JP2022106703A - 齲蝕処置のためのパーソナルデンタルケア製品 - Google Patents

Abstract

【課題】デンタルケア、例えば、齲蝕病変などの歯の病変の予防および／もしくは処置、歯の表面の再石灰化または滑らかさもしくは輝きの増加における使用のため、あるいは歯の表面の硬度を増加させるための、特定のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドを含む新規のデンタルケア製品を提供する。【解決手段】歯の病変の処置もしくは予防および／または歯の表面の再石灰化への使用のためのデンタルケア製品であり、（ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、（ｉｉ）薬学的に許容される主剤と、を含み、齲蝕、好ましくは、活動性齲蝕の診断と無関係に対象の複数の歯に適用され、適用後に、自己集合ペプチドは、少なくとも１分間、単量体状態で存在する、デンタルケア製品を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、デンタルケア、例えば、齲蝕病変などの歯の病変の予防および／もしくは処置、歯の表面の再石灰化または滑らかさもしくは輝きの増加における使用のため、あるいは歯の表面の硬度を増加させるための、特定のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドを含む新規のデンタルケア製品を提供する。本発明は、チューインガム、タフィーまたは練り歯磨きなどのデンタルケア製品を提供し、この製品において、ペプチドは口腔への適用後に長期間、単量体型として存在し、それにより、活動性（すなわち、以前にうまく処置されていない）病変の診断とは無関係に複数の歯の非標的処置を可能にする。本発明の製品は、動物およびヒトに有用である。

今まで、歯の再石灰化は、主に歯の病変または空洞にカルシウムおよびリン酸イオンをデリバリーすることによって実現されている。カルシウムおよびリン酸イオンは、一般に、例えば、研磨剤、フッ化物、界面活性剤およびその他の再石灰化薬剤も含む、練り歯磨きに含まれる。カルシウムおよびリン酸イオンは、さまざまな結晶形態、例えば、ヒドロキシアパタイトベースの材料として、または一部のカゼインホスホペプチドベースの材料中などの非晶質リン酸カルシウムとして使用することができる。例えば、ＷＯ２０１３／０５０４３２は、そのような再石灰化薬剤およびこれらの薬剤と歯肉を接触させるための選択肢について記載している。ＷＯ２００９／１００２７６は、例えば、再石灰化を促進するための遊離型または塩形態の塩基性アミノ酸と関連するデンタルフロスについて教示している。

さらに最近、歯の再石灰化に対する代替的なアプローチが示され、これは、合理的に設計された短い自己集合ペプチドに基づくものである。ＷＯ２００４／００７５３２は、三次元の足場を形成し、それにより新規のリン酸カルシウムの核生成を促進することができるペプチドを開示している。こうした人工のペプチドは、集合して、ベータ－シート型テープ様アセンブリー（ａｓｓｅｍｂｌｙ）を形成する。ペプチドアセンブリーは、化学的または物理的トリガーに反応して流体からネマチックのより硬いゲル状態へ変わることが可能である。このペプチドは、特定のｐＨ、イオン強度および／または温度条件に反応して、テープ、リボン、微小繊維および繊維の階層的順序でアセンブリーを形成するよう設計されていた。Ａｇｇｅｌｉら（２００３，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５，９６１９－９６２８）は、ペプチドベータ－シート自己集合のトリガーとしてｐＨについて分析している。

いくつかのその他の自己集合ペプチドが先行技術に示されてきた。例えば、ＷＯ２０１０／０４１６３６Ａ１は、生理的なｐＨにおいてベータ構造に自己集合する、交互に結合した親水性アミノ酸および疎水性（ｈｙｄｒｏｐｈｏｐｂｉｃ）アミノ酸を有する８～２００アミノ酸残基を有する人工ペプチドを含む生体吸着性（ｂｉｏａｄｓｏｒｂａｂｌｅ）ペプチド組織閉塞剤（ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）について記載している。細胞外基質と相互作用する、交互の疎水性および親水性残基または範囲を有する自己集合ペプチドも、ＷＯ２００８／１１３０３０Ａ２に開示されている。ＷＯ２０１０／１０３８８７Ａ１は、特定の一次配列の塩基性、疎水性および酸性アミノ酸を含む自己集合ペプチド、ならびに高強度のそのペプチドゲルを開示している。

別の出願、ＷＯ２００７／０００９７９Ａ１は、極性および非極性アミノ酸を有する自己集合ペプチドについて記載している。このペプチドは、ベータ－シート構造を形成することができ、この中で、非極性アミノ酸残基は集合型の構造の一方の側に配置される。ゆっくりとした拡散薬物デリバリーなどの生体材料用途に使用される安定した巨視的膜として使用するための両親媒性の自己集合ペプチドがＵＳ６，５４８，６３０に記載されている。

ＥＰ２３２７４２８Ａ２は、互いに相補的な自己集合ペプチドナノファイバーおよび心筋梗塞後の組織などの損傷した組織を修復するための少なくとも１つの細胞を含む医薬組成物について言及している。

ＥＰ２８５３２５６Ａ１およびＷＯ２０１５／０４４２６８Ａ１は、特定のサイズの鉱物粒子およびフルオロフォアをさらに含む自己集合ペプチドハイドロゲルが歯のホワイトニングに有用であることについて教示している。

例えば、ＵＳ２００８／１９９４３１Ａ１およびＷＯ２００９／０２６７２９Ａ１には生理活性薬剤のデリバリーのための自己集合ペプチドの使用について記載されている。ＷＯ２００６／０７３８８９Ａ２は、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）においてＰＤＧＦをゆっくりと放出するゲルに集合するペプチドにヒトＰＤＧＦが直接結合した組成物に関する。ＷＯ２００６／０４７３１５Ａ２は、ビオチン／ストレプトアビジン結合を使用した自己集合ペプチドへの治療薬の結合を提示している。

ＫｉｒｋｈａｍらおよびＫｉｎｄらは、エナメル質の再石灰化を促進する自己集合ペプチド足場に関する（Ｋｉｒｋｈａｍら．２００７，Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．８６（５），４２６－４３０；Ｋｉｎｄら．２０１７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｎｔａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １－８，ｄｏｉ１０．１１７７／００２２０３４５１７６９８４１９）。

歯の病変、特に、表面下の病変（すなわち、初期の齲蝕病変または白斑）を効果的に処置するために、自己集合ペプチドは、病変への拡散を可能にするために歯の病変の外側では単量体型である必要があり、歯の病変の内側に入ると集合型に変わる必要がある。ペプチドが病変の外側で集合すると、形成された三次元構造が孔を通って拡散するには大き過ぎるため、ペプチドは低いｐＨおよび高いイオン強度を有する病変内の再石灰化を促進することができない。したがって、ペプチドの集合は、作用部位に到達するまで妨げられなければならない。

ＷＯ２０１４／０２７０１２Ａ１およびＥＰ２６９８１６２Ａ１は、歯の病変の標的処置のための自己集合ペプチドを含む凍結乾燥溶液を提供する。ペプチドを含む溶液が初期の齲蝕病変の表面に直接塗布されなければならないため、適用は専門家のユーザー、例えば、歯科医に限定される。さらに、プラーク、食べ物のかすおよびステインを除去するための歯の専門家によるクリーニングならびに次亜塩素酸ナトリウムおよびリン酸による処置、それに続く水によるすすぎおよび歯の表面の乾燥を含む、処置対象の歯の前処置が非常に複雑である。Ｂｒｕｎｔｏｎら，２０１３，Ｂｒ．Ｄｅｎｔ．Ｊ．２１５（４）：Ｅ６，ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｊ．ｂｄｊ．２０１３．７４１）は、処置前に、病変が歯の掃除用ペーストでクリーニングされ、表面下の病変の孔を開けるためにエッチ液により３０秒間処置された後、洗浄および乾燥されたことを確認している。単量体型の凍結乾燥された自己集合ペプチドは、滅菌水を用いて再水和され、得られた溶液の１滴がすぐに病変の表面に直接塗布された。Ｐ１１－４溶液がもはや目で見えなくなるまで（およそ２分間）確実に水分の制御がなされた。対象は、処置後４日目まで処置された四分円の歯をブラシでこすらないよう言われた。Ｓｃｈｌｅｅら，２０１４，Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｉｅ １１１：１７５－１８１は、前処理および水分の制御の必要性を裏付ける。

複雑な処置のために、患者および／または関係のある医療制度に相当な負担がかかる。さらに、精神的な理由から、歯科医が自己集合ペプチドを使用する処置アプローチよりも穴を開け、填塞することを好む可能性のある程、齲蝕病変が広範囲に進行するまで歯科開業医に行くのを避けるか、または遅くする対象がいる。

したがって、最新の技術を考慮して、本発明者らは、適用するのが容易で、好ましくは、カウンター販売または小売り用の、齲蝕を処置もしくは予防するためおよび／または歯の表面を再石灰化するために患者または消費者が適用することができる、齲蝕病変を処置することが可能なデンタルケア製品を提供するという課題を解決した。

この課題は、本発明によって、特に、特許請求される主題によって解決される。

第１の態様において、本発明は、歯の病変の処置もしくは予防および／または歯の表面の再石灰化への使用のためのデンタルケア製品であり、
（ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、
（ｉｉ）薬学的に許容される主剤と、
を含み、
齲蝕、好ましくは、活動性齲蝕の診断と無関係に対象の複数の歯に適用され、
適用後に、自己集合ペプチドは、少なくとも１分間、単量体状態で存在する、デンタルケア製品を提供する。

特に、本発明のデンタルケア製品は、歯の病変、好ましくは、齲蝕病変、例えば、表面下の齲蝕または空洞が形成された齲蝕病変の処置に使用することができる。あるいはまたは加えて、前記デンタルケア製品は、歯の表面、例えば、歯の空洞、白斑病変または露出した象牙質の再石灰化に使用することができる。好ましくは、本発明の製品は、初期の齲蝕病変の空洞が形成された齲蝕病変への進行を予防するために使用することができる。

特にストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびアクチノミセス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）属の細菌は、食物に由来する炭水化物の発酵により酸を産生する。発酵時に形成される酸は、硬い歯の組織、すなわち、エナメル質、象牙質およびセメント質の脱灰をもたらす。歯の病変および空洞は、物理的な外傷の結果である場合もある。未処置のままだと、齲蝕病変または空洞は、血管および神経を含む髄腔の感染症に至ることもあり、これは、最終的に歯の喪失をもたらす可能性もある。

一般に、病変または空洞は、あらゆる歯、例えば、切歯、門歯（ｉｎｃｉｓｏｒ）（Ｄｅｎｔｅｓ ｉｎｃｉｓｉｖｉ）、犬歯（ｃａｎｉｎｅ ｔｅｅｔｈ）（Ｄｅｎｔｅｓ ｃａｎｉｎｉ）、前臼歯（ｐｒｅｍｏｌａｒ ｔｅｅｔｈ）（Ｄｅｎｔｅｓ ｐｒａｅｍｏｌａｒｅｓ）および／または臼歯（ｍｏｌａｒ ｔｅｅｔｈ）（Ｄｅｎｔｅｓ ｍｏｌａｒｅｓ）にある場合がある。同様に、病変または空洞は、歯のあらゆる表面、すなわち、唇側表面、近心側表面、頬側表面、口蓋側表面、隣接表面、咬合表面および／または遠心側表面を冒す場合がある。本発明の文脈において、明確に言及されているか、または文脈から明らかでない限り、「１つ（ａ）」は、単数には限定されず、「１つ以上の」を意味する場合もある。例えば、「１つの病変（ａ ｌｅｓｉｏｎ）」という言及は、２つ以上の病変、特に、対象のすべての病変の言及を含む。

本発明の製品は、齲蝕（または好ましくは活動性齲蝕）の事前の診断と無関係に、好ましくは、齲蝕（または好ましくは活動性齲蝕）の事前の診断がない場合、より好ましくは、脱灰または酸蝕の診断がない場合の日常的なデンタルケアでの使用を対象とする。活動性齲蝕、例えば、齲蝕の第１ステージと考えられる白斑またはさらに進行したステージの診断は、一般に歯科専門家によって行われる。本発明は、有利にも専門家の歯科開業医による診断および処置の必要性を避け、対象が自身の歯の病変を効果的に処置および予防することを可能にする。好ましくは、対象は、デンタルケア製品を定期的に適用し、その結果、初期の齲蝕、例えば、白斑または脱灰は本発明の製品によって再石灰化することができる。

本明細書中において使用される場合、「齲蝕の事前の診断」または「活動性齲蝕の事前の診断」は、専門家、例えば、歯科医によって診断されたが、まだ処置されていない齲蝕病変を指す。反対に、（活動性）齲蝕の事前の診断は、本発明の製品の適用の前に首尾よく処置された齲蝕病変は指さない。

進行が止められた齲蝕の処置は必要がないことが当該技術分野において知られている。反対に、進行が止められた齲蝕は、健康なエナメル質または象牙質よりも齲蝕の再発に対して抵抗性であると考えられる。したがって、当業者は、当該技術分野において従来法で処置されたあらゆる齲蝕病変が活動性齲蝕病変であることがわかるであろう。いかなる場合も、進行が止められた齲蝕病変の存在は、本発明のデンタルケア製品の適用の妨げにはならない。デンタルケア製品はまた、進行が止められた齲蝕病変のさらなる再石灰化にも寄与することができる。したがって、本発明の製品が、進行が止められた齲蝕病変の診断と無関係にまたは事前の診断なしに使用することもできることは当業者に明らかである。

以前の処置は、一般に歯科専門家によって適用される、少なくとも齲蝕の進行を止めることができる標的処置に関し、すなわち、これは、自己集合ペプチドを用いた標的処置ならびに穴を開け、填塞するアプローチを含む。活動性齲蝕病変の上首尾の処置は、進行が止められた齲蝕病変に至る。

口腔への適用時に、本ペプチドは、製品の複数の歯への分散を確実にするため、および存在するのであれば表面下の病変への侵入を可能にさせるために、ある一定期間、単量体型の集合していない状態のままである。特に、本発明のデンタルケア製品は、歯の病変および／または空洞を例えば、唾液中に存在するカルシウムおよびリン酸イオンの沈着によって病変の再石灰化を促進する相互接続したペプチドのネットワークにより填塞するために使用することができる。本明細書中において使用される場合、齲蝕「病変」は、歯または歯の表面にある表面下の病変または表面下の微小病変であり、これは、通常、口腔のバイオフィルムに存在する細菌の酸形成が原因である（ＩＣＤＡＳ－ＩＩスケール１～４）。本明細書中において使用される場合、歯の「空洞」は、歯の表面にある穴である（ＩＣＤＡＳ－ＩＩスケール≧５）。

本発明は、とりわけ、ペプチドが集合することを妨げる環境を提供することによって自己集合ペプチドを長期間にわたって単量体状態に維持することができる、適したガレヌス形態が使用される場合、本製品が標的手法で歯の病変に適用される必要はないという見識に基づく。したがって、これらは、例えば、歯科医による専門家の支援なく、患者または消費者（ｃｏｓｔｕｍｅｒ）による適用に適している。さらに、これらの製品は、齲蝕、好ましくは、活動性齲蝕の診断と無関係に使用することができる。

自己集合ペプチドは、口腔への適用後、少なくとも１分間、好ましくは少なくとも２分間、より好ましくは少なくとも３分間、単量体状態で存在することが可能である。好ましくは、自己集合ペプチドは、例えば、製品が練り歯磨きであり、製品が歯ブラシにより適用される場合、デンタルケア製品が通常、歯に適用される一般的な時間範囲、例えば、２～３分間の間、単量体状態で存在する。

本明細書中において使用される場合、「対象」とは、歯を有するあらゆる対象、例えば、歯を有する哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ネコなどのネコ科動物、マウス、ラット、ハムスター、テンジクネズミなどのげっ歯類、雌ウシ、ウマ、ラクダ、ヒツジ、ヤギまたは別のペット、家畜、もしくは動物園の動物を指す。

本発明はまた、歯の病変、好ましくは齲蝕病変を処置するため、および／または歯の表面を再石灰化するための方法であり、本方法は、齲蝕、好ましくは、活動性齲蝕の診断と無関係にデンタルケア製品を対象の複数の歯に適用することを含み、デンタルケア製品は、
（ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、
（ｉｉ）薬学的に許容される主剤と、
を含み、
適用後に、自己集合ペプチドは、少なくとも１分間、単量体状態で存在する、方法を提供する。

別の態様において、本発明は、歯の表面を再石灰化するためあるいは歯の表面の硬度、例えば、微小硬度を増加させるための方法であって、齲蝕、好ましくは、活動性齲蝕または脱灰または酸蝕の診断と無関係に、前記デンタルケア製品を対象の複数の歯に適用することを含む方法を提供する。

７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドはまた、歯の病変、好ましくは齲蝕病変の処置のためおよび／または歯の表面を再石灰化するためおよび／または歯の硬度を増加させるためのデンタルケア製品の調製のために使用することができる。

別の態様において、本発明はまた、歯を処置するための非治療的な方法であって、本発明の製品を対象の複数の歯に適用することを含む方法に関する。具体的には、本発明はまた、歯を処置するため、例えば、歯の表面の硬度を増加させるための非治療的、例えば、美容的、方法であって、本発明のデンタルケア製品を複数の歯に適用することを含む方法を提供する。本発明のデンタルケア製品は、歯の表面の滑らかさを増すためおよび／または歯の輝きを増加させるために適用されてもよい。

本発明の製品に使用される自己集合ペプチドは、特定のｐＨおよびイオン強度に応じて自己集合が起こる。特に、本発明による使用のための自己集合ペプチドは、それらの環境のｐＨが特定のｐＨ未満、例えば、ｐＨ７．５未満に低下するとすぐに自己集合が起こるよう選択される。本発明の自己集合ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨは、７．５未満、好ましくは７．２未満、より好ましくは７．０未満である。例えば、自己集合ペプチドＰ１１－４（配列番号１）および末端が改変されたＰ１１－４（配列番号２）が自己集合を起こし始めるｐＨは約７．５である。これは、自己集合ペプチドが、ｐＨが７．５未満に低下したときに顕著な程度まで自己集合し始めることを意味する。

本明細書中において使用される場合、自己集合ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨは、溶液中のペプチドの顕著な程度の自己集合が観察されるよりも低いｐＨを指し、これは、デンタルケア製品中に見出されるペプチドのうちの少なくとも約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％またはさらに約１００％が集合していることを意味する。好適な実施形態において、デンタルケア製品中に見出されるペプチドの少なくとも約２５％は、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨ未満において集合する。

好ましくは、自己集合を開始するｐＨ、例えば、Ｐ１１－４および改変されたＰ１１－４に関する約ｐＨ７．５において、ペプチドのうちのわずか約２０％以下、好ましくはわずか約１５％以下、より好ましくは１０％以下、さらにより好ましくは５％以下が多量体型の状態である。

反対に、自己集合を開始するｐＨ未満、例えば、Ｐ１１－４（配列番号１）および改変されたＰ１１－４（配列番号２）に関するｐＨ７．５未満において、溶液中のペプチドの顕著な程度の自己集合が観察され、これは、溶液中に見出されるペプチドのうちの少なくとも約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％またはさらに約１００％が集合している、すなわち、多量体型であることを意味する。

ペプチドが自己集合を起こすイオン強度は、生理学的なイオン強度であるのが好ましい。

本明細書中において使用される場合、ペプチドの「自己集合」とは、それ自体の種類の他のペプチド（または類似の構造を有するペプチド）とのペプチドの、多量体型アセンブリーへの非共有結合性相互作用による自然発生的で可逆性の組織化を指す。多量体型アセンブリーの形成の原因となる非共有結合性相互作用としては、ペプチドのアミノ酸骨格および／またはアミノ酸側鎖の間のファンデルワールス、ｐｉ－スタッキング、水素結合、極性およびイオン性相互作用が挙げられる。

本発明の製品に使用される自己集合ペプチドは、好ましくは、ベータ－プリーツシートに集合する。ベータ－プリーツシートにおいて、シート様構造は、異なるポリペプチド鎖にある残基間または折り畳まれたポリペプチドの異なる区画にある残基間の一連の水素結合によって作り出される。一般に、ベータ－プリーツシート中の隣接するポリペプチド鎖は逆平行であり、これは、それらのペプチド鎖が反対方向に伸びていることを意味する。ただし、隣接する鎖は平行に伸びている場合もある。いくつかのポリペプチド鎖がシート形成に関与する場合、シートは硬質の壁様構造である。複数のプリーツシートは、必要な靭性および剛性をもたらす。本発明の製品に使用することができるペプチドは、自己集合時に安定した二次構造を形成する。好ましくは、本発明に使用されるペプチドは、１分子の厚さのベータ－プリーツ構造を含む長い「ベータ－テープ」を形成することになる。ペプチドは、集合の間にらせん状のテープ（１分子の厚さ）、ねじれたリボン（二重のテープ）、微小繊維（ねじれたリボンの積み重ね）および繊維（絡み合った微小繊維）などの複雑な構造を形成する場合がある。ｐＨの低下に伴い、らせん状のテープ、ねじれたリボン、微小繊維および最後に繊維が生じることもある。

当業者に知られているとおり、ペプチドの集合状態はまた、イオン強度に影響される。溶液のイオン強度は、その溶液中に存在するすべてのイオンの濃度の関数である。したがって、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨを超えるｐＨであっても、すなわち、ペプチドが溶液中で実質的に単量体であるとき、特に高いイオン強度がペプチドの集合を引き起こす可能性もあろう。

しかしながら、イオン強度が生理的な範囲、すなわち、１５０ｍＭ ＮａＣｌに相当するイオン強度に対応するか、またはそれ未満にあるときに、本発明のペプチドの集合は有利にも引き起こされない。当業者は、どのように溶液のイオン強度を求め、測定するかわかるであろう。イオン強度Ｉは、式Ｉ＝１／２Σｚ_ｉ ^２ｂ_ｉに従って一般に算出され、この場合、ｚは価数係数であり、ｂ_ｉはｉ番目のイオン濃度のモル濃度［ｍｏｌ／ｋｇ｛Ｈ_２Ｏ｝］である。総和、Σは、溶液中のすべてのイオンが含まれる。例えば、１５０ｍＭのＮａＣｌ溶液のイオン強度は、およそ０．１５である。これはまた、ほぼ血液のイオン強度である。口腔に存在する唾液のイオン強度は、一般にはるかに低く、例えば、およそ０．０４である。したがって、好適な実施形態において、本発明のデンタルケア製品のイオン強度は、０．１５未満、０．１未満、０．０５未満、または０．０２５未満である。好適な実施形態において、デンタルケア製品のイオン強度は、０．１５未満である。別の好適な実施形態において、イオン強度は０．１未満である。

当業者は、調製物のイオン強度を求めるための数々の方法を知っている。例えば、イオン強度は、以下のとおりのＲｕｓｓｅｌｌの係数による溶液の電気伝導度（Ｓ＝１／Ω＝Ａ／Ｖ）の測定値から推定することができる：Ｉ＝１．６×１０^－５×固有の伝導度［μＳ／ｃｍ］。１５０ｍＭのＮａＣｌ溶液は、およそ８０～１００ｍＳ／ｃｍの伝導度を有する。したがって、上の示された電気伝導度の概算によると、デンタルケア製品は、１００ｍＳ／ｃｍ未満、好ましくは８０ｍＳ／ｃｍ未満の電気伝導度を有することになる。

さらに、当業者は、所与のイオン強度において本発明のペプチドが自己集合を始めることになるｐＨを求めるための数々の方法を知っている。適した方法は、例えば、Ａｇｇｅｌｉらによる刊行物（２００３，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，１２５，９６１９－９６２８）に示されている。

本発明の製品に使用される自己集合ペプチドのサイズは、特に限定されない。本発明のペプチドは、ｐＨ依存的な様式で自己集合を可能にする任意の長さであってよい。好ましくは、ペプチドは、約４～２００アミノ酸、より好ましくは、６～１００アミノ酸、８～５０アミノ酸、１０～３０アミノ酸または１１～２０アミノ酸のサイズを有することになる。さらにより好ましくは、自己集合ペプチドは、約２７アミノ酸、２４アミノ酸、２１アミノ酸、１５アミノ酸、または１１アミノ酸長を有することになる。特に好適な実施形態において、自己集合ペプチドは、１１アミノ酸長を有する。

本自己集合ペプチドは、ペプチド合成の分野において一般的に知られている任意の適した方法によって調製することができる。例えば、５０超のアミノ酸長を有するペプチドは、組み換え法によって調製することができる。一実施形態において、自己集合ペプチドは、融合ペプチドとして生成される。本明細書中において使用される場合、融合ペプチドとは、Ｎ末端またはＣ末端で第２のアミノ酸配列と連結されている、目的とする自己集合ペプチドを含む第１のアミノ酸配列の融合を指す。第２のアミノ酸配列は、アフィニティタグ、すなわち、自己集合ペプチドのＮ末端またはＣ末端と融合し、別の化合物との高いアフィニティを示すことにより、融合ペプチドの精製を可能にするアミノ酸配列であってもよい。好ましくは、このタグ配列は、例えば、自己集合ペプチドとアフィニティタグとの間にタンパク質分解切断部位をもたらすことによって精製後に目的とする自己集合ペプチドから除去される。一実施形態において、自己集合ペプチドは、Ｋｙｌｅら，２０１０，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ３１，９３９５－９４０５およびＫｙｌｅら．２００９， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７（７），４２３－４３３に開示されているとおりに調製される。

それより小さな自己集合ペプチドは、一般に化学合成によって調製される。例えば、ペプチドは、固相または液相法によって化学合成することができる。ペプチドの溶液相化学合成に関するプロトコルが示されてきた（例えば、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ５５：２２７－２５０，２０００参照）。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによって示された固相合成に関する技術（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６４，８５，２１４９－２１５４）が使用されてもよい。このアプローチにおいて、成長させるペプチドが不溶性樹脂に固定され、未反応の可溶性試薬がろ過または洗浄工程によって、操作による損失なく除去される。固相ペプチド合成は、自動装置の使用により容易に実施することができる。

本発明の製品に使用されるペプチドは、天然のタンパク質を構成する任意のアミノ酸を含んでもよい。さらに、このペプチドはまた、カルニチン、ガンマ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ヒドロキシプロリン、セレノメチオニン、ハイプシン、ランチオニン、２－アミノイソ酪酸、デヒドロアラニン、オルニチン（Ｏｒｎ、Ｏ）、シトルリン、ベータアラニン（３－アミノプロパン酸）、および同種のものなどの普通ではない、タンパク質を構成しないアミノ酸を含んでもよい。タンパク質を構成しないアミノ酸は、翻訳後修飾によって、またはペプチドの化学合成中の直接的な組み込みによってペプチドに組み込むことができる。

本ペプチドは、好ましくは－ＣＯＯＨ基を含むアミノ酸側鎖を含む。－ＣＯＯＨを有するアミノ酸側鎖は、その公称ｐＫ値よりも高いｐＨ値において脱プロトン化されることになる。例えば、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）およびグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）などの側鎖に－ＣＯＯＨ基を含むアミノ酸は、低いｐＫａ（Ａｓｐ：３．７１；Ｇｌｕ：４．１５）を示すため、中性、すなわち、ｐＨ７を超えるｐＨにおいて本質的に脱プロトン化される。本発明の製品に使用される自己集合ペプチドにおいて、－ＣＯＯＨ基を含むアミノ酸側鎖は、結果として、－ＣＯＯＨ基が－ＣＯＯ－に脱プロトン化されたときに、隣接する同一の自己集合ペプチドが静電気的相互作用によりはね返されることになる、隣接するペプチド間の静電気的相互作用を抑制し、ペプチド間の結合における結合自由エネルギーより勝るよう特にペプチド鎖中に配置される。特定の閾値、すなわち、Ｐ１１－４（配列番号１）および改変されたＰ１１－４（配列番号２）に関する約ｐＨ７．５などペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨ未満にｐＨを低下させることは、本発明の自己集合ペプチドにおける－ＣＯＯＨ基のプロトン化につながり、これが、ペプチド間の反発する静電気的相互作用を低減し、ペプチドの自己集合を可能にする。

本発明の製品に使用されるペプチドは、好ましくは式Ｘ１－Ｘ２－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ１の配列を含み、この場合、Ｘ１は酸性側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ２はアラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから成る群から選択される疎水性側鎖を有するアミノ酸である（配列番号３）。

さらに好適な実施形態において、本発明の製品に使用される自己集合ペプチドは、配列Ｇｌｕ－Ｘ２－Ｇｌｕ－Ｘ２－Ｇｌｕを含み、この場合、Ｘ２はアラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから成る群から選択される疎水性側鎖を有するアミノ酸であり（配列番号４）、またはＡｓｐ－Ｘ２－Ａｓｐ－Ｘ２－Ａｓｐを含み、この場合、Ｘ２はアラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから成る群から選択される疎水性側鎖を有するアミノ酸である（配列番号５）。

好適な別の実施形態において、本発明の製品に使用される自己集合ペプチドは、配列Ｇｌｎ－Ｇｌｎ－Ａｒｇ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｇｌｕ－Ｐｈｅ－Ｇｌｕ－Ｇｌｎ－Ｇｌｎ（Ｐ１１－４、配列番号１）、もしくはそれと少なくとも８０％、好ましくは９０％の配列同一性を有する配列を含むかまたはから成る。このペプチドが配列番号２に示される改変されたＰ１１－４またはそれと少なくとも８０％、好ましくは９０％の配列同一性を有する配列であることがさらに好ましい。

本明細書においてＰ１１－４と言及されるペプチドに関して、単量体型からの集合した多量体型への転換は、ｐＨによって制御される。ｐＨがｐＨ７．５未満の場合、このペプチドは集合する。ｐＨがそれより高い場合、ペプチドの状態は単量体型である。

配列番号１または２と少なくとも８０％以上の配列同一性を有するペプチドは、好ましくは、配列番号１または２のアミノ酸の５、７および９に対応する位置にグルタミン酸、またはアスパラギン酸を含む。特に、配列番号１と少なくとも８０％以上の配列同一性を有するペプチド配列は、好ましくは、配列番号１のアミノ酸の５、７および９に対応する位置にグルタミン酸を含む。残りのアミノ酸位置は、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンから成る群から選択される疎水性側鎖を有するアミノ酸であるのが好ましい。残りのアミノ酸位置は、塩基性側鎖を有するアミノ酸、すなわち、中性あたりのｐＨにおいて正の電荷を持つことになろうアミノ酸ではないのが好ましい。

一実施形態において、本発明の製品に使用されるペプチドは、１、２または３個のアミノ酸の置換によって配列番号１および２に示される配列とは異なる配列を含むかまたはから成る。一般に、配列番号１および２のペプチド配列内のそれぞれのアミノ酸残基は、得られるペプチドがそれでも７．５未満のｐＨ値において自己集合を起こすことができる限り、別の残基によって置換されてもよい。置換は、保存的置換、すなわち、機能的な同等物として働く類似の極性のアミノ酸による１つ以上のアミノ酸残基の置換であるのが好ましい。代替物として使用されるアミノ酸残基は、置換されるアミノ酸残基と同じアミノ酸のグループから選択されるのが好ましい。例えば、疎水性残基は、別の疎水性残基で置換することができ、または極性残基は同じ電荷を有する別の極性残基で置換することができる。保存的置換に使用することができる機能的に一致するアミノ酸は、例えば、グリシン、バリン、アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、およびトリプトファンなどの非極性アミノ酸を含む。非電荷極性アミノ酸の例は、セリン、トレオニン、グルタミン、アスパラギン、チロシンおよびシステインを含む。電荷極性（塩基性）アミノ酸の例は、ヒスチジン、アルギニンおよびリジンを含む。電荷極性（酸性）アミノ酸の例は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。

さらに、本発明の製品に使用されるペプチドは、例えば、１つ以上の改変されたアミノ酸の導入によって、１つ以上のアミノ酸位置において構造的に改変されていてもよい。本発明によると、これらの改変されたアミノ酸は、例えば、ビオチン化、リン酸化、グリコシル化、アセチル化、分岐および／または環化によって変えられたアミノ酸であってもよい。さらに、本発明のペプチドは、さらにまたは代わりに、末端ブロッキング基、ホルミル基、ガンマ－カルボキシグリタミン酸ヒドロキシル基、メチル基、ホスホリル基、ピロリドンカルボン酸基、および／または硫酸基などの他の改変を含む。好適な実施形態において、本発明のペプチドは、Ｎ末端においてアセチル化され、および／または例えば、ＮＨ_２基によりＣ末端においてアミド化される。特に好適な実施形態は、Ｎ末端がアセチル化され、Ｃ末端がＮＨ_２基によりアミド化されたペプチドＰ１１－４であり、以下の配列として示される：ＣＨ_３ＣＯ－ＱＱＲＦＥＷＥＦＥＱＱ－ＮＨ_２（配列番号２）。

本発明のデンタルケア製品において、自己集合ペプチドは、再石灰化が実現される歯の病変に拡散することができる集合していない状態として歯の表面に適用される。

健康なヒト対象の唾液の平均ｐＨは、約７．０６±０．０４、慢性歯肉炎を有する対象に関しては７．２４±０．１０であることが見出された一方で、広汎型慢性歯周炎を有する対象の平均ｐＨは６．８５±０．１１であり（Ｂａｌｉｇａら，２０１３．Ｊ Ｉｎｄｉａｎ Ｓｏｃ Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．１７：４６１－４６５）、この場合、ｐＨは、十分に緩衝され、例えば、酸性の食物または飲料による酸蝕を最小限に抑える。

歯の病変において、ｐＨは、通常、口腔のミクロフローラを形成する乳酸菌による乳酸の連続的な産生の結果として５．０から６．５の間またはそれより低い（Ｈｉｒａｉｓｈｉ，Ｎ．ら，２００３，Ｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ ２８（５）：５９８－６０４）。初期の齲蝕病変、例えば、表面下の齲蝕病変は酸条件および高いイオン強度を有するため、自己集合ペプチドは、その場で集合し始め、三次元ネットワークを形成する。したがって、ｐＨにより引き起こされた単量体型ペプチドの集合が病変内で始まり、それにより、続くリン酸カルシウムの沈着のための足場として働くことができる多量体型アセンブリーを形成する。このプロセスは、本発明の文脈において重合とも呼ばれる。ネットワーク形成後に、カルシウムが唾液から引き寄せられ、初期の齲蝕病変におけるリン酸カルシウム結晶（ヒドロキシアパタイト）の形成のための核生成の島状のもの（ｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ ｉｓｌａｎｄ）を生じる。さらに、空洞が形成された齲蝕の表面領域は、深いくぼみおよび溝を含み非常に高い。

形成された足場は孔を通って拡散するには大き過ぎるため、単量体型で集合していない状態の自己集合ペプチドの適用が表面下の齲蝕病変の処置に特に重要である。ペプチドの病変への十分なデリバリーを確保するために、ペプチドの集合は、ペプチドが作用部位に到達するまで妨げられなければならない。

本発明のデンタルケア製品は、口腔への適用後に長期間にわたってペプチドの集合を防ぎ、確実にペプチドを単量体化する。したがって、上記のとおり、好ましくは、十分な量のペプチド単量体が作用部位、例えば、歯の病変にデリバリーされるまで、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨを超えるｐＨに維持される必要がある。

本発明のデンタルケア製品において、効果的な単量体化は、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．５ｐＨ単位を超えて高いｐＨを有する製品を使用することによって達成することができる。本発明の製品のｐＨは、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．６ｐＨ単位を超えて高いのが好ましい。ｐＨは、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．７ｐＨ単位を超えて高いのがさらにより好ましい。

例えば、本明細書において配列番号１または配列番号２と呼ばれるペプチドを使用するとき、本製品は、これらのペプチドの自己集合がｐＨ７．５において始まるため、８．０以上のｐＨを有してもよい。

したがって本発明の製品のｐＨは、７．５～９．０であってもよい。好適な実施形態において、本製品のｐＨは、７．８～８．５、より好ましくは８～８．２である。

本発明のデンタルケア製品のｐＨは、自己集合ペプチドのかなりの割合が、確実にペプチドが潜在的な病変の部位に到達するのに十分な時間、単量体型にとどまることを確実にするために緩衝されてもよい。

ＷＯ２０１４／０２７０１２は、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨより０．１から０．５ｐＨ単位高いｐＨを有する自己集合ペプチドを含む組成物の生成について記載している。前記組成物は、齲蝕病変への専門家の直接適用が意図される。ＷＯ２０１４／０２７０１２に開示されている方法は本発明に使用または適合されてもよいが、本発明のデンタルケア製品は、好ましくは、ｐＨを増加させる揮発性化合物を含むＷＯ２０１４／０２７０１２に従って作製された製品、およびそこで開示されているプロセスの中間生成物とは異なる。

本発明のデンタルケア製品に使用するための適したバッファーとしては、ＴＡＰＳ（｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸）、ビシン（Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）－アミノメタン）、トリシン（Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン）、ＴＡＰＳＯ（３－［Ｎ－トリス（ヒドロキシル－メチル）メチルアミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（４－２－ヒドロキシ－エチル－１－ピペラジンエタンスルホン酸）、ＴＥＳ（２－｛［トリス（ヒドロキシ－メチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸）、および同様のｐＨ範囲を維持するその他のバッファーが挙げられる。クエン酸、リン酸、およびその他などの酸バッファーはまた、ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．５ｐＨ単位を超えて高い所望のｐＨを得るため、および緩衝能をもたらすために上のバッファーのいずれかおよび／またはアルカリ性溶液、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、二および三塩基性リン酸ナトリウム、二および三塩基性リン酸カリウム、トリポリリン酸ナトリウム、トリス、トリエタノールアミン、ポリエチレンイミンと併せて使用されてもよい。好適な実施形態において、ｐＨ７．５などのペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．５ｐＨ単位を超えて高い特定のｐＨをもたらすためのバッファーはトリスである。

一実施形態において、本発明のデンタルケア製品は、鉱物粒子を含まない。

本発明のデンタルケア製品の高いｐＨにおいて、適用前に、自己集合ペプチドのうちの少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％または少なくとも９５％または少なくとも９９％が単量体型の集合していない状態で存在する。

あるいは、本発明のデンタルケア製品、特に、タフィー、チューインガム、噛むおもちゃ（ｃｈｅｗｉｎｇ ｔｏｙ）、キャンデー、トローチ、ゼラチンガム、歯磨き粉もしくはビスケットなどの低水分含有量のもの、または本質的に固体製品において、それぞれの高い含有量の単量体型ペプチドは、混合を容易にするために、適切であれば他の成分を温めた後に、単量体型ペプチドを他の成分の混合物に添加することによって実現することができる。低水分含有量は、自己集合を妨げる。

口腔内の複数の歯への適用時、ペプチドのうちの少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、好ましくは、少なくとも７０％は、少なくとも１分間、単量体型のままである。ペプチドの前記割合は、適用後少なくとも２分間、少なくとも３分間、少なくとも５分間または少なくとも１０分間、単量体状態のままであるのが好ましい。

このように、本発明は、単量体状態で存在する単量体型ペプチドの複数の歯、好ましくは、すべての歯への効果的な非標的デリバリーを可能にする。本ペプチドは、作用部位でのみ再石灰化のためのアセンブリー、および足場を形成し、この場合、最も好適な作用部位は、齲蝕病変などの病変である。歯の表面への分散後、自己集合ペプチドの高分子型または集合した膜も生じ、石灰化、したがって、歯の表面の硬度を増すことができる。

特に好適な実施形態において、本デンタルケア製品は、ペプチドＰ１１－４（配列番号１）または配列番号２に示される改変されたＰ１１－４を含み、この製品のｐＨは約８．０以上であり、好ましくは、ｐＨは約８．０以上に緩衝される。

一実施形態において、ペプチドのうちの少なくとも７０％は、口腔内への適用前に単量体状態で存在し、ペプチドのうちの少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％は、口腔への適用後、少なくとも１分間、好ましくは少なくとも２分間、より好ましくは少なくとも３分間または少なくとも５分間、単量体状態で存在する。

別の実施形態において、ペプチドのうちの少なくとも８０％は、口腔への適用前に単量体状態で存在し、ペプチドのうちの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％または少なくとも８０％は、口腔への適用後、少なくとも１分間、好ましくは少なくとも２分間、より好ましくは少なくとも３分間または少なくとも５分間、単量体状態で存在する。

特に好適な実施形態において、ペプチドのうちの少なくとも９０％は、口腔への適用前に単量体状態で存在し、ペプチドのうちの少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％は、口腔への適用後、少なくとも１分間、好ましくは少なくとも２分間、より好ましくは少なくとも３分間、単量体状態で存在する。

自己集合ペプチドのうちの少なくとも９０％は、適用前にデンタルケア製品中において単量体状態で存在するのが好ましい。

自己集合ペプチドのうちの少なくとも６０％は、口腔への適用後、少なくとも１分間、好ましくは少なくとも２分間、より好ましくは少なくとも３分間、単量体状態で存在するのが好ましい。

当業者は、本質的にすべての自己集合ペプチドが、通常の実験によって単量体型であるかどうかを判断することができるであろう。例えば、溶液中のペプチドの集合状態は、^１Ｈ－ＮＭＲなどの核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって、円偏光二色性分析によって、動的光散乱（ＤＬＳ）分析によって、拡散波分光法、ネイティブ電気泳動法、粘度測定（レオロジー）、消散監視機能付き水晶振動子マイクロバランス（ＱＣＭＤ）および同種のもの、好ましくは、ネイティブ電気泳動法によって判断することができる。

本発明の製品は、作用部位の外側におけるペプチドの自己集合による顕著な量のペプチドの損失が避けられるため、特に有利である。同時に、本発明の製品は、必要な濃度の単量体型自己集合ペプチドの歯および当てはまる場合は、病変の内側への分散を容易にして、自己集合を可能にする。

溶液中のペプチドの分解および／または析出を防ぐために、ｐＨは、通常１０．５より高い値には増加させない。ペプチドの化学的特性がアミノ酸配列によって決まることは一般的に知られている。例えば、システイン残基およびメチオニン残基の可逆的酸化は、より高いｐＨにおいて促進されることもあり、チオールはより容易に脱プロトン化され、容易に鎖内または鎖間のジスルフィド結合を形成する。当業者は、塩基性のｐＨによって悪影響を受けるアミノ酸側鎖がわかるであろうし、通常の実験によって自己集合ペプチドの完全性を完全な状態のまま維持する最高のｐＨを求めることができるであろう。例えば、この最高のｐＨは、ペプチド中に存在する各アミノ酸の既知の特性に基づいて予測することができる。あるいは、ペプチドの完全性を判断するために、電気泳動法などの生化学的な方法が利用されてもよい。

ペプチド濃度がペプチドの集合に影響を与える可能性がある、すなわち、特に高いペプチド濃度がより早く集合を引き起こす場合があることが当業者に知られている。さらに、並外れて低いペプチド濃度は、すなわち、歯の病変および口腔にある低いｐＨ条件下であっても本発明のペプチドの集合を妨げることがある。

本発明のデンタルケア製品中のペプチド濃度は、０．１から５００００ｍｇペプチド／ｋｇバルク製品の間、例えば、１～１００００ｍｇペプチド／ｋｇバルク製品、５～１０００ｍｇペプチド／ｋｇバルク製品、好ましくは２０から５００ｍｇペプチド／ｋｇバルク製品または３３～１００ｍｇペプチド／ｋｇバルク製品であってもよい。濃度はまた、約１００～３００ｍｇ／ｋｇバルク製品または約２００ｍｇ／ｋｇであってもよい。下の例は、そのような濃度が表面下の病変において自己集合ペプチドを侵入および濃縮を可能にさせることを示す。

一実施形態において、自己集合ペプチドは、カプセル化される。本発明の一実施形態において、自己集合ペプチドは、実施例２に開示されているとおり、軟カプセル、例えば、噛むカプセル（ｃｈｅｗｉｎｇ ｃａｐｓｕｌｅ）にカプセル化される。別の実施形態において、自己集合ペプチドは、マイクロカプセル化される。本発明の製品に使用される自己集合ペプチドは、２つの相補的な自己集合ペプチドの組み合わせであってもよく、この場合、相補的なペプチドは、例えば、自己集合ペプチドのうちの一方のカプセル化、またはそれぞれのペプチドの個別のカプセル化によって製品中において分離されるのが好ましい。相補的なペプチドは、歯への適用、およびカプセルの破壊後に互いに接触することになるのが好ましい。相補的なペプチドに関する例が、例えば、ＥＰ２３２７４２８Ａ２に提供されている。当然、製品が、例えば、上記のとおりの配列番号４、配列番号３、配列番号２または配列番号１を有する自己集合ペプチドの１種類を含む場合も、カプセル化を適用することができる。カプセル化されたペプチドは、例えば、チューインガム、タフィー、カプセル、ビスケットもしくはチュートイ（ｃｈｅｗ ｔｏｙ）などのデンタルケア製品を噛むことによるカプセルの機械的破壊後、または歯への適用による、例えば、ブラッシングもしくはフロスで掃除をすることによって生じる機械的応力後に歯と接触することになるのが好ましい。

カプセル化の適した方法は、例えば、Ｎｅｄｏｖｉｃら，Ｐｒｏｃｅｄｉａ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ １，２０１１，１８０６－１８１５において提供されている。好ましくは、本発明の自己集合ペプチドは、噴霧乾燥、押出成形法、例えば、シェル材料としてアルギナートに対する、乳化、またはリン酸カルシウム粒子に対する流動層コーティングによってカプセル化されてもよい。

自己集合ペプチドに適したカプセル化シェルは、デンプンおよび誘導体、例えば、アミロース、アミロペクチン、デキストリン、マルトデキストリン、ポリデキストロース、シロップ、セルロースおよび誘導体、植物滲出物および抽出物、例えば、アラビアゴム、トラガカントゴム、カラヤゴム、メスキートゴム、ガラクトマンナン、ペクチンおよび可溶性大豆多糖、海洋性抽出物、例えば、カラゲナンおよびアルギナート、微生物および動物多糖、例えば、デキストラン、キトサン、キサンタンおよびゲラン、タンパク質、例えば、ミルクおよびホエータンパク質、例えば、カゼイン、ゼラチンおよびグルテン、食用に適した脂質材料、例えば、脂肪酸および脂肪族アルコール、ワックス、例えば、蜜蝋、カルナウバワックスおよびキャンデリラワックス、グリセリドおよびリン脂質、または他の材料、例えば、ＰＶＰ、パラフィン、セラック、無機材料を含んでもよい。

本発明は、上記の使用のいずれかに適したデンタルケア製品を提供する。本発明のデンタルケア製品は、固体、半固体または液体であってもよい。特に、デンタルケア製品は、キャンデー、トローチ、ゼラチンガム、タフィー、チューインガム、ビスケット、カプセル、チュートイ、ペースト、例えば、練り歯磨き、ゲル、例えば、歯磨きジェル（ｔｏｏｔｈｇｅｌ）、予防ペースト（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ｐａｓｔｅ）、歯磨き粉、口内洗浄剤、マウススプレー（ｍｏｕｔｈｓｐｒａｙ）、液剤、コーティングされたデンタルフロス、コーティングされた歯間ブラシまたはコーティングされた歯ブラシを含む群から選択されてもよい。本デンタルケア製品は、好ましくは、タフィーまたはチューインガムであり、最も好ましくはタフィーである。

キャンデー、トローチ、ゼラチンガム、タフィー、チューインガム、ビスケットもしくはチュートイなどの噛むことを必要とするか、または噛むことを可能にする本発明のデンタルケア製品、特に、チューインガム（ヒト用）もしくはチュートイ（動物用）などの長い（例えば、５分以上の）適用と関連するような形態は、その使用が同時にバイオフィルムまたはプラークを低減することができ、それにより歯の表面および潜在的な病変への到達を容易にするため、特有の利点に関連付けられる。そのような製品はまた、唾液分泌を増加させる。これにより、唾液中に含まれるイオン、例えば、カルシウムイオンが引き寄せられ、潜在的な歯の病変にリン酸カルシウム結晶の形成のための核生成の島状のものを生じる。例えば、本発明のキャンデー、トローチ、ゼラチンガム、チューインガム、ビスケットまたはカプセルはまた、歯の病変を予防および／または処置するためおよび／または子供の歯の表面を再石灰化するために使用することができる。

チュートイまたはビスケットは、例えば、ネコ、イヌまたはウマなどのペット、特に、イヌのための動物使用に適したデンタルケア製品の特に適した形態であり得る。チュートイは、自己集合ペプチドによりコーティングされてもよく、および／またはそれに組み込まれてもよい。そのような実施形態は、低コストで労力の少ない、動物のための歯の病変に対する処置および予防手段を利用する機会を提供する。したがって、動物、特に、イヌの口臭などの齲蝕病変の副次的影響も本発明のデンタルケア製品によって防ぐことができる。

練り歯磨き、歯磨きジェル、予防ペースト、歯磨き粉、口内洗浄剤、マウススプレー、液剤、コーティングされたデンタルフロス、コーティングされた歯間ブラシまたはコーティングされた歯ブラシなどの歯科衛生のために一般に使用されるデンタルケア製品は、歯のプラークを低減し、歯の表面への到達も容易にする。これら、特にコーティングされたデンタルフロスまたはコーティングされた歯間ブラシは、歯の間の空間にも到達することができるため、そのような場所の齲蝕の予防または処置に特に適している。したがって、本発明のそのような製品は、到達するのが困難であるため、齲蝕の侵入を受けやすい場所、例えば、歯間の空間にある歯の病変の予防および／または処置を特に対象とする。

本発明のデンタルケア製品は、少なくとも１分間、適用される。本発明の製品は、好ましくは少なくとも３分間、より好ましくは少なくとも５分間、または最も好ましくは少なくとも１０分間、適用される。適用とは、対象の複数の歯、または好ましくはすべての歯が、このそれぞれの種類の製品が一般に使用される方法でデンタルケア製品と接触させられることを意味する。例えば、練り歯磨きは、一般に１～５分、特に約２～３分の時間、歯のブラッシングのために使用される。

本デンタルケア製品は、通常のデンタルケア後、例えば、夕刻に歯のブラッシング後に使用されてもよい。好ましくは、本デンタルケア製品は、通常適用される製品の代わりに、例えば、通常の練り歯磨きの代わりに、または通常のデンタルフロスの代わりに使用されてもよい。

本発明のデンタルケア製品は、少なくとも週に１回適用するためのものである。本製品は、少なくとも週に２回、好ましくは、少なくとも毎日、例えば、１日１回、少なくとも１日２回、または少なくとも１日３回、例えば、食後に適用するためのものであってもよい。本製品は、好ましくは少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも１か月、少なくとも２か月、少なくとも６か月、または少なくとも１年間適用される。本製品は、残りの生涯の間、例えば、毎日、適用されてもよい。

本発明のデンタルケア製品は、少なくとも１か月、少なくとも２週間、または少なくとも１週間、毎日適用された後に、歯の病変を処置もしくは予防すること、および／または歯の表面を再石灰化することおよび／または対象の歯の表面の硬度、例えば、微小硬度を増加させることにおいて効果的である。例えば、微小硬度、例えば、脱灰した歯の微小硬度は、４週間の毎日の適用時に少なくとも１０％、好ましくは、少なくとも２０％、少なくとも３０％、または少なくとも４０％増加され得る。微小硬度、例えば、ヴィッカース硬度またはヌープ硬度、好ましくは、ヌープ硬度は、例えば、Ｃｈｕｅｎａｒｒｏｎら（２００９，Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２（４），４７３－４７６）に記載されている方法によって測定することができ、ここで、押し込み荷重は、好ましくは１００ｇである。

本発明のデンタルケア製品は、例えば、電動歯ブラシまたは口腔洗浄器を使用して手でまたは機械的に適用されてもよい。さらに、これには、単量体型ペプチドを処置の部位、すなわち、歯の病変または歯の表面に適用する際に補助する付加的な化合物を混合することができる。

本デンタルケア製品は、一般にそれぞれのデンタルケア製品の１つ以上の一般的な成分、例えば、必要とされるｐＨを有する薬学的に許容される一般的な基剤を含み、ここに、自己集合ペプチドが組み込まれてもよい。

本発明のデンタルケア製品の薬学的に許容される基剤は、研磨剤、例えば、カーボネート、ホスファート、特に、リン酸二カルシウム、シリケート、アクリラート、アルミナ、および／またはバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファーを含んでもよい。これらの薬剤は、薄膜の除去を可能にするため、自己集合ペプチドのさらに良好な侵入を可能にする。

一般に、このように、本デンタルケア製品だけで、歯からのバイオフィルムまたは薄膜の十分な除去ができる。さらに、歯は、本発明のデンタルケア製品の使用前に、例えば、歯のブラッシング（例えば、手による歯ブラシまたは電動歯ブラシを用いて、好ましくは、音波歯ブラシを用いて）、歯のフロスによる掃除、口腔洗浄器の使用、および／または製品中に使用される自己集合ペプチドのうちの少なくとも５０％が単量体型であるｐＨを有してもよい塩および界面活性剤の溶液を用いたすすぎによってクリーニングすることができることもあり得る。発明者らは、音波歯ブラシを用いた歯のブラッシングが、表面下の病変への自己集合ペプチドの取り込みを驚くほど向上させることを示せるであろうことから、好ましくは、そのようなクリーニングは、音波処理を含み、特に、音波歯ブラシを用いた歯のブラッシングによって行われてもよい。

音波歯ブラシは、音波の範囲またはそれを超えるブラシヘッド速度を生じる。すなわち、それは、少なくともヒトが聞こえる周波数の範囲にある速度、すなわち、約７０から２０，０００ｈｚ、好ましくは、約１００から約１０００Ｈｚで振動する。一般的な音波歯ブラシは、約２００から約４００Ｈｚの周波数で振動する。本出願の文脈において「音波歯ブラシ」という用語は、別の指定がなければ、超音波歯ブラシを含む。超音波歯ブラシは、２０，０００Ｈｚ超、好ましくは、約１～２ＭＨｚまたは約１．６ＭＨｚの周波数で振動し、これは、１分当たり１９２，０００，０００回の動きに換算される。例えば、Ｓｏｎｉｃａｒｅ（登録商標）歯ブラシは、１分当たりブラシ３１，０００振りを行うことができ、これは、約２５８ｈｚに相当する。比較のために、非音波電動歯ブラシは、１分当たり２，５００～７，５００振り程度を生じるブラッシングメカニズムを有する。音波ブラシの毛の強烈な振動速度は、ユーザーの歯を取り囲む流体を、その流体がブラシの毛が実際に接触した場所を越えた場所でも歯のプラークを破壊することができる程に激しく動かす（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｎｉｍａｔｅｄ－ｔｅｅｔｈ．ｃｏｍ／ｅｌｅｃｔｒｉｃ＿ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈｅｓ／ｔ３＿ｓｏｎｉｃ＿ｔｏｏｔｈｂｒｕｓｈｅｓ．ｈｔｍ）。例となる音波歯ブラシは、Ｐｈｉｌｉｐｓ（例えば、Ｓｏｎｉｃａｒｅ（登録商標）歯ブラシ）またはＯｒａｌ Ｂから入手可能である。

製品の味および受け入れを改善するために、本発明のデンタルケア製品は、糖および／または糖代替物を含んでもよく、これは、好ましくは、歯の壊変を助長しない、例えば、ポリオールあるいは糖アルコール、例えば、ソルビトール、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルト、キシリトールおよび／またはエリトリトール、あるいはＤ－タガトースおよび／またはトレハロースなどである。本製品は、糖を含まない製品であり、すなわち、これらは、スクロースまたはグルコースを顕著な量で含まないか、またはまったく含まないのが好ましい。例えば、Ｚｕｍｂｅら，２００１，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ８５，Ｓｕｐｐｌ．１，Ｓ３１－Ｓ４５に開示されている調製物の適した改変に基づく糖を含まず、自己集合ペプチドをさらに含み、本明細書中で開示されているとおり、例えば、適切なバッファーおよびｐＨの選択によって、ペプチドの単量体状態を確保するよう制御されたｐＨを有する製品が使用されてもよい。

デンタルケア製品が、自己集合ペプチドに加えて、抗齲蝕性であり、歯の再石灰化の助けになることが示されたキシリトール（Ｄ－キシリトール）を含む場合、特に有利である。これは、バイオフィルムおよびプラークも低減するため、本発明の自己集合ペプチドの歯の表面および潜在的な病変への到達を容易にする。当然、キシリトールは、その物質が有毒であるイヌ、雌ウシ、ヤギ、ウサギまたは他の動物に適用するためには使用されない。キシリトールは、ヒト対象または例えば、ネコ、好ましくは、ヒト対象における使用のための本発明の製品に使用することができる。

本発明による練り歯磨きは、例えば、ＷＯ２００４／０６９１７０Ａ１に従って調製することができる。例えば、本発明の練り歯磨きのための一般的な医薬品基剤は、例えば、研磨剤、例えば、カーボネート、ホスファート、シリケート、アクリラート、アルミナ、懸濁剤、例えば、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ソルビトール、キシリトール、結合剤、例えば、セルロースおよびその誘導体、カラゲナン、パラフィン、キシロース、界面活性剤、例えば、水素化ひまし油、ラウリル硫酸ナトリウム、香料、例えば、カラメル、バニリン、メントール、保存料（ｃｏｎｓｅｒｖｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えば、エタノール、安息香酸ナトリウム、着色剤、例えば、ソルベントレッド、アシッドブルー３、活性薬剤、例えば、フッ化物、好ましくは、三級アミンの形態、例えば、アミンフッ化物，または有機フッ化物、例えば、モノフルオロリン酸ナトリウム、硝酸カリウム、および／またはオキサラートをさらに含んでもよい。本発明の練り歯磨きは、遊離型の（すなわち、カプセル化されてない）自己集合ペプチドを含んでもよい。本発明の練り歯磨きは、さらにまたは代わりにカプセル化形態の少なくとも１つの自己集合ペプチドを含んでもよく、これは、例えば、ブラッシングによる機械的応力後に歯と接触することになってもよい。

例えば、本発明の歯磨きジェルのための薬学的に許容される基剤は、例えば、懸濁剤、例えば、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ソルビトール、キシリトール、結合剤、例えば、セルロースおよびその誘導体、カラゲナン、パラフィン、キシロース、界面活性剤、例えば、水素化ひまし油、ラウリル硫酸ナトリウム、香料、例えば、カラメル、バニリン、メントール、保存料、例えば、エタノール、安息香酸ナトリウム、着色剤、例えば、ソルベントレッド、アシッドブルー３、活性薬剤、例えば、フッ化物、好ましくは、三級アミンの形態、例えば、アミンフッ化物または有機フッ化物、例えば、ナトリウムモノフルオロホスファット、硝酸カリウム、および／またはオキサラートを含んでもよい。本発明の歯磨きジェルは、遊離型の自己集合ペプチドを含んでもよい。本発明の歯磨きジェルは、カプセル化形態の少なくとも１つの自己集合ペプチドを含んでもよく、これは、例えば、ブラッシングによる機械的応力後に歯と接触することになってもよい。

例えば、本発明の歯磨き粉のための薬学的に許容される基剤は、例えば、ステインを除去するための重曹、研磨剤としてカルシウム粉末、香料、例えば、カラメル、バニリン、メントール、保存料、例えば、エタノール、安息香酸ナトリウム、着色剤、例えば、ソルベントレッド、アシッドブルー３、活性薬剤、例えば、フッ化物、好ましくは、三級アミンの形態、例えば、アミンフッ化物、または有機フッ化物、例えば、モノフルオロリン酸ナトリウム、硝酸カリウム、および／またはオキサラートを含んでもよい。

例えば、本発明のゼラチンガムのための薬学的に許容される基剤は、例えば、ゼラチンおよび／またはペクチン、水、糖もしくは糖代替物、例えば、シロップの形態、酒石酸および／またはクエン酸を含んでもよい。本発明のゼラチンガムは、遊離型の自己集合ペプチドを含んでもよく、少なくとも１つの自己集合ペプチドがカプセル化形態で組み込まれてもよい。本発明のゼラチンガムはまた、自己集合ペプチドによりコーティングされてもよい。例となる糖を含まないゼラチンガムおよびその調製については、Ｚｕｍｂｅら，２００１，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ８５，Ｓｕｐｐｌ．１，Ｓ３１－Ｓ４５、特に、表１３または表１４において教示されており、ここに、自己集合ペプチドが添加され、ｐＨがその単量体状態を確保するよう適合される。

本発明のチューインガムは、硬い、または柔らかいチューインガムであってもよい。自己集合ペプチドを含む柔らかいチューインガムは、例えば、Ｓｈｉｖａｎｇ Ａ Ｃｈａｕｄｈａｒｙら，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．２０１２ Ｊｕｌ－Ｓｅｐ； ２（３）；１２３－１３３；Ａｂｏｌｆａｚｌ Ａｓｌａｎｉら，Ａｄｖ Ｂｉｏｍｅｄ Ｒｅｓ．２０１３，２：７２；Ｚｕｍｂｅら，２００１，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ８５，Ｓｕｐｐｌ．１，Ｓ３１－Ｓ４５（特に、図８）；ＷＯ２０１４／１５２９５２Ａ１；ＷＯ２００６／１２７５５９Ａ２またはＷＯ２００７／１４３９８９Ａ１に従って調製することができる。硬いチューインガムは、例えば、ガムベース、キシリトール、自己集合ペプチド、例えば、Ｐ１１－４（例えば、約１００μｇ／チューインガム）、炭酸水素ナトリウム、酒石酸、香料、例えば、レモン香料を例えば、含んでもよい。

タフィーは、水溶液系中の脂肪のエマルジョンを含む。本発明のペプチドタフィーは、一般に、自己集合ペプチドに加えて、糖もしくは糖代替物、例えば、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトールおよび／またはイソマルト、少なくとも部分的にシロップの形態でもよい、例えば、マルチトールシロップ、植物油、例えば、ココナツ油、大豆油、ヒマワリ油、ナタネ油、オリーブ油、および／またはピーナッツ油、ゲル化剤、例えば、ゼラチンおよび／またはペクチン、および、適宜、ビタミン、酸化防止剤、例えば、クエン酸および／またはアスコルビン酸、香味料、着色料、甘味料、例えば、アセスルファムＫ、アスパルテームおよび／またはスクラロースを含む。例となる糖を含まないタフィーおよびその調製については、Ｚｕｍｂｅら，２００１，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ８５，Ｓｕｐｐｌ．１，Ｓ３１－Ｓ４５、特に、表１２において教示されており、ここに、自己集合ペプチドが添加され、ｐＨがその単量体状態を確保するよう適合される。

本発明のペプチドトローチは、自己集合ペプチドに加えて、糖もしくは糖代替物、例えば、マルチトール、ソルビトール、キシリトール、ラクチトールおよび／またはイソマルト、および適宜、成分、例えば、抗酸化剤、例えば、クエン酸および／またはアスコルビン酸、香味料、着色料および甘味料、例えば、アスパルテーム、アセスルファムＫおよびスクラロースを含んでもよい。

一実施形態において、本発明のタフィー、チューインガムまたはトローチなどの本発明の固体製品は、バイオフィルムおよび／または薄膜の除去に寄与する、例えば、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよび／またはバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファーを含む外側シェルを含む。内部コアは、緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ７．６～９または約ｐＨ８中に溶解した自己集合ペプチドを含んでもよい（図１Ａ、２Ｃ、３Ｂ参照）。内部コアは、緩衝された塩基性環境においてカプセル化形態の自己集合ペプチドを含んでもよい（図１Ｂ、２Ｄ、３Ｃ参照）。

本発明のゼラチンガムは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウム、および／またはバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファー、ならびに塩基性環境、例えば、ｐＨ７．６～９または約ｐＨ８中の自己集合ペプチドを含んでもよい（図４ＡおよびＢ参照）。

本発明の軟カプセルは、親油性基剤、例えば、中鎖トリグリセリド、ワックス、例えば、蜜蝋、乳化剤、例えば、大豆レシチン、ゲル化剤、例えば、二酸化ケイ素を含んでもよい（実施例２および図５参照）。

以下の例は、本発明を説明することが意図され、限定することは意図しない。本明細書中で引用されるすべての参考文献は、これにより完全に組み込まれる。

図１は、本発明の例となるトローチを示す。図１Ａは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るトローチを示し、単量体型自己集合ペプチドは緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中に溶解している（Ｂ）。図１Ｂは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るトローチを示し、単量体型自己集合ペプチドは、緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中にカプセル化形態で存在する（Ｂ）。 図２は、本発明の例となるタフィーを示す。図２Ａは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウムおよびＳＤＳを含むタフィーを示すが、単量体型自己集合ペプチドは塩基性に緩衝されたタフィーに組み込まれる。図２Ｂは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウムおよびＳＤＳを含むタフィーを示すが、単量体型自己集合ペプチドは塩基性に緩衝されたタフィー中にカプセル化形態で組み込まれる。図２Ｃは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るタフィーを示し、単量体型自己集合ペプチドは緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中に溶解している（Ｂ）。図２Ｄは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るタフィーを示し、単量体型自己集合ペプチドは、緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中にカプセル化形態で存在する（Ｂ）。 図３は、本発明のチューインガムを示す。図３Ａは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファーを含むチューインガムを示し、チューインガムは塩基性環境、例えば、ｐＨ８中に単量体型自己集合ペプチドを含む。図３Ｂは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るチューインガムを示し、単量体型自己集合ペプチドは緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中に溶解している（Ｂ）。図３Ｃは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳ、および／またはリン酸バッファーを含む外側シェル（Ａ）から成るチューインガムを示し、単量体型自己集合ペプチドは、緩衝された塩基性環境、例えば、ｐＨ８中にカプセル化形態で存在する（Ｂ）。 図４は、本発明のゼラチンガムを示す。図４Ａは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファーを含むゼラチンガムを示し、ゼラチンガムは塩基性環境、例えば、ｐＨ８中に単量体型自己集合ペプチドを含む。図４Ｂは、研磨剤、例えば、リン酸二カルシウムおよびバイオフィルム除去剤、例えば、炭酸ナトリウム、ＳＤＳおよび／またはリン酸バッファーを含むゼラチンガムを示し、ゼラチンガムは塩基性環境、例えば、ｐＨ８中にカプセル化形態の単量体型自己集合ペプチドを含む。 図５Ａは、自己集合ペプチドを含む軟カプセルを示す。このカプセルは、実施例２に示したとおりに調製した。図５Ｂは、実施例１に従って調製した２３０ｍｇ／ｋｇのＰ１１－４を含む本発明の例となるタフィーを示し、これは、実施例５に使用した。 図６は、弾性係数Ｇ’の測定によって評価されたＰ１１－４の自己集合反応速度を示す。異なるバッファー組成（以下参照）を用いて１５ｍｇ／ｍｌでＰ１１－４を調製し、０．１％変形度、３７℃および１ラジアン／秒の周波数において測定した。ペプチド単量体の重合体への自己集合は、使用された中性のｐＨにおけるイオン強度と無関係に５分超かかっている。四角（記号の最上の線）－ＮａＣｌ：トリス（０．０５５Ｍ）＋ＮａＣｌ、最終的なイオン強度１４２ｍＭ；人工唾液（記号の上から２番目の線）：トリス、Ｃａ（ＮＯ_３）_２、ＫＨ_２ＰＯ_４（比率０．７７：０．１４：０．０８）、イオン強度１４２ｍＭ；ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）：ＮａＣｌ、ＮａＨＣＯ_３、ＫＣｌ、ＣａＣｌ_２、ＭｇＳＯ_４（比率０．６６：０．４：０．０５：０．０２：０．００７）、イオン強度１６５ｍＭ；ＭｇＳＯ_４：０．０５５Ｍ トリス＋０．１９２Ｍ ＭｇＳＯ_４ ０．１４Ｍイオン強度 図７は、４時間にわたる消散監視機能付き水晶振動子マイクロバランス（ＱＣＭ－Ｄ）を用いた自己集合反応速度調査を示す。アミン結合センサーの表面にｐＨ８．５のＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌのＰ１１－４ペプチドの層を形成した。１時間および１時間２５分後、そのセンサーを、ＰＢＳ、ｐＨ８．５により洗浄した。１時間３８分後、ＰＢＳ、ｐＨ８．５中の１０ｍｇ／ｍｌのＰ１１－４ペプチドを注入した。２時間後、０．１Ｍ ＨＣｌを注入して、自己集合を引き起こした。本質的に完全な自己集合が０．１Ｍ ＨＣｌの注入の約３０分後に起こったことがわかる。共鳴振動数Ｆ（左の目盛り、Ｈｚ）およびエネルギー散逸係数Ｄ（右の目盛り）、三角＝周波数、四角＝散逸が示されている。 図８は、チューインガムから歯へのペプチドの移動を示す。実施例６において詳細に記載されるとおり、Ｐ１１－４を含む本発明のチューインガムを歯とともにインキュベーションした。Ａは、標準物質として水中のペプチドＰ１１－４のＭＡＬＤＩ－ＴＯＶ分析を示し、Ｂは、インキュベーションの２時間後の歯の穴に開けた粉末中の前記ペプチドの存在を示し、Ｃは、インキュベーションの２時間後の上清中の前記ペプチドの存在を示す。 図９Ａは、取り出したヒト臼歯における人工病変の形成を示す。図９Ｂ、Ｃ、ＤおよびＥは、ｐＨ８．４～８．５においてペプチドとともにインキュベーションした後の蛍光標識ペプチドＰ１１－４の人工病変への侵入を示す。図９ＦおよびＧは、ｐＨ６．３～６．８においてペプチドとともにインキュベーションした後の蛍光標識ペプチドＰ１１－４を示す。共焦点写真は、インキュベーション前（ａ）、１分間のインキュベーション後（ｂ）、２分間のインキュベーション後（ｃ）、５分間のインキュベーション後（ｄ）および再石灰化バッファー中での４日間の洗浄後（ｅ）の４×の倍率における標識ペプチドの検出を示す。図９Ｃ、Ｄ、ＥおよびＧは、蛍光標識ペプチドＰ１１－４を示し、この場合、ペプチドとのインキュベーションは歯のヒトの唾液とのプレインキュベーション後であった。図９ＤおよびＥでは、唾液によって形成された薄膜を、ＮａＣｌＯ（図９Ｄ）および超音波処理（図９Ｅ）によってＰ１１－４とのインキュベーション前に除去した。これらの実験は、実施例７に詳細に記載している。

実施例

ペプチドタフィーの調製
本発明のタフィーを、以下のとおり混合した：
成分 ％（ｗ／ｗ）
マルチトールシロップ ４９．００
イソマルト ３１．００
ココナツ油 ５．５０
ゼラチン ３．００
ビタミン混合物 １．２５
クエン酸 ０．９０
香味料、例えば、ラズベリー香味料 ０．８５
ペプチドＰ１１－４ 例えば、０．０３から０．２５
着色料（例えば、アントシアニン） ０．０２
アセスルファムＫ ０．０１
スクラロース ０．００４
水 １００まで

ペプチドＰ１１－４を除くすべての成分を温めた。粉末形態の単量体型ペプチドを添加し、すべての成分を混合した。タフィーを形成した。タフィーを実施例５の咀嚼試験に利用した。

水分含有量が低いため、このペプチドは単量体型にとどまる。乾燥ペプチドをクエン酸と混合しても、このことは当てはまる。集合は、唾液と接触した後にのみ起こり得る。タフィーを、実施例５に利用した。

ペプチドのカプセル化
自己集合ペプチドを、以下のとおり軟ゼラチンカプセル中にカプセル化した。

自己集合ペプチド、ＭＣＴ油、大豆レシチン、蜜蝋および二酸化ケイ素を下に示した量で含む充填材料を調製し、カプセル化した。カプセルシェルのための溶液は、例えば、ゼラチン、グリセリン、ソルビトールおよび、適宜、着色料を含んでいた。その後、カプセルを乾燥し、詰めてもよい。得られたカプセルを図５Ａに示す。
成分 ｍｇ／カプセル
ペプチドＰ１１－４ １
ＭＣＴ油 ８２９
大豆レシチン ３５
蜜蝋 １２０
二酸化ケイ素 １５

ペプチドチューインガムの調製
本発明の例となるチューインガムは、例えば、Ｚｕｍｂｅら，２００１，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ８５，Ｓｕｐｐｌ．１，Ｓ３１－Ｓ４５：、図８に従って調製することができる。すべての他の成分を混合した後に、単量体型のペプチドを添加する。
成分 ％ｗ／ｗ
ペプチド ０．０１
粉砕したキシリトール ２０
ソルビトールシロップ １５．２
グリセリン ２
香味料 １．８
重曹 １
アスパルテーム ０．０５
粉砕したソルビトール ３５．０
ガムベース １００まで

練り歯磨きの調製
練り歯磨きは、ＷＯ２００４／０６９１７０に従って調製することができる。
成分 ％（ｗ／ｗ）
ソルビトール（７０％） ４３．００
ＣａＣＯ_３ １４．５０
グリセリン ９．６０
ラウリル硫酸ナトリウム ０．３４
モノフルオロリン酸Ｎａ ０．７５
キサンタンガム ０．３６
カッシアガム ０．０４
Ｃａｒｂｏｐｏｌ ９８０ ＮＦ Ｐｏｌｙｍｅｒ ０．４
サッカリンＮａ ０．２
ペプチド ０．０５
バッファー ０．１
重曹 １
脱イオン化水 １００まで
ｐＨ８．２

咀嚼試験
４人の対象の群に３０ｍｇ／ｋｇ（群Ａ）および２３０ｍｇ／ｋｇ（群Ｂ）のいずれかの単量体型自己集合ペプチドＰ１１－４を含むタフィーを与え、群Ｃはタフィーの中にペプチドを含まない（プラセボ）。各対象は、ペプチドの含有量を知らずにタフィーを５分間咀嚼し、感覚的体験（ｓｅｎｓｏｒｉｃ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ）に関して報告した。

このタフィーは、快い食感および好ましい味を有していた。群Ａおよび群Ｂのすべてのメンバーが、タフィーを咀嚼している間および後に歯の表面の滑らかで清潔な感覚を報告した一方で、群Ｃはそのような発見を報告しなかった。群Ａおよび群Ｂを含む２つのペプチドのうち、群Ｂは、滑らかな感覚がより速く始まったことを示した。

チューインガムから歯へのペプチドの移動
Ｐ１１－４を含む、実施例３に従って調製した本発明のチューインガムを、４～５ｍｍの粒子の大きさの小片に切った後、義歯により水または再石灰化バッファー（（２ｍＭ Ｃａ（ＮＯ３）、１．２ｍＭ ＫＨＰＯ４、および６０ｍＭ トリス／ＨＣｌ、１Ｍ ＫＯＨによりｐＨを７．４に調節した）のいずれかの中で５分間咀嚼した。その後、抽出されたペプチドを含む、得られた「唾液」を使用して、その中において、ヒトの歯を３７℃で、約２時間、振盪機上でインキュベーションした。

インキュベーション後、その歯を風乾し、上部のエナメル質層を、高速ドリルを用いて機械的に取り出した。得られた粉末を、アンモニアによりｐＨ８に適合させた２００μｌの蒸留水に懸濁させた後、Ｃｌｅａｎｕｐ Ｃ１８ピペットチップを用いて精製した。そのチップを、１０μｌのＨ_２Ｏ中の５０ｗｔ％アセトニトリルで２回すすぎ、その後、１０μｌのＨ_２Ｏ＋１％ １Ｍ ＮＨ_４ＯＨ中の０．１Ｍ トリエチルアンモニウムアセタートで２回すすいだ後、Ｈ_２Ｏ中の０．１％ ＴＦＡで３回すすいだ。サンプルを、１０μｌのＨ_２Ｏ中の５０％アセトニトリルにより溶出した。

サンプルホルダーＭＴＰ３８４を、１．５μｌのマトリックス（Ｈ_２Ｏ／アセトニトリル（１：１）＋０．１％ＴＦＡ中の２０ｍｇ／ｍｌ ３，５－ジメトキシ－４－ヒドロキシ桂皮酸）とともに準備し、１．５μｌのサンプル溶液をマトリックスに入れた。個々のスポットに、２μｌの較正標準を入れた。その後、Ｎ_２）－レーザー、λ＝３３７ｎｍ、レーザーパワー ２２％、各サンプルの５つの側面へのレーザーショットを用いて５２０～３２００の質量／電荷（ｍ／ｚ）比に対する質量スペクトルを得、ＦｌｅｘＣｏｎｔｒｏｌ（バージョン２．４）およびＦｌｅｘＡｎａｌｙｓｉｓ（バージョン２．４）ソフトウェアを用いて算出した。

図８の結果は、歯の粉末および上清の両方が自己集合ペプチドＰ１１－４を含むことを示し、すなわち、この実験は、ペプチドの歯への移動を示している。

単量体型自己集合ペプチドの表面下の病変への侵入
ａ）人工齲蝕病変の作製
取り出したヒト臼歯に対する人工病変の作製を、Ｌｏら．２０１０（Ｊ Ｄｅｎｔ．３８（４）：３５２－３５９）に記載されるとおりに実施した。脱灰した表面下の領域（すなわち、人工齲蝕病変または白斑）の位置を明確にするために、歯を無色のマニキュア液で覆い、およそ４×４ｍｍの領域を残しておいた。その歯を脱灰バッファー（２．２ｍＭ ＣａＣｌ２、２．２ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ 酢酸；１ＭのＫＯＨによりｐＨを４．４に調節した）中に３７℃で３日間置いた。一般的な活動性齲蝕病変においてのように、確実にすべての孔を開いた状態にするために、生じた表面下の病変を１０μＬの２％ＮａＣｌＯ（１分間のインキュベーション）により処置し、すすぎ、室温で風乾した。

プラセボ処置サンプルも同一の前処理を行った。

一般的な人工病変を図９Ａに示す。

ｂ）処置
－ ２５ｍＭトリスバッファー中の、１０ｐｐｍのＡＴＴＯ６４７－Ｐ１１－４（蛍光標識Ｐ１１－４（配列番号６）：Ａｃ－ＱＱＲＦＥＷＥＦＥＱＱＳＧＳＧＣ－（ＡＴＴＯ６４７）－ＮＨ_２）を添加した、Ｐ１１－４（配列番号２）の２００ｐｐｍ（すなわち、２００μｇ／ｍｌ）溶液、すなわち、１：２０の溶液をさまざまなｐＨ、特に、８．４または８．５または６．３、６．５または６．８）において調製した。
－ 下記表に明記されるとおり、例えば、ヒト唾液中における１日（約２４時間）のインキュベーションによって、適宜、それに続いて５分間の超音波処理（音波歯ブラシ、Ｓｏｎｉｃａｒｅ Ｄｉａｍｏｎｄ Ｃｌｅａｎ（登録商標）（Ｐｈｉｌｉｐｓ）による２５８ｈｚ）または２％ＮａＣｌＯに１分間漬けることによって歯を適宜、前処理した。
－ 歯をＰ１１－４溶液に規定した期間、１、２または５分間浸した後、取り出し、水中において１０分間または再石灰化バッファー（２ｍＭ Ｃａ（ＮＯ３）、１．２ｍＭ ＫＨＰＯ４、および６０ｍＭ トリス／ＨＣｌ、１Ｍ ＫＯＨによりｐＨを７．４に調節した）中において４日間および／もしくは６日間洗浄した。
－ １、２または５分間のインキュベーション後の共焦点評価は、歯がＰ１１－４溶液中にある間に行い、水中の１０分後または再石灰化バッファー中の４もしくは６日後の洗浄後に行ってもよい。

ｃ）共焦点顕微鏡法
サンプルをμ－スライドＩ（ｉｂｉｄｉ、Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ）において蒸留水に入れ、共焦点レーザー顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＩＸ８１）によって解析した。記録された重ねた４つの二次元イメージのそれぞれは、５１．４μｍ厚の病変容量を投影し、２０５μｍの合計評価深さを得た（対物レンズ：ＵＰＬＳＡＰＯ ２０×／ＮＡ ０．７５；ヘリウムネオンガスレーザー；励起：６３３ｎｍおよび蛍光：６６８ｎｍ）。イメージをＯｌｙｍｐｕｓソフトウェア（ＦｌｕｏＶｉｅｗ ＦＶ１０００）によって解析した。

ｄ）結論
視覚的解析は正確な量的結論は与えないが、繰り返される実験において検出される傾向がインキュベーションおよび前処理の異なる条件間の比較を可能にする。

ｐＨ８．５における病変のＰ１１－４とのインキュベーション後（歯１０および１、図９Ｂの歯１０）、ペプチドは、インキュベーションの１分後に既に検出可能であった（図９Ｂｂ）が、大半のペプチドは、病変において２分間のインキュベーション後（図９Ｂｃ）または５分間のインキュベーション後（図９Ｂｄ）に検出された。それより少ないが顕著な量のペプチドが、再石灰化バッファー中での４日間のインキュベーション後に、病変において再現性よく依然として検出できた（図９Ｂｅ）。

洗浄が水中で行われた範囲のみ異なった比較実験（歯２、写真は示していない）は、水の代わりに再石灰化バッファーが病変における自己集合ペプチドの存在を安定させる傾向を示している。

これらの実験は、やや塩基性のバッファー中で２００ｐｐｍの濃度の単量体型蛍光標識Ｐ１１－４が人工齲蝕病変に拡散し、そこで安定したネットワークを形成することができることを示している。従来技術は、これが病変の再石灰化につながることを実証している。病変の外側では顕著な量のペプチドは検出されていない。病変におけるペプチドの集合により、濃度勾配がシフトし、溶液から病変へのペプチドのさらなる拡散が可能になり、それが、病変における自己集合ペプチドの濃縮につながると考えられる。Ｐ１１－４含有溶液と接触させた後に、ヒトの唾液を模倣した再石灰化バッファー中でインキュベーションすると、おそらく、複合体の形成および再石灰化によって、病変における自己集合ペプチドの維持が向上する。

非標識Ｐ１１－４は検出された標識ペプチドと同じように挙動するため、これは、この濃度または同様の低濃度で本発明による表面下の齲蝕病変などの初期の齲蝕病変の非標的処置に使用することができるという結論を得ることができる。

Ｐ１１－４とのインキュベーションの前の前処理としての音波処理は、病変におけるペプチドの存在を増加させた（歯ＺＲ１、写真は示していない）。

歯上における薄膜の形成につながることが知られている、人工病変を有する歯のヒト唾液とのプレインキュベーション後の（歯１１、５およびＺＲ４、図９Ｃにおける歯１０）、ｐＨ８．５における１、２、または５分間の蛍光標識ペプチドＰ１１－４とのインキュベーションは、そのようなプレインキュベーションを行わない場合よりも歯上または病変における蛍光ペプチドの存在が著しく少なくなる傾向があった（図９Ｂ）。

ヒトの唾液とのインキュベーション後の薄膜のこの悪影響は、超音波処理（歯ＺＲ３、図９Ｄに示す）またはＮａＣｌＯによる処理（歯ＺＲ２、図９Ｅに示す）のいずれかにより歯をクリーニングすることによって打ち消すことができたことを示すことができた。

このように、薄膜の形成および音波処理によるクリーニング後に、驚くべきことに、自己集合ペプチドが唾液とのプレインキュベーションを行わない場合よりもさらに多い量で検出できた。

ｐＨ６．３～６．８におけるインキュベーション後（歯４、１２（ともに唾液を含まない）、３、１３（ともに唾液を含む）、それぞれ図９Ｆおよび９Ｇに示される歯１２および１３）、すなわち、ペプチドが重合型であったとき、ｐＨ８．４または８．５におけるインキュベーション後よりも少ない量のペプチドが、病変において一般に検出できた。唾液とのインキュベーションによる薄膜形成（歯３、１３）はペプチドの侵入をさらに低減させた。

Claims (16)

1. 歯の病変の処置もしくは予防および／または歯の表面の再石灰化における使用のためのデンタルケア製品であり、
   （ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こすことができる自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、
   （ｉｉ）薬学的に許容される主剤と
   を含み、
   齲蝕の診断と無関係に対象の複数の歯に適用され、
   適用後に、自己集合ペプチドは、少なくとも１分間、単量体状態で存在する、デンタルケア製品。
2. 歯の病変、好ましくは、齲蝕病変の処置における使用のための、請求項１に記載の使用のためのデンタルケア製品。
3. 歯の表面の再石灰化における使用のための、請求項１に記載の使用のためのデンタルケア製品。
4. 適用前に、前記自己集合ペプチドのうちの少なくとも７０％は、前記デンタルケア製品中に単量体状態で存在し、好ましくは、前記自己集合ペプチドのうちの少なくとも５０％は、適用後に口腔内で少なくとも１分間、単量体状態で存在する、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
5. 前記デンタルケア製品のｐＨは、７．５～９．０、好ましくは、７．８～８．５、より好ましくは、８～８．２である、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
6. 前記デンタルケア製品のｐＨは、前記ペプチドが自己集合を起こし始めるｐＨよりも０．５ｐＨ単位を超えて高い、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
7. 自己集合ペプチドの濃度は、０．１～１０００ｍｇ／ｋｇである、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
8. 前記ペプチドは、配列番号３の配列を含み、前記ペプチドは、好ましくは、配列番号４または５のいずれか１つの配列を含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
9. 前記自己集合ペプチドは、配列番号１または２の配列の１つと少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含み、前記ペプチドは、好ましくは配列番号１の配列を含む、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
10. キャンデー、トローチ、ゼラチンガム、タフィー、チューインガム、チュートイ、ビスケット、カプセル、練り歯磨き、歯磨きジェル、予防ペースト、歯磨き粉、口内洗浄剤、マウススプレー、液剤、コーティングされたデンタルフロス、コーティングされた歯間ブラシまたはコーティングされた歯ブラシを含む群から選択され、好ましくは、タフィーまたはチューインガムであり、最も好ましくは、タフィーである、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
11. 前記自己集合ペプチドは、カプセル化される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
12. 少なくとも１分間適用される、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
13. 少なくとも１週間に１回、適用するためのものである、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
14. １週間の毎日の適用後に対象の歯の病変を処置もしくは予防すること、および／または歯の表面を再石灰化することおよび／または歯の表面の硬度を増加させることにおいて効果的である、先行する請求項のいずれか１項に記載の使用のためのデンタルケア製品。
15. 先行する請求項のいずれか１項に記載の使用に適したデンタルケア製品であり、
    （ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こし始める自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、
    （ｉｉ）薬学的に許容される主剤と、
    を含む、デンタルケア製品。
16. （ｉ）７．５未満のｐＨにおいて自己集合を起こし始める自己集合ペプチドであって、単量体型としてデンタルケア製品中に存在する、自己集合ペプチドと、
    （ｉｉ）薬学的に許容される主剤と、
    を含む前記デンタルケア製品を、齲蝕の診断と無関係に複数の歯に適用することを含む、歯を処置するための非治療的な方法であり、
    適用後に、前記自己集合ペプチドは、少なくとも１分間、単量体状態で存在する、方法。

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