ES2828973T3

ES2828973T3 - Producto para el cuidado dental personal para el tratamiento de caries

Info

Publication number: ES2828973T3
Application number: ES17728086T
Authority: ES
Inventors: Michael Hug; Dominikus Amadeus Lysek
Original assignee: Credentis AG
Current assignee: Credentis AG
Priority date: 2016-05-24
Filing date: 2017-05-24
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2037-05-24
Also published as: WO2017202940A1; SG11201808904SA; JP7055385B2; CN109475484A; EP3463279B1; BR112018073866A2; US20190142724A1; EP3248590A1; PT3463279T; JP2022106703A; ZA201807745B; CA3020489A1; JP2019516760A; EP3463279A1

Abstract

Producto para el cuidado dental que es esencialmente sólido, seleccionado del grupo que consiste en caramelo, pastilla, goma de gelatina, tofe, goma de mascar, juguete de mascar o galleta, que comprende (i) péptidos de autoensamblaje que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 4 y que tienen al menos 80% de identidad de secuencia con una de las secuencias de SEQ ID NO: 1 o 2, que son capaces de experimentar autoensamblaje a un pH inferior a 7,5, en el que los péptidos de autoensamblaje están presentes en el producto para el cuidado dental en forma monomérica, y (ii) una base farmacéuticamente aceptable, para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión dental y/o en la remineralización de una superficie dental, en el que el producto para el cuidado dental se aplica a una pluralidad de dientes de un sujeto independiente del diagnóstico de caries, y en el que, después de la aplicación, los péptidos de autoensamblaje están presentes en estado monomérico durante al menos 1 minuto.

Description

DESCRIPCIÓN

Producto para el cuidado dental personal para el tratamiento de caries

[0001] La presente invención proporciona nuevos productos para el cuidado dental que comprenden péptidos de autoensamblaje que son capaces de experimentar autoensamblaje a un pH determinado para su uso en el cuidado dental, por ejemplo, prevenir y/o tratar una lesión dental tal como una lesión de caries, remineralizar una superficie dental o aumentar la suavidad o brillo, o para aumentar la dureza de una superficie dental. La presente invención proporciona productos para el cuidado dental tales como goma de mascar, tofes o pasta de dientes, en los que los péptidos están presentes en forma monomérica durante un período prolongado después de la aplicación en la cavidad bucal, permitiendo así el tratamiento no dirigido de una pluralidad de dientes, independientemente del diagnóstico de una lesión activa (es decir, no tratada previamente con éxito). Los productos de la invención son útiles para animales y seres humanos.

[0002] Hasta la fecha, la remineralización dental se logra principalmente mediante la administración de iones de calcio y fosfato en lesiones o cavidades dentales. Los iones de calcio y fosfato suelen incluirse en pastas dentales que también contienen, por ejemplo, abrasivos, fluoruros, tensioactivos y otros agentes de remineralización. Los iones de calcio y fosfato se pueden usar en diversas formas cristalinas, por ejemplo, como materiales a base de hidroxiapatita o como fosfato de calcio amorfo, tal como en algunos materiales a base de fosfopéptidos de caseína. Por ejemplo, el documento WO 2013/050432 describe dichos agentes de remineralización y opciones para poner en contacto la encía con estos agentes. El documento WO 2009/100276 enseña un hilo dental asociado con un aminoácido básico en forma libre o salina, por ejemplo, para promover la remineralización.

[0003] Más recientemente, se ha descrito una estrategia alternativa a la remineralización dental, que se basa en péptidos de autoensamblaje cortos diseñados racionalmente. El documento WO 2004/007532 describe péptidos que son capaces de formar andamios tridimensionales, promoviendo así la nucleación de fosfato de calcio de-novo. Estos péptidos artificiales se ensamblan para formar ensamblajes tipo cinta de lámina beta. Los ensamblajes peptídicos pueden cambiar de un fluido a un estado de gel más rígido y nemático en respuesta a disparadores físicos o químicos. Los péptidos se diseñaron para formar ensamblajes en respuesta a determinadas condiciones de pH, fuerza iónica y/o temperatura en el siguiente orden jerárquico: cintas, bandas, fibrillas y fibras. Aggeli y col. (2003, J. Am. Chem. Soc. 125, 9619-9628) analiza el pH como un disparador del autoensamblaje de la lámina beta peptídica.

[0004] En la técnica anterior se han descrito varios otros péptidos de autoensamblaje. Por ejemplo, el documento WO 2010/041636 A1 describe un agente ocluyente de tejido con péptido bioadsorbible que contiene un péptido artificial que tiene 8-200 residuos de aminoácidos con los aminoácidos hidrofílicos y aminoácidos hidrofóbicos unidos alternativamente, que se autoensambla en una estructura beta a pH fisiológico. Los péptidos de autoensamblaje con residuos o tramos hidrofóbicos e hidrofílicos alternos que interactúan con la matriz extracelular también se describen en el documento WO 2008/113030 A2. El documento WO 2010/103887 A1 describe péptidos de autoensamblaje, que comprenden aminoácidos básicos, hidrófobos y ácidos de una secuencia primaria específica y geles peptídicos de los mismos que tienen una alta fortaleza.

[0005] Otra solicitud, WO 2007/000979 A1, describe péptidos de autoensamblaje con aminoácidos polares y no polares. Los péptidos son capaces de formar una estructura de lámina beta en la que los residuos de aminoácidos no polares están dispuestos en un lado de la estructura en la forma ensamblada. Péptidos anfifílicos de autoensamblaje para uso como membranas macroscópicas estables, que se utilizan en aplicaciones de biomateriales, tales como administración de fármacos de difusión lenta, se describen en el documento US 6.548.630.

[0006] El documento EP 2327428 A2 se refiere a una composición farmacéutica que comprende nanofibras peptídicas de autoensamblaje, que son complementarias entre sí, y al menos una célula para reparar tejido dañado, tal como tejido después de un infarto de miocardio.

[0007] Los documentos EP 2 853 256 A1 y WO 2015/044268 A1 enseñan que hidrogeles peptídicos de autoensamblaje que comprenden además partículas minerales de tamaños específicos y fluoróforos son útiles para el blanqueamiento dental.

[0008] Se ha descrito el uso de péptidos de autoensamblaje para la administración de agentes bioactivos, por ejemplo, en los documentos US 2008/199431 A1 y en WO 2009/026729 A1. El documento WO 2006/073889 A2 se refiere a una composición en la que PDGF (Platelet Derived Growth Factor - Factor de Crecimiento Derivado de Plaquetas) humano se une directamente a péptidos que se ensamblan en un gel que libera lentamente PDGF in vivo. El documento WO 2006/047315 A2 propone la unión de agentes terapéuticos a péptidos de autoensamblaje utilizando enlaces de biotina/estreptavidina.

[0009] Kirkham y col. y Kind y col. se refieren a andamios peptídicos de autoensamblaje que promueven la remineralización del esmalte (Kirkham y col. 2007, Dent. Res. 86(5), 426-430; Kind y col. 2017, Journal of Dental Research 1-8, doi10.1177/0022034517698419).

[0010] Para tratar eficazmente las lesiones dentales, en particular, las lesiones subsuperficiales (es decir, una lesión de caries temprana o mancha blanca), el péptido de autoensamblaje necesita estar en una forma monomérica fuera de la lesión dental para permitir la difusión en la lesión, y necesita cambiar a una forma ensamblada una vez dentro de la lesión dental. Si el péptido se ensambla fuera de la lesión, no puede facilitar la remineralización dentro de la lesión, con un pH bajo y una alta fuerza iónica, ya que las estructuras tridimensionales formadas son demasiado grandes para difundirse a través de los poros. Por lo tanto, se debe evitar el ensamblaje del péptido hasta que alcance su sitio de acción.

[0011] Los documentos WO 2014/027012 A1 y EP 2 698 162 A1 proporcionan soluciones liofilizadas que comprenden péptidos de autoensamblaje para el tratamiento dirigido de lesiones dentales. Dado que la solución que comprende los péptidos tiene que aplicarse directamente sobre la superficie de la lesión de caries temprana, la aplicación está restringida a usuarios profesionales, por ejemplo, dentistas. Además, el preacondicionamiento del diente a tratar es muy complejo, incluyendo la limpieza profesional del diente con el fin de eliminar la placa, restos de alimentos y manchas, así como el tratamiento con hipoclorito de sodio y ácido fosfórico, enjuague posterior con agua y secado de la superficie dental. Brunton y col., 2013, Br. Dent. J.215(4): E6, doi:10.1038/sj.bdj.2013.741) confirma que, antes del tratamiento, la lesión se limpió con una pasta profiláctica, se trató con solución de decapado durante 30 segundos para abrir los poros de la lesión subsuperficial y posteriormente se lavó y secó. El péptido de autoensamblaje liofilizado en forma monomérica se rehidrató con agua estéril y una sola gota de la solución resultante se aplicó inmediatamente directamente a la superficie de la lesión. Se aseguró el control de la humedad hasta que la solución P11-4 ya no era más visible (aproximadamente dos minutos). Se les pidió a los sujetos que no se cepillaran los dientes en el cuadrante tratado hasta 4 días después del tratamiento. Schlee y col., 2014, Stomatologie 111:175-181 confirma la necesidad de pretratamiento y control de la humedad.

[0012] Debido a la complejidad del tratamiento, hay un coste sustancial para el paciente y/o el sistema de salud involucrado. Además, hay sujetos que, por razones psicológicas, evitan o retrasan las visitas al odontólogo hasta que las lesiones de caries han progresado tan ampliamente que el odontólogo puede preferir perforar y rellenar en lugar de la estrategia de tratamiento utilizando péptidos de autoensamblaje.

[0013] Por consiguiente, a la luz del estado de la técnica, los inventores resolvieron el problema de proporcionar un producto para el cuidado dental capaz de tratar lesiones de caries que es fácil de administrar, preferentemente para la venta sin receta o venta al por menor, y que puede ser aplicado por el paciente o consumidor para tratar o prevenir caries y/o remineralizar superficies dentales.

[0014] Este problema se resuelve mediante la presente invención, en particular, mediante la materia reivindicada.

[0015] En un primer aspecto, la presente invención proporciona un producto para el cuidado dental según definido en la reivindicación 1, que comprende

(i) péptidos de autoensamblaje que son capaces de experimentar autoensamblaje a un pH inferior a 7,5, donde los péptidos de autoensamblaje están presentes en el producto para el cuidado dental en forma monomérica, y (ii) una base farmacéuticamente aceptable,

para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión dental y/o en la remineralización de una superficie dental, donde el producto para el cuidado dental se aplica a una pluralidad de dientes de un sujeto independiente del diagnóstico de caries, preferentemente, caries activas,

y donde, después de la aplicación, los péptidos de autoensamblaje están presentes en estado monomérico durante al menos 1 minuto.

[0016] En particular, los productos para el cuidado dental de la presente invención se pueden utilizar en el tratamiento de una lesión dental, preferentemente una lesión de caries, por ejemplo, caries subsuperficial o una lesión de caries cavitada. Alternativa o adicionalmente, dichos productos para el cuidado dental se pueden usar para remineralizar una superficie dental, por ejemplo, una cavidad dental, una lesión de mancha blanca o dentina expuesta. Preferentemente, los productos de la invención se pueden usar para prevenir la progresión de lesiones de caries tempranas a lesiones de caries cavitadas.

[0017] Las bacterias, en particular de los géneros Streptococcus, Lactobacillus y Actinomyces, producen ácido por fermentación de carbohidratos que se originan a partir de los alimentos. El ácido formado tras la fermentación resulta en una desmineralización de los tejidos dentales duros, es decir, el esmalte, la dentina y el cemento. Las lesiones y cavidades dentales también pueden ser el resultado de un trauma físico. Si no se trata, una lesión o cavidad de caries puede conducir a una infección de la cámara pulpar, que contiene vasos sanguíneos y nervios, que en última instancia puede resultar en la pérdida de dientes.

[0018] Generalmente, la lesión o cavidad puede estar presente en cualquier diente, por ejemplo, en los incisivos (Dentes incisivi), los dientes caninos (Dentes canini), los dientes premolares (Dentes praemolares) y/o los dientes molares (Dentes molares). De manera similar, la lesión o cavidad puede afectar cualquiera de las superficies de un diente, es decir, en las superficies labiales, mesiales, palatales, proximales, oclusales y/o distales. En el contexto de la invención, a menos que se mencione explícitamente o quede claro a partir del contexto, las palabras "un", “uno”, “una” no se limita al singular, sino que también puede significar "uno(a) o más". Por ejemplo, la referencia a "una lesión" incluye referencia a más de una lesión, en particular, todas las lesiones del sujeto.

[0019] Los productos de la invención están destinados a ser utilizados en el cuidado dental de rutina independientemente del diagnóstico previo de caries (o, preferentemente, de caries activa), preferentemente, sin diagnóstico previo de caries (o, preferentemente, de caries activa), más preferentemente, también sin diagnóstico de desmineralización o erosión dental. El diagnóstico de la caries activa, por ejemplo, de manchas blancas que se consideran la primera etapa de una caries o de las etapas más avanzadas, suele ser llevado a cabo por un profesional dental. La invención evita ventajosamente la necesidad de diagnóstico y tratamiento por parte de odontólogos profesionales y permite a los sujetos tratar y prevenir eficazmente lesiones dentales por sí solos. Preferentemente, los sujetos aplican el producto para el cuidado dental regularmente, de modo que el producto de la invención pueda remineralizar caries iniciales, por ejemplo, manchas blancas o desmineralizaciones.

[0020] Tal como se usa en esta invención, "diagnóstico previo de caries" o "diagnóstico previo de caries activa" se refiere a una lesión de caries que ha sido diagnosticada por un profesional, por ejemplo, un dentista, pero que aún no ha sido tratada. Por el contrario, el diagnóstico previo de caries (activa) no se refiere a una lesión de caries que haya sido tratada con éxito antes de la aplicación del producto de la invención.

[0021] Se sabe en la técnica que no hay necesidad de tratamiento de la caries detenida. Por el contrario, se considera que la caries detenida es más resistente a la recurrencia de caries que el esmalte o dentina sanos. Por lo tanto, el experto sabría que cualquier lesión de caries tratada convencionalmente en la técnica es una lesión de caries activa. En cualquier caso, la presencia de lesiones de caries detenidas no impide la aplicación del producto para el cuidado dental de la invención. El producto para el cuidado dental también puede contribuir a una mayor remineralización de las lesiones de caries detenidas. Por consiguiente, es evidente para el experto en la técnica que los productos de la invención también se pueden utilizar independientemente del diagnóstico o sin el diagnóstico previo de lesiones de caries detenidas.

[0022] El tratamiento anterior se refiere al tratamiento dirigido administrado típicamente por un profesional dental, que es capaz de al menos detener la progresión de caries, es decir, abarca el tratamiento dirigido con péptidos de autoensamblaje, así como una estrategia de perforación y relleno. El tratamiento exitoso de una lesión de caries activa conduce a una lesión de caries detenida.

[0023] Tras la aplicación a la cavidad bucal, los péptidos permanecen en un estado monomérico, no ensamblado durante un período determinado para asegurar la distribución del producto a una pluralidad de dientes y para permitir la entrada en lesiones subsuperficiales, si las hay. En particular, los productos para el cuidado dental de la invención se pueden utilizar para rellenar lesiones y/o cavidades dentales con una red de péptidos interconectados que promueven la remineralización de la lesión por deposición de iones de calcio y fosfato, que están presentes, por ejemplo, en la saliva. Tal como se usa en esta invención, una "lesión" de caries es una lesión subsuperficial o una microlesión subsuperficial en el diente o la superficie del diente que normalmente es causada por formación ácida de las bacterias presentes en la biopelícula oral (escala ICDAS-II 1-4 [ICDAS - International Caries Detection and Assessment System - Sistema Internacional de Detección y Evaluación de Caries]). Tal como se usa en esta invención, una "cavidad" dental es un agujero en la superficie de un diente (escala ICDAS-II >5).

[0024] La presente invención se basa, entre otras cosas, en la idea de que, si se utilizan formas galénicas adecuadas que son capaces de mantener los péptidos de autoensamblaje en su estado monomérico durante un período prolongado al proporcionar un entorno que impida que los péptidos se ensamblen, los productos no necesitan aplicarse a lesiones dentales de una manera dirigida. Por lo tanto, son adecuados para su aplicación por el paciente o el cliente sin asistencia profesional, por ejemplo, por un dentista. Además, estos productos se pueden utilizar independientemente del diagnóstico de caries, preferentemente caries activa.

[0025] Los péptidos de autoensamblaje pueden estar presentes en un estado monomérico durante al menos 1 minuto, preferentemente, al menos 2 minutos, más preferentemente al menos 3 minutos después de la aplicación en la cavidad oral. Preferentemente, los péptidos de autoensamblaje están presentes en un estado monomérico durante el lapso de tiempo típico para el cual el producto para el cuidado dental se aplica normalmente a los dientes, por ejemplo, durante 2-3 minutos si el producto se aplica con un cepillo de dientes, por ejemplo, si el producto es una pasta de dientes.

[0026] Tal como se usa en esta invención, "sujeto" se refiere a cualquier sujeto que tiene dientes, por ejemplo, un mamífero tal como un humano, un perro, un felino tal como un gato, un roedor tal como un ratón, rata, hámster, conejillo de indias, una vaca, un caballo, un camello, una oveja, una cabra u otra mascota, animal de granja o de zoológico que tiene dientes.

[0027] El alcance de la invención se define por las reivindicaciones adjuntas. Describimos un procedimiento para tratar una lesión dental, preferentemente una lesión de caries, y/o para remineralizar una superficie dental, que comprende aplicar un producto para el cuidado dental a una pluralidad de dientes de un sujeto independiente del diagnóstico de caries, preferentemente caries activa, donde el producto para el cuidado dental comprende

[0028] En un aspecto adicional, la invención proporciona un producto para su uso para remineralizar una superficie dental o aumentar la dureza, por ejemplo, la microdureza de una superficie dental, que comprende aplicar dicho producto para el cuidado dental a una pluralidad de dientes de un sujeto independiente del diagnóstico de caries, preferentemente, caries activa o desmineralización o erosión dental.

[0029] Péptidos de autoensamblaje que son capaces de experimentar autoensamblaje a un pH inferior a 7,5 también se pueden usar para la preparación de un producto para el cuidado dental para el tratamiento de una lesión dental, preferentemente una lesión de caries y/o para remineralizar una superficie dental y/o para aumentar la dureza de los dientes.

[0030] Los productos para el cuidado dental tal como se describen en esta invención también se pueden aplicar para aumentar la suavidad de las superficies dentales y/o proporcionar un mayor brillo a los dientes.

[0031] Los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la invención experimentan autoensamblaje en respuesta a un determinado pH y fuerza iónica. En particular, los péptidos de autoensamblaje para su uso según la invención se seleccionan de manera que experimentan autoensamblaje tan pronto como el pH de su entorno descienda por debajo de un pH determinado, por ejemplo, por debajo del pH 7,5. El pH al que los péptidos de autoensamblaje de la invención comienzan a experimentar autoensamblaje es inferior a 7,5, preferentemente inferior a 7,2, más preferentemente inferior a 7,0. Por ejemplo, el pH al cual los péptidos de autoensamblaje P11-4 (SEQ ID NO: 1) y P11-4 modificado terminalmente (SEQ ID NO: 2) comienzan a experimentar autoensamblaje es de alrededor de 7,5. Esto significa que los péptidos de autoensamblaje comienzan a autoensamblarse en una medida significativa cuando el pH cae por debajo de 7,5.

[0032] Tal como se usa en esta invención, el pH al cual el péptido de autoensamblaje comienza a experimentar autoensamblaje se refiere al pH por debajo del cual se observa un grado significativo de autoensamblaje de los péptidos en solución, lo que significa que se ensamblan al menos alrededor del 25%, alrededor del 30%, alrededor del 35%, alrededor del 40%, alrededor del 45%, alrededor del 50%, alrededor del 55%, alrededor del 60%, alrededor del 65%, alrededor del 70%, alrededor del 75%, alrededor del 80%, alrededor del 85%, alrededor del 90%, alrededor del 95%, alrededor del 99% o incluso alrededor del 100% de los péptidos que se encuentran en el producto para el cuidado dental. En una realización preferida, al menos alrededor del 25% de los péptidos encontrados en el producto para el cuidado dental se ensamblan por debajo del pH al cual el péptido comienza a experimentar autoensamblaje.

[0033] Preferentemente, al pH que inicia el autoensamblaje, por ejemplo, alrededor de pH 7,5 para P11-4 y P11-4 modificado, sólo alrededor del 20% o menos, preferentemente sólo alrededor del 15% o menos, más preferentemente 10% o menos, e incluso más preferentemente 5% o menos de los péptidos están en un estado multimérico.

[0034] Por el contrario, por debajo del pH que inicia el autoensamblaje, por ejemplo, por debajo del pH 7,5 para P11-4 (SEQ ID NO: 1) y P11-4 modificado (SEQ ID NO: 2), se observa un grado significativo de autoensamblaje de los péptidos en solución, lo que significa que al menos alrededor del 25%, alrededor del 30%, alrededor del 35%, alrededor del 40%, alrededor del 45%, alrededor del 50%, alrededor del 55%, alrededor del 60%, alrededor del 65%, alrededor del 70%, alrededor del 75%, alrededor del 80%, alrededor del 85%, alrededor del 90%, alrededor del 95%, alrededor del 99% o incluso alrededor del 100% de los péptidos que se encuentran en la solución están ensamblados, es decir, son multiméricos.

[0035] Preferentemente, la fuerza iónica a la que los péptidos experimentan autoensamblaje es una fuerza iónica fisiológica.

[0036] Tal como se usa en esta invención, "autoensamblaje" de los péptidos se refiere a la organización espontánea y reversible de péptidos con otros péptidos de su propio tipo (o péptidos que tienen una estructura similar) en ensamblajes multiméricos mediante interacciones no covalentes. Las interacciones no covalentes que son responsables de formar los ensamblajes multiméricos incluyen interacciones de Van-der-Waals, apilamiento pi, enlaces de hidrógeno, interacciones polares e iónicas entre las estructuras principales de aminoácidos y/o las cadenas laterales de aminoácidos de los péptidos.

[0037] Los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la invención preferentemente se ensamblan en láminas beta-plegadas. En la lámina beta-plegada, la estructura tipo lámina se crea mediante una serie de enlaces de hidrógeno entre residuos en diferentes cadenas de polipéptidos o entre residuos en diferentes secciones de un polipéptido plegado. Típicamente, las cadenas de polipéptidos adyacentes en láminas beta-plegadas son antiparalelas, lo que significa que corren en direcciones opuestas. Sin embargo, las cadenas adyacentes también pueden correr paralelas. Si varias cadenas de polipéptidos participan en la formación de láminas, la lámina es una estructura rígida similar a una pared. Múltiples láminas plegadas proporcionan la dureza y rigidez necesarias. Los péptidos que se pueden utilizar en los productos de la invención forman estructuras secundarias estables tras el autoensamblaje. Preferentemente, los péptidos utilizados en la invención formarán "cintas beta" largas que comprenden una estructura beta-plegada de una única molécula de espesor. Los péptidos pueden formar estructuras complejas durante el ensamblaje, tales como cintas helicoidales (espesor de molécula única), bandas trenzadas (cintas dobles), fibrillas (pilas trenzadas de bandas) y fibras (fibrillas entrelazadas). Con la disminución del pH, se pueden formar cintas helicoidales, bandas torcidas, fibrillas y, por último, fibras.

[0038] Como sabe el experto en la técnica, el estado de ensamblaje de los péptidos también es influenciado por la fuerza iónica. La fuerza iónica de una solución es una función de la concentración de todos los iones presentes en esa solución. Por lo tanto, incluso a un pH por encima del pH al que el péptido comienza a experimentar autoensamblaje, es decir, cuando el péptido es sustancialmente monomérico en solución, una fuerza iónica particularmente alta podría ser capaz de desencadenar el ensamblaje del péptido.

[0039] Sin embargo, el ensamblaje de los péptidos de la presente invención ventajosamente no se desencadena cuando la fuerza iónica está en el intervalo fisiológico, es decir, corresponde a o está por debajo de la fuerza iónica correspondiente a NaCl 150 mM. El experto en la técnica sabrá cómo determinar y medir la fuerza iónica de una solución. La fuerza iónica I se calcula generalmente según la fórmula I = 1/2£z¡2b¡, donde z es el factor de valencia y bi es la molalidad [mol/kg{H2O}] de la iésima concentración iónica. La sumatoria es tomada sobre todos los iones en una solución. Por ejemplo, la fuerza iónica de una solución de NaCl 150 mM es aproximadamente 0,15. Esta es también aproximadamente la fuerza iónica de la sangre. La fuerza iónica de la saliva presente en la cavidad bucal es generalmente mucho menor, tal como, por ejemplo, aproximadamente 0,04. Por lo tanto, en una realización preferida, la fuerza iónica en el producto para el cuidado dental de la invención es menor que 0,15, menor que 0,1, menor que 0,05 o menor que 0,025. En una realización preferida, la fuerza iónica del producto para el cuidado dental es menor que 0,15. En una realización preferida adicional, la fuerza iónica es menor que 0,1.

[0040] El experto en la técnica está consciente de numerosos procedimientos para determinar la fuerza iónica de una preparación. Por ejemplo, la fuerza iónica puede estimarse a partir de una medición de la conductancia eléctrica (S = 1/Ó = A/V) de una solución a través del factor de Russell de la siguiente manera: I = 1,6 x 10'5 x Conductancia Específica [pS/cm]. Una solución de NaCl 150 mM tiene una conductancia de aproximadamente 80-100 mS/cm. Por lo tanto, según lo anterior y la estimación descrita de la conductancia eléctrica, el producto para el cuidado dental tendrá una conductancia eléctrica inferior a 100 mS/cm, preferentemente inferior a 80 mS/cm.

[0041] Además, el experto en la técnica conoce numerosos procedimientos para determinar el pH al cual un péptido de la presente invención comenzará el autoensamblaje a una fuerza iónica dada. Procedimientos adecuados se indican, por ejemplo, en una publicación de Aggeli y col. (2003, J Am Chem Soc, 125, 9619-9628).

[0042] El tamaño de los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la invención no está limitado específicamente. Los péptidos de la presente invención pueden ser de cualquier longitud que permita el autoensamblaje de una manera dependiente del pH. Preferentemente, los péptidos tendrán un tamaño de alrededor de 4-200 aminoácidos, más preferentemente, 6-100 aminoácidos, 8-50 aminoácidos, 10-30 aminoácidos o 11-20 aminoácidos. Incluso más preferentemente, los péptidos de autoensamblaje tendrán una longitud de alrededor de 27 aminoácidos, 24 aminoácidos, 21 aminoácidos, 15 aminoácidos u 11 aminoácidos. En una realización particularmente preferida, los péptidos de autoensamblaje tienen una longitud de 11 aminoácidos.

[0043] Los péptidos de autoensamblaje se pueden preparar mediante cualquier procedimiento adecuado que se conozca comúnmente en el campo de la síntesis de péptidos. Por ejemplo, los péptidos con una longitud de más de 50 aminoácidos se pueden preparar mediante procedimientos recombinantes. En una realización, los péptidos de autoensamblaje se producen como péptidos de fusión. Tal como se usa en esta invención, un péptido de fusión se refiere a una fusión de una primera secuencia de aminoácidos que comprende el péptido de autoensamblaje de interés que está unido de forma terminal N o terminal C a una segunda secuencia de aminoácidos. La segunda secuencia de aminoácidos puede ser una etiqueta de afinidad, es decir, una secuencia de aminoácidos que se fusiona con el extremo N o el extremo C del péptido de autoensamblaje y que exhibe una mayor afinidad con otro compuesto, permitiendo así la purificación del péptido de fusión. Preferentemente, la secuencia de etiqueta se retira del péptido de autoensamblaje de interés después de la purificación, por ejemplo, proporcionando un sitio de escisión proteolítica entre el péptido de autoensamblaje y la etiqueta de afinidad. En una realización, el péptido de autoensamblaje se prepara tal como se describe en Kyle y col., 2010, Biomaterials 31, 9395-9405 y Kyle y col. 2009, Trends in Biotechnol.

27 (7), 423-433.

[0044] Péptidos de autoensamblaje más pequeños generalmente se preparan mediante síntesis química. Por ejemplo, los péptidos pueden sintetizarse químicamente mediante procedimientos de fase sólida o fase líquida. Se han descrito protocolos para la síntesis química de péptidos en fase de solución (ver, por ejemplo, Andersson y col., Biopolymers 55:227-250, 2000). Para la síntesis de fase sólida, puede ser usada la técnica descrita por Merrifield (J. Am. Chem. Soc., 1964, 85, 2149-2154). En esta estrategia, el péptido en crecimiento está anclado en una resina insoluble y los reactivos solubles sin reaccionar se eliminan mediante filtración o etapas de lavado sin pérdidas manipulativas. La síntesis de péptidos de fase sólida se puede realizar fácilmente mediante el uso de dispositivos automatizados.

[0045] Los péptidos utilizados en los productos de la invención pueden comprender cualquier aminoácido proteinogénico natural. Además, los péptidos también pueden comprender aminoácidos no proteinógenos inusuales, tales como carnitina, ácido gamma-aminobutírico (GABA), hidroxiprolina, selenometionina, hipusina, lantionina, ácido 2-aminoisobutírico, deshidroalanina, ornitina (Orn, O), citrulina, beta alanina (ácido 3-aminopropanoico) y similares. Los aminoácidos no proteinogénicos se pueden incorporar al péptido mediante modificación postraduccional o mediante incorporación directa durante la síntesis química del péptido.

[0046] Los péptidos comprenden preferentemente cadenas laterales de aminoácidos que incluyen un grupo -Co o H. Las cadenas laterales de aminoácidos con un -COOH se desprotonarán a valores de pH por encima de sus valores pK nominales. Por ejemplo, los aminoácidos que comprenden un grupo -COOH en su cadena lateral tal como ácido aspártico (Asp, D) y ácido glutámico (Glu, E) se desprotonan esencialmente a un pH por encima de neutro, es decir, a pH 7, porque exhiben un pKa bajo (Asp: 3,71; Glu: 4,15). En los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la presente invención, las cadenas laterales de aminoácidos que contienen un grupo -COOH se ubican específicamente en la cadena peptídica para controlar las interacciones electrostáticas entre péptidos vecinos, es decir, de manera que péptidos adyacentes, idénticos y autoensamblados, se repelan a través de interacciones electrostáticas cuando el grupo -COOH se desprotona a -COO-, y para dominar la energía libre de asociación en enlaces entre péptidos. La reducción del pH por debajo de un determinado umbral, es decir, el pH en el que el péptido comienza a experimentar autoensamblaje, tal como alrededor de pH 7,5 para P11-4 (SEQ ID NO: 1) y P11-4 modificado (SEQ ID NO: 2), conduce a la protonación del grupo -COOH en los péptidos autoensamblados de la presente invención, lo que reduce las interacciones electrostáticas repelentes entre los péptidos y permite el autoensamblaje de los péptidos.

[0047] Los péptidos utilizados en los productos de la invención comprenden preferentemente la secuencia de la fórmula X1-X2-X1-X2-X1, donde X1 es un aminoácido con una cadena lateral ácida y X2 es un aminoácido con una cadena lateral hidrofóbica que se selecciona del grupo que consiste en alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina y triptófano (SEQ ID NO: 3).

[0048] En una realización más preferida, los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la invención comprenden la secuencia Glu-X2-Glu-X2-Glu, donde X2 es un aminoácido con una cadena lateral hidrofóbica que se selecciona del grupo que consiste en alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina y triptófano (SEQ ID NO: 4) o Asp-X2-Asp-X2-Asp, donde X2 es un aminoácido con una cadena lateral hidrofóbica que se selecciona del grupo que consiste en alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina y triptófano (SEQ ID NO:5).

[0049] En otra realización preferida, los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la presente invención comprenden o consisten en la secuencia Gln-Gln-Arg-Phe-Glu-Trp-Glu-Phe-Glu-Gln-Gln-Gln (PII-4, SEQ ID NO: 1), o una secuencia que tiene al menos 80%, preferentemente 90% de identidad de secuencia con la misma. Además, se prefiere que los péptidos se modifiquen P11-4 como se muestra en la SEQ ID NO:2 o una secuencia que tenga al menos 80%, preferentemente 90% de identidad de secuencia con la misma.

[0050] Para los péptidos a los que se hace referencia en esta invención como P11-4, el cambio de la forma monomérica a la forma multimérica ensamblada, se controla mediante el pH. Si el pH está por debajo de pH 7,5, el péptido se ensambla. Si el pH es mayor, el estado del péptido es monomérico.

[0051] El péptido que tiene al menos 80% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:1 o 2 preferentemente comprende ácido glutámico o ácido aspártico en posiciones que corresponden a los aminoácidos 5, 7 y 9 de la SEQ ID ⁿO:1 o 2. Específicamente, la secuencia peptídica que tiene al menos 80% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:1 preferentemente comprende ácido glutámico en posiciones que corresponden a los aminoácidos 5, 7 y 9 de la SEQ ID NO:1. Preferentemente, las posiciones de aminoácidos restantes son aminoácidos con una cadena lateral hidrofóbica que se selecciona del grupo que consiste en alanina, valina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, tirosina y triptófano. Preferentemente, las posiciones de aminoácidos restantes no son aminoácidos que tienen cadenas laterales básicas, es decir, aminoácidos que se cargarían positivamente a un pH alrededor de neutro.

[0052] En una realización, los péptidos utilizados en los productos de la invención comprenden o consisten en secuencias que difieren de las representadas en las SEQ ID NO: 1 y 2 mediante el reemplazo de 1,2 o 3 aminoácidos. Generalmente, cada uno de los residuos de aminoácidos dentro de la secuencia peptídica de las SEQ ID NO: 1 y 2 puede ser sustituido por otro residuo, siempre y cuando el péptido resultante todavía sea capaz de experimentar autoensamblaje a un valor de pH inferior a 7,5. Se prefiere que las sustituciones sean sustituciones conservativas, es decir, sustituciones de uno o más residuos de aminoácidos por un aminoácido de polaridad similar, que actúa como un equivalente funcional. Preferentemente, el residuo de aminoácido utilizado como sustituto se selecciona del mismo grupo de aminoácidos que el residuo de aminoácido que se va a sustituir. Por ejemplo, un residuo hidrofóbico puede sustituirse con otro residuo hidrofóbico, o un residuo polar puede sustituirse con otro residuo polar que tenga la misma carga. Los aminoácidos funcionalmente homólogos que se pueden usar para una sustitución conservativa comprenden, por ejemplo, aminoácidos no polares tales como glicina, valina, alanina, isoleucina, leucina, metionina, prolina, fenilalanina y triptófano. Ejemplos de aminoácidos polares sin carga comprenden serina, treonina, glutamina, asparagina, tirosina y cisteína. Ejemplos de aminoácidos polares cargados (básicos) comprenden histidina, arginina y lisina. Ejemplos de aminoácidos polares cargados (ácidos) comprenden ácido aspártico y ácido glutámico.

[0053] Además, los péptidos utilizados en los productos de la invención se pueden modificar estructuralmente en una o más posiciones de aminoácidos, por ejemplo, mediante la introducción de uno o más aminoácidos modificados. Según la invención, estos aminoácidos modificados pueden ser aminoácidos que se han cambiado mediante, por ejemplo, biotinilación, fosforilación, glicosilación, acetilación, ramificación y/o ciclización. Además, los péptidos de la invención pueden contener adicional o alternativamente otras modificaciones, tales como grupos de bloqueo terminales, grupos formilo, ácido gamma-carboxiglutámico hidroxilo, metilo, fosforilo, pirrolidona ácido carboxílico y/o sulfato. En una realización preferida, los péptidos de la invención se acetilan en su extremo N y/o se amidan, por ejemplo, con un grupo NH², en su extremo C. Una realización particularmente preferida es un péptido P11-4 que está acetilado en el extremo N y amidado en el extremo C con un grupo NH², tal como se ilustra en la siguiente secuencia: CH³CO-QQRFEWEFEQQ-NH²(SEQ ID NO:2).

[0054] En los productos para el cuidado dental de la presente invención, los péptidos de autoensamblaje se aplican a las superficies dentales en un estado no ensamblado en el que son capaces de difundirse en lesiones dentales donde se debe lograr la remineralización.

[0055] Se encontró que el pH promedio de la saliva de sujetos humanos sanos era de alrededor de 7,06 ± 0,04, para sujetos con gingivitis crónica, 7,24 ± 0,10, mientras que el pH promedio de aquellos con periodontitis generalizada crónica era de 6,85 ± 0,11 (Baliga y col., 2013. J Indian Soc Periodontol. 17:461-465), donde el pH está bien tamponado, minimizando, por ejemplo, la erosión de los dientes por alimentos o bebidas ácidos.

[0056] En una lesión dental, el pH está normalmente entre 5,0 y 6,5 o menor como resultado de la producción continua de ácido láctico por bacterias de ácido láctico que forman la microflora de la cavidad bucal (Hiraishi, N. y col., 2003, Operative Dentistry 28(5):598-604). Como una lesión de caries temprana, por ejemplo, una lesión de caries subsuperficial, tiene condiciones ácidas y alta fuerza iónica, los péptidos de autoensamblaje comenzarán a ensamblarse in situ, formando una red tridimensional. Por lo tanto, el ensamblaje inducido por pH de los péptidos monoméricos comienza dentro de la lesión, formando así ensamblajes multiméricos que pueden actuar como andamios para la deposición posterior de fosfato de calcio. Este proceso también se conoce en el contexto de la invención como polimerización. Después de la formación de la red, el calcio es atraído de la saliva, generando islas de nucleación para la formación de cristales de fosfato de calcio (hidroxiapatita) en la lesión de caries temprana. Además, el área superficial de la caries cavitada es muy alta, incluyendo fosas y surcos profundos.

[0057] La aplicación de los péptidos de autoensamblaje en su estado monomérico, no ensamblado, es particularmente crítica para el tratamiento de lesiones de caries subsuperficial, ya que los andamios formados son demasiado grandes para difundirse a través de poros. Con el fin de garantizar una administración suficiente de péptidos a la lesión, su ensamblaje debe evitarse hasta que alcancen su sitio de acción.

[0058] Los productos para el cuidado dental de la invención protegen los péptidos del ensamblaje y garantizan la monomerización de los péptidos durante un período prolongado después de la aplicación en la cavidad bucal. Por lo tanto, como se describió anteriormente, se requiere el mantenimiento de un pH por encima del pH al que los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje, preferentemente hasta que se administre una cantidad suficiente de monómeros peptídicos al sitio de acción, por ejemplo, una lesión dental.

[0059] En los productos para el cuidado dental de la presente invención, se puede lograr la monomerización eficaz mediante el uso de un producto que tiene un pH que está más de 0,5 unidades de pH por encima del pH al que los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje. Preferentemente, el pH en los productos de la invención está más de 0,6 unidades de pH por encima del pH al cual los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje. Aún más preferentemente, el pH está más de 0,7 unidades de pH por encima del pH al que los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje.

[0060] Por ejemplo, cuando se utilizan los péptidos a los que se hace referencia en esta invención como SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:2, el producto puede tener un pH de 8,0 o mayor, ya que el autoensamblaje de estos péptidos comienza a pH 7,5.

[0061] Por lo tanto, en el producto de la invención, el pH puede ser 7,5 - 9,0. En una realización preferida, el pH en el producto es 7,8 - 8,5, más preferentemente, 8 - 8,2.

[0062] El pH del producto para el cuidado dental de la invención se puede tamponar para asegurar que un porcentaje sustancial del péptido de autoensamblaje permanezca en forma monomérica durante un tiempo suficiente para asegurar que alcance los sitios de lesiones potenciales.

[0063] El documento WO 2014/027012 describe la producción de una composición que comprende péptidos de autoensamblaje que tiene un pH de 0,1 a 0,5 unidades de pH por encima del pH en el que los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje. Dichas composiciones están destinadas a la aplicación profesional directamente a lesiones de caries. Aunque los procedimientos descritos en el documento WO 2014/027012 se pueden usar o adaptar para la presente invención, el producto para el cuidado dental de la presente invención preferentemente difiere del producto producido según el documento WO 2014/027012, y del producto intermedio del proceso descrito en el mismo que comprende un compuesto volátil que aumenta el pH.

[0064] Tampones adecuados para su uso en el producto para el cuidado dental de la invención incluyen TAPS (ácido {[tris(hidroximetil)metil]amino}propanosulfónico), Bicina (N,N-bis (2-hidroxietil)glicina), Tris(Tris(hidroximetil)-aminometano), Tricina (N-tris(hidroxilmetil)metilglicina), TAPSO (ácido 3-[N-Tris(hidroxil-metil)metilamino]-2-hidroxipropanosulfónico), HEPES (ácido 4-2-hidroxi-etil-1-piperazina-etanosulfónico), TES (ácido 2-{[tris (hidroximetil)metil]amino}etanosulfónico) y otros tampones que mantienen un intervalo de pH similar. Tampones ácidos, tales como ácido cítrico, ácido fosfórico y otros también se pueden utilizar junto con cualquiera de los tampones y/o soluciones alcalinas anteriores, tales como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de amonio, fosfato de sodio di y tribásico, fosfato de potasio di y tribásico, tripolifosfato de sodio, Tris, trietanolamina, polietilenimina, para obtener el pH deseado que es más de 0,5 unidades de pH por encima del pH al cual el péptido comienza a experimentar autoensamblaje y para proporcionar capacidad tampón. En una realización preferida, el tampón para proporcionar un pH específico que está más de 0,5 unidades de pH por encima del pH al cual el péptido comienza a experimentar autoensamblaje, tal como pH 7,5, es Tris.

[0065] En una realización, el producto para el cuidado dental de la invención no comprende partículas minerales.

[0066] Al pH alto del producto para el cuidado dental de la invención, antes de la aplicación, al menos el 70%, preferentemente al menos el 80%, más preferentemente al menos el 90% o al menos el 95% o al menos el 99% de los péptidos de autoensamblaje están presentes en un estado monomérico, no ensamblado.

[0067] Alternativamente, en los productos para el cuidado dental de la presente invención, en particular aquellos con un bajo contenido de agua, o productos esencialmente sólidos, tales como tofes, goma de mascar, juguete de mascar, caramelos, pastillas, goma gelatina, polvo dental o galletas, se puede lograr un contenido alto respectivo de péptidos monoméricos mediante la adición de péptido monomérico a una mezcla de los otros ingredientes, si es apropiado después de calentar los otros ingredientes para facilitar la mezcla. El bajo contenido de agua impide el autoensamblaje.

[0068] Tras la aplicación a la pluralidad de dientes en la cavidad bucal, al menos 40%, al menos 50%, al menos 60%, preferentemente, al menos 70% de los péptidos permanecen en una forma monomérica durante al menos 1 minuto. Preferentemente, dicho porcentaje de péptidos permanece en un estado monomérico durante al menos 2 minutos, al menos 3 minutos, al menos 5 minutos o al menos 10 minutos después de la aplicación.

[0069] De esta manera, la presente invención permite la administración eficaz y no dirigida de péptidos monoméricos presentes en un estado monomérico a una pluralidad de dientes, preferentemente a todos los dientes. Los péptidos forman ensamblajes y andamios para remineralización solo en su sitio de acción, donde los sitios de acción más preferidos son lesiones tales como lesiones de caries. Después de la distribución en la superficie de los dientes, una película polimérica o ensamblada de péptidos de autoensamblaje también se puede formar y conducir a una mineralización aumentada y, por consiguiente, dureza de la superficie dental.

[0070] En una realización particularmente preferida, el producto para el cuidado dental comprende el péptido P11-4 (SEQ ID NO: 1) o P11-4 modificado como se muestra en SEQ ID NO:2 y el producto tiene un pH de alrededor de 8,0 o más, donde, preferentemente, el pH se tampona a alrededor de 8,0 o más.

[0071] En una realización, al menos el 70% de los péptidos están presentes en un estado monomérico antes de la aplicación en la cavidad oral, donde al menos el 50%, preferentemente al menos el 60%, más preferentemente al menos el 70% de los péptidos están presentes en un estado monomérico durante al menos 1 minuto, preferentemente al menos 2 minutos, más preferentemente al menos 3 minutos o al menos 5 minutos, después de la aplicación en la cavidad oral.

[0072] En otra realización, al menos el 80% de los péptidos están presentes en un estado monomérico antes de la aplicación en la cavidad oral, donde al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70% o al menos el 80% de los péptidos están presentes en un estado monomérico durante al menos 1 minuto, preferentemente al menos 2 minutos, más preferentemente al menos 3 minutos o al menos 5 minutos, después de la aplicación en la cavidad oral.

[0073] En una realización particularmente preferida, al menos el 90% de los péptidos están presentes en un estado monomérico antes de la aplicación en la cavidad oral, donde al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80% o al menos el 90% de los péptidos están presentes en un estado monomérico durante al menos 1 minuto, preferentemente al menos 2 minutos, más preferentemente al menos 3 minutos, después de la aplicación en la cavidad oral.

[0074] Preferentemente, al menos el 90% del péptido de autoensamblaje está presente en estado monomérico en el producto para el cuidado dental antes de la aplicación.

[0075] Preferentemente al menos el 60% del péptido de autoensamblaje está presente en estado monomérico durante al menos 1 minuto, preferentemente al menos 2 minutos, más preferentemente al menos 3 minutos después de la aplicación en la cavidad oral.

[0076] El experto en la técnica será capaz de determinar si esencialmente todos los péptidos de autoensamblaje se encuentran en una forma monomérica mediante experimentación de rutina. Por ejemplo, el estado de ensamblaje de los péptidos en solución se puede determinar mediante resonancia magnética nuclear (RMN), tal como 1H-RMN, mediante análisis de dicroismo circular, mediante análisis de dispersión dinámica de luz (DDL), espectroscopia de difusión de ondas, procedimientos electroforéticos naturales, mediciones de viscosidad (reología), microbalanza de cristal de cuarzo con monitoreo de disipación (CCMD) y similares, preferentemente mediante procedimientos electroforéticos naturales.

[0077] Los productos de la presente invención son particularmente ventajosos, porque se evita la pérdida de cantidades significativas de péptidos debido al autoensamblaje de los péptidos fuera de los sitios de acción. Al mismo tiempo, los productos de la presente invención facilitan la distribución de la concentración necesaria de péptidos de autoensamblaje monoméricos en los dientes y, si corresponde, dentro de las lesiones para permitir el autoensamblaje.

[0078] Para evitar la degradación y/o precipitación de los péptidos en solución, el pH normalmente no se aumentará a un valor superior a 10,5. Se sabe comúnmente que las propiedades químicas de un péptido dependen de la secuencia de aminoácidos. Por ejemplo, la oxidación reversible de los residuos de cisteína y metionina puede acelerarse a un pH más alto, donde el tiol se desprotona más fácilmente y forma fácilmente enlaces disulfuro intracadena o intercadena. El experto en la técnica estará consciente de que cadenas laterales de aminoácidos se ven afectadas negativamente por un pH básico y será capaz de determinar el pH máximo que mantiene intacta la integridad del péptido de autoensamblaje mediante experimentación de rutina. Por ejemplo, este pH máximo puede predecirse sobre la base de las propiedades conocidas de cada aminoácido presente en el péptido. Alternativamente, se pueden emplear procedimientos bioquímicos, tales como procedimientos electroforéticos, para determinar la integridad del péptido.

[0079] El experto en la técnica sabe que la concentración peptídica puede influir en el ensamblaje de péptidos, es decir, una concentración peptídica particularmente alta puede desencadenar el ensamblaje antes de tiempo Además, una concentración peptídica excepcionalmente baja puede impedir el ensamblaje de los péptidos de la invención, es decir, incluso en condiciones de pH bajo como las presentes en las lesiones dentales y la cavidad bucal.

[0080] La concentración de péptidos en el producto para el cuidado dental de la invención puede ser de entre 0,1 y 50000 mg de péptido/kg de producto a granel, por ejemplo, 1-10000 mg de péptido/kg de producto a granel, 5 1000 mg de péptido/kg de producto a granel, preferentemente 20 a 500 mg de péptido/kg de producto a granel o 33 100 mg de péptido/kg de producto a granel. La concentración también puede ser de alrededor de 100-300 mg/kg de producto a granel o alrededor de 200 mg/kg. Los ejemplos a continuación muestran que dichas concentraciones permiten la penetración y concentración de péptidos de autoensamblaje en lesiones subsuperficiales.

[0081] En una realización, un péptido de autoensamblaje está encapsulado. En una realización de la invención, los péptidos de autoensamblaje se encapsulan en cápsulas blandas, por ejemplo, cápsulas de masticación, tal como se describe en el Ejemplo 2. En otra realización, el péptido de autoensamblaje está microencapsulado. Los péptidos de autoensamblaje utilizados en los productos de la invención pueden ser una combinación de dos péptidos de autoensamblaje complementarios, donde preferentemente los péptidos complementarios se separan en el producto, por ejemplo, mediante encapsulación de uno de los péptidos de autoensamblaje, o encapsulación separada de cada uno de los péptidos. Preferentemente, los péptidos complementarios entran en contacto entre sí después de la aplicación a los dientes y la descomposición de las cápsulas. Se proporcionan ejemplos para péptidos complementarios, por ejemplo, en el documento EP 2327428 A2. Por supuesto, la encapsulación también se puede aplicar si el producto comprende un solo tipo de péptidos de autoensamblaje, por ejemplo, que tienen SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 3, SEQ ID No : 2 o SEQ ID NO: 1, tal como se describió anteriormente. Preferentemente, el péptido encapsulado entra en contacto con los dientes después de la descomposición mecánica de las cápsulas, por ejemplo, masticando el producto para el cuidado dental tal como una goma de mascar, tofe, cápsula, galleta o juguete de mascar, o después del estrés mecánico debido a la aplicación a los dientes, por ejemplo, causado por cepillado o hilo dental.

[0082] Se proporcionan procedimientos adecuados de encapsulación, por ejemplo, en Nedovic y col., Procedia Food Science 1, 2011, 1806-1815. Preferentemente, los péptidos de autoensamblaje de la presente invención pueden encapsularse mediante secado por aerosol, procedimientos de extrusión, por ejemplo, para alginatos como material de cubierta, emulsificación o recubrimiento de lecho fluido en partículas de cal-ciumfosfato.

[0083] Cubiertas de encapsulación adecuadas para péptidos de autoensamblaje pueden comprender almidón y derivados, por ejemplo, amilosa, amilopectina, dextrinas, maltodextrinas, polidextrosa, jarabes, celulosa y derivados, exudados y extractos vegetales, por ejemplo, goma arábiga, goma tragacanto, goma karaya, goma mesquite, galactomananos, pectinas y polisacáridos solubles de soja, extractos marinos, por ejemplo, carragenanos y alginato, polisacáridos microbianos y animales, por ejemplo, dextrano, quitosano, xantano y gelán, proteínas, por ejemplo, proteínas de leche y suero de leche tales como caseínas, gelatina y gluten, materiales lipídicos adecuados para aplicaciones alimentarias, por ejemplo, ácidos grasos y alcoholes grasos, ceras tales como cera de abeja, cera de carnauba y cera de candelia, glicéridos y fosfolípidos, u otros materiales tales como PVP, parafina, goma laca, materiales inorgánicos.

[0084] La presente invención proporciona productos para el cuidado dental adecuados para cualquiera de los usos mencionados anteriormente. Los productos para el cuidado dental de la invención pueden ser esencialmente sólidos como se define en las reivindicaciones. En particular, el producto para el cuidado dental se puede seleccionar del grupo que comprende caramelo, pastilla, goma de gelatina, tofe, goma de mascar, galleta o juguete de mascar. Preferentemente, el producto para el cuidado dental es un tofe o una goma de mascar, más preferentemente un tofe.

[0085] Un producto para el cuidado dental de la invención que requiere o permite la masticación, tal como caramelo, pastilla, goma gelatina, tofe, goma de mascar, galleta o juguete de mascar, en particular, tales formas asociadas con una aplicación larga (por ejemplo, 5 minutos o más) tal como goma de mascar (para seres humanos) o juguete de mascar (para animales), se asocian con ventajas particulares, ya que su uso puede reducir al mismo tiempo la biopelícula o placa y, por lo tanto, facilitar el acceso a las superficies dentales y potenciales lesiones. Estos productos también aumentan la salivación. Los iones contenidos en la saliva, por ejemplo los iones de calcio, son atraídos y generan islas de nucleación para la formación de cristales de calciofosfato en lesiones dentales potenciales. Por ejemplo, un caramelo, pastilla, goma de gelatina, goma de mascar, galleta o cápsula de la invención también se pueden usar para prevenir y/o tratar una lesión dental y/o remineralizar las superficies dentales en un niño.

[0086] Juguetes de mascar o galletas pueden ser formas particularmente adecuadas del producto para el cuidado dental adecuado para uso animal, por ejemplo, para mascotas tales como gatos, perros o caballos, en particular, perros. Juguetes de mascar pueden recubrirse con los péptidos de autoensamblaje y/o pueden incorporarlos. Tales realizaciones proporcionan acceso a medios de tratamiento y prevención para lesiones dentales para animales a bajo costo y esfuerzo. Por lo tanto, los efectos secundarios de lesiones de caries tales como mal aliento de animales, en particular, perros, también pueden prevenirse mediante el producto para el cuidado dental de la invención.

[0087] Los productos para el cuidado dental utilizados típicamente para la higiene dental tales como pasta dental, gel dental, pasta profiláctica, polvo dental, enjuague bucal, aerosol bucal, solución, hilo dental recubierto, cepillo interdental recubierto o cepillo dental recubierto reducen la placa dental y también facilitan el acceso a la superficie dental. También pueden acceder a espacios entre los dientes y, por lo tanto, son especialmente adecuados para prevenir o tratar caries en dichas ubicaciones, en particular, hilo dental recubierto o cepillos interdentales recubiertos. Por lo tanto, dichos productos están especialmente destinados a prevenir y/o tratar lesiones dentales en lugares de difícil acceso y, por lo tanto, susceptibles a la infiltración de caries, por ejemplo, en espacios interdentales.

[0088] Los productos para el cuidado dental de la invención se aplican durante al menos 1 minuto. Preferentemente, los productos de la invención se aplican durante al menos 3 minutos, más preferentemente durante al menos 5 minutos, o lo más preferentemente durante al menos 10 minutos. Aplicación significa que una pluralidad de dientes, o, preferentemente, todos los dientes de un sujeto se ponen en contacto con el producto para el cuidado dental de la manera en que se utiliza típicamente este tipo respectivo de producto. Por ejemplo, una pasta de dientes se utiliza típicamente para cepillarse los dientes durante un tiempo de 1-5 minutos, en particular, alrededor de 2-3 minutos. El producto para el cuidado dental se puede usar después del cuidado dental normal, por ejemplo, por la noche después de cepillarse los dientes. Preferentemente, el producto para el cuidado dental se puede usar en lugar de un producto aplicado normalmente, por ejemplo, en lugar de una pasta dental normal o en lugar de hilo dental normal.

[0089] El producto para el cuidado dental de la invención es para aplicación al menos una vez a la semana. El producto puede ser para aplicación al menos dos veces a la semana, preferentemente, al menos diariamente, por ejemplo, una vez al día, al menos dos veces al día o al menos tres veces al día, por ejemplo, después de una comida. Preferentemente, el producto se administra durante al menos una semana, al menos dos semanas, al menos tres semanas, al menos cuatro semanas, al menos un mes, al menos 2 meses, al menos 6 meses o al menos un año. El producto se puede administrar durante el resto de la vida, por ejemplo, diariamente.

[0090] Los productos para el cuidado dental de la invención son eficaces en el tratamiento o prevención de una lesión dental, y/o en la remineralización de una superficie dental y/o en el aumento de la dureza, por ejemplo, microdureza, de una superficie dental en un sujeto después de la administración diaria durante al menos un mes, al menos dos semanas o al menos una semana. Por ejemplo, la microdureza, por ejemplo, la microdureza de los dientes desmineralizados, se puede aumentar en al menos 10%, preferentemente, en al menos 20%, al menos 30% o al menos 40% tras la administración diaria durante cuatro semanas. La microdureza, por ejemplo, dureza de Vickers o dureza de Knoop, preferentemente, dureza de Knoop, puede medirse, por ejemplo, mediante procedimientos descritos en Chuenarron y col. (2009, Materials Research 12(4), 473-476), donde la carga de sangrado preferentemente es 100 g.

[0091] El producto para el cuidado dental de la invención se puede aplicar manual o mecánicamente, por ejemplo, utilizando un cepillo de dientes eléctrico o un irrigador oral. Además, se puede mezclar con compuestos adicionales que ayudan en la administración de los péptidos monoméricos al sitio de tratamiento, es decir, la lesión dental o la superficie dental.

[0092] El producto para el cuidado dental comprende típicamente uno o más ingredientes típicos del producto para el cuidado dental respectivo, por ejemplo, bases farmacéuticamente aceptables típicas que tienen el pH requerido, donde los péptidos de autoensamblaje pueden incorporarse.

[0093] Las bases farmacéuticamente aceptables de los productos para el cuidado dental de la invención pueden comprender agentes abrasivos, por ejemplo, carbonatos, fosfatos, en particular, fosfato dicálcico, silicatos, acrilatos, alúmina y/o agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato. Estos agentes permiten una eliminación de la película, permitiendo así una mejor penetración del péptido de autoensamblaje.

[0094] Típicamente, el producto para el cuidado dental por sí solo es capaz de extraer suficiente biopelícula o película de los dientes. Es posible que, adicionalmente, los dientes se puedan limpiar antes del uso del producto para el cuidado dental de la invención, por ejemplo, mediante cepillado dental (por ejemplo, con un cepillo de dientes manual o un cepillo de dientes eléctrico, preferentemente, con un cepillo de dientes sónico), hilo dental, uso de un irrigador oral y/o enjuague con una solución de sal y detergente, que puede, opcionalmente, tener un pH al cual al menos el 50% del péptido de autoensamblaje utilizado en el producto es monomérico. Como los inventores podrían mostrar que el cepillado dental con un cepillo de dientes sónico mejora sorprendentemente la absorción del péptido de autoensamblaje en lesiones subsuperficiales, preferentemente, dicha limpieza comprende sonificación y, en particular, puede llevarse a cabo mediante cepillado dental con un cepillo de dientes sónico.

[0095] Un cepillo de dientes sónico genera velocidades del cabezal del cepillo en el intervalo sónico o superior, es decir, vibra al menos a una velocidad que se encuentra dentro del intervalo de frecuencias que los seres humanos pueden escuchar, es decir, de alrededor de 70 a 20.000 hz, preferentemente, de alrededor de 100 a alrededor de 1.000 Hz. Los cepillos de dientes sónicos típicos vibran a una frecuencia de aproximadamente 200 a aproximadamente 400 Hz. El término "cepillo de dientes sónico" en el contexto de la solicitud, si no se especifica lo contrario, incluye un cepillo de dientes ultrasónico. Los cepillos de dientes ultrasónicos vibran a una frecuencia de más de 20.000 Hz, preferentemente, aproximadamente 1-2 MHz o aproximadamente 1,6 MHz, lo que se traduce en 192.000.000 de movimientos por minuto. Por ejemplo, un cepillo de dientes Sonicare® puede llevar a cabo 31.000 pinceladas por minuto, lo que corresponde a aproximadamente 258 hz. A modo de comparación, los cepillos de dientes eléctricos no sónicos tienen un mecanismo de cepillado que genera en el orden de 2.500 a 7.500 pinceladas por minuto. La intensa velocidad vibratoria de las cerdas de un cepillo sónico agita los fluidos que rodean los dientes del usuario hasta el punto de que pueden alterar la placa dental incluso más allá de donde las cerdas del cepillo realmente tocan (https://www.animated- teeth.com/electric_toothbrushes/t3_sonic_toothbrushes.htm). Cepillos de dientes sónicos ejemplares están disponibles en Philips (por ejemplo, cepillos de dientes Sonicare®) u Oral B.

[0096] Para mejorar el sabor y la aceptación de los productos, los productos para el cuidado dental de la invención pueden comprender azúcar y/o sustitutos del azúcar, que, preferentemente, no promueven caries dentales, por ejemplo, polioles o alcoholes de azúcar tales como sorbitol, manitol, maltitol, lactitol, isomalta, xilitol y/o eritritol, o D-tagatosa y/o trehalosa. Preferentemente, los productos son productos sin azúcar, es decir, no comprenden sacarosa ni glucosa en cantidades significativas, o en absoluto. Se pueden usar productos libres de azúcar basados en modificaciones adecuadas de preparaciones descritas, por ejemplo, por Zumbe y col., 2001, British Journal of Nutrition 85, Suppl. 1, S31-S45, que comprenden además los péptidos de autoensamblaje y con un pH controlado para asegurar el estado monomérico de los péptidos, tal como se describe en esta invención, por ejemplo, mediante la elección de tampones y pH adecuados.

[0097] Es particularmente ventajoso si el producto para el cuidado dental, además de los péptidos de autoensamblaje, comprende xilitol (D-xilita), que ha demostrado ser anticariogénico y útil para la remineralización de los dientes. También reduce la biopelícula y la placa y, por lo tanto, facilita el acceso de los péptidos de autoensamblaje de la invención a la superficie dental y potenciales lesiones. Por supuesto, el xilitol no se utiliza para su aplicación en perros, vacas, cabras, conejos u otros animales para los que la sustancia es tóxica. El xilitol se puede utilizar en productos de la invención para su uso en sujetos humanos o, por ejemplo, gatos, preferentemente, sujetos humanos.

[0098] Pastas dentales según la invención se pueden preparar, por ejemplo, según el documento WO 2004/069170 A1. Bases farmacéuticas típicas para, por ejemplo, pastas dentales de la invención, pueden comprender adicionalmente, por ejemplo, agentes abrasivos tales como carbonatos, fosfatos, silicatos, acrilatos, alúmina, agentes de suspensión tales como glicerina, polietilenglicoles (PEG), sorbitol, xilitol, agentes aglutinantes tales como celulosa y derivados de la misma, carragenano, parafina, xilosa, detergentes tales como aceite de ricino hidrogenado, laurilsulfato de sodio, aroma tal como caramelo, vainillina, mentol, agentes conservantes tales como etanol, benzoato de sodio, agentes colorantes tales como rojo disolvente, azul ácido 3, agentes activos tales como fluoruros, preferentemente, en forma de aminas terciarias, tales como fluoruro de amina o fluoruro orgánico tal como monofluorofosfato de sodio, nitrato de potasio y/u oxalato. Las pastas dentales de la invención pueden comprender péptidos de autoensamblaje libres (es decir, no encapsulados). Pastas dentales de la invención pueden comprender adicional o alternativamente al menos un péptido de autoensamblaje en forma encapsulada, que puede entrar en contacto con los dientes después de un esfuerzo mecánico, por ejemplo, debido al cepillado.

[0099] Bases farmacéuticamente aceptables para, por ejemplo, geles dentales de la invención, pueden comprender, por ejemplo, agentes de suspensión tales como glicerina, polietilenglicoles (PEG), sorbitol, xilitol, agentes aglutinantes tales como celulosa y derivados de la misma, carragenano, parafina, xilosa, detergentes tales como aceite de ricino hidrogenado, laurilsulfato de sodio, aroma tal como caramelo, vainillina, mentol, agente conservante tal como etanol, benzoato de sodio, agentes colorantes tales como rojo solvente, azul ácido 3, agentes activos tales como fluoruros, preferentemente, en forma de aminas terciarias, tales como fluoruro de amina o fluoruro orgánico tal como monofluorofosfato de sodio, nitrato de potasio y/u oxalato. Geles dentales de la invención pueden comprender péptidos de autoensamblaje libres. Opcionalmente, los geles dentales de la invención pueden comprender al menos un péptido de autoensamblaje en forma encapsulada, que puede entrar en contacto con los dientes después de un esfuerzo mecánico, por ejemplo, debido al cepillado.

[0100] Bases farmacéuticamente aceptables para, por ejemplo, polvos dentales de la invención, pueden comprender, por ejemplo, bicarbonato de sodio para eliminar manchas, polvo de calcio como abrasivo, aroma tal como caramelo, vainillina, mentol, agentes conservantes tales como etanol, benzoato de sodio, agentes colorantes tales como rojo solvente, azul ácido 3, agentes activos tales como fluoruros, preferentemente, en forma de aminas terciarias, tal como fluoruro de amina, o fluoruro orgánico tal como monofluorofosfato de sodio, nitrato de potasio y/u oxalato.

[0101] Bases farmacéuticamente aceptables para, por ejemplo, una goma de gelatina de la invención, pueden comprender, por ejemplo, gelatina y/o pectina, agua, un azúcar o un sustituto del azúcar, por ejemplo, en forma de un jarabe, ácido tartárico y/o ácido cítrico. Gomas de gelatina de la invención pueden comprender péptidos de autoensamblaje libres, donde, opcionalmente, al menos un péptido de autoensamblaje se incorpora en forma encapsulada. Gomas de gelatina de la invención también se pueden recubrir con los péptidos de autoensamblaje. Gomas de gelatina sin azúcar ejemplares y su preparación se enseñan en Zumbe y col., 2001, British Journal of Nutrition 85, Suppl. 1, S31-S45, en particular, en la Tabla 13 o Tabla 14, donde se agregan péptidos de autoensamblaje y el pH se adapta para asegurar su estado monomérico.

[0102] Gomas de mascar de la invención pueden ser gomas de mascar duras o blandas. Se pueden preparar gomas de mascar blandas que contienen péptidos de autoensamblaje, por ejemplo, según Shivang A Chaudhary y col., Int J Pharm Investig. 2012 Jul-Sep; 2(3); 123-133; Abolfazl Aslani y col. Adv Biomed Res. 2013, 2:72; Zumbe y col., 2001, British Journal of Nutrition 85, Suppl. 1, S31-S45 (en particular, la Fig. 8); WO2014/152952A1; WO2006/127559A2 o WO2007/143989A1. Gomas de mascar duras pueden comprender, por ejemplo, base de goma de mascar, xilita, péptido de autoensamblaje, por ejemplo, PI 1-4 (por ejemplo, alrededor de 100 mg/goma de mascar), bicarbonato de sodio, ácido tartárico, aroma, por ejemplo, aroma de limón.

[0103] Tofes comprenden una emulsión de grasa en un sistema acuoso. Un tofe peptídico de la invención típicamente comprende, además del péptido de autoensamblaje, un azúcar o sustituto de azúcar, por ejemplo, maltitol, sorbitol, xilitol, lactitol y/o isomalta, opcionalmente, al menos parcialmente en forma de un jarabe tal como jarabe de maltitol, un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de coco, aceite de soja, aceite de girasol, aceite de colza, aceite de oliva y/o aceite de maní, un agente gelificante tal como gelatina y/o pectina y, opcionalmente, vitaminas, antioxidantes, por ejemplo, ácido cítrico y/o ácido ascórbico, saborizantes, colorantes, edulcorantes, por ejemplo, acesulfamo K, aspartamo y/o sucralosa. Tofes sin azúcar ejemplares y su preparación se enseñan en Zumbe y col., 2001, British Journal of Nutrition 85, Suppl. 1, S31-S45, en particular, en la Tabla 12, donde se agregan péptidos de autoensamblaje y el pH se adapta para asegurar su estado monomérico.

[0104] Una pastilla peptídica de la invención puede comprender, además del péptido de autoensamblaje, un azúcar o sustituto del azúcar, por ejemplo, maltitol, sorbitol, xilitol, lactitol y/o isomalta, y opcionalmente, ingredientes tales como un antioxidante, por ejemplo, ácido cítrico y/o ácido ascórbico, saborizante, colorantes y edulcorantes, por ejemplo, aspartamo, acesulfamo K y sucralosa.

[0105] En una realización, los productos sólidos de la invención tales como tofes, gomas de mascar o pastillas de la invención comprenden una cubierta externa que contribuye a la eliminación de biopelícula y/o película, por ejemplo, que comprende un abrasivo tal como fosfato dicálcico y/o un agente de eliminación de biopelícula tal como carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato. Un núcleo interno puede comprender los péptidos de autoensamblaje disueltos en un entorno básico tamponado, por ejemplo, pH 7,6-9 o alrededor de pH 8 (cf. Fig. 1A, 2C, 3B). Opcionalmente, un núcleo interno puede comprender los péptidos de autoensamblaje en forma encapsulada en un entorno básico tamponado (cf. Fig. 1B, 2D, 3C).

[0106] Gomas de gelatina de la invención pueden comprender agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y/o agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, y el péptido de autoensamblaje en un entorno básico, por ejemplo, pH 7,6-9 o alrededor de pH 8 (cf. Fig. 4A y B).

[0107] Cápsulas blandas de la invención pueden comprender bases lipofílicas, por ejemplo, triglicéridos de cadena media, ceras tales como cera de abeja, emulsionantes tales como lecitina de soja, agentes gelificantes tales como dióxido de silicio (cf. Ejemplo 2 y Fig. 5).

[0108] Los siguientes ejemplos pretenden ilustrar, pero no limitar, la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[0109]

La Figura 1 muestra pastillas ejemplares de la invención. La Figura 1A muestra una pastilla que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico se disuelve en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8 (B). La Figura 1B muestra una pastilla que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico está presente en forma encapsulada en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8 (B).

La Figura 2 ilustra tofes ejemplares de la invención. La Figura 2A muestra un tofe que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio y SDS, mientras que el péptido de autoensamblaje monomérico se incorpora en el tofe tamponado básico. La Figura 2B muestra un tofe que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio y s Ds , mientras que el péptido monomérico de autoensamblaje se incorpora en forma encapsulada en el tofe tamponado básico. La Figura 2C muestra un tofe que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico se disuelve en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8, (B). La Figura 2D muestra un tofe que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico está presente en forma encapsulada en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8 (B).

La Figura 3 muestra gomas de mascar de la invención. La Figura 3A ilustra una goma de mascar que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde la goma de mascar contiene péptido de autoensamblaje monomérico en un entorno básico, por ejemplo, a pH 8. La Figura 3B muestra una goma de mascar que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico se disuelve en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8, (B). La Figura 3C muestra una goma de mascar que consiste en una cubierta externa (A) que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde el péptido de autoensamblaje monomérico está presente en forma encapsulada en un entorno básico tamponado, por ejemplo, a pH 8 (B).

La Figura 4 muestra gomas de gelatina de la invención. La Fig.4A ilustra una goma de gelatina que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde la goma de gelatina contiene péptido de autoensamblaje monomérico en un entorno básico, por ejemplo, a pH 8. La Figura 4B ilustra una goma de gelatina que comprende agentes abrasivos, por ejemplo, fosfato dicálcico y agentes de eliminación de biopelícula, por ejemplo, carbonato de sodio, SDS y/o tampón de fosfato, donde la goma de gelatina contiene péptido de autoensamblaje monomérico en forma encapsulada en un entorno básico, por ejemplo, a pH 8.

La Fig. 5 A muestra cápsulas blandas que comprenden péptidos de autoensamblaje. Las cápsulas se produjeron como se indica en el Ejemplo 2. La Fig.5 B muestra tofes ejemplares de la invención preparados según el Ejemplo 1 que contienen 230 mg/kg de P11-4, que se utilizaron en el Ejemplo 5.

La Fig. 6 muestra la cinética de autoensamblaje de PII-4, evaluada mediante mediciones del módulo elástico G'. Se preparó P11-4 a 15 mg/ml con diferentes composiciones de tampón (ver más adelante) medidas a 0,1% de tensión, 37°C y una frecuencia de 1 rad/segundo. El autoensamblaje de monómeros peptídicos a polímeros toma más de 5 min independientemente de la fuerza iónica utilizada a pH neutro.

Cuadrados (línea superior de símbolos) - NaCl: Tris (0,055 M) NaCl, fuerza iónica final 142 mM; Saliva artificial (segunda línea de símbolos desde arriba): Tris, Ca(NO3)2, KH2PO4 (relación 0,77:0,14: 0,08), fuerza iónica 142 mM;

Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM): NaCl, NaHCO3, Kcl, CaCl2, MgSO4 (relación 0,66:0,4:0,05: 0,02:0,007), fuerza iónica 165 mM;

MgSO4: 0,055 M Tris 0,192 M MgSO40,14 M fuerza iónica

La Fig. 7 muestra estudios cinéticos de autoensamblaje con microbalanza de cristal de cuarzo con monitoreo por disipación (QCM-D) durante 4 horas. El péptido P11-4 se colocó en capas en la superficie del sensor con acoplamiento de amina a 1 mg/ml en PBS (PBS - Phosphate Buffered Saline - Solución Salina Tamponada con Fosfato) a pH 8,5. Después de 1 hora y 1 hora y 25 minutos, el sensor se lavó con PBS pH 8,5. Después de 1 hora y 38 minutos, se inyectaron 10 mg/ml de péptido P11-4 en PBS pH 8,5. Después de 2 horas, se inyectó HCl 0,1 M para inducir el autoensamblaje. Se puede observar que el autoensamblaje esencialmente completo se ha producido aproximadamente 30 minutos después de la inyección de HCl 0,1 M. Se muestran la frecuencia de resonancia F (escala izquierda, Hz) y el factor de disipación de energía D (escala derecha), triángulo = frecuencia, cuadrado = disipación.

La Fig.8 muestra la transferencia del péptido de la goma de mascar al diente. Se incubó una goma de mascar de la invención que comprende P11-4 con un diente como se describe en detalle en el Ejemplo 6. A muestra un análisis MALDI-TOV del péptido P11-4 en agua como estándar, B muestra la presencia de dicho péptido en el polvo de perforación del diente después de 2 h de incubación y C muestra la presencia de dicho péptido en el sobrenadante después de 2 h de incubación.

La Fig. 9A muestra la generación de lesiones artificiales en molares humanos extraídos. Las Figs. 9B, C, D y E muestran la penetración del péptido P11-4 marcado con fluorescencia en lesiones artificiales después de la incubación con el péptido a pH 8,4-8,5. Las Figs. 9F y G muestran el péptido P11-4 marcado con fluorescencia después de la incubación con el péptido a pH 6,3-6,8. Las imágenes confocales muestran la detección del péptido etiquetado con un aumento de 4x antes de la incubación (a), después de 1 min de incubación (b), 2 min de incubación (c), 5 min de incubación (d) y después de 4 días de lavado en tampón de remineralización (e). Las Figs.

9C, D, E y G muestran el péptido P11-4 marcado con fluorescencia, donde la incubación con péptido fue después de la preincubación del diente con saliva humana. En las Figs.9D y E, la película formada por saliva se retiró antes de la incubación con el P11-4 mediante NaClO (Fig.9D) y sonicación (Fig. 9E). Los experimentos se describen en detalles en el Ejemplo 7.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Preparación de un tofe peptídico

[0110] Los tofes de la invención se compusieron de la siguiente manera:

Ingrediente % (p/p)

Jarabe de maltitol 49,00

Isomalta 31,00

Aceite de coco 5,50

Gelatina 3,00

Mezcla de vitaminas 1,25

Ácido cítrico 0,90

(continuación)

Ingrediente % (P/P)

Sabor, por ejemplo, sabor de

frambuesa 0,85

Péptido P11-4 por ejemplo, 0,03

a 0,25

Colorante (por ejemplo,

antocianos) 0,02

Acesulfamo K 0,01

Sucralosa 0,004

Agua hasta 100

[0111] Todos los ingredientes excepto el péptido P11-4 se calentaron. Se añadió péptido monomérico en forma de polvo y se mezclaron todos los ingredientes. Se formaron tofes. Se emplearon tofes para la prueba de masticación en el Ejemplo 5.

[0112] Debido al bajo contenido de agua, el péptido permanece en forma monomérica. Esto se aplica incluso aunque el péptido seco está compuesto con ácido cítrico. El montaje solo puede ocurrir después del contacto con la saliva. Se emplearon tofes para el Ejemplo 5.

Ejemplo 2: Encapsulación de péptidos

[0113] Los péptidos de autoensamblaje se encapsularon en cápsulas de gelatina blanda de la siguiente manera.

[0114] Se preparó y encapsuló material de relleno que comprende los péptidos de autoensamblaje, aceite MCT, lecitina de soja, cera de abejas y dióxido de silicio en las cantidades indicadas a continuación. La solución para las cubiertas de las cápsulas comprendía, por ejemplo, gelatina, glicerina, sorbitol y, opcionalmente, colorantes. Las cápsulas se secaron posteriormente y pueden envasarse. Las cápsulas resultantes se muestran en la Fig. 5 A.

Ingrediente mg/cápsula

Péptido P11-4 1

Aceite MCT 829

Lecitina de soja 35

Cera de abeja 120

Dióxido de silicio 15

Ejemplo 3: Preparación de goma de mascar peptídica

[0115] Se pueden preparar gomas de mascar ejemplares de la invención, por ejemplo, según Zumbe y col., 2001, British Journal of Nutrition 85, Suppl. 1, S31-S45:, Fig. 8. Se añade péptido en forma monomérica después de mezclar todos los demás ingredientes.

Ingrediente % p/p

Péptido 0,01

Xilitol molido 20

Jarabe de sorbitol 15,2

Glicerina 2

Sabor 1,8

Bicarbonato de sodio 1

Aspartamo 0,05

Sorbitol molido 35,0

Base de goma hasta 100

Ejemplo 4: Preparación de pasta dental

[0116] Se puede preparar una pasta dental según el documento WO2004/069170.

Ingrediente % (P/P)

Sorbitol (70%) 43,00

CaCOa 14,50

Glicerina 9,60

Lauril sulfato sódico 0,34

Monofluorofosfato de Na 0,75

Goma de xantano 0,36

Goma Cassia 0,04

Polímero Carbopol 980 NF 0,4

Sacarina de Na 0,2

Péptido 0,05

Tampón 0,1

Bicarbonato de sodio 1

Agua desionizada hasta 100

pH 8,2

Ejemplo 5: Prueba de masticación

[0117] A grupos de cuatro sujetos se les dio un tofe que contenía 30 mg/kg (grupo A) y 230 mg/kg (grupo B) de péptido monomérico de autoensamblaje P11-4 y grupo C sin péptido en el mismo (Placebo). Cada sujeto masticó el tofe durante 5 min e informó con respecto a la experiencia sensorial sin conocimiento del contenido del péptido.

[0118] El tofe tenía una textura agradable y sabor agradable. Todos los miembros de los grupos A y B informaron una sensación suave y limpia en la superficie de los dientes mientras y después de masticar el tofe, mientras que el grupo C no informó tal resultado. Dentro de los dos péptidos que contienen los grupos A y B, el grupo B mostró un inicio más rápido de la sensación suave.

Ejemplo 6: Transferencia de péptido de la goma de mascar a a los dientes

[0119] Una goma de mascar de la invención que comprende P11-4, preparada según el Ejemplo 3, se cortó en pedazos de 4-5 mm de tamaño de partícula y a continuación se masticó con una dentadura ya sea en agua o tampón de remineralización ((Ca(NO3) 2 mM, KHPO41,2 mM y Tris/HCl 60 mM, pH ajustado a 7,4 con KOH 1 M) durante 5 minutos. A continuación se utilizó la "saliva" resultante con péptido extraído para incubar un diente humano en la misma a 37°C durante aproximadamente 2 h en un agitador.

[0120] Después de la incubación, el diente se secó al aire y la capa superior del esmalte se extrajo mecánicamente con un taladro de alta velocidad. El polvo resultante se suspendió en 200 ml de agua destilada adaptada a pH 8 con amoníaco, seguido de purificación con Puntas de Pipeta Cleanup C18. Las puntas se enjuagaron dos veces con 10 ml con 50% en peso de acetonitrilo en H²O, a continuación 2 veces con 10ml de acetato de trietilamonio 0,1M en H²O 1% de NH⁴OH 1M y a continuación 3 veces 0,1% de TFA (TFA - Trifluoroacetic Acid -Ácido Trifluoro Acético) en H²O. La muestra se eluyó con 10ml de acetonitrilo al 50% en H²O.

[0121] El soporte de muestra MTP384 se preparó con matriz de 1,5 ml (20mg/ml de ácido 3,5-dimetoxi-4-hidroxicinámico en H²O/acetonitrilo (1:1)+0,1% TFA), cargado con 1,5 ml de solución de muestra en la matriz. En un punto separado, se colocaron 2 ml del estándar de calibración. A continuación se adquirieron los espectros de masas sobre una relación masa/carga (m/z) de 520-3200 con un láser de N², A= 337nm , potencia del láser 22%, disparos de láser sobre 5 lados en cada muestra y se calcularon con software FlexControl (Versión 2.4) y FlexAnalysis (Versión 2.4).

[0122] El resultado en la Fig. 8 muestra que tanto el polvo dental como el sobrenadante comprenden el péptido de autoensamblaje P11-4, es decir, el experimento demuestra una transferencia de péptido al diente.

Ejemplo 7: Penetración del péptido monomérico de autoensamblaje en lesiones subsuperficiales

a) Creación de lesiones cariosas artificiales

[0123] La creación de lesiones artificiales en dientes molares humanos extraídos se realizó como se describe en Lo y col. 2010 (J Dent. 38(4):352-359). Para definir la posición del área subsuperficial desmineralizada (es decir, lesión cariosa artificial o mancha blanca), el diente se cubrió con esmalte de uñas incoloro, dejando una ventana de aproximadamente 4 X 4 mm. El diente se colocó en tampón de desmineralización (CaCl22,2 mM, NaH2PO42,2 mM, ácido acético 50 mM; pH ajustado con KOH 1 M a 4,4) durante 3 días a 37°C. Para asegurar que todos los poros estuviesen abiertos, como en una lesión típica de caries activa, las lesiones subsuperficiales resultantes se trataron con 10 mL de NaClO al 2% (incubación durante 1 min), se enjuagaron y se secaron al aire a temperatura ambiente.

[0124] Muestras tratadas con placebo se sometieron a un pretratamiento idéntico.

Lesiones artificiales típicas se muestran en la Fig.9A.

b) Tratamiento

[0125]

- Una solución de 200 ppm (es decir, 200 mg/ml) de P11-4 (SEQ ID NO: 2), enriquecida con 10 ppm de ATTO647-P11-4 (P11-4 etiquetado con fluorescencia (SEQ ID NO: 6): Ac-QQRFEWEFEQQSGSGC-(ATTO647)-NH²), es decir, 1:20, en tampón TRIS 25 mM se preparó a pH diferente, en particular, a 8,4 u 8,5 o 6,3, 6,5 o 6,8)

- Como se especifica en la tabla a continuación, el diente se pretrató opcionalmente, por ejemplo, mediante incubación en saliva humana durante un día (alrededor de 24 horas), opcionalmente seguido de sonicación de 5 min (258 hz con un cepillo de dientes sónico, Sonicare Diamond Clean ® (Philips)) o por inmersión en NaClO al 2% durante 1 min.

- Los dientes se sumergieron en la solución P11-4 durante un período de tiempo definido, 1, 2 o 5 min, y a continuación se retiraron y lavaron en agua durante 10 min o en tampón de remineralización (Ca(NO3) 2 mM, KHPO41,2 mM y Tris/HCl 60 mM, pH ajustado a 7,4 con KOH 1 M) durante 4 días y/o 6 días.

- Se llevó a cabo una evaluación confocal después de 1, 2 o 5 min de incubación mientras los dientes estaban en solución P11-4 y, opcionalmente, después del lavado en agua o en tampón de remineralización después de 10 min o 4 o 6 días.

c) Microscopia confocal

[0126] Las muestras se colocaron en una p-slide I (ibidi, Martinsried) en agua destilada y se analizaron mediante un microscopio láser confocal (Olympus IX81). La pila registrada de cuatro imágenes bidimensionales proyectó cada una el volumen de la lesión de 51,4 pm de espesor, dando una profundidad total de evaluación de 205 pm (objetivo: UPLSAPO 203/NA 0,75; láser de gas helio-neón; excitación: 633 nm y emisión: 668 nm). Las imágenes fueron analizadas por el software Olympus (FluoView FV1000).

d) Conclusión

[0127] Mientras que el análisis visual no permite conclusiones cuantitativas exactas, las tendencias detectadas en experimentos repetidos permiten comparaciones entre diferentes condiciones de incubación y pretratamiento.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Producto para el cuidado dental que es esencialmente sólido, seleccionado del grupo que consiste en caramelo, pastilla, goma de gelatina, tofe, goma de mascar, juguete de mascar o galleta, que comprende

(i) péptidos de autoensamblaje que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 4 y que tienen al menos 80% de identidad de secuencia con una de las secuencias de SEQ ID NO: 1 o 2, que son capaces de experimentar autoensamblaje a un pH inferior a 7,5, en el que los péptidos de autoensamblaje están presentes en el producto para el cuidado dental en forma monomérica, y

(ii) una base farmacéuticamente aceptable,

para su uso en el tratamiento o la prevención de una lesión dental y/o en la remineralización de una superficie dental, en el que el producto para el cuidado dental se aplica a una pluralidad de dientes de un sujeto independiente del diagnóstico de caries,

y en el que, después de la aplicación, los péptidos de autoensamblaje están presentes en estado monomérico durante al menos 1 minuto.

2. Producto para el cuidado dental para su uso, según la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento de una lesión dental, preferentemente una lesión de caries.

3. Producto para el cuidado dental para su uso, según la reivindicación 1, para su uso en la remineralización de una superficie dental.

4. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que al menos el 70% del péptido de autoensamblaje está presente en un estado monomérico en el producto para el cuidado dental antes de la aplicación, y en el que, preferentemente, al menos el 50% de los péptidos de autoensamblaje están presentes en un estado monomérico durante al menos 1 minuto después de la aplicación en la cavidad bucal.

5. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el pH del producto para el cuidado dental es 7,5 - 9,0, preferentemente, 7,8 - 8,5, más preferentemente, 8 - 8,2.

6. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el pH del producto para el cuidado dental es más de 0,5 unidades de pH por encima del pH al que los péptidos comienzan a experimentar autoensamblaje.

7. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la concentración de péptidos de autoensamblaje es de 0,1 - 1000 mg/kg.

8. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dichos péptidos de autoensamblaje comprenden una secuencia que tiene una de las secuencias de SEQ ID NO: 1 o 2.

9. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto para el cuidado dental es un tofe o una goma de mascar, más preferentemente, un tofe.

10. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el péptido de autoensamblaje está encapsulado.

11. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto se aplica durante al menos 5 minutos.

12. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto es para aplicación al menos una vez a la semana.

13. Producto para el cuidado dental para su uso, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto es eficaz en el tratamiento o prevención de una lesión dental, y/o en la remineralización de una superficie dental y/o en el aumento de la dureza de una superficie dental en un sujeto después de la administración diaria durante una semana.