯＣＴＥＴ試験結果を示す。また、それぞれの抗体に対してＫｄ値が表示される。それぞれのラインは、試験に使用された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の個別の濃度（すなわち、３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．３ｎＭ、又は１．１ｎＭ）に相応する。 ＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体１３Ｂ４の結合に対するＯＣＴＥＴ試験結果を示す。また、それぞれの抗体に対してＫｄ値が表示される。それぞれのラインは、試験に使用された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の個別の濃度（すなわち、３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．３ｎＭ、又は１．１ｎＭ）に相応する。 ＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体１３Ｆ７の結合に対するＯＣＴＥＴ試験結果を示す。また、それぞれの抗体に対してＫｄ値が表示される。それぞれのラインは、試験に使用された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の個別の濃度（すなわち、３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．３ｎＭ、又は１．１ｎＭ）に相応する。 ＦＡＭ１９Ａ５に対する抗体１５Ａ９の結合に対するＯＣＴＥＴ試験結果を示す。また、それぞれの抗体に対してＫｄ値が表示される。それぞれのラインは、試験に使用された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の個別の濃度（すなわち、３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．３ｎＭ、又は１．１ｎＭ）に相応する。 ＦＡＭ１９Ａ５に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。次の抗体に対する結果が示される：１－６５、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１－２８、２－１３、３－２、Ｐ１－Ａ０３、Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｄ０３、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ１－Ｇ０９、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｃ１２、Ｐ２－Ｆ０７及びＰ２－Ｆ１１（左から右へ）。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の様々な濃度に対する棒グラフであり、結果を示す。 ＦＡＭ１９Ａ５に対するいくつかの抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合に対するＥＬＩＳＡ結果を示す。次の抗体に対する結果が示される：１－６５、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１－２８、２－１３、３－２、Ｐ１－Ａ０３、Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｄ０３、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ１－Ｇ０９、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｃ１２、Ｐ２－Ｆ０７及びＰ２－Ｆ１１（左から右へ）。個別の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するＫｄ（ｎＭ）を表す。 異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体（１００μｇ／マウス）で処理された動物から脳組織の損傷された領域の代表的な免疫組織化学染色イメージを提供する。２つの異なる濃度１００μｇ（上部列）及び１０μｇ（下部列）で抗体１３Ｂ４に対する代表的なイメージを示す。それぞれのイメージにおいて、脳組織部分は、脳傷害後に反応性星状細胞から誘導されるものと知られた、ＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。点線は、外傷性脳傷害に露出後病巣境界を表示する。 異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体（１００μｇ／マウス）で処理された動物から脳組織の損傷された領域の代表的な免疫組織化学染色イメージを提供する。抗体１３Ｆ７に対する６個の異なる代表的なイメージを示す。それぞれのイメージにおいて、脳組織部分は、脳傷害後に反応性星状細胞から誘導されるものと知られた、ＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。点線は、外傷性脳傷害に露出後病巣境界を表示する。 異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体（１００μｇ／マウス）で処理された動物から脳組織の損傷された領域の代表的な免疫組織化学染色イメージを提供する。抗体１５Ａ９に対する３個の異なる代表的なイメージを示す。それぞれのイメージにおいて、脳組織部分は、脳傷害後に反応性星状細胞から誘導されるものと知られた、ＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。点線は、外傷性脳傷害に露出後病巣境界を表示する。 異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体（１００μｇ／マウス）で処理された動物から脳組織の損傷された領域の代表的な免疫組織化学染色イメージを提供する。抗体Ｐ２－Ａ０３（上部列）及びＰ２－Ｆ１１（下部列）に対するそれぞれ３個の代表的なイメージを示す。それぞれのイメージにおいて、脳組織部分は、脳傷害後に反応性星状細胞から誘導されるものと知られた、ＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。点線は、外傷性脳傷害に露出後病巣境界を表示する。 異なるＦＡＭ１９Ａ５抗体（１００μｇ／マウス）で処理された動物から脳組織の損傷された領域の代表的な免疫組織化学染色イメージを提供する。抗体Ｐ１－Ａ０３に対する３個の代表的なイメージを示す。それぞれのイメージにおいて、脳組織部分は、脳傷害後に反応性星状細胞から誘導されるものと知られた、ＧＦＡＰ（神経膠線維酸性タンパク質、緑色）及びネスチン（赤色）で染色された。点線は、外傷性脳傷害に露出後病巣境界を表示する。
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年１１月７日付に出願された米国特許仮出願番号第６２／４１８，６７４号に優先権を主張し、その全文が本明細書に参考として組み込まれる。
電子的に提出された配列目録の参考資料
本出願と共に提出されたＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名：３７６３．００３ＰＣ０１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：１３３，６７６バイト、生成日：２０１７年１１月６日）で電子的に提出された配列目録の内容全体が本明細書に参考として組み込まれる。
配列類似性を持つヒトファミリー１９、メンバー５（ＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合し、本明細書に開示された特性の一つ以上を表す、分離された単クローン性抗体又はその抗原結合部分が開示される。
一具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープに対する結合において重鎖及び軽鎖を含む基準抗体と相互競合し、（ｉ）前記重鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）前記重鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含む。一部の具体例において、（ｉ）前記軽鎖ＣＤＲ１はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）前記軽鎖ＣＤＲ２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）前記軽鎖ＣＤＲ３はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含む。
一部の具体例において、基準抗体は、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
一部の具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合する。他の具体例において、単クローン性抗体、又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープにだけ結合する。一部の具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７及びそれらの組合せからなる群から選ばれる追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する。
一部の具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ６、ＥＰ７、及び／又はＥＰ８として確認された少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ６はアミノ酸ＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）を含んだり、これらから本質的に構成されたり又はこれらから構成され、ＥＰ７はアミノ酸ＧＣＤＬＬＩＮＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）を含んだり、これらから本質的に構成されたり又はこれらから構成され、ＥＰ８はアミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）を含む、又はこれらから本質的に構成され、又はこれらから構成される。特定の具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ６、ＥＰ７及び／又はＥＰ８にだけ結合する。他の具体例において、単クローン性抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３８及びそれらの任意の組合せからなる群から選ばれる追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する。
開示された内容の理解を容易にさせるために、多数の用語及び語句が定義される。追加の定義は、詳細な説明全般にわたって提示される。
Ｉ．定義
本開示内容の全体において、用語“一つの”又は“ある”実体は、その実体の一つ以上であることを意味する；例えば、“一つの抗体”は、一つ以上の抗体を表すものと理解される。このように、用語“一つの”（又は“ある”）、“一つ以上の”及び“少なくとも一つの”は、互いに言い換えることができる。
また、“及び／又は”は、他の一方と共に又は他の一方無しで両方の明示された特徴又は成分のそれぞれの具体的な開示として使用されると理解すべきである。したがって、“Ａ及び／又はＢ”は、“Ａ及びＢ”、“Ａ又はＢ”、“Ａ（単独）”、及び“Ｂ（単独）”を含むことを意図する。同様に、“Ａ、Ｂ及び／又はＣ”は、“Ａ、Ｂ及びＣ”、“Ａ、Ｂ又はＣ”、“Ａ又はＣ”、“Ａ又はＢ”、“Ｂ又はＣ”、“Ａ及びＣ”、“Ａ及びＢ”、“Ｂ及びＣ”、“Ａ（単独）”、“Ｂ（単独）”、及び“Ｃ（単独）”の態様のそれぞれを含むことを意図する。
各態様が単語“含む”と共に使われる場合には、“構成される”及び／又は“本質的に構成される”の側面で説明された他の類似の態様も提供されるものとして理解される。
別に定義されない限り、開示された全ての技術及び科学用語は、関連する当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓが、本開示内容で使用された大部分の用語に対する一般辞典的意味を当業者に提供する。
単位、接頭辞及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅ（ＳＩ）で承認された形態で表示される。数値範囲は、当該範囲を限定する数字の両端の値を含む。別に言及しない限り、アミノ酸配列は左側から右側にアミノからカルボキシ方向に提示される。提供された表題は、本発明の様々な態様の制限ではなく、それらは全体的に本明細書に対する参照として利用され得る。したがって、次に定義される用語は、明細書全般においてより十分に定義される。
用語“約”は、概略的、およそ、近く又は付近を意味する。用語“約”が数値範囲と共に使用された時、提示された数値範囲の上と下の限界を延長することによって当該範囲を変更する。一般に、用語“約”は、例えば、上や下に（より高いか又はより低い）１０％の変量だけ、明示された値の上と下へと数値範囲を変更し得る。
用語“配列類似性を持つファミリー１９、メンバーＡ５”又は“ＦＡＭ１９Ａ５”は、５個の高度に相同性であるタンパク質のＴＡＦＡファミリー（ＦＡＭ１９ファミリーともいう。）に属するタンパク質を指し、脳と脊髄で主導的に発現する。ＦＡＭ１９Ａ５はまた、ＴＡＦＡ５又はケモカイン様タンパク質ＴＡＦＡ－５とも知られている。
ヒトにおいて、ＦＡＭ１９Ａ５を暗号化する遺伝子は、染色体２２に位置する。次のような多数のヒトＦＡＭ１９Ａ５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７）イソフォームがあり、それらは代案的スプライシングによって生成され得る：１３２個のアミノ酸で構成されたイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１）、１２５個のアミノ酸で構成されたイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２）及び５３個のアミノ酸で構成されたイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）。ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質は膜結合された形態と可溶性（分泌された）形態で存在する。イソフォーム１は、一つの経膜領域を持つ膜である。イソフォーム２は、分泌されたタンパク質（可溶性）としてＴａｎｇ Ｔ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ８３（４）：７２７－３４（２００４）に報告されており、アミノ酸位置１－２５に信号ペプチドを含有する。イソフォーム１は膜タンパク質と見なされる。次にこの３つの公知されたヒトＦＡＭ１９Ａ５イソフォームのアミノ酸配列が提示される。
（I）イソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－１、経膜タンパク質）：このイソフォームが公式配列として選択された。
ＭＡＰＳＰＲＴＧＳＲ ＱＤＡＴＡＬＰＳＭＳ ＳＴＦＷＡＦＭＩＬＡ ＳＬＬＩＡＹＣＳＱＬ ＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬ ＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴ ＩＡＲＱＴＡＲＣＡＣ ＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲ ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩ ＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ ＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬ ＬＩＮＲＳＧＷＴＣＴ ＱＰＧＧＲｉＫＴＴＴ ＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）
（II）イソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－２、可溶性タンパク質）：
ＭＱＬＬＫＡＬＷＡＬ ＡＧＡＡＬＣＣＦＬＶ ＬＶＩＨＡＱＦＬＫＥ ＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩ ＶＴＬＤＲＤＳＳＱＰ ＲＲＴＩＡＲＱＴＡＲ ＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧ ＴＴＲＡＲＰＡＣＶＤ ＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣ ＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧ ＣＤＬＬＩＮＲＳＧＷ ＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫ ＴＴＴＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）
（III）イソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｑ７Ｚ５Ａ７－３）：
ＭＹＨＨＲＥＷＰＡＲ ＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭ ＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤ ＬＬＩＮＲＳＧＷＴＣ ＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴ ＴＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）
用語“ＦＡＭ１９Ａ５”は、細胞によって自然的に発現するＦＡＭ１９Ａ５の任意の変異体又はイソフォームを含む。したがって、本明細書に開示された抗体は、同じ種における異なるイソフォーム（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の異なるイソフォーム）と交差反応、又はヒト以外の別の種からのＦＡＭ１９Ａ５（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）と交差反応し得る。また、抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的でよく、別の種との交差反応性を示すことはできない。ＦＡＭ１９Ａ５又はその任意の変異体及びイソフォームは、これらを自然的に発現する細胞又は組織から分離され又は組換え生成され得る。ヒトＦＡＭ１９Ａ５を暗号化するポリヌクレオチドは、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ０３９３９６及び次の配列を有する。
Figure 0007045724000001
用語“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）”及び“抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）”は当業界の用語であり、互換して本明細書にて使われており、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を持つ分子のことを指す。本明細書に使われるこの用語は、全抗体及び任意の抗原結合断片（すなわち、“抗原結合部分”）又はその単鎖を含む。一具体例において、“抗体”は、二硫化物結合によって相互連結された少なくとも２個の重鎖（Ｈ）と２個の軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質又はその抗原結合部分を指す。他の具体例において、“抗体”は、単一可変ドメイン、例えばＶＨＨドメインを含む単鎖抗体を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨと略記）と重鎖不変領域からなる。自然的に発生した抗体において、重鎖不変領域は３個のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３からなる。自然的に発生した抗体において、各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬと略記）と軽鎖不変領域からなる。軽鎖不変領域は一つのドメイン、ＣＬからなる。
ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名された、超可変性の領域へとさらに細分でき、これらは、フレームワーク領域（ＦＲ）と命名されたさらに保存された領域に散在する。各ＶＨ及びＶＬは、３個のＣＤＲと４個のＦＲからなり、これらは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端へと配列される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の不変領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体システムの第１成分（Ｃｌｑ）を含む、免疫グロブリンと宿主組織又は因子の結合を媒介し得る。
用語“Ｋａｂａｔナンバリング”及び類似の用語は当業界で認定され、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域においてアミノ酸残基をナンバリングするシステムをいう。特定の態様において、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによって決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１） Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを用いて、抗体重鎖分子内のＣＤＲは典型的にアミノ酸位置３１～３５（これは選択的に３５番に続いて１個又は２個の追加のアミノ酸を含むことができる（Ｋａｂａｔナンバリングシステムにおいて３５Ａ及び３５Ｂという。））（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５～１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを用いて、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは典型的にアミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。特定の具体例において、本明細書に開示された抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリング方式によって決定された。語句“Ｋａｂａｔに提示されたアミノ酸位置ナンバリング”、“Ｋａｂａｔ位置”及びそれらの変形は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））において抗体集団の重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインに使用されたナンバリングシステムをいう。このナンバリングシステムを用いて、実際の線形アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＷ又はＣＤＲの短縮、又はこれへの挿入に相応するより少ない又は追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインはＨ２の残基５２に続いて単一アミノ酸挿入体（Ｋａｂａｔによって残基５２ａ）を含むことができ、重鎖ＦＷ残基８２に続いて挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによって残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含むことができる。表１Ｂを参照されたい。
Figure 0007045724000002
残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体配列の相同性領域において“標準”Ｋａｂａｔナンバリング配列との整列によって与えられた抗体に対して決定され得る。Ｃｈｏｔｈｉａは、構造的ループの位置を提案する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔナンバリング慣例を用いてナンバリングされた時、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの末端は、ループの長さによってＨ３２とＨ３４との間で可変的である（これは、Ｋａｂａｔナンバリング方式が挿入部をＨ３５ＡとＨ３５Ｂに位置させるためである。３５Ａと３５Ｂ両方とも存在しない場合、ループは３２で終わる。３５Ａだけ存在すると、ループは３３で終わる。３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合は、ループは３４で終わる）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループ間の相殺を表示し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。
ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）も、ＣＤＲを含む免疫グロブリン可変領域のためのナンバリングシステムを提供する。例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（２００３）を参照し、これは参考として本明細書に組み込まれる。ＩＭＧＴナンバリングシステムは、５，０００個を越える配列の整列、構造データ及び超可変ループの特性化に基づいており、全ての種において可変領域とＣＤＲ領域の容易な比較を可能にする。ＩＭＧＴナンバリング方式によれば、ＶＨ－ＣＤＲ１は位置２６～３５にあり、ＶＨ－ＣＤＲ２は位置５１～５７にあり、ＶＨ－ＣＤＲ３は位置９３～１０２にあり、ＶＬ－ＣＤＲ１は位置２７～３２にあり、ＶＬ－ＣＤＲ２は位置５０～５２にあり、ＶＬ－ＣＤＲ３は位置８９～９７にある。
本明細書に開示された全ての重鎖不変領域アミノ酸位置に対するナンバリングは、最初に配列化されたヒトＩｇＧ１である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を説明している、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６３（ｌ）：７８－８５に最初に開示されたＥＵインデックスに従う。ＥｄｅｌｍａｎなどのＥＵインデックスは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ）にも提示される。したがって、語句“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックス”又は“ＫａｂａｔのＥＵインデックス”及び“Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスに従う…位置”及びそれらの変形は、Ｋａｂａｔ１９９１に提示されたようなＥｄｅｌｍａｎなどのヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体に基づく残基ナンバリングシステムを指す。
可変ドメイン（重鎖及び軽鎖の両方とも）及び軽鎖不変領域アミノ酸配列に使用されたナンバリングシステムは、Ｋａｂａｔ １９９１に提示されたものである。
抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ）、任意の類型（例えば、Ｉｇｄ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１又はＩｇＡ２）、又は任意のサブクラス（例えば、ヒトにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、及びマウスにおいてＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３）を有することができる。免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１は、いくつかのアロタイプで存在し、これらは、最大でいくつかのアミノ酸が互いに異なる。本明細書に開示された抗体は、通常知られたイソタイプ、類型、サブクラス又はアロタイプのいずれかから由来し得る。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラス又はそれらの任意のハイブリッドに属する。特定の具体例において、抗体はＩｇＧ２、ＩｇＧ４又はＩｇＧ２／ＩｇＧ４サブクラスに属する。
抗体は、例えば、自然発生及び非自然発生抗体；単クローン性及び多クローン性抗体；キメラ及びヒト化抗体；ヒト及び非ヒト抗体；完全合成抗体；単鎖抗体；単一特異的抗体；多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む。）；２個の重鎖分子と２個の軽鎖分子を含むテトラマー抗体；抗体軽鎖モノマー；抗体重鎖モノマー；抗体軽鎖ダイマー、抗体重鎖ダイマー、抗体軽鎖－抗体重鎖対；イントラボディー；ヘテロコンジュゲート抗体；１価抗体；単鎖抗体；ラクダ化抗体；アフィボディー；抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗－抗Ｉｄ抗体を含む。）及び十分に抗原結合ができる単一モノマー可変抗体ドメイン（例えば、ＶＨドメイン又はＶＬドメイン）で構成された結合分子を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂｓ）を含む（Ｈａｒｍｅｎ Ｍ．Ｍ．ａｎｄ Ｈａａｒｄ Ｈ．Ｊ．Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（１）：１３－２２（２００７））。
本明細書で使う用語、抗体の“抗原結合部分”は、抗原に特異的に結合する能力を保有した抗体（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）の一つ以上の断片をいう。このような“断片”は、例えば約８～約１５００個のアミノ酸長、好適には約８～約７４５個のアミノ酸長、約８～約３００個、約８～約２００個のアミノ酸又は約１０～約５０個又は１００個のアミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって行われることから明らかになった。抗体、例えば、本明細書に開示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の“抗原結合部分”という用語に含まれた結合断片の例は、（i）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインで構成された１価断片；（ii）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域で二硫化物ブリッジによって連結された２個のＦａｂ断片を含む２価断片；（iii）ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成されたＦｄ断片；（iv）抗体の一つの腕のＶＬ及びＶＨドメイン、及び二硫化物－連結されたＦｖ（ｓｄＦｖ）で構成されたＦｖ断片；（v）ＶＨドメインで構成されたｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）及び（vi）分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）又は（vii）合成リンカーによって選択的につながり得る２つ以上の分離されたＣＤＲの組合せを含む。また、Ｆｖ断片、ＶＬ及びＶＨののうち２個のドメインは別の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、ＶＬとＶＨ領域が対をなして１価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））を形成した単一タンパク質鎖をなさせ得る合成リンカーによってつながり得る（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照）。このような単鎖抗体も同様、抗体の“抗原結合部分”に含まれるように意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知である従来の技術によって得られ、断片は無損傷抗体と同じ方式で有用性に対してスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術、又は無損傷免疫グロブリンの酵素又は化学的切断によって生成され得る。
本明細書で使われた用語“可変領域”又は“可変ドメイン”は、互換して使用する。可変領域は、典型的に抗体の一部分、一般的に軽鎖又は重鎖の一部分、典型的に成熟した重鎖において約アミノ末端１１０～１２０個のアミノ酸及び成熟した軽鎖において約９０～１１５個のアミノ酸をいい、それらは抗体ごとに配列が広範囲に異なり、特定抗体の特定抗原に対する結合及び特異性を特化する。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメインにおいてより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。
軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗体と抗原の相互作用及び特異性を主に担当する。特定の具体例において、可変領域はヒト可変領域である。特定の具体例において、可変領域は、げっ歯類又はミューリンＣＤＲとヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の具体例において、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の具体例において、可変領域は、げっ歯類又はミューリンＣＤＲと霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
本明細書に提示された用語“重鎖”とは、抗体と共に使用される場合、任意の異なるタイプ、例えば、不変ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）のことを指すことができ、これらはそれぞれ、ＩｇＧのサブクラス、例えばＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの類型を発生させる。
本明細書に提示された用語“軽鎖”とは、抗体と共に使用される場合、任意の異なるタイプ、例えば、不変ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）又はラムダ（λ）のことを指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当業界によく知られている。特定の具体例において、軽鎖はヒト軽鎖である。
用語“ＶＬ”及び“ＶＬドメイン”は、互換して使用され、抗体の軽鎖可変領域を指す。
用語“ＶＨ”及び“ＶＨドメイン”は、互換して使用され、抗体の重鎖可変領域を指す。
本明細書で使われた用語“不変領域”又は“不変ドメイン”は、互換して使用可能である。不変領域は、抗体部分、例えば、抗体と抗原の結合には直接伴わないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような様々なエフェクター機能を示し得る軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシ末端部分である。免疫グロブリン分子の不変領域は一般に、免疫グロブリン可変ドメインに比べてさらに保存されたアミノ酸配列を
有する。
“Ｆｃ領域”（断片結晶化可能な領域）、“Ｆｃドメイン”又は“Ｆｃ”は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）上に位置したＦｃ受容体又は古典的補体システムの第１成分（Ｃｌｑ）との結合を含む、免疫グロブリンと宿主組織又は因子の結合を媒介する抗体の重鎖のＣ末端領域を指す。したがって、Ｆｃ領域は、第１不変領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ１又はＣＬ）を除く抗体の不変領域を含む。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体イソタイプにおいて、Ｆｃ領域は、抗体の２つの重鎖の第２（ＣＨ２）及び第３（ＣＨ３）不変ドメインから由来した、２つの同じタンパク質断片を含む；ＩｇＭ及びＩｇＥ Ｆｃ領域は、各ポリペプチド鎖において３個の重鎖不変ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃ領域は、免疫グロブリンドメインＣγ２及びＣγ３、そしてＣγ１とＣγ２間のヒンジを含む。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は可変的でよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は一般に、位置Ｃ２２６又はＰ２３０にあるアミノ酸残基（又は、これら２つのアミノ酸間のアミノ酸）から重鎖のカルボキシ末端まで伸びるものと定義され、ここでナンバリングは、Ｋａｂａｔに提示されたＥＵインデックスに従う。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、概略アミノ酸２３１から概略アミノ酸３４０まで延長され、ＣＨ３ドメインはＦｃ領域においてＣｍドメインのＣ末端側に位置するが、すなわち、ＩｇＧの概略アミノ酸３４１から概略アミノ酸４４７まで延長される。本明細書に提示されたＦｃ領域は、任意のアロタイプ変異体を含む自生配列Ｆｃ又は変異体Ｆｃ（例えば、非自然発生Ｆｃ）でよい。また、Ｆｃは、“Ｆｃ融合タンパク質”（例えば、抗体又は免疫接合体）ともいう“Ｆｃ領域を含む結合タンパク質”のようなＦｃ含有タンパク質ポリペプチドでよい。
“自生配列Ｆｃ領域”又は“自生配列Ｆｃ”は、自然から発見されたＦｃ領域のアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を含む。自生配列ヒトＦｃ領域は、自生配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域；自生配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域；自生配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域；及び自生配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域だけでなく、それらの自然的に発生した変異体を含む。自生配列Ｆｃは、Ｆｅｓの様々なアロタイプを含む（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，（２００９）ｍＡｂｓ１：１；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０））。
“Ｆｃ受容体”又は“ＦｃＲ”は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する受容体である。ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲは、これら受容体の対立形質変異体及び他の方式でスプライシングされた形態を含むＦｃγＲファミリーの受容体を含む。ＦｃγＲファミリーは、３個の活性化受容体（マウスにおいてＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIII及びＦｃγＲIV；ヒトにおいてＦｃγＲIＡ、ＦｃγＲIIＡ及びＦｃγＲIIIＡ）及び一つの抑制性（ＦｃγＲIIＢ）受容体で構成される。ヒトＩｇＧ１は、大部分のヒトＦｃ受容体に結合し、最も強力なＦｃエフェクター機能を導出する。ヒトＩｇＧ４は、結合した活性化Ｆｃ受容体の種類と関連してミューリンＩｇＧ２ａと同等であると見なされる。一方、ヒトＩｇＧ４は、最小限のＦｃエフェクター機能を導出する（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０））。
不変領域は、一つ以上のエフェクター機能を除去するために、例えば組換え技術によって操作され得る。“エフェクター機能”は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドの相互作用、又はそれからの結果である生化学的事件をいう。例示的な“エフェクター機能”は、Ｃｌｑ結合、補体依存的細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＦｃγＲ－媒介エフェクター機能、例えばＡＤＣＣ及び抗体依存的細胞－媒介貪食作用（ＡＤＣＰ）及び細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方調節を含む。このようなエフェクター機能は一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされ得るＦｃ領域を必要とする。したがって、用語“Ｆｃ機能がない不変領域”は、Ｆｃ領域によって媒介された一つ以上のエフェクター機能が減少した又は初めからない不変領域を含む。
抗体のエフェクター機能は、異なる接近法によって減少され又は回避され得る。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域を欠如した抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインで構成されたｓｄＡｂのような）によって減少され又は回避され得る。また、Ｆｃ領域において特定残基に結合された糖を除去して、いわゆる非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体を生成することができ、これによって、Ｆｃ領域の他の価値ある属性（例えば、延長された半減期及びヘテロダイマー化）は維持したままで抗体のエフェクター機能を減少させることができる。非グリコシル化抗体は、例えば、糖が付着された残基の欠失又は変更、酵素的糖除去、グリコシル化抑制剤の存在下に培養された細胞において抗体の生成、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞（例えば、バクテリア宿主細胞）において抗体の発現によって生成され得る（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号参照）。他の接近法は、減少されたエフェクター機能を持つＩｇＧサブクラスからＦｃ領域を利用することであり、例えば、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３よりも低いレベルのＦｃエフェクター機能の有することを特徴とする。Ｆｃ部分のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域に最も近くにある残基が抗体のエフェクター機能を担当し、それは先天的免疫系のエフェクター細胞上のＣｌｑ（補体）及びＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して相当重なった結合部位を有する（Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０））。したがって、Ｆｃエフェクター機能が減少された又は減少されない抗体は、例えば、ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ２ドメインとＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２からのヒンジ領域とＩｇＧ４からのＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域（例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）、又は変更されたＦｃエフェクター機能、例えば減少された又は減少されないＦｃ機能をもたらす突然変異を持つＦｃ領域を生成することによって作製され得る。突然変異を持つかかるＦｃ領域は、当業界に公知である（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びこの文献で引用された米国出願及びＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ１：６，５７２－５７９（２００９）参照；これらの開示内容は、その全体が本明細書に参考として含まれる）。
“ヒンジ”、“ヒンジドメイン”、“ヒンジ領域”又は“抗体ヒンジ領域”は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインを連結する重鎖不変領域のドメインをいい、ヒンジの上部、中央及び下部の部分を含む（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８１６１：４０８３）。ヒンジは、抗体の結合領域とエフェクター領域の間に様々なレベルのフレキシビリティを提供し、また、両重鎖不変領域の間に分子間二硫化物結合のための部位を提供する。本明細書に提示されたヒンジは、全てのＩｇＧイソタイプに対してＧｌｕ２１６から始まってＧｌｙ２３７で終わる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ，１９９８Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６１：４０８３）。野生型ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４ヒンジの配列は、当業界に公知されている（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）参照）。
用語“ＣＨ１ドメイン”は、重鎖不変ドメインのヒンジと可変ドメインを連結する重鎖不変領域のことをいう。本明細書に提示されたＣＨ１ドメインは、Ａ１１８から始まってＶ２１５で終わる。用語“ＣＨ１ドメイン”は、野生型ＣＨ１ドメインだけでなく、自然的に存在するその変異体を含む（例えば、アロタイプ）。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＣＨ１ドメイン配列（野生型及びアロタイプを含む。）は、当業界に公知である（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）同上及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）参照）。例示的なＣＨ１ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変形するドメインを持つＣＨ１ドメインを含む（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びこの文献で引用された米国特許及び特許公開及びＰＣＴ公開を参照）。
用語“ＣＨ２ドメイン”は、重鎖不変ドメインのＣＨ３ドメインとヒンジを連結する重鎖不変領域をいう。本明細書に提示されたＣＨ２ドメインは、Ｐ２３８から始まってＫ３４０で終わる。用語“ＣＨ２ドメイン”は、野生型ＣＨ２ドメインだけでなく、自然的に存在するその変異体を含む（例えば、アロタイプ）。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＣＨ２ドメイン配列（野生型及びアロタイプを含む。）は、当業界に公知である（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）同上及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）参照）。例示的なＣＨ２ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば、半減期及び／又は減少されたＦｃエフェクター機能を変形するドメインを持つＣＨ２ドメインを含む（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０及びこの文献で引用された米国特許及び特許公開及びＰＣＴ公開を参照）。
用語“ＣＨ３ドメイン”は、重鎖不変ドメインのＣＨ２ドメインに向けてＣ末端である重鎖不変領域をいう。本明細書に提示されたＣＨ３ドメインは、Ｇ３４１から始まってＫ４４７で終わる。用語“ＣＨ３ドメイン”は、野生型ＣＨ３ドメインだけでなく、自然的に存在するその変異体を含む（例えば、アロタイプ）。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のＣＨ３ドメイン配列（野生型及びアロタイプを含む。）は、当業界に公知である（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）同上及びＶｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）参照）。例示的なＣＨ３ドメインは、抗体の生物学的活性、例えば、半減期を変形するドメインを持つＣＨ３ドメインを含む（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０及びこの文献に引用された米国特許及び特許公開及びＰＣＴ公開を参照）。
本明細書に提示された“イソタイプ”は、重鎖不変領域遺伝子によって暗号化される抗体類型（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ及びＩｇＥ抗体）をいう。
“アロタイプ”は、特定のイソタイプグループ内で自然的に発生する、いくつかのアミノ酸に差異がある変異体をいう（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，（２００９）ｍＡｂｓ１：１）。本明細書に開示された抗体は、任意のアロタイプを有することができる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のアロタイプは、当業界に公知である（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）同上；Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）；及びＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ１：４，１－７（２００９）参照）。
語句“抗原を認識する抗体”及び“抗原に対して特異的な抗体”は、用語“抗原に特異的に結合する抗体”と互換して本明細書で使用される。
本明細書に提示された“分離された抗体”は、異なる抗原特異性を持つ他の抗体が実質的にない抗体をいう（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する分離された抗体は、ＦＡＭ１９Ａ５以外の抗原に特異的に結合する抗体が実質的にない）。しかし、ＦＡＭ１９Ａ５のエピトープに特異的に結合する分離された抗体は、異なる種からの他のＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対して交差反応性を有する。
“結合親和性”は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）間の非共有相互作用の合計強度をいう。別に示さない限り、本明細書に開示された“結合親和性”は、結合対の構成員（例えば、抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性をいう。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表示され得る。親和性は、制限ではないが、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡結合定数（ＫＡ）を含む、当業界に公知である多数の方式で測定及び／又は表現することができる。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎから計算され、モル濃度（Ｍ）として表現され、ＫＡはｋｏｎ／ｋｏｆｆから計算される。ｋｏｎは、抗体と抗原の結合速度定数であり、ｋｏｆｆは抗体と抗原の解離である。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、免疫分析（例えば、酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ））、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）又は力学的排除分析（ＫｉｎＥｘＡ）のような当業界における公知の技術によって決定され得る。
本明細書に開示された用語“特異的に結合する”、“特異的に認識する”、“特異的結合”、“選択的結合”及び“選択的に結合する”とは、抗体と関連して類似の用語であり、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子（例えば、抗体）をいい、このような結合は、当業者に理解されるとおりである。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫分析、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）又は当業界に公知である他の分析によって決定された時、より低い親和性で、他のペプチド又はポリペプチドに結合し得る。特定の具体例において、抗原に特異的に結合する分子は、当該分子が他の抗原に結合する時のＫＡよりも少なくとも２ｌｏｇｓ、２．５ｌｏｇｓ、３ｌｏｇｓ、４ｌｏｇｓ又はそれ以上のＫＡで抗原に結合する。
抗体は、典型的に１０－５～１０－１１Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）によって反映された、高い親和性で同族抗原に特異的に結合する。約１０－４Ｍを超える任意のＫＤは、一般的に非特異的結合を表すものと見なされる。本明細書に提示された、抗原に“特異的に結合する”抗体は、高い親和性で抗原及び実質的に同じ抗原に結合するが、無縁の抗原には高い親和性で結合しない抗体をいい、高い親和性とは、例えば、定められた抗原を使用して免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）又はＢＩＡＣＯＲＥ２０００機器で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定された時、１０－７Ｍ以下、好ましくは１０－８Ｍ以下、より好ましくは１０－９Ｍ以下、及び最も好ましくは１０－８Ｍ～１０－１０Ｍ以下のＫＤを有することを意味する。
本明細書に開示された用語“抗原”は、任意の天然又は合成免疫原性物質、例えばタンパク質、ペプチド又はハプテンをいう。抗原は、ＦＡＭ１９Ａ５又はその断片でよい。
本明細書に開示された“エピトープ”とは、当業界の用語であり、抗体が特異的に結合し得る抗原の局所領域をいう。例えば、エピトープは、ポリペプチドの隣接アミノ酸であってもよく（線形又は隣接エピトープ）、又はエピトープは一つのポリペプチド又は複数のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域から共に合わせられてもよい（立体構造的、非線形、不連続、又は非隣接エピトープ）。隣接アミノ酸から形成されたエピトープは、常時ではないが、典型的に変性溶媒への露出時に維持されるが、３次フォルディングによって形成されたエピトープは典型的に変性溶媒への処理時に失われる。エピトープは典型的に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は２０個のアミノ酸を独特の空間的立体構造で含む。与えられた抗体によってエピトープが結合される方式を決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は当業界に公知であり、例えば、免疫ブロッティング及び免疫沈殿分析を含み、本明細書では、重複又は隣接ペプチド（例えば、ＦＭＡＭ１９Ａ５から）が、与えられた抗体（例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体）との反応性に対して試験される。エピトープの空間的立体構造を決定する方法は、当業界の技術及び本明細書に提示されたもの、例えばｘ－線結晶学、２－次元核磁気共鳴及びＦＩＤＸ－ＭＳを含む（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）。
特定の具体例において、抗体が結合するエピトープは、例えばＮＭＲ分光学、ｘ－線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡ分析、質量分析法と結合された水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィー電気噴霧質量分析法）、アレイ基盤オリゴペプチドスキャニング分析及び／又は突然変異誘発マッピング（例えば、部位指定突然変異誘発マッピング）によって決定され得る。ｘ－線結晶学の場合、当業界における公知の方法のいずれかを用いて結晶化が達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３；Ｃｈａｙｅｎ Ｅ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３参照）。抗体：抗原結晶は、よく知られたｘ－線回折技術を用いて研究でき、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．によって配布；例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４＆１１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ；Ｕ．Ｓ．２００４／００１４１９４参照）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６ Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ；Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３）のようなコンピュータソフトウェアを用いて確認することができる。突然変異誘発マッピング研究は、当業界における公知の任意の方法を用いて行うことができる。アラニンスキャニング突然変異誘発技術を含む突然変異誘発技術に関する内容は、例えば、Ｃｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照する。
用語“エピトープマッピング”は、抗体－抗原認識のための分子決定基を確認する過程をいう。
２つ以上の抗体と関連して用語“同一エピトープに結合する”とは、与えられた方法によって決定された時、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントに結合するということを意味する。抗体が本明細書に提示された抗体と“ＦＡＭ１９Ａ５上の同一エピトープ”に結合するか否かを決定する技術は、例えば、エピトープマッピング方法、例えば、当該エピトープの原子分解能を提供する抗原：抗体複合体結晶に対するｘ－線分析及び水素／重水素交換質量分析法（ＨＤＸ－ＭＳ）を含む。他の方法は、抗原断片や抗原の突然変異された変異型に対する抗体の結合をモニターし、この場合、抗原配列内でアミノ酸残基の変形による結合の喪失がエピトープ成分のしるしとして主に考慮される。また、エピトープマッピングのためのコンピュータ組合せ方式の方法が用いられてもよい。それらの方法は、組合せ方式ファージディスプレイペプチドライブラリーから特定の短いペプチドを親和性分離できる関心抗体の能力に依存する。同一のＶＨ及びＶＬ又は同一のＣＤＲ１、２及び３配列を持つ抗体は、同一エピトープに結合すると予想される。
“標的との結合に対して他の抗体と競合する”抗体は、残りの抗体と標的の結合を抑制する（部分的に又は完全に）抗体をいう。両抗体が標的との結合に対して互いに競合するか否か、すなわち一つの抗体が残りの抗体と標的の結合を抑制するか否か及びその度合いは、公知の競合実験によって決定され得る。特定の具体例において、抗体は他の抗体と標的の結合に対して競合し、他の抗体と標的の結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％だけ抑制する。抑制又は競合のレベルは、抗体が“遮断抗体”（すなわち、まず標的と共にインキュベーションされる冷蔵抗体）か否かによって異なり得る。競合分析は、例えば、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７又はＥｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ１９９９“Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”の第１１章に開示されたとおりに行われ得る。競合抗体は、同一エピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープ（例えば、立体障害によって証明されたとおり）に結合する。
他の競合結合分析は、固体相直接又は間接放射性免疫分析（ＲＩＡ）、固体相直接又は間接酵素免疫分析（ＥＩＡ）、サンドウィッチ競合分析（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ９：２４２（１９８３）参照）；固体相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）参照）；固体相直接標識分析、固体相直接標識サンドウィッチ分析（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）参照）；Ｉ－１２５標識を使用する固体相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）参照）；固体相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０）参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０）参照）を含む。
“二重特異的”又は“二重機能性”抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対と２つの異なる結合部位を持つ人工ハイブリッド抗体である。二重特異的抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の結合を含む様々な方法によって生成され得る（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ＆ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３（１９９２）参照）。
本明細書に提示された“単クローン性抗体”は、特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を表す抗体又は全ての抗体が特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を表す抗体の組合せのこと
を指す。したがって、用語“ヒト単クローン性抗体”は、単一結合特異性を表し、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から由来した可変領域及び選択的な不変領域を持つ抗体又は抗体組成物をいう。一具体例において、ヒト単クローン性抗体は、不滅化された細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを持つ遺伝子導入非ヒト動物、例えば遺伝子導入マウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成される。
本明細書に提示された“組換えヒト抗体”は、組換え手段によって作製、発現、生成又は分離された全てのヒト抗体を含み、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入又は染色体導入である動物（例えば、マウス）又はそれから作製されたハイブリドーマから分離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから分離された抗体、（ｃ）組換え、組合せ方式ヒト抗体ライブラリーから分離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列と他のＤＮＡ配列のスプライシングを伴う任意の他の手段によって作製、発現、生成又は分離された抗体がある。このような組換えヒト抗体は、可変領域及び不変領域を含み、それらは、生殖細胞系（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）遺伝子によって暗号化された特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を利用するが、例えば、抗体成熟化中に起きる、後続再配列及び突然変異を含む。当業界に公知とされたとおり（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７－１１２５参照）、可変領域は抗原結合ドメインを有し、外来抗原に特異的な抗体を形成するように再配列した様々な遺伝子によって暗号化される。再配列に加えて、可変領域は、外来抗原に対する抗体の親和性を増加させるために多数の単一アミノ酸変化によってさらに変形されてもよい（体細胞突然変異又は超突然変異）。不変領域は、抗原に対する追加の反応において変化するであろう（すなわち、イソタイプスイッチ）。したがって、抗原に反応して軽鎖及び重鎖免疫グロブリンポリペプチドを暗号化する再配列がなされ、体細胞突然変異された核酸分子は、親核酸分子と配列同一性を有することはできないが、その代わりに、実質的に同一又は類似になるであろう（すなわち、少なくとも８０％同一性を有する）。
“ヒト”抗体（ＨｕＭＡｂ）は、フレームワークとＣＤＲ領域が両方ともヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から由来した可変領域を持つ抗体を指す。また、抗体が不変領域を含有する場合、不変領域もまたヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から由来する。本明細書に開示された抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によって暗号化されないアミノ酸残基を含むことができる（例えば、試験管内無作為又は部位特異的突然変異誘発によって又は生体内体細胞突然変異によって導入された突然変異）。しかし、本明細書に開示された“ヒト抗体”は、マウスのような他の哺乳類種の生殖細胞系から由来したＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含まない。用語“ヒト”抗体及び“完全ヒト”抗体は、同じ意味で使われる。
“ヒト化”抗体は、非ヒト抗体のＣＤＲドメイン外にあるアミノ酸の一部、大部分又は全部がヒト免疫グロブリンから由来した相応するアミノ酸に置換された抗体をいう。抗体のヒト化形態の一具体例において、ＣＤＲドメインの外側にあるアミノ酸の一部、大部分又は全部が、ヒト免疫グロブリンからのアミノ酸に置換され、一つ以上のＣＤＲ領域内のアミノ酸の一部、大部分又は全部はそのまま維持される。アミノ酸の小さな追加、欠失、挿入、置換又は変形は、抗体が特定抗原に結合する能力を無くさない限り、許容され得る。“ヒト化”抗体は親抗体と類似の抗原特異性を保有する。
“キメラ抗体”は、可変領域が一つの種から由来し、不変領域が他の種から由来した抗体、例えば、可変領域がマウス抗体から由来し、不変領域がヒト抗体から由来した抗体をいう。
本明細書に開示された用語“交差反応する”とは、本明細書に提示された抗体が異なる種からのＦＡＭ１９Ａ５に結合する能力をいう。例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する抗体はさらに、ＦＡＭ１９Ａ５の他の種（例えば、マウスＦＡＭ１９Ａ５）にも結合し得る。交差反応性は、結合分析（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）で精製された抗原との特異的反応性を検出することによって、又はＦＡＭ１９Ａ５を生理的に発現する細胞に対する結合又は他の機能的相互作用を検出することによって測定することができる。交差反応性を決定する方法は、本明細書に提示された標準結合分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ ２０００ ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いたＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析、又はフローサイトメトリー技術を含む。
本明細書に開示された用語“自然的に発生した”は、物体に適用される場合、物体が自然から発見され得るということをいう。例えば、自然供給源から分離可能であり、実験室で人によって意図的に変形されていない有機体（ウイルスを含む）に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチド配列が、自然的に発生したものである。
“ポリペプチド”は、少なくとも２個の構成的に連結されたアミノ酸残基を含む鎖をいい、鎖の長さには上限がある。タンパク質において一つ以上のアミノ酸残基は、限定されないが、グリコシル化、リン酸化又は二硫化物結合形成のような変形を含有することができる。“タンパク質”は、一つ以上のポリペプチドを含むことができる。
本明細書に開示された用語“核酸分子”は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含む。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖でよく、ｃＤＮＡであってもよい。
本明細書に開示された用語“べクター”は、それが連結された他の核酸を輸送できる核酸分子のことを指す。ベクターの一つの種類は“プラスミド”であり、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る円形の二本鎖ＤＮＡループをいう。ベクターの他の種類は、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。特定ベクターは、それらが導入された宿主細胞において自己複製が可能である（例えば、バクテリア複製起源を持つバクテリアベクター及びエピゾーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピゾーム哺乳類ベクター）も、宿主細胞に導入時、宿主細胞のゲノムに統合され得、これによって宿主ゲノムと共に複製される。また、特定ベクターは、それらの作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは“組換え発現ベクター”（又は簡単に、“発現ベクター”）として本明細書に提示される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用性を持つ発現ベクターは、主に、プラスミドの形態である。本明細書において、“プラスミド”及び“ベクター”は、互換して使用でき、プラスミドは、ベクターの最も一般的に使用される形態である。しかし、同等の機能を持つウイルスベクターのような他の形態の発現ベクターも含まれる（例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ関連ウイルス）。
本明細書に開示された用語“組換え宿主細胞”（又は簡単に、“宿主細胞”）は、細胞に自然的に存在しない核酸を含む細胞を指し、組換え発現ベクターが導入された細胞でよい。このような用語は、特定対象細胞だけでなく、それら細胞の子孫のことも指すということが理解できよう。突然変異や環境影響によって後続世代では特定の変形が起きることがあるので、このような子孫は実際に親細胞と同一でないことがあるが、本明細書に開示された用語“宿主細胞”の範囲内に依然として含まれる。
本明細書に開示された用語“連結された”とは、２つ以上の分子の会合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）をいう。この連結は、共有又は非共有でよい。連結はまた、遺伝的（すなわち、組換え融合）であってもよい。このような連結は、化学的コンジュゲーション及び組換えタンパク質生成のような広範囲な当業界に認定された技術を用いて達成することができる。
本明細書に開示された“投与する”は、当業者に公知である様々な方法及び送達システムのいずれかを用いて、対象に、治療剤又は治療剤を含む組成物を物理的に導入することをいう。本明細書に提示された抗体のための好ましい投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊椎、又は他の非経口投与経路、例えば注射や注入による経路を含む。本明細書に開示された“非経口投与”は、腸及び局所投与以外の投与方式、一般的に注射によることを意味し、限定されないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、脊椎腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、血内、経気管、皮下、皮膚下、関節内、嚢下、蜘蛛膜下、脊椎内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入、並びに生体内電気穿孔を含む。また、本明細書に提示された抗体は、非－非経口経路、例えば局所、上皮又は粘膜投与経路を通じて、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下又は局所経路によって投与され得る。投与はまた、例えば１回、複数回、及び／又は１回以上の延長された期間にわたって行われ得る。
本明細書に開示された用語“治療する”及び“治療”は、疾患に関連した症状、合併症、状態又は生化学的指標の進行、発生、深刻度又は再発の逆転、軽減、緩和、阻害又は遅延や予防の目的下に対象に対して行われた、又は対象に活性剤を投与する任意の種類の介入や過程をいう。治療は、疾患を持つ対象又は疾患を持たない対象（例えば、予防のために）に対して行われ得る。
本明細書に開示された用語“対象”は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。用語“非ヒト動物”は、全ての脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類、例えば非ヒト霊長類、羊、犬、牛、鶏、両棲類、爬虫類などを含む。
本明細書に開示された用語“神経膠症の開始”又は“反応性神経膠症の開始”は、神経膠症の始まり又は開始を含む。神経膠症は、例えば、外傷、脳脊髄損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患からの傷害や損傷に反応して中枢神経系（ＣＮＳ、例えば、脳及び／又は脊髄）において神経膠細胞の非特異的反応性変化であり、星状細胞、小神経細胞及び希突起膠細胞を含むいくつかの異なるタイプの神経膠細胞の増殖や肥大を含む。神経膠症の開始は、瘢痕の形成を招くことがあり、外傷や傷害を受けたＣＮＳの部分において軸索突起再生を阻害する。神経膠症の開始の有害な効果は、神経に対する非可逆的又は永久的な損傷及び／又は周囲ニューロンの回復の防止を含む。したがって、用語“神経膠症の開始を遅延する”及び“反応性神経膠症の開始を遅延する”とは、神経膠症の始まりや開始及びＣＮＳに対するその関連した有害な効果を阻害、遅延、抑制又は防止することを含む。
本明細書に開示された用語“反応性星状細胞の過度な増殖”は、例えば、ＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髄損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患による周囲ニューロンの破壊によって星状細胞の数が異常増加することを含む。反応性星状細胞の過度な増殖は、外傷や傷害を受けたＣＮＳの部分において軸索突起再生を阻害する瘢痕の形成、炎症の悪化、神経毒性レベルの反応性酸素種の生成及び放出、潜在的興奮毒性グルタメートの放出、発作発生に対する潜在的寄与、血液－脳障壁機能の損傷、外傷及び脳卒中の間における細胞毒性浮腫、慢性疼痛に寄与できる星状細胞の慢性的サイトカイン活性化に対する可能性及びＣＮＳ傷害後二次的変性を含むＣＮＳでの有害な効果を招くことがある（Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｖ．（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，３２（１２）：６３８－４７；ＭｃＧｒａｗ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６３（２）：１０９－１５；ａｎｄ Ｓｏｆｒｏｎｉｅｗ，Ｍ．Ｖ．（２００５）Ｔｈｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ１１（５）：４００－７参照）。したがって、用語“反応性星状細胞の過度な増殖を抑制する”ことは、反応性星状細胞の過度又は異常増殖及びＣＮＳに対するそれに関連した有害な効果の阻害、遅延、抑制、制限又は予防をすることを含む。
本明細書に開示された用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカン”は、タンパク質コアとコンドロイチン硫酸からなるプロテオグリカンを含む。ＣＳＰＧとも知られたコンドロイチン硫酸プロテオグリカンは、発生中のＣＮＳと成体ＣＮＳの全てにおいて広範囲に発現した細胞外基質分子である。ＣＳＧＰは、神経発生及び神経膠瘢痕の形成において重要な役割を果たし、ＣＮＳの傷害後軸索突起再生を阻害する。公知のＣＳＰＧは、アグリカン（ＣＳＰＧ１）、バーシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又はニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体構造維持３）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）、ＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化クラスター４４）及びホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）を含む（Ｒｈｏｄｅｓ，Ｋ．Ｅ．ａｎｄ
Ｆａｗｃｅｔｔ，Ｊ．Ｗ．（２００４）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎａｔｏｍ．２０４（ｌ）：３３－４８参照）。したがって、用語“コンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる”ということは、一つ以上のＣＳＧＰのレベルを低下、阻害、減少させる、又は一つ以上のＣＳＧＰの活性を減少させたり非活性させることを含む。特定の具体例において、この用語は、ニューロカン、ＮＧ２、又はこれら両方のレベルを低下、阻害、減少させることを含み、また、ニューロカン、ＮＧ２、又はこれら両方の活性を減少させたり非活性させることを含む。
本明細書に開示された用語“ニューロン”は、電気信号及び化学信号を通じて情報を加工し伝送する電気的興奮性細胞を含む。ニューロンは、ＣＮＳの脳及び脊髄、及び末梢神経系（ＰＮＳ）の神経膠の主要成分であり、互いに連結されて神経網を形成することができる。典型的なニューロンは、神経細胞体（ソーマ）、樹状突起及び軸索突起からなる。ニューロンのソーマ（神経細胞体）は核を含有する。ニューロンの樹状突起は、多くの分岐を持つ細胞延長部であり、大部分のニューロン入力が発生する。軸索突起は、ソーマから延長されたさらに微細なケーブル型保護部であり、ソーマから離れた所の神経信号を運搬し、特定の種類の情報をソーマから再び運搬する。用語“ニューロンの再成長を促進する”ということは、好ましくは、傷害又は損傷後、ニューロンの成長を刺激、促進、増加又は活性化することを含む。
本明細書に開示された用語“ｃ－ｆｏｓ”は、前癌遺伝子ｃ－ｆｏｓを含み、神経伝達物質の刺激によって速く誘導され、マウス及びヒトを含む多くの種に存在する。ｃ－ｆｏｓ遺伝子及びタンパク質は、公知及び特性化されている（Ｃｕｒｒａｎ，Ｔ，Ｔｈｅ ｃ－ｆｏｓ ｐｒｏｔｏ－ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ｐｐ ３０７－３２７（Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｒｅｄｄｙ ＥＰ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）（１９８８）参照）。ｃ－ｆｏｓの発現は、当業界における公知の方法、例えばノーザンブロット、定量ＰＣＲ又は免疫組織化学によって決定され得る。用語“ｃ－ｆｏｓの発現を増加させる”ということは、ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、ｃ－ｆｏｓタンパク質又はｃ－ｆｏｓタンパク質活性のレベルの増加を含む。
本明細書に開示された用語“ｐＥＲＫ”は、リン酸化された細胞外信号調節キナーゼを含む。細胞外信号調節キナーゼ、又はＥＲＫ１及びＥＲＫ２を含むＥＲＫは、ミトゲン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）ファミリーの構成員である。ＥＲＫは上流キナーゼによるリン酸化によって活性化されることにより、ｐＥＲＫを形成し、次いで、下流標的を活性化する。ＥＲＫは、学習、及び記憶及び疼痛過敏症の基礎になる神経及びシナプス可塑性に伴われる（Ｊｉ Ｒ．Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ（１９９９）２：１１１４－１１１９参照）。ＥＲＫ遺伝子、タンパク質、リン酸化及び活性化は、公知及び特性化されており、ＥＲＫ及びｐＥＲＫの発現は、当業界における公知の方法（例えば、ノーザンブロット、定量ＰＣＲ又は免疫組織化学）によって決定され得る（Ｇａｏ Ｙ．Ｊ．ａｎｄ Ｊｉ Ｒ．Ｒ．，Ｏｐｅｎ Ｐａｉｎ Ｊ．（２００９）２：１１－１７参照）。用語“ｐＥＲＫの発現を増加させる”ということは、ＥＲＫ ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性のレベルの増加を含む。
“成長関連タンパク質４３”と知られた本明細書に開示された用語“ＧＡＰ４３”は、神経突起の形成、再生及び可塑性を促進する神経組織特異的タンパク質である（Ｂｅｎｏｗｉｔｚ Ｌ．Ｉ．ａｎｄ Ｒｏｕｔｔｅｎｂｅｒｇ Ａ．（１９９７）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０（２）：８４－９１；Ａａｒｔｓ Ｌ．Ｈ．ｅｔ ａｌ，（１９９８）Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４４６：８５－１０６参照）。ヒトＧＡＰ４３は、ＧＡＰ４３遺伝子によって暗号化される。ヒトＧＡＰ４３ポリペプチド配列（ＵｎｉＰｒｏｔ：ＫＢ－Ｐ１７６７７）とこのポリペプチドを暗号化するｃＤＮＡ配列は、当業界に公知である（Ｋｏｓｉｋ Ｋ．Ｓ．ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｎｅｕｒｏｎ １（２）：１２７－３２；Ｎｇ Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｎｅｕｒｏｎ １（２）：１３３－９参照）。ＧＡＰ４３の発現は、当業界における公知の方法（例えば、ノーザンブロット、定量ＰＣＲ又は免疫組織化学）によって決定され得る。用語“ニューロンでＧＡＰ４３を増加させる”ということは、ＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質のレベルの増進又は増加、又はＧＡＰ４３タンパク質の活性の増加を含む。
本明細書に開示された用語“治療的有効量”は、対象の疾患又は障害を“治療”あるいは疾患又は障害（例えば、中枢神経系損傷）の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させるのに効果的な、単独、又は他の治療剤と組み合わされた、薬物の量をいう。“治療的有効量”は、疾患又は障害（例えば、外傷性脳傷害のような中枢神経系損傷又は本明細書に開示された他の疾患）を有するか又は有する危険がある対象に、一部の改善や利益を提供する薬物又は治療剤の量を指す。したがって、“治療的有効”量は、疾患又は障害の危険、潜在性、可能性又は発生を減少させ又は一部の軽減、緩和を提供し及び／又は少なくとも一つの表示子（例えば、反応性神経膠症の開始）を減少させ及び／又は疾患又は障害の少なくとも一つの臨床症状を減少させる量である。
II．抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体
特定の機能的特徴又は特性を特徴とする抗体、例えば単クローン性抗体が開示される。例えば、抗体は、可溶性ＦＡＭ１９Ａ５及び膜結合されたＦＡＭ１９Ａ５を含む、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。可溶性及び／又は膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合するだけでなく、本明細書に提示された抗体は、次の機能的特性のいずれか一つ以上を表す：
（ａ）酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する；
（ｃ）反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延及び／又は予防する；
（ｄ）反応性星状細胞の過度な増殖を抑制する；
（ｅ）ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少させる；
（ｆ）ニューロンの核でｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させる；
（ｇ）ニューロンの生存を促進する；
（ｈ）ニューロンでＧＡＰ４３の発現を増加させる；及び
（ｉ）軸索突起の再成長を促進する。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、高い親和性で、例えば１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ（０．１ｎＭ）以下、１０－１１Ｍ以下又は１０－１２Ｍ以下、例えば、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－９Ｍ～１０－７Ｍ、例えば、１０－１２Ｍ、５Ｘ１０－１２Ｍ、１０－１１Ｍ、５Ｘ１０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ、５Ｘ１０－１０Ｍ、１０－９Ｍ、５Ｘ１０－９Ｍ、１０－８Ｍ、５Ｘ１０－８Ｍ、１０－７Ｍ又は５Ｘ１０－７ＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５又は膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。様々な種のヒトＦＡＭ１９Ａ５に向ける抗体の結合能力を評価するための標準分析は、当業界に公知であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、及びＲＩＡを含む。適切な分析は実施例にて詳しく説明される。抗体の結合動力学（例えば、結合親和性）もＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ分析又はＫｉｎＥｘＡのような当業界における公知の標準分析によって評価され得る。ＦＡＭ１９Ａ５の機能的特性（例えば、リガンド結合）に対する抗体の効果を評価する分析は、下記及び実施例にてさらに詳しく説明される。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＥＬＩＳＡによって決定された時、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－８Ｍ～１０－７ＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、１０ｎＭ以下、例えば、０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭのＫＤで可溶性ＦＡＭ１９Ａ５に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定された時、約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、若しくは約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ又は９ｎＭ、若しくは約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭのＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＥＬＩＳＡによって決定された時、１０－７Ｍ以下、１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下、１０－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０－１０Ｍ以下、１０－１２Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１１Ｍ～１０－７Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－７Ｍ、１０－９Ｍ～１０－７Ｍ又は１０－８Ｍ～１０－７ＭのＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定された時、１０ｎＭ以下、例えば、０．１～１０ｎＭ、０．１～５ｎＭ、０．１～１ｎＭ、０．５～１０ｎＭ、０．５～５ｎＭ、０．５～１ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ又は５～１０ｎＭのＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＬＩＳＡによって決定された時、約１ｐＭ、２ｐＭ、３ｐＭ、４ｐＭ、５ｐＭ、６ｐＭ、７ｐＭ、８ｐＭ、９ｐＭ、１０ｐＭ、２０ｐＭ、３０ｐＭ、４０ｐＭ、５０ｐＭ、６０ｐＭ、７０ｐＭ、８０ｐＭ、９０ｐＭ、１００ｐＭ、２００ｐＭ、３００ｐＭ、４００ｐＭ、５００ｐＭ、６００ｐＭ、７００ｐＭ、８００ｐＭ又は９００ｐＭ、若しくは約１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、ｏｒ９ｎＭ、若しくは約１０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、５０ｎＭ、６０ｎＭ、７０ｎＭ、８０ｎＭ又は９０ｎＭのＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合する。
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、神経膠症の開始を遅延又は阻害することができ、例えば、外傷、脳脊髄損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患による傷害又は損傷に反応して中枢神経系（ＣＮＳ、例えば脳及び／又は脊髄）において神経膠細胞の非特異的反応性変化の始まりや開始を阻止、遅延又は抑制することができる。
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、反応性星状細胞の過度又は異常増殖及びＣＮＳに対するその関連した有害な効果を阻止、阻害、遅延、抑制、制限又は防止することができる。例えば、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髄損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患によるニューロンの破壊による星状細胞の数の異常増加を阻害又は防止することができ、ＣＮＳにおいて瘢痕形成を阻害又は防止することができ、神経毒性レベルの反応性酸素種の放出又は潜在的興奮毒性グルタメートの放出を阻害又は減少させることができ、発作、疼痛及び／又はＣＮＳ傷害後２次退行を減少又は阻害することができる。本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、好ましくは、ＣＮＳ傷害又は損傷後、ニューロン及び／又は軸索突起の再成長を促進、刺激、増加又は活性化することができる。
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、タンパク質コア及びコンドロイチン硫酸（ＣＳＧＰｓ）、例えば、アグリカン（ＣＳＰＧ１）、バーシカン（ＣＳＰＧ２）、ニューロカン（ＣＳＰＧ３）、ＣＳＰＧ４（又は、ニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２））、ＣＳＰＧ５、ＳＭＣ３（ＣＳＰＧ６、染色体構造維持３）、ブレビカン（ＣＳＰＧ７）、ＣＤ４４（ＣＳＰＧ８、分化クラスター４４）及びホスファカンニューロカン（ＣＳＰＧ３）からなるプロテオグリカンを含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を阻害することができる。一部の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ニューロカン及び／又はＮＧ２のレベル、又はニューロカン及び／又はＮＧ２の活性を阻害、低下又は減少させる。
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はニューロンの核においてｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加させることができ、例えば、ｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫのｍＲＮＡ、タンパク質及び／又はタンパク質活性を増加させることができる。また、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＧＡＰ４３ｍＰＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質の発現レベルを増加又は増進、又はＧＡＰ４３タンパク質活性を増加又は増進させることができる。
特定の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープとの結合において本明細書に開示されたＣＤＲ又は可変領域を含む抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と相互競合する（又は、結合を阻害する）。特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む基準抗体の結合を阻害し、（１）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み；（２）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：２９，３０，３１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３２，３３，３４を含み；（３）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３５，３６，３７を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３８，３９，４０を含み；（４）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４１，４２，４３を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４４，４５，４６を含み；（５）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４７，４８，４９を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５０，５１，５２を含み；（６）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５３，５４，５５を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５６，５７，５８を含み；（７）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５９，６０，６１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６２，６３，６４を含み；（８）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６５，６６，６７を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６８，６９，７０を含み；（９）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７１，７２，７３を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７４，７５，７６を含み；（１０）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７７，７８，７９を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８０，８１，８２を含み；（１１）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８３，８４，８５を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８６，８７，８８を含み；または（１２）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８９，９０，９１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：９２，９３，９４を含む。
一部の具体例において、基準抗体は、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
特定の具例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％だけ、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対するこのような基準抗体の結合を阻害する。競合する抗体は、同一エピトープ、重複エピトープ又は隣接エピトープ（例えば、立体障害によって証明されたとおり）に結合する。２個の抗体が標的に対する結合に対して互いに競合するか否かは、ＲＩＡ及びＥＩＡのような当業界における公知の競合実験によって決定され得る。
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む本明細書に開示された基準抗体と同じＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、（１）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含み；（２）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：２９、３０、３１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３２、３３、３４を含み；（３）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３５、３６、３７を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：３８、３９、４０を含み；（４）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４１、４２、４３を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４４、４５、４６を含み；（５）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：４７、４８、４９を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５０、５１、５２を含み；（６）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５３、５４、５５を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５６、５７、５８を含み；（７）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５９、６０、６１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６２、６３、６４を含み；（８）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６５、６６、６７を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６８、６９、７０を含み；（９）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７１、７２、７３を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７４、７５、７６を含み；（１０）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：７７、７８、７９を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８０、８１、８２を含み；（１１）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８３、８４、８５を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８６、８７、８８を含み；または（１２）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：８９、９０、９１を含み、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はそれぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：９２、９３、９４を含む。
一部の具体例において、基準抗体は、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（４）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（５）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（６）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（７）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（８）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（９）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１０）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（１１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；または（１２）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
２個の抗体が同一のエピトープに結合するか否かを決定するための技術は、例えばエピトープマッピング方法、例えばエピトープの原子分解能を提供する抗原－抗体複合体の結晶のｘ－線分析水素／重水素交換質量分光法（ＨＤＸ－ＭＳ）、抗原断片又は抗原の突然変異された変異型に対する抗体の結合をモニタリングする方法、抗原配列内でアミノ酸残基の変形による結合の喪失がエピトープ成分の標識として主に見なされる場合、エピトープマッピングのためのコンピュータ組合せ方法を含む。
本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、例えばヒトＦＡＭ１９Ａ５の断片に抗体の結合によって決定された時、成熟したヒトＦＡＭ１９Ａ５の少なくとも一つのエピトープに結合し得る。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＣＤＭＬＰＣＬＥＧＥＧＣＤＬＬＩＮＲＳＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、エピトープＦ５、実施例１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸残基９０～１０９）のアミノ酸配列を持つ少なくとも一つのエピトープに結合、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列内に位置した断片、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸残基９９～１０７（すなわち、ＥＧＣＤＬＬＩＮＲ）に結合する。特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸残基９９、１００、１０２、１０３、１０５、及び１０７（すなわち、ＥＧ－ＤＬ－Ｉ－Ｒ）に結合する。他の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸残基１０２、１０３、１０５、及び１０７（すなわち、ＤＬ－Ｉ－Ｒ）に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４の９９、１００、及び１０７（すなわち、ＥＧ－－－－－－Ｒ）に結合する。一部の具体例において、少なくとも一つのエピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２である、ヒトＦＡＭ１９Ａ５エピトープにだけ、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のアミノ酸配列内に位置した断片、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つエピトープに結合する。
一部の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、その自生立体構造（すなわち、非変性）においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２又はその断片に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はグリコシル化された及び非グリコシル化されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に全て結合する。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、一つ以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープにさらに結合する。したがって、特定の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のエピトープ及び追加のエピトープに結合する。一部の具体例において、一つ以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、
ＱＦＬＫＥＧＱＬＡＡＧＴＣＥＩＶＴＬＤＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、エピトープＦ１）、
ＴＬＤＲＤＳＳＱＰＲＲＴｉＡＲＱＴＡＲＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、エピトープＦ２）、
ＴＡＲＣＡＣＲＫＧＱＩＡＧＴＴＲＡＲＰＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、エピトープＦ３）、
ＡＲＰＡＣＶＤＡＲＩＩＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、エピトープＦ４）、又は
ＮＲＳＧＷＴＣＴＱＰＧＧＲＩＫＴＴＴＶＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、エピトープＦ６）、若しくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列内に位置した断片、又はそれらの任意の組合せから選択される。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のアミノ酸配列内に位置した断片は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のいずれかの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つ断片を含む。一部の具体例において、一つ以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列内に位置した断片、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０個のアミノ酸を持つ断片、又はそれらの任意の組合せから選択される。一部の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、その自生立体構造（すなわち、非変性）において一つ以上の追加のエピトープのいずれかと結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、一つ以上の追加のＦＡＭ１９Ａ５エピトープのグリコシル化されたもの及び非グリコシル化されたものと結合する。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ６、ＥＰ７、又はＥＰ８として確認された少なくとも一つのＦＡＭ１９Ａ５エピトープに結合し、ＥＰ６はアミノ酸ＫＴＫＱＷＣＤＭＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３９）を含み、ＥＰ７はアミノ酸ＧＣＤＬＬＩＮＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４０）を含み、ＥＰ８はアミノ酸ＴＣＴＱＰＧＧＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４１）を含む。一部の具体例において、少なくとも一つのエピトープは、ＥＰ６、ＥＰ７又はＥＰ８と少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を有する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ６、ＥＰ７又はＥＰ８にだけ結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ６、ＥＰ７及びＥＰ８に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＥＰ７及びＥＰ８に結合する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分はＥＰ７に結合する。
特定の具体例において、例えば、免疫分析（例えば、ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴又は力学的排除分析によって測定された時、ＦＡＭ１９Ａファミリーの他の分子への結合よりも、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％高い又はさらに高い親和性でＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体又はその抗原結合部分が提供される。特定の具体例において、例えば、免疫分析によって測定された時、ＦＡＭ１９Ａファミリーの他の分子と交差反応性を持たないＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に結合する抗体又はその抗原結合部分が提供される。
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、自生抗体でないか、又は自然的に発生した抗体ではない。例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、翻訳後に変形がより多いかより少ないか、又は異なるタイプであるような、自然的に発生した抗体とは異なる翻訳後変形を有する。
III．例示的な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体
本明細書に提示された特定の抗体は、抗体１－６５、Ｐ２－Ｃ１２、１３Ｂ４、１３Ｆ７、１５Ａ９、Ｐ１－Ａ０３、Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ０７又はＰ２－Ｆ１のＣＤＲ及び／又は可変領域配列を持つ抗体、例えば単クローン性抗体、またそれらの可変領域又はＣＤＲ配列に少なくとも８０％同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％同一性）を持つ抗体である。本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列は、それぞれ、表２及び３に提示される。
Figure 0007045724000003
Figure 0007045724000004
Figure 0007045724000005
Figure 0007045724000006
したがって、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５又は１０３～１１３のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５又は１０３～１１３からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲを含む。
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６又は１１４～１２４のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６又は１１４～１２４からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
特定の具体例において、分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５又は１０３～１１３からなる群から選ばれる重鎖可変領域のＣＤＲ及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６又は１１４～１２４からなる群から選ばれる軽鎖可変領域のＣＤＲを含む。
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、
（i）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含み；
（ii）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４のアミノ酸配列を含み；
（iii）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１５のアミノ酸配列を含み；
（iv）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１６のアミノ酸配列を含み；
（v）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７のアミノ酸配列を含み；
（vi）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１８のアミノ酸配列を含み；
（vii）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１９のアミノ酸配列を含み；
（viii）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０９のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２０のアミノ酸配列を含み；
（ix）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１０のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２１のアミノ酸配列を含み；
（x）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１１のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２２のアミノ酸配列を含み；
（xi）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２３のアミノ酸配列を含み；及び
（xii）重鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１３のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２４のアミノ酸配列を含む。
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５又は１０３～１１３に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６又は１１４～１２４に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
また、重鎖及び軽鎖可変領域を含む分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分が開示され、重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５又は１０３～１１３に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：６又は１１４～１２４に提示されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％又は約１００％同じアミノ酸配列を含む。
一部の具体例において、本発明は分離された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を提供し、これは、
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：５及び６をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０３及び１１４をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０４及び１１５をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０５及び１１６をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０６及び１１７をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０７及び１１８をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｇ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０８及び１１９をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｈ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１０９及び１２０をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１１０及び１２１をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｊ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１１１及び１２２をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；
（ｋ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１１２及び１２３をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列；または
（ｌ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯｓ：１１３及び１２４をそれぞれ含む重鎖及び軽鎖可変領域配列
を含む。
特定の具体例において、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、（i）１－６５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又は１－６５の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（ii）Ｐ２－Ｃ１２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ２－Ｃ１２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（iii）１３Ｂ４の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又は１３Ｂ４の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（iv）１３Ｆ７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又は１３Ｆ７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（v）１５Ａ９の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又は１５Ａ９の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（vi）Ｐ１－Ａ０３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ１－Ａ０３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（vii）Ｐ１－Ａ０８の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ１－Ａ０８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（viii）Ｐ１－Ｆ０２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ１－Ｆ０２の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（ix）Ｐ２－Ａ０１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ２－Ａ０１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（x）Ｐ２－Ａ０３の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ２－Ａ０３の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；（xi）Ｐ２－Ｆ０７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ２－Ｆ０７の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せ；または（xii）Ｐ２－Ｆ１１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの組合せ、及び／又はＰ２－Ｆ１１の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、又はそれらの任意の組合せを含む。本明細書に開示された異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表２に提示されている。本明細書に開示された異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列は、表３に提示されている。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＨ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；及び／又は
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗体又はその抗原結合部分は、前記ＶＬ ＣＤＲのいずれか１個、２個、又は３個全部を含む。
一部の具体例において、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は：
（ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１；
（ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２；
（ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３；
（ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１；
（ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２；及び／又は
（ｆ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３
を含む。
特定の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、前記ＣＤＲのいずれか１個、２個、３個、４個、５個又は６個を含む。
本明細書に提示されたＶＨドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、重鎖、例えば全長重鎖を形成するために不変ドメインに連結され得る。同様に、本明細書に提示されたＶＬドメイン又はその一つ以上のＣＤＲは、軽鎖、例えば全長軽鎖を形成するために不変ドメインに連結され得る。全長重鎖と全長軽鎖は組み合わされて全長抗体を形成することができる。
したがって、特定の具体例において、抗体軽鎖及び重鎖、例えば分離された軽鎖及び重鎖を含む抗体が本明細書に提示される。軽鎖と関連して、特定の具体例において、本明細書に提示された抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。他の特定の具体例において、本明細書に提示された抗体の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。更に他の特定の具体例において、本明細書に提示された抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖又はヒトラムダ軽鎖である。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示された任意のＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、軽鎖の不変領域はヒトカッパ軽鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示されたＶＬ又はＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、軽鎖の不変領域は、ヒトラムダ軽鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。ヒト不変領域配列の非制限的な例は、当業界に公知である（例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，（１９９１）（同上）を参照）。
重鎖と関連して、一部の具体例において、本明細書に提示された抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖でよい。他の特定の具体例において、本明細書に提示された抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）又はミュー（μ）重鎖を含むことができる。一具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の不変領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖不変領域のアミノ酸配列を含む。他の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の不変領域は、本明細書に提示された、又は当業界における公知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト不変領域配列の非制限的な例は、当業界に公知である（例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ，１９９１（同上）を参照）。
一部の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示されたＶＨ又はＶＨ ＣＤＲ及びＶＬ及びＶＬ ＣＤＲを含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、不変領域はＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子、若しくはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子の不変領域のアミノ酸配列を含む。他の特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５ポリペプチド（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する、本明細書に提示された抗体は、本明細書に提示された任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、不変領域はＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ又はＩｇＹ免疫グロブリン分子又は免疫グロブリン分子の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２）の不変領域のアミノ酸配列を含む。一部の具体例において、不変領域は、サブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）、及びアロタイプ（例えば、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ，Ｇ３ｍ及びｎＧ４ｍ）及びその変異体を含む、自然的に発生したヒトＩｇＧの不変領域のアミノ酸配列を含む（例えば、Ｖｉｄａｒｓｓｏｎ Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：５２０（オンライン公開２０１４－１０－２０）、及びＪｅｆｆｅｒｉｓ Ｒ．及びＬｅｆｒａｎｃ ＭＰ，ｍＡｂｓ１：４，１－７（２００９）参照）。一部の具体例において、不変領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４、若しくはその変異体の不変領域のアミノ酸配列を含む。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、Ｆｃエフェクター機能、例えば補体依存的細胞毒性（ＣＤＣ）及び／又は抗体依存的細胞貪食作用（ＡＤＣＰ）を持たない。エフェクター機能はＦｃ領域によって媒介され、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおいてヒンジ領域に最も近接している残基が抗体のエフェクター機能を担当し、先天的免疫系のエフェクター細胞上でＣｌｑ（補体）とＩｇＧ－Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）に対して相当重なった結合部位を含有する。また、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４抗体は、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体よりも低いレベルのＦｃエフェクター機能を有する。抗体のエフェクター機能は、当業界における公知の異なる接近法によって減少されたり回避され、（１）Ｆｃ領域を欠如した抗体断片の使用（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインで構成されたｓｄＡＢ）；（２）糖が付着された残基の欠失又は変更、酵素的に糖の除去、グリコシル化抑制剤の存在下に培養された細胞において抗体の生成、又はタンパク質をグリコシル化できない細胞において抗体の発現によって生成され得る、非グリコシル化抗体の生成（例えば、バクテリア宿主細胞、米国特許公開第２０１２０１００１４０号参照）；（３）減少されたエフェクター機能を持つＩｇＧサブクラスからＦｃ領域の利用（例えば、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体からのＦｃ領域又はＩｇＧ２又はＩｇＧ４抗体からのＣＨ２ドメインを含むキメラＦｃ領域、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びＬａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）参照）；及び（４）減少されたＦｃ機能をもたらす、又はＦｃ機能をなくす突然変異を持つＦｃ領域の生成（例えば、米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びこの文献に引用された米国出願及びＰＣＴ出願及びＡｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ１：６，５７２－５７９（２００９）参照）；を含む。
したがって、一部の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、又はモノマーＶＨ又はＶＬドメインで構成されたｓｄＡｂである。このような抗体断片は当業界に十分に公知であり、本明細書に開示されている。
一部の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、減少されたＦｃエフェクター機能を有する、又はＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域を含む。一部の具体例において、不変領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４のＦｃ領域のアミノ酸配列を含む。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体はＩｇＧ２／ＩｇＧ４イソタイプを有する。一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、ＩｇＧ４イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ２ドメイン及びＩｇＧ１イソタイプのＩｇＧ抗体からのＣＨ３ドメインを含むキメラＦｃ領域、又はＩｇＧ２からのヒンジ領域及びＩｇＧ４からのＣＨ２領域を含むキメラＦｃ領域、又は減少されたＦｃ機能をもたらす、又はＦｃ機能をなくす突然変異を持つＦｃ領域を含む。減少されたＦｃエフェクター機能を有する、又はＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域は、当業界における公知のものを含む（例えば、Ｌａｕ Ｃ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４７６９－４７７７（２０１３）；Ａｎ ｅｔ ａｌ，ｍＡｂｓ１：６，５７２－５７９（２００９）；及び米国特許公開第２０１２０１００１４０号及びこの文献に引用された米国特許及び特許公開及びＰＣＴ公開を参照）。また、減少されたＦｃエフェクター機能を有する、又はＦｃエフェクター機能を有しないＦｃ領域は、当業者によって容易に作製され得る。
IV．核酸分子
本明細書に開示された他の態様は、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分のうち任意の一つを暗号化する一つ以上の核酸分子に関する。核酸は、全体細胞、細胞溶解物、又は部分的に精製された、又は実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、他の細胞成分や他の汚染物質、例えば他の細胞核酸（例えば、他の染色体ＤＮＡ、例えば、分離されたＤＮＡに連結された染色体ＤＮＡ）又はタンパク質からアルカリ性／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動及び当業界によく公知である他の技術を含む標準技術によって精製された時、“分離され”又は“実質的に純粋になる”（例えば、Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。本明細書に提示された核酸は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡでよく、イントロン配列を含有又は非含有できる。特定の具体例において、核酸はｃＤＮＡ分子である。
本明細書に提示された核酸は、標準分子生物学技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、より詳細に後述されるとおり、ヒト免疫グロブリン遺伝子を持つ遺伝子導入マウスから作製されたハイブリドーマ）によって発現した抗体の場合、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖及び重鎖を暗号化するｃＤＮＡは、標準ＰＣＲ増幅又はｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリー（例えば、ファージディスプレイ技術を用いた）から得られた抗体の場合、抗体を暗号化する核酸は、ライブラリーから回収され得る。
本明細書に提示された特定の核酸分子は、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及びＶＬ配列を暗号化するものである。ＶＨ及びＶＬ配列を暗号化する例示的なＤＮＡ配列は、それぞれ、表６及び表７に提示される。
Figure 0007045724000007
Figure 0007045724000008
本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を作製する方法は、信号ペプチド、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８及び１９をそれぞれ持つ重鎖及び軽鎖を暗号化するヌクレオチド配列を含む細胞株で重鎖及び軽鎖を発現することを含む。それらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞は本発明に含まれる。
ＶＨ及びＶＬセグメントを暗号化するＤＮＡ断片が得られると、それらのＤＮＡ断片は、標準組換えＤＮＡ技術によって、例えば可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、又はｓｃＦｖ遺伝子に転換するようにさらに操作され得る。それらの操作において、ＶＬ－又はＶＨ－暗号化ＤＮＡ断片は、他のタンパク質、例えば抗体不変領域又はフレキシビリティリンカーを暗号化する他のＤＮＡ断片に作動可能に連結される。用語“作動可能に連結された”は、２つのＤＮＡ断片によって暗号化されたアミノ酸配列がフレーム内に維持されるように２つのＤＮＡ断片がつながることを意味する。
ＶＨ領域を暗号化する分離されたＤＮＡは、ＶＨ－暗号化ＤＮＡを重鎖不変領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及び／又はＣＨ３）を暗号化する他のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に転換され得る。ヒト重鎖不変領域遺伝子の配列は当業界に公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）、それらの領域を含むｄｎＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖不変領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤ不変領域、例えばＩｇＧ２及び／又はＩｇＧ４不変領域でよい。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨ－暗号化ＤＮＡは、重鎖ＣＨ１不変領域だけを暗号化する他のＤＮＡ分子に作動可能に連結され得る。
ＶＬ領域を暗号化する分離されたＤＮＡは、ＶＬ－暗号化ＤＮＡを軽鎖不変領域、ＣＬを暗号化する他のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（Ｆａｂ軽鎖遺伝子だけでなく）に転換され得る。ヒト軽鎖不変領域遺伝子の配列は当業界に公知されており（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２参照）、それらの領域を含むＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖不変領域は、カッパ又はラムダ不変領域でよい。
ｓｃＦｖ遺伝子を生成するために、ＶＨ－及びＶＬ－暗号化ＤＮＡ断片がフレキシビリティリンカーを暗号化する、例えばアミノ酸配列（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）３を暗号化する他の断片に作動可能に連結され、これによって、ＶＨ及びＶＬ配列は、ＶＬ領域とＶＨ領域がフレキシビリティリンカーによってつながった隣接単鎖タンパク質として発現され得る（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４参照）。
一部の具体例において、本発明は、抗体又はその抗原結合部分を暗号化するヌクレオチド配列を含む分離された核酸分子を含むベクターを提供する。他の具体例において、ベクターは、遺伝子治療療法に用いることができる。
本発明のための適切なベクターは、発現ベクター、ウイルスベクター及びプラスミドベクターを含む。一具体例において、ベクターはウイルスベクターである。
本明細書に提示された発現ベクターは、挿入されたコーディング配列の転写及び翻訳に必要な要素を含有する任意の核酸構成物を指すか、又はＲＮＡウイルスベクターの場合、適切な宿主細胞に導入された時、複製及び翻訳に必要な要素を指す。発現ベクターは、プラスミド、ファージミド、ウイルス及びそれらの誘導体を含むことができる。
本発明の発現ベクターは、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分を暗号化するポリヌクレオチドを含むことができる。一具体例において、抗体又はその抗原結合部分に対するコーディング配列は、発現制御配列に作動可能に連結される。２つの核酸配列は、それらが、各成分核酸配列がその機能性を維持するように許容する方式で共有連結された時、作動可能に連結される。コーディング配列と遺伝子発現制御配列は、それらが、遺伝子発現制御配列の影響や制御下にコーディング配列の発現又は転写及び／又は翻訳を行える方式で共有連結された時、作動可能に連結されたという。２つのＤＮＡ配列は、５’遺伝子発現配列にプロモーターの導入がコーディング配列の転写をもたらし、２つのＤＮＡ配列間結合の性質が、（１）フレーム移動突然変異の導入をもたらさない、（２）コーディング配列の転写を指示するプロモーター領域の能力を妨害しない、又は（３）タンパク質に翻訳される相応するＲＮＡ転写体の能力を妨害しないと、作動可能に連結されたという。したがって、遺伝子発現配列は、この遺伝子発現配列が当該コーディング核酸配列の転写を行えたとすれば、コーディング核酸配列に作動可能に連結されたものであり、これによって、転写体は、所望の抗体又はその抗原結合部分に翻訳される。
ウイルスベクターは、限定されないが、次のウイルスからの核酸配列を含む：レトロウイルス、例えばＭｏｌｏｎｅｙミューリン白血病ウイルス、Ｈａｒｖｅｙミューリン肉腫ウイルス、ミューリン乳房腫瘍ウイルス、及びＲｏｕｓ肉腫ウイルス；レンチウイルス；アデノウイルス；アデノ関連ウイルス；ＳＶ４０－タイプウイルス；ポリオーマウイルス；エプスタインバールウイルス；乳頭腫ウイルス；ヘルペスウイルス；牛痘ウイルス；ポリオウイルス；及びＲＮＡウイルス、例えばレトロウイルス。当業者は当業界における公知の他のベクターも容易に利用できる。特定のウイルスベクターは、非必須遺伝子が関心遺伝子に置換された非細胞変性真核生物ウイルスに基づく。非細胞変性ウイルスはレトロウイルスを含み、これのライフサイクルは、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写を伴い、後続して宿主細胞ＤＮＡにプロウイルス統合がなされる。レトロウイルスはヒト遺伝子治療療法試験のために承認された。最も有用なものは、複製欠陥（すなわち、所望のタンパク質の合成を指示できるが、感染性粒子は作製できない。）を持つレトロウイルスである。このような遺伝的に変更されたレトロウイルス発現ベクターは、生体内遺伝子の高効率形質導入において一般的な有用性を有する。複製欠陥レトロウイルスを生成する標準プロトコル（プラスミドに外因性遺伝子物質の統合段階、プラスミドでパッケージング細胞株のトランスフェクション段階、パッケージング細胞株による組換えレトロウイルスの生成段階、組織培養培地からウイルス粒子の収集段階、及びウイルス粒子で標的細胞の感染段階を含む。）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）；Ｍｕｒｒｙ，Ｅ．Ｊ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．（１９９１）に提示される。
一具体例において、ウイルスは、アデノ関連ウイルス、二本鎖ＤＮＡウイルスである。アデノ関連ウイルスは、複製欠陥になるように遺伝操作されることがあり、広範囲な細胞タイプ及び種を感染させることがある。アデノ関連ウイルスは、熱及び脂質溶媒安定性；造血細胞を含む様々な系統の細胞において高い形質導入頻度；及び超感染抑制を欠如することによる多数の連続形質導入の許容といった利点を有する。実験結果によれば、アデノ関連ウイルスは、部位特異的方式でヒト細胞ＤＮＡに統合され得、これによって、レトロウイルス感染の特徴である挿入突然変異誘発の確率及び挿入された遺伝子発現の可変性を最小化する。また、野生型アデノ関連ウイルス感染が選択圧の不在下に１００継代を超える間に組織培養物で追跡され、これはアデノ関連ウイルスゲノム統合が比較的安定した事件であることを暗示する。また、アデノ関連ウイルスは、染色体外方式で機能し得る。
他の具体例において、ベクターは、レンチウイルスから誘導される。特定の具体例において、ベクターは、非分裂細胞を感染させ得る組換えレンチウイルスのベクターである。
レンチウイルスゲノム及びプロウイルスＤＮＡは、典型的に、レトロウイルスから発見された３個の遺伝子、すなわちｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖを有し、これらは２個の長い末端反復部（ＬＴＲ）配列が側面に位置する。ｇａｇ遺伝子は内部構造（基質、カプシド及びヌクレオカプシド）タンパク質を暗号化し、ｐｏｌ遺伝子はＲＮＡ指定ＤＮＡ重合酵素（逆転写酵素）、プロテアーゼ及びインテグラーゼを暗号化し、ｅｎｖ遺伝子はウイルス外皮糖タンパク質を暗号化する。５’及び３’ＬＴＲは、ビリオンＲＮＡの転写及びポリアデニル化を促進する作用をする。ＬＴＲは、ウイルス複製に必須である全てのｃｉｓ－作用配列を含有する。レンチウイルスは、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ｎｅｆ及びｖｐｘを含む追加の遺伝子を有する。
５’ＬＴＲに隣接してゲノムの逆転写（ｔＲＮＡプライマー結合部位）と粒子にウイルスＲＮＡの効果的なカプシド化（Ｐｓｉ部位）に必要な配列がある。カプシド化（又は、感染性ビリオンにレトロウイルスＲＮＡのパッケージング）に必要な配列がウイルスゲノムにない場合、ｃｉｓ欠乏はゲノムＤＮＡのカプシド化を防止する。
しかし、突然変異は、全てのビリオンタンパク質の合成を指示できるように維持される。本発明は、非分裂細胞を感染させ得る組換えレンチウイルスを生成する方法を提供し、この方法は、適切な宿主細胞をパッケージング機能を持つ２つ以上のベクター、すなわちｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖ、又はｒｅｖ及びｔａｔでトランスフェクションすることを含む。次の開示のとおり、機能的ｔａｔ遺伝子を欠如したベクターが特定の用途に好ましい。したがって、例えば、第１ベクターは、ウイルスｇａｇ及びウイルスｐｏｌを暗号化する核酸を提供でき、他のベクターは、パッケージング細胞を生成できるウイルスｅｎｖを暗号化する核酸を提供することができる。伝達ベクターとして確認された、異種性遺伝子を提供するベクターを当該パッケージング細胞に導入することは、関心外来遺伝子を持つ感染性ウイルス粒子を放出するプロデューサー細胞を提供する。
ベクター及び外来遺伝子の前記提示された構成形態によって、第２ベクターは、ウイルス外皮（ｅｎｖ）遺伝子を暗号化する核酸を提供することができる。ｅｎｖ遺伝子は、レトロウイルスを含む任意の適切なウイルスから由来し得る。一部の具体例において、ｅｎｖタンパク質は、ヒト及び他の種の細胞の形質導入を許容する両側性外皮タンパク質である。
レトロウイルス－由来ｅｎｖ遺伝子の非制限的な例は、Ｍｏｌｏｎｅｙミューリン白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ又はＭＭＬＶ）、Ｈａｒｖｅｙミューリン肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ又はＨＳＶ）、ミューリン乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ又はＭＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ又はＧＡＬＶ）、ヒト免疫欠乏ウイルス（ＨＩＶ）及びＲｏｕｓ肉腫ウイルス（ＲＳＶ）を含む。水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）タンパク質Ｇ（ＶＳＶ Ｇ）、肝炎ウイルス及びインフルエンザーのような他のｅｎｖ遺伝子も使用され得る。
ウイルスｅｎｖ核酸配列を提供するベクターは、本明細書に提示された調節配列と作動可能に会合される。
特定の具体例において、ベクターは、非分裂細胞を形質導入するベクターの能力を損傷させず、ＨＩＶ病毒性遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ及びｎｅｆが欠失されたレンチウイルスベクターを含む。
一部の具体例において、ベクターは、３’ＬＴＲのＵ３領域の欠失を含むレンチウイルスベクターを含む。Ｕ３領域の欠失は、完全な欠失又は部分的欠失でよい。
一部の具体例において、本明細書に提示されたＦＶＩＩＩヌクレオチド配列を含む本発明のレンチウイルスベクターは、（ａ）ｇａｇ、ｐｏｌ、又はｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子を含む第１ヌクレオチド配列、及び（ｂ）異種性ｅｎｖ遺伝子を含む第２ヌクレオチド配列で細胞にトランスフェクションされ得る；ここで、レンチウイルスベクターは機能的ｔａｔ遺伝子を欠如する。他の具体例において、細胞は、ｒｅｖ遺伝子を含む第４ヌクレオチド配列でさらにトランスフェクションされる。特定の具体例において、レンチウイルスベクターはｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ及びｎｅｆ、又はそれらの組合せから選択された機能的遺伝子を欠如する。
特定の具体例において、レンチウイルスは、ｇａｇタンパク質、Ｒｅｖ－反応要素、中心ポリプリントラック（ｃＰＰＴ）、又はそれらの任意の組合せを暗号化する一つ以上のヌクレオチド配列を含む。
レンチウイルスベクターの例は、Ｗ０９９３１２５１、Ｗ０９７１２６２２、Ｗ０９８１７８１５、Ｗ０９８１７８１６、及びＷ０９８１８９３４に開示され、これらはその全体が参考として本明細書に組み込まれる。
他のベクターは、プラスミドベクターを含む。プラスミドベクターは、当業界に広範囲で公知である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９参照）。ここ数年間、プラスミドベクターは、宿主ゲノム内で複製されて統合され得る能力を有しないことから、生体内で細胞に遺伝子を送達するのに特に有益なものと判明された。しかし、宿主細胞と両立可能なプロモーターを持つプラスミドは、プラスミド内で作動可能に暗号化された遺伝子からペプチドを発現することができる。商業的供給者から入手可能な一部の共通使用されるプラスミドは、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、様々なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、様々なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔを含む。具体的なプラスミドの追加の例は、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログナンバーＶ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログナンバーＶ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ－Ｈｉｓ、カタログナンバーＶ８６３２０；及びｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログナンバーＶ５３２２０を含み、いずれもＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）から購入可能である。他のプラスミドも当業者にとって公知である。さらに、プラスミドは、ＤＮＡの特定の断片を除去し及び／又は追加するために標準分子生物学技術を用いて注文デザインされ得る。
Ｖ．抗体生成
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその断片は、抗体の合成のための当業界における公知の任意の方法によって、例えば化学合成や組換え発現技術によって生成され得る。本明細書に開示された方法は、別に示さない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び変形、核酸混成化及び当業界の関連分野における従来の技術を利用する。これらの技術は、本明細書に引用された参考文献等に記載されており、これらの文献には詳細に説明されている（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ Ｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ，（１９８９）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ ｅｔ ａｌ，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７及び年次更新）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕ－ｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９８７及び年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏ－ｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｉｒｒｅｎ Ｂ ｅｔ ａｌ，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ参照）。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗体は、例えば、ＤＮＡ配列の合成、遺伝子遺伝操作による生成を伴う任意の手段によって作製、発現、生成又は分離された抗体（例えば、組換え抗体）である。特定の具体例において、このような抗体は、生体内で動物又は哺乳類（例えば、ヒト）の抗体生殖細胞系レパートリー内に自然的に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列又はアミノ酸配列）を含む。
特定の態様において、本明細書に提示された細胞又は宿主細胞を培養することを含む、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を作製する方法が開示される。特定の態様において、本明細書に提示された細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に提示された抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を使用して抗体又はその抗原結合断片を発現する（例えば、組換え発現する）ことを含む、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片の作製方法が開示される。特定の具体例において、細胞は、分離された細胞である。特定の具体例において、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入された。特定の具体例において、この方法は、細胞又は宿主細胞から得られた抗体又は抗原結合断片を精製する段階をさらに含む。
多クローン性抗体を生成するための方法は当業界に公知である（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ１１，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。
単クローン性抗体は、ハイブリドーマ、組換え及びファージディスプレイ技術、又はそれらの組合せを含む、当業界における公知の広範囲な技術を用いて作製することができる。単クローン性抗体は当業界に公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ＆ Ｌａｎｅ Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ＧＪ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ５６３６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に教示されたハイブリドーマ技術を用いて生成することができる。本明細書に提示された“単クローン性抗体”は、ハイブリドーマ技術によって生成された抗体に制限されない。例えば、単クローン性抗体は、本明細書に提示された抗体又はその断片、例えばこのような抗体の軽鎖及び／又は重鎖を外因性発現する宿主細胞から組換え生成されてもよい。
特定の具体例において、本明細書に提示された“単クローン性抗体”は、単一細胞（例えば、組換え抗体を生成するハイブリドーマ又は宿主細胞）によって生成された抗体であり、例えば、ＥＬＩＳＡ又は当業界に公知であるか本明細書に開示された実施例に提示された他の抗原結合又は競合結合分析によって決定された時、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する。特定の具体例において、単クローン性抗体はキメラ抗体又はヒト化抗体でよい。特定の具体例において、単クローン性抗体は、１価抗体又は多価（例えば、２価）抗体である。特定の具体例において、単クローン性抗体は、単一特異的又は多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）である。本明細書に提示された単クローン性抗体は、例えばＫｏｈｌｅｒ Ｇ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５に記載されたとおり、ハイブリドーマ方法によって作製されてもよく、又は本明細書に提示されたような技術を用いてファージライブラリーから分離されてもよい。クローン細胞株の作製及びこのように発現された単クローン性抗体の作製のための他の方法も、当業界に十分に公知である（例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ１１，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ、同上）。
ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を生成しスクリーニングする方法は、当業界に十分に公知である。例えば、ハイブリドーマ方法において、マウス又は他の適切な宿主動物、例えば、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター又はマカクザルが免疫化に使用されたタンパク質（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する抗体を生成する、又は生成し得るリンパ球を導出するように免疫化される。また、リンパ球が試験管内免疫化され得る。次に、リンパ球は、適切な融合剤、例えばポリエチレングリコールを使用して骨髄腫細胞と融合し、これによりハイブリドーマ細胞が形成される（Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）参照）。さらに、ＲＩＭＭＳ（反復免疫化多重部位）技術が動物を免疫化するの利用され得る（Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ ＫＥ ｅｔ ａｌ，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１６：３８１－９、その全体が参考として本明細書に組み込まれる）。
一部の具体例において、マウス（又は、他の動物、例えば、ニワトリ、ラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター又はイヌ）が抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５、例えばヒトＦＡＭ１９Ａ５）で免疫化され得、免疫反応が検出されると、抗原に特異的な抗体がマウス血清で検出され、マウス脾臓が回収され、脾臓細胞が分離される。次に、公知の技術によって脾臓細胞が任意の適切な骨髄腫細胞、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入可能な細胞株ＳＰ２０からの細胞に融合し、これによりハイブリドーマが形成される。ハイブリドーマは、制限された希釈によって選択されクローニングされる。特定の具体例において、免疫化されたマウスのリンパ節が回収され、ＮＳＯ骨髄腫細胞と融合する。
このように作製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、未融合、親骨髄腫細胞の成長や生存を抑制する一つ以上の物質を含有する適切な培養培地に播種され成長される。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠如すると、ハイブリドーマの培養培地は典型的に、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含むはずであり、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠陥細胞の成長を防止する。
特定の具体例は、選択された抗体生成細胞を効果的に融合し、それによる安定した高いレベルの抗体生成を支援し、ＨＡＴ培地のような培地に敏感な骨髄腫細胞を利用する。それらの骨髄腫細胞株の中にはミューリン骨髄腫細胞株、例えばＮＳＯ細胞株又はＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍から由来したもの、及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ－２又はＸ６３－Ａｇ８．６５３細胞がある。ヒト骨髄腫及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株がまた、ヒト単クローン性抗体を生成するために提示された（Ｋｏｚｂｏｒ Ｄ（１９８４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１３３：３００１－５；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）参照）。
ハイブリドーマ細胞が成長した培養培地は、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に対して指定された単クローン性抗体の生成に対して評価される。ハイブリドーマ細胞によって生成された単クローン性抗体の結合特異性は、当業界における公知の方法によって、例えば免疫沈殿又は試験管内結合分析、例えば放射性免疫分析（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を生成するハイブリドーマ細胞が確認された後、クローンは希釈過程を制限することによってサブクローニングされ、標準方法によって成長され得る（Ｇｏｄｉｎｇ ＪＷ（Ｅｄ）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、同上）。この目的のための適切な培養培地は、例えばＤ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ１６４０培地を含む。また、ハイブリドーマ細胞は、動物で腹水（ａｓｃｉｔｅｓ）腫瘍として生体内成長され得る。
サブクローンから分泌される単クローン性抗体は、例えば、タンパク質Ａセファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又は親和性クロマトグラフィーのような従来の免疫グロブリン精製過程によって培養培地、腹水流体又は血清から好適に分離され得る。
本明細書に提示された抗体は、特定のＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）を認識する抗体断片を含み、当業者に公知である任意の技術によって生成され得る。例えば、本明細書に提示されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片の生成）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片の生成）のような酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質加水分解切断によって生成され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一腕の一つに相応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対をなす完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域で二硫化物結合によって連結された抗体分子の２個の抗原結合腕を含有する。
また、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合断片は、当業界に公知である様々なファージディスプレイ方法を用いて生成され得る。ファージディスプレイ方法において、機能的抗体ドメインがそれを暗号化するポリヌクレオチド配列を持つファージ粒子の表面にディスプレイされる。特に、ＶＨ及びＶＬドメインを暗号化するＤＮＡ配列が動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、疾患組織のヒト又は非ヒト、例えばミューリン又はニワトリｃＤＮＡライブラリー）から増幅される。ＶＨ及びＶＬドメインを暗号化するＤＮＡは、ＰＣＲによってｓｃＦｖリンカーと共に組換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターはイーコリに電気穿孔され、イーコリはヘルパーファージで感染される。これらの方法に使用されたファージは、典型的に、ｆｄ及びＭ１３を含む糸状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインは一般に、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩに組換え融合する。特定遺伝子に結合する抗原結合ドメインを発現するファージを選択でき、抗原、例えば標識された抗原又は固体表面やビーズに連結された、又は捉えた抗原を用いて確認することができる。本明細書に提示された抗体を作製するのに利用できるファージディスプレイ方法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｕ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１－５０；Ａｍｅｓ ＲＳ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７－１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ＣＡ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ２４：９５２－９５８；Ｐｅｒｓｉｃ Ｌ ｅｔ ａｌ，（１９９７）Ｇｅｎｅ１８７：９－１８；Ｂｕｒｔｏｎ ＤＲ ＆ Ｂａｒｂａｓ ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ５７：１９１－２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４；国際公開番号ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、及びＷＯ９７／１３８４４；及び米国特許公報第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号及び第５，９６９，１０８号に開示されたものを含む。
前記参考文献に記載されたとおり、ファージ選択後、ファージから抗体コーディング領域が分離され、ヒト抗体を含む全抗体、又は任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために使用され得、下記のとおり、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及びバクテリアを含む任意の所望の宿主で発現し得る。また、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片のような抗体断片を組換え生成する技術が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ ＲＬ ｅｔ ａｌ，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １２（６）：８６４－９；Ｓａｗａｉ Ｈ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ３４：２６－３４；及びＢｅｔｔｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３に開示されたもののように、当業界に公知である。
一態様において、全抗体を生成するために、ＶＨ又はＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するためのフランキング（ｆｌａｎｋｉｎｇ）配列を含むＰＣＲプライマーが、鋳型、例えばｓｃＦｖクローンからＶＨ又はＶＬ配列を増幅するために使用され得る。当業者に公知であるクローニング技術を用いて、ＰＣＲ増幅されたＶＨドメインがＶＨ不変領域を発現するベクターにクローニングされ、ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインはＶＬ不変領域、例えばヒトカッパ又はラムダ不変領域を発現するベクターにクローニングされ得る。また、ＶＨ及びＶＬドメインは必須不変領域を発現する一つのベクターにクローニングされ得る。次に、当業者に公知の技術を用いて重鎖転換ベクターと軽鎖転換ベクターが細胞株に共トランスフェクションされることにより、全長抗体、例えばＩｇＧを発現する安定的な又は一時的な細胞株を生成することができる。
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子から由来した分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の不変領域に融合した非ヒト動物（例えば、マウス、ラット又はニワトリ）単クローン性抗体の可変領域を含有し得る。キメラ抗体を生成するための方法は、当業界に公知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－７；Ｏｉ ＶＴ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ（１９８６）Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４－２２１；Ｇｉｌｌｉｅｓ ＳＤ ｅｔ ａｌ，（１９８９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１－２０２；及び米国特許出願番号５，８０７，７１５号、４，８１６，５６７号、第４，８１６，３９７号、及び第６，３３１，４１５号参照）。
ヒト化抗体は、定められた抗原に結合でき、実質的にヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を持つフレームワーク領域及び実質的に非ヒト免疫グロブリン（例えば、ミューリン又はニワトリ免疫グロブリン）のアミノ酸配列を持つＣＤＲを含む。特定の具体例において、ヒト化抗体はまた免疫グロブリン不変領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にヒト免疫グロブリンのものを含む。抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域を含むことができる。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥ、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む任意のイソタイプを含む免疫グロブリンの任意の類型から選択され得る。ヒト化抗体は、当業界における公知の様々な技術を用いて生成することができ、公知技術の非制限的な例は、ＣＤＲ－グラフティング（ヨーロッパ特許番号ＥＰ２３９４００；国際公開番号ＷＯ９１／０９９６７；及び米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号、及び第５，５８５，０８９号）、ベニアリング又はリサーフェーシング（ヨーロッパ特許番号ＥＰ５９２１０６及びＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ＧＭ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｐｒｏｔ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ，（１９９４）ＰＮＡＳ９１：９６９－９７３）、鎖シャッフリング（米国特許Ｎｏ．５，５６５，３３２）、そして米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開番号ＷＯ９３／１７１０５；Ｔａｎ Ｐ ｅｔ ａｌ，（２００２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９：１１１９－２５；Ｃａｌｄａｓ Ｃ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３（５）：３５３－６０；Ｍｏｒｅａ Ｖ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０（３）：２６７－７９；Ｂａｃａ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９９７）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２（１６）：１０６７８－８４；Ｒｏｇｕｓｋａ ＭＡ ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ ９（１０）：８９５９０４；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ；Ｃｏｕｔｏ ＪＲ ｅｔ ａｌ，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ５５（８）：１７１７－２２；Ｓａｎｄｈｕ ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ １５０（２）：４０９－１０及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ＪＴ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２３５（３）：９５９－７３に記載された技術を含む。また、米国出願公開番号ＵＳ２００５／００４２６６４Ａ１（２００５－２－２４）を参照し、これはその全体が参考として本明細書に組み込まれる。
多重特異的（例えば、二重特異的）抗体を作製する方法が公開されている（例えば、米国特許第７，９５１，９１７号；第７，１８３，０７６号；第８，２２７，５７７号；第５，８３７，２４２号；第５，９８９，８３０号；第５，８６９，６２０号；第６，１３２，９９２号及び第８，５８６，７１３号参照）。
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠如した抗体が当業界における公知の方法によって生成され得る（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ ＆ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ（１９９９）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３１：２５－３８；Ｎｕｔｔａｌｌ ＳＤ ｅｔ ａｌ，（２０００）Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １（３）：２５３－２６３；Ｍｕｙｌ－ｄｅｒｍａｎｓ Ｓ，（２００１）Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４（４）：２７７－３０２；米国特許第６，００５，０７９号；及び国際公開番号ＷＯ９４／０４６７８、ＷＯ９４／２５５９１及びＷＯ０１／４４３０１参照）。
また、ＦＡＭ１９Ａ５抗原に免疫特異的に結合する抗体は、当業者にとって公知の技術を用いて、抗原を“模倣する”抗イディオタイプ抗体を生成するのに利用され得る（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ ＮＳ ＆ Ｂｏｎａ ＣＡ（１９８９）７７（５）：４３７－４４４；及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆ Ａ（１９９１）７ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７（８）：２４２９－２４３８参照）。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体としてＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）の同一エピトープに結合する、本明細書に提示された抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に対する結合から本明細書に提示された抗体（例えば、１－６５）を競合的に遮断する（例えば、容量依存的方式で）、本明細書に提示された抗体は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。
ヒト抗体は当業界における公知の任意の方法を用いて生成され得る。例えば、機能的内因性免疫グロブリンを発現することはできないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できる遺伝子導入マウスを使用することができる。特に、ヒト重鎖と軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体が無作為に又は相同性組換えによってマウス胚幹細胞に導入され得る。また、ヒト可変領域、不変領域及び多様性領域がヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚幹細胞に導入され得る。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同性組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入と同時に又は別途に非機能的になり得る。特に、ＪＨ領域の同型接合性の欠失は、内因性抗体の生成を防止する。変形された胚幹細胞が拡張され、胚盤胞にマイクロインジェクションされることによってキメラマウスが生成される。次に、キメラマウスは、ヒト抗体を発現する同型接合性子孫を生成するように飼育される。遺伝子導入マウスは、選択された抗原で、例えば、抗原（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５）の全部又は一部で正常方式によって免疫化される。抗原に対して指定された単クローン性抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて免疫化された、遺伝子導入マウスから得られる。遺伝子導入マウスによって隠されたヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配列され、次いで類型転換及び体細胞突然変異を経る。したがって、このような技術を用いて、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体を生成することが可能である。ヒト抗体を生成するためのこの技術の概略的な内容については、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ ＆ Ｈｕｓｚａｒ Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ１３：６５－９３を参照する。ヒト抗体及びヒト単クローン性抗体を生成するためのこの技術及びこのような抗体を生成するプロトコルに関する詳細な内容は、例えば、国際公開番号ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９６／３４０９６及びＷＯ９６／３３７３５；及び米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８及び第５，９３９，５９８号を参照する。ヒト抗体を生成できるマウスの例は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥTM（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．；米国特許番号第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，１８４号）、ＨＵＡＢ－ＭＯＵＳＥTM（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ Ｐｈａｒｍ；米国特許第５，５４５，８０６号及び第５，５６９，８２５号）、ＴＲＡＮＳ ＣＨＲＯＭＯ ＭＯＵＳＥTM（Ｋｉｒｉｎ）及びＫＭ ＭＯＵＳＥTM（Ｍｅｄａｒｅｘ／ Ｋｉｒｉｎ）を含む。
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から由来した抗体ライブラリーを使用する前記記載されたファージディスプレイ方法を含む当業界における公知の様々な方法によって作製され得る。また、米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号及び第５，８８５，７９３号；及び国際公開番号ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、及びＷＯ９１／１０７４１を参照する。
一部の具体例において、ヒト抗体は、マウス－ヒトハイブリドーマを使用して生成され得る。例えば、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球は、ヒト単クローン性抗体を分泌するマウス－ヒトハイブリドーマを生成するためにマウス骨髄腫細胞と融合でき、これらのマウス－ヒトハイブリドーマは標的抗原（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５のようなＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合するヒト単クローン性抗体を分泌することを決定するためにスクリーニングされ得る。このような方法は当業界に公知である（例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ Ｈ ｅｔ ａｌ，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４６：１９－２３；Ｎａｇａｎａｗａ Ｙ ｅｔ ａｌ，（２００５）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ １４：２７－３１参照）。
VI．抗体遺伝操作方法
前述のとおり、本明細書に提示されたＶＨ及びＶＬ配列を持つ抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ配列、又はそこに付着された不変領域を変形することによって、新しい抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を生成することに使用され得る。したがって、他の態様において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の構造的特徴は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する結合のような、本明細書に提示された抗体の少なくとも一つの機能的特性を保有する構造的に関連した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を生成することに使用される。例えば、遺伝操作方法のための出発材料は、本明細書に提示されたＶＨ及び／又はＶＬ配列、又はその一つ以上のＣＤＲ領域である。遺伝操作された抗体を生成するために、本明細書に提示されたＶＨ及び／又はＶＬ配列のいずれか一つ以上、又はその一つ以上のＣＤＲ領域を持つ抗体を実際に作製すること（すなわち、タンパク質として発現すること）は不要である。むしろ配列に含まれた情報が親配列から由来した“２世代”配列を生成するための出発材料として使用され、次に“２世代”配列がタンパク質として作製され発現する。
したがって、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を作製する方法が本明細書に提示され、この方法は、
（ａ）（i）表２に提示されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表４に提示された重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む重鎖可変領域配列；及び（ii）表３に提示されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３配列又は表５に提示された重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域配列を提供する段階；
（ｂ）重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列内の少なくとも一つのアミノ酸残基を変更して、少なくとも一つの変更された抗体又は抗原結合部分配列を生成する段階；及び
（ｃ）変更された抗体又は抗原結合部分配列をタンパク質として発現する段階
を含む。
標準分子生物学技術が、変更された抗体又は抗原結合部分配列を作製及び発現するのに利用され得る。
一部の具体例において、変更された抗体又は抗原結合部分配列によって暗号化された抗体又はその抗原結合部分は、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の機能的特性の一つ、一部又は全部を保有するものであり、機能的特性は、次を含む：
（１）例えばＢｉａｃｏｒｅによって測定された時、１０ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１０ｎＭ）のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（２）例えばＥＬＩＳＡによって測定された時、１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１ｎＭ）のＫＤで膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（３）例えばＥＬＩＳＡによって測定された時、１ｎＭ以下（例えば、０．０１ｎＭ～１ｎＭ）のＥＣ５０で膜結合ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
（４）反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延及び／又は予防；
（５）反応性星状細胞の過度な増殖を抑制；
（６）ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現の減少；
（７）ニューロンの核でｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫ発現の増加；
（８）ニューロンの生存促進；
（９）ニューロンでＧＡＰ４３の発現増加；
（１０）軸索突起の再成長促進；及び
（１１）ヒトＦＡＭ１９Ａ５に対する結合において本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と一方向に又は両方向に競合。
変更された抗体又はその抗原結合部分は、前記（１）～（１１）に提示された機能的特性のうち、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上、６つ以上、７つ以上、８つ以上、９つ以上、１０つ以上、１１つ又は全部を表すことができる。変更された抗体又はその抗原結合部分の機能的特性は、実施例に提示されたもののよう（例えば、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ）に当業界で利用可能であり、及び／又は本明細書に提示された標準分析によって評価され得る。
本明細書に提示された抗体を遺伝操作する方法の特定の具体例において、突然変異が抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体コーディング配列の全部又は一部に沿って無作為に又は選択的に導入され得、その結果、変形された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は結合活性及び／又は本明細書に提示された他の機能的特性に対してスクリーニングされ得る。突然変異方法は当業界に公知である（例えば、ＳｈｏｒｔによるＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９２７８０は、飽和突然変異誘発、合成ライゲーション組立体、又はそれらの組合せを用いて抗体突然変異を生成しスクリーニングする方法を開示する。）。または、ＬａｚａｒなどによるＰＣＴ公開ＷＯ０３／０７４６７９は、抗体の物理化学的特性を最適化するためのコンピュータスクリーニング方法を使用する方法を開示する。
VII．細胞及びベクター
特定の態様において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に提示された抗体（又は、その抗原結合部分）を発現する（例えば、組換え方式で）細胞（例えば、宿主細胞）及び関連したポリヌクレオチド及び発現ベクターが開示される。宿主細胞、例えば哺乳類細胞における組換え発現のために、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又は断片を暗号化するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が開示される。また、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、ヒト又はヒト化抗体）を組換え発現するためのこのようなベクターを含む宿主細胞が開示される。特定の態様において、宿主細胞からこのような抗体を発現させることを含む、本明細書に提示された抗体を生成する方法が開示される。
ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に特異的に結合する本明細書に提示された抗体（例えば、本明細書に提示された全長抗体、抗体の重鎖及び／又は軽鎖、又は単鎖抗体）の組換え発現は、抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構成を伴う。本明細書に提示された抗体分子、抗体の重鎖及び／又は軽鎖、又はその断片（例えば、重鎖及び／又は軽鎖可変ドメイン）を暗号化するポリヌクレオチドが得られると、抗体分子の生成のためのベクターが、当業界における公知の技術を用いる組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。したがって、ヌクレオチド配列を暗号化する抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を作製する方法が、本明細書に開示される。当業界における公知の方法が、抗体又は抗体断片（例えば、軽鎖又は重鎖）コーディング配列と適切な転写及び翻訳制御信号を含有する発現ベクターを構成するために利用され得る。これらの方法は、例えば、試験管内組換えＤＮＡ技術、合成技術及び生体内遺伝子組換えを含む。また、プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に提示された抗体分子、抗体の重鎖又は軽鎖、抗体の重鎖又は軽鎖可変ドメイン又はその断片、あるいは重鎖又は軽鎖ＣＤＲを暗号化するヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターが開示される。このようなベクターは、例えば、抗体分子の不変領域を暗号化するヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開番号ＷＯ８６／０５８０７及びＷＯ８９／０１０３６；及び米国特許第５，１２２，４６４号参照）、全体重鎖、全体軽鎖、又は全体重鎖と軽鎖の両方の発現のために、このようなベクターに抗体の可変ドメインがクローニングされ得る。
発現ベクターは従来の技術によって細胞（例えば、宿主細胞）に伝達され、次に、得られた細胞が従来の技術によって培養されて、本明細書に提示された抗体（例えば、本発明の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体のＶＨ及び／又はＶＬ、又はＶＨ及び／又はＶＬＣＤＲのいずれか一つ以上を含む抗体）又はその断片を生成することができる。したがって、宿主細胞においてこのような配列の発現のためにプロモーターに作動可能に連結された、本明細書に提示された抗体又はその断片、又はその重鎖又は軽鎖、又はその断片、又は本明細書に提示された単鎖抗体を暗号化するポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が、本明細書に開示される。特定の具体例において、二本鎖抗体の発現のために、重鎖と軽鎖の両方を個別的に暗号化するベクターが、以下に詳細に記載されるとおり、全体免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞で共発現し得る。特定の具体例において、宿主細胞は、本明細書に提示された抗体、又はその断片の重鎖及び軽鎖の両方を暗号化するポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。特定の具体例において、宿主細胞は２つの異なるベクターを含有し、第１ベクターは、本明細書に提示された抗体、又はその断片の重鎖又は重鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含み、第２ベクターは、本明細書に提示された抗体、又はその断片の軽鎖又は軽鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む。他の具体例において、第１宿主細胞は、本明細書に提示された抗体、又はその断片の重鎖又は重鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第１ベクターを含み、第２宿主細胞は、本明細書に提示された抗体の軽鎖又は軽鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含む。特定の具体例において、第１細胞によって発現した重鎖／重鎖可変領域は、第２細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合し、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合断片を形成する。特定の具体例において、このような第１宿主細胞とこのような第２宿主細胞を含む宿主細胞集団が開示される。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の軽鎖／軽鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第１ベクター、及び本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の重鎖／重鎖可変領域を暗号化するポリヌクレオチドを含む第２ベクターを含むベクター集団が開示される。
様々な宿主発現ベクターシステムが、本明細書に提示された抗体分子を発現させるために利用され得る。このような宿主発現システムは、関心コーディング配列が生成され、次いで精製され得るビークルを含むだけでなく、適切なヌクレオチドコーディング配列で形質転換され、又はトランスフェクションされた時、本明細書に提示された抗体分子をインシチュ発現し得る細胞を含む。このような宿主発現システムは、抗体コーディング配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡで形質転換されたバクテリア（例えば、イーコリ及びバチルスサブティリス）のような微生物；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染された昆虫細胞システム；抗体コーディング配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染された又は組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞システム（例えば、クラミドモナスラインハーティ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）のような緑色藻類）；または哺乳類細胞のゲノム（例えば、メタロチオネインプロモーター）から又は哺乳類ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；牛痘ウイルス７．５Ｋプロモーター）から由来したプロモーターを含有する組換え発現構成物を隠している哺乳類細胞システム（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＳＯ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７０３０、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ３Ｔ３、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０及びＢＭＴ１０細胞）を含む。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合断片を発現させるための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えばＣＨＯ ＧＳ ＳＹＳＴＥＭ（商標）（Ｌｏｎｚａ）からのＣＨＯ細胞である。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体を発現させるための細胞は、ヒト細胞、例えばヒト細胞株である。特定の具体例において、哺乳類発現ベクターは、ＰＯＰＴＩＶＥＣ（商標）又はｐｃＤＮＡ３．３である。特定の具体例において、特に、全体組換え抗体分子の発現のために、イーコリ又は真核生物細胞（例えば、哺乳類細胞）のようなバクテリア細胞が組換え抗体分子の発現のために使用される。例えば、中国ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳類細胞は、ヒトサイトメガロウイルスからの主要中間体初期遺伝子プロモーター要素のようなベクターと共に、抗体に対する効果的な発現システムになる（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ＭＫ ＆ Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ ４５：１０１－５；及びＣｏｃｋｅｔｔ ＭＩ ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ８（７）：６６２－７参照）。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体は、ＣＨＯ細胞又はＮＳＯ細胞によって生成される。特定の具体例において、ＦＡＭ１９Ａ５（例えば、ヒトＦＡＭ１９Ａ５）に免疫特異的に結合する本明細書に提示された抗体を暗号化するヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター又は組織特異的プロモーターによって調節される。
バクテリアシステムにおいて、多数の発現ベクターが、発現する抗体分子によって有益に選択され得る。例えば、抗体分子の薬学組成物の生成のために多量の抗体が生成されるべき場合、容易に精製される高いレベルの融合タンパク質生成物の発現を指示するベクターが好ましいであろう。このようなベクターの非制限的な例は、抗体コーディング配列がｌａｃ Ｚコーディング領域を持つフレーム内でベクターに個別的にライゲーションされることにより、融合タンパク質が生成され得るイーコリ発現ベクターＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ Ｕ ＆ Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｌｌ Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ Ｊ２：１７９１－１７９４）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ Ｓ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ Ｇ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ ＳＭ（１９８９）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２４：５５０３－５５０９）などを含む。また、ｐＧＥＸベクターがグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現するために使用され得る。一般に、このような融合タンパク質は可溶性であり、基質グルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合後、自由グルタチオンの存在下に溶出によって細胞溶解された細胞から容易に精製され得る。ｐＧＥＸベクターは、トロンビン又は因子Ｘａプロテアーゼ切断部位を含むようにデザインされ、これで、クローニングされた標的遺伝子生成物がＧＳＴ部分から放出され得る。
昆虫システムにおいて、例えば、オートグラファカルフォルニカ核多面体形成ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が外来遺伝子を発現させるためのベクターとして使用され得る。このウイルスは、スポドプテラフルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞で成長する。抗体コーディング配列がウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別的にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えば、ポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
哺乳類宿主細胞において、多数のウイルス基盤発現システムが利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、関心抗体コーディング配列がアデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモーター及び３部リーダー配列にライゲーションされ得る。次に、このキメラ遺伝子は、試験管内又は生体内組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）での挿入は、生育性であり且つ感染された宿主で抗体分子を発現できる組換えウイルスをもたらすはずである（例えば、Ｌｏｇａｎ Ｊ ＆ Ｓｈｅｎｋ Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ ８１（１２）：３６５５－９参照）。特定の開始信号がまた、挿入された抗体コーディング配列の効果的な翻訳のために必要である。これらの信号はＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。また、開始コドンは、全体挿入体の翻訳を保障するために所望のコーディング配列のリーディングフレームと同じ位相にある必要がある。これらの外因性翻訳制御信号及び開始コドンは、天然及び合成の様々な起源を有することができる。発現効能は適切な転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどを含むことによって増進され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ Ｇ ｅｔ ａｌ，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４参照）。
また、挿入された配列の発現を調整する、又は、所望の特定の方式で遺伝子生成物を変形し処理する宿主細胞菌株が選択され得る。タンパク質生成物のこのような変形（例えば、グリコシル化）及び処理（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であろう。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子生成物の翻訳後処理及び変形に対する特異的なメカニズムを有する。発現した外来タンパク質の正確な変形及び処理を保障し得る適切な細胞株又は宿主システムが選択され得る。そのために、遺伝子生成物の１次転写体、グリコシル化及びリン酸化の適切な処理のための細胞機構を持つ真核生物宿主細胞が使用され得る。このような哺乳類宿主細胞の限定されない例は、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０及びＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（任意の免疫グロブリン鎖を内因性生成しないミューリン骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７０３０、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１又はＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒｌ．ｌ、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞を含む。特定の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞で生成される。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分は、減少されたフコース含有量を有する、又はフコース含有量を有しない。このような抗体は、当業者に公知の技術を用いて生成され得る。例えば、抗体はフコシル化能力に欠陥がある、又はフコシル化能力を欠如した細胞で発現し得る。特定例において、１，６－フコシルトランスフェラーゼの２つの対立形質がノックアウトされた細胞株が、減少されたフコース含有量を持つ抗体又はその抗原結合部分を生成するために使用され得る。減少されたフコース含有量を持つ抗体又はその抗原結合部分を生成するために使用し得るこのようなシステムの一例は、ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）である。
組換えタンパク質の長期的高収率を得るために、安定した発現細胞が生成され得る。例えば、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分を安定的に発現する細胞株が遺伝操作され得る。特定の具体例において、本明細書に提示された細胞は、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分を形成するために会合する軽鎖／軽鎖可変ドメインと重鎖／重鎖可変ドメインを安定的に発現する。
特定の態様において、ウイルス複製起源を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は適切な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）及び選択性マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換され得る。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、遺伝操作された細胞は、濃縮した培地で１～２日間成長でき、次に選択性培地に転換される。組換えプラスミドの選択性マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞が染色体にプラスミドを安定的に統合及び成長して焦点（ｆｏｃｉ）を形成するようにし、これは順次に細胞株にクローニングされ拡張され得る。この方法は、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗体結合部分を発現する細胞株を遺伝操作するのに有益に使用され得る。このような遺伝操作された細胞株は、抗体分子と直接又は間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価に特に有用であり得る。
多数の選択システムを使用することができ、限定されない例として、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９７７）Ｃｅｌｌ １１（１）：２２３－３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＥＨ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ４８（１２）：２０２６－２０３４）及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ Ｉ ｅｔ ａｌ，（１９８０）Ｃｅｌｌ ２２（３）：８１７－２３）遺伝子がそれぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－又はａｐｒｔ－細胞において利用され得る。また、抗代謝物質耐性を次の遺伝子に対する選択の基礎として使用することができる：ｄｈｆｒ（メトトレキサートに対する耐性を付与する）（Ｗｉｇｌｅｒ Ｍ ｅｔ ａｌ，（１９８０）ＰＮＡＳ７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ Ｋ ｅｔ ａｌ，（１９８１）ＰＮＡＳ ７８：１５２７－３１）；ｇｐｔ（ミコフェノール酸に対する耐性を付与する）（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ ＆ Ｂｅｒｇ Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ ７８（４）：２０７２－６）；ｎｅｏ（アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与する）（Ｗｕ ＧＹ ＆ Ｗｕ ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ Ｐ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；及びＭｏｒｇａｎ ＲＡ ＆ Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ６２：１９１－２１７；Ｎａｂｅｌ ＧＪ ＆ Ｆｅｉｇｎｅｒ ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １１（５）：２１１－５）；及びｈｙｇｒｏ（ハイグロマイシンに対する耐性を付与する）（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ＲＦ ｅｔ ａｌ，（１９８４）Ｇｅｎｅ ３０（１－３）：１４７－５６）。組換えＤＮＡ技術の分野における公知の方法を、所望の組換えクローンを選択するために慣例的に適用することができ、このような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ ｅｔ ａｌ，（ｅｄｓ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ Ｍ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２，１３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ＮＣ ｅｔ ａｌ，（ｅｄｓ．）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ Ｆ ｅｔ ａｌ，（１９８１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １５０：１－１４に記載され、これらはその全体が参考として本明細書に組み込まれる。
抗体分子の発現レベルはベクター増幅によって増加し得る（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ＣＲ ＆ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ ＣＣＧ，ＤＮＡクローニングで哺乳類細胞においてクローニングされた遺伝子の発現のための遺伝子増幅に基づくベクターの使用、Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）参照）。抗体を発現するベクターシステムのマーカーが増幅可能な場合、宿主細胞の培養物に存在する抑制剤レベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させるはずであろう。増幅された領域が抗体遺伝子と関連することから、抗体の生成も増加するはずであろう（Ｃｒｏｕｓｅ ＧＦ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２５７－６６参照）。
宿主細胞は、本明細書に提示された２つ以上の発現ベクター、すなわち重鎖由来ポリペプチドを暗号化する第１ベクター及び軽鎖由来ポリペプチドを暗号化する第２ベクターで共トランスフェクションされ得る。両ベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの同等な発現を可能にする同一の選択性マーカーを含み得る。宿主細胞は２つ以上の発現ベクターの異なる量で共トランスフェクションされ得る。例えば、宿主細胞は、第１発現ベクター及び第２発現ベクターの比率１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、又は１：５０のいずれか一つでトランスフェクションされ得る。
または、重鎖及び軽鎖ポリペプチドを全て暗号化し発現し得る単一ベクターが使用され得る。軽鎖は、毒性のない重鎖の過量を避けるために重鎖の前に位置しなければならない（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５６２－５６５；及びＫｏｈｌｅｒ Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ ７７：２１９７－２１９９）。重鎖及び軽鎖のコーディング配列は、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡを含むことができる。発現ベクターは、モノシストロン性又はマルチシストロン性でよい。マルチシストロン性の核酸構成物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上、又は２～５、５～１０又は１０～２０範囲の遺伝子／ヌクレオチド配列を暗号化できる。例えば、バイシストロン性核酸構成物は、プロモーター、第１遺伝子（例えば、本明細書に提示された抗体の重鎖）及び第２遺伝子（例えば、本明細書に提示された抗体の軽鎖）の順に含み得る。このような発現ベクターにおいて、両遺伝子の転写はプロモーターによって誘導され、第１遺伝子からｍＲＮＡの翻訳はキャップ依存性スキャニングメカニズムによってなされ、第２遺伝子からｍＲＮＡの翻訳はキャップ独立的メカニズム、例えばＩＲＥＳによってなされ得る。
本明細書に提示された抗体分子が組換え発現によって生成されると、免疫グロブリン分子の精製のために当業界における公知の任意の方法によって、例えばクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａ後特定抗原に対する親和性、及びサイズ分類カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、又はタンパク質の精製のための任意の他の標準技術によって精製され得る。また、本明細書に提示された抗体は、本明細書に開示された異種性ポリペプチド配列に融合され得るか、又は精製を促進するための当業界における公知の他の方式が適用され得る。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分は、分離又は精製される。一般に、分離された抗体は、分離された抗体以外の他の抗原特異性を持つ他の抗体が実質的にないものである。例えば、特定の具体例において、本明細書に提示された抗体の作製物は、細胞物質及び／又は化学前駆体が実質的にない。語句“細胞物質が実質的にない”ものは、抗体が分離又は組換え生成された細胞の細胞成分から抗体が分離された抗体の作製物を含む。したがって、細胞物質が実質的にない抗体は、異種性タンパク質（又は、汚染タンパク質）及び／又は抗体の変異体、例えば抗体の異なる翻訳後変形された形態又は抗体（又は、抗体結合部分）の他の異なるバージョンを約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、又は０．１％（乾燥重量基準）未満で持つ抗体の作製物を含む。抗体が組換え生成された時、一般的に培養培地を実質的に持たず、すなわち、培養培地がタンパク質作製物の体積の約２０％未満、１０％未満、２％、１％、０．５％、又は０．１％未満である。抗体が化学合成によって生成された時、一般的に化学前駆体や他の化学物質を実質的に持たず、すなわち、タンパク質の合成に伴う化学前駆体や他の化学物質から分離される。したがって、抗体のこのような作製物は、関心抗体以外の他の化学前駆体又は化合物を約３０％、２０％、１０％、又は５％（乾燥重量基準）未満で持つ。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体は分離又は精製される。
VIII．分析
本明細書に提示された抗体は、例えば、標準ＥＬＩＳＡによってＦＡＭ１９Ａ５に対する結合に対して試験され得る。マイクロタイタープレートが、ＰＢＳ中に１～２μｇ／ｍｌで精製されたＦＡＭ１９Ａ５でコーティングされ、続いて、ＰＢＳ中の５％ウシ血清アルブミンで遮断される。抗体希釈物（例えば、ＦＡＭ１９Ａ５－免疫化されたマウスからの血漿の希釈物）が各ウェルに添加され、３７℃で１～２時間インキュベーションされる。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎでプレートが洗浄され、続いて、３７℃で１時間セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートされた２次試薬（例えば、ヒト抗体に対して、ヤギ－抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ－特異的多クローン性試薬）と共にインキュベーションされる。洗浄後、プレートがＡＢＴＳ基質（Ｍｏｓｓ Ｉｎｃ，ｐｒｏｄｕｃｔ：ＡＢＴＳ－１０００）で展開され、ＯＤ ４１５～４９５で分光光度計によって分析される。次に、免疫化されたマウスからの血清が、ヒトＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞株に対する結合に対してフローサイトメトリー法によってさらにスクリーニングされ、このとき、ＦＡＭ１９Ａ５を発現しない対照群細胞株は結合されない。ＦＡＭ１９Ａ５発現ＣＨＯ細胞と抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を１：２０希釈で共にインキュベーションすることによって抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合が評価される。細胞は洗浄され、結合がＰＥ－標識された抗ヒトＩｇＧ Ａｂで検出される。フローサイトメトリー分析がＦＡＣＳｃａｎフローサイトメトリー機によって行われる（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）。好ましくは、最高の力価を発生させたマウスが融合に使用されるであろう。
前述したＥＬＩＳＡ分析は、ＦＡＭ１９Ａ５免疫原との陽性反応性を表す抗体及び抗体を生成するハイブリドーマをスクリーニングするために使用され得る。次に、ＦＡＭ１９Ａ５に対して、好ましく高い親和性で結合する抗体を生成するハイブリドーマがサブクローニングされ、より特性化される。次に、親細胞の反応性を保有した各ハイブリドーマからの一つのクローンが細胞銀行を作り且つ抗体を精製するために選択され得る（ＥＬＩＳＡによって）。
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマが単クローン性抗体精製のための２Ｌスピナーフラスコで成長され得る。上清液はタンパク質Ａ－セファロース親和性クロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）に先立ってろ過及び濃縮され得る。純度を保障するために溶出されたＩｇＧは、ゲル電気泳動及び高性能液体クロマトグラフィーによって検査され得る。バッファ溶液がＰＢＳに交換されてもよく、濃度は、１．４３吸光係数を用いてＯＤ２８０によって決定され得る。単クローン性抗体はアリコートされ、－８０℃に保管され得る。
選択された抗ＦＡＭ１９Ａ５単クローン性抗体が独特のエピトープに結合するか否かを決定するために、各抗体は、商業的に利用可能な試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてビオチン化し得る。ビオチン化されたＭＡｂ結合は、ストレプトアビジン標識されたプローブで検出され得る。未標識単クローン性抗体とビオチン化された単クローン性抗体を用いた競合研究は、前述のとおり、ＦＡＭ１９Ａ５－コーティングされたＥＬＩＳＡプレートを用いて行うことができる。
精製された抗体のイソタイプを決定するために、特定イソタイプの抗体に特異的な試薬を用いてイソタイプ ＥＬＩＳＡを行うことができる。例えば、ヒト単クローン性抗体のイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェル４℃で一晩抗ヒト免疫グロブリン１μｇ／ｍＬでコーティングされ得る。１％ ＢＳＡで遮断後、１～２時間周辺温度でプレートが試験単クローン性抗体又は精製されたイソタイプ対照群１μｇ／ｍＬ以下と反応する。次に、ウェルはヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＭ－特異的アルカリ性フォスファターゼ－コンジュゲートされたプローブと反応し得る。プレートは、前述のとおり、展開され分析される。
ＦＡＭ１９Ａ５を発現する生きている細胞に対する単クローン性抗体の結合を試験するために、実施例に記載されたとおり、フローサイトメトリー法を用いることができる。膜結合されたＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞株（標準成長条件下に成長）が０．１％ ＢＳＡを含有するＰＢＳ中の様々な濃度の単クローン性抗体と１時間４℃で混合される。洗浄後、細胞は、１次抗体染色と同じ条件下に、フルオレセイン標識抗ＩｇＧ抗体と反応する。サンプルは、単一細胞上で扉を開閉する（ｇａｔｅ）ライトアンドサイドスキャッタ特性を用いるＦＡＣＳｃａｎ機器によって分析でき、標識された抗体の結合が測定される。フローサイトメトリー分析に加えて又は代えて蛍光顕微鏡を使用する他の分析も可能である。細胞は、前述のとおり、正確に染色され、蛍光顕微鏡によって検査され得る。この方法は、個別細胞の視角化を許容するが、抗原の密度によっては低下した感度を有し得る。
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を、ウェスタンブロッティングによってＦＡＭ１９Ａ５抗原との反応性に対してさらに試験することができる。ＦＡＭ１９Ａ５を発現する細胞からの細胞抽出物を作製でき、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動を行うことができる。電気泳動後、分離された抗原は、ニトロセルロース膜に伝達され、２０％マウス血清で遮断され、試験される単クローン性抗体で探針されるであろう。ＩｇＧ結合は、抗ＩｇＧアルカリ性フォスファターゼを用いて検出し、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質錠剤（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で展開することができる。
様々な抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性、交差反応性及び結合動力学を分析するための方法は、当業界に公知である標準分析、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）２０００ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いたＢＩＡＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を含む。
一具体例において、抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の可溶性形態に特異的に結合する。一具体例において、抗体は、ヒトＦＡＭ１９Ａ５の膜結合された形態に特異的に結合する。抗体はＦＡＭ１９Ａ５の特定エピトープ（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２内の断片）に特異的に結合し得る。特定の具体例において、抗体は、好ましくは、高い親和性でヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合し、タンパク質のＦＡＭ１９サブファミリーの他のメンバーとは交差反応しない。
IX．二重特異的分子
本明細書に提示された抗体を、二重特異的分子を形成するために使用することができる。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分は、他の機能的分子、例えば他のペプチド又はタンパク質（例えば、他の抗体又は受容体のリガンド）に誘導体化又は結合され、これによって、少なくとも２つの異なる結合部位又は標的分子に結合する二重特異的分子が生成される。ＩＬ－６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ及びＴＧＦａのようなサイトカインは、タンパク質信号トランスデューサ又は転写３の活性因子（ＳＴＡＴ３）を活性化することによって、神経膠症及び／又は反応性神経膠症の開始のトリガーとしてかかわり（Ｂａｌａｓｉｎｇａｍ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１４（２）：８４６－５６（１９９４）；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｔ Ｕ．Ｓ．Ａ．２０；９２（１３）：５８６５－９（１９９５）参照）、次いで、ＣＮＳ傷害後、多くの態様の反応性星状細胞症を調節する（Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（２８）：７２３１－７２４３（２００８）参照）。例えば、ＳＴＡＴ３の不在や減少は、神経膠線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）の弱化した上方調節、星状細胞肥大の失敗、及び炎症の増加した伝搬、増加した病巣容積及びＣＮＳ傷害後に部分的に弱化した運動回復を招く（Ｈｅｒｒｍａｎｎ Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（２８）：７２３１－７２４３（２００８）参照）。したがって、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、組合せ治療のために神経膠症の開始及び／又は反応性星状細胞症の過度な増殖を抑制するのに伴う任意のタンパク質に特異的に結合する抗体又はｓｃＦｖに、例えばＩＬ－６、ＣＮＴＦ、ＬＩＦ、ＥＧＦ又はＴＧＦａに対する抗体に結合され得る。
また、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、対象の中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳傷害、脳脊髄損傷、脳卒中又は脳腫瘍）、脳脊髄系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髄及び神経障害、又は神経病症性疼痛を含む疾患又は障害（下記の第ＸＩＩ章に記載された疾患又は障害を参照）を治療する抗体又はｓｃＦｖに結合され得る。例えば、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体は、多発性硬化症を治療する抗体又はｓｃＦｖ、例えばナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））に結合され得る。
本明細書に提示された抗体は、実際に３つ以上の異なる結合部位及び／又は標的分子に結合する多重特異的分子を生成するために、２個以上の他の機能的分子に誘導体化又は結合され得る。このような多重特異的分子も“二重特異的分子”に含まれる。本明細書に提示された二重特異的分子を生成するために、本明細書に提示された抗体は、一つ以上の他の結合分子、例えば、他の抗体、その抗体結合部分、ペプチド又は結合模倣体に機能的に連結され（例えば、化学カップリング、遺伝子融合、非共有会合又は他の方式によって）、これによって二重特異的分子が得られる。一具体例において、二重特異的分子はＦＡＭ１９Ａ５及びＶＥＧＦに結合する。他の具体例において、二重特異的分子はＦＡＭ１９Ａ５及びＥＧＦに結合する。
したがって、ＦＡＭ１９Ａ５に対する少なくとも一つの第１結合特異性及び第２標的エピトープに対する第２結合特異性を含む二重特異的分子が、本明細書に開示される。二重特異的分子が多重特異性である一具体例において、分子は第３結合特異性をさらに含むことができる。
一具体例において、本明細書に提示された二重特異的分子は結合特異性として、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、又は単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む少なくとも一つの抗体又はその抗体結合部分を含む。抗体はまた、軽鎖又は重鎖ダイマー、又はその任意の最小断片、例えばＬａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ、米国特許第４，９４６，７７８号に記載されたＦｖ又は単鎖構成物でよく、その内容は参考として本明細書に組み込まれる。
ヒト単クローン性抗体が好ましいが、本明細書に提示された二重特異的分子に利用可能な他の抗体は、ミューリン、キメラ及びヒト化単クローン性抗体である。
本明細書に提示された二重特異的分子は、当業界における公知の方法を用いて構成結合特異性をコンジュゲートすることによって作製され得る。例えば、二重特異的分子の各結合特異性は個別的に生成された後、互いにコンジュゲートされ得る。結合特異性がタンパク質又はペプチドである時、様々なカップリング剤又は架橋剤が共有コンジュゲーションに使用され得る。架橋剤の例は、タンパク質Ａ、カルボジイミド、Ｎ－サクシニミジル－Ｓ－アセチル-チオ酢酸（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロベンゾ酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）及びスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）を含む（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ，（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，ＭＡ ｅｔ ａｌ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｅｔ ＵＳＡ８２：８６４８参照）。他の方法は、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８－１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１－８３）、及びＧｌｅｎｎｉｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７－２３７５）に記載されたものを含む。好ましいコンジュゲーション製剤はＳＡＴＡ及びスルホ－ＳＭＣＣであり、これらはいずれもＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から購入可能である。
結合特異性が抗体である時、これらは２個の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を通じてコンジュゲートされ得る。特に、好ましい具体例において、ヒンジ領域は、奇数個のスルフヒドリル残基、好ましくは１個の残基を含有するようにコンジュゲーション前に変形される。
また、両結合特異性が同一であるベクターで暗号化され、同一の宿主細胞で発現及び組立てされ得る。この方法は、二重特異的分子がａ ｍＡｂ ｘ ｍＡｂ、ｍＡｂ ｘ Ｆａｂ、ｍＡｂ ｘ（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ ｘ Ｆ（ａｂ’）２又はリガンドｘ Ｆａｂ融合タンパク質である場合に特に有用である。二重特異的抗体は、各重鎖のＣ末端にｓｃＦｖを含む抗体を含むことができる。本明細書に提示された二重特異的分子は、単鎖抗体と結合決定基を含む単鎖分子、又は２個の結合決定基を含む単鎖二重特異的分子でよい。二重特異的分子は少なくとも２個の単鎖分子を含むことができる。二重特異的分子を作製する方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号；米国特許第５，４５５，０３０号；米国特許第４，８８１，１７５号；米国特許第５，１３２，４０５号；米国特許第５，０９１，５１３号；米国特許第５，４７６，７８６号；米国特許第５，０１３，６５３号；米国特許第５，２５８，４９８号；及び米国特許第５，４８２，８５８号に記載されている。
二重特異的分子の特異的標的に対する結合は、当業界における公知の方法、例えば酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫分析（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長抑制）、又はウェスタンブロット分析を用いて確認され得る。これらの分析はそれぞれ一般に、関心複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体）を利用することによって特定の関心タンパク質－抗体複合体を検出する。
Ｘ．診断
一具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に付着される部分は、結合部分、標識化部分及び生物学的活性部分で構成された群から選ばれる。
本明細書に提示された抗体は、サンプル試験及び生体内映像化を含む診断目的のために使用でき、この目的のために抗体（又は、その結合部分）は適切な検出可能な製剤にコンジュゲートされることによって免疫コンジュゲートを形成することができる。診断目的のために、適切な製剤は、放射性同位元素を含む検出可能な標識であり、全身映像化のための適切な製剤は、放射性同位元素、酵素、蛍光標識及びサンプル試験のための他の適切な抗体タグである。
検出可能な標識は、試験管内診断分野において現在使用される様々な種類のいずれかのものでよく、コロイド状金のような金属ゾルを含む微粒子標識、例えば、Ｎ２Ｓ２、Ｎ３Ｓ又はＮ４タイプのペプチドキレート化剤と共に提示されるＩ１２５又はＴｃ９９のような同位元素、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光マーカーなどを含む発色団、又は与えられた基質を検出可能なマーカーに転換する酵素標識、及び重合酵素連鎖反応のような増幅後に表れるポリヌクレオチドタグを含む。適切な酵素標識は、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリ性フォスファターゼなどを含む。例えば、標識は、１，２－ジオキセタン基質の転換後の化学発光の存在又は形成を測定することによって検出される、酵素アルカリ性フォスファターゼ、例えば、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ジナトリウム３－（４－（メトキシスピロ｛１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１ ３，７｝デカン｝－４－イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）だけでなく、ＣＤＰ及びＣＤＰ－ｓｔａｒ又は当業者における公知の他の発光基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）及びユーロピウム（ＩＩＩ）のような適切なランタン族元素のキレートでよい。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識又はその反応生成物の出現は、標識が微粒子であり、適切なレベルで蓄積される場合には、肉眼を用いて、又は分光光度計、発光測定計、蛍光測定計などのような機器を用いて確認することができ、いずれも標準実施過程に従う。
また、本明細書に提示された抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）のような免疫コンジュゲートを形成するために治療剤にコンジュゲートされ得る。適切な治療剤は、神経膠症及び／又は反応性星状細胞症の開始を調整し及び／又は退行性脳障害、中枢神経系損傷、又は神経病症性疼痛を治療する製剤を含む。退行性脳障害を治療するための治療剤は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を治療する薬物を含む。治療剤は、このような退行性脳障害を治療するために通常使われる薬物、例えば第XII章に開示された薬物を含む。
免疫コンジュゲートは、当業界における公知の方法によって作製され得る。好ましくは、コンジュゲーション方法は実質的に（又は、ほとんど）非免疫原性である結合、例えばペプチド－（すなわち、アミド－）、スルフィド－、ジスルフィド－、ハイドラゾーン－及びエーテル結合をもたらす。これらの結合はほとんど非免疫原性であり、血清内で適切な安定性を表す（例えば、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（２００９）２３５－２４４；ＷＯ２００９／０５９２７８；ＷＯ９５／１７８８６参照）。
モイエティ及び抗体の生化学的性質によって、異なるコンジュゲーション戦略が利用され得る。モイエティが自然的に発生、又は５０～５００個のアミノ酸の組換え体である場合、タンパク質コンジュゲート合成の標準過程は文献に記載されており、当業者にはそれが容易に再現できる（例えば、Ｈａｃｋｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｃ．Ｐ．Ｒ．，ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚｅｒ，Ｄ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４７（２００８）１００３０－１００７４参照）。一具体例において、抗体又はモイエティ内のシステイン残基とマレインイミドモイエティの反応が使用される。これは、抗体のＦａｂ又はＦａｂ’－断片が使用される場合に特に好適なカップリング化学である。また、一具体例において、抗体又はモイエティのＣ末端とのカップリングが行われる。タンパク質、例えばＦａｂ－断片のＣ末端変形は、例えば文献（Ｓｕｎｂｕｌ，Ｍ．ａｎｄ Ｙｉｎ，Ｊ．，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．７（２００９）３３６１－３３７１）に記載されたとおりに行われ得る。
一般に、部位特異的反応及び共有カップリングは、他の官能基の反応性に直交する反応性を持つアミノ酸に天然アミノ酸を変形することに基づく。例えば、まれな配列内容中の特定のシステインはアルデヒドに酵素的に転換され得る（Ｆｒｅｓｅ，Ｍ．Ａ．、及びＤｉｅｒｋｓ，Ｔ．，ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ．１０（２００９）４２５－４２７参照）。また、与えられた配列内容において天然アミノ酸と特定酵素の特異的酵素反応性を利用することによって、所望のアミノ酸変形を得ることが可能である（例えば、Ｔａｋｉ，Ｍ．ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７（２００４）１１９－１２６；Ｇａｕｔｉｅｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１５（２００８）１２８－１３６；及びＰｒｏｔｅａｓｅ－ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃ－Ｎ ｂｏｎｄｓ ｉｓ ｕｓｅｄ ｂｙ Ｂｏｒｄｕｓａ，Ｆ．，Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ ｉｎ Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００４）３８９－４０３参照）。
部位特異的反応及び共有カップリングはまた、適切な変形試薬と末端アミノ酸の選択的反応によって達成され得る。Ｎ末端システインとベンゾニトリルの反応性が、部位特異的共有カップリングを達成するために使用され得る（Ｒｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．４８（２００９）９６５８－９６６２参照）。自生的化学ライゲーションもＣ末端システイン残基に依存し得る（Ｔａｙｌｏｒ，Ｅ．Ｖｏｇｅｌ；Ｉｍｐｅｒｉａｌｉ，Ｂ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００９）、２２（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、６５－９６参照）。
ＥＰ１０７４５６３は、正に帯電したアミノ酸のストレッチに位置したシステインと負に帯電したアミノ酸のストレッチ内のシステインの速い反応に基づくコンジュゲーション方法を開示する。
モイエティはまた、合成ペプチド又はペプチド模倣体でよい。ポリペプチドが化学的に合成される場合、直交する化学反応性を持つアミノ酸がこのような合成中に統合され得る（例えば、ｄｅ Ｇｒａａｆ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．２０（２００９）１２８１－１２９５参照）。非常に様々な直交官能基が関連しており、合成ペプチドに導入され得るので、リンカーにこのようなペプチドのコンジュゲーションは標準化学である。
単一標識されたポリペプチドを得るために、１：１化学量論のコンジュゲートが他のコンジュゲーション副産物からクロマトグラフィーによって分離され得る。この過程は、染料標識された結合対構成員と帯電したリンカーを使用することによって促進され得る。電荷及び分子量の差異が分離に使用され得るので、標識され且つ高度に負に帯電した結合対構成員を使用することによって、単一コンジュゲートされたポリペプチドが非標識されたポリペプチド及び２つ以上のリンカーを持つポリペプチドから容易に分離される。蛍光染料は、標識された１価バインダーのような未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。
XI．薬学組成物
生理的に許容される担体、賦形剤又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）中に所望の程度の純度を持つ本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分を含む組成物が本明細書に開示される。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、利用された投薬量及び濃度がレシピエントに非毒性であり、フォスフェート、シトレート及び他の有機酸のようなバッファ；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０個残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性重合体、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート化剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトールのような糖；ナトリウムのような塩－形成カウンターイオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又は非－イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
特定の具体例において、薬学組成物は、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、及び選択的に一つ以上の追加の予防剤又は治療剤を製薬学的に許容される担体中に含む。特定の具体例において、薬学組成物は、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分の有効量、及び選択的に一つ以上の追加の予防剤又は治療剤を製薬学的に許容される担体中に含む。一部の具体例において、抗体は、薬学組成物に含まれた唯一の活性成分である。本明細書に提示された薬学組成物は、ＦＡＭ１９Ａ５活性を増進、誘導又は活性化し、中枢神経系損傷、退行性脳障害又は神経病症性疼痛のような状態を治療するのに有用であり得る。
非経口製剤に使用された製薬学的に許容される担体は、水性ビークル、非水性ビークル、抗菌剤、等張剤、バッファ、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁及び分散剤、乳化剤、封鎖又はキレート化剤及び他の製薬学的に許容される物質を含む。水性非経口ビークルの例は、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、滅菌水注射液、デキストロース及び乳酸リンゲル注射液を含む。非水性非経口ビークルは、植物起源の固定油、綿実油、とうもろこし油、ごま油及びピーナッツ油を含む。静菌又は靜真菌濃度で抗菌剤が多重容量容器に包装された非経口製剤に添加され、これらは、フェノール又はクレゾール、水銀含有物質、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル及びプロピルｐ－ヒドロキシベンゾ酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム及び塩化ベンゼトニウムを含む。等張剤は、塩化ナトリウム及びデキストロースを含む。バッファはフォスフェート及びシトレートを含む。抗酸化剤は硫酸水素ナトリウムを含む。局所麻酔剤は、プロカイン塩酸塩を含む。懸濁及び分散剤は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリドンを含む。乳化剤は、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）を含む。金属イオンの封鎖又はキレート化剤は、ＥＤＴＡを含む。製薬学的担体はまた、水混和性ビークルのためにエチルアルコール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールを含み、ｐＨ調整のために水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸又は乳酸を含む。
薬学組成物は、対象に投与する任意の経路に合わせて製剤化できる。投与経路の具体的な例は、鼻内、経口、非経口、脊椎腔内、脳室内、肺、皮下又は心室内経路を含む。また、皮下、筋肉内又は静脈内注射を特徴とする非経口投与が考慮される。注射剤は、液体溶液や懸濁液、注射前に溶液又は懸濁液になるのに適した固体形態として、又はエマルジョンとして従来の形態で作製され得る。注射剤、溶液及びエマルジョンはまた、一つ以上の賦形剤を含有する。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロール又はエタノールである。また、投与される薬学組成物は、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解性増進剤、及び他の製剤、例えば酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート及びシクロデキストリンのような非毒性補助物質を少量含有し得る。
抗体の非経口投与用製剤は、使用直前に直ぐに注射可能な滅菌溶液、滅菌乾燥可溶性製品、例えば使用直前に直ぐに溶媒と組み合わされ得る凍結乾燥粉末、例えば皮下注射用錠剤、使用直前に直ぐに注射可能な滅菌懸濁液、使用直前に直ぐにビークルと組み合わされ得る滅菌乾燥不溶性製品及び滅菌エマルジョンを含む。溶液は、水性又は非水性でよい。
静脈内投与される場合、適切な担体は、生理食塩水又はフォスフェート緩衝食塩水（ＰＢＳ）、及び増粘剤及び可用化剤を含有する溶液、例えばグルコース、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコール及びそれらの混合物を含む。
抗体を含む局所混合物は、局所及び全身投与用として記述されたとおりに作製される。得られた混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョンなどでよく、クリーム、ジェル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、フォーム、エアロゾル、灌漑剤（Ｉｒｒｉｇｒａｔｉｏｎｓ）、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ又は局所投与に適切な任意の他の製剤とされ得る。
本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分は、例えば、吸入による局所適用のためのエアロゾルとして製剤化され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達のためのエアロゾルを説明する米国特許第４，０４４，１２６号、第４，４１４，２０９号及び第４，３６４，９２３号参照）。気道に投与するためのそれらの製剤は、エアロゾル又はネブライザー用溶液の形態、又は吸入剤用超微粒粉末でよく、単独で又はラクトースのような非活性担体と組み合せて使用され得る。このような場合、製剤の粒子は、一具体例において５０ミクロン未満、一具体例において１０ミクロン未満の直径を有する。
本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分は、局部又は局所適用のために、例えば皮膚及び粘膜に、例えば目への局所適用のために、ジェル、クリーム及びローションの形態で、及び目に適用又は髄槽内又は脊髄内適用のために製剤化され得る。局所投与は、経皮送達及び目又は粘膜投与用に、又は吸入治療療法用に考慮される。抗体単独又は他の製薬学的に許容される賦形剤と組み合わされた点鼻液が再び投与され得る。
イオン泳動及び電気泳動装置を含む経皮パッチが当業界に公知であり、これは抗体を投与するのに使用され得る。例えば、このようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、第６，２６１，５９５号、第６，２５６，５３３号、第６，１６７，３０１号、第６，０２４，９７５号、第６，０１０，７１５号、第５，９８５，３１７号、第５，９８３，１３４号、第５，９４８，４３３号、及び第５，８６０，９５７号に開示されている。
特定の具体例において、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分を含む薬学組成物は、凍結乾燥された粉末であり、溶液、エマルジョン及び他の混合物として投与するために復元され得る。また、薬学組成物は、固体又はジェルとして復元されて製剤化され得る。凍結乾燥された粉末は、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分、又はその製薬学的に許容される誘導体を適切な溶媒に溶解することによって作製される。一部の具体例において、凍結乾燥された粉末は滅菌粉末である。溶媒は、粉末又は粉末から作製された復元された溶液の安定性又は他の薬学的成分を改善する賦形剤を含有し得る。使用可能な賦形剤の限定されない例は、デキストロース、ソルビトール、フラクトース、とうもろこしシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース又は他の適切な製剤を含む。また、溶媒は、中性ｐＨバッファ、例えばシトレート、ソジウム又はポタシウムフォスフェート又は当業界に公知の他のバッファを含有し得る。溶媒を後続滅菌ろ過した後、当業界に公知である標準条件下に凍結乾燥し、所望の製剤を得ることができる。一具体例において、得られた溶液は、凍結乾燥用バイアルに分配されるはずである。各バイアルは、化合物の単一投薬量又は多数投薬量を有するはずである。凍結乾燥された粉末は適切な条件下に、例えば約４℃～室温で保管され得る。
注射用水で凍結乾燥された粉末を復元させ、非経口投与用製剤を得ることができる。復元のために、凍結乾燥された粉末は滅菌水又は他の適切な担体に添加される。正確な量は、選択された化合物に従う。このような量は経験的に決定され得る。
本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子、又は免疫コンジュゲート及び本明細書に提示された他の組成物はまた、治療される特定組織、受容体又は対象の身体の他の領域に標的化されるように製剤化され得る。多くの標的化方法が当業界に公知である。このような標的化方法は、本発明の組成物に使用するために考慮される。標的化方法の限定されない例は、米国特許第６，３１６，６５２号、第６，２７４，５５２号、第６，２７１，３５９号、第６，２５３，８７２号、第６，１３９，８６５号、第６，１３１，５７０号、第６，１２０，７５１号、第６，０７１，４９５号、第６，０６０，０８２号、第６，０４８，７３６号、第６，０３９，９７５号、第６，００４，５３４号、第５，９８５，３０７号、第５，９７２，３６６号、第５，９００，２５２号、第５，８４０，６７４号、第５，７５９，５４２、及び第５，７０９，８７４号を参照すればよい。特定の具体例において、本明細書に提示された抗体又はその抗原結合部分は、中枢神経系損傷、退行性脳障害、又は神経病症性疼痛を治療するように標的化される。
生体内投与するために使用可能な組成物は滅菌され得る。滅菌は、例えば、滅菌ろ過膜を通したろ過によって容易に達成される。
XII．キット
本明細書に提示された一つ以上の抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子、又はその免疫コンジュゲートを含むキットが開示される。特定の具体例において、本明細書に提示された一つ以上の抗体又はその抗原結合部分のような、本明細書に提示された薬学組成物の成分のいずれか一つ以上で満たされた一つ以上の容器、及び選択的な使用説明書を含む製薬学的パック又はキットが開示される。一部の具体例において、キットは、本明細書に提示された薬学組成物及び本明細書に提示された任意の予防剤又は治療剤を含有する。
XIII．治療的使用及び方法
一態様において、対象のＣＮＳの傷害又は損傷を緩和するための方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。
一具体例において、対象の神経膠症の始まり又は開始及びＣＮＳに対するその関連する有害な効果を阻害、遅延、抑制、制限又は予防する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象の反応性星状細胞の過度又は異常増殖及びＣＮＳに対するその関連する有害な効果を阻害、遅延、抑制、制限又は予防する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。
一具体例において、対象のニューロカン、ＮＧ２又はこれら両者のレベルを低下、阻害、減少させ、又はニューロカン、ＮＧ２又はこれら両者の活性を減少させたり非活性にさせる方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象において傷害又は損傷後にニューロンの成長を刺激、促進、増加又は活性化する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象において、好ましくはニューロンの核においてｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ、ｃ－ｆｏｓタンパク質、又はｃ－ｆｏｓタンパク質活性のレベルを増加させ、ＥＲＫ ｍＲＮＡ、ＥＲＫタンパク質又はｐＥＲＫ活性を増加させる方法が開示され、この方法は、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、必要な対象において、好ましくは、ニューロンにおいてＧＡＰ４３ ｍＲＮＡ、ＧＡＰ４３タンパク質のレベルを増進又は増加させる、又はＧＡＰ４３タンパク質の活性を増加させる方法が開示され、この方法は、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象のニューロンの生存を増進又は促進し及び／又は軸索突起の再成長を促進する方法が開示され、この方法は、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象は、ヒト、例えばＣＮＳ損傷、外傷、傷害、脳脊髄損傷、脳腫瘍、感染、虚血、脳卒中、自己免疫反応及び／又は神経退行性疾患からニューロンの傷害又は損傷を持つヒトである。
一部の具体例において、対象の中枢神経系損傷、脳脊髄系損傷、退行性脳障害、退行性脳脊髄又は神経障害、又は神経病症性疼痛を含む疾患又は障害を治療する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、中枢神経系損傷は、外傷性脳傷害、脳脊髄損傷、脳卒中、脳腫瘍又はそれらの組合せである。一具体例において、退行性脳障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又はそれらの組合せである。一具体例において、対象の外傷性脳傷害、脳脊髄損傷、脳卒中、脳腫瘍又はそれらの組合せを治療する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。一具体例において、対象のハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳを治療する方法が開示され、この方法は、対象に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート、又はその組成物を投与することを含む。好ましい具体例において、対象はヒトである。
一部の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲートの治療的有効量が投与される。対象（例えば、ヒト）を治療する時、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲートの治療的有効量は、年齢、性別、疾患の深刻度のような要因に従い、当業者（例えば、医師）によって決定され得る。典型的に、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲートは、一日０．０１μｇ～１０００ｍｇの容量で投与される。本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲートは、疾患又は障害の症状及び深刻度によって一日１回、２回、又はそれ以上の回数で投与され得る。
一部の具体例において、本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合部分、二重特異的分子又は免疫コンジュゲート又はその組成物は、静脈内、経口、非経口、脊椎腔内、脳室内、肺、皮下又は心室内経路で投与される。
一部の具体例において、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体又はその抗原結合分子、又はその組成物は、中枢神経系損傷（例えば、外傷性脳傷害、脳脊髄損傷、脳卒中又は脳腫瘍）、脳脊髄系損傷、退行性脳障害（例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、多発性硬化症、ＡＬＳ）、退行性脳脊髄又は神経障害、又は神経病症性疼痛を治療するための一つ以上の追加の製剤と共に投与され得る。例えば、ハンチントン病を治療するための限定されない例示的な製剤は、テトラベナジン（ＸＥＮＡＺＩＮＥ（登録商標））、抗精神病薬物、例えばハロペリドール（ＨＡＬＤＯＬ（登録商標））、クロルプロマジン、リスペリドン（ＲＩＳＰＥＲＤＡＬ（登録商標））及びクエチアピン（ＳＥＲＯＱＵＥＬ（登録商標））を含む。
パーキンソン病を治療するための限定されない例示的な製剤は、レボドパ（カルビドパと共に又はカルビドパ無しで）（ＬＯＤＯＳＹＮ（登録商標））、ドパミン作用剤、例えばプラミペキソール（ＭＩＲＡＰＥＸ（登録商標））、ロピニロール（ＲＥＱＵＩＰ（登録商標））、及びロチゴチン（ＮＥＵＰＲＯ（登録商標））、及びアポモルヒネ（ＡＰＯＫＹＮ（登録商標））、セレギリン（ＥＬＤＥＰＲＹＬ（登録商標），ＺＥＬＡＰＡＲ（登録商標））、ラサギリン（ＡＺＩＬＥＣＴ（登録商標））、エンタカポン（ＣＯＭＴＡＮ（登録商標））、ベンズトロピン（ＣＯＧＥＮＴＩＮ（登録商標））、トリヘキシフェニジル、及びアマンタジンを含む。
アルツハイマー病を治療するための限定されない例示的な製剤は、ドネペジル（ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））、ガランタミン（ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））、及びリバスチグミン（ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））を含む。
多発性硬化症を治療するための限定されない例示的な製剤は、グラチラマーアセテート（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））、フマル酸ジメチル（ＴＥＣＦＩＤＥＲＡ（登録商標））、フィンゴリモド（ＧＩＬＥＮＹＡ（登録商標））、テリフルノミド（ＡＵＢＡＧＩＯ（登録商標））、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（登録商標））、及びミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））を含む。
ＡＬＳを治療するための限定されない例示的な製剤は、リルゾール（ＲＩＬＵＴＥＫ（登録商標））を含む。
一つ以上の追加の治療薬物の容量及び投与は、当業界に公知されており、それは、例えばそれぞれの薬物の製品ラベルに記載される。
実施例
以下の実施例は例示であり、これらに限定されない。
実施例１：ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の発現及び精製
組換えヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を下記の通りに作製及び精製し、精製されたタンパク質を結合親和性分析基礎抗体スクリーニング分析に使用した。まず、ＦＡＭ１９Ａ５遺伝子を発現するＬＰＳ－ｈＴプラスミドをバクテリアに形質転換し、タンパク質過発現を誘導した。生成されたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質は、Ｎｉ－ＮＴＡ親和性クロマトグラフィー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して精製した。イミダゾールの濃度を順次に上げながらＮｉ－コラムからＨｉｓ－タグがついたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を除去した。溶液中のタンパク質発現は、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ Ｒ－２５０染料を使用して測定した。ＦＡＭ１９Ａ５イミダゾール含有溶液だけを取り、ＰＢＳを用いてＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を濃縮した。濃縮が完了した時、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の純度及び濃度をウェスタンブロット分析を用いて測定した。次に、濃縮したタンパク質を用いてＦＡＭ１９Ａ５－特異的抗体をスクリーニングした。
実施例２：抗体ライブラリーＦＡＭ１９Ａ５の生成
１．免疫化
油中水エマルジョンアジュバント（ＲＩＢＩ＋ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳアジュバント、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ，ＵＳＡ）を含有するＴＤＷ及びＣＷＳの細胞壁成分を乳化した後、ニワトリ３匹又はウサギ４匹に皮下注射した。ニワトリ及びウサギをそれぞれ計３回及び４回、概略２～３週間隔で免疫化した。免疫化された動物から得られた抗体の力価を、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質を過発現したＨＥＫ２９３Ｔ細胞の細胞溶解物を使用して免疫ブロッティングによって測定した。
２．免疫化されたニワトリ及びウサギから単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ライブラリーの生成
ＴＲＩ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて、前記開示された免疫化されたニワトリの脾臓、骨髄及び滑液嚢（ｓｙｎｏｖｉａｌ ｓａｃ）からＲＮＡを抽出した。Ｏｌｉｇｏ－ｄＴプライマー及びＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ（商標）ＩＩＩ第一鎖合成システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて第一鎖ｃＤＮＡを合成した。動物の免疫系から得られたｃＤＮＡに対して、拡張型高忠実度（Ｅｘｐａｎｄ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ）ＰＣＲシステム（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を用いて単鎖可変領域ライブラリーを生成した。各反応において、１μＬ ｃＤＮＡ、各プライマー６０ｐｍｏｌ、１０μＬ １０ｘ反応バッファ溶液、８μＬ ２．５ｍＭ ｄＮＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）及び０．５μＬ Ｔａｑ ＤＮＡ重合酵素を水と混合した。最終体積は１００μＬだった。ＰＣＲ反応は、次の条件で行われた：（ｉ）９４℃で１５秒、（ii）５６℃で３０秒及び（iii）７２℃で９０秒、その後、７２℃で１０分間最終エクステンションの３０サイクル。約３５０ｂｐの長さを持つ断片を含むＰＣＲ生成物を１．５％アガロースゲルにローディングし電気泳動した後、ＱＩＡＧＥＮ Ｇｅｌ ＩＩ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いてヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ生成物をＯＤ２６０ｎｍで判読することによって定量した（１単位ＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
２次ＰＣＲからの２個のＶＨ及びＶＬの１次生成物をオーバーラップエクステンションＰＣＲ（Ｏｖｅｒｌａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ＰＣＲ）によって無作為に連結した。各ＰＣＲ反応は、１００ｎｇの精製されたＶＬ及びＶＨ生成物、各プライマー６０ｐｍｏｌ、１０μＬ １０ｘ反応バッファ、８μＬ ２．５ｍＭ ｄＮＴＰ、０．５μＬ Ｔａｑ ＤＮＡ重合酵素及び最終体積１００μＬになるように水と混合し、次の条件下にＰＣＲを行った：（ｉ）９４℃で１５秒、（ii）５６℃で３０秒及び（iii）７２℃で２分、その後７２℃で１０分間最終エクステンションの２５サイクル。約７００ｂｐの長さを持つ単鎖可変領域断片を含むＰＣＲ生成物を１．５％アガロースゲルにローディングし電気泳動した後、ＱＩＡＧＥＮ Ｇｅｌ ＩＩ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いてヌクレオチド断片を精製した。精製されたＰＣＲ生成物をＯＤ２６０ｎｍで判読することによって定量した（１単位ＯＤ＝５０μｇ／ｍｌ）。
３．ライブラリー、ライゲーション及び形質転換
ＰＣＲ生成物のｓｃＦｖ断片とベクターｐＣｏｍｂ３Ｘ－ＳＳ（Ｔｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＣＡ，ＵＳＡ）をＳｆｉ Ｉ制限酵素で分解した。精製された重複ＰＣＴ生成物１０μｇを３６０単位のＳｉｆ Ｉ（１６単位当たりμｇＤＮＡ、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）、２０μＬ １０ｘ反応バッファ及び最終体積２００μＬになるように水と混合した。ｐＣｏｍｂ３Ｘ－ＳＳベクター２０μｇを１２０単位のＳｆｉ Ｉ（６単位当たりμｇＤＮＡ）、２０μＬ １０ｘ反応バッファ溶液及び最終体積２００μＬになるように水と混合した。混合物を８時間５０℃で分解させた。その後、ｓｃＦｖ断片（約７００ｂｐ）とベクター（約３４００ｂｐ）を含む分解された生成物を１％アガロースゲルにローディングし、Ｇｅｌ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ ＱＩＡＧＥＮ（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて精製した。
Ｓｆｉ Ｉ－制限されたｐＣｏｍｂ３Ｘベクター１４００ｎｇ及び分解されたｓｃＦｖ断片７００ｎｇを５ｘリガーゼバッファ、１０μＬ Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）及び最終体積２００μＬになるように水と混合した。混合物を１６時間１６℃でインキュベーションしてライゲーションを行った。
エタノールで沈殿後、ＤＮＡペレットを水１５μＬに溶解させた。ライブラリーを生成するために、バイブレーター遺伝子（遺伝子パルサー：Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて電気穿孔によってライゲーションサンプルをイーコリ菌株ＥＲ２７３８（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ，Ｈｉｔｃｈｉｎ，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｎｅ，ＳＧ４ＯＴＹ，Ｅｎｇｌａｎｄ，ＵＫ）に形質転換した。細胞を５ｍｌ ＳｕｐｅｒＢｒｏｔｈ（ＳＢ）培地で混合し、３７℃で１時間２５０ｒｐｍで撹拌しながらインキュベーションした。次に、１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン３μＬをＳＢ培地１００ｍＬに添加した。ライブラリーサイズを決定するために、培養サンプル０．１μＬ、１μＬ及び１０μＬを、５０μｇ／ｍＬカナマイシンを含有するＬｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）寒天プレート上に塗り付けた。１時間撹拌後、１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン４．５μＬをＬＢ培養物に添加し、１時間さらに撹拌した。次に、ＶＣＭ１３ヘルパーファージ水溶液２ｍＬ（＞１０１１ｃｆｕ／ｍｌ）を、１００ｍｇ／ｍＬカナマイシン９２．５μＬを含有する予熱されたＬＢ（１８３ｍＬ）と共にＬＢ培地に添加した。この混合物を３７℃で２５０ｒｐｍで２時間さらに撹拌した。次に、カナマイシン２８０μＬ（５０ｍｇ／ｍＬ）を培養物に添加し、３７℃で一晩撹拌した。翌日、バクテリアペレットを高速遠心分離機を用いて３，０００ｇ、４℃で遠心分離した。その後、バクテリアペレットを用いてファージミドＤＮＡを抽出し、上清液を滅菌遠心分離瓶に移した。次に、上清液にポリエチレングリコール－８０００（ＰＥＧ－８０００，Ｓｉｇｍａ）８ｇと塩化ナトリウム（ＮａＣｌ，Ｍｅｒｃｋ）６ｇを添加し、氷で３０分間維持させた。その後、上清液を１５，０００ｇ、４℃で１５分遠心分離した。次に、上清液を捨て、ファージペレット（１％ ＢＳＡを含有するＴｒｉｓ－再現）を緩衝食塩水（ＴＢＳ）に懸濁させた。
実施例３：固定された抗原に対するライブラリーパンニング（バイオパンニング）
磁気ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２７０エポキシ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてバイオパンニングを行った。室温で２０時間ビーズとタンパク質を共に回転させながら撹拌し、概略１×１０７ビーズを組換えＦＡＭ１９Ａ５タンパク質５μｇでコーティングした。コーティングが完了すると、ビーズをフォスフェート緩衝食塩水（ＰＢＳ）で４回洗浄し、室温で３％ ＢＳＡを含有するＰＢＳで１時間遮断させた。次に、コーティングされたビーズを前述のファージディスプレイされたｓｃＦｖと共に室温で２時間培養した。抗原コーティングされたビーズに結合されていないファージを除去するために、ビーズを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳで洗浄した。次に、結合されたファージは０．１Ｍグリシン／塩酸（０．１Ｍグリシン－ＨＣｌ、ｐＨ２．２）５０μＬで溶出し、塩化水素を持つ２Ｍ Ｔｒｉｓ（ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ９．１）３μＬで中和させた。このファージ－含有上清液を用いて大腸菌ＥＲ２７３８細胞を感染させ、ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージを用いて一晩増幅させて救出した。また、５０μｇ／ｍＬカナマイシンを含有するＬＢ寒天プレート上に、ファージ－感染された培養物をブロッティングすることによって、ファージ－感染された培養物からファージ力価による投入（インプット）及び生成（アウトプット）を決定した。翌日、ＰＥＧ－８０００及びＮａＣｌを用いてファージを沈殿させ、次いでバイオパンニングに使用した。バイオパンニングは、上記過程を反復することによって最大計５回行われた。各増幅ごとにファージをスクリーニングし、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に対する高い親和性に対して選択した。
実施例４：ファージＥＬＩＳＡによるクローンの選択
バイオパンニングから選択されたクローンを分析するために、ファージディスプレイされたｓｃＦｖから個別クローンを無作為に選択し、ＥＬＩＳＡを用いてクローンがＦＡＭ１９Ａ５組換えタンパク質に結合するか否か確認した。ＦＡＭ１９Ａ５組換えタンパク質を０．１Ｍ ＮａＨＣ０３バッファに希釈し、１００ｎｇ／ウェルタンパク質を用いて、１６時間４℃で９６－ウェルマイクロタイタープレートをコーティングした。翌日、プレートを１時間３７℃で３％ ＢＳＡ／ＰＢＳで遮断した。次に、ファージ上清液を６％ ＢＳＡ／ＰＢＳと混合し、３７℃で２時間培養した。次に、上清液を含有するプレートを０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳで洗浄した。ＨＲＰ－コンジュゲートされたＭ１３抗体（ａ－Ｍ１３－ＨＲＰ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）を１／５０００で希釈した。希釈された抗体５０μＬをプレートに添加し、３７℃で１時間インキュベーションした。インキュベーション及び洗浄後、色展開のためにプレートに０．０５Ｍクエン酸バッファ溶液、１μｇ／ｍＬ ２，２’－アジノー－ビス（３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸）（ＡＢＴＳ，Ａｍｒｅｓｃｏ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ，ＵＳＡ）及び０．１％Ｈ２０２を添加した。各ウェルの吸光度を４０５ｎｍで測定した。
図１Ａ～図１Ｃに示すように、ＦＡＭ１９Ａ５組換えタンパク質に結合し、高い吸光度を示す免疫化されたニワトリから生成された２４個のクローンを分析した。これら２４個のクローンから独特の配列を持つ１３個のｓｃＦｖクローンを得た。免疫化されたウサギから生成されたクローンの場合（データ不図示）、１７４個のクローンが初めて確認され、これらの中で１６４個のクローンが配列化された。これらのクローンから最終的に２２個の独特のｓｃＦｖ配列を得た。
実施例５：抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩＧＧ２／４抗体の生成
１．哺乳類発現ベクターに抗ＦＡＭ１９Ａ５ｓｃＦｖのサブクローニング
ＦＡＭ１９Ａ５ ｓｃＦｖ遺伝子配列においてヒトＣκ遺伝子を軽鎖可変ドメインに連結し、ＣＨ２，ＣＨ２及びＣＨ３遺伝子のヒト免疫グロブリンイソタイプＩｇＧ２／４を重鎖可変領域に連結した。制限部位（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ，ＵＳＡ）を添加することによって各軽鎖と各重鎖を持つ抗体を合成した。合成された遺伝子を、クローニングを促進するように変形された制限部位を持つ哺乳類細胞発現ベクターに挿入した。まず、軽鎖遺伝子を、Ｈｉｎｄ ＩＩＩ及びＸｂａ Ｉ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，ＵＫ）制限酵素を用いてベクターに挿入した後、Ｎｈｅｌ及びＢａｍＨＩ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，ＵＫ）制限酵素を用いて重鎖遺伝子をベクターに添加した（図２）。
２．抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の精製
抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩｇＧ２／４抗体を発現し精製するために、哺乳類細胞トランスフェクション及び過発現注入システムを使用した。哺乳類発現ベクター２μｇ／ｍＬとポリエチレンイミン（ＰＥＩ，Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）４μｇを、細胞培養物体積の１／１０に該当する１５０ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ，Ｍｅｒｃｋ）において混合した。混合物を室温で１５分放置した。混合物をＨＥＫ２９３Ｆ細胞（２ｘ１０６細胞／ｍｌ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に添加し、次いで７％ＣＯ２及び３７℃で１００Ｕ／ｍＬペニシリン及びストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有するＦＲＥＥＳＴＹＬＥ（商標）２９３発現培養培地で６日間１３５ｒｐｍの撹拌条件下にてインキュベーションした。細胞培養上清液から発現した抗ＦＡＭ１９Ａ５ ＩｇＧ２／４抗体を精製するために、タンパク質Ａビーズ（ＲｅｐｌｉＧｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）親和性ゲルクロマトグラフィーを使用した。タンパク質Ａクロマトグラフィー精製された抗体に、４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓ勾配ゲル電気泳動を行った。タンパク質のサイズ及び収率をＣｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ染色によって確認した（図３）。
実施例６：抗ＦＡＭ１９Ａ５－ＩＧＧ２／４抗体特異性の検証
タンパク質のＦＡＭ１９Ａファミリーを暗号化する遺伝子で安定的にトランスフェクションされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、２％ＳＤＳ、１０％グリセロール、１００ｍＭメルカプトエタノール及びブロモフェノールブルーを含有するバッファで細胞溶解させた。全細胞抽出物をＳＤＳ－ポリアクリルアミド（ＰＡＧＥ）ゲルで分解させ、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｔｒａｎｓ－Ｂｌｏｔ電気泳動装置（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）のニトロセルロースブロッティング膜に伝達した。ブロットを０．３％Ｔｗｅｅｎ２０及び５％脱脂乳を含有するＴｒｉｓ－緩衝食塩水で遮断し、室温で３時間抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体と共にインキュベーションした。次に、これらをＴＢＳ／０．３％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。次に、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）に結合された２次抗体と共にインキュベーションし、抗体結合を検出した。ブロットを３回洗浄し、ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＥＣＬ試薬（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍ－ｓｈｉｒｅ，ＵＫ）の適用後、０．５分又は１０分間ｘ－線フィルムに露出させ、免疫反応性バンドを視角化した。その結果、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５がＦｌａｇ－タグとコンジュゲートされたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質には特異的に結合するが、他のＦＡＭ１９Ａサブファミリータンパク質には結合しないことを確認した（図５Ａ）。免疫細胞化学分析の場合、ＦＡＭ１９Ａ－ファミリータンパク質を発現するＨＥＫ２９３細胞を４％ＰＦＡで固定した。次に、細胞を室温で３０分間ＰＢＳで３％ＢＳＡ及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で遮断した。１次抗体（抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５）を４℃で一晩適用した。ＰＢＳで数回洗浄後、適切な２次抗体を３０分間適用した。次に、細胞を洗浄し、蛍光顕微鏡や共焦点顕微鏡に装着して観察した（ＬＳＭ７００；Ｚｅｉｓｓ，Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。核をＨｏｅｃｈｓｔ ３３３４２で染色した。ＨＥＫ２９３Ｔで発現したＨｉｓタグＦＡＭ１９Ａ５の免疫細胞化学分析は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５がＨｉｓタグとコンジュゲートされたＦＡＭ１９Ａ５タンパク質に特異的に結合することを示した（図５Ｂ、左パネル）。
実施例７：ＦＡＭ１９Ａ５エピトープ断片Ｆ１－Ｆ６を用いたエピトープマッピング分析
ヒトＦＡＭ１９Ａ５タンパク質の重複ペプチド断片（Ｆ１－Ｆ６、図９参照）を合成し、ＢＳＡにコンジュゲートした。ウェスタンブロット分析又はＥＬＩＳＡ分析によって、ＢＳＡ－コンジュゲートされたペプチド断片Ｆ１－Ｆ６に対する異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合を確認した。ウェスタンブロット分析の場合、標準過程によってＢＳＡ－コンジュゲートされたＦＡＭ１９Ａ５断片Ｆ１－Ｆ６をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分離し、ニトロセルロース膜に伝達した。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（例えば、１－６５、２μｇ／ｍｌ、１－６５－ｓｃＦｖ－ウサギＦｃ－ＳＳＳ）と共に膜をインキュベーションし、セイヨウワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートされた適切な２次抗体（抗ウサギＩｇＧ（Ｆｃ特異的）－ＨＲＰ、１：４０００希釈）で抗原－抗体複合体を検出した。ＥＬＩＳＡ分析は次のプロトコルを使用した。ＦＡＭ１９Ａ５断片Ｆ１－Ｆ６（５０ｍＭカーボネートバッファ（Ｂｉｏｓｅｓａｎｇ）において１μｇ／ｍＬに希釈又は高濃度分析のために２０μｇ／ｍＬに希釈）を用いて４℃で一晩９６－ウェル免疫プレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（１００μＬ／ウェル）のウェルをコーティングした後、１ｘ ＰＢＳで２回洗浄した。次に、プレートを室温で１時間遮断バッファ（１００μＬ／ウェル）で遮断した。１時間インキュベーションする間、関連した抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を希釈バッファに１μｇ／ｍＬ（又は高濃度分析のためには２０μｇ／ｍＬ）に希釈した。プレートを洗浄した後（１ｘ ＰＢＳを使用して２ｘ）、希釈された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を適切なウェルに添加し、プレートを１時間室温でインキュベーションした。次に、プレートを洗浄バッファを使用して計５回洗浄した。次に、ＯＤＰ基質（９ｍＬ滅菌脱イオン水と１ｍＬ １０ｘ安定したＰｅｒｏｘｉｄｅ Ｓｔａｂｌｅバッファ（Ｔｈｅｒｏｍｏ）に１個のＯＤＰ錠剤（Ｏ－フェニレンジアミン二塩酸塩、Ｔｈｅｒｍｏ）を溶解して作製）を各ウェルに添加し、１０分間色変化反応がおきるように置いた。ウェルに２Ｎ Ｈ２ＳＯ４（Ｄａｅｊｕｎｇ）１００μＬを添加して反応を中断させた。９６－ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて４９２ｎｍで各ウェルの吸光度を検出した。
図１１及び図１２Ａに示すように、ウェスタンブロットとＥＬＩＳＡ分析によって測定されたところ、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５は断片Ｆ５に強く結合した。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体Ｐ２－Ｃ１２もまた、エピトープ断片Ｆ５には強く結合したが、他の断片（Ｆ１～Ｆ４及びＦ６）には有意に結合しなかった（図１２Ｂ参照）。一方、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体３－２は断片Ｆ５に結合しなかった。その代わりに、３－２抗体はエピトープ断片Ｆ２に強く結合し、他の断片には最小限で結合した（図１２Ａ参照）。この結果は、抗ＦＡＭ１９Ａ５１－２８抗体に対しても同一だった（データ不図示）。しかし、他の抗体とは違い、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体２－１３はいずれのエピトープ断片にも結合しないことが確認された（図１２Ａ参照）。
次に、１－６５及びＰ２－Ｃ１２抗体が結合するエピトープ断片Ｆ５内の特定のアミノ酸残基を確認するために、Ｆ５断片の異なるアミノ酸残基を、次の表９に表す通り、アラニンに置換した。突然変異された残基はボールド体及び下線で表示した。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性は、前述のとおり、ＥＬＩＳＡ分析を用いて測定した。
Figure 0007045724000009
二重下線：システインがペプチド合成過程において反応性であるので、反応性を減少させるためにセリンに置換された。セリンの構造がシステインに最も近いことからセリンに置換された。このような置換は二重下線で表示した。
図１３Ａに示すように、１－６５抗体は、類似の親和性で突然変異ペプチド＃１、５、６、７に結合し得た。しかし、断片Ｆ５のアミノ酸残基Ｄ１３、Ｌ１４、Ｉ１６及びＲ１８がアラニンに突然変異された時（上記表９でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５に基づいてナンバリング）、１－６５抗体はこのペプチド断片にそれ以上結合できず、これは、それらのアミノ酸残基が１－６５抗体の重要な結合部位であったことを示唆する。一方、Ｐ２－Ｃ１２抗体は、突然変異ペプチド＃２、３、４、５、７には高い結合性を示したが、突然変異ペプチド＃１、６、８には結合しなかった（図１３Ｂ参照）。表９（上記）に示したとおり、突然変異ペプチド＃１、６、８は、アミノ酸残基Ｇ１１、Ｅ１０及びＲ１８にアラニン置換を含み（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２５に基づいてナンバリング）、これは、それらのアミノ酸残基がＰ２－Ｃ１２抗体において重要な結合部位であることを示唆する。
実施例８：ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ１－Ｍ８を用いたエピトープマッピング分析
本明細書に開示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合エピトープをさらに特性化するために、異なるＦＡＭ１９ファミリーメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１－５）に対するアミノ酸配列を、図１４に示すとおりに整列した。この整列に基づいて、ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のアミノ酸配列がＦＡＭ１９Ａ５ファミリーの他のメンバー（すなわち、ＦＡＭ１９Ａ１－４）と最も有意に差異を有する８個の領域が確認された（Ｍ１～Ｍ８）。これらの領域のアミノ酸配列を、ＦＡＭ１９Ａ１－４タンパク質に対する相応する領域のコンセンサス配列に置換した（表１０参照－突然変異されたアミノ酸残基はボールド体及び下線で表示する。）。
突然変異ＦＡＭ１９Ａ５発現ファージを次のように作製した。ファージ培養培地を作製するために、２Ｍグルコース（Ｄ－（＋）－グルコース、Ｓｉｇｍａ）５５．６ｍＬ、１Ｍ ＭｇＣｌ２（Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ，Ｊｕｎｓｅｉ）５ｍＬ、３４ｍｇ／ｍＬクロラムフェニコール（Ｓｉｇｍａ）１ｍＬを２ｘ ＹＴ培地に添加した。モノファージＥＬＩＳＡによって得られたコロニーを選択し、作製された培地（２ｘ ＹＴ－ＧＭＣ）５ｍＬに入れ、シェイキングインキュベーター（ＶＳ－８４８０，Ｖｉｓｉｏｎ）で３７℃で１６時間培養した。各培養物１００μＬを個別的に１０ｍＬ ２ｘ ＹＴ－ＧＭＣに移し、インキュベーターにおいて３７℃でＯ．Ｄ．６００ｎｍにおける検出値が０．５に至るまで培養した。検出値がＯ．Ｄ．６００ｎｍで０．５に到達すると、サンプルとして各培養物５ｍＬを取って感染させた。サンプル作製後、Ｍ１ヘルパーファージ５０μＬを各サンプルに添加した後、３０分間シェイキング無しで、そして次の３０分間シェイキングしながら３７℃でインキュベーションした。個別の培養物をＭｉｃｒｏ遠心分離機（Ｍｉｃｒｏｌ２，Ｈａｎｉｌ）を用いて３，８５０ｒｐｍで１５分間遠心分離した。遠心分離された培養物の上清液を除去して別に保管し、１Ｍ ＩＰＴＧ（ＡＧ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）１ｍＬ、１Ｍ ＭｇＣｌ２ ５ｍＬ、７０μｇ／μＬカナマイシン（Ｂｉｏｐｕｒｅ）１ｍＬ及びクロラムフェニコール１ｍＬを含有する２ｘ ＹＴ培地５ｍＬに取り替えた。得られたペレットを新しく添加された培地に完全に分散させた後、撹拌しながら３０℃で１６時間インキュベーションした。
Figure 0007045724000010
図１５Ａ及び実施例７に記載されたデータを参照すると、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５は、ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ６、Ｍ７及びＭ８との結合に失敗した。Ｍ６及びＭ７突然変異は、ＦＡＭ１９Ａ５のエピトープ断片Ｆ５内の領域に相応する部位にアミノ酸突然変異を含む（上記の表１０参照）。
追加の抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体に対するエピトープ分析は、図１５Ｂ及び図１５Ｃに提供される。抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１３Ｂ４、１３Ｆ７及び１５Ａ９はいずれも、ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ８との結合に失敗し、突然変異Ｍ７に対しては減少した結合を有した。また、１３Ｂ４抗体はＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ６との結合に失敗した（図１５Ｂ参照）。同様に、抗体Ｐ１－Ａ０８、Ｐ１－Ｆ０２、Ｐ２－Ａ０１、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ０７及びＰ２－Ｆ１１はいずれも、ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ８との結合に失敗し、大部分の抗体はまた、突然変異Ｍ７に対して減少した結合を有したり結合しなかった。Ｐ２－Ｃ１２抗体は、それらの抗体と違い、ＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ８に強く結合した。その代わりに、Ｐ２－Ｃ１２抗体はＦＡＭ１９Ａ５突然変異Ｍ６との結合に失敗したが、この結果は、エピトープ断片Ｆ５がＰ２－Ｃ１２抗体の重要なＦＡＭ１９Ａ５結合部位を含むということを証明した先のデータと一致する。
実施例９：相互競合分析
次に、下記の通り、２－部位サンドウィッチＥＬＩＳＡを用いて、類似の結合エピトープを持つ異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が互いに競合するか否かを評価した（図１６Ａ参照）。
まず、インキュベーションされた抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で１ｘ ＰＢＳに希釈した。希釈された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（１ｘ ＰＢＳ中に１０μｇ／ｍ、“キャプチャー抗体”）を使用して概略１時間３７℃で９６－ウェルプレート（１００μＬ／ウェル）をコーティングした。インキュベーション後、プレートを洗浄バッファ（０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ；０．０１％ＰＢＳＴともいう。）で計５回洗浄し、遮断溶液（５％ＢＳＡ／ＰＢＳ；５％ＰＢＳＡともいう、２５０μＬ／ウェル）で３７℃で１時間遮断した後、再び洗浄した。次に、１００μｇ／ｍＬ ＦＡＭ１９Ａ５抗原（５％ＢＳＡ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳに希釈；５％ＰＢＳＡＴともいう；“希釈バッファ”）を各ウェルに添加し、９６－ウェルプレートを３７℃で２時間インキュベーションした。インキュベーション後、プレートを０．０１％ＰＢＳＴを使用して計５回洗浄した。最後の洗浄後、インキュベーションされたビオチン化抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体（“検出抗体”、５％ＰＢＳＡＴに１μｇ／ｍＬに希釈）を関連したウェル（１００μＬ体積）に添加し、プレートを３７℃で１時間さらにインキュベーションした。その後、プレートを０．０１％ＰＢＳＴで再び洗浄した（計５回洗浄）。次に、１０μＬの希釈された（５％ＰＢＳＡＴに１／２０００）ストレプトアビジン－ＨＲＰ（１ｍｇ／ｍＬ，Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）をウェルに添加し、プレートを室温で３０分間インキュベーションした。次に、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質１００μＬで処理した（次に、３，３プレートを洗浄し、１００μＬで処理した、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。室温で３０分さらにインキュベーション後、ＴＭＢ基質を添加して色変化反応を誘導した。反応を硫酸（２Ｎ Ｈ２ＳＯ４）５０μＬを使用して中断させ、９６－ウェルマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて６２０ｎｍ基準波長で４５０ｎｍにおける色変化程度を検出した。
図１６Ｂに示すように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ１１及び１３Ｂ４はいずれも相互競合した。この結果は、先のエピトープ分析と一致し、これらの抗体が類似のエピトープ（すなわち、ＥＰ６、ＥＰ７、及び／又はＥＰ８）でＦＡＭ１９Ａ５に結合するということを示した（図１５Ａ～図１５Ｃ参照）。
実施例１０：結合親和性分析
ＦＡＭ１９Ａ５に対する異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性に差異があるか否かを決定するために、ＯＣＴＥＴ（登録商標）試験とＥＬＩＳＡ分析を用いた。ＯＣＴＥＴ（登録商標）試験には、次のプロトコルを使用した。Ｏｃｔｅｔ ＱＫ３でＮｉ－ＮＴＡバイオセンサーをＵＰＬＣ等級水で水和させた。ＦＡＭ１９Ａ５タンパク質のＨｉｓ－タグをＮｉ－ＮＴＡバイオセンサー上に固定した（２ｎＭのレベルで）。インキュベーションした抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を３００ｎＭ、１００ｎＭ、３３ｎＭ、１１ｎＭ、３．３ｎＭ、１．１ｎＭ及び０ｎＭの濃度で希釈した。バイオセンサー上に固定されたＦＡＭ１９Ａ５に対する異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合動力学を測定した。このデータをＤａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン９．０）プログラムを用いて分析した。
図１７Ａ～図１７Ｄに示すように、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５及び１３Ｆ７は類似の結合親和性を有し（それぞれ、Ｋｄ＝０．２３ｎＭ及び０．２５ｎＭ）、抗体１３Ｂ４（Ｋｄ＝３．６ｎＭ）及び１５Ａ９（Ｋｄ＝５．９５ｎＭ）と比較して、より強くＦＡＭ１９Ａ５に結合した。ＥＬＩＳＡによって測定された異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の結合親和性が、図１８Ａ及び図１８Ｂに提示されている。
実施例１１：脳傷害動物モデルにおけるＦＡＭ１９Ａ５抗体の使用
本明細書に提示された抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体の生体内機能を評価するために、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）マウスモデルを使用した。Ｃ５７ＢＬ／６成体雄マウス（８～９週齢）をソジウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔した。１分間頭蓋冠上に予冷された鉄棒を置き、極低温ＴＢＩを誘導した。次に、マウスの皮膚を縫合し、正常マウスと同じ方式で収容しておいた（Ｍｏｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ２２：３０４－３０８（２０１１）参照）。ＴＢＩ誘導後約第１日に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に希釈された異なる抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体を様々な濃度（０．１、０．３、１、３、５、１０又は１００μｇ／マウス）で動物に静脈内投与した。正常ヒト対照群免疫グロブリン（ＨＣＩ）を対照群とした。
次に、ＴＢＩ誘導後第５日（ＴＢＩ５Ｄ）に、ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を潅流させて動物を殺し、脳組織を回収した。回収した脳組織を２４時間４％ＰＦＡ溶液にさらに固定させた。次に、脳組織を３０％スクロースで凍結保護し、クライオスタットで連続して切片化し（４０μｍ）、使用するまで－２０℃で５０％グリセロール／５０％ＰＢＳに保管した。
神経膠症に関連した反応性星状細胞を染色するために（ネスチン陽性及びＧＦＡＰ発現）、脳組織切片をＰＢＳ中の３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で３０分間遮断した。次に、１次抗体を４℃で一晩、切片と共にインキュベーションした。この研究に使用された１次抗体は、マウス抗ネスチン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）及びウサギ抗ＧＦＡＰ（Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ）であった。ＰＢＳで数回洗浄後、適切な２次抗体を３０分間適用した。Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）で核を標識した。次に、切片を洗浄し、蛍光又は共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ，Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に装着して観察した。
効果を定量するために、各イメージにおいてＧＦＡＰ－陰性領域のＲＯＩ（関心領域）をまず特定し、次いで、相応するＲＯＩの領域（μｍ２，Ａ）をＬＡＳ ＡＦライトソフトウェア（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍ ＣＭＳ ＧｍｂＨ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて計算した。また、半影と接している傷害中心の境界線の外側長（μｍ、，Ｂ）を同じソフトウェアで測定した。Ａ／Ｂの結果は、病巣中心から平均距離（Ａ／Ｂ，μｍ）を表す。
図６に示すように、対照群ＨＣＩ抗体と違い、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５は、外傷性脳傷害後半影領域において反応性神経膠症の開始を顕著に減少、逆転及び／又は予防しており、これは、病巣境界（点線で表示）近くでＧＦＡＰ－陽性染色が少ないことから証明される。類似の結果が抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１３Ｂ４、１３Ｆ７、１５Ａ９、Ｐ２－Ａ０３、Ｐ２－Ｆ１１及びＰ１－Ａ０３でも観察された（図１９Ａ～図１９Ｅ参照）。そして、図７に示すように、傷害中心及び半影におけるＧＦＡＰ及びＮｅｕＮの免疫染色は、抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体がまた、損傷された領域を取り囲む半影領域においてニューロンの生存を促進できることを示す。
実施例１２：脊髄傷害の治療のための抗ＦＡＭ１９Ａ５の効能
抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体が損傷された動物の機能的運動活性を改善できるか否かを試験するために、脊髄傷害（ＳＣＩ）動物モデルを利用した。成体雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット（ＤａｅＨａｎ ＢｉｏＬｉｎｋ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｋｏｒｅａ）を抱水クロラール（５００ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、８回又は１０回胸髄を露出させた。ヒト脊髄状態をシミュレーションするために、傷害強度を数値で計算するようにデザインされたＮＹＵインパクタ（Ｒｏｕｔｅｓ，Ｓｃｉｔｅｃｋ Ｋｏｒｅａ Ｉｎｃ．）を利用した。１０ｇ錘を２５ｍｍ高さで胸側９番脊髄に落とし、硬膜損傷無しでラミネクトミによって露出させた。ＮＹＵインパクタから計算されたデータは、傷害が誤差範囲内で均一に伝達されたことを確認し、傷を縫合した。傷部位にポビドンヨードを塗布後、ケージ当たり２匹のラットを収容し、膀胱を７週間一日３回マッサージして排尿を促進させた。次に、各動物は、次の抗体のいずれか一つを静脈内経路で投与された：（ｉ）抗ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５（６０μｇ）、（ii）抗ＦＡＭ１９Ａ５多クローン性Ａｂ（６０μｇ）又は（iii）ＰＢＳ中の正常ラットＩｇＧ（６０μｇ）。ＳＣＩ動物の運同機能をＢＢＢ運動能点数を用いて評価した。ＢＢＢ点数は、後足の動きがない場合の０点から正常動きに対する２１点までの範囲である。動物は、開放空間で自由に徘徊するように置き、２人のブラインド観察者によって観察された。ＳＣＩ後、第１日にＢＢＢ点数が１点を超える動物は研究から除外した。４０日間点数をモニターした。データは２本の後足点数の平均±ＳＥＭと定量し、編集され、グラフとして整理された。図８（左パネル）は、ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５の単一投与（Ｃ、円）が、ビークル治療されたラット（Ａ、ダイアモンド）と対比して、傷害後２１日（ｄｐｉ）から運動活性を有意に改善するということを示す。また、抗ＦＡＭ１９Ａ５多クローン性Ａｂ（Ｂ、四角）を用いた治療も、ビークル治療されたラット（Ａ、ダイアモンド）と対比して、３５ｄｐｉから運動活性を改善した。また、傾斜面試験を６週まで毎週行った（図８の右パネル）。傾斜面試験においてラットは調整可能な傾斜面に位置した。各動物が少なくとも５秒間安定した姿勢を維持した傾斜面の最対角度が、動物グループに対してブラインドされた２人の観察者によって評価され、平均角度が記録された。傾斜面試験も同様、対照群グループ（Ａ、ダイアモンド）と対比して、ＦＡＭ１９Ａ５抗体１－６５（Ｃ、円）又は抗ＦＡＭ１９Ａ５多クローン性Ａｂ（Ｂ、四角）で治療された動物の機能活性を改善したことを示した。
発明の概要及び要約の部分を除く発明の詳細な説明の部分は、特許請求の範囲を解釈するために用いられるよう意図される。発明の概要及び要約書の部分は、発明者によって考察されたような本開示内容の例示的な具体例を全部ではなく一つ以上提示でき、したがって、本開示内容及び添付の特許請求の範囲を何ら限定しない。
本開示内容は、明示された機能の実施及びそれらの関係を例示する機能的構成要素を用いて上に記載された。これらの機能的構成要素の境界は、説明の便宜のために本明細書で任意に限定された。他の境界は、明示された機能及びそれらの関係が適切に行われる範囲で限定され得る。
特定の具体例の前述した説明は、本開示内容の一般的な性質を十分に表すはずであり、他者は当業界における知識を適用することによって、本開示内容の一般的概念から逸脱することなく、過度な実験無しで、このような特定の具体例を容易に変形し及び／又は様々な適用に合わせて調整することができる。したがって、このような調整及び変形は、本明細書に提示された教示及び指針に基づいて開示された具体例の同等物の意味及び範囲内にあるように意図される。本明細書に提示された語句又は用語は制限ではなく説明の目的に使われるということを理解すべきであり、したがって、本明細書の用語及び語句は教示及び指針に照らして当業者によって解釈されなければならない。
本開示内容の範囲は、前述した例示的な具体例のいずれかによって限定されてはならず、添付の特許請求の範囲及びその同等物によって限定されるべきである。
本明細書に引用された全ての刊行物、特に、特許出願、インターネットサイト及び受託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド及びポリペプチド配列を含む。）は、各個別刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト又は寄託番号／データベース配列が本明細書に参考として含まれるという具体的且つ個別的に指摘されただけの程度で全ての趣旨のためにその全体が参考として本明細書に含まれる。

Claims (9)

  1. ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分であって、（１）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むことを特徴とする、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  2. ヒトＦＡＭ１９Ａ５に特異的に結合する抗体又はその抗原結合部分であって、
    重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
    （ｉ）重鎖ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９を含み；
    （ｉｉ）重鎖ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を含み；
    （ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を含み；
    （ｉｖ）軽鎖ＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含み；
    （ｖ）軽鎖ＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１を含み；及び
    （ｖｉ）軽鎖ＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２
    を含むことを特徴とする、分離された抗体又はその抗原結合部分。
  3. キメラ抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合部分。
  4. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列を含む重鎖、及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むことを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分。
  5. 次の特性の一つ以上を表すことを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合部分：
    （ａ）酵素結合免疫吸着分析（ＥＬＩＳＡ）によって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで可溶性ヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
    （ｂ）ＥＬＩＳＡによって測定された時、１０ｎＭ以下のＫＤで膜結合されたヒトＦＡＭ１９Ａ５に結合；
    （ｃ）反応性神経膠症の開始を減少、逆転、遅延及び／又は予防；
    （ｄ）反応性星状細胞の過度な増殖を抑制；
    （ｅ）ニューロカン及びニューロン－神経膠抗原２（ＮＧ２）を含むコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの発現を減少；
    （ｆ）ニューロンの核でｃ－ｆｏｓ及びｐＥＲＫの発現を増加；
    （ｇ）ニューロンの生存を促進；
    （ｈ）ニューロンでＧＡＰ４３の発現を増加；及び
    （ｉ）軸索突起の再成長を促進。
  6. 請求項１～５のいずれか一項の抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸。
  7. 請求項１～５のいずれか一項の抗体又はその抗原結合部分と担体を含む組成物。
  8. 疾患又は状態の治療療法で使用するための請求項１～５のいずれか一項の抗体又はその抗原結合部分。
  9. 対象の生理学的サンプルと接触させることにより、前記対象を診断する方法で使用するための請求項１～５のいずれか一項の抗体又はその抗原結合部分。
JP2019523016A 2016-11-07 2017-11-07 配列類似性を持つ抗ファミリー１９、メンバーａ５抗体及びその用途 Active JP7045724B2 (ja)

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