JP2022058780A - 核酸を抽出する装置および方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)溶解された生物学的試料に、水溶液の極性を低下させる少なくとも1種の物質を加えるか、または核酸を固相に結合させるための手段を加えるステップと、
b)このステップa)における混合物を、請求項1から5までのいずれか1項に記載の粗さのある材料または構造化された材料が中に存在するピペットチップで吸い上げて、出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、この場合に液体を該材料の傍らを通って移動させ、その粗さのある材料または構造化された材料に核酸が沈着し、それとともに固相へと結合されるステップと、
c)該ピペットチップを試料から取り出すステップと、
d)ピペットチップを洗浄バッファー溶液中に浸漬させ、出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、この場合に液体を該材料の傍らを通って移動させるステップ、
e)ピペットチップを乾燥させて、洗浄バッファーの残留アルコールを除去するステップと、
f)溶出バッファーを用いて、該溶出バッファーの出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、この場合に溶出バッファーを該材料の傍らを通って移動させることによって、核酸を引き離すステップと、
を特徴としている。
実施例1: 改変されたピペットチップを使用した本発明による方法によるNIH 3T3細胞からの核酸の手動式の抽出
1mlのピペットチップ(Sarstedt社)中に、ポリエチレン製のディスクを、終端から三分の一のところに垂直に固定した。5×105個のNIH 3T3細胞を使用した。核酸の単離のために使用される抽出用化学薬品は、この場合に、部分的には、市販の抽出キットinnuPREP Blood DNA Kit/IPC16X(Analytik Jena AG社)から採用された。溶解バッファー(溶解溶液CBV)およびプロテイナーゼKによって、細胞を60℃で15分間にわたって溶解させた。溶解は、2.0mlの反応容器中で行った。溶解後に、そのバッチに400μlのイソプロパノールを加えた。引き続き、改変されたピペットチップを使用し、ピペットを用いることによって、出し入れするピペッティング操作をそのバッチに20回行った。その後に、3個のさらなる2mlの反応容器を、アルコール性洗浄バッファー(洗浄溶液LS、80%エタノール、80%エタノール)で充填した。次いでそのピペットチップを、逐次その都度の洗浄バッファー中に浸漬させて、出し入れするピペッティング操作をそれぞれ5回行った。最後の洗浄ステップの後に、チップを乾燥させ、それにより残留エタノールを除去した。結合された核酸の溶出は、100μlの溶出バッファーを用いて行った。これを再び、2mlの反応容器中に入れた。出し入れするピペッティング操作を30回行った。ピペットチップを取り出した後に、単離された核酸は反応容器中に存在する。該方法は、極めて簡単かつ迅速である。
自動化された抽出は、自動抽出装置InnuPure C16(Analytik Jena AG社)を用いて実施した。この自動抽出装置は、磁性粒子による核酸抽出を基礎としている。本発明による方法に従う核酸抽出の実施のために、該自動抽出装置のために利用されるピペットチップを、本発明による手段に相応するように改変させた。ピペットチップ中に、その下から三分の一のところに垂直に、粗面化されたポリマーから製造されたディスクを収容したが、該ディスクは、その内径を閉鎖しないため、ピペットチップのピペット機能は保たれたままである。この場合に、種々の材料でできた粗面化されたディスクを使用した。核酸抽出のために、それぞれ5×105個のNIH 3T3細胞を使用した。核酸の単離のために使用される抽出用化学薬品は、この場合に、部分的には、市販の抽出キットinnuPREP Blood DNA Kit/IPC16X(Analytik Jena AG社)から採用された。溶解バッファー(溶解溶液CBV)およびプロテイナーゼKによって、細胞を60℃で15分間にわたって2.0mlの反応容器中で溶解させた。
自動化された抽出は、自動抽出装置InnuPure C16(Analytik Jena AG社)を用いて実施した。この自動抽出装置は、磁性粒子による核酸抽出を基礎としている。本発明による方法に従う核酸抽出の実施のために、該自動抽出装置のために利用されるピペットチップを、本発明による手段に相応するように改変させた。3種の異なるチップを使用した。
タイプ2: 亜鉛メッキされた木ネジ(これらは、前記記載によれば構造化された表面を表す)が互いに向き合って差し込まれたピペットチップ
タイプ3: 表面が事前に粗面化された4つのプラスチック粒状物を有するピペットチップ。これらのポリエチレン製のプラスチック粒状物は、前記記載によれば粗さのある表面を有する材料を表す。ポリプロピレンを有する強磁性材料。
Claims (11)
- 液体が導通される中空体を含む核酸を抽出する装置であって、前記中空体内に粗さのある表面または構造化された表面を有する材料が、その周りを液体が流れることができるように配置されていることを特徴とする装置。
- 前記中空体は、ピペットチップであり、かつ前記材料は、ピペットチップから出て行かない大きさを有することを特徴とする、請求項1に記載の装置。
- 収容された前記材料は、粗さのあるポリマー材料もしくは構造化されたポリマー材料、粗さのある表面を有する複合材料、または3Dプリントによって作製された材料であることを特徴とする、請求項1または2に記載の装置。
- 粗さのある表面または構造化された表面を有する収容された前記材料は、平滑でない金属表面、プラスチック表面またはゴム表面を有する材料であることを特徴とする、請求項1から3までのいずれか1項に記載の装置。
- 収容された前記材料は、ネジ、金属スポンジまたは粒状物、穿孔材料または二次元もしくは三次元の網目構造、あるいは粗さのある磁性粒子であることを特徴とする、請求項1から4までのいずれか1項に記載の装置。
- 前記中空体は、内壁が粗面化されているか、または収容された前記材料が内壁に固定化されているピペットチップであることを特徴とする、請求項1から5までのいずれか1項に記載の装置。
- 請求項1から6までのいずれか1項に記載の装置の少なくとも1つを含む、核酸を自動的に抽出するためのウォークアウェイ原理による機器。
- 自動ピペッティング装置または自動抽出装置であることを特徴とする、請求項7に記載の機器。
- 核酸を自動的に抽出する方法であって、
a)溶解された生物学的試料に、水溶液の極性を低下させる少なくとも1種の物質を加えるか、または核酸を固相に結合させるための手段を加えるステップと、
b)このステップa)における混合物を、請求項1から5までのいずれか1項に記載の粗さのある材料または構造化された材料が中に存在するピペットチップで吸い上げて、出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、液体を前記材料の傍らを通って移動させ、その粗さのある材料または構造化された材料に核酸が沈着するステップと、
c)前記ピペットチップを試料から取り出すステップと、
d)ピペットチップを洗浄バッファー溶液中に浸漬させ、出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、液体を前記材料の傍らを通って移動させるステップと、
e)ピペットチップを乾燥させて、洗浄バッファーの残留アルコールを除去するステップと、
f)溶出バッファーを用いて、前記溶出バッファーの出し入れするピペッティング操作を何度も行うことで、溶出バッファーを前記材料の傍らを通って移動させることによって、核酸を引き離すステップと、
を特徴とする方法。 - 前記水溶液の極性を低下させるための物質として、有機溶剤、好ましくはアルコールが使用されることを特徴とする、請求項9に記載の方法。
- 自動ピペッティング装置または自動抽出装置による、請求項9に記載の自動的な方法。
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