KR20230142819A - 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도 - Google Patents

암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230142819A
KR20230142819A KR1020237033663A KR20237033663A KR20230142819A KR 20230142819 A KR20230142819 A KR 20230142819A KR 1020237033663 A KR1020237033663 A KR 1020237033663A KR 20237033663 A KR20237033663 A KR 20237033663A KR 20230142819 A KR20230142819 A KR 20230142819A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
amino acid
fam19a5
antibody
acid sequence
Prior art date
Application number
KR1020237033663A
Other languages
English (en)
Inventor
김봉철
조은비
김동식
이재근
권순구
성재영
심주원
김태우
강신혁
Original Assignee
주식회사 뉴라클사이언스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 뉴라클사이언스 filed Critical 주식회사 뉴라클사이언스
Publication of KR20230142819A publication Critical patent/KR20230142819A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

본 발명은 FAM19A5에 특이적으로 결합하여 혈관 정상화를 촉진하고, 예를 들어 혈관 정상화를 촉진함으로써, 대상의 질환(예를 들어 암)을 치료하기 위한 길항제(예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 부분)의 제약학적 용도에 관한 것이다.

Description

암 치료를 위한 항-FAM19A5 항체의 용도{USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR TREATING CANCERS}
전자 방식으로 제출된 서열목록의 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일 형식의 전자 방식으로 제출된 서열목록(파일명: 3763.013PC01_SeqListing_ST25.txt; 크기: 166,890바이트; 생성일: 2018년 6월 27일)의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원 결합 단편, 또는 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 사용하여 대상(예를 들어, 인간)의 암을 치료 또는 진단하는 방법을 제공한다.
혈관형성(angiogenesis)(혈관의 발생 및 성장)은 성장 및 발생을 포함하는 많은 생물학적 활성에서, 그리고 상처 치유에서 중요한 역할을 한다. 정상적인 건강한 상태에서의 혈관형성은 엄격히 조절되는 과정이다(Carmeliet, P. and Jain, R.K., Nature 473(7347): 298-307 (2011)). 그러나, 암에서는 제어 메커니즘의 결함으로 인해 걷잡을 수 없는 혈관형성이 일어나게 된다. 과량의 신생혈관구조(neovasculature) 형성은 양성에서 악성 상태로의 종양의 전이에서 근본적인 단계이다(Ferrara, N., Nat Rev Cancer 2(10): 795-803 (2002)). 새로 형성된 혈관은 구조적으로 비정상적이며 증가된 투과성(permeability)을 가진다(Nagy J.A., et al., Br J Cancer 100(6): 865-869 (2009)). 이것은 저산소증 및 종양 내부와 주변에 섬유성 결합조직의 과도한 축적을 야기할 수 있다(Bottaro, D.P. and Liotta, L.A., Nature 423(6940): 593-595 (2003); 및 Wynn T.A., et al., Nat Med 18(7): 1028-1040 (2012)). 종양 혈관과 관련된 형태적- 및 분자적- 비정상성은 또한 숙주 면역 반응에 대한 종양의 고유한 저항성에 기여할 수 있다(Ganss R., et al., Eur J Immunol 34: 2635-2641 (2004)). 따라서, 혈관의 정상화를 유도할 수 있는 치료제는, 예를 들어 화학제제, 표적화 요법, 면역-종양학 요법 또는 면역세포 요법(예를 들어 CART, NK, 입양 T 세포 요법 등)과 조합하여 사용되었을 때, 다양한 암에 대해 효과적인 치료 옵션일 수 있다.
암 면역요법은 최근 잘 확립되었으며 현재 혈액학상의 악성물 및 고상 종양을 가진 환자에게 이용할 수 있는 더욱 성공적인 치료 옵션 중 하나이다(Scott, A.M., et al., Cancer Immun 12: 14 (2012)). 이러한 발전에도 불구하고 특정한 악성 종양(예를 들어 전이성 또는 난치성 고상 종양)을 가진 환자는 여전히 매우 불량한 예후를 보인다(Rosenberg S.A., et al., Cancer immunotherapy in Cancer: Principles & Practice of Oncology(Eds DeVita V.T, Lawrence T.S. and Rosenberg S.A.) 2011; 332-344(Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia Pa.)). 이러한 환자 중 단지 일부만이 실제로 장기적인 암의 차도를 경험하며, 많은 환자는 반응이 없거나 항체에 대한 내성이 발생하게 된다(Sharma, P., et al., Cell 168(4): 707-723 (2017)).
더욱이, 적응 면역(adaptive immunity)에 더하여, 선천적 면역 반응이 또한 암의 성공적인 치료에서 중요한 역할을 한다. 예를 들어, 선천적 면역 반응의 세포(예를 들어 대식세포 및 수지상 세포)는 종양 항원의 식세포 흡수(phagocytic uptake), 염증의 제어, 및 종양-특이적 T 세포에 대해 종양 항원을 제시함에 의한 적응 면역 반응을 유도한다. 많은 암 환자는 선천 면역이 또한 손상된다. 현재 암 환자의 선천 면역을 성공적으로 증진시킬 수 있는 치료제는 없다(Chanmee T., et al., Cancers 6(3): 1670-1690 (2014); 및 Gordon, S.R., et al., Nature 545(7655): 495-499 (2017)). 따라서, 많은 종류의 암에 대한 더욱 효과적인 치료 옵션에 대한 필요성이 여전히 존재한다.
본 발명은 대상의 종양에서 혈관 정상화를 촉진하기 위한, FAM19A5(family with sequence similarity 19, member A5) 단백질에 대한 길항제(antagonist)("FAM19A5 길항제")를 제공한다.
일부 구체예에서, 혈관 정상화는 (i) 감소된 혈관 투과성, (ii) 증가된 혈관 벽 두께, (iii) 개선된 연결성, (iv) 증가된 혈류량, 또는 (v) 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 (i) 대상의 종양으로 연장되는 혈관의 수를 증가시키거나, (ii) 대상의 종양에 면역 세포(예를 들어 대식세포, 수지상 세포, 또는 미세아교세포)의 침윤을 증가시키거나, (iii) 대상의 종양에 골수-유래 억제제 세포(MDSCs)의 모집을 감소시키거나, (iv) 대상의 종양에서 면역 세포(예를 들어 대식세포, 수지상 세포, 또는 미세아교세포)의 식세포 활성 및/또는 미토콘드리아 막 전위를 증진시키거나, 또는 (v) 이들의 임의의 조합을 수행한다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25를 포함한다. 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함한다. 추가 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함한다.
또한, FAM19A5 길항제를 대상의 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계 및 샘플에서 FAM19A5 단백질 수준 또는 FAM19A5 mRNA 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 암을 시험관내(in vitro) 진단하는 방법이 개시된다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체, 또는 인간 항체이다.
일부 구체예에서, 본 발명의 FAM19A5 길항제는 면역치료제, 화학치료제, 표적화 치료제, 또는 방사선치료제를 포함하는 추가의 암 제제와 조합하여 사용된다. 특정 구체예에서, 면역치료제는 단클론성 항체, 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포, NK-세포, 수지상 세포(DC), 입양 세포 전이(adoptive cell transfer, ACT), 면역 체크포인트 조정제, 사이토카인, 암 백신, 애쥬번트, 암살상(oncolytic) 바이러스, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 표적화 치료제는 티로신-키나아제 저해제, 소 분자 약물 콘쥬게이트(small molecule drug conjugates), 세린-트레오닌 키나아제 저해제, 항체, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 면역치료제는 PD-1, PD-L1, CTLA-4, IDO, TIM-3, LAG-3, 4-1BB, OX40, MERTK, CD27, GITR, B7.1, TGF-β, BTLA, VISTA, 아르기나아제, MICA, MICB, B7-H4, CD28, CD137, 및 HVEM으로 구성되는 군으로부터 선택된 신호화 분자인, 단클론성 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 단클론성 항체는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체이다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙이다. 일부 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 아테졸리주맙, 더발루맙 또는 아벨루맙이다. 일부 구체예에서, 단클론성 항체는 종양으로의 치료제의 침투를 증가시킨다.
일부 구체예에서, 화학치료제는 테모졸로마이드, 젬시타빈, 파클리탁셀, 카보플라틴, 시스플라틴, 엘로투무맙, 레날리도마이드, 덱사메타손, 옥살리플라틴 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 종양은 암종, 육종 또는 림프종을 포함한다. 특정 구체예에서, 종양은 흑색종, 췌장암, 유방암, 림프종, 폐암, 신장암, 전립선암, 섬유육종, 결장 선암종(colon adenocarcinoma), 간암, 난소암, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 암으로부터 유래된다.
구체예
구체예 1. FAM19A5의 저해제를 포함하는 제약학적 조성물의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 종양을 치료 또는 완화하는 방법으로서, FAM19A5의 저해제가 혈관의 정상화를 유도하는 것인 방법.
구체예 2. FAM19A5의 저해제가 종양의 성장을 억제하는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 3. FAM19A5의 저해제가 종양으로의 면역 세포의 침윤을 증진시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 4. FAM19A5의 저해제가 대식세포 또는 미세아교세포의 식세포 활성을 증진시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 5. FAM19A5의 저해제가 대식세포 또는 미세아교세포의 미토콘드리아 막 전위를 증가시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 6. FAM19A5의 저해제가 종양으로의 골수-유래 억제제 세포(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)의 모집을 감소시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 7. FAM19A5의 저해제가 종양에서의 괴사 및 부종을 감소시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 8. FAM19A5의 저해제가 종양의 조직 투과성을 감소시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 9. FAM19A5의 저해제가 종양에서의 혈류량을 증가시키는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 10. FAM19A5의 저해제가 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 펩타이드, 핵산, 화합물, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 1 내지 9 중 어느 하나의 방법.
구체예 11. FAM19A5의 저해제가 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 구체예 10의 방법.
구체예 12. FAM19A5의 저해제가 단클론성 항체 또는 이의 항원 결합 부분인, 구체예 11의 방법.
구체예 13. 종양이 흑색종, 췌장암, 유방암, 림프종, 폐암, 신장암, 전립선암, 섬유육종, 결장 선암종, 간암, 및 난소암으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 1 내지 12 중 어느 한 항의 방법.
구체예 14. 종양이 흑색종인, 구체예 13의 방법.
구체예 15. 종양이 췌장암인, 구체예 13의 방법.
구체예 16. 종양이 폐암인, 구체예 13의 방법.
구체예 17. 종양이 신장암인, 구체예 13의 방법.
구체예 18. 종양이 림프종인, 구체예 13의 방법.
구체예 19. 종양이 전립선암인, 구체예 13의 방법.
구체예 20. 종양이 선암종인, 구체예 13의 방법.
구체예 21. 혈관의 정상화는 혈관 내피 세포의 마커에 의해 평가되는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 22. 혈관 내피 세포의 마커는 CD31, 콜라겐 타입 IV, CD34, 및 CD146으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 21의 방법.
구체예 23. 혈관 내피 세포의 마커는 CD31인, 구체예 22의 방법.
구체예 24. 혈관의 정상화는 증가된 연결성, 증가된 벽 두께, 감소된 혈관 직경, 더 규칙적인 혈관 방향 및 분포 패턴, 증가된 혈관 수, 누출 및 투과성의 감소, 증가된 주피세포(pericyte) 범위 및 혈관에 대한 근접성, 증가된 산소화, 또는 이들의 조합을 포함하는 혈관 특성의 변화를 수반하는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 25. 종양의 성장 억제는 종양 질량, 종양 부피, 종양 크기, 종양 세포 수, 염색 스팟의 수, 및 이들의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 변수를 측정함으로써 평가되는 것인, 구체예 2의 방법.
구체예 26. 종양으로의 증가된 침윤을 나타내는 면역 세포는 대식세포, 수지상 세포, T 림프구, B 림프구, 및 자연살해(NK) 세포로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 3의 방법.
구체예 27. 면역 세포는 비대증을 더 나타내는 것인, 구체예 26의 방법.
구체예 28. 종양으로의 면역 세포의 증가된 침윤은 종양으로의 뉴런 세포 및 기저 세포(stromal cells)의 증가된 침윤을 더 수반하는 것인, 구체예 3의 방법.
구체예 29. 종양으로의 증가된 침윤을 나타내는 뉴런 세포는 성상교세포(astrocytes) 및 신경아교 세포(glial cells)로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 28의 방법.
구체예 30. 제약학적 조성물이 암 치료법과 조합하여 투여되는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 31. 제약학적 조성물이 면역요법, 화학요법, 및 방사선요법으로 구성되는 군으로부터 선택된 방법과 조합하여 투여되는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 32. 제약학적 조성물이 면역요법과 조합하여 투여되는 것인, 구체예 31의 방법.
구체예 33. 면역요법은 단클론성 항체, 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포, NK-세포, 수지상 세포(DC), 입양 세포 전이(ACT), 면역 체크포인트 조정제, 사이토카인, 암 백신, 애쥬번트, 암살상 바이러스, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인, 구체예 32의 방법.
구체예 34. 단클론성 항체가 PD-1, PD-L1, CTLA-4, IDO, TIM-3, LAG-3, 4-1BB, OX40, MERTK, CD27, GITR, B7.1, TGF-β, BTLA, VISTA, 아르기나아제, MICA, MICB, B7-H4, CD28, CD137, 및 HVEM으로 구성되는 군으로부터 선택된 신호화 분자를 조절하는 것인, 구체예 33의 방법.
구체예 35. 단클론성 항체가 PD-1, PD-L1, CTLA-4, IDO, TIM-3, LAG-3, 4-1BB, OX40, MERTK, 및 CD27로 구성되는 군으로부터 선택된 신호화 분자를 저해하는 것인, 구체예 34의 방법.
구체예 36. 단클론성 항체가 PD-1을 저해하는 것인, 구체예 35의 방법.
구체예 37. PD-1을 저해하는 단클론성 항체는 펨브롤리주맙 및 니볼루맙으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 36의 방법.
구체예 38. 단클론성 항체가 PD-L1을 저해하는 것인, 구체예 35의 방법.
구체예 39. PD-L1을 저해하는 단클론성 항체는 아테졸리주맙, 아벨루맙 및 더발루맙으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 38의 방법.
구체예 40. 단클론성 항체가 CTLA-4를 저해하는 것인, 구체예 35의 방법.
구체예 41. CTLA-4를 저해하는 단클론성 항체는 이필리무맙인, 구체예 40의 방법.
구체예 42. 제약학적 조성물이 화학요법과 조합하여 투여되는 것인, 구체예 31의 방법.
구체예 43. 화학요법은 테모졸로마이드, 젬시타빈, 파클리탁셀, 카보플라틴, 시스플라틴, 엘로투무맙, 레날리도마이드, 덱사메타손 및 옥살리플라틴으로 구성되는 군으로부터 선택된 약물을 포함하는 것인, 구체예 42의 방법.
구체예 44. 화학요법이 젬시타빈을 포함하는 것인, 구체예 43의 방법.
구체예 45. 제약학적 조성물이 피내(intradermal), 피하(subcutaneous), 정맥내(intravenous), 근육내(intramuscular) 및 척추강내(intrathecal)로 구성되는 군으로부터 선택된 경로에 의해 투여되는 것인, 구체예 1의 방법.
구체예 46. 대상으로부터 샘플을 얻는 단계; 샘플에서 FAM19A5 유전자의 발현을 검출하는 단계; 및 FAM19A5 유전자의 발현의 검출에 적어도 부분적으로 기초하여, 종양의 치료 또는 완화에 대한, 대상의 반응, 또는 잠재적 반응을 평가하는 단계를 포함하는; 종양의 치료 또는 완화에 대한, 대상의 반응, 또는 잠재적 반응을 평가하는, 구체예 1의 방법.
구체예 47. FAM19A5의 저해제는 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체(reference antibody)와 교차-경합(cross-compete)하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 1 내지 46 중 어느 하나의 방법.
구체예 48. FAM19A5의 저해제는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프와 결합하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 1 내지 47 중 어느 하나의 방법.
구체예 49. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프와 결합하는 것인, 구체예 48의 방법.
구체예 50. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, FAM19A5 에피토프에만 결합하는 것인, 구체예 48의 방법.
구체예 51. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 추가의 FAM19A5 에피토프와 더 결합하는 것인, 구체예 48 내지 50 중 어느 하나의 방법.
구체예 52. 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 51의 방법.
구체예 53. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 47 내지 52 중 어느 하나의 방법.
구체예 54. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR1이 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 17, 또는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 53의 방법.
구체예 55. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR2가 SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 18, 또는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 53 또는 54의 방법.
구체예 56. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR1이 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29, 또는 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 53 내지 55 중 어느 하나의 방법.
구체예 57. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR2가 SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 53 내지 56 중 어느 하나의 방법.
구체예 58. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR3이 SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 31, 또는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 53 내지 57 중 어느 하나의 방법.
구체예 59. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25를 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함하는 것인, 구체예 47 내지 52 중 어느 하나의 방법.
구체예 60. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 47 내지 59 중 어느 하나의 방법.
구체예 61. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 47 내지 60 중 어느 하나의 방법.
구체예 62. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 구체예 47 내지 61 중 어느 하나의 방법.
구체예 63. 항-FAM19A5 항체가 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인, 구체예 47 내지 62 중 어느 한 항의 방법.
구체예 64. 이의 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv(scFv)인, 구체예 47 내지 63 중 어느 하나의 방법.
구체예 65. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 이들의 변이체로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인, 구체예 47 내지 63 중 어느 하나의 방법.
구체예 66. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 IgG2, IgG4, 또는 이들의 조합인, 구체예 65의 방법.
구체예 67. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 IgG2/IgG4 이소타입 항체를 포함하는 것인, 구체예 65의 방법.
구체예 68. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 Fc 기능이 없는 불변 영역을 더 포함하는 것인, 구체예 47 내지 67 중 어느 하나의 방법.
구체예 69. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제2 결합 모이어티를 가진 분자에 연결되며, 이로써 이중특이적(bispecific) 분자를 형성하는 것인, 구체예 47 내지 48 중 어느 하나의 방법.
구체예 70. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제제에 연결되며, 이로써 면역콘쥬게이트를 형성하는 것인, 구체예 47 내지 49 중 어느 하나의 방법.
구체예 71. FAM19A5 단백질의 길항제가 제약학적으로 허용되는 캐리어와 함께 제제화되는 것인, 구체예 1 내지 70 중 어느 하나의 방법.
구체예 72. FAM19A5 단백질의 길항제가 정맥내, 경구, 비경구(parenterally), 척추강내, 뇌혈관내(intra-cerebroventricularly), 폐(pulmonarily), 근육내, 피하, 유리체내(intravitreally), 또는 심실내(intraventricularly) 경로로 투여되는 것인, 구체예 1 내지 71 중 어느 하나의 방법.
구체예 73. 대상이 인간인, 구체예 1 내지 72 중 어느 하나의 방법.
본 발명은 항-FAM19A5 길항제, 예를 들어 항-FAM19A5 항체의 투여에 의해 암이 제어, 치료, 완화, 또는 감소될 수 있음을 보여준다. 이러한 효능의 하나의 가능한 메커니즘은 항-FAM19A5 길항제(저해제)에 의해 유도된 혈관의 정상화로 인한 것일 수 있다. 따라서, FAM19A5 길항제는 종양의 성장을 억제하고, 종양으로의 면역 세포의 침윤을 증진시키고, 대식세포 또는 미세아교세포의 식세포 활성을 증진시키고, 대식세포 또는 미세아교세포의 미토콘드리아 막 전위를 증가시키고, 종양에 골수-유래 억제제 세포(MDSCs)의 모집을 감소시키고, 종양에서 괴사 및 부종을 감소시키고, 종양의 조직 투과성을 감소시키고, 및/또는 종양에서 혈류량을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 이해를 용이하게 하기 위해 다수의 용어 및 문구가 정의된다. 추가적인 정의는 상세한 설명 전체에서 제시된다.
I. 정의
본 명세서 전체에서, 용어 "한" 또는 "어떤" 존재는 그 존재의 하나 이상을 말한다; 예를 들어 "한 항체"는 하나 이상의 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "한"(또는 "어떤"), "하나 이상의" 및 "적어도 하나의"는 상호 교환하여 사용될 수 있다.
또한, "및/또는"은 두 명시된 특징 또는 성분의 각각이 나머지 하나와 함께 또는 단독으로 구체적으로 개시된다는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독)의 양태들을 각각 포함하는 것으로 의도된다.
어떤 양태가 "포함하는"과 함께 제시되면 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"으로 설명된 다른 유사한 양태도 또한 제공된 것으로 이해된다.
달리 정의되지 않는다면, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명과 관련되는 당업자에게 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, 문헌(the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press)들은 본 명세서에서 사용된 대부분의 용어에 대한 일반 사전적 의미를 당업자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 Systeme International de Unites(SI)에서 승인된 형태로 표시된다. 수치 범위는 그 범위를 한정하는 숫자들을 포괄적으로 포함한다. 특별한 언급이 없는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향으로 좌측에서 우측으로 쓰여진다. 본 명세서에 제공된 표제는 본 발명의 다양한 양태의 제한이 아니며, 이들은 전체적으로 명세서를 참조한 것일 수 있다. 따라서, 아래 정의된 용어들은 그 전체가 명세서를 참조하여 충분히 정의된다.
용어 "약"은 대략(approximately), 대충(roughly), 근처(around), 또는 ~~의 영역 내를 의미하는 것으로 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용될 때 그것은 제시된 수치 값 위와 아래로 경계를 확장시킴으로써 해당 범위를 변형한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어 위나 아래로(더 높거나 더 낮게) 10 퍼센트의 변동까지 언급된 값의 위와 아래로 수치 값을 변형할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 질환과 관련된 증상, 합병증, 상태 또는 생화학적 지표의 진행, 발생, 심각성 또는 재발을 반전, 개선, 완화, 저해 또는 지연시킬 목적으로 대상에 대해 수행된 임의의 종류의 개입 또는 과정, 또는 대상에 활성제의 투여를 말한다. 치료는 질환을 가진 대상 또는 질환을 갖지 않은 대상(예를 들어 예방)에 대해 이루어질 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "투여"는 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 송달 시스템(delivery systems) 중 어느 것을 사용하여, 대상에게 치료제 또는 치료제를 포함하는 조성물을 물리적으로 도입하는 것을 말한다. 본 명세서에 개시된 항체를 위한 상이한 투여 경로는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어, 주사(injection) 또는 주입(infusion)에 의한 것을 포함한다. 본 명세서에서 사용된 용어 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한, 장(enteral) 및 국부적(topical) 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하며, 제한은 없지만, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 림프내, 병소내, 낭내(intracapsular), 안와내(intraorbital), 심장내, 피내, 기관지경(transtracheal), 기관내, 폐, 피하, 표피하, 관절내, 낭하, 지주막하, 뇌실내, 유리체내, 경막외, 및 흉골하 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 또는, 본 명세서에 개시된 항체는 비-비경구 경로를 통해서, 예컨대 국부적, 상피 또는 점막 투여 경로를 통해서, 예를 들어 비내, 경구, 질, 직장, 설하 또는 국부적 경로를 통해서 투여될 수 있다. 또한, 투여는, 예를 들어 1회, 여러 번, 및/또는 한 번 이상의 연장된 기간에 걸쳐서 수행될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료하기에" 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어 암)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들어 암)를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감을 제공하고 및/또는 적어도 하나의 지표(예를 들어 암)를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "암"(cancer)은 체내에서 비정상 세포의 제어되지 않는 성장을 특징으로 하는 광범위한 군의 다양한 질환을 말한다. "암" 또는 "암 조직"은 종양(tumor)을 포함할 수 있다. 조절되지 않는 세포 분열 및 성장이 이웃 조직을 침범하는 악성 종양(malignant tumors)의 형성을 가져오며, 이것은 또한 림프 시스템이나 혈류를 통해서 신체의 먼 부위로 전이될 수 있다. 전이 후, 원위부 종양(distal tumors)은 전이 전 종양"으로부터 유래되었다"고 말할 수 있다. 예를 들어, 흑색종"으로부터 유래된 종양"은 전이된 흑색종의 결과인 종양을 말한다. 원위부 종양은 전이 전 종양으로부터 유래되기 때문에, 종양"으로부터 유래된"은 또한 전이 전 종양을 포함할 수 있으며, 예를 들어 흑색종으로부터 유래된 종양은 흑색종을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 "암"은 뇌암(예를 들어 신경교종(glioma) 또는 교모세포종(glioblastoma))을 배제한다.
"면역 반응"은 당업계에서 이해되는 대로이며, 일반적으로 외래 제제 또는 비정상(예를 들어 암세포)에 대한 척추동물의 생물학적 반응을 말하며, 이 반응은 이들 제제 및 이들에 의해 야기된 질환에 대해 유기체를 보호한다. 면역 반응은 면역 시스템의 하나 이상의 세포(예를 들어 T 림프구, B 림프구, 자연살해(NK) 세포, 대식세포, 호산구, 비만 세포, 수지상 세포 또는 호중구) 및 이들 세포 중 어느 것에 의해 생성된 가용성 거대분자의 작용에 의해, 또는 침범한 병원균, 병원균으로 감염된 세포 또는 조직, 암 또는 다른 비정상 세포, 또는 자가면역 또는 병리학적 염증의 경우, 정상 인간 세포 또는 조직을 척추동물의 신체로부터 선택적 표적화, 결합, 손상, 파괴 및/또는 제거하는 간(항체, 사이토카인 및 보체를 포함)의 작용에 의해 매개된다. 면역 반응은, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 이펙터 T 세포, Th 세포, CD4+ 세포, CD8+ T 세포, 또는 Treg 세포의 활성화 또는 저해, 또는 면역 시스템의 임의의 다른 세포, 예를 들어 NK 세포의 활성화 또는 저해를 포함한다.
용어 "면역조정제" 또는 "면역조절제"는 어떤 제제, 예를 들어 면역 반응을 조정(modulating), 조절(regulating), 또는 변형(modifying)하는데 수반될 수 있는 신호화 경로의 성분을 표적화하는 제제를 말한다. 면역 반응의 "조정", "조절" 또는 "변형"은 면역 시스템의 세포 또는 이러한 세포(예를 들어 Th1 세포와 같은 이펙터 T 세포)의 활성에 있어서의 변화를 말한다. 이러한 조정은 다양한 세포 타입의 수의 증가 또는 감소, 이들 세포의 활성의 증가 또는 감소, 또는 면역 시스템 내에서 일어날 수 있는 임의의 다른 변화에 의해 발현될 수 있는 면역 시스템의 자극 또는 억제를 포함한다. 저해성(inhibitory) 및 자극성(stimulatory) 면역조정제가 둘 다 확인되었으며, 이들 중 일부는 종양 미세환경에서 증진된 기능을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 면역조정제는 T 세포의 표면 상의 분자를 표적화한다. "면역조정 표적" 또는 "면역조절 표적"은 어떤 분자, 예를 들어 물질, 제제, 부분, 화합물 또는 분자에 의한 결합에 대해 표적화되고, 그것의 활성이 이 결합에 의해 변경되는 세포 표면 분자이다. 면역조정 표적은, 예를 들어 세포의 표면 상의 수용체("면역조정 수용체") 및 수용체 리간드("면역조정 리간드")를 포함한다.
용어 "면역요법"은 면역 시스템 또는 면역 반응을 유도, 증진, 억제 또는 변형하는 것을 포함하는 방법에 의한, 질환에 걸린 대상, 또는 질환에 걸리거나 또는 재발로 고통받을 위험이 있는 대상의 치료를 말한다.
본 명세서에서 사용된 문구 "종양 성장을 저해한다"는 종양 성장의 임의의 측정 가능한 감소, 예를 들어 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 99%, 또는 100%까지의 종양 성장의 저해를 포함한다.
용어 "유효 용량" 또는 "유효 투약량"은 원하는 효과를 달성하거나 또는 적어도 부분적으로 달성하기에 충분한 양으로 정의된다. 약물 또는 치료제의 "치료적 유효량" 또는 "치료적 유효 투약량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 사용되었을 때, 질환 증상의 심각성의 감소에 의해 증명된 질환 퇴행(regression), 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 또는 질환으로 인한 장해나 상해의 예방을 촉진하는 약물의 양이다. 약물의 치료적 유효량 또는 유효 투약량은 "예방적 유효량" 또는 "예방적 유효 투약량"을 포함하며, 이것은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 질환이 발생할 위험이 있거나 질환의 재발로 고통받을 위험이 있는 대상에 투여되었을 때 질환의 발생이나 재발을 저해하는 약물의 양이다. 질환 퇴행을 촉진하거나 또는 질환의 발생이나 재발을 저해하는 치료제의 효능은 당업자에게 공지된 여러 가지 방법을 사용하여 평가될 수 있으며, 예컨대 임상 시험 동안 인간 대상에서, 인간에서의 효능을 예측하는 동물 모델 시스템에서, 또는 시험관내 분석에서 제제의 활성을 분석함으로써 평가될 수 있다.
예로서, 항암제는 대상의 암 퇴행을 촉진하는 약물이다. 일부 구체예에서, 이 약물의 치료적 유효량은 암을 제거할 때까지 암 퇴행을 촉진한다. "암 퇴행의 촉진"은 단독으로 또는 항신생물제와 조합하여, 약물의 유효량을 투여하는 것이 종양의 성장이나 크기의 감소, 종양의 괴사, 적어도 하나의 질환 증상의 심각성의 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 질환으로 인한 장해나 상해의 예방, 또는 환자의 질환 증상의 다른 개선을 가져온다는 것을 의미한다. 이에 더하여, 용어 "유효한" 및 "유효성"은 치료와 관련하여 약물학적 유효성과 생리학적 안전성을 모두 포함한다. 약물학적 유효성은 환자의 암 퇴행을 촉진할 수 있는 약물의 효능을 말한다. 생리학적 안전성은 독성 수준, 또는 약물의 투여로 인해 생기는 세포, 기관 및/또는 유기체 수준에서의 다른 부정적인 생리학적 효과(부작용)를 말한다.
예로서, 종양 치료의 경우, 약물의 치료적 유효량 또는 유효 투약량은 세포 성장 또는 종양 성장을 치료되지 않은 대상에 비해 적어도 약 20%, 적어도 약 40%, 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 80%까지 저해한다. 일부 구체예에서, 약물의 치료적 유효량 또는 유효 투약량은 세포 성장 또는 종양 성장을 완전히 저해하는데, 즉 세포 성장 또는 종양 성장을 100%까지 저해한다. 종양 성장을 저해하는 화합물의 능력은 아래에 설명된 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 또는, 조성물의 이 특성은 세포 성장을 저해하는 화합물의 능력을 시험함으로써 평가될 수 있으며, 이러한 저해는 당업자에게 공지된 분석에 의해 시험관내 측정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 다른 구체예에서, 종양 퇴행이 관찰될 수 있고, 적어도 약 20일, 적어도 약 40일, 또는 적어도 약 60일 동안 지속될 수 있다.
본 발명의 일부 양태는 대상의 암 진단에 관한 것이다. 본 발명과 관련하여, 출원인은 조직 또는 장기의 손상시 손상 부위와 암을 가진 대상의 말초혈에서 FAM19A5 발현이 증가한다는 것을 발견했다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트를 대상으로부터 얻어진 샘플과 접촉시키는 단계 및 FAM19A5 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 대상의 암을 진단하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, FAM19A5의 수준은 암이 없는 대상의 기준 샘플에서의 FAM19A5의 수준과 비교하여 해당 대상의 샘플에서 증가된다(아래 참고).
본 명세서에서 사용된 용어 "진단"은 환자가 주어진 질환 또는 상태로 고통받고 있는지의 여부를 결정하거나 예측하기 위해 사용될 수 있는 방법을 말한다. 당업자는 하나 이상의 진단 마커(예를 들어 FAM19A5)에 기초하여 진단을 내릴 수 있고, 여기서 진단 마커의 존재, 부재, 양, 또는 양의 변화는 해당 상태의 존재, 심각성 또는 부재를 표시한다. 일부 구체예에서, 대상으로부터의 생물학적 샘플에서의 FAM19A5 발현의 증가는 종양에 대한 표시자(indicative)이다. 용어 "진단"은 100% 정확성으로 특정 질환의 존재 또는 부재를 결정하는 능력을 말하는 것은 아니며, 심지어 주어진 경과 또는 성과가 그렇지 않은 것보다 일어날 가능성이 있다는 것을 말하는 것도 아니다. 대신 당업자는 용어 "진단"이 특정 질환이 대상에 존재할 증가된 확률을 말한다는 것으로서 이해할 것이다.
용어 "진단 마커"(예를 들어 FAM19A5 발현)는 정상 세포로부터 종양을 분리하여 진단할 수 있는 물질을 말하며, 유기 생물분자, 예컨대 폴리펩타이드, 또는 핵산(예를 들어 mRNA), 지질, 당지질, 당단백질, 및 당(단당류, 이당류, 올리고당 등)을 포함하고, 이들은 종양의 세포에서 증가하거나 감소한다. 암에 대해 본 명세서에서 개시된 진단 마커는 종양 세포에서 발현이 증가하는 FAM19A5 유전자로부터 발현된 단백질일 수 있다.
암을 진단하기 위한 조성물은 FAM19A5 유전자의 mRNA의 발현 수준 또는 발현된 단백질의 양을 측정하기 위한 제제를 포함한다. 이러한 제제는 FAM19A5 mRNA에 상보성인 서열을 가진 올리고뉴클레오타이드, FAM19A5 mRNA에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 핵산 프로브, 및 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
용어 "서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5" 또는 "FAM19A5"는 5개의 고도로 상동성인 단백질의 TAFA 패밀리(FAM19 패밀리라고도 알려져 있음)에 속하며 뇌와 척수에서 우세하게 발현되는 단백질을 말한다(Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)). 이들 단백질은 고정된 위치에 보존된 시스테인 잔기를 함유하며, CC-케모카인 패밀리의 멤버인 대식세포 염증 단백질 1-알파(MIP-1-알파)와 관련된다. TAFA 단백질은 뇌와 척수의 특정 영역에서 우세하게 발현된다. 이들 단백질은 신경발생 과정에서 성인 신경 줄기 세포에 의해 발생되고 분배되는 것으로 여겨진다. FAM19A5는 또한 TAFA5 또는 케모카인-유사 단백질 TAFA-5(Chemokine-like protein TAFA-5)라고도 알려져 있다.
FAM19A5는 척추동물의 뇌에서 우세하게 발현되며, 완전한 중추신경계의 발생, 분화, 형성에 중요하다고 여겨진다. FAM19A5는 또한 많은 중추신경계 손상 및/또는 퇴행성 뇌 질환(예를 들어 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 뇌척수 손상, 뇌졸중 및 뇌종양)의 발병기전에서 유의한 역할을 한다. 중추신경계의 손상시 신경 줄기 세포가 FAM19A5를 생성하고, 이것은 정상 성상교세포의 반응성 성상교세포(reactive astrocytes)로의 분화를 유도한다. 이들 반응성 성상교세포는 (미세아교세포와 함께) 광범위한 ECM들(예를 들어 프로테오글리칸, 당단백질 및 콜라겐)을 발현할 수 있고, 신경교 흉터(glial scars)의 형성을 유도할 수 있으며, 이것은 중추신경계의 손상된 영역을 그물처럼 둘러싸서 뉴런의 재생을 방해할 수 있다. FAM19A5에 대한 항체는 중추신경계 상해 및/또는 질환의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다(미국특허 제9,579,398호 참조).
인간에서, FAM19A5를 암호화하는 유전자는 염색체 22에 위치된다. 다음과 같은 3가지 인간 FAM19A5(UniProt: Q7Z5A7) 이소폼이 있으며, 이들은 선택적 스플라이싱에 의해 생성되는 것으로 여겨진다: 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1), 이것은 132개 아미노산으로 구성된다; 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2), 이것은 125개 아미노산으로 구성된다; 및 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3), 이것은 53개 아미노산으로 구성된다. 인간 FAM19A5 단백질은 막 결합 형태와 가용성(분비된) 형태로 존재하는 것으로 여겨진다. 이소폼 1은 하나의 경막 영역을 가진 막 단백질인 것으로 여겨진다. 이소폼 2는 분비된 단백질(가용성)로서 문헌(Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004))에 보고되었고, 아미노산 위치 1-25에 신호 펩타이드를 함유한다. 이소폼 3은 EST 데이터에 기초하여 예상된다. 아래는 3가지 공지된 인간 FAM19A5 이소폼의 아미노산 서열이다.
(I) 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1, 경막 단백질): 이 이소폼을 표준 서열로 선택한다.
MAPSPRTGSRQDATALPSMSSTFWAFMILASLLIAYCSQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 1)
(II) 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2, 가용성 단백질):
MQLLKALWALAGAALCCFLVLVIHAQFLKEGQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 2)
(III) 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3):
MYHHREWPARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 3)
"FAM19A5"는 세포에 의해 자연적으로 발현되는 FAM19A5의 임의의 변이체 또는 이소폼을 포함한다. 따라서, 본 명세서에 개시된 항체는 동일한 종의 상이한 이소폼(예를 들어 인간 FAM19A5의 상이한 이소폼)들과 교차-반응할 수 있거나, 또는 인간 이외의 종의 FAM19A5(예를 들어 마우스 FAM19A5)와 교차-반응할 수 있다. 또는, 항체는 인간 FAM19A5에 특이적일 수 있으며, 다른 종과는 교차-반응성을 나타내지 못할 수 있다. FAM19A5, 또는 이의 임의의 변이체 및 이소폼은 이들을 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 분리되거나 또는 재조합적으로 생성될 수 있다. 인간 FAM19A5를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 GenBank 수탁번호 No. BC039396을 가지며 다음의 서열을 가진다:
[표 1a]
인간 FAM19A5의 폴리뉴클레오타이드 서열
용어 "FAM19A5 단백질에 대한 길항제"는 FAM19A5 단백질의 발현을 억제하는 길항제를 말한다. 이러한 길항제는 펩타이드, 핵산, 또는 화합물일 수 있다. 더 구체적으로, 길항제는 안티센스-올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5 표적화 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분일 수 있다.
용어 "항체" 및 "항체들"은 당업계의 용어이며 본 명세서에서 상호 교환하여 사용될 수 있고, 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 가진 분자를 말한다. 본 명세서에서 사용된 용어는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉 "항원-결합 부분") 또는 이들의 단쇄를 포함한다. 하나의 구체예에서, "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄(H)와 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 이의 항원-결합 부분을 말한다. 다른 구체예에서, "항체"는 단일 가변 도메인, 예를 들어 VHH 도메인을 포함하는 단쇄 항체를 말한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH로 약기)과 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 특정 자연-발생 항체에서, 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 특정 자연-발생 항체에서, 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL로 약기)과 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 이루어진다.
VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 칭하는, 더 보존되는 영역들이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)이라 칭하는, 초가변성의 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR와 4개의 FR로 이루어지며, 이들은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단을 향해 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어 이펙터 세포) 및 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
용어 "Kabat 넘버링" 및 유사한 용어들은 항체, 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 말한다. 특정 양태에서, 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라서 결정될 수 있다(예를 들어 Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조). Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35(이것은 선택적으로 35 이후에 하나 또는 2개의 추가의 아미노산을 포함할 수 있다; Kabat 넘버링 방식에서 35A 및 35B로 언급된다)(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56(CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97(CDR3)에 존재한다. 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 방식에 따라서 결정되었다.
문구 "Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", "Kabat 위치" 및 이들의 변이형들은 문헌(Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))에서 항체 컴필레이션의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 말한다. 이 넘버링 시스템을 사용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있는데, 이것은 가변 도메인의 FW 또는 CDR의 단축, 또는 이것으로의 삽입에 해당한다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따르면 잔기 52a) 및 중쇄 FW 잔기 82 이후 삽입된 잔기(예를 들어 Kabat에 따르면 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다(표 1b 참조).
[표 1b]
잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열과 항체의 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Chothia는 구조 루프의 위치를 대신 말한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Chothia CDR-H1 루프의 단부는 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링되었을 때 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 변한다(이것은 Kabat 넘버링 방식이 H35A와 H35B에 삽입을 위치시키기 때문이다; 35A도 35B도 존재하지 않는다면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 존재하면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 둘 다 존재하면 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충점을 표시하며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.
IMGT(ImMunoGeneTics)도 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역에 대한 넘버링 시스템을 제공한다. 예를 들어 문헌(Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003))을 참고하며, 이것은 본 명세서에 참고로 포함된다. IMGT 넘버링 시스템은 5,000개를 넘는 서열의 정렬, 구조 데이터, 및 초가변 루프의 특성화에 기초했으며, 모든 종에 대해 가변 영역과 CDR 영역의 용이한 비교를 가능케한다. IMGT 넘버링 스키마에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 있고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다.
본 명세서에서 개시된 모든 중쇄 불변 영역 아미노산 위치에 대해, 넘버링은 서열화된 최초의 인간 IgG1인 골수종 단백질 EU의 아미노산 서열을 설명한 문헌(Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85)에서 최초로 제시된 EU 인덱스에 따른다. Edelman et al.의 EU 인덱스는 또한 문헌(Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda)에도 제시된다. 따라서, 문구 "Kabat에 제시된 EU 인덱스" 또는 "Kabat의 EU 인덱스" 및 "Kabat에 제시된 EU 인덱스에 따른 위치" 및 이들의 변이형들은 Kabat 1991에 제시된 것과 같은 Edelman et al.의 인간 IgG1 EU 항체에 기초한 잔기 넘버링 시스템을 말한다.
가변 도메인(중쇄와 경쇄 모두) 및 경쇄 불변 영역 아미노산 서열에 사용된 넘버링 시스템은 Kabat 1991에 제시된 것이다.
항체는 면역글로불린 분자의 임의의 타입(예를 들어 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 유형(예를 들어 IgD, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 아형(예를 들어 인간에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4; 및 마우스에서IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3)를 가질 수 있다. 면역글로불린, 예를 들어 IgG1은 몇몇 알로타입으로 존재하며, 이들은 최대 몇 개의 아미노산이 서로 상이하다. 본 명세서에 개시된 항체는 통상 알려진 이소타입, 유형, 아형, 또는 알로타입 중 어느 것으로부터 유래할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아형 또는 이들의 임의의 하이브리드이다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1 아형 또는 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 아형의 것이다.
"항체"는, 예로서, 자연-발생 및 비-자연-발생 항체; 단클론성 및 다클론성 항체; 키메라 및 인간화된 항체; 인간 및 비-인간 항체, 전체 합성 항체; 단쇄 항체; 단일특이적 항체; 다중특이적 항체(이중특이적 항체를 포함); 2개의 중쇄와 2개의 경쇄 분자를 포함하는 테트라머 항체; 항체 경쇄 모노머; 항체 중쇄 모노머; 항체 경쇄 다이머; 항체 중쇄 다이머; 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍; 인트라바디; 헤테로콘쥬게이트 항체; 1가 항체; 낙타화 항체; 아피바디; 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어 항-항-Id 항체를 포함), 및 충분히 항원 결합할 수 있는 단일 모노머 가변 항체 도메인(예를 들어 VH 도메인 또는 VL 도메인)으로 구성된 결합 분자를 포함하는 단일-도메인 항체(sdAb)를 포함한다(Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22 (2007)).
본 명세서에서 사용된 용어 항체의 "항원-결합 부분"은 항원(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 이러한 "단편"은, 예를 들어 약 8 내지 약 1500개 아미노산 길이, 적합하게는 약 8 내지 약 745개 아미노산 길이, 더 적합하게는 약 8 내지 약 300개, 예를 들어 약 8 내지 약 200개 아미노산, 또는 약 10개 내지 약 50 또는 100개 아미노산 길이이다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 항체, 예를 들어 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체의 "항원-결합 부분"이란 용어에 포함되는 결합 단편의 예들은 (i) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, 및 이황화물-연결된 Fvs(sdFv); (v) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR) 또는 (vii) 합성 링커에 의해 선택적으로 이어질 수 있는 둘 이상의 분리된 CDR의 조합을 포함한다. 또한, Fv 단편의 두 도메인인 VL과 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 사용하여, 이어질 수 있으며, 이로써 VL과 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 사슬이 될 수 있다(단쇄 Fv(scFv)라고 한다)(예를 들어 Bird et al., (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 참조). 이러한 단쇄 항체도 또한 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포함된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 종래의 기술을 사용하여 얻어지며, 단편들은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해, 또는 무손상 면역글로불린의 효소 또는 화학 절단에 의해 생성될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 당업계에서 통상적으로 상호 교환하여 사용된다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부분, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부분, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 약 아미노 말단 110 내지 120개 아미노산 및 성숙한 경쇄에서 약 90 내지 115개 아미노산을 말하며, 이들은 항체와 서열이 광범하게 상이하고 이의 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성 때문에 사용된다. 서열 변동성은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리는 영역에 집중되며, 가변 도메인에서 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다.
경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호작용 및 특이성을 주로 담당한다고 여겨진다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 영장류(예를 들어 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "중쇄"는 항체와 관련하여 사용되었을 때, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 임의의 상이한 타입, 예를 들어 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 말할 수 있으며, 이들은 각각 IgG의 아형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여, 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 유형을 발생시킨다.
본 명세서에서 사용된 용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용되었을 때, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 상이한 타입, 예를 들어 카파(κ) 및 람다(λ)를 말할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 공지되어 있다. 특정한 구체예에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 경쇄 가변 영역을 말한다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 중쇄 가변 영역을 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 상호 교환 가능하며 당업계에서의 통상의 의미를 가진다. 불변 도메인은 항체 부분이며, 예를 들어 항체와 항원의 결합에는 직접 연루되지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복시 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 가진다.
"Fc 영역"(단편 결정화 가능한 영역) 또는 "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어 이펙터 세포) 상에 위치된 Fc 수용체 또는 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)과의 결합을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개하는 항체의 중쇄의 C-말단 영역을 말한다. 따라서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어 CH1 또는 CL)을 제외한 항체의 불변 영역을 포함한다. IgG, IgA 및 IgD 항체 이소타입에서, Fc 영역은 항체의 두 중쇄의 제2(CH2) 및 제3(CH3) 불변 도메인으로부터 유래된 2개의 동일한 단백질 단편을 포함한다; IgM 및 IgE Fc 영역은 각 폴리펩타이드 사슬에 3개의 중쇄 불변 도메인(CH 도메인 2~4)을 포함한다. IgG의 경우, Fc 영역은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3과 Cγ1과 Cγ2 사이의 힌지를 포함한다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양하지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226이나 P230에 있는 아미노산 잔기(또는 이들 두 아미노산 사이의 아미노산)에서 중쇄의 카복시-말단까지 늘어난 것으로서 한정되며, 여기서 넘버링은 Kabat에서와 같은 EU 인덱스를 따른다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 연장되고, CH3 도메인은 Fc 영역에서 Cm 도메인의 C-말단 측에 위치되는데, 즉 그것은 IgG의 약 아미노산 341에서 약 아미노산 447까지 연장된다. Fc 영역은 임의의 알로타입 변이체를 포함하는 자생 서열 Fc, 또는 변이체 Fc(예를 들어 비-자연-발생 Fc)일 수 있다. 또한, Fc는 분리된 상태의 영역을 말하거나 또는 "Fc 융합 단백질"(예를 들어 항체 또는 면역유착(immunoadhesion))이라고도 하는, "Fc 영역을 포함하는 결합 단백질"과 같은 Fc-포함 단백질 폴리펩타이드와 관련된 영역을 말한다.
"자생 서열 Fc 영역" 또는 "자생 서열 Fc"는 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 자생 서열 인간 Fc 영역은 자생 서열 인간 IgG1 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 자생 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 자연-발생 변이체를 포함한다. 자생 서열 Fc는 Fe들의 다양한 알로타입을 포함한다(예를 들어 Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고).
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 면역글로불린의 Fc 영역에 결합하는 수용체이다. IgG 항체에 결합하는 FcR은 Fcγ 패밀리의 수용체를 포함하고, 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 다른 방식으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. Fcγ 패밀리는 3가지 활성화 수용체(마우스에서 FcγRI, FcγRIII, 및 FcγRIV; 인간에서 FcγRIA, FcγRIIA, 및 FcγRIIIA)와 하나의 저해 수용체(FcγRIIB)로 구성된다. 인간 IgG1은 대부분의 인간 Fc 수용체와 결합하며 가장 강한 Fc 이펙터 기능을 도출한다. 그것이 결합하는 활성화 Fc 수용체의 종류에 대해서는 뮤린 IgG2a와 동등하다고 간주된다. 반면, 인간 IgG4는 최소한의 Fc 이펙터 기능을 도출한다(Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).
불변 영역은 하나 이상의 이펙터 기능을 제거하기 위해, 예를 들어 재조합 기술에 의해 조작될 수 있다. "이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용, 또는 그로부터 생기는 생화학적 이벤트를 말한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, FcγR-매개 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 및 항체 의존성 세포-매개 포식작용(ADCP), 및 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체; BCR)의 하향조절을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어 항체 가변 도메인)과 조합되는 것을 필요로 한다. 따라서, 용어 "Fc 기능이 없는 불변 영역"은 Fc 영역에 의해 매개된 하나 이상의 이펙터 기능이 감소되거나 없는 불변 영역을 포함한다.
항체의 이펙터 기능은 상이한 접근법에 의해 감소 또는 회피될 수 있다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어 예컨대 Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)을 사용하여 감소되거나 회피될 수 있다. 또는, Fc 영역의 다른 가치 있는 속성(예를 들어 연장된 반감기 및 헤테로다이머화)은 보유하면서 항체의 이펙터 기능을 감소시키기 위해 소위 말하는 무글리코실화(aglycosylated) 항체가 Fc 영역에서 특정 잔기에 연결된 당을 제거함으로써 생성될 수 있다. 무글리코실화 항체는, 예를 들어 당이 부착된 잔기를 결실 또는 변경함으로써, 당을 효소적으로 제거함으로써, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포에서 항체를 생성함으로써, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어 박테리아 숙주 세포)에서 항체를 발현함으로써 생성될 수 있다(예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 참조). 다른 접근법은 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터의 Fc 영역을 이용하는 것인데, 예를 들어 IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 갖는 것을 특징으로 한다. Fc 부분의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당하며, 그것은 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유한다(Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)참조). 따라서, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 항체는, 예를 들어 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터 힌지 영역과 IgG4로부터 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역(예를 들어 Lau C. et al. J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참조), 또는 변경된 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 감소되거나 없는 Fc 기능을 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 생성함으로써 제조될 수 있다. 돌연변이를 가진 이러한 Fc 영역은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허공개 제20120100140호와 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원들 그리고 문헌(An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009))를 참조하며, 이들은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
"힌지", "힌지 도메인" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인에 연결하고 힌지의 상부, 중앙, 및 하부 부분을 포함하는 중쇄 불변 영역의 도메인을 말한다(Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083). 힌지는 항체의 결합 영역과 이펙터 영역 사이에 가요성의 수준을 변화시키며, 또한 두 중쇄 불변 영역 사이에 분자간 이황화물 결합을 위한 부위를 제공한다. 본 명세서에서 제시된 힌지는 모든 IgG 이소타입에 대해 Glu216에서 시작해서 Gly237에서 끝난다(Roux et al., 1998 J Immunol 161:4083). 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 힌지의 서열이 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).
용어 "CH1 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 가변 도메인과 힌지를 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 제시된 CH1 도메인은 A118에서 시작해서 V215에서 끝난다. 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH1 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH1 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH1 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
용어 "CH2 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 힌지와 CH3 도메인을 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 제시된 CH2 도메인은 P238에서 시작해서 K340에서 끝난다. 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH2 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH2 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기 및/또는 감소된 Fc 이펙터 기능을 변형하는 돌연변이를 가진 CH2 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
용어 "CH3 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 CH2 도메인에 대해 C-말단인 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 제시된 CH3 도메인은 G341에서 시작해서 K447에서 끝난다. 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH3 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH3 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH3 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
본 명세서에서 사용된 "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 유형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체)을 말한다.
*"알로타입"은 몇 개의 아미노산이 차이가 있는 특정한 이소타입 그룹 내에서 자연-발생한 변이체를 말한다(예를 들어 Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1 참조). 본 명세서에 제시된 항체는 임의의 알로타입을 가질 수 있다. IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 알로타입은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동); Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개); 및 Lefranc MP, mAbs 1:4, 1-7(2009) 참조).
용어 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 본 명세서에서 상호 교환하여 사용된다.
본 명세서에서 사용된 "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 말한다(예를 들어 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 FAM19A5 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, FAM19A5의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 FAM19A5 단백질에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다.
"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들어 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어 항원) 간의 비-공유 상호작용의 전체 합계 강도를 말한다. 특별한 언급이 없다면, 본 명세서에서 사용된 "결합 친화성"은 결합 쌍의 멤버(예를 들어 항체와 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화성을 말한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(KD)에 의해 표시될 수 있다. 친화성은, 제한은 아니지만, 평형 해리 상수(KD), 및 평형 결합 상수(KA)를 포함하는, 당업계에 공지된 다수의 방식으로 측정 및/또는 표시될 수 있다. KD는 koff/kon의 몫으로부터 계산되고 몰 농도(M)로 표시되며, 는 KA의 kon/koff의 몫으로부터 계산된다. kon은, 예를 들어 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 말하고, koff는, 예를 들어 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 말한다. kon 및 koff는 면역분석(예를 들어 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)), BIACORE® 또는 역학적 배제 분석(KinExA®)과 같은, 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식한다", "특이적 결합", "선택적 결합" 및 "선택적으로 결합한다"는 항체와 관련하여 유사한 용어들로서 항원(예를 들어 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자(예를 들어 항체)와 관련된 용어이며, 이러한 결합은 당업자에 의해 이해되는 대로이다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 예를 들어 면역분석, BIACORE®, KinExA® 3000 기기(Sapidyne Instruments, Boise, ID), 또는 당업계에 공지된 다른 분석들에 의해 결정되었을 때, 일반적으로 더 낮은 친화성으로 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 특정한 구체예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 이 분자가 다른 항원에 결합할 때의 KA보다 적어도 2 logs, 2.5 logs, 3 logs, 4 logs 또는 그 이상 더 큰 KA으로 그 항원에 결합한다.
항체는 전형적으로 10-5 내지 10-11 M 이하의 해리 상수에 의해 반영되는, 높은 친화성으로 동족 항원에 특이적으로 결합한다. 약 10-4 M를 초과하는 KD는 일반적으로 비특이적 결합을 나타낸다고 간주된다. 항원과 "특이적으로 결합하는" 항체는 높은 친화성으로 항원 및 실질적으로 동일한 항원에 결합하는 항체를 말하며, 이것은 예를 들어 정해진 항원을 사용하여 면역분석(예를 들어 ELISA) 또는 BIACORE™ 2000 기기에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 바람직하게 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게 10-9 M 이하, 및 가장 바람직하게 10-8 M 내지 10-10 M의 KD를 갖는 것을 의미하고, 이것은 관련 없는 항원에는 높은 친화성으로 결합하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 용어 "항원"은 임의의 천연 또는 합성 면역원성 물질, 예컨대 단백질, 펩타이드 또는 합텐을 말한다. 항원은 FAM19A5 또는 이의 단편일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 "에피토프"는 당업계의 용어로서 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 말한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드의 연속(contiguous) 아미노산들(선형 또는 연속 에피토프)일 수 있거나, 또는 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 둘 이상의 비-연속 영역들이 합쳐진 것(입체형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-연속 에피토프)일 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 항상 그렇지는 않지만 전형적으로 변성 용매에 노출시 보유되고, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 입체형태에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 20개 아미노산을 포함한다. 에피토프가 주어진 항체에 의해 결합된 것을 결정하는 방법(즉 에피토프 맵핑)이 당업계에 잘 공지되어 있고, 이것은 예를 들어 면역블롯팅 및 면역침전 분석을 포함하며, 중첩 또는 연속 펩타이드(예를 들어 FMAM19A5로부터의)가 주어진 항체(예를 들어 항-FAM19A5 항체)와의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프의 공간적 입체형태를 결정하는 방법은 당업계의 기술 및 본 명세서에 개시된 것들을 포함하며, 예를 들어 엑스선 결정학, 2-차원 핵자기공명 및 HDX-MS를 포함한다(예를 들어 Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996) 참조).
특정 구체예에서, 항체가 결합한 에피토프는, 예를 들어 NMR 분광법, 엑스선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량분광법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어 액체 크로마토그래피 전자분무 질량분광법), 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 분석, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. 엑스선 결정학의 경우, 결정화는 당업계에 공지된 방법 중 어느 것을 사용하여 달성될 수 있다(예를 들어 Giege R et al, (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303 참조). 항체:항원 결정은 잘 공지된 엑스선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있으며, X-PLOR(Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc.에 의해 배포; 예를 들어 Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff H.W. et al.,; 미국 특허공개 제2004/0014194호 참조), 및 BUSTER(Bricogne G. (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt1):37-60; Bricogne G. (1997) Meth Enzymol 276A:361-423, ed Carter CW; Roversi P. et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)과 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 연구될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 알라닌 스캐닌 돌연변이유발 기술을 포함하는 돌연변이유발 기술의 내용은, 예를 들어 문헌(Champe M. et al., (1995) J Biol Chem 270:1388-1394 및 Cunningham B.C. & Wells J.A. (1989) Science 244: 1081-1085)을 참고한다.
용어 "에피토프 맵핑"은 항체-항원 인식에 대한 분자 결정소의 확인 과정을 말한다.
둘 이상의 항체와 관련하여 용어 "동일한 에피토프에 결합한다"는 주어진 방법에 의해 결정되었을 때 항체들이 아미노산 잔기의 동일한 세그먼트에 결합한다는 것을 의미한다. 항체들이 본 명세서에 제시된 항체와 "FAM19A5 상의 동일한 에피토프"에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS)을 포함한다. 다른 방법은 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하며, 여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주된다. 이에 더하여, 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법이 또한 사용될 수 있다. 이들 방법은 조합 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리로부터 특정한 짧은 펩타이드를 친화성 분리할 수 있는 관심 항체의 능력에 의존한다. 동일한 VH 및 VL 또는 동일한 CDR1, 2 및 3 서열을 가진 항체는 동일한 에피토프에 결합할 것으로 예상된다.
"표적과의 결합에 대해 다른 항체와 경합하는" 항체는 나머지 항체와 표적의 결합을 (부분적으로 또는 완전히) 저해하는 항체를 말한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경합하는지의 여부, 즉 하나의 항체가 나머지 항체와 표적의 결합을 저해하는지의 여부와 저해하는 정도는 공지된 경합 실험을 사용하여 결정될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 다른 항체와 표적의 결합에서 경합하며 이 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%까지 저해한다. 저해 또는 경합의 수준은 항체가 "차단 항체"(즉 표적과 먼저 인큐베이션된 저온 항체)인지에 따라 상이할 수 있다. 경합 분석은, 예를 들어 E.d. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 또는 E.d. Harlow and David Lane에 의한 "Using Antibodies"(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999)의 제11장에 제시된 대로 수행될 수 있다. 경합 항체는 (예를 들어 입체 장해에 의해) 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프에 결합한다.
다른 경합 결합 분석은 고체상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소면역분석(EIA), 샌드위치 경합 분석(Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986) 참조); 고체상 직접 표지화 분석, 고체상 직접 표지화 샌드위치 분석(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); 1-125 표지를 사용한 고체상 직접 표지 RIA( Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology 176:546 (1990) 참조); 및 직접 표지화 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990) 참조)를 포함한다.
"이중특이적" 또는 "이중기능성 항체"는 두 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 두 상이한 결합 부위를 가진 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 여러 가지 방법에 의해 생성될 수 있다(예를 들어 Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)를 참조).
본 명세서에서 사용된 용어 "단클론성 항체"는 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 또는 모든 항체가 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체들의 조성물을 말한다. 따라서, 용어 "인간 단클론성 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 선택적 불변 영역을 가진 항체 또는 항체 조성물을 말한다. 하나의 구체예에서, 인간 단클론성 항체는 트랜스제닉 비-인간 동물, 예를 들어 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스젠과 경쇄 트랜스젠을 포함하는 게놈을 가진, 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.
용어 "재조합 인간 항체"는 (a) 인간 면역 글로불린 유전자에 대해 트랜스젠이거나 트랜스염색체성(transchromosomal)인 동물(예를 들어 마우스)로부터 분리된 항체 또는 그로부터 제조된 하이브리도마, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 분리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체, 및 (d) 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열을 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체와 같은, 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 점라인 유전자에 의해 암호화되지만, 예를 들어 항체 성숙화 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함하는 특정한 인간 점라인 면역글로불린 서열을 이용하는 가변 및 불변 영역을 포함한다. 당업계에 공지된 대로(예를 들어 Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125 참조), 가변 영역은 외래 항원에 대해 특이적인 항체를 형성하도록 재배열한 다양한 유전자에 의해 암호화된, 항원 결합 도메인을 함유한다. 재배열에 더하여, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 초돌연변이)에 의해 더 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가의 반응(즉 이소타입 스위치)에서 변할 것이다. 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래 핵산 분자와 서열 동일성을 가질 수 없지만, 대신 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(즉 적어도 80% 동일성을 가진다).
"인간" 항체(HuMAb)는 프레임워크와 CDR 영역이 둘 다 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진 항체를 말한다. 또한, 이 항체가 불변 영역을 함유한다면, 불변 영역 역시 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 명세서에 제시된 항체는 인간 점라인 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어 시험관내 무작위 또는 부위-특정 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이). 그러나, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 점라인으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 접목된 항체는 포함하지 않는다. 용어 "인간" 항체와 "완전한 인간" 항체는 동의어로서 사용된다.
용어 "인간화된 항체"는 비-인간 항체의 CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 치환된 항체를 말한다. 항체의 인간화된 형태의 하나의 구체예에서, CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 치환되고, 하나 이상의 CDR 영역 내의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 그대로 남는다. 아미노산의 첨가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은 이들이 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 없애지 않는 한 허용된다. "인간화된" 항체는 원래 항체의 것과 유사한 항원 특이성을 보유한다.
"키메라 항체"는 하나의 종으로부터 가변 영역이 유래되고 다른 종으로부터 불변 영역이 유래된 항체, 예컨대 마우스 항체로부터 가변 영역이 유래되고 인간 항체로부터 불변 영역이 유래된 항체를 말한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "교차-반응한다"는 상이한 종들로부터의 FAM19A5에 결합하는 본 명세서에 제시된 항체의 능력을 말한다. 예를 들어, 인간 FAM19A5에 결합하는 본 명세서에 제시된 항체는 또한 다른 종의 FAM19A5(예를 들어 마우스 FAM19A5)에도 결합할 수 있다. 이러한 교차-반응성은 결합 분석(예를 들어 SPR, ELISA)에서 정제된 항원과의 특이적 반응성을 검출함으로써 또는 FAM19A5를 생리학적으로 발현하는 세포와의 결합, 또는 기능적 상호작용을 검출함으로써 측정될 수 있다. 교차-반응성을 결정하는 방법은 본 명세서에 개시된 표준 결합 분석, 예를 들어 BIACORE® 2000 SPR 기기(Biacore AB, Uppsala, Sweden)를 사용한 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석, 또는 유세포계수 기술을 포함한다.
본 명세서에서 어떤 물체에 적용된 용어 "자연-발생"은 물체가 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 말한다. 예를 들어, 자연의 출처로부터 분리될 수 있고 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은 유기체에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연-발생이다.
"폴리펩타이드"는 적어도 두 개의 연속 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 사슬을 말하며, 사슬 길이에 상한은 없다. 단백질에서 하나 이상의 아미노산 잔기는, 제한은 아니지만, 글리코실화, 포스포릴화 또는 이황화물 결합 형성과 같은 변형을 함유할 수 있다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, cDNA일 수 있다.
용어 "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기로 치환되는 것을 말한다. 유사한 측쇄를 가진 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 규정되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄(예를 들어 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어 알라닌, 발린, 로이신, 이소로이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지 측쇄(예를 들어 트레오닌, 발린, 이소로이신) 및 방향족 측쇄(예를 들어 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 가진 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, 항-TIM3 항체에서 예상된 비필수 아미노산 잔기가 동일한 측쇄 패밀리로부터의 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 항원 결합을 해치지 않는 뉴클레오타이드 및 아미노산 보존성 치환을 확인하는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다(예를 들어 Brummell et al., Biochem. 32: 1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); 및 Burks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997) 참조).
핵산의 경우, 용어 "실질적인 상동성"은 두 핵산, 또는 이들의 지정된 서열이 최적 정렬되고 비교되었을 때 동일하다는 것을 나타내며, 이때 뉴클레오타이드의 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 내지 95%, 또는 뉴클레오타이드의 적어도 약 98% 내지 99.5%에서, 적절한 뉴클레오타이드 삽입 또는 결실을 가진다. 또는, 실질적인 상동성은 세그먼트가 선택적 혼성화 조건하에 그 가닥의 보체와 혼성화할 때 존재한다.
폴리펩타이드의 경우, 용어 "실질적인 상동성"은 두 폴리펩타이드, 또는 이들의 지정된 서열이 최적 정렬되고 비교되었을 때 동일하다는 것을 나타내며, 이때 아미노산의 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 내지 95%, 또는 아미노산의 적어도 약 98% 내지 99.5%에서, 적절한 아미노산 삽입 또는 결실을 가진다.
두 서열 사이의 동일성 퍼센트는 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는, 갭의 수, 및 각 갭의 길이를 고려한, 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다(즉 상동성 % = 동일한 위치의 #/위치의 총 # x 100). 서열의 비교 및 두 서열 사이의 동일성 퍼센트는 아래 비제한적 예들에 설명된 것과 같은 수학적 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
두 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 퍼센트는 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있으며(worldwideweb.gcg.com에서 이용 가능함), 이것은 NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 갭 가중치 40, 50, 60, 70, 또는 80 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6을 사용한다. 두 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 또한 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 E. Meyers and W. Miller(CABIOS, 4: 11-17 (1989))의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있고, 이것은 PAM120 가중 잔기 표, 갭 길이 패널치 12 및 갭 패널티 4를 사용한다. 이에 더하여, 두 아미노산 서열 사이의 동일성 퍼센트는 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 Needleman and Wunsch(J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있으며(http://www.gcg.com에서 이용 가능함), 이것은 Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 갭 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6을 사용한다.
본 명세서에 제시된 핵산 및 단백질 서열은, 예를 들어 관련된 서열을 확인하기 위해 공공 데이터베이스에서 검색을 수행하기 위한 "쿼리 서열"로서 사용될 수 있다. 이러한 검색은 문헌(Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10)의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 뉴클레오타이드 검색은 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 단어길이 = 12 하에 수행될 수 있으며, 이로써 본 명세서에 제시된 핵산 분자와 상동성인 뉴클레오타이드 서열이 얻어진다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 단어길이 = 3 하에 수행될 수 있으며, 이로써 본 명세서에 제시된 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열이 얻어진다. 비교 목적으로 갭이 있는 정렬을 얻기 위해, Gapped BLAST가 문헌(Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402)에 설명된 대로 이용될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예를 들어 XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 변수가 이용될 수 있다(worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov 참조)
핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제된 형태나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로오스 겔 전기영동 및 당업계에 잘 공지된 다른 기술들을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포(예를 들어 염색체의 나머지 부분) 핵산 또는 단백질로부터 정제되었을 때, "분리되거나" 또는 "실질적으로 순수하다"(F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987) 참조).
핵산, 예를 들어 cDNA는 유전자 서열을 제공하기 위한 표준 기술에 따라서 돌연변이될 수 있다. 코딩 서열의 경우, 이들 돌연변이는 원한다면 아미노산 서열에 영향을 미칠 수 있다. 특히, 본 명세서에 제시된 자생 V, D, J, 불변, 스위치 및 다른 이러한 서열과 실질적으로 상동성이거나 그로부터 유래된 DNA 서열이 고려된다(여기서 "유래된"은 서열이 다른 서열과 동일하거나 또는 그로부터 변형된 것을 나타낸다).
용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 말한다. 한 가지 종류의 벡터는 "플라스미드"이고, 이것은 추가의 DNA 세그먼트가 리게이션될 수 있는 원형의 이중가닥 DNA 루프를 말한다. 다른 종류의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서는 추가의 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈에 리게이션될 수 있다. 특정한 벡터(예를 들어 박테리아 복제 기원을 가진 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자가 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포에 도입시 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있고, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정한 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")라고 언급된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용성을 가진 발현 벡터는 주로 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는 플라스미드가 벡터의 가장 흔히 사용되는 형태이기 때문에 상호 교환하여 사용될 수 있다. 그러나, 바이러스 벡터(예를 들어 복제 결합 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같은 다른 형태의 발현 벡터도 또한 포함되며, 이들은 동등한 기능을 수행한다.
용어 "재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")는 세포에 자연적으로 존재하지 않는 핵산을 포함하는 세포를 말하며, 재조합 발현 벡터가 도입된 세포일 수 있다. 이러한 용어는 특정한 해당 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손도 포함한다는 것이 이해되어야 한다. 돌연변이나 환경적 영향으로 인해 이어진 세대들에서는 특정한 변형이 일어날 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일할 수는 없지만 그래도 여전히 본 명세서에서 사용된 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.
본 명세서에서 사용된 용어 "연결된"은 둘 이상의 분자의 회합을 말한다. 연결은 공유 연결 또는 비-공유 연결일 수 있다. 연결은 또한 유전자(즉 재조합적으로 융합되는) 연결일 수 있다. 이러한 연결은 화학적 콘쥬게이션 및 재조합 단백질 생성과 같은 당업계에 인정된 여러 가지 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료"하기에 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어 암)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 암과 관련된 질환 또는 장애를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감을 제공하고 및/또는 적어도 하나의 지표(예를 들어 암 또는 종양 형성의 개시)를 감소시키고, 및/또는 암과 관련된 질환 또는 장애의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
II. 암 치료 방법
대상의 종양(또는 암)을 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 이 방법은 FAM19A5에 대한 길항제를 대상에 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 단백질에 특이적으로 결합하고 FAM19A5 활성을 감소시킨다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 조성물의 투여는 혈관 정상화를 촉진함으로써 대상의 종양을 치료, 감소, 완화, 제어, 또는 저해한다. 상기 설명된 대로, 다수의 암에서 발생하는 과량의 혈관형성은 비정상적인 혈관의 형성을 가져올 수 있다(Nagy J.A., et al., Br J Cancer 100(6):865-869 (2009)). 예를 들어, 이러한 혈관은 증가된 투과성 및/또는 감소된 혈류량을 가질 수 있고, 이것은 암 조직으로의 산소 및/또는 면역 세포(예를 들어 대식세포, 미세아교세포 및 T 림프구)의 효과적인 송달을 방해할 수 있다. 따라서, 특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 혈관 투과성을 감소시키고 및/또는 혈류량을 증가시킴으로써 혈관 정상화를 촉진한다. 일부 구체예에서, 혈관 정상화는 반응성 산소 종(ROS)의 생성과 관련되며, 따라서 산소의 송달을 증가시키고 저산소증을 개선한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체에 의해 유도된 ROS의 생성 및 산소의 송달은 화학제제에 의한 종양 세포의 세포자살을 증가시킨다. 일부 구체예에서, 혈관 정상화는 감소된 저산소증 및/또는 부종 형성과 관련된다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 또한 종양으로 연장되는 혈관의 수를 증가시킨다. 특정 구체예에서, 종양으로 연장된 혈관은 종양에 존재하는 기준 혈관(예를 들어 항-FAM19A5 치료의 부재하에 발생함)과 비교하여 더 두껍고 개선된 연결성을 가진다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 또는 그 이상까지 종양으로 연장되는 혈관(증가된 두께 및 개선된 연결성을 가짐)의 수를 증가시킨다. 일부 구체예에서, 종양에서의 혈관의 증가는 종양 내에서의 콜라겐(예를 들어 타입 IV) 및/또는 CD31 발현의 증가 및/또는 산소 송달의 증가와 관련되며, 종양 내에서의 저산소증을 개선한다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 종양으로의 면역 세포의 침윤을 증가시킨다. 일부 구체예에서, 종양으로의 면역 세포의 침윤은 기준(예를 들어 항-FAM19A5 항체에 노출되지 않은 종양에 존재하는 면역 세포의 수)과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 또는 그 이상까지 증가된다. 특정 구체예에서, 면역 세포는 대식세포, 수지상 세포, 미세아교세포, 및 T-림프구를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 또한 종양으로의 다른 세포(예를 들어 뉴런 세포 및/또는 기질 세포)의 침윤을 증가시킬 수 있다. 따라서, 일부 구체예에서, 종양으로의 면역 세포의 침윤은 종양에서의 다른 세포(예를 들어 뉴런 세포 및/또는 기질 세포)의 침윤을 동반한다. 다른 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 종양에 존재하는 면역 세포의 부피를 증가시킨다. 특정 구체예에서, 면역 세포의 부피는 기준(예를 들어 항-FAM19A5 항체에 노출되지 않은 종양에 존재하는 면역 세포의 부피)과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 또는 그 이상까지 증가된다. 특정 구체예에서, 면역 세포의 부피 증가는 면역 세포의 성숙화(예를 들어 단구에서 대식세포로)와 관련된다. 일부 구체예에서, 면역 세포의 부피 증가는 면역 세포의 증가된 이펙터 기능(예를 들어 식세포 작용)과 관련된다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 종양에서의 면역 세포의 식세포 활성 및/또는 막 전위를 증가시킨다. 특정 구체예에서, 면역 세포는 대식세포 또는 미세아교세포를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역 세포의 식세포 활성 및/또는 막 전위는 기준(예를 들어 항-FAM19A5 항체에 노출되지 않은 종양에 존재하는 면역 세포에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 또는 그 이상까지 증가된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법에 의한 면역 세포의 증가된 식세포 활성은 종양 미세환경을 개선하며, 이것은 혈관 정상화가 일어나게 한다. 일부 구체예에서, 면역 세포의 증가된 식세포 활성은 선천 면역(예를 들어 종양 항원의 청소, 염증 조절, 및 T 세포에 대한 종양-항원 제시)을 증진시키다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 또한 종양에서의 억제제 세포의 빈도를 감소시킬 수 있다. 용어 "억제제 세포"는 항원(예를 들어 종양 단백질)에 대한 숙주 면역 반응을 저해 또는 억제할 수 있는 면역 시스템의 세포를 말한다. 일부 구체예에서, 억제제 세포는 골수-유래 억제제 세포를 포함한다. 용어 "골수-유래 억제제 세포"(MDSC)는 골수 선조 세포 및 미성숙 골수 세포(IMC)로 구성된 이종성 세포 집단을 말한다. 건강한 개체에서, 골수에서 빠르게 발생된 IMC는 성숙한 과립구, 대식세포 또는 수지상 세포(DC)로 분화한다. IMC의 성숙한 골수 세포로의 분화가 방해되면 MDSC 집단이 확장된다. MDSC가 암 및 다른 질환과 관련하여 면역 반응의 부정적인 조절에 기여한다는 것이 밝혀졌다(예를 들어 미국 특허공개 제2015/0209404호 참조). 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 기준(예를 들어 항-FAM19A5 항체에 노출되지 않은 종양에서의 억제제 세포의 빈도)과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%까지 종양에서의 억제제 세포의 빈도를 감소시킨다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 종양에 대한 내인성 면역 반응을 개선할 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 암 면역요법(예를 들어 키메라 항원 수용체 T 세포(CART), NK 세포 요법, 또는 사이토카인-유도 살해 세포)의 활성을 개선 및/또는 증진시킬 수 있다. 따라서, 아래 기술되는 바와 같이, 특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체는 암을 치료하기 위한 하나 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 대상의 종양 성장을 저해 및/또는 감소시킨다. 특정 구체예에서, 종양 성장(예를 들어 종양 부피 또는 중량)은 기준(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체를 받지 않았던 대상에서의 상응하는 종양 부피 또는 중량)과 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 100%까지 감소된다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 기준(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체를 받지 않았던 대상에서의 상응하는 빈도)과 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 또는 100%까지 평균 종양 성장 저해(TGI)를 증가시킨다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 조성물(예를 들어 항-FAM19A5 항체)의 투여는 기준(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체를 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 그 이상까지 평균 생존을 증가시킨다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법으로 치료될 수 있는 종양은 전형적으로 면역요법에 반응성인 암들 및 전형적으로 면역요법에 비반응성인 암들로부터 유래된다. 일부 구체예에서, 암은 고상 종양 또는 혈액 악성물(액상 종양)을 가진 암이다. 다른 구체예에서, 암은 섬유증 관련 종양으로부터 유래된다. 용어 "섬유증 관련 종양" 및 "섬유증과 관련된 종양"은 섬유증을 수반하는 종양을 말한다. 용어 "섬유증"은 종양 조직 및/또는 그 근처에서 섬유성 결합조직(예를 들어 세포외 바탕질 단백질의 증가된 축적으로 인한)이 과잉 형성되거나 존재하는 것을 말한다.
치료를 요하는 암의 비제한적 예들은 편평 세포 암종, 소-세포 폐암, 비-소 세포 폐암, 편평 비-소 세포 폐암(NSCLC), 비편평 NSCLC, 위장관암, 신암(예를 들어 투명 세포 암종), 난소암, 간암, 결직장암, 자궁내막암, 신장암(예를 들어 신장 세포 암종(RCC)), 전립선암(예를 들어 호르몬 난치성 전립선 선암종), 갑상선암, 췌장암, 자궁경부암, 위암, 방광암, 간세포암, 유방암, 결장 암종, 및 두경부암(또는 암종), 위장암, 생식 세포 종양, 소아 육종, 비강 자연 살해, 흑색종(예를 들어 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부 또는 안내 악성 흑색종), 뼈암, 피부암, 자궁암, 항문 부위의 암, 고환암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 성기의 암, 소아의 고상 종양, 요관의 암, 신우의 암종, 종양 혈관형성, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 상피상 암, 편평 세포 암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유발된 것들을 포함하는 환경 유발 암, 바이러스 관련 암 또는 바이러스 기원의 암(예를 들어 인간 유두종 바이러스(HPV-관련 또는 -기원 종양)), 및 두 가지 주요 혈액 세포 계통, 즉 골수성 셀라인(이것은 과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만 세포를 생성함) 또는 림프성 셀라인(이것은 B, T, NK 및 혈장 세포를 생성함) 중 어느 하나로부터 유래된 혈액학상의 악성물, 예컨대 모든 종류의 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예를 들어 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수성 백혈병, 예컨대 급성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL) 및 만성 골수성 백혈병(CML), 비분화 AML(MO), 골수모구성 백혈병(M1), 골수모구성 백혈병(M2; 세포 성숙화 동반), 전골수성 백혈병(M3 또는 M3 변이형[M3V]), 골수단핵구성 백혈병(M4 또는 호산구증가증 동반 M4 변이형[M4E]), 단핵구성 백혈병(M5), 적백혈병(M6), 거핵아구 백혈병(M7), 분리된 과립구성 육종, 및 녹색종; 림프종, 예컨대 호지킨 림프종(HL), 비-호지킨 림프종(NHL), B 세포 혈액학상의 악성물, 예를 들어 B-세포 림프종, T-세포 림프종, 림프모구세포종 림프종, 단구성 B-세포 림프종, 점막-관련 림프성 조직(MALT) 림프종, 역형성(예를 들어 Ki 1+) 거대-세포 림프종, 성인 T-세포 림프종/백혈병, 맨틀 세포 림프종, 혈관-면역아구성 T-세포 림프종, 혈관중심 림프종, 장 T-세포 림프종, 원발성 종격동 B-세포 림프종, 전구체 T-림프모구성 림프종, T-림프모구성; 및 림프종/백혈병(T-Lbly/T-ALL), 말초 T-세포 림프종, 림프모구성 림프종, 이식 후 림프증식 장애, 진성 조직구성 림프종, 원발성 유출 림프종, B세포 림프종, 림프모구성 림프종(LBL), 림프 계통의 조혈성 종양, 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 소포성 림프종, 미만성 조직구성 림프종(DHL), 면역아구성 거대 세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 피부 T-세포 림프종(CTLC)(균상식육종 또는 시자리 증후군이라고도 한다), 및 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증을 동반한 림프모구세포종 림프종(LPL); 골수종, 예컨대 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 무증상 다발성 골수종(smoldering myeloma)(무통성 골수종이라고도 함), 고립 형질세포종(solitary plasmocytoma), 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모양 세포 림프종; 골수 계통의 조혈성 종양, 섬유육종 및 횡문근육종을 포함하는 간엽 기원의 종양; 섬유육종, 횡문근육종, 및 골육종을 포함하는 간엽 기원의 정상피종, 기형암종, 종양; 및 흑색종, 색소성건피증, 각질가시세포종, 정상피종, 갑상선 소포성 암 및 기형암종을 포함하는 기타 종양들, 림프 계통의 조혈성 종양, 예를 들어 제한은 아니지만 소 세포 및 대뇌양 세포 타입을 포함하여 T-전림프구성 백혈병(T-PLL)과 같은 T-세포 장애를 포함하는 T-세포 및 T-세포 종양; T-세포 타입의 거대 과립 림프구 백혈병(LGL); a/d T-NHL 간비장 림프종; 말초/흉선 뒤(post-thymic) T 세포 림프종(다형성 및 면역아구성 서브타입); 혈관중심(코) T-세포 림프종; 머리 또는 목의 암, 신암, 직장암, 갑상선의 암; 급성 골수성 림프종, 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 종양(예를 들어 고상 종양)은 암종, 육종, 또는 림프종을 포함한다. 특정 구체예에서, 고상 종양은 암종 또는 육종이다. 본 명세서에서 사용된 "육종"은 암의 일종을 말하며, 예를 들어 결합조직 신생물인데, 이것은 일반적으로 매우 악성이고 중배엽 세포의 증식에 의해 형성된다(즉 간엽 기원의 종양). 일부 구체예에서, 육종은 아스킨 종양, 포도상 육종, 혈관육종, 골육종, 연골육종, 척삭종, 인대 모양 섬유종증, 유잉 육종, 섬유아세포성 육종, 위장관 기질 종양(GIST), 뼈의 거대 세포 종양(GCT), 부인과 육종, 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 악성 말초 신경집 종양(MPNST), 악성 혈관내피종, 골육종, 복막후부 육종, 횡문근육종, 연조직 유잉 육종, 연조직 육종, 활막 육종, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 육종은 연조직 육종이다. 특정 구체예에서, 연조직 육종은 포상연부 육종, 혈관육종("헤마안지오사르코마"라고도 함), 엽상 낭상육종, 융기성 피부 섬유육종, 인대 모양 종양, 결합조직성 소 원형 세포 종양, 상피양 육종, 외골격 연골육종, 외골격 골육종, 섬유육종, 위장관 기질 종양, 혈관주위세포종("고립 섬유성 종양"이라고도 함), 카포시 육종, 평활근육종, 지방육종, 림프관육종, 림프육종, 얼기섬유 섬유조직구 종양, 횡문근육종, 활막 육종, 미분화 다형세포 육종, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 고상 종양은 림프종이다. 본 명세서에 개시된 "림프종"은 림프구(일종의 백혈구)로부터 발생한 일군의 혈액암이다. 많은 림프종 서브타입이 당업계에 공지되어 있다. 일부 구체예에서, 림프종은 호지킨 림프종(HL), 비-호지킨 림프종(NHL), 다발성 골수종, 또는 면역증식성 질환이다.
일부 구체예에서, 종양은 섬유증과 관련된다. 특정 구체예에서, 섬유증과 관련된 종양은 간암, 폐암, 신암, 유방암, 췌장암, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 암으로부터 유래된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 종양(예를 들어 고상 종양)은 유방암, 림프종(예를 들어 B-세포 림프종), 흑색종, 폐암, 췌장암, 신장암, 전립선암, 섬유육종, 결장 선암종, 간암, 난소암, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 유래되거나 관련된다. 다른 구체예에서, 본 발명의 방법으로 치료 가능한 종양은 뇌종양이 아니다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법으로 치료 가능한 종양은 교모세포종이 아니다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 또한 전이성 암, 절제 불가능한, 난치성 암(예를 들어 기존의 암 요법, 예를 들어 면역요법, 예를 들어 차단 PD-(L)1 항체에 의한 요법에 대해 내성인 암), 및/또는 재발성 암의 치료에 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 기존의 암 요법은 화학요법을 포함한다. 일부 구체예에서, 화학요법은 백금-기반 요법을 포함한다. 일부 구체예에서, 백금-기반 요법은 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 네다플라틴, 트리플라틴 4질산염, 페난트리플라틴, 피코플라틴, 사트라플라틴, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 백금-기반 항신생물제를 포함한다. 특정 구체예에서, 백금-기반 요법은 시스플라틴을 포함한다. 다른 구체예에서, 백금-기반 요법은 카보플라틴을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 하는 대상(예를 들어 종양이 침범된)의 생존 지속기간을 효과적으로 증가시킨다. 예를 들어, 대상의 생존 지속기간은 기준 개체(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체로 치료되지 않은 다른 대상)과 비교했을 때 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 1년 또는 그 이상까지 증가된다. 또 다른 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 대상의 생존 지속기간을, 기준 대상(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체로 치료되지 않은 다른 대상)의 생존 지속기간보다 더 긴 수준으로(약 1개월 더 길게, 약 2개월 더 길게, 약 3개월 더 길게, 약 4개월 더 길게, 약 5개월 더 길게, 약 6개월 더 길게, 약 7개월 더 길게, 약 8개월 더 길게, 약 9개월 더 길게, 약 10개월 더 길게, 약 11개월 더 길게, 또는 약 1년 더 길게) 증가시킨다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 대상의 질환 진행 없는 생존 지속기간을 증가시킨다. 예를 들어, 대상의 질환 진행 없는 생존 지속기간은 기준 대상(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체로 치료되지 않은 다른 대상)과 비교했을 때 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 또는 적어도 약 1년까지 증가된다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 일군의 대상에서의 반응 속도를 효과적으로 증가시킨다. 예를 들어, 일군의 대상에서의 반응 속도는 기준 대상(예를 들어 본 명세서에 개시된 조성물, 예를 들어 항-FAM19A5 항체로 치료되지 않은 다른 대상)과 비교했을 때 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 99% 또는 적어도 약 100%까지 증가된다.
일부 구체예에서, 본 방법에서 치료될 대상은 비-인간 동물, 예컨대 래트 또는 마우스이다. 일부 구체예에서, 본 방법에서 치료될 대상은 인간이다.
본 발명은 또한 다른 암 제제와 조합하여 대상의 암을 치료하는 방법을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법에서 유용한 항-FAM19A5 항체는 조합 요법으로, 즉 적어도 하나의 다른 항암제 및/또는 면역조정제, 예를 들어 T-세포 자극(예를 들어 활성화) 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 발명의 방법에서 유용한 항-FAM19A5 항체는 암의 치료에 사용되는 다른 화합물, 약물, 및/또는 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 이러한 화합물, 약물, 및/또는 제제는, 예를 들어 화학요법 약물, 소 분자 약물, 또는 암에 대한 면역 반응을 자극하는 항체를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 표준 치료(예를 들어 수술, 방사선 및 화학요법)와 조합하여 사용된다. 다른 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법은 유지 요법, 예를 들어 종양의 발생이나 재발을 방지하고자 하는 요법으로서 사용된다.
일부 구체예에서, 본 발명에서 유용한 항-FAM19A5 항체는 둘 이상의 면역-종양학 제제와 조합될 수 있으며, 예를 들어 다음의 요법 중 하나 이상과 같은, 면역 경로의 다수의 요소를 표적화하는 조합 접근법과 조합될 수 있다: 종양 항원 제시를 증진시키는 요법(예를 들어 수지상 세포 백신, GM-CSF 분비 세포 백신, CpG 올리고뉴클레오타이드, 이미퀴모드); CTLA-4 및/또는 PD1/PD-L1/PD-L2 경로를 억제하고 및/또는 Treg 또는 다른 면역 억제 세포(예를 들어 골수-유래 억제제 세포)를 결실 또는 차단함에 의한, 부정적 면역 조절을 저해하는 요법; CD-137, OX-40, 및/또는 CD40 또는 GITR 경로를 자극하고 및/또는 T 세포 이펙터 기능을 자극하는 작동제로, 긍정적 면역 조절을 자극하는 요법; 항-종양 T 세포의 빈도를 전신적으로 증가시키는 요법; CD25의 길항제(예를 들어 다클리주맙)를 사용하거나 또는 생체외 항-CD25 비드 고갈에 의해, 종양에서 Treg와 같은 Treg를 고갈 또는 저해하는 요법; 종양에서 억제제 골수 세포의 기능에 영향을 미치는 요법; 종양 세포의 면역원성을 증진시키는 요법(예를 들어 안트라시클린); 유전자 변형된 세포, 예를 들어 키메라 항원 수용체에 의해 변형된 세포를 포함하는 입양 T 세포 또는 NK 세포 이식(CAR-T 요법); 인돌레아민 디옥시게나아제(IDO), 디옥시게나아제, 아르기나아제, 또는 산화질소 합성효소와 같은 대사 효소를 저해하는 요법; 종양 부위에서 선천 면역 활성화 및/또는 염증을 촉발하는 요법; 면역 자극 사이토카인의 투여; 또는 면역 억제 사이토카인의 차단. 일부 예에서, 본 발명에서 유용한 항-FAM19A5 항체와 조합될 수 있는 추가의 항암제는, 제한은 아니지만 항-CTLA-4 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-OX40(CD134, TNFRSF4, ACT35 및/또는 TXGP1L라고도 함) 항체, 항-CD137 항체, 항-LAG-3 항체, 항-GITR 항체, 또는 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명에 유용한 항-FAM19A5 항체는 PD-1 경로의 길항제(예를 들어 항-PD-1, 항-PD-L1, 또는 항-PD-L2 항체)와 조합하여 투여된다.
본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체와 함께 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙(BMS-936558) 또는 항체 17D8, 2D3, 4H1, 5C4, 7D3, 5F4 및 4A11 중 하나의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체이며, 이는 WO 2006/121168에 개시되어 있다. 특정 구체예에서, 항-PD-l 항체는 WO 2012/145493에 개시된 MK-3475(람브롤리주맙); WO 2012/145493에 개시된 AMP-514; 또는 PDR001이다. 공지된 PD-1 항체 및 다른 PD-1 저해제는 WO 2009/014708, WO 03/099196, WO 2009/114335, WO 2011/066389, WO 2011/161699, WO 2012/145493, 미국특허 제7,635,757호 및 제8,217,149호, 및 미국 특허공개 제2009/0317368호에 개시된 것들을 포함한다. WO 2013/173223에 개시된 항-PD-1 항체 중 어느 것이 또한 사용될 수 있다. PD-1 상에서 이들 항체 중 하나와 동일한 에피토프와의 결합을 경합하고 및/또는 결합하는 항-PD-1 항체가 또한 본 발명의 조합 치료에서 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 조합 요법에서 유용한 예시적인 항-PD-L1 항체는 BMS-936559(WO 2007/005874 및 미국특허 제7,943,743호에서 12A4로 제시), 또는 3G10, 12A4, 10A5, 5F8, 10H10, 1B12, 7H1, 11E6, 12B7 및 13G4의 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항체이며, 이들은 PCT 공개 WO 07/005874 및 미국특허 제7,943,743호에 개시된다. 특정 구체예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736(더발루맙 및 항-B7-H1라고도 함), MPDL3280A(아테졸리주맙 및 RG7446라고도 함), MSB0010718C(아벨루맙이라고도 함; WO 2013/79174), 또는 rHigM12B7이다. WO 2013/173223, WO 2011/066389, WO 2012/145493, 미국특허 제7,635,757호 및 제8,217,149호 및 미국 특허공개 제2009/145493호에 개시된 항-PD-L1 항체 중 어느 것이 또한 사용될 수 있다. 이들 항체 중 어느 것과 동일한 에피토프와 경합 및/또는 결합하는 항-PD-L1 항체가 또한 조합 치료에서 사용될 수 있다.
조합 요법으로서 사용되었을 때, 본 명세서에 개시된 조성물은 개별 치료제가 단독으로 투여되었을 때 관찰된 것보다 더 큰 항암 효과를 가진다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체와 추가의 항암제를 둘 다 투여하는 것은 항-FAM19A5 항체 또는 추가의 항암제를 단독으로 투여하는 것과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%까지 종양 형성을 저해한다. 일부 구체예에서, 항-PD-(L)1 항체와 조합하여 항-FAM19A5 항체를 투여하는 것은 항체의 단독 투여와 비교하여 더 큰 종양 저해를 가져온다. 특정 구체예에서, 항-PD-(L)1 항체와 조합하여 항-FAM19A5 항체를 투여하는 것은 기준(예를 들어 조합 요법을 받지 않은 대상에서 종양 성장의 저해, 예를 들어 항체의 단독요법)과 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%까지 종양 성장의 저해를 증가시킨다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체와 본 명세서에 개시된 제2 제제(예를 들어 항-PD-(L)1 항체)의 조합은 제약학적으로 허용되는 담체 중에서 단일 조성물로서 동시에, 또는 항-FAM19A5 항체를 가진 별도의 조성물과 제약학적으로 허용되는 담체 중의 제2 제제로서 동시에 투여될 수 있다. 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체와 제2 제제(예를 들어 항-PD-(L)1 항체)의 조합은 순차적으로 투여될 수 있다.
상기 논의된 대로, 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체는 면역치료제, 화학치료제, 표적화 치료제, 방사선치료제(방사선 요법), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 하나 이상의 추가의 암 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 면역치료제의 비제한적 예들은 단클론성 항체(본 명세서에 개시된 것들, 예를 들어 항-PD-(L)1 항체), 키메라 항원 수용체(CAR) T-세포, NK-세포, 수지상세포(DC), 입양 세포 전이(ACT), 면역 체크포인트 조정제, 사이토카인, 암 백신, 애쥬번트, 및 암살상(oncolytic) 바이러스를 포함한다. 화학치료제의 비제한적 예들은 테모졸로마이드, 젬시타빈, 파클리탁셀, 카보플라틴, 시스플라틴, 엘로투무맙, 레날리도마이드, 덱사메타손 및 옥살리플라틴을 포함한다. 용어 "표적화 치료제"는 하나 이상의 암형성 신호화 단백질(예를 들어 세포 성장 및 생존에 수반된 것들)을 특이적으로 표적화하여 저해하는 분자를 말한다. 이러한 표적화 치료제의 비제한적 예들은 티로신-키나아제 저해제(예를 들어 이마티닙(GLEEVEC®), 제피티닙(IRESSA®), 에를로티닙(TARCEVA®), 소라페닙(NEXAVAR®), 서니티닙(SUTENT®), 다사티닙(SPRYCL®), 라파티닙(TYKERB®), 닐로티닙(TASIGNA®), 보르테조밉(VELCADE®), 타목시펜(NOLVADEX®), 토파시티닙(XELJANZ®), ALK 저해제(예를 들어 크리조티닙), Bcl-2 저해제(예를 들어 오바토클락스, 나비토클락스, 고시폴), PARP 저해제(예를 들어 이니파립, 올라파립), PI3K 저해제(예를 들어 페리포신), 아파티닙, AN-152, Braf 저해제(예를 들어 트라메티닙, MEK162), CDK 저해제(예를 들어 PD-0332991, LEE011), Hsp90 저해제, 살리노마이신, VAL-083)); 소 분자 약물 콘쥬게이트(예를 들어 빈타폴라이드); 세린-트레오닌 키나아제 저해제(예를 들어 템시롤리무스(TORISEL®), 에베롤리무스(AFINITOR®), 베뮤라페닙(ZELBORAF®), 트라메티닙(MEKINIST®), 다브라페닙(TAFINLAR®)); 항체(항-CD20 항체(예를 들어 리툭시맙(RITUXAN®)), 항-HER2/neu 항체(예를 들어 트라스투주맙(HERCEPTIN®)), 알렘투주맙(CAMPATH®), 항-EGFR 항체(예를 들어 세툭시맙, 파니투무맙), 항-VEGF 항체(예를 들어 베바시주맙(AVASTIN®))을 포함한다.
III. 암 진단 방법
현재, 암을 진단하는데 이용할 수 있는 가장 신뢰성 있는 방법은 조직 생검을 통한 것이다. 그러나, 이러한 방법은 대체로 매우 침습적이고 다양한 부작용(예를 들어 생검 부위 출혈, 통증 및 불편함)을 초래한다. 따라서, 대상의 암을 진단하는 다른 방법이 본 명세서에 개시되며, 이 방법은 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 대상의 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계 및 샘플에서의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5 단백질을 암호화하는 mRNA 수준을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 생물학적 샘플에서의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5 단백질을 암호화하는 mRNA 수준은 기준 샘플(예를 들어 종양을 갖지 않는 대상의 샘플)에서의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5 단백질을 암호화하는 mRNA 수준과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 또는 적어도 30배 증가한다.
본 명세서에 개시된 방법은 대상의 FAM19A5 발현 수준(단백질 및/또는 mRNA)을 측정함으로써 대상에서의 종양의 존재를 진단할 수 있으며, 기준 수준(예를 들어 종양이 없는 대상의 FAM19A5 발현 수준)과 비교하여 증가된 발현은 그 대상이 종양을 가진다는 것을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 발명은 종양을 가진다고 의심되는 대상의 FAM19A5 단백질 수준을 측정함으로써 종양의 존재를 확인할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 종양을 진단하는데 사용되는 다른 분석과 조합하여 대상의 FAM19A5 단백질 수준을 측정하는 것을 개시한다.
일부 구체예에서, FAM19A5 단백질 수준은 면역조직화학, 웨스턴 블롯팅, 방사성면역분석, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성면역확산, 면역침전 분석, Ouchterlony 면역확산법, 로켓 면역전기영동, 조직 면역염색법, 보체 고정 분석, FACS, 또는 단백질 칩에 의해 측정된다. 하나의 구체예에서, FAM19A5 단백질을 암호화하는 mRNA의 수준은 RT-PCR, 실시간 중합효소 연쇄 반응, 또는 노던 블롯에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 침, 뇌척수액, 유리체내액, 또는 소변을 포함한다. 종양에서 증가하여 발현된 FAM19A5 단백질은 혈청으로 누출될 수 있고, 혈청 중 단백질이 상기 열거된 분석 중 어느 것을 사용하여 측정될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암을 가진다고 의심되는 대상의 혈청에서의 FAM19A5 단백질 발현을 측정하는 방법을 개시한다. 따라서, 본 발명의 방법은 대부분의 현재 이용 가능한 진단 방법(예를 들어 생검)보다 더 편리하고 덜 침습적일 수 있다.
V. 본 발명에 유용한 FAM19A5 길항제
일부 구체예에서, 본 발명에 유용한 FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5를 특이적으로 표적화하는 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다.
본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체는 특정한 기능적 특징이나 특성을 특징으로 하는 단클론성 항체를 포함한다. 예를 들어, 이 항체는 가용성 FAM19A5 및 막 결합 FAM19A5를 포함하는 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 가용성 및/또는 막 결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 것에 더하여, 본 명세서에 개시된 항체는 또한 (a) 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하거나; (b) 1 nM 이하의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5에 결합하거나; 또는 (a)와 (b)를 둘 다 나타낸다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M(0.1 nM) 이하, 10-11 M 이하, 또는 10-12 M(1 pM) 이하, 예를 들어 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 또는 10-9 M 내지 10-7 M, 예를 들어 10-12 M, 5 X 10-12 M, 10-11 M, 5 X 10-11 M, 10-10 M, 5 X 10-10 M, 10-9 M, 5 X 10-9 M, 10-8 M, 5 X 10-8 M, 10-7 M, 또는 5 X 10-7 M의 KD의 높은 친화성으로 가용성 인간 FAM19A5 또는 막 결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 다양한 종의 인간 FAM19A5에 대한 항체의 결합 능력을 평가하는 표준 분석은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯, 및 RIA를 포함한다. 적합한 분석들이 실시예에서 상세히 설명된다. 항체의 결합 동력학(예를 들어 결합 친화성)이 또한 ELISA, Biacore® 분석 또는 KinExA®과 같은 당업계에 공지된 표준 분석에 의해 평가될 수 있다. FAM19A5의 기능적 특성(예를 들어 리간드 결합)에 대한 항체의 효능을 평가하는 분석이 아래 및 실시예에서 더 상세히 설명된다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, ELISA에 의해 결정되었을 때, 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 결합한다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 본 명세서에 개시된 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체와 교차-경합한다(또는 결합을 저해한다).
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체의 결합을 저해하며, 여기서 (i) 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 이러한 기준 항체와 인간 FAM19A5의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 또는 100%까지 저해한다. 경합 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프(예를 들어 입체 장해에 의해 증명)와 결합한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경합하는지의 여부는 RIA 및 EIA와 같은 당업계에 공지된 경합 실험을 사용하여 결정될 수 있다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 본 명세서에 개시된 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 (i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
두 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS), 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하는 방법(여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합은 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주됨), 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법을 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 항체와 인간 FAM19A5의 단편의 결합에 의해 결정되었을 때, 성숙한 인간 FAM19A5의 적어도 하나의 에피토프와 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 42 내지 61)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 6의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 46 내지 51(즉, DSSQPR), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 50, 및 52(즉, D---P-R), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 47, 48, 및 50(즉, DSS-P)에 해당하는 하나 이상의 아미노산에서 SEQ ID NO: 6에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 90 내지 109)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 9의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 4의 하나 이상의 아미노산 잔기 99 내지 107(즉, EGCDLLINR), 예를 들어 아미노산 잔기 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에서 SEQ ID NO: 9에 결합한다.
일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 6과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 9와 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프인, 인간 FAM19A5에만 결합한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6 또는 이의 단편과 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 9 또는 이의 단편과 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 글리코실화 및 비글리코실화 인간 FAM19A5와 모두 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프와 더 결합한다. 따라서, 특정한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프와 추가의 에피토프 또는 SEQ ID NO: 9의 에피토프와 추가의 에피토프에 결합한다. 다른 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 5의 에피토프, SEQ ID NO: 9의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프, SEQ ID NO: 10의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO: 5, 에피토프 F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO: 7, 에피토프 F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO: 8, 에피토프 F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9, 에피토프 F5), 또는 NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO: 10, 에피토프 F6), 또는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 또는 이들의 임의의 조합의 아미노산 서열 내에 위치된 단편으로부터 선택된다. SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편은 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10 중 어느 것의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 에피토프에 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프의 글리코실화 및 비글리코실화 형태에 모두 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP2, EP4, 및/또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 EP2는 아미노산 DSSQP(SEQ ID NO: 66)을 포함하고, EP4는 아미노산 ARCACRK(SEQ ID NO: 68)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP2, EP4, 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단지 EP2에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP4 및 EP8에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 EP6은 아미노산 KTKQWCDML(SEQ ID NO: 70)을 포함하고, EP7은 아미노산 GCDLLINR(SEQ ID NO: 71)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP6, EP7, 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단지 EP6, EP7, 또는 EP8에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP7 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP7에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 FAM19A5 에피토프에 결합한다.
특정 구체예에서, 예를 들어 면역분석(예를 들어 ELISA), 표면 플라즈몬 공명, 또는 역학적 배제 분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 더 높은 친화성으로 FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)와 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본 명세서에 개시된다. 특정한 구체예에서, 예를 들어 면역분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질과 교차 반응성 없이 FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본 명세서에 개시된다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 자생 항체가 아니거나 또는 자연 발생 항체가 아니다. 예를 들어, 항-FAM19A5 항체는, 더 많은, 더 적은, 또는 상이한 타입의 번역 후 변형(post-translational modification)을 가짐으로써, 자연 발생인 항체의 것과는 상이한 번역 후 변형을 가진다.
V. 예시적인 항-FAM19A5 항체
본 명세서에 개시된 방법에 사용될 수 있는 특정한 항체는 본 명세서에 개시된 CDR 및/또는 가변 영역 서열을 가진 항체, 예를 들어 단클론성 항체, 뿐만 아니라 이들의 가변 영역 또는 CDR 서열과 적어도 80% 동일성(예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성)을 가진 항체이다. 본 발명의 상이한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 표 4 및 5에 제공된다.
가변 중쇄 CDR 아미노산 서열(Kabat 시스템에 따름)
항체 VH-CDR1 VH-CDR2 VH-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SHGMF
(SEQ ID NO: 11)		 EITNDGSGTNYGSAVKG
(SEQ ID NO: 12)		 STYECPGGFSCWGDTGQIDA
(SEQ ID NO: 13)
항-FAM19A5
("3-2")		 SFNMF
(SEQ ID NO: 14)		 QISSSGSSTNYAPAVRG
(SEQ ID NO: 15)		 SSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDA (SEQ ID NO: 16)
항-FAM19A5
("1-65")		 SYQMG
(SEQ ID NO: 17)		 VINKSGSDTS
(SEQ ID NO: 18)		 GSASYITAATIDA
(SEQ ID NO: 19)
항-FAM19A5
("1-28")		 GFDFSDYG
(SEQ ID NO: 20)		 IRSDGSNP
(SEQ ID NO: 21)		 AKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDA (SEQ ID NO: 22)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 TYAVT
(SEQ ID NO: 89)		 YINWRGGTSYANWAKG
(SEQ ID NO: 90)		 DASSGAAFGSYGMDP
(SEQ ID NO: 91)
항-FAM19A5
("13B4")		 SSNWWS
(SEQ ID NO: 95)		 EIYHGGTTNYNPSLKG
(SEQ ID NO: 96)		 WQLVGGLDV
(SEQ ID NO: 97)
항-FAM19A5
("13F7")		 GYSWT
(SEQ ID NO: 101)		 EISHFGSANYNPSLKS
(SEQ ID NO: 102)		 ALRGTYSRFYYGMDV
(SEQ ID NO: 103)
항-FAM19A5
("15A9")		 SYYWS
(SEQ ID NO: 107)		 YIYPSGSTNYNPSLKS
(SEQ ID NO: 108)		 VNPFGYYYAMDV
(SEQ ID NO: 109)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 SDYMS
(SEQ ID NO: 113)		 IIYPSTTTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 114)		 GSNWSSGMNL
(SEQ ID NO: 115)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TYYMS
(SEQ ID NO: 119)		 IVYPSGTTYYANWAKG
(SEQ ID NO: 120)		 GDSFGYGL
(SEQ ID NO: 121)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 NYYMG
(SEQ ID NO: 125)		 IIYASGSTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 126)		 IDIGVGDYGWAYDRLDL
(SEQ ID NO: 127)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 GYYMS
(SEQ ID NO: 131)		 IIYPSGSTDYASWAKG
(SEQ ID NO: 132)		 VAGYVGYGYETFFDI
(SEQ ID NO: 133)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 NYDMS
(SEQ ID NO: 137)		 FMDTDGSAYYATWAKG
(SEQ ID NO: 138)		 RGSSYYGGIDI
(SEQ ID NO: 139)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 SYYMN
(SEQ ID NO: 143)		 IIYPSGTTYYAGWAKG
(SEQ ID NO: 144)		 TVSGYFDI
(SEQ ID NO: 145)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 SYGVS
(SEQ ID NO: 149)		 YIANNYNPHYASWAKG
(SEQ ID NO: 150)		 DNYGMDP
(SEQ ID NO: 151)
가변 경쇄 CDR 아미노산 서열(Kabat 시스템에 따름)
항체 VL-CDR1 VL-CDR2 VL-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SGGSYSYG
(SEQ ID NO: 23)		 WDDERPS
(SEQ ID NO: 24)		 GTEDISGTAGV
(SEQ ID NO: 25)
항-FAM19A5
("3-2")		 SGGGSYAGSYYYG
(SEQ ID NO: 26)		 ESNKRPS
(SEQ ID NO: 27)		 GSWDSSNGGI
(SEQ ID NO: 28)
항-FAM19A5
("1-65")		 SGGGSSGYGYG
(SEQ ID NO: 29)		 WNDKRPS
(SEQ ID NO: 30)		 GNDDYSSDSGYVGV
(SEQ ID NO: 31)
항-FAM19A5
("1-28")		 GYGYG
(SEQ ID NO: 32)		 QND
(SEQ ID NO: 33)		 GSEDSSTLAGI
(SEQ ID NO: 34)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 QASQSISSYLS
(SEQ ID NO: 92)		 EASKLAS
(SEQ ID NO: 93)		 QQGYSSTNVWNA
(SEQ ID NO: 94)
항-FAM19A5
("13B4")		 SGDKLGNVYAS
(SEQ ID NO: 98)		 QDNKRPS
(SEQ ID NO: 99)		 QAWDSSTAV
(SEQ ID NO: 100)
항-FAM19A5
("13F7")		 RSSQSLLHSNGYNYLD
(SEQ ID NO: 104)		 LGSNRAS
(SEQ ID NO: 105)		 MQARQTPLT
(SEQ ID NO: 106)
항-FAM19A5
("15A9")		 RASQSISTSLN
(SEQ ID NO: 110)		 GASTLQS
(SEQ ID NO: 111)		 QESASIPRT
(SEQ ID NO: 112)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 116)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 117)		 LGGYSYSSTGLT
(SEQ ID NO: 118)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TADTLSRSYAS
(SEQ ID NO: 122)		 RDTSRPS
(SEQ ID NO: 123)		 ATSDGSGSNYQYV
(SEQ ID NO: 124)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 128)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 129)		 LGGYSYSSIT
(SEQ ID NO: 130)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 134)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 135)		 LGGVTYSSTGTHLT
(SEQ ID NO: 136)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QASQSIGGNLA
(SEQ ID NO: 140)		 RASTLAS
(SEQ ID NO: 141)		 QSPAYDPAAYVGNA
(SEQ ID NO: 142)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 LASEDIYSALA
(SEQ ID NO: 146)		 GTSNLES
(SEQ ID NO: 147)		 QGYSSYPLT
(SEQ ID NO: 148)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QASQSVYNNKNLA
(SEQ ID NO: 152)		 AASTLAS
(SEQ ID NO: 153)		 QGEFSCSSADCNA
(SEQ ID NO: 154)
가변 중쇄 아미노산 서열
항체 VH 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSHGMFWVRQTPGKGLEYVAEITNDGSGTNYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCARSTYECPGGFSCWGDTGQIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 35)
항-FAM19A5
("3-2")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEYVAQISSSGSSTNYAPAVRGRATISRDNGQSTVRLQLNNPGAEDTGTYYCAKSSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 36)
항-FAM19A5
("1-65")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKGLEWVGVINKSGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKGSASYITAATIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 37)
항-FAM19A5
("1-28")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFDFSDYGMGWVRQAPGKGLEWVAAIRSDGSNPSYGSAVKGRATISKDNGRSTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 38)
항-FAM19A5("P2-C12") QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYAVTWVRQAPGKGLEWIGYINWRGGTSYANWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARDASSGAAFGSYGMDPWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 155)
항-FAM19A5
("13B4")		 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLNCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHGGTTNYNPSLKGRVTMSVDKTKNQFSLRLSSVTAVDTAVYYCARWQLVGGLDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 156)
항-FAM19A5
("13F7")		 QVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAINAESFNGYSWTWIRQTPGKGLEWIGEISHFGSANYNPSLKSRATISADKSKNQFSLKLTSVTAVDTAVYYCARALRGTYSRFYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 157)
항-FAM19A5
("15A9")		 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYPSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLNLKSVTAVDTAVYYCARVNPFGYYYAMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 158)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSDYMSWVRQAPGEGLEWIGIIYPSTTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVELKMTSLTTEDTATYFCARGSNWSSGMNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYYMSWVRQAPGKGLEWIGIVYPSGTTYYANWAKGRFTISTASTTVDLMITSPTTEDTATYFCARGDSFGYGLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 160)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMGWVRQAPGEGLEWIGIIYASGSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARIDIGVGDYGWAYDRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 161)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 QEQLVESGGRLVTPGTPLTLSCTASGFFLSGYYMSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGSTDYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITTPTTEDTATYFCARVAGYVGYGYETFFDIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 162)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYDMSWVRQAPGKGLEYIGFMDTDGSAYYATWAKGRFTISRTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARRGSSYYGGIDIWGPGTPVTVSL (SEQ ID NO: 163)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMNWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGTTYYAGWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARTVSGYFDIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 164)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QEQLVESGGRLVTPGTTLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWIGYIANNYNPHYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDNYGMDPWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 165)
가변 경쇄 아미노산 서열
항체 VL 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSYSYGWFQQKSPGSALVTVIYWDDERPSDIPSRFSGALSGSTNTLTITGVQADDEAVYFCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 39)
항-FAM19A5
("3-2")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKAPGSAPVTLIYESNKRPSDIPSRFSGSTSGSTATLTITGVQADDEAIYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 40)
항-FAM19A5
("1-65")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSSGYGYGWYQQKSPSSAPLTVIYWNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 41)
항-FAM19A5
("1-28")		 ALTQPSSVSANLEGTVEITCSGSGYGYGWYQQKSPGSAPVTVIYQNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYYCGSEDSSTLAGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 42)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 ELDMTQTPSSVSAAVGGTVTIKCQASQSISSYLSWYQQKPGQPPKLLIYEASKLASGVPSRFSGSGYGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSTNVWNAFGGGTNVEIK (SEQ ID NO: 166)
항-FAM19A5
("13B4")		 SYELTQPLSVSVSPGQTASITCSGDKLGNVYASWYQQKPGQSPTLVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGKTATLTISGTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 167)
항-FAM19A5
("13F7")		 DIVMTQTPLSLPVAPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYVQKPGQPPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARQTPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 168)
항-FAM19A5
("15A9")		 DIQMTQSPSSLSASVGDRITISCRASQSISTSLNWYQQTPGKAPRLLIYGASTLQSGVPSRFSGGGSGTDFSLTITSLQPEDFATYYCQESASIPRTFGQGTKLDIK (SEQ ID NO: 169)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPEKPPTLLISGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSTGLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 170)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 ELVLTQSPSVQVNLGQTVSLTCTADTLSRSYASWYQQKPGQAPVLLIYRDTSRPSGVPDRFSGSSSGNTATLTISGAQAGDEADYYCATSDGSGSNYQYVFGGGTQLTVT (SEQ ID NO: 171)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 ELDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSITFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 172)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGSDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGVTYSSTGTHLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 173)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 ELDLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSIGGNLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSPAYDPAAYVGNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 174)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 ELDLTQTPPSLSASVGGTVTINCLASEDIYSALAWYQQKPGKPPTLLISGTSNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYFCQGYSSYPLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 175)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 ELDLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQPPKLLIYAASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGEFSCSSADCNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 176)
따라서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 본 명세서에 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
특정 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR 및 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 (i) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고; (v) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하고; (vii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 168의 아미노산 서열을 포함하고; (viii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 158의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 169의 아미노산 서열을 포함하고; (ix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 170의 아미노산 서열을 포함하고; (x) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하고; (xi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 172의 아미노산 서열을 포함하고; (xii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하고; (xiii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 174의 아미노산 서열을 포함하고; (xiv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 164의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 175의 아미노산 서열을 포함하고; 및 (xv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함한다.
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 본 명세서에 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 본 명세서에 개시되며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 본 명세서에 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 명세서는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 개시하며, 이것은
(a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 (i) 2-13의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ii) 3-2의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 3-2의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iii) 1-65의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-65의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iv) 1-28의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-28의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (v) P2-C12의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-C12의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vi) 13B4의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13B4의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vii) 13F7의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13F7의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (viii) 15A9의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 15A9의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ix) P1-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (x) P1-A08의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A08의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xi) P1-F02의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-F02의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xii) P2-A01의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A01의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiii) P2-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiv) P2-F07의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F07의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; 또는 (xv) P2-F11의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F11의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 명세서에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열이 표 2에 기재되어있다. 본 명세서에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 표 3에 기재되어있다.
2-13에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13에 제시된다. 2-13에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25에 제시된다. 3-2에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16에 제시된다. 3-2에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28에 제시된다. 1-65에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19에 제시된다. 1-65에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31에 제시된다. 1-28에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22에 제시된다. 1-28에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34에 제시된다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1; 및/또는
(b) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 CDR 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개를 포함한다.
본 명세서에 개시된 VH 도메인, 또는 이의 하나 이상의 CDR은 중쇄, 예를 들어 전장 중쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 유사하게, 본 명세서에 개시된 VL 도메인, 또는 이의 하나 이상의 CDR은 경쇄, 예를 들어 전장 경쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 전장 중쇄와 전장 경쇄는 조합되어 전장 항체를 형성할 수 있다.
따라서, 특정한 구체예에서, 항체 경쇄 및 중쇄, 예를 들어 분리된 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체가 본 명세서에 개시된다. 경쇄와 관련하여, 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 카파 경쇄이다. 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 람다 경쇄이다. 또 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 인간 카파 경쇄 또는 인간 람다 경쇄이다. 특정 구체예에서, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 여기서 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 여기서 경쇄의 불변 영역은 인간 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 미국특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참조).
중쇄와 관련하여, 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄는 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄일 수 있다. 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄는 인간 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 여기서 중쇄의 불변 영역은 인간 감마(γ) 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 여기서 중쇄의 불변 영역은 본 명세서에 개시되거나 당업계에 공지된 인간 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 미국특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참조).
일부 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 VH 또는 VH CDR 및 VL 또는 VL CDR을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 또는 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 특정한 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 본 명세서에 개시된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 아형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 아형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 및 알로타입(예를 들어 G1m, G2m, G3m 및 nG4m) 및 이들의 변이체를 포함하는, 자연-발생인, 인간 IgG의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 및 Jefferis R. and Lefranc M.P., mAbs 1:4, 1-7 (2009) 참조). 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4, 또는 이들의 변이체의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 보체-의존성 세포독성(CDC) 및/또는 항체-의존성 세포 포식작용(ADCP)을 갖지 않는다. 이펙터 기능은 Fc 영역에 의해 매개되며, Fc 영역의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당하고, 그것은 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유한다. 또한, IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3 항체보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 가진다. 항체의 이펙터 기능은 다음과 같은 당업계에 공지된 상이한 접근법에 의해 감소되거나 회피될 수 있다: (1) Fc 영역을 결여한 항체 단편(예컨대 Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)의 사용; (2) 당이 부착된 잔기의 결실 또는 변경, 효소적으로 당의 제거, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포(예를 들어 박테리아 숙주 세포)에서 항체의 생성, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포에서 항체의 발현에 의해 생성될 수 있는, 무글리코실화 항체의 생성(미국 특허공개 제20120100140호 참조); (3) 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터 Fc 영역(예를 들어 IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 Fc 영역 또는 IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 CH2 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역)의 이용(미국 특허공개 제20120100140호 및 Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참wg); 및 (4) Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역의 생성(미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원들과 An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009)를 참조).
따라서, 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb이다. 이러한 항체 단편은 당업계에 잘 공지되어 있으며 상기 기재되어 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG2 또는 IgG4의 Fc 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입의 것이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터 힌지 영역과 IgG4로부터 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다. Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업계에 공지된 것들을 포함한다(예를 들어, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013); An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); 및 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허와 특허공개 및 PCT 공개들을 참조). 또한, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다.
VI. 핵산 분자
본 발명의 다른 양태는 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분 중 어느 하나를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제된 형태나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 제한 효소, 아가로오스 겔 전기영동 및 당업계에 공지된 다른 기술들을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산(예를 들어 다른 염색체 DNA, 예를 들어 자연에서 분리된 DNA에 연결된 염색체 DNA) 또는 단백질로부터 정제되었을 때, "분리되거나" 또는 "실질적으로 순수하다"(F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York 참조). 본 명세서에 개시된 핵산은, 예를 들어 DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 명세서에 개시된 핵산은 표준 분자생물학 기술을 사용하여 얻어질 수 있다. 하이브리도마(예를 들어 인간 면역글로불린 유전자를 지닌 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 이 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 얻어질 수 있다. (예를 들어 파지 디스플레이 기술을 사용한) 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 얻어진 항체의 경우, 이 항체를 암호화하는 핵산이 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
본 명세서에 개시된 특정 핵산 분자는 본 발명의 다양한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 서열을 암호화하는 것들이다. 이러한 항체의 VH 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열이 SEQ ID NOs: 43-46 및 177에 제시된다. 이러한 항체의 VL 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열은 SEQ ID NOs: 47-50 및 178에 제시된다.
가변 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 가변 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
(2-13)		 GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCCATGGCATGTTCTGGGTGCGACAGACGCCCGGCAAGGGGTTGGAATATGTCGCTGAAATTACCAATGATGGTAGTGGCACAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTTCTGCGCCAGATCTACTTATGAATGTCCTGGTGGTTTTAGTTGTTGGGGTGATACTGGTCAAATAGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 43)
항-FAM19A5 (3-2) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCTTCAACATGTTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTCAAATTAGCAGCAGTGGTAGTAGCACAAACTACGCACCCGCGGTGAGGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCCCGGGGCTGAAGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAAGTAGTTATGACTGTCCTTACGGTCATTGTAGTAGTGGTGTTGATAGTGCTGGTGAGATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 44)
항-FAM19A5 (1-65) GCCGTGACACTGGACGAATCTGGGGGAGGGCTGCAGACTCCAGGCGGAGCTCTGAGCCTGGTGTGCAAGGCATCCGGGTTCACCTTTAGCTCCTACCAGATGGGATGGGTGCGGCAGGCACCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCGGAGTGATCAACAAATCTGGGAGTGACACAAGCTACGGCAGCGCCGTGAAGGGAAGGGCCACCATCAGCAGGGACAATGGCCAGAGTACCGTGCGGCTGCAGCTGAACAATCTGCGCGCTGAGGACACTGGCACCTACTTCTGTGCTAAGGGATCAGCAAGCTATATCACAGCCGCTACTATTGATGCATGGGGACACGGGACAGAAGTCATCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 45)
항-FAM19A5 (1-28) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCGATTATGGCATGGGTTGGGTGCGACAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCTGCTATTAGAAGTGATGGTAGTAACCCATCATACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAAGGACAACGGGCGAAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAAGGATGGTAATGGTTACTGTGCTCTCGATGCTTATCGTAGTGGTGGTTATAGTTGTGGTGTTTATCCTGGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC (SEQ ID NO: 46)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATGCAGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTAATTGGCGTGGTGGGACATCCTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCTAGTAGTGGTGCTGCTTTTGGGTCTTACGGCATGGACCCCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 177)
가변 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 가변 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
(2-13)		 GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATAACCTGCTCCGGGGGTAGCTATAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCTTGTCACTGTGATCTACTGGGATGATGAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTGCCCTATCCGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGACTGAAGACATCAGCGGCACTGCTGGTGTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTGGG (SEQ ID NO: 47)
항-FAM19A5 (3-2) GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGCAGCTATGCTGGAAGTTACTATTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATGAAAGCAACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCACATCTGGCTCCACAGCCACACTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGATGACGAGGCTATCTATTACTGTGGGAGCTGGGACAGTAGCAATGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTAGG (SEQ ID NO: 48)
항-FAM19A5 (1-65) GCCCTGACTCAGCCCTCTTCCGTGTCAGCCAACCCTGGAGAAACTGTGAAGATCACCTGCAGCGGAGGAGGGAGCTCCGGATACGGATATGGGTGGTATCAGCAGAAATCCCCATCTAGTGCCCCCCTGACTGTGATCTATTGGAACGACAAGAGGCCTAGTGATATTCCATCAAGATTCAGTGGATCAAAAAGCGGGTCCACTCACACCCTGACAATCACTGGCGTGCAGGCAGAGGACGAAGCCGTCTACTTCTGCGGAAATGACGATTACTCAAGCGATTCTGGCTATGTGGGCGTCTTTGGCGCAGGAACCACACTGACAGTGCTG (SEQ ID NO: 49)
항-FAM19A5 (1-28) GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGAAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGAGTGGCTATGGTTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATCAGAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGTGAAGACAGCAGCACTCTTGCTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 50)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 GAGCTCGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGCTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGAAGCATCCAAACTGGCCTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATATGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTACTAATGTTTGGAATGCTTTCGGCGGAGGCACCAATGTGGAAATCAAA
(SEQ ID NO: 178)
본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체의 제조 방법은 신호 펩타이드와 함께 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 각각 SEQ ID NOs: 43 및 47, SEQ ID NOs: 44 및 48, SEQ ID NOs: 45 및 49, SEQ ID NOs: 46 및 50, SEQ ID NOs: 177 및 178을 포함하는 셀라인에서 항체의 관련된 중쇄 및 경쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있다. 이들 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 숙주 세포는 본 발명에 포함된다.VH 및 VL 세그먼트를 암호화하는 DNA 단편이 얻어진 후, 이들 DNA 단편은, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환하기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 다른 단백질을 암호화하는 다른 DNA 단편에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 인-프레임(in-frame)을 유지하도록 2개의 DNA 단편이 이어지는 것을 의미한다.
VH 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(힌지, CH1, CH2 및/또는 CH3)을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며(예를 들어 Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역, 예를 들어 IgG2 및/또는 IgG 4 불변 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-암호화 DNA는 단지 중쇄 CH1 불변 영역만을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며(예를 들어 Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-암호화 DNA 단편이 가요성 링커를 암호화하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 암호화하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결되며, 이로써 VL과 VH 영역이 가요성 링커에 의해 이어진 상태로 VH 및 VL 서열이 연속 단쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어 Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554 참조).
일부 구체예에서, 본 명세서는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 개시한다. 다른 구체예에서, 벡터는 유전자 요법에 사용될 수 있다.
본 발명에 적합한 벡터는 발현 벡터, 바이러스 벡터, 및 플라스미드 벡터를 포함한다. 하나의 구체예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.
본 발명의 발현 벡터는 적절한 숙주 세포에 도입되었을 때, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위한 필수 요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우, 복제 및 번역을 위한 필수 요소를 함유하는 임의의 핵산 구성물이다. 발현 벡터는 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 및 이들의 유도체를 포함할 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 대한 코딩 서열은 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결된다. 두 핵산 서열은 이들이 각 성분 핵산 서열이 그것의 기능성을 보유하도록 허용하는 방식으로 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결된 것이다. 코딩 서열 및 유전자 발현 제어 서열은, 코팅 서열의 발현 또는 전사 및/또는 번역이 유전자 발현 제어 서열의 영향 또는 제어하에 있는 방식으로 이들이 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결되었다고 말한다. 두 DNA 서열은, 5' 유전자 발현 서열에서 프로모터의 유도가 코딩 서열의 전사를 가져오고, 두 DNA 서열의 연결의 성격이 (1) 프레임-시프트 돌연변이의 도입을 가져오거나, (2) 코딩 서열의 전사를 지시하는 프로모터 영역의 능력을 방해하거나, 또는 (3) 단백질로 번역되는 상응하는 RNA 전사체의 능력을 방해하지 않는다면, 작동 가능하게 연결되었다고 말한다. 따라서, 유전자 발현 서열은 이 유전자 발현 서열이 코딩 핵산 서열의 전사를 행할 수 있었다면 코딩 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된 것이며, 이로써 얻어진 전사체는 원하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로 번역된다.
바이러스 벡터는, 제한은 아니지만, 레트로바이러스, 예컨대 Moloney 뮤린 백혈병 바이러스, Harvey 뮤린 육종 바이러스, 뮤린 유방 종양 바이러스, 및 Rous 육종 바이러스; 렌티바이러스; 아데노바이러스; 아데노-관련 바이러스; SV40-타입 바이러스; 폴리오마바이러스; 엡스타인-바 바이러스; 유두종 바이러스; 헤르페스 바이러스; 우두 바이러스; 폴리오 바이러스; 및 RNA 바이러스, 예컨대 레트로바이러스로부터의 핵산 서열을 포함한다. 당업계에 공지된 다른 벡터들도 쉽게 이용할 수 있다. 특정 바이러스 벡터는 비-필수 유전자가 관심 유전자로 치환된 비-세포변성(non-cytopathic) 진핵생물 바이러스에 기초한다. 비-세포변성 바이러스는 레트로바이러스를 포함하며, 이것의 생애 주기는 게놈 바이러스 RNA의 DNA로의 역 전사와 후속하여 숙주 세포 DNA로의 프로바이러스 통합을 수반한다. 레트로바이러스는 인간 유전자 요법 시험을 위해 승인되었다. 복제-결함(즉 원하는 단백질의 합성을 지시할 수 있지만 감염성 입자는 제조할 수 없음)이 있는 레트로바이러스가 가장 유용하다. 이러한 유전자 변경된 레트로바이러스 발현 벡터는 생체내 유전자의 고 효능 형질도입(transduction)에서 일반적인 유용성을 가진다. 복제-결함 레트로바이러스를 생성하는 표준 프로토콜(플라스미드로의 외래 유전자 물질의 통합, 플라스미드로 패키징 셀라인의 트랜스펙션, 패키징 셀라인에 의한 재조합 레트로바이러스의 생성, 조직 배양 배지로부터 바이러스 입자의 수집, 및 바이러스 입자로 표적 세포의 감염 단계를 포함)은 문헌(Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., New York (1990) 및 Murry, E.J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991))에 재시된다.
하나의 구체예에서, 바이러스는 이중-가닥 DNA 바이러스인 아데노-관련 바이러스이다. 아데노-관련 바이러스는 복제 결함이 있도록 조작될 수 있고, 광범위한 세포 타입 및 종을 감염시킬 수 있다. 또한, 이 바이러스는 열 및 지질 용매 안정성; 조혈 세포를 포함하는 다양한 계통의 세포에서 높은 형질도입 빈도; 및 균교대증 저해의 결여와 같은 이점을 가지며, 이로써 많은 일련의 형질도입이 가능하다. 보고된 바에 따르면, 아데노-관련 바이러스는 부위-특정 방식으로 인간 세포 DNA에 통합될 수 있으며, 이로써 삽입 돌연변이유발의 확률 및 레트로바이러스 감염의 삽입된 유전자 발현 특징의 변동성을 최소화한다. 이에 더하여, 야생형 아데노-관련 바이러스 감염이 선택압의 부재하에 100 계대 이상 동안 조직 배양물에서 추적되었으며, 이는 아데노-관련 바이러스 게놈 통합이 상대적으로 안정한 이벤트임을 시사한다. 또한, 아데노-관련 바이러스는 염색체외 방식으로 기능할 수 있다.
다른 구체예에서, 벡터는 렌티바이러스로부터 유래된다. 특정 구체예에서, 벡터는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스의 벡터이다.
렌티바이러스 게놈 및 프로바이러스 DNA는 전형적으로 레트로바이러스에서 발견되는 3가지 유전자 gag, pol 및 env를 가지며, 이들의 측면에는 2개의 긴 말단 반복부(LTR) 서열이 있다. gag 유전자는 내부 구조(바탕질, 캡시드 및 뉴클레오캡시드) 단백질을 암호화하고, pol 유전자는 RNA-지정 DNA 중합효소(역 전사효소), 프로테아제 및 인테그라아제를 암호화하고, env 유전자는 바이러스 외피 당단백질을 암호화한다. 5' 및 3' LTR은 비리온 RNA의 전사 및 폴리아데닐화를 촉진하는 작용을 한다. LTR은 바이러스 복제에 필요한 다른 시스-작용 서열을 모두 함유한다. 렌티바이러스는 vif, vpr, tat, rev, vpu, nef 및 vpx(HIV-1, HIV-2 및/또는 SIV에서)를 포함하는 추가의 유전자를 가진다.
5' LTR에 인접해서 게놈의 역 전사에 필요한 서열이 있으며(tRNA 프라이머 결합 부위), 이것은 입자로의 바이러스 RNA의 언캡시데이션에 효과적이다(Psi 부위). 언캡시데이션(또는 감염성 비리온으로의 레트로바이러스 RNA의 패키징)에 필수적인 서열이 바이러스 게놈에서 빠질 경우, 이 시스 결함은 게놈 DNA의 언캡시데이션을 방지한다.
그러나, 얻어진 돌연변이는 모든 비리온 단백질의 합성을 여전히 지시할 수 있다. 본 명세서는 패키징 기능을 지닌 두 가지 이상의 벡터, 즉 gag, pol 및 env, 뿐만 아니라 rev 및 tat로 적합한 숙주 세포를 트랜스펙션하는 것을 포함하는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스의 생성 방법을 제공한다. 아래 개시된 것과 같이, 기능적 tat 유전자를 결여한 벡터는 특정 용도에 바람직하다. 따라서, 예를 들어, 제1 벡터는 바이러스 gag와 바이러스 pol을 암호화하는 핵산을 제공할 수 있고, 다른 벡터는 바이러스 env를 암호화하는 핵산을 제공할 수 있으며, 이로써 패키징 세포가 생성된다. 패키징 세포에, 이식 벡터로서 확인된, 이종성 유전자를 제공하는 벡터를 도입하는 것은 관심의 외래 유전자를 지닌 감염성 바이러스 입자를 방출하는 프로듀서(producer) 세포를 제공한다.
벡터 및 외래 유전자의 구성형태에 따라서, 제2 벡터는 바이러스 외피(env) 유전자를 암호화하는 핵산을 제공할 수 있다. env 유전자는 레트로바이러스를 포함하는, 거의 모든 적합한 바이러스로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예에서, env 단백질은 인간 및 다른 종의 세포의 형질도입을 허용하는 양쪽성 외피 단백질이다.
레트로바이러스-유래 env 유전자의 예들은, 제한은 아니지만, Moloney 뮤린 백혈병 바이러스(MoMuLV 또는 MMLV), Harvey 뮤린 육종바이러스(HaMuSV 또는 HSV), 뮤린 유방 종양 바이러스(MuMTV 또는 MMTV), 기본(gibbon) 원숭이 백혈병 바이러스(GaLV 또는 GALV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 및 Rous 육종 바이러스(RSV)를 포함한다. 다른 env 유전자들, 예컨대 수포성 구내염 바이러스(VSV) 단백질 G(VSV G), 간염 바이러스 및 인플루엔자의 것도 사용될 수 있다.
바이러스 env 핵산 서열을 제공하는 벡터는 본 명세서에 개시된 조절 서열과 작동 가능하게 회합된다.
특정 구체예에서, 벡터는 비-분열 세포를 형질도입하는 벡터의 능력을 손상시키지 않고 HIV 병독성 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef가 결실된 렌티바이러스 벡터를 포함한다.
일부 구체예에서, 벡터는 3' LTR의 U3 영역의 결실을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 포함한다. U3 영역의 결실은 완전 결실 또는 부분 결실일 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 FVIII 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 본 발명의 렌티바이러스 벡터는 세포에서 (a) gag, pol, 또는 gag 및 pol 유전자를 포함하는 제1 뉴클레오타이드 서열 및 (b) 이종성 env 유전자를 포함하는 제2 뉴클레오타이드 서열로 트랜스펙션될 수 있으며, 이때 렌티바이러스 벡터는 기능적 tat 유전자를 결여한다. 다른 구체예에서, 세포는 rev 유전자를 포함하는 제4 뉴클레오타이드 서열로 더 트랜스펙션된다. 특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 vif, vpr, vpu, vpx 및 nef, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 기능적 유전자를 결여한다.
특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 gag 단백질, Rev-반응 요소, 중심 폴리퓨린 트랙(cPPT), 또는 이들의 임의의 조합을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
렌티바이러스 벡터의 예들은 WO9931251, W09712622, W09817815, W09817816, 및 WO9818934에 개시되며, 이들은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
다른 벡터는 플라스미드 벡터를 포함한다. 플라스미드 벡터는 당업자에게 공지되어 있다(예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989를 참조). 지난 수 년간 플라스미드 벡터는 숙주 게놈 내에서 복제할 수 없고 통합될 수 없는 특성 때문에 생체내에서 세포에 유전자를 송달하는데 특히 유익한 것으로 판명되었다. 그러나, 숙주 세포와 양립하는 프로모터를 가진 이들 플라스미드는 플라스미드 내에서 작동 가능하게 암호화된 유전자로부터 펩타이드를 발현할 수 있다. 상업적 공급자로부터 이용할 수 있는 플라스미드는 pBR322, pUC18, pUC19, 다양한 pcDNA 플라스미드, pRC/CMV, 다양한 pCMV 플라스미드, pSV40, 및 pBlueScript를 포함한다. 특정 플라스미드의 추가의 예들은 pcDNA3.1, 카탈록 번호 V79020; pcDNA3.1/hygro, 카탈록 번호 V87020; pcDNA4/myc-His, 카탈록 번호 V86320; 및 pBudCE4.1, 카탈록 번호 V53220를 포함한다(모두 Invitrogen(Carlsbad, CA.)의 제품). 다른 플라스미드들도 당업자에게 공지되어 있다. 또한, 플라스미드는 DNA의 특정 단편을 제거 및/또는 부가하기 위해 표준 분자생물학 기술을 사용하여 주문 설계될 수 있다.
VII. 항체 생성
FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편은 항체의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 본 명세서에 개시된 방법은, 특별한 언급이 없다면, 분자생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 당업계 기술 범위 내의 관련 분야의 종래의 기술들을 이용한다. 이들 기술은 본 명세서에 인용된 참고자료들에 기술되며 문헌에 기재된다(예를 들어, Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참조).
특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체는, 예를 들어 합성, DNA 서열의 유전자 조작을 통한 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체(예를 들어 재조합 항체)이다. 특정 구체예에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유류(예를 들어 인간)의 항체 점라인 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어 DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
VIII. 제약학적 조성물
생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA) 중에서 원하는 정도의 순도를 가진 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분(예를 들어 항-FAM19A5 항체)을 포함하는 조성물이 본 명세서에 개시된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 이용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 버퍼, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 염화 옥타데실디메틸벤질암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레졸시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물들; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온 계면활성제, 예컨대 TWEEN®, PLURONICS® 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 특정 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 유효량, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 제약학적 조성물에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물은 FAM19A5 활성을 감소시키는데 유용할 수 있으며, 이로써 암을 치료할 수 있다.
비경구 제조물에서 사용된 제약학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항균제, 등장제, 버퍼, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 금소 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제 및 다른 제약학적으로 허용되는 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예들은 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장 덱스트로오스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로오스 및 락테이트 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항균제가 다수-용량 용기에 패키지된 비경구 제조물에 첨가될 수 있으며, 이들은 페놀 또는 크레졸, 수은함유물질, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 염화벤잘코늄 및 염화벤제토늄을 포함한다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 버퍼는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 염산염을 포함한다. 현탁 및 분산제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제는 EDTA를 포함한다. 제약학적 담체는 또한 수 혼화성 비히클용 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함하고, pH 조정용 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
제약학적 조성물은 대상에 대한 임의의 투여 경로에 맞게 제제화될 수 있다. 투여 경로의 구체적인 예들은 비내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 피하, 또는 심실내 경로를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 고려된다. 주사가능물질이 종래의 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중에서 용액 또는 현탁액으로 되기에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 주사가능물질, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는, 예를 들어 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 이에 더하여, 원한다면, 투여될 제약학적 조성물은 또한 소량의 비-독성 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 유화제, pH 완충제, 안정제, 용해성 증진제, 및 다른 제제들, 예컨대 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 사이클로덱스트린을 함유할 수 있다.
항체의 비경구 투여용 제조물은 바로 주사 가능한 멸균 용액, 피하주사용 정제를 포함하는 사용 직전에 용매와 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 가용성 제품, 예컨대 동결건조된 분말, 바로 주사 가능한 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀젼을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리학적 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS), 및 증점 및 용해제를 함유하는 용액, 예컨대 글루코오스, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 포함한다.
항체를 포함하는 국부용 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 설명된 대로 제조된다. 얻어진 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있으며, 크림, 겔, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크, 페이스트, 폼, 에어로졸, 관주제, 스프레이, 좌약, 붕대, 피부 패치 또는 국부적 투여에 적합한 임의의 다른 제제로서 제제화될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, 예컨대 흡입에 의한, 국부적 투여를 위한 에어로졸로서 제제화될 수 있다(예를 들어 미국특허 제4,044,126호, 제4,414,209호 및 제4,364,923호 참조, 이 출원들은 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 송달을 위한 에어로졸을 개시함). 기도에 투여하기 위한 이들 제제는 분무기용의 에어로졸 또는 용액의 형태이거나, 또는 흡입제용의 마이크로파인 분말일 수 있으며, 단독으로 사용되거나 또는 락토오스와 같은 비활성 담체와 조합하여 사용된다. 이러한 경우, 제제의 입자는, 50 마이크론 미만, 구체적으로 10 마이크론 미만의 직경을 가질 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 국소 또는 국부적 적용, 예컨대 피부 및 점막에 국부적 적용, 예컨대 눈에 국소 적용을 위해, 젤, 크림 및 로션으로 제제화될 수 있고, 눈에 적용 또는 수조내 또는 척추내 적용을 위해 제제화될 수 있다. 국부적 투여는 경피 송달용으로 고려되며, 또한 눈이나 점막 투여, 또는 흡입 요법용으로 고려된다. 다른 제약학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 또는 단독으로 항체의 코 용액이 또한 투여될 수 있다.
이온영동 및 전기영동 장치를 포함하는 경피 패치가 당업자에게 공지되어 있으며, 항체를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국특허 제6,267,983호, 제6,261,595호, 제6,256,533호, 제6,167,301호, 제6,024,975호, 제6,010715호, 제5,985,317호, 제5,983,134호, 제5,948,433호, 및 제5,860,957호에 개시되어 있다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 제약학적 조성물은 동결건조된 분말이며, 이것은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여용으로 복원될 수 있다. 동결건조된 분말은 또한 고체 또는 겔로서 복원 및 제제화될 수 있다. 동결건조된 분말은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 이의 제약학적으로 허용되는 유도체를 적합한 용매에 용해함으로써 제조된다. 일부 구체예에서, 동결건조된 분말은 멸균 상태이다. 용매는 분말 또는 분말로부터 제조된 복원된 용액의 안정성 또는 다른 약물학적 성분을 개선하는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는, 제한은 아니지만, 덱스트로오스, 소르비톨, 프럭토오스, 콘 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코오스, 수크로오스 또는 다른 적합한 제제를 포함한다. 또한, 용매는 약 중성의 pH의, 버퍼, 예컨대 시트레이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트 또는 당업자에게 알려진 다른 버퍼를 함유할 수 있다. 용액의 후속 멸균 여과와 이어지는 당업자에게 공지된 표준 조건하에서의 동결건조는 원하는 제제를 제공한다. 일부 구체예에서, 얻어진 용액은 동결건조용 바이알에 배분될 수 있다. 각 바이알은 화합물의 단일 투약량 또는 다수 투약량을 함유할 수 있다. 동결건조된 분말은 적절한 조건하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 보관될 수 있다.
주사용수에 의한 이 동결건조된 분말의 복원은 비경구 투여용 제제를 제공한다. 복원용으로 동결건조된 분말은 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따른다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트 및 본 명세서에 개시된 다른 조성물은 또한 치료될 대상의 특정 조직, 수용체, 또는 다른 신체 영역에 표적화되도록 제제화될 수 있다. 다양한 표적화 방법이 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 표적화 방법을 본 조성물에 사용하는 것이 고려된다. 표적화 방법의 비제한적 예들은 미국특허 제6,316,652호, 제6,274,552호, 제6,271,359호, 제6,253,872호, 제6,139,865호, 제6,131,570호, 제6,120,751호, 제6,071,495호, 제6,060,082호, 제6,048,736호, 제6,039,975호, 제6,004,534호, 제5,985,307호, 제5,972,366호, 제5,900,252호, 제5,840,674호, 제5,759,542호 및 제5,709,874호를 참고한다. 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 암을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균될 수 있다. 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다.
IX. 키트
본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 이의 면역콘쥬게이트를 포함하는 키트가 본 명세서에 개시된다. 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물의 성분들 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기, 선택적인 사용 설명서를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트가 본 명세서에 개시된다. 일부 구체예에서, 키트는 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물 및 본 명세서에 개시된 임의의 예방 또는 치료제를 함유한다.
본 발명은 FAM19A5에 특이적으로 결합하여 혈관 정상화를 촉진하고, 예를 들어 혈관 정상화를 촉진함으로써, 대상의 질환(예를 들어 암)을 치료하기 위한 길항제(예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 부분)의 제약학적 용도에 관한 것이다.
도 1은 3명의 상이한 간암 환자로부터의 간 생검조직에서 FAM19A5 단백질 발현의 면역조직화학 분석을 도시한다. 각 환자는 다양한 정도의 섬유증을 나타냈다: (i) 단계 #0(좌측 칼럼), (ii) 단계 #2(중앙 칼럼), 및 (iii) 단계 #4(우측 칼럼). 하부 열은 상부 열의 박스 표시된 영역을 더 높은 배율로 확대한 도면이다. 화살표는 FAM19A5-양성 간 성상 세포(hepatic stellate cells)의 예들을 나타낸다.
도 2a는 시간(접종 후 경과 주)의 함수로서 동물의 체중(그램)을 도시한다. 동물의 일부는 Hep3B 세포가 단독 접종되었고, 정상 인간 면역글로불린(원형, 그룹 1: "Hep3B+NHI", n = 3) 또는 항-FAM19A5 항체(닫힌 상자, 그룹 2: "Hep3B+FAM19A5 Ab", n = 3)로 치료되었다. 다른 동물은 Hep3B 세포와 인간 간 성상 세포(HHSteC)가 모두 접종되었고, 정상 인간 면역글로불린(다이아몬드, 그룹 3: "Hep3B+HHSteC + NHI", n = 3) 또는 항-FAM19A5 항체(열린 상자, 그룹 4: "Hep3B+HHSteC+FAM19A5 Ab", n = 3)로 치료되었다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.
도 2b는 시간(접종 후 경과 주)의 함수로서 상이한 그룹의 동물에서 관찰된 평균 종양 부피를 도시한다. 그룹은 도 2a에 제시된 것들과 동일하다. 종양 부피는 0.5 x 길이 x 너비2 = 종양 부피(mm3)의 식으로 계산되었다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.
도 2c 및 2d는 각각 접종 후 42일째에 도 2a에 제시된 동물로부터 분리된 종양의 촬영 이미지 및 중량(그램)을 도시한다. 도 2c에서, (i) 상부 좌측은 "Hep3B +NHI" 그룹(n = 2)의 종양을 도시하고; (ii) 상부 우측은 "Hep3B+HHSteC+NHI" 그룹(n = 2)의 종양을 도시하고; (iii) 하부 좌측은 "Hep3B+FAM19A5 Ab" 그룹(n = 3)의 종양을 도시하고; (iv) 하부 우측은 "Hep3B+HHSteC+FAM19A5 Ab" 그룹(n = 3)의 종양을 도시한다. 도 2d는 상이한 그룹으로부터 분리된 종양의 평균 중량(g)을 도시한다.
도 3a, 3b, 및 3c는 흑색종 종양 모델에서 항-FAM19A5 항체의 항암 효과를 도시한다. 도 3a는 항체 투여 일정을 나타낸 다이어그램이다. 도 3b는 출생 후 상이한 시점에서, 인간 IgG(검은색 막대) 또는 항-FAM19A5 항체(회색 막대)로 치료된 동물에서 종양 부피의 비교를 제시한다. 출생 후 56일이 항체 치료의 시작일에 해당한다(즉 8주째). 도 3c는 인간 IgG(좌측 이미지) 또는 항-FAM19A5 항체(우측 이미지)로 치료된 동물에서 BrafV600E-유도 염색 병소의 비교를 제시한다.
도 4는 인간 IgG 항체(상부 이미지) 또는 항-FAM19A5 항체(하부 이미지)로 치료된 동물의 흑색종에서 (CD31 발현에 기초한) 혈관의 분포 패턴을 도시한다. 이미지의 우측에 있는 화살표는 조직 샘플의 배향을 나타내며, 상부가 표피이고 피하 조직은 하부를 향해 있다.
도 5는 인간 IgG 항체(상부 이미지) 또는 항-FAM19A5 항체(하부 이미지)로 치료된 동물의 흑색종에서 (CD31 발현에 기초한) 혈관 및 (Iba1 발현에 기초한) 대식세포의 분포 패턴을 도시한다. 좌측 칼럼은 CD31 발현을 단독으로 도시한다. 중앙 칼럼은 Iba1 발현을 단독으로 도시한다. 우측 칼럼은 CD31과 Iba1 발현을 둘 다 도시한다. 이미지의 우측에 있는 화살표는 조직 샘플의 배향을 나타내며, 상부가 표피이고 피하 조직은 하부를 향해 있다.
도 6a, 6b, 6c, 및 6d는 마우스 흑색종 모델에서 종양으로의 대식세포 및 수지상 세포의 침윤에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 도시한다. 도 6a는 대조군(인간 IgG) 항체(좌측 칼럼) 또는 항-FAM19A5 항체(우측 칼럼)로 치료된 동물의 흑색종에서 (Iba1 및 CD45 발현에 기초한) 대식세포 및 수지상 세포의 분포 패턴을 도시한다. 하부 이미지는 상부 열에 도시된 대표 영역을 확대한 것이다. 도 6b는 대조군인 인간 IgG 항체(흰색 막대) 또는 항-FAM19A5 항체(검은색 막대)로 치료된 동물의 흑색종에서 검출된 대식세포의 빈도(흑색종 내에서 총 CD45+ 세포의 % Iba1+로서 나타냄)의 비교를 제시한다. 도 6c는 대조군인 인간 IgG 항체(흰색 막대) 또는 항-FAM19A5 항체(검은색 막대)로 치료된 동물의 흑색종에서 관찰된 (복셀 수에 기초한) 대식세포의 세포 부피의 비교를 제시한다. 도 6d는 상이한 군의 동물로부터 분리된 흑색종의 대표 영역에서 관찰된 대식세포의 수를 제시하는 표를 도시한다.
도 7a 및 7b는 마우스 흑색종 모델에서 (CD3 및 CD45 발현에 기초한) 종양에 T 림프구의 침윤에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 도시한다. 도 7a는 T 림프구 분포의 면역조직화학 분석을 도시한다. 도 7b는 대조군인 인간 IgG 항체 또는 항-FAM19A5 항체로 치료된 동물로부터 분리된 흑색종의 대표 영역에서 관찰된 T 림프구의 수를 제시하는 표를 도시한다.
도 8a 및 8b는 마우스 동계 결장 선암종 모델(mouse syngenic colon adenocarcinoma model)에서 종양으로의 T 림프구(도 8a) 및 골수-유래 억제제 세포(도 8b)의 침윤에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 도시한다. 동물은 대조군인 인간 IgG 항체("대조군") 또는 항-FAM19A5 항체("FAM19A5Ab")로 치료되었다. 도 8a에서, T 림프구의 집단은 분석된 전체 세포 중 CD3+ 세포 퍼센트로서 나타낸다. 유사하게, 도 8b에서, 골수-유래 억제제 세포의 집단은 분석된 전체 세포 중 Ly6G+ 세포 퍼센트로서 나타낸다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.
도 9a는 인간 췌장암 이종이식편 동물 모델에서 항-FAM19A5 항체의 항암 효과를 평가하기 위한 실험 그룹 및 투여 일정을 도시한다. 종양 접종시 동물은 인간 IgG 대조군 항체 또는 항-FAM19A5 항체를 단독으로 또는 젬시타빈과 조합하여 투여받았다. 대조군 및 항-FAM19A5 항체는 종양 유도 후 10, 17, 및 24일에 투여되었다(점선 화살표). 젬시타빈을 투여받은 동물은 종양 유도 후 12, 15, 19, 22, 26, 및 29일에 그것이 투여되었다(검은색 실선 화살표).
도 9b 및 9c는 (i) 인간 IgG 항체(hIgG), (ii) 항-FAM19A5 항체(FAM19A5Ab), (iii) 젬시타빈(GEM), 또는 (iv) 항-FAM19A5 항체와 젬시타빈(FAM19A5 Ab + GEM)으로 치료된 인간 췌장암 이종이식편 동물 모델에서 종양 중량(g)(도 9b) 및 상대적 콜라겐 함량(%)(도 9c)의 비교를 제시한다. 도 9b 및 9c에서 데이터는 평균±S.D.로 나타낸다.
도 10a 및 10b는 흑색종 마우스 모델에서 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효과를 도시한다. 도 10a는 항체 투여 일정 및 실험 그룹을 제시한다. 종양 접종시 동물은 다음과 같이 치료되었다: (1) 인간 IgG 항체 및 래트 IgG 항체, (2) 항-FAM19A5 항체 + 래트 IgG 항체, (3) 항-PD-1 항체 + 인간 IgG 항체, 및 (4) 항-PD-1 항체 + 항-FAM19A5 항체로 치료되었다. 항-FAM19A5 항체 및 인간 IgG 항체는 종양 접종 후 7일 및 14일에 관련된 동물에 투여되었다. 항-PD-1 항체 및 래트 IgG 항체는 종양 접종 후 10일 및 12일에 관련된 동물에 투여되었다. 도 10b는 상이한 치료군에서의 항-종양 효능의 비교를 제시한다: (i) 항-PD-1 항체 + 인간 IgG 항체("G3", 그룹 3), (ii) 항-FAM19A5 항체 + 래트 IgG 항체("G2", 그룹 2), 및 (iii) 항-PD-1 항체 + 항-FAM19A5 항체("G4", 그룹 4). 항-종양 효능은 대조군 그룹, 즉 그룹 1에 대한 종양 성장의 저해 퍼센트로서 나타낸다. 데이터는 평균±S.D.로 나타낸다.
도 11은 항-FAM19A5 항체 단독으로 또는 항-PD-1 항체와 조합하여 치료된 췌장암 동물의 종양 부피를 도시한다. 상이한 치료군은 (i) 인간 IgG 항체 + 마우스 IgG 항체 (G1); (ii) 항-FAM19A5 항체 + 마우스 IgG 항체 (G2); (iii) 인간 IgG 항체 + 마우스 항-PD-1 항체 (G3); 및 (iv) 항-FAM19A5 항체 + 마우스 항-PD-1 항체를 포함한다.
도 12a 및 12b는 상이한 면역 세포의 식세포 능력 및/또는 막 전위에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 도시한다. 도 12a는 LPS 단독 또는 LPS와 항-FAM19A5 항체로 자극 후 식세포성인(phagocytic) Raw 264.7 세포(마우스 대식세포)의 퍼센트를 도시한다. 인간 IgG 항체 또는 시토칼라신 D로 처리된 Raw 264.7 세포가 각각 음성 대조군 및 양성 대조군으로 사용되었다. 도 12b는 BV-2 세포(마우스 미세아교세포)의 식세포 능력(회색 막대)과 막 전위(줄무늬 막대) 둘 다에 대한 항-FAM19A5의 효과를 도시한다. 인간 IgG 항체 또는 FAM19A5 단백질로 처리된 BV-2 세포가 대조군으로 사용되었다. 식세포성 및 막 전위 데이터는 대조군의 퍼센트로서 나타낸다.
실험 방법 및 상세한 내용은 아래의 실시예를 참고한다.
실시예 1: 인간 FAM19A5 단백질의 발현 및 정제
재조합 인간 FAM19A5 단백질을 생성 및 정제하고, 정제된 단백질을 결합 친화성 분석에 기초한 항체 스크리닝 분석에 사용했다. 먼저, FAM19A5 유전자를 함유하는 LPS-hT 플라스미드를 박테리아에 형질전환하고 단백질 과발현을 유도했다. 생성된 FAM19A5 단백질을 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피(Qiagen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 정제했다. 이미다졸을 점차 높은 농도로 사용하여 Ni-칼럼으로부터 His-택된 FAM19A5 단백질을 제거했다. 용액 중 단백질 발현을 코마씨 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue) R-250 염료를 사용하여 측정했다. FAM19A5 이미다졸 함유 용액만을 취해 PBS를 사용하여 FAM19A5 단백질을 농축했다. 농축이 완료되었을 때, FAM19A5 단백질의 순도와 농도를 웨스턴 블롯 분석을 사용하여 측정했다. 이어서, 농축된 단백질을 사용하여 FAM19A5-특이적 항체에 대해 스크리닝했다.
실시예 2: 항체 라이브러리 FAM19A5의 생성
FAM19A5 단백질을 닭의 면역화용 항원으로서 사용했다. 합성 펩타이드 KLH 콘쥬게이트 50μg을 750μL 포스페이트 완충 식염수(PBS)에 혼합하고 30분간 37℃에서 인큐베이션했다. 이후, 2% 스쿠알렌 내독소 MPL(모노포스포릴레이트 지질 A 종)에서 독소를 제거하고, 유중수 에멀젼 애쥬번트(RIBI + MPL + TDM + CWS 애쥬번트, Sigma, St. Louis, Mo, USA)를 함유하는 TDW 및 CWS의 세포벽 성분의 미코박테리아(미코박테리아)를 에멀젼화하고, 이것을 이후 3마리 닭에 피하 주사했다. 닭은 면역화 사이에 대략 2-3주 간격으로 총 3회 면역화했다. 면역화된 닭으로부터 얻어진 항체의 역가를 FAM19A5 단백질을 과발현했던 HEK293T 세포의 세포용해물을 사용하여 면역 블롯팅을 통해서 측정했다. 3차례 면역화된 닭의 혈청을 1차 항체로서 사용했다. 사용된 2차 항체는 HRP(양고추냉이 퍼옥시다아제)(토끼 항-닭 IgG(Y)-HRP, Millipore corporation, Billeria, MA, USA)에 콘쥬게이트된 항-닭 IgG(Y) 다클론성 항체였다.
면역화된 닭으로부터 단쇄 가변 단편(scFv)을 제조했다. TRI 시약(Invitro-gen, Carlsbad , CA USA)을 사용하여 상기 면역화된 닭의 비장, 골수 및 활액낭으로부터 RNA를 추출했다. Oligo-dT 프라이머와 Superscript™ III 제1-가닥 합성 시스템(Invitrogen)을 사용하여 제1 가닥 cDNA를 합성했다. 닭의 면역 시스템으로부터 얻어진 cDNA에 대해, 확장형 고 충실도 PCR 시스템(Roche Molecular Systems, IN, USA)을 사용하여 단쇄 가변 영역 라이브러리를 생성했다. 각 반응에서, cDNA 1μL, 각 프라이머 60pmol, 10 x 반응 버퍼 용액 10μL, 8μL의 2.5mM dNTP(Promega, Madison, WI, USA), 및 Taq DNA 중합효소 0.58μL를 물과 혼합했다. 최종 부피는 100μL였다. PCR 반응을 다음의 조건을 사용하여 수행했다: 30 사이클 (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 90초, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 350bp의 길이를 가진 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고, 전기영동 후 QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN, Valencia, CA, USA)를 사용하여 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 50μg/mL).
2차 PCR로부터의 2개의 VH 및 VL 제1 생성물을 중첩 확장 PCR(오버랩 익스텐션 PCR)에 의해 무작위로 연결했다. 각 PCR 반응물을 100ng의 정제된 VL 및 VH 생성물, 각 프라이머 60pmol, 10 x 반응 버퍼 10μL, 8μL의 2.5mM dNTP, Taq DNA 중합효소 0.5μL 및 물과 100μL의 최종 부피로 혼합했다. PCR을 다음의 조건하에서 수행했다: 25 사이클 (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 2분, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 700bp의 길이를 가진 단쇄 가변 영역 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고, 전기영동 후 QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN)를 사용하여 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 500.5μg/mL).
PCR 생성물의 scFv 단편과 벡터 pComb3X-SS(The Scripps Research Institute CA, USA)를 Sfi I 제한 효소로 절단(digest)했다. 정제된 중첩 PCT 생성물 100.5μg을 Sif I 360유닛(16 유닛 당 μg DNA, Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA, USA), 10 x 반응 버퍼 20μL 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. pComb3X-SS 벡터 20μg을 Sfi I 120 유닛(6 유닛 당 μg DNA), 10 x 반응 버퍼 20μL 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. 혼합물을 8시간 동안 50℃에서 절단했다. 이후, scFv 단편(약 700bp) 및 벡터(약 3400bp)를 포함하는 절단된 생성물을 1% 아가로오스 겔 위에 로딩하고 겔 추출 키트 II QIAGEN(QIAGEN, Valencia, CA, USA)을 사용하여 정제했다. Sfi I-제한된 pComb3X 벡터 1400ng과 절단된 scFv 단편 700ng을 5 x 리가아제 버퍼, 10μL의 T4 DNA 리가아제(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. 혼합물을 16시간 동안 16℃에서 인큐베이션하여 리게이션(ligation)을 수행했다.
에탄올로 침전 후 DNA 펠릿을 물 15μL에 용해했다. 라이브러리를 생성하기 위해, 리게이션 샘플을 이콜리(E. coli) 균주 ER2738(New England Biolabs Inc., Hitchin, Hertfordshine, SG4 OTY, England, UK)에 바이브레이터 유전자(유전자 펄서: Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 사용하여 전기천공을 통해서 형질전환했다. 세포를 수퍼 브로스(SB) 배지 5mL와 혼합하고 37℃에서 1시간 동안 250rpm에서 교반하면서 인큐베이션했다. 이어서, 100mg/mL 카나마이신 3μL를 SB 배지 10mL에 첨가했다. 라이브러리 크기를 결정하기 위해, 배양물 샘플 0.1μL, 1μL 및 10μL를 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 루리아 브로스(LB) 한천판 위에 문질러발랐다. 1시간 교반 후, 100mg/mL 카나마이신 4.5μL를 LB 배양물에 첨가하고 추가로 1시간 더 교반했다. 이어서, 물 중의 VCM13 헬퍼 파지 2mL(>1011 cfu/mL)를 100mg/mL 카나마이신 92.5μL를 함유하는 예열된 LB(183mL)와 함께 LB 배지에 첨가했다. 이 혼합물을 추가로 2시간 동안 37℃에서 250rpm에서 교반했다. 이어서, 카나마이신 280μL(50mg/mL)를 배양물에 첨가하고 37℃에서 하룻밤 교반했다. 다음날, 박테리아 펠릿을 고속 원심분리기(Beckman, JA-10 로터)를 사용하여 4℃, 3,000g에서 원심분리했다. 이후, 박테리아 펠릿을 사용하여 파지미드 DNA를 추출했고 상청액은 멸균 원심분리병으로 옮겼다. 이이서, 폴리에틸렌글리콜-8000(PEG-8000, Sigma) 8g과 염화나트륨 6g을 상청액에 첨가한 다음 얼음에서 30분간 유지했다. 이후, 상청액을 4℃, 15,000g에서 15분간 원심분리했다. 이어서, 상청액을 버리고 파지 펠릿을 완충 식염수(TBS)에 현탁했다.
실시예 3: 면역화된 항원에 대한 라이브러리 패닝(바이오패닝)(bio-panning)
자기 비드(Dynabeads M - 270 Epoxy, Invitrogen)를 사용하여 바이오-패닝을 수행했다. 실온에서 대략 1 x 107 비드를 재조합 FAM19A5 단백질 5μg으로 실온에서 20시간 동안 비드와 단백질을 함께 회전 교반하여 코팅했다. 코팅이 완료되면, 비드를 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 4번 세척하고 실온에서 3% BSA를 함유하는 PBS 중에서 1시간 동안 차단했다. 이어서, 코팅된 비드를 상기 파지-디스플레이된 scFv와 함께 실온에서 2시간 동안 배양했다. 항원 코팅된 비드에 결합되지 않은 파지를 제거하기 위해, 비드를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. 이어서, 결합된 파지를 50μL의 0.1M 글리신/염화수소(0.1M 글리신-HCl, pH 2.2)로 용출하고 염화수소와 함께 2M Tris(Tris-HCl, pH 9.1) 3μL로 중화했다. 이 파지-함유 상청액을 사용하여 이콜리 ER2738 세포를 감염시켰고, VCSM13 헬퍼 파지를 사용하여 하룻밤 증폭하고 구제했다. 또한, 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 LB 한천판 상에 파지-감염된 배양물을 블롯팅함으로써 파지-감염된 배양물로부터의 파지 역가에 의해 투입(인풋) 및 생성(아웃풋)을 결정했다. 다음날, PEG-8000과 NaCl을 사용하여 파지를 침전시킨 후, 바이오패닝에 사용했다. 바이오패닝은 상기 과정을 반복함으로써 최대 총 5회 수행했다. 각 증폭에서, FAM19A5 단백질에 대해 높은 친화성을 가지는 파지를 스크리닝하고 선택했다.
실시예 4: 파지 ELISA에 의한 클론의 선택
바이오패닝으로부터 선택된 클론을 분석하기 위해, 파지-디스플레이된 scFv로부터 개별 클론을 무작위로 선택했고 ELISA를 사용하여 클론이 FAM19A5 재조합 단백질에 결합하는 것을 확인했다. FAM19A5 재조합 단백질을 0.1M NaHCO3 버퍼에 희석하고, 단백질을 웰 당 100ng을 사용하여 16시간 동안 4℃에서 96웰 마이크로타이터 플레이트를 코팅했다. 다음날, 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 3% BSA/PBS로 차단했다. 이어서, 파지 상청액을 6% BSA/PBS와 혼합하고 37℃에서 2시간 동안 배양했다. 이어서, 상청액을 함유하는 플레이트를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. HRP-콘쥬게이트된 M13 항체(a-M13-HRP, Pierce Chemical Co, Rockford, IL, USA)를 1/5000으로 희석했다. 희석된 항체 50μL를 플레이트에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 및 세척 후, 색 전개를 위해 플레이트에 0.05M 시트레이트 버퍼 용액, 1μg/mL의 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS, Amresco, Solon, OH, USA), 및 0.1% H2O2를 첨가했다. 각 웰에 대한 흡광도를 405nm에서 측정했다.
FAM19A5 재조합 단백질에 결합하고 높은 흡광도를 나타낸 24개 클론을 분석했다. 24개 클론으로부터 독특한 서열을 가진 13개의 scFv 클론을 얻었다. 클론의 추가 선택 후, 최고의 친화성을 가진 클론 1-65를 얻었다.
실시예 5: 항-FAM19A5-IgG2/4 항체의 생성
항-FAM19A5 scFv를 포유류 발현 벡터에 서브클로닝했다. FAM19A5 scFv 유전자 서열에서, 인간 Cκ 유전자를 경쇄 가변 도메인에 연결했고, CH1, CH2, 및 CH3 유전자의 인간 면역글로불린 이소타입 IgG2/4를 중쇄 가변 영역에 연결했다. 제한 부위(Genscript, USA)를 첨가함으로써 각 경쇄와 각 중쇄를 가진 항체를 합성했다. 클로닝을 용이하게 하기 위해 합성된 유전자를 변형된 제한 부위를 가진 포유류 세포 발현 벡터에 삽입했다. 먼저, 경쇄 유전자를 Hind III 및 Xba I(New England Biolabs, UK) 제한 효소를 사용하여 벡터에 삽입한 후, NheI 및 BamHI(New England Biolabs, UK) 제한 효소를 사용하여 벡터에 중쇄 유전자를 첨가했다.
항-FAM19A5-IgG2/4 항체를 발현 및 정제하기 위해, 포유류 세포 트랜스펙션 및 과발현 주사 시스템을 사용했다. 세포 배양 부피의 1/10에 상응하는 150mM 염화나트륨(NaCl, Merck) 중에서 2μg/mL의 포유류 발현 벡터와 4μg의 폴리에틸렌이민(PEI, Polysciences, Warrington, PA, USA)을 혼합했다. 혼합물을 실온에서 15분간 방치했다. 혼합물을 HEK293F 세포(2 x 106 세포/mL, Invitrogen)에 가한 후, 7% CO2 및 37℃에서 6일간 135rpm의 교반 조건에서 100 U/mL 페니실린 및 스트렙토마이신(Invitrogen)을 함유하는 Freestyle™ 293 발현 배양 배지에서 인큐베이션했다. 세포 배양 상청액으로부터 발현된 항-FAM19A5 IgG2/4 항체를 정제하기 위해, 단백질 A 비드(RepliGen, Waltham, MA, USA) 친화성 겔 크로마토그래피를 사용했다. 단백질 A 크로마토그래피는 4-12% Bis-Tris 구배 겔 전기영동 상에서 전개되었다. 단백질의 크기 및 수율을 코마씨 브릴리언트 블루 염색에 의해 확인했다.
실시예 6: 인간 간암 환자 분석
간암에서의 FAM19A5 발현을 평가하기 위해, FAM19A5 단백질 발현을 면역조직화학을 사용하여 인간 간 생검체에서 측정했다. 간단히 말해서, 다양한 정도의 섬유증(즉, 단계 #0에서 단계 #4)을 가진 간암 환자로부터 간 샘플을 얻었다. 조직 샘플을 항-FAM19A5 항체로 면역염색한 다음 헤마톡실린과 에오신(H&E)으로 대조염색했다.
도 1에 도시된 대로, 단계 #0의 환자와 비교하여 단계 #2에서 단계 #4의 암 환자로부터의 간 조직에서는 FAM19A5 단백질 발현에 유의한 증가가 있었다. 증가된 FAM19A5 발현은 흉터 형성 영역 근처와 간 성상 세포에 주로 집중되었다. 또한, FAM19A5 발현의 증가는 질환 진행과 관련되었는데, 단계 #2 간 조직과 비교하여 단계 #4 간 조직은 FAM19A5를 훨씬 더 높은 수준으로 발현했다. 종합하면, 이 데이터는 FAM19A5가 인간 간암에서도 중요한 역할을 한다는 것을 증명한다.
실시예 7: 간암 이종이식편 모델에서의 항-FAM19A5 항체 투여 효능의 분석
인간 간암에 대한 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효능을 평가하기 위해, 간암의 이종이식편 마우스 모델을 사용했다. 간단히 말해서, 누드 마우스를 구입하고 특정 병원균-무함유(SPF) 조건에 수용했다. 대략 1주일의 적응 기간 후, Hep3B 세포 및/또는 인간 간 성상 세포(HHSteC)를 동물에 피하 주사했다. 이렇게 하기 위해, 세포를 먼저 트립신으로 처리하여 단일 세포 용액을 제조했다. 이어서, 세포를 세척하고 대략 5 x 106의 Hep3B 및/또는 0.4 x 106의 HHSteC 세포를 DMEM 배지 100μL에 재현탁했다. 이어서, 세포를 누드 마우스의 우측 옆구리에 인슐린 주사기를 사용하여 피하 주사했다. 주사 후 약 3주째에 종양 형성에 대해 동물을 관찰했다.
종양 형성시(주사 후 ~3주), 동물에 정상 인간 면역글로불린(NHI, 대조군) 또는 3-2 인간 IgG1 항-FAM19A5 항체(2.5mg/kg)를 정맥내 주사했다. 동물은 총 3주 동안 매주 1회 항체를 투여받았다. 체중과 종양 크기를 매주 평가했다. 접종 후 42일째에 동물을 죽이고 종양을 더 분석했다.
도 2a에 도시된 대로, 모든 상이한 그룹의 동물들이 실험 기간 내내 유사한 체중을 가졌다. 그리고 도 2b-2d에 도시된 대로, 항-FAM19A5 항체의 투여는 단지 Hep3B 세포만으로 접종된 동물에 대해 최소한의 항-종양 효과를 가졌다(즉, "Hep3B + NHI" 및 "Hep3B + FAM19A5 Ab"). 그러나, Hep3B 세포와 HHSteC가 모두 접종된 동물에서는 항-FAM19A5 항체의 투여가 종양 크기/중량의 유의한 감소를 가져왔다(즉, "Hep3B+HHSteC + NHI" 및 "Hep3B+HHSteC + FAM19A5 Ab"). 이러한 데이터는 종양 미소환경에서 항-FAM19A5 항체와 간세포의 간 성상 세포의 상호작용이 간암을 치료할 수 있음을 보여준다.
실시예 8: 유도성 마우스 흑색종 모델에서의 항-FAM19A5 항체의 항암 효과의 평가
항-FAM19A5 항체의 항암 효과를 평가하기 위해, 수컷 Tyr::CreER; Braf+/+; Ptenlox/lox 마우스(Jackson Lab, USA)와 암컷 Tyr::CreER;BrafCA/CA; Ptenlox/lox 마우스의 교잡육종(crossbreeding)에 의해 Tyr::CreER; BrafCA/+; Ptenlox/lox 마우스를 생성하여 흑색종을 유도했다. 얻어진 교잡육종된 마우스는 흑색종을 자연 발생시키는 것으로 잘 알려진 동물 모델이다(Dankort D., et al., Nat Genet 41(5): 544-552 (2009) 참조). 흑색종은 출생 후 7주부터 자발적으로 유도되었고, 각 마우스는 각각의 종양 부피 및 흑색종 수에 따라 분류하였다.
분리 후, 인간 IgG 또는 항-FAM19A5 항체를 출생 후 8주부터 5 mg/kg의 용량으로 주 1회씩 총 3번 정맥내 주사했다(8, 9 및 10주). 12주(즉, 초기 항체 투여 후 4주)에, 마우스 흑색종의 부피 분석을 캘리퍼(Caliper; Mitutoyo, Japan)를 사용하여 수행했다(도 3a 참조).
도 3b 및 3c에 도시된 대로, 항-FAM19A5 항체 치료군은 종양 부피(도 3b)와 염색된 영역의 면적(도 3c)의 측면에서 모두 대조군인 인간 IgG 치료군과 비교하여 흑색종 성장의 유의한 저해를 나타냈다.
실시예 9: 마우스 흑색종 모델에서의 항-FAM19A5 항체의 투여 후 혈관 정상화 및 면역 세포 침윤의 촉진
혈관 정상화 및 흑색종에 면역 세포 침윤에 대한 항-FAM19A5의 효과를 평가하기 위해, 마우스에서 흑색종을 유도하고 실시예 8에 기재된 대로 인간 IgG 또는 항-FAM19A5 항체를 투여했다. 이어서, 마우스를 우레탄 0.5cc/100g으로 복강내 국소 마취했다. 가슴 피부를 절개하고 좌측 심실에 IV를 주사하고 0.9% 식염수 50mL를 투여하여 혈관으로 흘려보냈다. 4% 파라포름알데하이드(PFA)를 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS) 50mL을 마우스에 관류시켜 고정했다.
흑색종을 고정된 마우스의 피부로부터 분리하고 4% 파라포름알데하이드(PFA)를 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 후기-고정했다. 24시간 후, 흑색종을 PBS로 옮기고 사용할 때까지 보관했다. 3-차원 분석을 위해, CLARITY 및 면역조직화학을 사용하여 항-FAM19A5 항체 치료 후 흑색종에서의 혈관 및 면역 세포 분포를 관찰했다. CD31 및 IBA1을 각각 혈관 내피 세포 및 대식세포에 대한 마커로서 사용했다. 약 700-750μm에서 제조된 샘플의 형광 이미지를 공초점 현미경(Leica)을 사용하여 얻었다.
도 4에 도시된 대로, 대조군(상부 이미지)에서의 혈관의 분포 패턴은 암 조직에서 관찰된 것과 유사했으며, 불량한 혈관 연결성과 불규칙적인 혈관 방향을 가졌다. 이와 대조적으로, 항-FAM19A5-항체 치료군은 증가된 혈관 연결성 및 더욱 규칙적인 혈관 방향을 가진 규칙적인 혈관을 형성하는 정상 조직과 유사한 특징들을 나타냈다(도 4(하부 이미지) 참조; 도 5(CD31 표지된 칼럼의 하부 이미지) 참조).
더욱이, 대조군에서의 대식세포 분포는 피하 조직 내에만 강하게 집중되었고, 표피에의 분포는 유의하게 감소되었다(도 5, 상부 중앙 패널). 한편, 항-FAM19A5 항체 치료군에서는 조직 전체적으로 대식세포가 균일하게 분포되었다(도 5, 하부 중앙 패널).
이들 결과는 항-FAM19A5 항체를 사용한 치료적 처치가 혈관 정상화를 매개하여, 흑색종으로의 면역 세포의 침윤을 촉진시킬 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 10: 자발적 흑색종 마우스 모델에서의 항-FAM19A5 항체 치료 후 면역 세포 침윤의 촉진
면역 세포에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 더 평가하기 위해, 마우스에서 흑색종을 유도하고 실시예 8에 기재된 대로 인간 IgG 또는 항-FAM19A5 항체를 투여했다. 이어서, 마우스를 우레탄 0.5cc/100g으로 복강내 국소 마취했다. 가슴 피부를 절개하고 좌측 심실에 IV를 주사하고 0.9% 식염수 50mL를 투여하여 혈관으로 흘려보냈다. 마우스에 4% 파라포름알데하이드(PFA)를 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS) 50mL을 관류시켜 고정했다. 흑색종을 고정된 마우스의 피부로부터 분리하고 4% 파라포름알데하이드(PFA)를 함유하는 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 후기-고정했다.
이어서, 흑색종을 추가로 24시간 동안 30% 수크로오스를 함유하는 PBS와 함께 인큐베이션했다. 이어서, 조직을 조직 몰드에 넣고 드라이아이스에서 30% 당 용액을 함유하는 최적 절단 온도(OCT) 조성물과 함께 동결했다. 피부 조직을 저온유지 마이크로톰(cryostat microtome)을 사용하여 30μm로 절단했다. 면역조직화학을 사용하여 항-FAM19A5 항체 치료 후 흑색종에서의 면역 세포 분포를 분석했다.
흑색종 종양 덩어리에서의 면역 세포의 분포를 검사하기 위해, 대식세포 및 수지상 세포 분포를 각각 확인할 수 있는 백혈구 공통 항원 마커 CD45와 대식세포 마커 Iba-1를 함께 표지했다. 또한, T 림프구 분포를 확인하기 위해 CD45 및 CD3, T 림프구 마커를 함께 표지했다.
대식세포 또는 수지상 세포 분포 분석으로부터 입증된 바(도 6a), 항-FAM19A5 항체 치료군의 흑색종에서의 대식세포 또는 수지상 세포의 분포는 인간 IgG-치료군의 분포와 유사했다(도 6b). 그러나, 대식세포 및/또는 수지상 세포 당 복셀 강도는 인간 IgG 치료군과 비교하여 항-FAM19A5 항체 치료군에서 유의하게 증가했는데, 이는 대식세포의 세포 부피의 증가를 나타낸다(도 6c 및 6d).
또한, 인간 IgG로 치료된 동물과 비교하여 T 림프구의 유의하게 더 높은 침윤이 항-FAM19A5 항체 치료군에서 입증되었다(도 7a 및 7b).
이 결과는 혈관 정상화가 항-FAM19A5 항체 치료 후 흑색종 내에서 발생하여, 대식세포의 세포 부피와 흑색종으로의 T 림프구의 침윤이 증가한 것을 나타냈다.
실시예 11: 마우스 동계 결장 선암종 모델에서의 종양 조직으로의 면역 세포의 침윤에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과의 평가
항암 효능의 동계 종양 모델을 사용하여, 종양 조직으로의 면역 세포의 침윤의 정도를 동물로부터 MC-38 결장 선암종 모델 종양의 추출에 의해 평가했다. 간단히 말해서, 결장 선암종 종양 세포(5 x 105)를 각 마우스에 이식했다. 종양 크기가 약 80-100mm3에 도달했을 때 동물을 상이한 그룹으로 분리했다. 이어서, 인간 IgG 또는 항-FAM19A5 항체를 관련된 그룹의 동물에 투여했다(2.5mg/kg의 용량으로 2주 동안 매일 2회, 복강내 주사). 마지막 항체 투여 후 10일째에 마우스를 죽이고 종양을 수거했다.
특정 크기의 수거된 종양을 세포 스트레이너를 통해서 체질하여 균일한 단일 세포 현탁액을 얻었다. 세포를 PBS로 세척하고, 각 종양으로부터의 세포를 3개의 튜브에 나누어 100μL에 현탁했다. 각 튜브를 개별적으로 1μg의 항-CD3 FITC 항체(abcam, ab34722), 항-Ly6G FITC 항체(abcam, ab25024), 또는 이소타입 대조군인 래트 IgG FITC 항체(abcam, ab37364)로 처리했다. 항체-세포 현탁액을 30분간 4℃에서 방치한 다음, 형광-활성화 세포 정렬(FACS)(Guava, Merck) 분석을 위해 PBS로 세척했다.
대조군인 인간 IgG를 투여받은 동물과 비교하여, 항-FAM19A5 항체(3-2)로 치료된 마우스 동계 결장 선암종 모델은 암 조직 내의 T 세포의 침윤을 증가시켰다(도 8a). 유사하게, 항-FAM19A5 항체를 투여받은 동물은 또한 대조군 동물과 비교하였을 때 암 조직 내에서의 골수-유래 억제제 세포(MDSCs)의 빈도가 대략 25% 감소했다.
이들 결과는 항-FAM19A5 항체 투여가 종양 조직에서의 MDSC의 모집을 감소시키면서 T 세포의 침윤을 증가시킬 수 있음을 나타냈으며, 이는 종양 조직의 면역 억제 환경을 변형시켜 항암 효능을 증진시켰다.
실시예 12: 동계 종양 성장 모델에서의 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효과의 평가
이 연구의 목적은 상이한 피하 동계 뮤린 종양 모델에서의 항-FAM19A5 항체(3-2)의 항-종양 효능을 평가하는 것이었다. 시험된 종양 모델은 4T-1 종양 세포(유방암), A20 종양 세포(B 세포 림프종), B16F10 종양 세포(흑색종), LLC 종양 세포(폐암), Pan02 종양 세포(췌장암), Renca 종양 세포(신장암), RM-1 종양 세포(전립선암), WEHI-164 종양 세포(섬유육종), 및 MC-38 종양 세포(결장 선암종)를 포함했다.
종양을 유도하기 위해, 각 마우스의 우측 옆구리에 PBS 0.1mL 중에서 다음과 같은 마우스 종양 세포 중 하나를 피하 접종했다: (i) 4T-1 종양 세포(3 x 105), (ii) A20 종양 세포(5 x 105), (iii) B16F10 종양 세포(2 x 105), (iv) LLC 종양 세포(3 x 105), (v) Pan02 종양 세포(3 x 106), (vi) Renca 종양 세포(1 x 106), (vii) RM-1 종양 세포(1 x 106), (viii) WEHI-164 종양 세포(1 x 106), 또는 MC-38 종양 세포(5 x 105).
접종 후 종양 부피를 캘리퍼를 사용하여 2-차원으로 주 2회 측정했으며, 측정된 부피는 식 V = 0.5 x a x b2에 의해 계산하였으며 mm3로 표시했다(여기서 a 및 b는 각각 종양의 장경 및 단경). 종양 부피가 80-100 mm3에 도달하면 항체 치료를 시작했다. 각 연구 그룹의 동물 수, 투약량, 투약 경로 및 투여 일정은 표 8에 제시한다.
종양 성장 저해는 TGI(%) = 100 x (1-T/C)로 나타냈으며, 이것이 항-종양 효능의 표식으로서 사용되었다. T 및 C는 각각 항-FAM19A5 치료군 및 대조군(인간 IgG) 치료군의 평균 종양 부피이다.
연구 설계
그룹 N 치료 용량(mg/kg) 투약 경로 일정
1 8 hIgG 2.5 i.p. BIW x 3주
2 8 FAM19A5 Ab 2.5 i.p. BIW x 3주
표 9의 항-FAM19A5 항체로 치료된 각 동계 종양 성장 모델의 TGI(%)를 사용하여 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효과를 평가했다.
항-FAM19A5 항체로 치료된 다양한 동계 종양 성장 모델의 TGI(%)
종양 종류 4T-1 A20 B16F10 LLC Pan02 Renca RM-1 WEHI-164 MC-38
경과일
(종양
접종 후)		 29 27 21 34 32 31 20 22 21
TGI% 10.92 15.2 6.03 11.83 19.00 16.98 15.00 41.00 11.89
이들 결과는 동계 종양의 성장이 음성 대조군 인간 IgG 치료군과 비교했을 때 항-FAM19A5 항체 치료군에서 저해되었음을 증명했다.
실시예 13: 인간 췌장암의 이종이식편 마우스 모델에서의 항-FAM19A5 항체의 항암 효과의 평가
항-FAM19A5 항체의 항암 효과를 더 평가하기 위해, 인간 췌장암 이종이식편 모델을 사용했다. 간단히 말해서, MIA paca-2 세포(ATCC; Manassas, VA)를 37℃, 95% CO2에서 10% 태아 소 혈청(FBS), 2.5% 말 혈청, 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 듈베코스 변형 이글 배지(DMEM)에서 배양했다. 이어서, 0.05% 트립신-0.02% EDTA를 사용하여 세포를 수거하고, 원심분리하고(1500rpm에서 3분), 1 x 107 세포/0.1mL의 농도로 PBS에 재현탁했다. 종양 성장을 유도하기 위해, 누드 마우스를 케타민/자일라진으로 마취하고 좌측 옆구리를 70% 알코올로 소독했다. 소독된 영역을 절개해서(0.7-1cm) 췌장을 노출시켰다. 이어서, MIA paca-2 세포(1 x 107 세포/0.1mL)를 인슐린 주사기(1mL, 31G)를 사용하여 췌장에 주사했다. 인간 IgG(음성 대조군) 또는 항-FAM19A5 항체(3-2)를 종양 유도 후 10, 17, 및 24일에 2.5mg/kg의 용량으로 동물에게 정맥내 투여했다. 젬시타빈과 조합한 항-FAM19A5 항체의 효과를 평가하기 위해, 종양 유도 후 12, 15, 19, 22, 26, 및 29일에 50mg/kg의 용량으로 관련된 동물에게 젬시타빈을 또한 투여했다. 마지막 투여 후, 마우스를 죽이고 혈액을 제거하고, 분석을 위해 동물로부터 췌장을 수거했다.
종양 조직을 10% 완충 중성 포르말린 용액에서 칭량했다. 췌장 조직을 고정하고 파라핀으로 포매하고 4-5μm 조직 절편을 제조했다. 췌장암 조직에서의 섬유증의 정도를 세포외 바탕질 단백질의 축적에 의해 확인했다. Sirius 레드 염색에 의해 섬유증의 진행 정도를 평가했는데, 이것은 구체적으로 세포외 바탕질의 성분인 콜라겐을 염색시켰다. 염색된 조직의 이미지를 획득하고, 이미지화된 영역 내에서의 상대적 콜라겐 함량을 측정했다(Image Pro Plus 7.0, MediaCybernetics, USA).
도 9b에 도시된 대로, 항-FAM19A5 항체로 치료된 동물은 대조군 동물(인간 IgG 항체로 치료)과 비교하여 종양 성장(종양 중량에 의해 측정)에 대해 효과를 보이지 않았다. 그러나, 젬시타빈과 조합한 항-FAM19A5 항체는 유의한 항-종양 효과를 갖는 것으로 드러났다. 항-FAM19A5 항체와 젬시타빈을 둘 다 투여받은 동물은 상이한 그룹들 중에서 가장 적은 종양 중량을 가졌다. 즉, 항-FAM19A5 항체가 혈관 정상화를 촉진하고, 이것이 종양으로의 젬시타빈의 송달을 증가시키는 것으로 추정된다.
섬유증의 진행에 대한 효과와 관련하여, 항-FAM19A5 항체 단독의 투여는 인간 IgG 투여 단독과 비교했을 때 섬유증의 형성(상대적 콜라겐 함량에 의해 측정)의 더 큰 저해를 가져왔다(도 9c). 젬시타빈 단독과 비교했을 때, 항-FAM19A5 항체와 젬시타빈의 조합 투여는 더 큰 항-섬유증 효과를 가져왔다.
이들 결과는 항-FAM19A5 항체가 단독으로 또는 젬시타빈과 조합하여 투여되었을 때 음성 대조군(인간 IgG) 및 양성 대조군(젬시타빈 단독)과 비교하여 유의하게 더 높은 항암 효과를 가질 수 있음을 증명했다.
실시예 14: 흑색종 동물 모델에서의 단독 또는 항-PD-1 항체와 조합한 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효능의 평가
마우스 흑색종 암 셀라인 B16F10을 한국 셀라인 뱅크(KCLB)로부터 구입했다. 마우스 동계 흑색종 모델을 유도하기 위해 2 x 105 세포/0.2mL의 세포를 각 마우스의 옆구리에 접종했다.
접종 후 7일째에 각 종양의 부피를 캘리퍼(Caliper; Mitutoyo, Japan)를 사용하여 측정했다. 측정된 부피는 식: V = 0.5 x a x b2에 의해 계산하였으며 mm3으로 표시했다(여기서 a 및 b는 각각 종양의 장경과 단경).
도 10a에 도시된 대로, 종양 부피가 80-100mm3에 도달하면 항체 치료를 시작했다. 인간 IgG(음성 대조군) 또는 항-FAM19A5 항체를 5mg/kg의 용량으로 2주 기간 동안 매주 1회 정맥내 투여했다. 래트 IgG(음성 대조군) 또는 항-마우스 PD-1(mPD-1) 항체를 1주 동안 매주 2회 복강내 투여했다. 종양 접종 후 17일째에 종양 부피를 측정하고 동물을 죽였다(도 10a).
TGI(%) = 100 x (1-T/C)로 계산된 종양 성장 저해(TGI)를 항-종양 효능의 표식으로서 사용했다. T는 항-FAM19A5 항체 투여된 마우스의 개별 종양 부피이고, C는 대조군[인간 IgG + 래트 IgG]의 평균 종양 부피이다. 도 10b에 도시된 대로, 대조군 동물(인간 IgG + 래트 IgG 치료군)과 비교하여, 항-FAM19A5 항체 단독 또는 항-PD-1 항체 단독으로 치료된 동물에서는 유의한 항-종양 효과가 관찰되지 않았다. 그러나, 항-FAM19A5 항체와 항-PD-1 항체를 둘 다 투여받은 마우스는 대조군 동물과 비교하여 종양 부피의 유의한 감소를 나타냈다(도 10b).
이들 결과는 mPD-1 항체와 조합한 항-FAM19A5 항체의 투여가 유의한 항-종양 효과를 가져올 수 있다는 것을 증명했다.
실시예 15: 췌장암 동물 모델에서의 단독 또는 항-PD-1 항체와 조합한 항-FAM19A5 항체의 항-종양 효능의 평가
항-FAM19A5 항체와 항-PD-1 항체의 조합 사용의 항-종양 효능을 더 평가하기 위해 췌장암 마우스 모델을 사용했다. C57BL/6 마우스에서 유전자 돌연변이(KrasLSL-G12D/WT; P53KO/KO; Pdx1-cre)를 통해 췌장암을 유도한 후 암 조직을 제거하고 새로운 C57BL/6 마우스의 췌장 조직에 이식했다. 3일 후 암 조직을 이식받은 동물을 상이한 그룹으로 분리하고 다음과 같이 치료했다: (i) 대조군 인간 및 마우스 IgG 항체, (ii) 항-FAM19A5 항체 + 마우스 IgG 항체, (iii) 인간 IgG 항체 + 항-마우스 PD-1 항체 또는 (iv) 항-FAM19A5 항체 + 항-마우스 PD-1 항체. 인간 IgG(CrownBio, cat # C0001) 및 항-FAM19A5 항체(3-2 클론, Lot # 171123)는 5 mg/kg의 용량으로 3주 동안 매주 1회 정맥내 투여했다. 마우스 IgG(Bioxcell, cat # BE0089) 및 마우스 항-PD1 항체(Bioxcell, cat # BE0146)는 10 mg/kg의 용량으로 3주 동안 매주 2회 투여했다. 종양 접종 후 3주째에 동물을 죽이고 상이한 치료 섭생의 항암 효과를 평가했다.
도 11에 도시된 대로, 대조군(G1: 인간 IgG 항체 + 마우스 IgG 항체)과 비교하여, 항-FAM19A5 항체 단독으로 치료된 동물(G2) 및 항-PD-1 항체 단독으로 치료된 동물(G3)은 각각 약 50% 및 51% 종양 저해를 나타냈다. 마우스 흑색종 모델로부터의 결과(실시예 14 참조)와 동일하게, 항-FAM19A5 항체와 항-PD-1 항체 둘 다로 치료된 동물(G4)은 가장 큰 종양 저해(대조군과 비교하여 ~61% 저해)를 보였다. 이들 결과는 항-FAM19A5 항체와 항-PD-1 항체의 조합 치료가 흑색종 및 췌장암을 포함하는 다양한 암에 대한 효과적인 치료일 수 있음을 확인한다.
실시예 16: Raw 264.7(마우스 대식세포) 및 BV-2 세포(마우스 미세아교세포)의 포식작용에 대한 항-FAM19A5 항체의 영향
Raw 264.7(한국 셀라인 뱅크) 세포를 웰 당 1 x 105 세포/mL로 12개 웰에 평판하고 16시간 동안 5% CO2 및 37℃에서 배양했다. 이어서, 세포를 (i) 무자극(대조군), (ii) 시토칼라신 D(5mM), (iii) LPS(1μg/mL) 단독(sigma) 또는 (iv) LPS와 항-FAM19A5 항체(1μg/mL)와 함께 24시간 동안 5% CO2 및 37℃에서 배양했다. 상청액 제거 및 PBS 세척 후, 용액을 이콜라이 바이오입자 옵소닌화 시약(Thermofisher, E2870)과 미리 반응된 pHrodo 이콜리 바이오입자(Thermofisher, P35381)로 웰 당 0.05mg/300μL로 처리했다. 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션 후, 상청액을 제거하고, PBS 세척 후 세포를 수거했다. GUAVA 기기(Merck)를 사용하여 포식작용 후 리소좀의 융합으로 인해 낮은 pH에서 선택적으로 형광이 되는 pHrodo 발현을 분석했다.
BV-2 세포를 웰 당 1 x 105 세포/mL로 24개 웰에 평판하고 16시간 동안 5% CO2 및 37℃에서 배양했다. 상청액 제거 및 PBS 세척 후, 용액을 이콜리 바이오입자 옵소닌화 시약(Thermofisher, E2870)과 미리 반응된 pHrodo 이콜리 바이오입자(Thermofisher, P35381)로 웰 당 0.05mg/300μL로 처리했다. 각 웰은 (i) 1μg/mL FAM19A5 단백질 또는 (ii) 1μg/mL FAM19A5 단백질과 항-FAM19A5 항체로 처리했다. 미토콘드리아 막 전위를 측정하기 위해, Image-iT™ TMRM 시약(테트라메틸로다민 메틸 에스테르, 미토콘드리아 막 전위 지시약; ThermoFisher, I34361)(10nM 농도)으로 세포를 더 처리했다. 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션 후, 상청액을 제거하고, PBS 세척 후 세포를 수거했다. GUAVA 기기(Merck)를 사용하여 포식작용 후 리소좀의 융합으로 인해 낮은 pH에서 선택적으로 형광이 되는 pHrodo 발현을 B-Green 채널에서 분석했고, TMRM을 B-Yellow 채널에서 분석했다.
도 12a에 도시된 대로, FACS 분석은 대조군과 비교하여 Raw 264.7 세포가 고-용량 LPS 단독으로 24시간 동안 처리되었을 때 포식작용이 저해되었음을 나타냈다. 세포가 동일한 농도의 LPS와 함께 항-FAM19A5 항체로 처리되었을 때 포식작용의 수준은 약 67% 증가했다. 유사하게, FAM19A5 단백질 단독으로 BV-2 세포의 처리는 감소된 포식작용과 미토콘드리아 막 전위를 가져왔다(도 12b). 그러나, BV-2 세포가 항-FAM19A5 항체로 더 처리되었을 때, 항체는 전형적인 식세포인 대식세포와 미세아교세포의 식세포 활성을 증가시켰고, 또한 미토콘드리아 전위를 증가시켰다(각각 약 6% 및 16%)(도 12b).
개요 및 요약 부분을 포함하는 상세한 설명 부분은 청구항을 해석하기 위해 사용되도록 의도된다는 것이 인정되어야 한다. 개요 및 요약 부분은 본 발명자(들)에 의해 고찰된 대로 본 발명의 전부는 아니지만 하나 이상의 예시적인 구체예를 제시할 수 있고, 따라서 본 발명과 첨부된 청구항을 어떤 식으로도 제한하려고 의도하지 않는다.
본 발명은 명시된 기능들과 이들의 관계의 실시형태를 예시하는 기능적 구성 요소의 보조하에 상기 개시되었다. 이들 기능적 구성 요소의 경계는 설명의 편의를 위해 본 명세서에서 자의적으로 한정되었다. 명시된 기능들과 이들의 관계가 적절히 수행되는 한 대안의 경계도 한정될 수 있다.
특정한 구체예들에 대한 전술한 설명은 본 발명의 일반적인 성질을 충분히 드러낼 것이며, 제3자는 당업계의 지식을 적용함으로써 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않고 과도한 실험 없이 이러한 특정한 구체예들을 다양한 용도에 맞게 쉽게 변형 및/또는 개조할 수 있다. 따라서, 이러한 개조 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 구체예들의 등가물의 의미와 범위 내에 있도록 의도된다. 본 명세서에서 사용된 문구 또는 용어는 제한이 아닌 설명의 목적을 위한 것임이 이해되어야 하며, 본 명세서의 용어 또는 문구는 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 한다.
본 발명의 범위 및 영역은 상기 설명된 예시의 구체예들 중 어느 것에 의해 제한되어서는 안 되며, 청구항 및 그것의 등가물에 따라서만 한정되어야 한다.
본 명세서에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 및 수탁번호/데이터베이스 서열(폴리뉴클레오타이드와 폴리펩타이드 서열을 모두 포함)은 각 개별 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 또는 수탁 번호/데이터베이스 서열이 참고로 포함되도록 구체적으로 그리고 개별적으로 적시된 것과 동일한 범위로 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
이 PCT 출원은 2017년 6월 27일자 제출된 미국 가출원 제62/525,633호, 2017년 11월 7일자 제출된 제62/582,886호 및 2017년 12월 12일자 제출된 제62/597,920호의 우선권의 이익을 주장하며, 이들은 모두 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> NEURACLE SCIENCE CO., LTD. <120> USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR TREATING CANCERS <130> 3763.013PC01/C-K/DKC <150> 62/525,633 <151> 2017-06-27 <150> 62/582,886 <151> 2017-11-07 <150> 62/597,920 <151> 2017-12-12 <160> 200 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 132 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu 1 5 10 15 Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu 20 25 30 Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 35 40 45 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 50 55 60 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 65 70 75 80 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 85 90 95 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 100 105 110 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 115 120 125 Thr Thr Val Ser 130 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Met Gln Leu Leu Lys Ala Leu Trp Ala Leu Ala Gly Ala Ala Leu Cys 1 5 10 15 Cys Phe Leu Val Leu Val Ile His Ala Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln 20 25 30 Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser 35 40 45 Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg 50 55 60 Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp 65 70 75 80 Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu 85 90 95 Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys 100 105 110 Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr Thr Thr Val Ser 115 120 125 <210> 3 <211> 53 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 3 Met Tyr His His Arg Glu Trp Pro Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln 1 5 10 15 Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu 20 25 30 Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys 35 40 45 Thr Thr Thr Val Ser 50 <210> 4 <211> 1501 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 4 ggcggcggag gatggcgcgc gcggggcccg cacgtggagg ccggcgcggg ggcgcgggca 60 gggccggctg ctgagacgcg ctgctgcccc ccgcgcgggc gccgcggctt caatggcgcc 120 atcgcccagg accggcagcc ggcaagatgc gaccgccctg cccagcatgt cctcaacttt 180 ctgggcgttc atgatcctgg ccagcctgct catcgcctac tgcagtcagc tggccgccgg 240 cacctgtgag attgtgacct tggaccggga cagcagccag cctcggagga cgatcgcccg 300 gcagaccgcc cgctgtgcgt gtagaaaggg gcagatcgcc ggcaccacga gagcccggcc 360 cgcctgtgtg gacgcaagaa tcatcaagac caagcagtgg tgtgacatgc ttccgtgtct 420 ggagggggaa ggctgcgact tgttaatcaa ccggtcaggc tggacgtgca cgcagcccgg 480 cgggaggata aagaccacca cggtctcctg acaaacacag cccctgaggg ggccccggga 540 gtggccttgg ctccctggag agcccacgtc tcagccacag ttctccactc gcctcggact 600 tcacccgttc tctgccgccc gcccactccg tttccctgtg gtccgtgaag gacggcctca 660 ggccttggca tcctgagctt cggtctgtcc agccgacccg aggaggccgg actcagacac 720 ataggcgggg ggcggcacct ggcatcagca atacgcagtc tgtgggagcc cggccgcgcc 780 cagcccccgc cgaccgtggc gttggccctg ctgtcctcag aggaggagga ggaggaggca 840 gctccggcag ccacagaagg ctgcagccca gcccgcctga gacacgacgc ctgccccagg 900 ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960 tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020 caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080 gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140 gagcaccccg cacaccctcg gaggacgggc ttcggctgcg cggaggccgt ggcacacctg 1200 cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260 acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320 ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380 tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440 taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500 a 1501 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F1 <400> 5 Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg 1 5 10 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F2 <400> 6 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 7 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F3 <400> 7 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 1 5 10 15 Ala Arg Pro Ala 20 <210> 8 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F4 <400> 8 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 1 5 10 15 Cys Asp Met Leu 20 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F5 <400> 9 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 1 5 10 15 Asn Arg Ser Gly 20 <210> 10 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F6 <400> 10 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 1 5 10 15 Thr Thr Val Ser 20 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VH-CDR1 <400> 11 Ser His Gly Met Phe 1 5 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VH-CDR2 <400> 12 Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VH-CDR3 <400> 13 Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly 1 5 10 15 Gln Ile Asp Ala 20 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VH-CDR1 <400> 14 Ser Phe Asn Met Phe 1 5 <210> 15 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VH-CDR2 <400> 15 Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Arg 1 5 10 15 Gly <210> 16 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VH-CDR3 <400> 16 Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser 1 5 10 15 Ala Gly Glu Ile Asp Ala 20 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VH-CDR1 <400> 17 Ser Tyr Gln Met Gly 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VH-CDR2 <400> 18 Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VH-CDR3 <400> 19 Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH-CDR1 <400> 20 Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr Gly 1 5 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH-CDR2 <400> 21 Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro 1 5 <210> 22 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH-CDR3 <400> 22 Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly 1 5 10 15 Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala 20 25 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL-CDR1 <400> 23 Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL-CDR2 <400> 24 Trp Asp Asp Glu Arg Pro Ser 1 5 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL-CDR3 <400> 25 Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val 1 5 10 <210> 26 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL-CDR1 <400> 26 Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL-CDR2 <400> 27 Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 28 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL-CDR3 <400> 28 Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly Gly Ile 1 5 10 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL-CDR1 <400> 29 Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly 1 5 10 <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL-CDR2 <400> 30 Trp Asn Asp Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL-CDR3 <400> 31 Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr Val Gly Val 1 5 10 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL-CDR1 <400> 32 Gly Tyr Gly Tyr Gly 1 5 <210> 33 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL-CDR2 <400> 33 Gln Asn Asp 1 <210> 34 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL-CDR3 <400> 34 Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile 1 5 10 <210> 35 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VH <400> 35 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp 100 105 110 Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser 115 120 125 Ser <210> 36 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VH <400> 36 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val 50 55 60 Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val 100 105 110 Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile 115 120 125 Val Ser Ser 130 <210> 37 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VH <400> 37 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp 100 105 110 Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser 115 120 <210> 38 <211> 136 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH <400> 38 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly 100 105 110 Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His 115 120 125 Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser 130 135 <210> 39 <211> 104 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL <400> 39 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln 20 25 30 Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu 35 40 45 Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser 50 55 60 Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val 65 70 75 80 Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly 85 90 95 Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 <210> 40 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL <400> 40 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr 20 25 30 Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly 85 90 95 Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 41 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL <400> 41 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp 35 40 45 Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys 50 55 60 Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp 65 70 75 80 Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly 85 90 95 Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 42 <211> 104 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL <400> 42 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val 1 5 10 15 Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln 20 25 30 Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys 35 40 45 Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser 50 55 60 Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val 65 70 75 80 Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly 85 90 95 Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 <210> 43 <211> 388 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VH <400> 43 gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacagacg 120 cccggcaagg ggttggaata tgtcgctgaa attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180 gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 300 tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360 cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcca 388 <210> 44 <211> 394 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VH <400> 44 gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120 cccggcaagg ggctggaata cgtcgctcaa attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180 gcacccgcgg tgaggggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaaccccgg ggctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300 tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360 tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcca 394 <210> 45 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VH <400> 45 gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agctatcaga tgggctgggt gcgacaggcg 120 cccggcaagg ggctggaatg ggtcggtgtt attaacaaga gtggtagtga cacatcatac 180 gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc caaaggttct 300 gctagttata taactgctgc taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360 tcctcc 366 <210> 46 <211> 408 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH <400> 46 gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc gattatggca tgggttgggt gcgacaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggttgctgct attagaagtg atggtagtaa cccatcatac 180 gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgaaggaca acgggcgaag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccacct actactgcgc caaggatggt 300 aatggttact gtgctctcga tgcttatcgt agtggtggtt atagttgtgg tgtttatcct 360 ggtagcatcg acgcatgggg ccacgggacc gaagtcatcg tctcctcc 408 <210> 47 <211> 315 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL <400> 47 ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agataacctg 60 ctccgggggt agctatagct atggctggtt ccagcagaag tctcctggca gtgcccttgt 120 cactgtgatc tactgggatg atgagagacc ctcggacatc ccttcacgat tctccggtgc 180 cctatccggc tccacaaaca cattaaccat cactggggtc caagccgacg acgaggctgt 240 ctatttctgt gggactgaag acatcagcgg cactgctggt gtatttgggg ccgggacaac 300 cctgaccgtc ctggg 315 <210> 48 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL <400> 48 ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agatcacctg 60 ctccgggggt ggcagctatg ctggaagtta ctattatggc tggtaccagc agaaggcacc 120 tggcagtgcc cctgtcactc tgatctatga aagcaacaag agaccctcgg acatcccttc 180 acgattctcc ggttccacat ctggctccac agccacacta accatcactg gggtccaagc 240 cgatgacgag gctatctatt actgtgggag ctgggacagt agcaatggtg gtatatttgg 300 ggccgggaca accctgaccg tcctagg 327 <210> 49 <211> 331 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL <400> 49 ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaaccctggg gaaactgtca agatcacctg 60 ctccgggggt ggtagcagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt cacctagcag 120 tgcccctctc actgtgatct actggaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt 180 ctccggttcc aaatccggct ccacacacac attaaccatc actggggtcc aagccgagga 240 cgaggctgta tatttctgtg ggaatgatga ctacagcagt gatagtggat atgtcggtgt 300 atttggggcc gggacaaccc tgaccgtcct a 331 <210> 50 <211> 312 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL <400> 50 gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacctggaag gaaccgtcga gatcacctgc 60 tccgggagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt ctcctggcag tgcccctgtc 120 actgtgatct atcagaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt ctccggttcc 180 aaatccggct ccacgggcac attaaccatc actggggtcc aagtcgagga cgaggctgtc 240 tattactgtg ggagtgaaga cagcagcact cttgctggta tatttggggc cgggacaacc 300 ctgaccgtcc ta 312 <210> 51 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M3 mutant <400> 51 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ile Glu Glu Arg Ser Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 52 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M4 mutant <400> 52 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Val Lys Cys Ser Cys Phe Pro Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 53 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M5 mutant <400> 53 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Asn Lys Pro Ser Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 54 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M6 mutant <400> 54 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Leu Gln Arg Trp Trp 50 55 60 Cys Gln Met Glu Leu Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 55 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M7 mutant <400> 55 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Glu Cys Lys Thr Leu Pro 65 70 75 80 Asp Asn Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 56 <211> 101 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M8 mutant <400> 56 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Ser Cys Ser Ser Gly Asn Lys Ile Lys 85 90 95 Thr Thr Thr Val Ser 100 <210> 57 <211> 459 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody HC <400> 57 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp 100 105 110 Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser 115 120 125 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 130 135 140 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 145 150 155 160 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 165 170 175 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 180 185 190 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 195 200 205 Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 210 215 220 Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 225 230 235 240 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 245 250 255 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 260 265 270 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 275 280 285 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 290 295 300 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 305 310 315 320 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 325 330 335 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 340 345 350 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 355 360 365 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 370 375 380 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 385 390 395 400 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 405 410 415 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 420 425 430 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 435 440 445 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 <210> 58 <211> 461 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody HC <400> 58 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val 35 40 45 Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val 50 55 60 Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val 100 105 110 Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile 115 120 125 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 130 135 140 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 145 150 155 160 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 165 170 175 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 180 185 190 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 195 200 205 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 210 215 220 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 225 230 235 240 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 245 250 255 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 275 280 285 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 305 310 315 320 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 340 345 350 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 385 390 395 400 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 420 425 430 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 59 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody HC <400> 59 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp 100 105 110 Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 60 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody HC <400> 60 Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly 100 105 110 Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His 115 120 125 Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 145 150 155 160 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 210 215 220 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 225 230 235 240 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 245 250 255 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 260 265 270 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 280 285 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 305 310 315 320 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 340 345 350 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 355 360 365 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 370 375 380 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 385 390 395 400 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460 Gly Lys 465 <210> 61 <211> 211 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody LC <400> 61 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln 20 25 30 Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu 35 40 45 Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser 50 55 60 Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val 65 70 75 80 Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly 85 90 95 Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 100 105 110 Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 115 120 125 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 130 135 140 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 145 150 155 160 Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 165 170 175 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 180 185 190 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 195 200 205 Gly Glu Cys 210 <210> 62 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody LC <400> 62 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr 20 25 30 Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly 85 90 95 Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 63 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody LC <400> 63 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val 1 5 10 15 Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp 20 25 30 Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp 35 40 45 Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys 50 55 60 Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp 65 70 75 80 Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly 85 90 95 Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 64 <211> 211 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody LC <400> 64 Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val 1 5 10 15 Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln 20 25 30 Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys 35 40 45 Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser 50 55 60 Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val 65 70 75 80 Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly 85 90 95 Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 100 105 110 Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 115 120 125 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 130 135 140 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 145 150 155 160 Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 165 170 175 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 180 185 190 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 195 200 205 Gly Glu Cys 210 <210> 65 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP1 Epitope <400> 65 Ile Val Thr Leu Asp 1 5 <210> 66 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP2 Epitope <400> 66 Asp Ser Ser Gln Pro 1 5 <210> 67 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP3 Epitope <400> 67 Arg Thr Ile Ala Arg 1 5 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP4 Epitope <400> 68 Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys 1 5 <210> 69 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP5 Epitope <400> 69 Ala Arg Pro Ala 1 <210> 70 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP6 Epitope <400> 70 Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu 1 5 <210> 71 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP7 Epitope <400> 71 Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg 1 5 <210> 72 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> EP8 Epitope <400> 72 Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg 1 5 <210> 73 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-01-BSA (#1) <400> 73 Thr Ala Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 74 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-02-BSA (#2) <400> 74 Thr Leu Ala Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 75 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-03-BSA (#3) <400> 75 Thr Leu Asp Arg Ala Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 76 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-04-BSA (#4) <400> 76 Thr Leu Asp Arg Asp Ala Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 77 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-05-BSA (#5) <400> 77 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ala Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 78 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-06-BSA (#6) <400> 78 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Ala Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 79 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-07-BSA (#7) <400> 79 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Ala Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 80 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-08-BSA (#8) <400> 80 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ala Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 81 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-09-BSA (#9) <400> 81 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Ala Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 82 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-10-BSA (#10) <400> 82 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ala Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 83 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-11-BSA (#11) <400> 83 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Arg Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 84 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-12-BSA (#12) <400> 84 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Ala Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 85 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2-12-BSA (#13) <400> 85 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Val Arg Cys 20 <210> 86 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Wild-type FAM19A5 Isoform 2 (without signal peptide) <400> 86 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 87 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M1 mutant <400> 87 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Val Ile 1 5 10 15 Ala Ala His Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 88 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M2 mutant <400> 88 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Cys Cys Asn Lys Asn Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 65 70 75 80 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 85 90 95 Thr Thr Val Ser 100 <210> 89 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12 antibodyVH CDR1 <400> 89 Thr Tyr Ala Val Thr 1 5 <210> 90 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVH CDR2 <400> 90 Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 91 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVH CDR3 <400> 91 Asp Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro 1 5 10 15 <210> 92 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12 antibodyVL CDR1 <400> 92 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser 1 5 10 <210> 93 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVL CDR2 <400> 93 Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVL CDR3 <400> 94 Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn Val Trp Asn Ala 1 5 10 <210> 95 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVH CDR1 <400> 95 Ser Ser Asn Trp Trp Ser 1 5 <210> 96 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVH CDR2 <400> 96 Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly 1 5 10 15 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVH CDR3 <400> 97 Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val 1 5 <210> 98 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVL CDR1 <400> 98 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 99 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVL CDR2 <400> 99 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 100 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVL CDR3 <400> 100 Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val 1 5 <210> 101 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVH CDR1 <400> 101 Gly Tyr Ser Trp Thr 1 5 <210> 102 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVH CDR2 <400> 102 Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 103 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVH CDR3 <400> 103 Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 104 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVL CDR1 <400> 104 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVL CDR2 <400> 105 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 106 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVL CDR3 <400> 106 Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 107 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVH CDR1 <400> 107 Ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVH CDR2 <400> 108 Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 109 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVH CDR3 <400> 109 Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val 1 5 10 <210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVL CDR1 <400> 110 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser Leu Asn 1 5 10 <210> 111 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVL CDR2 <400> 111 Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVL CDR3 <400> 112 Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg Thr 1 5 <210> 113 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVH CDR1 <400> 113 Ser Asp Tyr Met Ser 1 5 <210> 114 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVH CDR2 <400> 114 Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 115 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVH CDR3 <400> 115 Gly Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu 1 5 10 <210> 116 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVL CDR1 <400> 116 Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVL CDR2 <400> 117 Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 118 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVL CDR3 <400> 118 Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Thr Gly Leu Thr 1 5 10 <210> 119 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVH CDR1 <400> 119 Thr Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 120 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVH CDR2 <400> 120 Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 121 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVH CDR3 <400> 121 Gly Asp Ser Phe Gly Tyr Gly Leu 1 5 <210> 122 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVL CDR1 <400> 122 Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 123 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVL CDR2 <400> 123 Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser 1 5 <210> 124 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVL CDR3 <400> 124 Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn Tyr Gln Tyr Val 1 5 10 <210> 125 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVH CDR1 <400> 125 Asn Tyr Tyr Met Gly 1 5 <210> 126 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVH CDR2 <400> 126 Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 127 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVH CDR3 <400> 127 Ile Asp Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp 1 5 10 15 Leu <210> 128 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVL CDR1 <400> 128 Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 129 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVL CDR2 <400> 129 Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 130 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVL CDR3 <400> 130 Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Ile Thr 1 5 10 <210> 131 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVH CDR1 <400> 131 Gly Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 132 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVH CDR2 <400> 132 Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 133 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVH CDR3 <400> 133 Val Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 134 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVL CDR1 <400> 134 Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser 1 5 10 <210> 135 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVL CDR2 <400> 135 Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 136 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVL CDR3 <400> 136 Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser Thr Gly Thr His Leu Thr 1 5 10 <210> 137 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVH CDR1 <400> 137 Asn Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 138 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVH CDR2 <400> 138 Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 139 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVH CDR3 <400> 139 Arg Gly Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile 1 5 10 <210> 140 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVL CDR1 <400> 140 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 141 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVL CDR2 <400> 141 Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 142 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVL CDR3 <400> 142 Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala Ala Tyr Val Gly Asn Ala 1 5 10 <210> 143 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVH CDR1 <400> 143 Ser Tyr Tyr Met Asn 1 5 <210> 144 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVH CDR2 <400> 144 Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 145 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVH CDR3 <400> 145 Thr Val Ser Gly Tyr Phe Asp Ile 1 5 <210> 146 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVL CDR1 <400> 146 Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 147 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVL CDR2 <400> 147 Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 148 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVL CDR3 <400> 148 Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 149 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVH CDR1 <400> 149 Ser Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 150 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVH CDR2 <400> 150 Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 151 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVH CDR3 <400> 151 Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro 1 5 <210> 152 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVL CDR1 <400> 152 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Lys Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 153 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVL CDR2 <400> 153 Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 154 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVL CDR3 <400> 154 Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala 1 5 10 <210> 155 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVH <400> 155 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala 20 25 30 Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp 85 90 95 Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 156 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVH <400> 156 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 157 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVH <400> 157 Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr 20 25 30 Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 158 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVH <400> 158 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 159 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVH <400> 159 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 160 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVH <400> 160 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp 85 90 95 Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser <210> 161 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVH <400> 161 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr 20 25 30 Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp 85 90 95 Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 162 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVH <400> 162 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile 65 70 75 80 Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val 85 90 95 Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu 115 120 <210> 163 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVH <400> 163 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly 35 40 45 Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly 85 90 95 Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val 100 105 110 Thr Val Ser Leu 115 <210> 164 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVH <400> 164 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Val 85 90 95 Ser Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Leu <210> 165 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVH <400> 165 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys 65 70 75 80 Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg 85 90 95 Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser <210> 166 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVL <400> 166 Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn 85 90 95 Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 167 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4antibodyVL <400> 167 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 168 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7antibodyVL <400> 168 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 169 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9antibodyVL <400> 169 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys 100 105 <210> 170 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03antibodyVL <400> 170 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 171 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08antibodyVL <400> 171 Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn 85 90 95 Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr 100 105 110 <210> 172 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02antibodyVL <400> 172 Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 173 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01antibodyVL <400> 173 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 174 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03antibodyVL <400> 174 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala 85 90 95 Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu 100 105 110 <210> 175 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07antibodyVL <400> 175 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 176 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11antibodyVL <400> 176 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys 85 90 95 Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile 100 105 110 Leu <210> 177 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVH <400> 177 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcaccgtct ctggattctc cctcagtacc tatgcagtga cctgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggatacatt aattggcgtg gtgggacatc ctacgcgaac 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagatgc tagtagtggt 300 gctgcttttg ggtcttacgg catggacccc tggggcccag ggaccctcgt caccgtctct 360 tca 363 <210> 178 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVL <400> 178 gagctcgata tgacccagac tccatcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agctacttat cctggtatca gcagaaacca 120 gggcagcctc ccaagctcct gatctatgaa gcatccaaac tggcctctgg ggtcccatcg 180 cggttcagcg gcagtggata tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240 gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatagta gtactaatgt ttggaatgct 300 ttcggcggag gcaccaatgt ggaaatcaaa 330 <210> 179 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12 HC <400> 179 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala 20 25 30 Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp 85 90 95 Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 180 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4 HC <400> 180 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 181 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7 HC <400> 181 Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr 20 25 30 Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 182 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9 HC <400> 182 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 183 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03 HC <400> 183 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met 65 70 75 80 Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly 85 90 95 Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 184 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08 HC <400> 184 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp 85 90 95 Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 115 120 125 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 180 185 190 Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 185 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02 HC <400> 185 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr 20 25 30 Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp 85 90 95 Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 186 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01 HC <400> 186 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile 65 70 75 80 Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val 85 90 95 Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly 100 105 110 Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 187 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03 HC <400> 187 Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp 20 25 30 Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly 35 40 45 Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly 85 90 95 Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val 100 105 110 Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 188 <211> 443 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07 HC <400> 188 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr 20 25 30 Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Val 85 90 95 Ser Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 115 120 125 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 130 135 140 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 145 150 155 160 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 180 185 190 Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp 195 200 205 Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 189 <211> 444 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11 HC <400> 189 Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys 65 70 75 80 Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg 85 90 95 Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val 100 105 110 Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser 115 120 125 Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys 130 135 140 Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu 145 150 155 160 Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 180 185 190 Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 190 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12 LC <400> 190 Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn 85 90 95 Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 191 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13B4 LC <400> 191 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 192 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 13F7 LC <400> 192 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 193 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9 LC <400> 193 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 194 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03 LC <400> 194 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 195 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08 LC <400> 195 Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn 85 90 95 Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 196 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02 LC <400> 196 Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 197 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01 LC <400> 197 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 198 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03 LC <400> 198 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala 85 90 95 Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu 100 105 110 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 199 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07 LC <400> 199 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 200 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11 LC <400> 200 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys 85 90 95 Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile 100 105 110 Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220

Claims (13)

  1. 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5) 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제") 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 섬유증 관련 종양의 완화 또는 치료; 또는 혈관 정상화를 통한 종양의 완화 또는 치료용 제약학적 조성물로서,
    상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터인 것이며,
    상기 항-FAM19A5 항체는 QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO: 5, 에피토프 F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO: 7, 에피토프 F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO: 8, 에피토프 F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9, 에피토프 F5), 또는 NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO: 10, 에피토프 F6)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 46 내지 51(즉, DSSQPR), 아미노산 잔기 46, 50, 및 52(즉, D---P-R), 또는 아미노산 잔기 46, 47, 48, 및 50(즉, DSS-P)에 해당하는 하나 이상의 아미노산에서 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 99 내지 107(즉, EGCDLLINR), 아미노산 잔기 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), 아미노산 잔기 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 또는 아미노산 잔기 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에 해당하는 하나 이상의 아미노산에서 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편에 결합하는 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 40에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서, 혈관 정상화는 (i) 감소된 혈관 투과성, (ii) 증가된 혈관벽 두께, (iii) 개선된 연결성, (iv) 증가된 혈류량, 또는 (iv) 이들의 임의의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  8. 제 1 항에 있어서, FAM19A5 길항제는 (i) 대상의 종양으로 연장되는 혈관의 수를 증가시키거나, (ii) 대상의 종양으로의 면역 세포의 침윤을 증가시키거나, (iii) 대상의 종양으로의 골수-유래 억제제 세포(MDSCs)의 모집을 감소시키거나, (iv) 대상의 종양 내 면역 세포의 식세포 활성 또는 미토콘드리아 막 전위를 증진시키거나, 또는 (v) 이들의 임의의 조합을 수행하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  9. 제 1 항에 있어서, 상기 섬유증 관련 종양은 간암, 폐암, 신암, 유방암, 췌장암, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 인간화된 항체, 키메라 항체, 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  11. 제 1 항에 있어서, FAM19A5 길항제는 면역치료제, 화학치료제, 표적화 치료제, 또는 방사선치료제를 포함하는 추가의 암 제제와 조합하여 사용되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  12. 제 1 항에 있어서, 종양은 암종, 육종, 또는 림프종을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  13. 제 1 항에 있어서, 종양은 흑색종, 췌장암, 유방암, 림프종, 폐암, 신장암, 전립선암, 섬유육종, 결장 선암종, 간암, 난소암, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 암으로부터 유래되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
KR1020237033663A 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도 KR20230142819A (ko)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762525633P 2017-06-27 2017-06-27
US62/525,633 2017-06-27
US201762582886P 2017-11-07 2017-11-07
US62/582,886 2017-11-07
US201762597920P 2017-12-12 2017-12-12
US62/597,920 2017-12-12
KR1020227006389A KR20220031738A (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도
PCT/IB2018/054784 WO2019003164A1 (en) 2017-06-27 2018-06-27 USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCERS

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227006389A Division KR20220031738A (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230142819A true KR20230142819A (ko) 2023-10-11

Family

ID=64741255

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227006389A KR20220031738A (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도
KR1020237033663A KR20230142819A (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도
KR1020197027050A KR102454460B1 (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227006389A KR20220031738A (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020197027050A KR102454460B1 (ko) 2017-06-27 2018-06-27 암 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11560425B2 (ko)
EP (1) EP3645040A4 (ko)
JP (2) JP7012384B2 (ko)
KR (3) KR20220031738A (ko)
CN (1) CN111093700A (ko)
AU (1) AU2018291081A1 (ko)
CA (1) CA3067416A1 (ko)
WO (1) WO2019003164A1 (ko)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106350533B (zh) * 2015-10-09 2020-07-17 上海宇研生物技术有限公司 Anti-PD-L1-CAR-T及其制备方法和应用
IL265800B2 (en) 2016-10-11 2023-10-01 Agenus Inc Anti-LAG-3 antibodies and methods of using them
KR102539159B1 (ko) * 2016-11-07 2023-06-02 주식회사 뉴라클사이언스 서열 유사성을 가진 항-패밀리 19, 멤버 a5 항체 및 그것의 사용 방법
KR102574549B1 (ko) * 2017-06-27 2023-09-07 주식회사 뉴라클사이언스 항-fam19a5 항체 및 이의 용도
CN110972463A (zh) 2017-06-27 2020-04-07 纽洛可科学有限公司 抗序列相似家族19成员a5抗体在治疗青光眼中的用途
EP3645040A4 (en) 2017-06-27 2021-05-05 Neuracle Science Co., Ltd USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCERS
WO2019003159A1 (en) * 2017-06-27 2019-01-03 Neuracle Science Co., Ltd. USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF FIBROSIS
JP7051150B2 (ja) * 2017-10-02 2022-04-11 ニューラクル サイエンス カンパニー リミテッド 気分障害の治療及び診断のための抗－配列類似性１９を持つファミリー、メンバーａ５抗体の用途
MX2021004504A (es) * 2019-01-02 2021-10-01 Neuracle Science Co Ltd Anti-familia con similitud de secuencia 19, anticuerpos del miembro a5 y método de uso de los mismos.

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
IL129242A0 (en) 1996-10-01 2000-02-17 Cima Labs Inc Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
AU725143B2 (en) 1996-10-17 2000-10-05 Oxford Biomedica (Uk) Limited Retroviral vectors
GB9621680D0 (en) 1996-10-17 1996-12-11 Oxford Biomedica Ltd Lentiviral vectors
GB9622500D0 (en) 1996-10-29 1997-01-08 Oxford Biomedica Ltd Therapeutic gene
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
JP4395200B2 (ja) 1997-10-28 2010-01-06 バンドー化学株式会社 皮膚貼付薬シート及びそのための基材シートの製造方法
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
WO2001014556A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Novel b7-4 molecules and uses therefor
WO2001039722A2 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h1, a novel immunoregulatory molecule
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
MX2007006117A (es) 2004-11-23 2007-07-13 Pip Co Ltd Caja de llave de servicio de agua empotrada en la pared.
CN105315373B (zh) 2005-05-09 2018-11-09 小野药品工业株式会社 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法
CA2651376A1 (en) * 2005-05-11 2006-11-16 Aarhus Universitet Method for diagnosis and treatment of a mental disease
KR101607288B1 (ko) 2005-07-01 2016-04-05 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체
US20090028857A1 (en) 2007-07-23 2009-01-29 Cell Genesys, Inc. Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof
WO2009114335A2 (en) 2008-03-12 2009-09-17 Merck & Co., Inc. Pd-1 binding proteins
SG196798A1 (en) 2008-12-09 2014-02-13 Genentech Inc Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
BRPI1006998A2 (pt) 2009-01-23 2015-08-25 Biogen Idec Inc Polipeptídeos fc estabilizados com função efetora reduzida e métodos de uso
CA2778714C (en) 2009-11-24 2018-02-27 Medimmune Limited Targeted binding agents against b7-h1
EP2545381A1 (en) 2010-03-10 2013-01-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Cellular blood markers for early diagnosis of als and for als progression
US8907053B2 (en) 2010-06-25 2014-12-09 Aurigene Discovery Technologies Limited Immunosuppression modulating compounds
US9670547B2 (en) * 2010-09-15 2017-06-06 Almac Diagnostics Limited Molecular diagnostic test for cancer
ES2669310T3 (es) 2011-04-20 2018-05-24 Medimmune, Llc Anticuerpos y otras moléculas que se unen con B7-H1 y PD-1
PT2785375T (pt) 2011-11-28 2020-10-29 Merck Patent Gmbh Anticorpos anti-pd-l1 e usos destes
PL2815769T3 (pl) * 2012-02-15 2021-05-04 Neuracle Science Co., Ltd. FAM19A5 do zastosowania w diagnostyce i leczeniu uszkodzeń OUN
SG10201700698WA (en) 2012-05-15 2017-02-27 Bristol Myers Squibb Co Cancer immunotherapy by disrupting pd-1/pd-l1 signaling
WO2015015000A1 (en) 2013-08-02 2015-02-05 Université Catholique de Louvain Signature of cycling hypoxia and use thereof for the prognosis of cancer
KR101802411B1 (ko) 2015-02-17 2017-11-29 울산대학교 산학협력단 Ｆａｍ１９ａ５ 단백질을 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물 및 이를 이용한 비만 치료제의 스크리닝 방법
KR101885238B1 (ko) 2015-11-30 2018-08-06 주식회사 뉴라클사이언스 스펙신 기반 갈라닌 ２형 수용체의 효현제 및 이의 용도
KR102539159B1 (ko) * 2016-11-07 2023-06-02 주식회사 뉴라클사이언스 서열 유사성을 가진 항-패밀리 19, 멤버 a5 항체 및 그것의 사용 방법
KR102574549B1 (ko) * 2017-06-27 2023-09-07 주식회사 뉴라클사이언스 항-fam19a5 항체 및 이의 용도
EP3645040A4 (en) 2017-06-27 2021-05-05 Neuracle Science Co., Ltd USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCERS
WO2019003159A1 (en) 2017-06-27 2019-01-03 Neuracle Science Co., Ltd. USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF FIBROSIS
CN110972463A (zh) 2017-06-27 2020-04-07 纽洛可科学有限公司 抗序列相似家族19成员a5抗体在治疗青光眼中的用途
JP7051150B2 (ja) 2017-10-02 2022-04-11 ニューラクル サイエンス カンパニー リミテッド 気分障害の治療及び診断のための抗－配列類似性１９を持つファミリー、メンバーａ５抗体の用途
CN112424223A (zh) 2018-04-24 2021-02-26 纽洛可科学有限公司 抗序列相似家族19成员a5的抗体在治疗神经性疼痛中的用途
CA3098807A1 (en) * 2018-05-08 2019-11-14 Neuracle Science Co., Ltd. Adeno-associated virus (aav) delivery of anti-fam19a5 antibodies
CN112119091A (zh) 2018-05-10 2020-12-22 纽洛可科学有限公司 抗序列相似家族19成员a5的抗体及其使用方法
JP7211610B2 (ja) 2018-10-16 2023-01-24 ニューラクル サイエンス カンパニー リミテッド 抗ｆａｍ１９ａ５抗体の用途

Also Published As

Publication number Publication date
US20200223914A1 (en) 2020-07-16
US11560425B2 (en) 2023-01-24
CN111093700A (zh) 2020-05-01
JP2020525505A (ja) 2020-08-27
JP7282401B2 (ja) 2023-05-29
JP7012384B2 (ja) 2022-02-14
EP3645040A1 (en) 2020-05-06
US20230348584A1 (en) 2023-11-02
JP2021088593A (ja) 2021-06-10
KR102454460B1 (ko) 2022-10-17
WO2019003164A1 (en) 2019-01-03
KR20190109574A (ko) 2019-09-25
AU2018291081A1 (en) 2020-01-16
CA3067416A1 (en) 2019-01-03
KR20220031738A (ko) 2022-03-11
EP3645040A4 (en) 2021-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7282401B2 (ja) 癌治療のための抗ｆａｍ１９ａ５抗体の用途
US20210238285A1 (en) Treatment regimens using anti-nkg2a antibodies
JP7143452B2 (ja) ＣＤ４７とＳＩＲＰａの相互作用を遮断できる抗体及びその応用
KR102340832B1 (ko) 항 pd-1 항체 및 그의 용도
JP7374995B2 (ja) 抗ｐｄ－１／抗ｖｅｇｆａ二官能性抗体、その医薬組成物およびその使用
JP6552621B2 (ja) 抗ｐｄ−１抗体およびその使用方法
RU2756275C2 (ru) Антитела, специфические к рецептору полиовируса (pvr) человека
KR20210009308A (ko) 인간 넥틴4에 특이적인 항체
TW201726730A (zh) 抗ｌａｇ３抗體及其用途
CN111196852A (zh) 抗tigit抗体及其用途
KR102574549B1 (ko) 항-fam19a5 항체 및 이의 용도
CN113286634A (zh) 对gucy2c特异性的抗体及其用途
JP7102670B2 (ja) 抗ｐｄ‐ｌ１抗体とｉｌ‐７との融合
KR102573257B1 (ko) 섬유증의 치료를 위한 항-fam19a5 항체의 용도
KR20190109575A (ko) 녹내장의 치료를 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 a5 항체의 용도
CN114181310B (zh) 抗tigit抗体、其药物组合物及用途
KR20240000655A (ko) 죽상경화증을 치료하기 위한 항-fam19a5 항체의 사용
US20230391883A1 (en) Methods of Cancer Treatment Using Anti-TIGIT Antibodies in Combination with Anti-PD1 Antibodies
KR20240038043A (ko) 약학적 조성물 및 용도
JP2021504492A (ja) 癌治療のための組成物および方法

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent