BR112020022669A2

BR112020022669A2 - distribuição de vírus adenoassociado (aav) de anticorpos anti-fam19a5

Info

Publication number: BR112020022669A2
Application number: BR112020022669-6A
Authority: BR
Inventors: Jong-mook Kim; Dong Sik Kim; Juwon SHIM; Soon-gu KWON
Original assignee: Neuracle Science Co., Ltd; Neuracle Genetics
Priority date: 2018-05-08
Filing date: 2019-05-08
Publication date: 2021-02-17
Also published as: CN112074605A; JP7410522B2; JP7226719B2; KR20200131335A; KR102585324B1; EP3790979A1; EP3790979A4; KR20230117641A; CA3098807A1; WO2019215644A1; EA202092457A1; AU2019265855A1; US20210388382A1; JP2022125088A; JP2021520842A

Abstract

A presente divulgação fornece vetores de vírus adenoassociados (AAV) e usos dos mesmos. Em certas modalidades, os vetores AAV compreendem um ácido nucleico que codifica um antagonista contra uma família com similaridade de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5), por exemplo, anticorpo anti-FAM19A5, por exemplo, scFv anti-FAM19A5.

Description

DISTRIBUIÇÃO DE VÍRUS ADENOASSOCIADO (AAV) DE ANTICORPOS ANTI-FAM19A5

REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS ENVIADA ELETRONICAMENTE

[001] O conteúdo da listagem de sequências enviada eletronicamente em arquivo de texto ASCII (Nome: 3763_010PC01_SeqListing_ST25.txt; Tamanho:

261.643 bytes; e Data de criação: 8 de maio de 2019) depositado com o pedido é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

CAMPO DA DIVULGAÇÃO

[002] A presente divulgação se refere a vetores de vírus adenoassociado (AAV) recombinantes e usos dos mesmos. Mais especificamente, a presente divulgação se refere a vetores AAV compreendendo um ácido nucleico que codifica um antagonista contra uma família com semelhança de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5). Em certos aspectos, o antagonista FAM19A5 é um fragmento variável de cadeia simples direcionado a uma proteína FAM19A5.

FUNDAMENTOS DA DIVULGAÇÃO

[003] FAM19A5 é um membro da subfamília TAFA de proteínas que é composta por cinco pequenas proteínas altamente homólogas. Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004). Essas proteínas contêm resíduos conservados de cisteína em posições fixas e estão relacionadas à proteína inflamatória 1-alfa dos macrófagos (MIP-1-alfa), um membro da família das quimiocinas CC. Como muitas das outras proteínas TAFA, FAM19A5 é predominantemente expresso em regiões específicas do cérebro e da medula espinhal. Acredita-se que ele desempenhe um papel importante não apenas no desenvolvimento, diferenciação e formação de um sistema nervoso central completo, mas também na patogênese de muitas doenças associadas ao sistema nervoso central. Consequentemente, a administração in vivo de um anticorpo anti-FAM19A5 demonstrou melhorar os sintomas associados a danos ou doenças do sistema nervoso central. Patente U.S. 9.579.398.

[004] Anticorpos terapêuticos têm sido usados com sucesso para tratar várias doenças. Ecker D.M., et al., MAbs 7: 9-14 (2015). No entanto, apesar de sua eficácia, existem limitações conhecidas para anticorpos, que limitam seu uso terapêutico generalizado. Por exemplo, muitos anticorpos foram descritos como tendo farmacocinética e acessibilidade ao tecido inadequadas, bem como interações prejudicadas com o sistema imunológico. Chames P., et al., Br J Pharmacol 157(2): 220-223 (2009). Além disso, os anticorpos frequentemente precisam ser administrados em grandes quantidades para atingir a eficácia clínica, resultando em altos custos de fabricação. Consequentemente, existe uma necessidade de um método alternativo, que seja eficaz e econômico, para distribuir anticorpos terapêuticos, por exemplo, anticorpos anti-FAM19A5, a um sujeito para tratar doenças.

BREVE SUMÁRIO DA DIVULGAÇÃO

[005] A presente divulgação fornece um vetor de vírus adenoassociado (AAV) que compreende um ácido nucleico que codifica um antagonista contra uma família com semelhança de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5). Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende ainda um íntron, um peptídeo sinal e/ou uma ou mais repetições terminais invertidas de vírus adenoassociado (ITRs).

[006] Em algumas modalidades, o antagonista FAM19A5 é um anticorpo anti- FAM19A5. Por conseguinte, em algumas modalidades, o vetor AAV compreende um ácido nucleico que codifica um anticorpo anti-FAM19A5. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um Fab, um Fab', um F(ab')2, um Fv ou um Fv de cadeia simples (scFv). Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 é um scFv.

[007] Em algumas modalidades, o vetor AAV compreende um ácido nucleico que foi otimizado por códon. Em algumas modalidades, o ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206 ou SEQ ID NO: 301. Em algumas modalidades, o scFv compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 256.

[008] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 exibe uma propriedade selecionada de: (a) se liga a FAM19A5 humano solúvel com um KD de 10 nM ou menos conforme medido por ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA); (b) se liga a FAM19A5 humano ligado à membrana com um KD de 10 nM ou menos conforme medido por ELISA; ou (c) ambos (a) e (b).

[009] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compete de forma cruzada para a ligação a um epítopo FAM19A5 humano com um anticorpo de referência compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, (i) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 18, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 19, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 30, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 31; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 15, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 27, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO:

28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 11, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 12, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 13, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 23, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 24, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 25; ou (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 222, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 225 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 224.

[010] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga ao mesmo epítopo FAM19A5 como um anticorpo de referência compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, (i) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 18, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 19 , a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 30 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 31; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 15, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 27, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 11, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 12, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 13, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 23, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 24, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 25; ou (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 222, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 225 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 224.

[011] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a pelo menos um epítopo FAM19A5, que é SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 9. Em outras modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga apenas a um epítopo FAM19A5, que é SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 9. Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga ainda a um epítopo FAM19A5 adicional. Em algumas modalidades, o epítopo FAM19A5 adicional é selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 , e qualquer combinação dos mesmos.

[012] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3, da cadeia leve, em que a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, a CDR1 da cadeia pesada do anticorpo anti-FAM19A5 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 212. Em algumas modalidades, a CDR2 da cadeia pesada do anticorpo anti-FAM19A5 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 213. Em algumas modalidades, a CDR1 da cadeia leve do anticorpo anti-FAM19A5 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 23 ou SEQ ID NO: 222. Em algumas modalidades, a CDR2 da cadeia leve do anticorpo anti-FAM19A5 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 225. Em determinadas modalidades, a CDR3 da cadeia leve do anticorpo anti-FAM19A5 compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 25 ou SEQ ID NO: 224.

[013] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3, da cadeia leve em que (i) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreende SEQ ID NOs: 17, 18 e 19, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreende SEQ ID NOs: 29, 30 e 31, respectivamente; (ii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreendem as SEQ ID NOs: 14, 15 e 16, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreende as SEQ ID NOs: 26, 27 e 28, respectivamente; (iii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreende SEQ ID NOs: 11, 12 e 13, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreende SEQ ID NOs:

23, 24 e 25, respectivamente; ou (iv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreende SEQ ID NOs: 212, 213 e 16, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreende SEQ ID NOs: 222, 225 e 224, respectivamente.

[014] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 35, ou SEQ ID NO: 236 e/ou um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 39 ou SEQ ID NO: 245. Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 37 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 41. Em outras modalidades, o anticorpo anti- FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 36 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 40. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 35 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 39. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 236 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 245.

[015] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada e um domínio variável da cadeia leve, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 37, 36, 35 ou 236. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de

80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 41, 40, 39 ou 245. Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99%, ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 37, 36, 35 ou 236; e em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 41, 40, 39 ou 245.

[016] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 inibe a ligação de um anticorpo de referência ao FAM19A5 humano em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% , ou em 100%, conforme medido por um ensaio de inibição de ligação. Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 reduz a concentração da proteína FAM19A5 em um meio de cultura que compreende uma linhagem celular de astrócitos (por exemplo, C8-D1A) em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%, conforme medido por ELISA.

[017] Também é divulgado aqui um método de produção de uma partícula de vírus adenoassociado (AAV) recombinante, compreendendo (a) a cultura de uma célula hospedeira que foi transfectada com o vetor AAV divulgado neste documento para fornecer uma cultura de células, e (b) recuperar a partícula AAV recombinante de um sobrenadante da cultura de células.

[018] A presente divulgação também fornece um método para distribuir in vivo um antagonista contra uma proteína FAM19A5 a um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV aqui descrito.

[019] A presente divulgação fornece ainda um método de tratamento de uma doença ou condição em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV conforme divulgado neste documento.

[020] Também é divulgado neste documento um método de tratamento de uma dor neuropática em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV da presente divulgação. Em algumas modalidades, a dor neuropática é uma dor neuropática periférica.

[021] A presente divulgação fornece um método para aumentar um limiar ou latência para um estímulo externo em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV divulgado neste documento. Em algumas modalidades, o estímulo externo é um estímulo mecânico. Em outras modalidades, o estímulo externo é um estímulo térmico.

[022] Em algumas modalidades, o vetor AAV da presente divulgação é administrado por via intravenosa, oral, parenteral, intratecal, intracerebroventricular, pulmonar, intramuscular, subcutânea, intraperitoneal, intravítrea, epidural, subrretiniana ou intraventricular. Em algumas modalidades, o sujeito é um humano.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[023] A FIG. 1 fornece um mapa do construto pscAAV, que foi usado para gerar os construtos AAV scFv anti-FAM19A5 descritos nos Exemplos. Como mostrado na FIG. 1, o construto pscAAV compreende os seguintes elementos-chave: (i) beta globina humana sob um promotor CMV; (ii) transgene que codifica o scFv 3-2, 1-65 ou 2-13, e (iii) repetições terminais invertidas esquerda e direita (ITRs).

[024] As FIGs. 2A, 2B e 2C mostram o nível de expressão do scFv anti-

FAM19A5 após a transdução de células HEK293 com um dos seguintes construtos AAV: (i) scAAV8-CMV- 3-2-ScFv; (ii) scAAV9-CMV-3-2-ScFv; (iii) scAAV9-CMV-1-65- ScFv; ou (iv) scAAV9-2-13-ScFv. Na FIG. 2A, as células HEK293 foram transduzidas com scAAV8-CMV-3-2-ScFv em dois MOI diferentes: 5x104 (barra branca) ou 1x105 (barra preta). Os níveis de anticorpos foram medidos no dia 1, 4 e 8 pós-transdução. Na FIG. 2B, células HEK293 foram transduzidas com scAAV9-CMV-3-2-ScFv (barra branca: MOI = 1x105; barra preta = 2x105). Os níveis de anticorpos foram medidos em um único ponto de tempo, isto é, no dia 8 pós-transdução. Na FIG. 2C, células HEK293 foram transfectadas com scAAV9-CMV-1-65-ScFv (barra branca: MOI = 1x105; barra preta = 2x105) ou scAAV9-2-13-ScFv (barra branca com pontos: MOI = 1x105; barra preta com pontos = 2x105).

[025] As FIGs. 3A, 3B e 3C mostram a intensidade média de fluorescência (MFI) da ligação de FAM19A5-Fc humano a células U87MG na presença ou ausência de sobrenadante de células transduzidas com diferentes construtos de AAV anti- FAM19A5. A FIG. 3A mostra os dados para scAAV9-CMV-1-65-ScFv. O número "1" indica o controle (GFP) e o número "2" indica o scFv 1-65. A FIG. 3B mostra os dados para scAAV9-2-13-ScFv. O número "1" indica o controle (GFP) e o número "2" indica o 2-13 scFv. A FIG. 3C mostra os dados para scAAV9-CMV-3-2-ScFv. O número "1" indica o controle (PBS) e o número "2" indica o 3-2 scFv.

[026] As FIGs. 4A e 4B mostram o nível de proteína FAM19A5 humana em cultura de células C8-D1A após tratamento com sobrenadante de células transduzidas com diferentes construtos de AAV anti-FAM19A5. A FIG. 4A mostra uma comparação dos níveis de proteína FAM19A5 quando as células C8-D1A foram cultivadas com o sobrenadante de células transduzidas com scAAV8-CMV-3-2-ScFv ou PBS sozinho. A FIG. 4B mostra uma comparação dos níveis de FAM19A5 quando as células C8- D1A foram cultivadas com scAAV9-2-13-ScFv, scAAV9-CMV-1-65-ScFv ou o construto de controle (scAAV9-CMV-GFP). Nas FIGs. 4A e 4B, "Ingênua" indica células C8-D1A que não foram ativadas e, portanto, produziram proteína FAM19A5 mínima em cultura.

[027] A FIG. 5 mostra a expressão de anti-FAM19A5 (3-2) scFv no cérebro em uma semana (linha superior) e 2 semanas (linha inferior) após a administração intratecal de scAAV8-CMV-3-2-ScFv em camundongos C57BL/6. As imagens à esquerda são dos animais ingênuos (sem administração). As imagens à direita são de camundongos que receberam o construto AAV. A seta na imagem superior direita indica coloração positiva.

[028] As Figs. 6A e 6B mostram o efeito da administração de scAAV8-CMV- 3-2-ScFv na alodinia mecânica (FIG. 6A) e hiperalgesia térmica (FIG. 6B) após lesão do nervo periférico. Na FIG. 6A, o efeito sobre a alodinia mecânica é mostrado como a frequência em que os animais reagiram com dor à estimulação com um microfilamento de Von Frey. Na FIG. 6B, o efeito na hiperalgesia térmica é mostrado como latência de retirada da pata (quanto tempo os animais levaram para se afastar da fonte de calor). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

[029] As FIGs. 7A e 7B mostram o efeito da administração de scAAV9-CMV- 3-2-ScFv na alodinia mecânica (FIG. 7A) e hiperalgesia térmica (FIG. 7B) após lesão do nervo periférico. Na FIG. 7A, o efeito sobre a alodinia mecânica é mostrado como a frequência em que os animais reagiram com dor à estimulação com um microfilamento de Von Frey. Na FIG. 7B, o efeito na hiperalgesia térmica é mostrado como latência de retirada da pata (quanto tempo os animais levaram para se afastar da fonte de calor). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

[030] As FIGs. 8A e 8B mostram o efeito da administração de scAAV1-CMV- 3-2-ScFv na alodinia mecânica e hiperalgesia térmica, respectivamente. Na FIG. 8A, o efeito na alodinia mecânica é mostrado como a frequência em que os animais reagiram com dor à estimulação com um microfilamento de Von Frey (de 10 estímulos). Na FIG. 8B, o efeito na hiperalgesia térmica é mostrado como latência de retirada da pata (quanto tempo os animais levaram para se afastar da fonte de calor). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

[031] As FIGs. 9A e 9B mostram o efeito da administração de scAAV9-CMV- 2-13-ScFv na alodinia mecânica e hiperalgesia térmica, respectivamente. Na FIG. 9A, o efeito sobre a alodinia mecânica é mostrado como a frequência em que os animais reagiram com dor à estimulação com um microfilamento de Von Frey (de 10 estímulos). Na FIG. 9B, o efeito na hiperalgesia térmica é mostrado como latência de retirada da pata (quanto tempo os animais levaram para se afastar da fonte de calor). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

[032] As FIGs. 10A e 10B mostram o efeito da administração de scAAV9-CMV- 1-30-ScFv na alodinia mecânica e hiperalgesia térmica, respectivamente. Na FIG. 10A, o efeito sobre a alodinia mecânica é mostrado como a frequência em que os animais reagiram com dor à estimulação com um microfilamento de Von Frey (de 10 estímulos). Na FIG. 10B, o efeito na hiperalgesia térmica é mostrado como latência de retirada da pata (quanto tempo os animais levaram para se afastar da fonte de calor). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

[033] As FIGs. 11A, 11B e 11C fornecem uma comparação do efeito de diferentes construtos de AAV scFv anti-FAM19A5 sozinhos ou em combinação com outro agente terapêutico. Na FIG. 11A, os animais receberam um dos seguintes: (i) scAAV1-CMV-GFP (círculo aberto); (ii) scAAV1-CMV-3-2-ScFv (círculo fechado); (iii) scAAV9-CMV-mIL-10 (quadrado aberto); (iv) scAAV1-CMV-3-2-ScFv + scAAV9-CMV- mIL-10 (quadrado fechado). Na FIG. 11B, os animais receberam um dos seguintes: (i) scAAV9-CMV-GFP (círculo aberto); (ii) scAAV9-CMV-2-13-ScFv (círculo fechado); (iii) scAAV9-CMV-mIL-10 (quadrado aberto); (iv) scAAV9-CMV-2- 13-ScFv + scAAV9-

CMV-mIL-10 (quadrado fechado). Na FIG. 11C, os animais receberam um dos seguintes: (i) scAAV9-CMV-GFP (círculo aberto); (ii) scAAV9-CMV-1-30-ScFv (círculo fechado); (iii) scAAV9-CMV-mIL-10 (quadrado aberto); (iv) scAAV9-CMV-1-30-ScFv + scAAV9-CMV-mIL-10 (quadrado fechado). "*" indica significância estatística de p <0,05, em comparação ao grupo controle.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA DIVULGAÇÃO

[034] São divulgadas aqui composições, por exemplo, vetor de vírus adenoassociado (AAV), compreendendo um ácido nucleico que codifica um antagonista contra uma família com semelhança de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5). Também são fornecidos aqui métodos de uso de tais composições como terapia genética para o tratamento de uma doença ou distúrbio, por exemplo, dor neuropática.

[035] Para facilitar a compreensão da divulgação aqui fornecida, uma série de termos e frases são definidos. Definições adicionais são estabelecidas em toda a descrição detalhada. I. Definições

[036] Ao longo desta divulgação, o termo "um" ou "uma" entidade refere-se a uma ou mais dessas entidades; por exemplo, "um anticorpo" é entendido como representando um ou mais anticorpos. Como tal, os termos "um" (ou "uma"), "um ou mais" e "pelo menos um" podem ser aqui usados indistintamente.

[037] Além disso, "e/ou", quando utilizado neste documento, deve ser considerado como divulgação específica de cada um dos dois recursos ou componentes especificados, com ou sem o outro. Assim, o termo "e/ou", conforme usado em uma expressão como "A e/ou B" neste documento, pretende incluir "A e B", "A ou B", "A" (sozinho) e "B" (sozinho). Da mesma forma, o termo "e/ou" usado em uma expressão como "A, B e/ou C" deve abranger cada um dos seguintes aspectos: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B

(sozinho); e C (sozinho).

[038] Entende-se que sempre que aspectos são aqui descritos com a linguagem "compreendendo", também são fornecidos aspectos análogos descritos em termos de "consistindo em" e/ou "consistindo essencialmente em".

[039] A menos que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que o comumente entendido por um versado comum na técnica à qual esta divulgação está relacionada. Por exemplo, o Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei- Show, 2ª ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3ª ed., 1999, Academic Press; e o Dicionário Oxford de Bioquímica e Biologia Molecular, Revisado, 2000, Oxford University Press, fornece a um versado um dicionário geral de muitos dos termos usados nesta divulgação.

[040] Unidades, prefixos e símbolos são indicados em sua forma aceita pelo Système International de Unites (SI). As faixas numéricas incluem os números que definem a faixa. Salvo indicação em contrário, as sequências de aminoácidos são escritas da esquerda para a direita na orientação amino para carboxi. Os títulos aqui fornecidos não são limitações dos vários aspectos desta divulgação que podem ser obtidos por referência à especificação como um todo. Consequentemente, os termos definidos imediatamente abaixo são mais completamente definidos por referência ao relatório descritivo em sua totalidade.

[041] O termo "cerca de" é usado aqui para significar aproximadamente, em torno de, ao redor ou nas regiões de. Quando o termo “cerca de” é usado em conjunto com uma faixa numérica, ele modifica essa escala estendendo as ligações acima ou abaixo dos valores numéricos estabelecidos. Em geral, o termo "cerca de" pode modificar um valor numérico acima e abaixo do valor declarado por uma variação de, por exemplo, 10 por cento, para cima ou para baixo (maior ou menor).

[042] Como utilizado neste documento, o termo "vírus adenoassociado" ou

"AAV" refere-se a todos os vírus adenoassociados que são usados em terapia genética, incluindo seus derivados, subtipos de vírus e formas de ocorrência natural e recombinantes. Os vários sorotipos de AAVs podem ser usados como vírus de transferência de genes recombinantes para transduzir muitos tipos de células diferentes. Exemplos não limitativos de sorotipos de AAV incluem AAV tipo 1 (AAV-1), AAV tipo 2 (AAV-2), AAV tipo 3 (AAV-3), AAV tipo 4 (AAV-4), AAV tipo 5 (AAV- 5), AAV tipo 6 (AAV-6), AAV tipo 7 (AAV-7), AAV tipo 8 (AAV-8), AAV tipo 9 (AAV-9), AAV aviário, AAV bovino, AAV canino, AAV equino, AAV primata, AAV não primata e AAV ovino. Em algumas modalidades, o AAV é AAV tipo 8 (AAV-8) ou AAV tipo 9 (AAV-9).

[043] A organização genômica de todos os sorotipos de AAV conhecidos é muito semelhante. O genoma do AAV é uma molécula de DNA linear de fita simples com menos de 5.000 nucleotídeos (nt) de comprimento. O genoma compreende três genes, rep (Replicação), cap (Capsídeo) e aap (Montagem). Esses três genes dão origem a pelo menos nove produtos de genes por meio do uso de três promotores, sítios alternativos de início da tradução e emenda diferencial. Os vetores AAV da presente divulgação podem incluir elementos adicionais que funcionam em cis ou em trans. Em modalidades particulares, um vetor AAV que inclui um genoma de vetor também tem uma ou mais sequências de repetição terminal invertida (ITR) que flanqueiam o terminal 5' ou 3' da sequência doadora; um elemento de controle de expressão que conduz a transcrição (por exemplo, um promotor ou intensificador) da sequência doadora, tal como um elemento de controle constitutivo ou regulável, um elemento de controle de expressão específico de tecido, uma sequência de íntron, um stuffer ou sequência de polinucleotídeos de enchimento; e/ou uma sequência de poli- adenina localizada a 3' da sequência doadora.

[044] O AAV possui características únicas que o tornam atraente como um vetor para distribuição de DNA estranho às células. A infecção de células em cultura por AAV geralmente não é citopática, e a infecção natural em humanos e outros animais é silenciosa e assintomática. Além disso, o AAV infecta muitos tipos diferentes de células de mamíferos, permitindo a possibilidade de atingir muitos tecidos diferentes in vivo. O AAV também possui vantagens adicionais que o tornam um sistema viral particularmente atraente para distribuição de genes, incluindo a promoção de uma resposta imune mais suave em comparação com outras formas de distribuição de genes e expressão persistente em células em divisão e quiescentes como um vetor não integrador. Além disso, o AAV resiste às condições usadas para inativar o adenovírus (56° a 65° C por várias horas), tornando a preservação a frio de vacinas baseadas em rAAV menos crítica. Em algumas modalidades, o AAV da presente divulgação compreende uma ou mais dessas características.

[045] O termo "vetor AAV", como utilizado neste documento, refere-se a qualquer vetor que compreende ou deriva de componentes de um vírus adenoassociado (AAV) e é adequado para infectar células de mamíferos, incluindo células humanas, de qualquer um de uma série de tipos de tecido, como cérebro, coração, pulmão, músculo esquelético, fígado, rim, baço ou pâncreas, seja in vitro ou in vivo. O termo "vetor de AAV" pode ser usado para se referir a uma partícula viral do tipo AAV (ou vírion) compreendendo pelo menos uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de interesse. Em algumas modalidades, o vetor AAV é um "vetor AAV recombinante", que se refere a um vetor AAV compreendendo uma sequência de polinucleotídeo não de origem AAV (isto é, um polinucleotídeo heterólogo para AAV, por exemplo, um anticorpo anti-FAM19A5), tipicamente uma sequência de interesse para a transformação genética de uma célula. Em geral, o polinucleotídeo heterólogo é flanqueado por pelo menos uma, e geralmente por duas sequências de repetição terminal invertida de AAV (ITRs). O termo vetor AAV abrange tanto as partículas do vetor AAV quanto os plasmídeos do vetor AAV.

[046] Conforme usado neste documento, o termo "ITR" refere-se a repetições terminais invertidas. Tipicamente, as ITRs estão envolvidas na replicação e resgate de DNA de parvovírus (por exemplo, AAV), ou excisão, de plasmídeos procarióticos (Daya, S., et al., Clin Microbiol Rev 21(4): 583-593 (2008). Além disso, as ITRs são geralmente consideradas as sequências mínimas necessárias para a integração proviral de AAV e para o empacotamento de DNA de AAV em vírions. Consequentemente, esses elementos são essenciais para a multiplicação eficiente do genoma de um parvovírus.

[047] Conforme usado neste documento, o termo "sorotipo" refere-se a uma subdivisão de AAV que é identificável por métodos sorológicos ou de sequenciamento de DNA e pode ser distinguível por seu caráter antigênico. Além disso, o termo "isolado", quando usado em referência a AAV, significa um sorotipo de AAV particular obtido de uma fonte específica. O versado prontamente reconhecerá a diferença entre um "AAV isolado", que se refere à pureza relativa de uma amostra de AAV, e um "isolado de AAV", que se refere a uma preparação derivada clonalmente de um sorotipo de AAV particular, com base no contexto em que o termo é utilizado.

[048] O termo vetor ou molécula de ácido nucleico "livre de capsídeo" ou "sem capsídeo" (ou variações dos mesmos) refere-se a um construto de vetor livre de um capsídeo. Em algumas modalidades, o vetor sem capsídeo ou molécula de ácido nucleico não contém sequências que codificam, por exemplo, uma proteína Rep de AAV.

[049] Em algumas modalidades, o AAV divulgado aqui se replica usando um vírus auxiliar. Como utilizado neste documento, um "vírus auxiliar" para AAV refere-se a um vírus que permite que AAV (por exemplo , AAV de tipo selvagem) seja replicado e empacotado por uma célula de mamífero. Uma variedade de tais vírus auxiliares para AAV são conhecidos na técnica, incluindo adenovírus, herpesvírus e poxvírus, tais como vaccinia. Os adenovírus englobam vários subgrupos diferentes, embora o adenovírus tipo 5 do subgrupo C seja o mais comumente usado. Numerosos adenovírus de origem humana, de mamíferos não humanos e de aves são conhecidos e estão disponíveis em depósitos como o ATCC. Os vírus da família do herpes incluem, por exemplo, vírus herpes simplex (HSV) e vírus Epstein-Barr (EBV), bem como citomegalovírus (CMV) e vírus da pseudo-raiva (PRV); que também estão disponíveis em depositários como o ATCC.

[050] Em algumas modalidades, o AAV da presente divulgação tem capacidades distintas de direcionamento de tecido (por exemplo, tropismos de tecido). Em algumas modalidades, o AAV exibe ainda transdução ou tropismo aumentados em um ou mais tipos de células-tronco humanas em comparação com polipeptídeos de capsídeo parental não variantes. Em algumas modalidades, os tipos de células- tronco humanas incluem, mas não estão limitados a células-tronco embrionárias, células-tronco de tecido adulto (isto é, células-tronco somáticas), medula óssea, células progenitoras, células-tronco pluripotentes induzidas e células-tronco reprogramadas. Em algumas modalidades, as células-tronco adultas podem incluir células-tronco organoides (isto é, células-tronco derivadas de qualquer órgão ou sistema orgânico de interesse dentro do corpo). Em algumas modalidades, o tecido alvo de um AAV é gônada, diafragma, coração, estômago, fígado, baço, pâncreas ou rim. Em algumas modalidades, o AAV direciona órgãos do corpo incluem, mas não estão limitados a, pele, cabelo, unhas, receptores sensoriais, glândula sudorípara, glândulas de óleo, ossos, músculos, cérebro, medula espinhal, nervo, glândula pituitária, glândula pineal, hipotálamo, glândula tireoide, paratireoide, timo, suprarrenais, pâncreas (tecido das ilhotas), coração, vasos sanguíneos, nódulos linfáticos, vasos linfáticos, timo, baço, amígdalas, nariz, faringe, laringe, traqueia, brônquios, pulmões, boca, faringe, esôfago, estômago, intestino delgado, intestino grosso, reto, canal anal, dentes, glândulas salivares, língua, fígado, vesícula biliar, pâncreas, apêndice, rins, ureteres, bexiga urinária, uretra, testículos, ducto (canal) deferente, uretra, próstata, pênis, escroto, ovários, útero, trompas uterinas (falópio), vagina, vulva e glândulas mamárias (seios). Os sistemas de órgãos do corpo incluem,

mas não estão limitados ao sistema tegumentar, sistema esquelético, sistema muscular, sistema nervoso, sistema endócrino, sistema cardiovascular, sistema linfático, sistema respiratório, sistema digestivo, sistema urinário e sistema reprodutivo. Em algumas modalidades, a transdução e/ou tropismo é aumentado em cerca de 5%, cerca de 10%, cerca de 15%, cerca de 20%, cerca de 25%, cerca de 30%, cerca de 35%, cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, 65%, cerca de 70%%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 99% ou cerca de 100%. Em algumas modalidades, a transdução e/ou tropismo é aumentado em cerca de 5% a cerca de 80%, cerca de 10% a cerca de 70%, cerca de 20% a cerca de 60% ou cerca de 30% a cerca de 60%.

[051] As frases "tropismo" e "transdução" estão inter-relacionadas, mas existem diferenças. O termo "tropismo", como utilizado neste documento refere-se à capacidade de um vetor AAV ou vírion de infectar um ou mais tipos de células especificados, mas também pode abranger como o vetor funciona para transduzir a célula em um ou mais tipos de células especificados; isto é, tropismo refere-se à entrada preferencial do vetor AAV ou vírion em certos tipos de células ou tecidos e/ou interação preferencial com a superfície celular que facilita a entrada em certos tipos de células ou tecidos, opcionalmente e preferencialmente seguida pela expressão (por exemplo, transcrição e, opcionalmente, tradução) de sequências transportadas pelo vetor AAV ou vírion na célula, por exemplo, para um vírus recombinante, expressão da(s) sequência(s) nucleotídica(s) heteróloga(s). Como utilizado neste documento, o termo "transdução" refere-se à capacidade de um vetor AAV ou vírion para infectar um ou mais tipos de células particulares; isto é, transdução refere-se à entrada do vetor AAV ou vírion na célula e à transferência do material genético contido no vetor AAV ou vírion para a célula para obter expressão do genoma do vetor. Em alguns casos, mas não em todos os casos, a transdução e o tropismo podem estar correlacionados.

[052] Como utilizado neste documento, o termo "multiplicidade de infecção" ou "MOI" refere-se à razão de vetores de integração: células hospedeiras usadas durante a transfecção ou transdução de células hospedeiras. Por exemplo, se

1.000.000 de vetores são usados para transduzir 100.000 células hospedeiras, a multiplicidade de infecção é 10. O uso deste termo não está limitado a eventos que envolvem transdução, mas em vez disso, abrange a introdução de um vetor em um hospedeiro por métodos como lipofecção, microinjeção, precipitação com fosfato de cálcio e eletroporação.

[053] O termo "dor neuropática" refere-se a uma dor devido a uma lesão, dano e/ou função inadequada que afeta qualquer nível do sistema nervoso central (CNS) e/ou o sistema nervoso periférico. O termo "dor neuropática" inclui todo e qualquer tipo de dor neuropática, independentemente da causa e de todos e quaisquer sintomas de dor neuropática.

[054] A dor neuropática inclui dor neuropática central e dor neuropática periférica. Como utilizado neste documento, o termo "dor neuropática central" refere- se à dor resultante de um distúrbio, defeito congênito ou lesão do sistema nervoso central (isto é, o cérebro ou a medula espinhal). Como utilizado neste documento, o termo "dor neuropática periférica" refere-se à dor resultante de uma lesão ou infecção dos nervos sensoriais periféricos.

[055] Os sintomas de dor neuropática podem incluir dor persistente/crônica, dor espontânea, bem como alodinia (por exemplo, uma resposta dolorosa a um estímulo que normalmente não é doloroso), hiperalgesia (por exemplo, uma resposta acentuada a um estímulo doloroso que geralmente causa apenas um desconforto leve, como uma picada de alfinete), hiperestesia (por exemplo, sensibilidade física excessiva a estímulos, especialmente da pele) ou hiperpatia (por exemplo, quando um pequeno desconforto se torna uma dor intensa e prolongada). Em algumas modalidades, os sintomas podem ser de longa duração e persistir após a resolução da causa primária, se uma estiver presente. Merck Manual, Neuropathic Pain, available at merckmanuals.com/professional/neurologic-disorders/pain/neuropathic- pain; Campbell J. N. e Meyer R. A. Neuron 52(1): 77–92 (2006).

[056] Em algumas modalidades, os tipos de dor neuropática podem incluir: (1) neuralgia, (2) síndrome de dor de desaferentação, (3) síndrome de dor regional complexa (CRPSs) e (4) neuropatia (central ou periférica).

[057] Em algumas modalidades, a dor neuropática é uma neuralgia, que se refere a uma dor que se irradia ao longo do curso de um ou mais nervos específicos (por exemplo, nervos cranianos), geralmente sem qualquer alteração patológica demonstrável na estrutura nervosa. Neuralgia inclui, sem limitação, neuralgia trigeminal (TN), neuralgia trigeminal atípica (ATN), neuralgia occipital, neuralgia glossofaríngea, neuralgia pós-herpética (causada por herpes zoster), dor de lesão de nervo periférico, ciática, dor lombar e uma dor facial atípica. Irritação química, doença renal crônica, diabetes, inflamação, trauma (incluindo cirurgia), compressão dos nervos por estruturas próximas (por exemplo, tumores), certos medicamentos (por exemplo, cisplatina, paclitaxel ou vincristina), porfiria (distúrbio do sangue), e infecções (por exemplo, herpes zoster (cobreiro), HIV/AIDS, doença de Lyme ou sífilis) podem levar à neuralgia.

[058] Em algumas modalidades, a dor neuropática é uma síndrome de dor de desaferentação, que pode resultar de uma perda da entrada sensorial de uma porção do corpo (por exemplo, causada pela interrupção de fibras sensoriais periféricas ou nervos do sistema nervoso central). A síndrome da dor de desaferentação inclui, sem limitação, uma lesão no cérebro ou medula espinhal, uma dor pós-derrame, uma dor fantasma, uma paraplegia, lesões por avulsão do plexo braquial e radiculopatias lombares.

[059] Em algumas modalidades, a dor neuropática é uma "Síndrome de Dor Regional Complexa" (CRPS), que é uma condição de dor crônica que mais comumente afeta um braço ou uma perna. Em algumas modalidades, a CRPS se desenvolve após uma lesão, cirurgia, acidente vascular cerebral ou ataque cardíaco. Em certas modalidades, a CRPS é uma CRPS do tipo I (CRPS-I) (também conhecida como síndrome da distrofia simpática reflexa). Indivíduos sem lesão nervosa confirmada são frequentemente classificados como portadores de CRPS-I. Em outras modalidades, a CRPS é uma CRPS tipo II (CRPS-II) (também conhecida como causalgia), que está associada a uma lesão nervosa confirmada.

[060] Em algumas modalidades, a dor neuropática é uma neuropatia, que se refere a uma dor resultante de uma alteração funcional ou patológica (por exemplo, uma doença ou dano) em um nervo. A neuropatia geralmente pode ser caracterizada clinicamente por anormalidades dos neurônios motores ou sensoriais. Em certas modalidades, a neuropatia é uma neuropatia central (por exemplo, uma alteração funcional ou patológica no sistema nervoso central). Em outras modalidades, a neuropatia é uma neuropatia periférica (por exemplo, uma alteração funcional ou patológica em um ou mais nervos periféricos, incluindo um nervo motor, um nervo sensorial, um nervo autônomo ou uma combinação dos mesmos). Em algumas modalidades, a neuropatia periférica envolve uma alteração funcional ou patológica em um único nervo ou grupo de nervos (isto é, mononeuropatia). Em algumas modalidades, a neuropatia periférica envolve uma alteração funcional ou patológica que afeta vários nervos (local ou sistemicamente) (isto é, polineuropatia). Em algumas modalidades, a neuropatia periférica afeta ambos os lados do corpo aproximadamente da mesma forma (isto é, polineuropatia simétrica). Em algumas modalidades, a neuropatia periférica afeta áreas díspares do corpo (por exemplo, mononeurite múltipla, mononeuropatia multifocal ou mononeuropatia múltipla).

[061] Como utilizado neste documento, "mononeuropatia" é uma neuropatia periférica envolvendo perda de movimento ou sensação em uma área causada por dano ou destruição de um único nervo periférico ou grupo de nervos. A mononeuropatia é mais frequentemente causada por uma lesão ou trauma em uma área local, que, por exemplo, resulta em pressão/compressão prolongada em um único nervo. No entanto, certos distúrbios sistêmicos (por exemplo, mononeurite múltipla) também podem causar mononeuropatia. Em algumas modalidades, a lesão ou trauma em uma área local causa a destruição da bainha de mielina (cobertura) do nervo ou de parte da célula nervosa (o axônio), o que pode desacelerar ou impedir a condução de impulsos através do nervo. Em algumas modalidades, a mononeuropatia pode afetar qualquer parte do corpo. Exemplos de dor mononeuropática incluem, sem limitação, uma disfunção do nervo ciático, uma disfunção do nervo fibular comum, uma disfunção do nervo radial, uma disfunção do nervo ulnar, uma mononeuropatia craniana VI, uma mononeuropatia craniana VII, uma mononeuropatia craniana III (tipo de compressão), uma mononeuropatia craniana III (tipo diabético), uma disfunção do nervo axilar, uma síndrome do túnel do carpo, uma disfunção do nervo femoral, uma disfunção do nervo tibial, uma paralisia de Bell, uma síndrome do desfiladeiro torácico, uma síndrome do túnel do carpo e uma paralisia do sexto nervo (abducente). Finnerup N. B. et al., Pain 157(8): 1599-1606 (2016); National Institute of Neurological Disorders and Stroke, Peripheral Neuropathy Fact Sheet, available at ninds.nih.gov/disorders/peripheralneuropathy/detail_peripheralneuropathy.htm. Em algumas modalidades, a dor mononeuropática é uma ciática.

[062] Como utilizado neste documento, "polineuropatia" é uma neuropatia periférica que envolve a perda de movimento ou sensação em uma área causada por dano ou destruição de vários nervos periféricos. A dor polineuropática inclui, sem limitação, síndrome pós-pólio, síndrome pós-mastectomia, neuropatia diabética, neuropatia por álcool, amiloide, toxinas, AIDS, hipotireoidismo, uremia, deficiências de vitaminas, dor induzida por quimioterapia, tratamento com 2',3'-didesoxicitidina (ddC), síndrome de Guillain-Barre ou doença de Fabry. Finnerup N. B. et al., Pain 157(8): 1599-1606 (2016); National Institute of Neurological Disorders and Stroke,

Peripheral Neuropathy Fact Sheet, available at ninds.nih.gov/disorders/peripheralneuropathy/detail_peripheralneuropathy.htm. Em algumas modalidades, a polineuropatia é uma neuropatia periférica diabética. Em certas modalidades, a neuropatia periférica diabética é causada pelos altos níveis de glicose no sangue (açúcar no sangue) e/ou os altos níveis de gordura (por exemplo, triglicerídeos) no sangue de sujeitos diabéticos, o que causa danos aos nervos periféricos do sujeito.

[063] Em algumas modalidades, a neuropatia periférica divulgada neste documento pode ser classificada com base na parte da célula nervosa que está danificada ou afetada (por exemplo, axônio, bainha de mielina ou o corpo celular). Em algumas modalidades, a neuropatia periférica é uma axonopatia distal, que resulta de um distúrbio metabólico ou tóxico dos axônios. Em algumas modalidades, o distúrbio metabólico compreende diabetes, insuficiência renal, síndromes de deficiência, como desnutrição e alcoolismo. Em algumas modalidades, o distúrbio metabólico é diabetes e a axonopatia distal é neuropatia diabética.

[064] Em algumas modalidades, a neuropatia periférica é uma mielinopatia, que resulta de um ataque primário à mielina ou às células de Schwann mielinizantes, causando uma falha aguda de condução do impulso. A causa mais comum é polineuropatia de desmielinização inflamatória aguda (AIDP; também conhecida como síndrome de Guillain-Barré), embora outras causas incluam a síndrome desmielinizante inflamatória crônica (CIDP), distúrbios metabólicos genéticos (por exemplo, leucodistrofia) ou toxinas.

[065] Em algumas modalidades, a neuropatia periférica é uma neuronopatia, que se deve a uma destruição dos neurônios do sistema nervoso periférico (PNS). Em algumas modalidades, a neuronopatia é causada por doenças do neurônio motor, neuronopatias sensoriais (por exemplo, Herpes zoster), toxinas ou disfunção autonômica. Em algumas modalidades, a neuronopatia é causada por neurotoxinas,

como o agente quimioterápico vincristina.

[066] A dor neuropática pode resultar de ou estar associada a várias etiologias (por exemplo, uma lesão física (por exemplo, trauma ou estresse repetitivo), uma doença ou distúrbio, exposição a um agente tóxico ou uma combinação dos mesmos). Em algumas modalidades, a dor neuropática resulta de ou está associada a uma lesão ou dano traumático, como, por exemplo, uma lesão por compressão do nervo (por exemplo, um esmagamento do nervo, um estiramento do nervo, um encarceramento do nervo ou uma transecção incompleta do nervo); lesão da medula espinhal (por exemplo, uma hemissecção da medula espinhal); uma lesão ou dano a um nervo periférico (por exemplo, um nervo motor, nervo sensorial ou nervo autônomo, ou uma combinação dos mesmos), uma amputação de membro; uma contusão; uma inflamação (por exemplo, uma inflamação da medula espinhal); ou um procedimento cirúrgico. Em algumas modalidades, a dor neuropática resulta de ou está associada a um estresse repetitivo, incluindo, por exemplo, atividades repetitivas, estranhas e/ou forçadas que requerem movimento de qualquer grupo de articulações por períodos prolongados. Não estando limitado por nenhuma teoria, a irritação resultante pode fazer com que ligamentos, tendões e músculos fiquem inflamados e inchados, constringindo as passagens estreitas através das quais os nervos passam (por exemplo, neuropatia ulnar e síndrome do túnel do carpo, que são neuropatias de nervos presos ou comprimidos no cotovelo ou punho). Em algumas modalidades, a dor neuropática resulta de ou está associada a uma doença ou distúrbio incluindo, por exemplo, um evento isquêmico (por exemplo, um acidente vascular cerebral ou um ataque cardíaco), esclerose múltipla, uma doença metabólica e/ou endócrina ou distúrbio (por exemplo, diabetes mellitus, doença metabólica e acromegalia, uma condição causada pela superprodução do hormônio do crescimento e é caracterizada pelo aumento anormal de partes do esqueleto, incluindo as articulações, levando à compressão do nervo e dor.), uma doença de pequenos vasos que causa diminuição do suprimento de oxigênio para os nervos periféricos levando a danos no tecido nervoso (por exemplo, vasculite, ou seja, inflamação dos vasos sanguíneos), uma doença autoimune (por exemplo, síndrome de Sjögren, lúpus, artrite reumatoide e neuropatia desmielinizante inflamatória aguda, também conhecida como síndrome de Guillain-Barré), um distúrbio renal, um câncer ou tumor (por exemplo, um tumor neoplásico, neuromas, síndromes paraneoplásicas e toxicidade dos agentes quimioterápicos e radiação no tratamento do câncer), uma infecção (por exemplo, infecções por vírus como herpes varicelazoster (cobreiro), vírus Epstein-Barr, vírus do Nilo Ocidental, citomegalovírus e vírus herpes simplex, uma síndrome de imunodeficiência adquirida (AIDS) ou por bactérias como a doença de Lyme, difteria e lepra), um distúrbio inflamatório, um distúrbio do nervo periférico (por exemplo, neuroma), um distúrbio genético, hereditário ou surgido de novo (por exemplo, os distúrbios de Charcot-Marie-Tooth incluem enfraquecimento extremo e perda de músculos na parte inferior das pernas e pés, anormalidades da marcha, perda dos reflexos do tendão e dormência nos membros inferiores), uma mononeuropatia ou polineuropatia. Em algumas modalidades, a dor neuropática resulta de ou está associada a um agente infeccioso (por exemplo, infecção transmitida por carrapato, herpes varicelazoster, vírus de Epstein-Barr, vírus do Nilo Ocidental, citomegalovírus, vírus herpes simplex, AIDS). Em algumas modalidades, a dor neuropática resulta de ou está associada a uma exposição a um agente tóxico, incluindo, por exemplo, uma droga, um álcool, um metal pesado (por exemplo, chumbo, arsênico, mercúrio), um agente industrial (por exemplo, um solvente, fumos de uma cola) ou óxido nitroso.

[067] O termo "uma dor neuropática associada a" uma doença ou distúrbio refere-se a uma dor neuropática que acompanha uma doença ou distúrbio (por exemplo, aqueles divulgados neste documento), ou causada por ou resultante de uma doença ou distúrbio (por exemplo, aqueles divulgados aqui).

[068] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", como utilizados neste documento, referem-se a qualquer tipo de intervenção ou processo realizado ou administrar um agente ativo ao sujeito com o objetivo de reverter, aliviar, melhorar, inibir, ou desacelerar ou impedir a progressão, desenvolvimento, gravidade ou recorrência de um sintoma, complicação, condição ou indicação bioquímica associada a uma doença. O tratamento pode ser de um sujeito com uma doença ou um sujeito que não tem uma doença (por exemplo, para profilaxia).

[069] Como utilizado neste documento, "administração" refere-se à introdução física de um agente terapêutico ou de uma composição compreendendo um agente terapêutico a um sujeito, utilizando qualquer um dos vários métodos e sistemas de administração conhecidos dos versados na técnica. As vias de administração preferidas para os anticorpos aqui descritos incluem vias de administração intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, espinal, intravitreal, ou outras vias parenterais, por exemplo por injeção ou infusão. A expressão "administração parenteral", como utilizada neste documento, significa modos de administração diferentes da administração entérica e tópica, geralmente por injeção, e inclui, sem limitação injeção intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intralinfática, intralesional, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intravítrea, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, epidural e intraesternal, bem como eletroporação in vivo. Alternativamente, um anticorpo aqui descrito pode ser administrado por uma via não parenteral, como uma via tópica, epidérmica ou mucosa de administração, por exemplo, intranasal, oral, vaginal, retal, sublingual ou tópica. A administração também pode ser realizada, por exemplo, uma vez, uma pluralidade de vezes e/ou por um ou mais períodos prolongados.

[070] O termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como utilizado neste documento, refere-se a uma quantidade de uma droga, sozinha ou em combinação com outro agente terapêutico, eficaz para "tratar" uma doença ou distúrbio em um sujeito ou reduzir o risco, potencial, possibilidade ou ocorrência de uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma dor neuropática). Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" inclui uma quantidade de uma droga ou agente terapêutico que proporciona alguma melhoria ou benefício a um sujeito com ou em risco de ter uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma dor neuropática aqui divulgada). Assim, uma quantidade "terapeuticamente eficaz" é uma quantidade que reduz o risco, potencial, possibilidade ou ocorrência de uma doença ou causa distúrbio ou algum alívio, mitigação e/ou reduz pelo menos um indicador (por exemplo, uma dor neuropática), e/ou diminui em pelo menos um sintoma clínico de uma doença ou distúrbio.

[071] Como utilizado neste documento, o termo "sujeito" inclui qualquer animal humano ou não humano. O termo "animal não humano" inclui todos os vertebrados, por exemplo, mamíferos e não mamíferos, como primatas não humanos, ovelhas, cães, vacas, galinhas, anfíbios, répteis, etc.

[072] O termo "família com similaridade de sequência 19, membro A5" ou "FAM19A5" refere-se a uma proteína que pertence à família TAFA (também conhecida como família FAM19) de cinco proteínas altamente homólogas e é predominantemente expressa no cérebro e na medula espinhal. O FAM19A5 também é conhecido como TAFA5 ou proteína semelhante a quimiocina TAFA-5.

[073] Em humanos, o gene que codifica FAM19A5 está localizado no cromossomo 22. Existem múltiplas isoformas humanas FAM19A5 (UniProt: Q7Z5A7), que se acredita serem produzidas por emenda alternativa: isoforma 1 (UniProt: Q7Z5A7-1), que consiste em 132 aminoácidos; isoforma 2 (UniProt: Q7Z5A7-2), que consiste em 125 aminoácidos; e isoforma 3 (UniProt: Q7Z5A7-3), que consiste em 53 aminoácidos. Acredita-se que a proteína FAM19A5 humana exista tanto na forma ligada à membrana quanto na forma solúvel (secretada). Acredita-se que a isoforma 1 seja uma membrana com uma região transmembranar. A isoforma 2, que foi relatada em Tang T. Y. et al., Genomics 83 (4): 727-34 (2004) como uma proteína secretada

(solúvel), contém um peptídeo sinal nas posições de aminoácidos 1-25. Acredita-se que a isoforma 1 seja uma proteína de membrana. Abaixo estão as sequências de aminoácidos das três isoformas conhecidas do FAM19A5 humano. (I) Isoforma 1 (UniProt: Q7Z5A7-1, proteína transmembranar): essa isoforma foi escolhida como a sequência canônica.

MAPSPRTGSR QDATALPSMS STFWAFMILA SLLIAYCSQL AAGTCEIVTL

DRDSSQPRRT IARQTARCAC RKGQIAGTTR ARPACVDARI IKTKQWCDML PCLEGEGCDL LINRSGWTCT QPGGRIKTTT VS (SEQ ID NO: 1) (II) Isoforma 2 (UniProt: Q7Z5A7-2, proteína solúvel):

MQLLKALWAL AGAALCCFLV LVIHAQFLKE GQLAAGTCEI VTLDRDSSQP

RRTIARQTAR CACRKGQIAG TTRARPACVD ARIIKTKQWC DMLPCLEGEG CDLLINRSGW TCTQPGGRIK TTTVS (SEQ ID NO: 2) (III) Isoforma 3 (UniProt: Q7Z5A7-3):

MYHHREWPAR IIKTKQWCDM LPCLEGEGCD LLINRSGWTC TQPGGRIKTT TVS (SEQ ID NO: 3)

[074] O termo "FAM19A5" inclui quaisquer variantes ou isoformas de FAM19A5 que são naturalmente expressas pelas células. Por conseguinte, os anticorpos aqui descritos podem reagir de maneira cruzada com isoformas diferentes da mesma espécie (por exemplo, isoformas diferentes de FAM19A5 humano) ou reagir com FAM19A5 de espécies diferentes de humanos (por exemplo, FAM19A5 de camundongo). Alternativamente, os anticorpos podem ser específicos para o FAM19A5 humano e não podem exibir nenhuma reatividade cruzada com outras espécies. O FAM19A5, ou quaisquer variantes e isoformas dos mesmos, pode ser isolado de células ou tecidos que os expressam naturalmente ou ser produzido de forma recombinante. O polinucleotídeo que codifica o FAM19A5 humano possui o número de Acessão GenBank BC039396 e a seguinte sequência:

Tabela 1A. sequência de polinucleotídeos de FAM19A5 humano sequência de polinucleotídeos (SEQ ID NO: 4) FAM19A5 (No. de Acessão GenBank BC039396)

[075] O termo "antagonista contra uma proteína FAM19A5" refere-se a todos os antagonistas que suprimem a expressão da proteína FAM19A5. Esse antagonista pode ser um peptídeo, um ácido nucleico ou um composto. Mais especificamente, o antagonista pode ser um oligonucleotídeo antissentido, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, aptâmero, PNA (ácido nucleico de peptídeo) direcionado a FAM19A5 ou um vetor incluindo o mesmo. Em algumas modalidades, o antagonista pode ser um anticorpo, ou uma porção de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga especificamente à proteína FAM19A5.

[076] Os termos "anticorpo" e "anticorpos" são termos de técnica e podem ser usados aqui de forma intercambiável e referem-se a uma molécula com um sítio de ligação ao antígeno que se liga especificamente a um antígeno. Os termos aqui utilizados incluem anticorpos completos e quaisquer fragmentos de ligação ao antígeno (isto é, "porções de ligação ao antígeno") ou cadeias únicas dos mesmos. Um "anticorpo" refere-se, em algumas modalidades, a uma glicoproteína compreendendo pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto, ou uma porção de ligação a antígeno. Em outras modalidades, um "anticorpo" refere-se a um anticorpo de cadeia simples compreendendo um único domínio variável, por exemplo, domínio VHH. Cada cadeia pesada é composta por uma região variável de cadeia pesada (aqui abreviada como VH) e uma região constante de cadeia pesada. Em certos anticorpos de ocorrência natural, a região constante de cadeia pesada é composta por três domínios, CH1, CH2 e CH3. Em certos anticorpos de ocorrência natural, cada cadeia leve é composta por uma região variável de cadeia leve (aqui abreviada como VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é composta por um domínio, CL.

[077] As regiões VH e VL podem ainda ser subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR). Cada VH e VL é composta por três CDRs e quatro FRs, dispostas a partir do terminal amino para o terminal carboxil na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contém um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina aos tecidos ou fatores hospedeiros, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (C1q) do sistema de complemento clássico.

[078] O termo "numeração de Kabat" e termos semelhantes são reconhecidos na técnica e referem-se a um sistema de numeração de resíduos de aminoácidos nas regiões variáveis de cadeia pesada e leve de um anticorpo, ou uma porção que se liga ao antígeno do mesmo. Em certos aspectos, as CDRs de um anticorpo podem ser determinadas de acordo com o sistema de numeração de Kabat (ver, por exemplo,

Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Usando o sistema de numeração de Kabat, as CDRs dentro de uma molécula de cadeia pesada de anticorpo estão tipicamente presentes nas posições de aminoácidos 31 a 35, que opcionalmente podem incluir um ou dois aminoácidos adicionais, após 35 (referido no esquema de numeração de Kabat como 35A e 35B) (CDR1), posições de aminoácidos 50 a 65 (CDR2) e posições de aminoácidos 95 a 102 (CDR3). Usando o sistema de numeração de Kabat, as CDRs dentro de uma molécula de cadeia leve de anticorpo estão tipicamente presentes nas posições de aminoácidos 24 a 34 (CDR1), nas posições de aminoácidos 50 a 56 (CDR2) e nas posições de aminoácidos 89 a 97 (CDR3). Numa modalidade específica, as CDRs dos anticorpos aqui descritos foram determinadas de acordo com o esquema de numeração de Kabat.

[079] As expressões "numeração de posição de aminoácidos como em Kabat", "posição de Kabat" e variantes gramaticais das mesmas referem-se ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991). Usando este sistema de numeração, a sequência de aminoácidos linear real pode conter mais ou menos aminoácidos correspondentes a um encurtamento ou inserção em uma FW ou CDR de domínio variável. Por exemplo, um domínio variável de cadeia pesada pode incluir uma única inserção de aminoácido (resíduo 52a de acordo com Kabat) após o resíduo 52 de H2 e resíduos inseridos (por exemplo, resíduos 82a, 82b e 82c, etc. de acordo com Kabat) após o resíduo FW de cadeia pesada 82. Ver a TABELA 1B.

TABELA 1B Alça Kabat AbM Chothia L1 L24-L34 L24-L34 L24-L34 L2 L50-L56 L50-L56 L50-L56 L3 L89-L97 L89-L97 L89-L97 H1 H31-H35B H26-H35B H26-H32…34 (Numeração de Kabat) H1 H31-H35 H26-H35 H26-H32 (Numeração de Chothia) H2 H50-H65 H50-H58 H52-H56 H3 H95-H102 H95-H102 H95-H102

[080] A numeração de resíduos de Kabat pode ser determinada para um determinado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat "padrão". Chothia refere-se, em vez disso, à localização das alças estruturais (Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196:901- 917 (1987)). O final do alça Chothia CDR-H1 quando numerado usando a convenção de numeração de Kabat varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento do alça (isso ocorre porque o esquema de numeração Kabat coloca as inserções em H35A e H35B; se nem 35A nem 35B estão presentes, o alça termina em 32; se apenas 35A estiver presente, o alça termina em 33; se ambos 35A e 35B estiverem presentes, o alça termina em 34). As regiões hipervariáveis AbM representam um compromisso entre as CDRs Kabat e os alças estruturais de Chothia e são usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular.

[081] IMGT (ImMunoGeneTics) também fornece um sistema de numeração para as regiões variáveis de imunoglobulina, incluindo as CDRs. Ver, por exemplo,,

Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55-77 (2003), que é aqui incorporado por referência. O sistema de numeração IMGT foi baseado em um alinhamento de mais de 5.000 sequências, dados estruturais e caracterização de alças hipervariáveis e permite fácil comparação das regiões variável e CDR para todas as espécies. De acordo com o esquema de numeração IMGT, VH-CDR1 está nas posições 26 a 35, VH-CDR2 está nas posições 51 a 57, VH-CDR3 está nas posições 93 a 102, VL-CDR1 está nas posições 27 a 32, VL-CDR2 está nas posições 50 a 52 e VL-CDR3 está nas posições 89 a 97.

[082] Para todas as posições de aminoácidos da região constante da cadeia pesada discutidas na presente divulgação, a numeração está de acordo com o índice da EU descrito pela primeira vez em Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63 (1): 78-85, descrevendo a sequência de aminoácidos da proteína EU do mieloma, que é a primeira lgG1 humana sequenciada. O índice da EU de Edelman et al. também é apresentado em Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda. Assim, as expressões "índice da EU conforme estabelecido em Kabat" ou "índice da EU em Kabat" e "posição ... de acordo com o índice da EU conforme estabelecido em Kabat" e variantes gramaticais das mesmas referem-se ao sistema de numeração de resíduos com base no anticorpo EU de lgG1 humana de Edelman et al. conforme estabelecido em Kabat 1991.

[083] O sistema de numeração usado para os domínios variáveis (cadeia pesada e cadeia leve) e sequência de aminoácidos da região constante da cadeia leve é o estabelecido em Kabat 1991.

[084] Os anticorpos podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ou IgY), qualquer classe (por exemplo, IgD, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 ou IgA2), ou qualquer subclasse (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 em humanos e IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3 em camundongos) da molécula de imunoglobulina. As imunoglobulinas, por exemplo, IgG1, existem em vários alótipos, que diferem entre si em no máximo alguns aminoácidos. Um anticorpo aqui divulgado pode ser de qualquer um dos isótipos, classes, subclasses ou alótipos comumente conhecidos. Em certas modalidades, os anticorpos aqui descritos são da subclasse IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 ou qualquer um dos seus híbridos. Em certas modalidades, os anticorpos são da subclasse IgG2, IgG4 ou IgG2/IgG4.

[085] "Anticorpo" inclui, a título de exemplo, anticorpos de ocorrência natural e não natural; anticorpos monoclonais e policlonais; anticorpos quiméricos e humanizados; anticorpos humanos e não humanos; anticorpos totalmente sintéticos; anticorpos de cadeia simples; anticorpos monoespecíficos; anticorpos multiespecíficos (incluindo anticorpos biespecíficos); anticorpos tetraméricos compreendendo duas moléculas de cadeia pesada e duas de cadeia leve; um monômero de cadeia leve de anticorpo; um monômero de cadeia pesada de anticorpo; um dímero de cadeia leve de anticorpo, um dímero de cadeia pesada de anticorpo; um par de cadeia pesada anticorpo-cadeia leve anticorpo; intracorpos; anticorpos heteroconjugados; anticorpos monovalentes; anticorpos de cadeia simples; anticorpos camelizados; corpos de pessoas; anticorpos anti-idiotípicos (anti-Id) (incluindo, por exemplo, anticorpos anti-anti-Id) e anticorpos de domínio único (sdAbs), que incluem moléculas de ligação que consistem em um único domínio de anticorpo variável monomérico que é totalmente capaz de ligação ao antígeno (por exemplo, um domínio VH ou um domínio VL). Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13–22 (2007)).

[086] Os termos "porção de ligação ao antígeno" e "fragmento de ligação ao antígeno" de um anticorpo, como utilizado neste documento, são intercambiáveis e se referem a um ou mais fragmentos de um anticorpo que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno (por exemplo, FAM19A5 humano). Tais "fragmentos" têm, por exemplo, entre cerca de 8 e cerca de 1500 aminoácidos de comprimento,

adequadamente entre cerca de 8 e cerca de 745 aminoácidos de comprimento, adequadamente cerca de 8 a cerca de 300, por exemplo cerca de 8 a cerca de 200 aminoácidos, ou cerca de 10 a cerca de 50 ou 100 aminoácidos de comprimento.

Foi demonstrado que a função de ligação ao antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento total.

Exemplos de fragmentos de ligação englobados no termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo anti-FAM19A5 aqui descrito, incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste em domínios VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CH1; (iv) um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo e Fvs ligados a dissulfeto (sdFv); (v) um fragmento de dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste em um domínio VH; e (vi) uma região determinante de complementaridade isolada (CDR) ou (vii) uma combinação de duas ou mais CDRs isoladas que podem opcionalmente ser unidas por um ligante sintético.

Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que sejam produzidos como uma única cadeia proteica na qual as regiões VL e VH pareiam para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv)); ver, por exemplo, Bird et al., (1988) Science 242:423-426; and Huston et al., (1988) Proc.

Natl.

Acad.

Sci.

USA 85:5879-5883). Esses anticorpos de cadeia simples também se destinam a ser abrangidos pelo termo "porção de ligação ao antígeno" de um anticorpo.

Estes fragmentos de anticorpo são obtidos utilizando técnicas convencionais conhecidas pelos versados na matéria e os fragmentos são pesquisados quanto à utilidade da mesma maneira que os anticorpos intactos.

As porções de ligação ao antígeno podem ser produzidas por técnicas de DNA recombinante ou por clivagem enzimática ou química de imunoglobulinas intactas.

[087] Como utilizado neste documento, os termos "região variável" ou "domínio variável" são usados de forma intercambiável e são comuns na técnica. A região variável refere-se tipicamente a uma porção de um anticorpo, geralmente, uma porção de uma cadeia leve ou pesada, tipicamente sobre os aminoácidos 110 a 120 aminoácidos na cadeia pesada madura e cerca de 90 a 115 aminoácidos na cadeia leve madura, que diferem extensivamente na sequência entre anticorpos e são usadas na ligação e especificidade de um anticorpo específico para seu antígeno específico. A variabilidade na sequência está concentrada nas regiões chamadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), enquanto as regiões mais altamente conservadas no domínio variável são chamadas regiões estruturais (FR).

[088] Sem desejar estar vinculado a qualquer mecanismo ou teoria particular, acredita-se que as CDRs das cadeias leve e pesada sejam as principais responsáveis pela interação e especificidade do anticorpo com o antígeno. Em certas modalidades, a região variável é uma região variável humana. Em certas modalidades, a região variável compreende CDRs de roedores ou murinos e regiões estruturais humanas (FRs). Em modalidades particulares, a região variável de primata (por exemplo, primata não humano). Em certas modalidades, a região variável compreende CDRs de roedores ou murinos e regiões de estrutura (FRs) de primatas (por exemplo, primatas não humanos).

[089] Como utilizado neste documento, o termo "cadeia pesada" (HC) quando usado em referência a um anticorpo pode se referir a qualquer tipo distinto, por exemplo, alfa (α), delta (δ), epsilon (ε), gama (γ) e mu (μ), com base na sequência de aminoácidos do domínio constante, que dão origem às classes IgA, IgD, IgE, IgG e IgM de anticorpos, respectivamente, incluindo subclasses de IgG, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.

[090] Como utilizado neste documento, o termo "cadeia leve" (LC) quando usado em referência a um anticorpo pode se referir a qualquer tipo distinto, por exemplo, capa (k) ou lambda (λ) com base na sequência de aminoácidos dos domínios constantes. As sequências de aminoácidos de cadeia leve são bem conhecidas na técnica. Em modalidades específicas, a cadeia leve é uma cadeia leve humana.

[091] Os termos "VL" e "domínio VL" são utilizados alternadamente para se referir à região variável de cadeia leve de um anticorpo.

[092] Os termos "VH" e "domínio VH" são usados indiferentemente para se referir à região variável da cadeia pesada de um anticorpo.

[093] Como utilizado neste documento, os termos "região constante" e "domínio constante" são intercambiáveis e têm seu significado comum na técnica. A região constante é uma porção de anticorpo, por exemplo, uma porção terminal carboxil de uma cadeia leve e/ou pesada que não está diretamente envolvida na ligação de um anticorpo ao antígeno, mas que pode exibir várias funções efetoras, como interação com o receptor Fc. A região constante de uma molécula de imunoglobulina geralmente tem uma sequência de aminoácidos mais conservada em relação a um domínio variável da imunoglobulina.

[094] Uma "região Fc" (região cristalizável de fragmento) ou "domínio Fc" ou "Fc" refere-se à região C-terminal da cadeia pesada de um anticorpo que medeia a ligação da imunoglobulina a tecidos ou fatores hospedeiros, incluindo a ligação a receptores de Fc localizados em várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) ou no primeiro componente (C1q) do sistema clássico de complemento. Assim, uma região Fc compreende a região constante de um anticorpo, excluindo o primeiro domínio de imunoglobulina da região constante (por exemplo, CH1 ou CL). Nos isótipos de anticorpos IgG, IgA e IgD, a região Fc compreende dois fragmentos de proteína idênticos, derivados do segundo (CH2) e do terceiro (CH3) domínios constantes das duas cadeias pesadas do anticorpo; as regiões IgM e IgE Fc compreendem três domínios constantes de cadeia pesada (domínios CH 2-4) em cada cadeia de polipeptídeos. Para IgG, a região Fc compreende domínios de imunoglobulina Cγ2 e Cγ3 e a dobradiça entre Cγ1 e Cγ2. Embora os limites da região Fc de uma cadeia pesada de imunoglobulina possam variar, a região Fc de cadeia pesada de IgG humana é geralmente definida para se estender de um resíduo de aminoácido na posição C226 ou P230 (ou aminoácido entre esses dois aminoácidos) ao terminal carboxi da cadeia pesada, em que a numeração está de acordo com o índice da EU como em Kabat. O domínio CH2 de uma região Fc de IgG humana se estende de cerca do aminoácido 231 a cerca do aminoácido 340, enquanto o domínio CH3 está posicionado no lado C-terminal de um domínio Cm em uma região Fc, isto é, se estende a partir do aminoácido 341 a cerca do aminoácido 447 de uma IgG. Como utilizado neste documento, a região Fc pode ser uma sequência nativa Fc, incluindo qualquer variante alotípica ou uma variante Fc (por exemplo, um Fc de ocorrência não natural). Fc também pode se referir a essa região isoladamente ou no contexto de um polipeptídeo de proteína compreendendo Fc, como uma "proteína de ligação compreendendo uma região Fc", também chamada de "proteína de fusão Fc" (por exemplo, um anticorpo ou imunoadesão).

[095] Uma "região Fc de sequência nativa" ou "sequência nativa Fc" compreende uma sequência de aminoácidos que é idêntica à sequência de aminoácidos de uma região Fc encontrada na natureza. As regiões Fc humanas de sequência nativa incluem uma região Fc de IgG1 humana de sequência nativa; região Fc de IgG2 humana de sequência nativa; região Fc de IgG3 humana de sequência nativa; e região Fc de IgG4 humana de sequência nativa, bem como variantes de ocorrência natural das mesmas. A sequência nativa Fc inclui os vários alótipos de Fes (ver, por exemplo, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014)).

[096] Um "receptor Fc" ou "FcR" é um receptor que se liga à região Fc de uma imunoglobulina. Os FcRs que se ligam a um anticorpo IgG compreendem receptores da família FcγR, incluindo variantes alélicas e formas emendadas alternativamente desses receptores. A família FcγR consiste em três receptores de ativação (FcγRI, FcγRIII e FcγRIV em camundongos; FcγRIA, FcγRIIA e FcγRIIIA em humanos) e um receptor inibitório (FcγRIIB). A IgG1 humana se liga à maioria dos receptores Fc humanos e provoca as funções efetoras mais fortes de Fc. É considerado equivalente à IgG2a murina em relação aos tipos de receptores Fc de ativação aos quais se liga. Inversamente, a IgG4 humana provoca o menor número de funções efetoras de Fc. Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014).

[097] A região constante pode ser manipulada, por exemplo, por tecnologia recombinante, para eliminar uma ou mais funções efetoras. Uma "função efetora" refere-se à interação de uma região Fc do anticorpo com um receptor ou ligando Fc, ou um evento bioquímico resultante dela. "Funções efetoras" exemplificativas incluem ligação de C1q, citotoxicidade dependente do complemento (CDC), ligação do receptor de Fc, funções efetoras mediadas por FcγR, como ADCC e fagocitose mediada por células dependente de anticorpo (ADCP) e infrarregulação de um receptor de superfície celular (por exemplo, o receptor de células B; BCR). Tais funções efetoras geralmente requerem que a região Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável do anticorpo). Por conseguinte, o termo "uma região constante sem a função Fc" inclui regiões constantes com uma ou mais funções efetoras reduzidas ou sem funções mediadas pela região Fc.

[098] As funções efetoras de um anticorpo podem ser reduzidas ou evitadas por diferentes abordagens. As funções efetoras de um anticorpo podem ser reduzidas ou evitadas usando fragmentos de anticorpo que não possuem a região Fc (por exemplo, como Fab, F(ab')2, Fv de cadeia simples (scFv) ou um sdAb consistindo em um domínio VH ou VL monomérico). Alternativamente, os chamados anticorpos aglicosilados podem ser gerados pela remoção de açúcares que estão ligados a resíduos específicos na região Fc para reduzir as funções efetoras de um anticorpo,

mantendo outros atributos valiosos da região Fc (por exemplo, meia-vida prolongada e heterodimerização). Os anticorpos aglicosilados podem ser gerados, por exemplo, pela exclusão ou alteração do resíduo ao qual o açúcar está ligado, pela remoção enzimática dos açúcares, pela produção do anticorpo em células cultivadas na presença de um inibidor da glicosilação ou pela expressão do anticorpo em células incapazes de glicosilar proteínas (por exemplo, células hospedeiras bacterianas). Ver, por exemplo, Pub. U.S. 20120100140. Outra abordagem é empregar regiões Fc de uma subclasse de IgG que possuem função efetora reduzida, por exemplo, os anticorpos IgG2 e IgG4 são caracterizados por apresentar níveis mais baixos de funções efetoras de Fc do que IgG1 e IgG3. Os resíduos mais proximais à região da dobradiça no domínio CH2 da parte Fc são responsáveis pelas funções efetoras dos anticorpos, pois contêm um local de ligação amplamente sobreposto para os receptores C1q (complemento) e IgG-Fc (FcγR) nas células efetoras do sistema imunológico inato. Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014). Por conseguinte, os anticorpos com funções efetoras Fc reduzidas ou sem funções podem ser preparados gerando, por exemplo, uma região Fc quimérica que compreende um domínio CH2 a partir de um anticorpo IgG do isótipo IgG4 e um domínio CH3 de um anticorpo IgG do isótipo IgG1 ou uma região Fc quimérica que compreende a região de dobradiça da IgG2 e a região CH2 da IgG4 (ver, por exemplo, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013)) ou uma região Fc com mutações que resultam em funções efetoras de Fc alteradas, por exemplo, funções Fc reduzidas ou inexistentes. Tais regiões Fc com mutações são conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Pub. U.S. 20120100140 e pedidos U.S. e PCT citados nela An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); cujas divulgações são incorporadas por referência à sua totalidade.

[099] Uma "dobradiça", "domínio de dobradiça" ou "região de dobradiça" ou "região de dobradiça de anticorpo" refere-se ao domínio de uma região constante de cadeia pesada que une o domínio CH1 ao domínio CH2 e inclui as porções superior, média e inferior da dobradiça (Roux et al., J. Immunol. 1998 161:4083). A dobradiça fornece níveis variáveis de flexibilidade entre as regiões de ligação e efetoras de um anticorpo e também fornece sítios para ligação dissulfeto intermolecular entre as duas regiões constantes de cadeia pesada. Como utilizado neste documento, uma dobradiça começa em Glu216 e termina em Gly237 para todos os isótipos de IgG (Roux et al., 1998 J Immunol 161: 4083). As sequências das dobradiças IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 de tipo selvagem são conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014).

[0100] O termo "domínio CH1" refere-se à região constante de cadeia pesada que liga o domínio variável à dobradiça em um domínio constante de cadeia pesada. Como utilizado neste documento, um domínio CH1 começa em A118 e termina em V215. O termo "domínio CH1" inclui domínios CH1 de tipo selvagem, bem como variantes naturalmente existentes dos mesmos (por exemplo, alótipos). As sequências do domínio CH1 de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 (incluindo tipo selvagem e alótipos) são conhecidas na técnica. Ver, por exemplo,, Kabat EA et al., (1991) supra and Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014). Domínios CH1 exemplificativos incluem domínios CH1 com mutações que modificam uma atividade biológica de um anticorpo, por exemplo, meia vida, por exemplo, descrita em Pub. U.S. 20120100140 e patentes e publicações U.S. e publicações PCT citadas na mesma.

[0101] O termo "domínio CH2" refere-se à região constante de cadeia pesada que liga a dobradiça ao domínio CH3 em um domínio constante de cadeia pesada. Como utilizado neste documento, um domínio CH2 começa em P238 e termina em K340. O termo "domínio CH2" inclui domínios CH2 de tipo selvagem, bem como variantes naturalmente existentes dos mesmos (por exemplo, alótipos). As sequências do domínio CH2 de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 (incluindo tipo selvagem e alótipos) são conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Kabat EA et al., (1991) supra and Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014). Os domínios CH2 exemplificativos incluem domínios CH2 com mutações que modificam uma atividade biológica de um anticorpo, por exemplo, meia-vida e/ou função efetora Fc reduzida, por exemplo, descrito na Pub. U.S. 20120100140 e patentes e publicações U.S. e publicações PCT citadas na mesma.

[0102] O termo "domínio CH3" refere-se à região constante de cadeia pesada que é C-terminal ao domínio CH2 em um domínio constante de cadeia pesada. Como utilizado neste documento, um domínio CH3 começa em G341 e termina em K447. O termo "domínio CH3" inclui domínios CH3 de tipo selvagem, bem como variantes naturalmente existentes dos mesmos (por exemplo, alótipos). Sequências de domínio CH3 de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 (incluindo tipo selvagem e alótipos) são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Kabat EA et al., (1991) supra and Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20 de outubro de 2014). Domínios CH3 exemplificativos incluem domínios CH3 com mutações que modificam uma atividade biológica de um anticorpo, por exemplo, meia-vida, por exemplo, descritos na Pub. U.S. 20120100140 e patentes e publicações U.S. e publicações PCT citadas na mesma.

[0103] Como utilizado neste documento, "isótipo" refere-se à classe de anticorpos (por exemplo, anticorpo IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD e IgE) que é codificado pelos genes da região constante de cadeia pesada.

[0104] "Alótipo" refere-se a variantes de ocorrência natural dentro de um grupo isotípico específico, cujas variantes diferem em alguns aminoácidos (ver, por exemplo,, Jefferis et al., (2009) mAbs 1:1). Os anticorpos aqui descritos podem ser de qualquer alótipo. Alótipos de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 são conhecidos na técnica. Ver,

por exemplo, Kabat EA et al., (1991) supra; Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20, 2014); e Lefranc MP, mAbs 1:4, 1-7(2009).

[0105] As expressões "um anticorpo que reconhece um antígeno" e "um anticorpo específico para um antígeno" são usadas aqui de forma intercambiável com o termo "um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno".

[0106] Um "anticorpo isolado", como utilizado neste documento, destina-se a se referir a um anticorpo que está substancialmente livre de outros anticorpos com especificidades antigênicas diferentes (por exemplo, um anticorpo isolado que se liga especificamente a FAM19A5 está substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente a antígenos que não sejam FAM19A5). Um anticorpo isolado que se liga especificamente a um epítopo de FAM19A5 pode, no entanto, ter reatividade cruzada com outras proteínas FAM19A5 de diferentes espécies.

[0107] "Afinidade de ligação" geralmente se refere à força da soma total de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). Salvo indicação em contrário, como utilizado neste documento, "afinidade de ligação" refere- se à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação de 1:1 entre os membros de um par de ligação (por exemplo, anticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X para seu parceiro Y geralmente pode ser representada pela constante de dissociação (KD). A afinidade pode ser medida e/ou expressa de várias maneiras conhecidas na técnica, incluindo, mas não se limitando a, constante de dissociação de equilíbrio (KD), e constante de associação de equilíbrio (KA). O KD é calculado a partir do quociente de koff/kon e é expresso em concentração molar (M), enquanto KA é calculado a partir do quociente de kon/koff. kon refere-se à constante da taxa de associação de, por exemplo, um anticorpo para um antígeno e koff refere-se à dissociação de, por exemplo, um anticorpo para um antígeno. A kon e koff podem ser determinadas por técnicas conhecidas por aqueles versados na técnica, tais como imunoensaios (por exemplo, ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA)), BIACORE® ou ensaio de exclusão cinética (KinExA).

[0108] Como utilizado neste documento, os termos "se liga especificamente", "reconhece especificamente", "ligação específica", "ligação seletiva" e "se liga seletivamente" são termos análogos no contexto de anticorpos e se referem a moléculas (por exemplo, anticorpos) que se ligam a um antígeno (por exemplo, epítopo ou complexo imunológico), como tal ligação é entendida por um versado na técnica. Por exemplo, uma molécula que se liga especificamente a um antígeno pode se ligar a outros peptídeos ou polipeptídeos, geralmente com menor afinidade, conforme determinado por, por exemplo, imunoensaios, BIACORE®, instrumento KinExA® 3000 (Sapidyne Instruments, Boise, ID), ou outros ensaios conhecidos na técnica. Em uma modalidade específica, as moléculas que se ligam especificamente a um antígeno se ligam ao antígeno com um KA que é pelo menos 2 logs, 2,5 logs, 3 logs, 4 logs ou mais que o KA quando as moléculas se ligam a outro antígeno.

[0109] Os anticorpos tipicamente se ligam especificamente ao antígeno cognato com alta afinidade, refletido por uma constante de dissociação (KD) de 10-5 a 10-11 M ou menos. Qualquer KD superior a cerca de 10-4 M é geralmente considerado para indicar ligação não específica. Como usado aqui, um anticorpo que "se liga especificamente" a um antígeno se refere a um anticorpo que se liga ao antígeno e a antígenos substancialmente idênticos com alta afinidade, o que significa ter um KD de 10-7 M ou menos, preferivelmente 10-8 M ou menos, ainda mais preferencialmente 10-9 M ou menos, e mais preferencialmente entre 10-8 M e 10-10 M ou menos, quando determinado por, por exemplo, imunoensaios (por exemplo, ELISA) ou tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) em um instrumento BIACORE 2000 usando o antígeno predeterminado, mas não se liga com alta afinidade a antígenos não relacionados.

[0110] Como utilizado neste documento, o termo "antígeno" refere-se a qualquer substância imunogênica natural ou sintética, como uma proteína, peptídeo ou hapteno. Um antígeno pode ser FAM19A5 ou um fragmento do mesmo.

[0111] Como utilizado neste documento, um "epítopo" é um termo na técnica e refere-se a uma região localizada de um antígeno ao qual um anticorpo pode se ligar especificamente. Um epítopo pode ser, por exemplo, aminoácidos contíguos de um polipeptídeo (epítopo linear ou contíguo) ou um epítopo pode, por exemplo, reunir-se de duas ou mais regiões não contíguas de um polipeptídeo ou polipeptídeo (conformacional, não linear, epítopo descontínuo ou não contíguo). Epítopos formados de aminoácidos contíguos são tipicamente, mas não sempre, retidos na exposição a solventes de desnaturação, enquanto os epítopos formados por dobramento terciário são tipicamente perdidos no tratamento com solventes de desnaturação. Um epítopo normalmente inclui pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 20 aminoácidos em uma conformação espacial única. Os métodos para determinar quais epítopos estão ligados por um determinado anticorpo (isto é, mapeamento de epítopos) são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, ensaios de imunotransferência e imunoprecipitação, em que peptídeos contíguos ou sobrepostos (por exemplo, de FMAM19A5) são testados quanto à reatividade com um determinado anticorpo (por exemplo, anticorpo anti-FAM19A5). Os métodos para determinar a conformação espacial dos epítopos incluem técnicas na técnica e as descritas aqui, por exemplo, cristalografia de raios-x, ressonância magnética nuclear bidimensional e HDX-MS (ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)).

[0112] Em certas modalidades, o epítopo ao qual um anticorpo se liga pode ser determinado por, por exemplo, espectroscopia de NMR, estudos de cristalografia por difração de raios-X, ensaios ELISA, troca de hidrogênio/deutério acoplada à espectrometria de massa (por exemplo, espectrometria de massa por eletropulverização por cromatografia líquida), matriz ensaios de varredura de peptídeo oligo-peptídico e/ou mapeamento de mutagênese (por exemplo, mapeamento de mutagênese direcionada ao sítio). Para cristalografia de raios X, a cristalização pode ser realizada usando qualquer um dos métodos conhecidos na técnica (por exemplo, Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251 : 6300-6303). Anticorpo: os cristais de antígeno podem ser estudados usando técnicas de difração de raios-X bem conhecidas e podem ser refinados usando software de computador como X-PLOR (Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.; ver, por exemplo, Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al. ; U.S. 2004/0014194), and BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323). Os estudos de mapeamento de mutagênese podem ser realizados usando qualquer método conhecido por um versado na técnica. Ver, por exemplo, Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388- 1394 and Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081- 1085 para uma descrição de técnicas de mutagênese, incluindo técnicas de mutagênese de varredura de alanina.

[0113] O termo "mapeamento de epítopos" refere-se ao processo de identificação dos determinantes moleculares para o reconhecimento anticorpo- antígeno.

[0114] O termo "liga-se ao mesmo epítopo" com referência a dois ou mais anticorpos significa que os anticorpos se ligam ao mesmo segmento de resíduos de aminoácidos, conforme determinado por um determinado método. As técnicas para determinar se os anticorpos se ligam ao "mesmo epítopo em FAM19A5" com os anticorpos aqui descritos incluem, por exemplo, métodos de mapeamento de epítopo

, tais como, análises de raios-x de cristais de complexos de antígeno:anticorpo que fornecem resolução atômica do epítopo e espectrometria de massa de troca hidrogênio/deutério (HDX-MS). Outros métodos monitoram a ligação do anticorpo a fragmentos de antígeno ou variações mutadas do antígeno, onde a perda de ligação devido a uma modificação de um resíduo de aminoácido dentro da sequência de antígeno é frequentemente considerada uma indicação de um componente de epítopo. Além disso, métodos combinatórios computacionais para mapeamento de epítopos também podem ser utilizados. Estes métodos dependem da capacidade do anticorpo de interesse em isolar por afinidade peptídeos curtos específicos de bibliotecas de peptídeos combinados de fagos combinatórios. Espera-se que os anticorpos possuindo as mesmas sequências VH e VL ou as mesmas sequências CDR1, 2 e 3 se liguem ao mesmo epítopo.

[0115] Anticorpos que "competem com outro anticorpo pela ligação a um alvo" referem-se a anticorpos que inibem (parcial ou completamente) a ligação do outro anticorpo ao alvo. Se dois anticorpos competem entre si pela ligação a um alvo, isto é, se e até que ponto um anticorpo inibe a ligação do outro anticorpo a um alvo, pode ser determinado usando experimentos de competição conhecidos. Em certas modalidades, um anticorpo compete com e inibe a ligação de outro anticorpo a um alvo em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%. O nível de inibição ou competição pode ser diferente dependendo de qual anticorpo é o "anticorpo bloqueador" (isto é, o anticorpo frio que é incubado primeiro com o alvo). Os ensaios de competição podem ser realizados como descrito, por exemplo, em Ed Harlow e David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi: 10.1101/pdb.prot4277 ou no capítulo 11 de "Using Antibodies" de Ed Harlow e David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999. Os anticorpos concorrentes se ligam ao mesmo epítopo, a um epítopo sobreposto ou a epítopos adjacentes (por exemplo, como evidenciado pelo impedimento estérico).

[0116] Outros ensaios de ligação competitiva incluem: radioimunoensaio direto ou indireto (RIA) em fase sólida, imunoensaio enzimático direto ou indireto (EIA) em fase sólida, ensaio de competição em sanduíche (ver Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)); solid phase direct biotin-avidin EIA (see Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)); ensaio marcado direto em fase sólida, ensaio em sanduíche rotulado direto em fase sólida (ver Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)); RIA de marcador direto em fase sólida usando marcador 1-125 (ver Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)); EIA direta de biotina-avidina em fase sólida (Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); and direct labeled RIA. (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)).

[0117] O termo "Fv de cadeia simples" ou "scFv" refere-se a um anticorpo Fv de cadeia simples ("fragmento variável") em que os domínios variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve de um anticorpo tradicional de duas cadeias foram unidos para formar um cadeia.

[0118] Um anticorpo "biespecífico" ou "anticorpo bifuncional" é um anticorpo híbrido artificial, tendo dois pares de cadeia pesada/leve diferentes e dois sítios de ligação diferentes. Anticorpos biespecíficos podem ser produzidos por uma variedade de métodos incluindo fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab’. Ver, por exemplo, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992).

[0119] O termo "anticorpo monoclonal", como utilizado neste documento, refere-se a um anticorpo que exibe uma única especificidade e afinidade de ligação para um epítopo específico ou uma composição de anticorpos em que todos os anticorpos exibem uma única especificidade e afinidade de ligação para um epítopo específico. Por conseguinte, o termo "anticorpo monoclonal humano" refere-se a um anticorpo ou composição de anticorpo que exibe uma especificidade de ligação única e que possui regiões constantes variáveis e opcionais derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Em algumas modalidades, os anticorpos monoclonais humanos são produzidos por um hibridoma que inclui uma célula B obtida de um animal não humano transgênico, por exemplo, um camundongo transgênico, tendo um genoma compreendendo um transgene de cadeia pesada humano e um transgene de cadeia leve fundido a uma célula imortalizada.

[0120] O termo "anticorpo humano recombinante", como utilizado neste documento, inclui todos os anticorpos humanos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, como (a) anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico ou transcromossômico para genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir deles, (b) anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo, por exemplo, de um transfectoma, (c) anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpos humanos combinatória recombinante e (d) anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva a emenda de sequências de genes de imunoglobulina humana a outras sequências de DNA. Tais anticorpos humanos recombinantes compreendem regiões variáveis e constantes que utilizam determinadas sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana são codificadas pelos genes da linhagem germinativa, mas incluem rearranjos e mutações subsequentes que ocorrem, por exemplo, durante a maturação do anticorpo. Como conhecido na técnica (ver, por exemplo, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125), a região variável contém o domínio de ligação ao antígeno, que é codificado por vários genes que se reorganizam para formar um anticorpo específico para um antígeno estranho. Além do rearranjo, a região variável pode ser posteriormente modificada por várias alterações de um único aminoácido (referido como mutação somática ou hipermutação) para aumentar a afinidade do anticorpo para o antígeno estranho. A região constante mudará em resposta adicional a um antígeno (isto é, troca de isótipo). Portanto, as moléculas de ácido nucleico reorganizadas e somaticamente mutadas que codificam os polipeptídeos da imunoglobulina de cadeia leve e de cadeia pesada em resposta a um antígeno não podem ter identidade de sequência com as moléculas originais do ácido nucleico, mas serão substancialmente idênticas ou semelhantes (isto é, possuem pelo menos 80% de identidade).

[0121] Um anticorpo "humano" (HuMAb) refere-se a um anticorpo possuindo regiões variáveis nas quais as regiões de estrutura e CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Além disso, se o anticorpo contiver uma região constante, a região constante também será derivada das sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana. Os anticorpos aqui descritos podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de imunoglobulina da linhagem germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou específica do sítio in vitro ou por mutação somática in vivo). No entanto, o termo "anticorpo humano", como utilizados neste documento, não pretende incluir anticorpos nos quais as sequências de CDR derivadas da linha germinal de outra espécie de mamífero, tal como um ratinho, foram enxertadas em sequências de estrutura humanas. Os termos anticorpos "humanos" e anticorpos "totalmente humanos" são usados como sinônimos.

[0122] Um "anticorpo humanizado" refere-se a um anticorpo no qual alguns, a maioria ou todos os aminoácidos fora dos domínios CDR de um anticorpo não humano são substituídos por aminoácidos correspondentes derivados de imunoglobulinas humanas. Em algumas modalidades de uma forma humanizada de um anticorpo, alguns, a maioria ou todos os aminoácidos fora dos domínios CDR foram substituídos por aminoácidos de imunoglobulinas humanas, enquanto alguns, a maioria ou todos os aminoácidos dentro de uma ou mais regiões CDR permanecem inalterados. São permitidas pequenas adições, deleções, inserções, substituições ou modificações de aminoácidos, desde que não revoguem a capacidade do anticorpo de se ligar a um antígeno específico. Um anticorpo "humanizado" retém uma especificidade antigênica semelhante à do anticorpo original.

[0123] Um "anticorpo quimérico" refere-se a um anticorpo no qual as regiões variáveis são derivadas de uma espécie e as regiões constantes são derivadas de outra espécie, como um anticorpo no qual as regiões variáveis são derivadas de um anticorpo de camundongo e as regiões constantes são derivadas de um anticorpo humano.

[0124] O termo "reação cruzada", como utilizado neste documento, refere-se à capacidade de um anticorpo aqui descrito de se ligar ao FAM19A5 de uma espécie diferente. Por exemplo, um anticorpo aqui descrito que se liga a FAM19A5 humano também pode se ligar a outras espécies de FAM19A5 (por exemplo, camundongo FAM19A5). Como utilizado neste documento, a reatividade cruzada pode ser medida detectando uma reatividade específica com antígeno purificado em ensaios de ligação (por exemplo, SPR, ELISA) ou ligando a, ou interagindo funcionalmente com células que expressam fisiologicamente FAM19A5. Os métodos para determinar a reatividade cruzada incluem ensaios de ligação padrão, como descrito aqui, por exemplo, por análise por ressonância plasmônica de superfície (SPR) BIACORE™ utilizando um instrumento BIACORE™ 2000 SPR (Biacore AB, Uppsala, Sweden), ou técnicas de citometria de fluxo.

[0125] O termo "ocorrência natural", conforme aplicado a um objeto divulgado neste documento, refere-se ao fato de que um objeto pode ser encontrado na natureza. Por exemplo, uma sequência de polipeptídeos e polinucleotídeos que está presente em um organismo (incluindo vírus) que pode ser isolada de uma fonte natural e que não foi intencionalmente modificada pelo homem no laboratório é de ocorrência natural.

[0126] Um "polipeptídeo" refere-se a uma cadeia compreendendo pelo menos dois resíduos de aminoácidos ligados consecutivamente, sem limite superior no comprimento da cadeia. Um ou mais resíduos de aminoácidos na proteína podem conter uma modificação, como, sem limitação, formação de glicosilação, fosforilação ou ligação dissulfeto. Uma "proteína" pode compreender um ou mais polipeptídeos.

[0127] O termo "molécula de ácido nucleico", como utilizado neste documento, pretende incluir moléculas de DNA e moléculas de RNA. Uma molécula de ácido nucleico pode ser de fita simples ou dupla e pode ser cDNA.

[0128] O termo "célula hospedeira recombinante" (ou simplesmente "célula hospedeira"), como utilizado neste documento, pretende se referir a uma célula que compreende um ácido nucleico que não está presente naturalmente na célula e pode ser uma célula na qual um vetor de expressão recombinante foi introduzido. Deve-se entender que tais termos se referem não apenas à célula em questão, mas também à descendência de uma célula. Como certas modificações podem ocorrer nas gerações seguintes devido a mutações ou influências ambientais, essa descendência não pode, de fato, ser idêntica à célula-mãe, mas ainda está incluída no escopo do termo "célula hospedeira", como utilizado neste documento.

[0129] Como utilizado neste documento, o termo "ligado" refere-se à associação de duas ou mais moléculas. A ligação pode ser covalente ou não covalente. A ligação também pode ser genética (isto é, fundida de forma recombinante). Tais ligações podem ser alcançadas usando uma ampla variedade de técnicas reconhecidas na técnica, como conjugação química e produção de proteínas recombinantes. II. Vírus Adenoassociado (AAV) e Vetores derivados do mesmo

[0130] Os vetores AAV aqui divulgados incluem um ácido nucleico que codifica uma proteína de interesse, por exemplo, um antagonista FAM19A5, por exemplo, um anticorpo anti-FAM19A5. Em algumas modalidades, o ácido nucleico também pode incluir uma ou mais sequências regulatórias que permitem a expressão e, em algumas modalidades, a secreção da proteína de interesse, como, por exemplo,

um promotor, intensificador, sinal de poliadenilação, um sítio de entrada de ribossomo interno (IRES), uma sequência que codifica um domínio de transdução de proteína (PTD) e semelhantes. Assim, em algumas modalidades, o ácido nucleico pode compreender uma região promotora operativamente ligada à sequência de codificação para causar ou melhorar a expressão da proteína de interesse em células infectadas. Tal promotor pode ser ubíquo, específico para células ou tecidos, forte, fraco, regulado, quimérico, etc., por exemplo, para permitir a produção eficiente e estável da proteína no tecido infectado. O promotor pode ser homólogo à proteína codificada ou heterólogo, embora geralmente os promotores de uso nos métodos divulgados sejam funcionais em células humanas. Exemplos de promotores regulados incluem, sem limitação, promotores contendo o elemento Tet on/off, promotores induzíveis por rapamicina, promotores induzíveis por tamoxifeno e promotores de metalotioneína. Outros promotores que podem ser usados incluem promotores que são específicos para tecidos, como rim, baço, pâncreas, cérebro ou medula espinhal. Exemplos de promotores ubíquos incluem promotores virais, particularmente o promotor CMV, o promotor RSV, o promotor SV40, etc., e promotores celulares, tais como o promotor PGK (fosfoglicerato quinase) e o promotor β-actina.

[0131] Em algumas modalidades dos vetores AAV aqui divulgados, um ou mais elementos de feedback podem ser usados para amortecer a superexpressão da proteína de interesse. Por exemplo, algumas modalidades dos vetores AAV incluem uma ou mais sequências de siRNA que direcionariam o transcrito exógeno. Em outras modalidades, o vetor AAV inclui um ou mais promotores adicionais que podem ser reconhecidos por fatores de transcrição inibitórios. Em várias modalidades, os vetores AAV divulgados neste documento compreendem um construto que pode criar um alça de feedback homeostático que pode manter os níveis de expressão da proteína de interesse em um nível fisiológico.

[0132] Em algumas modalidades, os vetores AAV divulgados neste documento compreendem um ácido nucleico que inclui uma sequência líder (ou peptídeo sinal) permitindo a secreção da proteína codificada. Em algumas modalidades, a fusão do transgene de interesse com uma sequência que codifica um peptídeo sinal de secreção (geralmente localizado no terminal N de polipeptídeos secretados) permite a produção da proteína terapêutica em uma forma que pode ser segregada da célula transduzida. Exemplos não limitativos de tais peptídeos de sinal incluem beta-globina humana, albumina, β-glucuronidase, protease alcalina ou peptídeos de sinal secretórios de fibronectina.

[0133] Em algumas modalidades, o mRNA expresso a partir do vetor AAV da presente divulgação compreende um sítio de ligação de miRNA de um miRNA que é expresso preferencialmente em tecido não CNS. Em certas modalidades, o sítio de ligação de miRNA é um sítio de ligação para miR-122. Em certas modalidades, o sítio de ligação de miRNA é um sítio de ligação para miR-1. Em algumas modalidades, o mRNA expresso a partir do gene associado ao CNS não compreende um sítio de ligação de miRNA de um miRNA que é expresso preferencialmente no tecido do CNS.

[0134] AAV, um membro da família Parvoviridae, é um pequeno vírus icosaédrico sem envelope com genomas de DNA linear de fita simples de 4,7 quilobases (kb) a 6 kb. Gonçalves, M., Virol J 2: 43 (2005). Esta família pode ser dividida em duas subfamílias: a Parvovirinae, que infecta vertebrados, e a Densovirinae, que infecta insetos. Os membros da subfamília Parvovirinae são aqui referidos como parvovírus e incluem o gênero Dependovírus. Como pode ser deduzido do nome de seu gênero, os membros do Dependovírus são únicos, pois geralmente requerem coinfecção com um vírus auxiliar, como o adenovírus ou o vírus do herpes, para infecção produtiva em cultura celular. O gênero Dependovirus inclui AAV, que normalmente infecta humanos (por exemplo, sorotipos 1, 2, 3A, 3B, 4, 5 e 6) ou primatas (por exemplo, sorotipos 1 e 4) e vírus relacionados que infectam outros animais de sangue quente (por exemplo, vírus adenoassociados bovinos, caninos,

equinos e ovinos). Mais informações sobre parvovírus e outros membros do Parvoviridae são descritas em Kenneth I. Berns, “Parvoviridae: The Viruses and Their Replication,” Chapter 69 in Fields Virology (3d Ed. 1996). Genes AAV de replicação, capsídeo e montagem

[0135] O genoma de fita simples de AAV compreende três genes, rep (Replicação), cap (Capsídeo), e aap (Montagem). Esses três genes dão origem a pelo menos nove produtos de genes por meio do uso de três promotores, sítios alternativos de início da tradução e emenda diferencial.

[0136] O gene rep codifica quatro proteínas (Rep78, Rep68, Rep52 e Rep40), que são necessárias para a replicação e empacotamento do genoma viral. A expressão do gene cap dá origem às proteínas do capsídeo viral (VP1; VP2; VP3), que formam a camada externa do capsídeo que protege o genoma viral, além de estarem ativamente envolvidos na ligação e internalização celular. Estima-se que o revestimento viral seja composto por 60 proteínas dispostas em uma estrutura icosaédrica. O gene aap codifica a proteína ativadora de montagem (AAP) em uma estrutura de leitura alternativa que se sobrepõe ao gene cap. Acredita-se que esta proteína nuclear fornece uma função de andaime para a montagem do capsídeo e desempenha um papel na localização nucleolar das proteínas VP em alguns sorotipos de AAV.

[0137] Em algumas modalidades, o vetor AAV aqui divulgado é um AAV recombinante e não possui um ou mais do gene rep, o gene cap e o gene aap. Em algumas modalidades, o rAAV é modificado de modo que um ou mais do gene rep, o gene cap e o gene aap sejam mutados de modo que a expressão de um ou mais genes de AAV seja modificada. Em algumas modalidades, um ou mais dos genes rep, cap ou aap ocorrem naturalmente, por exemplo , os genes rep, cap ou app compreendem todos ou uma porção dos genes rep, cap ou aap do parvovírus. Em algumas modalidades, um ou mais dos genes rep, cap ou aap compreendem uma sequência sintética.

[0138] Deve ser entendido que um determinado genoma de AAV aqui descrito pode ter genes de diferentes genomas de AAV (por exemplo, genomas de AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11). Assim, são divulgados neste documento os vetores AAV que compreendem qualquer permutação possível de rep, cap ou aap. Repetições terminais invertidas

[0139] Certos aspectos da presente divulgação são direcionados a uma molécula de ácido nucleico que compreende uma primeira ITR, por exemplo, uma 5' ITR, e uma segunda ITR, por exemplo, uma 3' ITR. Em algumas modalidades, a ITR compreende uma de ocorrência natural, por exemplo , a ITR compreende todas ou uma porção de uma ITR de parvovírus. Em algumas modalidades, a ITR compreende uma sequência sintética.

[0140] Em algumas modalidades, a ITR compreende uma ITR de um genoma de AAV. Em algumas modalidades, a ITR é uma ITR de um genoma de AAV selecionado de AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 e qualquer combinação dos mesmos. Em certas modalidades, a ITR é uma ITR do genoma de AAV8 ou AAV9. Em outras modalidades, a ITR é uma sequência sintética geneticamente modificada para incluir em suas extremidades 5' e 3' ITRs derivadas de um ou mais genomas de AAV. Em algumas modalidades, as ITRs são derivadas do mesmo genoma, por exemplo, do genoma do mesmo vírus ou de genomas diferentes, por exemplo, dos genomas de dois ou mais genomas de AAV diferentes. Em certas modalidades, as ITRs são derivadas do mesmo genoma de AAV. Em outras modalidades, as duas ITRs presentes na molécula de ácido nucleico da presente divulgação são as mesmos e podem, em particular, ser AAV2 ITRs. Em algumas modalidades, a primeiro ITR e a segunda ITR são idênticas.

[0141] Em algumas modalidades, ITR é uma sequência sintética geneticamente modificada para incluir em suas extremidades 5' e 3' ITRs não derivadas de um genoma de AAV. Em algumas modalidades, a sequência ITR compreende uma ou mais sequências palindrômicas. Uma sequência palindrômica de uma ITR divulgada neste documento inclui, mas não está limitada a, sequências palindrômicas nativas (isto é, sequências encontradas na natureza), sequências sintéticas (isto é, sequências não encontradas na natureza), como sequências pseudopalindrômicas e combinações ou formas modificadas dos mesmos. Uma "sequência pseudopalindrômica" é uma sequência de DNA palindrômica, incluindo uma sequência palíndrômica imperfeita, que compartilha menos de 80%, incluindo menos de 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10% ou 5 %, ou nenhuma identidade de sequência de ácido nucleico com as sequências na sequência palindrômica de AAV nativa que formam uma estrutura secundária. As sequências palindrômicas nativas podem ser obtidas ou derivadas de qualquer genoma aqui divulgado. A sequência palindrômica sintética pode ser baseada em qualquer genoma aqui divulgado. A sequência palindrômica pode ser contínua ou interrompida. Em algumas modalidades, a sequência palindrômica é interrompida, em que a sequência palindrômica compreende uma inserção de uma segunda sequência. Em algumas modalidades, a segunda sequência compreende um promotor, um intensificador, um local de integração para uma integrase (por exemplo, sítios para a recombinase Cre ou Flp), uma estrutura de leitura aberta para um produto de gene ou uma combinação dos mesmos.

[0142] Em algumas modalidades, as ITRs formam estruturas de alça em hairpin. Em uma modalidade, a primeira ITR forma uma estrutura em hairpin. Em outra modalidade, a segunda ITR forma uma estrutura em hairpin. Ainda em outra modalidade, tanto a primeira ITR quanto a segunda ITR formam estruturas em hairpin.

[0143] Em algumas modalidades, uma ITR em uma molécula de ácido nucleico aqui descrito pode ser uma ITR ativada transcricionalmente. Uma ITR ativada transcricionalmente pode compreender a totalidade ou uma parte de uma ITR de tipo selvagem que foi ativada transcricionalmente pela inclusão de pelo menos um elemento transcricionalmente ativo. Vários tipos de elementos transcricionalmente ativos são adequados para uso neste contexto. Em algumas modalidades, o elemento transcricionalmente ativo é um elemento constitutivo transcricionalmente ativo. Os elementos constitutivos transcricionalmente ativos fornecem um nível contínuo de transcrição do gene e são preferidos quando se deseja que o transgene seja expresso continuamente. Em outras modalidades, o elemento transcricionalmente ativo é um elemento transcricionalmente ativo induzível. Os elementos transcricionalmente ativos induzíveis geralmente exibem baixa atividade na ausência de um indutor (ou condição indutora) e são suprarregulados na presença do indutor (ou mudam para uma condição indutora). Elementos transcricionalmente ativos indutíveis podem ser preferidos quando a expressão é desejada apenas em certos momentos ou em certos locais, ou quando é desejável titular o nível de expressão usando um agente indutor. Os elementos transcricionalmente ativos também podem ser específicos do tecido; isto é, eles exibem atividade apenas em certos tecidos ou tipos de células.

[0144] Os elementos transcricionalmente ativos podem ser incorporados em uma ITR de várias maneiras. Em algumas modalidades, um elemento transcricionalmente ativo é incorporado 5' a qualquer porção de uma ITR ou 3' a qualquer porção de uma ITR. Em outras modalidades, um elemento transcricionalmente ativo de uma ITR ativada transcricionalmente encontra-se entre duas sequências de ITR. Se o elemento transcricionalmente ativo compreende dois ou mais elementos que devem ser espaçados, esses elementos podem alternar com porções da ITR. Em algumas modalidades, uma estrutura em hairpin de uma ITR é excluída e substituída por repetições invertidas de um elemento transcricional. Este último arranjo criaria um hairpin que imita a porção deletada na estrutura. Múltiplos elementos tandem transcricionalmente ativos também podem estar presentes em uma ITR ativada transcricionalmente, e estes podem ser adjacentes ou espaçados. Além disso, os sítios de ligação de proteína (por exemplo, sítios de ligação Rep) podem ser introduzidos em elementos transcricionalmente ativos das ITRs transcricionalmente ativadas. Um elemento transcricionalmente ativo pode compreender qualquer sequência permitindo a transcrição controlada de DNA pela RNA polimerase para formar RNA, e pode compreender, por exemplo, um elemento transcricionalmente ativo, conforme definido abaixo.

[0145] ITRs ativadas transcricionalmente fornecem ativação transcricional e funções ITR para a molécula de ácido nucleico em um comprimento de sequência de nucleotídeo relativamente limitado que maximiza efetivamente o comprimento de um transgene que pode ser transportado e expresso a partir da molécula de ácido nucleico. A incorporação de um elemento transcricionalmente ativo em uma ITR pode ser realizada de várias maneiras. Uma comparação da sequência ITR e os requisitos de sequência do elemento transcricionalmente ativo pode fornecer uma visão sobre as maneiras de codificar o elemento dentro de uma ITR. Por exemplo, a atividade transcricional pode ser adicionada a uma ITR através da introdução de mudanças específicas na sequência ITR que replica os elementos funcionais do elemento transcricionalmente ativo. Existem várias técnicas na técnica para adicionar, deletar e/ou alterar de forma eficiente sequências de nucleotídeos particulares em sítios específicos (ver, por exemplo, Deng e Nickoloff (1992) Anal. Biochem. 200:81-88). Outra maneira de criar ITRs ativadas transcricionalmente envolve introduzir um sítio de restrição em um local desejado na ITR. Além disso, vários elementos ativados transcricionalmente podem ser incorporados em uma ITR ativada transcricionalmente, usando métodos conhecidos na técnica.

[0146] A título de ilustração, ITRs ativadas transcricionalmente podem ser geradas pela inclusão de um ou mais elementos transcricionalmente ativos, tais como:

caixa TATA, caixa GC, caixa CCAAT, sítio Sp1, região Inr, sítio CRE (elemento regulatório cAMP), sítio ATF-1/CRE, caixa APBβ, caixa APBα, caixa CArG, caixa CCAC ou qualquer outro elemento envolvido na transcrição como conhecido na técnica. Antagonistas FAM19A5

[0147] Os vetores AAV da presente divulgação compreendem um ácido nucleico, que codifica um ou mais antagonistas de uma proteína FAM19A5. Em algumas modalidades, o antagonista FAM19A5 é um anticorpo, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga especificamente à proteína FAM19A5. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um Fab, um Fab', um F(ab')2, um Fv ou um Fv de cadeia simples (scFv). Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 é um scFv.

[0148] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv anti-FAM19A5) expresso pelos vetores AAV da presente divulgação é caracterizado por características ou propriedades funcionais particulares. Por exemplo, os anticorpos se ligam especificamente ao FAM19A5 humano, incluindo o FAM19A5 solúvel e o FAM19A5 ligado à membrana. Além de se ligar especificamente ao FAM19A5 humano solúvel e/ou ligado à membrana, os anticorpos aqui descritos exibem uma ou mais das seguintes propriedades funcionais: (a) reduzir, reverter e/ou prevenir a fibrose; (b) reduzir a formação de matriz extracelular excessiva (ECM); (c) retardar o crescimento ou progressão do tumor; (d) ligar ao FAM19A5 humano solúvel com uma KD de 10 nM ou menos, conforme medido pelo ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA); (e) ligar a FAM19A5 humano ligado à membrana com uma KD de 10 nM ou menos conforme medido por ELISA; (f) reduzir, reverter, retardar e/ou prevenir o início da gliose reativa;

(g) suprimir uma proliferação excessiva de astrócitos reativos; (h) diminuir a expressão de proteoglicanos de sulfato de condroitina incluindo neurocan e antígeno neurônio-glia 2 (NG2); (i) aumentar a expressão de c-fos e pERK no núcleo dos neurônios; (j) promover a sobrevivência dos neurônios; (k) aumentar a expressão de GAP43 em neurônios; e (l) promover o crescimento de um axônio.

[0149] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) liga-se especificamente a FAM19A5 humano solúvel ou humano ligado à membrana com alta afinidade, por exemplo, com uma KD de 10-7 M ou menos, 10-8 M ou menos, 10-9 M (1 nM) ou menos, 10-10 M (0,1 nM) ou menos, 10-11 M ou menos, ou 10-12 M ou menos, por exemplo, 10-12 M a 10-7 M, 10-11 M a 10-7 M, 10- 10 M a 10-7 M, ou 10-9 M a 10-7 M, por exemplo, 10-12 M, 5 X 10-12 M, 10-11 M, 5 X 10-11 M, 10-10 M, 5 X 10-10 M, 10-9 M, 5 X 10-9 M, 10-8 M, 5 X 10-8 M, 10-7 M, ou 5 X 10-7 M. Ensaios padrão para avaliar a capacidade de ligação do anticorpo para FAM19A5 humano de várias espécies são conhecidas na técnica, incluindo, por exemplo, ELISAs, Western blots e RIAs. A cinética de ligação (por exemplo, afinidade de ligação) dos anticorpos também pode ser avaliada por ensaios padrão conhecidos na técnica, como por ELISA, análise BIACORETM ou KINEXA®.

[0150] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga a FAM19A5 humano solúvel com uma KD, por exemplo, conforme determinado por ELISA, de 10-7 M ou menos, 10-8 M (10 nM) ou menos, 10-9 M (1 nM) ou menos, 10-10 M ou menos, 10-12 M a 10-7 M, 10-11 M a 10-7 M, 10-10 M a 10-7 M, 10-9 M a 10-7 M, ou 10-8 M a 10-7 M. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga a FAM19A5 solúvel com uma KD de 10 nM ou menos, por exemplo, entre 0,1 e 10 nM, entre 0,1 e 5 nM, entre 0,1 e 1 nM, entre 0,5 e 10 nM, entre 0,5 e 5 nM, entre 0,5 e 1 nM, entre 1 e 10 nM, entre 1 e 5 nM, ou entre 5 e 10 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga especificamente a FAM19A5 humano solúvel com uma KD de cerca de 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM ou 900 pM, ou cerca de 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, ou 9 nM, ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM ou 90 nM, conforme determinado por como determinado por ELISA.

[0151] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga a humanos ligados à membrana com uma KD, por exemplo, conforme determinado por ELISA, de 10-7 M ou menos, 10-8 M (10 nM) ou menos, 10-9 M (1 nM) ou menos, 10-10 M ou menos, 10-12 M a 10-7 M, 10-11 M a 10-7 M, 10-10 M a 10-7 M, 10-9 M a 10-7 M, ou 10-8 M a 10-7 M. Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga especificamente ao FAM19A5 humano ligado à membrana com uma KD de 10 nM ou menos conforme determinado por ELISA, por exemplo, entre 0,1 e 10 nM, entre 0,1 e 5 nM, entre 0,1 e 1 nM, entre 0,5 e 10 nM, entre 0,5 e 5 nM, entre 0,5 e 1 nM, entre 1 e 10 nM, entre 1 e 5 nM, ou entre 5 e 10 nM. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) se liga ao FAM19A5 humano ligado à membrana com uma KD de cerca de 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM ou 900 pM, ou cerca de 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, ou 9 nM, ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM ou 90 nM , conforme determinado por conforme determinado por ELISA.

[0152] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFv) adequado para os métodos aqui divulgados compete de forma cruzada para a ligação (ou inibe a ligação de) um epítopo FAM19A5 humano com um anticorpo anti- FAM19A5 compreendendo CDRs ou regiões variáveis divulgadas aqui.

[0153] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 (por exemplo, scFvs) inibem a ligação de um anticorpo de referência compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, (i) em que CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada do anticorpo de referência compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 e SEQ ID NO: 13, respectivamente, e CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve do anticorpo de referência compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 25, respectivamente; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 19, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 30 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31; (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 32, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34 ; (v) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 89, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 92, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94; (vi) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 95, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 96, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 97, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 98, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 99 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 100 ; (vii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 102, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 106 ; (viii) em que a CDR1 da cadeia peada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 107, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 108, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 109, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 110, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 112 ; (ix) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 115, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 116, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 117 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 118; (x) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 119, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 120, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 121, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 122, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 123 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 124; (xi) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 125, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 126, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 127, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 128, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 129 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 130; (xii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 131, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 132 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 133, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 134, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 135 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 136; (xiii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 137, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 138 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 139, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 140, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 141 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 142; (xiv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 143, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 144 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 145, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 146, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 148; ou (xv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 149, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 150 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 151, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 152, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 153 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 154. Em algumas modalidades, a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada do anticorpo de referência compreende uma sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 conforme estabelecido na Tabela 2, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve do anticorpo de referência compreende uma sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 conforme estabelecido na Tabela 3, respectivamente.

[0154] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência compreende (a) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 35 e 39, respectivamente; (b) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 36 e 40, respectivamente; (c) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 37 e 41,

respectivamente; (d) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 38 e 42, respectivamente; (e) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 155 e 166, respectivamente; (f) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 156 e 167, respectivamente; (g) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 157 e 168, respectivamente; (h) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 158 e 169, respectivamente; (i) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 159 e 170, respectivamente; (j) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 160 e 171, respectivamente; (k) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 161 e 172, respectivamente; (l) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 162 e 173, respectivamente; (m) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 163 e 174, respectivamente; (n) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 164 e 175, respectivamente; ou (o) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 165 e 176, respectivamente. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (VL), em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na Tabela 4, e a VL compreende uma sequência de aminoácidos como estabelecido na Tabela 5.

[0155] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFvs) inibe a ligação de tal anticorpo de referência ao FAM19A5 humano em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%. Os anticorpos concorrentes se ligam ao mesmo epítopo, a um epítopo sobreposto ou a epítopos adjacentes (por exemplo, como evidenciado pelo impedimento estérico). Se dois anticorpos competem entre si pela ligação a um alvo pode ser determinado usando experimentos de competição conhecidos na técnica, como RIA e EIA.

[0156] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFvs) se liga ao mesmo epítopo FAM19A5 como um anticorpo de referência divulgado neste documento compreendendo CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, (i ) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13 , a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18 e a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 19, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 30 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31; (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 20, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 21, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 22, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 32, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 33 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 34 ; (v) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 89, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 90, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 91, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 92, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 93 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 94 ; (vi) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 95, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 96, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 97, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 98, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 99 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 100 ; (vii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 101, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 102, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 103, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 104, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 105 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 106 ; (viii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 107, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 108, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 109, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 110, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 111, e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 112; (ix) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 113, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 114, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 115, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 116, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 117 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 118 ; (x) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 119, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 120, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 121, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 122, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 123 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 124 ; (xi) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 125, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 126, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 127, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 128, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 129 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 130 ; (xii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 131, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 132, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 133, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 134, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 135 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 136 ; (xiii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 137, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 138, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 139, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 140, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 141 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 142 ; (xiv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 143, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 144, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 145, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 146, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 147 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 148; ou (xv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 149, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 150, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO : 151, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 152, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 153 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 154 Em algumas modalidades, a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada do anticorpo de referência compreende uma sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 conforme estabelecido na Tabela 2, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve do anticorpo de referência compreende uma sequência de CDR1, CDR2 e CDR3 conforme estabelecido na Tabela 3, respectivamente.

[0157] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência compreende (a) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 35 e 39, respectivamente; (b) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 36 e 40, respectivamente; (c) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 37 e 41, respectivamente; (d) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 38 e 42, respectivamente; (e) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 155 e 166, respectivamente; (f) sequências da região variável de cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 156 e 167, respectivamente; (g) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 157 e 168, respectivamente; (h) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 158 e 169, respectivamente; (i) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 159 e 170, respectivamente; (j) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 160 e 171, respectivamente; (k) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 161 e 172, respectivamente; (l) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 162 e 173, respectivamente; (m) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 163 e 174, respectivamente; (n) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 164 e 175, respectivamente; ou (o) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 165 e 176, respectivamente. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (VL),

em que a VH compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na Tabela 4, e a VL compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecido na Tabela 5.

[0158] As técnicas para determinar se dois anticorpos se ligam ao mesmo epítopo incluem, por exemplo, métodos de mapeamento de epítopos, como análises de raios-x de cristais de antígeno: complexos de anticorpos que fornecem resolução atômica do epítopo e espectrometria de massa de troca hidrogênio/deutério (HDX- MS), métodos que monitoram a ligação do anticorpo a fragmentos de antígeno ou variações mutadas do antígeno, em que a perda de ligação devido a uma modificação de um resíduo de aminoácido na sequência do antígeno é frequentemente considerada uma indicação de um componente de epítopo, métodos combinatórios computacionais para mapeamento de epítopos.

[0159] Um anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFvs) que seria útil nos métodos aqui divulgados pode se ligar a pelo menos um epítopo de FAM19A5 humano maduro, conforme determinado, por exemplo, por ligação dos anticorpos a fragmentos de FAM19A5 humano. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam a um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos de TLDRDSSQPRRTIARQTARC (SEQ ID NO: ou resíduos de aminoácidos 42 a 61 de SEQ ID NO: 2), por exemplo, um epítopo tendo pelo menos 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos de SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam à SEQ ID NO: 6 em um ou mais aminoácidos correspondentes aos resíduos de aminoácidos 46 a 51(isto é, DSSQPR), por exemplo, resíduos de aminoácidos 46, 50 e 52 (isto é, D---P-R), por exemplo, resíduos de aminoácidos 46, 47, 48, e 50 (isto é, DSS-P) de SEQ ID NO: 2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam a um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos de CDMLPCLEGEGCDLLINRSG (SEQ ID NO: 9 ou aminoácidos 90 a 109 de SEQ ID NO: 2), por exemplo, um epítopo tendo pelo menos 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos de SEQ ID NO: 9. Em certas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam à SEQ ID NO: 9 em um ou mais resíduos de aminoácidos 99 a 107 (isto é, EGCDLLINR), por exemplo, resíduos de aminoácidos 102, 103, 105 e 107 (isto é, DL- I-R), por exemplo, resíduos de aminoácidos 99, 100, 102, 103, 105 e 107 (isto é, EG- DL-I-R), por exemplo, resíduos de aminoácidos 99, 100 e 107 (isto é, EG ------ R) da SEQ ID NO: 4.

[0160] Em algumas modalidades, o pelo menos um epítopo tem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou aproximadamente 100% idêntica à SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, o pelo menos um epítopo tem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à SEQ ID NO: 9.

[0161] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo, scFvs) se liga a um epítopo FAM19A5 humano apenas, que é SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, ou um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, por exemplo, um epítopo tendo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.

[0162] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 da presente divulgação se liga à SEQ ID NO: 6 ou a um fragmento da mesma em sua conformação nativa (isto é, não desnaturado). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga à SEQ ID NO: 9 ou a um fragmento da mesma em sua conformação nativa (isto é, não desnaturado). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a FAM19A5 humano glicosilado e não glicosilado.

[0163] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 (por exemplo,

scFvs) se liga ainda a um ou mais epítopos FAM19A5 adicionais. Portanto, certos anticorpos anti-FAM19A5 se ligam a (i) um epítopo da SEQ ID NO: 6 e um epítopo adicional, ou (ii) um epítopo da SEQ ID NO: 9 e um epítopo adicional. Outros anticorpos anti-FAM19A5 podem se ligar a um epítopo de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 9 e um epítopo adicional. Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam a um epítopo de SEQ ID NO: 6, um epítopo de SEQ ID NO: 10 e um epítopo adicional.

[0164] Em algumas modalidades, um ou mais epítopos FAM19A5 adicionais são selecionados de QLAAGTCEIVTLDR (SEQ ID NO: 5, epítopo F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC (SEQ ID NO: 6, epítopo F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA (SEQ ID NO: 7, epítopo F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML (SEQ ID NO: 8, epítopo F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG (SEQ ID NO: 9, epítopo F5), ou NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 10, epítopo F6), ou um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 10 ou qualquer combinação dos mesmos. Um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 10, inclui um fragmento tendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 e SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 ou SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, um ou mais epítopos FAM19A5 adicionais são selecionados de SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, ou um fragmento localizado dentro da sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, por exemplo, um fragmento com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 aminoácidos da SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- FAM19A5 da divulgação se liga a qualquer um ou mais epítopos adicionais em sua conformação nativa (isto é, não desnaturada). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a ambos glicosilados e não glicosilados de um ou mais epítopos adicionais de FAM19A5.

[0165] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 da presente divulgação (por exemplo, scFvs) se ligam a pelo menos um epítopo FAM19A5 identificado como EP2, EP4 e/ou EP8, em que EP2 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste no aminoácidos DSSQP (SEQ ID NO: 66), em que EP4 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos ARCACRK (SEQ ID NO: 68), e em que EP8 compreende, consiste essencialmente em, ou consiste nos aminoácidos TCTQPGGR (SEQ ID NO: 72). Em algumas modalidades, o pelo menos um epítopo tem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou aproximadamente 100% idêntica a EP2, EP4, ou EP8. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- FAM19A5 se ligam apenas ao EP2. Em algumas modalidades, os anticorpos anti- FAM19A5 se ligam a EP4 e EP8.

[0166] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a pelo menos um epítopo FAM19A5 identificado como EP6, EP7 ou EP8, em que EP6 compreende os aminoácidos KTKQWCDML (SEQ ID NO: 70), em que EP7 compreende os aminoácidos GCDLLINR (SEQ ID NO: 71), e em que EP8 compreende os aminoácidos TCTQPGGR (SEQ ID NO: 72). Em algumas modalidades, o pelo menos um epítopo tem a sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou aproximadamente 100% idêntica a EP6, EP7, ou EP8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga apenas a EP6, EP7 ou EP8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a EP6, EP7 e EP8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a EP7 e EP8. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a EP7.

[0167] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 se ligam a um ou mais epítopos FAM19A5 selecionados do grupo que consiste em SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, e quaisquer combinações dos mesmos.

[0168] Em algumas modalidades, é fornecido aqui um anticorpo que se liga a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) com 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou afinidade maior do que outra proteína na família FAM19A medida por, por exemplo, um imunoensaio (por exemplo, ELISA), ressonância plasmônica de superfície ou ensaio de exclusão cinética. Em uma modalidade específica, é aqui fornecido um anticorpo que se liga a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) sem reatividade cruzada com outra proteína da família FAM19A conforme medido por, por exemplo, um imunoensaio.

[0169] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-FAM19A5 não são anticorpos nativos ou não são anticorpos de ocorrência natural. Por exemplo, os anticorpos anti-FAM19A5 têm modificações pós-traducionais que são diferentes daquelas dos anticorpos de ocorrência natural, como por ter mais, menos ou um tipo diferente de modificação pós-traducional. Anticorpos anti-FAM19A5 exemplificativos

[0170] Os anticorpos específicos que podem ser expressos pelos vetores AAV aqui divulgados são anticorpos, por exemplo, scFv, tendo as sequências de CDR e/ou da região variável de anticorpos anti-FAM19A5 1-65, 3-2 e 2-13, bem como anticorpos com pelo menos 80% de identidade (por exemplo, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95% ou pelo menos 99% de identidade) com suas sequências de CDR ou região variável. Ver Pat. U.S. 9.579.398; Pedido Internacional PCT/IB2017/001490. As Tabelas 2 e 3 fornecem sequências de CDR da cadeia pesada e da cadeia leve exemplificativas, respectivamente. As CDRs para os seguintes anticorpos foram identificadas usando o esquema de numeração de Kabat (ver supra): 1-65, 3-2, 2-13, 1-28, P2-C12, 13B4, 13F7, 15A9, P1- A03, P1- A08, P1-F02, P2-A01, P2-A03, P2- F07, P2-F11, SS01-13, SS01-13-s5 e S5-2.GKNG. As CDRs para os seguintes anticorpos foram identificadas usando o sistema de numeração IMGT (ver supra): 1- 7A-IT, Low-PI, 1-30, 1-17, 1-32, 4-11, 6-10, 2- 13D, 2-13D-37, 2-13D-37-1.5W-41, e 2-13D-37-3W-16. As sequências de aminoácidos VH e VL de diferentes anticorpos anti-FAM19A5 da presente divulgação são fornecidas nas Tabelas 4 e 5, respectivamente. Tabela 2. Sequências de aminoácidos de CDR da cadeia pesada variável Anticorpo VH-CDR1 VH-CDR2 VH-CDR3 Anti-FAM19A5 SYQMG (SEQ IDVINKSGSDTS (SEQ ID GSASYITAATIDA ("1-65") NO: 17) NO: 18) (SEQ ID NO: 19) Anti-FAM19A5 SFNMF QISSSGSSTNYAPAVRG SSYDCPYGHCSSGV ("3-2") (SEQ ID NO: 14) (SEQ ID NO: 15) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 SHGMF EITNDGSGTNYGSAVKG STYECPGGFSCWG ("2-13") (SEQ ID NO: 11) (SEQ ID NO: 12) DTGQID A (SEQ ID NO: 13) Anti-FAM19A5 GFDFSDYG IRSDGSNP AKDGNGYCALDAYR ("1-28") (SEQ ID NO: 20) (SEQ ID NO: 21) SGGYS

CGVYPGSIDA (SEQ ID NO: 22) Anti-FAM19A5 TYAVT YINWRGGTSYANWAKG DASSGAAFGSYGMD ("P2-C12") (SEQ ID NO: 89) (SEQ ID NO: 90) P (SEQ ID NO: 91) Anti-FAM19A5 SSNWWS EIYHGGTTNYNPSLKG WQLVGGLDV ("13B4") (SEQ ID NO: 95) (SEQ ID NO: 96) (SEQ ID NO: 97) Anti-FAM19A5 GYSWT EISHFGSANYNPSLKS ALRGTYSRFYYGMD ("13F7") (SEQ ID NO: 101) (SEQ ID NO: 102) V (SEQ ID NO: 103) Anti-FAM19A5 SYYWS YIYPSGSTNYNPSLKS VNPFGYYYAMDV ("15A9") (SEQ ID NO: 107) (SEQ ID NO: 108) (SEQ ID NO: 109) Anti-FAM19A5 SDYMS IIYPSTTTYYASWAKG GSNWSSGMNL ("P1-A03") (SEQ ID NO: 113) (SEQ ID NO: 114) (SEQ ID NO: 115) Anti-FAM19A5 TYYMS IVYPSGTTYYANWAKG GDSFGYGL ("P1-A08") (SEQ ID NO: 119) (SEQ ID NO: 120) (SEQ ID NO: 121)

Anti-FAM19A5 NYYMG IIYASGSTYYASWAKG IDIGVGDYGWAYDRL ("P1-F02") (SEQ ID NO: 125) (SEQ ID NO: 126) DL (SEQ ID NO: 127) Anti-FAM19A5 GYYMS IIYPSGSTDYASWAKG VAGYVGYGYETFFDI ("P2-A01") (SEQ ID NO: 131) (SEQ ID NO: 132) (SEQ ID NO: 133) Anti-FAM19A5 NYDMS FMDTDGSAYYATWAKG RGSSYYGGIDI ("P2-A03") (SEQ ID NO: 137) (SEQ ID NO: 138) (SEQ ID NO: 139) Anti-FAM19A5 SYYMN IIYPSGTTYYAGWAKG TVSGYFDI ("P2-F07") (SEQ ID NO: 143) (SEQ ID NO: 144) (SEQ ID NO: 145) Anti-FAM19A5 SYGVS YIANNYNPHYASWAKG DNYGMDP ("P2-F11") (SEQ ID NO: 149) (SEQ ID NO: 150) (SEQ ID NO: 151) Anti-FAM19A5 SYQMG (SEQ IDVINKSGSDTS (SEQ ID GSASYITAATIDA ("SS01-13") NO: 17) NO: 18) (SEQ ID NO: 19) Anti-FAM19A5 SYQMG (SEQ IDAINKSGSDTS (SEQ ID GSASYITAATIDA ("SS01-13- s5") NO: 17) NO: 208) (SEQ ID NO: 19) Anti-FAM19A5 SYQMG (SEQ IDAINKGGSDTS (SEQ IDGSASYITAATIDA ("S5- NO: 17) NO: 209) (SEQ ID NO: 19)

2.GKNG") Anti-FAM19A5 GFTFSSFNMF QISSSGSSTNYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("1-7A-IT") (SEQ ID NO: 210) (SEQ ID NO: 211) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("Low-PI") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("1-30") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("1-17") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("1-32") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("4-11") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFDFESFNMF QISSSEEDENYAPAVKG SSYDCPYGHCSSGV ("6-10") (SEQ ID NO: 212) (SEQ ID NO: 213) DSAGE IDA (SEQ ID NO: 16) Anti-FAM19A5 GFTFSSHGMF EITNDGSGTNYGSAVKG STYECPGGFSCWG ("2-13D") (SEQ ID NO: 214) (SEQ ID NO: 12) DTGQID A (SEQ ID NO: 13) Anti-FAM19A5 GFDFSSHGMF EITNDGSGTNYGSAVKG STYECPGGFSCWG ("2-13D-37") (SEQ ID NO: 215) (SEQ ID NO: 12) DTGQID A (SEQ ID NO: 13)

Anti-FAM19A5 GFDFSSHGMF EITNDGSGTNYGSAVKG SSYVCPGGFSCWG ("2-13D-37- (SEQ ID NO: 215) (SEQ ID NO: 12) DTGQID A (SEQ ID

1.5W-41") NO: 216) Anti-FAM19A5 GFDFSSHGMF EITNDGSGTNYGSAVKG SNYACPGGFSCWG ("2-13D-37- (SEQ ID NO: 215) (SEQ ID NO: 12) DTGQID A (SEQ ID 3W-16") NO: 217) Tabela 3 Sequências de aminoácidos de CDR da cadeia leve variável Anticorp VL-CDR1 VL-CDR2 VL-CDR3 o Anti- SGGGSSG WNDKRPS GNDDYSSDS FAM19A5 ("1-YGYG (SEQ ID NO: 30) GYVGV (SEQ ID NO: 65") (SEQ ID 31) NO: 29) Anti- SGGGSYA ESNKRPS (SEQ GSWDSSNGG FAM19A5 ("3-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 27) I (SEQ ID NO: 28) 2") NO: 26) Anti- SGGSYSY WDDERPS GTEDISGTAG FAM19A5 ("2-G (SEQ ID NO: 24) V (SEQ ID NO: 25) 13") (SEQ ID NO: 23) Anti- GYGYG QND GSEDSSTLAG FAM19A5 ("1- (SEQ ID (SEQ ID NO: 33) I (SEQ ID NO: 34) 28") NO: 32) Anti- QASQSISS EASKLAS QQGYSSTNV FAM19A5 ("P2- YLS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 93) WNA (SEQ ID NO: 94) C12") 92) Anti- SGDKLGNV QDNKRPS QAWDSSTAV FAM19A5 YAS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 99) (SEQ ID NO: ("13B4") 98) 100) Anti- RSSQSLLH LGSNRAS MQARQTPLT FAM19A5 SNGYNYLD (SEQ (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: ("13F7") ID NO: 104) 105) 106) Anti- RASQSIST GASTLQS QESASIPRT FAM19A5 SLN (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: ("15A9") 110) 111) 112) Anti- LASEDIYS GASNLES LGGYSYSST FAM19A5 ("P1- GIS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: GLT (SEQ ID NO: 118) A03") 116) 117) Anti- TADTLSRS RDTSRPS ATSDGSGSN FAM19A5 ("P1- YAS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: YQYV (SEQ ID NO: A08") 122) 123) 124)

Anti- LASEDIYS GASNLES LGGYSYSSIT FAM19A5 ("P1- GIS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: F02") 128 129) 130) Anti- LASEDIYS GASNLES LGGVTYSSTG FAM19A5 ("P2- GIS (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: THLT (SEQ ID NO: A01") 134) 135) 136) Anti- QASQSIGG RASTLAS QSPAYDPAA FAM19A5 ("P2- NLA (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: YVGNA (SEQ ID NO: A03") 140) 141) 142) Anti- LASEDIYSA GTSNLES QGYSSYPLT FAM19A5 ("P2- LA (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: F07") 146) 147) 148) Anti- QASQSVYN AASTLAS QGEFSCSSA FAM19A5 ("P2- NKNLA (SEQ ID (SEQ ID NO: DCNA (SEQ ID NO: F11") NO: 152) 153) 154) Anti- SGGASSG KDDERPS (SEQ GNDDYSSDS FAM19A5 YGYG (SEQ ID NO:ID NO: 219) GYVGV (SEQ ID NO: ("SS01-13") 218) 31) Anti- SGGASSG KDSERPS (SEQ GNDDYSSDS FAM19A5 YGYG (SEQ ID NO:ID NO: 220) GYVGV (SEQ ID NO: ("SS01-13- S5") 218) 31) Anti- SGGASSG KDSERPS (SEQ GNDDYSSDS FAM19A5 ("S5- YGYG (SEQ ID NO:ID NO: 220) GYVGV (SEQ ID NO:

2.GKN 218) 31) G") Anti- SGGGSYA ENNKRPS (SEQ GSWDSSNGG FAM19A5 ("1-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 221) I (SEQ ID NO: 28) 7A-IT") NO: 26) Anti- SGGGSEE EDEERPS (SEQ GSWDSEDED FAM19A5 EQYYYG (SEQ ID ID NO: 223) H (SEQ ID NO: 223) ("Low-PI") NO: 222) Anti- SGGGSEE QDEERPS (SEQ GSWDSEDED FAM19A5 ("1-EQYYYG (SEQ ID ID NO: 225) H (SEQ ID NO: 224) 30") NO: 222) Anti- SGGGSYA EDEQRPS (SEQ GSWDSEDED FAM19A5 ("1-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 226) H (SEQ ID NO: 224) 17") NO: 26) Anti- SGGGSYA QDEERPS (SEQ GSWDSEDED FAM19A5 ("1-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 225) H (SEQ ID NO: 224) 32") NO: 26) Anti- SGGGSYA EDHERPS (SEQ GSWDSSDED FAM19A5 ("4-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 227) H (SEQ ID NO: 228) 11") NO: 26) Anti- SGGGSYA QDLLRPS (SEQ GSWDSLSSS FAM19A5 ("6-GSYYYG (SEQ ID ID NO: 229) H (SEQ ID NO: 230) 10") NO: 26)

Anti- SGGVYSY WDDERPS GTEDISGTAG FAM19A5 ("2-G (SEQ ID NO: 231) (SEQ ID NO: 24) V (SEQ ID NO: 25) 13D") Anti- SGGVYSY WDDERPS GTEDISGTAG FAM19A5 ("2-G (SEQ ID NO: 231) (SEQ ID NO: 24) V (SEQ ID NO: 25) 13D-37") Anti- SGGVYSY WDDERPS GTEDISGTAG FAM19A5 ("2-G (SEQ ID NO: 231) (SEQ ID NO: 24) V (SEQ ID NO: 25) 13D-37-

1.5W- 41") Anti- SGGVYSY WDDERPS GTEDISGTAG FAM19A5 ("2-G (SEQ ID NO: 231) (SEQ ID NO: 24) V (SEQ ID NO: 25) 13D-37- 3W- 16") Tabela 4: Sequência de aminoácidos da cadeia pesada variável Anticorpo Sequência de aminoácidos VH (SEQ ID NO) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKG ("1-65") LEWVGVINKSGSDTSY

GSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKGSASYITA ATIDAWGHGTEVIV SSTS (SEQ ID NO: 37) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGL ("3-2") EYVAQISSSGSSTNY

APAVRGRATISRDNGQSTVRLQLNNPGAEDTGTYYCAKSSYDCPY GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 36) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSHGMFWVRQTPGKG ("2-13") LEYVAEITNDGSGTNY

GSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCARSTYECPG

GFSCWGDTGQIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 35) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFDFSDYGMGWVRQAPGKG ("1-28") LEWVAAIRSDGSNPSY

GSAVKGRATISKDNGRSTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKDGNGYCA LDAYRSGGYSCGVYP GSIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 38) Anti- FAM19A5 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYAVTWVRQAPGKGLE ("P2-C12") WIGYINWRGGTSYAN

WAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARDASSGAAFGSY

GMDPWGPGTLVTVS S (SEQ ID NO: 155) Anti- FAM19A5 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLNCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGK ("13B4") GLEWIGEIYHGGTTNY

NPSLKGRVTMSVDKTKNQFSLRLSSVTAVDTAVYYCARWQLVGGL DVWGQGTTVTVSS

(SEQ ID NO: 156) Anti- FAM19A5 QVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAINAESFNGYSWTWIRQTPGKGL ("13F7") EWIGEISHFGSANYN

PSLKSRATISADKSKNQFSLKLTSVTAVDTAVYYCARALRGTYSRFY

YGMDVWGQGTTVT VSS (SEQ ID NO: 157) Anti- FAM19A5 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGL ("15A9") EWIGYIYPSGSTNYN

PSLKSRVTISVDTSKNQFSLNLKSVTAVDTAVYYCARVNPFGYYYA MDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 158) Anti- FAM19A5 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSDYMSWVRQAPGEGLE ("P1-A03") WIGIIYPSTTTYYAS

WAKGRFTISKTSSTTVELKMTSLTTEDTATYFCARGSNWSSGMNL WGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159) Anti- FAM19A5 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYYMSWVRQAPGKGLE ("P1-A08") WIGIVYPSGTTYYAN

WAKGRFTISTASTTVDLMITSPTTEDTATYFCARGDSFGYGLWGPG TLVTVSS (SEQ ID NO: 160) Anti- FAM19A5 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMGWVRQAPGEGLE ("P1-F02") WIGIIYASGSTYYAS

WAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARIDIGVGDYGWAY

DRLDLWGQGTLVTV SS (SEQ ID NO: 161) Anti- FAM19A5 QEQLVESGGRLVTPGTPLTLSCTASGFFLSGYYMSWVRQAPGKGL ("P2-A01") EWIGIIYPSGSTDYA

SWAKGRFTISKTSTTVDLKITTPTTEDTATYFCARVAGYVGYGYETF FDIWGPGTLVTVS L (SEQ ID NO: 162) Anti- FAM19A5 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYDMSWVRQAPGKGLE ("P2-A03") YIGFMDTDGSAYYAT

WAKGRFTISRTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARRGSSYYGGIDIW

GPGTPVTVSL (SEQ ID NO: 163) Anti- FAM19A5 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMNWVRQAPGKGLE ("P2-F07") WIGIIYPSGTTYYAG

WAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARTVSGYFDIWGPGT LVTVSL (SEQ ID NO: 164) Anti- FAM19A5 QEQLVESGGRLVTPGTTLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGL ("P2-F11") EWIGYIANNYNPHYA

SWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDNYGMDPWG PGTLVTVSS (SEQ ID NO: 165) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALSLSCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKG ("SS01-13") LEWVGVINKSGSDTSY

GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAKGSASYITA

ATIDAWGHGTEVIV SS (SEQ ID NO: 232)

Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKG ("SS01-13- LEWVSAINKSGSDTSY s5") GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKGSASYITA ATIDAWGHGTEVIV SS (SEQ ID NO: 233) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKG ("S5- LEWVSAINKGGSDTSY

2.GKNG") GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKGSASYITA ATIDAWGHGTEVIV SS (SEQ ID NO: 234) Anti- AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGL FAM19A5 EYVSQISSSGSSTNY ("1-7A-IT") APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY

GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 235) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG ("Low-PI") LEYVSQISSSEEDENY

APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG FAM19A5 ("1- LEYVSQISSSEEDENY 30") APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY

GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG ("1-17") LEYVSQISSSEEDENY

APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY

GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG ("1-32") LEYVSQISSSEEDENY

APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY

GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG ("4-11") LEYVSQISSSEEDENY

APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQAPGKG ("6-10") LEYVSQISSSEEDENY

APAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSYDCPY

GHCSSGVDSAGEIDA WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 236) Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFTFSSHGMFWVRQAPGKG ("2-13D") LEYVSEITNDGSGTNY

GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSTYECPG

GFSCWGDTGQIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 237)

Anti- FAM19A5 AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGKG ("2-13D- LEYVSEITNDGSGTNY 37") GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSTYECPG GFSCWGDTGQIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 238) Anti- AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGKG FAM19A5 LEYVSEITNDGSGTNY ("2-13D-37- GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSSYVCPG

1.5W-41") GFSCWGDTGQIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 239) Anti- AVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGKG FAM19A5 LEYVSEITNDGSGTNY ("2-13D-37- GSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSNYACPG 3W-16") GFSCWGDTGQIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 240) Tabela 5: Sequência de aminoácidos da cadeia leve variável Anticorpo Sequência de aminoácidos VL (SEQ ID NO) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSSGYGYGWYQQKSPSSAPLT

VIYWNDKRPSDIPSRF FAM19A5 ("1-SGSKSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGT 65") TLTVL (SEQ ID NO: 41) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKAPGSAP FAM19A5 ("3-VTLIYESNKRPSDIPS 2") RFSGSTSGSTATLTITGVQADDEAIYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 40) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSYSYGWFQQKSPGSALVTVIYW FAM19A5 ("2-DDERPSDIPSRFSGA 13") LSGSTNTLTITGVQADDEAVYFCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 39) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANLEGTVEITCSGSGYGYGWYQQKSPGSAPVTVIYQ ("1-28") NDKRPSDIPSRFSGS

KSGSTGTLTITGVQVEDEAVYYCGSEDSSTLAGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 42) Anti- FAM19A5ELDMTQTPSSVSAAVGGTVTIKCQASQSISSYLSWYQQKPGQPPK ("P2-C12") LLIYEASKLASGVPS

RFSGSGYGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSTNVWNAFGGGT NVEIK (SEQ ID NO: 166) Anti- FAM19A5 SYELTQPLSVSVSPGQTASITCSGDKLGNVYASWYQQKPGQSPTL ("13B4") VIYQDNKRPSGIPER

FSGSNSGKTATLTISGTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTV L (SEQ ID NO: 167) Anti- DIVMTQTPLSLPVAPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYVQKP FAM19A5 GQPPQLLIYLGSNRA ("13F7") SGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARQTPLTFGG GTKVEIK (SEQ ID NO: 168)

Anti- FAM19A5 DIQMTQSPSSLSASVGDRITISCRASQSISTSLNWYQQTPGKAPRL ("15A9") LIYGASTLQSGVPS

RFSGGGSGTDFSLTITSLQPEDFATYYCQESASIPRTFGQGTKLDIK (SEQ ID NO: 169) Anti- FAM19A5ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPEKPPTLL ("P1-A03") ISGASNLESGVPP

RFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSTGLTFGAGT NVEIK (SEQ ID NO: 170) Anti- FAM19A5 ELVLTQSPSVQVNLGQTVSLTCTADTLSRSYASWYQQKPGQAPVL ("P1-A08") LIYRDTSRPSGVPDR

FSGSSSGNTATLTISGAQAGDEADYYCATSDGSGSNYQYVFGGG TQLTVT (SEQ ID NO: 171) Anti- FAM19A5ELDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTL ("P1-F02") LIYGASNLESGVPP

RFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSITFGAGTNVE IK (SEQ ID NO: 172) Anti- FAM19A5 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTL ("P2-A01") LIYGASNLESGVPP

RFSGSGSGSDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGVTYSSTGTHLTFGA GTNVEIK (SEQ ID NO: 173) Anti- FAM19A5ELDLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSIGGNLAWYQQKPGQPPK ("P2-A03") LLIYRASTLASGVPS

RFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSPAYDPAAYVGNAFGG GTELEIL (SEQ ID NO: 174) Anti- FAM19A5 ELDLTQTPPSLSASVGGTVTINCLASEDIYSALAWYQQKPGKPPTL ("P2-F07") LISGTSNLESGVPP

RFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYFCQGYSSYPLTFGAGTNVEI K (SEQ ID NO: 175) Anti- FAM19A5 ELDLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQ ("P2-F11") PPKLLIYAASTLASGV

SSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGEFSCSSADCNAFG GGTELEIL (SEQ ID NO: 176) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVRITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVI ("SS01-13") YKDDERPSDIPSRFS

GSSSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTT LTVL (SEQ ID NO: 241) Anti- FAM19A5ALTQPSSVSANPGETARITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVI ("SS01-13- s5") YKDSERPSDIPSRFS

GSSSGSTHTLTISGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTT LTVL (SEQ ID NO: 242)

Anti- FAM19A5ALTQPSSVSANPGETARITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVI ("S5- YKDSERPSDIPSRFS

2.GKNG") GSSSGSTHTLTISGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTT LTVL (SEQ ID NO: 242) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPV FAM19A5 TLIYENNKRPSDIPSR ("1-7A-IT") FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 243) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSEEEQYYYGWYQQKPGSAPV

TLIYEDEERPSDIPSR FAM19A5 FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLT ("Low-PI") VL (SEQ ID NO: 244) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSEEEQYYYGWYQQKPGSAPV FAM19A5 ("1-TLIYQDEERPSDIPSR 30") FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 245) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPV FAM19A5 ("1-TLIYEDEQRPSDIPSR 17") FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 246) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPV ("1-32") TLIYQDEERPSDIPSR

FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 247) Anti- FAM19A5ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPV ("4-11") TLIYEDHERPSDIPSR

FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSSDEDHFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 248) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPV ("6-10") TLIYQDLLRPSDIPSR

FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSLSSSHFGAGTTLT VL (SEQ ID NO: 249) Anti- ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWD FAM19A5 ("2-DERPSDIPSRFSGAL 13D") SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 250) Anti- FAM19A5ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWD ("2-13D- DERPSDIPSRFSGAL 37") SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 250) Anti- ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWD FAM19A5 DERPSDIPSRFSGAL ("2-13D-37- SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL

1.5W-41") (SEQ ID NO: 250)

Anti- ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWD FAM19A5 DERPSDIPSRFSGAL ("2-13D-37- SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL 3W-16") (SEQ ID NO: 250)

[0171] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende regiões variáveis da cadeia pesada e leve, em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NOs: 35-38, 155-165 ou 232- 240 (ver Tabela 4). Em outras modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende as CDRs da região variável da cadeia pesada selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 35-38, 155-165 ou 232-240 (ver Tabela 4).

[0172] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende regiões variáveis da cadeia pesada e leve, em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 39-42, 166-176 ou 241- 250 (ver Tabela 5). Em outras modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende as CDRs da região variável da cadeia leve selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 39-42, 166-176 ou 241-250 (ver Tabela 5).

[0173] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende as CDRs da região variável da cadeia pesada selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 35-38, 155-165 ou 232-240 (ver Tabela 4) e as CDRs da região variável da cadeia leve selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NOs: 39-42, 166-176 ou 241-250 (ver Tabela 5).

[0174] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende regiões variáveis da cadeia pesada e leve, (i) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 37 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 41; (ii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 36 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 40; (iii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 35 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 39; (iv) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 38 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 42; (v) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 155 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 166; (vi) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 156 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 167; (vii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 157 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 168; (viii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 158 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 169; (ix) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 159 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 170; (x) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 160 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 171; (xi) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 161 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 172; (xii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 162 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 173; (xiii) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:

163 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 174; (xiv) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 164 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 175; e (xv) em que a região variável da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 165 e em que a região variável da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 176. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-FAM19A5 isolado, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, compreende uma região variável da cadeia pesada (VH) e uma região variável da cadeia leve (VL), em que a VH compreende uma sequência de VH conforme estabelecido na Tabela 4 , e a VL compreende uma sequência de VL conforme estabelecido na Tabela 5.

[0175] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NOs: 35-38, 155-165 ou 232-240 (ver Tabela 4).

[0176] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NOs: 39-42, 166-176 ou 241-250

(ver Tabela 5).

[0177] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende regiões variáveis da cadeia pesada e leve, em que a região variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90% , pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NOs: 35- 38, 155-165 ou 232-240 (ver Tabela 4), e em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NOs: 39-42, 166 -176 ou 241-250 (ver Tabela 5).

[0178] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 35 e 39, respectivamente; (b) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 36 e 40, respectivamente; (c) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 37 e 41, respectivamente; (d) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 38 e 42, respectivamente; (e) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 155 e 166, respectivamente; (f) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 156 e 167, respectivamente;

(g) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 157 e 168, respectivamente; (h) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 158 e 169, respectivamente; (i) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 159 e 170, respectivamente; (j) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 160 e 171, respectivamente; (k) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 161 e 172, respectivamente; (l) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 162 e 173, respectivamente; (m) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 163 e 174, respectivamente; (n) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 164 e 175, respectivamente; (o) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 165 e 176, respectivamente; (p) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 232 e 241, respectivamente; (q) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 233 e 242, respectivamente; (r) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 234 e 242, respectivamente; (s) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 235 e 243, respectivamente; (t) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo

SEQ ID NOs: 236 e 244, respectivamente; (u) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 236 e 245, respectivamente; (v) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 236 e 246, respectivamente; (w) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 236 e 247, respectivamente; (x) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 236 e 248, respectivamente; (y) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 236 e 249, respectivamente; (z) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 237 e 250, respectivamente; (aa) sequências de regiões variáveis de cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 238 e 250, respectivamente; (bb) sequências da região variável da cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 239 e 250, respectivamente; (cc) sequências de regiões variáveis de cadeia pesada e leve compreendendo SEQ ID NOs: 240 e 250, respectivamente.

[0179] Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende (i) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-65, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-65, ou combinações dos mesmos; (ii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 3-2, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 3-2, ou qualquer combinação dos mesmos; (iii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 2-13, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 2-13, ou qualquer combinação dos mesmos; (iv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-28, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-28, ou qualquer combinação dos mesmos; (v) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesa de P2-C12, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P2-C12, ou qualquer combinação dos mesmos; (vi) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 13B4, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 13B4, ou qualquer combinação dos mesmos; (vii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 13F7, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 13F7, ou qualquer combinação dos mesmos; (viii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 15A9, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 15A9, ou qualquer combinação dos mesmos; (ix) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P1-A03, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P1-A03, ou qualquer combinação dos mesmos; (x) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P1-A08, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P1-A08, ou qualquer combinação dos mesmos; (xi) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P1-F02, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P1- F02, ou qualquer combinação dos mesmos; (xii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P2-A01, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P2-A01, ou qualquer combinação dos mesmos; (xiii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P2-A03, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P2-A03, ou qualquer combinação dos mesmos; (xiv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P2-F07, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de P2-F07, ou qualquer combinação dos mesmos; (xv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de P2-F11, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de F2-F11, ou qualquer combinação dos mesmos; (xvi) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de SS01- 13, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de

SS01-13, ou qualquer combinação dos mesmos; (xvii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de SS01-13-s5, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de SS01-13-s5, ou qualquer combinação dos mesmos; (xviii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de S5-2.GKNG, ou combinações dos mesmos e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de S5-2.GKNG, ou qualquer combinação dos mesmos; (xix) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-7A-IT, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-7A- IT, ou qualquer combinação dos mesmos; (xx) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de Low-PI, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de Low-PI, ou quaisquer combinações dos mesmos; (xxi) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-30, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-30, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-17, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-17, ou qualquer combinações dos mesmos; (xxiii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 1-32, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 1-32, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxiv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 4-11, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 4-11, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 6-10, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 6-10, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxvi) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 2-13D, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 2-13D, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxvii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 2-13D-37, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 2-13D-37, ou qualquer combinação dos mesmos; (xxviii) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 2- 13D-37-1.5W- 41, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 2-13D-37-1.5W- 41, ou qualquer combinação dos mesmos; ou (xxiv) a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada de 2-13D-37-3W-16, ou combinações dos mesmos, e/ou a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve de 2-13D-3W-16, ou qualquer combinação dos mesmos. As sequências de aminoácidos da VH CDR1, CDR2 e CDR3 para os diferentes anticorpos anti-FAM19A5 aqui divulgados são fornecidas na Tabela 2. As sequências de aminoácidos da VL CDR1, CDR2 e CDR3 para os diferentes anticorpos anti-FAM19A5 aqui divulgados são fornecidas na Tabela 3.

[0180] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17; e/ou (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; e/ou (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19.

[0181] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VH acima.

[0182] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; e/ou (b) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30; e/ou (c) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31.

[0183] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VL acima.

[0184] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende:

(a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 17; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 18; (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 19; (d) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 29; (e) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 30; e/ou (f) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 31.

[0185] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15; e/ou (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16.

[0186] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VH acima.

[0187] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; (b) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27; e/ou (c) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 28.

[0188] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VL acima.

[0189] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 14; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 15; (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 16; (d) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 26; (e) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 27; e/ou (f) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 28.

[0190] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; e/ou (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13.

[0191] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VH acima.

[0192] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID

NO: 23; (b) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou (c) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

[0193] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VL acima.

[0194] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 11; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 12; (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 13; (d) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 23; (e) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 24; e/ou (f) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 25.

[0195] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 21; e/ou (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22.

[0196] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VH acima.

[0197] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32; (b) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33; e/ou (c) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34.

[0198] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma, duas ou todas as três CDRs VL acima.

[0199] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende: (a) uma CDR1 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 20; (b) uma CDR2 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 21; (c) uma CDR3 VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 22; (d) uma VL CDR1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 32; (e) uma VL CDR2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 33; e/ou (f) uma VL CDR3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 34.

[0200] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 aqui divulgado (por exemplo, scFvs) compreende uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs acima. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 divulgado neste documento (por exemplo, scFvs) compreende uma, duas, três, quatro, cinco ou seis das CDRs fornecidas na Tabela 2 ou Tabela 3.

[0201] Em algumas modalidades, um domínio VH e um domínio VL aqui descritos podem ser ligados por um ligante flexível para produzir um anticorpo Fv de cadeia simples. Por conseguinte, em algumas modalidades, o anticorpo anti- FAM19A5, ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, compreende um domínio VH selecionado da Tabela 4 e um domínio VL selecionado da Tabela 5, em que o domínio VH e o domínio VL são unidos por um ligante flexível. Em algumas modalidades, o ligante flexível compreende a sequência SGGGGSSGGGGS (SEQ ID NO: 207). Em outras modalidades, o ligante flexível compreende a sequência GQSSRSSGGGGSSGGGGS (SEQ ID NO: 300). As sequências de aminoácidos de scFv anti-FAM19A5 exemplificativo são fornecidas na Tabela 6, abaixo (o domínio VH está sublinhado, o domínio VL está em negrito e o ligante está em itálico).

Tabela 6: Sequência de aminoácidos da cadeia pesada variável Anticorpo de Sequência de aminoácidos (SEQ ID NO) ScFv Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSSGYGYGWYQQKSPSSAPLTVI FAM19A5 YWNDKRPSDIPSRF

SGSKSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTT

LTVLSGGGGSSGGG ("1-65") GSAVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGK

GLEWVGVINKSGSDT SYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKGSASYIT

AATIDAWGHGTEV IVSS (SEQ ID NO: 202) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKAPGSAPV

TLIYESNKRPSDIPS RFSGSTSGSTATLTITGVQADDEAIYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLTV

LSGGGGSSGGGGS ("3-2") AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGL

EYVAQISSSGSSTNY APAVRGRATISRDNGQSTVRLQLNNPGAEDTGTYYCAKSSYDCPY GHCSSGVDSAGEIDA

WGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 201) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSYSYGWFQQKSPGSALVTVIYWD

DERPSDIPSRFSGA LSGSTNTLTITGVQADDEAVYFCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVLSGG

GGSSGGGGSAVTL ("2-13") DESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSHGMFWVRQTPGKGLEYVA

EITNDGSGTNYGSAV KGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCARSTYECPGGFSC

WGDTGQIDAWGHGTE VIVSS (SEQ ID NO: 203) Anti-FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVRITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVIY

KDDERPSDIPSRFS ("SS01-13") GSSSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTL scFv TVLGQSSRSSGGGG

SSGGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALSLSCKASGFTFSSYQMGWV RQAPGKGLEWVGVINK SGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNNLRAEDTAVYFCAKG

SASYITAATIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 251) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETARITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVIY

KDSERPSDIPSRFS GSSSGSTHTLTISGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTL

TVLGQSSRSSGGGG ("SS01-13- SSGGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSYQMGWV

RQAPGKGLEWVSAINK s5") scFv SGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKG

SASYITAATIDAWG HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 252) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETARITCSGGASSGYGYGWYQQKPSSAPLTVIY

KDSERPSDIPSRFS GSSSGSTHTLTISGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTL

TVLGQSSRSSGGGG ("S5- SSGGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSYQMGWV

RQAPGKGLEWVSAINK

2.GKNG") GGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKG

SASYITAATIDAWG scFv HGTEVIVSS (SEQ ID NO: 253) Anti- ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPVT FAM19A5 LIYENNKRPSDIPSR

FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("1-7A-IT") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFTFSSFNMFWVRQA scFv PGKGLEYVSQISSSG

SSTNYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 254)

Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSEEEQYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYEDEERPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("Low-PI") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 255) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSEEEQYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYQDEERPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("1-30") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 256) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYEDEQRPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("1-17") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 257) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYQDEERPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSEDEDHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("1-32") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 258) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYEDHERPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSSDEDHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("4-11") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 259)

Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKPGSAPVT

LIYQDLLRPSDIPSR FSGSTSGSTATLTITGVQAGDEADYYCGSWDSLSSSHFGAGTTLTV

LGQSSRSSGGGGSS ("6-10") GGGGSAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCKASGFDFESFNMFWVRQ

APGKGLEYVSQISSSE scFv EDENYAPAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYYCAKSSY

DCPYGHCSSGVDSA GEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 260) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWDD

ERPSDIPSRFSGAL SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVLGQSS

RSSGGGGSSGGGG ("2-13D") SAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFTFSSHGMFWVRQAPGKG

LEYVSEITNDGSGTN scFv YGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSTYECPG

GFSCWGDTGQIDAW GHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 261) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWDD

ERPSDIPSRFSGAL SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVLGQSS

RSSGGGGSSGGGG ("2-13D- SAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGK

GLEYVSEITNDGSGTN 37") scFv YGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSTYECPG

GFSCWGDTGQIDAW GHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 262) Anti- FAM19A5 ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWDD

ERPSDIPSRFSGAL SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVLGQSS

RSSGGGGSSGGGG ("2-13D-37- SAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGK

GLEYVSEITNDGSGTN

1.5W-41") YGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSSYVCPG

GFSCWGDTGQIDAW scFv GHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 263) Anti- ALTQPSSVSANPGETAKITCSGGVYSYGWFQQKPGSALVTVIYWDD

ERPSDIPSRFSGAL FAM19A5 SGSTNTLTITGVQAEDEADYYCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVLGQSS

RSSGGGGSSGGGG ("2-13D-37- SAVTLDESGGGLQTPGGALRLSCSASGFDFSSHGMFWVRQAPGK

GLEYVSEITNDGSGTN 3W-16") YGSAVKGRATISRDNGQSTLYLQMNSLRAEDTGTYFCARSNYACPG

GFSCWGDTGQIDAW scFv GHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 264)

[0202] Um domínio VH, ou uma ou mais CDRs aqui descritas, também pode ser ligado a um domínio constante para formar uma cadeia pesada, por exemplo, uma cadeia pesada de comprimento total. Da mesma forma, um domínio VL, ou uma ou mais CDRs aqui descritas, pode ser ligado a um domínio constante para formar uma cadeia leve, por exemplo, uma cadeia leve de comprimento total. Uma cadeia pesada de comprimento total e uma cadeia leve de comprimento total combinam-se para formar um anticorpo de comprimento total.

[0203] Por conseguinte, em modalidades específicas, é fornecido um anticorpo que compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada do anticorpo, por exemplo, uma cadeia leve e uma cadeia pesada separadas que são úteis nos métodos aqui divulgados. No que diz respeito à cadeia leve, em uma modalidade específica, a cadeia leve de um anticorpo aqui descrito é uma cadeia leve capa. Em uma outra modalidade específica, a cadeia leve de um anticorpo aqui descrito é uma cadeia leve lambda. Em ainda outra modalidade específica, a cadeia leve de um anticorpo aqui descrito é uma cadeia leve capa humana ou uma cadeia leve lambda humana. Em uma modalidade específica, um anticorpo descrito útil nos métodos divulgados aqui, que se liga especificamente a um polipeptídeo FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) compreende uma cadeia leve que compreende qualquer sequência de aminoácidos VL ou VL CDR aqui descrita, e em que a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de uma região constante de cadeia leve capa humana. Em uma modalidade específica, um anticorpo descrito útil nos métodos divulgados aqui, que se liga especificamente a um polipeptídeo FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) compreende uma cadeia leve que compreende sequências de aminoácidos VL ou VL CDR aqui descritas e em que a região constante de cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de uma região constante de cadeia leve lambda humana. Exemplos não limitativos de sequências de regiões constantes humanas foram descritos na técnica, por exemplo, ver Patente U.S.

5.693.780 e Kabat EA et al. (1991) supra.

[0204] No que diz respeito à cadeia pesada, em algumas modalidades, a cadeia pesada de um anticorpo aqui descrito pode ser uma cadeia pesada alfa (a), delta (δ), épsilon (ε), gama (γ) ou gama (γ) ou mu (μ). Em outra modalidade específica, a cadeia pesada de um anticorpo descrito pode compreender uma cadeia pesada alfa (a), delta (δ), épsilon (ε), gama (γ) ou mu (μ) humana. Em algumas modalidades, um anticorpo descrito útil nos métodos aqui divulgados, que se liga especificamente a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano), compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos VH ou VH CDR aqui descrita, e em que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de uma região constante da cadeia pesada gama (γ) humana. Em outras modalidades, um anticorpo aqui descrito, que se liga especificamente a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano), compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos VH ou VH CDR aqui divulgada, e em que a região constante da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de uma cadeia pesada humana aqui descrita ou conhecida na técnica. Exemplos não limitativos de sequências de regiões constantes humanas foram descritos na técnica, por exemplo, ver Patente U.S. 5.693.780 e Kabat EA et al., (1991) supra.

[0205] Em algumas modalidades, um anticorpo descrito útil nos métodos divulgados aqui, que se liga especificamente a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) compreende um domínio VL e um domínio VH compreendendo as CDRs VH ou VH e CDRs VL e VL aqui descritas e em que as regiões constantes compreendem as sequência de aminoácidos das regiões constantes de uma molécula de imunoglobulina IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ou IgY ou uma molécula de imunoglobina IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ou IgY humana. Em outra modalidade específica, um anticorpo aqui descrito, que se liga especificamente a FAM19A5 (por exemplo, FAM19A5 humano) compreende um domínio VL e um domínio VH compreendendo quaisquer sequências de aminoácidos aqui descritas e em que as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos das regiões constantes de uma molécula de imunoglobulina IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ou IgY, qualquer subclasse (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) da molécula de imunoglobulina. Em algumas modalidades, as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos das regiões constantes de uma IgG humana, de ocorrência natural, incluindo subclasses (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4) e alótipos (por exemplo, G1m, G2m, G3m e nG4m) e variantes das mesmas. Ver, por exemplo, Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (publicado online em 20, 2014) e Jefferis R. e Lefranc MP, mAbs 1:4, 1-7(2009). Em algumas modalidades, as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos das regiões constantes de uma IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana, ou variantes das mesmas.

[0206] Em certas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 divulgado útil nos métodos divulgados neste documento não tem funções efetoras de Fc, por exemplo, citotoxicidade dependente do complemento (CDC) e/ou fagocitose celular dependente de anticorpo (ADCP). As funções efetoras são mediadas pela região Fc e os resíduos mais proximais à região da dobradiça no domínio CH2 da região Fc são responsáveis pelas funções efetoras dos anticorpos, pois contêm um local de ligação amplamente sobreposto para os receptores C1q (complemento) e IgG-Fc (FcγR) nas células efetoras do sistema imunológico inato. Além disso, os anticorpos IgG2 e IgG4 têm níveis mais baixos de funções efetoras de Fc do que anticorpos IgG1 e IgG3. As funções efetoras de um anticorpo podem ser reduzidas ou evitadas por diferentes abordagens conhecidas na técnica, incluindo (1) o uso de fragmentos de anticorpo sem a região Fc (por exemplo, como Fab, F(ab')2, Fv de cadeia simples (scFv) ou um sdAb consistindo em um domínio VH ou VL monomérico); (2) gerar anticorpos aglicosilados, que podem ser gerados por, por exemplo, exclusão ou alteração do resíduo ao qual o açúcar está ligado, remoção dos açúcares enzimaticamente,

produção do anticorpo em células cultivadas na presença de um inibidor da glicosilação ou expressão do anticorpo em células incapazes de glicosilar proteínas (por exemplo, células hospedeiras bacterianas, ver, por exemplo, Pub. U.S. 20120100140); (3) empregar regiões Fc de uma subclasse IgG que possuem função efetora reduzida (por exemplo, uma região Fc de anticorpos IgG2 ou IgG4 ou uma região Fc quimérica compreendendo um domínio CH2 de anticorpos IgG2 ou IgG4, ver, por exemplo, Pub. U.S. 20120100140 e Lau C. et al. J. Immunol. 191:4769-4777 (2013)); e (4) gerar uma região Fc com mutações que resultam em funções Fc reduzidas ou inexistentes. Ver, por exemplo, Pub. U.S. 20120100140 e pedidos U.S. e PCT aqui citados e An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009).

[0207] Assim, em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 útil nos métodos aqui divulgados é um Fab, um Fab', um F(ab')2, um Fv, um Fv de cadeia simples (scFv) ou um sdAb consistindo em um domínio VH ou VL monomérico. Tais fragmentos de anticorpo são bem conhecidos na técnica e são descritos supra.

[0208] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 útil nos métodos aqui divulgados compreende uma região Fc com função efetora Fc reduzida ou nenhuma função. Em algumas modalidades, as regiões constantes compreendem as sequências de aminoácidos da região Fc de uma IgG2 ou IgG4 humana, em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 é de um isótipo IgG2/IgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região Fc quimérica que compreende um domínio CH2 de um anticorpo IgG do isótipo IgG4 e um domínio CH3 de um anticorpo IgG do isótipo IgG1 ou uma região Fc quimérica que compreende uma região de dobradiça de IgG2 e uma região CH2 de IgG4, ou uma região Fc com mutações que resultam em funções Fc reduzidas ou inexistentes. As regiões Fc com função efetora Fc reduzida ou inexistente incluem aquelas conhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013); An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); e Pub. U.S. 20120100140 e as patentes e publicações U.S. e publicações PCT citadas nelas. Também as regiões Fc com função efetora Fc reduzida ou inexistente podem ser prontamente fabricadas por um versado na técnica. Moléculas de ácido nucleico

[0209] Outro aspecto aqui descrito refere-se a uma ou mais moléculas de ácido nucleico que codificam qualquer um dos anticorpos, ou porções de ligação ao antígeno dos mesmos, aqui divulgados. Tais moléculas de ácido nucleico podem ser expressas em um vetor AAV da presente divulgação. Um ácido nucleico é "isolado" ou "tornado substancialmente puro" quando purificado para longe de outros componentes celulares ou outros contaminantes, por exemplo, outros ácidos nucleicos celulares (por exemplo, outro DNA cromossômico, por exemplo, o DNA cromossômico que está ligado ao DNA isolado in nature) ou proteínas, por técnicas padrão, incluindo tratamento alcalino/SDS, bandas de CsCl, cromatografia em coluna, enzimas de restrição, eletroforese em gel de agarose e outros bem conhecidos na técnica. Ver, F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York. Um ácido nucleico aqui descrito pode ser, por exemplo, DNA ou RNA e pode ou não conter sequências intrônicas. Em certas modalidades, o ácido nucleico é uma molécula de cDNA.

[0210] Certas moléculas de ácidos nucleicos aqui descritas são aquelas que codificam as sequências VH e VL dos anticorpos anti-FAM19A5 da presente divulgação. Sequências de DNA exemplificativas que codificam a sequência VH de tais anticorpos são estabelecidas nas SEQ ID NOs: 43-46, 177 e 265-278 (Tabela 7). As sequências de DNA exemplificativas que codificam as sequências VL de tais anticorpos são estabelecidas em SEQ ID NOs: 47-50, 178 e 279-292 (Tabela 8). Sequências de DNA exemplificativas que codificam os anticorpos scFv 1-65, 3-2 e 2- 13 são fornecidas na Tabela 9.

Tabela 7: Sequência de polinucleotídeos da cadeia pesada variável

ANTICORPO SEQUÊNCIA DE POLINUCLEOTÍDEO DE CADEIA PESADA VARIÁVEL (SEQ ID NO) (“BAIXO-PI”)

Tabela 8: sequência de polinucleotídeos da cadeia leve variável

ANTICORPO SEQUÊNCIA DE POLINUCLEOTÍDEO DE CADEIA LEVE VARIÁVEL (SEQ ID NO) (“BAIXO-PI”)

Tabela 9: sequência de polinucleotídeos de scFv variável

ANTICORPO ScFv SEQUÊNCIA DE POLINUCLEOTÍDEO (SEQ ID NO)

[0211] Para criar um anticorpo scFv anti-FAM19A5 aqui divulgado, os fragmentos de DNA que codificam VH e VL são operativamente ligados a outro fragmento que codifica um ligante flexível, por exemplo, que codifica a sequência de aminoácidos (Gly4-Ser) 3, de modo que as sequências VH e VL podem ser expressas como uma proteína de cadeia simples contígua, com as regiões VL e VH unidas pelo ligante flexível (ver, por exemplo, Bird et al., (1988) Science 242:423-426; Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554). Essa sequência de ácido nucleico pode então ser inserida em um vetor AAV aqui divulgado, que pode então ser usado para produzir o anticorpo scFv, por exemplo, como demonstrado nos Exemplos.

[0212] Alternativamente, as sequências de nucleotídeos que codificam as cadeias pesadas e leves dos anticorpos anti-FAM19A5 (com ou sem um peptídeo sinal), por exemplo, SEQ ID NOs: 43 e 47, SEQ ID NOs: 44 e 48, SEQ ID NOs: 45 e 49, SEQ ID NOs: 46 e 50, SEQ ID NOs: 177 e 178, respectivamente, podem ser inseridos em um ou mais vetores AAV da presente divulgação. Esses vetores AAV podem então ser usados para produzir anticorpos de comprimento total. As células hospedeiras que foram transduzidas com vetores AAV da presente divulgação são aqui abrangidas.

[0213] Os métodos de produção de vetores AAV, conforme divulgados neste documento, são bem conhecidos na técnica, incluindo métodos, por exemplo, usando células de empacotamento, vírus ou plasmídeos auxiliares e/ou sistemas de baculovírus (ver, por exemplo, Samulski et al., J. Virology 63, 3822 (1989); Xiao et al., J. Virology 72, 2224 (1998); Inoue et al., J. Virol. 72, 7024 (1998); WO1998/022607; e WO2005/072364).

[0214] Métodos de produção de vetores AAV pseudotipados também são conhecidos (ver, por exemplo, WO00/28004), bem como várias modificações ou formulações de vetores AAV, para reduzir sua imunogenicidade após administração in vivo (ver, por exemplo, WO01/23001; WO00/73316; WO04/112727; WO05/005610; e WO99/06562). Em algumas modalidades, os vetores de AAV podem ser preparados ou derivados de vários sorotipos de AAVs que podem ser misturados ou misturados com outros tipos de vírus para produzir vírus AAV quiméricos (por exemplo, pseudotipados). III. Composições Farmacêuticas

[0215] São fornecidas aqui composições que compreendem um vetor AAV da presente divulgação com o grau de pureza desejado em um transportador, excipiente ou estabilizador fisiologicamente aceitável (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Os transportadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos aos recebedores nas dosagens e concentrações empregadas, e incluem tampões, como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos, como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-

pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, como polivinilpirrolidona; aminoácidos, como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, como EDTA; açúcares, como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos, como TWEEN™,PLURONICS™ ou polietileno glicol (PEG).

[0216] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas compreendem um vetor AAV aqui descrito e, opcionalmente, um ou mais agentes profiláticos ou terapêuticos adicionais, em um transportador farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade específica, as composições farmacêuticas compreendem uma quantidade eficaz de um anticorpo ou porção de ligação ao antígeno do mesmo aqui descrito e, opcionalmente, um ou mais agentes terapêuticos profiláticos adicionais, em um transportador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o anticorpo é o único ingrediente ativo incluído na composição farmacêutica. As composições farmacêuticas aqui descritas podem ser úteis na redução da atividade do FAM19A5 e no tratamento de uma condição, como um dano, doença ou distúrbio do sistema nervoso central, por exemplo, dor neuropática.

[0217] Os transportadores farmaceuticamente aceitáveis usados em preparações parenterais incluem veículos aquosos, veículos não aquosos, agentes antimicrobianos, agentes isotônicos, tampões, antioxidantes, anestésicos locais, agentes de suspensão e dispersão, agentes emulsificantes, agentes sequestrantes ou quelantes e outras substâncias farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de veículos aquosos incluem injeção de cloreto de sódio, injeção de Ringers, injeção de dextrose isotônica, injeção de água estéril, injeção de dextrose e Ringers lactados. Os veículos parenterais não aquosos incluem óleos fixos de origem vegetal, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de gergelim e óleo de amendoim. Agentes antimicrobianos em concentrações bacteriostáticas ou fungistáticas podem ser adicionados a preparações parenterais embaladas em recipientes de doses múltiplas que incluem fenóis ou cresóis, mercuriais, álcool benzílico, clorobutanol, ésteres de metil e propil-ácido p-hidroxibenzoico, timerosal, cloreto de benzalcônio e cloreto de benzetônio. Agentes isotônicos incluem cloreto de sódio e dextrose. Os tampões incluem fosfato e citrato. Antioxidantes incluem bissulfato de sódio. Anestésicos locais incluem cloridrato de procaína. Agentes de suspensão e dispersão incluem carboximetilcelulose de sódio, hidroxipropil metilcelulose e polivinilpirrolidona. Os agentes emulsificantes incluem Polissorbato 80 (TWEEN® 80). Um agente sequestrante ou quelante de íons metálicos inclui EDTA. Os transportadores farmacêuticos também incluem álcool etílico, polietileno glicol e propileno glicol para veículos miscíveis em água; e hidróxido de sódio, ácido clorídrico, ácido cítrico ou ácido lático para ajuste do pH.

[0218] Uma composição farmacêutica da presente divulgação pode ser formulada para qualquer via de administração a um sujeito. Exemplos específicos de vias de administração incluem intranasal, oral, parenteral, intratecal, intracerebroventricular, pulmonar, subcutânea, intraperitoneal, intravítrea, epidural, subrretiniana ou intraventricular. A administração parenteral, caracterizada por injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa, também é contemplada aqui. Os injetáveis podem ser preparados em formas convencionais, como soluções líquidas ou suspensões, formas sólidas adequadas para solução ou suspensão em líquido antes da injeção, ou como emulsões. Os injetáveis, as soluções e as emulsões também contêm um ou mais excipientes. Excipientes adequados são, por exemplo, água, solução salina, dextrose, glicerol ou etanol. Além disso, se desejado, as composições farmacêuticas a serem administradas também podem conter quantidades menores de substâncias auxiliares não tóxicas, como agentes umectantes ou emulsificantes,

agentes tamponantes de pH, estabilizadores, intensificadores de solubilidade e outros agentes, como por exemplo, sódio acetato, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanolamina e ciclodextrinas.

[0219] As preparações para administração parenteral de um anticorpo incluem soluções estéreis prontas para injeção, produtos solúveis secos estéreis, como pós liofilizados, prontas para serem combinadas com um solvente imediatamente antes do uso, incluindo comprimidos hipodérmicos, suspensões estéreis prontas para injeção, produtos insolúveis secos estéreis prontos para serem combinados com um veículo imediatamente antes do uso e emulsões estéreis. As soluções podem ser aquosas ou não aquosas.

[0220] Se administrados por via intravenosa, transportadores adequados incluem solução salina fisiológica ou solução salina tamponada com fosfato (PBS) e soluções contendo agentes espessantes e solubilizantes, como glicose, polietileno glicol e polipropileno glicol e misturas dos mesmos.

[0221] As misturas tópicas compreendendo um anticorpo são preparadas como descrito para a administração local e sistêmica. A mistura resultante pode ser uma solução, suspensão, emulsões ou semelhantes e pode ser formulada como cremes, géis, pomadas, emulsões, soluções, elixires, loções, suspensões, tinturas, pastas, espumas, aerossóis, irrigações, sprays, supositórios, bandagens, adesivos dérmicos ou quaisquer outras formulações adequadas para administração tópica.

[0222] Um vetor AAV aqui descrito pode ser formulado como um aerossol para aplicação tópica, tal como por inalação (ver, por exemplo, Patente U.S. 4.044.126,

4.414.209 e 4.364.923, que descrevem aerossóis para a distribuição de um esteroide útil para o tratamento de doenças inflamatórias, particularmente asma). Estas formulações para administração ao trato respiratório podem estar na forma de um aerossol ou solução para um nebulizador, ou como um pó microfino para insuflações, isoladamente ou em combinação com um transportador inerte, como a lactose. Em tal caso, as partículas da formulação terão, em algumas modalidades, diâmetros inferiores a 50 mícrons, em algumas modalidades inferiores a 10 mícrons.

[0223] Um vetor AAV aqui descrito pode ser formulado para aplicação local ou tópica, tal como para aplicação tópica na pele e membranas mucosas, tal como nos olhos, na forma de géis, cremes e loções e para aplicação nos olhos ou para aplicação intracisternal ou intraespinhal. A administração tópica é contemplada para distribuição transdérmica e também para administração aos olhos ou mucosa, ou para terapias de inalação. As soluções nasais do anticorpo isoladamente ou em combinação com outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis também podem ser administradas.

[0224] Em algumas modalidades, uma composição farmacêutica compreendendo um vetor AAV aqui descrito é um pó liofilizado, que pode ser reconstituído para administração como soluções, emulsões e outras misturas. Também pode ser reconstituído e formulado como sólidos ou géis. O pó liofilizado é preparado dissolvendo um anticorpo ou porção de ligação ao antígeno do mesmo aqui descrita, ou um derivado farmaceuticamente aceitável, em um solvente adequado. Em algumas modalidades, o pó liofilizado é estéril. O solvente pode conter um excipiente que melhora a estabilidade ou outro componente farmacológico do pó ou solução reconstituída, preparado a partir do pó. Os excipientes que podem ser utilizados incluem, mas não estão limitados a, dextrose, sorbitol, frutose, xarope de milho, xilitol, glicerina, glicose, sacarose ou outro agente adequado. O solvente também pode conter um tampão, como citrato, fosfato de sódio ou potássio ou outro tampão conhecido dos versados na técnica, em algumas modalidades, em pH neutro. A filtração estéril subsequente da solução seguida de liofilização sob condições padrão conhecidas dos versados na técnica fornece a formulação desejada. Em algumas modalidades, a solução resultante será distribuída em frascos para liofilização. Cada frasco para injetáveis conterá uma dose única ou doses múltiplas do composto. O pó liofilizado pode ser armazenado sob condições apropriadas, tais como cerca de 4°C até a temperatura ambiente.

[0225] A reconstituição deste pó liofilizado com água para injeção fornece uma formulação para uso na administração parenteral. Para reconstituição, o pó liofilizado é adicionado à água estéril ou outro veículo adequado. A quantidade precisa depende do composto selecionado. Essa quantidade pode ser determinada empiricamente.

[0226] O vetor AAV aqui descrito e outras composições aqui fornecidas também podem ser formuladas para serem direcionadas a um determinado tecido, receptor ou outra área do corpo do sujeito a ser tratado. Muitos desses métodos de direcionamento são bem conhecidos dos versados na técnica. Todos esses métodos de direcionamento são aqui contemplados para uso nas composições instantâneas. Para exemplos não limitativos de métodos de direcionamento, ver, por exemplo, Patentes U.S. 6.316.652, 6.274.552, 6.271.359, 6.253.872, 6.139.865, 6.131.570,

6.120.751, 6.071.495, 6.060.082, 6.048.736, 6.039.975, 6.004.534, 5.985.307,

5.972.366, 5.900.252, 5.840.674, 5.759.542 e 5.709.874. Em certas modalidades, um vetor AAV aqui descrito é direcionado para tratar uma doença ou distúrbio, por exemplo, um dano ao sistema nervoso central, doença degenerativa do cérebro ou dor neuropática.

[0227] As composições a serem usadas para administração in vivo podem ser estéreis. Isso é facilmente obtido por exemplo, por filtração através de membranas de filtração estéreis. IV. Kits

[0228] Também são fornecidos neste documento kits que compreendem um ou mais vetores AAV aqui descritos. Em algumas modalidades, é fornecido aqui um pacote ou kit farmacêutico que compreende um ou mais recipientes preenchidos com um ou mais dos ingredientes das composições farmacêuticas aqui descritas, como um ou mais vetores AAV aqui fornecidos, opcional e com instruções de uso. Em algumas modalidades, os kits contêm uma composição farmacêutica aqui descrita e qualquer agente profilático ou terapêutico, como os aqui descritos. V. Usos e Métodos terapêuticos

[0229] Em certos aspectos, são apresentados aqui métodos para mitigar lesão ou dano ao CNS em um sujeito, compreendendo administrar um vetor AAV da presente divulgação ao sujeito.

[0230] Em outros aspectos, são apresentados aqui métodos para inibir, desacelerar, suprimir, restringir, reduzir, reverter ou prevenir o começo ou início da gliose e seus efeitos prejudiciais associados do CNS em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV aqui divulgado. Em algumas modalidades, são apresentados aqui métodos para inibir, desacelerar, suprimir, conter, reduzir, reverter ou prevenir a proliferação excessiva ou anormal de astrócitos reativos e seus efeitos prejudiciais associados do CNS em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito um AAV vetor da presente divulgação. Em algumas modalidades, são apresentados aqui métodos para diminuir, inibir ou reduzir a expressão de proteoglicanos de sulfato de condroitina (incluindo o nível de neurocano, NG2 ou ambos), ou reduzir a atividade de, ou tornar neurocano inativo, NG2 ou ambos em um sujeito que compreende administrar ao sujeito um vetor AAV aqui descrito. Em algumas modalidades, são apresentados aqui métodos para estimular, promover, aumentar ou ativar o crescimento de neurônios, de preferência após lesão ou dano em um sujeito, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV como aqui descrito. Em outras modalidades, são apresentados aqui métodos para aumentar o nível de atividade de mRNA de c-fos, proteína c-fos ou proteína c-fos, e aumentar o nível de mRNA de ERK, proteína ERK ou atividade de pERK, de preferência no núcleo de neurônios, em um sujeito em necessidade, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV da presente divulgação. Em certas modalidades, são apresentados aqui métodos para intensificar ou aumentar o nível de mRNA GAP43, proteína GAP43 ou aumentar a atividade da proteína GAP43, de preferência nos neurônios, em um sujeito em necessidade dos mesmos, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV como aqui divulgado. Em certas modalidades, são apresentados aqui métodos para intensificar ou promover a sobrevivência de neurônios e/ou promover o recrescimento de um axônio, em um sujeito em necessidade, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV aqui divulgado. Em algumas modalidades, o sujeito é um ser humano, preferencialmente um ser humano com lesão ou dano a um neurônio, por exemplo, dano ao CNS, trauma, lesão, dano cérebro-espinhal, tumor cerebral, infecção, isquemia, acidente vascular cerebral, resposta autoimune e/ou doença neurodegenerativa.

[0231] Em alguns aspectos, também são apresentados aqui métodos para tratar uma doença ou distúrbio, incluindo um dano ao sistema nervoso central, um dano ao sistema cérebro-espinhal, um distúrbio cerebral degenerativo, um distúrbio cerebral degenerativo ou do nervo, ou uma dor neuropática, em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV da presente divulgação. Em algumas modalidades, o dano ao sistema nervoso central é uma lesão cerebral traumática, uma lesão cérebro-espinhal, um acidente vascular cerebral, um tumor cerebral ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o distúrbio cerebral degenerativo é doença de Huntington, doença de Parkinson, doença de Alzheimer, esclerose múltipla, esclerose lateral amiotrófica (ALS) ou uma combinação das mesmas. Assim, em certas modalidades, é divulgado neste documento um método para tratar uma lesão cerebral traumática, um dano cérebro-espinhal, um acidente vascular cerebral, um tumor cerebral ou uma combinação dos mesmos em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV divulgado neste documento ou uma composição do mesmo. Em algumas modalidades, é divulgado aqui um método para tratar a doença de Huntington, doença de Parkinson, doença de Alzheimer, esclerose múltipla, ALS em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV divulgado neste documento, ou uma composição do mesmo. Em algumas modalidades, o sujeito é um humano.

[0232] Em certas modalidades, são apresentados aqui métodos para tratar, reduzir, reverter, prevenir, melhorar, controlar ou inibir uma fibrose em um sujeito em necessidade do mesmo, compreendendo administrar ao sujeito um vetor AAV aqui divulgado, ou uma composição do mesmo. Em algumas modalidades, a fibrose é benigna (isto é, não causa sintomas). Em outras modalidades, a fibrose está associada a um estado patológico, que pode ou não ser reversível. Em algumas modalidades, a fibrose é selecionada do grupo que consiste em fibrose hepática, fibrose pulmonar, fibrose renal, mielofibrose, fibrose pancreática, fibrose da pele, fibrose cardíaca, fibrose arterial, artrofibrose, fibrose da mama, fibrose muscular, fibrose retroperitoneal, fibrose tireoidiana, fibrose linfonodal, fibrose da bexiga e/ou fibrose pleural. Numa modalidade, a fibrose é uma fibrose hepática ou fibrose pulmonar. Em outra modalidade, a fibrose está associada a um tumor derivado de um câncer, como câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer renal, câncer de mama e/ou câncer de pâncreas. Em uma modalidade, o método diminui, reverte, alivia, melhora, inibe ou desacelera a velocidade ou impede uma fibrose, um sintoma associado à fibrose, uma causa subjacente da fibrose ou uma combinação dos mesmos.

[0233] Em outras modalidades, os vetores AAV divulgados neste documento podem tratar, reduzir, reverter, prevenir, melhorar, controlar ou inibir uma doença ou distúrbio associado à fibrose em um sujeito em necessidade do mesmo. O termo "uma fibrose associada a uma doença ou distúrbio" refere-se a uma fibrose que acompanha uma doença ou distúrbio, ou causada por ou resultante de uma doença ou distúrbio. O termo inclui uma fibrose que resulta de ou é causada pela doença ou distúrbio divulgado acima, ou uma fibrose que acompanha a doença ou distúrbio.

[0234] Em ainda outras modalidades, o vetor AAV da presente divulgação pode tratar, reduzir, reverter, prevenir, retardar, melhorar, controlar ou inibir um câncer de fígado, um câncer de pulmão, um câncer renal, um câncer de mama e/ou um câncer pancreático em um sujeito em necessidade do mesmo, em que o método compreende administrar ao sujeito o vetor AAV. Em algumas modalidades, o câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer renal, câncer de mama e/ou câncer de pâncreas está associado ou causado por fibrose.

[0235] Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um vetor AAV da presente divulgação, ou uma composição do mesmo, é administrada. Ao tratar um sujeito (por exemplo, um humano), uma quantidade terapeuticamente eficaz do vetor AAV aqui divulgado depende de fatores como idade, sexo, gravidade da doença.

[0236] Em algumas modalidades, um vetor AAV da presente divulgação, ou uma composição do mesmo, é administrado por via intravenosa, oral, parenteral, transtecal, intratecal, intracerebroventricular, intramuscular, pulmonar, intraperitoneal, intravítrea, subcutânea, epidural, subrretiniana, ou intraventricularmente.

[0237] Em algumas modalidades, um vetor AAV divulgado neste documento, ou uma composição do mesmo, pode ser administrado em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de uma fibrose (por exemplo, pirfenidona (ESBRIET®) ou nintedanibe (OFEV®) para fibrose pulmonar idiopática). A dose e a administração de uma ou mais drogas terapêuticas adicionais são conhecidas na técnica, por exemplo, conforme instruído pelo marcador do produto da droga respectiva.

[0238] Em algumas modalidades, um vetor AAV aqui descrito, ou uma composição do mesmo, pode ser administrado em combinação com um ou mais agentes adicionais para o tratamento de um dano ao sistema nervoso central (por exemplo, uma lesão cerebral traumática, uma lesão cérebro-espinhal, um acidente vascular cerebral , ou um tumor cerebral), um dano ao sistema cérebro-espinhal, um distúrbio cerebral degenerativo (por exemplo, doença de Huntington, doença de

Parkinson, doença de Alzheimer, esclerose múltipla, ALS), um distúrbio cerebral degenerativo ou do nervo, ou uma dor neuropática. Por exemplo, exemplos de agentes não limitativos para o tratamento da doença de Huntington incluem Tetrabenazina (XENAZINE®), drogas antipsicóticas, como haloperidol (HALDOL®), clorpromazina, risperidona (RISPERDAL®) e quetiapina (SEROQUEL®).

[0239] Agentes exemplificativos não limitativos para o tratamento da doença de Parkinson incluem levodopa (com ou sem carbidopa), agonistas da dopamina, como o pramipexol (MIRAPEX®), ropinirol (REQUIP®), e rotigotina (NEUPRO®), e apomorfina (APOKYN®), selegilina (ELDEPRYL® e ZELAPAR®), rasagilina (AZILECT®), Entacapona (COMTAN®), benztropina (COGENTIN®), tri-hexifenidil e amantadina.

[0240] Agentes exemplificativos não limitativos para o tratamento da doença de Alzheimer incluem Donepezil (ARICEPT®), Galantamina (RAZADYNE®), e Rivastigmina (EXELON®).

[0241] Agentes exemplificativos não limitativos para o tratamento da esclerose múltipla incluem acetato de Glatiramer (COPAXONE®), Fumarato de dimetil (TECFIDERA®), Fingolimod (GILENYA®), Teriflunomida (AUBAGIO®), Natalizumabe (TYSABRI®), Alemtuzumabe (LEMTRADA®), e Mitoxantrona.

[0242] Agentes exemplificativos não limitativos para o tratamento da ALS incluem riluzol (RILUTEK®).

[0243] A dose e a administração de uma ou mais drogas terapêuticas adicionais são conhecidas na técnica, por exemplo, conforme instruído pelo marcador do produto da droga respectiva.

[0244] Os seguintes exemplos são oferecidos a título de ilustração e não como limitação. Exemplo 1: Construção de vetor viral adenoassociado (AAV)

[0245] Os vetores AAV que codificam um fragmento variável de cadeia simples (scFv) dos clones de anticorpo anti-FAM19A5 1-65, 2-13 ou 3-2 foram construídos como segue. Resumidamente, para construir o vetor AAV que codifica o scFv 3-2, o vetor de expressão pscAAV-MCS (Cell biolabs, cat. #VPK-430) foi digerido com EcoRI e NotI. Em seguida, um transgene que codifica o íntron da beta globina humana sob um promotor CMV e scFv 3-2 foram inseridos no vetor pscAAV-MCS como mostrado na FIG. 1. O íntron da beta globina humana foi inserido para maximizar a expressão do gene. Para gerar vetores AAV que codificam o scFv 1-65 ou 2-13, o vetor AAV acima foi digerido com EcoRV e NotI para remover o transgene scFv 3-2. Então, o transgene que codifica o 1-65 ou 2-13 ScFv foram inseridos no vetor AAV. Os transgenes que codificam o ScFv 3-2, 1-65 ou 2-13 foram otimizados por códons para a expressão ideal em camundongos. Todos os vetores AAV incluíram um peptídeo sinal de cadeia capa de IgG de camundongo na frente do transgene scFv para promover a secreção das células. Os vetores AAV também incluíram uma etiqueta FLAG na parte de trás do transgene scFv para auxiliar na detecção da expressão do gene. Uma vez construídos, os vetores AAV foram transformados em E. coli, cultivados, e grandes quantidades dos vetores AAV foram obtidos usando maxiprep. Os vetores AAV que codificam scFv 1-30 ou IL-10 de camundongo ou GFP foram gerados e fornecidos por Signagen Laboratories (Rockville, Maryland).

[0246] Os seguintes AAVs recombinantes foram usados para os exemplos descritos abaixo: (i) scAAV8-CMV-3-2-ScFv (Sirion, Alemanha), (ii) scAAV9-CMV-3-2-ScFv (Signagen Laboratories, USA), (iii) scAAV9-CMV-1-65-ScFv (Signagen Laboratories, USA), scAAV9- CMV-2-13-ScFv (Signagen Laboratories, USA); (iv) scAAV1-CMV-3- 2-ScFv (Signagen Laboratories, USA). (v) scAAV9-CMV-1-30-ScFv (Signagen Laboratories, USA). (vi) scAAV9-CMV-mIL-10 (Signagen Laboratories, USA). (vii) scAAV9-CMV-GFP (Signagen Laboratories, USA). (viii) scAAV1-CMV-GFP (Signagen

Laboratories, USA). Exemplo 2: Análise da expressão do gene ScFv Anti-FAM19A5

[0247] A expressão do ScFv anti-FAM19A5 foi testada usando os vetores AAV construídos acima (scAAV8-CMV-3-2-ScFv, scAAV9-CMV-3-2-ScFv, scAAV9- CMV-1-65-ScFv, e scAAV9-CMV-2-13-ScFv). Resumidamente, células HEK293 (1,2 x 106)células foram semeadas em um prato de 60 mm2 e cultivadas por 24 horas. Posteriormente, o meio foi substituído por meio opti-MEM (baixo teor de soro) e as células HEK293 foram transduzidas com os diferentes vetores AAV (usando multiplicidade múltipla de infecção (MOI)). O sobrenadante foi recuperado nos dias 1, 4 e 8 após a transdução. Para confirmar a expressão do gene, o kit de ELISA ABSbio™ DYKDDDK tag (Advanced Bioreagent, cat. # SE002-flag) foi usado para detectar a etiqueta FLAG que foi incluída na parte de trás do gene scFv (ver FIG. 1 e Exemplo 1). O sobrenadante coletado foi diluído 1 a 10 vezes, depois 100 µL do sobrenadante diluído foram adicionados a um poço da placa de ELISA e deixados reagir à temperatura ambiente durante 2 horas a 350 rpm. Em seguida, a placa foi lavada e 100 µL do anticorpo de detecção foram adicionados a cada um dos poços e deixados reagir em temperatura ambiente por 1 hora a 350 rpm. Em seguida, a placa foi lavada novamente, 100 µL da solução TMB foram adicionados a cada poço e deixados reagir por 10-30 minutos. Em seguida, 100 µL da solução de parada foram adicionados aos poços e a absorbância foi medida a 450 nm. A quantidade de FLAG foi medida por meio da curva de calibração e a quantidade de scFv foi calculada multiplicando a razão da expressão de FLAG pelo peso molecular do padrão.

[0248] Conforme mostrado na FIG. 2A, para o vetor scAAV8-CMV-3-2-scFv, o anti-FAM19A5 scFv pode ser detectado no sobrenadante logo no dia 1 após a transdução (em 1 x 105 MOI). No dia 8 pós-transdução, aproximadamente 100 ng/mL de 3-2 scFv foi detectado no sobrenadante (a 1 x 105 MOI). Com o vetor scAAV9-

CMV-3-2-scFv, no dia 8 após a transdução, aproximadamente 70 ng/mL de scFv 3-2 foi detectado no sobrenadante (a 2 x 105 MOI). Resultados semelhantes foram observados com scAAV9-CMV-1-65-ScFv e scAAV9-CMV-2- 13-ScFv. Como mostrado na FIG. 2C, aproximadamente 120 ng/mL e 115 ng/mL de 1-65 scFv e 2-13 scFv, respectivamente, foram detectados no sobrenadante no dia 4 pós-transdução.

[0249] Os dados acima demonstram que todos os vetores AAV construídos no Exemplo 1 foram construídos corretamente e que podem induzir a expressão de scFv anti-FAM19A5 quando transduzidos em células. Exemplo 3: Inibição da ligação de FAM19A5 em células U87MG

[0250] Para avaliar a capacidade de ligação do scFv anti-FAM19A5 produzido pelos construtos AAV acima, um ensaio de inibição de ligação usando células U87MG (uma linhagem de células de glioblastoma primário humano e pode se ligar à proteína FAM19A5-Fc humana) foi realizado. Resumidamente, as células U87MG foram transduzidas com scAAV8-CMV-2-3-ScFv (MOI 1x105), scAAV9- CMV-1-65-ScFv (MOI 2x105), ou scAAV9-CMV-2-13-ScFv (MOI 2x105). Então, no dia 4 pós- transdução, 0,1 µg de proteína FAM19A5-Fc humana foi misturado com 200 µL de sobrenadante, e a mistura foi deixada a incubar por 30 minutos a 4°C. O controle negativo consistiu em PBS ou sobrenadante de células HEK293 transduzidas com o vetor scAAV9-CMV-GFP. Após a incubação de 30 minutos, 100 µL da mistura (FAM19A5-Fc humano + o sobrenadante de células transfectadas com o construto AAV scFv anti- FAM19A5) foram adicionados a células U87MG (2x105) e deixados reagir durante 1hora a 4°C. Em seguida, as células foram lavadas com PBS, tratadas com 100 µL de anticorpo de cabra anti-IgG 488 humana (Invitrogen, cat. #A11013) (diluído 1:50), incubadas por mais 30 minutos a 4°C. As células foram então lavaaos novamente e a ligação de FAM19A5-Fc humano às células U87MG foi analisada usando citometria de fluxo.

[0251] Conforme mostrado nas FIGs. 3A, 3B e 3C, quando as células U87MG foram tratadas com a mistura (FAM19A5-Fc humano + sobrenadante de células transfectadas com o construto AAV scFv anti-FAM19A5), houve ligação reduzida de FAM19A5-Fc humano às células em comparação a quando as células foram tratadas com uma mistura de controle (FAM19A5-Fc humano + sobrenadante de células transfectadas com o construto scAAV9-CMV-GFP). Isso foi verdade para todos os construtos AAV scFv anti-FAM19A5 testados. Os sobrenadantes de células transduzidas com scAAV9-CMV-1-65-ScFv, scAAV9-CMV-2-13-ScFv, scAAV8-CMV- 3-2-ScFv reduziram a intensidade média de fluorescência (MFI) da ligação de FAM19A5-Fc humano para células U87MG em 19% (FIG. 3A), 68% (FIG. 3B) e 42% (FIG. 3C), respectivamente, em comparação com o controle correspondente (sobrenadante de células transfectadas com um vetor AAV-GFP ou tratadas com PBS).

[0252] Estes resultados demonstram que o scFv anti-FAM19A5 produzido pelos construtos de AAV descritos no Exemplo 1 pode se ligar de forma eficaz ao FAM19A5 humano com alta afinidade. Exemplo 4: Inibição da ligação de FAM19A5 em células C8-D1A

[0253] Para confirmar a inibição da ligação observada no Exemplo 3, células C8-D1A foram usadas para o ensaio de inibição da ligação. As células C8-D1A são uma linhagem de células de astrócitos e podem secretar FAM19A5 para o meio circundante quando cultivadas. Se o scFv anti-FAM19A5 produzido pelos construtos AAV puderem se ligar de forma eficaz ao FAM19A5 humano, então o tratamento do meio de cultura de células C8-D1A com sobrenadantes de células transduzidas com o AAV anti-FAM19A5 scFv deve resultar em uma diminuição no nível da proteína FAM19A5 no meio de cultura.

[0254] Resumidamente, células C8-D1A foram semeadas em uma placa de 6 poços (2x105 células/poço) e cultivadas por aproximadamente 24 horas. Os sobrenadantes contendo scFv anti-FAM19A5 foram produzidos por transfecção de células HEK293 com um dos seguintes: (i) scAAV8-CMV-3-2-ScFv (MOI 1x105); (ii) scAAV9-CMV-1-65-ScFv (MOI = 2x105); ou (iii) scAAV9-CMV-2-13-ScFv (MOI = 2x105) e, em seguida, o sobrenadante coletado no dia 8 pós-transdução. Para ativar as células C8-D1A, TGF-β (20 ng/mL) foi adicionado às células com o sobrenadante contendo o scFv anti-FAM19A5. PBS ou sobrenadante de células transduzidas com scAAV-9-CMV-GFP foram usados como um controle negativo. As células foram deixadas a incubar por 24 horas, e então o nível de proteína anti-FAM19A5 na cultura foi medido usando um ensaio ELISA (ver Exemplo 1 para métodos usados no ensaio ELISA).

[0255] Conforme mostrado na FIG. 4A, quando as células C8-D1A foram ativadas na presença de sobrenadante de células transduzidas com scAAV8-CMV-3- 2-ScFv, houve uma redução de cerca de 38% no nível de proteína FAM19A5 detectada no meio de cultura, em comparação com um controle correspondente (PBS). O sobrenadante das células transduzidas com scAAV9-CMV-2-13- ScFv e scAAV9-CMV-1-65-ScFv reduziu o nível de proteína FAM19A5 no meio de cultura em cerca de 63% e 14%, respectivamente, em comparação com um controle correspondente (sobrenadante de células transfectadas com um vetor GFP AAV). Veja a FIG. 4B.

[0256] Os dados acima confirmam ainda que o scFv anti-FAM19A5 produzido pelos vetores AAV pode se ligar de forma eficaz ao FAM19A5 humano. Exemplo 5: Análise de expressão in vivo

[0257] Para confirmar a expressão de scFv anti-FAM19A5 in vivo, o construto scAAV8-CMV-3-2-ScFv foi administrado a camundongos C57BL/6 por via intratecal (1x1011 genoma viral (vg)/camundongo). Os camundongos foram então sacrificados 1 e 2 semanas após a administração, e o tecido da medula espinhal (medula espinhal lombar) foi analisado. Para detectar a expressão de genes, foram utilizados anticorpos anti-FLAG e microscopia de fluorescência.

[0258] Conforme mostrado na FIG. 5, não houve expressão de anticorpos positivos em animais virgens (isto é, nenhuma administração do vetor AAV), tanto na semana 1 (imagem superior esquerda) e na semana 2 (imagem inferior esquerda) após a administração. Em contraste, nos animais tratados com scAAV8-CMV-3-2- ScFv, a expressão de anti-FLAG (isto é, scFv anti-FAM19A5) foi observada no neurônio do corno ventral na semana 1 após a administração (imagem superior direita). Na semana 2, houve uma expressão muito mais alta, inclusive na região do corno dorsal.

[0259] Estes dados confirmaram os dados de expressão in vitro anteriores (ver Exemplo 2) e indicaram que quando os vetores AAV anti-FAM19A5 são administrados por via intratecal, eles podem transduzir as células circundantes, resultando na produção de scFv anti-FAM19A5. Exemplo 6: Avaliação do alívio da dor em um modelo de dor neuropática crônica (CCI) usando scAAV8-CMV-3-2-ScFv

[0260] Para avaliar os efeitos in vivo da administração dos construtos AAV scFv anti-FAM19A5, foi utilizado um modelo de camundongo de lesão por constrição crônica (CCI). Resumidamente, PBS (controle) ou scAAV8-CMV-3-2-ScFv foram administrados a camundongos C57BL/6 por via intratecal (nas vértebras). Então, cerca de 1 semana após a administração, a lesão do nervo periférico foi induzida nos animais através da ligadura do nervo escrotal. Em vários momentos após a lesão, tanto a alodinia mecânica (resposta a estímulos físicos externos) quanto a hiperalgesia térmica (resposta à temperatura elevada) foram avaliadas nos animais. A alodinia mecânica foi avaliada pela aplicação de monofilamentos de Von Frey (0,16 g) no pé lesado várias vezes e pela observação da frequência com que os animais reagiam com dor. A hiperalgesia térmica foi avaliada por meio do teste de Hargreaves, no qual um estímulo térmico radial (intensidade: 30) foi aplicado no pé lesado e a latência de retirada da pata foi determinada.

[0261] Conforme mostrado na FIG. 6A, os animais que receberam scAAV8- CMV-3-2 responderam ao monofilamento de Von Frey com menos frequência em comparação aos animais de controle (apenas PBS). Resultados semelhantes foram observados para hiperalgesia térmica. Veja a FIG. 6B. Estes resultados demonstram que a administração in vivo de construtos anti-FAM19A5 AAV pode reduzir a dor neuropática após uma lesão de nervo periférico. Exemplo 7: Avaliação do alívio da dor em um modelo de dor neuropática crônica (CCI) usando scAAV9-CMV-3-2-ScFv

[0262] Os efeitos in vivo de scAAV9-CMV-3-2-ScFv também foram testados usando um modelo de camundongo de lesão por constrição crônica (CCI), conforme descrito no Exemplo 6. Resumidamente, o construto scAAV9-CMV-3-2-ScFv foi administrado por via intratecal a camundongos C57BL6. Os animais de controle receberam o construto scAAV9-CMV-GFP. Então, cerca de 1 semana após a administração, a lesão do nervo periférico foi induzida. Em seguida, tanto a alodinia mecânica quanto a hiperalgesia térmica foram avaliadas nos animais em vários pontos de tempo, conforme descrito no Exemplo 6.

[0263] Conforme mostrado nas FIGs. 7A e 7B, os animais que receberam scAAV9-CMV-3-2-ScFv pareceram ser mais tolerantes à dor após lesão do nervo periférico. Por exemplo, em comparação com os animais de controle, os camundongos que receberam scAAV9-CMV-3-2-ScFv responderam ao monofilamento de Von Frey com menos frequência (FIG. 7A) e tiveram maior tempo de latência para temperatura elevada (FIG. 7B).

[0264] Coletivamente, esses resultados demonstram que o scFv anti- FAM19A5 pode ser distribuído in vivo de forma eficaz usando vetores AAV e que o scFv anti-FAM19A5 produzido pelos vetores AAV são totalmente funcionais (por exemplo, se liga ao FAM19A5 humano e reduz a dor neuropática).

Exemplo 8: Avaliação do alívio da dor em um modelo de dor neuropática crônica (CCI) usando scAAV1-CMV-3-2-ScFv

[0265] Para avaliar adicionalmente se os efeitos acima eram dependentes do tipo de AAV usado, os efeitos in vivo de scAAV1-CMV-3-2-ScFv foram testados. Resumidamente, os camundongos C57BL/6 receberam duas doses (cada dose = 1 x 1011 vg/camundongo) de scAAV1-CMV-3-2-ScFv em um intervalo de duas semanas por meio de administração intratecal. Uma semana após a última administração, a lesão de nervo periférico foi induzida e tanto a alodinia mecânica quanto a hiperalgesia térmica foram avaliadas conforme descrito no Exemplo 6.

[0266] Conforme observado nos Exemplos 6 e 7, em comparação com o grupo de controle, os animais tratados com scAAV1-CMV-3-2-ScFv mostraram melhora da alodinia mecânica (isto é, responderam com menos frequência à estimulação do monofilamento de Von Frey) começando por volta do dia 4 após a indução da lesão (ou seja, dias após a cirurgia). FIG. 8A. Esta melhora foi mantida até o final do experimento no dia 24 após a indução da lesão. Para hiperalgesia térmica, também foi observada melhora em animais tratados com scAAV1-CMV-3-2-ScFv (isto é, maior tempo de latência em resposta ao estímulo de calor) começando por volta do dia 5 após a indução da lesão e durou pelo menos até o dia 12 após a indução da lesão. FIG. 8B.

[0267] Esses resultados confirmam ainda a eficácia do scFv anti-FAM19A5 3- 2 no tratamento da dor neuropática e demonstram que os benefícios terapêuticos não dependem do tipo de vetor AAV utilizado. Exemplo 9: Avaliação do alívio da dor em um modelo de dor neuropática crônica (CCI) usando scAAV9-CMV-2-13-ScFv ou scAAV9-CMV-1-30-ScFv

[0268] Para avaliar se outros clones do anticorpo anti-FAM19A5 também podem tratar a dor neuropática, o modelo de camundongo de lesão por constrição crônica (CCI) descrito no Exemplo 6 foi novamente usado. Resumidamente, scAAV9-

CMV-2-13-ScFv (duas doses em intervalos de duas semanas; cada dose = 1 x 1011 vg/camundongo) ou scAAV9-CMV-1-30-ScFv (dose única; 1 x 1011 vg/camundongo) foi administrado a camundongos C57BL/6 via administração intratecal. Os animais de controle receberam scAAV9-CMV-GFP. Aproximadamente uma semana após a última administração, a lesão do nervo periférico foi induzida, e tanto a alodinia mecânica quanto a hiperalgesia térmica foram avaliadas em vários pontos de tempo após a indução da lesão (ver Exemplo 6).

[0269] Conforme mostrado nas FIGs. 9A, 9B, 10A e 10B, os animais tratados com scAAV9-CMV-2-13-ScFv ou scAAV9-CMV-1-30-ScFv mostraram melhora tanto para alodinia mecânica e hiperalgesia térmica. Estes resultados demonstram que diferentes clones do anticorpo anti-FAM19A5 podem ser usados para tratar a dor neuropática. Exemplo 10: Avaliação do alívio da dor em um modelo de dor neuropática crônica (CCI) usando anti-FAM19A5 ScFv em combinação com IL-10

[0270] Para determinar a eficácia do anti-FAM19A5 ScFv em combinação com outros agentes terapêuticos (isto é, IL-10), um dos seguintes regimes foi administrado a camundongos C57BL/6 por via intratecal: (i) scAAV1-CMV-GFP; (ii) scAAV1-CMV- 3-2-ScFv; (iii) scAAV1-CMV-3-2-ScFv + scAAV9-CMV-mIL-10; e (iv) scAAV9-CMV- mIL-10. Os diferentes regimes de tratamento foram administrados aos camundongos duas vezes (intervalo de duas semanas) a uma dose de 1 x 1011 µg/camundongo. Uma semana após a última administração, a lesão do nervo periférico foi induzida e a alodinia mecânica foi avaliada em vários pontos de tempo (ver Exemplo 6).

[0271] Como observado nos exemplos anteriores, os animais tratados com scAAV1-CMV-3-2-ScFv sozinho foram mais tolerantes aos estímulos físicos (isto é, responderam com menos frequência à aplicação do monofilamento de Von Frey) em comparação com o grupo de controle (isto é, scAAV1- CMV-GFP). Respostas semelhantes foram observadas em animais tratados com scAAV9-CMV-mIL-10 sozinho (FIG. 11A). Quando os animais foram tratados com a combinação de scAAV1- CMV-3-2-ScFv e scAAV9-CMV-mIL-10, eles exibiram uma resposta melhorada ainda maior, em comparação com animais tratados com um único regime de tratamento. Resultados semelhantes foram observados para scAAV9-CMV-2-13-ScFv (FIG. 11B) e scAAV9-CMV-1-30-ScFv (FIG. 11C).

[0272] Estes resultados demonstram ainda a eficácia do scFv anti-FAM19A5 administrado por meio de vetores AAV no tratamento da dor neuropática. Os resultados também demonstram que esta eficácia pode ser intensificada ainda mais quando combinada com outros agentes terapêuticos, como IL-10.

[0273] Este pedido PCT reivindica o benefício prioritário do Pedido Provisório U.S. 62/668.634, depositado em 8 de maio de 2018, que é incorporado neste documento por referência em sua totalidade.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Vetor de vírus adenoassociado (AAV), CARACTERIZADO pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica um antagonista contra uma família com semelhança de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5).

2. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda um íntron, um peptídeo sinal e/ou uma ou mais repetições terminais invertidas de vírus adenoassociado (ITRs).

3. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o antagonista FAM19A5 é um anticorpo anti-FAM19A5.

4. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um Fab, um Fab', um F(ab')2, um Fv ou um Fv de cadeia simples (scFv).

5. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 é um scFv.

6. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o ácido nucleico é otimizado por códon.

7. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que o ácido nucleico compreende uma sequência de nucleotídeos conforme estabelecido na SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 206 ou SEQ ID NO: 301.

8. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o scFv compreende uma sequência de aminoácidos conforme estabelecida na SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 203 ou SEQ ID NO: 256.

9. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 exibe uma propriedade selecionada de: (a) ligar ao FAM19A5 humano solúvel com uma KD de 10 nM ou menos,

conforme medido pelo ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA); (b) ligar a FAM19A5 humano ligado à membrana com uma KD de 10 nM ou menos conforme medido por ELISA; (c) ambos (a) e (b).

10. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 9, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compete de forma cuzada pela ligação a um epítopo FAM19A5 humano com um anticorpo de referência compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2, e CDR3 da cadeia leve, (i) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19, A CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 30 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; ou (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 222, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 225 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 224.

11. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 se liga ao mesmo epítopo FAM19A5 como um anticorpo de referência compreendendo uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, (i) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 17, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 18, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 19, A CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 29, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 30 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 31; (ii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 14, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 15, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 26, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 27 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 28; (iii) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 11, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 12, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 13, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 23, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 24 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 25; ou (iv) em que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 212, a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 213, a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 16, a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 222, a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 225 e a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO: 224.

12. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 se liga a pelo menos um epítopo FAM19A5, que é SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 9.

13. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 se liga apenas a um epítopo FAM19A5, que é SEQ ID NO: 6 ou SEQ ID NO: 9.

14. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 3 a 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 se liga ainda a um epítopo FAM19A5 adicional.

15. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que o epítopo FAM19A5 adicional é selecionado do grupo que consiste em SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, e qualquer combinação dos mesmos.

16. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3, da cadeia leve, em que a CDR3 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 16 ou SEQ ID NO: 13.

17. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que a CDR1 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 212.

18. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, CARACTERIZADO pelo fato de que a CDR2 da cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 12 ou SEQ ID NO: 213.

19. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 18, CARACTERIZADO pelo fato de que a CDR1 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 23 ou SEQ ID NO: 222.

20. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 19, CARACTERIZADO pelo fato de que a CDR2 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 24 ou SEQ ID NO: 225.

21. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que a CDR3 da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos estabelecida em SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 25 ou SEQ ID NO: 224.

22. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada e uma CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve, em que

(i) as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreendem SEQ ID NOs: 17, 18 e 19, respectivamente, e as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendem SEQ ID NOs: 29, 30 e 31, respectivamente; (ii) as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreendem SEQ ID NOs: 14, 15 e 16, respectivamente, e a CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendem SEQ ID NOs: 26, 27 e 28, respectivamente; (iii) as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada compreendem SEQ ID NOs: 11, 12 e 13, respectivamente, e as CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve compreendem SEQ ID NOs: 23, 24 e 25, respectivamente; ou (iv) a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 compreende SEQ ID NOs: 212, 213 e 16, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 compreende SEQ ID NOs: 222, 225 e 224, respectivamente.

23. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 16 a 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável de cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 35 ou SEQ ID NO: 236 e/ou um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 39 ou SEQ ID NO: 245.

24. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 37 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 41.

25. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 36 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 40.

26. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 35 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 39.

27. Vetor AAV, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada compreendendo SEQ ID NO: 236 e um domínio variável da cadeia leve compreendendo SEQ ID NO: 245.

28. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende um domínio variável da cadeia pesada e um domínio variável da cadeia leve, em que o domínio variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 37, 36, 35 ou 236.

29. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 41, 40, 39 ou 245.

30. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 compreende uma região variável da cadeia pesada e uma região variável da cadeia leve, em que a região variável da cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99%, ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 37, 36, 35 ou 236; e em que a região variável da cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95%, pelo menos cerca de 96%, pelo menos cerca de 97%, pelo menos cerca de 98%, pelo menos cerca de 99% ou cerca de 100% idêntica à sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 41, 40, 39 ou 245.

31. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 30, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 inibe a ligação de um anticorpo de referência ao FAM19A5 humano em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% , 80%, 90% ou 100%, conforme medido por um ensaio de inibição de ligação.

32. Vetor AAV, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 31, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-FAM19A5 reduz a concentração da proteína FAM19A5 em um meio de cultura compreendendo uma linhagem de células de astrócitos (por exemplo, C8-D1A) em pelo menos 10%, 20%, 30 %, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%, conforme medido por ELISA.

33. Método de produção de uma partícula de vírus adenoassociado (AAV) recombinante, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende (a) cultivar uma célula hospedeira que foi transfectada com o vetor AAV como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 32 para fornecer uma cultura de células, e (b) recuperar a partícula AAV recombinante de um sobrenadante da cultura de células.

34. Vetor de vírus adenoassociado (AAV), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que é para distribuição in vivo de um antagonista contra uma família com semelhança de sequência 19, proteína membro A5 (FAM19A5) ("antagonista FAM19A5").

35. Vetor de vírus adenoassociado (AAV), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou condição em um sujeito em necessidade do mesmo.

36. Vetor de vírus adenoassociado (AAV), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que é para o tratamento de uma dor neuropática em um sujeito em necessidade do mesmo.

37. Vetor AAV para uso de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de que a dor neuropática é uma dor neuropática periférica.

38. Vetor de vírus adenoassociado (AAV), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, CARACTERIZADO pelo fato de que é para aumentar um limiar ou latência para um estímulo externo em um sujeito em necessidade do mesmo.

39. Vetor AAV para uso de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADO pelo fato de que o estímulo externo é um estímulo mecânico.

40. Vetor AAV para uso de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADO pelo fato de que o estímulo externo é um estímulo térmico.

41. Vetor AAV para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 40, CARACTERIZADO pelo fato de que o vetor AAV é administrado por via intravenosa, oral, parenteral, intratecal, intracerebroventricular, pulmonar, intramuscular, subcutânea, intraperitoneal, intravítrea, epidural, subrretiniana ou intraventricular.

42. Vetor AAV para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 41, CARACTERIZADO pelo fato de que o sujeito é um humano.