KR20240000655A

KR20240000655A - 죽상경화증을 치료하기 위한 항-fam19a5 항체의 사용

Info

Publication number: KR20240000655A
Application number: KR1020237043994A
Authority: KR
Inventors: 김봉철; 김동식; 이재근; 심주원
Original assignee: 주식회사 뉴라클사이언스
Priority date: 2018-12-27
Filing date: 2019-12-26
Publication date: 2024-01-02
Also published as: EP3902826A4; KR20200143493A; WO2020136603A1; EP3902826A1; JP2022516059A; US20220064277A1; JP7239216B2; CN113227139A

Abstract

본 발명은 치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증을 치료하기 위한 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 길항제(예를 들어, 항체 또는 그것의 항원 결합 부분)의 제약학적 사용에 관한 것이다.

Description

죽상경화증을 치료하기 위한 항-FAM19A5 항체의 사용{USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR TREATING ATHEROSCLEROSIS}

관련 출원의 상호 참조

본 PCT 출원은 2018년 12월 27일자 제출된 미국 임시출원 제62/785,569호의 우선권을 주장하며, 이것은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.

전자 제출된 서열목록

본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일 형식의 전자제출된 서열목록의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다(파일명: 3763_015PC01_SeqListing_ST25.txt, 크기: 262,323 bytes, 생성일: 2019년 12월 26일).

기술분야

본 발명은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 대한 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체) 또는 이러한 길항제를 포함하는 조성물을 사용하여 대상(예를 들어, 인간)의 죽상경화증(atherosclerosis)을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

죽상경화증은 지질을 지닌 대식세포의 축적으로 인해 혈관(예를 들어, 동맥)이 좁아짐으로써 병변이나 플라크가 형성되는 것을 특징으로 하는 질환이다(Lu, H., et al, Arterioscler Thromb Vase Biol 35(3): 485-491 (2015)). 죽상경화증 초기에는 일반적으로 증상이 없지만 치료하지 않고 방치하면 손상된 동맥에 따라 관상동맥 질환, 뇌졸중, 말초동맥 질환, 또는 신장 관련 문제를 초래할 수 있다.

죽상경화증은 일반적으로 젊은 시절에 시작되어 나이가 들면서 악화된다. 65세가 되면 거의 모든 인간들이 어느 정도 이 질환의 영향을 받는다. 현재 적용가능한 치료 옵션은 일반적으로 식이요법, 운동요법, 및 콜레스테롤을 저하시키는 제제(예를 들어, 스타틴)와 같은, 혈압을 조절하고(예를 들어, 항고혈압 약물), 및/또는 응고를 감소시키는(예를 들어, 아스피린) 약물요법을 포함한다(Bergheanu, S.C., et al, Neth Heart J 25(4): 231-242 (2017)). 이 질환이 심한 경우에는 침습적인 과정이 필요할 수 있다(예를 들어, 경피적 관상동맥 중재술, 관상동맥 우회 이식술, 또는 경동맥 내막절제술). 이러한 치료 옵션에도 불구하고 죽상경화증은 선진국에서 사망 및 장애의 가장 큰 원인중 하나로 보고된다(Herrington, W., et al., Circ Res 118(4): 535-46 (2016)). 더욱이, 이용가능한 치료 옵션은 대부분 바람직하지 않은 부작용을 가질 수 있다(Stroes, E.S., et al, Eur Heart J 36(17): 1012-22 (2015)).

따라서, 죽상경화증에 대한 더 효과적이고 포괄적인 치료 옵션에 대한 필요성이 여전히 존재한다.

치료를 필요로 하는 대상에서의 대식세포에 의한 저밀도 지방단백질(LDL)의 포식작용을 증가시키는 방법이 본 발명에 제공되며, 이 방법은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 증가된다. 특정 구체예에서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용의 증가는 죽상경화증 병변에서 일어난다. 추가적인 구체예에서, LDL은 산화된 LDL을 포함한다. 일부 구체예에서, 죽상경화증 병변 부위는 혈관에 있다. 특정 구체예에서, 혈관은 동맥, 정맥, 모세관, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 동맥은 대동맥이다.

또한, 치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 및/또는 축적을 증가시키는 방법이 본 발명에 개시되며, 이 방법은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 및/또는 축적은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 증가된다. 추가적인 구체예에서, 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 증가된 이주 및/또는 축적은 대상의 저밀도 지방단백질(LDL) 수준의 감소와 관련된다.

본 발명은 치료를 필요로 하는 대상의 저밀도 지방단백질(LDL) 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 이 방법은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 대상의 LDL 수준은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 감소된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 기술된 (예를 들어, FAM19A5 길항제로 치료된) 대상은 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낸다: (i) 대식세포에 의한 LDL의 증가된 포식작용; (ii) 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 증가된 이주 및/또는 축적; 및 (iii) 감소된 LDL 수준.

치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증을 치료하는 방법이 본 발명에 제공되며, 이 방법은 서열유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 죽상경화증은 관상동맥 심장 질환(CHD), 경동맥 질환, 말초동맥 질환, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 망막동맥 폐쇄, 장 손상으로 인한 복부 통증, 복막염, 또는 이들의 조합을 포함하는 질환과 관련된다. 특정 구체예에서, 죽상경화증은 고 지방 및/또는 고 콜레스테롤(고콜레스테롤성) 식이와 관련된다. 추가적인 구체예에서, 죽상경화증은 죽상경화증이 없는 대상(예를 들어, 건강한 대상)과 비교하여, 증가된 총 콜레스테롤 수준, 증가된 트리글리세라이드 수준, 증가된 LDL 수준, 감소된 HDL 수준, 플라크 내에서의 옥소-LDL-유도 포말 세포(foam cell)의 증가된 수 및/또는 체류, 또는 이들의 조합과 관련된다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)의 투여는 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 대상의 저밀도 지방단백질(LDL) 수준을 감소시킨다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제의 투여는 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 대상의 대동맥의 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 및/또는 축적을 증가시킨다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제의 투여는 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 대식세포에 의한 LDL의 포식작용을 증가시킨다. 특정 구체예에서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용의 증가는 혈관의 죽상경화증 병변 부위에서 일어난다. 일부 구체예에서, LDL은 산화된 LDL을 포함한다. 특정 구체예에서, 혈관은 동맥, 정맥, 모세관, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 동맥은 대동맥이다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5 표적화 dsRNA, 앱타머, PNA, 또는 이들을 포함하는 벡터이다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체"), 또는 그것의 항원 결합 부분이다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 (a) 효소-결합 면역흡착 분석법(ELISA)에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합; (b) ELISA에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 KD로 막 결합된 인간 FAM19A5에 결합; 및 (c) (a)와 (b) 둘 다로부터 선택된 특성을 나타낸다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 기준 항체와 상호-경쟁하며, 기준 항체는 표 2-5로 구성되는 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 기준 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28로서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합하며, 기준 항체는 표 2-5로 구성되는 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 기준 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28로서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, (i) 중쇄 CDR1은 표 2의 CDR1들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR1을 포함하고; (ii) 중쇄 CDR2는 표 2의 CDR2들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR2를 포함하고; (iii) 중쇄 CDR3은 표 2의 CDR3들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR3을 포함하고; (iv) 경쇄 CDR1은 표 3의 CDR1들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR1을 포함하고; (v) 경쇄 CDR2는 표 3의 CDR2들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR2를 포함하고; 및/또는 (vi) 경쇄 CDR3은 표 3의 CDR3들로 구성된 군으로부터 선택된 CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, (i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, (ii)중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고; (iv) 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고; (v) 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고; 및/또는 (vi) 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28로서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16으로서 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28로서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, VH는 SEQ ID NO: 36으로서 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, VH는 SEQ ID NO: 36으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, VL은 SEQ ID NO: 40으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, (i) VH는 SEQ ID NO: 36으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고; (ii) VL은 SEQ ID NO: 40으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 또는 단쇄 Fv(scFv)를 포함한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, 및 이들의 변이체로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2, IgG4, 또는 이들의 조합이다. 추가적인 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입 항체를 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 Fc 기능이 없는 불변 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화 항체이다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 이중특이적 분자를 형성하는 제2 결합 모이어티를 가진 분자에 연결된다. 일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 면역콘쥬게이트를 형성하는 제제에 연결된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법은 치료제를 투여하는 단계를 더 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화된다. 일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 동맥내, 유리체내, 경막내 경로로, 또는 이들의 조합에 의해 투여된다.

일부 구체예에서, 본 발명으로 치료될 대상은 인간이다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법은 콜레스테롤 저하제를 투여하는 단계를 더 포함한다. 특정 구체예에서, 콜레스테롤 저하제는 FAM19A5 길항제에 이어서 또는 동시에 투여된다.

도 1은 고콜레스테롤혈증 마우스의 체중에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 나타낸다. 마우스는 인간 IgG 대조군 항체(그룹 2, 검은색 삼각형) 또는 두 가지 상이한 농도, 5 mg/kg(그룹 3, 빈 정사각형) 또는 10 mg/kg(그룹 4)의 항-FAM19A5 항체로 치료되었다. 정상 마우스(즉, 정상식이; 그룹 1, 빈 삼각형)가 대조군으로 사용되었다. 체중은 약 42일 동안 7개의 상이한 시점에서 측정되었다.
도 2는 고콜레스테롤혈증 마우스의 LDL 수준에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 나타낸다. 마우스는 인간 IgG 대조군 항체(G2) 또는 두 가지 상이한 농도, 5 mg/kg(G3) 또는 10 mg/kg(G4)의 항-FAM19A5 항체로 치료되었다. 정상 마우스(즉, 정상식이; G1)가 대조군으로 사용되었다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.
도 3A, 3B, 3C, 및 3D는 상이한 치료 그룹의 마우스의 대동맥에서의 CD68(좌측 패널) 및 CD146(우측 패널) 발현의 면역조직학 분석을 나타낸다. 도 3A는 정상 마우스(즉, 정상식이)에서의 발현을 나타낸다. 도 3B는 인간 IgG 대조군 항체로 치료된 고콜레스테롤혈증 마우스에서의 발현을 나타낸다. 도 3C 및 3D는 두 가지 상이한 농도, 5 mg/kg 및 10 mg/kg의 항-FAM19A5 항체로 치료된 마우스에서의 발현을 나타낸다. 나타낸 영상은 100x 확대한 것이다.
도 4A 및 4B는 BV2 세포의 포식작용 능력에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 나타낸다. 도 4A는 다음 중 하나로 처리된 BV2 세포에서의 22시간 동안의 _PHRODO™ Green E. coli BioParticles의 포식작용성 흡수를 나타낸다: (i) 인간 Fc 단독("1"), (ii) 인간 FAM19A5-Fc 단백질 단독("2"), 또는 (iii) 다양한 농도(25 μg/mL("6"), 12.5 μg/mL("5"), 6.25 μg/mL("4"), 또는 3.125 μg/mL("3"))의 항-FAM19A5 항체와 조합된 인간 FAM19A5-Fc 단백질. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다. 도 4B는 다음 중 하나로 처리된 BV2 세포의 대표적인 면역형광 이미지를 제공한다: (i) 인간 Fc 단독(좌측 패널), (ii) 인간 FAM19A5-Fc 단백질 단독(중앙 패널), 또는 (iii) 항-FAM19A5 항체(25 μg/mL)와 조합된 인간 FAM19A5-Fc 단백질(우측 패널).
도 5는 BV2 세포에 의한 TNF-α 생산에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과를 나타낸다. 나타낸 상이한 치료 그룹은 (좌측에서 우측으로) (1) LPS 단독, (2) LPS + FAM19A5-Fc 단백질, (3) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 0.78125 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (4) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 1.5625 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (5) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 3.125 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (6) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 6.25 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (7) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 12.5 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (8) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 25 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, (9) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 50 μg/mL의 항-FAM19A5 항체, 및 (10) LPS + FAM19A5-Fc 단백질 + 100 μg/mL의 항-FAM19A5 항체를 포함한다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다. 막대 위의 "***"는 LPS 치료된 그룹과 비교하여 통계적으로 유의한 차이(p<0.005)를 나타낸다. 막대 위의 "###"는 LPS + FAM19A5-Fc 단백질 치료된 그룹과 비교하여 통계적으로 상이한 차이(p<0.005)를 나타낸다.
도 6A 및 6B는 마우스 골수-유래 대식세포("BMDM")의 포식작용 능력에 대한 FAM19A5 신호화의 효과를 나타낸다. 포식작용 능력은 유세포계수법을 사용하여 측정되며, _PHRODO™ 발현에 대해 양성인 마우스 BMDM의 퍼센트로 표시된다. 도 6A는 상이한 치료 그룹 각각에 대한 대표적인 히스토그램 플롯을 제공한다(우측 위 사분면에 제공된 값은 _PHRODO™ 발현에 대해 양성인 BMDM의 퍼센트를 나타냄). 도 6B는 3가지 독립적 실험으로부터의 결과를 요약한 표를 제공한다. 도 6A 및 6B에 나타낸 상이한 BMDM 치료 그룹은 다음을 포함한다: (A1) 마우스 BMDM 단독, (A2) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포, (A3) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + 대조군 Fc(0.4μM), (A4) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + 대조군 Fc(0.8 μM), (A5) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.4 μM), 및 (A6) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM).
도 7A 및 7B는 마우스 골수-유래 대식세포("BMDM")의 포식작용 능력에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과를 나타낸다. 포식작용 능력은 유세포계수법을 사용하여 측정되며, _PHRODO™ 발현에 대해 양성인 마우스 BMDM의 퍼센트로 표시된다. 도 7A는 상이한 치료 그룹 각각에 대한 대표적인 히스토그램 플롯을 제공한다(우측 위 사분면에 제공된 값은 _PHRODO™ 발현에 대해 양성인 BMDM의 퍼센트를 나타냄). 도 7B는 3가지 독립적 실험으로부터의 결과를 요약한 표를 제공한다. 도 7A 및 7B에 나타낸 상이한 BMDM 치료 그룹은 다음을 포함한다: (B1) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM) + hlgGl 대조군 항체(25 nM), (B2) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM) + hlgGl 대조군 항체(50 nM), (B3) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM) + "3-2" 항-FAM19A5 항체(25 nM), (B4) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM) + "3-2" 항-FAM19A5 항체(50 nM), (B5) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 pM) + "1-65" 항-FAM19A5 항체(25 nM), 및 (B6) 마우스 BMDM + 세포사멸 흉선세포 + FAM19A5-Fc(0.8 μM) + "1-65" 항-FAM19A5 항체(50 nM).
도 8은 도 6A, 6B, 7A, 및 7B에 나타낸 결과의 그래프 비교를 제공한다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.

본 발명에 개시된 발명의 이해를 용이하게 하기 위해 다수의 용어 및 문구가 정의된다. 추가적인 정의는 상세한 설명 전체에서 제시된다.

I. 정의

본 발명 전체에서, 용어 "한" 또는 "어떤" 존재는 그 존재가 하나 이상임을 말한다; 예를 들어 "한 항체"는 하나 이상의 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "한"(또는 "어떤"), "하나 이상의" 및 "적어도 하나의"는 본 발명에서 상호 교환하여 사용될 수 있다.

또한, "및/또는"은 본 발명에서 사용된 경우 두 명시된 특징 또는 성분의 각각이 나머지 하나와 함께 또는 단독으로 구체적으로 개시된다는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 것과 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 것과 같은 용어 "및/또는"은 A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독)의 양태들을 각각 포함하는 것으로 의도된다.

어떤 양태가 "포함하는"과 함께 본 발명에 설명되면 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"으로 설명된 다른 유사한 양태도 또한 제공된다는 것이 이해된다.

달리 정의되지 않는다면, 본 발명에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 관련되는 당업자에게 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press가 본 발명에서 사용된 대부분의 용어에 대한 일반적인 의미를 당업자에게 제공한다.

단위, 접두사 및 기호는 Systeme International de Unites(SI)에서 승인된 형태로 표시된다. 수치 범위는 그 범위를 한정하는 숫자들을 포괄적으로 포함한다. 다른 언급이 없는 경우, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향으로 좌측에서 우측으로 쓰여진다. 본 발명에 제공된 표제는 발명의 다양한 양태의 제한이 아니며, 이들은 전체적으로 명세서를 참조한 것일 수 있다. 따라서, 아래 정의된 용어들은 그 전체가 명세서를 참조하여 더 충분히 정의된다.

용어 "약"은 대략, 대충, 근처, 또는 ..의 영역 내 임을 의미하기 위해 본 발명에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용될 때 그것은 제시된 수치 값 위와 아래로 경계를 확장시킴으로써 해당 범위를 변형한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어 위나 아래로(더 높거나 더 낮게) 10 퍼센트의 변동까지 언급된 값의 위와 아래로 수치 값을 변형할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "죽상경화증", "죽상경화증 플라크", "플라크", 또는 "아테롬"은 혈관의 벽에 지질, 콜레스테롤, 콜라겐, 및 대식세포 중 하나 이상의 축적을 말한다. 일부 구체예에서, 이러한 축적은 혈관 벽의 변형된 지방단백질, 단구-유래 대식세포, T 세포, 및 정상 세포 요소들 간의 상호작용을 수반하는 염증 과정으로부터의 결과일 수 있다. 이 염증 과정은 혈관의 벽을 따라 복잡한 병변이나 플라크의 발생을 초래할 수 있고, 그 결과 혈관 내강이 좁아진다.

죽상경화증에 대한 위험 인자의 비제한적 예들은 고혈압, 당뇨병, 고콜레스테롤혈증, 상승된 혈장 저밀도 지방단백질 및 트리글리세라이드, 흡연, 비만, 가족력, 건강하지 못한 식이, 및 이들의 조합을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "HDL"은 고밀도 지방단백질을 말한다.

본 발명에서 사용된 용어 "LDL"은 저밀로 지방단백질을 말한다. 일부 구체예에서, LDL은 산화된다("산화된 LDL이다").

본 발명에서 사용된 용어 "VLDL"은 밀도가 매우 낮은 지방단백질을 말한다.

본 발명에서 사용된 용어 "고콜레스테롤혈증"은 혈액 중 총 콜레스테롤의 매우 높은 수준을 특징으로 하는 상태(예를 들어, 죽상경화증)를 말한다. "총 콜레스테롤"은 혈장 내에 존재하는 모든 주요 혈장 지방단백질(예를 들어, LDL, HDL 및 VLDL)의 합계를 말한다.

일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증은 적어도 약 200 mg/dL, 적어도 약 210 mg/dL, 적어도 약 220 mg/dL, 적어도 약 230 mg/dL, 적어도 약 240 mg/dL, 적어도 약 250 mg/dL, 적어도 약 260 mg/dL, 적어도 약 270 mg/dL, 적어도 약 280 mg/dL, 적어도 약 290 mg/dL 또는 그 이상의 총 콜레스테롤 수준과 관련된다. 특정 구체예에서, 고콜레스테롤혈증은 약 240 mg/dL 또는 그 이상의 총 콜레스테롤 수준과 관련된다.

일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상은 혈액 중 상승된 LDL 수준을 가진다. 특정 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 LDL 수준은 적어도 약 130 mg/dL, 적어도 약 140 mg/dL, 적어도 약 150 mg/dL, 적어도 약 160 mg/dL, 적어도 약 170 mg/dL, 적어도 약 180 mg/dL, 적어도 약 190 mg/dL, 적어도 약 200 mg/dL 또는 그 이상이다. 일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 LDL 수준은 약 160 mg/dL 이상이다. 특정 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 LDL 수준은 약 190 mg/dL 이상이다.

일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상은 혈액 중 상승된 트리글리세라이드 수준을 가진다. 일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 트리글리세라이드 수준은 적어도 약 150 mg/dL, 적어도 약 175 mg/dL, 적어도 약 200 mg/dL, 적어도 약 225 mg/dL, 적어도 약 250 mg/dL, 적어도 약 275 mg/dL, 적어도 약 300 mg/dL, 적어도 약 325 mg/dL, 적어도 약 350 mg/dL, 적어도 약 375 mg/dL, 적어도 약 400 mg/dL, 적어도 약 425 mg/dL, 적어도 약 450 mg/dL, 적어도 약 475 mg/dL, 적어도 약 500 mg/dL, 적어도 약 525 mg/dL, 적어도 약 550 mg/dL, 적어도 약 575 mg/dL, 적어도 약 600 mg/dL, 적어도 약 625 mg/dL, 적어도 약 650 mg/dL 또는 그 이상이다. 특정 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 트리글리세라이드 수준은 약 150 mg/dL 이상이다. 다른 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 트리글리세라이드 수준은 약 200 mg/dL 이상이다. 추가적인 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 트리글리세라이드 수준은 약 500 mg/dL 이상이다.

일부 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상은 혈액 중 감소된 HDL 수준을 가진다. 특정 구체예에서, 고콜레스테롤혈증 대상에서의 HDL 수준은 약 50 mg/dL 미만, 약 45 mg/dL 미만, 약 40 mg/dL 미만, 약 30 mg/dL 미만, 약 20 mg/dL 미만, 약 10 mg/dL 미만, 또는 약 5 mg/dL 미만이다.

본 발명에서 사용된 용어 "포말 세포"는 혈관 벽 상의 지방 침착물에 국소화되는 대식세포 종류를 말하며, 이들은 저밀도 지방단백질(예를 들어, 산화된 LDL)을 섭취하고 지질을 지니게 됨으로써 포말형 외관을 가지게 된다. 이들 세포는 플라크 성장에 수반된 다양한 물질을 분비하고, 이들의 사멸은 염증을 촉진하여, 심혈관 질환을 야기한다. 혈관 내에서의 포말 세포의 축적은 초기 죽상경화증 병변인 지방 가닥의 형성을 초래할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 질환과 관련된 증상, 합병증, 상태 또는 생화학적 지표의 진행, 발생, 심각성 또는 재발을 반전, 개선, 완화, 억제 또는 지연시킬 목적으로 대상에 대해 수행된 임의의 개입 또는 과정, 또는 대상에 대한 활성제의 투여를 말한다. 치료는 질환을 가진 대상 또는 질환을 갖지 않은 대상(예를 들어, 예방)에 대해 이루어질 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "투여"는 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 송달 시스템 중 어느 것을 사용하여, 대상에게 치료제 또는 치료제를 포함하는 조성물을 물리적으로 도입하는 것을 말한다. 본 발명에 설명된 항체를 위한 상이한 투여 경로는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 것을 포함한다. 본 발명에서 사용된 문구 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한, 장 및 국부적(topical) 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하며, 제한은 없지만, 유리체내, 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 척추강내, 림프내, 병변내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 기관지경, 폐, 피하, 표피하, 관절내, 낭하, 지주막하, 뇌실내, 유리체내, 경막외, 및 흉골하 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 또는, 본 발명에 설명된 항체는 비경구 경로를 통해서, 예컨대 국부적, 상피 또는 점막 투여 경로를 통해서, 예를 들어 비내, 경구, 질, 직장, 설하 또는 국부적 경로를 통해서 투여될 수 있다. 또한, 투여는, 예를 들어 1회, 여러 번, 및/또는 한 번 이상의 연장된 기간에 걸쳐서 수행될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료하기에" 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어, 죽상경화증)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들어, 죽상경화증)를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감을 제공하고 및/또는 적어도 하나의 징표(예를 들어, 증가된 염증 또는 플라크 형성)를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.

본 발명에서 사용된 용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.

용어 "서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5" 또는 "FAM19A5"는 5개의 고도로 상동성인 단백질의 TAFA 패밀리(FAM19 패밀리라고도 알려져 있음)에 속한다(Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)). 이들 단백질은 고정된 위치에 보존된 시스테인 잔기를 함유하며, CC-케모카인 패밀리의 멤버인 대식세포 염증 단백질 1-알파(MIP-1-알파)와 관련된다. TAFA 단백질은 뇌와 척수의 특정 영역에서 발현된다. 이들 단백질은 신경발생 과정에서 성인 신경 줄기 세포에 의해 발생되고 분배되는 것으로 추정된다. FAM19A5는 또한 TAFA5 또는 케모카인-유사 단백질 TAFA-5라고도 알려져 있다.

FAM19A5는 완전한 중추신경계의 발생, 분화, 형성에 중요한 역할을 담당하는 것으로 밝혀졌다. FAM19A5는 또한 많은 중추신경계 손상 및/또는 퇴행성 뇌 질환(예를 들어, 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 뇌척수 손상, 뇌졸중 및 뇌종양)의 발병기전에서 유의한 역할을 한다. 중추신경계의 손상시 신경 줄기 세포가 FAM19A5를 생성하고, 이것은 정상 성상교세포의 반응성 성상교세포로의 분화를 유도한다. 이들 반응성 성상교세포는 (미세아교세포와 함께) 광범위한 ECM들(예를 들어, 프로테오글리칸)을 발현할 수 있고, 신경교 흉터의 형성을 유도할 수 있으며, 이것은 중추신경계의 손상된 영역을 그물처럼 둘러싸서 뉴런의 재생을 방해할 수 있다. FAM19A5에 대한 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)는 중추신경계 상해 및/또는 질환의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다(미국특허 제9,579,398호 참조).

그러나, 특정 질환의 경우, 특히 혈관 비정상성과 관련된 질환의 경우, 최근 연구는 FAM19A5 길항제가 성공적인 치료 옵션이 아닐 수 있음을 시사했다(Wang et al, Circulation 138(l):48-63 (2018)). Wang 등은 정상적인 건강한 개체의 지방 조직이 FAM19A5를 생성하고, 이것은 스핑고신-1-포스페이트 수용체 2(S1PR2)를 통해서 혈관 평활근 세포(VSMC)의 증식 및 이주를 억제하고 손상 후 신생혈관내막 형성을 약화시키는 신호를 내보내는 것을 밝혔냈다. 그러나, 비만인 개체에서는 지방 조직에서 FAM19A5 발현(mRNA와 단백질 둘 다)이 상당히 감소한다. Wang 등은 FAM19A5 활성의 이러한 감소가 많은 비만 개체에서 관찰된 심혈관 질환의 가속된 발생을 초래한다고 결론내렸다.

인간에서, FAM19A5를 암호화하는 유전자는 염색체 22에 위치된다. 다음과 같은 3개의 인간 FAM19A5(UniProt: Q7Z5A7) 이소폼이 있으며, 이들은 선택적 스프라이싱에 의해 생성되는 것으로 추정된다: 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1), 이것은 132개 아미노산으로 구성된다; 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2), 이것은 125개 아미노산으로 구성된다; 및 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3), 이것은 53개 아미노산으로 구성된다. 인간 FAM19A5 단백질은 막 결합 형태와 가용성(분비된) 형태로서 모두 존재한다고 추정된다. 이소폼 1은 하나의 경막 영역을 가진 막 단백질인 것으로 추정된다. 이소폼 2는 분비된 단백질(가용성)로서 Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)에 보고되었고, 아미노산 위치 1-25에 신호 펩타이드를 함유한다. 이소폼 3은 EST 데이터에 기초하여 예상된다. 아래는 3개의 공지된 인간 FAM19A5 이소폼의 아미노산 서열이다.

(I) 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1, 경막 단백질): 이 이소폼이 표준 서열로서 선택되었다.

MAPSPRTGSR QDATALPSMS STFWAFMILA SLLIAYCSQL AAGTCEIVTL DRDSSQPRRT IARQTARCAC RKGQIAGTTR ARPACVDARI IKTKQWCDML PCLEGEGCDL LINRSGWTCT QPGGRIKTTT VS (SEQ ID NO: 1)

(II) 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2, 가용성 단백질):

MQLLKALWAL AGAALCCFLV LVIHAQFLKE GQLAAGTCEI VTLDRDSSQP RRTIARQTAR CACRKGQIAG TTRARPACVD ARIIKTKQWC DMLPCLEGEG CDLLINRSGW TCTQPGGRIK TTTVS (SEQ ID NO: 2)

(III) 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3):

MYHHREWPAR IIKTKQWCDM LPCLEGEGCD LLINRSGWTC TQPGGRIKTT TVS (SEQ ID NO: 3)

용어 "FAM19A5"는 세포에 의해 자연적으로 발현되는 FAM19A5의 임의의 변이체 또는 이소폼을 포함한다. 따라서, 본 발명에 설명된 항체는 동일한 종의 상이한 이소폼(예를 들어, 인간 FAM19A5의 상이한 이소폼)들과 교차-반응할 수 있거나, 또는 인간 이외의 종의 FAM19A5(예를 들어, 마우스 FAM19A5)와 교차-반응할 수 있다. 또는, 항체는 인간 FAM19A5에 특이적일 수 있으며, 다른 종과는 교차-반응성을 나타내지 못할 수 있다. FAM19A5, 또는 그것의 임의의 변이체 및 이소폼은 이들을 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 분리되거나 또는 재조합적으로 생성될 수 있다. 인간 FAM19A5를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 GenBank 수탁번호 No. BC039396을 가지며 다음의 서열을 가진다:

[표 1A]

용어 "FAM19A5 단백질에 대한 길항제"는 FAM19A5 단백질의 발현 및/또는 활성을 억제하고 및/또는 중화시키는 모든 길항제를 말한다. 이러한 길항제는 펩타이드, 핵산, 또는 화합물일 수 있다. 더 구체적으로, 길항제는 안티센스-올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5 표적화 PNA(펩타이드 핵산) 또는 이들을 포함하는 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분일 수 있다.

용어 "항체" 및 "항체들"은 당업계의 용어이며, 본 발명에서 상호 교환하여 사용될 수 있고, 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 가진 분자를 말한다. 본 발명에서 사용된 용어는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉, "항원 결합 부분") 또는 이들의 단쇄를 포함한다. 한 구체예에서, "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄(H)와 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 그것의 항원 결합 부분을 말한다. 다른 구체예에서, "항체"는 단일 가변 도메인, 예를 들어 VHH 도메인을 포함하는 단쇄 항체를 말한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 발명에서 VH로 약기됨)과 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 특정한 자연-발생 항체에서, 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 특정한 자연-발생 항체에서, 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 발명에서 VL로 약기됨)과 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 이루어진다.

VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 명명된, 더 보존된 영역들이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)이라 명명된, 초가변성의 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR와 4개의 FR로 이루어지며, 이들은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단을 향해 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적인 보체 시스템의 제1 성분(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.

용어 "Kabat 넘버링" 및 유사한 용어들은 당업계에서 통용되며, 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 말한다. 특정 양태에서, 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라서 결정될 수 있다(예를 들어, Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조). Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35(이것은 선택적으로 35 이후에 하나 또는 2개의 추가적인 아미노산을 포함할 수 있다; Kabat 넘버링 방식에서 35A 및 35B로 언급된다)(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56(CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97(CDR3)에 존재한다. 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 방식에 따라서 결정되었다.

문구 "Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링", "Kabat 위치" 및 이들의 변이형들은 Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)에서 항체 컴필레이션의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 말한다. 이 넘버링 시스템을 사용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 더 적은 또는 추가적인 아미노산을 함유할 수 있는데, 이것은 가변 도메인의 FW 또는 CDR의 단축, 또는 이것에의 삽입에 해당한다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후 삽입된 단일 아미노산 잔기(Kabat에 따르면 잔기 52a) 및 중쇄 FW 잔기 82 이후 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따르면 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다(표 1B 참조).

[표 1B]

잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열과 항체의 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Chothia는 구조 루프의 위치를 대신 말한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Chothia CDR-H1 루프의 단부는 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링되었을 때 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 변한다(이것은 Kabat 넘버링 방식이 H35A와 H35B에 삽입을 위치시키기 때문이다; 35A도 35B도 존재하지 않는다면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 존재하면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 둘 다 존재하면 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충점을 표시하며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.

IMGT(ImMunoGeneTics)도 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역에 대한 넘버링 시스템을 제공한다(예를 들어 Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)를 참조하며, 이것은 본 명세서에 참고로 포함된다). IMGT 넘버링 시스템은 5,000개를 넘는 서열의 정렬, 구조 데이터, 및 초가변 루프의 특성화에 기초했으며, 모든 종에 대해 가변 영역과 CDR 영역의 비교를 용이하게 한다. IMGT 넘버링 스키마에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 있고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다.

본 발명에서 논의된 모든 중쇄 불변 영역 아미노산 위치에 대해, 넘버링은 서열화된 최초의 인간 IgG1인 골수종 단백질 EU의 아미노산 서열을 설명한 Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1): 78-85에 설명된 EU 인덱스에 따른다. Edelman 등의 EU 인덱스는 또한 Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda에도 제시된다. 따라서, 문구 "Kabat에 제시된 EU 인덱스" 또는 "Kabat의 EU 인덱스" 및 "Kabat에 제시된 EU 인덱스에 따른 위치" 및 이들의 변이형들은 Kabat 1991에 제시된 것과 같은 Edelman 등의 인간 IgG1 EU 항체에 기초한 잔기 넘버링 시스템을 말한다.

가변 도메인(중쇄와 경쇄 모두) 및 경쇄 불변 영역 아미노산 서열에 사용된 넘버링 시스템은 Kabat 1991에 제시된 것이다.

항체는 면역글로불린 분자의 임의의 타입(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 유형(예를 들어, IgD, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 아형(예를 들어, 인간에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4; 및 마우스에서IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3)를 가질 수 있다. 면역글로불린, 예를 들어 IgG1은 몇몇 알로타입으로 존재하며, 이들은 최대 몇 개의 아미노산이 서로 상이하다. 본 발명에 개시된 항체는 통상 알려진 이소타입, 유형, 아형, 또는 알로타입 중 어느 것으로부터 유래할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아형 또는 이들의 임의의 하이브리드이다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1 아형 또는 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 아형의 것이다.

"항체"는 자연-발생 및 비-자연-발생 항체; 단클론성 및 다클론성 항체; 키메라 및 인간화된 항체; 인간 및 비-인간 항체, 전체 합성 합체; 단쇄 항체; 단일특이적 항체; 다중특이적 항체(이중특이적 항체를 포함); 2개의 중쇄와 2개의 경쇄 분자를 포함하는 테트라머 항체; 항체 경쇄 모노머; 항체 중쇄 모노머; 항체 경쇄 다이머; 항체 중쇄 다이머; 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍; 인트라바디; 헤테로콘쥬게이트 항체; 1가 항체; 낙타화 항체; 아피바디; 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어 항-항-Id 항체를 포함), 및 충분히 항원 결합할 수 있는 단일 모노머 가변 항체 도메인(예를 들어 VH 도메인 또는 VL 도메인)으로 구성된 결합 분자를 포함하는 단일-도메인 항체(sdAb)를 포함한다(Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22 (2007)).

본 발명에서 사용된 용어 항체의 "항원 결합 부분"은 항원(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 이러한 "단편"은, 예를 들어 약 8개 내지 약 1500개 아미노산 길이, 약 8개 내지 약 745개 아미노산 길이, 8개 내지 약 300개, 8개 내지 약 200개 아미노산, 또는 약 10개 내지 약 50개 또는 100개 아미노산 길이이다. 항체의 항원-결합 단편은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 항체, 예를 들어 본 발명에 설명된 항-FAM19A5 항체의 "항원 결합 부분"에 포함된 결합 단편의 예들은 (i) Fab 단편, VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편; (ii) F(ab')₂ 단편, 힌지 영역에서 이황화물 다리에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, 및 이황화물-연결된 Fvs(sdFv); (v) dAb 단편(Ward el al, (1989) Nature 341 :544-546), 이것은 VH 도메인으로 구성됨; 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR) 또는 (vii) 선택적으로 합성 링커에 의해 연결될 수 있는 둘 이상의 분리된 CDR의 조합을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개 도메인, VL 및 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 재조합 방법을 사용하여, 이들을 VL 및 VH 영역이 짝을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 사슬로 만들 수 있는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다(단쇄 Fv(scFv)라고 알려져 있음; 예를 들어, Bird el al. (1988) Science 242: 423-426; 및 Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883) 참조). 이러한 단쇄 항체도 항체의 "항원 결합 부분"에 포함된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 종래의 기술을 사용하여 얻어지며, 단편은 무손상 항체와 동일한 방식으로 활용에 대해 스크리닝된다. 항원 결합 부분은 재조합 DNA 기술, 또는 무손상 면역글로불린의 효소 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 당업계의 통상적인 용어이다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부분, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부분, 전형적으로 성숙한 중쇄의 약 아미노-말단 110개 내지 120개 아미노산 및 성숙한 경쇄의 약 90개 내지 115개 아미노산을 말하며, 이들은 항체별로 서열이 광범위하게 상이하고, 그것의 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성을 위해 사용된다. 서열 변동성은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리는 영역에 집중되며, 가변 도메인의 더 많이 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다.

경쇄 및 중쇄의 CDR은 항체와 항원의 상호작용 및 특이성을 주로 담당하는 것으로 추정된다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.

본 발명에서 사용된 용어 "중쇄"(HC)는 항체와 관련하여 사용되었을 때 임의의 구별되는 타입, 예를 들어 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 말하며, 이들은 각각 IgG의 아형, 예를 들어 IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는, 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 유형을 생성한다.

본 발명에서 사용된 용어 "경쇄"(LC)는 항체와 관련하여 사용되었을 때 임의의 구별되는 타입, 예를 들어 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(κ) 또는 람다(λ)를 말한다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 알려져 있다. 특정 구체예에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.

용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 상호 교환하여 사용되며, 항체의 경쇄 가변 영역을 말한다.

용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 상호 교환하여 사용되며, 항체의 중쇄 가변 영역을 말한다.

본 발명에서 사용된 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호 교환 가능하며, 당업계의 통상적인 의미를 가진다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어 항체와 항원의 결합에 직접 수반되지는 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복시 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 가진다.

"Fc 영역"(단편 결정화가능한 영역) 또는 "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 상에 위치된 Fc 수용체 또는 고전적인 보체 시스템의 제1 보체(C1q)에 대한 결합을 포함하는, 면역글로불린과 숙주 조직 또는 인자의 결합을 매개하는 항체의 중쇄의 C-말단 영역을 말한다. 따라서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어, CH1 또는 CL)을 제외한 항체의 불변 영역을 포함한다. IgG, IgA 및 IgD 항체 이소타입에서, Fc 영역은 항체의 두 중쇄의 제2(CH2) 및 제3(CH3) 불변 도메인으로부터 유래된 2개의 동일한 단백질 단편을 포함한다. IgM 및 IgE Fc 영역은 각 폴리펩타이드 사슬에서 3개의 중쇄 불변 도메인(CH 도메인 2-4)을 포함한다. IgG의 경우, Fc 영역은 면역글로불린 Cy2 및 Cy3과 Cy1과 Cy2 사이의 힌지를 포함한다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 바운더리는 가변적이지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226 또는 P230(또는 이들 두 아미노산 사이의 아미노산)에 있는 아미노산 잔기로부터 중쇄의 카복시-말단까지 신축할 수 있다고 정의된다(넘버링은 Kabat에서와 같이 EU 인덱스를 따름). 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 약 아미노산 231부터 약 아미노산 340까지 연장됨에 반해, CH3 도메인은 Fc 영역에서 Cm 도메인의 C-말단 측에 위치되며, 즉 IgG의 약 아미노산 341부터 약 아미노산 447까지 연장된다. 본 발명에서 사용된 Fc 영역은 임의의 알로타입 변이체, 또는 변이체 Fc(예를 들어, 비-자연 발생 Fc)를 포함하는, 자생 서열 Fc일 수 있다. Fc는 또한 분리된 상태의 영역 또는 "Fc 영역을 포함하는 결합 단백질"과 같은 Fc-포함 단백질 폴리펩타이드와 관련된 영역을 말할 수 있으며, 후자는 "Fc 융합 단백질"(예를 들어, 항체 또는 면역접합체)이라고 언급될 수 있다.

"자생 서열 Fc 영역" 또는 "자생 서열 Fc"는 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 자생 서열 인간 Fc 영역은 자생 서열 인간 IgG1 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 자생 서열 인간 IgG4 Fc 영역, 및 이들의 자연-발생 변이체들을 포함한다. 자생 서열 Fc는 Fc의 다양한 알로타입을 포함한다(예를 들어, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).

"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 면역글로불린의 Fc 영역에 결합하는 수용체이다. IgG 항체에 결합하는 FcR은, 대립형질 변이체 및 이들 수용체의 다른 방식으로 스플라이스된 형태를 포함하는, FcγR 패밀리의 수용체를 포함한다. FcγR 패밀리는 3개의 활성화(마우스에서 FcγRI, FcγRIII 및 FcγRIV; 인간에서 FcγRIA, FcγRIIA 및 FcγRIIIA) 수용체와 1개의 억제성(FcγRIIB) 수용체로 구성된다. 인간 IgG1은 대부분의 인간 Fc 수용체에 결합하고 가장 강한 Fc 이펙터 기능을 도출하며, 그것이 결합하는 활성화 Fc 수용체의 종류에 대해서 뮤린 IgG2a와 동등하다고 간주된다. 반면, 인간 IgG4는 최소한의 Fc 이펙터 기능을 도출한다(Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).

불변 영역은 하나 이상의 이펙터 기능을 제거하도록, 예를 들어 재조합 기술에 의해, 조작될 수 있다. "이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용, 또는 그로부터 일어난 생화학적 사건을 말한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, FcγR-매개 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 및 항체 의존성 세포-매개 포식작용(ADCP), 및 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향조절을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 도메인)과 조합되는 것을 필요로 한다. 따라서, 용어 "Fc 기능이 없는 불변 영역"은 Fc 영역에 의해 매개된 하나 이상의 이펙터 기능이 감소되거나 없는 불변 영역을 포함한다.

항체의 이펙터 기능은 상이한 접근법에 의해 감소되거나 회피될 수 있다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어, Fab, F(ab')₂, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)을 사용함으로써 감소되거나 회피될 수 있다. 대안으로서, Fc 영역의 다른 속성(예를 들어, 연장된 반감기 및 헤테로다이머화)을 보유하면서 항체의 이펙터 기능을 감소시키기 위해 Fc 영역에서 특정 잔기에 연결된 당을 제거함으로써 소위 말하는 비글리코실화(aglycosylated) 항체가 생성될 수 있다. 비글리코실화 항체는, 예를 들어 당이 부착된 잔기의 결실 또는 변경, 당의 효소적 제거, 글리코실화 억제제의 존재하에 배양된 세포에서의 항체의 생성, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어, 박테리아 숙주 세포)에서의 항체의 발현에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, 미국 출원공개 제20120100140호 참조). 다른 접근법은 감소된 이펙터 기능을 가진 IgG 아형의 Fc 영역을 이용하는 것이며, 예를 들어 IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3보다 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 갖는 것을 특징으로 한다. 선천면역 시스템의 이펙터 세포 상의 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유하기 때문에, Fc 부분의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까운 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당한다(Vidarsson G. el al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개)). 따라서, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 항체는, 예를 들어 IgG4 이소타입의 IgG 항체의 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체의 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2의 힌지 영역과 IgG4의 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역(예를 들어, Lau C. et al. J. Immunol. 191: 4769-4777 (2013) 참조), 또는 변경된 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 감소되거나 없는 Fc 기능을 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 생성함으로써 제조될 수 있다. 돌연변이를 가진 이러한 Fc 영역은 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 출원 및 PCT 공보들 및 An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009) 참조; 이들의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함됨).

"힌지", "힌지 도메인" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 CH2 도메인에 CH1 도메인을 연결하는 중쇄 불변 영역의 도메인을 말하며, 힌지의 상부, 중앙 및 하부 부분을 포함한다(Roux et al. J. Immunol. 1998 161 :4083). 힌지는 항체의 결합 및 이펙터 영역들에 다양한 수준의 가요성을 제공하며, 또한 두 중쇄 불변 영역 사이의 분자간 이황화물 결합을 위한 자리를 제공한다. 본 발명에서 사용된 힌지는 모든 IgG 이소타입에 대해 Glu216에서 시작해서 Gly237에서 끝난다(Roux et al, 1998 J Immunol 161 :4083). 야생형 IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4 힌지의 서열은 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Rabat EA et al, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).

용어 "CH1 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 힌지에 가변 도메인을 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH1 도메인은 A118에서 시작해서 V215에서 끝난다. 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어, 알로타입)을 포함한다. IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4의 CH1 도메인 서열(야생형 및 알로타입을 포함)이 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Kabat EA et al, (1991) 상동 및 Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH1 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형시키는 돌연변이를 가진 CH1 도메인을 포함하며, 이것은 예를 들어 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 특허 및 공보 그리고 PCT 공보들에 설명된다.

용어 "CH2 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 CH3 도메인에 힌지를 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH2 도메인은 P238에서 시작해서 K340에서 끝난다. 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어, 알로타입)을 포함한다. IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4의 CH2 도메인 서열(야생형 및 알로타입을 포함하는)이 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Kabat EA et al, (1991) 상동 및 Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH2 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기 및/또는 감소된 Fc 이펙터 기능을 변형시키는 돌연변이를 가진 CH2 도메인을 포함하며, 이것은 예를 들어 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 특허 및 공보 그리고 PCT 공보들에 설명된다.

용어 "CH3 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 CH2 도메인에 대해 C-말단인 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH3 도메인은 G341에서 시작해서 K447에서 끝난다. 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어, 알로타입)을 포함한다. IgGl, IgG2, IgG3 및 IgG4의 CH3 도메인 서열(야생형 및 알로타입을 포함하는)은 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Kabat EA et al, (1991) 상동 및 Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조). 예시적인 CH3 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형시키는 돌연변이를 가진 CH3 도메인을 포함하며, 이것은 예를 들어 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 특허 및 공보 그리고 PCT 공보들에 설명된다.

본 발명에서 사용된 "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화된 항체 유형(예를 들어, IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD, 및 IgE 항체)을 말한다.

"알로타입"은 특정한 이소타입 그룹 내에서 자연 발생한 변이체들을 말하며, 이 변이체들은 몇 개의 아미노산이 상이하다(예를 들어, Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1 참조). 본 발명에 설명된 항체는 임의의 알로타입일 수 있다. IgGl, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 알로타입이 당업계에 알려져 있다(예를 들어, Kabat EA et al, (1991) 상동, Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520 (2014년 10월 20일 온라인 공개); 및 Lefranc MP, mAbs 1 :4, 1-7 (2009) 참조).

문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 본 발명에서 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 상호 교환하여 사용된다.

본 발명에서 사용된 "분리된(isolated) 항체"는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 말한다. 예를 들어, FAM19A5에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 FAM19A5 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없는 항체이다. 그러나, FAM19A5의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 FAM19A5 단백질에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다.

"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그것의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 비-공유 상호작용의 전체 합계 강도를 말한다. 특별한 언급이 없는 경우, 본 발명에서 사용된 "결합 친화성"은 결합 쌍의 멤버(예를 들어, 항체와 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화성을 말한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(K_D)에 의해 표시될 수 있다. 친화성은, 제한은 아니지만, 평형 해리 상수(K_D), 및 평형 결합 상수(K_A)를 포함하는, 당업계에 공지된 다수의 방식으로 측정 및/또는 표시될 수 있다. K_D는 k_off/k_on의 몫으로부터 계산되고 몰 농도(M)로 표시되며, K_A는 k_on/k_off의 몫으로부터 계산된다. k_on은, 예를 들어 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 말하고, k_off는, 예를 들어 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 말한다. k_on 및 k_off는 면역분석법(예를 들어, 효소-결합 면역흡착 분석법(ELISA)), BIACORE™ 또는 역학적 배제 분석법(KINEXA®)과 같은, 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식한다", "특이적 결합", "선택적 결합" 및 "선택적으로 결합한다"는 항체와 관련하여 유사한 용어들로서 항원(예를 들어, 에피토프 또는 면역복합체)과 분자(예를 들어, 항체)의 결합을 말하며, 이러한 결합은 당업자에게 이해되는 대로이다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 예를 들어 면역분석법, BIACORE™, KINEXA® 3000 기기(Sapidyne Instruments, Boise, ID), 또는 당업계에 공지된 다른 분석법들에 의해 결정되었을 때, 일반적으로 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 더 낮은 친화성으로 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 이 분자가 다른 항원에 결합할 때의 K_A보다 적어도 2 log, 2.5 log, 3 log, 4 log 또는 그 이상 더 큰 K_A으로 그 항원에 결합한다.

항체는 전형적으로 10^-5 내지 10^-11 M 이하의 해리 상수에 의해 반영되는, 높은 친화성으로 동족 항원에 특이적으로 결합한다. 약 10^-4 M를 초과하는 K_D는 일반적으로 비특이적 결합을 나타낸다고 간주된다. 본 발명에서, 항원과 "특이적으로 결합하는 항체"는 높은 친화성으로 항원 및 실질적으로 동일한 항원에 결합하는 항체를 말하며, 예를 들어 정해진 항원을 사용하여 면역분석법(예를 들어, ELISA) 또는 BIACORE™ 2000 기기에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정되었을 때, 10^-7 M 이하, 바람직하게 10^-8 M 이하, 더욱더 바람직하게 10^-9 M 이하, 및 가장 바람직하게 10^-8 M 내지 10^-10 M 이하의 K_D를 갖는 것을 의미하고, 관련 없는 항원에는 높은 친화성으로 결합하지 않는다.

본 발명에서 사용된 용어 "항원"은 임의의 천연 또는 합성 면역원성 물질, 예컨대 단백질, 펩타이드 또는 합텐을 말한다. 항원은 FAM19A5 또는 그것의 단편일 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "에피토프"는 당업계의 용어로서 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 말한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드의 연속(contiguous) 아미노산들(선형 또는 연속 에피토프)일 수 있거나, 또는 예를 들어 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 둘 이상의 비-연속 영역들이 합쳐진 것(입체형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-연속 에피토프)일 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 항상 그렇지는 않지만 전형적으로 변성 용매에 노출시 유지되고, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 입체형태에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 20개 아미노산을 포함한다. 에피토프가 주어진 항체에 의해 결합된 것을 결정하는 방법(즉, 에피토프 맵핑)이 당업계에 잘 알려져 있고, 예를 들어 면역블롯팅 및 면역침전 분석을 포함하며, (예를 들어, FAM19A5로부터의) 중첩 또는 연속 펩타이드가 주어진 항체(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)와의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프의 공간적 입체형태를 결정하는 방법은 당업계의 기술 및 본 발명에 설명된 것들을 포함하며, 예를 들어 엑스선 결정학, 2-차원 핵자기공명 및 HDX-MS를 포함한다(예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996) 참조).

특정 구체예에서, 항체가 결합한 에피토프는, 예를 들어 NMR 분광법, 엑스선 회절 결정학 연구, ELISA 분석법, 질량분광법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전자분무 질량분광법), 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 분석법, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. 엑스선 결정학의 경우, 결정화는 당업계에 공지된 방법 중 어느 것에 의해 달성될 수 있다(예를 들어, Giege R et al, (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303 참조). 항체:항원 결정은 잘 공지된 엑스선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있으며, X-PLOR(Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc.에 의해 배포; 예를 들어 Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff H.W. et al.,; 미국 출원공개 제2004/0014194호 참조), 및 BUSTER(Bricogne G. (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt1):37-60; Bricogne G. (1997) Meth Enzymol 276A:361-423, ed Carter CW; Roversi P. et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)과 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용할 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 알라닌 스캐닌 돌연변이유발 기술을 포함하는 돌연변이유발 기술의 설명은, 예를 들어 Champe M. et al., (1995) J Biol Chem 270:1388-1394 및 Cunningham B.C. & Wells J.A. (1989) Science 244: 1081-1085를 참조한다.

용어 "에피토프 맵핑"은 항체-항원 인식에 대한 분자 결정소의 확인 과정을 말한다.

둘 이상의 항체와 관련하여 용어 "동일한 에피토프에 결합한다"는 주어진 방법에 의해 결정되었을 때 항체들이 아미노산 잔기의 동일한 세그먼트에 결합한다는 것을 의미한다. 항체들이 본 발명에 설명된 항체와 "FAM19A5 상의 동일한 에피토프"에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS)을 포함한다. 다른 방법은 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하며, 여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주된다. 이에 더하여, 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법이 또한 사용될 수 있다. 이들 방법은 조합 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리로부터 특정한 짧은 펩타이드를 친화성 분리할 수 있는 관심 항체의 능력에 의존한다. 동일한 VH 및 VL 또는 동일한 CDR1, 2 및 3 서열을 가진 항체는 동일한 에피토프에 결합할 것으로 예상된다.

"표적과의 결합에 대해 다른 항체와 경쟁하는" 항체는 나머지 항체와 표적의 결합을 (부분적으로 또는 완전히) 억제하는 항체를 말한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경쟁하는지의 여부, 즉 하나의 항체가 나머지 항체와 표적의 결합의 억제하는지의 여부와 억제하는 정도는 공지된 경쟁 실험을 사용하여 결정될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 다른 항체와 표적의 결합에서 경쟁하며 이 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%까지 억제한다. 억제 또는 경쟁의 수준은 항체가 "차단 항체"(즉, 표적과 먼저 인큐베이션된 저온 항체)인지에 따라 상이할 수 있다. 경쟁 분석은, 예를 들어 E.d. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 또는 E.d. Harlow and David Lane에 의한 "Using Antibodies"(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999)의 제11장에 설명된 대로 수행될 수 있다. 경쟁 항체는 (예를 들어, 입체장해에 의해 증명된 대로) 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프에 결합한다.

다른 경쟁 결합 분석들은 고체상 직접 또는 간접 방사성면역 분석법(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소면역 분석법(EIA), 샌드위치 경쟁 분석법(Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986) 참조); 고체상 직접 표지화 분석법, 고체상 직접 표지화 샌드위치 분석법(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); 1-125 표지를 사용한 고체상 직접 표지 RIA( Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지화 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))를 포함한다.

"이중특이적 또는 이중기능성 항체"는 두 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 두 상이한 결합 부위를 가진 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 여러 가지 방법에 의해 생성될 수 있다(예를 들어, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992) 참조).

본 발명에서 사용된 용어 "단클론성 항체"는 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 또는 모든 항체가 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 조성물을 말한다. 따라서, 용어 "인간 단클론성 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 선택적 불변 영역을 가진 항체 또는 항체 조성물을 말한다. 한 구체예에서, 인간 단클론성 항체는 트랜스제닉 비-인간 동물, 예를 들어 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스젠과 경쇄 트랜스젠을 포함하는 게놈을 가진, 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.

본 발명에서 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 (a) 인간 면역 글로불린 유전자에 대해 트랜스젠이거나 트랜스염색체성(transchromosomal)인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 분리된 항체 또는 그로부터 제조된 하이브리도마, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 분리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체, 및 (d) 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열을 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체와 같은, 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 점라인 유전자에 의해 암호화되지만, 예를 들어 항체 성숙화 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함하는 특정한 인간 점라인 면역글로불린 서열을 이용하는 가변 및 불변 영역을 포함한다. 당업계에 공지된 대로(예를 들어, Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125 참조), 가변 영역은 외래 항원에 대해 특이적인 항체를 형성하도록 재배열한 다양한 유전자에 의해 암호화된, 항원 결합 도메인을 함유한다. 재배열에 더하여, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 초돌연변이)에 의해 더 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가 반응(즉, 이소타입 스위치)에서 변할 것이다. 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래 핵산 분자와 서열 동일성을 가질 수는 없지만, 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(즉, 적어도 80% 동일성을 가짐).

"인간 항체(HuMAb)"는 프레임워크와 CDR 영역이 둘 다 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진 항체를 말한다. 또한, 이 항체가 불변 영역을 함유한다면, 불변 영역 역시 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명에 설명된 항체는 인간 점라인 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특정 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명에서 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 점라인으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 접목된 항체는 포함하지 않는다. 용어 "인간" 항체와 "완전한 인간" 항체는 동의어로서 사용된다.

"인간화 항체"는 비-인간 항체의 CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 치환된 항체를 말한다. 항체의 인간화된 형태의 한 구체예에서, CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 치환되고, 하나 이상의 CDR 영역 내의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 그대로 남는다. 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 없애지 않는 한 아미노산의 미세한 첨가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은 허용된다. "인간화 항체"는 원래 항체의 것과 유사한 항원 특이성을 보유한다.

"키메라 항체"는 하나의 종으로부터 가변 영역이 유래되고 다른 종으로부터 불변 영역이 유래된 항체, 예컨대 마우스 항체로부터 가변 영역이 유래되고 인간 항체로부터 불변 영역이 유래된 항체를 말한다.

본 발명에서 사용된 용어 "교차-반응한다"는 상이한 종들로부터의 FAM19A5에 결합하는 본 발명에 설명된 항체의 능력을 말한다. 예를 들어, 인간 FAM19A5에 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 또한 다른 종의 FAM19A5(예를 들어, 마우스 FAM19A5)에도 결합할 수 있다. 본 발명에서 사용된 교차-반응성은 결합 분석(예를 들어, SPR, ELISA)에서 정제된 항원과의 특이적 반응성을 검출함으로써 또는 FAM19A5를 생리학적으로 발현하는 세포와의 결합, 또는 기능적 상호작용을 검출함으로써 측정될 수 있다. 교차-반응성을 결정하는 방법은 본 발명에 설명된 표준 결합 분석법, 예를 들어 BIACORE™ 2000 SPR 기기(Biacore AB, 스웨덴 웁살라)를 사용한 BIACORE™ 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석법, 또는 유세포계수 기술을 포함한다.

본 발명에서 어떤 물체에 적용된 용어 "자연-발생"은 물체가 자연에서 발생될 수 있다는 사실을 말한다. 예를 들어, 자연의 출처로부터 분리될 수 있고 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은 유기체에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연-발생이다.

"폴리펩타이드"는 적어도 두 개의 연속 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 사슬을 말하며, 사슬의 길이에는 상한은 없다. 단백질에서 하나 이상의 아미노산 잔기는, 제한은 아니지만, 글리코실화, 포스포릴화 또는 이황화물 결합 형성과 같은 변형을 함유할 수 있다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, cDNA일 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 말한다. 한 가지 종류의 벡터는 "플라스미드"이고, 이것은 추가적인 DNA 세그먼트가 리게이션될 수 있는 원형의 이중가닥 DNA 루프를 말한다. 다른 종류의 벡터는 바이러스 벡터이며, 이 벡터에서는 추가적인 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈에 리게이션될 수 있다. 특정한 벡터(예를 들어, 박테리아 복제 기원을 가진 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자가 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포에 도입시 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있고, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정한 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 발명에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")라고 언급된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용성을 가진 발현 벡터는 주로 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는 플라스미드가 벡터의 가장 흔히 사용되는 형태기 때문에 상호 교환하여 사용될 수 있다. 그러나, 바이러스(예를 들어, 복제 결합 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스) 벡터와 같은 다른 형태의 발현 벡터도 또한 포함되며, 이들은 동등한 기능을 수행한다.

본 발명에서 사용된 용어 "재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")는 세포에 자연적으로 존재하지 않는 핵산을 포함하는 세포를 말하며, 재조합 발현 벡터가 도입된 세포일 수 있다. 이러한 용어는 특정한 해당 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손도 언급한다는 것이 이해되어야 한다. 돌연변이나 환경적 영향으로 인해 이어진 세대들에서는 특정한 변형이 일어날 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일할 수 없지만 그래도 여전히 본 발명에서 사용된 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.

본 발명에서 사용된 용어 "연결된"은 둘 이상의 분자의 회합을 말한다. 연결은 공유 연결 또는 비-공유 연결일 수 있다. 연결은 또한 유전자 연결(즉 재조합적으로 융합)일 수 있다. 이러한 연결은 화학적 콘쥬게이션 및 재조합 단백질 생성과 같은 당업계에 인정된 여러 가지 기술을 사용하여 달성될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료"하기에 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어, 죽상경화증)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들어, 죽상경화증)를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제(예를 들어, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체)의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감을 제공하고 및/또는 적어도 하나의 징표를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애(예를 들어, 죽상경화증)의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.

II. 죽상경화증 치료 방법

치료를 필요로 하는 대상의 심혈관 상태를 치료하는 방법이 본 발명에 개시된다. 더 구체적으로, 본 발명에 개시된 방법은 죽상경화증과 관련된 질환 및 장애를 포함하는, 죽상경화증을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 질환 및 장애의 비제한적 예들은 관상동맥 질환, 뇌졸중, 말초동맥 질환, 신장 손상, 망막동맥 폐쇄, 장 손상으로 인한 복부 통증, 및 복막염, 또는 이들의 조합을 포함한다, 아래 설명된 대로, 죽상경화증은 일반적으로 혈장 중 지방단백질의 비정상적 수준과 관련된다. 특정 구체예에서, 용어 "지방단백질"은 총 콜레스테롤, LDL, HDL, 트리글리세라이드, 또는 이들의 조합을 포함한다. 이러한 지방단백질의 비정상적 수준은 지질을 지닌 대식세포(포말 세포라고도 알려져 있음)의 축적을 야기할 수 있고, 그 결과 혈관 벽을 따라 병변 또는 플라크 축적이 일어난다. 따라서, 본 발명은 또한 치료를 필요로 하는 대상(예를 들어, 죽상경화증을 가진)에서 하나 이상의 지방단백질의 수준을 조정하는(즉, 감소 또는 증가시키는) 방법을 제공한다. 또한, 치료를 필요로 하는 대상에서의 플라크 내의 포말 세포(예를 들어, 옥소-LDL-유도 포말 세포)의 수 및/또는 포말 세포의 체류를 감소시키는 방법이 본 발명에 제공된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법은 대상에게 FAM19A5 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5 표적화 dsRNA, 앱타머, PNA, 또는 이들을 포함하는 벡터이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체"), 또는 그것의 항원 결합 부분, 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그것의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 FAM19A5 단백질에 결합하고 FAM19A5 활성을 감소시킨다.

본 발명에 개시된 방법으로 치료될 수 있는 대상(예를 들어, 죽상경화증을 가진 대상)은 죽상경화증을 갖지 않은 대상(예를 들어, 건강한 대상)과 비교하여 다음의 특성 중 하나 이상을 나타낼 수 있다: (i) 증가된 총 콜레스테롤 수준, (ii) 증가된 트리글리세라이드 수준, (iii) 증가된 LDL 수준, (iv) 감소된 HDL 수준, (v) 플라크에서의 포말 세포의 증가된 수 및/또는 포말 세포의 체류, 또는 (vi) 이들의 조합.

따라서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)는 상기 설명된 특성 중 하나 이상의 감소, 완화 및/또는 역전에 의해 죽상경화증을 치료할 수 있다. 일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질을 중화시킬 수 있는, 예를 들어 FAM19A5 중화제이다. 다른 구체예에서, FAM19A5길항제는 항-FAM19A5 항체이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중화 항체이다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상의 총 콜레스테롤 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 대상의 총 콜레스테롤 수준은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 감소된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상의 트리글리세랄이드 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 대상의 트리글리세라이드 수준은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 감소된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상의 저밀도 지방단백질(LDL) 수준을 감소시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 대상의 LDL 수준은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 감소된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상의 고밀도 지방단백질(HDL) 수준을 증가시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 대상의 HDL 수준은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 증가된다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)는 치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증 병변 부위에 대식세포의 이주 및/또는 축적을 증가시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 죽상경화증 병변 부위에 대식세포의 이주 및/또는 축적은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 증가된다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상에서의 대식세포(또는 포식작용 능력을 가진 다른 세포, 예를 들어 수지상세포)에 의한 저밀도 지방단백질(LDL)의 포식작용을 증가시킬 수 있다. 특정 구체예에서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용은 기준값(예를 들어, FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제를 투여하기 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지 증가된다.

일부 구체예에서, (i) 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 및/또는 축적의 증가 및/또는 (ii) 대식세포에 의한 LDL의 포식작용의 증가는 혈액 중 LDL의 수준을 감소시킬 수 있고, 이로써 죽상경화증(또는 죽상경화증과 관련된 질환 또는 장애)을 치료할 수 있다. 일부 구체예에서, 대식세포는 지질을 지닌 대식세포(포말 세포라고도 알려져 있음)이다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제는 치료를 필요로 하는 대상의 혈관의 정상화를 유도할 수 있다. 특정 구체예에서, 혈관 정상화는 (i) 증가된 혈관 수, (ii) 개선된 혈관 연결성, (iii) 감소된 혈관 투과성, (iv) 증가된 혈류량, 또는 (v) 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 구체예에서, 혈관의 정상화는 혈관 벽 내에 감소된 플라크 축적과 관련된다.

본 발명에서 사용된 용어 "혈관"은 그것을 통해서 혈액이 체내를 순환하는 맥관을 말한다. 용어 "맥관"은 동맥이나 정맥과 같은 유체를 운반하는 채널을 말한다. 일부 구체예에서, 혈관은 동맥, 정맥, 또는 모세관을 포함한다. 특정 구체예에서, 혈관은 대동맥을 포함한다.

아래 설명된 대로, 적절히 치료되지 않는다면, 죽상경화증은 다른 심혈관 질환 및 장애를 초래할 수 있다. 따라서, 일부 구체예에서, 본 발명으로 치료될 수 있는 죽상경화증은 관상동맥 심장 질환(CHD), 경동맥 질환, 말초동맥 질환, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 망막동맥 폐쇄, 장 손상으로 인한 복부 통증, 및 복막염, 또는 이들의 조합을 포함하는 질환과 관련된다. 일부 구체예에서, 죽상경화증은 고 지방 및/또는 고 콜레스테롤(고콜레스테롤성) 식이와 관련된다. 특정 구체예에서, 고 지방 및/또는 고 콜레스테롤 식이는 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80% 또는 그 이상의 총 지방 농도를 포함한다. 일부 구체예에서, 고 지방 및/또는 고 콜레스테롤 식이는 약 42%의 총 지방 농도를 포함한다. 다른 구체예에서, 죽상경화증은 죽상경화증이 없는 대상(예를 들어, 건강한 대상)과 비교하여 증가된 총 콜레스테롤 수준, 증가된 트리글리세라이드 수준, 증가된 LDL 수준, 감소된 HDL 수준, 플라크 내에서의 옥소-LDL-유도 포말 세포의 증가된 수 및/또는 체류, 또는 이들의 조합과 관련된다.

일부 구체예에서, 본 발명에서 사용된 용어 "기준"은 본 발명에 개시된 조성물(FAM19A5 길항제, 예를 들어 항-FAM19A5 항체)를 투여 받지 않았던 상응하는 대상(예를 들어, 죽상경화증을 가진 대상)을 말한다. 용어 "기준"은 또한 본 발명에 개시된 조성물을 투여하기 전의 동일한 대상(예를 들어, 죽상경화증을 가진 대상)을 말할 수 있다. 특정 구체예에서, 용어 "기준"은 대상(예를 들어, 죽상경화증을 가진 대상)의 집단의 평균을 말한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 대상은 비-인간 동물, 예컨대 래트 또는 마우스이다. 다른 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법으로 치료될 수 있는 대상은 인간이다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체), 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트, 또는 본 발명에 개시된 이들의 조성물은 정맥내 투여를 통해 대상에게 송달된다. 다른 투여 경로의 비제한적 예들은 피하, 근육내, 경구, 유리체내, 경막내 경로, 또는 이들의 조합을 포함한다.

본 발명에 개시된 FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체), 또는 그것의 조성물의 투여를 위해, 투약량은 약 0.0001 내지 100 mg/kg의 범위이다.

일부 구체예에서, FAM19A5 길항제, 또는 그것의 조성물은 죽상경화증을 치료하기 위한 하나 이상의 추가적인 제제(예를 들어, 치료제)와 함께 투여될 수 있다. 이러한 추가적인 제제의 비제한적 예들은 (i) 콜레스테롤 저하제, (ii) 항-혈소판 제제, (iii) 베타-차단제, (iv) 안지오텐신-전환 효소(ACE) 억제제, (v) 칼슘 채널 차단제, (vi) 당뇨병 약물, 또는 (vii) 이들의 조합을 포함한다.

일부 구체예에서, 콜레스테롤 저하제는 스타틴(예를 들어, 아토르바스타틴 (LIPITOR®), 플루바스타틴(LESCOL®), 로바스타틴, 피파바스타틴(LIVALO®), 프라바스타틴(PRAVACHOL®), 로슈바스타틴 칼슘(CRESTOR®), 및 심바스타틴(ZOCOR®))을 포함한다. 다른 구체예에서, 콜레스테롤 저하제는 PCSK9 억제제(예를 들어, 알리로큐맙(PRALUENT®) 및 에볼로큐맙(REPATHA®))을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-혈소판 제제는 아세틸살리실산 또는 아스피린(ASPIRIN®, ASAPHEN®, ENTROPHEN®, NOVASEN®), 시클로피도그렐(PLAVIX®), 프라슈그렐 (EFFIENT®), 또는 티카그렐로르(BRILINTA®)을 포함한다.

일부 구체예에서, 베타 차단제는 아세부토롤(SECTRAL®), 아테노롤(TENORMIN®), 비소프로롤(ZEBETA®), 메토프로롤(LOPRESSOR® 및 TOPROL-XL®), 나도롤 (CORGARD®), 네비보롤(BYSTOLIC®), 또는 프로프라노롤(INDERAL LA® 및 INNOPRAN XL®)을 포함한다.

일부 구체예에서, ACE 억제제는 베나제프릴(LOTENSIN®, LOTENSIN HCT®), 캡토프릴(CAPOTEN®), 에날라프릴(VASOTEC®), 포시노프릴(MONOPRIL®), 리시노프릴(PRINIVIL®, ZESTRIL®), 모엑시프릴(UNIVASC®), 페린도프릴(ACEON®), 퀴나프릴(ACCUPRIL®), 라미프릴(ALTACE®), 또는 트란돌라프릴(MAVIK®)을 포함한다.

일부 구체예에서, 칼슘채널 차단제는 암로디핀(NORVASC), 딜티아젬(CARDIZEM®, TIAZAC®), 펠로디핀, 이스라디핀, 니카디핀, 니페디핀(ADALAT CC®, AFEDITAB CR®, PROCARDIA®), 니솔디핀(SULAR®), 또는 베라파밀(CALAN®, VERELAN®)을 포함한다.

일부 구체예에서, 당뇨병 약물은 메트포르민(GLUCOPHAGE®, GLUMETZA®), 설포닐유레아(DIABETA®, GLYNASE®, GLUCOTROL®, AMARYL®), 메글리틴디스(PRANDIN®, STARLIX®), 티아졸리딘디온(AVANDIA®, ACTOS®), DPP-4 억제제(JANUVIA®, ONGLYZA®, TRADJENTA®), GLP-1 수용체 작용제(BYETTA®, VICTOZA®), SGLT2 억제제(INVOKANA®, FARXIGA®), 또는 인슐린 치료제를 포함한다.

FAM19A5 길항제, 또는 그것의 조성물과 조합하여 사용될 수 있는 현재 이용가능한 다른 치료 옵션은, 제한은 아니지만, 수술(예를 들어, 관상동맥 우회 이식술, 또는 경동맥 내막절제술) 및 조정가능한 위험 인자의 제어(예를 들어, 운동, 건강한 식이, 담배 사용 중단)을 포함한다.

III. FAM19A5 길항제

일부 구체예에서, 본 발명에 유용한 FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5를 특이적으로 표적화하는 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체"), 또는 그것의 항원 결합 부분, 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그것이 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다.

본 발명에 개시된 방법에서 유용한 항체는 특별한 기능적 특징이나 특성을 특징으로 하는 단클론성 항체이다. 예를 들어, 항체는 가용성 FAM19A5 및 막 결합된 FAM19A5를 포함하는 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 가용성 및/또는 막 결합된 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 것에 더하여, 본 발명에 설명된 항체는 또한 (a) 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하거나; (b) 10 nM 이하의 KD로 막 결합된 인간 FAM19A5에 결합하거나; 또는 (c) (a)와 (b)가 둘 다 가능하다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 높은 친화성으로, 예를 들어 10^-7 M 이하, 10^-8 M (10 nM) 이하, 10^-9 M (1 nM) 이하, 10^-10 M (0.1 nM) 이하, 10^-11 M 이하, 또는 10^-12 M 이하, 예를 들어, 10^-12 M 내지 10^-7 M, 10^-11 M 내지 10^-7 M, 10^-10 M 내지 10^-7 M, 또는 10^-9 M 내지 10^-7 M, 예를 들어 10^-12 M, 5 x 10^-12 M, 10^-11 M, 5 x 10^-11 M, 10^-10 M, 5 x 10^-10 M, 10^-9 M, 5 x 10^-9 M, 10^-8 M, 5 x 10^-8 M, 10^-7 M, 또는 5 x 10^-7 M의 K_D로 가용성 인간 FAM19A5 또는 막-결합된 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 다양한 종의 인간 FAM19A5에 대한 항체의 결합 친화성을 평가하기 위한 표준 분석법은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 및 RIA를 포함한다. 적합한 분석법은 실시예에 상세히 설명된다. 항체의 결합 동력학(예를 들어, 결합 친화성)도 ELISA, BIACORE™ 분석 또는 KINEXA^®과 같은 당업계에 공지된 표준 분석법에 의해 평가될 수 있다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때 10^-7 M 이하, 10^-8 M (10 nM) 이하, 10^-9 M (1 nM) 이하, 10^-10 M 이하, 10^-12 M 내지 10^-7 M, 10^-11 M 내지 10^-7 M, 10^-10 M 내지 10^-7 M, 10^-9 M 내지 10^-7 M, 또는 10^-8 M 내지 10^-7 M의 K_D로 가용성 인간 FAM19A5에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 K_D로 가용성 FAM19A5에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 K_D로 가용성 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10^-7 M 이하, 10^-8 M(10 nM) 이하, 10^-9 M(1 nM) 이하, 10^-10 M 이하, 10^-12 M 내지 10^-7 M, 10^-11 M 내지 10^-7 M, 10^-10 M 내지 10^-7 M, 10^-9 M 내지 10^-7 M, 또는 10^-8 M 내지 10^-7 M의 K_D로 막-결합된 인간 FAM19A5에 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, ELISA에 의해 결정되었을 때, 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 K_D로 막-결합된 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 K_D로 막-결합된 인간 FAM19A5에 결합한다.

특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법에서 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 본 발명에 개시된 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체와 상호-경쟁한다(또는 결합을 억제한다).

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체의 결합을 억제하며, (i) 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, 및 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함하거나; (xvi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 208의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 209의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 210의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 표 2에 제시된 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고, 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 표 3에 제시된 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) 각각 SEQ ID NOs: 35 및 39를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) 각각 SEQ ID NOs: 36 및 40을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) 각각 SEQ ID NOs: 37 및 41을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) 각각 SEQ ID NOs: 38 및 42를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) 각각 SEQ ID NOs: 155 및 166을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) 각각 SEQ ID NOs: 156 및 167을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) 각각 SEQ ID NOs: 157 및 168을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) 각각 SEQ ID NOs: 158 및 169를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) 각각 SEQ ID NOs: 159 및 170을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) 각각 SEQ ID NOs: 160 및 171을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) 각각 SEQ ID NOs: 161 및 172를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) 각각 SEQ ID NOs: 162 및 173을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) 각각 SEQ ID NOs: 163 및 174를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) 각각 SEQ ID NOs: 164 및 175를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (o) 각각 SEQ ID NOs: 165 및 176을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (p) 각각 SEQ ID NOs: 211 및 212를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 기준 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, VH는 표 4에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 표 5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 인간 FAM19A5에 대한 기준 항체의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%까지 또는 100%까지 억제한다. 경쟁 항체는 (예를 들어, 입체 장해에 의해 증명된 대로) 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프에 결합한다. 표적에 대한 결합에 대해 2개의 항체가 서로 경쟁하는지의 여부는 RIA 및 EIA와 같은 당업계에 공지된 경쟁 실험을 사용하여 확인할 수 있다.

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 본 발명에 개시된 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 결합하며, (i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xvi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 208의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 209의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 210의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 표 2에 제시된 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고, 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 표 3에 제시된 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다.

두 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS), 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이의 결합을 모니터링하는 방법(여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 주로 에피토프 성분의 징표로서 간주됨), 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법을 포함한다.

본 발명에 개시된 방법에 유용할 수 있는 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예를 들어 항체와 인간 FAM19A5의 단편의 결합에 의해 결정되었을 때, 성숙한 인간 FAM19A5의 적어도 하나의 에피토프와 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 42 내지 61)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 6의 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 46 내지 51(즉, DSSQPR), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 50, 및 52(즉, D---P-R), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 47, 48, 및 50(즉, DSS-P)에 해당하는 하나 이상의 아미노산에서 SEQ ID NO: 6에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 90 내지 109)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 9의 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 4의 하나 이상의 아미노산 잔기 99 내지 107(즉, EGCDLLINR), 예를 들어 아미노산 잔기 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에서 SEQ ID NO: 9에 결합한다.

일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 6과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 9와 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프인, 인간 FAM19A5에만 결합한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6 또는 그것의 단편과 자생 입체형태(즉, 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 9 또는 그것의 단편과 자생 입체형태(즉, 비변성) 상태로 결합한다. 다른 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 5와 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 10과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 글리코실화 및 비글리코실화 인간 FAM19A5와 모두 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 FAM19A5 에피토프와 더 결합한다. 따라서, 특정한 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프와 추가적인 에피토프 또는 SEQ ID NO: 9의 에피토프와 추가적인 에피토프에 결합한다. 다른 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 5의 에피토프, SEQ ID NO: 9, 및 추가적인 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프, SEQ ID NO: 10의 에피토프, 및 추가적인 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 FAM19A5 에피토프는 QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO: 5, 에피토프 F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO: 7, 에피토프 F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO: 8, 에피토프 F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9, 에피토프 F5), 또는 NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO: 10, 에피토프 F6), 또는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10, 또는 이들의 임의의 조합의 아미노산 서열 내에 위치된 단편으로부터 선택된다. SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편은 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10 중 어느 것의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가적인 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 에피토프에 자생 입체형태(즉, 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가적인 FAM19A5 에피토프의 글리코실화 및 비글리코실화 형태에 모두 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP2, EP4, 및/또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, EP2는 아미노산 DSSQP(SEQ ID NO: 66)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되고, EP4는 아미노산 ARCACRK(SEQ ID NO: 68)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성된다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP2, EP4, 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 단지 EP2에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP4와 EP8에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, EP6은 아미노산 KTKQWCDML(SEQ ID NO: 70)을 포함하고, EP7은 아미노산 GCDLLINR(SEQ ID NO: 71)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP6, EP7, 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 단지 EP6, EP7, 또는 EP8에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP7 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP7에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 FAM19A5 에피토프에 결합한다.

특정 구체예에서, 예를 들어 면역분석법(예를 들어, ELISA), 표면 플라즈몬 공명, 또는 역학적 배제 분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 더 높은 친화성으로 FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)와 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공된다. 특정 구체예에서, 예를 들어 면역분석법에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질과 교차 반응성 없이 FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공된다.

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 자생 항체가 아니거나 또는 자연 발생 항체가 아니다. 예를 들어, 항-FAM19A5 항체는, 예컨대 더 많은, 더 적은, 또는 상이한 타입의 번역 후 변형을 가짐으로써, 자연 발생 항체와는 상이한 번역 후 변형을 가진다.

IV. 예시적인 항-FAM19A5 항체

본 발명에 개시된 방법에 사용될 수 있는 특정한 항체는 본 발명에 개시된 CDR 및/또는 가변 영역 서열을 가진 항체, 예를 들어 단클론성 항체, 뿐만 아니라 이들의 가변 영역 또는 CDR 서열과 적어도 80% 동일성(예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성)을 가진 항체이다. 상이한 항-FAM19A5 항체들에 대한 VH 및 VL CDR의 아미노산 서열이 각각 표 2 및 3에 제공된다. 다음의 항체들에 대한 CDR은 Kabat 넘버링 시스템(상기 참조)을 사용하여 확인되었다: 1-65, 3-2, 2-13, 1-28, P2-C12, 13B4, 13F7, 15A9, P1-A03, P1-A08, P1-F02, P2-A01, P2-A03, P2-F07, P2-F11, SS01-13, SS01-13-s5, 및 S5-2.GKNG. 다음의 항체들에 대한 CDR은 IMGT 넘버링 시스템(상기 참조)을 사용하여 확인되었다: 1-7A-IT, Low-PI, 1-30, 1-17, 1-32, 4-11, 6-10, 2-13D, 2-13D-37, 2-13D-37-1.5W-41, 및 2-13D-37-3W-16. 본 발명의 상이한 항-FAM19A5 항체들에 대한 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 표 4 및 5에 제공된다.

[표 2]

[표 3]

[표 4]

[표 5]

중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공되며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38, 155-165, 211, 214, 234-237, 또는 249-251의 아미노산 서열을 포함한다(표 4 참조). 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38, 155-165, 211, 214, 234-237, 또는 249-251로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다(표 4 참조).

또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 제공되며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42, 166-176, 212, 215, 또는 238-245의 아미노산 서열을 포함한다(표 5 참조). 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 39-42, 166-176, 212, 215, 또는 238-245로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다(표 5 참조).

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38, 155-165, 211, 214, 234-237, 또는 249-251로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR 및 SEQ ID NOs: 39-42, 166-176, 212, 215, 또는 238-245로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.

또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 제공되며, (i) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 168의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 158의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 169의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 170의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 172의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 174의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 164의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 175의 아미노산 서열을 포함하거나; (xv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함하거나; (xvi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 211의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 212의 아미노산 서열을 포함하거나; (xvii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 214의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 215의 아미노산 서열을 포함하거나; (xviii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 249의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 215의 아미노산 서열을 포함하거나; (xix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 234의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 238의 아미노산 서열을 포함하거나; (xx) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 239의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 240의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 241의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxiii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 242의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxiv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 243의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 235의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 244의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxvi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 245의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxvii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 250의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 245의 아미노산 서열을 포함하거나; (xxviii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 245의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xxix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 251의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 245의 아미노산 서열을 포함한다.

중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공되며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38, 155-165, 211, 214, 234-237, 또는 249-251에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다(표 4 참조).

또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공되며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42, 166-176, 212, 215, 또는 238-245에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다(표 5 참조).

또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분이 본 발명에 제공되며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38, 155-165, 211, 214, 234-237, 또는 249-251에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42, 166-176, 212, 215, 또는 238-245에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분을 제공하며, 이것은

(a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(p) SEQ ID NOs: 211 및 212를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(q) SEQ ID NOs: 214 및 215를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(r) SEQ ID NOs: 249 및 215를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(s) SEQ ID NOs: 234 및 238을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(t) SEQ ID NOs: 235 및 239를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(u) SEQ ID NOs: 235 및 240을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(v) SEQ ID NOs: 235 및 241을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(w) SEQ ID NOs: 235 및 242를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(x) SEQ ID NOs: 235 및 243을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(y) SEQ ID NOs: 235 및 244를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(z) SEQ ID NOs: 236 및 245를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(aa) SEQ ID NOs: 250 및 245를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;

(bb) SEQ ID NOs: 237 및 245를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는

(cc) SEQ ID NOs: 251 및 245를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열

을 포함한다.

특정 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 (i) 2-13의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ii) 3-2의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 3-2의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iii) 1-65의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-65의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iv) 1-28의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-28의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (v) P2-C12의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-C12의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vi) 13B4의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13B4의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vii) 13F7의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13F7의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (viii) 15A9의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 15A9의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ix) P1-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (x) P1-A08의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A08의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xi) P1-F02의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-F02의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xii) P2-A01의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A01의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiii) P2-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiv) P2-F07의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F07의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xv) P2-F11의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F11의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xvi) SS01-13의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 SS01-13의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xvii) SS01-13-s5의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 SS01-13-s5의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xviii) S5-2.GKNG의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 S5-2.GKNG의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xix) 1-7A-IT의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-7A-IT의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xx) Low-PI의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 Low-PI의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxi) 1-30의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-30의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxii) 1-17의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-17의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxiii) 1-32의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-32의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxiv) 4-11의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 4-11의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxv) 6-10의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 6-10의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxvi) 2-13D의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13D의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxvii) 2-13D-37의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13D-37의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xxviii) 2-13D-37-1.5W-41의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13D-37-1.5W-41의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; 또는 (xxix) 2-13D-37-3W-16의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13D-37-3W-16의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체들에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열이 표 2에 제공된다. 본 발명에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체들에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열이 표 3에 제공된다.

일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은:

(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

을 포함한다.

특정 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.

일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은:

(a) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(b) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

특정 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;

(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

(d) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(e) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(f) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(b) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;

(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

(d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(e) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(f) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(b) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;

(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

(d) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(e) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(f) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(b) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;

(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

(d) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(e) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(f) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 상기 CDR 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개를 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 220의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 225의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(b) SEQ ID NO: 228의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(c) SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

(a) SEQ ID NO: 220의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;

(b) SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;

(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3

(d) SEQ ID NO: 225의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;

(e) SEQ ID NO: 228의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는

(f) SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3

을 포함한다.

본 발명에 설명된 VH 도메인, 또는 그것의 하나 이상의 CDR은 중쇄, 예를 들어 전장 중쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 유사하게, 본 발명에 설명된 VL 도메인, 또는 그것의 하나 이상의 CDR은 경쇄, 예를 들어 전장 경쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 전장 중쇄와 전장 경쇄는 조합되어 전장 항체를 형성할 수 있다.

따라서, 특정 구체예에서, 항체 경쇄 및 중쇄, 예를 들어 분리된 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체가 본 발명에 제공된다. 경쇄와 관련하여, 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 경쇄는 카파 경쇄이다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 경쇄는 람다 경쇄이다. 또 다른 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 경쇄는 인간 카파 경쇄 또는 인간 람다 경쇄이다. 특정 구체예에서, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 설명된 임의의 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 경쇄의 불변 영역은 인간 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되었다(예를 들어, 미국 특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동) 참조).

중쇄와 관련하여, 일부 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 중쇄는 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄일 수 있다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체의 중쇄는 인간 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 중쇄의 불변 영역은 인간 감마(γ) 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 개시된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 중쇄의 불변 영역은 본 발명에 설명되거나 당업계에 공지된 인간 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되었다(예를 들어, 미국 특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동) 참조).

일부 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VH 또는 VH CDR 및 VL 또는 VL CDR을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 또는 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 특정 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 본 발명에 설명된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 아형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 아형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 및 알로타입(예를 들어 G1m, G2m, G3m 및 nG4m) 및 이들의 변이체를 포함하는, 자연-발생한 인간 IgG의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5: 520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 및 Jefferis R. and Lefranc M.P., mAbs 1:4, 1-7 (2009) 참조). 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4, 또는 이들의 변이체의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.

특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 보체-의존성 세포독성(CDC) 및/또는 항체-의존성 세포 포식작용(ADCP)을 갖지 않는다. 선천면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유하기 때문에, 이펙터 기능은 Fc 영역에 의해 매개되며, Fc 영역의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당한다. 또한, IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3 항체보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 가진다. 항체의 이펙터 기능은 다음과 같은 당업계에 공지된 상이한 접근법에 의해 감소되거나 회피될 수 있다: (1) Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어, Fab, F(ab')₂, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)의 사용; (2) 당이 부착된 잔기의 결실 또는 변경, 당의 효소적 제거, 글리코실화 억제제의 존재하에 배양된 세포에서의 항체의 생성, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어, 박테리아 숙주 세포, 미국 출원공개 제20120100140호 참조)에서의 항체의 발현에 의해 생성될 수 있는, 비글리코실화 항체의 생성; (3) 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터 Fc 영역(예를 들어, IgG2 또는 IgG4 항체의 Fc 영역 또는 IgG2 또는 IgG4 항체의 CH2 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 미국 출원공개 제20120100140호 및 Lau C. et al., J. Immunol. 191: 4769-4777 (2013) 참조)의 이용; 및 (4) 감소된거나 없는 Fc 기능을 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역의 생성(예를 들어, 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 출원 및 PCT 공보들 및 An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009) 참조).

따라서, 일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb이다. 이러한 항체 단편은 당업계에 잘 알려져 있으며 위에서 상술하였다.

일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG2나 IgG4의 Fc 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG4 이소타입의 IgG 항체의 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체의 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2의 힌지 영역과 IgG4의 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 감소되거나 없는 Fc 기능을 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다. Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업계에 공지된 것들을 포함한다(예를 들어, Lau C. et al., J. Immunol. 191: 4769-4777 (2013); An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); 및 미국 출원공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국 특허 및 공보 및 PCT 공보들 참조). 또한, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다.

V. 핵산 분자

본 발명에 설명된 다른 양태는 본 발명에 설명된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분 중 어느 하나를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자의 사용에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포의 일부로서, 세포 용해물로서, 또는 부분적으로 정제된 형태나 실질적으로 순수한 형태로서 사용될 수 있다. 핵산은 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 제한 효소, 아가로오스 겔 전기영동 및 당업계에 잘 공지된 다른 기술들을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산(예를 들어, 다른 염색체 DNA, 예를 들어 자연에서 분리된 DNA에 연결된 염색체 DNA) 또는 단백질로부터 정제되었을 때, "분리되거나" 또는 "실질적으로 순수하다"고 한다(F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York 참조). 본 발명의 방법에 유용한 핵산은, 예를 들어 DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 핵산은 cDNA 분자이다.

본 발명에 설명된 핵산은 표준 분자생물학 기술을 사용하여 얻어질 수 있다. 하이브리도마(예를 들어, 아래 더 상세히 설명된 대로 인간 면역글로불린 유전자를 지닌 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 이 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 cDNA가 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 얻어질 수 있다. (예를 들어, 파지 디스플레이 기술을 사용한) 면역글로불린 유전자 라이브러리로부터 얻어진 항체의 경우, 이 항체를 암호화하는 핵산이 라이브러리로부터 회수될 수 있다.

본 발명의 방법에 유용한 특정한 핵산 분자는 본 발명의 다양한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 서열을 암호화하는 것들이다. 이러한 항체의 VH 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열이 SEQ ID NOs: 43-46 및 177에 제시된다. 항-FAM19A5 항체의 VH 서열을 암호화하는 추가적인 예시적인 DNA 서열이 표 6(아래)에 제공된다. 이러한 항체의 VL 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열은 SEQ ID NOs: 47-50 및 178에 제시된다. 항-FAM19A5 항체의 VL 서열을 암호화하는 추가적인 예시적인 DNA 서열이 표 7(아래)에 제공된다.

[표 6]

[표 7]

본 발명의 방법에 유용한 VH 및 VL 세그먼트를 암호화하는 DNA 단편이 얻어진 후, 이들 DNA 단편은, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환하기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 다른 단백질을 암호화하는 다른 DNA 단편에 작동 가능하게 연결된다. 이와 관련하여 사용된, 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 인-프레임(in-frame)을 유지하도록 2개의 DNA 단편이 연결되는 것을 의미한다.

본 발명의 방법에 유용한 VH 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(힌지, CH1, CH2 및/또는 CH3)을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 알려져 있고(예를 들어, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역, 예를 들어 IgG2 및/또는 IgG4 불변 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-암호화 DNA는 단지 중쇄 CH1 불변 영역만을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.

본 발명의 방법에 유용한 VL 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 알려져 있고(예를 들어, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.

scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-암호화 DNA 단편이 가요성 링커를 암호화하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)₃을 암호화하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결됨으로써, VL과 VH 영역이 가요성 링커에 의해 연결된 상태로 VH 및 VL 서열이 연속 단쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어, Bird et al., (1988) Science 242:423-426; Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554 참조).

일부 구체예에서, 본 발명은 본 발명에 개시된 방법에서 항체 또는 그것의 항원 결합 부분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터의 사용을 제공한다. 다른 구체예에서, 벡터는 유전자 요법에 사용될 수 있다.

개시된 방법에 적합한 벡터는 발현 벡터, 바이러스 벡터, 및 플라스미드 벡터를 포함한다. 한 구체예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.

본 발명에서 사용된 발현 벡터는 적절한 숙주 세포에 도입되었을 때, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위한 필수 요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우, 복제 및 번역을 위한 필수 요소를 함유하는 임의의 핵산 구성물을 말한다. 발현 벡터는 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 및 이들의 유도체를 포함할 수 있다.

개시된 방법을 위한 발현 벡터는 본 발명에 개시된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원 결합 부분에 대한 코딩 서열은 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결된다. 본 발명에서 사용된, 두 핵산 서열은 각 성분 핵산 서열이 기능성을 보유하도록 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결된 것이다. 코딩 서열 및 유전자 발현 제어 서열은, 코팅 서열의 발현 또는 전사 및/또는 번역이 유전자 발현 제어 서열의 영향 또는 제어하에 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결된 것이다. 두 DNA 서열은, 5' 유전자 발현 서열에서 프로모터의 유도가 코딩 서열의 전사를 가져오고, 두 DNA 서열의 연결의 성격이 (1) 프레임-시프트 돌연변이의 도입을 가져오지 않거나, (2) 코딩 서열의 전사를 지시하는 프로모터 영역의 능력을 방해하지 않거나, 또는 (3) 단백질로 번역되는 상응하는 RNA 전사체의 능력을 방해하지 않는다면, 작동 가능하게 연결된 것이다. 따라서, 코팅 핵산 서열을 전사시킨 경우 유전자 발현 서열은 코딩 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된 것이므로, 얻어진 전사체는 원하는 항체 또는 그것의 항원 결합 부분으로 번역된다.

본 발명의 방법에 유용한 바이러스 벡터는, 제한은 아니지만, 레트로바이러스, 예컨대 Moloney 뮤린 백혈병 바이러스, Harvey 뮤린 육종 바이러스, 뮤린 유방 종양 바이러스, 및 Rous 육종 바이러스; 렌티바이러스; 아데노바이러스; 아데노-관련 바이러스; SV40-타입 바이러스; 폴리오마바이러스; 엡스타인-바 바이러스; 유두종 바이러스; 헤르페스 바이러스; 우두 바이러스; 폴리오 바이러스; 및 RNA 바이러스, 예컨대 레트로바이러스와 같은 바이러스로부터의 핵산 서열을 포함한다. 당업계에 잘 공지된 다른 벡터들도 쉽게 이용할 수 있다. 특정한 바이러스 벡터는 비-필수 유전자가 관심 유전자로 치환된 비-세포변성(non-cytopathic) 진핵생물 바이러스에 기초한다. 비-세포변성 바이러스는 레트로바이러스를 포함하며, 이것의 생애 주기는 게놈 바이러스 RNA의 DNA로의 역 전사와 후속하여 숙주 세포 DNA에 프로바이러스 통합을 수반한다. 레트로바이러스는 인간 유전자 요법 시험을 위해 승인되었다. 복제-결함이 있는 레트로바이러스(즉, 원하는 단백질의 합성을 지시할 수 있지만 감염성 입자는 제조할 수 없슴)가 가장 유용하다. 이러한 유전자 변경된 레트로바이러스 발현 벡터는 생체내 유전자의 고 효능 형질도입(transduction)에서 일반적인 유용성을 가진다. 복제-결함 레트로바이러스를 생성하는 표준 프로토콜(플라스미드로의 외래 유전자 물질의 통합, 플라스미드로 패키징 셀라인을 트랜스펙션, 패키징 셀라인에 의한 재조합 레트로바이러스의 생성, 조직 배양 배지로부터의 바이러스 입자의 수집, 및 바이러스 입자로 표적 세포를 감염하는 단계를 포함)은 Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., New York (1990) 및 Murry, E.J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991)에 제공된다.

한 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 바이러스는 이중-가닥 DNA 바이러스인 아데노-관련 바이러스이다. 아데노-관련 바이러스는 복제 결함이 있도록 조작될 수 있고, 광범위한 세포 타입 및 종을 감염시킬 수 있다. 또한, 아데노-관련 바이러스는 열 및 지질 용매 안정성; 조혈 세포를 포함하는 다양한 계통의 세포에서의 높은 형질도입 빈도; 및 균교대증 억제의 결여와 같은 이점을 가지므로, 다중 형질도입이 가능하다. 보고된 바에 따르면, 아데노-관련 바이러스는 부위-특정 방식으로 인간 세포 DNA에 통합될 수 있으므로, 삽입 돌연변이유발의 확률 및 레트로바이러스 감염의 삽입된 유전자 발현 특징의 변동성을 최소화한다. 이에 더하여, 야생형 아데노-관련 바이러스 감염이 선택압의 부재하에 100계대 이상 동안 조직 배양물에서 추적되었는데, 이것은 아데노-관련 바이러스 게놈 통합이 상대적으로 안정한 이벤트임을 시사한다. 또한, 아데노-관련 바이러스는 염색체외 방식으로 기능할 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 벡터는 렌티바이러스로부터 유래된다. 특정 구체예에서, 벡터는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스의 벡터이다.

렌티바이러스 게놈 및 프로바이러스 DNA는 전형적으로 레트로바이러스에서 발견되는 3개의 유전자 gag, pol 및 env를 가지며, 이들의 측면에는 2개의 긴 말단 반복부(LTR) 서열이 있다. gag 유전자는 내부 구조(바탕질, 캡시드 및 뉴클레오캡시드) 단백질을 암호화하고, pol 유전자는 RNA-지정 DNA 중합효소(역 전사효소), 프로테아제 및 인테그라아제를 암호화하고, env 유전자는 바이러스 외피 당단백질을 암호화한다. 5' 및 3' LTR은 비리온 RNA의 전사 및 폴리아데닐화를 촉진하는 작용을 한다. LTR은 바이러스 복제에 필요한 다른 시스-작용 서열을 모두 함유한다. 렌티바이러스는 (HIV-1, HIV-2 및/또는 SIV에서) vif, vpr, tat, rev, vpu, nef 및 vpx를 포함하는 추가적인 유전자를 가진다.

5' LTR에 인접해서 게놈의 역 전사에 필요한 서열(tRNA 프라이머 결합 부위)이 있으며, 이것은 입자로의 바이러스 RNA의 언캡시데이션에 효과적이다(Psi 부위). 언캡시데이션(또는 감염성 비리온에 레트로바이러스 RNA의 패키징)에 필수적인 서열이 바이러스 게놈에서 빠질 경우, 이 시스 결함은 게놈 DNA의 언캡시데이션을 방지한다.

그러나, 얻어진 돌연변이는 모든 비리온 단백질의 합성을 여전히 지시할 수 있다. 또한, 패키징 기능을 지닌 둘 이상의 벡터, 즉 gag, pol 및 env, 뿐만 아니라 rev 및 tat로 숙주 세포를 트랜스펙션하는 것을 포함하는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스가 본 발명에 유용하다. 아래 개시된 대로, 기능적 tat 유전자를 결여한 벡터는 특정 용도에 바람직하다. 따라서, 예를 들어, 제1 벡터는 바이러스 gag와 바이러스 pol을 암호화하는 핵산을 제공하고, 제2 벡터는 바이러스 env를 암호화하는 핵산을 제공하여, 패키징 세포가 생성될 수 있다. 패키징 세포에, 이식 벡터로서 본 발명에서 확인된, 이종성 유전자를 제공하는 벡터를 도입하는 것은 관심의 외래 유전자를 지닌 감염성 바이러스 입자를 방출하는 프로듀서(producer) 세포를 제공한다.

벡터 및 외래 유전자의 상기 나타낸 구성형태에 따라서, 제2 벡터는 바이러스 외피(env) 유전자를 암호화하는 핵산을 제공할 수 있다. env 유전자는 레트로바이러스를 포함하는, 거의 모든 적합한 바이러스로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예에서, env 단백질은 인간 및 다른 종의 세포를 형질도입시키는 양쪽성 외피 단백질이다.

레트로바이러스-유래 env 유전자의 예들은, 제한은 아니지만, Moloney 뮤린 백혈병 바이러스(MoMuLV 또는 MMLV), Harvey 뮤린 육종바이러스(HaMuSV 또는 HSV), 뮤린 유방 종양 바이러스(MuMTV 또는 MMTV), 기본(gibbon) 원숭이 백혈병 바이러스(GaLV 또는 GALV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 및 Rous 육종 바이러스(RSV)로 부터 유래된 유전자를 포함한다. 다른 env 유전자들, 예컨대 수포성 구내염 바이러스(VSV) 단백질 G(VSV G), 간염 바이러스 및 인플루엔자로 부터 유래된 것도 사용될 수 있다.

바이러스 env 핵산 서열을 제공하는 벡터는 본 명세서에서 설명된 조절 서열과 작동 가능하게 회합된다.

특정 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 벡터는 비-분열 세포를 형질도입하는 벡터의 능력을 손상시키지 않고 HIV 병독성 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef가 결실된 렌티바이러스 벡터를 포함한다.

일부 구체예에서, 벡터는 3' LTR의 U3 영역의 결실을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 포함한다. U3 영역의 결실은 완전 결실 또는 부분 결실일 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명에 설명된 FVIII 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 본 발명의 렌티바이러스 벡터는 세포에서 (a) gag, pol, 또는 gag 및 pol 유전자를 포함하는 제1 뉴클레오타이드 서열 및 (b) 이종성 env 유전자를 포함하는 제2 뉴클레오타이드 서열로 트랜스펙션될 수 있으며, 이때 렌티바이러스 벡터는 기능적 tat 유전자를 결여한다. 다른 구체예에서, 세포는 rev 유전자를 포함하는 제4 뉴클레오타이드 서열로 더 트랜스펙션된다. 특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 vif, vpr, vpu, vpx 및 nef, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 기능적 유전자를 결여한다.

특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 gag 단백질, Rev-반응 요소, 중심 폴리퓨린 트랙(cPPT), 또는 이들의 임의의 조합을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

렌티바이러스 벡터의 예들은 WO9931251, WO9712622, WO9817815, WO9817816, 및 WO9818934에 개시되며, 이들은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.

본 발명의 방법에 유용한 다른 벡터는 플라스미드 벡터를 포함한다. 플라스미드 벡터는 당업계에 광범하게 공지되어있다(예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 참조). 지난 수 년간 플라스미드 벡터는 숙주 게놈 내에서 복제할 수 없고 통합될 수 없는 특성으로 인해 생체내에서 세포에 유전자를 송달하는데 특히 유익한 것으로 판명되었다. 그러나, 숙주 세포와 양립하는 프로모터를 가진 플라스미드는 플라스미드 내에서 작동 가능하게 암호화된 유전자로부터 펩타이드를 발현할 수 있다. 상업적 공급자로부터 이용할 수 있는 플라스미드는 pBR322, pUC18, pUC19, 다양한 pcDNA 플라스미드, pRC/CMV, 다양한 pCMV 플라스미드, pSV40, 및 pBlueScript를 포함한다. 특정한 플라스미드의 추가적인 예들은 pcDNA3.1, 카탈록 번호 V79020; pcDNA3.1/hygro, 카탈록 번호 V87020; pcDNA4/myc-His, 카탈록 번호 V86320; 및 pBudCE4.1, 카탈록 번호 V53220를 포함한다(모두 Invitrogen(Carlsbad, CA.) 제품). 다른 플라스미드들도 당업자에게 잘 알려져 있다. 추가로, 플라스미드는 DNA의 특정 단편을 제거 및/또는 부가하기 위해 표준 분자생물학 기술을 사용하여 주문 설계될 수 있다.

VI. 항체 생성

FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 그것의 단편은 항체의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 본 발명에 설명된 방법은, 다른 특별한 언급이 없는 한, 분자생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 당업계 기술 범위 내의 관련 분야의 종래의 기술들을 이용한다. 이들 기술은 본 발명에 인용된 참고자료들에 기술되며 문헌에 충분히 설명된다(예를 들어, Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press 참조).

특정 구체예에서, 본 발명에 설명된 항체는, 예를 들어 합성, DNA 서열의 유전자 조작을 통한 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체(예를 들어, 재조합 항체)이다. 특정 구체예에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유류(예를 들어, 인간)의 항체 점라인 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어, DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.

VII. 제약학적 조성물

원하는 정도의 순도를 가진 본 발명의 방법에 유용한 항체 또는 그것의 항원 결합 부분을 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및/또는 안정제 중에 포함하는 조성물이 본 발명에 제공된다(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 이용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 버퍼, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 염화 옥타데실디메틸벤질암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레졸시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온 계면활성제, 예컨대 TWEEN®, PLURONICS® 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 제약학적 조성물은 본 발명에 설명된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트, 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 일부 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 발명에 설명된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분의 유효량, 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 제약학적 조성물에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 발명에 설명된 제약학적 조성물은 FAM19A5 활성을 감소시키는데 유용할 수 있으므로, 죽상경화증과 같은 심혈관-관련 질환 또는 장애를 치료할 수 있다.

비경구 제조물에서 사용된 제약학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항균제, 등장제, 버퍼, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 봉쇄 또는 킬레이트화제 및 다른 제약학적으로 허용되는 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예들은 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장 덱스트로오스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로오스 및 락테이트 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항균제가 다수-용량 용기에 패키지된 비경구 제조물에 첨가될 수 있으며, 페놀 또는 크레졸, 수은함유물질, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 염화벤잘코늄 및 염화벤제토늄을 포함한다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 버퍼는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 염산염을 포함한다. 현탁 및 분산제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제는 EDTA를 포함한다. 제약학적 담체는 또한 수 혼화성 비히클용의 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함하고, pH 조정용의 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.

본 발명의 방법에 유용한 제약학적 조성물은 대상에 대한 임의의 투여 경로에 맞게 제제화될 수 있다. 피하, 근육내, 복강내, 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 본 발명에서 또한 고려된다. 주사가능물질이 종래의 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중에서 용액 또는 현탁액으로 되기에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 주사가능물질, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는, 예를 들어 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 이에 더하여, 필요한 경우, 투여될 제약학적 조성물은 또한 소량의 비-독성 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 유화제, pH 완충제, 안정제, 용해성 증진제, 및 다른 제제들, 예컨대 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 사이클로덱스트린을 함유할 수 있다.

항체의 비경구 투여용 제조물은 바로 주사 가능한 멸균 용액, 피하주사용 정제를 포함하는 사용 직전에 용매와 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 가용성 제품, 예컨대 동결건조된 분말, 바로 주사 가능한 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀젼을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.

정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리학적 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS), 및 증점 및 용해제를 함유하는 용액, 예컨대 글루코오스, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 포함한다.

항체를 포함하는 국부용 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 설명된 대로 제조된다. 얻어진 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있으며, 크림, 겔, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크, 페이스트, 폼, 에어로졸, 관주제, 스프레이, 좌약, 붕대, 피부 패치 또는 국부적 투여에 적합한 임의의 다른 제제로서 제제화될 수 있다.

본 발명에 설명된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예컨대 흡입에 의한, 국부 적용을 위한 에어로졸로서 제제화될 수 있다(예를 들어, 미국특허 제4,044,126호, 제4,414,209호 및 제4,364,923호 참조, 이 출원들은 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 송달을 위한 에어로졸을 개시한다). 기도 투여용인 이들 제제는 분무기용 에어로졸 또는 용액 형태이거나, 또는 흡입제용 마이크로파인 분말일 수 있으며, 단독으로 사용되거나 또는 락토오스와 같은 비활성 담체와 조합된다. 이러한 경우, 제제의 입자는, 한 구체예에서 50 마이크론 미만, 한 구체예에서 10 마이크론 미만의 직경을 가진다.

본 발명의 방법에 유용한 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 국소 또는 국부적 적용, 예컨대 피부 및 점막에 국부적 적용을 위해, 젤, 크림 및 로션으로 제제화될 수 있다. 국부적 투여는 경피 송달용으로 고려되며, 또한 점막 투여 또는 흡입 요법용으로 고려된다. 다른 제약학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 또는 단독으로 항체의 코 용액이 또한 투여될 수 있다.

이온영동 및 전기영동 장치를 포함하는 경피 패치가 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 이 패치는 항체를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국특허 제6,267,983호, 제6,261,595호, 제6,256,533호, 제6,167,301호, 제6,024,975호, 제6,010715호, 제5,985,317호, 제5,983,134호, 제5,948,433호, 및 제5,860,957호에 개시된다.

특정 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 항체 또는 그것의 항원 결합 부분을 포함하는 제약학적 조성물은 동결건조된 분말이며, 이 분말은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여용으로 복원될 수 있다. 동결건조된 분말은 또한 고체 또는 겔로서 복원 및 제제화될 수 있다. 동결건조된 분말은 본 발명에 설명된 항체 또는 그것의 항원 결합 부분, 또는 그것의 제약학적으로 허용되는 유도체를 적합한 용매에 용해함으로써 제조된다. 일부 구체예에서, 동결건조된 분말은 멸균 상태이다. 용매에는 분말 또는 분말로부터 제조된 복원된 용액의 안정성 또는 다른 약물학적 성분을 개선하는 부형제가 함유될 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는, 제한은 아니지만, 덱스트로오스, 소르비톨, 프럭토오스, 콘 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코오스, 수크로오스 또는 기타 적합한 제제를 포함한다. 또한, 용매에는, 한 구체예에서, 약 중성 pH의, 버퍼, 예컨대 시트레이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트 또는 당업자에게 알려진 기타 버퍼가 함유될 수 있다. 용액의 후속 멸균 여과와 이어서 당업자에게 공지된 표준 조건하에서의 동결건조는 원하는 제제를 제공할 수 있다. 한 구체예에서, 얻어진 용액은 동결건조용 바이알에 배분될 수 있다. 각 바이알은 화합물의 단일 투약량 또는 다수 투약량을 함유할 수 있다. 동결건조된 분말은 적절한 조건하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 보관될 수 있다.

주사용수에 의한 동결건조된 분말의 복원은 비경구 투여용 제제를 제공한다. 복원을 위해 동결건조된 분말이 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따른다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 방법에 유용한 항체 또는 그것의 항원 결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트 및 본 발명에 제공된 다른 조성물은 또한 치료될 대상의 특정 조직, 수용체, 또는 다른 신체 영역에 표적화되도록 제제화될 수 있다. 많은 표적화 방법이 당업자에게 잘 알려져 있다. 이러한 표적화 방법들을 본 조성물에 사용하는 것이 본 발명에서 고려된다. 표적화 방법의 비제한적 예들은 미국특허 제6,316,652호, 제6,274,552호, 제6,271,359호, 제6,253,872호, 제6,139,865호, 제6,131,570호, 제6,120,751호, 제6,071,495호, 제6,060,082호, 제6,048,736호, 제6,039,975호, 제6,004,534호, 제5,985,307호, 제5,972,366호, 제5,900,252호, 제5,840,674호, 제5,759,542호 및 제5,709,874호를 참조한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 죽상경화증을 치료하고 및/또는 죽상경화증과 관련된 하나 이상의 증상(예를 들어, 증가된 총 콜레스테롤, LDL, 트리글리세라이드 수준, 감소된 HDL 수준, 및/또는 플라크 내에서의 옥소-LDL-유도 포말 세포의 증가된 수 및/또는 체류)를 감소, 완화, 또는 억제하기 위해 사용될 수 있다.

생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균될 수 있다. 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 멸균될 수 있다.

VIII. 키트

본 발명의 방법에 유용한 하나 이상의 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 그것의 면역콘쥬게이트를 포함하는 키트가 본 발명에 제공된다. 특정 구체예에서, 본 발명에 제공된 하나 이상의 항체 또는 그것의 항원 결합 부분과 같은, 본 발명의 방법에 유용한 제약학적 조성물의 성분들 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기 및 선택적인 사용 설명서를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트가 본 발명에 제공된다. 일부 구체예에서, 키트는 본 발명의 방법에 유용한 제약학적 조성물 및 본 발명에 설명된 것들과 같은 임의의 예방제 또는 치료제를 함유한다.

실시예

실시예 1: 죽상경화증의 마우스 모델에서의 항-FAM19A5 항체의 생체내 투여 후 체중의 평가

죽상경화증에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과 평가를 시작하기 위해, 죽상경화증 경향이 있는 C57BL/6 아포지방단백질 E-결핍(Apoe -/-) 마우스(Jackson Laboratory, 미국)를 사용했다. 간단히 말해서, Apoe -/- 마우스에게 5주 동안 고지방(고콜레스테롤성) 식이(TD. 88137 조사된 완전 칼로리 식이, 42% 총 지방, Halan Laboratories, Inc., 미국)를 제공하여 죽상경화증을 유도했다. 다음에, 인간 IgG 대조군 항체(10 mg/kg) 또는 항-FAM19A5 항체(클론 "3-2")를 총 6주 동안 매주 1회 정맥내 투여했다. 항-FAM19A5 항체는 두 가지 상이한 농도(5 mg/kg 또는 10 mg/kg)로 관련 마우스에 투여되었다. 정상적인(즉, 정상식이(+40 RMM-SP-10 조사된 완전식, 15.2% 단백질, SAFE Inc., 프랑스)) 건강한 마우스를 대조군으로 사용했다. 정상 마우스와 고콜레스테롤혈증 마우스는 실험 기간 내내 각자의 식이를 유지했다. 체중 및 일반적인 임상 관찰을 치료 기간 내내 모니터링했다. 마지막 항체를 투여하고 1주 후에 상이한 치료 그룹의 마우스들을 죽이고 분석했다. 표 8은 상이한 치료 그룹을 제공한다.

[표 8]

표 9(아래) 및 도 1에 나타낸 대로, 정상식이(그룹 1)가 제공된 동물과 비교하여, 고지방식이를 제공받은 동물은 모두 실험 과정 동안 체중이 증가했다. 그룹 1, 3 및 4의 모든 동물은 전 실험 기간 동안 생존했다(즉, 42일). 그러나, 그룹 2(대조군 인간 IgG 항체로 치료된 고콜레스테롤혈증 마우스)에서는 실험이 끝날 때까지 10마리 마우스 중 3마리가 죽었다. 죽은 3마리 마우스 중 2마리는 죽기 전에 비정상적 증상(예를 들어, 경련 및 보행장애)을 나타냈다. 상이한 치료 그룹의 마우스에서는 유의한 비정상성은 관찰되지 않았다.

[표 9]

상기 결과는 항-FAM19A5 항체의 투여가 고콜레스테롤혈증 동물의 체중에는 유의한 영향을 미치지 않는다는 것을 시사한다. 그러나, 항-FAM19A5 치료는 대조군 항-인간 IgG 대조군 항체로 치료된 고콜레스테롤혈증 그룹에서 죽었던 3마리 마우스에 의해 증명된 대로 생존을 촉진할 수 있다.

실시예 2: LDL 수준에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과 평가

LDL 수준에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과를 평가하기 위해, 실시예 1에 설명된 고콜레스테롤혈증 마우스를 또한 사용했다. 간단히 말해서, 상이한 그룹의 마우스들을 마지막 항체를 투여하고 대략 1주(즉, 최초 항체 투여 후 7주) 후에 죽였다. 복부 정맥으로부터 혈액(약 1mL)을 채취하고 EDTA-2K로 처리하고 원심분리하여(실온에서 10분 동안 약 3000rpm) 혈장을 제거했다. 다음에, 마우스의 LDL 수준을 측정했다.

표 10(아래)에 나타낸 대로, 인간 IgG 대조군 항체(그룹 2)로 치료된 마우스와 비교하여 항-FAM19A5 항체(그룹 3 및 4)로 치료된 고콜레스테롤혈증 마우스의 LDL 수준이 약간 감소했다(도 2 참조).

[표 10]

상기 결과는 항-FAM19A5 치료가 고콜레스테롤혈증 동물의 혈액 중 LDL 수준을 저하시킴으로써 죽상경화증의 치료를 도울 수 있다는 것을 시사한다. LDL 수준의 이런 감소는 혈액 중 감소된 총 콜레스테롤 수준을 의미할 수 있다.

실시예 3: 대동맥 상의 죽상경화증 병변 부위로의 대식세포의 이주에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 면역조직화학 분석

죽은 세포 및 산화된 LDL의 대식세포에 의한 포식작용은 죽상경화증 플라크의 청소에 중요하다. 따라서, 항-FAM19A5 치료가 혈관의 죽상경화증 병변 부위에서의 단구/대식세포의 축적 및/또는 포식작용 특성에 어떤 영향을 미치는지 결정하기 위해, 실시예 1에서 상기 설명된 고콜레스테롤혈증 마우스의 대동맥에서의 CD68 및 C146의 발현을 평가했다. CD68 및 CD146은 조직 내의 지방을 지닌 대식세포(포말 세포)를 검출하는데 통상 사용되는 마커이다.

간단히 말해서, 상이한 그룹의 마우스들을 마지막 항체를 투여하고 대략 1주(즉, 최초 항체 투여 후 7주) 후에 죽였다. 마우스로부터 심장과 대동맥을 분리하기 전에 PBS와 4% 파라포름알데히드로 차례로 심장 관류를 수행했다. 심장과 대동맥을 수거하고 10% 중성 포르말린에 고정시켰다. 다음에, 조직 샘플을 CD68과 CD146으로 염색하고, 조직 샘플의 전체 병변 영역에서의 포말 세포 또는 지방을 지닌 대식세포의 존재를 결정했다.

도 3A-3D에 나타낸 대로, 정상적인 건강한 마우스(그룹 1)와 비교하여 고콜레스테롤혈증 마우스(그룹 2, 3 및 4)의 대동맥에서의 CD68 및 CD146 발현이 증가했다. 이런 증가는 항-FAM19A5 항체로 치료된 고콜레스테롤혈증 마우스에서 훨씬 더 뚜렷했다.

이 결과는 항-FAM19A5 항체가 고콜레스테롤혈증 동물의 대동맥 내의 죽상경화증 병변 부위로의 CD68 및 CD146을 발현하는 지방을 지닌 대식세포(포말 세포)의 이주 및 활성화를 촉진할 수 있다는 것을 시사한다.

실시예 4: BV2 세포의 포식작용 활성에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 평가

항-FAM19A5 항체 치료가 대식세포 기능에 영향을 미치는지 평가하기 위해, BV 세포(불멸화된 뮤린 소교세포 셀라인)을 사용했다. 간단히 말해서, BV2 세포(4 x 10³/100μL/웰)를 96웰 플레이트 위에 평판하고 6시간 동안 37℃ 5% CO₂에서 인큐베이션했다. 다음에, BV2 세포를 인간 FAM19A5-Fc 단백질(0.25 μM, Lot# 170815)로 단독으로 또는 다양한 농도(25 μg/mL, 12.5 μg/mL, 6.25 μg/mL, 또는 3.125 μg/mL)의 항-FAM19A5 항체(클론 "1-30"; Lot# A5ml80831)와 조합하여 처리했다. 처리된 세포를 37℃ 5% CO₂에서 16시간 더 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 세포에 _PHRODO™ Green E. coli BioParticles(Thermofisher, P35366)를 첨가했다(15 μg/100 μL/웰). 다음에, INCUCYTE®(Sartorius)를 사용하여 1시간마다 녹색 형광 강도를 측정함으로써 BioParticles의 포식작용성 흡수를 관찰했다.

도 4A 및 4B에 나타낸 대로, 인간 FAM19A5-Fc 단백질에 의한 BV2 세포의 처리는 BV2 세포의 포식작용 능력을 억제했다. 그러나, 인간 FAM19A5-Fc 단백질과 항-FAM19A5 항체의 조합에 의한 BV2 세포의 처리는 농도-의존적 방식으로 포식작용을 회복시켰다. BioParticles로 처리하고 대략 9시간 후에 대조군(즉, 인간 FAM19A5-Fc 단백질 단독)과 비교하여 3.125, 6.25, 12.5, 및 25 μg/mL 항-FAM19A5 항체에서 관찰된 포식작용은 각각 66%, 68%, 80%, 91%, 및 104%였다.

상기 결과는 항-FAM19A5 항체가 FAM19A5 단백질 처리 후 BV2 세포의 포식작용 능력을 효과적으로 회복시킬 수 있음을 증명한다. 종합하면, 상기 실시예들은 항-FAM19A5 항체 치료가 고콜레스테롤혈증 동물에서의 지질을 지닌 대식세포의 이주성(예를 들어, 혈관벽 상의 죽상경화증 병변 부위로) 및 기능성(예를 들어, 포식작용)을 모두 증진시킬 수 있다는 것을 시사한다. 이러한 대식세포는 순환계로부터의 LDL의 흡수에 있어 중요할 수 있으므로, 혈액 중 LDL 수준을 감소시킬 수 있다.

실시예 5: BV2 세포에 의한 산화된 LDL의 포식작용에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 평가

대식세포 기능에 대한 항-FAM19A5 항체의 효과를 더 평가하고자 항-FAM19A5 항체 처리 후 산화된 LDL에 포식작용할 수 있는 BV2 세포의 능력이 평가되었다. BV2 세포가 96웰 플레이트 위에 평판되고 인간 FAM19A5-Fc 단백질(0.25 μM, Lot# 170815)로 단독으로 또는 다양한 농도의 항-FAM19A5 항체와 조합하여 처리되었다. BV2 세포는 37℃ 5% CO₂에서 인큐베이션되었다. 다음에, 세포에 Ox-LDL(AbD Serotec에서 구입, 영국 옥스포드 킬링턴)가 첨가되었다. Ox-LDL의 세포 함량이 Oil Red O를 사용하여 측정되었다. INCUCYTE^®(Sartorius)를 사용하여 1시간마다 Oil Red O 강도를 측정함으로써 Ox-LDL의 포식작용성 흡수가 관찰되었다.

실시예 6: 플라크 형성에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 평가

항-FAM19A5 항체가 죽상경화증과 관련된 플라크 형성에 영향을 미치는지 평가하고자 죽상경화증 경향이 있는 C57BL/6 아포지방단백질 E-결핍(Apoe -/-) 마우스(Jackson Laboratory, 미국)가 사용되었다. 실시예 1에 설명된 대로, 고지방식이를 제공하여 동물의 죽상경화증이 유도된 다음, 인간 IgG 대조군 항체 또는 항-FAM19A5 항체로 치료하였다. 마지막 치료 후, 마우스를 죽이고, Oil Red O 염색을 사용하여 혈관벽에서의 플라크 축적이 평가되었다.

실시예 7: BV2 세포에 의한 TNF-α 섹션에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 평가

죽상경화증과 관련된 대식세포에 대한 항-FAM19A5 치료 효과를 더 이해하기 위해, BV2 세포를 96웰 플레이트 위에 평판하고(5 x 10³ 세포/웰) 5% CO₂ 환경에서 37℃에서 6시간 동안 인큐베이션했다. 다음에, 세포를 다음과 같이 처리했다: (i) 5 μL LPS(0.5 μg/mL) 단독, (ii) 5 μL LPS(0.5 μg/mL) + 5 μL FAM19A5-Fc 단백질(10 μg/mL), 및 (iii) 5 μL LPS(0.5 μg/mL) + 5 μL FAM19A5-Fc 단백질(10 μg/mL) + 다양한 농도의 항-FAM19A5 항체(클론 "1-30"). 항-FAM19A5 항체의 최종 농도는 다음과 같았다: 100 μg/mL, 50 μg/mL, 25 μg/mL, 12.5 μg/mL, 6.25 μg/mL, 3.125 μg/mL, 1.5625 μg/mL, 및 0.78125 μg/mL. 처리된 세포를 5% CO₂ 환경에서 37℃에서 16-18시간 더 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 세포를 3분 동안 3,000 rpm으로 원심분리했다. 다음에, 상이한 웰의 상청액을 수집하고, Quantikine ELISA 마우스 TNF-α 면역분석법((R&D biosystems, cat# SMTA00B)을 사용하여 샘플에 존재하는 TNF-α의 농도를 평가했다.

도 5에 나타낸 대로, FAM19A5-Fc 단백질은 대조군 세포(즉, LPS 단독 처리된 세포)와 비교하여 LPS로 자극 후 BV2 세포에 의해 생성된 TNF-α의 양을 상당히 증가시켰다. 이런 증진된 효과는 항-FAM19A5 항체가 세포에 첨가되었을 때 억제되었다. 억제 효과는 항-FAM19A5 항체가 12.5 μg/mL의 농도일 때부터 관찰되었다(IC₅₀ = 11.5 μg/mL).

상기 결과는 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체가 FAM19A5 단백질 활성을 효과적으로 중화시킬 수 있으므로, FAM19A5 단백질이 죽상경화증과 관련된 대식세포에 미칠 수 있는 전염증 유도 효과를 억제 및/또는 감소시킬 수 있음을 증명한다.

실시예 8: 말초 대식세포에 대한 항-FAM19A5 항체 치료 효과의 평가

말초 대식세포에 대한 항-FAM19A5 항체 치료의 효과를 평가하기 위해, 세포사멸 세포에 포식작용하는 마우스 골수-유래 대식세포("m-BMDMs")의 능력을 평가했다.

세포사멸 세포를 생성하기 위해, 마우스로부터 흉선세포를 분리하고 1.0 x 10⁶ 흉선세포/mL의 일정한 세포 농도 하에 이온화 방사선 2 Gy에 노출시켰다. 세포의 세포사멸 상태를 아넥신 V-양성 및 요오드화프로피듐-음성 염색 또는 유세포계수법에 의해 TUNEL 염색을 사용하여 평가했다. 세포의 대략 60-70%가 세포사멸이었을 때 세포를 _PHRODO™(Invitrogen)로 표지하고 아래 설명된 대로 포식작용 분석에 사용했다.

포식작용을 측정하기 위해, m-BMDM을 24웰 플레이트 위에 평판하고(2 x 10⁵ 세포/웰) 하룻밤 인큐베이션했다. 다음에, 2% FBS를 함유하는 DMEM/F12로 30분 동안 세포를 아사시키고, _PHRODO™ 표지된 세포사멸 흉선세포(상기 설명된)(4.0 x 10⁶ 세포/웰)와 함께 다음 중 하나의 존재하에 인큐베이션했다: (i) 대조군 Fc, (ii) FAM19A5-Fc 단백질, (iii) 인간 IgG 대조군 항체, (iv) 3-2 항-FAM19A5 항체, 및 (v) 1-65 항-FAM19A5 항체. 상이한 치료 그룹이 표 11(아래)에 제시된다. 인큐베이션 후, 세포를 PBS로 세척하고, 트립신화하고, 1% NaN₃을 함유하는 차가운 매체에 재현탁하고, 유세포계수법에 의해 분석했다. 전방 및 측면 산란 변수를 사용하여 먹힌 표적과 포식세포를 구별했다. 이 데이터를 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석했다. 형광 신호-양성 BMDM이 표적을 먹는 포식세포인 것으로 간주되었다.

[표 11]

도 6A, 6B 및 8에 나타낸 대로, FAM19A5-Fc 단백질은 FAM19A5-Fc 단백질로 처리되지 않았던 m-BMDM과 비교하여 세포사멸 흉선세포에 포식작용하는 m-BMDM의 능력을 억제했다(예를 들어, 도 6A에서 A3 및 A4 대 A5 및 A6 참조). 그러나, 세포가 또한 항-FAM19A5 항체(3-2 및 1-65 항체 모두)로 처리되었을 때, m-BMDM의 포식작용 능력은 FAM19A5-Fc 단백질로 처리되지 않았던 상응하는 세포와 비슷했으며(예를 들어, 도 7A의 B5 및 B6 대 도 6A의 A3 및 A4 참조), 이것은 항-FAM19A5 항체(특히 50 nM의 농도)가 FAM19A5-Fc 단백질의 활성을 효과적으로 중화시켰다는 것을 시사한다.

상기 결과는 BV2 세포를 사용하여 위에서 관찰한 결과(실시예 4 참조)를 확인하고, (본 발명에 개시된 것들과 같은) 항-FAM19A5 항체의 투여가 또한 말초 대식세포의 기능적성(예를 들어, 포식작용)을 개선할 수 있으며, 죽상경화증의 치료에 유용할 수있음을 증명한다.

개요 및 요약 부분을 제외한 상세한 설명 부분은 청구항을 해석하기 위해 사용되도록 의도된다는 것이 인정되어야 한다. 개요 및 요약 부분은 본 발명자(들)에 의해 고찰된 대로 본 발명의 전부는 아니지만 하나 이상의 예시적인 구체예를 제시할 수 있고, 따라서 본 발명과 첨부된 청구항을 어떤 식으로도 제한하려고 의도하지 않는다.

본 발명은 명시된 기능들과 이들의 관계의 실시형태를 예시하는 기능적 빌딩 블록의 보조하에 상기 설명되었다. 이들 기능적 빌딩 블록의 경계는 설명의 편의를 위해 자의적으로 한정되었다. 명시된 기능들과 이들의 관계가 적절히 수행되는 한 대안의 경계도 한정될 수 있다.

특정한 구체예들에 대한 전술한 설명은 본 발명의 일반적인 성질을 충분히 드러낼 것이며, 제3자는 당업계의 지식을 적용함으로써 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않고 과도한 실험 없이 이러한 특정한 구체예들을 다양한 용도에 맞게 쉽게 변형 및/또는 개조할 수 있다. 따라서, 이러한 개조 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 구체예들의 등가물의 의미와 범위 내에 있도록 의도된다. 본 명세서에 사용된 문구 또는 용어는 제한이 아닌 설명의 목적을 위한 것임이 이해되어야 하며, 본 명세서의 용어 또는 문구는 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 한다.

본 발명의 범위 및 영역은 상기 설명된 예시의 구체예들 중 어느 것에 의해 제한되어서는 안 되며, 이후의 청구항 및 그것의 등가물에 따라서만 한정되어야 한다.

본 발명에 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 및 (폴리뉴클레오타이드와 폴리펩타이드 서열을 모두 포함하는) 수탁번호/데이터베이스 서열은 각 개별 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 또는 수탁 번호/데이터베이스 서열이 참고로 포함되도록 구체적으로 그리고 개별적으로 적시된 것과 동일한 범위로 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> NEURACLE SCIENCE CO., LTD. <120> USE OF ANTI-FAM19A5 ANTIBODIES FOR TREATING ATHEROSCLEROSIS <130> 3763.015PC01/C-K/DKC <150> US 62/785,569 <151> 2018-12-27 <160> 273 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 132 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu 1 5 10 15 Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu 20 25 30 Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 35 40 45 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 50 55 60 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 65 70 75 80 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 85 90 95 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 100 105 110 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 115 120 125 Thr Thr Val Ser 130 <210> 2 <211> 125 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 2 Met Gln Leu Leu Lys Ala Leu Trp Ala Leu Ala Gly Ala Ala Leu 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caatggcgcc 120 atcgcccagg accggcagcc ggcaagatgc gaccgccctg cccagcatgt cctcaacttt 180 ctgggcgttc atgatcctgg ccagcctgct catcgcctac tgcagtcagc tggccgccgg 240 cacctgtgag attgtgacct tggaccggga cagcagccag cctcggagga cgatcgcccg 300 gcagaccgcc cgctgtgcgt gtagaaaggg gcagatcgcc ggcaccacga gagcccggcc 360 cgcctgtgtg gacgcaagaa tcatcaagac caagcagtgg tgtgacatgc ttccgtgtct 420 ggagggggaa ggctgcgact tgttaatcaa ccggtcaggc tggacgtgca cgcagcccgg 480 cgggaggata aagaccacca cggtctcctg acaaacacag cccctgaggg ggccccggga 540 gtggccttgg ctccctggag agcccacgtc tcagccacag ttctccactc gcctcggact 600 tcacccgttc tctgccgccc gcccactccg tttccctgtg gtccgtgaag gacggcctca 660 ggccttggca tcctgagctt cggtctgtcc agccgacccg aggaggccgg actcagacac 720 ataggcgggg ggcggcacct ggcatcagca atacgcagtc tgtgggagcc cggccgcgcc 780 cagcccccgc cgaccgtggc gttggccctg ctgtcctcag aggaggagga ggaggaggca 840 gctccggcag ccacagaagg ctgcagccca gcccgcctga gacacgacgc ctgccccagg 900 ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960 tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020 caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080 gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140 gagcaccccg cacaccctcg gaggacgggc ttcggctgcg cggaggccgt ggcacacctg 1200 cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260 acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320 ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380 tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440 taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500 a 1501 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F1 <400> 5 Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg 1 5 10 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F2 <400> 6 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Cys 20 <210> 7 <211> 20 <212> PRT 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ctatccggct ccacaaacac attaaccatc actggggtcc aagccgacga cgaggctgtc 240 tatttctgtg ggactgaaga catcagcggc actgctggtg tatttggggc cgggacaacc 300 ctgaccgtcc tg 312 <210> 48 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 3-2 Antibody VL <400> 48 gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacccaggag aaaccgtcaa gatcacctgc 60 tccgggggtg gcagctatgc tggaagttac tattatggct ggtaccagca gaaggcacct 120 ggcagtgccc ctgtcactct gatctatgaa agcaacaaga gaccctcgga catcccttca 180 cgattctccg gttccacatc tggctccaca gccacactaa ccatcactgg ggtccaagcc 240 gatgacgagg ctatctatta ctgtgggagc tgggacagta gcaatggtgg tatatttggg 300 gccgggacaa ccctgaccgt ccta 324 <210> 49 <211> 331 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 Antibody VL <400> 49 ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaaccctggg gaaactgtca agatcacctg 60 ctccgggggt ggtagcagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt cacctagcag 120 tgcccctctc actgtgatct actggaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt 180 ctccggttcc aaatccggct ccacacacac attaaccatc actggggtcc aagccgagga 240 cgaggctgta tatttctgtg ggaatgatga ctacagcagt gatagtggat atgtcggtgt 300 atttggggcc gggacaaccc tgaccgtcct a 331 <210> 50 <211> 312 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VL <400> 50 gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacctggaag gaaccgtcga gatcacctgc 60 tccgggagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt ctcctggcag tgcccctgtc 120 actgtgatct atcagaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt ctccggttcc 180 aaatccggct ccacgggcac attaaccatc actggggtcc aagtcgagga cgaggctgtc 240 tattactgtg ggagtgaaga cagcagcact cttgctggta tatttggggc cgggacaacc 300 ctgaccgtcc ta 312 <210> 51 <211> 100 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> M3 mutant <400> 51 Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 1 5 10 15 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ile Glu Glu Arg Ser Gln 20 25 30 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 35 40 45 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 50 55 60 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys 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ctgcaaaccc ctggcggggc cttgtccttg 420 gtttgtaagg cttccggatt tactttctca agttttaata tgttttgggt gcgacaggcc 480 ccagggaaag ggttggaata tgttgcacag atctccagct caggttcatc caccaattat 540 gcacctgccg tccgagggag ggctacaatt tctagggaca acgggcagtc aactgtacgg 600 ttgcagctta acaatcccgg agcagaagat acaggtacct attactgtgc taagagttca 660 tacgactgtc cctatggtca ctgttcctca ggtgttgact ccgcagggga gatagatgct 720 tgggggcatg ggaccgaagt gattgtgtca tct 753 <210> 205 <211> 732 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-65 scFv <400> 205 gccttgacac aaccctcatc agtatctgct aaccccggcg aaacagttaa aataacatgc 60 tcaggaggtg gttcatctgg ctatggatat gggtggtatc aacagaaatc accaagttcc 120 gcccccttga ccgtgattta ttggaatgat aagcgcccct cagacattcc cagtcgcttc 180 tcaggcagta aatcaggctc aacccatact cttactatca ccggtgtcca agcagaagat 240 gaagccgtgt atttttgtgg gaatgatgac tattccagcg attctggcta tgtaggagtg 300 ttcggtgccg gtactaccct cacagtattg agtggtggtg gcggaagttc aggtggtggt 360 ggaagcgctg tcactttgga tgaatcaggt ggaggcctcc aaaccccagg tggcgcactc 420 agtctcgtat gtaaagcctc tggtttcact ttcagctcat atcaaatggg atgggtgcgg 480 caggctcccg gcaaggggtt ggagtgggtc ggtgttatca acaagagcgg ctctgatact 540 agctatggaa gcgcagtcaa ggggagagct actataagca gggataatgg gcaaagtacc 600 gtcaggcttc aattgaacaa tctcagggct gaggatacag gaacctactt ctgcgccaaa 660 gggtcagcat cttatatcac agcagctacc attgacgcat ggggacatgg cacagaggtc 720 attgtttcca gt 732 <210> 206 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 scFv <400> 206 gctctgacac aaccaagctc tgtcagtgca aatccaggag agaccgttaa aatcacttgc 60 agcggaggct cttattccta cggatggttc cagcaaaaaa gtcctggttc agccctcgtt 120 actgtcatct actgggacga cgagcgccct agcgatattc ctagtagatt ctcaggggct 180 cttagcggct ccactaatac tttgaccatt actggagtac aggctgatga cgaagcagtt 240 tacttctgtg gcaccgaaga tataagcgga actgcagggg tatttggggc tggtacaaca 300 ctcacagtgc tctccggggg gggcgggagc tcaggaggcg gcggatcagc tgtaaccctg 360 gacgaatctg gtggggggct tcaaacaccc ggaggagccc tctccctcgt atgcaaagct 420 tcaggattca ccttctcttc acatggaatg ttctgggtaa ggcagacacc tggcaaaggg 480 cttgaatatg tagctgagat cactaatgac ggtagcggta caaactatgg gtctgctgtg 540 aaaggccggg ctacaataag tcgagacaat ggacaaagta ccgttagact ccagctcaac 600 aacctgcgag ctgaggacac aggcacttac ttttgtgcac gcagtactta cgagtgtcca 660 ggtggatttt catgttgggg agataccgga cagatcgacg cttgggggca cggcaccgag 720 gtcattgtaa gtagc 735 <210> 207 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 207 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 208 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VL CDR1 <400> 208 Ser Gly Gly Ala Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly 1 5 10 <210> 209 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VL CDR2 <400> 209 Lys Asp Asp Glu Arg Pro Ser 1 5 <210> 210 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VL CDR3 <400> 210 Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr Val Gly Val 1 5 10 <210> 211 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VH <400> 211 Ala Val Thr Leu Asp 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attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180 gcacccgcgg tgaaaggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300 tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360 tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcc 393 <210> 255 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Low-PI VH <400> 255 gccgtgacgt tggatgaatc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctccgcctc 60 agctgcaagg cctctgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120 cccggcaagg ggctggaata cgtctcgcag attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180 gcacccgcgg tgaaaggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacactgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300 tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360 tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcc 393 <210> 256 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-30; 1-17; 1-32; 4-11; 6-10 VH <400> 256 gccgtgacgt tggatgaatc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc 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Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly 195 200 205 Cys Cys Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys 210 215 220 Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr 245 250 255 Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr 275 280 285 Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr 305 310 315 320 Ala <210> 264 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-17 VL <400> 264 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Cys 35 40 45 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr Gly Cys 65 70 75 80 Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr 85 90 95 Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala 100 105 110 Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr 130 135 140 Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Ala Gly Ala Cys 145 150 155 160 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys 165 170 175 Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly 195 200 205 Cys Cys Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys 210 215 220 Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr 245 250 255 Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr 275 280 285 Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr 305 310 315 320 Ala <210> 265 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-32 VL <400> 265 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Cys 35 40 45 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr Gly Cys 65 70 75 80 Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr 85 90 95 Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala 100 105 110 Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr 130 135 140 Cys Ala Gly Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys 145 150 155 160 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys 165 170 175 Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly 195 200 205 Cys Cys Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys 210 215 220 Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr 245 250 255 Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr 275 280 285 Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr 305 310 315 320 Ala <210> 266 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 4-11 VL <400> 266 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Cys 35 40 45 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr Gly Cys 65 70 75 80 Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr 85 90 95 Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala 100 105 110 Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr 130 135 140 Gly Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Ala Gly Ala Gly Ala Cys 145 150 155 160 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys 165 170 175 Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly 195 200 205 Cys Cys Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys 210 215 220 Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr 245 250 255 Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Ala Gly Cys Gly Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr 275 280 285 Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr 305 310 315 320 Ala <210> 267 <211> 321 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 6-10 VL <400> 267 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Cys 35 40 45 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr Gly Cys 65 70 75 80 Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Ala Thr 85 90 95 Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala 100 105 110 Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Thr 130 135 140 Cys Ala Gly Gly Ala Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys 145 150 155 160 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys 165 170 175 Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Gly 195 200 205 Cys Cys Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys 210 215 220 Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr 245 250 255 Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys 275 280 285 Cys Ala Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Gly Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr 305 310 315 320 Ala <210> 268 <211> 309 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13D; 2-13-37; 2-13D-37-1.5W-41; 2-13D-37-3W-16 VL <400> 268 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Cys Gly 35 40 45 Ala Ala Gly Ala Thr Ala Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Ala Gly Cys Thr Ala 65 70 75 80 Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly 85 90 95 Ala Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys 100 105 110 Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala 115 120 125 Cys Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Gly Ala Gly Ala 130 135 140 Cys Cys Cys Thr Cys Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr 145 150 155 160 Cys Ala Cys Gly Ala Thr Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Gly Cys 165 170 175 Cys Cys Thr Ala Thr Cys Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala 180 185 190 Ala Ala Cys Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala 195 200 205 Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala 210 215 220 Ala Gly Ala Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Ala Thr Thr Ala Thr 225 230 235 240 Thr Ala Thr Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Cys Thr Gly Ala Ala Gly 245 250 255 Ala Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Cys Ala Cys Thr Gly Cys 260 265 270 Thr Gly Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys 275 280 285 Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly 290 295 300 Thr Cys Cys Thr Gly 305 <210> 269 <211> 366 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5-2.GKNG VH <400> 269 Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Gly Thr Thr Gly Gly Ala Cys Gly 1 5 10 15 Ala Gly Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr 20 25 30 Cys Cys Ala Gly Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Ala 35 40 45 Gly Cys Gly Cys Thr Cys Cys Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr 50 55 60 Gly Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Thr Thr 65 70 75 80 Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr 85 90 95 Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Cys 100 105 110 Gly Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Cys Ala Ala 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Gly Thr Cys 130 135 140 Ala Gly Cys Gly Cys Gly Ala Thr Thr Ala Ala Thr Ala Ala Gly Gly 145 150 155 160 Gly Cys Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gly Ala Cys Ala Cys Ala Thr Cys 165 170 175 Ala Thr Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly 180 185 190 Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala 195 200 205 Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Gly 210 215 220 Gly Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys Thr Gly Thr Ala Cys 225 230 235 240 Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys 245 250 255 Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 260 265 270 Cys Gly Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys 275 280 285 Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Ala 290 295 300 Gly Thr Thr Ala Cys Ala Thr Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys 305 310 315 320 Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Cys Gly Cys Ala Thr Gly Gly 325 330 335 Gly Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Gly Ala Cys Cys Gly Ala Ala Gly 340 345 350 Thr Cys Ala Thr Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys 355 360 365 <210> 270 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> S5-2.GKNG VL <400> 270 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Gly 35 40 45 Cys Gly Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Thr Gly Gly Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly 65 70 75 80 Cys Thr Ala Thr Gly Gly Thr Thr Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly 85 90 95 Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Ala 100 105 110 Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys 130 135 140 Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Cys Gly Gly 145 150 155 160 Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Gly Ala Thr Thr 165 170 175 Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr 195 200 205 Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Gly Gly Gly Thr 210 215 220 Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala Gly 225 230 235 240 Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr Ala Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly 245 250 255 Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Gly 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Gly Ala Thr Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr 275 280 285 Gly Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly 290 295 300 Cys Cys Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys 305 310 315 320 Cys Gly Thr Cys Cys Thr Ala 325 <210> 271 <211> 366 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VH <400> 271 Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Gly Thr Thr Gly Gly Ala Cys Gly 1 5 10 15 Ala Gly Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr 20 25 30 Cys Cys Ala Gly Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Ala 35 40 45 Gly Cys Gly Cys Thr Cys Thr Cys Thr Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr 50 55 60 Gly Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Thr Thr 65 70 75 80 Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Ala Thr 85 90 95 Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Cys 100 105 110 Gly Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Cys Ala Ala 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Gly Thr Cys 130 135 140 Gly Gly Thr Gly Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ala Cys Ala Ala Gly Thr 145 150 155 160 Cys Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gly Ala Cys Ala Cys Ala Thr Cys 165 170 175 Ala Thr Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly 180 185 190 Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala 195 200 205 Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Gly 210 215 220 Gly Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys Thr Gly Thr Ala Cys 225 230 235 240 Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Cys 245 250 255 Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 260 265 270 Cys Gly Cys Thr Gly Thr Thr Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys 275 280 285 Gly Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Ala 290 295 300 Gly Thr Thr Ala Cys Ala Thr Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys 305 310 315 320 Thr Ala Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Cys Gly Cys Ala Thr Gly Gly 325 330 335 Gly Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Gly Ala Cys Cys Gly Ala Ala Gly 340 345 350 Thr Cys Ala Thr Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys 355 360 365 <210> 272 <211> 327 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SS01-13 VL <400> 272 Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys Gly Thr 1 5 10 15 Cys Cys Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala 20 25 30 Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ala Cys Thr Gly Thr Thr 35 40 45 Cys Gly Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Thr Gly Cys Thr Ala Gly Cys Ala Gly Thr Gly Gly 65 70 75 80 Cys Thr Ala Thr Gly Gly Thr Thr Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly 85 90 95 Thr Ala Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Cys Cys Thr Ala 100 105 110 Gly Cys Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Cys 115 120 125 Thr Gly Thr Gly Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys 130 135 140 Gly Ala Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Cys Gly Gly 145 150 155 160 Ala Cys Ala Thr Cys Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Gly Ala Thr Thr 165 170 175 Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys Cys 180 185 190 Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr 195 200 205 Thr Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Gly Thr 210 215 220 Cys Cys Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala Gly 225 230 235 240 Gly Cys Thr Gly Thr Ala Thr Ala Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly 245 250 255 Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Gly 260 265 270 Cys Ala Gly Thr Gly Ala Thr Ala Gly Thr Gly Gly Ala Thr Ala Thr 275 280 285 Gly Thr Cys Gly Gly Thr Gly Thr Ala Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly 290 295 300 Cys Cys Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Cys 305 310 315 320 Cys Gly Thr Cys Cys Thr Ala 325 <210> 273 <211> 387 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13D-37 VH <400> 273 Gly Cys Cys Gly Thr Gly Ala Cys Gly Thr Thr Gly Gly Ala Cys Gly 1 5 10 15 Ala Gly Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr 20 25 30 Cys Cys Ala Gly Ala Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Ala Gly Gly Ala 35 40 45 Gly Cys Gly Cys Thr Cys Cys Gly Cys Cys Thr Thr Ala Gly Cys Thr 50 55 60 Gly Cys Ala Gly Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly Thr Thr 65 70 75 80 Cys Gly Ala Thr Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Cys Ala Thr 85 90 95 Gly Gly Cys Ala Thr Gly Thr Thr Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Cys 100 105 110 Gly Ala Cys Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Cys Gly Gly Cys Ala Ala 115 120 125 Gly Gly Gly Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala Thr Ala Thr Gly Thr Cys 130 135 140 Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Thr Thr Ala Cys Cys Ala Ala Thr Gly 145 150 155 160 Ala Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gly Gly Cys Ala Cys Ala Ala Ala 165 170 175 Cys Thr Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly 180 185 190 Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala 195 200 205 Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Gly 210 215 220 Gly Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys Thr Gly Thr Ala Thr 225 230 235 240 Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Cys 245 250 255 Thr Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Cys Ala Cys 260 265 270 Cys Gly Gly Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys 275 280 285 Gly Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Thr Ala Cys Thr Thr Ala Thr Gly 290 295 300 Ala Ala Thr Gly Thr Cys Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Thr 305 310 315 320 Thr Ala Gly Thr Thr Gly Thr Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Ala Thr 325 330 335 Ala Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Ala Thr Ala Gly Ala Cys Gly 340 345 350 Cys Ala Thr Gly Gly Gly Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Gly Ala Cys 355 360 365 Cys Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Thr Cys Gly Thr Cys Thr Cys Cys 370 375 380 Thr Cys Cys 385

Claims

치료를 필요로 하는 대상에서의 대식세포에 의한 저밀도 지방단백질(LDL)의 포식작용을 증가시키기 위한 제약학적 조성물로서,
상기 제약학적 조성물은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제") 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하며,
상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 상기 항-FAM19A5 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터인 것이며,
상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용은, 기준값(FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제 투여 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 또는 그 이상까지 증가되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 대식세포에 의한 LDL의 포식작용의 증가는 죽상경화증 병변에서 일어나는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항에 있어서, LDL은 산화된 LDL을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 3 항에 있어서, 죽상경화증 병변 부위는 혈관에 있는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 5 항에 있어서, 혈관은 동맥, 정맥, 모세관, 또는 이들의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 6 항에 있어서, 동맥은 대동맥인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 또는 축적을 증가시키기 위한 제약학적 조성물로서,
상기 제약학적 조성물은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제") 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하며,
상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 상기 항-FAM19A5 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터인 것이며,
상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 제약학적 조성물.
제 8 항에 있어서, 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 이주 또는 축적은, 기준값(FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제 투여 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 또는 그 이상까지 증가되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
치료를 필요로 하는 대상의 저밀도 지방단백질(LDL) 수준을 감소시키기 위한 제약학적 조성물로서,
상기 제약학적 조성물은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제") 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하며,
상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 상기 항-FAM19A5 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터인 것이며,
상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 제약학적 조성물.
제 12 항에 있어서, 대상의 LDL 수준은, 기준값(FAM19A5 길항제를 투여 받지 않았던 대상에서의 상응하는 값 또는 FAM19A5 길항제 투여 전 대상에서의 상응하는 값)과 비교하여, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 또는 그 이상까지 감소되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항 및 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상은 다음 중 하나 이상의 특성을 나타내는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물:
(i) 대식세포에 의한 LDL의 증가된 포식작용;
(ii) 죽상경화증 병변 부위에서의 대식세포의 증가된 이주 또는 축적; 및
(iii) 감소된 LDL 수준.
치료를 필요로 하는 대상의 죽상경화증을 치료하기 위한 제약학적 조성물로서,
상기 제약학적 조성물은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제") 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하며,
상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 상기 항-FAM19A5 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터인 것이며,
상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 제약학적 조성물.
제 13 항에 있어서, 죽상경화증은 관상동맥 심장 질환(CHD), 경동맥 질환, 말초동맥 질환, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 망막동맥 폐쇄, 장 손상으로 인한 복부 통증, 복막염, 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택된 특성을 나타내는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물:
(a) 효소-결합 면역흡착 분석법(ELISA)에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 K_D로 가용성 인간 FAM19A5에 결합;
(b) ELISA에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 K_D로 막-결합된 인간 FAM19A5에 결합; 및
(c) (a)와 (b) 둘 다.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며,
(i) VH는 SEQ ID NO: 36으로서 제시된 아미노산 서열로 구성되고 VL은 SEQ ID NO: 40으로서 제시된 아미노산 서열로 구성;
(ii) VH는 SEQ ID NO: 36으로서 제시된 아미노산 서열로 구성되고 VL은 SEQ ID NO: 41로서 제시된 아미노산 서열로 구성; 또는
(iii) VH는 SEQ ID NO: 235로서 제시된 아미노산 서열로 구성되고 VL은 SEQ ID NO: 240으로서 제시된 아미노산 서열로 구성; 되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, 또는 단쇄 Fv(scFv)를 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 및 이들의 변이체로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화 항체인 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, FAM19A5 길항제는 제2 결합 모이어티를 가진 분자에 연결되어 이중특이적 분자를 형성하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, FAM19A5 길항제는 면역콘쥬게이트를 형성하는 제제에 연결되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 치료제를 투여하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, FAM19A5 길항제는 정맥내, 피하, 근육내, 경구, 유리체내, 경막내, 또는 이들의 조합으로 투여되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제 1 항, 제 8 항, 제 10 항 및 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 콜레스테롤 저하제를 투여하는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.