KR20240038043A - 약학적 조성물 및 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 항체의 중쇄 가변 영역은 서열번호 3-5의 아미노산 서열로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3을 포함하고; 상기 항체의 경쇄 가변 영역은 서열번호 8-10의 아미노산 서열로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3을 포함한다.
Description
본 발명은 의학 분야에 속하며, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
TIGIT(T cell Ig and ITIM domain, WUCAM, Vstm3, VSIG9라고도 함)는 폴리오바이러스 수용체(PVR)/Nectin 패밀리의 구성원이다. TIGIT는 세포외 면역글로불린 가변 영역(IgV) 도메인, I형 막횡단 도메인 및 고전적인 면역 수용체 티로신 억제 모티프(ITIM) 및 면역글로불린 티로신 테일(ITT) 모티프를 갖는 세포내 도메인으로 구성된다. TIGIT는 림프구, 특히 이펙터 및 조절 CD4+ T 세포, 여포 보조 CD4+ T 세포, 이펙터 CD8+ T 세포 및 자연 살해(NK) 세포에서 고도로 발현된다(Yu X, Harden K, Gonzalez L C, et al. The surface protein TIGIT suppresses T cell activation by promoting the generation of mature immunoregulatory dendritic cells[J]. Nature immunology, 2009, 10(1):48).
CD155(PVR, Necl5 또는 Tage4라고도 함), CD112(PVRL2/nectin 2라고도 함) 및 CD113(PVRL3이라고도 함)은 TIGIT 결합 리간드이며(Martinet L, Smyth M J. Balancing natural killer cell activation through paired receptors[J]. Nature Reviews Immunology, 2015, 15(4):243-254), 여기서 CD155는 TIGIT의 고친화성 리간드이다. NK 세포에서, TIGIT 결합 리간드 CD155 및 CD112는 TIGIT 고발현 세포에 대한 NK 세포의 살상 작용을 억제할 수 있다(Stanietsky N, Simic H, Arapovic J, et al. The interaction of TIGIT with PVR and PVRL2 inhibits human NK cell cytotoxicity[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2009, 106(42):17858-17863). 일부 보고에 따르면, PD-1과 TIGIT를 동시에 차단하면 CD8+ T 세포의 살상 작용을 향상시킬 수 있는 것으로 나타났다(Johnston R J, Comps-Agrar L, Hackney J, et al. The immunoreceptor TIGIT regulates 항tumor and 항viral CD8+ T cell effector function[J]. Cancer cell, 2014, 26(6):923-937). 최근 연구에서는 TIGIT가 NK 세포의 면역 관문으로서 종양 발달 과정에서 억제성 수용체인 TIGIT가 NK 세포 고갈을 유발할 수 있는 것을 발견하였으며, 항-TIGIT 단클론 항체가 NK 세포 고갈을 역전시키고 다양한 종양의 면역 치료에 사용될 수 있음을 입증하였다(Zhang Q, Bi J, Zheng X, et al. Blockade of the checkpoint receptor TIGIT prevents NK cell exhaustion and elicits potent 항-tumor immunity[J]. Nature immunology, 2018, 19(7):723-732).
또한, 일부 보고에 따르면, TIGIT 차단제는 단독으로 또는 PD-1 차단제와의 병용에 CD96 차단제를 추가하여 야생형 및 Cd155-/- 마우스 모델에서 B16 흑색종의 성장을 현저하게 감소시킬 수 있다(Li X-Y, Das I, Lepletier A, et al. Cd155 loss enhances tumor suppression via combined host and tumor-intrinsic mechanisms. J Clin Invest 2018; 128:2613-25). CD112R 차단제는 단독으로 또는 TIGIT 차단제 및/또는 PD-1 차단제와 병용하여 난소 종양, 자궁내막 종양 및 폐 종양에서 TIL의 사이토카인 생산 능력을 증가시킬 수 있다(Whelan S, Ophir E, Kotturi MF, et al. PVRIG and PVRL2 Are Induced in Cancer and Inhibit CD8+ T-cell Function. Cancer Immunol Res 2019; 7:257-68).
항-TIGIT 항체 약물은 새로운 면역 관문 항체 약물로서 광범위한 응용 전망을 가지며, 종양의 면역 치료에 사용될 수 있다. 제약회사 로슈(Roche)에서 개발된 티라고루맙(Tiragolumab)은 이미 임상 3상 단계에 처해 있으며, 보고에 따르면 TIGIT 단클론 항체 티라고루맙(Tiragolumab)과 PD-L1 약물 티센트릭(Tecentriq)(아테졸리주맙, Atezolizumab)의 병용을 1차 요법으로 사용하고, PD-L1 양성 전이성 비소세포폐암(NSCLC) 환자의 치료를 위한 2상 임상 연구에서 티라고루맙(Tiragolumab)과 티센트릭(Tecentriq)의 조합은 내수성이 우수하고 질환 진행 위험을 43% 감소시키며 병용 효과가 현저한 것을 발견하였다(Exit C. Roche to present first clinical data on novel 항-TIGIT cancer immunotherapy tiragolumab at ASCO[J]). 기존 임상 정보 기록에는 TIGIT가 비소세포폐암, 소세포폐암, 유방암, 난소암, 결장직장암, 흑색종, 췌장암, 자궁경부 종양, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 형질세포종의 치료를 위한 중요한 표적인 것으로 나와 있다.
막횡단 수용체 PD-1(세포예정사-1)은 CD28 유전자 패밀리의 구성원이며, 활성화된 T 세포, B 세포 및 골수 세포에서 발현된다. PD-1의 리간드 PDL1(Programmed cell death 1 ligand 1, 약칭: PDL-1) 및 PDL2(Programmed cell death 1 ligand 2, 약칭: PDL-2)는 모두 B7 슈퍼패밀리에 속하며, 여기서 PDL1은 T 세포, B 세포, 내피 세포 및 상피 세포를 포함한 다양한 세포에서 발현되고, PDL2는 수지상 세포 및 대식 세포와 같은 항원 제시 세포에서만 발현된다.
PD-1/PDL1 신호 경로는 면역 내성, 미생물 감염 및 종양 면역 회피를 조절하는 데 중요한 작용을 발휘한다. PD-1은 주로 T 세포와 같은 면역 세포에서 발현되고, PD-1의 리간드 PDL1은 주로 많은 인간 종양 조직에서 고도로 발현된다. PD-1/PDL1 신호 경로를 차단하면 억제된 T 세포를 활성화시켜 암 세포를 공격할 수 있다. PD-1/PDL1 신호를 차단하면 종양 항원 특이적 T 세포의 증식을 촉진하고 종양 세포의 살상 작용을 발휘하여 국소 종양 성장을 억제할 수 있다(Julie R et al., 2012, N Engl J Med. 366:2455-2465). 또한, PDL1 고발현 종양에는 검출하기 어려운 암이 동반된다(Hamanishi et al., 2007, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104:3360-5). 효과적인 구현 방법은 체내에서 항-PD-1 항체를 주사하여 PD-1의 발현을 조절하는 것이다. PD-1 항체의 광범위한 항종양 전망과 놀라운 약효로 인해 업계에서는 일반적으로 PD-1 경로를 표적으로 하는 항체가 다양한 종양 치료에 획기적인 발전을 가져올 것이라고 믿고 있으며, 예를 들어 비소세포폐암, 신세포암, 난소암, 흑색종(Homet M. B., Parisi G., et al., 2015, Semin Oncol. 42(3):466-473), 백혈병 및 빈혈(Held SA, Heine A, et al., 2013, Curr Cancer Drug Targets. 13(7):768-74)을 치료하는 데 사용된다.
세포독성 T 림프구 관련 항원-4(cytotoxic T lymphocyte sociated 항gen 4, 약칭: CTLA4)와 CD28 분자는 유전자 구조, 염색체 위치, 서열 상동성 및 유전자 발현 측면에서 매우 유사한 관계를 가지고 있으며, 모두 공동자극분자 B7의 수용체로 주로 활성화된 T 세포 표면에서 발현된다. CTLA4는 B7에 결합한 후 마우스 및 인간 T 세포의 활성화를 억제할 수 있고, T 세포 활성화에서 음성 조절 작용을 한다.
CTLA4 항체(또는 항-CTLA4 단클론 항체) 또는 CTLA4 리간드는 CTLA4가 이의 천연 리간드에 결합하는 것을 방지함으로써 T 세포 음성 조절 신호에 대한 CTLA4의 전달을 차단하고 다양한 항원에 대한 T 세포의 반응성을 향상시킬 수 있으며, 이 측면에서 생체내 및 생체외 연구 결과는 기본적으로 일치하다. 현재 CTLA4 단클론 항체는 임상 시험 단계에 처해 있거나 전립선암, 방광암, 직장결장암, 위장관암, 간암, 악성 흑색종 등의 치료용으로 승인되었다(Grosso JF., Jure-Kunkel MN., 2013, Cancer Immun. 13:5.).
인터루킨-2(IL-2)는 T 세포에 의해 생산되고, T 세포 아집단을 조절하는 성장 인자이자 면역 반응을 조절하는 중요한 인자이며, 활성화된 B 세포의 증식을 촉진하고 항체 반응, 조혈 및 종양 감시에 참여할 수 있다. 재조합 인간 IL-2는 악성 종양(흑색종, 신장 종양 등 포함) 치료용으로 미국 FDA의 승인을 받았고, 현재 만성 바이러스 감염 치료에 대한 임상 연구가 진행 중이다(Chavez, A.R., et al., 2009, Ann N Y Acad Sci, 1182: p. 14-27). CTLA4 및 CTLA4 항체는 T 세포 기능 상태에 영향을 미치는 중요한 요소로서 유기체의 면역 미세환경을 방해한다. 생체외 및 생체내 시험에서 CTLA4 항체는 CTLA4의 유기체 면역 억제를 특이적으로 해제하고 T 세포를 활성화하며 IL-2 생산을 유도할 수 있고, 종양 및 기생충 등 질환에 대한 유전자 치료에 광범위한 응용 전망을 가지고 있다.
요약하면, 독성이 보다 낮고, 보다 효과적인 치료 수단 및 병용 투여 치료 방안의 개발은 임상적으로 매우 유의미하다.
본 발명자는 심층적인 연구와 창의적인 노력을 통해 포유동물 세포 발현 시스템을 이용해 재조합 인간 TIGIT를 발현하여 항원으로 사용하여 마우스를 면역화시키고, 마우스의 비장 세포와 골수종 세포를 융합시켜 하이브리도마 세포를 얻었다. 발명자는 대량의 샘플을 스크리닝하여 하이브리도마 세포주 LT019(수탁번호는 CCTCC NO: C2020208임)를 얻었다.
본 발명자는 놀랍게도 하이브리도마 세포주 LT019가 인간 TIGIT에 특이적으로 결합하는 특이적 단클론 항체(26B12로 명명)를 분비하고 생산할 수 있으며, 상기 단클론 항체가 TIGIT에 매우 효과적으로 결합하고 면역 세포에 대한 TIGIT의 억제 작용을 감소시키며 T 세포 활성을 촉진하고 NK 세포 고갈을 역전시키며 종양에 대한 면역 세포의 살상 작용을 향상시킬 수 있다는 것을 발견하였다. 추가로, 본 발명자는 항인간 TIGIT의 인간화 항체(26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4로 명명)를 창의적으로 제조하였다.
또한, 본 발명자는 놀랍게도 본 발명의 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4가 TIGIT에 결합하는 활성을 가지고 매우 강한 친화력을 가지며; 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4가 TIGIT의 활성을 효과적으로 감소시킬 수 있다는 것을 발견하였다.
이로부터 하기와 같은 발명을 제공한다.
본 발명의 일 양태는 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것으로,
상기 항-TIGIT 항체는 서열번호 1로 표시되는 중쇄 가변 영역에 포함되는 HCDR1-HCDR3 및 서열번호 6으로 표시되는 경쇄 가변 영역에 포함되는 LCDR1-LCDR3을 포함하고,
바람직하게는, IMGT 넘버링 시스템에 따라, 상기 항체의 중쇄 가변 영역은 서열번호 3-5의 아미노산 서열로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3을 포함하고; 상기 항체의 경쇄 가변 영역은 서열번호 8-10의 아미노산 서열로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3을 포함한다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15 및 서열번호 17로부터 선택되고;
상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23 및 서열번호 25로부터 선택된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서,
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 11로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 19로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 17로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 19로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 13으로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 21로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 13으로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 23으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 15로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 21로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 15로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 23으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 11로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 25로 표시되며; 또는
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 17로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 25로 표시된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 비-CDR 영역을 포함하고, 상기 비-CDR 영역은 뮤린 이외의 종, 예를 들어 인간 항체에서 유래된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체의 중쇄 불변 영역은 Ig gamma-1 chain C region(예: NCBI ACCESSION: P01857)이고; 경쇄 불변 영역은 Ig kappa chain C region(예: NCBI ACCESSION: P01834)이다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, 상보성 결정 영역 단편, 단일 사슬 항체, 인간화 항체, 키메라 항체 또는 디아바디로부터 선택된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 4E-10 미만 또는 4E-11 미만의 KD로 TIGIT-mFc에 결합하고; 바람직하게는, 상기 KD는 Fortebio 분자 상호작용 분석기에 의해 측정된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 1.5nM 미만, 1.2nM 미만 또는 1nM 미만의 EC50으로 TIGIT-mFc에 결합하고; 바람직하게는, 상기 EC50은 유세포 분석기에 의해 측정된다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체는 단클론 항체이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체는 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체(예: 이중특이적 항체)이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, 상보성 결정 영역 단편, 단일 사슬 항체(예: scFv), 인간화 항체, 키메라 항체 또는 이중특이적 항체로부터 선택된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 하이브리도마 세포주 LT019에 의해 생산된 항체이며, 상기 하이브리도마 세포주 LT019는 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208이다.
본 발명의 다른 양태는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 코딩하는 분리된 핵산 분자에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 분리된 핵산 분자 또는 본 발명의 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태는 하이브리도마 세포주 LT019에 관한 것으로, 상기 하이브리도마 세포주 LT019는 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208이다.
본 발명의 또 다른 양태는 접합체에 관한 것으로, 상기 접합체는 항체 및 접합 부분을 포함하고, 상기 항체는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편이며, 상기 접합 부분은 검출 가능한 표지이고; 바람직하게는, 상기 접합 부분은 방사성 동위원소, 형광 물질, 발광 물질, 착색 물질 또는 효소이다.
본 발명의 또 다른 양태는 키트에 관한 것으로, 상기 키트는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 접합체를 포함하고;
바람직하게는, 상기 키트는 상기 항체를 특이적으로 인식하는 제2 항체를 더 포함하며; 선택적으로, 상기 제2 항체는 방사성 동위원소, 형광 물질, 발광 물질, 착색 물질 또는 효소와 같은 검출 가능한 표지를 더 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 어느 하나에 따른 항체 또는 본 발명의 접합체의 키트 제조에 있어서의 용도에 관한 것으로, 상기 키트는 샘플중에서의 TIGIT의 존재 또는 그 수준을 검출하는 데 사용된다.
본 발명의 또 다른 양태는 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 약학적 조성물은 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 접합체를 포함하고; 선택적으로, 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 더 포함한다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 약학적 조성물은 하나 이상의 항-PD-1 항체 또는 하나 이상의 항-PD-L1 항체, 예를 들어 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 더 포함한다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 약학적 조성물에서, 항체의 질량에 따라 계산하면, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 질량비는 (1:5)-(5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 또는 5:1이다.
본 발명의 또 다른 양태는 조합 제품(예: 키트)에 관한 것으로, 상기 조합 제품은 개별 포장된 제1 제품 및 제2 제품을 포함하고,
상기 제1 제품은 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 본 발명의 접합체 또는 본 발명의 어느 하나에 따른 약학적 조성물을 포함하며;
상기 제2 제품은 적어도 하나의 항-PD-1 항체 또는 적어도 하나의 항-PD-L1 항체, 예를 들어 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 포함하고;
바람직하게는, 상기 조합 제품은 개별 포장된 제3 제품을 더 포함하며, 상기 제3 제품은 하나 이상의 화학요법 약물을 포함하고,
바람직하게는, 상기 제1 제품 및 상기 제2 제품은 독립적으로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 보조제를 더 포함하며;
바람직하게는, 상기 조합 제품은 제품 설명서를 더 포함한다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 조합 제품에서, 항체의 질량에 따라 계산하면, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 질량비는 (1:5)-(5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 또는 5:1이다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 어느 하나에 따른 항체, 본 발명의 접합체, 본 발명의 어느 하나에 따른 약학적 조성물 또는 본 발명의 어느 하나에 따른 조합 제품의 종양의 치료 및/또는 예방용 약물의 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 어느 하나에 따른 항체, 본 발명의 접합체, 본 발명의 어느 하나에 따른 약학적 조성물 또는 본 발명의 어느 하나에 따른 조합 제품은 종양의 치료 및/또는 예방에 사용된다.
본 발명의 또 다른 양태는 종양의 치료 및/또는 예방 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 필요한 피험자에게 유효량의 본 발명의 어느 하나에 따른 항체, 본 발명의 접합체, 본 발명의 어느 하나에 따른 약학적 조성물 또는 본 발명의 어느 하나에 따른 조합 제품을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 종양(특히, 악성 종양) 또는 감염 또는 전염병의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 피험자에게 치료적 유효량의 항-TIGIT 항체를 투여하고, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체와 병용하는 단계를 포함하고, 보다 바람직하게는, 추가로 하나 이상의 약물(예: 화학요법제 또는 성장 억제제, 표적화 치료제, 항체-약물 접합체, 항대사 약물, 항생제, 식물성 항암 약물 및/또는 호르몬 약물, 아드리아마이신계, 타목시펜, 메게스트롤, 및/또는 아스파라기나제)과 병용하고, 바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 종양 화학요법 약물은 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 상기 화학요법제 또는 성장 억제제는 백금계 약물(예: 시스플라틴, 카보플라틴 또는 옥살리플라틴), 플루오로우라실계 항종양제, 시클로포스파미드, 페메트렉시드, 파클리탁셀, 빈블라스틴, 아드리아마이신계, 고세렐린, 알킬화제, 안트라사이클린, 항호르몬제, 아로마타제 억제제, 항남성호르몬제, 단백질 키나아제 억제제, 지질 키나아제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 항대사제, 토포이소머라아제 억제제, 세포독성제 또는 항종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항미세소관제, EGFR 길항제, 레티노이드, 티로신 키나아제 억제제, 히스톤 디아세틸라제 억제제 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 표적화 치료제는 B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, 비포스파티딜이노시톨 3-키나아제/mTOR 억제제 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 상기 항체-약물 접합체는 메이탄신, 모노메틸아우리스타틴 E, 칼리키아마이신, esperamicin 및 방사성 동위원서 킬레이트제로 이루어진 군으로부터 선택되는 약물을 포함한다.
본 발명은 종양(특히, 악성 종양)의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 피험자에게 치료적 유효량의 항-TIGIT 항체를 투여하고, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체와 병용하는 단계를 포함하고, 보다 바람직하게는, 추가로 하나 이상의 화학요법 약물과 병용하고, 바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 화학요법 약물은 동시에 또는 순차적으로 투여된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 종양은 췌장암, 유방암, 난소암, 결장직장암, 자궁경부 종양, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 형질세포종, 두경부암, 뇌암, 인후암, 비인두암, 식도암, 식도 편평세포암종, 갑상선암, 중피종, 선암(예: 췌장암, 유방암), 폐암(예: 소세포폐암, 소세포폐암), 유방암, 간암(예: 간세포암, 간담암), 위암, 위장관암, 대장암(예: 결장암, 결장직장암), 담도암(예: 담관암), 신장암, 나팔관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 요로상피암, 전립선암, 고환암, 피부암, 흑색종, 골수종(예: 다발성 골수종), 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 형질세포종, 백혈병, 림프종, 골암, 골육종, 연골육종, 고빈도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 고형 종양 중 하나 이상으로부터 선택된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는,
PD-1을 표적으로 하는 제1 단백질 기능 영역, 및
CTLA4를 표적으로 하는 제2 단백질 기능 영역을 포함하며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 면역글로불린이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이며; 또는, 상기 제1 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 면역글로불린이며;
상기 면역글로불린은 서열번호 27로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 29-31로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 32-34로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 및 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 35로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 37-39로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 36으로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 40-42로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하며;
또는,
상기 면역글로불린은 서열번호 35로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 37-39로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 36으로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 40-42로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 및 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 27로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 29-31로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 32-34로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함한다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27, 서열번호 43 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28, 서열번호 44 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며;
또는,
상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27, 서열번호 43 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28, 서열번호 44 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 이중특이적 항체는 하기 (1)-(20) 중 어느 하나로부터 선택되되,
(1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(2) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(3) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(4) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(5) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(6) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(7) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(8) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(9) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(10) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(11) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(12) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(13) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(14) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(15) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(16) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(17) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(18) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(19) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
및,
(20) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 53 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 54 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 제1 단백질 기능 영역과 상기 제2 단백질 기능 영역은 직접 연결되거나 연결 단편을 통해 연결되고; 및/또는 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역과 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역은 직접 연결되거나 연결 단편을 통해 연결된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 연결 단편은 (GGGGS)n이고, n은 양의 정수이며; 바람직하게는, n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 제1 단백질 기능 영역 및 제2 단백질 기능 영역은 독립적으로 1개, 2개 또는 2개 이상이다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 단일 사슬 항체(바람직하게는, 중쇄 가변 영역)는 면역글로불린의 중쇄의 C-말단에 연결된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린은 인간 IgG1 아형이며;
EU 넘버링 시스템에 따라, 상기 면역글로불린의 중쇄 불변 영역은,
L234A 및 L235A; 또는
L234A 및 G237A; 또는
L235A 및 G237A; 또는
L234A, L235A, G237A의 돌연변이 조합 중 하나를 갖는다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 이중특이적 항체는,
PD-1을 표적으로 하는 제1 단백질 기능 영역, 및
CTLA4를 표적으로 하는 제2 단백질 기능 영역을 포함하며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 1개이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 2개이며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 면역글로불린이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이며;
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 53 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 54 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
상기 단일 사슬 항체는 면역글로불린의 중쇄의 C-말단에 연결되고;
상기 제1 단백질 기능 영역과 상기 제2 단백질 기능 영역은 제1 연결 단편을 통해 연결되며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역과 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역은 제2 연결 단편을 통해 연결되고; 상기 제1 연결 단편과 상기 제2 연결 단편은 동일하거나 상이하며;
바람직하게는, 상기 제1 연결 단편 및 상기 제2 연결 단편의 아미노산 서열은 독립적으로 서열번호 55 및 서열번호 56으로부터 선택되고;
바람직하게는, 상기 제1 연결 단편 및 상기 제2 연결 단편의 아미노산 서열은 모두 서열번호 56으로 표시된다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 중쇄 아미노산 서열은 서열번호 57로 표시되고, 경쇄 아미노산 서열은 서열번호 59로 표시되며, 이중특이적 항체 구조는 IgG-scFv이고, IgG 부분은 항-PD1 항체이며, scFv 부분은 항-CTLA4 항체이고,
항-PD1 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 61로 표시되며, HCDR2 서열은 서열번호 62로 표시되고, HCDR3 서열은 서열번호 63으로 표시되며, VH 서열은 서열번호 73으로 표시되고, 항-PD1 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 70으로 표시되며, LCDR2 서열은 서열번호 71로 표시되고, LCDR3 서열은 서열번호 72로 표시되며, VL 서열은 서열번호 76으로 표시되고,
항-CTLA4 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 64로 표시되며, HCDR2 서열은 서열번호 65로 표시되고, HCDR3 서열은 서열번호 66으로 표시되며, VH 서열은 서열번호 74로 표시되고, 항-CTLA4 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 67로 표시되며, LCDR2 서열은 서열번호 68로 표시되고, LCDR3 서열은 서열번호 69로 표시되며, VL 서열은 서열번호 75로 표시된다.
본 발명의 다른 양태에서, 단위 제제에 관한 것으로, 바람직하게는, 종양 치료에 사용되고, 상기 단위 제제는 1-10000mg(바람직하게는, 10-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg 또는 200mg)의 본 발명의 어느 한 양태에 따른 항-TIGIT 항체 및 1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 본 발명의 어느 한 양태에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 및 선택적으로 하나 이상의 본 발명에 따른 화학요법 약물(예: 백금계 약물 및/또는 플루오로우라실계 항종양제)을 포함하며; 상기 항-TIGIT 항체, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 화학요법 약물은 각각 개별 포장된다.
본 발명은 암 또는 종양의 예방 또는 치료 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 필요한 피험자에게 하나 이상의 본 발명에 따른 단위 제제를 투여하는 단계를 포함하고, 바람직하게는, 상기 단위 제제 중의 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-TIGIT 항체 및 화학요법 약물은 각각 별도로 투여된다.
본 발명의 다른 양태에서, 1회 약물 용량 단위에 관한 것으로, 바람직하게는, 종양 치료에 사용되고, 0.1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 및 0.1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 본 발명의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 포함한다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 상기 항-TIGIT 항체, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및/또는 상기 화학요법 약물은 정맥 주사 또는 정맥 점적에 적합한 형태, 바람직하게는 액체 형태이다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 피험자에게 유효량의 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 및/또는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 투여하는 단계는 수술 치료 이전 또는 이후 및/또는 방사선 치료 이전 또는 이후에 수행된다.
본 발명의 하나 또는 다수의 실시형태에서, 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 및/또는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 1회 투여량은 1kg 체중당 0.1-100mg, 바람직하게는, 1-10mg이고; 또는, 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 및/또는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 1회 투여량은 피험자 1인당 10-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg 또는 200mg이다,
바람직하게는, 1일 2회 내지 약 격일 1회 투여되거나, 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 1회 투여되고;
바람직하게는, 투여 방식은 정맥 점적 또는 정맥 주사이다.
경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원의 결합을 결정하고; 각 사슬의 가변 영역에는 상보성 결정 영역이라고 불리우는 3개의 초가변 영역이 포함되어 있다(중쇄(H)의 CDR은 HCDR1, HCDR2, HCDR3을 포함하고, 경쇄(L)의 CDR은 LCDR1, LCDR2, LCDR3을 포함하며; Kabat 등에 의해 명명되고, Bethesda M.d., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 1991; 1-3:91-3242를 참조바람). 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역이 알려진 상황에서 Kabat, IMGT, Chothia 및 AbM 넘버링 시스템을 포함하여 항체 CDR 영역을 결정하는 여러 가지 방법이 있다. 그러나, 각종 항체 또는 이의 변이체의 CDR의 정의에 관한 적용은 모두 본문에서 정의되고 사용되는 용어의 범위 내에 있다. 상기 항체의 가변 영역의 아미노산 서열이 주어진다면 당업자는 통상적으로 상기 서열 자체 이외의 임의의 실험 데이터에 의존하지 않고 특정 CDR을 결정할 수 있다.
바람직하게는, CDR도 IMGT 넘버링 시스템에 의해 정의될 수 있고, Ehrenmann, Francois, Quentin Kaas, and Marie-Paule Lefranc. IMGT/3Dstructure-DB and IMGT/DomainGapAlign: a database and a tool for immunoglobulins or antibodies, T cell receptors, MHC, IgSF and MhcSF. Nucleic acids research 2009; 38(suppl_1): D301-D307을 참조바란다.
VBASE2 데이터베이스와 같은 당업자에게 잘 알려진 기술수단을 통해 IMGT 정의에 따라 단클론 항체 서열의 CDR 영역의 아미노산 서열을 분석한다.
본 발명에 관련된 항체 26B12, 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4는 동일한 CDR을 갖는다.
이의 중쇄 가변 영역의 3개의 CDR 영역의 아미노산 서열은 하기와 같다.
HCDR1: GHSFTSDYA (서열번호 3)
HCDR2: ISYSDST (서열번호 4)
HCDR3: ARLDYGNYGGAMDY (서열번호 5)
이의 경쇄 가변 영역의 3개의 CDR 영역의 아미노산 서열은 하기와 같다.
LCDR1: QHVSTA (서열번호 8)
LCDR2: SAS (서열번호 9)
LCDR3: QQHYITPWT (서열번호 10)
본 발명에서, 달리 명시되지 않는 한, 본문에 사용된 과학적 및 기술적 명사는 당업자가 통상적으로 이해하는 의미를 갖는다. 또한, 본문에 사용된 세포배양, 분자유전학, 핵산화학, 면역학 실험실 조작 단계는 모두 상응한 분야에서 널리 사용되는 일상적인 단계이다. 아울러, 본 발명을 더 잘 이해하기 위해, 아래에서는 관련 용어의 정의 및 설명을 제공한다.
본문에 사용된 바와 같이, TIGIT(NCBI GenBank ID: NP_776160.2)의 아미노산 서열이 언급되는 경우, TIGIT 단백질의 전장 또는 세포외 면역글로불린 가변 영역(IgV) 도메인 또는 세포외 면역글로불린 가변 영역(IgV) 도메인을 포함하는 단편을 포함하고; 마우스 또는 인간 IgG의 Fc 단백질 단편(mFc 또는 hFc)에 융합되는 단편과 같은 TIGIT의 융합 단백질도 포함한다. 그러나, 당업자는 TIGIT 단백질의 아미노산 서열에서 돌연변이 또는 변이(치환, 결실 및/또는 첨가를 포함하지만 이에 한정되지 않음)가 생물학적 기능에 영향을 미치지 않고 천연적으로 생산되거나 인공적으로 도입될 수 있다는 것을 이해한다. 따라서, 본 발명에서, 용어 “TIGIT 단백질” 또는 “TIGIT”는 표시되는 서열 및 이의 천연 또는 인공 변이체를 포함하여 이러한 모든 서열을 포함해야 한다. 또한, TIGIT 단백질의 서열 단편을 설명하는 경우, 서열 단편을 포함할 뿐만 아니라 천연 또는 인공 변이체의 상응한 서열 단편도 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 EC50은 절반최대유효농도(concentration for 50% of maximal effect)를 의미하고, 최대 효과의 50%를 유발할 수 있는 농도를 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “항체”는 통상적으로 두 쌍의 폴리펩티드 사슬(각각의 쌍은 하나의 “경”(L) 사슬 및 하나의 “중”(H) 사슬을 가짐)로 구성된 면역글로불린 분자를 의미한다. 항체의 경쇄는 κ 및 λ 경쇄로 분류할 수 있다. 중쇄는 μ, δ, γ, α 또는 ε로 분류할 수 있고, 항체의 아이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서 가변 영역과 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 “J” 영역을 통해 연결되고, 중쇄는 약 3개 이상의 아미노산의 “D” 영역을 더 포함한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인(CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 구성된다. 항체의 불변 영역은 면역 시스템의 다양한 세포(예: 이펙터 세포)와 고전적인 보체 시스템의 제1 성분(C1q)의 결합을 포함하는 면역글로불린과 숙주 조직 또는 인자의 결합을 매개할 수 있다. VH 및 VL 영역은 또한 초가변성을 지닌 영역(상보성 결정 영역(CDR)이라고 함), 그간에 산재되어 있는 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 비교적 보존적인 영역으로 세분될 수 있다. 각 VH 및 VL은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4의 순서로 아미노 말단에서 카르복실 말단까지 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다. 각 중쇄/경쇄 쌍의 가변 영역(VH 및 VL)은 각각 항원 결합 부위를 형성한다. 아미노산 내지 각 영역 또는 도메인의 분배는 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health, Bethesda M.d.(1987 and 1991)), 또는 Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 1987; 196:901-917; Chothia 등, Nature 1989; 342:878-883을 따르거나 IMGT 넘버링 시스템에 의해 정의되며, Ehrenmann, Francois, Quentin Kaas, and Marie-Paule Lefranc. “IMGT/3Dstructure-DB and IMGT/DomainGapAlign: a database and a tool for immunoglobulins or antibodies, T cell receptors, MHC, IgSF and MhcSF.” Nucleic acids research 2009; 38(suppl_1): D301-D307.의 정의를 참조바란다. 용어 “항체”는 항체를 생산하는 임의의 특정 방법에 한정되지 않는다. 예를 들어, 특히 재조합 항체, 단클론 항체 및 다클론 항체를 포함한다. 항체는 IgG (예: IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 아형), IgA1, IgA2, IgD, IgE 또는 IgM 항체와 같은 상이한 아이소타입의 항체일 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 항체의 “항원 결합 단편”은 전장 항체의 단편을 포함하는 폴리펩티드를 의미하며, 이는 전장 항체에 결합되는 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 유지하고, 및/또는 항원에 대한 특이적 결합에 있어서 전장 항체와 경쟁하며, “항원 결합 부분”이라고도 한다. 통상적으로, Fundamental Immunology, Ch. 7(Paul, W., ed., 제2판, Raven Press, N.Y.(1989)를 참조바라고, 그 전문은 참조로서 본문에 인용되고, 모든 목적에 사용된다. 재조합 DNA 기술 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단을 통해 항체의 항원 결합 단편을 생산할 수 있다. 일부 경우에, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb 및 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일 사슬 항체(예: scFv), 키메라 항체, 디아바디(diabody) 및 폴리펩티드에 특이적 항원 결합 능력을 부여하기에 충분한 항체의 적어도 일부를 포함하는 이러한 폴리펩티드를 포함한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “Fd 단편”은 VH 및 CH1 도메인으로 구성된 항체 단편을 의미하고; 용어 “Fv 단편”은 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 항체 단편을 의미하며; 용어 “dAb 단편”은 VH 도메인으로 구성된 항체 단편(Ward 등, Nature 341:544-546(1989))을 의미하고; 용어 “Fab 단편”은 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 항체 단편을 의미하며; 용어 “F(ab')2 단편”은 힌지 영역의 이황화 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 항체 단편을 의미한다.
일부 경우에, 항체의 항원 결합 단편은 단일 사슬 항체(예: scFv)이고, 여기서 VL 및 VH 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬의 생성을 가능하게 하는 링커에 의해 페어링되어 1가 분자가 형성된다(예를 들어, Bird 등, Science 242:423-426(1988) 및 Huston 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883(1988)을 참조바람). 이러한 scFv 분자는 일반 구조: NH2-VL-링커-VH-COOH 또는 NH2-VH-링커-VL-COOH를 가질 수 있다. 적합한 선행 기술 링커는 반복된 GGGGS 아미노산 서열 또는 이의 변이체로 구성된다. 예를 들어, 아미노산 서열 (GGGGS)4를 갖는 링커를 사용할 수 있지만, 이의 변이체도 사용할 수 있다(Holliger 등(1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448). 본 발명에 사용 가능한 다른 링커는 Alfthan 등(1995), Protein Eng. 8:725-731, Choi 등(2001), Eur. J. Immunol. 31: 94-106, Hu 등(1996), Cancer Res. 56:3055-3061, Kipriyanov 등(1999), J. Mol. Biol. 293:41-56 및 Roovers 등(2001), Cancer Immunol.에 기술되어 있다.
일부 경우에, 항체의 항원 결합 단편은 디아바디, 즉, 2가 항체이며, 여기서 VH 및 VL 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에서 발현되지만 너무 짧은 링커를 사용하여 동일한 사슬의 두 도메인 사이의 페어링이 허용되지 않아 도메인이 다른 사슬의 상보적 도메인과 페어링되고 2개의 항원 결합 부위가 생성된다(예를 들어, Holliger P. 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993), 및 Poljak R. J. 등, Structure 2:1121-1123(1994)을 참조바람).
다른 일부 경우에, 항체의 항원 결합 단편은 “이중특이적 항체”이고, 제1 항체(단편) 및 제2 항체(단편) 또는 항체 유사체가 접합 아암을 통해 형성된 접합체를 의미하며, 접합 방식은 화학 반응, 유전자 융합 및 효소 반응을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항체의 항원 결합 단편은 “다중특이적 항체”일 수 있고, 예를 들어 삼중특이적 항체 및 사중특이적 항체를 포함하며, 전자는 세 가지 상이한 항원 결합 특이성을 갖는 항체이고, 후자는 네 가지 상이한 항원 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예를 들어, 설계된 안키린 반복 단백질(DARPin)은 IgG 항체, scFv-Fc 항체 단편에 연결되거나 이들과 조합되며, CN104341529A에 기재된 바와 같다. 항-IL-17a의 fynomer은 항-IL-6R 항체에 결합하고, WO2015141862A1에 기재된 바와 같다.
당업자에게 공지된 일반 기술(예: 재조합 DNA 기술 또는 효소적 또는 화학적 절단 방법)을 사용하여 주어진 항체(예: 본 발명에서 제공되는 단클론 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4)로부터 항체의 항원 결합 단편(예: 상기 항체 단편)을 얻을 수 있고, 온전한 항체에 사용된 방식과 동일한 방식으로 특이적으로 항체의 항원 결합 단편을 스크리닝할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “단클론 항체” 및 “mAb”는 상동성이 높은 항체 분자군, 즉 자발적으로 발생할 수 있는 자연 돌연변이를 제외하고는 완전히 동일한 항체 분자군으로부터의 하나의 항체 또는 항체의 하나의 단편을 의미한다. 단클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 대해 높은 특이성을 갖는다. 단클론 항체에 비해, 다클론 항체는 통상적으로 적어도 두 가지 또는 그 이상의 상이한 항체를 포함하고, 이러한 상이한 항체는 통상적으로 항원의 상이한 에피토프를 인식한다. 단클론 항체는 통상적으로 Kohler 등에 의해 처음 보고된 하이브리도마 기술을 사용하여 얻을 수 있지만(Kφhler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting 항body of predefined specificity[J]. nature, 1975; 256(5517): 495), 재조합 DNA 기술을 사용하여 얻을 수도 있다(예: U.S.Patent 4,816,567을 참조바람).
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “인간화 항체”는 인간 면역글로불린(수용체 항체)의 CDR 영역 전체 또는 일부가 비인간 항체(공여자 항체)의 CDR 영역으로 대체된 후 얻어진 항체 또는 항체 단편을 의미하고, 여기서 공여자 항체는 원하는 특이성, 친화성 또는 반응성을 갖는 비인간(예: 마우스, 래트 또는 토끼) 항체일 수 있다. 이 밖에, 수용체 항체의 프레임워크 영역(FR)의 일부 아미노산 잔기는 상응한 비인간 항체의 아미노산 잔기로 대체되거나 다른 항체의 아미노산 잔기로 대체되어 항체의 성능이 추가로 향상되거나 최적화될 수 있다. 인간화 항체에 대한 더 자세한 내용은 예를 들어 Jones et al., Nature 1986; 321:522-525; Reichmann et al., Nature 1988; 332:323-329; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 1992; 2:593-596; 및 Clark M. Antibody humanization: a case of the ‘Emperor’s new clothes’?[J]. Immunol. Today, 2000; 21(8): 397-402를 참조할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “분리” 또는 “분리된”은 자연 상태에서 인공 수단에 의해 획득된 것을 의미한다. 자연계에서 “분리”된 물질 또는 성분이 발생하는 경우, 이들이 위치한 자연 환경이 변경되었거나 자연 환경에서 상기 물질이 분리되었거나 둘 다일 수 있다. 예를 들어, 살아 있는 동물 체내에 분리되지 않은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드가 자연적으로 존재하고, 이러한 자연 상태에서 분리된 순도가 높은 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 분리된 것이라고 한다. 용어 “분리” 또는 “분리된”은 인공 또는 합성 물질의 혼합물을 배제하지 않고, 물질의 활성에 영향을 미치지 않는 다른 불순한 물질도 배제하지 않는다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “벡터(vector)”는 폴리뉴클레오티드가 삽입될 수 있는 핵산 운반체를 의미한다. 벡터가 삽입된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 단백질을 발현할 수 있는 경우, 벡터를 발현 벡터라고 한다. 벡터는 형질전환, 형질도입 또는 형질감염을 통해 숙주 세포에 도입될 수 있고, 이로써 운반된 유전 물질 요소가 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 벡터는 당업자에게 공지된 것으로, 플라스미드; 파지미드; 코스미드; 효모 인공 염색체(YAC), 박테리아 인공 염색체(BAC) 또는 P1 유래 인공 염색체(PAC)와 같은 인공 염색체; λ 파지 또는 M13 파지와 같은 파지 및 동물 바이러스를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 벡터로 사용될 수 있는 동물 바이러스는 레트로바이러스(렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노관련바이러스, 헤르페스바이러스(예: 단순포진바이러스), 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 유두종바이러스, 파포바바이러스(예: SV40)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 벡터는 다양한 발현 제어 요소를 포함할 수 있고, 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서 서열, 선택 요소 및 리포터 유전자를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 또한, 벡터는 복제 개시 부위를 포함할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “숙주 세포”는 벡터 도입에 사용될 수 있는 세포를 의미하고, 대장균 또는 고초균과 같은 원핵 세포, 효모 세포 또는 아스페르길루스와 같은 진균 세포, S2 초파리 세포 또는 Sf9와 같은 곤충 세포, 또는 섬유아세포, CHO 세포, COS 세포, NSO 세포, HeLa 세포, GS 세포, BHK 세포, HEK 293 세포 또는 인간 세포와 같은 동물 세포를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “특이적 결합”은 항체와 그것이 표적으로 삼는 항원 사이의 반응과 같은 두 분자 사이의 비-무작위 결합 반응을 의미한다. 일부 실시형태에서, 특정 항원에 특이적으로 결합하는 항체(또는 특정 항원에 대해 특이성을 갖는 항체)는 항체가 약 10-5M 미만, 예를 들어 약 10-6M, 10-7M, 10-8M, 10-9M 또는 10-10M 미만 또는 그 이하의 친화력(KD)으로 상기 항원에 결합한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “KD”는 항체와 항원 사이의 결합 친화력을 설명하기 위한 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 의미한다. 평형 해리 상수가 작을수록 항체-항원 결합이 더 단단해지고 항체와 항원 사이의 친화력이 더 높다. 통상적으로, 항체는 약 10-5M 미만, 예를 들어 약 10-6M, 10-7M, 10-8M, 10-9M 또는 10-10M 미만 또는 그 이하의 해리 평형 상수(KD)로 항원(예: TIGIT 단백질)에 결합한다. 당업자에게 잘 알려진 방법을 사용하여 KD를 측정할 수 있고, 예를 들어 Fortebio 분자 상호작용 분석기를 사용하여 측정할 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “단클론 항체” 및 “ mAb”는 동일한 의미를 가지고 서로 교환하여 사용할 수 있으며; 용어 “다클론 항체” 및 “pAb”는 동일한 의미를 가지고 서로 교환하여 사용할 수 있으며; 용어 “폴리펩티드” 및 “단백질”은 동일한 의미를 가지고 서로 교환하여 사용할 수 있다. 본 발명에서, 아미노산은 통상적으로 본 분야에 공지된 1문자 및 3문자 약어로 표시된다. 예를 들어 알라닌은 A 또는 Ala으로 표시될 수 있다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제”는 피험자 및 활성 성분과 약리학적 및/또는 생리학적으로 상용하는 벡터 및/또는 부형제를 의미하고, 이는 당업자에게 공지되어 있으며(예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences. Edited by Gennaro AR, 19th ed. Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1995를 참조바람), pH 조절제, 계면활성제, 보조제, 이온 강도 강화제를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, pH 조절제는 인산염 완충액을 포함하지만 이에 한정되지 않고; 계면활성제는 양이온성, 음이온성 또는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 Tween-80을 포함하지만 이에 한정되지 않으며; 이온 강도 강화제는 염화나트륨을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “유효량”은 원하는 효과를 획득하기에 충분하거나 적어도 부분적으로 획득하는 양을 의미한다. 예를 들어, 질환(예: 종양)을 예방하는 유효량은 질환(예: 종양)의 발생을 예방, 방지 또는 지연하기에 충분한 양을 의미하고; 질환을 치료하는 유효량은 질환을 앓고 있는 환자의 질환 및 이의 합병증을 치유하기에 충분하거나 적어도 부분적으로 방지하는 양을 의미한다.
본문에 사용된 바와 같이, 용어 “하이브리도마” 및 “하이브리도마 세포주”는 서로 교환하여 사용할 수 있고, 용어 “하이브리도마” 및 “하이브리도마 세포주”가 언급되는 경우 하이브리도마의 아클론 및 자손 세포도 포함한다.
용어 “1회 약물 용량 단위”는 투여 방안 시, (바람직하게는, 피험자의 1kg 체중당) 피험자에게 투여할 본 발명에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 항-TIGIT 항체를 포함하는, 앰플에 넣은 주사제와 같은 1회 약물 제형을 의미한다. 본 발명의 구체적인 실시형태에서, 투여 방안은 예를 들어 1일 2회 내지 약 격일 1회의 투여 주기에 따라 1회 약물 용량 단위를 투여하거나 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 1회 투여하는 것을 포함한다.
본 발명에서, 달리 명시되지 않는 한, 상기 “제1”(예: 제1 단백질 기능 영역, 제1 연결 단편) 및 “제2”(예: 제2 단백질 기능 영역, 제2 연결 단편)는 지칭 상의 구별 또는 표현 상의 명확성을 목적으로 전형적인 순차적 의미를 갖지 않는다.
약물 또는 치료제의 “치료적 유효량” 또는 “치료에 유효한 용량”은 단독으로 사용되거나 다른 치료제와 병용 사용될 때 질환 발병으로부터 주체를 보호하거나 질환 퇴행을 촉진하는 약물의 임의의 양이고, 상기 질환 퇴행은 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상이 없는 단계의 빈도 및 지속 시간 증가, 또는 질환으로 인한 손상 또는 장애 예방을 통해 입증된다. 숙련자에게 공지된 다양한 방법을 사용하여 치료제의 질환 퇴행 촉진 능력을 평가할수 있고, 예를 들어 임상 시험 기간에 인간 주체에서, 인간에 대한 효능을 예측하는 모델 시스템에서, 또는 생체외 측정 방법에서 상기 약제의 활성을 측정한다.
약물의 “예방적 유효량”은 암 발생 위험이 있는 주체(예: 악화 전 병증을 갖는 주체) 또는 암 재발 위험이 있는 주체에 단독으로 사용되거나 항종양제와 병용 사용될 때 암의 발생 또는 재발을 억제하는 약물의 임의의 양을 의미한다. 일부 실시형태에서, 예방적 유효량은 암의 발생 또는 재발을 완전히 방지한다. 암의 발생 또는 재발 “억제”는 암의 발생 또는 재발 가능성을 감소시키거나 암의 발생 또는 재발을 완전히 방지하는 것을 의미한다.
본 발명의 단클론 항체는 TIGIT에 특이적으로 매우 잘 결합할 수 있고 매우 강한 진화력을 가지며 면역 세포에 대한 TIGIT의 억제 작용을 감소시키고 T 세포 활성을 촉진하며 NK 세포 고갈을 역전시키고 종양에 대한 면역 세포의 살상 작용을 향상시킬 수 있다. 항-TIGIT 항체는 단독으로 또는 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체(및/또는 화학요법 약물)와 조합하여 종양을 효과적으로 치료하거나 예방할 수 있으며, 항-TIGIT 항체와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 조합은 종양 성장을 효과적으로 억제하는 약리학적 효과를 가지고, 항-TIGIT 항체 단일 제제 또는 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 단일 제제보다 우수하며, 우수한 응용 전망과 시장 가치를 갖는다.
도 1은 TIGIT-mFc에 대한 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2 및 RG6058 항체의 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 2는 TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058 항체의 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 3은 TIGIT-mFc에 대한 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2 및 RG6058 항체의 인간 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 4는 TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058 항체의 인간 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 5는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H3L3의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 6은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H1L1의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 7은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H2L2의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 8은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H2L3의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 9는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H3L2의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 10은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H4L4의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 11은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H1L4의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 12는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H4L1의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 13은 TIGIT-mFc에 대한 RG6058의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 14는 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 결합 활성을 보여준다.
도 15는 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD155과의 경쟁적 결합 활성을 보여준다.
도 16은 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD112과의 경쟁적 결합 활성을 보여준다.
도 17은 Jurkat-TIGIT 및 HT1080-aCD3scFv 세포 시스템에 TIGIT 항체를 첨가한 후 분비된 IL-2의 양을 검출한 것을 보여준다.
도 18은 hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 효과를 보여준다.
도 19는 hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 체중 변화를 보여준다.
도 20은 BALB/c-hPD1/hTIGIT 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델에 대한 26B12H2L2와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 CP004(hG1TM)의 병용 효과를 보여준다.
도 21은 BALB/c-hPD1/hTIGIT 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 체중 변화에 대한 26B12H2L2와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 CP004(hG1TM)의 병용 영향을 보여준다.
수탁에 관련된 생물학적 재료:
하이브리도마 세포주 LT019(TIGIT-26B12)는 2020년 10월 22일 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208이며, 수탁주소는 중국 우한시 우한대학교이고, 우편번호는 430072이다.
도 2는 TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058 항체의 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 3은 TIGIT-mFc에 대한 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2 및 RG6058 항체의 인간 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 4는 TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058 항체의 인간 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과를 보여준다.
도 5는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H3L3의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 6은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H1L1의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 7은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H2L2의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 8은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H2L3의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 9는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H3L2의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 10은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H4L4의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 11은 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H1L4의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 12는 TIGIT-mFc에 대한 26B12 H4L1의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 13은 TIGIT-mFc에 대한 RG6058의 친화력 상수 검출 결과도를 보여준다. 도면에서 위에서 아래로 각 쌍의 곡선에 첨가된 항체의 농도는 각각 5nM, 1.67nM, 0.557nM, 0.185nM, 0.06nM이다.
도 14는 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 결합 활성을 보여준다.
도 15는 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD155과의 경쟁적 결합 활성을 보여준다.
도 16은 FACS에 의해 검출된 293T-TIGIT 세포막 표면 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD112과의 경쟁적 결합 활성을 보여준다.
도 17은 Jurkat-TIGIT 및 HT1080-aCD3scFv 세포 시스템에 TIGIT 항체를 첨가한 후 분비된 IL-2의 양을 검출한 것을 보여준다.
도 18은 hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 효과를 보여준다.
도 19는 hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 체중 변화를 보여준다.
도 20은 BALB/c-hPD1/hTIGIT 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델에 대한 26B12H2L2와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 CP004(hG1TM)의 병용 효과를 보여준다.
도 21은 BALB/c-hPD1/hTIGIT 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델의 체중 변화에 대한 26B12H2L2와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 CP004(hG1TM)의 병용 영향을 보여준다.
수탁에 관련된 생물학적 재료:
하이브리도마 세포주 LT019(TIGIT-26B12)는 2020년 10월 22일 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208이며, 수탁주소는 중국 우한시 우한대학교이고, 우편번호는 430072이다.
아래에서는 실시예를 결합하여 본 발명의 실시형태를 자세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되어서는 안 됨을 당업자는 이해할 것이다. 실시예에 구체적인 기술 또는 조건이 명시되지 않은 경우, 본 분야의 문헌에 기재된 기술 또는 조건(예를 들어 J. Sambrook 등 저작, Huang Peitang 등 번역한 “분자 클로닝 실험 매뉴얼”, 제3판, 과학출판사를 참조바람)을 따르거나 제품 설명서에 따라 수행된다. 사용된 시약 또는 기기에 제조업체가 명시되지 않은 경우, 시중에서 구입할 수 있는 일반 제품이다. 예를 들어 293T는 ATCC에서 구입할 수 있다.
본 발명의 하기 실시예에서, 사용된 BALB/c마우스는 Guangdong Medical Laboratory Animal Center에서 구입할 수 있다.
본 발명의 하기 실시예에서, 사용된 양성 대조 항체 RG6058의 서열은 중국 특허 공개 CN108290946의 서열 34 및 36을 참조할 수 있다.
본 발명의 하기 실시예에서, 사용된 병용된 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 CP004(hG1TM)는 Zhongshan Akeso Biopharma사에서 생산되고, 그 서열은 공개 특허 CN112300286A에 기술된 항체로부터 유래되며, CP004(hG1TM) 중쇄 전장 서열(아미노산 서열은 서열번호 57로 표시되고, 뉴클레오티드 서열은 서열번호 58로 표시됨), 경쇄 전장 서열(아미노산 서열은 서열번호 59로 표시되며, 뉴클레오티드 서열은 서열번호 60으로 표시됨)을 참조바라고, CP004(hG1TM) 구조는 IgG-scFv이며, 여기서 IgG 부분은 항-PD1 항체이고, scFv 부분은 항-CTLA4 항체이며,
여기서 항-PD1 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 61로 표시되고, HCDR2 서열은 서열번호 62로 표시되며, HCDR3 서열은 서열번호 63으로 표시되고, VH 서열은 서열번호 73으로 표시되며, 항-PD1 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 70으로 표시되고, LCDR2 서열은 서열번호 71로 표시되며, LCDR3 서열은 서열번호 72로 표시되고, VL 서열은 서열번호 76으로 표시되며,
항-CTLA4 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 64로 표시되고, HCDR2 서열은 서열번호 65로 표시되며, HCDR3 서열은 서열번호 66으로 표시되고, VH 서열은 서열번호 74로 표시되며, 항-CTLA4 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 67로 표시되고, LCDR2 서열은 서열번호 68로 표시되며, LCDR3 서열은 서열번호 69로 표시되고, VL 서열은 서열번호 75로 표시된다.
실시예
1: 항-
TIGIT
항체
26B12의
제조
1. 하이브리도마 세포주 LT019의 제조
항-TIGIT 항체의 제조에 사용된 항원은 인간 TIGIT-mFc(TIGIT는 GenbankID: NP_776160.2이고, mFc의 서열은 서열번호 77로 표시됨)이다. 면역화된 마우스의 비장 세포를 마우스의 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 제조하였다. 인간 TIGIT-mFc를 항원으로 사용하고, 하이브리도마 세포를 간접 ELISA 방법으로 스크리닝하여, TIGIT에 특이적으로 결합하는 항체를 분비할 수 있는 하이브리도마 세포를 얻었다. 스크리닝된 하이브리도마 세포에 대해 한계희석법을 통해 안정적인 하이브리도마 세포주를 얻었다. 위의 하이브리도마 세포주를 하이브리도마 세포주 LT019로 명명하고, 이들로부터 분비된 단클론 항체를 26B12로 명명하였다.
하이브리도마 세포주 LT019(TIGIT-26B12라고도 함)는 2020년 10월 22일 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208이며, 수탁주소는 중국 우한시 우한대학교이고, 우편번호는 430072이다.
2. 항-TIGIT 항체 26B12의 제조
CD 배지(Chemical Defined Medium, 1% 페니실린-스트렙토마이신 함유)를 사용하여 위에서 제조된 LT019 세포주를 5% CO2, 37℃의 조건에서 배양하였다. 7일 후 세포 배양 상층액을 수집하고, 고속 원심분리 후 미세다공성 여과 필름으로 진공 여과하며, HiTrap protein A HP 컬럼으로 정제하여 항체 26B12를 제조하였다.
실시예
2: 항-
TIGIT
항체
26B12의
서열 분석
배양 세포 박테리아 총 RNA 추출 키트(Tiangen, Cat. No. DP430)의 방법에 따라 실시예 1에서 배양된 LT019 세포주로부터 mRNA를 추출하였다.
Invitrogen SuperScript® III First-Strand Synthesis System for RT-PCR키트 설명서에 따라 cDNA를 합성하고 PCR 증폭을 수행하였다.
PCR 증폭 산물에 대해 TA 클로닝을 직접 수행하고, 구체적인 조작은 pEASY-T1 Cloning Kit(Transgen CT101) 키트 설명서를 참조할 수 있다.
TA 클로닝 산물을 직접 시퀀싱하고, 시퀀싱 결과는 하기와 같다.
중쇄 가변 영역의 핵산 서열은 서열번호 2로 표시되고, 단편 길이는 363bp이다.
코딩된 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되고, 길이는 121개의 아미노산이다.
여기서 중쇄 HCDR1의 서열은 서열번호 3으로 표시되고, HCDR2의 서열은 서열번호 4로 표시되며, HCDR3의 서열은 서열번호 5로 표시된다.
경쇄 가변 영역의 핵산 서열은 서열번호 7로 표시되고, 길이는 321bp이다.
코딩된 아미노산 서열은 서열번호 6으로 표시되고, 길이는 107개의 아미노산이다.
여기서 경쇄 LCDR1의 서열은 서열번호 8로 표시되고, LCDR2의 서열은 서열번호 9로 표시되며, LCDR3의 서열은 서열번호 10으로 표시된다.
실시예
3: 항-인간
TIGIT의
인간화 항체의
경쇄
및
중쇄
설계와 제조
1. 항-인간 TIGIT의 인간화 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4의 경쇄 및 중쇄 설계
인간 TIGIT 단백질의 3차원 결정질 구조 및 실시예 2에서 얻은 항체 26B12의 서열에 따라, 컴퓨터를 통해 항체 모델을 시뮬레이션한 후, 모델에 따라 돌연변이를 설계하여, 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4의 가변 영역 서열(항체 불변 영역 서열은 NCBI의 데이터베이스에서 유래되고, 중쇄 불변 영역은 모두 Ig gamma-1 chain C region, ACCESSION: P01857을 사용하며; 경쇄 불변 영역은 Ig kappa chain C region, ACCESSION: P01834임)을 얻었다.
설계된 가변 영역 서열은 하기 표 A와 같다.
인간화
단클론
항체
26B12H1L4의
중쇄
가변 영역 및
경쇄
가변 영역 서열
위의 8개의 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4에서, 중쇄 가변 영역의 핵산 서열의 길이는 모두 363bp이고, 코딩된 아미노산 서열의 길이는 모두 121aa이며; 경쇄 가변 영역의 핵산 서열의 길이는 모두 321bp이고, 코딩된 아미노산 서열의 길이는 모두 107aa이다.
상기 8개의 항체는 동일한 HCDR1-HCDR3 및 LCDR1-LCDR3을 가지고, 하기와 같다.
HCDR1의 서열은 서열번호 3으로 표시되고, HCDR2의 서열은 서열번호 4로 표시되며, HCDR3의 서열은 서열번호 5로 표시되고;
LCDR1의 서열은 서열번호 8로 표시되며, LCDR2의 서열은 서열번호 9로 표시되고, LCDR3의 서열은 서열번호 10으로 표시된다.
2. 인간화 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4의 제조
중쇄 불변 영역은 모두 Ig gamma-1 chain C region, ACCESSION: P01857을 사용하고; 경쇄 불변 영역은 모두 Ig kappa chain C region, ACCESSION: P01834를 사용하였다.
26B12H1L1 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H4L1 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H2L2중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H3L2 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H2L3 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H3L3 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H1L4 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H2L4 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA, 26B12H4L4 중쇄 cDNA 및 경쇄 cDNA를 각각 pUC57simple(Genscript사에서 제공) 벡터에 클로닝하고, 각각 pUC57simple-26B12H1, pUC57simple-26B12L1; pUC57simple-26B12H4, pUC57simple-26B12L1; pUC57simple-26B12H2, pUC57simple-26B12L2; pUC57simple-26B12H3, pUC57simple-26B12L2; pUC57simple-26B12H2, pUC57simple-26B12L3; pUC57simple-26B12H3, pUC57simple-26B12L3; pUC57simple-26B12H1, pUC57simple-26B12L4; pUC57simple-26B12H2, pUC57simple-26B12L4; 및 pUC57simple-26B12H4, pUC57simple-26B12L4를 얻었다. 《분자 클로닝 실험 매뉴얼(제2판)》에서 소개된 표준 기술을 참조하여, EcoRI&HindIII 효소 절단으로 합성된 중쇄 및 경쇄 전장 유전자를 제한효소(EcoRI&HindIII)로 절단하여 발현 벡터 pcDNA3.1에 서브클로닝하여 발현 플라스미드 pcDNA3.1-26B12H1, pcDNA3.1-26B12L1, pcDNA3.1-26B12H4, pcDNA3.1-126B12H2, pcDNA3.1-26B12L2, pcDNA3.1-26B12H3, pcDNA3.1-26B12L3 및 pcDNA3.1-26B12L4를 얻고, 재조합 발현 플라스미드의 중/경쇄 유전자에 대해 시퀀싱 분석을 추가로 수행하였다. 그 후 상응한 경쇄 및 중쇄 재조합 플라스미드 설계 유전자를 포함하는 조합(pcDNA3.1-26B12H1/pcDNA3.1-26B12L1, pcDNA3.1-26B12H4/pcDNA3.1-26B12L1, pcDNA3.1-26B12H2/pcDNA3.1-26B12L2, pcDNA3.1-26B12H3/pcDNA3.1-26B12L2, pcDNA3.1-26B12H2/pcDNA3.1-26B12L3, pcDNA3.1-26B12H3/pcDNA3.1-26B12L3, pcDNA3.1-26B12H1/pcDNA3.1-26B12L4 및 pcDNA3.1-26B12H4/pcDNA3.1-26B12L4)을 각각 293F 세포에 공동 형질감염시킨 후 배양액을 수집하여 정제하였다. 시퀀싱이 정확한지 검증한 후, 엔도톡신이 없는 발현 플라스미드를 제조하고 플라스미드를 HEK293 세포에 일시적으로 형질감염시켜 항체 발현을 수행하며, 배양 7일 후 세포 배양액을 수집하고, Protein A 컬럼으로 친화 정제하여 인간화 항체를 얻었다.
실시예
4: ELISA 방법에 의한 항원
TIGIT
-mFc에 대한 항체의 결합 활성 검출
실험 단계: 염소 항-마우스 IgG Fc(Jackson사에서 구입, 배치번호: 132560) 2μg/mL를 마이크로플레이트에 코팅한 후, 4℃에서 16시간 동안 배양하였다. 배양 후 PBST를 사용하여 염소 항-마우스 IgG Fc로 코팅된 마이크로플레이트를 1회 세척한 후, 1% BSA의 PBST 용액을 마이크로플레이트 차단(blocking) 용액으로 사용하여 2시간 동안 차단하였다. 마이크로플레이트 차단 후 PBST로 플레이트를 3회 세척하였다. 그런 다음 항원 인간 TIGIT-mFc 1μg/mL를 첨가하고, 37℃에서 30분 동안 배양한 후 PBST로 플레이트를 3회 세척하였다. 마이크로플레이트의 웰에 PBST 용액으로 구배 희석된 항체를 첨가하고, 항체 희석 구배에 대한 자세한 내용은 표 1 및 표 2를 참조바란다. 시험할 항체가 첨가된 마이크로플레이트를 37℃에서 30분 동안 배양하고, 배양 후 PBST로 플레이트를 3회 세척하였다. 플레이트 세척 후 1:5000 비율로 희석된 HRP 표지 염소 항-인간 IgG Fc(Jackson사에서 구입, 배치번호: 128332) 제2 항체 작업 용액을 첨가하고, 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 배양 후 PBST로 플레이트를 4회 세척하고, TMB(Neogen, 308177)를 첨가하여 암실에서 4분 동안 발색시킨 후, 정지 용액을 첨가하여 발색 반응을 종료시켰다. 마이크로플레이트를 즉시 마이크로플레이트 리더에 넣고, 450nm 광 파장을 선택하여 마이크로플레이트의 각 웰의 OD값을 판독하였다. SoftMax Pro 6.2.1 소프트웨어를 이용하여 데이터에 대해 분석 처리를 수행하였다.
항원 TIGIT-mFc에 대한 항체의 결합 결과는 도 1 및 도 2에 도시된 바와 같다. 각 용량의 OD값은 표 1 및 표 2와 같다. 항체 농도를 횡좌표로 하고, 흡광도값을 종좌표로 하여 곡선 피팅을 수행하며, 항원에 대한 항체의 결합 EC50을 계산하고, 결과는 표 1, 표 2 및 도 1, 도 2에 나타낸 바와 같다.
표 1: TIGIT-mFc에 대한 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2 및 RG6058의 결합 활성 검출 결과
표 2: TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058의 결합 활성 검출 결과
결과에 따르면, 항체 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4는 모두 인간 TIGIT-mFc에 효과적으로 결합할 수 있고, 결합 효율은 용량 의존 관계를 나타내며, 결합 활성은 동일한 표적 양성 약물 RG6058과 비슷하고, 이는 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4가 TIGIT에 효과적으로 결합하는 기능을 가짐을 나타낸다.
실시예
5: 경쟁 ELISA 방법에 의한
TIGIT
-mFc에 대한 항체의 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 측정
실험 단계: TIGIT-mFc 2μg/mL를 마이크로플레이트에 코팅한 후, 4℃에서 밤새 배양하였다. 배양 후 PBST를 사용하여 항원으로 코팅된 마이크로플레이트를 1회 세척한 후, 1% BSA의 PBST 용액을 마이크로플레이트 차단 용액으로 사용하여 2시간 동안 차단하였다. 마이크로플레이트 차단 후 PBST로 플레이트를 3회 세척하였다. 마이크로플레이트에 PBST 용액으로 구배 희석된 항체를 첨가하고, 항체 농도에 대한 자세한 내용은 표 3 및 표 4를 참조바라며, 실온에서 10분 동안 배양한 후 동일한 부피의 2μg/mL(최종 농도 1μg/mL) CD155-hFc-Biotin(Zhongshan Akeso Biopharma사에서 생산되고, 배치번호는 20170210이며, 여기서 CD155의 GenBank 번호는 NP_006496.4이고, hFc의 서열은 서열번호 78로 표시됨)를 첨가하여 항체와 골고루 혼합한 후 마이크로플레이트를 37℃에서 30분 동안 배양하고, 배양 후 PBST로 플레이트를 3회 세척하였다. 플레이트 세척 후 1:4000 비율로 희석된 SA-HRP 작업 용액을 첨가하고, 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 배양 후 PBST로 플레이트를 4회 세척하고, TMB(Neogen, 308177)를 첨가하여 암실에서 5분 동안 발색시킨 후, 정지 용액을 첨가하여 발색 반응을 종료시켰다. 마이크로플레이트를 즉시 마이크로플레이트 리더에 넣고, 450nm 광 파장을 선택하여 마이크로플레이트의 각 웰의 OD값을 판독하였다. SoftMax Pro 6.2.1 소프트웨어를 이용하여 데이터에 대해 분석 처리를 수행하였다.
TIGIT-mFc에 대한 항체의 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 결과는 표 3 및 표 4와 같다. 항체 농도를 횡좌표로 하고, 흡광도값을 종좌표로 하여 곡선 피팅을 수행하며, TIGIT-mFc에 대한 항체의 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 EC50을 계산하고, 결과는 표 3, 표 4 및 도 3, 도 4에 나타낸 바와 같다.
표 3: TIGIT-mFc에 대한 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2 및 RG6058의 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과
표 4: TIGIT-mFc에 대한 26B12H3L3, 26B12H1L4, 26B12H4L1, 26B12H4L4 및 RG6058의 CD155-hFc-Biotin과의 경쟁적 결합 활성 검출 결과
결과에 따르면, 동일한 실험 조건에서, 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4는 항원 TIGIT-mFc에 대한 결합에 있어서 CD155-hFc-Biotin과 경쟁할 수 있고, 활성은 동일한 표적 양성 약물 RG6058과 비슷하며, 이는 26B12H1L1, 26B12H4L1, 26B12H2L2, 26B12H3L2, 26B12H2L3, 26B12H3L3, 26B12H1L4 및 26B12H4L4가 TIGIT-mFc에 대한 결합에 있어서 CD155-hFc-Biotin과 효과적으로 경쟁하는 기능을 가짐을 나타낸다.
실시예
6:
Fortebio
분자 상호작용 분석기에 의한 항원
TIGIT
-mFc에 대한 인간화 항체
26B12H3L3
,
26B12H1L1
,
26B12H2L2
,
26B12H2L3
,
26B12H3L2
,
26B12H4L4
, 26B12H1L4,
26B12H4L1
및 RG6058의 결합의 동역학 매개변수 측정
샘플 희석 완충액은 PBS, 0.02% Tween-20, 0.1% BSA, pH 7.4이다. TIGIT-mFc를 AMC 센서에 3 μg/mL의 농도로 50초 동안 고정하고, 센서를 완충액에서 60초 동안 평형화시킨 후, 센서에 고정된 TIGIT-mFc를 0.06-5nM(3배 희석) 농도로 120초 동안 항체에 결합시키고, 단백질을 완충액에서 300초 동안 해리시켰다. 센서는 10mM 글리신, pH=1.7 용액을 사용하여 재생시켰다. 검출 온도는 37도이고, 검출 주파수는 0.3Hz이며, 샘플 플레이트의 진동 속도는 1000rpm이다. 데이터를 1:1 모델로 피팅하고 분석하여 친화력 상수를 얻었다.
TIGIT에 대한 인간화 항체(대조 항체로 사용)의 친화력 상수 측정 결과는 표 5와 같고, 검출 결과는 도 5 내지 도 13에 도시된 바와 같다.
표 5: 항원 TIGIT-mFc에 대한 인간화 항체의 친화력 상수 검출 결과
KD: 친화력 상수; KD=kdis/kon.
결과에 따르면, TIGIT-mFc에 대한 인간화 항체 26B12H3L3, 26B12H1L1, 26B12H2L2, 26B12H2L3, 26B12H3L2, 26B12H4L4, 26B12H1L4, 26B12H4L1 및 RG6058의 친화력 상수는 순차적으로 9.64E-11M, 1.64E-11M, 8.40E-12M, 4.85E-11M, 5.40E-11M, 3.69E-11M, 4.63E-11M, 8.57E-12M 및 3.16E-11M이다.
결과에 따르면, TIGIT-mFc에 대한 TIGIT 각 항체의 결합 친화력은 강한 것부터 약한 것 순으로 26B12H2L2, 26B12H4L1, 26B12H1L1, RG6058, 26B12H4L4, 26B12H1L4, 26B12H2L3, 26B12H3L2, 26B12H3L3이다. 여기서 인간화 항체 26B12H2L2, 26B12H4L1, 26B12H1L1의 친화력은 양성 약물 RG6058의 친화력보다 강하고, 26B12H4L4의 친화력은 양성 약물 RG6058의 친화력과 비슷하다.
실시예 7 : FACS에 의한 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 결합 활성 검출
실험 방법:
TIGIT 벡터 plenti6.3-TIGITFL-BSD(TIGIT는 GenbankID: NP_776160.2임)를 GenScript에 의뢰하여 유전자 최적화를 통해 인간 TIGIT 전장 cDNA 서열을 합성하고, TIGITFL로 명명하며, pUC57simple(Genscript사에서 제공) 벡터에 클로닝하여, pUC57simple-TIGITFL 플라스미드를 얻었다. BamHI&XhoI 이중 효소 절단으로 합성된 pUC57simple-TIGITFL 플라스미드에서, TIGITFL 표적 유전자 단편을 회수하고 제한 부위 BamHI&XhoI를 통해 plenti6.3 발현 벡터(벡터 pLenti6.3은 Invitrogen사에서 구입)에 서브클로닝한 후, 293T 세포에 형질감염시키며, 스크리닝을 통해 TIGIT를 안정적으로 발현하는 세포주 293T-TIGIT 세포를 얻었다.
293T-TIGIT 세포(DMEM+10% FBS)를 수집하고, 5분 동안 원심분리한 후 상층액을 제거하며, 재현탁 후 계수하고 생존율을 측정(P7, 95.79%)하며, 세포를 희석한 후, 투명한 V-BOTTOM 96웰 플레이트의 각 웰에 30w 세포를 첨가하고, 각 튜브에 200μL의 1% PBSA를 첨가하며, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 실험 설계에 따라 각 웰에 100μL의 항체(최종 농도 300nM, 100nM, 33.3nM, 11.1nM, 3.7nM, 1.23nM, 0.41nM, 0.041nM, 0.0041nM)를 대응되게 첨가하고, 블랭크 대조군 및 아이소타입 대조군을 설계한 후, 얼음 위에서 60분 동안 배양하였다. 각 튜브에 200μL의 1% PBSA를 첨가하고, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거한 후, 2회 세척하였다. 각 샘플에 FITC 염소 항-인간 IgG 항체(Jackson사에서 구입, Cat. No.: 109-095-098)(PBSA로 500배 희석)를 첨가하고, 암실에서 얼음 위에서 40분 동안 배양하며; 각 튜브에 200μL의 PBSA를 첨가하고, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 200μL의 PBSA를 첨가하여 세포를 재현탁하고, 유세포 분석 튜브에 옮겨 유세포 분석기에 의해 각 농도의 세포의 평균 형광 강도를 검출하였다.
표 6: FACS에 의한 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 결합 활성 검출
실험 결과는 표 6 및 도 14에 나타낸 바와 같고, 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 양성 대조 항체 RG6058의 결합 EC50은 1.257nM이며, 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2의 결합 EC50은 0.917nM이다.
실험 결과에 따르면, 인간화 항체 26B12H2L2는 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 결합 능력이 양성 대조 항체 RG6058보다 강하다.
실시예
8:
FACS에
의한 293T-
TIGIT
세포막 표면 항원
TIGIT에
대한 인간화 항체
26B12H2L2
및 RG6058의 CD155 또는 CD112과의 경쟁적 결합 활성
실험 방법: 293T-TIGIT 세포를 수집하고, 5분 동안 원심분리한 후 상층액을 제거하며, 재현탁 후 계수하고 생존율을 측정(94.95%)하며, 세포를 희석한 후, 투명한 V-BOTTOM 96웰 플레이트의 각 웰에 30w 세포를 첨가하고, 각 튜브에 200μL의 1% PBSA를 첨가하며, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 실험 설계에 따라 각 웰에 100μL의 항체(최종 농도 300nM, 100nM, 33.3nM, 11.1nM, 3.7nM, 1.23nM, 0.123nM, 0.0123nM)를 대응되게 첨가하고, 블랭크 대조군 및 아이소타입 대조군을 설계한 후, 얼음 위에서 30분 동안 배양하였다. 각 샘플에 CD155(최종 농도 10nM)(Zhongshan Akeso Biopharma사에서 생산, 배치번호: 20190726, 여기서 CD155의 GenBank 번호: NP_006496.4) 또는 CD112(최종 농도 30nM)(Zhongshan Akeso Biopharma사에서 생산, 배치번호: 20190726, 여기서 CD112의 GenBank 번호: NP_001036189.1)를 첨가하고, 암실에서 얼음 위에서 60분 동안 배양한 다음, 각 튜브에 200μL의 1% PBSA를 첨가하고, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거한 후 2회 세척하였다. 각 샘플에 APC 염소 항-마우스 IgG(Biolegend사에서 구입, 배치번호 405308)(최소 교차 반응 활성, minimal x-reactivity) 항체(PBSA 300배 희석)를 첨가하고, 암실에서 얼음 위에서 40분 동안 배양하며; 각 튜브에 200μL의 PBSA를 첨가하고, 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 200μL의 PBSA를 첨가하여 세포를 재현탁하고, 유세포 분석 튜브에 옮겨 유세포 분석기에 의해 각 농도의 세포의 평균 형광 강도를 검출하였다.
실험 결과는 각각 표 7 및 도 15, 표 8 및 도 16에 나타낸 바와 같다.
표 7: FACS에 의한 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD155과의 경쟁적 결합 활성 검출
표 8: FACS에 의한 293T-TIGIT 세포막 표면 항원 TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2 및 RG6058의 CD112과의 경쟁적 결합 활성 검출
결과에 따르면, TIGIT에 대한 양성 대조 항체 RG6058의 CD155과의 경쟁적 결합 EC50은 1.212nM이고, TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2의 CD155과의 경쟁적 결합 EC50은 1.049nM이며; TIGIT에 대한 양성 대조 항체 RG6058의 CD112과의 경쟁적 결합 EC50은 1.224nM이고, TIGIT에 대한 인간화 항체 26B12H2L2의 CD112과의 경쟁적 결합 EC50은 1.140nM이다.
결과에 따르면, 인간화 항체 26B12H2L2는 CD155 또는 CD112과 경쟁하여 세포막 표면 항원 TIGIT에 결합하는 능력이 양성 대조 항체 RG6058보다 강하다.
실시예
9:
Jurkat
-
TIGIT
및 HT1080-
aCD3scFv
세포 시스템에
TIGIT
항체가 첨가된 혼합 림프 반응
실험 방법:
TIGIT 벡터 plenti6.3/V5-TIGITFL-BSD(벡터 pLenti6.3은 Invitrogen에서 구입함)를 Jurkat 세포에 형질감염시키고, 스크리닝을 통해 TIGIT를 안정적으로 발현하는 세포주 Jurkat-TIGIT 세포를 얻으며; 항-CD3 항체 벡터 pCDH-aCD3scFv-puro를 GenScript에 의뢰하여 유전자 최적화를 통해 항-CD3scFv의 cDNA 서열을 합성하고, pUC57simple(Genscript사에서 제공) 벡터에 클로닝하여, pUC57simple-항-CD3scFv플라스미드를 얻었다. XbaI&BamHI 이중 효소 절단으로 합성된 pUC57simple-항-CD3scFv 플라스미드에서, 항-CD3scFv 표적 유전자 단편을 회수하고 제한 부위 BamHI&XhoI를 통해 pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro(unibio에서 구입) 발현 벡터에 서브클로닝하며(항-CD3scFv 서열은 참고문헌: Eukaryotic expression of anti-CD3 single chain Fv antibody gene and the characterization of its bioactivities JOURNAL Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi 20 (5), 552-555 (2004), PUBMED 15367345에서 유래됨); HT-1080 세포에 형질감염시키고, 스크리닝을 통해 세포막에서 항-CD3scFv를 안정적으로 발현하는 세포주 HT1080-aCD3scFv 세포를 얻었다.
대수성장기 Jurkat-TIGIT 및 HT1080-aCD3scFv 세포를 수집하고, 96웰 플레이트에서 Jurkat-TIGIT의 각 웰에 5W 세포를 첨가하고 HT1080-aCD3scFV의 각 웰에 1W 세포를 첨가하였다. 희석된 항체(최종 농도 10nM, 50nM, 250nM)를 첨가한 후 항-인간 CD28 항체(R&D에서 구입, Cat. No.: MAB342-500)(3μg/mL)를 첨가하고, 인큐베이터에서 48시간 동안 배양하며; 배양 상층액을 수집하고, IL-2 ELISA 검출 키트로 IL-2의 함량을 검출하였다.
실험 결과는 도 17에 도시된 바와 같다.
결과에 따르면, 인간화 항체 26B12H2L2 및 양성 대조 항체 RG6058은 모두 시스템의 IL-2 분비를 촉진할 수 있고, 각 농도(10nM, 50nM, 250nM)의 인간화 항체 26B12H2L2는 IL-2 분비 촉진 수준이 RG6058과 비슷하다.
결과에 따르면, 인간화 항체 26B12H2L2는 IL-2 분비에 대한 세포의 유도 능력이 양성 대조 항체 RG6058과 비슷하다.
실시예
10:
hTigit
-
BALB
/c
트란스제노시스
마우스에 CT26을 접종한 마우스 이식 종양에 대한
26B12H2L2의
치료 작용
hTigit-BALB/c 트란스제노시스 마우스(마우스는 Jiangsu GemPharmatech Co., Ltd에서 구입하고, 구입된 트란스제노시스 마우스의 정상적인 TIGIT 유전자를 인간 TIGIT 유전자로 대체함)의 등에 50만/마리의 CT26 세포(마우스 결장암 세포주, ATCC에서 구입)를 접종하고, 구체적인 실험 단계는 2500만/ml의 CT26 세포를 마우스당 200μl씩 마우스에 접종하여 마우스 종양 모델을 구축하는 것이다. 실험 마우스는 그룹당 8마리이고, 아이소타입 대조군(투여량은 20mg/kg이고, 투여 방식은 복강내 주사(i.p.), 주 2회임) 및 실험군(투여량은 20mg/kg이고, 투여 방식은 복강내 주사(i.p.), 주 2회임)을 설정하였다. 구체적인 방안은 표 9에 나타낸 바와 같다.
표 9: 마우스 CT26 종양 모델의 모델링 및 항체의 투여 방안
실험 결과는 도 18에 도시된 바와 같다.
결과에 따르면, hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델에서 26B12H2L2는 종양 부피를 현저하게 감소시킨다.
결과에 따르면, hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스 CT26 종양 모델에서 26B12H2L2는 매우 강한 약효를 가지고; 종양, 특히 결장암의 치료 및/또는 예방을 위한 잠재력을 갖는다.
아울러, 도 19에 도시된 바와 같이, 26B12H2L2는 CT26 종양 모델로 사용된 hTIGIT-BALB/c 트란스제노시스 마우스의 체중에 영향을 미치지 않고, 이는 26B12H2L2 항체가 마우스에 독성 부작용을 일으키지 않음을 나타낸다.
실시예
11: 항-
TIGIT
항체와 항-
CTLA4
-항-PD-1
이중특이적
항체의 병용에 의한 유효 치료
항-TIGIT 항체와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체CP004(hG1TM)의 병용의 생체내 종양 억제 활성을 검출하기 위해, 먼저 CT26 세포(인간 결장암 세포, Jiangsu GemPharmatech Co., Ltd에서 구입)를 5-7주령의 암컷 BALB/c-hPD1/hTIGIT 마우스(Jiangsu GemPharmatech Co., Ltd에서 구입) 피하에 접종하고, 평균 종양 부피가 80-120mm3 에 도달하면 마우스를 종양 부피에 따라 무작위로 그룹당 6마리씩 4개 그룹으로 나누었다. 그룹화 당일을 D0으로 정의하고, 그룹화 당일 D0일부터 투여를 시작하였다. 병용군의 투여 방식은 약물을 별도로 제조하여 순차적으로 각각 투여하는 것이다(투여 순서 및 시간 간격에 대한 특정 요구사항이 없고, 한 약물을 투여한 후 다른 약물을 투여함). 모델링과 구체적인 투여 방식은 표 10과 같다. 투여 후 각 그룹의 종양 크기를 측정하고, 종양 부피를 계산하였다.
표 10: 항-TIGIT 항체와 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 병용에 의해 CT26 이식 종양 BALB/c-hPD1/hTIGIT마우스 모델을 치료하는 투여 방안
결과는 도 20에 도시된 바와 같다. 결과에 따르면, 아이소타입 대조 항체 hIgG에 비해, CP004(hG1TM), 26B12H2L2는 모두 마우스의 종양 성장을 효과적으로 억제할 수 있고, CP004(hG1TM)+26B12H2L2군은 이 모델에서 협동적인 항종양 약효를 보이며, 이들 병용 사용은 시험 약물 단독 사용군보다 종양을 더 잘 억제한다.
이 밖에, 도 21에 도시된 바와 같이, 종양 보유 마우스는 시험 약물 CP004(hG1TM) 및 26B12H2L2 단독 사용과 병용 사용에 대해 우수한 내성을 나타내고, 각 그룹은 종양 보유 마우스의 체중에 영향을 미치지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시형태를 상세히 설명하였지만, 당업자는 공개된 모든 교시에 따라 세부사항에 대해 다양한 수정 및 대체를 이룰 수 있고 이러한 변경이 본 발명의 보호범위 내에 속함을 이해할 것이다. 본 발명의 전체 범위는 첨부된 청구범위 및 이의 등가물에 의해 제공된다.
서열목록(참고: 밑줄 친 부분은 CDR 서열을 나타냄)
26B12VH의 아미노산 서열
26B12VH의 핵산 서열
GAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGACCTGGCCTGGTGAAACCCTCTCAGTCTCTGTCCCTCACCTGCACTGTCACTGGCCACTCATTCACCAGTGATTATGCCTGGAACTGGATCCGGCAGTTTCCAGGAAACAGACTGGAGTGGATGGGCTACATAAGCTACAGTGATAGCACTAACTACAACCCATCTCTCAAAAGTCGAATCTCTATCACTCGAGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCTTGCAGATGAATTCTGTGACTACTGAGGACACAGCCACATATTACTGTGCAAGATTGGACTATGGTAACTACGGTGGGGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGGACCTCAGTCACCGTCTCCTCA (서열번호 2)
HCDR1:GHSFTSDYA (서열번호 3)
HCDR2:ISYSDST (서열번호 4)
HCDR3:ARLDYGNYGGAMDY (서열번호 5)
26B12VL의 아미노산 서열
DIVLTQSHEFMSTSLRDRVSITCKSSQHVSTAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVKAEDLAVYYCQQHYITPWTFGGGTKLEIK (서열번호 6)
26B12VL의 핵산 서열
GATATTGTGCTAACTCAGTCTCACGAATTCATGTCCACCTCATTACGAGACAGGGTCAGCATCACCTGCAAATCCAGTCAACATGTGAGTACTGCTGTAGCCTGGTATCAACAGAAACCAGGACAATCTCCTAAACTACTGATTTACTCGGCATCCTACCGGTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGATTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGAAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAACATTATATTACTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA (서열번호 7)
LCDR1:QHVSTA (서열번호 8)
LCDR2:SAS (서열번호 9)
LCDR3:QQHYITPWT (서열번호 10)
26B12H1의 아미노산 서열
26B12H1의 핵산 서열
GATGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCCGGACTGGTGAAGCCTTCCCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACAGTGTCTGGCCACAGCTTCACATCCGACTACGCCTGGAACTGGATCAGGCAGTTTCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCTCTTATAGCGACTCCACCAACTATAATCCCTCTCTGAAGAGCCGGATCACCATCAGCAGAGATACATCCAAGAACCAGTTCTTTCTGCAGCTGAACAGCGTGACAGCCGCCGACACCGCCACATACTATTGCGCCCGGCTGGACTACGGCAATTATGGCGGAGCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCTCCGTGACAGTGAGCTCC (서열번호 12)
26B12H2의 아미노산 서열
26B12H2의 핵산 서열
GATGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCAAGCCAGACCCTGTCCCTGACCTGTACAGTGTCCGGCCACTCTTTTACAAGCGACTACGCCTGGTCTTGGATCAGGCAGCCCCCTGGCAAGGGACTGGAGTGGATCGGCTACATCTCCTATTCTGACAGCACCAACTATAATCCCTCCCTGAAGTCTCGGGTGACCATCTCTAGAGATACAAGCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCCGTGACCGCAGCAGACACAGCCGTGTACTATTGCGCCCGGCTGGACTACGGCAATTATGGCGGAGCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACAGTGTCTAGC (서열번호 14)
26B12H3의 아미노산 서열
26B12H3의 핵산 서열
GATGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCAAGCCAGACCCTGTCCCTGACCTGTACAGTGTCCGGCCACTCTTTTACAAGCGACTACGCCTGGTCTTGGATCAGACAGCCCCCTGGCAAGGGACTGGAGTGGATCGGCTACATCTCCTATTCTGACAGCACCAACTATAATCCCTCCCTGAAGTCTAGAGTGACCATCTCTGTGGATACAAGCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCCGTGACCGCAGCAGACACAGCCGTGTACTATTGCGCCCGGCTGGACTACGGCAATTATGGCGGAGCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACAGTGTCTAGC (서열번호 16)
26B12H4의 아미노산 서열
26B12H4의 핵산 서열
GATGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCCGGACTGGTGAAGCCTTCCCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACAGTGTCTGGCCACAGCTTCACATCCGACTACGCCTGGAACTGGATCAGGCAGTTTCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTACATCTCTTATAGCGACTCCACCAACTATAATCCCTCTCTGAAGAGCCGGATCACCATCAGCAGAGATACATCCAAGAACCAGTTCTTTCTGCAGCTGAACAGCGTGACAGCCGCCGACACCGCCACATACTATTGCGCCCGGCTGGACTACGGCAATTATGGCGGAGCCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCTCCGTGACAGTGAGCTCC (서열번호 18)
26B12L1의 아미노산 서열
DIQMTQSPKSLSTSVGDRVTITCRSSQHVSTAVAWYQQKPGKSPKLLIYSASYRYSGVPDRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDFATYYCQQHYITPWTFGGGTKLEIK (서열번호 19)
26B12L1의 핵산 서열
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTAAGTCCCTGTCTACAAGCGTGGGCGATCGGGTGACCATCACATGTAGAAGCTCCCAGCACGTGTCTACCGCAGTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGAGCCCTAAGCTGCTGATCTATTCCGCCTCTTACAGGTATTCCGGAGTGCCAGACCGGTTTAGCGGCTCCGGCTCTGGCACCGATTTCACCTTTACAATCTCTAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTACATCACCCCATGGACCTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (서열번호 20)
26B12L2의 아미노산 서열
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQHVSTALAWYQQKPGKSPKLLIYSASSRYSGVPDRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDFATYYCQQHYITPWTFGGGTKLEIK (서열번호 21)
26B12L2의 핵산 서열
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTAGCTCCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGTAGATCTAGCCAGCACGTGTCTACAGCCCTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGAGCCCTAAGCTGCTGATCTACTCCGCCTCCTCTAGGTATTCTGGAGTGCCAGACCGGTTTTCCGGCTCTGGCAGCGGCACCGATTTCACCTTTACAATCAGCTCCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTATATCACCCCATGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG (서열번호 22)
26B12L3의 아미노산 서열
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQHVSTALAWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYITPWTFGGGTKLEIK (서열번호 23)
26B12L3의 핵산 서열
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTAGCTCCCTGAGCGCCTCCGTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGTAGAGCCTCTCAGCACGTGAGCACAGCCCTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATCTATAGCGCCTCTAGCCTGCAGTCCGGAGTGCCATCTCGGTTCTCTGGCAGCGGCTCCGGAACCGACTTTACCCTGACAATCTCCTCTCTGCAGCCAGAGGATTTCGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTACATCACCCCATGGACCTTCGGCGGCGGCACCAAGCTGGAGATCAAG (서열번호 24)
26B12L4의 아미노산 서열
DIQMTQSPKSMSTSVGDRVTITCRSSQHVSTAVAWYQQKPGKSPKLLIYSASYRYSGVPDRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDFATYYCQQHYITPWTFGGGTKLEIK (서열번호 25)
26B12L4의 핵산 서열
GACATCCAGATGACCCAGTCCCCTAAGTCCATGTCTACAAGCGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTAGAAGCTCCCAGCACGTGTCTACCGCAGTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGAGCCCTAAGCTGCTGATCTATTCCGCCTCTTACAGGTATTCCGGAGTGCCAGACCGGTTTAGCGGCTCCGGCTCTGGCACCGATTTCACCTTTACAATCTCTAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTACATCACCCCATGGACCTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (서열번호 26)
이하는 CTLA4-PD1의 서열이다
14C12 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
14C12 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
DIKMTQSPSSMYASLGERVTFTCKASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGSGSGQDYSLTISSLEYEDMGIYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK (서열번호 28)
14C12의 HCDR1: Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr Asp (서열번호 29)
14C12의 HCDR2: Ile Ser Gly Gly Gly Arg Tyr Thr (서열번호 30)
14C12의 HCDR3: Ala Asn Arg Tyr Gly Glu Ala Trp Phe Ala Tyr (서열번호 31)
14C12의 LCDR1: Gln Asp Ile Asn Thr Tyr (서열번호 32)
14C12의 LCDR2: Arg Ala Asn (서열번호 33)
14C12의 LCDR3: Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Leu Thr (서열번호 34)
4G10 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
4G10 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
4G10의 HCDR1: Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr (서열번호 37)
4G10의 HCDR2: Ile Asn Pro Tyr Asn Asn Ile Thr (서열번호 38)
4G10의 HCDR3: Ala Arg Leu Asp Tyr Arg Ser Tyr (서열번호 39)
4G10의 LCDR1: Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Phe (서열번호 40)
4G10의 LCDR2: Gly Thr Asn (서열번호 41)
4G10의 LCDR3: Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Val (서열번호 42)
14C12H1L1 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
14C12H1L1 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK (서열번호 44)
4G10H1L1 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQAPGQGLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMELSRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA (서열번호 45)
4G10H3L3 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA (서열번호 46)
4G10H1V(M)의 아미노산 서열
QVQLVESGAELVKPGASMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYNQKFMGKATFTVDKSISTAYMELSRLTSDDSGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA (서열번호 47)
4G10H3V(M)의 아미노산 서열
QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA (서열번호 48)
4G10H1L1 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQEKPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL (서열번호 49)
4G10H3L3 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGGGTKLTVL (서열번호 50)
4G10L1V(M)의 아미노산 서열
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFANWVQEKPGQAFRSLIGGTNNRASWVPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYFCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR (서열번호 51)
4G10L3V(M)의 아미노산 서열
QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR (서열번호 52)
CP004(hG1TM) 중의 면역글로불린 부분의 중쇄의 아미노산 서열
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 53)
14C12H1L1 경쇄(14C12L1)에 의해 코딩된 아미노산 서열: (214 aa)
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호 54)
Linker1의 아미노산 서열: GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 55)
Linker2의 아미노산 서열: GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 56)
CP004(hG1TM) 중쇄의 아미노산 서열EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSSYDMSWVRQAPGKGLDWVATISGGGRYTYYPDSVKGRFTISRDNSKNNLYLQMNSLRAEDTALYYCANRYGEAWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR (서열번호 57)
CP004(hG1TM) 중쇄의 핵산 서열
GAAGTGCAGCTGGTCGAGTCTGGGGGAGGGCTGGTGCAGCCCGGCGGGTCACTGCGACTGAGCTGCGCAGCTTCCGGATTCGCCTTTAGCTCCTACGACATGTCCTGGGTGCGACAGGCACCAGGAAAGGGACTGGATTGGGTCGCTACTATCTCAGGAGGCGGGAGATACACCTACTATCCTGACAGCGTCAAGGGCCGGTTCACAATCTCTAGAGATAACAGTAAGAACAATCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCTGAGGACACCGCACTGTACTATTGTGCCAACCGCTACGGGGAAGCATGGTTTGCCTATTGGGGGCAGGGAACCCTGGTGACAGTCTCTAGTGCCAGCACCAAAGGGCCCAGCGTGTTTCCTCTCGCCCCCTCCTCCAAAAGCACCAGCGGAGGAACCGCTGCTCTCGGATGTCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAACCCGTCACCGTGAGCTGGAATAGCGGCGCTCTGACAAGCGGAGTCCATACATTCCCTGCTGTGCTGCAAAGCAGCGGACTCTATTCCCTGTCCAGCGTCGTCACAGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGTAACGTCAACCACAAGCCCTCCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCCTGCGACAAGACACACACCTGTCCCCCCTGTCCTGCTCCCGAAGCTGCTGGAGCCCCTAGCGTCTTCCTCTTTCCTCCCAAACCCAAGGACACCCTCATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTCACCTGTGTCGTCGTGGATGTCAGCCATGAGGACCCCGAGGTGAAATTCAACTGGTATGTCGATGGCGTCGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAGGAACAGTACAACTCCACCTACAGGGTGGTGTCCGTGCTGACAGTCCTCCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGCTCTCCCTGCCCCCATTGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAAGGCCAACCCAGGGAGCCCCAGGTCTATACACTGCCTCCCTCCAGGGACGAACTCACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTTTATCCCAGCGACATCGCCGTCGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCCGAGAATAACTACAAGACCACCCCTCCTGTCCTCGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACAGCAAACTGACCGTGGATAAGTCCAGATGGCAGCAGGGCAATGTCTTTTCATGTTCCGTGATGCACGAGGCACTGCACAACCACTATACCCAGAAGTCTCTGAGTCTGTCACCAGGAAAAGGAGGAGGAGGCTCTGGAGGAGGCGGAAGTGGAGGCGGAGGATCAGGAGGGGGAGGATCTCAGGTGCAGCTGGTCGAATCCGGAGCCGAGGTGAAGAAACCCGGCGCTTCCGTGAAGGTCTCTTGCAAAGCATCAGGCTACAGCTTCACAGGGTATACTATGAACTGGGTGCGGCAGGCACCTGGACAGTGTCTGGAATGGATCGGCCTGATTAACCCATACAACAACATCACTAACTACGCCCAGAAGTTCCAGGGCCGGGTGACTTTTACCGTGGACACTAGCATTTCCACCGCTTACATGGAGCTGAGTCGGCTGAGATCAGACGATACCGGCGTGTATTTTTGCGCAAGGCTGGATTACAGAAGTTATTGGGGACAGGGAACACTTGTTACAGTCTCTGCTGGAGGAGGCGGATCTGGAGGAGGAGGATCTGGCGGAGGAGGCAGTGGAGGAGGAGGATCACAGGCTGTGGTTACTCAGGAACCAAGCCTGACCGTGAGCCCCGGAGGCACAGTCACTCTGACCTGTGGGAGCTCCACAGGAGCTGTGACCACATCTAACTTCCCTAATTGGGTGCAGCAGAAGCCAGGACAGGCACCTCGATCCCTGATCGGGGGAACCAACAACAAGGCCAGCTGGACACCCGCCAGATTTTCTGGCAGTCTGCTGGGCGGGAAAGCCGCTCTGACCATTAGCGGCGCTCAGCCTGAGGACGAAGCAGAGTACTATTGCGCCCTGTGGTATAGTAATCATTGGGTGTTCGGGTGTGGGACAAAACTGACCGTGCTGAGA (서열번호 58)
CP004(hG1TM) 경쇄의 아미노산 서열
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열번호 59)
CP004(hG1TM) 경쇄의 핵산 서열GACATTCAGATGACTCAGAGCCCCTCCTCCATGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGGGTCACCTTCACATGCCGCGCTAGTCAGGATATCAACACCTACCTGAGCTGGTTTCAGCAGAAGCCAGGGAAAAGCCCCAAGACACTGATCTACCGGGCTAATAGACTGGTGTCTGGAGTCCCAAGTCGGTTCAGTGGCTCAGGGAGCGGACAGGACTACACTCTGACCATCAGCTCCCTGCAGCCTGAGGACATGGCAACCTACTATTGCCTGCAGTATGATGAGTTCCCACTGACCTTTGGCGCCGGGACAAAACTGGAGCTGAAGCGAACTGTGGCCGCTCCCTCCGTCTTCATTTTTCCCCCTTCTGACGAACAGCTGAAATCAGGCACAGCCAGCGTGGTCTGTCTGCTGAACAATTTCTACCCTAGAGAGGCAAAAGTGCAGTGGAAGGTCGATAACGCCCTGCAGTCCGGCAACAGCCAGGAGAGTGTGACTGAACAGGACTCAAAAGATAGCACCTATTCCCTGTCTAGTACACTGACTCTGTCCAAGGCTGATTACGAGAAGCACAAAGTGTATGCATGCGAAGTGACACATCAGGGACTGTCAAGCCCCGTGACTAAGTCTTTTAACCGGGGCGAATGT (서열번호 60)
CP004(hG1TM) 중쇄 CDR 아미노산 서열
HCDR1:GFAFSSYD (서열번호 61)
HCDR2:ISGGGRYT (서열번호 62)
HCDR3:ANRYGEAWFAY (서열번호 63)
HCDR4:GYSFTGYT (서열번호 64)
HCDR5:INPYNNIT (서열번호 65)
HCDR6:ARLDYRSY (서열번호 66)
HCDR7:TGAVTTSNF (서열번호 67)
HCDR8:GTN (서열번호 68)
HCDR9:ALWYSNHWV (서열번호 69)
CP004(hG1TM) 경쇄 CDR 아미노산 서열
LCDR1:QDINTY (서열번호 70)
LCDR2:RAN (서열번호 71)
LCDR3:LQYDEFPLT (서열번호 72)
CP004(hG1TM) 중쇄 가변 영역 아미노산 서열
VH2:QVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQCLEWIGLINPYNNITNYAQKFQGRVTFTVDTSISTAYMELSRLRSDDTGVYFCARLDYRSYWGQGTLVTVSA (서열번호 74)
VH3:QAVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCGSSTGAVTTSNFPNWVQQKPGQAPRSLIGGTNNKASWTPARFSGSLLGGKAALTISGAQPEDEAEYYCALWYSNHWVFGCGTKLTVLR (서열번호 75)
CP004(hG1TM) 경쇄 가변 영역 아미노산 서열
DIQMTQSPSSMSASVGDRVTFTCRASQDINTYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVSGVPSRFSGSGSGQDYTLTISSLQPEDMATYYCLQYDEFPLTFGAGTKLELK (서열번호 76)
mFc 아미노산 서열: PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK (서열번호 77)
hFc 서열
THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호 78)
Claims (8)
- 약학적 조성물 또는 키트로서,
항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고, 선택적으로, 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 부형제를 더 포함하며,
상기 항-TIGIT 항체는 서열번호 1로 표시되는 중쇄 가변 영역에 포함되는 HCDR1-HCDR3 및 서열번호 6으로 표시되는 경쇄 가변 영역에 포함되는 LCDR1-LCDR3을 포함하고(바람직하게는, IMGT 넘버링 시스템에 따라, 상기 항체의 중쇄 가변 영역은 서열번호 3-5의 아미노산 서열로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3을 포함하고; 상기 항체의 경쇄 가변 영역은 서열번호 8-10의 아미노산 서열로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3을 포함함),
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는,
PD-1을 표적으로 하는 제1 단백질 기능 영역, 및
CTLA4를 표적으로 하는 제2 단백질 기능 영역을 포함하며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 면역글로불린이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이며; 또는, 상기 제1 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 면역글로불린이며;
상기 면역글로불린은 서열번호 27로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 29-31로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 32-34로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 및 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 35로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 37-39로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 36으로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 40-42로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하며;
또는,
상기 면역글로불린은 서열번호 35로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 37-39로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 36으로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 40-42로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하고; 및 상기 단일 사슬 항체는 서열번호 27로 표시되는 중쇄 가변 영역 중의 HCDR1-HCDR3(바람직하게는, 서열번호 29-31로 각각 표시되는 HCDR1-HCDR3) 및 서열번호 28로 표시되는 경쇄 가변 영역 중의 LCDR1-LCDR3(바람직하게는, 서열번호 32-34로 각각 표시되는 LCDR1-LCDR3)을 포함하는, 약학적 조성물 또는 키트. - 제1항에 있어서,
상기 항-TIGIT 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 11, 서열번호 13, 서열번호 15 및 서열번호 17로부터 선택되고; 상기 항-TIGIT 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6, 서열번호 19, 서열번호 21, 서열번호 23 및 서열번호 25로부터 선택되며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서,
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 1로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 6으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 11로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 19로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 17로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 19로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 13으로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 21로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 13으로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 23으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 15로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 21로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 15로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 23으로 표시되며;
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 11로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 25로 표시되며; 또는
상기 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 17로 표시되고, 상기 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 25로 표시되며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 비-CDR 영역을 포함하고, 상기 비-CDR 영역은 뮤린 이외의 종, 예를 들어 인간 항체에서 유래되며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체의 중쇄 불변 영역은 Ig gamma-1 chain C region(예: NCBI ACCESSION: P01857)이고; 경쇄 불변 영역은 Ig kappa chain C region(예: NCBI ACCESSION: P01834)이며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, 상보성 결정 영역 단편, 단일 사슬 항체, 인간화 항체, 키메라 항체 또는 디아바디로부터 선택되고;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 4E-10 미만 또는 4E-11 미만의 KD로 TIGIT-mFc에 결합하며; 바람직하게는, 상기 KD는 Fortebio 분자 상호작용 분석기에 의해 측정되고;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 1.5nM 미만, 1.2nM 미만 또는 1nM 미만의 EC50으로 TIGIT-mFc에 결합하며; 바람직하게는, 상기 EC50은 유세포 분석기에 의해 측정되고;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체는 단클론 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 다중특이적 항체(예: 이중특이적 항체)이며;
바람직하게는, 상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, 상보성 결정 영역 단편, 단일 사슬 항체(예: scFv), 인간화 항체, 키메라 항체 또는 이중특이적 항체로부터 선택되고;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서, 상기 항체는 하이브리도마 세포주 LT019에 의해 생산된 항체이며, 상기 하이브리도마 세포주 LT019는 CCTCC(China Center for Type Culture Collection)에 수탁되고, 수탁번호는 CCTCC NO: C2020208인, 약학적 조성물 또는 키트. - 제1항에 있어서,
상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27, 서열번호 43 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28, 서열번호 44 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며;
또는,
상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27, 서열번호 43 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되고; 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28, 서열번호 44 또는 이들과 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로부터 선택되며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 이중특이적 항체는 하기 (1)-(20) 중 어느 하나로부터 선택되되,
(1) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(2) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(3) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(4) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(5) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(6) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(7) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(8) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 35 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 36 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(9) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(10) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 45 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 49 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(11) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(12) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 46 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 50 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(13) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(14) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(15) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(16) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(17) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(18) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 27 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 28 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
(19) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 47 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 98%, 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 51 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
및,
(20) 상기 면역글로불린의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 면역글로불린의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며; 및, 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 43 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 44 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 53 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 54 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 제1 단백질 기능 영역과 상기 제2 단백질 기능 영역은 직접 연결되거나 연결 단편을 통해 연결되고; 및/또는 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역과 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역은 직접 연결되거나 연결 단편을 통해 연결되며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 연결 단편은 (GGGGS)n이고, n은 양의 정수이며; 바람직하게는, n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 제1 단백질 기능 영역 및 제2 단백질 기능 영역은 독립적으로 1개, 2개 또는 2개 이상이며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 단일 사슬 항체(바람직하게는, 중쇄 가변 영역)는 면역글로불린의 중쇄의 C-말단에 연결되고;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서,
상기 면역글로불린은 인간 IgG1 아형이며;
EU 넘버링 시스템에 따라, 상기 면역글로불린의 중쇄 불변 영역은,
L234A 및 L235A; 또는
L234A 및 G237A; 또는
L235A 및 G237A; 또는
L234A, L235A, G237A의 돌연변이 조합 중 하나를 가지고;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체에서, 상기 이중특이적 항체는,
PD-1을 표적으로 하는 제1 단백질 기능 영역, 및
CTLA4를 표적으로 하는 제2 단백질 기능 영역을 포함하며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 1개이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 2개이며;
상기 제1 단백질 기능 영역은 면역글로불린이고, 상기 제2 단백질 기능 영역은 단일 사슬 항체이며;
상기 면역글로불린의 중쇄의 아미노산 서열은 서열번호 53 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 경쇄의 아미노산 서열은 서열번호 54 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 48 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되고, 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 서열번호 52 또는 이와 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 92%, 93%, 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 상동성을 갖는 서열로 표시되며;
상기 단일 사슬 항체는 면역글로불린의 중쇄의 C-말단에 연결되고;
상기 제1 단백질 기능 영역과 상기 제2 단백질 기능 영역은 제1 연결 단편을 통해 연결되며; 상기 단일 사슬 항체의 중쇄 가변 영역과 상기 단일 사슬 항체의 경쇄 가변 영역은 제2 연결 단편을 통해 연결되고; 상기 제1 연결 단편과 상기 제2 연결 단편은 동일하거나 상이하며;
바람직하게는, 상기 제1 연결 단편 및 상기 제2 연결 단편의 아미노산 서열은 독립적으로 서열번호 55 및 서열번호 56으로부터 선택되고;
바람직하게는, 상기 제1 연결 단편 및 상기 제2 연결 단편의 아미노산 서열은 모두 서열번호 56으로 표시되며;
바람직하게는, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 중쇄 아미노산 서열은 서열번호 57로 표시되고, 경쇄 아미노산 서열은 서열번호 59로 표시되며, 이중특이적 항체 구조는 IgG-scFv이고, IgG 부분은 항-PD1 항체이며, scFv 부분은 항-CTLA4 항체이고,
항-PD1 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 61로 표시되며, HCDR2 서열은 서열번호 62로 표시되고, HCDR3 서열은 서열번호 63으로 표시되며, VH 서열은 서열번호 73으로 표시되고, 항-PD1 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 70으로 표시되며, LCDR2 서열은 서열번호 71로 표시되고, LCDR3 서열은 서열번호 72로 표시되며, VL 서열은 서열번호 76으로 표시되고,
항-CTLA4 항체의 HCDR1 서열은 서열번호 64로 표시되며, HCDR2 서열은 서열번호 65로 표시되고, HCDR3 서열은 서열번호 66으로 표시되며, VH 서열은 서열번호 74로 표시되고, 항-CTLA4 항체의 LCDR1 서열은 서열번호 67로 표시되며, LCDR2 서열은 서열번호 68로 표시되고, LCDR3 서열은 서열번호 69로 표시되며, VL 서열은 서열번호 75로 표시되는, 약학적 조성물 또는 키트. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
항체의 질량에 따라 계산하면, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 항-CTLA4-항-PD-1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 질량비는 (1:5)-(5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 또는 5:1인, 약학적 조성물. - 키트로서,
개별 포장된 제1 제품 및 제2 제품을 포함하고,
상기 제1 제품은 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하며;
상기 제2 제품은 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하고;
바람직하게는, 상기 키트는 개별 포장된 제3 제품을 더 포함하며, 상기 제3 제품은 하나 이상의 화학요법 약물을 포함하고,
바람직하게는, 상기 제1 제품 및 상기 제2 제품은 독립적으로 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 보조제를 더 포함하며;
바람직하게는, 상기 조합 제품은 제품 설명서를 더 포함하고;
바람직하게는, 상기 키트에서, 항체의 질량에 따라 계산하면, 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 질량비는 (1:5)-(5:1), 예를 들어 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 또는 5:1인, 키트. - 종양의 치료 및/또는 예방 방법으로서,
필요한 피험자에게 유효량의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-TIGIT 항체 또는 이의 항원 결합 단편; 및/또는 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함하고;
바람직하게는, 추가로 하나 이상의 약물(예: 화학요법제 또는 성장 억제제, 표적화 치료제, 항체-약물 접합체, 항대사 약물, 항생제, 항호르몬제, 식물성 항암 약물 및/또는 호르몬 약물)과 병용하는 단계를 포함하고, 바람직하게는, 상기 약물은 아드리아마이신계, 타목시펜, 메게스트롤, 아스파라기나제, 백금계 약물(예: 시스플라틴, 카보플라틴 또는 옥살리플라틴), 플루오로우라실계 항종양제, 시클로포스파미드, 페메트렉시드, 파클리탁셀, 빈블라스틴, 아드리아마이신계, 고세렐린, 알킬화제, 안트라사이클린, 항남성호르몬제, 아로마타제 억제제, 단백질 키나아제 억제제(예: 티로신 키나아제 억제제), 지질 키나아제 억제제, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 리보자임, 토포이소머라아제 억제제, 세포독성제, 항종양 항생제, 프로테아좀 억제제, 항미세소관제, EGFR 길항제, 레티노이드, 히스톤 디아세틸라제 억제제, B-raf 억제제, MEK 억제제, K-ras 억제제, c-Met 억제제, Alk 억제제, 포스파티딜이노시톨 3-키나아제 억제제, Akt 억제제, mTOR 억제제, 비포스파티딜이노시톨 3-키나아제/mTOR 억제제, 메이탄신, 모노메틸아우리스타틴 E, 칼리키아마이신, esperamicin 및 방사성 동위원서 킬레이트제 중 하나 이상으로부터 선택되며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 종양 화학요법 약물은 동시에 또는 순차적으로 투여되고; 보다 바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체, 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체는 수술 치료 이전 또는 이후 및/또는 방사선 치료 이전 또는 이후에 투여되며;
바람직하게는, 상기 항-TIGIT 항체, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및/또는 상기 화학요법 약물은 정맥 주사 또는 정맥 점적에 적합한 형태, 바람직하게는 액체 형태이고;
바람직하게는, 상기 종양은,
유방암, 난소암, 결장직장암, 자궁경부 종양, 다발성 골수종, 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 형질세포종, 두경부암, 뇌암, 인후암, 비인두암, 식도암, 식도 편평세포암종, 갑상선암, 중피종, 선암(예: 췌장암), 폐암(예: 소세포폐암, 소세포폐암), 유방암, 간암(예: 간세포암, 간담암), 위암, 위장관암, 대장암(예: 결장암, 결장직장암), 담도암(예: 담관암), 신장암, 나팔관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 방광암, 요로상피암, 전립선암, 고환암, 피부암, 흑색종, 골수종(예: 다발성 골수종), 비호지킨 림프종, B 세포 림프종, 형질세포종, 백혈병, 림프종, 골암, 골육종, 연골육종, 고빈도 현미부수체 불안정성(MSI-H) 또는 불일치 복구 결함(dMMR) 고형 종양 중 하나 이상으로부터 선택되며;
바람직하게는, 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-TIGIT 항체 및/또는 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 1회 투여량은 1kg 체중당 0.1-100mg, 바람직하게는, 1-10mg이고; 또는, 본 발명의 어느 하나에 따른 항-TIGIT 항체 및/또는 본 발명의 어느 하나에 따른 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체의 1회 투여량은 피험자 1인당 10-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg 또는 200mg이며,
바람직하게는, 1일 2회 내지 약 격일 1회 투여되거나, 3일, 4일, 5일, 6일, 10일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 1회 투여되고;
바람직하게는, 투여 방식은 정맥 점적 또는 정맥 주사인, 방법. - 단위 제제로서,
바람직하게는, 종양 치료에 사용되고,
상기 단위 제제는 1-10000mg(바람직하게는, 10-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg 또는 200mg)의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-TIGIT 항체 및 1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체, 및 선택적으로 하나 이상의 제6항에서 정의된 상기 화학요법 약물(예: 백금계 약물 및/또는 플루오로우라실계 항종양제)을 포함하고; 상기 항-TIGIT 항체, 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체 및 화학요법 약물은 각각 개별 포장되는, 단위 제제. - 1회 약물 용량 단위로서,
바람직하게는, 종양 치료에 사용되고,
0.1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-TIGIT 항체 및 0.1-10000mg(바람직하게는, 1-1000mg, 바람직하게는, 50-500mg, 100-400mg, 150-300mg, 150-250mg, 200mg 또는 100mg)의 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에서 정의된 상기 항-CTLA4-항-PD-1 이중특이적 항체를 포함하는, 1회 약물 용량 단위.
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