CN105263961B - 用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关疾病的抗vegf抗体和含有所述抗体的药物组合物 - Google Patents
用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关疾病的抗vegf抗体和含有所述抗体的药物组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105263961B CN105263961B CN201480030403.9A CN201480030403A CN105263961B CN 105263961 B CN105263961 B CN 105263961B CN 201480030403 A CN201480030403 A CN 201480030403A CN 105263961 B CN105263961 B CN 105263961B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gly
- ser
- amino acid
- ala
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 26
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 title claims description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 16
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 title description 5
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims abstract description 127
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims abstract description 125
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims abstract 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 7
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 7
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- -1 Intederon Alpha-2a Chemical compound 0.000 claims description 5
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 claims description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 4
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 claims description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 4
- WAVYAFBQOXCGSZ-UHFFFAOYSA-N 2-fluoropyrimidine Chemical compound FC1=NC=CC=N1 WAVYAFBQOXCGSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 3
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 3
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 claims description 3
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 claims description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 claims description 3
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 3
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 3
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 3
- YJGVMLPVUAXIQN-LGWHJFRWSA-N (5s,5ar,8ar,9r)-5-hydroxy-9-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5a,6,8a,9-tetrahydro-5h-[2]benzofuro[5,6-f][1,3]benzodioxol-8-one Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-LGWHJFRWSA-N 0.000 claims description 2
- 101100230376 Acetivibrio thermocellus (strain ATCC 27405 / DSM 1237 / JCM 9322 / NBRC 103400 / NCIMB 10682 / NRRL B-4536 / VPI 7372) celI gene Proteins 0.000 claims description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 claims description 2
- NRGONRDRXCPMIC-GDKBPFBDSA-N N1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(C=O)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 Chemical compound N1C=2C(=O)NC(N)=NC=2NCC1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(C=O)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 NRGONRDRXCPMIC-GDKBPFBDSA-N 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 claims description 2
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004404 adrenal cortex Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims description 2
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 claims description 2
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 claims description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 229940125532 enzyme inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 2
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 claims description 2
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 claims description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 2
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 claims description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- HDZGCSFEDULWCS-UHFFFAOYSA-N monomethylhydrazine Chemical class CNN HDZGCSFEDULWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001072 progestational effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 11
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N Capecitabine Chemical compound C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UORFTKCHSA-N 0.000 claims 1
- GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N Capecitabine Natural products C1=C(F)C(NC(=O)OCCCCC)=NC(=O)N1C1C(O)C(O)C(C)O1 GAGWJHPBXLXJQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims 1
- 206010071989 Vascular endothelial growth factor overexpression Diseases 0.000 claims 1
- 229960004117 capecitabine Drugs 0.000 claims 1
- KMWVJRBQGMUMID-UHFFFAOYSA-N catharanthamine Chemical compound C1C(CC)(OC2C3(C(=O)OC)C=4C(=CC5=C(C67C(C(C(OC(C)=O)C8(CC)C=CCN(C78)CC6)(O)C(=O)OC)N5C)C=4)OC)CC2CN1CCC1=C3NC2=CC=CC=C12 KMWVJRBQGMUMID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims 1
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 claims 1
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 claims 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 claims 1
- 101000808007 Mus musculus Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 abstract description 30
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 22
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 abstract description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 8
- 230000035699 permeability Effects 0.000 abstract description 5
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 333
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 112
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 86
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 46
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 38
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 38
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 37
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 31
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 30
- HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N Gly-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 HQSKKSLNLSTONK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 29
- BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BUDNAJYVCUHLSV-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 28
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 28
- SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 27
- LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N Ala-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N LMFXXZPPZDCPTA-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 27
- VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N Arg-Ala-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VKKYFICVTYKFIO-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 27
- MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N Asp-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MNQMTYSEKZHIDF-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 27
- OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N Gln-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N OYTPNWYZORARHL-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 27
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 27
- IFHJOBKVXBESRE-YUMQZZPRSA-N Gly-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)CN IFHJOBKVXBESRE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 27
- IMRNSEPSPFQNHF-STQMWFEESA-N Gly-Ser-Trp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C12)C(=O)O IMRNSEPSPFQNHF-STQMWFEESA-N 0.000 description 27
- RPZFUIQVAPZLRH-GHCJXIJMSA-N Ile-Asp-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N RPZFUIQVAPZLRH-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 27
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 27
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N Phe-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IAOZOFPONWDXNT-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 27
- QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QEDMOZUJTGEIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 27
- PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPCZVWHJWJFTFN-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 27
- MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N Trp-Val-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 MBLJBGZWLHTJBH-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 27
- 108010069020 alanyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 27
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 27
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 27
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 27
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 108010020755 prolyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 27
- MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N Asn-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MKJBPDLENBUHQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 26
- WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N Asn-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WLVLIYYBPPONRJ-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 26
- VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N Asp-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N VNXQRBXEQXLERQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 26
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 26
- PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N Glu-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 26
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 26
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 26
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 26
- AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AXZGZMGRBDQTEY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 26
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 26
- FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N Phe-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O FGWUALWGCZJQDJ-URLPEUOOSA-N 0.000 description 26
- KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O KZSYAEWQMJEGRZ-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 26
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 26
- OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N Val-Tyr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N OWFGFHQMSBTKLX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 26
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 26
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 23
- KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KIZIOFNVSOSKJI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 23
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- QAMFAYSMNZBNCA-UWVGGRQHSA-N His-Gly-Met Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(O)=O QAMFAYSMNZBNCA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 20
- NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N Ile-Arg-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- HAXARWKYFIIHKD-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ile-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAXARWKYFIIHKD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 16
- BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N Ser-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O BNFVPSRLHHPQKS-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 16
- YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N Ala-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YJHKTAMKPGFJCT-NRPADANISA-N 0.000 description 15
- PXAFZDXYEIIUTF-LKTVYLICSA-N Ala-Trp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PXAFZDXYEIIUTF-LKTVYLICSA-N 0.000 description 12
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 12
- UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N Asp-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 12
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 12
- ULHJJQYGMWONTD-HKUYNNGSSA-N Tyr-Gly-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O ULHJJQYGMWONTD-HKUYNNGSSA-N 0.000 description 12
- ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N Tyr-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O ZPFLBLFITJCBTP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 12
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 12
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 12
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 11
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 11
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 11
- QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 11
- PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N Glu-Asp-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PAQUJCSYVIBPLC-AVGNSLFASA-N 0.000 description 11
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 11
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 11
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 11
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 11
- RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RPWTZTBIFGENIA-VOAKCMCISA-N 0.000 description 11
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 11
- YYKZDTVQHTUKDW-RYUDHWBXSA-N Phe-Gly-Gln Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N YYKZDTVQHTUKDW-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 11
- KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N Phe-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KLYYKKGCPOGDPE-OEAJRASXSA-N 0.000 description 11
- BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N Pro-Ser-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BGWKULMLUIUPKY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 11
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 11
- GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N GJFYFGOEWLDQGW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 11
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 11
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 11
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 11
- FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N Tyr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O FQNUWOHNGJWNLM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 11
- QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 11
- NAHUCETZGZZSEX-IHPCNDPISA-N Tyr-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N NAHUCETZGZZSEX-IHPCNDPISA-N 0.000 description 11
- VCAWFLIWYNMHQP-UKJIMTQDSA-N Val-Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N VCAWFLIWYNMHQP-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 11
- PMDOQZFYGWZSTK-LSJOCFKGSA-N Val-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)C(C)C PMDOQZFYGWZSTK-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 11
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 11
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 11
- NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N Cys-Ser-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O NXQCSPVUPLUTJH-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 10
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 10
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 10
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 9
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JEGFCFLCRSJCMA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 7
- LJUUGSWZPQOJKD-JYJNAYRXSA-N Phe-Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O LJUUGSWZPQOJKD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 7
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 7
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 108700042769 prolyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- AHZNUGRZHMZGFL-GUBZILKMSA-N Met-Arg-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CCCNC(N)=N AHZNUGRZHMZGFL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 108010045126 glycyl-tyrosyl-glycine Proteins 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N Ala-Tyr-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 PGNNQOJOEGFAOR-KWQFWETISA-N 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- FXLVSYVJDPCIHH-STQMWFEESA-N Gly-Phe-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FXLVSYVJDPCIHH-STQMWFEESA-N 0.000 description 4
- JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N 0.000 description 4
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 4
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 4
- MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N Phe-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MCIXMYKSPQUMJG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 4
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 4
- SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- MXIULRKNFSCJHT-STQMWFEESA-N Gly-Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 MXIULRKNFSCJHT-STQMWFEESA-N 0.000 description 3
- OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OHUKZZYSJBKFRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N Gly-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN LCRDMSSAKLTKBU-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 3
- ABQFNJAFONNUTH-FHWLQOOXSA-N Phe-Gln-Tyr Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N ABQFNJAFONNUTH-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 3
- 108010082093 Placenta Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N Pro-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 3
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 3
- PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N Ser-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 3
- VAIWUNAAPZZGRI-IHPCNDPISA-N Ser-Trp-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)[C@H](CO)N VAIWUNAAPZZGRI-IHPCNDPISA-N 0.000 description 3
- JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N Thr-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JQAWYCUUFIMTHE-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 3
- IIJWXEUNETVJPV-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Ser Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)O IIJWXEUNETVJPV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 3
- XDGPTBVOSHKDFT-KKUMJFAQSA-N Tyr-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XDGPTBVOSHKDFT-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 3
- 108010073923 Vascular Endothelial Growth Factor C Proteins 0.000 description 3
- 108010073919 Vascular Endothelial Growth Factor D Proteins 0.000 description 3
- 102000016548 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010053096 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000016549 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Human genes 0.000 description 3
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 3
- 102100038232 Vascular endothelial growth factor C Human genes 0.000 description 3
- 102100038234 Vascular endothelial growth factor D Human genes 0.000 description 3
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical class O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 2
- JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JGDGLDNAQJJGJI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N Arg-His-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CN=CN1 CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- UGZUVYDKAYNCII-ULQDDVLXSA-N Arg-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UGZUVYDKAYNCII-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- LLQIAIUAKGNOSE-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N LLQIAIUAKGNOSE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- YNDLOUMBVDVALC-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ala-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YNDLOUMBVDVALC-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N Asn-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UYCPJVYQYARFGB-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O KRXIWXCXOARFNT-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 2
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102400001047 Endostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 2
- YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N Gln-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YJIUYQKQBBQYHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- PDXIOFXRBVDSHD-JBACZVJFSA-N Gln-Phe-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N PDXIOFXRBVDSHD-JBACZVJFSA-N 0.000 description 2
- DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)CN DHNXGWVNLFPOMQ-KBPBESRZSA-N 0.000 description 2
- GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C[NH3+])CC1=CC=CC=C1 GGAPHLIUUTVYMX-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N Gly-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)CN)O WNZOCXUOGVYYBJ-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- VDCRBJACQKOSMS-JSGCOSHPSA-N Gly-Phe-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VDCRBJACQKOSMS-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 2
- ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N Gly-Trp-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ONSARSFSJHTMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N Gly-Val-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O RYAOJUMWLWUGNW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 2
- KYFGGRHWLFZXPU-KKUMJFAQSA-N His-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N KYFGGRHWLFZXPU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- VIJMRAIWYWRXSR-CIUDSAMLSA-N His-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 VIJMRAIWYWRXSR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 101000898034 Homo sapiens Hepatocyte growth factor Proteins 0.000 description 2
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 101000868152 Homo sapiens Son of sevenless homolog 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MFESCIUQSIBMSM-UHFFFAOYSA-N I-BCP Chemical compound ClCCCBr MFESCIUQSIBMSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UCOCBWDBHCUPQP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N Leu-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O YOKVEHGYYQEQOP-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N Leu-Val-Arg Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N FBNPMTNBFFAMMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N Lys-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KNKHAVVBVXKOGX-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- LNXGEYIEEUZGGH-JYJNAYRXSA-N Met-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)CC1=CC=CC=C1 LNXGEYIEEUZGGH-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RDFQNDHEHVSONI-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N Ser-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O XNCUYZKGQOCOQH-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N Ser-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- NERYDXBVARJIQS-JYBASQMISA-N Ser-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N)O NERYDXBVARJIQS-JYBASQMISA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N Thr-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CEXFELBFVHLYDZ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- 102000002938 Thrombospondin Human genes 0.000 description 2
- 108060008245 Thrombospondin Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- QFXVAFIHVWXXBJ-AVGNSLFASA-N Tyr-Ser-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QFXVAFIHVWXXBJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- ZYVAAYAOTVJBSS-GMVOTWDCSA-N Tyr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZYVAAYAOTVJBSS-GMVOTWDCSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 2
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 2
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KVWLTGNCJYDJET-LSJOCFKGSA-N Ala-Arg-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KVWLTGNCJYDJET-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N Ala-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N SMCGQGDVTPFXKB-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SOBIAADAMRHGKH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N Ala-Thr-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OEVCHROQUIVQFZ-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N Ala-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VNFSAYFQLXPHPY-CIQUZCHMSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- XCIGOVDXZULBBV-DCAQKATOSA-N Ala-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O XCIGOVDXZULBBV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 101710153593 Albumin A Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PYZPXCZNQSEHDT-GUBZILKMSA-N Arg-Met-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N PYZPXCZNQSEHDT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YTMKMRSYXHBGER-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N YTMKMRSYXHBGER-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N Arg-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- QTAIIXQCOPUNBQ-QXEWZRGKSA-N Arg-Val-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QTAIIXQCOPUNBQ-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- VYZBPPBKFCHCIS-WPRPVWTQSA-N Arg-Val-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N VYZBPPBKFCHCIS-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N Asn-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DAPLJWATMAXPPZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N Asn-Gly-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N WONGRTVAMHFGBE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N Asn-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RPUYTJJZXQBWDT-SRVKXCTJSA-N Asp-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N RPUYTJJZXQBWDT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010052358 Colorectal cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- NRVQLLDIJJEIIZ-VZFHVOOUSA-N Cys-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O NRVQLLDIJJEIIZ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- LJEPDHWNQXPXMM-NHCYSSNCSA-N Gln-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O LJEPDHWNQXPXMM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N Glu-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DLISPGXMKZTWQG-IFFSRLJSSA-N Glu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DLISPGXMKZTWQG-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- VXEFAWJTFAUDJK-AVGNSLFASA-N Glu-Tyr-Ser Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O VXEFAWJTFAUDJK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- LERGJIVJIIODPZ-ZANVPECISA-N Gly-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LERGJIVJIIODPZ-ZANVPECISA-N 0.000 description 1
- OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N Gly-Gly-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN OLPPXYMMIARYAL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N Gly-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N Gly-Leu-Gln Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O TWTPDFFBLQEBOE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN IRJWAYCXIYUHQE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IALQAMYQJBZNSK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CSMYMGFCEJWALV-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CSMYMGFCEJWALV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- VNNRLUNBJSWZPF-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ser-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VNNRLUNBJSWZPF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YABRDIBSPZONIY-BQBZGAKWSA-N Gly-Ser-Met Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O YABRDIBSPZONIY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N Gly-Thr-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O TVTZEOHWHUVYCG-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N Gly-Val-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101001001487 Homo sapiens Phosphatidylinositol-glycan biosynthesis class F protein Proteins 0.000 description 1
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 1
- AZEYWPUCOYXFOE-CYDGBPFRSA-N Ile-Arg-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N AZEYWPUCOYXFOE-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- CAHCWMVNBZJVAW-NAKRPEOUSA-N Ile-Pro-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N CAHCWMVNBZJVAW-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- JERJIYYCOGBAIJ-OBAATPRFSA-N Ile-Tyr-Trp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)N JERJIYYCOGBAIJ-OBAATPRFSA-N 0.000 description 1
- JZBVBOKASHNXAD-NAKRPEOUSA-N Ile-Val-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N JZBVBOKASHNXAD-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LOLUPZNNADDTAA-AVGNSLFASA-N Leu-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LOLUPZNNADDTAA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N Leu-His-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CC1=CN=CN1 KXODZBLFVFSLAI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TUIOUEWKFFVNLH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN UWKNTTJNVSYXPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N Lys-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O FUKDBQGFSJUXGX-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N Lys-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GQZMPWBZQALKJO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VWPJQIHBBOJWDN-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VWPJQIHBBOJWDN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 102000002111 Neuropilin Human genes 0.000 description 1
- 108050009450 Neuropilin Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- PLNHHOXNVSYKOB-JYJNAYRXSA-N Phe-Arg-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N PLNHHOXNVSYKOB-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N Phe-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N Phe-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JJHVFCUWLSKADD-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- FKFCKDROTNIVSO-JYJNAYRXSA-N Phe-Pro-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FKFCKDROTNIVSO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N Pro-Ala-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O APKRGYLBSCWJJP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WIPAMEKBSHNFQE-IUCAKERBSA-N Pro-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 WIPAMEKBSHNFQE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GMJDSFYVTAMIBF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 description 1
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010038934 Retinopathy proliferative Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N Ser-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N BRKHVZNDAOMAHX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- HBOABDXGTMMDSE-GUBZILKMSA-N Ser-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBOABDXGTMMDSE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N Ser-Asn-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KAAPNMOKUUPKOE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGOWRLSWJCVYAQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N Ser-Gln-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZOHGLPQGEHSLPD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BKZYBLLIBOBOOW-GHCJXIJMSA-N Ser-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BKZYBLLIBOBOOW-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N Ser-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DJACUBDEDBZKLQ-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- NIOYDASGXWLHEZ-CIUDSAMLSA-N Ser-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O NIOYDASGXWLHEZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N Ser-Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GYDFRTRSSXOZCR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N Ser-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O BDMWLJLPPUCLNV-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- STIAINRLUUKYKM-WFBYXXMGSA-N Ser-Trp-Ala Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)=CNC2=C1 STIAINRLUUKYKM-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- WMZVVNLPHFSUPA-BPUTZDHNSA-N Ser-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 WMZVVNLPHFSUPA-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- FZNNGIHSIPKFRE-QEJZJMRPSA-N Ser-Trp-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O FZNNGIHSIPKFRE-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N Ser-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N SDFUZKIAHWRUCS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N Ser-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N ATEQEHCGZKBEMU-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 1
- XPVIVVLLLOFBRH-XIRDDKMYSA-N Ser-Trp-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(O)=O XPVIVVLLLOFBRH-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- ZWSZBWAFDZRBNM-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZWSZBWAFDZRBNM-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- RTXKJFWHEBTABY-IHPCNDPISA-N Ser-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N RTXKJFWHEBTABY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- HAUVENOGHPECML-BPUTZDHNSA-N Ser-Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)=CNC2=C1 HAUVENOGHPECML-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- 239000012163 TRI reagent Substances 0.000 description 1
- LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N Thr-Ala-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O LVHHEVGYAZGXDE-KDXUFGMBSA-N 0.000 description 1
- BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N Thr-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O BNGDYRRHRGOPHX-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N Thr-Pro-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O MXDOAJQRJBMGMO-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N Thr-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 YOPQYBJJNSIQGZ-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- QYSBJAUCUKHSLU-JYJNAYRXSA-N Tyr-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QYSBJAUCUKHSLU-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N Tyr-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MQGGXGKQSVEQHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DEGUERSKQBRZMZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 102000016663 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010053100 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 Proteins 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 1
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 description 1
- 238000002583 angiography Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000001669 bursa of fabricius Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000009575 disk growth Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000013534 fluorescein angiography Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010033719 glycyl-histidyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L magnesium chloride Substances [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 108010064486 phenylalanyl-leucyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及:对血管内皮生长因子(VEGF)具有强结合亲和力并能够体内抑制肿瘤生长的新抗VEGF抗体;以及包含所述抗体的用于治疗癌症的组合物。本发明的抗体表现出对人VEGF和小鼠VEGF的明显结合特性,抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和渗透性并可阻抑肿瘤生长,因此可用作用于治疗癌症的抗体。
Description
技术领域
本发明涉及:与血管内皮生长因子(VEGF)结合的新抗体,以及包含所述新抗体的药物组合物;所述新抗体具有对VEGF的强结合亲和力并因此可用于治疗癌症或血管发生相关疾病。
背景技术
众所周知,血管发生参与多种疾病的发病机制,所述疾病包括实体瘤、与眼的新血管生成有关的增殖性视网膜病变或年龄相关的黄斑变性(AMD)等。
已经在对血管发生的研究中鉴定了多种诱导因子,例如aFGF、bFGF、TGF-α、TGF-β、HGF、TNF-β和血管生成素。血管发生抑制剂可包括血小板反应蛋白(thrombospondin)(16kDa的促乳素N端片段(Clapp等,Endocrinology,133:1292-1299(1993))、制管张素(angiostatin)和内皮抑制素(endostatin)等。
诱导还是抑制血管发生取决于血管发生诱导物和抑制物之间的平衡(folkman,J,等,J.Biol.Chem.,267,10931-10934(1992))。
在血管发生诱导物中,血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)参与血管和淋巴管的发育和稳态,并且还对神经细胞表现出显著作用。在低氧情况下或者响应于通过细胞生长因子(例如TGF、白细胞介素和PDGF)的刺激,主要在血管内皮细胞、造血细胞和基质细胞中产生VEGF。VEGF与VEGF受体结合,并且VEGF的每一种同种型结合特异性受体,这诱导受体的同源或异源缀合物形成,从而活化每个信号转导通路(Karsan A.,Int J.Mol.Med.,5(5):447-56(2000))。VEGF受体的信号转导特异性受到共同受体(例如神经毡蛋白(neuriphilin)、硫酸肝素(heparin sulfate)、整联蛋白(integrin)、钙黏着蛋白(cadherin)等)更精细的调节(Zachary IC,等,Mol.Biol.Cell.,22(15):2766-76(2011))。已知VEGF是肿瘤和眼中血管发生相关疾病的重要介体。另外,在被调查的大多数对象中,肿瘤过表达VEGF mRNA(Berkman等,J.Clin.Invest.,91:153-159(1993))。由于癌症为了其生长需要新的毛细血管作为用于营养物供应和废物排出的通道以用于其成长,癌症细胞及其基质细胞持续分泌VEGF,其扩散到整个组织并刺激血管内皮细胞的迁移(Ferrara.N等,Nat.Rev.Cancer,2:795-803,(2002))。与正常形成的毛细血管相比,由癌症细胞诱导的新脉管系统的特征在于不完整,因为它们独立于周围的细胞。尽管VEGF与受体VEGFR1、VEGFR2和VEGFR 3结合,但VEGF通过VEGFR2来递送信号,从而导致内皮细胞的增殖、迁移和渗透性(Zeng H.等,J.Biol.Chem.,276:26969-26976(2001))。因此,通过使用靶向VEGF的药物控制血管发生,可治疗癌细胞的增殖以及与血管发生相关的疾病。其中,与VEGF结合的抗体可用于药物,其经历人源化过程以提高对VEGF的结合亲和力并降低抗体的免疫原性。人源化的抗体描述于文献(Bending,Methods:Comp.Meth.Enzy.,8:83-93(1995))中。抗VEGF中和抗体在裸鼠中阻抑多种人肿瘤细胞系的生长(Kim等,Nature.,362:841-844(1993);warren等,J.Clin.Invest.,95:1789-1797(1995);Borgstroem等,Cancer Res.,56:4032-4039(1996);和Melnyk等,Cancer Res.,56:921-924(1996)),并在视网膜的缺血性血管病症模型中阻抑眼内血管发生(Adamis等,Arch.Ophtalmol.,114:66-71(1996))。抗VEGF抗体可以以有效降低VEGF之活性的浓度局部地施用到眼中。这样的缺血性视网膜病症可包括糖尿病性视网膜病变或年龄相关的黄斑变性。
目前所开发的抗VEGF中和抗体包括贝伐单抗(bevacizumab,阿瓦斯汀(AvastinTM),Genentech/Roche),其被FDA于2004年2月批准用于结肠直肠癌。贝伐单抗的适应症已经拓展至总共六种类型的进行性肿瘤的治疗,所述肿瘤包括转移性结肠直肠癌和进行性卵巢癌。另外,设计成与VEGF结合的阿柏西普(Aflibercept)(Bayer Health Care)的上市许可申请于2011年被FDA批准用于黄斑变性的治疗。然而,FDA于2011年撤回了阿瓦斯汀的乳腺癌相关适应症,因为与安慰剂相比,其未能在乳腺癌患者中表现出总生存率的显著提高。随后的报告指出,阿瓦斯汀提高了乳腺癌患者中心力衰竭的风险,表明需要改进之前开发的抗VEGF中和抗体,并需要确定其在临床前阶段的精确功效。因为阿瓦斯汀不结合小鼠VEGF,所以难以准确确定其在使用小鼠的临床前模型中的功效。因此,本发明的一个目的是开发与小鼠VEGF和人VEGF二者结合的抗体,从而获得临床前模型中结果的可靠性;以及提高抗体对VEGF的结合亲和力,从而改进抗肿瘤效果。
通过生物淘选和亲和力提高,本发明人已经开发了包含之前未知的新互补决定区(CDR)的抗体,并且通过其与VEGF的特异性结合所述抗体能够治疗肿瘤和多种眼内新生血管性病症。
发明概述
因此,本发明的一个目的是提供特异性结合VEGF的抗体。
本发明的另一个目的是提供包含上述抗体的药物组合物。
为实现本发明如上所述的目的,提供了与血管内皮生长因子(VEGF)结合的抗体,所述抗体包含:
1)轻链可变区,其包含互补决定区(CDR)1、CDR2和CDR3,其中CDR2由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出;并且CDR3由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出;以及
2)重链可变区,其包含CDR1、CDR2和CDR3,其中所述CDR3由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出。
为实现本发明如上所述的另一个目的,提供了包含上述抗体的药物组合物,其用于预防、诊断或者治疗由VEGF过表达引起的血管发生相关病症或癌症。
本发明的抗体表现出对人VEGF和小鼠VEGF的明显结合特性,阻抑人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和渗透性并抑制肿瘤生长,因此可用作用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关病症的抗体。
附图说明
当结合附图时,根据本发明的以下描述,本发明的以上以及其他目的和特征将变得明显。
图1示出克隆HF2-11与VEGF的结合与解离的传感图。
图2是示出本发明抗体抑制VEGF与VEGFR2之结合,而不抑制VEGF与VEGFR1之结合的图。
图3是示出本发明抗体与人和小鼠VEGF-A特异性结合的图。
图4示出HF2-11克隆的SDS-PAGE结果。
图5示出抗体HF2-4的重链(a)和轻链(b)的质量分析结果。
图6示出HF2-8克隆的尺寸排阻色谱法(SEC)的结果。
图7和8示出通过ELISA测量的本发明抗体和阿瓦斯汀与人和小鼠VEGF抗体的结合特性的结果。
图9示出本发明抗体和阿瓦斯汀对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖之阻抑活性的测试结果。
图10示出本发明抗体(a)和阿瓦斯汀(b)对HUVEC渗透性之阻抑活性的测试结果。
图11示出本发明抗体对HUVEC迁移之阻抑活性的测试结果。
图12示出本发明抗体在植入HT29的动物模型中对肿瘤生长的抑制活性。
图13示出本发明抗体对脉络膜血管发生的阻抑活性。
发明详述
在本发明中,提供了与VEGF结合的抗体(下文称作“抗VEGF抗体”),所述抗体包含1)轻链可变区,其包含CDR1、CDR2和CDR3,其中所述CDR2由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出;并且CDR3由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出;以及2)重链可变区,其包含CDR1、CDR2和CDR3,其中所述CDR3由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出。
在下表1中示出根据本发明之抗体的轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3(下文分别称作LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列;以及根据本发明之抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3(下文分别称作HCDR1、HCDR2和HCDR3)的氨基酸序列的列表。
[表1]轻链和重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列
根据本发明的与VEGF结合的抗体可包含:1)轻链可变区,其包含选自SEQ ID NO 4至14的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ ID NO2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由选自SEQ ID NO 15至34的氨基酸序列示出的CDR1、由选自SEQ ID NO 35至50的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 4的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 15的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 35的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 16的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 36的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 17的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 37的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 18的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 19的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 39的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 20的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 40的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 21的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ lDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 22的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 7的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 23的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 41的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 24的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 25的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 8的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 26的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 42的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 27的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 9的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 28的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 43的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 29的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 44的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 10的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 30的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 45的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 11的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 31的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 42的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 11的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 20的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 39的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 11的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 32的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 46的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 33的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 45的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 5的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 34的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 47的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 6的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出表的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 25的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 48的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 12的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 31的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 9的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 31的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 46的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 10的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 17的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 42的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 13的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 34的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 49的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)轻链可变区,其包含由SEQID NO 14的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2和由SEQ IDNO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及2)重链可变区,其包含由SEQ ID NO 17的氨基酸序列示出的CDR1、由SEQ ID NO 50的氨基酸序列示出的CDR2和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
根据本发明的与VEGF结合的抗体可包含:1)由选自SEQ ID NO 54至65的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由选自SEQ ID NO 78至104的氨基酸序列示出的重链可变区(参见表2)。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 54的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 78的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 79的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 80的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ lD NO 56的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 81的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 82的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 83的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 84的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 85的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 58的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 86的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 87的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 88的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 59的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 89的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 90的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 60的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 91的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 92的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 61的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 93的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 62的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 94的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 62的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 95的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 62的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 96的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 97的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 98的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 57的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 99的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 63的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 100的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 60的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 101的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 61的氨基酸片列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 102的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 64的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 103的氨基酸序列示出的重链可变区。
根据本发明的一个实施方案的抗VEGF抗体可包含:1)由SEQ ID NO 65的氨基酸序列示出的轻链可变区;以及2)由SEQ ID NO 104的氨基酸序列示出的重链可变区。
本发明的抗体可包含轻链恒定区和重链恒定区,所述轻链恒定区和重量恒定区可以是公众已知的人抗体的轻链恒定区和重链恒定区(U Rutishauser等,PNAS,61(4):1414-1421(1968);和Takahashi N.,等,Cell,29:671-679(1982))。
根据本发明的抗体可以是人抗体或人源化抗体。
根据本发明的抗体可以包括免疫球蛋白IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM,以及可以为与VEGF结合的抗体,或者其组合或变体。
根据本发明的抗体的形式可以为Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb、scFv或骨架缀合物,其中所述抗体的CDR是用于与VEGF结合的主要部分。
另外,在本发明中,提供了选自SEQ ID NO 66至77的碱基序列,其编码由选自SEQID NO 54至65的氨基酸序列示出的轻链可变区。
在本发明中,提供了选自SEQ ID NO 105至131的碱基序列,其编码由选自SEQ IDNO 78至104的氨基酸序列示出的重链可变区。
以下在表2中示出了本发明抗体的轻链和重链之可变区的氨基酸序列和对应碱基序列的列表。
[表2]
另外,在本发明中,提供了编码与VEGF结合之抗体的轻链可变区的DNA,所述轻链可变区包含由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2;以及由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的CDR3。
编码由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出之CDR 2的DNA可以由SEQ ID NO 51的碱基序列示出;并且编码由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出之CDR3的DNA可以由SEQ ID NO 52的碱基序列示出。
因此,编码本发明抗体之轻链可变区的DNA序列可包含编码LCDR2的SEQ ID NO 51的碱基序列;以及编码LCDR3的SEQ ID NO 52的碱基序列.
在本发明中,提供了编码与VEGF结合之抗体的重链可变区的DNA,所述重链可变区包含由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
编码由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出之CDR 3的DNA可以由SEQ ID NO 53的碱基序列示出。
编码抗VEGF抗体的重链可变区的DNA可包含编码HCDR3之SEQ ID NO 53的碱基序列。
在本发明中,提供了包含编码抗体轻链可变区之DNA的表达载体,所述载体表达与VEGF结合之抗体的轻链可变区。
优选地,提供了包含以下的表达载体:编码由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出之CDR 2的SEQ ID NO 51的碱基序列;和编码由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出之CDR 3的SEQID NO 52的碱基序列。
另外,在本发明中,提供了包含编码抗VEGF抗体之重链可变区的DNA的表达载体,所述载体表达与VEGF结合之抗体的重链可变区。
优选地,提供了包含编码由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出之CDR3的碱基序列的表达载体,所述载体表达与VEGF结合之抗体的重链可变区。
可以将本发明的表达载体转染到动物细胞系中,例如CHO细胞、HEK细胞或NS0细胞,但不限于此。
另外,在本发明中,提供了包含编码抗体之轻链可变区的DNA的表达载体,所述载体表达与VEGF结合之抗体的轻链可变区。
血管发生指从先前存在的毛细血管形成新的毛细血管。本文所用的“血管发生相关疾病”涵盖由VEGF过表达引起的与血管发生相关的所有疾病或病症。“血管发生相关疾病”可以包括多种癌症和眼部病症等,但不限于此。在本发明中,由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症可以选自:选自结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和脑癌的癌症;以及选自黄斑变性、糖尿病性视网膜病变和缺血性视网膜病变的眼部病症;等等。
临床实践中,抗VEGF抗体可以与药物组合使用,所述药物例如,基于氟嘧啶的药物、紫杉醇、基于铂的药物、干扰素α-2a、卡铂等(FDA US BL125085阿瓦斯汀标签)。
除了以上抗体之外,本发明的药物组合物还可以与选自以下的药物组合使用:基于氟嘧啶的药物、紫杉醇、基于铂的药物、干扰素α-2a、卡铂、多柔比星(doxorubicin)、顺铂、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、伊立替康、奥沙利铂卡培他滨和多西他赛,但不限于此。
显示出抗癌活性的任何化学治疗剂均可以与本发明的药物组合物组合使用。化学治疗剂可以选自烷基化剂、抗代谢物、叶酸同系物、嘧啶同系物、嘌呤同系物和相关抑制剂,长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配合物、蒽二酮取代的尿素、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素同系物。
在本发明中,提供了用于癌症或由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病的诊断试剂盒,所述试剂盒包含与VEGF结合的抗体。血管发生相关疾病的实例如上所述。
根据本发明的抗体不影响VEGF与VEGF受体Flt-1(VEGFR-1)之间的结合,但选择性地抑制VEGF与VEGF受体KDR(VEGFR-2)之间的结合(图2)。另外,所述抗体根本不结合人VEGF-B、人VEGF-C、人VEGF-D或人胎盘生长因子(PIGF),但对人VEGF-A和小鼠VEGF-A显示出高的结合特异性(图3)。
通过酶联免疫吸附测定(ELISA)来评估本发明的抗体对人血管内皮生长因子的结合亲和力。结果,所述抗体显示出对人VEGF的浓度依赖性结合(图7)。与之前的现有抗VEGF抗体阿瓦斯汀(其不显示出对小鼠VEGF的结合)相比,所述抗体还显示出对小鼠VEGF的优异结合,表明本发明的抗体适合用于使用小鼠的临床前研究(图8)。
此外,本发明的抗体阻抑人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖(VEGF刺激HUVEC渗透性和HUVEC迁移),其程度等于或大于阿瓦斯汀(图9至11),并且在植入人结肠癌细胞系的小鼠中阻抑肿瘤生长,其程度远远超过阿瓦斯汀(图12)。与对照组相比,本发明的抗体还显著阻抑脉络膜血管发生模型中的血管发生(图13)。因此,本发明的人(或人源化的)抗体可以用于治疗癌症或血管发生相关疾病,并且因此本发明提供了用于预防和治疗癌症或血管发生相关疾病之包含上述抗体的组合物。
定义
在本发明中,“VEGF”不仅指165-氨基酸人血管内皮生长因子以及相关的121-氨基酸、189-氨基酸和206-氨基酸血管内皮生长因子,也指天然人血管内皮生长的等位基因形式或经修饰的形式(参见[Leung等,Science.,246:1306(1989);和Houck等,Mol.Endocrin.,5:1806(1991)])。
在本发明中,“抗VEGF抗体”指通过阻碍VEGF与VEGF受体结合来使VEGF活化细胞失活或者在VEGF已经与VEGF受体结合之后抑制血管内皮细胞之活化而发挥作用的抗体。
在本发明中,“抗体”指显示出与某些抗原特异性结合的糖蛋白。“人源化”形式的非人(例如啮齿类动物)抗体是包含来自非人免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗体。大多数情况下,通过用具有期望特异性、亲和力和能力的小鼠、大鼠、兔、鸡或非人灵长类动物的高变区残基替换人免疫球蛋白的高变区残基来构建人源化抗体。在一些情况下,用对应的非人残基替代人免疫球蛋白的框架区(FR)残基。
在本发明中,“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含存在于单个多肽链中的抗体的VH和VL结构域。一般而言,Fv多肽还包含帮助scFv形成与抗原结合之适当结构的VH和VL结构域之间的多肽接头。
在本发明中,“Fab抗体片段”是通过用木瓜蛋白酶消化抗体获得的片段,其中抗体的VH和VL结构域,以及CH1和CL结构域通过S-S键连接,并且其具有抗原结合功能。
在本发明中,“F(ab′)2抗体片段”指不包含Fc(CH2和CH3)片段的抗体部分。F(ab′)2抗体片段可以通过在其铰链区下对抗体进行切割构建。
在本发明中,“Fab′”是铰链区切掉的F(ab′)2抗体片段的形式;并具有两个-SH基团。
在本发明中,“Fv”指抗体的可变区,而“dAb”指单个结构域抗体片段。
在本发明中,“VEGF受体”指VEGF的细胞受体,一般而言,指能够与hVEGF结合的细胞表面受体或其变体。VEGF受体的一个实例是酪氨酸激酶的跨膜受体,特别是fms型酪氨酸激酶(flt)(参见[DeVries等,Science.,255:989(1992);Shibuya等,Oncogene.,5;519(1990)])。Flt受体包含胞外结构域、跨膜结构域和具有酪氨酸激酶活性的细胞内结构域。虽然胞外结构域与VEGF结合有关,而细胞内结构域与信号转导相关。VEGF受体的另一个实例是flk-1受体(下文被称为“KDR”)(参见[Matthews等,Proc.Nat.Acad.Sci.,88:9026(1991);Terman等,Oncogene.,6:1677(1991))。
下文中,将用以下实施例更加详细地描述本发明。提供以下实施例来举例说明本发明,但本发明的范围不限于此。
实施例1.VEGF免疫和cDNA文库构建
为了选择特异性结合VEGF的抗体,从免疫的动物构建抗体文库。通过从用抗原免疫的动物的免疫细胞获得mRNA来构建文库,通过使用抗体基因之引物组合的PCR扩增抗体基因,并将这些基因克隆到用于噬菌体展示的载体中。
具体地,将人VEGF和小鼠VEGF(R&D Systems,美国)与弗氏完全佐剂(completeFreund′s adjuvant)和弗氏不完全佐剂(Sigma,美国)混合,并将其混合物以3周的间隔皮下注射到3只白色来航鸡中5次。获得经免疫动物的血清,使用PBSB(含3%牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液)以1∶100、1∶500、1∶2500和1∶12500稀释并储存,然后通过酶免疫测定来评估其与人VEGF和小鼠VEGF的结合。对于ELISA板,分别用0.2μg/mL人VEGF(VEGF-165,R&DSystems,美国)和小鼠VEGF(VEGF-164,R&D Systems,美国)各自在4℃下包被过夜,然后添加上述稀释的血清,并进行反应2小时。用PBST(含0.1%tween-20的PBS)洗涤3次后,添加抗鸡免疫球蛋白辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)(1∶3000)并进行反应1小时。用PBST洗涤3次后,添加超TMB(Thermo,美国)并允许显色7分钟,使用微板阅读仪(microplate reader)测量在650nm下的吸光度。免疫前的血清不结合VEGF,并且选择产生强烈结合人VEGF和小鼠VEGF二者之血清的动物。
在最后一次注射后5天,从所选的鸡收集骨髓、脾和腔上囊组织。将组织与10mLTRI试剂(Molecular Research Center,美国)混合,匀浆,然后添加20mL TRI试剂,离心以获得上清液。添加3mL的1-溴-3-氯丙烷(1-bromo-3-chloropropane,BCP)之后,离心后获得上清液。通过用15mL异丙醇处理来沉淀总RNA。使用Super Script转录系统(Invitrogen,美国)和随机六聚体(random hexamer)作为引物,进行逆转录反应(65℃,5分钟;4℃,5分钟;50℃,50分钟;85℃,5分钟;以及4℃)。将5μL的反应溶液(含有从逆转录反应得到的cDNA)上样到1%琼脂糖凝胶并进行电泳,并且验证具有多种长度的cDNA带。
实施例2.抗体文库的构建
(2-1)免疫抗体基因的扩增
为扩增鸡抗体的重链可变区和轻链可变区(VH和VL结构域),如下进行PCR反应。
使用实施例1中制备的cDNA作为模板,设计用于VH和VL以及连接VH和VL之单链Fv(scFv)的引物组合,进行PCR反应。将0.5μL VH和VL的各cDNA文库,30pmole正向引物,30pmole反向引物,10×PCR缓冲液,200μM dNTP和0.5μL Taq DNA聚合酶混合至50μL的终体积。将混合物在94℃反应5分钟,然后重复以下反应30个循环:94℃,15秒;56℃,30秒和72℃,90秒。
[表3]PCR反应中使用的引物
将PCR扩增的抗体DNA在1%琼脂糖凝胶上进行电泳,以根据大小分离每种扩增的DNA,并使用凝胶提取试剂盒(Gel extraction kit,Qiagen,美国)进行纯化。
为获得scFv DNA,使用50ng的各自经纯化的VH和VL DNA作为模板,其与30pmole正向引物和30pmole反向引物(表3)、10×PCR缓冲液、200μM dNTP以及0.5μL Taq DNA聚合酶混合至终体积50μL。对混合物进行PCR反应,94℃,5分钟;随后如下进行20个循环:94℃,30秒;56℃,30秒和72℃,2分钟。将PCR扩增的抗体DNA在1%琼脂糖凝胶上进行电泳以根据大小分离每种扩增的DNA,然后使用凝胶提取试剂盒(Qiagen,美国)进行纯化。
(2-2)通过限制性酶切割抗体DNA
通过限制性酶SfiI(Roche,美国)切割上述制备的scFv和噬菌粒载体pComb3X(theScripps Research Institute,CA,美国)。
将10μg编码scFv的PCR片段,360单位的SfiI(Roche,美国)以及20μg的10×缓冲液混合至终体积200μL,并在50℃反应过夜。
此外,将20μg的pComb3X载体,120单位的SfiI和20μL的10×缓冲液混合至终体积200μL,并在50℃反应过夜。对通过限制性酶切割获得的片段进行电泳,然后使用凝胶提取试剂盒(Qiagen,美国)进行纯化。
(2-3)抗体DNA的连接和文库的制备
为了将scFv片段插入到pComb3X载体中,将在(2-2)中使用SfiI切割的700ng编码scFv的PCR片段,与1.4μg的pComb3X混合。添加T4 DNA连接酶(Invitrogen,美国)后,将混合物在16℃反应过夜。通过乙醇沉淀来纯化连接混合物。然后,通过电穿孔用混合物转化大肠杆菌ER2738(New England Biolab,美国),并在46μg/mL羧苄青霉素和70μg/mL卡那霉素的存在下进行培养,以制备复杂性为1.5×109的文库。
实施例3.选择含有抗VEGF scFv的噬菌体克隆
从实施例2中获得的含有scFv形式之随机化重链和轻链的文库中,使用固体固定的VEGF选择与人VEGF和小鼠VEGF二者都结合的抗体。
(3-1)选择与VEGF结合的抗体
首先,将10ug人VEGF(R&D systems,美国)和小鼠VEGF(R&D systems,美国)各自缀合到磁珠。
将实施例2中获得的抗体文库DNA(其被构建以使得scFv形式的抗体以与噬菌体外壳蛋白PIII融合的形式展示)通过电穿孔转染到大肠杆菌ER2738(New England Biolab)中,然后将其在37℃培养。添加VCSM13辅助嗜菌体(Stratagene,美国)之后,进一步添加46ug/ml羧苄青霉素和70ug/ml卡那霉素,随后在SB培养基(30g/L胰蛋白胨,20g/L酵母提取物和10g/L MOPS,pH 7.0)中培养过夜。
将上述获得的含有大肠杆菌和噬菌体的培养基离心以移除大肠杆菌沉淀。回收上清液之后,添加40mg/ml的聚乙二醇8000和30mg/ml的NaCl,随后离心以收集PEG沉淀的噬菌体,其在PBS中重悬。
与磁珠缀合的人VEGF或小鼠VEGF与噬菌体在室温下反应两小时以允许对VEGF有亲和力的噬菌体结合,然后将所得的样品用含有0.5%Tween 20的PBS洗涤,用0.1M甘氨酸(pH 2.2)洗脱,并用2M tris溶液中和。为了下一轮的淘选(panning),用洗脱的噬菌体感染大肠杆菌ER2738并培养过夜。通过重复该过程4次来进行淘选。
随着淘选的循环逐渐增加,洗涤的次数增加,导致具有高结合亲和力的噬菌体累积。为了发现人VEGF和小鼠VEGF二者的结合物,使用仅人VEGF或交替的人VEGF和小鼠VEGF作为抗原。
在100ug/ml羧苄青霉素、70ug/ml卡那霉素以及VCSM13辅助嗜菌体(1∶1000)存在下,将从每个第四轮淘选输出选择的单个克隆在96深孔板中在37℃培养过夜,从而诱导表达抗体的噬菌体增殖。
因此离心所获得的培养液以获取含有噬菌体的培养物上清液。将所获取的培养物上清液添加到用VEGF包被的ELISA板并在37℃孵育2小时。使用HRP缀合的抗M13抗体作为二抗通过ELISA鉴定与VEGF结合的抗体。
(3-2)所选抗体的测序
将在实施例3-1中选择的含有对人VEGF和小鼠VEGF二者显示出阳性信号之克隆的ER2738在SB培养基中培养过夜,并离心以获得大肠杆菌。使用DNA微型制备试剂盒(GeneAll,韩国)来获得质粒DNA并分析其碱基序列。使用在表4中示出的测序引物(SEQ IDNO 138和139)来确定碱基序列。所选择的克隆被称为“克隆F”。在表1中示出了克隆F抗体的详细碱基序列信息。
[表4]
正向(SEQ ID NO 138) | ACA CTT TAT GCT TCC GGC TC |
反向(SEQ ID NO 139) | CAA AAT CAC CGG AAC CAG AG |
实施例4.人源化和亲和力改进
将从动物免疫抗体文库获得的抗体克隆F的框架转变成人抗体框架,同时不改变对抗原结合重要的一些残基(Nishibori等,Molecular Immunology,43(2006))。
为了亲和力改进,对重链和轻链的CDR序列进行随机化以产生新的噬菌体文库。通过在实施例2中所示的相同方法,将所获得的噬菌体文库与10μg固定到磁珠的10ug人VEGF在室温反应2小时并用含0.5%Tween 20的PBS洗涤5次。洗涤之后,用0.1M甘氨酸(pH 2.2)溶液洗脱与抗原结合的噬菌体并用2M tris溶液中和。在第二轮淘选中,将样品用含有Tween 20的PBS洗涤10次,并且在第三轮淘选中用含有Tween 20的PBS洗涤20次以提高选择压力。
经过以上过程的克隆F的变体克隆被称为“HF2-1至HF2-26”,并且通过ELISA和BIAcore来验证其结合亲和力。结果,确认从以上过程获得的与人VEGF和小鼠VEGF结合的抗体具有比母代克隆F高至少10倍的亲和力,其中一些克隆显出出高至少100倍的亲和力。
实施例5.抗体的生产
为了上述获得之抗体的亲和力测量和活性分析,产生scFv或免疫球蛋白(IgG)蛋白。
为了scFv蛋白产生,用含有所选克隆之DNA的pComb3X质粒转化大肠杆菌HB2151,随后纯化所表达的scFv。
具体地,当O.D.值达到1时添加1mM异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG),随后在37℃培养过夜。然后通过离心分离大肠杆菌和培养基。为了纯化结合C末端His标签的scFv,将scFv蛋白质与镍NTA柱(GE,美国)结合,用250-300mM咪唑溶液洗脱并在PBS缓冲液中透析过夜。
为了IgG产生,通过使用实施例2中的条件和表5中所示的引物组合进行PCR来从含有scFv的pComb3x获得重链和轻链的可变区以及恒定区的片段。
通过使用表5中的HC和LC引物组合进行PCR获得重链和轻链的可变区以及恒定区(CH和Ck),并使用pcDNATM3.3- TA克隆试剂盒和pOptiTMVEC- TA克隆试剂盒(Invitrogen,美国)转移到哺乳动物细胞表达质粒。将1μL的每种载体(pcDNATM3.3-载体和pOptiTM VEC-载体)以及片段添加至含有200mM之NaCl和10mM之MgCl2的缓冲液,至总体积为6μL,并在室温下反应5分钟。通过施加热激来转化DH 5a大肠杆菌感受态细胞并且将这样获得的集落在大规模上培养以获得质粒。
用上述制备的质粒转染HEK293F细胞(Invitrogen,美国),并使用蛋白A柱(GE,美国)纯化培养7天后所获得的抗体。将培养基上样至柱以允许培养基中的抗体(IgG)结合蛋白A。然后用20mM柠檬酸钠缓冲液(pH 3.0)洗脱抗体。轻链和重链的分子量与理论上计算的值一致,并且通过SDS-PAGE确认了高度的纯度。
[表5]
实施例6.结合亲和力的测量
分别用0.2μg/ml的人VEGF和小鼠VEGF(R&D systems,美国)包被ELISA板,并以系列稀释浓度孵育由HB2151表达之scFv形式的实施例5中获得的纯化蛋白质或者由293F细胞表达的IgG。结果,在实施例3-2中获得的克隆F以及通过亲和力改进获得的其变体显示出与人VEGF和小鼠VEGF以浓度依赖性方式的良好结合。
期间,按照制造商的说明书,将人VEGF和小鼠VEGF与羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5,GE)偶联以测量亲和力。为了测量结合和解离速率,将IgG蛋白系列稀释2倍至5nM、2.5nM、1.25nM、0.625nM、0.313nM和0.156nM并进行注射。
通过结合与解离传感图表示结合与解离速率并使用简单地1∶1Langmuir结合模型(BIAcore X100评估软件,2.0版)计算。按照解离速率常数(Kd)除以结合速率常数(Ka)计算的平衡解离常数(KD)在指示高亲和力的亚纳摩尔水平得到确认。在表6中示出了抗体HF2-1至HF2-11、HF2-13和HF2-14针对人VEGF(hVEGF)的测量值,并且在图1中示出作为一个代表性实例的HF2-11的传感图。
[表6]
克隆 | 结合分子 | Ka(1/Ms) | Kd(1/s) | KD(M) |
HF2-1 | hVEGF | 2.5X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
HF2-2 | hVEGF | 1.1X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
HF2-3 | hVEGF | 1.3X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
HF2-4 | hVEGF | 1.6X10<sup>6</sup> | 3.1X10<sup>-6</sup> | 1.9X10<sup>-12</sup> |
HF2-5 | hVEGF | 1.3X10<sup>6</sup> | 2.6X10<sup>-5</sup> | 1.9X10<sup>-11</sup> |
HF2-6 | hVEGF | 1.6X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
HF2-7 | hVEGF | 1.6X10<sup>6</sup> | 2.7X10<sup>-5</sup> | 1.6X10<sup>-11</sup> |
HF2-8 | hVEGF | 1.5X10<sup>6</sup> | 5.7X10<sup>-5</sup> | 3.6X10<sup>-11</sup> |
HF2-9 | hVEGF | 1.7X10<sup>6</sup> | 3.2X10<sup>-5</sup> | 1.8X10<sup>-11</sup> |
HF2-10 | hVEGF | 1.6X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
HF2-11 | hVEGF | 1.4X10<sup>6</sup> | 6.8X10<sup>-6</sup> | 4.7X10<sup>-12</sup> |
HF2-13 | hVEGF | 1.4X10<sup>6</sup> | 1X10<sup>-5</sup> | 9.0X10<sup>-12</sup> |
HF2-14 | hVEGF | 1.3X10<sup>6</sup> | <1X10<sup>-6</sup> | <1X10<sup>-12</sup> |
实施例7.抑制配体-受体结合的验证
为了验证本发明所选的抗体(HF2-1、HF2-5、HF2-9和HF2-11)对VEGF与VEGF受体KDR(下文称为VEGFR2)或VEGF受体Flt-1(下文称为VEGFR1)之结合的抑制作用,如下进行实验。
将0.5μg/ml的人VEGF包被到96孔ELISA板并用含3%BSA和0.05%Tween 20的PBS溶液封闭。将6nM的Flt-1ECD IgG-Fc融合蛋白(27-687,R&D systems,美国)或9nM的KDRECD IgG-Fc融合蛋白(R&D systems,美国)与系列稀释(0.01nM、0.1nM、0.3nM、1nM、3nM、10nM和100nM)的每种抗体HF2-1、HF2-5、HF2-9和HF2-11一起添加至每个孔,并在37℃孵育1小时。尽管抗体抑制Flt-1ECD IgG Fc融合蛋白和KDR ECD IgG-Fc融合蛋白结合,然而使用抗人IgG-Fc抗体HRP缀合物(Jackson Immunoresearch,美国),随后通过ABTS显色和在405nm测量吸光度检测结合。
结果,如图2所示,本发明的抗体以浓度依赖性方式抑制VEGF与KDR(VEGFR2)的结合,但不抑制VEGF与Flt-1(VEGFR1)的结合。因此,确认本发明所选的抗体选择性地抑制VEGF与VEGF受体的结合。
实施例8.结合特异性的验证
为测量本发明所选的抗体HF2-1、HF2-5、HF2-9和HF2-11对人VEGF-A(hVEGF-A)、小鼠VEGF-A(mVEGF-A)、人VEGF-B(hVEGF-B)、人VEGF-C(hVEGF-C)、人VEGF-D(hVEGF-D)和人胎盘生长因子(PlGF)的结合特异性,如下进行实验。
分别用0.2μg/ml各蛋白质(hVEGF-A、mVEGF-A、hVEGF-B、hVEGF-C、hVEGF-D和PlGF)(R&D systems)各自包被ELISA板的孔。在用含有3%BSA和0.05%Tween 20的PBS在37℃封闭30分钟后,将提高浓度的抗体克隆蛋白在37℃孵育2小时。然后用含有3%BSA和0.05%Tween 20的PBS洗涤孔3次,向其添加抗人IgG-Fab-HRP缀合物(Jackson Immunoresearch,美国)并在室温下孵育1小时。然后将它们用含有3%BSA和0.05%Tween 20的PBS洗涤3次,并使用TMB显色,在650nm下测量吸光度。使用阿瓦斯汀(Roche,瑞士)作为对照。
如图3中所示,本发明的抗体克隆良好结合hVEGF-A和mVEGF-A,而根本不结合VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D或PlGF,表明对VEGF的高特异性。
实施例9.物理化学特征的分析
对本发明抗体的物理化学特征进行分析。
在DTT存在以移除二硫键的还原条件下和在不存在DTT处理的非还原条件下,使用NuPAGE 4-12%Bis-Tris凝胶(Invitrogen Co.)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析确认整个抗体的轻链和重链的存在。在图4中示出作为一个示例性实例的HF2-11的分子量测量结果。
如图4所示,在非还原条件(NR,5μg)下分析的试样显示出在116 kDa大小标记和205 kDa大小标记之间的主带,确认了对应于整个抗体之大小的条带的存在。在还原条件(R,2μg)下分析试样显示出分别在55 kDa和20.1 kDa大小标记附近的主带,确认了对应于抗体的重链和轻链之条带的存在。因此,通过SDS-PAGE鉴定了对应于整个抗体、重链和轻链的条带,并且未发现其他主要的杂质条带。
另外,使用液相色谱/质谱法(LC/MS)确认了HF2-4的分子量,及其与理论氨基酸序列的估计值一致。在图5(a)和(b)中示出了作为一个代表性实例的HF2-4之重链和轻链的质量分析结果。
在部分还原试样后,分析重链和轻链的质量。重链显示的主峰为50.6 kDa大小而轻链显示的主峰为23.3 kDa大小,这与估计的分子量值一致。另外,观察到的小峰似乎是翻译后修饰(例如糖基化)的结果。
此外,使用TSKgel G3000SWxl柱(Tosoh Co.)通过尺寸排阻色谱法(SEC)分析本发明抗体HF2-8的聚集状态(即,可溶聚集体,一种类型的杂质),并且在图6中示出结果。通过用100mM磷酸盐缓冲液(pH6.6)作为移动相的等度洗脱来分离,并在280nm监测,观察到单体峰面积为总峰面积的98%或以上,然而聚集体所占的峰面积小于2%,表明高的纯度。
实施例10.与人VEGF或小鼠VEGF结合的抗体的分析
使用ELISA方法来验证本发明抗体(HF2-1至HF2-26)与人血管内皮生长因子(VEGF)的结合特性。
将稀释在150μL缓冲液中的1.5ng人VEGF置于96孔免疫板(Nunc,美国)中,并在4℃吸附过夜,随后用含有0.1%Tween 20的缓冲液洗涤3次。然后将它们与含有1%牛血清白蛋白(Sigma,美国)的缓冲液在室温下反应1小时,并洗涤3次。然后将每个孔用150μL系列稀释的抗体(1ng/mL、10ng/mL、30ng/mL、100ng/mL、1000ng/mL和3000ng/mL)处理。允许它们在室温下反应1小时,以使得抗原可与抗体结合,随后用缓冲液洗涤3次。
用1∶20000稀释的抗人免疫球蛋白Fc-HRP抗体(AbSerotec,美国)以150μL/孔处理每个孔,并允许在室温下反应1小时。在反应完成后,用缓冲液进行3次洗涤,随后添加150μL的TMB(Sigma,美国)并显色10分钟。用1N的硫酸溶液终止该反应,并使用分光光度计(Molecular Device,美国)在450nm测量吸光度。结果在图7中示出。将阿瓦斯汀用作对照组,以相同方式测量其吸光度。
如图7所示,确认HF克隆(b)(其是克隆F(a)的人源化克隆)的结合特性通过亲和力改进过程而提高。发现相比于阿瓦斯汀,这些HF克隆(HF2-1至HF2-26)的大多数显示出对VEGF更高的结合特性。
通过ELISA以上文所述的相同方式验证抗体对小鼠VEGF的结合特性。在图8中示出的结果表明,与阿瓦斯汀不同,本发明的抗体HF2-1、HF2-5、HF2-8和HF2-9结合小鼠VEGF以及人VEGF,表明本发明的抗体适用于使用小鼠的临床前研究。
实施例11.确认本发明抗体对VEGF诱导之HUVEC增殖的阻抑活性
确认本发明抗体对VEGF诱导之HUVEC增殖的阻抑活性。
通过离心人脐静脉内皮细胞(HUVEC,Clonetics,美国)获得沉淀,然后将其在不包含生长因子和牛血清的EBM-2基础培养基(Clonetics,美国)中悬浮。将细胞悬浮液铺板到96孔细胞培养板上(每孔的细胞数目相同),将其在恒温加湿培养箱中孵育24小时。孵育完成后,弃掉培养基,并用以系列浓度(30ng/mL、60ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL、300ng/mL、1000ng/mL和3000ng/mL)稀释的各个抗体与以30~90ng/mL的某浓度稀释的人VEGF的混合溶液处理孔。将用抗原和抗体处理的细胞在恒温加湿培养箱中培养4天,然后用刃天青溶液(Invitrogen,美国)以每孔10μL处理。3~4小时后,在530nm/590nm测量荧光。使用阿瓦斯汀作为对照,并且相对于仅用VEGF处理的孔的荧光值定量抗体对细胞增殖的阻抑作用。在图9(b)中示出了当用抗体HF-1、HF-4、HF-5和HF-8处理时,HUVEC增殖速率的结果,而图9(c)和(d)中示出了用抗体HF-1至HF-5、HF-9和HF-11处理时,细胞存活率的结果。
如图9中所示,本发明的抗体HF2-5阻抑VEGF诱导的HUVEC增殖,程度上类似于阿瓦斯汀(图9(b)和(d))。另外,示出通过F克隆的人源化(a)和亲和力改进(b、c、d)提高了抗体的活性。
实施例12.确认本发明抗体对VEGF诱导的HUVEC渗透性的阻抑活性
评估本发明抗体对VEGF诱导的HUVEC(Clonetics,美国)渗透性的阻抑活性。
测试前一天,用胶原蛋白溶液(Sigma,美国)处理具有0.4μm微多孔膜的Transwell以促进细胞附着。使用胰蛋白酶收集细胞,并以5×104细胞/mL的浓度悬浮。将Transwell中的胶原蛋白溶液弃掉,并用缓冲溶液洗涤Transwell一次。将100ul的细胞悬浮液分散到每个孔中。向底室添加600μL体积的EGM-2培养基(Clonetics,美国)。形成单层内皮细胞后,将含有稀释的抗体(HF2-5、HF2-9、HF2-11或阿瓦斯汀(对照),各自以1×或10×)和稀释到30ng/mL至90ng/mL的人VEGF的混合溶液分别以100μL和600μL的体积添加至Transwell和底室,并允许在培养箱中反应过夜。在反应完成后,移除Transwell中的溶液,并且用100μL的葡聚糖-FITC溶液处理Transwell。1小时后,在490nm/520nm测量荧光以检测通过Transwell的葡聚糖。使用不含有VEGF的EBM培养基作为对照。
如图10中所示,本发明的抗体以浓度依赖性的模式阻抑由VEGF导致的内皮细胞渗透性增强(a),这与阳性对照阿瓦斯汀类似(b)。
实施例13.确认本发明抗体对VEGF诱导的HUVEC迁移的阻抑活性
评估本发明抗体HF2-4和HF2-8对VEGF诱导的HUVEC(Clonetics,美国)迁移特性的阻抑活性。
为了定量评估内皮细胞的迁移特性,使用具有3μm微多孔膜的Transwell进行Boyden室测试。为提高VEGF的反应性,测试前,将在烧瓶中培养的细胞于含有0.1%BSA的EBM-2基础培养基中饥饿4小时以上。将细胞悬浮液以100μL体积中每孔50,000个细胞置于上室中,而含有稀释在基础培养基中3ng/mL的VEGF以及9ng/mL或90ng/mL抗体(HF2-4或HF2-8)的混合溶液以600uL体积置于下室。
孵育24小时后,使用胰蛋白酶分开已经随VEGF的浓度梯度迁移到Transwell的相对侧的细胞。通过离心收集分开的细胞,然后用裂解缓冲液(Invitrogen,美国)裂解。用DNA染料(Invitrogen,美国)染色经裂解细胞中的DNA,并且在480nm/520nm测量荧光。在图11中示出结果。
图11中的结果表明内皮细胞的迁移特性被人VEGF增强,并且增强的迁移特性可被抗体HF2-4和HF2-8以浓度依赖性方式阻抑。
实施例14:确认本发明抗体对肿瘤生长的阻抑活性
为评估抗体对肿瘤生长的阻抑活性,将本发明的抗体注射到裸鼠中,在裸鼠中已经通过植入人癌细胞来形成肿瘤。
具体地,将在含有10%FBS和1%青霉素链霉素的McCoy的5A培养基中培养的2~5×106个HT-29细胞(人结肠癌细胞系HTB-38,ATCC)皮下注射到BALB/c裸鼠(Orient Bio)中。当小鼠中的肿瘤充分生长至约200~300mm3的平均体积时,分别将抗体HF2-1、HF2-5、HF2-9和HF2-11注射到划分的组中。以3mg/kg或10mg/kg的剂量一周两次腹膜内注射抗体。在不同的时间点(第7天、第14天、第21天、第28天和第35天)测量肿瘤的体积(mm3)。使用缓冲液(PBS)作为阴性对照组,并且在阳性对照组中施用阿瓦斯汀。结果在图12中示出。
如图12中所示,与对照组相比,注射抗体的小鼠中,肿瘤生长被显著阻抑。特别地,与注射阿瓦斯汀的组相比,注射抗体的组显示出优越得多的肿瘤生长阻抑作用。
实施例15:确认本发明抗体对视网膜新血管形成的阻抑活性
为了确认本发明抗体对视网膜新血管形成的阻抑活性,如下进行实验。
首先,为了诱导视网膜中的新血管形成,在实验的第0天使用光凝结器(viridislaser,Quantel,法国)向小鼠的右眼施加150mW且530nm的激光,持续0.1秒。损伤后将投影调整至0.1uM。在第0天和第7天,将抗体HF2-4和HF2-11分别以1ug和5ug的剂量注射到右眼球中。在第7天和第14天进行眼底荧光素血管造影术以评估眼底血管发生的程度。使用PBS作为阴性对照组(载剂),并且使用阿柏西普(Bayer health care)作为阳性对照组(参照药物)。通过dunnett的多重比较检验分析眼底血管造影评分,结果在图13中示出。
如图13中所示,与阴性对照组相比,注射本发明抗体的组显示出对脉络膜血管发生的优越阻抑作用,并且至少等于市售的比较药物。
虽然已经参照以上具体实施方案描述了本发明,然而应当认识到本领域技术人员可以对本发明进行多种修饰和改变,其也落入由所述权利要求所限定之本发明的范围内。
<110> DONG-A SOCIO HOLDINGS CO., Ltd.
IBIO, INC.
<120> 用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关疾病的
抗VEGF抗体和含有所述抗体的药物组合物
<130> PCB403009IBO
<150> KR 2013/0062413
<151> 2013-05-31
<160> 151
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区中CDR2的氨基酸序列
(LCDR2)
<400> 1
Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区中CDR3的氨基酸序列
(LCDR3)
<400> 2
Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly Val Gly Ile
1 5 10
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区中CDR3的氨基酸序列
(HCDR3)
<400> 3
Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的LCDR1的氨基酸序列
<400> 4
Ser Gly Gly Ser Asn Ser Ala Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1、HF2-2、HF2-3、HF2-4、HF2-5、
HF2-14、HF2-19、HF2-20的LCDR1的氨基酸序列
<400> 5
Ser Gly Gly Ser Asp Ser Ala Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6、HF2-7、HF2-9、HF2-10、
HF2-12、HF2-21的LCDR1的氨基酸序列
<400> 6
Ser Gly Gly Ser Met Glu Pro Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的LCDR1的氨基酸序列
<400> 7
Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Ser Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的LCDR1的氨基酸序列
<400> 8
Ser Gly Gly Ser Ser Glu Pro Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13、HF2-23的LCDR1的氨基酸序列
<400> 9
Ser Gly Gly Ser Asp Leu Leu Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15、HF2-24的LCDR1的氨基酸序列
<400> 10
Ser Gly Gly Ser Gln Glu Ser Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 11
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16、HF2-17、HF2-18的LCDR1的氨基酸序列
<400> 11
Ser Gly Gly Ser Ile Glu Pro Leu Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-22的LCDR1的氨基酸序列
<400> 12
Ser Gly Gly Ser Thr Ala Gly Val Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的LCDR1的氨基酸序列
<400> 13
Ser Gly Gly Ser Asn Phe Pro Met Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的LCDR1的氨基酸序列
<400> 14
Thr Ala Pro Ala Asp Ser Ala Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的HCDR1的氨基酸序列
<400> 15
Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1的HCDR1的氨基酸序列
<400> 16
Asn Phe Val Phe Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-2、HF2-24、HF2-26的HCDR1的氨基酸序列
<400> 17
Arg Phe Asn Met Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3的HCDR1的氨基酸序列
<400> 18
His Phe Asn Met Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-4的HCDR1的氨基酸序列
<400> 19
Gly Trp Ser Met Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-5、HF2-17的HCDR1的氨基酸序列
<400> 20
Gly Phe Met Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6的HCDR1的氨基酸序列
<400> 21
Arg Phe Leu Leu Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-7的HCDR1的氨基酸序列
<400> 22
Gln Phe Trp Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的HCDR1的氨基酸序列
<400> 23
Gly Phe His Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-9的HCDR1的氨基酸序列
<400> 24
Met Phe Arg Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-10、HF2-21的HCDR1的氨基酸序列
<400> 25
Phe Gln Tyr Phe Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的HCDR1的氨基酸序列
<400> 26
Gly Phe Leu Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-12的HCDR1的氨基酸序列
<400> 27
Tyr Ser Glu Val Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13的HCDR1的氨基酸序列
<400> 28
Gly Phe Leu Val Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-14的HCDR1的氨基酸序列
<400> 29
His Ser Ser Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15的HCDR1的氨基酸序列
<400> 30
Gly Phe Val Val Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16、HF2-22、HF2-23的HCDR1的氨基酸序列
<400> 31
Gly Phe Arg Ile Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-18的HCDR1的氨基酸序列
<400> 32
Tyr Trp Ala Phe Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-19的HCDR1的氨基酸序列
<400> 33
Gly Phe Ser Thr Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-20、HF2-25的HCDR1的氨基酸序列
<400> 34
Tyr Met Glu Tyr Arg Ser His Gly Met Gln
1 5 10
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的HCDR2的氨基酸序列
<400> 35
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Thr Gly Tyr Gly Ala Ala Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 36
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1的HCDR2的氨基酸序列
<400> 36
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Thr Gly Tyr Gly Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-2的HCDR2的氨基酸序列
<400> 37
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Glu Arg Val Gly Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 38
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3、HF2-6、HF2-7、HF2-9、
HF2-10、HF2-12、HF2-22的HCDR2的氨基酸序列
<400> 38
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-4、HF2-17的HCDR2的氨基酸序列
<400> 39
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Arg Arg His Ser Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-5的HCDR2的氨基酸序列
<400> 40
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ala Arg His Ser Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的HCDR2的氨基酸序列
<400> 41
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Leu Lys Leu Ser Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11、HF2-16、HF2-24的HCDR2的氨基酸序列
<400> 42
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Val Lys Val Ala Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13的HCDR2的氨基酸序列
<400> 43
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Gln Arg Val Asn Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-14的HCDR2的氨基酸序列
<400> 44
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Leu Arg Gln Asp Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15、HF2-19的HCDR2的氨基酸序列
<400> 45
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Lys Ala Thr Ala Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-18、HF2-23的HCDR2的氨基酸序列
<400> 46
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Ser Ser Ala Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-20的HCDR2的氨基酸序列
<400> 47
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ser Arg Val Asp Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-21的HCDR2的氨基酸序列
<400> 48
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Tyr Arg Val Gln Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的HCDR2的氨基酸序列
<400> 49
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Met Asn Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的HCDR2的氨基酸序列
<400> 50
Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ile Arg Val Gln Ala Ala Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区的碱基序列(LCDR2)
<400> 51
tgggacgaca agcggccctc c 21
<210> 52
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区的碱基序列(LCDR3)
<400> 52
ggagcctggg agtactccgg cggcgtgggc atc 33
<210> 53
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区的碱基序列(HCDR3)
<400> 53
gacttctcca ccggctacgg agccgactcc atcgacgcc 39
<210> 54
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 54
Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val Lys
1 5 10 15
Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asn Ser Ala Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Trp Asp
35 40 45
Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser
50 55 60
Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Arg Ala Glu Asp Glu
65 70 75 80
Ala Val Tyr Phe Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly Val Gly Ile
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 55
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1、HF2-2、HF2-4、HF2-5、HF2-14、HF2-19、
HF2-20的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asp Ser Ala Tyr Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 56
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asp Ser Ala Tyr Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6、HF2-7、HF2-9、HF2-10、HF2-12、HF2-21
的轻链可变区的氨基酸序列的氨基酸序列
<400> 57
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Met Glu Pro Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 58
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Ser Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 59
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Ser Glu Pro Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13、HF2-23的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asp Leu Leu Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15、HF2-24的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Gln Glu Ser Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 62
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16、HF2-17、HF2-18
的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Ile Glu Pro Leu Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 63
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-22的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 63
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Thr Ala Gly Val Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 64
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 64
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Asn Phe Pro Met Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的轻链可变区的氨基酸序列
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Thr Ala Pro Ala Asp Ser Ala Tyr Gly
20 25 30
Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Asp Asp Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Glu Tyr Ser Gly Gly
85 90 95
Val Gly Ile Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 66
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的轻链可变区的碱基序列
<400> 66
ctgactcagc cgtcctcggt gtcagcaaac ccaggagaaa ccgtcaagat cacctgctcc 60
gggggcagta acagtgctta tggctatggc tggtatcagc agaagtctcc tggcagtgcc 120
cctgtcactc tgatctattg ggacgacaag cggccctccg acatcccttc acgattctcc 180
ggttccgcat ccggctccac agccacatta accatcactg gggtccgagc cgaggacgag 240
gctgtctatt tctgtggtgc ctgggaatac agcggcggcg ttggtatatt tggggccggg 300
acaaccctga ccgtccta 318
<210> 67
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1、HF2-2、HF2-4、HF2-5、HF2-14、HF2-19、HF2-20
的轻链可变区的碱基序列
<400> 67
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cgactccgcc tacggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 68
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3的轻链可变区的碱基序列
<400> 68
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cgactccgcc tacggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgcgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 69
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6、HF2-7、HF2-9、HF2-10、HF2-12、HF2-21
的轻链可变区的碱基序列
<400> 69
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc catggagcct ttgggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 70
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的轻链可变区的碱基序列
<400> 70
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cacttatagt cttggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 71
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的轻链可变区的碱基序列
<400> 71
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cagtgagcct ctgggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 72
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13、HF2-23的轻链可变区的碱基序列
<400> 72
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cgatctgttg ttgggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 73
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15、HF2-24的轻链可变区的碱基序列
<400> 73
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc ccaggagtct cttggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 74
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16、HF2-17、HF2-18的轻链可变区的碱基序列
<400> 74
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cattgagcct ttgggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 75
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-22的轻链可变区的碱基序列
<400> 75
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc cacggcgggt gttggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 76
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的轻链可变区的碱基序列
<400> 76
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccggcggctc caattttcct atgggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 77
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的轻链可变区的碱基序列
<400> 77
gacatccaga tgacccagtc cccctcctcg ctgagcgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgca ctgcgcctgc tgactccgcc tacggctacg gctggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggcgc ctaagacgct gatctactgg gacgacaagc ggccctccgg cgtgccttcc 180
cggttctccg gatccagatc cggcaccgac ttcaccctga ccatctcctc cctgcaacct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgcggagcc tgggagtact ccggcggcgt gggcatcttc 300
ggccagggta ccaaggtgga gatcaag 327
<210> 78
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的重链可变区的氨基酸序列
<400> 78
Ala Val Thr Leu His Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Thr Gly Tyr Gly Ala Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 79
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1的重链可变区的氨基酸序列
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asn Phe Val Phe Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Thr Gly Tyr Gly Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-2的重链可变区的氨基酸序列
<400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Asn Met Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Glu Arg Val Gly Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 81
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3的重链可变区的氨基酸序列
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser His Phe Asn Met Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 82
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-4的重链可变区的氨基酸序列
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Trp Ser Met Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Arg Arg His Ser Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-5的重链可变区的氨基酸序列
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Met Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ala Arg His Ser Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 84
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6的重链可变区的氨基酸序列
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Leu Leu Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 85
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-7的重链可变区的氨基酸序列
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gln Phe Trp Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 86
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的重链可变区的氨基酸序列
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe His Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Leu Lys Leu Ser Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 87
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-9的重链可变区的氨基酸序列
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Met Phe Arg Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 88
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-10的重链可变区的氨基酸序列
<400> 88
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Phe Gln Tyr Phe Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 89
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的重链可变区的氨基酸序列
<400> 89
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Leu Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Val Lys Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 90
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-12的重链可变区的氨基酸序列
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Ser Glu Val Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 91
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13的重链可变区的氨基酸序列
<400> 91
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Leu Val Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Gln Arg Val Asn Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 92
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-14的重链可变区的氨基酸序列
<400> 92
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser His Ser Ser Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Leu Arg Gln Asp Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 93
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15的重链可变区的氨基酸序列
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Val Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Lys Ala Thr Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 94
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16的重链可变区的氨基酸序列
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Val Lys Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-17的重链可变区的氨基酸序列
<400> 95
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Met Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Arg Arg His Ser Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 96
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-18的重链可变区的氨基酸序列
<400> 96
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Trp Ala Phe Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Ser Ser Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 97
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-19的重链可变区的氨基酸序列
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Thr Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Lys Ala Thr Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 98
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-20的重链可变区的氨基酸序列
<400> 98
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Met Glu Tyr Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ser Arg Val Asp Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-21的重链可变区的氨基酸序列
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Phe Gln Tyr Phe Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Tyr Arg Val Gln Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 100
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-22的重链可变区的氨基酸序列
<400> 100
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 101
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-23的重链可变区的氨基酸序列
<400> 101
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Arg Ile Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Ser Ser Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 102
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-24的重链可变区的氨基酸序列
<400> 102
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Asn Met Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Val Lys Val Ala Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 103
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的重链可变区的氨基酸序列
<400> 103
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Tyr Met Glu Tyr Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Phe Arg Met Asn Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 104
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的重链可变区的氨基酸序列
<400> 104
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Asn Met Arg Ser His
20 25 30
Gly Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Ser Asp Gly Ser Trp Ile Arg Val Gln Ala Ala Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Phe Ser Thr Gly Tyr Gly Ala Asp Ser Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 105
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆F的重链可变区的碱基序列
<400> 105
gccgtgacgt tgcacgagtc cgggggcggc ctccagacgc cgggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgcagtgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggctggagta tgtcgcgggt attagtagtg atggtagttg gacaggctac 180
ggggcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggcagaggac accgccacct actactgcgc cagagatttt 300
agtactggct atggcgctga tagtatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360
tcctcc 366
<210> 106
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-1的重链可变区的碱基序列
<400> 106
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccaattt tgtgtttagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gaccggctac 180
ggagccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 107
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-2的重链可变区的碱基序列
<400> 107
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccgttt taatatgcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg ggagagggtt 180
ggggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 108
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-3的重链可变区的碱基序列
<400> 108
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccattt taatatgcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 109
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-4的重链可变区的碱基序列
<400> 109
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccgggtg gagtatgcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gaggaggcat 180
agtgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 110
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-5的重链可变区的碱基序列
<400> 110
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tatgattcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg ggcgcggcat 180
tcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 111
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-6的重链可变区的碱基序列
<400> 111
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccggtt tcttctgcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 112
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-7的重链可变区的碱基序列
<400> 112
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccagtt ttggattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 113
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-8的重链可变区的碱基序列
<400> 113
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccgggtt tcatattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gcttaagctg 180
agtgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 114
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-9的重链可变区的碱基序列
<400> 114
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccatgtt taggattcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 115
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-10的重链可变区的碱基序列
<400> 115
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctttca gtattttcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 116
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-11的重链可变区的碱基序列
<400> 116
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tcttattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg ggtgaaggtg 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 117
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-12的重链可变区的碱基序列
<400> 117
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctatag tgaggttcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 118
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-13的重链可变区的碱基序列
<400> 118
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tcttgtgcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gcagcgtgtg 180
aatgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 119
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-14的重链可变区的碱基序列
<400> 119
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccatag ttcgattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gcttaggcag 180
gatgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 120
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-15的重链可变区的碱基序列
<400> 120
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tgtggttagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gaaggctacg 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 121
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-16的重链可变区的碱基序列
<400> 121
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tcgtattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg ggtgaaggtg 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 122
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-17的重链可变区的碱基序列
<400> 122
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tatgattcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gaggaggcat 180
agtgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 123
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-18的重链可变区的碱基序列
<400> 123
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctattg ggcgtttagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gttttctagt 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 124
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-19的重链可变区的碱基序列
<400> 124
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccgggtt tagtacgcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gaaggctacg 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 125
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-20的重链可变区的碱基序列
<400> 125
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctatat ggagtatagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtcgcgggtg 180
gatgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 126
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-21的重链可变区的碱基序列
<400> 126
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctttca gtattttcgt tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtatcgggtg 180
caggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 127
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-22的重链可变区的碱基序列
<400> 127
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tcgtattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgggtt 180
gctgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 128
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-23的重链可变区的碱基序列
<400> 128
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggttt tcgtattagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gttttctagt 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 129
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-24的重链可变区的碱基序列
<400> 129
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccgttt taatatgcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg ggtgaaggtg 180
gcggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 130
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-25的重链可变区的碱基序列
<400> 130
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcctatat ggagtatagg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gtttcgtatg 180
aatgccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 131
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 克隆HF2-26的重链可变区的碱基序列
<400> 131
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggaag cttgcggctg 60
tcctgcgccg cctcccgttt taatatgcgg tcccacggca tgcagtgggt gcggcaggcc 120
cctggcaagg gcctcgagta cgtggccggc atctcctccg acggctcctg gattcgggtg 180
caggccgccg tggagggccg gttcaccatc tcccgcgacg actccaagaa caccgcctac 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagagacttc 300
tccaccggct acggagccga ctccatcgac gcctggggcc agggcacact agtgaccgtg 360
tcctcc 366
<210> 132
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增VH结构域的PCR正向引物
<400> 132
ggtcagtcct ctagatcttc cggcggtggt ggcagctccg gtggtggcgg ttccgccgtg 60
acgttggacg ag 72
<210> 133
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增VH结构域的PCR反向引物
<400> 133
ctggccggcc tggccactag tggaggagac gatgacttcg gtcc 44
<210> 134
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增VL结构域的PCR正向引物
<400> 134
gtggcccagg cggccctgac tcagccgtcc tcggtgtc 38
<210> 135
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增VL结构域的PCR反向引物
<400> 135
ggaagatcta gaggactgac ctaggacggt cagg 34
<210> 136
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增ScFV的PCR正向引物
<400> 136
gaggaggagg aggaggaggt ggcccaggcg gccctgactc ag 42
<210> 137
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增ScFV的PCR反向引物
<400> 137
gaggaggagg aggaggagga gctggccggc ctggccacta gtggagg 47
<210> 138
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于质粒DNA(克隆F)之测序的正向引物
<400> 138
acactttatg cttccggctc 20
<210> 139
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于质粒DNA(克隆F)之测序的反向引物
<400> 139
caaaatcacc ggaaccagag 20
<210> 140
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的VH结构域的PCR正向引物
<400> 140
gctagccgcc accatgggc 19
<210> 141
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的VH结构域的PCR反向引物
<400> 141
aggggccctt ggtggaggcc tggccggcct ggccact 37
<210> 142
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的CH结构域的PCR正向引物
<400> 142
gcctccacca agggcccctc 20
<210> 143
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的CH结构域的PCR反向引物
<400> 143
cgggatccct tgccggccgt 20
<210> 144
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的HC的PCR正向引物
<400> 144
gctagccgcc accatgggc 19
<210> 145
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的HC的PCR反向引物
<400> 145
cgggatccct tgccggccgt 20
<210> 146
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的VL的PCR正向引物
<400> 146
aagcttgccg ccaccatg 18
<210> 147
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的VL的PCR反向引物
<400> 147
agggggcggc cacggtccgg gaagatctag aggactg 37
<210> 148
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的Ck结构域的PCR正向引物
<400> 148
cggaccgtgg ccgccccctc 20
<210> 149
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的Ck结构域的PCR反向引物
<400> 149
gctctagact agcactcgc 19
<210> 150
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的LC的PCR正向引物
<400> 150
aagcttgccg ccaccatg 18
<210> 151
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 用于扩增从pComb3x获得的LC的PCR反向引物
<400> 151
gctctagact agcactcgc 19
Claims (16)
1.与血管内皮生长因子(VEGF)结合的抗体,所述抗体包含:
1)轻链可变区,其包含:由SEQ ID NO 5的氨基酸序列示出的互补决定区(CDR)1;由SEQID NO 1的氨基酸序列示出的CDR 2;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的CDR3;以及
2)重链可变区,其包含:由SEQ ID NO 19的氨基酸序列示出的CDR1;由SEQ ID NO 39的氨基酸序列示出的CDR2;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
2.权利要求1所述的与VEGF结合的抗体,其中所述抗体包含:
1)轻链可变区,其由SEQ ID NO 55的氨基酸序列示出;以及
2)重链可变区,其由SEQ ID NO 82的氨基酸序列示出。
3.权利要求1所述的与VEGF结合的抗体,其中所述抗体是人源化抗体。
4.权利要求1所述的与VEGF结合的抗体,其中所述抗体是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或者其组合。
5.权利要求4所述的与VEGF结合的抗体,其中所述抗体的形式为Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb、scFv或骨架缀合物,其包含所述抗体的CDRs作为用于与VEGF结合的主要部分。
6.编码权利要求1所述的与VEGF结合之抗体的DNA。
7.权利要求6所述的DNA,其包含:
SEQ ID NO 51的碱基序列,所述碱基序列编码由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的CDR2;以及
SEQ ID NO 52的碱基序列,所述碱基序列编码由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的CDR3。
8.权利要求6所述的DNA,其包含SEQ ID NO 53的碱基序列,所述碱基序列编码由SEQID NO 3的氨基酸序列示出的CDR3。
9.包含权利要求6所述的DNA的表达载体,所述载体表达与VEGF结合之抗体的轻链可变区和重链可变区。
10.动物细胞系,其被权利要求9所述的表达载体转化。
11.权利要求10所述的动物细胞系,其中所述动物细胞系是CHO细胞、HEK细胞或NS0细胞。
12.用于预防、诊断或者治疗由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症的药物组合物,所述组合物包含根据权利要求1所述的抗体。
13.权利要求12所述的药物组合物,其中所述由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症选自:选自结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和脑癌的癌症;以及选自黄斑变性、糖尿病性视网膜病变和缺血性视网膜病变的眼部疾病。
14.权利要求12所述的药物组合物,其中所述药物组合物与选自以下的化学治疗剂组合使用:烷基化剂、抗代谢物、叶酸同系物、嘧啶同系物、嘌呤同系物和相关抑制剂,长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配合物、蒽二酮取代的尿素、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素同系物。
15.权利要求12所述的药物组合物,其中所述药物组合物与选自以下的药物组合使用:基于氟嘧啶的药物、紫杉醇、基于铂的药物,干扰素α-2a、卡铂、多柔比星、顺铂、吉西他滨、5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、多西他赛及其混合物。
16.用于由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症的诊断试剂盒,所述试剂盒包含根据权利要求1所述的与VEGF结合的抗体。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2013-0062413 | 2013-05-31 | ||
KR1020130062413A KR101541478B1 (ko) | 2013-05-31 | 2013-05-31 | 항-vegf 항체 및 이를 포함하는 암 또는 신생혈관형성관련 질환의 예방, 진단 또는 치료용 약학 조성물 |
PCT/KR2014/004858 WO2014193191A1 (ko) | 2013-05-31 | 2014-05-30 | 항-vegf 항체 및 이를 포함하는 암 또는 신생혈관형성관련 질환의 예방, 진단 또는 치료용 약학 조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105263961A CN105263961A (zh) | 2016-01-20 |
CN105263961B true CN105263961B (zh) | 2019-08-27 |
Family
ID=51989135
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201480030403.9A Expired - Fee Related CN105263961B (zh) | 2013-05-31 | 2014-05-30 | 用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关疾病的抗vegf抗体和含有所述抗体的药物组合物 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9822174B2 (zh) |
EP (1) | EP3006465A4 (zh) |
JP (1) | JP6328231B2 (zh) |
KR (1) | KR101541478B1 (zh) |
CN (1) | CN105263961B (zh) |
AU (1) | AU2014271446B2 (zh) |
BR (1) | BR112015029550A2 (zh) |
CA (1) | CA2913126C (zh) |
MX (1) | MX370789B (zh) |
NZ (1) | NZ715177A (zh) |
RU (1) | RU2644245C2 (zh) |
WO (1) | WO2014193191A1 (zh) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11007259B2 (en) | 2016-01-06 | 2021-05-18 | Order-Made Medical Research Inc. | High-affinity anti-VEGF antibody |
WO2017119434A1 (ja) | 2016-01-06 | 2017-07-13 | 株式会社オーダーメードメディカルリサーチ | Vegfとnrp1との結合を阻害する抗体 |
CN111511400A (zh) * | 2017-12-29 | 2020-08-07 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 抗vegf抗体及其使用方法 |
CN110283248B (zh) * | 2018-01-05 | 2020-07-28 | 百奥泰生物制药股份有限公司 | 一种长效低毒的重组抗vegf人源化单克隆抗体及其生产方法 |
WO2020127864A1 (en) * | 2018-12-21 | 2020-06-25 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for improving inhibition of vegf-binding to vegf-r1 of an anti-vegf antibody |
US11407999B2 (en) | 2019-07-01 | 2022-08-09 | Seoul National University R&Db Foundation | Pharmaceutical composition for preventing or treating angiogenesis relating ocular diseases comprising inhibitors of MCT expression or activity |
CN114502781A (zh) * | 2019-09-20 | 2022-05-13 | 纳维再生科技股份有限公司 | 个人化癌症免疫治疗 |
US11912784B2 (en) | 2019-10-10 | 2024-02-27 | Kodiak Sciences Inc. | Methods of treating an eye disorder |
US20220390456A1 (en) * | 2019-10-17 | 2022-12-08 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Small extracellular vesicle-associated vegf as a predictor for therapeutic responses |
EP4206226A1 (en) * | 2020-08-31 | 2023-07-05 | Medytox Inc. | Anti-vegf hexameric antibody and composition comprising same |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1259962A (zh) * | 1997-04-07 | 2000-07-12 | 基因技术股份有限公司 | 抗-血管内皮生长因子的抗体 |
CN1829741A (zh) * | 2003-05-30 | 2006-09-06 | 健泰科生物技术公司 | 利用抗-vegf抗体的治疗 |
CN101918442A (zh) * | 2007-11-30 | 2010-12-15 | 基因技术公司 | 抗vegf抗体 |
CN102292101A (zh) * | 2008-11-26 | 2011-12-21 | 五佳医疗股份有限公司 | 通过serpine2来调节胶原和平滑肌肌动蛋白表达的组合物和方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US25085A (en) | 1859-08-16 | Improvement in steam-generators | ||
KR100816572B1 (ko) * | 1999-04-28 | 2008-03-24 | 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 | 항-vegf 항체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 |
US20050106667A1 (en) | 2003-08-01 | 2005-05-19 | Genentech, Inc | Binding polypeptides with restricted diversity sequences |
ES2572356T3 (es) | 2007-11-09 | 2016-05-31 | Peregrine Pharmaceuticals Inc | Composiciones de anticuerpos dirigidos contra VEGF y procedimientos |
PL3216803T3 (pl) * | 2008-06-25 | 2020-10-19 | Novartis Ag | Stabilne i rozpuszczalne przeciwciała hamujące vegf |
US8834883B2 (en) | 2010-06-14 | 2014-09-16 | Vaccinex, Inc. | Anti-VEGF antibodies and uses thereof |
US20120225081A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-09-06 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Vegf-binding molecules |
CN102286101B (zh) * | 2011-08-08 | 2013-05-08 | 常州亚当生物技术有限公司 | 抗VEGF单克隆抗体Fab片段Vasculizumab及其应用 |
KR101453516B1 (ko) * | 2011-09-20 | 2014-10-24 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 항-vegf 항체를 포함하는 자가면역질환 예방 및 치료용 조성물 |
-
2013
- 2013-05-31 KR KR1020130062413A patent/KR101541478B1/ko active IP Right Grant
-
2014
- 2014-05-30 EP EP14803672.6A patent/EP3006465A4/en not_active Withdrawn
- 2014-05-30 NZ NZ71517714A patent/NZ715177A/en not_active IP Right Cessation
- 2014-05-30 MX MX2015016472A patent/MX370789B/es active IP Right Grant
- 2014-05-30 JP JP2016516455A patent/JP6328231B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-05-30 US US14/893,813 patent/US9822174B2/en active Active
- 2014-05-30 CA CA2913126A patent/CA2913126C/en active Active
- 2014-05-30 AU AU2014271446A patent/AU2014271446B2/en not_active Ceased
- 2014-05-30 BR BR112015029550A patent/BR112015029550A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-05-30 RU RU2015156461A patent/RU2644245C2/ru active
- 2014-05-30 CN CN201480030403.9A patent/CN105263961B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-05-30 WO PCT/KR2014/004858 patent/WO2014193191A1/ko active Application Filing
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1259962A (zh) * | 1997-04-07 | 2000-07-12 | 基因技术股份有限公司 | 抗-血管内皮生长因子的抗体 |
CN1829741A (zh) * | 2003-05-30 | 2006-09-06 | 健泰科生物技术公司 | 利用抗-vegf抗体的治疗 |
CN101918442A (zh) * | 2007-11-30 | 2010-12-15 | 基因技术公司 | 抗vegf抗体 |
CN102292101A (zh) * | 2008-11-26 | 2011-12-21 | 五佳医疗股份有限公司 | 通过serpine2来调节胶原和平滑肌肌动蛋白表达的组合物和方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
A Humanized Anti-VEGF Rabbit Monoclonal Antibody Inhibits Angiogenesis and Blocks Tumor Growth in Xenograft Models;Yanlan Yu;《PLoS ONE 》;20100205;第5卷(第2期);第1-12页 * |
Selection and Analysis of an Optimized Anti-VEGF Antibody: Crystal Structure of an Affinity-matured Fab in Complex with Antigen;Yvonne Chen;《J. Mol. Biol.》;19991105;第4卷(第293期);第865-881页 * |
基于CHO 细胞定点整合技术的新型抗体呈现系统的构建;何阳阳;《军事医学》;20120831;第36卷(第8期);第608-612页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2015156461A (ru) | 2017-06-30 |
WO2014193191A1 (ko) | 2014-12-04 |
AU2014271446B2 (en) | 2017-07-06 |
CN105263961A (zh) | 2016-01-20 |
BR112015029550A2 (pt) | 2017-09-19 |
JP6328231B2 (ja) | 2018-05-23 |
MX2015016472A (es) | 2016-07-05 |
US9822174B2 (en) | 2017-11-21 |
EP3006465A4 (en) | 2017-04-05 |
CA2913126C (en) | 2019-09-17 |
NZ715177A (en) | 2019-09-27 |
MX370789B (es) | 2020-01-06 |
KR20140141818A (ko) | 2014-12-11 |
US20160122426A1 (en) | 2016-05-05 |
CA2913126A1 (en) | 2014-12-04 |
RU2644245C2 (ru) | 2018-02-08 |
KR101541478B1 (ko) | 2015-08-05 |
EP3006465A1 (en) | 2016-04-13 |
AU2014271446A1 (en) | 2016-01-21 |
JP2016522210A (ja) | 2016-07-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105263961B (zh) | 用于预防、诊断或者治疗癌症或血管发生相关疾病的抗vegf抗体和含有所述抗体的药物组合物 | |
CN107614529B (zh) | Pd-l1抗体、其抗原结合片段及其医药用途 | |
CN110305210A (zh) | 新型抗体分子、其制备方法及其用途 | |
WO2019174603A1 (zh) | 靶向ctla-4抗体、其制备方法和用途 | |
CN106459217A (zh) | 多特异性抗体构建体 | |
CN106459216A (zh) | 多特异性抗体构建体 | |
WO2020011275A1 (zh) | 一种sema4d抗体及其制备方法和应用 | |
CN108712908A (zh) | 自交联抗体 | |
CN109721656A (zh) | 靶向rankl的治疗性抗体 | |
WO2021197401A1 (zh) | 结合cd47的抗原结合多肽及用途 | |
WO2019114793A1 (zh) | 一种egfr抗体及其制备方法和应用 | |
CN108948193A (zh) | 针对tim-3的抗体分子,抗原结合片段及其医药用途 | |
CN109021103A (zh) | 抗人血管内皮生长因子的抗体及其制备方法和应用 | |
WO2023125842A1 (zh) | 一种新型upar单域抗体的开发 | |
WO2019192493A1 (zh) | 抗人lag-3单克隆抗体及其应用 | |
KR102291725B1 (ko) | 항-cntn4 항체 및 그의 용도 | |
WO2021032174A1 (zh) | 一种抗cd47抗原结合蛋白及其应用 | |
JP7119225B2 (ja) | Pdgf受容体に対する抗体およびその用途 | |
WO2016059068A1 (en) | Vegfr-2 binding polypeptides | |
WO2016059057A1 (en) | Vegfr-2 binding polypeptides | |
CN110272489A (zh) | 一种针对tim-3的全人源化抗体分子,抗原结合片段及其医药用途 | |
KR20220157686A (ko) | 항-bcam 항체 또는 그의 항원 결합 단편 | |
CN116178540A (zh) | 抗ang2抗体及其用途 | |
Khalili | Disulfide-bridging PEGylation of antibody fragments | |
CN114341170A (zh) | 一种人源化抗vegfr2抗体及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190827 |