JP2021151975A

JP2021151975A - ヒアルロニダーゼ阻害剤

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Publication number: JP2021151975A
Application number: JP2020053471A
Authority: JP
Inventors: 紋代久保田; Akiyo Kubota; 洋介後居; Yosuke Goi
Original assignee: Dai Ichi Kogyo Seiyaku Co Ltd
Current assignee: DKS Co Ltd
Priority date: 2020-03-24
Filing date: 2020-03-24
Publication date: 2021-09-30
Anticipated expiration: 2040-03-24
Also published as: JP6810817B1

Abstract

【課題】ヒアルロニダーゼ阻害活性により肌の老化を防ぐ技術を提供する。【解決手段】ヒアルロニダーゼ阻害剤は、セルロース繊維の一部の水酸基が所定の式で表される置換基によって修飾されている硫酸化セルロース繊維を有効成分として含有し、前記硫酸化セルロース繊維は、（Ａ）数平均繊維径が２ｎｍ以上５００ｎｍ以下、（Ｂ）平均アスペクト比が５０以上３０００以下、（Ｃ）セルロースＩ型結晶構造を有し、（Ｄ）前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下であるという条件を満たす。【選択図】なし

Description

本発明は、ヒアルロニダーゼ阻害剤に関する。

一般に、人間の皮膚には保湿性能を持つヒアルロン酸が存在するが、同様に、人間の皮膚にはヒアルロン酸の分解酵素であるヒアルロニダーゼについても存在する。この二つのバランスがくずれ、ヒアルロン酸が減少してしまうと、肌の乾燥や肌荒れの原因につながりやすく、くすみや肌の老化に繋がる。

このヒアルロニダーゼの働きを阻害する化合物であるヒアルロニダーゼ阻害活性化合物として、硫酸化多糖が知られている。硫酸化多糖は、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、抗炎症作用や組織の再生作用を示すものと考えられる。代表的な硫酸化多糖としては、コンドロイチン硫酸が一般に知られている。更には、コンドロイチン硫酸の約１００倍のヒアルロニダーゼ阻害活性能をもつ硫酸化セルロースが知られている（特許文献１）。

特開２００６−４９７８０号公報

しかしながら、特許文献１に記載の硫酸化セルロースが有するヒアルロニダーゼ阻害活性については、十分ではなく、さらなる改善の余地があった。このため、十分なヒアルロニダーゼ阻害活性を有するヒアルロニダーゼ阻害剤の開発が望まれていた。

本発明は、上記の課題を解決するためになされたものであり、以下の形態として実現することができる。

（１）本発明の一形態によれば、ヒアルロニダーゼ阻害剤が提供される。このヒアルロニダーゼ阻害剤は、セルロース繊維の一部の水酸基が下記式（１）で表される置換基によって修飾されている硫酸化セルロース繊維を有効成分として含有し、前記硫酸化セルロース繊維は、以下の（Ａ）から（Ｄ）の条件を満たすことを特徴とする。
（Ａ）数平均繊維径が２ｎｍ以上５００ｎｍ以下
（Ｂ）平均アスペクト比が５０以上３０００以下
（Ｃ）セルロースＩ型結晶構造を有する
（Ｄ）前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下

〔式中、Ｍは水素イオン、金属イオン、アミン、又はオニウムイオンを示す。〕

この形態のヒアルロニダーゼ阻害剤によれば、ヒアルロニダーゼ阻害活性により肌の老化を防ぐことができる。

（２）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、１．２ｍｍｏｌ／ｇ以上２．７ｍｍｏｌ／ｇ以下であってもよい。

この形態のヒアルロニダーゼ阻害剤によれば、セルロース繊維構造を保持しつつ、セルロース繊維の表面を置換基で覆うことができる。

（３）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の結晶化度が４０％以上９８％以下であってもよい。

この形態のヒアルロニダーゼ阻害剤によれば、セルロース結晶構造に由来する特性をより効果的に発現することにより、ヒアルロニターゼ阻害活性を向上させることができる。

（４）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量が０．０５質量％以上１質量％以下であってもよい。

この形態のヒアルロニダーゼ阻害剤によれば、十分なゲル状のバリア膜が形成されるとともに、ヒアルロニダーゼ阻害剤として適当な粘度に調整することができる。

なお、本発明は、種々の形態で実現することが可能であり、例えば、ヒアルロニダーゼ阻害剤の製造方法等の態様で実現することができる。

繊維径の測定方法を説明する図。

Ａ．ヒアルロニダーゼ阻害剤
本発明の一実施形態であるヒアルロニダーゼ阻害剤は、セルロース繊維の一部の水酸基が下記式（１）で表される置換基によって修飾されている硫酸化セルロース繊維を有効成分として含有する。本明細書において、「有効成分」とは、ヒアルロニダーゼの活性を抑制する上で、必要とされる成分のことを意味する。

本実施形態の硫酸化セルロース繊維は、以下の（Ａ）から（Ｄ）の条件を満たす。
（Ａ）数平均繊維径が２ｎｍ以上５００ｎｍ以下
（Ｂ）平均アスペクト比が５０以上３０００以下
（Ｃ）セルロースＩ型結晶構造を有する
（Ｄ）前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下

ヒアルロニダーゼ阻害剤の形態は、特に限定されず、例えば、サスペンション、エマルション等の分散体、溶液、スラリー、粉体等であってよく、ローション、クリーム、ゲル、バーム等と呼ばれるものを含む。また、噴射剤等と共に充填されエアゾールとして塗布される形態であってもよい。

ヒアルロニダーゼ阻害剤は、ヒアルロニダーゼの阻害効果を損なわない範囲で、さらに薬理学的に許容可能な担体や添加物を含んで製剤化されたものであってよい。担体の例としては、特に限定されないが、例えば、水、生理食塩水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３ブチレングリコール等が挙げられる。添加物の例としては、特に限定されないが、例えば、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、シクロデキストリン等が挙げられる。また、ヒアルロニダーゼ阻害剤の製剤化において一般的に使用される賦形剤、乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤等を適宜配合してもよい。

製剤化されたヒアルロニダーゼ阻害剤は、液体状、ペースト状、ゲル状、粉末状、顆粒状等の任意の剤形とすることができる。

ヒアルロニダーゼ阻害剤の有効成分である硫酸化セルロース繊維の含量は、効果面を考慮して任意に決定することができる。

本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤によれば、硫酸化セルロースやコンドロイチン硫酸のような硫酸基を含む多糖類と比較して、高いヒアルロニダーゼ阻害活性が得られる。このような効果を奏するメカニズムは定かではないが、セルロース繊維表面に硫酸基が緻密かつ規則的に導入されているためと推定される。

［硫酸化セルロース繊維］
本明細書において、「硫酸化セルロース繊維」とは、セルロース繊維の一部の水酸基が下記式（１）で表される置換基によって修飾されているセルロース繊維を示す。下記式（１）では、波線部分がセルロース分子を表す。つまり、硫酸化セルロース繊維は、セルロース中の水酸基の酸素原子に対して、水素原子の代わりに−ＳＯ_３ ⁻Ｍが結合した構造を有し、セルロース繊維表面に硫酸基が導入されている。

ここで、上述のＭは、水素イオン、金属イオン、アミン、又はオニウムイオンを示す。Ｍは、１価から３価の陽イオンが例示できる。ここで、Ｍが２価又は３価の陽イオンの場合、当該陽イオンは、２つ又は３つの−ＯＳＯ_３ ⁻との間でイオン結合を形成する。

金属イオンとしては、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、遷移金属イオン、その他の金属イオンが挙げられる。ここで、アルカリ金属としては、特に限定されないが、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウム等が挙げられる。アルカリ土類金属としては、特に限定されないが、例えば、カルシウム、ストロンチウム等が挙げられる。遷移金属としては、特に限定されないが、例えば、鉄、ニッケル、パラジウム、銅、銀等が挙げられる。その他の金属としては、例えば、ベリリウム、マグネシウム、亜鉛、アルミニウム等が挙げられる。

アミンとしては、例えば、１〜３級アミンが挙げられる。ここで、１〜３級アミンとしては、特に限定されないが、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、モノエタノールアミン，ジエタノールアミン，トリエタノールアミン、プロピルアミン、ｓｅｃ−ブチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミン、ペンチルアミン、ｔｅｒｔ−ペンチルアミン、ジブチルアミン、２−エチルへキシルアミン、ジへキシルアミン、トリへキシルアミン、オクチルアミン、ドデシルアミン、プロぺニルアミン、イソブテニルアミン等が挙げられる。

オニウムイオンとしては、特に限定されないが、例えば、アンモニウムイオンやホスホニウムイオン等が挙げられる。アンモニウムイオンとしては、ＮＨ_４ ^＋だけでなく、ＮＨ_４ ^＋の１つ以上の水素原子が有機基に置き換わってできる各種アミン由来のアンモニウムイオンが挙げられる。アンモニウムイオンとしては、例えば、ＮＨ_４ ^＋、第四級アンモニウムカチオン、アルカノールアミンイオン、ピリジニウムイオン等が挙げられる。ホスホニウムイオンとしては、第４級ホスホニウムカチオン等が挙げられる。

Ｍで表される陽イオンとしては、保存安定性の観点から、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、第四級アンモニウムカチオンの少なくとも一つが好ましい。Ｍで表される陽イオンは、いずれか１種でもよいが、２種以上を組み合わせてもよい。

（置換基の含有量）
本実施形態の硫酸化セルロース繊維において、硫酸化セルロース繊維１ｇあたりにおける前記式（１）で表される置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）は、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下である。セルロース結晶構造を保持する観点から、この含有量は、より好ましくは２．８ｍｍｏｌ／ｇ以下であり、さらに好ましくは２．７ｍｍｏｌ／ｇ以下であり、特に好ましくは２．５ｍｍｏｌ／ｇ以下である。また、セルロース繊維の表面を置換基で覆うという観点から、この含有量は、０．０５ｍｍｏｌ以上／ｇであることが好ましく、より好ましくは０．１ｍｍｏｌ／ｇ以上であり、さらに好ましくは１．０ｍｍｏｌ／ｇ以上であり、特に好ましくは１．２ｍｍｏｌ／ｇ以上である。

本明細書において、置換基の含有量は、電位差滴定により算出される値であり、例えば、洗浄により原料として用いた変性化剤や、それらの加水分解物等の副生成物を除去した後、電位差測定の分析を行って算出することができる。具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定することができる。

（結晶化度）
本実施形態の硫酸化セルロース繊維は、セルロースＩ型結晶構造を有するものであり、硫酸化セルロース繊維の結晶化度が４０％以上であることが好ましい。結晶化度が４０％以上であることにより、セルロース結晶構造に由来する特性をより効果的に発現することができる。結晶化度は、より好ましくは６０％以上、さらに好ましくは６５％以上であり、７０％以上でもよい。結晶化度の上限は特に限定されないが、９８％以下が好ましく、より好ましくは９５％以下であり、更に好ましくは９０％以下であり、特に好ましくは８５％以下である。

本明細書において、セルロースの結晶化度は、Ｘ線回折法による回折強度値からＳｅｇａｌ法により算出したセルロースＩ型結晶化度であり、下記式により定義される。
セルロースＩ型結晶化度（％）＝〔（Ｉ_２２．６−Ｉ_１８．５）／Ｉ_２２．６〕×１００
〔式中、Ｉ_２２．６は、Ｘ線回折における格子面（２００面）（回折角２θ＝２２．６°）の回折強度を示し、Ｉ_１８．５は、アモルファス部（回折角２θ＝１８．５°）の回折強度を示す。〕
なお、セルロースＩ型とは天然セルロースの結晶型のことであり、セルロースＩ型結晶化度とは、セルロース全体のうち結晶領域量の占める割合のことを意味する。

（数平均繊維径）
硫酸化セルロース繊維の数平均繊維径は２ｎｍ以上５００ｎｍ以下であるが、好ましくは２ｎｍ以上１５０ｎｍ以下であり、より好ましくは２ｎｍ以上１００ｎｍ以下であり、特に好ましくは３ｎｍ以上８０ｎｍ以下である。数平均繊維径が２ｎｍ未満であると、セルロースが溶解してナノファイバーとして得られず、ゲル状のバリアが形成されない虞がある。一方、数平均繊維径が５００ｎｍ超の場合、繊維が太すぎるため、使用感が極端に悪化する虞がある。硫酸化セルロース繊維の最大繊維径は、皮膚に塗布後の透明性に優れ、かつ、使用感に優れる観点から、１０００ｎｍ以下であることが好ましく、特に好ましくは５００ｎｍ以下である。

図１は、繊維径の測定方法を説明する図である。繊維径は、１本の繊維Ｆの長手方向に直交する線と繊維の外周との２つの交点間の距離を測定することにより、求めることができる。つまり、繊維径は、図１で示す点Ｐ１と点Ｐ２との間の距離を示す。繊維長は、繊維の全体が観察画像中に写っている繊維の長さを測定することにより、求めることができる。繊維の長さを測定する際、繊維に折れ曲がりがある場合は、例えば、折れ曲がり点が１点であれば、一端から折れ曲がり点までの長さと、この折れ曲がり点から他端までの長さの合計値を繊維長とする。なお、繊維径及び繊維長は少なくとも２５本以上の繊維を観察する。また、大きな繊維径の繊維を含む場合には、ガラス上へキャストした表面の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）像や光学顕微鏡像を観察してもよい。そして、構成する繊維の大きさに応じて５０００倍、１００００倍あるいは５００００倍のいずれかの倍率で電子顕微鏡画像による観察を行ってもよい。このようにして得られた繊維径及び繊維長のデータにより、数平均繊維長および数平均繊維径を算出する。

（平均アスペクト比）
上記硫酸化セルロース繊維の平均アスペクト比は５０以上３０００以下であるが、好ましくは２０００以下、より好ましくは１０００以下であり、好ましくは１００以上、より好ましくは２００以上である。平均アスペクト比が５０未満であるとネットワークを形成せず、保湿効果が低減し、皮膚へ塗布した際の使用感が悪化する虞がある。

上記硫酸化セルロース繊維の平均アスペクト比は、先に述べた方法に従って得られた数平均繊維径および数平均繊維長を用いて、下記の式により算出される。
平均アスペクト比＝数平均繊維長［ｎｍ］／数平均繊維径［ｎｍ］

［硫酸化セルロース繊維の製造方法］
硫酸化セルロース繊維の製造方法は、特に限定されないが、例えば、セルロース原料とスルファミン酸を反応させる方法が挙げられる。この製造方法は、繊維形状を保ったままのセルロース繊維をスルファミン酸で処理することによって、スルファミン酸と当該セルロース繊維の構成要素であるセルロース微細繊維を反応させることにより、セルロース微細繊維を硫酸エステル化する工程（化学修飾工程）を含む。

（セルロース原料）
上記の化学修飾工程で用いるセルロース繊維（セルロース原料）の具体例としては、特に限定されないが、例えば、植物、動物（例えば、ホヤ類）、藻類、微生物（例えば、酢酸菌）、微生物産生物等を起源とするもの等が挙げられる。植物としては、例えば、木材、綿、竹、麻、ジュート、ケナフ、農地残廃物、布、パルプ、再生パルプ、古紙等が挙げられる。これらの中で、植物由来パルプが好ましい原材料として挙げられる。

植物由来パルプは、例えば、植物原料を化学的、若しくは機械的に、又は両者を併用してパルプ化することで得られる植物由来パルプが挙げられる。具体的な植物由来パルプとしては、例えば、ケミカルパルプ（クラフトパルプ（ＫＰ）、亜硫酸パルプ（ＳＰ））、セミケミカルパルプ（ＳＣＰ）、ケミグランドパルプ（ＣＧＰ）、ケミメカニカルパルプ（ＣＭＰ）、砕木パルプ（ＧＰ）、リファイナーメカニカルパルプ（ＲＭＰ）、サーモメカニカルパルプ（ＴＭＰ）、ケミサーモメカニカルパルプ（ＣＴＭＰ）等が好ましいものとして挙げられる。

また、セルロース原料としては、本実施形態の目的を阻害しない範囲内で化学修飾されていてもよく、即ち、化学変性パルプを用いてもよい。例えば、セルロース繊維表面に存在する一部あるいは大部分の水酸基が酢酸エステル、硝酸エステルを含むエステル化されたもの、またメチルエーテル、ヒドロキシエチルエーテル、ヒドロキシプロピルエーテル、ヒドロキシブチルエーテル、カルボキシメチルエーテル、シアノエチルエーテルを含むエーテル化されたもの、また一級水酸基を酸化させたＴＥＭＰＯ（２，２，６，６−テトラメチルピペリジノオキシラジカル）酸化処理パルプを含むことができる。

本実施形態に使用されるセルロース原料の形状は、特に制限はないが、取り扱いの観点から繊維状、シート状、綿状、粉末状、チップ状、フレーク状が望ましい。

（前処理工程）
嵩密度が１０ｋｇ／ｍ^３以上のセルロース原料を用いる場合は、化学修飾工程の反応に先立ち、前処理を行い、嵩密度を０．１〜５．０ｋｇ／ｍ^３にしてもよい。この前処理を予め行うことにより、硫酸エステル化工程をより効率的に行うことができる。前処理方法としては、特に限定されないが、機械処理を行うことにより、セルロース原料を適度な嵩密度にすることができる。機械処理としては、使用する機械や処理条件に制限はなく、例えばシュレッダー、ボールミル、振動ミル、石臼、グラインダー、ブレンダー、高速回転ミキサー等が挙げられる。嵩密度は好ましくは、０．１〜５．０ｋｇ／ｍ^３であり、より好ましくは０．１〜３．０ｋｇ／ｍ^３であり、さらにより好ましくは０．１〜１．０ｋｇ／ｍ^３である。

（反応工程）
硫酸エステル化工程において、セルロース繊維と硫酸化試薬との反応（即ち、硫酸エステル化反応）は、硫酸化試薬を含む薬液にセルロース原料（セルロース繊維）を浸漬することにより行うことができる。

硫酸化試薬としては、スルファミン酸が好ましく用いられる。スルファミン酸は、無水硫酸や硫酸水溶液等に比べてセルロース溶解性が小さいだけでなく、酸性度が低いために重合度の保持が可能である。また、強酸性かつ高腐食性のある無水硫酸や硫酸水溶液に対して、スルファミン酸は、取り扱いに制限がなく、大気汚染防止法の特定物質にも指定されていないため、環境に対する負荷が小さい。

スルファミン酸の使用量は、セルロース繊維への置換基の含有量を考慮して適宜調整することができる。スルファミン酸は、例えば、セルロース分子中のアンヒドログルコース単位１モル当たり、好ましくは０．０１〜５０モル使用することができ、より好ましは０．１〜３０モル使用することができる。

硫酸エステル化反応を行う薬液は、スルファミン酸と溶媒を混合したものであり、更に触媒を添加してもよく、添加しなくてもよい。触媒としては、特に限定されないが、例えば、尿素、アミド類、三級アミン類等が挙げられるが、工業的観点から尿素を用いることが好ましい。触媒の使用量は、特に限定されないが、例えば、セルロース分子中のアンヒドログルコース単位１モル当たり０．００１〜５モルが好ましく、０．００５〜２．５モルがより好ましく、０．０１〜２．０モルが更に好ましい。触媒は、高濃度のものをそのまま用いてもよく、事前に溶媒で希釈して用いてもよい。また、触媒の添加方法は、特に限定されないが、一括添加、分割添加、連続的添加、又はこれらの組合せで行うことができる。

薬液に使用する溶媒は、特に限定されないが、公知の溶媒を使用してもよい。公知の溶媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、オクタノール、ドデカノール等の炭素数１〜１２の直鎖あるいは分岐のアルコール；アセトン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン等の炭素数３〜６のケトン；直鎖又は分岐状の炭素数１〜６の飽和炭化水素又は不飽和炭化水素；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素；塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；炭素数２〜５の低級アルキルエーテル；ジオキサン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ピリジン等の溶媒が挙げられる。これらは、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。上記の溶媒の中では、セルロース原料の膨潤を促進する観点から、たとえば、水または極性有機溶媒がより好ましい。なお、上記溶媒は単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。溶媒の使用量は、特に限定されないが、例えば、セルロース原料の溶媒含有量（即ち、セルロース原料の乾燥質量に対する溶媒の質量の比率）が１０質量％以上、好ましくは１０〜１００００質量％、より好ましくは２０〜５０００質量％、更に好ましくは５０〜２０００質量％で使用される。溶媒量が少ないほど、洗浄工程の利便性が向上する。

硫酸エステル化反応の温度は０〜１００℃を例示でき、好ましくは１０〜８０℃、さらに好ましくは２０〜７０℃である。この反応温度が低すぎると反応完結に長時間を要し、反応温度が高すぎるとセルロース分子内のグリコシド結合が切断するため好ましくない。硫酸エステル化反応は通常３０分〜５時間で完結する。

着色の少ない製品を得るために、更に、硫酸エステル化反応の際に、窒素ガス、ネオンガス、アルゴンガス、ヘリウムガス等の不活性ガスや炭酸ガスを導入してもよい。これらのガスの導入方法としては、例えば、（ｉ）ガスを反応槽に吹き込みながら反応を行う方法、（ｉｉ）反応前に反応槽内をガスで置換した後、反応槽を密閉して反応を行う方法等が挙げられる。工業的見地から、ガスは反応時に使用しないのが好ましい。

また、硫酸化工程の後、必要に応じて更なる化学修飾工程を設けてもよい。化学修飾工程としては、例えば、硫酸化されなかったセルロース繊維表面に存在する一部の水酸基を、酢酸エステル、硝酸エステルによりエステル化する工程、メチルエーテル、ヒドロキシエチルエーテル、ヒドロキシプロピルエーテル、ヒドロキシブチルエーテル、カルボキシメチルエーテル、シアノエチルエーテルによりエーテル化する工程、また一級水酸基を酸化させたＴＥＭＰＯ酸化処理する工程等が挙げられる。

（中和・洗浄工程）
本実施形態では、必要に応じて、硫酸エステル塩を中和する工程を設けてもよい。硫酸エステル塩は、得られた粗製物のｐＨが低下することによって酸性を示した場合、粗製物の保存安定性が低い。そのため、この硫酸エステル塩に塩基性化合物を添加して中和させることにより、ｐＨを中性もしくはアルカリ性に調整することが好ましい。中和に用いる塩基性化合物としては、特に限定されるものではないが、例えば、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、その他の無機塩、アミン類、オニウム化合物等が挙げられる。具体的には、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、水酸化マグネシウム、酢酸マグネシウム、乳酸マグネシウム、シュウ酸マグネシウム、塩基性乳酸アルミニウム、塩基性塩化アルミニウム、アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、テトラブチルアンモニウムヒドロキシド、テトラブチルホスホニウムヒドロキシド等が挙げられる。なお、本実施形態において、一種以上の塩基性化合物を使用して中和することができる。

また、反応停止の目的、及び／又は、硫酸化試薬残渣、残留触媒、溶媒等の除去の目的で、湿潤状態の化学修飾セルロース繊維を洗浄する工程を設けてもよい。この時、洗浄条件は特に限定されないが、洗浄に使用する溶媒として水、及び／又は、有機溶媒を用いて、反応終了後の化学修飾セルロース繊維を洗浄するのが好ましい。

脱溶媒方法は、特に限定されないが、例えば、遠心沈降法、濾過、プレス処理等を使用できる。ここで、溶媒を完全に除去せず、化学修飾セルロース繊維からなるシートを溶媒で湿潤状態にしておいてもよい。化学修飾セルロース繊維の溶媒含有量（即ち、化学修飾セルロース繊維集合体の乾燥質量に対する溶媒の質量の比率）は１〜５００質量％であることが好ましく、より好ましくは１０〜１００質量％であり、更に好ましくは１０〜５０質量％である。

（微細化工程）
マイクロオーダーの硫酸化セルロース繊維に対して、機械的解繊による微細化処理を行うことにより、ナノオーダーの硫酸化セルロース繊維を得ることができる。硫酸化セルロース繊維の微細化処理を行う装置としては、特に限定されないが、例えば、リファイナー、二軸混錬機（二軸押出機）、高圧ホモジナイザー、媒体撹拌ミル（例えば、ロッキングミル、ボールミル、ビーズミル等）、石臼、グラインダー、振動ミル、サンドグラインダー等が挙げられる。

また、ヒアルロニダーゼ阻害剤において、硫酸化セルロース繊維の含有量は、特に限定されないが、０．０５質量％以上１質量％以下が好ましく、０．１質量％以上０．５質量％以下がより好ましい。硫酸化セルロース繊維の含有量が０．０５質量％以上であることにより、十分なゲル状のバリア膜が形成される。また、硫酸化セルロース繊維の含有量が１質量％以下であることにより、ヒアルロニダーゼ阻害剤として適当な粘度に調整することができる。

また、ヒアルロニダーゼ阻害剤には、効果を妨げない範囲において他の成分を添加してもよい。他の成分としては、特に限定されないが、例えば、当該分野で一般的に使用されるものが挙げられる。他の成分としては、例えば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、チオジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール、ポリエチレングリコール等のエチレンジオール類；２−メチル−１，３−プロパンジオール、２−エチル−１，３−プロパンジオール、３−メトキシ−１，２−プロパンジオール等のプロパンジオール類；２−ブテン−１，４−ジオール、１，３−ブタンジオール、２−メチル−１，４−ブタンジオール等のブタンジオール類；２−メチル−２，４−ペンタンジオール、１，５−ペンタンジオール、１，４−ペンタンジオール、３−メチル−１，３−ペンタンジオール、２，４−ジエチル−１，５−ペンタンジオール等のペンタンジオール類；１，２−ヘキサンジオール等のヘキサンジオール類；１，２，６−トリメチル−１，７−ヘプタンジオール、２，４，６−トリエチル−１，７−ヘプタンジオール等のヘプタンジオール類；３，６−ジチア−１，８−オクタンジオール等のオクタンジオール類；プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ブチレングリコール等のアルキレンジオール類；グリセリン、ヘキサントリオール、チオジグリコール、トリメチロールプロパン等のポリオール類等；エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールモノブチルエーテル、トリエチレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテル、プロピレングリコールモノブチルエーテル、ジプロピレングリコールモノメチルエーテル、トリエチレングリコールモノメチルエーテル、ポリエチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノイソプロピルエーテル、トリエチレングリコールモノブチルエーテル、エチレングリコールモノイソブチルエーテル、ジエチレングリコールモノイソブチルエーテル、プロピレングリコールモノプロピルエーテル、エチレングリコールジアセテート、エチレングリコールモノメチルエーテルアセテート、トリエチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノフェニルエーテル等のグリコール誘導体；スクワラン、流動パラフィン、軽質流動イソパラフィン、重質流動イソパラフィン、マイクロクリスタリンワックス、固形パラフィン等の炭化水素類；ジメチコン、フェメチコン、シクロメチコン、アモジメチコン、ポリエーテル変性シリコーン等のシリコーン類；ホホバ油、カルナウバワックス、モクロウ、ミツロウ、ゲイロウ、オレイン酸オクチルドデシル、イソプロピルミリステート、ネオペンチルグリコールジイソステアレート、リンゴ酸ジイソステアレート等のエステル類；ステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、イソステアリン酸、イソパルミチン酸、ベヘン酸、オレイン酸等の脂肪酸類；ベヘニルアルコール、セタノール、オレイルアルコール、オクタデシルアルコール等の高級アルコール類；ヒマシ油、椰子油、水添椰子油、椿油、小麦胚芽油、イソステアリン酸トリグリセライド、イソオクタン酸トリグリセライド、オリーブオイル等のトリグリセライド類；ソルビタンセスキオレート、ソルビタンモノオレート、ソルビタントリオレート、ソルビタンセスキステアレート、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンステアレート、ポリオキシエチレンオレート、ポリオキシエチレングリセリル脂肪酸エステル、ポリエキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤類；ソジウムラウリルステアレート、ポリオキシエチレンアルキル硫酸塩、スルホコハク酸エステル塩等のアニオン界面活性剤類；４級アルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類；アルキルベタイン等の両性界面活性剤類；結晶セルロースや架橋型メチルポリシロキサン、ポリエチレン粉末、アクリル樹脂粉体等の有機粉体類；タルク、マイカ、セリサイト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、二酸化チタン、酸化鉄、紺青、群青、チタンマイカ、チタンセリサイト、シリカ等の、表面処理されていてもよい粉体類；アクリル酸・メタクリル酸アルキルコポリマー及び／又はその塩、カルボキシビニルポリマー及び／又はその塩、キサンタンガムやヒドロキシプロピルセルロース等の増粘剤；レチノール、レチノイン酸、トコフェロール、リボフラビン、ピリドキシン、アスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸エステル塩等のビタミンやグリチルリチン酸塩、グリチルレチン、ウルソール酸、オレアノール酸等のテルペン類、エストラジオール、エチニルエストラジオール、エストリオール等のステロイド類等の有効成分；フェノキシエタノール、パラベン類、ヒビテングルコネート、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤；ジメチルアミノ安息香酸エステル類、桂皮酸エステル類、ベンゾフェノン類等の紫外線吸収剤等が挙げられる。これらは用途等に応じて適宜選択されるものであり、１種で用いてもよいし、２種以上を組み合わせてもよい。

本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤は、通常の製造方法によって製造することができる。例えば、本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤は、硫酸化セルロース繊維と、その他の任意成分とを、所定の方法にて混合する事により製造することができる。具体的には、本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤は、例えば、精製水に分散した硫酸化セルロース繊維を、精製水および増粘剤を混合溶解した液体に攪拌しながら徐々に加えることによって粘ちょう性液体とし、ついで、他の任意成分を加えて均一にした後、放置することによって製造することができる。

また、各成分を均一に混合する方法は、特に限定されないが、例えば、ホモディスパー、ホモミキサー等を使用して混合する方法が好ましい。

ヒアルロニダーゼ阻害剤としては、例えば、化粧料、医薬部外品、外用医薬品等が挙げられる。本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤は、これらの何れにも適用可能であるが、特に好ましくは化粧料への適用である。化粧料としては、特に限定されないが、例えば、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ピールオフパック、フォーム状パック、アンダーメークアップ、ファウンデーション等が挙げられる。

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。なお、例中、「％」とあるのは、特に限定のない限り「質量％」を意味する。

［硫酸化セルロース繊維の合成］
まず、実験に用いる硫酸化セルロース繊維を下記の製造例１〜３に従って合成する。

（製造例１）
まず、反応工程として、スルファミン酸１４．４ｇ（セルロース分子中のアンヒドログルコース単位１モル当たり１．２モル）に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）６２０ｇを添加した後、３０分撹拌を行った。その後、室温（２５℃）下において、セルロース原料として針葉樹クラフトパルプ２０．０ｇを添加した。その後、５５℃で４時間反応させた後、室温（２５℃）まで冷却した。次に、繊維を取り出した後に、水で洗浄した後、中和剤として２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を添加することにより、ｐＨを７．６に調整した。その後、脱水を行った後に、固形分濃度が６．０％になるように水で希釈した。その後、微細化処理工程として、マイクロフルイタイザーによる処理（１５０ＭＰａ、１０パス）を行うことによって、硫酸化セルロース繊維Ａ１を得た。

（製造例２）
反応工程においてスルファミン酸の仕込み量を２３．９ｇとした点、微細化処理工程において固形分濃度を３．０％とした点、マイクロフルイタイザー処理を１５０ＭＰａ、５パスとした点以外は、製造例１と同様の手順により硫酸化セルロース繊維Ａ２を得た。

（製造例３）
反応工程においてスルファミン酸の仕込み量を４１．９ｇとした点、微細化処理工程において固形分濃度を２．０％とした点、マイクロフルイタイザー処理を１５０ＭＰａ、３パスとした点以外は、製造例１と同様の手順により硫酸化セルロース繊維Ａ３を得た。

（評価）
製造例１〜３により得られたセルロースについて硫酸基量と、結晶化度とを測定した。測定結果を表１に示す。各測定の詳細については、以下に示す。

・硫酸基量（ｍｍｏｌ／ｇ）
硫酸基量は、電位差滴定により算出した。ここで、硫酸基量は、硫酸化セルロース繊維の含有量に対する置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）と同義である。乾燥質量を精秤した硫酸化セルロース繊維試料を用いて、固形分率０．５％に調製した硫酸化セルロース繊維の水分散体を６０ｍＬ調製した。その後、１Ｎ塩酸水溶液によって、水分散体のｐＨを約１．０とした。その後、ろ過及び水洗浄をした後、硫酸エステル化セルロース繊維を再び固形分率０．５％となるように水に再分散させた。その後、０．１Ｎ水酸化カリウム水溶液を滴下することにより電位差測定を行った。そして、この滴下量を用いて硫酸基量を算出した。

・セルロースＩ型結晶化度（％）
硫酸化セルロース繊維のＸ線回折強度を、Ｘ線回折法を用いて測定した。そして、その測定結果からＳｅｇａｌ法を用いて、下記式により結晶化度を算出した。
セルロースＩ型結晶化度（％）＝〔（Ｉ_２２．６−Ｉ_１８．５）/Ｉ_２２．６〕×１００

上記式中、Ｉ_２２．６は、Ｘ線回折における格子面（２００面）（回折角２θ＝２２．６°）の回折強度を示し、Ｉ_１８．５は、アモルファス部（回折角２θ＝１８．５°）の回折強度を示す。また、サンプルのＸ線回折強度の測定は、株式会社リガク製の「ＲＩＮＴ２２００」を用い、以下の条件にて実施した。
Ｘ線源：Ｃｕ／Ｋα―ｒａｄｉａｔｉｏｎ
管電圧：４０ｋＶ
管電流：３０ｍＡ
測定範囲：回折角２θ＝５〜３５°
Ｘ線のスキャンスピード：１０°／ｍｉｎ

・平均繊維径及び平均アスペクト比
セルロース繊維の平均繊維径及び平均繊維長は、光学顕微鏡又は原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）で観察した繊維５０本の平均値である。また、平均アスペクト比は、平均繊維長／平均繊維径の値である。

［ＴＥＭＰＯ酸化セルロース繊維の合成］
比較例に用いるＴＥＭＰＯ酸化セルロース繊維について、製造例４に従って合成した。

（製造例４）
針葉樹クラフトパルプ２．０ｇに、水１５０ｍL、臭化ナトリウム０．２５ｇ、２，２，６，６−テトラメチルピペリジノオキシラジカル（ＴＥＭＰＯ）０．０２５ｇを加えた後、十分撹拌させた。その後、１３質量％次亜塩素酸ナトリウム水溶液を、上記パルプ１．０ｇに対して次亜塩素酸ナトリウム量が１０ｍｍｏｌ／ｇとなるように加えることにより、反応を開始した。さらに、反応中のｐＨが１０〜１１に保持するように０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を滴下しながら、４５分間反応させた。反応後、０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨを７．０とした後、脱水を行った後、固形分濃度が２．０％になるように水で希釈した。その後、微細化処理工程としてマイクロフルイタイザーによる処理（１５０ＭＰａ、３パス）を行うことにより、ＴＥＭＰＯ酸化セルロース繊維Ｂ１を得た。

（評価）
製造例４により得られたＴＥＭＰＯ酸化セルロース繊維Ｂ１についてカルボキシル基量と、結晶化度とを測定した。なお、カルボキシル基量の測定方法は以下の方法で行い、結晶化度の測定方法は硫酸化セルロース繊維の評価と同様の手法で行った。測定結果を表１に示す。

・カルボキシル基量
上記セルロース繊維０．２５ｇを水に分散させたセルロース水分散体６０ｍｌを調製した後、０．１Ｎの塩酸水溶液によってｐＨを約２．５とした。その後、０．０５Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を滴下することにより、電気伝導度測定を行った。測定は、ｐＨが１１になるまで続けた。電気伝導度の変化が緩やかな弱酸の中和段階において、消費された水酸化ナトリウム量（Ｖ）を用いて、下記式に基づいてカルボキシル基量を求めた。
カルボキシル基量［ｍｍｏｌ／ｇ］＝Ｖ［ｍｌ］×（０．０５／セルロース質量［ｇ］）

［硫酸化セルロースの合成］
水溶性セルロースとして用いる硫酸化セルロースを製造例５に従って合成した。

（製造例５）
結晶性セルロース５０．０ｇにＤＭＦ１５０ｍＬを加えた後、１時間撹拌させた。１８質量％無水硫酸―ＤＭＦ溶液４８０ｍＬを氷冷下でゆっくり滴下した後、室温（２５℃）で６時間反応させた。その後、反応液を５℃まで冷却した後、氷冷下において反応液を水４００ｇに滴下した。ｐＨが１０となるよう５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた後、さらに１Ｎ塩酸を加えることにより、ｐＨを７．０とした。その後、析出物を濾別した後、ろ液をイソプロピルアルコール２Ｌに滴下した後、ろ過及びろ物の乾燥を行うことにより、硫酸化セルロースＣ１を得た。その後、硫酸化セルロースＣ１の乾燥固形分量が１．０ｇとなるように秤量した後、水を添加し、その後、一日スターラーで撹拌することで１％の硫酸化セルロース溶液を得た。

（製造例６）
λ−カラギーナンを乾燥固形分量が１．０ｇとなるように秤量した後、水を添加し、その後、一日スターラーで撹拌することで１％のセルロース溶液を得た。

［ヒアルロニダーゼ阻害剤の調製］
次に、上記製造方法により得られたセルロース繊維等を用いてヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（実施例１）
製造例１により得られた硫酸化セルロース繊維Ａ１を、終濃度で０．２質量％となるように水を加えて調製した。その後、プライミクス社製のホモミキサーＭＡＲＫＩＩ２．５型により８，０００ｒｐｍで１０分間撹拌した後、脱気することにより、ヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（実施例２〜７）
製造例１〜３により得られた硫酸化セルロース繊維を用いて、表２に示す含有量となるように、実施例１と同様の操作を行うことでヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（比較例１）
硫酸化セルロース繊維Ａ１の代わりに製造例５で製造した硫酸化セルロースＣ１を用いた以外は、実施例１と同様の操作でヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（比較例２）
硫酸化セルロース繊維Ａ１の代わりに製造例６のカラギーナンを用いた以外は、実施例１と同様の操作でヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（比較例３）
硫酸化セルロース繊維Ａ１の代わりに製造例４で製造したＴＥＭＰＯ酸化セルロース繊維Ｂ１を用いた以外は、実施例１と同様の操作でヒアルロニダーゼ阻害剤を調製した。

（評価）
実施例及び比較例について、ヒアルロニダーゼ阻害活性を評価した。

・ヒアルロニダーゼ阻害活性
ヒアルロニダーゼ阻害剤２．５ｍＬを１５ｍＬ容量の遠沈管に添加した後、さらに、酢酸緩衝液７．５ｍＬを加えて、ボルテックスミキサー（サイエンティフィックインダストリーズ社製、ジェニー２）で混合した。その後、２４ｗｅｌｌプレートへ１００μＬずつ添加した。その後、各ウェルへ４ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼ／酢酸緩衝液を５０μＬ加えた後、恒温機を用いて３７℃で２０分間加熱した。その後、その後の溶液中のＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０と塩化カルシウムとがそれぞれ０．０５質量％、０．５質量％となるように、Ｃｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０と塩化カルシウムとを含む酢酸緩衝液を上記混合物に１００μL加えた後、３７℃で２０分間加温した。その後、０．８ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸ナトリウムの酢酸緩衝液２５０μＬを添加した後、３７℃で４０分間酵素反応を行った。その後、０．４ＮＮａＯＨを１００μＬ、０．４ＮＫＯＨ／０．８Ｎホウ酸溶液を１００μＬ添加し、１００℃のオーブンで３分間加熱した。その後、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド／酢酸・塩酸溶液を１５０μＬ添加し、３７℃で２０分間加温した後、５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。ヒアルロニダーゼ阻害剤を加えない以外は同様の方法でブランクを作製し、この吸光度をブランクとした。そして、ヒアルロニダーゼ阻害率を下記式より算出した。
ヒアルロニダーゼ阻害率（％）＝［〔１−（サンプル吸光度−サンプルブランクの吸光度）／（コントロールの吸光度−コントロールブランクの吸光度）〕］×１００
ここで、式中の「サンプル吸光度」とは、ヒアルロニダーゼ阻害剤を添加しヒアルロニダーゼ阻害活性試験を２回行うことによって得られた吸光度の平均値である。「サンプルブランクの吸光度」とは、ヒアルロニダーゼを添加せずに酢酸緩衝液を添加して調製したサンプルの吸光度である。「コントロールの吸光度」とは、ヒアルロニダーゼ阻害剤の代わりに酢酸緩衝液を添加して調製したサンプルの吸光度である。「コントロールブランクの吸光度」とはヒアルロニダーゼ阻害剤及びヒアルロニダーゼの代わりに酢酸緩衝液を添加して調製したサンプルの吸光度である。ここで、「サンプルブランクの吸光度」、「コントロールの吸光度」及び「コントロールブランクの吸光度」については、ヒアルロニダーゼ阻害活性試験を３回行うことによって得られた平均値である。

得られた結果を、以下の表に示す。なお、表３では、互いに同じ濃度（０．２質量％）のセルロースを用いた実施例および比較例について、硫酸基１ｍｏｌあたりのヒアルロニダーゼ阻害活性の度合等の比較を示している。

上述の結果から以下のことが分かった。つまり、表２の結果から、本実施形態の有効成分である硫酸化セルロース繊維は、導入されている硫酸基量が多いほどヒアルロニダーゼ阻害活性が高く、また、硫酸化セルロース繊維の濃度が高いほどヒアルロニダーゼ阻害活性が高いことが分かった。

また、表３の結果から、硫酸基１ｍｏｌあたりのヒアルロニダーゼ阻害活性の度合は、実施例のほうが、比較例に比べて、極めて高いことが分かった。

また、比較例１は、硫酸化セルロースを使用しており、また、比較例２は、カラギーナンを使用している。これらはいずれも硫酸基量の含有量は、実施例よりも多い（表１、表３参照）。このため、一般に、硫酸基量の多いものを用いた場合、硫酸基量の少ないものを用いた場合よりもヒアルロニダーゼ阻害活性に優れると考えられる。しかし、表３の結果から、実施例のほうが、比較例１，２よりも２倍以上のヒアルロニダーゼ阻害活性を有することが分かった。実施例がヒアルロニダーゼ阻害活性に優れるメカニズムは定かではないが、微細なセルロース繊維上に硫酸基が緻密に導入されているため、ヒアルロニダーゼの阻害効率が高いことが原因と考えられる。なお、比較例３のセルロース繊維Ｂ１は、硫酸基を有していないため、ヒアルロニダーゼ阻害活性を示さなかった。

本実施形態のヒアルロニダーゼ阻害剤は、例えば、化粧料、医薬部外品、外用医薬品等に用いることができる。特に、ヒアルロニダーゼ阻害活性が良好であることから、これらの性能が求められるアンチエイジング化粧料等の分野に好適に用いることができる。

本発明は、上述の実施形態に限られるものではなく、その趣旨を逸脱しない範囲において種々の構成で実現することができる。例えば、発明の概要の欄に記載した各形態中の技術的特徴に対応する実施形態、実施例中の技術的特徴は、上述の課題の一部または全部を解決するために、あるいは、上述の効果の一部または全部を達成するために、適宜、差し替えや、組み合わせを行うことが可能である。また、その技術的特徴が本明細書中に必須なものとして説明されていなければ、適宜、削除することが可能である。

Ｐ１…点
Ｐ２…点
Ｆ…繊維

本発明は、上記の課題を解決するためになされたものであり、以下の形態として実現することができる。
（１）本発明の一形態によれば、ヒアルロニダーゼ阻害剤が提供される。このヒアルロニダーゼ阻害剤は、セルロース繊維の一部の水酸基が下記式（１）で表される置換基によって修飾されている硫酸化セルロース繊維を有効成分として含有し、前記硫酸化セルロース繊維は、以下の（Ａ）から（Ｅ）の条件を満たすことを特徴とする。
（Ａ）数平均繊維径が２ｎｍ以上５００ｎｍ以下
（Ｂ）平均アスペクト比が５０以上３０００以下
（Ｃ）セルロースＩ型結晶構造を有する
（Ｄ）前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、０．１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下
（Ｅ）結晶化度が７０％以上

〔式中、Ｍは水素イオン、金属イオン、アミン、又はオニウムイオンを示す。〕
（２）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、１．２ｍｍｏｌ／ｇ以上２．７ｍｍｏｌ／ｇ以下であってもよい。
（３）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の結晶化度が４０％以上９８％以下であってもよい。
（４）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量が０．０５質量％以上１質量％以下であってもよい。
（５）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の数平均繊維径が３１０ｎｍ以下であってもよい。
その他、本発明は、以下のような形態として実現することも可能である。

〔式中、Ｍは水素イオン、金属イオン、アミン、又はオニウムイオンを示す。〕
（２）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、１．２ｍｍｏｌ／ｇ以上２．７ｍｍｏｌ／ｇ以下であってもよい。
（３）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の結晶化度が７０％以上９８％以下であってもよい。
（４）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の含有量が０．０５質量％以上１質量％以下であってもよい。
（５）上記形態のヒアルロニダーゼ阻害剤において、前記硫酸化セルロース繊維の数平均繊維径が３１０ｎｍ以下であってもよい。
その他、本発明は、以下のような形態として実現することも可能である。

Claims

セルロース繊維の一部の水酸基が下記式（１）で表される置換基によって修飾されている硫酸化セルロース繊維を有効成分として含有し、前記硫酸化セルロース繊維は、以下の（Ａ）から（Ｄ）の条件を満たすことを特徴とする、ヒアルロニダーゼ阻害剤。
（Ａ）数平均繊維径が２ｎｍ以上５００ｎｍ以下
（Ｂ）平均アスペクト比が５０以上３０００以下
（Ｃ）セルロースＩ型結晶構造を有する
（Ｄ）前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、０．０１ｍｍｏｌ／ｇ以上３．０ｍｍｏｌ／ｇ以下

〔式中、Ｍは水素イオン、金属イオン、アミン、又はオニウムイオンを示す。〕
前記硫酸化セルロース繊維の含有量に対する前記置換基の含有量（置換基の含有量［ｍｍｏｌ］／硫酸化セルロース繊維の含有量［ｇ］）が、１．２ｍｍｏｌ／ｇ以上２．７ｍｍｏｌ／ｇ以下であることを特徴とする、請求項１に記載のヒアルロニダーゼ阻害剤。
前記硫酸化セルロース繊維の結晶化度が４０％以上９８％以下であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のヒアルロニダーゼ阻害剤。
前記硫酸化セルロース繊維の含有量が０．０５質量％以上１質量％以下であることを特徴とする、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載のヒアルロニダーゼ阻害剤。