JP2021019602A - 操作した肝臓組織、そのアレイ、およびそれを製造する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2013年3月15日に出願の米国出願第13/841,430号の一部継続出願の利益を主張し、これら各々は、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
脂質を保存する;グリコゲンを保存する;以下の2つ以上を含む肝臓特異的なタンパク質を発現する:アルブミン、フィブリノゲン、トランスフェリン、CYP450、α1−アンチトリプシン、オルニチントランスカルバミラーゼ、グリコゲン合成酵素、第VIII因子および第IX因子;以下の1つ以上を含む肝臓モジュレータに反応する:ホルモン、誘導物質、毒性物、薬、抗体、干渉RNA、小型RNA、ロックト核酸、ウイルス、細菌、寄生虫および炎症性の誘導物質;以下の1つ以上を含む肝臓毒性物に反応する:アセトアミノフェン、アルコール、トロバフロキサシン、メトトレキセート、ジクロフェナク、トログリタゾン、バルプロ酸および塩酸アミオダロン;以下の1つ以上を含む輸送タンパク質を発現する:BSEP、OATP1B1、NTCP、PGP、BCRP、OATP1B3、ABCB4、ATP8B1、多重薬剤抵抗性輸送体(MDR);成形後に少なくともいくつかの静止した星細胞を保持する;及び、微小血管の構造を含む。
特に他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明の属する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
組織工学は、臓器の増強、修復、または置換を介して組織機能を回復、維持、または改善する生物学的代替物の開発に向けて、工学とライフサイエンスの原理を適用して組み合わせる学際的分野である。典型的な組織工学に対する基本的なアプローチは、生体適合性である且つ最終的に生体分解性である環境(例えば、スキャフォールド)に生細胞を蒔き、その後、始原細胞の個体群がさらに拡大する且つ成熟するように、この構成物をバイオリアクター内で培養し、移植後に標的組織をもたらすことである。生物学的な細胞外マトリクス(ECM)を模倣する適切なスキャフォールドによって、発達中の組織は、インビトロおよびインビボの成熟後に所望の臓器の形態および機能の両方を取り入れ得る。しかしながら、天然組織様の構造を有する十分に高い細胞密度を達成することは、スキャフォールドの全体にわたって細胞の分布および空間的配置を制御する能力が限定されるため、困難である。これらの限定によって、結果的に、機械的性質が乏しい及び/又は機能が不十分な組織または臓器がもたらされ得る。さらなる困難は、スキャフォールドの生体分解、残留ポリマーの捕捉、および製造プロセスの工業上のスケールアップに関係している。スキャフォールドがないアプローチが試みられてきた。現在のスキャフォールドがないアプローチは、いくつかの制限を受ける:
・1つ以上の層が組成上又は構造上他の層と異なる、又は各層が異なる細胞型を含む、空間的に定義される互いに近傍な配置である多層構造などの、複雑な平面及び/又は層状の構造は、天然組織様の結果を再生可能に達成するために、具体的な構造内で細胞型の明確で高分解能の配置を必要とし得る。
・尺度および幾何学的構造は、拡散及び/又は栄養供給に対する機能的な血管網のための必要条件によって限定される。
・いくつかの場合、組織の生存能力は拡散を限定し、栄養に対する細胞のアクセスを制限する制限物質によって損なわれ得る。
・細胞を含む組織および/または器官を生産することができる。・天然組織様細胞内相互作用を再び作ることで、成長、ホメオスタシス及び/又は天然組織の病原において見られる環境的条件を模倣する。
・複雑なトポロジー及び構造(例えば多層構造、セグメント、シート、チューブ、嚢等)の幅広いアレイによって生きている三次元組織を随意に向上させ、組織を成形する。
・製造の自動化した又は半自動化した手段と適合性があり、スケーラブルである。
幾つかの実施形態では、操作した肝臓組織/構成物の少なくとも1つの成分およびそのアレイが、バイオプリントされた。さらなる実施形態では、バイオプリントされた構成物は、細胞溶液、細胞懸濁液、細胞を含むゲルまたはペースト、細胞濃縮液、多細胞体(例えば、シリンダー、スフェロイド、リボンなど)、および随意に、三次元の送達装置(例えば、バイオプリンター)による生体適合性支持体の表面上の制限物質(例えば、ヒドロゲル及び/又は多孔質膜から成る)を含む、細胞の、三次元の、自動化された、コンピューター支援の堆積に基づいて、急速なプロトタイピング技術を利用する方法で作られる。本明細書で使用されるように、幾つかの実施形態では、組織及び/又は器官に言及するために使用されるときの、用語「操作した(engineered)」は、細胞、細胞溶液、細胞懸濁液、細胞を含むゲルまたはペースト、細胞濃縮液、多細胞集合体、およびそれらの層が、コンピュータースクリプトに基づくコンピューター支援のデバイス(例えば、バイオプリンター)によって、三次元構造を形成するために配置されることを意味する。さらなる実施形態では、コンピュータースクリプトは、例えば、1つ以上のコンピュータープログラム、コンピューターアプリケーション、またはコンピューターモジュールである。またさらなる実施形態では、細胞又は多細胞体のバイオインクのプリンティング後の融合を介して形成される三次元の組織構造は、いくつかの場合において初期の形態形成における自己集合現象に類似する。
図1を参照すると、天然の肝臓組織は、互いに近傍に位置する、異なる空間的にパターン化された構造で配置された複数の細胞型を含む。各肝小葉は、肝臓の操作した機能単位を構成し、形状においてはほぼ六角形である。実質細胞又は肝細胞は、小葉を囲んで補助する位置にある非実質細胞(胆管細胞、類洞内皮細胞、星細胞およびクッパー細胞)とともに小葉の大部分を構成し、門脈と胆管の間で(小葉の末梢に沿って)中心静脈に向かって広がっている。非実質細胞の位置及びにそれぞれ類洞及び胆細管に沿った血流と胆汁の流れは、肝細胞のための正常な微小環境を形成するために一緒にふるまい、よって容態及びこれらの細胞の機能に影響する。肝臓中の硬変あるいは繊維症のような様々な病理学的状態は、細胞外マトリクスの過剰生成、炎症、及び病原性サイトカイン及び成長因子の生成によって肝細胞の微小環境が崩壊し、肝臓の構造が次第に破壊されるため、重要な代謝機能の喪失をもたらす。
天然の組織は、組織の細胞内及び細胞外構成要素(つまり空間、細胞外マトリクス、タンパク質の物質など)によって駆動する空間的及び構成的パターンの存在によって特徴づけられる。三次元性を達成するために合成スキャフォールドを展開させる組織工学的戦略に対する固有の難題は、天然組織の構造的及び生物学的属性を再生産できないことである。現在までに、スキャフォールド構造中に天然組織様層状又は平面構造を作る試みがなされている一方、天然組織を模倣する密度での細胞の組み込みを可能にすることは、技術的な限界によって阻まれている。バイオプリンティングは、図18A−Eに図示されている例に基づく、細胞を含むバイオインクの空間的に定義された堆積を通して、両方の固有の難題(平面/層状構造及び細胞密度)を克服する。いくつかの実施形態では、平面構造は多数のバイオインク製剤から作成され、これによって2つ以上の組織要素(すなわちストロマ、上皮、血管、硬骨、軟骨、柔組織的、皮質、骨髄、乳頭、小葉など)が、各組織要素/細胞集団/バイオインク製剤を、X、Y及び/又はZ平面上で互いに近傍である定義された位置に配置するような様式で成形される。いくつかの実施形態では、平面構造は空間を組込む。さらなる実施形態において、平面構造における空間は、血液、リンパ、胆汁、尿、分泌液などのような体液の少なくとも1つの要素を模倣した液体を収容する。さらなる実施形態では、空間は、随意に非接着細胞型あるいは体液由来の構成要素(例えば血球、骨髄細胞、リンパ細胞、免疫細胞、癌細胞、血小板、タンパク質など)を含んでいる。またさらなる実施形態では、体液由来の構成要の素非接着細胞型は、平面構造の細胞を含む要素に、成形前、最中又は後で導入された非空間の要素として随意に存在する。まださらなる実施形態では、非支持者の細胞の構成要素あるいは体液を派生した構成要素は、細胞間の相互作用あるいは分泌された要因に対する反応の結果平面構造内の細胞を含むスペースへ空間から補充される。
本明細書には、幾つかの実施形態において、1つ以上のタイプの哺乳動物細胞を含む操作した肝臓組織(例えば肝臓アナログ)が開示される。さらなる実施形態では、操作した肝臓組織は、肝細胞あるいは肝細胞様細胞を含む。またさらなる実施形態では、適切な肝細胞あるいは肝細胞様細胞は、限定されないが原発性の肝細胞、HepG2細胞のような細胞株、HepaRG細胞のような組織に特有の前駆細胞あるいはその組み合わせを含む。さらなる実施形態では、操作した肝臓組織は胆管上皮性細胞あるいは胆管上皮性細胞様細胞を含む。さらなる実施形態では、操作した肝臓組織は非実質細胞を含む。またさらなる実施形態では、適切な非実質細胞は限定されないが、血管細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、筋線維芽細胞、脂肪細胞、脂肪生成の細胞、間葉細胞、免疫細胞、クッパー細胞、星細胞、胆管上皮細胞、胆管上皮性細胞様細胞、類洞内皮細胞、肝臓由来の幹細胞/前駆細胞、非肝臓由来の幹細胞/前駆細胞、またその組み合わせを含む。
本発明の操作した肝臓組織で使用される細胞型は、当該技術分野に既知の任意の方法で適切に培養され得る。細胞および組織の培養の方法は、当該技術分野で公知であり、例えば、Cell & Tissue Culture:Laboratory Procedure s; Freshney (1987), Culture of Animal Cells : A Manual of Basic Techniquesに記載され、それらの内容は、そのような情報のための引用によって本明細書に組み込まれる。本発明と併用して使用され得る、一般的な哺乳動物の細胞培養技術、細胞株、および細胞培養系も、Doyle,A.,Griffiths,J.B.,Newell,D.G.,(eds.)Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures,Wiley(1998)に記載され、それらの内容は、そのような情報のための引用によって本明細書に組み込まれる。
本明細書には、特定の実施形態において、バイオプリントされた細胞を含む肝臓組織/構成物を含む組織、その配列、および方法が開示される。幾つかの実施形態では、細胞は、バイオプリンターからバイオインクを堆積させる又は押し出すことによってバイオプリントされる。幾つかの実施形態では、「バイオインク」は、複数の細胞を含む、液体、半固体、または固体の組成物を含む。幾つかの実施形態では、バイオインクは、液体または半固体の細胞溶液、細胞懸濁液、または細胞濃縮液を含む。さらなる実施形態では、細胞溶液、細胞懸濁液又は細胞濃縮液は、液体又は半固体(例えば粘性)担体及び複数の細胞を含む。またさらなる実施形態では、担体は、本明細書中に記載されているような適切な細胞栄養培養液である。いくつかの実施形態では、バイオインクは、バイオプリンティングに先立って多細胞集合体へ随意に凝集した複数の細胞を含む。さらなる実施形態において、バイオインクは複数の細胞を含み、特定の平面及び/又は層状構造を生成するためにバイオプリントされ、ここで個別の細胞の凝集がバイオインク中でバイオプリンティングの前、最中及び/又は後で起こる。いくつかの実施形態では、バイオインクは1)固定された容量中の複数の細胞を集めることにより生産され;ここで、細胞の構成要素は、全容積の少なくとも約30%と最も多くて100%に相当する。いくつかの実施形態では、バイオインクは半固体又は固体の多細胞集合体あるいは多細胞体を含む。さらなる実施形態では、バイオインクは、1)結果的にバイオインクをもたらすために、予め決められた割合で複数の細胞または細胞集合体を生体適合性の液体またはゲルと混合することによって、および2)所望の細胞密度および粘性を有するバイオインクを生成するために、バイオインクを圧縮する(compacting)ことによって生成される。幾つかの実施形態では、バイオインクの圧縮は、遠心分離、タンジェント流ろ過(「TFF」)、またはそれらの組み合わせによって達成される。幾つかの実施形態では、バイオインクの圧縮は、結果的に、押し出し成形できる組成物をもたらし、多細胞集合体または多細胞体の形成を可能にする。幾つかの実施形態では、「押し出し成形できる」は、ノズルまたは開口部(orifice)(例えば、1つ以上の穴またはチューブ)を通して押し進める(forcing)(例えば、圧力下で)ことによって形作られることが可能であることを意味する。幾つかの実施形態では、バイオインクの圧縮は、適切な密度まで細胞を成長させることから結果的に生じる。バイオインクに必要な細胞密度は、使用されている細胞および生成されている組織または器官に応じて異なる。幾つかの実施形態では、バイオインクの細胞は、凝集及び/又は接着される。幾つかの実施形態では、「凝集する」、「凝集した」、および「凝集」は、細胞、多細胞集合体、多細胞体、及び/又はそれらの層を結合する細胞間の接着特性を指す。さらなる実施形態では、前記用語は、「融合する」、「融合した」、および「融合」と交換可能に使用される。幾つかの実施形態では、バイオインクはさらに、支持材、細胞培養培地、細胞外マトリクス(またはその成分)、細胞接着剤、細胞死抑制剤、抗アポトーシス性薬剤、抗酸化剤、押出化合物、およびそれらの組み合わせを含む。
幾つかの実施形態では、バイオインクは、細胞培養培地を含む。細胞培養培地は、任意の適切な培地である。様々な実施形態では、適切な細胞培養培地は、限定しない例として、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、Earle’s Balanced Salts、Hanks’Balanced Salts、Tyrode’s Salts、オルシーバー液、Gey’s Balanced Salt Solution、Kreb’s−Henseleit Buffer Modified、Kreb’s−Ringer Bicarbonate Buffer、Puck’s Saline、ダルベッコ変法イーグル培地、ダルベッコ変法イーグル培地/栄養素F−12Ham、栄養素混合物F−10Ham(Ham’s F−10)、培地199、最少必須培地イーグル、RPMI−1640培地、Ames’Media、BGJb培地(Fitton−Jackson Modification)、Click’s培地、CMRL−1066培地、Fischer’s培地、Glascow最少必須培地(GMEM)、Iscove変法ダルベッコ培地(IMDM)、L−15培地(Leibovitz)、McCoy’s 5A変法培地、NCTC媒体、Swim’s S−77培地、Waymouth培地、William’s培地E、あるいはそれらの組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、細胞培養培地は、変更されるか又は補足される。幾つかの実施形態では、細胞培養培地は、アルブミン、セレン、トランスフェリン、フェチュイン、砂糖、アミノ酸、ビタミン、成長因子、サイトカイン、ホルモン、抗生物質、脂質、脂質担体、シクロデキストリン、またはそれらの組み合わせをさらに含む。
幾つかの実施形態では、バイオインクは、細胞外マトリクスまたはその誘導体の1つ以上の成分をさらに含む。幾つかの実施形態では、「細胞外マトリクス」は、細胞によって生成され、細胞から細胞外空間へと輸送されるタンパク質を含み、ここで、タンパク質は、組織を一緒に保持するための支持として機能することで、引っ張り強度を提供し、及び/又は細胞シグナル伝達を促進する。細胞外マトリクス成分の例は、限定されないが、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ヒアルロナート、エラスチン、およびプロテオグリカンを含む。例えば、多細胞集合体は、様々なECMタンパク質(例えば、ゼラチン、フィブリノゲン、フィブリン、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、エラスチン、及び/又はプロテオグリカン)を含み得る。ECM成分またはECM成分の誘導体は、多細胞集合体を形成するために使用される細胞ペーストに加えられ得る。細胞ペーストに加えられたECM成分またはECM成分の誘導体は、ヒトまたは動物源から精製され得るか、または当該技術分野に既知の組換え方法によって生成され得る。あるいは、ECM成分またはECM成分の誘導体は、細長い細胞体中の細胞によって自然に分泌され得るか、または細長い細胞体を作るために使用される細胞は、当該技術分野に公知の任意の適切な方法によって遺伝子操作され得ることで、1以上のECM成分またはECM成分の誘導体及び/又は1以上の細胞接着分子または細胞基質接着分子(例えば、セレクチン、インテグリン、免疫グロブリン、およびアドヒリン(adherins))の発現レベルを変化させることができる。ECM成分またはECM成分の誘導体は、多細胞集合体中の細胞の凝集を促進し得る。例えば、ゼラチン及び/又はフィブリノゲンは、細胞ペーストに適切に加えられ得、多細胞集合体を形成するために使用される。フィブリノゲンは、トロンビンを加えることによってフィブリンに転換され得る。
幾つかの実施形態では、バイオインクは、押出化合物(すなわち、バイオインクの押出特性を変更する化合物)をさらに含む。押出化合物の例は、限定されないが、ゲル、ヒドロゲル、ペプチドヒドロゲル、アミノ酸に基づくゲル、界面活性剤ポリオール(例えばPluronic F−127またはPF−127)、熱応答性ポリマー、ヒアルロナート、アルギナート、細胞外マトリクス成分(およびその誘導体)、コラーゲン、ゼラチン、他の生体適合性の天然または合成のポリマー、ナノファイバー、および自己集合性ナノファイバーを含む。いくつかの実施形態では、押出化合物は、物理的な手段、化学の手段、あるいは酵素的な手段によってバイオプリントした後に取り除かれる。
いくつかの実施形態では、バイオインクは多細胞体を含み、それはさらに非実質的な肝細胞(例えば内皮細胞、肝星細胞、クッパー細胞)を含む。さらなる実施形態では、クッパー細胞:肝星細胞:内皮細胞の比率は、任意の適切な比率である。さらなる実施形態では、クッパー細胞:肝星細胞:内皮細胞の比率は、約90:10:0から約10:90:0である。さらなる実施形態では、クッパー細胞:肝星細胞:内皮細胞の比率は、45:45:10である。
幾つかの実施形態では、構成物または組織を形成するために使用される多細胞集合体は、操作した組織に含められるすべての細胞型(例えば、肝細胞、内皮細胞、肝星細胞、クッパー細胞など)を含み;このような例では、各細胞型は、肝臓組織構成物などの操作した組織を形成するために、(例えば、成熟の間に)適切な位置へと移動する。他の実施形態では、構造を形成するために使用される多細胞集合体は、操作した組織に含められるすべての細胞型より少ない細胞型を含む。幾つかの実施形態では、各タイプの細胞は、多細胞集合体または組織の領域または層内に均一に分散される。
他の実施形態では、各細胞型は、多細胞集合体または組織の領域または層内の特定の領域に局在化する。
幾つかの実施形態では、本明細書には、操作した、移植された組織及び器官が開示され、これらは、任意の予め形成されたスキャフォールドがほぼない。さらなる実施形態では、「スキャフォールド」は、ポリマースキャフォールドおよび多孔性ヒドロゲルなどの合成のスキャフォールド、予め形成された細胞外マトリクスの層および脱細胞化組織などの非合成のスキャフォールド、および操作した組織及び/又は臓器の物理的構造に不可欠である、および組織及び/又は器官から取り除かれない、任意の他のタイプの予め形成されたスキャフォールドを指す。またさらなる実施形態では、脱細胞化された組織スキャフォールドは、脱細胞化された天然の組織あるいは任意の方法で培養細胞によって生成された脱細胞化された細胞形質成分を含み;例えば、生きている間生成するECMはあとにして、死ぬこと又は脱細胞化することが可能である細胞層がある。
幾つかの実施形態では、本明細書には、肝臓組織/構成物を含む、操作した組織のアレイが開示される。幾つかの実施形態では、「アレイ」は、複数の試験がサンプル上で行われることを可能にする、1つ以上の試験が複数のサンプル上で行われることを可能にする、またはその両方を可能にするように空間的に配置された、複数の要素の関連性を含む科学的ツールである。幾つかの実施形態では、アレイは、スクリーニングの方法および機器に適応しているか又は適合性があり、これは、高スループットのスクリーニングに関連するアレイを含む。さらなる実施形態では、アレイによって、複数の試験を同時に行うことができる。さらなる実施形態では、アレイによって、複数のサンプルを同時に試験することができる。幾つかの実施形態では、アレイは、細胞のマイクロアレイである。さらなる実施形態では、細胞のマイクロアレイは、固体担体の表面上の生細胞の多重の照合(multiplex interrogation)を可能にする研究ツールである。他の実施形態では、アレイは、組織のマイクロアレイである。さらなる実施形態では、組織のマイクロアレイは、アレイにおいて集められた複数の個別の組織または組織サンプルを含み、これによって、複数の生化学的、代謝的、分子的、または組織学的な解析の実施が可能となる。
幾つかの実施形態では、本明細書で開示される、操作した肝臓組織、およびそのアレイは、インビトロでのアッセイに使用される。幾つかの実施形態では、「アッセイ」は、有機サンプルまたは生体サンプル(例えば、細胞集合体、組織、臓器、有機体など)において、物質(例えば、化学物質、分子、生化学物質、薬物など)の存在または活性を試験または測定するための手順である。さらなる実施形態では、アッセイは、定性的アッセイおよび定量的アッセイを含む。またさらなる実施形態では、定量的アッセイは、サンプル中の物質の量を測定する。
さらなる実施形態において、肝臓構成物は、1つ以上の表面上の追加の組織構成物と直接接触している。またさらなる実施形態では、肝臓組織は、流体経路又は一般的な流体リザーバーを介して1つ以上の追加の組織構成物又は細胞と接触している。またさらなる実施形態では、操作した肝臓組織構成物と接触する液体培地は、免疫細胞、血液由来の細胞あるいは腫瘍由来の細胞のような生きている哺乳動物細胞を含んでいる。他の実施形態では、操作した肝臓組織構成物と接触する液体培地は、細菌、ウイルス、寄生虫あるいは他の病原体を含んでいる。いくつかの実施形態では、X線あるいはcryo−EMを含む三次元構造研究のための肝臓指向性ウイルスを繁殖させるために、操作した肝臓組織とアレイが、ビヒクルとして使われる。
いくつかの実施形態では、操作され肝臓組織構成物は、複数の層、シリンダー状のバイオインクを含む各層、実質的に平行に軸方向に整列したバイオインク、肝実質細胞を含むバイオインク; 及び、随意に、シリンダー状のバイオインク中又は間に非実質細胞;並びに、随意に、シリンダー状のバイオインク中の空間又は潅流チャネルを含む。さらなる実施形態において、操作した肝臓組織は、必要とする被験体に体外の支援を提供するために使用される。またさらなる実施形態では、血液をろ過し、被験体の肝機能を補足するために、血液は、構成物上あるいは構成物を通って流れる。
幾つかの実施形態において、本明細書中で開示されているのは、生きている、三次元肝臓組織構成物を構築する方法であって、該方法は、形態の中又は上に少なくとも1つの肝細胞型を含むバイオインクをバイオプリントする工程、及び生きている、三次元肝臓組織構成物中にバイオインクを融合する工程を含む。さらなる実施形態において、組織構成物はインビトロで使用するためのものである。
幾つかの実施形態では、この方法は、1つ以上の哺乳動物細胞型を含む凝集した多細胞集合体を調製する工程を含み、少なくとも1つの細胞の構成要素は肝細胞を意味する。幾つかの実施形態では、この方法は肝臓実質細胞を含む凝集した多細胞集合体を調製する工程を含んでいる。幾つかの実施形態では、この方法はさらに非実質細胞を含む凝集した多細胞集合体を調製する工程を含んでいる。幾つかの実施形態では、この方法は、内皮細胞、星細胞、繊維芽細胞、クッパー細胞、免疫細胞、リンパ球、癌細胞、ウイルス輸送細胞(virus−bearing)、病原性細胞、脂肪細胞、脂肪生成の細胞、平滑筋細胞あるいは幹細胞/前駆細胞由来の細胞の1つ以上の他の細胞型をさらに含む凝集した多細胞集合体を調製する工程を含んでいる。
幾つかの実施形態では、多細胞集合体は、複数の生細胞を含有している又は所望の細胞密度および粘度を有する細胞ペーストから成形される。さらなる実施形態では、細胞ペーストは、所望の形状および成熟(例えば、インキュベーション)によって形成された多細胞体へと成型される。幾つかの実施形態では、多細胞集合体の形状はその周りを囲む型又は枠の形状によって決定する。さらなる実施形態では、型又は枠は、定義された構造に自動装置によって成形される。またさらなる実施形態では、型又は枠はバイオインクからなり、肝臓由来の細胞を含んでいる。さらなる実施形態では、型又は枠は肝臓由来の非実質細胞、及び枠を満たし実質細胞を含む多細胞集合体を作るために使用されるペーストを含む。幾つかの実施形態では、多細胞集合体は実質的にシリンダー状である。他の実施形態では、多細胞集合体は六角形、正方形、立方骨、長方形、多角体である。またさらなる実施形態では、複数の多細胞集合体は、囲む型又は枠を繰り返し構造の碁盤目状のパターンで成形し、続いて又は同時に細胞ペーストで型又は枠を埋めることにより形成される。さらなる実施形態では、細長い多細胞体を形成するのに細胞が互いに接着及び/又は凝集することを可能にするために、細胞ペーストは制御された環境でインキュベートされる。他の特定の実施形態では、多細胞体は、細胞ペーストを三次元の形状中に保持するデバイスの中に複数の生きている細胞を含む細胞ペーストを成型することで生成される。さらなる実施形態では、平らな表面上で自身を支えるのに十分な凝集力を有する多細胞体を生成するために、細胞ペーストは、三次元の形状中で十分な時間保持される一方、制御された環境でインキュベートされる。
所望の三次元構造を生成するために、多くの方法が、支持体上へと多細胞集合体を配置するのに適切である。例えば、幾つかの実施形態では、多細胞集合体は、互いに接して手動で配置されるか、ピペット、ノズル、又は針からの押出によって適所に堆積されるか、又はバイオプリンターなどの、自動化した、コンピューター支援の機器によって位置付けられる。
細胞の1つ以上の層を、凝集した哺乳動物細胞構成物の1つ以上の外部層上に適用するのに、多くの方法が適切である。例えば、幾つかの実施形態では、細胞の層を適用する工程は、凝集した多細胞集合体の1つ以上の表面を、懸濁液、シート、単一層又は細胞の融合した集合体でコーティングする工程を含む。様々な実施形態では、凝集した哺乳動物細胞構成物の1、2、3、4、又はそれ以上の表面がコーティングされている。
幾つかの実施形態では、この方法は、非実質細胞を含む1つ以上のバイオインクを調製する工程;肝細胞又は肝細胞様細胞のような実質細胞を含む1つ以上のバイオインクを調製する工程;支持体上にバイオインクを堆積する工程;及び少なくとも1つの区画を含む、生きている、三次元の肝臓組織構成物を形成するために、堆積されたバイオインクを約1時間から約30日までの間インキュベートする工程であって、該区画は非実質細胞を含む境界で制限された、実質細胞を含む内部を含む工程、を含む。
この実施形態では、細胞がない材料は使用時にスキャフォールドのない組織を生成するために消える。
幾つかの実施形態では、多細胞集合体はインキュベートされる。さらなる実施形態では、インキュベーションによって、多細胞集合体は、接着及び/又は凝集して、肝臓組織のような組織を形成することができる。幾つかの実施形態では、多細胞集合体は、凝集して、細胞培養環境(例えば、ペトリ皿、細胞培養フラスコ、バイオリアクターなど)において組織を形成する。さらなる実施形態では、多細胞集合体は、凝集して、多細胞集合体に含まれる細胞型の成長を促進するのに適切な条件を有する環境において組織を形成する。1つの実施形態では、多細胞集合体は、接着及び/又は凝集を促進する細胞培養培地を含有している因子及び/又はイオンの存在下で、約5%のCO2を含有している湿気のある環境において、約37℃でインキュベートされる。他の実施形態では、多細胞集合体は、0.1%から21%のO2を含有している環境で維持される。
幾つかの実施形態では、方法は、操作した組織の生存率を増加させるための工程をさらに含む。さらなる実施形態では、これらの工程は、制限物質の一時的又は半永久的な格子状構造(lattice)を介して組織と栄養培地との間の直接的な接触を提供する工程を含む。幾つかの実施形態では、組織は、多孔性の又は間隙のある(gapped)材料において制限される。栄養素に対する操作した組織の細胞の少なくとも幾つかの直接的なアクセスによって、操作した組織の生存率は増加する。
例えば、幾つかの実施形態では、制限物質は、切除されるか、細胞からはぎ取られるか、消化されるか、又は溶解される。
本明細書に記載されているバイオプリントされた肝臓組織は、ヒト組織に類似の多細胞構造を含んでいた。天然の肝臓組織のように、バイオプリントされた肝臓組織は、特定の領域で集積され、パターン化され区画化された構造を産出する特定の細胞型(例えば、肝星細胞、肝細胞、内皮細胞など)を含んでいた。
操作した肝臓組織を、連続的な堆積機構を使用するNovoGen MMX Bioprinter(商標)(Organovo,Inc.,San Diego,CA)を利用してバイオプリントした。肝臓組織の三次元構造は、この場合、六角形の繰り返しの機能ユニットに基づいていた。バイオインクは、肝星細胞及び押出化合物(界面活性剤ポリオール−PF−127)にカプセル化された内皮細胞から成っていた。
30%PF−127溶液(w/w)を、PBSを用いて作製した。PF−127パウダーを、4℃に維持した磁気撹拌プレートを使用して冷蔵のPBSと混合した。完全溶解は約48時間で生じた。
82%の星細胞(SC)及び18%のヒト大動脈内皮細胞(HAEC)とヒト成人皮膚繊維芽細胞(HDFa)で構成される細胞懸濁液を、遠心分離の後、3つの細胞濃度:50×106細胞/ml、100×106細胞/ml、及び200×106細胞/mLを達成するために15mLのチューブに分離した。各細胞ペレットを30%PF−127に再懸濁し、バイオプリンターで使用する3ccのリザーバーへ吸引した。510μmの分注チップで、カプセル化された細胞を、単一の六角形(図6Aを参照)又は六角形の碁盤目状の配置(図6Bを参照)になるよう、PDMS基板プレート上にバイオプリントした。各構成物は約200μLの培地を受け取り、構成物の統合性を評価するために、室温にて20分間インキュベートした。
六角形碁盤目状配列実験のために、連続する(4)層までをバイオプリントした結果、より多くの細胞形質成分が存在する、より高さが高い構造をもたらした。成形に続き、各構成物は、構成物の統合性を評価するために約200μLの完全培地を最初に受け取った。構成物を室温で20分間インキュベートし、その後、20mLの完全培地に浸した。
10%ウシ胎児血清を含む増殖培地(PF127を溶解する)で18時間培養後、バイオプリントされた構造に含まれる細胞は、最初のデザインの幾何学的なパターニングを保持した完全な連続した組織のシートを生成するために、十分に互いに凝集した(図6Dを参照)。図7は、10%中性緩衝ホルマリン中に固定化した後の、碁盤目状の構成物の単一セグメントのH&E染色を示す。細胞は、生存可能で、完全で、それらの最初のプリントされた構造にとどまることが分かった。
細胞集団(同種の又は異種の)をバイオプリンティングのために、シリンダー状のバイオインク又はプルロニックF−127(Lutrol,BASF)の細胞懸濁液のいずれかとして調製した。要約すると、バイオインクの調製のために、細胞を組み換えヒト・トリプシン(75μg/mL,Roche)又は0.05%トリプシン(Invitrogen)のいずれかを使用して、標準的な組織培養プラスチックから遊離させた。酵素遊離に続いて、細胞を洗浄し、回収し、カウントし、所望の比率(つまり、50:50、肝星細胞(hSC):内皮細胞(EC))で組み合わせ、遠心分離によりペレットにした。その後、上清を細胞ペレットから取り除き、細胞混合物を、典型的に内径が500μm又は250μmの所望の直径のガラスマイクロキャピラリーへ吸引した。その後、このシリンダー状の細胞調製物を、バイオインク成熟のためのチャネルを備えた非細胞接着性ヒドロゲル材料から生成された型へ押し出した。その後、得られたシリンダー状のバイオインクを、典型的に2から24時間の経験的に決められた時間、完全細胞培養培地で培養した。
細胞パターニング、積層化又は配置を、バイオプリンティングを使用して達成した。異種の(つまり多型の)細胞集団を含むバイオインクでのバイオプリンティングによって、若しくは高密度細胞ゲル又は細胞懸濁液のバイオインク(同種の又は異種の細胞集団)を組み合わせることによって、異なる細胞の組織化が観察された。加湿チャンバー(インキュベータ)内でのこれらの新組織構成物の成熟は、これらのバイオプリントされた新組織における異なる細胞配置、組織化及び/又は分離のさらなる確立をもたらした。
細胞集団(同種の又は異種の)を、シリンダー状のバイオインク集合体、細胞集合体の懸濁液又は細胞懸濁液/ペーストを含み、随意に押出化合物を含む、様々なバイオインクフォーマットを使用するバイオプリンティングのために調製した。要約すると、シリンダー状のバイオインクの調製のために、細胞を、組み換えヒト・トリプシン(75μg/mL,Roche)又は0.05%トリプシン(Invitrogen)のいずれかを使用して、標準的な組織培養プラスチックから遊離させた。酵素遊離に続いて、細胞を洗浄し、回収し、カウントし、所望の比率(つまり、50:50、肝星細胞(hSC):内皮細胞(EC))に組み合わせ、遠心分離によってペレットにした。その後、上清を細胞ペレットから取り除き、細胞混合物を、典型的に内径が500μm又は250μmの所望の直径のガラスマイクロキャピラリーへ吸引した。その後、このシリンダー状の細胞調製物を、バイオインクの成熟のためのチャネルを備えた非細胞接着性ヒドロゲル材料から生成された型へ押し出した。その後、得られたシリンダー状のバイオインクを、典型的に2から24時間の経験的に決められた時間、完全細胞培養培地で培養した。
バイオプリントされた組織を、マルチウェル培養プレート又はマルチウェル培養インサート内で成形に成功した後、マルチウェルプレートに挿入した。このアプローチは、同一又は特有の培養条件を生成するために、随意に培養され処置される複製したバイオプリントされた組織の生成を可能にする。このアプローチは、バイオプリンティングのプロセス処理能力及びサンプル生成の著しい増大をもたらす(図16を参照)。
適切な異種の(つまり、多型の)細胞集団を含むシリンダー状のバイオインクを調製した。細胞の生理学的に適切な集団(例えば、肝星細胞(hSC)及びヒト大動脈内皮細胞(EC))を、適切なバイオインクを生成するために特定の割合で組み合わせた。細胞を標準的な実験条件下で維持し、増殖させた。また、細胞を、細胞と同じ業者から購入した培地、又は特定の細胞型のための標準的な細胞培養の実行の助けとなる主要な文献に記載されている典型的な構成物を含む培地のいずれかの培地において培養した。バイオインク調製のための細胞処理は下記の通りだった:要約すると、細胞を、カチオンを含まないリン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄することにより標準的な組織培養プラスチックから遊離させ、その後、0.1−0.05%のトリプシン(Invitrogen)にさらした。その後、遊離した細胞を、刺激アッセイ又は実施されている実験のために、血清含有培地で洗浄し、回収し、カウントし、適切な比率で組み合わせ、そして遠心分離によってペレットにした。その後、上清を細胞ペレットから取り除き、細胞ペレットをガラスマイクロキャピラリーへ吸引し、その後、約15から20分間、完全培地に浸した。その後、このシリンダー状のバイオインク構造を、直線チャネルを含む非細胞接着性ヒドロゲルの型へ押し出し、2から18時間保持した。その後、hSC及びECを含むシリンダー状のバイオインクを、バイオプリントされた組織構成物を成形するために使用し、加湿チャンバー内で維持及び/又は成熟させた。組織セグメントを、1.25mm×8mm×0.25mm(W×L×H)の最初の寸法で成形した。バイオプリンティング後の成熟期の間、幾つかの構成物を、組織特異的な反応を誘発させるために、サイトカインTGF−β1にさらした(図15参照)。
細胞の生理学的に適切な集団を含むバイオプリントされた新組織を、二次元のインビトロシステムでの細胞反応を誘発させるために以前に実証されたサイトカインで刺激することに成功した。バイオプリントされた三次元の組織構成物で観察された反応は用量依存的であり、バイオプリントされた構成物内の細胞に特有であることを観察した(例えば、図15を参照)。
<30%PF−127の調製>
30%PF−127溶液(w/w)はPBSを使用して作製した。PF−127パウダーを、4℃に維持した磁気撹拌プレートを使用して、冷蔵のPBSと混合した。完全溶解は約48時間で生じた。
バイオプリンターを使用して、510μmの分注チップによって3ccのリザーバーに3mLのPF−127溶液を吸引し、30%PF−127溶液を、単一の六角形の形状へと6ウェルのTranswell上にバイオプリントし、6回続けて積層した。
<細胞培養>
低温保存原発性のヒト肝細胞(Life Technologies)を、メーカーのプロトコルに従って精製し、ペニシリン100I.U./ml、ストレプトマイシン0.25μg/ml及びアンフォテリシン85μg/ml(1XP/S/A)(Life Technologies)を補った肝細胞維持培地(Life Technologies)中でインキュベートした。ヒト臍静脈内皮細胞(HUVEC;Becton Dickenson)及び肝星細胞(ScienCell)をバイオプリントされた組織の非実質細胞構成物に利用し、メーカーのインストラクションに従って増殖させた。HUVECをEGM−2培地(Lonza)中で、及び肝星細胞を10%FBS(Life Technologies)、ペニシリン100I.U./ml、ストレプトマイシン0.25μg/ml及びアンフォテリシン85μg/ml(1XP/S/A;Corning)を供給したDMEM培地(Corning)中で、成長させた。
次の試薬をSigmaから購入した:リファンピシン、ジクロフェナク、ベラパミル、5−(及び6)−カルボキシ−2’,7’ジクロロフルオレセインジアセテート及びビタミンD3。
バイオインクを本明細書に記載されるプロトコル及び技術に基づいて調製した。細胞を含むヒドロゲルの調製のために、NovoGel2.0(Organovo, Inc.)をメーカーのインストラクションに従って調整し、非実質細胞集団をバイオプリンティング前に組み込んだ。
全ての組織は、標準的なOrganovoバイオプリンティングプロトコル及びNovoGen MMX Bioprinter又はそれらの変更を含むものに使用する、標準的な組織培養ウェルインサート(Corning Transwell)の膜上に直接成形した。バイオプリントされた肝臓組織は、Novogel 2.0中に非実質細胞(肝星細胞、HUVEC)を含む、境界を含んでいた。境界は、内部を含む区画を定義した。区画の内部を、原発性の肝細胞を含む細胞ペーストで満たした。バイオプリントされた肝臓組織は、さらにNovogel 1.0を含む堀(moat)を含んでいた。図20はバイオプリントされたヒト肝臓組織の特定の例を示す。実験の間、バイオプリントされた肝臓組織を、これらの膜上で維持した。構成物を、90%の原発性の肝細胞培地及び10%のEGM−2の混合物を600μl含む培地で毎日培地交換し、37℃、5%CO2を補った加湿雰囲気条件下でインキュベートした。使用済みの培地を分泌された要素の分析のために回収し、肝臓組織をエンドポイント分析(例えば、遺伝子発現、組織学的検査、組織生存率など)のために回収した。
使用済みの培地を集め、−80℃で保存し、その後、以下の肝臓代謝物のために、市販のELISAキットによって分析した:アルブミン(Bethyl Laboratories)、フィブリノゲン(GenWay Labs)及びトランスフェリン(GenWay Labs)。コレステロール生合成を、蛍光定量的に定量した(Cayman Biochemical)。乳酸脱水素酵素(LDH)活性を、市販の試薬(Abcam)で比色定量的に測定した。
大量のRNAを、メーカーのインストラクションによってQuick−RNA MiniPrep(Zymo)を用いて、三次元の肝臓構成物から抽出した。RNAを、分光光度計(Beckman Coulter DU 640)を用いて定量した。投入量(input)2μgのRNAを、メーカーのインストラクション(CloneTech)に従って、個々のcDNA合成のSmartScribe反応で利用した。TaqMan(Life Technologies)プローブ並びにFAMで標識化されたCYP3A4及びVICで標識化された18Sのためのプライマー対を、メーカーのガイドライン(Life Technologies)に従って、Taqman Universal Master Mix UNGで利用した。転写増幅産物を、Step One Plus system(Life Technologies)を用いて検出した。
肝臓構成物を、室温で24時間、2%パラホルムアルデヒド溶液(PBS中に、2%パラホルムアルデヒド、10mM塩化カルシウム、50mMスクロース)で、インサイチュで固定化した。24時間後、固定溶液を取り除き、70%エタノールで置換した。付着したTranswell膜を備えた構成物を、プラスチック生検の型中で45℃の液体HistoGel(American MasterTech,Lodi,CA,catalog#EMHGECS)に浸し、これは室温での凝固を可能にした。その後、埋め込まれた肝臓構成物を備えたHistoGelブロックを、パラフィン包埋のために組織プロセッサーを使用して処理した。パラフィンの浸潤に続き、肝臓構成物をパラフィンの型に埋め込み、5μmの横断切片(cross−sections)を、回転式ミクロトーム(Jung Biocut 2035,Leica Microsystems,Buffalo Grove,IL)を使用して作製した。ヘマトキシリン−エオシン染色のため、スライドは、キシレン中でワックスを取り除き(dewaxed)、100%、95%、70%及び50%のエタノールを通して再水和させ、蒸留水中ですすいだ。スライドを、Gill’s hematoxylin (Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)に浸した。蒸留水でのすすぎに続いて、スライドを、0.2%v/vの水酸化アンモニウムに一時的に浸した。蒸留水ですすいだ後、スライドを水性のエオシン溶液(American MasterTech)に浸した。その後、スライドを、エタノール勾配を通して脱水し、キシレン中で取り除き、樹脂の封入剤(resinous mounting media)(CytoSeal,Fisher Scientific)に封入した。
肝臓構成物をDPBSで一度すすぎ、Tissue−Tek OCT compound(Sakura Finetek Europe B.V.,Netherlands)に浸し、急速凍結した。その後、肝臓構成物を含む凍結ブロックを、クライオスタット(Leica Cryocut 1800, Leica Microsystems)上で5μmに切り分けた。切り分けられたスライドを、−20℃の液体アセトンでスナップ固定(snap fixed)し、それは室温で20分間風乾させた。Oil RedO染色のため、スライドを蒸留水で再水和させ、60%イソプロパノールに2分間浸した。スライドを、室温で15分間、60%イソプロパノール中の0.3%w/vのOil RedO(Sigma−Aldrich)で染色し、続けて、60%イソプロパノールで1分間すすいだ。対比染色するために、スライドをGill’s hematoxylinに一時的に浸した。スライドを蒸留水ですすぎ、水性溶媒(American MasterTech)で封入した。
H&E、PAS及びOil RedO染色したスライドを、Zeiss Axioskop顕微鏡(Zeiss,Jena,Germany)を使用して可視化した。画像を、Insight 2 camera及びSpot 5.0 software(Diagnostic Instruments,Inc.,Sterling Heights,MI)で得た。蛍光染色したスライドを、Zeiss AxioImager顕微鏡で可視化し、画像を、Zeiss ICM−1 camera及びZen Pro softwareで得た。
培地を三次元の肝臓構成物から吸引し、1Xプロテアーゼインヒビターカクテル(Sigma)を補った400μlのリン酸緩衝食塩水(Corning)を構成物に添加し、続けて、−80℃で凍結させた。構成物を解凍し、TissuRuptor(Qiagen)及びディスポーザブルチップを利用して、90秒間3000rpm、続けて90秒間の休止、続けて90秒間3000rpmにて均質化した。均質化した上清を、20分間4℃で、20,000Xgで遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、続けてタンパク質を定量した。
タンパク質の定量を、標準物質としてウシアルブミン(Sigma)を備えたブラッドフォードアッセイ(Sigma)を利用して達成した。
S9画分をタンパク質含有量により基準化し、メーカーのプロトコルに従ってルシフェリン−IPAアッセイ(CYP ProGlo;Promega)に利用し、発光を、プレートリーダ(Polastar,BMG)を利用して読み取った。
分散分析及びスチューデントt検定での統計解析を、GraphPad Prism Softwareで実行した。
バイオプリントされた肝臓組織は、ヒト組織に似ている多細胞構造を含んでいた。天然の肝臓組織のように、バイオプリントされた肝臓組織は特定の領域で豊富な特定の細胞型(例えば、肝星細胞、肝細胞、内皮細胞など)を含んでおり、パターン化された、区画化された構造をもたらした。
クッパー細胞の組み込みは、Organovoの3Dの肝臓組織の免疫学的側面の研究を可能にする。クッパー細胞を、生理学的に適切な割合でバイオプリントされた肝臓構成物内に組み込んだ。構成物は、LPS刺激(LPS:E.coli0127:B8;Sigma)に対して用量依存的に反応する。図31を参照。クッパー細胞を、生理学的に適切な割合(〜12%)で肝臓構成物へバイオプリントした。構成物はLPS刺激に対して用量依存的に反応する。IL−10及びTNF−αはサイトカインに対抗している。IL−10の発現は、TNF−αの発現を減少させる。これはバイオプリントされた3Dの肝臓組織内で観察され、LPSの100μg/ml用量で最も著しい。図32を参照。
肝臓類洞内皮細胞の組み込みは、三次元のバイオプリントされた肝臓組織の免疫学的側面の研究を可能にする。肝臓類洞内皮細胞(HSEC)は天然の肝臓内皮細胞集団である。図33は、HSECの二次元の単一層を示す。これらの細胞は、免疫学的応答のための細胞シグナリングを含む特徴的な特性を有する。HSECは、図34に実証される、2D培養中でのIL−6の生成により、LPSに反応する。対照的に、LPSによって刺激された時、HUVECは検出できる量のIL−6を生成しない。バイオプリンティング処理に組み入れられた時、HSECは融合した3Dの肝臓組織を生成する。図35は、HSECを備えた、融合した三次元の肝臓組織を示す。この組織を生産するために、肝臓類洞内皮細胞の組織を非実質細胞の画分に組み込み、融合構造を生成する。
低分子が三次元のバイオプリントされた肝臓組織の全体にわたって浸透することができるかどうか決定するために、実験を行った。5−(及び6)−カルボキシ−2’,7’ジクロロフルオレセインジアセテートを、24時間、1μMで3Dの肝臓組織の培地に供給した。構成物を1mlのHBSSバッファーですすぎ、洗浄バッファーを吸引した。この処理を3回繰り返した。OCT包埋溶液を添加し、構成物を急速凍結し、凍結切片とした。5ミクロンのセクションを、495nmの励起光で、FITCチャネルで可視化した。5−(及び6)−カルボキシ−2’,7’ ジクロロフルオレセインジアセテート分子の蛍光構成物は、この波長で励起する。このセクションは構成物内で約150ミクロンであり、蛍光標識化合物はくまなく観察された。5−(及び6)−カルボキシ−2’,7’ジクロロフルオレセインジアセテートの式量は529.28である。図36は、低分子浸透を実証する、5倍での3Dの肝臓組織凍結切片のFITCイメージングを示す。
Claims (31)
- 操作した、生きている、三次元の肝臓組織構成物であって、
該構成物は、平面構造を定義する少なくとも1つの区画を備え、該区画は境界によって定義される内部を含み、該内部は実質細胞を含み、該境界は非実質細胞を含み、
細胞は生きている、三次元の肝臓組織構成物を形成するために凝集し、
該構成物の少なくとも1つの構成要素はバイオプリントされ、該構成物は使用時予め形成されたスキャフォールドが実質的にないように提供される、構成物。 - 実質細胞は、成体の哺乳類の肝臓組織、胎児の哺乳類の肝臓組織、胚性幹細胞(ESC)、ESC由来の肝細胞様細胞、人工多能性幹細胞(iPSC)、iPSC由来の肝細胞様細胞、肝臓由来の成人の幹細胞/前駆細胞、及び肝臓以外の組織に由来した成人の幹細胞/前駆細胞のソースの1つ以上に由来することを特徴とする、請求項1記載の構成物。
- 非実質細胞は、血管細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、間葉細胞、免疫細胞、クッパー細胞、星細胞、胆嚢上皮細胞、胆嚢上皮細胞様細胞、類洞内皮細胞 、肝臓由来の幹細胞/前駆細胞および非肝臓由来の幹細胞/前駆細胞の1つ以上を含むことを特徴とする、請求項1記載の構成物。
- 複数の層を含むことを特徴とする、請求項1記載の構成物。
- 層構造を作成するために、少なくとも1つの層が少なくとも1つの他の層と組成上又は構造上異なることを特徴とする、請求項4記載の構成物。
- ヒトの中の1つ以上の肝機能の強化で使用するためのものであることを特徴とする、請求項1記載の構成物。
- 損傷、疾患あるいは変性の部位での被験体における移植のためのものであることを特徴とする、請求項6記載の構成物。
- 複数の請求項1記載の操作した、生きている、三次元の肝臓組織構成物であって、インビトロでのアッセイに使用するためのアレイに配置されている、構成物。
- 創薬;薬物検査;前臨床研究;毒性試験;吸収、分布、代謝および排出試験(ADME);薬物代謝と薬物動態学試験(DMPK);疾患モデリング;感染症モデリング;宿主疾患モデリング;三次元の生物学的研究;及び細胞に基づくスクリーニングの1以上で使用するためのものである、請求項8記載のアレイ。
- 操作した、生きている、三次元の肝臓組織構成物であって、
該構成物は1つ以上の層を含み、各層は1つ以上の肝細胞型を含み、生きている、三次元の肝臓組織構成物を形成するために1つ以上の層が凝集し、該構成物は、
a.平面構造を作成するために細胞型が互いに近傍になるよう空間的に配置されている、複数の細胞型を含む少なくとも1つの層、及び
b.少なくとも1つの層が少なくとも1つの他の層と組成上又は構造上異なる、複数の層、
の少なくとも1つを有することを特徴とする、構成物。 - 構成物の少なくとも1つの構成成分がバイオプリントされていることを特徴とする、請求項10記載の構成物。
- 使用時予め形成されたスキャフォールドが実質的にないことを特徴とする、請求項10記載の構成物。
- 肝細胞は、成体の哺乳類の肝臓組織、胎児の哺乳類の肝臓組織、胚性幹細胞(ESC)、ESC由来の肝細胞様細胞、人工多能性幹細胞(iPSC)、iPSC由来の肝細胞様細胞、肝臓由来の成人の幹細胞/前駆細胞、及び肝臓以外の組織に由来した成人の幹細胞/前駆細胞のソースの1つ以上に由来することを特徴とする、請求項10記載の構成物。
- 血管細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、間葉細胞、免疫細胞、癌細胞、クッパー細胞、星細胞、胆嚢上皮細胞、胆嚢上皮細胞様細胞、類洞内皮細胞、肝臓由来の幹細胞/前駆細胞および非肝臓由来の幹細胞/前駆細胞の1つ以上の細胞型をさらに含むことを特徴とする、請求項10記載の構成物。
- ヒトの中の1つ以上の肝機能の強化で使用するためのものであることを特徴とする、請求項10記載の構成物。
- 損傷、疾患あるいは変性の部位での被験体における移植のためのものであることを特徴とする、請求項15記載の構成物。
- 複数の請求項10記載の操作した、生きている、三次元の肝臓組織構成物であって、インビトロでのアッセイに使用するためのアレイに配置されている、構成物。
- 創薬;薬物検査;前臨床研究;毒性試験;吸収、分布、代謝および排出試験(ADME);薬物代謝と薬物動態学試験(DMPK);疾患モデリング;感染症モデリング;宿主疾患モデリング;三次元の生物学的研究;及び細胞に基づくスクリーニングの1以上で使用するためのものである、請求項17記載のアレイ。
- 生きている、三次元の肝臓組織構成物を成形する方法であり、該方法は、
a.非実質細胞を含む1つ以上のバイオインクを調製する工程;
b.実質細胞を含む1つ以上のバイオインクを調製する工程;
c.支持体上にバイオインクを堆積する工程; 及び
d.生きている、三次元の肝臓組織構成物を形成するために、堆積されたバイオインクを約1時間から約30日までの間インキュベートする工程であって、該構成物は少なくとも1つの区画を備え、該区画は非実質細胞を含む境界で制限された、実質細胞を含む内部を含む工程、
を含む方法。 - 非実質細胞は、血管細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、間葉細胞、免疫細胞、癌細胞、クッパー細胞、星細胞、胆嚢上皮細胞、胆嚢上皮細胞様細胞、類洞内皮細胞 、肝臓由来の幹細胞/前駆細胞および非肝臓由来の幹細胞/前駆細胞の1つ以上を含むことを特徴とする、請求項19記載の方法。
- 実質細胞は、成体の哺乳類の肝臓組織、胎児の哺乳類の肝臓組織、胚性幹細胞(ESC)、ESC由来の肝細胞様細胞、人工多能性幹細胞(iPSC)、iPSC由来の肝細胞様細胞、肝臓由来の成人の幹細胞/前駆細胞、及び肝臓以外の組織に由来した成人の幹細胞/前駆細胞のソースの1つ以上に由来することを特徴とする、請求項19記載の方法。
- 構成物の少なくとも1つの構成成分がバイオプリントされていることを特徴とする、請求項19記載の方法。
- 構成物は使用時予め形成されたスキャフォールドが実質的にないことを特徴とする、請求項19記載の方法。
- 構成物が神経支配されていないことを特徴とする、請求項19記載の方法。
- 生きている、三次元の肝臓組織構成物を成形する方法であり、該方法は、非実質細胞を含む1つ以上のバイオインク、及び実質細胞を含み、支持体上に堆積される1つ以上のバイオインクを、生きている、三次元の肝臓組織構成物を形成するために約1時間から約30日の間インキュベートする工程を含み、該構成物は少なくとも1つの区画を備え、該区画は非実質細胞を含む境界で制限された、実質細胞を含む内部を含む、方法。
- 操作した、生きている三次元の肝臓組織構成物であって、該構成物は1つ以上の層を含み、少なくとも1つの層は少なくとも2つの細胞型を含み、少なくとも2つの細胞型は実質肝細胞型及び非実質肝細胞型を含み、少なくとも2つの細胞型は平面構造を作成するために互いに近傍に空間的に配置され、平面構造は少なくとも1つの実質肝細胞区画及び少なくとも1つの非実質肝細胞区画を含み、1つ以上の層は生きている三次元の肝臓組織構成物を形成するために凝集し、生きている三次元の肝臓組織構成物が少なくとも7日間のインビトロ培養で実質的に生存でき、
a.コレステロールを合成する;
b.脂質を保存する;
c.グリコーゲンを保存する;
d.アルブミン、フィブリノゲン、トランスフェリン、CYP450、α1−アンチトリプシン、オルニチントランスカルバミラーゼ、グリコーゲン合成酵素、第VIII因子および第IX因子の2つ以上を含む肝臓特異的なタンパク質を発現する;
e.ホルモン、誘導物質、毒性物、薬、抗体、干渉RNA、小型RNA、ロックト核酸、ウイルス、細菌、寄生虫および炎症性の誘導物質の1つ以上を含む肝臓モジュレータに反応する;
f.:アセトアミノフェン、アルコール、トロバフロキサシン、メトトレキセート、ジクロフェナク、トログリタゾン、バルプロ酸および塩酸アミオダロンの1つ以上を含む肝臓毒性物に反応する;
g.BSEP、OATP1B1、NTCP、PGP、BCRP、OATP1B3、ABCB4、ATP8B1、多重薬剤抵抗性輸送体(MDR)の1つ以上を含む輸送タンパク質を発現する;
h.成形後に少なくともいくつかの静止した星細胞を保持する;及び、
i.微小血管の構造を含む、
の内少なくとも2つの肝臓の特性を有するように提供される、肝臓組織構成物。 - 少なくとも14日間のインビトロ培養で実質的に生存できることを特徴とする、請求項26記載の肝臓組織構成物。
- 少なくとも28日間のインビトロ培養で実質的に生存できることを特徴とする、請求項27記載の肝臓組織構成物。
- 少なくとも40日間のインビトロ培養で実質的に生存できることを特徴とする、請求項28記載の肝臓組織構成物。
- 少なくとも2つの細胞型は人工多能性幹細胞(iPSC)に由来した細胞を含むことを特徴とする、請求項26記載の肝臓組織構成物。
- 少なくとも2つの細胞型は、単球またはマクロファージに由来した骨髄性細胞を含むことを特徴とする、請求項26記載の肝臓組織構成物。
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---|---|---|---|---|
US8241905B2 (en) | 2004-02-24 | 2012-08-14 | The Curators Of The University Of Missouri | Self-assembling cell aggregates and methods of making engineered tissue using the same |
EP2310847B1 (en) | 2008-06-24 | 2016-05-04 | The Curators Of The University Of Missouri | Self-assembling multicellular bodies and methods of producing a three-dimensional biological structure using the same |
WO2011140441A2 (en) | 2010-05-06 | 2011-11-10 | Children's Hospital Medical Center | Methods and systems for converting precursor cells into intestinal tissues through directed differentiation |
EP2629975B1 (en) | 2010-10-21 | 2022-03-09 | Organovo, Inc. | Devices for the fabrication of tissue |
KR20140072883A (ko) * | 2011-09-12 | 2014-06-13 | 오가노보, 인크. | 시험관내 연구 용도를 위한 조작된 조직, 이의 어레이 및 이의 제조방법 |
US9499779B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-11-22 | Organovo, Inc. | Devices, systems, and methods for the fabrication of tissue utilizing UV cross-linking |
EP2919794B1 (en) | 2012-11-15 | 2021-01-20 | AlloSource | Minced cartilage systems and methods |
WO2014130883A2 (en) | 2013-02-22 | 2014-08-28 | Allosource | Cartilage mosaic compositions and methods |
US9442105B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-13 | Organovo, Inc. | Engineered liver tissues, arrays thereof, and methods of making the same |
KR102138399B1 (ko) | 2013-03-15 | 2020-07-27 | 알로소스 | 천공된 골연골 동종이식 조성물 |
KR20160036619A (ko) | 2013-07-31 | 2016-04-04 | 오가노보, 인크. | 조직을 제작하기 위한 자동화 장치, 시스템 및 방법 |
JP2017518070A (ja) | 2014-04-04 | 2017-07-06 | オルガノボ インコーポレイテッド | 人工的な三次元の乳房組織、脂肪組織、および腫瘍疾患モデル |
EP3712254A1 (en) | 2014-05-28 | 2020-09-23 | Children's Hospital Medical Center | Methods and systems for converting precursor cells into gastric tissues through directed differentiation |
KR20170064547A (ko) | 2014-10-06 | 2017-06-09 | 오가노보, 인크. | 조작된 신장 조직, 이의 어레이, 및 이를 제조하는 방법 |
US11584916B2 (en) | 2014-10-17 | 2023-02-21 | Children's Hospital Medical Center | Method of making in vivo human small intestine organoids from pluripotent stem cells |
WO2016073782A1 (en) | 2014-11-05 | 2016-05-12 | Organovo, Inc. | Engineered three-dimensional skin tissues, arrays thereof, and methods of making the same |
TWI741980B (zh) | 2015-04-07 | 2021-10-11 | 大陸商四川藍光英諾生物科技股份有限公司 | 一種生物磚及其用途 |
DK3280463T3 (da) | 2015-04-07 | 2021-08-02 | Revotek Co Ltd | Sammensætninger til celle-baseret tredimensionel printning |
CA2989679C (en) * | 2015-06-16 | 2023-11-28 | Aspect Biosystems Ltd. | Continuously bioprinted multilayer tissue structure |
US20180280578A1 (en) * | 2015-07-21 | 2018-10-04 | Bioink Solutions Inc. | Bio-ink composition having improved physical and biological properties |
AU2016334242B2 (en) | 2015-10-09 | 2020-09-24 | Deka Products Limited Partnership | Fluid pumping and bioreactor system |
JP6873985B2 (ja) * | 2015-10-15 | 2021-05-19 | ウェイク・フォレスト・ユニヴァーシティ・ヘルス・サイエンシズ | インビトロで肝臓構築物を産生する方法およびその使用 |
AU2016352873B2 (en) * | 2015-11-09 | 2023-01-05 | Organovo, Inc. | Improved methods for tissue fabrication |
CN106916781A (zh) * | 2015-12-25 | 2017-07-04 | 清华大学 | 一种体外三维人体肝组织的构建方法及其应用 |
WO2017123722A1 (en) | 2016-01-12 | 2017-07-20 | Cleveland State University | 3d-printed miniature biological constructs |
CN105561389A (zh) * | 2016-01-18 | 2016-05-11 | 西北工业大学 | 一种蛋白质自组装人工肝支架制备方法 |
US20200377863A1 (en) * | 2016-02-10 | 2020-12-03 | Wake Forest University Health Sciences | Model system of liver fibrosis and method of making and using the same |
EP4177335A1 (en) | 2016-05-05 | 2023-05-10 | Children's Hospital Medical Center | Methods for the in vitro manufacture of gastric fundus tissue and compositions related to same |
KR20190028433A (ko) | 2016-06-16 | 2019-03-18 | 애스펙트 바이오시스템즈 리미티드 | 바이오프린팅된 반월판 임플란트 및 이를 사용하는 방법 |
US10073346B2 (en) | 2016-07-08 | 2018-09-11 | Cypre, Inc. | Apparatus for patterning hydrogels into multi-well plates |
US10345208B2 (en) | 2016-07-12 | 2019-07-09 | Deka Products Limited Partnership | System and method for applying force to a device |
US11254901B2 (en) | 2016-07-12 | 2022-02-22 | Deka Products Limited Partnership | System and method for printing tissue |
EP3496774A1 (en) * | 2016-08-15 | 2019-06-19 | Organovo, Inc. | Three dimensional bioprinted tumor models for drug testing |
EP3940059A1 (en) * | 2016-08-25 | 2022-01-19 | Philip Morris Products S.A. | Cell culture |
CA3036378A1 (en) | 2016-09-13 | 2018-03-22 | President And Fellows Of Harvard College | Methods relating to intestinal organ-on-a-chip |
GB2555787A (en) | 2016-11-07 | 2018-05-16 | Landberg Goran | Diagnostic methods |
US11299705B2 (en) | 2016-11-07 | 2022-04-12 | Deka Products Limited Partnership | System and method for creating tissue |
US11850330B2 (en) | 2016-11-10 | 2023-12-26 | Organovo, Inc. | Bioprinted hair follicles and uses thereof |
US11390836B2 (en) | 2016-11-17 | 2022-07-19 | Cleveland State University | Chip platforms for microarray 3D bioprinting |
CN110268056A (zh) * | 2016-11-23 | 2019-09-20 | Hsj增殖合伙人有限公司 | 包封的肝组织 |
SG10202105768WA (en) | 2016-12-05 | 2021-06-29 | Childrens Hospital Med Ct | Colonic organoids and methods of making and using same |
JP6889363B2 (ja) * | 2016-12-05 | 2021-06-18 | 澁谷工業株式会社 | 細胞の集合構造体の作製方法および作製装置 |
GB201622149D0 (en) * | 2016-12-23 | 2017-02-08 | Insphero Ag | Screenable liver disease models and methods |
CN108305213B (zh) * | 2017-01-13 | 2020-12-25 | 中国科学技术大学 | 图像重建方法、系统及结构照明显微镜 |
JP6985684B2 (ja) * | 2017-02-16 | 2021-12-22 | 国立大学法人京都大学 | 細胞評価方法、細胞評価装置、及び細胞評価プログラム |
WO2018187380A1 (en) * | 2017-04-03 | 2018-10-11 | Greene Nguyen Deborah Lynn | Use of engineered liver tissue constructs for modeling liver disorders |
CN108938089A (zh) * | 2017-05-19 | 2018-12-07 | 新加坡国立大学 | 软体机器人的制造方法 |
KR102625361B1 (ko) * | 2017-06-09 | 2024-01-18 | 칠드런즈 호스피탈 메디칼 센터 | 간 유사 장기 조성물 및 이를 제조 및 사용하는 방법 |
US10570362B2 (en) | 2017-07-12 | 2020-02-25 | Deka Products Limited Partnership | System and method for transferring tissue |
KR102062465B1 (ko) | 2017-09-25 | 2020-01-03 | 아주대학교산학협력단 | 나노섬유 기반 장기간 초대 간세포 3차원 배양시스템 및 배양방법 |
US11262349B2 (en) | 2017-10-11 | 2022-03-01 | Cleveland State University | Multiplexed immune cell assays on a micropillar/microwell chip platform |
CA3079555A1 (en) * | 2017-10-20 | 2019-04-25 | Indiana University Research And Technology Corporation | Scaffold-free 3d bioprinting of porcine cells |
KR102146682B1 (ko) | 2018-06-18 | 2020-08-21 | 주식회사 티앤알바이오팹 | 하이브리드 바이오 잉크와 그 제조 방법, 및 이를 이용한 인공 조직 제조 방법 |
US11426818B2 (en) | 2018-08-10 | 2022-08-30 | The Research Foundation for the State University | Additive manufacturing processes and additively manufactured products |
CN109628377A (zh) * | 2019-01-02 | 2019-04-16 | 贵州省人民医院 | 一种小鼠原代肝细胞灌注式分离及离体培养方法 |
EP3938489A1 (en) | 2019-03-13 | 2022-01-19 | Cellink AB | Liver tissue model constructs and methods for providing the same |
KR102261908B1 (ko) * | 2019-05-15 | 2021-06-08 | 주식회사 이노리젠 | 이중 가교 가능한 2액형 바이오 잉크 조성물 및 이를 이용한 조직 유사 구조체의 제조방법 |
CN110373380B (zh) * | 2019-06-14 | 2022-01-28 | 中国科学院生态环境研究中心 | 一种肝脏类器官模型及其建立方法和应用 |
CN110384823B (zh) * | 2019-07-19 | 2021-08-03 | 大连医科大学 | 基于丝素蛋白支架的仿生肝小叶及构建方法 |
KR102191644B1 (ko) * | 2019-07-23 | 2020-12-16 | 주식회사 티앤알바이오팹 | 간 오가노이드 및 이의 제조방법 |
CN110403731B (zh) * | 2019-07-30 | 2021-09-10 | 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 | 基于活细胞3d打印的组织工程仿生肝叶结构及制备方法 |
CN110511905A (zh) * | 2019-08-22 | 2019-11-29 | 杭州捷诺飞生物科技股份有限公司 | 肝单元支架的构建方法、肝单元支架及在药物检测领域的应用 |
KR102658161B1 (ko) * | 2019-10-01 | 2024-04-18 | 고꾸리쯔 다이가꾸 호우징 오사까 다이가꾸 | 피브린 시트의 제조 방법 |
CN110904026B (zh) * | 2019-11-18 | 2021-10-26 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种不同来源肝前体样细胞的制备方法及其应用 |
CN110923195B (zh) * | 2019-12-31 | 2020-11-17 | 广东赛尔生物科技有限公司 | 胚胎干细胞的高效诱导分化培养方法 |
CN111481320B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-12-09 | 中国医科大学 | 用于制备复杂器官的专用组合模具制备肝脏前体的方法 |
CA3206143A1 (en) | 2021-02-26 | 2022-09-01 | Wei Hsu | Skeletal stem cell isolation and uses thereof |
CN113350574B (zh) * | 2021-05-26 | 2022-11-18 | 泸州国之荣耀酒业有限公司 | 图案化类肝小叶微组织制造方法 |
WO2023081329A1 (en) * | 2021-11-04 | 2023-05-11 | The Trustees Of Princeton University | 3d-printing engineered living materials |
WO2023159107A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | The Forsyth Institute | Markers for skeletal stem cell and uses thereof |
EP4230233A1 (en) | 2022-02-22 | 2023-08-23 | mimiX Biotherapeutics Sàrl | Method for producing tissue constructs |
WO2024091824A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Ada Forsyth Institute, Inc. | Differentiation and reprogramming of chondrocyte |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013040078A2 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Organovo, Inc. | Engineered tissues for in vitro research uses, arrays thereof, and methods of making the same |
Family Cites Families (115)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4759764A (en) | 1985-05-24 | 1988-07-26 | Clayton Foundation For Research | Peripheral nerve regeneration |
US4808435A (en) | 1987-04-06 | 1989-02-28 | International Business Machines Corporation | Screen printing method for producing lines of uniform width and height |
US5099090A (en) | 1988-05-11 | 1992-03-24 | Ariel Electronics, Inc. | Circuit writer |
EP2075015B1 (en) | 1997-07-03 | 2015-03-11 | Massachusetts Institute of Technology | Tissue-engineered constructs |
US6401795B1 (en) | 1997-10-28 | 2002-06-11 | Sandia Corporation | Method for freeforming objects with low-binder slurry |
EP1084454B1 (en) | 1998-04-21 | 2016-03-09 | University of Connecticut | Free-form nanofabrication using multi-photon excitation |
US6697694B2 (en) | 1998-08-26 | 2004-02-24 | Electronic Materials, L.L.C. | Apparatus and method for creating flexible circuits |
US7338798B2 (en) | 1998-09-15 | 2008-03-04 | The Regents Of The University Of Michigan | System and method for forming a cardiac muscle construct |
DE69907397T2 (de) | 1999-02-17 | 2004-01-22 | Hewlett-Packard Co. (N.D.Ges.D.Staates Delaware), Palo Alto | Druckvorrichtung |
US6979670B1 (en) | 1999-03-10 | 2005-12-27 | Biora Bioex Ab | Matrix protein compositions for grafting |
US6642243B1 (en) | 1999-07-22 | 2003-11-04 | Ashkan Imanzahrai | Migraine medicine and method for treating same |
JP2001145956A (ja) | 1999-11-19 | 2001-05-29 | Meiko:Kk | 光硬化性樹脂三次元造形物の積層造形装置及びその積層造形方法 |
US6503273B1 (en) | 1999-11-22 | 2003-01-07 | Cyograft Tissue Engineering, Inc. | Tissue engineered blood vessels and methods and apparatus for their manufacture |
US6454972B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-09-24 | Sandia Corporation | Solid freeform fabrication using chemically reactive suspensions |
US20030096411A1 (en) | 1999-12-07 | 2003-05-22 | George Michalopoulos | Novel long-term three-dimensional tissue culture system |
US6520997B1 (en) | 1999-12-08 | 2003-02-18 | Baxter International Inc. | Porous three dimensional structure |
US6315469B1 (en) | 2000-01-19 | 2001-11-13 | Hewlett-Packard Company | Tool and method for adjustment of printhead to platen spacing in a printer |
DE10013223C2 (de) | 2000-03-13 | 2002-07-18 | Co Don Ag | Verfahren zur in vitro-Herstellung von dreidimensionalem, vitalem Knorpel- oder Knochengewebe und dessen Verwendung als Transplantationsmaterial |
US20050091576A1 (en) | 2003-10-24 | 2005-04-28 | Microsoft Corporation | Programming interface for a computer platform |
DE10018987A1 (de) | 2000-04-17 | 2001-10-31 | Envision Technologies Gmbh | Vorrichtung und Verfahren zum Herstellen von dreidimensionalen Objekten |
US20020182633A1 (en) | 2000-07-11 | 2002-12-05 | Chen Christopher S. | Methods of patterning protein and cell adhesivity |
US7998735B2 (en) | 2000-08-21 | 2011-08-16 | Victorian Tissue Engineering Centre Pty. Ltd. | Vascularized tissue graft |
US6561607B1 (en) | 2000-10-05 | 2003-05-13 | Eastman Kodak Company | Apparatus and method for maintaining a substantially constant closely spaced working distance between an inkjet printhead and a printing receiver |
US6939489B2 (en) | 2001-03-23 | 2005-09-06 | Ivoclar Vivadent Ag | Desktop process for producing dental products by means of 3-dimensional plotting |
AU2002305201A1 (en) | 2001-04-19 | 2002-11-05 | Case Western Reserve University | Fabrication of a polymeric prosthetic implant |
DE10127225A1 (de) | 2001-05-22 | 2002-11-28 | Zeiss Carl | Ultraviolettlicht-Abschwächungsfilter |
US20030049839A1 (en) | 2001-08-01 | 2003-03-13 | The University Of Texas System | Transparent multi-channel cell scaffold that creates a cellular and/or molecular gradient |
WO2003017745A2 (en) | 2001-08-23 | 2003-03-06 | Sciperio, Inc. | Architecture tool and methods of use |
US6934600B2 (en) | 2002-03-14 | 2005-08-23 | Auburn University | Nanotube fiber reinforced composite materials and method of producing fiber reinforced composites |
US20100254900A1 (en) | 2002-03-18 | 2010-10-07 | Campbell Phil G | Biocompatible polymers and Methods of use |
WO2003079985A2 (en) | 2002-03-18 | 2003-10-02 | Carnegie Mellon University | Method and apparatus for preparing biomimetic scaffold |
US6907307B2 (en) | 2002-07-02 | 2005-06-14 | 3D Systems, Inc. | Support volume calculation for a CAD model |
AU2003251874A1 (en) | 2002-07-12 | 2004-02-02 | Dirk R. Albrecht | Three dimensional cell patterned bioploymer scaffolds and method of making the same |
US7641898B2 (en) | 2003-03-21 | 2010-01-05 | Materials Evolution And Development Usa, Inc. | Keratinocyte-fibrocyte concomitant grafting for wound healing |
US20040197375A1 (en) | 2003-04-02 | 2004-10-07 | Alireza Rezania | Composite scaffolds seeded with mammalian cells |
US7051654B2 (en) | 2003-05-30 | 2006-05-30 | Clemson University | Ink-jet printing of viable cells |
WO2005003300A2 (en) | 2003-06-04 | 2005-01-13 | University Of South Carolina | Tissue scaffold having aligned fibrils, apparatus and method for producing same, and methods of using same |
JP4474858B2 (ja) | 2003-07-07 | 2010-06-09 | セイコーエプソン株式会社 | ギャップ調整装置、これに使用されるキャリブレーション用治具、およびギャップ調整装置を備えた液滴吐出装置、並びに電気光学装置の製造方法 |
US20050074877A1 (en) | 2003-07-28 | 2005-04-07 | Mao Jeremy Jian | Biological engineering of articular structures containing both cartilage and bone |
FR2859128B1 (fr) | 2003-08-29 | 2006-03-10 | Centre Nat Rech Scient | Procede et dispositif de fabrication d'un composant multimateriaux tridimensionnel par impression du type jet d'encre |
US8043614B2 (en) | 2004-03-09 | 2011-10-25 | Ahlfors Jan-Eric W | Autogenic living scaffolds and living tissue matrices: methods and uses thereof |
DE10353281A1 (de) | 2003-11-14 | 2005-06-16 | Bayer Cropscience Ag | Wirkstoffkombination mit insektiziden und akariziden Eigenschaften |
US20050276791A1 (en) | 2004-02-20 | 2005-12-15 | The Ohio State University | Multi-layer polymer scaffolds |
US8241905B2 (en) | 2004-02-24 | 2012-08-14 | The Curators Of The University Of Missouri | Self-assembling cell aggregates and methods of making engineered tissue using the same |
US20090142307A1 (en) | 2004-07-09 | 2009-06-04 | Athanasiou Kyriacos A | Shape-Based Approach for Scaffoldless Tissue Engineering |
US7625198B2 (en) | 2004-08-11 | 2009-12-01 | Cornell Research Foundation, Inc. | Modular fabrication systems and methods |
US7651665B2 (en) | 2004-09-07 | 2010-01-26 | Hewlett-Packard Development Company, L.P. | Microtray for handling biosubstances |
US7767446B2 (en) | 2004-09-16 | 2010-08-03 | Becton, Dickinson And Company | Perfusion bioreactors for culturing cells |
KR100606457B1 (ko) | 2004-11-11 | 2006-11-23 | 한국기계연구원 | 3차원 프린팅 조형시스템 |
JP4539316B2 (ja) | 2004-12-08 | 2010-09-08 | セイコーエプソン株式会社 | ヘッド位置補正方法およびヘッド位置補正装置、並びに液滴吐出装置、電気光学装置の製造方法 |
US7568904B2 (en) | 2005-03-03 | 2009-08-04 | Laser Solutions Co., Ltd. | Stereolithography apparatus |
JP4729948B2 (ja) | 2005-03-09 | 2011-07-20 | ブラザー工業株式会社 | 液体供給装置、この液体供給装置を備えたインクジェット記録装置 |
US7780897B2 (en) | 2005-04-22 | 2010-08-24 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Hydrogel constructs using stereolithography |
EP2495310A3 (en) | 2005-05-24 | 2013-03-27 | The Regents Of the University of California | Microscale micropatterned engineered in vitro tissue |
EP2093256A3 (en) | 2005-07-28 | 2009-10-14 | Carnegie Mellon University | Biocompatible polymers and methods of use |
US8690957B2 (en) | 2005-12-21 | 2014-04-08 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Bone graft composition, method and implant |
US20070200276A1 (en) | 2006-02-24 | 2007-08-30 | Micron Technology, Inc. | Method for rapid printing of near-field and imprint lithographic features |
US7680555B2 (en) | 2006-04-03 | 2010-03-16 | Stratasys, Inc. | Auto tip calibration in an extrusion apparatus |
US20070231787A1 (en) | 2006-04-04 | 2007-10-04 | Voelker Mark A | Methods and devices for imaging and manipulating biological samples |
AU2007254048A1 (en) | 2006-04-05 | 2007-11-29 | William Marsh Rice University | Dermis-derived cells for tissue engineering applications |
US20090263849A1 (en) | 2006-04-21 | 2009-10-22 | Drexel University | Bioprinting Three-Dimensional Structure Onto Microscale Tissue Analog Devices for Pharmacokinetic Study and Other Uses |
US20090208466A1 (en) | 2006-04-21 | 2009-08-20 | James Yoo | Ink-jet printing of tissues |
JP4051077B2 (ja) | 2006-04-28 | 2008-02-20 | シャープ株式会社 | 液滴塗布装置、液滴吐出部のギャップ測定方法、および、液滴吐出部のギャップ調整方法 |
FR2901143B1 (fr) | 2006-05-16 | 2008-10-03 | Centre Nat Rech Scient | "methode de construction de materiaux vivants fonctionnels, materiaux obtenus et applications" |
RU2330675C2 (ru) | 2006-07-28 | 2008-08-10 | ЗАО "РеМеТэкс" | Трансплантат для восстановления дефектов соединительной ткани и способ его получения |
US7959942B2 (en) | 2006-10-20 | 2011-06-14 | Orbusneich Medical, Inc. | Bioabsorbable medical device with coating |
DE102006053121B3 (de) | 2006-11-10 | 2007-12-27 | Eos Gmbh Electro Optical Systems | Vorrichtung und Verfahren zum Herstellen eines dreidimensionalen Objektes mittels eines Beschichters für pulverförmiges Aufbaumaterial |
WO2008097906A2 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-14 | The Regents Of The University Of Michigan | System and method for forming bone, ligament and bone-ligament constructs |
US8343740B2 (en) | 2007-03-29 | 2013-01-01 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Micro-organ device |
AU2008262331B2 (en) | 2007-06-07 | 2013-10-17 | Wake Forest University Health Sciences | Inkjet gene printing |
EP2188114B1 (en) | 2007-07-25 | 2018-09-12 | Stratasys Ltd. | Solid freeform fabrication using a plurality of modeling materials |
AU2008292089B2 (en) | 2007-08-29 | 2011-09-29 | Vito Nv | Method for producing a three-dimensional macroporous filament construct based on phase inversion and construct thereby obtained |
US20090076531A1 (en) | 2007-09-18 | 2009-03-19 | Richardson Charles L | Method and apparatus for bypass graft |
EP2203129A4 (en) | 2007-10-15 | 2011-11-23 | Univ Wake Forest Health Sciences | METHODS AND COMPOSITIONS FOR PRINTING NANOTUBE COMPOSITES OF BIOLOGICALLY COMPATIBLE AUTOLOGOUS TISSUE |
US7923846B2 (en) | 2007-11-16 | 2011-04-12 | Stats Chippac Ltd. | Integrated circuit package-in-package system with wire-in-film encapsulant |
KR100922232B1 (ko) | 2008-02-13 | 2009-10-16 | 연세대학교 산학협력단 | 전기수력학 프린팅 기법을 이용한 살아있는 세포의 직접패터닝 방법 및 장치 |
EP2090584A1 (en) | 2008-02-13 | 2009-08-19 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Identification of a novel cysteine-rich cell penetrating peptide |
WO2009102484A2 (en) | 2008-02-14 | 2009-08-20 | Wake Forest University Health Sciences | Inkjet printing of tissues and cells |
US20090248145A1 (en) | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Nanyang Technological University | Method of forming a three-dimensional structure of unidirectionally aligned cells |
US8876513B2 (en) | 2008-04-25 | 2014-11-04 | 3D Systems, Inc. | Selective deposition modeling using CW UV LED curing |
HUE037881T2 (hu) | 2008-06-20 | 2018-09-28 | Univ Maastricht | Önrendezõdõ szövetmodulok |
EP2310847B1 (en) | 2008-06-24 | 2016-05-04 | The Curators Of The University Of Missouri | Self-assembling multicellular bodies and methods of producing a three-dimensional biological structure using the same |
US9097702B2 (en) | 2008-07-29 | 2015-08-04 | Cornell University | Pathologically relevant tumor microenvironments for high-throughput drug screening |
JP2010057439A (ja) | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Konica Minolta Holdings Inc | 細胞培養支持体とその製造方法並びに細胞培養方法 |
US20110212501A1 (en) | 2008-09-12 | 2011-09-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | 3-dimensional multi-layered hydrogels and methods of making the same |
WO2010060080A1 (en) | 2008-11-24 | 2010-05-27 | Immunotrex Corporation | Three dimensional tissue generation |
JP5407344B2 (ja) | 2009-01-13 | 2014-02-05 | 大日本印刷株式会社 | 生体組織の作製方法 |
WO2011038373A2 (en) | 2009-09-28 | 2011-03-31 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Three-dimensional bioprinting of biosynthetic cellulose (bc) implants and scaffolds for tissue engineering |
US8409603B2 (en) | 2009-10-01 | 2013-04-02 | University Of South Carolina | Compositions and methods for tissue engineering, tissue regeneration and wound healing |
EP2521587B1 (en) | 2010-01-08 | 2020-04-08 | Wake Forest University Health Sciences | Delivery system |
WO2011088213A1 (en) | 2010-01-15 | 2011-07-21 | University Of Utah Research Foundation | Crosslinked hydrogels and methods of making and using thereof |
CA2788514A1 (en) | 2010-02-02 | 2011-08-11 | Gabor Forgacs | Engineered biological nerve graft fabrication and application thereof |
US9039998B2 (en) | 2010-03-04 | 2015-05-26 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medical (Inserm) | Bioprinting station, assembly comprising such bioprinting station and bioprinting method |
GB2489081B (en) | 2010-03-16 | 2013-03-27 | Organovo Inc | Multilayered vascular tubes |
US9012415B2 (en) | 2010-03-26 | 2015-04-21 | Stemmatters, Biotecnologia E Medicina Regenerativa S.A. | Photo-crosslinked gellan gum-based hydrogels: preparation methods and uses thereof |
WO2012003465A2 (en) | 2010-07-01 | 2012-01-05 | The Regents Of The University Of Michigan | Scaffold-free three dimensional nerve fibroblast constructs |
US20120089238A1 (en) | 2010-10-06 | 2012-04-12 | Hyun-Wook Kang | Integrated organ and tissue printing methods, system and apparatus |
EP2629975B1 (en) | 2010-10-21 | 2022-03-09 | Organovo, Inc. | Devices for the fabrication of tissue |
HUE029316T2 (en) | 2010-11-04 | 2017-03-28 | Univ Of Pecs | Tüdõszövetmodell |
DE202011003443U1 (de) | 2011-03-02 | 2011-12-23 | Bego Medical Gmbh | Vorrichtung zur generativen Herstellung dreidimensionaler Bauteile |
EP2683328B1 (en) | 2011-03-07 | 2017-11-08 | Wake Forest University Health Sciences | Delivery system |
GB201105226D0 (en) | 2011-03-29 | 2011-05-11 | Univ Leiden | Methods |
JP5599356B2 (ja) | 2011-03-31 | 2014-10-01 | 富士フイルム株式会社 | シミュレーション方法、プログラムおよびそれを記録した記録媒体、並びに、それらを利用した液滴配置パターンの作成方法、ナノインプリント方法、パターン化基板の製造方法およびインクジェット装置。 |
JP2014526318A (ja) | 2011-09-12 | 2014-10-06 | オルガノボ,インク. | 操作した移植可能な組織および臓器のためのプラットフォームおよびそれを製造する方法 |
WO2013116443A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Nscrypt, Inc. | Micro-dispensing multi-layered 3d objects with curing steps |
WO2013130823A1 (en) | 2012-02-29 | 2013-09-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Inverse patterning process for three-dimensional multi-compartmental micro-organization of multiple cell types |
KR20140142278A (ko) | 2012-03-06 | 2014-12-11 | 더 유에이비 리서치 파운데이션 | 삼차원, 예비맥관화, 조작 조직 구조체, 조직 구조체의 제조 방법 및 사용 방법 |
US9499779B2 (en) | 2012-04-20 | 2016-11-22 | Organovo, Inc. | Devices, systems, and methods for the fabrication of tissue utilizing UV cross-linking |
US20140099709A1 (en) | 2012-06-19 | 2014-04-10 | Organovo, Inc. | Engineered three-dimensional connective tissue constructs and methods of making the same |
US9399322B2 (en) | 2012-08-08 | 2016-07-26 | Makerbot Industries, Llc | Three dimensional printer with removable, replaceable print nozzle |
US9442105B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-13 | Organovo, Inc. | Engineered liver tissues, arrays thereof, and methods of making the same |
CN105188993A (zh) | 2013-03-15 | 2015-12-23 | 麦特法布公司 | 用于增材制造装置的料盒和方法 |
US9802360B2 (en) | 2013-06-04 | 2017-10-31 | Stratsys, Inc. | Platen planarizing process for additive manufacturing system |
KR20160036619A (ko) | 2013-07-31 | 2016-04-04 | 오가노보, 인크. | 조직을 제작하기 위한 자동화 장치, 시스템 및 방법 |
US11903612B2 (en) | 2013-11-04 | 2024-02-20 | University Of Iowa Research Foundation | Bioprinter and methods of using same |
-
2013
- 2013-03-15 US US13/841,430 patent/US9442105B2/en active Active
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2014
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WO2013040078A2 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | Organovo, Inc. | Engineered tissues for in vitro research uses, arrays thereof, and methods of making the same |
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