JP2021504484A - 上皮成長因子受容体に対する親和性が増加した抗体およびそれに由来するフラグメント - Google Patents
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Abstract
Description
現在市販されている抗EGFRモノクローナル抗体には、セツキシマブ(Erbitux)、パニツムマブ(Vectibix)、およびニモツズマブ(TheraCIM)の3つが存在し(Reichert, J., MAbs.4: 413-415, 2012)、その他に7つが、第I相〜第III相の臨床試験中である(Reichert, J. and Dhimolea, E., Drug Discovery Today, 17: 954-963, 2012)。これらは、EGFRの細胞外領域を認識し、リガンドの結合および受容体の二量体化を競合的に阻害し、したがって、受容体の自己リン酸化およびその活性化をもたらすシグナル伝達カスケードを阻害するように、特別に設計されたものである(Burgess, A. and others, Molecular Cell, 12: 541-552, 2003)。
一実施形態において、それは、重鎖の可変領域の相補性決定領域(CDR)のCDR2の配列が、
− 配列番号20および
− 配列番号21を含む群から選択され、
重鎖のCDR1およびCDR3の配列が、それぞれ、配列番号9および配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24である、モノクローナル抗体を指す。
別の実施形態において、本発明の組換えモノクローナル抗体は、重鎖の可変領域のCDR2の配列が、
− 配列番号10、
− 配列番号11、
− 配列番号12、
− 配列番号17、
− 配列番号18、および
− 配列番号29を含む群から選択され、
該重鎖において、CDR1の配列が、配列番号9であり、CDR3の配列が、配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDRの配列が、
− CDR 1、配列番号22、
− CDR 2、配列番号23、
− CDR 3、配列番号24であることを特徴とする。
− 配列番号2および
− 配列番号8を含む群から選択され、
重鎖のCDR1およびCDR3の配列が、それぞれ、配列番号1および配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22、
− CDR 2、配列番号23、
− CDR 3、配列番号24である、モノクローナル抗体に関する。
− 配列番号13および
− 配列番号19を含む群から選択され、
重鎖のCDR2およびCDR3配列が、それぞれ、配列番号14および配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24であることを特徴とする。
具体的には、本発明は、重鎖および軽鎖の以下の可変領域配列
重鎖
− CDR1、配列番号15
− CDR2、配列番号16
− CDR3、配列番号3
軽鎖
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24
を有することを特徴とするモノクローナル抗体に関する。
重鎖
− FW 1、配列番号4
− FW 2、配列番号5
− FW 3、配列番号6
− FW 4、配列番号7
軽鎖
− FW 1、配列番号25
− FW 2、配列番号26
− FW 3、配列番号27
− FW 4、配列番号28
を有する、すべての前述のモノクローナル抗体を包含する。
加えて、本開示の抗体は、重鎖にヒトIgG1定常領域を含み、軽鎖にヒトカッパを含む。
別の実施形態において、本発明は、活性成分として、50〜400mgの範囲の開示されるモノクローナル抗体またはフラグメント、ならびに薬学的に許容される担体を有する、がん治療に有用な医薬組成物に関する。加えて、本発明は、活性成分が、1〜9mgの範囲の開示されるモノクローナル抗体またはフラグメントであり、薬学的に許容されるビヒクルを含む、腫瘍の診断に有用な医薬組成物に関する。
別の実施形態において、本発明は、EGFRを発現する腫瘍の治療、ならびにそれらが適切なマーカーにコンジュゲートした場合の、EGFRを有する腫瘍の診断における、開示されるモノクローナル抗体およびフラグメントの使用に関する。また、免疫学的目的のタンパク質またはタンパク質ドメインとコンジュゲートされた場合の、EGFR陽性腫瘍に対して免疫応答を指向させるための、これらのモノクローナル抗体およびフラグメントの使用にも関する。
本発明は、ニモツズマブのアミノ酸配列との97%より高い同一性を共有し、hEGFRの細胞外領域に結合する能力の増加を有する、ニモツズマブに由来する13個のフラグメントに関する。本発明において記載されるバリアントの変異により、ニモツズマブのもともとのFabと比較して、中等度のEGFR発現を有するより多くのヒト細胞を認識する能力を有する、ニモツズマブのバリアントの獲得がもたらされる。
本発明において記載されるフラグメントは、107個を上回る繊維状ファージにディスプレイされた分子のライブラリーから、hEGFRの細胞外領域に結合するその能力に起因して、ニモツズマブのFabの変異型バリアントを選択することによって、得ることができる。これらのバリアントに対応する遺伝子を、ファージミド型発現ベクター(繊維状ファージのキャプシドタンパク質をコードする遺伝子のうちの1つに融合したもの)に挿入することができ、タンパク質バリアントが表面上に露出したウイルス粒子の産生に使用することができる。開始ライブラリーは、相補性決定領域(CDR)の位置のセットに異なる程度の多様性を含み得、これにより、抗原−抗体の相互作用に機能的に重要であるこの領域の十分な試験が可能となるであろう。これらの位置にあるもともとの残基のそれぞれを、20個のアミノ酸の混合物によって、いくらかの物理化学的特性、たとえば、疎水性、芳香族特性、正味の電荷、および/もしくはサイズを共有する残基の事前に定義されたセットによって、置き換えることができるか、または、それぞれの対応するコドン位置(これは、もともとの配列の優勢度を維持する)に、わずかな比率のヌクレオチドのランダム混合物を導入することによるソフトランダム化に供することができる。選択される位置は、同じライブラリーにおいて、または複数の別個のライブラリーにおいて、同時に多様化させてもよい。これらのライブラリーは、もともとのニモツズマブFabに対して、保存的または保存的でない、1つまたは複数の変異を有する、変動する比率の分子を含み得る。
hEGFRの細胞外領域への結合能力の増加を有するバリアントを有するファージの選択は、固体表面に固定化したhEGFR抗原と接触させたライブラリー由来のファージ混合物のインキュベーション、洗浄による未結合ファージの除去、およびタンパク質相互作用に干渉する条件下における結合したファージの溶出に基づき得る。いくつかの連続的な選択サイクルを、同様の条件下において行うことができる。選択したファージミドに挿入されたDNA配列の分析により、規則性が判明し得、これによりEGFR結合能力の増加と関連するであろうもっとも存在度の高い置換の特定がもたらされる。個別の改変であるか、またはライブラリーか直接的に選択された変化の組合せであるかにかかわらず、見出された反復的な変異を、それらの間で組み合わせて、新しいバリアントを形成させ、EGFR結合能力のさらなる増加を得ることができる。
あるいは、本発明のフラグメントは、コンビナトリアル生物学の他のプラットフォーム、たとえば、リボソームまたは酵母ディスプレイを利用することによって、得ることができる。
加えて、新規な可変領域をコードする遺伝子を、哺乳動物細胞の発現ベクターにクローニングし、新規な変異を含む組換えモノクローナル抗体を産生することができる。この形式の場合、得られたモノクローナル抗体が、表面プラズモン共鳴(BIAcore)に基づく親和性測定を通じて、ニモツズマブと比較して、hEGFRの細胞外領域を優先的に認識する能力を保持することも検証することができる。
ライブラリーから直接的に選択されたか、または後でフラグメントもしくは完全な抗体の形式で構築された、フラグメントバリアントのそれぞれの機能的優越性は、インビトロまたはインビボのアッセイにおいて、実証することができる。それぞれのバリアントに対して、異なるEGFR発現を有する細胞株の認識を、フローサイトメトリーによって評価し、新規なバリアントが、より高いパーセンテージおよびより高い蛍光平均強度で陽性細胞を認識することを検証することができ、この効果は、中等度または低いEGFR発現を有する株において、より明白である。この目的で、以下の特徴を有する細胞が使用される。
− 高いEGFR発現:ヒト起源の扁平上皮細胞癌のA431、ヒト起源の胸水転移を有する乳房腺癌のMDA−MB−468などであるが、これらに限定されない
− 中等度のEGFR発現:ヒト起源の肺腺癌のH125およびH292であるが、これらに限定されない。
− 低いEGFR発現:ヒト起源の小細胞肺がんのU1906、ヒト起源の乳房腺癌のMDA−MB−231、卵巣癌のSKOV3、乳がんのSKBR3であるが、これらに限定されない。
一方で、異なるEGFR発現を有するヒト腫瘍を保持する無胸腺マウスにおけるモノクローナル抗体またはフラグメントの抗腫瘍効果を、測定することができ、その場合、腫瘍成長における遅延が、測定されるであろう。
加えて、フラグメントまたはモノクローナル抗体を、放射性同位体またはフルオロフォアで標識し、異なるEGFR発現を有するヒト腫瘍を保持する無胸腺マウスに植え付けることができる。これにより、インビボで腫瘍認識を検出するフラグメントの能力の評価が可能となり、これにより、画像を得ることによるがんの診断のためのツールとしての使用が支持される。
本発明において得られる新規なモノクローナル抗体およびフラグメントは、ニモツズマブよりも高い親和性を有するため、それらを、ニモツズマブでは制限を有する状況、たとえば、低いかまたは中間的なEGFR発現を有する細胞において、使用することが可能である。該モノクローナル抗体は、頭頸部腫瘍、神経膠腫、食道、肺、および膵臓を有する患者の処置において使用することができる。
治療的使用については、モノクローナル抗体およびフラグメントは、疾患を有する対象に、独立して、またはがんの処置のための従来的な治療法、たとえば、放射線療法もしくは化学療法と組み合わせてその治療作用を増強するために、投与されるものとする。投与の経路は、薬物の非経口投与のための当該技術分野において説明されているもののうちのいずれか、好ましくは、静脈内または皮下経路によるものであり得る。
本発明のモノクローナル抗体およびフラグメントは、それらを、放射性同位体またはフルオロフォアとコンジュゲートすることによって、EGFR陽性腫瘍の診断のための用途を有し得るが、これは、それらが、中等度または低いEGFR発現を有する細胞を認識するより高い親和性および能力を有するためであり、これは、この特性を有する腫瘍の診断において、ニモツズマブと比較して有利である。
加えて、本発明において記載されるフラグメントは、EGFR陽性腫瘍細胞に対して免疫応答を指向させる目的で、免疫学的目的のタンパク質またはタンパク質ドメインに融合させることができる。この適用は、腫瘍部位に応答を集中させることによって、両方の治療法の能力を別個に組み合わせる利点を有する。Fabフラグメントが、抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性を提供し、一方で、タンパク質または融合されたタンパク質ドメインが、免疫学的役割を果たし、これが、単剤療法よりも優れた効果を有し得る。
本発明において記載されるモノクローナル抗体およびフラグメントは、がん治療に有用な医薬組成物の一部として投与される。好ましくは、本発明は、薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を包含する。薬学的に許容される担体としては、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、および類似物が挙げられるが、これらに限定されない。患者への投与に好適な他の緩衝剤、分散剤、および非毒性不活性物質が、本発明の組成物に含まれてもよい。組成物は、通常、滅菌であり、望ましくない粒子を含まない。
本発明は、さらに、以下の実施例および図面とともに詳述される。しかしながら、これらの実施例は、本発明の範囲を制限すると解釈されるべきではない。
ニモツズマブの抗原結合フラグメント(FabR3)のM13繊維状ファージディスプレイの成功
それぞれApaLI/XhoIおよびSfiI/BstEII制限部位が隣接する、ニモツズマブの軽鎖の可変領域(VL)および重鎖の可変領域(VH)をコードする遺伝子を、PCRによって増幅させた。VLおよびVHの両方の遺伝子フラグメントを、pCES1ベクター(Haard, H., Methods in Molecular Biology.178: 87-100, 2002)にクローニングした後、それぞれ、カッパ軽鎖定常領域(CK)および重鎖定常領域(CH1)をコードする遺伝子をクローニングした。CH1領域をコードする遺伝子を、c−mycタグペプチドをコードする遺伝子に連結させた後、遺伝子IIIに連結させた。この遺伝子コンストラクトにより、ニモツズマブに由来する抗原結合フラグメント(FabR3)をコードした。大腸菌種のTG1株のコンピテント細菌に、得られた遺伝子コンストラクトを形質転換し、それを使用して、50mLの規模で、ウイルスキャプシドのP3タンパク質に融合した、ファージにディスプレイされたFabR3を産生させ、それを精製した(Marks, J. et al. J. Mol. Biol. 222: 581-597, 1991)。精製されたファージディスプレイされたこの分子の特異的な認識を、ELISAによって評価した(図1)。これを行うために、ポリスチレンプレート(MaxiSorp、USA)に、ニモツズマブの抗原であるヒトEGFR(Her1)の細胞外領域(Ramirez, B. et al., Int. J. Cancer, 119: 2190-2199, 2006)、抗c−mycタグ9E10モノクローナル抗体(Center of Genetic Engineering and Biotechnology of Sancti Spiritus、Cuba)、および無関係な分子としてBSAをコーティングした。結合したファージを、西洋ワサビペルオキシダーゼ(GE Healthcare、USA)にコンジュゲートした抗M13モノクローナル抗体および対応する酵素の基質で検出した。図1に示されるように、ファージにディスプレイされたFabR3は、ディスプレイレベルを検出する9E10モノクローナル抗体認識によって測定され、Her1を特異的に認識するニモツズマブの能力を保持していたため、適切にフォールディングされていた。
ヒトEGFRの細胞外領域に対してより高い反応性を有する、繊維状ファージによりディスプレイされるFabR3バリアントのフラグメントの選択および特徴付け
ニモツズマブの重鎖の3つのCDR(AbM定義による)の突出するセグメントに位置する25個の残基のソフトランダム化戦略を、設計した。可能性として20個すべてのアミノ酸を含むが、ライブラリーの分子のほとんどにおいてもともとの残基を保持する、混合物によって、それらのうちのほとんど(24/25)を、置き換えた。これを行うために、それぞれの位置の90%においてもともとのヌクレオチドを保存する縮重コドンを導入したが、残りの10%は、他の3つのヌクレオチドの等モル混合物に対応していた。他の残基(F29)は、他の疎水性残基(I、L、M、V)によって置き換えられただけであるが、もともとの残基が、ライブラリーの分子の大半を占めていた。これを行うために、縮重コドンを、もともとのヌクレオチドの90%を維持するトリプレットの1位および3位に使用し(それぞれ、TおよびC)、一方で残りの10%は、他の3つのヌクレオチドの等モル混合物に対応し、トリプレットの2位(T)は、改変させなかった。設計したライブラリーは、可変領域をpCES−1ベクターにクローニングすることによって、Fab形式で構築した。この様式で、1.5×107個のメンバーから構成されるニモツズマブのFabバリアントのライブラリーを構築した。
hEGFRの細胞外領域による、新規な繊維状ファージによりディスプレイされたFabR3バリアントの反応性の増加の実証
大腸菌TG1株のコンピテント細菌に、3回の選択の後に回収した、もともとのニモツズマブのものとは異なる固有な配列を含む、遺伝子コンストラクトを形質転換した。これらの配列から、ファージにディスプレイされたFabR3バリアントを、産生させ、精製した。Her1によるこれらの新規なバリアントの反応性を判定するために、異なる濃度のウイルス粒子でのファージ調製物の認識を、ELISAによって判定した。6つがCDR2にのみ変異を有し(図4A)、5つがCDR1およびCDR2に変異を有する(図4B)、評価したすべてのバリアントが、評価した様々な濃度において、もともとのFabR3よりも高いHer1に対する反応性を示した。加えて、反応性がもっとも増加したCDR2変異を、もっとも反復性の高いCDR1変異と組み合わせた、2つの新規なバリアントを、Kunkel変異生成によって構築した(図5A)。これらの新規なバリアントの認識を、ELISAによって評価した。変異の組合せは、両方のバリアントが、もともとのファージにディスプレイされたFabR3よりも高いHer1に対する反応性を示したため、適合性があった(図5B)。
哺乳動物細胞において可溶性タンパク質として産生された新規なニモツズマブのバリアントの親和性の増加の実証
ニモツズマブ(R3モノクローナル抗体)のもともとのVH、ならびに実施例3に記載されるようなCDR1およびCDR2に変異を有する(図5A)K4およびK5と命名された2つの構築されたニモツズマブのバリアントのVH、ならびにニモツズマブのもともとのカッパ軽鎖可変領域(VK)をコードする遺伝子を、哺乳動物発現ベクターpSV−gptおよびpSV−hygに、それぞれ、クローニングした(Orlandi, R. et al., PNAS: 3833-3837, 1989)。目的の遺伝子を有するベクターを、Pvu I酵素により線形化し、エタノールの存在下において沈降させた。リン酸緩衝食塩水中で再構成されたDNAを使用して、NS0細胞を電気穿孔した。R3、K4、およびK5モノクローナル抗体を産生するクローンを得るために、対応するVHを有するpSV−gptベクター4μg(表1)およびもともとのニモツズマブのpSV−hyg−VKベクター8μgを、コトランスフェクトした。安定なクローンを得るための手順を、キサンチン、ヒポキサンチン、およびミコフェノール酸を選択薬として用いて実行した。この手法により、目的とされる3つの分子を、IgG1アイソタイプおよび軽鎖カッパの抗体として得ることが可能となった。産生された抗体を、プロテインA親和性クロマトグラフィーによって、上清から精製した。
哺乳動物細胞において産生されたK4およびK5モノクローナル抗体に由来するFabは、ニモツズマブに由来するFabよりも高い、H125肺腺癌ヒト細胞株の認識を示した
Her1分子を認識するK4およびK5モノクローナル抗体に由来するFabの能力を、判定した。この事例において、Her1の認識は、細胞株において、その天然の環境で、フローサイトメトリーによって評価した。これを行うために、R3、K4、およびK5モノクローナル抗体に由来するFabを、1.25μg/mlで、中等度の受容体発現を有するH125肺腺癌ヒト細胞株とともにインキュベートした。細胞の膜においてHer1に結合したFabを、フィコエリトリンにコンジュゲートしたマウス抗ヒトカッパ軽鎖モノクローナル抗体で検出した。図6Aにおいて明白なように、K4およびK5モノクローナル抗体に由来するFabは、R3モノクローナル抗体に由来するFabと比較して、より高いパーセンテージのHer1陽性細胞を、より高い蛍光中央値強度(FMI)(図6B)で認識した。
K4およびK5モノクローナル抗体の親和性の増加は、EGFに媒介されるEGFRリン酸化を阻害するこれらの抗体のより高い能力をもたらした
EGFに媒介されるリン酸化を阻害する新規なモノクローナル抗体の能力を判定するために、ウエスタンブロットアッセイを行った。2つの細胞株を使用した。
− 肺腺癌ヒト細胞株H125(中等度のEGFR発現)。
− ヒト起源の胸水転移を有する乳房腺癌のMDA−MB−468(高いEGFR発現)。
Claims (16)
- ヒト上皮成長因子受容体(Her1)の細胞外領域を認識する組換えモノクローナル抗体(mAb)であって、ニモツズマブ抗体に対して95%より高い同一性を共有すること、ならびに重鎖の可変領域のCDR2配列が、
− 配列番号20および
− 配列番号21を含む群から選択され、
これらの重鎖において、CDR1の配列が、配列番号9であり、CDR3の配列が、配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24であることを特徴とする、組換えモノクローナル抗体。 - Her1を認識するモノクローナル抗体であって、重鎖の可変領域のCDR2配列が、
− 配列番号10、
− 配列番号11、
− 配列番号12、
− 配列番号17、
− 配列番号18、および
− 配列番号29を含む群から選択され、
これらの重鎖において、CDR1の配列が、配列番号9であり、CDR3の配列が、配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24であることを特徴とする、モノクローナル抗体。 - Her1を認識するモノクローナル抗体であって、重鎖の可変領域のCDR2配列が、
− 配列番号2および
− 配列番号8を含む群から選択され、
これらの重鎖において、CDR1の配列が、配列番号1であり、CDR3の配列が、3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、以下:
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24に示されることを特徴とする、モノクローナル抗体。 - Her1を認識するモノクローナル抗体であって、重鎖の可変領域のCDR1配列が、
− 配列番号13および
− 配列番号19を含む群から選択され、
これらの重鎖において、CDR2の配列が、配列番号14であり、CDR3の配列が、配列番号3であり、軽鎖の可変領域のCDR配列が、
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24であることを特徴とする、モノクローナル抗体。 - Her1を認識するモノクローナル抗体であって、重鎖および軽鎖の可変領域のCDRが、以下の配列
重鎖
− CDR1、配列番号15
− CDR2、配列番号16
− CDR3、配列番号3
軽鎖
− CDR 1、配列番号22
− CDR 2、配列番号23
− CDR 3、配列番号24を含むことを特徴とする、モノクローナル抗体。 - 重鎖および軽鎖の可変領域のフレームワーク領域(FW)が、以下の配列
重鎖
− FW 1、配列番号4
− FW 2、配列番号5
− FW 3、配列番号6
− FW 4、配列番号7
軽鎖
− FW 1、配列番号25
− FW 2、配列番号26
− FW 3、配列番号27
− FW 4、配列番号28を有することを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体。 - 重鎖定常領域の配列が、ヒトIgG1であることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体。
- 軽鎖の定常領域が、ヒトカッパであることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体。
- Fab型のフラグメントであることを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1項に記載のモノクローナル抗体に由来するフラグメント。
- (Fab)2型のフラグメントであることを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1項に記載のフラグメント。
- 一本鎖可変領域フラグメントであることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1項に記載のフラグメント。
- 活性成分として50〜400mgの範囲の請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗体またはフラグメントと、薬学的に許容されるビヒクルとを有する、がん治療に有用な医薬組成物。
- 活性成分として1〜9mgの範囲の請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗体またはフラグメントと、薬学的に許容されるビヒクルとを有する、腫瘍の診断に有用な医薬組成物。
- EGFRを発現する腫瘍の治療法における、請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗体およびフラグメントの使用。
- 適切なマーカーにコンジュゲートされた場合の、EGFRを有する腫瘍の診断のための請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗体およびフラグメントの使用。
- 免疫学的目的のタンパク質またはタンパク質ドメインにコンジュゲートされた場合の、EGFR陽性腫瘍に対して免疫応答を指向させるための請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗体またはフラグメントの使用。
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US5891996A (en) * | 1972-09-17 | 1999-04-06 | Centro De Inmunologia Molecular | Humanized and chimeric monoclonal antibodies that recognize epidermal growth factor receptor (EGF-R); diagnostic and therapeutic use |
WO2006090930A1 (ja) * | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | スルホンアミド化合物の新規併用 |
JP2015510761A (ja) * | 2012-03-08 | 2015-04-13 | ハロザイム インコーポレイテッド | 条件依存活性抗上皮細胞増殖因子受容体抗体およびその使用方法 |
JP2015533141A (ja) * | 2012-10-12 | 2015-11-19 | スパイロジェン・エス・アー・エール・エルSpirogen Sarl | ピロロベンゾジアゼピン類およびその複合体 |
WO2016207089A1 (de) * | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Binder-wirkstoff-konjugate (adcs) und binder-prodrug-konjugate (apdcs) mit enzymatisch spaltbaren gruppen |
JP2017514471A (ja) * | 2014-04-23 | 2017-06-08 | ボード・オブ・リージエンツ,ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | キメラ抗原受容体(car)並びにその製造及び使用方法 |
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---|---|---|---|---|
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5891996A (en) * | 1972-09-17 | 1999-04-06 | Centro De Inmunologia Molecular | Humanized and chimeric monoclonal antibodies that recognize epidermal growth factor receptor (EGF-R); diagnostic and therapeutic use |
WO2006090930A1 (ja) * | 2005-02-28 | 2006-08-31 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | スルホンアミド化合物の新規併用 |
JP2015510761A (ja) * | 2012-03-08 | 2015-04-13 | ハロザイム インコーポレイテッド | 条件依存活性抗上皮細胞増殖因子受容体抗体およびその使用方法 |
JP2015533141A (ja) * | 2012-10-12 | 2015-11-19 | スパイロジェン・エス・アー・エール・エルSpirogen Sarl | ピロロベンゾジアゼピン類およびその複合体 |
JP2017514471A (ja) * | 2014-04-23 | 2017-06-08 | ボード・オブ・リージエンツ,ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム | キメラ抗原受容体(car)並びにその製造及び使用方法 |
WO2016207089A1 (de) * | 2015-06-22 | 2016-12-29 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Binder-wirkstoff-konjugate (adcs) und binder-prodrug-konjugate (apdcs) mit enzymatisch spaltbaren gruppen |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
E-C BROCKMANN; ET AL, PROTEIN ENGINEERING, DESIGN AND SELECTION, vol. VOL:24, NR:9, JPN5021004550, 16 June 2011 (2011-06-16), GB, pages 691 - 700, ISSN: 0004904635 * |
JANICE M REICHERT: "MARKETED THERAPEUTIC ANTIBODIES COMPENDIUM", MABS, vol. VOL:4, NR:3, JPN5021004545, May 2012 (2012-05-01), pages 413 - 415, ISSN: 0005089921 * |
JUAN C ALMAGRO; ET AL: "ANTIBODY ENGINEERING: HUMANIZATION, AFFINITY MATURATION, AND SELECTION TECHNIQUES", THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES: FROM BENCH TO CLINIC, JPN5021004548, October 2009 (2009-10-01), US, pages 311 - 334, XP055311028, ISSN: 0004904633, DOI: 10.1002/9780470485408.ch13 * |
KIM HYUNG-YONG; ET AL: "AFFINITY MATURATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES BY MULTI-SITE-DIRECTED MUTAGENESIS", MONOCLONAL ANTIBODIES: METHODS AND PROTOCOLS, vol. 1131, JPN5021004547, 2014, US, pages 407 - 420, ISSN: 0004904632 * |
RENAUT LAURENCE; ET AL, METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, vol. 907, JPN5021004549, 2007, pages 1 - 11, ISSN: 0004904634 * |
WARK K L; ET AL: "LATEST TECHNOLOGIES FOR THE ENHANCEMENT OF ANTIBODY AFFINITY", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, vol. VOL:58, NR:5-6, JPN5021004546, 7 August 2006 (2006-08-07), NL, pages 657 - 670, ISSN: 0005089920 * |
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